NO338345B1 - Substituerte triaziner som prion protein ligander og deres anvendelse for å detektere eller fjerne prioner. - Google Patents

Substituerte triaziner som prion protein ligander og deres anvendelse for å detektere eller fjerne prioner. Download PDF

Info

Publication number
NO338345B1
NO338345B1 NO20071087A NO20071087A NO338345B1 NO 338345 B1 NO338345 B1 NO 338345B1 NO 20071087 A NO20071087 A NO 20071087A NO 20071087 A NO20071087 A NO 20071087A NO 338345 B1 NO338345 B1 NO 338345B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
compound
formula
optionally substituted
prion
group
Prior art date
Application number
NO20071087A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20071087L (no
Inventor
James Christopher Pearson
Helen Rosemary Tatton
Patrick Vasconcelos Gurgel
Original Assignee
Prometic Biosciences Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Prometic Biosciences Ltd filed Critical Prometic Biosciences Ltd
Publication of NO20071087L publication Critical patent/NO20071087L/no
Publication of NO338345B1 publication Critical patent/NO338345B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/53—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with three nitrogens as the only ring hetero atoms, e.g. chlorazanil, melamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
    • B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
    • B01J20/321—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3206—Organic carriers, supports or substrates
    • B01J20/3208—Polymeric carriers, supports or substrates
    • B01J20/3212—Polymeric carriers, supports or substrates consisting of a polymer obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3248—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such
    • B01J20/3251—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such comprising at least two different types of heteroatoms selected from nitrogen, oxygen or sulphur
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B01J20/3248—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such
    • B01J20/3255—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure the functional group or the linking, spacer or anchoring group as a whole comprising at least one type of heteroatom selected from a nitrogen, oxygen or sulfur, these atoms not being part of the carrier as such comprising a cyclic structure containing at least one of the heteroatoms nitrogen, oxygen or sulfur, e.g. heterocyclic or heteroaromatic structures
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D251/00—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings
    • C07D251/02—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings not condensed with other rings
    • C07D251/12—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D251/26—Heterocyclic compounds containing 1,3,5-triazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hetero atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C07D251/40—Nitrogen atoms
    • C07D251/54—Three nitrogen atoms
    • C07D251/70—Other substituted melamines
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/11—Compounds covalently bound to a solid support
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2828—Prion diseases

