NO321035B1 - Fremgangsmate for fremstilling av PNA-oligomerer, en forbindelse og fremgangsmater for a fremstille denne ved anvendelse av baselabil aminobeskyttelsesgruppe - Google Patents
Fremgangsmate for fremstilling av PNA-oligomerer, en forbindelse og fremgangsmater for a fremstille denne ved anvendelse av baselabil aminobeskyttelsesgruppe Download PDFInfo
- Publication number
- NO321035B1 NO321035B1 NO19950958A NO950958A NO321035B1 NO 321035 B1 NO321035 B1 NO 321035B1 NO 19950958 A NO19950958 A NO 19950958A NO 950958 A NO950958 A NO 950958A NO 321035 B1 NO321035 B1 NO 321035B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- formula
- compound
- amino
- fmoc
- protecting group
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 title claims abstract description 19
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 title claims description 46
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 44
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 claims abstract description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 156
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 147
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 132
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 63
- -1 2.5-diaminopurine Chemical compound 0.000 claims description 33
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 29
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 28
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 26
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 21
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 17
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 claims description 16
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 15
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 15
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 12
- PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 2-(2-azaniumylethylamino)acetate Chemical compound NCCNCC(O)=O PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 11
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 8
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000005500 uronium group Chemical group 0.000 claims description 5
- PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 7-deaza-adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1C=CN2 PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 4
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 4
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 4
- CQYBNXGHMBNGCG-RNJXMRFFSA-N octahydroindole-2-carboxylic acid Chemical compound C1CCC[C@H]2N[C@H](C(=O)O)C[C@@H]21 CQYBNXGHMBNGCG-RNJXMRFFSA-N 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O phosphonium Chemical compound [PH4+] XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 4
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 4
- INRNDFZVAKDYFY-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroquinoline-3-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2CC(C(=O)O)CNC2=C1 INRNDFZVAKDYFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims description 3
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 3
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 3
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 3
- LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 7-deazaguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1CC=N2 LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 claims description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 claims description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 claims description 2
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 claims description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-amino-8-[(4-phenylphenyl)methylamino]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC=CC=2)C=CC=1CNC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N 0.000 claims 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000006242 amine protecting group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000002585 base Substances 0.000 claims 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 claims 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 abstract description 23
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 90
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 73
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- 239000000047 product Substances 0.000 description 35
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 27
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 25
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 20
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 20
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 13
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 13
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 11
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 11
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 11
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 9
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 9
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,6,7,8,9,10-octahydropyrimido[1,2-a]azepine Chemical compound C1CCCCN2CCCN=C21 GQHTUMJGOHRCHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 8
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 7
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 7
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FPQVGDGSRVMNMR-JCTPKUEWSA-N [[(z)-(1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidene)amino]oxy-(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium;tetrafluoroborate Chemical compound F[B-](F)(F)F.CCOC(=O)C(\C#N)=N/OC(N(C)C)=[N+](C)C FPQVGDGSRVMNMR-JCTPKUEWSA-N 0.000 description 6
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 6
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 9h-fluoren-9-ylmethyl carbonate Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SMLJSDLXJRGOKW-UHFFFAOYSA-N 2-[9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl-[2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]ethyl]amino]acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N(CC(O)=O)CCNC(=O)OC(C)(C)C)C3=CC=CC=C3C2=C1 SMLJSDLXJRGOKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 5
- 125000004744 butyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 5
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 5
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-4-methoxybenzene Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OBOHMJWDFPBPKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TZDMCKHDYUDRMB-UHFFFAOYSA-N 2-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)acetic acid Chemical compound CC1=CN(CC(O)=O)C(=O)NC1=O TZDMCKHDYUDRMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- YDCHPLOFQATIDS-UHFFFAOYSA-N methyl 2-bromoacetate Chemical compound COC(=O)CBr YDCHPLOFQATIDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 4
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- USRLZSWLWVKNDJ-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hydroxy-5-methyl-4-oxo-1,3-dihydropyrimidin-2-yl)acetic acid Chemical compound CC1=CNC(O)(CC(O)=O)N=C1O USRLZSWLWVKNDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CUBWWSKWBFJGLJ-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[1-amino-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxy)-1-(4-methoxyphenyl)-2-oxoethyl]-2,4-dimethoxyphenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(N)(C=1C(=CC(OC)=C(C(C)C(O)=O)C=1)OC)C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 CUBWWSKWBFJGLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QMDGTRIHWIALAV-UHFFFAOYSA-N CCOC(=O)CC1(O)N=CC(C)=C(O)N1COCC1=CC=CC=C1 Chemical compound CCOC(=O)CC1(O)N=CC(C)=C(O)N1COCC1=CC=CC=C1 QMDGTRIHWIALAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 3
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 3
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- GQANPLVWEULXKU-UHFFFAOYSA-N n-benzhydryl-n-(4-methoxyphenyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N(C=1C=2NC=NC=2N=CN=1)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 GQANPLVWEULXKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 3
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CXBDYQVECUFKRK-UHFFFAOYSA-N 1-methoxybutane Chemical compound CCCCOC CXBDYQVECUFKRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NDVMCQUOSYOQMZ-UHFFFAOYSA-N 2,2-bis(trimethylsilyl)acetamide Chemical compound C[Si](C)(C)C(C(N)=O)[Si](C)(C)C NDVMCQUOSYOQMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVPRBUAWGVRAJM-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)-6-oxo-3h-purin-9-yl]acetic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N(C=1NC=2N(CC(O)=O)C=NC=2C(=O)N=1)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 GVPRBUAWGVRAJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PDWDIXZFKLTQHE-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(hydroxymethyl)-2-methoxyphenoxy]acetic acid Chemical compound COC1=CC(CO)=CC=C1OCC(O)=O PDWDIXZFKLTQHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(hydroxymethyl)phenoxy]acetic acid Chemical compound OCC1=CC=C(OCC(O)=O)C=C1 VUCNQOPCYRJCGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KQPQYISDNGAGKO-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)-2-hydroxy-2h-pyrimidin-1-yl]acetic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N(C=1C=CN(CC(O)=O)C(O)N=1)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KQPQYISDNGAGKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GMPYYPYAMAUPGU-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[(4-methoxyphenyl)-phenylmethyl]phenoxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(CC)C(O)=O)=CC=C1C(C=1C=CC(OC)=CC=1)C1=CC=CC=C1 GMPYYPYAMAUPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OBNXYYPVQKNVEA-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[amino-(4-methoxyphenyl)methyl]-2,4-dimethoxyphenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C(N)C1=CC(C(C)C(O)=O)=C(OC)C=C1OC OBNXYYPVQKNVEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZTAUZLIDNPDKY-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)purin-9-yl]acetic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N(C=1C=2N=CN(CC(O)=O)C=2N=CN=1)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FZTAUZLIDNPDKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XXCCCRWKXQMOOQ-UHFFFAOYSA-N 3-acetyl-2-hydroxy-5-methyl-1,2-dihydropyrimidin-6-one Chemical compound CC(=O)N1C=C(C)C(O)=NC1O XXCCCRWKXQMOOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 4-ethylmorpholine Chemical compound CCN1CCOCC1 HVCNXQOWACZAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QYLALVBBJMUUCX-UHFFFAOYSA-N 6-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1N(C=1NC(=O)N=CC=1)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 QYLALVBBJMUUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RITINAODYALYMN-UHFFFAOYSA-N OC1N=CC(C)=C(O)N1COCC1=CC=CC=C1 Chemical compound OC1N=CC(C)=C(O)N1COCC1=CC=CC=C1 RITINAODYALYMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007825 activation reagent Substances 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLKUQAFDYMLBCK-UHFFFAOYSA-N butan-1-ol;ethyl acetate Chemical compound CCCCO.CCOC(C)=O YLKUQAFDYMLBCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical group 0.000 description 2
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N glyoxylic acid Chemical compound OC(=O)C=O HHLFWLYXYJOTON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229940087646 methanolamine Drugs 0.000 description 2
- YRRLJSIUDOAJDU-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(2-amino-6-chloropurin-9-yl)acetate Chemical compound N1=C(N)N=C2N(CC(=O)OC)C=NC2=C1Cl YRRLJSIUDOAJDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MECCRYLLTNULKT-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[2-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)-6-chloropurin-9-yl]acetate Chemical compound N1=C2N(CC(=O)OC)C=NC2=C(Cl)N=C1N(C=1C=CC(OC)=CC=1)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MECCRYLLTNULKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBIZWMWSVVIQDF-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[4-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)-2-hydroxy-2h-pyrimidin-1-yl]acetate Chemical compound OC1N(CC(=O)OC)C=CC(N(C(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(OC)=CC=2)=N1 LBIZWMWSVVIQDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJVLAVTXBJOPJA-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[6-(n-benzhydryl-4-methoxyanilino)purin-9-yl]acetate Chemical compound N1=CN=C2N(CC(=O)OC)C=NC2=C1N(C=1C=CC(OC)=CC=1)C(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RJVLAVTXBJOPJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N phenoxyacetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=CC=C1 LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 2
- 239000001120 potassium sulphate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000006884 silylation reaction Methods 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N triethylsilane Chemical compound CC[SiH](CC)CC AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- IMEJKJODGOOFNC-UHFFFAOYSA-N (2,4-dimethoxyphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 IMEJKJODGOOFNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(1-tritylimidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(N=C1)=CN1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N 0.000 description 1
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 DVBUCBXGDWWXNY-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- QTWZCODKTSUZJN-LJAQVGFWSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,5,7,8-pentamethyl-3,4-dihydrochromen-6-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C(C(C)=C1C)=C(C)C2=C1OC(C)(C)CC2 QTWZCODKTSUZJN-LJAQVGFWSA-N 0.000 description 1
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWNXKZVIZARMME-UHFFFAOYSA-N 1-[[5-[2-[(2-chloropyridin-4-yl)amino]pyrimidin-4-yl]-4-(cyclopropylmethyl)pyrimidin-2-yl]amino]-2-methylpropan-2-ol Chemical compound N=1C(NCC(C)(O)C)=NC=C(C=2N=C(NC=3C=C(Cl)N=CC=3)N=CC=2)C=1CC1CC1 AWNXKZVIZARMME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VUTZFAOGDXUYEJ-UHFFFAOYSA-N 1-[chloro(diphenyl)methyl]-4-methylbenzene Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(Cl)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VUTZFAOGDXUYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBXJEAPQVULNKE-UHFFFAOYSA-N 1-acetyl-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC(=O)N1C=C(C)C(=O)NC1=O YBXJEAPQVULNKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXUNZSDDXMPKLP-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenethiol Chemical compound CC1=CC=CC=C1S LXUNZSDDXMPKLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ITSKWKZDPHAQNK-UHFFFAOYSA-N 2-acetyl-5,5-dimethylcyclohexane-1,3-dione Chemical compound CC(=O)C1C(=O)CC(C)(C)CC1=O ITSKWKZDPHAQNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZTVOTGDHWTJNR-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-3-(2,4-dioxo-1H-pyrimidin-5-yl)propanoic acid Chemical compound ClC(C=1C(NC(NC=1)=O)=O)CC(=O)O AZTVOTGDHWTJNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SFYDWLYPIXHPML-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-1-(2,4,6-trimethylphenyl)sulfonyl-1,2,4-triazole Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)N1N=C([N+]([O-])=O)N=C1 SFYDWLYPIXHPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIVWXNPUCAHAJX-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1,1-dioxo-2,5-diphenylthiophen-3-one Chemical compound O=S1(=O)C(C=2C=CC=CC=2)C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 UIVWXNPUCAHAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HISMSXHVLNAPEQ-UHFFFAOYSA-N 5-[4-(aminomethyl)-3,5-dimethoxyphenoxy]pentanoic acid Chemical compound COC1=CC(OCCCCC(O)=O)=CC(OC)=C1CN HISMSXHVLNAPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYYIULNRIVUMTQ-UHFFFAOYSA-N 6-chloroguanine Chemical compound NC1=NC(Cl)=C2N=CNC2=N1 RYYIULNRIVUMTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXSSNABWMAAQGJ-UHFFFAOYSA-N 9h-carbazole-1-carbonyl chloride Chemical compound C12=CC=CC=C2NC2=C1C=CC=C2C(=O)Cl DXSSNABWMAAQGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZZOKVYOCRSMTSS-UHFFFAOYSA-M 9h-fluoren-9-ylmethoxymethanimidate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)[NH-])C3=CC=CC=C3C2=C1 ZZOKVYOCRSMTSS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- FMWKWQGIQVQDAV-UHFFFAOYSA-N C(C1=CC=CC=C1)OCN1C(NC=C(C1=O)CCC(=O)O)=O.C(C1=CC=CC=C1)OCN1C(N=CC(=C1O)C)(CC(=O)O)O Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OCN1C(NC=C(C1=O)CCC(=O)O)=O.C(C1=CC=CC=C1)OCN1C(N=CC(=C1O)C)(CC(=O)O)O FMWKWQGIQVQDAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJFAVBWHUFORKH-UHFFFAOYSA-N C(C1=CC=CC=C1)OCN1C(NC=C(C1=O)CCC(=O)OCC)=O Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OCN1C(NC=C(C1=O)CCC(=O)OCC)=O QJFAVBWHUFORKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LHCIVHBUFBVNAL-UHFFFAOYSA-N OC(=O)CC1(O)N=CC(C)=C(O)N1COCC1=CC=CC=C1 Chemical compound OC(=O)CC1(O)N=CC(C)=C(O)N1COCC1=CC=CC=C1 LHCIVHBUFBVNAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- GLYOPNLBKCBTMI-UHFFFAOYSA-N [2-chloro-2-(1-chloro-2-phenylethoxy)ethyl]benzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1CC(Cl)OC(Cl)CC1=CC=CC=C1 GLYOPNLBKCBTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKUGMXWFFBQIPT-UHFFFAOYSA-N acridin-10-ium;(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound [O-]C(=O)ON1C(=O)CCC1=O.C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 CKUGMXWFFBQIPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 1
- SIOVKLKJSOKLIF-UHFFFAOYSA-N bis(trimethylsilyl)acetamide Chemical compound C[Si](C)(C)OC(C)=N[Si](C)(C)C SIOVKLKJSOKLIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- JYYOBHFYCIDXHH-UHFFFAOYSA-N carbonic acid;hydrate Chemical compound O.OC(O)=O JYYOBHFYCIDXHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N chlorocarbonic acid Chemical class OC(Cl)=O AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 150000001893 coumarin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- SWQRLFZSMOLVPV-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-(2-hydroxy-5-methyl-4-oxo-1,3-dihydropyrimidin-2-yl)acetate Chemical compound CCOC(=O)CC1(O)NC=C(C)C(O)=N1 SWQRLFZSMOLVPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N ethyl bromoacetate Chemical compound CCOC(=O)CBr PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl formate Chemical compound CCOC=O WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Substances CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- COQRGFWWJBEXRC-UHFFFAOYSA-N hydron;methyl 2-aminoacetate;chloride Chemical compound Cl.COC(=O)CN COQRGFWWJBEXRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N iodoacetic acid Chemical compound OC(=O)CI JDNTWHVOXJZDSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRDXJKGNWSUIBT-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Chemical group [CH2]OC1=CC=CC=C1 HRDXJKGNWSUIBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N phenyl isocyanate Chemical compound O=C=NC1=CC=CC=C1 DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 1
- 239000012258 stirred mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N sulfurochloridic acid Chemical class OS(Cl)(=O)=O XTHPWXDJESJLNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055764 triaz Drugs 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAQYAMRNWDIXMY-UHFFFAOYSA-N trichloroborane Chemical compound ClB(Cl)Cl FAQYAMRNWDIXMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMHHVULEAZTJMA-UHFFFAOYSA-N trioxsalen Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=C1C=C1C=C(C)OC1=C2C FMHHVULEAZTJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000850 trioxysalen Drugs 0.000 description 1
- JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl chloride Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Chemical group 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Chemical group 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical group 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical group C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
- C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
- C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
- C07D239/47—One nitrogen atom and one oxygen or sulfur atom, e.g. cytosine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
- C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
- C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
- C07D239/52—Two oxygen atoms
- C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
- C07D473/18—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 one oxygen and one nitrogen atom, e.g. guanine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
- C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
- C07D473/32—Nitrogen atom
- C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
- C07K14/003—Peptide-nucleic acids (PNAs)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
- C08G69/02—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids
- C08G69/08—Polyamides derived from amino-carboxylic acids or from polyamines and polycarboxylic acids derived from amino-carboxylic acids
- C08G69/10—Alpha-amino-carboxylic acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polyamides (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av PNA-oligomerer, en forbindelse med formel IV og fremgangsmåte for fremstilling av denne ved
anvendelse av en baselabil beskyttelsesgruppe.
Peptidnukleinsyre (PNA)er DNA-analogforbindelser hvor deoksyribose-fosfat-skjelletet er erstattet med en peptidoligomer. Syntese beskrevet tidligere i litteraturen (Michael Egholm, Peter E. Nielsen, Ole Buchardt og Rolf H. Berg, J. Am. Chem Soc. 1992, 114, 9677-9678; Ole Buchardt, Michael Egholm, Peter E. Nielsen og Rolf H. Berg, WO 92/20702) anvender for temporær beskyttelse av aminogruppen til monomerene den syrelabile tert-butyloksykarbonyl (Boe)-beskyttelsesgruppen som blir avspaltet med middelsterke syrer, som for eksempel trifluoreddiksyre. Fastfase-
syntesen av oligomerer foregår ved vanlige peptidsyntese fremgangsmåter som for eksempel beskrevet av Merrifield (B. Merrifield, J. Am. Chem. Socl., 1963, 85, 2149).
Avspaltning av PNA-oligomerer fra faste bærere foregår
dermed med sterke syrer, vanligvis med flytende fluorhydrogen. Disse reaksjonsbetingelsene, spesielt den gjentatte behandlingen med trifluoreddiksyre tillater ikke en reaksjon i åpne reaksjonsbeholdere, som for eksempel er tilfellet ved anvendelse av multiple peptidsynteser (oversikt: G. Jung og A. Beck-Sickinger, Angew. Chem. 104(1992) 375-391).
Fremgangsmåter for å fremstille PNA-oligomerer beskrives i
WO 92/020702 og av Kim L. Dueholm et al., i Journal of the American Chemical Society 1994, nr. 59, s 5767-5773. Ingen
av disse beskriver imidlertid anvendelse av en baselabil temporær aminobeskyttelsesgruppe hvilket gjør det mulig å avspalte PNA-oligomeren fra den faste bæreren ved hjelp av svake eller middels sterke syrer.
Målet for oppfinnelsen er å utvikle en syntesefremgangsmåte med en baselabil temporær amino-beskyttelsesgruppe for oppbygning av PNA-oligomerer som muliggjør en avspaltning fra faste bærere under svake eller middels sterke syrer.
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av PNA-oligomerer med formel I
hvor
R° er hydrogen, Ci-Cjg-alkanoyl, Cj-Cig-alkoksykarbonyl,
C3-Cg-cykloalkanoyl, C7-<C>i5-<a>royl, C3-Ci3-<h>eteroaryl, eller en gruppe som begunstiger intracellulært opptak av oligomeren eller de som ved hybridiseringen
reagerer med målnukleinsyrene;
A er et aminosyreresidie, fortrinnsvis fra rekken glycin, leucin, histidin, fenylalanin, cystein, lysin, arginin, asparaginsyre, glutaminsyre, prolin, tetrahydrochinolin-3-karboksylsyre, oktahydroindol-2-karboksylsyre og N-(2-aminoetyl)glycin;
k er et helt tall fra 0 til 20, fortrinnsvis 0 til 10; 0 er et aminosyreresidie, fortrinnsvis fra rekken glycin, leucin, histidin, fenylalanin, cystein, lysin, arginin, asparaginsyre, glutaminsyre, prolin, tetrahydrochinolin-3-karboksylsyre, oktahydroindol-2-karboksylsyre og N-(2-aminoetyl)glycin; 1 er et helt tall fra 0 til 20, fortrinnsvis 0 til 10; B er en i nukleotidkjemien vanlige nukleobase,
eksempelvis for naturlige nukleobaser som adenin, cytosin, guanln, thymin og uracil eller unaturlige nukleobaser som purin, 2.6-diaminopurin, 7-deazaadenin, 7-deazaguanin, N<4>N<4->etancytosin, N^N^-etano-2.6-diaminopurin, 5-metylcytosin, S- iC^- C^)-alkinyl-uracil, 5-(C3-C£, )-alkinylcytosin, 5-fluor-uracil eller pseudoisocytosin, 2-hydroksy-5-metyl-4-triazolopyrimidin eller promedikamentformer derav;
Q° er hydroksy , NH2, NHR" betyr hvor R" = C-L-C-tg-alkyl,
C22-C18-amInoalkyl, <C>2-<C>18-hydroksyalkyl; og
n er et helt tall fra 1-50, fortrinnsvis 4-35, som er kjennetegnet ved at man til en polymer bærer med formel II
som er utstyrt med en ankergruppe L, som latent inneholder resten 0°, enten først tilkoblet med en for fast fase syntese vanlig fremgangsmåte aminosyrer (Q') og deretter tilkobler på den derved som mellomprodukt oppståtte forbindelsen med formel III
hvor L er definert som ovenfor, Q' er en aminosyre Q, som eventuelt er beskyttet i sidekjeden og L betyr et helt tall fra 0 til 20, eller direkte på den polymere bæreren med formel II
a) en forbindelse med formel IV
hvor
<PG> er en baselabil aminobeskyttelsesgruppe utvalgt blant Fmoc, Bnpeoc, Dnpeoc, Msc eller Dde og
B' er en på den eksocykliske aminofunksjonen beskyttede nukleobasen, under anvendelse av koblingsreagenser som er vanlige innen peptidkjemien, b) Avspalter den temporære baselabile beskyttelsesgruppen PG ved hjelp av et egnet reagens,
c) Gjentar trinnene a og b (n-1) ganger,
d) tilkobler med en for fast fase syntese vanlig fremgangsmåte ytterligere aminosyre A', som er definert som A, men som derimot eventuelt er beskyttet i sidekjeden og innfører deretter i det tilfellet hvir R<*> ikke er hydrogen, resten R<* >ved en vanlig fremgangsmåte, e) avspalter fra den som mellomforbindelse oppnådde forbindelsen med formel Ia
hvor R* , A', k, B<*>. n, Q' og 1 er definert som ovenfor og L betyr en ankergruppe, forbindelsen med formel I ved hjelp av et avspaltningsreagens fra polymerbæreren 1 det samtidig eller også deretter blir de på den eksocykliske am i no funksjonen til nukleobasen og på sidekjeden av aminosyren eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper avspaltet.
Grupper som begunstiger intracellulært opptak av oligomeren er eksempelvis alkanoyl- og alkoksykarbonylforbindeIser med forskjellige lipofile rester som -(CB^J^-CB^, hvor x er et helt tall fra 6-18, -(CH2)n-CB>CH-(CH2)m-CH3, hvor n og m uavhengig av hverandre er et helt tall fra 6 til 12,-(CH2CH20)4-(CH2)9-CH3, -(CH2CH20)8-(CH2)13-CH3 og -(CH2-CH20)7~(CH2 )ig-CH3t men også steroid-rester som kolesteryl eller vitamin-rester som vitamin E, vitamin A eller vitamin D og andre konjugater, som benytter naturlige bærersystemer som gallesyre, folsyre, 2-(N-alkyl, N-alkoksy)-aminioanthrachinon og konjugater av mannose og peptider til tilsvarende reseptorer som fører til reseptorformidlede endozytoser av oligomeren som EGF (epidermal vektsfaktor), bradykinin og PDGF (blodplateavledet vekstfaktor). Med markerings-grupper forstås fluorescerende grupper eksempelvis dansyl-(N-dl»etyl-1-aminonaftyl-5-sulfonyl-), fluorescein eller coumarin-derivater eller kjemiluminescerende grupper eksempelvis som acridin-derivater og også det over ELISA påvisbare dogoksy-genin-systemet som med det biotin/avidin-systemet påvisbare biotion-gruppen eller linker-armer med funksjonelle grupper som utgjør en senere derivat!sering med påvisbare reporter-grupper, eksempelvis en aminoalkyllinker, som blir omsatt med en acridinium-aktivester for kjemiluminescens-probe. Vanlige
markeringsgrupper er:
R = H eller aminobeskyttelsesgruppe Biotinkonjugat (= "biotin" for R = Boe)
Grupper som ved hybridiseringen av oligomerene angriper på mål-nukleinsyren under binding, tverrbinding eller spaltning som eksempel acridin-, psoralen-, phenanthridin, nafto, chinon-, daunomycin- eller kloretylaminoaryl-konjugater. Vanlige interkalerende og tverrbindbare rester er:
Acrinderivat x = 2-12, fortrinnsvis 4
x = 2-12, fortrinnsvis 4 Trimetylpsoralen-konjugat (= "Psoralen" for X = 0) Fenanthro1i nkonjugat x = 1-18. X = Alkyl, Halogen, N02, CN. x = 1-18, X = Alkyi, Halogen, N02, CN,
Ankergruppen L som har latent funksjonen Q° er for eksempel beskrevet av George Barany, Nancy Kneib-Cordonler og Daniel G. Mullen., Int. J. Peptide Protein Res., 1987, 30, 705-739; Gregg B. Fileds og Richard L. Noble, Int. J. Peptide Protein Res, 35, 1990, 161-214; K. Barlos, D. Gatos, J. Hondrelis, J. Matsoukas, G.J. Moore, W. Schafer og P. Sotirlou, Liebigs Ann. Chem. 1989, 951-955; H. Rink, Tetrahedron Lett. 1987, 3787-3790; G. Breipohl, J.Knolle og R. Geiger, Tetrahedron Lett. 1987, 5647-5650; G. Breipohl, J. Knolle og W. Sttlber, Int. J. Peptide Protein Res., 1989, 34, 262-267; W. Stuber, J. Knolle og G. Breipohl, Int. J. Peptide Protein Res., 1989, 34, 215-220 eller i EP-A-0 264 802 (HOE 86/F259), EP-A-0 287 882 (HOE 86/F101), EP-A-0 322 348 (HOE 87/F386K).
Polymere bærere som har en ankergruppe som latent inneholder gruppen Q° er eksempelvis 4-alkoksybenzylalkohol-harpiks, 2-metoksy-4-alkoksybenzylalkohol-harpiks, 2-klortrofenylmetyl-harplks, 2,4-dimetoksybenzhydrylamin-harpiks, 4-(2<*>,4'-dimetoksyfenylaminometyl)fenoksymetyl-harpiks, eller som er tilkoblet en primær amlnogruppe funksjonalisert polymerbærer, som for eksempel polyHIPE, Tentagel, Controlled Pore Glass, Polystyrol på en av de latente gruppe Q" inneholdende ankergrupper som for eksempel 4-(4'-metoksybenzhydryl-fenoksyeddlksyre, 4-(4 '-metoksybenzhydryl )-fenoksysme»rsyre, 4-hydroksymetylfenoksyeddiksyre, 2-metoksy-4-hydroksymetylfenoksyeddiksyre, 5-(4-aminometyl-3,5dimetoksyfenoksy)-valeriesyre, 3-(amino-4-metoksybenzyl)-4-metoksyfenol-propionsyre, 5-(amino-4-metoksybenzyl)-2,4-dimetoksyfenyl-propionsyre, 4-(amino-(C2-Cg)alkylaminokarbonyloksymetyl)-f enoksyeddlksyre, oksalsyremono(amino-C2-Ci£,-alkyl Jester, Bernsteinsyremono(amino-C2-C15-alkyl)ester.
Fortrinnsvis anvendes følgende ankergrupper eller allerede på polymerbæreren bundede ankergrupper: 4-alkoksybenzylalkohol-harpiks, metoksy-4-alkoksybenzylalkohol-harpiks, 2-klortrifenylmetyl-harpiks, eller de på en med en primær amlnogruppe funksjonalisert bærer av type tentagel, Controlled Pore Glass, Polystyrol, latent gruppen 0" inneholdende koblede ankergrupper 4-(4'-metoksybenzhydryl)-fenoksysmøresyre, 4-hydroksymetylfenoksyeddlksyre, 2-metoksy-4-hydroksymetylfenoksyeddlksyre, 5-(amino-4-metoksy-benzyl)-2,4-dimetoksyfenylpropionsyre, 4-(amino-(C2-Cg)-alkylamlnokarbonyloksymetyl)fenoksyeddlksyre, oksalsyremono-(amino-C2-C^5-alkyl)ester, bernsteinsyremono(amino-C2-Ci6-alkylJester.
Baselabile aminobeskyttelsesgruppene PG er for eksempel 9-fluorenylmetoksykarbonyl (Fmoc) og 2 ,2-[bis(4-nitrofenyl)]-etoksykarbonyl (Bnpeoc) (\J. Konig, D. Btlcher, R. Kntlttel, K. Lindner og A. Volk, Proceedings of the Akabori Conference, Grainau-Eibsee/Baviara, juni 12-13, 1985, s. 32) og R. Ramage, A.J. Blake, M.R. Florence, Th. Gray, G.Raphy og P.L. Roach, Tetrahedron 1991, 37, 8001-8024), 2-(2,4-dinitro-fenyl)etoksykarbonyl (Dnpeoc) (M. Acedo, F. Albericio, R. Eritja, Tetrahedron Lett. 1992, 4989-4992), 2-metylsulfonyl-etyloksykarbonyl (Msc), l-(4,4-dimetyl-2,6-dioksocyklo-heksyliden)etyl (Dde) (B.W. Bycroft, W. C. Chan, S.R. Chhabra og N.D. Home, J. Chem. Soc, Chem. Commun. 1993, 778-779), foretrukket er anvendelse av Fmoc, Bnpeoc og Dnpeoc, spesielt foretrukket er anvendelse av Fmoc-beskyttelsesgruppen.
Den i trinn a av ovennevnte syntesefremgangsmåten anvendte aktiveringsmetoden kjent innenfor peptidsyntese utgjør for eksempel Houben-Weyl, Methoden der organischem Chemie, band 15/2, Georg Thieme Verlag Stuttgart 1974 eller ytterligere reagenser som for eksempel BOP (B. Castro, J.R. Dormoy, G. Evin og C. Selve, Tetrahedron Lett. 1975, 1219-1222), PyBOP (J. Coste, D. Le-Nguyen og B. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 205-208), BroP (J. Coste, M.-N- Dufour, A. Pantaloni og B. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 669-672), ByBroP (J. Coste, E. Frerot, P. Jouin og B. Castro, Tetrahedron Lett. 1991, 1967-1970) og uronium-reagenser, som for eksempel HBTU (V. Dourtoglou, B. Gross, V. Lambropoulou, C. Zioudrou, Synthesis 1984, 572.574), TBTU, TPTU, TSTU, TNTU (R. Knorr, A. Trzeciak, W. Bannwarth og D. GiHessen, Tetrahedron Letters 1989, 1927-1930), TOTU (EP-A-0 460 446), HATXJ (L.A. Carpino, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397-4398), HAPyU, TAPipU (A. Ehrlich, S. Rothemund, M. Brudel, M. Beyermann, L.A. Carpino og M. Bienert, Tetrahedron Lett. 1993, 4781-4784), BOI (K. Aka;) i, N. Kur i y ama, T. Kimura, Y. Fujiwara og Y. Kiso, Tetrahedron Lett. 1992, 3177-3180) eller syreklorider henholdsvis syrefluorider (L.A. Carpino, H. G. Chao, M. Beyermann og M. Bienert, J. Org. Chem., 56 (1991), 2635; J.-N. Bertho, A. Loffet, C. Pinel, F. Reuther og G. Sennyey i E. Giralt og D. Andreu (Eds.) Peptides 1990, Escom Science Publishers B. V. 1991, s. 53-54; J. Green og K. Bradley, Tetrahedron 1993, 4141-4146), 2,4,6-mesitylensulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazolid (MSNT) (B.Blankemeyer-Mengde, M. Nimitz og R. Frank, Tetrahedron Lett. 1990, 1701-1704), 2,5-difenyl-2.3- dihydro-3-okso-4-hydroksytiofendioksid (TDO) (R. Kirstgen, R.C. Sheppard, V. Steglich, J. Chem. Soc. Chem. Commun, 1987, 1870-1871) eller aktivert ester (D. Hudson)-Peptide Res. 1990, 51-55).
Foretrukket er anvendelse av karbodiimider, for eksempel dlcykloheksylkarbodiimid eller diisopropylkarbodiimid. Det anvendes fortrinnsvis fosfonium-reagenser, som for eksempel PyBOP eller PyBroP, uronium-reagenser, som for eksempel HBTTJ. TBTU, TPTU; TSTU, TNTU, TOTU eller HATU, BOI eller syreklorid henholdsvis syrefluorid.
Koblingen kan deretter foregå direkte ved addisjon av aminosyrederivat eller PNA-monomer med formel IV med aktiveringsreagens og eventuelt under tilførsel av additiver som for eksempel l-hydroksybenzotrlazol (HOBt) (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 788 (1970)) eller 3-hydroksy-4-okso-3.4- dihydrobenzotriazin (HOObt) (W. KBnig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 2034 (1970)) til harpiks eller så kan for-aktiveringen av byggestenen foregå separat som aktivert ester og oppløsningen av den aktiverte formen i et egnet opp-løsningsmiddel kan bli tilsatt til den koblingsdyktige polymeren.
For de eksocykliske aminofunksjonbeskyttede nukleobasene B' anvendes for beskyttelse av den eksocykliske aminofunksjonen med baselablle amlnobeskyttelsesgruppe PG kompatible beskyttelsesgrupper som for eksempel mot svake eller middels sterke syrelabile beskyttelsesgrupper av uretantype som tert. butylokykarbonyl (Boe), 4-metoksybenzoyloksykarbonyl (Moz), 3.5-dimetoksyfenyl-2-propyl-2-oksykarbonyl (Ddz) eller fra trityl-type som trifenylmetyl (Trt), (4-metoksyfenyl)-difenylmetyl) (Mmt), (4-metylfenyl)difenylmetyl (Mtt), Di-(4-metoksyfenyl)fenylmetyl (Dmt), 9-(9-fenyl)xanthenyl (Pixyl). Spesielt foretrukket er anvendelse av butyloksykarbonyl (Boe), trifenylmetyl (Trt), (4-metoksyfenyl)difenylmetyl (Mmt), (4-metylfenyl)difenylmetyl (Mtt), Di-(4-metoksyfenyl)-f enylmetyl (Dmt) samt Trt, Mmt og Dmt som overraskende tydelig forbedrer oppløseligheten til monomerene. Spesielt foretrukket er anvendelse av (4-metoksyfenyl)difenylmetyl (Mmt).
Avspaltningsreagenser for den baselablle aminobeskyttelsesgruppen PG er eksempelvis en oppløsning av piperidin, morfolin, hydrazin eller 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-en (DBTJ) i dimetylformamid, N-metylpyrrolidinon (NMP), acetonitril (ACN) eller diklormetan (DCM), foretrukket er spesielt for Fmoc, Dnpeoc og Bnpeoc-beskyttelsesgruppen anvendelse av 20% piperidin i DMF eller N-metylpyrrolidinon samt en blanding av 2% DBU og 2% piperidin i DMF eller 0.1M DBU i DMF eller 0.1 N DBU i diklormetan.
Tilkobling av aminosyreresten Q' henholdsvis A' med formel Ia foregår med aminosyrederivater som fortrinnsvis bærer samme amlnobeskyttelsesgruppe PG som også anvendes for forbindelser med formel IV. Eventuelt tilstedeværende sidekjedefunksjoner til aminosyrene er utstyrt med en mot svake til middels sterke syrer labile beskyttelsesgrupper, som foreksempel Boe Moz, OtBu, tBu, Trt, Mtr, Pmc. Foretrukket er aminosyrederivater som PG-Gly-OH, PG-Lys(Boc)-0H, PG-Arg(Mtr)-0H, PG-Arg(Pmc)-OH. PG-Arg(Trt)-0H, PG-Cys(Trt)-0H, PG-Asp(OtBu)-OH, PG-Glu(OtBu)-OH, PG-Aeg(Boc)-OH, PG-His(Trt)0H, hvor PG har ovennevnte betydning. Spesielt foretrukket er følgende aminosyrederivater: Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Lys(Boc )-0H, Fmoc-Arg-(Mtr)- OH; Fmoc-Arg(Pmc)-0H, Fmoc-Arg(Trt)-0H, Fmoc.Cys(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Aeg(Boc)-0H, Fmoc-His(trt)-0H.
I ovennevnte syntesefremgangsmåte anvendes forbindelser med formel IV
Foreliggende oppfinnelse angår således oqså forbindelser med formel IV,
hvor
PG betyr Fmoc, Bnpeoc, Dnpeoc, Msc eller Dde, og
B' er en på den eksocykliske amlnofunksjon beskyttede
nukleobasen, og de er nye.
Forbindelse med formel IV
oppnås ifølge oppfinnelsen ved at man omsetter en forbindelse med formel V
hvor
PG betyr Fmoc, Bnpeoc, Dnpeoc, Msc eller Dde, og
R' er en esterbeskyttelsesgruppe som for eksempel metyl,
etyl, butyl, 2-(metoksyetoksy)-etyl, benzyl, fortrinnsvis metyl, 2-(metoksy-etoksy)-etyl, spesielt foretrukket er metyl, med en forbindelse med formel
VI
hvor
B' er en nuklobase, hvor den eksocykliske aminofunksjonen til nukleobasen er beskyttet med en av den baselablle aminobeskyttelsesgruppen kompatible beskyttelsesgruppen som for eksempel mot svake syrer labile beskyttelsesgrupper av uretantype som Boe, Moz
eller av trityl-type som Trt, Mmt, Dmt, Pixyl,
ved 0-45°C, fortrinnsvis ved romtemperatur, i et egnet oppløsningsmiddel, som for eksempel DMF, acetonitril, diklormetan eller blandinger av dette oppløsningsmlddelet ved anvendelse av en innen peptldkjemien vanlige koblingsreagenser, som for eksempel karbodiimider, fosfonlum-reagenser, uronium-reagenser, syrehalogenider, aktiverte estere til en forbindelse med formel VII
hvor
PG, B' og R<1> er definert som ovenfor, og til slutt avspalter estergruppen R<1> med alkalilut eller også enzymatisk ved hjelp av esteraser eller lipaser ved 0-50"C i et egnet oppløsnings-mlddel som for eksempel dloksan, vann, tetrahydrofuran, metanol, vann eller blandinger av disse oppløsningsmldlene.
En ytterligere fremgangsmåte ifølge oppfinnelsen er fremstilling av forbindelsen med formel IV er ved at en forbindelse med formel V
hvor
PG er en baselabil amlnobeskyttelsesgruppe i ovennevnte
betydning og
R<1> er hydrogen eller en temporær silylbeskyttelsesgruppe, som for eksempel trimetylsilyl,
omsettes med en forbindelse med formel VIII
hvor
B' er definert som i formel VI og
R<2> er halogen, som for eksempel fluor, klor, brom eller resten av en aktiv ester, som for eksempel OBt, OObt, OPfp, ONSu,
ved 0-40"C, fortrinnsvis 20-30°C, i et egnet oppløsnlngs-middel, som eksempelvis DMF, NMP, acetonitril, diklormetan
eller blandinger av dette oppløsnlngsmiddelet. Den temporærer beskyttelsen av syrefunksjonen i forbindelsene med formel V kan foregå ved omsetning med vanlige silyleringsreagenser som for eksempel bis-trimetylsilylacetamid. Avspaltnlng av denne
temporære beskyttelsesgruppen foregår etter omsetning med forbindelser med formel VIII ved tilførsel av vann eller alkoholer til reaksjonsblandlngen.
For fremstilling av forbindelser med formel V blir aminoetylglycin eller den tilsvarende aminoetylglycinesteren utstyrt med den tilsvarende baselablle beskyttelsesgruppen. Innføring av den baselabile beskyttelsesgruppen foregår delvis modifisert fremgangsmåte kjent fra litteraturen. Egnede reagenser er for eksempel Fmoc-Cl, Fmoc-ONSu, Bnpeoc-ONSu, Dnpeoc.ONSu, Msc-Cl, 2-acetyldimedon (Dde). Ved denne omsetningen kan oppløseligheten til aminoetylglycinet bli forbedret ved samtidig beskyttelse av syrefunksjonen ved omsetning med vanlige silyleringsreagenser som for eksempel bis-trimetylsilyacetamid. Avspaltning av denne temporære beskyttelsesgruppen foregår etter omsetning med beskyttelsesgruppe reagenser ved tilførsel av vann eller alkoholer til reaksjonsblandingen. Det som av utgangsmaterialet anvendte aminoetylglycin eller den tilsvarende aminoetylglycinesteren blir fremstilt ifølge metoder kjent i litteraturen (E.P. Heimer, H.E. Gallo-Torres, A.M. Felix, M. Ahmad, T.J. Lambros, F. Scheidl og J. Meienhofer Int. J. Peptide Protein Res. 23, 1984, 203-211) 2-aminoetylglycin (H-Aeg-OH).
En ytterligere letter fremgangsmåte for fremstilling av aminoetylglycin består i reduktiv aminering av glyoksylsyre med etylendiamin og er beskrevet i den samtidig inngitte søknaden med tittelen "Verfahren zur Herstellung von Aminoethylglycin" (HOE 94/F 061, DE-P 44 08 530.3).
Nukleobase-eddiksyrederivater med formel VI blir innført ved alkylering av tilsvarende nukleobaser eller i eksocykliske aminofunksjon beskyttede nukleobaser med kloreddlksyre, bromeddiksyre, jodeddiksyre eller estere derav. Eventuelt blir det for selektiv alkylering innført ytterligere temporære beskyttelsesgrupper på nukleobasen. Som beskyttelsesgruppe for nukleobasen kan det anvendes alle med den baselabile beskyttelsesgruppen PG kompatbile beskyttelsesgrupper. For den eksocykliske aminofunksjonen blir det fortrinnsvis anvendt de mot svake syrer labile beskyttelses-gruppene av uretantype som Boe, Moz, Ddz eller av trityl-type som Trt, Mmt, Smt, Pixyl. Spesielt foretrukket er de mot svake syrer labile beskyttelsesgrupper av trityl-type som tert., Mmt, Smt, spesielt foretrukket er Mmt, i det sist-nevnte overraskende tydeligere forbedrer oppløseligheten til de monomere byggestenene, slik at oppløsninger for anvendelse i automatiske synteseapparater, som for eksempel mutliple peptidsyntetisatorer, kan bli fremstilt.
De for fremstilling av forbindelser med formel V anvendte i eksocykliske aminofunksjonbeskyttede nukleobaser B' blir fremstilt fra i litteraturen kjente fremgangsmåter fra tilsvarende nukleobaser ved anvendelse av et egnet be-skyttelsesgruppereagens som for eksempel BocgO, Moz-azid, Trt-Cl, Mtt-Cl, Mmt-Cl, Dmt-Cl, Pixyl C. Eventuelt blir det innført for selektiv alkylering ytterligere temporære beskyttelsesgrupper på nukleobasen.
Tilkobling av nukleobase-eddiksyrer med formel VI på de med baselabile beskyttelsesgrupper beskyttede aminoetylglycin-derivater med formel V foregår ved anvendelse av aktiverings-metoder som er vanlige Innen peptidsyntesen og som er beskrevet ovenfor. Foretrukket er anvendelse av karbodiimider, for eksempel dicykloheksylkarbodiimid eller diisopropylkarbodiimid. Det anvendes fortrinnsvis eventuelt fosfoniumreagenser, som for eksempel BOP (B. Castro, J.R. Dormoy, G. Evin og C. Selve, Tetrahedron Lett. 1975, 1219-1222) og uronium-reagenser, som for eksempel HBTU (V. Dourtoglou, B. Gross, V. Lambropoulou, C. Zioudrou, Synthesis 1984, 572-574); TBTU, TPTU, TSTU, TNTU (R. Knorr, A. Trzeciak, W. Bannwarth og D. Gillessen, Tetrahedron Letters 1989, 1927-1930); TOTU (EP-A-0 460 446) eller syreklorider for eksempel syrefluorid (L.A. Carpino, H.G. Chao, M. Beyermann og M. Bienert, J. org. Chem., 56(1991), 2635; J—N. Bertho, A. Loffet, C. Pinel, F. Reuther og G. Sennyey i E. Giralt og D. Andreu (Eds.) Peptides 1990, Escom Science Publishers B. V. 1991, s. 53-54).
Ovennevnte PNA blir dannet ved fastfasesyntese på et egnet
bærerm&teriale, (for eksempel polystyrol, med polyoksyetylen modifisert polystyrol, som for eksempel Tentage1, Controlled Pore Glass) som har en ankergruppe L og som latent inneholder resten 0° . fastfasesyntesen begynner ved den C-terminale enden av PNA med kobling av en med en baselabil beskyttelsesgruppe beskyttet monomer eller aminosyre som eventuelt er beskyttet 1 sidekjedefunksjonen, på en tilsvarende harpiks.
Etter avspaltning av den baselablle beskyttelsesgruppen av harpiks koblede byggestener med et egnet reagens som beskrevet ovenfor blir påfølgende beskyttede byggestener (PNA-monomerer og aminosyrederivater) etter hverandre koblet i ønsket rekkefølge. De dannede mellomproduktene, med en baselabil beskyttelsesgruppe på N-terminus beskyttet PNa-harpiks blir før koblingen ved påfølgende PNA-monomerer endeblokkert med ovennevnte reagenser.
Koblingen henholdsvis aktiveringen av aminosyrederivatene med en av de ovenfor nevnte aktiveringsreagensene gjennomføres i dimetylformamid, N-metylpyrrolidinon, acetonitril eller metylenklorid eller en blanding av de angitte oppløsnings-midlene. Det aktiverte derivatet blir anvendt i et 1,5 til 10 ganger overskudd. I de tilfeller hvor det inntreffer en ufullstendig kobling blir kobllngsreaksjonen gjentatt uten endeblokkering av aminogruppen til den nettopp tilkoblede byggestenen.
Fremgangsmåte for innføring av resten R<*> utgjør eksempelvis i det tilfellet hvor resten inneholder en karboksylsyre-funksjon, den ovenfor beskrevne fremgangsmåten for tilkobling av aminosyrene og PNA-monomerene. Ytterligere fremgangsmåter er omsetning av isocyanater som for eksempel fenylisocyanat, isotiocyanater som for eksempel fluoresceinisotiocyanat, klormaursyrederivater, som for eksempel klorformylkarbazol, karboksylsyreaktive estere som for eksempel cholesterin-(4-nitrofenyl )karbonat, acridinium-succinimidylkarbonat, sulfoklorider som for eksempel dansylklorid osv.
Ovenfor angitte syntese forløp kan også bli gjennomført ved hjelp av kommersielle oppnåelige syntese automater, som for eksempel peptidsyntese apparater, multiple peptidsyntese-apparater, DNA-syntetiseringsapparater med modifikasjon av vanlige anvendte synteseprogrammer.
Etter syntese av PNA i den ovenfor angitte måten kan PNA-oligomeren bli avspaltet fra harpiksen med egnede reagenser, som for eksempel trifluoreddiksyre mot svake eller middels sterke syrelabile ankergrupper. Alt etter anvendte linkere og type anvendte beskyttelsesgrupper blir oligomerer og ytterligere sldekjede beskyttelsesgrupper til nuklelnbasen samtidig avspaltet. Avspaltningsreagenser kan derved bli fortynnet anvendt også med egnede oppløsningsmldler, som for eksempel metylenklorid. Eventuelt kan det for å unngå bireaksjoner bli tilført ytterligere additiver av dette avspaltningsreagénset. Som kationoppfanger egner det seg forbindelser som fenol, kresol, tiokresol, anisol, tioanisol, etandithiol, dimetylsulfid, etylmetylsulfid, trietylsilan, triisopropylsilan eller lignende vanlige additiver innen fast fase peptidsyntese som kan bli tilsatt enkeltvis eller som blanding av to eller flere av disse hjelpemidlene.
Rensing av oppnådde urensede oligomerer etter avspalting foregår ved hjelp av fremgangsmåter som er kjente innen peptid- eller nukleotidkjemien, som for eksempel HPLC, ionebyttekromato-grafi osv.
Forkortelser anvendt for aminosyrer tilsvarer de som er vanlige innen peptidkjemlen angitt med tre bokstav-koden som beskrevet i Europ. J. Biochem. 138, 9 (1984). Ytterligere anvendte forkortelser er ført opp nedenfor.
De følgende eksemplene tydllggjør de foretrukne fremgangsmåter for fremstilling av forbindelsene Ifølge oppfinnelsen.
Eksempel 1
N-(Fmoc-aminoetyl)glycinmetylester-hydroklorid Fmoc-Aeg-OMe'HC1
8.2 g aminoetylglyclnmetylester-dihydroklorid blir oppløst i 100 ml vann og under kraftig omrøring blir det tilført 13,48 g Fmco-ONSu i 400 ml dioksan. Det tilsettes dråpevis 10.08 g natriumhydrogenkarbonat 1 ISO ml vann 1 løpet av 15 min. Dette røres i ytterligere 15 timer ved romtemperatur og inndampes deretter 1 vakuum til ca 100 ml. Man ekstraherer med 600 ml etylacetat og vasker den organiske fasen tre ganger med 50 ml vann. Den organiske fasen blir tørket over natriumsulfat og deretter inndampet til ca 50 ml. Det omsettes med 100 ml diklormetan og 20 ml 2N metanol i sk saltsyre i det produktet øyeblikkelig faller ut. Dette lar man stå over natt i lukket kolbe ved 4<*>C. Resten blir sugd av og tørket.
Utbytte: 9.8 g
Rp: 0.50 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
MS(FAB, NBA/LiCl): 361.2 [M+L19]+
Eksempel 2
N-(Fmoc-amlnoetyl)glycln-hydroklorid
Fmoc-Aeg-OH • HC1
11.21 g aminoetylenglycin blir suspendert i 250 ml DMF og under omrøring omsatt med 98.8 ml bis(trimetylsilyl)acetamid. Etter 15 min. omrøring oppnår man en klar oppløsning. Til dette tilsetter man dråpevis i løpet av 15 min. en oppløsning av 33.7 g Fmoc-ONSu i 200 ml DMF. Dette røres i ytterligere 1 time og deretter tilføres 100 ml metanol og vann til reaksjonsblandingen. Etter 10 min. blir det ytterligere tilført 16.6 ml 6N saltsyre og dette røres i ytterligere 10 min. Deretter blir blandingen inndampet på rotasjonsfordamper i vakuum til tørrhet og resten blir omsatt med 250 ml diklormetan og omrørt. Først oppnår man en klar oppløsning og fra denne faller det deretter langsomt ut etter ca 5 min. produktet. Ytterligere 250 ml diklormetan tilsettes og dette omrøres i totalt 1.5 timer. Det utfelte produktet blir avsugd og deretter omrørt i en trakt to ganger med 150 ml diklormetan og sugd av. Bunnfallet blir til slutt overført til en kolbe og rørt med ca 300 ml etylacetat ved 45°C, filtrerer dette varmt av og ettervasker med litt varm etylacetat. Bunnfallet blir grundig tørket 1 vakuumeksikator.
Utbytte: 34.4 g
Eksempel 3
Frigjøring av Fmoc-aminoetylglycin
Fmoc-Aeg-OH
23 g av ovennevnte Fmoc-aminoetylglycin-hydroklorid blir varmt oppløst i 400 ml metanol. Etter avkjøling til romtemperatur blir det under grundig omrøring dråpevis tilsatt en oppløsning av 2.2 g NaOH i 80 ml metanol. Produktet faller da øyeblikkelig ut. Det tilsettes ytterligere 40 ml vann til oppløsningen og denne blandingen oppvarmes og det oppstpr en klar oppløsning som man langsomt avkjøler til romtemperatur og lar dette stå i ytterligere 1 time ved 0"C. Bunnfallet blir sugd av, vasket tre ganger hver med 70 ml 90% vandig metanol og deretter grundig tørket i vakuumeksikator.
Utbytte: 15.0 g
Rp: 0.55 (n-butanol/eddiksyre/vann 2:1:2)
MS(FAB, NBA): 341.2 [M + H]<+>
Eksempel 4
2-amino-6-klor-purin-9-yl-eddiksyremetylester
I en godt tørket glassapparatur blir det under argonatmosfære tilført 1.43 g matriumhydrid (95%) og videre tilført 200 ml godt tørket N,N-dimetylformamid. Deretter blir det tilført 10.0 g 2-amino-6-klorpurin og gassutvikling og oppvarming oppstår samt en gul oppløsning. Etter 1 time blir det under grundig omrøring dråpevis tilsatt en oppløsning av 10.8 g bromeddiksyremetylester i 40 ml DMF. Dette røres ytterligere 1 2 timer og reaksjonsblandingen inndampes på rotasjonsfordamper i oljepumpevakuum. Resten blir omsatt med vann og deretter ekstrahert med etylacetat. Den organiske fasen blir lnndampet til tørrhet og råproduktet blir renset ved hjelp av flamme-kromatograf1 på kiselgel med diklormetan/metnaol (95/5).
Utbytte: 11 g produkt
Rp: 0.44 (diklormetan/metanol 9:1)
MS(C1): 242(M+H)<+>
Eksempel 5
2 - ( 4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-6-klor-purin-9-yl-eddiksyremetylester
II g 2-amino-6-klor-purin-9-yl-eddiksyremetylester blir suspendert i en blanding av 75 ml pyridin og 9.5 ml trietylamin under argon og deretter blir det tilført 15 g 4-metoksyfenyl-difenylmetylklorid i 4 porsjoner i løpet av 1 time. Dette lar man over natt reagere og inndamper blandingen til tørrhet, koevaporerer en gang med litt toluen og renser råproduktet ved hjelp av flamme-kromatografi på kiselgel med diklormetan/metanol (98:2).
Uthytte: 15.5 g
Rp: 0.60 (diklormetan/metanol 97:3)
MS(ES<+>):514.2(M+H)<+>
Eksempel 6
2-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-6-hydroksy-purin-9-yl-eddiskyre
0.5 g 2-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-6-klor-purin-9-yl-eddiksyremetylester blir oppvarmet i 3 timer i 12 ml 10% natronlut under tilbakeløp. Deretter blir dette avkjølt til romtemperatur og forsiktig nøytralisert med 10% HC1. Det utfelte produktet blir sugd av, vasket flere ganger med vann og grundig tørket.
Utbytte: 400 mg
Rp: 0.1 (diklormetan/metanol 7:3)
MS(FAB, NBA/LiCl): 488.2(M+Li)<+>
Eksempel 7
6-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-purin
13.5 g 6-aminopurin og 46.2 g 4-metoksyfenyl-difenylmetyl-klorid blir suspendert i 500 ml tørr dimetylformamid og etter tilførsel av 13.9 ml trietylamin kort oppvarmet til 60°C. Den faste klare, grønnaktige oppløsningen blir latt stå over natt. Deretter blir blandingen inndampet på rotasjonsfordamper i vakuum og etter omsetning med 50 ml metanol ytterligere inndampet. Resten blir renset på kiselgel med
diklormetan/metanol (95:5) under tilsetning av 0.1% trietylamin kromatografisk.
Utbytte: 9.8 g av et skum
Rp: 0.35 (diklormetan/metanol 9:1)
MS(FAB, MeOH/NBA): 408.2 (M+H)<+>
Eksempel 8
6-(4-metoksyfenyl-di fenylmetyl-amino)-purin
20.25 g 6-aminopurin og 69.3 4-metoksyfenyl-difenylmetyl-klorid blir suspendert i 500 ml tørr pyridin og etter tilførsel av 19.1 ml 4-etylmorfolin kort oppvarmet til ca 40° C. Blandingen blir latt stå over natt. Deretter blir suspensjonen omrørt med vann og diklormetan og bunnfallet blir sugd av. Diklormetan-fasen blir inndampet til tørrhet i vakuum, rørt med litt diklormetan, bunnfallet blir sugd av og blandet med det første oppnådde. Etter tørking oppnår man 47.3 g produkt.
Rp: 0.53 (etylacetat)
MS(FAB, MeOH/NBA): 408.2(M + H)<+>
Eksempel 9
6 - (4 -me tok sy f enyl -dif enylmetyl-amino)-pur in-9-yl-eddiksyremetylester
6.2 g 6-(4-métoksyfenyl-difenylmetyl-amino )-purin blir fordelt i 75 ml tørr dimetylformamld og deretter blir 0.36 g natriumhydrid tilsatt. Dette røres i ytterligere 1 time og deretter tilsettes 2.52 g bromeddiksyremetylester og dette røres videre i 2 timer. Deretter blir reaksjonsblandingen omsatt med 2 ml metanol, etterrørt i 10 minutter og deretter inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir renset på kiselgel med etylacetat under tilsetning av 0.5% trietylamin kromatografisk.
