PT2242759E - Compostos - Google Patents

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PT2242759E
PT2242759E PT97090682T PT09709068T PT2242759E PT 2242759 E PT2242759 E PT 2242759E PT 97090682 T PT97090682 T PT 97090682T PT 09709068 T PT09709068 T PT 09709068T PT 2242759 E PT2242759 E PT 2242759E
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PT
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alkyl
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compound
independently selected
cycloalkyl
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PT97090682T
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Inventor
Andrew Bailey
Lilian Alcaraz
Timothy Johnson
Richard James Bull
Nicholas David Kindon
Andrew Stuart Lister
Andrew James Robbins
Michael John Stocks
Barry John Teobald
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Pulmagen Therapeutics Synergy
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Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS" A presente invenção refere-se a derivados de amida espirociclicos, um processo para a sua preparação, composições farmacêuticas que os contêm, um processo para preparar tais composições farmacêuticas, sua utilização em terapia e intermediários para serem utilizados na sua preparação. 0 tratamento de primeira linha para uma diversidade de distúrbios pulmonares, incluindo doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD) e asma, é através da utilização de broncodilatadores. Os antagonistas do receptor muscarinico (anticolinérgicos) são broncodilatadores que exercem a sua eficácia reduzindo o tónus colinérgico vagai, a componente reversível principal de constrição das vias aéreas na COPD. Os agonistas do receptor adrenérgico β também são broncodilatadores devido à sua aptidão para antagonizar funcionalmente as respostas broncoconstritoras a uma gama de mediadores, incluindo acetilcolina.
Além de melhorar a função pulmonar, estes agentes melhoram a dispneia (dificuldades de respiração), qualidade de vida, tolerância ao exercício físico e reduzem as exacerbações. Vários estudos clínicos demonstraram que a administração associada de um anticolinérgico e um agonista do receptor β2 é mais eficaz do que qualquer dos componentes individualmente (van Noord, J.A., Aumann, J-L., Janssens. E., Smeets, J.J., Verhaert, J., Disse, B., Mueller. A. & Cornelissen, P.J.G., 2005. "Comparison of 1 tiotropium once daily, formoterol twice daily and both combined once daily in patients with COPD", Eur. Respir. J., vol 26, pp 214-222.)· Uma única molécula possuindo actividades nos receptores muscarinico e β2 (MABA) pode proporcionar vantagens adicionais para os doentes com COPD em termos de eficácia e perfil de efeitos secundários em relação a qualquer agente isolado. Além do mais, uma molécula possuindo actividade dupla pode também oferecer vantagens em termos de casos de utilização e adesão à terapêutica pelo doente em relação à co-administração das terapias separadas. Um único agente também pode ser vantajoso na perspectiva de formulação em comparação com dois compostos separados, oferecendo também o potencial, se associado a outro terapêutico, para terapias de acção tripla.
De acordo com um primeiro aspecto da invenção, as requerentes proporcionam agora um composto de fórmula I
Ar (I) 0 documento W02007/102771 (AstraZeneca) divulga derivados de fenetanolamina úteis como agonistas do receptor adrenérgico beta2 em que Ar representa um grupo de ligação ao receptor adrenérgico β; L representa uma unidade de ligação compreendendo um cadeia hidrocarbilo linear ou ramificada de até 15 átomos de carbono; 2 em que até três dos átomos de carbono na cadeia estão opcionalmente substituídos com até quatro substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, S(O)0-2R56, NR57R58, S (0) 2NR59R60, C(0)NR61R62, C(0)0R63, NR64S (0) 2R65, NR66C(0)R67, NR68C(0) OR69, NR70C(O)NR71R72, OR73, alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6, e em que alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo C1-6; em que até cinco átomos de carbono da cadeia podem estar substituídos com grupos independentemente seleccionados de 0, NR45, S, S(0), S(0)2, C(0)0, 0C(0), NR46C(0), C(0)NR47, NR48S(0)2, S(0)2NR49, NR50C (0) NR51, NR52S (0) 2NR53, 0C(0)NR54, NR55C(0)0, com a condição de que quaisquer desses grupos na cadeia estão separados por pelo menos 2 átomos de carbono; e em que até seis átomos de carbono da cadeia podem fazer parte de um anel alifático, heteroalifático, aromático ou heteroaromático mono- ou bicíclico possuindo até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, compreendendo o referido anel até 10 átomos endocíclicos, e em que o anel está opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogeneo, S(0)0o-2R , NR R , S (0) 2NR59R60, C(0)NR61R62, C(0)0R63, NR64S (0) 2R6s, NR66C(0)R67, NR68C (0) OR69, NR70C(O)NR71R72, OR73, alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3_6, e em que alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo C1-6; 3 e a cadeia pode compreender até três desses anéis, cada, independentemente seleccionado; em que R56, R65 e R69 representam, cada, independentemente alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3-6 em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3_ 6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6; e R45, R46, R47, R48, R49, Rb0, Rbl, Rb2, Rb3, Rb4, Rbb, Rb/, Rb8, Rba, RbU, R61, R62, R63, R64, R66, R67, R68, R70, R71, R72 e R73 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci-ε; ou qualquer de R57 e R58, R59 e R60, R61 e R62 ou R71 e R72, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros, em que o anel heterocíclico pode compreender até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 e S, em que o anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci_6; e em que a cadeia pode compreender adicionalmente até três ligações duplas carbono-carbono; em que a cadeia pode compreender adicionalmente até três ligações triplas carbono-carbono; 4 L1 e L2 representam independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6; L3 e L4 representam independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci-ε; além disso L1 e/ou L3 podem estar ligados aos átomos de carbono da cadeia hidrocarbilo na unidade de ligação L para formar anéis alifáticos de até 6 átomos endocíclicos, em que cada anel pode compreender até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 e S; R1 representa um anel de fenilo, um anel heteroalifático de 4 a 8 membros, um anel alifático de 3 a 8 membros ou um anel heteroarilo de 5 a 6 membros possuindo, cada, até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R% NR6R7, S(0)2NR8R9, C (0) NR10Rn, C (0) OR12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C(0) OR18, NR19C(O)NR20R21, OR , alquilo Ci_7 ou cicloalquilo C3_g (em que cada de alquilo Ci_7 e cicloalquilo C3_s pode estar opcionalmente substituído com até seis substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(0)o-2R5, NR6R7, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C (0) OR12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (0) OR18, NR19C (0) NR20R21, OR ) , um anel de fenilo, um anel heteroalifatico de 4 a 8 membros, um anel heteroarilo de 5 a 6 membros, possuindo, cada, até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel de fenilo, anel heteroalif ático de 4 a 8 5 membros, anel alifático de 3 a 8 membros ou anel heteroarilo de 5 a 6 membros pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6 em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-6, ciano, nitro, NH2, NH (alquilo C1-6) e N (alquilo Ci-6) 2; ou R1 representa um anel alifático fundido, heteroalifático fundido, aromático fundido ou heteroarilo fundido de até 10 átomos e possuindo até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, O ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, NR6R7, S(0)NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, NR13S (O) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C(0)R18, NR19C(O)NR20R21, OR22, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6 em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-6, NH2, NH (alquilo Ci_6) e N (alquilo Ci_6)2; ou R1 representa ainda uma cadeia alquilo Ci_6 em que um ou dois dos átomos de carbono podem estar substituídos com O, S ou N e em que R1 pode estar substituído com até três cadeias alquilo Ci_3 e duas dessas cadeias podem ser ligadas para formar uma cadeia cicloalquilo C3_g em que o alquilo Ci_3 e as cadeias cicloalquilo C3_g podem estar opcionalmente substituídas com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, NR6R7, S(0)2NRsR9, C (O) NR10RU, 6 NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C(0) OR18, NR19C(O)NR20R21, C(O) OR12, OR22, e em que a cadeia alquilo Ci_6 está ainda opcionalmente substituída com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(0)o-2R5r NR6R7, S(0)2NR8R9, C (0) NRl0R11, C (O) OR12, NR13S (O) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (O) OR18, NR19C (O) NR20R21, OR22, um anel de fenilo, um anel heteroalif ático de 4 a 8 membros, um anel alifático de 3 a 8 membros, um anel heteroarilo de 5 a 6 membros possuindo, cada, até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, e em que cada anel está opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, S(O)0-2R5, S(0)2NR8R9, C(O)NR10R11, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci_7 ou cicloalquilo C3-7 (em que cada de alquilo C1-7 e cicloalquilo C3-7 pode estar opcionalmente substituído com até seis substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, NR6R7, S(0)2NR8R9, C (O) NR10Rn, C (0) OR12, NR13S (O) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (0) OR18, NR19C (0) NR20R21, OR ) , um anel de fenilo, um anel heteroalifatico de 4 a 8 membros, um anel alifático de 3 a 8 membros, um anel heteroarilo de 5 a 6 membros, possuindo, cada, até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel de fenilo, anel heteroalifático de 4 a 8 membros, anel alifático de 3 a 8 membros ou anel heteroarilo de 5 a 6 membros pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, S (0) o-2R5, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6, em que alquilo C1-6 e cicloalquilo C3-6 pode estar, cada, opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-6, NH2, NH (alquilo Ci_6) e N(alquilo Ci-6)2; 7 ou a cadeia alquilo Ci_6 pode estar substituída com um anel alifático fundido, heteroalifático fundido, aromático fundido ou heteroarilo fundido de até 10 átomos e possuindo até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, O ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, NR6R7, S(0)2NRsR9, C(O)NR10Rn, C (O) OR12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C(0) OR18, NR19C(O)NR20R21, OR22, alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3-6 em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-6, NH2, NH (alquilo C1-6) e N (alquilo Ci_6)2; R5, R14 e R18 representam independentemente alquilo C1-6 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-6, NH2, NH (alquilo Ci-ε) e N(alquilo Ci-6)2; e R6, R7, R8, R9,
R 10
R 11
R 12
R 13
R 15
R 16
R 17
R 19
R 20
R 21
e R 22 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6r em que o alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6 pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-61 NH2, NH (alquilo Ci_6) e N (alquilo Ci_6)2; ou qualquer de R6 e R7, R8 e R9, R10 e R11, ou R20 e R21 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros, em que o anel heterocíclico pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alquilo Ci-6, cicloalquilo Ci-6 e alcoxilo C1-6, em que 8 o alquilo Ci-6, cicloalquilo Ci_6 ou alcoxilo Ci_6 pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci_6, NH2, NH (alquilo Ci_6) e N (alquilo Ci-6)2; X representa 0, S, S(0)o ou CR25R26; m= 0, 1, 2 ou 3; n = 1, 2, 3 ou 4; com a condição de que m + n é maior ou igual a 2 o= 1, 2; W representa CR27R28CR29R30 ou CR31R32CR33R34CR35R36; V e Z representam independentemente uma ligaçao, CR R ou CR39R40CR41R42, com a condição de que quando X representa 0, S ou S(0)o então m, V e Z são de tal forma que todos os heteroátomos nos anéis estão separados por pelo menos dois átomos de carbono (e. g., quando V é uma ligação então m não é 0, Z não é uma ligação); Y representa CO, CONR43, S02 ou S02NR44; R25, R26, R21, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38 R39, R40, R41, R42, representam, cada, independentemente hidrogénio, flúor ou alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6; e quando não ,26 ,27
representam hidrogénio ou flúor, R25 e RZfe, Rz/ e R28, R2y e R3U, R ,28 t-,29 ,30 ,31 e R32, R33 e R34, R35 e R36, R37 e R38, R39 e R40 ou R41 e R42, em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados, podem formar adicionalmente um anel alifático de 3 a 6 membros; ,33 ,34 ,35 ,36 ,37 ,38 ,39 9 R43 e R44 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6 e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Por "grupo de ligação ao receptor adrenérgico β", as requerentes significam um grupo capaz de ligar um receptor adrenérgico β; por exemplo, tal como delineado no artigo de revisão "β-adrenergic receptors in Comprehensive Medicinal Chemistry", 1990, B.E. Main, pl87 (Pergamon Press). Tais grupos também são conhecidos a partir, por exemplo, dos documentos WO/2005092841, US/20050215542, WO/2005070872, WO/2006023460, WO/2006051373, WO/2006087315, WO/2006032627.
Os exemplos de grupos de ligação ao receptor adrenérgico β convenientes incluem
¥ ¥ o o M1 é S, C(O), NA5, CA6A7, CH2CH2, CH=CH, CH20 ou OCH2; M2 é S, C(O), NA5, CA6A7, CH2CH2, CH=CH, CH20 OU OCH2; 10 A1, A2, A3 e A4 sao, independentemente, hidrogénio, halogéneo, trifluorometilo, ciano, carboxilo, hidroxilo, nitro S(0)2A8, NA9S(0)2A10, C(0)NAnA12, NA13C (0) A14, alquil Ci_6, alcoxilo Ci-e, C(0) (alquilo Ci_6) ou C(0)0alquilo Ci_6; A3 também pode ser CH20H, NHCHO, NHS (0) 2NA15A16 ou NHS02A17; A5, A6, A7, A9, A11, A12, A13, A14, A15 ou A16 são, independentemente, hidrogénio ou alquilo Ci-6; A8, A10 e A7 são, independentemente, alquilo Ci-β;
Mais convenientemente, o grupo Ar de ligação ao receptor adrenérgico β é seleccionado de
em que M1 é S, CH=CH, CH20 ou 0CH2; M2 é S, CH=CH, CH20 ou 0CH2; A1, A2, e A4 sao, independentemente, hidrogénio, halogéneo, alquilo Ci_6, alcoxilo Ci-6; A3 também pode ser CH20H, NHCHO, NHS (0) 2NA15A16 ou NHSOA17; 11 A15 ou A16 sao independentemente seleccionados de hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6; A17 é alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6;
Os exemplos de alquilo C1-6 incluem alquilo Ci_4 e alquilo Ci_2.
Exemplos de ciclolalquilo C3-6 incluem ciclolalquilo C3-5 e ciclolalquilo C3-4.
Exemplos de alcoxilo C1-6 incluem alcoxilo Ci_4 e alcoxilo C1-2.
Mais convenientemente, o grupo Ar de ligação ao receptor adrenérgico β é seleccionado de:
O O em que A1, A2 e A4 sao todos hidrogénio, A3 é CH2OH, NHCHO, M1 é S, CH=CH, OU OCH2; M2 é S, CH=H ou OCH2.
Mais convenientemente, o grupo Ar de ligação ao receptor adrenérgico β é seleccionado de: 12
Convenientemente, L representa uma unidade de ligação compreendendo uma cadeia hidrocarbilo linear ou ramificada de até 12 átomos de carbono ou de até 10 átomos de carbono ou de até 8 átomos de carbono; em que até dois dos átomos de carbono na cadeia estão opcionalmente substituídos com até quatro substituintes independentemente seleccionados de halogeneo, S(0)o-2R , NR R , S (0 ) 2nr59r60, C (0) nr61r62, C (0) OR63, NR64S(0) 2R65, NR66C(0)R67, NR68 C(0) OR69, NR70C(O)NR71R72, OR73, alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3_6, e em que alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci-6
Convenientemente, até dois átomos de carbono da cadeia podem estar substituídos com grupos independentemente seleccionados de O, NR45, S, S(O), S(0)2, C(0)0, OC(O), NR46C(0), C (O) NR47, NR48S(0)2, S(0)2NR49, NR50C (O) NR51, NR52S (O) 2NR53; ou independentemente seleccionados de O, S, S(O), S(0)2, NR46C(0), C(0)NR47; com a condição de que, em cada caso, quaisquer desses grupos na cadeia estão separados por pelo menos 2 átomos de carbono; 13
Convenientemente, até quatro átomos de carbono da cadeia podem fazer parte de um anel alifático, heteroalifático, aromático ou heteroaromático mono- ou biciclico possuindo até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, compreendendo o referido anel até 10 átomos endociclicos, e em que o anel está opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, s(O)0-2R56, nr57r58, s (O)2nr59r60, c(o)nr61r62, c(0)or63, nr64s(O) 2r65, NR66C(0)R67, NR68C (O) OR69, NR70C(O)NR71R72, OR73, alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6, e em que alquilo C1-6 e cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo C1-4;
Convenientemente, a cadeia pode compreender até dois ou um desses anéis, cada, deles independentemente seleccionado; 1 £ c. f, Q .
Convenientemente, R , R e R representam, cada, independentemente alquilo C1-4 ou cicloalquilo C3-6 em que o alquilo C4_4 e cicloalquilo C3^6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_4; e λί '-i- 4- τι45 ,-,46 ,-,47 π48 ,-,49 ,-,50 π51 d52 d53
Convenientemente, R,R,R,R,R,R,R,R,R, 62 ,-,63 ,-,64 ,-,66 ,r\,r\,r\,r\,r\,r\,jA, e R/3 representam, cada, independentemente hidrogénio, .lo C4_4 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo Ci_4 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_4; ou qualquer de R57 e R58, R59 e R60, R61 e R62 ou R71 e R72, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático de 4 vP LO r55, R5 7 r72 e R73 alquilo C4_4 ,58 ,-,59 ,60 ,61 ,67 ,68 ,70 >71 14 a 8 membros, em que o anel heterocíclico pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alquilo Ci_4 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci_4 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci_4;
Os exemplos de sistemas de anel convenientes que podem estar presentes como parte da unidade de ligação hidrocarbilo incluem
em que o anel heterociclilo está nao substituído ou substituído com 1 ou 2 substituintes independentemente seleccionados de 121 halogéneo, alquilo Ci_4 (opcionalmente substituído com OR , NR122R123 ou NR124C (0) R125) , OR126, NR127R128, C (0) NR129R130, NR131C(0)R132, CN, S(0)R133 ou S (0) 2NR134R135 ; R133 representa alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci-6 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente 15 substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6; e
Rm, R122, R123, R124, R125, R126, R12/, R12 , Ri2y, Ri3U, R131, R132, R134, R135 e R136 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-6; ou qualquer um R122 e R123, R127 e R128,
R 129
e R 130 ,135 ou R134 e R133, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros, em que o anel heterocíclico pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alquilo C1-6 ou cicloalquilo C3^6, em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo e hidroxilo;
Convenientemente, a cadeia pode compreender adicionalmente até duas ligações duplas carbono-carbono ou uma única ligação dupla carbono-carbono.
Convenientemente, a cadeia pode compreender adicionalmente até duas ligações triplas carbono-carbono ou uma única ligação tripla carbono-carbono.
Convenientemente, cada de L1, L2, L3 e L4 representam independentemente hidrogénio, um grupo alquilo Ci_4 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci_4 e cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo e hidroxilo; além 16 disso L1 e/ou L3 podem estar ligados a um átomo de carbono da cadeia hidrocarbilo na unidade de ligação L para formar um anel alifático de até 6 átomos endocíclicos, em que o anel pode compreender até dois heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 e S.
Quando quatro átomos de carbono da cadeia fazem parte de um anel alifático, heteroalifático, aromático ou heteroaromático mono- ou bicíclico possuindo até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, o referido anel pode, se for um sistema de anel alifático, compreender até 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 ou 3 átomos endocí clicos; se for um sistema de anel aromático, então este pode compreender 10, 9, 6 ou 5 átomos endocíclicos; cada independentemente seleccionado; R1 representa um anel de fenilo ou um anel heteroarilo de 5 a 6 membros possuindo, cada, até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, O ou S, ou R1 representa um anel alifático fundido, heteroalifático fundido, aromático fundido ou heteroarilo fundido de até 10 átomos e possuindo até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, O ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, NR6R7, S(0)NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, NR13S (O) 2R14, NR1SC(0)R16, NR17C(0) OR18, NR19C(O)NR20R21, OR22, alquilo Ci_7 ou cicloalquilo C3^8 (em que cada de alquilo Ci_7 e cicloalquilo C3_8 pode estar opcionalmente substituído com até seis substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(0)o^R5, NR6R7, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C (O) OR12, NR13S (O) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (O) OR18, NR19C (O) NR20R21, OR22), um anel de fenilo, opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, 17 ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6 r em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6, ciano, nitro, NH2, NH (alquilo Ci-δ) e N (alquilo Ci_6)2; R5, R14 e R18, representam alquilo C1-6 ou cicloalquilo C3-6 opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo Ci_6; R8, R9, R10, R11, R12 e R22 representam, cada, independentemente hidrogénio ou alquilo C1-6 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci-6,* ou qualquer de R8 e R9, ou R10 e R11 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático 4 a 6 membros, em que o anel heterocíclico pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci-g e alquilo Ci_6; X representa 0, S, ou S(0)2. m = 0, 1, 2 ou 3; n = 1, 2 ou 3; W representa CR27R28CR29R30 ou CR31R32CR33R34CR35R36. 18 ou V e Z representam independentemente uma ligação, CR37R38 CR39R40CR41R2.
Quando X representa 0, S, ou S(0)2, então m, V e Z são de tal forma que todos os heteroátomos nos anéis estão separados por pelo menos dois átomos de carbono (e. g., quando V é uma ligação, então m não é 0, Z não é uma ligação). Y representa CO, CONR43, S02. R27, R28, R29, R30, R31 R35, R36, R37, R38, independentemente cicloalquilo C3-6. p32 p33 p34 p35 p36 í\ f Γ\ f t\ f Γ\ f I\ ψ R39, R40, R41 e R42 hidrogénio, flúor,
R 31
R 32
R 32
R 33
R 34 representam, cada, alquilo C1-6 ou
Quando não representam hidrogénio ou flúor, R27 e R28, R29 e R30, R31 e R32, R 33 e R34, R35 e R36, R37 e R38, R39 e R40 ou R41 e R42 em conjunto com 0 átomo de carbono ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel alifático de 3 a 6 membros; e 4 λ 1 R representa, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6
Mais convenientemente: L representa uma unidade de ligação compreendendo uma cadeia hidrocarbilo linear ou ramificada de até 8 átomos de carbono, tal como de até 7, 6, 5 ou 4 átomos de carbono. Os exemplos de tais cadeias incluem aquelas de 4-7, 4-6, 4-5, 5-7, 6-7 e 5-6 átomos de carbono. 19 L representa uma cadeia alquilo C4_8 opcionalmente substituída com até quatro (tal como até três, dois ou um) grupos flúor ou metilo;
Convenientemente, até dois átomos de carbono da cadeia podem estar substituídos com grupos independentemente seleccionados de 0, S, S{0)2, NR46C(0), C(0)NR47, NR48S(0)2/ S(0)2NR49 com a condição de que, em cada caso, quaisquer desses grupos na cadeia estão separados por pelo menos 2 átomos de carbono;
Convenientemente, até quatro átomos de carbono, tal como até três ou até dois átomos de carbono da cadeia podem fazer parte de um anel aromático ou heteroaromático mono- ou bicíclico possuindo até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, compreendendo o referido anel até 10 átomos endocíclicos, e em que o anel está opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, S(O)0-2R56, S (0) 2NR59R60, C(0)NR61R62, OR73, alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6, e em que alquilo C1-6 e cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci_6;
Convenientemente, a cadeia pode compreender um anel desse tipo;
Convenientemente, R56 representa alquilo Ci_4 ou cicloalquilo C3_6 em que o alquilo C4_4 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci-4; e 20
Convenientemente, R46, R47, R48, R49, R59, R60, R61, R62 e R73 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo C1-4 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci_4 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_4; ou qualquer um R59 e R60, ou R61 e R62, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático 4 a 6 membros, em que o anel heterocíclico pode estar opcionalmente substituído com até dois substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alquilo C1-4 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo Ci_ 4 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituído com um substituinte independentemente seleccionado de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci-4; L1, L2, L3 e L4 representam independentemente hidrogénio ou metilo; R1 representa fenilo ou um anel heteroarilo de 5 a 6 membros possuindo até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci_7 ou cicloalquilo C3_s, em que o alquilo Ci_7 e o cicloalquilo C3_8 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo Ci_3; ou R1 representa um anel aromático fundido ou heteroarilo fundido de até 10 átomos possuindo até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, O ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes 21 nitro ciano, independentemente seleccionados de halogéneo, ----- -, C (0) OR12, OR22, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente 12 seleccionados de halogéneo, ciano, hidroxilo ou alcoxilo C1-3; R e R22 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo C1-6 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo C1-6 ou cicloalquilo C3-6 pode estar opcionalmente substituído com um substituinte seleccionado de halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo C1-3;
Os substituintes de anel mais convenientes incluem halogéneo, por exemplo flúor e, por exemplo, cloro.
Mais convenientemente, a espécie -L- é representada por
em que anel D representa um anel de fenilo, tiofeno, furano ou tiazole; R representa até três substituintes de anel, cada, independentemente seleccionado de H, F, Cl, alquilo Ci_4, e CF3 ; t= 0 ou 1; G=0, CR43R44 ou S; quando G=0 ou S então v = 1 ou 2; quando G=C então v = 0, 1 ou 2, e em que a espécie -L- está ligada aos átomos adjacentes em qualquer orientação.
Mais convenientemente, a espécie -L- é seleccionada de 22 -(fen-1,4-ileno)OCH2-, em que o fenilo está opcionalmente substituído com 3, 2 ou 1 grupos metilo; -(fen-1,4-ileno)OCH2CH2-; -CH2 (fen-1,4-ileno)OCH2- em que o fenilo está opcionalmente substituído com 3, 2 ou 1 de Cl ou F (independentemente seleccionado) ; -CH2 (fen-1,4-ileno)-; -CH2(fen-1, 4-ileno)CH2-; - (CH2)7-; -CH2 (fen-1,3-ileno) - em que o anel de fenilo está opcionalmente substituído com até três de alquilo Ci-3/ F, Cl e CF3 (independentemente seleccionado); -CH2 (tien-2,5-ileno)CH2-; -CH2 (tien-2,5-ileno)-; -CH2 (tien-3,5-ileno)-; -CH2 (tien-2,4-ileno) - ; -CH20(fen-1,3-ileno)-; e -CH2S(fen-1,3-ileno)-.
Outras unidades de ligação convenientes incluem: 23 -(naft-1,5-ileno)- -C(CH3)2-(fenil-l,3-ileno)- -(fen-l,3-ileno)OCH2CH2- -(fen-l,3-ileno) -C(CH3)2-(CH2)4- -C (CH3)2-(CH2)- -CH2 (fen-1,3-ileno)OCH2-; -ch2s(ch2) 5-;
Cada das unidades de ligaçao acima tomada isolada representa um aspecto independente da invenção.
Mais convenientemente, a espécie -L- é seleccionada de: -CH2 (tien-2,5-ileno) -CH2 (fen-1,3-ileno)- em que o fenilo pode estar monossubstituido com F; -CH2 (tien-2,4-ileno)-; e -CH2 (tien-3,5-ileno)-;
mais convenientemente L1, L2, L3 e L4 = H 2 4
Mais convenientemente, R1 é seleccionado de qualquer uma das espécies particulares como proporcionadas nos Exemplos a seguir. X representa 0 ou S. m = 1 ou 2; η = 1 ou 2; W representa CR27R28CR29R30 ou CR31R32CR33R34CR35R36. 37 38 V e Z representam mdependentemente uma ligação ou CR R .
V e Z sao de tal forma que todos os heteroátomos nos anéis estão separados por pelo menos dois átomos de carbono (e. g., quando V ~ 37 38 é uma ligação então Z e CR R ) . 43 Y representa CO, CONR , SO2; tal como CO ou SO2, por exemplo CO. R36, R37 e R38 representam, flúor ou alquilo C^3 ou -p 2 7 p28 p29 p30 p31 p32 p33 p34 p35 K , K , K , l\ , l\ , l\ , Γ\ , Γ\ , r\ cada, independentemente hidrogénio, cicloalquilo C3.
Quando estes não representam hidrogénio ou flúor, R27 e R28, t-,29 ^ t-j 30 τ-,31 ^ t-,32 033 ^ D34 n35 ^ n36 „ π37 π38 . R eR,R eR,R eR,R eR,ouR eR em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel alifático de 3 a 6 membros. R43 representam, cada, independentemente hidrogénio ou alquilo Ci_ 3 ou cicloalquilo C3. 25
Mais convenientemente, o espirociclo abrangido pelo sistema de anel biciclico compreendendo -N-(Λ)m-C-V-X-W-N(Y-R1)-z-(C)-(Λ)n- é um em que: (i) m e n = 2, v = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CH2CH2 (ii) m e n = 2, v = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CF2CH2 (iii) m e n = 1, v = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CH2CH2 (iv) m e n = 2, v = ligação, Z = CH2CH2, X = 0 e W = CH2CH2
Mais convenientemente, o espirociclo é seleccionado de (i) e (ii) acima.
Mais convenientemente, R1 é seleccionado de tiofeno ou tiazole ou benzofurano, cada, opcionalmente substituído com um ou dois substituintes. Um dos substituintes opcionais é convenientemente seleccionado de H, Cl, F e alquilo C1-3. 0 outro substituinte opcional é seleccionado de metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH(CH3)CH2,CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo;
Cada composto da invenção exemplificado representa um aspecto particular e independente da invenção.
Os compostos convenientes da invenção incluem os compostos dos Exemplos 1, 2, 3, 4, 5, 6, OO • 9, 11 , 12, 14, 15, 19, 22 23, 25, 26, 27, 28, 29 , 36, 37, 38, 40, 42 , 44, 45, 47, 48, 52 56, 57, 58, 66, 67, 70 , 71, 75, 76, 82, 83 OO 86, 87, 88, 91 93, 99, 105, 109 , 111, 115, 265, 266, 278 e 280 . 26
Os compostos convenientes da invenção incluem os compostos dos Exemplos 22, 23, 36, 40, 42, 44, 47, 48, 57, 66, 82, 83, 84, 86, 87, 99, 265 e 266.
Os compostos convenientes da invenção incluem os compostos dos Exemplos 40, 42, 47, 48, 82, 84, 99 e 278.
Entender-se-á que determinados compostos da presente invenção podem existir nas formas solvatada, por exemplo hidratada, bem como não solvatada. É para ser entendido que a presente invenção abrange todas essas formas solvatadas. Determinados compostos de fórmula (I) são capazes de existir em formas estereoisoméricas. Entender-se-á que a invenção abrange todos os isómeros geométricos e ópticos dos compostos de fórmula (I) e as suas misturas, incluindo racematos. Os tautómeros e as suas misturas também formam um aspecto da presente invenção.
Convenientemente o centro quiral no átomo de carbono substituído com hidroxilo adjacente ao grupo de ligação ao receptor adrenérgico β tem estereoquímica R. É também para ser entendido que a presente invenção abrange a substituição de qualquer carbono quaternário, mais especificamente o carbono quaternário presente no sistema espirocíclico, com um átomo de silício, por exemplo como divulgado em "Silicon switches of Marketed Drugs: Mini-reviews in Med. Chem.", 2006, 6, 1169-1177.
No contexto da presente descrição o termo "heteroaromático" denota um grupo ou parte de um grupo compreendendo uma unidade orgânica monocíclica ou multicíclica aromática opcionalmente substituída desde 5 a 14 átomos endocíclicos, de um modo 27 preferido desde 5 a 10 átomos endocíclicos, na qual até quatro dos átomos endocíclicos é/são elemento(s) que não carbono, por exemplo azoto, oxigénio ou enxofre. Os exemplos desses grupos incluem os grupos benzimidazolilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzofuranilo, benzotienilo, furilo, imidazolilo, indolilo, indolizinilo, isoxazolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, tetrazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo e triazolilo. O grupo heteroarilo pode estar substituído com um ou mais grupos substituintes. O grupo heteroarilo pode estar ligado ao resto do composto da invenção por qualquer átomo de carbono ou azoto disponível. A expressão "Anel heterocíclico alifático" denota anéis não aromáticos compreendendo pelo menos um heteroátomo seleccionado do grupo consistindo de azoto, oxigénio e enxofre. Os exemplos de anéis heterocíclicos alifáticos 4-8 membros de acordo com a presente invenção incluem pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, morfolinilo, homopiperazinilo, homopiperidinilo e azetidinilo.
Salvo indicação em contrário, no contexto da presente descrição, os grupos e unidades alquilo podem ser de cadeia linear ou ramificada e incluem, por exemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, iso-butilo ou terc-butilo. Os grupos cicloalquilo são monocíclicos, por exemplo ciclopentilo ou ciclo-hexilo. Halogéneo é, por exemplo, fluoreto, cloreto ou brometo. 28
No contexto da presente descrição, quando é especificado que um grupo pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes, o grupo pode estar não substituído ou substituído; quando substituído o grupo estará geralmente substituído com um, dois ou três substituintes. Em geral, uma unidade hidroxilo não estará ligada a um átomo de carbono que é adjacente a um átomo de azoto, outro átomo de oxigénio ou um átomo de enxofre. A invenção proporciona ainda um processo para a preparação de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido acima, o qual compreende: (a) quando L1 representa hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (II), ou um seu sal adequado,
em que LG1 representa um grupo de saída (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato) e L, L2, L3, L4, R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), com um composto de fórmula (III), ou um seu sal adequado (e. g., bromidrato, acetato ou cloridrato),
NH 2
P
O
Ar (ΙΠ) 29 em que Ar é como definido na fórmula (I) e P1 é hidrogénio ou um grupo de protecção (e. g., terc-butildimetilsililo) na presença de uma base (e. g., carbonato de potássio, trietilamina ou diisopropiletilamina), seguida de remoção do grupo de protecção (e. g., utilizando complexo de ácido fluorídrico-piridina); ou (b) quando L1 representa hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (IV), ou um seu sal adequado,
em que L, L2, L3, L4, R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), com um composto de fórmula (III) ou um seu sal adequado na presença de um agente de redução adequado (e. g., cianoboro-hidreto de sódio, triacetoxiboro-hidreto de sódio ou hidrogénio na presença de um catalisador de paládio sobre carvão ou óxido de platina adequado); ou (c) fazer reagir um composto de fórmula (V), ou um seu sal adequado,
30 (V) em que L, L1, L2, L3, L4, R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), P3 representa hidrogénio ou um grupo de activação (e. g., 3-nitrof enilsulf onilo) com um composto de fórmula (VI), ou um seu sal adequado, LG2
(VI) em que Ar é como definido na fórmula (I), LG2 representa um grupo de saida (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato) e P1 é como definido na fórmula (III) na presença de uma base (e. g., quando P3 é hidrogénio, carbonato de potássio, trietilamina, diisopropiletilamina e, quando P3 é 3-nitrofenilsulfonilo, hidreto de sódio ou di-iso-propilamida de litio), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., utilizando complexo de ácido fluoridrico-piridina, tiofenol, ácido tioacético); ou com um composto de fórmula (VII), ou um seu sal adequado, ** (VII) em que Ar é como definido na fórmula (I) na presença de uma base (e. g., quando P3 é hidrogénio, carbonato de potássio, trietilamina, diisopropiletilamina e, quando P3 é 3-nitrofenilsulfonilo, hidreto de sódio ou di-iso-propilamida de litio), seguida de remoção dos grupos de 31 protecção (e. g., ácido trifluoroacético, tiofenol, ácido tioacético); ou com um composto de fórmula (VIII), ou um seu sal adequado,
V
Ar
(VIII) em que Ar é como definido na fórmula (I), LG2 representa um qrupo de saída (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato) na presença de uma base (e. g., quando P3 é hidrogénio, carbonato de potássio, trietilamina, diisopropiletilamina e, quando P3 é 3-nitrofenilsulfonilo, hidreto de sódio ou di-iso- propilamida de lítio), sequida de redução da cetona (e. g., utilizando boro-hidreto de sódio ou um complexo de borano/catalisador quiral), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., ácido trifluoroacético, tiofenol, ácido tioacético); ou (d) quando L3 e L4 representa, cada, hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (IX), ou um seu sal adequado,
Ar 32 (IX) em que Ar, L, L1 e L2 são como definidos na fórmula (I), P1 é como definido na fórmula (III), P3 representa um grupo de protecção (e. g., terc-butilcarbamato ou 3-nitrofenilsulfonilo) com um composto de fórmula (X), ou um seu sal adequado,
Η—N
/X\(mV W ^ N-Y Λ (X) em que R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), na presença de um agente de redução adequado (e. g., cianoboro-hidreto de sódio, triacetoxiboro-hidreto de sódio, ou hidrogénio na presença de um catalisador de paládio sobre carvão ou óxido de platina adequado), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., tratamento com ácido clorídrico ou trifluoroacético, tiofenol, ácido tioacético); ou (e) quando um ou ambos de L3 e L4 representam hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (XI), ou um seu sal adequado,
P
Ar 33 (XI) em que Ar, L, L1 e L2 são como definidos na fórmula (I), P1 é como definido na fórmula (III), P3 representa um grupo de protecção (e. g.r terc-butilcarbonilo ou 3-nitrofenilsulfonilo), LG3 representa um grupo de saída (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato), com um composto de fórmula (X) ou um seu sal adequado, na presença de uma base (e. g., carbonato de potássio, trietilamina, diisopropiletilamina), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., ácido trifluoroacético, tiofenol, ácido tioacético); ou (f) quando L1 e L2 representam, cada, hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (XII), ou um seu sal adequado,
em que Ar, L, L3, L4, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I) e P1 é como definido na fórmula (III) e P4 é um grupo de protecção de azoto adequado (e. g., terc-Butilcarbonato) com um agente de redução adequado (e. g., complexo de borano tetra-hidrofurano), seguida de remoção do grupo de protecção (e. g., utilizando complexo de ácido fluorídrico-piridina) e reacção com um composto de fórmula (XIII), ou um seu sal adequado, 34 LG4—Υ v K (xm) em que R1 e Y são como definidos na fórmula (I) e LG4 representam hidroxilo ou um grupo de saída (e. g., halogeneto, cloreto), ou um seu sal adequado, seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., utilizando complexo de ácido fluorídrico-piridina, ácido clorídrico ou ácido trifluoroacético).
Quando LG4 representa hidroxilo, a reacção é convenientemente realizada na presença de um reagente de activação, por exemplo, carbonildiimidazole, anidrido cíclico do ácido 1-propanofosfónico (T3P) ou hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-Ν,Ν, Ν', Ν'-tetrametilurónio (HATU), num solvente orgânico, por exemplo, N, IV-dimetilf ormamida ou diclorometano, opcionalmente na presença de uma base (e. g., trietilamina), a uma temperatura, por exemplo na gama desde 0 a 60 °C,
Quando LG4 representa um halogeneto (e. g., cloreto), a reacção é convenientemente realizada na presença de uma base, por exemplo, trietilamina, diisopropiletilamina ou piridina num solvente orgânico, por exemplo, diclorometano ou tetra-hidrofurano a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 0 a 25 0 C; e opcionalmente após (a) , (b) , (c) , (d) , (e) ou (f) realizar uma ou mais das seguintes: converter o composto obtido num outro composto da invenção 35 preparar um sal farmaceuticamente aceitável do composto.
Nos processos (a) , (c) e (e) , a reacção pode ser convenientemente realizada num solvente orgânico, tais como N,N-dimetilformamida, etanol, n-butanol ou dimetilsulfóxido, a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 50 a 140 °C.
Nos processos (b) e (d), a reacção pode ser convenientemente realizada num solvente orgânico, tais como metanol, etanol, diclorometano, ácido acético IV-metilpirolidinona ou N, IV-dimet ilf ormamida, contendo até 10% em peso de água e ácido acético.
Nos processos (f) , a reacção pode ser convenientemente realizada num solvente orgânico tal como tetra-hidrofurano, a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 0 a 80 °C.
Alternativamente, os compostos de Fórmula I (representados nos esquemas abaixo como fórmulas A, B e C) podem ser preparados como se segue: 36 O;
G* = H ou F R*® = alquilo
Reacção de Wittig Br PhjP^HOR200
Carbonilação redutiva EtjSiH, CO.Pd-116 base de Hunnig, THF R2*? G<
Geometria E ou Z ou nBuLi, iPrMgCI N-formil-morfoiina
A
Aminação redutiva
NMP, NaBH(OAc)j Ácido fórmico
NMP ou MeOH, NaCNBH, ou
Aminação redutiva Ar NMP, NaBH(OAc)a pir é H ou um grupo de protecção adequado que é removido após a aminação redutiva
Método alternativo para preparar o composto A
Reacção de Heck
,200
O catalisador de paládio adequado
Método alternativo para preparar o composto B
ou acetona
LG9 = grupo de saída adequado, tais como Br, Cl, OM, OT Oxidação
Reagente de Dess-Martin TFA, DCM__
O
Método alternativo para preparar o composto B
G^HouF R*°° alquilo R» = alquilo Geometria E ou Z
B Método para preparar o composto C quando LG9 é
Cl ou Br
LG9 = Br, Cl 38 R*°i
Via B
Aminação Redutiva
NMP, NaBH(OAc),
P1Í é um grupo de protecção adequado ta! como CFaC(0)
Aminação Redutiva
NMP ou MeOH, NaCNBH, ou NMP. NaBH(OAc), P17 é H ou um grupo de protecção adequado
Pu é um grupo de protecção adequado tal como BOC 1) R1COlH,
Remoção de P”
Para P13= CFjC(O) amónia
reagente de acoplamento (e. g. HATU) 2) Remoção de P,e
e. g. para BOC utilizar TFA e remoção de P17
(quando é um grupo de protecção) e. g. para tBuMe2Si utilizar Et/f.3HF 39
Via C
LG10 é um grupo de saída adequado, tais como halogéneo, OM, OT ,17 1) Y^nh, Ar
HO
R*
2) Remoção de P17 (quando é um grupo de protecção) e. g. para tBuMe^Si utilizar NEtj.3HF pir é H ou um grupo de protecção adequado
Os compostos de fórmula (II) podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula (XIV), ou um seu sal adequado,
em que L, L3, L4, R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (II), com um composto de fórmula (XV) L2-Mt (XV) em que L e como definido na fórmula (II) e Mt representa um metal, tais como lítio ou magnésio, ou alumínio ou boro (e. g., metil-litio, brometo de metil-magnésio, hidreto de alumínio lítio, boro-hidreto de sódio) num solvente orgânico, por 40 exemplo, tetra-hidrofurano ou éter, a uma temperatura, por exemplo na gama desde 0 a 60 °C, seguida de conversão do grupo hidroxilo resultante num grupo de saída adequado (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato).
Os compostos de fórmula (IV) podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula (XIV) com um composto de fórmula (XV) num solvente orgânico, por exemplo, tetra-hidrofurano ou éter, a uma temperatura, por exemplo na gama desde -10 a 60 °C, seguida de oxidação do grupo hidroxilo resultante com um agente oxidante adequado (e. g., reagente de Swem, reagente de Dess-Martin ou clorocromato de piridínio) num solvente orgânico tal como diclorometano, N, N-dimetilformamida ou dimetilsulfóxido a uma temperatura, por exemplo na gama desde -78 a 60 °C.
Os compostos de fórmula (V), em que L1 representa hidrogénio e L, L2, L3, L4, P3, R1, m, η, V , W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (V), podem ser preparados a) fazendo reagir um composto de fórmula (II) com azida de sódio, num solvente orgânico, por exemplo, tetra-hidrofurano, N, iV-dimetilformamida ou dimetilsulfóxido a uma temperatura, por exemplo na gama desde 25 a 85 °C, seguida de redução do composto azido resultante utilizando um agente de redução adequado (e. g., trifenilfosfina) num solvente orgânico, por exemplo, tetra-hidrofurano e água, e eventualmente seguida de protecção da amina resultante (e. g., tratamento com cloreto de 3-nitrofenilsulfonilo na presença de uma base tal como piridina); ou, 41 b) fazendo reagir um composto de fórmula (IV) com uma amina (e. g., benzilamina, a-metil-benzilamina, 4-metoxibenzilamina ou 2,4-metoxibenzilamina) seguida de redução da imina resultante utilizando um agente de redução adequado (e. g., cianoboro-hidreto de sódio ou triacetoxiboro-hidreto de sódio) num solvente orgânico tal como metanol, etanol, diclorometano, ácido acético, IV-metilpirolidinona ou N, N-dimetilformamida contendo até 10% em peso de água e ácido acético, seguida de remoção do grupo de protecção benzilo resultante utilizando o reagente apropriado (e. g.r hidrogénio e um catalisador adequado (Paládio sobre carvão ou hidróxido de paládio), 2,3-dicloro-5,β-dicianobenzoquinona (DDQ) ou nitrado de amónio e cério (CAN)) num solvente orgânico, por exemplo, etanol, metanol, tetra-hidrofurano, diclorometano, acetonitrilo, água ou uma sua mistura, a uma temperatura que varia desde 25 a 80 °C e, eventualmente, seguida de protecção da amina resultante (e. g., tratamento com cloreto de 3-nitrofenilsulfonilo na presença de uma base tal como piridina);
Os compostos de fórmula (V) em que L, L1, L2, L3, L4, P3, R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (V) podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula (XVI), ou um seu sal adequado,
42 (xvi) em que LG5 é um grupo de saída (e. g., hidroxilo ou cloro), L, L1, L2, L3, L4, R1, m, n, v, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (V) , com reagentes, tais como, quando LG5 é hidroxilo, azida difenilfosfónica, na presença de uma amina (e. g., trietilamina), num solvente orgânico, por exemplo, terc-butanol, tetra-hidrofurano, diclorometano, água ou uma sua mistura, a uma temperatura que varia desde 25 a 100 °C, ou quando LG5 é cloro, azida de sódio, num solvente orgânico, por exemplo, éter, terc-butanol, tetra-hidrofurano, água ou uma sua mistura, a uma temperatura que varia desde 25 a 100 °C (Angewandte Chemie, 2005, 54, 5188), eventualmente seguida de protecção da amina resultante (e. g., tratamento com cloreto de 3-nitrof enilsulf onilo na presença de uma base tal como piridina) .
Os compostos de fórmula (III), (VI), (VII), (VIII), (XIII) e (XV) são conhecidos na literatura ou podem ser preparados utilizando técnicas conhecidas.
Os compostos de fórmula (IX) podem ser preparados a) fazendo reagir um composto de fórmula (XVII), ou um seu sal adequado,
P5 (XVU) em que P5 é hidrogénio ou um grupo de protecção (e. g.r terc-butildimetilsililo, tetra-hidropirano) e P3, L, L1 e L2 43 são como definidos na fórmula (IX), com um composto de fórmula (VI), (VII) ou (VIII), ou um seu sal adequado, na presença de uma base (e. g., carbonato de potássio, trietilamina ou diisopropiletilamina quando P3 é hidrogénio e hidreto de sódio ou di-iso-propilamida de litio quando P3 é 3-nitrofenilsulfonilo) num solvente orgânico tal como N,N- dimet ilf ormamida, iV-met ilpirolidinona, tetra- hidrofurano, etanol, n-butanol ou dimetilsulfóxido, a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 50 a 140 °C. Quando a reacção é realizada com o composto de fórmula (VIII) é necessário um segundo passo envolvendo a redução da cetona (e. g., utilizando boro-hidreto de sódio ou um complexo de borano/catalisador quiral). A remoção selectiva apropriada do grupo de protecção (e. g., complexo de ácido fluorídrico-piridina, fluoreto de tetrabutilamónio, ácido clorídrico diluído ou resina amberlyst-15 em metanol) e oxidação do álcool resultante no aldeído correspondente com um agente oxidante adequado (clorocromato de piridínio, reagente de Dess-Martin ou reagente de Swern) leva ao composto de fórmula (IX); ou, b) fazendo reagir um composto de fórmula (XVIII), ou um seu sal adequado,
π (XVIII) em que P6 e P7 representam um grupo de protecção de carbonilo acíclico ou cíclico (e. g., acetal de dimetoxilo 44 ou dietoxilo, 1,3-dioxolano ou 1,3-dioxano) e L, L1, L1 e P3 são como definidos na fórmula (IX) , com um composto de fórmula (VI), (VII) ou (VIII), ou um seu sal adequado, na presença de uma base (e. g. ., carbonato de potássio, trietilamina ou diisopropiletilamina quando P3 é hidrogénio e hidreto de sódio ou di-iso-propilamida de litio quando P3 é 3-nitrofenilsulfonilo) num solvente orgânico, tais como N, IV-dimetilf ormamida, IV-metilpirolidinona, tetra-hidrofurano, etanol, n-butanol ou dimetilsulfóxido, a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 50 a 140 °C. Quando se faz reagir com um composto de fórmula (VIII), esta é seguida de redução da cetona (e. g., utilizando boro- hidreto de sódio ou um complexo de borano/catalisador quiral) . A remoção do grupo de protecção (e. g., ácido clorídrico diluído ou resina amberlyst-15 em metanol) leva a um composto de fórmula (IX); ou, c) quando L1 representa hidrogénio, fazendo reagir um composto de fórmula (XIX), ou um seu sal adequado,
—P5 (XIX) em que P5 é hidrogénio ou um grupo de protecção (e. g., terc-butildimetilsililo, tetra-hidropirano) e L e L2 são como definidos na fórmula (IX), com um composto de fórmula (III), ou um seu sal adequado, na presença de um agente de redução adequado (e. g., cianoboro-hidreto de sódio, triacetoxiboro-hidreto de sódio ou hidrogénio na presença de um catalisador de paládio sobre carvão ou óxido de platina 45 adequado) num solvente orgânico, tais como metanol, etanol, diclorometano, ácido acético, N-metilpirolidinona ou N,N- dimet ilf ormamida, contendo até 10% em peso de água e ácido acético, seguida de remoção selectiva apropriada do grupo de protecção (e. g., complexo de ácido fluorídrico- piridina, fluoreto de tetrabutilamónio, ácido clorídrico diluído ou resina amberlyst-15 em metanol) e oxidação do álcool resultante no aldeído correspondente com um agente oxidante adequado (clorocromato de piridínio, reagente de Dess-Martin ou reagente de Swem); ou d) quando L1 representa hidrogénio, fazendo reagir um composto de fórmula (XX), ou um seu sal adequado, o—P° 7D H °-p (XX) em que P6 e P7 representam um grupo de protecção de carbonilo acíclico ou cíclico (e. g., acetal de dimetoxilo ou dietoxilo, 1,3-dioxolano ou 1,3-dioxano) e L e L2 são como definidos na fórmula (IX), com um composto de fórmula (III), ou um seu sal adequado, na presença de um agente de redução adequado (e. g., cianoboro-hidreto de sódio, triacetoxiboro-hidreto de sódio ou hidrogénio na presença de um catalisador de paládio sobre carvão ou óxido de platina adequado) num solvente orgânico, tal como metanol, etanol, diclorometano, ácido acético, N-metilpirolidinona ou N,N- dimetilf ormamida, contendo até 10% em peso de água e ácido acético, seguida de remoção do grupo de protecção 46 (e. g., ácido clorídrico diluído ou resina amberlyst-15 em metanol).
Os compostos de fórmula (XI) podem ser preparados convertendo um composto de fórmula (IX), ou um precursor do composto de fórmula (IX) como descrito acima, escolhendo uma sequência de reacções apropriada, por exemplo, redução de um aldeído a um álcool (e. g.f boro-hidreto de sódio), remoção selectiva apropriada do grupo de protecção (e. g., complexo de ácido fluorfdrico-piridina, fluoreto de tetrabutilamónio, ácido clorídrico diluído ou resina amberlyst-15 em metanol) e conversão de um álcool num grupo de saída adequado (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato); ou
Os compostos de fórmula (XII) podem ser preparados fazendo reagir um composto de fórmula (XXI), ou um seu sal adequado,
(T3P) hexafluorofosfato ou em que L, L3, L4, P4, m, η, V , fórmula (XII) e LG6 representa (e. g., cloro), com um composto adequado;
Quando LG6 representa convenientemente realizada na activação, por exemplo, carboni ácido 1-propanofosfónico W, X e Z são como definidos na hidroxilo ou um grupo de saída de fórmula (III), ou um seu sal hidroxilo, a reacção é presença de uma reagente de diimidazole, anidrido cíclico do de Ο-(7-azabenzotriazol-l-il)-Ν,Ν, Ν', Ν' -tetrametilurónio (HATU), num solvente orgânico, por exemplo, N,N- dimetilformamida ou diclorometano, opcionalmente num presença de uma base (e. g.f trietilamina), a uma temperatura, por exemplo na gama desde 0 a 60 °C. Quando LG6 representa cloro, a reacção é convenientemente realizada na presença de uma base, por exemplo, trietilamina ou diisopropiletilamina num solvente orgânico, por exemplo, diclorometano ou tetra-hidrofurano a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 0 a 25 °C.
Os compostos de fórmula (V) , (X), (XIV), (XVI) e (XXI) podem ser acedidos através de uma reacção de acoplamento geral de um composto de fórmula (XIII) em gue R1, Y são como definidos na fórmula (I) e LG4 representa hidroxilo ou um grupo de saída (e. g., halogeneto, cloreto), ou um seu sal adequado,
Quando LG4 representa hidroxilo, a reacção é convenientemente realizada na presença de uma reagente de activação, por exemplo, carbonildiimidazole, anidrido cíclico do ácido 1-propanofosfónico (T3P) ou hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-Ν, Ν, Ν', N' - tetrametilurónio (HATU), num solvente orgânico, por exemplo, N,N-dimetilformamida ou diclorometano, opcionalmente num presença de uma base (e. g., trietilamina); a uma temperatura; por exemplo na gama desde 0 a 60 °C, ou
Quando LG4 representa um halogeneto (e. g., cloreto), a reacção é convenientemente realizada na presença de uma base, por exemplo, trietilamina, diisopropiletilamina ou piridina num solvente orgânico, por exemplo, diclorometano ou tetra-hidrofurano a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 48 0 a 25 °C, com um composto de fórmula geral (XXII), ou um seu sal adequado, /X\
mV W
P9—N (ΧΧΠ) em que m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I) e, - para os compostos de fórmula (V), P9 representa
fórmula (V); - para os compostos de fórmula (X) , P9 representa um grupo de protecção de azoto apropriado, tal como terc-butoxicarbonilo, ou - para os compostos de fórmula (XIV), P9 representa
X-A OP L4 11 em que L, L3 e L4 são como definidos na fórmula (XIV) , em que P e P12 representam um grupo de protecção de carbonilo aciclico ou 49 cíclico (e. g.r acetal de dimetoxilo ou dietoxilo, 1,3-dioxolano ou 1,3-dioxano), seguida de desprotecção adequada (e. g.r ácido clorídrico diluído ou resina amberlyst-15 em metanol); - para os compostos de fórmula (XVI), P9 representa
em que L, L1, L2, L3, e L4 são como definidos na fórmula (XVI), em que P14 representam um grupo de protecção de ácido (e. g., metilo, etilo ou terc-butilo), seguida de desprotecção adequada (e. g.r hidróxido de lítio ou hidróxido de sódio, ácido trifluoroacético, ácido clorídrico); - para os compostos de fórmula (XXI), P9 representa
em que L, L3 e L4 são como definidos na fórmula (XXI), em que P14 representam um grupo de protecção de ácido (e. g.r terc-butilo), seguida de desprotecção adequada (e. g., ácido trifluoroacético, ácido clorídrico);
Um composto de fórmula geral (XXII), em que V representa uma ligação, X representa 0, W representa CR27R28CR29R30, Z representa CR37R38, R27, R28, R29, R30, R37, R38 representam, cada, hidrogénio, e P9 representa um grupo de protecção de azoto 50 apropriado como terc-butoxicarbonilo, pode ser preparado a partir de um composto de fórmula (XXIII)
em que P9, m e n são como definidos no composto de fórmula (XXII), por tratamento com um agente de redução adequado, tal como complexo de borano-THF num solvente adequado, tal como tetra-hidrofurano a 30-70 °C com o complexo de boro resultante decomposto por uma amina adequada, tal como
Nl, IV2-dimetilenoamina-l, 2-diamina em metanol a 60-90 °C
Um composto de fórmula (XXIII) pode ser preparado a partir de um composto de fórmula (XXIV)
η , em que LG e um grupo de saida adequado, tais como halogéneo ou tosilato e P9, m e n são como definidos no composto de fórmula (XXIII), por tratamento com uma base adequada, tal como terc-butóxido de potássio num solvente adequado, tal como tetra-hidrofurano a 50-90 °C.
Um composto de fórmula (XXIV) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXV) com um composto de fórmula (XXVI) 51 LG7
em que LG8 representa um hidroxilo ou halogéneo grupo tal como cloreto e P9, m, n e LG7 são como definidos no composto de fórmula (XXIV);
Para o caso em que LG8 representa hidroxilo, a reacção é convenientemente realizada na presença de uma reagente de activação, por exemplo, carbonildiimidazole, anidrido cíclico do ácido l-propanofosfónico (T3P) ou hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N,N',N'-tetrametilurónio (HATU), num solvente orgânico, por exemplo, N, iV-dimetilf ormamida ou diclorometano, opcionalmente na presença de uma base (e. g.r trietilamina), a uma temperatura, por exemplo na gama desde 0 a 60 °C;
Para o caso em que LG8 representa cloreto, a reacção é convenientemente realizada na presença de uma base, por exemplo, trietilamina ou diisopropiletilamina num solvente orgânico, por exemplo, diclorometano ou tetra-hidrofurano a uma temperatura, por exemplo, na gama desde 0 a 25 °C;
Um composto de fórmula (XXV) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXVII) 52 ηη (χχνιΐ) em que Ρ9, m e η sao como definidos no composto de fórmula (XXV), com amónia num solvente adequado tal como metanol a uma temperatura na gama desde 20-60 °C;
Um composto de fórmula (XXVII) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXVIII)
em que P9, m e n são como definidos no composto de fórmula (XXVII), com iodeto de trimetilsulfoxónio na presença de uma base adequada tal como hidreto de sódio ou terc-butóxido de potássio num solvente adequado tal como dimetilsufóxido a uma temperatura na gama desde 0-20 °C;
Além disso, o processo acima refere-se a passos de oxidação e redução simples, estes são realizados sob condições correntes bem estabelecidas na literatura (e. g., oxidações de Dess-Martin, Swern, clorocromato de piridínio, complexo de piridínio-trióxido de enxofre) . Estes podem ser convenientemente realizados num solvente orgânico tal como diclorometano, numa gama de temperatura desde -78 a 50 °C (Annual Reports on the Progress of Chemistry, Section B: Organic Chemistry, 2004, 100, 51-70) . 53
Um composto de fórmula geral (XXII), em que V representa uma ligação, X representa 0, W representa CR27R28CR29R30, Z representa CR37R38, R27, R18, R29, R30, R37, R38 representam, cada, hidrogénio, e P9 representa um grupo de protecção de azoto apropriado pode ser preparado a partir de um composto de fórmula (XXIX) sob condições reaccionais adequadas tal como em ácido forte
Um composto de fórmula geral (XXIX) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXVII) com etanolamina.
Um composto de fórmula geral (XXII), em que V representa uma ligação, X representa 0, W representa CR21R28CR29R30, Z representa CR37R38, R27, R28, R29, R30, R37, R38 representam, cada, hidrogénio, e P9 representa um grupo de protecção de azoto apropriado pode ser preparado a partir de um composto de fórmula (XXX) em que LG11 é um grupo de saida adequado, tais como halogéneo, OM ou OT.
54
Um composto de fórmula geral (XXX) pode ser formado a partir de um composto de fórmula (XXIX) sob condições apropriadas.
Um composto de fórmula (XIV) pode ser preparado a partir de um composto de fórmula (XXXI) em que CH2L5 é L e R200 é alquilo ou alquilo substituído com dialquilamina por tratamento sob condições ácidas tal como ácido fórmico.
Um composto de fórmula (XXXI) pode ser preparado a partir de um composto de fórmula (XXXII) por tratamento com um composto de fórmula (XXXIII). Hé y~
200
PPh3=CHOR (XXXIII)
Um composto de fórmula (IV) ou (XIV) pode ser preparado a partir de um composto de fórmula (XXXII) por oxidação do álcool sob condições adequadas tal como utilizando o reagente de Dess-Martin num solvente adequado tal como diclorometano contendo ácido trifluoroacético. 55
Li
HO (XXXII)
Um composto de fórmula (XXXII) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXXIII) em que P e um hidrogénio ou um grupo de protecção adequado e LG12 representa um grupo de saída (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato), com um composto de fórmula (X) ou um seu sal adequado, na presença de uma base (e. g., carbonato de potássio, trietilamina, diisopropiletilamina), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., ácido trifluoroacético, tiofenol, ácido tioacético);
(ΧΧΧΙΠ)
Um composto de fórmula (XXXII) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXXIV) em que P18 representa hidrogénio ou um grupo de protecção adequado com um composto de fórmula (X) , ou um seu sal adequado, na presença de um agente de redução adequado (e. g., cianoboro-hidreto de sódio, triacetoxiboro-hidreto de sódio ou hidrogénio na presença de um catalisador de paládio sobre carvão ou óxido de platina adequado), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., tratamento com clorídrico ou ácido trifluoroacético tiofenol, ácido tioacético); 56
(XXXIV)
Um composto de fórmula (XXXI) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXXV) em que CH2L5 é L e R200 é alquilo ou alquilo substituído com dialquilamina e LG13 representa um grupo de saída (e. g., cloreto, brometo, iodeto, metanossulfonato ou para-toluenossulfonato), com um composto de fórmula (X) ou um seu sal adequado, na presença de uma base (e. g., carbonato de potássio, trietilamina, diisopropiletilamina), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., ácido trifluoroacético, tiofenol, ácido tioacético);
(XXXV) 13
Um composto de fórmula (XXXI) pode ser preparado fazendo reagir um composto de fórmula (XXXVI) em que CH2L5 é L e R200 é alquilo ou alquilo substituído com dialquilamina com um composto de fórmula (X), ou um seu sal adequado, na presença de um agente de redução adequado (e. g., cianoboro-hidreto de sódio, triacetoxiboro-hidreto de sódio ou hidrogénio na presença de um catalisador de paládio sobre carvão ou óxido de platina adequado), seguida de remoção dos grupos de protecção (e. g., tratamento com clorídrico ou ácido trifluoroacético tiofenol, ácido tioacético); 57
(XXXVI)
Os compostos convenientes de fórmula (IV) incluem aqueles em que m e n = 2, V = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CH2CH2, Y = CO, R1 é 4-tiazole opcionalmente substituído na posição 2 do tiazole com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH(CH3)CH2,CH3, CH2CH(CH3)2, C (CH3) 3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; ou R1 é 3-tiofeno opcionalmente substituído na posição 5 do tiofeno com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH(CH3)CH2,CH3, CH2CH(CH3) 2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; representam R1 = 4-tiazole e 3-tiofeno
H (ΧΧΧΥΠ)
Os compostos convenientes de fórmula (X) e os análogos adequadamente protegidos no azoto incluem aqueles em que m e n = 2, V = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CH2CH2, Y = CO, R1 é 4-tiazole opcionalmente substituído na posição 2 do tiazole com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH (CH3)CH2,CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; ou R1 é 3-tiofeno opcionalmente substituído na posição 5 do tiofeno com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, 58 CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH(CH3)CH2,CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; R1 = 4-tiazole e 3-tiofeno são como representados na fórmula (XXXVII)
Os compostos convenientes de fórmula (XIV) incluem aqueles em que m e n = 2, V = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CH2CH2, Y = CO, R1 é 4-tiazole opcionalmente substituído na posição 2 do tiazole com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH(CH3)CH2,CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; ou R1 é 3-tiofeno opcionalmente substituído na posição 5 do tiofeno com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH (CH3) ch2, CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; R1 = 4-tiazole e 3-tiofeno são como representados na fórmula (XXXVII).
Os compostos convenientes de fórmula (XXXI) incluem aqueles em que m e n = 2, V = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CH2CH2, Y = CO, R1 é 4-tiazole opcionalmente substituído na posição 2 do tiazole com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH (CH3) CH2, CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; ou R1 é 3-tiofeno opcionalmente substituído na posição 5 do tiofeno com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH(CH3)CH2,CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; r1 = 4-tiazole e 3-tiofeno são como representados na fórmula (XXXVII) 59
Os compostos convenientes de fórmula (XXXII) incluem aqueles em que m e n = 2, V = ligação, Z = CH2, X = 0 e W = CH2CH2, Y = CO, R1 é 4-tiazole opcionalmente substituído na posição 2 do tiazole com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH (CH3) ch2, ch3, CH2CH (CH3) 2, C (CH3) 3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; ou R1 é 3-tiofeno opcionalmente substituído na posição 5 do tiofeno com metilo, etilo, propilo, butilo, CF3, CH2CF3, CH(CH3)2, CH(CH2CH3)2, CH (CH3) CH2, CH3, CH2CH(CH3)2, C(CH3)3, ciclopropilo, ciclobutilo e ciclopentilo; R1 = 4-tiazole e 3-tiofeno são como representados na fórmula (XXXVII).
Os compostos de fórmula (VI), (VII), (VIII), (XIII), (XV), (XVII), (XVIII), (XIX), (XX), (XXVI) e (XXVIII) estão comercialmente disponíveis, são conhecidos na literatura ou podem ser facilmente preparados pelos especialistas na técnica utilizando um dos processos descritos acima ou utilizando técnicas conhecidas.
Outros compostos intermediários são novos e representam aspectos independentes da invenção. Em particular, um número dos novos compostos intermediários aqui descritos são compostos que são capazes de originar bloqueio nos receptores muscarínicos M3. Os compostos intermediários da presente invenção possuindo actividade como antagonistas muscarínicos incluem: (9-(2-(4-(Hidroximetil)fenoxi)etil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona; 60 (9-(9-Hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-me tiltiazol-4-il)metanona ; (9-(2-(4-(2-Hidroxietil)fenoxi)etil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona; (9-(2-(5-(2-Hidroxietil)tiofen-2-il)etil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona; (9-(4-(2-Hidroxietil)fenetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona; 9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il) (2-metiltiazol-4-il)metanona; (9-(3-(2-Hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona; e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Será compreendido pelos especialistas na técnica que nos processos da presente invenção determinados grupos funcionais, tais como os grupos hidroxilo ou amino, nos reagentes podem precisar de ser protegidos com grupos de protecção. Assim, a preparação dos compostos de fórmula (I) pode envolver, numa fase apropriada, a adição ou remoção de um ou mais grupos de protecção. A protecção e desprotecção de grupos funcionais é descrita em "Protective Groups in Organic Chemistry", editado por J.W.F. McOmie, Plenum Press (1973) e "Protective Groups in Organic 61
Synthesis", 3a edição, T.W. Greene e P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience (1999).
Os compostos de fórmula (I) podem ser convertidos noutros compostos de fórmula (I) utilizando procedimentos correntes. produtos receptor incluindo M3), em que podem seus sais
Os compostos de fórmula I têm actividade como farmacêuticos, em particular como agonistas do adrenérgico β e agentes anticolinérgicos duplos antagonistas do receptor muscarinico (Ml, M2, e particular antagonistas de M3. As doenças e estados ser tratados com os compostos de fórmula (I) e os farmaceuticamente aceitáveis incluem: 1. aparelho respiratório: doenças obstrutivas das vias aéreas incluindo: asma, incluindo asma brônquica, alérgica, intrínseca, extrínseca, induzida pelo exercício físico, de origem medicamentosa (incluindo induzida por aspirina e NSAID) e induzida por pó, intermitente e persistente e de todas as gravidades, e outras causas de hipersensibilidade das vias aéreas; doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD); bronquite, incluindo bronquite infecciosa e eosinofílica; enfisema; bronquectasia; fibrose quística; sarcoidose; pulmão do agricultor e doenças relacionadas; pneumonite de hipersensibilidade; fibrose pulmonar, incluindo alveolite fibrosante criptogénica, pneumonias intersticiais idiopáticas, fibrose que complicam a terapia antineoplásica e infecção crónica, incluindo tuberculose e aspergilose e outras infecções fúngicas; complicações do transplante de pulmão; distúrbios vasculíticos e trombóticos da vasculatura pulmonar, e hipertensão pulmonar; actividade antitússica incluindo tratamento de tosse crónica associada a condições 62 inflamatórias e secretoras das vias aéreas, e tosse iatrogénica; rinite aguda e crónica incluindo rinite medicamentosa, e rinite vasomotora; rinite alérgica perene e sazonal incluindo rinite nervosa (febre dos fenos); polipose nasal; infecção virai aguda incluindo a constipação, e infecção devido ao vírus sincicial respiratório, gripe, coronavírus (incluindo SARS) ou adenovírus; ou esofagite eosinofílica; 2. osso e articulações: artrites associadas a ou incluindo osteoartrite/osteoartrose, primária e secundária a, por exemplo, displasia congénita da anca; espondilite cervical e lombar, e dor lombossagrada e do pescoço; osteoporose; artrite reumatóide e doença de Still; espondilartropatias seronegativas incluindo espondilite anquilosante, artrite psoriática, artrite reactiva e espondilartropatia indiferenciada; artrite séptica e outras artropatias relacionadas com infecção e distúrbios ósseos tais como tuberculose, incluindo doença de Potts e síndrome de Poncet; sinovite aguda e crónica induzida por cristais incluindo gota úrica, doença por depósito de pirofosfato de cálcio e tendão relacionado com apatite de cálcio, inflamação da bursa e sinovial; doença de Behcet; síndrome primária e secundária de Sjogren; esclerose sistémica e esclerodermia limitada; lúpus eritematoso disseminado, doença mista do tecido conjuntivo e doença indiferenciada do tecido conjuntivo; miopatias inflamatórias incluindo dermatomiosite e polimiosite; polimialgia reumática; artrite juvenil incluindo artrites inflamatórias idiopáticas de qualquer distribuição articular e síndromes associadas, e febre reumática e as suas complicações sistémicas; vasculites incluindo arterite de células gigantes, arterite de 63
Takayasu, síndrome de Churg-Strauss, poliarterite nodosa, poliarterite microscópica e vasculites associadas a infecção virai, reacções de hipersensibilidade, crioglobulinas, e paraproteinas; dor lombossagrada; Febre Mediterrânica Familiar, síndrome de Muckle-Wells, e Febre Hiberniana Familiar, doença de Kikuchi; artralgias de origem medicamentosa, tendinites e miopatias; 3. dor e remodelação de tecido conjuntivo de distúrbios musculoesqueléticos devido a lesão [por exemplo, lesão desportiva] ou doença: artrites (por exemplo, artrite reumatóide, osteoartrite, gota ou artropatia cristalina), outra doença articular (tais como degenerescência do disco intervertebral ou degenerescência da articulação temporomandibular), doença de remodelação do osso (tais como osteoporose, doença de Paget ou osteonecrose), policondrite, esclerodermia, distúrbio misto do tecido conjuntivo, espondilartropatias ou doença periodontal (tal como periodontite); 4. pele: psoríase, dermatite atópica, dermatite de contacto ou outras dermatoses eczematosas, e reacções de hipersensibilidade de tipo retardado; fito- e fotodermatite; dermatite seborreica, dermatite herpetiforme, líquen plano, líquen escleroso e atrófico, pioderma gangrenoso, sarcoidose da pele, lúpus eritematoso discóide, pênfigo, penfigóide, epidermólise bolhosa, urticária, angioedema, vasculites, eritemas tóxicos, eosinofilias cutâneas, alopecia areata, calvície de padrão masculino, síndrome de Sweet, síndrome de Weber-Christian, eritema multiforme; celulite, infecciosa e não infecciosa; paniculite; linfomas cutâneos, cancro da pele não-melanoma e outras lesões displásicas; distúrbios 64 de origem medicamentosa incluindo erupções ficas de fármacos; 5. olhos: blefarite; conjuntivite, incluindo conjuntivite alérgica perene e vernal; irite; uveíte anterior e posterior; coroidite; auto-imune; distúrbios degenerativos ou inflamatórios que afectam a retina; oftalmia incluindo oftalmia simpática; sarcoidose; infecções incluindo virais, fúngicas e bacterianas; 6. aparelho gastrointestinal: glossite, gengivite, periodontite; esofagite, incluindo refluxo; gastroenterite eosinofílica, mastocitose, doença de Crohn, colite incluindo colite ulcerosa, proctite, prurido anal; doença celíaca, síndrome do intestino irritável, e alergias de origem alimentar que podem ter efeitos remotos a partir do intestino (por exemplo, enxaqueca, rinite ou eczema); 7. abdominal: hepatite, incluindo auto-imune, alcoólica e virai; fibrose e cirrose do fígado; colecistite; pancreatite aguda e crónica; 8. urogenital: nefrite incluindo intersticial e glomerulonefrite; síndrome nefrótica; cistite incluindo aguda e crónica (intersticial) cistite e úlcera de Hunner; uretrite aguda e crónica, prostatite, epididimite, ooforite e salpingite; vulvovaginite; doença de Peyronie; disfunção eréctil (masculina e feminina); 9. rejeição de aloenxerto: aguda e crónica após, por exemplo, transplante de rim, coração, fígado, pulmão, medula 65 óssea, pele ou córnea ou após transfusão de sangue; ou doença crónica do enxerto contra o hospedeiro; 10. SNC: doença de Alzheimer e outros distúrbios demenciais incluindo CJD e nvCJD; amiloidose; esclerose múltipla e outras sindromes desmielinizantes; aterosclerose e vasculite cerebral; arterite temporal; miastenia grave; dor aguda e crónica (aguda, intermitente ou persistente, quer de origem central ou periférica) incluindo dor visceral, dor de cabeça, enxaqueca, nevralgia do trigémeo, dor facial atípica, dor da articulação e do osso, dor decorrente de invasão por cancro e tumor, sindromes de dor neuropática incluindo diabética, pós-herpética, e neuropatias associadas a HIV; neurossarcoidose; complicações do sistema nervoso central e periférico de processos malignos, infecciosos ou auto-imunes; 11. outros distúrbios auto-imunes e alérgicos incluindo tiroidite de Hashimoto, doença de Graves, doença de Addison, diabetes mellitus, púrpura trombocitopénica idiopática, fasciíte eosinofílica, síndrome de hiper-IgE, síndrome antifosfolípido; 12. outros distúrbios com uma componente inflamatória ou imunológica; incluindo síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA), lepra, síndrome de Sezary e sindromes paraneoplásicas; 13. cardiovascular: aterosclerose, que afecta a circulação coronária e periférica; pericardite; miocardite, cardiomiopatias inflamatórias e auto-imunes incluindo sarcóide do miocárdio; lesões de isquémia-reperfusão; 66 endocardite, valvulite e aortite incluindo infecciosa (por exemplo, sifilitica); vasculites; distúrbios das veias proximais e periféricas incluindo flebite e trombose, incluindo trombose das veias profundas e complicações das varizes; 14. oncologia: tratamento de cancros comuns, incluindo tumores da próstata, mama, pulmão, ovário, pâncreas, intestino e cólon, estômago, pele e cérebro e malignidades que afectam a medula óssea (incluindo as leucemias) e sistemas linfoproliferativos, tais como o linfoma de Hodgkin e não-Hodgkin; incluindo a prevenção e tratamento de doença metastática e recorrências de tumores, e síndromes paraneoplásicas; e, 15. aparelho gastrointestinal: doença celíaca, proctite, gastroenterite eosinofílica, mastocitose, doença de Crohn, colite ulcerosa, colite microscópica, colite indeterminada, distúrbio do intestino irritável, síndrome do intestino irritável, diarreia não inflamatória, alergias de origem alimentar que têm efeitos remotos a partir do intestino, e. g., enxaqueca, rinite e eczema.
Assim, a presente invenção proporciona um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como acima definido para ser utilizado em terapia.
Num outro aspecto, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como acima definido no fabrico de um medicamento para ser utilizado em terapia. 67
No contexto da presente especificação, o termo "terapia" também inclui "profilaxia" a menos que existam indicações especificas em contrário. Os termos "terapêutico" e "terapeuticamente" devem ser interpretados em conformidade. É esperado que a profilaxia seja particularmente relevante para o tratamento de pessoas que sofreram um episódio anterior, ou são de outro modo consideradas como estando em maior risco de sofrer, da doença ou estado em questão. As pessoas em risco de desenvolver uma doença ou estado particular, incluem geralmente aquelas que têm um passado familiar da doença ou estado, ou aqueles que foram identificados por ensaios genéticos ou rastreios como sendo particularmente susceptiveis a desenvolver a doença ou estado.
As requerentes divulgam um método de tratamento, ou redução do risco, de uma doença ou estado inflamatório (incluindo uma doença ou estado obstrutiva das vias aéreas reversível), o qual compreende administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula (I), ou um seu sal f armaceut icamente aceitável como acima definido, a um doente necessitado do mesmo.
Em particular, os compostos desta invenção podem ser utilizados no tratamento de síndrome de insuficiência respiratória do adulto (ARDS), enfisema pulmonar, bronquite, bronquectasia, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), asma e rinite.
Para as utilizações terapêuticas supramencionadas a dosagem administrada variará, evidentemente, com o composto utilizado, o modo de administração, o tratamento desejado e o distúrbio indicado. Por exemplo, a dosagem diária do composto da invenção, 68 se inalado , pode ser na gama desde 0,05 microgramas por quilograma de peso corporal (pg/kg) a 100 microgramas por quilograma de peso corporal (pg/kg). Alternativamente, se o composto for administrado por via oral, então a dosagem diária do composto da invenção pode ser na gama desde 0,01 microgramas por quilograma de peso corporal (pg/kg) a 100 miligramas por quilograma de peso corporal (mg/kg).
Os compostos de fórmula (I) e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser utilizados sozinhos, mas serão geralmente administrados na forma de uma composição farmacêutica na qual o composto/sal de fórmula (I) (ingrediente activo) está em associação com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. Os procedimentos convencionais para a selecção e preparação de formulações farmacêuticas adequadas são descritos em, por exemplo, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", Μ. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.
Dependendo do modo de administração, a composição farmacêutica compreenderá de um modo preferido desde 0,05 a 99% em peso (por cento em peso) , de um modo mais preferido desde 0,05 a 80% em peso, de um modo ainda mais preferido desde 0,10 a 70% em peso, e de um modo ainda mais preferido desde 0,10 a 50% em peso, de ingrediente activo, sendo todas as percentagens em peso baseadas na composição total. A presente invenção também proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como acima definido, em associação com um adjuvante, diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. 69 A invenção proporciona ainda um processo para a preparação de uma composição farmacêutica da invenção, o qual compreende misturar um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como acima definido com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
As composições farmacêuticas podem ser administradas por via tópica (e. g., na pele ou no pulmão e/ou vias aéreas) na forma, e. g. , de cremes, soluções, suspensões, aerossoles de Hidrofluoroalcano (HFA) e formulações de pó seco, por exemplo, formulações para o dispositivo inalador conhecido como o Turbuhaler®; ou sistemicamente, e. g., por administração oral na forma de comprimidos, cápsulas, xaropes, pós ou granulados; ou por administração parentérica na forma de soluções ou suspensões; ou por administração subcutânea; ou por administração rectal na forma de supositórios; ou por via transdérmica.
As formulações de pó seco e os aerossoles de HFA pressurizados dos compostos da invenção podem ser administrados por inalação oral ou nasal. Para inalação, o composto está, de modo desejável, finamente dividido. De um modo preferido, o composto finamente dividido tem um diâmetro médio de massa inferior a 10 pm, e pode estar suspenso numa mistura propulsora com a ajuda de um dispersante, tal como um ácido gordo Cg-C2o ou o seu sal, (por exemplo, ácido oleico), um sal biliar, um fosfolípido, um alquilsacárido, um tensioactivo perfluorado ou polietoxilado, ou outro dispersante farmaceuticamente aceitável.
Os compostos da invenção também podem ser administrados por meio de um inalador de pó seco. O inalador pode ser um inalador 70 de dose única ou de doses múltiplas, e pode ser um inalador de pó seco accionado pela respiração.
Uma possibilidade é misturar o composto da invenção finamente dividido com uma substância veiculo, por exemplo, um mono-, di- ou polissacárido, um açúcar-álcool, ou outro poliol. Os veículos adequados são açúcares, por exemplo, lactose, glucose, rafinose, melezitose, lactitol, maltitol, trealose, sacarose, manitol; e amido. Alternativamente o composto finamente dividido pode ser revestido por outra substância. A mistura em pó também pode ser introduzida em cápsulas de gelatina dura, contendo cada, a dose desejada do composto activo.
Outra possibilidade é processar o pó finamente dividido em esferas que se quebram durante o procedimento de inalação. Este pó em esferas pode ser introduzido no reservatório de fármaco de um inalador multidose, por exemplo, aquele conhecido como Turbuhaler®, no qual uma unidade de dosagem mede a dose desejada que é depois inalada pelo doente. Com este sistema, o ingrediente activo, com ou sem uma substância veículo, é administrado ao doente.
Para administração oral o composto da invenção pode ser misturado com um adjuvante ou um veículo, por exemplo, lactose, sacarose, sorbitol, manitol; um amido, por exemplo, amido de batata, amido de milho ou amilopectina; um derivado de celulose; um aglutinante, por exemplo, gelatina ou polivinilpirrolidona; e/ou um lubrificante, por exemplo, estearato de magnésio, estearato de cálcio, polietilenoglicol, uma cera, parafina e semelhantes e, em seguida, prensado em comprimidos. Se for necessário comprimidos revestidos, os núcleos, preparados como 71 descrito acima, podem ser revestidos com uma solução concentrada de açúcar que pode conter, por exemplo, goma-arábica, gelatina, talco e dióxido de titânio. Alternativamente, o comprimido pode ser revestido com um polímero adequado dissolvido num solvente orgânico facilmente volátil.
Para a preparação de cápsulas de gelatina mole, o composto da invenção pode ser misturado com, por exemplo, um óleo vegetal ou polietilenoglicol. As cápsulas de gelatina dura podem conter granulados do composto utilizando os excipientes para comprimidos supramencionados. Formulações líquidas ou semi-sólidas do composto da invenção também podem ser introduzidas em cápsulas de gelatina dura.
As preparações líquidas para aplicação oral podem estar na forma de xaropes ou suspensões, por exemplo, soluções contendo o composto da invenção, sendo o restante açúcar e uma mistura de etanol, água, glicerol e propilenoglicol. Opcionalmente, essas preparações líquidas podem conter corantes, aromatizantes, sacarina e/ou carboximetilcelulose como um espessante ou outros excipientes conhecidos dos especialistas na técnica.
Em particular, os compostos da presente invenção e os seus sais podem ser utilizados no tratamento de doenças inflamatórias tais como (mas não se limitando a) artrite reumatóide, osteoartrite, asma, rinite alérgica, doença pulmonar obstrutiva crónica (COPD), psoríase e doença inflamatória do intestino, os compostos da invenção podem ser combinados com os seguintes agentes: agentes anti-inflamatórios não esteróides (a seguir NSAIDs) incluindo inibidores não selectivos de ciclo-oxigenase C0X-1/C0X-2 aplicados por via tópica ou sistémica (tais como piroxicam, diclofenac, ácidos propiónicos, tais como naproxeno, 72 flurbiprofeno, fenoprofeno, cetoprofeno e ibuprofeno, fenamatos, tais como ácido mefenâmico, indometacina, sulindac, azapropazona, pirazolonas tal como fenilbutazona, salicilatos tal como aspirina); inibidores selectivos de COX-2 (tais como meloxicam, celecoxib, rofecoxib, valdecoxib, lumarocoxib, parecoxib e etoricoxib); doadores de óxido nítrico inibidores da ciclo-oxigenase (CINOD); glucocorticosteróides (administrados pelas vias tópica, oral, intramuscular, intravenosa ou intra-articular); metotrexato; leflunomida; hidroxicloroquina; d-penicilamina; auranofina ou outras preparações de ouro parentéricas ou orais; analgésicos; diacereína; terapias intra-articulares tal como derivados de ácido hialurónico; e suplementos nutritivos tal como glucosamina.
Os compostos da invenção também podem ser administrados em conjunto com outros compostos utilizados para o tratamento dos estados acima.
Por conseguinte, a invenção refere-se ainda a terapias de associação em que um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, ou uma composição ou formulação farmacêutica compreendendo um composto da invenção, é administrado simultaneamente ou sequencialmente ou como uma preparação de associação com outro agente ou agentes terapêuticos, para o tratamento de uma ou mais dos estados listados acima. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em conjunto com uma citocina ou agonista ou antagonista da função da citocina, (incluindo agentes que actuam nas vias de sinalização de citocina, tais como os moduladores do sistema 73 SOCS) incluindo os alfa-, beta- e gama-interferões; factor de crescimento tipo insulina de tipo I (IGF-1); interleucinas (IL) incluindo IL1 a 17, e antagonistas ou inibidores de interleucina tal como anakinra; inibidores do factor de necrose tumoral alfa (TNF-cx) tais como os anticorpos monoclonais anti-TNF (por exemplo infliximab; adalimumab e CDP-870) e antagonistas do receptor de TNF incluindo moléculas de imunoglobulina (tal como etanorcept) e agentes de baixo peso molecular tal como pentoxifilina.
Além disso a invenção refere-se a uma associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, com um anticorpo monoclonal direccionado para Linfócitos B (tal como CD20 (rituximab), MRA-aIL16R) ou linfócitos T (CTLA4-Ig, HuMax 11-15) . A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, com um modulador da função do receptor de quimiocina, tais como um antagonista de CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 e CCR11 (para a família C-C) ; CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 e CXCR5 (para a família C-X-C) e CX3CRI para a família C-X3-C. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, com um inibidor de metaloprotease da matriz (MMP) , i. e., as estromelisinas, as colagenases e as gelatinases, bem como a agrecanase; especialmente a colagenase-1 (MMP-1), colagenase-2 (MMP-8), colagenase-3 (MMP-13), estromelisina-1 (MMP-3), estromelisina-2 (MMP-10) e estromelisina-3 (MMP-11) e MMP-9 e MMP-12, incluindo agentes tal como a doxiciclina. 74 A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um inibidor da biossintese de leucotrienos, inibidor de 5-lipoxigenase (5—LO) ou antagonista da proteína de activação da 5-lipoxigenase (FLAP) tais como; zileuton; ABT-761; fenleuton; tepoxalina; Abbott-79175; Abbott-85761; uma N-(5-substituída)-tiofeno-2-alquilsulfonamida; 2,6-di-terc-butilfenol-hidrazonas; um metoxitetra-hidropirano tal como Zeneca ZD-2138; o composto SB-210661; um composto de 2-cianonaftaleno substituído com piridinilo tal como L-739 010; um composto de 2-cianoquinolina tal como L-746 530; ou um composto de indole ou quinolina, tais como MK-591, MK-886 e BAY x 1005. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um antagonista de receptor para leucotrienos (LT) B4, LTC4, LTD4 e LTE4 seleccionado do grupo consistindo do fenotiazin-3-los tal como L-651 392; compostos de amidino tal como CGS-25019c; benzoxalaminas tal como ontazolast; benzenocarboximidamidas tal como BIIL 284/260; e compostos, tais como zafirlucaste, ablucaste, montelucaste, pranlucaste, verlucaste (MK-679), RG-12525, Ro-245913, iralucaste (CGP 45715A) e BAY x 7195. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um inibidor de fosfodiesterase (PDE) tal como uma metilxantanina incluindo teofilina e aminofilina; um inibidor selectivo da isoenzima PDE incluindo um inibidor de PDE4 um inibidor da isoforma PDE4D ou um inibidor de PDE5. 75 A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um antagonista do receptor de histamina tipo 1, tais como cetirizina, loratadina, desloratadina, fexofenadina, acrivastina, terfenadina, astemizole, azelastina, levocabastina, clorfeniramina, prometazina, ciclizina ou mizolastina; aplicado por via oral, tópica ou parentérica. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um inibidor da bomba de protões (tal como omeprazole) ou um antagonista gastroprotector do receptor de histamina de tipo 2. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um antagonista do receptor de histamina de tipo 4. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um agente simpaticomimético vasoconstritor agonista dos receptores adrenérgicos alfa-l/alfa-2, tais como propil-hexedrina, fenilefrina, fenilpropanolamina, efedrina, pseudoefedrina, cloridrato de nafalozina, cloridrato de oximetazolina, cloridrato de tetra-hidrozolina, cloridrato de xilometazolina, cloridrato de tramazolina ou cloridrato de etilnorepinefrina. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e uma cromona, tais como cromoglicato de sódio ou nedocromilo sódico. 76 A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, com um glucocorticóide, tais como flunisolida, acetonido de triancinolona, dipropionato de beclometasona, budesonida, propionato de fluticasona, ciclesonida ou furoato de mometasona. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, com um agente que modula um receptor hormonal nuclear tal como PPAR. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em conjunto com uma imunoglobulina (Ig) ou preparação de Ig ou um antagonista ou anticorpo de modulação da função de Ig tal como anti-IgE (por exemplo, omalizumab). A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e outro agente anti-inflamatório aplicado por via sistémica ou por tópica, tal como talidomida ou um seu derivado, um retinóide, ditranol ou calcipotriol. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e associações de aminossalicilatos e sulfapiridina, tais como sulfassalazina, messalazina, balsalazida e olsalazina; e agentes imunomoduladores, tal como as tiopurinas e corticosteróides tal como a budesonida. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, 77 em conjunto com um agente antibacteriano, tais como um derivado de penicilina, uma tetraciclina, um macrólido, uma beta-lactama, uma fluoroquinolona, metronidazole, um aminoglicósido inalado; um agente antiviral incluindo aciclovir, famciclovir, valaciclovir, ganciclovir, cidofovir, amantadina, rimantadina, ribavirina, zanamavir e oseltamavir; um inibidor de protease tal como indinavir, nelfinavir, ritonavir e saquinavir; um inibidor nucleosidico da transcriptase inversa, tais como didanosina, lamivudina, estavudina, zalcitabina ou zidovudina; ou um inibidor não nucleosidico da transcriptase inversa, tais como nevirapina ou efavirenz. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um agente cardiovascular, tais como um bloqueador do canal de cálcio, um bloqueador do receptor adrenérgico beta, um inibidor da enzima de conversão da angiotensina (ACE), um antagonista do receptor de angiotensina-2; um agente hipolipemiante, tais como uma estatina ou um fibrato; um modulador de morfologia da célula sanguínea tal como pentoxifilina; trombolítico, ou um anticoagulante tal como um inibidor da agregação de plaquetas. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um agente do SNC, tais como um ant idepressivo (tal como sertralina), um fármaco antiparkinsónico (tal como deprenilo, L-dopa, ropinirole, pramipexole, um inibidor de MAOB, tais como selegina e rasagilina, um inibidor de comP, tal como tasmar, um inibidor de A-2, um inibidor da recaptação de dopamina, um antagonista de NMDA, um agonista de nicotina, um agonista de dopamina ou um inibidor de óxido nítrico-sintase neuronal) ou um 78 rivastigmina, fármaco anti-Alzheimer, tais como donepezil, tacrina, um inibidor de COX-2, propentofilina ou metrifonato. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um agente para o tratamento de dor aguda ou crónica, tal como um analgésico que actua centralmente ou perifericamente (por exemplo, um opióide ou seu derivado) , carbamazepina, fenitoina, valproato de sódio, amitriptilina ou outros agentes antidepressivos, paracetamol ou um agente anti-inflamatório não esteróide. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em conjunto com um agente anestésico local aplicado por via parentérica ou tópica (incluindo inalada) tal como lignocaina ou um seu derivado.
Um composto da presente invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, também pode ser utilizado em associação com um agente antiosteoporose incluindo um agente hormonal tal como raloxifeno, ou um bifosfonato tal como alendronato. A presente invenção refere-se ainda à associação de um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em conjunto com um: (i) inibidor de triptase; (ii) antagonista do factor de activação de plaquetas (PAF); (iii) inibidor da enzima de conversão de interleucina (ICE); (iv) inibidor de IMPDH; (v) inibidores da molécula de adesão incluindo antagonista de VLA-4; (vi) catepsina; (vii) inibidor de cinase tal como um inibidor de tirosina-cinase (tal como Btk, Itk, Jak3 79 ou MAP, por exemplo mesilato de Gefitinib ou Imatinib), uma serina/treonina-cinase (tal como um inibidor de uma MAP cinase tal como p38, JNK, proteína-cinase A, B ou C, ou IKK) , ou uma cinase envolvida na regulação do ciclo celular (tal como um cinase dependente de ciclina); (viii) inibidor da glucose-6 fosfato-desidrogenase; (ix) antagonista do receptor de quinina-B.sub 1. ou B.sub2.; (x) agente antigota, por exemplo colchicina; (xi) inibidor de xantina-oxidase, por exemplo alopurinol; (xii) agente uricossúrico, por exemplo probenecida, sulfinpirazona ou benzobromarona; (xiii) secretagogo da hormona do crescimento; (xiv) factor de crescimento transformante (TGFP); (xv) factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF); (xvi) factor de crescimento de fibroblastos, por exemplo factor de crescimento de fibroblastos básico (bFGF); (xvii) factor de estimulação de colónias de granulócitos macrófagos (GM-CSF); (xviii) creme de capsaicina; (xix) antagonista do receptor de taquicinina NK.subl. ou NK.sub3., tais como NKP-608C, SB-233412 (talnetant) ou D-4418; (xx) inibidor de elastase tal como UT-77 ou ZD-0892; (xxi)inibidor da enzima de conversão de TNF-alfa (TACE); (xxii) inibidor da óxido nitrico-sintase induzida (iNOS); (xxiii) molécula homóloga do receptor quimiotáctico expressada em células TH2, (tal como um antagonista de CRTH2); (xxiv) inibidor de P38; (xxv) agente de modulação da função dos receptores tipo Toll (TLR), (xxvi) agente de modulação da actividade dos receptores purinérgicos tal como P2X7; (xxvii) inibidor de activação do factor de transcrição, tais como NFkB, API ou STATS; ou (xxviii) um agonista do receptor de glucocorticóides (receptor GR) .
Num outro aspecto a presente invenção proporciona uma associação (por exemplo, para o tratamento de COPD, asma ou 80 rinite alérgica) de um composto de fórmula (I) e um ou mais agentes seleccionados da lista compreendendo: • um agonista receptor de glucocorticóides não esteróide (receptor GR); • um inibidor de PDE4 incluindo um inibidor da isoforma PDE4D; • um modulador da função do receptor de quimiocina (tal como um antagonista do receptor de CCR1); • um esteróide (tal como budesonida); e • um inibidor da função cinase de p38.
Um composto da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, também pode ser utilizado em associação com um agente terapêutico existente para o tratamento de cancro, por exemplo os agentes adequados incluem: (i) um fármaco antiproliferativo/antineoplásico ou uma associação dos mesmos, como utilizado em oncologia médica, tais como um agente alquilante (por exemplo, cis-platina, carboplatina, ciclofosfamida, mostarda de azoto, melfalano, clorambucil, bussulfano ou um nitrosoureia); um antimetabolito (por exemplo, um antifolato, tais como uma fluoropirimidina como 5-fluorouracilo ou tegafur, raltitrexed, metotrexato, citosina arabinosido, hidroxiureia, gencitabina ou paclitaxel); um antibiótico antitumoral (por exemplo, uma antraciclina, tais 81 como adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina ou mitramicina); um agente antimitótico (por exemplo, um alcaloide de vinca, tais como vincristina, vinblastina, vindesina ou vinorelbina, ou um taxóide, tais como taxol ou taxotere) ; ou um inibidor de topoisomerase (por exemplo, uma epipodofilotoxina, tais como etoposido, teniposido, amsacrina, topotecano ou uma camptotecina); (ii) um agente citostático tal como um antiestrogénio (por exemplo, tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno ou iodoxifeno), um regulador negativo do receptor de estrogénio (por exemplo, fulvestrant) , um antiandrogénio (por exemplo, bicalutamida, flutamida, nilutamida ou acetato de ciproterona), um antagonista de LHRH ou agonista de LHRH (por exemplo, goserrelina, leuprorrelina ou buserrelina), um progestogénio (por exemplo, acetato de megestrol), um inibidor de aromatase (por exemplo, anastrozole, letrozole, vorazole ou exemestano) ou um inibidor de 5a-redutase tal como finasterida; (iii) um agente que inibe a invasão por células cancerígenas (por exemplo, um inibidor de metaloproteinases como marimastat ou um inibidor da função do receptor do activador plasminogénico da urocinase); (iv) um inibidor da função do factor de crescimento, por exemplo: um anticorpo contra o factor de crescimento (por exemplo, o anticorpo anti-erbb2 trastuzumab ou o anticorpo anti-erbbl cetuximab [C2 2 5]), um inibidor da farnesil-transferase, um inibidor de tirosina-cinase ou um inibidor de serina/treonina-cinase, um inibidor da família do factor de crescimento epidérmico (por exemplo, um inibidor de 82 tirosina-cinase da família de EGFR tal como N-(3-cloro-4-fluorofenil)-7-metoxi-6-(3-morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (gefitinib, AZD1839), N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2- metoxietoxi)quinazolin-4-amina erlotinib, OSI-774) ou 6-acrilamido-N- (3-cloro-4-fluorofenil)-7-(3- morfolinopropoxi)quinazolin-4-amina (Cl 1033)), um inibidor da família do factor de crescimento derivado de plaquetas, ou um inibidor da família do factor de crescimento de hepatócitos; (v) um agente antiangiogénico tal como um que inibe os efeitos do factor de crescimento do endotélio vascular (por exemplo, o anticorpo anti-factor de crescimento de células endoteliais vasculares bevacizumab, um composto divulgados nos documentos WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 ou WO 98/13354), ou um composto que actua por outro mecanismo (por exemplo, linomida, um inibidor da função da Integrina ανβ3 ou uma angiostatina); (vi) um agente de deterioração vascular tal como combretastatina A4, ou um composto divulgado nos documentos WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 ou WO 02/08213; (vii) um agente utilizado em terapia de antimensageiro, por exemplo um dirigido contra um dos alvos listados acima, tal como ISIS 2503, um antimensageiro anti-ras: (viii) um agente utilizado numa abordagem de terapia de genes, por exemplo abordagens para substituir genes aberrantes, tais como p53 aberrante ou BRCA1 ou BRCA2 aberrante, GDEPT (terapia de profármaco enzimático dirigido para gene) abordagens tais como aquelas que utilizam citosina-desaminase, timidina-cinase ou uma enzima nitro-redutase bacteriana e abordagens para 83 aumentar a tolerância do doente à quimioterapia ou radioterapia tal como a terapia de genes de resistência a múltiplos fármacos; ou (ix) um agente utilizado num abordagem imunoterapêutica, por exemplo abordagens ex vivo e in vivo para aumentar a imunogenicidade das células tumorais do doente, tal como a operação com citocinas, tais como interleucina 2, interleucina 4 ou factor de estimulação de colónias de granulócitos-macrófagos, abordagens para diminuir a anergia de células T, abordagens utilizando células imunitárias transfectadas, tais como células dendríticas transfectadas com citocinas, abordagens utilizando linhas de células tumorais transfectadas com citocinas e abordagens utilizando anticorpos anti-idiotípicos.
Os compostos de fórmula (I) acima podem ser convertidos num seu sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo um sal de adição de ácido tal como um cloridrato (por exemplo, um dicloridrato), bromidrato (por exemplo, um dibromidrato) , trifluoroacetato (por exemplo, um ditrifluoroacetato), sulfato, fosfato, acetato, fumarato, maleato, tartarato, lactato, citrato, piruvato, succinato, oxalato, metanossulfonato ou p-toluenossulfonato. ilustrada utilizados por referência aos os seguintes Métodos A invenção será agora seguintes Exemplos onde foram Gerais: 84 Métodos Gerais
Os espectros de RMN de ΧΗ foram registados num instrumento Inova de 40 0 MHz da Varian ou um Mercury-VX de 300 MHz da Varian. Os picos centrais do clorofórmio-d (δΗ 7,27 ppm), dimetilsulfóxido-d6 (δΗ 2,50 ppm), acetonitrilo-ch (δΗ 1,95 ppm) ou metanol-cO (δΗ 3,31 ppm) foram utilizados como referências internas. A cromatografia em coluna foi realizada utilizando silica gel; sílica 60a de Fisher Scientific, tamanho de partícula 35-70 mícron, Davisll® ou 0,040-0,63 mm, cartuchos pré-empacotados biotage KP-Sil. Salvo indicação em contrário, os materiais de partida estavam comercialmente disponíveis. Todos os solventes e reagentes comerciais foram de pureza laboratorial e foram utilizados como recebidos. O seguinte método foi utilizado para análise por LC/MS:
Instrumento Agilent 1100; Coluna Waters Symmetry Cis, 2,1 x 50 mm; Massa APCI ou multimodo (APCI + ESI; Caudal 1 mL/min; Comprimento de onda 220 nm; Solvente A: água + 0,1% de TF A; Solvente B: acetonitrilo + 0,1% de TFA ; Gradiente 5-95%/B ao longo de 8 min. A purificação por HPLC preparativa de fase inversa foi realizada utilizando um gradiente de acetonitrilo ou metanol em solução aquosa de TFA a 0,2% ou ácido fórmico aquoso a 0,1% utilizando uma coluna SunFire™ prep C8 OBD™ 5 pm 30 x 100 mm (Waters Corporation) a um caudal de 35 mL/min ou um gradiente de acetonitrilo ou metanol em solução aquosa de acetato de amónio a 0,1% ou ácido fórmico aquoso a 0,1% utilizando uma coluna Xbridge® 50 x 19 mm (Waters Corporation) a um caudal de 18,5 mL/min. 85 Métodos gerais para os Exemplos 101-115 e 279-285 0 seguinte método foi utilizado para análise por LC/MS:
Os compostos finais foram analisados utilizando MS3 e os intermediários utilizando MS4 MS3: Instrumento espectrómetro de massa de quadrupolo ZQ da
Waters Micromass ligado a um sistema de LC HP1100 da Hewlett Packard. A injecção da amostra é feita por um amostrador automático Gilson 215. O espectrómetro tem uma fonte de electropulverização a funcionar no modo de ião positivo e negativo. A detecção adicional é conseguida utilizando um detector de dispersão de luz evaporativo Sedex 55. Caudal 1 mL/min; Comprimento de onda 254 nm; Solvente A: água + 0,1% de ácido fórmico; Solvente B: acetonitrilo + 0,1% de ácido fórmico ; Gradiente 5-95% de B ao longo de 20 min MS4: Instrumento espectrómetro de massa de quadrupolo simples AQA da Finnigan ligado a um sistema de LC 1050 da Hewlett
Packard com detector de matriz de diodos de UV e amostrador automático. O espectrómetro tem uma fonte de electropulverização a funcionar no modo de ião positivo. A detecção adicional é conseguida utilizando um detector de dispersão de luz evaporativo Sedex 65. Caudal 1 mL/min; Comprimento de onda 254 nm; Solvente A: água + 0,1% de ácido fórmico; Solvente B: acetonitrilo + 0,1% de ácido fórmico; Gradiente 5-95% de B ao longo de 5 min.
Os espectros de RMN foram registados em um de três instrumentos: 86
Um espectrómetro Unity Inova 400 da Varian a funcionar a 400 MHz para ο 3H munido de uma sonda de ressonância tripla de detecção inversa de 5 mm para detecção de 1H, 13C, 31P com o campo magnético proporcionado por um iman supercondutor de 9,4 Tesla da Oxford Instruments e uma estação de trabalho SunBlade 1000 da Sun Microsystems como hospedeiro.
Um espectrómetro Avance DRX 400 da Bruker a funcionar a 400 MHz para o XH munido de uma sonda TXI de ressonância tripla de detecção inversa de 5 mm para detecção de 3H, 13C, 15N com o campo magnético proporcionado por um iman supercondutor de 9,4 Tesla da Oxford Instruments e uma estação de trabalho wx5000 da HP a funcionar sob Windows XP com o software WIN-RMN como computador hospedeiro.
Um espectrómetro Bruker Avance DPX 300 a funcionar a 300 MHz para o Hl munido de uma sonda de frequência dupla de 5 mm corrente para detecção de Hl e C13 com o campo magnético proporcionado por um iman supercondutor de 7, 05 Tesla da Bruker e uma estação de trabalho da HP a funcionar sob Windows 2000 com o software XWIN-RMN da Bruker como hospedeiro. A cromatografia em coluna foi realizada utilizando sílica gel: cartuchos RediSep®Rf da Teledyne Isco, Inc. pré-empacotados com sílica gel 60 da Fluka, tamanho de partícula 35-70 mícron ou cartuchos de SPE pré-empacotados Isolute Flash Si II. Todos os solventes e reagentes comerciais foram de pureza laboratorial e foram utilizados como recebidos. A purificação por HPLC preparativa de fase inversa foi realizada utilizando um gradiente de acetonitrilo em solução 87 aquosa de TFA a 0,1% ou ácido fórmico aquoso a 0,1% utilizando uma coluna Phenomenex Gemini® C18 (250 x 21,2 mm, 5 micron) como fase estacionária a um caudal de 18 mL/min.
As abreviaturas ou termos utilizados nos exemplos têm os significados seguintes: SCX: Troca catiónica forte - Extracção em fase sólida baseada em sílica com um adsorvente de ácido sulfónico HPLC: Cromatografia líquida de alta eficiência DCM: Diclorometano DMF: N, IV-Dimetilf ormamida NMP: 1-Metilpirrolidin-2-ona THF: tetra-hidrofurano TFA: ácido trifluoroacético DMSO: dimetilsulfóxido aq: aquosa h: horas min: minutos g: gramas mL: mililitros TA: temperatura ambiente MP-TsOH65: resina de troca iónica ligada a polímero HATU macroporoso fornecida por Biotage. Hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)_ N, N, Ν', N'-tetrametilurónio NBS iV-bromossuccinimida T3P Anidrido do ácido propanofosfónico TBAF fluoreto de tetrabutilamónio CDI 1,1'-Carbonildiimidazole MTBE Éter terc-butilmetílico 88
MCPBA Ácido meta-cloroperbenzóico
Cartucho bond elute NH2 da Varian: troca aniónica forte. Extracção em fase sólida baseada em silica com um adsorvente de NH2 0 sal de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo foi adquirido de WuXi Pharma Tech 0 acetato ou sal de HC1 de 7-[(IR)-2-amino-l-hidroxi-etil]-4-hidroxi-3H-benzotiazol-2-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) tem 86-94% ee A (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8- hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) tem 92-96% ee
Software de atribuição de nomes para os compostos em epígrafe/subepígrafe:
Struct=Name 9.0.7 da CambridgeSoft Corporation 89
Exemplo 1
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5. 5] -undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 7-(2-Cloro-acetil)-4-hidroxi-3H-benzotiazol-2-ona
Foi adicionado etanol (1500 mL) a uma mistura de 7-acetil-4-hidroxi-3H-benzotiazol-2-ona (150 g) (documento W02004/016578) e dicloroiodato de benziltrimetilamónio (374 g) num balão equipado com um agitador vertical suspenso. A mistura foi aquecida a 78 °C durante lhe deixada arrefecer até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi vertida para água (2 L), e o precipitado recolhido por
filtração, lavado com água, filtrado até quase à secura e suspenso em acetato de etilo. A mistura foi aquecida até refluxo e deixada arrefecer até à temperatura ambiente sob agitação. O sólido foi recolhido por filtração, lavado com acetato de etilo frio (200 mL), em seguida ressuspenso em éter dietilico (1 L). O 90 sólido foi recolhido, novamente filtrado e lavado com éter (200 mL) e seco in vacuo para dar o composto em subepígrafe. Rendimento 164 g. m/z 244 (M+H)+ (APCI) b) 7-(2-Azido-acetil)4-hidroxi-3H-benzotiazol-2-ona
7-(2-Cloro-acetil)-4-hidroxi-3H-benzotiazol-2-ona (exemplo 1, passo a) (331 g) foi dissolvida em N,N- dimetilf ormamida (1800 mL) e agitada num banho de gelo durante 10 minutos. Foi adicionada azida de sódio (88,3 g) em porções ao longo de 15 minutos. A reacção foi agitada durante 72 horas e em seguida a mistura reaccional foi dividida em 3 porções iguais e cada uma foi desactivada separadamente em gelo e água (2,5 L) . O sólido foi filtrado e lavado com água (1 L) e ressuspenso em acetonitrilo (1, 5 L) . 0 solvente foi evaporado e foi adicionada mais uma porção de acetonitrilo d L) e o solvente novamente evaporado para secar o produto. Foi adicionado éter dietílico (1,5 L) e a mistura agitada para conseguir uma suspensão homogénea. O sólido foi recolhido e seco in vacuo a 35 °C durante 24 horas para dar o composto em subepígrafe. Rendimento 285 g. m/z 251 (M+H)+ (APCI) 91 c) 7-[(IR)-2-Azido-l-hidroxi-etil]-4-hidroxi.-3H- benzotiazol-2-ona
Foi adicionado (IR, 2S)-( + )-cis-l-amino-2-indanol (149 g) em porções a complexo de borano-tetra-hidrofurano (1 M em tetra-hidrofurano, 2997 mL) ao longo de 25 minutos mantendo uma temperatura de 20-25 °C. A mistura foi agitada a 20 °C durante mais 30 minutos, arrefecida até 0 °C e adicionada 7-(2-azido-acetil)-4-hidroxi-3H-benzotiazol-2-ona (exemplo 1, passo b) (250 g) em porções mantendo a temperatura 0 - 5 °C. A mistura reaccional foi agitada durante mais 1 h a 0 °C e em seguida desactivada gota a gota com metanol (350 g, 442 mL) (cuidado efervescência!). Uma exotérmica levou a temperatura até 17 °C. A reacção foi evaporada até uma espuma castanha e redissolvida em acetato de etilo (1,2 L). Foi adicionado ácido clorídrico aquoso (87 mL de HC1 conc. em 1,2 L de água) e a mistura agitada vigorosamente durante 30 minutos. A camada aquosa foi separada e lavada com acetato de etilo fresco (2 x 600 mL). A solução orgânica combinada foi lavada com água (1,2 L) . A camada aquosa foi filtrada através de Celite e extraída com acetato de etilo (600 mL) . As soluções de acetato de etilo foram combinadas, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas. O sólido resultante foi suspenso em 5% de etanol/diclorometano (2 L), agitado durante 3 h, filtrado e seco in vacuo para dar o composto em subepígrafe. Rendimento 213 g. m/z 253 (M+H)+ (APCI) 92 d) 7-[(1Λ)-2-Amino-l-hidroxi-etil]-4-hidroxi-3H-benzotiazol-2-ona, sal de acetato
Foi adicionada pasta de paládio sobre carvão a 5% tipo 87L (22 g) a 7-[(IR)-2-azido-l-hidroxi-etil]-4-hidroxi-3H- benzotiazol-2-ona (exemplo 1, passo c) (225 g) dissolvida em etanol (3 L) . A reacção foi agitada sob hidrogénio (3 bar) durante 48 h. Foi adicionado mais 10 g do catalisador e a hidrogenação continuou durante mais 5 dias. A mistura reaccional foi filtrada e o sólido (produto + catalisador) suspenso em etanol (2,5 L) , em seguida, foi adicionado ácido acético (150 mL) e tudo agitado de um dia para o outro. A mistura foi novamente filtrada para remover o catalisador de paládio sobre carvão. A solução foi evaporada até à secura e submetida a evaporação azeotrópica com tolueno (2x1 L). O sólido foi suspenso em tetra-hidrofurano (1 L) durante 4 horas, filtrado e seco a 40 °C in vacuo para dar o composto em subepígrafe. Rendimento 57 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 6,85 (d, 1H) , 6,69 (d, 1H) , 4,54 (dd, 1H), 2,78-2,67 (m, 2H) + 5 protões permutáveis 93 e) 4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro-[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado anidrido cíclico do ácido 1-propanofosfónico (solução 1Λ57 M em THF, 4,18 mL) a uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (1,92 g) , ácido 2-metiltiazole-4-carboxílico (0,94 g) e trietilamina (5,48 mL) em DMF (70 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. A mistura reaccional foi vertida para água (500 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 200 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 2,30 g. RMN de (400 MHz, d6- DMSO, O O O δ 7, 95 (s, 1H), 3, 80- 3,45 (m, 8H), 3,18-2,96 (m, 2H) , 2,67 (s, 3H), 1, 77-1,62 (m, 2H), 1,43-1,31 (m, 11H) 94 f) Cloridrato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (10 mL) a uma solução de 4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 1, passo e) (2,3 g) em DCM (50 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. O solvente foi evaporado in vácuo. Foi adicionado tolueno (50 mL) e a mistura evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (20 mL) e aplicado num cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. O cartucho foi lavado com metanol (250 mL) e eluído com solução de amónia 3 M em metanol (150 mL). 0 eluente foi evaporado in vacuo e o resíduo, dissolvido em MeCN (100 mL) . Foi adicionado HC1 (solução 1 M em éter dietílico, 10 mL) e o solvente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um sólido amarelo. Rendimento 1,90 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 9,16 (s, 2H), 7,92 (s, 1H), 4,25 (s, 4H) , 3,66-3,58 (m, 2H) , 3,12-2,90 (m, 4H) , 2,69 (s, 3H), 2,01-1,89 (m, 2H), 1,85-1,73 (m, 2H). 95 g) [4-(2,2-Dietoxi-etoxi)-fenil]-metanol
HO
Foi adicionado carbonato de césio (39,4 g) a uma solução de 4-hidroximetil-fenol (10 g) e 2-bromo-l,1-dietoxietano (12,73 mL) em DMF (200 mL) e a mistura resultante foi agitada a 90 °C durante 16 h. A reacção foi vertida para água (500 mL) e extraida com acetato de etilo (3 x 250 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (250 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (250 mL) , em seguida secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de iso-hexano até éter dietílico para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 9,5 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13: ) δ 7,29-7,25 (m, 2H) , 6,93- 6, 88 (m, 2H), 4,83 (t, J = 5,2 Hz, , 1H), 4,61 (s, 2H) , 4, 00 (d, J = 5,2 Hz, 2H) , 3,81-3,72 (m, 2H) , 3,68-3,58 (m, 2H) , 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 6H). Um protão permutável nao observado. h) 2-(4-(Hidroximetil)fenoxi)acetaldeido
96
Foi adicionado HC1 2 m (4 mL) a uma solução de (4-(2,2-dietoxietoxi)fenil)metanol (exemplo 1, passo g) (0,9 g) em acetona (20 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente. A reacção foi concentrada in vacuo e a solução aquosa resultante extraída com acetato de etilo (3 x 20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente, a qual foi utilizada directamente no passo seguinte. Rendimento 0,50 g. i) (9 2 (4 (Hidroximetil)fenoxi)etil)—1—oxa-4,9— diazaespiro[5.5]undecan-4-ii)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado cloridrato de (2-metiltiazol-4-il)(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 1, passo f) (0,38 g) a uma solução de 2-(4-(hidroximetil)fenoxi)acetaldeído (exemplo 1, passo h) (0,17 g) em NMP (10 mL) e ácido acético (0,06 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 30 min, em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,32 g) e a reacção deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reacção foi diluída com metanol (30 mL) e aplicada num cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. 0 cartucho foi lavado com metanol (250 mL) e eluído com solução de amónia 3 M em metanol (150 mL). O eluente foi evaporado in vacuo e o resíduo 97 purificado por cromatografia em etilo:trietilamina 95:5 para dar uma goma. Rendimento 0,32 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, Dg- -DMSO) 2H) , 6,85 (dt, J = 8,7, 1, 1 Hz, 4,38 (m, 2H) , - 1, 10-3,99 (m, 2H) , 3,55 (m, 2H) , 2,71-2,64 (m , 5H) (m, 2H), 1,59-1,45 (m, 2H). coluna eluindo com acetato de o composto em subepígrafe como δ 7,86 (s, 1H), 7,23-7,16 (m, 2H), 4, 72-4,62 (m, 1H) , 4,44-3,66 (d, J = 6,7 Hz, 4H) , 3,61-2, 47-2, 42 (m, 4H) , 1,76-1,64 j) 4-(2-(4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzaldeído
Foi adicionado dióxido de manganês (0,65 g) a uma solução de (9-(2-(4-(hidroximetil)fenoxi)etil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (0,32 g) (exemplo 1, passo i) em DCM (20 mL) e a suspensão preta resultante aquecida sob refluxo durante 1 h. Depois de arrefecer a mistura reaccional foi feita passar através de uma almofada de Celite. A almofada foi lavada com DCM (2 x 30 mL) e o filtrado e lavagens combinados evaporados in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,25 g. m/z 430 (M+H)+ (APCI) 98 RMN de ΤΗ (300 MHz, D6-DMSO) δ 9,86 (s, 1H) , 7,96 (s, 1H) , 7, 88-7, 83 (m, 2H) , 7,13 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 4,26-4,11 (m, 2H) , 3,77-3,46 (m, 6H), 2,78 - 2,65 (m, 5H), 2,48-2,34 (m, 4H), 1,76-1,36 (m, 4H) . k) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diaza-espiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado HC1 (solução 2 M em éter, 0,29 mL) a uma solução de acetato de (P)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (exemplo 1, passo d) (0,17 g) em NMP (1 mL) e a mistura agitada durante 10 min. A solução resultante foi adicionada a uma solução de 4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzaldeído (exemplo 1, passo j) (0,25 g) em NMP (4 mL) e agitada durante 1 h. A reacção foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,19 g) em porções. A mistura resultante foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reacção foi partilhada entre tampão de fosfato a pH 7,2 (50 mL) e acetato de etilo (50 mL) . As camadas foram separadas e a aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL) . A fase aquosa foi basificada com bicarbonato de sódio e extraída com acetato 99 de etilo (3 x 50 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram evaporadas in vacuo. O resíduo foi redissolvido em acetonitrilo (50 mL) e acidificado com ácido trifluoroacético (1 mL) . Foi
adicionado tolueno (50 mL) e a mistura evaporada in vacuo. A
goma resultante foi dissolvida numa mistura de acetonitrilo e água (1:1, 10 mL) e filtrada. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e o resíduo triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco.
Rendimento 0,35 g. m/z 640 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, d6- -DMSO, 90 °C) δ 11 , 26 (s, 1H) , 7, 91 (s, 1H) , 7 , 46 (d, J = 8, 5 Hz, 2H) t 7, 03 (d, J = = 8,5 Hz, 2H) , 6,89 (d, J = 8, 5 Hz, 1H) , 6, 75 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4, 93 - 4, 87 (m, 1H) , 4, 40 - - 4,35 (m, 2H ), 4,19 - 4, 13 (m, 2H) , 3, 76 - 3, 63 (m, 6H) , 3, 58 - - 3,51 (m, 2H ), 3,43 - 3,35 (m, 2H) , 3, 30 - 3, 14 (m, 2H) , 3, 03 - 2,96 (m, 2H) , 2,68 (s, 3H) , 2,: 11 - 1,99 i (m, 2H ) , 1,92 - 1, 78 (m, 2H) . Cinco protões permutáve is não observados 100
Exemplo 2
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4- (2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) (9-(9-Hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado 9-bromononan-l-ol (0,29 g) a uma suspensão de cloridrato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 1, passo f) (0,4 g) numa mistura de trietilamina (0,41 mL) e acetonitrilo (10 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 16 h a 50 °C. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (30 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (30 mL). As camadas foram separadas e a aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 30 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (10 mL) e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. 0 101 cartucho foi lavado com metanol (10 mL) e eluído com solução de amónia 3 M em metanol (100 mL). O eluente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepigrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,32 g. RMN de 2H (300 MHz, D6-DMSO) δ 7,95 (s, 1H) , 4,30 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,78-3,44 (m, 8H), 3,42-3,33 (m, 2H), 2,69 (s, 3H), 2,35-2,14 (m, 8H) , 1,71-1,57 (m, 2H) , 1,55-1,19 (m, 12H) . b) 9-(4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonanal
H
Foram adicionados DMSO (0,32 mL) e trietilamina (0,32 mL) a uma solução de (9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro-[ 5.5]undecan-4-il) (2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 2, passo a) (0,32 g) em diclorometano (5 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo-sal e foi adicionado piridina-trióxido de enxofre (0,36 g). A reacção foi agitada a -10 °C durante 1 h, em seguida deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante mais 3 h. A reacção foi diluída com DCM (20 mL) , em seguida vertida para solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) . As camadas foram separadas e a camada orgânica lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo: trietilamina 102 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5 para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,25 g. RMN de (300 MHz, D6- -DMSO) δ 9, 66 (t, J = 1,6 Hz, \—1 7, 95 (s, 1H), 3,72-3,46 (m, 8H), 3,31 (s, 2H), 2,69 (s, 3H) , 2, 44- -2,18 (m, 8H), 1,73-1,14 (m, 12H) c) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado cloridrato de (f?)-7-(2-amino-l-hidroxietil) -4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,17 g) a uma solução de 9-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonanal (exemplo 2, passo b) (0,23 g) e ácido acético (0,03 mL) em metanol (15 mL). A mistura resultante foi agitada durante 10 min e arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,17 g) e a mistura agitada durante 16 h. A reacção foi concentrada in vacuo e o resíduo dissolvido numa mistura de água e acetonitrilo (1:1, 5 mL). A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi triturado com éter e evaporado para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,15 g. 103 m/z 632 (M+H)+ (APCI) RMN de (300 MHz, Dg ;-DMSO, o o O ) δ 1 1, 42 (s, 1H) , 10, 75 (s, 1H) , 9, 01 (s, 1H) , 8, 72 (s, 1H) , 7, 92 (s, 1H) , 6, 94 (d, J = 8,5 H z, 1H ) , 6 , 78 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 5, 02- -4, 93 (m , 1H) , 3, 78 -3,56 (m, 6H) , 3,33- -3, 23 (m, 1H) , 3,07- -2,88 (m, 8H) , 2,69 (s, 3H) , 2, 07- -1,89 (m, 4h; ) , 1, 75- -1,62 (m, 4H) , 1,3 -i, 2 4 (m, 10H) + 1 protão obscurecido pelo solvente pico.
Exemplo 3
Dicloridrato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
104 a) 2-(4-(2,2-Dietoxietoxi)fenil)etanol
Foi adicionado carbonato de césio (28,3 g) a uma solução de 4-(2-hidroxietil)fenol (10 g) e 2-bromo-l,1-dietoxietano (11,79 mL) em DMF (150 mL) . A suspensão resultante foi aquecida a 90 °C durante 16 h. A reacção foi vertida para água (500 mL) . A fase aquosa foi extraida com acetato de etilo (3 x 200 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (200 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (200 mL) , em seguida secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano até acetato de etilo:isso-hexano 1:1 para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 10 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,14 (d, J = 6,9 Hz, 2H) , 6, 88 (d, J = 6, 9 Hz, 2H), 4, 83 (t, J = = 5, 0 Hz, 1H) , 4, 00 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 3,87-3, 7 0 (m, 4H), 3, 70-3, , 56 (m, 2H), 2, 81 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,25 (t, J = 6,9 Hz, 6H). OH não observado. 105 b) 2-(4-(2-Hidroxietil)fenoxi)acetaldeído
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (5 mL) a uma solução de 2-(4-(2,2-dietoxietoxi)fenil)etanol (exemplo 3, passo a) (0,76 g) em 1,4-dioxano (10 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 1 h. A reacção foi diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 50 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), em seguida secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe, o qual foi utilizado directamente. Rendimento 0,35 g. c) (9-(2-(4-(2-Hidroxietil)fenoxi)etil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado cloridrato de (2-metiltiazol-4-il)(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 1, passo f) 106 (0,63 g) a uma solução de 2-(4-(2-hidroxietil)fenoxi)acetaldeído (exemplo 3, passo b) (0,541 g) numa mistura de NMP (10 mL) e ácido acético (0,11 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min, em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,64 g) e a reacção foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 16 h. A reacção foi diluida com metanol (30 mL) e aplicada a um cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. O cartucho foi lavado com metanol (100 mL) e eluido com solução de amónia 3 M em metanol (100 mL) . O eluente foi evaporado in vacuo e o resíduo purificado por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com acetato de etilo:trietilamina 95:5 para dar o composto Rendimento 0,74 g. 2H) . em subepígrafe como um óleo castanho. RMN de H (30 0 ^Hz J = 8,4 Hz, 2H) , 6,84-6/77 J = 6,0 Hz, 2H), 3,68-3 c. (m, 5H), 2,51-2,42 (m D6-DMS0) δ 7,86 (s, 1H) , 7,09 (d, '7 (m, 2H) , 4,24-4,15 (m, 1H) , 4,02 (t, 54 (m, 8H) , 3,00 (s, 2H) , 2,71 - 2,61 4H), 1, 75-1,65 (m, 2H) , 1,59-1,45 (m,
107
Foi adicionado ácido tnifluoroacético (0,04 itiL) 9. uma g0 9_(2-(4-(2-hidroxietil)fenoxi)etil)-4-(2- metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa 4 aza 9 azoniaespiro[5.5]undecano (exemplo 3, passo c) (0,22 g) em DCM (3 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionada periodinano de Dess-Martin (0,31 g) e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (0,5 mL), solução de bicarbonato de sódio (0,5 mL) e éter (5 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. A camada orgânica foi separada e lavada com solução de bicarbonato de sódio (1 mL) e água (1 mL) , em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepigrafe como um óleo transparente que foi imediatamente utilizado. Rendimento 0,19 g.
exemplo 1, passo d) (0,^q ato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)--Ona (documento W02007027134, metiltiazole-4-carbonil) g) a uma solução de 2-(4-(2-(4-(2-05ccL"4, 9-diazaespiro [5.5] undecan-9- 108 il)etoxi)fenil)acetaldeído (exemplo 3, passo d) (0,14 g) e ácido acético (0,02 mL) em metanol ( 1 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,103 g) , a reacção foi agitada durante 10 min e evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água (1:1, 5 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em acetonitrilo (5 mL) e foi adicionado HC1 em éter (1 M, 2 mL) , em seguida o solvente foi evaporado in vacuo. 0 resíduo foi triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,075 g. m/z 654 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 11,50-11,14 (m, 2H), 9,22 (s, 1H) , 8,87 (s, 1H) , 7,91 (s, 1H) , 7 ,20 (d, J = 8 ,5 Hz, 2H) , 1 00 σ') kd 6,92 (m, 3H) , 6,78 (d, J = 8,5 Hz, 1H ), 5,0 - -4, 96 (m, 1H) , 4, 42 (t, J = 5 , 1 Hz , 2H ), 3,83 - 3,55 (m , 5H) , 3, 52- -3,43 (m, 5H) , 3,22 -3,04 (m, 4H) , 3,01-2, 93 (m, 2H) , 2,69 (s r 3H) , 2, 11 -1,93 (m, 4H) + 2 protões obscurecidos pelo solvente φ 109
Exemplo 4
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofen-2-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) terc-Butildimetil(2-(tiofen-2-il)etoxi)silano
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (12,66 g) em porções a 2-(2-tienil) etanol (9,0 g) e imidazole (5,7 g) em DMF (35 mL) . A solução resultante foi agitada durante 18 h. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e água. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio e os solventes evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com acetato de etilo: iso-hexano 99:1 a 96:4 para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 16 g. 110 RMN de ΧΗ J = 5,0, 3,2 Hz, 2H), 3,03 (t, J = (400 MHz, CDC13) δ 7,13 (d, ** K \—1 6, 92 (dd 1H) , 6,83- 6,82 (m, 1H), 3,82 (t, J = 6, 7 Hz 6,8 Hz, 2H ), 0,97 (s , 9H), 0,03 (s, 6H) b) 5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído
O
Foi adicionado, gota a gota, n-butil-lítio (2,5 M em hexanos, 30 mL) a uma solução de terc-butildimetil(2-(tiofen-2-il)etoxi)silano (exemplo 4, passo a) (16 g) em tetra-hidrofurano (250 mL) a -78 °C. A mistura reaccional foi deixada aquecer até 0 °C e agitada durante 1 h. A reacção foi então arrefecida até -78 °C e foi adicionada DMF (34 mL) ao longo de 10 min. A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 18 h. A mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, lavada com água, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel, eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 93:7 para dar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 15,4 g. RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ 9,83 (s, 1H) , 7,61 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,96 (d, 1H) , 3,86 (t, J = 6,3 Hz, 2H) , 3,06 111 (td, J = 6,1, 0,1 Hz, 2H), 0,88 (t, J = 2,9 Hz, 9H) , 0,02 (s, 6H) . c) (5-(2-(terc-Butildimetbilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metanol
Foi adicionado boro-hidreto de sódio (1,74 g) a uma solução de 5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído (12,4 g) (exemplo 4, passo b) em etanol (120 mL) a 0 °C. A solução resultante foi agitada a 0 °C durante 1 h. A mistura reaccional foi partilhada entre solução aquosa saturada de cloreto de sódio e acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo para dar o composto em subepigrafe.
Rendimento 12,1 g. RMN de XH (400 MHz, cdci3: ) δ 6 , 82 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 3,3 Hz , 1H) , 4, 75 (d, J = : 4,9 Hz, 2H), 3,81 (t, J = 6, 7 H z, 2H) , 2,99 (t , J = 6,8 Hz, 2H) , 1,65 (t, J = 5,5 Hz, 1H) , - 0,89 (d, J = 2,8 Hz, 9H) , 0,03 (d, J = 3,1 Hz, 6H) φ 112 d) 2-(5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)acetonitrilo
Foram adicionados trifenilfosfina (13,04 g) e tetrabrometo de carbono (15,71 g) numa porção a uma solução de (5—(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metanol (exemplo 4, passo c) (10,94 g) em DCM (20 mL) a 0 °C. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado cianeto de tetraetilamónio (8,96 g). A mistura foi diluída com diclorometano (10 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 40 min. A mistura reaccional foi partilhada entre diclorometano e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi separada, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 95:5 até 94:6 para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 7,6 g. RMN de aH (400 MHz, CDC13) δ 6,87-6,84 (m, 1H) , 6,70-6,68 (m, 1H), 3,84 (d, J = 0,8 Hz, 2H) , 3,80 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 2,97 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 0,89 (s, 9H), 0,03 (s, 6H). 113 e) Ácido 2-(5-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)acético
Foi adicionada uma solução de 2-(5-(2-{terc- butildimetilsililoxi)etil)-tiofen-2-il)acetonitrilo (exemplo 4, passo d) (3 g) em etanol (30 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de hidróxido de potássio (1,20 g) em água (30 mL) . A mistura resultante foi agitada a 100 °C durante 4 horas. A reacção foi concentrada in vacuo e a mistura resultante foi partilhada entre solução aquosa saturada de cloreto de sódio e acetato de etilo. A camada aquosa foi arrefecida com gelo, acidificada por adição gota a gota de ácido clorídrico concentrado e extraída três vezes com acetato de etilo. As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e o solvente evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um sólido amarelo. Rendimento 1,75 g. RMN de ΤΗ ( 400 MHz, D6-DMSO) δ 12, 44 (s, 1H) , 6,72 (d, J = 3,3 Hz, 1H) , 6,67 (d, J = 3,3 Hz, 1H) , 4, 76 (s, 1H), 3,71 (S, 2H), 3,61- 3,55 (m, 2H' ) , 2,86 (t, J = 6,8 Hz, 2H) . 114 f) 2-(5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2- il)etanol
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (6,63 g) em porções a uma solução de imidazole (2,99 g) e ácido 2-(5-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)acético (3,9 g) (exemplo 4, passo e) em DMF (50 mL) ao longo de 20 minutos. A solução resultante foi agitada durante 1 h. Foi então adicionado THF (50 mL) e a reacção arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionada uma solução de carbonato de potássio (4,05 g) em água (50 mL) e a mistura agitada durante 20 min. A reacção foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi separada e lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo. 0 residuo foi dissolvido em THF (80 mL) e foi adicionado, gota a gota, complexo de borano tetra-hidrofurano (solução 1 M em THF, 62,8 mL). A solução resultante foi agitada durante 2 h e desactivada por adição gota a gota de metanol (30 mL) . Os solventes foram então evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel, eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 83:17 para dar o composto em subepigrafe como um liquido amarelo. Rendimento 4,6 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 6,69-6,63 (m, 2H) , 3,87-3,75 (m, 4H) , 3,05-2,91 (m, 4H) , 0,89 (s, 9H) , 0,03 (s, 6H) + protões permutáveis 115 g) 2-(5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)acetaldeído
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,38 g) a uma solução de 2-(5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)etanol (exemplo 4, passo f) (0,22 g) em diclorometano (5 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 30 min. Foi adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (25 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 10 min. A camada orgânica foi separada e lavada com uma solução de solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) , em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente que foi imediatamente utilizado. Rendimento 0,21 g. RMN de 1R (400 MHz, CDC13) δ 9,70 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 6,73 (s, 2H), 3,83-3, 78 (m, 4H) , 2,98 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , 0,89 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) 116 h) Trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado anidrido cíclico do ácido 1-propanofosfónico (solução 1,57 M em THF, 2,49 mL) a uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (1 g) , ácido 2-metiltiazole-4-carboxílico (0,56 g) e trietilamina (3,26 mL) em DMF (30 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A reacção foi partilhada entre água (500 mL) e acetato de etilo (200 mL) . As camadas foram separadas e a camada aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 150 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), em seguida secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo. O óleo resultante foi dissolvido em diclorometano (30 mL) e foi adicionado gota a gota ácido trifluoroacético (3 mL). Este foi então agitado durante 1 hora e concentrado in vacuo. 0 resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com tolueno (20 mL) . A goma resultante foi triturada com éter para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 1,20 g. m/z 282 (M+H)+ (APCI) 117 RMN de ΧΗ (300 MHz, D6-DMSO) δ 8,59-8,18 (m, 2H) , 8,00 (s, 1H), 3,86-3,49 (m, 6H) , 3,22-2, 86 (m, 4H) , 2,69 (s, 3H) , 2,00- 1,90 (m, 2H), 1,74-1,58 (m, 2H). i) (9-(2-(5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2- il)etil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il) (1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,25 g) a uma solução de 2-(5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)acetaldeido (0,2 g) (exemplo 4, passo g) numa mistura de NMP (5 mL) e ácido acético (0,04 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,22 g). A mistura foi agitada durante lhe vertida para tampão a pH 7,2 (50 mL). A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 50 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com tampão a pH 7,2 (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), em seguida secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 4:1:0,05 até acetato de etilo:trietilamina 95:5 para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,23 g. 118 RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 7, 86 (s, 1H) i , 6,62 (s, 2H) , 3,76 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3, ιο -3,57 (m, 6H) , 3,30 (t, N E O II •"D 2H) , 2,91-2,81 (m, 4H ί , 2,68 (s, 3H ), 2,44-2,37 (m, 4Η) , 1, 74-1,66 (m, 2H) , 1,58-1, 49 (m, 2H) , 0, 88-0, 84 (m, 9H) , 0,01-0,00 (m, 6H). j) (9-(2-(5-(2-Hidroxietil)tiofen-2-il)etil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (0,5 mL) a uma solução de (9-(2-(5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)etil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 4, passo i) (0,235 g) em metanol (5 mL) e a solução resultante foi agitada durante 1 h. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo submetido a evaporação
azeotrópica com tolueno e redissolvido em metanol (~2 mL) . O resíduo foi dissolvido em metanol (10 mL) e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. O cartucho foi lavado com metanol (100 mL) e eluído com solução de amónia 1 M 119 em metanol (100 mL). O eluente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,12 g. RMN de 2H (300 MHz, D6-DMSO) δ 7,87 (s, 1H) , 6,64 (s, 2 H), 4,38 (t, J = 4, 9 Hz, 1H), 3, 70-3,51 (m, 8H ), 2,84 (t, J = 6,7 Hz, 4H) , 2,68 (s, 3H), 2 ,60-2,52 . (m, 2H) , 2,4-2,38 (m, 4H), 1,76-1, 65 (m, 2H), 1,60-1,49 (m, 2H) . k) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)etil)tiofen-2-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,02 mL) a uma solução de (9-(2-(5-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)etil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 4, passo j) (0,128 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado periodinano de Dess-Martin (0,15 g) e a mistura agitada durante 10 min. Foi adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (25 mL) e a mistura agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram 120 lavadas com uma solução saturada de solução de bicarbonato de sódio (10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL), em seguida secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi redissolvido em MeOH (1 mL) . Foi adicionado ácido acético (0,04 mL) seguido de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,19 g) e a
mistura foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,157 g) e a mistura resultante foi agitada durante 1 h, em seguida concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água (1:1, 5 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,04 g. m/z 644 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (300 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,92 (s, 1H), 6,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6, 84-6, 73 (m, 3H) , 4,89 (dd, J = 7,9, 5,4 Hz, 1H), 3,74-3,62 (m, 6H), 3,44-3,07 (m, 14H), 2,68 (s, 3H), 2,11- 1,93 (m, 2H) , 1, 89-1, 72 (m, 2H) . Seis protões permutáveis não observados. 121
Exemplo 5
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)etil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 2,2'-(1,4-fenileno)dietanol
Foi adicionado complexo de borano-sulfureto de metilo (solução 2 M em tetra-hidrofurano, 80 mL) ao longo de 20 min a uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2,2'-(1,4-fenileno)diacético (10,20 g) em tetra-hidrofurano (100 mL) arrefecida num banho de gelo. Após 16 h, a mistura reaccional foi cuidadosamente desactivada com metanol (40 mL) . A solução foi evaporada in vacuo e a goma resultante foi partilhada entre acetato de etilo e cloreto de amónio aquoso saturado. A solução de acetato de etilo foi separada, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepigrafe como goma. Rendimento 8,64 g. 122 RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,18 (s, 4H) , 3,86 (t, 4H) , 2,85 (t, 4H) + 2 protões permutáveis. b) 2-{4-[2-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-etil]-fenil}- etanol
HO
Foi adicionado terc-butildimetilclorossilano (9,68 mL) a uma solução de 2, 2'-(1,4-fenileno)dietanol (exemplo 5, passo a) (8,64 g) e imidazole (10,21 g) em DMF seca (100 mL) arrefecida num banho de gelo. Após 45 min, a mistura reaccional foi diluida com acetato de etilo, lavada três vezes com água e evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 5:1 para dar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 6,20 g. RMN de ΤΗ (3 00 MHz, CDCI3) δ 7,21-7,13 (m, 4H) (m, 4H) , 2,92-2,76 (m, 4H) , 0,89 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) 123 c) 2-(4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)fenil)-acetaldeido
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,38 g) a uma solução de 2-(4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)fenil)etanol (exemplo 5, passo b) (0,21 g) em diclorometano (5 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 30 min. Foi adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (25 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 10 min. A fase orgânica foi separada e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) , em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada para dar o composto em subepigrafe como um óleo transparente que foi imediatamente utilizado. Rendimento 0,20 g. RMN de 1H (300 MHz, CDC13) δ 9,74 (t, J = 2,4. Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 3,82 (t J = 7,1 Hz, 2H) , 3,67 (d, J = 2,6 Hz, 2H), 2,83 (t, J = 7, 1 Hz 2H) , 0,88 (s, 9H) , 0,00 (s, 6H) 124 d) (9-(4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)fenetil)-1-oxa- 4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,26 g) a uma solução de 2-(4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)fenil)acetaldeido (exemplo 5, passo c) (0,2 g) e ácido acético (0,04 mL) em NMP (5 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,23 g) . A mistura foi agitada durante 1 h, vertida para tampão a pH 7,2 (50 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 50 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com tampão a pH 7,2 (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), em seguida secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 80:15:5 isso-hexano:acetato de etilo:trietilamina até acetato de etilo:trietilamina 95:5 para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,30 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,90 (s, 1H), 7,12 (s, 4H) , 3,80 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 3,71-3,60 (m, 6H), 2,77-2,67 (m, 7H) , 2,46-2,41 (m, 2H) , 1, 76-1,67 (m, 2H) , 1,61-1,51 (m, 2H) , 0,87 (s, 9H) , 0,02 (s, 6H) + 4 protões obscurecidos pelos picos do solvente. 125 e) (9-(4-(2-Hidroxietil)fenetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro(5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (0,5 mL) a uma solução de (9-(4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)fenetil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 5, passo d) (0,3 g) em metanol (5 mL) e a solução resultante foi agitada durante 1 h. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica com tolueno e redissolvido em metanol (~2 mL) . O resíduo foi diluído com metanol (10 mL) e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. O cartucho foi lavado com metanol (100 mL) e eluído com solução de amónia 1 M em metanol (100 mL) . O eluente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,2 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,86 (s, 1H) , 7,09 (s, 4H) , 4,24 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 3,69-3,55 (m, 8H) , 2,68 (s, 3H), 2,45-2,38 (m, 4H) , 1, 74-1,65 (m, 2H) , 1,57-1, 48 (m, 2H) + 6 protões obscurecidos pelos picos do solvente. 126 f) Ditrifluoroacetato de {R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(4— (2—(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]— undecan-9-il)etil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,04 mL) a uma solução de (9-(4-(2-hidroxietil)fenetil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 5, passo e) (0,21 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado periodinano de Dess-Martin (0,25 g) e a mistura agitada durante 10 min. Foi adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (25 mL) e a mistura agitada durante 10 min. A aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL), em seguida secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi redissolvido em MeOH (1 mL) . Foi adicionado ácido acético (0,04 mL) , seguido de cloridrato de (R)-Ί-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,19 g) e a mistura foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,157 g) e a mistura resultante foi agitada durante 1 h 127 em seguida concentrada in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água (1:1, 5 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco.
Rendimento 0,17 g. m/z 638 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 7,92 (s, 1H) , 7, 26-7, 18 (m 4H) , 6, 93 (d, J = 8,5 Hz , 1H), 6 ,77 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4, . 96- 4,87 (m, 1H) , 3,76-2,90 (m, 20H) , 2,68 (s, 3H) , 2, 14-1, 75 (m 4H). Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 6
Ditrifluoroacetato de (i?)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
128 a) 2-(3-(Bromometil)fenil)etanol
Foi adicionado, gota a gota, complexo de borano-sulfureto de dimetilo (solução 2 M em THF, 5,78 mL) a uma solução de ácido 2-(3-(bromometil)fenil)acético (1,06 g) em THF (10 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 10 min. A reacção foi então deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. Foi então adicionado metanol (5 mL) e a mistura concentrada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de iso-hexano até éter dietilico para dar o composto em subepigrafe como um sólido branco. Rendimento 1 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,34-724 (m, 3H) , 7,22-7,12 (m, 1H), 4,48 (s, 2H), 3,87 (t, J = 6,5 Hz, 2H) , 2,87 (t J = 6,5 Hz, 2H), OH nao observado. b) 9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
129
Foi adicionado 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,11 g) a uma solução de trif luoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,2 g) e trietilamina
(0,17 mL) em acetonitrilo (5 mL) e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado in vácuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (25 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (25 mL) . A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 25 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 80:15:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5 para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,15 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7, 85 (s, 1H) , 7, 18 (t, J = 7, 4 Hl 1H), 7,12-7,04 (m, 3H) , 4,24 (t , J = 5,1 Hz, 1H) , 3, 71 -3,54 (m, 8h; ), 3,42 (s, 2H) , 2, 71 (t, J = = 6,9 Hz, 2H) , 2,68 (S, 3H) , 2,38-2, 27 (m, 4H) , 1, 74- 1,64 (m, 2H) , 1,57- -1, 47 (m, 2H) . 130 c) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,03 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 6, passo b) (0,17 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado periodinano de Dess-Martin (0,21 g) e a mistura agitada durante 10 min. Foi adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (25 mL) e a mistura agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) , em seguida secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi redissolvido em metanol (25 mL). Foi adicionado ácido acético (0,04 mL) seguido de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,16 g) e a mistura arrefecida até 0 °C num banho de gelo, antes da adição de 131 triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,16 g) . A mistura resultante foi agitada durante lhe concentrada. O resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água (1:1,5 mL). A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,125 g. m/z 624 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7,90 (s, 1 H), 7,45-7,31 (m, 4H), 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 4,92 (dd, J = 7,9, 5,1 Hz, 1H) , 4,30 (s, 2H), 3, 74-3,58 (m, 6H) , 3,29-2,97 (m, 10H) , 2,67 (s, 3H) , 2,13- 1,95. (m, 2H) , 1, 88-1, 70 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 7
Ditrifluoroacetato de (K)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
132
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,02 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 6, passo b) (0,11 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado periodinano de Dess-Martin (0,14 g) e a mistura agitada durante 10 min. Foi adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (25 mL) e a mistura foi agitada durante 10 min. A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi redissolvido em metanol (25 mL) . Foi adicionado ácido acético (0,02 mL) seguido de (.R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,09 g) e a mistura arrefecida até 0 °C num banho de gelo, antes da adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,08 g) . A mistura resultante foi agitada durante lhe concentrada in vacuo. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e tampão a pH 7,2 (50 mL) . A aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 92:8:0,8. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e dissolvidas em THF (1 mL) . Foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,05 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo foi 133 dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água (1:1,5 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,06 g. m/z 618 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, De- -DMSO) δ 8, 16 (d, J = 10,0 Hz, 1 H) , 7, 90 (s, 1 H ) , 7,47- 7,30 (m, . 4H) , 7, 13 (d, J = = 8,2 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8, 2 Hz , 1H ) , 6 ,54 (d, J = 10,0 Hz , 1H), 5,35 (dd, J = 8,5, 4, 1 Hz , 1H) , 4,30 (s, 2H) r 3, 74-3,57 (m, 4H), 3,32- 2, 98 (m, 12H) r 2, 67 (s, 3H) , 2, 12-1,92 (m, r 2H) , 1,87-1,67 (m, 2H) . „ . . não observados
Seis protoes permutáveis n*'-'
Exemplo 8 de
Ditrifluoroacetato (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(3- v,rtniD '"1“°xa-4,9-diazaespiro [5.5]unde-(4- (2—metiltiazole—4—car*>01 i jxo) etil) benzo [d] tiazol-2 (3H) -ona can-9-il) propoxi) benziiaJnJ'
134 a) 4-(3-Bromopropoxi)benzaldeído 0
Foi adicionado 1,3-dibromopropano (20,0 g) a uma suspensão, mantida sob agitação, de 4-hidroxibenzaldeído (4,0 g) e carbonato de potássio (7,0.g) em acetona (80 mL) . Após 16 h, a mistura foi aquecida sob refluxo durante mais 2 h, arrefecida, filtrada para remover os inorgânicos, e a solução foi evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano para remover o 1,3-dibromopropano e em seguida diclorometano:iso-hexano 2:1 para recolher o composto em subepígrafe. Rendimento 3,45 g. RMN de (300 MHz, CDC13) δ 9,89 (s, 1H), 7,84 (d J = 9,2 Hz, 2H), 7, 01 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 4,21 (t, J = 5, 6 Hz 2H), 3,62 (t, J = 6,0 Hz, 2H) , 2,36 (quinteto, J = 6,1 Hz, 2H) b) 4-(3-(4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propoxi)benzaldeído
Uma mistura de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il) (1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-ii)metanona (exemplo 4, passo 135 h) (0,244 g), 4-(3-bromopropoxi)benzaldeído (exemplo 8, passo a) (0,15 g) e trietilamina (0,344 mL) em MeCN (2 mL) foi aquecida a 60 °C. Após 16 h, a mistura reaccional foi evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 10:1 para dar o composto em subepígrafe como um óleo. Rendimento 0,24 g. m/z 444 (M+H)+ (APCI) c) Ditrifluoroacetato de (.R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(3-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diaza-espiro[5.5]undecan-9-il)propoxi)benzilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado cloreto de hidrogénio (0,4 mL de uma solução 1 M em éter dietílico) a uma solução, mantida sob agitação, de 4-(3-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)propoxi)benzaldeído (exemplo 8, passo b) (0,15 g) e acetato de (R)-1-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2 (3H) -ona (exemplo 1, passo d) (0,15 g) em MeOH (15 mL) . Após 5 minutos foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,05 g) . Após 16 h a solução foi concentrada até ~2 mL e em 136
seguida partilhada entre acetato de etilo e tampão de fosfato a pH 7,2 (20 mL) . A solução de acetato de etilo foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água (1:1, 5 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%): As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,045 g. m/z 654 (M+H)+ (APCI) RMN de 1H (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,92 (s, 1H), 7,42 (d, J = 8, 7 Hz, 2H) , 6, 98 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6, 75 (d, J = = 8,2 Hz, 1H), 4,91 - 4,84 (m, 1H), 4,18 - 4, 04 (m, 4H) , 3,78 - 2,94 (m, 14H), 2,71 (s, 3H), 2,19 - 2,00 (m, 4H), 1,85 - 1 , 66 (m, 2H). Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 9
Ditrifluoroacetato de (.R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona 137
a) 4-(5-Metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
o
Foi adicionado anidrido cíclico do ácido 1-propanofosfónico (solução 1,57 M em THF, 0,64 mL) a uma solução de cloridrato de l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (0,26 g) , ácido 5-metiltiofeno-2-carboxílico (0,142 g) e trietilamina (0,84 mL) em DMF (8 m) e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. A mistura reaccional foi vertida para água (100 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 200 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), em seguida secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano, 1:1 para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,32 g. 138 RMN de 1h (400 MHz, CDC13: ) δ 7,11 (d, J = 3, 6 Hz, 1H), 6,72 6,69 (m, 1H) , 3,78 - 3,67 (m, 8H), 3,60 - 3,51 (m, 2H), 3,19 3, 10 (m, 2H) , 2,51 (s, 3H), 1, 86 - 1, 79 (m, 2H) , 1, 45 (s, 9H) . 139 b) Trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
4-(5-Metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 9, passo a) (0,32 g) em DCM (3 mL) foi tratado com ácido trifluoroacético (1,0 g). Após 2 h, a mistura reaccional foi evaporada in vacuo e submetida a evaporação azeotrópica duas vezes com tolueno para produzir o composto em subepígrafe que foi directamente utilizado. Rendimento 0,32 g. c) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,136 g) a uma solução, mantida sob agitação, de trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 9, passo b) (0,250 g) e trietilamina (0,278 mL) em MeCN (5 mL). Após 1 h, a mistura reaccional foi concentrada e aplicada a uma coluna de silica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 95:5 para dar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,24 g. 140 RMN de (400 MHz, CDC13 ) δ 7,28-7,24 (m, 2H) t 7, 18- -7, 15 (m, 1H) , 7 , 11 -7, 08 (m, 2H) , 6,70-6,67 (m, 1H) , 3,86 (t, J = 6,6 Hz, 2H) , 3,77 -3,69 (m, 4H) , 3,56 (s, 2H) , 3, 48 (s, 2H) , 2, 86 (t, J = = 7, 0 Hz, 2H) , 2,55- -2,48 (m, 5H) , 2,40-2, 32 (m; 2H) , 1, 89-1, 82 (m, 2H) , 1, 70-1,50 (2Hs sob pico da água). Um protão permutável não observado. d) 2-(3-((4-(5-Metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,16 g) a uma solução, mantida sob agitação, de ( 9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (0,13 g) (exemplo 9, passo c) e ácido trifluoroacético (0,036 g) em DCM (4 mL) sob azoto. Após 0,5 h foram adicionadas solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e a mistura reaccional extraída duas vezes com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com bicarbonato de sódio saturado e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados in vacuo para dar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,13 g. Utilizado directamente. 141 e) Ditrifluoroacetato de {R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Foi adicionada (.R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,179 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído (exemplo 9, passo d) (0,13 g) e ácido acético (0,031 mL) em MeOH (5 mL) .
Após 5 minutos foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,114 g) . Após outros 15 min. foi adicionado acetato de etilo (30 mL) e a mistura reaccional foi lavada com tampão a pH 7 (30 mL) e evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com DCMrMeOH:amónia aquosa "880" 92:7:1 para dar o intermediário sililado. Este intermediário foi dissolvido em THF (2 mL) e adicionado trifluoridrato de trietilamina (0, 062 mL) . Após 16 h, a reacção foi evaporada in vacuo, adicionado tolueno (150 mL) e a mistura evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de
acetonitrilo e água (1:1, 5 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, 142 evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,05 g. m/z 617 (M+H)+ (APCI) RMN de 1R 100 MHz, D6 -DMSO) δ 10,55-10 , 45 (m, 2H) , 9, . 95- 9,84 (m, 0,2H) r 9,68- 9,57 (m, 0, 8H) (rot< srmeros) , 8, 97-8, 74 (m, 2H) , 8,16 (d, j = = 9,5 Hz, 1H), 7, 49-7,33 (m, 4H) , 7, 29-7, . 26 (m, 0,2H ) , 7, 25-7, 21 (m, 0, 8H) ) (rot> ormeros) , 7, 15 (d, J = ! 9,5 Hz, 1H) , 6,9! 3 (d, J - 9, 5 Hz, 1H) , 6,86-6, 81 (m, 1H) , 6, 58 (d, J = io, i : Hz, 1H), 6,2 7-6,18 (m, 1H), 5, 37-5 ,30 (m, 2H) , 4, . 44- 4, 40 (m, 0,5H) r 4,35- 4, 29 (m, 1, 5H), 3, 73-3 , 63 (m, 4H) , 3, 51- 3,46 (m, 2H) , 3, 31-2, 94 (m , 8H) , , 2,46 (s, 3H) , 2, 12-2, 00 (m, 2H) , 1, 70· -1,58 (m, r 2H) 0m protão permutável não observado •
Exemplo 10 de (£)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-(2-il)-l-oxa-4,9-
Ditrifluoroacetato (4—(2-metiltiazole-4-carl:j011 ^1)etoxi)benzilamino)etil)bem- diazaespiro[5.5]undecan-9"1 zo[d]tiazol-2(3H)-ona
143 a) Metanossulfonato de 2-(3-formilfenoxi)etilo
Foram adicionados 2-bromoetanol (10,23 g) e carbonato de potássio (11,32 g) a uma solução de 3-hidroxibenzaldeído (5 g) em acetonitrilo (100 mL) e a mistura resultante foi agitada a refluxo durante 72 h. A mistura reaccional foi arrefecida e partilhada entre acetato de etilo e hidróxido de sódio aquoso diluido, gelado. A camada orgânica foi separada, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido in vacuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (30 mL) e foi adicionada trietilamina (3,44 mL) . A solução foi arrefecida até 0 °C e tratada gota a gota com cloreto de metanossulfonilo (1,89 mL). A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 10 minutos e em seguida deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 1 h. A mistura foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 6:4. As fracções puras foram evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 3,50 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 9,98 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,53-7,46 (m, 2H), 7,41-7,39 (m, 1H) , 7,22-7,19 (m, 1H) , 4,62-4,59 (m, 2H), 4,34-4,30 (m, 2H), 3,10 (s, 3H). 144 b) 3-(2-(4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzaldeído
Foi adicionado metanossulfonato de 2-(3-formilfenoxi)etilo (exemplo 10, passo a) (0,38 g) a uma solução de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4- il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,62 g) e trietilamina (0,55 mL) em acetonitrilo (5 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 16 h a 65 °C. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (25 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (25 mL) . A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 25 mL) . As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47:5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5 para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,48 g. RMN de (400 MHz r D6-DMSO) δ 9 ,97 (s, 1H ) , 7, 96 (s, 1H) 7,56 - 7 ,40 (m, 3H) , 7, 32 - 7,25 (m, 1H) , 4, 14 (s, 2H) , 3, 75 3,47 (m, 6 H) , 2 ,80 - 2, 62 (m, 5H) , 2, 55 - 2, 37 (m, 4H) , 1, 74 1,40 (m, 4H). 145 c) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)bem-zo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado 3-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzaldeido (exemplo 10, passo b) (0,24 g) a uma mistura de cloridrato de (.R)-7-(2-amino-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134 , exemplo 1, passo d) (0,15 g) e ácido acético (0,032 mL) em metanol (2 mL) . A mistura foi agitada durante 30 min em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,18 g) e a mistura agitada durante 2 h. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e tampão de fosfato a pH 7,2 (50 mL) . A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter e evaporado in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. 146 g.
Rendimento 0,21 m/z 640 (M+H)+(APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7,92 (s, 1H), 7,37 (t, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,19-7,12 (m, 2H) , 7,05 (d, J = 8,2 Hz, 1 H ) , 6,90 (d , J = 8,2 Hz, 1 H), 6,76 (d, J = 8,2 Hz, 1 H) , 4, 92 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 4,45-4,31 (m, 2H) , 4,26 -4,12 (m, 2H) , 3 ,76-3,53 (m, 8H ), 3,45-3 , 36 (m, 2H) , 3 ,31- 3,20 (m, 2H), 3,1 06-3 ,00 (m, 2H) , 2 ,68 (s, 3H), 2,1 -1,97 (m, 2H) , 1,92-1, 80 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 11
Ditrifluoroacetato de 5-hidroxi-8-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2- metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 1
147 a) 1-(2,4-Di-hidroxi-3-nitrofenil)etanona
Foi adicionado 2-nitrobenzeno-l,3-diol (24,5 g) em porções ao longo de 15 minutos a uma solução, mantida sob agitação vigorosa, de cloreto de alumínio (46,3 g) em nitrobenzeno (325 mL). Foi então adicionado gota a gota anidrido acético (15,7 mL) à mistura ao longo de mais 15 minutos e a mistura em seguida aquecida a 100 °C durante 5 h. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente e cuidadosamente desactivada com ácido clorídrico 2 M gelado (300 mL). A mistura foi extraída com éter dietílico (2 x 500 mL) e os extractos de éter dietílico combinados em seguida extraídos com hidróxido de sódio aquoso 2 M (2 x 400 mL) . Os extractos básicos combinados foram lavados com éter dietílico (4 x 500 mL) e em seguida acidificados até pH 1 com ácido clorídrico 2 M ( 700 mL) . O precipitado resultante foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar o composto em subepígrafe como um amarelo-sólido castanho. Rendimento 29,5 g. RMN de ΤΗ (400 MHz D6-DMSO) δ 13,32 (s, 1H), 12,31 (s, 1H) 7,98 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , 6,63 (d, J = 28,2 Hz, 1H) , 2,59 (s 3H) . 148 b) 1-(4-(Benziloxi)-2-hidroxi-3-nitrofenil)etanona
Foi adicionado terc-butóxido de litio (4,06 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 1-(2,4-di-hidroxi-3-nitrofenil) etanona (exemplo 11, passo a) (10 g) em DMF (100 mL) , sob azoto, enquanto a temperatura interna foi mantida inferior 30 °C. Depois de agitar durante mais 10 minutos à temperatura ambiente, foi adicionado brometo de benzilo (6,03 mL) e a mistura agitada durante mais 20 h. Foi adicionado mais brometo de benzilo (3 mL) e a mistura agitada durante 24 h. A reacção foi desactivada com água (300 mL) , foi adicionado hidróxido de sódio aquoso 1 M (50 mL) e a mistura foi lavada com éter dietilico (2 x 300 mL), filtrando através de Celite para ajudar a separação. A solução básica foi arrefecida em gelo/água, acidificada com ácido clorídrico 2 M gelado (200 mL) e o precipitado resultante filtrado, lavado com água e seco para proporcionar um sólido castanho claro. O sólido foi suspenso com etanol (100 mL) durante 1 h e o sólido filtrado, lavado com etanol frio (20 mL) e seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido castanho claro.
Rendimento 6,8 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMS0) δ 13,04 (s, 1H) , 8,14 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7, 45 5,42 (s, 2H), 2,64 observados. - 7,32 (m, 5H) , 7,01 (d, J = 9,2 Hz, 1H) , (s, 3H) + 3 protões permutáveis não 149 c) 1-(3-Amino-4-(benziloxi)-2-hidroxifenil)etanona
NH,
Foi adicionado zinco em pó (5,5 g) em porções a uma suspensão de 1-(4-(benziloxi)-2-hidroxi-3-nitrofenil)etanona (exemplo 11, passo b) (5,5 g) em ácido acético (55 mL) ao longo de 15 minutos, enquanto a temperatura interna foi mantida inferior a 40 °C com um banho de gelo. A mistura foi deixada atingir a temperatura ambiente e agitada durante 2 h. A mistura foi filtrada através de Celite (Cuidado: Fica Quente - não deixar secar), lavada com ácido acético e o filtrado vertido sobre gelo/água (500 mL). O precipitado resultante foi filtrado, lavado com água e seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar o composto em subepigrafe como um sólido castanho claro. Rendimento 4,8 g. RMN de (300 MHz, D6-DMSO) δ 7,53 (m, 2H) , 7, 48 - 7,33 (m, 3H) , 7,28 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 6,72 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 5,29 (s, 2H), 2,59 (s, 3H). 150 d) 8-Acetil-5-(benziloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona
Foi adicionado gota a gota cloreto de 2-cloroacetilo (1,8 mL) a uma mistura, mantida sob agitação, de 1-(3-amino-4-(benziloxi)-2-hidroxifenil)etanona (exemplo 11, passo c) (5,2 g) e hidrogenocarbonato de sódio (3,74 g) em DMF (30 mL) e em seguida agitada durante 2 h. Foi adicionado carbonato de césio (7,90 g) e a mistura aquecida a 100 °C durante 20 h. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente, desactivada com água (500 mL), extraída com acetato de etilo (2 x 200 mL), lavada com água (3 x 300 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada sob vácuo. O resíduo sólido foi tratado com éter dietílico, filtrado e seco para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido bege. Rendimento 5,7 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 10,33 (s, 1H), 7,55 (m, 2H) , 7,39 (m, 2H), 7,34 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,33 (m, 1H, 6,89 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,27 (s, 2H), 4,67 (s, 2H), 3,32 (s, 3H). 151 e) 5-(Benziloxi)-8-(2-cloroacetil)-2H-benzo[b][l,4]oxazin-3(4H)-ona
Foi adicionado dicloroiodato de benziltrimetilamónio (14,17 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 8-acetil-5-(benziloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona (exemplo 11, passo d) (5,5 g) numa mistura de diclorometano (100 mL), ácido acético (33 mL) e água (5,5 mL) e a mistura reaccional agitada a 65 °C durante 20 h. A reacção foi arrefecida até à temperatura ambiente, tratada com bissulfito de sódio aquoso (5, 78 g em 100 mL) e agitada durante mais 30 min. A mistura foi diluída com éter dietílico (200 mL) e o sólido resultante recolhido por filtração, lavado com água e éter dietílico, e seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido castanho claro. Rendimento 5,6 g. RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 10, 41 (s, 1H) , 7, 55 (m, 2H) 7,44 (d, J = 9,4 Hz, 1H) , 7,39 (m, 2H) , 7,32 (m, 1H ), 6,95 (d CTi II Hz, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4, , 69 (s, 2H) . 152 f) 8-(2-Azidoacetil)-5-(benziloxi)-2H-benzo[b][l,4]oxazin- 3(4H)-ona
Foi adicionada azida de sódio (1,176 g) a uma suspensão de 5-(benziloxi)-8-(2-cloroacetil)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona (exemplo 11, passo e) (4,8 g) em DMF (50 mL) e agitada durante 2 h. A mistura foi vertida sobre gelo/água e o sólido resultante recolhido por filtração, lavado com água e seco sob vácuo a 40 °C para proporcionar o composto em subepigrafe como um sólido castanho claro. Rendimento 4,6 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, D6-DMS0) δ 10,42 (s, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,48 (m, 1H), 7, 43 - 7,29 (m, 3H) , 6,97 (m, 1H) , 5,31 (s, 2H) , 4,69 (s, 2H) , 4,63 (s, 2H) . g) 8-(2-Azido-l-hidroxietil)-5-(benziloxi)-2H-benzo[b] [1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 1
153
Uma suspensão de 8-(2-azidoacetil)-5-(benziloxi)-2H-benzo[b] [ 1,4]oxazin-3(4H)-ona (exemplo 11, passo f) (2 g) em etanol (80 mL) foi tratada com boro-hidreto de sódio (0,224 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1,5 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O sólido em bruto foi triturado com acetona (20 mL) para proporcionar 1,6 g de produto racémico.
Separação da mistura racémica: 8-(2-Azido-l-hidroxietil)-5-(benziloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona racémica (2,5 g) foi dissolvida em metanol a uma concentração de 10 mg/mL e separada por HPLC quiral utilizando uma coluna Chiralpak®AS (250 x 50 mm ID, 20 pm de tamanho de partícula) eluida com etanol. As fracções contendo o isómero que eluiu primeiro foram combinadas e concentradas in vacuo para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,67 g. m/z 339 (M-H)~~ (APCI) 154 h) Acetato de 8-(2-amino-l-hidroxietil)-5-hidroxi-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 1
Uma mistura de 8-(2-azido-l-hidroxietil)-5-(benziloxi)-2H-benzo[b] [1, 4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 1 (exemplo 11, passo g) (0,67 g) em etanol (30 mL) com catalisador de paládio a 10% sobre carvão (0,210 g) foi agitada vigorosamente sob 4 bar de pressão de hidrogénio durante 18 horas. O catalisador foi filtrado e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em ácido acético (15 mL) e etanol (15 mL) e a mistura agitada com catalisador de paládio a 10% sobre carvão (0,210 g) sob 4 bar de pressão de hidrogénio durante 18 horas. A mistura foi filtrada e foi adicionado catalisador de paládio a 10% sobre carvão fresco (0,210 g) e a agitação sob 4 bar de pressão de hidrogénio continuou durante 18 horas. A mistura foi filtrada e adicionado catalisador de paládio a 10% sobre carvão fresco (0,210 g) e a agitação sob 4 bar de pressão de hidrogénio continuou durante 18 horas. A mistura foi filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com acetonitrilo (30 mL) para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,33 g. RMN de (400 MHz, De-DMSO) δ 6,85 (d, 1H), 6,50 (d, 1H) 4,74 - 4,69 (m, 1H), 4,52 - 4,42 (m, 2H) , 2,74 - 2,50 (m, 2H) 1,83 (s, 3H). Seis protões permutáveis não observados. 155 i) Ditrifluoroacetato de 5-hidroxi-8-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-2H-benzo[b][1,4][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 1
Uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 6, passo b) (0,198 g) em DCM (7 mL) foi arrefecida num banho de gelo e tratada com ácido trifluoroacético (0,037 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (303 mg) . A mistura foi agitada a 20 °C durante 30 minutos. Foi adicionado mais periodinano de Dess-Martin (303 mg) e a agitação continuou durante mais 30 minutos. A mistura foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (7 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (7 mL) e a totalidade agitada vigorosamente durante 10 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado, gota a gota, a uma solução de acetato de 8-(2-amino-l-hidroxietil)-5-hidroxi-2H-benzo[b] [1, 4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 1 (exemplo 11, passo h) (110 mg) em metanol (5 mL) que tinha sido arrefecido até 0 °C e tratado com ácido acético (0, 022 mL) seguido de HC1 (1 M em éter, 0,387 mL) e em seguida cianoboro-hidreto de sódio (37 mg). A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 156 2 horas. A mistura foi evaporada até um volume de 3 mL e partilhada entre acetato de etilo (30 mL) e tampão aquoso de fosfato (pH = 7,2) (50 mL) . A camada aquosa foi acidificada por adição de ácido acético e feita passar através de um cartucho de SCX de 10 g. A coluna foi lavada com água e em seguida purgada com amónia 7 N em metanol para eluir o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi dissolvido em metanol, tratado com ácido acético (0,5 mL) e os solventes removidos sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,059 g. m/z 622 (M+H)+(APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6 -DMSO, 90 °C) δ 9,46 (s, 1H), 7, 90 (s, 1H) , 7, 46 - 7,30 (m, 4H) , 6, 93 - 6,89 (m, 1H), 6,58 - 6,55 (m, 1H) , 5,13 - 5,05 (m, 1H) , 4, 52 (s, 2H), 4,28 (s, 2H) , 3, 70 (s, 4H) , 3,63 (s, 2H), 3,29 - 2,98 (m, 10H), 2,68 (s, 3H) , 2,09 - 1,95 (m, 2H), 1,85 - 1,70 (m, 2H ). Cinco protões permutáveis nao observados. 157
Exemplo 12
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-((4-(5-etiltiofen-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9- il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
a) 3-Oxo-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado, gota a gota, cloreto de cloroacetilo (4,88 mL) a uma mistura, mantida sob agitação vigorosa, a 0 °C de carbonato de potássio (17,43 g) em água (78 mL) e 4-(aminometil)-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (10,4 g) em acetato de etilo (92 mL). Após 30 minutos a 0 °C a mistura foi extraída com acetato de etilo e a camada orgânica seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em THF (200 mL) e adicionado, gota a gota, ao longo de 3 horas a uma solução, mantida sob agitação, sob azoto e aquecida a refluxo de terc-butóxido de potássio (1 M em terc-butanol, 75 mL) e THF 158 (250 mL) . A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e deixada agitar durante 18 horas. A maior parte do solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada aquosa foi reextraída com acetato de etilo e os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por trituração com uma mistura de éter (30 mL) e iso-hexano (20 mL) para proporcionar o subproduto em epígrafe. Rendimento 8,20 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) 8 7, 95 (s, 1H) , 3,97 (s, 2H) , 3, 72 - 3,62 (m, 2H) , 3,10 (d, 2H) , 3,05 - 2,93 (m, 2H) , 1,77 -1,69 (m, 2H), 1,53 - 1,43 (m, 2H), 1,40 (s, 9H). b) l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de 3-oxo-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 12, passo a) (8,2 g) em THF (100 mL) foi tratada, gota a gota, com complexo de borano-THF (1 M em THF, 91 mL) e a mistura resultante aquecida a 55 °C durante 2 horas. Foi adicionado complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 15,17 mL) e o mistura resultante aquecida a 55 °C durante 2 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e desactivada com metanol, em seguida os 159 solventes foram evaporados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (250 mL) e a solução tratada com N1,N2-dimetiletano-1,2-diamina (10 g) e a mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 6 horas. Foi adicionado mais Nl,N2-dimetiletano-1,2-diamina (3 g) e o aquecimento a refluxo continuou durante 6 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e os solventes evaporados sob pressão reduzida, o resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 1% de trietilamina e 5% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 7,40 g. RMN de λΕ (400 MHz, CDC13) δ 3,72 (s, 2H) , 3,68 - 3,64 (m, 2H) , 3,14 (t, J = 20 Hz, 2H) , 2,87 - 2,81 (m, 2H) , 2,68 (s, 2H), 1,97 - 1,88 (m, 2 H) , 1,46 (s, 9H), 1,44 - 1,36 (m, 2H). Um protão permutável não observado. c) 4-(2,2,2-Trifluoroacetil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de anidrido trif luoroacético (0,496 mL) dissolvido em DCM (3 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de trietilamina (0,538 mL) e l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo 160 (exemplo 12, passo b) (0,9 g) em DCM (20 mL) a 0 °C, ao longo de um período de 5 minutos sob azoto. A solução resultante foi agitada a 0 °C durante 30 minutos. Foi adicionada água (20 mL) e a mistura, agitada vigorosamente, agitada durante 10 minutos. A camada orgânica foi separada, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 40% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1 g. Utilizado directamente sem purificação. d) Trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-l-(1—oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (15 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de 4-(2,2,2-trifluoroacetil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5-5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 12, passo c) (1 g) em DCM (15 mL) a 20 °C. A solução resultante foi agitada a 20 °C durante 10 minutos. Foi adicionado tolueno (50 mL) e os solventes foram evaporados sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,4 g. m/z 253 (M+H)+ (APCI) 161 e) 2,2,2-Trifluoro-l-(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa- 4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a ) (0,223 g) dissolvido em acetonitrilo (1 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de trietilamina (0 ,318 mL) e trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-1-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo d) (0,38 g) em acetonitrilo (2 mL) a 20 °C, ao longo de um período de 2 minutos. A mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado e resíduo foi partilhado entre diclorometano e água, a camada aquosa foi reextraída duas vezes com DCM e os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 6% de metanol e 1% de trietilamina em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,260 g. m/z 387 (M+H)+ (APCI) 162 f) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(2,2,2- trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,052 mL) a uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-(2-hidroxietil)benzi1)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo e) (0,26 g) em diclorometano (7,0 mL) a 20 °C. A mistura foi tratada com periodinano de Dess-Martin (0,428 g) e agitada durante 30 minutos a 20 °C. A mistura foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (7,0 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (7,0 mL) e a mistura agitada vigorosamente durante 10 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (7,0 mL) , e foram adicionados (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,225 g) e ácido acético (0,039 mL) à mistura arrefecida a 0 °C. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,214 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 90 minutos. A maior parte do metanol foi evaporado e o remanescente partilhado entre acetato de etilo e tampão aquoso de fosfato (pH =7,2), a camada 163 orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 1% de amónia aquosa concentrada e 10% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,144 g. m/z 703 (M+H)+ (APCI) g) (R)-2-Hidroxi-2-(8-hidroxi-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)etil(3-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionada uma solução de trifluoridrato de trietilamina (0,044 mL) dissolvido em metanol (1 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 12, passo f) (0,140 g) , em THF (4 mL) a 20 °C. A solução resultante foi agitada a 20 °C durante 18 horas. A mistura reaccional foi tratada com trietilamina (0,111 mL) seguida de uma solução de dicarbonato de 164 di-terc-butilo (0,048 mL) em metanol (1 mL) . A mistura foi agitada a 20 °C durante 3 horas e os solventes evaporados em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 1% de amónia aquosa "880" e 10% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,100 g. m/z 689 (M+H)+ (APCI) h) (R)-3-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)fenetil(2-hidroxi-2-(8-hidroxi-2-oxo-l, 2-di-hidroquinolin-5-il)etil)carbamato de terc-butilo
O
Uma solução de (R)-2-hidroxi-2-(8-hidroxi-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)etil(3-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4, 9- de diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetil)carbamato terc-butilo (exemplo 12, passo g) (0,100 g) em metanol (5,0 mL) foi tratado com uma solução de carbonato de potássio (0,035 g) em água (5,0 mL) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 5 horas. O metanol foi evaporado sob uma corrente de azoto e foi adicionada mais água (5,0 mL). A solução foi acidificada por adição de ácido acético e em seguida feita 165 passar através de um cartucho de sílica C18 de 10 g. O cartucho foi lavado com água e em seguida purgado com metanol para retirar o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida para produzir 0,090 g do sal de ácido acético. Este sólido foi dissolvido em metanol (2 mL) e feito passar através de 0,700 g de resina Bond Elut NH2 da VARIAN e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,074 g. m/z 593 (M+H)+(APCI) i) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-((4-(5-etiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R) -3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)fenetil(2-hidroxi-2-(8-hidroxi-2-oxo-l, 2-di-hidroquinolin-5-il)etil)carbamato de terc-butilo (exemplo 12, passo h) (0,068 g) em DMF (2,0 mL) foi tratada com trietilamina (0,048 mL) seguida de ácido 5-etiltiofeno-2-carboxílico (0,018 g) e em seguida HATU (0,057 g). A mistura foi agitada a 20 °C durante 2 horas. Foi adicionado amónia aquosa "880" (4 gotas) e a agitação continuou durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de 166 cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano (1 mL) e a solução tratada com ácido trifluoroacético (1 mL). A solução foi deixada em repouso a 20 °C durante 10 minutos, foi adicionado tolueno (20 mL) e os solventes foram evaporados sob pressão reduzida, o resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,039 g. m/z 631 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, d6 -DMSO, . 90 °C) δ 8,18 (d, J = 10,0 Hz 1H) , 7, 46 - 7, . 33 ( ;m, 4H) r 7,23 (d, 1H) , 7, 14 (d, 1H) , 7, 00 (d 1H) , 6, 84 (d, 1H) , 6, 55 (d , 1H) , 5, 39 - 5,33 (m, 1H) , 4, 29 (s 2H) , 3, 74 - 3 , 63 (m, 4H ) , 3,54 (s, 2H) , 3,29 (t, 2H) , 3,2 1 3,00 (m r 8H) , 2,83 (q, 2H) , 2,10 - 1 , 96 (m, 2H) , 1, 84 - 1,69 (m 2H) , 1, 26 (td, 3H) . . Se is protoes permutáveis não observados. 167
Exemplo 13
Ditrifluoroacetato de 5-hidroxi-8-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 2
a) 8-(2-Azido-l-hidroxietil)-5-(benziloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 2
0 Isómero 2 foi obtido como o isómero que eluiu em segundo lugar a partir da separação por HPLC quiral detalhada no exemplo 11, passo g. As fracções contendo o isómero que eluiu em segundo lugar foram combinadas e concentradas in vacuo para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,72 g. m/z 339 (M-H)- (APCI) 168 b) Acetato de (S)-8-(2-amino-l-hidroxietil)-5-hidroxi-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 2
NH2 HO
OH
Uma solução de 8-(2-azido-l-hidroxietil)-5-(benziloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 2 (exemplo 13, passo a) (0,72 g) numa mistura de ácido acético (10 mL) e etanol (10 mL) foi agitada vigorosamente com catalisador de paládio a 10% sobre carvão (0,225 g) sob 4 bar de pressão de hidrogénio durante 18 horas. A mistura foi filtrada e adicionado catalisador de paládio a 10% sobre carvão fresco (0,225 g) e a agitação sob 4 bar de pressão de hidrogénio continuou durante 18 horas. A mistura foi filtrada e adicionado catalisador de paládio a 10% sobre carvão fresco (0,225 g) e a agitação sob 4 bar de pressão de hidrogénio continuou durante 18 horas. A mistura foi filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi triturado com acetonitrilo (30 mL) para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,28 g. m/z 222 (M-H ) (APCI) 169 c) Ditrifluoroacetato de 5-hidroxi-8-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 2
Uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-
diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 6, passo b) (0,163 g) em DCM (7,0 mL) foi arrefecida num banho de gelo e tratada com ácido trifluoroacético (0, 030 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,246 g) . A mistura foi agitada a 20 °C durante 30 minutos, tratada com mais periodinano de Dess-Martin (0,246 g) e agitada durante mais 30 minutos a 20 °C. A mistura foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (7,0 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (7,0 mL) e agitada vigorosamente durante 10 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2,0 mL) e adicionado, gota a gota, a uma solução de acetato de 8-(2-amino-l-hidroxietil)-5-hidroxi-2H-benzo[b][1,4]oxazin-3(4H)-ona, Isómero 2 (exemplo 13, passo b) (0, 090 g) em metanol (5,0 mL) que tinha sido arrefecida até 0 °C e tratado com ácido acético (0,018 mL) seguido de HC1 (1 M em éter, 0,32 mL) e em seguida cianoboro-hidreto de sódio (0, 030 g) . A mistura foi agitada a 20 °C durante 2 horas. A 170 mistura foi evaporada até um volume de 3 mL e partilhada entre acetato de etilo (30 mL) e tampão aquoso de fosfato (pH = 7,2) (50 mL) . A camada aquosa foi acidificada por adição de ácido acético e feita passar através de um cartucho de SCX de 10 g. A coluna foi lavada com água e em seguida purgada com amónia 7 N em metanol para eluir o produto. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi dissolvido em metanol, tratado com ácido acético (0,5 mL) e os solventes removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,053 g. m/z 622 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz , De-DMSO, 90 °C) δ 9, 45 (s, i—1 7, 90 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 7, 45 - - 7,31 (m, 4H ) , 6,95- - 6, 88 (m, 1H) , 6,60 - 6, 54 (m, 1H), 5,1 4 - 5,07 (m, 1H) , 4,54 (s , 2H), 4,30 (s, 2H) , 3, 70 (s, 4H ), 3,64 (s, 2H), 3,28 2,98 (m, 10H) , 2,68 (s, 3H) , 2, 08 - 1,' 57 (m, 2H) , 1,88 - 1, 71 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis não observados. 171
Exemplo 14
Ditrifluoroacetato de (R)—8—hidroxi—5—(1—hidroxi—2-(2-(5- ((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-2-il)etilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
a) 5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeido
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (2,82 g) em porções a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(tiofen-2-il)etanol (2 g) e imidazole (1,275 g) em DMF (20 mL) a 20 °C ao longo de um período de 20 minutos. A mistura foi agitada a 20 °C durante 18 horas e em seguida partilhada entre acetato de etilo e água, a camada orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 1-4% de acetato de etilo em iso-hexano. O resíduo (2,7 g) foi dissolvido em THF (50 mL) e a solução arrefecida até -78 °C, foi adicionado n-butil-lítio (2,5 M em hexanos, 5,06 mL) gota a gota ao longo de 10 minutos 172 e a mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi arrefecida até -78 °C e foi adicionada gota a gota DMF (5,7 mL) ao longo de 5 minutos. A mistura foi agitada a 20 °C durante 3 horas. A mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo, a camada orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, eluindo com 7% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2,3 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) 8 9 , 83 (s, 1H), 7,61 (d, 1H) (d, 1H) , 3,86 (t, 2H), 3,07 (t, 2H) , 0, 88 (s, 9H), 0, 02 (s 6H) . b) (9-((5-(2-(fcerc-Butildimetilsiiloxi)etil)tiofen-2-il)metil)-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Uma solução de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,25 g) e 5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído (exemplo 14, passo a) (0,171 g) em NMP (5 mL) com ácido acético (0,036 mL) foi tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,201 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C 173 durante 18 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,3 g. m/z 536 (M+H)+(APCI) c) (9-((5-(2-Hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Uma solução de (9-((5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il) metanona (exemplo 14, passo b) (0,3 g) em THF (5 mL) foi tratada, gota a gota, com uma solução de fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 0,672 mL) . A mistura foi deixada em repouso a 20 °C durante 30 minutos. Os solventes foram evaporados utilizando uma corrente de azoto e o resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 1% de trietilamina e 2,5% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,187 g. m/z 422 (M+H)+ (APCI) 174 d) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(2-(5-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-2-il)etilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (9-((5-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-1-oxa-4,9-diazaespiro [5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 14, passo c) (0,18 g) em diclorometano (10 mL) a 20 °C foi tratada com ácido trifluoroacético (0,033 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,254 g) e a mistura agitada a 20 °C durante 90 minutos. A mistura foi então tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e agitada vigorosamente durante 10 minutos. A mistura foi extraida duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,143 g) e ácido acético (0,024 mL) em metanol (7 mL). A mistura foi arrefecida num banho de gelo e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,136 g) . O banho de gelo foi retirado e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A maior parte do metanol foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre 175 acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica eluindo com 9% de metanol e 1% de amónia aquosa "880" em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,078 g. m/z 738 (M+H)+ (APCI) e) Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(2-(5-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-2-il)etilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
O
Uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(2-(5-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)metil)tiofen-2-il)etilamino)etil)-8-hidroxi-quinolin-2(1H)-ona (exemplo 14, passo d) (0,078 g) numa mistura de THF (4 mL) e metanol (1 mL) foi tratada com trifluoridrato de trietilamina (0, 022 mL) e a mistura deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica com tolueno. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa 176 (Sunfire™, Gradiente: 10-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epigrafe. Rendimento 0,021 g. m/z 624 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MH [z, D6-DMS0) δ 10,50 (s, 2H) , 10,15 - 9,84 (m, 1H), 8,S >1 ( :s, 1H) , 8, 80 (s, 1H), 8,16 (d, J = 10, 0 Hz, 1H) , 8,00 (s, 1H) , 7 , 26 - 7 ,12 (m, 2H), 7,02 - 6,94 (m, 2H) , 6,58 (d, J = 9,7 Hz, 1H) , 6 ,21 (s, , 1H), 5,36 - 5,31 (m, 1H) , 4, 53 (s, 2H) , 3,83 - 3, 48 (m, 6H) , 3,33 - 2,93 (m, 1 0H) , 2,68 (s, 3H, 2,16 - 2,04 (m, 2H, 1, ' 79 - - 1,59 (m, 2H).
Exemplo 15
Trifluoroacetato de (.R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado cloreto de hidrogénio (2 M em éter dietílico, 0,504 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de acetato de (R) -Ί- (2-amino- -1-hidroxietil)-4- 177 hidroxibenzo[d]tiazol-2(3Η)-ona (exemplo 1, passo d) (0,222 g) e 2-(3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído (exemplo 9, passo d) (0,320 g) em metanol (10 mL). Após 5 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,100 g) e a mistura reaccional agitada de um dia para o outro. A solução foi concentrada até 3 mL e partilhada entre tampão a pH 7,2 (80 mL) e acetato de etilo. Foi adicionada solução saturada de bicarbonato de sódio à camada aquosa, a qual foi então extraída com acetato de etilo. As soluções de acetato de etilo foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas até à secura. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 25-65% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas até à secura in vacuo. Foi adicionado acetonitrilo, a solução foi evaporada in vacuo, e este processo foi repetido. Foi adicionado éter dietílico e a goma triturada para dar o composto em epígrafe como um sólido. Rendimento 0,017 g. m/z 623 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 11 ,67 (s, 1H) , 10, , 25 (s, 1H) , 9, 73 - 9,63 (m, , 1H) , 8, 99 - 8,89 (m, 1H) , 8, 85 - 8, 76 (m, 1H) , 7, 46 - 7,32 (m , 3H) , 7, 30 - 7,20 (m, 1H) , 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6, 86 - 6,81 (m, 1H), 6,77 (d, J = 8, 3 Hz, 1H) , 6, 53 - 6,45 (m, 1H) , 4,! 33 - 4,86 (m, 1H), 4,45 - 4,39 (m, 0, 4H) , 4, 35 - 4, 28 (m, 1,6H), 3,74 - 3, 60 (m, 4H) , 3 ,49 (s, 2H) , 3,27 - 3, 14 (m, 4H) , 3, 13 - 2, 89 (m, , 6H), 2,46 (: 3, 3H) , 2, 12 - 2, 03 (m, 2H) , 1,70 - 1,59 (m, 2H) . Um protão permutável não observado. 178
Exemplo 16
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(4-(Bromometil)fenil)etanol
Br
Foi adicionado, gota a gota, complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THE, 4,37 mL) a uma solução de ácido 2-(4-(bromometil) fenil) acético (1,0 g) em THF (20 mL) a 20 °C e a mistura agitada durante 1 hora. Foi adicionado metanol gota a gota até parar o borbulhamento e o solvente evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 30% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um sólido cristalino branco. Rendimento 0,86 g. RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,36 - 7,32 (m, 2H), 7,20 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 4,68 (s, 2H), 4,64 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,64 - 3,55 (m, 2H), 2,75 - 2,67 (m, 2H). 179 b) (9-(4-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
O HO
A uma solução de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazapiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,791 g) e trietilamina (0,697 mL) em acetonitrilo (10 mL) foi adicionado 2-(4-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 16, passo a) e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (25 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (25 mL) . A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 25 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,76 g. m/z 416 (M+H)+ (APCI) c) 2-(4-((4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
180
Foi adicionado TFA (0,030 mL) a uma solução de (9-(4-(2-hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 16, passo b) (0,16 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,245 g) e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 45 min. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraida com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi então adicionado AcOH (0,1 mL) e a mistura foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepigrafe como um óleo transparente que foi imediatamente utilizado. Rendimento 0,16 g. d) Ditrifluoroacetato de (R)-4-Hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(4-(-2-metiltiazole-4-carbonil)-4-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionada uma solução de 2-(4-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeido (exemplo 16, passo c) (0,08 g) em metanol (2 mL) a 181 uma mistura de cloridrato de (R)~7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,076 g) e ácido acético (0,017 mL) em metanol (0,5 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 5 min, em seguida, arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,012 g) e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. A mistura reaccional foi aplicada a um cartucho C18 (Varian 10 g) . O cartucho foi lavado com água (50 mL) e eluído com metanol (50 mL). A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,66 g. m/z 624 (M+H)+ (APCI) RMN de 2H (3 00 MHz, De-DMSO, 90 °C) δ 11, 28 (s, 1H) , 7, 90 (S, 1H) , 7, 48 (d, J = 7, 1 Hz, 2H ) , 7,34 (d, J = 7,3 Hz, 2H) , 6, 94 (d, J = = 8, 1 Hz, 1H), 6, 78 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4, 99 - 4, 88 (m, 1H) , 4, 31 (s, 2H), 3 ,76 - 3, 55 (m, 6 H), 3,32 - 2,91 (m, 10H) , 2, 67 (s , 3H), 2, 10 - 1, .67 (m, 4H) Cinco protoes permutáveis não observados. 182
Exemplo 17
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(4-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil}-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Foi adicionada uma solução de 2-(4-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeído (exemplo 16, passo c) (0,08 g) em metanol (2 mL) a uma mistura de (R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W002004106333) (0,097 g) e ácido acético (0,017 mL) em metanol (0,5 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 5 min, em seguida arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,018 g) e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. A mistura reaccional foi aplicada ao cartucho C18 (Varian 10 g). O cartucho foi lavado com água (50 mL) e eluído com metanol (50 mL) . As fracções foram combinadas, evaporadas e purificadas por cromatografia sobre sílica gel eluindo com DCM:metanol:solução
de amónia "880" 95:5:0,5 até 89:10:1. 0 resíduo foi dissolvido em THF (2 mL) , foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0, 047 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o 183 produto foram combinadas, evaporadas in vácuo e o resíduo triturado com éter para dar os compostos em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,07 g. m/z 618 (M+H)+(APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ oo \—1 00 (d, J = 9, 7 Hz, na \—1 7, 90 (s , 1H) , 7, 48 (d, J = 7, 7 Hz, 2H) , 7,34 (d, J = 7,9 Hz, 2h; ), 7,14 (d, J = 8,2 Hz, r 1H) r 7, 00 (d, J = 7, 9 Hz, na \—1 6,54 (d r J = 10, na \—1 N o , 5, 36 (dd, J = 8, 6, 4 , 0 Hz, 1H) , 4,31 (s, 2 H) r 3, 75 - 3,58 (m, 6H) r 3,33 - 2,97 (m, 10H) , 2,67 (s, 3H) , 2,11 - 1,67 (m, 4H) . Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 18
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2,5-dimetil-4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
184 a) Acido 4-hidroxi-2,5-dimetilbenzóico
Foi adicionado, gota a gota, solução de tribrometo de boro
(1 M em DCM, 7, 21 mL) a uma suspensão de ácido 4 -metoxi-2,5- dimetilbenzóico d g) em DCM (5 mL) a -78 °C. A reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi arrefecida até -78 °C e foi adicionada solução de tribrometo de boro (1 M em DCM, 7,21 mL) . A reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi cuidadosamente vertida sobre gelo (~50 mL) . A solução aquosa resultante foi extraída com DCM (5 x 50 mL). As soluções orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido castanho-amarelado. Rendimento 0,75 g. RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 12,19 (s, 1H) , 9,91 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,09 (s, 3H). b) 4-Hidroxi-2,5-dimetilbenzoato de metilo
185
Foi adicionado, gota a gota, cloreto de acetilo (0,107 mL) a uma solução de ácido 4-hidroxi-2,5-dimetilbenzóico (exemplo 18, passo a) (0,249 g) em metanol (15 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h. Foi então adicionado cloreto de acetilo (0,107 mL) e a reacção aquecida até 50 °C e agitada a esta temperatura de um dia para o outro. A reacção foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 1:1 até 100% de acetato de etilo. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,25 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, D6-DMSO) δ 10,04 (s, 1H) , 7,64 (s, 1H), 6,67 (s, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,09 (s, 3H). c) 4-(2,2-Dietoxietoxi)-2,5-dimetilbenzoato de metilo
Foi adicionado 2-bromo-l,1-dietoxietano (0,31 mL) a uma mistura de 4-hidroxi-2,5-dimetilbenzoato de metilo (exemplo 18, passo b) (0,25 g) e carbonato de césio (0,68 g) em DMF (20 mL). A mistura resultante foi agitada a 85 °C durante 16 h. A reacção foi partilhada entre água (200 mL) e acetato de etilo (100 mL) . A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com 186 água (2 x 100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano até iso-hexano:acetato de etilo 10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,26 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDCla ) δ 7,75 (s, 1H \—1 to hO 4,86 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 3,88 - 3,58 (m, 7H), 2,58 (s, 3 H) , 2,20 (s, 3H) , 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 6H). d) (4-(2,2-Dietoxietoxi)-2,5-dimetilfenil)metanol
Foi adicionada, gota a gota, solução de hidreto de alumínio lítio (1 M em THF, 1,17 mL) a uma solução de 4-(2,2-dietoxietoxi)-2,5-dimetilbenzoato de metilo (exemplo 18, passo c) (0,231 g) em THF (20 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi cuidadosamente adicionado etanol (0,5 mL) e a reacção concentrada. O resíduo foi partilhado entre NaOH 1 M (50 mL) e acetato de etilo (100 mL) . A aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados para dar 187 o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,20 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7, 08 (s, 1H), 6,66 (s, 1H) 4, 85 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 4, 60 (s, 2H) , 4,00 (d, J = 5,2 Hz 2H) , 3, 84 - 3,58 (m, 4H) , 2,33 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,25 (t J = 7,0 Hz, 6H). Um protão permutável nao observado. e) (9-(2-(4-(Hidroximetil)-2,5-dimetilfenoxi)et11)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Uma solução de (4-(2,2-dietoxietoxi)-2,5- dimetilfenil)metanol (exemplo 18, passo d) (0,2 g) numa mistura de ácido acético (5 mL) e água (5 mL) foi aguecida a 65 °C durante lhe deixada arrefecer até à TA. A mistura reaccional foi vertida para solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 25 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aguosa saturada de cloreto de sódio (25 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O resíduo foi redissolvido em metanol (5 mL) , foi adicionado ácido acético (5 mL) seguido de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,35 g) . A mistura resultante foi agitada durante 15 min, em seguida foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,07 g) e a mistura agitada de um dia para o outro. 0 solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 30 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,12 g. m/z 460 (M+H)+ (APCI) f) 2,5-Dimetil-4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzaldeído
Foi adicionado dióxido de manganês (0,32 g) a uma solução de (9-(2-(4-(hidroximetil)-2,5-dimetilfenoxi)etil)-l-oxa-4,9-
diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 18, passo e) (0,17 g) em DCM (10 mL) . A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 4 h. A reacção foi filtrada através de Celite e a almofada do filtro lavada com DCM 189 (2 χ 50 mL) . As águas-mães e as lavagens foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,17 g. m/z 458 (M+H)+ (APCI) g) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2,5-dimetil-4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado 2,5-dimetil-4-(2-(4-(2-metiltiazole-4- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)-benzaldeído (exemplo 18, passo f) (0,08 g) a uma mistura de cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,07 g) e ácido acético (0,010 mL) em metanol (2 mL) . A mistura foi agitada durante 30 min em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,016 g) e a mistura agitada durante 2 h. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e tampão de fosfato a pH 7,2 (50 mL). A aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL). 190
As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 92:8:0,8. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,069 g. m/z 668 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MH: i, De-DMSO, 90 c 'Ο δ 11 ,34 - 11, 14 (m, 1H) 7,92 (s, 1H) , 7,26 (s , 1H), 6,93 (d, . J = 8, 2 Hz, 1H) , 6, 86 (s 1H) , 6, 76 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H), 4, 94 (t, J = 6,5 H z, 1H) , 4, 39 4,31 (m, 2H) , 4, 23 - 4,09 (m, 2H) , 3, 78 - 3,63 (m, 6H) , 3 ,61 3,55 (m, 2H) , 3,49 - 3 ,20 (m, 4H) , 3, 13 - 3, 03 (m, 2H) , 2,68 (s 3H) , 2,33 ' (s, 3H) , 2, 21 - 2,01 (m, 5H) , 1 ,94 - 1, 78 (m, 2H)
Cinco protões permutáveis nao observados. 191
Exemplo 19
Ditrifluoroacetato de (R) -7- (2-(3-fluoro-5-((4-(2- metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Ácido 2-(3-(bromometil)-5-fluorofenil)acético
Foi adicionado peróxido de benzoilo (0,05 g) a uma mistura de ácido 2-3-fluoro-5-metilfenil)acético (0,518 g) e IV-bromossuccinimida (0,6 g) em DCM (10 mL) . A reacção foi aquecida a refluxo durante 1 h. Foram adicionados DCM (10 mL) e água (20 mL) e a fase orgânica separada. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi triturado com tolueno e o sólido branco resultante removido por filtração. As águas-mães foram evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco que foi 192 utilizado no passo seguinte sem mais purificação. Rendimento 0,3 g. b) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona F Í1 HO η N v 0 Foi adicionado, gota a gota, uma solução de complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 3,85 mL) a uma solução de ácido 2-(3-(bromometil)-5-fluorofenil)acético (exemplo 19, passo a) (0,38 g) em THF (10 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. A reacção foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado gota a gota metanol (1 mL) até parar o borbulhamento. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo redissolvido em MeCN (10 mL) . Foi então adicionado trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazapiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,61 g) seguido de trietilamina (0,54 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 70 h. O solvente foi então evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 99:1:0,1 até 94,5:5:0,5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma espuma amarela. Rendimento 0,57 g. m/z 434 (M+H)+ (APCI) 193 c) 2-(3-Fluoro-5-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido
Foi adicionado TFA (0,08 mL) a uma solução de (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 19, passo b) (0,46 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado periodinano de Dess-Martin (0,68 g) e a mistura agitada à TA durante 45 min. Foram então adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificadas com ácido acético (0,1 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,4 g. m/z 432 (M+H)+ (APCI) 194 d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-Fluoro-5-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionada uma solução de 2-(3-fluoro-5-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido (exemplo 19, passo c) (0,2 g) em metanol (3 mL) a uma mistura de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento
WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,18 g) e ácido acético (0,04 mL) em metanol (0,5 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 5 min em seguida arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,03 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 2 h. 0 solvente foi evaporado in vacuo e a purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 a 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e purificadas por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,018 g. m/z 642 (M+H)+ (APCI) 195 RMN de ΤΗ (400 MHz, D6- DMSO, 90 °C) δ 7, 89 (s, 1H) , 7,26 7, 12 (m, 3H) , 6, 93 (d, J = = 8,5 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = = 8,2 Hz 1H) , 4,94 - 4, 85 (m, 1H) , 4 ,26 - 4, 13 (m, 2H) , 3, 74 - 3,59 (m 6H) , 3,35 - 2, 94 (m , 10H), 2,67 (s, 3H) , 2,06 - 1, 91 (m, 2H) 1,83 - 1,68 (m, 2H). Seis protões permutáveis nao observados
Exemplo 20
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-(2-(4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-dlazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)benzilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(3-(Hidroximetil)fenil)etanol
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 5 min, hidreto de alumínio lítio (1 M em éter dietílico, 5,55 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de 3-(2-hidroxietil)benzoato de metilo (1,0 g) em tetra-hidrofurano (15 mL) arrefecida num banho de gelo. Após 1 h, a mistura reaccional foi desactivada com metanol e evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo: iso-hexano, 2:1, em seguida acetato de etilo para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,5 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7,31 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 7,26 - 7,20 (m, 2H), 7,16 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 4,67 (s, 2H) , 3,86 (t, J = 6,9 Hz, 2H) , 2,87 (t, J = 6,9 Hz, 2H) . Dois protões permutáveis não observados. b) 3-(2-Hidroxietil)benzaldeído
Foi adicionado dióxido de manganês (IV) (2,0 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(3-(hidroximetil)fenil)etanol (exemplo 20, passo a) (0,50 g) em DCM (10 mL) à temperatura ambiente. Após 6 h, a mistura reaccional foi filtrada através de Celite eluindo com DCM. A solução foi evaporada in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Utilizado directamente. Rendimento 0,46 g. 197 c) 2-(3-(Dietoximetil)fenil)etanol
Foi adicionado cloreto de amónio (0,08 g) a uma solução de 3-(2-hidroxietil)benzaldeido (exemplo 20, passo b) (0,45 g) e trietoximetano (0,55 g) em EtOH (8 mL) e a mistura reaccional aquecida a 70 °C durante 3 h. Depois de arrefecer, a mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. A solução de acetato de etilo foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,24 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,38 - 7, 25 (m, 3H) , 7, 22 7,16 (m, 1H) , 5,50 - 5,47 (m, 1H), 3,93 - 3,82 (m, 2H) , 3, 71 3,47 (m, 4H) , 2, 94 - 2,86 (m, 2H), 1,29 - 1 ,21 (m, 6H) . protão permutável nao observado. d) Metanossulfonato de 3-(dietoximetil)fenetilo
Foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (0,18 g) em diclorometano (0,2 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de 198 2-(3-(dietoximetil)fenil)etanol (exemplo 20, passo c) (0,23 g) e trietilamina (0,429 mL) em diclorometano (2,5 mL) arrefecida num banho de gelo. Após 1 h, a mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada de acetato de etilo foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,28 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7, 40 - - 7,29 (m, 3H) , 7, 19 (d J N II 1H), 5, 47 (s, 1H) , 4, 42 (t, J = 6, . 9 Hz , 2H) , 3, 67 3, à 00 ), 3,07 (t, J = 6,9 Hz, 2H) , 2,86 (s, 3H) , 1,24 (t J = 6,8 Hz, 6H) . e) (9-(3-(Dietoximetil)fenetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado metanossulfonato de 3-(dietoximetil)fenetilo (exemplo 20, passo d) (0,30 g) em acetonitrilo (1,5 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(l-oxa-4,9-diazapiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 9, passo b) (0,391 g) e trietilamina (0,415 mL) em acetonitrilo (1,5 mL) e a solução aquecida a 70 °C durante 48 h. Depois de arrefecer, a solução foi evaporada 199 in vacuo e aplicada a uma coluna de sílica gel para purificação, eluindo com acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina, 60:40:5 dando o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,2 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7, 30 - 7, 24 (m, 3H) , 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,11 (d, J = 3,7 Hz, 1H) , 6,69 (dd, J ^ = 3,7 Hz, 1,1 Hz, 1H) , 5, 46 (s, 1H) , 3, 78 - 3, 71 (m, 4H) , 3,65 - 3,49 (m, 6H), 2, 82 - 2, 77 (m, 2H) , 2,65 - - 2 , 57 (m , 4H) , 2,50 (s, 3H) , 2,48 - 2,39 (m, r 2H) , 1,94 - - 1, 86 (m, , 2H) , 1,67 - 1,56 (m, 2H) , 1,23 (t , J = 7, 2 Hz, i SH) . f) 3-(2-(4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)benzaldeído
Foi adicionado ácido fórmico (2 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de (9-(3-(dietoximetil)fenetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 20, passo e) (0,20 g) em tetra-hidrofurano (3 mL) e água (1 mL) arrefecida num banho de gelo. Após 10 min, a mistura reaccional foi evaporada in vacuo, foi adicionado tolueno e a mistura reaccional foi evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em acetonitrilo e em seguida evaporado in vacuo, e este processo foi repetido para dar o composto em subepígrafe como um óleo que foi directamente utilizado. Rendimento 0,16 g. m/z 413 (M+H)+ (APCI) 200 g) Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(3— (2-(4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)etil)benzilamino)etil)-benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado ácido acético (0,033 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de 3-(2-(4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)benzaldeido (exemplo 20, passo f) (0,17 g) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,15 g) em metanol (10 mL) . Após 2 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,10 g) e a mistura reaccional agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução de metanol foi concentrada até ~3 mL e diluída com acetato de etilo. Formou-se um precipitado gomoso. O acetato de etilo foi decantado e lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seco sobre sulfato de sódio. A goma foi dissolvida numa pequena quantidade de metanol e adicionada ao acetato de etilo. O acetato de etilo foi filtrado e evaporado in vacuo para dar um sólido branco. O sólido foi dissolvido em metanol e purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 15-50% de
acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas até à secura. A 201 trituração com éter dietílico deu o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,11 g. m/z 623 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,67 (s, 1H), 1 0,23 (s, 1H) , 9, 85 - - 9, 75 e 9, 61 - 9, 50 (m, total 1H) , 9,1 8 - 8,98 (m, 2H) , 7, 45 - 7,31 (m, 4H) , 7 ,29 - 7,: 24 (m, 1H) , 6,89 (d, J = 7, 4 H z, 1H) , 6, 86 - 6, 83 (m, 1H) , - 6, , 75 (d, J = 7,4 Hz, 1H) , 6, 48 - 6, 44 (m, • 1H) , 4, 93 - 4, 85 (m, 1H :), 4, 21 - 4, 14 (m, 2H) , 3, 74 - 3, 64 (m, 4H) , 3,53 (s, 2H) , 3 ,48 - 3,40 (m, 2H) , 3, 36 - 3,27 (m, 2H) , 3 ,08 - 2,92 (m, 6H), 2, 47 (S, 3H) , 2 ,16 - 2,08 (m, 2H) , 1, 74 t ~ 1, 61 (m, 2H) .
Exemplo 21
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-((5- (2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)etil)tiofen-2-il)metilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
202 a) 5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (2,82 g) em porções a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(tiofen-2-il)etanol (2 g) e imidazole (1,275 g) em DMF (20 mL) a 20 °C ao longo de um período de 20 minutos. A mistura foi agitada a 20 °C durante 18 horas e em seguida partilhada entre acetato de etilo e água, a camada orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 1-4% de acetato de etilo em iso-hexano. O resíduo (2,7 g) foi dissolvido em THF (50 mL) e a solução arrefecida até -78 °C, foi adicionado gota a gota n-butil-lítio (2,5 M em hexanos, 5,06 mL) ao longo de 10 minutos e a mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi arrefecida até -78 °C e foi adicionada gota a gota DMF (5,7 mL) ao longo de 5 minutos. A mistura foi agitada a 20 °C durante 3 horas. A mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo, a camada orgânica foi lavada com água, seca sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, eluindo com 7% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2,3 g. 203 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 9,83 (s, 1H) , 7,61 (d, 1H) , 6,96 (d, 1H), 3,86 (t, 2H), 3,07 (t, 2H), 0,88 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) . b) 2-(5-(Dietoximetil)tiofen-2-il)etanol
Uma mistura de 5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído (exemplo 21, passo a) (1,37 g) e cloreto de amónio (0,135 g) e ortoformato de trietilo (0,928 mL) em etanol (15 mL) foi aquecida a refluxo sob azoto durante 3 horas. A maior parte do etanol foi removido sob pressão reduzida e a mistura remanescente foi partilhada entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em THF (20 mL) e foi adicionado gota a gota fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 5,07 mL) ao longo de 1 minuto. A mistura foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 30 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 25% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,940 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 6,85 (d, 1H) , 6,73 (d, 1H) , 5,64 (s, 1H), 4, 79 - 4, 74 (m, 1H), 3,62 - 3,43 (m, 6H) , 2,87 (t, 2H), 1,13 (t, 6H). 204 c) 5-(2-(4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofeno-2-carbaldeído
Uma solução de 2-(5-(dietoximetil)tiofen-2-il)etanol (exemplo 21, passo b) (0,54 g) em diclorometano (20 mL) foi tratada com trietilamina (0,359 mL) e a mistura arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionada, gota a gota ao longo de 2 minutos, uma solução de cloreto de metanossulfonilo (0,183 mL) em diclorometano (3 mL) e a mistura reaccional agitada a 0 °C durante 1 hora. A mistura foi lavada com água e a camada orgânica seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo (7 mL) e DMF (1 mL) e foi adicionada trietilamina (0,654 mL) , seguida de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,5 g) e aquecida a 70 °C durante 10 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em THF (5 mL) e arrefecido num banho de gelo, foi adicionado ácido fórmico (4 mL) seguido de água (1 mL) . A mistura foi deixada em repouso a 0 °C durante 10 minutos. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica duas vezes com tolueno e duas vezes com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de trietilamina e 2% de metanol em diclorometano 205 como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,52 g. m/z 420 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—((5— (2—(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofen-2-il)metilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,22 g) em metanol (8 mL) foi tratada com ácido acético (0,041 mL) seguida de uma solução de 5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofeno-2-carbaldeído (exemplo 21, passo c) (0,3 g) em metanol (2 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0, 067 g) . A mistura foi então agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A maior parte do metanol foi evaporado sob pressão reduzida e o remanescente partilhado entre THF (50 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 206 0,2%). As fracções contendo o produto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,08 g. m/ z 630 (M+H)+ (APCI) RMN de 1 H (400 MHz, d6- -DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) t 7, 92 (S, 1H) , 7, 14 (d, 1H), 6, 94 - 6,88 (m , 2H), 6,76 (d, 1H), 4, 91 - 4, 85 (m, 1H) , 4,37 (s, 2H), 3,70 (s, 4H) f 3,66 (s, 2H), 3, 40 - 3,30 (m, 4H) , 3,26 - 3,07 (m , 4H), 3, 04 - 3 ,02 (m, 2H), 2, 68 (s, 3H) , 2,0 9 - 1,99 (m, 2H ) , 1,87 - 1 , 73 (m , 2H) . Cinco protões permutáveis nao observados.
Exemplo 22
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
207 a) 4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de ácido 2-isopropiltiazole-4-carboxílico (1 g) e cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (1,71 g) em DMF (30 mL) foi arrefecida num banho de gelo e tratada com trietilamina (2,442 mL) seguida de HATU (2,89 g). O banho de gelo foi retirado e a mistura foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 70% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2 g. RMN de (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7, 93 (s, 1H) , 3, 71 3,63 (m, 6H), 3,51 - 3,44 (m, 2H), 3,35 - 3,26 (m, 1H) , 3, 18 3,10 (m, 2H), 1, 74 - 1,67 (m, 2H), 1,49 - 1,41 (m, 2H) , 1,39 (s, 9H), 1,34 (d, J = 7,6 Hz, 6H). 208 b) Trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Uma solução de 4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de teuc-butilo (exemplo 22, passo a) (2,3 g) numa mistura de diclorometano (40 mL) e ácido trifluoroacético (10 mL) foi deixada em repouso a 20 °C durante 30 minutos. Foi adicionado tolueno (50 mL) e os solventes foram evaporados, em seguida este processo foi repetido com mais tolueno (50 mL) . O resíduo foi triturado com éter. A goma foi então dissolvida em acetonitrilo e o solvente evaporado para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,64 g. m/z 310 (M+H)+ (APCI) c) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
209
Uma mistura de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,85 g) e 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,432 g) em acetonitrilo (10 mL) a 20 °C foi tratada com trietilamina (0,616 mL) e em seguida agitada durante 2 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 1% de trietilamina e 3% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,71 g. m/z 444 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9- il) metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
S
Uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 22, passo c) (0,3 g) em diclorometano (10 mL) foi 210 tratada com ácido trifluoroacético (0,052 mL) seguido de periodinano de Dess-Martin (0,402 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,039 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução a 0 °C de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,2 g) e ácido acético (0, 039 mL) em metanol (10 mL) . Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,064 g) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A maior parte do metanol foi evaporado sob pressão reduzida e o remanescente partilhado entre THF (50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,170 g. m/z 652 (M+H)+ (APCI) RMN de 1H. (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, \—1 7, 94 (s, 1H) , 7, 45 - 7,31 (m, 4H) , 6,93 (d, J = 31,1 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 24,6 Hz , 1H) , 4, 96 - 4,87 (m, 1H) , 4,27 (S, 2H) , 3, 70 211 (S, 4H) , 3,65 (s, 2H) , 3,35 - 2,97 (m, 11H), 2,08 - 1,96 (m, 2H) , 1,84 - 1,67 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 20,7 Hz, 6H) . Cinco protões permutáveis nao observados.
Exemplo 23
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
a) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 22, passo c) (0,159 g) em DCM (10 mL) foi tratada com 212 ácido trifluoroacético (0, 028 mL) , seguida de periodinano de Dess-Martin (0,213 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,039 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,12 g) e ácido acético (0,021 mL) em metanol (10 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,114 g) , em seguida a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. O metanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio e acetato de etilo, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de amónia aquosa "880" e 8% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,127 g. m/z 760 (M+H)+ (APCI) 213 b) Ditrifluoroacetato de {R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-( ( 4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 23, passo a) (0,127 g) em THF (4 mL) foi tratada com uma solução de trifluoridrato de trietilamina (0,035 mL) em metanol (1 mL) e a mistura resultante foi deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,085 g. m/z 646 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6- -DMSO, 90 ' °C) δ 8,16 (d, J = 36, 5 Hz \—1 7, 9 4 (s, 1H), 7,45 - 7, 33 (m, 4H) , 7, 13 (d, J = 26, 1 Hz \—1 6, 99 (d, J = 24,2 Hz, 1H ), 6,54 (d, J = 24 , 2 H z, 1 H) , 5,3 - 5, 32 (m, 1H) , 4,29 (s, 2H ) , 3,70 (s , 4H) , 3,64 (s, 2 H) , 3 ,32 3,24 (m , 3H) , 3,21 - 3,00 (m, 8H) , 2 , 08 - - 1,97 (m, 2H) , i , 82 214 j = 25,7 Hz, 6H) . Seis protões 1,68 (m, 2H), 1,34 (d' permutáveis não observados·
Exemplo 24 _4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-(2-
Ditrifluoroacetato „ Q • -l-oxa-4,9- (4- (2-metiltiazole-4-carbon1 £e„etiiamino)etil)ben- diazaespiro[5.5]undecan-9-i^^e zo[d]tiazol-2(3H)-ona
HO
Foi adicionado carbonato de césio (8,84 g) a uma solução de 3-(2-hidroxietil)fenoi (2,5 g> e 2-bromo-l,1-dietoxietano (3,74 g) em DMF (50 mL) , e a mistura resultante foi agitada a 90 °C de um dia para o outro, em seguida deixada arrefecer. A mistura foi vertida para água e extraída três vezes com acetato de etilo. Os extractos combinados foram lavados com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca sobre sulfato de sódio anidro e purificada por cromatografia flash sobre sílica eluído com um gradiente de éter dietílico em 215 composto em subepígrafe iso-hexano para proporcionar ° 3,0 g. óleo amarelo pálido. Rendimenr como um 6,72 2H) , (m, RMN (m, 3,81 2H) , . 5 7,21 - de (400 MHz, CDCls)c 3 Hz, 1H)' 3H), 4,80 (t, J = Q o 78 - 3,69 (t, J = 6,5 Hz, 2H), ' 2,80 (t, J = 6,5 HZ, 2H)' 7, 16 3,97 (m, , J = (m, \—1 6,82 - (d, J = 5,1 Hz, 2H) , 3, 65 - 3,56 6,9 Hz, 6H) . Um protão permutável não observado· β acetaldeído b) 2-(3-(2-Hidroxietil)fen°
idrico concentrado (1,5 mL) a uma Foi adicionado ácido clori )fenil)etanol (exemplo 24 passo solução de 2-(3-(2,2-dietoxietoX ' ,o mL) e a mistura resultante foi a) (0,256 g) em 1,4-dioxano (4 . _ Hurante 1,5 horas. A solução foi agitada a temperatura ambiente ^ ^t-r-aída duas vezes com acetato de então diluída com agua e exuio. foram lavados com solução aguosa etilo. Os extractos combinados rUJ- , cpcos sobre sulfato de magnésio saturada de cloreto de sodio, oara proporcionar o composto em anidro e concentrados m vacuo FaJ- r r r , , _ uranra. Rendimento 0,150 g. subepígrafe como uma espuma joranoa 7,28 - 7,13 (m, (t, J = 6,5 Hz, permutável não RMN de 1E (400 MHz, CDCl3) δ 9,86 (s' 1H) ' 1H) , 2H) , 6, 92 - 6,66 (m, 3H) , 4,57 (s, 2H) , 3,87 2,86 (t, J = 6,5 Hz, 2H). Um protão observado. 216 c) (9-(2-(3-(2-Hidroxietil)fenoxi)etil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Uma suspensão de 2-(3-(2-hidroxietil)fenoxi)acetaldeído (exemplo 24, passo b) (0,143 g) e trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,314 g) em metanol (10 mL) foi tratada com ácido acético (0,045 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A mistura foi arrefecida em gelo-água, tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,254 g) e agitada ao longo de 3 dias, permitindo que o banho de gelo acabasse. A solução resultante foi purificada por cromatografia flash sobre sílica eluído com trietilamina:metanol:diclorometano 1:15:84 para proporcionar o produto em bruto (0,243 g). Uma segunda purificação por cromatografia flash sobre sílica eluído com trietilamina:metanol:diclorometano 1:5:94 proporcionou o composto em subepígrafe ligeiramente impuro como uma goma castanha. Rendimento 0,122 g. m/z 446 (M+H)+ (APCI) d) 2-(3-(2-(4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)fenil)acetaldeído
O
217
Uma solução de (9-(2-(3-(2-hidroxietil)fenoxi)etil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 24, passo c) (0,152 g) em DCM (5 mL) foi arrefecida em gelo-água e tratada com ácido trifluoroacético (0,039 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,221 g) e a mistura foi retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente durante 25 minutos. A reacção foi desactivada pela adição de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (5 mL) , e a mistura bifásica resultante foi agitada durante 10 minutos. A mistura foi então extraída duas vezes com acetato de etilo, e os extractos orgânicos combinados lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,1 mL) e em seguida os extractos acidificados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em subepigrafe como uma goma castanha. Rendimento 0,118 g. m/z 444 (M+H)+ (APCI) e) Ditrifluoroacetato de (J?)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)fenetilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
218
Uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,105 g) em metanol (2 mL) foi tratada com ácido acético (0,023 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-(3-(2-(4-(2-metiltiazole-4- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)fenil)-acetaldeído (exemplo 24, passo d) (0,117 g) em metanol (3 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, antes de arrefecer em gelo-água e tratar com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,085 g) . A mistura foi agitada em gelo durante 1 hora, e em seguida foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0, 086 g) . A mistura foi agitada em gelo durante 1 hora, em seguida foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,169 g) e a mistura foi agitada durante 1 hora. Foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,506 g) e a mistura foi agitada de um dia para o outro, permitindo que aquecesse lentamente até à temperatura ambiente. No dia seguinte, a mistura foi arrefecida novamente em gelo-água e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,254 g) e agitada em gelo-água durante 45 minutos em seguida concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo (3 mL) e água (1,5 mL) e purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas duas vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. 0 resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido que foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,011 g. m/z 654 (M+H)+ (APCI) 219 RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMS0) δ : 11,68 (s 1, 1H ), 10 , 22 (s 1 1H) , 8, 00 (s, 1H) , 7 ,29 (t, J = : 7, 9 Hz, 1H) , 6, 96 - 6, 84 (m 4H) , 6, 77 (d, J = 8 , 5 Hz , 1H), 6, , 48 (s 1, 1H) , 4 ,93 - 4, 85 (m 1H) , 4, 36 - 4, 27 (m r 2H) , 3,83 - 3, 61 (m, 6H) , 3 ,60 - 3, 51 (m 2H) , 3, 50 - 3, 42 (m r 2H) , 3,24 - 3, 02 (m, 6H) , 3 , 02 - 2, 84 (m 2H) , 2, 69 (s, 3H) , 2, , 15 - 2,06 (m, 2H) , 1,88 - 1,67 (m , 2H)
Três protões permutáveis não observados.
Exemplo 25
Ditrifluoroacetato de (J?) -8-hidroxi-5- (l-hidroxi-2- (3- ((4-(2-(trifluorometil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
a) Trifluoroacetato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il(2-(trifluorometil)tiazol-4-il)metanona
220
Uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi
PharmaTech) (0,594 g) e ácido 2-(trifluorometil)tiazole-4-carboxílico (0,4 g) em DMF (10 mL) foi tratada com trietilamina (0,848 mL) e arrefecida até 0 °C. Foi adicionado HATU (1,003 g) e a mistura agitada a 20 °C durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 40% de acetato de etilo em iso-hexano para produzir o produto como a base livre. Esta foi dissolvida em diclorometano (40 mL) e tratada com ácido trifluoroacético (10 mL) e em seguida a mistura foi deixada em repouso a 20 °C durante 1 hora. Foi adicionado tolueno (60 mL) e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,740 g. m/z 336 (M+H)+ (APCI) b) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(trifluorometil)tiazol-4-il)metanona
221
Foi adicionado 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,354 g) a uma solução de trifluoroacetato de 1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il(2-(trifluorometil)tiazol-4-il)metanona (exemplo 25, passo a) (0,74 g) e trietilamina (0,689 mL) em acetonitrilo (15 mL) e a mistura agitada a 20 °C durante 2 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de trietilamina e 3% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,640 g. m/z 470 (M+H)+ (APCI) c) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(2-(trifluorometil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
S F 222
Uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(trifluorometil)tiazol-4-il)metanona (exemplo 25, passo b) (0,211 g) em diclorometano (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,035 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,266 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,026 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução de (R)-5(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,150 g) e ácido acético (0,026 mL) em metanol (10 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,143 g) e em seguida a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. 0 metanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio e acetato de etilo, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de amónia aquosa "880" e 8% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,11 g. m/z 786 (M+H)+ (APCI) 223 d) Ditrifluoroacetato de {R)—8—hidroxi—5—(1—hidroxi—2—(3— ((4-(2-(trifluorometil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,030 mL) em metanol (1 mL) a uma solução de (P)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(2-trifluorometil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 25, passo c) (0,11 g) em THF (4 mL) e a solução resultante deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe 0,075 g. m/z 672 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz , Dg- -DMSO, vo o o O ) δ 8, 78 (s, 1H) , 8, 18 (d J = 49,2 Hz, 1H) , 7 ,45 - 7, 33 (m, 4H) , 7,1 4 (d, J = = 21,8 Hz, 1H) 7, 00 (d, J = 19, 8 Hz, 1H) , 6,54 (d, J = 21,9 Hz, 1H) # . 5,39 · 5, 33 (m, 1H) , 4, 29 (S, 2H) , 3,75 - 3, 63 (m, 4H) , 3,59 (s, 2H) 3, 28 (t, J = = 8,1 H 2 2H), 3,21 - 3, 00 (m, 8H) , 2, 10 - 1, 97 (m 224 2Η), 1,84 observados . 1,67 (m, 2H). Cinco protões permutáveis não
Exemplo 2 6
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-(trifluorometil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)ben-zo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de ( 9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(trifluorometil)tiazol-4-il)metanona (exemplo 25, passo b) (0,268 g) em diclorometano (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,044 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,339 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraida duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,033 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O residuo foi dissolvido em metanol (2 mL) e 225 adicionado a uma solução a 0 °C de cloridrato (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,15 g) e ácido acético (0, 033 mL) em metanol (10 mL) . Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,054 g) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A maior parte do metanol foi evaporada sob pressão reduzida e o remanescente partilhado entre THF (50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,13 g. m/z 678 (M+H)+ (APCI) RMN de 1 H (400 : MHz, D 6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 8, 74 (s, 1H), 8,52 (s, 1H) , 7,45 - 7,3 (m, 4H) , 6,93 (d , J = = 41,1 Hz, 1H) , 6,77 (d, . J = 36 ,9 Hz, 1H) , 4,97 - 4, 87 (m, 1H) , 4,27 (s, 2H) , 3, 74 - 3,69 (m, 2H) , 3,69 - 3, 64 (m , 2H) , 3,59 (s, 2H) , 3,25 (t, J = 14,5 Hz, 2H) , 3,19 - 2,9 9 (m, 8H), 2, 09 - 1, 97 (m, 2H) , 1, 84 - 1,69 (m, 2H) . Quatro protões permutáveis não observados. 226
Exemplo 27
Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(2—(5— ((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) terc-Butildimetil(2-(tiofen-3-il)etoxi)silano
Foi adicionado terc-butilclorodimetilsilano (3,88 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(tiofen-3-il)etanol (3,00 g) e lH-imidazole (4,78 g) em DMF (30 mL) arrefecida em banho de gelo. Após 16 h, a mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (300 mL) , lavada com água (3 x 150 mL) e evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano e em seguida acetato de etilo:iso-hexano 1:5, para recolher o composto em subepígrafe como um óleo. Rendimento 5,2 g. 227 RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7, 23 (dd, J = 2,9, 4,9 Hz, 1H) , 7,01 - 6,99 (m, 1H), 6,97 (dd, J = 1 ,3, 4,9 Hz, 1H) , 3, 80 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,85 (t, J = 6 ,8 Hz, 2H), 0,88 (s, 9H), 0, 01 (s, 6H). b) Mistura de 4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído com 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído
Foi adicionado, gota a gota, n-butil-litio (1,6 M em hexanos, 7 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de terc-butildimetil(2-(tiofen-3-il)etoxi)silano (exemplo 27, passo a) (2,210 g) em tetra-hidrofurano (60 mL) arrefecida a -78 °C. Após a adição, a mistura reaccional foi agitada num banho de gelo durante 1 h e em seguida arrefecida até -78 °C. Foi adicionada N, N-dimet ilf ormamida (9,00 g) gota a gota ao longo de 5 min e após mais 10 min o banho de arrefecimento foi retirado. Após 1 h, a mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo e a solução de acetato de etilo lavada duas vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre silica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano 1:20, deu uma mistura 4:1 de 4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2- carbaldeido e 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2- carbaldeído por RMN de XH como um óleo. Rendimento 1,3 g. 228 4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído: RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13 ) δ 9,93 (d, J = 1, 2 Hz, 1H) , 7, 7 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H) , 3,92 - 3,E 14 (m , 2H), 2,91 (t J = 6,5 Hz, 2H) , 0,92 (s, 9H) , 0,0 4 (s, 6H) . 3-(2-(t erc -butildimet .ilsi' lilo: xi) et .il) t io: f eno- 2-carbaldeí do: RMN de ΤΗ (400 MHz , CDCI3) δ 10,08 (s, 1H) , 7,69 (d J = 5,0 Hz, 1H) , 7,09 (d, J = 5, 0 Hz, 1H) , 3 ,92 - - 3,84 (m, 2H) 3,22 (t, J = 6, 5 Hz, 2H), 0,89 (s, 9H) , -0,01 (s, 6H) . c) (9-((4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 9, passo b) (0,230 g) a uma solução, mantida sob agitação, de uma mistura 4:1 de 4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído e 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2- carbaldeído (exemplo 27, passo b) (0,20 g) e AcOH (0,033 mL) em iV-metil-2-pirrolidinona (3 mL) . Após 5 min foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,35 g) . Após 16 h foi adicionada água e a mistura extraída com acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada três vezes com água e 229 evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina 20:80:5, separou os dois produtos isoméricos e deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,21 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,09 (d, J = 3, .8 Hz, 1H) r 6,86 (S, 1H) , 6, 75 (s, 1H), 6,69 (d, J = 3, , 8 Hz, 1H) , 3, 78 (t, J = 6,6 Hz , 2 H) ' , 3, 76 - 3,69 (m, 4H) , 3, 64 (s, 2H) , 3, 56 (s, 2H) , . 2, 76 (t, J = 7,1 Hz , 2H) , 2,62 - 2, 54 (m, 2H) , 2, 50 (s, 3H) , . 2,41 - 2,: 32 (m, 2H) , 1,90 - 1,82 (m, 2H) , 1,63 - - 1, 52 (m, 2H), 0,88 (s, 9H), 0,01 (s, 6H). d) (9-((4-(2-Hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em tetra-hidrofurano, 2 mL) a uma solução de (9-((4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 27, passo c) (0,65 g) em tetra-hidrofurano (7 mL) . Após 1 h, a solução foi evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com acetato de etilo:trietilamina 20:1, deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,45 g. RMN de 1R (400 MHz, CDC13) δ 7,09 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,69 (dd, J = 1,0, 3,7 Hz, 1H), 3,83 (t, 230 J = 6,4 Hz, 2H) , 3, 76 - 3, 70 (m, 4H) , 3,66 (s, 2H) , 3,56 (s 2H), 2,82 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 2,62- 2,55 (m, 2H) , 2,50 (s 3H), 2,43 - 2,33 (m, 2H), 1,91 - 1,82 (m, 2H), 1,65 - 1,50 (m 2Η). Um protão permutável não observado. e) 2-(5-((4-(5-Metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,35 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il) (5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 27, passo d) (0,19 g) e ácido trifluoroacético (0,052 mL) em DCM (5 mL ) · Após 1 h foi adicionado acetato de etilo (30 mL) seguido de uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) . A mistura reaccional foi bem agitada e separada. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,07 mL) , a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vácuo (temperatura do banho 231 30 °C) para dar o composto em subepigrafe como uma goma.
Rendimento 0,19 g. Utilizado directamente. f) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,039 g) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,17 g) e 2-(5-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeido (exemplo 27, passo e) (0,19 g) em MeOH (10 mL) . Após 1 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,10 g) . Após 3 h, a mistura reaccional foi concentrada 232 in vacuo até ~2 mL, foi adicionado THF (20 mL) e a solução lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (2 mL). A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O sólido foi dissolvido em metanol e purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas até à secura in vacuo. Foi adicionado acetonitrilo e a solução foi evaporada in vacuo, e este processo foi repetido. Foi adicionado éter dietilico e a goma triturada para dar o composto em epígrafe como um sólido. Rendimento 0,097 g. m/z 629 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 11, 67 (s, 1H) f 10, 23 (s, 1H) , 9, 82 - 9,67 (m, . 1H) , 8, 93 - 8,67 (m, 2H) , 7 , 46 (i 3, 1H), 7, 25 - 7, 22 (m, 1H ), 7,1 7 (s, 1H) , 6,93 (d, J = 8, 8 H z, 1H ), 6,77 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 6,60 1 — 6,46 (m, 1H), 6,51 - 6, 46 (m , 1H) , 4, 92 - 4, 86 (m, 1H) , 4,68 - 4,51 (m, 2H) , 3, 74 - 2,8 8 (m, 16H) , 2,46 (s f 3H), 2,15- 2, 04 (m, 2H) , 1,69 - 1 , 56 (m, 2 H) 1 .
Exemplo 28
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-fluoro-5-((4-(2- metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9- 233 il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionada uma solução de 2-(3-fluoro-5-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeido (exemplo 19, passo c) (0,2 g) em metanol (3 mL) a uma mistura de (R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento WO2004106333) (0,23 g) e ácido acético (0,027 mL) em metanol (3 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 5 min em seguida arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,044 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 2 h. O solvente foi evaporado in vacuo e a purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em THF (3 mL), foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,11 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. A reacção foi concentrada in vacuo. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,021 g. 234 m/z 636 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8, 15 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 7,90 (s, 1H), 7,29 - 7,17 (m, 3H) , 7, 13 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,55 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 5,37 - 5,29 (m, 1H) , 4,35 - 4,19 (m, 2H) , 3 ;, 75 - 3,59 (m, 6H), 3,34 - 2,98 (m, 1 OH) , 2,67 (s, 3H), 2,06 - 1,93 (m, 2H), 1,83 - 1,69 (m, 2H) . Seis protões permutáveis não observados. 235
Exemplo 29
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(4-fluoro-3-((4- (5- metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H(
OH a) Acido 2-(4-fluoro-3-metilfenil)acético
Foram combinados 2-(4-fluoro-3-metilfenil)acetonitrilo (1 g) e hidróxido de sódio (0,8 g) numa mistura de metanol (10 mL) e água (3 mL). A mistura resultante foi então aquecida a refluxo de um dia para o outro. A reacção foi concentrada in vácuo e o resíduo dissolvido em água (25 mL). A fase aquosa foi lavada com éter (2 x 25 mL), acidificada com ácido clorídrico concentrado e extraída com éter (3 x 25 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 1,1 g. 236 6,99 RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 12,31 (s, 1H) , 7,20 - (m, 3H), 3,52 (s, 2H), 2,21 (s, 3H). b) (9-(2-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado peróxido de benzoílo (0,058 g) a uma mistura de ácido 2-(4-fluoro-3-metilfenil)acético (0,6 g) (exemplo 29, passo a) e N-bromossuccinimida (0,7 g) em DCM (10 mL). A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 4 h. Foram adicionados DCM (10 mL) e água (20 mL) e a fase orgânica separada. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O residuo foi redissolvido em THF (10 mL) e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionada, gota a gota, uma solução de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 4,46 mL) e a mistura agitada durante 1 h. Foi cuidadosamente adicionado metanol (2 mL) , e uma vez terminado o borbulhamento, o solvente foi evaporado in vacuo. O residuo foi redissolvido em acetonitrilo (10 mL) e foi adicionado trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 9, passo b) (0,7 g) , seguida de trietilamina (1,49 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro e em seguida concentrada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 99:1:0,1 até 97:3:0,3. As fracções contendo o produto 237 foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como uma espuma. Rendimento 0,46 g. m/z 433 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,22 - 7, 16 (m, 2H), 7, 14 - 7,07 (m, 1H), 6,97 (dd, J = 10,0, 8 , 5 Hz r 1H) , 6,80 - 6, 76 (m, \—1 3,67 - 3,57 (m, 6H), 3,50 - 3, 45 (m, 4H) , 2, 70 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,46 (s, r 3H), 2,41 - 2,: 35 (m, 4H) , 1, 76 - 1,67 (m, 2H) , 1,55 - 1,45 (m, 2H) . Um protão permutável não observado. c) Ditrifluoroacetato de (Λ)-7-(2-(4-fluoro-3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado TFA (0,032 mL) a uma solução de (9-(2-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 29, passo b) (0,18 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,27 g). A solução amarela resultante foi 238 deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (25 mL) e a mistura resultante foi agitada vigorosamente durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (25 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL), em seguida foram adicionados ácido acético (0,012 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,17 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,039 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM: metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,11 g. m/z 641 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, d6 -DMSO, 90 O O co 7, 47 - 7,35 (m, 2H) 7,29 - 7,17 (m, 2H), 6, 93 (d, J = 8, ,2 Hz, 1H ) , 6,82 - 6, 75 (m 2H) , 4, 91 (dd, J = 8,1, 5,3 \—1 N 4,32 - 4, ,20 (m, 2H) , 3, 74 239 3,61 (m, 4H) , 3,53 (s, 2H), 3,28 - 2, 93 (m, 10H) , 2,46 (s, 3H) , 2,05 - 1,97 (m, 2H), 1,82 - 1,74 (m, 2H). Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 30
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(9-(3-(2-(2-hidroxi-2-(4- hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7- il)etilamino)etil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo
a) 4-(5-(Metoxicarbonll)tiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (0,6 g) e ácido tiofeno-2,5-dicarboxílico (1,7 g) em DMF (10 mL) foi tratada com trietilamina (2,75 mL) e arrefecida até 0 °C. Foi adicionado HATU (1,013 g) e a mistura agitada a 240 20 °C durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio contendo ácido acético (2 mL) , a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de ácido acético em acetato de etilo como solvente. Este material foi dissolvido em THF (30 mL), tratado com carbonildiimidazole (0,332 g) e a mistura foi deixada em repouso a 45 °C durante 1 hora. Foi adicionado metanol (20 mL) e a reacção aquecida a 50 °C durante 30 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 40% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,45 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, Dê ;-DMSO, 90 °C) δ 7, 72 (d, J II co > co Hz 1H) , 7,40 (d r J = 3,8 Hz, 1H) , 3 , 85 (S, 3H) , 3, 72 - 3,68 (m 2H) , 3,63 - 3, 59 (m, 2H) , 3,58 - - 3, 51 (m, 2H) , 3, 49 (s, 2H) 3,12 - 3, 04 (m, r 2H), 1,77 - 1, 70 (m, 2H) , 1,46 - 1, . 40 (m, 2H) 1,39 (s, 9H). 241 b) Trifluoroacetato de 5-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo
Foi adicionado ácido trifluoroacético (10 mL) a uma solução de 4-(5-(metoxicarbonil)tiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 30, passo a) (0,45 g) em diclorometano (40 mL) e a mistura resultante foi deixada em repouso a 20 °C durante 1 hora. Foi adicionado tolueno (50 mL) e os solventes removidos sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,46 g. m/z 325 (M+H)+ (APCI) c) 5-(9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo
Uma solução de trifluoroacetato de 5-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo (exemplo 30, passo b) (0,46 g) e 242 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo, 6, passo a) (0,226 g) em acetonitrilo (10 mL) foi tratada com trietilamina (0,44 mL) e a mistura agitada a 20 °C durante 2 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o residuo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de trietilamina e 3% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,41 g. m/z 459 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)—5—(9—(3—(2—(2—hidroxi—2—(4— hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7- il)etilamino)etil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo
Uma solução de 5-(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo (exemplo 30, passo c) (0,262 g) em diclorometano (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,044 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,339 g) e a mistura resultante foi 243 agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,033 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução a 0 °C de cloridrato de (R)-7-(2-amino-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,15 g) e ácido acético (0, 033 mL) em metanol (10 mL) . Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,054 g) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A maior parte do metanol foi evaporado sob pressão reduzida e o remanescente partilhado entre THF (50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,175 g. m/z 667 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6 -DMSO , 90 °C) δ 1 ,27 (s r 1H) , 7, 72 (d, J = 3,8 Hz, r 1H), 7,44- 7,33 (m, 5H ), 6,93 (d, j = 8,5 Hz, 1H) , r 6, 7 7 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4, 95 - 4,89 (m, 1H ), 4, 30 (s, 2H) , r 3,8 5 (s, 3H), 3,74 - 3,69 (m, 2H) , 3,66 - 3, 61 (m, 2H) , 244 3,53 (s, 2H), 3,28 -2, 98 (m, 10H), 2, 09 - 1, 99 (m, 2H) , 1,77 (s, 2H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 31
Ditrifluoroacetato de (R)—5—(9—(3—(2—(2—hidroxi—2—(8— hidroxi—2—oxo—1,2-di-hidroquinolin-5-il)etilamino)etil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo
a) (R)-5-(9-(3-(2-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(8-hidroxi-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)etilamino)etil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo
Uma solução de 5-(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de 245 metilo (exemplo 30, passo c) (0,137 g) em diclorometano (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,023 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,178 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,017 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para produzir o intermediário aldeído em bruto (0,13 g) . O aldeído foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)-etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,10 g) e ácido acético (0,017 mL) em metanol (10 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,095 g) e em seguida a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. O metanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio e acetato de etilo, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de amónia aquosa "880" e 9% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,108 g. m/z 775 (M+H)+ (APCI) 246 b) Ditrifluoroacetato de {R)-5-(9-(3-(2-(2-hidroxi-2-(8-hidroxi-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)etilamino)etil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo
OH
(R)- 5-(9-(3-(2-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(8-hidroxi-2-oxo-l, 2-di-hidroquinolin-5-il)etilamino)etil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carbonil)tiofeno-2-carboxilato de metilo (exemplo 31, passo a) (0,108 g) em THF (4 mL) foi tratado com trifluoridrato de trietilamina (0,029 mL) em metanol (1 mL) e a solução deixado em repouso a 20 °C durante 18 horas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,055 g. m/z 661 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMS0, 90 °C) 8 8,18 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 3,8 Hz, 1H) , 7, 45 - 7,32 (m, 5H) , 7,14 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 5, 40 - 5,34 (m, 1H) , 4,30 (s, 2H) , 3,85 (s, 3H) , 3,75 - 3,70 (m, 2H), 3,66 - 3,61 (m, 2H) , 3,53 (s, 2H) , 3,29 (t, J = 8,1 Hz, 2H), 3,22 - 3,01 (m, 8H) , 2,10 - 1,99 (m, 2H) , 1,78 (s, 2H). Seis protões permutáveis não observados. 247
Exemplo 32
Ditrifluoroacetato de (J?)-7-(2-(3,4-difluoro-5-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(3,4-Difluorofenil)etanol
F
HO
Foi cuidadosamente adicionada uma solução de borano-sulf ureto de dimetilo (2 M em THF, 18,30 mL) a uma solução de ácido 2-(3,4-difluorofenil)acético (2,1 g) em THF (20 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. A reacção foi arrefecida num banho de gelo e foi adicionado gota a gota metanol (5 mL) . A reacção foi agitada até parar o borbulhamento e o solvente evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano até iso-hexano:acetato de etilo 4:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in 248 vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1,92 g. RMN de (300 MHz, CDC13) δ 7,14 - 7, 00 (m, 2H), 6,98 6,90 (in, 1H) , 3, 85 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 2, 82 (t, J = 6,4 Hz 2H). Um protão permutável não observado. b) 2,3-Difluoro-5-(2-hidroxietil)benzaldeido
Foi adicionada 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (6,15 mL ) a uma solução de n-butil- lítio em hexanos (1,6 M, 22,8 mL) a -70 °C. Foi adicionada, gota a gota, uma solução de 2-(3,4- difluorofenil)etanol (exemplo 32, passo a) (1,92 g) em THF (25 mL). Foi adicionado THF (25 mL) e a mistura agitada a 1 0 0 0 durante 6 h. Foi então adicionada DMF (4,7 mL) e a mistura agitada durante 1 h a -70 °C. A mistura foi então deixada aquecer até à TA e agitada durante 70 h. Foi adicionada solução aquosa de HC1 (2 M, 10 mL) seguida de acetato de etilo (20 mL) e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 20 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:éter dietílico 4:1 até 2:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in 249 vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 1,9 g. RMN de (400 MHz, CDC13) δ 10,33 (s, 1H), 7,54 - 7, 47 (m, 1H), 7,39 - 7,32 (m, 1H), 3,92 - 3,86 (m, 2H), 2,88 (t, J = 6,3 Hz, 2H). Um protão permutável não observado. c) (9-(2,3-Difluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il) (1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 9, passo b) (0,53 g) a uma solução de 2,3-difluoro-5-(2-hidroxietil)benzaldeido (exemplo 32, passo b) (0,25 g) e ácido acético (0,08 mL) em metanol (5 mL) . A reacção foi agitada durante 30 min e arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,13 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 18 h. A reacção foi concentrada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 99:1:0,1 até 97:3:0,3. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,08 g. m/z 451 (M+H)+ (APCI) 250 RMN de XH . (400 MHz, d6-dmso, O O C) δ 7, 18 (d, J = 3,6 Hz, 1H) , 7, 14 - 7 , , 06 (m, , 1H) , 7,04 - 6, 99 (m, 1H) , 6, 80 - - 6, 77 (m, 1H) , 4,34 -4,29 (m, 1H) , 3,68 - 3,57 (m, 6H) , 3,53 - 3,46 (m, 4H) , 2, 70 (t, J = 6 , 7 Hz , 2H), 2 , 47 2 ,34 (m, 7H) , 1, 77 - 1,67 (m, 2H), 1 , 55 - 1, 45 (m, 2H) . d) Ditrifluoroacetato de (J?)-7-(2-(3,4-difluoro-5-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado TFA (0,013 mL) a uma solução de (9-(2,3-difluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 32, passo c) (0,077 g) em DCM (2 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,11 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (1 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) e acetato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi agitada vigorosamente durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (25 mL) . As soluções orgânicas 251 combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 residuo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,005 mL) e cloridrato de (R) -7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo [d]tiazol-2 (3H) -ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,045 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,016 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até
89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,052 g. m/z 659 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H), 7,46 -7,37 (m, 1H), 7, 28 - 7, 23 (m, 1H) , 7,20 (d, J = 3,6 Hz, 1H) , 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,81- 6,74 (m, 2H), 4-91 (dd, J = 8,1, 5,0 Hz, 1H), 4,28 - 4,19 (m, 2H) , 3, 74 - 3,62 (m, 4H) , 3,53 (s, 2H), 3,25 (t, J = 7,9 Hz, 2H) , 3,15 - 2,95 (m, 8H) , 2,46 (s, 3H) , 2,01 - 1,93 (m, 2H) , 1, 80 - 1,67 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis não observados. 252
Exemplo 33
Ditrifluoroacetato de (Λ)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((8-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-5-oxa-2,8-diazaespiro[3. 5]nonan-2-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]triazol-2(3H)-ona
a) l-Benzidrilazetidin-3-ona
Foi adicionada trietilamina (24,7 mL) a uma solução de l-benzidrilazetidin-3-ol (5 g) em DMSO (25 mL) . Foi adicionada, gota a gota, uma solução de piridina-trióxido de enxofre (18 g) em DMSO (65 mL) e a mistura agitada a 20 °C durante 90 minutos. A mistura foi vertida sobre gelo/água e extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados três vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, antes de serem secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2% de trietilamina em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2,9 g. 253 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,50 - 7, 46 (m, 4H) , 7,30 (t 11,4 Hz, 4H) , 7,24 - - 7, 19 (m, 2H) , 4,59 (s, 1H) , 4, 00 (s 4Η) . b) l-Benzidril-3-(trimetilsililoxi)azetidina-3-carbonitrilo
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 15 minutos, cianeto de tetrabutilamónio (0,283 g) em diclorometano (50 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de l-benzidrilazetidin-3-ona (exemplo 33, passo a) (2,5 g) e cianeto de trimetilsililo (2,82 mL) em diclorometano (50 mL) a 20 °C sob azoto. A mistura foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi lavada com água, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 3,5 g. Utilizado directamente sem purificação. c) 3-(Aminometil)-l-benzidrilazetidin-3-ol
254
Uma solução de l-benzidril-3-(trimetilsililoxi)azetidina-3-carbonitrilo (exemplo 33, passo b) (3,5 g) em THF (50 mL) foi tratada com complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 20,8 mL) e a mistura resultante aquecida a 70 °C durante 1 hora sob azoto. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e cuidadosamente desactivada com metanol (50 mL) , seguido de tratamento com etilenodiamina (2,81 mL). Esta mistura foi agitada a 20 °C durante 1 hora e em seguida a 55 °C durante 1 hora. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e tratada com fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 15,6 mL), em seguida agitada à temperatura ambiente durante 40 minutos. Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 6 a 7% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,95 g. m/z 269 (M+H)+ (APCI) d) N-((l-Benzidril-3-hidroxiazetidin-3-il)metil)-2-cloroacetamida
255
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 30 minutos, cloreto de cloroacetilo (0,846 mL) a um mistura, mantida sob agitação vigorosa, de 3-(aminometil)-l-benzidrilazetidin-3-ol (exemplo 33, passo c) (2,1 g) em acetato de etilo (100 mL) e carbonato de potássio (3,03 g) em água (100 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante mais 30 minutos a 0 °C e em seguida extraída com acetato de etilo, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2,6 g. m/z 345 (M+H)+ (APCI) e) 2-Benzidril-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-7-ona
Foi adicionada, gota a gota ao longo de 90 minutos, N- ((l-benzidril-3-hidroxiazetidin-3-il)metil)-2-cloroacetamida (exemplo 33, passo d) (2,6 g) em THF (50 mL) a uma solução, mantida sob agitação vigorosa, a 75 °C de terc-butóxido de potássio d M em terc -butanol, 15 OO O mL) e THF (150 mL) sob azoto. Depois de a adição estar concluída a mistura foi agitada a 75 °C durante 10 minutos e em seguida arrefecida até à temperatura ambiente. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido 256 sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 2,05 g. m/z 309 (M+H)+ (APCI) f) 2-Benzidril-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonano
Foi adicionado complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 10,7 mL) a uma solução de 2-benzidril-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-7-ona (exemplo 33, passo e) (2 g) em THF seco (40 mL) e a solução resultante foi agitada a 70 °C sob azoto durante 50 minutos. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e tratada, gota a gota, com metanol (40 mL) seguida de Nl, IV2-dimetiletano-1,2-diamina (3,43 g) . A mistura foi aquecida a 70 °C durante 6 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de trietilamina e 5% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 1,35 g. m/z 295 (M+H)+ (APCI) 257 g) (2-Benzidril-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-8-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado HATU (2,267 g) numa porção a uma solução de ácido 5-metiltiofeno-2-carboxílico (0,652 g) e 2-benzidril-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonano (exemplo 33, passo f) (1,35 g) e trietilamina (1,917 mL) em DMF (20 mL) a 0 °C. O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio antes de serem secos sobre sulfato de sódio, filtrado e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 0,4 a 5% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,5 g. m/z 419 (M+H)+ (APCI) 258 h) Cloridrato de (5—metiltiofen—2—il)(5—oxa—2,8— diazaespiro[3.5]nonan-8-il)metanona
Foi adicionado, gota a gota, cloroformato de 1-cloroetilo (0,508 mL) a uma solução de (2-benzidril-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-8-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 33, passo g) (1,5 g) em acetonitrilo (30 mL) a 0 °C. A mistura foi então aquecida a refluxo durante 1 hora sob azoto. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em metanol (50 mL). Esta solução foi aquecida a refluxo sob azoto durante 30 minutos. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo triturado com acetato de etilo (40 mL) e em seguida com acetonitrilo (7 mL) para produzir o composto em subepígrafe. Rendimento 0,29 g. m/z 253 (M+H)+ (APCI) i) (2-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-8-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
259
Foi adicionado 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,281 g) a uma solução de cloridrato de (5-metiltiofen-2-il)(5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-8-il)metanona (exemplo 33, passo h) (0,29 g) e trietilamina (0,42 mL) em acetonitrilo (15 mL) a 20 °C e a mistura resultante foi agitada durante 3 horas a 20 °C. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 3% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,32 g. m/z 387 (M+H)+ (APCI) j) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((8-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-2-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (2-(3-(2-hidroxietil)benzil)-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonan-8-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 33, passo i) (0,16 g) em diclorometano (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,032 mL) seguida de 260 periodinano de Dess-Martin (0,246 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,024 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução a 0 °C de cloridrato de (R)-Ί-(2-amino-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H) -ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,15 g) e ácido acético (0, 024 mL) em metanol (10 mL) . Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,039 g) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A maior parte do metanol foi evaporado sob pressão reduzida e o remanescente partilhado entre THF (50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,13 g. m/ z 595 (M+H)+ (APCI) RMN de ' LH (400 MHz, D6- -DMSO, 90 0 C) δ 11 , 26 (s, 1H) , 7,42 - 7, 29 (m, 4h; 7, 24 (d, J = 3,6 Hz, 1H) f 6, 93 (d, J = = 8,5 Hz, 1H) , 6,82 - 6, 75 (m, 2H) , 4,95 - 4, 88 (m, 1H) , 4, 36 (s, 2H), 4, 09 - 3 ,97 (m, , 4H) , 3,87 (s, 2H), 3 , 73 - 3, .69 (m, 2H) , 3,66 - 261 3,62 (m, 2H), 3,24 (t, J = 8,1 Hz, 2H) , 3,15 - 2,97 (m, 4H) , 2,46 (s, 3H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 34
Ditrifluoroacetato de (Λ)-7-(2-(2,6-difluoro-3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) (9-(2,4-Difluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
F
HO
Foi adicionado peróxido de dibenzoílo (0,03 g) a uma mistura de NBS (0,53 g) e ácido 2-(2,6-difluoro-3- metilfenil)acético (0,5 g) em DCM (10 mL). A reacção foi aquecida a refluxo durante 4 h. Foram adicionados DCM (10 mL) e água (20 mL) e a fase orgânica separada. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 residuo foi 262 redissolvido em THF (10 mL) e arrefecido num banho de gelo. Foi adicionada, gota a gota, uma solução de complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 4 mL) e a mistura agitada durante 1 h. Foi cuidadosamente adicionado, gota a gota, metanol (2 mL) e uma vez terminado o borbulhamento o solvente foi evaporado. O resíduo foi redissolvido em acetonitrilo (10 mL) e foi adicionado trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(1-oxa- 4.9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 9, passo b) (0,8 g) seguido de trietilamina (1,12 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro, evaporada e purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 99:1:0,1 até 97:3:0,3 para dar o composto em subepígrafe como uma espuma transparente. Rendimento 0,37 g. m/z 451 (M+H)+ (APCI) b) 2-(2,6-Difluoro-3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-1-oxa- 4.9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
F
Foi adicionado TFA (0,05 mL) a uma solução de
(9-(2,4-difluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 34, passo a) (0,27 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado periodinano de Dess-Martin (0,38 g) e a mistura agitada à TA 263 durante 45 min. Foram então adicionadas solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura agitada vigorosamente durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraida com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepigrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,27 g. m/z 449 (M+H)+ (APCI) c) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(2,6—difluoro—3—((4—(5— metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionada uma solução de 2-(2,6-difluoro-3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido (exemplo 34, passo b) (0,135 g) em metanol (3 mL) a uma mistura de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,11 g) e ácido acético 264 (0,015 mL) em metanol (0,5 mL). A mistura resultante foi agitada durante 5 min em seguida arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,025 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 2 h. A reacção foi concentrada e purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e purificadas por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,1 g. m/z 659 (M+H)+ (APCI) RMN de 1 H (400 MH z, Όβ- -DMSO, 90 °C) δ 11,27 (S, 1H) , 7,64 - 7, 50 (m, 1H) , 7,26 - 7, 12 (m, 2H) , 6, , 93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6, 84 - 6,69 (m, 2H) , 4, 91 (dd, J = : 8,! 3, 4,9 Hz, 1H) , 4,30 (s, 2H ) , 3, 77 - 3,47 (m, 6H ) , 3,29 - 2 , 99 (m , 10H), 2,46 (s, 3H), 2, 10 - 1,90 (m, 2H) 1 t 1, 88 - 1, 68 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis não observados. 265
Exemplo 35
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2,6-difluoro-3-((4-(5- metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino-l-hidroxietil-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionada uma solução de 2-(2,6-difluoro-3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído (exemplo 34, passo b) (0,135 g) em metanol (3 mL) a uma mistura de (J?)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,12 g) e ácido acético (0,017 mL) em metanol (3 mL). A mistura resultante foi agitada durante 5 min em seguida arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,028 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 2 h. A reacção foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e o resíduo foi dissolvido em THF (3 mL), foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,074 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. A reacção foi concentrada e o resíduo purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções 266 contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,12 g. m/z 653 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,18 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 7,64 - 7,51 (m, 1H), 7,22 - 7,10 (m, 3H), 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 1H) O 00 VQ (d, J = 3,3 Hz, 1H) , 6,54 (d, J = 10,0 Hz, 1H) ( 5, 36 (dd, J = 8, 7, 4, 1 Hz, 1H), 4,34 (s, 2H), 3,76 - 3,46 (m, 6H) , 3 , 33 - 3,03 (m, 10H), 2,46 (s, 3H) , 2,09 - 1,95 (m, 2H) ( 1 ,87 - 1,66 (m, 2H). Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 36
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2- (5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
267 a) (9-((4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4—il)metanona
Foi adicionado trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,50 g) a uma solução, mantida sob agitação, de uma mistura 4:1 de 4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeido e 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído (exemplo 27, passo b) (0,40 g) e AcOH (0,085 mL) em AJ-metil-2-pirrolidinona (6 mL) . Após 5 min foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,48 g) . Após 16 h foi adicionada água e a mistura foi extraída com acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada três vezes com água e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina, 20:80:5 separou os dois produtos isoméricos e deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,27 g. RMN de ΧΗ (401 0 MHz, CDC13) δ 7, 81 (s, , 1H), 6,86 (s r 1H) , 6, 75 (s, 1H) , 3 ,99 - 3,91 (m, 1H ) r 3,88 - 3,82 (m, 1H ) , 3, 81 - 3, 72 (m, 5H) , 3, 69 - 3,58 (m, 3H) , 3,37 - - 3 , 25 (m, 1H) , 2, 76 (t, J = 7,1 Hz, 2H) , 2, 59 - 2, 44 (m, 3H), 2, 41 - 2,29 (m, 1H) r 1,89 - 1, 81 (m, 2H) , 1, 78 - 1, , 67 (m, 1 Η) , 1 , 56 -1,50 (m, 1H) 1, 46 - 1, 34 (m, 6 H) , o, 87 (s , 9H) , 0, 00 (s, 6H) . 268 b) (9-((4-(2-Hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em tetra-hidrofurano, 2 mL) a uma solução de (9-((4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 36, passo a) (0,27 g) em tetra-hidrof urano (4 mL) . Após 1 h, a solução foi evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre silica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 20:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,18 g. RMN de TH (400 MHz, CDCls) δ 7,81 (s , 1H) , 6, 91 (s r 1H) 6, 77 (s, 1H) 1 o o 3,90 (m, 1H), 3,87 - 3,80 (m, 3H) r 3, 79 3, 72 (m, 3H) , 3,71 - 3,60 (m, 3H), 3,36 - 3 ,25 (: m, 1H), 2, 82 (t J = 6 ,6 Hz, 3H), 2,61 - 2, 42 (m, 3H ), 2,42 - 230 (m, ih; i , 1, 90 1, 82 (m, 2 H) , 1,78 - 1,67 (m, 1H), 1,67 - 1,58 (m, 1H) r 1, 44 1,36 (m, 6H). c) 2-(5-((4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído
269
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,25 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 36, passo b) (0,17 g) e ácido trifluoroacético (0,07 mL) em DCM (5 mL) . Após 1 h foi adicionado acetato de etilo (30 mL) seguido de uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A mistura reaccional foi bem agitada e separada. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,07 mL) , a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo (temperatura do banho ~30 °C) para dar o composto em subepigrafe como uma goma. Rendimento 0,19 g. Utilizado directamente d) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH 270
Foi adicionado ácido acético (0,037 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-Ί-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,170 g) e 2-(5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído (exemplo 36, passo c) (0,170 g) em metanol (8 mL) . Após 1 min foi adicionado
cianoboro-hidreto de sódio (0,08 g). Após 3 h, a mistura reaccional foi concentrada in vacuo até ~2 mL, adicionado THF (20 mL) e a solução lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (2 mL) . A solução orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O sólido foi dissolvido em metanol e purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas até à secura. A trituração com éter dietílico deu o composto em epigrafe como um sólido branco. Rendimento 0,026 g. m/z 658 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMS0) δ 1 .1,( 57 (s, ih; ) , 10,24 (s, IH) , 10 , 09 - 9, 78 (: m, 1H) , 8,91 - 8, , 68 (m, 2H) , 8, 03 (s, IH) , 7 , 46 (s , ih: ) , 7,17 (s, 1H ) , 6, 93 (d, J = 8,9 Hz, IH) , 6, 77 (d, J = 8,9 Hz, . 1H) , δ,51 - 6,46 (m, ih; i , 4, 93 - 4, 85 (m, IH) , 4 ,67 - 4,51 (m, 2H) , 3,85 - 2,88 (m, 17H ) , 2, 14 - 2, 05 (m, 2 H) , 1 , 82 - 1,58 (m, 2H) , 1,34 (d, . J = 6,8 Hz, 6H ) · 271
Exemplo 37
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-((2,2-difluoro-4-(5- metiltiofeno—2—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
a) 4-((2-Bromo-2,2-difluoroacetamido)metil)-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de 4-(aminometil)-4-hidroxipiperidina-l carboxilato de terc-butilo (1, 702 g) em DMF (20 mL) a 20 °C foi tratada com 2-bromo-2,2-difluoroacetato de etilo (1,5 g) e a mistura agitada durante 90 minutos a 20 °C sob azoto. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2,5 g. m/z 385/387 (M-H)~~ (APCI) 272 b) 2,2 Difluoro 3-oxo l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
F
O
Foi adicionada, gota a gota ao longo de 15 minutos, uma solução de 4-((2-bromo-2,2-difluoroacetamido)metil)-4- hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (exemplo 37, passo a) (3,2 g) em THF (40 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de terc-butóxido de potássio (1 M em t-butanol, 16,53 mL) e THF (60 mL) a 70 °C sob azoto. No final da adição a mistura foi aquecida durante mais 10 minutos e em seguida arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 30% iso-hexano em acetato de etilo. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,55 g. m/z 305 (M-H) (APCI) RMN de ΤΗ ( 400 MHz, d6-dmso ) δ 8, 98 (s, 1H 13,3 Hz, 2H), 3,43 (d, J = 2,8 Hz, 2H) , 3,05 (s, (m, 2H) # 1,70- 1,61 (m, 2H), 1,40 (s , 9H) . , 3,74 (d, 2H), 1,81 - 273 c) 2,2-Difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado, gota a gota, complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 2,69 mL) a uma solução de 2,2-difluoro-3-oxo-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 37, passo b) (0,55 g) em THF (15 mL). A mistura reaccional foi aquecida a 55 °C sob azoto durante 25 minutos e em seguida arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi desactivada pela adição, cuidadosa, gota a gota, de metanol (5 mL). Foi então adicionada N1,N2-dimetiletano-1,2-diamina (0,633 g) e a mistura aquecida a 70 °C durante 40 minutos. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 4% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,32 g. Utilizado directamente. d) 2,2-Difluoro-4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
F
274
Foi adicionado HATU (0,541 g) numa porção a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de 2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 37, passo c) (0,32 g) e ácido 5-metiltiofeno-2-carboxílico (0,171 g) e trietilamina (0,458 mL) em DMF (20 mL) . A mistura foi então agitada a 20 °C durante 7 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 0,5 a 5% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,4 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, De-DMSO, 90 °C) δ 7,29 (d, J = 3, 6 Hz, 1H ) , 6, 84 (dd, J = 3,6, 1 , 0 Hz, 1H) , 4, 08 (t, J = 8 , 8 Hz, 2H) , 3, 79 (s, 2H) , 3,65 - 3,58 (m, 2H) , 3 ,21 - 3, 11 (m, 2H) , 1 ,81 - 1, 73 (m, 2H) , 1,66 - - 1,56 (m, 2H), 1, 39 (s, 9H) + 3H (metil ) não observado (sob solvente). e) Trifluoroacetato de (2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (5 mL) a uma solução de 2,2-difluoro-4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4, 9- 275 diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 37, passo d) (0,4 g) em diclorometano (20 mL) a 20 °C. A solução foi deixada em repouso a 20 °C durante 25 minutos. Foi adicionado tolueno (40 mL) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi evaporado duas vezes com acetonitrilo. A goma resultante foi triturada com éter para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,39 g. m/z 317 (M+H)+ (APCI) J = 3,84 1,98 RMN de 3,8 Hz, 1H) (s, 2H), (m, 2H), (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,53 (s, 2H), 7,31 (d, , 6,88 - 6,85 (m, 1H), 4,14 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 3,27 - 3,21 (m, 2H) , 3,13 - 3,04 (m, 2H), 2,05 -1,91 - 1,81 (m, 2H) . Protões do metilo não observados (sob o solvente). f) (2,2-Difluoro-9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
F
Foi adicionado 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,095 g) a uma solução de trifluoroacetato de (2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5- metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 37, passo e) (0,19 g) e trietilamina (0,185 mL) em acetonitrilo (10 mL) e a mistura reaccional agitada a 20 °C durante 3 horas. 0 solvente foi 276 evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,188 g. m/z 451 (M+H)+ (APCI) g) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-((2,2-difluoro-4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (2,2-difluoro-9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 37, passo f) (0,188 g) em diclorometano (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,032 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,248 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de 277 sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados, tratados com ácido acético (0,024 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) e adicionado a uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,14 g) e ácido acético (0,024 mL) em metanol (10 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,133 g) e agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. O metanol foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio e acetato de etilo, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de amónia aquosa "880" e 8% de metanol em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,114 g. m/z 767 (M+H)+ (APCI) 278 h) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-((2,2-difluoro-4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,03 mL) em metanol (1 mL) a uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-((2,2-difluoro-4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino) etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 37, passo g) (0,114 g) em THF (4 mL) e a solução resultante foi deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida, o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aguoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,080 g. m/z 653 (M+H)+ (APCI) RMN de (40 0 MHz, D6- DMSO, 90 < ’C) δ 8 ,16 (d, J = 9,7 Hz, 1H) , 7, 46 - - 7, 26 (m, 5H) , 7, 14 (d, J = = 8,2 Hz, 1H) , 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6 , 86 - 6,83 (m, 1H) , 6/ 57 - 6,52 (m, 1H), 5,37 - 5, 31 (m, 1H) , 4, 25 (s, 2H) , 4,13 (t, J = 8, 8 Hz, 2H) , 3,82 (s, 2H) , 3, 30 - - 2, 99 (m, 10H) , 2, 10 - 1 , 88 (m, 4H) . Sei s protões 279 permutáveis não observados. Protoes do metilo nao observados (sob o solvente).
Exemplo 38
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi—2-(2-(3- ((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenoxi)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (3-(2,2-Dietoxietoxi)fenil) metanol
Foi adicionado carbonato de césio (7,87 g) a uma solução de 3-(hidroximetil)fenol (2,5 g) e 2-bromo-l,1-dietoxietano (3,97 g) em DMF (40 mL) e a mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 18 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi 280 purificado por cromatograf ia flash sobre síi-; . . , X1ca utilizando 30% de acetato de etilo em iso-hexano como sou, iVSnte. As fracçoes puras foram evaporadas até à secura para pronr^ . ^urcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,9 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,21 (t 1H) , r J = 7, 9 Hz, 6, 91 - 6, 86 (m, 2H) , 6,82 - 6, 78 (m, 1H) , 5, 14 (t, J = 5, 9 Hz, 1H) , 4,79 (t. J = 5, r 1 HZ, 1H) , 4 , 46 (d, J = 2H) , 3,93 5 , 9 Hz, (d, J = 5,1 Hz, 2H) , 3, 71 - 3,63 (m, 2H) , 3, 61 - 3,52 (m, 2H) , 1, 14 (t, J = 7, 0 Hz, 6H) . b) (9-(3-(2,2-Dietoxietoxi)benzil)-l-oxa-d ^, 9— diazaespiro [5.5] undecan-4-il) (5-metiltiofen-2 : ί » ) metanona
Foi adicionado, gota a gota, cloretn ^ υ metanossulfonilo (0,1 mL) a uma solução, mantida sob ^yitaçao, a 0 °C de (3-(2,2-dietoxietoxi) fenil) metanol (exemplo o0 > ^ υ jo, passo a) (0,307 g) e trietilamina (0,178 mL) em dicloromet-an^ y tano (30 mL). A mistura resultante foi agitada a 20 °C durante i u . . nora. A mistura foi lavada com água e a camada orgânica foi ^ ^ seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sok ~ , . ,
°ojo pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em acetonitrilo ran T, mL) e tratado com trietilamina (1 mL) seguida de ^ trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(l-oxa-4,9-diazaespirorς ci ^ „ .n. ^ υLo.5]undecan-4-il)- metanona (exemplo 9, passo b) (0,42 g) . a c . . η ^ ' * ' ν' - ά. mistura foi agitada a 281 20 °C durante 2 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 3% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,45 g. m/z 503 (M+H)+(APCI) c) 2-(3-((4—(5—Metiltiofeno—2—carbonil)—1—oxa—4,9— diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenoxi)acetaldeido
Uma solução de ( 9-(3-(2,2-dietoxietoxi)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 38, passo b) (0,45 g) numa mistura de ácido acético (25 mL) e água (25 mL) foi aquecida a 65 °C sob azoto durante 16 horas. A maior parte dos solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio em excesso. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e filtrada, foi adicionado ácido acético (0,051 mL) e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,38 g. Utilizado directamente. 282 d) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(3-((4-(5-metiltiofeno-l-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenoxi)etilamino)etil)-benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,084 g) a uma solução, mantida sob agitação, a 20 °C de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,303 g) e 2-(3-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)metil)fenoxi)acetaldeido (exemplo 38, passo c) (0,38 g) e ácido acético (0,051 mL) em metanol (12 mL) . A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 5 horas. A mistura reaccional foi evaporada sob pressão reduzida até um volume de 3 mL e em seguida partilhada entre acetato de etilo (20 mL) e água (20 mL) . A camada aguosa foi tratada com solução saturada de bicarbonato de sódio (3 mL). A mistura aguosa foi então tratada com cloreto de sódio sólido para dar uma solução saturada, a gual foi extraída com THF (20 mL) . A camada de THF foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,1 g. 283 m/z 639 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MH z, d6-dmso, O O C) δ 11, 28 (s , 1H ) , 7, 43 - 7, 36 (m, 1H ) , 7,21 (s , 1H) , 7, 14 (s, 2H :), 7, 07 (d , J = 8,5 H z, 1H) , 6, 95 (d, J = S 3,2 Hz, ih; i , 6, 82 - 6, 76 (m r 2H) , 5, 00 - 4, 91 (m, 1H) , 4, 36 - 4, 28 (m, 4H) f 3, 73 - 3, 69 (m r 2H) , 3, 68 - 3, 63 (m, 2H) , 3, 54 (s, 2H) , 3 , 45 (s f 2H) , 3, 25 - 3, 04 (m, 6H ) , 2, 46 (s, 3H) , 2, 09 - 1, 98 (m, 2H) f 1, 87 1 , 72 (: m, 2H ) · Cinco protões permutáveis nao observados.
Exemplo 39
Ditrifluoroacetato de 7-((IR)-2-(2-fluoro-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)etilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(3-Bromofenil)-2-fluoroacetato de etilo
O
Br
EtO
F 284
Uma solução de 2-(3-bromofenil)acetato de etilo (1,00 g) e terc-butildimetilclorossilano (0,749 g) em THF (4 mL) foi arrefecida até -78 °C sob uma atmosfera de azoto e tratada com bis (trimetilsilil) amida de lítio (1 M em THF, 4,6 mL) , adicionada gota a gota ao longo de 10 minutos. A solução foi agitada a -78 °C durante 5 minutos, em seguida retirada do banho de arrefecimento e deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 30 minutos. A solução foi concentrada in vacuo e o resíduo suspenso em iso-hexano e filtrado para remover o cloreto de lítio precipitado. O filtrado foi concentrado in vacuo para dar um óleo (1,49 g) , o qual foi dissolvido em acetonitrilo (2 mL) e adicionado gota a gota a uma suspensão, mantida sob agitação, de reagente de fluoração Selectfluor™ (1,93 g) em acetonitrilo (17 mL) à temperatura ambiente, completando a adição com acetonitrilo (3x1 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 1,5 horas, em seguida concentrada sobre sílica e purificada por cromatografia flash sobre sílica eluído com 10% de éter dietílico em iso-hexano, para proporcionar o composto em subepígrafe contaminado com material de partida como um óleo incolor. Rendimento 0,884 g. RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ 7,63 (s, 1H) , 7,53 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,28 (t, J = 8,0 Hz, 2H) , 5,73 (d, J = 47,7 Hz, 1H), 4,33 - 4,19 (m, 2H), 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3H). b) 2-(3-Bromofenil)-2-fluoroetanol
Br
HO
F 285
Foi adicionado, em porções ao longo de 7 minutos, hidreto de alumínio lítio (1 M em THF, 13,0 mL) a uma solução de 2-(3-bromofenil)-2-fluoroacetato de etilo (exemplo 39, passo a) (2,94 g) em THF (35 mL) , pré-arrefecida em gelo-água. A mistura resultante foi agitada em gelo-água durante 30 minutos, em seguida desactivada através da adição cuidadosa de metanol (5 mL), adicionado em porções ao longo de 30 minutos. A mistura foi vertida para HC1 aquoso 2 molar e extraída três vezes com acetato de etilo. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de magnésio anidro e purificados por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 25% de éter dietílico em iso-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 1,39 g. RMN t—1 cu d H (400 MHz, CDC13) δ 7,53 - 7,46 (m, 2H) , 7,30 - 7,24 (m, 2H) , 5,53 (ddd, J = 48,2, 7,2, 3,3 Hz, 1H) , 3,97 - 3, 77 (m, 2H), 1, 95 (dd, J = 8,2, 5,1 Hz, 1H) . c) (2-(3-Bromofenil)-2-fluoroetoxi)(terc-butil)dimetilsilano -^-|i-0'V'|A^Br
Uma solução de 2-(3-bromofenil)-2-fluoroetanol (exemplo 39, passo b) (1,38 g) e imidazole (1,29 g) em DMF (14 mL) foi arrefecida em gelo-água, tratada com terc-butildimetilcloro-silano (1, 049 g) , em seguida retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A 286 solução foi vertida para água e extraída duas vezes com éter dietílico. Os extractos orgânicos combinados foram lavados duas vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida secos sobre sulfato de magnésio anidro e purificados por cromatografia flash sobre sílica eluído com 10% de diclorometano em iso-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 1,94 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,51 - 7,49 (m, 1H) , 7,46 (dt, J = 7,0, 2,0 Hz, 1H), 7,28 - 7,21 (m, 2H) , 5,43 (ddd, J = 47,5, 6,5, 3,8 Hz, 1H), 3,95 - 3, 76 (m, 2H) , 0,88 (s, 9H) , 0,03 (d, J = 4,6 Hz, 6H) . d) 3-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)-1-fluoroetil)-benzaldeído
Uma solução de (2-(3-bromofenil)-2-fluoroetoxi)(terc-butil)dimetilsilano (exemplo 39, passo c) (1,8 g) em THF (36 mL) foi arrefecida até -78 °C sob uma atmosfera de azoto e tratada com butil-lítio (1,8 M em hexanos, 3,3 mL) , adicionado gota a gota ao longo de 5 minutos. A solução foi agitada a -78 °C durante 30 minutos, tratada com N, N-dimetilformamida (0,63 mL) , agitada a -78 °C durante mais 30 minutos, em seguida retirada do banho de arrefecimento e deixada aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 140 minutos. A solução foi desactivada pela adição de cloreto de amónio aquoso a 10% e a mistura resultante foi extraída duas vezes com éter dietílico. As fases orgânicas 287 combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio anidro e purificadas por cromatografia flash sobre silica eluido com 50% de diclorometano em iso-hexano para proporcionar o composto em subepigrafe como um óleo incolor. Rendimento 1,26 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 10,04 (s, 1H), 7, 88 - 7, 84 (m, 2H), 7,63 (d, J = 7, 4 Hz, 1H) , 7,56 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 5,55 (ddd, J = 47,3, 6,2, 4,0 Hz, 1H), 4,00- 3,83 (m, 2H) , 0,87 (s, 9H), 0,02 (d, J = 3,9 Hz, 6H). e) (9-(3-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)-1-fluoroetil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Uma solução de 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)-1-fluoroetil)benzaldeido (exemplo 39, passo d) (0,329 g) em MeOH (4 mL) foi tratada com ácido acético (0,055 mL) seguido de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,408 g) e agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. A solução foi arrefecida num banho de água com gelo, tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,309 g) , agitada em gelo-água durante 135 minutos, em seguida retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente durante mais 65 minutos. A solução foi novamente arrefecida em gelo-água, tratada com mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,310 g) e agitada em gelo-água durante 75 minutos. Foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,312 g) e a mistura foi agitada durante 70 minutos. Foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,619 g) e a mistura foi agitada de um dia para o outro, permitindo que o banho de arrefecimento acabasse lentamente. No dia seguinte foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,307 g) e a mistura foi agitada durante 70 minutos. Foi adicionado mais ácido acético (0,055 mL) e a mistura foi agitada durante 80 minutos. A mistura foi aquecida até 40 °C e agitada a essa temperatura durante 25 minutos, em seguida foi concentrada sobre sílica flash in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluído com 5% de metanol em diclorometano para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido branco pegajoso. Rendimento 0,344 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, O O Oh C) δ 7, 93 (s, 1H) , 7, 57 1-1 \—1 r- (m, 4H) , 5,64 - 5,43 (m, 1H) , 4, 00 - 3, 81 (m, 2H) , 3, 77 3,55 (m, 6H) i, 3,31 (septeto, J = 6,8 Hz, 1H) r 3,13 - 2, 88 (m 2H) , 2,57 - 2,35 (m , 4H), 2,16 - 1,94 (m, 2H ), 1, 74 - 1- , 54 (m 2H) , 1,36 (d, , J = 6, 7 Hz, 6H) , 0,8' 1 (s, 9H) , o ,01 (s, 6H) . f) (9-(3-(l-Fluoro-2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
F cPyd
289
Uma solução de (9-(3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)-1-fluoroetil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 39, passo e) (0,33 g) em THF (5 mL) foi tratada com fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 0,69 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 50 minutos. Foi adicionado mais fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 0,69 mL) e a mistura foi agitada durante mais 80 minutos. A solução foi então concentrada sobre sílica flash e o resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluído com 7,5% de metanol em diclorometano para proporcionar o composto em subepígrafe como uma espuma branca. Rendimento 0,221 g· RMN de 1ti (400 MHz, D6 -DMSO, 90 °C) δ 7, 91 (d, J = = 1, 5 Hz, 1H) , 7,36 - 7,] -9 (m, 4H) , 5 ,45 (ddd, J = 48, ,5, 6 ,6, 3,7 Hz, 1H) , 4, 86 - 4,76 (m , 1H) , 3,80 - - 3, 58 (m, 9H) r 3,58 - 3, 44 (m, 1H) , 3,31 (septeto, J = 6 ,8 Hz, 1H) , 2, 46 - 2, 28 (m, 4H), 1, 79 -1,67 (m, 2H), 1,66 - 1,50 (m, 2H) , 1, , 36 (d, J = = 6 , 9 Hz , 6H) . g) 2-Fluoro-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
rvlo
Uma solução de (9-(3-(1-fluoro-2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 39, passo f) (0,213 g) em DCM (5 mL) foi arrefecida em gelo-água e tratada com ácido trifluoroacético 290 (0,053 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,296 g) e a mistura foi retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. Foi adicionado mais periodinano de Dess-Martin (0,295 g) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante mais 30 minutos. A reacção foi então desactivada pela adição de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (5 mL), e a mistura bifásica resultante foi agitada durante 10 minutos. A mistura foi então extraída duas vezes com acetato de etilo e os extractos orgânicos combinados lavados com solução aguosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,1 mL) , em seguida os extractos acidificados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro e concentrados in vacuo para proporcionar o subproduto em epígrafe em bruto como uma espuma esbranquiçada. Rendimento 0,240 g. m/z 460 (M+H)+ (APCI) h) Ditrifluoroacetato de 7-((1Λ)-2-(2-fluoro-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)etilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
291
Uma solução de cloridrato de (f?)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1 passo d) (0,182 g) em metanol (3 mL) foi tratada com ácido acético (0,039 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-fluoro-2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeído (exemplo 39, passo g) (0,239 g) em metanol (4 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,146 g). A mistura foi agitada em gelo durante 25 minutos, em seguida foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,444 g) . A mistura foi então agitada ao longo do fim-de-semana, permitindo que aquecesse lentamente até à temperatura ambiente. Na segunda-feira seguinte, a mistura foi concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de metanol (3 mL) e água (1,5 mL) e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 15-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. O resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o qual foi removido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o produto em epígrafe como um sólido branco (0,03 g). m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO, 90 0 C) δ 7,94 (s, 1H) , 7,60 - 7,45 (m, 4H) , 6,93 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 5,97 (dt, J = 49,2, 9, 7 Hz, 1H), 4, 99 - 4, 89 (m, 1H) , 4, 36 - 4,17 (m, 2H) , 3,75- 3,62 (m, 6H), 3,60 - 2,90 292 1,64 (m, 2H), 1,35 (d, (m, 9H), 2,08 - 1, 92 (m, 2H) , 1,81 - J = 6,9 Hz, 6H). Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 40
Ditrifluoroacetato de (R) -7-(2-(4-fluoro-3-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzaldeído
Foi adicionada, gota a gota, 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (3,0 g) a uma solução, mantida sob agitação, de n-butil-lítio (1,6 M em hexanos, 13 mL) em tetra-hidrofurano seco (12 mL) a -78 °C. Após 10 min foi adicionado gota a gota 2-(4-fluorofenil)etanol (1,00 g) . A mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante 5 h e em seguida foi adicionada, gota a gota ao longo de 5 min, DMF seca (3,18 mL). 0 banho de 293 arrefecimento foi retirado e a mistura reaccional deixada aquecer até à temperatura ambiente de um dia para o outro, foram adicionados acetato de etilo e HC1 aquoso (2 M) e a solução separada. A camada de acetato de etilo foi lavada com água, solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano, 1:1 para dar o composto em subepígrafe como um óleo. Rendimento 0,43 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 10,35 (s, 1H) , 7,73 (dd, J = 6,4 & 2,0 Hz, 1H), 7, 52 - 7, 46 (m, 1H) , 7,12 (dd, J = 10,0 & 8,4 Hz, 1H), 3,88 (t, J = 6,5 Hz, 2H) , 2,90 (t, J = 6,5 Hz, 2H) . Um protão permutável não observado. b) (9-(2-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,339 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 2-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzaldeído (exemplo 40, passo a) (0,135 g) , trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,339 g) e ácido acético (0,046 mL) em NMP (7 mL) . Após 16 h foi adicionado mais 2-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzaldeído 294 (exemplo 40, passo a) (0,135 g) seguido de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,339 g) . Após 2 h, a mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (60 mL) e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (30 mL) . A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. A solução de acetato de etilo combinada foi evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 10:1 para dar o composto em subepígrafe como uma goma que continha NMP. A NMP foi removida aplicando a goma num cartucho de SCX de 10 g, eluindo primeiro com metanol e em seguida com 20% de amónia aquosa "880" em metanol para recolher o composto em subepígrafe. A solução foi evaporada até à secura e a goma resultante aplicada a uma coluna de sílica gel eluindo com acetato de etilo: trietilamina, 10:1 para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,31 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6 -DMSO, 90 °C) δ 7 , 90 (s, i—1 7, 19 (d, J = 7,3 Hz, 1H) , 7, 13 - 7, 07 (m, 1H), 6,97 (t, J = ^ 9,3 Hz t 1H) , 4, 28 - 4 ,24 (m, , 1H) , 3,71 - 3,55 (m, 6H), 3,46 (s , 2H) r 3, 35 - 3, 26 (m, 1H ) , 3, 00 (s, 2H), 2,70 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , ψ 2,· 45 - 2, 26 (m, 4H) , 1 ,74 - 1,65 (m, 2H) , 1,59 - 1 , 49 (m, 2H) , 1, 36 (d, J = 7,0 Hz, 6H). c) 2-(4-Fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
295
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,284 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (9-(2-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 40, passo b) (0,21 g) e ácido trifluoroacético (0, 046 mL) em DCM (5 mL) . Após 1 h foi adicionado acetato de etilo (30 mL) seguido de uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A mistura reaccional foi bem agitada e separada. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, água e solução aguosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,07 mL) , a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo (temperatura do banho ~30 °C) para dar o composto em subepígrafe como uma goma.
Rendimento 0,2 g. Utilizado directamente. m/z 460 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(4-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 296
Foi adicionado ácido acético (0,037 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,17 g) e 2-(4-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido (exemplo 40, passo c) (0,20 g) em metanol (8 mL) . Após 1 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,10 g). Após 3 h, a mistura reaccional foi concentrada in vacuo até ~2 mL, foi adicionado THF (20 mL) e a solução lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (2 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo. As soluções de THF e acetato de etilo foram combinadas e evaporadas in vacuo. A goma foi dissolvida em metanol e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas até à secura. A trituração com éter dietílico deu o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,126 g. 297 m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de 1H (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,33 - 11,22 (m, 1H) , 7,94 (s, 1H) , 7, 46 - 7,36 (m, 2H) , 7,25 (t, J = 9, 0 Hz, 1H) , 6,93 (d, J = 8, 4 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,93 - 4, 88 (m, 1H) , 4,30 - 4,20 (m, 2H), 3,70 (s, 4H), 3,66 (s, 2H), 3, 35 - 2,93 (m, 11H) , 2, 05 - 1,95 (m, 2H), 1,83 - 1,67 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 7 , 0 Hz, 6H) . Cinco protões permutáveis nao observados 298
Exemplo 41
Ditrifluoroacetato de (R) -7-(2-(3-fluoro-5((4- (2- feniltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Ácido 2—(3—(bromometil)—5—fluorofenil)acético
F
Foi adicionado peróxido de benzoilo (0,5 g) a uma mistura, mantida sob agitação, de ácido 2-(3-fluoro-5-metilfenil)acético (5,19 g) e NBS (6,04 g) em diclorometano (100 mL) . A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 5 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e em seguida lavada duas vezes com água, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de ácido acético e 17% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 43 g. 299 RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) 8 7,22 - 7, 17 (m, 2H) , 7,09 -7,05 (m, 1H) , 4,68 (s, 2H) , 3,61 (s, 2H) . Um protão permutável não observado. b) 2-(3-(Bromometil)-5-fluorofenil)etanol
Br
F
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 10 minutos, complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 17,4 mL) a uma solução de ácido 2-(3-(bromometil)-5-fluorofenil)acético (exemplo 41, passo a) (4,3 g) em THF, (60 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 10 minutos e em seguida a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi desactivada por adição gota a gota de metanol e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 30% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 3,7 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,15 (s, 1H), 7,14 - 7,09 (m, 1H) , 7, 05 - 6, 99 (m, 1H) , 4,66 (s, 2H) , 3,61 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,72 (t, J = 6,7 Hz, 2H) . Um protão permutável não observado. 300 c) 2,2,2-Trifluoro-1-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona
Uma solução de 2-(3-(bromometil)-5-fluorofenil)etanol (exemplo 41, passo b) (3,6 g) e trif luoroacetato de 2,2,2-trifluoro-l-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo d) (5,66 g) em acetonitrilo (80 mL) foi tratada com trietilamina (5,38 mL) e a mistura agitada a 20 °C durante 20 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 4,9 g. m/z 405 (M+H)+ (APCI) 301 d) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-feniltiazol-4-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo c) (0,21 g) em metanol (3 mL) a amónia (solução aquosa a 35%, 15 mL) e a mistura reaccional agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o resíduo submetido três vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. 0 resíduo foi dissolvido em DMF (7 mL) e tratado com ácido 2-feniltiazole-4-carboxílico (0,117 g) seguido de trietilamina (0,29 mL) e em seguida HATU (0,257 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,27 g. m/z 496 (M+H)+ (APCI) 302 e) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4- (2-feniltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-feniltiazol-4-il)metanona (exemplo 41, passo d) (0,25 g) em diclorometano (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,039 mL) seguido de periodinano de Dess-Martin (0,278 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,029 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2-(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,199 g) e ácido acético (0,029 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0, 063 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 303 horas. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida até um volume de 3 mL e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. 0 produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,19 g. m/z 704 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) 8 11,28 (s, 1H) , 8,14 (s, 1H), 7,96 - 7,91 (m, 2H) , 7, 54 - 7, 49 (m, 3H) , 7,28 - 7,18 (m, 3H), 6,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,5 Hz, 114), 4, 94 - 4, 87 (m, 1H), 4,28 (s, 2H), 3, 83 - 3,66 (m, 6H) , 3,26 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 3,21 - 2,99 (m, 8H) , 2,10 - 2,00 (m, 2H), 1,84 - 1,69 (m, 2H). Cinco protões permutáveis não observados. 304
Exemplo 42
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9— diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo d) (0,21 g) em metanol (3 mL) a amónia (solução aquosa a 35%, 15 mL) e a mistura reaccional agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o resíduo submetido três vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. 0 resíduo foi dissolvido em DMF (7 mL) e tratado com ácido 2-isopropiltiazole-4-carboxílico (0,098 g) seguido de trietilamina (0,290 mL) e em seguida HATU (0,257 g) e a mistura 305 resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,25 g. m/z 462 (M+H)+ (APCI) b) Ditrifluoroacetato de (fl) -7-(2-(3-fluoro-5- ((4- (2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 42, passo a) (0,23 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,038 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,275 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os 306 orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,029 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O residuo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,196 g) e ácido acético (0,029 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,063 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida até um volume de 3 mL e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,15 g. m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, d6-dmso, 90 °C) δ 11,27 (S, 1H) , 7,94 (s, 1H) , 7,28 - 7, 16 (m, 3H), 6,93 (d , J = = 8,5 Hz, 1H), 6, 77 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4, 94 - 4,88 (m, 1H ) , 4 ,27 (s, 2 H), 3, 70 (s, 4H) , 3, 66 (s, 2H) , 3,32 - 3,23 (: m, 3H) , 3,17 - 2,99 (m , 8H) , 2,07 - 1,96 (m ., 2h; ' , 1, 81 -1,69 (m, 2H) , 1,35 (d, 6H) . Cinco protões permutáveis nao observados. 307
Exemplo 43
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-(5-((4—(2—terc— butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 1-(9-((4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2- il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-2,2,2-t ri fluoroet anona
Foi adicionado trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-1-(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo d) (1,084 g) a uma solução, mantida sob agitação, de uma mistura 4:1 de 4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído e 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeído (exemplo 27, passo b) (1,0 g) , e AcOH (0,16 mL) em iV-metil-2-pirrolidinona (15 mL). Após 5 min foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,57 g) . Após 16 h foi adicionada água e a mistura extraída com acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada três vezes com água e 308 evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina, 1:20:1 separou os dois produtos isoméricos e deu o composto em subepígrafe como um óleo. Rendimento 1,04 g. RMN de (400 MHz t CDC13 ) δ 6,87 (s, 1H) , 6, 75 (d, J = 3, 7 H z, 1H) , 3, 79 - 3, 12 (m, 4H) , 3,65 (s, 3H), 3, 59 - 3,55 (m, 1H) , 3,52 (: 5, 1H) , 3, 37 (s, 1H) , 2, 76 (t, J = 6,9 Hz, 2H) , 2, 68 - 2, 61 (m, 1H) , 2,57 - 2,50 (m, 1H) , 2,46 - 2,38 (m, 1H) , 2, 31 (t, J = = 11, 5 Hz, 1H) , 1 ,89 - 1, 75 (m, 2H) , 1,68 - 1,52 (m, 2H) , 0, 87 (s, 9H), 0,00 (s, 6H) . b) 9-((4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano \ i 0~\
' ^ ^ H
Foi adicionado amónia aquosa "880" (1,5 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de 1-(9-((4-(2-(terc- butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-2,2,2-trifluoroetanona (exemplo 43, passo a) (1,0 g) em metanol (5 mL) . Após 16 h a mistura reaccional foi evaporada até à secura. Foi adicionado acetonitrilo, a solução foi evaporada até à secura in vacuo, e este processo foi repetido três vezes para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,78 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 6,94 (s, 1H) , 6,87 (s, 1H) , 3,91 - 3,85 (m, 2H) , 3,78 (t, J = 7,1 Hz, 2H) , 3, 72 - 3,68 (m, 309 2Η) , 2,93 - 2, 82 (m, 4H) , 2, 80 - 2, 73 (m, 4H) , 2,62 - 2,53 (m, 2H) , 2,11 - 2,01 (m, 2H) , 1, 76 - 1,64 (m, 2H) , 0,87 (s, 9H) , 0,00 (s, 6H) + 1 protão permutável não observado. c) (9-((4-(2—(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen—2-il)metil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-terc-butiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado HATU (0,306 g) a uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-terc-butiltiazole-4-carboxílico (0,16 g) , 9-((4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-1-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecano (exemplo 43, passo b) (0,300 g) e trietilamina (0,41 mL) em DMF (3 mL) . Após 1 h, a mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada duas vezes com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina. 12:90:10 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,3 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7,82 (s, 1H) , 6, 85 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,01 - 3,92 (m, 1H), 3,92 - 3, 84 (m, 1H) , 3,82 - 3,71 (m, 7H), 3,69 - 3,58 (m, 3H), 2,79 - 2, 71 (m, 2H) ; 2,60 - 310 2,28 (m, 4H), 1,93 - 1,79 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 0,87 (s, 9H), -0, 01 (s, 6H) . d) (2-terc-Butiltiazol-4-il)(9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado TBAF (1,5 mL de uma solução 1 M em THF) a uma solução, mantida sob agitação, de ( 9-((4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-terc-butiltiazo1-4-il)metanona (exemplo 43, passo c) (0,300 g) em THF (3 mL) . Após 1 h a reacção foi evaporada até uma goma. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 20:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma . Rendimento 0,22 g· RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 8, 00 (s, 1H), 7, 01 (s, 1H), 6, 84 - 6, 73 (m, 1H) , 4, 59 (t, J = = 5,3 Hz, 1H), 3,77 - 3, 48 (m, 10H) , 2,64 (t, J = 7, 0 H z, 2H), 2, 54 - 2,16 (m, 4H) , 1, 74 - 1,63 (m, 2H), 1,58- 1, 43 (m, 2H), 1 ,41 (s, 9H) . 311 e) 2-(5-((4-(2-terc-Butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,316 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (2-terc-butiltiazol-4-il) (9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 43, passo d) (0,23 g) e TFA (0,05 mL) em DCM (5 mL) . Após 40 min, a mistura reaccional foi tratada com solução aguosa saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (30 mL) . A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, foi adicionado ácido acético (0,08 mL) , em seguida a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e, em seguida, evaporada in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,23 g. Utilizado directamente. m/z 462 (M+H)+ (APCI) 312 f) Ditrifluoroacetato de (R) —1—(2-(2-(5-((4—(2-terc-butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,039 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,180 g) e 2-(5-((4-(2-terc-butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído (exemplo 43, passo e) (0,230 g) em MeOH (8 mL) . Após 1 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,125 g) . Após 3 h, a mistura reaccional foi filtrada e
purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente : 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas até à secura. A trituração com éter dietílico deu o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,14 g. m/z 672 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D( 5-DMSO) δ 1—1 i—1 67 (s, 1H), 10 ,24 (s, i—1 8,91 - 8 , 71 (m, 2H), 8, 04 (s, 1H) , 7, 46 (s, 1H), 7, 18 (s, 1H) , 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = = 8 ,4 Hz, 1H), 6,54 - 6,44 (m, 1H) , 4, 93 - 4,86 (m, 1H) , 4, 68 - 4, 51 (m, 2H) , 3,82 - 3,47 313 (m, 8H), 3,32 (m, 2H), 1,83 3,15 (m, 4H) , 3,12 - 2,87 (m, 5H) , 2,15 1,54 (m, 2H), 1,39 (s, 9H). 2, 07
Exemplo 44
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-((2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
a) 2,2-Difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1—oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado HATU (1,184 g) a uma solução de 2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 37, passo c) (0,7 g) e ácido 2-isopropiltiazole-4-carboxílico (0,41 g) e trietilamina (1 mL) em DMF (12 mL) a 20 °C e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica 314 foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 30% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,78 g. RMN de XH (400 MHz, De-DMSO, 90 °C) δ 8,11 (s, 1H) , 4, 29 4,20 (m, 2H) , 4,03 - 3,98 (m, 2H), 3,58 - 3,51 (m, 2H) , 3,37 3,30 (m, 1H) , 3,26 - 3,17 (m, 2H), 1,81 - 1,74 (m, 2H) , 1,66 1,57 (m, 2H) , , 1,40 (s, 9H), 1,35 (d, 6H) b) Trifluoroacetato de (2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Uma solução de 2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 44, passo a) (0,78 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (5 mL) e a mistura reaccional deixado em repouso a 20 °C durante 30 minutos. Foi adicionado tolueno (40 mL) e os solventes evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,8 g. 315 m/z 346 (M+H)+ (APCI) RMN de 2H (300 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,57 (s, 2H), 8,16 (s, 1H), 4,39 - 4,22 (m, 2H), 4,04 (s, 2H), 3,39 - 3,28 (m, 1H, 3,27 - 3,19 (m, 2H), 3,16 - 3,04 (m, 2H), 2,07 - 1,97 (m, 2H), 1,93 -1,80 (m, 2H), 1,37 (d, 6H). c) (2,2-Difluoro-9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado 2-(3-(bromometil)fenil )etanol (exemplo 6, passo a) (0,21 g) a uma mistura de trifluoroacetato de (2,2-difluoro-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5] undecan-4-il) (2- isopropil- -tiazol-4-il) metanona (exemplo 44, passo b) (0,40 g) e trietilamina (0,37 mL) em acetonitrilo (15 mL). A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 2 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,40 g. 316 m/z 480 (M+H)+ (APCI) d) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-((2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinlin-2(1H)-ona
Uma solução de (2,2-difluoro-9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 44, passo c) (0,38 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,061 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,437 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,045 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8- 317 hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento WO2004106333) (0,345 g) em metanol (15 mL). A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,252 g) numa porção. A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 10% de metanol em diclorometano com 1% de amónia aquosa "880" como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,32 g. m/z 796 (M+H)+ (APCI) e) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-((2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,082 mL) em metanol (2 mL) a uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-((2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole- 318 4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 44, passo d) (0,32 g) em THF (8 mL) e a mistura reaccional deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,21 g. m/z 682 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6- -DMSO, 90 c ’C) δ 8,18 - - 8, 11 (m, 2H) 7, 44 - 7,31 (m, 4H), 7, 14 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,99 (d J = 7,9 Hz, 1H), 6, 55 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 5,37 - 5,31 (m, 1H) 4, 31 (s , 2H), 4,23 (s, 2H), 4,01 (s, 2H) , 3 ,40 - 2, 98 (m, 11H) 2, 08 - 1,99 (m, 2H), 1,98 - 1,88 (m , 2H) , 1,36 (d, 6H) . Sei prot ões permutáveis não observados. 319
Exemplo 45
Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(2,6—difluoro—3—((4—(2— isopropiltiazole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9—il)metil)fenetilamino)—1—hidroxietil)—4—hidroxibenzo[d]tiazol— 2(3H)-ona
OH a) 2-(2,6-Difluorofenil)etanol
Foi adicionada cuidadosamente uma solução de complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 26 mL) a uma solução de ácido 2-(2,6-difluorofenil) acético (3 g) em THF, (50 mL) a 0 °C. A reacção foi então deixada aquecer até à TA e agitada durante 3 h. A reacção foi arrefecida num banho de gelo e cuidadosamente desactivada com metanol (10 mL) . O solvente foi evaporado e o residuo purificado por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 9:1 até 4:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepigrafe como um óleo transparente. Rendimento 2,2 g. 320 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,20 - 7, 13 (m, 1H), 6,94 6,82 (m, 2 M, 3, 85 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,97 (t, J = 6,7 Hz 2Η). Um protão permutável não observado. b) 2,4-Difluoro-3-(2-hidroxietil)benzaldeido
HO
Foi adicionada 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (5 mL) a uma solução de butil-litio (1,6 M em hexanos, 19 mL) em THF (25 mL) a -70 °C. Foi adicionada, gota a gota, uma solução de 2-(2,6-difluorofenil)etanol (exemplo 45, passo a) (1,6 g) em THF (25 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 2 h. Foi então adicionada DMF (3,9 mL) e a mistura agitada durante lha -70 °C. A mistura foi então deixada aquecer até à TA e agitada durante 70 h. A reacção foi desactivada com solução de HC1 (2 M, 50 mL) , diluída com acetato de etilo (100 mL) e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:éter 4:1 até 2:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas. O óleo resultante foi dissolvido em acetato de etilo (50 mL) e lavado com solução de HC1 (2 M, 30 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL), seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e evaporado para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1,1 g. 321 RMN de ΧΗ (300 MHz, CDC13) δ 10,28 (s, 1H) . 7, 84 - 7, 74 (m, 1H) , 7, 05 - 6,95 (m, 1H) , 3,89 (t, J = 6,6 Hz, 2H) , 3,01 (t, J = 6,6 Hz, 2H). Um protão permutável não observado. c) (9-(2,4-Difluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado 2,4-difluoro-3-(2-hidroxietil)benzaldeído (exemplo 45, passo b) (0,35 g) a uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il) (l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,67 g) e ácido acético (0,09 mL) em N-metil-2-pirrolidinona (1 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 1 h, em seguida desactivada com a adição em porções de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,335 g) ao longo de 5 min. A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro, diluída com acetonitrilo (20 mL) e aplicada a um cartucho de SCX (10 g Varian, pré-humedecido com acetonitrilo, (50 mL) ) . O cartucho foi lavado com acetonitrilo (50 mL) e eluído com solução de amónia aquosa "880" a 10% em acetonitrilo (50 mL) . O eluente foi evaporado, submetido a evaporação azeotrópica com tolueno e purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 77,5:17,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5 para dar o composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,74 g. 322 m/z 480 (M+H)+ (APCI) RMN de 1H (300 MHz, D g-DMSO) δ 8, 00 (s, 1H), 7,32 - 7,16 (m, 1H) , 7, 00 (t, J = 8,7 Hz, 1H), 4, , 80 (t, J = 5,5 Hz, 1H) , 3,78 - 3,38 (m, 11H) , 2,77 (t, J = 7, 0 Hz, 2H) , 2 ,46 - 2,26 (m, 4H) , r-\—1 - 1, 40 (m, . 4H), 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 6H) d) 2-(2,6-Difluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido
Foi adicionado TFA (0,11 mL) a uma solução de (9-(2,4-difluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 45, passo c) (0,7 g) em DCM (5 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi então adicionado periodinano de Dess-Martin (0,93 g) e a mistura agitada à TA durante 45 min. Foi então adicionada solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura agitada durante 10 min. A camada aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificados com algumas gotas de ácido acético, a mistura foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,64 g. 323 m/z 478 (M+H)+ (APCI) e) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2,6-difluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado uma solução de 2-(2,6-difluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido (exemplo 45, passo d) (0,323 g) em metanol (3 mL) a uma mistura de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,23 g) e ácido acético (0,034 mL) em metanol (2 mL). A mistura resultante foi agitada durante 5 min, em seguida arrefecida até 0 °C. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,057 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 2 h. Os solventes foram evaporados e o resíduo purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e purificadas por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, 324 evaporadas e trituradas com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,21 g. m/z 688 (M+H)+(APCI) RMN de XH (400 MHz, d6-dmso O o C) δ 11,27 (s, 1H) t 7, 94 (S, 1H), 7, 62 - 7,53 (m, r 1H) , 7, 23 - - 7,1 4 (m, 1H) , 6, 93 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,78 (d , J = 8 , 2 Hz, 1H) , 4, 92 (dd, J = 8,1, 4, 7 Hz, 1H), 4, 31 (s, 2H) , 3,75 - 3,61 (m, 6H) , 3 ,34 - 3, 02 (m, 11H) , 2,10 - 1,95 (m, 2H), 1, 86 - 1, 71 (m, 2H) , 1, 34 (d, J = 6,7 Hz, 6H). Cinco protões permutáveis nao observados.
Exemplo 46
Ditrifluoroacetato de (R)—5—(2—(2,6—difluoro—3—((4—2— isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionada uma solução de 2-(2,6-difluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído (exemplo 45, passo d) (0,29 g) em metanol (3 mL) a uma mistura de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona 325 (documento WO2004106333) (0,20 g) e ácido acético (0,034 mL) em metanol (3 mL). A mistura resultante foi agitada durante 5 min em seguida arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,057 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 2 h. O solvente foi evaporado e o resíduo purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi dissolvido em THF (3 mL), foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,29 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. A reacção foi concentrada e o resíduo purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e trituradas com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,23 g. m/z 682 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, d6-dmso, 90 °C) δ 8, 19 (d, J = 10, 0 Hz, I H) , 7, 94 (s, 1H) , 7,65 - 7,51 (m, 1H) , 7, 24 - 7,10 (m, 2H) , 7, 01 (d, J = 7, 9 Hz, 1H) , . 6,53 (d, J = 10 ,0 Hz, 1H), 5,37 (dd, J = 8,6, 4,0 Hz , 1H) , 4,3 4 (s, 2H), 3, 75 - 3 ,59 (m, 6H), 3 ,34 - 3, 03 (m, 11H) , 2, 11 - 1, 95 (m, 2H) , 1,88 - 1,72 (m, 2H), 1,34 (d r J = 6,9 Hz, 6H) . Seis protões permutáve is não observados ♦ 326
Exemplo 47
Ditrifluoroacetato de (R)—1— (2-(2-fluoro-5-((4- (2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(5-Bromometil)-2-fluorofenil)etanol
Foi adicionado peróxido de dibenzoilo (0,14 g) a uma solução de NBS (1,53 g) e ácido 2-(2-fluoro-5-metilfenil)acético (1,45 g) em DCM (50 mL) e a mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 12 h. 0 solvente foi evaporado e o sólido branco partilhado entre acetato de etilo (100 mL) e solução de cloreto de sódio a 10% (50 mL) . As camadas foram separadas e a fase orgânica lavada com solução de cloreto de sódio a 10% (50 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. O sólido branco obtido foi redissolvido em tetra-hidrofurano (25 mL) e arrefecida num banho de gelo. Foi cuidadosamente adicionada uma solução de complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 327 13 mL) e a mistura foi então deixada aquecer até à TA e agitada durante 2 h. A reacção foi arrefecida num banho de gelo e cuidadosamente desactivada com metanol. Uma vez terminado o borbulhamento, o solvente foi evaporado e o resíduo purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etilo: iso-hexano 9:1 até 4:1 para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1,35 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7,32 - 7,21 (m, 2H) , 7,04 - 6,97 (m, 1H) , 4,46 (s, 2H) , 3,87 (t, J = 6,5 Hz, 2H) , 2,93 - 2, 87 (m, 2H) . Um protão permutável não observado. b) (9-(4-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
HO
Foi adicionado 2-(5-(bromometil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 47, passo a) (0,16 g) a uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,3 g) e trietilamina (0,3 mL) em acetonitrilo (10 mL). A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro, diluída com acetonitrilo (20 mL) e aplicada a um cartucho de SCX (10 g Varian, pré-humedecido com acetonitrilo (50 mL)) . O cartucho foi lavado com acetonitrilo (50 mL) e eluído com solução de amónia aquosa "880" a 10% em acetonitrilo (50 mL). O eluente foi evaporado, submetido a evaporação azeotrópica com tolueno e purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 77,5:17,5:5 até acetato 328 de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar ao composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,22 g. m/z 462 (M+H)+ (APCI) RMN de 1H (400 MHz, De-DMSO, 90 °C) δ 7, 91 (s , 1H), 7 ,22 - 7,14 (m, 1H) , 7, 14 - 7, 06 (m, 1H ) , 7,00 (dd, J = 10,0, 8, 3 Hz, 1H) , 4, 40 (t, J = 5, 3 Hz, 1H), 3, 72 - 3,52 (m, 8H) , 3,43 - 3,23 (m, 3H) , 2, 74 (t, J = 7,0 Hz, 2H) f 2,42 - 2,23 (m , 4H), 1 ,75 - 1,65 (m, 2H) , 1,59 - 1,47 (m, 2H), 1, 36 (d, J = 6 ,9 Hz, 6H) . c) Ditrifluoroacetato de (R) —7—(2—(2—fluoro—5—((4—2— isopropiltiazole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)—1—hidroxietil)—4—hidroxibenzo[d]tiazol— 2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,033 mL) a uma solução de (9-(4-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 47, passo b) (0,2 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,28 g). A solução amarela resultante foi 329 deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (1 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) e acetato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (5 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio
(5 mL) , acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) , foram em seguida adicionados ácido acético (0,025 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,17 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,04 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até
89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,14 g. m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H), 7,94 (S, 1H), 7,52 - 7,42 (m, 2H), 7,25 (t, J = 9,2 Hz, 1H) , 6,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,93 (dd, J = 7,9, 330 4,6 Hz, 1H), 4,29 (s, 2H) , 3,80 - 3,58 (m, 6H) , 3,34 - 2,95 (m, 11H) , 2,11 - 1,95 (m, 2H) , 1, 87 - 1,64 (m, 2H) , 1,34 (d, J = 6,7 Hz, 6H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 47A (R) -7-(2-(2-Fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)—1— hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona a) 2-(5-(Bromometil)-2-fluorofenil)etanol
Foi adicionado peróxido de dibenzoilo (1 g) a uma solução de NBS (10,6 g) e ácido 2-(2-fluoro-5-metilfenil)acético (10 g) em DCM (250 mL) e a mistura resultante foi aquecida sob refluxo durante 12 h. O solvente foi evaporado e o sólido branco partilhado entre acetato de etilo (250 mL) e solução de cloreto de sódio a 10% (500 mL) . As camadas foram separadas e a fase orgânica lavada com solução de cloreto de sódio a 10% (500 mL) , seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. O sólido branco obtido foi redissolvido em tetra-hidrofurano (150 mL) e arrefecido num banho de gelo. Foi cuidadosamente adicionada uma solução de complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 89 mL) e a mistura foi então deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi arrefecida num banho de gelo e cuidadosamente desactivada com metanol. Uma vez terminado 331 o borbulhamento, ο solvente foi evaporado e o resíduo foi triturado com uma mistura 4:1 de iso-hexanos e éter. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etilo: iso-hexano 9:1 até 4:1 para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 6,5 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,32 - 7,21 (m, 2H) , 7, 04 6,97 (m, 1H), 4,46 (s, 2H), 3, 87 (t, J = 6,5 Hz, 2H) , 2, 93 2,87 (m, 2H). Um protão permutável não observado. b) (9-(4-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
HO
Foi adicionado 2-(5-(bromometil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 47A, passo a) (5,2 g) a uma suspensão de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b)
(9,4 g) e carbonato de potássio (6,8 g) em etanol (75 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro e filtrada. 0 bolo de filtração foi lavado com etanol (50 mL) e o filtrado e lavagens combinados foram evaporados. O resíduo foi partilhado entre água (100 mL) e acetato de etilo (250 mL) , as camadas foram separadas e a orgânica lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de acetato de 332 etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar ao composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 7,9 g. m/z 462 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,91 (s, 1H) , 7,22 -7,14 (m, 1H), 7,14 - 7,06 (m, 1H) , 7,00 (dd, J = 10,0, 8,3 Hz, 1H), 4,40 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 3, 72 - 3,52 (m, 8H), 3,43 - 3,23 (m, 3H), 2,74 (t, J = 7,0 Hz, 2H) , 2,42 - 2,23 (m, 4H) , 1,75 -1,65 (m, 2H), 1,59 - 1,47 (m, 2H), 1,36 (d, J = 6,9 Hz, 6H). c) (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (1,32 mL) a uma solução de (9-(4-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 47A, passo b) (7,9 g) em DCM (200 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (12,3 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (100 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) e acetato de etilo (500 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , acidificadas com ácido acético (2 mL), secas 333 sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (140 mL) e foi então adicionado cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (4,5 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,6 g), a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo e partilhada entre THF (100 mL) e uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução saturada de bicarbonato de sódio (10:1, 100 mL). As camadas foram separadas e a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada, evaporada e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCMrmetanol: amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 4,1 g m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de 1H (400 MHz, d6-dmso, O O C) δ 11,27 (s, 1H) r 7, 94 (S, 1H) , 7,52 - 7, 42 (m, 2H) , 7,25 (t, J = 9,2 Hz, 1H) , 6, 94 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,78 (d , J = 8,2 Hz, 1H), 4,93 (dd, J = 7,9, 4,6 Hz, 1H), 4, 29 (s , 2H) , 3, 80 - 3,58 (m, 6H) , 3 ,34 - 2, 95 (m, 11H) , 2 , 11 - 1, 95 (m, 2H) , 1, 87 - 1,64 (m, 2H) , 1,34 (d, J = 6,7 Hz, 6H). Cinco protões permutáveis não observados. 334
Exemplo 47B
Sal do ácido di(IS)-(+)-10-canforsulfónico de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido IS-(+)-canforsulfónico (41 mg) a uma solução de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (exemplo 47A) (59 mg) em etanol (5 mL) e a solução transparente resultante evaporada até à secura para dar sal do ácido dicanforsulfónico de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona como um sólido branco amorfo. Rendimento 0,1 g
Foi adicionado iso-propanol (1 mL) ao sal do ácido dicanforsulfónico de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-fenetilamino)-1-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (20 mg) e a solução transparente resultante foi agitada 2 dias. Formou-se um sólido branco e a suspensão foi agitada durante mais 5 dias. O sólido foi isolado por filtração centrífuga e seco sob alto vácuo para dar sal do ácido dicanforsulfónico de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxi-etil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona como um sólido cristalino branco. Rendimento 5 mg. 335
Uma mistura de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (4,3 g, 6,42 mmol) (exemplo 47A), ácido (IS)—(+)—10— canforsulfónico (2,98 g, 12,84 mmol) e iso-propanol (300 mL) foi aquecida a 50 °C até se formar uma solução transparente, adicionados núcleos de cristalização, deixada arrefecer até à TA e agitada durante 4 dias. O sólido foi isolado por filtração, lavado com iso-propanol (lOOmL), éter (2 x 200mL) e seco por sucção para dar o composto em epígrafe como um sólido cristalino branco. Rendimento 5,1 g O excesso enantiomérico do composto em epígrafe é superior ao composto obtido no exemplo 47A. (exemplo 47A = 86% ee, composto em epígrafe >96% ee) Método Quiral Analítico: Chiralcel OJ-H 4,6x250 mm, iso-hexano:etanol 80:20 + 0,1% de etilenodiamina, 1 mL/min, 35C, 225 h—10 nm ao longo de 30 min.
Tempo de retenção para o enantiómero R = 15,91 min
Tempo de retenção para o enantiómero S = 22,85 min RMN de (300 MHz, DMSO, í 30 0 C) δ 11,42 ( s, 1H), 9 ,95 (s, K t—1 8,89 (s, 2H) , 7, 95 (s, 1H ) , 7,61 - 7,54 (m, 1H ) , 7,53 - 7, 46 (m, 1H), 7,27 (t, J = 9,2 Hz, 1 H), 6,94 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8 ,3 H: z, 1H), 4,í 37 - 4,90 (m, 1H) , 4, , 30 (s, 2H) , 3, 74 - 3,59 (m, 6H) , 3 ,35 3,02 (m, 9H) , 2, 93 (d, J = 14,6 Hz, 2H), 2 ,76 - 2,61 (m, 2H), 2,44 (d, J - = 1 4,6 Hz, 2H) , 2,29 - 2, 23 (m, . 2H) , 2,22 - 2 , 16 (m, 2H) , 2,13 - 2 , 00 (m, 2H) , 1,96 - 1, 68 (m, 6H) , 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1, 32 - 1,20 336 (m, 4H), 1,06 (s, 6H), 0,76 (s, 6H) dois protões permutáveis nao observados.
Um padrão de XRPD do di-sal de ácido (IS)-(+)-10-canforsulfónico da modificação A é apresentado na Figura 1.
Alguns picos característicos para a modificação A
Pos. [0 2Th.] espaçamento d [À] 4, 9 18,1 > CO 9,1 12,5 1—1 i—1 \—1 5,5 17,3 5,1
Exemplo 47C
Fumarato de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetil-amino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona Modificação A
Uma solução de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (13 mg) (exemplo 47D, passo a) e ácido fumárico (2 mg) em metanol (0,75 mL) foi agitada à TA durante 7 dias. O sólido branco resultante que se formou foi isolado por filtração e seco sob alto vácuo para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 5 mg. 337 m/z 670 (M+H)+ (APCI)
Um padrão de XRPD do sal de fumarato da modificação A é apresentado na Figura 2.
Alguns picos caracteristicos para o sal de fumarato da modificação A
Pos. [0 2Th.] espaçamento d [Â] i—1 14, 4 CO > 9, 9 13,8 6, 4 21,5 4,1 23,5 3, 8
Exemplo 47D
Monofumarato de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-
isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona Modificação B a) (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Sal do ácido di-(IS)-(+)-10-canforsulfónico de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (Exemplo 47B) (4,1 g) foi 338 partilhado entre 2-metil-THF recentemente destilado (100 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) . As camadas foram separadas e a camada orgânica lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O sólido vitreo resultante foi triturado três vezes com éter para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 2,6 g.
b) Monofumarato de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona Modificação B (R)-7-(2-(2-Fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (2,4 g) foi dissolvido em etanol (240 mL) a 50 °C. Foi adicionado ácido fumárico (0,416 g) e a mistura aquecida sob refluxo até se formar uma solução transparente. A solução resultante foi deixada arrefecer até 60 °C e adicionados núcleos de cristalização da forma A (exemplo 47C) (50 mg). A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro a 50 °C e em seguida deixada arrefecer até à TA ao longo de 3 h. O sólido branco resultante foi isolado por filtração, lavado com etanol (50 mL. ) , éter (2x200 mL) e seco por sucção para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 2,3 g. m/z 670 (M+H)+ (APCI) 339 RMN de XH (400 MHz, DMSO, 9 C ) °C ) δ 7, 89 (s , I H ) , 7, ,19 - 7, 09 (m, 2H), 7, 01 (dd , J = 9, r 9, 8,3 H: 2, 1 H) r 6,86 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,69 (d, J = 8, 5 Hz, 1 H) , 6,59 (d, j = 1, 0 Hz, 2H) , 4, 65 - 4, 59 (m, 1H) , 3,73 - 3, 56 (m, 6H) , 3, 41 (s, 2 H) , 3,30 (septeto, J = 3,3 Hz, 1H) , 2, 90 - - 2, 71 (m, 6H), 2, 42 - 2,26 (m, 4H), 1, 75 - 1,64 (m, 2H) , 1, 59 - 1,48 (m, 2H) r 1,35 (dd, J = 6,8, 1,2 Hz, 6H) + 6 permutáveis nao observados
Um padrão de XRPD do sal de fumarato da modificação B é apresentado na Figura 3.
Alguns picos caracteristicos para o sal de fumarato da modificação B
Pos. [°2Th.] espaçamento d [Â] 14, 3 6,2 16,3 5,4 18,0 4, 9 19,6 4,5 23,0 3,9 26,1 3,4 - PANalytical CubiX PRO
Os dados de XRPD foram recolhidos com um equipamento PANalytical CubiX PRO na configuração Θ-2Θ ao longo da gama de varrimento de 2o até 40° 2Θ com uma exposição de 100 segundos por incremento de 0,02°. Os raios X foram gerados por um tubo longo de cobre operado a 45 kV e 40 mA. O comprimento de onda dos raios X de cobre foi de 1,5418 Á. Os dados foram recolhidos em suportes de fundo nulo onde foram colocados 2 mg do composto. 340 0 suporte foi feito de um único cristal de silício, o qual tinha sido cortado ao longo de um plano de não difracção e, em seguida, polido com um acabamento opticamente plano. 0 raios X incidentes neste superfície foram negados por extinção de Bragg.
Exemplo 47E (R)-7-(2-(2-Fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)—1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona a) 4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9— diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Uma mistura de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (reagente limitante) e ácido 2-isopropiltiazole-4-carboxílico (1,1 molar equivalentes) foi suspenso em 2-MeTHF (10 volumes) e arrefecida até 10-15 °C. Foi adicionada trietilamina (7,2 equivalentes molares) em porções a 10-15 °C. A suspensão espessa foi arrefecida até 5-10 °C e foi adicionado T3P (1,3 equivalentes molares de uma solução 1,57 M em THF) gota a gota a 5-10 °C ao longo de 0,5 h. A mistura reaccional foi deixada aquecer até à temperatura ambiente (35 min) e agitada durante 2,5 h. A mistura 341 foi diluída com água (10 volumes, exotérmica de 5 °C) e a mistura agitada vigorosamente; a aquosa (pH 10) foi separada e extraída com 2-MeTHF (2x2 volumes). Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 volumes) e água (2x2 volumes). A fase orgânica foi evaporada e submetida a evaporação azeotrópica com MeCN (2x2 volumes) para dar uma goma castanha; a qual foi seca a 35 °C in vacuo durante 24 h. Rendimento: 89% do teórico. RMN de ΤΗ (300 MHz, DMSO) δ 8,03 (s, i—1 3, 76 - - 3,44 (m 8H) , 3,37 - 3,25 (m, 3H), 3,16 - 3,00 (m, 2H) , 1, 76 - - 1,66 (m 2H) , 1,39 (s , 9H), 1, 33 (d, J = 6,9 Hz, 6H) b) (2-Isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona, sal de trifluoroacetato
A uma solução de 4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (reagente limitante) (passo a) em DCM (5 volumes) foi adicionado ácido trifluoroacético (13,4 equivalentes molares) em porções a 10-15 °C. A solução foi deixada aquecer até à ambiente e agitada durante 16 h. Solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em éter dietílico (10 volumes). A solução foi arrefecida em gelo e raspada para dar precipitação; a suspensão espessa foi agitada a 0°-10 °C durante 0,5 h, em seguida filtrada fria. O bolo foi lavado com éter dietílico (5 volumes) e seco in vacuo a 35 °C para dar um pó de cor bege. Rendimento: 91% do teórico. 342 RMN de ΤΗ (300 MHz, DMSO) δ 8, 70 - 8,37 (m, 2H) , 8,05 (s, 1H) , 3,82 - 3,52 (m, 6H) , 3, 42 - - 3,25 (m, 1H) , 3:19 - 3,07 (m, 2H) , 3,05 - 2,90 (m, 2H) , 2, 02 - - 1,91 (m, 2H) , 1, 74 - 1,54 (m, 2H), 1,35 (d, J = 6,7 Hz, 6H) c) 4-Bromo-l-fluoro-2-(2-metoxivinil)benzeno (mistura de isómeros cis e trans)
Foi adicionado em porções, ao longo de 30 minutos, terc-butóxido de potássio (1,2 equivalentes molares) a uma suspensão, mantida sob agitação, de cloreto de (metoximetil)trifenilfosfónio (1,3 equivalentes molares) em THF (2,5 volumes) a -3 °C (+ ou - 2 °C) . Desenvolveu-se uma cor vermelha escura. A temperatura foi aumentada até 18 °C ao longo de 0,5 horas e a reacção agitada durante mais 1,5 horas. Foi então adicionado 5-bromo-2-fluorobenzaldeido (reagente limitante) como uma solução em THF (5 volumes) ao longo de 90 minutos, de tal forma que a temperatura da reacção não excedeu 24 °C. A reacção foi então agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi vertida para solução aquosa saturada de cloreto de amónio (10 volumes) e extraída com t-BME (2 x 2,5 volumes). Os extractos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (3x 2 volumes), seca (Na2SO<i) , filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo oleoso foi extraído com iso-hexano (8 x 0,5 volumes). Os extractos de iso-hexano combinados foram filtrados, em seguida lavados com ácido acético glacial (2 volumes) e ácido acético 343 glacial a 50% em água (2 volumes) . Após secagem (Na2S04) e filtração, o solvente foi removido num evaporador rotativo para dar um óleo laranja pálido. O rendimento foi 90% do teórico.
Isómero cis: RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 8,07 (d, J= 9,4 Hz, 1H), 7,41 - 7,39 (m, 1H) , 7,13 (q, J= 1,8 Hz, 1H) , 6,54 (d, J= 7,1 Hz, 1H), 5,31 (d, J= 7,1 Hz, 1H) , 3,83 (s, 3H)
Isómero trans. RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 7,73 - 7,68 (m, 1H), 7,44 (d, J = 12,9 Hz, 1H) , 7, 41 - 7,39 (m, 1H), 7,18 7,09 (m, 1H), 5,79 (d, J = 12,9 Hz, 1H) , 3,67 (s, 3H) d) 4-Fluoro-3-(2-metoxivinil)benzaldeido
4-Bromo-l-fluoro-2-(2-metoxivinil)benzeno (reagente limitante) (passo c) foi dissolvido em 2-metiltetra-hidrofurano (5 volumes) e a solução arrefecida até -10 °C. Foi adicionado cloreto de iso-propilmagnésio (0,37 equivalentes molares de uma solução 2 M em THF) gota a gota, mantendo a temperatura a -7 °C (+ ou - 2 °C) , ao longo de cerca de 30 minutos, seguido de butil-litio (0,74 equivalentes molares de uma solução 1,5 M em hexano) , controlando a temperatura a -6 °C (+ ou - 2 °C) , ao longo de cerca de 1 hora. Agitada durante 45 minutos, em seguida adicionada a uma solução de 4-formilmorfolina (2 equivalentes molares) em 2-metiltetra-hidrofurano (7 volumes) a -5 °C. Esta adição demorou cerca de 90 minutos. A reacção foi então agitada durante 1 hora, durante a qual a temperatura interna aumentou 344 até 5 °C. A mistura reaccional foi vertida para solução aq. saturada de cloreto de amónio (10 volumes) e extraída com t-BME (2x 3 volumes). Os extractos combinados foram lavados com cloreto de amónio aq. saturado (até o pH da lavagem ser aprox. 6) (2x3 volumes), água (5 volumes), secos (Na2S04) , filtrados e evaporados para dar um óleo laranja móvel. O óleo foi submetido a cromatografia sobre sílica utilizando 5% de acetato de etilo em iso-hexano como eluente. O rendimento foi 80% do teórico.
Isómero trans: RMN de TH (400 MHz, CDCL3) δ 9,93 (s, 1H) 7,83 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7 , 66 - 7,61 (m, 1H) , 7,25 (d J = 13,1 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 10,3 Hz, 1H) , 5,87 (d J = 13,1 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H)
Isómero cis: RMN de ΤΗ (400 MHz, CDCI3) δ 9,95 (s, 1H), 8,57 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,70 - 7,66 (m, 1H) , 7,12 (d, J = 11,5 Hz, 1H) (s, , 6,34 (d, J = 7,2 Hz, 3H) 1H) , 5, 48 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 3,86 e) (9-(4-Fluoro-3-(2-metoxivinil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona F ( rW 1 v \ / O ( O A uma suspensão de 4-fluoro-3-(2- me toxivinil)benzaldeído (reagente limitante) (passo d) e trifluoroacetato de 345 (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-metanona (1,05 equivalentes molares) (passo b) em 2-metiltetra-hidrofurano (25 volumes) foi adicionada trietilamina (1,73 equivalentes molares) numa porção (exotérmica de 4 °C). A mistura foi agitada durante 0,5 h; foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,5 equivalentes molares) numa porção (sem exotérmica) e a solução resultante foi agitada durante 16 h.
Foi adicionado NaHC03 aq. Saturado (25 volumes) e a mistura agitada vigorosamente. A fase orgânica foi separada e a aquosa (pH 8) foi extraída com 2-MeTHF (lOOmL); os orgânicos combinados foram lavados com água (2x50mL) e secos (Na2S04) , filtrados e evaporados para dar um óleo escuro. Rendimento: 78% do teórico. RMN de (300 MHz, D6-DMSO) mistura de isómeros cis e trans : δ 7, 97 (s, 1H) , 7 , 86 - 7, 79 (m, 0, 5H) , 7,34 - 7, 20 (m 1H) , 7,07 - - 6,98 (m, 2H) , 6 ,41 (d, J = 7, 1 Hz, 0,5H), 5, 82 (d J = 1 2,9 Hz , 0,5 M, 5, .32 (d, J = 6,9 Hz, 0 ,5H) , 3,77 (s, o, 5H) 3,66 (s, 2, 5H), 3,42 - 3, 19 (m, 7H) , 2, 41 - - 2,26 (m, 4H) , 1, 76 1,63 (m, 3H ), 1,59 - 1 ,45 (m, 3H ), 1, 35 (d, J = 6 ,7 Hz, 6H) 346 f) (R)-7-(2-(2-Fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil- l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(4-fluoro-3-(2-metoxivinil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (reagente limitante) (passo e) em THF (5 volumes) foi tratada com água (2,5 volumes) seguida de ácido clorídrico conc. (6 equivalentes molares) . A solução foi aquecida a 55-60 °C durante 1,5 h; a solução foi arrefecida até ambiente e diluída com água (2,5 volumes). O THF foi removido por evaporação e o resíduo aquoso foi adicionado a uma mistura, mantida sob agitação, de bicarbonato de sódio (7 equivalentes molares), água (5 volumes) e DCM (10 volumes) . O orgânico foi separado e a aquosa (pH 8) foi extraída com DCM (5 volumes) . O orgânico combinado foi lavado com solução aquosa saturada de NaHCC>3 (5 volumes), água (2x5 volumes), seco (sulfato de sódio) e filtrado. 0 filtrado foi diluído com MeOH (10 volumes) e o DCM evaporado a 35 °C/405 mbar. A solução de aldeído em metanol foi tratada com ácido acético (2 equivalentes molares) e adicionada a cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (1 molar equivalente) numa porção; a mistura foi arrefecida até 0-5 °C e agitada durante 5 min para dar uma solução. A esta foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (1,5 equivalentes molares) numa porção e a 347 mistura foi agitada a 5 °C durante 0,5 h em seguida aguecida até à ambiente e agitada durante 0,5 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre 2-MeTHF (10 volumes) e solução saturada de NaHC03 (5 volumes); os orgânicos foram lavados com solução aguosa de cloreto de sódio a 20% (5 volumes), secos (Na2S04) , filtrados e evaporados. Deu uma espuma amarela gue foi suspensa em acetato de etilo (13 volumes) e o sólido resultante foi recolhido por filtração e seco in vacuo. Deu um sólido amarelo pálido que foi purificado sobre sílica (20 vezes peso da mistura reaccional em bruto), eluente DCM/10-15% de MeOH/1-1,5% de amónia.
Rendimento: 29% do teórico. m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 7,99 (s, 1H), 7,23 - 7,02 (m, 3H) , 6, 84 (d, J = 8 , 3 Hz, 1H), 6, 69 (d, J = 8 ,3 Hz, 1H) , 4, 58 (q, J = 4, 1 Hz, 1H) , 3,75 - 3, 24 (m 1, 10H) , 2, 80 - 2,59 (m, 6H) , 2, 41 - 2,11 (m, 7H), 1 ,76 - 1, 41 (m, 4H) , 1,34 (d, J = 6,9 Hz, 6H) 348
Exemplo 48
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzaldeido
Foi adicionado 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (10,8 mL) a uma solução de butil-litio (1,6 M em hexanos, 40,1 mL) em THF (40 mL) a -70 °C. Foi adicionado, gota a gota, uma solução de 2-(2-fluorofenil)etanol (3 g) em THF (40 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 6 h a -70 °C. Foi então adicionada DMF (8,29 mL) e a mistura agitada durante lha -70 °C. A mistura foi então deixada aquecer até à TA e agitada durante 70 h. A reacção foi desactivada com solução de HC1 (2 M, 50 mL) , diluida com acetato de etilo (100 mL) e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução de HC1 (2 M, 50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto 349 de sódio (20 mL) , secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 até 2:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo.
Rendimento 1,2 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 10,37 (s, 1H) , 7, 80 -7, 71 (m, 1H) , 7,54 (td, J = 7,4, 1,9 Hz, 1H), 7,22 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 3,96 - 3,87 (m, 2H), 2, 99 (td, J = 6,5, 1 ,2 Hz, 2H) , 1,53 (t, J = 5,6 Hz, 1H) . b) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado 2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzaldeído (exemplo 48, passo a) (0,19 g) a uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,32 g) e ácido acético (0,043 mL) em iV-metil-2-pirrolidinona (5 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 1 h, em seguida foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,24 g) em porções ao longo de 5 min. A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro, diluída com acetonitrilo (20 mL) e aplicada a um cartucho de SCX 350 (10 g Varian, pré-humedecido com acetonitrilo (50 mL)). O cartucho foi lavado com acetonitrilo (50 mL) e eluido com solução de amónia aquosa "880" a 10% em acetonitrilo (50 mL) . O eluente foi evaporado, submetido a evaporação azeotrópica com tolueno e purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 77,5:17,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,33 g. m/z 462 (M+H)+ (APCI) RMN < de ΧΗ (4 00 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 1—1 (s, \—1 7,23 7,13 (m, 2H ) , 7, 03 (t, J = 7,5 Hz, 1H) , 4, 40 (t, J = 5,3 Hz 1H) , 3, 72 - 3,56 (m, 9 H), 3,48 (s, 2H) , 2, 75 (t, J = 6,9 Hz 2H) , 2,46 - 2,26 (m, 4H) , 1,75 - 1, 63 (m, 2H) , 1, 59 - 1 ,46 (m 2H) , 1,35 (d, r J = 6,9 Hz, 6H) . c) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9—il)metil)fenetilamino)—1—hidroxietil)—4—hidroxibenzo[d]tiazol— 2(3H)-ona
351
Foi adicionado TFA (0, 044 mL) a uma solução de ( 9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 48, passo b) (0,3 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,37 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (5 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (2 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,033 mL) e cloridrato de (R) -7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,28 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,054 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. 0 solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,14 g. 352 m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, Dg ;-DMSO , 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7,9 (s f 1H) , 7, 51 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 7,4 4 (t, J = 7,0 Hz, 1H) 7, 25 (t, J = 7, 7 Hz, 1H) , 6, 94 (d, J = 8, 2 Hz, 1H) , 6, 78 (d J 8,5 H z, 1H) , . 4, 93 (dd, J = 8 ,3, 4, 7 Hz , 1H) , 4,34 (s, 2H) 3, 77 - 3, 60 (m, 6H) , 3,36 - 3,04 (m, 11H ) , 2,09 - 1,97 (m, 2H) 1, 87 - 1 , 72 (m, r 2H) , 1,35 (d, J = 6,9 Hz, . 6H) . Cinco protõe: permutáveis nao observados.
Exemplo 4 9
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-((4-(2-metilbenzo[d]tiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
353 a) (9-((4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2- il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metilbenzo[d]tiazol-5-il)metanona
Foi adicionado HATU (0,333 g) a uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-metilbenzo[d]tiazole-5-carboxílico (0,17 g), 9-((4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2- il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano (exemplo 43, passo b) (0,3 g) e trietilamina (0,407 mL) em DMF (3 mL). Após 1 h, a mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada duas vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina, 2:8:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,36 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7, 38 (d, J = = 8, 3 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H) , 6, . 96 (s, 1H) f 6, 78 (s, 1H) , 3, , 77 (t, J = = 6,7 Hz, 2H), 3,68 - 3, . 63 (m, 2H) , 3, 58 (s, 2H) , 3, 53 - 3, 46 (m , 2H) , 3,42 - 3,36 (m, 2H) , 2,82 (s f 3H) , 2, 70 (t , J = 6, 8 Hz, 2H) , 2,42 - 2,31 (m, 4H) , 1, 81 - 1, 72 (m, 2H) , 1, 52 - - 1 ,41 (m, 2H) , 0,86 (s, 9H), 0,00 (s, 6H) . 354 b) (9-((4-(2-Hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metilbenzo[d]tiazol-5-il)metanona
HO
Foi adicionado TBAF (solução 1 M em THF, 1,5 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de (9-((4-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metilbenzo[d]tiazol-5-il)metanona (exemplo 49, passo a) (0,36 g) em THF (2 mL) . Após 1 h, a reacção foi evaporada até uma goma. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 20:1 deu o composto em subepigrafe como uma goma. Rendimento 0,2 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,05 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,37 (d, J = 7, 5 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H) , 6,94 (s, 1H), 6, 76 (S, 1H), 4,30 - 4,23 (m, 1H), 3,68 - 3,54 (m, 6H) , 3,54 - 3, 44 (m, 2H), 3,43 - 3,33 (m, 2H), 2,81 (s, 3H), 2, 71 - 2,62 (m, 2H) , 2,47 - 2,29 (m, 4 M, 1,81 - 1,71 (m, 2H), 1, 55 - 1, 40 (m, 2H) * 355 c) 2-(5-((4-(2-Metilbenzo[d]tiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,27 g) a uma solução, mantida sob agitação, de ( 9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metilbenzo[d]tiazol-5-il)metanona (exemplo 49, passo b) (0,20 g) e ácido trifluoroacético (0,033 mL) em DCM (5 mL) . Após 40 min, a mistura reaccional foi tratada com solução aguosa saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (30 mL) . A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, foi adicionado ácido acético (0,08 mL) , em seguida a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. Rendimento 0,2 g. Utilizado directamente no passo seguinte. m/z 470 (M+H)+ (APCI) 356 d) Ditrifluoroacetato de (Λ)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-((4-(2-metilbenzo[d]tiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,037 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-1-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,168 g) e 2-(5-((4-(2-metilbenzo[d]tiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeido (exemplo 49, passo c) (0,200 g) em MeOH (8 mL) . Após 1 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,107 g) . Após 3 h, a mistura reaccional foi filtrada e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas até à secura. A trituração com éter dietilico deu o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,15 g.
m/ z 680 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, d6-dmso, O o O δ 11, 29 (s, d d II 8,2 Hz, 1H), 7, 90 \—1 to 1 CM 7, 37 (m, 2H 1H), 6,93 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 4,94 - 357 4,86 (m, 1H), 4,50 - 4,41 (m, 2H) , 3, 73 - 3,63 (m, 2H) , 3,58 -3,33 (m, 4H) , 3,29 - 2, 90 (m, 10H) , 2,81 (s, 3H) , 2,16 - 2,00 (m, 2H), 1,78 - 1,62 (m, 2H). 4 protões permutáveis não observados.
Exemplo 50
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(2-terc-butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (2-terc-Butiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 2,2,2-trifluoro-l-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]— undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo d) (0,21 g) em metanol 358 (3 mL) a amónia (solução aquosa a 35%, 15 mL) e a mistura reaccional agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o resíduo submetido três vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O resíduo foi dissolvido em DMF (7 mL) e tratado com ácido 2-terc-butiltiazole-4-carboxílico (0,096 g), seguido de trietilamina (0,290 mL) e em seguida HATU (0,257 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,22 g. m/z 476 (M+H)+ (APCI) . b) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(2-terc-butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (2-terc-butiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 50, passo a) (0,22 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,036 mL) seguido de 359 periodinano de Dess-Martin (0,255 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,026 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,182 g) e ácido acético (0,026 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,058 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,135 g. m/z 684 (M+H)+ (APCI) 360 RMN de (4' 00 MHz, D6-DMS0, 90 °C) δ 7, 95 (s , 1H) , 7,27 - \—1 r- (m, 3h: ) , 6, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) r 6, 77 (d , J = 8,5 Hz, 1H) , 4, 94 - 4, 88 (m, , 1H) , 4, 21 ( s, 2H) , 3, 71 (s f 4H) , 3 ,66 (s, 2 H) , 3,26 (t f J = 7, 9 Hz, , 2 H) , 3, 15 - 2, 98 (m, 8H) vo o CM - 1,95 (m, 2H) , 1, 79 - 1 ,67 (m, 2H) , 1 , 41 (s , 9H) e Seis protões permutáveis nao observados.
Exemplo 51
Ditrifluoroacetato de (R) -5-(2-(2-(5-((2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
a) (9-((4-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
361
Foi adicionado trifluoroacetato de (2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 44, passo b) (0,40 g) a uma solução, mantida sob agitação, de uma mistura 4:1 de 4-(2-(terc- butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeido e 3-(2-(terc- butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-2-carbaldeido (exemplo 27, passo b) (0,36 g) e AcOH (0,05 mL) em iV-metil-2-pirrolidinona (5 mL) . Após 5 min foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,28 g) . Após 16 h foi adicionada água e a mistura extraída com acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada três vezes com água e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina 20:80:5 separou os dois produtos isoméricos e deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,24 g. RMN de (400 MHz, D6 -DMSO, 90 O C) δ 8,11 (s, 1H) , 7, 00 (s, 1H) , 6,82 (s, 1H ), 4,28 - 4, 16 (m, 2H) , 4, 05 - 3, 95 (m, 2H) , 3,78 (t, J = 6 ,6 Hz, 2H) , 3,64 (s, 2H) , 3,40 - 3,31 (m, 1H) , 2, 71 (t, J = 6, r 6 Hz, 2H), 1,85 - - 1, 7 7 (m, 2H) , 1 ,74 - 1,64 (m, 2H) , 1,39 (d, J = 6,8 Hz, 6H) , 0, 86 (s, 9H) , 0, 86 (s , 6H) ' , 4 protões sob solvente picos. b) (2,2-Difluoro-9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)—1— oxa-4,9-diazaespiro(5,5)undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
362
Foi adicionado TBAF (1 M em THF, 1,5 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de (9-((4-(2-(terc- butildimetilsililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-2,2-difluoro-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 51, passo a) (0,30 g) em THF (3 mL). Após 1 h, a reacção foi evaporada in vacuo até uma goma. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 20:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,2 g. RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 8,19 (s, 1H) , 7,02 (s, 1H) , 6,81 (s, 1H), 4,60 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 4, 54 - 4,39 (m, 1H) , 4,20 - 3,98 (m, 3H) , 3,88 - 3, 75 (m, 1H), 3,66 - 3,53 (m, 5H) , 2,65 (t, J = 7,0 Hz, 3H) , 1,81 - 1,73 (m, 2H) , 1, 72 - 1,60 (m, 2H) , 1,36 (d, J = 6,4 Hz, 6H) . 2 protões obscurecidos pelos picos do solvente. c) 2-(5-((2,2-Difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5-5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeido
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,20 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (2,2-difluoro-9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 51,
passo b) (0,15 g) e ácido trifluoroacético (0,031 mL) em DCM 363 (4 mL). Após 40 min, a mistura reaccional foi tratada com solução aquosa saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (30 mL) . A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, foi adicionado ácido acético (0,08 mL) , em seguida o solvente foi seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. Rendimento 0,19 g. Utilizado directamente. m/z 484 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2-(5-((2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado (R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,156 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(5-((2,2-difluoro-4-(2-isopropiltiazole-4- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído (exemplo 51, passo c) (0,15 g) e ácido acético (0, 027 mL) em metanol (8 mL) . Após 5 minutos foi adicionado 364 cianoboro-hidreto de sódio (0,078 g). Após 3 h, a mistura reaccional foi evaporada in vacuo até ~3 mL e partilhada entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. A goma resultante foi dissolvida em THF (2 mL) e adicionado trifluoridrato de trietilamina (0, 064 g) . Após 16 h foi adicionado tolueno e a solução foi evaporada in vacuo. A purificação por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas até à secura, submetidas a evaporação azeotrópica com MeCN, em seguida trituradas com éter dietilico para dar o composto em epígrafe as sólido.
Rendimento 0,14 g. m/z 688 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz r De-DMSO) δ 10, 52 - 10, 4 7 (m, 2H) , 8, 85 - 8, 70 (m, 2H) , 8,22 (s r 1H), 8,15 (d , J = 9,6 Hz, 1H) , 7, 49 - 7, 43 (m, 1H) , 7, 21 - 7, 12 (m, 1H), 7, 15 (d, J = 6,9 Hz r 1H) , 6,99 (d, J = 8, 1 Hz, 1H) , . 6,58 (d, J = = 10,6 Hz, 1H) , 6,24 - 6, 17 (m, 1H) , 5,33 (d, J = 8, 9 Hz, 1H), 4, 66 - 4, 51 (m, 2H) , 3, 44 - 2,91 (m, 10H) , 2, 15 - 2 , 03 (m, 2H ) , 1,95 - 1, 77 (: m, 2H) r 1, 35 (d, J = 6, 9 Hz , 6H) φ 6 protões obs curecidos pel< os pico; do solvente. 365
Exemplo 52
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-cloro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Ácido 2-(3-(bromometil)-5-clorofenil)acético
Foi adicionado peróxido de benzoílo (0,112 g) a uma suspensão de ácido 2-(3-cloro-5-metilfenil)acético (0, 752 g) e IV-bromossuccinimida (0,801 g) em DCM (15 mL) , e a mistura resultante foi aquecida a 50 °C sob azoto de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo para remover o diclorometano e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo (10 mL). A solução foi aquecida a 85 °C sob azoto durante 4 horas, em seguida arrefecida. A solução foi lavada três vezes com água e uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca sobre sulfato de magnésio anidro e purificada por cromatografia flash sobre sílica eluído com ácido 366 acético:acetato de etilo:iso-hexano 1:20:79 para proporcionar o composto em subepígrafe em bruto como um sólido amarelo pálido. Rendimento 0,735 g. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) δ 7,33 - 7,31 (m, 1H) , 7,24 - 7,22 (m, 1H), 7,21 - 7,18 (m, 1H) , 4,41 (s, 2H) , 3,64 (s, 2H) .
Um protão permutável não observado. b) 2-(3-(Bromometil)-5-clorofenil)etanol
Foi adicionada, em porções ao longo de 5 minutos, uma solução de complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 2,8 mL) a uma solução de ácido 2-(3-(bromometil)-5-clorofenil) acético (exemplo 52, passo a) (0,73 g) em THF seco (10 mL) à temperatura ambiente. A solução efervescente resultante foi agitada durante 1 hora, em seguida arrefecida em gelo-água e desactivada pela adição de metanol (3 mL) em porções ao longo de 5 minutos. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante mais 20 minutos e em seguida concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluído com 25% de acetato de etilo em iso-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe em bruto como um sólido branco. Rendimento 0,46 g. RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ 7, 29 - 7, 24 (m, 1H) , 7,19 -7,13 (m, 2H), 4,41 (s, 2H) , 3,87 (t, J = 6,5 Hz, 2H) , 2,84 (t, J = 6,4 Hz, 2H). Um protão permutável não observado. 367 c) (9-(3-Cloro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
HO
Foi adicionada trietilamina (0,18 mL) a uma suspensão de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,217 g) e 2-(3-(bromometil)-5-clorofenil)etanol (exemplo 52, passo b) (0,160 g) em acetonitrilo (5 mL) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução foi então purificada por cromatografia flash sobre sílica eluída com trietilamina:metanol:diclorometano 1:5:94 para proporcionar uma goma. A goma foi dissolvida em diclorometano e a solução foi lavada três vezes com água, seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe como uma espuma amarela pálida. Rendimento 0,254 g. RMN de (400 MHz, d6-dmso , 90 °C) δ 7, 90 (s, 1H), 7, 21 - 6, . 92 (m, 3H) , 4,31 (t, J = 5,3 Hz, 1H) r 3, 79 - 3,49 (m, 8H) , 3, . 42 (s, 2H) , 3, 31 (septeto , J = 6 ,8 Hz, 1H), 2,71 (t, J = 6, 7 Hz, 2H) , 2,43 - 2,22 (m, 4H) , 1, 77 - 1, 65 (m, 2H), 1,60 - 1, 48 (m, 2H), 1,36 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . 368 d) 2-(3-Cloro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
Uma solução de (9-(3-cloro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 52, passo c) (0,242 g) em DCM (5 mL) foi arrefecida em gelo-água, tratada com ácido trifluoroacético (0,059 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,323 g) , em seguida a mistura foi retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A solução foi diluída com solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 minutos. A mistura foi então extraída duas vezes com acetato de etilo, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificadas com ácido acético (0,1 mL), secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas in vacuo para dar o composto em subepígrafe em bruto como uma espuma amarela. Rendimento 0,297 g. m/z 476 (M+H)+ (APCI) 369 e) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(3—cloro—5—((4—(2— isopropiltiazole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de cloridrato de (f?)-7-(2-amino-l-hidroxietil) -4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,220 g) em metanol (3 mL) foi tratada com ácido acético (0,047 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-(3-cloro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeido (exemplo 52, passo d) (0,296 g) em metanol (4 mL), e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,181 g) . A mistura foi agitada em gelo-água durante 10 minutos e em seguida à temperatura ambiente durante 45 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,533 g) . A mistura foi então agitada de um dia para o outro, permitindo que aquecesse lentamente até à temperatura ambiente. Na manhã seguinte a mistura foi concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de metanol (1,5 mL), acetonitrilo (1,5 mL) e água (1,5 mL) e purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 370 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. O resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o qual foi removido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,092 g. m/z 686 (M+H)+ (APCI) RMN de 2Η (400 ΜΗς :, D '6-DMSO, o o O δ 7,94 (s, 1H) f 7,50 - 7, 44 (m, 1H) , 7,44 - 7, 37 (m, 1H) , 7,34 - 7 ,26 (m, 1H), 6, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6, . 77 (d, J = 8,2 ! Hz, 1H) , 4,90 (dd, J = 7,9, 5, 4 Hz, 1H) , 4,26 - - 4, 08 (m, 2H) , 3, 77 - 3,59 (m, 6H) r 3,35 - 3, 21 (m, 3H) i, 3,16 - 2 ,91 (m , 8H) , 2,06 - 1,90 (m, 2H) r 1,81 - 1, 63 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 6, 9 Hz, 6H) . Sei s protões permutáveis não observados.
Exemplo 53
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(4- isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
371 a) 4-Isopropiltiazole-2-carboxilato de etilo
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 15 minutos, 1-bromo-3-metilbutan-2-ona (3,72 g) em etanol (15 mL) a uma solução, a refluxo, de 2-amino-2-tioxoacetato de etilo (3 g) em etanol (120 mL) . A mistura foi aquecida a refluxo durante 2 horas e em seguida arrefecida até à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida até um volume de 30 mL, esta solução foi adicionada a gelo/água (200 mL) e a mistura neutralizada por adição gota a gota de amónia aquosa concentrada "880". A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 20% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2,2 g. m/z 200 (M+H)+ (APCI) b) Ácido 4-isopropiltiazole-2-carboxilico
372
Uma solução de 4-isopropiltiazole-2-carboxilato de etilo (exemplo 53, passo a) (2,2 g) numa mistura de metanol (10 mL) e THF (20 mL) foi tratada com uma solução de hidróxido de litio (0,264 g) em água (20 mL) . A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 24 horas. O solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida e a mistura aquosa remanescente foi partilhada entre acetato de etilo e água. A camada aquosa foi acidificada com ácido clorídrico 2 M e extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi triturado com ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,93 g. m/z 170 (M-H)- (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,67 (s, 1H), 3,16 - 3,05 (m, 1H), 1,26 (d, 6H). Um protão permutável não observado. c) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-isopropiltiazol-2-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]— undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo d) (0,21 g) em metanol 373 15 mL) e a mistura (3 mL) a amónia (solução aquosa a 35%, reaccional agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o resíduo submetido três vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O resíduo foi dissolvido em DMF (7 mL) e tratado com ácido 4-isopropiltiazole-2-carboxílico (exemplo 53, passo b) (0,089 g) seguido de trietilamina (0,290 mL) e em seguida HATU (0,257 g) e
a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,325 g. m/z 462 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5- ((4-(4-isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-isopropiltiazol-2-il)metanona (exemplo 53, passo c) (0,23 g) em DCM (20 mL) foi 374 tratada com ácido trifluoroacético (0,038 mL) seguido de periodinano de Dess-Martin (0,275 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,029 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,196 g) e ácido acético (0,029 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,063 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,140 g. m/z 670 (M+H)+ (APCI) 375 RMN de XH (400 MHz, D6-DMS0, 90 °C) δ 11 ,27 (s, 1H) r 7,51 (S, 1H) , 7, 28 - 7,16 (m, 3H) , 6,93 (d, J = = 8,2 Hz, 1H), 6, , 77 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4,95 - 4 , 88 (m, 1H) , 4,2( 5 (s, 2H) , 4, 19 - 3,82 (m, 4H) , 3, 80 - 3,74 (m, 2 H) , 3,27 (t, J = 7, 9 Hz , 2H) , 3, 19 - 2,98 (m, 9H ), 2, 09 - 1,98 (m, 2H), 1,85 - 1, 73 (m, 2H), 1, ,27 (d, J = 7,1 Hz, 6 H) . Cinco protões permutáveis não obse: rvados.
Exemplo 54
Ditrifluoroacetato de (R) -7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5- isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 5-Isopropiltiazole-2-carboxilato de etilo
Foi lentamente adicionada, gota a gota, uma solução de bromo (0,162 mL) numa mistura de DCM (1,2 mL) e dioxano (0,3 mL) a uma solução arrefecida a 0 °C de 3-metilbutanal (0,272 g) numa mistura de DCM (1,6 mL) e dioxano (0,4 mL) . A mistura foi agitada a 5 °C durante 2 horas. A mistura reaccional foi 376 arrefecida até 0 °C e os solventes foram removidos sob uma corrente de azoto gasoso. 0 resíduo, ainda a 0 °C foi tratado em porções com 2-amino-2-tioxoacetato de etilo (0,42 g) . A mistura resultante foi aquecida sob azoto desde 0 °C até 70 °C ao longo de um período de 15 minutos. No final deste período, a mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 30% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,105 g. m/z 200 (M+H)+ (APCI) b) Ácido 5-isopropiltiazole-2-carboxílico
OH
Uma solução de 5-isopropiltiazole-2-carboxilato de etilo (exemplo 54, passo a) (0,105 g) em metanol (5 mL) foi tratada com uma solução de hidróxido de lítio (0,025 g) em água (3 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada a 20 °C durante 2 horas. O metanol foi evaporado sob pressão reduzida e a solução aquosa residual foi diluída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) . A camada aquosa foi lavada com éter, em seguida arrefecida num banho de gelo e acidificada por adição gota a gota de ácido clorídrico aquoso concentrado. A 377 mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo. As camadas de acetato de etilo combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,048 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,84 (s, 1H), 3,34 - 3,26 (m, 1H) , 1,31 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Um protão permutável não observado. c) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiazol-2-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo d) (0,113 g) em metanol (3 mL) a amónia (solução aquosa a 35%, 15 mL) e a mistura reaccional agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o resíduo submetido três vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. 0 resíduo foi dissolvido em DMF (7 mL) e tratado com ácido 5-isopropiltiazole-2-carboxílico (exemplo 54, passo b) (0,048 g) seguido de trietilamina (0,156 mL) e em seguida HATU (0,139 g) e
a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa 378 saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 104 mg. m/z 462 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5-isopropiltiazole-2-carbonil)-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiazol-2-il)metanona (exemplo 54, passo c) (0,104 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,017 mL) seguido de periodinano de Dess-Martin (0,124 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A 379 mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,013 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (f?)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,089 g) e ácido acético (0,013 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,028 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,045 mg. m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de ] Ή (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7 ,67 (s, 1H) , 7 ,28 - 7,16 (m, 3H) t 6, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6, , 77 (d, J = = 8, 5 Hz, 1H) , 4, 94 - 4, 89 (m, 1H), 4,26 (s, 2H) , 4, 11 - 3, 79 (m, 4H) , 3,78 - 3, 73 (m, - 2H) , 3,31 - 3,24 (m, 2H) , 3 ,18 - 2, 99 (m, 9H) , 380 2, 06 - 1,97 (m, 2H) , 1,85 - 1, 74 (m, 2H) , 1,31 (d, J = 7,0 Hz, 6H). Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 55
Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(3—fluoro—5—((4—(2— isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-Isopropiltiazole-5-carboxilato de etilo
Uma mistura de 2-metilpropanotioamida (3,3 g) e 2-cloro-3-oxopropanoato de etilo (4,82 g) em acetona (50 mL) foi aguecida a refluxo sob azoto durante 3 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 12% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à 381 secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,6 g. m/z 200 (M+H)+ (APCI) b) Acido 2-isopropiltiazole-5-carboxílico
Uma solução de 2-isopropiltiazole-5-carboxilato de etilo (exemplo 55, passo a) (0,33 g) em metanol (6 mL) foi tratada com uma solução de hidróxido de lítio (0, 079 g) em água (3 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 2 horas a 20 °C. O metanol foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre éter e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada aquosa foi acidificada por adição gota a gota de ácido clorídrico diluído e a mistura extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,185 g. m/z 172 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 13,38 (s, 1H) , 8,22 (s, 1H) , 3,35 - 3,26 (m, 1H), 1,34 (d, J = 6,8 Hz,6H). 382 C) 2-(3-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenil)etanol
Foi adicionada solução de amónia "880" (5 mL) a uma solução de 2,2,2-trifluoro-l-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil) -benzi1) -1- oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo d) (2,2 g) em metanol (25 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 90 min e o solvente evaporado. O resíduo foi submetido três vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo e concentrado para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 1,96 g. m/z 309 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (300 MHz, D6 -DMSO) δ 6,97 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,91 (s, 1H) , 3,65 - 3,56 (m, 4H) , 3,49 - 3,39 (m, 2H), 2,85- 2, 78 (m, 2H) , 2,76 - 2,68 (m, 4H) , 2,48 - 2,39 (m, 2H), 2,32 - 2,21 (m, 2H) , 1,89 - 1,77 (m, 2H) , 1,58 - 1,44 (m, 2H) . Dois protões permutáveis não observados. 383 d) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-5-il)metanona
Uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenil)etanol (exemplo 55, passo c) (0,153 g) em DMF (7 mL) foi tratada com trietilamina (0,208 mL) seguida de ácido 2-isopropiltiazole-5-carboxílico (exemplo 55, passo b) (0,085 g) . A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado HATU (0,245 g). A mistura reaccional foi agitada durante 2 horas a 20 °C. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,130 g. m/z 462 (M+H)+ (APCI) 384 e) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4- (2-isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-5-il)metanona (exemplo 55, passo d) (0,13 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,022 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,155 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,016 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,111 g) e ácido acético (0,016 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,035 g) . O banho de 385 arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,1 g. m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7,92 (s, 1H), 7,30 - 7,18 (m, 3H), 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4, 95 - 4, 89 (m, 1H) , 4,30 (s, 2H) , 3,75 - 3,70 (m, 2H), 3,68 - 3,63 (m, 2H), 3,54 (s, 2H) , 3,33 - 3,24 (m, 3H) , 3,22 - 3,00 (m, 8H) ; 2, 07 - 1, 98 (m, 2H) , 1, 84 - 1, 72 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Cinco protões permutáveis não observados. 386
Exemplo 56
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2- propiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 2-Butiramido-3-mercaptopropanoato de etilo
Foi adicionada trietilamina (4,5 mL) a uma suspensão de cloridrato de 2-amino-3-mercaptopropanoato de etilo (5 g) em DCM (50 mL). A mistura resultante foi arrefecida num banho de gelo/sal e foi adicionado cloreto de butirilo (3,3 mL) gota a gota. A mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi desactivada com solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O sólido branco resultante foi 387 purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com um gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 até 1:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 3 g. RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 8,21 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 4, 43 - 4,37 (m, 1H), 4,13 - 4,06 (m, 2H) , 2, 88 - 2,80 (m, 1H), 2, 78 - 2,69 (m, 1H) , 2,12 (t, J = 7,2 Hz, 2H) , 1,60 - 1,47 (m, 2H) , 1,22 - 1, 14 (m, 3H), 0,90 - 0,81 (m, 3H). Um protão permutável não observado, m/z 218 (Μ-H)- (APCI) b) 2-Propiltiazole-4-carboxilato de etilo
Foi adicionado uma solução de HC1 (4 M em 1,4-dioxano, 20 mL) a uma solução de 2-butiramido-3-mercaptopropanoato de etilo (exemplo 56, passo a) (3 g) em etanol (20 mL) e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o resíduo submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com tolueno. O resíduo foi redissolvido em acetonitrilo (50 mL), foi adicionado dióxido de manganês (11,9 g) e a mistura aquecida a refluxo de um dia para o outro. A reacção foi filtrada através de uma almofada de Celite. A almofada do filtro foi lavada com MeCN (3 x 100 mL) . O filtrado e lavagens combinados foram evaporados e o resíduo foi 388 purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 9:1. 0 produto contendo as fracções foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,24 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 8, 05 (s, 1H), 4,42 (q J = 7,1 Hz, 2H) , 3,04 (t, 1= 7,7 Hz, 2H) , 1 ,89 - 1,77 (m, 2H) 1, 40 (t, J = 7,0 Hz, 3H ), i II >"0 -P CM 0 7, 4 Hz , 3h: ) . c) Ácido 2-propiltiazole-4-carboxílico
Foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidrato (0,2 g) a uma solução de 2-propiltiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 56, passo b) (024 g) numa mistura de THF (4 mL) e água (1 mL) . A suspensão resultante foi agitada de um dia para o outro à TA. A reacção foi acidificada com solução aquosa de HC1 (2 M, 3 mL) e evaporada. O resíduo foi partilhado entre solução aquosa saturada de cloreto de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento. 0,17 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, De-DMSO) δ 12,91 (s, \—1 8,31 (s, 1H) 2,96 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,79 - 1,68 (m, 2H) , 0,95 (t J = 7,4 Hz, 3H) . 389 d) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-propiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, NN'-tetrametilurónio (0,25 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenil)-etanol (exemplo 55, passo c) (0,16 g), ácido 2-propiltiazole-4-carboxílico (exemplo 56, passo c) (0,09 g) e trietilamina (0,29 mL) em DMF (7 mL) e a solução amarela resultante foi agitada durante 30 min. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) . A fase orgânica foi separada, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre silica gel eluindo com um gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e a mistura evaporada para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,14 g. m/z 462 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,89 (s, 1H), 6,95 (s, 1H) , 6,89 (s, 1H) , 6,86 (s, 1H), 431 (t, J = 4,7 Hz, 1H), 3,69- 390 3,59 (m, 8H), 3,44 (s, 2H) , 2,98 (t, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,72 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,43 - 2,28 (m, 4H), 1,82 - 1,66 (m, 4H), 1,59 - 1,50 (m, 2H), 0,97 (t, J = 7,3 Hz, 3H). e) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(3—fluoro—5—((4—(2— propiltiazole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado TFA (0,023 mL) a (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-propiltiazol-4-il)metanona (exemplo 56, passo d) (0,14 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,19 g) · A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , 391 acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL), foram então adicionados ácido acético (0,017 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,12 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0, 029 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,077 g. m/z 670 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (4 0 0 MHz , D6-DMSO, 9 O O O δ 11, 27 (s, 1H), 7, 93 (s, i—1 7, 29 - - 7, 15 (m, 3H), 6,93 (d, J = 8, 2 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4 ,95 - 4, 88 (m, 1H) , 4, 28 - 4,21 (m, 2H) r 3, 73 - 3, 61 (m, 6H), 3, 27 (t, J = 7,9 Hz, 2H) , 3 ,16 - 2,93 (m, 1 0H) , 2, 05 - 1, 95 (m, 2H), 1,83 - 1,70 (m, 4H) , 0,96 (t, J = 7 ',3 Hz, 3H). Cinco protoes permutáveis nao observados. 392
Exemplo 57
Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(3—((4—(2—ciclopropiltiazo-le—4—carbonil) -l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H(
OH a) 2-(Ciclopropanocarboxamido)-3-mercaptopropanoato de etilo
Foi adicionado cloreto de ciclopropanocarbonilo (3,1 mL) a uma suspensão de trietilamina (4,68 mL) e cloridrato de 2-amino-3-mercaptopropanoato de etilo (5,2 g) em DCM (200 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro A reacção foi desactivada com etanol e o solvente evaporado. O resíduo foi suspenso em acetato de etilo (200 mL) e lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 150 mL) , solução aquosa de HC1 (2 M, 2 x 150 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (150 mL), em seguida seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e evaporado. O sólido branco 393 resultante foi purificado por cromatografia sobre silica gel eluindo com iso-hexano: acetato de etilo 4:1 para dar o composto em subepigrafe como um sólido branco. Rendimento 5 g. RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 8,51 (d, J = 7, 7 Hz, 1H) , 4, 44 (td, J = 7( . 5, 5,3 Hz, 1H) , 4,17 - - 4,05 (m, 2H), 2, 91 - 2,67 (m, 2H), 2, 53 - 2,52 (m, 1H), 1,78 - 1,60 (m, 1H), 1,19 (t, J = 6,8 Hz, 3 H) , 0, 71 - o, 66 (m, 4H). b) 2-Ciclopropiltiazole-4-carboxilato de etilo
Uma solução de 2-(ciclopropanocarboxamido)-3-mercaptopropanoato de etilo (exemplo 57, passo a) (5 g) e ácido tósico (0,875 g) em tolueno (100 mL) foi aquecida a refluxo sob condições de Dean e Stark de um dia para o outro. A reacção foi deixada arrefecer e a solução de tolueno foi lavada com solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (3 x 100 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. A goma castanha resultante foi redissolvida em acetonitrilo (100 mL). Foi adicionado dióxido de manganês (40 g) e a mistura aquecida a refluxo de um dia para o outro. A reacção foi filtrada através de Celite e a almofada do filtro lavada com MeCN (3 x 100 mL). O filtrado e lavagens combinadas foram evaporadas e o resíduo purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 9:1 a 4:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o 394 composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,15 g. RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ 7, 94 (s, 1H), 4,40 (q 7, 1 Hz, 2H) , 2, 45 - 2,37 (m, 1H), 1,39 (t, J = 7,2 Hz, 3H) 1,20 - 1,04 (m, 4H). c) Acido 2-ciclopropiltiazole-4-carboxilico
Foi adicionado hidróxido de litio mono-hidrato (0,13 g) a uma solução de 2-ciclopropiltiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 57, passo b) (0,15 g) numa mistura de THF (8 mL) e água (2 mL) e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. A reacção foi acidificada com HC1 aquoso (2 M, 3 mL) e o solvente evaporado. O resíduo foi partilhado entre solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 30 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido esbranquiçado. Rendimento 0,12 g. RMN de (300 MHz, D6-DMSO) δ 12,88 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 2,48 - 2,37 (m, 1H), 1,18 - 1,09 (m, 2H) , 1,01- 0,94 (m, 2H) . 395 d) (2-Ciclopropiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il) -N, N, NN '-tetrametilurónio (0,34 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenil)-etanol (exemplo 55, passo c) (0,21 g), ácido 2-ciclopropiltiazole-4-carboxílico (exemplo 57, passo c) (0,12 g) e trietilamina (0,38 mL) em DMF (7 mL) e a solução amarela resultante foi agitada durante 30 min. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), a camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,15 g. m/z 460 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,79 (s, 1H), 6,96 (s, 1H) , 6,90 (s, 1H), 6,86 (s, 1H) , 4,35 (s, 1H) , 3,67 - 3,56 (m, 396 8H) , 3, ,44 (S, 2H ) , 2, 72 (t, J = = 6, 7 Hz, 2H), 2, 46 - 2,30 (m 5H) , 1, 75 - 1 , 66 (m, 2H) , 1,58 - - 1,47 (m, 2H) , 1, 17 - 1,10 (m 2H) , 1, 01 - o, 94 (m, 2H) . e) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(3—((4—(2—ciclopropilti— azole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,025 mL) a (2-ciclopropiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 57, passo d) (0,15 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,21 g) . A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre 397 sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL), foram então adicionados ácido acético (0,019 mL) e cloridrato (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,13 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,031 g) a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,085 g. m/z 668 (M+H)+(APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7, 81 (s, 1H), 7,28 7,16 (m, 3H) , 6, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 8,2 Hz 1H), 4,97 - 4,86 (m, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,72 - 3,58 (m, 6H), 331 - 2,99 (m, 10H), 2,06- 1,92 (m, 2H), 1,82 - 1,68 (m, 2H), 1,19 -0,90 (m, 4H) . Um protão obscurecido pelo DMSO e seis protões permutáveis não observados. 398
Exemplo 58
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(2-ciclobutiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H(
OH a) 2-(Ciclobutanocarboxamido)-3-mercaptopropanoato de etilo
Foi adicionada trietilamina (15 mL) a uma suspensão de ácido ciclobutanocarboxilico (2,57 mL) e cloridrato de 2-amino-3-mercaptopropanoato de etilo (5 g) em DMF (40 mL) . A mistura resultante foi arrefecida num banho de gelo e foi adicionada, gota a gota, uma solução de T3P (1,57 M em THF, 20,6 mL) . A mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi desactivada com solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (2 x 100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e 399 evaporadas. 0 sólido branco resultante foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 a 1:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 3,20 g. m/z 230 (M-H) (APCI) 4, 412, 21 RMN de - 4,32 - 1, 70 ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) (m, 1 H), 4,14 - 4,05 (m, 7H), 1,18 (t, δ 8,05 (d, J = 7,9 Hz, 1H) (m, 2H) , 2,89 - 2,68 (m, 2H) J = 7,1 Hz, 3H). Um protão permutável nao observado. b) 2-Ciclobutiltiazole-4-carboxilato de etilo
Foi adicionada uma solução de HC1 (4 M em 1,4-dioxano, 3,46 mL) a uma solução de 2-(ciclobutanocarboxamido)-3-mercaptopropanoato de etilo (exemplo 58, passo a) (3,2 g) em etanol (20 mL) e a mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o resíduo submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com tolueno. O resíduo foi redissolvido em acetonitrilo (50 mL) , foi adicionado dióxido de manganês (12 g) e a mistura aquecida a refluxo de um dia para o outro. A reacção foi filtrada através de uma almofada de Celite, a qual foi então lavada com MeCN (3 x 100 mL) . O filtrado e lavagens combinados foram evaporados e o resíduo foi purificado 400 por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 9:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,48 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 8,06 (s, 1H), 4,42 (q, 7,1 Hz, 2H), 4, 00 - 3,89 (m, 1H), 2,56 - 2,45 (m, 2H) , 2,41 29 (m, 2H), 2, 16 - 1,90 (m, 2H) , 1,40 (t, J = 7,0 Hz, 3H) c) Acido 2-ciclobutiltiazole-4-carboxílico
‘“'Vv-O
Foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidrato (0,38 g) a uma solução de 2-ciclobutiltiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 58, passo b) (0,48 g) numa mistura de THF (8 mL) e água (2 mL) . A suspensão resultante foi agitada de um dia para o outro à TA. A reacção foi acidificada com solução aquosa de HC1 (2 M, 5 mL) e evaporada até à secura. 0 resíduo foi partilhado entre solução aquosa saturada de cloreto de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,38 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 12,91 1—1 co 8,32 (s, 1H) 3,94 - 3,83 (m, 1H) , 2,46 - 2,35 (m, 2H) , 2,32 - 2,21 (m, 2H) 2,09 - 1,97 (m, 1H) , 1, 94 - 1,81 (m, 1H) . 401 d) (2-Ciclobutiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, N', N'-tetrametilurónio (0,32 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenil)-etanol (exemplo 55, passo c) (0,2 g) , ácido 2-ciclobutiltiazole-4-carboxílico (exemplo 58, passo c) (0,12 g) e trietilamina (0,36 mL) em DMF (7 mL) e a solução amarela resultante foi agitada durante 30 min. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) e as camadas separadas. A fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,18 g. RMN de XH (400 MHz, d6-dmso, 90 °C) δ 7,91 (s, 1H), 6,95 (s, 6,89 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 4,36 - 4,25 (m, 1H), 3,87 (q, J = 8,3 Hz, 1H), 3, 70 - 3,57 (m, 8H) , 3,43 (s, 2H) , 2,72 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,46 - 2,26 (m, 8H), 2,11 - 1,91 (m, 2H), 1,76 - 1,66 (m, 2H), 1,60 - 1,51 (m, 2H). 402 e) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(2-ciclobutiltiazole-4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado TFA (0, 026 mL) a uma solução de (2-ciclobutiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 58, passo d) (0,16 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,22 g) . A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,019 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l- hidroxietil) -4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento 403 W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,13 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,032 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. 0 solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,12 g. m/z 682 (M+H)+(APCI) RMN de (400 MHz ,, Dg -DMSO, 90 °C) δ 11, , 26 (s, 1H) , 7, 94 (S r 1H) , 7, 30 - 1—1 r 3H) , 6, 93 (d, , J = 8 ,2 Hz, 1H) , 6, 78 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4,99 - 4, 89 (m, 1H) , 4,35 - - 4 , 25 (m, 2H) , 3,93 - 3, 81 (m, 1H) , 3,75 - 3,62 (m, 6H ) , 3,32 - 2, 99 (m, 10H) , 2,47 - 2, 39 (m, 2H) , 2,31 - 2,20 (m, 2H ) , 2,10 - 1, 72 (m, 6H) . Cinco prot ões permutáveis nao observados. 404
Exemplo 59
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-ciclopentiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-flurofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(Ciclopentanocarboxamido)-3-mercaptopropanoato de etilo
Foi adicionado CDI (8,5 g) a uma solução de ácido ciclopentanocarboxilico (5,2 mL) em DMF (40 mL). A mistura resultante foi agitada durante lhe arrefecida num banho de gelo. Foi adicionado cloridrato de 2-amino-3-mercaptopropanoato de etilo (8,88 g) , seguido de trietilamina (10 mL) . A mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi desactivada com solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e as camadas separadas. A aquosa foi extraída com DCM (2 x 100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto 405 de sódio (100 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O sólido resultante foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 até 1:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 7,7 g. RMN de 2H (400 MHz, De-DMSO) δ 8,15 (d, J = 7,7 Hz, 1H) 4,41 - 4,34 (m, 1H), 4,14 - 4,05 (m, 2H), 2,89 - 2,61 (m, 3H) 1,81 - 1,45 (m, 9H) , 1,18 (t, J = 7,0 Hz, 3H) . b) 2-Ciclopentil-4,5-di-hidrotiazole-4-carboxilato de etilo
Foi adicionado ácido tósico mono-hidrato (0,78 g) a uma solução de 2-(ciclopentanocarboxamido)-3-mercaptopropanoato de etilo (exemplo 59, passo a) (5 g) em tolueno (40 mL) . A mistura resultante foi aquecida a refluxo sob condições de Dean e Stark durante 6 h. A reacção foi deixada arrefecer, em seguida a solução de tolueno foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e o solvente evaporado. O resíduo foi submetido a evaporação azeotrópica com tolueno. O sólido branco resultante foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 9:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 3,2 g. 406 RMN de 2H (400 MHz, CDC1 3) δ 5, 08 - 4, 99 (m, 1H) , . 4,26 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 3,56 - 3, 44 (m, 2H) , 3,08 - 2,99 (m, 1H) , 2,03 - 1, , 93 (m, 2H) , 1, 83 - 1, 70 (m, 4H) , 1,64 - 1,59 (m, 2H) , 1,31 (t, J = 7,2 Hz, 3H) . c) 2-Ciclopentiltiazole-4-carboxilato de etilo
Foi adicionado dióxido de manganês (24 g) a uma solução de 2-ciclopentil-4,5-di-hidrotiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 59, passo b) (3,2 g) em acetonitrilo (100 mL) e a mistura resultante aquecida a refluxo de um dia para o outro. A reacção foi deixada arrefecer e filtrada através de uma almofada de Celite. A almofada do filtro foi lavada com acetonitrilo (2 x 100 mL) e o filtrado e lavagens combinados evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 9:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e redissolvidas em etanol (20 mL) . Foi adicionado uma suspensão espessa de paládio sobre carvão (5%, 0,66 g) em água (0,5 mL) e a suspensão resultante foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio a 5 bar de pressão durante 2 h. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite, a qual foi lavada com etanol (3 x 50 mL) . O filtrado e lavagens combinados foram evaporados para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,9 g. 407 CDC13) δ 8,04 (s, 1H), 4,41 (q RMN de XH (400 MHz, J = 7,2 Hz, 2H), 3,60 - 3,48 (m, 1H) , 2,29 - 2,18 (m, 2H), 1,89 - 1,67 (m, 6H) , 1,40 (t, J = 7,0 Hz, 3H) . d) Ácido 2-ciclopentiltiazole-4-carboxilico
Foi adicionado hidróxido de litio mono-hidrato (0,67 g) a uma solução de 2-ciclopentiltiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 59, passo c) (0,9 g) numa mistura de THF (40 mL) e água (10 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. A reacção foi acidificada com solução aquosa de HC1 (2 M, 10 mL) e o solvente evaporado. 0 residuo foi partilhado entre solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) e acetato de etilo (50 mL) e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido amarelo pálido. Rendimento 0,77 g. RMN de 2H (400 MHz, D6-DMSO) δ 12,89 (s, 1H) , 8,30 (s, 1H), 3,51 - 3,41 (m, 1H) , 2,17 - 2,07 (m, 2H) , 1, 82 - 1, 59 (m, 6H) . 408 e) (2-Ciclopentiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
HO
Foi adicionado hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, N', N'-tetrametilurónio (0,33 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenil)-etanol (exemplo 55, passo c) (0,21 g), ácido 2-ciclopentiltiazole-4-carboxílico (exemplo 59, passo d) (0,13 g) e trietilamina (0,38 mL) em DMF (7 mL) e a solução amarela resultante foi agitada durante 30 min. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,19 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 1H) , 6,88 (s, 1H) , 6,86 (s, 1H) - 3,61 (m, 8H), 3,43 (s, 2H) , 2 (m, 4H) , 2,18 - 2,06 (m, 2H) , 1 (m, 2H). 90 °C) δ 7, 89 (s, i—1 6, 95 (s, 4, 30 (t, J = 5,1 Hz, 1H) , 3 , 69 76 - 2,69 (m, 3H) , 2, 42 - 2 , 28 86 - 1,64 (m, 8H) , 1, 60 - 1 , 49 409 f) Ditrifluoroacetato de {R)-7-(2-(3-((4-(2-ciclopentil-tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,028 mL) a uma solução de (2-ciclopentiltiazol-4-il)(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxi-etil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 59, passo e) (0,18 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,23 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,021 mL) e cloridrato de (.R) -7 - (2-amino-1-hidroxietil) -4-hidroxibenzo [d] tiazol-2 (3H) -ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,14 g) e a 410 mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,034 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,7 g. m/z 696 (M+H)+ (APCI) RMN de λΗ (400 : MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7, 92 (s , 1H) , 7,28 - 7, 15 (m, 3H), 6, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6, 77 (d , J = 8,2 Hz, i—1 4,97 - 4, 86 (m, 1H) , 4, 30 - 4, 20 (m, 2H) , 3, 74-3 ,58 (m, 6H) , 3,52 - 3, 42 (m, 1H) , r 3,27 (t, J = 7,9 Hz, 2H) , 3,19 - 2,96 (m, 8H), 2,18 - 1 ,93 (m, 4H), 1,84 - 1,59 (m, 8H) . Seis protões permutáveis não observados. 411
Exemplo 60
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(4- metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(3-Fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-il)(4-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo d) (0,17 g) em metanol (3 mL) a amónia (solução aquosa a 35%, 15 mL) e a mistura reaccional agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi evaporada até à secura sob pressão reduzida e o resíduo submetido três vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O resíduo foi dissolvido em DMF (6 mL) e tratado com ácido 4-metiltiofeno-2-carboxílico (0,060 g) seguido de trietilamina 412 (0,176 mL) e em seguida HATU (0,208 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de
sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,120 g. m/z 433 (M+H)+(APCI) b) Ditrifluoroacetato de (Λ)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(4-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol(3H)-ona
Uma solução de (9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 60, passo a) (0,120 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,021 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,153 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C 413 durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraida duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,016 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,109 g) e ácido acético (0,016 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,035 g). 0 banho de arrefecimento foi retirado e a mistura
agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,075 g. m/z 641 (M+H)+ (APCI) RMN de 1R (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,30 - 7,17 (m, 5H) , 6,93 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4,94 - 4,89 414 (m, 1H) , 4,27 (s, 2H) , 3, 73 - 3, 69 (m, 2H), 3,67 - 3,63 (m, 2H) , 3,54 (s, 2H) , 3, 27 (t , J = = 7,9 Hz, 2H), 3,19 - 2, 99 (m, 8H) , 2,22 (s, 3H) , 2, 05 - 1,97 (m, 2H) , 1,82 - 1,71 (m, 2H) . Seis protões permutáveis nao observados.
Exemplo 61
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(4-cloro-3-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Ácido 5-(carboximetil)-2-clorobenzóico
O
Foi adicionado hidróxido de potássio (0,969 g) em água (10 mL) a uma solução de ácido 2-cloro-5-(cianometil)benzóico (1,25 g) em etanol (10 mL) e a mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 2,25 horas, em seguida deixada arrefecer. A mistura foi concentrada in vacuo para remover o etanol e em 415 seguida diluída com água e lavada duas vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram rejeitadas, enquanto a fase aquosa foi acidificada até pH 1 com ácido clorídrico concentrado e extraída duas vezes com acetato de etilo. Os extractos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma castanha. Rendimento 1,38 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 12,93 (s 1, 2H) , 7,69 (d J = 2,1 Hz, 1H) , 7,48 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,42 (dd, J = 8,3 2,2 Hz, 1H), 3, 66 (s, 2H). b) 2-(4-Cloro-3-(hidroximetil)fenil)etanol
OH
HO
Foi adicionada, em porções ao longo de 5 minutos, uma solução de complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 6,50 mL) a uma solução de ácido 5-(carboximetil)-2-clorobenzóico (exemplo 61, passo a) (1,37 g) em THF seco (20 mL) à temperatura ambiente. A solução efervescente resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas, em seguida aquecida até refluxo durante 1 hora. A mistura arrefecida foi desactivada pela adição de metanol em porções (5 mL) ao longo de 5 minutos. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e em seguida purificada por cromatografia flash sobre sílica eluída com 5% de metanol em diclorometano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,933 g. 416 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,36 (d, J = 2, 1 Hz, 1H) , 7,30 (d, J = 7,9 Hz , ih: ), 7,11 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H) , 4, 77 (s, 2H) , 3,87 (t, J = 6,5 Hz , 2H) , 2,86 (t, J = 6,5 Hz, 2H) . Dois protões permutáveis nao observados. c) 2-Cloro-5-(2-hidroxietil)benzaldeído
Foi adicionado dióxido de manganês (IV) (1,00 g) a uma solução de 2-(4-cloro-3-(hidroximetil)fenil)etanol (exemplo 61, passo b) (0,200 g) em DCM (5 mL) , e a suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi então filtrada através de Celite, lavando bem o resíduo com DCM. O filtrado e lavagens foram concentrados in vacuo para proporcionar 0 Rendimento 0,197 composto g. em subepígrafe como um óleo incolor. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDCI3) δ 10,47(s, 1H) , 7, 80(d, J = 2,1 Hz, 1H) , 7, 42(d, J = 2,1 Hz, 1H) , 7,41 (s, 1H) , 3,89 (t 1, J = 5,9 Hz, 2H), 2,90 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 1, 42 (s 1, 1H) . 417 d) (9-(2-Cloro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
HO
Uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,294 g) em NMP (2 mL) foi tratada com ácido acético (0,039 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-cloro-5-(2-hidroxietil)benzaldeido (exemplo 61, passo c) (0,189 g) em NMP (3 mL) , a solução resultante foi agitada durante 1 hora e foi então tratada com triacetoxiboro- hidreto de sódio (0,217 g). A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, em seguida vertida para bicarbonato de sódio saturado e extraída duas vezes com acetato de etilo. Os extractos combinados foram lavados três vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida secos sobre sulfato de magnésio anidro e purificados por cromatografia flash sobre sílica eluído com trietilamina:metanol:diclorometano 1:2:97 para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma incolor. Rendimento 0,238 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,91 (s, 1H), 7,29 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,09 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1H), 4,29 (t, J = 5,1 Hz, 1H) , 3, 70 - 3,59 (m, 8H) , 3,51 (s, 2H) , 3,32 (septeto, J = 6,9 Hz, 1H) , 2,7 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,45 - 2,29 (m, 4H) , 1, 75 - 1,66 (m, 2H) , 1,60 - 1,51 (m,2H), 1,36 (d, J = 6,7 Hz, 6H). 418 e) 2-(4-Cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido
Uma solução de (9-(2-cloro-5-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 61, passo d) (0,230 g) em DCM (5 mL) foi arrefecida em gelo-água, tratada com ácido trifluoroacético (0,074 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,313 g) , em seguida a mistura foi retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente durante 40 minutos. A solução foi diluída com solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 minutos. A mistura foi então extraída duas vezes com acetato de etilo, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificadas com ácido acético (0,1 mL) , secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma espuma amarela em bruto. Rendimento 0,274 g. m/z 476 (M+H)+ (APCI) 419 f) Ditrifluoroacetato de (Λ)-7-(2-(4-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de cloridrato de (J?)-7-(2-amino-l-hidroxietil) -4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,225 g) em metanol (3 mL) foi tratada com ácido acético (0,029 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-(4-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeido (exemplo 61, passo e) (0,274 g) em metanol (4 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,051 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 140 minutos, antes de ser tratada com mais cianoboro-hidreto de sódio (0,055 g) . A mistura foi então agitada de um dia para o outro. Na manhã seguinte, a mistura foi concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de metanol (1,5 mL), acetonitrilo (1,5 mL) e água (1,5 mL) e purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo 420 para dar um resíduo incolor. 0 resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o qual foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,062 g. m/z 686 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ(4 00 MHz, Dg- -DMSO, 90 O C) δ 7, 93 (s, 1H) , 7, 52 7, 43 (m, 2H ) , 7 , 35 - 7,26 (m , 1H) r 6, 93 (d, , J = i 3,5 Hz, 1H 6, 77 (d, J = 8,5 Hz , 1H ), 4 co hO (dd, j = 7,8 , 5,5 Hz, ih; i , 3, , 76 3, 60 (m, 6H) , 3, 36 - 3, , 16 (m, 3H) , 3 ,15 - 2,83 (m, 8H) , 2, 02 1, 84 (m, 2H) , 1, 80 - 1, 63 (m, 2H) , 1, 35 (d , J = 6,9 Hz, 6H) metileno (dois protões) muito largo e seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 62
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-((5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)naftalen-1-il)metilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
421 a) (9-((5-(Bromometil)naftalen-l-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionada trietilamina (0,185 mL) a uma suspensão de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,225 g) em acetonitrilo (5 mL) para dar uma solução incolor que foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, em seguida concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em NMP (5 mL) e tratado com mais trietilamina (0,111 mL) . Entretanto, uma suspensão de 1,5-bis(bromometil)naftaleno (0,500 g) em acetonitrilo (5 mL) e NMP (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, em seguida concentrada in vacuo para remover o acetonitrilo para dar uma solução. A solução de amina anterior foi então adicionada gota a gota ao longo de 35 minutos, terminando a adição com mais NMP (1 mL) . A solução resultante foi agitada durante 75 minutos, em seguida vertida para água e extraída três vezes com éter dietílico. Os extractos combinados foram lavados três vezes com água e uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida secos sobre sulfato de magnésio anidro e purificados por cromatografia flash sobre sílica eluído com trietilamina:diclorometano:acetato de etilo (1:49:50) para proporcionar o composto em subepígrafe como uma espuma branca. Rendimento 0,132 g. m/z 542/544 (M+H)+ (APCI) 422 b) Ditrifluoroacetato de (R)-4-Hidroxi-7-(l-hidroxi-2-((5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)naftalen-1-il)metilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionada trietilamina (0,16 mL) a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]- tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,188 g) em metanol (5 mL) para dar uma suspensão, o qual foi concentrada in vacuo e redissolvida em NMP (4 mL) . Foi adicionada mais trietilamina (0,16 mL) , em conjunto com uma solução de (9-( (5-(bromometil)naftalen-l-il)metil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 62, passo a) (0,126 g) em NMP (3 mL), adicionada gota a gota ao longo de 30 minutos, terminando a adição com mais NMP (1 mL) . A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução foi então filtrada, acidificada com ácido trifluoroacético (0,27 mL) e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas uma vez de acetonitrilo e duas vezes de metanol. O resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o qual foi removido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente 423 para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido amarelo pálido. Rendimento 0,056 g. m/z 688 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,42 (d, J = 8,2 Hz, \—1 8,31 (d 1 ., J = 8, 4 Hz, 1H) , 7, 93 (s, 1H) , 7,87 - 7,61 (m, 4H) , 6, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6, 76 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5, 00 - 4, 94 (m, 1H), 4,75 (dd, J = 23,6, 14,1 Hz, 2H) , 3,80 - 3,56 (m, 6H) , 3, 45 - 2, 99 (m, 9H), 2,08 - 1,87 (m, 2H) , 1,81 - 1,58 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Seis protões permutáveis não observados
Exemplo 63
Ditrifluoroacetato de (R) -7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5- metiltiofen-2-ilsulfonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
424 a) 2-(3-Fluoro-5-((4-(5-metiltiofen-2-ilsulfonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)etanol
°'Ί>-
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de cloreto de 5-metiltiofeno-2-sulfonilo (0,15 g) em DCM (3 mL) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluoro-fenil) etanol (exemplo 55, passo c) (0,21 g) e N-etil-N-isopropilpropan-2-amina (0,14 mL) em DCM (20 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 1 h e o solvente evaporado. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (50 mL) . As camadas foram separadas e a aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etilo:iso-hexano:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,21 g. RMN de (400 MHz , d6 -DMSO r 90 °C) δ 7,46 (d, J = = 3,6 Hz 1H ) , 7, 02 (dd, J = 3,6, 1,0 Hz r ih; ) , 6,97 (s, 1H ) , 6, , 94 (s, 1H) 6, 91 (s, 1H) , 4,64 (t, J = = 5 , i H 2 s, 1H), 3,73 - - 3, 67 (m, 2H) 3, 63 - 3, 57 (m, 2H) , 3, 44 (s, 2H) , r 2 2,88 - 2,83 (m, 2H) , 2, 74 2, 69 (m, 4H), 2 , 53 (s, 3H), 2, 44 - 2, 35 (m, 2H), 2,3! L - 2,22 (m 2H ) , 1,80 - 1,72 (m( , 2H) , 1, 60 - 1, 51 (m, 2H) 425 b) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5-metiltiofen-2-ilsulfonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado TFA (0,033 mL) a uma solução de 2-(3-fluoro-5-((4-(5-metiltiofen-2-ilsulfonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]— undecan-9-il)metil)fenil)etanol (exemplo 63, passo a) (0,2 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,27 g) . A solução amarela resultante foi deixada aguecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aguosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL), foram então adicionados ácido acético (0,024 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,17 g) e a mistura agitada 426 durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,04 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™. Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,7 g. m/z 677 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (4 0 0 MHz, D6 -DMSO, 90 °C) δ 7,43 (d, J II GO Hz, 1H) , • 7,30 7,1 6 (m , 3h; ), 7,00 - 6,96 (m, 1H), 6, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H ) , 6, 78 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4,92 (dd, J = 7,9, 5,4 Hz, 1H), 4, ,29 (s, 2Η) , 3,79 - 3,71 (m, 2H), 3,32 - 3,23 (m, 2H) # . 3,17 - 2, 93 (m. 10H) , 2,85 (s, 2H) , 2,53 (s, 3H) , 2, 13 - 2,02 (m, 2H) , 1,90 - 1, 74 (m, 2H). Seis protoes permutáveis não observados. 427
Exemplo 64
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(2—(3— ((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9- il)metil)fenoxi)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(3-(2,2-Dietoxietoxi)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado, gota a gota, cloreto de metanossulfonilo (0,110 mL) a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de (3-(2,2-dietoxietoxi)fenil)metanol (exemplo 38, passo a) (0,307 g) e trietilamina (0,196 mL) em DCM (30 mL). A mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura foi lavada com água e a camada orgânica foi seca sobre sulfato de
sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em acetonitrilo (30 mL) e tratado com 428 trietilamina (1 mL) seguida de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il) (l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-metanona (exemplo 22, passo b) (0,400 g). A mistura foi agitada a 20 °C durante 2 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,360 g. m/z 532 (M+H)+(APCI) b) 2-(3-((4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenoxi)acetaldeído
Uma solução de (9-(3-(2,2-dietoxietoxi)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 64, passo a) (0,36 g) em ácido acético (20 mL) foi tratada com água (20 mL) e a mistura reaccional em seguida aquecida a 65 °C durante 18 horas sob azoto. Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo foi submetido a 429 evaporaçao azeotrópica com tolueno para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,31 g. Utilizado directamente. c) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenoxi)etilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de 2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenoxi)acetaldeído (exemplo 64, passo b) (0,31 g) em metanol (10 mL) foi tratada com cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,267 g) seguida de ácido acético (0,039 mL) e a mistura arrefecida num banho de gelo. Foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,085 g) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi 430 purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,2 g. m/z 668 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, d6-dmso, vo o o O δ 11, 27 (s , 1H) r 7,9 (S, 1H) , 7,39 (t, J = 8,0 Hz, 1H) , 7, 16 - 7, 13 (m, 2H) f 7, 09 7, 05 (m, 1H) , 6, 94 (d, J = 8,5 Hs 2, 1H) t 6, 78 (d, J = = 8 !,2 Hz 1H) , 4, 98 ! - 4 , 93 (m , 1H) , 4, 36 - 4, 28 (m, , 4H ) , 3, 70 (s r 4H) 3,65 (s, 2H) , 3,47 - 3,42 (m, 2H), 3,34 - 3,26 (m, 1H) t 3, 23 3,05 (m, 6H) , 2, 09 - 1,98 (m, 2H) , 1,84 - 1 , 71 (m, 2H), 1, 35 (d J = 7,1 Hz, 6H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 65
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)feniltio)etilamino)e-til)benz[d]tiazol-2(3H)-ona
431 a) Ácido 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etiltio)benzóico
Foi adicionado, gota a gota, (2-bromoetoxi)(terc-butil)dimetilsilano (1,48 mL) a uma suspensão de ácido 3-mercaptobenzóico (1,07 g) e carbonato de potássio (1,91 g) em DMF (15 mL) . A suspensão resultante foi agitada durante 2 h. A reacção foi cuidadosamente acidificada por adição, gota a gota, de solução aquosa de HC1 (2 M, 10 mL) e vertida para água (100 mL) . A aquosa resultante foi extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados para dar o composto em subepigrafe como um óleo transparente. Rendimento 2,8 g. RMN de (400 MHz, D6- -DMSO) δ 13,11 (s , 1H) , <\ co (t, J = N 1-1 1H) , 7, 79 - 7 , 74 (m, 1H ) , 7,66 - 7, 61 (m, 1H) , 7, 47 (t, J = 7, 7 ' Hz, 1H) , 3 , 82 (t, J = = 6,4 Hz r 2H) , 3,19 (t, J = 6,4 Hz, 2H) , 0,87 (s, 9H) , 0,05 (s, 6H) . b) 2-(3-(Hidroximetil)feniltio)etanol
Foi adicionado, gota a gota, complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 17,3 mL) a uma solução gelada de ácido 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etiltio)benzóico (exemplo 65, 432 passo a) (2,16 g) em THF (50 mL) . A reacção foi deixada aquecer até à TA, em seguida aquecida a refluxo durante 2 h. A reacção foi arrefecida num banho de gelo e foi adicionada, gota a gota, solução aquosa de HC1 (2 M, 50 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. A reacção foi concentrada até metade do seu volume original e a aquosa resultante extraída com DCM (3 x 100 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 até 100% de acetato de etilo. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,77 g. RMN de (400 MHz, Dg-DMSO) δ 7, 29 - 7, 23 (m, 2H) , 7,21 -7,17 (m, 1H), 7,13 - 7,09 (m, 1H) , 5,20 (t, J = 5,8 Hz, 1H) , 4, 92 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 5,9 Hz, 2H) , 3,59 - 3,53 (m, 2H), 3,02 (t, J = 6,9 Hz, 2H) . c) 3-(2-Hidroxietiltio)benzaldeido
Foi adicionado dióxido de manganês (1,36 g) a uma solução de 2-(3-(hidroximetil)feniltio)etanol (exemplo 65, passo b) (0,29 g) em DCM (10 mL) . A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 4 h, arrefecida e filtrada através de Celite. A almofada do filtro foi lavada com DCM (3 x 20 mL) . O filtrado e lavagem foram combinados e evaporados para dar o composto em 433 subepígrafe Rendimento 0,2 g. como uma goma amarela. RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 9,99 (s, 1H) , 7,84 (s, 1H) , 7,71- 7,64 (m, 2H) , 7,54 (t, J = 7,7 Hz, 1H) , 4,99 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,64 - 3,57 (m, 2H), 3,13 (t, J = 6,7 Hz, 2H). d) (9-(3-(2-hidroxietiltio)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado 3-(2-hidroxietiltio)benzaldeido (exemplo 65, passo c) (0,16 g) a uma solução de trif luoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il) (l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,25 g) e ácido acético (0, 046 mL) em iV-met il-2-pirrolidinona (5 mL) e a mistura resultante foi agitada durante lhe arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,26 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi vertida para uma mistura de solução de bicarbonato de sódio (20 mL) e água (80 mL) . A fase aquosa foi extraída com éter (3 x 100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas 434 para dar o composto em subepígrafe como um Rendimento 0,22 g. óleo amarelo. RMN de (400 MHz, r ϋβ- -DMSO, 7, 28 - 7, , 18 (m, 3H) , 7, 12 - - 7, 05 3, 70 - 3, , 54 (m, 8H) , 3, 47 - - 3,39 3, 06 - 2, , 96 (m, 2H) , 2, 42 - - 2,25 1, 59 - 1, 50 (m, 2H) , i—1 1 i—1 1—1 32 (m, 90 O 0 01 > ÍD 1 7, 83 (m, 1H) (m, 1H), 4,61 - 4, 53 (m, 1H) (m, 2H), 3,37 - 3,27 (m, 1H) (m, 4H) , 1,75 - 1,65 (m, 2H) 6H) . e) Ditrifluoroacetato de (J?)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)feniltio)etilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,033 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietiltio)benzil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 65, passo d) (0,22 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,29 g) · A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada 435 e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,026 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,15 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,044 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,54 g. m/z 684 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, Οβ- -DMSO, 90 °C) 8 7, 94 (s, 1H ) , 7,54 - 7,34 (m, 4H), 6, 91 (d, ό = 8,2 Hz, 1H) 1 t 6, 76 (d, J 8,2 Hz, i—1 4,88 (dd, J = 8 , 7, 4,6 Hz, 1 H) , 4, 24 (s, 2H) , 3, : - 3,61 (m, 6H), 3,38 - - 2,95 (m, 11H), 2, 08 - - 1, . 94 (m, 2H) , 1, 82 - 1,68 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Seis protoes permutáveis nao observados. 436
Exemplo 66
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi—2—(3-((4-(4-isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
a) 4-(4-Isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado HATU (0,924 g) numa porção a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de ácido 4-isopropiltiazole-2-carboxílico (0,32 g) e l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo, 12, passo b) (0,547 g) e trietilamina (0,781 mL) em DMF (12 mL). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aguosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre 437 sílica utilizando 30% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,54 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7, 50 (s, 1H) , 3, 77 3,72 (m, 2H) , 3,52 - 3,45 (m, 2H) , 3,21 - 3,13 (m, 2H) , 3, 12 3,04 (m, 1H) , 3,00 (s, 4H) , 1, 74 - 1,67 (m, 2H) , 1,52 - 1,43 (m 2H), 1,39 (s, 9H), 1,26 (d, J = 6,8 Hz, 6H). b) (4-Isopropiltiazol-2-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-4-i1)metanona
Uma solução de 4-(4-isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro [ 5.5] undecano-9-carboxilato de te_rc-butilo (exemplo 66, passo a) (0,54 g) em DCM (20 mL) foi tratado com ácido trifluoroacético (5 mL) e a mistura reaccional deixada em repouso a 20 °C durante 20 minutos. Foi adicionado tolueno (40 mL) e os solventes removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,56 g. m/z 310 (M+H)+ (APCI) 438 c) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-isopropiltiazol-2-il)metanona
Uma solução de (4-isopropiltiazol-2-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 66, passo b) (0,28 g) e 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,171 g) em acetonitrilo (20 mL) foi tratada com trietilamina (0,276 mL) e a mistura reaccional agitada durante 2 horas a 20 °C. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,25 g. m/z 444 (M+H)+(APCI) 439 d) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4—(4—isopropiltiazole—2—carbonil)—1—oxa—4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)ben-zo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-isopropiltiazol-2-il)metanona (exemplo 66, passo c) (0,25 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,043 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,311 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,032 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo [d]tiazol-2 (3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,222 g) e ácido acético (0,032 mL) em metanol (20 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,071 g). O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um 440
volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,18 g m/z 652 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (300 MHz, De-DMSO, 90 °C) δ 11,35 (s, 1H) , 7, 53 (S, 1H), 7, 43 - 7,32 (m, 4 Hz, 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6, 78 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4, 97 - 4, 89 (m, 1H), 4,29 (s, 2H) , 3,76 (s, 2H) , 4, 17 - 3, 30 (m, 4H) , 3,28 - 3,15 (m, 4H), 3,14 - 2,98 (m, 7H), 2,10 - 1,97 (m, 2H), 1,87 - 1, 70 (m, 2H) , 1,26 (d, J = 7,1 Hz, 6H) . Cinco protões permutáveis não observados. 441
Exemplo 67
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro—3—((4—(2—(2,2,2— trifluoroetil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
S a) 3,3,3-Trifluoropropanamida
Uma solução de ácido 3,3,3-trifluoropropanóico (4 g) em éter (150 mL) a 0 °C foi tratado numa porção com pentacloreto de fósforo (6,06 g) . A mistura foi aquecida a refluxo sob azoto durante 2,5 horas. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente. Foi adicionado mais éter (100 mL) e a mistura arrefecida num banho de gelo. Foi borbulhada amónia gasosa através da mistura, mantida sob agitação, durante 30 minutos. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio e acetato de etilo. A camada aquosa foi reextraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente foi removido sob 442 pressão reduzida para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 3,9 g. Utilizado directamente. b) 3,3,3-Trifluoropropanotioamida
Foi adicionado pentassulfureto de fósforo (1,603 g) numa porção a uma solução de 3,3,3-trifluoropropanamida (exemplo 67, passo a) (3,9 g) em MTBE (150 mL) . A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 20 horas. A mistura foi filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 4 g. O produto foi utilizado directamente no passo seguinte. c) 2-(2,2,2-Trifluoroetil)tiazole-4-carboxilato de etilo
S
Uma solução de 3,3,3-trifluoropropanotioamida (exemplo 67, passo b) (4 g) e 3-bromo-2-oxopropanoato de etilo (5,45 g) em THF (120 mL) foi aquecida a refluxo durante 2 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto 443 em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 17% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,9 g. m/z 240 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 8,23 (s, 1H) , 4,45 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 3,94 (q, J = 10,2 Hz, 2H) , 1,42 (t, J = 7,0 Hz, 3H) . d) Ácido 2-(2,2,2-trifluoroetil)tiazole-4-carboxilico
S
Uma mistura de 2-(2,2,2-trifluoroetil)tiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 67, passo c) (0,3 g) em ácido clorídrico concentrado (7 mL) e água (7 mL) foi aquecida a 80 °C durante 5 horas sob azoto. O solvente foi evaporado sob uma corrente de azoto e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (40 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (3 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,23 g. m/z 210 (M-H)“ (APCI) RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 8,36 (s, 1H) , 3,95 (q, J = 10,0 Hz, 2H). Um protão permutável não observado. 444 e) 2,2,2-Trifluoro-l-(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona
Foi adicionado 2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzaldeído (exemplo 48, passo a) (1,05 g) a uma solução de trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-1-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo d) (2,08 g) e ácido acético (0,33 mL) em iV-metil-2-pirrolidinona (10 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 15 min em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,81 g) e a mistura agitada de um dia para o outro. A reacção foi vertida para uma mistura de solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (20 mL) e água (100 mL) . A aguosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL) e solução aguosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 + 5% de trietilamina até acetato de etilo + 5% de trietilamina. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1,9 g. Utilizado imediatamente. 445 f) 2-(3-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol
Foi adicionada solução aquosa de amónia "880" (5 mL) a uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(2-fluoro-3-(2- hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 67, passo e) (1,9 g) em metanol (25 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 90 min e o solvente evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol: amónia "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar uma goma que solidificou em repouso. O sólido branco foi triturado com iso-hexano e seco sobre sulfato de sódio para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 1 g. m/z 309 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMS0) δ 7,24 - 7,15 (m, 2H), 7,06 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 4, , 69 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 3,64 - 3,54 (m, 2H), 3, 53 - 3, 43 (m, 4h; >, 2,74 (t , J = 7,0 Hz, 2H), 2,60 (t, J = 4, 9 Hz, 2H) , 2, . 45 - 2,35 (m, 2H) , 2,34 - 2,24 (m, 2H), 1,83 - 1, 74 (m, 2H) , 1, 47 - 1,36 (m, 2H) . Dois protões obscurecidos pelos picos do solvente e um protão permutável nao observado. 446 g) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(2,2,2-trifluoroetil)tiazol-4-il)metanona
Foi adicionado HATU (0,181 g) numa porção a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de ácido 2-(2,2,2-trifluoroetil)tiazole-4-carboxílico (exemplo 67, passo d) (0,077 g) e 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 67, passo f) (0,113 g) e trietilamina (0,153 mL) em DMF (5 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,180 g. m/z 502 (M+H)+ (APCI) 447 h) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3- ((4- (2-(2,2,2-trifluoroetil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(2,2,2-trifluoroetil)-tiazol-4-il)metanona (exemplo 67, passo g) (0,18 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,028 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,198 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,021 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,141 g) e ácido acético (0,021 mL) em metanol (15,0 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,045 g) . O banho de 448 arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. 0 solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL). A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. 0 produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,091 g. m/z 710 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (4 : 0 0 MHz, Dg -DMSO, 90 °C) δ 8,15 (s, 1H) , 7, 52 - 7,40 (m, 2H) , 7( . 25 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 6,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 8 , 2 Hz r 1H) , 4 , 94 - 4, 89 (m, 1H), 4 ,29 (s, 2H) , 4,20 (q, J 11 , 0 Hz r 2H), 3, 74 - 3,61 - (m, 6 H), 3,28 - 3,02 (m, 10H) , 2,06- i, 96 (m, 2H ), 1,85 - 1, 72 (m, 2H) . Seis protões permutáveis nao observados. 449
Exemplo 68
Ditrifluoroacetato de (J?) -7- (2- (3- ((4- (benzo [b] tiofeno-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Benzo[b]tiofen-5-il(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)ben-zil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
N
Foi adicionado HATU (0,181 g) numa porção a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de ácido benzo[b]tiofeno-5-carboxílico (0,065 g) e 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 67, passo f) (0,113 g) e trietilamina (0,153 mL) em DMF (5 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com 450 solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,160 g. m/z 469 (M+H)+ (APCI) b) Ditrifluoroacetato de (R) -7-(2-(3-((4-(benzo[b]tiofeno-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de benzo[b]tiofen-5-il(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 68, passo a) (0,160 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,026 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,188 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados.
Foi adicionado ácido acético (0,02 mL) a esta solução e o 451 solvente removido em seguida sob pressão reduzida. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]- tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,135 g) e ácido acético (0,02 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,043 mg). O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. 0 solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™,
Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,116 g. m/z 677 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO; 90 °C) δ 11,28 (s, 1H), 8,04 (d r J = 8,2 Hz, 1H) , 7,91 (s , 1H ), 7,80 (d, J = 5,4 Hz, 1H) , 7, 52 - 7 ,42 (m, 3H) ,738-7 , 35 (m, 1H) , 7,25 (t , J = 7,' 7 Hz, 1H ) , 6,9' 1 (d , J = 8, 5 Hz, 1H), 6, 7 8 (t, J = = 4,1 Hz , 1H), 4, 95 - 4, 90 (m, 1H) , 4,35 (s, 2H), 3,69 (t, J = 5, 0 Hz, 2H), 3, 53 - 3, 44 (m, 4H) , 3,28 - - 3,19 (m, 4H) , , 3,16 - 3,04 (m , 6H) , 2, 11 - 2, 03 (m, 2H) , , 1,80- 1,68 (m, 2H) . Cinco protões > permutáveií 3 não observados. 452
Exemplo 69
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(2- isopropil-5-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-Isopropil-5-metiltiazole-4-carboxilato de metilo
Uma mistura de 3-bromo-2-oxobutanoato de metilo (4,6 g) e 2-met ilpropanot ioamida (2,5 g) em THF (100 mL) foi aquecida a refluxo durante 18 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O residuo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio e a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O residuo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 17% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,7 g. 453 m/z 200 (M+H)+ (APCI) b) Ácido 2-isopropil-5-metiltiazole-4-carboxílico
Foi adicionada uma solução de hidróxido de litio mono-hidratado (02 g) em água (3 mL) a uma solução de 2-isopropil-5-metiltiazole-4-carboxilato de metilo (exemplo 69, passo a) (0,5 g) em metanol (7 mL) e a mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 3 horas. O metanol foi removido sob pressão reduzida e a solução aquosa remanescente foi lavada com acetato de etilo. A camada aquosa foi acidificada por adição gota a gota de HC1 aquoso concentrado e esta mistura foi extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A goma resultante cristalizou em repouso. A trituração com uma mistura de iso-hexano (4 mL) e éter (1 mL) proporcionou o composto em subepígrafe. Rendimento 0,160 g. RMN de (400 MHz, cdci3: ) δ 3,29 - 3,18 (m, 1H), 2,78 (s, 3H), 1,38 observado. (d, J = 7, 1 Hz, 6H) . Um protão permutável não 454 c) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropil-5-metiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado HATU (0,175 g) numa porção a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de ácido 2-isopropil-5-metiltiazole-4-carboxílico (exemplo 69, passo b) (0,066 mg) e 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)-etanol (exemplo 67, passo f) (0,109 g) e trietilamina (0,148 mL) em DMF (5 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,155 mg. m/z 476 (M+H)+ (APCI) 455 d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(2- isopropil-5-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropil-5-metiltiazol-4-il)metanona (exemplo 69, passo c) (0,155 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,025 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,180 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,019 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)4-hidroxibenzo[d]- tiazol-2(3H)- ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,128 g) e ácido acético (0,019 mL) em metanol (15,00 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (41 mg). O banho de arrefecimento foi 456 retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,12 g. m/z 684 (M+H)+ (APCI) RMN de 1ti (400 MHz, D6- -DMSO , 90 °C) δ 11, 28 (s, 1H) , 7, 50 - 7, 39 (m, 2H) , 7, 28 - 7, 22 (m, 1H) , 6,93 (d, J = 24, 1 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 26,1 H z, 1H), 4, 93 ; - 4 , 88 (m, 1H) , 4, 26 (s, 2H) , 3, 67 (s, 2H) , 3, 58 - 3, 43 (m, 4H) , 3,26 - 3 , 00 (m, 11H) , 2,43 (s r 3H) , 2,03 - 1, 94 (m, 2H) , 1,81 - 1, 65 (m, 2H) , 1,30 (d, J = 6,8 Hz, 6H). Cinco protoes permutáveis nao observados. 457
Exemplo 70
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3- ((4- (5- isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-3-il)metanona
Foi adicionado HATU (0,183 g) numa porção a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de ácido 5-isopropiltiofeno-3-carboxílico (0,063 g) e 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 67, passo f) (0,114 g) e trietilamina (0,155 mL) em DMF (5 mL) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre 458 sílica utilizando 2,5% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,100 g. m/z 461 (M+H)+ (APCI) b) Ditrifluoroacetato de (R) —7—2—(2—fluoro—3—((4—(5— isopropiltiofeno—3—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-3-il)metanona (exemplo 70, passo a) (0,100 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,017 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,120 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. 459
Foi adicionado ácido acético (0,012 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]- tiazol-2(3H)- ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,086 g) e ácido acético (0,012 mL) em metanol (15,00 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0, 027 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,052 mg. m/z 669 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,51 - 7,46 (m, 2H) , 7,43 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,25 (t, J = 7,7 Hz, 1H) , 6,95 - 6,89 (m, 2H), 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4, 95 - 4, 90 (m, 1H), 4,30 (s, 2H) , 3,69 - 3,65 (m, 2H) , 3,55 - 3,51 (m, 2H) , 3,45 (s, 2H) , 3,24 (t, J = 8,1 Hz, 2H) , 3,20 - 3,03 (m, 9H) , 2,05 - 1, 97 (m, 2H) , 1, 79 - 1,69 (m, 2H), 128 (d, J = 6,8 Hz, 6H) . Seis protões permutáveis não observados. 460
Exemplo 71
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(2-(pentan-3-il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 2-Etilbutanamida
Foi cuidadosamente adicionado, gota a gota, cloreto de 2-etilbutanoílo (5 g) a amónia aquosa a 35% gelada (50 mL) e a suspensão resultante foi agitada durante 1 h. A mistura reaccional foi extraída com DCM (3 x 100 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 3,4 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMS0) δ 7,23 (s, 1H) , 6,71 (s, 1H) , 1,98 - 1,88 (m, 1H) , 1,50 - 1,27 (m, 4H) , 0,81 (t, J = 7,4 Hz 6H) . 461 b) 2-Etilbutanotioamida s
"vC
Foi adicionado pentassulfureto de fósforo (1,54 g) a uma solução de 2-etilbutanamida (exemplo 71, passo a) (3,4 g) em MTBE (300 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 3 h. A reacção foi filtrada através de Celite e a almofada do filtro lavada com MTBE (100 mL). O filtrado e lavagens combinados foram evaporados para dar o composto em subepigrafe como um óleo amarelo. Rendimento 3,8 g. Utilizado directamente. c) 2-(Pentan-3-il)tiazole-4-carboxilato de etilo
Foi adicionado, gota a gota, 3-bromo-2-oxopropanoato de etilo (2,5 mL) a uma solução de 2-etilbutanotioamida (exemplo 71, passo b) (3,8 g) em etanol (100 mL) e a mistura resultante aquecida a refluxo de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o residuo foi partilhado entre acetato de etilo (100 mL) e solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (100 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa extraida com acetato de etilo (2 x 100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O residuo foi purificado por cromatografia sobre silica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 20:1. As 462 fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 2,8 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6 -DMSO) δ 8,42 (s, 1H), 4,29 (q, J = 7,1 Hz, 2H) , 2,99 - 2,89 (m, 1H) , 1,82 - 1,58 (m, 4H) , 1,30 (t, J = 7, 0 Hz, 3H) , 0 ,81 (t, J = 7, 4 Hz, 6H) φ d) Ácido 2-(pentan-3-il)tiazole-4-carboxílico
Foi adicionado hidróxido de litio mono-hidrato (2,07 g) a uma solução de 2-(pentan-3-il)tiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 71, passo c) (2,8 g) numa mistura de THF (80 mL) e água (20 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. A reacção foi acidificada com ácido clorídrico concentrado (6 mL) e os voláteis evaporados. A mistura aquosa resultante foi saturada com cloreto de sódio e extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 2,3 g RMN de XH (300 MHz, D6-DMSO) δ 12,91 (s, 1H) , 8,34 (s, 1H), 2,98 - 2, 86 (m, 1H) , 1, 84 - 1,56 (m, 4H) , 0,81 (t, J = 7,3 Hz, 6H) . 463 e) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(pentan-3-il)tiazol-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, N', N'-tetrametilurónio (0,2 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 67, passo f) (0,13 g) , ácido 2-(pentan-3-il)tiazole-4-carboxílico (exemplo 71, passo d)
(0,081 g) e trietilamina (0,23 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C. A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e em seguida evaporada. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,25 g. m/z 490 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,93 (s, 1H), 7,22 - 7,14 (m, 2H) , 7, 03 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,39 - 4,32 (m, 1H) , 464 3,69 - 3,58 (m, 6H). 3,52 - 3,46 (m, 2H), 2,97 - 2,90 (m, 1H) 2, 75 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,70 (s, 2H), 2,46 - 2,29 (m, 4H) 1, 82 - 1,66 (m, 6H), 1,58 - 1,47 (m, 2H), 0,85 (t, J = 7,3 Hz 6Η) . f) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(2—fluoro-3-((4-(2- (pentan—3—il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,031 mL) a uma solução de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(pentan-3-il)tiazol-4-il)metanona (exemplo 71, passo e) (0,2 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,25 g) . A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , acidificadas com algumas gotas de 465 filtradas e ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, evaporadas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL), foram então adicionados ácido acético (0,023 mL) e cloridrato de (R) -7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,13 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0, 038 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,17 g. m/z 698 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, r ϋβ -DMSO, 90 °C) δ 11,26 (s, 1H) , 8,01 - 7, 83 (m, 1H) , 7,56 - 7, • 38 (m, 2H) , 7,30 - 7, 19 (m, 1H) , 7, 01 - 6, 89 (m, 1H) , 6,83 - 6 , 71 (m, 1H) , 4, 99 - 4,88 (m, . 1H, 4,38 - 4, 23 (m, 2H) , 3, 78 - 3, 57 (m, 6H) , 3,33 - 2, 86 (m, 11H) , 2, 10 - 1, 97 (m, 2H) , 1, 87 - 1 ,61 (m, 6H) , 0, 91 - 0, 76 (m , 6H) . Cinco protões permutáveis nao observados. 466
Exemplo 72
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(2- isobutiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazapiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 3-Metilbutanamida
Foi cuidadosamente adicionado, gota a gota, cloreto de 3-metilbutanoílo (10 mL) a amónia aquosa a 35% gelada (50 mL) e a suspensão resultante foi agitada durante 1 h. A mistura reaccional foi extraida com DCM (3 x 100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepigrafe como um sólido branco. Rendimento 5,6 g. RMN de ΧΗ (300 MHz, D6-DMS0) δ 7,20 (s, 1H) , 6,67 (s, 1H) , 1,99 - 1,88 (m, 3H), 0,87 (d, J = 6,4 Hz, 6H). 467 b) 3-Metilbutanotioamida
H2N
Foi adicionado pentassulfureto de fósforo (2,9 g) a uma suspensão de 3-metilbutanamida (exemplo 72, passo a) (5,6 g) em MTBE (300 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 3 h. A reacção foi filtrada através de Celite e a almofada do filtro lavada com MTBE (100 mL). O filtrado e lavagens combinadas foram evaporadas para dar o composto em subepigrafe como um óleo amarelo. Rendimento 5,6 g. RMN de ΧΗ (300 MHz, D6-DMSO) δ 9,32 (s, 1H) , 9,10 (s, 1H) , 2,33 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 2,22 - 2,07 (m, 1H), 0,88 (d, J = 6,4 Hz, 6H) . c) 2-Isobutiltiazole-4-carboxilato de etilo
A uma solução de 3-metilbutanotioamida (exemplo 72, passo b) (5,6 g) em etanol (100 mL) foi adicionado 3-bromo-2- oxopropanoato de etilo (6, 7 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro à TA, em seguida aquecida a refluxo durante 5 h. O solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (250 mL) e solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (100 mL) . As camadas foram separadas e a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de 468 cloreto de sódio (100 mL), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 20:1 até 10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 5,2 g. RMN de TH ( 400 MHz, D6-DMSO) δ 8,39 (s, 1H) , 4,29 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,88 (d, J = 7,2 Hz, 2H) , 2,10 - 1,97 (m, 1H), 1,30 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,93 (d, J = 6,7 Hz, 6H). d) Ácido 2-isobutiltiazole-4-carboxílico
HO
Foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidrato (4,1 g) a uma solução de 2-isobutiltiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 72, passo c) (5,2 g) numa mistura de THF (80 mL) e água (20 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. A reacção foi cuidadosamente acidificada com ácido clorídrico concentrado (10 mL) e os voláteis evaporados. A mistura aquosa resultante foi vertida para solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 3,8 g. 469 RMN de ΤΗ (300 MHz, D6-DMSO) δ 12,90 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 2,87 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 2,11 - 1,96 (m, 1H) , 0,94 (d, J = 6,7 Hz, 6H). e) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il(2-isobutiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N, N, N', N'-tetrametilurónio (0,2 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 67, passo f) (0,13 g) , ácido 2-isobutiltiazole-4-carboxílico (exemplo 72, passo d) (0,08 g) e trietilamina (0,23 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C e a solução amarela resultante deixada aquecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e em seguida evaporada. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,24 g. 470 m/z 476 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7, 90 (s, 1H) t 7, 22- 7, 14 (m, , 2H) , 7,03 (t, J = 7,4 Hz, 18) , 4,35 (t, J = 4, 7 Hz, i—1 3, 68-3 ,57 (m, 6H), 3,52 - 3,42 (m, 2H) , 2, 89 ' (d, J = 6 ,9 Hz, 2H), . 2,76 (t , J = 7, 5 Hz, 2H) , 2, 70 (s, 2H) , 2 ,45 - 2, 28 (m, 4H) , 2 ,12 - 2,03 (m, 1H), 1, ,74 - 1,65 (m, 2H) , 1 ,57 - 1, 48 (m, 2H), 0, 96 (d, J = 6,7 Hz, 6H) f) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(2-isobutiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,031 mL) a uma solução de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isobutiltiazol-4-il)metanona (exemplo 72, passo e) (0,19 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,25 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi 471 vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,023 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,13 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,038 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol: amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,10 g. m/z 684 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6- -DMSO, 90 °C) δ 11,39 - 11, 19 (m, 1H) , 7, 94 (s, 1H), 7,53 - 7, 40 (m, 2H) , 7,25 (t, J = 7 , 7 Hz, 1H) , 6, 93 (d, J = 8,2 Hz , 1H) , 6, 77 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H) , . 4 ,92 (dd, J = 8 ,5, 4, 9 Hz, ih; ), 4,33 - 4,26 (rr i, 2H), 3, 72 - 3, 59 (m, 6H) , 3, 28 - 3 ,0 (m, 10H) , 2,88 (d, J = 6 ,9 Hz, 2H) , 2, 11 - 1,95 (m, 3H ) , 1,8 4 - 1,69 (m, 2H ) , o, 95 (d, J = 6,7 Hz, 6H) 1 . Cinco protões permutáveis nao observados. 472
Exemplo 73
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(5- isopropiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de 0-7-azabenzotriazol-l-il) -N, N, NN '-tetrametilurónio (0,2 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 67, passo f) (0,13 g) , ácido 5-isopropiltiofeno-2-carboxilico (0,07 g) e trietilamina (0,23 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C. A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente 473 evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,23 g. m/z 461 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,22 - 7,15 (m, 3H) , 7, 03 (t , J = 7,4 Hz, 1H), 6, , 83 (d, J = 3, 6 Hz, 1H), 4, 35 (t, J = 5, 0 Hz, 1H), 3,69 - 3,58 (m, 6H) , 3,49 (s, 2H), 3, 21 - 3 ,13 (m, 1H) , 2, 76 (t, J = 8,4 Hz, 2H) , 2, .70 (s, 2H), 2,42 - - 2 ,36 (m, 4H) , 1, 75 1,68 (m , 2H) , 1, 56 - 1, 46 (m, 2H), 1, 29 (d, J = 6, 7 Hz, 6H) b) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(5- isopropiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi solução adicionado ácido trifluoroacético (0,031 mL) a uma de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4, 9- 474 diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-2-il)metanona (exemplo 73, passo a) (0,18 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,25 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,023 mL) e cloridrato de (R)-Ί-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,13 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,025 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco.
Rendimento 0,12 g. m/z 669 (M+H)+(APCI) 475 RMN de 1H ( 400 MHz, D6 -DMSO , 90 °C) 11,26 E i—1 co , 7, 54 - 7, 40 (m, 2H) , 7 , 28 - 7,21 (m, 2H) , 6,94 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6, 84 (dd, J = 3, 6, 0,8 Hz, 1H) , 6, 78 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H), 4, 93 (dd, J = 8,5, 4, 9 H z, 1H), 4, 34 (s, 2H) , 3, 73 - 3,64 (m, 4H) , 3, 54 (s, 2H) , 3, 29 - 3,03 (m, 11H), 2 ,07 - - 1, 98 (m, 2H) , 1, 85 - 1, 73 (m, 2h: ) , 1 ,29 (d, J = = 6, 9 Hz, 6H) . Cinco protoes permutáveis não observados.
Exemplo 7 4
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(4- isopropiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 1-(4-Isopropiltiofen-2-il)etanona
Foi adicionado 1-(tiofen-2-il)etanona (5,4 mL) a uma suspensão gelada de cloreto de alumínio (33 g) em clorofórmio 476 seco (100 mL) . Foi então adicionado gota a gota 2-bromopropano (5,2 mL) ao longo de 5 min. A reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A suspensão escura foi cuidadosamente vertida sobre gelo e a mistura agitada durante 10 min. As camadas foram separadas e a fase aquosa extraida com D CM (100 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de hidróxido de sódio (2 M, 200 mL) e água (200 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. 0 resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 2% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo claro. Rendimento 5,4 g. RMN de 2H (400 MHz, CDC13) δ 7,58 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 3,01 - 2,92 (m, 1H), 2,55 (s, 3H) , 1,27 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Um tiofeno protão obscurecido pelo sinal de CDCI3 a ~7,26. b) Ácido 4-isopropiltiofeno-2-carboxílico
HO
Foi cuidadosamente adicionada uma solução de 1-(4-isopropiltiofen-2-il)etanona (exemplo 74, passo a) (1 g) em 1,4-dioxano (10 mL) a uma solução de hidróxido de sódio (1,19 g) 477 em hipoclorito de sódio aquoso (8%, 50 mL) a 60 °C. A mistura resultante foi aquecida até 75 °C e agitada durante 1 h. A reacção foi deixada arrefecer e a fase aquosa lavada com DCM (50 mL). A fase aquosa foi tratada com solução aquosa de bissulfito de sódio (10%, 20 mL) e cuidadosamente acidificada com ácido clorídrico concentrado. A mistura resultante foi extraída com DCM (3 x 50 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar um óleo amarelo. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-95% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e seca sob alto vácuo para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,5 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, D6-DMSO) δ 12,95 (s, 1H) , 7,65 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 7,51 - 7,49 (m, 1H), 2,94 (septeto, J = 6,9 Hz, 1H), 1,20 (d, J = 6,9 Hz, 6H). c) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9— diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-isopropiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il) -N, N, N', Ν’-tetramet ilurónio (0,2 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 67, passo f) (0,13 g) , ácido 4-isopropiltiofeno-2-carboxílico (exemplo 74, passo b) (0,07 g) 478 e trietilamina (0,23 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C. A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , a camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,23 g. m/z 461 (M+H)+(APCI) RMN de 1 H (400 MHz, D6 -DMSO, 90 °C) δ 7,3,0 - 7, 14 (m, 4H) , 7, 05 - 7 , 00 (m, 1H ), 4,35 (s, 1H), 3,68 - - 3,58 (m, 6H) , 3,51- 3, 47 (m, 2H) , 2,98 - 2,92 (m, 1H) , 2,75 (t, J = 7 ,3 Hz, 2H) , 2, 70 (s, 2H) , . 2,41 - 2,34 (m, 4H), 1,75 - 1,68 (m, 2H) , 1 ,56 - 1, 47 (m, 2H) , 1,21 (d, J = 6,9 Hz, 6H). d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(4-isopropiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 479
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,031 mL) a uma solução de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-isopropiltiofen-2-il)metanona (exemplo 74, passo c) (0,18 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,25 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,023 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,13 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0, 025 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 480 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,13 g. m/z 669 (M+H)+ (APCI) RMN de 2H (400 MHz, d6-dmso, 90 °C) δ 11,26 (s, 1H), 7, 53 - 7, 47 (m, 1H ) , 7,47 - 7,41 (m, - 1H) , 7,31 (s, 1H) , 7,29 (s, 1H) , 7, 25 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 6 r 94 (d, J = = 8,5 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 8,2 Hz, 1H ), 4,93 (dd , J = = 8, 3, 4,7 Hz, 1H), 4,35 - 4,31 (m, 2H) , 3, 73 - 3 , 62 (m, 4H) , 3, 54 (s, 2H) , 3,26 - 3, 03 (m, 1 0H) , 2, 94 (septeto, J = 7 Hz, 1H) , 2, 08 - 1, 98 (m, 2H), 1,85 - 1, 71 (m, 2H), í,; 21 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . C linco protões permutáveis não observados.
Exemplo 75
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-cloro-5- ((4- (2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
481 a) Acido 3-(carboximetil)-4-clorobenzóico
OH O
Foi adicionado hidróxido de potássio (1,549 g) em água (15 mL) a uma suspensão de ácido 4-cloro-3-(cianometil)benzóico (2,07 g) em etanol (15 mL) e a solução resultante foi aquecida a refluxo durante 4 horas, em seguida deixada arrefecer. A mistura foi concentrada in vacuo para remover o etanol e em seguida diluída com água e lavada duas vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram rejeitadas, enquanto a fase aquosa foi acidificada até pH 1 com ácido clorídrico concentrado e extraída duas vezes com acetato de etilo. Os extractos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de magnésio anidro e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido castanho pálido. Rendimento 2,06 g. m/z 214 (M+) (EI) b) 2-(2-Cloro-5-(hidroximetil)fenil)etanol
Foi adicionada, em porções ao longo de 3 minutos, uma solução de complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 482 12,0 mL) a uma suspensão de ácido 3-(carboximetil)-4-clorobenzóico (exemplo 75, passo a) (2,06 g) em THE seco (30 mL) à temperatura ambiente. A suspensão densa efervescente resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, em seguida aquecida a refluxo durante 1 hora. A mistura arrefecida foi desactivada pela adição de metanol em porções (10 mL) ao longo de 2 minutos. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e em seguida concentrada sobre sílica e purificada por cromatografia flash sobre sílica eluído com 5% de metanol em diclorometano para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,983 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,35 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,28 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,18 (dd, J = 8,2, 2,1 Hz, 1H) , 4,65 (s, 2H) , 3,89 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , 3,02 (t, J = 6,5 Hz, 2H) . Dois protões permutáveis não observados. c) 4-Cloro-3-(2-hidroxietil)benzaldeido
HO
Foi adicionado dióxido de manganês (IV) (1,00 g) a uma solução de 2-(2-cloro-5-(hidroximetil)fenil)etanol (exemplo 75, passo b) (0,205 g) em DCM (10 mL) , e a suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi então filtrada através de Celite, lavando bem a almofada do filtro com DCM. O filtrado e lavagens foram concentrados in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,159 g. 483 RMN de 1H (400 MHz, CDC13 ) δ 9,97 (s, 1 M, 7,81 (d, J = 2,0, 1Η) , 7,70 (dd, J = 2,0, 8,2, 1H), 7, 53 (t, J = 6,7, 1H) , 3,94 (dd, J = 6,4, 11,6, 2H), 3, 10 (t, J = = 6,6, 21-1), 1,46 (t, J = ! 5,2, 1H) . 484 d) (9-(4-Cloro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
HO
Uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,178 g) em NMP (2 mL) foi tratada com ácido acético (0,032) mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 4-cloro-3-(2-hidroxietil)benzaldeido (exemplo 75, passo c) (0,154 g) em NMP (3 mL) , a solução resultante foi agitada durante 1 hora e foi então tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,181 g) e agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,404 g) e a mistura foi agitada durante mais 6 horas, em seguida vertida para bicarbonato de sódio saturado e extraída duas vezes com acetato de etilo. Os extractos combinados foram lavados três vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida secos sobre sulfato de magnésio anidro e purificados por cromatografia flash sobre sílica eluída com trietilamina:metanol:diclorometano 1:2:97 para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma incolor. Rendimento 0,157 g. RMN de aH (400 MHz, D, 5-DMSO, vo o o O δ 7, 90 (s, i—1 7, 29 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,24 (d, J = 1, ,4 Hz, 1H) , 7, 11 (dd, J = 8,2, 00 t—1 Hz, 1H) , 4, 37 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 3 ,73 - 3 , 56 (m, 8 H) r 3,41 (s, 2H) , 3,35 - - 3,28 (m, 1H) , 2, 85 (t, J = 6, $ ) Hz , 2H) f 2, 41 - 2,10 (m, 4H) , i ,75 - 1,62 (m, 2H) , 1,60 - 1, 46 (m, 2H) , 1, 36 (d, J = 6,7 Hz, 6H) 485 e) 2-(2-Cloro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
Uma solução de (9-(4-cloro-3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 75, passo d) (0,152 g) em DCM (5 mL) foi arrefecida em gelo-água, tratada com ácido trifluoroacético (0,049 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,205 g) , em seguida a mistura foi retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A solução foi diluída com solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 minutos. A mistura foi então extraída duas vezes com acetato de etilo, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificadas com ácido acético (0,1 mL), secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas in vacuo para dar o composto em subepígrafe em bruto como uma goma amarela. Rendimento 0,197 g. m/z 476 (M+H)+ (APCI) 486 f) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(2—cloro—5—((4—(2— isopropiltiazole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil) -4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,145 g) em metanol (2 mL) foi tratada com ácido acético (0,024 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-(2-cloro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5:5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeído (exemplo 75, passo e) (0,197 g) em metanol (3 mL), e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,039 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 140 minutos, antes de ser tratada com mais cianoboro-hidreto de sódio (0, 040 g) . A mistura foi então agitada de um dia para o outro. Na manhã seguinte, a mistura foi desactivada com uma gota de água e a solução foi filtrada e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 15-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. O resíduo foi triturado com éter 487 dietílico para dar um sólido, o qual foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,077 g. m/z 686/688 (M+H)+ (APCI) RMN de λΕ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,94 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7, 48 - 7, 39 (m, 2H) , 6,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,9 (dd, J = 8,5, 4,9 Hz, 1H) , 4,22 (s, 2H), 3, 75 - 3,60 (m, 6H) , 3,52 - 2,96 (m, 11H) , 2,09 - 1,90 (m, 2H), 1,83 - 1,62 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 7 6
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(4-isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
488 a) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(4-isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(4-isopropiltiazol-2-il)metanona (exemplo 66, passo c) (0,195 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,034 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,242 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0, 025 mL) a esta solução e o solvente foi removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de (IR)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (191 mg) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,140 g) numa porção. A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi removido sob pressão 489 reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 9% de metanol em diclorometano com 1% de amónia aquosa "880" como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,133 g. m/z 760 (M+H)+ (APCI) b) Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(4-isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,034 mL) em metanol (1 mL) a uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(4-isopropiltiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 76, passo a) (0,133 g) em THF (4 mL) e a mistura reaccional deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa 490 (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epigrafe.
Rendimento 0,090 g. m/z 646 (M+H)+(APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,17 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 7, 51 (s, 114) , , 7 ', 44 - 7 , 33 (m, 4H) , 7, 14 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H) , 7, 00 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H) , 6, 54 (d, J = 10, 0 Hz, 1H) , 5,38 - 5, 33 (m r 1H) , 4, 28 (s, 2H) , 3, 78 - 3, 74 (m, 2H) , 4, 13 - 3, 47 (m, 4H) , 3, 28 (t, J = 8 ,2 Hz, 2H) , 3 ( r 2 1 - - 3,00 (m, 9H) , 2,09 - 1, 99 (m, 2H) t 1, 84 - 1, 72 (m, 2H) r 1,26 (d, J = 6, 8 Hz, 6H) . Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 77
Ditrifluoroacetato de (R) -5-(2-(2,3-difluoro-4-(2-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
491 a) Ácido 2-(2,3-difluoro-4-hidroxifenil)acético
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de tribrometo de boro (1 M em DCM, 13,4 mL) a uma suspensão de ácido 2-(2,3-difluoro-4-metoxifenil)acético (1,18 g) em DCM (5 mL) a -78 °C. A reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi arrefecida até -78 °C e foi adicionada uma solução de tribrometo de boro (1 M em DCM, 13,4 mL) . A reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. A reacção foi vertida sobre gelo. A solução aquosa resultante foi extraida com DCM (5 x 50 mL). A fase aquosa foi então extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) . As soluções orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido castanho-amarelado. Rendimento 1,09 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 12,43 (s, 1H) , 10,24 (s, 1H) , 6,91 (td, J = 8,3, 2,1 Hz, 1H) , 6,72 (td, J = 8,3, 1,8 Hz, 1H), 3,54 (s, 2H). 492 b) 2,3-Difluoro-4-(2-hidroxietil)fenol
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 14,4 mL) a uma solução de ácido 2-(2,3-difluoro-4-hidroxifenil)acético (exemplo 77, passo a) (1,08 g) em tetra-hidrofurano (25 mL) a 0 °C e a mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi desactivada com metanol e quando o borbulhamento terminou o solvente evaporou. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 até acetato de etilo. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,95 g. RMN de ΧΗ (300 MHz, D6-DMSO) δ 10,08 (s, 1H) , 6,87 (td, J = 8,3, 2,2 Hz, 1H), 6,69 (td, J = 8,4, 1,9 Hz, 1H) , 4,68 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 3,58 - 3,49 (m, 2H), 2,66 (t, J = 7,0 Hz, 2H). c) 2-(4-(2,2-Dietoxietoxi)-2,3-difluorofenil)etanol
a uma solução de 77, passo b)
Foi adicionado carbonato de césio (0,99 g) 2,3-difluoro-4-(2-hidroxietil)fenol (exemplo 493 (0,44 g) e 2-bromo-l, 1-dietoxietano (0,4 mL) em DMF (10 mL) . A suspensão resultante foi aquecida a 90 °C durante 18 h. A reacção foi deixada arrefecer e vertida para água (100 mL) . A mistura aquosa foi extraída com éter dietílico (3 x 100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (200 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (200 mL) , secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. 0 material em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano até acetato de etilo:iso-hexano 1:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo.
Rendimento 0, 49 g. RMK í de ΤΗ ( 400 MHz, De-DMSO) δ 7, 06 - 6, 93 (m, 2H), 4,81 (t, J = 5,1 Hz, 1 H) , 4 , 70 (t, J = 5, .3 Hz , 1H), 4, 02 (d, J = 5,4 Hz, 2H) , 3, 73 - 3 , 62 (m, 2H), 3, 61 - 3,50 (m, 4H) , 2,71 (t, J = 6, 9 Hz, 2H) , 1, 13 (t ., J = 7, 0 Hz, 6H) . d) 2-(2,3-Difluoro-4-(2-hidroxietil)fenoxi)acetaldeído
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (5 mL) a uma solução de 2-(4-(2,2-dietoxietoxi)-2,3-difluorofenil)etanol (exemplo 77, passo c) (0,49 g) em 1,4-dioxano (10 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 1 h. A mistura foi cuidadosamente diluída com água (50 mL) e extraída com acetato de etilo (3 x 50 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com 494 água (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados para dar o composto em subepígrafe, o qual foi directamente utilizado. Rendimento 0,31 g. e) (9-(2-(2,3-Difluoro-4-(2-hidroxietil)fenoxi)etil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,5 g) a uma solução de 2-(2,3-difluoro-4-(2-hidroxietil)fenoxi)acetaldeído (exemplo 77, passo d) (0,31 g) em N-metil-2-pirrolidinona (10 mL) e ácido acético (0,07 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 30 min em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,38 g) e a reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e água (100 mL) . A fase aquosa foi basificada com solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio e as camadas separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 10 0 mL ) . As soluçoes orgânicas combinadas foram lavadas com água(100 mL) e 495 solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até 5% de trietilamina em acetato de etilo. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,41 g. m/z 510 (M+H)+ (APCI) RMN de lH (400 MHz, D6- DMSO, 90 °C) δ 7,93 (s, 1H) , 7, 06 - 6, 85 (m, 2H) , 4,58 - 4,36 (m, 1H) , 4, 13 (t, J = 5,7 Hz, 2H) , 3, 73 - 3 ,51 (m, 8H), 3,36 - 3,23 (m, 1H) , 2,76 - 2,63 (m, 4H) , 1, 76 - 1, 45 (m, 4H), 1,35 (d, J = = 6, 9 Hz, 6H) + 4 protões obscurecidos pelo pico do DMSO. f) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2,3-Difluoro-4-(2-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,03 mL) a uma solução de (9-(2-(2,3-difluoro-4-(2-hidroxietil)fenoxi)etil)-1- 496 oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 77, passo e) (0,18 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A reacção foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,225 g) . A mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foram adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a aquosa extraída com acetato de etilo (20 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificados com algumas gotas de ácido acético, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O resíduo foi redissolvido em metanol (5 mL), foram adicionados ácido acético (0,02 mL) e (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0, 12 g) , a mistura foi agitada durante 5 min e arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,033 g) , a reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi concentrada e purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCMrmetanol:amónia "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi dissolvido em THF (5 mL) , foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,17 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. 0 solvente foi evaporado e o resíduo submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com tolueno. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e trituradas com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,11 g. 497 m/z 712 (M+H)+(APCI) RMN de 1H (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,18 (d, . J = = 9, 7 Hz, \—1 7, 96 (s, 1H) , 7,18 - 6,96 (m, 4H) , 6,54 (d, J = 10, 0 Hz, \—1 5,36 (dd, J = 8 ,7, 4,1 Hz, 1H) , 4,50 - - 4, 42 (m, . 2h; >, 3 ,76 - 3,65 (m, 6H) , 3,62 - 3,54 (m, 2H), 3 ,44 - 2,98 (m, 11H) , 2 ,12 - i—1 O CM (m, 2H) , 1,90 - 1,75 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 6, 7 Hz, 6H) .
Seis protões permutáveis nao observados.
Exemplo 7 8
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(2-butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) terc-Butil(2-fluorofenetoxi)dimetilsilano
F
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (6,45 g) a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(2-fluorofenil)etanol 498 (5,00 g) e lH-imidazole (7,29 g) em DMF seca (30 mL) arrefecida num banho de gelo. Após 45 min, a mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo, lavada três vezes com água e evaporada in vacuo. A goma resultante foi dissolvida em iso-hexano e aplicada a uma coluna de sílica gel eluindo com iso-hexano seguido de acetato de etilo:iso-hexano 1:3 para recolher o produto como um óleo. Rendimento 9,0 g. RMN de XH (400 MHz, CDC13) 8 7,28-7, 18 (m, 2H) , 7,13-7,00 (m, 2H), 3,84 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 2,89 (t, J = 7,2 Hz, 2H) 0,89 (s, 9H), 0,008 (s, 6H). b) 3-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzaldeído
F O
Foi adicionado, ao longo de 5 minutos, terc-butil(2-fluorofenetoxi)dimetilsilano (exemplo 78, passo a) (5,00 g) a uma solução, mantida sob agitação, de sec-butil-lítio (solução 1,4 molar em ciclo-hexano, 14,0 mL) e Nl-(2-(dimetilamino)etil)-Nl,N2,N2-trimetiletano-1,2-diamina (4,10 mL) em THF (25 mL) arrefecida até -78 °C. Após 2 h foi adicionada N,N-dimetilformamida (10,06 g) , a mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante 1 h, e em seguida o banho de arrefecimento foi retirado. Após mais 0,5 h, a reacção foi desactivada com água. Foi adicionado acetato de etilo (300 mL) e a mistura reaccional lavada com água (3 x 150 mL), HC1 2 M (2 x 50 mL), água (2 x 50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em 499 seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo. Rendimento 5,3 g. RMN de TH (400 MHz, CDC13 ) δ 10,40 (s , 1H) , 7,76 (dt, J = 2,0 e 6, 8 Hz, 1H), 7,5· 4 (dt, J = 1,6 e 7,2 Hz, 1H) , 7,21 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,88 (t, J = 5, 2 Hz, 2H), 2, 95 (dt, J = 1,2 e 6,4 Hz, 2H) , 0,88 (s, 9H) , 0,008 (s , 6H) . c) 1-(9-(3-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-2,2,2-trifluoroetanona
F
Foi adicionado 3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzaldeido (exemplo 78, passo b) (2,159 g) a uma solução, mantida sob agitação, de trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-1-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo d) (2,80 g) e ácido acético (0,438 mL) em NMP (25 mL) . Após 5 minutos foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (3,24 g) . Após 16 h foi adicionada água e a mistura partilhada entre água (250 mL) e acetato de etilo (250 mL) . A solução de acetato de etilo foi lavada com água (3 x 250 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida evaporada até à secura. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 20:1:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 2,5 g. 500 RMN de XH (400 MHz, CDC13: ) δ 7,27 - 7,20 (m, 1H) 1- V, 20 - 7, 13 (m, 1H) , 7,08 - 7,01 (m, 1H 0, 3,84 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 3, 80 - 3, , 77 (m, 2H), . 3,71 - 3, 67 (m, 1H), 3,64 - 3 , 58 (m, 3H) , 3, 56 (s, 1H) , 3,41 (s, 1H), 2 :, 90 (q, J = = 6, 4 Hz, 2H) , 2, 69 - 2, 62 (m, 1H) , 2,52 - - 2,44 (m, 1H) , , 2,43 - 2,35 (m, 1H) , 1, 92 - 1, 80 (m, 2H) , 1, 72 - 1,60 (m, 2H), 0,89 (s, 9H) , 0,00 (s , 6 H) 1 # d) 9-(3-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano
F
Foi adicionado amónia aquosa "880" (3,0 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de 1-(9-(3-(2-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-2,2,2-trifluoroetanona (exemplo 78, passo c) (2,5 g) em MeOH (10 mL) . Após 1 h, a mistura reaccional foi evaporada até à secura. Foi adicionado acetonitrilo, a solução foi evaporada até à secura in vacuo, e o processo repetido três vezes para dar o composto em subepigrafe como um óleo. Rendimento 2,07 g. Utilizado directamente. m/z 423 (M+H)+ (APCI) 501 e) Pentanotioamida
NH2 s
Foi adicionado pentassulfureto de fósforo (5,56 g) a uma suspensão, mantida sob agitação, de pentanamida (10,0 g) em éter terc-butilmetílico (300 mL) . Após 16 h, a mistura foi filtrada através de Celite e evaporada in vacuo para dar o composto em subepigrafe como um óleo amarelo. Rendimento 11,4 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 9, 35-9,23 (s 1, 1H) , 9,15- 9,05 (s 1, 1H), 2,52-2,42 (m, 2H), 1,68-1,55 (m, 2H), 1,35-1,22 (m, 2H), 0,87 (t, J = 7,6 Hz, 3H). f) 2-Butiltiazole-4-carboxilato de etilo
Foi adicionado, muito cuidadosamente, 3-bromo-2-oxo-propanoato de etilo (6,76 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de pentanotioamida (exemplo 78, passo e) (6,30 g) em etanol (100 mL) . A solução foi então aquecida a refluxo durante 16 h. Depois de arrefecer, a mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo, lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo: iso-hexano 1:6 502 deu o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 6,5 g. RMN de (400 MHz, CDC13) δ 8,05 (s, 1H), 4,42 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,02-3,05 (m, 2H), 1,85-1,75 (m, 2H), 1,50-1,38 (m, 5H), 0,95 (t, J = 7,1 Hz, 3H). g) Ácido 2-butiltiazole-4-carboxílico
Foi adicionado hidróxido de litio (5,00 g) a uma mistura, mantida sob agitação, de 2-butiltiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 78, passo f) (6,50 g) em THF (80 mL) e água (20 mL) . Após 16 h foi adicionado ácido clorídrico concentrado (10 mL) e a solução concentrada até ~40 mL. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada aquosa foi extraída três vezes com acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um sólido esbranquiçado. Rendimento 4,6 g. 503 RMN de (300 MHz, CDC13) δ 8,18 (s, 1H) , 3,11-3,03 (m, 2H), 1,88-1,78 (m, 2H), 1,52-1,38 (m, 2H), 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 3H). Um protão permutável não observado. h) (9-(3-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-butiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de 2-(3H-[l,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-l,l,3,3-tetrametilisourónio (V) (0,378 g) a uma solução, mantida sob agitação, de ácido 2-butiltiazole-4-carboxílico (exemplo 78, passo g) (0,193 g) , 9-(3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-2- fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano (exemplo 78, passo d) (0,4 g) e trietilamina (0,383 g) em DMF (4 mL) . Após 1 h, a mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada duas vezes com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 7:1:0,5 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,35 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, Dg-DMSO, 90 °C) δ 7,94 (s, 1H) , 7,30 - 7, 16 (m, 2H) , 7,13 - 7,05 (m, 1H) , 3,88 - 3,80 (m, 2H) , 3,74 - 3,62 (m, 6H) , 3,55 - 3,49 (m, 2H) , 3,09 - 3,00 (m, 2H sob pico 504 da água) i , 2,87- 2, 79 (m, 2H) , 2,49 - 2,32 (m, 4H ), 1,84- 1,68 (m, 4H) , 1,62 - 1,51 (m, 2H) , 1,50 - 1,39 (m, 2H), 0,97 (t, J = 7,9 Hz, 3H), 0, 87 (s, 9H) , 0,00 (s, 6H). i) (2-Butiltiazol-4-il)(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado TBAF (solução 1 M em THF, 2,0 mL) a uma solução de (9-(3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-2- fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-butiltiazol-4-il)metanona (exemplo 78, passo h) (0,350 g) em THF (4 mL). Após 0,5 h, a solução foi concentrada. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo: trietilamina 10:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,24 g. RMN de XH (400 MHz, d6- -DMSO, 90 °C) δ 7, 88 (s, 1H) , 7,22 - 7,13 (m, 2H) , 7, 03 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 4, 35 (t, J = 5,2 Hz, 1H) , 3,68 - 3, , 56 (m 12H), 3,48 (s, 2H) , 3, 00 (t, J = 7,5 Hz, 2H) , 2, 75 (t, J = 7, 5 Hz , 2H), 2, 44 - - 2,28 (m, 4H) , 1,78 - 1,65 (m, 2H), 1 ,45 - - 1, 33 (m, 2H) , 0,91 (t, J = 7,5 Hi 2, 3H) j) 2-(3-((4-(2-Butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenil)acetaldeído 505
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,278 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (2-butiltiazol-4-il)(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)metanona (exemplo 78, passo i) (0,240 g) e ácido trifluoroacético (0,058 mL) em DCM (5 mL). Após 1 h foi adicionado acetato de etilo (30 mL) seguido de uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A mistura reaccional foi bem agitada e separada. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,08 mL) , a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo (temperatura do banho ~30 °C) para dar o composto em subepígrafe como uma goma.
Rendimento 0,24 g. Utilizado directamente. m/z 474 (M+H)+ (APCI) k) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(2-butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2- 506 fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,044 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,200 g) e 2-(3-((4-(2-butiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenil)acetaldeído (exemplo 78, passo j) (0,240 g) em MeOH (10 mL) . Após 1 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,064 g). Após 1,5 h, a mistura reaccional foi filtrada e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas in vacuo. Foi adicionado acetonitrilo (200 mL) e a solução foi evaporada in vacuo até uma goma. Este processo foi repetido duas vezes. Foi adicionado éter dietilico e o composto em epígrafe recolhido como um sólido. Rendimento 0,15 g. m/z 684 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO, , 90 °C) δ 11,28 (s 1, 1H) r 7, 92 (S, 1H) , 7,52 - 7,37 (m, 2H), 7, 25 (t, J = 8, 4 Hz , 1H), 6, 93 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8, 3 Hz, 1H), 4, 94 - 4,87 (m L 1H) , 4, 30 (s, 2H) , 3,70 (s 1 , 6H) , 3,63 (s, 2H) , 3 , 28 - 2, 92 (m, 10H) , 2, 06 - 1, 94 (m, 2H) , 1,82 - 1,66 (m, 4H) , 1, 43 - 1, 31 (m, 507 2Η) , 0,90 (t, J = 7,6 Hz, 3H) . Cinco protões permutáveis nao observados. 508
Exemplo 79
Ditrifluoroacetato de (J?)-7-(2-(3-((4-(benzo [b] tiofeno-2- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Benzo[b]tiofen-2-il(9-(3-(2-(terc-butildimetilsi-liloxi)etil)-2-fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-i1)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de 2-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-1,1,3,3-tetrametilisourónio (V) (0,378 g) a uma solução, mantida sob agitação, de ácido benzo[b]tiofeno-2-carboxílico (0,186 g) , 9-(3-(2-(terc-butil-dimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro-[5.5]undecano (exemplo 78, passo d) (0,40 g) e trietilamina (0,383 g) em DMF (4 mL) . Após 1 h, a mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada duas vezes com água e uma 509 vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 7:1:0,5 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,38 g. RMN de ΤΗ (400 MHz :, D6-DMSO) δ 8, 14 - 8,08 (m t—1 t 8, 05 - 7, 99 (m, 1H), 7,82 (s, 1H), 7 ,57 - 7, ,51 (m, 2H), 7, 33 - 7, 23 (m, 2H) , 7,14 (t, J = 8, 1 Hz, 1H) , 3, 86 (t, J = = 7,3 Hz , 2H) t 3,81 - 3, 72 (m, 4H) , 3,63 (s, 2H) , 3 , 56 (s, 2H), 3 ,38 (s, 2H) , 2, 86 (t, J = 7,4 Hz, 2H ), 2,46 - - 2,34 (m, 2H) , 1,89 - 1,81 (m, 2H) , 1,66 - 1, 52 (m, 2H) , 0,88 (s , 9H), 0, 00 (s , 6H) . b) Benzo[b]tiofen-2-il(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-11)metanona
Foi adicionado TBAF (solução 1 M em THF, 2 mL) a uma solução de benzo[b]tiofen-2-il(9-(3-(2-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 79, passo a) (0,370 g) em THF (4 mL) . Após 0,5 h, a solução foi concentrada. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina 10:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,26 g. 510 RMN de (400 MHz, E >6-dmso, O o O δ 7,99 - 7, 95 (m, K i—1 7, 93 - 7, 88 (m, 1H) , 7,67 (S, 1H), 7, 46 - 7,39 (m, 2H) , 7, 17 (q, J = 7,5 H z, 2H) , 7,0 '1 (t, J = 8,0 Hz, 1H) , 4,39 - 4, 33 (m, 1H) , 3, 72 - 3, 57 (m, 4H) , 3,54 (s, 2H) , 3,48 (s, 2H), 2, 99 (s, 2H) , 2, 75 (t, J : = 7, 6 Hz, 2H) , 2,46 - 2,32 (m , 4H), 1, 80 - 1, 71 (m, 2H) , 1,58 - 1,4! 3 (m, 2H) . c) 2-(3-((4-(Benzo[b]tiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenil)acetaldeído
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,282 g) a uma solução, mantida sob agitação, de benzo[b]tiofen-2-il(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)metanona (exemplo 79, passo b) (0,240 g) e ácido trifluoroacético (0,059 mL) em DCM (5 mL). Após 1 h foi adicionado acetato de etilo (30 mL) seguido de uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A mistura reaccional foi bem agitada e separada. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,08 mL) , em seguida a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo (temperatura do 511 banho ~30 °C) para dar o composto em subepígrafe como uma goma.
Rendimento 0,24 g. Utilizado directamente. m/z 467 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(benzo[b]tiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)—2— fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,044 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-7(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento
W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,203 g) e 2-(3-((4-(benzo[b]tiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenil)acetaldeído (exemplo 79, passo c) (0,240 g) em MeOH (10 mL). Após 1 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,081 g) . Após 1,5 h, a mistura reaccional foi filtrada e purificada por HPLC 512 preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas in vacuo. Foi adicionado acetonitrilo (200 mL) e a solução foi evaporada in vacuo até uma goma. Este processo foi repetido duas vezes. Foi adicionado éter dietilico e o composto em epígrafe recolhido como um sólido. Rendimento 0,19 g. m/z 677 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,28 (s, 1H), 8,00 - 7,95 (m, 1H), 7, 92 - 7, 88 (m, 1H) , 7,69 (s, 1H) , 7, 50 - 7,38 (m, 4H) , 7,25 (t, J = 7,5 Hz, 1H) , 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,90 (dd, J = 4,2 e 8,56 Hz, 1H) , 4,35 - 4,19 (m, 2H), 3, 76 - 3,68 (m, 4H), 3,59 (s, 2H) , 3,27 - 2,99 (m, 10H) , 2, 09 - 1,99 (m, 2H) , 1, 82 - 1, 70 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 80
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-cloro-3-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
513 a) Acido 2-cloro-3-(cianometil)benzóico
Cl o
Uma solução de ácido 3-(bromometil)-2-clorobenzóico (6,39 g) em DMF (75 mL) foi tratada com uma solução de cianeto de potássio (3,34 g) em água (25 mL) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi diluida com água e extraida duas vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram rejeitadas, enquanto a fase aquosa foi cuidadosamente acidificada com ácido clorídrico concentrado (25 mL) , deixando sair qualquer HCN libertado através de uma solução de lixívia via uma corrente de azoto. Depois de ter sido agitada durante 2 horas, a fase aquosa foi extraída mais duas vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas três vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe em bruto como um sólido castanho pálido. Rendimento 4,12 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,73 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1H) , 7,69 (dd, J = 7,8, 1,7 Hz, 1H) , 7,48 (t, J = 7,7 Hz, 1H) , 4,16 (s, 2H) + 1 protão permutável não observado. b) Ácido 3-(carboximetil)-2-clorobenzóico
Cl O 514
Foi adicionado hidróxido de potássio (2,976 g) em água (30 mL) a uma suspensão de ácido 2-cloro-3-(cianometil)benzóico (exemplo 80, passo a) (4,12 g) em etanol (30 mL) e a solução resultante foi aquecida a refluxo durante 2 horas, em seguida deixada arrefecer de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo para remover o etanol e em seguida diluída com água e lavada duas vezes com acetato de etilo. As fases orgânicas foram rejeitadas, enquanto a fase aquosa foi acidificada até pH 1 com ácido clorídrico concentrado e extraída três vezes com acetato de etilo. Os extractos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro e concentrados in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe em bruto como um sólido amarelo. Rendimento 4,11 g. Utilizado directamente. c) 2-(2-Cloro-3-(hidroximetil)fenil)etanol
Cl
Foi adicionada, em porções ao longo de 5 minutos, uma solução de complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 20 mL) a uma suspensão de ácido 3-(carboximetil)-2-clorobenzóico (exemplo 80, passo b) (4,11 g) em THF seco (100 mL) à temperatura ambiente. A suspensão efervescente resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos, em seguida aquecida até refluxo durante 60 minutos, e deixada arrefecer até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi desactivada pela adição de metanol em porções (15 mL) ao longo de 15 minutos. A mistura foi ainda diluída com metanol para dar 515 uma solução, o qual foi então concentrada in vacuo para dar um xarope. 0 xarope foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluída com 2% de metanol em diclorometano para proporcionar o composto em subepígrafe em bruto como um sólido branco. Rendimento 1,44 g. m/z 186 (M+) (EI) d) 2-Cloro-3-(2-hidroxietil)benzaldeído
Cl
HO
Foi adicionado dióxido de manganês (IV) (1,599 g) a uma solução de 2-(2-cloro-3-(hidroximetil)fenil)etanol (exemplo 80, passo c) (0,342 g) em DCM (20 mL) e a suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi então concentrada sobre sílica e purificada por cromatografia flash sobre sílica eluída com 25% de acetato de etilo em iso-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido cristalino branco. Rendimento 0,223 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 10,54 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 7,83 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1H) , 7,55 (dd, J = 7,7, 1,8 Hz, 1H), 7,35 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,94 (dd, J = 11,0, 6,4 Hz, 2 H), 3,11 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,46 (t, J = 4, 9 Hz, 1H). e) (9-(2-Cloro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona 516
rQyjry^
Uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,325 g) em NMP (3 mL) foi tratada com ácido acético (0,067 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-cloro-3-(2-hidroxietil)benzaldeido (exemplo 80, passo d) (0,217 g) em NMP (4 mL) , a solução resultante foi agitada durante 1 hora e em seguida tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,025 g). A mistura foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, em seguida vertida para bicarbonato de sódio saturado e extraída duas vezes com acetato de etilo. Os extractos combinados foram lavados três vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida secos sobre sulfato de magnésio anidro e purificados por cromatografia flash sobre sílica eluída com trietilamina:metanol:diclorometano 1:2:97 para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma incolor. Rendimento 0,411 g. RMN de XH (400 MHz, D 6-DMSO , 90 °C) δ 7, 91 (d, J = 1,3 Hz, 1H) , 7, 30 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7, 24 - 7 ,16 (m , 2H) , 4,36 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,73 - 3,59 (m, 8H) , 3, 55 (s, 2H) , 3,32 (septeto, J = 6,8 Hz, 1H) , 2,89 (t, J = 7, 0 Hz f 2H) , 2,46 - 2, 40 (m, 1H), 2, ,40 - 2,28 (m, 1H) , 2,17 (t, J = 8, 1 Hz, 1H) , 1, 91 (quinteto, J = 7,5 Hz, 1H) , 1, 77 - 1,65 (m, 2H) , 1, 62 - 1,50 (m, 2H), 1,36 (d, J = 6,5 Hz, 6H). 517 518 f) 2-(2-Cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa- 4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído
Cl
Uma solução de (9-(2-cloro-3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 80, passo e) (0,386 g) em DCM (5 mL) foi arrefecida em gelo-água, tratada com ácido trifluoroacético (0,125 mL) e agitada durante 5 minutos. Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,519 g) , em seguida a mistura foi retirada do banho de arrefecimento e agitada à temperatura ambiente durante 35 minutos. A solução foi diluída com solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 minutos. A mistura foi então extraída duas vezes com acetato de etilo, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, acidificadas com ácido acético (0,1 mL), secas sobre sulfato de magnésio anidro e concentradas in vacuo para dar o composto em subepígrafe em bruto como uma goma amarela pálida. Rendimento 0,494 g. m/z 476 (M+H)+ (APCI) 519 g) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil) -4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,181 g) em metanol (2 mL) foi tratada com ácido acético (0,030 mL) e agitada durante 10 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-(2-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeido (exemplo 80, passo f) (0,247 g) em metanol (3 mL), e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,102 g) . 0 banho de arrefecimento foi retirado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. No dia seguinte foi adicionado mais cianoboro-hidreto de sódio (0,099 g) e a mistura foi agitada durante mais 4 horas. A solução foi desactivada pela adição de uma gota de água, filtrada e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. O resíduo foi triturado com éter dietílico para 520 dar um sólido, o qual foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,053 g. m/z 686/688 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6- -DMSO) β 11, 68 (s, 1H), 10, 23 (s, 1H) , 8,91 (d 1, J = 26,7 Hz, 2H) , 8, 03 i (s, 1H), 7,68 - - 7, 56 (m, 1H) , 7, 54 - 7, 40 (m, 2H), 6 ,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , , 6, 78 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H), 6,56 - 6 ,43 (m, 1H) , 4,91 (d 1, J = 8,5 Hz, 1H) , 4,57 - 4,43 (m, 2H), 3, 90 - 3 ,42 (m, 6H), 3,38 - 3,25 (m, 4H) , 3,24 - - 3,02 (m, 7H) , 2,08 (d 1, J = 13,3 H z, 2H), 1,! 92 - 1,54 (m, 2H ), 1,34 (d, J = 6, 7 Hz, 6H) . Um protão permutável não observado.
Exemplo 81
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2-cloro-3—((4—(2— isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
521 a) (Λ)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(2-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetil-sililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,261 g) em metanol (2 mL) foi tratada com ácido acético (0,030 mL) e agitada durante 10 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-(2-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-acetaldeido (exemplo 80, passo f) (0,247 g) em metanol (3 mL), e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,102 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Foi adicionado mais cianoboro-hidreto de sódio (0,101 g) e a mistura foi agitada uma segunda vez de um dia para o outro. A solução foi então concentrada sobre sílica flash in vacuo e o pó resultante foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluída com trietilamina:metanol:diclorometano 1:3:96 até 1:5:94 para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,130 g. 522 RMN de ΧΗ (400 MHz, D6- -DMSO, 90 °C) δ 8,40 (d , J : = 9,7 Hz, 1H) , to O \—1 oo 1H) , 7, „48 (dd ·, J = 7,3 , 2,1 Hz, 1H), 7,3 8 - 7,30 (m, 2H), 7,17 (d, J = 8,2 Hz, 1H ) , 7, 09 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,65 d. > C, II > 7 Hz f 1H), 5, 26 (dd , J = 7,6 , 5,0 Hz , ih; ) , 3, 91 - 3, 78 (m, 6H) , 3 , 72 (s , 2H) , 3,55 - 3, 46 (m, 1H) , 3, 10 - 3,03 (m, 1H) , 2,99 (s, 4H) , 2 ,93 - 2,86 ( m, 1H) , 2,68 - - 2,47 (m, 4H) , 1,94 - 1,84 (m, , 2H] i , 1,80 - - 1,68 (m, 2H) , 1,55 (d , j : = 7,0 Hz, 6H) , 0,99 (s, 9 H) f 0,18 (d, J 4,6 Hz , 6 H) φ Três protões permutáveis não observados. b) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R)-5-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(2-cloro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 81, passo a) (0,124 g) e trif luoridrato de trietilamina (0,05 mL) em THF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro em seguida concentrada in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (4 mL) e a solução resultante foi filtrada e purificada por HPLC 523 preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. O resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o qual foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um pó branco. Rendimento 0,076 g. m/z 680/682 (M+H)+ (APCI) RMN de TH (400 MH: d6-dmso, 90 c 'Ο δ 8,17 (d, J = 10,0 Hz, \—1 7, 94 (s, 1H), 7, 55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7, 47 - - 7,34 (m, 2H) , 7, 14 (d, J = 8,2 Hz , 1H) , 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6:55 (d, J = : 10, 0 H z, 1H), 5, 34 (dd, J = 9,1, 4, 0 Hz , 1H .), 4,33 - 4, 09 (m 1, 2H) , 3,77 - 3, 60 (m, 6H) , 3,44 - 2,87 (m, 11H), 2,02 - 1, 87 (m, 2H) i—1 00 1—1 - 1 , 65 (m, 2H) , 1,35 (d, J = 6, 9 Hz, 6H).
Seis protoes permutáveis não observados. 524
Exemplo 82
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(3-(l-0xa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)fenil)etanol
Foi adicionada solução de amónia "880" (5 mL) a uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-(2-hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo e) (2,02 g) em metanol (25 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 90 min e o solvente evaporado. O residuo foi purificado por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1,44 g. m/z 291 (M+H)+ (APCI) 525 RMN de 1 Ή (40 0 MH z, Dg ;-DMS0, 90 °C) δ 7, 18 (t, J = 7,4 Hz, 1H) , 7, 13 - 7, 02 (m, 3H) , 4, 34 (s, 1H) , 3,61 (t, J = 6,9 Hz, 2H) , 3, 51 - 3, 45 (m, 2H) , 3, 41 (s, 2H) , 2, 71 (t, J = 6,9 Hz, 2H) , 2, 62 (t r J = 4, 9 Hz, 2H) , 2 , 52 (s, 2H) , 2,42 - 2 , 23 (m, 4H) , 1, 82 - 1 ,72 (m, 2H) r 1,53 - 1,38 (m, 2H) . Um protão permutável nao observado. b) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-3-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il) -N, N, N, Ν’-tetrametilurónio (0,55 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)fenil)etanol (exemplo 82, passo a) (0,32 g) , ácido 5-isopropiltiofeno-3-carboxilico (0,19 g) e trietilamina (0,61 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C. A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o 526 composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,4 g. m/z 443 (M+H)+ (APCI) c) Ditrifluoroacetato de (J?) -4-hidroxi-7- (l-hidroxi-2- (3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]— undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,035 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro-[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-3-il)metanona (exemplo 82, passo b) (0,2 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,29 g) . A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vácuo. O resíduo foi 527 dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,026 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,14 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,043 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vácuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,07 g. m/z 651 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, d6 -DMSO, 90 °C) δ 7,50 - 7,32 (m, 5H) , 6, 96 - 6, 88 (m, , 2H) r 6, 77 (d, J = 8, 2 Hz, 1H) , 4,98 - 4, 8E 5 (m, 1H) , 4,28 ( s, 2H) , 3, 72 - 3,63 (m, 2H) , 3,59 - 3,34 (m, 4H) , 3, 29 - 2, 97 (m, 11H ) , 2, 11 - 1,93 (m. r 2H) , 1,86 - 1,68 (m, 2H) , 1, 28 (d, J = 6, 7 Hz f 6H ) . Seis prot < ões permutáveis não observados. 528
Exemplo 83
Ditrifluoroacetato de (Λ)-5-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado TFA (0,04 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il) (5-isopropiltiofen-3-il)metanona (exemplo 82, passo b) (0,2 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A reacção foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,29 g) . a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada durante l h.
Foram adicionadas solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a aquosa extraída com acetato de etilo (20 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificados com algumas gotas de ácido acético, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O resíduo foi redissolvido em metanol (5 mL) , foram adicionados ácido acético (0,03 mL) e (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento WO2004106333) (0,15 g) , em seguida a mistura foi agitada durante 5 min e arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio 529 (0,043 g) , a reacção foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi concentrada e purificada por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas. O resíduo foi dissolvido em THF (5 mL), foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,22 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o resíduo submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com tolueno. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e trituradas com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,06 g. m/z 645 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 8,17 (d, J = 9,7 Hz, 1H) , 7,48 (s, 1H), 7,45 - 7,33 (m, 4H), 7, 14 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7, 00 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6,90 (s, 1H), 6,54 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 5,36 (dd, J = 8 ,5, 4,1 Hz , 1H) , 4,29 (s, 2H) , 3, 72 - 3,63 (m, 2H), 3,57 - 3,38 (m, 4H) , 3,28 (t, J = 8, 1 Hz, 2 H) , 3,22 - 2,98 (m, 9H) , 2,10 - 1,95 (m, 2H) , 1,81 - 1,62 (m, 2H) , 1,28 (d, J = 6,7 Hz, 6H). Seis protões permutáveis não observados. 530
Exemplo 84
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-isobutiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isobutiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (0,34 g) a uma solução de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)fenil)etanol (exemplo 82, passo a) (02 g) , ácido 2-isobutiltiazole-4-carboxilico (0,13 g) e trietilamina (0,38 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C. A solução amarela resultante foi deixada aguecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 531 gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepígrafe como uma goma transparente. Rendimento 0, 2 g. m/z 458 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, d6- DMSO, 90 °C) δ 7, 99 (s, 1H) , 7,26 7,03 (m, 4H ) , 4,60 (t, J = 5,3 H z, 1H) , 3, 72 - 3, 50 (m, 8H) 3,46 - 3, 34 (m , 2H) , 2, 94 - 2,84 (m, 2H) , 2, 71 (t, J = = 7,1 Hz 2H) , 2,43 - 2, 01 (m , 5H ) , 1 ,74 - 1,3 7 (m, 4H) , 1, 01 - 0,90 (m, 6H) b) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-isobutiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,032 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isobutiltiazol-4-il)metanona (exemplo 84, passo a) (0,19 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura 532 foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,26 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,024 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,11 g) e a mistura foi agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,04 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,1 g. m/z 666 (M+H)+ (APCI) 533 RMN [ de ΤΗ (400 MHz f D6- DMSO, 90 °C) δ ** i—1 i—1 27 (s, 1H) , 7, 93 (S, 1H) , 7, 44 - 7,33 (m, 4H) , δ, 93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4,92 (dd, J = 7,9, 5, 1 Hz, 1H) , 4, 34 - 4,21 (m, 2H) , r 3, 73 - 3, 60 (m, 6H) , 3,28 - 2,96 (m, 10H) , 2,88 (d, J = 6,9 Hz, 2H) , 2,11 - 1,95 (m, 3H), 1,84 - 1 , 64 (m, 2H) , 0, 95 (d, J = 6,7 Hz, 6H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 85
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-fluoro-3-((4-(6- isopropilpicolinoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9— il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-Isopropilpiridina
Foi adicionada, gota a gota ao longo de 20 min, uma solução de butil-litio (1,6 M em hexanos, 50 mL) a uma solução de 2-etilpiridina (9,34 mL) em tetra-hidrofurano (50 mL) a -70 °C. A mistura foi agitada durante 2 h, em seguida foi adicionado 534 iodeto de metilo (5 mL) gota a gota ao longo de 15 min. A suspensão laranja espessa resultante foi deixada aguecer até à TA e agitada de um dia para o outro. 0 solvente foi evaporado e o resíduo diluído com éter dietílico (100 mL). A camada orgânica foi lavada com água (2 x 100 mL) e solução aguosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 9,1 g. m/z 122 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (300 MHz, CDC13) δ 8,56 - 8,52 (m, 1H) , 7,60 (td, J = 7,7, 2,1 Hz, 1H), 7,19 - 7,15 (m, 1H) , 7,09 (ddd, J = 7,4, 4,9, 1,2 Hz, 1H), 3,06 (septeto, J = 6,9 Hz, 1H), 1,31 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . b) 1-Óxido de 2-isopropilpiridina
O
Foi adicionado MCPBA (22,0 g) a uma solução de
2-isopropilpiridina (exemplo 85, passo a) (9,1 g) em DCM (250 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 3 h. A mistura reaccional foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (4 x 100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etilo até 535 10% de metanol em acetato de etilo. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 3,9 g. m/z 138 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) δ 8,23 (dd, J = 6,2, 1,5 Hz, 1H), 7,41 (dd, J = 7,7, 2,3 Hz, 1H) , 7, 35 - 7, 24 (m, 2H) , 3,56 (septeto, J = 7 Hz, 1H), 1,20 (d, J = 7 Hz, 6H). c) 6-Isopropilpicolinonitrilo
Foi adicionado cianeto de trimetilsililo (1,53 mL) a uma solução de 1-óxido de 2-isopropilpiridina (exemplo 85, passo b) (1,3 g) em DCM (40 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 5 min. Foi adicionado cloreto de dietilcarbamoilo (1,2 mL) e a mistura agitada durante 3 dias. Foi adicionada uma solução aquosa de carbonato de potássio (10%, 40 mL) e a mistura agitada durante 10 min. As camadas foram separadas e a fase aquosa extraída com DCM (2 x 40 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 3:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1,23 g. 536 m/z 147 (M+H)+(APCI) RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,74 r+ > II 7,8 Hz, \—1 7,51 (dd, J = 7,6, 0,9 Hz, 1H ), 7,39 (dd, J 1—1 00 II 0,9 Hz, \—1 3,11 (septeto, J = 6,7 Hz, 1H) , 1,31 (d, J = 6,7 Hz, 6H) . d) Ácido 6-isopropilpicolínico
Foi adicionado ácido clorídrico concentrado (15 mL) a uma solução de 6-isopropilpicolinonitrilo (exemplo 85, passo c) (1,23 g) em metanol (30 mL). A mistura resultante foi aquecida a refluxo durante 17 h e deixada arrefecer até à TA. A mistura foi cuidadosamente vertida para solução de hidróxido de sódio (10 M, 50 mL) e agitada à TA de um dia para o outro. A reacção foi concentrada e o pH ajustado a 5 utilizando solução de HC1 2 Μ. A mistura aquosa foi extraída com clorofórmio (3 x 100 mL) . As soluções orgânicas foram combinadas, lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,94 g. m/z 166 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7,89 - 7,81 (m, 2H), 7, 48 (dd, J = 7,2, 1,3 Hz, 1H), 3,05 (septeto, J = 6,9 Hz, 1 H), 1,22 (d, J = 6,9 Hz, 6H). Um protão permutável nao observado. 537 e) (9-(2-Fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(6-isopropilpiridin-2-il)metanona
F
Foi adicionado hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio (0,20 g) a uma solução de 9-(3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano (exemplo 78, passo d) (0,17 g), ácido β-isopropilpicolínico (exemplo 85, passo d) (0,07 g) e trietilamina (0,22 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C. A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) . A fase orgânica foi separada, lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. O residuo foi dissolvido em THF (10 mL) e foi adicionada uma solução de TBAF em THF (1 M, 0,8 mL). A mistura resultante foi agitada durante 2 h e o solvente evaporado. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (50 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepigrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,2 g. m/z 456 (M+H)+ (APCI) 538 f) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(2—fluoro—3—((4—(6— isopropilpicolinoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado TFA (0,034 mL) a uma solução de (9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(6-isopropilpiridin-2-il)metanona (exemplo 85, passo e) (0,2 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,28 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,025 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,12 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho 539 de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,04 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,057 g. m/z 664 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7,81 (t, J = 7,7 Hz, 1H) , 7, 54 - 7 ,21 (m, 5H) , 6,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H) # 6, 77 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4, 97 - 4,82 (m, 1H), 4, 40 - 4,25 (m, 2H), 3,77 - 3,47 (m, 6H) , 3, 29 - 2,99 (m, 11H), 2, 11 - 1,62 (m, 4H) , 1,24 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Cinco protões permutáveis não observados. 540
Exemplo 86
Ditrifluoroacetato de (R) —7—(2—(3—((4—(5—etiltiofeno—3— carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9- il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H(
OH a) (5-Etiltiofen-3-il)(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado HATU (0,209 g) a uma solução, mantida sob agitação, de ácido 5-etiltiofeno-3-carboxílico (0, 086 g) , 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)fenil)etano1 (exemplo 82, passo a) (0,160 g) e trietilamina (0,3 mL) em DMF (2 mL) . Após 1 h, a mistura reaccional foi diluida com acetato de etilo (25 mL) e lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 25 mL). A camada de acetato de etilo foi evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel 541 eluindo com acetato de etilo:trietilamina 10:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,18 g. RMN de 2H (400 MHz , Dê -DMSO, 90 °C) δ 7,52 (s, 1H) , 7, 20 (t, J = 7,4 Hz, 1H) , 7 ,13 - 7 , 05 (m, 3H) , 6,90 (s, 1H) , 4, 60 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 3, 64 - - 3, 55 (m, 4H) , 3, ,53 - 3,46 (m, 2H) r 3,31 (s, 4H) , r 2, 81 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 2,74 - 2,66 (m ., 2H ) , 2, 37 - 2,23 (m, 4H ), i 75 - 1, 65 (m, 2H), 1,56 - 1,35 (m, 2H) , 1, 24 (t, J = 7, 7 Hz, 3H) φ b) 2-(3-((4-(5-Etiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metilfenil)acetaldeído
Foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,232 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (5-etiltiofen-3-il)(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 86, passo a) (0,180 g) e ácido trifluoroacético (0,042 mL) em DCM (5 mL ) . Após 1 h foi adicionado acetato de etilo (30 mL) seguido de uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL). A mistura reaccional foi bem agitada e separada. A solução de acetato de etilo foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,08 mL) , a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo (temperatura do banho 542 ~30 °C) para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,17 g. Utilizado directamente. m/z 427 (M+H)+ (APCI) c) Ditrifluoroacetato de (R)—7—(2—(3—((4—(5—etiltiofeno—3— carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9- il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,036 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-Ί-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,166 g) e 2-(3-((4-(5-etiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido (exemplo 86, passo b) (0,180 g) em metanol (8 mL) . Após 1 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,080 g). Após 1,5 h, a mistura reaccional foi filtrada e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%. As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas in vacuo. Foi adicionado acetonitrilo (200 mL) e a solução foi evaporada in vacuo para dar uma goma. Este processo foi repetido duas 543 vezes. Foi adicionado éter dietilico e o composto em epígrafe recolhido como um sólido branco. Rendimento 0,13 g. m/z 637 (M+H)+ (APCI) RMN de (300 MHz, D6- DMSO, 90 ° C) δ 11,37 (s, 1H) , 7, 51 - 7, 30 (m, 5H) , 6, 93 (d, J : = 8,1 Hz, 1H), 6,77 (d, J = = 8,1 Hz, 1H) , 6,91 - 6, 86 (m, 1H), 4,94 - 4, 86 (m, 1H) , 4, 29 (S, 2H) , 3, 71 - 3,31 (m, , 8H) , 3,29 - - 2,93 (m, 8H), 2,81 (q/ J = = 7,9 Hz, 2H) , 2,15 - 1,91 (m, 2H) , 1/75 - 1,51 (m, 2H) r 1,25 (t, J = 7,6 Hz, 3H) . 5 protões permutáveis não observados
Exemplo 87
Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(3—((4— (2-propiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Butanotioamida
S
Foi adicionado pentassulfureto de fósforo (3 g) a uma suspensão de butiramida (5 g) em MTBE (300 mL) e a mistura 544 resultante foi agitada durante 3 h. A reacção foi filtrada através de Celite e a almofada do filtro lavada com MTBE (100 mL) . O filtrado e lavagens combinados foram evaporados para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 5,2 g· RMN de 1E (300 MHz, D6-DMSO) δ 9,32 (s, 1H) , 9,12 (s, 1H) 2,43 (t, J = 7, 4 Hz, 2H), 1,72 - 1,59 (m, 2H), 0,86 (t J = 7,4 Hz, 3H) . b) 2-Propiltiazole-4-carboxilato de etilo
Foi adicionado 3-bromo-2-oxopropanoato de etilo (6,32 mL) a uma solução de butanotioamida (exemplo 87, passo a) (5,2 g) em etanol (100 mL) e a mistura resultante aquecida a refluxo de um dia para o outro. O solvente foi evaporado e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (100 mL) e solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (100 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa extraída com acetato de etilo (2 x 100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano:acetato de etilo 10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 5,24 g. 545 m/z 200 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 8,05 (s, 1H), 4,42 (q 7,2 Hz, 2H), 3,04 (t, J = 7, 7 Hz, 2H) , 1,89 - 1,78 (m, 2H) 1,40 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,02 (t, J = 7,2 Hz, 3H). c) Ácido 2-propiltiazole-4-carboxílico
O
HO
Foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidratado (4,4 g) a uma solução de 2-propiltiazole-4-carboxilato de etilo (exemplo 87, passo b) (5,24 g) numa mistura de THF (80 mL) e água (20 mL) . A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro. A reacção foi acidificada com ácido clorídrico concentrado e os voláteis evaporados. A mistura aquosa resultante foi saturada com cloreto de sódio e extraída com acetato de etilo (3 x 100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 2,5 g. RMN de (300 MHz, D6-DMSO) δ 12,91 (s, 1H) , 8,31 (s, 1H), 2,97 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 1,81 - 1,67 (m, 2H) , 0,95 (t, J = 7,3 Hz, 3H) . 546 d) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-propiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il) -N, N, Ν', iV-tetrametilurónio (0,24 g) a uma solução de 2-(3-(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)fenil)etanol (exemplo 82, passo a) (0,14 g) , ácido 2-propiltiazole-4-carboxílico (exemplo 87, passo c) (0,084 g) e trietilamina (0,27 mL) em DMF (7 mL) a 0 °C. A solução amarela resultante foi deixada aguecer até à TA e foi agitada durante 2 h. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo (100 mL) e solução aguosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 100 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5. As fracções contendo o produto foram combinadas, foi adicionado tolueno (200 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar o composto em subepigrafe como uma goma transparente. Rendimento 0,14 g. m/z 444 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,91 (s, 1H), 7,18 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,12 - 7,04 (m, 3H) , 4,37 - 4,30 (m, 1H), 3,69 - 3,57 (m, 8H), 3,41 (s, 2H), 2,98 (t, J = 7,3 Hz, 2H) , 2,71 (t, 547 J = 7,1 Hz, 2H), 2, 40 - 2,23 (m, 4H), 1,82 - 1,64 (m, 4H) , 1,59 - 1,46 (m, 2H), 0,97 (t, J = 7,4 Hz, 3H) . e) Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(3— ((4-(2-propiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado TFA (0, 023 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-propiltiazol-4-il)metanona (exemplo 87, passo d) (0,13 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,19 g) . A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL), foram então adicionados ácido acético (0,017 mL) 548 e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,077 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,028 g), a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,09 g. m/z 652 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D 6-DMSO, 90 °C) δ 11,29 (s, 1H), 7,96 - 7, 92 (m, 1H) , 7,46 - 7,32 (m, 4H) , 6,98 - 6,92 (m, 1H), 6,81 - 6, 75 (m, 1H) , 4,98 - 4,90 (m, 1H) , 4,34 - 4,27 (m, 2H), 3,76 - 3, 62 (m, 6H) , 3,30- 2,94 (m, 12H) , 2, 08 - 1,98 (m, 2H), 1,85 - 1, 70 (m, 4H) , 1,01- 0,92 (m, 3H). Cinco protões permutáveis não observados. 549
Exemplo 88
Ditrifluoroacetato de (R)—1—(2-(3-(2-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole—4—carbonil—1—oxa—4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)propilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 3-(2-Fluorofenil)propan-l-ol
HO
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de complexo de borano-sulfureto de dimetilo (2 M em THF, 27,6 mL) a uma solução de ácido 3-(2-fluorofenil)propanóico (3,09 g) em tetra-hidrofurano (25 mL) e a mistura resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi desactivada com metanol e, quando o borbulhamento terminou, é evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 a 1:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente: Rendimento 2,72 g. 550 7,13 (m, 2H), 7,09 RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 7,24 -6,97 (m, 2H), 3,67 (t, J = 6,3 Hz, 2H) , 2,74 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,95 - 1,83 (m, 2H). Um protão permutável não observado. b) terc-Butil(3-(2-fluorofenil)propoxi)dimetilsilano
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (3,19 g) a uma solução de imidazole (3,6 g) e 3-(2-tluorofenil)propan-1-ol (exemplo 88, passo a) (2,72 g) em DMF seca (30 mL) arrefecida num banho de gelo. Após 45 min, a mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (100 mL) , lavada com água (3 x 100 mL) e evaporada. A goma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 4,4 g. RMN de XH (300 MHz, CDC13) δ 7,23 - 7, 09 (m, 2H) , 7,09 - 6,94 (m, 2H) , 3,64 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2, 75 - 2,66 (m, 2H) , 1,89 - 1, 76 (m, 2H) , 0,91 (s, 9H) , 0,05 (s, 6H) . 551 c) 3-(3-(terc-Butildimetilsililoxi)propil)-2-fluorobenzaldeído
F
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 5 min, terc-butil(3-(2-fluorofenil)propoxi)dimetilsilano (exemplo 88, passo b) (4,4 g) a uma solução de sec-butil-litio (1,4 M em ciclo-hexano, 11,7 mL) e 1,1,4,7,7-pentametildietilenotriamina (3,4 mL) em THF (25 mL) a -78 °C. A mistura resultante foi agitada durante 2 h, em seguida foi cuidadosamente adicionado DMF (6,4 mL) e a mistura resultante deixada aguecer até à TA e agitada de um dia para o outro. A reacção foi desactivada com água (100 mL) e em seguida foi adicionado acetato de etilo (250 mL) . As fases foram separadas e a fase orgânica lavada com água (2 x 100 mL) , solução de HC1 2 M (2 x 50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), em seguida secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano até 10% de éter em iso-hexano. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 10,38 (s, 1H), 7, 73 - 7,67 (m 1H ) , 7,48 (td, J = 7,4, 1, 8 Hz, 1H) , 7,18 (t, J = 7,7 Hz, 1H) 3, 66 (1 J = 6,0 Hz, 2H) , 2, 82 - 2, 75 (m, 2H) 1,90 1,80 (m, 2H) 0, 91 (s, 9H) , 0 , 06 (s, 6H) . 552 d) (9-(2-Fluoro-3-(3-hidroxipropil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado 3-(3-(terc-butildimetilsililoxi)propil)-2-fluorobenzaldeido (exemplo 88, passo c) (0,15 g) a uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,19 g) e ácido acético (0,03 mL) em IV-metil-2-pirrolidinona (10 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 15 min em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,16 g) e a mistura agitada de um dia para o outro. A reacção foi vertida para uma mistura de solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (20 mL) e água (100 mL) . A aquosa foi extraida com acetato de etilo (3 x 100 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com água (50 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL), secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. O residuo foi redissolvido em THF (10 mL) e foi adicionada uma solução de TBAF (1 M em THF, 1,52 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 2 h e o solvente evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna eluindo com gradiente de iso-hexano:acetato de etilo 4:1 + 5% de trietilamina até acetato de etilo + 5% de trietilamina. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,22 g. 553 m/z 476 (M+H)+(APCI) RMN de (400 MHz, d6- -DMSO, 90 ' 3C) δ 7, 99 (s, 1H) , 7,24 - 7,12 (m, 2H) r 7, 08 - 7, 01 (m, 1H) , 4, 48 (t, J = 5 , 1 Hz , 1H) , 3,74 - 3, 38 (m, 10H) , 2, 62 (t, J = 7, 7 Hz, 2H) , 2,46 - 2, 13 (m, 4H) , 1,74-1, 44 (m, 6H) , 1 ,35 (d, J = 6,4 Hz, 6H) . Um protão obscurecido pelo pico da água. e) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-(2-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metilfenil)propilamino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,032 mL) a uma solução de (9-(2-fluoro-3-(3-hidroxipropil)benzil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 88, passo d) (0,2 g) em DCM (5 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,27 g). A solução amarela resultante foi deixada aquecer até à TA e agitada durante 1 h. Foi então adicionada uma mistura de solução saturada de tiossulfato de sódio (5 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (5 mL) e acetato de etilo (20 mL) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 10 min. A fase aquosa foi separada 554 e extraída com acetato de etilo (20 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), acidificadas com algumas gotas de ácido acético, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) , foram então adicionados ácido acético (0,024 mL) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,11 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0, 040 g) , a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,14 g. m/z 684 (M+H)+ (APCI) RMN de 1H (400 MHz, D6- -DMSO, 90 °C) δ 11,25 (s, 1H) , 7,98 7, 89 (m, 1H) , 7,52 - 7,35 (m, 2H), 7, 28 - 7, 16 (m, 1H) , 6,98 6, 86 (m, 1H) , 6,82 - 6, 70 (m, 1H) , 4, 96 - 4, 84 (m, 1H) , 4,39 4, 24 (m, 2H) , 3,77 - 3,58 (m, 6H), 3,34 - 2,94 (m, 9H) , 2, 80 2, 66 (m, 2H) , 2, 10 - 1, 70 (m, 6H) , 1, 41 - 1, 27 (m, 6H) e permutáveis nao observados 555
Exemplo 89
Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(3—((10— (2—metiltiazole—4—carbonil)-7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecan-3-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 4-(Cianometil)-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de l-oxa-6-azaespiro[2.5]octano-6-carboxilato de terc-butilo (2 g) em DMF (20 mL) foi tratada com cianeto de potássio (0,672 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 4 dias. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 60% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,18 g. 556 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) 8 3, 95 - 3,85 (m, 2H) , 3,19 -3,10 (m, 2H), 2,54 (s, 2H) , 1,86 (s, 1H) , 1,76 - 1,61 (m, 4H) , 1,46 (s, 9H). b) 4-(2-Aminoetil)-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de 4-(cianometil)-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (exemplo 89, passo a) (1,4 g) numa mistura de etanol (20 mL) e ácido acético (20 mL) foi hidrogenada a 4 atmosferas de pressão de hidrogénio na presença de óxido de platina(IV) (0,25 g) durante 4 horas. O catalisador foi filtrado e os solventes removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi partilhado entre NaOH aquoso diluído e acetato de etilo e a camada orgânica seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,1 g. Utilizado directamente. 557 c) 4-(2-(2-Cloroacetamido)etil)-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 10 minutos, cloreto de cloroacetilo (0,483 mL) a uma mistura, mantida sob agitação vigorosa, a 0 °C de 4-(2-aminoetil)-4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (exemplo 89, passo b) (1,1 g) em acetato de etilo (25 mL) e carbonato de potássio (1,77 g) dissolvido em água (20 mL) . A mistura foi então agitada a 0 °C durante 45 minutos, antes de ter sido extraída com acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com acetato de etilo. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,9 g. m/z 319 (M-H)“ (APCI) 558 d) 9-Oxo-7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecano-3-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de 4-(2-(2-cloroacetamido)etil)-4-hidroxi- piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (exemplo 89, passo c) (0,3 g) em THF seco (18 mL) foi adicionada gota a gota ao longo de 6 horas a uma mistura, a refluxo, de terc-butóxido de potássio (1 M em terc-butanol, 3 mL) e THF seco (60 mL) . No final da adição a mistura foi aquecida a refluxo durante mais 15 minutos e em seguida arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. A trituração com éter dietilico proporcionou o composto em subepigrafe. Rendimento 0,117 g. RMN de (400 MHz, D6-DMSO) δ 7 ,67 (s , 1H) , 4,01 (s, 2H) , 3,57 (d, J = 13, 1 Hz, 2H), 3,11 (dd, J = 9, 6, 4,2 Hz, 2H), 3, 05 - 2, 95 (m, 2H), 1, 85 - 1, 76 (m, 4H) , 1,38 (s, 9H) , 1,37 - 1,32 (m, 2H) . 559 e) 7-Oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecano-3-carboxilato de terc-butilo
.0
NH
Foi adicionado complexo de borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 2,88 mL) a uma solução de 9-oxo-7-oxa-3,10- diazaespiro [5.6]dodecano-3-carboxilato de terc-butilo (exemplo 89, passo d) (0,41 g) em THF seco (40 mL) e a mistura reaccional em seguida aquecida a 70 °C durante 30 minutos sob azoto. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e desactivada com metanol. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em metanol (100 mL). Foi adicionada Nl, N2-dimetiletano-1,2-diamina (1,0 g) e a mistura aquecida a refluxo sob azoto durante 16 h. Foi adicionada mais
Nl,N2-dimetiletano-1,2-diamina (1,0 g) e o refluxo continuou durante 16 h. Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica com tolueno. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 6% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,176 g. m/z 271 (M+H)+ (APCI). 560 f) 10-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecano-3-carboxilato de terc-butilo
O
Foi adicionado HATU (0,322 g) numa porção a uma solução a 0 °C de 7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecano-3-carboxilato de terc-butilo (exemplo 89, passo e) (0,176 g) e ácido 2-metiltiazole-4-carboxílico (0,093 g) e trietilamina (0,36 mL) em DMF (10 mL) . A mistura foi então agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com acetato de etilo. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 210 mg. RMN de XH (400 MHz, D 6-DMSO, 90 °C) δ 7, 78 (s, 1H), 3,69 (s 4H) , 3,65 - 3 ,62 (m, 2H), 3,59 - - 3, 53 (m, 2H) , 3, 11 - 3,03 (m 2H) , 2,66 (s, 3H) , 1,85 - 1, 81 (m, 2H) , 1, 74 - 1,67 (m, 2H) 1,39 (s, 9H), 1,38 - 1,33 (m, 2H) * 561 g) Trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecan-10-il)metanona
Uma solução de 10-(2-metiltiazole-4-carbonil)-7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecano-3-carboxilato de terc-butilo (exemplo 89, passo f) (0,21 g) em DCM (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (10 mL) e a solução deixada em repouso a 20 °C durante 25 minutos. Foi adicionado tolueno (40 mL) e os solventes evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,21 g. m/z 296 (M+H)+ (APCI) h) (3-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecan-10-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
Uma solução de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il) (7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecan-10-il)metanona (exemplo 89, passo g) (0,21 g) em acetonitrilo (15 mL) foi tratada com trietilamina (0,214 mL) seguida de 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (exemplo 6, passo a) (0,121 g). A mistura reaccional foi agitada 562 durante 3 horas a 20 °C. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre DCM e solução saturada de bicarbonato de sódio. A camada aquosa foi reextraída duas vezes com DCM e os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 6% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,21 g. m/z 430 (M+H)+ (APCI) i) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((10-(2-metiltiazole-4-carbonil)-7-oxa-3,10-diazaes-piro[5.6]dodecan-3-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (3-3-(2-hidroxietil)benzil)-7-oxa-3,10-diazaespiro[5.6]dodecan-10-il)(2-metiltiazol-il)metanona (exemplo 89, passo h) (0,21 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,038 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,311 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de 563 bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,028 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,193 g) e ácido acético (0, 028 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio
(0,061 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O residuo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,145 g. m/z 638 (M+H)+ (APCI) RMN de (400 MHz, D6-DMS0, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7,79 (s, 1H), 7, 44 - 7,32 (m, 4H), 6,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,77 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4, 94 - 4, 89 (m, 1H) , 4,28 (s, 2H) , 3,71 (s, 4H) , 3,68 - 3,64 (m, 2H), 3,25 (t, J = 8,1 Hz, 2H) , 3,20 - 2,99 564 (m, 8H), 2,66 (s, 3H), 2,04 - 1,95 (m, 2H), 1,91 - 1,83 (m, 2H) 1,78 - 1,67 (m, 2H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 90
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-(2-fluoro-3-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(2-Fluorofenil)acetato de metilo
Uma solução de ácido 2-(2-fluorofenil)acético (9,6 g) em metanol (200 mL) foi tratada com cloreto de trimetilsililo (10 mL) e a mistura aquecida a refluxo durante 2 horas. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 9,7 g. 565 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,29 - 7, 23 (m, 2H) , 7,13 - 7,03 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (s, 2H). b) 2-(2-Fluorofenil)-2-metilpropanoato de metilo
F
A uma solução de iodometano (3,2 mL) em DMF seca (80 mL) a 0 °C foi adicionado hidreto de sódio (suspensão a 60%, 2 g) seguida de 2-(2-fluorofenil)acetato de metilo (exemplo 90, passo a) (2,75 g) . A mistura foi deixada aquecer lentamente até à temperatura ambiente e em seguida agitada à temperatura ambiente durante 5 horas. A reacção foi desactivada pela adição cuidadosa de cloreto de amónio aquoso saturado (120 mL) . A mistura foi extraida três vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 8% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 2,6 g. RMN de λΕ (400 MHz, D6-DMSO) δ 7, 46 - 7, 40 (m, 1H) , 7,35 -7,29 (m, 1H), 7,22 - 7,11 (m, 2H), 3,58 (s, 3H) , 1,48 (s, 6H) . 566 c) Acido 2-(2-fluorofenil)-2-metilpropanóico
F HO
Foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (1 g) em água (50 mL) a uma solução de 2-(2-fluorofenil)-2-metilpropanoato de metilo (exemplo 90, passo b) (2,6 g) em metanol (50 mL) e THF (50 mL). A mistura reaccional foi aquecida a 40 °C durante 40 horas. Os orgânicos foram removidos sob pressão reduzida e a solução aquosa remanescente lavada com acetato de etilo. A camada aquosa foi arrefecida e acidificada por adição de HC1 concentrado. A mistura foi extraída com acetato de etilo e a camada orgânica lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio antes de ser seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,5 g. m/z 181 (M-H)“ (APCI) d) 2-(2-Fluorofenil)-2-metilpropan-l-ol
F
Foi adicionado, gota a gota, borano-sulfureto de metilo (2 M em THF, 12,35 mL) a uma solução de ácido 2-(2-fluorofenil)-2-metilpropanóico (exemplo 90, passo c) (1,5 g) em THF (30 mL) . A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 8 horas. A 567 mistura foi desactivada através da adição cuidadosa de metanol até parar a libertação de gás. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica com tolueno. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 30% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,3 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,36 - 7,31 (m, 1H) , 7,25 - 7,19 (m, 1H), 7,13 - oo o (m, 1H) , 7,04 - 6,99 (m, 1H) , 3,79 N IX! 0 1 1 II Ί3 2H) , 1,39 (d, J = 1, 0 Hz, 6H) . Um protão permutável nao observado. e) terc-Butil(2-(2-fluorofenil)-2-metilpropoxi)dimetil-silano
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (1,4 g) em porções a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(2-fluorofenil)-2-metilpropan-l-ol (exemplo 90, passo d) (1,3 g) e imidazole (0,631 g) em DMF (7 mL) a 20 °C. A mistura reaccional foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente e em seguida partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por 568 cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 100% de iso-hexano até 1% de éter dietílico em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 1,4 g. RMN de (400 MHz, CDC13) δ 7,34-7, 29 (m, 1H) , 7,20-7,14 (m, 1H), 7, 08-7, 03 (m, 1H) , 7, 00-6,94 (m, 1H) , 3,71 (s, 2H) , 1,35 (s, 6H), 0,80 (s, 9H), -0,06 (s, 6H). f) 3-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-metilpropan-2-il)—2— ftuorobenzaldeído
H
O
Foi adicionado sec-butil-lítio (1,4 M em ciclo-hexano, 3,54 mL) a tetra-hidrofurano seco (10 mL) sob azoto e a solução arrefecida até -78 °C. Foi adicionada lentamente, gota a gota, Nl- (2- (dimetilamino) etil) -Nl, N2,772-trimetiletano-l, 2-diamina (0,859 g). Foi então adicionada, gota a gota ao longo de 5 minutos, uma solução de terc-butil(2-(2-fluorofenil)-2-metilpropoxi)dimetilsilano (exemplo 90, passo e) (1,4 g) em tetra-hidrofurano seco (3 mL) . A mistura reaccional foi agitada durante 2 horas a - 78 °C. Foi adicionada, gota a gota ao longo de 5 minutos, DMF (2,69 mL) e a mistura agitada a -78 °C durante 1 hora seguida de temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura reaccional foi desactivada por adição de água. Foi adicionado acetato de etilo (200 mL) e o orgânico lavado três vezes com água seguido de duas vezes com HC1 2 M e duas vezes com água, em seguida solução aquosa saturada de cloreto de sódio 569 e seco sobre sulfato de sódio, filtrado e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 1 a 5% de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,98 g. RMN de λΕ (400 MHz, CDC13) δ 10,39 (s, 1H) , 7, 75-7, 70 (m, 1H), 7, 63-7, 58 (m, 1H), 7,19 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 3,74 (s, 2H) , 1,39 (d, J = 1,3 Hz, 6H), 0,79 (s, 9H), -0,05 (s, 6H). g) (9-(2-Fluoro-3-(l-hidroxi-2-metilpropan-2-il)benzil)—1— oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,502 g) a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il) (1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,668 g) e 3-(l-(terc- butildimetilsililoxi)-2-metilpropan-2-il)-2-fluorobenzaldeído (exemplo 90, passo f) (0,49 g) e ácido acético (0,090 mL) em NMP (20 mL) . A mistura reaccional foi então agitada a 20 °C durante 18 horas. A mistura foi partilhada entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi 570 lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. A goma resultante foi dissolvida em THF (20 mL) e tratada com fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 3,16 mL) . A solução foi deixada em repouso a 20 °C durante 8 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, gradiente de eluição 0 a 1% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,63 g. m/z 490 (M+H)+ (APCI) h) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-(2-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(2-fluoro-3-(l-hidroxi-2-metilpropan-2-il)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 90, passo g) (0,21 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,033 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,273 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura 571 reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,025 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-Ί-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,169 g) e ácido acético (0,025 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,054 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™,
Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,125 g. m/ z 698 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) δ 11,25 (s, 1H), 7,93 1H) , 7,56 - 7, 46 (m, 2H), 7, 31 - 7,25 (m, 1H) , 6,89 (d, 572 J = 8,5 Hz, 1H) , 6, 75 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4, 97 - 4, 91 (m, 1H) 4,31 (s, 2H) , 3 ,70 (s, 4H), 3 ,65 (s, 2H) , 3,50 - 3,37 (m, 2H) 3,33 - 3,26 (m, 1H), 3,23 - 3 ,15 (m, 2H) , 3, 12 - 3, 02 (m, 4H) 2,06 - 1,97 (m, 2H), 1,83 - 1, 72 (m, 2H) , 1,50 (s, 6H) , 1,34 (d J = 6,8 Hz, 6H) . Cinco protões permutáveis nao observados
Exemplo 91
Ditrifluoroacetato de (R) -7-(2-(3-((4-(5-etiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (5-Etiltiofen-3-il)(9-(2-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado HATU (0,316 g) numa porção a uma solução a 0 °C de 9-(3-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-2- 573 fluorobenzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano (exemplo 78, passo d) (0,271 g) e ácido 5-etiltiofeno-3-carboxílico (0,1 g) e trietilamina (0,36 mL) em DMF (10 mL) . A mistura foi então agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em THF (20 mL) e tratado com fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em THF, 1,921 mL). A mistura reaccional foi deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas e o solvente foi então removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,12 g. m/z 447 (M+H)+ (APCI) b) Ditrifluoroacetato de (R) —7— (2—(3—((4—(5—etiltiofeno—3— carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
574
Uma solução de (5-etiltiofen-3-il) (9-(2-fluoro-3-(2- hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 91, passo a) (0,12 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,021 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,171 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e foi vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,015 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-1-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-
tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,106 g) e ácido acético (0,015 mL) em metanol (15 mL) . A
mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0, 034 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 m) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™,
Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à 575 secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,095 g. m/z 655 (M+H)+ (APCI) RMN de XH (400 MHz, d6-dmso, 90 °C) δ 11, ,21 (S, t—1 7,52 7, 41 (m, 3H) , 7, 25 (t, J = 7, 7 Hz, 1H) , 6, 94 (d, J = 8,5 Hz 1H ) , 6,89 (s, 1H ) , 6, 77 (d, J = 8,2 Hz, . 1H) , ‘ 1, 95 - 4 , 89 (m 1H ) , 4,30 (s f 2H) , 3 ,67 (t , J = 5 , 0 Hz r 2H) , 3, 53 (t J = 5 ,0 Hz, 2H) 1 , 3,45 (s , 2H ) , 3,24 (t, J = 7,9 ) Hz, 2H) , 3,18- 3, 03 (m, 8H), 2, 81 (q, J = 7,5 Hz, 2H) , • 2, C )5 - - 1, 97 (: m, 2H) 1, 79 - 1,68 (m, 2H) , i, 25 (t, J = 7,6 Hz, 3H) . Cinco protõe; permutáveis nao observados.
Exemplo 92
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2-(2-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
576 a) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(2-(2-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (9-(2-fluoro-3-(l-hidroxi-2-metilpropan-2-il)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 90, passo g) (0,21 g) em DCM (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,033 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,236 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,025 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8- hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento WO2004106333) (0, 186 g) em metanol (15 mL). A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0, 136 g) numa 577 porção. A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 9% de metanol em diclorometano com 1% de amónia aquosa "880" como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,28 g. m/z 806 (M+H)+ (APCI) b) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2-(2-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0,074 mL) em metanol (2 mL) a uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(2-(2-fluoro-3-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 92, passo a) (0,28 g) em THF (8 mL) e a mistura 578 reaccional deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,175 g. m/z 692 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 1 MHz, D6- -DMSO, 90 ° C) δ 8, 14 (d, J = O i—1 0 Hz, 1H) , 7, 93 (s, 1H ) , 7,57 - 7, 50 (m, 2H) , 7, 29 (t, J = 7, 8 Hz, 1H) , 7, 08 (d, J = = 8 ,2 Hz, 1H) , 6,98 (d, J = 8, 2 Hz, 1H) , 6,52 (d, J = 10, 0 Hz, 1H) , 5, 40 - 5,34 (m , 1H ) , 4,3 4 (s, 2H) , 3,69 (s, 4H), 3, 65 (s, 2H ), 3,56 - 3,43 (m, 2H) , 3,33 - 3,18 (m, 3H) , 3,15 - 3,06 i (m, 4H) , 2,06 - 1 ,98 (m, 2H) , 1,83 - 1, 72 (m, 2H) , 1,52 (s, 6H) , 1,34 (d, J = 7,8 Hz, 6H) . Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 93
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(5-etiltiofeno-3- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
579 a) (5-Etiltiofen-3-il)(9-(3-fluoro-5-(2- hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado HATU (0, 449 g) numa porção a uma solução a 0 °C de 2-(3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenil)etanol (exemplo 55, passo c) (0,28 g) e ácido 5-etiltiofeno-3-carboxílico (0,142 g) e trietilamina (0,506 mL) em DMF (10 mL) . A mistura foi então agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica utilizando 2% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,21 g. m/z 447 (M+H)+ (APCI) 580 b) Ditrifluoroacetato de (R) -7-(2-(3-((4-(5-etiltiofeno-3- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (5-etiltiofen-3-il)(9-(3-fluoro-5-(2- hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 93, passo a) (0,21 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,036 mL) seguido de periodinano de Dess-Martin (0,299 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados.
Foi adicionado ácido acético (0,027 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]- tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,185 g) e ácido acético (0, 027 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0, 059 g) . O banho de arrefecimento 581 foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,115 g. m/z 655 (M+H)+ (APCI) RMN de : ΧΗ (400 MHz, d6-dmso, 90 c ’C) δ 11 ,26 (s, i—1 7 ,47 (s, 1H) , 7, 28 - 7,17 (m, 3H) , 6, 93 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,89 (s, 1H) , 6, 77 (d, J = 8 , 2 Hz , 1H ) , 4, 95 4, 90 (m, 1H) , 4,28 (s, 2H) , - 3, 67 (t, J = 5 , 0 Hz , 2H ) , 3, 53 (t, , J = 4, 9 Hz, 2H) , 3 , 45 (S, 2H) , 32 :7 (t J = : 7,9 Hz, 2H) f 3,19 3,00 (m, 8 H) , 2,81 (q, J = 7,6 Hz, 2H) , 2,0 7-1 ,99 (m, 2 H) , 1, 80 - : 1,68 (m, 2 H) , 1 , 25 (t, J = 7,4 Hz, 3H) . Cinco protões permut áveis não observados # 582
Exemplo 94 (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-(2-
Ditrifluoroacetato de
diazaespiro[5.5]undeoan-9-il)eto*i>benzilamino)etil)quinolin- 2(1H)-ona
OH
Foi adicionado 3-(2-(4-(2 metiltiazole 4 carbonil) 1 oxa 4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzaldeído (exemplo 10, passo b) (0,24 g) a uma mistura de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,187 g) e ácido acético (0,032 mL) em metanol (2 mL) . A mistura foi agitada durante 30 min em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado
triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,178 g) e a mistura agitada durante 2 h e concentrada in vacuo. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo (50 mL) e tampão a pH 7,2 (50 mL) . A aquosa foi separada e extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL), secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 95:5:0,5 até 92:8:0,8. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e dissolvidas em tetra-hidrofurano (5 mL) . Foi adicionado 583 trifluoridrato de trietilamina (0,091 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo e o resíduo dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água (1:1, 5 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar os compostos em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,15 g. m/z 634 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ ( 300 MHz, D, 6-DMSO, O O OA C) δ 8,09 (d, J = 10, i N 1) f 7, 92 (s, 1H) , 7,37 (t, J = 7, 8 Hz, 1H) , 7,20 - 6, 94 (m, 5H) , 6, 50 (d, J = = 10, 0 Hz, 1H), 5,37 (dd, J = : 3,2, 4 ,5 Hz , i H) , 4,37 (t f J = 5, 0 Hz, 2H) , 4,30 - 4, 16 (m, 2H) , 3, 76 - 3, 62 (m, 6H) , 3, 61 - 3 ,54 (m, 2H), 3,46 - 3,35 (m, 2H) , 3,31 - 3, 17 (m, 2H) , 3, 11 - 3 ,01 (m, 2H), 2,68 (s, 3H ), 2, . 11 - - 1,98 (m r 2H) , 1, . 94 - 1, 78 (m, 2H) . Se. is protões permutáveis não observados. 584
Exemplo 95
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-(3-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propoxi)benzilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
S a) Metanossulfonato de 3-(3-formilfenoxi)propilo
H
Foram adicionados 3-bromo-l-propanol (3,94 mL) e carbonato de potássio (6,22 g) a 3-hidroxibenzaldeído (5 g) em acetonitrilo (100 mL). A mistura resultante foi agitada a refluxo durante 5 horas sob azoto. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e partilhada entre acetato de etilo e hidróxido de sódio aquoso diluído, gelado. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM (30 mL) e tratado com trietilamina (5,7 mL) . A solução foi arrefecida até 0 °C e tratada gota a gota com cloreto de metanossulfonilo (3,2 mL) . A mistura reaccional foi agitada a 585 0 °C durante 10 minutos e em seguida à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 33% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 5,20 g. RMN de XH (400 MHz, CDC13 ) δ 9,98 (s, 1—1 7,50 - 7,43 (m, 2H) , - 7, 40 - 7,39 (m, 1H) , 7,20 - 7, 16 (m, 1H), 4,46 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 4, 17 (t, r J = 5,9 Hz, 2H) , 3,01 (s, 3H), 2, 30 - 2, 23 (m, 2H) . b) 3-(3-(4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propoxi)benzaldeído
Uma solução de metanossulfonato de 3-(3-formilfenoxi)propilo (exemplo 95, passo a) (0,209 g) e trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,32 g) e trietilamina (0,282 mL) em acetonitrilo (10 mL) foi aquecida a 65 °C durante 18 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de 586 etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2% de metanol e 1% de trietilamina em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,157 g. m/z 444 (M+H)+ (APCI) c) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-(3-(4-(2- metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propoxi)benzilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,113 g) numa porção a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de 3-(3-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)propoxi)benzaldeído (exemplo 95, passo b) (0,157 g), (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8- hidroxiquinolin-2(1H)-ona (W02004106333) (0,118 g) e ácido acético (0, 020 mL) em metanol (7 mL) . A mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 2 horas. A maior parte do metanol foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre 587 acetato de etilo e tampão aquoso de fosfato (pH =7,2), a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica utilizando 8% de metanol e 1% de amónia aquosa "880" em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,160 g. m/z 762 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-(3-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propoxi)benzilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-(3-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-9-il)propoxi)benzilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 95, passo c) (0,160 g) em THF (2 mL) foi tratada com trifluoridrato de trietilamina (0,041 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 18 horas a 20 °C. O solvente foi evaporado e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-35% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,081 mg. m/z 648 (M+H)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 10 ,75 - 10 ,43 (m, 2H) , io O o V - 9, 74 (m, 1H) , 9, 30 (s, 1H), 9,: 10 (s, 1H) , 8, 07 (d, J = 9, 7 Hz, i—1 8, 01 (s, 1H) t 7,36 (t, J : = 7 ,9 Hz, 1H) , - 7, , 16 - 7 , 09 (m, 3H) , 7, 01 - 6, 94 (m, 2H) , 6,54 (d, J = 9, 7 Hz, 1H) , 5 , 35 (d, J = 9,5 Hz 1H) , 4, 21 (s, 2H), 4, 07 - 4, 00 (m, 2H) , 3, 83 - 3 ,16 (m, 10H) , 3,08 - 2, 90 (: m, 4H), 2, 70 (s, 3H) , 2 ,18 - 2 ,04 (m, 4H) , 1, 83 - 1,66 (m, 2H) . Um prot ão permutável não observado.
Exemplo 96
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)benzilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
589 a) 3-((4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)benzaldeído
Uma solução de trifluoroacetato de (2-metiltiazol-4-il) (1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 4, passo h) (0,408 g), 3-(bromometil)benzaldeído (0,205 g) e trietilamina (0,36 mL) em acetonitrilo (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução foi concentrada in vacuo e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e bicarbonato de sódio saturado. A fase orgânica foi lavada duas vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca sobre sulfato de magnésio anidro e purificada por cromatografia flash sobre sílica eluído com 5% de metanol em diclorometano para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,325 g. RMN de (400 MHz, D6 -DMSO, 90 °C) δ 10, , 01 (S, 1H), 7, 85 (d, J = 0, 8 Hz, r 1H) , 7, 80 (s, 1H) F 7, 76 (d, J = 7,4 Hz, 1H ) , 7, 61 (d, J = = 7, 4 Hz, 1H), 7, , 52 (t, J = 7,4 Hz, 1H) , 3,71 - 3, 46 (m, 8H) , 2,6 .8 ( s, 3H) , 2,44 - 2 ,29 (m, 4H) , 1, / '8 - 1,65 (m, 2H ) , 1,61 - 1 , 46 (m, 2H) . 590 b) {R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)benzilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de 3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)benzaldeído (exemplo 96, passo a) (0,303 g) , (R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,330 g) e ácido acético (0,043 mL) em metanol (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos, em seguida arrefecida num banho de água com gelo sob azoto e tratada com triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,243 g) numa porção. A mistura foi agitada em gelo-água durante 2 horas, em seguida concentrada in vacuo. O resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, as fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída mais duas vezes com acetato de etilo. Quaisquer resíduos gomosos insolúveis foram dissolvidos em metanol. As fases de acetato de etilo combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio e combinadas com a solução de metanol. A totalidade foi purificada por cromatografia flash sobre sílica eluída com trietilamina:metanol:diclorometano 1:7:92 para proporcionar o subproduto em epígrafe ligeiramente impuro como uma espuma amarela. Rendimento 0,324 g. 591 RMN de ΧΗ (400 MHz, D6- DMSO, 90 c ’C) δ 8, 35 (d, O \—1 II i Hz 1H) , 8,0 1 (s, 1H) , 7, 40 - 7,30 (m, 2H) f 7, 30 - 7, 23 (m, 2H) 7,17 (d, J = 8,2 Hz , 1H) , 7, 08 (d, J = = 8 ,2 Hz, 1H ), 6,59 (d J = 10,0 Hz, 1H), 5 ,30 (dd, J = 7,3 r 4, 7 Hz , 1H) , 3,91 - 3, 7 (m, 8H) , 3,57 (s, 2H), 3,02 (dd, J = 12 ,3 r 7,4 Hz, 1H), 2, 91 2, 77 (m, 4H) , 2,56 - 2,43 ( m, 4H ) , 1 , 90 - 1 , 8 0 (m, 2H), 1, 74 1,62 (m, 2H) , 0, 99 (s, 9H) , 0,1 9 ( s , 3H) f 0,00 (s , 3H) . Trê protoes permutáveis nao observados. c) Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)benzilamino)etil)quinolin-2(lH)-ona
Uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)benzilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 96, passo b) (0,320 g) e trif luoridrato de trietilamina (0,15 mL) em THF (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro em seguida concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo (3 mL) e água (1 mL) e a solução resultante purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o 592 produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar uma espuma branca. A espuma foi triturada com éter dietilico para dar um sólido, o qual foi removido por filtração, lavado com éter dietilico e seco in-vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um pó branco. Rendimento 0,264 g. m/z 604 (M+H)+ (APCI) RMN de 1R (400 MHz, d6-dmso, 90 °C) δ 8,08 (d, J = 9, 7 Hz, 1H) , 7, 90 (s, 1H) , 7, 65 - 7, 49 (m, 4H) , 7, 10 (d, J = 7, 9 Hz, 1H) , 6, 97 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6 , 52 (d, J = io, 0 Hz r 1H, 5, , 3 5 (dd, J = 8 ,6, 4,2 Hz, 1H) , 4,35 - 4, 21 (m, 4H) , 3, 74 3,5 7 (m, 6H) , 3, 23 - 2 ,98 (m, 6H) , 2,67 (s, 3H) , 2,06 - 1, 91 (m, 2H) , 1,85 - 1,65 (m, 2H). Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 97
Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(2,5-dimetil-4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Foi adicionado 2,5-dimetil-4-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)- 593 benzaldeído (exemplo 18, passo f) (0,08 g) a uma mistura de (R)-5-(2-amino-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento WO2004106333) (0,088 g) e ácido acético (0,010 mL) em metanol (2 mL). A mistura foi agitada durante 30 min em seguida arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,016 g) e a mistura agitada durante 2 h. O solvente foi removido in vacuo e o resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aguosa "880" 95:5:0,5 até 92:8:0,8. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi redissolvido em tetra-hidrofurano (5 mL), foi adicionado trifluoridrato de trietilamina (0, 028 mL) e a mistura agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aguoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo e o resíduo triturado com éter dietílico para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,07 g. m/z 662 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 90 °C) 8 8, 12 (d, J = 10, ( 0 Hz, 1H) , 7,9 2 (s, 1H) , 7,27 (s, 1H), 7,: 12 (d, J = 8,2 Hz, : LH) r 6,99 (d, J = 8,2 H; 2, 1H ), 6,86 (s, 1H), 6,51 (d, J = 9, 7 Hz r 1H) , 5,38 (dd , J = 8,2, 4,6 Hz, 1H), 4, 35 (t, J = 4, 9 Hz , 2h; l , 4, ,25 - 4,13 (m, 2H) , 3,76 - 3,64 (m, 6H) r 3,61 - 3,53 (m, , 2H) r 3, 46 - 3,36 (m, 2H) , 3,33 - 3,20 (m, 2H), 3 ,19 - 3,10 (m, 2H) , 2, 6 ( 3 (s, 3H) , 2,33 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) , 2 ,12 - 2,01 (m, 2 H) r 1, 95 - 1,79 (m, 2H) . Seis protões permutáveis nao observados. 594
Exemplo 98
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-((5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)etil)tiofen-2-il)metilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
a) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-((5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofen-2-il)metilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma solução de 5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofeno-2-carbaldeido (exemplo 21, passo c) (0,188 g) e (.R)-5-(2-amino-l-(terc-
butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (documento W02004106333) (0,150 g) em metanol (10 mL) foi tratada com ácido acético (0,026 mL) seguida de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,143 g). A mistura foi agitada a 20 °C 595 durante 18 horas. Foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,143 g) e agitação a 20 °C continuou durante 2 horas. Foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (143 mg) e agitação continuou durante 2 horas. O metanol foi removido sob pressão reduzida e o residuo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio e acetato de etilo. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica utilizando 1% de amónia aquosa concentrada e 8% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,122 g. m/z 738 (M+H)+ (APCI) b) Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-((5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofen-2-il)metilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
HO
O
Uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-((5-(2-(4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etil)tiofen-2-il)metilamino)etil)- 596 8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (exemplo 98, passo a) (0,122 g) em THF (4 mL) foi tratada com uma solução de trif luoridrato de trietilamina (0,035 mL) em metanol (1 mL) e a mistura resultante foi deixada em repouso a 20 °C durante 18 horas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,085 g. m/z 624 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz , D6- DMSO, to O o O co co 10 (d, J = 31,8 Hz 1H) , 7 ,93 (s, 1H), 7, 15 (d, J = 12,5 H: z, 1H), 7,10 (d J = 15, 7 Hz , 1H), 6, 98 (d, J = 22, 6 Hz, 1H) , 6 ,92 (d J = 11, 2 Hz , 1H), 6,53 (d, J = 30,4 Hz, 1H) , 5,37 - 5, 31 (m 1H) , 4, 41 (dd, J = 17, 7, 1- 4, 4 H; z, 2H), 3, 71 (s, 4H), 3,66 (s 2H) , 3, 42 - 3,33 (m, 4H) , 3,27 - 3, 06 (m, 6H), 2,68 (s, 3H) 2,10 - 1, 98 (m, 2H) , 1, 88 - 1, 75 (m, 2H). Seis protõe: permutáveis nao observados. 597
Exemplo 99
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(5-((4-(5-etiltiofeno-3- carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Trifluoroacetato de (5-etiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado HATU (1,15 g) numa porção a uma solução a 0 °C de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de ierc-butilo (WuXi PharmaTech) (0,682 g) e ácido 5-etiltiofeno-3-carboxílico (0,364 g) e trietilamina (1,3 mL) em DMF (10 mL). A mistura foi então agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 50% 598 de acetato de etilo em iso-hexano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o intermediário protegido com "BOC". Foi adicionado DCM (10 mL) seguido de ácido trifluoroacético (10 mL) e a solução resultante deixada em repouso a 20 °C durante 25 minutos. Foi adicionado tolueno (30 mL) e os solventes evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo para produzir o composto em subepígrafe. Rendimento 0,950 g. m/z 295 (M+H)+ (APCI) b) (5-Etiltiofen-3-il)(9-(4-fluoro-3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado 2-(5-(bromometil)-2-fluorofenil)etanol (exemplo 47, passo a) (0,171 g) a uma solução de trifluoroacetato de (5-etiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 99, passo a) (0,3 g) e trietilamina (0,410 mL) em acetonitrilo (15 mL) e a mistura agitada a 20 °C durante 2 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio. A 599 camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 1% de trietilamina e 2% de metanol em diclorometano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,2 g. m/z 447 (M+H)+ (APCI) c) Ditrifluoroacetato de (R) -7- (2-(5-((4-(5-etiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (5-etiltiofen-3-il)(9-(4-fluoro-3-(2- hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 99, passo b) (0,2 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,035 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,285 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL ) e solução saturada de bicarbonato de sódio ' (2 0 mL ) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os 600 orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,026 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-Ί-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,176 g) e ácido acético (0, 026 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0, 056 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,14 g. (M+H) + 655 (APCI :) RMN < de ΤΗ (400 MH 4 d6-dmso , 90 °C) δ 11, 27 (S, 1H), 7, 49 - 7,44 (m, 3H) , 7,29 - 7, 23 (m, 1H) , 6, 94 (d, J = 7, 2 Hz, 1 H) , 6,89 (s, 1 H) , 6, 77 (d, J = 8, 2 Hz, 1 H), 4, 94 - 4, .89 (m, 1H) , 4,26 (s, 2H) , 3,67 (t, J = 5, 0 Hz, 1H) , 3, 53 (t, J = 5, 0 Hz, 2H) , 3,45 (s, 2H) , 3,24 (t, J = 8, 1 Hz, 2H) r 3,18 - 3, 02 (m, 8H) , 2,81 (q, J = 7, 5 Hz , 2H), 2,07 - 1,98 (m, 2H) , 1, 79 - 1,67 601 (m, 2H) , 1,25 (t, J = 7,4 Hz, 3H). Cinco protoes permutáveis não observados.
Exemplo 100
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(5-etiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-4-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
a) terc-Butil(4-fluorofenetoxi)dimetilsilano
Foi adicionado cloreto de terc-butildimetilsililo (0,903 g) em porções a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(4-fluorofenil)etanol (0,7 g) e imidazole (0,408 g) em DMF (20 mL) a 20 °C. A mistura reaccional foi agitada durante 3 horas à temperatura ambiente e em seguida partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. 0 produto 602 em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica utilizando 2% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,99 g. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) 8 7,18-7,13 (m, 2H) , 6,99-6,93 (m, 2H), 3,77 (t, J= 6,9 Hz, 2H) , 2,78 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 0,86 (s, 9H), -0,03 (s, 6H) b) 5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)—2— fluorobenzaldeído
Foi adicionado sec-butil-lítio (1,4 M em ciclo-hexano, 2,78 mL) a tetra-hidrofurano seco (10 mL) sob azoto e a solução arrefecida até -78 °C. Foi lentamente adicionada, gota a gota, Nl-(2-(dimetilamino)etil)-Nl,N2,N2-trimetiletano-1,2-diamina (0,674 g). Foi então adicionada, gota a gota ao longo de 5 minutos, uma solução de terc-butil(4-fluorofenetoxi)dimetil-silano (exemplo 100, passo a) (0,99 g) em tetra-hidrofurano seco (3 mL) . A mistura reaccional agitada durante 2 horas a -78 °C. Foi adicionada, gota a gota ao longo de 5 minutos, DMF (2,1 mL) e a mistura agitada a -78 °C durante 1 hora, seguida de temperatura ambiente durante 45 minutos. A mistura reaccional foi desactivada por adição de água. Foi adicionado acetato de etilo (200 mL) e o orgânico lavado três vezes com água, seguida de duas vezes com HC1 2 M e em seguida duas vezes com água. A 603 solução orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. 0 produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica utilizando 2% de acetato de etilo em iso-hexano como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,5 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ O \—1 36 (s \—1 , 7, 72-7,69 (m 1H) , 7, 48 -7, 43 (m, 1H) , 7,11-7,06 (m, 1H) , 3,80 (t, J = 6,5 Hz 2H) , 2,83 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 0,85 (s, 9H) , 0,04 (s, 6H) . c) (5-Etiltiofen-3-il)(9-(2-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,225 g) a uma solução, mantida sob agitação, a 0 °C de trifluoroacetato de (5-etiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 99, passo a) (0,289 g) e 5—(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-2-fluorobenzaldeído (exemplo 100, passo b) (0,2 g) e ácido acético (0,041 mL) em NMP (20 mL) . A mistura reaccional foi então agitada a 20 °C durante 18 horas. Foi adicionado mais triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,150 g) e a agitação continuou durante 4 horas. A mistura foi partilhada 604
entre acetato de etilo e solução saturada de bicarbonato de sódio, a camada orgânica foi lavada duas vezes com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. A goma resultante foi dissolvida em THF (20 mL) e tratada com TBAF (1 M em THF, 1,4 mL) . A solução foi deixada em repouso a 20 °C durante 8 horas. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica utilizando 2% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina como solvente. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,18 g. m/z 447 (M+H)+ (APCI) d) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((4-(5-etiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)4-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (5-etiltiofen-3-il)(9-(2-fluoro-5-(2- hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 100, passo c) (0,18 g) em DCM (15 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,031 mL) seguida de 605 periodinano de Dess-Martin (0,256 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída duas vezes com acetato de etilo, os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, secos sobre sulfato de sódio e filtrados. Foi adicionado ácido acético (0,023 mL) a esta solução e o solvente removido em seguida sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2(3H)-ona (documento WO2007027134, exemplo 1, passo d) (0,159 g) e ácido acético (0,023 mL) em metanol (15 mL) . A mistura foi arrefecida num banho de gelo e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,051 g) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada a 20 °C durante 3 horas. O solvente foi evaporado até um volume de 3 mL sob pressão reduzida e foi adicionado THF (20 mL) . A mistura foi lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (1 mL) . A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. O produto em bruto foi purificado por HPLC preparativa (Sunfire™,
Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o composto desejado foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,14 g. m/z 655 (M+H)+ (APCI) 606 RMN de (400 MHz, D6- DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7 r 48 - 7, 43 (m, 2H) r 7, 42 - 7,37 (m, 1H), 7, 25 (t, J = 9 , 1 Hz t 1 H) , 6,93 (d, J = 8 ,1 Hz, 1H) , 6,89 (s, 1H) , 6, 77 (d, J = 8, 5 Hz, 1H) , 4:94 - 4, 88 (m, 1H) , 4,27 (s, 2H) , 3,67 (t, J = 5, 0 Hz, 2H) , 3,53 (t, J = 5, 0 Hz , 2H) t 3, 45 (s, 2H) , 3, 23 (t, J = 8 ,2 Hz, 2H) , 3,18 - 2,9 7 (m, 8H) , 2,81 (q, J = 7,8 Hz, 2H) , 2,04 - 1,98 (m, r 2H) , 1, 79 - - 1,69 (m , 2H) , 1,25 (t, J = 7, 6 Hz, 3Η). Cinco protões permutáveis nao observados.
Exemplo 101
Formato de (.R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(6-(4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)hexiltio)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 6-(2,2-Dimetoxietiltio)hexan-l-ol
HO A uma solução de 6-mercapto-hexan-l-ol (2,5 L) em MeCN (30 mL) a 0 °C foi adicionado hidreto de sódio (suspensão a 60% em óleo mineral, 0,81 g) . A mistura foi agitada a 0 °C durante 1 h, em seguida foi adicionado 2-bromo-l,1-dimetoxi-etano 607 (2,4 mL). A mistura resultante foi agitada à TA durante 20 h, em seguida foi desactivada por adição de solução saturada de bicarbonato de sódio. A mistura foi extraída com acetato de etilo (x 3), em seguida os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio, em seguida com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 25% de acetato de etilo em ciclo-hexano para dar o composto em subepígrafe como um líquido incolor. Rendimento 1,85 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D4-MeOH) δ 4,49 (t, J = 5,5 Hz, 1H) , 3,64 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,37 (s, 6H) , 2,69 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,59 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,66-1,52 (m, 4H), 1,46-1,32 (m, 4H). Um protão permutável não observado. b) 2-(6-Bromo-hexiltio)acetaldeído
A uma solução de 6-(2,2-dimetoxietiltio)hexan-l-ol (exemplo 101, passo a) (1,85 g) em DCM (75 mL) a 0 °C sob N2 foi adicionado tetrabrometo de carbono (3,31 g) seguido de trifenilfosfina (2,62 g) em porções. A mistura resultante foi agitada à TA durante 1,25 h em seguida concentrada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-50% de acetato de etilo em ciclo-hexano para dar o composto em subepígrafe como um líquido amarelo. Rendimento 1,31 g. 608 RMN de XH (400MHz, CDC13) δ 9,47 (t, J = 3,5 Hz E 1—1 ** ) , 3, 43- 3,36 (m, 2H), 3,18 (d, J = 3,5 Hz, 2H) , 2,44 (t, J = 7, 3 Hz, 2H) , 1,91-1,81 (m, 2H) , 1,64-1,53 (m, 2H) , 1,49-1,36 (m, 4H) c) (R)-2-(6-Bromo-hexiltio)etil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
A uma solução de 2-(6-bromo-hexiltio)acetaldeído (exemplo 101, passo b) (1,2 g) em DMF (20 mL) com ácido acético (0,287 mL) e peneiros moleculares de 3 Â a 0 °C sob N2 foi adicionado cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (1,45 g) . A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 h, em seguida foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (1,6 g) e a mistura agitada à TA durante 2 h. Foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (1,1 g) e a agitação continuou durante 20 h. A mistura reaccional foi desactivada por adição de solução saturada de bicarbonato de sódio (40 mL) , em seguida a solução foi extraída com acetato de etilo (x 3) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-100% de acetato de 609 etilo em ciclo-hexano para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,56 g. RMN de (300 MHz, D4-MeOH) δ 6,89 (dd, J = 18,6, 8,3 Hz, 1H) , 6, 72 (d, J = 8,2 Hz, 1H) co (s, 1H) , 3,59-3, 39 (m, 4H), 3,33- -3,29 (m, 2H) , 2,64-2 , 41 (m, 4H) Οδ OD 1-1 -1,80 (m, 2H), 1,66- 1,32 (m, 15H). Três protões permutáveis nao observados. d) 4-(2,2,2-Trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo XX)
Foi adicionada, gota a gota ao longo de 20 min, uma solução de anidrido trif luoroacético (2,2 mL) em DCM (14 mL) a uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (4,7 g) e trietilamina (4,9 mL) em DCM (90 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 45 min e em seguida à TA durante 2 h. Foi adicionada água (90 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada durante 10 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com DCM (50 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e evaporadas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 40-50% de AcOEt em éter de petróleo (40-60 °C) para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 2,73 g. 610 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 3,86 (d, J = 13,3 Hz, 1 H) , 3,77 (t, J = 4,9 Hz, 2 H), 3,74-3,64 (m, 2H), 3,61 (t, J = 4,8 Hz, 1 H), 3,52 (s, 1 H) , 3,23-3,15 (m, 1H) , 3,07 (t, J = 11,4 Hz, 1 H), 1,85 (d, J = 13,8 Hz, 1H) , 1, 77 (d, J = 13,9 Hz, 1H) , I ,52-1,37 (m, 12H) . e) Trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-l-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona
F
Foi adicionado ácido trifluoroacético (66 mL) a uma solução de 4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 101, passo d) (4,33 g) em DCM (66 mL) e a mistura resultante foi agitada à TA durante 20 min. Foi adicionado tolueno (50 mL) e a mistura foi evaporada in vacuo (x 3) para dar o composto em subepigrafe. Rendimento 5,52 g. RMN de ΤΗ ( 400 MHz, CDC13) δ 8,73 (s 1, 2H), 3,77 (d, J = 5,1 Hz, 2H) , 3,72 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 3,65 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 3,58 (s, 1H), 3,48 (s, 1H) , 3,33 (s, 2H) , 3,24 (s, 2H) , 2,08 (t, J = 14,6 Hz, 2H), 1,93-1,75 (m, 2H). 611 f) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di- hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(2-(6-(4-(2,2,2-trifluoroacetil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)hexiltio)etil)carbamato de terc-butilo
(R)-2-(6-Bromo-hexiltio)etil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo (exemplo 101, passo c) (0,55 g) foi combinado com sal de ácido trifluoroacético de 2,2,2-trifluoro-1-(l-oxa-4, 9-diaza- espiro[5.5]undec-4-il)-etanona (exemplo 101, passo e) (0,25 g) e trietilamina (0,26 mL) em acetonitrilo (20 mL) e aquecida a 80 °C durante 48 h. Os voláteis foram evaporados in vacuo. A purificação foi conseguida por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 10% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,10 g e 0,074 g (menos puro). m/z 721 (M+H) RMN de XH (400 MHz, D4-MeOH) δ 6, 81 (s, 1 H) i , 6,69 (d, J = 8,21 Hz, 1 H) , 3, 80-3, 74 (m, 2H) , 3,65 (s, 2H) , 3,58-3,54 (m, 1H), 3, 52- 3,47 (m, 1H), 3,11 -2,94 (m, 4H) , 2, 51-2,41 (m, 6H) , 2,05-1, 95 (m, 2H), 1,80-1,59 (m, 8H) , 1,50 (s, 9H), 1,46- 1,25 (m, 6H). Um protão obscurecido pelo pico do solvente e três protões permutáveis não observados. 612 g) {R)-2-(6-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)hexiltio)etil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
A uma solução, mantida sob agitação, de (R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(2-(6-(4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)hexiltio)etil)carbamato de terc-butilo (exemplo 101, passo f) (0,18 g) em metanol (10 mL) foi adicionada uma solução de carbonato de potássio (0,06 g) em água (10 mL) . A mistura foi agitada à TA durante 17 h, em seguida o metanol foi removido sob uma corrente de azoto. A solução foi diluída com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, extraída com acetato de etilo (x 3) e seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em metanol e evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um vidro castanho. Rendimento 0,15 g. m/z 625 (M+H)+ RMN de (300 MHz, D4-MeOH) δ 6, 94-6, 82 (m, 1H) , 6,73 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 3,66-3,59 (m, 2H), 3,51-3,40 (m, 2H), 2,80-2,69 (m, 4H) , 2,66-2,62 (m, 2H) , 2,55-2, 40 (m, 8H) , 2, 04-1, 94 (m, 2H) , 1,62-1,56 (m, 8H) , 1,55-1,21 (m, 13H) . Um protão obscurecido pelo pico do solvente e quatro protões permutáveis não observados. 613 h) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(6-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)hexiltio)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
A uma solução (R) -2-(6-(l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)hexiltio)etil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo (exemplo 101, passo g) (0, 093 g) em DMF (3 mL) foi adicionada trietilamina (0,062 mL) e ácido 2-isopropil-tiazole-4- carboxilico (0,025 g) seguido de hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, N', N'-tetrametilurónio (0,079 g) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 4 h, em seguida foram adicionadas 4 gotas de amónia aquosa "880" e a mistura foi agitada durante 15 min. Foram adicionados solução aquosa saturada de cloreto de sódio e acetato de etilo à solução e as fases foram separadas, em seguida a fase orgânica foi extraída com acetato de etilo (x 2) . A fase orgânica combinada foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi dissolvido em DCM (2 mL) , em seguida foi adicionado ácido trifluoroacético (1 mL) . A solução foi deixada em repouso à TA durante 40 min, em seguida foi adicionado tolueno (20 mL) e a mistura foi concentrada in vacuo. Foi adicionada uma quantidade adicional de tolueno e a mistura novamente concentrada antes do material ser submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em ácido fórmico 614 aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido incolor. Rendimento 0,016 g. m/z 678 (M+H)+ RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 80 °C) δ 8,18 (s, 1H), 7,91 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6,72 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4, 64-4, 58 (m, 1H) , 3, 72-3,62 (m, 2H) , 3,62-3,58 (m, 6H) , 3,38- 3. 28 (m, 1H), 2,84-2,74 (m, 6H), 2,62-2,58 (m, 2H), 2,47-2,31 (m, 6H), 1, 78-1,69 (m, 2H) , 1,60-1,50 (m, 4H) , 1,45-1,41 (m, 2H), 1,38 (d, J = 6,6 Hz, 6H), 132-1,26 (m, 2H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 102
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(7-(4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2,2-dimetil-heptilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
615 a) 7-Bromo-2,2-dimetil-heptanoato de etilo
O A uma solução de diisopropilamina (5,82 mL) em THF (30 mL) foi adicionado n-butil-lítio (2,5 M em hexanos, 16,4 mL) a 0 °C e a mistura foi agitada durante 30 min a esta temperatura, antes de ter sido arrefecida até -78 °C. Foi adicionado, gota a gota, isobutirato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi agitada a -78 °C durante 1 h, antes da adição de 1,5-dibromopentano (5,61 mL) . A mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante 1 h, em seguida à TA durante 2,5 h, antes de ter sido vertida para solução saturada de cloreto de amónio. A solução foi extraida com acetato de etilo (x 2), em seguida os orgânicos combinados foram lavados com água e secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-25% de acetato de etilo em ciclo-hexano para dar o composto em subepígrafe como um líquido amarelo. Rendimento 4,45 g. RMN de 1H (400 MHz, CDC13 ) δ 4,08 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,41- 3,33 (m, 2H) , 1,91-1,77 (m, 2H) , 1,61-1,44 (m, 2H) , 1,52-1,24 (m, 2H), 1,21 (t, J = 7,1 Hz, 5H) , 1,12 (s, 6H) . b) 7-Bromo-2,2-dimetil-heptan-l-ol
616 A uma solução de 7-bromo-2,2-dimetil-heptanoato de etilo (exemplo 102, passo a) (1,5 g) em éter dietílico seco (50 mL) a 0 °C sob N2 foi adicionado hidreto de diisobutil-aluminio (1 M em tolueno, 12,5 mL) gota a gota. A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 1 h, em seguida desactivada por adição de tartarato de potássio e sódio saturado (150 mL) . A mistura foi agitada durante 1 h, em seguida extraída com acetato de etilo (x 3). Os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-25% de acetato de etilo em ciclo-hexano para dar o composto em subepígrafe como um líquido incolor. Rendimento 1,16 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 3,41 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 3,32 (d, J = 5,8 Hz, 2H), 1,93-1,82 (m, 2H), 1,47-137 (m, 2H), 1,35-1,20 (m, 4H), 0-91-0,81 (m, 6H). Um protão permutável não observado. c) (9-(7-Hidroxi-6,6-dimetil-heptil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,5 g) foi dissolvido em metanol e aplicado a um cartucho de 617 SCX pré-humedecido com metanol. 0 cartucho foi lavado com metanol e eluído com solução de amónia 2 M em metanol. 0 eluente foi evaporado in vacuo para proporcionar o material como uma base livre (0,29 g). A este material foi adicionado 7-bromo-2,2-dimetil-heptan-l-ol (exemplo 102, passo b) (0,26 g) em acetonitrilo (10 mL) , em seguida trietilamina (0,27 mL) e a mistura resultante foi aquecida a 60 °C durante 17 h. Os voláteis foram evaporados in vacuo e o produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0%, em seguida 5%, em seguida 10% de metanol em DCM para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma incolor. Rendimento 0,29 g. m/z 452 (M+H)+ RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) δ 7,87 (s, 1H) , 4,01-3,95 (m, 2H) , 3,80-3,62 (m, 2H) , 3,49 (s, 1H), 3,34-3,28 (m, 2H) , 3,16- 3,09 (m, 1H) , 2,98- -2, 75 (m, 3H), 2,42-2,20 (m, 2H), 2, 09 (m 1, 2H) , 1,95-1,82 (m, 2H) , 1, 47-1, 40 (m, 8H) , 1,34-1, 21 (m, 8H) , 0,85 (s, 6H). Um protão permutável nao observado. 618 d) 7-(4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2,2-dimetil-heptanal
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,048 mL) a uma solução de (9-(7-hidroxi-6,6-dimetil-heptil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 102, passo c) (0,28 g) em DCM (15 mL) a 0 °C sob árgon e a mistura agitada durante 5 min, antes da adição de periodinano de Dess-Martin (0,39 g) . A mistura reaccional foi agitada à TA durante 1 h, em seguida foi desactivada por adição de solução saturada de bissulfito de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL), em seguida foi adicionado acetato de etilo e a mistura agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a solução aquosa foi extraída com acetato de etilo (x 2) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,053 mL) à fase orgânica, a qual foi então seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe em bruto como um óleo amarelo. Rendimento 0,33 g. m/z 450 (M+H)+ RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13 ) δ 9,43 (s, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 4,02- -3,86 (m, 3 H), 3,82 -3,67 (m, 4H) , 3,36-3,26 (m, 2 H), 3,24- 2,97 (m, 2H), 2,85-2,66 (m, 4H ), 2,03 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 1,79- 619 1,60 (s, 2H) , 1, 48-1,35 (m, 8H) , 1,34-1,19 (m, 4H) , 1,06 (s, 6H) . e) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(7-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2,2-dimetil-heptilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,053 mL) a uma mistura de 7-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]— undecan-9-il)-2,2-dimetil-heptanal (exemplo 102, passo d) (0,33 g) e cloridrato de (P)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,25 g) com peneiros moleculares de 3 Á em metanol anidro (10 mL) . A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida arrefecida até 0 °C. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,13 g) e a mistura resultante foi agitada à TA durante 16,5 h. A solução foi filtrada em seguida concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água e purificado por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,1 g. m/z 660 (M+H)+ 620 RMN de ΤΗ (400 MHz, : D4-MeOH) δ 8, 50 (s, 1H) , 7, 89 (s, \—1 6,93 (d, J = 8,3 Hz , 1H) , 6,71 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4,93 (dd, J = 9,5, 4, 1 Hz, 1H) , 3, 92-3,56 (m, 6H) , 3,37- 3,26 (m, 1H) , 3,10 -2,66 (m, 10H), 2, 11- 1,96 (m, 2H) t 1,84 -1,57 (m, 4H) , 1,38 (d, J = 6, 9 Hz, 6H), r 1,29 (s, 6H) , o, 96 (s, 6H) . Cinco protões permutáveis nao observados.
Exemplo 103
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2,2-dimetilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 9-Bromo-2,2-dimetilnonanoato de etilo
O
Br A uma solução de diisopropilamina (5,82 mL) em THF (30 mL) foi adicionado n-butil-litio (2,5 M em hexanos, 16,4 mL) a 0 °C e a mistura foi agitada durante 30 min a esta temperatura antes de ter sido arrefecida até -78 °C. Foi adicionado gota a gota isobutirato de etilo (5 mL) e a mistura resultante foi agitada a -78 °C durante 1 h, antes da adição de 1,7-dibromo-heptano (6,4 mL) . A mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante 1 h 621 em seguida à TA durante 2 h, antes de ter sido vertida para solução saturada de cloreto de amónio. A solução foi extraída com acetato de etilo (x 2), em seguida os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de acetato de etilo em ciclo-hexano para dar o composto em subepígrafe como um líquido incolor. Rendimento 1,27 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 4, 11 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,43- 3,37 (m, 2 H) , 1,91-1,80 (m, 2H), 1,56-1,36 (m, 4H) , 1,39-1,21 (m, 9H), 1,15 (s, 6H) . b) 9-Bromo-2,2-dimetilnonan-l-ol
A uma solução de 9-bromo-2,2-dimetilnonanoato de etilo (exemplo 103, passo a) (1,27 g) em éter dietílico seco (40 mL) a 0 °C sob N2 foi adicionado, gota a gota, hidreto de diisobutil-alumínio (1 M em tolueno, 9,5 mL) . A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 1,25 h, em seguida desactivada por adição de solução saturada de tartarato de potássio e sódio (150 mL). A mistura foi agitada durante 15 min, em seguida extraída com acetato de etilo (x 3), em seguida os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-25% de acetato de etilo em ciclo-hexano para dar o composto em subepígrafe como um líquido incolor. Rendimento 0,56 g. 622 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) β 3,41 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 3,31 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 1,91-1,79 (m, 2H), 1,47-1,39 (m, 2H), 1,34-1,21 (m, 8H), 0,86 (s, 6H). Um protão permutável não observado. c) (9-(9-Hidroxi-8,8-dimetilnonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Trifluoroacetato de 2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,5 g) foi dissolvido em metanol e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. O cartucho foi lavado com metanol e eluído com solução de amónia 2 M em metanol. O eluente foi evaporado in vacuo para proporcionar o material como uma base livre (0,26 g). A este material Foi adicionado 9-bromo-2,2-dimetilnonan-l-ol (exemplo 103, passo b) (0,25 g) em acetonitrilo (10 mL) e trietilamina (0,23 mL) e a mistura resultante foi aquecida a 60 °C durante 15 h. Os voláteis foram evaporados in vacuo e o produto em bruto purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em DCM para proporcionar o composto em subepígrafe impuro como uma goma incolor que foi repurificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em DCM para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido esbranquiçado. Rendimento 0,37 g. 623 m/z 480 (M+H) RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,87 (s, 1H) , 4,08-3,91 (m, 1H), 3,80-3, 75 (m, 3H) , 3,45-3,32 (m, 2H) , 3,35-3,30 (m, 2H) , 3,06-2, 84 (m, 3H) , 2,48-2,31 (m, 2H) , 2,17-2,03 (m, 2H) , 1,96-1,83 (m, 2H), 1,66-1,51 (m, 4H), 1,43 (d, J = 6,9 Hz, 6H) , 1,39-1,31 (m, 4H), 1,30-1,16 (m, 6H), 0,86 (s, 6H). Um protão permutável não observado. d) 9-(4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2,2-dimetilnonanal
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,059 mL) a uma solução de (9-(9-hidroxi-8,8-dimetilnonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 103, passo c) (0,37 g) em DCM (20 mL) a 0 °C sob árgon e a mistura agitada durante 5 min, antes da adição de periodinano de Dess-Martin (0,49 g) . A mistura reaccional foi agitada à TA durante 1,25 h, em seguida foi desactivada por adição de solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) , em seguida foi adicionado acetato de etilo e a mistura agitada durante 5 min. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (x 2). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio. Foi 624 adicionado acido acético (0,066 mL) a fase orgânica, a qual foi em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para proporcionar o composto em subepigrafe em bruto 0,40 g. como um óleo amarelo. Rendimento m/z 478 (M+H]+ RMN de ΧΗ (400 MHz , CDC13) 1H) , 4,05-3,89 (m, 3H) , 3,82-3, 2,87- -2, 79 (m, 4H) , 2,09- -2,02 (m 1,36 (m, 10H) , 1,32- 1,13 (m, 6H), δ 9,46-9,41 (s, 1H) , 7,87 (s, 67 (m, 5H) , 3,36-3,26 (m, 3H) , , 2H), 1,77-1,65 (m, 2H), 1,47- 1,03 (s, 6H). e) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2,2-dimetilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,066 mL) a uma mistura de 9-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2,2-dimetilnonanal (exemplo 103, passo d) (0,4 g) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,3 g) com peneiros moleculares de 3 Â em metanol anidro (10 mL) . A mistura foi agitada durante 5 min, em seguida arrefecida até 0 °C. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,16 g) e a mistura resultante foi agitada à 625 TA durante 16,5 h. A solução foi filtrada, em seguida concentrada in vácuo. 0 resíduo foi dissolvido numa mistura de acetonitrilo e água e purificado por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,10 g. m/z 688 (M+H)+ RMN de (400 MHz, D4-MeOH) δ 8,51 (s, 1H) , 7,88 (s, 1H) , 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4,93-4,88 (m, 1H), 3, 92-3,53 (m, 6H) , 3,32-3,25 (m, 1H) , 3,11-2,52 (m, 10H), 1,98 (s, 2H), l,82-l,48 (m i, 3H) , 1,37 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 1,38-1,31 1 (m, 5 M, 1,30-1,22 (m, 6H) , 0,91 (s, 6H) . Cinco protões permutáveis não observados
Exemplo 104
Formato de "4-ilicjroxi_7- (i-hidroxi-2- (4- (2-(4- (5- metiltiofeno-3-carbonil)-i °Xa-4 f9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il) etoxi) benzilamino) etil) k-. eil2o [d] tiazol-2 (3H) -ona
626 a) 4-(5-Metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
>rv
Foi adicionado hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il) -IV, N, Ν', Ν'-tetrametilurónio (0,91 g) a uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (0,5 g) , ácido 5-metil-tiofeno-3-carboxílico (0,243 g) e trietilamina (0,95 mL) em DMF (10 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. A mistura reaccional foi vertida para solução aguosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) e extraida com acetato de etilo (3 x 50 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (150 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (150 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em diclorometano para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,34 g. RMN de ΤΗ (400 MHz , CDC13 ) δ 7,23 (s, 1H) , 6,81 (s, 1H) 3,72 (s, 6H) . 3,46 (s, 3H), 3, 15 (s, 3H) , 2, r 49 (d, J = 1,1 Hz 3H) , 1,82 (d 1, J = 13,5 Hz, 2H) , 1,45 (s, 9H) • 627 b) (5-Metiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-i1)metanona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (2,5 mL) a uma solução de 4-(5-metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diaza espiro [ 5 . 5 ] undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 104, passo a) (0,34 g) em DCM (10 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 45 minutos e deixada em repouso de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. Foi adicionado tolueno (3 x 25 mL) e a mistura evaporada in vacuo. O resíduo foi
dissolvido em metanol (20 mL) e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com metanol. O cartucho foi lavado com metanol (40 mL) e eluído com solução de amónia 2 M em metanol (20 mL). O eluente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,25 g. RMN de (400 MHz, De-DMSO) δ 7,50 (s, 1H) , 6,88 (s, 1H) 3,67-3,57 (m. 2H) , 3,49 (s, 2H), 3,38 (s, 4H) , 2,68 (s, 2 H) 2,45 (d, J = 1,1 Hz, 3H), permutável não observado. 1,57 (s, 2H), 1,37 (s, 2H) . Um protã 628 c) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(4-(2-(4-(5-metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionada trietilamina (0,25 mL) a uma solução de (5-metiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)- metanona (exemplo 104, passo b) (0,195 g) em acetonitrilo (2,5 mL) . Esta solução foi adicionada a uma solução de metanossulf onato de (R)-2-(4-((terc-butoxicarbonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)-metil)fenoxi)etilo (exemplo 108, passo c) (0,5 g) em acetonitrilo (2,5 mL). A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 48 horas. A mistura reaccional foi evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel eluindo com 0-10% de metanol em diclorometano para dar o composto em subepigrafe como um sólido creme. Rendimento 0,33 g. RMN de ΤΗ (300 MHz , D4- -MeOH ) δ 7,42 (s, 1H), 7,07 (d, J = 6, 7 Hz, 2H; ) , 6, 85 (d, J = 13,0 Hz, 4H) , 6,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4,28 (s, 1H) , 4, 12 (s, 2H) , 3,71 (s, 2H), 3,66-3,48 (m, 5H) , 3,38-3,29 (m, 5H) , 2,90 (s, 2H) , 2,80-2,55 (m, 4H) , 2,48 (s, 3H), 1,94- 1,89 (m, 1 H) , 1, 44 (s, 4H), 1,37 (s, 6H) . Três protões permutáveis não observados. 629 d) Formato de metiltiofeno-3-carbonil) il) etoxi) benzilamino) etiij ^ ^hidroxi-7- (l-hidroxi-2- (4- (2-(4- (5-°*a.-4 f g-diazaespiro [5.5] undecan-9-[d]tiazol-2(3H)-ona
adicionado ácid0 de
Foi solução uma trifluoroacético (1,2 mL) ~2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di- hidrobenzo [d] tiazol-7-il) Ω+- η , „ '«cii(4_(2_(4_(5-metiltiofeno-3- carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaesr,·; ^ rΊ _ . Ί . efc>Piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzi1)- carbamato de terc-butilo , - „ . . .
exemplo 104, passo c) (0,33 g) em DCM (5 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos.
Foi adicionado tolueno (20 mL) e a mistura foi evaporada in vacuo. 0 resíduo foi submetido a evaporação azeotrópica com tolueno (3 x 20 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fraeções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,12 g. m/z 639 (M+H) RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 8,13 (s, 1H) , 7,45 (s, 1H) , 7,22 (d, J = 8,34 Hz, 2H) , 6,88-6, 78 (m, 4H) , 6,66 (d, J = 8,27 Hz, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,09-4,00 (m, 2H), 3,85-3,77 (m, 3H) , 3,67-3,60 (m, 4H) , 3,56-3,47 (m, 2H) , 2,81-2,63 (m, 5H) , 2, 49-2,36 (m, 5H) , 1, 77-1,67 (m, 2H) , 1,59-1,37 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis não observados. 630
Exemplo 105
Formato de (Λ)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(5- metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(9-Hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-3-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 9-bromo-l-nonanol (0,335 g) em acetonitrilo (3 mL) a uma solução de (5-metiltiofen-3-il) (1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 104, passo b) (0,28 g) e trietilamina (0,278 mL) em acetonitrilo (7 mL) . A mistura resultante foi agitada a 60 °C de um dia para o outro. A mistura reaccional foi evaporada in vacuo e o resíduo foi retomado em DCM (30 mL) , lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 15 mL) , seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em diclorometano para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,3 g. 631 RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) 8 7, 54 (s, 1H) . 6, 91 (s, 1H) , 4, 32 (t, J = 5 , 1 Hz , 1H) , 3,66 (s, 2H) , 3,52 (s, 2H) t 3,41- -3,33 (m, 3H) , 2,95 (s, ‘ 4H) , 2 ,45 (d, J = 1,1 Hz, 3H) , 2, 02 (s, 3H) , 1, 64 (s, 4H) , 1,40 (t, J = 6,8 Hz, 2H) , 1 , 26 (s, 11H) Um protão permutável não observado. b) Formato de (K)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(5-metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,055 mL) a uma solução de (9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaspiro[5.5]undecan-4-il)(5-metiltiofen-3-il)metanona (exemplo 105, passo a) (0,3 g) em DCM (15 mL) a 0 °C sob árgon. A mistura resultante foi agitada durante 5 min e em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,45 g). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h, em seguida desactivada por adição de solução saturada de tiossulfato de sódio (14 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (14 mL), em seguida foi adicionado acetato de etilo (30 mL) e a mistura agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 40 mL) . Foi adicionado ácido acético (0,159 mL) às camadas orgânicas combinadas, as quais foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 óleo amarelo foi dissolvido em metanol seco (15 mL). Foi 632 adicionado cloridrato (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxi-benzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,28 g), seguido de ácido acético (0,061 mL) e peneiros moleculares de 3 Ã. Depois de agitar durante 5 min à temperatura ambiente, a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,15 g) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura reaccional foi filtrada e o solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,07 g. m/z 631 (M+H)+ RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 8,24 (s, 1H) , 7,45 (s, 1H) , 6,85-6, 80 (m, 2H) , 6,67 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4,67 (t, 6,5 Hz, 1H) , 3,63-3,21 (m, 6H), 2 , 75 (d, J = 6,5 Hz, 2H) , (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,40 (d, J = 1,1 Hz, 3H), 2,38-2,16 6H) , 1,70-1,61 (m, 2H) , 1,47-1,29 (m, 6H) , 1,19 (s, 10H).
Cinco protões permutáveis não observados. 633
Exemplo 106
Formato de (R)-7-(2-(4-(2-(4-(benzo[d]tiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 4-(Benzo[d]tiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N, N', N'-tetrametilurónio (1,45 g) a uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi PharmaTech) (0,8 g), ácido 1,3-benzotiazol-2-carboxílico (0,588 g) e trietilamina (1,51 mL) em DMF (15 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 16 h. O volume de DMF foi reduzido in vacuo e a mistura reaccional foi partilhada entre água (30 mL) e acetato de etilo (30 mL). A camada orgânica foi lavada com água (30 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em diclorometano para 634 dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,83 g. RMN de (400 MHz, D6-DMS0) δ 8,23-8 , 09 (m, 2H) , 7,63- -7,52 (m, 2H) , 4,34 (s, 1H), 4,20 (s, 1H)# . 3, 78 (s, 2H) , . 3,71 (s, 1H) , 3,64 -3,51 (m, 3H), 3,08 (s, 2H), 1, 76 (d, J = : 13,7 Hz, 2H) , 1,55 -1,34 (m, 11H). b) Benzo[d]tiazol-2-il(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (5 mL) a uma solução de 4-(benzo[d]tiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]— undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 106, passo a) (0,83 g) em DCM (15 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 25 minutos. O solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi dissolvido em DCM:metanol (1:1) (5 mL) e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com DCM:metanol (1:1). O cartucho foi lavado com metanol (60 mL) e eluído com solução de amónia 2 M em metanol (40 mL) . O eluente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,57 g. RMN de XH (400 MHz, d6- DMSO) δ 8,18-8 ,13 (m, 1H) , 1 o i—1 00 co o (m, 1H), 7,60- -7, 50 (m, 2H) , 4, 25 (t, J = 4,8 Hz, 1H) , 4,17 (s, t—1 4,04 (s, 1H) , 3, 70 (s, 2H) , 3,65 (d, J = : 5,5 Hz, 1H) , 3,56 635 (s, 1H), 2, 73-2,46 (m, 2H) . 4H) , 1,62-1,54 (m, 2H) , 1,50-1,36 (m, c) (R)-4-(2-(4-(Benzo[d]tiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3—di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionada trietilamina (0,25 mL) a uma solução de benzo[d]tiazol-2-il(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-metanona (exemplo 106, passo b) (0,22 g) em acetonitrilo (2,5 mL) . Esta solução foi adicionada a uma solução de metanossulfonato de (R)-2-(4-((terc-butoxicarbonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)-metil)fenoxi)etilo (exemplo 108, passo c) (0,5 g) em acetonitrilo (2,5 mL). A mistura resultante foi aquecida a 80 °C durante 48 horas. A mistura reaccional foi evaporada in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em diclorometano para dar o composto em subepigrafe como uma espuma creme. Rendimento 0,34 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 11,49 (s, 1H), 9,93 (s, 1H) , 8,21 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 8,14 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,64-7,56 (m, 2H), 7,07 (s, 2H), 6,93-6, 79 (m, 2H) , 6, 78-6,67 (m, 2H) , 636 5, 68 (s, i—1 4,73 (s, 1H) r 4, 35-4,22 (m, 3H )r 4,07 (S, 4H), 3, 76 (s, 2H) , 3,70 (s, 1H), 3,62 (s, 1H), 3,17 (s, 6H), 2,67 (s, 2H) , 1, 77 (s, 1H), 1,62 (S, 1H) , 1,35 (s, 3H), 1,27 (s, 6H) . Um protão permutável não observado. d) Formato de (Λ)-7-(2-(4-(2-(4-(benzo[d]tiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil-amino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (1,25 mL) a uma solução de (R)-4-(2-(4-(benzo[d]tiazole-2-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo (exemplo 106, passo c) (033 g) em DCM (4 mL) e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. Foi adicionado tolueno (20 mL) e a mistura foi evaporada in vacuo. O resíduo foi submetido a evaporação azeotrópica com tolueno (3 x 20 mL) . A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,096 g. m/z 676 (M+H)+ 637 RMN de (400 MHz, D4-MeOH ) δ 8, 44 (s, 1H) ; 8 ,09 -8,00 (m, 2H) ; 7,58 -7, 48 (m, 2H) ; 7,37 (t, J = 6,6 Hz, 2h; ); 7,00 (t, J = 9,4 Hz f 2h; i ; 6, 91 (d , J = 8, 3 Hz, 1H) ; 6 , 71 (d, j = 8,3 Hz, 1H) ; 4, 93- -4, 88 (m, 1H) ; 4,43-3, .38 (m , 1H) ; 437 -4, 34 (s, 1H); 4,27 -4,20 (m r 2H) ; 4, 14 (s, 2H) 3,8' 7-3,82 (m, 2H ); 3,81-3,76 (m, 1H) ; 3, ' 71 (s, 1H) ; 3,20-3, 11 (m, 2H) ; 3,12 -3, 01 (m, 4H) ; 2, 96 -2,82 (m r 2H) ; 2,10- 2,01 (m, r 2H) ; 1,88-: L, 76 (m, 2H) . Cinco protões permutáveis nao observados.
Exemplo 107
Formato de (R) -7-(2-(9-(4-(benzo[d]tiazole-2-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) Benzo[d]tiazol-2-il(9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 9-bromo-l-nonanol (0,335 g) em acetonitrilo (3 mL) a uma solução de benzo[d]tiazol-2-il(1- 638 (exemplo oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 106, passo b) (0,34 g) e trietilamina (0,278 mL) em acetonitrilo (7 mL) . A mistura resultante foi agitada a 60 °C de um dia para o outro. A mistura reaccional foi evaporada in vacuo e o resíduo foi retomado em DCM (30 mL) , lavado com solução aguosa saturada de cloreto de sódio (2 x 15 mL) , seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em diclorometano para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,34 g. RMN de 1H (400 MHz, d6- -DMSO) δ 8, 22 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 8, 14 (d, J = 7, 9 Hz, 1H) , 7,' 65-7,56 (m, 2H) , 4,37 (s, 1H) , 4,31 (t f J = . 5,1 Hz . 1H) , 4,27 (S , 1H) , 3,80 (s , 2H) , 3, 72 (S, 1H) , 3, 63 (s, 1H) , 3,41-3 , 33 (m, 2H) , 2,99 (S, 4H) , 2,10 (S, 2H) , 1, 86 (S, 2H), 1 ,64 (s, , 2H) , i ,40 (s, 3H) , 1, 27 (s, 11H) . b) Formato de (R)-7-(2-(9-(4-(benzo[d]tiazole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2-(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,056 mL) a uma solução de benzo[d]tiazol-2-il(9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 107, passo a) 639 (0,33 g) em DCM (15 mL) a 0 °C sob árgon. A mistura resultante foi agitada durante 5 min e em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,46 g) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Foram adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (14 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (14 mL) e AcOEt (30 mL) e a mistura foi agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraida com AcOEt (2 x 40 mL) . Foi adicionado ácido acético (0,159 mL) às camadas orgânicas combinadas, as quais foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vacuo. O óleo amarelo foi dissolvido em MeOH seco (15 mL) . Foi adicionado cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,28 g) , seguido de ácido acético (0, 062 mL) e peneiros moleculares de 3 Â. Depois de agitar durante 5 min à
temperatura ambiente, a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C. Foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0, 5 g) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura reaccional foi filtrada e o solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini® Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,14 g. m/z 668 (M+H)+ RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO) δ 8,23 (s, 1H) , 8, 17 -8, 14 (m, 1H) , 8,09 (d, J = 7, 9 Hz, 1H), 7 ,60-7 , 49 (m, 2H) f 6, 84 (d, J = 8,3 Hz , 1H), 6, 68 (d, J = 8, 29 Hz, 1H) , 4, 74 -4, ( 54 (ir ó 1H) , 4,29 -4,24 (m, 1H), 4, 20 (s, 1H) f 3, 72- 3,62 (m, 3H) f 3, 56 (s, 1H) , 2, 79 (d, J = 5 ,5 Hz, 2H), 2 ,69 -2,62 (m, 2H) , 2, 42 -2, 13 (m, 640 6Η), 1,74-1,64 (m, 2H), 1,63-1,30 (m, 6H), 1,19 (d, J = 9,6 Hz, 10H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 108
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 4-(2-Hidroxietoxi)benzaldeído .Xr0^0"
Foram sucessivamente adicionados 2-bromoetanol (5,8 mL) e carbonato de potássio (11,3 g) a uma solução de 4-hidroxibenzaldeído (5,0 g) em MeCN (100 mL) . A mistura resultante foi agitada e aquecida a refluxo durante 3 dias sob árgon. A mistura reaccional foi arrefecida até à TA e partilhada entre AcOEt (100 mL) e solução aquosa de NaOH 1 M (100 mL) . A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) . As camadas aquosas foram combinadas e extraídas com AcOEt (50 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas 641 in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 6,4 g. RMN de (400 MHz , CDC13) δ 9,90 (s, 1H), 7,87-7,81 (m 2H) , 7,0 6-6,98 (m, 2H) , 4,18 (dd, J = 5,0, 4,0 Hz, 2H) , 4, 04- 3,97 (m, 2H), 2, , 18-1 , 96 (m, 1H) . b) Metanossulfonato de 2-(4-formilfenoxi)etilo ^V0n/Aso/Sn
oJU
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 5 min, cloreto de metanossulfonilo (3,3 mL) a uma solução de 4-(2-hidroxietoxi)benzaldeído (exemplo 108, passo a) (6,4 g) e trietilamina (6,4 mL) em DCM (30 mL) a 0 °C sob árgon. A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 10 min e em seguida à TA durante 1 h. A mistura reaccional foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 30 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 40-50% de AcOEt em éter de petróleo (40-60 °C) para dar o composto em subepígrafe como um óleo viscoso amarelo. Rendimento 8,87 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 9,92-9, 87 (m, 1H) , 7,89-7,81 (m, 2H), 7,05-6,98 (m, 2H), (m, 2H), 4,36-4,32 (m, 2H), 3,10 (s, 3H) . 642 c) Metanossulfonato de (R) -2- (4- ((terc-butoxicarbonil (2- hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d] tiazol-7- il)etil)amino)metil)fenoxi)etilo
HO
Uma mistura de metanossulfonato de 2-(4-formilfenoxi)etilo (exemplo 108, passo b) (1,7 g), cloridrato de (R)-7-(2-amino-l- (documento hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona W02007027134, exemplo 1, passo d) (2,0 g) e ácido acético (0,44 mL) em DMF seca (40 mL) foi agitada à TA durante 15 min na presença de peneiros moleculares de 4 Â. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,2 g) em 4 porções em intervalos de 2 min. A mistura resultante foi agitada à TA durante 1 h. Foi adicionado dicarbonato de di-terc-butilo (1,8 g) à mistura reaccional, a qual foi agitada durante 2 h. Foram adicionados solução saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) e AcOEt (100 mL) e a mistura foi agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (x 4). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-80% de AcOEt em éter de petróleo (40-60 °C) para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 2,25 g. 643 RMN de 2H (400 MHz, CDC13) δ 7,05 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,80 (d, J = 8, 0 Hz, 3H), 6, 70 (d, O 00 II >"0 Hz,1H) 1—1 w i—1 OO V 1H) 4, 54 (t, J = 4,3 Hz, 2H) , 4, 34 -4,26 (m, 1H) , 4, 24-4, 08 (m, 3H) 3,57- -3,42 (m, 1H), 3,33-3 ,23 (m, 1H) , 3, 07 (s, 3H), 1,49 (s 9H) . Três protões permutáveis não observados. d) (J?) -2-Hidroxi-2- (4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(4-(2-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-11)etoxi)benzil)carbamato de terc-butilo
Uma solução de metanossulfonato de (.R)-2-( 4-( (terc- butoxicarbonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)metil)fenoxi)etilo (exemplo 108, passo c) (0,295 g) em MeCN (1,1 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il) (l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,150 g) e trietilamina (0,11 mL) em MeCN (1,1 mL) à TA sob árgon. A mistura resultante foi agitada a 60 °C sob árgon durante 34 h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vacuo. O residuo foi retomado em DCM, lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (x 2), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O sólido amarelo foi purificado por 644 cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-5% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido verde. Rendimento 0,135 g. m/z 768 (M+H)+ RMN de 1 H (400 MHz, CDC13) δ 7,86 (s, 1H) , 6, 83 (s CM 1—1 6,71-6,46 (m, 4H) , 4, 78 (s 1, 1H), 4,46-2 ,51 (m, 19H) , 1,90 (s 1, 4H), 1,53 (s, 9H), 1, 39 (s, 3H), 1,29 (s, 3H) . Três protões permutáveis não observados. e) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,7 mL) a uma solução de (R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di- hidrobenzo[d]tiazol-7-il)-etil(4-(2-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil)-carbamato de terc-butilo (exemplo 108, passo d) (0,122 g) em DCM (1,5 mL) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 10 min. Foi adicionado tolueno (15 mL) e a mistura reaccional foi evaporada in vacuo. O resíduo foi submetido duas vezes a evaporação azeotrópica com MeCN. O resíduo amarelo viscoso foi purificado por HPLC (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de 645 acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,052 g. m/z 668 (M+H)+ RMN de 1H (400 MH: z, D4 -MeOH) δ 8,47 (s, ih: ) , 7,87 (S, 1H) , 7, 36 (d, J = 8, 19 H z, 2H) , 6,98 (s, 2H), 6,91 (d , J = 8,36 Hz, 1H ) , 6,71 (d, J = 8 ,30 Hz, 1H) , 4,90 (dd, J = 9 ,4 , 4,1 Hz, 1H) , 4, 18 (s, 2H), 4, r 11 (s, 2H) , 3, 75 (s, 5H), 3,63 ( s, 1H) , 3,40 (m, 1H ) , 3,19-2,80 (m, 8H) , 1, 95 (s , 2H), 1 ,75 (s r 1H) , 1,65 (s, 1H ) , 1,38 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 109
Formato de (Λ)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2- isopropiltiazole—4—carbonil)—1—oxa—4,9—diazaespiro[5.5]undecan— 9-il)nonilamlno)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
646 a) (9-(9-Hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 9-bromo-l-nonanol (0,316 g) em MeCN (3 mL) a uma solução de trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 22, passo b) (0,40 g) e trietilamina (0395 mL) em MeCN (7 mL) . A mistura resultante foi agitada a 60 °C sob árgon durante 16 h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vácuo. 0 resíduo foi retomado em DCM, lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (x 2), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O sólido laranja foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido esbranquiçado. Rendimento 0,325 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7,87 (s, m i—1 3, 97 (s, 2H) 3,76 (s, 3H), 3,63 (t, J = 6,6 Hz, 2H) , 3,36 (s, 3H) , 2, 92 (s 4H) , 2,25 (s, 2H), 2,14-2,03 (m, 2 H) , 1, 84 (s, 2H) , 1,63 (s 2H) , 10 H) 1,60-1,50 (m, 2H), 1,42 (d, J = 6,8 Hz, 6 H), 1, 42- -1,21 (m 647 b) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2-isopropiltiazole—4—carbonil)—1—oxa—4,9—diazaespiro[5.5]undecan— 9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,027 mL) a uma solução de (9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9 diazaespiro[5.5]undecan-4-i1)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 109, passo a) (0,16 g) em DCM (6,3 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi agitada durante 5 min e em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,225 g) . A mistura foi agitada à TA durante 45 min. Foram adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (6 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (6 mL) e AcOEt (36 mL) e a mistura foi agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 40 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio (40 mL), tratadas com ácido acético (0, 067 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O óleo viscoso laranja foi dissolvido em MeOH seco (6,6 mL) e foi adicionado cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,138 g), seguido de ácido acético (0,03 mL) e peneiros moleculares de 3 Â. Depois de agitar durante 5 min à TA, a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,075 g) . A mistura foi agitada à TA durante 1 h, em 648 seguida foi adicionada outra porção de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,075 g) e a mistura foi agitada à TA durante mais 16 h. A mistura reaccional foi filtrada e o solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%) . As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,060 g. m/ z 660 (M+H)+ RMN de ΤΗ (400 MHz, d4- -MeOH ) δ 8,52 (s, 1H) , 7, 86 (s, 1H) , 6, 94 (d, J = 8,4 Hz , 1H) t 6, 52 (d , J = 8,3 Hz, 1H) r 4, 98- -4, 89 (m, 1H) , 3, 90-3,58 (m, 6H) r 3, 37- 3,25 (m, 1H) , 3, 15- -3,02 (m, 3H) , 3,0 1-2, 93 (m, 3H) , 2, 91 -2, 65 (m, 4H) , 2,10 -í, 96 (m, 2H) , 1,83-1,54 (m, 6H), 1,41-1,28 (m, 16H). Cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 110
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(5- metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
649 a) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(4-(2-(4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil)carbamato de terc-butilo
Uma solução de metanossulfonato de (R)-2-(4-((terc- butoxicarbonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)metil)fenoxi)etilo (exemplo 108, passo c) (0, 426 g) em MeCN (2 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de trifluoroacetato de (5-metiltiofen-2-il) (l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 9, passo b) (0,154 g) e trietilamina (0,15 mL) em MeCN (5 mL) à TA sob árgon. A mistura resultante foi agitada a 60 °C sob árgon durante 16 h, e em seguida a 80 °C durante mais 3 h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi retomado em DCM, lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e água (x 2), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O sólido castanho foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido amarelo. Rendimento 0,246 g. RMN de 1R (400 MHz, CDC13) δ 7,11 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,89 (s, 2H), 6, 70-6,59 (m, 4H) , 6,51 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 4,76 (s, 1H), 4,20-4,10 (m, 4H) , 3,74 (s, 4H) , 3,59-3,44 (m, 4H), 2,93- 650 2,77 (m, 4H) , 2,61 (s, 2H) , 2,47 (s, 3H) , 1,93-1, 84 (m, 2H) , 1, 74-1,60 (m, 2H) , 1,52 (s, 9H) . Três protões permutáveis não observados. b) Formato de (Λ)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(5- metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,75 mL) a uma solução de metanossulfonato de (R)-2-(4 - ( (terc-butoxicarbonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)metil)fenoxi)etilo (exemplo 110, passo a) (0,243 g) em DCM (3 mL) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 10 min. Foi adicionado tolueno (30 mL) e a mistura reaccional foi evaporada in vacuo (x 3) . O resíduo foi purificado por HPLC (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,65 g. m/z 639 (M+H)+ RMN de 1R (400 MHz, D4-MeOH) δ 8,44 (s, 1 H) , 7, 40-7,35 (m, 2 H), 7,19 (d, J = 3,7 Hz, 1 H) , 7, 02-6, 97 (m, 2 H) , 6,92 (d, 651 J = 8 ,36 Hz , 1 H) , < 5,78-6 .,76 (m, 1 H ) , 6, 71 (d, J II co co o Hz , 1 H) , 4 ,93 -4, 88 (m, 1 H) , 4,21 (t, J = 5,17 Hz , 2 H) , 4, 13 (s , 2 H) , 3 , 76 -3, 70 (m, 4 H) , 3 ,61 (s, 2 H) , 3,11 .-3 ,07 (m, 2 H) , 3, 07- 3, 01 (m, 2 H) , 3, 03- -2,91 (m, 2 H), 2, co co 1 ISJ > 76 (m, 2 H), 2, 47 (d, J = 1 ,0 1 Hz, 3 H) , 2, \—1 1 CM O 93 ( m, 2 H) , 1-1 -i, 61 (m, 2 H) . Ci nco protões permutáveis não observados.
Exemplo 111
Formato de (2?)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(5- metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(9-Hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4- il)(5-metiltiofen-2-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 9-bromo-l-nonanol (0,314 g) em MeCN (3 mL) a uma solução de trif luoroacetato de (5-metiltiofen-2-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)-metanona (exemplo 9, passo b) (0,263 g) e trietilamina 652 (0,261 mL) em MeCN (7 mL) . A mistura resultante foi agitada a 60 °C sob árgon durante 16 h. Depois de arrefecer até à TA, o solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi retomado em DCM, lavado com solução aguosa saturada de cloreto de sódio (x 2), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O sólido branco foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0352 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 7 , 10 (d, J = 3,6 Hz, 1H) , 6, 71 (dd, J = 3,6, 1,2 Hz, 1H) , 3,73 (s, 4H), 3,66-3,60 (m, 4H) , 3,22 (s, 2H) , 2,84 (s, 3H), 2 ,50 (d, J = 1,0 Hz, 3H) , 2, 15 (s, 1H) , 2,11 -1,97 (m, 2H), 1,83 (s, 2H), 1,61-1,50 (m, 3H) , 1,32 (s, 11H). Um protão permutável não observado. b) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(5- metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,064 mL) a uma solução de (9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(5-metiltiofen-2-il)metanona (exemplo 111, passo a) (0,350 g) em DCM (15 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi agitada durante 5 min e em seguida foi adicionado periodinano de 653
Dess-Martin (0,527 g) . A mistura foi agitada à TA durante 1 h. Foram adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (14 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (14 mL) e
AcOEt (30 mL) e a mistura foi agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 40 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio (40 mL) , tratadas com ácido acético (0,159 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O óleo amarelo foi dissolvido em MeOH seco (15,6 mL) e foi adicionado cloridrato de (A)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,327 g) , seguido de ácido acético (0,071 mL) e peneiros moleculares de 3 Á. Depois de agitar durante 5 min à TA, a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,176 g) e a mistura foi agitada à TA durante 1 h. Foi adicionada outra porção de triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,075 g) e a mistura foi agitada à TA durante 17 h. A mistura reaccional foi filtrada e o solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%) . As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,127 g. m/z 631 (M+H) RMN de 1H (400 MHz, d4 -MeOH) δ 8,49 (s, 1H ) , 7,20 (d, J = 3,7 : Hz, 1H) f 6,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6, 79- -6, 76 (m, 1H) , 6, 73 (d, J = 8, 3 Hz, 1H), 4, 9 7-4, S >1 (m, 1H) , 3, 76 -3, , 72 (m, 4H) , 3,62 (s, 2H) , 3, 20-3, 04 (m, 4H) , 3,03- -2,93 (m, 3h; ) , 2,95- -2,84 (m, 3H) , 2, 47 (d , J = 1,0 Hz, 3H) ( . 2,11 -2,01 (m, 2H ) , 1,80- -1,62 654 1θΗ). Cinco protões permutáveis nao (m, 6H), 1,40-1,31 (m, observados.
Exemplo 112
Ditrifluoroacetato (R) -4-hidroxi-7- (l-hidroxi-2- (4-(2- (4-(2-feniltiazole-4-carh^^· °0lUl)-l-oxa-4,9- diazaesplro [5.5] undecan-g^.^ zo[d]tiazol-2(3H)-ona ^-l) etoxi)benzilamin°) etil)ben-
a) 4-(2-Feniltiazole diazaespiro[5.5]undecano- '4-Carbonil) -l-oxa-4, 9-
Q carboxilato de terc-butilo
Uma
solução cloridrato de diazaespiro[5.5]undecano~9-carboxilato de l-oxa-4,9-terc-butilo (WuXi PharmaTech) (0,60 g) em DMF (11 mL) foi tratada com trietilamina (1,1 mL) , . , , - . , „ £ , η 0 . . , . ' &^guida de acido 2-fenil-l,3-tiazole-4- carboxilico (0,421 σ) _ e em seguida hexafluorofosfato de O- (7-azabenzotriazol-l-il \ Λτ Λτ ΛΤ, ST, 4. 4. . . η - . ,Λ , ν --i\7,N, Ν',Ν'-tetrametiluronio (1,09 g) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 7 h. A DMF foi 655 removida in vacuo. 0 resíduo foi retomado em AcOEt (50 mL) e lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 30 mL), água (30 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL ) , seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. 0 óleo castanho foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de MeOH em DCM para dar o composto em subepí grafe como um sólido castanho. Rendimento 0,857 g· RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 8,00 (s, 1H) , 7, 92 (s, 2H), 7,47 (d, J = 4,1 Hz, 3H), 4,13-3,96 (m, 2H) , 3,83 (s, 3H), 3,73 (s, 2H), 3,29-3,13 (m, 2H) , 1,94-1,83 (m, 2H) , 1,62- -1,51 (m, 3H), 1,45 (s, 9H). b) (2-Feniltiazol-4-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (3,8 mL) a uma solução de 4-(2-feniltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro [ 5 . 5 ] undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 112, passo a) (0,85 mg) em DCM (15,2 mL) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 1 h. Foi adicionado tolueno (30 mL) e a mistura foi evaporada in vacuo. O resíduo amarelo foi dissolvido em MeOH e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com MeOH. O cartucho foi lavado com MeOH e eluído com amónia 2 M em MeOH. O eluente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo castanho. Rendimento 0,629 g. 656 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) δ 7'98 (s' 1H) ' 7, 95-7, 90 (m, 2H) , 7, 49-7, 44 (m, 3H) , 4,07 (s 1. 1H) # 3," (s 1H), 3,88- 3,79 (m, 3H) , 3,70 (s 1, 1H) , 3,02-2,81 (m, 3H), 2, 80-2,69 (m, 1H), 1,83 (d, J = 13,7 Hz, 2H) , 1, 70-1, 44 (m, 2H) . Um protão permutável não observado. c) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di- hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(4-(2-(4-(2-feniltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de metanossulfonato de (J?) -2-(4-( (terc-butoxicarbonil (2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)-metil)fenoxi)etilo (exemplo 108, passo c) (0,619 g) em MeCN (3 mL) a uma solução de (2-feniltiazol-4-il)(l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 112, passo b) (0,274 g) e trietilamina (0,22 mL) em MeCN (7,3 mL) à TA sob árgon. A mistura resultante foi agitada a 80 °C sob árgon durante 16 h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vacuo. 0 resíduo foi retomado em DCM, lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio e água, seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-70% 657 de AcOEt em éter de petróleo (40-60 °C) para dar o composto em subepígrafe como um sólido amarelo. Rendimento 0,42 g. RMN de (400 MHz, CDC13) δ 8,04-7, 95 (m, 1H) , 7,94-7,79 (m, 2H), 7,50-7,41 (m, 2H) , 7, 40-7, 28 (m, 1H) , 7,02-6,81 (m, 2H), 6, 70-6 :37 (m, 3H) , 4, 84-4, 70 (m, 1H) , 4, 25-3, 92 (m, 6H) , 3, 87-3, 75 (m, 3H) , 3, 74-3,58 (m, 2H) , 3,57-3,36 (m, 2H) , 2,99-2,77 (m, 3H), 2, 76-2,43 (^ 3H) f 2,01-1,86 (m, 2H) , 1,84-1,58 (m, 2H), 1,52 (s, 9H). Trê s Protões permutáveis nao observados. d) Ditrifluoroacetato de (J?) -4-hidroxi-7- (l-hidroxi-2- <4-(2-(4-(2-feniltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiroC5.53undecan-9-.il* . ... .. ...... -*·-1·) etoxi)benzilamino) etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado uma uo trifluoroacético (1,2 mL) a solução de ÍD, „ ~2-hidroxi-2- ( 4-hidroxi-2-oxo-2,3-d hidrobenzo [d] tiazol-7-ii\ _ >tíril(4-(2-(4-(2-feniltiazole-4- carbonil)-l-oxa-4, 9-diaz carbamato de terc-butilo aesPiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil)-
Exemplo 112, passo c) (0,415 g) em DCM (4,7 mL) . A mistura resulta ante foi agitada à TA durante 15 min. Foi adicionado tolueno c4n mL) e a mistura reaccional foi evaporada in vácuo (x 2)
O resíduo foi purificado por HPLC (Phenomenex Gemini®, Gradi ente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). .
As fracções contendo o produto foram 658 combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,176 g. m/z 702 (M+H)+ RMN de XH (400 MHz, d4- -MeOH) δ 8,07 (s, 1H ) , 7,94 (s 1, 2H) , 7, 51- -7,39 (m, 5H) , 7, 06 ( s 1, 2H), 6, 93 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6, 71 (d, J = 8, 4 H z, 1H ) , 4 ,92- 4,88 (m 1H), 4, ,38 (s 1, 2H) , 4, 24- -4, 14 (m, 2H) , 4, 03- 3, 49 (m, 10H) , 338-3, 28 (m, 2H) r 3,08- 3, 00 (m, 2H) , 233- 2,22 (m r 2H) , 1, 87 (s 1, 2H) . Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 113
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4- (2- feniltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
659 a) (9-(9-Hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-feniltiazol-4-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 9-bromo-l-nonanol (0,346 g) em MeCN (3 mL) a uma solução de (2-feniltiazol-4-il) (l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 112, passo b) (0,355 g) e trietilamina (0,288 mL) em MeCN (7 mL) . A mistura resultante foi agitada a 60 °C sob árgon durante 17 h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi retomado em DCM, lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (x 2), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O óleo amarelo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-7% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,378 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC1 3) δ 8,02 (s, i—1 8, O o l > 87 (m, 2H) , 7,57 (s, 1H) , 7, 49- -7, 42 (m, 2H), 4,16 -4, 08 (m, , 2H) , 3 r 81 (s, 4H) , 3,72 (s 1, 1H) , 3,63 (t, J = 6,6 Hz , 2H) , 3, 33-2, 64 (m, 6H) , 2,25-2,04 (m, 3H) , 1, 79 (s, 3H), 1,61- 1,50 (m, 3H) , 1, 39- 1,25 (m, 9H) . 660 b)
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2-feniltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,059 mL) a uma solução de (9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]- undecan-4-il)(2-feniltiazol-4-il)metanona (exemplo 113, passo a) (0,373 g) em DCM (14 mL) a -0 °C. A mistura resultante foi agitada durante 5 min e em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,489 g) . A mistura foi agitada à TA durante 1 h. Foram adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (14 mL) , solução saturada de bicarbonato de sódio (14 mL) e AcOEt (30 mL) e a mistura foi agitada durante 5 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 30 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram tratadas com ácido acético (0,148 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. 0 óleo amarelo foi dissolvido em MeOH seco (15 mL) e foi adicionado cloridrato de
(R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,303 g) , seguido de ácido acético (0,066 mL) e peneiros moleculares de 3 Â. Depois de agitar durante 5 min à TA, a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,163 g) e a mistura foi agitada à TA durante 18 h. A 661 mistura reaccional foi filtrada e o solvente foi evaporado in vacuo. 0 resíduo foi purificado por HPLC (Phenomenex Gemini®, Gradiente 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,118 g. m/z 694 (M+H)+ RMN de 1ti (400 MHz, D4-MeOH) δ 8,31 (s, 1H), 7,97 (s 1, 1H), 7,99-7,91 (m, 2H) , 7,51-7,44 (m, 3H) , 6,95 (d, J = 8,4 Hz, 1H) , 6,72 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,97-4,89 (m, 1H), 3,99-3,86 (m, 2H), 3,85-3,63 (m, 4H) , 3,14-3,01 (m, 2H) , 3,00-2,91 (m, 3H) , 2,90- 2,56 (m, 4H) , 2,12-1,97 (m, 2H) , 1,85-1,47 (m, 6H) , 1,43-1,22 (m, 10H). Um protão obscurecido pelo solvente e cinco protões permutáveis não observados.
Exemplo 114
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
662 a) 4-(2-Isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de cloridrato de l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (WuXi
PharmaTech) (0,694 g) em DMF (13 mL) foi tratada com trietilamina (1,3 mL) , seguida de ácido 2-isopropiltiazole-5-carboxílico (exemplo 55, passo b) (0,406 g) e em seguida hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, NΝ' - tetrametilurónio (1,26 g). A mistura resultante foi agitada à TA durante 16 h. A DMF foi removida in vacuo. O residuo foi retomado em AcOEt (40 mL) e lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 40 mL) , água (40 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (40 mL) , seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O óleo viscoso laranja foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-7% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um óleo viscoso laranja. Rendimento 0,765 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 7, 80 (s, 1H) f 3, 75 (d J = 3,2 Hz 6H), 3,55 (d, J = 4,3 Hz, 2H) , 3,36 -3, 28 (m, 1H) 3, 15 (s, 2H), 1, 89-1, 78 (m, 2H) , 1,58 (s, 2H) , 1, 45 (s, 9H) 1, 42 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . 663 b) (2-Isopropiltiazol-5-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-4-il)metanona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (3,9 mL) a uma solução de 4-(2-isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-9-carboxilato de terc-butilo (exemplo 113, passo a) (0, 765 g) em DCM (14,8 mL) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 1 h. Foi adicionado tolueno (30 mL) e a mistura foi evaporada in vácuo. O resíduo amarelo foi dissolvido em MeOH e aplicado a um cartucho de SCX pré-humedecido com MeOH. O cartucho foi lavado com MeOH e eluído com amónia 2 M em MeOH. O eluente foi evaporado in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,552 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) δ 7, 81 (s, 1H) , 3, 79- -3, 71 (m 4H) , 3,64 -3,44 (m, 2H) , 3,36-3,26 (m, 1H) , 2,96- -2, 87 (m, 2H) 2,85- -2, 73 (m, 2H) , 1, 86- -1,75 (m, 2H) , 1,59 (s, 2H) , 1,42 (d J = 6,9 Hz, 6H). Um protão permutável nao observado. 664 c) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(4-(2-(4-(2-isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionada, gota a gota, uma solução de
metanossulfonato de (R)-2-(4-((terc-butoxicarbonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)-metil)fenoxi)etilo (exemplo 108, passo c) (0,575 g) em MeCN (3 mL) a uma solução de (2-isopropiltiazol-5-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 114, passo b) (0,229 g) e trietilamina (0,2-1 mL) em MeCN (7,3 mL) à TA sob árgon. A mistura resultante foi agitada a 80 °C sob árgon durante 16 h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi retomado em DCM (25 mL), lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) e água (20 mL), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-8% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido amarelo. Rendimento 0,395 g. RMN de (400 MHz, CDC13) δ 7,69 (s, 1 H), 7,01-6,83 (s, 2 H) , 6, 70-6,62 (m, 3 H), 6,57-6, 47 (m, 1 H), 4,79 (s, I H), 4,25- 4,06 (m, 3 H), 3,77-3,63 (m, 4 H), 3,57-3,39 (m, 4H), 3,34-3,26 (m, 2H), 2,90 (s, 4 H) , 2,61 (s, 2 H) , 1,95-1,85 (m, 2 H) , 1,63 665 (s, 2H) , 1,51 (s, 9 H) ' 1,45-1,37 (m, 6 H). Três protões permutáveis não observados (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-°arbonil)-l-oxa-4,9- d) Ditrifluoroacetato etoxi) benzilamino) etil)ben- (2-(4-(2-isopropiltiazole-5, diazaespiro [5.5] undecan-9-» zo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado áciHr> υ trifluoroacético (1,2 mL) a uma solução de (R)-2-hidrox-i o J-~2- ( 4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo- [d]tiazol-7-il)etil(4-(2-(4_,0 . .Ί,. , R n. V4: (2-isopropiltiazole-5-carbonil)-1- oxa-4, 9-diazaespiro [5.51 . > . V1 . Ίν J undecan-9-il)etoxi)benzil)carbamato de terc-butilo (exemplo 114 ^ ^ „
^ Passo c) (0,39 g) em DCM (4,7 mL) . A mistura resultante foi n . a<3itada a TA durante 15 mm. Foi adicionado tolueno (30 ηιτ 1 ^ .
Li-d e a mistura reaccional foi evaporada in vacuo (x 3). O resícinn ^ . uu° f o 1 purificado por HPLC (Phenomenex
Gemini , Gradiente 5-40% de acetonitrilo em ácido trifluoroacético aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,201 g. m/z 668 (M+H) J = RMN de ΤΗ ( 400 MHz, D4-MeOH) δ 7,91 (s, 1H) , 7,42 (d, i,6 Hz, 2H), 7,06 (d, j = q,6 Hz, 2H) . 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 666 1H) , 6, 71 (d, J = ‘ 8,3 Hz , 1H), 4,9 00 00 1 i—1 (m, 1H), 4,38 (t, J = 4,9 Hz, 2H) , 4, 24-4, 15 (m, 2H), 3 ,82-3,71 (m, 5H) , 3,66- -3,57 (m, 4H) , 3 , 56- 3, 48 (m, 2H), 3,38-3, 25 (m, 1H), 3,08- -3, 00 (m, 2H) , 2,29-2 ,17 (m, 2H) , 2, 12-1,93 (s 1, 1H), 1,88-1,73 (m, 2H) , 1,38 (d, J = 6, 7 Hz r 6H). Seis protõe s permutáveis não observados .
Exemplo 115
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2- isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(9-Hidroxinonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-5-il)metanona
Foi adicionada uma solução de 9-bromo-l-nonanol (0,446 g) em MeCN (3,9 mL) a uma solução de (2-isopropiltiazol-5-il) (1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (exemplo 114, 667 passo b) (0,395 g) e trietilamina (0,36 mL) em MeCN (8,6 mL). A mistura resultante foi agitada a 60 °C sob árgon durante 16 h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vacuo. O resíduo foi retomado em DCM (25 mL) , lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) e água (20 mL) , seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de MeOH em DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,329 g. RMN de 1R (400 MHz, CDC13) δ 7,81 (s, 1H), 3,74 (s, 4H) , 3,63 (t, J = 6, 6 Hz, 2H), 3,59 (s, 2H) , 3,36-3,26 (m, 1H), 3,ΙΟ 2,49 (m, 5H) , 2,03-1,91 (m, 3H) , 1,68 (s, 2H), Ι,61-1,50 (m, 3H) , 1, 43 (d, J = 6,9 Hz , 6H), 1, 36-1, 29 (m, 11H). Um protão permutável não observado. b) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2-isopropiltiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d]tiazo-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,055 mL) a uma solução de (9-(9-hidroxinonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-5-il)metanona (exemplo 115, passo a) (0,325 g) em DCM (13 mL) a 0 °C sob 668 árgon. A mistura resultante foi agitada durante 5 min e em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0, 458 g) . A mistura foi agitada à TA durante 1,5 h. Foram adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (14 mL), solução saturada de bicarbonato de sódio (14 mL) e AcOEt (28 mL) e a mistura foi agitada durante 10 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com AcOEt (2 x 20 mL) . A camada orgânica combinada foi tratada com ácido acético (0,16 mL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O óleo amarelo foi dissolvido em MeOH seco (15 mL) e foi adicionado cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,284 g) , seguido de ácido acético (0, 062 mL) e peneiros moleculares de 3 Â. Depois de agitar durante 5 min à TA, a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,153 g) e a mistura foi agitada à TA durante 16 h. A mistura reaccional foi filtrada e o solvente foi evaporado in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,090 mg. m/z 660 (M+H)+ RMN de 1H (400 MHz, d4- -MeOH) δ 8,50 (s, 1H) , 7, 90 (s, 1H) , 6,95 (d, J = 8 !, 5 Hz , 1H) r 6, 73 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4,96- -4, 90 (m, 1H) , 3, 79- -3,68 (m, 4H) r 3, 64-3,55 (m, 2H) , 3, 38-3,26 (m, 1H) , 3, 11 -3,05 (m, 2H) , 3, 04 -2, 92 (m, 4H) , 2, 86 -2, 69 (m, 4H) , 2, 07- -2, 04 (m, 2H) , 1, 76- 1,55 (m, r 6H) , 1,39-: 1,36 (m, 7H) , 1 .,36- 1,31 (m, 9H). Cinco protoes permutáveis não observados. 66 9 pEC5o e Actividade Intrínseca. A Actividade Intrínseca é exprimida como uma fracção em relação à actividade máxima determinada para o formoterol em cada experiência.
Exemplos 116-182
a) (R)-3-Fluoro-5-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
Uma solução de 2,2,2-trifluoro-1-(9-(3-fluoro-5-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 41, passo c) (0,8 g) em diclorometano (50 mL) a 20 °C foi tratada com ácido trifluoroacético (0,152 mL) seguido de periodinano de Dess-Martin (1,091 g) e a mistura resultante foi agitada a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi tratada com tiossulfato de sódio aquoso 670 saturado (20 mL), bicarbonato de sódio aquoso saturado (20 mL) e acetato de etilo (30 mL) e vigorosamente agitada durante 5 minutos. A mistura foi extraída com acetato de etilo (x2), os orgânicos combinados foram lavados com bicarbonato de sódio aquoso, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente removido sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (3 mL) e adicionado a uma solução de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona, HC1 (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,780 g) em metanol (20 mL) com ácido acético (0,113 mL). Esta mistura foi tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,186 g) e agitada durante 2 horas a 20 °C. Foi adicionada trietilamina (0,69 mL) seguida de dicarbonato de di-terc-butilo (0,689 mL) e a agitação continuou durante 2 horas a 20 °C. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente removido sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 10% de metanol em diclorometano com 1% de amónia aquosa concentrada. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,7 g. m/z 713,3 (M+H) + 671 b) (R)-3-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenetil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
Uma solução de (R)-3-fluoro-5-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)- 1- oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetil(2-hidroxi- 2- (4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7- il)etil)carbamato de terc-butilo (exemplos 116-182, passo a) (0,7 g) em solução aquosa de amónia a 35% (15 mL) foi deixada em repouso a 20 °C durante 40 minutos. A mistura reaccional foi evaporada até metade do seu volume inicial sob pressão reduzida. Foi adicionada água (10 mL) e esta solução foi feita passar através de um cartucho de silica C18 de 10 g que tinha sido pré-humedecido com água. A coluna foi purgada com água (20 mL) . A coluna foi então purgada com metanol (50 mL) para retirar o produto. 0 solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo (x2) para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,580 g. m/z 617 (M+H)+ 672 c) Síntese Paralela - Preparação dos Exemplos 116-182
Uma solução de (R)-3-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)-5-fluorofenetil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo (exemplos 116-182, passo b) (496 mg) e trietilamina (244 mg) em NMP (2,4 mL) foi distribuída como alíquotas de 30 uL de volume total. A cada alíquota foi adicionado uma solução do ácido apropriado (0,01 mmol) em NMP (80 uL) seguida de uma solução de HATU (4,9 mg) em NMP (30 uL) . A mistura reaccional foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 18 horas. Foi adicionado acetonitrilo (800 uL) e a solução foi feita passar através de resina "Tosic-65" (350 mg) . A resina foi lavada com acetonitrilo (800 uL) e as lavagens combinadas recolhidas e feitas novamente passar através da resina "Tosic-65". A resina foi então lavada com acetonitrilo (3 mL) . Foi feita passar uma solução de amónia em metanol (2,5 mL de uma solução 3,5 M) através da resina e as lavagens resultantes evaporadas sob uma corrente de azoto gasoso. O resíduo foi dissolvido em ácido fórmico (250 uL) e a mistura deixada em repouso à temperatura ambiente durante 18 horas. Foi adicionado acetonitrilo (600 uL) e a solução feita passar através de resina "Tosic-65" (350 mg) . A resina foi lavada com acetonitrilo (800 uL) e as lavagens combinadas recolhidas e feitas novamente passar através da resina "Tosic-65". A resina foi então lavada com acetonitrilo (3 mL) . Foi feita passar uma solução de amónia em metanol (2,5 673 mL de uma solução 3,5 M) através da resina e as lavagens resultantes evaporadas sob uma corrente de azoto gasoso. Foi adicionado DMSO (200 uL) ao resíduo e a solução resultante feita passar através de uma coluna preparativa C18 "Sunfire" (19 x 50 mm) utilizando uma gradiente de eluição de concentração de acetonitrilo contra TFA aquoso a 0,1% para purificação. As fracções contendo o produto foram evaporadas para produzir os compostos em epígrafe.
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+l Observado Tempo de retenção* (mln) 116 (R)-7-(2-(3-((4-(3-(1H-benzo[d]imidazol-2-il)propanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 689, 4 0, 97 117 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4— (2-(2-metoxifenil)acetil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona *γΟ 1 665,3 \—1 \—1 674 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 PM+l Observado Tempo de retenção* (min) 118 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5-metiltiofeno-2-carbonil)-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 641,3 1,1 119 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(quinolina-2-carbonil)-1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona O 672,3 1,11 120 (R)-7-(2-(3-((4-(lH-indole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 660,3 1, 19 121 (R)-7-(2-(3-fluoro-5- ( (4-(2-metilbenzoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona °tV 635, 3 1, 07 122 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(3-metilbenzoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 635, 3 1,1 675 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+l Observado Tempo de retenção* (min) 123 (R)-7-(2-(3-((4-(2-(bifenil-4-il)acetil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 711, 4 1,25 124 (R)-7-(2-(3-((4-(5-clorotiofeno-2-carbonil)-1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 661,2 1, 16 125 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(3-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona ♦ 641,3 1 126 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-(tiofen-3-il)acetil)-1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 641,3 0, 98 127 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(3-metilfurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 625, 3 1,1 676 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 128 (R)-7-(2-(3-((4-(3-(1H-indol-3-il)propanoil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H 688, 4 1, 03 129 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(1-fenilciclopenta-nocarbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona °?o 689,5 1,1 130 (R)-7-(2-(3-((4-(3,3-dimetilbutanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil) 5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 615, 4 1,1 131 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-metilfurano-3-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona i1· * 625, 3 1,1 132 (R) — 7 — (2 — (3 — ( (4-(benzo[d]tiazole-6-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona •F' II 678,3 1, 02 677 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 133 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5-metilimidazo[1,2-a]piridina-2-carbonil)-1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * νΝΎ^° 675, 3 0, 98 134 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-(3-metil-lH-l, 2, 4-triazol-5-il)acetil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fene-tilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona Xxi N H 640, 4 0,9 135 (R)-7-(2-(3-((4-(2-(3-etil-2-oxo-2,3-di-hidro-lH-benzo[d]imidazol-1-il)acetil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona cá- * 719, 4 1, 16 136 (R)-7-(2-(3-((4-(2,5-dimetoxibenzoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona y 681,3 1,11 137 (R)-7-(2-(3-((4-(lH-indole-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona y o 660,3 1, 09 678 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 138 (R)-7-(2-(3-((4-(lH-indole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 660,3 1, 05 139 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(l-metil-lH-indole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 1 o 674, 3 1, 09 140 (R)-7-(2-(3-((4-(lH-indole-6-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H 660,3 1,11 141 (R)-7-(2-(3-((4-(lH-indole-7-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona cr> I H cr^* 660,3 1, 13 142 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(1-isopropil-lH-benzo[d][1,2,3]triazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 'l· N. 1, 'Ν'Νγ' 704, 4 1, 04 679 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+l Observado Tempo de retenção* (min) 143 (R)-7-(2-(3-( (4-(2,6- dimetilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 0 689, 4 0, 82 144 (R)-7-(2-(3-((4-(2-(benzo[d]isoxazol-3-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona |TV°' * 6763 1, 01 145 (R)-7-(2-(3-((4-(bifenilcarbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 0¾ 697, 4 1,3 146 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(4,5,6,7-tetra-hidro-2H-indazole-3-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fene-tilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona o 665, 3 1, 13 147 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 641,3 1,11 680 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 148 (R)-7-(2-(3-((4-(4-(1H-pirazol-3-il)benzoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona o H 687, 4 1, 07 149 (R)-7-(2-(3-((4-(2,3-di-hidrobenzofurano-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 5¾ 663,3 1, 07 150 (R)-7-(2-(3-((4-2,5-dimetiltiofeno-3-carbonil) -l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona > * 655, 3 1, 15 151 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(4-metil-l,2,5-oxadiazole-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 627, 3 1, 05 152 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-metilimidazo[1,2-a]piridina-3-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)fenetilamino )-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 675, 4 0, 88 681 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 153 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-(3-metil-lH-pirazol-l-il)acetil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona N 639,3 0, 97 154 (R)-7-(2-(3-((4-(5-etoxi-2-hidroxibenzoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona L„ °rV * OH 681, 4 1, 03 155 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(3-fenil-lH-pirazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona 0 HN T u 687, 3 1,11 156 (R) -7-(2-(3-((4-(4-(1H-imidazol-l-il)benzoil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 687, 4 0, 81 157 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5-metil-lH-indole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona * 674, 4 1,14 682 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+l Observado Tempo de retenção* (min) 158 7-((R)-2-(3-fluoro-5-((4-( (S)-tetra-hidrofurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona °*rQ * 615, 3 0, 84 159 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(4-(oxazol-5-il)benzoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)fene-tilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 688,3 0, 97 160 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(1-fenil-lH-pirazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona 687, 3 1, 16 161 7-((IR)-2-(3-fluoro-5-((4-(3-(3-metil-5-oxo-4,5-di-hidro-lH-pirazol-4-il)propanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona hnA 669,4 0, 97 162 (R)-7-(2-(3-((4-(1,2-dimetil-lH-benzo[d]imidazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 1 689, 4 0, 92 683 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 163 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-(4-metil-l,2,5-oxadiazol-3-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)fene-tilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 641,3 1, 02 164 (R)-7-(2-(3-((4-(3-(1H-1,2,4-triazol-l-il)propanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 0. /=NV 640,3 0, 88 165 (R)-7-(2-(3-((4-(lH-indole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H cxy 0^* 660, 4 1, 03 166 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-(2-metiltiazol-4-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 656,3 0, 93 167 (R)—7—(2—(3—((4-(2-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona /°'M * 654, 3 0, 93 684 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 168 (R)-7-(2-(3-((4-(2-(7- cloro-ΙΗ-indo1-1-il)acetil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5- fluorofenetililamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 9t· * 708,3 1, 12 169 (R)-7-(2-(3-((4-(bifenilcarbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 697, 4 1, 18 170 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5-metil-2-fenil-2H-l,2,3-triazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)fene-tilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 702,3 1, 13 171 (R)-7-(2-(3-((4-(bifenilcarbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxetil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 697, 4 1,34 172 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(quinolina-3-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)fene-tilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 0 672,3 1, 05 685 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+l Observado Tempo de retenção* (min) 173 (R)-7-(2-(3-((4-(benzofurano-5-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 661,3 1, 12 174 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-fenetoxiacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)fenetilamino )-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 0 Λ 679, 4 1,22 175 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-fenil-lH-imidazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona Kl • no 687, 4 1 176 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-metil-2-fenilpropanoil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona 663, 4 1,23 177 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(2-(2-(trifluorometil)-1H-benzo[d]imidazol-1-il)acetil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona OH- * 743,3 1,14 686 (continuação)
Exemplo N2 NOME 0 A« PM+1 Observado Tempo de retenção* (min) 178 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(quinolina-7-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)metil)fene-tilamino)-1-hidroxietil) - 4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona o 672,3 0, 93 179 (R)-7-(2-(3-fluoro-5-((4-(5-isopropilisoxazole-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazoespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 654, 4 1, 13 180 (R)-7-(2-(3-( (4-(4, 5-dimetilfurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 639,3 1, 07 181 (R)-7-(2-(3-fluoro-5- ( (4-(2-(4- hidroxifenoxi)acetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona X O 0 * 667, 3 0, 92 182 (R)-7-(2-(3-((4-(5-clorobenzofurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-5-fluorofenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * Cl 695, 3 1, 12 687
Condições de HPLC analítica: coluna C18 2,5 μπι 4,6x30 mm SunFire™ (Waters Corporation), MeCN/TFA aq. a 0,1%, gradiente 5-95% de MeCN).
Tempo (min) % aquosa % MeCN Caudal (mL/min) 0,3 95 5 2,5 2, 7 5 95 2,5 2,8 5 95 2,5 2,9 95 5 2,5
Exemplos 183-222
a) 9-Bromononanal 0
Br
Foram adicionados N-etildiisopropilamina (23mL) e DMSO (9,7mL) a uma solução de 9-bromo-l-nonanol (10,0 g) em DCM seco (230mL) à TA sob árgon. A mistura foi arrefecida até -15 °C e foi adicionado complexo de trióxido de enxofre-piridina (21,4 g) em 4 porções em intervalos de 5 min. A mistura foi agitada durante 15 min após a conclusão da adição, em seguida foi adicionada água (200 mL) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa de bissulfato de sódio 1 M (4 x 250 mL), carbonato de potássio aquoso saturado (250 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 200 mL) , seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo para dar o composto em subepigrafe como um óleo laranja. Rendimento 9,02 g. RMN de ΧΗ (400 MHz , CDC13) : δ 9,77 (t, J = 1,8 Hz, 1H) , 3,40 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,42 (td, J = 7,3, 1 ,8 Hz, 2H), 1,89- -1,80 (m, 2H) , 1,66-1 ,57 (m, 2H), 1,58- -1,26 (m, 8 H) . b) (R)-9-Bromononil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-ozo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
Uma solução de 9-bromononanal (exemplo 183-222, passo a) (3,48 g), cloridrato de hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona exemplo I parte d) (4,54 g) e seca (91 mL) foi agitada à reaccional foi arrefecida triacetoxiboro-hidreto de sód: intervalos de 2 min. A mistur durante 5 min e em seguida à dicarbonato de di-terc-butilo qual foi agitada durante 1,5 h (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-(documento W02007027134,
ácido acético (0,99 mL) em DMF TA durante 30 min. A mistura até O O O e foi adicionado .0 (5,00 g) em 4 porções em a resultante foi agitada a 0 °C TA durante 1 h. Foi adicionado 4,12 g) à mistura reaccional, a em seguida arrefecida até 0 °C e 689 desactivada com bicarbonato de sódio aquoso saturado (220mL). Foi adicionado acetato de etilo (200 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada durante 15 min. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 150mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-70% de AcOEt/éter de petróleo (40/60 °C) para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 1,68 g. m/z 532 (M+H) RMN de ΤΗ (400 1 MHz, CDC13 ) : δ 7,02-6,90 (m, 1H) ; 6,78 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,92 -4,87 (m, 1H) , 3,63-3,27 (m, 5H) , 3,20-3,04 CT> \—1 1 cr> 00 1-1 D? \—1 (m, 2H) , 1, 71· -1,17 (m, 21H) + 3 protões permutáveis não observados. c) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(9-(4-(2,2,2-trifluoroacetil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonil)carbamato de terc-butilo
Uma solução de (R)-9-bromononil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de 690 terc-butilo (exemplo 183-222, passo b) (1,68 g) em MeCN (8 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-l-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo d) (1,18 g) e trietilamina (0,81 mL) em MeCN (8mL) . A mistura resultante foi agitada a 80 °C durante 18h. A reacção foi deixada arrefecer até à TA e o solvente foi removido in vacuo. O resíduo castanho foi retomado em DCM e a camada orgânica foi lavada com água (x2) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. A espuma castanha foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de MeOH/DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 500 mg. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13): δ 6,95 (s, 1H), 6,80 (dd, ,3, 4,0 Hz, 1H), 4,93 (s, 1HJ 1, 3,79-3,26 (m, 10H), 3,03- (m, 6H) , 2,10-1,98 (m, 4H), 1, 78-1, 70 (m, 2H), 1,48 (s, 9H) , 1,36-0, 96 (m, 12H) mais 3 permutáveis não observados. d) (R)-9-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
691
Uma solução de carbonato de potássio (165 mg) em água (24 mL) foi adicionada a uma solução de (R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(9-(4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonil)carbamato de terc-butilo (exemplo 183-222, passo c) (495 mg) em MeOH (24 mL) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 4 h. 0 metanol foi removido por evaporação sob uma corrente de azoto mantendo a mistura reaccional a 30 °C. Foram adicionadas água (20 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (80mL) e a mistura foi extraída com AcOEt (5 x 60 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O resíduo sólido castanho foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-20% de (NH3 2 M em MeOH)/DCM para dar o composto em subepígrafe como um sólido amarelo. Rendimento 323 mg. m/z 607 (M+H) + RMN de XH (400 MHz r DMSO) : δ 05 co o 1 00 (m, k·. t—1 6,65 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 5,58 (s 1, 1H), 4, 69- 4, 56 (m, 1H) , 3,44 (t, J = 3,9 Hz, 2H) , 3,20-3, 11 (m, 2H) , 3,05 -2, 94 (m, 2H) , 2,57 (t, J = 5, 2 Hz, 2H) , 2,50-2, . 46 (m, 2H) , 2,40 -2,31 (m, 2H) , . 225- 2,13 (m, 4H) , i ,77- 1,68 (m, 2H) , 1,45- -1,02 (m, 25H) + 3 protoes permutáveis nao observados. 692 e) Química Paralela - preparação dos exemplos 183-222
Uma solução de (R) -9-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d] tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo (292 mg) e
trietilamina (exemplos 183-222, passo d) (0,20 mL) em NMP (1,14 mL) foi distribuída como alíquotas de 30 uL de volume total. A cada alíquota foi adicionada uma solução do ácido apropriado (0,01 mmol) em NMP (80 uL) seguida de uma solução de HATU (4,0 mg) em NMP (30 uL) . A mistura reaccional foi deixada em repouso à temperatura ambiente de um dia para o outro. Foi adicionado acetonitrilo (800 uL) e a solução feita passar através de resina "Tosic-65" (350 mg) . A resina foi lavada com acetonitrilo (800 uL) e as lavagens combinadas recolhidas e feitas novamente passar através do resina "Tosic-65". A resina foi então lavada com acetonitrilo (3 mL). Foi feito passar amónia (3,5 M em metanol, 2,4 mL) através da resina e as lavagens resultantes evaporadas sob uma corrente de azoto gasoso. O resíduo foi dissolvido em ácido fórmico (250 uL) e a mistura deixada em repouso à temperatura ambiente de um dia para o outro. Foi adicionado acetonitrilo (600 uL) e a solução feita passar através de resina "Tosic-65" (350 mg). A resina foi lavada com acetonitrilo (800 uL) e as lavagens combinadas recolhidas e feitas novamente passar através do resina "Tosic-65". A resina foi então lavada com acetonitrilo (3 mL). Foi feito passar amónia (3,5 M em metanol, 2,4 mL) através da 693 resina e as lavagens resultantes evaporadas sob uma corrente de azoto gasoso. Foi adicionado DMSO (360 uL) ao resíduo e a solução resultante feita passar através de uma coluna preparativa C18 (19 x 50 mm) "Sunfire" utilizando um gradiente de eluição de concentração de acetonitrilo contra TFA aguoso a 0,1% para purificação. As fracções contendo o produto foram evaporadas para produzir os compostos em epígrafe.
OH
Exemplo Na NOME O xB1 * R1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 183 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(4 - (tiofen-2-il)butanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 659,4 1,24 184 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(1-metil-lH-pirrole-2-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona Jp' * 614,4 \—1 \—1 t—1 185 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4- (2-(tiofen-2-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 631,3 \—1 \—1 \—1 694 (continuação)
Exemplo N2 NOME O PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 186 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-fenilacetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona ro 625,4 1, 16 187 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(3-fenilpropanoil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 0 \ 639,4 1,2 188 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(4-fenilbutanoil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 653,4 1,25 189 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-meti1-2-fenilpropanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 653,4 1,25 190 (R)-7-(2-(9-(4-(5-clorotiofeno-2-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 651,3 1,21 191 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(3-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona * 631,4 1, 05 695 (continuação)
Exemplo N2 NOME O AR1 PM+l Observado Tempo de retenção * (min) 192 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4- (2-(tiofen-3-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona •-to 631,3 1,14 193 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(3-metilfurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona ♦ 615,4 1, 12 194 (R)-7-(2-(9-(4-(benzo[b]tiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona * 667,4 1, 16 195 (R)-7-(2-(9-(4- (4,5-dimetilfurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona °Y&. * 629,4 1,17 196 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(6- metilpicolinoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 626,4 1, 04 197 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-metilfurano-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona y- * 615,4 1,1 (continuação)
Exemplo N2 NOME O AR1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 198 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(5-metilfurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona °y& * 615,4 1,11 199 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-fenoxiacetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona O Λ X) 641,4 1, 15 200 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-(5-metil-lH-pirazol-l-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona Όΐ * 629,4 0, 96 201 (R)-7-(2-(9-(4- (2,5-dimetiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona N I * 646,4 1, 08 202 (R)-7-(2-(9-(4- (2,5-dimetiltiofeno)-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona > * 645,4 1, 13 203 (R)-7-(2-(9-(4-(2-(benziloxi)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)nonilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona A i—o o o 655,4 1, 18 697 (continuação)
Exemplo N2 NOME O AR1 PM+l Observado Tempo de retenção * (min) 204 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-(3-metil-lH-pirazol-l-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)nonil-amino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona Λλ N 629,4 1, 04 205 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona i1- * 631,4 1, 12 206 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4- (3-fenoxipro-panoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona °X) 655,4 1,22 207 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(3-(tiofen-2-il)propanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 645,4 1, 19 208 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-(3-metilisoxazol-5-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 630,4 1, 05 209 (R)-7-(2-(9-(4-(benzofurano-5-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 651,4 1,14 698 (continuação)
Exemplo N2 NOME O PM+l Observado Tempo de retenção * (min) 210 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-(2-metiltiazol-4-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona 646,4 1, 05 211 (R) — 7— (2— (9 — (4— (2 — (2, 4— dimetiltiazol-5-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 660,4 0, 97 212 (R)-7-(2-(9 - (4 - (2-clorotiofeno-3-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona i*· * 651,3 1,14 213 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(4-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona * 631,4 1, 15 214 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2—(9-(4-(5-isopropilisoxazole-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona N-O 644,4 1,3 215 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2—(9-(4-(2- metilbenzo[d]tiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona V N=/ 682,4 1, 13 (continuação)
Exemplo N2 NOME O AR1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 216 (R)-7-(2-(9-(4-(2-terc-butiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2 (3H)-ona 0^* 674,4 1,26 217 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2—(9-(4-(2- (trifluorometil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona & 686,3 1, 18 218 (R)-7-(2-(9-(4-(2-ciclopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 658,4 1, 16 219 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(9-(4-(2-propiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)etil)benzo[d] tiazol-2(3H)-ona * 660,4 1, 16 220 (R)-7-(2-(9-(4-(2- ciclobutiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino)-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona ís^O Ογ-Ν * 672,4 1,17 700 (continuação) Exemplo N2 NOME O AR1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 221 (R)-7-(2-(9 - (4 - (2-ciclopentiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 686,4 1,23 0=3^ * 222 (R)-7-(2-(9-(4-(4,5- dimetiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)nonilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 645,4 1,29 ★ coluna C18 2,5 pm MeCN/TFA aq. a 0,1%, * Condições de HPLC analítica: 4,6 x 30 mm SunFire™ (Waters Corporation gradiente 5-95% de MeCN).
Tempo (min) % aquosa % MeCN Caudal (mL/min) 0,3 95 5 2,5 2, 7 5 95 2,5 2,8 5 95 2,5 2,9 95 5 2,5 701
Exemplos 223-263
a) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo_2 >3-di-hidrobenzo [d] tiazol-7-il) etil (4- (2- (4" <2'2'2-trifluoroacetil) -1- oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-iDetoxi)kenzil)carbamato terc-butilo
Uma solução de metanossulfonato de (R)-2-(4-((terc- butoxicarbonil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi~2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)amino)metil)fenoxi)etilo (exemplo 108, passo c) (2,20 g) em MeCN (8,5 mL) foi adicionada gota a
gota a uma solução de trifluoroacetato de 2,2,2-trifluoro-1-(1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (exemplo 12, passo d) (1,18 g) e trietilamina (0,81 mL) em MeCN (8,5 mL) à TA sob árgon. A mistura resultante foi agitada a 60 °C sob árgon durante 25h. Depois de arrefecer até à TA o solvente foi removido in vacuo. O residuo castanho foi retomado em DCM (35 mL), lavado com água (2 x 35 mL), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado in vacuo. O sólido amarelo foi 702 purificado por cromatografia sobre silica gel eluindo com 0-10% de MeOH/DCM para dar o composto em subepigrafe como um sólido amarelo. Rendimento 729 mg. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13): δ 6,88-6,50 (m, 6H) , 4,86-4,64 (s 1, 1H), 4,34-4,15 (s 1, 3H), 4,11-3,87 (m, 2H), 3,70-3,01 (m, 11H), 2,95-2,73 (s 1, 2H), 2,04-1,81 (m, 2H), 1,56-1,37 (m, 11H) mais 3 permutáveis não observados. b) (R)-4-(2-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil(2—hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionada uma solução de carbonato de potássio (240 mg) em água (35 mL) a uma solução de (R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(4-(2-(4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzil)carbamato de terc-butilo (exemplos 223-263, passo a) (725 mg) em MeOH (35 mL) . A mistura resultante foi agitada à TA durante 5 h. O metanol foi removido por evaporação sob uma corrente de azoto mantendo a mistura reaccional a 25 °C. Foram adicionadas água (20 mL) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio (30 mL) e a mistura foi extraída com acetato de etilo (7 x 30 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram secas 703 filtradas e evaporadas in vacuo. 0 sobre sulfato de sódiO' 0x cromatografia sobre sílica gel resíduo foi purificado o m em MeOH) /DCM para dar o composto em eluindo com 0-20% de (NH3 j-j^anco. Rendimento 385 mg. subepígrafe como um sóli^° RMN de XH (400 MHz, 6 2 ,pMS0) : δ 7, 06-6, 97 (m, 2H) , 6,83 (d, (m, 2H), 5,64 (s; 1H) , 4,68 (s 1, J = 8,6 Hz, 2H), 6, 78-6' 1H), 4,24 (s, 2H), 3,98 _ , (jd, 4H) , 2,57 (s, 2H) , 2,52-2, 47 (m, J = 5,6 Hz, 2H), 3,50 (t, 2H) , 3,24- 3,02 (m, 2H), 2,68-2,60 3 2H), 2,32 (td, J = 11,9 1,43 (td, J = 10,8, 3,7 #z' 3 permutáveis não observa^0 0 Hz, 2H), 1,76 (d, J = 13,0 Hz, 2H), 2H), 1,31 (s, 3H), 1,22 (s, 6H) mais c) Química Paralela preparação dos Exemplos 223-263
, (2-(l~oxa-4, 9-diazaespiro [5.5] undecan-
Uma solução de (R) 2"(^~hidroxi-2-oxo-2,3-di-9-il)etoxi)benzi1(2-hidroxx rii)carbamato de terc-butilo (exemplo hidrobenzo[d]tiazol-7-il)eu
> e trietilamina (0,20 mL) em NMP 223-263, passo b) (297 (1,24 mL) foi distribui total. A cada alíquota , como alíquotas de 30 uL de volume
Laa. apropriado (0,01 mmol) ein HATU (4,0 mg) em NMP (30 em repouso à TA de urn foi adicionada uma solução do ácido NMP (80 uL) seguida de uma solução de uL) · A mistura reaccional foi deixada dia para o outro. Foi adicionado 704 acetonitrilo (800 uL) e a solução feita passar através de resina "Tosic-65" (350 mg). A resina foi lavada com acetonitrilo (800 uL) e as lavagens combinadas recolhidas e feitas novamente passar através de resina "Tosic-65". A resina foi então lavada com acetonitrilo (3 mL) . Foi feito passar amónia (3,5 M em metanol, 2,4 mL) através da resina e as lavagens resultantes evaporadas sob uma corrente de azoto gasoso. O resíduo foi dissolvido em ácido fórmico (250 uL) e a mistura deixada em repouso à temperatura ambiente de um dia para o outro. Foi adicionado acetonitrilo (600 uL) e a solução feita passar através de resina "Tosic-65" (350 mg) . A resina foi lavada com acetonitrilo (800 uL) e as lavagens combinadas recolhidas e feitas novamente passar através de resina "Tosic-65". A resina foi então lavada com acetonitrilo (3 mL). Foi feito passar amónia (3,5 M em metanol, 2,4 mL) através da resina e as lavagens resultantes evaporadas sob uma corrente de azoto gasoso. Foi adicionado DMSO (360 uL) ao resíduo e a solução resultante feita passar através de uma coluna preparativa C18 (19 x 50 mm) "Sunfire" utilizando um gradiente de eluição de concentração de acetonitrilo contra TFA aquoso a 0,1% para purificação. As fracções contendo o produto foram evaporadas para produzir os compostos em epígrafe. 705
Exemplo N2 ΝΟΜΕ 0 AB1 • R1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 223 (R)-7-(2-(4-(2-(4-benzoil-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona *0 619,3 1, 06 224 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(4-(2-(4-(4-(tiofen-2-il)butanoil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 667,3 1, 15 225 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(l-metil-lH-pirrole-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 622,3 1 226 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2- (4- (2-(tiofen-2-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 639,3 1, 01 706 (continuação)
Exemplo N2 NOME O ar1 * R1 PM+l Observado Tempo de retenção * (min) 227 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2- (4- (2-fenilacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 633,3 1, 04 228 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(3-fenilpropanoil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 0 647,4 1,11 229 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(4-fenilbutanoil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 661,4 1,17 230 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metil-2-fenilpropanoil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 661,4 1, 18 231 (R) - 7-(2-(4-(2-(4-(5-clorotiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[dltiazol-2(3H)-ona * 659,2 1,1 232 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(3-metiltiofeno-2-carbonil) -l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 639,3 1, 03 707 (continuação)
Exemplo N2 NOME O ar1 * R1 PM+l Observado Tempo de retenção * (min) 233 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-(tiofen-3-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 639,3 1 234 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(3-metilfurano-2-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 623,3 0, 97 235 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(benzo[b]tiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 675,3 1, 09 236 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(4,5-dimetilfurano-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 637,3 0, 99 237 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2- (4- (6-metilpicolinoil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-i1)etoxi)benzilamino )etil)benzo[d]tiaz ol-2 (3H)-ona 634,3 0, 88 708 (continuação)
Exemplo N2 NOME O ar1 * R1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 238 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metilfurano-3-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 623,3 0, 91 239 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(5-metilfurano-2-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 623,3 1, 02 240 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-fenoxiacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona O •Λ °O 649,3 1, 13 241 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-(5-metil-lH-pirazol-1-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona Nfl * 637,4 0, 96 242 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2,5-dimetiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona & * 654,3 0, 92 243 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2,5- dimetiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona > * 653,3 1,11 709 (continuação)
Exemplo N2 NOME O ar1 * R1 PM+l Observado Tempo de retenção * (min) 244 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2-(benziloxi)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-il)etoxi)ben-zilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 663,4 1, 12 245 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-(3-metil-lH-pirazol-1-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona N 637,4 0, 94 246 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 639,3 1, 03 247 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2- (4-(3-fenoxipropanoil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]un-decan-9-i1)etoxi)benzi lamino )etil)benzo[d]tiaz ol-2(3H)-ona *^o 663,3 1,11 248 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(4-(2-(4-(3-(tiofen-2-il)propanoil)-1-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 653,3 1, 04 249 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-(3-metilisoxazol-5-il)acetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona XCL 638,3 0, 9 710 (continuação)
Exemplo N2 NOME O ar1 * R1 PM+l Observado Tempo de retenção * (min) 250 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(benzofurano-5-carbonil) -l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 659,3 1, 08 251 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-(2-metiltiazol-4-il)acetil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona λ/1 N 654,3 0, 88 252 (R) — 7— (2 — (4— (2 — (4— (2 — (2, 4 — dimet iltiazol—5 — i1)acetil}-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 668,3 0, 83 253 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2-clorotiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 659,2 0, 96 254 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(4-metiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 639,3 1, 08 711 (continuação)
Exemplo N2 NOME O ar1 * R1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 255 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(5-isopropilisoxazole-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona N-0 652,4 1, 02 256 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-metilbenzo[d]tiazole-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona Λα N=/ 690,3 1, 13 257 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2-terc-butiltiazole-4-carbonil) -l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona γΝ 682,4 1,23 258 (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-(trifluorometil)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona 694,3 1,1 259 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2-ciclopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 666,3 1, 05 712 (continuação)
Exemplo N2 NOME O ar1 * R1 PM+1 Observado Tempo de retenção * (min) 260 (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(2-(4-(2-propiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)etil) benzo[d]tiazol-2(3H)-ona o 668,3 1, 08 261 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2-ciclobutiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona íVO 0^N * 680,3 1, 12 262 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(2-ciclopentiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona 694,4 1, 19 263 (R)-7-(2-(4-(2-(4-(4,5- dimetiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)benzilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona * 653,3 1, 18 *Condições de HPLC analítica: coluna C18 2,5 pm 4,6 x 30 mm SunFire™ (Waters Corporation), MeCN/TFA aq. a 0,1%, gradiente 5-95% a MeCN, 713 (continuação)
Tempo (min) % aquosa % MeCN Caudal (mL/min) 0,3 95 5 2,5 2, 7 5 95 2,5 2,8 5 95 2,5 2,9 95 5 2,5 1 H permutável nao observado.
Exemplo 264
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
714 a) 2,2,2-Trifluoro-l-(9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona
Foi adicionado TBAF (1 M em THF, 2,96 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de l-(9-((4-(2-(terc-butildimetil-sililoxi)etil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)-2,2,2-trifluoroetanona (Exemplo 43, passo a) (1,500 g, 2,96 mmol) em THF (5 mL) . Após 1 h, a solução foi evaporada até uma goma. A purificação por cromatografia sobre silica gel eluindo com acetato de etilo:trietilamina, 10:1 deu o composto em subepigrafe como uma goma. Rendimento 0,25 g. m/z 393 (M+H)+ (APCI+) b) 2-(5-((4-(2,2,2-Trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído
O composto em subepigrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 43 passo (e) utilizando 2,2,2-trifluoro-l-(9-((4-(2-hidroxietil)tiofen-2-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)etanona (0,15 g) (Exemplo 264, passo a). Rendimento 0,15 g 715 m/z 391 (M+H)+ (APCI+) c) (R)-2-Hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2, 3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(2-(5-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionado (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona, HC1 (1,020 g) (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) a uma solução, mantida sob agitação, de 2-(5-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)acetaldeído (Exemplo 264, passo b) (0,9 g) e ácido acético (0,198 mL) em MeOH (20 mL) . Após 2 min foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,290 g). Após 2 h foi adicionada trietilamina (1,1 mL) e em seguida Anidrido de BOC (0,845 g) . Após 1 h foi adicionado mais anidrido de BOC (0,4 g) e trietilamina (0,5 mL). Após 2h, a solução foi concentrada até ~5 mL, em seguida partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada de acetato de etilo foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. A purificação por cromatografia sobre sílica gel eluindo com metanol:diclorometano:amónia 880, 716 10:90:1 deu o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,32 g m/z 701 (M+H)+ (APCI+) d) (R)-2-(5-(l-Oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)tiofen-3-il)etil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo
Foi adicionada amónia aquosa a 35% (5 mL) a (R)-2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil(2-(5-((4-(2,2,2-trifluoroacetil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etil)carbamato de terc-butilo (Exemplo 264, passo c) (0,2 g) . Após 40 min a 20 °C a solução foi concentrada até ~1 mL e a suspensão espessa adicionada a um cartucho C18 (10 g) lavando com água (20 mL) , em seguida eluindo o produto com metanol. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. O sólido resultante foi dissolvido em acetonitrilo e evaporado in vacuo. Rendimento 0,11 g. 717 m/z 605 (M+H)+ (APCI+) e) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(5-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-3-il)etilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado HATU (0,075 g) a uma solução, mantida sob agitação, de (R)-2-(5-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-ilmetil)tiofen-3-il)etil(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etil)carbamato de terc-butilo (Exemplo 264, passo d) (0,1 g), ácido 5-isopropiltiofeno-3-carboxilico (0, 028 g) e trietilamina (0, 092 mL) em DMF (2 mL) . Após 1 h, a mistura reaccional foi partilhada entre água e acetato de etilo. A camada de acetato de etilo foi lavada com água (x 2) e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. A goma resultante foi dissolvida em ácido fórmico (2 mL) . Após 16 h, a solução foi evaporada in vacuo. Foi adicionado acetonitrilo e a mistura evaporada in vacuo (x 2). Foi adicionado tolueno e a mistura evaporada in vacuo. A mistura foi dissolvida em metanol, filtrada e purificada por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 718 10-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto puro foram combinadas e evaporadas in vacuo. Foi adicionado acetonitrilo (200 mL) e a solução foi evaporada in vacuo até uma goma. Este processo foi repetido duas vezes. Foi adicionado éter dietilico e o composto em epígrafe recolhido como um sólido. Rendimento 0,05 g. m/z 657 (M+H)+ (multimodo+) RMN de XH (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 11,29 (s, 1H) , 7,49 (s, 1H) , 7,41 (s, 1H) , 7,16 (s, 1H) , 6, 96 - 6, 88 (m, 2H) , 6,76 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,94 - 4 , 86 (m, 1H), 4, 47 (s, 2H), 3, 71 - 3,62 (m, 2H) , 3,57 - 3,48 (m, 2H) , 3,48 - 3,40 (m, 2H) , 3 ,31 - 2,9 (m, 11H) , 2,11 -1,95 (m, 2H) , 1,80 - 1,63 (m , 2H) , 1,28 (d, J = 6,6 Hz, 6H) mais 5 protões permutáveis ausentes.
Exemplo 265
Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(3—((4— (2—(pentan-3-il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona 719 HO,
S >=° N a) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(pentan-3-il)tiazol-4-il)metanona
0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (b) utilizando ácido 2-(pentan-3-il)tiazole-4-carboxílico (0,12 g) (Exemplo 71, passo d). Rendimento 0,18 g. RMN de (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 7,92 (s, 1H) , 7,18 (t, J = 7,6 Hz, ih ; ) , 7, 11 - 7, 04 (m, 3H) , 4,24 (dd, J = = 5,3, 3,5 Hz, 1H) , 3, 72 - 3 ,57 (m, 8H) , 3,41 (s, 2H) , 2, 71 (t , J - = 6,9 Hz, 2H) , 2, 41 - - 2, 24 (m, 4H) , 1,82 - 1,66 (m, 4H) , 1, 59 - 1, 47 (m, 2H) , 0, 86 (t, J = 7, 3 Hz, 6H) + 3H obscurecidos pelo pico da água. 720 721 b) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-(pentan-3-il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo [d]tiazol-2(3H)-ona
0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (c) utilizando (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(pentan-3-il)tiazol-4-il)metanona (0,18 g) (Exemplo 265, passo a) . 0 aldeído em bruto foi dissolvido em DCM em vez de metanol. Rendimento 0,09 g. m/z 680 (M+H)+ (Multimodo+) RMN de (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 11,36 (s, 1H) , 7, 98 (s, 1H) , 7,44 - - 7, 32 (m, 4H) , 6,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4, 94 - 4, 86 (m, 1H) , 4,34 - 4, 24 (m, 2H) , 3, 75 - 2,88 (m, 17H) , 2,13 - 1,96 (m, 2H) , 1, 79 - 1,59 (m, 6H) , 0, 83 (t, J = 7,3 Hz, 6H) + 5 permutáveis nao observados. 722
Exemplo 266 (R)-7-(2-(3-((4-(benzofurano-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona di(ácido trifluoroacético)
a) Benzofuran-5-il(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (b) utilizando ácido benzofurano-5-carboxílico (0,1 g). Rendimento 0,16 g. RMN de ’ή (400 MHz, DMSO, 90 °C) 8 7, 99 (d, J = 2, 1 Hz, 1H) , 7,67 (s, r 1H) , 7,60 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,31 (dd, J = 8,6, 1, 7 Hz, 1H), 7, 16 (t, J = 7, 6 Hz, 1H) , 7, 10 - 7, 02 (m, 3H) , 6,97 (t, J = 1,2 Hz, r 1H) , 4,24 (t, J = = 5,3 Hz, 1H), 3, 68 - - 3,58 (m, 723 2,27 4Η) , 3,52 - 3,34 (m, 6H), 2,70 (t, J= 6,9 Hz, 2H) , 2,38 - (m, 4H), 1,81 - 1,68 (m, 2H), 1,55 - 1,42 (m, 2H) b) (R)-7-(2-(3-((4-(benzofurano-5-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona di(ácido trifluoroacético)
0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (c) utilizando benzofuran-5-il(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (0,15 g) (Exemplo 266, passo a) . O aldeído em bruto foi dissolvido em DCM em vez de metanol. Rendimento 0,07 g. m/z 643 (M+H)+ (Multimodo+) RMN de XH (300 MHz, DMSO, 90 °C) δ 11 oo oo (s, 1H), 8, 02 (d, J = 2 ,1 H b 1H) , 7, 71 (s, 1H), 7,63 (d, J = 8, 5 Hz, 1H) r 7, 47 - 7, 31 (m, 5H ) , 6,99 - 6,90 (m , 2H), 6, 77 (d, J = 8,3 Hz r 1H) , 4, 95 - 4, 86 (m, 1H) , 4,33 - 4, 25 (m, 2H ) , 3, 72 - 2, 94 (m, 1 6H) , 2, 14 - 1 ,98 (m , 2H) , 1, 77 - 1,53 (m, 2H) + 5 permutáve is não observados. 724
Exemplo 267
Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-propiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-propiltiofen-3-il)metanona
0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (b) utilizando ácido 5-propiltiofeno-3-carboxílico (0,1 g)· Rendimento 0,15 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, DMSO, 90 °C) 8 7,44 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,18 (t, J= 7,4 Hz, 1H), 7,11 - 7,04 (m, 3H) , 6,87 (d, J= 1,3 Hz, 1H), 4,24 (t, J= 5,1 Hz, 1H) , 3,67 - 3,59 (m, 4H) , 3,51 - 3,47 (m, 2H) , 3,40 (s, 4H) , 2,77 (dd, J= 14,7,0,9 Hz, 725 2Η) , 2,71 (t, J= 7,0 Hz, 2H) , 2, 40 - 2,25 (m, 4H) , 1,74 - 1,59 (m, 4H) , 1,55 - 1, 45 (m, 2H) , 0,94 (t, J= 7,3 Hz, 3H) . b) Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(3— ((4-(5-propiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (c) utilizando (9-(3-(2-hidroxietil)benzi1)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il) (5-propiltiofen-3-il)metanona (0,15 g) (Exemplo 267, passo a) . 0 aldeído em bruto foi dissolvido em DCM em vez de metanol. Rendimento 0,9 g. m/z 651 (M+H)+(Multimodo+) RMN de ΤΗ (300 MHz, DMSO, 90 °C) δ 11,38 (s, 1H), 7, 51 7, 32 (m, 5H] 6,96 - 6, ( 37 (m, 2H) , 6,77 (d, J = 8,3 Hz , 1H) 4, 94 - 4, 87 (m, 1H) , 4, 35 - 4,25 (m, 2H), 3,63 - 2,93 (m, 16H) 2, 76 (t, J = : 7, 3 Hz, 2H) , 2, 14 - 1,98 (m, 2H) , 1,72 - 1, 56 (m 4H :), 0,93 (t, r J = 7,3 Hz, 3H) + 5 permutáveis nao observados. 726
Exemplo 268
Ditrifluoroacetato de (.R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
HC
OH a) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-2-il)metanona
0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (b) utilizando ácido 5-isopropiltiofeno-2-carboxílico (0,1 g) . Rendimento 0,18 g. RMN de XH (400 MHz, DMSO, 90 °C) 8 7,23 - 7,15 (m, 2H), 7,13 - 7,04 (m, 3H), 6,84 (d, J= 3,6 Hz, 1H) , 4,24 (t, J= 4,7 Hz, 1H), 3,69 - 3,58 (m, 6H) , 3,50 (s, 2H) , 3,41 (s, 2H) , 3,17 (septeto, J = 6,8 Hz, 1H), 2,71 (t, J = 6,9 Hz, 2H) , 2,39 - 2,30 727 (m, 4H) , 1, 75 - 1,67 (m, 2H) , 1,56 - 1, 47 (m, 2H) , 1,29 (d, J = 6,7 Hz, 6H). b) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-2-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (c) utilizando (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-2-il)metanona (0,18 g) (Exemplo 268, passo a) . O aldeído em bruto foi dissolvido em DCM em vez de metanol. Rendimento 0,09 g m/z 651 (M+H)+ (Multimodo+) RMN de ΧΗ (300 MHz, DMSO, , 90 ' 3C) δ 11,37 (s, \—1 7, 45 7, 33 (m, 4H) , 7, 24 (d, , J = 3 ,1 Hz, 1H) , 6,93 (d, J = 8, 1 Hz 1H :), 6, 85 (d, J = 3, 7 Hz, 1H) , 6, 77 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 4, , 96 4, 86 (m, 1H) , 4,36 - - 4,26 (m, 2H) , 3, 75 - 3,63 (m, 4H) , 3, . 56 3, 48 (m, 2H) , 3,36 - 2,94 (m, 11H) , 2,13 - 1,96 (m, 2H) , 1- , 81 728 1,62 (m, 2H) observados. 1,28 (d, J = 6,9 Hz, 6H) + 5 permutáveis não
Exemplo 269
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2,3-difluoro-4-(2-(4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)etoxi)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 82 passo (c) utilizando (9-(2-(2,3-difluoro-4-(2-hidroxietil)fenoxi)etil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (0,22 g)(Exemplo 77, passo e). 0 aldeído em bruto foi dissolvido em DCM em vez de metanol. Rendimento 0,13 g. m/z 718 (M+H)+(Multimodo+) RMN de ΧΗ (300 MHz, DMSO, 90 °C) δ 11,36 (s, 1H) , J= 0,8 Hz, 1H), 7,15 - 7,00 (m, 2H), 6,93 (d, J = 8,3 - 4,86 (m, 1H), 4,46 - 7,98 (d, 6,77 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4, 93
Hz, 1H), 4,38 (m, 729 2Η) , 3, 74 - 2, 94 (m, 19H), 2,15 - 1,97 (m, 2H) , 1, 87 - 1,69 (m, 2H), 1,35 (d, J = 6,7 Hz, 6H) + 5 permutáveis não observados.
Exemplo 270
Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(5—((4— (2—isopropiltiazole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)-2-(trifluorometil)fenetilamino)etil)benzo[d]ti-azol-2(3H)-ona
a) 2-(5-(Bromometil)-2-(trifluorometil)fenil)etanol
Foi adicionado peróxido de benzoilo (0,085 g) a uma suspensão de ácido 2-(5-metil-2-(trifluorometil)fenil)acético (1,12 g) e N-bromossuccinimida (1,101 g) em clorobenzeno (18 mL) , a mistura resultante foi aguecida a 100 °C sob azoto durante 80 minutos e, em seguida deixada arrefecer. A mistura resultante foi diluída com acetato de etilo, lavada três vezes 730 com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca (MgS04) , filtrada e concentrada in vacuo para dar um óleo amarelo. 0 óleo foi dissolvido em tetra-hidrofurano (11 mL) e tratado com uma solução 2 molar de complexo de borano-sulfureto de metilo em THF (5,1 mL) , em porções ao longo de 2 minutos. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, em seguida arrefecida em gelo-água e desactivada pela adição de metanol. A mistura efervescente foi retirada do banho de arrefecimento, agitada à temperatura ambiente durante 70 minutos, em seguida concentrada in vacuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluída com 15% de acetato de etilo em iso-hexano para proporcionar o produto em bruto como um óleo amarelo. Rendimento 0,919 g. b) (9-(3-(2-Hidroxietil)-4-(trifluorometil)benzil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
HO O composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 6 passo (b) utilizando uma solução de 2-(5-(bromometil)-2-(trifluorometil)fenil)etanol (0,38 g) (Exemplo 270 passo a) em acetonitrilo, a qual foi adicionada gota a gota ao longo de 30 minutos a trifluoroacetato de (2-isopropiltiazol-4-il) (l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (Exemplo 22 passo b) . A purificação foi por 731 cromatografia sobre sílica gel eluindo com 5% de trietilamina em acetato de etilo. Rendimento 0,32 g. RMN de 2h (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 7, 90 (s, 1H) , 7, . 56 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7,39 (s r 1H) , 7 ,29 (d, J = 7,9 Hz, 1H) f 4 ,44 (t, J = 5,3 Hz, 1H) , 3, 7 1 - 3, 56 (m, 6H) , 3 , 50 (s, 2H) r 3 ,31 (septeto , J = 6, r 9 Hz, 1H) r 2, 90 (t , J - = 6,9 Hz , 2H ), 2, 57 - 2 , 25 (m, 4H) , 1, 81- 1,66 (m, 4H) , 1, 62 - 1,49 (m, 2H) , 1, 36 (d, J = 6,9 Hz, 6H) . c) 2-(5-((4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-(trifluorometil)fe-nil)acetaldeído
O composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 16 passo c) utilizando (9-(3-(2-hidroxietil)-4-(trifluorometil)benzil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (0,32 g) (Exemplo 270, passo b) . A mistura foi agitada durante 90 min após a adição do periodinano de Dess-Martin. Rendimento 0,38 g. 732 d) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-loxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2- (trifluorometil)fenetilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
HC
OH 0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 18 passo g) , utilizando uma solução de 2-(5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-(trifluorometil)fenil)-acetaldeído (0,3 g) (Exemplo 270, passo c) em metanol (3 mL) . Após a adição de cianoboro-hidreto de sódio a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3,75 horas. A solução foi concentrada até um volume de ~3 mL, diluída com THF e lavada com uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio e bicarbonato de sódio aquoso saturado. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi co-evaporado duas vezes de acetonitrilo, em seguida dissolvido em acetonitrilo:água (1:1), filtrado e purificado por HPLC preparativa (Sunfire, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram 733 combinadas e concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. 0 resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o qual foi removido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o produto como um sólido branco. Rendimento 0,115 g. m/z 720 (M+H)+(APCI+) RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO, 90 °C) β 7,93 (s, 1H) , 7,77 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 7,61 - 7,53 (m, 2H) , 6,94 (d, J= 8,2 Hz, 1H) , 6,77 (d, J= 8,5 Hz, 1H), 4,91 (dd, J= 8,6, 4,7 Hz, 1H), 4,27 -4,08 (m, 2H), 3, 76 - 3,59 (m, 6H), 3,48 - 2,85 (m, 11H) , 2,03 -1,88 (m, 2H), 1, 78 - 1,63 (m, 2H) , 1,35 (d, J= 6,9 Hz, 6H) . Seis protões permutáveis não observados.
Exemplo 271
Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((2,2-dimetil-4-(2- metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona
HC
OH 734 735 a) l-Benzil-4-((2-metilalilamino)metil)piperidin-4-ol
Uma mistura de 6-benzil-l-oxa-6-azaespiro[2.5]octano (2 g) e 2-metilprop-2-en-l-amina HC1 (2 g) e Base de Hunig (3,44 mL) em etanol (30 mL) foi aquecida a 70 °C durante 18 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi partilhado entre DCM e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada aquosa foi reextraída com DCM fresco e os orgânicos combinados secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporados sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 2,70 g. m/z 275 (M+H)+ (APCI+) b) 9-Benzil—2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado ácido sulfúrico concentrado (12 mL) a 1-benzi1-4-((2-metilalilamino)metil)piperidin-4-ol (Exemplo 271, 736 passo a) (2,2 g) e a mistura foi deixada em repouso durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi tratada com gelo/água (100 mL) seguida de bicarbonato de sódio sólido, em porções, até a mistura ser básica. Foi adicionado acetonitrilo (50 mL) seguido de anidrido de BOC (1, 925 g) e a mistura reaccional agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura reaccional foi extraída com acetato de etilo (x 2) e os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, eluindo com 1% de metanol em diclorometano trocando para 1% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,8 g. m/z 375 (M+H)+ (APCI+) c) 2,2-Dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carboxilato de terc-butilo
Uma mistura de 9-benzil-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaspieo [ 5.5 ] undecano-4-carboxilato de te_rc-butilo (Exemplo 271, passo b) (0,8 g) dissolvido em etanol (50 mL) e paládio a 10% sobre carvão (0,5 g) foi tratada com formato de amónio (0,8 g) e a mistura reaccional aquecida a refluxo durante 737 30 minutos. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e filtrada através de terra de diatomáceas. O solvente foi evaporado e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo (x 2) para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,55 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 3,25 (s, 2H) , 3,19 (s, 2H), 2, 84 - 2, 76 (m, 2H) , 2,59 - 2,50 (m, 2H) , 1,51 - 1,42 (m, 4H) , 1,41 (s, 9H) , 1,13 (s, 6H) . 1 permutável não observado. d) 9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carboxilato de terc-butilo
Foi adicionado 2-(3-(bromometil)fenil)etanol (0,416 g) em porções ao longo de 1 hora a uma solução de 2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecano-4-carboxilato de terc-butilo (Exemplo 271, passo c) (0,55 g) e trietilamina (0, 809 mL) em acetonitrilo (20 mL) . A mistura foi agitada durante 2 horas a 20 °C. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio e DCM, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, eluindo com 2% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,78 g. 738 RMN de XH (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 7,21 - 7,04 (m, 4H), 4,24 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 3,66 - 3,59 (m, 2H), 3,43 (s, 2H), 3,25 (s, 2H), 3,19 (s, 2H), 3,00 (s, 2H), 2,71 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 2,32 - 2,24 (m, 2H), 1, 64 - 1,50 (m, 4H), 1,40 (s, 9H) , 1,13 (s, 6H) . e) 2-(3-((2,2-Dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)etanol
Foi adicionado ácido trifluoroacético (5 mL) a uma solução de 9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecano-4-carboxilato de terc-butilo (Exemplo 271, passo d) (0,78 g) em DCM (20 mL) e a mistura reaccional deixada em repouso durante 30 minutos a 20 °C. Foi adicionado tolueno (40 mL) e os solventes evaporados sob pressão reduzida, o resíduo foi submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo (x 2). O resíduo foi dissolvido em água (30 mL) e lavado com acetato de etilo, a camada aquosa foi basificada por adição de carbonato de sódio sólido e agitada durante 30 minutos a 20 °C. A mistura aquosa foi então extraída com DCM (x 6), as camadas de DCM combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,4 g. m/z 319 (M+H)+ (APCI+) 739 f) (9-(3-(2-Hidroxietil)benzil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona
0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 22 passo (a) utilizando 2-(3-((2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)etanol (0,2 g) (Exemplo 271, passo e) e ácido 2-metiltiazole-4-carboxílico (0,09 g) . A mistura reaccional foi agitada durante 18 h e o solvente de eluição para a cromatograf ia foi 2% de metanol em diclorometano com 1% de trietilamina. Rendimento 0,16 g m/z 444,1 (M+H)+ (APCI+) g) Ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(3-((2,2-dimetil-4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona H<
OH 740 0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 22 passo (d) utilizando (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (0,15 g) (Exemplo 271, passo f) . A mistura foi agitada durante 3 h após a adição do cianoboro-hidreto de sódio e foi adicionado 2-metiltetra-hidrofurano em vez de THF. Rendimento 0,12 g. m/z 652 (M+H)+ (Multimodo+) RMN de (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 11,27 (s, 1H) , 7, 93 (s 1H) , 7,43 - 7, 32 (m, 4H) , 6,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6, 77 (d J = 8,2 Hz, 1H) , 4, 94 - 4, 89 (m, 1H) , 4,29 (s, 2H) , 3,68 (s 2H) , 3,62 (s, 2H), 3,28 - 3,10 (m, 8H), 3,06 - 2,97 (m, 2H) 2,67 (s, 3H) , 1,95 - 1, 73 (m, 4H) , 1,19 (s, 6H) . 5 permutáveis não observados.
Exemplo 272
Ditrifluoroacetato de (R) —5—(2—(3—((4—(5—etiltiofeno—3— carbonil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
741 a) (5-Etiltiofen-3-il)(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona
0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 271 passo (f) utilizando 2-(3-(2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)etanol (0,2 g) (Exemplo 271, passo e) e ácido 5-etiltiofeno-3-carboxílico. Rendimento 0,22 g. m/z 457,1 (M+H)+ (APCI+) b) Ditrifluoroacetato de (R)-5-(2-(3-((4-(5-etiltiofeno-3-carbonil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona H(
OH O composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 23 utilizando (5-etiltiofen-3- 742 il)(9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-2,2-dimetil-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (0,22 g) (Exemplo 272, passo a) . A mistura foi agitada durante 3 h após a adição de triacetoxiboro-hidreto de sódio no passo a). Rendimento 0,085 g. m/z 65 9 (M+H)+ (Multimodo+) RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO, 90 °C) β 8,16 (d, J = = 1 0, 0 Hz, 1H) , . 7, 48 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 7, 44 - 7 ,29 ( m, 4H) , 7, . 13 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H) , 6,9 1 (d, J = 1,0 Hz, 1H) , . 6,55 (d, J = 10,0 Hz , D , 5, 37 - 5 ,32 ( m, 1H), 4, . 24 (s, 2H) , . 3,52 - - 3,40 (m, 4H), 3,28 (t, J = 8, 3 Hz, 2H), 3, 20 - 2, 99 (m, 8H), 2, 81 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 1,93 - 1,65 (m, 4H), 1 , 25 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,18 (s, 6H) . 6 permutáveis não observados.
Exemplo 273
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-9-il)metil)-2— (trifluorometil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R)-5-(2-amino-l-(terc- butildimetilsililoxi)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (0,15 g) 743 (documento WO2004106333) em metanol (2 mL) foi tratada com ácido acético (0,021 mL) e agitada durante 10 minutos. Foi então adicionada uma solução de 2-(5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-2-(trifluorometil)fenil)acetaldeído (Exemplo 270, passo c) (0,190 g) em metanol (3 mL), e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos, antes de ser arrefecida em gelo-água e tratada com cianoboro-hidreto de sódio (0,038 g). O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2,75 horas. A solução foi concentrada até um volume de ~3 mL, diluída com THF (20 mL) e lavada com uma mistura de solução aguosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e bicarbonato de sódio aguoso saturado (1 mL) . A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi co-evaporado duas vezes de acetonitrilo, parcialmente dissolvido em THF (10 mL), tratado com trifluoridrato de trietilamina (0,12 mL) e agitado à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi concentrada in vacuo e o resíduo dissolvido em acetonitrilo:água (3:2, 10 mL), filtrado e purificado por HPLC preparativa (Sunfire, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aguoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. O resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o gual foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,133 g. 744 m/z 714 (M+H)+(APCI+) RMN de (400 MHz, DMSO, 90 °C ) δ 8,17 d. Ch II = io, 0 Hz, 1H) , 7,93 (s , 1H) , 7, 77 (d, J = 8, , 2 Hz, 1H) , 7,62 - 7, 53 (m, 2H) , 7,14 (d , J = 8 ,2 Hz , 1H) , 7,0 0 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H) f 6,55 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 5, 34 (dd, J = 9,1, 4,0 Hz, 1H) r 4, .29 - 4,10 (m, 2H) , 3, 76 - 3 ,59 1 (m, 6H ) , 3, 49 - 2,87 (m, 11H ), 2 , 05 - 1,87 (m, 2H) , 1,80 - 1, 62 (m, 2H) f 1,34 (d, J = 6,9 Hz f 6H) .
Seis protões permutáveis nao observados.
Exemplo 274
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-(pentan-3-il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
745 a) 2-(3-((4-(2-(Pentan-3-il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeido
0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 16 passo c) utilizando (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-(pentan-3-il)tiazol-4-il)metanona (0,16 g) (Exemplo 265, passo a). Rendimento 0,24 g. m/z 470 (M+H)+ (APCI+) b) Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(3-((4-(2-(pentan-3-il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
0 composto em epigrafe semelhante ao descrito foi preparado utilizando um método no Exemplo 273 utilizando 746 2-(3-((4-(2-(pentan-3-il)tiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)acetaldeído (Exemplo 274, passo a). Rendimento 0,097 g. m/z 674 (M+H)+ (APCI+) RMN de 1ti (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 8, 15 (d, J = 10,0 Hz, 1H) . 7, 95 (s, 1H) , 7, 47 - 7,28 (m , 4H), 7 ,13 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6, 99 (d, J = 7, 9 Hz, 1H) , 6 , 55 (d, J = 9, 7 Hz, 1H), 5,39 - 5, 28 (m, 1H) , 4,33 - - 4, i: L (m, 2H), 3,79 - 3 , 56 (m, 6H), 3,50 - 2,84 (m, 11H) , 2,11 - 1, 90 (m, 2H) , 1,83 - 1,58 (m, 6H) . 0,84 (t, J = 7, r 3 Hz, 6H) . Seis protões permutáveis nao ' observados.
Exemplo 275
Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(1-hidroxi—2-(1-(3- ((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
747 a)
Acido 3-(2-(terc-butoxicarbonilamino)-2- metilpropil)benzóico
OH O 0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 53, passo b) utilizando de 3-(2-(terc-butoxicarbonilamino)-2-metilpropil)benzoato metilo. A mistura reaccional foi agitada a 20 °C durante 18 horas, em seguida a 40 °C durante 10 horas. A mistura foi partilhada entre água e éter dietilico e a não foi necessária trituração final. m/z 292 (M-H)+ (APCI+) b) 1-(3-(Hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilcarbamato de terc-butilo
O composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 16, passo a) utilizando ácido 3-(2-(terc-butoxicarbonilamino)-2-metilpropil)benzóico (2,68 g) . A mistura reaccional foi arrefecida num banho de gelo durante a adição, em seguida agitada a 20 °C durante 2 horas. Rendimento 2,5 g. 748 RMN de ΧΗ (4 00 MHz, DMSO) 8 7 , 23 - 7, 13 (m, 2H) , 7,06 (s, 1H) , 6,98 (d, J = 7,4 Hz, 1H) , 6, . 23 (s, 1H ) , 5,09 (t, J = 5,6 Hz, 1H) , 4,45 (d, J = 5,6 Hz, 2H) , 2, 89 (s, 2H) , 1, 42 (s, 9H), 1, 14 (s, 6H) . c) (3-(2-Amino-2-metilpropil)fenil)metanol
Foi adicionado ácido trifluoroacético (5 mL) a uma solução de 1-(3-(hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilcarbamato de terc-butilo (Exemplo 275, passo b) (0,7 g) em DCM (20 mL) e a solução resultante deixada em repouso a 20 °C durante 30 minutos. Foi adicionado tolueno (40 mL) e os solventes evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi partilhado entre DCM e hidróxido de sódio aquoso 1 M e a camada aquosa foi extraída com DCM (x 2). Os orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,440 g. m/z 180 (M+H)+ (APCI+) RMN de (400 MHz, DMSO) δ 7,23 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 7,19 - 7,12 (m, 2H), 7,04 (d, J= 8,6 Hz, 1H) , 4,47 (s, 2H) , 2,58 (s, 2H) , 0,99 (s, 6H) . 3 permutáveis não observados. 749 d) (R)-8-(Benziloxi)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-(hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Uma mistura de (R)-8-(benziloxi)-5-(2-bromo-l-(terc-butildimetilsililoxi )etil)quinolin-2(1H)-ona (0,518 g) e (3-(2-amino-2-metilpropil)fenil)metanol (0,19 g) (exemplo 275, passo c) e iodeto de sódio (0,159 g) e Base de Hunig (0,555 mL) em acetonitrilo (3 mL) foi aquecida a refluxo sob azoto durante 2 dias. Foram adicionados mais (3-(2-amino-2- metilpropil)fenil)metanol (0,19 g, ) e Base de Hunig (0,185 mL) e o aquecimento a refluxo continuou durante 1 dia. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e partilhada entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 3% de metanol e 1% de trietilamina em diclorometano. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,44 g. m/z 587 (M+H)+ (APCI+) 750 e) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-(hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma mistura de (R)-8-(benziloxi)-5-(1-(terc- butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-(hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona (Exemplo 275, passo d) (0,44 g) e paládio sobre carvão (10%) (80 mg) em etanol (30 mL) foi vigorosamente agitada sob 5 bar de pressão de hidrogénio durante 3 horas. O catalisador foi filtrado e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,37 g. m/z 497 (M+H)+ (APCI+) 751 f) (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(1-(3- (hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-8-il-carbonato de terc-butilo
Uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-(hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (Exemplo 275, passo e) (0,37 g) e anidrido de BOC (0,163 g) e trietilamina (0,208 mL) em etanol (20 mL) foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 18 horas. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,44 g. m/z 597 (M+H)+ (APCI+) 752 g) (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-formilfenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-8-il-carbonato de terc-butilo
Foi adicionado dióxido de manganês (0,6 g) a uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(1-(3- (hidroximetil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-8-il-carbonato de terc-butilo (Exemplo 275, passo f) (0,44 g) em diclorometano (30 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada a 20 °C durante 3 horas. A mistura reaccional foi filtrada através de terra de diatomáceas e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,42 g. m/z 595 (M+H)+ (APCI+) 753 h) (R)-3-(2-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(8-hidroxi-2-oxo-1,2-di-hidroquinolin-5-il)etilamino)—2— metilpropil)benzaldeido
Uma solução de (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-formilfenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-8-il-carbonato de te-rc-butilo (Exemplo 275, passo g) (0,42 g) em metanol (15 mL) foi tratada com amónia (35% aquosa) (2 mL) . A mistura reaccional foi deixada em repouso durante 3 horas a 20 °C. 0 solvente foi removido sob uma corrente de azoto e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo e os orgânicos combinados secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente evaporado sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,34 g. m/z 495 (M+H)+ (APCI+) 754 i) (5-Isopropiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]unde-can-4-il)metanona
Hl
O 0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 22, passos a) e b) utilizando ácido 5-isopropiltiofeno-3-carboxílico. No passo b) o resíduo não foi purificado por cromatografia. 0 produto em bruto foi submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo (x 2). 0 resíduo foi partilhado entre DCM e hidróxido de sódio aquoso 1 M, a camada aquosa foi extraída com DCM (x 3) e os orgânicos combinados secos sobre sulfato de sódio, filtrados e o solvente removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,4 g. m/z 309 (M+H)+ (APCI+) 755 j) (R)-5-(1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-((4- (5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro(5,5)undecan-9-il)metilfenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
OH 0 composto em subepígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 14, passo b) utilizando (R)—3—(2—(2—(terc-butildimetilsililoxi)-2-(8-hidroxi-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)etilamino)-2-metilpropil)benzaldeído (0,32 g)(Exemplo 275, passo h) e (5-isopropiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (0,21 g) (Exemplo 275, passo i) ) . O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica, 8% de metanol em diclorometano com 1% de amónia aquosa 880. As fracções puras foram evaporadas até à secura para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,3 g. m/z 787 (M+H)+ (APCI+) 756 k) Ditrifluoroacetato de (R)-8-hidroxi-5-(l-hidroxi-2-(1-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-metilpropan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
0 composto em epígrafe foi preparado utilizando um método semelhante ao descrito no Exemplo 23, passo b) utilizando (R)-5-(1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(1-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)-2-metilpropan-2-ilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona (0,31 g)(Exemplo 275, passo j).
Rendimento 0,18 g. m/z 673 (M+H)+ (Multimodo+) RMN de ΤΗ (400 MHz , DMSO, O o O i δ 9 00 cr> s, 1H), 8, 14 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 7, 47 (S, 1H) , 7, 44 - 7,4 0 (m, 2H), 7,36 - 7,30 (m , 2H) , 7, 20 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 7, 01 (d, J = 8,2 Hz, 1H) , 6, 89 (s, 1H ), 6,58 (d, J - 9, 7 Hz, 1H) , 5,37 - 5,31 (m, 1H) , 4, 26 (s, 2H) , 3,68 - 3, 63 (m, 2H) , 3 ,55 - 3,51 (m, 2H) , 3, 21 - 2, 98 (m, 11H ), 2,01 (s, 2 H) i ,69 (s, 2H) , . 1,31 - 1,24 (m, 12H) mais 5 permutáveis nao observados. 757
Exemplo 276
Ditrifluoroacetato de 8-hidroxi-5-((R)-l-hidroxi-2-((R)-1-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)propan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
a) 1-(3-((terc-Butildimetilsililoxi)metil)fenil)propan-1- ona
Uma mistura de (3-bromobenziloxi)(terc-butil)dimetilsilano (16,72 g) , acetato de isopropenilo (9,2 mL) , metóxido tri-n-butilestanho (24 mL) , acetato de paládio(II) (0,625 g) e tri(o-tolil)fosfina (1,70 g) em tolueno anidro (65 mL) foi aquecida a refluxo a 100 °C durante 5 horas e em seguida deixada arrefecer de um dia para o outro. A mistura foi diluída com acetato de etilo (130 mL) e fluoreto de potássio aquoso 4 molar (80 mL) e vigorosamente agitada durante 20 minutos. Foi adicionado terra de diatomáceas e a suspensão foi então filtrada 758 através de terra de diatomáceas, lavando bem o resíduo com acetato de etilo. 0 filtrado e lavagens combinados foram secos sobre sulfato de magnésio anidro e concentrados in vacuo e purificados por cromatografia flash sobre sílica eluindo com iso-hexano, 10% de diclorometano em iso-hexano e 20% de éter dietílico em iso-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 13,71 g. RMN de (400 MHz, CDC13) δ 7,30 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 7,23 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H) , 7,09 (d, J = 7,4 Hz, 1H) , 4,73 (s, 2H), 3,68 (s, 2H), 2,14 (s, 3H) , 0,94 (s, 9H) , 0,10 (s, 6H) . b) Cloridrato de (3-((R)-2-((R)-1-feniletilamino)pro-pil)fenil)metanol
OH
Uma solução de 1-(3-((terc-butildimetilsililoxi)metil)-fenil)propan-2-ona (Exemplo 276, passo a) (6,85 g) em diclorometano (240 mL) foi tratada com ácido acético (1,27 mL) , (R) -(+)-1-feniletilamina (2,83 mL) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (7,09 g) , e a suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi desactivada pela adição em porções de bicarbonato de sódio aquoso saturado (120 mL) ao longo de 5 minutos. A mistura bifásica foi vigorosamente agitada durante 1,75 horas, em seguida separada. A fase aquosa foi extraída com mais diclorometano, e as fases orgânicas combinadas foram secas 759 (MgS04) , filtradas e concentradas para proporcionar um óleo. 0 óleo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 10% de etanol em iso-hexano para dar o álcool sililado como um óleo amarelo (7,21 g) . O óleo foi dissolvido em solução de HCl/metanol (1 M, 20 mL), mantido à temperatura ambiente durante 25 minutos, em seguida concentrado in vacuo. A goma resultante foi triturada com metanol/éter dietílico para dar uma suspensão espessa cristalina que foi agitada durante 30 minutos. 0 sólido foi removido por filtração, lavado bem com éter dietílico e recristalizado três vezes de metanol/éter dietílico para proporcionar o composto em subepígrafe como cristais brancos. Rendimento 1,9 g. m/z 270 (M+H)+ (APCI+) RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO) δ 9, 84 (s 1, 1H) , 9,21 (s 1, K i—1 7,69 (d, J = 6,9 Hz, 2H) , 7, 53 - 7, 40 (m, 3H) , 7, 23 (t, J = 7, 6 Hz, 1H), 7, 16 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 6, 98 (s, 1H) , 6, 88 (d, J = 7,4 Hz, 1H) , 5, 16 (t, J = 5, 6 Hz, 1H) , 4, 69 - - 4, 55 (m, 1H) , 4, 43 (d, J = 5, 4 H z, 2H) , 3,42 - 3,30 (m, 1H), 3 ,04 - 2, 91 (m, 1H), 2,61 - 2,47 (m , 1H), 1,63 (d, J = 6, 7 Hz, 3H) , 1,10 (d, J = 6,7 Hz, 3H) . c) (R)-(3-(2-Aminopropil)fenil)metanol
,OH
H2N (3-((R)-2-((R)-1-276, passo b)
Uma mistura de cloridrato de feniletilamino)propil)fenil)metanol (Exemplo 760 (1,92 g) , hidróxido de paládio a 20% sobre carvão (0, 757 g) e formato de amónio (2,28 g) em etanol (30 mL) foi agitada a 75 °C durante 1,5 horas, em seguida deixada arrefecer. A suspensão foi filtrada através de terra de diatomáceas, lavando bem o resíduo com etanol. O filtrado e lavagens combinados foram concentrados in vacuo para proporcionar uma goma amarela pálida como uma mistura do produto desejado e do análogo desidroxilo. Rendimento 1,54 g. Utilizado directamente d) (R)-1-(3-(Hidroximetil)fenil)propan-2-ilcarbamato de terc-butilo
Uma solução de dicarbonato de di-terc-butilo (2,034 g) em THF (5 mL) foi adicionada, gota a gota ao longo de 20 minutos, a uma solução do (R)-(3-(2-aminopropil)fenil)metanol impuro (Exemplo 276, passo c) (1,54 g) em THF (10 mL) e água (10 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente ao longo de um fim-de-semana, em seguida foi adicionada trietilamina (3,90 mL) . Foi adicionado, gota a gota ao longo de 30 minutos, mais dicarbonato de di-terc-butilo (2,013 g) em THF (5 mL) . A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, em seguida concentrada in vacuo para remover o THF. A fase aquosa oleosa resultante foi extraída duas vezes com acetato de etilo e os extractos combinados secos (MgS04) , filtrados e concentrados sobre sílica flash in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 761 35% de acetato de etilo em iso-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,9 g. RMN de 2Η (40 0 MHz, CDC13) δ 7, 29 (t, J = 7, 6 Hz, 1H) , 7, 25 - 7,17 (m, 2H), 7,11 (d, J = 7, 4 Hz, 1H) , 4, 68 (s, 2H) , 4,37 (s 1, 1H), 3,91 (s 1, 1H), 2,85 (dd, J = 12,7, 5,0 Hz, 1H) , 2,66 (dd, J= 13,3, 7,4 Hz, 1H) , 1,42 (s, 9H) , 1,09 (d, J= 6,7 Hz, 3H). Um protão permutável não observado. e) 8-(Benziloxi)-5-((R)-1-(terc-butildimetilsililoxi)-2-((R)-1-(3-(hidroximetil)fenil)propan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R)-1-(3-(hidroximetil)fenil)propan-2-ilcarbamato de terc-butilo (Exemplo 276, passo d) (0,78 g) em diclorometano (20 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (5 mL) e agitada à temperatura ambiente durante 40 minutos. Foi adicionado tolueno e a solução foi concentrada in vacuo. O residuo foi partilhado entre NaOH aquoso 1 M e DCM e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída mais duas vezes com DCM, em seguida os extractos orgânicos combinados foram secos (MgSCq) e concentrados in vacuo para proporcionar 762 (R)-(3-(2-aminopropil)fenil)metanol como um óleo incolor que cristalizou lentamente em repouso até um sólido branco (0,442 g). Uma mistura de (R)-(3-(2-aminopropil)fenil)metanol (0,223 g) , (R)-8-(benziloxi)-5-(2-bromo-l-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-quinolin-2(1H)-ona (0,72 g), iodeto de sódio (0,219 g) e base de Hunig (0,77 mL) em acetonitrilo (3 mL) foi aquecida a refluxo sob azoto de um dia para o outro. Foram adicionados mais (R)-(3-(2-aminopropil)fenil)metanol (0,219 g) , base de Hunig (0,51 mL) e acetonitrilo (2 mL) e a mistura foi aquecida a refluxo uma segunda vez de um dia para o outro. A mistura reaccional arrefecida foi diluída com acetato de etilo, lavada duas vezes com água, uma vez com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca (MgSCh) e concentrada sobre sílica flash in vacuo. O pó resultante foi purificado por cromatografia flash sobre sílica eluindo com 5% de trietilamina em acetato de etilo para proporcionar o composto em subepígrafe como um espuma amarela pálida. Rendimento 0,525 g. RMN de XH ( 400 MHz, CDC13) δ 9,37 (s 1, 1H), 8,46 (d, J = 9,7 Hz, 1H) , 7,69 - 7,56 (m, 5H ) , 7,39 - 7,22 (m, 4H) , 7,17 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 10,0 Hz, 1H) , 5,37 (d, <J = 2, 1 Hz, 2H) , 5,26 (dd , J = 7,4, 5,6 Hz, 1H), 4,82 (s, 2H), 3,24 (dd, J = 11,4, 7,6 Hz, 1H) , 3,05 (q, J = 6,5 Hz, 1H) , 2, 93 (dd, J = 11, 4, 5,5 Hz, 1H), 2,84 (dd, j = 13,6, 7, 0 Hz , 1H) , 2, 74 (dd, J = = 13,2, 6,8 Hz, 1H) , 1,25 (d, j = 6,2 Hz, 3H) , CM O E Oh to 0 1 1 (s, 3H) , 0,00 (s, 3H) . Dois protões permutáveis não observados. 763 f) 5-((R)-1-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-((R)-1-(3-(hidroximetil)fenil)propan-2-ilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(1H)-ona
Uma
mistura de 8-(benziloxi)-5-((R)-1-(terc- butildimetilsililoxi)—2—((R)—1—(3—(hidroximetil)fenil)propan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona (Exemplo 276, passo e) (0,52 g) e catalisador de paládio a 10% sobre carvão (0,102 g) em etanol (36 mL) foi hidrogenada à temperatura ambiente e a 5 bar de pressão de hidrogénio durante 1,5 horas, em seguida hidrogenada à temperatura ambiente e a 1 bar de pressão de hidrogénio de um dia para o outro. A mistura foi filtrada através de terra de diatomáceas, lavando bem o catalisador com etanol, e o filtrado e lavagens combinados foram concentrados in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,42 g. Material utilizado imediatamente no passo seguinte. m/z 483 (M+H)+ (APCI+) 764 g) (R)-2-(8-(terc-Butoxicarboniloxi)-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)-2-(terc-butildimetilsililoxi)etil((R)-1-(3-(hidroximetil)fenil)propan-2-il)carbamato de terc-butilo
5- ( (R) -1- (terc-Butildimetilsililoxi )-2-( (R)-1-(3-(hidroximetil)fenil)propan-2-ilamino)etil)-8-hidroxiquinolin-2(lH)-ona (Exemplo 276, passo f) (0,42 g) foi dissolvida em etanol (25 mL), tratada com trietilamina (0,26 mL) e dicarbonato de di-terc-butilo (0,201 g) e agitada à temperatura ambiente durante 1,5 horas. Foram adicionados mais dicarbonato de di-terc-butilo (0,203 g) e trietilamina (0,13 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, antes de ter sido concentrada in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,609 g. Material utilizado imediatamente no passo seguinte. m/z 683 (M+H)+ (APCI+) 765 h) (R)-2-(8-(terc-Butoxicarboniloxi)-2-oxo-l, 2-di-hidroquinolin-5-il)-2-(terc-butildimetilsililoxi)etil((R)-1-(3-formilfenil)propan-2-il)carbamato de terc-butilo
(R) -2 - ( 8 - (terc-Butoxicarboniloxi) -2-oxo-l, 2-di-hidroquinolin-5-il)-2-(terc-butildimetilsililoxi)etil((R)-1-(3-(hidroximetil)fenil)propan-2-il)carbamato de terc-butilo (Exemplo 276, passo g) (0,609 g) foi dissolvido em diclorometano (30 mL) , tratado com óxido de manganês (IV) (0,791 g) e a suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente ao longo de um fim-de-semana. Foi adicionado mais óxido de manganês (IV) (0,801 g) e a suspensão foi agitada durante mais 4 horas. A mistura foi filtrada através de terra de diatomáceas, lavando bem o residuo com DCM, e o filtrado e lavagens combinados foram concentrados in vacuo para proporcionar o composto em subepigrafe. Rendimento 0,521 g. Material utilizado imediatamente no passo seguinte. m/z 681 (M+H)+ (APCI+) 766 i) (R)-2-(terc-Butildimetilsililoxi)-2- (δ-ΙιϊάΓοχϊ^-οχο-Ι, 2-di-hidroquinolin-5-il)etil((R)-1-(3-formilfenil)propan-2-il)carbamato de terc-butilo
(R)-2-(8-(terc-Butoxicarboniloxi)-2-oxo-l, 2-di-hidroquinolin-5-il)-2-(terc-butildimetilsililoxi)etil((R)-l-(3-formilfenil)propan-2-il)carbamato de terc-butilo (Exemplo 276, passo h) (0,521 g) foi suspenso em metanol (20 mL) e tratado com amónia aquosa "880" (2,5 mL) para dar uma suspensão que foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi concentrada borbulhando com uma corrente de azoto, e o resíduo foi partilhado entre acetato de etilo, água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo, e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas (MgSCq) e concentradas in vacuo para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,476 g. Material utilizado imediatamente no passo seguinte. m/z 581 (M+H)+ (APCI+) 767 j) (R)-2-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(8-hidroxi-2-oxo-1,2-di-hidroquinolin-5-il)etil((R)-1-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenil)propan-2-il)carbamato de terc-butilo
(R)-2-(terc-Butildimetilsililoxi)-2-(8-hidroxi-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)etil((R)-l-(3-formilfenil)propan-2-il)carbamato de terc-butilo (Exemplo 276, passo i) (0,476 g) foi tratado com (5-isopropiltiofen-3-il)(l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (Exemplo 275, passo i) (0,296 g), N-metil-2-pirrolidinona (20 mL) , ácido acético (0,052 mL) e triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,294 g) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução foi vertida para uma mistura de solução saturada de bicarbonato de sódio e água e extraída três vezes com éter dietílico. Os extractos combinados foram lavados com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos (MgS04) e concentrados in vacuo, em seguida purificados por cromatografia flash sobre sílica eluído com NEt3:MeOH:DCM 1:5:94 para proporcionar o composto em subepígrafe. Rendimento 0,471 g. m/z 874 (M+H)+ (APCI+) 768 k) Ditrifluoroacetato de 8-hidroxi-5-((R)-l-hidroxi-2-((R)-1-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazapiro[5-5]undecan-9-il)metil)fenil)propan-2-ilamino)etil)quinolin-2(1H)-ona
Uma solução de (R)-2-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(8-hidroxi-2-oxo-l,2-di-hidroquinolin-5-il)etil((R)-1-(3-((4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il) metil) fenil) propan-2-il) carbamato de terc-butilo (Exemplo 276, passo j) (0,465 g) em ácido fórmico (25, mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas, em seguida diluída com tolueno e concentrada in vacuo. O resíduo foi dissolvido numa mistura de água e acetonitrilo (11 mL) , filtrado e purificado por HPLC preparativa (Sunfire, Gradiente: 5-50% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%) . As fracções contendo o produto foram concentradas in vacuo e co-evaporadas três vezes de acetonitrilo para dar um resíduo incolor. O resíduo foi triturado com éter dietílico para dar um sólido, o qual foi recolhido por filtração, lavado com éter dietílico e seco in vacuo à temperatura ambiente para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,234 g. m/z 659 (M+H)+ (APCI+) 769 RMN de ΤΗ (400 MHz, DMSO, 90 °C) δ 8,20 - 8,13 (m, 1H), 7,48 (d, J = 1, N o , 1H) , 7, 46 - 7,31 (m, 4H) , 7,20 - 7, 13 (m, 1H) , 7, 00 (d, j = 8,2 Hz, 1H) ( . 6,90 (s, 1H) , 6,56 (d, J = 9,7 Hz, 1H) , 5,37 (t, J = 6, 4 Hz, 1H) , 4,29 (s, 2H) , 3, 70 - 3,62 (m, 2H) , 3,62 - 3, 50 (m, 3H) , 3,49 - 3,36 > (m, 2H) , 3,30 - 2,98 (m, 8H) , 2,81 - 2 ,71 (m, 1H) , 2,12 1,93 (m, 2H) , 1, 81 - 1,60 (m, 2H) , 1,28 (d, J = 6, 7 Hz, 6H), 1, 20 - 1, 13 (m, 3H). Sei s protões permutáveis nao observados.
Exemplo 277
Ditrifluoroacetato de (R)-N-ciclo-hexil-N-(2-(2-hidroxi-2-(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etilamino)etil)-3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)propanamida
770 a) 3-(3-((4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5,5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)propanoato de terc-butilo
Foi adicionado Triton-B (0,094 mL) a uma solução de (9-(3-(2-hidroxietil)benzil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-metiltiazol-4-il)metanona (Exemplo 6, passo b) (1,72 g) em tolueno (30 mL). A mistura foi concentrada in vacuo e arrefecida até 0 °C. Foi adicionado acrilato de terc-butilo (0,671 mL) ao longo de 1 minuto e a mistura foi agitada à temperatura ambiente ao longo de 20 horas. A reacção foi diluída com DCM (50 mL) e o orgânico lavado com solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL), seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado para proporcionar o composto em subepígrafe. Material utilizado directamente no passo seguinte. b) Ácido 3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)propanóico
3-(3-((4-(2-Metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)propanoato de terc-butilo (Exemplo 277, passo a) foi dissolvido em DCM (10 mL) 771 e foi adicionado TFA (2 mL). A mistura resultante foi agitada durante 2 h, em seguida evaporada. 0 residuo foi submetido a evaporação azeotrópica com tolueno e redissolvido em MeCN (10 mL) . Este foi aplicado a um cartucho de SCX (50 g, Varian) gue tinha sido pré-humedecido com MeCN. O cartucho foi lavado com MeCN (100 mL) e eluido com amónia aquosa 880 em MeCN (1:4, 100 mL). O eluente foi evaporado para proporcionar o composto em subepígrafe. Material utilizado directamente no passo seguinte. c) N-Ciclo-hexil-N-(2,2-dimetoxietil)-3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazepin[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)propanamida
Ácido 3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)propanóico (Exemplo 277, passo b) foi dissolvido em DMF (10 mL) e foram adicionados N-(2,2-dimetoxietil)ciclo-hexanamina (W02008075025) (0,93 g), trietilamina (2,88 mL) e T3P (3,95 mL). A reacção foi agitada de um dia para o outro e partilhada entre água (100 mL) e acetato de etilo (100 mL). As camadas foram separadas e a aquosa extraida com acetato de etilo (2 x 100 mL) . Os orgânicos combinados foram lavados com solução saturada de bicarbonato de sódio (100 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash sobre 772 sílica eluindo com gradiente de acetato de etilo:i-hexano:trietilamina 47,5:47,5:5 até acetato de etilo:trietilamina 95:5 para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,9 g. RMN de XH (400 MH z, DMSO, 90 °C) δ 7,85 (s, 1H), 7, , 26 - 7, 05 (m, 4H) , 4,46 - 4,37 (m, 1H) , 3 , 68 - 3,55 (m, HH) , 3, 43 (s, 2H) , 3,33 - 3 ,22 (m, 8H) , 2, 77 (t, J = 6,9 Hz , 2H), 2, 68 (s, 3H) , 2,56 (t, J = 6, 7 Hz, 2H) , 2, 38 - 2,32 (m, 4H), 1, 78 - 1,65 (m, 4H), 1,63 - 1,42 (m, 6H) , 1, 33 - - 1,19 (m, 2H), 1, 15 - 1,00 (m, 2H) . d) N-Ciclo-hexil-3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)-N-(2-ozoetil)propanamida
Foi adicionado ácido tósico (1384 mg) a uma solução de N-ciclo-hexil-N-(2,2-dimetoxietil)-3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)-fenetoxi)propanamida (Exemplo 277, passo c) (683 mg) em DCM (10 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Foi cuidadosamente adicionada solução de bicarbonato de sódio (saturado, 10 mL) e a mistura agitada até parar o borbulhamento (10 min) . A reacção foi diluída com DCM (50 mL) e a aquosa separada. 0 orgânico foi lavado com solução 773 saturada de bicarbonato de sódio (2 x 20 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (20 mL) , seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado para proporcionar o composto em subepigrafe. m/z 611 (M+H)+ (APCI+) e) Ditrifluoroacetato de (R)—N—ciclo—hexil—N—(2—(2—hidroxi— 2—(4-hidroxi-2-oxo-2,3-di-hidrobenzo[d]tiazol-7-il)etilamino)etil)-3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)propanamida
Uma solução de N-ciclo-hexil-3-(3-((4-(2-metiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazapiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetoxi)-N-(2-oxoetil)propanamida (Exemplo 277, passo d) (0,122 g) em metanol (3 mL) foi adicionada a uma mistura de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona, HC1 (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,079 g) e ácido acético (0,011 mL) . A mistura resultante foi agitada durante 5 min em seguida arrefecida até 0 °C. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,019 g) e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 2 h. O solvente foi evaporado e o resíduo purificado por cromatografia em coluna 774 flash sobre sílica eluindo com DCM:MeOH: amónia aquosa 880 95:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e purificadas por HPLC (Sunfire, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas e trituradas com éter dietílico para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,085 g. m/z 821 (M+H)+ (Multimodo+) RMN de (400 MHz, DMSO , 90 °C) δ 11, 26 (s, 1H) , 7, 90 (s 1H) , 7, 41 - 7, 2 8 (m, 4H) , 6 ,93 (d, J = 8 ,2 Hz, 1H) , 6, 77 (d J = 8,2 Hz, 1H) , 4,89 (dd, J = 8, 7, 4,1 Hz , 1H) , 4,29 (s, 2H) 3,74 - 3,43 (m, . 13H), 3,29 - 2,98 (m , 8H) , 2,83 ( t, J = 6,7 Hz 2H) , 2, 71 - 2, 56 (m, 5H) , 1, 98 - 1, 01 (m, 14H) . 5 permutávei: nao observados. 775
Exemplo 278
Ditrifluoroacetato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(2—(4— ((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaes-piro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-2-il)etilamino)etil)benzo [d]tiazol-2-(3H)-ona
a) terc-Butil(2-(5-clorotiofen-2-il)etoxl)dimetilsilano
Foi adicionada IV-clorossuccinimida (0,83 g) em porções a uma solução de terc-butildimetil(2-(tiofen-2-il)etoxi)silano (1,5 g) (exemplo 4 passo a) em clorofórmio (50 mL) e aquecida a refluxo durante 3 dias. A solução amarela foi diluída com DCM (100 mL) e lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (2x100 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (lOOmL), seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com iso-hexano. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 1 g. 776 RMN de (300 MHz, CDC13) 8 6,69 (d, J= 3,5 Hz, 1H), 6,57 - 6,54 (m, 1H), 3,75 (t, J= 6,5 Hz, 2H) , 2,89 (t, J= 6,4 Hz, 2H), 0,87 (s, 9H), 0,01 (s, 6H) b) 5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-l-clorotiofeno-3-carbaldeído
Foi adicionado, gota a gota ao longo de 5 min, terc-butil(2-(5-clorotiofen-2-il)etoxi)dimetilsilano (0,8 g) (exemplo 278, passo a) a uma solução, mantida sob agitação, de butil-litio (2,5 M em hexanos 1,7 mL) e 2,2,6,6-tetrametilpiperidina (0,73 mL) em THF (25 mL) a -78 °C. A mistura resultante foi agitada durante 2 h e foi adicionada DMF (0,67 mL) . A mistura foi agitada durante mais lhe deixada aquecer até à TA. A reacção foi cuidadosamente vertida para solução de HC1 (0,5 M, 200 mL) e extraída com acetato de etilo (3x100 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (2x100 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas in vacuo. O óleo resultante foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de iso-hexano até 5% de éter em iso-hexano. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento (0,8 g) 777 RMN de XH (400 MHz, CDC13) δ 9,98 (s, 1H) , 7, 06 - 7, 04 (m, 1H), 3,79 (t, J= 6,0 Hz, 2H) , 2, 95 - 2, 85 (m, 2H) , 0,90 (s, 9H), 0,05 (s, 6H) c) 5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofeno-3-carbaldeido
5-(2-(terc-Butildimetilsililoxi)etil)-2-clorotiofeno-3-carbaldeido (0,8 g) (exemplo 278, passo b) numa mistura de etanol (50 mL) e trietilamina (0,91 mL) com catalisador de paládio a 10% sobre carvão (0,28 g) foi vigorosamente agitado sob 4 bar de pressão de hidrogénio durante 18 horas. A mistura foi filtrada através de celite e a almofada do filtro lavada com etanol (50mL). O filtrado e lavagens combinados foram evaporados e submetidos a evaporação azeotrópica com tolueno (20 mL) para dar um óleo amarelo. 0 óleo foi dissolvido em DCM (100 mL) , foi adicionado dióxido de manganês (2,3 g) e a suspensão resultante submetida a refluxo de um dia para o outro. A mistura foi filtrada através de celite e a almofada do filtro lavada com DCM (50 mL) . O filtrado e lavagens combinados foram evaporados in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 0,6 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) δ 9,80 (s, 1H) , 7, 93 - 7, 90 (m, 1H), 3,80 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 2,99 (t, J= 5,9 Hz, 2H) , 0,88 (s, 9H), 0,01 (s, 6H) + um H obscurecido pelo pico do solvente 778 d) (9-((5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-3-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado 5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)-tiofeno-3-carbaldeido (0,6 g) (exemplo 278, passo c) a (2-isopropiltiazol4-il) (l-oxa-4,9-diazaespiro[ 5.5]undecan-4-il)metanona (0,94 g) (exemplo 22, passo b) numa mistura de N-metil-2-pirrolidinona (5 mL) e ácido acético (0,13 mL) e agitada durante 30 min. Foi então adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (0,71 g) e a mistura agitada de um dia para o outro. A reacção foi vertida para água (100 mL) , o pH foi ajustado até 8 utilizando solução saturada de bicarbonato de sódio e a solução aquosa resultante extraída com acetato de etilo (3x100 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com água (3x100 mL), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) , secas sobre sulfato de sódio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de i-hexano:acetato de etilo:trietilamina 77,5:17,5:5 até i-hexano:acetato de etilo:trietilamina 47,5:47,5:5. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como um óleo transparente. Rendimento 0,8 g. 779 564 (Μ+Η)+ (APCI) RMN de ΤΗ (400 ΜΗζ, D6-DMSO, 90 °C) δ 7,91 (s, 1Η), 6,97 (s, 1Η), 6,77 (s, 1H), 3,79 (t, J= 6,3 Hz, 2H) , 3,69 - 3,55 (m, 4H) , 3,41 - 3,27 (m, 3H), 2,92 (td, J= 6,3, 0,8 Hz, 2H) , 2,42 -2,23 (m, 6H), 1, 75 - 1,64 (m, 2H), 1,59 - 1, 47 (m, 2H) , 1,37 (d, J = 6,9 Hz, 6H), 0,89 (s, 9H), 0 (s, 6H) e) (9-((5-(2-hidroxietil)tiofen-3-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Foi adicionado fluoreto de tetrabutilamónio (1 M em tetra-hidrofurano, 2,1 mL) a uma solução de (9-((5-(2-(terc-butildimetilsililoxi)etil)tiofen-3-il)metil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 278, passo d) (0,80 g) em tetra-hidrofurano (10 mL). Após 2 h, a solução foi evaporada in vacuo e o resíduo foi partilhado entre solução saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e acetato de etilo (50 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa extraída com acetato de etilo (2x50 mL). As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secas sobre sulfato de 780 sódio, filtradas e evaporadas. 0 resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel, eluindo com acetato de etilo:trietilamina 20:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo para dar o composto em subepígrafe como uma goma. Rendimento 0,61 g. 450 (M+H)+ (APCI) RMN de ΧΗ (400 MHz, D 6-DMSO, 90 ° C) δ 7, 90 (s, 1H), 6,94 (s, 1H) , 6, 74 (s, 1H), 4,41 (t, J = 5,1 Hz, 1H) , 3,72 - 3,55 (m, 4H) , 3,41 - 3,24 (m, 3 H) , 3,00 (s, 2H) , 2,88 (t, J = 6,7 Hz, 2H) , 2,43 - 2,26 (m, 6H), 1, 75 - 1,30 (m, 10H) f) Ditrifluoroacetato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(2-(4-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespi-ro[5.5]undecan-9-il)metil)tiofen-2-il)etilamino)etil)benzo[d]ti-azol-2(3H)-ona
OH
Uma solução de (9-((5-(2-hidroxietil)tiofen-3-il)metil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (0,35 g) (exemplo 278, passo e) em diclorometano (10 mL) foi tratada com ácido trifluoroacético (0,06 mL) seguida de periodinano de Dess-Martin (0,56 g) e a mistura resultante 781 foi agitada à TA durante 1 hora. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio (10 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio (10 mL) e acetato de etilo (10 mL) e agitada vigorosamente durante 5 minutos. A mistura foi extraída com acetato de etilo (2x30 mL) . As soluções orgânicas combinadas foram lavadas com solução saturada de bicarbonato de sódio, secas sobre sulfato de sódio, filtradas, tratadas com ácido acético (0,09 mL) e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) e foi então adicionado cloridrato de (R)-7-(2-amino-l- hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,15 g) e a mistura agitada durante 5 min antes de ser arrefecida num banho de gelo. Foi então adicionado cianoboro-hidreto de sódio (0,07 g) e a mistura foi deixada aquecer até à TA e agitada de um dia para o outro. O solvente foi evaporado in vacuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com gradiente de DCM:metanol:amónia aquosa "880" 94,5:5:0,5 até 89:10:1. As fracções contendo o produto foram combinadas e evaporadas in vacuo. A purificação adicional foi por HPLC preparativa (Sunfire™, Gradiente: 10-30% de acetonitrilo em TFA aquoso a 0,2%). As fracções contendo o produto foram combinadas, evaporadas in vacuo, submetidas a evaporação azeotrópica com acetonitrilo e o resíduo triturado com éter para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,10 g. m/z 658 (M+H)+ (Multimodo) RMN de (500 MHz, d6- -DMSO) δ 11,68 (s, 1H) , 10,42 - 10,01 (m, 2H) , 9,06 (s, 1H), 8, 86 (s, 1H), 8,04 (S, 1H) 7,59 (s, 1H) , 7,03 (s, 1H) , 6, 92 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6, 79 (d, J = ‘ 8, 3 Hz, 1H) , 6,52 (s, ih; ), 4,94 - 4, 86 (m, 1H) , 4, 42 - - 4,23 (m, 2H) , 782 3.82 - 3,48 (m, 6H), 3,34 - 2,91 (m, 11H), 2,14 - 2,02 (m, 2H), 1.83 - 1,59 (m, 2H), 1,33 (d, J= 6,8 Hz, 6H)
Exemplo 279
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-3,3-dimetilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 8-(terc-Butildimetilsililoxi)-2,2-dimetiloctanoato de etilo
0'V o
Foi adicionado n-butil-lítio (32,8 mL) a uma solução de diisopropilamina (1 M em tolueno, 11,64 mL) em THF (60 mL) a 0 °C até 5 °C ao longo de 15 minutos, e esta mistura foi agitada durante 30 minutos. A mistura reaccional foi arrefecida até -78 °C, em seguida foi adicionado gota a gota éster etílico do ácido isobutírico (10 mL) ao longo de 15 minutos. A mistura foi agitada a -78 °C durante 1 hora, em seguida foi adicionado, gota a gota, (6-bromo-hexiloxi)-terc-butildimetilsilano (23 mL) e a 783 mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante mais 60 minutos. O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro antes de ter sido vertida sobre uma solução aquosa saturada de cloreto de amónio (300 mL) e extraída com acetato de etilo (2 x 300 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (250 mL) , secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas para dar o produto em bruto. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0- 40% de acetato de etilo em ciclo- hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um líquido âmbar pálido. Rendimento 20 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 4,11 (q, J = 7, 1 Hz, 2H); 3,59 (t, J = 6,6 Hz, 2H); 1,54-1,45 (m, 4H); 1,35-1,18 (m, 9H); 1,15 (s, 6H); 0,89 (s, 9H); 0,05-0,03 (m, 6H). b) 8-(fcerc-Butildimetilsililoxi)-2,2-dimetiloctan-l-ol
HO
8-(terc-Butildimetilsililoxi)-2,2-dimetiloctanoato de etilo (exemplo 279, passo a) (20 g) em éter seco sob azoto (300 mL) foi arrefecido até 0 °C num banho de gelo, em seguida foi adicionado, gota a gota, hidreto de diisobutil-alumínio (1 M em tolueno, 133 mL). A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 1 hora, em seguida desactivada com tartarato de potássio e sódio aquoso saturado (sal de Rochelle, 400 mL) e agitada de um dia para o outro. A mistura foi extraída com acetato de etilo (3 x 300 mL) , em seguida as camadas orgânicas combinadas foram 784 lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-20% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um líquido incolor. Rendimento 10,11 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) : 5 3,60 (t, J = 6,6 Hz, 2H) ; 3,31 (s, 2H) ; 1,56-1,46 (m, 2H) ; 1,38-1,18 (m, 8H); 0,89 (s, 9H) ; 0,86 (s, 6H) ; 0, 06-0, 03 (m, 6H) mais um permutável não observado. c) Mistura de (E)-terc-Butil(9-metoxi-7,7-dimetilnon-8-eniloxi)dimetilsilano e (Z)-terc-Butil(9-metoxi-7,7-dimetilnon-8-eniloxi)dimetilsilano
Foi adicionado cloreto de oxalilo (5,9 mL) a -70 °C a uma solução de dimetilsulfóxido (4,98 mL) em diclorometano seco (60 mL) e a mistura agitada durante 1 hora. Foi adicionado, gota a gota, 8-(terc-butildimetilsililoxi)-2,2-dimetiloctan-l-ol (exemplo 279, passo b) (10,11 g) , dissolvido em diclorometano (20 mL) , e a mistura deixada agitar durante 1 hora. Foi então adicionada trietilamina (19,4 mL) e a agitação continuou durante 1 hora. O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente, altura em que foi adicionado DCM (15 mL) . Foi adicionado HC1 1 N gota a gota para dissolver os sais presentes na mistura reaccional e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2 x 250 mL) , em 785 seguida as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com carbonato de sódio aquoso saturado (250 mL) , secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob vácuo para dar um liquido laranja. 0 resíduo foi filtrado através de um tampão curto de sílica utilizando éter dietílico como o eluente para proporcionar 8-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-2,2-dimetiloctanal como um líquido amarelo que foi utilizado sem mais purificação.
Terc-butóxido de potássio (15,3 g) e cloreto de (metoximetil) trifenilfosfónio (48 g) em THF seco (350 mL) foram arrefecidos até 0 °C e agitados durante 30 minutos. 8-{terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-2,2-dimetil-octanal (10,03 g) foi dissolvido em THF seco (150 mL) e adicionado à mistura reaccional, a qual foi em seguida agitada a 0 °C durante 1 hora. A mistura foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada durante 30 minutos, antes da adição de solução saturada de bicarbonato de sódio (300 mL) seguida de extracção com éter dietílico (3 x 300 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (300 mL), secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas sob vácuo para dar o produto em bruto.
Foi adicionado ciclo-hexano (300 mL) e a mistura agitada durante 5 minutos. O solvente foi decantado e este processo foi repetido. A evaporação da camada de ciclo-hexano deu um líquido amarelo com algum sólido branco presente. O sólido foi removido por filtração, em seguida o filtrado foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-40% de acetato de etilo em ciclo-hexano. A purificação adicional foi conseguida dissolvendo o material (3,2 g) em acetona (50 mL) , tratando com iodeto de sódio (3,05 g) seguido de resina de Merrifield (6,4 g) 786 e agitando a mistura durante o fim-de-semana. A resina foi filtrada e lavada com acetona (100 mL) , DCM (50 mL) e metanol (50 mL) . O filtrado foi evaporado e retomado em DCM (200 mL) , lavado com água (2 x 60 mL) e a camada orgânica seca sobre sulfato de magnésio e evaporada sob pressão reduzida para dar o subproduto em epígrafe como um líquido amarelo pálido e como uma mistura de isómeros cis/trans. Rendimento 2,6 g. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) : δ 6,16 (d, J = 12,9 Hz, 0,6H); 5,69 (d, J = 7,0 Hz, 0, 4 H) ; 4,73 (d, J = 12,9 Hz, 0,6H); 4,09 (d, J = 7,0 Hz, 0, 4H) ; 3,61-3,56 (m, 2H) ; 3,53-3,47 (m, 3H) ; 1,56-1,45 (m, 2H); 1,38-1,16 (m, 8H); 1,05 (d, J = 10,1 Hz, 3H); 0,97 (s, 3H); 0,92-0,86 (m, 9H); 0,06-0,02 (m, 6H). d) A mistura de (E)-9-Metoxi-7,7-dimetilnon-8-en-l-ol e (Z)-9-Metoxi-7,7-dimetilnon-8-en-l-ol
/O
OH (E)-terc-Butil(9-metoxi-7,7-dimetilnon-8-eniloxi)dimetil-silano (exemplo 279, passo c) (2,57 g) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (60 mL) e foi adicionado fluoreto de tetrabutilamónio (16,4 mL) e a mistura reaccional deixada agitar à temperatura ambiente durante 4 horas. A mistura reaccional foi desactivada com água (50 mL) e extraída com éter dietílico (3 x 100 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob vácuo para dar o composto em subepígrafe como um líquido amarelo pálido e como uma mistura de isómeros cis/trans, o qual foi utilizada sem mais purificação. Rendimento 1,2 g 787 RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) : δ 6,16 (d, J = 12,9 Hz, 0,5H); 5,70 (d; J = 7,0 Hz, 0,5H); 4,74 (d, J = 12,9 Hz, 0,5H); 4,11 (d, J = 7,0 Hz, 0,5H); 3,68-3,61 (m, 2H) ; 3,52 (s, 1,5H); 3,49 (s, 1,5H) ; 1,62-1:51 (m, 2H) ; 1,40-1,21 (m, 8H) ; 1,07 (s, 3H) ; 0,98(s, 3H) mais um permutável não observado. e) Metanossulfonato de 7,7-dimetil-9-oxononilo
Uma mistura de (E)-9-metoxi-7,7-dimetilnon-8-en-l-ol e (Z)-9-metoxi-7,7-dimetilnon-8-en-l-ol (exemplo 279, passo d) (1,6 g) foi dissolvida em diclorometano (15 mL) e foi adicionada trietilamina (1,33 mL) , em seguida a mistura foi arrefecida até 0 °C num banho de gelo sob árgon. Foi adicionado, gota a gota ao longo de 5 minutos, cloreto de metanossulfonilo (0,68 mL) e a mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos e em seguida à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura reaccional foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (2 x 30 mL) , seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada sob vácuo para dar o produto em bruto. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel, eluindo com 0-100% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepigrafe como um óleo incolor. Rendimento 1,2 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) : δ 9,85-9,81 (m, 1H) ; 4,25-4,18 (m, 2H) ; 3,00 (s, 3H) ; 2,25 (m, 2H) ; 1, 80-1,69 (m, 2H) ; 1,47-1,37 (m, 2H), 1,31 (s, 6H); 1,05-1,01 (m, 6H). 788 f) 9-(4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-3,3-dimetilnonanal
(2-Isopropil-tiazol-4-il)-(l-oxa-4, 9-diaza-espiro [5.5]undec-4-il)-metanona (0,262 g) (preparada a partir do sal de trifluoroacetato como no Exemplo 102, passo c) foi dissolvida em acetonitrilo (4 mL) e foi adicionada trietilamina (0,22 mL) . Esta solução foi então adicionada a uma solução de metanossulfonato de 7,7-dimetil-9-oxononilo (Exemplo 279, passo e) (0,291 g) em acetonitrilo (4 mL) e a mistura resultante aquecida a 80 °C de um dia para o outro. Os solventes foram removidos sob vácuo. A purificação foi por cromatografia sobre silica gel eluindo com 0-10% de Metanol em DCM para proporcionar o composto em subepigrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,361 g. RMN de (400 MHz, CDC13) : δ 9,80-9,77 (m, 1H) ; 7,81 (s, 1H) ; 4,12 -3,80 (m, 2H) ; 3,73 (s, 3H); 3,68-3,58 (m, 1H); 3,34- 3,22 (m, 1H); 2, 90-2,33 (m, 6H) ; 2,21 (d, J = 3, 17 Hz, 2H); 1,99-1,65 (m, 6H); 1,63-1,47 (m, 2H) ; 1,37 (d, J = 6,9 Hz, 6H); 1,31-1,20 (m, 6H); 1,00 (s, 6H). 789 g) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2— isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-3,3-dimetilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,035 mL) a uma solução, mantida sob agitação, de 9-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-3,3-dimetilnonanai (exemplo 279, passo f) (195 mg) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-1-hidroxietil)4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (161 mg) em metanol (10 mL) e após um minuto foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (51 mg) e a mistura reaccional agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. A mistura foi concentrada e em seguida partilhada entre THF (12 mL) e uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução saturada de bicarbonato de sódio (10:1, 12 mL) . As camadas foram separadas e a fase orgânica seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. 0 material resultante foi purificado por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%) . As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,038 g. m/z 688 (M+H)+ 790 RMN de XH (400 MHz, D 6' -DMSO, 80 °C) : δ 8, 12 (S, 1, 6H) f 7, 89 (S, 1H) ; 6, . 88 (d, J = 8,3 Hz , 1H) ; 6, 70 (d , J = 8 ,3 Hz r 1H) ; 4,59 (t, J = 6 ,2 Hz, 1H) ; 3, 64 (d, J = 9 ,5 Hz, 6H) r 2, 75 (d, J = 6,7 Hz, 2H) ; 2,61-2, 53 (m, 2H) ; 2,40 '-2, 21 (m, 6H) r 1, 72- 1,63 (m, 2H) ; 1, 58- 1,47 (m, 2H) r 1,43-1, • 30 (m, 1 0H) ; 1, 29 -i, 09 (m, 8Η) ; 0,82 (s, 6H) mais um sinal obscurecido pelo solvente e quatro permutáveis não observados.
Exemplo 280
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(1-hidroxi—2—(10—(4—(2— isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)decan-2-ilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 10-Bromodecan-2-ol
A uma solução de 9-bromo-nonanol (1,7 g) em D CM (100 mL) foi adicionada diisopropiletilamina (3,91 mL) , em seguida DMSO (1,62 mL) e a mistura arrefecida até -14 °C, em seguida foi adicionado complexo de trióxido de enxofre-piridina (3,64 g) em 791 porções. A mistura foi agitada durante 30 minutos, em seguida deixada em repouso de um dia para o outro. Foi adicionada água e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com hidrogenossulfato de sódio 1 M (x 3), solução aguosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi separada e seca utilizando um vidro poroso hidrófobo, em seguida evaporada para proporcionar o aldeido como um liquido amarelo (2,32 g). A uma solução do aldeido (750 mg) em éter seco (20 mL) a 0 °C foi adicionado gota a gota metil-litio (1,6M em éter, 2,1 mL) . Após 45 minutos a mistura foi vertida sobre ácido sulfúrico 2 M sob agitação e as fases foram separadas. A camada orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-30% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em epígrafe como um líquido cor de palha. Rendimento 0,286 g. RMN de (400 MHz, CDC13) : δ 3,83-3,75 (m, 1H) ; 3,41 (t, J= 6,9 Hz, 2H); 1,90-1,80 (m, 2H); 1,50-1,37 (m, 6H); 1,36-1,26 (s, 6H); 1,19 (d, J = 6,2 Hz, 3H) mais um permutável não observado. 792 b) (9-(9-Hidroxidecil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Trifluoroacetato de (2-isopropil-tiazol-4-il)-(l-oxa-4,9-diaza-espiro[5.5]undec-4-il)-metanona (exemplo 22, passo b) (500 mg) foi aplicado a um cartucho SCX-2 humedecido com metanol, lavado com metanol, em seguida eluído utilizando amónia 2 N em metanol e evaporado para proporcionar a base livre (276 mg) . Este material foi misturado com 10-bromodecan-2-ol (exemplo 280, passo a, 280 mg) e trietilamina (0,247 mL) em acetonitrilo (10 mL) e aquecido a 60 °C durante 18 h. O solvente foi removido por evaporação e o material em bruto purificado por cromatografia sobre silica gel eluindo com 0-20% de metanol em DCM para proporcionar o composto em epígrafe. Rendimento 0,298 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO): δ 8,99 (s, 1H); 8,0 0 (s, t—1 4, 23 (d, J = 4,7 Hz , 1H) ; 3,78-3,44 (m, 8H); 3,11-2,77 (m, 4H) ; 2, 08-1,92 (m, 2H) ; 1, 76- 1,48 (m, 4H) ; 1,30 (d, J = 6,9 Hz, 7H) ; 1, 26-1,16 (m, 12H); 0,98 (d, J = 6, 1 Hz, 3H). 793 c) 10-(4-(2-Isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)decan-2-ona
A uma solução de (9-(9-hidroxidecil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 280, passo b) (287 mg) em DCM (10 mL) a 0 °C sob azoto foi adicionado ácido trifluoroacético (0, 048 mL) . A mistura foi agitada durante 5 minutos, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (392 mg) . A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 horas, em seguida foi adicionada mais uma quantidade de periodinano de Dess-Martin (392 mg) a 0 °C, depois agitada à temperatura ambiente durante 1,75 h. Foram adicionados solução saturada de tiossulfato de sódio (20 mL), solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (20 mL) e acetato de etilo e a mistura agitada, em seguida as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (x 2) e os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. Foi adicionado ácido acético (0,053 mL) em seguida os orgânicos foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados para proporcionar o composto em epígrafe como uma goma amarela. Rendimento 0,338 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13): δ 7,85 (s, 1H) ; 4, 07-3, 72 (m, 5H) ; 3,36-3,21 (m, 2H) ; 2, 96-2, 82 (m, 3H) ; 2, 47-2,37 (m; 4H) ; 794 2,12 (s, 3H); 2,11-2,02 (m, 2H) ; 1, 85-1, 75 (m, 2H) ; 1,62-1,49 (m, 3H); 1,46-1,36 (m, 7H); 1,35-1,20 (m, 9H). d) Formato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(10—(4—(2— isopropiltiazole—4—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)decan-2-ilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido acético (0,053 mL) a uma mistura de 10-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)decan-2-ona (exemplo 280, passo c) (335 mg) e cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (243 mg) em metanol seco com peneiros moleculares de 3 Ã à temperatura ambiente sob azoto e agitada durante 5 minutos. A mistura foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (131 mg). A mistura reaccional foi agitada, aquecendo até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi filtrada e evaporada. A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®,
Gradiente: 10-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,032 g. 795 m/z 674 (M+H) RMN de ΤΗ (400 MHz, D6-DMSO, 80 °C) : δ 8,15 (s, 2H) ; 7,88 (s, 1H) ; 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 6,69 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 4, 57-4,50 (m, 1H) ; 3,71-3,58 (m, 8H) ; 3,36-3,25 (m, 2H) ; 2,79-2,59 (m, 3H) ; 2,40-2,31 (m, 2H) ; 2,32-2,22 (m, 4H) ; 1,73-1,63 (m, 2H) ; 1,59-1,48 (m, 2H) ; 1, 44-1,32 (m, 8H) ; 1,31-1,16 (s, 1OH) ; 0, 99-0,93 (m, 2H) mais 4 permutáveis não observados.
Exemplo 281
Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(3-(4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propiltio)butilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH a) 4-(2-(1,3-Dioxolan-2-il)etiltio)butan-l-ol
Uma solução de 4-mercaptobutanol (4,936 g) em acetonitrilo seco sob árgon foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 2, 044 g) em porções. A mistura 796 foi agitada durante 1 hora a 0 °C, em seguida foi adicionado 2-(2-bromoetil)-1,3-dioxolano (9,26 g) e a suspensão cinzenta resultante foi aguecida até à temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A reacção foi desactivada por adição de solução aguosa saturada de bicarbonato de sódio (150 mL) e em seguida extraída com acetato de etilo (3 x 150 mL). Os orgânicos foram combinados e lavados com solução aguosa saturada de cloreto de sódio (150 mL), secos sobre sulfato de sódio, filtrados e secos para proporcionar o produto em bruto. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-50% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo amarelo. Rendimento 7,3 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) : δ 4, 98-0,93 (m, 1H) ; 4,01-3,93 (m, 2H) ; 3,89-3,83 (m, 2H) ; 3,69-3,63 (m, 2H) ; 2,65-2,58 (m, 2H) ; 2,59-2,53 (m, 2H) ; 1,98-1,91 (m, 2H) ; 1, 73-1,62 (m, 4H) mais um permutável não observado. b) (9-(3-(4-Hidroxibutiltio)propil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
4-(2-(1,3-Dioxolan-2-il)etiltio)butan-l-ol (exemplo 281, passo a) (500 mg) foi dissolvido numa solução aguosa de ácido fórmico a 80% (6 mL) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante o fim-de-semana. A mistura foi diluída com água (10 mL) e extraída com éter (3 x 10 mL) , em 797 seguida os orgânicos foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) , secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados para proporcionar 3-(4-hidroxi-butilsulfanil)-propionaldeido como um óleo. Este foi dissolvido em metanol seco e foram adicionados trifluoroacetato de (2-isopropil-tiazol-4-il)-(l-oxa-4,9-diaza-espiro[5.5]undec-4-il)-metanona (Exemplo 22, passo b) (606 mg) e peneiros moleculares de 3 Á. Foi adicionado ácido acético (0,2 mL) e a mistura agitada durante 5 minutos sob árgon antes de ser arrefecida até 0 °C e adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (633 mg) . O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura reaccional agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi filtrada, em seguida aplicada directamente a um cartucho SCX-2 e lavada com metanol, antes de eluir o produto com amónia 2 N em metanol. A purificação adicional foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 10% de metanol em DCM para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo verde pálido. Rendimento 0,37 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13): δ 7,85 (s, 1H) ; 4, 02-3, 87 (m, 2H) ; 3,80-3, 73 (m, 3H) ; 3,69-3,63 (m, 3H) ; 3,39-3,23 (m, 5H) ; 2,86-2, 74 (m, 2H) ; 2,67-2,59 (m, 2H) ; 2,58-2,50 (m, 5H) ; 1,96- 1,81 (m, 4H); 1,74-1,63 (m, 4H); 1,41 (d, J = 6,9 Hz, 6H). 798 c) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(4-(3-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propiltio)butilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Cloreto de oxalilo (0, 068 mL) foi dissolvido em DCM seco (2 mL) e a solução arrefecida até -78 °C. Foi adicionado, gota a gota, DMSO (0,12 mL) em DCM (0,03 mL) e a mistura agitada. Após 15 minutos foi adicionada, gota a gota, uma solução de (9-(3-(4-hidroxibutiltio)propil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 281, passo b) (290 mg) em DCM (1 mL) e a agitação continuou durante 15 minutos antes da adição gota a gota de trietilamina (0,44 mL) . O banho de arrefecimento foi retirado e a reacção deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 1 hora a mistura reaccional foi vertida sobre cloreto de amónio aquoso saturado (3 mL) e adicionado DCM (3 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com DCM (2x5 mL). Os orgânicos foram combinados, lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (5 mL) , secos sobre sulfato de sódio e evaporados para proporcionar o aldeído em bruto. O aldeído (195 mg) foi agitado com cloridrato de (A)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (170 mg) em metanol 799 seco (8 mL) e foram adicionados peneiros moleculares de 3 Á e ácido acético (0,07 mL) . Depois de agitar durante 5 minutos a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (200 mg). O banho de arrefecimento foi retirado e a mistura reaccional agitada à temperatura ambiente durante o fim-de-semana. A mistura foi filtrada e evaporada. A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para dar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,006 g. m/z 664 (M+H)+ RMN de XH (400 MHz, D4-MeOH): δ 8, 48 (s , 1, 8H) ; 7, 88 (s, 1 H) ; 6,95 (d f J = 8, 3 Hz , 1H) ; 6,73 (d , J = 8,3 Hz, 1H) ; 4, 97- 4, 90 (m, 1H ); 3,89- -3,56 (m, 6H); 3, 38 -3,24 (m, 1H) ; 3,13 -3,04 (m, 2H) ; 3, 04- -2,96 (m, 2H) ; 2,97-2, 61 (m, 6H) ; 2, 60-2,49 (m, 4H) ; 2,0' 4-1, 91 (m, 2H) ; 1, 91 -1,70 (m, 5H) ; 1,70-1, 57 (m, 3H) ; 1,38 (d, J = 6, ,9 Hz, 6H) ma is 4 permutáveis nao observados. 800
Exemplo 282
Formato de 4-hidroxi-7-((IR)-l-hidroxi-2-(4-(3-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)propilsulfinil)butilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
OH
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,06 mL) a uma solução de (9-(3-(4-hidroxibutiltio)propil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (Exemplo 281, passo b) (360 mg) em DCM seco (14 mL) sob árgon. A solução foi arrefecida até 0 °C e deixada agitar durante 5 minutos, antes da adição de periodinano de Dess-Martin (502 mg). A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, em seguida desactivada por adição de tiossulfato de sódio saturado (14 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (14 mL) . Foi adicionado acetato de etilo (30 mL) e a mistura agitada durante 5 minutos, em seguida as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 30 mL) . foi adicionado ácido acético (0,053 mL) aos orgânicos combinados, os quais foram em seguida secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados para proporcionar o aldeído como um óleo. Este foi dissolvido em metanol seco (15 mL) em conjunto com cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil) -4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (W02007027134, exemplo 1, 801 passo d) (311 mg) e foram adicionados peneiros moleculares de 3 Ã e ácido acético (0,07 mL) . Depois de agitar durante 5 minutos a mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (200 mg) e agitação continuou à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi filtrada e evaporada. A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,018 g. m/z 680 (M+H)+ RMN de ΤΗ (400 MHz, D4-MeOH) : δ 8,40 (s, 2H); 7,88 (s, 1H) ; 6,96 (d, J = 8,3 Hz , ih: ) ; 6, 73 (d, J = 8, 3 Hz, 1H) ; 4, 98-4, 92 (m, 1H) ; 3,90-3,56 (m, 6H) ; 3,36-3,24 (m, 1H) ; 3,19-3,03 (m, 4H) ; 3,04- -2,67 (m, 10H) ; 2,15-1,95 (m, 4H) ; 1, 93-1,56 (m, 6H) ; 1,38 (d, J = 6,9 Hz, 6H) mais 4 permutáveis não observados.
Exemplo 283
Formato de 4-hidroxi-7-((IR)-l-hidroxi-2-(9-(4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2-metilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
802 a) 9-Bromo-2-metilnonan-l-ol
A uma solução de diisopropilamina (5,42 mL) em THF seco (30 mL) sob árgon a 0 °C foi adicionado lentamente n-butil-litio 2,5 M (15,5 mL) , mantendo a temperatura abaixo de 10 °C. A solução foi agitada a 0 °C durante 30 minutos antes de ser arrefecida até -78 °C. Foi adicionado, gota a gota, propionato de etilo (4,01 mL) e a solução agitada a -78 °C durante 1 hora. Foi adicionado 1,7-dibromo-heptano (6,63 mL) e agitação continuou a -78 °C durante 1 hora, em seguida o banho de arrefecimento foi retirado e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Foi adicionado cloreto de amónio aquoso saturado (30 mL) à reacção seguida de acetato de etilo (30 mL) . As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (2 x 30 mL). Os orgânicos foram combinados, lavados com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) , solução aquosa saturada de cloreto de sódio (50 mL) , secos sobre sulfato de sódio e evaporados. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 1-5% de acetato de etilo em éter de petróleo (40-60 °C) para dar 9-bromo-2-metilnonanoato de etilo, o qual foi utilizado sem mais purificação.
Este material (0,84 g) foi dissolvido em éter seco (27 mL) e arrefecido até 0 °C sob árgon. Foi adicionado, gota a gota, hidreto de diisobutil-alumínio (1 M em tolueno, 6,7 m) e a reacção foi agitada a 0 °C durante 1 h 15 minutos. A reacção foi desactivada por adição de tartarato de potássio e sódio aquoso saturado e a mistura resultante foi agitada durante 15 minutos. 803
Foram adicionados acetato de etilo (60 mL) e água (20 mL) e as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (3 x 30 mL) , em seguida os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. A purificação foi por cromatograf ia sobre sílica gel eluindo com 0 a 10% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,23 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) : δ 3,51 (dd, J = 10,5, 5,8 Hz, 1H); 3,46-3,38 (m, 3H) ; 1, 90-1, 80 (m, 2H) ; 1,66-1,55 (m, 2H) ; 1, 47-1,22 (m, 9H) ; 0,92 (d, J = 6, 7 Hz, 3H) mais um permutável não observado. b) (9-(9-Hidroxi-8-metilnonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Ditrifluoroacetato de (2-isopropil-tiazol-4-il)-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undec-4-il)-metanona (Exemplo 22, passo b) (500 mg) foi aplicado a um cartucho SCX-2 humedecido com metanol, lavado com metanol, em seguida eluído utilizando amónia 2 N em metanol e evaporado para proporcionar a base livre (279 mg). Esta foi dissolvida em acetonitrilo (10 mL) em conjunto com 9-bromo-2-metilnonan-1-ol (exemplo 283, passo a) (220 mg) e foi adicionada trietilamina (0,223 mL). A mistura reaccional foi 804 aquecida até 60 °C de um dia para o outro, em seguida concentrada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0 a 10% de metanol em DCM para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido castanho pálido. Rendimento 0,38 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC1 3) : δ 7, 97 (s, 1H) ; 4, 06- -3,90 (m, 2 H) ; 3,83- -3, 71 (s, 4H) ; 3,52- -3,37 (m, r 4 H) ; 3, 05- -2,85 (m, 4H) ; 2,48- -2,32 (m, 2H) ; 2, 15- 2, 05 (m, 2H) ; 1, 97- 1,84 (m, 2H); 1 , 66 — 1,50 (m, 4H) ; 1, 48- -1,39 (m, 6H) ; 1,38-1,21 (m, 8H) ; 0, 91 (d, J = í 5,7 Hz , 3 H) mais um permut. ável não observado. c) (9-(9-Bromo-8-metilnonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
(9-(9-Hidroxi-8-metilnonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 283, passo b) (100 mg), tetrabrometo de carbono (143 mg) e imidazole (30 mg) foram dissolvidos em DCM (5 mL) . A solução foi arrefecida até 0 °C e foi adicionada, gota a gota, uma solução de trifenilfosfina (85 mg) em DCM (1 mL) . A mistura reaccional foi agitada a esta temperatura durante 1 hora, em seguida à temperatura ambiente durante 2 horas. Foi adicionada mais quantidade de tetrabrometo de carbono (150 mg), a mistura arrefecida até 0 °C e adicionada, gota a gota, trifenilfosfina 805 (114 mg) em DCM (1 mL) . Agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, em seguida foi adicionada água e as fases separada. A fase orgânica foi evaporada e o produto purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-10% de metanol em DCM para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma laranja. Rendimento 0,088 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13): δ 7,8 7 (s, 1H) ; 4, 03- 3,91 (m, 2H) ; 3,81 -3, 70 (m, 4H) ; 3,43-3,313 (m, 4H) ; 3,06 -2, 86 (m, 4H) ; 2,49- -2,34 (m, 2H) ; 2, 15- -2,05 (m, 2H) ; 1, 98- 1,86 (m, 2H ); 1 ,57- 1,50 (m, 2H) ; 1, 47- -1,39 (m, 6H) ; 1,37- -1, 19 (m, 10H) ; 1, 00 (d, J = 6,6 Hz, 3H). d) Formato de 4-hidroxi-7-((IR)-l-hidroxi-2-(9-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-2-metilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4- hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134,
exemplo 1, passo d) (263 mg) foi dissolvido em metanol (10 mL) e foi adicionado metóxido de sódio (54 mg) e a mistura agitada durante 25 minutos. O sólido foi recolhido por filtração e lavado com metanol e seco ao ar para proporcionar a base livre (150 mg). Algum deste material (61 mg) foi dissolvido em DMF 806 (3,5 mL) e foi misturado com (9-(9-Bromo-8-metilnonil)-1-oxa-4,9-diaza-espiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 283, passo c) (71 mg) e diisopropiletilamina (0,023 mL). A mistura reaccional foi aquecida a 50 °C de um dia para o outro, em seguida arrefecida e partilhada entre acetato de etilo (10 mL) e água (10 mL) . Os orgânicos foram secos sobre sulfato de sódio, filtrados e concentrados. A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%) . As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,002 g. m/z 674 (M+H)+ RMN de XH (400 MHz, d4- -MeOH) : δ 8,51 (s, 1H) ; 7,87 (s, 1H) ; 6, 92 (d, J = 8 ,3 Hz, 1H ); 6, 70 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 3,85- 3,55 (s, 6H) ; 2, 92- 2,80 (m, 2H ); 2, 76-2 ,34 (m, 8H) ; 1, 97- -1,82 (m, 2H) ; 1, 77 -i, 44 (m, 5H); 1,3 7 (d, J = 6. 9 Hz, 6H) ; 1,36 -1,17 (m, 9H) ; 1,17 -i, 04 (m, 1H) ; 0,9 2 (dd, r J = = 6,6 , 3, 2 Hz , 3H) mais dois sinais obscurecidos pelo solvente e quatro permutáveis nao observados. 807
Exemplo 284
Formato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(7—(4—(5— isopropiltiofeno—3—carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)heptilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) (9-(7-Hidroxi-heptil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan- 4-il)(5-isopropiltiofen-3-il)metanona
HO
Foi adicionada uma solução de 7-bromo-l-heptanol (380 mg) em acetonitrilo (3,9 mL) a uma solução de (5-isopropiltiofen-3-il) (l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)metanona (Exemplo 275, passo i) (400 mg) e trietilamina (0,361 mL) em acetonitrilo (8,6 mL) . A mistura resultante foi agitada a 60 °C durante 16 horas. O solvente foi removido sob vácuo e o resíduo retomado em DCM (25 mL) e lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (25 mL) e água (20 mL) , em seguida seco sobre sulfato de sódio, filtrado e evaporado. A purificação foi por 808 cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0 a 10% de metanol em D CM para proporcionar o composto em subepígrafe como um sólido castanho pálido. Rendimento 0,305 g. RMN de ΤΗ (4 : 0 0 MHz, CDC1 3) : δ 7,26 (s, 1H) ; 6,84 (s, \—1 3, 74- -3,67 (m, , 4H) r 3,63 (t, J = 6,4 Hz, 2H) ; 3,5 >7-3,48 (m, 2H) ; 3, 35- -3,10 (m , 2H) r 2,99- 2, 70 (m, 3H) ; 2 , 28- 1, 98 (m, 4H) ; 1 ,92- 1, 74 (m, 2H) ; i, 6 7- -1, 47 (m, 4H) if 41- 1,34 (m, 5H) ; 1,34 (d, J = { 5,9 H z, 6H) ; 1 ,28-1 , 23 (m, 1H) mais um permutável não observado. b) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(7-(4-(5-isopropiltiofeno-3-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)heptilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Foi adicionado ácido trifluoroacético (0,054 mL) a uma solução de (9-(7-hidroxi-heptil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]-undecan-4-il)(5-isopropiltiofen-3-il)metanona (exemplo 284, passo a) (295 mg) em DCM (7,5 mL). A mistura foi agitada durante 5 minutos, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (503 mg) e a agitação continuou durante 1 hora 50 minutos. A mistura reaccional foi desactivada por adição de solução saturada de tiossulfato de sódio (4 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (4 mL) . Foi adicionado acetato 809 de etilo (25 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada durante 5 minutos, em seguida as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (5 mL) . Os orgânicos foram combinados, lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (5 mL) em seguida foi adicionado ácido acético (0,080 mL) e a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada para proporcionar o aldeído como um óleo (504 mg) . Este foi dissolvido em metanol seco (5 mL) , em seguida foi adicionado cloridrato de (R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)4-hidroxibenzo[d]-tiazol-2(3 H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (202 mg) e a mistura agitada durante 5 minutos. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado cianoboro-hidreto de sódio (66 mg) e a agitação continuou a 0 °C durante 2 horas, em seguida à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura foi concentrada sob vácuo e partilhada entre THF (6 mL) e uma mistura de solução aquosa saturada de cloreto de sódio e solução saturada de bicarbonato de sódio (10:1, 6 mL) . As camadas foram separadas e a fase orgânica seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada e o resíduo submetido a evaporação azeotrópica com acetonitrilo. A purificação foi por HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,037 g. m/z 631 (M+H)+ RMN de (400 MHz, D4-MeOH) : δ 8,49 (s, 2H); 7,45 (s, 1H) ; 6, 95 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 6 ,91 (s, 1H); 6, 73 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 4, 93 (dd, J = 9,1, 4,5 Hz, 1H); 3,79-3,47 (m, 6H) ; 3,2 0- 3, 04 (m, 3H); 3,01-2,94 (m, 3H) ; 2,92-2,70 (m, 4H) ; 2,08-1,97 810 (m, 2H); 1,75-1,56 (m, 6H); 1,43-1,33 (m, 6H); 1,30 (d, J = 6,9 Hz, 6H) mais um sinal obscurecido pelo solvente e quatro permutáveis não observados.
Exemplo 285
Formato de (R)—4—hidroxi—7—(1—hidroxi—2—(9—(4—(2— isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-4,4-dimetilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
a) 2-(5-Bromopentiloxi)tetra-hidro-2H-pirano
A uma solução de 5-bromopentanol (10 g) em DCM (150 mL) foi adicionado p-toluenossulfonato de piridinio (1,5 g) , seguido de 3,4-di-hidro-2H-pirano (8,1 mL) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente sob azoto durante 21 horas. A solução foi diluída com éter, em seguida lavada com solução aquosa diluída de cloreto de sódio (solução aquosa saturada de cloreto de sódio:água 1:1, 140 mL) antes de os orgânicos terem
sido secos sobre sulfato de sódio, filtrados e evaporados. A 811 purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0 a 50% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um líquido incolor. Rendimento 14,14 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) : δ 4,59-4, 56 (m, 1H) ; 3,91-3,82 (m, 1H) ; 3,79-3,71 (m, 1H) ; 3,57-3,47 (m, 1H) ; 3,44-3,36 (m, 3H); 1,94-1,76 (m, 3H); 1,76-1,66 (m, 1H); 1,65-1,46 (m, 8H). b) 2,2-Dimetil-7-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)heptanoato de etilo
Uma solução de diisopropilamina (1,78 mL) em THF seco (10 mL) a 0 °C sob azoto foi tratada gota a gota com n-butil-lítio (2,5 M em hexanos, 5,09 mL) para gerar uma solução amarela pálida que foi agitada a 0 °C durante 30 minutos, em seguida arrefecida até -78 °C e tratada gota a gota com isobutirato de etilo (1,55 mL). A solução foi agitada a -78 °C durante 45 minutos, em seguida foi adicionada, gota a gota, uma solução de 2-(5-bromopentiloxi)tetra-hidro-2H-pirano (exemplo 285, passo a) (3,20 g) em THF seco (1 mL). A mistura reaccional foi agitada a -78 °C durante 10 minutos, em seguida foi deixada aquecer até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C, em seguida tratada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio (3 mL) e extraída com acetato de etilo. A fase aquosa foi extraída com acetato de etilo (x 2) e a fase orgânica combinada foi lavada com água, 812 solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-5% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como líquido incolor. Rendimento 2,22 g. RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 4,59-4,55 (m, 1H) q 1—1 1—1 J = 7,1 Hz, 2H) ; 3, 90-3, 82 (m, 1H) ; 3,72 (dt, J = 9, 6, 6,8 Hz, ffi i—1 3,53-3, 45 (m, 1H) ; 3, 37 (dt, J = 9,6, 6,6 Hz, 1H); 1,88- 1,77 (m, 1H ); 1, 75- -1,67 (m , 1H); 1,64-1,48 (m, 8H) ; 1,40-1,30 (m, 2H) ; 1,2 9-1 ,20 ( m, 5H); 1,15 (s, 6H) . c) 2,2-Dimetil-7-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)heptan-l-ol
Uma solução de 2,2-dimetil-7-(tetra-hidro-2H-piran-2- iloxi)heptanoato de etilo (exemplo 285, passo b) (2,22 g) em éter seco (22 mL) a 0 °C sob azoto, foi tratada gota a gota ao longo de 5 minutos com hidreto de diisobutil-alumínio (1 M em tolueno, 17,1 mL) . Após 1 hora a 0 °C a mistura reaccional foi tratada cuidadosamente com tartarato de potássio e sódio aquoso, diluída com éter e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 1,5 horas. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (x 2) . A fase orgânica combinada foi lavada com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0 813 a 50% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 1,83 g. RMN de (400 MHz, CDC13) : δ 4,58-4,55 (m, 1H); 3,91-3,83 (m, 1H) ; 3, 77-3,69 (m, 1H) ; 3,53-3,46 (m, 1H); 3,39 (dt, J = 9,6, 6,6 Hz, 1H) ; 3,31 (d, J = 4,1 Hz, 2H) ; 1, 90-1, 78 (m, 1H) ; 1, 76-1,64 (m, 1H) ; 1,64-1, 48 (m, 4H) ; 1, 40-1,20 (m, 8H) ; 0,86 (s, 6H) mais um permutável não observado. d) (E)-4,4-Dimetil-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)non-2- enoato
Uma solução de cloreto de oxalilo (0,78 mL) em DCM seco (20 mL) a -78 °C foi tratada gota a gota com uma solução de DMSO (1,26 mL) em DCM (0,3 mL) . Após 15 minutos foi adicionada, gota a gota, uma solução de 2,2-dimetil-7-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)heptan-l-ol (exemplo 285, passo c) (1,73 g) em DCM (10 mL) e a agitação continuou durante 15 minutos, antes da adição gota a gota de trietilamina (4,93 mL) . O banho de arrefecimento foi retirado e a reacção deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 1 hora a mistura reaccional foi tratada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio e as camadas foram separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (x 2) e os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados para proporcionar o aldeído em bruto. Este foi retomado em DCM, lavado com água, seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e 814 evaporado para proporcionar o aldeído como um óleo incolor, o qual foi directamente utilizado. Uma solução de fosfonoacetato de trietilo (1,62 mL) em acetonitrilo (8 mL) foi tratada com cloreto de lítio (0,43 g) e em seguida arrefecida até 0 °C e adicionada, gota a gota, trietilamina (1,23 mL) como uma solução em acetonitrilo (2,5 mL). A mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 15 minutos, em seguida foi adicionada uma solução de 2,2-dimetil-7-(tetra-hidro-piran-2-iloxi)-heptanal (1,65 g) em acetonitrilo (6 mL) . A mistura resultante foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e foi agitada durante 3 horas, antes de ter sido tratada com solução aquosa saturada de cloreto de amónio, éter e água. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (x 2) e os orgânicos combinados foram lavados com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evaporados para proporcionar o produto em bruto. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0 a 40% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,89 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13) : δ 6,91 (d, J = 15,9 Hz, 1H) ; 5,71 (dd, J = 15,9, 1,9 Hz, 1H) ; 4, 59-4, 55 (m, 1H) ; 4,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H); 3,90-3,82 (m, 1H); 3,76-3,68 (m, 1H); 3,53-3,46 (m, 1H) ; 3,40-3,33 (m, 1H) ; 1, 89-1, 77 (m, 1H) ; 1, 76-1,66 (m, 1H); 1,64-1,48 (m, 6H) ; 1,39-1,19 (m, 9H); 1,05-1, 03 (m, 6H) . 815 e) 4,4-Dimetil-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)nonanoato de etilo
O
Uma solução de (E)-4,4-dimetil-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)non-2-enoato de etilo (exemplo 285, passo d) (0,89 g) em IMS (álcool industrial desnaturado) (10 mL) foi tratada com paládio sobre carvão (ponta de espátula) sob azoto, em seguida o balão foi purgado com hidrogénio (x 3), depois agitada sob uma atmosfera de hidrogénio de um dia para o outro. Foi adicionada mais uma porção de paládio sobre carvão e a hidrogenação retomada durante mais 24 horas. O catalisador foi removido por filtração através de terra de diatomáceas e o filtrado foi evaporado para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,86 g. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 4,59-0,56 (m, 1H) ; 4,12 (q, J = 7,1 Hz, 2 H); 3,90-3,83 (m, 1H); 3, 75-3,68 (m, 1H); 3,53-3,46 (m, 1H); 3,41-3,34 (m, 1H) ; 2,26-2,19 (m, 2H) ; 1, 88-1, 79 (m, 2H) ; 1, 76-1,66 (m, 2H) ; 1,66-1,43 (m, 6H) ; 1,40-1,14 (m, 9H) ; 0,84 (s, 6H). 816 f) 9-Hidroxi-4,4-dimetilnonanoato de etilo v^o
OH O A uma solução de 4,4-dimetil-9-(tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)nonanoato de etilo (exemplo 285, passo e) (0,86 g) em metanol (10 mL) foi adicionado ácido p-toluenossulfónico mono-hidratado (52 mg) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi diluída com acetato de etilo e água e as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (x 2) e a fase orgânica combinada foi lavada com ácido cítrico a 10%, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 0-50% de acetato de etilo em ciclo-hexano para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,44 g. RMN de 1H (400 MHz, CDC13) : δ 4,12 (q, J 1—1 II Hz; 2H) ; 3,67- -3,61 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 2,28-2,20 (m, 2H); 1,61· -1,50 (m, 4H) ; 1,49 -1,37 (m, 1H) ; 1,38-1,22 (m, 7H) ; 1,21- -1,12 (m, 2H) ; 0,85 (s, ( 5H) . 817 g) 9-Bromo-4,4-dimetilnonanoato de etilo
O
Uma solução de 9-hidroxi-4,4-dimetilnonanoato de etilo (exemplo 285, passo f) (0,44 g) em DCM (19 mL) a 0 °C foi tratada com tetrabrometo de carbono (0,76 g) seguida de trifenilfosfina (0,60 g) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Foram adicionadas mais quantidades de tetrabrometo de carbono (0,76 g) e trifenilfosfina (0,60 g) e a agitação continuou durante 3 horas. 0 solvente foi removido por evaporação, em seguida a mistura foi triturada com ciclo-hexano e o sólido resultante removido por filtração. O sólido foi lavado com ciclo-hexano e o filtrado foi concentrado até cerca de 15 mL e deixado em repouso de um dia para o outro. O sólido que saiu da solução foi removido por filtração, lavado com ciclo-hexano e o filtrado evaporado para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo castanho pálido. Rendimento 0,56 g. RMN de ΤΗ (300 MHz, CDC13) : δ 4,12 (q, J = 7, 1 Hz, 2H) ; 3,41 (t, J = 6,8 Hz, 2H); 2,28-2,20 (m, 2H); 1,93-1,80 (m, 2H); 1,59-1,49 (m, 2H) ; 1,46-1,34 (m, 2H) ; 1,32-1,21 (m, 5H) ; 1,22-1,13 (m, 2H); 0,85 (s, 6H). 818 h) 9-Bromo-4,4-dimetilnonan-l-ol
Uma solução de 9-bromo-4,4-metilnonanoato de etilo (exemplo 285, passo g) (0,56 g) em éter seco (19 mL) sob azoto a 0 °C foi tratada com hidreto de diisobutil-alumínio (1 M em tolueno, 4,20 mL) e a mistura reaccional foi agitada a 0 °C durante 1 hora 15 minutos. A mistura reaccional foi tratada cuidadosamente com solução aquosa de tartarato de potássio e sódio e agitada durante 1 hora. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraida com éter (x 2), em seguida a fase orgânica combinada foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada para proporcionar o composto em subepígrafe como um óleo incolor. Rendimento 0,42 g. RMN de ΤΗ (400 MHz, CDC13): δ 3,62 (t, J = 6,7 Hz, 2H) ; 3,41 (t, J = 6,9 Hz, 2H); 1,91-1,82 (m; 2H); 1,55-1,45 (m, 2H); 1,46-1,35 (m, 2H); 1,30-1,15 (m, 6H); 0,85 (s, 6H) mais um permutável não observado. 819 i) (9-(9-Hidroxi-6,6-dimetilnonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona
Ditrifluoroacetato de (2-isopropil-tiazol-4-il)-(l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undec-4-il)-metanona (Exemplo 22, passo b) (0,40 g) foi aplicado a um cartucho SCX-2 humedecido com metanol, lavado com metanol, em seguida eluido utilizando amónia 2 N em metanol e evaporado para proporcionar a base livre (227 mg). Este material foi tratado com 9-bromo-4,4-dimetilnonan-l-ol (exemplo 285, passo h) (0,11 g) em acetonitrilo (8,8 m) seguido de trietilamina (0,20 mL). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 21 h, em seguida o solvente foi removido por evaporação. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 75% de acetato de etilo em ciclo-hexano com 5% de trietilamina, até 100% de acetato de etilo mais 5% de trietilamina para proporcionar o composto em subepígrafe como uma goma incolor. Rendimento 0,295 g. RMN de XH (400 MHz, D6-DMSO) : δ 8,00 (s, 1H) ; 4, 35-4,30 (m, 1H); 3, 76-3, 45 (m, 6H) ; 3,37-3,28 (m, 1H) ; 2,41,2,03 (m, 6H) ; 1,72-1,58 (m, 2H); 1,57-1,44 (m, 2H); 1,43-1,28 (m, 10H); 1,27-1,05 (m, 9H); 0,81 (s, 6H) mais um permutável não observado. 820 j) Formato de (R)-4-hidroxi-7-(l-hidroxi-2-(9-(4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)-4,4-dimetilnonilamino)etil)benzo[d]tiazol-2(3H)-ona
Uma solução de (9-(9-hidroxi-6,6-dimetilnonil)-l-oxa-4, 9-diazaespiro[5.5]undecan-4-il)(2-isopropiltiazol-4-il)metanona (exemplo 285, passo i) (0,255 g) em DCM (5,3 mL) a 0 °C sob azoto foi tratada com ácido trifluoroacético (0,04 mL) e agitada durante 5 minutos, em seguida foi adicionado periodinano de Dess-Martin (0,339 g). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, em seguida foi adicionada mais uma quantidade de periodinano de Dess-Martin (0,113 g) e a agitação continuou durante 30 minutos. A mistura reaccional foi tratada com solução saturada de tiossulfato de sódio e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (1:1), diluída com DCM e agitada durante 10 minutos. Foi adicionado acetato de etilo e as fases foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etilo (x 2) . Os orgânicos foram combinados, lavados com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, em seguida secos sobre sulfato de magnésio, em seguida foi adicionado ácido acético (0,046 mL) e a solução evaporado para proporcionar o aldeído (0,362 g) . Este foi suspenso em metanol seco (9 mL) e tratado com cloridrato de (.R)-7-(2-amino-l-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona (documento W02007027134, exemplo 1, passo d) (0,210 g) , peneiros moleculares de 3 Ã e ácido 821 acético (0,046 mL) e a mistura agitada durante 5 minutos. A mistura reaccional foi arrefecida até 0 °C e foi adicionado triacetoxiboro-hidreto de sódio (113 mg) e agitação continuou à temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura foi filtrada, em seguida concentrada sob vácuo. A purificação foi por cromatografia sobre sílica gel eluindo com 5, 6, 7, 8, 9, 10 e 12% de uma (solução de amónia aquosa em metanol a 10%) em DCM seguida de HPLC preparativa (Phenomenex Gemini®, Gradiente: 5-40% de acetonitrilo em ácido fórmico aquoso a 0,1%). As fracções contendo o produto foram combinadas e secas por congelação para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. Rendimento 0,024 g. m/z 688 (M+H)+ RMN de ΧΗ (400 MHz, D6-DMSO, 80 °C) : 8 8,26-8, 13 (m, 1H) ; 7,89 (s, 1H) ; 6,87 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 6,69 (d, J = 8,3 Hz, 1H) ; 4, 61 -4, 53 (m, 1H) ; 3,69-3,63 (m, 6H) ; 3,37 -3,24 (m, 1H) ; 2, 76- -2,66 (m, 2H) ; 2,59- -2,50 (m, 2H) ; 2,40- 2,31 (m, 2H ); 2,31- 2, 20 (m, 4H) ; 1, 72 -1,63 (m, 2H) ; 1,58- -1,47 (m, 2H) ; 1 ,44-1,29 (m, 10H) ; 1, 29-1, 09 (m, 8H) ; 0, 80 (s, 6H) mais quatro permutáveis nao observados.
Os compostos da invenção podem ser testados quanto à actividade farmacológica utilizando ensaios conhecidos na técnica, tal como por exemplo: 822
Ensaio para a produção de cAMP mediada pelo adrenérqico β2
Preparação de células Células H292 são cultivadas em balões de 225 cm2 numa incubadora a 37 °C, 5% de CO2 em meio RPMI contendo 10% (v/v) de FBS (soro fetal bovino) e 2 mM de L-glutamina. Método Experimental
As células H292 aderentes são removidas dos balões de cultura de tecido por tratamento com solução de descolamento de células Accutase™ durante 15 minutos. Os balões são incubados durante 15 minutos numa incubadora humidificada a 3 7 °C, 5% de CO2. As células desprendidas são ressuspensas em meio RPMI (contendo 10% (v/v) de FBS e 2 mM de L-glutamina) a 0,1 x 106 células por mL. São adicionadas 10000 células em 100 pL a cada poço de uma placa de 96 poços de cultura de tecido tratada e as células incubadas de um dia para o outro numa incubadora humidificada a 3 7 °C, 5% de CO2. O meio de cultura é removido e as células são lavadas duas vezes com 100 pL de tampão de ensaio e substituído por 50 pL de tampão de ensaio (solução HBSS contendo 10 mM de HEPES, pH 7,4 e 5 mM de glucose) . As células são repousadas à temperatura ambiente durante 20 minutos, após o que são adicionados 25 pL de rolipram (1,2 mM preparado em tampão de ensaio contendo 2,4% (v/v) de dimetilsulfóxido) . As células são incubadas com rolipram durante 10 minutos após o que são adicionados compostos de ensaio e as células são incubadas durante 60 minutos à temperatura ambiente. A concentração final de rolipram no ensaio é 300 pM e a concentração final de veículo é 1% (v/v) dimetilsulfóxido. A reacção é parada removendo os 823 sobrenadantes, lavando uma vez com 100 pL de tampão de ensaio e substituindo por 50 pL de tampão de lise. A monocamada de células é congelada a -80 °C durante 30 minutos (ou de um dia para o outro).
Detecção de cAMP com AlphaScreen™ A concentração de cAMP (adenosina monofosfato cíclico) no lisado de células é determinada utilizando a metodologia AlphaScreen™. A placa de células congelada é descongelada durante 20 minutos num agitador de placas, em seguida 10 pL do lisado de células é transferido para uma placa branca de 96 poços. A cada poço são adicionados 40 pL de esferas de detecção mistas AlphaScreen™ pré-incubadas com cAMP biotinilado e a placa incubada à temperatura ambiente durante 3 horas no escuro. O sinal de AlphaScreen™ é medido utilizando um espectrofotómetro EnVision (Perkin-Elmer Inc.) com os ajustes recomendados pelo fabricante, as concentrações de cAMP são determinadas por referência a uma curva de calibração determinada na mesma experiência utilizando concentrações de padrão de cAMP. São construídas curvas concentração-resposta para os agonistas e os dados são ajustados por uma equação logística de quatro parâmetros para determinar a pEC5o e a Actividade Intrínseca. A Actividade Intrínseca é expressa como uma fracção em relação à actividade máxima determinada para o formoterol em cada experiência 824
Ensaio de ligação ao receptor muscarínico 3 A afinidade (pIC5o) dos compostos que se ligam ao receptor M3 é determinada por ligação competitiva de [3H]N-metil-escopolamina (NMS) a membranas celulares de CH0-K1 (Ovário de Hamster Chinês) que expressam o receptor muscarínico de acetilcolina M3 humano (M3-ACh) num formato do ensaio de proximidade de cintilação (SPA)
Esferas SPA são pré-revestidas com membranas e em seguida incubadas a 2 mg de esferas por poço com diluições sucessivas dos compostos da invenção, [3H]NMS a 0,1 nM, a quarta parte de Kd (constante de dissociação determinada experimentalmente) e tampão de ensaio (20 mM de HEPES, pH 7,4 contendo 5 mM de MgCl3) . 0 ensaio é realizado num volume final de 200 pL, na presença de 1% (v/v) de dimetilsulfóxido (DMSO). A ligação total de [3H]NMS é determinada na ausência de composto competitivo e a ligação não específica de [3H]NMS é determinada na presença de atropina 1 μΜ. As placas são incubadas durante 16 horas à temperatura ambiente e em seguida lidas no Wallac Microbeta™ utilizando um protocolo de 3H normalizado. É determinado o pICso, definido como o logaritmo negativo da concentração molar de composto necessária para 50% de redução na ligação específica de [3H]-NMS.
Os compostos da invenção foram testados nos ensaios acima e obtidos os seguintes resultados: 825
Exemplo Na pEC50 B2 (actividade intrínseca) pIC50 M3 1 7,2 (0,8) 8,5 2 7,9 (0,8) 9,5 3 8,1 (1,0) 9 4 7,8 (0,9) 8,9 5 7,1 (0,9) 8,6 6 8,4 (0,9) 9,5 7 8,2 (0,8) 9,3 8 7,4 (1,0) 8,4 9 8,3 (0,9) 8, 7
Exemplo Número PEC50 β2 Actividade intrínseca β2 pICso m3 10 6,5 0,9 8,3 11 co co O CO 10 12 8 1 9 13 7, 4 0 co 10, 1 14 8,3 0,9 8,2 15 CO 0,9 03 00 16 7,8 0,9 8,1 17 7,3 0,5 7,3 18 7,2 1 8,6 19 8,5 0,9 CO co 20 6, 7 0,8 7,5 21 6, 7 0,5 9 22 8 0,9 9,9 23 7,8 0,9 9,6 24 8,3 1 7,6 25 7,8 O CO 9 26 7,9 0 co 9,2 27 CO 1 CO 03 826 (continuação)
Exemplo Número PEC50 β2 Actividade intrínseca β2 PIC50 M3 28 8 1 8,6 29 8,8 1 8,4 30 CO 0,9 7,8 31 8,3 0,9 7,2 32 8,5 1,1 7, 4 33 8,2 1 7,9 34 8,5 1 7, 7 35 7,9 1 7,6 36 8,2 1 9,3 37 8,5 0,9 8,5 38 7, 7 0,8 8,6 39 7 0,9 9,5 40 7,9 1,1 9,4 41 8,2 1,1 6,9 42 8,1 1 9,2 43 8,3 0,8 7, 4 44 CO 1 8,5 45 8 0,8 8,3 46 7, 1 1 8,2 47 7,8 0,9 9,3 48 8,3 0,9 9,1 49 8,1 0,9 7, 4 50 8,1 0,9 7, 4 51 8,5 0,9 7,8 52 8,3 0,9 8,1 53 8 1 7,9 54 8,2 0,9 6, 7 55 8,2 1 7,2 56 8,1 1 8,6 827 (continuação)
Exemplo Número PEC50 β2 Actividade intrínseca β2 PIC50 M3 57 8,2 1,1 9,1 58 8 0,9 8,2 59 7,8 1 8,1 60 8,3 1 8,4 61 7,2 0,9 8,3 62 6,6 0,9 6,6 63 8,3 1 <6 64 7,3 0,9 9, 7 65 7 0,9 9,2 66 7,8 0,9 9,1 67 7,8 0,9 8,5 68 8,2 0,8 7,6 69 7,8 0,9 7, 7 70 8,1 0,8 8,5 71 7, 7 0,8 8,3 72 8,1 0,8 8 73 8,1 0,9 8,1 74 7,9 0,9 7, 7 75 7,6 0,8 8, 7 76 7,5 0,9 8, 7 77 7, 1 1 8,6 78 7,8 0,9 8 79 8,2 0,9 6,9 80 8,2 0,8 8,3 81 8,1 0, 7 8,2 82 8,4 0,9 9, 4 83 7,9 0,8 9,3 84 8,3 0,9 9,1 85 8,1 0,8 7,3 828 (continuação)
Exemplo Número PEC50 β2 Actividade intrínseca β2 pICso m3 86 co O CO CO 87 8,5 0,9 9,3 88 7,9 1 8, 7 89 CO co 1 7,5 90 6, 7 0,9 7, 1 91 CO 0, 7 CO 92 6,1 0,9 6,9 93 CO O CO CO 94 5,9 0, 7 7,9 95 NV* NV* CO co 96 NV* NV* 9,6 97 <5,5 1,5 8,2 98 5, 7 0,4 CO 99 8,1 O CO co co 100 8,3 0,9 co co 101 co 1 9,5 102 6, 7 0,9 9 103 6,6 1 9 104 7, 1 0,9 8,5 105 CO O CO 9,9 106 7 0 co 6, 7 107 7, 4 0,9 8,2 108 6,9 0,9 8,4 109 8,1 0,9 9, 7 110 7,2 O CO 7, 7 111 7,5 0 co 9,1 112 6,9 0,9 6,3 113 7, 7 O CO 7, 7 114 7,2 0,9 6,5 829 (continuação)
Exemplo Número PEC50 β2 Actividade intrínseca β2 pICso m3 115 8,2 0,8 8,1 118 8,2 1 7, 7 124 8,4 0,9 7,9 130 7,9 1 7, 1 141 8,2 0,9 7,6 149 8,1 0,9 7,6 173 8,6 0,8 8,1 178 8,3 0,8 7,5 190 7,9 0,9 8, 7 198 7,9 O co 8,5 201 7,5 0,9 8,2 202 7, 7 0,9 8,1 209 7,6 0,9 8, 7 210 7,8 0,8 8,1 213 7,9 0,8 9,1 217 7, 4 0,9 9,2 218 7,6 0,9 9,4 219 7,3 0,8 9 220 7,6 0,8 9,2 221 7,5 0,9 CO co 259 6, 7 0,9 8,3 264 7, 7 1 8,1 265 7,9 1 9,1 266 8,1 0, 7 9,5 267 8 0,9 8,8 268 8 1 8,8 269 7,5 1,1 8,2 270 6,6 0, 7 7,1 830 (continuação)
Exemplo Número PEC50 β2 Actividade intrínseca β2 pICso m3 271 8,2 1 3 0% de inibição a 1 μΜ 272 8 1 6,1 273 6, 4 0,5 7,1 274 7,6 1,0 CO 275 7,3 1 co co 276 7,4 1 8, 7 277 7,5 0,9 10 278 8,4 1,0 9, 4 279 6,5 0,9 8,1 280 8,3 1,2 9,1 281 7,5 O co CO co 282 7,3 1 7, 7 283 7,1 1,1 co 284 7,9 0,9 8, 7 285 7,8 1 8,4 NV* = inactivo até uma concentração máxima de 3,2 μΜ do composto de ensaio. 0 procedimento experimental seguinte foi utilizado para medir a % de efeito em beta-2 a 1 μΜ para os compostos dos Exemplos 116-263. 831
Produção de cAMP mediada por adrenérqico β2
Preparaçao de células Células H292 são cultivadas em balões de 225cm2 numa incubadora a 37 °C, 5% de C02 em meio RPMI contendo 10% (v/v) de FBS (soro fetal bovino) e 2 mM de L-glutamina. Método Experimental
Os compostos foram preparados por uma primeira diluição inicial em DMSO para dar uma concentração-mãe de 1 mM. Esta foi seguida de uma diluição a 1 para 10 da concentração-mãe (10 pL do composto na solução-mãe + 90 pL de DMSO) para dar composto a 0,1 MM. Uma placa de adição de composto foi preparada fazendo mais uma diluição a 1 para 25 em tampão de ensaio (solução HBSS contendo 10 mM de HEPES, pH 7,4 e 5 mM de glucose) contendo 4% de dimetilsulfóxido. A concentração final do composto no ensaio é 1 pM.
As células H292 aderentes são removidas dos balões de cultura de tecido por tratamento com solução de descolamento de células Accutase™ durante 15 minutos. Os balões são incubados durante 15 minutos numa incubadora humidificada a 3 7 °C, 5% de C02. As células desprendidas são ressuspensas em meio RPMI (contendo 10% (v/v) de FBS e 2 mM de L-glutamina) a 0,1 x 106 células por mL. São adicionadas 10000 células em 100 pL a cada poço de um placa de 96 poços de cultura de tecido tratada e as células incubadas de um dia para o outro numa incubadora humidificada a 3 7 °C, 5% de C02. O meio de cultura é removido e as células são lavada duas vezes com 100 pL de tampão de ensaio 832 e substituído por 50 pL de tampão de ensaio (solução HBSS contendo 10 mM de HEPES, pH 7,4 e 5 mM de glucose) . As células são repousadas à temperatura ambiente durante 20 minutos após o que são adicionados 25 pL de rolipram (1,2 mM preparado em tampão de ensaio). As células são incubadas com rolipram durante 10 minutos após o que são adicionados 25 pL de compostos de ensaio e as células são incubadas durante 60 minutos à temperatura ambiente. A concentração final de rolipram no ensaio é 300 pM e a concentração final de veículo é 1% (v/v) de dimetilsulfóxido. A reacção é parada removendo os sobrenadantes, lavando uma vez com 100 pL de tampão de ensaio e substituindo por 50 pL de tampão de lise. A monocamada de células é congelada a -80 °C durante 30 minutos (ou de um dia para o outro).
Detecção de cAMP com AlphaScreen™ A concentração de cAMP (adenosina monofosfato cíclico) no lisado de células é determinada utilizando a metodologia AlphaScreen™. A placa de células congelada é descongelada durante 20 minutos num agitador de placas, em seguida 10 pL do lisado de células são transferidos para um placa branca de 96 poços. A cada poço são adicionados 40 pL de esferas de detecção mistas AlphaScreen™ (contendo volumes iguais de esferas doadoras (pré-incubadas com cAMP biotinilado no escuro durante 30 minutos) e esferas aceitadoras e a placa incubada à temperatura ambiente durante 3 horas no escuro. O sinal de AlphaScreen™ é medido utilizando um espectrofotómetro EnVision (Perkin-Elmer Inc.) com os ajustes recomendados pelo fabricante. A concentração de cAMP produzida por poço foi calculada por referência à curva de calibração de cAMP determinada na mesma 833 experiência e expressa como uma percentagem da resposta máxima gerada por formoterol 1E-07M. 0 procedimento experimental seguinte foi utilizado para determinar a % de inibição de M3 a 1 μΜ dos compostos dos Exemplos 116-263.
Ensaio de ligação ao receptor muscarínico 3 A actividade (% de inibição da ligação especifica) dos compostos no receptor M3 é determinada por ligação competitiva de [3H]N-metil-escopolamina (NMS) a membranas celulares de CH0-K1 (Ovário de Hamster Chinês) que expressam o receptor muscarínico de acetilcolina M3 humano (M3-ACh) num ensaio de formato de proximidade de cintilação (SPA).
As esferas SPA sao pré-revestidas com membranas e em seguida incubadas a 2 mg de esferas por poço com 1 μΜ de composto da invenção, [3H]NMS a 0,1 nM, a quarta parte de Kd (constante de dissociação determinada experimentalmente) e tampão de ensaio (20 mM de HEPES, pH 7,4 contendo 5 mM de MgCl2> . O ensaio é realizado num volume final de 200 pL, na presença de 1% (v/v) de dimetilsulfóxido (DMSO). A ligação total de [3H]NMS é determinada na ausência de composto competitivo e a ligação não específica de [3H]NMS é determinada na presença de atropina 1 μΜ. As placas são incubadas durante 16 horas à temperatura ambiente e em seguida lidas num Wallac Microbeta™ utilizando um protocolo de 3H normalizado. É determinada a actividade do composto a 1 μΜ, definida como a % de inibição da ligação específica de [3H]-NMS. 834 (continuação)
Exemplo N2 M3 (% inibição a 1 μΜ) β2 (% efeito a 1 μΜ) 116 3 111 117 22 101 118 95 101 119 60 100 120 82 101 121 28 85 122 86 82 123 62 97 124 97 100 125 52 97 126 50 98 127 78 97 128 14 112 129 20 90 130 90 109 131 41 95 132 85 92 133 56 110 134 4 116 135 1 106 136 26 111 137 13 112 138 27 92 139 34 101 140 76 109 141 91 105 142 -3 100 143 2 108 144 35 101 145 7 53 146 41 96 835 (continuação)
Exemplo N2 M3 (% inibição a 1 μΜ) β2 (% efeito a 1 μΜ) 147 66 102 148 4 104 149 92 113 150 91 100 151 71 98 152 13 110 153 67 98 154 28 102 155 4 101 156 3 106 157 13 102 158 72 95 159 3 90 160 5 91 161 42 87 162 8 91 163 25 95 164 35 99 165 11 89 16 6 69 95 167 8 100 168 29 95 169 -2 92 170 42 102 171 11 86 172 19 98 173 99 93 174 41 89 175 3 94 176 16 87 177 1 78 836 (continuação)
Exemplo N2 M3 (% inibição a 1 μΜ) β2 (% efeito a 1 μΜ) 178 89 94 179 6 6 95 180 51 92 181 10 86 182 16 88 183 97 91 184 96 89 185 95 81 186 95 86 187 84 92 188 96 93 189 96 93 190 99 77 191 94 82 192 96 88 193 99 91 194 85 92 195 88 86 196 95 89 197 97 78 198 99 82 199 91 91 200 70 92 201 98 105 202 99 98 203 94 99 204 97 101 205 91 85 206 95 95 207 94 101 208 88 98 837 (continuação)
Exemplo N2 M3 (% inibição a 1 μΜ) β2 (% efeito a 1 μΜ) 209 99 84 210 95 92 211 68 91 212 88 93 213 99 87 214 91 82 215 94 89 216 90 88 217 100 103 218 100 95 219 99 92 220 100 109 221 99 93 222 91 87 223 56 87 224 70 89 225 60 74 226 53 76 227 48 80 228 22 67 229 67 83 230 31 70 231 91 53 232 56 83 233 51 82 234 80 78 235 29 97 236 30 73 237 46 62 238 57 73 239 90 76 838 (continuação)
Exemplo N2 M3 (% inibição a 1 μΜ) β2 (% efeito a 1 μΜ) 240 34 92 241 11 85 242 83 43 243 78 84 244 48 60 245 51 76 246 38 72 247 60 75 248 44 70 249 31 76 250 91 77 251 51 68 252 10 88 253 35 73 254 92 71 255 32 66 256 38 76 257 36 56 258 96 55 259 99 68 260 93 56 261 90 70 262 82 69 263 37 74
Descrição das Figuras
Figura 1: padrão de difracção de raios X do padrão de di-sal de ácido (IS) -( + )-10-canforsulfónico da modificação A Exemplo 47B. 839
Figura 2: padrao de difracçao de raios X do sal de fumarato da modificação A - Exemplo 47C.
Figura 3: da modificação
padrao de difracçao de raios X do sal de fumarato B - Exemplo 47D
Lisboa, 28 de Novembro de 2012 840

Claims (19)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I
    em que Ar representa um grupo de ligaçao ao receptor adrenérgico β; L representa uma unidade de ligação compreendendo um cadeia hidrocarbilo linear ou ramificada de até 15 átomos de carbono; em que até três dos átomos de carbono na cadeia estão opcionalmente substituídos com até quatro substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, S(O)0-2R56í nr57r58, s (0) 2nr59r60, c(0)nr61r62, c(0)or63, nr64s (0) 2r65, NR66C(0)R67, NRS8C (0) OR69, NR70C(O)NR71R72, OR73, alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6r e em que alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci-6; em que até cinco átomos de carbono da cadeia podem estar substituídos com grupos independentemente seleccionados de 0, NR45, S, S(0), S(0)2, C(0)0, 0C(0), NR46C(0), C(0)NR47, 1 nr48s(0)2, S(0)2nr49, NR50C(O)NR51, NR52S(0)2NR53, 0C(0)NR54, NR55C(0)0, com a condição de que quaisquer desses grupos na cadeia estão separados por pelo menos 2 átomos de carbono; e em que até seis átomos de carbono da cadeia podem fazer parte de um anel alifático, heteroalifático, aromático ou heteroaromático mono- ou biciclico possuindo até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, compreendendo o referido anel até 10 átomos endociclicos, e em que o anel está opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, S(0)q-2R56, NR57R58, S (0) 2NR59R60, C(0)NR61R62, C (0) OR63, NR64S (0) 2R65, NR66C(0)R67, NR68C (0) OR69, NR70C(O)NR71R72, OR73, alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6, e em que alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci-6,* e a cadeia pode compreender até três desses anéis, cada, independentemente seleccionado; em que R56, R65 e R69 representam, cada, independentemente alquilo Ci—g ou cicloalquilo C3-6 em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6; e R45, R46, •p47 p48 p 49 p50 p51 Γλ. f í\ f í\ f í\ f í\ f R52, R53, R54, R55, R57, R58, R59, R60, R61, ^62 -^63 R67, R68, R70, R71, R72 e R73 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3_6, em que o alquilo Ci-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com 2 até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6; ou qualquer de R57 e R58, R59 e R60, R61 e R62 ou R71 e R72, em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros, em que o anel heterocíclico pode compreender até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 e S, em que o anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6, em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci-ε; e em que a cadeia pode compreender adicionalmente até três ligações duplas carbono-carbono; em que a cadeia pode compreender adicionalmente até três ligações triplas carbono-carbono; L1 e L2 representam independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6; L3 e L4 representam independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6 em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3_6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci_6; além disso L1 e/ou L3 podem estar ligados aos átomos de carbono da cadeia hidrocarbilo na unidade de ligação L para formar anéis alifáticos de até 6 átomos endocíclicos, em que cada anel pode compreender até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 e S; 3 R1 representa um anel de fenilo, um anel heteroalifático de 4 a 8 membros, um anel alifático de 3 a 8 membros ou um anel heteroarilo de 5 a 6 membros possuindo, cada, até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(0)o-2R5, NR6R7, S(0)2NRsR9, C (0) NR10R11, C (0) OR12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (0) OR18, NR19C (0) NR20R21, OR22, alquilo Ci_7 ou cicloalquilo C3-8 (em que cada de alquilo Ci_7 e cicloalquilo C3-8 pode estar opcionalmente substituído com até seis substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(0)o-2R5, NR6R7, S(0)2NR8R9, C(O)NR10R11, C(0)0R12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (0) OR18, NR19C (0) NR20R21, OR22), um anel de fenilo, um anel heteroalifático de 4 a 8 membros, um anel heteroarilo de 5 a 6 membros, possuindo, cada, até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel de fenilo, anel heteroalifático de 4 a 8 membros, anel alifático de 3 a 8 membros ou anel heteroarilo de 5 a 6 membros pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S (¢))0-2^% S(0)2NR8R9, C(O)NR10Ru, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6 em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6, ciano, nitro, NH2, NH (alquilo Ci_6> e N(alquilo Ci_6)2; ou R1 representa um anel alifático fundido, heteroalifático fundido, aromático fundido ou heteroarilo fundido de até 10 átomos e possuindo até quatro heteroátomos independentemente 4 seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, NR6R7, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (0) OR18, NR19C (0) NR20R21, OR22, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3-6 em que o alquilo C1-6 e o cicloalquilo C3-6 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo C1-6, NH2, NH(alquilo Ci-ε) e N (alquilo Ci-6)2; ou R1 representa ainda uma cadeia alquilo C1-6 em que um ou dois dos átomos de carbono podem estar substituídos por 0, S ou N e em que R1 pode estar substituído com até três cadeias alquilo C i-3 e duas dessas cadeias podem ser ligadas para formar um cadeia cicloalquilo C3-8 em que o alquilo C1-3 e as cadeias cicloalquilo C3-8 podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5f NR6R7, S(0)2NR8R9, C(O)NR10R11, C(0)0R12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (0) OR18, NR19C (0) NR20R21, OR22, e em que a cadeia alquilo Ci_6 está ainda opcionalmente substituída com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(O)0-2R5, NR6R7, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C(0)0R18, NR19C (O)NR20R21, OR22, um anel de fenilo, um anel heteroalifático de 4 a 8 membros, um anel alifático de 3 a 8 membros, um anel heteroarilo de 5 a 6 membros possuindo, cada, até quatro heteroátomos 5 independentemente seleccionados de N, 0 ou S, e em que cada anel está opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, S(O)0-2R5, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci_7 ou cicloalquilo C3-7 (em que cada de alquilo Ci_7 e cicloalquilo C3-7 pode estar opcionalmente substituído com até seis substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(0)o-2R5,· NR6R7, S(0)2NR8R9, C (0) NR10R11, C (0) OR12, NR13S (0) 2R14, NR15C(0)R16, NR17C (0) OR18, NR19C (0) NR20R21, OR22), um anel de fenilo, um anel heteroalifático de 4 a 8 membros, um anel alifático de 3 a 8 membros, um anel heteroarilo de 5 a 6 membros possuindo, cada, até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, 0 ou S, em que cada anel de fenilo, anel heteroalif ático de 4 a 8 membros, anel alifático de 3 a 8 membros ou anel heteroarilo de 5 a 6 membros pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, S(0)o-2R5, S(0)2NR8R9, C(O)NR10Rn, C(0)0R12, OR22, alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3-6»· em que alquilo Ci_6 e cicloalquilo C3-6 podem estar, cada, opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6, NH2, NH (alquilo Ci_6> e N (alquilo Ci_6)2; ou a cadeia alquilo Ci_6 pode estar substituída com um anel alifático fundido, heteroalifático fundido, aromático fundido ou heteroarilo fundido de até 10 átomos e possuindo até quatro heteroátomos independentemente seleccionados de N, O ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, ciano, nitro, SH, S(0)o-2R5, 6 nr6r7 S(0)2NR8R9, C(O)NR10Ru, C(0)0R12 NR13S(0)2R14, NR15C(0)R16, NR17C(0)0R18, NR19C(O)NR20R21, OR22, alquilo Ch-g ou cicloalquilo C3-g em que o alquilo Ci_6 e o cicloalquilo C3-g podem estar opcionalmente substituídos com até três substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci_6, NH2, NH (alquilo Ci_g) e N (alquilo Ci_6)2; R5, R14 e R18 representam independentemente alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3-g, em que o alquilo Ci-6 e o cicloalquilo C3_g podem estar opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ci-6, NH2, NH (alquilo Ci-6) e N (alquilo Ci-6)2; e R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R15, R16, R17, R19, R20, R21 e R 22 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3-g, em que o alquilo Ci-6 ou cicloalquilo C3-6 pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alcoxilo Ch-g, NH2, NH (alquilo Ci_g) e N(alquilo Ci_6)2; ou qualquer de R6 e R7, R8 e R9, R10 e R11, ou R20 e R21 em conjunto com o átomo de azoto ao qual estão ambos ligados, podem formar um anel heterocíclico alifático de 4 a 8 membros, em que o anel heterocíclico pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo, alquilo Ci_6, cicloalquilo Ci_6 e alcoxilo Ci_6, em que o alquilo Ci_6, cicloalquilo Ci_6 ou alcoxilo Ci_6 pode estar opcionalmente substituído com um ou mais substituintes independentemente seleccionados de halogéneo, hidroxilo e alcoxilo Ci-6, NH2, NH (alquilo Ci-δ) e N (alquilo Ci-6)2; 7 X representa 0, S, S(0)o ou CR25R26; m = 0, 1, 2 ou 3; n = 1, 2, 3 ou 4; com a condição de que m + n é maior ou igual a 2 o= 1, 2; W representa CR27R28CR29R30 ou CR31R32CR33R34CR35R36; V e Z representam independentemente uma ligação, CR R ou CR39R40CR41R4z, com a condição de que quando X representa 0, S, ou S(0)o então m, V e Z são de tal forma que todos os heteroátomos nos anéis estão separados por pelo menos dois átomos de carbono (e. g., quando V é uma ligação então m não é 0, Z não é uma ligação); Y representa CO, CONR43, S02 ou S02NR44; R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32, R33, R34, R35, R36, R37, R38 R39, R40, R41, R42 representam, cada, independentemente hidrogénio, flúor ou alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6; e quando não representam hidrogénio ou flúor R25 e R26, R^' e ,28 t, 29 ,30 ,31 ,32 ,-,33 ,34 ,35 ,36 ,31 C3-6; e , R27 e !, R39 e R40 ou R41 e R42 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados, podem formar adicionalmente um anel alifático de 3 a 6 membros; R43 e R44 representam, cada, independentemente hidrogénio, alquilo Ci_6 ou cicloalquilo C3_6 e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
  2. 2. Composto de fórmula I ou um seu sal f armaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 e em que Ar é seleccionado de qualquer um
    em que M1 é S, C(0), NH, CH2, CH2CH2, CH=CH, CH20 ou OCH2; M2 é S, C(0), NH, CH2, CH2CH2, CH=CH, CH20 ou OCH2; A3 também pode ser CH2OH, NHCHO, NHS (0) 2NA15A16 ou NHS02A17; A15 ou A16 são, independentemente, hidrogénio ou alquilo Ci_6; A17 é alquilo Ci_6;
  3. 3. Composto de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 e em que L representa 9 uma unidade de ligação compreendendo uma cadeia hidrocarbilo de até 10 átomos de carbono.
  4. 4. Composto de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 e em que W representa CR27R28CR29R30 ou CR31R32CR33R34CR35R36, V e Z representam independentemente uma ligação, CR R ou CR39R4°CR41R42, com a condição de que quando X representa O, S, ou S(0)o então m, V e Z são de tal forma que todos os heteroátomos nos anéis estão separados por pelo menos dois átomos de carbono; m = 0, 1, 2ou3eo=lou2;e p 2 7 n28 -p 2 9 -p30 -p31 p32 p33 r\ f I\ ψ Γ\ f Γ\ f Γ\ ψ £\ ψ £\ R41 e R42 representam, cada, metilo ou flúor. R34, R35, R36, R37, R38 R39 R40, independentemente hidrogénio,
  5. 5. Composto de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 e em que Y representa CO, CONR43, S02 ou S02NR44; e R43 e R44 representam, cada, independentemente hidrogénio ou metilo.
  6. 6. Composto de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 e em que R1 representa alquilo Ci_6, cicloalquilo C3-8, fenilo, um anel heteroarilo de 5 a 6 membros ou um aromático fundido ou anel heteroarilo de até 10 átomos possuindo até três heteroátomos independentemente seleccionados de N, O ou S, em que cada anel pode estar opcionalmente substituído com 10 até três substituintes como especificados para R1 na reivindicação 1.
  7. 7. Composto de fórmula I ou um seu sal f armaceut icamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 que é 7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino) -1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona.
  8. 8. Composto de fórmula I ou um seu sal f armaceut icamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 que é ditrifluoroacetato de (R)-7-(2-(2-Fluoro-5-((4-(2- isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4, 9- diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona.
  9. 9. Di-sal do ácido (IS)-(+)-10-canforsulfónico de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carboni1)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona.
  10. 10. Composto de fórmula I ou um seu sal f armaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1, que é o fumarato de (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-l-oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9- il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona.
  11. 11. Composto de fórmula I ou um seu sal f armaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1 que é (R)-7-(2-(2-fluoro-5-((4-(2-isopropiltiazole-4-carbonil)-1- 11 oxa-4,9-diazaespiro[5.5]undecan-9-il)metil)fenetilamino)-1-hidroxietil)-4-hidroxibenzo[d]tiazol-2(3H)-ona.
  12. 12. Processo para a preparação de um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como reivindicado na reivindicação 1, o qual compreende: (a) quando L1 representa hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (II), ou um seu sal,
    em que LG1 representa um grupo de saída e L, L2, L3, L4, R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), com um composto de fórmula (III), ou um seu sal,
    nh2 Ar (III) em que Ar é como definido na fórmula (I) e P1 é hidrogénio ou um grupo de protecção na presença de uma base, seguida de remoção do grupo de protecção; ou (b) quando L1 representa hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (IV), ou um seu sal, 12 (IV)
    em que L, L , L , L , R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), com um composto de fórmula (III) ou um seu sal na presença de um agente de redução; ou (c) fazer reagir um composto de fórmula (V), ou um seu sal,
    em que L, L1, L2, L3, L4, R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), P3 representa hidrogénio ou um grupo de activação com um composto de fórmula (VI), ou um seu sal, LG2
    (VI) em que Ar é como definido na fórmula (I), LG2 representa um grupo de salda e P1 é como definido na 13 fórmula (III) na presença de uma base, seguida de remoção dos grupos de protecção; ou ou um seu sal com um composto de fórmula (VII), adeguado,
    ΑΓ (VII) em gue Ar é como definido na fórmula (I) na presença de uma base, seguida de remoção dos grupos de protecção; ou com um composto de fórmula (VIII), ou um seu sal adequado, 2 LG 0. ™ (VIII) em que Ar é como definido na fórmula (I), LG2 representa um grupo de saída, na presença de uma base, seguida de redução da cetona, seguida de remoção dos grupos de protecção; ou (d) quando L3 e L4 representa, cada, hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (IX), ou um seu sal adequado, 14 (IX) 2 Ρ
    Ar em que Ar, L, L1 e L2 são como definidos na fórmula (I), P1 é como definido na fórmula (III), p3 representa um grupo de protecção com um composto de fórmula (X), ou um seu sal, Η—N
    em que R1, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I), na presença de um agente de redução, seguida de remoção dos grupos de protecção; ou (e) quando um ou ambos de L3 e L4 representam hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (XI), ou um seu sal,
    Ar 15 (XI) são como definidos na em que Ar, L, L1 e L2 fórmula (I), P1 é como definido na fórmula (III), P3 representa um grupo de protecção, LG3 representa um grupo de saida, com um composto de fórmula (X) ou um seu sal, na presença de uma base, seguida de remoção dos grupos de protecção; ou (f) quando L1 e L2 representam, cada, hidrogénio, fazer reagir um composto de fórmula (XII), ou um seu sal,
    em que Ar, L, L3, L4, m, η, V, W, X, Y e Z são como definidos na fórmula (I) e P1 é como definido na fórmula (III) e P4 é um grupo de protecção de azoto, com um agente de redução, seguida de remoção do grupo de protecção e reacção com um composto de fórmula (XIII), ou um seu sal, LG—Y V κ (XIII) em que R1 e Y são como definidos na fórmula (I) e LG4 representam hidroxilo ou um grupo de saida, ou um seu sal, seguida de remoção dos grupos de protecção e; 16 opcionalmente após (a), (b), (c), (d), (e) ou (f) realizar uma ou mais das seguintes: converter o composto obtido noutro composto da invenção preparar um sal farmaceuticamente aceitável do composto.
  13. 13. Composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável como definido em qualquer uma das reivindicações 1-11, em associação com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
  14. 14. Processo para a preparação de uma composição farmacêutica como reivindicado na reivindicação 13, o qual compreende misturar um composto de fórmula (I), como definido em qualquer uma das reivindicações 1-11, com um adjuvante, diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.
  15. 15. Composto de fórmula (I) ou um seu sal f armaceuticamente aceitável como definido em qualquer uma das reivindicações 1-11 para ser utilizado em terapia.
  16. 16. Utilização de um composto de fórmula (I) como definido em qualquer uma das reivindicações 1-11 no fabrico de um medicamento para ser utilizado no tratamento de uma doença ou estado respiratório. 17
  17. 17. Utilização de um composto de fórmula (I) como definido em qualquer uma das reivindicações 1-11 no fabrico de um medicamento para ser utilizado no tratamento de COPD.
  18. 18. Produto farmacêutico compreendendo, em associação, um primeiro inqrediente activo que é um composto de fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável como definido em qualquer uma das reivindicações 1-10, e um segundo inqrediente activo que é utilizado para o tratamento de uma doença inflamatória.
  19. 19. Produto farmacêutico como definido na reivindicação 18 e em que o segundo ingrediente activo é seleccionado de; um inibidor de PDE4; um modulador da função do receptor de quimiocina; um inibidor da função da p38-cinase; um glucocorticóide; e um antagonista do receptor de glucocorticóides não esteróide. Lisboa, 28 de Novembro de 2012 18
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