PT2242750E - Derivados de bifenilo conformacionalmente restritos para utilização como inibidores do vírus da hepatite - Google Patents

Description

1

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE BIFENILO CONFORMACIONALMENTE RESTRITOS PARA UTILIZAÇÃO COMO INIBIDORES DO VÍRUS DA HEPATITE C"

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS DA PATENTE RELACIONADOS

Este pedido reivindica o beneficio do pedido provisório US N° de série 61/028.266 depositado em 13 de Fevereiro de 2008. A presente descrição é geralmente direccionada a compostos antivirais, e mais especificamente direccionada a compostos que podem inibir a função da proteina NS5A codificada por vírus da Hepatite C (VHC), composições que compreendem tais compostos, e métodos para inibir a função da proteína NS5A. O VHC é um principal agente patogénico humano, que se estima que infecte umas 170 milhões de pessoas no mundo -aproximadamente cinco vezes o número infectado pelo vírus da imunodeficiência humana tipo 1. Uma fracção substancial destes indivíduos infectados pelo VHC desenvolve uma doença hepática progressiva grave, que inclui cirrose e carcinoma hepatocelular.

Actualmente, a terapêutica do VHC mais eficaz utiliza uma combinação de alfa-interferão e ribavirina, que leva a eficácia sustentada em 40 % dos pacientes. Resultados clínicos recentes demonstram que alfa-interferão peguilado é superior em relação a alfa-interferão não modificado como monoterapêutica. No entanto, mesmo com regimes terapêuticos experimentais que envolvem combinações de alfa-interferão peguilado e ribavirina, uma fracção substancial dos pacientes não têm uma redução sustentada da carga virai. Assim, existe uma clara e a muito sentida necessidade de desenvolver terapêuticas eficazes para o tratamento da infecção pelo VHC. O VHC é um vírus de ARN de cadeia positiva. Com base 2 numa comparação da sequência de aminoácidos deduzida e a similaridade extensiva na região não traduzida 5' , o VHC foi classificado como um género separado na familia Flaviviridae. Todos os membros da familia Flaviviridae têm viriões envelopados que contêm um genoma de ARN de cadeia positiva que codifica todas as proteínas específicas do vírus conhecidas via tradução de uma única grelha de leitura aberta não interrompida.

Encontra-se uma heterogeneidade considerável dentro do nucleótido e sequência de aminoácidos codificada ao longo do genoma do VHC. Pelo menos seis genótipos major foram caracterizados, e mais de 50 subtipos foram descritos. Os genótipos major do VHC diferem na sua distribuição no mundo, e o significado clínico da heterogeneidade genética do VHC permanece elusiva apesar dos numerosos estudos do possível efeito de genótipos sobre a patogénese e terapêutica. 0 genoma de ARN do VHC de cadeia simples tem aproximadamente 9500 nucleótidos de comprimento e tem uma única grelha de leitura aberta (ORF) que codifica uma única poliproteína grande de aproximadamente 3000 aminoácidos. Em células infectadas, esta poliproteína é clivada em locais múltiplos pelas proteases celular e virai para produzir as proteínas estrutural e não estrutural (NS). No caso de VHC, a geração de proteínas não estruturais maturas (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, e NS5B) é efectuada por duas proteases virais. Acredita-se que a primeira seja uma metaloprotease e cliva na junção NS2-NS3; a segunda é uma protease de serina contida dentro da região do terminal N da NS3 (a seguir no presente documento denominada como protease da NS3) e atua como mediadora de todas as clivagens a jusante subsequentes da NS3, tanto em cis, no local de clivagem de NS3-NS4A, e em trans, para os locais NS4A- NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B restantes. A proteína NS4A parece servir funções múltiplas, que agem como um cofactor para a protease da NS3 3 e possivelmente assistindo na localização membrana da NS3 e outros componentes de replicase virai. A formação de complexo da proteína NS3 com NS4A parece necessária para os eventos de processamento, o que aumenta a eficácia proteolítica em todos os locais. A proteína NS3 também exibe actividades de nucleósido trifosfatase e ARN helicase. NS5B (também denominado no presente documento como polimerase de VHC) é uma ARN polimerase dependente de ARN que está envolvida na replicação de VHC. São necessários compostos úteis para tratar pacientes infectados com o VHC que inibam selectivamente a replicação virai do VHC. Em particular, os compostos que são eficazes para inibir a função da proteína NS5A são desejados. A proteína NS5A de VHC é descrita, por exemplo, em Tan, S.-L., Katzel, M.G. Virology 2001, 284, 1-12; e em Park, K.-J.; Choi, S.-H, J. Biological Chemistry 2003. O documento WO 2007/031791 revela derivados de bifenilo úteis no tratamento de hepatite C.

Num primeiro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de Fórmula (I)

d), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que u e u' são independentemente 0, 1, 2, ou 3; D e E são, cada um, anéis aromáticos de cinco membros contendo um, dois, ou três heteroátomos independentemente seleccionados a partir de azoto, oxigénio, e enxofre; cada R1 e R1' é independentemente seleccionado a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, arilalcoxicarbonilo, carboxi, formilo, halo, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, -NRaRb, (NRaRb) alquilo, e 4 (NRaRb) carbonilo; R2 e R2', juntamente com os átomos de carbono aos quais são unidos, formam um anel insaturado de cinco a oito membros opcionalmente contendo um ou dois heteroátomos independentemente seleccionados a partir de azoto, oxigénio, e enxofre; em que o anel insaturado de cinco a oito membros é opcionalmente substituído com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilsulfonilo, carboxi, formilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, -NRaRb, (NRaRb) alquilo, (NRaRb) carbonilo, oxo, e espirociclo; R3 e R3' são, cada um, independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilalquilo, alquilo, arilalcoxicarbonilo, carboxi, haloalquilo, heterociclilalquilo, hidroxialquilo, (NRaRb) carbonilo, e trialquilsililalcoxialquilo ; R4 e R4' são, cada um, independentemente seleccionados a partir de

r8 (R5)s R^i/S9 i R7 ’e ’ em que cada m é independentemente 0, 1, ou 2; cada o é independentemente 1, 2, ou 3; cada s é independentemente 0, 1, 2, 3, ou 4; cada X é independentemente seleccionado a partir de O, S, S (O) , S02, CH2, CHR5, e C(R5)2; com a condição de que quando n for 0, X é seleccionado a partir de CH2, CHR5, e C(R5)2; cada R5 é independentemente seleccionado a partir de alcoxi, alquilo, arilo, halo, haloalquilo, hidroxi, e -NRaRb, em que o alquilo pode formar opcionalmente um anel 5 fusionado de três a seis membros com um átomo de carbono adjacente, em que o anel de três a seis membros é opcionalmente substituído com um ou dois grupos alquilo; cada R6 é independentemente seleccionado a partir de hidrogénio e R10-C(O)-, e R10-C(S)-; R7 é seleccionado a partir de hidrogénio e alquilo; R8 e R9 são, cada um, independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcenilo, alcoxialquilo, alquilo, haloalquilo, e (NRaRb) alquilo; ou, R8 e R9, juntamente com o átomo de carbono ao qual são unidos, formam um anel saturado de cinco ou seis membros opcionalmente contendo um ou dois heteroátomos seleccionados a partir de NRZ, 0, e S; em que Rz é seleccionado a partir de hidrogénio e alquilo; e cada R10 é independentemente seleccionado a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilalquilo, alquilo, alquilcarbonilalquilo, arilo, arilalcenilo, arilalcoxi, arilalquilo, ariloxialquilo, cicloalquilo, (cicloalquil)alcenilo, (cicloalquil)alquilo, cicloalquiloxialquilo, haloalquilo, heterociclilo, heterociclilalcenilo, heterociclilalcoxi, heterociclilalquilo, heterocicliloxi- alquilo, hidroxialquilo, -NRcRd, (NRcRd) alcenilo, (NRcRd) alquilo, e (NRcRd) carbonilo.

Numa primeira forma de realização do primeiro aspecto a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R4 e R4' são, cada um,

Numa segunda forma de realização do primeiro aspecto cada m é 1. Numa terceira forma de realização do primeiro aspecto cada X é CH2.

Numa terceira forma de realização do primeiro aspecto 6 a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R4 e R4' são, cada um,

e em que s é 0.

Numa quarta forma de realização do primeiro aspecto a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R4 e R4' são, cada um,

e em que cada R6 é R10-C(O)-. Numa quinta forma de realização do primeiro aspecto cada R10 é independentemente seleccionado a partir de arilalquilo, (cicloalquil)alquilo, e (NRcRd) alquilo.

Numa sexta forma de realização do primeiro aspecto a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (I) , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que u e u' são, cada um, 0.

Numa sétima forma de realização do primeiro aspecto a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (I), ou um sal f armaceut icamente aceitável do mesmo, em que em que R3 e R3' são, cada um, hidrogénio.

Numa oitava forma de realização do primeiro aspecto a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 e R2', juntamente com os átomos aos quais são unidos, formam um anel de cinco membros opcionalmente contendo um átomo de oxigénio ou azoto, em que o dito anel é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilsulfonilo, arilo, 7 arilalquilo, arilsulfonilo, carboxi, formilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, -NRaRb, (NRaRb) alquilo, (NRaRb) carbonilo, e oxo.

Numa nona forma de realização do primeiro aspecto a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 e R2', juntamente com os átomos aos quais são unidos, formam um anel de sete membros contendo um heteroátomo seleccionado a partir de oxigénio e azoto, em que o dito anel é opcionalmente substituído com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilsulfonilo, carboxi, formilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, - NRaRb, (NRaRb) alquilo, (NRaRb) carbonilo, e oxo.

Num segundo aspecto a presente revelação proporciona um composto de Fórmula (II)

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que A está ausente ou CRnR12; G é seleccionado a partir de CR41R12, 0, e NR13; J está ausente ou CR41R12; R3 e R4 são, cada um, independentemente seleccionados a partir de hidrogénio e R10-C(O)-; cada R10 é independentemente seleccionado arilalquilo, (cicloalquil)alquilo, e (NRcRd) alquilo; cada R11 e R12 são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alquilo, e - NRaRb; ou R11 e R12 juntos formam um grupo oxo; ou R11 e R12, juntamente com o átomo de carbono ao qual são unidos, formam um espirociclo de três a oito membros; e cada R13 é independentemente seleccionado a partir de hidrogénio, alcoxialquilo, alquilo, e arilsulfonilo.

Num terceiro aspecto a presente revelação proporciona uma composição que compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Numa primeira forma de realização do terceiro aspecto a composição compreende ainda um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC. Numa segunda forma de realização do terceiro aspecto pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão ou uma ribavirina. Numa terceira forma de realização do terceiro aspecto o interferão é seleccionado a partir de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão consenso, interferão alfa 2A, e interferão tau linfoblastoide.

Numa quarta forma de realização do terceiro aspecto a presente revelação proporciona uma composição que compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um veiculo farmaceuticamente aceitável, e um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC, em que pelo menos um dos compostos adicionais é seleccionado a partir de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que potencializa o desenvolvimento de uma resposta de célula T auxiliar do tipo 1, ARN de interferência, ARN antissense, Imiqimod, ribavirina, um inibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenase, amantadina, e rimantadina.

Numa quinta forma de realização do terceiro aspecto a presente revelação proporciona uma composição que compreende um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um veiculo farmaceuticamente aceitável, e um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC, em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função 9 de um alvo seleccionado a partir de metaloprotease de VHC, serina protease de VHC, polimerase de VHC, helicase de VHC, proteína NS4B de VHC, entrada de VHC, montagem de VHC, egressão de VHC, proteína NS5A de VHC, e IMPDH para o tratamento de uma infecção por VHC.

Num quarto aspecto a presente revelação proporciona compostos para utilização no tratamento de uma infecção por VHC num paciente, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Numa primeira forma de realização do quarto aspecto os compostos para utilização no mesmo compreendem ainda administrar um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes de, após ou simultaneamente com o composto de Fórmula (I), ou o sal f armaceuticamente aceitável do mesmo. Numa segunda forma de realização do quarto aspecto pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão ou uma ribavirina. Numa terceira forma de realização do quarto aspecto o interferão é seleccionado a partir de interferão alfa 2B, interferão alfa peguilado, interferão consenso, interferão alfa 2A, e interferão tau linfoblastoide. IMPDH para o tratamento de uma infecção por VHC.

Numa quarta forma de realização do quarto aspecto a presente revelação proporciona compostos para utilização no tratamento de uma infecção por VHC num paciente, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal f armaceut icamente aceitável do mesmo e um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes de, após ou simultaneamente com o composto de Fórmula (I), ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que pelo menos um dos compostos adicionais é seleccionado a partir de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, um composto que potencializa o desenvolvimento de uma resposta 10 de célula T auxiliar do tipo 1, ARN de interferência, ARN antissense, Imiqimod, ribavirina, um inibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenase, amantadina, e rimantadina.

Numa quinta forma de realização do quarto aspecto a presente revelação proporciona compostos para utilização num método de tratamento de uma infecção por VHC num paciente, que compreende administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável de mesmo e um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes de, após ou simultaneamente com o composto de Fórmula (I) , ou um sal farmaceuticamente aceitável de mesmo, em que em que pelo menos um dos compostos adicionais é eficaz para inibir a função de um alvo seleccionado a partir de metaloprotease de VHC, serina protease de VHC, polimerase de VHC, helicase de VHC, VHC NS4B portein, entrada de VHC, montagem de VHC, egressão de VHC, proteína NS5A de VHC, e IMPDH para o tratamento de uma infecção por VHC.

Outras formas de realização da presente invenção podem compreender combinações adequadas de duas ou mais das formas de realização e/ou aspectos revelados no presente documento.

Ainda outras formas de realização e aspectos da invenção serão aparentes de acordo com a descrição proporcionada a seguir.

Os compostos da presente invenção também existem como tautómeros; portanto a presente invenção também abrange todas as formas tautoméricas. A descrição da presente invenção no presente documento deve ser interpretada em congruidade com as leis e princípios de ligação química. Em alguns casos pode ser necessário remover um átomo de hidrogénio com a finalidade de acomodar um substituinte em qualquer dada localização.

Deve ser entendido que os compostos abrangidos pela 11 presente invenção são aqueles que são adequadamente estáveis para utilização como agente farmacêutico.

Pretende-se que a definição de qualquer substituinte ou variável (por exemplo, R1, R2, R5, R6, etc.) numa localização particular numa molécula seja independente das suas definições em qualquer outra parte nessa molécula. Por exemplo, quando u é 2, cada um dos dois grupos R1 pode ser o mesmo ou diferentes.

Como é usado na presente memória descritiva, os seguintes termos têm os significados indicados:

Como é usado no presente documento, as formas singulares "um", "uma", e "a/o" incluem referência ao plural a não ser que o contexto claramente dite de outro modo. A não ser que indicado de outro modo, todos os grupos arilo, cicloalquilo, e heterociclilo da presente invenção podem ser substituídos como é descrito em cada uma das suas respectivas definições. Por exemplo, a parte arilo de um grupo arilalquilo pode ser substituída como é descrito na definição do termo 'arilo'. 0 termo "alcenilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo de cadeia linear ou ramificada de dois a seis átomos de carbono contendo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono. 0 termo "alceniloxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alcenilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "alceniloxicarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alceniloxi unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "alcoxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "alcoxialquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos alcoxi. 12 0 termo "alcoxialquilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alcoxialquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "alcoxicarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alcoxi unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "alcoxicarbonilalquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos alcoxicarbonilo. 0 termo "alquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo derivado de um hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada contendo desde um até seis átomos de carbono. Nos compostos da presente descrição, quando m for 1 ou 2; X é CHR5, e R5 é alquilo, cada alquilo pode opcionalmente formar um anel fusionado de três a seis membros com um átomo de carbono adjacente para proporcionar uma das estruturas mostradas a seguir:

onde zél, 2, 3, ou 4, wéO, 1, ou 2, e R50 é alquilo. Quando w for 2, os dois grupos R50 alquilo podem ser o mesmo ou diferentes. 0 termo "alquilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "alquilcarbonilalquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos alquilcarbonilo. 0 termo "alquilcarboniloxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilcarbonilo unido à 13 fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "alquileno," como é usado no presente documento, refere-se a um grupo divalente derivado de um hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada contendo de um a seis átomos de carbono. 0 termo "alquilsulfanilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de enxofre. 0 termo "alquilsulfonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo sulfonilo. 0 termo "arilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo fenilo, ou um sistema de anel fusionado biciclico em que um ou ambos os anéis são um grupo fenilo. Os sistemas de anel fusionado biciclico consistem num grupo fenilo fusionado a um anel carbociclico aromático ou não aromático de quatro a seis membros. Os grupos arilo da presente invenção podem ser unidos à fracção molecular parental através de qualquer átomo de carbono substituível no grupo. Exemplos representativos de grupos arilo incluem, mas não são limitados a, indanilo, indenilo, naftilo, fenilo, e tetrahidronaftilo. Os grupos arilo da presente invenção são opcionalmente substituído com um, dois, três, quatro, ou cinco substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, um segundo grupo arilo, arilalcoxi, arilalquilo, arilcarbonilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro, —NRXRY, (NRXRY) alquilo, oxo, e -P(0)0R2, em que cada R é independentemente seleccionado a partir de hidrogénio e alquilo; e em que a parte alquilo do arilalquilo e do heterociclilalquilo não é substituída 14 e em que o segundo grupo arilo, a parte arilo do arilalquilo, a parte arilo do arilcarbonilo, do heterociclilo, e a parte heterociclilo do heterociclilalquilo e o heterociclilcarbonilo são substituídos opcionalmente ainda com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, e nitro. 0 termo "arilalcenilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alcenilo substituído com um, dois, ou três grupos arilo. 0 termo "arilalcoxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo arilo unido à fracção molecular parental através de um grupo alcoxi. 0 termo "arilalcoxialquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos arilalcoxi. 0 termo "arilalcoxialquilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo arilalcoxialquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "arilalcoxicarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo arilalcoxi unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "arilalquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos arilo. A parte alquilo do arilalquilo é substituída opcionalmente ainda com um ou dois grupos adicionais independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilcarboniloxi, halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, hidroxi, e -NRcRd, em que o heterociclilo é substituído opcionalmente ainda com um ou dois substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, arilo não substituído, arilalcoxi não substituído, arilalcoxicarbonilo não 15 substituído, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, e -NRXRY. 0 termo "arilalquilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo arilalquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "arilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo arilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "ariloxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo arilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "ariloxialquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos ariloxi. 0 termo "ariloxicarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo ariloxi unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "arilsulfonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo arilo unido à fracção molecular parental através de um grupo sulfonilo.

Os termos "Cap" e "cap" como é usado no presente documento, referem-se ao grupo que é colocado no átomo de azoto do anel contendo terminal azoto, isto é, os anéis de pirrolidina do composto de Fórmula (I). Deve ser entendido que "Cap" ou "cap" pode referir-se ao reagente usado para anexar o grupo ao anel contendo terminal azoto ou ao fragmento no produto final, isto é, "Cap-51" ou "0 fragmento Cap-51 encontrado no Exemplo 5". 0 termo "carbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a -C(0)-. 0 termo "carboxi", como é usado no presente documento, refere-se a -C02H. 0 termo "ciano", como é usado no presente documento, refere-se a -CN. 0 termo "cicloalquilo", como é usado no presente 16 documento, refere-se a um sistema de anel de hidrocarboneto monocíclico saturado que tem três a sete átomos de carbono e zero heteroátomos. Exemplos representativos de grupos cicloalquilo incluem, mas não são limitados a, ciclopropilo, ciclopentilo, e ciclohexilo. Os grupos cicloalquilo da presente invenção são opcionalmente substituídos com um, dois, três, quatro, ou cinco substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, arilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, heterociclilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro, e -NRXRY, em que o arilo e o heterociclilo são opcionalmente ainda substituídos com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, e nitro. 0 termo "(cicloalquil)alcenilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alcenilo substituído com um, dois, ou três grupos cicloalquilo. 0 termo "(cicloalquil)alquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos cicloalquilo. A parte alquilo do (cicloalquil)alquilo é substituída opcionalmente ainda com um ou dois grupos independentemente seleccionado a partir de hidroxi e -NRcRd. 0 termo "cicloalquiloxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo cicloalquilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "cicloalquiloxialquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos cicloalquiloxi. 0 termo "cicloalquilsulfonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo cicloalquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo sulfonilo. 0 termo "formilo", como é usado no presente documento, 17 refere-se a -CHO.

Os termos "halo" e "halogéneo", como é usado no presente documento, referem-se a F, Cl, Br, ou I. 0 termo "haloalcoxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo haloalquilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "haloalcoxicarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo haloalcoxi unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "haloalquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído por um, dois, três, ou quatro átomos de halogéneo. 0 termo "heterociclilo", como é usado no presente documento, refere-se a um anel de quatro, cinco, seis, ou sete membros contendo um, dois, três, ou quatro heteroátomos independentemente seleccionados a partir de azoto, oxigénio, e enxofre. 0 anel de quatro membros tem zero ligações duplas, o anel de cinco membros tem zero a duas ligações duplas, e os anéis de seis e sete membros têm zero a três ligações duplas. 0 termo "heterociclil" também inclui grupos bicíclicos em que o anel heterociclilo é fusionado a outro grupo heterociclilo monocíclico, ou um anel carbocíclico aromático ou não aromático de quatro a seis membros; bem como grupos bicíclicos unidos por ponte tais como 7-azabiciclo[2.2.1]hept-7-ilo, 2-azabiciclo[2.2.2]oc-2- tilo, e 2-azabiciclo[2.2.2]oc-3-tilo. Os grupos heterociclilo da presente invenção podem ser unidos à fracção molecular parental através de qualquer átomo de carbono ou átomo de azoto no grupo. Exemplos de grupos heterociclilo incluem, mas não são limitados a, benzotienilo, furilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, oxazolilo, piperazinilo, piperidinilo, pirazolilo, piridinilo, pirrolidinilo, pirrolopiridinilo, pirrolilo, tiazolilo, 18 tienilo, tiomorfolinilo, 7-azabiciclo[2.2.1]hept-7-ilo, 2-azabiciclo [2.2.2]oc-2-tilo, e 2-azabiciclo[2.2.2]oc-3-tilo. Os grupos heterociclilo da presente invenção são opcionalmente substituídos com um, dois, três, quatro, ou cinco substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, arilo, arilalquilo, arilcarbonilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, um segundo heterociclilo grupo, heterociclilalquilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi, hidroxialquilo, nitro, -NRXRY, (NRxRy) alquilo, e oxo, em que a parte alquilo do arilalquilo e o heterociclilalquilo não é substituída e em que o arilo, a parte arilo do arilalquilo, a parte arilo do arilcarbonilo, o segundo heterociclilo grupo, e a parte heterociclilo do heterociclilalquilo e o heterociclilcarbonilo são substituídos opcionalmente ainda com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, e nitro. 0 termo "heterociclilalcenilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alcenilo substituído com um, dois, ou três grupos heterociclilo. 0 termo "heterociclilalcoxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo heterociclilo unido à fracção molecular parental através de um grupo alcoxi. 0 termo "heterociclilalcoxicarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo heterociclilalcoxi unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "heterociclilalquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos heterociclilo. A parte alquilo do heterociclilalquilo é substituída opcionalmente ainda com um ou dois grupos adicionais independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilcarboniloxi, 19 arilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, e -NRcRd, em que o arilo é substituído opcionalmente ainda com um ou dois substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, arilo não substituído, arilalcoxi não substituído, arilalcoxicarbonilo não substituído, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, e -NRXRY. 0 termo "heterociclilalquilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo heterociclilalquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "heterociclilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo heterociclilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "heterocicliloxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo heterociclilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "heterocicliloxialquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos heterocicliloxi. 0 termo "heterocicliloxicarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo heterocicliloxi unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "hidroxi", como é usado no presente documento, refere-se a -OH. 0 termo "hidroxialquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos hidroxi. 0 termo "hidroxialquilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo hidroxialquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "nitro", como é usado no presente documento, 20 refere-se a -N02. O termo "-NRaRb", como é usado no presente documento, refere-se a dois grupos, Ra e Rb, que são unidos à fracção molecular parental através de um átomo de azoto. Ra e Rb são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcenilo, e alquilo. O termo ” (NRaRb) alquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos -NRaRb. O termo " (NRaRb) carbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo -NRaRb unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "-NRaRd", como é usado no presente documento, refere-se a dois grupos, Rc e Rd, que são unidos à fracção molecular parental através de um átomo de azoto. Rc e Rd são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alceniloxicarbonilo, alcoxialquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalcoxicarbonilo, arilalquilo, arilalquilcarbonilo, arilcarbonilo, ariloxicarbonilo, arilsulfonilo, cicloalquilo, cicloalquilsulfonilo, formilo, haloalcoxicarbonilo, heterociclilo, heterociclilalcoxicarbonilo, heterociclilalquilo, heterociclilalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, heterocicliloxicarbonilo, hidroxialquilcarbonilo, (NReRf) alquilo, (NReRf) alquilcarbonilo, (NReRf) carbonilo, (NReRf) sulfonilo, -C (NCN) OR', e - C (NCN) NRXRY, em que R' é seleccionado a partir de alquilo e fenilo não substituído, e em que a parte alquilo do arilalquilo, do arilalquilcarbonilo, do heterociclilalquilo, e do heterociclilalquilcarbonilo são substituídos opcionalmente ainda com um grupo -NReRf; e em que o arilo, a parte arilo do arilalcoxicarbonilo, do arilalquilo, do arilalquilcarbonilo, do arilcarbonilo, do ariloxicarbonilo, e do arilsulfonilo, do heterociclilo, e 21 a parte heterociclilo do heterociclilalcoxicarbonilo, do heterociclilalquilo, do heterociclilalquilcarbonilo, do heterociclilcarbonilo, e do heterocicliloxicarbonilo são substituídos opcionalmente ainda com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, e nitro. 0 termo " (NRcRd) alcenilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alcenilo substituído com um, dois, ou três grupos -NRcRd. 0 termo " (NRcRd) alquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos -NRcRd. A parte alquilo do (NRcRd)alquilo é substituída opcionalmente ainda com um ou dois grupos adicionais seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfanilo, arilalcoxialquilcarbonilo, carboxi, heterociclilo, heterociclilcarbonilo, hidroxi, e (NReRf) carbonilo; em que o heterociclilo é substituído opcionalmente ainda com um, dois, três, quatro, ou cinco substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, e nitro. 0 termo " (NRcRd) carbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um -NRcRd grupo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "-NReRf", como é usado no presente documento, refere-se a dois grupos, Re e Rf, que são unidos à fracção molecular parental através de um átomo de azoto. Re e Rf são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alquilo, arilo não substituído, arilalquilo não substituído, cicloalquilo não substituído, (ciclolalquil)alquilo não substituído, heterociclilo não substituído, heterociclilalquilo não substituído, (NRxRy)alquilo, e (NRxRy)carbonilo. 22 0 termo " (NReRf) alquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três -NReRfgrupos. 0 termo " (NReRf) alquilcarbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo (NReRf)alquilo unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo " (NReRf) carbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo -NReRf unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo " (NReRf) sulfonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo -NReRf unido à fracção molecular parental através de um grupo sulfonilo. 0 termo NReRY", como é usado no presente documento, refere-se a dois grupos, Rx e RY, que são unidos à fracção molecular parental através de um átomo de azoto. Rx e RY são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, arilo não substituído, arilalcoxicarbonilo não substituído, arilalquilo não substituído, cicloalquilo não substituído, heterociclilo não substituído, e (NRx,RYf ) carbonilo, em que Rx' e RY' são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio e alquilo. 0 termo "(NRXRY) alquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos -NRXRY. 0 termo " (NRXRY) carbonilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo -NRXRY unido à fracção molecular parental através de um grupo carbonilo. 0 termo "oxo", como é usado no presente documento, refere-se a =0. 0 termo "espirociclilo," como é usado no presente documento, refere-se a um diradical alquileno, cada extremidade do qual é unida ao mesmo átomo de carbono de a fracção molecular parental que forma uma fracção 23 bicíclica. 0 termo "sulfonilo", como é usado no presente documento, refere-se a -S02-. 0 termo "trialquilsililo", como é usado no presente documento, refere-se a -SiR3, em que R é alquilo. Os grupos R podem ser o mesmo ou diferentes. 0 termo "trialquilsililalquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos trialquilsililo. 0 termo "trialquilsililalcoxi", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo trialquilsililalquilo unido à fracção molecular parental através de um átomo de oxigénio. 0 termo "trialquilsililalcoxialquilo", como é usado no presente documento, refere-se a um grupo alquilo substituído com um, dois, ou três grupos trialquilsililalcoxi.

Centros assimétricos existem nos compostos da presente descrição. Estes centros são denominados pelos símbolos "R" ou "S", dependendo da configuração de substituintes ao redor do átomo de carbono quiral. Deve ser entendido que a descrição abrange todas as formas isoméricas estereoquímicas, ou misturas das mesmas, que possuem a capacidade para inibir NS5A. Estereoisómeros individuais de compostos podem ser preparados sinteticamente a partir de materiais de partida comercialmente disponíveis que contêm centros quirais ou por meio da preparação de misturas de produtos enantioméricos seguido por separação tal como conversão a uma mistura de diastereómeros seguido por separação ou recristalização, técnicas cromatográficas, ou separação directa de enantiómeros em colunas cromatográficas quirais. Compostos de partida de estereoquímica particular estão comercialmente disponíveis ou podem ser feitos e resolvidos por técnicas conhecidas na especialidade.

Certos compostos da presente invenção podem também 24 existir em diferentes formas conformacionais estáveis que podem ser separáveis. A assimetria torsional devido a rotação restrita ao redor de uma ligação simples assimétrica, por exemplo, por causa do bloqueio estérico ou resistência do anel, pode permitir a separação de conformadores diferentes. A presente invenção inclui cada isómero conformacional destes compostos e misturas de mesmo. 0 termo "compostos da presente descrição", e expressões equivalentes, pretendem abranger compostos de Fórmula (I), e enantiómeros farmaceuticamente aceitáveis, diastereómeros, e sais dos mesmos. De maneira similar, referências a intermediários pretendem abranger os seus sais onde o contexto assim o permitir.

Os compostos da presente invenção podem existir como sais farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo "sal farmaceuticamente aceitável", como é usado no presente documento, representa sais ou formas zwiteriónicas dos compostos da presente invenção que são solúveis em água ou óleo ou dispersíveis, que estão, dentro do âmbito de julgamento médico sensato, adequados para utilização em contacto com os tecidos de pacientes sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação proporcional com uma razão de risco/beneficio razoável, e são eficazes para a sua utilização pretendida. Os sais podem ser preparados durante o isolamento e purificação final dos compostos ou separadamente por meio da reacção de um átomo de azoto adequado com um ácido adequado. Sais de adição de ácido representativos incluem acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, benzenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato; digluconato, dihidrobrometo, dihidrocloreto, dihidroiodeto, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formato, fumarato, cloridrato, bromidrato, iodato, 2- 25 hidroxietanossulfonato, lactato, maleato, mesitilenossulfonato, metanossulfonato, naftilenossulfonato, nicotinato, 2-naftalenossulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-toluenossulfonato, e undecanoato. Exemplos de ácidos que podem ser utilizados para formar sais de adição farmaceuticamente aceitáveis incluem ácidos inorgânicos tais como clorídrico, bromídrico, sulfúrico, e fosfórico, e ácidos orgânicos tais como oxálico, maleico, succínico, e cítrico.

Sais de adição de base podem ser preparados durante o isolamento e purificação final dos compostos por meio da reacção de um grupo carboxi com uma base adequada tal como o hidróxido, carbonato, ou bicarbonato de um catião metálico ou com amónia ou uma amina primária, secundária, ou terciária orgânica. Os catiões de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio, e alumínio, bem como catiões de amina quaternária não tóxicos tais como amónio, tetrametilamónio, tetraetilamónio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina, tributilamina, piridina, N,N-dimetilanilina, N-metilpiperidina, N-metilmorfolina, diciclohexilamina, procaína, dibenzilamina, N,N-dibenzilfenetilamina, e N,Ν'-dibenziletilenodiamina. Outras aminas orgânicas representativas úteis para a formação de sais de adição de base incluem etilenodiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina, e piperazina.

Quando for possível que, para utilização em terapêutica, quantidades terapeuticamente eficazes de um composto de fórmula (I), bem como sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, possam ser administradas como o produto químico bruto, é possível apresentar o ingrediente activo como uma composição farmacêutica. Consequentemente, 26 a descrição proporciona ainda composições farmacêuticas, que incluem quantidades terapeuticamente eficazes de compostos de fórmula (I) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, ou excipientes. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como é usado no presente documento, refere-se à quantidade total de cada componente activo que é suficiente para mostrar um benefício importante para o paciente, por exemplo, uma redução na carga virai. Quando é aplicado a um ingrediente activo individual, administrado em separado, o termo refere-se a esse ingrediente somente. Quando é aplicado a uma combinação, o termo refere-se a quantidades combinadas dos ingredientes activos que resultam no efeito terapêutico, se for administrado em combinação, em séries, ou simultaneamente. Os compostos de fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, são como foram descritos acima. 0(s) veículo (es), diluente(s), ou excipiente(s) precisa (m) ser aceitável(is) no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da formulação e não prejudiciais ao destinatário dos mesmos. De acordo com outro aspecto da presente invenção também se proporciona um processo para a preparação de uma formulação farmacêutica incluindo a mistura de um composto de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável de mesmo, com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, ou excipientes. 0 termo "farmaceuticamente aceitável", como é usado no presente documento, refere-se a aqueles compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, dentro do âmbito de critério do parecer médico, adequados para utilização em contacto com os tecidos dos pacientes sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação proporcional a uma razão de benefício/risco razoável, e são eficazes para a sua utilização pretendida. 27

As formulações farmacêuticas podem ser apresentadas em formas farmacêuticas unitárias contendo uma quantidade predeterminada de ingrediente activo por dose unitária. Os niveis de dosagem de entre aproximadamente 0,01 e aproximadamente 250 miligramas por quilograma ("mg/kg") de peso corporal por dia, preferentemente entre aproximadamente 0,05 e aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por dia dos compostos da presente invenção são típicos numa monoterapêutica para a prevenção e o tratamento de doença mediada pelo VHC. Tipicamente, as composições farmacêuticas desta invenção poderiam ser administradas desde aproximadamente 1 até aproximadamente 5 vezes ao dia ou alternativamente, como uma infusão contínua. Tal administração pode ser utilizada como uma terapêutica crónica ou aguda. A quantidade de ingrediente activo que pode ser combinada com os materiais de veículo para produzir uma única forma farmacêutica variará dependendo da condição a ser tratada, a gravidade da condição, o tempo de administração, a via de administração, a taxa de excreção do composto utilizado, a duração de tratamento, e a idade, sexo, peso, e condição do paciente. Formulações de dosagem unitária preferidas são aquelas que contêm uma dose diária ou sub-dose, como no presente documento acima mencionado, ou uma fracção apropriada da mesma, de um ingrediente activo. O tratamento pode ser iniciado com dosagens pequenas substancialmente menos que a dose óptima do composto. Depois disso, a dosagem é aumentada por meio de pequenos incrementos até o efeito óptimo sob as circunstâncias ser alcançado. Em geral, o composto é mais desejavelmente administrado num nível de concentração que proporcionará geralmente resultados antiviralmente eficazes sem causar quaisquer efeitos secundários prejudiciais ou deletérios.

Quando as composições desta invenção compreendem uma combinação de um composto da presente invenção e um ou mais 28 agente terapêutico ou profiláctico adicional, tanto o composto como o agente adicional estão presentes usualmente em niveis de dosagem de entre aproximadamente 10 até 150 %, e mais preferentemente entre aproximadamente 10 e 80 % da dosagem normalmente administrada num regime monoterapêutico.

As formulações farmacêuticas podem ser adaptadas para a administração por gualquer via apropriada, por exemplo, pela via oral (incluindo bucal ou sublingual), rectal, nasal, tópica (incluindo bucal, sublingual, ou transdérmica), vaginal, ou parentérica (incluindo subcutânea, intracutânea, intramuscular, intra-articular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intralesional, intravenosa, ou injecções intradérmicas ou infusões) . Tais formulações podem ser preparadas por qualquer método conhecido na técnica de farmácia, por exemplo, por trazer em associação o ingrediente activo com o(s) veiculo(es) ou excipiente (s) . Administração oral ou administração por injecção são preferidas.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades discretas tais como cápsulas ou comprimidos; pós ou grânulos; soluções ou suspensões em líquidos aquosos ou não aquosos; espumas ou cremes comestíveis; ou emulsões líquidas óleo-em-água ou emulsões água-em-óleo.

Por exemplo, para a administração oral na forma de um comprimido ou cápsula, o componente de fármaco activo pode ser combinado com um veículo farmaceuticamente aceitável inerte não tóxico oral tal como etanol, glicerol, água, e similares. Pós são preparados por meio da pulverização do composto a um tamanho fino adequado e mistura com um veículo farmacêutico pulverizado de maneira similar tal como um hidrato de carbono comestível, como, por exemplo, amido ou manitol. Aromatizante, conservante, agente de dispersão, e corante podem também estar presentes. 29 Cápsulas são feitas por meio da preparação de uma mistura de pó, como foi descrito acima, e bainhas de gelatina em forma de carga. Deslizantes e lubrificantes tais como sílica coloidal, talco, estearato de magnésio, estearato de cálcio, ou polietileno glicol sólido pode ser adicionado à mistura de pó antes da operação de carga. Um agente desintegrante ou solubilizante tal como agar-agar, carbonato de cálcio, ou carbonato de sódio pode também ser adicionado para melhorar a disponibilidade do medicamento quando a cápsula é ingerida.

Além disso, quando for desejado ou necessário, aglutinantes adequados, lubrificantes, agentes desintegrantes, e agentes corantes podem também ser incorporados na mistura. Aglutinantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais tais como glicose ou beta-lactose, adoçantes de milho, gomas naturais e sintéticas tais como acácia, tragacanto ou alginato de sódio, carboximetilcelulose, polietileno glicol, e similares. Lubrificantes usados nestas formas farmacêuticas incluem oleato de sódio, cloreto de sódio, e similares. Desintegradores incluem, sem limitação, amido, metil celulose, agar, betonita, goma xantana, e similares. Comprimidos são formulados, por exemplo, por meio da preparação de uma mistura de pó, granulação ou fluidização agregativa, adição de um lubrificante e desintegrante, e compressão em comprimidos. Uma mistura de pó é preparada por meio da mistura do composto, pulverizado adequado, com um diluente ou base como foi descrito acima, e opcionalmente, com um aglutinante tal como carboximetilcelulose, um alginato, gelatina, ou polivinil pirrolidona, um retardante de solução tal como parafina, um acelerador de ressorção tal como um sal quaternário e/ou e agente de absorção tal como betonita, caulim, ou fosfato de dicálcio. A mistura de pó pode ser granulada por meio da humidificação com um aglutinante tal como xarope, pasta de 30 amido, mucilagem de acádia, ou soluções de materiais celulósicos ou poliméricos e por passagem forçada através de um crivo grosso. Como uma alternativa à granulação, a mistura de pó pode ser passada através da máguina de formação de comprimido e o resultado é pedaços imperfeitamente formados quebrados em grânulos. Os grânulos podem ser lubrificados para prevenir que grudem às formas de formação de comprimido por meio da adição de ácido esteárico, um sal de estearato, talco, ou óleo mineral. A mistura lubrificada é então comprimida em comprimidos. Os compostos da presente invenção podem também ser combinados com um veiculo inerte de fluxo livre e comprimida em comprimidos directamente sem passar pelas etapas de granulação ou fluidização agregativa. Um revestimento protector claro ou opaco que consiste numa cobertura de vedação de goma laca, um revestimento de açúcar ou material polimérico, e um revestimento de polimento de cera pode ser proporcionado. Corantes podem ser adicionados a estes revestimentos para distinguir diferentes dosagens unitárias.

Fluidos orais tais como solução, xaropes, e elixires podem ser preparados em forma farmacêutica unitária de modo que uma dada quantidade contém uma quantidade predeterminada do composto. Os xaropes podem ser preparados por meio da dissolução do composto numa solução aquosa adequadamente aromatizada, enquanto elixires são preparados através da utilização de um veiculo não tóxico. Solubilizantes e emulsificantes tais como álcoois isoestearílicos etoxilados e éteres de sorbitol de polioxietileno, conservantes, aditivo de aroma tal como óleo de hortelã-pimenta ou adoçantes naturais, ou sacarina ou outros adoçantes artificiais, e similares podem também ser adicionados.

Onde for apropriado, formulações unitárias de dosagem para a administração oral podem ser microencapsuladas. A 31 formulação pode também ser preparada para prolongar ou sustentar a libertação como, por exemplo, por meio do revestimento ou incrustação de material particulado em polímeros, cera, ou similares.

Os compostos de fórmula (I), e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, podem também ser administrados na forma de sistemas de administração em lipossoma, tais como vesículas unilamelares pequenas, vesículas unilamelares grandes, e vesículas multilamelares. Os lipossomas podem ser formados a partir de uma variedade de fosfolípidos, tais como colesterol, estearilamina, ou fosfatidilcolinas.

Os compostos de fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos podem também ser administrados pela utilização de anticorpos monoclonais como portadores individuais aos quais as moléculas de composto são acopladas. Os compostos podem também ser acoplados com polímeros solúveis como portadores de fármaco direccionáveis como alvo. Tais polímeros podem incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidafenol, polihidroxietilaspartamidafenol, ou óxido de polietileno-polilisina substituído com resíduos de palitoilo. Além disso, os compostos podem ser acoplados a uma classe de polímeros biodegradáveis úteis em alcançar libertação controlada de um fármaco, por exemplo, ácido poliláctico, poliépsilon caprolactona, ácido polihidroxi butírico, poliortoésteres, poliacetais, polidihidropiranos, policianoacrilatos, e copolímeros em bloco reticulados ou anfipáticos de hidrogéis.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração transdérmica podem ser apresentadas como sistemas transdérmicos discretos destinados a permanecer em contacto íntimo com a epiderme do destinatário para um período prolongado de tempo. Por exemplo, o ingrediente activo pode ser administrado desde o sistema transdérmico 32 por iontoforese como geralmente descrito em Pharmaceutical Investigation 1986, 3(6), 318.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração tópica podem ser formuladas como pomadas, cremes, suspensões, loções, pós, soluções, pastas, géis, sprays, aerossóis, ou óleos.

As formulações farmacêuticas adaptadas ou para administração rectal podem ser apresentadas como supositórios ou como enemas.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração nasal em que o veiculo é um sólido incluem um pó em curso que tem um tamanho de partícula, por exemplo, no intervalo 20 a 500 mícrones que é administrado da maneira em que o pó para inalações é tomado, isto é, por inalação rápida através da passagem nasal de um Container do pó mantido próximo ao nariz. Formulações adequadas em que o veículo é um líquido, para a administração como um spray nasal ou gotas nasais, incluem soluções aquosas ou em óleo do ingrediente activo.

As formulações farmacêuticas adaptadas para a administração por inalação incluem pós de partículas finas ou névoas, que podem ser geradas por meio de vários tipos de insufladores, nebulizadores ou aerossóis pressurizados calibrados.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas, ou formulações em spray.

As formulações farmacêuticas adaptadas para administração parentérica incluem soluções de injecção aquosas e não aquosas estéreis que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos, e vias que tornam a formulação isotónica com o sangue do destinatário pretendido; e suspensões aquosas e não aquosas estéreis que podem incluir agentes de suspensão e agentes espessantes. 33

As formulações podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou multi-dose, por exemplo, ampolas vedadas e frascos, e podem ser armazenados numa condição seca por congelamento (liofilizada) que requer somente a adição do veiculo liquido estéril, por exemplo, água para injecções, imediatamente antes do uso. Soluções extemporâneas de injecção e suspensões podem ser preparadas a partir de pós, grânulos, e comprimidos estéreis.

Deve ser entendido que além dos ingredientes particularmente mencionados acima, as formulações podem incluir outros agentes convencionais na técnica em relação ao tipo de formulação em questão, por exemplo, aqueles adequados para administração oral podem incluir agentes aromatizantes. 0 termo "paciente" inclui ambos seres humanos e outros mamíferos. 0 termo "tratar" refere-se a: (i) prevenir que uma doença, distúrbio ou condição ocorra num paciente que pode ser predisposto à doença, distúrbio, e/ou condição, mas que ainda não tenha sido diagnosticado como tendo a mesma; (ii) inibir a doença, distúrbio, ou condição, isto é, deter o seu desenvolvimento; e (iii) aliviar a doença, distúrbio, ou condição, isto é, produzir a regressão da doença, distúrbio, e/ou condição.

Os compostos da presente invenção podem também ser administrados com uma ciclosporina, por exemplo, ciclosporina A. Ciclosporina A mostrou-se activa contra VHC em ensaios clínicos (Hepatology 2003, 38, 1282; Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004, 313, 42; J. Gastroenterol. 2003, 38, 567) . 0 Quadro 1 a seguir lista alguns exemplos ilustrativos de compostos que podem ser administrados com os compostos desta invenção. Os compostos da descrição podem ser administrados com outros compostos com actividade anti-VHC em terapêutica de combinação, conjuntamente ou 34 separadamente, ou por meio da combinação dos compostos numa composição.

Quadro 1

Nome Comercial Classe Fisiológica Tipo de Inibidor ou Alvo Empresa de Origem NIM811 Inibidor de Ciclofilina Novartis Zadaxin Imunomodulador Sciclone Suvus Azul de metileno Bioenvision Actilon (CPG10101) agonista de TLR9 Coley Batabulin (T67) Anticancer inibidor de β-tubulina Tularik Inc., South San Francisco, CA ISIS 14803 Antiviral antissense ISIS Pharmaceutical s Inc, Carlsbad, CA/Elan Phamaceuticals Inc., Nova Iorque, NY Summetrel Antiviral antiviral Endo Pharmaceutical s Holdings Inc., Chadds Ford, PA GS-9132 (ACH-806) Antiviral Inibidor de VHC Achillion / Gilead Compostos de Pirazolopirimidina e sais do documento WO-2005047288 26 de Maio de 2005 Antiviral Inibidores de VHC Arrow Therapeutics Ltd. Levovirin Antiviral Inibidor de IMPDH Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA Merimepodib (VX-497) Antiviral Inibidor de IMPDH Vertex Pharmaceutical s Inc., Cambridge, MA XTL-6865 (XTL-002) Antiviral anticorpo monoclonal XTL Biopharmaceuti cais Ltd., Rehovot, Israel Telaprevir (VX-950, LY- 570310) Antiviral inibidor de NS3 serina protease Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA/Eli Lilly e Co. Inc. , Indianapolis, EM VHC-796 Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Wyet / Viropharma NM-283 Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Idenix / Novartis GL-59728 Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Gene Labs / Novartis 35

Nome Comercial Classe Fisiológica Tipo de Inibidor ou Alvo Empresa de Origem GL-60667 Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Gene Labs / Novartis 2'C MeA Antiviral NS5B Replicase Inibidor Gilead PSI6130 Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Roche RI 62 6 Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Roche 2'C Metil adenosina Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Merck JTK-003 Antiviral inibidor de RdRp Japão Tobacco Inc., Tokyo, Japão Levovirina Antiviral ribavirina ICN Pharmaceutical s. Costa Mesa, CA Ribavirina Antiviral ribavirina Schering-Plough Corporação, Kenilworth, NJ Viramidina Antiviral Pró-fármaco de Ribavirina Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA Heptazyme Antiviral ribozima Ribozima Pharmaceutical s Inc., Boulder, CO BILN-2061 Antiviral inibidor de serina protease Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Alemanha SCH 503034 Antiviral inibidor de serina protease Schering Plough Zadazim Imunomodulador Imunomodulador SciClone Pharmaceutical s Inc., San Mateo, CA Ceplene Imunomodulador imunomodulador Maxim Pharmaceutical s Inc., San Diego, CA CellCept Imunossupressor Imunossupressor de IgG de VHC F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suíça Civacir Imunossupressor Imunossupressor de IgG de VHC Nabi Biopharmaceuti cais Inc., Boca Raton, FL Albuferon - α Interferão albumina IFN-a2b Human Genoma Sciences Inc., Rockville, MD Infergen A Interferão IFN alfacon-1 InterMune Pharmaceutical s Inc., Brisbane, CA Omega IFN Interferão IFN- CQ Intarcia Therapeutics 36

Nome Comercial Classe Fisiológica Tipo de Inibidor ou Alvo Empresa de Origem IFN-β e EMZ701 Interferão IFN-β e EMZ701 Transição Therapeutics Inc., Ontario, Canada Rebif Interferão IFN-Pla Serono, Geneva, Suíça Roferon A Interferão IFN-a2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suíça Intron A Interferão IFN-a2b Schering-Plough Corporação, Kenilworth, NJ Intron A e Zadaxin Interferão IFN-a2b/al- timosina RegeneRx Biopharmiceuti cais Inc., Betesda, MD/ SciClone Pharmaceutical s Inc, San Mateo, CA Rebetron Interferão IFN-a2b/ribavirina Schering-Plough Corporação, Kenilworth, NJ Actimmune Interferão INF-γ InterMune Inc., Brisbane, CA Interferão-β Interferão Interferão-β-la Serono Multiferon Interferão IFN de longa duração Viragen/Valenti s Wellferon Interferão linfoblastoide IFN-anl GlaxoSmithKli ne plc, Uxbridge, UK Omniferon Interferão natural IFN-a Viragen Inc., Plantação, FL Pegasys Interferão IFN-a2a Peguilado F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suíça Pegasys e Ceplene Interferão IFN-a2a Peguilado / imunomodulador Maxim Pharmaceutical s Inc., San Diego, CA Pegasys e Ribavirina Interferão IFN-a2a Peguilado /ribavirina F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Suíça PEG-Intron Interferão IFN-a2b Peguilado Schering-Plough Corporação, Kenilworth, NJ PEG-Intron / Ribavirina Interferão IFN-a2b Peguilado /ribavirina Schering-Plough Corporação, Kenilworth, NJ IP-501 Protecção do fígado antifibrótico Indevus Pharmaceutical s Inc., Lexington, MA 37

Nome Comercial Classe Fisiológica Tipo de Initoidor ou Alvo Empresa de Origem IDN-6556 Protecção do fígado Inibidor de caspase Idun Pharmaceutical s Inc., San Diego, CA ITMN-191 (R-7227) Antiviral inibidor de serina protease InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA GL-59728 Antiviral Inibidor de NS5B Replicase Genelabs ANA-971 Antiviral agonista de TLR-7 Anadys

Os compostos da presente invenção podem também ser usados como reagentes de laboratório. Os compostos podem ser instrumentais em proporcionar ferramentas de investigação para desenhar de ensaios de replicação virai, validação de sistemas de ensaio animal e estudos de biologia estrutural para aumentar adicionalmente o conhecimento dos mecanismos da doença pelo VHC. Além disso, os compostos da presente invenção são úteis no estabelecimento ou determinação da ligação local de outros compostos antivirais, por exemplo, por inibição competitiva.

Os compostos desta invenção podem também ser utilizados para tratar ou prevenir a contaminação virai de materiais e portanto reduzir o risco de infecção virai do laboratório ou pessoal médico ou pacientes que entram em contacto com tais materiais, por exemplo, sangue, tecido, instrumentos e vestimentas cirúrgicas, instrumentos e vestimentas de laboratório, e colheita de sangue ou aparelhos e materiais de transfusão. A presente invenção pretende abranger os compostos que têm a fórmula (I) quando preparados por processos sintéticos ou por processos metabólicos incluindo aqueles que ocorrem no corpo humano ou animal (in vivo) ou processos que ocorrem in vitro.

As abreviações usadas no presente pedido, incluindo particularmente nos esquemas ilustrativos e exemplos que se 38 seguem, são bem conhecidas aos peritos na especialidade. Algumas das abreviações usadas são como se segue: HATU para hexafluorofosfato de 0-(7- azabenzotriazol-l-il)-N,N,N',N'-tetrametilurónio; NH4OAc para acetato de amónio; Boc ou BOC para terc-butoxicarbonilo; NBS para N-bromosuccinimida; TFA para ácido trifluoroacético; MeOH para metanol; DMSO para dimetilsulfóxido; THF para tetrahidrofurano; TA para temperatura ambiente ou tempo de retenção (o contexto ditará) ; tR ou TR para tempo de retenção; DMAP para 4-dimetilaminopiridina; EDCI para cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida; DEA para dietilamina; DBU para 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno; t-Bu3P para tri-terc-butilfosfina; HMDS para hexametildisilazida; DMF para N,N-dimetilformamida; EtOAc ou EtOAC para acetato de etilo; Me2S para dimetilsulfureto; Et3N ou TEA para trietilamina; LiHMDS para hexametildisilazida de litio; DIBAL para hidreto de alumínio de diisobutilo; TBDMSC1 para cloreto de terc-butildimetilsililo; iPrOH para álcool isopropílico; Cb z para carbobenziloxi; iPr2EtN ou DIPEA ou DIEA para diisopropiletilamina; BnBr para brometo de benzilo; KOAc para acetato de potássio; CAN para nitrato de amónio cérico; SEM-C1 para cloreto de (trimetilsilil)etoximetilo; Me2NH para dimetilamina; TMS para trimetilsililo; OAc para acetato; PPh3 para trifenilfosfina; Mel para iodeto de metilo; MeCN para acetonitrilo; n-BuLi para n-butillítio; e TBDMSOTf para triflato de terc-butildimetilsililo.

Os compostos e processos da presente invenção serão melhor entendidos em conexão com os seguintes esquemas de síntese que ilustram os métodos pelos quais os compostos da presente invenção podem ser preparados. Materiais de partida podem ser obtidos de fontes comerciais ou preparados por métodos bem estabelecidos na literatura conhecidos aos peritos com habilidade ordinária na especialidade. Será prontamente aparente a um perito com 39 habilidade ordinária na especialidade que os compostos definidos acima podem ser sintetizados por meio da substituição dos reagentes e agentes apropriados nas sínteses mostradas a seguir. Será também prontamente aparente a um perito na especialidade que as etapas de protecção selectiva e desprotecção, bem como a ordem das próprias etapas, podem ser levadas a cabo em ordem variada, dependendo da natureza das variáveis para completar de maneira bem-sucedida as sínteses a seguir. As variáveis são como foram definidas acima a não ser que de outro modo indicado a seguir.

Esquema 1:

Dibrometo 1 poderia ser elaborado para borar éster 2 e então acoplado com bromoimidazol 3 usando condições de acoplamento de Suzuki-Miayura padrão (Journal of Organic Chemistry 1995, 60, 7508; Angew Chem. Int. Ed Engl 2001, 40, 4544, ou variação das mesmas). Deveria ser notado que o ácido borónico análogo de 2 pode ser usado no lugar do éster, e esse imidazol 3 poderia ser utilizado como uma mistura de regioisómeros, com relação à posição de R20, e é inconsequente ao resultado final da via sintética. Desprotecção do grupo pirrolidina de 4, no caso onde R14 = t-butilo, poderia ser conseguida por meio do tratamento com ácido forte tal como HC1 ou ácido trifluoroacético. A acilação de 5 pode ser conseguida sob condições de acilação padrão. Um reagente de acoplamento tal como HATU em combinação com uma base amina tal como base de Hunig pode ser usado neste sentido. Alternativamente, 5 pode ser feito reagir com um isocianato ou um cloreto de carbamoilo para proporcionar compostos de fórmula 6 onde R10 é uma amina. Pirrolidina 5 pode também ser feita reagir com cloroformatos para propiciar 6 onde R10 é um álcool.

Intermediários 4 poderiam também ser preparados através de uma via alternativa. O acoplamento de brometo 1 com imidazol 7 sob condição de substituição aromática 40 electrofílica assistida por paládio poderia propiciar 4 (Org. Let. 2003, 5, 4835). A alquilação de ceto-brometo 8 com ácido apropriadamente substituído 9 poderia propiciar cetoéster 10, que poderia ser ciclizado em imidazol 11 por meio da reacção com NH4OAc em solventes tais como tolueno, sob condições de aquecimento por micro-ondas ou térmico. A conversão de 11 a 5 é conseguida de uma maneira análoga a os métodos usados para preparar 5 a partir de 4.

Esquema 2:

Pirrolidina 5 pode ser convertida a uma mistura separável de amidas 12 e 13, usando condições de acoplamento de amida padrão tais como HATU com uma base amina, tal como base de Hunig. Por meio da utilização das 41 mesmas condições de acoplamento, qualquer dos produtos mono-derivatizados (12 ou 13) poderia ser convertido a 14, onde os grupos R10 nas duas fracções de pirrolidina poderiam ser diferentes ou os mesmos. No evento onde os dois grupos R10 de 14 são os mesmos, será idêntico com 6.

Esquema 3:

Compostos tais como 18 (ou o seu regioisómero 19) poderiam ser sintetizados a partir de dibrometo 1 por meio da integração das duas imidazopirrolidinas 7 e 17 de uma maneira sequencial via um reacção de substituição aromática electrofilica assistido por paládio. É aparente a um perito na especialidade que os produtos monoacoplados 15 e 16 poderiam necessitar de ser separados antes de proceder à segunda etapa de acoplamento. Mono-desprotecção da fracção de pirrolidina de 18 pode ser conseguida quando os dois grupos R14 são diferentes. Quando um R14 = benzilo, e o outro R14 = t-butilo o tratamento com condições hidrogenoliticas produz 20. Por exemplo, o catalisador de Pd/C na presença de gás hidrogénio e uma base tal como carbonato de potássio pode ser usado. A acilação de 20 pode ser conseguida sob condições de acilação padrão. Um 42 reagente de acoplamento tal como HATU em combinação com uma base amina tal como base de Hunig pode ser usado neste sentido. Alternativamente, 20 pode ser feito reagir com um isocianato, cloreto de carbamoilo ou um cloroformato para proporcionar compostos de fórmula 21 onde R10 é uma amina ou um álcool. Desprotecção posterior de 21 pode ser conseguida por meio do tratamento com ácido forte tal como HC1 ou ácido trifluoroacético. Condições padrão análogas a aquelas usadas para converter 20 a 21 podem ser usadas para preparar 23 a partir de 22. Em outra forma de realização onde cada R14 = t-Bu, conversão directa de 18 a 24 pode ser conseguida por meio do tratamento com ácido forte tal como HC1 ou ácido trif luoroacético. A conversão de 24 a 23 é conseguida de uma maneira análoga aos métodos usados para preparar 23 a partir de 22. Neste caso, no entanto, os caps em 23 serão idênticos. É aparente a um perito na especialidade que o composto 19 poderia também ser elaborado sob via similar como a descrita para 18 para preparar os produtos finais regioisoméricos correspondentes. 43

Esquema 4: ,ιο O composto 25 (25 = 6 (Esquema 1) em que cada R1” e -CH (NHBoc) R ) pode ser convertido a 26 via tratamento com ácido forte tal como HC1 ou ácido trif luoroacético. Amina 26 poderia ser acilada sob condições de acoplamento tais como HATU/ base de Hunig para propiciar amida 27a. O tratamento de amina 26 com cloroformato apropriado, isocianato ou cloreto de carbamoilo, ou cloreto de sulfonilo propicia compostos 27b, 27c ou 27d respectivamente. 44 <R*>»

<R*>.

(R5>.

27a(TsCOR“) 27b <T = C02RW) 27c (T = OONR^R®) 27d (T = SOjR39)

Esquema 5:

Os materiais de partida requeridos para as sequências sintéticas representadas nos Esquemas 1-4 poderiam ser preparados de acordo com os seguintes procedimentos. 0 intermediário chave 33 é preparado a partir de ceto-amida 36 ou ceto-éster 32 via aquecimento com acetato de amónio sob condições de micro-ondas ou térmicas. Ceto-amida 36 pode ser preparada a partir de 35 via condensação com um aminoácido cíclico ou acíclico apropriado sob condições de formação de amida padrão. 0 brometo 30 pode ser convertido a 32 por meio da reacção com um aminoácido N-protegido cíclico ou acíclico apropriado na presença de base tal como base de Hunig. A bromação de 33 (ou o seu derivado protegido alcoxi metilo 7) com uma fonte de ião bromónio, tal como bromo ou NBS, resulta na formação de 3. Um caso especial de imidazol 33 (onde R3 = H) pode ser preparado a partir de aminoácidos N-protegidos apropriadamente substituídos por meio da reacção com glioxal numa solução metanólica de hidróxido de amónio. 45

Esquema 6:

Os derivados de fenilglicina substituída podem ser preparados por um número de métodos exemplificado a seguir. Éster t-butílico de fenilglicina pode ser redutivamente alquilado (via A) com um aldeído apropriado e um redutor tal como cianoborohidreto de sódio em meio ácido. A hidrólise do éster t-butílico pode ser conseguida com ácido forte tal como HC1 ou ácido trif luoroacético.

Alternativamente, fenilglicina pode ser alquilado com um haleto de alquilo tal como iodeto de etilo e uma base tal como bicarbonato de sódio ou carbonato de potássio (via B). Via C ilustra alquilação redutora de fenilglicina como na via A seguido por uma segunda alquilação redutora com um aldeído alternado tal como formaldeído na presença de um agente redutor e ácido. A via D ilustra a síntese de fenilglicinas substituídas via os correspondentes análogos de ácido mandélico. A conversão do álcool secundário a um grupo abandonante competente pode ser conseguida com cloreto de p-toluensulfonilo. 0 deslocamento do grupo tosilato com uma amina apropriada seguido por remoção redutora do éster benzílico pode proporcionar derivados de fenilglicina substituída. Na via E um derivado de fenilglicina substituída racémico é resolvido por esterificação com um auxiliar quiral enantiomericamente puro tal como, mas não é limitado a (+)-1-feniletanol, (-)- 46 1-feniletanol, uma oxazolidinona de Evan, ou pantolactona enantiomericamente pura. A separação dos diastereómeros é conseguida via cromatografia (silica gel, HPLC, cristalização, etc) seguido por remoção do auxiliar quiral que proporciona derivados de fenilglicina enantiomericamente puros. A via H ilustra uma sequência de sintese que intercepta com a via E em que o auxiliar quiral mencionado anteriormente é instalado antes da adição de amina. Alternativamente, um éster de um ácido arilacético pode ser bromado com uma fonte de ião de bromónio tal como bromo, N- bromosuccinimida, ou CBr4. 0 brometo benzilico resultante pode ser deslocado com uma variedade de aminas mono- ou dissubstituidas na presença de uma base de amina terciária tal como trietilamina ou base de Hunig. A hidrólise do éster metilico via tratamento com hidróxido de litio em temperatura baixa ou 6N HC1 em temperatura elevada proporciona os derivados de fenilglicina substituída. Outro método é mostrado na via G. Os análogos de glicina podem ser derivatizados com uma variedade de haletos de arilo na presença de uma fonte de paládio (0) tal como bis (tributilfosfina) de paládio e base tal como fosfato de potássio. O éster resultante pode então ser hidrolisado pelo tratamento com base ou ácido. Deve ser entendido que outros métodos bem conhecidos para preparar derivados de fenilglicina existem na técnica e podem ser modificados para proporcionar os compostos desejados nesta descrição. Deve também ser entendido que os derivados finais de fenilglicina podem ser purificados à pureza enantiomérica superior a 98 % ee via HPLC preparativa usando, por exemplo, coluna quiral. É aparente a um perito na especialidade as abordagens descritas para a síntese de derivados de glicina aromáticos é igualmente aplicável aos derivados de glicina de síntese contendo grupo não aromático em C-2. 47‘''gf'

NHj

R^NHR27

Br

Esquema 7:

Br

Em outra forma de realização da presente descrição, derivados de glicina acilados podem ser preparados como é ilustrado a seguir. Os derivados de glicina em gue o ácido carboxilico é protegido como um éster facilmente removido, pode ser acilado com um cloreto de ácido na presença de uma base tal como trietilamina para proporcionar as amidas correspondentes (via A). A via B ilustra a acilação do derivado de glicina de partida com um cloroformato apropriado enquanto a via C mostra a reacção com um isocianato apropriado ou cloreto de carbamoilo. Cada um dos três intermediários mostrados nas vias A - C pode ser desprotegido por métodos conhecidos pelos peritos na especialidade (isto é; tratamento do éster t-butilico com base forte tal como HC1 ou ácido trifluoroacético). 48

Esquema δ Ácidos fenilacéticos amino-substituidos podem ser preparados pelo tratamento de um ácido clorometilfenilacético com um excesso de uma amina.

Condições de análise de composto A avaliação de pureza e análise de massa de baixa resolução foram conduzidas num sistema Shimadzu LC acoplado com sistema Waters Micromass ZQ MS. Deve ser notado que tempos de retenção podem variar ligeiramente entre máquinas. As condições de LC utilizadas na determinação do tempo de retenção (TR) foram:

Condição 1 Coluna % de B inicial % de B final Tempo de gradiente Tempo de parada

Fenomenex-Luna 3,OX 50 mm S10 0 100 2 min 3 min 49 49 Taxa de Fluxo Comprimento de onda Solvente A Solvente B Condição 2 Coluna % de B inicial % de B final Tempo de gradiente Tempo de parada Condição 2 Taxa de Fluxo Comprimento de onda Solvente A Solvente B Condição 3 Coluna % de B inicial % de B final Tempo de gradiente Tempo de parada Taxa de Fluxo Comprimento de onda Solvente A Solvente B Condição Ml Coluna: % de B inicial % de B final Tempo de gradiente Tempo de parada Taxa de fluxo Solvente A: = 4 ml/min = 220 nm = 0, 1 % de TFA em 10 % de metanol/90 % de H20 = 0,1 % de TFA em 90 % de metanol/10 % de H20 = Fenomenex-Luna 4,6X50 mm S10 = 0 = 100 = 2 min = 3 min = 5 ml/min = 220 nm = 0,1 % de TFA em 10 % de metanol/90 % de h2o = 0,1 % de TFA em 90 % de metanol/10 % de h2o = HPLC XTERRA C 18 3, 0 x 5 0 mm S 7 = 0 = 100 = 3 min = 4 min = 4 ml/min = 220 nm = 0,1 % de TFA em 10 % de metanol/90 % de h2o = 0,1 % de TFA em 90 % de metanol/10 % de h2o

Luna 4,6X 50 mm S10 = 0 = 100 = 3 min = 4 min = 4 ml/min = 95 % de H20 : 5 % de CH3CN, 10 mm de Acetato de amónio 50

Solvente B: = 5 % de H20 : 95 % de CH3CN; 10 mm de Acetato de amónio

Sintese de caps comuns

Condições de LC adicionais aplicáveis à presente secção, a não ser que indicado de outro modo.

Cond-MS W1

Coluna = XTERRA 3, 0 X 50 mm S7 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Tempo de parada = 3 min Taxa de fluxo = 5 ml/min Comprimento de onda = 22 0 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 O, o de metanol/90 o, o de h2o Solvente B = 0,1 % de TFA em 90 o, o de metanol/10 o, o de h2o Cond.-MS-W2 Coluna = XTERRA 3, 0 X 50 mm S7 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Tempo de parada = 4 min Taxa de fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 22 0 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 o, o de metanol/90 o. o de h2o Solvente B = 0,1 % de TFA em 90 o, o de metanol/10 o. o de h2o Cond-MS-WS Coluna = XTERRA 3, 0 X 50 mm S7 % de B inicial = 0 % de B final = 30 Tempo de gradiente = 2 min Tempo de parada = 3 min Taxa de fluxo = 5 ml/min Comprimento de onda = 22 0 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 o, 0 de metanol/90 o. o de h2o Solvente B = 0,1 % de TFA em 90 o, o de metanol/10 o. o de h2o 51

Cond-Dl

Coluna = XTERRA Cl8 3, 0 X 50 mm S7 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Tempo de parada = 4 min Taxa de fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 % de metanol/90 % de H20 Solvente B Cond.-D2 = 0,1 % de TFA em 90 % de metanol/10 % de H20 Coluna = Fenomenex-Luna 4,6 X 50 mm S 10 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Tempo de parada = 4 min Taxa de fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 % de metanol/90 % de H20 Solvente B Cond.-M3 = 0,1 % de TFA em 90 % de metanol/10 % de H20 Coluna = XTERRA Cl8 3, 0 X 50 mm S7 % de B inicial = 0 % de B final = 40 Tempo de gradiente = 2 min Tempo de parada = 3 min Taxa de fluxo = 5 ml/min Comprimento de onda = 220 nm Solvente A = 0, 1 % de TFA em 10 % de metanol/90 % de H20 Solvente B Condição I = 0,1 % de TFA em 90 % de metanol/10 % de H20 Coluna = Fenomenex-Luna 3,0 X 50 mm S 10 % de B inicial = 0 % de B final = 100 52

Tempo de gradiente = 2 min Tempo de parada = 3 min Taxa de fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 22 0 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 o, o de metanol/90 o, o de h2o Solvente B = 0,1 % de TFA em 90 o, o de metanol/10 o, o de h2o Condição II Coluna = Fenomenex i-Luna 4 ,6 X 50 mm SI0 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Tempo de parada = 3 min Taxa de fluxo = 5 ml/min Comprimento de onda = 22 0 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 o, o de metanol/90 o, o de H20 Solvente B = 0,1 % de TFA em 90 o, o de metanol/10 o, o de H20 Condição III Coluna = XTERRA Cl8 3, 0 x 50 mm , S7 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Tempo de parada = 4 min Taxa de fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 22 0 nm Solvente A = 0,1 % de TFA em 10 o, o de metanol/90 o, o de h2o Solvente B = 0,1 % de TFA em 90 o "o de metanol/10 o, "o de h2o

Cap-1 cu.

Uma suspensão de 10 % Pd/C (2,0 g) em metanol (10 ml) foi adicionada a uma mistura de (R)-2-glicina (10 g, 66,2 mmol) , formaldeído (33 ml de 37 % em peso em água) , IN HC1 53 (30 ml) e metanol (30 ml), e exposta a H2 (60 psi) durante 3 horas. A mistura de reacção foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®), e o filtrado foi concentrado a vácuo. O material bruto resultante foi recristalizado a partir de isopropanol para proporcionar o sal de HC1 de Cap-1 como uma agulha branca (4,0 g) . Rotação óptica: -117,1° [c = 9,95 mg/ml em H20; λ = 589 nm] . ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): δ 7,43-7,34 (m, 5H) , 4,14 (s, 1H) , 2,43 (s, 6H) ; LC (Cond. I): TR = 0,25; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + Ci0H14NO2 180,10; encontrado 180,17; HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci0Hi4NO2 180,1025; encontrado 180,1017.

Cap-2

NaBH3CN (6,22 g, 94 mmol) foi adicionado em porções ao longo de alguns minutos a uma mistura arrefecida (gelo/água) de (R)-2-Glicina (6,02 g, 39,8 mmol) e metanol (100 ml), e agitado durante 5 minutos. Acetaldeido (10 ml) foi adicionado gota a gota ao longo de 10 minutos e a agitação foi continuada à mesma temperatura arrefecida durante 45 minutos e a temperatura ambiente durante ~6,5 horas. A mistura de reacção foi arrefecida de volta com banho de gelo-água, tratada com água (3 ml) e então extinta com uma adição gota a gota de HC1 concentrado ao longo de ~ 45 minutos até que o pH da mistura fosse ~ 1,5 - 2,0. O banho de arrefecimento foi removido e a agitação foi continuada ao mesmo tempo em que se adicionava HC1 concentrado com a finalidade de manter o pH da mistura ao redor de 1,3-2,0. A mistura de reacção foi agitada durante a noite, filtrada para remover a suspensão branca, e o filtrado foi concentrado a vácuo. O material bruto foi recristalizado a partir de etanol para propiciar o sal de HC1 de Cap-2 como um sólido branco brilhante em duas 54 colheitas (colheita-1: 4,16 g; colheita-2: 2,19 g). 2Η RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 10,44 (1,00, s 1, 1H), 7,66 (m, 2H) , 7,51 (m, 3H) , 5,30 (s, 1H) , 3,15 (m 1, 2H) , 2,98 (m 1, 2H) , 1,20 (s 1 ap, 6H) . Colheita-1: [a] 25-l02,210 (c = 0,357, H20) ; colheita-2: [a] 25 -99, 7 ° (c = 0,357, H20) . LC(Cond. I): TR = 0,43 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+

Ci2Hi8N02: 208,13; encontrado 208,26.

Cap-3

Acetaldeido (5,0 ml, 89,1 mmol) e uma suspensão de 10 % Pd/C (720 mg) em metanol/H20 (4mL/l ml) foi sequencialmente adicionado a uma mistura arrefecida (~ 15 °C) de (R)-2-glicina (3,096 g, 20,48 mmol), IN HC1 (30 ml) e metanol (40 ml) . O banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção foi agitada sob um balão de H2 durante 17 horas. Um acetaldeido adicional (10 ml, 178,2 mmol) foi adicionado e a agitação continuada sob atmosfera de H2 durante 24 horas [Nota: o fornecimento de H2 foi completo como necessário ao longo de toda a reacção] . A mistura de reacção foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®), e o filtrado foi concentrado a vácuo. O material bruto resultante foi recristalizado a partir de isopropanol para proporcionar o sal de HC1 de (R)-2-(etilamino)-2-fenilacético ácido como um sólido branco brilhante (2,846 g) · 2H RMN (DMSO d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz ) : δ 14,15 (s 1, 1H) , 9, 55 (s 1, 2H) , 7,55-7,48 (m, 5H) , 2, 88 (ml, 1H) , 2,73 (m 1, 1H) , 1,20 (t ap, J = 7,2, 3H) . LC (Cond. I): TR = 0, 39 min; >95 % de índice de homogeneidade ; LC/MS: Anal.

Calcd. para [M+H]+ Ci0Hi4NO2: 180,10; encontrado 180,18.

Uma suspensão de 10 % Pd/C (536 mg) em metanol/H20 (3 ml/1 ml) foi adicionada a uma mistura de ácido (R) -2-(etilamino)- 2-fenilacético/HCl (1,492 g, 6,918 mmol), 55 formaldeído (20 ml de 37 % em peso em água), IN HC1 (20 ml) e metanol (23 ml). A mistura de reacção foi agitada sob um balão de H2 durante ~72 horas, onde o fornecimento de H2 foi completo como necessário. A mistura de reacção foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®) e o filtrado foi concentrado a vácuo. O material bruto resultante foi recristalizado a partir de isopropanol (50 ml) para proporcionar o sal de HC1 de Cap-3 como um sólido branco (985 mg). XH RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz) : δ 10,48 (s 1, 1H), 7,59-7,51 (m, 5H), 5,26 (s, 1H), 3,08 (s 1 ap, 2H), 2,65 (s 1, 3H), 1,24 (m 1, 3H) . LC (Cond. I): TR = 0,39 min; >95 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+CnHi6N02 :194, 12; encontrado 194,18; HRMS : Anal. Calcd. para [M+H]+CnHi6N02 :194,1180; encontrado 194,1181.

Cap-4

ClC02Me (3,2 ml, 41,4 mmol) foi adicionado gota a gota a uma semi-solução arrefecida (gelo/água) em THF (410 ml) de (R)-terc-butilo 2-amino-2-fenilacetato/HCl (9,877 g, 40,52 mmol) e diisopropiletilamina (14,2 ml, 81,52 mmol) ao longo de 6 min, e agitado a temperatura similar durante 5,5 horas. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi dividido em partições entre água (100 ml) e acetato de etilo (200 ml). A camada orgânica foi lavada com IN HC1 (25 ml) e solução de NaHC03 saturado (30 ml), seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo. O óleo incolor resultante foi triturado a partir de hexanos, filtrado e lavado com hexanos (100 ml) para proporcionar (R)-terc-butil 2-(metoxicarbonilamino)-2-fenilacetato como um sólido branco (7,7 g) . ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz) : 7,98 (d, >8,0, 1H), 7,37-7,29 (m, 5H), 5,09 (d, J= 8, 1H) , 56 3,56 (s, 3H) , 1,33 (s, 9H) . LC (Cond. I): TR = 1,53 min; ~90 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+Na]+ CnHigNNaCh: 288,12; encontrado 288,15. TFA (16 ml) foi adicionado gota a gota a uma solução arrefecida (gelo/água) em CH2C12 (160 ml) do produto acima ao longo de 7 minutos, e o banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção foi agitada durante 20 horas. Uma vez que a desprotecção ainda não estava completa, um TFA adicional (1,0 ml) foi adicionado e a agitação continuada durante umas 2 horas adicionais. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo de óleo resultante foi tratado com dietil éter (15 ml) e hexanos (12 ml) para proporcionar um precipitado. O precipitado foi filtrado e lavado com dietil éter/hexanos (razão —1:3; 30 ml) e seco a vácuo para proporcionar Cap-4 como um sólido branco esponjoso (5,57 g). Rotação óptica: -176,9° [c = 3,7 mg/ml em H20; λ = 58 9 nm] . RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 12,84 (s 1, 1H) , 7,96 (d, J = 8,3, 1H) , 7,41-7,29 (m, 5H) , 5,14 (d, J = 8,3, 1H) , 3,55 (s, 3H) . LC (Cond. I) : TR = 1,01 min; >95 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci0Hi2NO4 210,08; encontrado 210,17; HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+

Ci0H12NO4 210,0766; encontrado 210,0756.

Cap-5

Uma mistura de (R)- 2-glicina (1,0 g, 6,62 mmol), 1,4-dibromobutano (1,57 g, 7,27 mmol) e Na2C03 (2,10 g, 19,8 mmol) em etanol (40 ml) foi aquecida a 100 °C durante 21 horas. A mistura de reacção foi arrefecida até a temperatura ambiente e filtrada, e o filtrado foi concentrado a vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em etanol e acidificado com IN HC1 até pH 3-4, e o componente volátil 57 foi removido a vácuo. 0 material bruto resultante foi purificado por uma HPLC de fase reversa (água/metanol/TFA) para proporcionar o sal de TFA de Cap-5 como uma espuma branca semi-viscosa (1,0 g). XH RMN (DMSO-d6, δ = 2,5, 500 MHz) δ 10,68 (s 1, 1H), 7,51 (m, 5H) , 5,23 (s, 1H) , 3,34 (s 1 ap, 2H) , 3,05 (s 1 ap, 2H) , 1,95 (s 1 ap, 4H) ; RT = 0,30 minutos (Cond. I); >98 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci2H16N02: 206,12; encontrado 206,25.

Cap-6

O sal de TFA de Cap-6 foi sintetizado a partir de (R)- 2-glicina e l-bromo-2-(2-bromoetoxi)etano usando o método de preparação de Cap-5. ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5, 500 MHz) δ 12,20 (s 1, 1H), 7,50 (m, 5H), 4,92 (s, 1H), 3,78 (s 1 ap, 4H) , 3,08 (s 1 ap, 2H) , 2,81 (s 1 ap, 2H) ; RT = 0,32 minutos (Cond. I); >98 %; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+

Ci2Hi6N03: 222, 11; encontrado 222,20; HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci2Hi6N03: 222, 1130; encontrado 222,1121.

Cap-7 cg» CN- Cap-7a: enantiómero-l j Cap-7b: enantiómero-2 n

I

Uma solução em CH2C12 (200 ml) de cloreto de p-toluenossulfonilo (8,65 g, 45,4 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução arrefecida (-5 °C) em CH2C12 (200 ml) de (S)-benzil 2-hidroxi-2-fenilacetato (10,0 g, 41,3 mmol), trietilamina (5,75 ml, 41,3 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (0,504 g, 4,13 mmol), enquanto se mantinha a temperatura entre -5 °C e 0 °C. A reacção foi agitada a 0 °C durante 9 58 horas, e então armazenada num congelador (-25 C) durante 14 horas. Foi degelada até a temperatura ambiente e lavada com água (200 ml) , IN HC1 (100 ml) e salmoura (100 ml) , seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para proporcionar benzil 2-fenil-2- (tosiloxi)acetato como um óleo viscoso que solidificou ao deixar parado (16,5 g). A integridade quiral do produto não foi verificada e esse produto foi usado para a seguinte etapa sem purificação adicional. XH RMN (DMSO- d6, δ = 2,5, 500 MHz) δ 7,78 (d, J = 8,6, 2H) , 7,43-7,29 (m, 10H), 7,20 (m, 2H) , 6,12 (s, 1H) , 5,16 (d, J = 12,5, 1H), 5,10 (d, J = 12,5, 1H), 2,39 (s, 3H). TR = 3,00 (Cond. III); >90 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C22H2oNa05S: 419,09; encontrado 419,04.

Uma solução em THF (75 ml) de benzil 2-fenil-2-(tosiloxi)acetato (6,0 g, 15,1 mmol), 1-metilpiperazina (3,36 ml, 30,3 mmol) e N,N-diisopropiletilamina (13,2 ml, 75,8 mmol) foi aquecida a 65 °C durante 7 horas. A reacção foi deixada arrefecer até a temperatura ambiente e o componente volátil foi removido a vácuo. O resíduo foi dividido em partições entre acetato de etilo e água, e a camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo. O material bruto resultante foi purificado por cromatografia flash (sílica gel, acetato de etilo) para proporcionar benzil 2 —(4 — metilpiperazin-l-il)-2-fenilacetato como um óleo viscoso castanho alaranjado (4,56 g). Análise de HPLC quiral (Chiralcel OD-H) indicou que a amostra é uma mistura de enantiómeros numa razão 38,2 a 58,7. A separação dos enantiómeros foi realizada como se segue: o produto foi dissolvido em 120 ml de etanol/heptano (1:1) e injectado (5 ml/injecção) em coluna de HPLC quiral (Chiracel OJ, 5 cm IDx 50 cm L, 20 mm) eluindo com 85:15 Heptano/ etanol a 75 ml/min, e monitorizado a 220 nm. Enantiómero-1 (1,474 g) e enantiómero-2 (2,2149 g) foram recuperados como óleo viscoso. ΤΗ RMN (CDC13, δ = 7,26, 500 MHz) 7,44-7,40 (m, 59 2Η) , 7,33-7,24 (m, 6H) , 7,21-7,16 (m, 2H) , 5,13 (d, J = 12,5, 1H), 5,08 (d, J = 12,5, 1H), 4,02 (s, 1H), 2,65-2,38 (s 1 ap, 8H), 2,25 (s, 3H). TR = 2,10 (Cond. III); >98 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C20H25N2O2: 325, 19; encontrado 325,20.

Uma solução em metanol (10 ml) de enantiómero de benzil 2-(4-metilpiperazin-l-il)-2-fenilacetato (1,0 g, 3,1 mmol) foi adicionada a uma suspensão de 10 % Pd/C (120 mg) em metanol (5,0 ml). A mistura de reacção foi exposta a um balão de hidrogénio, sob uma monitorização cuidadosa, durante <50 minutos. Imediatamente após o fim da reacção, o catalisador foi filtrado através de terra diatomácea (Celite®) e o filtrado foi concentrado a vácuo para proporcionar Cap- 7, contaminado com ácido fenilacético como uma espuma de cor ocre (867,6 mg; a massa está acima do rendimento teórico). O produto foi usado para a seguinte etapa sem purificação adicional. ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5, 500 MHz) δ 7,44-7,37 (m, 2H) , 7,37-7,24 (m, 3H) , 3,92 (s, 1H) , 2, 63-2,48 (s 1 ap, 2H) , 2,48-2,32 (m, 6H) , 2,19 (s, 3H) ; RT = 0,31 (Cond. II); >90 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C13H19N2O2: 233,14; encontrado 235,15; HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C13H19N2O2: 235, 1447; encontrado 235, 1440. A síntese de Cap-8 e Cap-9 foi conduzida de acordo com a síntese de Cap-7 usando aminas apropriadas para a etapa de deslocamento de SN2 (isto é, 4-hidroxipiperidina para Cap-8 e (S)-3-fluoropirrolidina para Cap-9) e condições modificadas para a separação dos respectivos intermediários estereoisoméricos, como é descrito a seguir.

Cap-8

OH 8a ;çndntiçmçrg-1 8b:enantiómero-2 60 A separação enantiomérica do intermediário acetato de benzil 2-(4-hidroxipiperidin-l-il)-2-fenilo foi realizada usando as seguintes condições: o composto (500 mg) foi dissolvido em etanol/heptano (5 ml/45 ml) . A solução resultante foi injectada (5 ml/injecção) numa coluna de HPLC quiral (Chiracel OJ, 2 cm ID x 25 cm L, 10 mm) eluindo com 80:20 heptano/etanol a 10 ml/min, monitorizado a 220 nm, para proporcionar 186,3 mg de enantiómero-1 e 209,1 mg de enantiómero-2 como óleos viscosos de cor amarela clara. Este éster benzilico foi hidrogenolisado de acordo com a preparação de Cap-7 para proporcionar Cap-8: ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5, 500 MHz) 7,40 (d, J = 7, 2H) , 7,28-7,20 (m, 3H) , 3,78 (s 1H) , 3,46 (m, 1H) , 2,93 (m, 1H) , 2,62 (m, 1H) , 2,20 (m, 2H), 1,70 (m, 2H), 1,42 (m, 2H). TR = 0,28 (Cond. II); >98 % de indice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci3H18N03: 236, 13; encontrado 236, 07; HRMS:

Calcd. para [M+H]+ Ci3Hi8N03: 236, 1287; encontrado 236, 1283.

Cap-9

F A separação dias tereomérica do intermediário benzil foi 2- ( (S)-3-fluoropirrolidin-l-il)-2-fenilacetato realizada usando as seguintes condições: o éster (220 mg) foi separado numa coluna de HPLC quiral (Chiracel OJ-H, 0,46 cm ID x 25 cm L, 5 mm) eluindo com 95 % C02/ 5 % de metanol com 0,1 % de TFA, a 10 bar de pressão, 70 ml/min de taxa de fluxo, e uma temperatura de 35 °C. O eluido de HPLC para os respectivos estereoisómeros foi concentrado, e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (20 ml) e lavado com um meio aquoso (10 ml de água + 1 ml de solução de NaHC03 saturado) . A fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para proporcionar 92,5 mg de fracção-1 e 59,6 mg de fracção-2. Estes ésteres benzílicos foram 61 hidrogenolisados de acordo com a preparação de Cap-7 para preparar Caps 9a e 9b. Cap-9a (diastereómero-1; a amostra é um sal de TFA como um resultado de purificação numa HPLC de fase reversa usando solvente de H20/metanol/TFA) : ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5, 400 MHz) 7,55-7,48 (m, 5H) , 5,38 (d de m, J = 53,7, 1H), 5,09 (s 1, 1H), 3,84-2,82 (m 1,4H), 2,31- 2,09 (m,2H). TR = 0,42 (Cond. I); >95 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci2H15FN02: 224,11; encontrado 224,14; Cap-9b (diastereómero-2): 1R RMN(DMSO-d6, 8 = 2,5,400MHz)7,43-7,21 (m, 5H), 5,19 (d de m, J = 55,9, 1H) , 3,97 (s, 1H) , 2, 95-2,43 (m, 4H) , 2,19-1,78 (m, 2H) . TR = 0,44 (Cond. I); LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + Ci2Hi5FN02: 224,11; encontrado 224,14.

Cap-IO O ,

H A uma solução de D-prolina (2,0 g, 17 mmol) e formaldeído (2,0 ml de 37 % em peso em H20) em metanol (15 ml) foi adicionada uma suspensão de 10 % Pd/C (500 mg) em metanol (5 ml) . A mistura foi agitada sob um balão de hidrogénio durante 23 horas. A mistura de reacção foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®) e concentrada a vácuo para proporcionar Cap-10 como um sólido branco pérola (2,15 g) · ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5, 500 MHz) 3,42 (m, 1H) , 3,37 (dd, J = 9 ,4, 6,1, 1H), 2,85-2,78 (m, 1H) , 2,66 (s, 3H) , 2,21 -2,13 (m, 1H) , 1,93- -1,84 (m, 2H), 1,75-1,66 (m, 1H). TR = 0,28 (Cond. II); >98 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C6H12N02:130,0 9; encontrado 129, 96.

Cap-11

F 62

Uma mistura de ácido (2S, 4R.)-4-fluoropirrolidina-2-carboxílico (0,50 g, 3,8 mmol), formaldeido (0,5 ml de 37 % em peso em H20), 12 N HC1 (0,25 ml) e 10 % Pd/C (50 mg) em metanol (20 ml) foi agitada sob um balão de hidrogénio durante 19 horas. A mistura de reacção foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®) e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi recristalizado a partir de isopropanol para proporcionar o sal de HC1 de Cap-11 como um sólido branco (337,7 mg). ΧΗ RMN (DMS0-d6, δ = 2,5, 500 MHz) 5,39 (dm, J = 53,7, 1H), 4,30 (m, 1H) , 3,90 (ddd, J = 31,5, 13,5, 4,5, 1H) , 3,33 (dd, J = 25, 6, 13,4, 1H) , 2,85 (s,3H), 2,60-2,51 (m, 1H) , 2,39-2,26 (m, 1H) . TR = 0,28 (Cond. II); >98 % de índice de homogeneidade; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C6HnFN02: 148,08; encontrado 148,06.

Cap-12 (o mesmo que Cap-52)

O L-Alanina (2,0 g, 22,5 mmol) foi dissolvida em solução de carbonato de sódio aquoso a 10 % (50 ml) , e uma solução em THF (50 ml) de cloroformato de metilo (4,0 ml) foi adicionada à mesma. A mistura de reacção foi agitada sob condições ambientais durante 4,5 horas e concentrada a vácuo. O sólido branco resultante foi dissolvido em água e acidificado com IN HC1 a um pH ~ 2-3. A solução resultante foi extraída com acetato de etilo (3 x 100 ml) , e a fase orgânica combinada foi seca (Na2SC>4) , filtrada, e concentrada a vácuo para proporcionar um óleo incolor (2,58 g). 500 mg deste material foram purificados por uma HPLC de fase reversa (H20/metanol/TFA) para proporcionar 150 mg de Cap-12 como um óleo incolor. ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5, 500 MHz) 7,44 (d, J = 7,3, 0, 8H) , 7,10 (s 1, 0,2H), 3,97 (m, 1H), 3,53 (s, 3H), 1,25 (d, J = 7,3, 3H). 63

Cap-13

Uma mistura de L-alanina (2,5 g, 28 mmol), formaldeído (8,4 g, 37 % em peso), IN HC1 (30 ml) e 10 % Pd/C (500 mg) em metanol (30 ml) foi agitada sob uma atmosfera de hidrogénio (50 psi) durante 5 horas. A mistura de reacção foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®) e o filtrado foi concentrado a vácuo para proporcionar o sal de HC1 de Cap-13 como um óleo que solidificou ao deixar parado sob vácuo (4,4 g; a massa está acima do rendimento teórico). 0 produto foi usado sem purificação adicional. ΤΗ RMN (DMSO-de, δ = 2,5, 500 MHz) δ 12,1 (s 1, 1H) , 4,06 (q, J = 7,4, 1H), 2,76 (s, 6H), 1,46 (d, J = 7,3, 3H).

Cap-14

Cap-14

Etapa 1: Uma mistura de éster terc-butilico (R)-(-)-D-glicina (3,00 g, 12,3 mmol), NaBH3CN (0,773 g, 12,3 mmol), KOH (0,690 g, 12,3 mmol) e ácido acético (0,352 ml, 6,15 mmol) foi agitada em metanol a 0 °C. A esta mistura foi

adicionado dialdeido glutárico (2,23 ml, 12,3 mmol) gota a gota ao longo de 5 minutos. A mistura de reacção foi agitada enquanto se deixava aquecer até a temperatura ambiente e a agitação foi continuada na mesma temperatura durante 16 horas. O solvente foi subsequentemente removido e o resíduo foi dividido em partições com 10 % de NaOH aquoso e acetato de etilo. A fase orgânica foi separada, seca (MgS04) , filtrada e concentrada até secura para proporcionar um óleo claro. Este material foi purificado 64 por HPLC preparativa de fase reversa (Primesphere C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H2O-0,1 % de TFA) para dar o intermediário éster (2,70 g, 56 %) como um óleo claro. RMN (400 MHz, CDC13) δ 7,53-7,44 (m, 3H) , 7,40-7,37 (m, 2H) , 3,87 (d, J = 10,9 Hz, 1H) , 3,59 (d, J = 10,9 Hz, 1H) , 2,99 (t, >11,2 Hz, 1H) , 2,59 (t, >11,4 Hz, 1H) , 2,07-2,02 (m, 2H) , 1,82 (d, >1,82 Hz, 3H) , 1,40 (s, 9H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C17H25NO2: 275; encontrado: 276 (M+H) + .

Etapa 2: a uma solução agitada do intermediário éster (1,12 g, 2,88mmol) em diclorometano (10 ml) foi adicionado TFA (3 ml). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 4 horas e então foi concentrada até secura para dar um óleo amarelo claro. O óleo foi purificado usando HPLC preparativa de fase reversa (Primesphere C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H2O-0, 1 % de TFA) . As fracções apropriadas foram combinadas e concentradas até secura a vácuo. O resíduo foi então dissolvido numa quantidade mínima de metanol e aplicado a cartuchos de extracção de MCX LP (2x6 g) . Os cartuchos foram enxaguados com metanol (40 ml) e então o composto desejado foi eluído usando 2M amónia em metanol (50 ml). As fracções contendo produto foram combinadas e concentradas e o resíduo foi absorvido em água. A liofilização desta solução proporcionou o composto do título (0,492 g, 78 %) como um sólido amarelo claro. 2Η RMN (DMSO-d6) δ 7,50 (s, 5H) , 5,13 (s, 1H) , 3,09 (s 1, 2H) , 2, 92-2,89 (m, 2H) , 1,74 (m, 4H) , 1,48 (s 1, 2H) . LC/MS: Anal. Calcd. para Ci3Hi7N02: 219; encontrado: 220 (M+H)+.

Cap-15

65

Etapa 1: (S)-1-Feniletil 2-bromo-2-fenilacetato: a uma mistura de ácido α-bromofenilacético (10,75 g, 0,050 mol) , (S)-(-)-1-feniletanol (7,94 g, 0,065 mol) e DMAP (0,61 g, 5,0 mmol) em diclorometano seco (100 ml) foi adicionado EDCI sólido (12,46 g, 0,065 mol) todo de uma vez. A solução resultante foi agitada a temperatura ambiente sob Ar durante 18 horas e então foi diluída com acetato de etilo, lavada (H20 x 2, salmoura), seca (Na2S04) , filtrada, e concentrada para dar um óleo amarelo pálido. Cromatografia flash (Si02/ hexano-acetato de etilo, 4:1) deste óleo proporcionou o composto do título (11,64 g, 73 %) como um sólido branco. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 7,53-7,17 (m, 10H) , 5,95 (q, >6,6 Hz, 0,5H), 5,94 (q, >6,6 Hz, 0,5H), 5,41 (s, 0,5H), 5,39 (s, 0,5H), 1,58 (d, >6,6 Hz, 1,5H), 1,51 (d, >6,6 Hz, 1,5H) .

Etapa 2: (S)-1-Feniletil (R)-2-(4-hidroxi-4- metilpiperidin-l-il)- 2-fenilacetato: a uma solução de (S)-1- feniletil2-bromo-2-fenilacetato (0,464 g, 1,45 mmol) em THF (8 ml) foi adicionada trietilamina (0,61 ml,4,35 mmol), seguido por iodeto de tetrabutilamónio (0,215 g, 0,58 mmol) . A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 5 minutos e então uma solução de 4-metil-4-hidroxipiperidina (0,251 g, 2,18 mmol) em THF (2 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 1 hora a temperatura ambiente e então foi aquecida a 55-60 °C (temperatura do banho de óleo) durante 4 horas. A mistura de reacção arrefecida foi então diluída com acetato de etilo (30 ml), lavada (H20 x2, salmoura), seca (MgS04) , filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (0-60 % de acetato de etilo-hexano) para proporcionar primeiro o (S,R)-isómero do composto do título (0,306 g, 60 %) como um sólido branco e então o correspondente (S, S)-isómero (0,120 g, 23 %) , também como um sólido branco. (S, R)-isómero: 2Η RMN (CD3OD) δ 7,51-7,45 (m, 2H), 7,41-7,25 (m, 8H), 5,85 (q, >6,6 Hz, 66 1Η) , 4,05 (s, 1H), 2,56-2,45 (m, 2H) , 2,41-2,29 (m, 2H) , 1,71-1,49 (m, 4H) , 1,38 (d, J = 6,6 Hz, 3H) , 1,18 (s, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para C22H27NO3: 353; encontrado: 354 (M+H) + . (S,S)-isómero: ΤΗ RMN (CD3OD) δ 7,41-7,30 (m, 5H) , 7,20-7,14 (m, 3H) , 7, 06-7, 00 (m, 2H) , 5,85 (q, J = 6,6 Hz, 1H) , 4,06 (s, 1H) , 2,70-2, 60 (m, 1H) , 2,51 (dt, J = 6,6, 3,3 Hz, 1H) , 2,44-2,31 (m, 2H) , 1,75-1, 65 (m, 1H) , 1,65-1,54 (m, 3H), 1,50 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,20 (s, 3H). LCMS: Anal. Calcd. para C22H27NO3: 353; encontrado: 354 (M+H)+.

Etapa 3: ácido (R)-2-(4-Hidroxi-4-metilpiperidin-1-il)-2- fenilacético: a uma solução de (S)-1-feniletilo (R)-2-(4-hidroxi-4-metilpiperidin-l-il)-2-fenilacetato (0, 185 g, 0,52 mmol) em diclorometano (3 ml) foi adicionado ácido trifluoroacético (1 ml) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. Os voláteis foram subsequentemente removidos a vácuo e o residuo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Primesphere C-18, 20 x 100 mm; CH3CN-H2O-0, 1 % de TFA) para dar o composto do título (como sal TFA) como um sólido azulado pálido (0,128 g, 98 %) . LCMS: Anal. Calcd. para

Ci3H19N03: 249; encontrado: 250 (M+H) + .

Cap-16

(RhCap-16

Etapa 1: (S)-1-Feniletil2-(2-fluorofenil)acetato: Uma mistura de ácido 2-fluorofenilacético (5,45 g, 35,4 mmol), (S)-1-feniletanol (5,62 g, 46,0 mmol), EDCI (8,82 g, 46,0 mmol) e DMAP (0,561 g, 4,60 mmol) em CH2C12 (100 ml) foi agitada a temperatura ambiente durante 12 horas. O solvente foi então concentrado e o resíduo dividido em partições com H20-acetato de etilo. As fases foram separadas e a camada 67 aquosa extraída de volta com acetato de etilo (2x) . As fases orgânicas combinadas foram lavadas (H20, salmoura), secas (Na2S04) , filtradas, e concentradas a vácuo. 0 resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage/ 0-20 % de acetato de etilo- -hexano) para proporcionar o composto do título como um óleo incolor (8,38 g, 92 %) . ΧΗ RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,32-7,23 (m, 7H), 7,10-7,04 (m, 2), 5, 85 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 3,71 (s, 2H), 1,48 (d, J = 6,5 Hz, 3H) .

Etapa 2: (R) - ( (S)-1-Feniletil) 2-(2-fluorofenil)-2- (piperidin-l-il)acetato: a uma solução de (S)-1-feniletilo 2-(2-fluorofenil)acetato (5,00 g, 19,4 mmol) em THF (1200 ml) a 0 °C foi adicionado DBU (6,19 g, 40,7 mmol) e a solução foi deixada que aquecesse até a temperatura ambiente enquanto agitação durante 30 minutos. A solução foi então arrefecida até -78 °C e uma solução de CBr4 (13,5 g, 40,7 mmol) em THF (100 ml) foi adicionada e a mistura foi deixada que aquecesse até -10 °C e agitado a esta temperatura durante 2 horas. A mistura de reacção foi extinta com NH4C1 aq. saturado e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída de volta com acetato de etilo (2x) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas (H20, salmoura), secas (Na2S04) , filtradas, e concentradas a vácuo. Ao resíduo foi adicionada piperidina (5,73 ml, 58,1 mmol) e a solução foi agitada a temperatura ambiente durante 24 horas. Os voláteis foram então concentrados a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage/ 0-30 % de dietil éter-hexano) para proporcionar uma mistura pura de diastereómeros (razão 2:1 em ΧΗ RMN) como um óleo amarelo (2,07 g, 31 %) , juntamente com material de partida não reagido (2,53 g, 51 %) . Além disso, a cromatograf ia da mistura diastereomérica (Biotage/ 0-10 % de dietil éter- tolueno) proporcionou o composto do título como um óleo incolor (0,737 g, 11 %) . ΤΗ RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,52 68 (ddd, J = 9,4, 7,6, 1,8 Hz, 1H) , 7,33 - 7,40 (m, 1), 7,23 -7,23 (m, 4H) , 7,02 - 7,23 (m, 4H) , 5,86 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 4,45 (s, 1H), 2,39 - 2,45 (m, 4H), 1,52 -1,58 (m, 4H), 1,40-1,42 (m, 1H) , 1,38 (d, J = 6,6 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para C21H24FNO2: 341; encontrado: 342 (M+H)+.

Etapa 3: ácido (R)-2-(2 — fluorofenil)-2-(piperidin-1-il)acético: Uma mistura de (R)-((S)-1-feniletil) 2—(2— fluorofenil)-2-(piperidin-l-il)acetato (0,737 g, 2,16 mmol) e 20 % Pd(OH)2/C (0, 070 g) em etanol (30 ml) foi hidrogenada a temperatura ambiente e pressão atmosférica (balão de H2) durante 2 horas. A solução foi então purgada com Ar, filtrada através de terra diatomácea (Celite®), e concentrada a vácuo. Isto proporcionou o composto do titulo como um sólido incolor (0,503 g, 98 %) . 2Η RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,65 (ddd, J = 9,1, 7,6, 1,5 Hz, 1H) , 7,47-7,53 (m, 1H) , 7,21-7,30 (m, 2H) , 3,07-3,13 (m, 4H) , 1,84 (s 1, 4H) , 1,62 (s 1, 2H) . LCMS: Anal. Calcd. para Ci3Hi6N02: 237; encontrado: 238 (M+H)+.

Cap-17

(R)·Cap-17

Etapa 1: (S)-1-Feniletil (R)-2-(4-hidroxi-4- fenilpiperidin-l-il)- 2-fenilacetato: a uma solução de (S)-1- feniletil 2-bromo-2-fenilacetato (1,50 g, 4,70 mmol) em THF (25 ml) foi adicionada trietilamina (1,31 ml, 9,42 mmol), seguido por iodeto de tetrabutilamónio (0,347 g, 0,94 mmol). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 5 minutos e então uma solução de 4-fenil-4-hidroxipiperidina (1,00 g, 5,64 mmol) em THF (5 ml) foi adicionada. A mistura foi agitada durante 16 horas e então foi diluída com acetato de etilo (100 ml), lavada (H20 x2, 69 salmoura), seca (MgS04), filtrada e concentrada. 0 resíduo foi purificado numa coluna de sílica gel (0-60 % de acetato de etilo-hexano) para proporcionar uma mistura aproximadamente 2:1 de diastereómeros, como foi julgado por 1H RMN A separação destes isómeros foi realizada usando cromatografia de fluido supercrítico (Chiralcel OJ-H, 30 x2 5 0 mm; 2 0 % etanol em C02 a 35 °C), para dar primeiro 0 (R) - isómero do composto do titulo (0, 534 g, 27 %; ) como um óleo amarelo e então o correspondente (S)-isómero (0,271 g,

14 %) , também como um óleo amarelo. (S, R)-isómero: ΧΗ RMN (4 00 MHz, CD3OD) δ 7,55· -7,47 (m , 4H) r 7 , 44-7,25 (m, 10Hz), 7, 25- -7, 17 (m, 1H ) , 5, 88 (q, J = 6, 6 Hz f 1H), 4, 12 (s , 1H), 2, 82- -2,72 (m, 1H) ,2,64 (dt, J = 11, 1, 2,5 Hz, 1H) , 2,58- 2, 52 (m, 1H), 2, 40 (dt, J = 11, 1, 2, 5 H z, 1H), 2,20 (dt, J = 12, ,1, 4 ,6 Hz, 1H) , 2, 10 (dt, J = 12, 1 ,4,6 Hz, 1H) , 1,72- 1,57 (m, 2H), 1,53 (d, J = 6,5 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para C27H29NO3: 415; encontrado: 416 (M+H)+; (S, S)-isómero: H^MR (400 MHz, CD3OD) 8 7,55-7,48 (m, 2H), 7,45-7,39 (m, 2H) , 7,38-7,30 (m, 5H) , 7,25-7,13 (m, 4H) , 7,08-7,00 (m, 2H) , 5,88 (q, J = 6,6 Hz, 1H), 4,12 (s, 1H), 2,95-2,85 (m, t—1 2,68 (dt, J = 11,1, 2,3 Hz, 1H), 2,57-2,52 (m, 1H) , 2,42 (dt, J = 11,1, 2,5 Hz, 1H), 2,25 (dt, J = 12,1, 4, 6 Hz, 1H), 2,12 (dt, J = 12,1, 4,6 Hz, 1H), 1,73 (dd, J = 13, 6 , 3,0 Hz, 1H) , 1,64 (dd, J = 13,6, 3,0 Hz, 1H) , 1,40 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LCMS : Anal. Calcd. para C27H29NO3: 415; encontrado: 416 (M+H)+.

Os seguintes ésteres foram preparados de maneira similar: 70 Intermediário- 17a

Diastereómero 1: 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,36 (d, J = 6,41 Hz, 3H) 2,23-2,51 (m, 4H) 3,35 (s, 4H) 4,25 (s, 1H) 5,05 (s, 2H) 5,82 (d, J = 6,71 Hz, 1H) 7,15-7,52 (m, 15H). LCMS: Anal. Calcd. para: C28H3ON2O4 458,22; Encontrado: 459,44 (M+H)+. Diastereómero 2: 2H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,45 (d, J = 6,71 Hz, 3H) 2,27-2,44 (m, 4H) 3,39 (s, 4H) 4,23 (s, 1H) 5,06 (s, 2H) 5,83 (d, J = 6,71 Hz, 1H) 7,12 (dd, J = 6,41, 3,05 Hz, 2H) 7,19-7,27 (m, 3H) 7,27-7,44 (m, 10H). LCMS: Anal. Calcd. para: C28H3ON2O4 458,22; Encontrado: 459,44

Intermediário -17b

Intermediário -17c

(M+H)+._ Diastereómero 1: TR = 11,76 minutos (Cond. II); LCMS: Anal. Calcd. para C2oH22N203 338,16 Encontrado: 339,39 (M+H)+; Diastereómero 2: TR = 10,05 minutos (Cond. II); LCMS: Anal. Calcd. para: C20H22N2O3 338,16; Encontrado: 339,39 (M+H)+. Diastereómero 1: TR = 4,55 minutos (Cond. I); LCMS: Anal. Calcd. para: C21H26N2O2

338,20 Encontrado: 339,45 (M+H)+; Diastereómero 2: TR = 6,00 minutos (Cond. I) ; LCMS: Anal. Calcd. para: C21H26N2O2 338,20 Encontrado: 339,45 (M+H)+. 71

Intermediário -17d íT^i Diastereómero 1: TR = 7,19 minutos (Cond. I); LCMS: Anal. Calcd. para: C27H29NO2 399.22 Encontrado: 400,48 (M+H)+; Diastereómero 2: TR = 9,76 minutos (Cond. I) ; LCMS: Anal. Calcd. para: C27H29NO2 399.22 Encontrado: 400,48 (M+H)+. Condições de SFC Quiral para determinar o tempo de retenção

Condição I

Coluna: Coluna Chiralpak AD-H, 4,62x50 mm, 5mm

Solventes: 90 % CO2-10 % de metanol com 0,1 %DEA Temp: 35 °C Pressão: 150 bar Taxa de fluxo: 2,0 ml/min.

UV monitorizado @ 220 nm Injecção: 1,0 mg/3 ml de metanol Condição II

Coluna: Coluna Chiralcel OD-H, 4,62x50 mm, 5mm

Solventes: 90 % CO2-10 % de metanol com 0,1 % DEA Temp: 35 °C Pressão: 150 bar Taxa de fluxo: 2,0 ml/min. UV monitorizado @ 220 nm Injecção: 1,0 mg/ ml de metanol

Cap 17, Etapa 2; ácido (R)-2-(4-Hidroxi-4- fenilpiperidin-l-il)-2-fenilacético: A uma solução de (S)-1-feniletil (R)-2-(4-hidroxi-4-fenilpiperidin-l-il)-2- fenilacetato (0,350 g, 0,84 mmol) em diclorometano (5 ml) foi adicionado ácido trifluoroacético (1 ml) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. Os voláteis foram subsequentemente removidos a vácuo e o residuo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Primesphere C-18, 20 x 100 mm; CH3CN-H2O-0, 1 % de TFA) 72 para dar o composto do título (como sal TFA) como um sólido branco (0,230 g, 88 %) . LCMS: Anal. Calcd. para C19H21NO3: 311,15; encontrado: 312 (M+H)+. 72 Os seguintes ácidos carboxílicos foram preparados em forma opticamente pura de uma maneira similar:_

Cap-17a ô N 0 TR = 2,21 (Cond. II); ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,20-2,35 (m, 2H) 2,34-2,47 (m, 2H) 3,37 (s, 4H) 3,71 (s, 1H) 5,06 (s, 2H) 7,06-7,53 (m, 10H). LCMS: Anal. Calcd. para: C20H22N2O4 354,16; Encontrado: 355,38 (M+H)+. Cap-17b cV N Onr- TR = 0,27 (Cond. III); LCMS: Anal. Calcd. para: C12H14N2O3 234,10; Encontrado: 235,22 (M+H)+, Cap-17c ò oV TR = 0,48 (Cond. II); LCMS: Anal. Calcd. para: Ci3H18N202 234, 14; Encontrado: 235,31 (M+H)+. Cap-17d r 0 TR = 2,21 (Cond. I); LCMS: Anal. Calcd. para: Ci9H2iN02 295, 16; Encontrado: 296,33 (M+H)+. Condições de LCMS para determinar 0 tempo de retenção

Condição I

Coluna: Fenomenex-Luna 4,6 X 50 mm S10 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 4 min 73

Taxa de Fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 220

Solvente A = 10 % de metanol - 90 % de H20 - 0,1 % de TFA Solvente B = 90 % de metanol - 10 % de H20 - 0,1 % de TFA Condição II

Coluna: Waters-Sunfire 4,6 X 50 mm S5 % de B inicial = 0 % de B final = 100

Tempo de gradiente = 2 min

Taxa de Fluxo = 4 ml/min

Comprimento de onda = 220

Solvente A = 10 % de metanol - 90 % de H20 - 0,1 % de TFA

Solvente B = 90 % de metanol - 10 % de H20 - 0,1 % de TFA

Condição III

Coluna: Fenomenex lOm 3,0 X 50 mm % de B inicial = 0 % de B final = 100

Tempo de gradiente = 2 min

Taxa de Fluxo = 4 ml/min

Comprimento de onda =220

Solvente A = 10 % de metanol - 90 % de H20 - 0,1 % de TFA

Solvente B = 90 % de metanol - 10 % de H20 - 0,1 % de TFA

Cap-18

Etapa 1; (R,S)-Etil 2-(4-piridil)-2-bromoacetato: a uma solução de etilo 4-piridilacetato (1,00 g, 6,05 mmol) em THF seco (150 ml) a 0 °C sob árgon foi adicionado DBU (0,99 ml, 6,66 mmol). A mistura de reacção foi deixada que aquecesse até a temperatura ambiente ao longo de 30 minutos e então foi arrefecida até -78 °C. A esta mistura foi adicionado CBr4 (2,21 g, 6,66 mmol) e a agitação foi continuada a -78 °C durante 2 horas. A mistura de reacção foi então extinta com NH4C1 aq. sat. e as fases foram separadas. A fase orgânica foi lavada (salmoura), seca (Na2S04) , filtrada, e concentrada a vácuo. 0 óleo amarelo resultante foi imediatamente purificado por cromatografia flash (Si02/ hexano-acetato de etilo, 1:1) para proporcionar o composto do titulo (1,40 g, 95 %) como óleo amarelo um pouco instável. 1H. RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,62 (dd, J = 4,6, 1,8 Hz, 2H) , 7,45 (dd, J = 4,6, 1,8 Hz, 2H) , 5,24 (s, 1H) , 4,21-4,29 (m, 2H) , 1,28 (t, J = 7,1 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para CgH^BrNCt: 242, 244; encontrado: 243, 245 (M+H)+.

Etapa 2; (R,S)-Etil 2-(4-piridil)-2-(N,N- dimetilamino)acetato: a uma solução de (R,S)-etilo 2-(4-piridil)-2- bromoacetato (1,40 g, 8,48 mmol) em DMF (10 ml) a temperatura ambiente foi adicionada dimetilamina (2M em THF, 8,5 ml, 17,0 mmol). Após o fim da reacção (como foi julgado por cromatografia de camada fina) os voláteis foram removidos a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (Biotage, coluna 40+M Si02; 50 %-100 % de acetato de etilo- hexano) para proporcionar o composto do título (0, 539 g, 31 %) como um óleo amarelo claro. 1H RMN (400 MHz, CDC13) δ 8, 58 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7 , 36 (d, J = 6,0 Hz, 2H) , 4,17 (m, 2H) , 3, 92 (s, 1H) , 2,27 (s, 6H) , 1,22 (t, J = 7, 0 Hz) . LCMS : Anal. Calcd. para ΰηΗ16Ν202: 208; encontrado: 209 (M+H)+.

Etapa 3; ácido (R,S)-2-(4-Piridil)-2-(N,N- dimetilamino)acético: a uma solução de (R,S)-etil 2 — (4 — piridil)-2-(N,N- dimetilamino)acetato (0,200 g, 0,960 mmol) numa mistura de THF-metanol-H20 (1:1:1, 6 ml) foi adicionado LiOH em pó (0,120 g, 4,99 mmol) a temperatura ambiente. A solução foi agitada durante 3 horas e então foi acidificada até pH 6 usando IN HC1. A fase aquosa foi lavada com acetato de etilo e então foi liofilizada para 75 dar o dicloridrato do composto do titulo como um sólido amarelo (contendo LiCl) . 0 produto foi usado como tal em etapas subsequentes . RMN (400 MHz , DMSO-d6) δ 8,49 (d, J = 5,7 Hz, 2H) , 7,34 (d, J = 5,7 Hz, 2H) , 3,56 i [s, 1H) , 2,21 (s, 6H) . Os seguintes exemplos foram preparados de maneira similar usando o método descrito acima;

Cap-l9 NMe2 jj^V^COjH LCMS: Anal. Calcd. para C9H12N202 : 180; encontrado: 181 (M+H)+. Cap-2 0 NMe2 rj^Y^COíH LCMS: sem ionização. 2H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,55 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 7,84 (ap t, J = 5,3 Hz, 1H) , 7,61 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,37 (ap t, J = 5,3 Hz, 1H) , 4,35 (s, 1H) , 2,60 (s, 6H) . Cap-21 NMe2 |f^Y"C02H cr^rr LCMS: Anal. Calcd. para C9HhC1N202: 214, 216; encontrado: 215, 217 (M+H)+. Cap-22 NMe2 fV^C02H LCMS: Anal. Calcd. para CnH12N204 : 224; encontrado: 225 (M+H)+. Cap-23 NMe2 LCMS: Anal. Calcd. para Ci4H15N02: 229; encontrado: 230 (M+H)+. Cap-24 NMe2 F3C^c°2h LCMS: Anal. Calcd. para CuH12F3N02: 247; encontrado: 248 (M+H)+. Cap-25 NMe2 ^xf3 LCMS: Anal. Calcd. para CuH12F3N02: 247; encontrado: 248 (M+H)+. Cap-2 6 NMe2 (j^V^C02H LCMS: Anal. Calcd. para C10H12FNO2: 197; encontrado: 198 (M+H)+. 76

Cap-27 NMe2 LCMS: Anal. Calcd. para C10H12FNO2: 247; encontrado: 248 (M+H)+. Cap-2 8 NMe2 cl _ JL V^^jp C02H LCMS: Anal. Calcd. para C10H12ClNO2: 213; encontrado: 214 (M+H)+. Cap-2 9 NMe2 ^Cl LCMS: Anal. Calcd. para C10H12ClNO2: 213; encontrado: 214 (M+H)+. Cap-30 NMe2 LCMS: Anal. Calcd. para C10H12ClNO2: 213; encontrado: 214 (M+H)+. Cap-31 NMe2 /Y^COjH LCMS: Anal. Calcd. para C8H12N202S: 200; encontrado: 201 (M+H)+. Cap-32 NMe2 LCMS: Anal. Calcd. para C8H11N02S: 185; encontrado: 186 (M+H)+. Cap-33 NMe2 Cr^002" LCMS: Anal. Calcd. para C8HnN02S: 185; encontrado: 186 (M+H)+. Cap-34 λ» NMe2 Vn LCMS: Anal. Calcd. para CuH12N203: 220; encontrado: 221 (M+H)+. Cap-35 /==^ NMe2 Ijy" co2h LCMS: Anal. Calcd. para Ci2H13N02S: 235; encontrado: 236 (M+H)+. Cap-36 NMe2 LCMS: Anal. Calcd. para Ci2H14N202S: 250; encontrado: 251 (MtH)t. 77 77 Cap-37

Me2N^j^°Et Ο

A

Etapa 1; (R, S)-Etil 2-(quinolin-3-il)-2-(N,N- dimetilamino)-acetato: Uma mistura de etil N,N- dimetilaminoacetato (0,462 g, 3,54 mmol), K3P04 (1,90 g, 8,95 mmol), Pd(t-Bu3P) 2 (0, 090 g, 0,176 mmol) e tolueno (10 ml) foi desgaseifiçada com uma corrente de bolhas de Ar durante 15 minutos. A mistura de reacção foi então aquecida a 100 °C durante 12 horas, após o qual foi arrefecida até a temperatura ambiente e vertida em H20. A mistura foi extraída com acetato de etilo (2x) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas (H20, salmoura), secas (Na2S04) , filtradas, e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado primeiro por HPLC preparativa de fase reversa (Primesphere C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H20-5 mM NH4OAc) e então por cromatografia flash (Si02/ hexano-acetato de etilo, 1:1) para proporcionar o composto do título (0,128 g, 17 %) como um óleo de cor laranja. XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,90 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,32 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 8,03-8,01 (m, 2H) , 7,77 (ddd, J = 8,3, 6,8, 1,5 Hz, 1H) , 7,62 (ddd, J = 8,3, 6,8, 1,5 Hz, 1H) , 4,35 (s, 1H) , 4,13 (m, 2H) , 2,22 (s, 6H) , 1,15 (t, J = 7,0 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para

Ci5H18N202: 258; encontrado: 259 (M+H) + .

Etapa 2; ácido (R,S) 2-(Quinolin-3-il)-2-(N,N- dimetilamino)acético: Uma mistura de (R,S)-etil 2- (quinolin-3-il)- 2-(N,N-dimetilamino)acetato (0,122 g, 0,472 mmol) e 6M HC1 (3 ml) foi aquecida a 100 °C durante 12 horas. O solvente foi removido a vácuo para proporcionar o dicloridrato do composto do título (0,169 g, >100 %) como 78 uma espuma amarela clara. 0 material não purificado foi usado em etapas subsequentes sem purificação adicional. LCMS: Anal. Calcd. para C13H14N2O2: 230; encontrado: 231 78 (M+H)+.

A

Cap-38

B

F ^ Cap-38

OH

Etapa 1; (R) - ( (S)-1-feniletil) 2-(dimetilamino)-2-(2- fluorofenil)acetato e (S)-((S)-1-feniletil) 2- (dimetilamino)-2-(2-fluorofenil)acetato: A uma mistura de ácido (RS)-2-(dimetilamino)-2-(2-fluorofenil)acético (2,60 g, 13,19 mmol), DMAP (0,209 g, 1,71 mmol) e (S)-l-feniletanol (2,09 g, 17,15 mmol) em CH2C1(40 ml) foi adicionado EDCI (3,29 g, 17,15 mmol) e a mistura foi deixada a agitar a temperatura ambiente durante 12 horas. O solvente foi então removido a vácuo e o resíduo dividido em partições com acetato de etilo-H20. As camadas foram separadas, a camada aquosa foi extraída de volta com acetato de etilo (2x) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas (H20, salmoura), secas (Na2S04) , filtradas, e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage/ 0-50 % de dietil éter- hexano). A mistura diastereomérica pura resultante foi então separada por HPLC preparativa de fase reversa (Primesphere C-18,30x 100 mm; CH3CN-H20-0, 1 % de TFA) para dar primeiro (S)-1-fenetil(R)-2-(dimetilamino)-2-(2- fluorofenil) acetato (0,501 g, 13 %) e então (S)-1-fenetil (S)-2-(dimetilamino)-2-(2-fluorofenil)-acetato (0,727 g, 18 %) , ambos como os seus sais de TFA. (S, R)-isómero: ΧΗ RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7, 65-7,70 (m, 1H) , 7,55-7, 60 (ddd, J = 79 9,4, 8,1, 1,5 Hz, 1H), 7,36-7,41 (m, 2H) , 7,28-7,34 (m,

5H) , 6,04 (q, J = 6:5 Hz, 1H) , 5,60 (s, 1H) , 2,84 (s, 6H) , 1,43 (d, J = 6,5 Hz, 3H). LCMS: Anal. Calcd. para Ci8H2oFN02: 301; encontrado: 302 (M+H)+; (S, S) -isómero ΤΗ RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,58-7, 63 (m, 1H) , 7,18-7,31 (m, 6H) , 7,00 (dd, J = 8,5, 1,5 Hz, 2H) , 6,02 (q, J = 6,5 Hz, 1H) , 5,60 (s, 1H), 2,88 (s, 6H) , 1,54 (d, J = 6,5 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para Ci8H20FNO2: 301; encontrado: 302 (M+H)+.

Etapa 2; ácido (R)-2-(dimetilamino)-2-(2- fluorofenil)acético: Uma mistura de (R)-((S)-1-feniletil) 2-(dimetil- amino)-2-(2-fluorofenil)acetato sal de TFA (1,25 g, 3,01 mmol) e 20 % Pd(OH)2/C (0,125 g) em etanol (30 ml) foi hidrogenada a temperatura ambiente e pressão atmosférica (H2 balão) durante 4 horas. A solução foi então purgada com Ar, filtrada através de terra diatomácea (Celite®) , e concentrada a vácuo. Isto deu o composto do titulo como um sólido incolor (0,503 g, 98 %). XH RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,53-7, 63 (m, 2H) , 7,33-7,38 (m, 2H) , 5,36 (s, 1H) , 2,86 (s, 6H) . LCMS: Anal. Calcd. para Ci0Hi2FNO2: 197; encontrado: 198 (M+H)+. O S-isómero poderia ser obtido a partir de (S) — ( (S)—1 — feniletil)2-(dimetilamino)-2-(2-fluorofenil)acetato sal de TFA de maneira similar.

Cap-39

cap-39

Uma mistura de (R) -(2-clorofenil)glicina (0,300 g, 1,62 mmol), formaldeido (35 % solução aquosa, 0,80 ml, 3,23 mmol) e 20 % Pd(OH)2/C (0,050 g) foi hidrogenada a temperatura ambiente e pressão atmosférica (balão de H2) durante 4 horas. A solução foi então purgada com Ar, filtrada através de terra diatomácea (Celite®) e 80 concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Primesphere C-18, 30 x 100 mm; CH3CN-H20- 0,1 % de TFA) para dar o sal de TFA do composto do título ácido (R)-2-(dimetilamino)-2-(2- clorofenil)acético como um óleo incolor (0,290 g, 55 %) . 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,59-7, 65 (m, 2H) , 7,45-7,53 (m, 2H) , 5,40 (s, 1H) , 2,87 (s, 6H) . LCMS: Anal. Calcd. para CioHi2C1N02: 213; encontrado: 214 (M+H) + .

Cap-40

O

cap-40 A uma solução de gelo fria de (R) — (2 — clorofenil)glicina (1,00 g, 5,38 mmol) e NaOH (0,862 g, 21,6 mmol) em H20 (5,5 ml) foi adicionado cloroformato de metilo (1,00 ml, 13,5 mmol) gota a gota. A mistura foi deixada a agitar a 0 °C durante 1 hora e então foi acidificada pela adição de HC1 conc. (2,5 ml) . A mistura foi extraída com acetato de etilo (2x) e a fase orgânica combinada foi lavada (H20, salmoura) , seca (Na2S04) , filtrada, e concentrada a vácuo para dar o composto do título ácido (R)-2-(metoxicarbonilamino)-2-(2- clorofenil)acético como uma espuma de cor laranja amarelada

(1,31 g, 96 %) · ΧΗ RMN (400 MHz , CD3OD) δ 7,39-7,43 (m, 2H) , 7,29 - 7,31 (m, 2H) , 5,69 (s, 1H) , 3,65 (s, 3H). LCMS: Anal. Calcd. para C10H10CINO4: 243; Cap-41 encontrado: 244 (M+H)+. c -V3 ,G _ yo \ o OH ( \ OH cap-41 81 A uma suspensão de ácido 2-(2- (clorometil)fenil)acético (2,00 g, 10,8 mmol) em THF (20 ml) foi adicionada morfolina (1,89 g, 21,7 mmol) e a solução foi agitada a temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura de reacção foi então diluída com acetato de etilo e extraída com H20 (2x). A fase aquosa foi liofilizada e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (Biotage/ 0-10 % de metanol-CH2Cl) para dar o composto do título ácido 2-(2-(Morfolinometil)fenil)acético como um sólido incolor (2,22 g, 87 %) . XH RMN (400 MHz, CD3OD) 8 7,37-7,44 (m, 3H), 7,29-7,33 (m, 1H), 4,24 (s, 2H) , 3,83 (s 1, 4H) , 3,68 (s, 2H) , 3,14 (s 1, 4H) . LCMS: Anal. Calcd. para Ci3Hi7N03: 235; encontrado: 236 (M+H)+.

Os seguintes exemplos foram preparados de maneira

82Cap-45a

NH2 • sal de pTsOH

^NH

Cap-45a HMDS (1,85 ml, 8,77 mmol) foi adicionado a uma suspensão de ácido (R)-2-amino-2-fenilacético p- toluenosulfonato (2,83 g, 8,77 mmol) em CH2C12 (10 ml) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. Isocianato de metilo (0,5 g, 8,77 mmol) foi adicionado numa porção agitando continuamente durante 30 minutos. A reacção foi extinta pela adição de H20 (5 ml) e o precipitado resultante foi filtrado, lavado com H20 e n- hexanos, e seco sob vácuo. Ácido (R) - 2-(3-metilureido)-2-fenilacético (1,5 g; 82 %) foi recuperado como um sólido branco e foi usado sem purificação adicional. 2Η RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,54 (d, J = 4,88 Hz, 3H) 5,17 (d, J = 7,93 Hz, 1H) 5,95 (q, J = 4,48 Hz, 1H) 6,66 (d, J = 7,93

Hz, 1H) 7,26-7,38 (m, 5H) 12,67 (s, 1H). LCMS: Anal. Calcd.

para CioH12N203 208, 08 encontrado 209, 121 (M+H)+; HPLC

Fenomenex C-18 3, 0 x 46 mm, 0 a 100 % B ao longo de 2 minutos, tempo de espera de 1 minuto, A = 90 % de água, 10 % de metanol, 0,1 % de TFA, B = 10 % de água, 90 % de metanol, 0,1 % de TFA, TR = 1,38 min, 90 % de índice de homogeneidade.

Cap-46

cap-46 sal de pTsOH 83

0 produto desejado foi preparado de acordo com o método descrito para Cap-45a. ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO- d6) δ ppm 0,96 (t, J = 7,17 Hz, 3H) 2,94-3, 05 (m, 2H) 5,17 (d, J = 7,93 Hz, 1H) 6,05 (t, J = 5,19 Hz, 1H) 6,60 (d, J = 7,63

Hz, 1H) 7,26-7,38 (m, 5H) 12,68 (s, 1H). LCMS: Anal. Calcd. para Ci1H14N203 222,10 encontrado 223, 15 (M+H) + . HPLC XTERRA C-18 3,0 x 506 mm, 0 a 100 % B ao longo de 2 minutos, tempo de espera de 1 minuto, A = 90 % de água, 10 % de metanol, 0,2 % H3PO4, B = 10 % de água, 90 % de metanol, 0,2 % H3PO4, RT = 0,87 min, 90 % de indice de homogeneidade.

Cap-47

B Cap-47

Etapa 1; (R)-terc-butil 2-(3,3-dimetilureido)-2- fenilacetato: a uma solução agitada de (R)-terc-butil-2-amino-2- fenilacetato (1,0 g, 4,10 mmol) e base de Hunig (1,79 ml, 10,25 mmol) em DMF (40 ml) foi adicionado cloreto de dimet ilcarbamoilo (0,38 ml, 4,18 mmol) gota a gota ao longo de 10 minutos. Após agitação a temperatura ambiente durante 3 horas, a reacção foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi dissolvido em acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com H20, IN aq. HC1 e salmoura, seca (MgSCg) , filtrada e concentrada sob pressão reduzida. (R)-terc- butil 2-(3,3-dimetilureido)-2-fenilacetato foi obtido como um sólido branco (0,86 g; 75 %) e usado sem purificação adicional. ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 1,33 (s, 9H) 2,82 (s, 6H) 5,17 (d, J = 7,63

Hz, 1H) 6,55 (d, J = 7,32 Hz, 1H) 7,24-7,41 (m, 5H). LCMS:

Anal. Calcd. para C15H22N2O3 278,16 encontrado 279, 23 (M+H)+; HPLC Fenomenex LUNA C-18 4,6 x 50 mm, 0 a 100 % B ao longo de 4 minutos, tempo de espera de 1 minuto, A = 90 % de 84 água, 10 % de metanol, 0,1 % de TFA, B = 10 % de água, 90 % de metanol, 0,1 % de TFA, TR = 2,26 min, 97 % de índice de homogeneidade.

Etapa 2; ácido (R)-2-(3,3-dimetilureido)-2- fenilacético: a uma solução agitada de ((R)-terc-butil 2-(3,3-dimetil- ureido)-2-fenilacetato (0,86 g, 3,10 mmol) em CH2C12 (250 ml) foi adicionado TFA (15 ml) gota a gota e a solução resultante foi agitada a rt durante 3 horas. O composto desejado foi então separado por precipitação da solução com uma mistura de EtOAC:Hexanos (5:20), separado por filtração e seco sob pressão reduzida. Ácido (R)-2-(3,3-dimetilureido)-2-fenilacético foi isolado como um sólido branco (0,59 g, 86 %) e usado sem purificação adicional. XH RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,82 (s, 6H) 5,22 (d, J = 7,32 Hz, 1H) 6,58 (d, J = 7,32 Hz, 1H) 7,28 (t, J = 7,17 Hz, 1H) 7,33 (t, J = 7,32 Hz, 2H) 7,38-7,43 (m, 2H) 12,65 (s, 1H) . LCMS: Anal. Calcd. para CnHi4N203: 222,24; encontrado: 223,21 (M+H)+. HPLC XTERRA C-18 3,0 x 50 mm, 0 a 100 % B ao longo de 2 minutos, tempo de espera de 1 minuto, A = 90 % de água, 10 % de metanol, 0,2 % H3PO4, B = 10 % de água, 90 % de metanol, 0,2 % H3P04, RT = 0,75 min, 93 % de índice de homogeneidade.

Cap-48

B Cap-48

Etapa 1; (R)-terc-butil 2-(3-ciclopentilureido)-2- fenilacetato: a uma solução agitada de (R) -2-amino-2-feny-lacético ácido cloridrato (1,0 g, 4,10 mmol) e base de Hunig (1,0 ml, 6,15 mmol) inDMF (15 ml) foi adicionado 85 isocianato de ciclopentilo (0,46 ml, 4,10 mmol) gota a gota e ao longo de 10 minutos. Após agitação a temperatura ambiente durante 3 horas, a reacção foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi absorvido em acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com H20 e salmoura, seca (MgS04) , filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. (R)-terc-butil 2-(3-ciclopentilureido)-2- fenilacetato foi obtido como um óleo opaco (1,32 g; 100 %) e usado sem purificação adicional. ΤΗ RMN (500 MHz, CD3C1-D) δ ppm 1,50-1,57 (m, 2H) 1,58-1, 66 (m, 2H) 1, 87-1, 97 (m, 2H) 3,89-3,98 (m, 1H) 5,37 (s, 1H) 7,26-7,38 (m, 5H). LCMS: Anal. Calcd. para Ci9H26N203 318,19 encontrado 319,21 (M+H)+; HPLC XTERRA C-18 3, 0 x 50 mm, 0 a 100 % B ao longo de 4 minutos, tempo de espera de 1 minuto, A = 90 % de água, 10 % de metanol, 0,1 % de TFA, B = 10 % de água, 90 % de metanol, 0,1% de TFA, TR = 2,82 min, 96 % de índice de homogeneidade.

Etapa 2; ácido (R)-2-(3-ciclopentilureido)-2- fenilacético: a uma solução agitada de (R)-terc-butil 2-(3- ciclopentilureido)-2-fenilacetato (1,31 g, 4,10 mmol) em CH2C12 (25 ml) foi adicionado TFA (4 ml) e triet ilsilano (1,64 ml; 10,3 mmol) gota a gota, e a solução resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 6 horas. Os componentes voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o produto bruto foi recristalizado em acetato de etilo/pentanos para produzir ácido (R) - 2-(3- ciclopentilureido)-2-fenilacético como sólido branco (0,69 g, 64 %) . 2H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,17-1,35 (m, 2H) 1,42-1,52 (m, 2H) 1,53-1, 64 (m, 2H) 1, 67-1, 80 (m, 2H) 3,75- 3,89 (m, 1H) 5,17 (d, J = 7,93 Hz, 1H) 6,12 (d, J = 7,32

Hz, 1H) 6,48 (d, J = 7,93 Hz, 1H) 7,24-7,40 (m, 5H) 12,73 (s, 1H) . LCMS: Anal. Calcd. para Ci4Hi8N203: 262,31; encontrado: 263,15 (M+H)+. HPLC XTERRA C-18 3,0 x 50 mm, 0 a 100 % B ao longo de 2 minutos, tempo de espera de 1 minuto, A = 90 % de água, 10 % de metanol, 0,2 % H3P04, B = 86 10 % de água, 90 % de metanol, 0,2 % H3PO4, RT - 1,24 min, 100 % de índice de homogeneidade.

Cap-49 cmr— o^r cap-49 A uma solução agitada de ácido 2-(benzilamino)acético (2,0 g, 12,1 mmol) em ácido fórmico (91 ml) foi adicionado formaldeído (6,94 ml, 93,2 mmol). Após cinco horas a 70 °C, a mistura de reacção foi concentrada sob pressão reduzida a 20 ml e um sólido branco precipitou. Em seguida à filtração, os licores mãe foram colhidos e Concentrados adicionalmente sob pressão reduzida proporcionando o produto bruto. Purificação por HPLC preparativa de fase reversa (Xterra 30 X 100 mm, detecção a 220 nm, taxa de fluxo 35 ml/min, 0 a 35 % B ao longo de 8 min; A = 90 % de água, 10 % de metanol, 0,1 % de TFA, B = 10 % de água, 90 % de metanol, 0,1 % de TFA) proporcionou o composto do título ácido 2-(benzil (metil)-amino) acético como seu sal de TFA (723 mg, 33 %) como uma cera incolor. ΤΗ RMN (300 MHz, DMSO-dg) δ ppm 2,75 (s, 3H) 4,04 (s, 2H) 4,34 (s, 2H) 7,29-7,68 (m, 5H) . LCMS: Anal. Calcd. para: Ci0H13NO2 179, 09;

Encontrado: 180,20 (M+H)+.

Cap-50

Gap-50 A uma solução agitada de ácido 3-metil-2- (metilamino) butanóico (0,50 g, 3,81 1 mmol) em água ( 30 ml) foi adicionado K2C03 (2, 63 g, 19,1 mmol) e cloreto de benzilo (1,32 g, 11,4 mmol) . A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura de reacção foi extraída com acetato de etilo (30 ml x 2) e 87 a camada aquosa foi concentrada sob pressão reduzida proporcionando o produto bruto que foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (Xterra 30 x 100 mm, detecção a 220 nm, taxa de fluxo 40 ml/min, 20 a 80 % B ao longo de 6 min; A = 90 % de água, 10 % de metanol, 0,1 % de TFA, B = 10 % de água, 90 % de metanol, 0,1 % de TFA) para proporcionar ácido 2-(benzil(metil)amino)-3-metilbutanóico, sal de TFA (12 6 mg, 19 %) como uma cera incolor. ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-dg) δ ppm 0,98 (d, 3H) 1,07 (d, 3H) 2,33- 2,48 (m, 1H) 2,54-2,78 (m, 3H) 3,69 (s, 1H) 4,24 (s, 2H) 7,29-7,65 (m, 5H) . LCMS: Anal. Calcd. para: C13H19NO2 221,14; Encontrado: 222,28 (M+H)+.

Cap-51

Na2C03 (1,83 g, 17,2 mmol) foi adicionado a NaOH (33 ml de 1M/H20, 33 mmol) solução de L-valina (3,9 g, 33,29 mmol) e a solução resultante foi arrefecida com banho de gelo-água. Cloroformato de metilo (2,8 ml, 36,1 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 15 min, o banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 3,25 h. A mistura de reacção foi lavada com éter (50 ml, 3x) , e a fase aquosa foi arrefecida com banho de gelo-água e acidificada com HC1 concentrado a uma região de pH de 1-2, e extraída com CH2C12 (50 ml, 3x) . A fase orgânica foi seca (MgS04) e evaporada a vácuo para propiciar Cap-51 como um sólido branco (6 g). 1H RMN para o rotámero dominante (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): 12,54 (s, 1H), 7,33 (d, J = 8,6, 1H), 3,84 (dd, J = 8,4, 6,0, 1H) , 3,54 (s, 3H) , 2,03 (m, 1H) , 0,87 (m, 6H) . HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C7H14N04: 176,0923; encontrado 176,0922. 88

Cap-52 (o mesmo que Cap-12)

Cap-52 foi sintetizado a partir de L-alanina de acordo com o procedimento descrito para a síntese de Cap-51. Para propósitos de caracterização, uma porção do material bruto foi purificado por uma HPLC de fase reversa (H20/metanol/TFA) para propiciar Cap-52 como um óleo incolor viscoso. XH RMN (DMSO-dg, δ = 2,5 ppm, 500 MHz) : 12,49 (s 1, 1H) , 7, 43 (d, J = 7,3, 0,88H), 7,09 (s 1 ap, 0, 12H) , 3,97 (m, 1H) , 3,53 (s, 3H) , 1,25 (d, J = 7,3, 3H) .

Cap-53 a -64 foram preparados a partir de materiais de partida apropriados de acordo com o procedimento descrito para a síntese de Cap-51, com modificações indicadas se existirem.

Cap Estrutura Dados Cap-53a: (R) Cap-53b: (S) Η Ϊ ^°YNY™ 1H RMN (DMSO-d6, Ô = 2,5 ppm, 500 MHz): δ 12,51 (s 1, 1H) , 7,4 (d, J = 7,9, 0,9H), 7,06 (s ap, 0,1 H) , 3, 86-3, 82 (m, 1H), 3,53 (s, 3H), 1,75-1,67 (m, 1H), 1,62-1,54 (m, 1H), 0,88 (d, J = 7,3, 3H). TR = 0,77 minutos (Cond. 2); LC/MS: Anal. Calcd. para [M+Na]+ C6HnNNa04 : 184,06; encontrado 184,07. HRMS Calcd. para [M+Na]+ C6HnNNa04: 184,0586; encontrado 184, 0592 . 89 Cap Cap-54a: (R) Cap- 54b: (S)

Estrutura

Dados 2H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): δ 12,48 (s, 1H), 7,58 (d, J = 7,6, 0,9H), 7,25 (s ap, 0,1H), 3,52 (s, 3H), 3,36-3,33 (m, 1H) , 1,10-1,01 (m, 1H), 0,54-0,49 (m, 1H), 0,46-0,40 (m, 1H), 0,39-0,35 (m, 1H), 0,31-0,21 (m, 1H). HRMS Calcd. para [M+H]+ C7H12N04: 174,0766; encontrado 174,0771

Cap-55

H || OyNsA,° S

OH 1H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): 8 12,62 (s, 1H), 7,42 (d, J = 8,2, 0,9H),-7,07 (s ap,-0,lH), 5,80-5,72 (m, 1H), 5,10 (d, J = 17,1,1H), 5,04 (d, J = 10,4, 1H) , 4,01-3,96 (m, 1H), 3,53 (s, 3H), 2,47-2,42 (m, 1H), 2,35-2,29 (m, 1H) .

Cap-56 u °0 s>

OH RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): δ 12,75 (s, 1H), 7,38 (d, J = 8,3, 0,9H), 6,96 (s ap, 0,1H), 4,20-4,16 (m, 1H), 3,60-3,55 (m, 2H), 3,54 (s, 3H), 3,24 (s, 3H).

Cap-57

O ° s

OH XH RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): δ 12,50 (s, 1H), 8,02 (d, J = 7,7, 0,0 8H), 7,40 (d, J = 7,9, 0,7 6H), 7,19 (d, J = 8,2, 0,07H), 7,07 (d, J = 6,7, 0,0 9H), 4,21- 4,12 (m, 0,0 8H), 4, 06-3, 97 (m, 0,07H), 3,96-3,80 (m, 0,85H), 3,53 (s, 3H), 1,69-1,51 (m, 2H), 1,39-1,26 (m, 2H), 0,85 (t, J = 7,4, 3H). LC (Cond. 2): TR = 1,39 LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C7H14N04: 176, 09; encontrado 176,06. 90 Cap Cap-58

Estrutura

Dados 2H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 MHz) : δ 12,63 (s 1, 1H) , (s,1H), 7,31 (d, J = 8,2 6,92 (s, 1H), 4,33-4,29 3,54 (s, 3H), 2,54 (dd, 5,4, 1H), 2,43 (dd, J = 8,0, 1H). TR = 0,16 min 2); LC/MS: Anal. Calcd. ppm, 500 7,35 , 1H) , (m, 1H) , J = 15,5 15,6, (Cond. para [M+H] +C6H11N2C)5: 191,07;

Cap-59a: (R) 59b: (S)

Cap-60

encontrado 191,14. 2H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 12,49 (s 1, 1H), 7,40 (d, J = 7,3, 0, 89H) , 7,04 (s 1, 0,11H), 4,00-3,95 (m, 3H), 1,24 (d, J = 7,3, 3H), 1,15 (t, J = 7,2, 3H). HRMS: Anal. Calcd. para [M+H ] + C6H12N04: 162,0766; encontrado 162,0771. O material bruto foi purificado com uma HPLC de fase reversa (H20/Me0H/TFA) para propiciar um óleo incolor viscoso que cristalizou a um sólido branco após exposição a alto vácuo. 2H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 12,38 (s 1, 1H) , 7,74 (s, 0,82H), 7,48 (s, 0,18H), 3,54/3,51 (dois s, 3H), 1,30 (m, 2H), 0,98 (m, 2H). HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C6H10NO4:

Cap-61

160,0610; encontrado 160,0604. 2H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 12,27 (s 1, 1H), 7,40 (s 1, 1H) , 3,50 (s, 3H), 1,32 (s, 6H). HRMS: Anal. Calcd. para [M+H] + C6H12NOa: 162,0766; encontrado 162,0765. 91

Cap Estrutura Dados Cap-62 ^°γΝΎ^0Η ° /k 2H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 12,74 (s 1, 1H), 4,21 (d, J = 10,3, 0,6H), 4,05 (d, J = 10,0, 0,4H), 3,62/3,60 (dois singletos, 3H), 3,0 (s, 3H), 2,14-2,05 (m, 1H), 0,95 (d, J= 6,3, 3H), 0,81 (d, J = 6,6, 3H). LC/MS: Anal. Calcd. para [M-H]-C8H14N04: 188, 09; encontrado 188,05. Cap-63 -y^°H [Nota: a reacção foi deixada a executar por mais do que foi indicado para o procedimento geral.] 2H RMN (DMSO- d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 12,21 (s 1, 1H), 7,42 (s 1, 1H), 3,50 (s, 3H), 2,02-1,85 (m, 4H), 1,66-1,58 (m, 4H). LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+-C8Hi4N04: 188, 09; encontrado 188,19. Cap-64 H ff dsV'" [Nota: a reacção foi deixada a executar por mais do que foi indicado para o procedimento geral.] 2H RMN (DMSO- d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 12,35 (s 1, 1H), 7,77 (s, 0,82H), 7,56/7,52 (sobreposição s 1, 0,18H), 3,50 (s, 3H), 2,47-2,40 (m, 2H), 2,14-2,07 (m, 2H), 1,93-1,82 (m, 2H) .

Cap-65

Cloroformato de metilo (0,65 ml, 8,39 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 5 min a uma mistura arrefecida (gelo-água) de Na2C03 (0,449 g, 4,23 mmol), NaOH (8,2 ml de 1M/H20, 8,2 mmol) e ácido (S)-2-amino-3-hidroxi- 92 3-metilbutanóico (1,04 g, 7,81 mmol). A mistura de reacção foi agitada durante 45 min, e então o banho de arrefecimento foi removido e a agitação foi continuada para umas 3,75 h adicionais. A mistura de reacção foi lavada com CH2C12, e a fase aquosa foi arrefecida com banho de gelo-água e acidificada com HC1 concentrado a uma região de pH de 1-2. O componente volátil foi removido a vácuo e o resíduo foi absorvido numa mistura 2:1 de MeOH/CH2Cl2 (15 ml) e filtrada, e o filtrado foi submetido a rotavapor para propiciar Cap-65 como uma espuma semi-viscosa branca (1,236 g) . ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz) : 8 6, 94 (d, J = 8,5, 0,9 H), 6,53 (s 1, 0,1H), 3,89 (d, J = 8,8, 1H) , 2,94 (s, 3H), 1,15 (s, 3H), 1,13 (s, 3H).

Cap-66 e -67 foram preparados a partir de materiais de partida apropriados comercialmente disponíveis usando o procedimento descrito para a síntese de Cap-65.

Cap-66

ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 8 12,58 (s 1, 1H) , 7,07 (d, J = 8,3, 0, 13H) , 6,81 (d, J = 8,8, 0,67H), 4,10-4,02 (m, 1, 15H) , 3,91 (dd, J = 9,1, 3,5, 0,85H), 3,56 (s, 3H) , 1,09 (d, J = 6,2, 3H) . [Nota: somente os sinais dominantes de NH foram indicados].

Cap-67

ΤΗ RMN (DMSO-de, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 12,51 (s 1, 1H) , 7,25 (d, J = 8,4, 0,7 5H), 7,12 (dl, J = 0,4, 0,05H), 6,86 (s 1, 0,08H), 3, 95-3, 85 (m, 2H), 3,54 (s, 3H) , 1,08 (d, J = 6,3, 3H) . [Nota: somente os sinais dominantes de NH foram indicados]. 93

Cap-68

Cloroformato de metilo (0,38 ml, 4,9 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de EM NaOH (aq) (9,0 ml, 9,0 mmol), 1M NaHC03 (aq) (9,0 ml, 9,0 mol) , éster β-benzílico do ácido L-aspártico (1,0 g, 4,5 mmol) e Dioxano (9 ml) . A mistura de reacção foi agitada em condições ambientais durante 3 h, e então lavada com Acetato de etilo (50 ml, 3x) . A camada aquosa foi acidificada com 12N HC1 a um pH ~ 1-2, e extraída com acetato de etilo (3 x 50 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas (Na2S04) , filtradas, e concentradas a vácuo para propiciar Cap-68 como um óleo amarelo claro (1,37 g; massa está acima do rendimento teórico, e o produto foi usado sem purificação adicional). ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz) : δ 12 , 88 (s 1 , 1H), 7,55 (d, J = 8,5, 1H) , 7,40- -7,32 (m, 5H) , 5 ,13 (d, J = 12,8, 1H), 5,10 (d, J = 12, 9, 1H) , 4,42 -4,38 (m, 1H) , 3,55 (s, 3H), 2,87 (dd, J = 16,2, 5,5, 1H) , 2,71 (dd, J = 16,2, 8,3, 1H) . LC (Cond . 2) : TR = 1, 90 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci3H16N06: 282,10; encontrado 282,12.

Cap-69a e 69b

Cep-69a: (R)enantiómero Cep-69b: (S)enantiómero

NaCNBH3 (2,416 g, 36,5 mmol) foi adicionado em séries a uma solução arrefecida (—15 °C) em água (17 ml)/MeOH (10 ml) de alanina (1,338 g, 15,0 mmol). Poucos minutos depois acetaldeído (4,0 ml, 71,3 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 4 min, o banho de arrefecimento foi removido, e a mistura de reacção foi agitada em condição ambiental 94 durante 6 h. Um acetaldeído adicional (4,0 ml) foi adicionado e a reacção foi agitada durante 2 h. HC1 concentrado foi adicionado lentamente à mistura de reacção até o pH atingir ~ 1,5, e a mistura resultante foi aquecida durante 1 h a 40 °C. Mais do componente volátil foi removido a vácuo e o resíduo foi purificado com um Dowex® 50WX8-100 resina de permuta de ião (a coluna foi lavada com água, e o composto foi eluído com NH4OH diluído, preparada por meio da mistura de 18 ml de NH4OH e 2 82 ml de água) para propiciar Cap-69 (2,0 g) como um sólido higroscópico suave branco pérola. ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz) : δ 3,44 (q, J = 7, 1, 1H) , 2,99-2,90 (m, 2H) , 2,89-2,80 (m, 2H), 1,23 (d, j = 7,1, 3H), 1,13 (t, J = 7,3, 6H). Cap-7 0 a -7 4x foram preparados de acordo com 0 procedimento descrito para a síntese de Cap-69 usando materiais de partida apropriados. Cap-70a: 70b: (S) (R) Cap- H RMN (DMSO-d6, Ô = 2,5 ppm, 400 MHz) : δ 3,42 (q, J = 7,1, 1H) , 2,68-2,60 (m,4H), 1,53-1,44 (m, 4H), 1,19 (d, J = 7,3, 3H) , 0,85 (t, J = 7,5, 6H). LGMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C9H20NO2: 17 4,15; encontrado 174,13._

Cap-71a: 71b: (S) (R) Cap-

H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): δ 3,18-3,14 (m, 1H), 2,84- 2,77 (m, 2H), 2,76-2,68 (m, 2H) , 1,69-1,54 (m, 2H), 1,05 (t, J= 7,2, 6H), 0,91 (t, J = 7,3, 3H). LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C8H18N02: 160,13; encontrado 160,06. _

Cap-72 H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 2,77-2,66 (m, 3H) , 2,39-2,31 (m, 2H), 1,94-1,85 (m, 1H), 0,98 (t, J = 7,1, 6H), 0,91 (d, J = 6,5, 3H), 0,85 (d, J = 6,5, 3H). LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C9H20NO2: 174, 15; encontrado 174,15. _ 95

Cap-73 '"'Ί o Sd 1 XH RMN (DMSO -d6, Ô = 2,5 ppm, 500 MHz): Ô 9,5 (s 1, 1H), 3,77 (dd, J = 10,8, 4,1,1H), 3,69-3,61 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 2,99-2,88 (m, 4H), 1,13 (t, J = 7,2, 6H). Cap-74 -η í? XH RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 vnJÍ nh2 MHz) : Ô 7,54 (s, 1H) , 6, 89 (s, 1H), 3,81 (t, J = 6,6, k,1H), 2,82-2,71 (m, 4H), 2,63 (dd, J= 15,6, 7,0, 1H), 2,36 (dd, J = 15,4, 6,3, 1H), 1,09 (t, J = 7,2, 6H). TR = 0,125 minutos (Cond. 2); LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C8H17N203 189, 12; encontrado 189,13. Cap-74x LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ X*-011 CioH22N02: 188, 17; encontrado 188,21 €õp»7$

Cap-75, "Λ

etapa a O

"OH

NaBH3CN (1,6 g, 25,5 mmol) foi adicionado a uma solução arrefecida (banho de gelo/água) em água (25 ml)/metanol (15 ml) de H-D-Ser-OBzl HC1 (2,0 g, 8,6 mmol). Acetaldeido (1,5 ml, 12,5 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 5 min, o banho de arrefecimento foi removido, e a mistura de reacção foi agitada em condição ambiental durante 2 h. A reacção foi extinta cuidadosamente com 12N HC1 e concentrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em água 96 e purificado com uma HPLC de fase reversa (Me0H/H20/TFA) para propiciar o sal de TFA de (R)-benzil 2-(dietilamino)-3-hidroxipropanoato como um óleo incolor viscoso (1,9 g) . RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz) : δ 9,73 (s 1, 1H) , 7,52-7,36 (m, 5H) , 5,32 (d, J = 12,2, 1H) , 5,27 (d, J = 12,5, 1H), 4,54-4,32 (m, 1H) , 4, 05-3, 97 (m, 2H) , 3,43-3,21 (m, 4H), 1,23 (t, J = 7,2, 6H). LC/MS (Cond. 2): TR = 1,38 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C14H22NO3: 252, 16; encontrado 252,19.

Cap-75

NaH (0,0727 g, 1,82 mmol, 60 %) foi adicionado a uma solução arrefecida (gelo-água) rm THF (3,0 ml) do sal de TFA (R)-benzil 2-(dietilamino)-3-hidroxipropanoato (0,3019 g, 0,8264 mmol) preparado acima, e a mistura foi agitada durante 15 min. Iodeto de metilo (56 ml, 0,90 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada durante 18 h ao mesmo tempo em que se permitia que o banho degelasse até condição ambiental. A reacção foi extinta com água e carregada num cartucho pré-condicionado de MeOH MCX (6 g) , e lavada com metanol seguido por eluição de composto com 2N NH3/Metanol. A remoção do componente volátil a vácuo propiciou Cap-75, contaminado com ácido (R)-2-(dietilamino)-3-hidroxipropanóico, como um semi-sólido amarelo (100 mg). O produto foi usado como tal sem purificação adicional.

Cap-76

NaCNBH3 (1,60 g, 24,2 mmol) foi adicionado em séries a uma solução arrefecida ( — 15 °C) em água/MeOH (12 ml cada) de ácido (S)-4-amino-2-(terc-butoxicarbonilamino) butanóico (2,17 g, 9,94 mmol). Poucos minutos depois acetaldeído (2,7 97 ml, 48,1 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 2 min, o banho de arrefecimento foi removido, e a mistura de reacção foi agitada em condição ambiental durante 3,5 h. Um acetaldeido adicional (2,7 ml, 48,1 mmol) foi adicionado e a reacção foi agitada durante 20,5 h. Mais do componente de MeOH foi removido a vácuo, e a mistura restante foi tratada com HC1 concentrado até o seu pH atingir ~ 1,0 e então aquecida durante 2 h a 40 °C. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi tratado com 4 M HCl/dioxano (20 ml) e agitado em condição ambiental durante 7.5 h. O componente volátil foi removido a vácuo e o resíduo foi purificado com resina de permuta de ião Dowex ® 50WX8-100 (a coluna foi lavada com água e o composto foi eluído com NH4OH diluído, preparada a partir de 18 ml de NH4OH e 282 ml de água) para propiciar intermediário ácido (S)-2-amino-4-(dietilamino)butanóico como um sólido branco pérola (1,73 g).

Cloroformato de metilo (0,36 ml, 4,65 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 11 min a uma mistura arrefecida (gelo-água) de Na2C03 (0,243 g, 2,29 mmol), NaOH (4,6 ml de 1M/H20,4,6 mmol) e o produto acima (802,4 mg). A mistura de reacção foi agitada durante 55 min, e então o banho de arrefecimento foi removido e a agitação foi continuada para um adicional 5,25 h. A mistura de reacção foi diluída com volume igual de água e lavada com CH2C12 (30 ml, 2x) , e a fase aquosa foi arrefecida com banho de gelo-água e acidificado com HC1 concentrado a uma região de pH de 2. O componente volátil foi então removido a vácuo e o material bruto foi livrado da base com resina de MCX (6,0 g; a coluna foi lavada com água, e a amostra foi eluída com 2,0 M NH3/MeOH) para propiciar Cap-76 impuro como um sólido branco pérola (704 mg). ΤΗ RMN (McOH-d4, δ = 3,29 ppm, 400 MHz) : δ 3,99 (dd, J = 7,5, 4,7, 1H) , 3,62 (s, 3H) , 3,25- 3.06 (m, 6H) , 2,18-2,09 (m, 1H) , 2,04-1, 96 (m, 1H) , 1,28 (t, J = 7,3, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + Ci0H2iN2O4 98 233,15; encontrado 233,24.

Cap-77a e 77b i :enantiómero -1 r.enantiómero -2

N N

Cap-77a:

Cap-77b: A síntese de Cap-77 foi conduzida de acordo com o procedimento descrito para Cap-7 usando 7-azabiciclo [2.2.1 ] heptano para a etapa de deslocamento de SN2, e por meio da realização da separação enantiomérica do intermediário benzil 2-(7-azabiciclo[2.2.1 ]heptan-7-il)-2-fenilaeetato usando a seguinte condição: o intermediário (303,7 mg) foi dissolvido em etanol, e a solução resultante foi injectada numa coluna de HPLC quiral (Chiracel AD-H coluna, 30 x 250 mm, 5 um) eluindo com 90 % CO2-10 % de EtOH a 70 ml/min, e uma temperatura de 35 °C para proporcionar 124,5 mg de enantiómero- 1 e 133,8 mg de enantiómero-2. Estes ésteres benzílicos foram hidrogenolisados de acordo com a preparação de Cap-7 para proporcionar Cap-77: ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 7,55 (m, 2H), 7,38-7,30 (m, 3H), 4,16 (s, 1H), 3,54

(Cond. 1): TR = 0,67 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ CiaHlsN02: 232,13; encontrado 232,18. HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci4H18N02: 232,1338; encontrado 232,1340.

Cap-78

NaCNBH3 (0,5828 g, 9,27 mmol) foi adicionada a uma mistura do sal de HC1 de ácido (R)-2-(etilamino)-2-fenilacético (um intermediário na síntese de Cap-3; 0,9923 mg, 4,60 mmol) e (1-etoxiciclopropoxi)trimetilsilano (1,640 99 g, 9,40 mmol) em MeOH (10 ml), e a mistura semi-heterogénea foi aquecida a 50 °C com um banho de óleo durante 20 h. Mais (1-etoxiciclopropoxi)trimetilsilano (150 mg, 0,86 mmol) e NaCNBH3 (52 mg, 0,827 mmol) foram adicionados e a mistura de reacção foi aquecida durante umas 3,5 h adicionais. Foi então deixada arrefecer até a temperatura ambiente e acidificada a uma região de ~ pH de 2 com HC1 concentrado, e a mistura foi filtrada e o filtrado foi submetido a rotavapor. O material bruto resultante foi absorvido em i-PrOH (6 ml) e aquecido para realizar dissolução, e a parte não dissolvida foi separada por filtração e o filtrado concentrado a vácuo. Cerca de 1/3 do material bruto resultante foi purificado com uma HPLC de fase reversa (H20/Me0H/TFA) para propiciar o sal de TFA de Cap-78 como um óleo incolor viscoso (353 mg). ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz; após permuta de D20) : δ 7,56-7,49 (m, 5H) , 5,35 (S, 1H) , 3,35 (m, 1H) , 3,06 (s 1 ap, 1H) , 2, 66 (m, 1H) , 1,26 (t, J = 7,3, 3H) , 0, 92 (m, 1H), 0,83- 0,44 (m, 3H) . LC (Cond . 1) : TR = 0,64 min ; LC/MS: Anal.

Calcd. para [M+H] +Ci3Hi8N02 :220,13; encontrado 220,21. HRMS : Anal. Calcd. para [M+HtCi3H2i+CN02:220,1338; encontrado 220,1343.

Cqp-79

Ozono foi borbulhado através de uma solução arrefecida (-78 °C) em CH2C12 (5,0 ml) de Cap-55 (369 mg, 2,13 mmol) durante cerca de 50 min até a mistura de reacção chegar a uma tinta de cor azul. Me2S (10 gotas de pipeta) foi adicionado, e a mistura de reacção foi agitada durante 35 min. O banho a -78 °C foi substituído com um banho a -10 °C e a agitação continuou durante uns 30 min adicionais, e 100 então o componente volátil foi removido a vácuo para propiciar um óleo incolor viscoso.

NaBH3CN (149 mg, 2,25 mmol) foi adicionado a uma solução em MeOH (5,0 ml) do material bruto acima e morfolina (500 ml, 5,72 mmol) e a mistura foi agitada em condição ambiental durante 4 h. Foi arrefecida até a temperatura de gelo-água e tratada com HC1 concentrado para trazer o seu pH a ~2,0, e então agitada durante 2,5 h. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi purificado com uma combinação de resina de MCX (lavagem com MeOH; eluição com 2,0 N NH3/MeOH) e uma HPLC de fase reversa (H20/Me0H/TFA) para propiciar Cap-79 contendo quantidade desconhecida de morfolina.

Com a finalidade de consumo do contaminante morfolina, o material acima foi dissolvido em CH2C12 (1,5 ml) e tratado com Et3N (0,27 ml, 1,94 mmol) seguido por anidrido acético (0,10 ml, 1,06 mmol) e agitado em condição ambiental durante 18 h. THF (1,0 ml) e H20 (0,5 ml) foram adicionados e a agitação continuada durante 1,5 h. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo resultante foi passado através de resina de MCX (lavagem com MeOH; eluição com 2,0 N NH3/MeOH) para propiciar Cap-79 impuro como um óleo viscoso castanho, que foi usado para a seguinte etapa sem purificação adicional.

Cap-80a e 80b

Cap-80a: S/S-diastereómero Cap-80b: S/R-diastereómero S0C12 (6,60 ml, 90,5 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 15 min a uma mistura arrefecida (gelo-água) de ácido (S)-3-amino- 4-(benziloxi)-4-oxobutanóico (10,04 g, 44, 98 mmol) e MeOH (300 ml), o banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção foi agitada em condição ambiental durante 29 h. Mais do componente volátil foi 101 removido a vácuo e o resíduo foi cuidadosamente dividido em partições entre EtOAc (150 ml) e solução de NaHC03 saturado. A fase aquosa foi extraída com EtOAc (150 ml, 2x) , e a fase orgânica combinada foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para propiciar (S)-l- benzilo 4-metil 2-aminosuccinato como um óleo incolor (9, 706 g) . ΧΗ RMN (DMS0-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): δ 7,40- 7,32 (m, 5H) , 5,11 (s, 2H) , 3,72 (t ap, J = 6,6, 1H), 3,55 (s, 3H) , 2, 68 (dd, J = 15, 9, b. 3, 1H) , 2 , 58 (dd, J = 15,9, K i—1 00 *sO 1, 96 (s, 2H). LC (Cond. 1) : TR = o, 90 min; LC/MS:

Anal. Calcd. para [M+H]+Ci2Hi6N04 : 238, 11; encontrado 238,22.

Pb(N03) 2 (6, 06 g, 18,3 mmol) foi adicionado ao longo de 1 min a uma solução em CH2C12 (80 ml) de (S)-l-benzil 4-metil 2- aminosuccinato (4,50 g, 19,0 mmol), 9-bromo-9-fenil-9H-fluoreno (6,44 g, 20,0 mmol) e Et3N (3,0 ml, 21,5 mmol), e a mistura heterogénea foi agitada em condição ambiental durante 48 h. A mistura foi filtrada e o filtrado foi tratado com MgS04 e filtrado de novo, e o filtrado final foi concentrado. 0 material bruto resultante foi submetido a uma purificação com Biotage (350 g de sílica gel, eluição com CH2C12) para propiciar (S)-l-benzil 4-metil 2-(9-fenil-9H-fluoren-9- ilamino)succinato como óleo incolor altamente viscoso (7,93 g) . ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = LO CN ppm, 400 MHz): δ 7,82 (m, 2H) , 7,39- 7,13 (m, 16H), 4,71 (d, J = 12,4, 1H) , 4,51 (d, J = 12,6, 1H) , 3,78 (d, J = 9,1, NH) , 3,50 (s , 3H) , 2,99 (m, 1H), 2,50 -2,41 (m, 2H, parcialmente sobreposto com solvente). LC (Cond. 1): TR = 2,16 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C3iH28N04: 478,20; encontrado 478,19.

LiHMDS (9,2 ml de 1,0 M/THF, 9,2 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 10 min a uma solução arrefecida (-78 °C) em THF (50 ml) de (S)-l-benzil 4-metil 2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)succinato (3,907 g, 8,18 mmol) e agitado durante ~1 h. Mel (0,57 ml, 9,2 mmol) foi 102 adicionado gota a gota ao longo de 8 min à mistura, e a agitação foi continuada durante 16,5 h ao mesmo tempo em que se permitia que o banho de arrefecimento degelasse até a temperatura ambiente. Após a extinção com solução de NH4C1 saturado (5 ml), mais do componente orgânico foi removido a vácuo e o resíduo foi dividido em partições entre CH2C12 (100 ml) e água (40 ml). A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo, e o material bruto resultante foi purificado com um Biotage (350 g de sílica gel; 25 % de EtOAc/hexanos) para propiciar 3,65 g de uma mistura diastereomérica 2S/3S e 2S/3R de 1-benzil 4-metil 3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)succinato em razão de -1,0:0,65 (ΤΗ RMN) . A estereoquímica do isómero dominante não foi determinada para esta junção, e a mistura foi submetida à próxima etapa sem separação. Dados parciais de ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz) : diastereómero maior, δ 4,39 (d, J = 12,3, 1H de CH2) , 3,33 (s, 3H, sobreposto com sinal de H20) , 3,50 (d, J = 10,9, NH) , l,13(d, J = 7,1,3H); diastereómero menor, δ 4,27 (d, J = 12,3, 1H de CH2) , 3,76 (d, J = 10,9, NH) , 3,64 (s, 3H) , 0,77 (d, J = 7,0, 3H). LC (Cond. 1): TR = 2,19 min; LC/MS:

Anal. Calcd. para [M+H]+ C32H30NO4: 492,22; encontrado 492,15.

Hidreto de diisobutilalumínio (20,57 ml de 1,0 M em hexanos, 20,57 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 10 min a uma solução arrefecida (-78 °C) em THF (120 ml) de (2S)-1-benzil 4-metil 3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9- ilamino)succinato (3,37 g, 6,86 mmol) preparado acima, e agitado a -78 °C durante 20 h. A mistura de reacção foi removida do banho de arrefecimento e rapidamente vertida em -1M H3P04/H20 (250 ml) com agitação, e a mistura foi extraída com éter (100 ml, 2x) . A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada e concentrada a vácuo. Uma malha de sílica gel do material bruto foi preparada e submetida a cromatografia (25 % de 103

EtOAc/hexanos; eluição por gravidade) para propiciar 1,1 g de (2S,3S)-benzil 4-hidroxi-3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)butanoato, contaminado com álcool benzilico, como um óleo incolor viscoso e (2S,3R)-benzil 4-hidroxi-3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato contendo o (2S,3R) estereoisómero como uma impureza. A última amostra foi ressubmetida às mesmas condições de purificação por cromatografia em coluna para propiciar 750 mg de material purificado como uma espuma branca. {Nota: o (2S, 3S)

isómero elui antes do (2S,3R) isómero sob a condição acima]. (2S, 3S) isómero: XH NOR (DMSO, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 7,81 (m, 2H), 7,39-7,08 (m, 16H), 4,67 (d, J = 12,3, 1H), 4,43 (d, J = 12,4, 1H), 4,21 (t ap, J = 5,2, OH), 3,22 (d, J = 10,1, NH), 3,17 (m, 1H), 3,08 (m, 1H), ~2,5 (m, 1H, sobreposto com o solvente sinal), 1,58 (m, 1H), 0,88 (d, J = 6,8, 3H) . LC (Cond. 1): TR = 2,00 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C31H30NO3: 464,45; encontrado 464,22. (2S, 3R) isómero: rmn (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz) : 7,81 (d, J = 7,5, 2H) , 7, 39- 7,10 (m, 16H) , 4,63 (d , J = 12,1, 1H) , 4,50 (t ap, J = 4 ,9, 1H) , 4,32 (d, J = 12,1, 1H) , 3, 59 -3, 53 (m, 2H) , 3, 23 (m, 1H) , 2,44 (dd, J = = 9,0, 8,3, 1 H) , 1,70 (m, 1H) , 0 ,57 (d, J = 6,8, 3H) . LC (Cond. 1): TR = 1,92 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C31H30NO3: 464,45; encontrado 464,52.

As atribuições estereoquímicas relativas dos produtos redução por DIBAL foram feitas com base em estudos de NOE conduzidas em derivados de lactona preparados a partir de cada isómero usando o seguinte protocolo: LiHMDS (50 ml de 1,0 M/THF, 0,05 mmol) foi adicionado a uma solução arrefecida (gelo-água) em THF (2,0 ml) de (2S,3S)-benzil 4-hidroxi-3-metil- 2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)butanoato (62,7 mg, 0,135 mmol), e a mistura de reacção foi agitada a temperatura similar durante ~2 h. O componente volátil foi removido a vácuo e o resíduo foi dividido em partições entre CH2C12 (30 ml) , água (20 ml) e solução de NH4C1 aquoso 104 saturado (1 I ml) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo, e o material bruto resultante foi submetido a uma purificação com Biotage (40 g de silica gel; 10-15 % de EtOAc/hexanos) para propiciar (3 S,4S)-4-metil-3-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) dihidrofuran-2 (3H-ona como um filme incolor de sólido (28,1 mg). (2S,3R)-benzil 4-hidroxi-3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)butanoato foi elaborado de maneira similar a (3S,4R)-4-metil-3-(9-fenil-9H-fluoren-9- ilamino)dihidrofuran-2(3H)-ona. Isómero (3S,4S)-lactona: ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz), 7,83 (d, J = 7,5, 2H) , 7,46-7,17 (m, 11H), 4,14 (t ap, J = 8,3, 1H), 3,60 (d, J = 5,8, NH), 3,45 (t ap, J = 9,2,1H), -2,47 (m, 1H, parcialmente sobreposto com solvente sinal), 2,16 (m, 1H) , 0,27 (d, J = 6,6, 3H) . LC (Cond. 1): TR = 1,98 min; LCMS: Anal. Calcd. para [M+Na]+ C24H2iNNa02: 378,15; encontrado 378,42. Isómero (3S,4R)-lactona: ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz), 7,89 (d, J = 7,6, 1H) , 7,85 (d, J = 7,3, 1H) , 7,46-7,20 (m, 11H), 3,95 (dd, J = 9,1, 4,8, 1H) , 3,76 (d, J = 8,8, 1H) , 2,96 (d, J = 3,0, NH) , 2,92 (dd, J = 6,8, 3, NCH), 1,55 (m, 1H), 0,97 (d, J = 7,0, 3H). LC (Cond. 1): TR = 2,03 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+Na]+ C24H21NNa02: 378,15; encontrado 378,49. TBDMS-C1 (48 mg, 0,312 mmol) seguido por imidazol (28,8 mg, 0,423 mmol) foram adicionados a uma solução em CH2C12 (3 ml) de (2 S,3S)-benzil 4-hidroxi-3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)butanoato (119,5 mg, 0,258 mmol), e a mistura foi agitada em condição ambiental durante 14,25 h. A mistura de reacção foi então diluida com CH2C12 (30 ml) e lavada com água (15 ml), e a camada orgânica foi seca (MS04) , filtradas, e concentradas a vácuo. O material bruto resultante foi purificado com um Biotage (40 g de silica gel; 5 % de EtOAc/hexanos) para propiciar (2S,3S)-benzil 4-(terc- butildimetilsililoxi)-3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)butanoato, 105 contaminado com impurezas à base de TBDMS, como um óleo incolor viscoso (124,4 mg). (2S,3R)-benzil 4-hidroxi-3-metil-2- ( 9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)butanoato foi

elaborado de maneira similar a (2S,3R)-benzil 4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino)butanoato. isómero (2S,3S)-silil éter: ΧΗ RMN (DMSO d 6, δ = = 2,5 ppm, 400 MHz) , 7,82 (d, J = 4,1, 1H) , 7,80 (d, J = 4,0, 1H) , 7,38 -7, 07 (m, 16 H) , 4,7 0 (d, J = CM \—1 1H) , 4( ,42 (d, J = 12,3 , 1H), 3,28- 3,19 (m, 3H) , 2,56 (dd, J = 10, 1, 5,5 , 1H) , 1, 61 (m, 1H) , 0, 90 (d, J = 6,8, 3H) , 0,70 (s, • 9H) , -0,13 (s, 3H) , -0,16 (s, 3H) . LC (Cond. 1, onde o tempo de execução foi estendido até 4 min): TR = 3,26 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C37H44NO3SÍ: 578, 31; encontrado 578, 40. Isómero (2S . 3R) - -silil éter: XH RMN (DMSO-d6, δ = 2, 5 ppm, 400 MHz), 7, 82 (d, J = 3 ,0, 1—1 7,80 P. > C| II i—1 00 \—1 7,39-7,10 (m, 16H) , 4, , 66 (d, J = 12,4 s* \—1 39 (d, J = 12,4, 1H), 3,61 (dd, J = 9 ,9, 5, 6, \—1 3,45 (d , J = 9,5, 1H) , 3,41 (dd, , J = 10 , 6 ,2, t—1 2,55 (dd, J II CD cn 7,3 l> i—1 κ 1—1 (m, 1H) , 0, 77 (s, 9H) , 0, 61 (d, J = 7,1, 3H), - -0,06 (s, 3H) r ~ OO 0 0 (s, 3H) e

Um balão de hidrogénio foi unido a uma mistura de (2S,3S)-benzil 4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metil-2-(9-fenil-9Hfluoren-9-ilamino)butanoato (836 mg, 1,447 mmol) e 10 % Pd/C (213 mg) em EtOAc (16 ml) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante ~ 21 h, onde o balão foi recarregado com H2 como necessário. A mistura de reacção foi diluída com CH2C12 e filtrada através de uma almofada de terra diatomácea (Celite-545®), e a almofada foi lavada com EtOAc (200 ml), EtOAc/MeOH (1:1 mistura, 200 ml) e MeOH (750 ml) . A fase orgânica combinada foi concentrado, e uma malha de sílica gel foi preparada a partir do material bruto resultante e submetido a uma cromatografia flash (mistura 8:2:1 de Et0Ac/i-Pr0H/H20) para propiciar ácido (2 S,3S)-2-amino-4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilbutanóico como um sólido esponjoso branco (325 mg). 106 (2S,3R)-benzil 4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metil-2-(9-fenil-9H-fluoren-9-ilamino) butanoato foi de maneira similar elaborado a ácido (2S,3R)-2-amino4-(terc-but ildimet ilsililoxi ) -3-met ilbutanóico . Isómero (2S,3S)- aminoácido: ΤΗ RMN (Metanol-d4, δ = 3,29 ppm, 400 MHz), 3,76 (dd, J = 10,5, 5,2, 1H) , 3,73 (d, J = 3,0, 1H) , 3,67 (dd, J = 10,5, 7,0, 1H) , 2,37 (m, 1H) , 0,97 (d, J = 7,0, 3H) , 0,92 (s, 9H), 0,10 (s, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + CiiH26N03Si: 248,17; encontrado 248,44. Isómero (2S, 3R) -aminoácido : ΧΗ RMN (Metanol-d4, δ=3,29 ppm, 400 MHz) , 3,76-3,75 (m, 2H), 3,60 (d, J = 4,1, 1H), 2,16 (m, \—1 1,06 (d, J = 7,3, 3H) , 0,91 (s, 9H) , 0, 09 (s, 6H) . Anal. Calcd. para [M+H] + 0ηΗ26Ν03 Si: 248,17; encontrado 248,44. Água (1 ml) e NaOH (0,18 ml de 1,0 M/H20, 0,18 mmol) foram adicionados a uma mistura de ácido (2S,3S)-2-amino-4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilbutanóico (41,9 mg, 0,169 mmol) e Na2C03 (11,9 mg, 0,112 mmol), e sonicados durante cerca de 1 min para realizar dissolução de reagentes. A mistura foi então arrefecida com um banho de gelo-água, cloroformato de metilo (0,02 ml, 0,259 mmol) foi adicionado ao longo de 30 s, e agitação vigorosa foi continuada a temperatura similar durante 40 min e então a temperatura ambiente durante 2,7 h. A mistura de reacção foi diluída com água (5 ml), arrefecida com banho de gelo-água e tratada gota a gota com solução aquosa de 1,0 N HC1 (-0,23 ml) . A mistura foi diluída adicionalmente com água (10 ml) e extraída com CH2C12 (15 ml, 2x) . A fase orgânica combinada foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para propiciar Cap-80a como um sólido branco pérola. Ácido (2 S,3R)-2-amino-4-(terc-butildimetilsililoxi)-3-metilbutanóico foi de maneira similar elaborado a Cap-80b. Cap-80a: RMN (DMSO-d6 δ = 2,5 ppm, 400 MHz), 12,57 (s 1, 1H) , 7,64 (d, J = 8,3, 0,3H) , 7,19 (d, J = 8,8, 0,7H), 4,44 (dd, J = 8,1, 4,6, 0,3H) , 4,23 (dd, J = 8,7, 4,4, 0,7H), 107 3,56/3,53 (dois singletos, 3H) , 3,48-3,40 (m, 2H) , 2,22- 2,10 (m, 1H), 0,85 (s, 9H), -0,84 (d, 0,9H, sobreposto com t-Bu sinal), 0,79 (d, J = 7, 2, 1H) , 0,02/0, 01/0, 00 (três singletos de sobreposição, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para [M+Na]+ Ci3H27NNa05Si: 328,16; encontrado 328,46. Cap-80b: 1H RMN (CDC13, δ=7,24 ppm, 400 MHz), 6,00 (dl, J = 6,8, 1H) , 4,36 (dd, J = 7,1, 3,1, 1H) , 3,87 (dd, J = 10,5, 3,0, 1H) , 3,67 (s, 3H) , 3,58 (dd, J = 10,6,4,8, 1H) , 2,35 (m, 1H) , 1,03 (d, J = 7,1, 3H), 0,90 (s, 9H) , 0,08 (s, 6H) . LC/MS:

Anal. Calcd. para [M+Na]+ Ci3H27NNa05Si: 328,16; encontrado 328,53. Os produtos brutos foram utilizados sem purificação adicional.

Cap-81

Preparado de acordo com o protocolo descrito por Falb et al. Synthetic Communications 1993, 23, 2839.

Cap-82 a Cap-85

Cap-82 a Cap-85 foram sintetizados a partir de materiais de partida apropriados de acordo com o procedimento descrito para Cap-51 ou Cap-13. As amostras exibiram perfis espectrais similares como esse dos seus enantiómeros (isto é, Cap-4, Cap-13, Cap-51 e Cap-52, respectivamente).

Cap-82 Cap-83 Cap-84 Cap-85

Cop-86 ,0

MeOjCHf^ 108 A uma mistura de O-met il-L-treonina (3,0 g, 22,55 mmol) , NaOH (0, 902 g, 22,55 mmol) em H20 (15 ml) foi adicionado C1C02M (1,74 ml, 22,55 mmol) gota a gota a 0 °C. A mistura foi deixada a agitar durante 12 h e acidificada até pH 1 usando IN HC1. A fase aguosa foi extraída com EtOAc e (2x250 ml) e 10 % de MeOH em CH2C12 (250 ml) e as fases orgânicas combinadas foram concentradas para a reacção a vácuo para propiciar um óleo incolor (4,18 g, 97 %) que foi de suficiente pureza para utilização em etapas subsequentes. ΤΗ RMN (400 MHz), CDC13) δ 4,19 (s, 1H) , 3, 92-3, 97 (m, 1H) , 3,66 (s, 3H) , 1,17 (d, J = 7,7 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para C7H13N05: 191; encontrado: 190 (Μ Η)-.

Cap-87 MeO^H^ n

A uma mistura de L-homoserina (2,0 g, 9,79 mmol), Na2C03 (2,08 g, 19,59 mmol) em H20 (15 ml) foi adicionado

ClC02Me (0,76 ml, 9,79 mmol) gota a gota a 0 °C. A mistura foi deixada a agitar durante 48 h e acidificada até pH 1 usando IN HC1. A fase aquosa foi extraída com EtOAc e (2X250 ml) e as fases orgânicas combinadas foram concentradas a vácuo para propiciar um sólido incolor (0,719 g, 28 %) que foi de suficiente pureza para utilização em etapas subsequentes. ΤΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 4,23 (dd, J = 4,5, 9,1 Hz, 1H) , 3,66 (s, 3H) , 3,43-3,49 (m, 2H), 2,08-2,14 (m, 1H), 1,82 -1,89 (m, 1H). LCMS: Anal. Calcd. para C7Hi3NOs: 191; encontrado: 192 (M+H) + .

Cap-88

109

Uma mistura de L-valina (1,0 g, 8,54 mmol), 3- bromopiridina (1,8 ml, 18,7 mmol), K2C03 (2,45 g, 17,7 mmol) e Cul (169 mg, 0, 887 mmol) em DMSO (10 ml) foi aquecida a 100 °C durante 12h. A mistura de reacção foi arrefecida até rt, vertida em H20 (cerca de 150 ml) e lavada com EtOAc (x2). As camadas orgânicas foram extraídas com uma quantidade pequena de H20 e as fases aq combinadas foram acidificadas até cerca de pH 2 com 6N HC1. O volume foi reduzido a cerca de um terço e 20 g de resina de permuta de catião (Strata) foram adicionados. A suspensão foi deixada parada durante 20 min e carregada numa almofada de resina de permuta de catião (Strata) (cerca de 25 g). A almofada foi lavada com H20 (200 ml), MeOH (200 ml), e então NH3 (3M em MeOH, 2X200 ml) . As fracções apropriadas foram concentradas a vácuo e o resíduo (cerca de 1,1 g) foi dissolvido em H20, congelado e liofilizado. O composto do título foi obtido como uma espuma (1,02 g, 62 %) . ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,00 (s, 1, 1H) , 7,68-7,71 (m, 1H) , 7,01 (s, 1, 1H), 6,88 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1, 1H) , 3,54 (s, 1H) , 2,04- 2,06 (m, 1H) , 0,95 (d, J = 6,0 Hz, 3H) , 0,91 (d, J = 6,6Hz, 3H). LCMS: Anal. Calcd. para

Ci0Hi4N2O2 :194; encontrado: 195 (M+H) + .

Cap-89

Uma mistura de L-valina (1,0 g, 8,54 mmol), 5-bromopirimidina (4,03 g, 17,0 mmol), K2C03 (2,40 g, 17,4 mmol) e Cul (179 mg, 0,94 mmol) em DMSO (10 ml) foi aquecida a 100 °C durante 12h. A mistura de reacção foi arrefecida até RT, vertida em H20 (cerca de 150 ml) e lavada com EtOAc (x2). As camadas orgânicas foram extraídas com uma quantidade pequena de H20 e as fases aq combinadas foram acidificadas até cerca de pH 2 com 6N HC1. O volume 110 foi reduzido a cerca de um terço e 20 g de resina de permuta de catião (Strata) foram adicionados. A suspensão foi deixada parada durante 20 min e carregada numa almofada de resina de permuta de catião (Strata) (cerca de 25 g). A almofada foi lavada com H20 (200 ml) , MeOH (200 ml) , e então NH3 (3M em MeOH, 2x200 ml) . As fracções apropriadas foram concentradas a vácuo e o resíduo (cerca de 1,1 g) foi dissolvido em H20, congelado e liofilizado. O composto do título foi obtido como uma espuma (1,02 g, 62 %) . XH RMN (400 MHz, CD3OD) mostrou que a mistura contém valina e a pureza poderia não ser estimada. O material foi usado como tal em reacções subsequentes. LCMS: Anal. Calcd. para C9H13N302: 195; encontrado: 196 (M+H) + .

Cap-90

Cap-90 foi preparado de acordo com o método descrito para a preparação de Cap-1. O material bruto foi usado como tal em etapas subsequentes. LCMS.: Anal. Calcd. para ChH15N02: 193; encontrado: 192 (M-H)~.

Os seguintes caps foram preparados de acordo com o método usado para a preparação de cap 51 a não ser que indicado de outro modo: _

Cap Estrutura LCMS Cap-91 NHC02Me LCMS: Anal. Calcd. para r^J^.C02H C11H13NO4: 223; encontrado: 222 Kj? (M-H)“. Cap-92 NHC02Me LCMS: Anal. Calcd. para 0ιιΗ13Ν04; 223; encontrado: 222 u (M-H)-. 111

112

113 Cap

Cap-10 6

Cap-107

Cap-10 8

Cap-109

Cap-110

Estrutura

N—< >-C02H Preparada a partir de ácido cis-4-aminociclohexano carboxílico e acetaldeído usando um procedimento similar descrito para a síntese de Cap-2. 0 sal de HC1 bruto foi passado através de MCX (lavagem com Me0H/H20/CH2Cl2; eluição com 2 N NH3/MeOH) para propiciar um óleo, que foi dissolvido em CH3CN/H20 e liofilizado para propiciar um sólido de cor ocre.

AfV'0 HN. .0s Y _Ω_ t fPh—''

LCMS 2H RMN (4 00 MHz, CD3OD) δ 3, 16 (q, J = 7,3 Hz, 4H), 2, 38 - 2,41 (m, 1H) , 2,28 - 2,31 ( m, 2H) , 1,79 - 1, 89 (m, 2H), 1, 74 (ap, ddd J = 3,5, 12,5, 15 ,9 Hz, 2H) , 1,46 (ap dt J = 4, 0, 12,9 Hz, 2H) , 1,26 (t, J = 7 ,3 Hz, 6H)

OH LCMS: Anal. Calcd. para Cg^O^C^S: 230; encontrado: 231 (M+H)+.

fNj]YY^0H r o LCMS: Anal. Calcd. para Ci5H17N304: 303; encontrado: 304 (M+H)+.

co2h LCMS: Anal. Calcd. para C10H12N2O4: 224; encontrado: 225 (M+H)+.

co2h LCMS: Anal. Calcd. para C10H12N2O4: 224; encontrado: 225 (M+H)+. 114

Cap-117 a Cap-123

Para a preparação de Cap-117 a Cap-123 os aminoácidos Boc foram obtidos a partir de fontes comerciais e foram desprotegidos pelo tratamento com 25 % de TFA em CH2C12. 115 Após a reacção estar completa como foi julgado por LCMS os solventes foram removidos a vácuo e o correspondente sal de TFA do aminoácido foi carbamoilado com cloroformato de metilo de acordo com o procedimento descrito para Cap-51.

Cap Estrutura LCMS Cap-117 O ^O^NH 0 í'· LCMS: Anal. Calcd. para Ci2H15N04: 237; encontrado: 238 (M+H)+. Cap-118 O stísNH 0 jXa0H LCMS: Anal. Calcd. para Ci0H13NO4S: 243; encontrado: 244 (M+H)+. Cap-119 o ^O^NH O \ S LCMS: Anal. Calcd. para Ci0H13NO4S: 243; encontrado: 244 (M+H)+. Cap-12 0 O ^O^NH O LCMS: Anal. Calcd. para C40H13NO4S: 243; encontrado: 244 (M+H)+. Cap-121 0 "cAnh ό-ΟΟ^Η XH RMN (400 MHz, CDC13) δ 4,06-4,16 (m, 1H), 3,63 (s, 3H) , 3,43 (s, 1H), 2,82 e 2,66 (s, 1, 1H) , 1,86 -2,10 (m, 3H) , 1,64 -1,76 (m, 2H), 1,44 -1,53 (m, 1H). Cap-122 O >AnH ^*y.,C02H Perfil de 2H RMN é similar a esse do seu enantiómero, Cap-121. 116

Cap Estrutura LCMS Cap-123 °h LCMS: Anal. Calcd. para C27H26N06: 474; encontrado: 475 (M+H)+.

Cap-124 0 sal cloridrato de éster terc-butílico de L-treonina foi carbamoilado de acordo com o procedimento para Cap- 51. A mistura de reacção bruta foi acidificada com IN HC1 até pH ~1 e a mistura foi extraida com EtOAc (2X50 ml) . As fases orgânicas combinadas foram concentradas a vácuo para dar um óleo incolor que solidificou ao deixar em repouso. A camada aquosa foi concentrada a vácuo e a mistura resultante de produto e sais inorgânicos foi triturada com EtOAc-CH2Cl2-MeOH (1:1:0,1) e então a fase orgânica foi concentrada a vácuo para dar um óleo incolor que foi mostrado por LCMS como sendo o produto desejado. Ambas as colheitas foram combinadas para dar 0,52 g de um sólido. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 4,60 (m, 1H) , 4,04 (d, J = 5,0 Hz, 1H) , 1,49 (d, J = 6,3 Hz, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para 05Η7Ν04:145; encontrado: 146 (M+H)+.

Cap-l25

•N O r, OH

BocHN A uma suspensão de Pd(OH)2, (20 %, 100 mg), aquoso formaldeido (37 % em peso, 4 ml), ácido acético, (0,5 ml) em metanol (15 ml) foi adicionado ácido (S)-4-amino-2-(terc-butoxicarbonilamino)butanóico (1 g, 4,48 mmol). A reacção foi purgada diversas vezes com hidrogénio e foi agitada durante a noite com um balão de hidrogénio a temp

117 ambiente. A mistura de reacção foi filtrada através de uma almofada de terra diatomácea (Celite®, e o componente volátil foi removido a vácuo. 0 material bruto resultante foi usado como tal para a seguinte etapa. LC/MS: Anal. Calcd. para C11H22N2O4: 246; encontrado: 247 (M+H)+.

Cap-126

CICQ2Me. NaHC03 THF / H20 / 0eC cJ-25 /Γ·ΝΜθ

NJL co2h

MeOaCHN^ cep-126

Este procedimento é uma modificação desse usado para preparar Cap-51. A uma suspensão de 3-metil-L-histidina (0,80 g, 4,70 mmol) em THF (10 ml) e H20 (10 ml) a 0 °C foi adicionado NaHC03 (0,88 g, 10,5 mmol). A mistura resultante foi tratada com ClCC^Me (0,40 ml, 5,20 mmol) e a mistura deixada a agitar a 0 °C. Após agitação durante cerca de 2 h LCMS não mostrou nenhum material de partida restante. A reacção foi acidificada até pH 2 com 6 N HC1.

Os solventes foram removidos a vácuo e o resíduo foi suspenso em 20 ml de 20 % de MeOH em CH2C12. A mistura foi filtrada e concentrada para dar uma espuma amarela clara (1,21 g, ) . LCMS e XH RMN mostraram o material como sendo uma mistura 9:1 do éster metílico e o produto desejado. Este material foi absorvido em THF (10 ml) e H20 (10 ml), arrefecido até 0 °C e LiOH (249, 1 mg, 10,4 mmol) foi adicionado. Após agitação cerca de 1 h LCMS não mostrou nenhum éster restante. Portanto, a mistura foi acidificada com 6N HC1 e os solventes removidos a vácuo. LCMS e XH RMN confirmam a ausência do éster. O composto do título foi obtido como seu sal de HC1 contaminado com sais inorgânicos (1,91 g, >100 %). O composto foi usado como tal em etapas subsequentes sem purificação adicional. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,84, (s, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 4,52 (dd, J = 5,0, 9,1 Hz, 1H) , 3,89 (s, 3H) , 3,62 (s, 3H) , 3,35 (dd, J = 4,5, 118 15,6 Hz, 1H, parcialmente obscurecido pelo solvente), (dd, J = 9,0,15,6 Hz, 1H).LCMS: Anal. Calcd. C9Hi3N304: 227,09; encontrado: 228,09 (M+H) + .Cap-m 3, 12 para

co2h

CIC02Me. NaHCOg THF / H20 / 0eC

MeN 4

Me02CHN COaH cj-26 cep-127

Cap-127 foi preparado de acordo com o método para Cap-126 acima partindo de ácido (S)-2-amino-3-(1-metil-lH-imidazol-4-il)propanóico (1,11 g, 6,56 mmol), NaHC03 (1,21 g, 14,4 mmol) e ClC02Me (0,56 ml, 7,28 mmol). O composto do titulo foi obtido como seu sal de HC1 (1,79 g, >100 %) contaminado com sais inorgânicos. LCMS e 1H RMN mostraram a presença de cerca de 5 % do éster metilico. A mistura bruta foi usada como tal sem purificação adicional. ΤΗ RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,90 (s, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 4,48 (dd, J = 5,0, 8,6 Hz, 1H) , 3,89 (s, 3H) , 3,62 (s, 3H) , 3,35 (m, 1H) , 3,08 (m, 1H) ; LCMS: Anal. Calcd. para C9Hi3N304: 227, 09; encontrado: 228 (M+H)+.Preparação de Cap-128 \

Ph-x

Cbz-C! / DMAP CH2CI2 / iPr2NEt

BocHN C02H cj-27e

0°C

BocHN C02Bn ç/-27b

BnBr / CuSO4-5H20 Ascorbato de sodio NaN3 / DMF / H20 65°C/12h

cj-28 1) TFA / CH2C!2 2) CIC02Me / NaHC03 thf-h2o

Ph—\N , •i í N

H2 / Pd-C MeOH

Me02CHN C02Bn cj-29 HN—,.:jl

MeQ2CHN C02H cap-128 119

Etapa 1. Preparação de (S)-benzil 2-(terc- butoxicarbonilamino)pent-4-inoato (cj-27b).

BocHN COjBn cj-27b A uma solução de cj-27a (1,01 g, 4,74 mmol) , DMAP (58 mg, 0,475 mmol) e iPr2NEt (1,7 ml, 9,8 mmol) em CH2C12 (100 ml) a 0 °C foi adicionado Cbz-Cl (0,68 ml, 4,83 mmol). A solução foi deixada a agitar durante 4 h a 0 °C, lavada (EM KHS04, salmoura), seca (Na2S04) , filtrada, e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash (TLC 6:1 hex:EtOAc) para dar o composto do título (1,30 g, 91 %) como um óleo incolor. RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,35 (s, 5H) , 5,35 (d, 1, J = 8,1 Hz, 1H) , 5,23 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 4,48-4,53 (m, 1H) , 2,68-2,81 (m, 2H) , 2,00 (t, J = 2,5 Hz, 1H) , 1,44 (s, 9H) . LCMS: Anal. Calcd. para Ci7H2iN04: 303; encontrado: 304 (M+H)+.

Etapa 2. Preparação de (S)-benzil 3-(1-benzil-lH-l,2,3-triazol-4-il)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoato (cj-28) . hl

BocHN C02Bn cj-28 A uma mistura de (S)-benzil 2-(terc- butoxicarbonilamino)pent-4-inoato (0,50 g, 1,65 mmol), ascorbato de sódio (0,036 g, 0,18 mmol), CuS04-5H20 (0,022 g, 0,09 mmol) e NaN3 (0,13 g, 2,1 mmol) em DMF-H20 (5 ml, 4:1) a rt foi adicionado BnBr (0,24 ml, 2,02 mmol) e a mistura foi aquecida até 65 °C. Após 5h LCMS indicou

conversão baixa. Uma porção adicional de NaN3 (100 mg) foi adicionada e o aquecimento foi continuado durante 12h. A 120 reacção foi vertida em EtOAc e H20 e agitada. As camadas foram separadas e a camada aquosa extraída 3x com EtOAc e as fases orgânicas combinadas lavadas (H20 x3, salmoura) , secas (Na2S04) , filtradas, e concentradas. O resíduo foi purificado por flash (Biotage, 40+M 0-5 % de MeOH em CH2C12; TLC 3 % de MeOH em CH2C12) para propiciar um óleo amarelo claro que solidificou ao deixar em repouso (748,3 mg, 104 %) . O RMN foi consistente com o produto desejado, mas sugere a presença de DMF. O material foi usado como tal sem purificação adicional. RMN (400 MHz, DMSO-4) δ 7,84 (s, 1H) , 7,27 -7,32 (m, 10H) , 5,54 (s, 2H) , 5,07 (s, 2H) , 4,25 (m, 1H), 3,16 (dd, J = 1,0, 5,3 Hz, 1H), 3,06 (dd, J = 5,3, 14,7 Hz), 2,96 (dd, J = 9,1, 14,7 Hz, 1H) , 1,31 (s, 9H) . LCMS: Anal. Calcd. para C24H28N404: 436; encontrado: 437 (M+H)+.

Etapa 3. Preparação de (S)-benzil 3-(1-benzil-lH-l,2,3-triazol4-il)-2-(metoxicarbonilamino)propanoato (cj- 29).

Ph—\

cj-29

Uma solução de (S)-benzil 3-(1-benzil-lH-l,2,3-triazol-4-il)-2 - (terc-butoxicarbonilamino)propanoato (0,52 g, 1,15 mmol) em CH2C12 foi adicionado TFA (4 ml) . A mistura foi deixada a agitar a temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi concentrada a vácuo para dar um óleo incolor que solidificou ao deixar em repouso. Este material foi dissolvido em THF-H20 e arrefecido até 0 °C. NaHC03 sólido (0,25 g, 3,00 mmol) foi adicionado seguido por ClC02Me (0,25 ml, 3,25 mmol). Após agitação durante l,5h a mistura foi acidificada até pH ~2 com 6N HC1 e então vertida em H20-Et0Ac. As camadas foram separadas e a fase aq extraída 2x com EtOAc. As camadas org combinadas foram lavadas (H20, salmoura), secas (Na2S04) , filtradas, e 121 121 concentradas a vácuo para dar um óleo incolor (505,8 mg, 111 %, RMN sugeriu a presença de uma impureza não identificada) gue solidificou enguanto se mantinha na bomba. O material foi usado como tal sem purificação adie ional. ΤΗ RMN (40 0 MHz, DMSO-d, s) δ 7,87 (s, 1H) , 7,70 (d, J = 8, 1 Hz, 1H), 7,27 - 7,32 (m, 10H), 5, 54 (S, 2H) , 5, 10 (d, J = 12,7 Hz, 1H), 5, ,06 (d, J = 12,7 Hz, 1H) , 4,32 - 4, 37 (m, 1H), 3,49 (s, 3H) , 3,09 (dd, J = 5, 6, 14, 7 Hz, 1H) , 2,98 (dd, J = 9,6, 14,7 Hz, 1H) . LCMS: Anal. Calcd. para C2iH22N404 : 394; encontrado: 395 (M+H) + .

Etapa 4. Preparação de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-(1H-1,2,3-triazol-4-il)propanóico (Cap-128) .

irx .!JL

Me02CHN "COjH Cap-128 (S)-benzi1 3-(1-benzil-lH-l,2,3-triazol-4-il)-2- (metoxicarbonilamino)propanoato (502 mg, 1,11 mmol) foi hidrogenado na presença de Pd-C (82 mg) em MeOH (5 ml) a pressão atmosférica durante 12 h. A mistura foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®) e concentrada a vácuo. Ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-(1H-1,2,3-triazol-4- il)propanóico foi obtido como uma goma incolor (266 mg, 111 %) gue foi contaminada com cerca de 10 % do éster metilico. O material foi usado como tal sem purificação adicional. ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-de) δ 12,78 (s, 1, 1H) , 7,59 (s, 1H) , 7,50 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 4,19 - 4,24 (m, 1H), 3,49 (s, 3H) , 3,12 (dd, J = 4,8 Hz, 14,9 Hz, 1H) , 2,96 (dd, J = 9,9, 15,0 Hz, 1H) . LCMS: Anal. Calcd. para C7Hi0N4O4: 214; encontrado: 215 (M+H) + .

Preparação de Cap-129 122 Λ Ν=\ ΗΝ^ <

Ns=\1)H2Pd-C/MeOH

CbzHN Ό CH3CN / 50°C CbzHN^co H 2) CICCfeMe

p Me02CHN^X02H çj-30 cj-31

NaHC03/THF-H20 cap-129

Etapa 1. Preparação de ácido (S)—2 — (benziloxicarbonilamino)-3-(lH-pirazol-l-il)propanóico (cj-31) . N=\

CbzHN^XC^H cj-31

Uma suspensão de (S)-benzil 2-oxooxetan-3-ilcarbamato (0,67 g, 3,03 mmol), e pirazol (0,22 g, 3,29 mmol) em CH3CN (12 ml) foi aquecida a 50 °C durante 24h. A mistura foi arrefecida até rt durante a noite e o sólido filtrado para propiciar ácido (S)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-(1H-pirazol-l-il)propanóico (330,1 mg). O filtrado foi concentrado a vácuo e então triturado com uma quantidade pequena de CH3CN (cerca de 4 ml) para propiciar uma segunda colheita (43,5 mg). Rendimento total 370,4 mg (44 %) . p.f. 165,5-168 °C. p.f. lit 168,5 - 169,5 [Vederas et al. J. Am. Chem. Soc. 1985, 107, 7105;. ΧΗ RMN (400 MHz, CD30D) δ 7,51 (d, J = 2,0, 1H) , 7,48 (s, J = 1,5 Hz, 1H) , 7,24-7,34 (m, 5H) , 6,23 m, 1H) , 5,05 (d, 12,7 Η, 1H) , 5,03 (d, J = 12,7

Hz, 1H) , 4,59 - 4, 66 (m, 2H) , 4, 42 - 4,49 (m, 1H) . LCMS:

Anal. Calcd. para Ci4Hi5N304: 289; encontrado: 290 (M+H) + . Etapa 2. Preparação de (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-(1H-pirazol-l-il)propanóico ácido (Cap-129).

MeOjfCHN^COaH cap-129 Ácido (S)-2-(benziloxicarbonilamino)-3-(lH-pirazol-1-il)propanóico (0,20 g, 0,70 mmol) foi hidrogenado na 123 presença de Pd-C (45 mg) em MeOH (5 ml) a pressão atmosférica durante 2h. 0 produto pareceu ser insolúvel em MeOH, portanto a mistura de reacção foi diluida com 5 ml H20 e poucas gotas de 6N HC1. A solução homogénea foi filtrada através de terra diatomácea (Celite®) , e o MeOH removido a vácuo. A solução restante foi congelada e liofilizada para dar uma espuma amarela (188, 9 mg) . Este material foi suspenso em THF-H20 (1:1, 10 ml) e então arrefecido até 0 °C. À mistura fria foi adicionado NaHC03 (146,0 mg, 1,74 mmol) cuidadosamente (evolução de C02). Após a evolução de gás ter cessado (cerca de 15 min) ClC02Me (0,06 ml, 0,78 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi deixada a agitar durante 2h e foi acidificada até pH ~2 com 6N HC1 e vertida em EtOAc. As camadas foram separadas e a fase aquosa extraída com EtOAC (x5) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas (salmoura), seca (Na2S04) , filtradas, e concentradas para dar o composto do título como um sólido incolor (117,8 mg, 79 %). ΤΗ RMN (400 MHz, DMS0-d6) δ 13,04 (s, 1H) , 7,63 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 7,48 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,44 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 6,19 (t ap, J = 2,0 Hz, 1H), 4,47 (dd, J = 3,0, 12,9 Hz, 1H) , 4,29 - 4,41 (m, 2H) , 3,48 (s, 3H) . LCMS: Anal. Calcd. para

CgHnNsCq: 213; encontrado: 214 (M+H) + .

Cap-130

AcHN^C02H

Cap-130 foi preparado por acilação de (R)-glicina comercialmente disponível análoga ao procedimento dado em: Calmes, M.; Daunis, J.; Jacquier, R; Verducci, J. Tetrahedron, 1987, 43(10), 2285. 124

Cap-131

Etapa a: Cloreto de dimetilcarbamoilo (0,92 ml, 10 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução de cloridrato de (S)-benzil 2-amino- 3-metilbutanoato (2,44 g; 10 mmol) e base de Hunig (3,67 ml, 21 mmol) em THF (50 ml). A suspensão branca resultante foi agitada a temperatura ambiente durante a noite (16 horas) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido em partições entre acetato de etilo e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgS04) , filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O óleo amarelo resultante foi purificado por cromatografia flash, eluindo com acetato de etilo:hexanos (1:1). As fracções colhidas foram concentradas sob vácuo que proporcionou 2,35 g (85 %) de óleo claro. RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,84 (d, J = 6,95 Hz, 3H) , 0,89 (d, J = 6,59 Hz, 3H) , 1,98-2,15 (m, 1H) , 2,80 (s, 6H) , 5,01-5,09 (m, J = 12,44 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 12,44 Hz, 1H) , 6,22 (d, J = 8,05 Hz, 1H), 7,26-7,42 (m, 5H) . LC (Cond. 1): TR = 1,76 min; MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C16H22N2O3: 279, 17; encontrado 279,03.

Etapa b: a uma solução em MeOH (50 ml) do intermediário preparado acima (2,35 g; 8,45 mmol) foi adicionado Pd/C (10 %; 200 mg) e a suspensão preta resultante foi esguichada com N2 (3x) e colocada para a reacção a 1 atm de H2. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite e filtrada através de um filtro de microfibra para remover o catalisador. A solução clara resultante foi então concentrada sob pressão reduzida para obter 1,43 g (89 %) de Cap-131 como uma espuma branca, que foi usada sem purificação adicional. ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-dô) δ ppm 0,87 (d, J = 4,27 Hz, 3H) , 0,88 (d, J = 3,97 Hz, 125 3Η) , 1,93-2,11 (m, 1H) , 2,80 (s, 6H) , 3,90 (dd, J = 8,39, 6, 87 Hz, 1H) , 5,93 (d, J = 8,54 Hz, 1H) , 12,36 (s, 1H) . LC (Cond. 1) : TR = 0,33 min; MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C8H17N203: 189, 12; encontrado 189, 04.

Cap-132

Cap-132 foi preparada a partir de cloridrato de (S)-benzil 2-aminopropanoato de acordo com o método descrito para Cap-131. ΧΗ RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1,27 (d, J = 7,32 Hz, 3H), 2,80 (s, 6H),4,06 (qt, 1H), 6,36 (d, J = 7,32 Hz, 1H) , 12,27 (s, 1H) . LC (Cond. 1): TR = 0,15 min; MS:

Anal. Calcd. para [M+H]+ C6Hi3N203: 161,09; encontrado 161,00.

Cap-133

nh2

HCI

Cap-133 foi preparada a partir de cloridrato de (S)-terc-butil 2-amino-3-metilbutanoato e cloroformato de 2-fluoroetilo de acordo com o método descrito para Cap-47, XH

RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 0,87 (t, J = 6,71 Hz, 6H) 1,97-2,10 (m, 1H), 3,83 (dd, J = 8,3 9, 5, 95 Hz, 1 H) 4,14-4, 18 (m, 1 H) , 4,20- -4,25 (m, 1H) , 4,50-4,54 (m, 1H) 4,59-4,65 (m, 1H), 7,51 (d, J = 8,54 Hz, 1H) , 12,54 (s

Cap-134 foi preparada a partir de (S)-dietil alanina e cloroformato de metilo de acordo com o método descrito para 126

Cap-51. ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,72-0, 89 (m, 6H), 1,15-1,38 (m, 4H) , 1,54-1,66 (m, 1H) , 3,46-3, 63 (m, 3H) , 4,09 (dd, J = 8,85, 5,19 Hz, 1H) , 7,24 (d, J = 8,85 Hz, 1H) , 12,55 (s, 1H) . LC (Cond. 2) : TR = 0,66 min; LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C9H18 N04: 204,12; encontrado 204,02.

Cap-135

Uma solução de ácido D-2-amino-(4 — fluorofenil) acético (338 mg, 2,00 mmol) , 1NHC1 em dietil éter (2,0 ml, 2,0 mmol) e formalina (37 %, 1 ml) em metanol (5 ml) foi submetida a hidrogenação em balão ao longo de 10 % de paládio em carbono (60 mg) durante 16 h a 25 °C. A mistura foi então filtrada através de Celite para propiciar o sal de HC1 de Cap-135 como uma espuma branca (316 mg, 80 %). ΤΗ RMN (300 MHz, MeOH-d4) δ 7,59 (dd, J = 8,80, 5,10 Hz, 2H) , 7,29 (t, J = 8,6 Hz, 2H) , 5,17 (s, 1H) , 3,05 (v s 1, 3H) , 2,63 (v s 1, 3H); Rt = 0,19 min (Cond.-MS-W5); 95 % homogenity index; LRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ CinHi3FN02: 198,09; encontrado: 198,10.

Cap-136

A uma suspensão arrefecida (-50 °C) de 1-benzil-lH-imidazol (1,58 g, 10,0 mmol) em dietil éter anidro (50 ml) sob azoto foi adicionado n-butil litio (2,5 M em hexanos, 4,0 ml, 10,0 mmol) gota a gota. Após ser agitado durante 20 min a - 50 °C, dióxido de carbono seco (passado através de 127

Drierite) foi borbulhado na mistura de reacção durante 10 min antes de ser deixado a aquecer até 25 °C. O precipitado pesado que formou na adição de dióxido de carbono à mistura de reacção foi filtrada para produzir um sólido branco hiqroscópico que foi absorvido em áqua (7 ml), acidificado até pH = 3, arrefecido, e induzido a cristalizar com

raspaqem. A filtração deste precipitado deu um sólido branco que foi suspenso em metanol, tratado com IN HCl/dietil éter (4 ml) e concentrado a vácuo. A liofilização do resíduo a partir de áqua (5 ml) propiciou o sal de HC1 de Cap-136 como um sólido branco (817 mg, 40 %). ΤΗ RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,94 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 7,71 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 7,50-7,31 (m, 5H) , 5,77 (s, 2H) ; Rt = 0,51 min (Cond. -MS-W5) ; 95 % de índice de homogeneidade; LRMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnH12N202: 203, 08; encontrado: 203,11.

COjH m

Cap-137, etapa a

Uma suspensão de l-cloro-3-cianoisoquinolina (188 mg, 1,00 mmol; preparada de acordo com o procedimento no documento WO 2003/ 099274) (188 mg, 1,00 mmol), fluoreto de césio (303,8 mg, 2,00 mmol), dicloreto de bis(tri-terc-butilfosfina) paládio (10 mg, 0,02 mmol) e 2-(tributilstannil)furano (378 ml, 1,20 mmol) em dioxano anidro (10 ml) sob azoto foi aquecida a 80 °C durante 16 h antes de ter sido arrefecida até 25 °C e tratada com solução de fluoreto de potássio saturado, aquoso com 128 agitação vigorosa durante 1 h. A mistura foi dividida em partições entre acetato de etilo e água e a fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em Na2S04, filtrada e concentrada. Purificação do residuo em silica gel (eluição com 0 % a 30 % de acetato de et ilo/hexanos) propiciou Cap-137, etapa a como um sólido branco que foi usado como tal (230 mg, 105 %) . Rt = 1,95 min (Cond.-MS-W2); 90 % de indice de homogeneidade; LRMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci4H8N20: 221, 07; encontrado: 221,12.

Cap-137

OOjH A uma suspensão de Cap 137, etapa a, (110 mg, 0,50 mmol) e periodato de sódio (438 mg, 2,05 mmol) em tetracloreto de carbono (1 ml), acetonitrilo (1 ml) e água (1,5 ml) foi adicionado tricloreto de ruténio hidratado (2 mg, 0,011 mmol). A mistura foi agitada a 25 °C durante 2 h e então dividida em partições entre diclorometano e água. A camada aquosa foi separada, extraída duas vezes mais com diclorometano e os extractos de diclorometano combinados foram secos em Na2S04, filtrados e concentrados. A trituração do resíduo com hexanos propiciou Cap-137 (55 mg, 55 %) como um sólido de cor acinzentada. Rt = 1,10 min (Cond.-MS-W2); 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnH8N202: 2 0 0, 0 8; encontrado: 200,08 .

Caps 138 a 158

Estratégia de Síntese. Método A.

fiwa 3WS.

tTiÇPSA

TMSCW . wkWí

íWNbOH

129 Οψ-Μ

A uma suspensão agitada de 5-hidroxisoquinolina (preparada de acordo com o procedimento no documento WO 2003/ 099274) (2,0 g, 13,8 mmol) e trifenilfosfina (4,3 g, 16,5 mmol) em tetrahidrofurano seco (20 ml) foi adicionado metanol seco (0,8 ml) e azodicarboxilato de dietilo (3,0 ml, 16,5 mmol) em porções. A mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 20 h antes de foi diluída com acetato de etilo e lavada com salmoura, seca em Na2SC>4, filtrada e concentrada. O resíduo foi pré-absorvido em sílica gel e purificado (eluição com 40 % de acetato de etilo/hexanos) para propiciar Cap-138, etapa a como um sólido amarelo claro (1,00 g, 45 %) . 1 H RMN (CDC13, 500 MHz) δ 9, 19 (s, 1H), 8, 51 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 6, 0 Hz, 1H), 7,52-7,50 (m, 2H), 7,00-6,99 (m, 1H), 4,01 (s, 3H) ; Rt = 0,66 min (Cond. D2); 95 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0Hi0NO: 160,08; encontrado 160,10.

Cap-138, etapa b

A uma solução agitada de Cap 138, etapa a (2,34 g, 14,7 mmol) em diclorometano anidro (50 ml) a temperatura 130 ambiente foi adicionado ácido meta-cloroperbenzóico (77 %, 3,42 g, 19,8 mmol) numa porção. Após ser agitado durante 20 h, carbonato de potássio em pó (2,0 g) foi adicionado e a mistura foi agitada durante lha temperatura ambiente antes de ter sido filtrada e concentrada para propiciar Cap-138, etapa b como um sólido amarelo pálido que foi suficientemente puro para levar adiante (2,15 g, 83,3 %) . XH RMN (CDC13, 400 MHz) δ 8,73 (d, J = 1,5 Hz, 1H) , 8,11 (dd, J = 7,3, 1,7 Hz, 1H) , 8,04 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 7,52 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 6,91 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H); Rt = 0,92 min, (Cond.-Dl); 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H10NO2: 176, 07; encontrado: 176,0.

Cap-138, etapa c

A uma solução agitada de Cap 138, etapa b (0,70 g, 4,00 mmol) e trietilamina (1,1 ml, 8,00 mmol) em acetonitrilo seco (20 ml) a temperatura ambiente sob azoto foi adicionado trimetilsililcianida (1,60 ml, 12,00 mmol). A mistura foi aquecida a 75 °C durante 20 h antes de ter sido arrefecida até a temperatura ambiente, diluída com acetato de etilo e lavada com saturado bicarbonato de sódio solução e salmoura antes de secar em Na2S04 e concentração com solvente. O residuo foi submetido a cromatografia flash em sílica gel (eluição com 5 % de acetato de etilo/hexanos) a 25 % de acetato de etilo/hexanos para propiciar Cap-138, etapa c (498,7 mg) como um sólido cristalino branco juntamente com 223 mg de adicional Cap-138, etapa c recuperado a partir do filtrado. ΤΗ RMN (CDC13, 500 MHz) δ 8,63 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 8,26 (d, J = 5,5 Hz, 1H) , 7,88 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,69 (t, J = 8,0 Hz, 1H) , 7,08 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 4,04 (s, 3H); Rt = 1,75 min, (Cond.-Dl); 90 % 131 de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnH9N20: 185, 07; encontrado: 185,10. 131 Cap-138

Cap-138, etapa c (0,45 g, 2,44 mmol) foi tratada com solução de hidróxido de sódio a 5N (10 ml) e a suspensão resultante foi aquecida a 85 °C durante 4 h, arrefecida até 25 °C, diluída com diclorometano e acidificada com ácido clorídrico a IN. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em Na2SC>4, concentrada até % em volume e filtrada para propiciar Cap-138 como um sólido amarelo (0,44 g, 88, 9 %) . ΤΗ RMN (DMSO-de, 400 MHz) δ 13,6 (s 1, 1H) , 8,56 (d, J = 6,0 Hz, 1H) , 8,16 (d , J = 6,0 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,71-7,67 (m, 1H), 7,30 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 4,02 (s, 3H) ; Rt = 0,70 min (Cond.-Dl); 95 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C11H10NO3: 204,07; encontrado: 204,05.

Estratégia de Síntese. Método B (derivado de Tetrahedron Letters, 2001, 42, 6707).

WO 2003/ 099274

SNNaOH

>> KCN, dpppe

Pd(OAc)2 TMEDA, 150°C tolueno

Cap-139

Cap-139, etapa a

A um frasco de contendo uma suspensão parede espessa de tampa de rosca desgaseifiçada com árgon de 1-cloro- 132 6-metoxiisoquinolina (1,2 g, 6,2 irunol; preparada de acordo com o procedimento no documento WO 2003/ 099274), cianida de potássio (0,40 g, 6,2 mmol), 1,5- bis(difenilfosfino)pentano (0,27 g, 0,62 mmol) e acetato de paládio (II) (70 mg, 0,31 mmol) em tolueno anidro (6 ml) foi adicionado N,N,Ν',Ν'-tetrametiletilenodiamina (0,29 ml, 2,48 mmol). O frasco foi vedado, aquecido a 150 °C durante 22 h e então deixado arrefecer até 25 °C. A mistura de reacção foi diluida com acetato de etilo, lavada com água e salmoura, seca em Na2S04, filtrada e concentrada. O residuo foi purificado em sílica gel eluindo com 5 % de acetato de etilo/hexanos a 25 % de acetato de etilo/hexanos para propiciar Cap-139, etapa a como um sólido branco (669,7 mg). XH RMN (CDC13, 500 MHz) δ 8,54 (d, J = 6,0 Hz, 1H) , 8,22 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 5,5 Hz, 1H) , 7,41-7,39 (m, 1H) , 7,13 (d, J = 2,0 Hz, 1H) , 3,98 (s, 3H) ; Rt = 1,66 min (Cond.-Dl); 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. for[M+H]+ CnH9N20: 185,07; encontrado: 185,20.

Cap-139

co2h

Cap-139 foi preparada a partir da hidrólise básica de Cap-139, etapa a com 5N NaOH de acordo com o procedimento descrito para Cap 138. ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,63 (v s 1, 1H) , 8,60 (d, J = 9,3 Hz, 1H) , 8,45 (d, J = 5,6 Hz, 1H) , 7,95 (d, J = 5,9 Hz, 1H) , 7,49 (d, J = 2,2 Hz, 1H) , 7,44 (dd, J = 9,3, 2,5 Hz, 1H) , 3,95 (s, 3H) ; Rt = 0,64 min (Cond.-Dl); 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnHi0NO3: 204,07; encontrado: 204, 05. 133

Cap-140 133

t

A uma mistura agitada vigorosamente de 1,3-dicloro-5-etoxiisoquinolina (482 mg, 2,00 mmol; preparada de acordo com o procedimento no documento WO 2005/051410), acetato de paládio (II) (9 mg, 0,04 mmol), carbonato de sódio (223 mg, 2,10 mmol) e 1,5-bis(difenilfosfino)pentano (35 mg, 0,08 mmol) em dimetilacetamida seca (2 ml) a 25 °C sob azoto foi adicionada N,N,Ν',Ν'-tetrametiletilenodiamina (60 ml, 0,40 mmol) . Após 10 min, a mistura foi aquecida até 150 C, e então uma solução stock de cianihidrina de acetona (preparada a partir de 457 ml de cianihidrina de acetona em 4,34 ml de DMA) foi adicionada em porções de 1 ml ao longo de 18 h usando uma bomba de seringa. A mistura foi então dividida em partições entre acetato de etilo e água e a camada orgânica foi separada, lavada com salmoura, seca em Na2S04, filtrada e concentrada. O resíduo foi purificado em sílica gel eluindo com 10 % de acetato de etilo/hexanos a 40 % de acetato de etilo/hexanos para propiciar Cap-140, etapa a como um sólido amarelo (160 mg, 34 %) . Rt = 2,46 min (Cond.-MS-W2) ; 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci2H9C1N20: 233, 05; encontrado: 233,08. 134

Cap-140 134

Cap-140 foi preparado pela hidrólise ácida de Cap-140, etapa a com 12N HC1 como é descrito no procedimento para a preparação de Cap 141, descrito a seguir. Rt = 2,24 min (Cond.-MS-W2); 90 % de indice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C12H11CINO3: 252,04; encontrado: 252,02.

Cap-141

Cap-141, etapa a F

Cap-141, etapa a foi preparado a partir de l-bromo-3-fluoroisoquinolina (preparada a partir de 3-amino-l- bromoisoquinolina usando o procedimento delineado em J. Med Chem. 1970, 13, 613) como é descrito no procedimento para a preparação de Cap- 140, etapa a (vide supra) RMN (500 MHz, CDCI3) δ 8,35 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,93 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,83 (t, J = 7,63 Hz, 1H), 7,77-7,73 (m, 1H), 7,55 (s, 1H) ; Rt = 1,60 min (Cond.-Dl); 90 % de indice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CioH6FN2: 173,05; encontrado: 172,99. 135Cap-141

F

Cap-141, etapa a (83 mg, 0,48 mmol) foi tratado com 12N HC1 (3 ml) e a suspensão resultante foi aquecida a 80 °C durante 16 h antes de ter sido arrefecida até a temperatura ambiente e diluída com água (3 ml) . A mistura foi agitada durante 10 min e então filtrada para propiciar Cap-141 como um sólido branco pérola (44,1 mg, 47,8 %) . O filtrado foi diluído com diclorometano e lavado com salmoura, seco em Na2SC>4, e concentrado para propiciar Cap-141 adicional que foi suficientemente puro para ser levado adiante directamente (29, 30 mg, 31,8 %) . 1H RMN (DMSO-d6, 500 MHz) δ 14,0 (s 1, 1H), 8,59-8,57 (m, 1H), 8,10 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7, 88-7,85 (m, 2H) , 7,74-7,71 (m, 1H) ; Rt = 1,33 min (Cond.-Dl); 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H7FNO2: 192,05; encontrado: 191,97.

Cap-142

Cap-142, etapa a

Cap-142, etapa a foi preparado a partir de N-óxido de 4-bromoisoquinolina como é descrito no procedimento de duas etapas para a preparação de Cap-138, etapas b e c. Rt = 136 1,45 min (Cond. -MS-W1) ; 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H6BrN2: 232, 97; encontrado: 233,00.

Cap-142, etapa b

A uma suspensão desgaseifiçada com árgon de Cap-142, etapa a (116 mg, 0,50 mmol), fosfato de potássio tribásico (170 mg, 0,80 mmol), acetato de paládio (II) (3,4 mg, 0,015 mmol) e 2-(diciclohexilfosfino)bifenilo (11 mg, 0,03 mmol) em tolueno anidro (1 ml) foi adicionada morfolina (61 ml, 0,70 mmol) . A mistura foi aquecida a 100 °C durante 16 h, arrefecida até 25 °C e filtrada através de terra diatomácea (Celite®). A purificação do resíduo em sílica gel, eluindo com 10 % a 70 % de acetato de etilo/hexanos propiciou Cap-142, etapa b (38 mg, 32 %) como um sólido amarelo, que foi levado adiante directamente. Rt = 1,26 min (Cond.-MS-W1); 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [Nl+H]+ C14H14N3O: 240, 11; encontrado: 240, 13.

Cap-142

COjH

Cap-142 foi preparado a partir de Cap-142, etapa b com hidróxido de sódio a 5N como é descrito no procedimento para Cap 138. Rt = 0,72 min (Cond.-MS-W1) ; 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+Ci4H15N203 : 259,11; encontrado: 259,08. 137 €αρ~ϊ4$

A uma solução agitada de 3-amino-l-bromoisoquinolina (444 mg, 2,00 mmol) em anidro dimetilformamida (10 ml) foi adicionado hidreto de sódio (60 %, não lavado, 96 mg, 2,4 mmol) numa porção. A mistura foi agitada a 25 °C durante 5 min antes de 2-bromoetil éter (90 %, 250 ml, 2,00 mmol) ter sido adicionado. A mistura foi agitada adicionalmente a 25 °C durante 5 h e a 75 °C durante 72 h antes de ter sido arrefecida até 25 °C, extinta com solução de cloreto de amónio saturado e diluída com acetato de etilo. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, seca em Na2SC>4, filtrada e concentrada. A purificação do resíduo em sílica gel eluindo com 0 % a 70 % de acetato de etilo/hexanos propiciou Cap- 143, etapa a como um sólido amarelo (180 mg, 31 %) . Rt = 1,75 min (Cond.-MS-W1) ; 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+

Ci3Hi4BrN20: 293, 03; encontrado: 293, 04.

Cap-Í43

A uma solução fria (-60 °C) de Cap-143, etapa a (154 mg, 0,527 mmol) em tetrahidrofurano anidro (5 ml) foi adicionada uma solução de n-butillítio em hexanos (2,5 M, 0,25 ml, 0,633 mmol). Após 10 min, dióxido de carbono seco foi borbulhado na mistura de reacção durante 10 min antes 138 de ter sido extinta com IN HC1 e deixada que aquecesse até 25 °C. A mistura foi então extraída com diclorometano (3 x 30 ml) e os extractos orgânicos combinados foram concentrados a vácuo. A purificação do resíduo por uma HPLC de fase reversa (MeOH/água/TFA) propiciou Cap-143 (16 mg, 12 %) . Rt = 1,10 min (Cond.-MS-W1) ; 90 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci4Hi5N203 : 259,11; encontrado: 259,08.

Cap-144

Cap-144, etapa a

Cl α 1,3-Dicloroisoquinolina (2,75 g, 13,89 mmol) foi adicionada em porções pequenas a uma solução fria (0 °C) de ácido nítrico fumegante (10 ml) e ácido sulfúrico concentrado (10 ml) . A mistura foi agitada a 0 °C durante 0,5 h antes de ter sido gradualmente aquecida até 25 °C onde se agitoudurante 16 h. A mistura foi então vertida num becker contendo gelo picado e água e a suspensão resultante foi agitada durante 1 h a 0 °C antes de ter sido filtrada para propiciar Cap-144, etapa a (2,73 g, 81 %) como um sólido amarelo que foi usado directamente. Rt = 2,01 min. (Cond.-Dl); 95 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal.

Cale. para [M+H]+ C9H5CI2N2O2: 242, 97; encontrado: 242, 92. 139 Cap-144, etapa b

Cap-144, etapa a (0,30 g, 1,23 mmol) foi absorvido em metanol (60 ml) e tratado com óxido de platina (30 mg), e a suspensão foi submetida a hidrogenação de Parr a 7 psi H2 durante 1,5 h. Então formalina (5 ml) e óxido de platina adicional (30 mg) foram adicionados, e a suspensão foi ressubmetida a hidrogenação de Parr a 45 psi H2 durante 13 h. Foi então filtrada por sucção através de terra diatomácea (Celite®) e concentrada para reduzir até % em volume. A filtração por sucção do seguinte precipitado propiciou o composto do titulo como um sólido amarelo gue foi submetido a cromatografia flash em silica gel eluindo com 5 % de acetato de etilo em hexanos a 25 % de acetato de etilo em hexanos para propiciar Cap-144, etapa b (231 mg, 78 %) como um sólido amarelo pálido. Rt = 2,36 min (Cond.-Dl) ; 95 % de índice de homogeneidade; ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,02 (s, 1H) , 7,95 (d, J = 8,6 Hz, 1H) , 7,57-7,53 (m, 1H) , 7,30 (d, J = 7,3 Hz, 1H) , 2,88 (s, 6H) ; LCMS:

Anal. Cale. para [M+H] +CiiHiiC12N2 : 241, 03; encontrado: 241, 02. HRMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnHuCl2N2: 241, 0299; encontrado: 241,0296.

Cap-144, etapa c

Cap-144, etapa c foi preparado a partir de Cap-144, etapa b de acordo com o procedimento descrito para a preparação de Cap-139, etapa a. Rt = 2,19 min (Cond.-Dl); 95 % de índice de homogeneidade; LCMS: Anal. Cale. para 140 [Μ+Η] + C12H11CIN3:232,0 6; encontrado: 232,03. HRMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci2HhC1N3- 232,0642; encontrado: 232,0631.

Cap-144

COjH ci

Cap-144 foi preparado de acordo com o procedimento descrito para Cap-141. Rt = 2,36 min (Cond.-Dl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C12H12CIN2O2: 238, 01; encontrado: 238,09.

Caps-145 a 162

Caps-145 a 162 foram preparados a partir das 1-cloroisoquinolinas apropriadas de acordo com o procedimento descrito para a preparação de Cap-138 (Método A) ou Cap-139 (Método B) a não ser que indicado de outro modo como delineado a seguir.

Cap # Cap Método Hidrólise Rt (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS Cap-145 OCf COjH Preparada a partir de 1,3-dicloroisoquinolina comercialmente disponível B 12N HC1 1,14 min (Cond.-MS-Wl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C10H7ClNO2: 208,02; encontrado: 208,00. Cap-146 cor COjH Preparada a partir de 3-hidroxiisoquinolina comercialmente disponível A 5N NaOH 1,40 min (Cond.-Dl); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnHtoNOa: 204,07; encontrado: 204,06. 141

Cap # Cap Método Hidrólise Rt (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS Cap-147 Preparada a partir de 1-cloro-4- hidroxiisoquinolina comercialmente disponível B 5N NaOH 0,87 min (Cond.-Dl); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CuH10NO3: 204,07; encontrado: 204,05. Cap-148 Preparada a partir de 7-hidroxiisoquinolina comercialmente disponível A 5N NaOH 0,70 min (Cond.-Dl); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ ChH10NO3 : 204,07; encontrado: 204,05. Cap-149 Preparada a partir de 5-hidroxiisoquinolina comercialmente disponível A 5N NaOH 0,70 min (Cond.-Dl); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnH10NO3: 204,07; encontrado: 204,05. Cap-150 Preparada a partir de 8-metoxi-1- cloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/ 099274 A 12N HC1 0,26 min (Cond.-Dl);95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnH10NO3: 204,07; encontrado: 204,04 . 142

Cap # Cap Método Hidrólise Rt (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS Cap-151 COjH Preparada a partir de 5-metoxi-1,3- dicloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2005 / 051410 . B 12N HC1 1,78 min (Cond.-Dl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C11H9CINO3: 238,03; encontrado: 238,09. Cap-152 Preparada a partir de 6-metoxi-1,3-dicloroisoquinolina comercialmente disponível B 12N HC1 1,65 min (Cond.-Dl); 95 %; LCMS.: Anal. Cale. para [M+H]+ C11H9CINO3: 238, 00; encontrado: 238,09. Cap-153 Preparada a partir de 4-bromoisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/ 062241 A 6N HC1 1,18 min (Cond.-MS-Wl); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C10H7BrNO2: 251, 97; encontrado: 251,95. 143

Cap # Cap Método Hidrólise Rt (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS Cap-154 xo COjH Preparada a partir de 7-fluoro-1- cloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/ 099274 B 5N NaOH 0,28 min (Cond.-MS-Wl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H7FNO2: 192, 05; encontrado: 192,03. Cap-155 XXjDi co2h Preparada a partir de 1,7- dicloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/ 099274 B 5N NaOH 0,59 min (Cond.-MS-Wl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C10H7ClNO2: 2 0 8, 02; encontrado: 208,00. Cap-156 °xç COjH Preparada a partir de 1,6- dicloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/099274 B 5N NaOH 0,60 min (Cond.-MS-Wl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H7C1NO2: 2 0 8, 02; encontrado: 208,03. 144

Cap # Cap Método Hidrólise Rt (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS Cap-157 Preparada a partir de 1,4- dicloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/ 062241 B 12N HC1 1,49 min (Cond.-Dl); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H17C1NO: 208, 02; encontrado: 208,00. Cap-158 óç Preparada a partir de 1,5- dicloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/ 099274 B 5N NaOH 0,69 min (Cond.-MS-Wl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H7C1NO2: 2 0 8, 02; encontrado: 208,01. Cap-159 00 COjH Preparada a partir de 5-fluoro-1- cloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo o procedimento no documento WO 2003/ 099274 B 5N NaOH 0,41 min (Cond.-MS-Wl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C10H7FNO2: 192, 05; encontrado: 192,03. 145

Cap # Cap Método Hidrólise Rt (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS Cap-160 xn CO2H Preparada a partir de 6-fluoro-1- cloroisoquinolina, que pode ser sintetizado seguindo 0 procedimento no documento WO 2003/ 099274 B 5N NaOH 0,30 min (Cond.-MS-Wl); 90 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ Ci0H7FNO2: 192,05; encontrado: 192,03. Cap-161 o2x. Preparada a partir de ácido 4-bromoquinolina-2- carboxílico e dimetilamina (DMSO, 100 °C) 0,70 min (Cond. Dl); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ C12H13N2O2: 217,10; encontrado: 217,06. Cap-162 ucçu. Preparada a partir de m-anisidina seguindo 0 procedimento descrito em J. Hetero. Chem. 1993, 17 e Heterocycles, 2003, 60, 953. 0,65 min (Cond.-M3); 95 %; LCMS: Anal. Cale. para [M+H]+ CnHioNOa: 204,07; encontrado: 203,94.

Cap-163

A uma solução de ácido 2-cetobutírico (1,0 g, 9,8 mmol) em dietil éter (25 ml) foi adicionado brometo de fenilmagnésio (22 ml, 1M em THF) gota a gota. A reacção foi 146 agitada a ~25 °C sob azoto durante 17,5 h. A reacção foi acidificada com IN HC1 e o produto foi extraído com acetato de etilo (3 x 100 ml) . A camada orgânica combinada foi lavada com água seguido por salmoura e seca em MgS04. Após concentração a vácuo, um sólido branco foi obtido. O sólido foi recristalizado a partir de hexanos/acetato de etilo para propiciar Cap-163 como agulhas brancas (883,5 mg). ΤΗ RMN (DMSO- d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz) : 12,71 (s 1, 1 H) , 7,54-7,52 (m, 2H) , 7,34-7,31 (m, 2H) , 7,26-7,23 (m, 1H) , 5,52-5,39 (s 1, 1H) , 2,11 (m, 1H) , 1,88 (m, 1H) , 0,79 (t ap, J = 7,4 Hz, 3H).

Cap-164

OH

Uma mistura de ácido 2-amino-2-fenilbutírico (1,5 g, 8,4 mmol) , formaldeído (14 ml, 37 % em água), IN HC1 (10 ml) e 10 % Pd/C (0,5 mg) em MeOH (40 ml) foi exposta a H2 a 50 psi numa garrafa de Parr durante 42 h. A reacção foi filtrada em Celite e concentrado a vácuo, o resíduo foi absorvido em MeOH (36 ml) e o produto foi purificado com uma HPLC de fase reversa (Me0H/H20/TFA) para propiciar o sal de TFA de Cap-164 como um sólido branco (1,7 g). ΤΗ RMN (DMSO- d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz) 7,54-7,47 (m, 5H) , 2,63 (m, 1H) , 2,55 (s, 6H) , 2,31 (m, 1H) , 0,95 (t ap, J = 7,3 Hz, 3H) .

Cap-165

/ A uma mistura de ácido 2-amino-2-indanocarboxílico (258,6 mg, 1,46 mmol) e ácido fórmico (0,6 ml, 15,9 mmol) 147 em 1,2-dicloroetano (7 ml) foi adicionado formaldeído (0,6 ml, 37 % em água) . A mistura foi agitada a -25 °C durante 15 min então aquecida a 70 °C durante 8h. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi dissolvido em DMF (14 ml) e purificado por uma HPLC de fase reversa (Me0H/H20/TFA) para propiciar o sal de TFA de Cap-165 como um óleo viscoso (120,2 mg) . 1H RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz) : 7,29-7,21 (m, 4 H) , 3,61 (d, J = 17,4 Hz, 2H), 3,50 (d, J = 17,4 Hz, 2H) , 2,75 (s, 6H) . LC/MS: Anal.

Calcd. para [M+H]+ Ci2Hi6N02: 206, 12; encontrado: 206, 07.

Cap-166a e 166b

N

Cap-166a: Diastereómero-1 Cap~166b: Diastereómem-2

Caps-166a e -166b foram preparados a partir de (IS, 4S)-(+)-2-metil-2,5-diazabiciclo[2.2.1]heptano (2HBr) de acordo com o método descrito para a síntese de Cap-7a e Cap-7b, com a excepção de que o intermediário éster benzílico foi separado usando um semi-prep Chrialcel OJ coluna, 20 x 250 mm, 10 mm eluindo com mistura 85:15 heptano/ etanol a 10 ml/min de taxa de eluição durante 25 min. Cap-166b: ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz): 7,45 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,27-7,19 (m, 3H), 4,09 (s, 1H), 3,34 (s 1 ap, 1H), 3,16 (s 1 ap, 1H), 2,83 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 2,71 (m, 2H) , 2,46 (m, 1H) , 2,27 (s, 3 H) , 1,77 (d, J = 9,8

Hz, 1H), 1,63 (d, J = 9,8 Hz, 1H). LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + Ci4Hi9N202: 247,14; encontrado: 247,11.

Cap-167

148

Uma solução de ácido Boc-1,3-dihidro-2H-isoindol carboxílico racémico (1,0 g, 3,8 mmol) em 20 % de TFA/CH2C12 foi agitada a -25 °C durante 4h. Todo o componente volátil foi removido a vácuo. Uma mistura do material bruto resultante, formaldeido (15 ml, 37 % em água), IN HC1 (10 ml) e 10 % Pd/C (10 mg) em MeOH foi exposto a H2 (40 PSI) numa garrafa de Parr durante 23 h. A mistura de reacção foi filtrada em Celite e concentrada a vácuo para propiciar Cap-167 como uma espuma amarela (873,5 mg). λΕ RMN (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 500 MHz) 7,59-7, 38 (m, 4H) , 5,59 (s, 1H) , 4,84 (d, J = 14 Hz, 1H) , 4,50 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 3,07 (s, 3H). LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci0Hi2NO2: 178, 09; encontrado: 178, 65.

Cap-168

Cap-168 racémico foi preparado a partir de ácido Boc-aminoindano-l-carboxílico racémico de acordo com o procedimento descrito para a preparação de Cap-167. 0 material bruto foi utilizado como tal.

Cap-169

Uma mistura de cloridrato do ácido 2-amino-2-fenilpropanóico (5,0 g, 2,5 mmol), formaldeido (15 ml, 37 % em água), IN HC1 (15 ml), e 10 % Pd/C (1,32 g) em MeOH (60 ml) foi colocada numa garrafa de Parr e agitada sob hidrogénio (55 PSI) durante 4 dias. A mistura de reacção foi filtrada em Celite e concentrada a vácuo. 0 resíduo foi absorvido em MeOH e purificado por HPLC prep de fase 149 reversa (MeOH/água/TFA) para propiciar o sal de TFA de Cap-169 como um semi-sólido viscoso (2,1 g). ΧΗ RMN (CDC13, δ = 7,26 ppm, 500 MHz): 7,58-7,52 (m, 2 H), 7,39-7,33 (m, 3H), 2,86 (s 1, 3H), 2,47 (s 1, 3H), 1,93 (s, 3H). LC/MS: Anal.

Calcd. para [M+H]+ CnHi6N02: 194,12; encontrado: 194,12.

Cap-170

A ácido (S)-2-amino-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il) acético (505mg; 3,18mmol; obtido a partir de Astatech) em água (15ml)) foi adicionado carbonato de sódio (673mg; 6,35mmol), e a mistura resultante foi arrefecida até 0 °C e então cloroformato de metilo (0,26ml; 3,33mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 5 minutos. A reacção foi deixada a agitar durante 18 horas ao mesmo tempo em que se permitia que o banho degelasse até a temperatura ambiente. A mistura de reacção foi então dividida em partições entre IN HC1 e acetato de etilo. A camada orgânica foi removida e a camada aquosa foi extraída adicionalmente com 2 porções adicionais de acetato de etilo. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo para propiciar Cap-170 um resíduo incolor. ΤΗ RMN (500 MHz, DMSO-de) δ ppm 12,65 (1 H, s 1), 7,44 (1 H, d, J = 8,24 Hz), 3, 77- 3, 95 (3 H, m) , 3,54 (3 H, s) , 3,11 - 3,26 (2 H, m) , 1, 82- 1, 95 (1 H, m) , 1,41 - 1,55 (2 H, m) , 1,21 - 1,39 (2 H, m) ; LC/MS:

Anal. Calcd. para [M+H]+ C9Hi6N05: 218,1; encontrado 218,1.

Cap-171

150

Uma solução de metil 2-(benziloxicarbonilamino)-2-(oxetan-3-ilideno)acetato (200 mg, 0,721 mmol; II Farmaco (2001), 56, 609-613) em acetato de etilo (7 ml) e CH2C12 (4,00 ml) foi desgaseif içada por meio da borbulhagem de azoto durante 10 min. Dicarbonato de dimetilo (0,116 ml, 1,082 mmol) e Pd/C (20 mg, 0,019 mmol) foram então adicionados, a mistura de reacção foi ajustada com um balão de hidrogénio e deixada a agitar a temperatura ambiente durante a noite em cujo tempo TLC (95:5 CH2C12 / MeOH: visualizado com coloração feita a partir de 1 g Ce (NH4) 2S04, 6 g de molibdato de amónio, 6 ml de ácido sulfúrico, e 100 ml de água) indicou conversão completa. A reacção foi filtrada através de celite e concentrada. O resíduo foi purificado via Biotage® (carregado com diclorometano em 25 samplet; eluído em coluna 25S com diclorometano durante 3CV então 0 a 5 % de MeOH / diclorometano ao longo de 250 ml então mantido a 5 % de MeOH / diclorometano durante 250 ml; fracções de 9 ml). As fracções colhidas contendo material desejado e concentradas até 120 mg (81 %) de metil 2- (metoxicarbonilamino)-2-(oxetan-3-il) acetato como um óleo incolor. λΕ RMN (500 MHz, CLOROFÓRMIO-D) δ ppm 3,29 - 3,40 (m, J = 6,71 Hz, 1 H) 3,70 (s, 3 H) 3,74 (s, 3 H) 4,55 (t, J = 6,41 Hz, 1 H) 4,58 - 4, 68 (m, 2 H) 4, 67 - 4,78 (m, 2 H) 5,31 (s 1, 1 H) . LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C8Hi4N05: 204,2; encontrado 204,0. A metil 2-(metoxicarbonilamino)-2-(oxetan-3-il)acetato (50 mg, 0,246 mmol) em THF (2 ml) e água (0,5 ml) foi adicionado hidróxido de lítio monohidratado (10,33 mg, 0,246 mmol). A solução resultante foi deixada a agitar durante a noite a temperatura ambiente. TLC (1:1 EA/ Hex; coloração de Hanessian [1 g Ce(NF4)2S04, 6 g de molibdato de amónio, 6 ml de ácido sulfúrico, e 100 ml de água]) indicou -10 % material de partida restante. Adicionou-se uns 3 mg de LiOH adicionais e deixou-se a agitar durante a noite em cujo tempo TLC não mostrou nenhum material de partida 151 restante. Concentrou-se a vácuo e colocou-se em vac alto durante a noite proporcionando 55 mg de 2-(metoxicarbonilamino)-2-(oxetan-3-il)acetato de litio como um sólido incolor. 1H RMN (500 MHz, MeOD) δ ppm 3,39 - 3,47 (m, 1 H) 3,67 (s, 3 H) 4,28 (d, J = 7,93 Hz, 1 H) 4,64 (t, J = 6,26 Hz, 1 H) 4,68 (t, J = 7,02 Hz, 1 H) 4,73 (d, J = 7, 63 Hz, 2 H) .

EXEMPLOS A presente invenção será agora descrita em conexão com certas formas de realização que não são destinadas a limitar o seu âmbito. Pelo contrário, a presente invenção cobre todas as alternativas, modificações, e equivalentes que podem ser incluídas dentro do âmbito das reivindicações. Assim, os seguintes exemplos, que incluem formas de realização específicas, ilustraram uma prática da presente descrição, entendendo-se que os exemplos são para os propósitos de ilustração de certas formas de realização e são apresentados para proporcionar o que se acredita que seja a descrição mais útil e prontamente entendida dos seus procedimentos e aspectos conceituais.

As percentagens de solução expressam uma relação de peso em relação ao volume, e as razões de solução expressam uma relação de volume em relação ao volume, a não ser que seja indicado de outro modo. Os espectros de ressonância magnética nuclear (RMN) foram registados num espectrómetro Bruker 300, 400 ou 500 MHz; os desvios químicos (δ) são relatados em partes por milhão. Cromatografia flash foi levada a cabo em sílica gel (Si02) de acordo com a técnica de cromatografia flash de Still (W.C. Still et al., J. Org. Chem., (1978), 43, 2923). A avaliação de pureza e análise de massa de baixa resolução foram conduzidas num sistema Shimadzu LC acoplado com sistema Waters Micromass ZQ MS. Deve ser notado que tempos de retenção podem variar ligeiramente entre máquinas. As condições de LC utilizadas na determinação do 152 tempo de retenção (TR) foram: Tempos de retenção foram

determinados de acordo com as Condição I

Coluna: Fenomenex-Luna 4,6 X % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 4 min Taxa de Fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 220 Solvente A = 10 % de CH3OH Solvente B = 90 % de CH3OH -Condição II

Coluna: Fenomenex-Luna 3,0 X % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Taxa de Fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 220 Solvente A = 10 % de CH3OH Solvente B = 90 % de CH3OH -Condição III

Coluna: Xbridge C 18 4,6 X 5 % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 3 min Taxa de Fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 220 Solvente A = H20 : ACN 95 ! amónio

Solvente B = H20 : ACN 5 %

amónio Condição IV

Coluna: Fenomenex C18 lOu 4, % de B inicial = 0 % de B final = 100 >eguintes condições de LC/MS: 5 0 mm S10

90 % de H20 - 0,1 % de TFA 10 % de H20 - 0,1 % de TFA 5 0 mm S10

90 % de H20 - 0,1 % de TFA 10 % de H20 - 0,1 % de TFA ) mm S5 : 5 o O 10 mm de Acetato de : 95 o 0 10 mm de Acetato de X 3 0 mm 153

Tempo de gradiente = 3 min Taxa de Fluxo = 4 ml/Min Comprimento de onda = 220

Solvente A = 10 % de CH3OH - 90 % de H20 - 0,1 % de TFA Solvente B = 90 % de CH3OH - 10 % de H20 - 0,1 % de TFA Condição V

Coluna: Fenomenex C18 lOu 4,6 X 30 mm % de B inicial = 0 % de B final = 100

Tempo de gradiente = lOmin

Taxa de Fluxo = 4 ml/Min

Comprimento de onda = 220

Solvente A = H20 : ACN 95 % : 5 % 10 mm de Acetato de amónio Solvente B = H20 : ACN 5 % : 95 % 10 mm de Acetato de amónio Condição VI

Coluna: Fenomenex lOu 3,0 X 50 mm % de B inicial = 0 % de B final = 100

Tempo de gradiente = 3 min

Taxa de Fluxo = 4 ml/Min

Comprimento de onda = 220

Solvente A = 10 % de CH3OH - 90 % de H20 - 0,1 % de TFA Solvente B = 90 % de CH3OH - 10 % de H20 - 0,1 % de TFA Condição VII % de B inicial = 0 % de B final = 100 Tempo de gradiente = 2 min Tempo de parada = 3 min Taxa de fluxo = 4 ml/min Comprimento de onda = 220 nm

Solvente A = 10 o O de CH3OH / 90 % de h2o / 0, 1 o O de TFA Solvente B = 90 o 0 de CH3OH / 10 % de h2o / 0, 1 o 0 de TFA Coluna 2 = Fenomenex-Luna 3, 0 x 50 mm S10

Exemplo 1 154

((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imida- zol-5-il)-9-oxo-9H-fluoren-2-il)-lH-imidazol- 2il)-lpirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamatos de metilo

Exemplo 1, Etapa a

la

Glioxal (2,0 ml de 40 % em água) foi adicionado gota a gota ao longo de 11 minutos a uma solução de CH3OH de NH4OH (32 ml) e (S)-Boc-prolinal (8,564 g, 42, 98 mmol) e agitado a temperatura ambiente durante 19 horas. O componente volátil foi removido a vácuo e o resíduo foi purificado por uma cromatografia flash (sílica gel, EtOAc) seguido por uma recristalização (EtOAc, temperatura ambiente) para propiciar imidazol la como um sólido fofo branco (4,43 g) . ΧΗ RMN (DMSO-de, δ= 2,50, 400 MHz) : 11, 68/11,59 (s 1, 1H) , 6,94 (s, 1H) , 6,76 (s, 1H) , 4,76 (m, 1H) , 3,48 (m, 1H) , 3,35-3,29 (m, 1H), 2,23-1,73 (m, 4H), 1,39/1,15 (s, 9H). LC (Cond. VII): TR = 0,87 min; >95 % de índice de homogeneidade LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C12H2ON3O2 238,16; encontrado 238,22

Imidazol la teve um ee de 98,9 % quando analisado sob condição de HPLC quiral indicado a seguir.

Coluna: Chiralpak AD, 10 um, 4,6 x 50 mm Solvente: 1,7 % de etanol/heptano (isocrático)

Taxa de fluxo: 1 ml/min Comprimento de onda: 220 ou 256 nm 155

Tempo de retenção relativo: 3,25 min (R) , 5,78 minutos (S)

Exemplo 1, Etapa b

H

1b N-bromosuccinimida (838,4 mg, 4,71 mmol) foi adicionada em lotes, ao longo de 15 minutos, a uma solução arrefecida (gelo/água) de CH2C12 (20 ml) de imidazol la (1,0689 g, 4,504 mmol), e agitada a temperatura similar durante 75 min. O componente volátil foi removido a vácuo, e o material bruto foi purificado por um sistema de HPLC de fase reversa (H20/CH30H/TFA) para separar brometo lb do seu análogo dibromo e o material de partida não consumido. O eluto de HPLC foi neutralizado com NH3/CH3OH em excesso (2,0 M) e o componente volátil foi removido a vácuo. O resíduo foi dividido em partições entre CH2C12 e água, e a camada aquosa foi extraída com CH2C12. A fase orgânica combinada foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para propiciar lb como um sólido branco (374 mg) . TH RMN (DMSO- d6, δ = 2,50, 400 MHz): 12,12 (s 1, 1H) , 7,10 (m, 1H) , 4,70 (m, 1H) , 3,31 (m, 1H; sobreposto com sinal de

água), 2,25-1,73 (m, 4H) , 1,39/1,17 (s, 3,8H + 5,2H). LC (Cond. VII) : TR = 1,10 min; >95 % de índice de homogeneidade LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci2Hi9BrN302 316, 07; encontrado 316,10

Exemplo 1, Etapa c

O le 156

Pd(Ph3P) 4 (750 mg, 0, 649 mmol) foi adicionado a um tubo de pressão contendo a mistura de 2,7-dibromo-9H-flu-oren-9-ona (5,124 g, 15,16 mmol), bis(pinacolato)diboro (15,03 g, 59,19 mmol), e KOAc (3,526 g, 35,92 mmol) em dioxano (60 ml). O recipiente de reacção foi enxaguado com azoto, tampado, e aquecido a 90 °C durante ~16 h. A mistura de reacção foi deixada que arrefecesse até a temperatura ambiente, o componente volátil foi removido a vácuo e o material bruto foi dividido em partições entre CH2CÍ2 (150 ml) e solução de NaHC03 saturado a 50 % (60 ml) . A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo. O óleo semi-sólido resultante foi triturado a partir de hexanos (100 ml), e o sólido amarelo foi filtrado e lavado com hexanos (100 ml) para propiciar bis-boronato impuro lc (5,011 g) . O produto foi submetido à etapa de acoplamento sem purificação adicional. ΤΗ RMN (CDC13, δ= 7,24, 400 MHz): 8,11 (s, 2H) , 7,93 (dd, J = 7,3, 1,0, 2H) , 7,54 (d, J = 7, 6, 2H) , 1,33 (S, 24H) .

Exemplo 1, Etapa d

Pd(Ph3P)4 (93,3 mg, 0,081 mmol) foi adicionado a um tubo de pressão contendo bis-boronato lc (508,7 mg, 1,177 mmol), bromoimidazol lb (714 mg, 2,26 mmol), NaHC03 (635,6 mg, 7,566 mmol) em DME (18 ml) e água (6 ml) . O tubo de pressão foi purgado com azoto, tampado e aquecido a 80 °C durante ~30 h, e então deixada que arrefecesse até condição ambiente. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi dividido em partições entre CH2CI2 e água. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo, e purificada com um Biotage® (sílica gel; EtOAc) seguido por HPLC de fase reversa (CH30H/H20/TFA) . O eluto 157 de HPLC foi neutralizado com excesso NH3/CH3OH (2,0 N) e o componente volátil foi removido a vácuo. O resíduo foi dividido em partições entre CH2C12 e ~3 % de solução de

NaHC03 saturado. A camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para propiciar carbamato ld como um semi-sólido vermelho escuro (145 mg) . ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ= 2, 50, 400 MHz) : 12,26-11, 94 (três s 1, 2H) , 7,97-7,41 (m, 8H), 4,85-4,77 (m, 2H) , 3,55 (m, 2H) , 3,37 (m, 2H) ,

2,30-1,79 (m, 8H) , 1,40 (s, 7,5 H) , 1,16 (s, 10,5H) . LC (Cond. VII) : TR = 1,37 min; >95 % de índice de homogeneidade LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C37H43N605 651,33; encontrado 651,26 Exemplo 1, Etapa e

Carbamato ld (184 mg, 0,283 mmol) foi tratado com 25 % de TFA/CH2CI2 (4,0 ml) e a mistura de reacção foi agitada a condição ambiente durante 6 horas. O componente volátil foi removido a vácuo e o resíduo estava livre de base com MCX (2 g; lavagem de CH3OH; eluição de NH3/CH3OH a 2,0 M) para propiciar pirrolidina le como uma espuma vermelha (129,8 mg; -3 mg acima do rendimento teórico) . RMN (DMSO-d6, δ = 2,50, 400 MHz): 11,91 (s 1, 2H) , 7, 96-7, 94 (m, 4H) , 7,69 (d, J = 8,1, J = 8,1, 2H), 7,61 (s, 2H) , 4,16 (m, 2H) , 2, 99-2, 93 (m, 2H) , 2, 89-2, 83 (m, 2H) , 2,10-2,01 (m, 2H) , 1, 94-1,86 (m, 2H) , 1, 82-1, 66 (m, 4H) . LC (Cond. VII): TR = 1,01 min; >95 % de índice de homogeneidade LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C27H27N60 451,22; encontrado 451,27.

Exemplo 1 HATU (216,3 mg, 0,569 mmol) foi adicionado num lote a um DMF (4,0 ml) solução de pirrolidina le (126 mg, 0,280 158 mmol), ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanóico (109,6 mg, 0,626 mmol) e i-Pr2EtN (0,12 ml, 0,689 mmol), e a mistura resultante foi agitada a condição ambiente durante ~6 horas. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi purificado primeiro por MCX (lavagem com metanol; eluição com NH3/metanol a 2,0 M) e então por um sistema de HPLC de fase reversa (H20/metanol/TFA) para proporcionar o sal TFA do Exemplo 1 como uma espuma laranja avermelhada (208, 9 mg). ΤΗ RMN DMSO-d6, δ = 2,50, 400 MHz) : 8,18-7,99 (m, 8H) , 7,33 (d, J = 8,5, 2H) , 5,53 (m, 0,16H), 5,13 (m, 1,84H), 4,12 (m, 2H), 3,91-3,80 (m, 4H), 2,42-2,33 (m, 2H) , 2,25-1, 94 (m, 8H) , 0,91-0,79 (m, 12H) . LC (Cond. VII) : TR = 1,26 min; >95 % de índice de homogeneidade LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C4iH49N807 765,37; encontrado 765,39. HRMS: Anal. Calcd. para [M+H]+ 765,3724; encontrado 765,3723 Exemplo 2

((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2pirrolidinil)-lH-imidazol-5il)-9H-fluoren-2il)-lH-imidazol-2il) -Ipirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo

NaBH4 (41 mg, 1,08 mmol) foi adicionado a uma solução de CH3OH (3 ml) arrefecida (gelo/água) o sal TFA do Exemplo 1 (165 mg, 0,166 mmol) e agitado durante 25 min. A mistura de reacção foi directamente passada através de coluna de MCX (6 g; lavado com 50 % de H20/CH30H, seguido por CH3OH; eluído com 2,0 N NH3/CH3OH), e então purificado com uma HPLC de fase reversa (CAN/H20/NH40Ac) para propiciar o Exemplo 2, contendo cerca de ~2 equiv de ácido acético, 159 como uma espuma bege (91 mg) . ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,50, 400 MHz) : 7, 97/7, 92 (dois s 1, 2H) , 7,76-7, 65 (m, 4H) , 7,52/7,45 (dois s 1, 2H), 7,29 (d, J = 8,3, ~2H), 5,48/5,46 (dois s, 1H) , 5,26 (m, 0,26H), 5,09 (m, 1,74 H) , 4,07 (m, 2H), 3,81/3,54-3,45 (m, 10H), 2,23-1,89 (10H), 0,9 (d, J= 6,8, 6H), 0,85 (d, J = 6,5, 6H). LC (Cond. VII): TR = 1,21 min; >95 % de índice de homogeneidade LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C4iH5iN807 767,39; encontrado 767,26 Exemplo 3

( (1S)-1-( ( (2S)-2-(5-(9-(dimetilamino) = 7-(2-((2S) = 1- ((2S)-2-((metoxicarbonil)amino)3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9H-fluoren-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo Exemplo 3, Etapa a

Uma mistura heterogénea de 2,7-dibromo-9H-fluoreno (4,98 g, 15,37 mmol) e N-bromosuccinimida (2,77 g, 15,56 mmol) foi submetida a refluxo durante ~5,5 horas. N-bromosuccinimida adicional (0,41 g, 2,30 mmol) foi adicionado e o refluxo foi continuado durante uma 1 h adicional. A mistura de reacção foi deixada que arrefecesse até a temperatura ambiente, e o componente volátil foi removido a vácuo.

Uma porção do material bruto acima (~ 5,1 g) foi

adicionada ao longo de 10 minutos a uma solução de THF 160 arrefecida (gelo/água) de dimetilamina (30 ml de 2,0 M) , e o banho de arrefecimento foi removido e a mistura heterogénea foi agitada durante 2 horas. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi dividido em partições entre CH2C12 e água, e a camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo. O material resultante foi submetido a uma purificação de Biotage (0-5 % de CH30H/CH2C12) para propiciar amina 3a como um óleo viscoso amarelo escuro que rendeu lentamente um sólido denso (1,327). ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,50, 400 MHz): 7,83 (d, J = 8,4, 2H) , 7,73 (s 1 ap , 2H), 7,61 (dd, J = 8,1, 1,3, 2H) , 4,98 (s, 1H), 2,22 (s, 6H) . LC (Cond. VII) : TR = 1,32 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci5Hi4Br2N: 367, 95; encontrado 367,81 (para o isótopo dominante)

Exemplo 3 0 Exemplo 3 (sal TFA) foi preparado partindo de amina 3a de acordo com o procedimento descrito para a síntese do Exemplo 1 a partir de 2,7-dibromo-9H-fluoren-9-ona. ΤΗ RMN (DMS0-d6, δ = 2,50, 400 MHz) : 8,27-7, 99 (m, 8H) , 7,33 (d, J = 8,3, 1,88H) , 6,91 (s 1, 0,12H), 5,92 (s 1, ~1H) , 0,12 (s 1, 0, 12H) , 5,17 (m, 1,88 H) , 4,12 (m, 1,88H), 3,91-3,79 (m, 4H) , 3,55 (s, ~6H), 2,75 (s 1 ap, 6H) , 2,43-2,35 (m, 2H) , 2,24-1, 95 (m, 8H) , 0,91-0,78 (m, 12H) . [Nota: alguns dos deslocamentos químicos do rotámero menor não foram identificados, e que é parcialmente a razão pela qual os valores aproximados são dados para algumas das integrações]. LC (Cond. VII): TR = 1,09 minutos, >95 % de índice de homogeneidade LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C43H56N906: 794,43; encontrado 794,29. 161

Exemplο 4 161 /

/ ( (IS) -1-( ( (2S) -2- (5-(7- (2- ( (2S) -1-( (2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-iH-imida- zol-5-il)-9H-fluoren-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo Exemplo 4, Etapa a

SEM

NaH (243 mg de 60 %, 6,08 mmol) foi adicionado num lote a uma semi-solução de DMF (15 ml) de imidazol la (1,228 g, 5,17 mmol), e agitado durante 75 min. SEM-C1 (1,0 ml, 5,65 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 7 minutos, e a mistura de reacção foi agitada durante umas 3,5 horas adicionais. O componente volátil, incluindo o solvente, foi removido a vácuo e o resíduo foi dividido em partições entre CH2CI2 e água. A camada orgânica foi seca (MgSOí), filtrada, e concentrada a vácuo. O material resultante foi purificado com um Biotage® (100 g de sílica gel; 60-100 % de EtOAc/hexanos) para propiciar imidazol la como um óleo viscoso incolor (1, 649 g) . ΤΗ RMN (DMSO- d6, δ= 2,50, 400 MHz) : 7,16/7,13 (singletos sobrepostos, 1H) , 6, 80/6,78 (singletos sobrepostos, 1H), 5,61 (d, J = 10,8, 0,41H) , 5,38 (d, J = 11,1,0,59 H) , 5,26 (d, J = 11,4, 1H) , 4, 95-4, 85 (m, 1H) , 3,51-3,33 (m, 4H) , 2,25-2, 00 (m, 2H) , 1, 90-1,77 (m, 2H) , 1,35 (s, 3,79H), 1,12 (s, 5,21 H) , 0,91-0,76 (m, 2H), -0,04 (s, 9H). LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C18H34N3O3S1: 368,24; encontrado 368,23. 162

Exemplo 4, Etapa b

162 SEM

Uma solução de CH3CN (6 ml) de NBS (573 mg, 3,22 mmol) foi adicionada gota a gota ao longo de 8 minutos a uma solução arrefecida (gelo/água) de CH3CN (10 ml) de amina 4a, e agitada durante 95 min. 0 banho de arrefecimento foi removido e a agitação foi continuada durante uns 35 min adicionais. 0 componente volátil foi removido a vácuo, e o material resultante bruto foi directamente submetido a uma purificação de Biotage® (100 g de sílica gel; 40-50 % de EtOAc/hexanos) para propiciar brometo 4b como óleo viscoso amarelo claro (0,8 95 g) . De acordo com ΤΗ RMN o produto aparece como sendo uma mistura de regioisómeros (numa razão de 7,1:1,0), e foi submetido à etapa seguinte como tal. LC (Cond. VII): TR = 1,77 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci8H33BrN303Si: 446, 15; encontrado 446,07 Exemplo 4, Etapa c

Carbamato 4c foi preparado partindo de 2,7-dibromo-9H-f luoren-9-ona e brometo 4b, via um acoplamento de , de acordo com o procedimento descrito para a síntese de carbamato ld. A atribuição regioquímica de SEM acima para o produto principal baseia-se em estudos de NOE, não obstante é inconsequente para o presente propósito. 1H RMN (DMSO-d6, δ= 2, 50, 500 MHz): 8,04-8, 02 (m, 2H) , 7,74-7,70 (m, 2H) , 7,56-7,49 (m, 2H) , 7,06 (s 1, 2H) , 5, 62-5, 60 (m, 0,82H), 5,43-5,41 (m, 1,18H), 5,27 (m, 2H) , 5,09 (m, 0,86H), 1,14 (m, 1, 14H) , 4,02 (s, 2H) , 3, 63-3, 38 (m, 8H) , 2,33-2, 09 (m, 163 4Η), 2,01-1,84 (m, 4H), 1,39 (s, 7,56H), 1,18 (s, 10,44H), 0,92-0,81 (m, 4H) , - 0,04 (s, 18H) . LC (Cond. VII): TR = 1,92 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C49H73N606SÍ2: 897,51; encontrado 897,37 Exemplo 4, Etapa d

Solução de dioxano de HC1 (3 ml de 4,0 N, 12 mmol) foi adicionada ao composto 4c (133 mg, 0,148 mmol) e a mistura de reacção heterogénea resultante foi agitada durante ~14 h, e então CH3OH (1,0 ml) foi adicionado e a agitação continuou durante umas ~4,5 horas adicionais. O componente volátil foi removido a vácuo, e seco sob alto vácuo, e submetido à etapa seguinte sem purificação.

Exemplo 4

Pirrolidina 4d foi elaborado ao sal TFA do Exemplo 4 de acordo com o protocolo descrito para a síntese do Exemplo 1, com uma excepção notável de que 6 mol equiv de i-Pr2EtN foi utilizado. ΤΗ RMN (DMSO-d6, 6 = 2,50, 400 MHz): 8,11-7,82 (m, 8H) , 7,34 (d, J = 8,3, 1,89H), 6,92 (s 1 ap, 0,11H), 5,55 (m, 0,14H), 5,16-5,13 (m, 1,86H), 4,14-3,74 (m, 8H), 3,55/3,35 (dois s, 6H), 2,45-2,34 (m, 2H), 2,20-1,74 (m, 8H), 0,91-0,78 (m, 12H). LC (Cond. VII): TR = 1,28 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C4iH51N806: 751,39; encontrado 751,24 Exemplo 5

MeO>

’0Me 164 ((IS, 2R) -2-metoxi-l- (((2S) -2- (5- (7- (2- ((2S) -1-(N(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9H-fluoren-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo 0 sal TFA do Exemplo 5 foi preparado a partir de pirrolidina 4d e ácido apropriado de acordo com o procedimento descrito para o Exemplo 4. ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ= 2,50, 400 MHz) : 8,11-7,82 (m, 8H) , 7,23 (d, J = 8,3, 1, 87H) , 6,75 (s 1 ap, 0,13H), 5,65 (m, 0,17H), 5,17-5,13 (m, 1,83H), 4,33-4,22 (m, 2H) , 4,09 (s, 2H), 3, 93-3, 72 (m, 4H), 3,61-3,19 (m, 14H), 2,44-2,33 (m, 2H) , 2,21-1,72 (m, 6H) , 1,10 (d, J = 6,3, 0,58H) , 5,42 (d, J = 6,0, 5,42H). LC (Cond. VII): TR = 1,17 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C4iH5iN808 : 783,38; encontrado 783,23 Exemplo 6-7

MeNH2 (4,9 ml, 9,87 mmol) e Na2C03 (0,349 g, 3,29 mmol) foram adicionados a uma solução de THF (6,5 ml) de 4,4'-dibromo-2,2'-bis(bromometil)bifenilo (0,328 g, 0,658 mmol), e a mistura de reacção foi submetida a refluxo durante 3 horas. O componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi passado através de MCX (lavagem com CH3OH; eluição com NH3/CH3OH a 2,0 M) para propiciar 3,9-dibromo-6-metil-6,7-dihidro-5H-dibenzo[c,e]azepina como um sólido branco (0,24 g) . *H RMN (DMSO-d5, δ = 2,50, 500 MHz): 2,31 (s, 3 Η) , 3,24 (s, 4 Η) , 7,47 (d, J = 7,9, 2 Η) , 7,55-7,82 (m, 4 H) . LC (Cond.III): TR = 2,42 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci5Hi4Br2N: 367, 95; encontrado 368,17 (para o isótopo dominante)

Os Exemplos 6-7 foram preparados partindo de 3, 9-dibromo-6-metil-6,7-dihidro-5H-dibenzo[c,e]azepina por meio da utilização dos procedimentos descritos para a síntese do Exemplo 4 a partir de 2,7-dibromo-9H-fluoren-9-ona. 165

Exemplo Nome do Composto R TA (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS 6 ((IS)-1-(( (2S) — T I 1,98 minutos (Cond. 2-(5-(9-(2-((2S)-1- ( (2S)- IV); >95 % 2-((metoxicarbonil)amino)- NHCOjMe 1.98 LC/MS: Anal. Calcd. 3- para [M+H]+ C43 HsôNgOg: metilbutanoil)-2- 794,43; encontrado pirrolidinil)-1H-imidazol—5-il)-6-metil-6,7-dihidro- 5H-dibenzo[c,e]azepin-3-il)-1H- imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil)-2- metilpropil)carbamato de metilo 795,27 7 (IS, 1 'S)—2,2'—((6-metil- 1,82 minutos (Cond. 6,7-dihidro- 5H- Q, < III); >95 % dibenzo[c,e]azepina-3,9-diil)bis (1 H-imidazol- Et' Et LC/MS: Anal. para [M+H]+ C53 Calcd. H64Ng02 : 4,2-diil(2S)-2,1- 858,52; encontrado pirrolidinadiil)) bis(N, N-dietil-2- oxo- 1-feniletanamina) 859,07.

Exemplo 8-12 HBr (11 ml, 97 mmol) foi adicionado a uma solução de THF (10 ml) de (4,4'-dibromobifenil-2,2'-diil)dimetanol (para a preparação, veja-se: Tetrahedron Letters 2004, 45; 2801; 1,3 g, 3,49 mmol), e a mistura foi submetida a refluxo durante seis horas e então deixada que arrefecesse até a temperatura ambiente. A maior parte do componente orgânico foi removido com um vaporizador giratório, e o residuo foi extraído com CH2C12 (10 ml, 3x). A fase orgânica combinada foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para propiciar um óleo castanho, que quando dissolvido em 5 ml de acetona e deixado repousar a condição ambiente durante 1 h propiciou um precipitado. Filtração e secagem a vácuo propiciou 3,9-dibromo-5,7-dihidrodibenzo[c,e]oxepina como um sólido branco (0,628 g, 51 % rendimento). ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,50, 500 MHz) : 4,23-4,29 (m, 4H) , 7,53-7, 60 (m, 2H) , 7,74 (dd, J = 7,9, 2,1, 2H) 7,79 (d, J = 2,1, 2H).

Os Exemplos 8-12 foram preparados partindo de 3, 9- dibromo-5,7-dihidrodibenzo[c,e]oxepina por meio da utilização dos procedimentos descritos para a síntese do Exemplo 4 a partir de 2,7-dibromo-9H-fluoren-9-ona e substratos apropriados.

Exemplo R Nome do Composto TA (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS 8 T i ((IS) -1-(((2S) -2-(5-(9- 2,31 minutos (Cond. IV); (2-((2S)~ 1- ((2S) -2- >95 % NHCOjMe ((metoxicarbonil)amino)-3-metílbutanoíl)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-4-il)-5, 7-dihidrodibenzo[c, e] oxepin-3-il)-lH-imidazol-2-il)-1- pirrolídinil)carbonil)-2-metilpropil) carbamato de metilo LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C42H53N807: 781,40; encontrado 781,59 167

Exemplo R Nome do Composto TA (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS 9 •j\r NHC02Me ( (IS) -2- ( (2S) -2- (4-(9- (2-((2S)- 1 ~ (N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2- pirrolidinil)-lH-ímídazol-4-il)-5, 7-dihidrodibenzo[c,e]oxepin-3-íl)-1H- imidazol-2-il)- 1- pirrolidinil) - 1-metil- 2- oxoetil)carbamato de metilo 2,05 minutos (Cond. IV); >95 % LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C38H45N807: 725,34; encontrado 725,32 10 xo (5, 7-díhídrodíbenzo[c,e] oxepina-3, 9-diilbis (1 H- 2,06 minutos (Cond. IV); >95 % NHC02Me imidazol-4,2- dííl(2S) 2,1-pírrolídínadííl ((IS) -2-oxo- 1-(tetrahidro-2H-píran-4-íl)-2,1-etanodiil)))biscarbamato de dimetilo LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H) + C46H57N809: 865,42; encontrado 865,89. 10A XO NHCOaMe (5, 7-díhídrodíbenzo[c, e] oxepina-3,9-diilbis(1 H-imidazol-4, 2- diil(2S)-2,1-pírrolídínadíil(2-oxo-1-(tetrahidro-2H-piran~4- il)~2,1 - etanodiíl)))biscarbamato de dimetilo 2,09 minutos (Cond. IV); >95 % LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C46H57N809: 865,42; encontrado 865,22. 11 Λ/> . ( (IS, 2R) -2-metoxi-l-( ( (2S) - 2- (4-(9- (2- ( (2S) - 2,15 minutos (Cond. IV); >95 % NHCOaMe 1 -(N-(metoxicarbonil)-0-metil-L- treonil)-2-pirrolidinil)- lH-imidazol- 4-íl)-5, 7- dihidrodibenzo[c,e]oxepin-3- il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil)propil) carbamato de metilo LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C42H53N809: 813,39; encontrado 814,31 168

Exemplo R Nome do Composto TA (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS 12 k/ν' I (IS, 1 'S) -2, 2 ' - (5, 7- 1,26 minutos (Cond. II); o^VPh dihidrodibenzo[c,e] >95 % A N oxepína-3,9-diilbis (1 H- LC/MS: Anal. Calcd. para Er Et imidazol-4,2- diil(2S)-2,1- pirrolidinadííl))bis(N, N-dietil-2-οχο- 1-feniletanamina) [M+H] + C52H61N803: 845,49; encontrado 845,22.

Exemplο 13 ( (IS) -1-(( (2S) -2- (5- (9- (dimetilamino)-7- (2- ((2S) -1-( (2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pir-rolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-metil-9H-fluoren-2-il) -1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo Exemplo 13, Etapa a

NaN(IMS)2 (3,40 ml de 1,0 M/THF, 3,4 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 2 minutos a uma solução de THF de amina 3a (1,14 g, 3,10 mmol), e agitado durante 20 min. Então Mel (0,27 ml, 4,33 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de 3 minutos, e a agitação foi continuada durante ~65 min. A reacção foi tratada com excesso CH30H e todo o componente volátil foi removido a vácuo. O material bruto resultante foi purificado com uma cromatografia flash (10 % de EtOAc/hexanos) para propiciar amina 13a como sólido branco pérola (793 mg) . ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ= 2,50, 400

169 ΜΗζ) : 7,80 (d, J = 8,0, 2H) ; 7,67 (d, J = 1,7, 2H) , 7,58 (dd, J = 8,1, 1,8, 2H), 2,06 (s, 6H), 1,58 (s, 3H). LC/MS:

Anal. Calcd. para [M+H]+ Ci6H15Br2N: 381, 96; encontrado 381,90 (para o isótopo dominante).

Exemplo 13, Etapa b

Pd(OAc)2 (5,3 mg, 0,024 mmol) foi adicionado à mistura de dibrometo 13a (101,8 mg, 0,267 mmol), imidazol 13a (145,6 mg, 0,396 mmol), Ph3P (12,5 mg, 0, 048 mmol) e K2CO3 (116 mg, 0,839 mmol) em dioxano (2,5 ml), e azoto foi borbulhado através do mesmo durante 1 minuto e então aquecido a 140 °C (micro-ondas) durante 3 horas. A mistura foi tratada com CH3OH (2 ml) , filtrada através de um plugue de algodão e o componente volátil foi removido a vácuo. O material bruto foi purificado por um sistema de HPLC de fase reversa (H20/CH30H/TFA) , e o eluto de HPLC foi neutralizado com excesso NH3/CH3OH e o componente volátil foi removido a vácuo. O material resultante foi dividido em partições entre CH2C12 e água, e a camada aquosa foi extraída com CH2C12. A fase orgânica combinada foi seca (MgSCq), filtrada, e concentrada a vácuo para propiciar 13b como uma espuma branca (56,1 mg). A constituição regioquímica de 13b não foi determinada uma vez que é inconsequente para o presente propósito. LC/MS: Anal. Calcd. para [M-SEM+H] + C46H66N7O5SÍ: 824,49; encontrado 824,34.

Exemplo 13 O sal TFA do Exemplo 13 foi preparado partindo de composto 13b por meio da utilização dos procedimentos descritos para a síntese do Exemplo 4 a partir do intermediário 4c, com a excepção de que o precursor de 170 pirrolidina correspondente utilizado para a última etapa foi livrado da base com MCX, e que somente 2 mol equiv de i-Pr2EtN foi utilizado para a etapa de acoplamento a HATU. ΤΗ RMN (DMSO-dg, δ = 2,50, 400 MHz) : 8,24-7, 96 (m, 8H) , 7,32 (m, 1, 8 9H) , 6,89 (s 1 ap, 0,11H), 5,52 (s 1 ap, 0,12H), 5,17-5,14 (m, 1,88H), 4,13-4,09 (m, 2H) , 3,85 (m, 2H) , 3,54/3,36 (dois s, 6H) , 2,63 (s 1 ap, 6H) , 2,43-1, 93 (m, 13H), 0,91-0,78 (m, 12H). LC (Cond. VII): TR = 1,14 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C44H58N906 : 808,45; encontrado 808,32 Exemplo 14

( (IS) -l-(( (2S) -2- (5- (7- (2- ( (2S) -1-( (2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-iH-imida- zol-5-il)-9, 9-dimetil-9H-fluoren-2-il)-1H- imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo Exemplo 14, Etapa a

KOH em pó (0,970 g, 17,3 mmol) foi adicionado em lotes ao longo de 1 minuto a uma mistura heterogénea de 2,7-dibromo-9H-fluoreno (1,30 g, 4,01 mmol) e Mel (0,560 ml, 9,00 mmol) em DMSO (10 ml), e agitado a condição ambiente durante -17,5 horas. A mistura foi diluída com água (100 ml) e extraída com hexanos (100 ml). A camada orgânica foi lavada com água (20 ml) , seca (MgSCq) , filtrada, e 171 concentrada a vácuo. 0 material resultante bruto foi purificado com uma cromatografia flash (a amostra foi carregada como uma malha de silica gel; hexanos) para propiciar 14a (728 mg) contaminado com o correspondente mono-metil-intermediário numa razão 12:1 (ΤΗ RMN) .

NaN(TMS)2 (0,5 ml de 1,0 M/THF, 0,50 mmol) foi adicionado a uma solução de THF (4,0 ml) da mistura acima (702 mg) e agitado durante 10 min. Então Mel (0,15 ml, 2,41 mmol) foi adicionado gota a gota ao longo de uns poucos minutos e agitado durante 75 min. Foi então extinto com CH3OH (10 ml) e o componente volátil foi removido a vácuo. O resíduo foi dividido em partições entre CH2CI2 e água, e a camada orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo para propiciar 14a como um sólido amarelo claro, livre da impureza mono-metilada. O material bruto foi submetido à etapa seguinte sem purificação. ΧΗ RMN (CDC13, δ = 7,24, 400 MHz): 7,53 (d, J = 7,8, 2H), 7,53 (d, J = 2, 2H) 7,45 (dd, J = 8,1, 1,8, 2H), 1,45 (s, 6H).

Exemplo 14, Etapa b

0 composto 14b foi preparado a partir de dibrometo 14a de acordo com o procedimento descrito para a síntese de 13b a partir de dibrometo 6a. LC/MS: Anal. Calcd. para [M-SEM+H] + C45H63N605Si: 795,46; encontrado 795,33.

Exemplo 14, Etapa c » O N"\ H lO ~Q-O- íT H U H 14c HCl/dioxano (5 ml de 4N, 20 mmo 1) foi composto 14b (124,5 mg, 0,135 mmo1) \ e agitado adicionado ao para realizar 172 a dissolução total. A solução foi arrefecida com banho de gelo/água e tratada com 1 ml de solução de HC1 concentrada a 33 % gota a gota ao longo de 2 min. Então o banho de arrefecimento foi removido e a mistura de reacção foi agitada durante -22,5 horas. 0 componente volátil foi removido a vácuo, e o resíduo foi primeiro livrado da base com MCX (2 g; lavagem com CH3OH; eluição de NH3/CH3OH a 2,0 N) e então purificado com uma HPLC de fase reversa (CH30H/H20/TFA) . O eluto de HPLC foi concentrada e o produto resultante foi livrado da base com MCX como indicado acima para propiciar pirrolidina 14c como um reddish-orange espuma, contaminado com impureza não identificada (38,7 mg). ΧΗ RMN (DMSO-d6, δ = 2,50, 400 MHz): 1, 83 (s, 2H) , 7,74- -7, 69 (m, 4H) , 7,49 (s 1 ap, 2H) , 4,24 4, 20 (m, 2H) , 3, 04· -2, 98 (m, 2H) , 2, 93- -2,87 (m, 2H) , 2, 13 2, 05 (m, 2H) , 1, 95- 1,70 (6H) , , 1,48 (s, 6H) . LC (Cond. VII): TR = 1,03 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C29H33N6: 465,28, encontrado 465,21.

Exemplo 14 O Exemplo 14 foi preparado como um sal TFA partindo de 14c de acordo com o procedimento descrito para a síntese do Exemplo 1 a partir do intermediário le. ΤΗ RMN (DMSO-d6, δ= 2, 50, 400 MHz): 8,13 (s, 2H) , 8,06-8,01 (m, 2H) , 7, 85-7,79 (m, 2H) , 7,39-7,33 (m, 1,89H), 6,93 (m, 0,11H), 5,61 (m, 0,14H), 5,17-5,14 (m, 1,86H), 4,15-4,06 (m, 2H) , 3,91-3,80 (m, 4H), 3,54/3,33 (dois s, 6H), 2,46-2,38 (m, 2H), 2,22-1, 99 (m, 8H) , 1,53 (s, 6H) , 0, 92-0,78 (m, 12H) . LC (Cond. VII): TR = 1,37 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C43H55N806: 779, 42; encontrado 779,23 173

Exemplο 15

((9, 9-dimetil-9H-fluoreno-2, 7-diil)bis(lH-imidazol-5,2-diil (2S) -2,1-pirrolidinadiil ((IS) -l-ciclopropil- 2-oxo-2, 1-etanodiil)))biscarbamato de dimetilo 0 Exemplo 15 (sal TFA) foi preparado de acordo com o protocolo descrito para o Exemplo 14 por meio da utilização do ácido apropriado para a etapa final. 1H RMN (DMSO-d6, δ= 2, 50, 400 MHz): 8,11-8,01 (m, 6H) , 7,83-7,79 (2H) , (d, J = 7,8, 1, 84H) , 7,47 (m, 0,16H), 5,46 (m, 0,19H), 5,18-5,15 (m, 1,81H), 3,89-3,72 (m, 6H), 3,55/3,33 (dois s, 6H) , 2,45-2,34 (m, 2H) , 2,23-1, 95 (m, 6H) , 1,54 (s, 6H) , 1,21-1,04 (m, 2H), 0,51-0,23 (m, 8H). LC (Cond. VII): TR = 1,25 min LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H]+ C43H5iN806: 775, 39; encontrado 775,36 Exemplos 16-17 KOH em pó (983 mg, 17,5 mmol) foi adicionado em lotes ao longo de 1 minuto a uma mistura heterogénea de 2,7-dibromo-9H-fluoreno (1,31 g, 4,04 mmol) e 1,3- dibromopropano (837 mg, 4,15 mmol) em DMSO (20 ml), e agitado a condição ambiente durante ~5 dias. A mistura foi diluida com água (200 ml) e extraida com 10 % de CH2C12/ hexanos (100 ml, 2x) . A fase orgânica combinada foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada a vácuo. O material resultante bruto foi purificado com um coluna cromatografia (a amostra foi carregada como uma malha de silica gel; hexanos, com eluição por gravidade) para propiciar 2 ' ,7 ' — dibromoespiro[ciclobutano-1,9'-fluoreno] como um sólido fofo branco (600 mg). ΤΗ RMN (CDC13, δ = 7,24, 400 MHz): 7,86 (d, J 1,8, 2H) , 7,48 (d, J = 8,0, 2H) , 7,44 (dd, J = 174 8,1, 1,8, 2Η), 2,61 (ap t, J = 8,1, 4H) , 2,42-2,34 (m, 2H) .

Os Exemplos 16-17 (sal TFA) foram preparados partindo de 2', 7'-dibromoespiro[ciclobutano-1,9'-fluoreno] por meio da utilização do procedimento descrito para a síntese do Exemplo 14 a partir de dibrometo 14a.

Exemplo R Nome do Composto TA (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS 16 y, ( (IS) -1-( ( (2S) -2- (5- (7 ' - (2-( (2S) - 1- ( (2S) -2-((metoxícarboníl)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-1-imidazol-5-il)espiro[cíclobutano-1,9'-fluoren]-2'-il)- 1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo 1,38 minutos (Cond. VII); >95 % LC/MS; Anal. Calcd. para [M+H] + C44H55N806: 791,42; encontrado 791,32 17 metil ((IS) -2- ((2S) -2- (5-(7'-(2-((2S)- 1 - (N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2- pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)espiro [ciclobutano-1, 9'-fluoren]-2'-il)-lH- imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metíl-2-oxoetíl)carbamato 1,22 minutos (Cond. VII); >95 % LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H] + C4oH47N806: 735,36; encontrado 735,28.

Exemplos 18-21

Os Exemplos 18-21 foram preparados partindo de 3,7-dibromodibenzo[b,d]furano (que por sua vez foi preparado de 175 175 acordo com utilização Exemplo 14 da do

Eur. J. Med. Chem. 1999, 34, 205) por meio dos procedimentos descritos para a síntese a partir de dibrometo 14a.

Exemplo R Nome do Composto TA (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS 18 ((IS) -1-(((2S) -2- (4-(7- RMN (DMSO-d6, δ= 2,50, } (2-((2S)~ 1- ( (2S) -2- 500 MHz) : 14,60 (s, 2H) , ((metoxícarbonil)amíno)- 8,32 (d, J = 7,9, 2H), NHCO;>Me 3- metilbutanoil) -2- 8,14-8,24 (m, 4H), 7,87 pirrolidinil) -1H- (d, J = 8,2, 2H), 7,34 (d, imidazol-4- J = 8,5, 2H) , 5,17 (ap t, il)dibenzo[b,d]furan-3- J = 7,2, 2H), 4,13 (t, J = íl)-lH-ímídazol-2-íl)-1- 7,9, 2H), 3,79-3,92 (m, pirrolidinil) carbonil)- 4H), 3,55 (s, 6H), 2,41(m, 2-metilpropil)carbamato 2H), 1, 94-2,26 (m, 8H) , de metilo 0,71-0,95 (m, 12 H) 2,27 minutos (Cond. VI); >95 % LC/MS: Anal. Calcd. para [M+H ] + C40H48N8O7: 753,37; encontrado 753,88 19 (dibenzo[b,d]furan-3, 7- 2,18 minutos (Cond. VI); díílbís (1 H-imidazol-4,2- >95 % LC/MS: Anal. Calcd. para NHC02Me diil (2S) -2,1- [M+H ] + C40H45N8O7: 749,34; pirrolidinadiil(( IS)-1-ciclopropil-2- oxo-2,1-etanodiil)))biscarbamato de dimetilo encontrado 749,78 176

Exemplo R Nome do Composto TA (LC-Cond.); % de índice de homogeneidade; dados de MS 20 T u ((IS) -1- (((2S) -2-(4-( 7- 2,51 minutos (Cond. VI); (2-((2S)~ 1- ((2S) -2- >95 % NHCOaMe ((metoxicarbonil)amíno)- LC/MS: Anal. Calcd. para 3, 3-dimetilbutanoil)-2- [M+H] + C42H53N807: 7 81,40; pirrolidinil)- 1H-imidazol-4- il)dibenzo[b,d]furan-3-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil) carbonil)-2, 2-dímetílpropíl) carbamato de metilo encontrado 781,85 21 κ/\η j οΛΛοη ((IS) -2-hidroxi-l-(( (2S) - 2-(4-(7-(2-((2S)~ 2,16 minutos (Cond. VI); >95 % NHCOgMâ 1- ((2S)-3-hidroxi- LC/MS Anal. Calcd. para 2- [M+H] + C40H49N8O9: 785,36; ((metoxicarbonil)amíno)-3- metilbutanoíl) -2-pírrolidinil) -1H-ímidazol-4- íl)dibenzo3[b, d]furan-3-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pírrolídíníl) carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo encontrado 785,89

Exemplo 22

MeOjCHN

N ^^^NHCOaMe ( (IS) -2- ( (2S) -2- (5- (7- (2- ( (2S) -1- (N- (metoxicarbonil) -L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-metil-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2- oxoetil)carbamato de metilo 177

Exemplo 22, Etapa a

A uma solução agitada de 2,7-dibromo-9-metil-9H-carbazol (1,52 g, 4,47 mmol) em THF anidro (150 ml) a -78 °C foi adicionado n-BuLi (1,06 M em hexano, 12,6 ml, 13,4 mmol) ao longo de 10 min. A suspensão resultante foi agitada a -78 °C durante 6 h, após o qual N-metil-N-metoxiacetamida (1,43 ml, 13,4 mmol) foi adicionada. A agitação foi continuada à medida que a mistura de reacção era deixada que aquecesse até a temperatura ambiente ao longo de 18 horas. A mistura foi então extinta com 2 N NaH2P04, extraída com acetato de etilo e a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada até a secura. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em coluna (sistema Biotage® Horizon / 2-55 % de acetato de etilo- hexanos) para propiciar 22a (0,560 g, 47 %) como um sólido amarelo. RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,35 (d, J = 8,09 Hz, 2H) , 8,27 (s, 2H) , 7, 86 (m, 1H) , 7,84 (m, 1H) , 4,05 (s, 3H) , 2,72 (s, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para Ci7H15N02: 2 65; encontrado: 266 (M+H)+. Exemplo 22, Etapa b

A uma suspensão fria em gelo de 22a (0,661 g, 2,49 mmol) em tolueno (20 ml) foi adicionada trietilamina (1,39 ml, 9, 96 mmol) e então triflato de terc-butildimetilsililo (1,72 ml, 7,47 mmol) . A agitação foi continuada a 0 °C durante 10 minutos e então a mistura de reacção foi deixada que aquecesse até a temperatura ambiente. Após 3 h a 178 mistura de reacção foi dividida em partições com Et0Ac-H20 e a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada até a secura para dar 22b como um sólido castanho claro em rendimento essencialmente quantitativo. Este material foi usado como tal na etapa seguinte sem manipulação adicional. Exemplo 22, Etapa c

22c A uma solução agitada de 22b em THF anidro (25 ml) a 0 °C foi adicionada N-bromosuccinimida (0,709 g, 3,98 mmol) numa porção. A agitação foi continuada a 0 °C durante uns 30 minutos adicionais e a suspensão resultante foi filtrada. O bolo do filtro foi seco ao ar para dar 22c (1,05 g, 100 % ) como um sólido amarelo. ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-de) δ 8,41 (d, J = 8,59 Hz, 2H) , 8,37 (s, 2H), 7,89 (m, 2H) , 5, 10 (s, 4H) , 4, 07 (s, 3H) . LC/MS: Anal. Calcd. para Ci7H i3Br2NC>2 : 421; encontrado: 422 (M+H)+.

Exemplo 22, Etapa d

Uma mistura de 22c (1,05 g, 2,49 mmol), Boc-L-prolina (1,07 g, 4,98 mmol) e DIEA (0,867 ml, 4,98 mmol) em acetonitrilo (20 ml) foi aquecida a 85 °C num tubo vedado durante 2 horas. A mistura arrefecida foi então concentrada até a secura para dar um sólido resíduo. Uma mistura de este material e NH4OAc (1,92 g, 0,025 mol) em tolueno (32 ml) foi aquecida a 120 °C num tubo vedado durante 2,5 h e então a mistura arrefecida de reacção foi dividida em partições com EtOAc-salmoura. A fase orgânica foi seca 179 (MgS04) , filtrada, e concentrada e o resíduo foi purificado por HPLC preparativa (CI8/CH3CN- H2O+0,l % de TFA) para dar o sal TFA de 22d (como 0,840 g, 34 % global) como um sólido amarelo. ΤΗ RMN (400 MHz, ch3 OH-d4) δ 8,28 (m, 2H), 7,95 (m 4H) , 7, 60 (m, 2H) , 5, 14 (m, 2H) , 4,03 (s, 3H), 2,56 (m 2H) , 2,09 (m, 6H) , 1, 93 (m, 2H) , 1,48 (s, 8H), 1,30 (s 10H) . LC/MS >: Anal. Calcd. . para C37 H45N704: 651; encontrado 652 (M+H) +

Exemplo 22, Etapa e

A uma solução do sal TFA de 22d (0,840 g, 0,845 mmol) em diclorometano (5 ml) foi adicionado TFA (15 ml) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura foi então concentrada até a secura e o resíduo foi dissolvido em CH30H e aplicado a um plugue de gel de extracção de MCX (12 g, pré-acondicionado com CH3OH-diclorometano, 1:1). O plugue foi eluído com CH3OH-diclorometano (1:1) e então 2 N NH3 em CH3OH, e as fracções contendo produto foram combinadas e concentradas para dar 22e como um sólido amarelo (rendimento quantitativo) . Este material foi usado como tal em etapas subsequentes.

Exemplo 22 A uma mistura de ácido (S)—2 — (metoxicarbonilamino)propanoico (0,022 g, 0,150 mmol) e HATU (0,057 g, 0,150 mmol) em DMF (1 ml) foi adicionado DIEA (0,104 ml, 0,60 mmol), e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 15 min. Uma solução de 22e (0,034 g, 0,075 mmol) em DMF (2,5 ml) foi então adicionada e a agitação foi continuada a temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura foi então dividida em partições com acetato de etilo-água (1:1) e a fase orgânica foi seca 180 (MgS04) , filtrada, e concentrada até a secura. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (C-18/MeCN- H2O+0,l % de TFA) e fracções contendo produto foram concentradas até a secura. O resíduo foi liofilizado a partir de CH3CN-H20 (1:1) para dar o sal TFA do Exemplo 22 (0,0064 g, 8 %) como um sólido amarelo. ΤΗ RMN (400 MHz, CH30H-d4) δ 8,25 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 7,93 (m, 4H) , 7,58 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 5,30 (m, 2H) , 4,49 (guart, J = 7,07 Hz, 2H) , 4,20 - 3, 98 (m, 1,5 H) , 4,00 (s, 3H) , 3,88 (m, 2H) , 3,65 (s, 6H) , 2,55 (m, 2H) , 2,23 (m, 6H) , 1,34 (d, J = 7,07 Hz, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para 037Η45Ν704: 709; encontrado: 710 (M+H) + .

Exemplos 23-24

Os Exemplos 23-24 foram preparados de acordo com o método geral indicado no Exemplo 22, usando ácidos apropriados ._

Exemplo R Nome do Composto Descrição (Rendimento) JH RMN e LC/dados de MS 23 ((IS, 2R) -2-metoxi-l- Sólido amarelo (0,011 (((2S)- g, 12 %); XH RMN (400 2-(5-(7-(2-( (2S) - 1-(N- MHz, CH3OH-d4) δ 8,25 NHCOjMe (metoxicarbonil)-O-metil-L- treoníl)-2-pirrolidinil)-lH-imídazol-5- il)-9-metil-9H-carbazol-2-il)-lH- imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil) propil)carbamato de metilo (m, 2H), 7,94 (m, 4H) , 7,59 (d, J = 8,08 Hz, 2H), 5,31 (m, 2H), 4,49 (m, 2H), 4,07 (m, 2H), 3,99 (m, 3H), 3,91 (m, 2H), 3,73 (m, 2H), 3,67 (s, 6H) , 2,59 (m, 2H), 2,22 (m, 6H) , 1,14 (m, 2H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C4iH51N908: 7 97; encontrado: 798 (M+H)+. 181 181 Exemplo R Nome do Composto Descrição (Rendimento) RMN e LC/dados de MS 24 ((IS) -3-metoxí-l- (((2S) - Sólido amarelo (0,0203 ΟΛ/s 2-(5-(7-(2-( (2S) - 1 - (N— g, 26 %) . RMN (40 0 (metoxicarbonil)-O-metil- MHz, CH3OH-d4) Ô 8,26 NHGOzMS L- homoseril) -2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9-metil-9H-carbazol-2- íl)-1H-imidazol-2-íl) -1-pírrolídíníl) carbonil)propil)carbamato de metilo (d, J = 8,08 Hz, 2H), 7,94 (s, 4H), 7,59 (d, J = 8,59 Hz, 2H) , 5, 31 (m, 2H), 4,59 (quart, J = 4,55 Hz, 2H) , 4,02 - 3,99 (m, 2,5 H) , 4,01 (s, 3H), 3,90 (m, 3H), 3,65 (s, 6H), 3,45 (m, 5H), 2,57 (m, 2H), 2,23 (m, 6H), 2,08 (m, 3H), 1,81 (m, 3H). LC/MS: Anal. Calcd. para C4iH51N908: 797; encontrado: 798 (M+H)+.

Exemplo 25

( (IS) -l-( ( (2S) -2- (5-(7- (2- ( (2S) -1-( (2S) -2- ((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-metil-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-11)-1 -pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo 0 produto bruto obtido de acordo com o método geral indicado no Exemplo 22, usando ácido (S)-2-(metoxicar-bonilamino)-3-metilbutanóico (0,024 g, 0,138 mmol) e 9-metil-2,7-bis(2- ( (S)-pirrolidin-2-il)-lH-imidazol-5-il)-9H-carbazol (0,021 g, 0,046 mmol), foi purificado por meio de HPLC prep (C-18 / MeCN-H20-NH40Ac) para propiciar o 182

Exemplo 25 (0,0207 g, 59 %) como um sólido branco. H RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 7,98 (m, 3H) , 7,82 (m, 0,6H), 7,74 (m, 2,4H), 7,53 (d, J = 7,07 Hz, 0,5H), 7,64 (m, 2,5H), 7,39 (m, 0,6H), 7,34 (m, 2,4H), 5,34 (m, 0,6H), 5,20 (dd, J = 5,31, 7,83 Hz, 2,4H), 4,24 (d, J = 7,07 Hz, 2H), 4,01 (m, 2H), 3,65 (s, 6H), 2,37 - 2,19 (m, 6H) , 2,09 - 2, 02 (m, 4H) , 0,94 (m, 12H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C41H51N9O6: 765; encontrado: 766 (M+H)+.

Exemplo 26

((IS) -2- ((2S) -2- (5-(7- (2- ((2S) -1-(N- (metoxicarbonil) -L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-(fenilsulfo-nil)-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-1 -metil-2-oxoetil)carbamato de metilo Exemplo 26, Etapa a

Uma mistura de KOH recém-pulverizado (1,31 g, 23,4 mmol) em DMSO (28 ml) foi agitada vigorosamente a temperatura ambiente durante 10 minutos, após o qual o sólido 2,7-dibromocarbazol (1,90 g, 5,85 mmol) foi adicionado numa porção. A mistura agitada durante lhe então cloreto de benzenosulfonilo (1,49 ml, 11,7 mmol) foi adicionado e a agitação foi continuada durante 18 horas. A mistura foi então diluída com água (150 ml) e o precipitado resultante foi retirado por filtração e o bolo do filtro foi lavado com água e seco ao ar. O pó bege resultante foi triturado com diclorometano-hexanos, filtrado e seco a 183 vácuo para dar 26a (2,10 g, 77 %) como um sólido bege. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,47 (d, J = 1,52 Hz, 2H), 7, 83 (d, J = 8,59 Hz, 2H) , 7,72 (d, J = 8, ,59 Hz, 2H) , 7,50 (m, 3H) , 7,40 (t, J = 8,08 Hz, 2H) . LC/MS: Anal. Calcd. para CisHnB^NChS :463; encontrado: 464 (M+H) + Exempl0 26, Etapa b A uma solução de 26a (2,086 g, 4,48 mmol) em THF seco (60 ml) a -78 °C sob árgon foi adicionado n-BuLi (1,29M em hexanos, 10,4 ml, 13,4 mmol) gota a gota ao longo de 5 min. A mistura resultante foi agitada a -78 °C durante 70 minutos e então N-metoxi-N-metilacetamida (1,43 ml, 13,45 mmol) foi adicionada e o banho de arrefecimento foi deixado que aquecesse até a temperatura ambiente ao longo de 18 horas. A reacção foi então extinta com 2N NaH2P04 e extraída com EtOAc. A fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada até a secura para dar um sólido de cor dourada. Este sólido foi triturado com hexanos-acetonitrilo e o precipitado resultante foi filtrado e seco a vácuo para dar 26b (1,16 g, 66 %) como um sólido bege

claro. ΧΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,79 (s, 2H) , 8,40 (d, J = 8,08 Hz, 2H), 8,10 (d, J = 8,08 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 7,07 Hz, 2H) , 7,64 (m, 2H) , 7,50 (m, 3H) , 2,74 (s, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C22H17NO4S: 391; encontrado: 392 (M+H)+.

Exemplo 26, Etapa c

.OTBDMS

TBDMSQ

N S02Ph 26c

184 A uma suspensão fria em gelo de 26b (1,16 g, 2,96 mmol) e trietilamina (1,65 ml, 11,8 mmol) em tolueno (50 ml) foi adicionado TBDMSOTf (2,04 ml, 8,88 mmol) e a mistura foi agitada durante 2 h a 0 °C e então foi então deixada que aquecesse até a temperatura ambiente ao longo de 18 horas. A mistura foi então dividida em partições com EtOAc-água e a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, e concentrada para dar 26c como um óleo laranja num rendimento quantitativo. Este material foi usado como tal na etapa seguinte sem purificação. ΧΗ RMN (400 MHz, CDC13) δ 8,60 (d, J = 1,52 Hz, 2H) , 7,79 (m, 4H) , 7,62 (dd, J = 1,52, 8,59 Hz, 2H) , 7,44 (m, 1H) , 7,29 (m, 2H) , 7,17 (m, 1H), 5,03 (d, J = 2,02 Hz, 2H), 4,53 (d, J = 2,02 Hz, 2H), 1,07 (s, 18H) , 0,27 (s, 12H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C34H45N04SSi2: 619; encontrado: 620 (M+H)+.

Exemplo 26, Etapa d

SC>2Ph 26d A uma solução de 26c (2,96 mmol) em THF (40 ml) foi adicionado NBS (0, 948 g, 5,34 mmol), e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura de reacção de cor âmbar escura foi então concentrada até próximo à secura e hexano foi adicionado até um precipitado castanho ter sido formado. A mistura foi filtrada para dar (após secagem a vácuo) 26d como um sólido castanho num rendimento quantitativo. Este material foi usado como tal na etapa seguinte sem purificação. aH RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,84 (s, 2H), 8,44 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 8,14 (d, J = 8,59 Hz, 2H) , 7,93 (d, J = 7,07 Hz, 2H) , 7,65 (m, 1H) , 7,51 (m, 2H), 5,13 (s, 4H) . 185

Exemplo 26, Etapa e

Uma solução de 26d (2,96 mmol), N-BOC-L-prolina (1,27 g, 5,92 mmol), e DIEA (1,03 ml, 5,92 mmol) em acetonitrilo (40 ml) foi aquecida num tubo vedado a cerca de 85 °C durante 2 horas. Após ser deixada que arrefecesse até a temperatura ambiente, a mistura foi concentrada até a secura para dar um óleo castanho.

Uma mistura do óleo bruto obtido acima e NH4OAc (2,28 g, 29,6 mmol) em tolueno (40 ml) foi aquecido a 125 °C num tubo vedado durante 3 horas. A mistura arrefecida foi dividida em partições com EtOAc-água e a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada até a secura. O residuo foi purificado por meio de cromatografia em coluna (sistema Biotage® Horizon / 0-10 % de metanol-diclorometano) para dar 26e (1,09 g, 47 %) como um sólido castanho. ΧΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8, 57 (s 1, 1H) , 7,80 (d J = 7,58 Hz, 6H) , 7,39 (m, 3H) , 7,28 (m, 2H) , 5, 01 (m, 2H) 3,55 - 3,43 (m, 5H) , 3,06 (s 1, 2H) , 2,19 (m, 4H) , 1,99 (m 3H) , 1,51 (s, 18H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C42H47N7O6S: 777; encontrado: 778 (M+H)+.

Exemplo 26, etapa f

A uma solução de 26f (0,868 g, 1,12 mmol) em diclorometano (20 ml) foi adicionado TFA (5 ml) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 2 h e então concentrada até a secura. O resíduo foi absorvido em CH3OH e aplicado a uma almofada pré-acondicionada (CH3OH) de gel 186 de extracção SCX (3cm x 3cm) . A almofada foi lavada com CH3OH e então eluída com 2M NH3 em CH3OH. As fracções contendo produto foram concentradas para dar 9- (fenilsulfonil)-2,7-bis (2- ( (S)-pirrolidin-2-il)-1H- imidazol-5-il)-9H-carbazol (0,582 g, 90 %.) como um sólido âmbar escuro que foi imediatamente usado na etapa seguinte. Exemplo 26 A uma solução de ácido (S)—2 — (metoxicarbonilamino)propanoico (0,061 g, 0,412 mmol) e HATU (0,157 g, 0,412 mmol) em DMF (5 ml) foi adicionado DIEA (0,359 ml, 2,06 mmol) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 10 min. A esta solução foi adicionado um 26f bruto (0,119 g, 0,206 mmol) e a agitação foi continuada durante 2 horas. A mistura de reacção foi então dividida em partições com EtOAc-água (1:1) e a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada até a secura. O resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa (C—18 / CH3CN-H20-NH40Ac) e fracções contendo produto foram concentradas até a secura. O resíduo foi liofilizado a partir de H20-CH3CN (7:3) para dar o Exemplo 26 (0,122 g, 66 %) como um sólido branco. XH RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 8,64 (s, 0,5H), 8,59 (s, 1,5H), 7,89 (m, 4H) , 7,74 (d, J = 8,08 Hz, 0,5H), 7,66 (d, J = 8,08 Hz, 1,5H), 7,48 (m, 1,5H), 7,36 (m, 3,5H), 5,25 (m, 2H) , 4,50 (quart, J = 6,91 Hz, 1,5H) , 4,27 (m, 0,5H), 3,89 (t, J = 6,57 Hz, 3H), 3,59 (m, 6H), 2,48 -1,99 (m, 9H), 1,36 (m, 6H). LC/MS:

Anal. Calcd. para C42H45N908S: 835; encontrado: 836 (M+H)+. Exemplo 21

( (IS) -1~( ( (2S) -2- (5-(7- (2- ( (2S) -1-( (2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)- 187 lH-imida- zol-5-il)-9-(fenilsulfonil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo A uma solução de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanóico (0,045 g, 0,256 mmol) e HATU (0,097 g, 0,256 mmol) em DMF (1 ml) foi adicionado DIEA (0,223 ml, 1,28 mmol) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 10 min. A esta mistura foi adicionada uma solução de 26f (0, 074 g, 0,128 mmol) em DMF (2 ml). A mistura de reacção foi agitada a temperatura ambiente durante 5 h e então água (5 ml) foi adicionada e a mistura foi concentrada até a secura a vácuo. O resíduo foi purificado por meio de HPLC prep (C-18/ CH3CN - H20 + 0,1 % de TFA) e as fracções contendo produto foram concentradas até a secura e repurificado por meio de HPLC prep (C-18/ CH3CN-H20-NH40Ac) para dar o Exemplo 27 (0,0591 g, 52 %) como um sólido bege. ΤΗ RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 8,63 (s, 0,5H), 8.58 (s, 1,5H) , 7,90 (m, 4H) , 7,74 (m, 0,5H), 7,67 (m, 1,5H), 7,48 (m, 1,5H), 7,36 (m, 3,5H), 5,22 (dd, J = 5,05, 7.58 Hz, 2H) , 4,25 (d, J = 7,58 Hz, 2H) , 4,02 (m, 2H) , 3,92 (m, 2H) , 3,65 (s, 5H), 3,47 (s, 1H), 2,41- 2,20 (m, 5,5H), 2,12 - 2,04 (m, 4,5H), 0,96 (m, 12H). LC/MS: Anal. Calcd. para C^HsaNgOgS: 891; encontrado: 892 (M+H) + .

Exemplo 28

( (IS) -3-metoxi-l- ( ( (2S) -2- (S-(7- (2- ( (2S) -1-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9- (fenilsulfonil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo A uma solução de ácido (S)-4-metoxi-2- 188 (metoxicarbonilamino)butanóico (0,076 g, 0,398 mmol) e HATU (0,151 g, 0,398 mmol) em DMF (5 ml) foi adicionado DIEA (0,348 ml, 1,99 mmol) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 10 min. A esta mistura foi adicionado 26f (0,115 g, 0,199 mmol), a agitação foi continuada durante 2 h e então a mistura de reacção foi dividida em partições com EtOAc-salmoura (1:1). A fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada até a secura. O resíduo foi purificado por meio de HPLC prep (C—18/ CH3CN-H20-NH40Ac) e fracções contendo produto foram liofilizado para dar o Exemplo 28 (0,122 g, 66 %) como um sólido branco. TH RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 8,64 (s, 0,5H), 8,59 (s, 1,5H), 7,90 (m, 4H) , 7,68 (m, 2H) , 7,49 (m, 1,5H), 7,37 (m, 3,5H), 5,40 (m, 0,5H), 5,25 (dd, J = 4, 04, 8,08 Hz, 1,5H), 4,61 (m, 1,5H), 4,40 (m, 0,5H), 3,93 (m, 3H) , 3,65 (s, 4,5H), 3,54 (s, 1,5H) , 3,49 (m, 4H) , 3,34 (m, 2H) , 2,49 (m, 1H) , 2,38 -2,32 (m, 2H), 2,27 - 2,08 (m, 8H), 2,04 -1,80 (6H). LC/MS: Anal. Calcd. para C46H53N9O10S: 923; encontrado: 463 [(M/2)+H)+.

Exemplo 29

H3 O u rac-((1 R,2S) -2-metoxi-l - (((2R)-2-(5-(7-(2-((2R) -1 - (N- (metoxicarbonil)-O-metil-D-treonil) -2-pirrolidi- nil)-lH-imidazol-5-il)-9-(fenilsulfonil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo O Exemplo 29 foi preparado de acordo com o método descrito para O Exemplo 28, e foi isolado como um sólido branco (0 , 083 g, 4 4 %) . RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 8, 63 (s, 0,5H) , 8, 58 (s, 1,5H), 7,89 (m, 4H) , 7,72 (m, 0,5H), 7,66 (m, 1,5H ) , 7,47 (m, 1,5H), 7,37 (m, 3,5H), 5, 5 6 (m, 189 0,4Η) , 5,25 (dd, J = 4,80, 7, 83 Ηζ, 1,6Η), 4,47 (d, J = 5,56 Hz, 1,5Η) , 4,35 (m, 0,5Η), 3,94 (m, 3Η) , 3,83 (m, 1Η) , 3, 73 - 3, 69 (m, 1,3Η), 3,66 (s, 6Η) , 3,61- 3,56 (m, 0,7Η), 2,40 - 2,22 (m, 6Η) , 2,07 (m, 3Η) , 1,21 (d, J = 6,06 Ηζ, 6Η) . LC/MS: Anal. Calcd. para C46H53N9O10S: 923; encontrado: 463 [(M/2)+H]+.

Exemplo 30

alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9H-carbazol- 2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo A uma mistura do Exemplo 26 (0,033 g, 0,039 mmol) e

Na2HP04 (0,022 g, 0,051 mmol) em EtOH absoluto (2 ml) foi adicionado Na amalgam a 6 % recém- pulverizado (0,079 g) . A suspensão resultante foi agitada a temperatura ambiente durante 6 h então foi filtrada usando um filtro de seringa d 0,45 mM. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi absorvido em CH30H (2 ml) e purificado por HPLC preparativa (C—18/ CH3CN-H20-NH40Ac) . As fracções contendo produto foram concentradas até a secura e o resíduo foi liofilizado a partir de H20-CH3CN (7:3) para dar o Exemplo 30 (0,014 g, 53 %) como um sólido bege. XH RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 7,98 (m, 2H), 7,79 (s, 0,5H), 7,71 (s, 1,5H), 7,52 (m, 0,5H), 7,44 (d, J = 8,08 Hz, 1,5H), 7,37 (s, 0,5H), 7,28 (s, 1,5H), 5,21 (dd, J = 4,29, 7,83 Hz, 2H), 4,48 (guart, J = 7,07 Hz, 1,5H), 4,27 (m, 0,5H), 3,87 (t, J = 6,32 Hz, 3H), 3,64 (s, 4H) , 3,57 (s, 2H) , 2,48 - 1, 92 (m, 9H) , 1,33 (d, J = 7,07 Hz; 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para CsetbiNgOg: 695; encontrado: 696 (M+H)+, 190

Exemplos 31-32

Os Exemplos 31-32 foram preparados a partir de os respectivos precursores de sulfonamida por meio da utilização do procedimento descrito para a síntese do Exemplo 30.

Exemplo R Nome do Composto Produto descrição (Rendimento) 1H RMN e LC/dados de MS 31 <ΛΛ ( (IS) -3-metoxí-l- Sólido amarelo (0,029 g, (( (2S) - 2-(5-(7-(2- 26 %); 2H RMN (400 MHz, NHC02Me ((2S) - CH3OH-d4) δ 8,22 (d, J = 1-(N-(metoxicarbonil)-0- 8,59 Hz, 2H), 7,90 (s, metil-L- homoseril)-2- 0,35H), 7,86-7,84 (m, pirrolidinil)-1H- 3,65H), 7,60 (m, 0,3H), imidazol-5-il)-9H 7,54 (d, J = 8,08 Hz, carbazol-2-íl)- 1H- 1,7H), 5,66 (m, 0,3H), imidazo/-2-il)-1- 5,29 (dd, J = 5,56, 8,08 pirrolidinil)carboníl) Hz, 1,7H), 4,58 (dd, J = propilo )carbamato de 4,55, 9,09 Hz, 1,7H), metilo 4,33 (m, 0,3H), 4,02-3,87 (m, 4H), 3,65 (s, 6H), 3,47 (m, 5H) , 3,34 (m, 2H), 2,55 (m, 2H), 2,26-2,16 (m, 7H), 2,12-2,04 (m, 4H), 1,85-1,77 (m, 2H). LC/MS: Anal. Calcd. para C40H49N9O8: 783; encontrado: 784 (M+H)+. 191 Exemplo

R

Nome do Composto

Produto (Rendimento) 1H LC/dados de MS descrição

RMN 32

AA NHCOgMe ((1S)-1~( ((2S) -2-(5-( 7- Sólido amarelo claro (2-((2S)~ 1- ( (2S) -2- (0,003 g, 1,6%); RMN ((metoxicarbonil)amino)- (400 MHz, CH3OH- d4) δ 3-metilbutanoil)-2- 8,22 (d, J = 8,59 Hz, pirrolidinil)-1H- 2H) , 7,84 (d, J = 3,54 ímídazol-5-íl)-9H- Hz, 3,5H), 7,76 (m, carbazol-2-íl)- 1H- 0,5H) , 7,61 (m, 0, 3H) , ímídazol-2-íl)- 1- 7,53 (d, J = 8,59 Hz, pirrolidinil) carbonil)- 1,7H) , 7,15 (m, 1, 5H) , 2-metílpropíl)carbamato 5,26 (t, J = 7,07 Hz, de metilo 2H) , 4,24 (m, 2H) , 4, 10 (m, 2H) , 3,88 (m, 2H) , 3, 65 (s, 5H), 3,43 (s, 1H) , 2,57 (m, 2H) , 2 ,37- 1, 95 (m, 10H) , 0,94 (d, J = 7,07 Hz, 6H) , 0,90 (d, J = 7,07 Hz, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C40H49 H9O6: 751; encontrado: 752 (M+H )+.

Exemplo 33

( (IS) -l-( ( (2S) -2- (5-(7- (2- ( (2S) -1-( (2S) -2- ((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imida- zol-5-il)-9- (2-metoxietil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo 192

Exemplo 33, Etapa a

A uma suspensão fria em gelo de NaH (60 % em óleo, 0,201 g, 5,02 mmol; anteriormente lavada com 3x5 ml de hexanos sob Ar) em DMF (5 ml) foi adicionada uma solução de 2,7-dibromo-9H-carbazol (1,419 g, 4,37 mmol) em DMF (25 ml). A mistura foi agitada a 0 °C durante 5 minutos e então 2-cloroetil metil éter (1,40 ml, 15,3 mmol) foi adicionado e a mistura de reacção foi aquecida até 60 °C e agitada durante 40 min. A mistura arrefecida foi então deitada em água com gelo (300 ml) e o precipitado branco resultante foi retirado por filtração e seco sob vácuo para propiciar 33a (1,54 g, 92 %) como um sólido branco que foi usado sem purificação adicional. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,87 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 7,59 (s, 2H), 7,34 (dd, J = 8,34, 1,77 Hz 2H) , 4,37 (t, J = 5,81 Hz, 2H) , 3,74 (t, J = 5,81 Hz, 2H) 3,29 (s, 3H) . LC/MS: Anal. Calcd. para Ci5H13Br2NO : 381; encontrado: 382 (M+H)+.

Exemplo 33, Etapa b

CH2CH2OMô 33b A uma solução agitada de 33a bruto (1,577 g, 4,12 mmol) em THF seco (40 ml) a -78 °C sob Ar foi adicionado n-BuLi (1,29M em hexano, 9,53 ml, 12,3 mmol) gota a gota ao longo de 5 min. A agitação foi continuada na mesma temperatura durante 2 h e então N-metoxi-N-metilacetamida (1,31 ml, 12,3 mmol) foi adicionada e o banho de arrefecimento foi deixado que aquecesse até a temperatura ambiente ao longo de 18 horas. A mistura de reacção foi 193 então extinta com 2N Na2HP04 e extraída com acetato de etilo (2x30 ml) . A fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada até a secura para dar um óleo de cor âmbar que foi purificado por meio de cromatograf ia em coluna (Biotage, 40+M coluna/ 10-60 % de acetato de etilo- hexanos). As fracções contendo produto foram combinadas, filtradas, e concentradas para dar 33b (0,967 g, 76 %) como um sólido amarelo. ΤΗ RMN (400 MHz, CDCI3) δ 8,11 (m, 3H) , 7,83 (dd, J = 8,34, 1,26 Hz, 1H), 7,55-7,47 (m, 2H) , 7,28-7,24 (m, 1H), 4,52 (t, J = 5,81 Hz, 2H) , 3,78 (t, J = 5,81

Hz, 2H), 3,29 (s, 3H), 2,73 (s, 3H) . LC/MS: Anal. Calcd. para Ci9H19N03: 309; encontrado: 310 (M+H) + .

Exemplo 33, Etapa c

CHaCHaOMe 33c A uma suspensão fria em gelo de 33b (0, 967 g, 3,12 mmol) e trietilamina (1,74 ml, 12,5 mmol) em tolueno (50 ml) foi adicionado TBDMSOTf (2,15 ml, 9,38 mmol) e a mistura foi agitada durante 20 minutos a 0 °C e então foi deixada que aquecesse até a temperatura ambiente ao longo de 24 horas. A mistura foi dividida em partições com EtOAc-água e a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada, filtrada, e concentrada para dar 33c como um óleo num rendimento quantitativo. Este material não era estável à análise de ΧΗ RMN ou LC/MS e foi usado como tal na etapa seguinte sem purificação.

Exemplo 33, Etapa d

S02Ph 33d 194 A uma solução de 33c (3,12 mmol) em THF (20 ml) foi adicionado NBS (1,00 g, 5,62 mmol) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 45 min. A suspensão amarela resultante foi filtrada, o bolo do filtro foi lavado com um volume mínimo de THF e o sólido foi seco a vácuo para dar 33d (0,66 g, 45 %) como um sólido amarelo. Este material foi usado como tal na etapa seguinte sem purificação adicional . ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,40 (m, 4H) , (dd, J = 8,34 , 1,26 Hz , 2H) , 5,08 (s, 4H) , 4,77 (t 3,31 Hz, 2H) , 3,77 (t, J = 5,31 Hz, 2H) , 3,18 (s, LCMS: Anal. Calcd. para Ci9H17Br2N03: 465; encontrado: 466 (M+H)+.

Exemplo 33, Etapa e

Uma solução de 33d (0,662 g, 1,42 mmol), N-BOC-L- prolina (0,611 g, 2,84 mmol), e DIEA (0,495 ml, 2,84 mmol) em acetonitrilo (20 ml) foi aquecido num tubo vedado a cerca de 85 °C durante 2,5 horas. Após ser deixada que arrefecesse até a temperatura ambiente, a mistura foi concentrada até a secura para dar um sólido amarelo. LC/MS: Anal. Calcd. para C3 gH4 gN3On: 735; encontrado: 736 (M+H) + .

Uma mistura do sólido acima e NH4OAc (1,09 g, 14,2 mmol) em tolueno (20 ml) foi aquecido a 125 °C num tubo vedado durante 3 horas. A mistura arrefecida foi concentrada sob pressão reduzida, dividida em partições com EtOAc-salmoura, e então a fase orgânica foi seca (MgS04) , filtrada e concentrada até a secura. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (C-18/ MeCN-H2O+0,l % de TFA) para dar 33e (0,810 g, 82 %) como um sólido bege. ΤΗ RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,31 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 8 , 20 (m, 1H), 8,14 (m, 1H) , 8, 08 (s, 2H) , 7, 66 (d, J = 8,59 Hz, 195 2H) , 5,06 (m, 2H) , 4,63 (t, J = 5,31 Hz, 2H) , 3, 80 (m, 2,5H) , 3, 64-3,58 (m, 2,5H) , 3,48-3,39 (m, 2,5H), 3, 18 (s, 3H), 2,45-2,40 (m, 2H), 2, 11-1,94 (m, 7 ,5H), 1,79 (m, 1H) , 1,41 (s, 8H), 1,19 (s, 10H). LC/MS: Anal. Calcd. para C36H4iN906: 695; encontrado: 696 (M+H)+.

Exemplo 33, Etapa f

A uma solução de 33e (0,810 g, 1,16 mmol) em diclorometano (20 ml) foi adicionado TFA (8 ml) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 24 h e então concentrada até a secura. O residuo foi absorvido em CH30H e aplicado a um pré-acondicionado (CH3OH) almofada de gel de extracção de SCX (3cm x 5cm). A almofada foi lavada com CH30H e então eluída com 2M CH3 em CH3OH. As fracções contendo produto foram concentradas para dar 33f (0,380 g, 66 %. ) como um sólido laranja que foi usado como tal na etapa seguinte. ΤΗ RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 8, 01 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 7,86 (s, 2H) , 7,54 (dd, J = 8, , 34, 1,26 Hz, 2H) , 7,49 (s, 2H) , 4,68 (t, J = 8,08 Hz, 2H) , 4,57 (t, J = 5,56 Hz, 2H) , 3,83 (t, J = 5,56 Hz, 2H) , 3, 43-3, 36 (m, 2H) , 3,33-3,28 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 2,48-2,05 (m, 8H). LC/MS: Anal. Calcd. para C29H33N70 : 495; encontrado: 496 (M+H) + . Exemplo 33 A uma solução de ácido (S)-2-(metoxicarbonilamino)-3-metilbutanóico (0,051 g, 0,29 mmol) e HATU (0,110 g, 0,29 mmol) em DMF (3 ml) foi adicionado DIEA (0,252 ml, 1,45 mmol) e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante 10 min. A esta solução foi adicionado 33f (0,072 g, 0,145 mmol) e a agitação foi continuada durante 4 horas. A mistura de reacção foi então dividida em partições com EtOAc-salmoura (1:1) e a fase orgânica foi seca (MgS04) , 196 filtrada e concentrada até a secura. 0 resíduo resultante foi purificado por HPLC preparativa (C-18/ CH3CN-H2O+0,1 % de TFA) e fracções contendo produto foram concentradas até a secura. Este propiciou o sal TFA do Exemplo 33 (0,055 g, 37 %) como um sólido amarelo. ΤΗ RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 8,25 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 7,96 (s, 2H) , 7,94 (s, 2H) , 7,58

(d, J = 8,08 Hz, 2H) , 5,28 (t, J = 7,33 Hz, 2H) , 4,67 (t, J = 5,05 Hz, 2H), 4,24 (d, J = 7,58 Hz, 2H), 4,14-4,09 (m, 2H) , 3, 93-3, 86 (m, 4H) , 3,65 (s, 6H) , 3,25 (s, 3H) , 2,62- 2,57 (m, 2H) , 2,31-2,04 (m, 8H) , 0,94 (d, J = 6,57 Hz, 6H) , 0,90 (d, J = 7,07 Hz, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C43H55N907 : 809; encontrado: 810 (M+H)+,

Exemplo 34

( (IS) -2- ( (2S) -2- (5-(7- (2- ((2S) -1- (N- (metoxicarbonil) -L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-(2-metox-yetil)-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo O sal TFA do Exemplo 34 foi preparado de acordo com o procedimento descrito para o Exemplo 33, e foi recuperado como um sólido amarelo (0, 0387 g, 27 %) . XH RMN (400 MHz, CH30H-d4) δ 8,26 (d, J = 8,08 Hz, 2H) , 7,96 (s, 2H) , 7,92 (s, 2H) , 7,58 (dd, J = 8, 08, 1,52 Hz, 2H) , 5,29 (m, 2H) , 4,68 (m, 2H) , 4,49 (m, 2H) , 4,00 (m, 2H) , 3,88 (m, 4H) , 3,65 (s, 6H), 3,25 (s, 3H) , 2,61-2,53 (m, 2H) , 2,26-2,18 (m, 6H) , 1,34 (d, J = 7,07 Hz, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C39H47N907 : 753; encontrado: 754 (M+H)+. 197 Exemplo 35

0 och3 •vN' OMe ΛΛ- o ((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)—2—(S—(7—(2—((2 S)—1—(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9-(2-metoxietil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo 0 sal TFA do Exemplo 35 foi preparado de acordo com o procedimento descrito para o Exemplo 33. Este material foi repurificado por HPLC preparativa (C-18/MeCN-H20-NH40Ac) para dar a base livre como um sólido bege (0,031 g, 25 %). XH RMN (400 MHz, CH3OH-d4) δ 7,99 (m, 2H) , 7,86 (m, 0,5H), 7,80 (s, 1,5H) , 7,54 (d, J = 8,59 Hz, 0,5H), 7,47 (d, J = 8,08 Hz, 1,5H) , 7,41 (m, 0,5H), 7,36 (s, 1,5H), 5,54 (m, 0,5H) , 5,23 (dd, J = 7,83, 4,8 Hz, 1,5H), 4, 60-4, 54 (m, 2H) , 4,46 (d, J = 5,05 Hz, 1,5H), 4,35 (d, J = 5,05 Hz, 0,5H), 4,00-3,82 (m, 6H), 3,70-3,63 (m, 7H), 3,49 (s, 1H), 3,37 (s, 2H) , 3,28 (m, 7H) , 2,39-2, 02 (m, 8H) , 1,18 (d, J = 6,06 Hz, 6H) . LC/MS: Anal. Calcd. para C43H55N9O7: 841; encontrado: 842 (M+H)+.

ACTIVIDADE BIOLÓGICA

Um ensaio de Replicão de VHC foi utilizado na presente descrição, e foi preparado, conduzido e validado como é descrito no documento PCT/US2006/022197 de propriedade comum e em 0'Boile et al. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Apr;49(4): 146-53.

As células de replicão de VHC lb-377-neo foram usadas para testar as séries de compostos actualmente descritos bem como células resistentes a composto A contendo uma mutação Y2065H em NS5A (descrito no pedido PCT/US2006/022197). Os compostos testados foram 198 determinados como tendo mais de 10 vezes menos actividade inibidora sobre células contendo a mutação que as células do tipo selvagem que indicam um mecanismo de acção relacionado entre as duas séries de compostos. Assim, os compostos da presente invenção podem ser eficazes para inibir a função da proteína NS5A de VHC e são entendidos como sendo eficazes em combinações como foi descrito anteriormente no pedido PCT/US2006/022197 e no documento WO/ 04014852 de propriedade comum. Além disso, os compostos da presente invenção podem ser eficazes contra o genótipo VHC lb. Deve também ser entendido que os compostos da presente invenção podem inibir múltiplos genótipos de VHC. O Quadro 2 mostra os valores de EC50 de compostos representativos da presente invenção contra o genótipo VHC lb. Numa forma de realização, os compostos da presente invenção são activos contra os genótipos la, lb, 2a, 2b, 3a, 4a, e 5a. Os intervalos de EC50 contra VHC lb são como se segue: A = >100 nM; B = 1-99 nM; C = 101-999 pM; e D = 1-100 pM.

Os compostos da presente invenção podem inibir VHC por meio de mecanismos adicionais ou diferentes de inibição de NS5A. Numa forma de realização, os compostos da presente invenção inibem o replicão de VHC e em outra forma de realização os compostos da presente invenção inibem NS5A. 199

199 Exemplo Intervalo/ Valor 1 9pM 2 C 3 C 4 D 5 I> 6 2nM 7 C 8 D 9 D 10 C 10A B

Quadro 2

11 146 pM 12 C 13 D 14 D 15 52 pM 16 D 17 D 18 D 19 D 20 D 21 D 22 B 23 D

24 C 25 D 26 D 27 D 28 D 29 D 30 2 0 nM 31 B 32 C 33 D 34 B 35 662 pM

Será evidente a um perito na especialidade que a presente invenção não é limitada aos exemplos ilustrativos precedentes, e que pode ser incorporada em outras formas especificas sem se afastar dos atributos essenciais da mesma. É portanto desejado que os exemplos sejam considerados em todos os aspectos como ilustrativos e não restritivos, sendo feita referência às reivindicações anexas, ao invés dos exemplos precedentes, e todas as mudanças que estão dentro do âmbito das reivindicações são portanto destinadas a serem abrangidas na mesma.

Os compostos da presente invenção podem inibir VHC por meio de mecanismos adicionais ou diferentes de inibição de NS5A. Numa forma de realização, os compostos da presente invenção inibem o replicão de VHC e em outra forma de realização os compostos da presente invenção inibem NS5A. Os compostos da presente invenção podem inibir múltiplos genótipos de VHC. 200

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor da presente solicitação de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, o IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descriçãoç • US 61028266 A [0001] • WO 2007031791 A [0008] • WO 2005047288 A [0060] • WO 2003099274 A [0190] [0193] [0198] [0213] • WO 2005051410 A [0200] [0213] • WO 2003062241 A [0213] • US 2006022197 W [0350] [0351] • WO 04014852 A [0351]

Literatura não relacionada com patentes referida na descrição • TAN, S.-L. ; KATZEL, M.G. Virology, 2001, vol. 284, 1-12 [0008] • PARK, K.—J. ; CHOI, S.-H. J. Biological Chemistry, 2003 [0008] • Pharmaceutical Research, 1986, vol. 3 (6), 318 [0049] • Hepatology, 2003, vol. 38, 1282 [0059] • Biochem. Biophys. Res. Commun., 2004, vol. 313, 42 [0059] • J. Gastroenterol., 2003, vol. 38, 567 [0059] • Journal of Organic Chemistry, 1995, vol. 60, 7508 [0066] • Angew Chem. Int. Ed Engl, 2001, vol. 40, 4544 [0066] • Org. Let., 2003, vol. 5, 4835 [0067] • J. Med. Chem., 1970, vol. 13, 613 [0202] • J. Hetero. Chem., 1993, 17 [0213] 201 • Heterocycles, 2003, vol. 60, 953 [0213] • II Farmaco, 2001, vol. 56, 60 9-613 [0222] • J. Org. Chem.f 1978, vol. 43, 2923 [0225] • Eur. J. Med. Chem., 1999, vol. 34, 205 [0289] • 0'BOYLE. Antimicrob Agents Chemother., April 2005, vol. 49 (4), 146-53 [0350]

Claims (15)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de Fórmula (I)

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que u e u' são independentemente 0, 1, 2, ou 3; D e E são, cada um, anéis aromáticos de cinco membros contendo um, dois, ou três heteroátomos independentemente seleccionados a partir de azoto, oxigénio, e enxofre; cada R1 e R1' é independentemente seleccionado a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, arilalcoxicarbonilo, carboxi, formilo, halo, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, -NRaRb, (NRaRb) alquilo, e (NRaRb) carbonilo; R2 e R2', juntamente com os átomos de carbono aos quais são unidos, formam um anel insaturado de cinco a oito membros opcionalmente contendo um ou dois heteroátomos independentemente seleccionados a partir de azoto, oxigénio, e enxofre; em que o anel insaturado de cinco a oito membros é opcionalmente substituído com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilsulfonilo, carboxi, formilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, -NRaRb, (NR8Rb) alquilo, (NRaRb) carbonilo, oxo, e espirociclo; R3 e R3' são, cada um, independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alcoxicarbonilalquilo, alquilo, arilalcoxicarbonilo, carboxi, haloalquilo, heterociclilalquilo, 2 hidroxialquilo, (NRaRb) carbonilo, e trialquilsililalcoxialquilo; R4 e R4' são, cada um, independentemente seleccionados a partir de R

fro Λ m R7 em que cada m é independentemente 0, 1, ou 2; cada o é independentemente 1, 2, ou 3; cada s é independentemente 0, 1, 2, 3, ou 4; cada X é independentemente seleccionado a partir de O, S, S (O) , S02, CH2, CHR5, e C(R5)2; com a condição de que quando n durante 0, X é seleccionado a partir de CH2, CHR5, e C(R5)2; cada R5 é independentemente seleccionado a partir de alcoxi, alquilo, arilo, halo, haloalquilo, hidroxi, e -NRaRb, em que o alquilo pode formar opcionalmente um anel condensado de três a seis membros com um átomo de carbono adjacente, em que o anel de três a seis membros é opcionalmente substituído com um ou dois qrupos alquilo; cada R6 é independentemente seleccionado a partir de hidroqénio e R10-C(O)-, e R10-C(S)-; R7 é seleccionado a partir de hidrogénio e alquilo; R8 e R9 são, cada um, independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcenilo, alcoxialquilo, alquilo, haloalquilo, e (NRaRb) alquilo; ou, R8 e R9, juntamente com o átomo de carbono ao qual são unidos, formam um anel saturado de cinco ou seis membros opcionalmente contendo um ou dois heteroátomos seleccionados a partir de NRZ, O, e S; em que Rz é seleccionado a partir de hidrogénio e alquilo; e cada R10 é independentemente seleccionado a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, 3 alcoxicarbonilalquilo, alquilo, alquilcarbonilalquilo, arilo, arilalcenilo, arilalcoxi, arilalquilo, ariloxialquilo, cicloalquilo, (cicloalquil)alcenilo, (cicloalquil)alquilo, cicloalquiloxialquilo, haloalquilo, heterociclilo, heterociclilalcenilo, heterociclilalcoxi, heterociclilalquilo, hetero-cicliloxialquilo, hidroxialquilo, -NRcRd, (NRcRd) alcenilo, (NRcRd) alquilo, e (NRcRd) carbonilo; Ra e Rb são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcenilo, e alquilo; Rc e Rd são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alceniloxicarbonilo, alcoxialquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalcoxicarbonilo, arilalquilo, arilalquilcarbonilo, arilcarbonilo, ariloxicarbonilo, arilsulfonilo, cicloalquilo, cicloalquilsulfonilo, formilo, haloalcoxicarbonilo, heterociclilo, heterociclilalcoxicarbonilo, heterociclilalquilo, heterociclilalquilcarbonilo, heterociclilcarbonilo, heterocicliloxicarbonilo, hidroxialquilcarbonilo, (NReRf) alquilo, (NReRf) alquilcarbonilo, (NReRf) carbonilo, (NReRf) sulf onilo, -C(NCN)OR', e - C (NCN) NRXRY, em que R' é seleccionado a partir de alquilo e fenilo não substituído, e em que a parte alquilo do arilalquilo, do arilalquilcarbonilo, do heterociclilalquilo, e do heterociclilalquilcarbonilo é substituída ainda opcionalmente com um grupo -NReRf; e em que o arilo, a parte arilo do arilalcoxicarbonilo, do arilalquilo, do arilalquilcarbonilo, do arilcarbonilo, do ariloxicarbonilo, e do arilsulfonilo, o heterociclilo, e a parte heterociclilo do heterociclilalcoxicarbonilo, do heterociclilalquilo, do heterociclilalquilcarbonilo, do heterociclilcarbonilo, e do heterocicliloxicarbonilo são substituídos ainda opcionalmente com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de 4 alcoxi, alquilo, ciano, halo, haloalcoxi, haloalquilo, e nitro; Rc e Rf são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alquilo, arilo não substituído, arilalquilo não substituído, cicloalquilo não substituído, (ciclolalquil)alquilo não substituído, heterociclilo não substituído, heterociclilalquilo não substituído, (NRXRY) alquilo, e (NRXRY) carbonilo; e Rx e RY são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, arilo não substituído, arilalcoxicarbonilo não substituído, arilalquilo não substituído, cicloalquilo não substituído, heterociclilo não substituído, e (NRX'RY') carbonilo, em que Rx' e RY' são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio e alquilo.

2. Um composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R4 e R4' são, cada um,

3. Um composto de acordo com farmaceuticamente aceitável do

4 . Um composto de acordo com farmaceuticamente aceitável do

5. Um composto de acordo com farmaceuticamente aceitável do a reivindicação 2, ou um sal mesmo, em que cada m é 1. a reivindicação 2, ou um sal mesmo, em que cada X é CH2. a reivindicação 2, ou um sal mesmo, em que s é 0. a reivindicação 2, ou um sal mesmo, em que cada R1 2 3 é R10- 1 Um composto de acordo com 2 farmaceuticamente aceitável do 3 C(0)-. 5

7. Um composto de acordo com a reivindicação 6, em que cada R10 é independentemente seleccionado a partir de arilalquilo, (cicloalquil)alquilo, e (NRcRd)alquilo.

8. Um composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que u e u' são, cada um, 0.

9. Um composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal f armaceut icamente aceitável do mesmo, em que R3 e R3' são, cada um, hidrogénio.

10. Um composto de acordo com a reivindicação 1 em que R2 e R2' , juntamente com os átomos aos quais são unidos, formam um anel de cinco membros opcionalmente contendo um átomo de oxigénio ou azoto, em que o dito anel é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilsulfonilo, carboxi, formilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, -NRaRb, (NRaRb) alquilo, (NRaRb) carbonilo, e oxo .

11. Um composto de acordo com a reivindicação 1, em que R2 e R2', juntamente com os átomos aos quais são unidos, formam um anel de sete membros contendo um heteroátomo seleccionado a partir de oxigénio e azoto, em que o dito anel é opcionalmente substituído com um, dois, ou três substituintes independentemente seleccionados a partir de alcoxi, alcoxialquilo, alcoxicarbonilo, alquilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilsulfonilo, carboxi, formilo, halo, haloalcoxi, haloalquilo, hidroxi, hidroxialquilo, -NRaRb, (NRaRb) alquilo, (NRaRb) carbonilo, e 0X0 . 6

12. Um composto de acordo com a reivindicação 1 que tem a Fórmula (II)

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que A está ausente ou é CR11R12; G é seleccionado a partir de CR11R12, 0, e NR13; J está ausente ou é CRnR12; R3 e R4 são, cada um, independentemente seleccionados a partir de hidrogénio e R10-C(O)-; cada R10 é independentemente seleccionado a partir de arilalquilo, (cicloalquil)alquilo, e (NRcRd)alquilo; cada R11 e R12 são independentemente seleccionados a partir de hidrogénio, alquilo, e -NRaRb; ou R11 e R12 juntos formam um grupo oxo; ou R11 e R12, juntamente com o átomo de carbono ao qual são unidos, formam um espirociclo de três a oito membros; e cada R13 é independentemente seleccionado a partir de hidrogénio, alcoxialquilo, alquilo, e arilsulfonilo.

13. Um composto de acordo com a reivindicação 1 seleccionado a partir de: ( (IS)-1- ( ((2S)-2-(5-(9-(2-((2S)-1-((2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-6-metil-6,7-dihidro-5H-dibenzo[c,e]azepin-3-il)-lH-imidazol-2-il) -1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (IS) -1- ( ( (2S) -2- (5-(7-(2-( (2S) -1- ( (2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-oxo-9H-fluoren-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (IS)-1-(((2S)-2-(5-(9-hidroxi-7-(2-((2S)-1-((2S)-2- 7 ((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9H-fluoren-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (1S)-1- ( ( (2S)—2 — (5—(9—(2—( (2S)—1— ( (2S)— 2 — ((metoxicarbonil)amino-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4-il)-5,7-dihidrodibenzo[c, e]oxepin-3-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil) 2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (IS)-1-(((2S)-2-(5-(9-(dimetilamino)-7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9H-fluoren-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (1S)-1- ( ( (2S)—2 — (5—(7—(2—( (2S)—1— ( (2S)-2- ((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-metil-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ((IS)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-( (2S)-1- ( (2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9H-fluoren-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (IS)-1-(((2S)-2-(5-(9-(dimetilamino)-7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-metil-9H-fluoren-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (IS)-2- ( (2S)—2 — (5— (7—(2—((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-metil-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-1-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo; ((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9-metil-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2- il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo; ((IS)-3-metoxi-l-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril)-2-pirrolidinil)-1H imidazol-5-il)-9-metil-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo; ( (IS)-1-( ( (2S)-2-(5-(7-(2-( (2S)-l-( (2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil) lH-imidazol-5-il)-9-(fenilsulfonil)-9H-carbazol-2-il)-1H imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; (lS,l'S)-2,2'-((6-metil-6,7-dihidro-5H-dibenzo[c,e]azepina-3,9-diil)bis(lH-imidazol-4,2-diil(2 S)-2,1-pirrolidinadiil))bis(N,N-dietil-2-oxo-l-feniletanamina); ( (IS)-2- ( (2S)-2 -(4-(9-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4-il)-5, 7-dihidrodibenzo[c,e]oxepin-3-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo; ((IS)-3-metoxi-l-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril)-2-pirrolidinil)-1H imidazol-5-il)-9-(fenilsulfonil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo; rac-((IR,2S)-2-metoxi-l-(((2R)-2-(5-(7-(2-((2R)-1-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-D-treonil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9-(fenilsulfonil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo; ( (IS)-2 - (2S)-2 - (5- (7 - (2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-(fenilsulfonil)-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-1-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo; ( (IS, 2R) -2-metoxi-l- (((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-l-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9H-fluoren-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1- 9 pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo; ( (IS)-2- ( (2S)-2- (5-(7-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo; ( (IS)-1- ( ( (2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9,9-dimetil-9H-fluoren-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ((9,9-dimetil-9H-fluoreno-2,7-diil)bis(lH-imidazol-5,2-diil (2S)-2,1-pirrolidinadiil((IS)-l-ciclopropil-2-oxo- 2.1- etanodiil)))biscarbamato de dimetilo; ( (IS)-1- ( ( (2S)-2-(5-(7'-(2-((2S)-1-((2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)espiro[ciclobutano-1,9'-fluoren]-2'-il)-IH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ( (1S)—2 — ( (2S)—2 — (5— (7 * — (2—((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5- il)espiro[ciclobutano-1,9'-fluoren]-2'-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo; (5,7-dihidrodibenzo[c,e]oxepina-3,9-diilbis(lH-imidazol- 4.2- diil(2 S)-2,1-pirrolidinadiil((IS)-2-oxo- 1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-2,1-etanodiil)))biscarbamato de metilo; (5,7-dihidrodibenzo[c,e]oxepina-3,9-diilbis(lH-imidazol- 4.2- diil(2 S)-2,1-pirrolidinadiil(2-oxo-l-(tetrahidro-2H-piran-4-il)-2,1-etanodiil)))biscarbamato de dimetilo; ((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)-2-(4-(9-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-4-il)-5,7-dihidrodibenzo[c,e]oxepin-3-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil) carbamato de metilo; 10 ( (IS) - 3-metoxi-l- ( ( (2S)-2-(5-(7-(2-( (2S)-1- (N- (metoxicarbonil)-O-metil-L-homoseril)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo; (lS,l'S)-2,2'-(5,7-dihidrodibenzo[c,e]oxepina-3,9-diilbis(lH-imidazol-4,2-diil(2S) -2,1- pirrolidinadiil))bis(N, N-dietil-2-oxo-l-feniletanamina); ( (IS)-1-( ( (2S) -2-(5- (7-(2-( (2S) -1- ( (2S) -2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; ((IS)-1-( ( (2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-( (2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-(2-metoxietil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil ) carbamato de metilo; ((1S)—2 —((2S)—2—(5—(7—(2—((2S)—1—(N-(metoxicarbonil)-L-alanil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-5-il)-9-(2-metoxietil)-9H-carbazol-2-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)-l-metil-2-oxoetil)carbamato de metilo; ((IS,2R)-2-metoxi-l-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(metoxicarbonil)-O-metil-L-treonil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-9-(2-metoxietil)-9H-carbazol-2-il)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)propil)carbamato de metilo; ( (IS) —1— ( ( (2S) —2 — (4 — (7 — (2 — ( (2S) —1— ( (2 S)-2- ((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4-il)dibenzo[b, d]furan-3-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo; (dibenzo[b,d]furan-3,7-diilbis(lH-imidazol-4,2-diil(2S)-2,1-pirrolidinadiil((IS)-l-ciclopropil-2-oxo-2,1-etanodiil)))biscarbamato de dimetilo; ( (1S)-1- ( ( (2S)—2—(4—(7—(2—( (2S)-1- ( (2S)— 2 — ((metoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanoil)-2- 11 pirrolidinil)-lH-imidazol-4-il)dibenzo[b, d]furan-3-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2,2-dimetilpropil)carbamato de metilo; e ((IS)-2-hidroxi-l-(((2S)-2-(4-(7-(2-((2S)-1-(2S)-3-hidroxi-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-lH-imidazol-4-il)dibenzo[b,d]furan-3-il)-lH-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo.

14. Uma composição que compreende um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável, opcionalmente que compreende ainda um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC.

15. A composição de acordo com a reivindicação 14, em que pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão que é preferentemente seleccionado a partir de interferão alfa 2B, interferão alfa pequilado, interferão consenso, interferão alfa 2A, e interferão tau linfoblastoide ou uma ribavirina.

16. Um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para utilização no tratamento de uma infecção por VHC num paciente, opcionalmente que compreende utilizar um ou dois compostos adicionais que têm actividade anti-VHC antes de, após ou simultaneamente com o composto de acordo com a reivindicação 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. 17. 0 composto para utilização de acordo com a reivindicação 16, em que pelo menos um dos compostos adicionais é um interferão que é preferentemente seleccionado a partir de interferão alfa 2B, interferão 12 alfa peguilado, interferão consenso, interferão alfa 2A, e interferão tau linfoblastoide ou uma ribavirina.