Utbytte: 4.0 g av et skum
Rp: 0.68 (etylacetat/metanol 3:1)
MS(FAB, NBA/LiCl): 480.2(M+H)<+>; 485.2(M+Li)<+>
Eksempel 10
6-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pur in-9-yl-eddiksyre
3.0 g 6-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-purin-9-yl-eddiksyremetylester blir oppløst i 20 ml dimetylformamid og
linder omrøring omsatt med 0.25 g NaOH i 5 ml vann. Etter 10 minutter er forsåpningen avsluttet og reaksjonsblandlngen blir innstilt på pH 6 med fortynnet eddiksyre. Dette fortynnes ytterligere med 100 ml vann og inndampes deretter i vakuum på rotasjonsfordamper. Deretter blir det etterdestillert ytterligere to ganger med litt toluen og resten blir omsatt med dietyleter, i det produktet krystalliseres ut. Det utfelte produktet blir sugd av, vasket med litt dietyl og tørket.
Utbytte: 3.2 g
Smeltepunkt: 157-160°C (dekomp.)
Rp: 0.15 (etylacetat/metanol 3:1)
MS(FAB, NBA/LiCl): 465.1(M+H)<+>; 472.1(M+Li)<+>; 478.2(M+2Li)<+>
Eksempel 11
l-acetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin
1-acetyl-thymin
75 g thymin blir suspendert i 375 ml acetanhydrid og oppvarmet i 45 minutter under tllbakeløp. Deretter blir blandingen avkjølt til 0°C, i det produktet faller ut. Bunnfallet blir sugd av og omrørt med 375 ml etylacetat. Bunnfallet suges av, vasket med litt dietyleter og tørkes.
Utbytte: 89.1 g
Smeltepunkt: 187-189°C
Rp: 0.67 (diklormetan/metanol 95:5)
Eksempel 12
3-benzyloksymetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin 3-benzyloksynretyl-thymin
52.0 g l-acetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin blir suspendert i 300 ml DMF og etter tilførsel av 47.5 ml trietylamin avkjølt til 0°C. Til den grundig omrørte blandingen blir det langsomt dråpevis tilført 100 ml benzylklormetyleter i 50 ml DMF ved denne temperaturen. Dette røres i ytterligere 1 time og blir latt stå over natt ved
romtemperatur. Deretter blir reaksjonsblandlngen inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper, tatt opp i 450 ml metanol og 300 ml av en 40% vandig oppløsning av metylamin og 1.5 t tørket med tllbakeløp. Oppløsningen blir deretter inndampet og omrørt med 10.8 g natrlumhydrogenkarbonat 1 600 ml vann. Det utfelte produktet blir sugd av, vasket med vann og etanol og omkrystallisert fra etanol.
Utbytte: 46.66 g
Smeltepunkt: 119-120<*>C
Rp: 0.38 (diklormetan/metanol 95:5)
Eksempel 13
3-benzyloksymetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyreetylester
3-benzyloksymetyl-thyminyl-eddIksyreetylester
4.97 g natriumhydrid blir tilsatt i 150 ml THF, og deretter blir 45.04 g 3-benzyloksymetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin oppløst i 550 ml THF under Ng-atmosfære ved 0°C dråpevis tilsatt og til slutt blir det tilført 21.42 ml bromeddiksyreetylester i 700 ml THF ved denne temperaturen. Dette røres i ytterligere 5 timer ved romtemperatur og det tilføres til slutt forsiktig vann. Den organiske fasen blir separert og vannfasen blir ekstrahert 4 ganger med diklormetan. De samlede organiske fasene blir tørket over magnes-iumsulfat, inndampet og resten blir omrørt med heptan.
Utbytte: 52.4 g
Rp: 0.15 (diklormetan/metanol 95:5)
MS(FAB, NBA): 319.1 (M+H)<+>
Eksempel 14
2.4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyreetylester thyminyl-eddiksyreetylester
25 g 3-benzyloksymetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyreetylester blir oppløst i 1000 ml diklormetan, blandingen blir avkjølt til -70°C og ved denne temperaturen under grundig omrøring blir det dråpevis tilsatt 375 ml av en IM oppløsning av bortriklorid i diklormetan. Dette lar man etterreagere i ytterligere 3 timer ved denne temperaturen og tilfører dermed dråpevis ved -70°C til -60"C 320 ml metanol. Etter 1 time tilfører man 197.05 ml trietylamin og lar blandingen komme til romtemperatur. Man tilfører ytterligere vann og inndamper blandingen på rotasjonsfordamper. Resten blir tatt opp i etylacetat og vasket med vann. Den organiske fasen blir tørket over magneslumsulfat og deretter inndampet til tørrhet.
Utbytte: 12 g
Rp: 0.45 (diklormetan/metanol 9:1)
MS(DCl): 199(M+H)<+>
Eksempel 15
2.4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyre
thyminy1-eddiksyre
10 g 2.4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidln-eddiksyreetylester blir oppløst i 130 ml dioksan/vann (1:1) og deretter etter tilførsel av 60 ml IN LiOH omrørt over natt ved romtemperatur. Deretter blir blandingen inndampet til et lite volum, den vandige fasen blir vasket med eter og deretter innstilt til pH 2.5. Produktet faller ut. Man suger av og oppnår 4.9 g produkt. Av mor luten er det mulig å oppnå ytterligere 1.5 g produkt ved ekstrahering med pentanol og utfelling med heptan/eter.
Utbytte: 6.4 g
Rp: 0.30 (diklormetan/metanol 3:2)
MS(DCl): 185(M+H)<+>
Eksempel 16
N-l klorkarboksymetylthymin
thyminyl-eddiksyreklorid
Eksempel 16a
2 g 2.4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyre blir omrørt i 3 timer 15 ml thionylklorid ved 60°C helt til det ikke dannes ytterligere gassutvikling. Deretter blir thinylklorid i overskudd fjernet i vakuum på rotasjonsfordamper og deretter etterdestillert ytterligere tre ganger med litt toluen. Det på denne måten oppnådd produktet blir deretter direkte anvendt i den etterfølgende reaksjonen.
Utbytte: 2.4 g
MS(DCl): 203(M+H)<+>
Eksempel 16b
N-l karboksymetylthymin (3.0 g; 16.3 mmol) blir suspendert i thionylklorid (90 ml). Suspensjonen blir oppvarmet i 1.5 timer til 70° C og deretter latt stå i 16 timer ved romtemperatur. Thionylklorid i overskudd blir fjernet i vakuum og resten tre ganger koevaporert med toluen. Det oppnådde produktet blir rørt to ganger med N-heksan og tørket i vakuum. Man oppnår forbindelsen som lys-orange pulver.
Utbytte: 3.30 g
MS(C1; diklormetan): 203 (M+H)2+
Rf=0.10 (diklormetan/metanol 7:3).
Eksempel 17
2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pyrimidin N* -Mmt-cytosin
11.6 g 4-amino-2-hydroksypyrimidin og 46.2 g 4-metoksyfenyl-difenylmetylklorid blir suspendert i 500 ml tørr pyridin og etter tilførsel av 12.8 ml 4-metylmorfolin kort oppvarmet til ca 40°C. Blandingen blir latt stå over natt. Deretter blir suspensjonen omrørt med vann og diklormetan og bunnfallet sugd av. Diklormetan-fasen blir Inndampet i vakuum til tørrhet, rørt med litt diklormetan, bunnfallet blir sugd av og forent med det som først ble oppnådd. Etter tørking oppnår man 16.8 g produkt.
Rp: 0.45 (diklormetan/metanol 9:1)
MS(FAB,MeOH/NBA): 384.2(M+H)<+>
Eksempel 18 2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pyrimidin-l-yl-eddiksyremetylester
-Mmt-cytosyl-eddiksyremetylester
11.5 g 2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-dIfenylmetyl-amino)-pyrimidin blir fordelt i 120 ml tørr dimetylformamid og deretter blir 0.72 g natriumhydrid tilført. Dette røres i ytterligere 1 time og det tilsettes deretter 5.05 g bromeddiksyremetylester og etterrøres i ytterligere 2 timer. Deretter blir reaksjonsblandingen omsatt med 2 ml metanol, etterrørt i 10 minutter og deretter inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir rørt med vann, sugd av og tørket.
Utbytte: 10.7 g
RF: 0.39 (etylacetat)
MS(FAB, NMA/LiCl). 462.2(M+Li)<+>
Eksempel 19
2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pyrimidin-l-yl-eddiksyre
-Mmt-cytosyl-eddiksyre
10.5 g 2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pyrimidin-l-yl-eddiksyre-metylester blir oppløst i 100 ml dimetylformamid og under omrøring omsatt med 0.94 g NaOE i 5 ml vann. Etter 10 minutter er forsåpningen avsluttet og reaksjonsblandingen blir innstilt på pH 6 med fortynnet eddiksyre. Dette fortynnes ytterligere med 100 ml vann og inndampes i vakuum på rotasjonsfordamper. Deretter blir det etterdestillert to ganger med litt toluen og resten blir omsatt med dietyleter i det produktet faller ut. Det utfelte produktet suges av, vaskes med litt dietyleter og tørkes.
Utbytte: 8.55 g
RF: 0.27 (etylacetat)
MS(FAB, NBA/LiCl): 448 (M+Li)<+>
Eksempel 20
N4-(tert .butyloksykarbonyl J-N^^-karboksymetylcytosin N4 -Boc-cytosyl-eddiksyre
Eksempel 20a
N<4->(tert.butyloksykarbonyl)-cytosin
N4 -Boc-cytosin
Cytosin (11.1 g) blir suspendert i tørr pyridin (250 ml). Deretter blir det tilført di-tert-butyldikarbonat (21.8 g) og en spatelspiss 4-dimetylaminopyridin. Blandingen blir omrørt i 6 timer ved 60'C og et tykt bunnfall oppstår. Reaksjons-oppløsnlngen blir avkjølt og resten blir sugd av. Resten blir omrørt 1 varme med vann, sugd av og tørket i vakuum.
Utbytte: 10.26 g
MS(DCl): 212 (M+H)<+>.
Rp: 0.6 (diklormetan/metanol 6:4)
Eksempel 20b
N<4->(tert.butyloksykarbonylJ-N^-metoksykarbonylmetylcytosin N<4->Boc-cytosyl-eddiksyremetylester
N<4->(tert.-butyloksykarbonyl)l-cytosin (1.6 g) blir suspendert i tørr DMF (30 ml), natriumhydrid (0.19 g) blir tilført i porsjoner og blandingen omrørt i 1,5 timer ved romtemperatur helt til hydrogenutviklingen er avsluttet. Ved romtemperatur tilsettes deretter dråpevis med en sprøyte bromeddiksyremetylester (0.84 ml). Dette røres i ytterligere 5 timer ved romtemperatur og omsettes deretter med metanol (1 ml). Oppløsningsmiddelet blir fjernet i vakuum og den dannede resten blir renset ved kolonnekromatografi på kiselgel med diklormetan som eluerlngsmiddel. Fraksjonene som Inneholder produktet blir samlet og Inndampet i vakuum.
Utbytte: 1.1 g
MS(DCl): 284 (M+H)<+>
Rp: 0.5 (diklormetan/metanol 95:5)
Eksempel 20c
N<4->(tert.butyloksykarbonylJ-l^-karboksymetylcytosin N4 -Boc-cytosyl-eddiksyre
N4-(tert .butyloksykarbonyl )-Nl-metoksykarbonylmetylcytosin (4.2 g) blir suspendert i vann (30 ml) og ved 0°C omsatt dråpevis med 2N vandig natronlut under pH-kontroll (pH 12) helt til metylester er forsåpet. Forløpet av reaksjonen blir fulgt ved hjelp av DC. Deretter blir reaksjonsoppløsnlngen innstilt til pH 3 med eddiksyre og oppløsningsmiddelet blir destillert av i vakuum. Rensing av råproduktet foregår ved kolonnekronratografi på kiselgel med diklormetan/metanol/- trietylamin 8:1:1 som elueringsmiddel. Fraksjoner inneholdende produktet blir slått sammen og Inndampet i vakuum.
Utbytte: 3.5 g
Smeltepunkt: 95-98°C, dek.
MS(FAB.NBA): 270.2 (M+H)<+.>
Rp: 0.35 (diklormetan/metanol/trietylamin 8:1:1)
Eksempel 21
N-[2-( 4-metoksyfényl-difenylmetyl-amino)-6-hydroksy-purin-9-yl-acetyl]-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl - glycin
Fmoc-Aeg(G<Mmt>)-0H
1 g 2-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-6-hydroksy-purin-9-yl-eddiksyre blir oppløst i DMF og oppløsningen avkjølt til 0°C blir det tilsatt 682 mg TOTU og 239 mg N-etylmorf ol in. Blandingen blir ytterligere omrørt i 20 min. ved romtemperatur. I en separat kolbe tilberedes en oppløsning av 1.06 g Fmoc-amlnoetylglycin i 4 ml dimetylformamid og 1.5 g bis-trimetylsilylacetamid. Denne oppløsningen blir deretter tilsatt til den foraktiverte oppløsningen av 2-(2-metoksy-f enyl-di f enylmetyl-am i no )-6-hydroksy-purin-9-yl-eddiksyre. Blandingen blir omrørt i ytterligere 2 timer og deretter inndampet til tørrhet. Dette blir deretter tatt opp i 30 ml etylacetat og ekstrahert tre ganger hver med 15 ml vann. Den organiske fasen blir tørket over natriumsulfat og kromatografisk renset på kiselgel med metanol/diklormetan/vann/- lseddlk (1.5:10:0.25:0.075).
Utbytte: 600 mg
Rf: 0.35 (metylenklorid:metanol/7:3)
MS(FAB,DMSO/NBA/LiCl): 810.3(M+Li)<+>
Eksempel 22
N[6-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-purin-9-yl-acetyl]-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glycin-metylester Fmoc-Aeg(AMmt)-0me
En blanding av 848 mg (2.6 mmol) Fmoc-Aeg-OMe • HC1 og 407 mg (2.5 mmol) HOOBt blir oppløst i 5 ml DMF, og deretter blir det tilført 640 pl (5 mmol) NEM og 1.2 g (2.5 mmol) 6-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-purin-9-yl-eddiksyre oppløst i 5 ml DMF. Deretter blir det tilført 471 jil (3 mmol) diisopropylkarbodiimid og blandingen blir omrørt i 4 timer ved romtemperatur. Deretter blir blandingen filtrert og filtratet inndampet på rotasjonsfordamper i vakuum. Den amorfe resten blir tatt opp i diklormetan, ekstrahert med vann og natriumhydrogenkarbonat-oppløsning, den organiske fasen blir tørket over natriumsulfat og deretter inndampet i vakuum til tørrhet. Resten blir oppløst i 4.5 ml etylacetat og utfelt ved tilførsel av 20 ml diisopropyleter. Den derav oppnådde halvfaste resten blir løst opp i 20 ml metanol og utfelt ved tilførsel av 30 ml vann og deretter inndampet I vakuum.
Utbytte: 1.05 g
Rp: 0.85 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
MS(FAB, DMSO/NBA): 802.4(M+H)<+>
Eksempel 23
Syntese av N-[6-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-purin-9-yl-acetyl]-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glycln
Fmoc-AegU1*11* )-0H
900 mg (1.125 mmol) Fmoc-AegU*1111* )-0Me blir oppløst i en blanding av 5 ml dloksan og 2.5 ml vann og under avkjøling forsåpet med Isvann ved porsjonsvis tilførsel av en blanding av 2.4 ml IN NaOE og 2.5 ml dloksan. Etter avsluttet reaksjon blir dette buffret med tilførsel av litt fast kulldioksid og den i mindre målestokk etterfulgte Fmoc-avspaltningen ble opphevet ved tilførsel av Fmoc-ONSU. Deretter blir dioksanet destillert av i vakuum, oppløsningen fortynnet med vann og belagt med etylacetat - n-butanol (1:1). Blandingen blir surgjort ved tilførsel av kaliumhydrogensulfat-oppløsning under avkjøling med isvann til pH 5 til 6. Den organiske fasen blir separert og den vandige fasen blir ytterligere to ganger ekstrahert med etylacetat-butanol (1:1). De forente organiske fasene blir tørket over natriumsulfat og inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir oppløst i 5 ml etylacetat og utfelt ved tilførsel av 20 ml metyl-butyl-eter.
Utbytte: 1.02 g
Rp: 0.73 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
MS(FAB, DMSO/NBA): 787 (M+H)<+>, 794 (M + LI)<+>
Eksempel 24
N-(2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrlmidin-1-yl-acetyl)-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glye in Fmoc-Aeg(T)-OH
4.03 g Fmoc-Aeg-OH blir suspendert i 80 ml DMF, omsatt med 4.39 ml N,0-blstrlmetylsilylacetamid og omrørt i 40 min. ved romtemperatur. Til den klare oppløsningen blir det tilført ved 0"C 2.4 g 2.4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyreklorid under grundig omrøring. Dette lar man etterreagere i ytterligere 3 timer ved romtemperatur og destillerer deretter
oppløsningsmiddelet på rotasjonsfordamper. Det på denne måten oppnådde råproduktet blir omsatt med vann og latt stå over natt ved 0°C. Deretter blir vannet dekantert av, resten tørket i høyt vakuum og kiselgel renset med diklormetan/- metanol/eddiksyre/vann (500/100/25/2) kromatografIsk. De forente produkt-fraksjonene blir redusert til tørrhet og ytterligere etterdestillert tre ganger med litt toluen.
Utbytte: 3.8 g
RF: 0.42 (diklormetan/metanol/eddiksyre 100:20:5)
MS(FAB, DMSO/NBA): 507.3 (M+H)<+>
Eksempel 25
N-(2.4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-l-yl-acetyl)-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbony1amino)-ety1-glye in Fmoe-Aeg(T)-0H
En blanding av 386 mg (2 mmol) 2.4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidineddiksyre og 652 mg (4 mmol) HOOBt blir oppvarmet i 6 ml tørr DMF kort ved 70 til 80° C. Etter avkjøling til romtemperatur blir det tilført 314 jjI (2 mmol) diisopropylkarbodiimid og blandingen blir omrørt i 30 min. Deretter blir det tilført 680 mg (2 mmol) Fmoc-Aeg-OH. I avstand på 30 min. blir blandingen tre ganger kort oppvarmet til ca 70°C. Deretter blir oppløsningsmiddelet avdampet i vakuum på rotas jonsfordamper og den dannede resten blir rørt med vann og det på denne måten oppnådde råproduktet blir fordelt mellom N-butanol og vann. Den organiske fasen blir ekstrahert med kaliumhydrogensulfat-oppløsning, natriumhydrogenkarbonat-oppløsning og vann. Deretter blir den organiske fasen inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper og produktet faller dermed ut.
Utbytte: 260 mg
Rp: 0.40 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
MS(FAB, DMSO/NBA): 507.3(M+H)<+>
Eksempel 26
N-[2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pyri-midin-l-yl-acetyl]-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glyein-metylester
Fmoc-Aeg( CVbat )-OMe
En blanding av 1.7 g (5 mmol) Fmoc-Aeg-OMe ■ HC1 og 675 mg (5 mmol) HOOBt blir oppløst I 10 ml DMF og 1.28 ml (10 mmol) NEM blir tilført. Deretter blir blandingen avkjølt til 0<e>C, 2.21 g (5 mmol) 2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pyrimidin-l-yl-eddiksyre blir tilført etterfulgt av 5 mmol dilsopropylkarbodiimid og denne blandingen blir omrørt ved 0"C i ytterligere 30 minutter. Dette røres til slutt i 4.5 timer ved romtemperatur og oppløsningsmiddelet destilleres deretter fra i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir fordelt mellom diklormetan og vann, den organiske fasen blir vasket med natriumhydrogenkarbonat-oppløsning og vann, tørket over natriumsulfat og inndampet på rotasjonsfordamper i vakuum til tørrhet. Resten blir løst opp i 10 ml metanol og utfelt ved tilførsel av 15 ml vann. Det oppnådde produktet blir rørt med litt vann og tørket i vakuumekslkator over kaliumhydroksid.
Utbytte: 3.19 g
RF: 0.79 (n-butanol/pyridin/vann/eddiksyre 8:2:2:10)
MS (FAB, DMSO/NBA): 778,4(M)<+>
Eksempel 27
N-[2-hydroksy-4-(4-metoksyfenyl-difenylmetyl-amino)-pyri-midin-l-yl-acetyl]-N-2-( 9-f luorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glycin
Fmo c -Aeg ( CVbat) - 0H
3.0 g (3.86 mmol) Fmoc-AegfcM111* )-0Me blir oppløst i en blanding av 15 ml dloksan og 10 ml vann og forsåpet under avkjøling med isvann ved porsjonsvis tilførsel av 10.2 ml av en blanding av IN NaOH og dloksan (1:1). Etter avsluttet reaksjon blir det buffret gjennom tilførsel av litt fast
karbondioksid og den i liten målestokk følgende Fmoc-avspaltningen blir opphevet ved tilførsel av 0.5 g Fmoc-ONSU og 45-minutters omrøring. Deretter blir blandingen innstilt på pH 6.5 med 0.5 ml 2M kaliumhydrogensulfat-oppløsnlng. Til slutt blir dioksanet vesentlig avdestillert i vakuum, oppløsningen fortynnet med vann og belagt med etylacetat. Blandingen blir surgjort ved tilførsel av kaliumhydrogen-sulfat-oppløsning under avkjøling med isvann til pH 5. Den organiske fasen blir separert og den vandige fasen blir ytterligere to ganger ekstrahert med etylacetat. De forente organiske fasene blir tørket over natriumsulfat og inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir oppløst i en blanding av 5 ml metanol og 15 ml etylacetat og utfelt ved tilførsel av 08 ml metylbutyleter. Produktet blir filtrert av og tørket i vakuum.
Utbytte: 1.95 g
Rp: 0.80 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
MS (FAB, DMSO/NBA/LiCl): 770.3 (M+Li)+
Eksempel 28
N- [2-hydroksy-4 (tert. -butyloksykarbonyl-amino )-pyrimidin-l-yl-acetyl]-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glyeinmetylester
Fmoc-Aeg(C<Boc>)-OMe
En blanding av 0.85 g (3 mmol) N<4->(tert.butyloksykarbonyl)-Ifi-karboksymetylcytosin og 0.49 f 83 mmol) HOOBt blir oppløst i 5 ml tørr DMF, 786 jjI (6 mmol) NEM blir tilført og deretter blir 1.02 g (3 mmol) Fmoc-Aeg-OMe ■ HC1 tilført. Deretter blir blandingen avkjølt til 0°C, 564 jjI (3.6 mmol) diisopropylkarbodiimid blir tilført og blandingen blir omrørt i 30 minutter ved 0"C og 4 timer ved romtemperatur. Deretter blir oppløsningsmiddelet avdestillert i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir fordelt mellom diklormetan og vann, den organiske fasen blir vasket med natrlumhydrogenkarbonat-oppløsnlng og vann, tørket over natriumsulfat og inndampet til tørrhet i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir omkrystallisert fra 20 ml etylacetat.
Utbytte: 1.19 g
Rp: 0.88 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
MS (FAB, DMSO/NBA: 606,3 (M<+>)
Eksempel 29
Fmoc-Aeg(C<Boc>)-0Me
En blanding av 2.87 g (8.47 mmol) Fmoc-Aeg-OMe * HC1 og 1.38 g (8.47 mmol) HOOBt blir oppløst i 15 ml tørr DMF, 1.08 ml (8.47 mmol) NEM blir tilført og deretter blir 2.4 g (8.47 mmol) N<2->(tert.butyloksykarbonyl)-N21-karboksymetylcytosin tilført. Deretter blir blandingen avkjølt til 0°C, 1.33 ml (8.47 mmol) diisopropylkarbodiimid blir tilført og blandingen blir omrørt I 30 min. ved 0°C og 3 timer ved romtemperatur. Deretter blir oppløsningsmiddelet destillert av på rotasjonsfordamper i vakuum. Resten blir tatt opp i 100 ml diklormetan, den organiske fasen blir vasket etter hverandre med vann, natriumhydrogenkarbonat-oppløsning og vann, tørket over natriumsulfat og Inndampet til tørrhet i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir rørt med metyl-tert.-butyleter.
Utbytte: 4.5 g
Rp: 0.88 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
Eksempel 30
N-[2-hydroksy-4-(tert.-butyloksykarbonyl-amino)-pyrimidin-l-yl-acetyl]-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glycin
Fmoc-Aeg(CBoc)-OH
700 mg (1.15 mmol) Fmoc-Aeg(C<Boc>)-0Me blir oppløst i en blanding av 6 ml dloksan og 3 ml vann og omsatt ved 0°C porsjonsvis med totalt 0.95 ml 2N NaOB i løpet av 2 timer. Etter endt reaksjon blir det buffret gjennom tilførsel av litt fast karbondioksid og den i liten målestokk forekommende Fmoc-avspaltningen blir redusert ved tilførsel av 50 mg Fmoc-
ONSU og 45-minutter lang etterrøring. Deretter blir blandingen innstilt til pH 6.5 med 0.5 ml 2M kaliumhydrogensulfat-oppløsning. Deretter blir dioksanet destillert av i vakuum, oppløsningen fortynnet med vann og belagt med etylacetat. Blandingen blir surgjort ved tilførsel av kaliumhydrogen-sulfatoppløsnlng under avkjøling med isvann til pH 5. Den organiske fasen blir separert og den vandige fasen blir ytterligere to ganger ekstrahert med etylacetat. De samlede organiske fasene blir tørket over natriumsulfat og inndampet på rotasjonsfordamper i vakuum som feller produktet. Produktet blir filtrert av og tørket i vakuum.
Utbytte: 485 mg
Rp: 0.55 (n-butanol/pyridin/eddiksyre/vann 8:2:2:10)
MS(FAB, DMSO/NBA): 592 (M<+>)
Eksempel 31
Fmoc-Aeg(T)-OMe
11.73 g Fmoc-Aeg-OMe * HC1 blir oppløst sammen med 5.52 g thyminyleddiksyre i 100 ml tørr DMF og deretter blir det etterhverandre tilført 9.84 g TOTU og 20.4 ml diisopropyl-etylamln. Blandingen blir omrørt i 3 timer ved romtemperatur og deretter inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper. Resten blir tatt opp i etylacetat og hver ekstrahert tre ganger med natriumhydrogenkarbonat- og kaliumhydrogensulfatoppløsning. Den organiske fasen blir redusert, resten oppløst i litt etylacetat og omsatt med eter i det produktet faller ut.
Utbytte: 12.3 g
Rp: 0.63 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1=
MS(ES<+>): 521.4(M+H)<+>
Eksempel 32
Fmoc-Aeg(T)-OH
12.0 g Fmoc-Aeg(T)-0Me blir suspendert i blanding av 100 ml dioksan og 50 ml vann forsåpet ved porsjonsvis tilførsel av 32 ml 2N NaOH. Etter avsluttet reaksjon blir det buffret ved tilførsel av litt fast karbondioksid og den delvise Fmoc-avspaltningen blir redusert ved tilførsel av 2.7 g Fmoc-ONSU. Deretter blir blandingen filtrert og filtratet ekstrahert med etylacetat. Den vandige fasen blir innstilt til pH 2 med IN HC1 og produktet faller ut. Bunnfallet blir sugd av og tørket 1 vakuum (råprodukt 11,6 g). For fjerning av salter blir råproduktet tatt opp i 70 ml DMF under sakte oppvarming, det uoppløste blir filtrert av og filtratet inndampet til tørrhet. Resten blir tatt opp i etylacetat og utfelt ved tilførsel av diisopropyleter. Produktet blir sugd av og tørket i vakuum.
Utbytte: 10.4 g
Rp: 0.40 (n-butanol/eddiskyre/vann 3:1:1)
MS(ES<+>): 507.3 (M+H)<+>
Eksempel 33
3-benzyloksymetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyre 3-benzyloksymetyl-thyminyl-eddiksyre
13.65 g 3-benzyloksymetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyreetylester blir oppløst i en blanding av 400 ml dloksan, 200 ml vann, 100 ml metanol og 40 ml IN NaOH. Etter 2 timer omrøring ved romtemperatur er forsåpningen avsluttet. Blandingen blir inndampet i vakuum på rotasjonsfordamper til et volum på ca 200 ml, omsatt med 200 ml vann og en gang ekstrahert med 100 ml etylacetat (blir kastet). Den vandige fasen blir innstilt til pH 1.5 med IN HC1 og deretter ekstrahert tre ganger med 100 ml etylacetat. De forente etylacetatfasene blir slått sammen og tørket over natriumsulfat. Etter avfiltrering av tørkemiddelet blir filtratet Inndampet til tørrhet. Det dannes en seig olje som
blir anvendt direkte i neste reaksjon. Etter lengre henstand blir oljen fast.
Utbytte: 11.35 g
Rp: 0.64 (2-butanon/pyridin/vann/eddiksyre 70:15:15:2) MS(ES<+>): 305.2 (M+H)<+>
Eksempel 34
N-(3-benzyloksymetyl-2 ,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-l-yl-acetyl )-N-2-( 9-f luorenyl -metyloksykarbonylamino )-etyl-glycinmetylester
Fmoc-Aeg(T<Bom>)-OMe
3.04 g 3-benzyloksymetyl-2,4-dihydroksy-5-metyl-pyrimidin-eddiksyre blir oppløst i 100 ml tørr DMF og etter hverandre blir det tilført 3.9 g Fmoc-Aeg-OMe • HC1, 3.28 g TOTU samt 5.1 ml diisopropyletylamin. Blandingen blir omrørt i 2 timer ved romtemperatur og deretter inndampet i vakuum til tørrhet på rotasjonsfordamper. Resten blir tatt opp i etylacetat og ekstrahert tre ganger hver med natriumhydrogenkarbonat- og kaliumhydrogensulfat-oppløsning. Den organiske fasen blir tørket over natriumsulfat og etter avfiltrering av tørke-middelet inndampet. Den dannede skummende resten blir rørt med petroleter, avsugd og tørket i vakuum.
Utbytte: 4.86 g
Rp: 0.75 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
ME(ES<+>): 641.4 (M+H)<+>
Eksempel 35
N-(3-benzyloksymetyl-2 ,4-dihydroksy-5-metyl-pyrlmidin-l-yl-acetyl)-N-2-(9-fluorenyl-metyloksykarbonylamino)-etyl-glycin Fmoc-Aeg(TBom)-OH
2.3 g Fmoc-Aeg(T<Bom>)-OMe blir oppløst i en blanding av 30 ml dloksan og 15 ml vann og forsåpet ved porsjonsvis tilførsel av 7.36 ml IN NaOH. Etter avsluttet reaksjon blir det buffret ved tilførsel av litt fast karbondioksid og delvis påfølgende Fmoc-avspaltning blir redusert ved tilførsel av 0.41 g Fmoc-
ONSU. Deretter blir blandingen filtrert, dloksan avdestillert i vakuum på rotasjonsfordamper, fortynnet med 30 ml vann og den fortsatt alkaliske oppløsningen blir ekstrahert en gang med etylacetat. Den vandige fasen blir med IN HC1 innstilt til pH 3 og produktet faller dermed ut. Etter henstand over natt 1 kjøleskap ved 4°C suges bunnfallet av og tørkes i vakuum. Fra filtratet faller ytterligere produkt ut etter lnndamping til lite volum.
Utbytte: 1.47 g
Rp: 0.37 (n-butanol/eddiksyre/vann 3:1:1)
MS(ES<+>):627.2(M+H)<+>
PNA-synteser:
Eksempel 36
H-(Aeg(T))8-Lys-N<H>2 (C4gH127N35033, FG2275.26)
Syntesen foregår på en aminometyl-polystyrolharpiks med 5-(Fmoc-amino-4-metoksybenzyl )-2 ,4-dimetoksyfenylpropionsyre som ankergruppe i en multippel peptidsynthesizer fra Fa. Abimed.
14.7 mg (10 jimol) Fmoc-amldanker-harpiks i DMF blir blandet og tilført i en reaksjonsbeholder i multiplen peptidsynthesizer. Følgende reaksjonsoppløsnlnger anvendes i syntesen: 1) Aktivator-Lsg.: 0.876 molar PyBOP-oppløsning i tørr DMF 2) Base for aktivering: 3.95 molar oppløsning av NEM i tørr
DMF
3) Fmoc-Lys(Boc)-0H: 0.65 molar i tørr DMF
4) Fmoc-Aeg(T)-OH: 250 mg i 1 ml tørr DMF
5) Piperidin: 20% oppløsning i DMF
Etter Fmoc-avspaltningen med piperidin-oppløsningen og vasking med DMF blir aktivatoroppløsningen, Fmoc-derivatet og basen tilført 1 reaksjonsbeholderen til beskyttet harpiks. Koblingstiden utgjør 40 minutter. Etter 28 minutter reak-sjonstid tilføres 100 pl diklormetan. Deretter blir harpiksen vasket fem ganger med DMF og er nå klar for den neste piperidinbehandlingen. Etter den siste Fmoc-avspaltningen blir harpiksen tørket og porsjonsvis behandlet med totalt 4 ml 95% TFA (ca 2.5 t). TFA-oppløsningen blir inndampet i vakuum og resten oppløst i 250 pl TFA. Denne oppløsningen blir fordelt i 5 Eppendorf-rør og hver felt med 600 pl metyl-tert.-butyleter. Bunnfallet blir sedimentert ved sentrifugering og deretter blir supernatanten dekantert av. Bunnfallet blir suspendert i litt metyl-tert.-butyleter og på ny sedimentert ved sentrifugering og deretter blir supernatanten igjen dekantert av. Dette forløpet blir gjentatt flere ganger og deretter blir produktet tørket i vakuum. Rensingen foregår kromatografiks over en mono 0 kolonne (Fa. Pharmacia, Munzingen) med 0.17 - 0.44 M natriumklorid-gradienter til 10 mM NaOH (pH 12) og utsaltning ved ultra-filtrering.
Utbytte: 198 OD260<«>
MS (FAB, AcOH/NBA): 2298 (M+Na)<+>
Eksempel 37
H-(Aeg(T<triaz>°<l>°)8-Lys-NH2 (C110<H>134<N>58026, FG 2682,65)
Denne syntesen foregår på en aminometyl-polystyrolharpiks med 5-(Fmoc-amino-4-metoksybenzyl)-2.4-dimetoksyfenylpropionsyre som ankergruppe med en ABI-DNA-synthesizer 380B. Det blir programstyrt omsatt 14.7 mg (10 pmol) Fmoc-amidankerharpiks ved tilførsel av følgende oppløsninger: Posisjon 1: Fmoc-Lys(Boe)-0H: 0.66 molar oppløsning i DMF Posisjon 2: Fmoc-Aeg(T<rlazol>2o)-0H 735 mg i 2 ml tørket DMF Posisjon 5: Blanding av 1.35 ml NEM og 1.7 ml DMF (3.46 molar)
Posisjon 6: PyBOP: 0.91 molar oppløsning i getr. DMF
Posisjon 14: 20% piperidin i DMF
Posisjon 16: DMF for vasking av harpiksen.
Posisjon 17: DMF(tørket) for reaksjon.
Appliseringsmengden blir bestemt av flytraten på et 5-ganger overskudd av lysin- henholdsvis aminpetylglycin-derivat. Koblingen foregår to ganger. For avspaltning av forbindelsn fra harpiksen blir totalt ca 5 ml 90% TFA i løpet av 2 timer manuelt ført gjennom kolonnen. TFA blir inndampet i vakuum, resten oppløst i 300 pl TFA og denne oppløsningen blir fordelt i 6 Eppendorf-rør. Produktet blir felt ved tilførsel av 1 ml metyl-tert.-butyleter. Bunnfallet blir sedimentert ved sentrifugering og deretter blir supernatanten dekantert av. Bunnfallet blir suspendert i litt metyl-tert.-butyleter og på ny sedimentert ved sentrifugering og deretter blir supernatanten igjen dekantert av. Dette forløpet blir igjen gjentatt og deretter blir produktet tørket i vakuum. På slutten blir dette Igjen suspendert I metyl-tert.-butyleter, sentrifugert og tørket.
Utbytte: 270 OD260*
MS(FAB,TFA/NBA): 2684 (M<+>)
Eksempel 38
H-(Aeg(C))7-Lys-NH2 (C76<H>106N38<0>22, FG 1903,92(
Syntesen blir gjennomført som beskrevet i eksempel 36, men med 750 mg Fmoc-AegCcM"11 )-0H, som blir tilført oppløst 1 1.5 ml tørket DMF. Avspaltningen og fellingen foregår som beskrevet ovenfor.
Utbytte: 16 mg eller 218 OD2£0
MS(FAB,TFA/NBA): 1905(M+H)<+>
Eksempel 39
Ac-Aeg(A)-Aeg(C)-Aeg(A)-Aeg(T)-Aeg(C)-Aeg(A)-Aeg(T)-Aeg(G)-Aeg(T)-Aeg(C)-Aeg(G)-Lys-NH2 (C137<H>176<N>72<0>38, FG 3439.39)
Syntese av PNA foregår på en Ecosyn D-300 DNA synthesizer (Fa. Eppendorf/Biotrink, Maintal) med 100 mg (5 pmol av en med 5-(Fmoc-amino-4-metoksybenzyl)-2,4-dimetoksyfenyl-propionsyre som ankergruppe belastet aminopropyl-CPG.
For syntesen ble følgende oppløsninger tilsatt:
1) Aktivator-Lsg: 0,3 molar HATU-oppløsnlng 1 tørr DMF
2) Base for aktivering: 0,3 molar oppløsning av NEM i tørr
DMF
3) Fmoc-Lys8Boc)-0H: 0,3 molar oppløsning i DMF
4) Avspaltning av Fmoc: 20% oppløsning av piperidin i DMF
5) Fmoc-Aeg(T)-OH: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF
6) Fmoc-Aeg(AMm<t>)-0H: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF
7) Fmoc-Aeg(C<Mmt>)-0H: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF
8) Fmoc-AegfG<M>"^)-0H: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF
Etter Fmoc-avspaltningen med piperidin-oppløsningen og vasking med DMF blir aktivatoroppløsning, Fmoc-derivat og base tilført i reaksjonsbeholderen til beskyttet bærer. Koblingstiden utgjør 20 minutter. Deretter blir CPG vasket 5 ganger med DMF og er klar for den neste piperidinbehandlingen. Etter avsluttet syntese blir PNA-CPG-bæreren tørket og opparbeidet som beskrevet ovenfor.
Utbytte: 210 OD260-
MS 3439.4 (ES<+>):(M)2+
Eksempel 40
H-Asp-Aeg(C )-Aeg(C )-Aeg( A )-Aeg(T )-Aeg(G )-Aeg(T )-Aeg( C )-
Aeg(C)-Aeg(C)-Asp-NH-(CH2)6-0H (Clig<H>1<g>7<N>57038, FG 2993.94)
Syntese av PNA foregår på en Ecosyn D-300 DNA synthesizer (Fa. Eppendorf/Biotronik, Maintal) med 133 mg (5 pmol) av en med 6-metylamino-hex-l-yl hemicuccinatbelastet aminopropyl-CPG.
For syntesen hie følgende oppløsninger anvendt:
1) Aktivator-Lsg: 0,3 molar HATTJ-oppløsning i tørr
DMF
2) Base for aktivering: 0,3 molar oppløsning av Nem i tørr DMF
3) Fmoc-Asp(0tBu)-0H: 0,3 molar oppløsning iDMF
4) Avspaltning av Fmoc: 20% oppløsning av piperidin i DMF 5) Fmoc-Aeg(T)-OH: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF 6) Fmoc-Aeg(A<Mmt>)-0H: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF 7) Fmoc-Aeg(C<Mmt>)-0H: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF 8) Fmoc-AegtG8111111 )-0H: 0,3 molar oppløsning i tørr DMF
Etter Fmoc-avspaltningen med piperidin-oppløsning og vasking med DMF blir det tilsatt aktivatoroppløsning, Fmoc-derivat og base i reaksjonsbeholderen til beskyttet bærer. Kdbllngstiden utgjør 20 min. Til slutt blir CPG vasket 5 ganger med DMF og er klar for den neste piperidinbehandlingen. Etter avslutning av syntesen blir PNA-CPG-bæreren tørket, avspaltet først med 3% trikloreddiksyre av Mmt-beskyttelsesgruppen til basen og deretter med 60% TFA i diklormetan av tert.-butylgruppen til asparaginsyren. Ved behandling med kons. ammoniakk-oppløsning ved 65<*>C blir deretter PNA avspaltet fra bæreren og opparbeidet som beskrevet ovenfor.
Utbytte: 100 OD<g>^o<*>
MS 2994.4(ES<+>): (M+H)<+>
Claims (7)
1.
Fremgangsmåte for fremstilling av PNA-oligomerer med formel I
hvor
R° betyr hydrogen, Ci-C^g-alkanoyl, C^-Cig-alkoksy
karbonyl, C3~Cg-cykloalkanoyl, C7-C^5~aroyl, C3-C13<->heteroaryl, eller en gruppe, som begunstiger intracellulært opptak av oligomeren eller de som ved hybridiseringen reagerer med målnukleinsyren;
A betyr et aminosyreresidie;
k betyr et helt tall fra 0 til 20;
Q betyr et aminosyreresidie;
1 betyr et helt tall fra 0 til 20;
B betyr en i nukleotidkjemien vanlig nukleobase eller
promedikamentformen derav;
Q° betyr hydroksy, NH2, NHR" hvor r" = C^-C-Lg-alkyl, C2-
Cig-aminoalkyl, C2-Cig-hydroksyalkyl; og n betyr et helt tall fra 1- 50,karakterisert ved at på en polymer bærer med formel II
som er utstyrt med en ankergruppe L, som latent inneholder resten 0°, enten tilkobler aminosyren Q<*> med en innen fast fase syntese vanlig fremgangsmåte og deretter til den derved som mellomprodukt oppståtte forbindelsen med formel III hvor L er definert som ovenfor, 0' hetyr en aminosyre Q, i - det sidekjeden eventuelt er beskyttet, og L betyr et helt tall fra 0 til 20, eller kobler direkte på polymeren bæreren med formel II a) en forbindelse med formel IV
hvor
PG betyr en baselabil amlnobeskyttelsesgruppe utvalgt
blant Fmoc, Bnpeoc, Dnpeoc, Msc eller Dde, og B' betyr en på den eksocykliske amlnofunksjonen beskyttede nukleobasen, under anvendelse av de i peptidkjemien vanlige koblingsreagenser, b) avspalter den temporære baselabile beskyttelsesgruppen PG ved hjelp av et egnet reagens, c) gjentar trinnene a og b (n-1) ganger, d) tilkobler med en innen fast fase syntesen vanlig frem
gangsmåte ytterligere aminosyrer A* , som er definert som A, men som eventuelt er beskyttet i sidekjeden og deretter dersom R" ikke er hydrogen, innfører resten R" med en vanlig fremgangsmåte, e) avspalter fra den som mellomforbindelse oppnådde forbindelse med formel Ia 48
hvor R", A', k, B', n, Q' og 1 er definert som ovenfor og L betyr en ankergruppe, forbindelsen med formel I ved hjelp av et avspaltningsreagens fra den polymere bæreren, i det samtidig eller også deretter de på den eksocykliske amlnofunksjonen til nukleobasen og på sldekjedene til aminosyrene avspalter eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupper.
2.
Fremgangsmåte for fremstilling av PNA-oligomerer med formel I ifølge krav 1,karakterisert ved at A betyr et aminosyreresidie fra rekken glycin, leucin,
histidin, fenylalanin, cystein, lysin, arginin, asparaginsyre, glutaminsyre, prolin, tetrahydrokinolin-3-karboksyl-syre, oktahydroindol-2-karboksylsyre og N-(2-aminoetyl)-glycin;
k betyr et helt tall fra 0 til 10;
Q betyr en aminosyrerest fra rekken glycin, leucin,
histidin, fenylalanin, cystein, lysin, arginin, asparaginsyre, glutaminsyre, prolin, tetrahydrochlnolin-3-karbok-sylsyre, oktahydroindol-2-karboksylsyre og N-(2-amino-etylJglycin;
1 betyr et helt tall fra 0 til 10;
B betyr en naturlig nukleobase fra rekken adenin, cytosin,
guanin, thymidin og uracil eller en unaturlig nukleobase fra rekken purin, 2.5-diaminopurin, 7-deazaadenin, 7-deazaguanin, N<4>N<4->ethanocytosin, N^N^-ethano-2.6-diaminopurin, 5-metylcytosln, 5-(C3-C6)-alklnyl-uracil, 5-(C3-Cf, )-alkinyl-cytosin, 5-fluor-uracil, pseudoisocytosin og 2-hydroksy-5-metyl-4-triazolopyrimidin eller promedikamentformen derav; og
n betyr et helt tall fra 4-35.
3.
Forbindelse, karakterisert ved at den har formelen IV
hvor
PG betyr Fmoc, Bnpeoc, Dnpeoc, Msc eller Dde, og B' betyr en nukleobase hvor den eksocykiisKe aminofunksjonen er beskyttet med en med den baselablle amlnobeskyttelses-gruppen kompatible beskyttelsesgruppen.
4.
Forbindelse med formel IV ifølge krav 3, karakterisert ved at
PG betyr Fmoc, Bnpeoc eller Dnpeoc-beskyttelsesgruppe og B' betyr en nukleobase, I det den eksocykliske aminofunksjonen er beskyttet med en mot svake eller middels sterke syrer labile beskyttelsesgrupper av uretantype eller trityl-type.
5.
Forbindelse med formel IV Ifølge krav 4, karakterisert ved at
PG betyr Fmoc-beskyttelsesgruppe og B' betyr en nukleobase, 1 det den eksocykliske aminofunksjonen er beskyttet med en mot svake eller middels sterke syrer labile beskyttelsesgrupper av uretantype eller trityl-type.
6.
Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser med formel IV ifølge kravene 3 til 5, karakterisert ved at man omsetter a) en forbindelse med formel V
hvor
PG betyr Fmoc, Bnpeoc, Dnpeoc, Msc eller Dde, og R<*> betyr en esterbeskyttelsesgruppe, mea en iorbindelse med
formel VI
hvor B' betyr en nukleobase hvor den eksocykliske aminofunksjonen er beskyttet med en med den baselabile aminobeskyttelsesgruppen kompatible beskyttelsesgruppen derav, ved 0-45°C i et egnet oppløsnlngsmlddel eller blandinger av dette oppløsningsmiddelet av anvendelse av et innen peptidkjemien vanlig kobllngsreagens til forbindelser med formel VII
hvor
PG, B' og R<1> er som definert ovenfor, og til slutt avspalter man esterbeskyttelsesgruppen R<*> med alkalilut eller også enzymatisk ved hjelp av esteraser eller lipaser ved 0-50°C i et egnet oppløsnlngsmlddel eller blandinger av dette oppløsningsmiddelet, eller b) omsetter en forbindelse med formel V
hvor
PG betyr en baselabil amlnobeskyttelsesgruppe med ovennevnte
betydning og
R<1> betyr hydrogen eller en temporær silylbeskyttelsesgruppe,
med en forbindelse med formel VIII
hvor B<*> er som definert i formel VI og
R<2> betyr halogen eller resten av en aktlvester, ved 0-40°C i
et egnet oppløsnlngsmlddel eller blandinger av dette oppløsningsmiddelet.
7.
Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser med formel IV ifølge krav 6, karakterisert ved at man omsetter a) en forbindelse med formel V, hvor
PG betyr en baselabil amlnobeskyttelsesgruppe og R<1> betyr en esterbeskyttelsesgruppe fra rekken metyl, etyl,
butyl, 2-(metoksyetoksy)-etyl og benzyl, med en forbindelse med formel VI hvor B' er en nukleobase, 1 det deres eksocykliske amlnofunksjon er beskyttet med en mot svake eller middels sterke syrer labile beskyttelsesgrupper av uretantype eller trityl-type, ved romtemperatur i et oppløsnlngsmlddel fra rekken DMF, acetonltril og diklormetan eller blandinger av dette oppløsningsmiddelet ved anvendelse av karbodiimider, fosfonium-reagenser, uronium-reagenser, syrehalogenider eller aktiverte estere til en forbindelse med formel VII hvor PG, B' og R<1> er som definert ovenfor, og til slutt avspalter esterbeskyttelsesgruppen Ri med alkalilut eller også enzymatisk ved hjelp av esteraser eller lipaser ved 0-50°C i et oppløsnlngsmlddel fra rekken dloksan, vann, tetrahydrofuran, metanol og vann eller blandinger av disse oppløsningsmldlene, eller b) omsetter en forbindelse med formel V, hvor PG er en baselabil amlnobeskyttelsesgruppe med ovennevnte betydning og R<*> betyr hydrogen eller trimetylsilyl, med en forbindelse med formel VIII, hvor B' er definert som i formel VI og
r<2> betyr fluor, klor, brom eller resten av en aktiv ester fra
rekken OBt, OObt, Opfp og ONSu, ved 20-30° C i et opp-løsningsmiddel fra rekken DMF, NMP, acetonitril og diklormetan eller blandinger av dette oppløsningsmiddelet.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4408533A DE4408533A1 (de) | 1994-03-14 | 1994-03-14 | PNA-Synthese unter Verwendung einer basenlabilen Amino-Schutzgruppe |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO950958D0 NO950958D0 (no) | 1995-03-13 |
NO950958L NO950958L (no) | 1995-09-15 |
NO321035B1 true NO321035B1 (no) | 2006-03-06 |
Family
ID=6512697
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO19950958A NO321035B1 (no) | 1994-03-14 | 1995-03-13 | Fremgangsmate for fremstilling av PNA-oligomerer, en forbindelse og fremgangsmater for a fremstille denne ved anvendelse av baselabil aminobeskyttelsesgruppe |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6121418A (no) |
EP (1) | EP0672701B1 (no) |
JP (1) | JP4098836B2 (no) |
AT (1) | ATE182602T1 (no) |
AU (1) | AU683714B2 (no) |
CA (1) | CA2144473C (no) |
DE (2) | DE4408533A1 (no) |
DK (1) | DK0672701T3 (no) |
ES (1) | ES2136755T3 (no) |
FI (1) | FI120262B (no) |
GR (1) | GR3031265T3 (no) |
NO (1) | NO321035B1 (no) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7825215B1 (en) * | 1993-04-26 | 2010-11-02 | Peter E. Nielsen | Substituted nucleic acid mimics |
US6133444A (en) | 1993-12-22 | 2000-10-17 | Perseptive Biosystems, Inc. | Synthons for the synthesis and deprotection of peptide nucleic acids under mild conditions |
JP2001518054A (ja) | 1995-06-07 | 2001-10-09 | パーセプティブ バイオシステムズ,インコーポレーテッド | Pna−dnaキメラと、このキメラ合成用のpnaシントン |
DE19712530A1 (de) * | 1997-03-25 | 1998-10-01 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue Monomerbausteine zur Markierung von peptidischen Nukleinsäuren |
US20030228619A1 (en) * | 2002-06-10 | 2003-12-11 | Xenoport, Inc. | Peptide nucleic acids as tags in encoded libraries |
WO2004022578A2 (en) * | 2002-09-08 | 2004-03-18 | Applera Corporation | Methods, compositions and libraries pertaining pna dimer and pna oligomer synthesis |
AU2007210014B2 (en) * | 2006-02-01 | 2012-11-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Potassium channel inhibitors |
CA2832553A1 (en) | 2011-04-08 | 2012-10-11 | Srinivas RAPIREDDY | Conformationally-preorganized, minipeg-containing gamma-peptide nucleic acids |
CN104211619B (zh) * | 2014-08-19 | 2016-08-17 | 苏州维泰生物技术有限公司 | 一种N-(2-Fmoc-氨乙基)甘氨酸甲酯盐酸盐的合成方法 |
JP2020511550A (ja) * | 2017-03-23 | 2020-04-16 | トゥルーコード ジーン リペアー, インコーポレイテッド | 直交保護エステル部分を有するペプチド核酸(pna)モノマー |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HUT41715A (en) * | 1984-12-28 | 1987-05-28 | Monsanto Co | Process for preparing n-substituted alpha-aminoacids and derivatives thereof |
DE3635670A1 (de) | 1986-10-21 | 1988-04-28 | Hoechst Ag | Synthese von peptid-aminoalkylamiden und peptidhydraziden mittels festphasenmethode |
DE3713433A1 (de) | 1987-04-22 | 1988-11-03 | Werner Grossmann | Einrichtung zum entfernen von schmutzteilchen vom plattenzylinder einer offsetdruckmaschine |
DE3887670D1 (de) | 1987-12-22 | 1994-03-17 | Hoechst Ag | Säurelabile Ankergruppen zur Synthese von Peptidamiden mittels Festphasenmethode. |
DE4016596A1 (de) | 1990-05-23 | 1991-11-28 | Hoechst Ag | Ein neues kupplungsreagenz fuer die peptidsynthese |
US5539082A (en) * | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
DK51092D0 (da) * | 1991-05-24 | 1992-04-15 | Ole Buchardt | Oligonucleotid-analoge betegnet pna, monomere synthoner og fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelser deraf |
MX9207334A (es) * | 1991-12-18 | 1993-08-01 | Glaxo Inc | Acidos nucleicos peptidicos y formulacion farma- ceutica que los contiene |
US5527675A (en) * | 1993-08-20 | 1996-06-18 | Millipore Corporation | Method for degradation and sequencing of polymers which sequentially eliminate terminal residues |
US5539083A (en) * | 1994-02-23 | 1996-07-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Peptide nucleic acid combinatorial libraries and improved methods of synthesis |
-
1994
- 1994-03-14 DE DE4408533A patent/DE4408533A1/de not_active Withdrawn
-
1995
- 1995-03-08 AT AT95103319T patent/ATE182602T1/de active
- 1995-03-08 DK DK95103319T patent/DK0672701T3/da active
- 1995-03-08 DE DE59506432T patent/DE59506432D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-08 EP EP95103319A patent/EP0672701B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-08 ES ES95103319T patent/ES2136755T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-10 AU AU14800/95A patent/AU683714B2/en not_active Ceased
- 1995-03-10 FI FI951129A patent/FI120262B/fi not_active IP Right Cessation
- 1995-03-13 CA CA002144473A patent/CA2144473C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-13 NO NO19950958A patent/NO321035B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-03-14 JP JP05464195A patent/JP4098836B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-10-29 US US08/967,197 patent/US6121418A/en not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-09-22 GR GR990402363T patent/GR3031265T3/el unknown
-
2000
- 2000-02-01 US US09/495,457 patent/US6316595B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE182602T1 (de) | 1999-08-15 |
US6121418A (en) | 2000-09-19 |
AU1480095A (en) | 1995-09-21 |
ES2136755T3 (es) | 1999-12-01 |
NO950958D0 (no) | 1995-03-13 |
JPH07291909A (ja) | 1995-11-07 |
NO950958L (no) | 1995-09-15 |
CA2144473C (en) | 2008-07-15 |
FI951129A (fi) | 1995-09-15 |
AU683714B2 (en) | 1997-11-20 |
DE4408533A1 (de) | 1995-09-28 |
FI120262B (fi) | 2009-08-31 |
CA2144473A1 (en) | 1995-09-15 |
US6316595B1 (en) | 2001-11-13 |
FI951129A0 (fi) | 1995-03-10 |
DE59506432D1 (de) | 1999-09-02 |
EP0672701B1 (de) | 1999-07-28 |
DK0672701T3 (da) | 2000-01-03 |
JP4098836B2 (ja) | 2008-06-11 |
EP0672701A1 (de) | 1995-09-20 |
GR3031265T3 (en) | 1999-12-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4098837B2 (ja) | 弱酸に不安定であるアミノ保護基を使用するpnaの合成 | |
US7022851B2 (en) | PNA monomer and precursor | |
US6403763B1 (en) | Chiral peptide nucleic acids | |
WO1996040709A1 (en) | Pna-dna chimeras and pna synthons for their preparation | |
JP4089979B2 (ja) | 合成用の改良されたシントンと、緩やかな条件下でのペプチド核酸の保護解除方法 | |
NO321035B1 (no) | Fremgangsmate for fremstilling av PNA-oligomerer, en forbindelse og fremgangsmater for a fremstille denne ved anvendelse av baselabil aminobeskyttelsesgruppe | |
KR20110059743A (ko) | 펩티드 핵산 단량체 및 올리고머 | |
CA2184681C (en) | Process for preparing substituted n-ethylglycine derivatives | |
Breipohl et al. | Synthesis of polyamide nucleic acids (PNAs) using a novel Fmoc/Mmt protecting-group combination | |
Bialy et al. | Dde-protected PNA monomers, orthogonal to Fmoc, for the synthesis of PNA–peptide conjugates | |
Kofoed et al. | PNA synthesis using a novel Boc/acyl protecting group strategy | |
US6075143A (en) | Substituted N-ethylglycine derivatives for preparing PNA and PNA/DNA hybrids | |
Kuwahara et al. | Synthesis of δ-amino acids with an ether linkage in the main chain and nucleobases on the side chain as monomer units for oxy-peptide nucleic acids | |
EP0736027B1 (en) | Guanine synthons for peptide nucleic acid synthesis and method for production | |
US6465650B1 (en) | Substituted N-ethylglycine derivatives for preparing PNA and PNA/DNA hybrids | |
EP1085020A1 (en) | Synthesis of modified diaminopurines and their incorporation into oligomers |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |