NO311965B1 - Anvendelse av antistoffer rettet mot variant -CD44- (vCD44)- overflateprotein for fremstilling av et farmasöytisk preparat - Google Patents
Anvendelse av antistoffer rettet mot variant -CD44- (vCD44)- overflateprotein for fremstilling av et farmasöytisk preparat Download PDFInfo
- Publication number
- NO311965B1 NO311965B1 NO19924103A NO924103A NO311965B1 NO 311965 B1 NO311965 B1 NO 311965B1 NO 19924103 A NO19924103 A NO 19924103A NO 924103 A NO924103 A NO 924103A NO 311965 B1 NO311965 B1 NO 311965B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- use according
- antibody
- vcd44
- cells
- diseases
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims description 8
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 title claims description 6
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 title claims description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 24
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 19
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 17
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 12
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 9
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 claims description 4
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 2
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 abstract description 7
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 69
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 47
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 description 24
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 21
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 20
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 14
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 13
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 10
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 8
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 8
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 7
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 7
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 5
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000000683 nonmetastatic effect Effects 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 4
- 201000009546 lung large cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920006926 PFC Polymers 0.000 description 3
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 3
- 102100038567 Properdin Human genes 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 102220497176 Small vasohibin-binding protein_T47D_mutation Human genes 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001894 2,4,6-trinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C(C(*)=C(C([H])=C1[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000699662 Cricetomys gambianus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102000010836 Lymphocyte Homing Receptors Human genes 0.000 description 1
- IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N Lys-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMAKMJCBYCSMHM-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 108010087066 N2-tryptophyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 208000018359 Systemic autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000409 cytocidal Toxicity 0.000 description 1
- 230000000445 cytocidal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 210000005095 gastrointestinal system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 102000048851 human CD44 Human genes 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000002625 monoclonal antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100001221 nontumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 210000001986 peyer's patch Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000004289 sodium hydrogen sulphite Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2884—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD44
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av antistoffer, spesielt monoklonale antistoffer rettet mot varianter av glykoprotein CD44 (vCD44) for overflateprotein for fremstilling av et farmasøytisk preparat.
CD44 er et glykoprotein som befinner seg på celleoverflaten og som opprinnelig er blitt beskrevet som "lymfocytt-målsøkingsreseptor", og den antas å inngå ved tilhefting av lymfocytter til visse mukøse endotelceller i vener (peyerske flekker eller peyerske plakk; eller folliculi lymphatici aggregati), eller postkapillære vener i lymfeknutene (S.T. Jalkanen et al., Eur. J. Immunol. 16, 1195-1202,1986; R.L. Camp et al., J. Exp. Med. 173, 763-766, 1991). Dessuten mener man at CD44-glykoproteinet deltar ved utvikling og aktivering av lymfocytter, eller at det har en nødvendig (tilleggs-)effekt ved den økte bevegelsesevne hos alle lymfoblaster (f.eks. R.L. Camp et al., 1991., som ovenfor; S. Huet et al., J. Immunol. 143, 798-801,1989) og at det skal spille en rolle som forankringssted for andre tilheftings-molekyler (Y. Shimizu et al., J. Immunol. 143, 2457-2463, 1989). Hittil er imidlertid ikke alle disse funksjoner hos CD44 entydig avklart.
Nylig er det, når det gjelder rotte-tumorceller som metastaserer over det lymfatiske system (BSp73-celler fra et spontant rottebukspyttkjerteladenokarsinom), blitt påvist at disse celler uttrykker varianter av CD44 (vCD44) og er ansvarlige for utbredelsen ("trafikkeringen") av tumorceller. Disse forhold kan likeledes påvises for andre tumorcellelinjer.
Det kan vises at dette vCD44-glykoprotein gir en tidligere ikke-metastaserende tumor metastase-evner, mens standardtype-CD44 (sCD44) ikke er i stand til dette. Følgelig kan man i dag gå ut fra at vCD44 er et metastasespesifikt protein overfor sCD44, som gir tumorer evne til å metastastere over lymfebanene (U. Gunthert et al., Cell 65, 13-24,1991).
U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor, har lykkes i å komme frem til den ytterligere kunnskap om vCD44-glykoproteinet hos rotten som hittil er den endelige karakterisering av DNA- og aminosyresekvensen, ved hjelp av BSp73-rottecelle-systemet, som består av to morfologisk eller fenotypisk forskjellige syngene celle-varianter: en ikke-metastaserende variant AS (BSp73AS) og en metastaserende variant ASML (BSp73ASML) (S. Matzku et al, Cancer Research 49, 1294-1299, 1989).
For dette formål er det blitt fremstilt monoklonale antistoffer (mAb'er) som oppfatter de antigene determinanter på den metastaserende variant BSp73ASML.
Det ble uttatt cellelinjer både fra primærtumoren (subkutane ikke-metastaserende knuter som besto av BSp73 AS-celler) og fra en metastase av denne (BSp73ASML-celler, som metastaserer i lymfeknuter og lunge). Det ble fremstilt mAb'er som er rettet mot membranproteinene hos BSp73ASML-celler (S. Matzku et al., 1989, som ovenfor). Ett av disse mAb'er, som bare oppfatter epitoper på BSp73ASML-celler, men ikke epitoper på BSp73AS-celler eller andre ikke-tumorogene celler, ble benyttet til å gjennomsøke (screening) et E. coli cDNA-ekspresjonsbibliotek, fremstilt av poly(A)<+>RNA fra BSp73ASML-celler og et egnet vektorsystem. På denne måte kunne det identifiseres en klon (pMeta-1) som inneholder det fullstendige cDNA med en lengde på 3207 bp og som koder for et ytterligere doméne på 162 aminosyrer. Dette doméne finnes verken i sCD44-celler eller i andre ikke-metastaserende tumorceller, og det inneholder den mAb-spesifikke epitopkodende region. Ved hjelp av mRNA-preparater fra celler i forskjellige vev og mRNA:DNA-hybridiseringer utført med disse med forskjellige DNA-prober fra cDNA-klonene kunne det fastslås at vCD44 representerer en skjøtingsvariant av sCD44 og at ekspresjon av vCD44-RNA'ene skjer ved fremkomsten av metastaser. Hermed er det sikkert at det ytterligere ekstracellulære doméne som er kodet ved det 486 bp lange innskudd (aminosyrer 224-385 i pMeta-1), er den metastase-relevante del av overflateglykoproteinet vCD44.
Den metastatiske tumorvekst (adenokarsinom hos rotte) kunne undertrykkes etter immunisering med monoklonale antistoffer som oppfatter den forannevnte epitop, eller som reagerer spesifikt med dette ekstracellulære område på vCD44 (S. Reber et al., Int. J. Cancer 46, 919-927, 1990).
Identifisering av disse ekstracellulære variantområder hos rotte (pMeta-1 henholdsvis rMeta-1) gjør det også mulig å oppklare de menneskelige nukleotid- og aminosyresekvenser som er ekvivalente til disse: Med en sonde avledet av DNA fra vCD44-doménet hos rotte kunne man ved hybridisering, eventuelt under strenge betingelser, med genom-DNA fra forskjellige artsspesifikke cellelinjer (for eksempel menneske, rotte, mus), finne homologe områder i disse DNA'er. En slik probe kan deretter anvendes for hybridisering overfor RNA'er fra forskjellige humane cellelinjer, spesielt tumorcellelinjer, for eksempel storcellede lungekarsinomer, melanomer, kolonkarsinomer, brysttumorer og keratinocytter. På denne måte kan det uten videre oppfinnes en egnet human-cellelinje, for eksempel av et storcellet lungekarsinom, som inneholder sekvenser homologe til cDNA-proben fra rotte. Ved PCR (polymerasekjedereaksjon), en kjent in vitro-fremgangsmåte for selektiv anriking av DNA-områder med definert lengde og definert sekvens, kan det, ut fra en blanding av DNA-molekyler, ved anvendelse av en DNA-polymerase og en egnet primer, fås cDNA-molekyler som koder for sCD44 og vCD44, av RNA-preparater fra forskjellige humancellelinjer, for eksempel celler av storcellede lungekarsonimer, melanomer, kolonkarsinomer eller immortaliserte keratinocytter.
En slik cDNA som er oppnådd ved PCR, kan innføres i en egnet klonings-vektor ved kjente metoder, og deretter, etter passende dyrkning av vertsceller som er transformert med denne, fortrinnsvis bakterier, for eksempel E. coli, sekvenseres. På denne måte får man fra de forskjelligste humane celler, utvalgt blant alle mulige tumorceller eller cellelinjer, spesielt fra slike som oppviser metastaserings-egenskaper, DNA-sekvenser som enten koder for et normalt humant sCD44-glykoprotein med kjent størrelsesorden i området 350 aminosyrer (I. Stamenkovic et al., Cell 56, 1057-1062, 1989), som inneholder et ekstracellulært doméne i området 85 kDa (S. Jalkanen et al., J. Cell Biol. 105, 983-990, 1987), eller som koder for et humant variant-vCD44-glykoprotein, som kan omfatte et ytterligere ekstracellulært doméne med forskjellig lengde, spesielt mellom 850 bp og 1,5 kb, eksempelvis 1014 bp (eller 338 aminosyrer), og som er innført i DNA-sekvensen som koder for det normale sCD44-glykoprotein, for eksempel mellom nukleotidstillingene 782 og 783 (fig. 4). En slik DNA-sekvens kan finnes i flere, for eksempel fem, doméner, som representerer forskjellige eksoner og som både kan finnes i forskjellige dyrecelle-linjer (for eksempel rotte eller mus) og i humancellelinjer.
På fig. 4A er det som eksempel vist en cDNA som er homolog med den lengste oppnådde variant-del av humane tumorcellelinjer, og som er blitt isolert fra rottetumorcellelinjen BSpASML ved PCR. En direkte sammenlikning av aminosyresekvensen avledet fra denne, med aminosyresekvensen fra en humanklon av en mennesketumorcellelinje, viser at doméne I viser 83%, doméne II viser 83%, doméne III viser 71%, doméne IV viser 82% og doméne V viser 66% homologi med rotte-DNA-sekvensen. Totalt viser dette at ca. 76% av human-sekvensene i variant-områdene er konservert i forhold til rottesekvensen. De tilsvarende rottesekvenser, som gir tumoren metastatisk potensiale (U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor), omfatter aminosyrene 258-420 og kodes ved doménene II og III.
Det var hermed klart for fagmannen at poly- eller monoklonale antistoffer, som spesifikt oppfatter disse epitoper, d.v.s. dette ytterligere ekstracellulære område på forskjellige skjøtingsvarianter av vCD44, og reagerer med dem, og som kan merkes med radioisotoper og/eller konjugeres med cytocid eller cytotoksisk virkende stoffer, kan anvendes til diagnostisk og terapeutisk bruk ved en metastaserende tumortilstand hos mennesker.
De ovenfor kort omtalte forhold er gjenstanden for den internasjonale patent-søknad WO 91/17248.
Det er nå overraskende blitt funnet at antistoffer, spesielt monoklonale antistoffer, som reagerer med de forskjellige metastasespesifikke varianter av CD44 (vCD44), utvikler immunundertrykkende virkning; denne nye egenskap kunne på ingen måte ventes på grunnlag av de ovenfor omtalte forhold.
Formålet med oppfinnelsen er derfor anvendelse av antistoffer rettet mot variant-CD44-(vCD44)-overflateprotein hos et pattedyr eller deler derav, for fremstilling av et farmasøytisk preparat for frembringelse av en immunundertrykkelse i en pattedyrorganisme i form av blokkert aktivering av B-celler og T-celler, og drastisk reduksjon av cytotoksisk T-cellerespons.
Det skal her fremheves at hvert vilkårlige variant-CD44 (cCD44)-glykoprotein av animalsk eller menneskelig opprinnelse og de nukleinsyrer som koder for disse (DNA'er og RNA'er), som foreligger som innskudd innenfor genområdet som koder for sCD44, følgelig nå er tilgjengelige for en fagmann, og at det ligger innenfor rammen av en gjennomsnittsfagmanns kunnskap å benytte disse proteiner og de nukleinsyrer som koder for disse proteiner, til fremstilling av ønskede antistoffer, spesielt monoklonale antistoffer, fragmenter og dervater av disse, for anvendelse ifølge oppfinnelsen og til bruk.
Med betegnelsen vCD44 eller, synonymt til denne, ekstracellulære variant-doméner eller områder av CD44 eller sCD44, menes det, når det er tale om nukleinsyrer, hver RNA, DNA som koder for én eller flere vCD44-proteiner eller -doméner, eller transkripsjoner av disse, innbefattende slike som er blitt forandret ved mutasjoner, for eksempel ved utelukkelser, innføringer, substitusjoner, inversjoner, transisjoner, trans versjoner, og slike som hybridiserer med DNA-sekvensen som vist på fig. 4A ved de kjente vanlige betingelser, og hvis komplementære kodings-strenger koder for et protein som gir tumorer metastase-egenskaper, uavhengig av om fremstillingen og isoleringen av disse nuklerinsyrer skjer på vanlig måte ved cellekulturer, eller ved DNA-rekombinasjon, ved syntetiske eller halvsyntetiske fremgangsmåter.
Med betegnelsen vCD44, eller synonymt til denne, ekstracellulære variant-doméner eller områder av CD44 eller sCD44, menes det, når det er tale om et tilsvarende overflateprotein, alle glykoproteiner som stammer fra dyr eller mennesker, og som, uavhengig av sin fremstilling eller isolering ved vanlige cellekulturer eller ved DNA-rekombinasjon eller ved syntetiske eller halvsyntetiske fremgangsmåter, foreligger som tilleggsdel i sCD44 og gir en tumor metastase-egenskaper.
Med betegnelsen antistoffer menes mono- eller polyvalente antistoffer og poly- og monoklonale antistoffer, men også slike som slike som utgjør fragmenter av disse og derivater av disse, innbefattende F(ab')2-, Fab<1-> og Fab-fragmenter, men også kimære antistoffer eller hybrid-antistoffer med minst to antigen- eller epitop-bindingssteder, eller bispesifikke rekombinante antistoffer (for eksempel kvadrom, triom), interart-hybridantistoffer, anti-idiotypiske antistoffer og de av disse som er blitt kjemisk modifisert og som er å oppfatte som derivater av disse antistoffer, og som kan fremstilles enten ved de kjente vanlige fremgangsmåter for antistoff-utvinning eller ved DNA-rekombinasjon, via hybridomteknikker eller antistoff-gensløyd eller syntetisk eller halvsyntetisk på i og for seg kjent måte, og som viser nøytraliserings- eller bindingsegenskaper med hensyn til det ovenfor beskrevne og definerte vCD44. Som eksempel skal det fra den mangfoldige litteratur bare vises til arbeider av G. Kohler & C. Milstein, Nature 256, 495-497, 1975; S. Biocca et al., EMBO J. 9, 101-108, 1990; R.E. Bird et al., Science 242, 423-426, 1988; M.A. Boss et al., Nucl. Acids Res. 12, 3791-3806, 1984; G.L. Boulianne et al, Nature 312, 643-646, 1984; J. Bukovsky & R.H. Kennett, Hybridoma 6, 219-228, 1987, M. Diano et al., Anal. Biochem. 166,223-229, 1987; J.S. Huston et al, Proe. Nati. Acad. Sei. USA 85, 5879-5883, 1988; P.T. Jones et al., Nature 321, 522-525, 1986; J.J. Langone & H.V. Vunakis (Hrsg.), Methods Enzymol. 121, Academic Press, London 1987; S. Morrison et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 81, 6851-6855, 1984; V.T. Oi & S.L. Morrison, BioTechniques 4, 214-221, 1986; L. Riechmann et al., Nature 332, 323-327, 1988; A. Tramontano et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 83, 6736-6740, 1986; CR. Wood et al., Nature 314, 446-449, 1985.
Når det gjelder fremstilling av polyklonale antistoffer mot epitoper av vCD44, er det tilgjengelig et antall fremgangsmåter. For eksempel kan det for dette formål, på i og for seg kjent måte, immuniseres forskjellige dyr ved injeksjon med vCD44, som kan være av naturlig opprinnelse eller kan være fremstilt ved DNA-rekombinasjon eller syntetisk, eller fragmenter derav, og av de deretter utvunnede sera kan de ønskede polyklonale antistoffer utvinnes og renses ifølge kjente metoder. Som alternativ kan det også anvendes intakte celler. Forskjellige hjelpestoffer for forsterkning av immunforsvaret overfor vCD44-dosen kan, avhengig av det dyr som utvelges for immunisering, likeledes anvendes - for eksempel Freunds adjuvans, mineralgeler så som f.eks. aluminiumhydroksyd, overflateaktive substanser så som f.eks. polyanioner, peptider, oljeemulsjoner, hemocyanin, dinitrofenol eller lysolecitin.
De foretrukkede monoklonale antistoffer mot en epitop av vCD44 for anvendelse ifølge oppfinnelsen kan fas ved hvilken som helst ønsket teknikk som står til rådighet for fremstilling av antistoffer ved dyrkning av cellelinjer. Til slike kjente teknikker hører f.eks. fremgangsmåtene beskrevet av G. Kohler & C. Milstein, 1975, som ovenfor, eller Taggart & Samloff, Science 219, 1228-1230, 1983, med hybridomceller eller fremgangsmåter med humane B-cellehybridomer (Kozbor et al., Immunology Today 4, 72-79, 1983). Kimære antistoffer mot vCD44 kan for eksempel være sammensatt av et museantigen-bindingsdoméne og humane konstante regioner (Morrison et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 81, 6851-6855, 1984; Takeda et al., Nature 314,452-454, 1985).
Antistoffene kan renses ved kjente metoder, eksempelvis ved immun-absorpsjons- eller immunaffinitetskromatografi, ved HPLC (høy-ytelses væske-kromatografi) eller ved kombinasjoner av disse. Antistoff-fragmenter som inneholder idiotypen av molekylet, kan likeledes fremstilles ved kjente fremgangsmåter. For eksempel kan F(ab')2-fragmenter fås ved pepsin-nedbryting av det fullstendige poly- eller monoklonale antistoff. Fab'-fragmenter kan fås ved at for eksempel disulfidbroene i det aktuelle F(ab')2-fragment reduseres, og Fab-fragmenter kan for eksempel fas ved behandling av antistoffmolekylene med papain og et reduksjons-middel.
For identifisering og utvelgelse av antistoffer, fragmenter eller derivater av disse, som reagerer med en epitop av vCD44, kan hver kjent fremgangsmåte anvendes, for eksempel ved at disse kan påvises etter passende merking, når de er blitt bundet til isolert eller renset vCD44, eller ved immunutfelning av vCD44 som for eksempel er renset ved hjelp av polyakrylamidgeler, eller ved at antistoffer mot vCD44 konkurrerer med andre vCD44-antistoffer om bindingen til vCD44.
Hybridomcellelinjer kan også anvendes til fremstilling av antistoffene eller et preparat.
Med hensyn til ytterligere detaljer angående den generelle anvendelse av monoklonale antistoffer for immunundertrykkelse og ved autoimmunsykdommer, av hybridantistoffer for terapeutiske formål og antistoffer fremstilt ved DNA-rekombinasjon, vises det til Progress in Allergy vol. 45, "Monoclonal Antibody Therapy", 1988, og til arbeidet av W.E. Seaman et al., Ann. Rev. Med. 39, 231-241, 1988.
Det ytterligere doméne i vCD44 så vel hos dyr (f.eks. rotte) som hos mennesker, er fullstendig avslørt ved hjelp av stoffparameteren (DNA- og aminosyresekvens, lokalisasjon innenfor det fullstendige gen som koder for CD44) og fremstillingen av den, slik at det ved denne avsløring er blitt gjort mulig for en fagmann å fremstille hvilke som helst antistoffer eller monoklonale antistoffer i henhold til de ovenfor angitte definisjoner for hver epitop som er lokalisert på dette ytterligere ekstracellulære doméne av vCD44 og benytte den ifølge oppfinnelsen, slik at anvendelsen av den ikke er begrenset til bestemte spesifkkke antistoffer eller de hybridcellelinjer som danner dem. For eksempel er epitopen som oppfatter 1.1ASML, nøyaktig definert ved aminosyresekvensen E-E-A-A-T-Q-K-E-K-W eller Glu Glu Ala Ala Thr Gin Lys Glu Lys Trp (fig. 4A).
Anvendelsen ifølge oppfinnelsen av slike antistoffer, fragmenter og derivater derav er ikke beskrevet innenfor teknikkens stand.
Ifølge oppfinnelsen finner preparater med slike antistoffer anvendelse ved immunregulatoriske forstyrrelser og sykdommer hos dyr og mennesker, som omfatter forhindring eller forebygging, kontrollering, diagnostisering eller behandling av disse.
På grunn av sin immunundertrykkende virkning er de nevnte antistoffer, eller de preparater som inneholder dem, egnet til forhindring og behandling av sykdommer og tilstander hvor det trenges en midlertidig eller vedvarende nedsettelse eller undertrykking av et immunforsvar. Særlig omfatter anvendelsen av dem undertrykkelse av aktivering av formeringen av lymfocytter eller cytotoksiske T-celler og/eller immunocytter, eksempelvis til forhindring eller behandling av autoimmunsykdommer, så som f.eks. sykdommer innenfor det reumatiske område, multippel sklerose, psoriasis, atopisk dermatitt, eller til forhindring av avstøting av transplanterte vev eller organer så som f.eks. nyrer, hjerte, lunger, benmarg, milt, hud eller øye-hornhinne, ved uønskede reaksjoner under eller etter transfusjoner, av allergiske sykdommer, spesielt slike som angår gastrointestinalsystemet og som kan påvises der som inflammasjon, eller av inflammatoriske, proliferative og hyperproliferative sykdommer og utslag på huden, immunologisk betingede sykdommer så som f.eks. eksematøse dermatitter, urticaria, vaskulitter, sklerodermi.
Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig anvendelse ifølge krav 6 til behandling av degenerative, inflammatoriske, proliferative og/eller hyperproliferative immunologiske sykdommer.
Anvendelsen ifølge oppfinnelsen er basert på den uventede observasjon at et antistoff rettet mot variant-delen av CD44 (vCD44) sterkt reduserte det T-celle-avhengige og T-celle-uavhengige immunforsvar in vivo og in vitro. Ved at det ved ett eller flere av de ovenfor beskrevne antistoffer, eller fragmenter eller derivater av disse, oppnås at virkningen av vCD44, om hvilken man kan anta at den ikke bare er nødvendig for det humorale immunforsvar, men også for aktiviteten av formeringen av cytotoksiske T-celler, nøytraliseres, blir det ved anvendelsen ifølge oppfinnelsen av disse antistoffer mulig en tilsiktet og - avhengig av mengden, varigheten og beskaffenheten av antistoffpreparatet som skal tilføres - når det gjelder intensiteten og varigheten, styrbar undertrykkelse av et immunforsvar. Følgelig er det spesielt fordelaktig med en klinisk anvendelse av disse antistoffer for de ovenfor nærmere beskrevne forstyrrelser, sykdommer og tilstander, d.v.s. når en immunundertrykkelse er ønsket i en animalsk eller menneskelig organisme.
Avhengig av arten og årsaken til sykdommen eller forstyrrelsen som skal behandles, eller den tilstand som skal påvirkes, i en dyre- eller menneskekropp, kan det være ønskelig å tilføre antistoffpreparatet systemisk, lokalt eller topisk på, eller i, det aktuelle vev eller organ. En systemisk virkemåte er for eksempel da ønsket når forskjellige organer eller organsystemer trenger behandling, så som f. eks. ved systemiske autoimmunsykdommer eller allergier eller ved transplantasjoner av fremmede større organer eller vev. På den annen side ville man måtte ta i betraktning en lokal virkning når bare en stedlig fremkomst av en immunologisk tilstand skal påvirkes, så som for eksempel ved småflate-transplantasjoner av huden og hornhinnen eller ved lokal dermatitt.
De aktuelle antistoffer kan administreres ved hvilken som helst av de enterale eller parenterale tilførselsmåter som er kjent for en fagmann. For systemisk tilførsel kan det for eksempel anvendes intravenøs, intravaskulær, intramuskulær, intra-arteriell, intraperitoneal, oral eller intratekal administreringsmåte. En heller lokal tilførsel kan for eksempel skje subkutant, intrakutant, intrakardialt, intralobulært, intramedullært, intrapulmonalt, eller i eller på vevet som skal behandles (binde-, muskel-, nerve-, epitel- eller benvev). Avhengig av varigheten og styrken av den immunundertrykkende virkning som skal oppnås, kan antistoffpreparatene administreres én gang eller flere ganger, også intermitterende, pr. dag over flere dager, uker eller måneder, og i forskjellige doser. For fremstilling av et antistoff-preparat som er egnet for nevnte anvendelser, kan de injiserbare, fysiologisk tolererbare løsninger som er kjent for fagfolk, anvendes i steril form. For fremstilling av en bruksferdig løsning for parenteral injeksjon eller infusjon er det tilgjengelig kjente vandige isotoniske løsninger, for eksempel saltløsninger eller en tilsvarende plasmaproteinløsning uten gammaglobulin. Preparatet kan imidlertid også foreligge i form av et lyofilisat eller et tørket preparat, som kan rekondisjo-neres med én av de kjente injiserbare løsninger umiddelbart før bruk under sterile betingelser, f.eks. som et sett av deler. Den endelige fremstilling av et antistoff-preparat for anvendelse ifølge oppfinnelsen for injeksjon, infusjon eller perfusjon skjer ved blanding av antistoffer renset ved kjente metoder ifølge ovenfor angitte definisjoner, med én av de nevnte fysiologisk tolererbare løsninger, som eventuelt kan være supplert med kjente bærer- eller hjelpestoffer (f.eks. serumalbuminer, dekstrose, natriumbisulfitt, EDTA).
Mengden av antistoffene for administrering avhenger av typen og graden av sykdommen eller forstyrrelsen som skal behandles, eller den tilstand som skal påvirkes, og den aktuelle pasient (dyr eller menneske). Man kan imidlertid gå ut fra en anvendelsesdosering på 1-1000 mg, fortrinnsvis 5-200 mg, av det aktuelle antistoff pr. dose-enhet, slik som det også er vanlig for andre antistoffer eller monoklonale antistoffer, hvorav det kan gis mellom 0,01 og 20 mg pr. dag og fra 0,1 til 100 mg pr. kg kroppsvekt pr. dag, i lengre tid (dager, uker, måneder), for oppnåelse av den ønskede effekt - alt etter hvor intensiv og over hvilket tidsrom en immunundertrykkelse ønskes oppnådd.
Forklaring av figurene:
Fig. 1: Krysshybirdisering av vCD44-sekvenser mellom rotte, mus og menneske. Bane 1 = rotte (leverceller),
bane 2 = mus (L-celler), bane 3 = menneske
(mammakarsinomcellelinje T47D)
Fig. 2: Ekspresjon av vCD44- og sCD44-sekvenser i
menneske-tumorcellelinjer. Bane 1 = LCLC103, bane 2 = LCLC97, bane 3 = CH3LC, bane 4 = EPLC32M1, bane 5 - SCLC24,
bane 6 = SCLC18. Bane 7 tilsvarer rottecellelinjen BSp73ASML og bane 8 rottecellelinjen BSp73AS.
GAPDH = glycerolaldehydfosfatdehydrogenase for relativ mengdebestemmelse av de påsatte RNA-mengder.
Fig. 3: Agarosegelelektroforetisk oppløsning av cDNA'er oppnådd ved PCR-forøkning, og som er komplementær til CD44-RNA'ene
uttrykt i forskjellige humane cellelinjer.
Bane 1 SW620, bane 2 - MeWo, bane 3 - HT29,
bane 4 = LCLC97, bane 5 = HPKII, bane 6 = lengdemarkør, Boehringer Mannheim, nr. 7.
Fig 4A: DNA- og aminosyresekvens av vCD44-regionen av cellelinje LCLC97
hos mennesker. Til sammenlikning er angitt DNA- og aminosyresekvensen av rotte-tumor-cellelinjen BSpASML, som ble avledet av den oppnådde DNA. Pilene angir grensene for de fem eksoner eller doméner D I - D V. H = menneske, R = rotte. Epitopen som det monoklonale antistoff 1.1ASML oppfatter, er kjennetegnet ved
Fig. 4B: Skjematisk gjengivelse av de fem eksoner (doméner) D I - D V
innenfor den ekstracellulære region av LCLC97. Tallangivelser = antall aminosyrer
Fig. 5: Innflytelse av anti-vCD44 (1.1 ASML) på den allogene aktivering av T-lymfocytter (målt som H-tymidin-innbygging etter stimulering
= CPM). I = milt-celler, II = lymfeknuteceller, begge fra DA-rotter. Immunisering av DA-rottene med BDX (lymfocytter, bestrålt med 3000R).
Immunisering med BCX, stimulert med BCX in vitro
= Immunisering med BCX i nærvær av 1.1 ASML,
stimulert med BCX in vitro
I Immunisering og stimulering med BDX i nærvær av 1.1 ASML
Fig. 6: Innflytelse av anti-vCD44 (1.1 ASML) på aktiveringen av cytotoksiske T-celler, primære CTL. Immunisering av DA-rotter med BDX (lymfocytter bestrålt med 3000 R).
Immunisering med BDX
Immunisering med BDX i nærvær av 1.1 ASML
E : T = Forhold mellom effektorceller (E, milt-celler) og målceller (T, -^Cr-merkede BDX-lymfoblaster).
Følgende eksempler vil belyse oppfinnelsen nærmere.
Eksempel 1: Karakterisering av vCD44 hos rotte
Fremgangsmåten og midlene for denne, som fører til karakterisering av vCD44-glykoproteinet hos rotte, og DNA-sekvensen som koder for disse, er
beskrevet fullstendig i publikasjonen av U. Gunthert et al., Cell 65,13-24,1991, slik at det kan henvises spesielt til denne. En ytterligere detaljert gjengivelse av de data som er beskrevet i denne publikasjon, er derfor overflødig. Denne publikasjon skal derfor i sin helhet forstås som en del av eksempel 1.
Eksempel 1: Karakterisering av vCD44 hos mennesker
2.1 Identifisering av homologe vCD44-sekvenser mellom rotte, mus og menneske
Det ble isolert genom-DNA både fra rotteleverceller, L-celler hos mus og fra mammakarsinomcellelinjen T47D hos mennesker (ATCC nr. HTB133) ved kjent metode (T. Maniatis, E.F. Fritsch, J. Sambrook i: Molecular Cloning, a laboratory manual, 1982, Cold Spring Harbor). Fra hver av disse ble det fullstendig nedbrutt 10 jig ifølge standardfremgangsmåter med EcoRI, og dette ble preparert og filter-fiksert ifølge kjent metode for den etterfølgende krysshybirdisering med en hybridi-seringsprobe som besto av cDNA-delen av posisjonene 941-1108 av pMeta-1 av variant-CD44-området fra rotte (U. Gunthert et al., Cell 65., 13-24, 1991), for DNA:DNA-Southern-hybridisering. Hybridiseringen skjedde over natten ved 65°C i 6xSSC. Filtrene ble deretter vasket tre ganger i 30 minutter hver gang ved 65°C i vaskebuffer (2xSCC, 0,1% SDS) og til slutt én gang i 0,5xSCC, 0,1% SDS. Det ble funnet DNA-fragmenter hos menneske, rotte og mus som klart er homologe med hverandre (fig. 1).
2.2 Ekspresjon av vCD44-sekvenser i tumorceller hos mennesker
Fra de kjente lungekarsinomcellelinjer SCLC18, SCLC24, EPLC32M1, CH3LC, LCLC97 og LCLC103, for hvilke både dyrkningsbetingelsene og egen-skapene er beskrevet (G. Bepler et al, J. Cancer Res. and Clin. Oncol. J_L3_, 31-40, 1987; G. Bepler et al., Differentiation 3J, 158-171, 1988; H.-H. Heidtmann et al.,
Cancer Res. 42, 6960-6965, 1989) ble det i hvert tilfelle preparert 3 ug poly(A)<+ >RNA for RNA-hybridiseringen ved Northern Blotting. Før "blottingen" av RNA farget med etidiumbromid i gelen, forsikret man seg om at det var like mengder av hver av RNA påsatt på gelen, eller tilstede pr. bane. Prepareringen av poly(A)<+->RNA, denatureringen av den og blottingen så vel som den videre fremgangsmåte for RNA-blot-analyse ble utført ifølge U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor. Probe A fra variant-CD44-området av pMeta-1, som ble anvendt for hybridiseringen, var identisk med den som er angitt under punkt 2.1. Som probe B, som stammer fra den normale CD44-region av pMeta-1 som ligger nedstrøms etter vCD44, ble området angitt i U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor, utvalgt. Som det kan sees av fig. 2, uttrykte human-cellelinjen LCLC97 av et storcelle-lungekarsinom sekvenser som er homologe til probe A av vCD44 av rotte. Med hensyn til probe B (normalt sCD44-område hos rotte), kunne det også påvises tydelige hybridiseringssignaler eller ekspresjoner av sCD44 i andre cellelinjer. Cellelinjene SCLC18 og SCLC24 var negative for begge prober. Til sammenlikning ble RNA'ene fra rottecellelinjene BSpAS (ikke-metastaserende) og BSpASML (metastaserende) påsatt (fig. 2, baner 7 og 8).
2.3 Isolering og karakterisering av CD44-varianter hos mennesker
Poly(A)<+->RNA'ene ble isolert ifølge kjent metode (M. Schwab et al., Nature 203., 497-501, 1983) fra de kjente cellelinjer SW260, HT29 (fas fra ATCC nr. CCL227 eller nr. HTB38), LCLC97 (som beskrevet under 2.2), HPKII (keratinocytt-cellelinje, beskrevet i P. Boukamp et al., J. Cell Biol. 106., 761-771, 1988) og MeWo (melanom-cellelinje, T.E. Carey et al., Proe. Nati. Acad. Sei. USA 23., 3278-3282, 1976), og de ble deretter transkribert for PCR-forøkning med AMV-reversert transkriptase (20 enheter) i enkeltkjedet DNA.
For fremstilling av cDNA'ene ved PCR-forøkning ble det benyttet to primere fra normale human-CD44-cDNA-sekvenser, og i virkeligheten oligonukleotider som representerer posisjonene 513-540 og 900-922 (I. Stamenkovic et al., Cell 56, 1057-1062,1989). Denne utvelging skjedde på denne måte, siden innskuddene av de metastasespesifikke ekstrasekvenser hos rotten finnes mellom disse posisjoner (U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor). Etter 60 cykluser ble PCR avsluttet og de oppnådde DNA-produkter oppløst ifølge kjent metode (T. Maniatis et al., 1982, som ovenfor) ved agarosegelelektroforese (1% agarose, Sigma) og farget med etidiumbromid. Med hensyn til den "normale" CD44-RNA-ekspresjon (sCD44) ble det ved anvendelse av denne primer oppnådd en cDNA med lengde 440 bp (innbefattende restriksjonsstedet for kloningen), slik som det kunne ventes for ekspresjon av denne RNA (MeWo- og SW620-celler). Når det gjelder RNA'ene fra de andre cellelinjer forefinnes det likeledes et bånd med samme lengde fra hver av disse, men i tillegg større PCR-produkter (cDNA'er). Fremherskende fragmenter med lengde 850 bp ble oppnådd med HT29- og LCLC97-celler. I HPKII-celler kunne de sterkeste bånd, ved siden av båndet på 440 bp, finnes i lengdeområdet 1,5 kb. Disse forhold er vist på fig. 3.
Alle cDNA'er som var oppnådd ved PCR-forøkning, ble klonet inn i vektoren pT7T3-19 (BRL, Gibco) og deretter sekvensert ifølge standardmetoder. Kloner av MeWo-celler og av SW60-celler inneholdt de normale CD44-(sCD44)-sekvenser (I. Stamenkovic et al., 1989, som ovenfor).
DNA- og aminosyresekvensen av hele variantregionen av de lengste cDNA som var oppnådd fra LCLC97-celler ved PCR og klonet i pT7T3-19, er vist på fig. 4A. Variantdelen omfatter 1014 bp (eller 338 aminosyrer), som er innført mellom nukleotidposisjonene 782 og 783 i den "normale" sCD44-RNA. Sekvensen i dette variantområde er under-inndelt i fem seksjoner eller doméner, hvilket er i overens-stemmelse med oppdagelsen av mindre PCR-produkter, som omfatter nøye definerte områder av den største klon (fra LCLC97). På grunn av det faktum at slike kloner kan isoleres reproduserbart fra forskjellige cellelinjer, kan det herav avledes at disse fem doméner D I - D V i LCLC97-cellelinjen (fig. 4A) gjenspeiler fem forskjellige eksoner som frembringer RNA'ene som PCR-klonene stammer fra, ved differensiell RNA-skjøting. Eksistensen av slike doméner kunne bekreftes ved oppdagelse av like forhold hos rottetumorcellelinjer.
En skjematisk oversikt over forholdene, slik som de foreligger når det gjelder LCLC97, er vist på fig. 4B. Ifølge kjent metode (U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor) ble det ved PCR isolert en cDNA-klon homolog med det lengste skjøtings-produkt i LCLC97-celler fra den metastaserende rottetumorcellelinje BSpASML. Fig. 4A viser en sammenlikning av den derav avledede aminosyresekvens med aminosyresekvensen fra det menneskelige klon (fra LCLC97). Posisjonen av innskuddet av disse variantsekvenser er forskjellige ved tre aminosyrer (aminosyre-posisjon 222 hos mennesker, posisjon 226 hos rotter). Doméne I viser 83%, doméne II 83%, doméne III 71%, doméne IV 82% og doméne 66% homologi i forhold til de tilsvarende aminosyresekvenser hos rotter.
cDNA hos rotter som svarer til LCLC97 på fig. 4A, og som gir en tumor metastatisk potensial (U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor), omfatter aminosyrene
258-420 og koder for doménene II og III. Aminosyresekvensen hos begge disse doméner er identisk med den aminosyrekvens som er avledet fra cDNA fra klonen pMeta-1, av det spesifikke BSp73ASML-ekstradoméne som er publisert av U. Gunthert et al., 1991, som ovenfor.
Eksempel 3: Immunundertrykkende virkning av det monoklonale antistoff
1.1 ASML som er rettet mot vCD44
3.1 Innvirkning av anti-vCD44 (1.1 ASML) på det humorale immunforsvar
På tidspunktet for antigenadministreringen ble det injisert intravenøst 200 /ug av det monoklonale antistoff 1.1 ASML til BDX-rotter. Som T-celle-uavhengig antigen ble det tilført intraperitonealt 50 fig 2,4,6-trinitrofenyl-lipopolysakkarid (TNP-LPS) (J.M. Fidler, Cellul. Immunol. 1Å, 223, 1975) og som T-celleavhengig antigen 5x10 celler av hapten-protein-konjugatet av 2,4,6-trinitrofenyl-røde hesteblodceller (TNP-HRBC) (M.B. Rittenberg, Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 132, 575-581, 1969) for immunisering av rottene. Antallet av cellene som danner de antigenspesifikke plakk (plakkdannende celler, PFC) ble bestemt 3 og 5 dager etter antigen-tilførselen eller injeksjon av 1.1 ASML, hvor det som målceller ble anvendt konjugater av 2,4,6-trinitrofenyl med saue-erytrocytter (røde saueblodceller (TNP-SRBC)) og HRBC (heste-erytrocytter eller røde hesteblodceller). PFC ble bestemt ifølge en modifikasjon (M. Zoller & G. Andrighetto, Cellul. Immunol. £9-, 310, 1984) av den hemolytiske plakkanalyse (N.K. Jerne & A.A. Nordin, Science 140, 405, 1963). Mengdebestemmelsen av anti-TNP-antistoffer i serum fira de immuni-serte rotter ble utført ifølge kjent metode (M. Zoller, Scand. J. Immunol. 31, 619, 1990), idet serumtitreringskurver ble sammenliknet med standardkurver av rensede monoklonale Anti-TNP-antistoffer ved hjelp av ELISA (E. Engvall & P. Perlman, J. Immunol. 109, 129, 1982).
Immunforsvarene både overfor det T-celleuavhengige antigen og det T-celle-avhengige antigen ble sterkt redusert eller undertrykket i nærvær av 1.1 ASML. Antallet av antigenspesifikke PFC ble redusert med 8-21% i forhold til kontroll-stimulerte dyr, og likeså ble det oppståtte serum-antistoffspeil undertrykket (tabell I)
Disse data muliggjør den tolkning at antistoffene enten bare virker ved hemning av B-lymfocyttstimuleringen eller at både B- og T-lymfocytter blokkeres.
Ekspresjon av vCD44 var imidlertid ikke bare nødvendig for det humorale, men også for det cellulære immunforsvar.
3.2. Innvirkning av anti-vCD44 på aktiveringen av T-lymfocytter
Effektiviteten av en allogen stimulering ble bestemt 4 dager etter immunisering ved bestemmelse av formeringen av T-celler etter fornyet stimulering in vitro.
DA-rottene som ble anvendt til dette, ble immunisert enten bare med 5x10 n bestrålte lymfocytter (3000 R) fra BDX-rotter, eller med bestrålte BDX-lymfocytter pluss 1.1 ASML (200 fig). Milt- og lymfeknutecellene fra disse ble stimulert på nytt in vitro med bestrålte BDX-lymfocytter.
Miltene og lymfeknutene ble oppsamlet 5 dager senere. Organene ble finknust forsiktig, og etter vasking i 15 ml RPMI 1640 ble cellene innstilt til 3 x 10^ celler pr. ml RPMI 1640, supplert med L-glutamin (4 mM), antibiotika (34 jiiM
penicillin, 32 [ iM streptomycin), 5 x 10 <5> M 2-merkaptoetanol, 10 <3> M Hepesbuffer og 2% varme-inaktivert rotteserum (RPMI-s). Porsjoner av cellesuspensjonen ble titrert tre ganger i mikrotiterplater med U-formige fordypninger. I hver fordypning ble det tilsatt 1,5 x 10<5> bestrålte (3000 R) BDX-lymfocytter i 100 /il RPMI-s, så vel som eventuelt monoklonale antistoffer 1.1 ASML i en sluttkonsentrasjon på 10 ug/ ml RPMI-s, renset ved protein A Sepharose 4B-kromatografi (Pharmacia).
Kulturene ble inkubert i 72 timer ved 37°C med 5% C02-gass ved atmosfæretrykk. Formeringen av DA-lymfocyttene ble bestemt ved tilsetning av 50 fiCi H-tymidin i løpet av de siste 8 timer av dyrkningen.
Innbyggingen av H-tymidin som mål for formeringen av T-celler og milt-celler fra slike rotter som ble immunisert sammen med l.lASML-allogen, var, sammenliknet med celler fra rotter som ble immunisert i fravær av antistoffet, drastisk redusert. Dette resultat var fortsatt det samme, uavhengig av om miltceller og lymfeknuteceller bare ble stimulert på nytt med allogene celler alene eller med allogene celler pluss 1.1 ASML (fig. 5).
3.3 Innvirkning av anti-vCD44 på aktiveringen av cytotoksiske T-celler
I forbindelse med T-celleformeringen i eksempel 3.2. ble den cytotoksiske aktivitet bestemt den syvende dag etter den allogene stimulering. Med hensyn til nødvendigheten av vCD44 under utviklingen og/eller aktiveringen av cytotoksiske T-celler (CTL), fikk man det praktisk talt identiske bilde som under eksempel 3.2 (fig. 5). I nærvær av 1.1 ASML ble antallet av cytotoksiske T-lymfocytter drastisk redusert (fig. 6).
Miltceller fra DA-rotter (DA-miltceller) som var blitt immunisert med BDX-lymfocytter som beskrevet i eksempel 3.2, ble oppsamlet 7 dager etter immunise-ringen og undersøkt med hensyn til cytotoksisk aktivitet overfor BDX-lymfoblaster (primære CTL).
Umiddelbart etter immunisering av oppsamlede DA-miltceller, ble de justert til 1x10 celler pr. ml RPMI-s. Porsjoner av cellesuspensjonen (effektorceller, E) ble titrert i mikrotiterplater med U-formige fordypninger, og 100 fil målceller (Target cells, T, 1 x 10<4> 51Cr-merkede BDX-conkanavalin A-lymfoblaster) ble tilsatt. Etter 6 timers inkubering ved 37°C, ble platene sentrifugert, porsjoner av supernatantene ble uttatt og den radioaktive stråling av51 Cr ble bestemt i en T-teller. På fig. 6 er vist middel-prosentsatsen for den spesifikke radioaktivitet av tre verdier.
Claims (21)
1. Anvendelse av antistoffer rettet mot variant-CD44-(vCD44)-overflateprotein hos et pattedyr eller deler derav, for fremstilling av et farmasøytisk preparat for frembringelse av en immunundertrykkelse i en pattedyrorganisme i form av blokkert aktivering av B-celler og T-celler, og drastisk reduksjon av cytotoksisk T-cellerespons.
2. Anvendelse av antistoffer ifølge krav 1 til nedsettelse og/eller undertrykking av et immunforsvar.
3. Anvendelse ifølge krav 1 eller 2 til terapeutisk behandling av immunregulatoriske forstyrrelser og/eller sykdommer.
4. Anvendelse ifølge krav 1 eller 2 til forhindring og/eller forebygging av immunregulatoriske forstyrrelser og/eller sykdommer.
5. Anvendelse ifølge krav 1 til bekjempelse og/eller diagnostisering av en immunregulatorisk forstyrrelse.
6. Anvendelse ifølge kravene 1-3 til forhindring og/eller terapeutisk behandling av sykdommer og tilstander hvor det er nødvendig med en midlertidig eller varig nedsettelse eller undertrykking av et immunforsvar.
7. Anvendelse ifølge krav 6 for behandling av autoimmunsykdommer.
8. Anvendelse ifølge krav 6 til behandling av allergiske sykdommer.
9. Anvendelse ifølge krav 6 til behandling av degenerative, inflammatoriske, proliferative og/eller hyperproliferative, immunologiske sykdommer.
10. Anvendelse ifølge krav 9 til behandling av sykdommer i det reumatiske område, av multippel sklerose, psoriasis og atopisk dermatitt.
11. Anvendelse ifølge krav 6 til forhindring av vevs- og/eller organavstøting av transplanterte vev eller organer.
12. Anvendelse ifølge kravene 1 -11, idet pattedyrorganismen er en menneske-organisme.
13. Anvendelse ifølge kravene 1-12, idet antistoffet er et monoklonalt antistoff.
14. Anvendelse av et antistoff ifølge ett av kravene 1-13, idet antistoffet oppfatter et vCD44-overflateprotein eller deler av dette, som i det minste foreligger som en tilleggsdel til det normale CD44-doméne (sCD44).
15. Anvendelse ifølge krav 13, idet det monoklonale antistoff oppfatter epitopen definert ved aminosyresekvensen E-E-A-A-T-Q-K-E-K-W.
16. Anvendelse ifølge kravene 1-15, idet antistoffet er et fragment eller et derivat derav, eller et kimært eller hybrid-antistoff, et anti-idiotypisk antistoff eller et bispesifikt antistoff.
17. Anvendelse ifølge ett av kravene 1-16, idet det farmasøytiske preparat som inneholder antistoffet, foreligger som bruksferdig løsning, som tørrpreparat i en form som er egnet for rekondisjonering, eller som sett.
18. Anvendelse ifølge krav 17, idet det farmasøytiske preparat som inneholder antistoffet, foreligger i en tilførselsform for enteral eller parenteral, systemisk, lokal og/eller topisk administrering.
19. Anvendelse ifølge krav 17 og 18, idet det farmasøytiske preparat som inneholder antistoffet, foreligger i en form som er egnet for tilførsel som injeksjon, infusjon eller perfusjon.
20. Anvendelse av en hybridomcellelinje som utsondrer et antistoff ifølge ett av kravene 1-16, til fremstilling av et farmasøytisk preparat for frembringelse av en immunundertrykkelse i en pattedyrorganisme.
21. Anvendelse ifølge krav 20, idet hybridomcellelinjen utsondrer et monoklonalt antistoff som oppfatter epitopen definert ved aminosyresekvensen E-E-A-A-T-Q-K-E-K-W.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4134982A DE4134982A1 (de) | 1991-10-23 | 1991-10-23 | Verwendung von antikoerper enthaltenden praeparationen zur immunsuppression |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO924103D0 NO924103D0 (no) | 1992-10-22 |
NO924103L NO924103L (no) | 1993-04-26 |
NO311965B1 true NO311965B1 (no) | 2002-02-25 |
Family
ID=6443260
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO19924103A NO311965B1 (no) | 1991-10-23 | 1992-10-22 | Anvendelse av antistoffer rettet mot variant -CD44- (vCD44)- overflateprotein for fremstilling av et farmasöytisk preparat |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5951982A (no) |
EP (1) | EP0538754B1 (no) |
JP (1) | JPH05310596A (no) |
KR (1) | KR100252620B1 (no) |
AT (1) | ATE162079T1 (no) |
AU (1) | AU659687B2 (no) |
CA (1) | CA2081150C (no) |
DE (2) | DE4134982A1 (no) |
DK (1) | DK0538754T3 (no) |
ES (1) | ES2111031T3 (no) |
GR (1) | GR3026526T3 (no) |
HU (1) | HU216020B (no) |
IL (1) | IL103510A0 (no) |
NO (1) | NO311965B1 (no) |
NZ (1) | NZ244851A (no) |
TW (1) | TW273514B (no) |
ZA (1) | ZA928162B (no) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5589458A (en) * | 1992-11-13 | 1996-12-31 | Thomas Jefferson University | Compounds that inhibit T cell proliferation and methods for using the same |
ES2110764T3 (es) * | 1993-06-18 | 1998-02-16 | Biotie Therapies Oy | Composiciones y metodos de diagnostico empleando anticuerpos monoclonales contra la cd44v6. |
DE4326573A1 (de) * | 1993-08-07 | 1995-02-23 | Boehringer Ingelheim Int | Durch Exon v5 des CD44-Gens kodierte Polypeptide als Targets für Immuntherapie und Immunszintigraphie von Tumoren |
DE4431297A1 (de) * | 1994-09-02 | 1996-03-07 | Boehringer Ingelheim Int | Monoklonaler Antikörper gegen CD44v6 |
DE19540515C1 (de) * | 1995-10-31 | 1997-02-06 | Boehringer Ingelheim Int | Tumortherapie durch adoptiven Transfer CD44v-spezifischer zytotoxischer T-Lymphozyten |
AU1672097A (en) * | 1996-02-15 | 1997-09-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Monoclonal antibody that recognizes antigens present on the surface of endothelial cell of tumor vessel |
US6136311A (en) | 1996-05-06 | 2000-10-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Treatment and diagnosis of cancer |
DE19652815C2 (de) * | 1996-12-18 | 1999-11-11 | Karlsruhe Forschzent | Mittel zur Identifizierung und Therapie metastasierender Tumore |
DE19653607A1 (de) | 1996-12-20 | 1998-06-25 | Boehringer Ingelheim Int | Verfahren zur Diagnose und Therapie von Hodgkin-Lymphomen |
DE19708713C2 (de) * | 1997-03-04 | 2002-11-28 | Boehringer Ingelheim Int | Verwendung von anti-CD44 Antikörpern enthaltenden Präparationen zur Behandlung bestimmter Tumore und zur Unterdrückung von Immunreaktionen |
IL121656A0 (en) * | 1997-08-29 | 1998-02-08 | Yissum Res Dev Co | Diagnosis prevention and treatment of diabetes |
US7534605B2 (en) * | 1999-06-08 | 2009-05-19 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | CD44 polypeptides, polynucleotides encoding same, antibodies directed thereagainst and method of using same for diagnosing and treating inflammatory diseases |
WO2004024750A2 (en) * | 2002-09-13 | 2004-03-25 | Dyax Corporation | Cd44-binding ligands |
US9701754B1 (en) | 2002-10-23 | 2017-07-11 | City Of Hope | Covalent disulfide-linked diabodies and uses thereof |
WO2005087264A1 (en) * | 2004-03-17 | 2005-09-22 | Academisch Ziekenhuis Bij De Universiteit Van Amsterdam | Cd44-targeting for reducing/preventing ischemia-reperfusion-injury |
EP2267030A1 (en) | 2005-08-25 | 2010-12-29 | Repair Technologies, Inc. | Devices, compositions and methods for the protection and repair of cells and tissues |
US8940871B2 (en) | 2006-03-20 | 2015-01-27 | The Regents Of The University Of California | Engineered anti-prostate stem cell antigen (PSCA) antibodies for cancer targeting |
US8940298B2 (en) | 2007-09-04 | 2015-01-27 | The Regents Of The University Of California | High affinity anti-prostate stem cell antigen (PSCA) antibodies for cancer targeting and detection |
WO2010058396A1 (en) | 2008-11-19 | 2010-05-27 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | A cd44vra antibody and diagnostic and therapeutic methods using same |
EP3495000A1 (en) | 2009-02-17 | 2019-06-12 | Cornell Research Foundation, Inc. | Methods and kits for diagnosis of cancer and prediction of therapeutic value |
CA3040276A1 (en) | 2009-12-02 | 2011-06-09 | Imaginab, Inc. | J591 minibodies and cys-diabodies for targeting human prostate specific membrane antigen (psma) and methods for their use |
DK2886126T3 (en) | 2013-12-23 | 2017-09-18 | Exchange Imaging Tech Gmbh | Nanoparticle conjugated to CD44-binding peptides |
BR112017000710B1 (pt) | 2014-07-15 | 2024-02-27 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Polipeptídeo isolado, composição de matéria, e, uso do polipeptídeo isolado ou da composição da matéria |
SG10201913625XA (en) | 2015-08-07 | 2020-03-30 | Imaginab Inc | Antigen binding constructs to target molecules |
WO2018147960A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Imaginab, Inc. | Extension sequences for diabodies |
US11313243B2 (en) | 2018-07-12 | 2022-04-26 | Rolls-Royce North American Technologies, Inc. | Non-continuous abradable coatings |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE114478T1 (de) * | 1987-08-11 | 1994-12-15 | Univ Leland Stanford Junior | Verfahren zur kontrolle der leukozyten- extravasation. |
DE4014510A1 (de) * | 1990-05-07 | 1991-11-14 | Kernforschungsz Karlsruhe | Variante cd44-oberflaechenproteine, diese kodierende c-dna-sequenzen, antikoerper gegen diese proteine sowie ihre verwendung in der diagnostik und therapie |
CA2059824A1 (en) * | 1991-02-26 | 1992-08-27 | Thomas M. Aune | Hybridomas and monoclonal antibodies that inhibit anti-cd3-stimulated t cell proliferation |
ES2110764T3 (es) * | 1993-06-18 | 1998-02-16 | Biotie Therapies Oy | Composiciones y metodos de diagnostico empleando anticuerpos monoclonales contra la cd44v6. |
-
1991
- 1991-10-23 DE DE4134982A patent/DE4134982A1/de not_active Withdrawn
-
1992
- 1992-10-07 TW TW081107971A patent/TW273514B/zh active
- 1992-10-17 EP EP92117775A patent/EP0538754B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-17 AT AT92117775T patent/ATE162079T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-10-17 DE DE59209129T patent/DE59209129D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-17 DK DK92117775.4T patent/DK0538754T3/da active
- 1992-10-17 ES ES92117775T patent/ES2111031T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-10-21 NZ NZ244851A patent/NZ244851A/en unknown
- 1992-10-22 CA CA002081150A patent/CA2081150C/en not_active Expired - Fee Related
- 1992-10-22 ZA ZA928162A patent/ZA928162B/xx unknown
- 1992-10-22 KR KR1019920019468A patent/KR100252620B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-10-22 HU HUP9203337A patent/HU216020B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-10-22 AU AU27244/92A patent/AU659687B2/en not_active Ceased
- 1992-10-22 NO NO19924103A patent/NO311965B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-10-22 IL IL103510A patent/IL103510A0/xx unknown
- 1992-10-23 JP JP4307913A patent/JPH05310596A/ja active Pending
-
1994
- 1994-12-20 US US08/359,850 patent/US5951982A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-04-03 GR GR980400710T patent/GR3026526T3/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0538754A3 (en) | 1994-05-25 |
DK0538754T3 (da) | 1998-03-30 |
JPH05310596A (ja) | 1993-11-22 |
AU659687B2 (en) | 1995-05-25 |
NZ244851A (en) | 1997-07-27 |
GR3026526T3 (en) | 1998-07-31 |
NO924103D0 (no) | 1992-10-22 |
CA2081150A1 (en) | 1993-04-24 |
ZA928162B (en) | 1993-05-05 |
NO924103L (no) | 1993-04-26 |
CA2081150C (en) | 2001-04-10 |
EP0538754B1 (de) | 1998-01-14 |
AU2724492A (en) | 1993-04-29 |
KR100252620B1 (ko) | 2000-09-01 |
ATE162079T1 (de) | 1998-01-15 |
US5951982A (en) | 1999-09-14 |
HUT63063A (en) | 1993-07-28 |
HU216020B (hu) | 1999-04-28 |
ES2111031T3 (es) | 1998-03-01 |
EP0538754A2 (de) | 1993-04-28 |
TW273514B (no) | 1996-04-01 |
IL103510A0 (en) | 1993-03-15 |
DE4134982A1 (de) | 1993-04-29 |
KR930007460A (ko) | 1993-05-20 |
DE59209129D1 (de) | 1998-02-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO311965B1 (no) | Anvendelse av antistoffer rettet mot variant -CD44- (vCD44)- overflateprotein for fremstilling av et farmasöytisk preparat | |
US8808667B2 (en) | Method for generating active antibodies against a resistance antigen, antibodies obtained by said method and their uses | |
JP2001502325A (ja) | 免疫調整の方法および組成物 | |
HU230768B1 (hu) | Aß peptidet kiválasztó humanizált ellenanyagok | |
WO2019095358A1 (zh) | 一种靶向cd47与pd-l1的双功能融合蛋白 | |
CN109384845B (zh) | 一种cd40单克隆抗体、其制备方法及其应用 | |
CA2468888C (en) | Common lymphatic endothelial and vascular endothelial receptor-1 (clever-1) and uses thereof | |
CN110343180B (zh) | 抗ctla-4抗体及其应用 | |
EP3556771A1 (en) | Claudin 5 antibody, and medicine containing said antibody | |
CA2417874C (en) | Use of ox-2 inhibitors for the treatment of cancer | |
EP3858862A1 (en) | Anti pd-l1 antibody and use thereof | |
AU2018326106B2 (en) | Composition For Preventing And Treating Skin Disease Comprising Material Specifically Binding To Vimentin-Derived Peptide | |
WO2024056098A1 (zh) | NKG2D-NKp46细胞接合器分子及其用途 | |
JP2002519303A (ja) | 脂質動員性を有する糖タンパク質およびその治療的適用 | |
TW202305006A (zh) | 與cd47及pd—l1特異性結合的雙特異性抗體 | |
CN114790241A (zh) | 抗tigit抗体及其应用 | |
RU2803148C2 (ru) | Противоопухолевое средство и способ его оценки | |
HU217175B (hu) | Új belhámvaszkuláris protein-1 (VAP-1), amely emberben a limfociták kötődését mediálja | |
CN116262791A (zh) | 钠钾atp酶的抗体及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |