PT1483251E - Derivados de c3-ciano-epotilona - Google Patents

Description

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Descrição "Derivados de C3-ciano-epotilona" 0 presente pedido de patente reclama prioridade relativamente ao pedido provisório com o número de série 60/363441, apresentado a 12 de Março de 2002. A presente invenção diz respeito a compostos de macrólido substituído em 3-ciano, que possuem actividade antitumoral, a métodos para a preparação destes compostos, a composições farmacêuticas que os contêm e à utilização destes compostos na produção de um medicamento.

As epotilonas são compostos de macrólidos úteis na área farmacêutica. Por exemplo, as epotilonas A e B com as seguintes estruturas

R

O OH O

Epotilona A R=H

Epotilona B R=Me -2- podem produzir efeitos estabilizantes dos microtúbulos semelhantes ao paclitaxel (TAXOL®) e, consequentemente, uma actividade citotóxica contra células em rápida proliferação, como sendo as células tumorais ou outras doenças celulares hiperproliferativas, veja-se Hofle, G., et al., Angew, Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, N.° 13/14, 1567-1569 (1996); a patente de invenção WO 93/10121 publicada a 27 de Maio de 1993, e a patente de invenção WO 97/19086, publicada a 29 de Maio de 1997.

Ao interesse generalizado em relação às epotilonas, resultante da descoberta da sua actividade estabilizadora dos microtúbulos, seguiu-se a descoberta de que as epotilonas eram activas in vitro contra várias linhas celulares de cancro humano resistentes ao paclitaxel (Bollag, D. M. et al., Câncer Res., Vol. 55, 2325-2333 (1995); Kowalski, R. J. et al. , J. Biol. Chem., Vol. 272, 2534-2541 (1997)) . Além disso, a síntese total relativamente eficaz das epotilonas, comparativamente com aquela do paclitaxel, conduziu a extensos esforços relativamente à síntese de análogos das epotilonas, bem como à caracterização da sua actividade biológica e características da relação estrutura/actividade (SAR) -3- (Altmann, K. H. et al., Curr. Opin. Chem. Biol., Vol. 5, 424-431 (2001)). Vários grupos têm-se mostrado activos nesta área, incluindo Danishefsky, no Memorial Sloan-Kettering Câncer Research Center, Nicolaou no Scripps Research Institute, Altmann na Novartis Pharma AG e Klar na Schering AG. Por exemplo, o grupo liderado por Danishefsky preparou e caracterizou a actividade biológica de derivados de 12,13-desoxiepotilona (Chou T. C., et ai., Proc. Natl. Acad. Sei., Vol. 95, 9642 (1998)). O grupo de Nicolaou, no Scripps Research Institute, sintetizou 12,13-ciclopropilo, 12,13-ciclobutilo e outras piridinas de cadeia lateral análogas de epotilona (Nicolaou, K. C., J. Amer. Chem. Soc., Vol. 123, 9313-9323 (2001)). Os derivados de epotilona contendo substituições 16-halo foram preparados pelo grupo da Schering Ag (patente de invenção WO 00/49021). Além disso, Altmann, da Novartis Pharma AG, sintetizou um análogo de epotilona no qual o grupo tiazol é conformacionalmente bloqueado por uma funcionalidade benzenóide (Altmann, K. H. et al., Chimica, Vol. 54, n.° 11, 612-621 (2000)).

Exemplos de compostos de epotilona substituída em C-3 são aqueles que possuem um grupo éter, halo ou sulfonilo (veja-se Schering Ag, patente de invenção WO 00/66589), ou nos -4- casos em que juntos, C-2 e C3 formam uma ligação dupla (veja-se Novartis, patente de invenção WO 00/25929 e WO 00/37473).

Derivados e análogos de epotilonas A e B foram sintetizados e testados contra uma série de cancros e outras doenças proliferativas. Tais análogos são descritos em Hofle, G., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., vol. 35, n.° 13/14, 1567-1569 (1996); Nicolaou, K. C., et al., Angew Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 36, n.° 19, 2097-2103 (1997); Su, D. S., et al., Angew. Chem. Int. Ed, Engl., Vol. 36, n.° 19, 2093-2097 (1997); Su, D. S. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 36, 757-759 (1997); Meng, D., et al., J. Amer. Chem. Soc., Vol. 119, 10073-10092 (1997); Yang, Z., et al.,

Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 36, 166-168 (1997); Nicolaou, K. C., et al., Angew. Chem. . Int. Ed. Engl ., Vol. 36, 525-527 (1997); Nicolaou, K. c., et al., Nature, Vol. 387, 268-272 (1997) ; Schinzer, D., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 36, 523-524 (1997) e Nicolaou, K. C., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 37, 2014-2045 (1998). Embora as epotilonas A e B naturais apresentem uma excelente actividade citotóxica ín vitro contra linhas celulares de cancro, mantêm-se algumas dificuldades no que diz respeito à sua utilização in vivo, devido à sua falta -5- de estabilidade, incluindo estabilidade metabólica, e potencial toxicidade (Lee, F., et al., Clin. Can. Res., Vol. 7, 1429-1437 (2001)). Assim, subsiste ainda uma necessidade de compostos de epotilona biologicamente activos, com uma melhor estabilidade melhorada e melhores perfis de segurança.

Resumo da invenção A presente invenção diz respeito a novos compostos de epotilona que possuem uma actividade antiproliferativa e antineoplásica, e a métodos para a preparação destes mesmos compostos. Além disso, a invenção inclui fármacos que contenham os compostos da invenção. A invenção engloba também o uso destes compostos na produção de um medicamento destinado ao tratamento ou prevenção de doenças ou perturbações proliferativas ou cancro metastático usando os compostos da presente invenção. Os compostos da presente invenção são particularmente úteis no tratamento ou prevenção de cancros que respondem a agentes de estabilização dos microtúbulos. -6-

Numa variante, a invenção diz respeito a compostos que podem, de forma gera, ser classificados como "compostos de 3-ciano epotilona", com a seguinte fórmula:

I em que: Q é seleccionado entre um grupo constituído por

M é 0, NR9, CR10R11; X é 0 ou NH;

Ri, R2, R3, R4 e R5 são, de forma independente, seleccionados entre um grupo constituído por hidrogénio ou alquilo de cadeia curta; R6 é seleccionado entre o grupo constituído por arilo, arilo substituído e heterociclo; -7- R7 e Rs são seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído e ciano;

Rg é seleccionado entre o grupo constituído por hidrogénio, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, -C(=0)Ri2, -C(=0)0Ri3, S(02)Ri4, -C(=0)NRi5Ri6, -S(02)N R17R18 e -NR19R20;

Rio e Rn são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, halogéneo, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, -C (=0) R2i, -C(=0)0R22, -C(=0)NHR3 e -NR24R25; e R12, Ri3 , R14, Ri5, Ri6, Ri7, Ris, Ri9, R20, R21, R22, R23, R24 e R25 são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído e heterociclo, sendo que R13 e R14 não podem ser hidrogénio;

Ris e Riê, Ri7 e R18, Ri9 e R2o; R24 e R25 podem, cada um deles, juntar-se para formar um anel heterocíclico; e isómeros, clatratos, sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos do mesmo. -8-

Numa outra variante, a presente invenção diz respeito ao uso dos compostos da invenção para a produção de um medicamento destinado ao tratamento de uma série de condições através da administração de uma dose terapêutica ou profilaticamente eficaz de um composto de fórmula (I) a um animal, preferivelmente um mamífero, em especial um ser humano que necessite do mesmo (adiante designado por "paciente"). Antes da administração, um ou mais compostos desta invenção são tipicamente formulados sob a forma de uma composição farmacêutica que contém uma dose eficaz de um ou mais compostos em combinação com um (ou mais) veículos farmaceuticamente aceitáveis.

Numa outra variante, a presente invenção diz respeito ao uso dos compostos da invenção na produção de um medicamento destinado à indução da estabilização dos microtúbulos em células de mamíferos através da colocação em contacto das células com um composto da presente invenção.

As condições que podem ser tratadas ou prevenidas com os compostos da presente invenção, ou composição farmacêutica dos mesmos, incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, os cancros primários, os cancros metastáticos, os tumores sólidos e os tumores do sangue. Numa variante, a presente invenção é direccionada para o uso dos compostos -9- da invenção para a produção de um medicamento destinado ao tratamento e/ou prevenção de cancros do cérebro, mama, sistema nervoso central, estômago, bexiga, próstata, cólon, recto, fígado, pulmões (de pequenas células e não pequenas células), pâncreas, esófago, boca, faringe, rins, ossos, hipófise, ovários, do útero, da pele, cabeça e pescoço, colo do útero e laringe.

Numa outra variante, a presente invenção também proporciona composições farmacêuticas que incluem uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de um ou mais compostos da invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável. Um veículo farmaceuticamente aceitável pode incluir um excipiente, diluente ou uma mistura destes.

Os compostos e composições farmacêuticas descritas também poderão ser úteis em terapia combinada, com outros agentes anticancro/citotóxicos, inibidores da angiogénese, vacinas anticancro e tratamentos baseados em anticorpos. Além disso, os compostos e composições farmacêuticas descritos poderão ser úteis como um adjuvante a terapias existentes e/ou experimentais. Os compostos da presente invenção também poderão ser úteis em combinação com quimio- e radioterapia. - 10-

Os métodos de administração incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, a via oral, parentérica, mucosa e tópica; tais modos de administração incluem também a administração intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutânea, intracerebral, epidural, sublingual, bucal, rectal, vaginal, intranasal, intra-ocular, oral e transdérmica. Preferivelmente, as composições farmacêuticas são formuladas para injecção. Preferivelmente, a administração oral será em combinação com um antiácido ou outro tampão adequado, eficaz na neutralização da acidez do estômago.

Estes e outros aspectos da invenção tornar-se-ão evidentes mediante a referência aos mesmos na seguinte descrição minuciosa. Para tal, são citadas determinadas patentes de invenção e outros documentos para, de forma mais específica, se descreverem os vários aspectos desta invenção.

Os compostos

Numa variante, a presente invenção diz respeito a análogos ou derivados química e biologicamente estáveis da epotilona, com um substituinte 3-ciano. Exemplos de tais - 11 - análogos ou derivados da epotilona que podem ser modificados para conterem um substituinte 3-ciano incluem aqueles presentes nas seguintes patentes de invenção norte-americanas: 4272525, 4820695, 5545624, 5610178, 5677287, 5716939, 5760011, 6034070, 6090601, 6121029, 6124453, 6204388, 6211412, 6262094 e 6291684.

Exemplos adicionais de compostos de epotilona que podem ser substituídos na posição 3 por um substituinte ciano incluem

aqueles presentes nas Publicações Internacionais de patentes de invenção n. ,os WO 00/43320, WO 00/01701, WO 00/01702, WO 00/23452, WO 00/26349, WO 00/31247, WO 00/37473, WO 00/39276, WO 00/47584, WO 00/49019, WO 00/49021, WO 00/50423, WO 00/57874, WO 00/63225, WO 00/66589, WO 00/71521, WO 00/71556, WO 01/07439, WO 01/09113, WO 01/27308, WO 96/09312, WO 92/19247, WO 93/10121, WO 94/21657, WO 95/21657, WO 96/26182, WO 97/19086, WO 97/38009, WO 98/02460, WO 98/03662, WO 98/08505, WO 98/08849, WO 98/22461, WO 98/24427, WO 98/25929, WO 98/38192, WO 98/47891, WO 98/54966, WO 99/01124, WO 99/02514, WO 99/03848, WO 99/03849, WO 99/07692, WO 99/12906, WO 99/16416, WO 99/27890, WO 99/43653, WO 99/44619, WO 99/54318, WO 99/54319, WO - 12- 99/54330, WO 99/58534, WO 99/61599, WO 99/65884, WO 99/65913, WO 99/66028, WO 99/67252 e WO 99/67253.