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Description

FAGOMRÅDE FOR FORELIGGENDE OPPFINNELSE
Foreliggende oppfinnelse angår fagområdet protein- ligand interaksjon, mer spesifikt forbindelser som binder til prionproteiner ("prionprotein ligander") og fremgangsmåter for bruk av forbindelsene for å detektere eller fjerne prioner fra biologiske prøver.
BAKGRUNN FOR FORELIGGENDE OPPFINNELSE
Rent eller cellulært prionprotein "PrPc" er bredt distribuert innenfor pattedyr- gruppen og har en spesielt konservert aminosyresekvens og proteinstruktur. Infeksiøse prioner antas å være sammensatt av en modifisert form av normalcellulart (PrPc) prionprotein og benevnes "PrPsc". Prioner har noen egenskaper felles med andre infeksiøse patogener, men det virker ikke som de inneholder nukleinsyre. Istedenfor er det foreslått at en post- translasjon konformasjonsendring er involvert i omvandlingen av ikke- infeksiøse PrPc til infeksiøse PrPsc gjennom hvilken a-helikser blir transformert til [3- flak. PrPc inneholder tre a- helikser og har få p- flak strukturer; i kontrast, PrPsc er rik på [3- flak. Konformasjonen av PrPc til PrPsc er antatt å lede til utvikling av transmissible spongiform encephalopathies (TSE) gjennom hvilken PrPsc akkumuleres i det sentrale nervesystemet (CNS) og er forbundet med neuropatologiske endringer og neurologisk dysfunskjon. PrPsc, ofte referert til som "scrapie" formen av prionprotein, anses som nødvendige og muligens tilstrekklige for overføring og patogenes av disse nevrodegenerasjonssykdommene hos dyr og mennesker.
Spesielle eksempler av TSE inkluderer skrapesyke som påvirker sauer og gjeter; spongiform encephalopathy hos storfe (BSE); spongiform encephalopathy hos kattedyr; og chronic wasting disease (CWD) hos mulhjort, hvithalehjort, svarthalehjort og elg. Hos menneske kan TSE sykdommer vise seg som kum, Creutzfeldt- Jakob sykdom (CJD), Gerstmann- Straussler- Scheinker Syndrom (GSS), fatal insomnia og variant Creutzfeldt- Jakob sykdom (vCJD). vCJD oppstod nylig hos mennesker som resultat av BSE epidemien i England og skylles mest sannsynlig bruket av matprodukter derivert fra storfe infisert med BSE eller "kugalskap". Et ukjent antall mennesker i England inntok potentielt smittet mat med hjernevev fra BSE- infisert storfe mellom midten av 1980- tallet til tidlig 1990. Ettersom inkubasjonstiden for oral pådratt sykdom kan være mer en 20 år hos mennesker kan den riktige spredningen kanskje ikke bli synlig på mange år. Til dags dato er det kjent at mer enn 150 mennesker har pådratt seg sykdommen, fremst i England, men tilfeller har også blitt rapportert i Canada, Frankrike, Hong Kong, Irland, Italia, og USA. Eksporten av infiserte storfeprodukter fra England til hele verden indikerer en mulig global tilstedeværende av BSE og derfor også sannsynligheten for vCJD. I overensstemmelse med disse observasjoner er deteksjonen av BSE i de fleste europeiske lander, Canada, USA, Japan og Israel. Som en konsekvens er muligheten for å detektere og fjerne infeksiøse prionproteiner fra en varietet av materialer, inkluderende matprodukter, av største betydning.
Historisk sett var diagnosen for TSE basert på forekomsten av kliniske tegn på sykdommen å kunne bli bekreftet kun gjennom obduksjonshistologisk eksaminasjon av hjernevevet. Karakteriserende for alle TSEer er mangelen på en målbar immunrespons på agenten hos verten. Derfor produseres ikke noen antistoffer og ingen konvensjonell serologisk test kan bli brukt for å identifisere infiserte dyr. Nylig har identifikasjonen av anormale prionproteiner i hjernen forbedret muligheten for å kunne gjøre en sykdoms diagnose.
I tillegg til inntak av infeksiøse produkter med opprinnelse i storfe, representerer blodtransfusjon og organtransplantasjon en annen potensiell mulighet for overføring av vCJD mellom mennesker. To suspekte fall av overføring av vCJD gjennom blodtransfusjon har forekommet i England. Infeksjonsrisikoen for vCJD hos mennesker gjennom blodtransfusjon er for tiden ikke kjent, men det finnes tiltakende uro for at dette kan være en mer effektiv måte for overføring av vCJD sammenlignet med inntak. Dette overensstemmer med data fra eksperimentelle dyremodeller som inkluderer overføring mellom sauer. Forskjellig fra andre humane TSEer, er PrPSc tilstedeværende i det lymferetikulere systemet hos vCJD pasienter, derved øker sannsynligheten for at de infeksiøse agentene finnes i blod og kan overføres gjennom blodtransfusjon. Andre faktorer som øker uroen for risken av overføring gjennom transfusjon inkluderer den ukjente, men antakeligvis høye, antallet av mennesker utsatt for BSE og mangelen på et preklinisk diagnostisk test for vCJD. I tillegg virker det som virulensen hos vCJD øker med overføringen mellom arter hos primater og mus, hvilket tyder på at overføring fra menneske til menneske kan være mer effektiv enn fra ku til menneske. Derfor finnes det et stort behov for fremgangsmåter som motvirker overføring av vCJD gjennom blodtransfusjon. Denne typen målinger kan inkludere tidlig identifikasjon av infeksiøse donorer og fjerning og inaktivering av TSE-midler hos dyrederivert mat og helseprodukter tenkt for dyre- eller menneskekonsumpsjon eller applikasjoner, blodderiverte produkter fra menneske og storfe og transplantasjonsorgan. Beklagelig er PrPsc bemerkelsesverdig resistent mot kjemiske og fysiske fremgangsmåter for inaktivering og en selektiv fremgangsmåte for inaktivering er vanskelig å finne.
Fjerning av prioner gjennom spesifikk interaksjon med ligander virker mer lovende. Flere ligander som binder til prioner har allerede blitt identifisert. Kombinatoriske peptidsamlinger har screenets for ligander som binder til den oktapeptidrepeterende sekvensen (PHGGGWGQ) som har blitt funnet i alle kjente pattedyrs prionproteiner og en serie av ligander har blitt funnet, som beskrevet i WO 01/77687. Andre materialer inkluderer en varietet av polymerer, f. eks. aminopolymetakrylate fra TosoBioSep, ionebytte- resiner generelt (se US Patent No 5,808,011 til Gawryl et al), ligander som interagerer med amyloid plakk, f. eks. Congo Red (Ingrosso et al, J. Virology 69:506-508 ( 1995)), 4-iodo, 4-deoksy doxorubicin (Tagliavini et al, Science 276:1119- 1122 ( 1997)), amphotericin B, porfyriner og ftalocyaniner (Priola et al, Science 287:1503-1506 ( 2000)), metaller (Stockel et al, Biochemistry, 37, 7185- 7193 ( 1998)), peptider som interagerer med PrP for å forme komplekser (se US Patent 5,750,361 til Prusiner et al og Soto et al, Lancet, 355:192- 197 ( 2000)), heparin og andre polysulfaterte polyanioner(Caughey et al, Binding of the Protease-sensitive form of prion protein PrP to Sulphated Glucosaminoglycan and Congo Red, J. Virology 68:2135- 2141( 1994)), antistoffer (Kascsak et al, Immunological Invest. 26:259- 268 ( 1997)), og andre proteiner, f. eks. plasminogen (Fischer et al, Nature 408:479- 483 ( 2000)). For tiden har ikke noen ligander blitt fulltkarakterisert, eller blitt funnet å være i stand til å kunne binde til prioner fra en bred varietet av medier, til tross for at noen kan være brukbare ved spesifikke omstendigheter (se US Patent No 5,808,011 til Gawryl et al). Affinitetsligander for prionproteiner er beskrevet i E.N. Soto Reneu et al., Journal of Molecular Recognition, 2004, 17, 248-261.
Til dags dato er human TSE sykdom 100 % fatal. Beklageligvis, til tross for at et antall forbindelser, inkluderende amfoterisiner, sulfaterte polyanioner, Congo Red farging og anthracyklinantibiotika har blitt rapportert som prospektive terapeutiske midler, har alle kun demonstrert moderat potensial til å hemme prionspredning, og ingen har vist å ha noen effekt for å kunne fjerne tidligere eksisterende prioner fra en infisert vert. Derfor finnes det fortsatt et umiddelbart behov for nye terapeutiske midler.
Samlingen og delningen av normale løselige proteiner til konformasjonsendrete og uløselige former er tenkt til å være en forårsakende prosess hos en varietet av andre sykdommer, av hvilke mange er neurologiske sykdommer. Relasjonen mellom sykdommens angrep og transisjonen fra det normale til den konformasjonsendrete proteinet er dårlig forstått. Eksempler på disse uløselige proteiner i tillegg til prioner inkluderer: [3- amyloid peptid i amyloid plakk hos Alzheimers sykdom og cerebral amyloid angiopati (CAA); a- synuclein avlagringer i Lewy legemer ved Parkisons sykdom; tau i neurofibrillære floker i frontal temporal demens og Picks sykdom; superoksid dismutas i amytrofisk lateral sklerose; og huntingtin i Huntingtons sykdom.
Ofte former disse veldig uløselige proteinene aggregat bestående av ikke- forgrenede fibriller med den vanlige karakteristiske konformasjonen hos et p- foldet flak. I det sentrale nervesystemet kan amyloider være tilstede i cerebrale og meningale blodkar (cerebrovaskulære deponeringer) og i hjerneparenchym (plakk). Neuropatologiske studier hos mennesker og dyremodeller indikerer at celler i midten av amyloide avlagringer er forstyrret i sine normale funksjoner.
Den presise mekanismen med hvilken neuritisk plakk formes og relasjonen hos plakkformasjon til den sykdomsassosierte neurodegenerative prosessen er hovedsakelig ukjent. Metodologier som raskt kan separere eller som kan skille mellom to eller flere ulike konformasjonsformer av et protein, f. eks. PrPc og PrPsc, er nødvendige for å forstå prosessen av konverteringen og for å finne strukturer som kommer å interagere spesifikt med den sykdomsassosierte formen. Nåværende metodologi for separering og atskillelse mellom isoformene inkluderer: forskjellig mobilitet i polyakrylamid geler med tilstedeværende av en chaotrope som urea, det vil si transvers ureagradient (TUG) geler; differensiert sensitivitet til proteasbehandling, f. eks. proteinas K (PK) og deteksjon av det PK- resistente smelteproduktet av PrPsc referert til som PrPres; differensiert temperaturstabilitet; relativ løselighet i ikkeioniske løsningsmiddel; og muligheten for fibrilliere strukturer å kunne binde spesielle kjemikalier, f. eks. Congo Red og isoflavin S. Men det forblir et ikke tilmøtekommet behov for å identifisere høyaffinitet reagenser som er spesifikke for det konformasjonsendrete proteinet og spesielt for den konformasjonsendrete proteinet og da spesielt former assosiert med sykdom. Sånne reagenser kan være nyttige for utvikling av diagnostiske kit for separasjon og purifikasjon av de ulike formene av proteinet, for fjerning av infeksiøse former av sykdommen fra terapeutiske midler, biologiske produkter, vaksiner og matvarer, og for terapi.
OPPSUMMERING AV FORELIGGENDE OPPFINNELSE
I følge en første aspekt av foreliggende oppfinnelse, er det skaffet til veie en anvendelse, ex vivo, av en forbindelse med formelen (I):
hvor
R<3>er hydrogen eller en arylgruppesubstituent eller R<3>er en fast støtte eventuelt festet via en spacer;
Z representerer et oksygenatom, et svovleatom eller NR<4>;
Y representerer et oksygenatom, et svovleatom eller NR<5>;
i hvilken R<4>og R<5>, som kan være like eller ulike, representere hydrogen, eventuelt substituert alkyl inneholdende 1 til 6 karbonatomer, eventuelt substituert fenyl, eventuelt substituert benzyl eller eventuelt substituert [3- fenyletyl;
en av X<1>eller X<2>representerer et nitrogenatom og den andre av X<1>eller X<2>representerer et nitrogenatom eller CR<6>, i hvilken R<6>representerer hydrogen eller en arylgruppe- substituent;
og hvor
R<1>representerer en gruppe en gruppe -(CH2)m-Q<1>, der n er fra 0 til 7, og Q<1>representerer - -NR11R1<2>, i hvilkenR11ogR1<2>sammen med nitrogenatomet til den de er festet, danner en eventuelt substituert heterosykloalkyl- gruppe; og R<2>representerer en gruppe -(CH2)m-Q<2>, der n er fra 0 til 7, og Q<2>representerer -CR21R22R<23>eller-NR21R2<2>, i hvilken R<23>representerer hydrogen, alkyl, sykloalkyl eller heteroalkyl, og R<11>og R<12>sammen med karbon- eller nitrogenatomet til den de er festet, danner en eventuelt substituert sykloalkyl- eller en eventuelt substituert heterosykloalkyl- gruppe;
hvor «arylgruppe substituent» hvis ikke annet er definert, refererer til hydroksyl, amino, alkyl, halogen, hydroksyalkyl, amid, acyl, acylamino, alkoksy, alkoksykarbonyl, alkylenedioksy, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkyltio, aroyl, aroylamino, aryl, arylalkoksy, arylalkoksykarbonyl, arylalkyltio, aryloksy, aryloksykarbonyl, arylsulfinyl, arylsulfonyl, aryltio, karboksy (eller en surbioisoster), cyano, heteroaroyl, heteroaryl, heteroarylalkyloksy, heteroaroylamino, heteroaryloksxy, nitro, ookso
eller trifluorometyl;
for affinitetsbindingen av et prionprotein.
Forbindelsen med formel (I) kan bli nyttig for detekteringen eller fjerningen av et prionprotein fra en prøve, så som biologiske væsker eller en miljøprøve. Forbindelsene er brukt for å detektere eller fjerne alle prionproteiner fra prøven eller kan bli selektivt valgt for å detektere eller fjerne en enkel form av prionprotein og kan derfor bli brukt for å skille mellom infeksiøse og ikke- infeksiøse prionprotein i prøven fra pasienter angrepne av humane TSEs og dyr angrepne av skrapesyken, BSE eller CWD. Forbindelsene er nyttige i fremgangsmåter for detektering av prionproteiner i en prøve, så som i en human- eller dyrederivert biologisk væske, men også i fremgangsmåter for å diagnostisere og behandle prionsykdommer. For eksempel, forbindelsene fra oppfinnelsen kan bli nyttige for behandling eller diagnostisering av patologer som CJD, vCJD, GSS, fatal insomnia, skrapesyke, BSE og CWD og andre TSEs ved å bruke hele blodet, blodkomponenter, celler, serum, plasma, plasma derivativer, cerebrospinal væske, urin, tårer, tonsiller, appendiks og andre vev. Forbindelsene kan også bli nyttige for fjerning av prionprotein fra prøver, så som blodprøver, blodkomponenter, celler, serum, plasma, plasma derivativ, cerebrospinal væske, urin, tårer, tonsiller, appendiks og andre materialer.
I en annen aspekt skaffer oppfinnelsen til veie for en fremgangsmåte for deteksjon av prionprotein i en prøve, og/eller fjerning av et prionprotein fra en prøve, hvilken fremgangsmåte innbefatter å la en forbindelse med formel (I) som definert ovenfor komme i kontakt med prøven.
Forbindelser med formelen (I) som ikke er bundet til en fast støtte, men i hvilken R<3>representerer hydrogen eller en substituent, kan også bli nyttig for behandling eller bremsing av utviklingen av en prionassosiert patologi hos et subjekt. For eksempel, ligandene hos oppfinnelsen kan bli nyttige i behandling av patologier som CJD, vCJD, GSS, fatal insomnia, skrapesyke, BSE og CWD. Uten å ønske å bli bundet til noen teori kan slike ligander agere ved å inhibere polymeriseringen av PrPsc eller gjennom inhibering av interaksjonen av PrPsc og PrPc og derved bremse opp utviklingen av flere PrPsc.
Derfor, i en videre aspekt av oppfinnelsen, er det skaffet til veie en fremgangsmåte for behandling, eller bremsing av utviklingen av en prionassosiert patologi hos et humant eller et animalt subjekt, hvor fremgangsmåten innbefatter administrering til subjektet en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse fra formel (I) som ikke er bundet til en fast støtte.
Lignende, oppfinnelsen skaffer videre til veie for bruk av en forbindelse fra formel (I) som ikke bundet til en fast støtte i fremstillingen av et medikament for behandling av en prionassosiert patologi.
DETALJERT BESKRIVELSE AV FORELIGGENDE OPPFINNELSE
Definisjoner
Termene "en", "et", "den", "det" og "de" er som brukt her definert til å ha betydningen "en eller flere" og inkluderer pluralformen hvis ikke konteksten er upassende. Termen "3F4" refererer til den monoklonale antistoffen som er spesifikk for rene former av PrPc, men ikke rene former av PrPsc eller PrPres. Antistoffen har spesifisitet for denaturerte former av hamster og humant PrPc, PrPsc og PrPres.
Termen "alkenyl" refererer til en alifatisk hydrogenkarbongruppe innbefattende en karbon- karbon dobbeltbinding og som kan være rettkjedet eller grenet. Foretrukne alkenyl- grupper har 2 til 12 karbonatomer i kjeden, og mer foretrukket 2 til 6 karbonatomer i kjeden, f. eks. propenyl, n- butenyl, iso- butenyl, 3-metylbut-2-enol, n-pentenyl og heptenyl. Termene "cykloalkenyl" og "heterocykloalkenyl" er i overensstemmelse med hverandre.
Termen "alkoksy" refererer til en alkyl-O-gruppe i hvilken alkylen forefinnes som her beskrevet. Eksempler inkluderer metoksy, etoksy, propoksy, isopropoksy, butoksy og pentoksy.
Termen "alkyl" som brukt her, alene eller i kombinasjon, refererer til en rettkjedet eller grenet, mettet hydrogenkarbon med 1 til 15 karbonatomer. Lavere alkyl- grupper med 1 til 6 karbon er foretrukket, f. eks. metyl, etyl, n- propyl, isopropyl, n-butyl, sec- butyl, iso- butyl, tert- butyl, n-pentyl, 2-metylbutyl, 3-metylbutyl, n- hexyl, 4-metylpentyl, neopentyl og 2,2-dimetylpropyl. Når en alkyl- gruppe er beskrevet som "eventuelt substituert" kan den gruppen bli substituert av en eller flere substituenter, spesielt av en eller flere "alkylgruppe- substituenter" som definert her.
Termen "alkylgruppe- substituenter" refererer, om ikke annet er definert, til hydroksyl, amino, alkyl, halogen, hydroksyalkyl, amid, acyl, acylamino, alkoksy, alkoksykarbonyl, alkylenedioksy, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkyltio, aroyl, aroylamino, aryl, arylalkoksy, arylalkoksykarbonyl, arylalkyltio, aryloksy, aryloksy karbonyl, arylsulfinyl, arylsulfonyl, aryltio, karboksy, (eller en sur bioisoster), cyano, heteroaroyl, heteroaryl, heteroarylalkyloksy, heteroaroylamino, heteroaryloksy, nitro ellertrifluormetyl.
Termen "aroyl" refererer til en aryl- CO- gruppe i hvilken arylgruppen forefinnes som her beskrevet, f. eks. benzoyl, og 1- og 2-naptoyl.
Termen "aryl" som en gruppe eller som del av en gruppe refererer til:
a) en eventuelt substituert monosyklisk eller multisyklisk aromatisk karbosyklisk del
av 6 til 18 karbonatomer, slik som fenyl, naftalen, aceantrylen, aceanaftylen, acefenantrylen, azulen, chrysen, indacen, inden, fluor, fenalen, og fenantren; eller
b) en eventuelt substituert delvis mettet multisyklisk aromatisk karbosyklisk del ved hvilken en aryl og en sykloalkyl, sykloalkenyl, hetersykloalkyl eller
heterosykloalkenyl er smeltet sammen for å forme en syklisk struktur, slik som en indonyl, tetrahydronaftyl, indenyl eller indanyl ring.
Foretrukne arylgrupper er eventuelt substituerte fenylgrupper.
Hvor en arylgruppe er beskrevet som en "eventuelt substituert" kan den gruppen bli substituert med en eller flere substituenter, spesielt av en eller flere "arylgruppesubstituenter" som definert her.
En "arylgruppe- substituent" refererer, om ikke annet er definert, til hydroksyl, amino, alkyl, halogen, hydroksylalkyl, amid, acyl, acylamino, alkoksy, alkoksykarbonyl, alkylendioksy, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkyltio, aroyl, aroylamino, aryl, arylalkoksy, arylalkoksykarbonyl, arylalkyltio, aryloksy, aryloksykarbonyl, arylsulfinyl, arylsulfonyl, aryltio, karboksy (eller en sur bioisoster), cyano, heteroaroyl, heteroarylalkyloksy, heteroaroylamino, heteroaryloksy, nitro, oxo eller trifluormetyl.
Som brukt her, er termen "blodderivert sammensetting" ment å inkludere hele blodet, konsentrat av røde blodceller, plasma, serum, platerike og platefattige fraksjoner, platekonsentrater, hvite blodceller, bunnfall av blod plasma, bunnfall av blodplasma-fraksjonerog supernatanter, immunglobin- preparasjoner som inkluderer IgA, IgE, IgG og IgM, rensede koaguleringsfaktorkonsentrat, fibrinogenkonsentrat, eller forskjellige andre sammensetninger som er derivert fra mennesker eller dyr. Det inkluderer også renset blodderivert protein preparert med en av forskjellige fremgangsmåter som er vanlig forekommende innefor fagområdet og inkluderer ionebytte, affinitet, gelfiltrerings, og/eller hydrofobisk kromatografi eller gjennom differensialt bunnfall. Termen "kombinatorisk bibliotek" refererer til en samling av kjemikalier som har blitt syntetisert av solidfasekombinatoriske kjemiske teknikker. Denne definisjon innbefatter anvendelsen av en splitt- koblings- rekombinasjonsfremgangsmåte som genererer millioner av tilfeldige forbindelser eller kan bli designet for å inkludere definerte strukturer. Byggesteinene kan være triazin byggedeler, og lignende.
Termen "sykloalkyl" refererer til mettede monosykliske, bisykliske eller polysykliske ringsystem med 3 til 12 karbonatomer, med eller uten en sidekjede, og eventuelt avbrudd av -(C=0)-. Foretrukne et sykloalkyl grupper er monosykloalkaner, f. eks. syklopropyl, syklopentyl, syklohexyl, sykloheptyl; bisykloalkanersom er forbundet med et karbon, f. eks. spriononan; og mettede forenende ringsystemer inkluderende bisykloalkaner som er forbundet med to karboner, f. eks. norbornane, biscyklo[4.3.2]undecan, bicycle[4.1.0]heptan og decalin, og polycykliske forenende systemer, f. eks. adamantin. Mer foretrukket er cykloalkyl- gruppen en monocykloalkan eller et forent ringesystem. Mest foretrukket er cykloalkyl- gruppen en syklohexyl, norbornan eller adamantane.
Der en cykloalkyl gruppe er beskrevet som "eventuelt substituert" så kan den gruppen være substituert av en eller flere substituenter, spesielt av en eller flere en eller flere "alkylgruppesubstituenter" som definert her.
Termen "halogen" betyr fluor, klor, brom eller jod.
Termen "heteroaryl" som en gruppe eller del av en gruppe refererer til:
a) en eventuelt substituert monocyklisk aryl i hvilken en eller flere av ringe medlemmer er element(er) forskjellig fra karbon, for eksempel N, 0 eller S, og
foretrukne eksempler er monocyklisk eller bicyklisk, f. eks. benzimidazoyl-, benzthiazoyl-, furyl-, imidazoyl-, indolyl-, indolizinyl-, isoxazoyl-, isoquinolyl-, isotiazoyl-, oxadiazoyl-, pyranyl-, pyrazinyl-, pyrazoyl-, pyrazoyl-, pyridyl-, pyrimidinyl-, pyrrolyl-, quinazolinyl-, quinolyl-, 1,3,4-tiadiazolyl-, tiazolyl-, tienyl-, og traizolyl- grupper, eventuelt substituert med en eller flere arylgruppesubstituenter som definert her, om ikke annet er definert: eller
b) en eventuelt substituert delvis mettet multisyklisk heterokarbosyklisk del i hvilken en heteroaryl- og en sykloakyl-, sykloalkenyl-, heterosykloalkyl- eller heterosykloalkenyl- gruppe er smeltet satt sammen for å forme en syklisk struktur (eksempler på slike grupper inkluderer pyrindalyl- grupper, eventuelt substituert med en eller flere arylsubstituenter som definert her, foruten når definert annerledes).
Termen "heterocykloalkyl" refererer til en cykloalkylgruppe med i det minste et karbonatom i ringen utbytt med et heteroatom eller heteroatom- inneholdende gruppe, f. eks. 0, S, N eller NR<7>, der R<7>er hydrogen eller alkyl. Foretrukne heterosykloalkyl-grupper inneholder et eller flere N- atomer, f. eks. imidazolidin, piperidin, morfolin, piperazin, pyrolidinon, pyrazolidin og quinuclidin. Mer foretrukne eksempler er heteromonosycloalkaner med et eller flere N- atomer, f. eks. piperidin og piperazin. Der en heteromonosycloalkan- gruppe er beskrevet som "eventuelt substituert" så kan den gruppen være substituert av en eller flere substituenter, spesielt av en eller flere en eller flere "alkylgruppe- substituenter" som definert her.
Termen "hydrofob gruppe" refererer til en lipofil gruppe som normalt sett er elektrisk nøytral og ikke- polar. Hydrofobe grupper foretrekker nøytrale og ikke- polare løsningsmiddel eller molekylære miljøer, i motsetning til vanninneholdende miljøer. En hydrofob gruppe kommer derfor å ha en affinitet for andre hydrofobe grupper i en normal fysiologisk miljø. Eksempler på hydrofobe grupper inkluderer normalt alkyl- og sykloalkyl- grupper, fortrinnsvis ikke-substituerte, og aryl- grupper.
Forbindelsen beskrevet i foreliggende oppfinnelse kommer generelt sett å bli brukt ved en pH som er den samme som, eller nær, fysiologisk pH. Den hydrofobe karakteren hos forbindelsene, eller av spesielle deler innenfor disse forbindelser, blir bestemt av om delen er ladet ved en slik pH. For eksempel 1 -(2-aminoetyl)piperidin er en hydrofobisk gruppe når, nitrogenet er uladet ved fysiologisk pH.
Termen "ligand" refererer til et molekyl som binder til et protein, peptid eller polypeptid. Foreliggende oppfinnelses ligander er substituerte heteroaromatiske forbindelser som for eksempel triaziner.
Termen "PrPc" refererer til det rene prionproteinmolekylet som er naturlig og vidt uttrykket i kroppen hos pattedyr. Dets struktur er veldig konservert og er ikke assosiert med en sykdomstilstand.
Termen "PrPsc" refererer til den konformasjonsendrete formen av PrPc molekylet som er som er tenkt å være infeksiøse og er assosiert med TSE/prionsykdommer, inkludert vCJD, CJD, kum, fatal insomnia, GSS, skrapesyken, BSE, CWD, og andre sjeldne TSEs hos fangne dyr og forsøksdyr. Det har den samme aminosyresekvensen som normalt, cellulært PrPc, men noen av a-heliksene er konvertert til (3-flak og er assosiert med en sykdomstilstand.
Termen "PrPres" refererer til proteinasresistente derivat av PrPsc- proteinet på 27-30 kDa som forblir igjen etter partiell digestion av PrPsc med PK.
Termen "PrP" refererer til prionprotein generelt.
Termen "spacer" refererer til en optisk del som binder affinitetsliganden til en support matriks. En foretrukket klasse av spacere er representert av den generelle formelen
(II):
Der
T representerer 0, S eller NR<7>;
V representerer en -0-, -S-, -COO-, -CONH- eller-NHCO-, -PO3H-, -NH-arylene-S02-CH2CH2- eller-NR<7>;
L representerer en optisk substituert hydrogenkarbon- kobling som inneholder 2 til 20 karbon atomer; og
a erO eller 1.
Termen "supportmatriks" refererer til hvilken som helst forbindelse eller material, enten partikulært eller ikke-patrikulært, løselig eller ikke-løselig, porøs eller ikke-porøs, som kan bli brukt for å danne en affinitetsligandmatriks- sammensetting i henhold til oppfinnelsen og som gir en passende måte å separere affinitetsligandene fra bestanddelene i en løsning. Support- matriksen kan derfor ta formen av en kolonne, perler, små partikler, en membran eller et nett, for eksempel.
Eksempler på support- matrikser inkluderer løselige support- matrikser så som naturlig forekommende polymerer, det vil si en polypeptid eller et protein, som for eksempel kryss- koblet albumin eller et polysakkarid som for eksempel agaros, alginat, karragen, kitin, cellulose, dekstran eller stivelse; syntetiske polymerer som for eksempel polyakrylamid, polystyren, polyakrolein, polyvinylalkohol, polymetylakrylat, perfluorokarbon; uorganiske forbindelser som for eksempel kiseldioksid, glass, kiselguhr, aluminium, jernoksid og andre metalloksider, eller kopolymerer bestående av hvilken som helst kombinasjon av to eller flere naturlig forekommende polymerer, syntetiske polymerer og uorganiske forbindelser.
Også inkludert i definisjonen av support matriser er løselige support- matriser inneholdende polymerer som for eksempel dekstran, polyetylen glykol, polyvinyl alkohol eller hydrolyser! stivelse som gir en affinitetsligandmatriks- sammensetting for bruk i væskeseparering; eller faste support- matriser inneholdende forbindelser som for eksempel perfluorodekalin som gir affinitetsligandmatriks- sammensettinger for bruk i danningen av affinitetsemulsjoner.
Videre inkludert i definisjonen av support- matriser er support- matriser som for eksempel agaros, cellulose, dekstran, stivelse, alginat, karragen, syntetiske polymerer, silikater, glass og metalloksider som har blitt, eller er, modifisert ved behandling med en aktiverende agent før, eller under, festing av liganden.
Support- matriser er foretrukket eventuelt aktivert agaros, silikat, cellulose, glass, metakrylate, hydroksyetylmetakrylate, polyakrylamid, styrendivinylbenze, Hyper D eller perfluorokarboner. Mest foretrukket er support- matrisen av metakrylat-materialer, av typen som selges under varenavnet Toyopearl (tilgjengelig fra Tosoh Bioscience LLC, 156 Keystone Drive, Montgomeryville, PA 18936, USA).
WO 97/10887 beskriver fremgangsmåter for festing av affinitetsliganden til support matrisen, det vil si anvendelsen av aktiveringsfremgangsmåter, og fremgangsmåter for festing av affinitetsliganden til en matriks ved hjelp av en spacer, det vil si gjennom kondenseringsreaksjoner, for å danne affinitetsligand- sammensettinger.
Forbindelser med formelen (I) er foretrukket i hvilken både X<1>og X<2>representerer nitrogen atomer.
Forbindelser med formelen (I) er foretrukket i hvilken både Z og Y representerer NR<4>, spesielt hvor R<4>er hydrogen.
