PT2318427E - Glucocorticóides ligados a ésteres de nitrato através de um grupo de ligação aromático na posição 21 e sua utilização em oftalmologia - Google Patents

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DESCRIÇÃO "GLUCGCORTICÓIDES LIGADOS A ÉSTERES DE NITRATO ATRAVÉS DE UM GRUPO DE LIGAÇÃO AROMÁTICO NA POSIÇÃO 21 E SUA UTILIZAÇÃO EM OFTALMOLOGIA" A invenção diz respeito a derivados nitro-oxi de esteroioes, a métodos para a sua preparação, a composições farmacêuticas que contêm estes compostos e métodos de utilização destes compostos e composições para o tratamento de doenças oculares, em partícula, edema macular diabético, retinopatia diabética, degeneração macular, degeneração macular associada à idade e outras doenças da retina e da mácula lútea.

A retina é a parte do olho que é se ;nsív el à luz . A má cuia li itea é a : região da retina q ue nc s pe ;rmite ler e re conhece r cdrss. As doenças da mácula, t a r s c orno de generaç ão macula r associada à id. ade e ed .ema ma cu lar di abético r s a o cias p r i n c i ρ a i s r e s p o n s á i ve i s por cegueira. Para combate] r estas doenças, for am investiga dos di versos fármacos quanto aos seus efe itos sobre distúrb ios de ceguei ra · Pres entemente, t. a i s fármacos são adrni' nistrados à má cuia e a retina por meio de proc edimentos cirúrgic os, t cl is como injecçõe s intr CA 0 j_ dí a. 1 Cd o LA periorbitais ou por rpip i o de vias sist émicas. Os métodos ; cin úrgic :os reque rerri f-r equentemente in jecções > repetidas 0 podem provo c a r CO mplicaç ões ocul, 3. r Θ s sérias, inc luind’ o endoftalmi te, de slocame nto da retina e hemorragia v ítrea . De igual mo 0.0 f 3. adminis traçao sis ;témica está associa ida a dive rsos efei f- r·) q L- vD O 2 secunaarios sistémicos potenciais e à dificuldade de administração de níveis terapêuticos dos fármacos à retina.

Recentemente, têm existido muitas publicações sobre a eficacia de acetonida de triancinolona intravítrea sara o tratamento de edema macular difuso, em comparação com o tratamento cora laser. No entanto, as injecções intravitreas de triancinolona são associadas a muitas complicações oculares. As complicações da terapêutica intravítrea com triancinolona compreendem o aumento da pressão intraocular induzido por esteróides, cataractogénese, endoftalmite imecciosa ou não mfecciosa pós-operatória e pseudo-endoftalmite.

No estado presente de quimioterapia, os esteróides e os rnibidores de anidra.se carbónica, enquanto compostos com maior eficácia, são utilizados em terapêutica sintomática, embora a sua eficácia não esteja estabelecida e a sua administração durante muito tempo dê origem à ocorrência de efeitos secundários, tais como cataratas, aumento da p r e s s ã o i n t. r a o c u 1 a r infecções, peio que induzida por esteróides, glaucoma e a utilização contínua destes fármacos em doenças crónicas, tais como diabetes mellitus, seja difícil nestas circunstâncias.

No documento EP 0929565 encontram-se descritos compostos de fórmula geral Β-Χχ-ΝΟ^?, em que o símbolo B contém um resíduo esteróide, em particular hidrocortisonar e o símbolo Xi representa uma ponte de ligação bivalente, a qual é um. anel benzilo, uma cadeia alquilo ou. um éter. O» compostos podem ser utilizados para o tratamento de distúrbios oculares.

No documento EP 1 475 386 encontram-se descritos

compostos de fórmula geral A-B-C-NCé, em que o símbolo A contém ura resíduo esteróide e o grupo B-C representa uma ponte de ligação bivalente que contém. um resíduo antroxidante. Os compostos podem ser utilizados no tratamento de stress oxidativo e/ou disfunções endoteliais.

Nos compostos descritos, o grupo de ligação (linker) antioxidante está ligado ao 21-OH do esteróide através de um grupo carboxílico, formando uma ligação éster.

No documento WO 03/64443 encontram-se descritos compostos de fórmula geral B-Xi-NCp, em que o símbolo B contém, um resíduo esteróide e o símbolo X:. representa uma ponte de ligação bivalente, a qual é um anel benzilo ou um grupo de ligação heterocíclico. Os compostos podem ser utilizados para o tratamento de doenças oculares.

No documento WO 07/025632 encontram-se descritos compostos de fórmula geral R-Z-X-ONO2, em que o grupo R-X contém um resíduo acetonida de triancinolona, valerato de betametasona ou etilcarbonato de prednisolona e o símbolo Xi representa uma ponte de ligação bivalente, a qual é um anel aromático, uma cadeia alquilo, um éter, ácido ferúlico, ácido vanílico ou um anel heterocíclico. Os doenças para o :.acto e compostos podem ser utilizados para o tratamento de de pele e da membrana mucosal e, em particular, tratamento de dermatite atópica, dermatite de con psonase. F. Galassi et al. Br J Ophthalmology 2006, 90, 1414- 1419 descrevem os efeitos de um 21-[(4-nitro-oximetil)]-benzoato de dexametasona num modelo e glaucoma induzido com corticoesteróides experimental em coelhos. A dexametasona libertadora de NO foi administrada por via tópica, duas vezes ao dia, e os resultados mostram que o composto pode prevenir o aumento da. pressão intraocular, a deficiência da 4 circulação retrobulbar e as alterações morfológicas nos corpos possivelmente induzidas pelo tratamento tópico com corticoesteróides.

Constitui um objecto da presente invenção proporcionar derivados nitro-oxi de esteróides para o tratamento de doença s i n f 1 araa t ó r i a s .

Constitui um outro objecto da presente invenção proporcionar derivados nitro-oxi de esteróides para a prevenção ou para o tratamento de doenças oculares, em particular, degeneração macular diabética, retinopatia diabética, degeneração macular associada à idade e outras doenças da retina e da mácula lútea. De acordo com um aspecto da invenção, um ou mais destes compostos reduzem os efeitos secundários associadas à terapêutica convencional com esteróides. De acordo com uma outra variante, um ou mais destes compostos possuem uma actividade farmacológica melhorada, em comparação com a terapêutica convencional presente.

Constitui um objecto da presente invenção um composto de fórmula estrutural (I), ou um seu sal,

í I) 5 em que o sím.bolo Ri representa OH, o símbolo R2 representa CH3 ou os símbolos R2 e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula estrutural (II)

O S 1ÍTLO OiO símbolo R4 - no R.3 representa um átomo de hidrogénio ou F e o representa F ou Cl, desde que: caso do símbolo Ri representar OH e o símbolo R-2 representa CH3, então o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio; no caso dos símbolos R2 e R2, considerados em conjunto, representarem o grupo de fórmula estrutural (II), então o símbolo R4 representa F; os símbolos Ri, R2, R3 e R4 estão ligados aos átomos de carbono em 17, 16, 6 e 9 da estrutura esteroidal na posição α ou β; o símbolo R representa:

6

em que o símbolo Y representa um grupo seleccionado entre: _pc-CH(ON02)R6 2) _r.-CH (0N02) - (CR7R8)n-CH (0N02) Rg 3) ... | (cH2)o-X]p-(CH2)q-CH(0N02)R9 4) _ [ (CHz) ο- (X) J p- (CH2) q—CH (0N02) — (CRnRg) n—CH (0N02) Rg, em que o símbolo Rs representa um alquileno (Ci-Ci0) de cadeia linear ou ramificade e, de prelerênc: o símbolo r5 representa um alquileno(Ci~C6) de cadeia linear; o símbolo Re representa H ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo Rg representa H ou -CH3; os símbolos R? e Rs, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, H ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, os símbolos R-7

Rg, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, h ou CH3; o símbolo R9 representa H ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo Rg representa H ou ~CH3; o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6 e, de preferência, o símbolo n representa 0 ou 1; 0 símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, de preferência, o símbolo o representa um número 7 inteiro compreendido entre 2 to 4 e, mais preferencialmente, o símbolo o representa 2; 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6; de preferência, o símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4 e, mais preferencialmente, o símbolo p representa 1 ou 2; o símbolo q representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6; de preferência, o símbolo q está compreendido entre 0 e 4 e, mais preferencialmente, representa 0 ou 1; o símbolo X representa 0, S ou NR10, em que o símbolo Rio representa H ou um alquilo (C1-C4) , e, de preferência, o símbolo X representa 0; desde que a invenção não inclua os compostos de fórmula estrutural (I), em que os símbolos Ri e R2, considerados em conjunto, representem um grupo de fórmula estrutural (II)

o símbolo R4 representa F e o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R representa o grupo de estrutural (III), em que o símbolo Y representa -R3-CH (ONO2) Re e o símbolo R6 representa H, a invenção proporciona

De acordo com outra variante, um composto de fórmula estrutural (I) 8

em que o símbolo R-4 representa F, o símbolo R3 representa F e os símbolos Ri e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula geral (II)

os símbolos Ri, k2, R3 e R4 estão ligados aos átomos de carbono em 17, 16, 6 e 9 da estrutura esteroidal na posição a;

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UV) em que o símbolo Y representa um grupo seleccionado entre: 1) -R5-CPI (0N02) Re 2) -R5-CH (0N02) - (CR7R8) n-CH {0N02) Ro 3) -[ (CH2)o-X]p-(CH2)q-CH(0N02)R9 4) -[ (CH2)o-(X) ]P-(CH2)q-CH(0N02)- (CR7R8) n~CH (0N02) Rg, em que o símbolo Rs representa um alquileno (Ci-C10) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo R5 representa um alquileno (Ci~-C6) de cadeia linear; o símbolo Re representa H ou um alquilo (Ci~C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo R6 representa H ou -CH3; os símbolos R? e Rs, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, H ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, os símbolos R7 e R8, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, H ou CH3; o símbolo Rg representa H ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo R9 representa H ou -CH3; o símbolo n representa um número inteiro com.preend.ido entre 0 e 6 e, de preferência, o símbolo n representa 0 ou 1; 0 símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, de preferência, o símbolo o representa um número 10 inteiro compreendido entre 2 to 4 e, mais preferencialmente, o símbolo o representa 1; 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6; de preferência, o símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4 e, mais preferencialmente, o símbolo p representa 1 ou 2; o símbolo q representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6; de preferência, o símbolo q está compreendido entre 0 e 4 e, mais preferencialmente, representa 0 ou 1; o símbolo X representa O, S ou NR10, em que o símbolo Rio representa H ou um alquilo (C1-C4) , e, de preferência, o símbolo X representa O.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula estruturai (I)

em que mto, representa, os símbolos Ri e R2, considerados em corr o grupo de fórmula estrutural (II) -Ô CH,

-o CM3 UI) 11 o símbolo R4 representa F e o símbolo R3 representa um át orno de h i drogéη i o; os símbolos Ri, R2 e R4 estão ligados aos átomos de carbono em 17, 16 e 9 da estrutura esteroidal na posição a; o símbolo R representa:

çm>

em que o símbol .o Y representa um grupo seleccionado entre: 1) -R5-CH (0N02) Re 2) -Rs-CH (0N02) ~ (CR7R8 ) n—CH (0N02) R9 3) — [ (CH2) 0-X] p- (CH2) q- -CH (0N02) R9 A N 4 ; -[ (CH2)o-(X) ] p- (CH2 ) q-CH (0N02) - (CR/Rs) n-CH (0N02) R9, em aue o símbolo R5 representa um alquileno (Ci-Cio) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo R5 representa um alquileno(Ci-C6) de cadeia linear; o símbolo R6 representa H ou um alquilo (Ci~C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo

Rg representa -CH3; 12 os símbolos R? e Rs, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, H ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, os símbolos r7 e Rs, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, H ou CH3; o símbolo R9 representa H ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo R9 representa H ou -CH3; o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6 e, de preferência, o símbolo n representa 0 ou 1; 0 símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, de preferência, o símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 2 to 4 e, mais preferencialmente, o símbolo o representa 2; 0 símbolo ρ representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6; de preferência, o símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4 e, mais preferencialmente, o símbolo p representa 1 ou 2; o símbolo q representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6; de preferência, o símbolo q está compreendido entre 0 e 4 e, mais preferencialmente, representa 0 ou 1; o símbolo X representa 0, S ou NRio, em que o símbolo

Rio representa H ou um alquilo (Ci-C4) , e, de preferência, o símbolo X representa 0.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula estrutural (I) 13

em que o símbolo R] representa OH, o símbolo R2 representa CH3, o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R4 representa F; os símbolos R4 e R4 estão ligados aos átomos de carbono 17 e 9 da estrutura esteroidal na posição α, o símbolo R2 está >ono

• O VdCL ligado ao átomo de ca posição β; o símbolo R representa: estrutura coloidal na

ilv) 14 em que o símbolo Y representa um grupo seleccionado entre: 1) -R5-CH (0N02)R6 2) -R5-CH (0N02) - (CR7RS) n-CH (0N02) R9 3) - [ (CH2) o-X] p- (CH2) q-CH (0N02) R9 4 ) -[ (CH2)0-(X) ]p-(CH2)q-CH(0N02)-(CR7R8)ri-CH(0N02)R9, em que o símbolo R5 representa um alquiieno (Ci-Ci0) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo

Rr representa um alquiieno(Cp—Cg) de cadeia linear; o símbolo Rg representa H ou um alquilo (Cr~C5) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo R6 representa H ou -CH3; os símbolos R? e R8, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, H ou um alquilo (Cr-Cg) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, os símbolos R7 e Rg, em cada ocorrência, representam, de um modo independente entre si, H ou CH3; o símbolo R9 representa H linear ou ramificada e, R9 representa H ou -CH3; o símbolo n representa um n 0 e 6 e, de preferência, o ou um alquilo (C-.-Cg) de cadeia de preferência, o símbolo úmero inteiro compreendido entre símbolo n representa 0 ou 1; 0 símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, de preferência, o símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 2 to 4 e, mais preferencialmente, o símbolo o representa 2; 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6; de preferência, o símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4 e, mais preferencialmente, o símbolo p representa 1 ou 2; 15 ímbo lo q representa um número inteiro compreendido entre 6; de preferência, o símbolo q está compreendido entre 0 e 4 e, mais preferencialmente, representa 0 ou 1; o símbolo X representa 0, S ou NR10, em que o símbolo Rig representa H ou um alquilo (Ci-C4) , e, cie preferência, o símbolo X representa 0.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula estrutural (I)

em que o símbolo Ri representa OH, o símbolo R2 representa CH3, o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R4 representa Cl; os símbolos R4 e R4 estão ligados aos átomos de carbono 17 e 9 da estrutura esteroidal na posição α, o símbolo R2 está ligado ao átomo de carbono 16 da estrutura esteroidal na posição β; o símbolo R representa: 16

em que o símbol o Y representa um grupo seleccionado entre: -1 \ J_ ) -Rg-CH (0N02) r6 O \ Z ) -Rs-CH (0N02) - (CR7R.8 ) n-CH (ONO2) R-9 3) - [ (CH2)o-X]p- (CH2) q- -CH (0N02) Rg 4) - [ (CH2) o- (X) ]p- (CH2 ) q-CH (0N02) ~ (CR7Rs)n-CH (ONO2) Rg, em que o símbolo P„5 representa um alquileno (C1-C10) cie cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo

Rs represen .ta um alquilen 0 0 i“C6) de cadeia linear; 0 símbolo Re representa H ou um alquilo (z]_-Zí) cie : cadeia li near ou ramificada e, de preferên C .1. â f O símbolo

Rg representa H ou -CH3; os símbolos R7 e Rs, em cada ocorrência, representam, de um moclo independente entre si, H ou um alquilo (Ci-Cg) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, os símbolos R7 e R8, em cada ocorrência, representam., de um modo independente entre si, H ou CH3; 17 o símbolo R9 representa H ou um alquilo (Ci-C5) de cadeia linear ou ramificada e, de preferência, o símbolo R9 representa H ou ~CH3; o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6 e, de preferência, o símbolo n representa 0 ou 1; 0 símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, de preferência, o símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 2 to 4 e, mais preferencialmente, o símbolo o representa 2; 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6; de preferência, o símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4 e, mais preferencialmente, o símbolo Ό J. representa 1 o\u 2; 0 símbolo q representa um número inteiro compreendi do entre 0 e 6; de prGfsrênciâf o SirnijOio q está c omp re endi do entre 0 e 4 e, ma iS ]32r0fOU0riCi 3.ΧΓΠ0Π L 0 / represen ta 0 ou 1; 0 símbolo X Γ6ΌΓΘ S0Ht cl QP S OU NP-iq^ em que o s ímbolo representa H ou um ulqurlo (Ci Ca) , e, de preferência, o símbolo X representa 0.

Como símbolos R preierxdos reiere-se.

(llla) aiifo) 18

ClXIe) ΟΝΟ,

O _.,ox 1 V·' '^f" O-' ,.ONO.: íí" jí f" ó .Jl, ,QNi ΌΝΟ,. HO" Y Óh HÔ"

OH í X V B í (IVb) o . OHO ,. .0, o o

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ϊ ΊΠ'O ,γ HO' Y ÒH '*V ' O -- ONO., (IV ú)

De acordo com outro aspecto, sl invenção proporciona um composto seleccionado entre o conjunto seguinte: 0-·όχ // ,x ' o Y~ong, ÇHJ |,#xPK>- i Λ £·Ύ. 'v.--,. v 19 íi) ftâçQ q. οΛ Íi o~^ O"'

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De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula estrutural (I) para o tratamento de doenças inf1amat órias.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula estrutural (I) para o tratamento de doenças oculares, em particular, de edema macular diabético, retinopatia diabética, degeneração macular, degeneração macular associada à idade e outras doenças da retina e da mácula lútea. Um composto preferido é o composto de fórmula estrutural (1) referido antes.

De acordo com outro aspecto, a invenção proporciona um composto de fórmula estrutural (I), incluindo os compostos de fórmula estrutural (I) em que os símbolos R:l e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula e s t ru t u ral (II)

o símbolo R4 representa F e o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio, e o símbolo R representa um grupo de fórmula estrutural (III), em que Y representa -R5- CH (0N02) Re e o símbolo R6 representa H, para utilização na prevenção ou no tratamento de edema macular diabético, retinopatia diabética, degeneração macular, degeneração macular associada à idade e outras doenças da retina e da mácula lútea, in particular edema macular diabético. Um composto preferido para esta utilização, que é conhecido para o tratamento de patologias dérmicas a partir do documento WO-07/025632, é o composto de fórmula estrutural (18)

Ainda de acordo com outro aspecto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade farmaceuticament e eficaz de um c ompo st o de fórmula est . ruturai (I) e/ou 06 UíTl S 3 X ou estereisómero, e pelo men.í os um excipiente aceitável sob o ponto de vista oftalmológico, numa forma adequada para administração por via intravítrea ou periorbital. 0 termo "excipiente" é aqui utilizado para descrever qualquer ingrediente diferente do(s) composto(s) da invenção. A escolha do excipiente irá depender, em grande via particular de sobre a estabilidade escala, de factores, tais como da administração, do efeito do excipiente e da natureza da. forma de dosagem. 24

Ainda de acordo com outro aspecto, a invenção proporciona uma composição farmacêutica, em que o composto da invenção é administrado sob a forma de uma suspensão ou de uma emulsão num veiculo aceitável sob o ponto de vista oftalmológico.

Os compostos da invenção pretendidos para utilização farmacêutica podem ser administrados c orno produtos cristalinos ou am orfos. Os compostos daL invenção pretendidos para utiliza ÍÇ;ão farmacêutica podem ser admi n i strados por si sós ou em c0mb i na çã0 c0m um ou mais de outros compostos da invenção. A utilidade dos compostos da invenção como agente medicinais para o tratamento ou para a prevenção de edema macular diabético, retinopatia diabética, degeneração macular, degeneração macular associada à idade e outras doenças da retina e da mácula lútea, é demonstrada pela actividade dos compostos em ensaios convencionais. *> J» V V; W W V νΐΰ 1) 0 composto de fórmula estrutural (I), em que os símbolos Ri, R2, R3 e R4 possuem as significações definidas antes, o radical R possui as significações definidas nas fórmulas estruturais III e IV, em que o símbolo Y possui as significações definidas antes, pode ser obtido: 1.1) por reacção de um composto de fórmula estrutural (V), {V} em que os símbolos Ri, R2, R?,, R4 possuem as significações definidas antes, o símbolo W representa H ou C(0)-Cl, com um composto de fórmula estrutural (VII) ou (VIII)

,'Y

as siani: (VIIX) ;ações definidas antes o símbolo Wi representa H, quando o símbolo W representa -C(0)-C1 ou o símbolo Wi representa -C(0)-Cl ou -C0-0-Ra, quando o símbolo W representa H, em que o símbolo Ra representa pentafluorofenilo ou 4-nitrofenilo, o símbolo Pi representa um grupo protector de diol, tal como acetal, tal como p-metoxibenzilideno, butilideno, e aqueles descritos por T. W. Greene em ,!Protective groups in organic synthesis", Harvard University Press, 1980, 2a edição; 26 1.1.a) a reacção de um composto de fórmula estrutural (V) , em que o símbolo W representa H, com um composto de fórmula estrutural formula (VII) ou (VIII), em que o símbolo Wx representa -C(0)-Cl ou a reacção de um composto de fórmula estrutural (V) , em que o símbolo W representa -C(0)-Cl, com um composto de fórmula estrutural (VII) ou (VIII), em que Wi representa H, pode ser efectuada na presença de uma base orgânica, tal como N,N-dimetilamino-piridina (DMAP), trietilamina, piridina. A reacção é efectuada num solvente orgânico inerte, tal como N,N’-dimetilformamida, tetra-hidrofurano, benzeno, tolueno, dioxano, um hidrocarboneto alifático P°li_nai°9'enado, a uma temperatura compreendida entre -20°C e 40 °C. A reacção é dada como completa ao fim de um intervalo de tempo compreendido entre 30 minutos e 36 horas; 1.1.b) a reacção de (V) , em que o símbolo W fórmula estrutural (VII) Wi representa -C (0)-0-Ra, um composto de fórmula estrutural representa H, com um composto de ou (VIII), em que o símbolo em que o símbolo Ra possui as significações presença de um de DMAP e de definidas antes, pode ser efectuada na catalisador, tal como DMAP, ou na presença um acido de Lewis, tal como Sc(0Tf)3 ou

Bi (OTf)3 A reacçao é efectuada num solvente orgânico inerte, benzeno, poli-hai -20°C e interval tal como N,N1-dimetilformamida, tetra-hidrofurano, tolueno, dioxano, um hidrocarboneto alifático ogenado, a uma temperatura compreendida entre iO°C. A reacção é dada como completa ao fim de um o de tempo compreendido entre 30 minutos e 36 horas; 27 1.2) desproteger, facultativamente, os compostos obtidos no passo 1.1.a) ou 1.1.b) de acordo com os métodos descritos por T. W. Greene em "Protective groups in organic synthesis", I-larvard University Press, 1980, 2 a edição. Ácido clorídrico em tetra-hidrofurano constitui o método preferido para remover o grupo protector acetal.

Preparação dos compostos de fórmula estrutural (V) 2) Os compostos de fórmula estrutural (V), em que. - o símbolo W representa H e o símbolo Ri representa OH, o símbolo R2 representa CH3, o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio, o símbolo R4 representa F ou Cl; - ou o símbolo W representa Η, o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou F, o símbolo R4 representa F e os símbolos Ri e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula estrutural (II) O *0 CH:; (II) encontram-se comercialmente disponíveis. 2.1) Os compostos de fórmula estrutural (V), em que o símbolo W represent a r2, R3 e R4 possuem as ser obt idos a par :ti. fórmula estrutural (V) símbolo W representa literatu ra. ou -C00-Ra e os símbolos Ri, ações definidas antes, podem partir dos correspondentes compostos de ialmente disponíveis, em que o .izando métodos conhecidos na 28

Preparação dos compostos de fórmula estrutural (VII) ou (VIII) 3) Os compostos de fórmula estrutural (VII) ou (VIII), em que o símbolo Wi representa Η, o símbolo ?! possui as significações definidas antes e o símbolo representa: - r5-ch (0N02) r6 - [ (CH2) o-X]p- (CH2)q-CH (0N02)R9 em que os símbolos R5, R6, R9, o, p e q possuem as significações definidas antes, podem ser preparados do modo seguinte: 3.1.a) por reacção de um composto de fórmula estrutural (IX) ou (X),

em que o símbolo P representa um grupo de protecção hidroxilo, tal como éteres silílicos, tais como trimetilsililo, terc-butil-dimetilsililo ou tritilo, e aqueles descritos por T. W, Greene em "Protective groups in organic synthesis", Harvard University Press, 1980, 2a edição, o símbolo Pi possui as significações definidas / ante: com um composto de fórmulé HO-Rs-CH (Q)R6 estrutural (XI) ou (XII) (XI) HO-í (CH2)0-X]p-(CH2)q- CH(0)R9 (XII) 29 29 possuem as Q representa um át orno de grupo mesilo em que os símbolos K5, R6, R9, o, p e q significações definidas antes e o símbolo 0N02 ou Qi , em que o símbolo Q1 representa cloro, um átomo de bromo, um átomo de iodo, um ou um grupo tosilo, na presença de um agente de condensação, tal como diciclo-hexilcarbodiimida (DCC) , cloridrato de N'-(3·-dimetilairunopropi 1) -N-eti±carbodiimida (EDAC) , N,N!—carbonil— d-Limidazoie \CDI) , fnculbativamente na or^sença de uma base, por exemplo, DMAP. ^ reacçao e erectuada num solvente orgãnrco inerte anidro, tal ^omo N, h ' drmet r lf ormcimidci., tetra-hidrofurano^ benzeno, tolueno, dioxano, um hidrocarboneto alifático poli-nalogenado, a uma temperatura compreendida, entre -20°C e oU C. A reacção é ciada como completa ao fim de um intervalo de tempo compreendido entre 30 minutos a 36 horas. 3.1.b) Por reacçao de um composto de fórmula estrutural (IX) ou (X), conforme descritas antes, com um composto de fórmula estrutural (XIII) ou (XIV) W3”R5-CH (Q) R6 (XIII) ou W3- [ (CH2) o-X] p- (CH2) q-CH (Q) R9 (XIV) em que os símbolos R5, R6 R9, o, p, q e Q possuem as significações definidas antes e o símbolo W3 representa Cl, Br, I, presença de uma b; orgamca., :omo 1 N,N-diisopropiletil-Lnorgânica, tal como 1 alcalino-terroso, diazabicício[5.4.0]undec-7-eno (DBU) , amina, diisopropilamina, ou uma base carbonato ou hidróxido de um met num. solvente carbonato oe porassio, carbonato de cés orgânico inerte, tal como N, N' -ciimetilf ormamida, tetra-hidrofurano, acetona, metil-etil-cetona, acetonitrilo, um hidrocarbonato alifático poli-halogenado, a uma temperatura compreendida entre -20 °C e 40°C e, de preferência, entre 5°C e 25°C. A reacção é dada como completa ao fim de um intervalo de tempo compreendido entre 1 e 8 horas. Quando o símbolo W3 representa um grupo seleccionado entre cloro ou bromo, a reacção é efectuada na presença de sais de iodo, tais como Kl. 3.1.c) Por reacção de estrutural (IXa) ou (Xa) .m composto de fórmula

(Xa) significaçõe em que definidas antes e o símbolo Rb representa pentafluorofenilo, 4-nitrofenilo ou - (N-succimidilo), com um composto de fórmula estrutural (XI) ou (XII) HO-R5-CH(Q)R6 (XI) HO— [ (CH2) 0-X] P- (CH2) q-CH (Q) Kg (XII) em que os símbolos R 5, Re? Rg? o, p, q e Q possuem as significações definidaLS antes, na presença de um catalisador, tal como DMAP, ou na presença de DMAP e de um ácido de Lewis, tal como Sc (OTf)3 ou Bi (OTf)- A reacçâo é efectuada num solvente orgânico inerte, tal como N,N'-dimetilformamida, tetra-hidrofurano, benzeno, tolueno, dioxano, um hidrocarboneto alifático poli-halogenado, a uma temperatura compreendida entre -20°C e 40°C. A reacçâo é dada como completa ao fim de um intervalo de tempo compreendido entre 30 minutos e 36 horas. ;t rut

Por reacçâo (IXb) ou (Xb) de um composto de fórmula

ÍO-

[ (CH2)0-X]o- (C pCH (Q) R= (xi: era que os símbolos R5, Rõ, R9, o, p, q e Q possuem as significações definidas antes, na presença de uma base orgânica, tal como N,N-dimetilamino-piridina (DMAP), trietilamina, piridina. A reacçâo é efectuada num solvente orgânico inerte, tal como N, N' -dimetilformamida, tetra-hidrofurano, benzeno, tolueno, dioxano, um hidrocarboneto alifático poli-halogenado, a uma temperatura compreendida entre -20 °C e 4 0°C. A reacçâo é dada como completa ao fim de um intervalo de tempo compreendido entre 30 minutos e 36 horas. 3.2) Por reacção do composto obtido nos passos 3.1.a)~ 3.1. d), em que o símbolo Q representa Qi, com uma fonte QO nitrato, -j- al como nitrato de prata , nitrat o de lít lo, nitrato de sódio, nitrato de potássio, nitrato de magnésio, nitrato de cálcio, nitrato de ferro, nitrato de zinco ou nitrato de tetraalquil-amónio (em que o grupo alquilo é um alquilo (C1-C10) ) , num acetonitrilo, tetra-h soivente orgânico adequado, tal como .drofurano, metil-etil-cetona, acetato de etilo, temperatura temperatura

DMF , a reacçao e efectuada, no escuro, a uma compreendida entre a temperatura ambiente e a o.e ebulição do solvente, Em alternativa, a ιγθθ-CÇclo com AqINíOs podo sou ofcct uaaa

SOiD irradiação cte micro-ondas em solventes, tais como acetonitrilo ou THF, a uma temperarura compreendida entre cerca de 100 °C—180 °C, auranue um inuervalo de tempo compreendido entre 1 e 60 minutos. A ronre de nitrato preferida é o nitrato de prata

O 3,3) la^jlLat. ivamente, remover o grupo protector hidroxilo P de acordo com os métodos descritos por T. w. Greene em erotective groups m orgamc synthesis", Harvard University Press, x9«0, 2a edição. A utilização do ião fluoreto constitui o método preferido para remover o grupo éter silíiico. 4) Os compostos ae fórmula estrutural (VII) ou (VIII), em que o símbolo Vh representa Η, o símbolo Pi possui as significações definidas antes e o símbolo Y representa R.5-CH (ON02) - (CR7R8) n—CH (0N02) Rg [ (CHc) o-X]P- (CH2) q-CH (0N02) - (CR7R8)n-CH (0N02) Rg 33 em que os símbolos R5, Rg, R7, R8, o, p e q possuem as significações definidas antes e o símbolo n representa 0, podem ser preparados do modo seguinte: 4.1. a) por reacção de um compo sto de f ó rm tural (IX) ou (X), conforme descrito antes, com um composto de fórmula estrutural (XV) ou (XVI) HO-R5-CH=CH-Rg (XV) HC )-[ (CH2)0-X]D-(CH2)a-CH =CH-R9 (XVI) em que os símbolos R5, o, p, q, X e R9 possuem as significações definidas antes, de acordo com o método descrito no passo 3.1.a); 4.1.b) por reacção de um composto de fórmula estrutural (IX) ou (X), conforme descrito antes, com um composto de fórmula estrutural (XVII) ou (XVIII) w3-r5-ch= =CH-R9 (XVII) W3- [ (CH2) 0-X] p- (CH2) q-CH = :CH- -Rg (XVIII) em que os s ímbolos R.5 , o , P, q, X e R9 possuem significações definida s antes e o símbolo W3 representa Br, I, de acordo com o método descrito η o passo 3 • 1 · b) ; 4.1. c) por reacção de um c omp 0 s 10 de fórmula estrutura 1 (IXa) ou (Xa), confo rme descrito antes, com um composto de fórmula estrutural (XV) ou (XVI) HO-R5-CH-CH-R9 (XV)

HO- [ (CH2) 0 X1 p (CH2) qCf- i=CH-R9 (XVI) em que os símbolos R5, 0, p, q, X e Rg possuem 3. S s i gn i f i ca çõe s de f i n i da s a nt e s, de acordo com o método descrito no passo 3.1.c); 4.1. d) por reacção de um composto de fórmula estrutural (IXb) ou (Xb), conforme descrito antes, com um composto de fórmula estrutural (XV) ou (XVI) HO-R5-CH=CH-R9 (XV) HO-[ (CH2) o—X] p- (CH2) q-CH—CH-Rg (XVI) em que os símbolos R5, o, p, q, X e R9 possuem as significações definidas antes, de acordo com o método descrito no passo 3.1.d); 4.2. a) por reacção de um composto de fórmula estrutural (VIIA) ou (VIIIA)

0N

0~Y' 0“Y!

CHS P;......O {VI IA) (Viu. A) ? em que os símbolos P e Pi possuem as significações def i .nidas ar ites (D O símbolo Y representa: - r5-ch =CH-R9 - L (CH2 ) o X1 p (CH2) qCH = CH-Ra em que os símbolos R5, o, p, q e Rg possuem as significações definidas antes, com uma fonte de nitrato, tal como nitrato de prata, na presença de iodo, num solvente orgânico adequado, tal como acetonitri1o, tetra-hidrofurano, meti1-eti1-cetona, acetato de etilo, DMF, a reacção é efectuada, no escuro, a uma temperatura compreendida entre -20°C e a temperatura o o derivado ebulição do solvente. Sm alt. pode ser efectuada sob solventes, tais como acetomtriio ou τ ernativa, a reacção rradiacrão ·, de micro-ondas, em

Hl compreendida entre cerca de 100°r intervalo de tempo compreendido ent;r , a uma temperatura '"180°C, durante um e 1 e 60 minutos. Em alternat iva, 4.2.b) por reacção de di-hidroxi i ~ . iâçao da ligação dupla do composto de fórmula estrutural (VIIR) ou (VIIIA)/ descrito antes, para se obter um comPOsto (VIIB) ou (VIIIB)

o-v ÍVIUB) (VIIB) pi Possuem as significações em que os símbolos P definidas antes e o símbolo Y" representa: - R5-CH(OH)-CH(OH)-R9 - [ (CH2) 0—X] p— (CH2) q-CH (OH) - CH (OH) ~R9 em que Oo símboros R5, o, p, q e r9 possuem as significações definidas antes, com um reagente para a reacção de di-hidroxilação assimétrica de Sharpless, tal como ADmix alfa ou ADmix beta numa mistura de água/terc-butanol, a uma temperatura compreendida entre -20°C e 30°C e, de preferência, entre -5°C e 5°C. A reacção é dada como completa ao fim de um intervalo de temperatura compreendido entre 1 e 24 horas. 3 6 4.3) Por reacção do composto obtido nos passos 4.2.b) com ácido nítrico e anidrido acético num solvente orgânico adequado, tal como cloreto de metileno, a uma temperatura compreendida entre -50°C e 0°C, em conformidade com métodos bem conhecidos na literatura. 4.4) Facultativamente, desproteger os compostos obtidos no passo 4.2.a) ou 4.3), conforme descrito por T. W. Greene em "Protective groups in organic syntnesis", Harvard University Press, 1980, 2a edição. A utilização de ião fluoreto constitui o método preferido para a remoção do grupo protector éter silílico. 5) Os compostos de fórmula estrutural (VII) ou (VIII), em que o símbolo Wi representa Η, o símbolo Pi possui as significações definidas antes e o símbolo Y representa - Rs-CH (0N02) - (CR7R8) n-CH (0N02) Rg - [ (CH2) 0-X] p- (CH2) q-CH (0N02) - (CR7R8) n-CH (0N02) Rg era que os símbolos R5, P.9, R7, R8, o, p e q possuem as significações definidas antes e o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6, podem ser preparados do modo seguinte: 5.1) por reacção de um composto de fórmula estrutural (IX) ou (X), conforme descrito ante, com um composto de fórmula estrutural (XIX) ou (XX) W3-R5-CH (Q2) - (CR7R8) n-CH (Q2) R9 (XIX) Ο π q2 representa o símbolo w3- [ (CH2) o-X] p- (CH2q-CH (Q2) q-CH (Q2) - (CR7R8)n-CH (Qz) R9 (xx> em que os símbolos R5, Rg, R7, R8, n, o, p e q possuem as s i g n i f i cações de f í nidas antes, 37 37 de acordo ONC'2 ou OH e o símbolo W3 representa Cl, Br, com o método descrito no passo 3.1.b); 5.2) por reacção do composto obtido no passo 5.1), em que o símbolo Q representa OH, com uma fonte de nitrato, de acordo com o método descrito no passo 4.3); 5.3) facultativamente, remover o grupo protector hidroxilo P de acordo com o método descrito no passo 3,3).

Preparação dos compostos (IX), (IXa), (IXb), (x), (xa) © (Xb) 5) Os compostos de fórmulas estruturais (IX), (IXa), (IXb), (X), (Xa) e (Xb), em. que os símbolos P, px e Rb possuem as significações definidas antes, podem ser preparados partindo de ácido vanilico ou de ácido gálico, os quciis se encontram comercialmente disponíveis, de acordo com métodos conhecidos na literatura.

Preparação de compostos (XI)-(XX) 6.1) Os compostos de fórmulas estruturais (XI)-(XIV), em que os símbolos R5, R6, R9, o, p, q e W3 possuem as significações definidas antes e o símbolo Q representa Qlf em que o símbolo Ch possui as significações definidas antes, encontram-se comercialmente disponíveis ou podem ser obtidos de acordo com métodos conhecidos na literatura. 6.2) Os compostos de fórmulas estruturais (XI) - (XIV), em que os símbolos r5, r6, r9, o, p, q e W3 possuem as significações definidas antes e o símbolo Q representa 0N02, podem ser obtidos a partir dos correspondentes 3 8 compostos, em que o símbolo Q representa Qlf por reacção com uma fonte de nitrato, conforme descrito antes. 6.3) Os compostos de fórmulas estruturais (XV) --- (XX), em que os símbolos W3, R5, R9, R7, R8, n, o, p e q possuem as significações definidas antes, encontram-se comercialmente disponíveis ou podem ser obtidos de acordo com métodos conhecidos na literatura.

Exemplo 1 - (composto (1)) Síntese de 4-((2-{(6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-diflúor-11—liidroxi—16,17—16,17—(1—metiletilidenobis(oxi))—10,13— dimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13 ,14,15,16,17-dodeea- hidro-3H-ciclopenta[a]£enantreno-17-il5-2-oxoefcoxi5-carboniloxi)-3-metoxibenzoato de 4-(nitro-oxi)-butilo

(1) A) 4-Hidroxi-3-metoxibenzoato de 4-(nitro-oxi)-butilo o tf > ‘V- ./ v A uma solução de ácido vanílico (5,0 g, 29,73 mmol) em N,N—dimetilformamida (50 mL) adicionou-se carbonato de césio (9,68 g, 29,73 mmol). Arrefeceu-se a mistura de reacção a 0°C e adicionou-se uma solução a 20% de 1-bromo-4-(nitro-oxi)-butano em diclorometano (29, 45 g) . Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 69 horas. Verteu-se a mistura numa solução aquosa de NaH2P04 a 5% e extraiu-se com éter dietílico (3 x 70 mL). Lavou-se as camadas orgânicas com água (70 mL) , secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, coluna de cartuchos F 'LASH 65 +M™ KP- Si 1, eluente: gradie nte de n- hexano/acetat o de etilo a 95/5 (500 mL) até n- hexano/acetat o de etilo a 1/ 1 durante 4000 ml, e depois n- hexano/acetato de etilo a 1/1 (500 mL)). Obteve-se o produto (5,88 g). B) 3-Metoxi-4-((4-nitrofenoxi)-carboniloxi)-benzoato de 4— (nitro-oxi)-butilo

A uma solução de composto A (2,94 g, 10,30 mmol) em diclorometano (50 mL) , arrefecida até 0°C, adicionou-se piridma (1,01 mL, 10,30 mmol) e cloroformato de p-nitrofenilo (2,07 mL, 10,30 mmol). Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 16 horas. Lavou-se a mistura com HC1 aquoso 1 M (2 x 50 mL) , secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida . Purificou-se 0 resíduo por cromatografia rápida 40 (Biotage System, coluna de cartuchos FLASH 65+M™ KP-Sil, eluente: gradiente de n-hexano/acetato de etilo a 93/7 (500 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 1/1 durante 4000 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 1/1 (500 mL)). Obteve-se o produto (3,50 g). C) 4-((2-((6S,9R, 10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-Diflúor-ll-hidroxi-16,17-16,17-(1-metiletilidenobis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo-6/7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H- ciclopenta[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-3-metoxibenzoato de 4-(nitro-oxi)-butilo A uma solução de composto B (1,00 g, 2,28 mmol) em clorofórmio (30 mL) adicionou-se triflato de escândio (0,10 g, 0,22 mmol) e DMAP (0,54 g, 4,56 mmol). Arrefeceu-se a mistura de reacção a 0°C e adicionou-se acetonida de fluocinolonai (0,99 g, 2,28 mmol). Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 28 noras. Diluiu-se a mistura com diclorometano (30 mL), lavou-se com uma solução a 5% de NaH2P04 e depois com uma solução aquosa, saturada de carbonato de sódio. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida, (Biotage System, coluna FLASH 40+M™ KP-Sil, eluente: gradiente de n-hexano/acetato de etilo 9/1 (200 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 3/7 durante 2000 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 3/7 (600 mL)). Obteve-se o produto (0,29 g).

Deixou-se cristalizar o produto a partir de n~ hexano/acetato de etilo. P.f. = 199 °C-2 0 0 °C. 41 41 1H-NMR: (DMSO) ; , δ: 7, 65 (2 H, d) ; 7 ,38 (1H, d) ; 7,27 (1H, d) ; 5, 60 (1H, dm) j ; 5 ,50 (1H, s) ; 5 ,35 (2 H, m) ; 4, 6 0 (2H, t) ; 4,35 (2H, t) ; 4, 20 (1H, m) ; 3, 89 (3H, s) ; 2,7 5- 2,50 (2 H, m) ; 2,25 (1H, m) 1 r 2 , 0 0 (2 H, m) ; i , 90-1 , 30 (13 H, m) ; 1,15 (3 H, s) ; 0 , , 83 (3 H, • s) ,

Exemplo 2 - (composto (3)) Síntese de 4- ((2-((6S, 9R, 10S, 11S, 13S, 16R, 17S) -6, 9-diflúor-ll-hidroxi-16,17-((1-metiletilideno)bis(oxi))-10,13-dimetil-3-οχο-β,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-3-metoxibenzoato de 5,β-bis(nitro-oxi)-hexilo &i*o

p -4. O ONO, V'""\‘ ••.—ONC... m D) 4-Hidroxi-3-metoxibenzoato de hex-5-enilo

A uma solução de ácido vanílico (0,6 g, 3,56 mmol) em N,N-dimetilformamida (7 mL) adicionou-se diisopropiletil-amina (0,93 mL, o,35 mmol) q 6-bromohex-l-eno (0,71 mL, 5,35 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a 50°C durante 8 horas, h, vaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Purnicou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, coluna BLhSh 4 0-*-Μϊμ KP-sil, eluente: gradiente de n- 42 hexano/acetato de etilo a 95/5 (200 mL) até n-hexano/ /acetato de etilo a 7/3 durante 2000 mL e depois n-hexano/ /acetato de etilo a 3/7 (400 mL) ) . Obteve-se o produto (0,59 g) . E) 4-(terc-Butildimetilsililoxi)-S-metoxibenzoato de hex~5-enilo

A uma solução de composto D (1,16 g, 4,64 mmol) em N,N-dimetilformamida (30 mL) adicionou-se imidazole (1,18 g, 17,40 mmol) e terc-butildimetilcloro-silano (1,31 g, 8,7 mmol). Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 12 horas. Verteu-se a mistura numa solução de água (50 mL) e extraiu-se com éter dietílico (3 x 50 mL). Secou-se as camadas orgânicas secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, coluna FLASH 4 0+M™ KP-Sil, eluente: n-hexano/acetato de etilo a 95/5). Obteve-se o produto (1,56 g). F) 4-(terc-Butildimetilsililoxi)-3-metoxibenzoato de 5,6-bis(nitro-oxi)-hexilo

MeG

ONO, “ONO, A uma solução de composto E (1,4 g, 3,97 mmol) em acetonitrilo (30 mL) adicionou-se nitrato de prata (0,8 g, 4,77 mmol). Arrefeceu-se a mistura de reacção a -15°C e 4 3 adicionou-se iodo (1,21 g, 4,77 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a -15°C durante 20 minutos. Aumentou-se a temperatura até 25°C e adicionou-se iodo (2,7 g, 15,9 mmol). Aqueceu-se a mistura de reacção até 100°C durante 60 minutos, sob irradiação de micro-ondas. Arrefeceu-se a mistura resultante, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, coluna FLASH 40+M™ KP-Sil, eluente: gradiente de n-hexano/acetato de etilo a 9/1 (400 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 7/3 durante 2000 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 7/3 (400 mL)). Obteve-se o produto (1,19 g). G) 4-Hidroxi-3-metoxibenzoato de 5, 6-bis (nitro-oxi) -hexilo

V<

%-J

P A uma solução de composto F (1,19 g, 2,43 mmol) em tetra-hidrofurano (40 mL) , arrefecida até -0°C, adicionou-se uma solução de fluoreto de tetrabutil-amónio 1 M em tetra-hidrofurano (2,43 mL, 2,43 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a 0°C durante 20 minutos. Verteu—se a mistura numa solução aquosa de NaH2P04 a 5% e extraiu-se com acetato de etilo (3 x 50 mL). Lavou-se as camadas orgânicas com água (50 mL), secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, coluna FLASH 40+M™ KP-Sil, eluente: gradiente de n-hexano/acetato de etilo a 9/1 (200 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 1/1 durante 1000 mL, depo i s n-hexano / acet. at o de etilo a 1/1 44 (200 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 4/6 durante 200 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 4/6 (400 mL)). Obteve-se o produto (0,9 g) . H) Carbonocloridrato de 2—((68,9R,10S,11S,13S,16R,17S)—6,9— di£lúor~ll~hidroxi~16,17-((1-metiletilideno)-bis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeea-hidro-3H-cielopenta-[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetilo

F A uma s o 1 u ç cLO de aceto nida de fluocinol on a (1,2 g, 2 r 6 5 ramo 1) e m tet ra -hidr o fura no (24 rnn ), arrefe ci da a u°i p s ob uma at mosf e ra de n2, a d icior iOU ι-se uma s ol u. a o de t ol ueno a 20 % em f o sgéni o (5, 58 mL, 10 ,6 mmol), A! gi tou-se a m 2- s tura de reacç ão a L1 °C dura nte ^ π O w minutos Θ depois à t em peratura ambie ryt* e dur ante 12 hora S * "P p pj q tr p — se o exces S 0 d fosaénio por a· queci mento a 4 0 0 r~* durante 45 S minuto s. E V3. porou-se o so Ivent e sob uma pressão h ip obáric a β U ti lizou-se o p: roduto impuro no pa lSSO subs O ÇJ uente s em q \1 cx lquer pur i f i c a Cã O * 1 4-((2-((68, 9R,10S,11S,138,16R,178)-6,9-Diflúor-ll-hidroxi- 16.17- ((1-metiletilideno)-bis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo- 6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- dodeca-hidro-3H-ciclopenta-[a]fenantreno—17—il)—2—oxoetoxi)—carboniloxi)—3—metoxi— benzoato de 5,6~bis(nitro-oxi)-hexilo 45 45 A uma s o cii c 1 oromet ano (0,21 mL, 1,2 ução de composto H (0,56 g, 1,09 mmol) em (24 mL) aaicionou-se diisopropiletilamina rnmol) , Arrefeceu-se a mistura de reacção a

0°C iicionou-se uma solução de composto G (0,45 g, 1,2 mmol) em diclorometano (3 mL) . Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 12 horas. Evaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, coluna FLASH 4U+M™ KP-Sil, eiuente: gradiente de n-hexano/acetato de et ilo a 8/2 (200 mt) até n-hexano/acetato de etilo a 2/8 du .ran te 24 00 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 2/8 (4 00 mL) ) . Obt eve-sf 2 o produto (0,6/ g) 1H-NMF ^ . ( CDCla) , δ: 7,7 0 (2H, d); 7,30 /1 H, d) ; 7,07 (1 H, d) ; 6 ;,45 (1H, s); 6,38 (1H, dd) ; 5,52- K F 28 (2 H, m) ; 5, 16- 4, 91 (2H, dd) ; 5,04 (1H, d); 4,74 (1H, dd) ; 4,50 (1H, m) ; ' 1,4 3-4 , 35 (3 H, m) ; 3,95 (3H, s) ; 2,60- ^ s 10 (4H, m) ; 1, 90- 1,47 (16H , m) ; 1,2 5 (3í-I,s); 0,95 (3H, s)

Exemplo 3 (composto (5)) Síntese de 4-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-diflúor- ll-hidroxi-16,17-((1-metiletilideno)-bis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantreno-17~il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-3-metoxibenzoato de 2-(2-(2-(nitro-oxi)-etoxi)-etoxi)-etilo 46 Me©. V- d. o.

CH„V O- no*,. ^v|; Π \ 0'"' 15} J) Ácido 4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metoxibenzóico

Ό

Ss \ A um9. soiuçdo οθ acido vemlico ^2, 0 g, il, 8 9 rrimo] ) θιπ N,N-dimetilformamida (50 mL) adicionou-se imidazole (4,04 g, 59, 45 mmol) e terc-but ildimetilcloro-silano (4,48 q, 29, / 2 mmo 1) * Agibou se a mistura de reacçao á ^ enioeirairuna ambiente durante 24 horas. Verteu-se a mistura numa solução de água (70 mL) e extraiu-se com éter dietílico (3 x 70 mL) Secou-se as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-por cromatografia rápida (Biotage System, se o resiauo coiuna

iSH 40 +M™ KP-C18 HS, eluente: gradiente de acetonitrilo/água a 65/35 (600 mL) até acetonitrilo/água a 80/20 durante 1200 mL). Obteve-se o produto (0,70 g). K) 4-(terc-Butildimetilsililoxi)-3-metoxibenzoato de 2— (2— (2-cloroetoxi)-etoxi)-etilo 47

ν*\ J í .r \ 9^\J o --¾ o-

.V A solução de composto J (1,25 g, 4,42 mmol) em diclorometano (60 mL) adicionou-se 2-(cloroetoxi)-etoxi-etanol (0,83 g, 5,75 mmol) e DMAP (quantidade catalítica). Arrefeceu-se a mistura de reacção a 0°C e adicionou-se EDAC (1,10 g, 5,75 mmol). Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 12 horas. Evaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, coluna de cartuchos FLASH 4 0+14™ KP-S.il, eluente: gradiente de n-hexano/acetato de etilo a 9/1 (40 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 6/4 durante 2000 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 6/4 (400 mL)). Obteve-se o produto (1,25 g). L) 4-(terc-Butildimetilsililoxi)-3-metoxibenzoato de 2-(2-(2-nitro-oxietoxi)-etoxi)-etilo svíêO,

V—o (1,53 9r 3,54 mmo I) em iodeto de sódio rí ir g, a de reacção a té 12 A Cp

A uma solução de composto acetonitrilo (45 mL) adicíonou-s 21,24 mmol). Aqueceu-se a mist durante 20 minutos, sob irradiação de micro-ondas. Arrefeceu-se a mistura resultante, filtrou-se e removeu-se o solvente sob pressão reduzida. A uma solução do resíduo em acetonitrilo (45 mL) adicionou-se nitrato de prata (2,04 g, 14,16 mmol). Aqueceu-se a mistura de reacção a 120°C 48 durante minutos, s ob irradiação cie micro-ondas.

Arrereceu se a mistura, resultante, filtrou-se o removeu-se o solvente sob pressão reduzida. Purificou-se o residuo por cromatograf ia rápida (Biotage System, coluna FLASH 40+MrM KP-Sil, eluente: gradiente de n-hexano/acetato de etilo a 9/1 (600 mL) até n-hexano/aceta.to de etilo a 6/4 durante 2000 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 6/4 (400 mL)). Obteve-se o produto (1,37 g). M) 4-Hidroxi-3-metoxibenzoate de 2-(2-(2-nitro-oxietoxi)-etoxi)-etilo

MeO, N~—^ A uma solução de composto L (1,10 g, 2,4 minol) em t-etra-hidrofurano (40 mL) , arrefecida a -0°C, adicionou-se uma solução de fluoreto de tetrabutil-amónio 1 M em tetra-hidrofurano (2,4 mL, 2,4 mmol). Agitou-se a mistura de teacção a 0°C durante 20 minutos. Verteu-se a mistura numa solução aquosa de NaH2P04 a 5% (100 mL) e extraiu-se com ucetato de etilo (3 x 50 mL), Lavou-se as camadas orgânicas Corr> água (100 mL) , secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo

Por cromatogra 4 0 +M™ KP-Sil, fia rápida (Biotage System, coluna eluente: gradiente de n-hexano/acet FLASí to de 1/1 1/1 :o de et •ilo a 9/1 (600 mL) até n-hexano/; durante 2000 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a (400 mL)). Obteve-se o produto (0,76 g). 49 Ν) 4-((2-{(6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-Diflúor-ll-hidroxi- 16.17- ((1-metiletilideno)-bis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo- 6.7.8.9.10.11.12.13.14.15.16.17- dodeca-hidro-3H-ciclopenta-[a]fenanfcreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-3-metoxi-benzoato de 2-(2-(2-(nitro-oxi)-etoxi)-etoxi)-etilo A uma solução de composto H (0,508 g, 0,98 mmol) em diclorometano (15 mL) adicionou-se diisopropiletilamina (0,18 mL, 1,06 mmol). Arrefeceu-se a mistura de reacçâo a 0°C e adicionou-se uma solução de composto M (0,37 g, 1,08 mmol) em diclorometano (3 mL) , Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 12 noras, avaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Purincou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage Syscem, coluna FLASH 40+M™ KP-Sil, eluente: gradiente de n-hexano/acetato de etilo a 8/2 (200 mL) até acetato de etilo a iu0% aurante 2400 mL e depois acetato de etilo a 100% (400 mL)), Ooteve-se o produto (0,70 g). 1H-NMR: (CDCls) , δ: 7,70 (2H, d) ; 7,30 (1H, d) ; 7, 0 7 (1H, d) ; 6, 45 (1H, s) ; 6,38 (1H, dd) ; 5,52- 5,32 (1H, m 0 ; 5, 15- -4, 91 ( 2H, dd) ; 5,04 (1H, d); 4, 57-4,49 (4 H, m) : 4, 41 (1H, m) ; 3 ,95 (3H, s) ; 3,84 (2H dd)} 3, 78 (2H, dd) ; 3, 68 (4H, m) ; 2,60-2 ,10 (4 H, m); 1 , 90 -1,47 ( 10 H, m) ; 1, 2 5 (3H, s) ; 0, 95 (3H, s) .

Exemplo 4 (composto (6)) Síntese de 3-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-diflúor-ll-hidroxi-16,17-((1-metiletilideno)bis(oxy))~10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-4,5-di-hidroxibenzoato de 4-(nitro-oxi)-butilo Ο.

Vo ΟΝΟ, CHÍ Ι| ϊ ^ ,,-¾ - 'v'·" i ífj

OH

o. 0 \L mj A- '0·.^ ”"O

V0.HO (6) O) 7-hidroxi-2-(4-metoxifenil)benzo[d][1,3]dioxole—5—

A uma suspensão de gaiato de metilo (10 g, 54,3 mmol) em tolueno (25 mL) adicionou-se ácido p-tolueno-sulfónico (29 mg) e dímetílacetal de p-anisaldeído (11,56 mL, 67,88 mmo 1) • Manteve-se a mistura de rea cção 3.0 refl- uxo durante 1 r 5 ho L· ci S f S O -O remoção contí nua de 3CJU3. L 2 1—| H iu-se a mis tu ra com diclorometano (70 ml \ J ) f lavou -se com uma solução aquos a saturada de MaHC03 ( 10 0 mL) 0 extr aiu -se com aceta to de etilo (3 x 5 0 mL) . Lavou-se 3 cama·: da orgânica com água (100 mL), secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Deixou-se cristalizar o resíduo a partir de n-hexano. Obteve-se o produto (8,6 g) . 51 P) Ácido 7-hidroxi-2-(4-ntetoxifenil)-benzo [d] [1,3] dioxole-5-carboxílico

MeO A urna suspensão de composto 0 (8,6 g, 2 8,41 mmol) em água/etanol a 5/95 (260 mL) adicionou-se hidróxido de sódio (2,5 mL, 62,5 mmol) . Lavou-se a mistura de reacção ao refluxo durante 15 horas. Evaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Dissolveu-se o resíduo em água (150 mL) e extraiu-se com acetato de etilo (100 mL) . Acidificou-se a camada aquosa até ρΗ 4 com HC1 aquoso 1 N e extraiu-se com acetato de etilo (6 x 50 mL), Secou-se as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Utilizou-se o produto impuro (5,78 g) no passo subsequente sem qualquer purificação. Q) 7-Hidroxi-2-(4-metoxifenil)-benzo[d][1,3]dioxole-5- carboxilato de 4-(nitro-oxi)-butilo

A r ima solo ição de compost o P (5,78 g, o n Z u , 05 mmol) em N, N- dime t ilf orm, amida (50 mL) a d i c i ο η o u - s e i CU irbonato de cé s i o ( b, o z g, 20, 05 mm ol) . Arrefeceu-se a mistura de re ac ção a 0°C e adie :ionou- -se o ima sol u ç a. o a 20% de 1-bromo- 4- / \ itro -oxi) -bi jtano O rpi .---i - i L l Ο-d. .clor ometano (19,8 5 g) . Agitou- -se 52 a mistura de reacçâo à temperatura ambiente durante 40 horas. Verteu-se a mistura numa solução aquosa de NaPpPCn a 5% e extraiu-se com éter dietilico (2x70 mL). Lavou-se as camadas orgânicas com água (50 mL) , secou-se sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resídr io por cromatografi a rápida (Biotage System, cartucho SNAP de sílica 100 g. eluente: gradiente de n- hexano/ac etato de etilo a 9/1 (2 0 0 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 1/1 durante 1200 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 1/1 (400 mL)). Obteve-se o produto (4,36 g). R) 7—((2—{(6S, 9R,1QS,11S,13S, 16R,17S)-6,9-Diflúor-ll-hidroxi-16,17-((l-metiletilideno)-bis(oxy))-10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8, 9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeea-hidro-3H-eiclopenta-[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-2-(4-metoxi~ fenil)-benzo[d][1,3]dioxole-5-carboxilato de 4-(nitro-oxi)-butilo OHCk

O cu (0, 0 0 c MO, l F \ O'' O GM» i 0-"^, o

O V OMs? A uma solução de composto Q (0,519 g, 1,2 8 ramol) em orometano (13 mL) adicionou-se diisopropiletilamina 79 mL, 1,28 mmol). Arrefeceu-se a mistura de reacção a e adicionou-se uma solução de composto H (0,6 g, 1,16 53 inmol) em diclorometano (3 mL) . Agitou-se a mistura de reacção à temperatura, ambiente durante 16 horas. Evaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, cartucho SN AP de sílica 100 g, eluente: gradiente de n-hexano/ /acetato de etilo a 9/1 (200 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 3/7 durante 1200 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 3/7 (400 mL)). Obteve-se o produto (0,979 g). 3-((2-((6S,9R,10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-Diflúor-ll-hidroxi-16,17-((1-metiletilideno)-bis(oxi))-10,13-diraetil-3-oxo-6, 7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta-[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-4,5-di-hidroxibenzoato de 4—(nitro—oxi)—butilo 1ΤΊ 1” ’ rou-Sí s sob P ressão reduzida. r ' croma' t", O Cj uT 3. £ í d rápida (Biotage ci :omat ogra.fi a -C cí.p j. Q3. (Biotage >í 1 ica 1 00 g, eluente: gradiente a 5/95 (200 m L) até acetona/ :;e 900 mL e depois acetona/ te 600 mL). Obteve-se o produto 51 (2 H, dd); 7, 14 (1H, d) } o, 4 / , 52 -5,32 (1H, m) r 3,24“ -4,93 (2H, > 77 ΓΊ f t) : 4,43-4,3 3 (3H, m); 2,54- A uma solução de composto R (0,97 g, 1,0 9 mmol) em tetra-hidrofurano (22,4 mL) adicionou-se HC1 aquoso 1 N (22,4 mL) , Agitou-se a mistura de reacção à temperatura ambiente durante 17 horas. Evaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Extraiu-se o resíduo com. acetato de etiio (2 x 30 mL) . Secou-se as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio e coi de acetona/diclorometano /diclorometano 2/8 dura /diclorometano a 3/7 dur; (0,344 g) . 54 2,17 (4 Η, m); 2,00-1, 65 (8Η, m); 1,53 (3H, s); 1,47 (3H,s); 1,25 (3H, s) ; 0,94 (3H, s) .

Exemplo 5 - (composto (10)) Síntese de 3-((2-((9R,1QS,11S,13S,16R,17S)-9-£lúor-ll-hidroxi~16,17-((1-metiletilideno)-bis(oxy))-10,13-dimetil-3-οχο-β,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-earboniloxi)-4,5-di-hidroxibenzoato de 4-(nitro-oxi)-butílo í ο Γ \v-o

Jj

(10) S) Carbonocloridrato de 2- ( (9R,10S,11S,13S,16R, 17S)-9-flúor-ll-hidroxi-16,17-((1-metiletilideno)-bis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta-[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetilo

O

55 A uma solução de acetonida de triancinolona (3 g, 6,9 rrunol) em tetra-hidrofurano (33 mL) , arrefecida a 0°C e sob uma atmosfera de N2, adicionou-se uma solução de fosgénio a 205 em tolueno (21,8 mL, 41,4 mmol). Agitou-se a mistura de reacção a U°C durante 1 hor a e depois à temperatura ambiente durante 17 horas. Remo veu-se o excesso de fosfagénio por aquecimento a 40°C durante 30 minutos. Evaporou-se o solvent e sob uma pressão hipobárica. Utilizou-se o produto impuro no passo subsequente sem qualquer purificação. T) 7- ((2- ((9R, 10S, 11S, 13S, 16R, 17S) -9-Flúor-ll-hidroxi-16,17-((1-metiletilideno)-bis(oxy))-10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8,9, 10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]-fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-2-(4-metoxi-fenil)-benzo[d][1,3]dioxole-5-carboxilato de 4-(nitro-oxi)-butilo ONO,

V-G O” HOi V,·- tr- /.....o 'γ' A uma s o 1 ução de composto Q (0,583 g, 1,32 ramo 1.) em diclorometano (14 mL) adicionou-se diisopropiletilamina (0,231 mL, 1,32 mmol). Arrefeceu-se a mistura de reacção a 0°C e adicionou-se uma solução de composto S (0,6 g, 1,2 5 6 mmol) em diclorometano (3 mL) . Agitou-se a mistura cie reacção à temperatura ambiente durante 16 horas. Evaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, cartucho SN AP de sílica 100 g, eluente: gradiente de n-hexano/ /acetato de etilo a 9/1 (200 mL) até n-hexano/acetato de etilo a 3/7 durante 1200 mL e depois n-hexano/acetato de etilo a 3/7 (400 mL)). Obteve-se o produto (0,819 g). U) 3-((2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-Flúor-ll-hidroxi-16,17- ((1-metiletilideno)-bis(oxy))-10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8,9, 10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]-fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-4,5-di-hidroxi-benzoato de 4-(nitro-oxi)-butilo A uma solução de T (0,81 g, 0,93 mmol) em tetra-hidrofurano (19,5 mL) adicionou-se HC1 aquoso 1 N (19,5 mL). Agitou-se a mistura de reacção ã temperatura amoiente durante 18 horas. Evaporou-se o solvente sob uma pressão hipobárica. Extraiu-se o resíduo com acetato de etilo (2 x 30 mL). Secou-se as camadas orgânicas sobre sulfato de sódio e concentrou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o resíduo por cromatografia rápida (Biotage System, purificação por cromatografia rapida (Biotage System, cartucho SNAP de sílica 100 g, eluent e: gradiente de acet ona/di cloromet ano a 5/95 (200 mL ) até aceton — / a./ / d i c 1 o r o metano a 3 / 7 du r ante 900 mL e depois aceton a/ /diclorometano a 3/7 (200 mL) . Obteve-se o produto (0,2 45 uí-NMk : (CDC13) , δ: 7,51 (2 H, dd); 7,23 (1H, d) ; 6,38 (1H, s); 6,1 8 (1H, dd) ; 5,21-4,90 (2H, dd) ; 5,03 (1H, d); 4,53 (2H, t) : 4,41- 4,32 (3H, m); 2,69-2,35 (4H, m) ; 2,00-

4,53 (2H 57 1,65 (1 OH, m) ; 1,53 (3H, s); 1,45 (3H,s); 1,24 (3H,s); 0,94 (3H, s) .

Exemplo 6 - (composto (17)) 4-((2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-Flúor-ll~hidroxi-16,17-((1-metiletilideno)-bis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo-6,7,8,9, 10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]-fenantreno-17—il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-3-metoxibenzoato de 2-(2-(2-(nitro-oxi)-etoxi)-etoxi)-etilo p // .—o O :i 1 >···<> V—x. * ··" \ „ ono,

, fiT a?) 0 composto foi sintetizado utilizando o procedimento descrito no exemplo 3, partindo do composto S e do composto M. iH-NMR: (CDC13) , δ: 7,71 (2H, d) ; 7,26 (1H, d) ; 7 ,15 (1H, d) ; 6, 31 (IH, dd) ; 6, 12 (1H, s) ; 5, 12 (1H, d) ; 4 , 91 (1H, d) ; 5, 01 (2 H, d) ; 4,56 (2H, m) ; 4, 49 (2 H, t) : 4 , 40 (1H, m) ; 3, 95 (3 H, s) ; 3,79 (2 H, t); 3,76 (2H, m) ; 3 , 67 (4H, m) ; o ^ / 65 -2,35 (4H, m) ; 2,15- -2,00 (1H, m) ; 1, 92- -1 ,84 (1H, m) ; 1, 72 -1, 55 (2H, m) ; 1,51 Í3H, s); 1,45 (3H, s); 1,25 (5H, m) f 0, 93 (3H, s) .

Exemplo 7 - (composto (18)) 4-((2-((9R,10S,11S,13S,16R,17S)-9-Flúor-ll-hidroxi-16,17-(1-metiletilideno-bis(oxi))-10,l3-dimetil-3-oxo-6,7,8,9, 10,11,12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]-fenantreno-17~il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-3-metoxibenzoato de 4-(nitro-oxi)-butilo ftíeO.

0 composto foi sintetizado utilizando o procedimento descrito no exemplo 1, partindo de acetonida de triancinolona Θ do comp osto B. 1H - NI' ΛΏ . / . v CDCI3) , δ: 7,65 (2H, m) ; 7,2 6 (1H, d) ; 7 ,17 (] -H, d) ; 6, 4 0 (1H, dd) ; 6,10 (1H, s); 5,11- 00 (2H, d d) ; 4, 99 (1H, d) ; (2 H, t); 4,37 í 2 H, t); 3,93 (311, b } f 2, -7-1 -2,30 (5 H, m) ; 2,00- -1,50 ( 6H, m) ; 1,87 (4H, m) ; 1 , 50 (2 m, s) ; 1,41 (3H, : 3) ; 1, r22 (3H, s) ; 0,92 (31 1, s) .

Exemplo Fl: ensaio do tónus vascular

Compostos de teste

Compost 0 (D , Composto (3) , Composto (5) , Composto (6) , Composto (10) Composto (18) descrito no Ex. 5 descrito no Ex. 7 des c r i 10 no Ex. i des ,·—> V" Ί Ί" t, j__L 'o no Ex. 2 des cri +c 0 no Ex. 3 des crito n 0 Ex . 4

Compostos de referência - Acetonida de fluocinolona (FC) - Acetonida de triancinolona (TAAC)

Testou-se in vitro a aptidão dos compostos da invenção para induzir o relaxamento dos vasos era comparação com compostos precursores, em preparações de aorta torácica de coelho isolada (Wanstall J.C. et al., Br. J. Pharmacol., 134: 463-472, 2001), Utilizou-se coelhos da Nova Zelândia machos (1,8-2 Kg). Anestesiou-se os animais com tiopental de sódio (50 mg/kg, iv) , sacrificou-se por sangramentos, depois abriu-se o tórax e dissecou-se a aorta. Imediatamente, colocou-se as aortas em tampão de Krebs-HEPES (pH 7,4; composição em rnM: NaCl 130,0, KC1 3,7, NaHCOa 14,9, KH2P04 1,2, MgS04 · 7H20 1,2, glicose 11,0, HEPES 10,0, CaCl2*2H20 1,6) e cortou-se em segmentos anelares (4-5 mm em comprimento). Colocou-se cada anel em 5 mL de banho para tecidos carregado com tampão de Krebs-HEPES (37°C), arejado com 95% de 02 e 5% de C02, e depois ligou-se a um transdutor de força (Grass FT03), ligado a um sistema BIOPAC MP150 para medi r a tensão isométrica2 . Deixou-se as preparações atingirem 0 equilíbrio durante 1 hora a uma tensão de repouso de 2 g, com mudança do tampão a buda 15 minutos, e depois estimulou-se por exposição a KCI 90 mM (3 vezes), com lavagens intervenientes. Após se atingir o equilíbrio, pré-contraiu-se submaximalmente os anéis com metoxamina (3 uM) e, quando a contracção atingiu um estado estacionário, obteve-se uma curva cumulativa de concentração-resposta para os compostos de teste. Os intervalos de tempo entre as doses foram baseados no tempo 60 necessário para se atingir uma resposta em estado estacionário.

As respostas aos compostos de teste foram expressas como uma percentagem da contracção residual e foram representadas graficamente contra a concentração do composto de teste. Os valores de CE50 (aqui, o termo CE.5Q designa a concentração que produz 50% do relaxamento máximo do composto de teste) foram interpolados a partir destes gráficos.

Conforme apresentado no quadro 1, os compostos de teste foram capazes de induzir o relaxamento de um modo dependente da concentração.

Quadro 1: ensaio do tónus vascular Composto de teste CEso (μΜ) FC sem efeito Composto (1) 2,2 Composto (3) 0,21 ± 0,07 Composto (5) 0,83 ± 0,25 Composto (6) 1,44 ± 0,41 TAAC sem efeito Composto (18) 1,56 Composto (10) 2,35 ± 0,98

Exemplo F2

Avaliação da eficácia dos compostos da invenção num modelo in vivo de derrame induzido com VEGF em ratos. O factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) activa as vias comuns de derrame vascular associadas a diversos processos patológicos, incluindo edema macular diabético (DME). 61

Compostos de teste: - Composto (1), descrito no exemplo 1 de composto

Acetonida de fluocinolona (FC) : referência do composto (1) - Composto (18) , descrito no exemplo 7 composto de - Acetonida de triancinolona (TAAC) referência do composto (18) . com .as % tópico para se ver a

Anesteaiou-se ratos Sprague Dawley machos (~250 q; laboratório Charles River) por inalação com isoflurano e aplicou-se, por via tópica, uma gota de tetracalna a 0,5% nos olhos. Efectuou-se a dilatação das pupil cloridrato de ciclopentolato a agulha para guiar a injeção intravitreal. Preparou-se factor de crescimento endotelial vascular de rato recombinante (VEGF; 100 ng/olho) ou VEGF a 100 ng/olho mais compostos de teste, em 0,5% de carboximetil-celulose (CMC) em soluto salmo estéril e injectou-se no vítreo com uma agulha de calibre 30 (Xu, Q., et al. Invest. Ophthalmol. Vis. Sei., 42: '/8 9-7 94, 2001). Efectuou-se a comparação dos compostos da invenção com os correspondentes núcleos esteróides para doses equimolares. Por exemplo, para se comparar com acetonida de fluocinolona a 25 e 50 pg/olho, preparou-se o composto (1) a 42,4 e 84,7 pg/olho, respectivamente. Os animais de controlo receberam veículo 0 composto (18) foi preparado de um modo semelhante em conjunto com acetonida de triancinolona, para comparação. O derrame vascular da retina foi medido conforme descrito anteriormente (Xu, Q., et ai. Invest. Ophthalmol. Vj_s. , hz . 7 8 9-/94, 2u0i) . Decorridas cerca de 18 horas apos a injecçâo do& compostos de teste, anestesiou—se os ratos com cetamina (80 mg/kg) e xilazina (4 mg/kg), por via 62 IP. Depois, injectou-se 45 mg/kg de azul de Evans (SB) na veia jugular. Deixou-se circular o corante durante 2 horas. Abriu-se a cavidade torácica e depois efectuou-se a perfusão dos ratos com 1% de formalina em tampão de citrato 0,5 M (pH 3, 5, 3 70 C), através do ventrículo esquerdo. Dissecou-se cuidadosamente as retinas a partir dos olhos enucleados, colocou-se em tubos de Eppendorf previamente pesados, secou-se em vácuo acelerado de um dia para o outro e registou-se os pesos secos. Extraiu-se o azul de Evans por incubação de cada retina em 120 pL de formamida durante CD \—1 horas e 70°C e centrifugação du rante 2 horas a 6000 r .ρ .m. . Mediu-se a absorvência de 6 0 pl de extracto a 62 0 nm e determinou-se a absorvência de referência a 740 nm.

Calculou-se a absorvência líquida por subtracção da referência a 740 nm à absorvência a 620 nm. Efectuou-se também a medição de uma curva padrão de azul de Evans em formamida e calculou-se o derrame de azul de Evans expresso em pL/g/h conforme a seguir apresentado: [EB (ng/mL) x 120 pL χ 1000] / [peso seco da retina (mg) x x tempo de circulação (h) x EB no plasma (ng/mL) x 100] ΠΟ ί O ro ; derrame induzid o por VEGF em 86,1% e 77 -j 0. r o , e (f iguras la e 1b, n = 9, P < 0,05). De uma dose de 10 pç ]/ olho de acetonida de e a sua dose equivalente de composto (18)

Conforme apresentado na figura IA seguinte, a injecção intravítrea de 100 ng de VEGF proporcionou um aumento de 3,5 vezes (n = 17, P < 0,05) na permeabilidade vascular, 18 horas após a in jecção. O tratamento com 25 pg/olho de acetonida de fluocinolona e com. 42,4 pg/olho de composto (1) inibiu o re spect ivament nanei 63 63 o COu uma redução de i ) / , 3 % Θ 34,0%, u ras 2a e 2b). Em todos os casos, a in respecti vame nt e ibição de derrame os compostos da s correspondentes foi semelhante em magnitude para ambos invenção (composto (1) e (18)) e dos seu núcleos esteróides.

Exemplo F3

Avaliação da melhoria do aumento de pressão intraocular (PIO) induzido por esteróides in vivo em ratos pelo composto da invenção.

Compostos de teste: - Composto (1), descrito no exemplo 1

Acetonida de fluocinolona (FC): composto de referência - Análogo des-nitro do composto (1): 4-((2-((6S,9R, 10S,11S,13S,16R,17S)-6,9-diflúor-ll-hidroxi-16, 17-16, 17-(1-metiletilideno-bis(oxi))-10,13-dimetil-3-oxo-6, 7,8,9,10,11, 12,13,14,15,16,17-dodeca-hidro-3H-ciclopenta[a]fenantreno-17-il)-2-oxoetoxi)-carboniloxi)-3-metoxibenzoato de butilo.

Aclimatizou-se ratos castanhos Norway machos (250-275 g; laboratório Charles River) durante uma semana antes das medições da PIO. As medições da PIO de referência com um tonómetro Tonolab (Tiolat Inc) foram efectuadas em ratos conscientes (Pease, Μ, E., et al J. Glaucoma, 15: 512-519, 2006), antes da injecção intravítrea dos compostos de teste. Depois, os ratos foram anestesiados por inalação com isoflurano e aplicou-se topicamente uma gota de tetracaína a 0,5% nos olhos. As pupilas foram dilatadas com 1% de cloridrato de ciclopentolato tópico e 2,5% de fenilefrina hci para se ver a agulha e se guiar a injecção intravítrea de 64 compostos de teste. Efectuou-se a comparação do composto (1) com o correspondente núcleo esteróide e com o análogo des-nitro, para doses equimolares. Por exemplo, para se comparar acetonida de fluocinolona a 25 e 50 yg/olho, preparou-se o composto (1) a 42,4 e 84,7 yg/olho, respectivamente. Preparou-se o análogo des-nitro do composto (1) a 39,1 yg/olho (equivalente a 25 yg de FC). Os animais de controlo receberam veículo.

Calculou-se a média de cinco medições para cada ponto de tempo. .As medições de PIO foram efectuadas uma. e duas semanas apos a injecção intravítrea dos compostos de teste. O valor de referência de PIO nos ratos castanhos Norway for ae 18 mm de Hg. Conforme apresentado na figura 3 seguinte, decorrida, uma. semana após a injecção de acetonida de fluocinolona, a PIO aumentou em 4 mm de Hg com 25 yg/olho e em 3 mm de Hg com 50 yg/olho, respectivamente. Tal manteve-se decorridas duas semanas (p < 0,05). No entanto, a injecção de composto (1) numa quantidade equivalente a 25 ou 50 yg/olho (42,4 e 84,7 yg/olho, respectivamente), não provocou qualquer alteração na PIO decorridas uma ou duas semanas (figura 3) . Numa outra experiência apresentada na figura 4 seguinte, o análogo des-nitro do composto (1) a uma quantidade equivalente a 25 yg/olho (39,1 yg/olho) e acetonida de fluocinolona (FC) a 25 yg/olho provocou um aumento na PIO em comparação com o composto (1) a uma quantidade equivalente a 25 yg/olho (42,4 yg/olho) .

Exemplo F4

Avaliaçao da eficácia de compostos sobre a pressão intraocular, sobre a hemodinâmica ocular e sobre a 65 protecção da retina e avali i nf1amató ri a s em humor aquos endotelina 1 (ET—1) in vi vo Zelândia. Compostos de teste - Compost o (1) do exemplo Acetor lida de fIuocj referência . ação do teor em citoquinas o em isquemia induzida com em coelhos brancos da Nova 1 no lona (FC) : composto de

Sistema e métodos de teste

Para as experiências, utilizou-se vinte coelhos albinos da Nova Zelândia adultos machos com um peso de 2 a 2,5 Kg. Dividiu-se os animais em dois grupos para o tratamento especifico seleccionado. Os procedimentos experimentais estavam em conformidade com os da 'Association for Research in Vision and Ophthalmology Resolution' sobre a utilização de animais e com conformidade com 'Good Laboratory Practice' para a utilização de animais e foram efectuados com a autorização dos regulamentos italianos no que diz respeito à protecção dos animais utilizados para fins experimentais e outros fins científicos (DM 116/1992), bem como em conformidade com os regulamentos da União Europeia (OJ de ECL 358/1, 12/12/1986). Os coelhos foram mantidos em gaiolas individuais, foi-lhes fornecido alimento e água ad libitum. Os animais foram mantidos num ciclo de luz/escuto de 12-12 ! horas numa sala com controlo de temperatura (22 °C- 2 3 0 C) . 0 modelo de isquemia de lesão óptica foi obtido através de injecção, duas vezes por semana, ao long o de 6 semanas, de endotelina-1 (ET -1) 250 nM e 50 0 uL de soluto 6 6

ambos os sia geral 100, 0,05 em 100 pL salino estéril, no corpo vítreo posterior de olhos, utilizando uma cânula lac.rirri.al, sob arreste produzida mg/kg) mai A ace por tiletamina mais zolazepam (Zoletil s xilazina (Xilor a 2%, 0,05 mL/kg), i.m tonida de flucinolona (FC) (0,5 mg/olho de veículo) ou o composto (1) (equivalente a 0,5 mg/olho em 100 μΐ de veículo) foram introduzidos por via intravitreal (IVT), duas semanas após o início do tratamento com ET-1 (T2), num dos olhos, sendo introduzido o mesmo volume de veículo no outro olho. - Pressão intraocular A pressão utilizando um USA), conforme (1992) 55: 73-' medição de intraocular (PIO) foi medida duas vezes dispositivo 'Tono-Pen XL' (Medtronic Solan. descrito pelo grupo de Maren (Exp. Eye Res. 79; Exp. Eye Res. (1993) 57: 67-78), com uma pressão padrão de dois pontos. Dois

investigadores independentes (C.U R. M. utilizando o mesmo tonómetro, efectuaram as medições de PIO.

Os dados apresentados no quadro 2 mostram que o tratamento com ET-1 não modificou a PIO nos coelhos brancos da Nova Zelândia. A acetonida de fluocinolona fez aumentar a pressão intraocular após isquemia induzida com ET-1; pelo contrário, a pressão intraocular após isquemida induzida com ET-1 não sofreu alteração com o composto (1).

Quadro 2: efeito de acetonida de fluocinolona (FC) ou do composto (1) vs, Veículo sobre a PIO. A PIO foi medida antes do tratamento diário com fármaco PIO {mm de Hg) Veículo FC* Veículo Composto 1 Referência 13,00 ± 2,83 13,50 ± 0,17: 12,60 ± 2,01 12,70 ± 1,8S 67

Quadro 2: ereito de acetonida de fluocinolona (FC) ou do composto (1) vs. Veículo sobre a PIO. A PIO foi medida antes do tratamento diário com fármaco PIQ (mm de Hg) Veículo FC* Veículo Composto 1 ET-1 13,50 ± 0,71 13,00 ± 2,83 12,80 ± 1,55 13,30 ± 1,49 I semana 14,00 ± 2,83 15,50 ± 0,71 13,30 ± 1,49 15,30 x 0,95 II semana 14,40 ± 0,71 19,00 ± 0,00 13,60 ± 1,96 15,00 ± 1,33 III semana 15,00 ± 1,41 19,00 ± 1,41 13,40 ± 1,51 13,50 ±1,08 IV semana 13,50 ± 1,27 20,80 ± 0,71 14,20 ± 2,15 13,20 ± 1,23 V semana 13,30 ± 1,77 22,20 ± 0,00 14,10 ± 2:64 15,00 ± 2,45 VI semana 13,00 ± 1,56 21,10 ± 0,00 14,80 ± 2,90 15,22 ± 1,09 * p < 0,001 vs. Veículo (N = 10). - Electrorretinograma (ERG) 0 electrorretinograma (ERG) foi efecti ao sob condiçoes de referência (TO), antes do início do tratamento com fármaco (T2) e no final do tratamento com fármaco (T6) . Foram efectuados exames com lâmpada de fenda e exames íundoscópicos em. todos os olhos antes do início do estudo. Os animais que apresentaram opacidade corneai ou das lentes ou lesão retinal antes do estudo foram excluídos. Foi aplicada anestesia tópica utilizando uma gota de cloridrato de oxibuprocaína a 0,2% (Novesine, Sandoz). Os olhos foram dilatados por meio da aplicação por via tópica de tropicamida (1%), adaptados ao escuro pelo menos durante 2 horas e registados os ERG padrão em ambos os olhos utilizando eléctrodos corneais. Os eléctrodos de referência e de fundo foram feitos de agulhas cirúrgicas de aço inoxidável e foram inseridos nos ouvidos. Os sinais de ERG foram registados utilizando um dispositivo Retimax (CSO, Florence, Itália). Foram registadas a resposta escotópica adaptada ao escuro (resposta rod) e a resposta escotópica 68 flash (cone ERG fotópico). Os flashes variaram em termos de intensidade desde -2,50 até + 0,4 iog scot cd s/rri2. Foi determinada uma média de três ERG em separado para cada o-i-ho * A amplxtude (uV) das ondas a e b foi calculada parei cada passo. Os valores de referencia foram comparados com a resposta obtida em T2 e no final do tratamento (T6). O tratamento com ET-1 reduziu significativamente a amplitude do cone ERG fotópico (T2, p < 0,05 vs. TO e T6 p < 0,05 vs. Tu). Os resuxraaos apresentados no quadro 3 mostram que os olhos tratados com acetonida de fluocinolona (FC) ou com composto (1) exibiram uma redução menos significativa (p < 0,05 vs. Veículo) na amplitude da onda de ERG do que aqueles tratados com veículo. Além do mais, o composto (1) foi ligeiramente mais eficaz do que a acetonida de fluocinolona.

Quadro 3: efeito do composto (1) ou de acetonida de fluocinolona (FC) vs. Veículos sobre o cone ERF fotópico, após o tratamento com ET-1.

Cone ERG fotópico (amplitude (yV))

Referência Veículo FC Composto (1) 147,41 ± 7,43 68,85 ± 6,41 136, 34 ± 11,98 140, 94 ± 6,22 p < 0,001 vs. veículo (N=8). - Hemodinâmica ocular

As avaliações hemodinâmicas foram efectuadas utilizando um eco-color-doppler 'DynaView TM II SSD-1700' (Aloka. Holding Europe AG, Milão, Itália) . Todos os animais foram submetidos a investigação com imagiologia por doppler colorimétrica (CDI) antes da injecção de ET-1 (T0), antes do início da instilação de fármaco (T2) e no final do 69 tratamento com fármaco (T6). Foi prestada uma atenção particular à avaliaçao da circulação da artéria oftálica e da artéria ciliar. As velocidades de fluxo sanguíneo foram medidas para cadci vaso 0 q indrce d.e resistência o.e Pourcelot (IR) foi calculado (Galassi F. et aí., Acta Opht. Scand Suppl. (2000) 37-38).

Os dados apresentados no quadro 4 mostram que a acetonida de fluocinorona fez aumentar significativamente (p < U,00i vs. veículos) o índice de resistência na artéria oftálmica, indicando uma diminuição na perfusão sanguínea; este efeito não foi evidente no tratamento com o composto u; .

Quadro 4: efeito do composto (1) ou de acetonida de nuocmolona (FC) vs. veiculo sobre a hemodinâmica ocular, avaliado como índice de resistência índice de resistência Referência uecorridas 2 semanas Decorridas 6 semanas Veículo 0,46 ± 0,07 0,44 ± 0,06 0,48 ± 0,05 FC 0, 45 ± 0,0 6 0,45 ± 0,06 0, 60 ± 0,04 Composto (1) 0,43 ± 0,06 0,43 ± 0,08 0,41 ± 0,0 3 * p < 0,001 vs. veículo ( N = 10). “ Citoquinas inflamatórias em humor aquoso

Amostras de humor aquoso foram recolhidas a partir de rruídos da camara anterior e posterior de cada olho antes da administraçao de ET-1 (T0), antes da administração de composto (1) ou de acetonida de fluorocinolona (T2) e no final dos tratamentos (T6). O mesmo volume de soluto salino roi re-introduz ido de cada vez. As amostras de humor acruoso > r\

/ V foram congeladas imediatamente a -80°C até ao momento da sua utilização.

Determinou-se o factor de necrose tumoral (TNFa) e a interleucma 6 (In-6) no humor aquoso com um estojo comercial, utilizando um método ELISA (Amersham Pharmacia Biotech). As concentrações mínimas detectáveis foram de 0,10 pg/mL para TL —6 e TNFa. 0 co eficiente de variação inter-ensaio foi de 0, —i q, l '0 para todos os ensaios. Os dados apresentados no quadro 5 mostram que o tratamento com ET—1 fez aumentar significativamente o teor em TNFa, IL-6 e VEGF nas amostras de humor aquoso e que o composto (D contrariou estes efeitos de um modo mais eficaz do que a acetonida de fluocinolona (FC).

Quadro 5: efeito do composto (1) e de acetonida de fluocinolona (FC) sobre o teor em TNFa, IL-6 e VEGF em humor aquoso. TNFa (pg/mL) VEGF (pg/mL) iL6 (pg/mL) Referência 0,55 ± 0,44 - 0,67 ± 0,4 3 Veículo 27,00 ± 4,30 166,76 ± 4,54 20,47 ±2,97 FC 20, 76 ± 1,74 114,58 ± 5,61 16,82 ± 0,98 Composto (1) 18, 93 ± 0, 98 105,79 ±1,98 15,70 ± 11 73 * p < 0,001 vs, veículo (N=6). - Protecção de retina: análise morfológica

Efectuou-se a enucleação dos olhos de cada animal, removeu-se a córnea e o cristalino e fixou-se os olhos em paraformaldeído. Depois, desidratou-se amostras com concentrações crescentes de álcool (50o-75°-95o-100°)· Após o tratamento com álcool a 95°, dividiu-se os olhos em duas partes seguindo um plano longitudinal desde a córnea até à as amostras em Θ SPG S SU ΓΓ3. com microscópicos aplicada a um e de 40x. nas as análises inserção do nervo óptico. Depois, embebeu-se parafina. Manchou-se secções com 8 mm de hematoxilina-eosina. Registou-se os campos através de uma câmara de digitalização microscópio de luz com uma objectiva de 20x imagens digitalizadas foram efectuadas morfológicas cio tecido da retina. A análise dos tecidos de retina mostrou que o tratamento com ET-1 de longo prazo induziu alterações morfológicas profundas, confirmando assim a lesão funcional observada nas medições de ERG. Estas alterações morfológicas não estavam presentes de um modo semelhantes em animais tratados com o composto (1), ao passo que acetonida de fluocinol ona não foi eficaz.

Descrição minuciosa das figuras

Figura la: derrame retinal medido em ratos induzidos com VEGF: controlo, tratados com composto (1) e com o seu correspondente núcleo esteróide, acetonida de fluocinolona (FC)

Figura 1b: percentagem de inibição resultante do derrame por FC e pelo composto (1), obtida a partir da figura la

Figura 2a: derrame retinal medido em ratos induzidos com VEGF: controlo, tratados com composto (18) e com o seu correspondente núcleo esteróide, acetonida de triancinolona (TA. AC)

Figura derrame pelo esteróide, acetonida 2b: percentagem de inibição resultante do composto (18) e pelo seu correspondente núcleo de triancinolona (TAAC), obtida a

Partir da

Figura 3: efeito in vivo sobre a IPO dei. administração por via intravítrea de acetonida de fluocinolona versus composto (1), em ratos castanhos Norway

Figure 4: efeito in vivo sobre a IPO da administração por via intravítrea de acetonida de fluocinolona (FC) , composto (1) e análogo des-nitro do composto (1) , em ratos castanhos Norway

REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o EPG não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição • EP 0929565 A [0004] • EP 1475386 A [0005] • WO 0364443 A [0006] • WO 07025632 A [0007] [0019]

Literatura citada na descrição, para além das patentes de invenção • F, GALASSI et al. Br J Ophthalmology, 200 6, vol. 90, 1414-1419 [0008] • T. W. GREENE. Protective groups in organic synthesis.

Harvard University Press, 1980 [0025] [0027] • WANSTALL J.C. et al. Br. J. Pharmacol. , 2001, vol. 134, 463-472 [0080] • XU, Q. et al. Invest. Ophthalmol. Vis. Sei., 2001, vol. 42, 789-794 [0082] • PEASE, Μ. E. et al. J. Glaucoma, 2006, vol. 15, 512-519 [0085] • Exp. Eye Res., 1992, vol. 55, 73-79 [0091] • Exp. Eye Res., 1993, vol. 57, 67-78 [0091] • GALASSI F. et al. Acta Opht. Scand Suppl., 2000, 37-38 [0094]

Claims (17)

1. ΡΈ" Τ\7ΤΚίΠ Τ Ρ 2k Γ*Γ\Τ? Q xxjui j, V Α 1,¾y a, »q8

   em que o símbolo Ri representa OH, o símbolo R2 representa CH3 ou os símbolos Ra e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula estrutural (II)

   (XX) o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio ou F e o símbolo R4 representa F ou Cl, desde que: quando o símbolo R3 representa OH e o símbolo R2 representa CH3, então o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio; quando os : símbolos Ri e R2, considerado conjunto, representam o grupo de fórmula estrutural então o símbolo R4 representa F; "Λ ζ os símbolos Ri, R2, R3 e R4 estão ligados aos átomos de carbono em 17, 16, 6 e 9 da estrutura esteroidal na posição a ou β; o símbolo R representa:

   (XIX)

   (XV} em que o símbolo Y representa um grupo seleccionado entre: 1) -Rk-CH (0N02) r6 2) -R5-CH (0N02) - (CR7R8) n-CH (0N02) R9 3) - [ (CH2) 0-X] p- (CH2) q-CH (0N02) R9 4) - [ (CH2) 0- (X) ] p (CH2)q-CH (0N02) - (CR7R8)n-CH (0N02)R9 em que o símbolo R5 representa um alquileno (Ci-Ci0) de cadeia linear ou ramificada; o símbolo R6 representa H ou um alquilo (Cb-Cg) de cadeia linear ou ramificada; os símbolos R7 e R8, em cada ocorrência, representam., de um modo independente, H ou um alquilo (Ci-Cg) de cadeia linear ou ramificada; o símbolo Ρ·9 representa Η ou um alquilo (Ci-C6) de cadeia linear ou ramificada; o símbolo n representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6 ; 0 símbolo o representa urn núrnero inteiro compreendido entre 1 e 6; 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 6; o símbolo q representa um número inteiro compreendido entre 0 e 6; o símbolo X representa 0, S ou NRi0, em que o símbolo Rio representa H ou um alquilo (Ci-Cb) e, de preferência, o símbolo X representa 0; excluindo os compostos de fórmula estrutural (I), em que os símbolos Ri e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula estrutural (II)

   o símbolo R4 representa F e o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R representa o grupo de fórmula estrutural (III), em que o símbolo Y representa -R.5-CH (0N02) Rg e o símbolo R6 representa H.
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1/ erri φΐ© ° símbolo R4 representa F, o símbolo R3 representa F, os símbolos R:l e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula estrutural (II); os símbolos Ri, R2#· Ra e R4 estão ligados aos átomos de carbono em 17, 16, 6 e 9 da estrutura esteroidal na posição a. 4
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que o símbolo Y representa: 1) -R5-CH (0N02) r6 em que o símbolo R5 representa um alquileno (Ci-C5) de cadeia linear e o símbolo Rs representa H ou -CH3; ou 2) -R5-CH (0N02) - (CR7Rs) n-CH (0N02) R9 em que o símbolo R5 representa um alquileno (Ci-C6) de cadeia linear, o símbolo R9 representa H, os símbolos R7 e R8, em cada ocorrência, representam, de urn modo independente, H ou CH3 e o símbolo n representa 0 ou 1; ou 3) - [ (CH2) o-X] P- <CH2) g-CH (0N02) R« em que o símbolo R9 representa H, o símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 2 e 4, 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4, o símbolo q está compreendido entre 0 e 4 e o símbolo X representa 0.
4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que os símbolos R:l e R2, considerados em conjunto, representam, o grupo de fórmula estrutural (II), o símbolo R,j representa F e o símbolo P,3 representa um átomo de hidrogénio e os símbolos Ri, R2, r3 e R4 estão ligados aos átomos de carbono em 17, 16, 6 e 9 da estrutura esteroidal na posição a. 5
5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que o símbolo Y representa: 1) -R5-CH(0N02)R6 em que o símbolo R5 representa alquileno (C|-C6) de cadeia linear e o símbolo R6 representa -CH3; ou 2 ) -R.5-CH (0N02) - (CR7R8) n-CH (0N02) R9 em que o símbolo r5 representa um alquileno(Ci-Ce) de cadeia linear, o símbolo R9 representa H, os símbolos R7 e Rg, em cada ocorrência, representam, de um modo independente, H ou CH?1, o símbolo n representa 0 ou 1; ou 3) ~[ (CH2)o-X]p-(CH2)q-CH(0N02)R9 em que o símbolo R9 representa H, o simboro o representa um número inteiro compreendido entre 2 e 4, 0 srmboro p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4, o símbolo q esta compreendido entre 0 e 4 e o símbolo X representa 0. 6. composto de acordo com a reivindicação 1, em que o oímboxo Ri representa Ou, o símbolo R2 representa CH3, o símbolo R3 representa um átomo de hidrogénio, o símbolo R4 representa F e os símbolos RT e R4 estão ligados aos ai.omos de carbono 17 e 9 da estrutura esteroidal na posição α, o srmboro R2 está ligado ao átomo de carbono 16 da estrutura esteroidal na posição β. 6
6. 7. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que o símbolo Y representa: 1) ~R5~CH (0N02) r6 em que o símbolo R5 representa um alquileno (Ci-C6) de cadeia linear e o símbolo R6 representa H ou -CH3; ou 2) -R5-CH (0N02) - (CR7R8) n-CH (0N02) R9 em que o símbolo R5 representa um alquileno(C2-C6) de cadeia linear e o símbolo R9 representa H; os símbolos R7 e R8, em cada ocorrência, representam., de um modo independente, H ou CH3; o símbolo n representa 0 ou 1; ou 3) -[ (CH2)o-X]p-(CH2)q-CH(0N02)R9 em que o símbolo Rg representa H, o símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 2 e 4, 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4, o símbolo q está compreendido entre 0 e 4 e o símbolo X representa 0, 8. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o símbolo Ri representa OH, o símbolo R2 representa CH3, o si mbolo Ra represent : a um át orno de nidrogéni o e o símbolo R4 representa Cl; 0 ^ símbo los Ri e R4 estão ligado s aos átomos de carbono 17 Θ 9 da estruturaL estero idal r 13. posição 0 í 0 o símbolo r2 está liqado ao átomo de carbono 16 cl cl estrutura esteroida1 na posiçãο β. /
7. 9. Composto cie acordo com a reivindicação 8, em que o símbolo Y representa 1) ~R5~CH (0N02) r6 em que o símbolo R5 representa um alquileno (Ci-C6) de cadeia linear e o símbolo R6 representa H ou -CH3; ou 2) -R5-CH (0N02) - (CR7R8) n-CH (0N02) R9 em que o símbolo R5 representa um alquileno(C2-C6) de cadeia linear e o símbolo R9 representa H; os símbolos R7 e R8, em cada ocorrência, representam., de um modo independente, H ou CH3; o símbolo n representa 0 ou 1; 3) -[ (CH2)o-X]p-(CH2)q-CH(0N02)R9 em que o símbolo Rg representa H, o símbolo o representa um número inteiro compreendido entre 2 e 4, 0 símbolo p representa um número inteiro compreendido entre 1 e 4, o símbolo q está compreendido entre 0 e 4 e o símbolo X representa 0,
8. 10. Composto de acordo com a reivindicação 1, seleccionado entre: 8 o θ'" _ O" Q,; f ( JK. T « HOv,.-x, \Λ °-v CH.j '•ir···,· ) -d 4 :F J v· ""'N.-··'*’ F (2 } O jiíteO Q-\ J Cr" "\ o ' V p p-%,0-4,. OSSO, Ν-Λ. * M í: O rt Wk lí ! ' Ô-% J Q-\ 0~^ ch y' çhJ \ V-d ο-' ν I ν.·ΧΛ ,/ o \..-0NiO* H) 9 HO, ,V" r ím P P I (5) O.v / CH. (6) ο· i Ύ~Ό 0-\ J/Cy-\J N°K <i ·"© MeO. £ 9r\J 0-\ -O G OMD* λ, V-w, v-»«? t' 0 /v° t ií r'VA ?'Λ« w ÇH< çhJ Ê / II* J o'" v ϊ„-^ν ;,ν w'*’··' \ '>.....Ci ^ (7)

   Qttô2 / V0Mt^J 10 GH. t θ' o / V--o Μ Ο'-Ν.; | , J ÔH Ο ΗΟ Qy { ; Ο "· {10} χ4-·· \ ÇH.J: ; ) ο"Χ·Υ i Γ"°r\A Λ«ο °κ (12) η Ρ '''a Ύί ; ο ΗΟν,„- ... fl/o·. \|,-1 ο ψΐ Ό -:>'αΙ·4. γ i .1 ρ y^-A^-r-AA' # ΟΝΟ. ?><ο. Ο. / y-o Ο'· "’ \ J/ Ο"·!. VOW qHO Ηϊν οκΐ } ί Ρ ί ÇHJ ' ί.· ·· ,Λ>.....Ο {11} OfíOa 'V-OlíO, Ο' '--λ. ·ν/ Υ-\ ί>"'\· > ΟΗ f ο^Ο &3, ;«Κ,······ .1·:' ο···., · G.Hj I > Ο ,ο-,Ι- Οο,'1— Ϊ 5 F Ο" feteO Ο.....\, // ΡγΆ ο- {13} oí^ío, {14} 11 Õ 0·; Hft

   HO, V. GHJ ϊ 1. p- n ! fj o-........ ©MO* ····'··. .«· · n 0-Ί O. / r w\ ÍH ' o. ÇH X-- ' 'M CHy p(16) CM. O.....'·> O y.-o-y \ í 0--Λ o χ\ ff9"\/%0Λ.ο. o O'”'"'' \.~- ON O., H0V· - 0·''/·..L>-:ó ! F | .·$*>. ^ y- '-y Vv-·' (17)
9. 11. Compos estrutural ite acorcio :om a reivindicação 1 de fórmula (I) 9 12 Ο M«Dy* ο--·\ 0-“°' ο, Γ\ ÇHJ >-0 S | F 5 ^ -V F WQNCb U)
10. 12, Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, para utilização como medicamento. 13, Compostos de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, para utilização no tratamento de edema macular diabético.
11. 14. Composto cie acordo com qualquer uma das reivindi açoes 1 a 11, para utilização no tratamento de retinopatia diabética.
12. 15. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, para utilização no tratamento de degeneração macular.
13. 16. Composto cie acordo com 1 a 11, para utilização macular associada à idade. qualquer uma das reivindicações no tratamento de degeneração
14. 17. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, para utilização no tratamento de doenças da retina e da mácula lútea. 13
15. 18. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade farmacêutica de pelo menos um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11 e excipientes aceitáveis sob o ponto de vista oftálmico numa forma adequada para administração por via intravítrea ou periorbital.
16. 19. Composto de fórmula estrutural (I), ou um seu sal,

    para utilização no tratamento de edema macular diabético, retinopatia diabética, degeneração macular, degeneração macular associada à idade e outras doenças da retina e daL mácula lútea, em que na fórmula estrutural (I) os símbolos Fq e R2, considerados em conjunto, representam o grupo de fórmula estrutural (II)

    o símbolo R.3 representa um átomo de hidrogénio, o símbolo R-4 representa F, 14 os símbolos em 17 f 16 e o símbolo R Ri, P.2 e R4 estão ligados aos átomos 9 da estrutura esteroidal na posição representa: dea; carbono

    (III) o símbolo Y representa -R5-CH (0N02) Re e o símbolo R6 representa Η, o símbolo R5 representa um alquileno{Ci— Cio) de cadeia linear ou ramificada.
17. 21. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz de pelo menos um composto de acordo com a reivindicação 19 ou 2 0 e excipientes aceitáveis sob o ponto de vista oftálmico numa forma adequada para administração por via intravítrea ou periorbital.