Por outras palavras, a invenção engloba compostos de epotilona activos e estáveis substituídos em 3-ciano. Numa variante, os compostos activos incluem aqueles que demonstram possuir uma útil actividade de estabilização dos microtúbulos. Os compostos estáveis incluem aqueles que não são rapidamente degradados pela exposição aos ácidos do estômago. São proporcionados infra exemplos de compostos de 3-ciano epotilona e da sua preparação.

Numa variante, a presente invenção proporciona compostos 3-ciano com a fórmula geral:

I em que: Q é seleccionado entre um grupo constituído por - 13-

M é 0, NRg, CR10R11; X é O ou NH;

Ri, R2, R3, R4 e R5 são, de forma independente, seleccionados entre um grupo constituído por hidrogénio ou alquilo de cadeia curta; Rç é seleccionado entre o grupo constituído por arilo, arilo substituído e heterociclo; R7 e Re são seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído e ciano;

Rg é seleccionado entre o grupo constituído por hidrogénio, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, -C(=0)Ri2, -C(=0)0Ri3, S(02)Ri4, -C (=0) NR15R16, -S(02)N R17R18 e -NRigR20;

Rio e Rn são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, halogéneo, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, -C (=0) R2i, -C(=0)0R22, -C(=0)NHR3 e -NR24R25; e - 14-

Rl2, R13, R-14 , Rl5r Rl6 r Rl7, Rl8f Rl9, R20, 1^21; ^22f R23, ^24 e R25 são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído e heterociclo, sendo que R13 e R14 não podem ser hidrogénio;

Ris e Ri6, Ri7 e Ris, R19 e R20, R24 e R25 podem, cada um deles, juntar-se para formar um anel heterocíclico; e isómeros, clatratos, sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos do mesmo.

As seguintes são definições dos vários termos usados na descrição da presente invenção. Estas definições aplicam-se aos termos usados ao longo desta especificação, excepto se limitado em contrário em casos específicos, quer individualmente, quer inseridos num grupo mais abrangente. O termo "alquilo" refere-se a grupos hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada, com 1 a 20 átomos de carbono, preferivelmente entre 1 a 7 átomos de carbono. A expressão "alquilo de cadeia curta" refere-se a grupos alquilo opcionalmente substituídos, com 1 a 4 átomos de carbono. O termo "alquilo substituído" refere-se a um grupo alquilo substituído por um ou 4 ou mais substituintes, como sendo - 15- halo, trifluorometil, trifluorometoxi, hidroxilo, alcoxi, cicloalcoxi, heterociclóxi, oxo, alcanoílo, arilo, arilóxi, aralquilo, alcanoilóxi, amino, alquilamino, arilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, amino dissubstituído no qual os dois substituintes no grupo amino são seleccionados entre alquilo, aralquilo, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino substituído, arilamino substituído, aralcanoilamino substituído, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonil, arilsulfonil, aralquilsulfonil, sulfonamido (por exemplo, SO2NH2) , sulfonamido substituído, nitro, ciano, carboxi, carbamilo (por exemplo, CONH2) , carbamilo substituído (por exemplo, alquilo CONH, arilo CONH, aralquilo CONH ou casos em que existem dois substituintes no azoto seleccionados entre alquilo, arilo ou aralquilo), alcoxicarbonilo, arilo, arilo substituído, guanidino e heterocíclicos como indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirrolidilo, piridilo, pirimidilo e semelhantes. Nos casos em que, conforme supra referido, os próprios substituintes são substituídos, sendo que esses substituintes são seleccionados entre o grupo constituído por halogéneo, alquilo, alcoxi, arilo e aralquilo. As definições - 16- apresentadas para alquilo e alquilo substituído aplicam-se, também, à porção alquilo dos grupos alcoxi. 0 termo "alquenilo" refere-se a grupos de hidrocarbonetos alifáticos insaturados opcionalmente substituídos com um a nove carbonos e um ou mais ligações duplas. Os substituintes podem incluir um ou mais grupos substituintes conforme supra descrito para o alquilo substituído. 0 termo "halogéneo" ou "halo" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo. 0 termo "arilo" refere-se a grupos de hidrocarbonetos aromáticos mono- ou bicíclicos com 6 a 12 átomos de carbono no anel, por exemplo, grupos fenil, naftil, bifenil e difenil, sendo que cada um deles pode ser substituído. 0 termo "aralquilo" refere-se a um grupo arilo ligado a uma entidade maior por um grupo alquilo, como benzilo. 0 termo "arilo substituído" refere-se a um grupo arilo substituído por, por exemplo, um a quatro substituintes, como alquilo, alquilo substituído, halo, trifluorometil, trifluorometoxi, hidroxilo, alcoxi, cicloalquilóxi, heterociclóxi, alcanoílo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, alcanoílamino, tiol, alquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, ureído, nitro, ciano, - 17- carboxi, carboxialquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido, ariloxi e semelhantes. 0 substituinte também pode ser substituído por um ou mais membros seleccionados entre o grupo constituído por halo, hidroxilo, alquilo, alcoxi, arilo, alquilo substituído, arilo substituído e aralquilo. 0 termo "cicloalquilo" refere-se a sistemas de anéis de hidrocarbonetos cíclicos saturados opcionalmente substituídos, preferivelmente contendo 1 a 3 anéis e 3 a 7 carbonos por anel, que podem ser fundidos com um anel carbocíclico insaturado C3-C7. Grupos exemplificativos incluem o ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclodecilo e adamantilo. Substituintes exemplificativos incluem um ou mais grupos alquilo conforme supra descritos, ou um ou mais dos grupos supra descritos como substituintes pelos grupos alquilo.

Os termos "heterocíclico" e "heterociclo" referem-se a um grupo cíclico aromático ou não aromático, insaturado, parcialmente saturado ou totalmente saturado, opcionalmente substituído, por exemplo, que é um sistema de anéis monocíclico de 4 a 7 membros, um bicíclico de 7 a 11 membros, ou um tricíclico de 10 a 15 membros, que possui -18- pelo menos um heteroátomo em pelo menos um anel que contenha um átomo de carbono. Cada anel do grupo heterocíclico contendo um heteroátomo pode ter 1, 2 ou 3 heteroátomos seleccionados entre átomos de azoto, átomos de oxigénio e átomos de enxofre, em que os heteroátomos de azoto e enxofre podem também ser oxidados e os heteroátomos de azoto podem opcionalmente ser quaternizados. 0 grupo heterocíclico pode ser anexado a uma molécula de maiores dimensões em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono. Grupos monocíclicos e heterocíclicos exemplificativos incluem o pirrolidinilo, pirrolilo, indolilo, pirazolilo, oxetanilo, pirazolinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, isoxazolinilo, tiazolilo, tiadiazolilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, isotiazolidinilo, furilo, tetrahidrofurilo, tienilo, oxadiazolilo, piperidinilo, piperazinilo, 2- oxopiperazinilo, 2-oxo-piperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, 2-oxazepinilo, azepinilo, 4-piperidonilo, piridilo, N-oxo-piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, tetrahidrotiopiranil sulfona, morfolinilo, tiomorfolinilo, sulfóxido tiomorfolinilo, tiomorfolinil sulfona, 1,3- dioxolano e tetrahidro-1, 1-dioxotienilo, dioxanilo, - 19- isotiazolidinilo, tietanilo, tiiranilo, triazinilo e triazolilo, e semelhantes.

Grupos bicíclicos e heterocíclicos exemplificativos incluem o benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzotienilo, quinuclidinilo, quinolinilo, quinolinil-N-óxido, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, cromonilo, coumarinilo, cinolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinil (tal como furo[2,3]piridinilo, furo[3,1-b]piridinil] ou furo[2,3-b]piridinilo), dihidroisoindolilo, dihidroquinazolinilo (tal como 3,4-dihidro-4-oxo-quinazolinilo), benzisotiazolilo, benzisoxazolilo, benzodiazinil,benzofurazanilo, benzotiopiranilo, benzotriazolilo, benzopirazolilo, dihidrobenzofurilo, dihidrobenzotienilo, dihidrobenzotiopiranilo, dihidrobenzotiopiranil sulfona, dihidrobenzopiranilo, indolinilo, isocromanilo, isoindolinilo, naftiridinilo, ftalazinilo, piperonilo, purinilo, piridopiridilo, quinazolinilo, tetrahidroquinolinilo, tienofurilo, tienopiridilo, tienotienilo e semelhantes.

Substituintes exemplificativos dos termos "heterociclico" e "heterociclo" incluem um ou mais grupos substituintes -20- conforme supra descrito para o alquilo substituído ou arilo substituído, e heterocíclicos mais pequenos, tais como epóxidos, aziridinas e semelhantes. O termo "alcanoílo" refere-se a -C (0)-alquilo. 0 termo "alcanoílo substituído" refere-se a alquilo -C (O)-substituído. 0 termo "arilo" refere-se a -C (0)-arilo. 0 termo "arilo substituído" refere-se a arilo -C(0)-substituído. 0 termo "trialquilsililo" refere-se a -Si(alquilo)3. 0 termo "arilo dialquilsilil" refere-se a -Si(alquilo)2(arilo). 0 termo "diarilo alquilsililo" refere-se a Si(arilo)2(alquilo). 0 termo "heteroátomos" deverão incluir oxigénio, enxofre e azoto.

Os compostos da invenção, em especial de fórmula I, formam sais com uma variedade de ácidos orgânicos e inorgânicos. Tais ácidos incluem aqueles formados com cloreto de hidrogénio, brometo de hidrogénio, ácido metanossulfónico, ácido hidroxietanossulfónico, ácido sulfúrico, ácido -21 - acético, ácido trifluoroacético, ácido maleico, ácido benzenossulfónico, ácido toluenossulfónico e vários outros (por exemplo, nitratos, fosfatos, boratos, tartratos, citratos, succinatos, benzoatos, ascorbatos, salicilatos e semelhantes). Tais sais são formados através da reacção de um composto representado pela fórmula I numa dose equivalente à do ácido, num meio no qual o sal precipita ou num meio aquoso, seguido de evaporação.

Os compostos representados pela fórmula I também podem formar sais com metais alcalinos, como o sódio, potássio e litio, com metais alcalino-terrosos como o cálcio e o magnésio, com bases orgânicas como a diciclohexilamina e tributilamina, com piridina e aminoácidos como a arginina, lisina e semelhantes. Tais sais podem ser obtidos, por exemplo, através da troca de protões de ácido carboxilico, se presente num composto representado pela fórmula I, com o desejado ião num meio no qual o sal precipita ou num meio aquoso seguido de evaporação. Outros sais podem ser formados através de métodos reconhecidos pelos conhecedores da arte.

Além disso, podem ser formados anfóteros ("sais internos") e são incluídos no âmbito do termo "sais" conforme usado. -22-

Solvatos dos compostos representados pela fórmula I também são contemplados.

Os compostos da invenção podem existir sob a forma de múltiplos isómeros ópticos, geométricos e estereoisómeros. Enquanto que os compostos apresentados são descritos para uma orientação óptica, também estão incluídos no âmbito da presente invenção, todos os isómeros e misturas dos mesmos. Os compostos preferidos representados pela fórmula I

.OH

I são aqueles em que: Q é seleccionado entre um grupo constituído por

M é 0, NR9, CR10R11; -23- X é 0 ou NH;

Ri, R2, R3, R4 e R5 são, de forma independente, seleccionados entre um grupo constituído por hidrogénio ou alquilo de cadeia curta; Rç é um grupo heterocíclico conforme definido, incluindo, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação:

pirrolidinilo, pirrolilo, indolilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, oxazolidinilo, tiazolilo, furilo, tienilo, piperidinilo, piperazinilo, azepinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, morfolinilo, tietanilo, tiranilo, triazinilo e triazolilo; R7 e R8 são seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído e ciano; R9 é seleccionado entre o grupo constituído por hidrogénio, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, Ri2-C=0, Ri30C=0, R14SO2, R15R16NC-O, R17R18NSO2 e NR19R20; -24-

Rio e Rn são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, halogéneo, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, R2iC=0, R220C=0, R23NHC=0 e NR24R25; e R12, Rl3, Rl4, Rl51 Rl61 Rl7 i Rl8f Rl9i R20; R21, R22, R23, R24 e R25 são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído e heterociclo, sendo que R13 e R14 não podem ser hidrogénio;

Ris e Ri6, R17 e Rn, Ri9 e R2o, R24 e R25 podem, cada um deles, juntar-se para formar um anel heterocíclico; e isómeros, clatratos, sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos do mesmo.

Composições e formulações farmacêuticas A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas que incluem pelo menos um dos compostos da invenção, tais como um composto representado pela fórmula I, capaz de tratar o cancro ou outras doenças proliferativas, numa quantidade eficaz, e um veículo farmaceuticamente aceitável. As composições da presente -25- invenção podem conter outros agentes, conforme infra descrito, e podem ser formuladas, por exemplo, ao empregar veículos sólidos ou líquidos convencionais, bem como aditivos farmacêuticos de um tipo adequado ao modo de administração desejado, tais como excipientes, aglutinantes, conservantes, estabilizadores, aromas e semelhantes, de acordo com as técnicas conhecidas na área farmacêutica ou amplamente aceites na prática farmacêutica. Os compostos representados pela fórmula I também podem ser formuladas em composições, como soluções esterilizadas ou suspensões para administração parentérica. Cerca de 0,1 a 500 mg de um composto representado pela fórmula I pode ser combinado com um veículo, excipiente, aglutinante, conservante, estabilizador, etc., numa forma de dosagem unitária amplamente aceite na prática farmacêutica. A quantidade de substância activa nestas composições ou preparados é, preferivelmente, uma que permita a obtenção de uma dosagem adequada no intervalo indicado.

Numa determinada variante, o termo "farmaceuticamente aceitável" significa que foi previamente aprovado por uma agência reguladora do governo federal ou estadual, ou se encontra referido na Farmacopeia dos EUA ou outra farmacopeia amplamente reconhecida para uso em animais, e -26- em particular, em humanos. A expressão "sal/sais farmaceuticamente aceitável(eis)", conforme usada, inclui, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, sais de grupos acidicos ou básicos que podem estar presentes em compostos usados nas presentes utilizações e composições. Composições exemplificativas para administração oral incluem suspensões que podem conter, por exemplo, celulose microcristalina como excipiente, ácido alginico ou alginato de sódio como agente de suspensão, metilcelulose como optimizador de viscosidade, adoçantes como a frutose, aspartame ou sacarina, aromatizantes como a hortelã-pimenta e o óleo de gaultéria, agentes corantes e agentes conservantes, para proporcionar um preparado farmaceuticamente apetecível. Os comprimidos de libertação imediata podem conter, por exemplo, um ou mais entre celulose microcristalina, fosfato dicálcio, amido, estearato de magnésio, lactose e outros excipientes reconhecidos, aglutinantes, agentes de extensão, desintegrantes, diluentes e lubrificantes. Comprimidos moldados, comprimidos prensados ou comprimidos liofilizados são exemplos de formas que podem ser usados. Composições exemplificativas incluem aquelas que formulam o(s) presente (s) composto (s) com diluentes de diluição rápida -27- como o manitol, lactose, sacarose e ciclodextrinas. Também incluídas em tais formulações podem também estar excipientes de elevado peso molecular, como as celuloses microcristalinas, polietilenoglicóis (PEG) e semelhantes. Tais formulações podem também incluir um excipiente para auxiliar a adesão à mucosa, tal como a hidroxipropilcelulose (HPC), hidroxipropilmetilcelulose (HPMC) , carboximetilcelulose de sódio (SCMC), copolímero de anidrido maleico (por exemplo Gantrez®, disponível na Aldrich®), e agentes para controlo da libertação, como um copolímero poliacrílico, carbopol e semelhantes. Lubrificantes, deslizantes, aromas, corantes e estabilizadores conhecidos também podem ser adicionados para agilizar o fabrico e uso. Além disso, nos casos em que se trata de comprimidos ou pílulas, as composições podem ser revestidas para adiar a desintegração e absorção no tracto gastrointestinal, proporcionando, assim, uma acção contínua ao longo de um período de tempo prolongado. Preferivelmente, as composições orais são co-administradas com um antiácido para auxiliar a neutralizar os fluidos gastrointestinais para impedir a decomposição do(s) composto(s) activo(s). Membranas selectivamente permeáveis que envolvem um composto osmoticamente activo também são -28- adequadas para compostos ou composições farmacêuticas destinados a uma administração oral. Nesta últimas plataformas, o fluido do ambiente que envolve a cápsula é absorvido pelo composto, que se distende para deslocar o agente ou composição agente através de uma abertura. Estas plataformas podem proporcionar um perfil de libertação essencialmente de ordem zero, em oposição aos perfis com picos das formulações de libertação imediata.

Um material retardante como o monoestearato de glicerol ou estearato de glicerol também pode ser usado.

Composições exemplificativas para administração nasal por aerosol ou inalação incluem as soluções em soro fisiológico que podem, por exemplo, conter álcool benzilico ou outros conservantes adequados, promotores de absorção para optimizar a biodisponibilidade e/ou outros agentes solubilizantes ou dispersantes como aqueles conhecidos na arte.

Composições exemplificativas para administração parentérica incluem soluções ou suspensões injectáveis que podem conter, por exemplo, diluentes ou solventes não tóxicos e parentericamente aceitáveis, incluindo tensioactivos como óleo de ricino polioxietilado, Cremphor EL®, polisorbato 80, manitol, 1,3-butanodiol, polietilenoglicol, etanol, -29- água, solução de Ringer, solução de Ringer lactado, soluções de dextrose, soluções salinas como a solução isotónica de cloreto de sódio, ou outros agentes molhantes ou de suspensão de dispersão adequada, incluindo mono- ou diglicerideos sintéticos e ácidos gordos, incluindo ácido oleico e semelhantes. Numa variante, imediatamente antes do seu uso, um composto da presente invenção é reconstituído em água esterilizada para injecção, USP, 5% dextrose em água (D5W) ou em 0,9% de cloreto de sódio para injecção, USP.

Composições exemplificativas para administração rectal incluem supositórios que podem conter, por exemplo, um excipiente não irritante adequado, como a manteiga de cacau, ésteres de glicerídeos sintéticos ou polietilenoglicóis, que, a uma temperatura comum, são sólidos mas se liquidificam e/ou dissolvem na cavidade rectal para libertar o fármaco.

Composições exemplificativas para administração tópica incluem um veículo tópico como Plastibase® (óleo mineral gelificado com polietileno disponível pela Bristol-Myers Squibb Company). Por exemplo, os compostos da invenção podem ser administrados topicamente para tratar placas -30- associadas à psoríase e, como tal, podem ser formulados sob a forma de creme ou unguento.

Quando administrado a um paciente, os compostos apresentam-se preferivelmente de forma isolada. Por "isolada", entende-se que, antes da administração, o composto é separado de outros componentes de uma mistura orgânica sintética de reacção química ou de uma fonte de produtos naturais. Preferivelmente, os compostos são isolados através de técnicas convencionais, por exemplo, extracção seguida de cromatografia, recristalização ou outra técnica convencional.

Usos e utilidade dos compostos A invenção proporciona o uso dos compostos da invenção para a produção de um medicamento destinado ao tratamento e/ou prevenção de cancros, através da administração a um paciente de uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz dos compostos da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" significa uma quantidade de um composto da invenção que irá despoletar -31- uma resposta biológica ou médica desejada pelo veterinário ou médico que está a tratar o paciente. 0 termo "quantidade profilaticamente eficaz" significa uma quantidade de um composto da presente invenção que irá prevenir ou inibir ou mitigar a doença de um paciente com uma condição médica que o veterinário ou médico está a tentar prevenir, inibir ou mitigar. Sem serem limitados por qualquer teoria, os compostos da invenção, e em particular aqueles de fórmula I, são amplamente aceites como agentes estabilizadores dos microtúbulos. Os compostos da invenção são úteis no tratamento de uma série de cancros e outras doenças proliferativas que incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, as seguintes: - carcinoma, incluindo o da bexiga, mama, cólon, rins, figado, pulmão, ovário, pâncreas, estômago, colo do útero, tiróide e pele, incluindo o carcinoma de células escamosas; - tumores hematopoiéticos de tipo linfóide, linfoma de células T, linfoma de Hodgkins, linfoma não-Hodgkins, tricoleucemia e linfoma de Burkitt; -32- - tumores hematopoiéticos de tipo mielóide, incluindo leucemias mielógenas agudas e crónicas e leucemia promielocítica; tumores de origem mesenquimatosa, incluindo fibrossarcoma, osteosarcoma e rabdomiosarcoma; outros tumores, incluindo melanoma, seminoma, xeroderma pigmentosa, teratocarcinoma, ceratoacantoma, neuroblastoma, cancro folicular da tiróide e glioma; - tumores dos sistemas nervosos central e periférico, incluindo astrocitoma, neuroblastoma, glioma e schwanomas.

Os compostos da presente invenção também são úteis no tratamento ou prevenção dos cancros do cérebro, mama, sistema nervoso central, estômago, bexiga, próstata, cólon, recto, fígado, pulmão (de pequenas células e não pequenas células), pâncreas, esófago, boca, faringe, rins, ossos, hipófise, ovários, do útero, da pele, cabeça e pescoço, colo do útero e laringe.

Os compostos representados pela fórmula I também inibem a angiogénese, afectando, por isso, o crescimento de tumores e proporcionando um tratamento dos tumores e doenças associados aos tumores. Tais propriedades antiangiogénicas -33- dos compostos representados pela fórmula I podem também ser úteis no tratamento de outras condições que respondem a agentes antiangiogénicos incluindo, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, certas formas de cegueira associadas à vascularização da retina, artrite, em especial a artrite inflamatória, esclerose múltipla, retinose e psoriase.

Os compostos da invenção, conforme representados pela fórmula I, induzirão ou inibirão a apóptose, um processo fisiológico de morte celular crucial para o desenvolvimento normal e a homeostase. As alterações das vias apópticas contribuem para a patogénese de uma série de doenças humanas. Os compostos representados pela fórmula I, enquanto moduladores da apóptose, serão úteis no tratamento de uma série de doenças humanas com anomalias na apóptose incluindo, sem que tal constitua qualquer tipo de limitações, o cancro e lesões pré-cancerosas, doenças relacionadas com a resposta imunológica, infecções virais, doenças degenerativas do sistema músculo-esquelético e doença renal.

Sem pretensões de estar associado a qualquer mecanismo ou morfologia, os compostos da invenção também podem ser usados para tratar condições que não o cancro ou outras -34- doenças proliferativas. Tais condições incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, infecções virais como o virus do herpes, vírus da varíola, vírus Epstein-Barr, vírus Sindbis e adenovírus, doenças autoimunes como o lúpus eritematoso sistémico, glomerulonefrite imunomediada, artrite reumatóide, psoríase, doenças inflamatórias dos intestinos e diabetes mellitus autoimune, doenças neurodegenerativas como a doença de Alzheimer e demência associada à SIDA, doença de Parkinson, esclerose amiotrófica lateral, retinite pigmentosa, atrofia muscular espinal e degeneração cerebelar, SIDA, síndromes mielodisplásicos, anemia aplástica, lesões isquémicas associadas a enfartes do miocárdio, lesões provocadas por acidentes vasculares cerebrais e reperfusão, restenose, arritmia, ateroesclerose, doenças hepáticas induzidas por toxinas ou álcool, doenças hematológicas como a anemia crónica e a anemia aplástica, doenças degenerativas do sistema músculo-esquelético como a osteoporose e a artrite, rinosinusite sensível à aspirina, fibrose cística, esclerose múltipla, doenças renais e dor oncológica. A presente invenção proporciona, assim, o uso dos compostos da invenção na produção de um medicamento destinado ao tratamento de um animal, preferivelmente mamíferos e em -35- especial seres humanos, que necessitem de tratamento para qualquer uma das condições supra mencionadas, em especial para o cancro ou outras doenças proliferativas, que inclui o passo da administração de uma quantidade de pelo menos um composto representado pela fórmula I a um indivíduo que dela necessite. Outros agentes terapêuticos como aqueles infra descritos podem ser usados com os compostos da invenção. No uso da presente invenção, tais outros agentes terapêuticos podem ser administrados antes de, em simultâneo ou após a administração dos compostos da presente invenção.

Os compostos da presente invenção podem ser administrados a pacientes sujeitos ou não a tratamento de quimioterapia. Os compostos da presente invenção também podem ser administrados a pacientes anteriormente sujeitos a tratamento de quimioterapia, bem como àqueles que nunca foram sujeitos a tais tratamentos. Os compostos da presente invenção podem ser administrados a pacientes sujeitos ou não a tratamento de radioterapia. Os compostos da presente invenção também podem ser administrados a pacientes anteriormente sujeitos a tratamento de radioterapia, bem como àqueles que nunca foram sujeitos a tais tratamentos. -36- A quantidade eficaz de um composto da presente invenção pode ser determinada através de metodologias conhecidas e inclui quantidades de dosagens exemplificativas a um ser humano entre cerca de 0,05 e 200 mg/kg/dia, que pode ser administrado numa dose única ou sob a forma de doses individuais divididas, por exemplo, até quatro vezes por dia. Preferivelmente, os compostos são administrados por via oral, intravenosa ou ambas, numa dosagem inferior a 100 mg/kg/dia, numa dose única ou em 2 a 4 doses divididas. Será evidente que o nivel de dosagem especifica e frequência de dosagem para qualquer indivíduo poderá variar e dependerá de vários factores reconhecidos pelos conhecedores da arte, incluindo a actividade do composto utilizado, a estabilidade metabólica e extensão da acção desse mesmo composto, a espécie, idade, peso corporal, estado de saúde geral, sexo e dieta do indivíduo, o modo e horário da administração, taxa de excreção, combinação farmacológica e severidade da doença. Os indivíduos preferidos para tratamento incluem animais, mais preferivelmente mamíferos, e em especial, os seres humanos. Tipicamente, os compostos da presente invenção são administrados até o paciente apresentar uma resposta, por exemplo, uma redução das dimensões do tumor, ou até se -37- observar toxicidade limitativa da dosagem. Um conhecedor da arte saberá rapidamente quando um paciente apresentar uma resposta ou quando a se verificar uma dose no limite de toxicidade. As toxicidades limitativas de dosagem mais comuns associadas às fórmulas I e II incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, a fadiga, artralgia/mialgia, anorexia, hipersensibilidade, neutropenia, trombocitopenia e neurotoxicidade.

Numa variante, os compostos da presente invenção são administrados por infusão intravenosa por um período de cerca de 10 minutos a cerca de 3 horas, preferivelmente cerca de 30 minutos a cerca de 2 horas, mais preferivelmente cerca de 45 minutos a cerca de 90 minutos, e idealmente em cerca de 1 hora. Em particular, os usos da invenção incluem protocolos de dosagem como uma vez por dia durante 2 a 10 dias, preferivelmente entre 3 a 9 dias, mais preferivelmente entre 4 a 8 dias e idealmente por 5 dias. Numa variante, ocorre um período de 3 dias a 5 semanas, preferivelmente entre 4 dias a 4 semanas, mais preferivelmente entre 5 dias a 3 semanas, e idealmente entre 1 semana a 2 semanas, entre ciclos em que não ocorre tratamento. Os compostos da presente invenção podem ser administrados por via oral, intravenosa ou ambas, uma vez -38- por dia durante 3 dias, com um periodo de preferivelmente 1 semana a 3 semanas em ciclos intermédios em que não ocorre tratamento. Numa outra variante, os compostos da presente invenção podem ser administrados por via oral, intravenosa ou ambas, uma vez por dia, durante 5 dias, com um periodo de preferivelmente 1 semana a 3 semanas em ciclos em que não ocorre tratamento.

Numa variante preferida, o ciclo de tratamento para administração dos compostos da presente invenção é de uma vez por dia, durante 5 dias consecutivos, e o periodo entre ciclos de tratamento é de entre 2 a 10 dias, preferivelmente de uma semana.

Os compostos da presente invenção também podem ser administrados por via oral, intravenosa ou ambas, a cada 1 a 10 semanas, preferivelmente entre 2 a 8 semanas, mais preferivelmente a cada 3 a 6 semanas, e ainda mais preferivelmente a cada 3 semanas. Numa variante, os compostos da presente invenção são administrados uma vez por semana. Numa outra variante, os compostos da presente invenção são administrados uma vez a cada 3 semanas.

Os compostos da invenção podem ser administrados isoladamente ou em combinação com outros agentes anticancro e agentes citotóxicos e terapias úteis no tratamento do -39- cancro ou outras doenças proliferativas. Tais agentes podem ser administrados em simultâneo ou sequencialmente com os compostos representados pela fórmula I. Especialmente úteis são as combinações de fármacos anticancro e citotóxicos em que o segundo fármaco seleccionado actua de forma diferente ou numa fase diferente do ciclo celular, por exemplo, fase S, comparativamente aos compostos de fórmula I, que exercem os seus efeitos na fase G2-M. Exemplos de classes de agentes anticancro e citotóxicos incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, os agentes alquilantes como a iperite de azoto, alquilsulfonatos, nitrosoureias, etileniminas e triazenos, antimetabolitos como os antagonistas do folato, análogos de purina e análogos de pirimidina, antibióticos como as antraciclinas, bleomicinas, mitomicina, dactinomicina, bleomicina A2, bleomicina B2, peplomicina e plicamicina, enzimas como L-asparaginase, inibidores da transferase da proteínas famesil, agentes hormonais como os glucocorticóides, estrogénios/antiestrogénios, androgénios/antiandrogénios, progestinas e antagonistas de hormonas libertadoras de hormona luteinizante, acetato octreótido, agentes disruptores dos microtúbulos tais como as ecteinascidinas ou seus análogos e derivados, agentes estabilizadores dos -40- microtúbulos como o paclitaxel (Taxol®), docetaxel (Taxotere®) e epotilonas A-F ou seus análogos e derivados, produtos vegetais como os alcaloides da vinca, epipodofilotoxinas, taxanos e inibidores da topoisomerase (por exemplo, irinotecano), inibidores da prenil-transferase e agentes vários como a hidroxiureia, procarbazina, mitotano, hexametilmelamina, complexos de coordenação de platina como a cisplatina e a carboplatina e outros agentes usados como agentes anticancro e citotóxicos, como os modificadores da resposta biológica, factores de crescimento, moduladores da resposta imunológica e anticorpos monoclonais. Os compostos da invenção também podem ser usados em conjugação com a quimio ou radioterapia.

Exemplos representativos destas classes de agentes anticancro/citotóxicos incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, a cisplatina, carboplatina, carminomicina, cloridrato de mecloretamina, pentametilmelamina, tiotepa, teniposido, ciclofosfamida, clorambucil, dimetoxi-hipocrelina A, melfalan, ifosfamida, trofosfamida, treosulfano, podofilotoxina ou derivados da podofilotoxina, fosfato de etoposido, teniposido, etoposido, leurosidina, leurosina, vindesina, 9- -41 - aminocamptotecina, camptoirinotecano, crisnatol, clorambucil, megestrol, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743, busulfano, carmustina (BCNU), lomustina (CCNU), lovastatina, ião l-metil-4-fenilpiridinio, semustina, estaurosporina, estreptozocina, tiotepa, ftalocianina, dacarbazina, aminopterina, metotrexato, trimetrexato, tioguanina, mercaptopurina, fludarabina, pentastatina, cladribina, citarabina (ara C), porfiromicina, 5-fluorouracil, 6-mercaptopurina, cloridrato de doxorrubicina, leucovorina, ácido micofenólico, daunorrubicina , deferoxamina , floxuridina, doxifluridina, raltitrexed, idarrubicina, epirrubicina, pirarrubicina, zorrubicina, mitoxantrona, sulfato de bleomicina, mitomicina C, actinomicina D, safracinas, saframicinas, quinocarcinas, discodermolides, vincristina, , vimblastina, tartrato de vinorelbina, verteporfina, paclitaxel, tamoxifen, raloxifeno, tiazofurano, tioguanina, ribavirina, EICAR, estramustina, fosfato sódico de estramustina, flutamida, bicalutamida, buserelina, leuprolida, pteridinas, diineses, levamisole, aflacon , interferão, interleucinas, aldesleucina, filgrastima, sargramostina, rituximab, BCG, tretinoina, cloridrato de irinotecano, betametosona, cloridrato de gencitabina, verapamil, VP-16, -42- altretamina, tapsigargina, topotecano e quaisguer análogos ou derivados dos mesmos.

Membros preferidos das classes de agentes anticancro/citotóxicos supra mencionados incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, o paclitaxel, cisplatina, carboplatina, cloridrato doxorrubicina, carminomicina, daunorrubicina, aminopterina, metotrexato, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743, porfiromicina, 5-fluorouacil, 6-mercaptopurina, gencitabina, citosina, arabinosida, podofilotoxina ou derivados da podofilotoxina tais como a etoposida, fosfato de etoposida ou teniposida, melfalan, vimblastina, vincristina, leurosidina, vindesina e leurosina.

Outros exemplos de agentes anticancro e de agentes citotóxicos incluem os seguintes: derivados de epotilona, conforme descrito na patente de invenção alemã n.°

4138042.8 e na Publicação Internacional PCT n.os WO 97/19086, WO 98/22461, WO 98/25929, WO 98/38192, WO 99/02224, wo 99/02514, WO 99/03848, WO 99/07692, WO 99/27890, WO 00/43320, WO 00/01701, WO 00/01702, WO 00/23452, wo 00/26349, WO 00/31247, WO 00/37473, WO 00/39276, wo 00/47584, WO 00/49019, WO 00/49020, WO 00/49021, wo 00/50423, WO 00/57874, WO 00/63224, WO -43-

00/63225, WO 00/66589, WO 00/71521, WO 00/71556, WO 01/07439, WO 01/09113, WO 01/27308, WO 96/09312, WO 92/19247, WO 93/10121, WO 94/21657, WO 95/02594, WO 96/26182, WO 97/38009, WO 98/02460, WO 98/03662, WO 98/08505, WO 98/08849, WO 98/24427, WO 98/47891, WO 98/54966, WO 99/01124, WO 99/03849, WO 99/07692, WO 99/12906, WO 99/16416, WO 99/43653, WO 99/44619, WO 99/54318, WO 99/54319, WO 99/54330, WO 99/58534, WO 99/61599, WO 99/65884, WO 99/65913, WO 99/66028, WO 99/67252, WO 99/67253 e WO 99/28324, inibidores da cinase dependentes de ciclina, conforme descritos na patente de invenção WO 99/24416, e inibidores da prenil-transferase, conforme descritos nas patentes de invenção n.os WO 97/30992 e WO 98/54966.

Os compostos representados pela fórmula I, bem como quaisquer combinações dos mesmos com os aqentes anticancro/citotóxicos supra mencionados, também podem ser formulados ou co-administrados com outros aqentes terapêuticos seleccionados pela sua particular utilidade no propiciar de determinadas terapias associadas às condições supra referidas. Por exemplo, os compostos da invenção podem ser formulados com agentes para prevenção das náuseas, hipersensibilidade e irritação gástrica, tais como -44- os antieméticos e anti-histamínicos Hi e H2. Os compostos da presente invenção também podem ser formulados com compostos antiangiogénese, com inibidores da topoisomerase e com formulações de anticorpos.

Os compostos da presente invenção também podem ser usados em combinação com antagonistas da angiogénese. Estes incluem inibidores do factor de crescimento epidérmico (EGF), cinases da família EGF (por exemplo, tirosina-cinase EGF), metaloproteínase da matriz (MMP's), receptor do factor de crescimento do endotélio vascular (VEGFR), receptor do factor de crescimento de fibroblastos (FGFR) e proteína 2 adaptadora da metionina (Met AP2). Os antagonistas da angiogénese preferidos também incluem anticorpos direccionados para os factores da angiogénese. Exemplos representativos destas classes de antagonistas da angiogénese incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, as indolinotionas, piridopirimidinas, quinazolinas, fenil-pirrolo-pirimidinas, trastuzumab, IMC-C225, AG 1571 (SU 5271), SU 5416, SU 6668, interferão alfa, interleucina-12, IM 862, EMD-121974, inibidor do influxo cálcio (CAI), neomicina, esqualamina, endostatina, SI-27, MMI-166, marimastat, BAY-129556, prinomastat (AG-3340), metastat (COL-3), CGS-27023A e BMS-275291. -45-

Os agentes supra mencionados, quando utilizados em combinação com os compostos representados pela fórmula I, podem ser usados na sua dosagem terapêutica usual, conforme definido, por exemplo, na obra Physician's Desk Reference (56.a ed., 2002) ou conforme determinado pelo especialista.

Vias de administração

Os compostos representados pela fórmula I podem ser administrados através de quaisquer meios adequados, por exemplo, por via oral (sob a forma de comprimidos, cápsulas, grânulos ou pós), sublingual, bucal, parentérica, sob a forma de soluções ou suspensões aquosas ou não aquosas, subcutânea, intravenosa, intramuscular ou por injecção intra-esternal ou técnicas de infusão, por via nasal como por exemplo através da inalação de spray, por via tópica sob a forma de creme ou unguento, ou por via rectal sob a forma de supositórios, em formulações de dosagem unitária contendo veículos não tóxicos e farmaceuticamente aceitáveis. Os presentes compostos podem, por exemplo, ser administrados numa forma adequada para libertação imediata ou libertação prolongada. A libertação imediata ou prolongada pode ser obtida através do uso de -46- composições farmacêuticas adequadas que incluam os presentes compostos ou, em especial no caso de libertação prolongada, através do uso de dispositivos como implantes subcutâneos ou bombas osmóticas. Os presentes compostos também podem ser administrados por via de lipossomas. Por exemplo, a substância activa pode ser utilizada numa composição como sendo comprimidos, cápsulas, soluções ou suspensões contendo cerca de 1 a cerca de 500 mg por dosagem unitária de um composto ou mistura de compostos representados pela fórmula I ou numa forma tópica contendo, por exemplo, 0,01 a 5% por peso do composto representado pela fórmula I, um a cinco tratamentos por dia. Variantes especificas incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, formas de dosagem unitárias de 1 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 100 mg, 250 mg e 500 mg.

Em variantes especificas, poderá ser desejável administrar um ou mais compostos ou composições farmacêuticas da invenção localmente, na área que necessite de tratamento. Tal poderá ser alcançável, por exemplo, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, através de infusão local durante cirurgia, aplicação tópica, por exemplo, em conjunção com uma compressa após cirurgia, por injecção, através de um cateter, através de um supositório ou através -47- de um implante, sendo que este implante deverá ser produzido em material poroso, não poroso ou gelatinoso, incluindo membranas, tais como membranas elásticas ou fibras. Numa variante, a administração pode ser realizada por injecção directa no local (ou anterior local) do cancro primário, metástase ou tumor sólido.

Determinação de actividade in vivo e in vitro

Também pode ser demonstrado que os compostos da presente invenção podem inibir o cancro primário, a proliferação de células tumorais em metástases, a proliferação de tumores sólidos, a transformação celular e tumorigenese in vitro e in vivo usando uma série de ensaios conhecidos, ou descritos (Borzilleri et al. , J. Amer. Chem. Soc., Vol. 122, 8890 (2000), Lee et al., An Epothilone Analog

Possessing Potent Activity Against Paclitaxel-Sensitive and -Resístant Human Book of Abstracts, 91st Annual Meeting of the American Association for Câncer Research, São Francisco, CA, 1-5 Abril, 2000; American Association for Câncer Research, Filadélfia, PA, 2000, LB-34; Lee et al., Clin. Câncer Res., Vol. 7, 1429 (2001)). Tal actividade pode ser demonstrada em ensaio in vitro através da -48- colocação em contacto dos compostos da presente invenção com células cancerígenas humanas. Em geral, as células cancerígenas humanas são expostas a concentrações variáveis dos compostos da presente invenção, seguindo-se a medição da sobrevivência celular comparativamente aos controlos (Borzilleri et al., Id.). Tais ensaios podem usar células de uma linha celular de cancro, ou células de um paciente. Muitos ensaios conhecidos na arte podem ser usados para avaliar tal taxa de sobrevivência e/ou crescimento; por exemplo, a proliferação celular pode ser analisada através da medição da incorporação de (3H)-timidina, por contagem celular directa, através da detecção de alterações de transcrição, tradução ou actividade de genes conhecidos, como os proto-oncogenes (por exemplo, fos, myc) ou marcadores do ciclo celular (Rb, cdc2, ciclina A, Dl, D2, D3, E, etc.) .

Também pode ser demonstrado que os compostos da presente invenção podem alterar a proliferação celular em células de cultura in vitro através de métodos conhecidos na arte. Exemplos específicos de modelos de culturas celulares de cancro primário do cérebro e metástases do cérebro incluem, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, aqueles -49- descritos nas patentes de invenção norte-americanas n.os 6194158, 6051376 e 6071696.

Também pode ser demonstrado que os compostos da presente invenção inibem a transformação celular (ou evolução para um fenótipo maligno) in vitro. Nesta variante, as células com um fenótipo celular transformado são colocadas em contacto com um ou mais compostos da presente invenção, e são analisados quanto a possíveis alterações nas características associadas a um fenótipo transformado (um conjunto de características in vitro associadas à capacidade tumorigénica in vivo), por exemplo, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, a formação de colónias em agar suave, uma morfologia celular mais arredondada, uma fixação mais solta ao substrato, uma inibição da perda de contacto, uma dependência da perda de ancoragem, libertação de proteases como o activador de plasminogénio, um maior transporte de açúcares, menores requisitos de soro ou expressão de antigénios fetais, etc. (veja-se Luria et al., 1978, General Virology, 3.a Ed., John Wiley & Sons, Nova Iorque, pp. 436-446) . A perda de invasão ou diminuição de adesão também poderão ser usadas para demonstrar os efeitos anticancro dos compostos da presente invenção. Por exemplo, um aspecto -50- crítico da formação de um cancro metastático consiste na capacidade de uma célula précancerosa ou cancerosa se separar do local primário da doença e fixar uma nova colónia de crescimento num local secundário. A capacidade da célula invadir locais periféricos é um reflexo de um potencial estado canceroso. A perda de carácter invasivo pode ser medida através de uma variedade de técnicas conhecidas, por exemplo, indução da adesão entre celular mediada pela E-caderina. Tal adesão mediada pela E-caderina pode resultar numa inversão fenotipica e perda de carácter invasivo (Hordijk et al., Science, Vol. 278, 1464-66 (1997) ) .

Também pode ser demonstrado que os compostos da presente invenção inibem a formação de tumores in vivo. Um vasto número de modelos animais de doenças hiperproliferativas, incluindo tumorigénese e difusão metastática, é conhecido na arte (veja-se o Quadro 317-1, capitulo 317, "Principies of Neoplasia”, in Harrison's Principies of Internai

Medicine, 13.a ed., Isselbacher et al., eds. McGraw-Hill, Nova Iorque, p. 1814, e Lovejoy et al., 1997, J. Pathol. 181:130-135. Em particular, a utilidade dos compostos da presente invenção pode ser demonstrada através dos seus efeitos em xenoenxertos de tumores humanos em ratos -51 - atímicos (Lee et al.r An Epothilone Analog Possessing Potent Activity Against Paclitaxel-Sensitive and -Resistant Human Book of Abstracts, 91st Annual Meeting of the American Association for Câncer Research, São Francisco, CA, 1-5 Abril, 2000; American Association for Câncer Research, Filadélfia, PA, 2000, LB-34; Lee et ai., Clin. Câncer Res., Vol. 7, 1429 (2001)). Além disso, foram descritos vários modelos de animais aplicáveis a vários tipos de cancro, incluindo, sem que tal constitua qualquer tipo de limitação, o modelo de rato deficiente de p-53 (Donehower, 1996, Semin. Câncer Biol. 7:269-278), o rato Min (Shoemaker et al., 1997, Biochem. Biophys. Acta, 1332:F25-F48), e respostas imunológicas a tumores em ratos (Frey, 1997, Methods, 12:173-188).

Por exemplo, um composto da presente invenção pode ser administrado a uma cobaia, preferivelmente a uma cobaia predisposta a desenvolver um tumor primário, sendo a cobaia subsequentemente examinada quanto à diminuição da incidência da formação de tumores comparativamente com os controlos que não receberam o composto. Em alternativa, um composto da presente invenção podem ser administrados às cobaias com tumores primários (por exemplo, animais nos quais os tumores foram induzidos pela introdução de células -52- malignas, neoplásicas ou transformadas, ou pela administração de um carcinogénio), examinando posteriormente os tumores das cobaias quanto à regressão dos tumores comparativamente aos animais de controlo que não receberam o composto. São descritos ensaios in vitro adicionais nos exemplos infra.

Ensaio de polimerização da tubulina in vitro

Preparou-se tubulina de cérebro de vitelo em ciclo duplo (2X) seguindo os procedimentos de Williams e Lee (Williams, R. C., Jr. e Lee, J. C., Methods in Enzymology, 85, 376-385 (1982)) e armazenou-se em azoto liquido antes da sua utilização. A quantificação da potência da polimerização da tubulina é conseguida através da modificação do procedimento descrito por Swindell, C. S., et al.r in J. Med. Chem., 34, 1176-1184 (1991). A modificação usou, em parte, resultados na expressão da potência da polimerização da tubulina enquanto concentração eficaz dos compostos.

De acordo com este método, diferentes concentrações de um composto sob estudo são misturadas com um tampão de polimerização (0,1 M de MES (ácido [2(4— morfolino)etanossulfónico)), 1 mM de EGTA (ácido 0,5 etilenoglicol-bis-(β-aminoetiléter)N,Ν'-tetracético), -53- mM de 0,5 mM de MgCl2, pH 6.6) e adicionou-se à tubulina preparada, também misturada com um tampão de polimerização correspondente, encontrando-se ambas as misturas a 37°C. A mistura resultante é, depois, colocada em poços de microcuvete de um espectrofotómetro ultravioleta (Beckman Instruments, Modelo DU 7400) . Geralmente, neste procedimento são usadas concentrações finais de proteína do microtúbulo de 1,0 mg/ml e concentrações de composto de 2,5, 5,0 e 10 μΜ.

Variações iniciais de alteração de OD medidas a cada dez segundos são calculadas pelo programa informático que acompanha o espectrofotómetro após os tempos iniciais e finais da região linear, que incluem pelo menos três pontos temporais, são medidos manualmente. Sob as condições prescritas, as variâncias lineares são geralmente <10’6, os declives variam entre 0,03 e 0,002 unidades de absorvência/minuto, e a absorvência máxima é de 0,15 unidades de absorvência. A concentração real (EC0,oi) é definida como sendo a concentração interpolada capaz de induzir um declive inicial de 0,01 OD/minuto e é calculada usando a fórmula EC o,oi — concentração/declive. -54-

Os valores EC0,oi são expressos sob a forma de média com desvio padrão obtido em três concentrações diferentes. Os valores EC0,oi para os compostos da invenção variam entre os 0,01 e os 1000 μΜ.

Ensaio de citotoxicidade in vitro A citotoxicidade é avaliada em células HCT-116 de carcinoma humano do cólon por ensaio MTS (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfenil)-2H-tetrazolium, sal) de Riss et al., Mol. Biol. Cell, 3 (Suppl.), 184 (1992) .

De acordo com este ensaio, as células HCT-116 de carcinoma humano do cólon são colocadas em placas (4000 células/poço) em placas de microtitulação de 96 poços. Vinte e quatro horas depois, o(s) composto(s) sob estudo é/são adicionado(s) e diluído(s) em série. As células são, depois, incubadas a 37 °C durante 72 horas. Após a incubação, o MTS (numa concentração final de 333 pg/ml) e um agente de acoplamento de electrões (25 μΜ de metossulfato de fenazina) são adicionados às células.

Uma enzima de dehidrogenase em células vivas reduz o MTS para uma forma que absorve a luz a 4 92 nM, podendo ser -55- quantifiçado por espectrofotometria. A absorvência é directamente proporcional ao número de células vivas, ou seja, quanto maior a absorvência, maior o número de células vivas presentes. Os resultados são expressos em valores de IC 50, que variam entre 0,01 e 1000 nM. O IC 50 consiste na concentração de fármaco necessária para inibir a proliferação celular (ou seja, uma absorvência de 450 nM) até 50% dos valores registados nas células de controlo por tratar.

Numa variante preferida, os valores IC 50 dos compostos da invenção situam-se num intervalo entre 0,01 e 1000 nM no ensaio de citotoxicidade, no entanto, os compostos com actividade fora deste intervalo são incluídos em determinadas variantes. Métodos gerais de preparação

Os compostos da invenção podem ser preparados a partir dos compostos de base designados e através dos métodos gerais descritos nos seguintes esquemas. Os compostos de base são materiais conhecidos e podem ser obtidos através de um processo de fermentação conforme descrito, por exemplo, em Hofle, G. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, n.° -56- 13/14, 1567-1569 (1996), através de semi-síntese de materiais de epotilona conforme descrito, por exemplo, por Vite, G., et al., na patente de invenção WO 99/02514 ou Borzilleri et al., J. Amer. Chem. Soc., Vol. 122, 8890 (2000), ou por síntese total de materiais de base conforme descrito, por exemplo, por Nicolaou, K. C., et al., Angew. Chem., Int. Ed., Vol. 37(15), 2014-2045 (1998) ou

Danishefsky, S. J. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, 2801 (1996). Todos os substituintes são conforme definidos nos esquemas que se seguem ou conforme supra definidos.

Os compostos representados pela fórmula I podem ser preparados conforme definido no Esquema 1. -57-

Esquema 1

Os compostos representados pela fórmula I podem ser preparados a partir de compostos representados pela fórmula II, conforme definido no Esquema I. A preparação de compostos representados pela fórmula II serão infra discutidos. 0 composto de fórmula IA pode ser preparado a -58- partir de um composto de fórmula II sob condições de reacção normais com ácido fórmico, trietilamina e anidrido acético em diclorometano. 0 composto representado pela fórmula IA é convertido num composto representado pela fórmula 1B através de uma reacção de eliminação com 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno em diclorometano conforme descrito, por exemplo, na patente de invenção n.° WO 97/19086. A remoção do grupo formato no composto 1B através de reacção com amónia em metanol rende um composto representado pela fórmula 1C. O composto representado pela fórmula 1D, em que Pi é um grupo protector de oxigénio, pode ser preparado a partir de um composto representado pela fórmula 1C através de métodos conhecidos, conforme descrito, por exemplo, por Corey, E. J. e Venkateswarlu, A., J. Am. Chem. Soc., (1972) 94, 6190. Os compostos representados pela fórmula 1E podem ser preparados a partir de um composto representado pela fórmula D através de tratamento com cianeto de potássio em dimetilformamida. A desprotecção de um composto de fórmula 1E, em que o grupo protector representado por Pi é, por exemplo, trietilsilil, pode ser realizado usando uma solução em 2:1:1 de ácido acético, tetrahidrofurano e água -59- ou fluoreto de hidrogénio-piridina, proporcionando um composto representado pela fórmula I.

Os compostos representados pela fórmula II, em que Q é oxiranil, ou seja, em que Q é representado pela primeira estrutura apresentada supra e M é 0, podem ser sintetizados através de um processo de fermentação, conforme descrito em Hofle, G., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, 35, n.° 13/14, 1567-1569, ou por síntese total conforme descrito em Nicolaou, K. C., et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1998, 37, 2014-2045.

Esquema 2

II (em que Q é oxiranil) -60-

0 Esquema 2 ilustra a síntese de compostos representados pela fórmula II em que Q é um grupo aziridinil, ou seja, em que Q é representado por:

e M é NR9. Um composto representado pela fórmula 2A, em que PI é um grupo protector de oxigénio, como trietilsilil, pode ser preparado a partir de um composto representado pela fórmula II através de métodos conhecidos, conforme -61- descrito por Corey, E. J. e Venkateswarlu, A., J. Am. Chem. Soc., (1972) 94, 6190. Os compostos representados pelas fórmulas 2B e 2C são preparadas através de tratamento com uma azida, como a azida de sódio, num solvente polar, como DMF. Um composto representado pela fórmula 2D pode ser preparada a partir de compostos representados pelas fórmulas 2B ou 2C, por reacção de Straudinger, que é descrita por Ittah, Y., et al., J. Org. Chem., (1978) 43, 4271. Um composto representado pela fórmula 2E, em que Rg não é H, pode ser preparada a partir de um composto representado pela fórmula 2D usando métodos conhecidos. Por exemplo, um composto representado pela fórmula 2E, em que Pi é um grupo trietilsilil, pode ser tratado para remover o grupo protector usando 10% de ácido trifluoroacético em diclorometano, para se obter o composto representado pela fórmula 2F, ou seja, um composto representado pela fórmula II, em que Q é um grupo aziridinil, ou seja, em que Q é representado pela estrutura supra apresentada e M é NR9 e Ri a R9 são conforme supra definidos.

Tal como apresentado no Esquema 3, os compostos representados pela fórmula II em que Q é um grupo ciclopropanil, ou seja em que Q é representado por: -62-

e M é CR10R11. Um composto representado pela fórmula 3A, pode ser preparado por reacção do material de base com cloreto de tungsténio (IV) e n-butilitio (veja-se, por exemplo, Sharpless, K. B., et al.r J. Am. Chem. Soc., (1072) 94, 6190). Um composto representado pela fórmula 3B pode ser preparada a partir de um composto representado pela fórmula 3A através de métodos conhecidos, veja-se, por exemplo, Corey, E. J. e Venkateswarlu, A., J. Am. Chem. Soc., (1972) 94, 6190. Um composto representado pela fórmula 3C pode ser preparado a partir de um composto representado pela fórmula 3B através da adição de um grupo carbeno de acordo com o método descrito por Denmark, S. E., et al.r J. Org. Chem., (1991), 56, 6974. A desprotecção de um composto representado pela fórmula 3C, por exemplo, quando Pi é um grupo trietilsilil, usando uma solução em 2:1:1 de ácido acético, tetrahidrofurano e água ou fluoreto de hidrogénio-piridina, proporciona um composto representado pela fórmula II (3D), em que Q é representado -63- -63- e Ri pela segunda estrutura apresentada supra, M é CRioRn até Re, R9 e Rio são conforme supra descrito.

Esquema 3

II (em que Q é oxiranil)

dos

Os procedimentos para a preparação de compostos

Esquemas 2 e 3 também podem ser consultados no pedido de -64- patente de invenção norte-americana n.° 09/280191 e na obra Regueiro-Ren et al., Org. Lett., (2001) 3, 2693.

Exemplos

Os seguintes exemplos não limitativos servem para ilustrar a prática da invenção.

Exemplo 1

ll-hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazol-4-il)-vinil]-5,9-dioxo-4,17-dioxa-biciclo [14,1.0]heptadecano-7-carbonitrilo

Passo 1: Sililação C-7

Adicionou-se 2,52 ml de N,N-diisopropiletilamina (1,871 g, 14,475 mmol, 15 eq.) e 118 mg de DMAP (N,N-dimetilaminopiridina) (0,965 mmol, 1 eq.) a uma solução -65- agitada de 2,3-dehidro epotilona A (459 mg, 0,965 mmol) preparada a partir de epotilona A de acordo com o procedimento A descrito na patente de invenção WO 97/19086 em 15 ml de diclorometano sob atmosfera de azoto. À mistura resultante adicionou-se 1,62 ml de cloreto de trietilsilil (1, 455 g, 9650 mmol, 10 eq.) e aqueceu-se a solução a 40°C durante 14 horas. Permitiu-se que a solução arrefecesse à temperatura ambiente e posteriormente verteu-se sobre uma solução saturada aquosa de 60 ml de bicarbonato de sódio. Extraiu-se a camada aquosa e lavou-se com três porções de 50 ml de diclorometano. Secaram-se as camadas orgânicas combinadas sob sulfato de sódio e concentraram-se sob pressão reduzida, formando um óleo ligeiramente castanho. Sujeitou-se este material bruto a cromatografia com sílica gel com eluição de 25% de acetato de etilo em hexanos, obtendo-se 546 mg de C7-trietilsiloxi-2,3-dehidro-epotilona A sob a forma de um óleo viscoso transparente (96%).

Passo 2: Adição de cianeto de potássio A uma solução agitada de C7-trietilsiloxi-2,3-dehidro-epotilona A (51 mg, 0,087 mmol) em 1,6 ml de dimetilformamida sob atmosfera de argão, adicionou-se 57 mg -66- de cianeto de potássio (0,873 mmol, 10 eq.). Agitou-se a mistura a 25"C durante 46 horas. Removeu-se o solvente sob vácuo. Colocou-se o material bruto numa coluna com silica gel e realizou-se a cromatografia, passo a passo, com 15% de acetonitrilo/tolueno, de seguida com 20% de acetato de etilo/hexanos, obtendo-se o produto resultante sob a forma de uma mistura de diastereómeros, que consiste de isómero A: 9,7 mg-18%, M+H= 617,4 e isómero B: 10,9 mg-20%, M+H=617,4 .

Passo 3: Desprotecgão

Colocaram-se os diastereómeros de C3-ciano-C7-trietilsiloxi-2,3-dehidroepotilona A em frascos separados (9,7 mg de isómero A e 10,9 mg de isómero B) . Agitou-se cada um dos frascos à temperatura ambiente, durante 48 horas em 0,5 ml de tetrahidrofurano, 0,25 ml de ácido acético e 0,25 ml de H20, e purificou-se através de cromatografia flash (35% de acetato de etilo/hexanos), obtendo-se um produto de 3,5 mg de isómero A (44%, M+H=503, 3) sob a forma de um óleo transparente, e um produto de 3,5 mg de isómero B (39%, M+H=503,3) sob a forma de um óleo turvo. -67-

Exemplo 2

ll-hidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazol-4-il)-vinil]-5,9-dioxo-4,17-dioxa-biciclo[14.1.0]heptadecano-7-carbonitrilo

Preparou-se o correspondente análogo de epotilona B usando o procedimento descrito no Exemplo 1, exceptuando o facto de que se usou 2,3-dehidro epotilona B como material de base. Obtiveram-se os seguintes rendimentos em cada um dos passos: (1) sililação de C-7 (90%); (2) adição de cianeto de potássio (aproximadamente uma mistura de 1:1 de diastereómeros C-3, 65% de rendimento combinado); (3) desprotecção (isómero A, 1,8 mg-53%, M+H=517; isómero B, 2,4 mg (41%), M+H=517). -68-

Exemplo 3

8-hidroxi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[l-metil-2-(2-metil-tiazol-4-il)-vinil]-2,6-dioxo-azaciclohexadec-13-eno-4-carbonitrilo

Preparou-se o correspondente análogo de epotilona D usando o procedimento descrito no Exemplo 1, exceptuando o facto de que se usou 2,3-dehidro epotilona D como material de base e subsequentemente se ter convertido em lactama através da abertura do anel na presença de azida de sódio, seguida de macrolactonizaçâo através de procedimentos conhecidos, tais como aqueles descritos na patente de invenção WO 99/27890. -69-

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO A presente listagem de referências citadas pela requerente é apresentada meramente por razões de conveniência para o leitor. Não faz parte da patente de invenção europeia. Embora se tenha tomado todo o cuidado durante a compilação das referências, não é possível excluir a existência de erros ou omissões, pelos quais o IEP não assume nenhuma responsabilidade.

Patentes de invenção citadas na descrição us 60363441 B [0001] wo 9310121 A [0003][0018] [0065] wo 9719086 A [0003][0018] [0065][0088][0096] wo 0049021 A [0005][0018] [0065] wo 0066589 A [0006][0018] [0065] wo 0025929 A [0006] wo 0037473 A [0006][0018] [0065] us 4272525 A [0017] us 4820695 A [0017] us 5545624 A [0017] us 5610178 A [0017] us 5677287 A [0017] us 5716939 A [0017] us 5760011 A [0017] us 6034070 A [0017] -70- us 6090601 A [0017] us 6121029 A [0017] us 6124453 A [0017] us 6204388 A [0017] us 6211412 A [0017] us 6262094 A [0017] us 6291684 A [0017] wo 0043320 A [0018] [0065] wo 0001701 A [0018] [0065] wo 0001702 A [0018] [0065] wo 0023452 A [0018] [0065] wo 0026349 A [0018] [0065] wo 0031247 A [0018] [0065] wo 0039276 A [0018] [0065] wo 0047584 A [0018] [0065] wo 0049019 A [0018] [0065] wo 0049020 A [0018] [0065] wo 0050423 A [0018] [0065] wo 0057874 A [0018] [0065] wo 0063224 A [0018] [0065] wo 0063225 A [0018] [0065] wo 0071521 A [0018] [0065] wo 0071556 A [0018] [0065] -71 - wo 0107439 A [0018] [0065] wo 0109113 A [0018] [0065] wo 0127308 A [0018] [0065] wo 9609312 A [0018] [0065] wo 9219247 A [0018] [0065] wo 9421657 A [0018] [0065] wo 9502594 A [0018] [0065] wo 9626182 A [0018] [0065] wo 9738009 A [0018] [0065] wo 9802460 A [0018] [0065] wo 9803662 A [0018] [0065] wo 9808505 A [0018] [0065] wo 9808849 A [0018] [0065] wo 9822461 A [0018] [0065] wo 9824427 A [0018] [0065] wo 9825929 A [0018] [0065] wo 9838192 A [0018] [0065] wo 9847891 A [0018] [0065] wo 9854966 A [0018] [0065] wo 9901124 A [0018] [0065] wo 9902514 A [0018] [0065][0086] wo 9903848 A [0018] [0065] wo 9903849 A [0018] [0065] -72- wo 9907692 A [0018] [0065] wo 9912906 A [0018] [0065] wo 9916416 A [0018] [0065] wo 9927890 A [0018] [0065][0102] wo 9943653 A [0018] [0065] wo 9944619 A [0018] [0065] wo 9954318 A [0018] [0065] wo 9954319 A [0018] [0065] wo 9954330 A [0018] [0065] wo 9958534 A [0018] [0065] wo 9961599 A [0018] [0065] wo 9965884 A [0018] [0065] wo 9965913 A [0018] [0065] wo 9966028 A [0018] [0065] wo 9967252 A [0018] [0065] wo 9967253 A [0018] [0065] DE 4138042 [0065] wo 9902224 A [0065] wo 9928324 A [0065] wo 9924416 A [0065] wo 9730992 A [0065] us 6194158 B [0073] US 6051376 B [0073] -73- • US 6071696 B [0073] • US 280191 A [0093]

Literatura não relacionada com patentes, citada na descrição • Hofle, G. et al. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1996, vol. 35 (13, 1), 1567-1569 [0003][0007][0090] • Kowalski, R. J. et al., J. Biol. Chem., 1997, vol. 272, 2534-2541 [0004] • Altmann, K. H. et al., Curr. Opin. Chem. Biol., 2001, vol. 5, 424-431 [0004] • Chou T. C. et al. Proc. Natl. Acad. Sei., 1998, vol. 95, 9642 [0005] • Nicolaou, K. C., J. Amer. Chem. Soc., 2001, vol. 123, 9313-9323 [0005] • Altmann, K. H. et al., Chimica, 2000, vol. 54(11), 612— 621 [0005] • Nicolaou, K. C. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1997, vol. 36(19), 2097-2103 [0007] • Su, D. S. et al. Angew. 36(19), 2093-2097 [0007] Chem. Int. Ed. Engl., 1997, vol • Su, D. S. et al. Angew. 36, 757-759 [0007] Chem. Int. Ed. Engl., 1997, vol • Meng D. et al., J. Amer. Chem. Soc., 1997, vol. 119, 10073-10092 [0007] • Yang, Z. et al. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1997, vol. 36, 166-168 [0007] • Nicolaou, K. C. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1997, vol. 36, 525-527 [0007] -74- • Nicolaou, K. C. et al., Nature, 1997, vol. 387, 268-272 [0007] • Schinzer, D. et al. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1997, vol. 36, 523-524 [0007] • Nicolaou, K. C. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1998, vol. 37, 2014-2045 [0007][0090] • Lee, F. et al., Clín. Can. Res., 2001, vol. 7, 1429-1437 [0007] • Physician's Desk Reference. 2002 [0069] • Borzilleri et al., J. Amer. Chem. Soc., 2000, vol. 122, 8890 [0072][0086] • An Epothilone Analog Possessing Potent Activity Against Paclitaxel-Sensitive and -Resistant Human Tumors Book of Abstracts. Lee et al. 91st Annual Meeting of the American Association for Câncer Research, 01 Abril 2000 [0072][0076] • Lee, F. et al., Clin. Can. Res., 2001, vol. 7, 1429 [0072] • Luria et al. General Virology. John Wiley & Sons, 1978, 436-446 [0074] • Hordijk et al. Science, 1997, vol. 278, 1464-66 [0075] • Principais of Neoplasia. Harrison's Principais of Internai Medicine. McGraw-Hill, 1814 [0076] • Lovejoy et al. J. Pathol., 1997, vol. 181, 130-135 [0076] • Donehower. Semin. Câncer Biol., 1996, vol. 7, 269-278 [0076] • Shoemaker et al. Biochem. Biophys. Acta, 1997, vol. 1332, F25-F48 [0076]

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Claims (32)

1. - 1 - Reivindicações 1. Composto representado pela fórmula I:

   I em que: Q é seleccionado entre um grupo constituído por

   M e 0, NR9, CRioRh; X é 0 ou NH; Ri, R2, R3, R4 e R5 são, de forma independente, seleccionados entre um grupo constituído por hidrogénio ou alquilo de cadeia curta; -2- R6 é seleccionado entre o grupo constituído por arilo, arilo substituído e heterociclo; R7 e Rs são seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído e ciano; R9 é seleccionado entre o grupo constituído por hidrogénio, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, Ri2C=0, Ri30C=0, R14SO2, Ri5Ri6C=0, R17R18NSO2 θ NR19R20; Rio e Rn são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, halogéneo, hidroxilo, alquilo, alquilo substituído, alcoxi, alcoxi substituído, arilo, arilo substituído, cicloalquilo, heterociclo, R2iC=0, R220C=0, R23NHC=0 e NR24R2s; e R12, Ri3, R14, Ri5, Ri6, R17, Ris, R19, R20, R21, R22, R23, R24 e R25 são, de forma independente, seleccionados entre o grupo constituído por hidrogénio, alquilo, alquilo substituído, arilo, arilo substituído e heterociclo, sendo que R13 e R14 não podem ser hidrogénio; Ris e Rie, Ri7 e Ris, R19 e R20, R24 e R25 podem, cada um deles, juntar-se para formar um anel heterocíclico; e isómeros, clatratos, sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos do mesmo, sendo que o termo -3- "alquilo de cadeia curta" refere-se a grupos alquilo opcionalmente substituídos com 1 a 4 átomos de carbono, os termos "alquilo substituído" e "alcoxi substituído" referem-se a um grupo alquilo ou a um grupo alcoxi substituídos por um a quatro ou mais substituintes seleccionados entre halo, trifluorometilo, trifluorometoxi, hidroxilo, alcoxi, cicloalcoxi, heterocicloxi, oxo, alcanoílo, arilo, ariloxi, aralquilo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, arilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, amino dissubstituído no qual os dois substituintes no grupo amino são seleccionados entre alquilo, aralquilo, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino substituído, arilamino substituído, aralcanoilamino substituído, tiol, alquiltio, ariltio, aralquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, alquiltiono, ariltiono, aralquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aralquilsulfonilo, sulfonamido, sulfonamido substituído, nitro, ciano, carboxi, carbamilo, carbamilo substituído, alcoxicarbonilo, arilo, arilo substituído, guanidino e heterociclos e em que, conforme supra descrito, os próprios substituintes são ainda substituídos, sendo que esses substituintes -4- adicionais são seleccionados entre o grupo constituído por halogéneo, alquilo, alcoxi, arilo e aralquilo, o termo "arilo" refere-se a grupos de hidrocarbonetos aromáticos mono ou bicíclicos com 6 a 12 átomos de carbono no anel, o termo "aralquilo" refere-se a um grupo arilo ligado a uma entidade maior por meio de um grupo alquilo, o termo "arilo substituído" refere-se a um grupo arilo substituído por substituintes seleccionados entre alquilo, alquilo substituído, halo, trifluorometilo, trifluorometoxi, hidroxi, alcoxi, cicloalquiloxi, heterocicloxi, alcanoílo, alcanoiloxi, amino, alquilamino, dialquilamino, aralquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, alcanoílamino, tiol, alquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, ureído, nitro, ciano, carboxi, carboxialquilo, carbamilo, alcoxicarbonilo, alquiltiono, ariltiono, alquilsulfonilo, sulfonamido, ariloxi e em que o substituinte também pode ser ainda substituído por um ou mais membros seleccionados entre o grupo constituído por halo, hidroxi, alquilo, alcoxi, arilo, alquilo substituído, arilo substituído e aralquilo, o termo "cicloalquilo" refere-se a sistemas de anéis de hidrocarbonetos cíclicos saturados opcionalmente -5- substituídos por substituintes seleccionados entre um ou mais grupos alquilo conforme supra descrito, ou um ou mais grupos supra descritos como substituintes para os grupos alquilo.
2. 2. Composto que é um regioisómero ou estereoisómero de um composto da reivindicação 1 ou sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos do mesmo.
3. 3. Composto da reivindicação 1, em que 1¾ é seleccionado entre o grupo constituído por:

   pirrolidinilo, pirrolilo, indolilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, oxazolidinilo, tiazolilo, furilo, tienilo, piperidinilo, piperazinilo, azepinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, morfolinilo, tietanilo, tiranilo, triazinilo e triazolilo ou sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos dos mesmos.
4. 4. Composto da reivindicação 1, em que X é 0. -6-
5. 5. Composto da reivindicação 1, em que X é NH.
6. 6. Composto da reivindicação 1, em que M é 0.
7. 7. Composto da reivindicação 1, em que M é NR9.
8. 8. Composto da reivindicação 1, em que CRioRn.
9. 9. Composto da reivindicação 1, em que o referido composto é seleccionado entre o grupo constituído por: -7-

   e misturas ou sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos dos mesmos.
10. 10. Composto da reivindicação 1, em que o referido composto é seleccionado entre o grupo constituído por: -8- ll-hidroxi-8,8,10,12-tetrametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazol-4-il)-vinil]-5,9-dioxo-4,17-dioxa-biciclo[14.1.0]heptadecano-7-carbonitrilo; ll-hidroxi-8,8,10,12,16-pentametil-3-[l-metil-2-(2-metil-tiazol-4-il)-vinil]-5,9-dioxo-4,17-dioxa-biciclo[14.1.0]heptadecano-7-carbonitrilo; e 8-hidroxi-5,5,7,9,13-pentametil-16-[l-metil-2-(2-metil-tiazol-4-il)-vinil]-2,6-dioxo-azaciclohexadec-13-eno-4-carbonitrilo, e sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos ou hidratos dos mesmos.
11. 11. Composição farmacêutica que inclui como ingrediente activo pelo menos um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais veículos, excipientes e diluentes farmaceuticamente aceitáveis.
12. 12. Composição farmacêutica da reivindicação 11, que inclui adicionalmente um ingrediente activo como agente terapêutico útil no tratamento do cancro ou outras doenças proliferativas. -9-
13. 13. Composição farmacêutica da reivindicação 12, em que o referido agente terapêutico útil no tratamento do cancro ou outras doenças proliferativas é seleccionado entre o grupo constituído por adriamicina, cisplatina, carboplatina, cimetidina, carminomicina, cloridrato de mecloretamina, pentametilmelamina, tiotepa, teniposido, ciclofosfamida, clorambucil, dimetoxi-hipocrelina A, melfalan, ifosfamida, trofosfamida, treosulfano, podofilotoxina ou derivados da podofilotoxina, fosfato de etoposido, teniposido, etoposido, leurosidina, leurosina, vindesina, 9-aminocamptotecina, camptoirinotecano, crisnatol, clorambucil, megestrol, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743, busulfano, carmustina (BCNU), lomustina (CCNU), lovastatina, ião l-metil-4-fenilpiridinio, semustina, estaurosporina, estreptozocina, tiotepa, ftalocianina, dacarbazina, aminopterina, metotrexato, trimetrexato, tioguanina, mercaptopurina, fludarabina, pentastatina, cladribina, citarabina (ara C) , porfiromicina, 5-fluorouracilo, 6-mercaptopurina, cloridrato de doxorrubicina, leucovorina, ácido micofenólico, daunorrubicina, deferoxamina, floxuridina, doxifluridina, raltitrexed, idarrubicina, epirrubicina, pirarrubicina, zorrubicina, mitoxantrona, sulfato de - 10- bleomicina, mitomicina C, actinomicina D, safracinas, saframicinas, quinocarcinas, discodermolides, vincristina, vimblastina, tartrato de vinorelbina, verteporfina, paclitaxel, tamoxifeno, raloxifeno, tiazofurano, tioguanina, ribavirina, EICAR, estramustina, fosfato sódico de estramustina, flutamida, bicalutamida, buserelina, leuprolida, pteridinas, diineses, levamisole, aflacon, interferão, interleucinas, aldesleucina, filgrastima, sargramostina, rituximab, BCG, tretinoína, cloridrato de irinotecano, betametosona, cloridrato de gemcitabina, verapamil, VP-16, altretamina, tapsigargina e topotecano.
14. 14. Uso do composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10 na produção de um medicamento destinado ao tratamento do cancro ou outras doenças proliferativas num mamífero que dele necessite, em que uma quantidade eficaz de pelo menos um composto das reivindicações 1 a 10, ou sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo, é administrado ao referido mamífero.
15. 15. Uso da reivindicação 14, em que o referido cancro responde à estabilização dos microtúbulos. - 11 -
16. 16. Uso do composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10 na produção de um medicamento destinado à inibição da angiogénese num mamífero que dele necessite, em que uma quantidade eficaz de pelo menos um composto das reivindicações 1 a 10, ou sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo, é administrado ao referido mamífero.
17. 17. Uso do composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10 na produção de um medicamento destinado à indução da apóptose num mamífero que dele necessite, em que uma quantidade eficaz de pelo menos um composto das reivindicações 1 a 10, ou sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo, é administrado ao referido mamífero.
18. 18. Uso da reivindicação 14, em que o referido composto das reivindicações 1 a 10 é administrado simultânea ou sequencialmente a um agente terapêutico útil no tratamento do cancro ou outras doenças proliferativas. - 12-
19. 19. Uso da reivindicação 18, em que o referido composto das reivindicações 1 a 10 é administrado antes da administração do agente terapêutico.
20. 20. Uso da reivindicação 18, em que o referido composto das reivindicações 1 a 10 é administrado depois da administração do agente terapêutico.
21. 21. Uso de qualquer uma das reivindicações 18 a 20, em que o referido agente terapêutico útil no tratamento do cancro ou outra doença proliferativa é seleccionado entre o grupo constituído por adriamicina, cisplatina, carboplatina, cimetidina, carminomicina, cloridrato de mecloretamina, pentametilmelamina, tiotepa, teniposido, ciclofosfamida, clorambucil, dimetoxi-hipocrelina A, melfalan, ifosfamida, trofosfamida, treosulfano, podofilotoxina ou derivados da podofilotoxina, fosfato de etoposido, teniposido, etoposido, leurosidina, leurosina, vindesina, 9-aminocamptotecina, camptoirinotecano, crisnatol, clorambucil, megestrol, metopterina, mitomicina C, ecteinascidina 743, busulfano, carmustina (BCNU), lomustina (CCNU), lovastatina, ião l-metil-4-fenilpiridinio, semustina, estaurosporina, estreptozocina, tiotepa, - 13- ftalocianina, dacarbazina, aminopterina, metotrexato, trimetrexato, tioguanina, mercaptopurina, fludarabina, pentastatina, cladribina, citarabina (ara C) , porfiromicina , 5-fluorouracilo, 6-mercaptopurina, cloridrato de doxorrubicina, leucovorina, ácido micofenólico, daunorrubicina , deferoxamina, floxuridina, doxifluridina , raltitrexed, idarrubicina, epirrubicina, pirarrubicina , zorrubicina, mitoxantrona, sulfato de bleomicina, mitomicina C, actinomicina D, safracinas, saframicinas, quinocarcinas, discodermolides, vincristina, vimblastina, tartrato de vinorelbina, verteporfina, paclitaxel, tamoxifeno, raloxifeno, tiazofurano, tioguanina, ribavirina, EICAR, estramustina, fosfato sódico de estramustina, flutamida, bicalutamida, buserelina, leuprolide, pteridinas, diineses, levamisole, aflacon, interferão, interleucinas, aldesleucina, filgrastima, sargramostina, rituximab, BCG, tretinoína, cloridrato de irinotecano, betametosona, cloridrato de gemcitabina, verapamil, VP-16, altretamina, tapsigargina e topotecano.
22. 22. Uso da reivindicação 14, em que o referido composto das reivindicações 1 a 10 é administrado simultânea ou -14- sequencialmente com um agente terapêutico útil na inibição da angiogénese.
23. 23. Uso da reivindicação 22, em que o referido composto das reivindicações 1 a 10 é administrado antes da administração do agente terapêutico.
24. 24. Uso da reivindicação 22, em que o referido composto das reivindicações 1 a 10 é administrado depois da administração do agente terapêutico.
25. 25. Uso de qualquer uma das reivindicações 22 a 24, em que o referido agente terapêutico útil na inibição da angiogénese é seleccionado entre o grupo constituído por indolinotionas, piridopirimidinas, quiniazolinas, fenil-pirrol-pirimidinas, trastuzumab, IMC-C225, AG 1571 (SU 5271), SU 5416, SU 6668, interferão alfa, interleucina-12, IM 862, EMD-121974, inibidor do influxo de cálcio (CAI), neomicina, esqualamina, endostatina, SI-27, MMI-166, marimastat, BAY-129556, prinomastat (AG-3340), metastat (COL-3), CGS-27023A e BMS-275291. - 15-
26. 26. Uso de qualquer uma das reivindicações 14 a 25, em que o referido mamifero é um ser humano.
27. 27. Uso da reivindicação 14, em que o referido cancro é um cancro do cérebro, mama, sistema nervoso central, estômago, bexiga, próstata, cólon, recto, figado, pulmão (de pequenas células e não pequenas células), pâncreas, esófago, boca, faringe, rins, ossos, hipófise, ovários, do útero, da pele, cabeça e pescoço, colo do útero e laringe.
28. 28. Uso da reivindicação 14, em que o referido cancro é um tumor sólido.
29. 29. Uso da reivindicação 14, em que o referido cancro é um tumor metastático.
30. 30. Forma farmacêutica unitária que inclui um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 10.
31. 31. Forma farmacêutica unitária esterilizada e injectável que inclui um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 10. - 16-
32. 32. Forma farmacêutica unitária das reivindicações 30 ou 31, em que a referida forma farmacêutica é liofilizada. Lisboa, 19/02/2010