Det er foretrukket at i det minste en av R<1>og R<2>representerer en eventuelt substituert alkyl- gruppe.
I en første gruppe av spesielt foretrukne forbindelser med generell formel (I), hvor
a) X<1>og X<2>er fortrinnsvis nitrogen begge to; b) både Z og Y representerer fortrinnsvis NR<4>, spesielt der R<4>er hydrogen; c) m er fortrinnsvis fra 0 til 4, mer foretrukket fra 0 til 3, og mest foretrukket fra 1 til 3; d) Q1 er fortrinnsvis -NR11R12;og R<11>og R<12>danner fortrinnsvis, til sammen med nitrogenatomet som de er festet til, en heterosykloalkyl- gruppe; e) n er fortrinnsvis fra 0 til 4, mer foretrukket fra 0 til 2, og mest foretrukket er 0; ogf)R<21>og R<22>danner fortrinnsvis, til sammen med karbonatomet eller nitrogenatomet som de er festet til, en sykloalkyl- eller heterosykloalkyl- gruppe.
Spesielt foretrukne grupper som Q<2>kan representere inkluderer hydrofobiske sykloalkyl- og heterosykloalkyl- grupper, spesielt med ringsystem som inneholder i det minste seks atomer. Eksempler på slike grupper inkluderer sykloheksyl, piperidyl, spesielt 1-piperidyl, og forende karbosykliske ringsystem, det vil si norbornyl. Slike grupper er fortrinnsvis ikke- substituert, spesielt ikke substituert med noen annen polar substituent.
Spesielle grupper som Q<1>kan representere inkluderer heterosykloalkyl grupper, spesielt piperidyl, spesielt 1-piperidyl, og piperazinyl, spesielt 1-piperazinyl.
En gruppe av spesifikke forbindelser med formelen (I) som har funnets ut å være brukbare i oppfinnelsen er forbindelser i hvilke: R<3>er som definert ovenfor;
X<1>ogX<2>er begge N;
Y og Z representerer begge to NH;
m representerer 2;
Q<1>representerer piperidyl eller piperazinyl;
n representerer 0 eller 2; og
Q<2>representerer 1-piperidyl eller adamantyl.
BESKRIVELSE AV FORETRUKNE UTFØRELSESFORMER
Foretrukne utførelsesformer av foreliggende oppfinnelse kommer nå å bli beskrevet, med hjelp av illustrasjoner kun, med referanser til de følgende
fremgangsmåtebeskrivelsene og Eksemplene.
Syntese av Ligander
Fremgangsmåter gjennom hvilke forbindelser med formelen (I) kan bli forberedt er generelt sett kjente for fagmannen. Referanser kan bli gitt, for eksempel, til fremgangsmåter om synteser vist i W097/10887.
En fremgangsmåte, hvor forbindelser med formelen (I) kan bli forberedt, innebefatter reaksjon av en forbindelse med generell formel (II)
i hvilken R<1>, Z, R<2>, Y, X<1>og X<2>er som definert oven i relasjon til formelen (I), med en amin- inneholdende support- matriks. En annen fremgangsmåte hvor forbindelser med formelen (I) kan bli forberedt innebefatter reaksjon av en forbindelse med formelen (III) i hvilken R<1>, Z, X<1>og X<2>er som definert oven i relasjon til formelen (I), med en amin-inneholdende support matriks for å danne en forbindelse med formelen (IV)
i hvilken R<1>, Z, X<1>og X<2>er som definert oven i relasjon til formelen (I) og R<3>representerer support matriksen eventuelt festet gjennom en spacer, fulgt av reaksjon av forbindelsen med formelen (IV) med en forbindelse med formelen H-Y-R<2>.
I en videre generell preparasjonsfremgangsmåte, en forbindelse med formelen (V)
i hvilken X<1>og X<2>er som definerte oven i relasjon til formelen (I) og R3 representerer en support matriks eventuelt festet gjennom en spacer, er reagert sekvensielt med forbindelser med formelen H-Z-R<1>og H-Z-R<2>.
Ligandidentifikasjon
Ligander kan bli identifisert som følger. Mimetikabiblioteker blir syntetisert og screenet for evnen til å binde til prionanalyter. Prionanalyter passerer gjennom kolonnen og bundne analytter blir detektert gjennom å bruke konvensjonelle fremgangsmåter slik som gjennom en merket antistoff spesifikk for prionprotein. Perler til hvilke analytten har blitt bundet blir identifisert som å være passende ligander.
Bruk av Ligander for å Fjerne Prioner
Ligander som binder prioner eller fragmenter av prioner er brukbare for en varietet av analytiske, preparerende, og diagnostiske applikasjoner. Prionbindende ligander kan bli immobilisert med hjelp av en støtte slik som en perle eller en membran, og brukt for å binde og fjerne prioner fra prøven. Den faste overflaten som ligandene er bundne til får komme i kontakt med prøven, slik som en biologisk væske, under forhold tilstrekklige for å årsaka danning av et prionligand- sammensetning, og prionprotein i prøven binds til liganden. Den faste overflaten separeres deretter fra prøven, og derved fjernes prionproteinet bundet til liganden, som er festet til den faste overflaten, fra prøven. Foreksempel, resinerog membraner for fjerning av kontaminanter er velkjente for fagmannen, slik som de beskrives i Baumbach et al, US Patent No 5,834,318 og WO 01/77687.
Eksempler på biologiske prøver inkluderer, men er ikke begrenset til, blod, blodderiverte sammensetninger og serum. Addisjonene biologiske prøver inkluderer cerebrospinal væske, urin, saliv, melk, duktil væske, tårer og sæd. Andre prøver kan inneholde kollagen, hjerne og kjertel ekstrakt.
Mange fremgangsmåter for å immobilisere molekyler til en varietet av faste overflater er kjente for fagmannen. For eksempel, den faste overflaten kan være en membran (f. eks. nitrocellulose), en mikrotiterdisk (f. eks. PVC, polypropylen, eller polystyren), et prøverør (glass eller plastikk), en målepinne (f. eks. glass, PVC, polypropylen, polystyren, lateks, og slike), et mikrosentrifugerør, eller en glass-, silikat-, plastikk-, metall- eller polymerperle. Den ønskete komponenten kan være kovalent bundet, eller ikke- kovalent festet gjennom ikke- spesifikk binding.
En vid varietet av organiske og uorganiske polymerer, både naturlige og syntetiske kan bli benyttes som materiale for den faste overflaten. Illustrative polymerer inkluderer polyetylen, polypropylen, poly(4-metylbuten), polystyren, polymetakrylat, polyakrylat, poly(etylen tereftalat), rayon, nylon, poly(vinyl butyrat), polyvinylidendifluorid (PVDF), silikoner, polyformaldehyd, cellulose, celluloseacetat, nitrocellulose, og slike. Andre materialer som kan bli benyttet, inkluderer papir, glass, keramikk, metaller, metalloider, semiledende materialer, sement eller slike. Dessuten kan substanser som danner geler, slik som proteiner (f. eks. gelatiner) lipopolysakkarider, silikater, agaros og polyakrylamid bli brukt. Polymerer som danner flere vannfaser, slik som dekstran, polyalkylen, glykoler eller overflatemolekyler, slik som fosfolipider, langkjedete (12-24 karbon atomer) alkylammoniumsalter og slike er også passende. Hvis den faste overflaten er porøs kan varierende porestørrelser bli benyttet avhengig av systemets natur. Dessuten kan peptidet bli inkorporert under polymerisering av den faste overflaten.
Ved preparering av overflaten kan en mangfold av forskjellige materialer bli benyttet, f. eks. som laminater, for å beholde forskjellige egenskaper. Foreksempel, protein-overflatebehandling, slik som gelatin kan bli brukt for å unngå ikke spesifikk binding, forenklet kovalent konjugasjon, og økende signaldeteksjon eller slikt.
Om kovalent binding mellom en forbindelse og overflaten er ønsket, er overflaten vanligvis polyfunksjonell eller kan være i stand til å være polyfunksjonalisert. Funksjonelle grupper som kan være tilstede på overflaten og brukt for sammenlenking kan inkludere karboksyl- syrer, aldehyder, amino- grupper, cyano-grupper, etyleniske grupper, hydroksyl- grupper, merkapto- grupper og slike. Måten å sammenlenke en vid varietet av forbindelser til forskjellige overflater er vel kjent og er utførlig illustrert i litteraturen.
Prionproteiner kan også bli separert fra andre proteiner i en prøve ved å bruke affinitetskromatografi. Ligander i følge oppfinnelsen kan bli festet til en fast støtte, slik som et resin eller en membran, og brukt for å binde og fjerne prionen fra løsningen. I dette tilfelle kan liganden bli koblet til en fast støtte, f. eks. en inert support slik som en membran eller et resin, og prionproteinet binder til den immobiliserte agenten. Den immobiliserte agenten/prionen kan bli detektert ved hjelp av antistoffer. Om ønsket kan en eller flere av sekvensene fra den initiale screeningen bli immobilisert på et resin, som en polymetakrylat eller agarose. Andre typer av resiner som kan bli brukt inkluderer, f. eks. sefarose, tverrbundne polysakkarider, celitt, PVDF, akrylat, polystyren og cellulose. Membraner slik som, f. eks. nylon og cellulose kan også bli brukt. Resinet kan være et polymetakrylatresin.
Bruk av Ligander for å Detektere Prioner
Ligandene beskrevet her er også brukbare i en fremgangsmåte for å detektere
tilstedeværende av eller kvantifisere et prionprotein i en biologisk prøve. En biologisk prøve slik som, men ikke limitert til, de listet ovenfor er kontaktet med en ligand under forhold tilstrekkelige for å årsaka danningen av et kompleks mellom prionproteinet og liganden. Komplekset blir deretter detektert med konvensjonelle fremgangsmåter, derved detekteres tilstedeværende av prionet i den biologiske prøven.
Komplekset detekteres gjennom merking av liganden, kombinering av den merkete liganden med prøven, og detektering av ligand- phon komplekset. Liganden er merket under ligandproduksjonen, slik som under peptid syntesen, eller en merking blir konjugert til liganden ved forbinding til liganden, enten kovalent eller ikke-kovalent. Alternativt kan et bindingsmolekyl spesifikt for liganden, slik som en antistoff, bli merket og komplekset detekteres indirekte. En stor variasjon av merkings- merknader og konjugasjonsteknikker er kjente og er omfattende rapportert i både vitenskaplige og patent litteratur. Passende markører inkluderer radionukleotider, enzymer, substrater, cofaktorer, inhibitorer, fluorescens- deler, kjemiluminescens- deler, magnetiske partikler, og slikt.
Deteksjon kan gjennomføres med hvilken som helst kjent fremgangsmåte, slik som immunoblotting, western analyse, gel- mobilitetskift fremgangsmåter, fluorescens in situ hybridiserings analyser (FISH), sporing av radioaktive eller bioluminescens-markører, kjernemagnetisk resonans, elektronparamagnetisk resonans, stopped-flow spektroskopi, kolumne- kromatografi, kapillær- elektrofores, eller andre fremgangsmåter som sporer et molekyl basert på en forendring i størrelse og/eller ladning. Den spesielle markøren eller detekterbare gruppen brukt i fremgangsmåtene er ikke en kritisk aspekt av oppfinnelsen. De detekterbare gruppene kan være av hvilket som helst materiale som har en detekterbar fysisk eller kjemisk egenskap. Slike detekterbare markører har blitt godt utviklet og, generelt, hvilken som helst markør brukbar i slike fremgangsmåter kan bli applisert til foreliggende fremgangsmåte. Derfor er en markør en hvilken som helst sammensetning som er detekterbar på en spektroskopisk, fotokjemisk, biokjemisk, immunokjemisk, elektrisk, optisk eller kjemisk måte. Brukbare markører i foreliggende oppfinnelse inkluderer fluorescerende farge (f. eks. fluorescein isotiocyanat, Texas red, rhodamine, og slikt), radiomarkører (f. eks.<3>H,125l,35S, 1<4>C, eller<32>P), enzymer (f. eks. LacZ, CAT, hest reddik peroksidas, alkaline fosfatase og andre, vanlig brukte som detekterings enzymer, enten i en EIA eller i en ELISA), og kolorimetriske markører slik som kollodiale gull eller ferget glass eller plastikk (f. eks. polystyren, polypropylen, lateks, etc.) perler. Markøren kan være koblet direkte eller indirekte til den ønskede komponenten hos fremgangsmåten ifølge fremgangsmåter godt kjent av en fagmann. Som indikert ovenfor, en vid varietet av markører kan bli brukt, med valget av markør avhengig av forlanget sensitivitet, enkelthet av konjugasjon hos forbindelsen, stabilitets krav, tilgjengelig instrumentasjon, og avfallsforsyning.
Ikke- radioaktive markører er ofte festet på indirekte måter. Generelt, er en ligand-molekyl (f. eks, biotin) er kovalent bundet til molekylet. Liganden binder deretter til en anti- ligand (f. eks. streptavidin) molekyl som er enten iboende detekterbar eller kovalent bundet til et signal system, slik som et detekterbart enzym, en fluorescerende forbindelse, eller en kjemiluminescerende forbindelse. Et antall ligander og anti- ligander kan bli brukt. Da en ligand har en naturlig anti- ligand, for eksempel, biotin, tyroksin, og kortisol, kan den bli brukt i konjunksjon med de markerte naturlig forekommende anti- ligandene. Alternativt, hvilken som helst haptenisk eller antigenisk forbindelse kan bli brukt i kombinasjon med en antistoff.
Molekylene kan også bli konjugert direkte til signalgenererende forbindelser, f. eks. gjennom konjugasjon med et enzym eller en fluorofor. Enzymer interessante som markører er hovedsakelig hydrolaser, spesielt peroksidasen Fluorescerende forbindelser inkluderer fluorescerin og dets derivater, rhodamin og dets derivater, dansyl, umbelliferon, etc. Kjemiluminescerende forbindelser inkluderer luciferin, og 2,3-dihydroftalazinedioner, f. eks. luminol.
Måter å detektere markører er godt kjent for fagmannen. Derfor, for eksempel, der markøren er en radioaktiv markør, inkluderer måten for deteksjon en scintillasjon-regner eller fotografisk film som ved autoradiografi. Der markøren er en fluorescerende markør, kan den bli detektert ved å eksitere fluorokromen med den passende bølgelengden på lyset og detekterer den resulterende fluorescencen, f. eks. med mikroskopi, visuell inspeksjon, via fotografisk film, ved bruk av elektroniske detektorer slik som ladede koblede innretninger (CCDs) eller fotomultipliserere og slikt. Lignende, enzymatiske markører blir detektert ved anskaffelse av passende substrater for enzymet og detekterer det resulterende produktet. Til slutt, enkle kolorimeteriske markører kan bli detektert simpelthen ved å observere fargen som er assosiert med markøren. Derfor, ved forskjellige målepinne- fremgangsmåter, opptrer konjugert gull ofte som rosa, mens forskjellige konjugerte perler opptrer i perlens farge.
Foreliggende oppfinnelsesligander kan også bli brukt for å detektere det ønskede ekstrahert i løsningen fra et fast materiale. For eksempel, en fast prøve kan bli ekstrahert med en vanndel, en organisk løsningsdel eller en kritisk væske og den resulterende supernatanten man komme i kontakt med liganden. Eksempler på faste prøver inkluderer animalsk deriverte produkter, spesielt de som har blitt eksponert fro midler som overfører prioner, f. eks. benmel derivert fra storfe kilder. Ligander i noen legemer kan bli brukt for å detektere tilstedeværende av prion proteiner i jord. Andre faste prøver inkluderer hjernevev, hornhinnevev, ekskrementmaterie, benmel, biprodukter av storfe, får, biprodukter av får, hjort og elg, biprodukter av hjort og elg, og andre dyr og biprodukter av dyr.
Alternativt kan phon- protein komplekset bli behandlet med PK. PrPc er veldig sensitiv til PL, mens PrPsc delvis blir oppløst for å danne PrPres. PrPres molekyler i seg selv er veldig resistent mot proteolyse. Derfor, PK- behandling bruker opp PrPc, og konverterer PK- sensitive PrPsc til PrPres. Når PK fjernes kan PrPres bli denaturert og detektert med antistoffer slik som 3F4.
I en annen utførelsesform, kan ligander i følge foreliggende oppfinnelse bli brukt for den selektive konsentrasjonen av PrPsc over PrPc.
Anvendelse av Ligander for å Kvantifisere Prioner
Et ligand- prion kompleks, eller alternativt, en antistoff til liganden eller ligand- prion kompleks, kan bli detektert og kvantifisert med hvilken som helst av et antall måter godt kjent for fagmenn. De inkluderer analytiske biokjemiske fremgangsmåter slik som spektrofotometri, radiografi, elektroforese, kapillar elektroforese, høyytelse væskekromatografi (HPLC), tynnsjiktskromatografi (TLC), hyperdiffusjons-kromatografi, og liknende, og forskjellige immunologiske fremgangsmåter slik som væske eller gel presipitasjonsreaksjoner, immunodiffusjon (enkel eller dobbel), immunoelektroforese, radioimmunoassays (RIAs), enzym- lenket immunosorbent fremgangsmåter (ELISAs), immunofluorescens fremgangsmåter, og liknende.
Reduksjon av Ikke- spesifikk Binding
Fagmannen vil forstå at det ofte er ønsket å redusere ikke- spesifikk binding i fremgangsmåter og under analyttfjerning fra prøver. Der fremgangsmåtene involverer en ligand eller en annen fangst agent immobilisert på et fast substrat, er det ønskelig å minimere mengden av ikke- spesifikke bindinger til det faste substratet. Måter å redusere slike ikke- spesifikke bindinger på er godt kjent for fagmenn. Typisk, involverer dette overflatebehandling av substratet med et proteinholdig sammensetning. Spesielt er proteinsammensetinger slik som storfe og humant serum albumin (BSA), ikke-fet tørrmelk, og gelatin vidt brukt.
Andre Fremgangsmåteformat
Western blot- analyser kan også bli brukt for å detektere og kvantifisere tilstedeværende av prionprotein i en prøve. Teknikken involverer generelt separering av prøveprodukter ved å bruke gelelektroforese, basert på molekylvekt med SDS tilstede, overføring av separerte proteiner til en passende fast støtte (slik som et nitrocellulosefilter, et nylonfilter, eller derivatisert nylonfilter), og inkuberer de bundne prøvene med ligandene beskrevet her. Ligandene binder spesifikt til et prionpeptid fiksert på den faste supporten. Disse ligander er direkte merket eller, alternativt, de kan være påfølgende detektert ved å bruke merkete antistoffer som spesifikt binder til liganden.
Andre fremgangsmåte format inkluderer liposom immunoassays (LIAs), som bruker liposomer designet for å binde spesifikke molekyler (f. eks. ligander) og løslater innkapslete reagenser eller markører. De løslatte kjemikaliene blir deretter detektert ifølge standard teknikker.
Farmasøytiske sammensetninger
Ligandene beskrevet her som ikke er koblet til en support- matriks er brukbare i terapeutiske og profylaktiske applikasjoner for behandling av TSEs grunnet infeksjon hos pattedyr av prionorganismer. Liganden kan forhindre polymerisering av PrPsc gjennom å inhibere bindingen av PrPsc til PrPsc. I tillegg kan det forhindre inhibering bindingen av PrPsc til PrPc, og derved minske PrPsc mediert omforming av PrPc til PrPsc og derved forsinke inntreden av kliniske symptomer. Dessuten, ligandene selv kan bli modifisert ved addisjon av en reaktiv agent for å lede molekylet til stedet for PrPsc akkumulering. Slike sammensetninger er passende for bruk i en varietet av medikamentleveringssystemer.
Sykdommer som kan bli behandlet i henhold med fremgangsmåten inkluderer, men er ikke begrenset til, BSE, overførbar mink ensefalopati, felin spongiform encefalopati, CWD, CJD, GSS, fatal insomnia, og vCJD.
De farmasøytiske sammensetningene er brakt i vei for parenteral, topikal, oral eller lokal administrasjon. Fortrinnsvis er de farmasøytiske sammensetningene administrert parenteralt, f. eks. intravenøst, subkutant, intradermalt, intranasalt eller intramuskulært. Derfor skaffer oppfinnelsen i vei for sammensetninger for parenteral administrasjon som innbefatter en løsning med agentene beskrevet oven løst eller suspendert i en akseptabel bærer, fortrinnsvis en vannbasert bærer. En varietet av vannbaserte bærere kan bli brukt, f. eks. vann, bufret vann, 0,4 % saltvann, 0,3 % glysin, hyaluronsyre, fibrin sealant og liknende. Disse sammensetningene kan bli sterilisert gjennom konvensjonelle, godt kjente steriliseringsteknikker, eller kan bli filtersterilisert. De resulterende vannløsningene kan bli pakket for bruk slik som det er, eller lyofilisert, lyofiliseringspreparasjonen er da kombinert med en steril løsning føre administrasjonen. Sammensetningene kan inneholde farmasøytiske akseptable hjelpesubstanser som trengt for å ligne fysiologiske forhold, slik som pH innstillings-og buffringsmidler, tonisitetsjusterende midler, fuktingsmidler og liknende, for eksempel natriumacetat, natriumlaktat, natriumklorid, kaliumklorid, kalsiumklorid, sorbitan monolaurat, trietanolaminoleat, etc.
Forfaste sammensetninger, kan konvensjonelle ikke toksiske faste bærere bli brukt som inkluderer, for eksempel, farmasøytiske grader av mannitol, laktose, stivelse, magnesiumstearat, natriumsakkarin, talkum, cellulose, glukose, sukrose, magnesiumkarbonat, og liknende. For oral administrasjon, blir en farmasøytisk akseptabel ikke toksisk sammensetning dannet gjennom inkorporering av hvilken som helst av den normalt brukte bestanddeler, slik som de bærerne tidligere listet, og generelt 1- 95 % av aktiv ingrediens og mer foretrukket ved en konsentrasjon på 25 % -75 %.
For aerosoladministrasjon blir de aktive ingrediensene fortrinnsvis levert i finfordelt form sammen med et overflateaktivt stoff og et drivmiddel. Det overflateaktive stoffet må, selvfølgelig, være ikke toksisk, og fortrinnsvis løselig i drivmiddel. Representativt for slike midler er estere eller partielle estere fra fettsyrer inneholdende fra 6 til 22 karbonatomer, slik som kapron, oktan, lauret palmitin, stearin, linolen, linilenen, olesterin, olein syre med en alifatisk polyhydratisk alkohol eller dets sykliske anhydrid. Blandete estere, slik som blandete eller naturlige glyserider kan bli brukt. En bærer kan også bli inkludert om ønsket, som med f. eks. lecitin for intranasal levering.
Den administrerte mengden kommer til å variere avhengig av hva som blir levert, tilstanden hos pattedyret som mottar behandling og administrasjonsmåten. I terapeutiske anvendelser blir sammensetninger administrert til et pattedyr som allerede lider av prioninfeksjon i en mengde som er høy nok til å inhibere spredningen av phonene, eller i det minste delvis stoppe opp sykdommens symptom og dens komplikasjoner. En mengde som er adekvat for å klare dette er definert som "terapeutisk effektiv dose". Mengder som er effektive for denne bruk er avhengig av voldsomheten av sykdommen, den spesielle sammensetningen, og vekten og den generelle tilstanden hos mottakeren. Generelt, dosen vil bli i rekkevidden av cirka 1 mg til cirka 5 mg per dag, fortrinnsvis cirka 100 mg per dag, for en pasient på 70 kg.
Eksempel 1
Identifikasjon av Prionbindende Ligander
De prionbindende ligandene beskrevet i tabellene nedenfor ble identifisert som følger.
Mimetikabiblioteksyntese
To 8 x 8 kombinatoriske biblioteker med mimetikaligander på epoksid- aktivert Purabead 6XL ble syntetisert (Bibliotek A og Bibliotek B). Purabead 6XL er en porøs perleagaros- support som er krysslinket for å gi holdbarhet.
Syntesefremgangsmåtene er tilsvarende de som er beskrevet i WO 97/10887, og kan lett bli gjentatt av en fagmannen innenfor fagområdet. Til oppsummering, etter fullføring av syntesen innbefatter hvert bibliotek en triazindel linket til Purabead 6XL med en fleksibel aminert spacer. Triazinkomponenten hos hvert bibliotekmedlem ble ytterligere substituert med to andre aminer.
Bibliotek A
Den fleksible aminerte spaceren for dette bibliotek var tre karbonatomer lang, og ble introdusert gjennom sekvensiell reaksjon av tverrbundet Purabead 6 XL med epiklorhydrin og ammoniakk. Tabell 1 oppsummerer de to ytterligere aminene inkorporert i triazinen hos hvert bibliotekmedlem, disse aminer tilsvarer gruppene -Z-R<1>og -Y-R<2>i formel (I). Aminene er referert til med de følgende numrene, liganden identifisert som 1/1 inneholder to 2-adamantamingrupper, som identifisert som 2/1 inneholdende en 4-(2-aminoetyl)- morfolin gruppe og en 2-adamantamingruppe, etc:
1 = 2-Adamantamin
2 = 4-(2-Aminoetyl)-morfolin
3 = 1-(2-Aminoetyl)-piperidin
4 = 1-(2-Aminoetyl)-piperazin
5 = (+/-)-2-Aminonorbornane
6 = 1-(2-Aminopropyl)-2-pyrrolidinon
7 = 3-Aminoquinuclidin
8 = 1-(2-Hydroksyetyl)-piperazin
9 = A/,A/-Dimetyl etylendiamin
Ladningen av ligandene til resinen var 12 mmol/g av fast resin, som bestemt gjennom eksperiment med fri amin etter addisjon av den aminerte spaceren, og eksperiment med kloridløslatelse etter addisjon av triklorotriazin til den aminerte spaceren.
Bibliotek B
Den fleksible aminerte spaceren for dette bibliotek var ti karbonatomer lang, og ble introdusert gjennom sekvensiell reaksjon av kryss- linket Purabead 6 XL med 1,4-butandioldiglycidyleter og ammoniakk. Tabell 2 oppsummerer de to videre aminene inkorporert i triazinen hos hvert bibliotek medlem, aminene blir referert til med de følgende numrene:
10 = (3-Alanin
11 = 2-Aminoetyl-pyridin
12 = 3-Aminobenzylalkohol
13 = Fenetylamin
14 = Tyramin
15 - 4-Fluorobenzylamin
16 - 4-Metylbenzylamin
17 - 2-(4-klorofenyl)-etylamin
18 -Tryptamin
19-Glysin
20 - L- Glutaminsyre
21 - DL-Valin
22 - 5-Aminovalonsyre
23 - 4-Aminosmørsyre
24 - L- ty rosin
25 -£- Aminokaprionsyre
Ladningen til ligandene i resinen var 19 mmol/g av fast resin, som ble bestemt gjennom eksperiment med fri amin etter addisjon av den aminerte spaceren, og eksperiment med løst klorid etter addisjon av triklorotriazin til den aminerte spaceren.
Mimetikabibliotek Bindningsscreening
Biblioteket ble invertert flere ganger, tillatt å sette seg og drenert med gravitasjon, fulgt av 2 vaskinger med 1 ml vann og 1 vask med 1 ml 10 med mer PBS, pH 7,4 per brønn. Brønnene ble stoppet og 0,5 ml PBS ble tilsatt per brønn. Biblioteket ble lagret over natt under kjøling. To rør inneholdende 1,8 ml av en 10 % hamsterhjernehomogenat (HaBH) hver ble fjernet fra lagring i flytende nitrogen og tinet. 180 ul av 5 % sarkosyl ble tilsatt hvert rør. Suspensjonen ble inkubert under rotering i 30 minutter ved romtemperatur, fulgt av sentrifugering i 10 minutter ved 13,400 rpm i en benkstående mikrosentrifuge. Supernatanten ble samlet og fortynnet 1:10 med PBS (endelig fortynning av HaHB: 1:100). Biblioteket ble drenert med gravitasjon, og 500 ul av HaHB løsningen tilsatt per brønn, og drenert med gravitasjon til en oppsamlingsplate. Straks brønnene var drenert ble hver brønn vasket med ytterligere 500 ul PBS, som ble samlet opp i samme oppsamlingsplate. Denne oppsamlingsplate ble merket som "Ikke-bundet". 500 ul av 1 M NaCI i PBS ble tilsatt til hver brønn, og samlet opp i en annen oppsamlingsplate merket "Salteluering), følgt av 500 ul av 2 % eddiksyre løsning, også oppsamlet i en oppsamlingsplate merket "Eddiksyreeluering". Deler på 26 ul fra hvert resin ble overført til mikrosentrifugerør, og lagret for analyse av de resterende bundne phonene. Ikke-bundne, salteluerings- og eddiksyreelueringsløsningene ble frosset inn i oppsamlingsplatene.
Fortynninger av HaHb løsningene med endelig konsentrasjon på 1:200 og 1:500 ble brukt som kontroller for SDS-PAGE og western blots.
Western Blot og SDS PAGE Analyse av Ikke- Bundne Fraksjoner
50 ul av hver av de "Ikke-bundne" prøvene ble tilsatt til 50 ul av en 2X prøvebuffer/reduksjonsmiddel (Blanding av Invitrogen NuPAGE LDS Sample Buffer 4X (25ul), Invitrogen NuPAGE Sample Reducing Agent (10 ul) og ACS gradert vann (15 ul)). Hvert rør ble varmet ved 90°C i 10 minutter.
Gelene ble kjørt som dublett for å så tillate Western Blot og SDS PAGE analyse av total protein. Formatet på prøvene i hver 17 brønners gel ble som følger:
En 17- brønners NuPAGE gelkassett ble vasket med avionisert vann. Den hvite tapestrimmelen og kammen ble fjernet, rennen vasket med 1X NuPAGE MES running buffer (Cat# NP0002) og kassetten ble plassert i gelreservoaret på en Xcell Mini-Gel Module (eller kompatibel). Det sentrale reservoaret ble fylt med 200 ml 1X NuPAGE MES running buffer inneholdende 500 ul NuPAGE antioksidant (Cat NP0005). Etter å ha sjekket for lekkasje ble den ytre reservoaret fylt med 1X NuPAGE MES running buffer (ingen tilsatt antioksidant). Mini-Gel modulen ble festet til en kompatibel energikilde og gelene ble kjørt i omtrent 45 minutter ved en konstant 200 V inntil fargefronten var innenfor 0,5 cm fra gel- bunnen.
SDS PAGE
Gelen ble fjernet fra gelkassetten og vasket tre ganger med ACS vann (25 ml, 5 minutter). Gelen ble ferget over en time med Invitrogen SimplyBlue Safestain, før avfarging gjennom tre vaskinger med ACS vann (25 ml, 1 time).
Western Blot
En 17-brønners NuPAGE gelkassett (eat. # NP0349) ble vasket med avionisert vann og rennene vasket med 1X NuPAGE running buffer. Gelen var plassert i en Xcell Mini-Gel Module (Invitrogen cat# EI0001) eller kompatible apparater. Det lavere kammeret ble fylt med 1X running buffer fra lager løsningen (Invitrogen 20X NuPAGE MES Running Buffer eat #NP0002 eller # NP0002-02). Det øvre kammeret ble fylt med 1X running buffer inneholdende antioksidant (Invitrogen eat #NP0005).
Til hver prøve ble det tilsatt prøvebuffer inneholdende reduksjonsmiddelet (Invitrogen eat # NP0007 og eat # NP0004), og prøvene ble varmet opp til 90°C i 10 minutter, sentrifugert en kort stund, og 5 ul av hver prøve ble påfylt. 5 ul av molekylvektmarkøren (Invitrogen eat # LC5925) ble også fylt på. Gelen ble kjør med elektroforese i 45 minutter ved en konstant 200 V. Etter kjøringen var fullstendig, ble kassetten fjernet fra enheten, åpnet, og gelen fjernet. Gelen ble gjennombløtet i kjølt overføringsbuffer i 5 minutter.
Overføringsmembranen ble fuktet i metanol, overført til overføringsbuffer og inkubert
i 2 X 10 minutter under risting. Elektrode overføringsbuffer fra stamløsning (Invitrogen eat # NP0006-1) ble forberedt med tilføyelsen av 20 % metanol og antioksidant, og kjølt før bruk. Reservoaret av overføringskammeret (BioRad eat #170-4070) ble halvfylt med kjølt elektroblot overføringsbuffer. En BioRad overføringsenhetskassett i et plastisk BioRad overføringskassettbrett ble forberett med adekvate volumer av kjølt elektroblot overføringsbuffer. Overføringssandwichen
ble forberedt gjennom lag på lag i rekkefølge svamp, filterpapir, PVDF overføringsmembran (Invitrogen eat. # LC2005), gel, filterpapir, og svamp. Kassetten ble brettet og klemt sammen. Gelene ble overført i 45 minutter ved en konstant 100V, med kammeret i romtemperatur.
Etter overføring ble membranen plassert i en ren disk og inkubert i 1 time på en gyngende plattform ved romtemperatur i 25 ml Western Breeze blokkeringsagent fra Invitrogen Western Breeze Chemiluminescence Kit, anti-Mouse (eat. # WB7104).
Membranen ble deretter inkubert i en 1:10000 fortynning av Signet 3F4 primært antistoff 3F4 monoklonalt antistoff fra mus (SIGNET, eat # 9620) stamløsning i 20 ml fersk Western Breeze Primary Antibody Diluent over natten, under kjøling på en gyngende plattform. Blottet ble vasket 3 ganger i 20 ml Western Breeze Antibody Wash og membranen deretter inkubert i 1:10.000 KPL-AP sekundært antistoff (KPL, eat. # 075-1802) i 20 ml Western Breeze Primary Diluent i 60 minutter ved romtemperatur på en gyngende plattform. Blottet ble vasket som over, deretter vasket med 20 ml 20mM Tris-Hcl, 1 mM MgCl2ved pH 9,8 i 10 minutter ved romtemperatur. Membranen ble overført til en tørr ren disk og gjennombløtt med 5 ml Western Breeze forblandet Chemiluminescence Substrate (CDP Star) i 5 minutter under varsom omrøring. Den alkaliske fosfatasen ble tillatt å reagere for 30 minutter. Blottet ble overført i en arkbeskytter til en film kassett og eksponert på film (Amersham eat. # RPN-3130K) i 5 minutter ved romtemperatur og fremkalt i et fremkallingsapparat.
Eksempel 2
Bruk av ligand 5/ 4 Festet til Agaros for Oppfanging av PrPc Fra Konsentrat av Røde Blodceller
En adsorbent inneholdende ligand 5/4 festet til PuraBead 6XL basematriks ble syntetisert som beskrevet i Eksempel 1 for å skaffe i vei for en forbindelse med formelen (VI):
En prøve med 10 % w/v normal hamsterhjernehomogenat i PBS buffer (100 ul) ble tint og 10 ul 10 % (w/v) sarcosyl ble tilsatt, blandet ved virvling og lagret i bløt is i 30 minutter. Blandingen ble sentrifugert ved 14,000 rpm i 5 minutter ved +4°C og supernatanten ble fjernet. Humant rød blodcellekonsentrat (RBCC; 250 ml) ble blandet med Adsol (110 ml) og varsomt blandet gjennom inversjon. Fortynnet RBCC (1,8 ml) ble fjernet og blandet med 0,2 ml hamsterhjerne homogenatoppløsning.
En 1:1 suspensjon (400 ul) av forbindelse (VI) suspendert i 40 mM citratbuffer/280mM NaCI pH 7,0 ble tilsatt til en 1,0 ml mikro- kolonne og ble tillatt å dreneres under gravitasjon. Hamsterhjernehomogenat i RBCC (1 ml) ble pipettert på den festede affinitets adsorbenten og tillattes å drenere. Adsorbenten ble etterpå vasket med 1 ml suspensjonsbuffer og tillatt å drenere. Begge strømmer gjennom fraksjonene ble oppsamlet, kombinert og lagret ved -20°C.
Affinitetsadsorbenten ble fjernet fra kolumnen gjennom suspendering i 0,5 ml suspensjonsbuffer og overført til en kryoflaske. Volumet av den overførte affinitetsadsorbenten ble dokumentert etter å ha tillatt flaskens innehold å synke og volumet til supernatanten ble justert til å skaffe i vei for en 1:1 blanding. En prøve (200 ul) ble overført til en mikrofugeflaske for bruk i SDS-PAGE og Western blot analyse av bundne proteiner som beskrevet i Eksempel 1.
Tilstedeværende av sterke bånd av western blot korresponderende til hamster PrPc indikert ligand 5/4 festet til Purabead 6XL (perleagaros matriks) er i stand til å binde PrPc selektivt fra humant rødt blodcellekonsentrat.
Eksempel 3
Preparasion av Prionprotein Bindingsligander festet til Polvmetakrvlat Resin Perler
Dette eksempel beskriver preparasjonen av et antall ligander inneholdende aminer brukt i Bibliotek A og B, men på aminerte polymetakrylat støtter (Toyopearl 650M), heller enn agaros.
3. 1 Diklorotriazin derivat av aminerte Toyopearl 650M
Toyopearl AF - Amino-650M (36 g) ble vasket på en sinter trakt med ti porsjoner (36 ml) RO- vann, deretter ble gelen drenert og resuspendert i 1 M kalium fosfat pH 7,0 (36 ml). Gelen ble tillatt å dreneres og deretter resuspendert i 1 M kalium fosfat pH 7,0 (27 ml) og RO- vann (27 ml). Blandingen ble overført til en reaksjonskar i glass med omrøring og 54 ml aceton ble tilsatt. Blandingen ble nedkjølt til 0°C, deretter til denne ble tilsatt cyanurinklorid (2,7 g) løst i kald (0°C) aceton (27 ml) og blandingen ble omrørt i 1 time ved 0-4°C. Den resulterende blandingen av diklorotriazinaktivert produkt ble hellet i et glass sinter og vasket med vannaceton (50 % v/v, 180 ml), RO-vann (180 ml), vannaceton (50 % v/v, 180 ml), RO- vann (180 ml), vannaceton (50 % v/v, 180 ml) og RO- vann (360 ml).
3. 2 Monoklorotriazin intermediærer
Forskjellige monoklorotriazin intermediærer ble tilberedt fra diklorotriazinaktiverte Toyopearl 650M som følger:
3.2.1 Monoklorotriazinaminerte Toyopearls 650M addisjonsprodukt av 1 -(2-aminoetyl)piperidin (amin 3) ble tilberett ved å løse 1 -(2-aminoetyl)piperidin (0,47 g) i RO-vann (28,8 ml) og kjøle løsingen til 4°C. Blandingen ble satt til 7 g diklorotriazinaktivert aminert Toyopearl som hadde blitt gjennombløtet i vann på en glassinter, overført til et reaksjonskar av plast og kjølnet til 4°C. Blandingen ble ristet i 2 timer ved 4°C, deretter ble blandingen helt over i en glassinter, vasket med vann-DMF (50% v/v, 35 ml), RO- vann (70 ml), deretter tillatt å drenere på sinteren.
3.2.2 Monoklorotriazinaminerte Toyopearl 650M addisjonsprodukt av (+/-) 2-aminonorbornane (amin 5) ble tilberedt ved å løse (+/-) 2-aminonorbornane (0,82 g) i vann- DMF (13,3% v/v, 57,68 ml), og kjøle løsningen til 4°C. Blandingen ble satt til 14 g diklorotriazinaktivert aminert Toyopearl som hadde blitt drenert i vann på en glassinter, overført til et reaksjonskar i plast og kjølnet til 4°C. Blandingen ble ristet i 2 timer ved 4°C, deretter ble blandingen helt over i en glassinter og vasket med vann-DMF (50% v/v, 70 ml), RO- vann (140 ml), deretter tillatt å drenere på sinteren.
3.2.3 Monoklorotriazinaminerte Toyopearl 650M addisjonsprodukt av L-glutaminsyre (amin 20) ble tilberedt ved å løse L- glutaminsyre (0,515 g) i vann- DMF (50% v/v; 28,0 ml) og natriumhydroksid i vann (10 M; 0,7 ml) og deretter kjøle løsningen til 4°C. Blandingen ble satt til diklorotriazinaktivert aminert Toyopearl (7 g) som hadde blitt drenert i vann på en glassinter, overført til et reaksjonskar i plast og kjølnet til 4°C. Blandingen ble ristet i 70 minutter ved 4°C, deretter ble blandingen helt over i en glassinter og vasket med vann- DMF (50% v/v, 70 ml), RO- vann (140 ml), deretter tillatt å drenere på sinteren.
3.2.4 Monoklorotriazinaminerte Toyopearl 650M addisjonsprodukt av 5-aminovalinsyre (amin 22) ble tilberedt ved å løse 5- aminovalinsyre (0,41 g) i vann-DMF (50% v/v; 28,0 ml) og natriumhydroksid i vann (10 M; 0,35 ml) og kjøle løsningen til 4°C. Blandingen ble satt til 7 g diklorotriazinaktivert aminert Toyopearl som hadde blitt drenert i vann på en glassinter, overført til et reaksjonskar i plast og kjølnet til 4°C. Blandingen ble ristet i 60 minutter ved 4°C, deretter ble blandingen helt over i en glassinter og vasket med vann- DMF (50% v/v, 70 ml), RO- vann (140 ml), deretter tillatt å drenere på sinteren.
3.2.5 Monoklorotriazinaminerte Toyopearl 650M addisjonsprodukt av glysin (amin 19) ble tilberett ved å løse glysin (0,563 g) i vann- DMF (50% v/v; 61,4 ml) og natriumhydroksid i vann (10 M; 0,75 ml) og kjøle løsningen til 4°C. Blandingen ble satt til 15 g diklorotriazinaktivert aminert Toyopearl som hadde blitt drenert i vann på
en glassinter, overført til et reaksjonskar i plast og kjølnet til 4°C. Blandingen ble ristet i 60 minutter ved 4°C, deretter ble blandingen helt over i en glassinter og vasket med vann- DMF (50% v/v, 75 ml), RO- vann (150 ml), deretter tillatt å drenere på sinteren.
3. 3 Sluttprodukter
Løsninger av aminer for det andre stadiets reaksjoner ble tilberedt som følger:
3.3.1 1-(2-aminoetyl)piperidin (amin 3; 0,94 g) ble løst i RO- vann (10,8 ml).
3.3.2 1 -(2-aminoetyl)piperazin (amin 4; 1,90 g) ble løst i RO- vann (21,6 ml) og deretter delt i to deler (11,8 ml hver).
3.3.3 2-(2-Aminoetyl)pyridin (amin 11; 0,84 ml) ble løst i vann- DMF (50% v/v; 10,9 ml), ordnet i to like deler.
3.3.5 Tyramin (amin 4; 0,96 g) ble løst i DMF (10,8 ml).
Reaksjonsblandinger ble samlet sammen fra kombinasjoner av den passende monoklorotriazin intermediæren og andre stadiets amin, ordnet i en reaksjonskar av plast inneholdende monoklorotriazin intermediæren (7 g) og aminoløsningen til et totalt løsningsvolum på 35 ml, inkluderende 5,7 5ml RO- vann sammen med de 7 g av monoklorotriazin mellomproduktet. Hvert kar ble tumlet ved 60°C i 24 timer. Gelene ble deretter vasket med vann- DMF (50% v/v, 35 ml), RO- vann (35 ml), 0,1 M saltsyre (35 ml), vann- isopropanol (30% v/v) inneholdende natriumhydroksid (0,2 M) (35 ml), Ro- vann (70 ml) og vann- etanol (20% v/v, 21 ml) og lagret i vann- etanol (20% v/v) ved 4°C.
Eksempel 4
Bruk av Prionbindningsligander Festet til Polymetakrylat Resin for Oppfangning av PrPsc fra Konsentrat av Røde Blodceller
Forbindelser innbefattende affinitetsligander festet til en perlete polymetakrylat-matriks (Toyopearl) ble syntetisert som beskrevet i Eksempel 3. En ekstrakt (1 % w/v) av skrapesyke- infisert hamsterhjerne spiked med konsentrat av humane røde blodseller (RBCC) ble preparert ved å bruke prosedyren beskrevet for normalt hamsterhjerne- homogenat (Eksempel 2). Bindingen av PrPsc gjennom polymetakrylat- affinitetsadsorbentene ble bestemt ved å pakke adsorbentblandinger i 1 ml mikrokolumner og stimulert med spiked RBCC ved å bruke prosedyren beskrevet i Eksempel 2. SDS-PAGE og western blotter på prøver ekstrahert fra affinitetsadsorbantene ble utført som beskrevet i Eksempel 1 med unntaket at det andre settet av prøvehalvpartene ble behandlet med proteinase K før blanding med SDS- PAGE reduksjonsbuffer.
Western blot analyse indikerte at polymetakrylat- resiner inneholdende ligandene 5/4, 19/13, 5/3, 22/13 og 19/14 demonstrerte alle høy affinitet for PrPsc i tilstedeværende av konsentrat av humane røde blodceller. Bindingen av PrPsc ble bekreftet ved å sammenligne båndmønstrene oppnådd ved western blot +/- proteinas K behandling. Tilstedeværelsen av klart synlige bånd av svakt lavere molekylvekt for den proteinas K behandlede prøven sammenlignet med den ikke- behandlede prøven bekreftet bindingen av den proteinas K resistente formen (infeksiøse formen) av PrP.
Eksempel 5
Bruk av Prionbindingsligander Festet til Polymetakrylat Resin for Oppfanging av det Humansporadiske CJD- Forårsakende Prionet fra Konsentrat av Røde Blodceller
Eksperimentet beskrevet i Eksempel 4 ble gjentatt ved å bruke RBCC spisset med
1 % (w/v) humansporadisk CJD- hjerne- homogenat. Western blot analyses indikerte at polymetakryl- resiner inneholdende ligandene 5/4, 19/13, 5/3, 22/13 og 3/4 demonstrerte alle sammen en høy affinitet for PrP fra humansporadisk CJD- hjerne ved tilstedeværelse av konsentrat av humane røde blodceller.
Eksempel 6
Bruk av ligand 5/ 4 Festet til Polymetakrylat Resinperler for Oppfanging av PrPsc fra human plasma og humant blod
En affinitetsadsorbent inneholdende ligand 5/4 festet til en perlete polymetakrylat-matriks ble syntetisert som beskrevet i Eksempel 3. Ekstrakt (1 % w/v) av skrapesykeinfisert hamsterhjerne spiked inn i humant oppsamlet plasma og humant helblod ble forberedt ved å bruke prosedyren beskrevet for normalt hamsterhjernehomogenat og RBCC (Eksempel 2). Bindingen av PrPsc gjennom polymetakrylat-affinitetsadsorbenter ble bestemt ved å pakke adsorbasjonsoppslemminger i en 1 ml mikrokolumne og lade den med spiked plasma og helblodprøver ved å bruke prosedyrene beskrevet i Eksempel 2. SDS-PAGE og western blots av prøver ekstrahert fra affinitetsadsorbentene ble utført som beskrevet i Eksempel 1 med unntaket at det andre settet av prøvehalvpartene ble behandlet med proteinase K før blanding med SDS- PAGE reduserende buffer.
Western blot analyse indikerte at polymetakrylat- resiner inneholdende ligandene 5/4 demonstrerer høy affinitet for PrPsc ved tilstedeværende av human plasma og helt humant blod. Bindingen av Prpsc ble bekreftet ved å sammenligne båndmønstrene oppnådd ved western blot +/- proteinas K behandling. Tilstedeværelsen av klart synlige bånd av svakt lavere molekylvekt for den proteinas K behandlede prøven sammenlignet med den ikke- behandlede prøven bekreftet bindingen av den proteinas K resistente formen (infeksiøse formen) av PrP.
Det vil være synlig for en fagmann at ligand 5/4 og andre ligander beskrevet her festet til support- matriksen slik som polymetakrylat er spesielt brukbare for oppfanging og konsentrering av bred varietet av prionproteinformer fra forskjellige blodkomponenter, inkluderende helt blod, RBCC og plasma. Slike materialer er derfor av eksepsjonell verdi for fjerningen av PrP fra slike komponenter og som et middel for PrP konsentrasjonen for å bistå påfølgende deteksjon og kvantifikasjon.
Selv om fremgangsmåter og materialer lignende eller ekvivalente med de som er beskrevet her kan bli brukt ved praktisering eller testing av den foreliggende oppfinnelsen, er passende fremgangsmåter og materialer er beskrevet oven. I tillegg er materialene, fremgangsmåtene og eksemplene kun illustrative og er ikke tilsiktet til å være begrensende.

Claims (7)

1. Anvendelse, ex vivo, av en forbindelse med formelen (I):
karakterisert vedat R<3>er hydrogen eller en arylgruppesubstituent eller R<3>er en fast støtte eventuelt festet via en spacer; Z representerer et oksygenatom, et svovleatom eller NR<4>; Y representerer et oksygenatom, et svovleatom eller NR<5>; i hvilken R<4>og R<5>, som kan være like eller ulike, representere hydrogen, eventuelt substituert alkyl inneholdende 1 til 6 karbonatomer, eventuelt substituert fenyl, eventuelt substituert benzyl eller eventuelt substituert [3- fenyletyl; en av X<1>eller X<2>representerer et nitrogenatom og den andre av X<1>eller X<2>representerer et nitrogenatom eller CR<6>, i hvilken R<6>representerer hydrogen eller en arylgruppe- substituent; og hvor R<1>representerer en gruppe en gruppe -(CH2)m-Q<1>, der n er fra 0 til 7, og Q<1>representerer - -NR11R1<2>, i hvilkenR11ogR1<2>sammen med nitrogenatomet til den de er festet, danner en eventuelt substituert heterosykloalkyl- gruppe; og R<2>representerer en gruppe -(CH2)m-Q<2>, der n er fra 0 til 7, og Q<2>representerer -CR21R22R2<3>eller-NR21R2<2>, i hvilken R<23>representerer hydrogen, alkyl, sykloalkyl eller heteroalkyl, og R<11>og R<12>sammen med karbon- eller nitrogenatomet til den de er festet, danner en eventuelt substituert sykloalkyl- eller en eventuelt substituert heterosykloalkyl- gruppe; hvor «arylgruppe substituent» hvis ikke annet er definert, refererer til hydroksyl, amino, alkyl, halogen, hydroksyalkyl, amid, acyl, acylamino, alkoksy, alkoksykarbonyl, alkylenedioksy, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkyltio, aroyl, aroylamino, aryl, arylalkoksy, arylalkoksykarbonyl, arylalkyltio, aryloksy, aryloksykarbonyl, arylsulfinyl, arylsulfonyl, aryltio, karboksy (eller en surbioisoster), cyano, heteroaroyl, heteroaryl, heteroarylalkyloksy, heteroaroylamino, heteroaryloksxy, nitro, okso eller trifluorometyl; for affinitetsbindingen av et prionprotein.
2. En fremgangsmåte for å detektere et prionprotein i en prøve, og/eller fjerne et prionprotein fra en prøve, hvilken fremgangsmåte innbefatter å bringe prøven i kontakt med en forbindelse med formelen (I) som definert i Krav 1.
3. En forbindelse med formel (I), som definert i krav 1 for anvendelse i behandling eller retardering a utviklingen av en prionassosisert patologi i et menneske eller dyr.
4. Anvendelse av en forbindelse med formel (I) som angitt i krav 1, som ikke er bundet til en fast støtte for fremstillingen av et medikament for behandling av en prionassosiert patologi.
5. En forbindelse med formel (I) som definert i Krav 1, der R<3>er som definert i Krav 1; X1 og X<2>er begge to N; Y og Z representerer begge to NH; m representerer 2; Q<1>representerer piperidyl eller piperazinyl; n representerer 0 eller 2; og Q<2>representerer 1-piperidyl eller adamantyl.
6. En forbindelse med formel (i) ifølge krav 1, der R<3>er som definert i Krav 1; X1 og X<2>er begge to N; Y og Z representerer begge to NH; m er 2; R<1>representerer piperazinyl; Q<2>representerer norbonyl.
7. Anvendelsen eller fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av Kravene 1 til 4, der forbindelsen med formel (I) er en forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 5 eller 6.
NO20071087A 2004-07-27 2007-02-26 Substituerte triaziner som prion protein ligander og deres anvendelse for å detektere eller fjerne prioner. NO338345B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0416699.7A GB0416699D0 (en) 2004-07-27 2004-07-27 Prion protein ligands and methods of use
PCT/GB2005/002910 WO2006010915A1 (en) 2004-07-27 2005-07-25 Substituted triazines as prion protein ligands and their use to detect or remove prions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20071087L NO20071087L (no) 2007-04-23
NO338345B1 true NO338345B1 (no) 2016-08-08

Family

ID=32947488

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20071087A NO338345B1 (no) 2004-07-27 2007-02-26 Substituerte triaziner som prion protein ligander og deres anvendelse for å detektere eller fjerne prioner.

Country Status (23)

Country Link
US (1) US8030484B2 (no)
EP (1) EP1786788B1 (no)
JP (1) JP5201988B2 (no)
KR (1) KR20070051285A (no)
CN (1) CN101023066B (no)
AP (1) AP2007003897A0 (no)
AT (1) ATE557011T1 (no)
AU (1) AU2005266208B2 (no)
BR (1) BRPI0513823A (no)
CA (1) CA2575214C (no)
DK (1) DK1786788T3 (no)
EA (1) EA014365B1 (no)
ES (1) ES2384573T3 (no)
GB (1) GB0416699D0 (no)
IL (1) IL180787A (no)
MA (1) MA28820B1 (no)
MX (1) MX2007001103A (no)
NO (1) NO338345B1 (no)
NZ (1) NZ552755A (no)
PT (1) PT1786788E (no)
TN (1) TNSN07019A1 (no)
WO (1) WO2006010915A1 (no)
ZA (1) ZA200700526B (no)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010121000A1 (en) 2009-04-15 2010-10-21 Abraxis Bioscience, Llc Prion-free nanoparticle compositions and methods
WO2012059932A1 (en) 2010-11-01 2012-05-10 Aurigene Discovery Technologies Limited 2, 4 -diaminopyrimidine derivatives as protein kinase inhibitors
KR101395814B1 (ko) * 2012-12-11 2014-05-16 한국화학연구원 플루오르알콕시기를 함유하는 트리아진계 반응성 자외선 안정제 및 그의 제조방법
US9676816B2 (en) * 2014-01-21 2017-06-13 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Heparin affinity tag and applications thereof

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1979000609A1 (en) * 1978-02-09 1979-08-23 Univ New York Preparation of trichloro-s-triazine activated supports

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB814947A (en) 1954-08-16 1959-06-17 Geigy Ag J R Improvements in and relating to plant growth influencing compositions
US3850918A (en) 1970-06-17 1974-11-26 Ciba Geigy Corp 2-amino-4,6-disalicyloyl-hydrazino-s-triazines
US4204060A (en) 1974-10-04 1980-05-20 Akzona Incorporated Novel monochloro-s-triazine derivatives
US4261892A (en) 1978-04-12 1981-04-14 American Cyanamid Company 2,4,6-Tris-(substituted-amino)-s-triazines
GB8911287D0 (en) 1989-05-17 1989-07-05 Ciba Geigy Ag Lubricant compositions
CA2124953C (en) 1991-12-03 2008-02-05 Robert V. Fishleigh Peptides related to prion proteins
WO1993023432A1 (en) 1992-05-15 1993-11-25 New York University Soluble prion polypeptides, and methods for detecting and purifying thereof
US5283274A (en) 1992-06-19 1994-02-01 Uniroyal Chemical Company, Inc. Substituted pyrimidines and substituted triazines as rubber-to-metal adhesion promoters
US5441563A (en) * 1993-07-06 1995-08-15 Armstrong World Industries, Inc. Highly insoluble azole embossing inhibitor and the use thereof
US5834318A (en) 1995-05-10 1998-11-10 Bayer Corporation Screening of combinatorial peptide libraries for selection of peptide ligand useful in affinity purification of target proteins
GB9519197D0 (en) 1995-09-20 1995-11-22 Affinity Chromatography Ltd Novel affinity ligands and their use
US5750361A (en) 1995-11-02 1998-05-12 The Regents Of The University Of California Formation and use of prion protein (PRP) complexes
US5874576A (en) 1995-12-19 1999-02-23 Givaudan-Roure (International) Sa Light screening agents
US5808011A (en) 1996-07-01 1998-09-15 Biopure Corporation Method for chromatographic removal of prions
WO1998035236A2 (en) 1997-02-06 1998-08-13 Enfer Technology Limited Immunological assay for spongiform encephalopathies
DE19741607A1 (de) 1997-09-20 1999-03-25 Prionics Ag Synthetische Polypeptide zur Diagnose und Therapie von Prionerkrankungen
US6750025B1 (en) 1998-07-09 2004-06-15 V.I. Technologies, Inc. Method of detecting and isolating prion protein and variants thereof
AU773538B2 (en) 1999-01-22 2004-05-27 Elan Pharmaceuticals, Inc. Acyl derivatives which treat VLA-4 related disorders
GB9910807D0 (en) 1999-05-10 1999-07-07 Prometic Biosciences Limited Novel detoxification agents and their use
IL152116A0 (en) 2000-04-05 2003-05-29 Vi Technologies Inc Prion-binding ligands and methods of using same
MXPA03007134A (es) * 2001-02-08 2004-10-15 Memory Pharm Corp Trifluorometilpurinas como inhibidores de fosfodiesterasa 4.
EA007298B1 (ru) 2001-11-01 2006-08-25 Янссен Фармацевтика Н.В. Гетероариламины в качестве ингибиторов гликогенсинтаза-киназы 3-бета (ингибиторов gsk3)
US20030166002A1 (en) 2001-12-12 2003-09-04 Young-Tae Chang Triazine library with linkers
GB0224446D0 (en) 2002-10-21 2002-11-27 Univ Cambridge Tech Affinity adsorbents for immunoglobulins
GB0228724D0 (en) 2002-12-09 2003-01-15 Prometic Biosciences Ltd Multidimensinal libraries
RS52273B (en) 2005-06-10 2012-10-31 Ares Trading S.A. PROCESS FOR PURIFICATION OF IL-18 BINDING PROTEIN

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1979000609A1 (en) * 1978-02-09 1979-08-23 Univ New York Preparation of trichloro-s-triazine activated supports

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RENOU, Emma N Soto, et al. The design, Synthesis and Evaluation of Affinity Ligands for Prion Proteins, Journal of molecular recognition,2004; 17: 248–261, Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP1786788B1 (en) 2012-05-09
EP1786788A1 (en) 2007-05-23
ZA200700526B (en) 2008-09-25
AU2005266208A1 (en) 2006-02-02
MX2007001103A (es) 2007-08-14
US20080269224A1 (en) 2008-10-30
JP2008508245A (ja) 2008-03-21
AU2005266208B2 (en) 2011-09-15
KR20070051285A (ko) 2007-05-17
ES2384573T3 (es) 2012-07-09
WO2006010915A1 (en) 2006-02-02
JP5201988B2 (ja) 2013-06-05
CN101023066B (zh) 2013-10-30
PT1786788E (pt) 2012-05-24
AP2007003897A0 (en) 2007-02-28
EA014365B1 (ru) 2010-10-29
ATE557011T1 (de) 2012-05-15
CA2575214C (en) 2014-05-27
EA200700161A1 (ru) 2007-10-26
IL180787A (en) 2013-07-31
GB0416699D0 (en) 2004-09-01
NZ552755A (en) 2010-09-30
MA28820B1 (fr) 2007-08-01
US8030484B2 (en) 2011-10-04
BRPI0513823A (pt) 2008-05-20
IL180787A0 (en) 2007-06-03
CN101023066A (zh) 2007-08-22
CA2575214A1 (en) 2006-02-02
TNSN07019A1 (en) 2008-06-02
NO20071087L (no) 2007-04-23
DK1786788T3 (da) 2012-06-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7510848B2 (en) Prion protein binding materials and methods of use
US7393658B2 (en) Prion protein binding materials and methods of use
DK2317317T3 (en) Prion protein ligands, as well as methods of use thereof
MXPA05011159A (es) Metodo para identificar ligandos especificos para isoformas estructurales de proteinas.
NO338345B1 (no) Substituerte triaziner som prion protein ligander og deres anvendelse for å detektere eller fjerne prioner.
NZ554246A (en) Prion protein binding materials and methods of use
MXPA05010726A (en) Prion protein binding materials and methods of use

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees