NO180381B - DNA-konstruksjoner inneholdende en Kluyveromyces alfa-faktor ledersekvens for utskillelse av heterologe polypeptider, ekspresjonsvektor og fremgangsmåte til fremstilling av et heterologt polypeptid i gjær - Google Patents
DNA-konstruksjoner inneholdende en Kluyveromyces alfa-faktor ledersekvens for utskillelse av heterologe polypeptider, ekspresjonsvektor og fremgangsmåte til fremstilling av et heterologt polypeptid i gjær Download PDFInfo
- Publication number
- NO180381B NO180381B NO883346A NO883346A NO180381B NO 180381 B NO180381 B NO 180381B NO 883346 A NO883346 A NO 883346A NO 883346 A NO883346 A NO 883346A NO 180381 B NO180381 B NO 180381B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- sequence
- leader sequence
- yeast
- dna
- heterologous polypeptide
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 53
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 50
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 49
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 42
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 title claims abstract description 34
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 title claims description 8
- 230000028327 secretion Effects 0.000 title description 17
- 241001138401 Kluyveromyces lactis Species 0.000 claims abstract description 38
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 24
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 108010064037 prorennin Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 47
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 13
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 12
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 11
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 11
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 5
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 4
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 abstract description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 32
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 11
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 108090000746 Chymosin Proteins 0.000 description 8
- 229940080701 chymosin Drugs 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N n,n,5,7-tetramethyl-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-amine Chemical compound C1=C(C)C=C2C(N(C)C)CCCC2=C1C GNOLWGAJQVLBSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 5
- 102100026038 Lens fiber membrane intrinsic protein Human genes 0.000 description 5
- 101710115990 Lens fiber membrane intrinsic protein Proteins 0.000 description 5
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 5
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 5
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 5
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150022713 LAC4 gene Proteins 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 3
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 3
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- LXJXRIRHZLFYRP-UHFFFAOYSA-N glyceraldehyde 3-phosphate Chemical compound O=CC(O)COP(O)(O)=O LXJXRIRHZLFYRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 3
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 101100074137 Arabidopsis thaliana IRX12 gene Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003016 pheromone Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-[(1r)-1-hydroxyethyl]oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]([C@@H](C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-DJWUNRQOSA-N 0.000 description 1
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102100034035 Alcohol dehydrogenase 1A Human genes 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 101100309712 Arabidopsis thaliana SD11 gene Proteins 0.000 description 1
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical group OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 101710089839 Dipeptidyl aminopeptidase A Proteins 0.000 description 1
- 108010065372 Dynorphins Proteins 0.000 description 1
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010049140 Endorphins Proteins 0.000 description 1
- 102000009025 Endorphins Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 108010033128 Glucan Endo-1,3-beta-D-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 101000780443 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1A Proteins 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000899 L-alpha-glutamyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 108010086093 Mung Bean Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102400000050 Oxytocin Human genes 0.000 description 1
- 101800000989 Oxytocin Proteins 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N Oxytocin Natural products N1C(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 P-endorphin Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010069341 Phosphofructokinases Proteins 0.000 description 1
- 102000001105 Phosphofructokinases Human genes 0.000 description 1
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 102100024622 Proenkephalin-B Human genes 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 description 1
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 description 1
- 108700040099 Xylose isomerases Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 108010056929 lyticase Proteins 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001723 oxytocin Drugs 0.000 description 1
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 229940016590 sarkosyl Drugs 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6478—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
- C12N9/6481—Pepsins (3.4.23.1; 3.4.23.2; 3.4.23.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/39—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
- C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører DNA-konstruksjoner inneholdende en kluyveromyces alfa-faktor ledersekvens for utskillelse av heterologe polypeptider, ekspresjonsvektor og fremgangsmåte til fremstilling av et heterologt polypeptid i gjær.
U.S. patentnummer 4,546,082 beskriver a-faktor forløpergenet til Saccharomyces cerevisiae og viser DNA-konstruksjoner av S. Cerevisiae ledersekvensen og heterologe gener som er nyttige for den utskillende uttrykkingen av de heterologe genene.
EPA 0 116 201 beskriver en aktuell anvendelse av S. cerevisiae a-faktor ledersekvens for å utskillende uttrykking av human epidermal vekstfaktor i gjær. US patentsøknaden serie nr. 522,909, inngitt august 12, 1983, beskriver anvendelsen av "spacer-fri" S. cerevisiae a-faktor ledersekvenser for å oppnå mere effektiv utskillende uttrykking av heterologe gener.
Science (1985) 229:1212-1224 rapporterer anvendelsen av S. cerevisiae a-faktor sekvenser for å lede utskilling av prochymosin. Det ble rapportert at det meste av det produs-erte prochymosinet var tilstede i en intracellulær uopp-løselig form istedenfor å bli utskilt. Selv om invertase-lederen var mere effektiv i å lede utskilling av aktiverbar prochymosin, var det nødvendig med en omfattende mutant-screen for å tilveiebringe akseptable mengder prochymosin-utskilling.
Det har tidligere ikke vært noen demonstrasjon av produksjon av parings-feromoner (a-faktor og a-faktor) ved K. lactis-celler eller andre Kluyveromyces-spesies. Det at slike peptider ikke er blitt identifisert i K. lactis kan delvis være forårsaket av det faktum at paring i K. lactis er induserbart; mens i S. cerevisiae blir parings-feromonene produsert konstitutivt.
Bortsett fra tilgjengeligheten av de nevnte ledersekvensene for leding av utskillingen av heterologe polypeptider i gjær, er det fortsatt nødvendig med alternative sekvenser som kan tilveiebringe mere effektiv eller mere praktisk produksjon av bestemte polypeptider. Søkerene prøvde dermed å bestemme om en K. lactis a-faktor eksisterer og, hvis den eksisterer, om den vil være nyttig for å lede utskillingen av heterologe polypeptider, såsom prochymosin, i gjær.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer DNA-konstruksjoner basert på Kluyveromyces a-faktor ledersekvensen for å lede utskilling av heterologe polypeptider i gjær. Kluyveromyces transformantene som inneholder disse konstruksjonene tilveiebringer effektiv utskilling av polypeptidene, såsom prochymosin .
Et aspekt av oppfinnelsen er dermed en DNA-konstruksjon som koder for et protein med en aminosyresekvens som omfatter en funksjonell sekresjons-ledende Kluyveromyces a-faktor ledersekvens bundet til en heterolog polypeptidsekvens, et gjærprosesseringssignal for prosessering av nevnte protein til nevnte heterologe polypeptid mellom nevnte ledersekvens og nevnte heterologe polypeptidsekvens og en gjærpromoter ved 5'-enden av nevnte ledersekvens.
Et annet aspekt av oppfinnelsen er en ekspresjonvektor som innbefatter et replikerende eller integrerende system som er funksjonelt i en gjærvert og en DNA-konstruksjon som koder for et protein med en aminosyresekvens som innbefatter en utskillings-ledende Kluyveromyces a-faktor ledersekvens bundet til en heterolog polypeptidsekvens via et gjærprosesseringssignal for prosessering av nevnte protein til nevnte heterologe polypeptid.
Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig en ekspresjonsvektor kjennetegnet ved at den omfatter et replikativt eller integrativt system for å tilveiebringe stabil opprettholdelse i gjær og en DNA konstruksjon som nevnt ovenfor.
Et annet aspekt av oppfinnelsen er en fremgangsmåte for å produsere et heterologt polypeptid i gjær innbefattende dyrking av gjær som inneholder ekspresjonsvektoren som ovenfor i et dyrkningsmedium under betingelser hvorved nevnte heterologe polypeptid blir uttrykt og utskilt av nevnte gjær som et "propolypeptid" og polypeptidet blir i hvert fall delvis prosessert til nevnte heterologe polypeptid. Figur 1 viser strategien som blir anvendt for å konstruere oligonukleotidprober som blir anvendt for å identifisere K.lactis a-faktor DNA. Figur 2 er den fullstendige sekvensen til et DNA-fragment som koder for a-faktoren til K. lactis. Figur 3 er en sammenligning mellom proteinsekvensen til K. lactis og S. cerevisiae a-faktorene. Figur 4 er en skjematisk representasjon av K. lactis og S. cerevisiae a-faktorene. Figur 5 er en sammenligning mellom DNA-sekvensene til genene som koder for a-faktorene til K. lactis og S. cerevisiae. Figur 6 er en skjematisk representasjon av tre plasmider og konstruksjonene er beskrevet i detalj i eksemplene. Figur 7 er et reaksjonsskjema som viser binding av DNAet til K. lactis a-faktorlederen til DNAet for prochymosin. Figur 8 representerer sekvensen til pAB309 BamHI/Sall innskudd i pUC18.
Figur 9 er et diagram av plasmid pGB901.
Figur 10 er et diagram av plasmid pGBTeG418.
Figur 11 representerer sekvensene til primerene som blir anvendt for mutagenese av K. lactis a-faktor leder-DNA. Figur 12 representerer DNA-sekvensene rundt forbindelses-punktet i K. lactis a-faktor leder/prochymosin DNA-fusjonene.
I henhold til oppfinnelsen blir gjærceller anvendt for produksjon av modne heterologe polypeptider, hvor slike polypeptider kan bli høstet rett fra et næringsmedium. Polypeptidene blir produsert ved anvendelse av en DNA-konstruksjon som koder for en Kluyveromyces a-faktor ledersekvens og en prosesseringssignalsekvens festet til det heterologe polypeptidet som er av interesse, som kan være et enkelt heterologt polypeptid eller et flertall heterologe polypeptider separert med prosesseringssignalet. Den resulterende konstruksjonen koder for et prepropolypeptid som vil inneholde signalene for utskilling av prepropolypeptidet og prosessering av polypeptidet, enten intracellulært eller ekstracellulært, til det modne polypeptidet.
Konstruksjonene ifølge oppfinnelsen innbefatter en DNA-sekvens med følgende formel som koder for et propolypeptid:
hvori:
X er et kodon for lysin eller arginin
Y er et kodon for arginin;
W er et kodon for alanin eller prolin;
Z er et kodon for en aminosyre, fortrinnsvis et kodon for serin, lysin eller asparagin når W koder for prolin og et kodon for glutaminsyre, asparagin, asparaginsyre, eller serin når W koder for alanin;
Y er et helt tall på minst en eller vanligvis ikke mer enn 10, vanligvis på ikke mer enn fire, for monomerer og multi-merer;
Gen<*> er et gen forskjellig fra villtype Kluyveromyces a-faktor assosiert med ledersekvensen som er fremmed for en gjærvert, vanligvis et plantegen eller et pattedyrgen;
n er 0 eller et helt tall som vanligvis vil variere fra 1 til 8, vanligvis 3 til 7. n er fortrinnsvis 0.
I denne formelen definerer aminosyrene kodet av X, Y, og Z og W a-faktorprosesseringssignalet hvori aminosyrene kodet av X og Y definerer et dipeptidspaltesete og de som blir kodet av Z og W definerer en oligopeptidspacer. Siden n kan være null er spaceren valgfri. Hvis en spacer er tilstede, vil konstruksjonen vanligvis innbefatte tilleggssekvenser som tillater fjerning av N-terminale residier definert ved spaceren for å tilveiebringe det modne proteinet som blir kodet fra gen<*.>
I de fleste tilfeller vil konstruksjonene ifølge oppfinnelsen i det minste ha følgende formel:
som koder for et prepropolypeptid, hvori L er en Kluyveromyces ledersekvens som tilveiebringer utskilling av prepropolypeptidet og de andre symbolene er som definert ovenfor. En hvilken som helst Kluyveromyces ledersekvens kan bli anvendt som tilveiebringer utskilling, og ledersekvenser er generelt på omtrent 20 til 120 aminosyrer, vanligvis omtrent 30 til 100 aminosyrer, med en hydrofob region og med en metionin ved dets N-terminus.
Ledersekvensen, L, kan være en a-faktor ledersekvens med full lengde fra en hvilken som helst spesies for Kluyveromyces, såsom K. lactis og K. fragilis, eller et funksjonelt (dvs. evnen til å lede utskilling) fragment, mutasjon, enten konservativ eller ikke-konservativ, vanligvis ikke mer enn 5, mere vanlig er ikke mer enn 3 forskjellige aminosyrer, eller analoger derav. Funksjonelle fragmenter kan bli identifisert ved å lage konstruksjoner med forskjellige lengder i forhold til villtype sekvensen med full lengde og screene disse for deres evne til å lede utskilling. Gensekvensen for villtype K. lactis a-faktoren er ført opp i figur 2 hvor ledersekvensen er de DNA-kodende aminosyrene 1-83. DNA-sekvensen i figur 2 er ikke essensiell. En hvilken som helst sekvens som koder for en konvensjonell Kluyveromyces leder oligopeptid er tilstrekkelig. Forskjellige sekvenser vil bli translert mere eller mindre effektivt. Helst blir i det minste en hoveddel av de foretrukne gjærkodonene anvendt i sekvensen.
For tilveiebringing av nyttige DNA-sekvenser som kan bli anvendt som kassetter for ekspresjon, kan følgende sekvens bli benyttet:
hvori :
Tr står for en DNA-sekvens som koder for transkripsjonene regulatoriske signaler, spesielt promoteren og slike andre regulatoriske signaler som operatorer, aktivatorer, kapp-signal, eller annen sekvens som er innbefattet med transkripsjonen eller translasjonen kontroll;
d er 0 eller 1, den er 1 når y er større enn 1;
Tr-sekvensen vil generelt være minst omtrent 100 bp og ikke mer enn omtrent 2000 bp. Spesielt nyttig er anvendelse av Tr-sekvensen assosiert med ledersekvensen L, slik at et DNA-fragment kan bli anvendt som innbefatter transkripsjonelle-og translasjonene signalsekvensene som er assosiert med signalsekvensen som er endogen for verten. Man kan alternativt anvende andre transkripsjonene og translasjonene signaler for å tilveiebringe forøket produksjon av ekspresjonsproduktet.
De gjenværende symbolene er blitt definert ovenfor.
3'-terminus til gen<*> kan mye lettere bli manipulert i form av en konstruksjon som tillater innsetting av gen<*> inn i et unikt restriksjonssete i konstruksjonen. En slik foretrukket konstruksjon ville tilveiebringe et restriksjonssete som var i riktig leseramme som initieringskodonet ved innsetting av gen<*> inn i restriksjonssetet. En slik konstruksjon kan bli symbolisert som følger:
hvori:
de symbolene som tidligere er blitt definert av samme def inisj on;
a er 0 eller 1 som innbefatter at konstruksjonen enten har eller så har den ikke transkripsjonene og translasjonene signaler;
SC representerer et stoppkodon;
Te er en transkripsjonen termineringssekvens og kan også innbefatte andre signaler, f.eks. polyadenylering; og b er et helt tall som generelt vil variere fra omtrent 0 til 4, vanligvis fra 0 til 3, det innbefatter at gen<*> kan innbefatte dets egne stoppkodon.
Sekvensen oppstrøms fra gen<*> kan bli konstruert på en slik måte at den tilveiebringer hensiktsmessige restriksjonsseter som tillater at en gitt spesies av gen<*> kan bli erstattet med en annen spesies av gen<*>. Linkere og adaptere kan bli anvendt, om nødvendig, for å tilveiebringe en slik erstat-ning.
Konstruksjonen tilveiebringer en transportabel sekvens for innsetting inn i vektorer, som tilveiebringer det ønskede replikasjonssystem. Som det er blitt vist, kan det i noen tilfeller være ønskelig å erstatte villtypepromoteren assosiert med signal sekvensen med en annen promoter. I gjær kan promotere som er innbefattet med enzymene i den glykoly-tiske veien tilveiebringe høyere transkripsjonene hastig-heter. Disse promoterene er assosiert med slike enzymer som fosfoglukoisomerase, fosfofruktokinase, fosfotrioseisomerase, forsfoglukomutase, enolase, pyruvik-kinase, glyceraldehyd-3-fosfatdehydrogenase og alkohol-dehydrogenase. Disse promoterene kan bli satt inn oppstrøms for signalsekvensen. Den 5'-flankerende regionen til ledersekvensen kan bli opprettholdt eller erstattet med 3'-sekvensen til den alternative promoteren. Vektorer kan bli laget og er blitt rapportert som innbefatter promotere som har hensiktsmessige restriksjonsseter nedstrøms for promoteren for innsetting av slike konstruksjoner som beskrevet ovenfor.
Den endelige ekspresjonsvektoren vil innbefatte ekspresjons-kassetten og et replikerende system eller integrerende system som er funksjonelt i gjaerverten og tilveiebringer stabil opprettholdelse i gjaerverten. Vektoren kan eventuelt inneholde et replikasjonssystem som tillater kloning i en prokaryot. I tillegg vil en eller flere markører for selek-sjon bli innbefattet, som tillater selektivt trykk for opprettholdelse i verten. Vektoren kan innbefatte et høyt eller lavt kopiantall, og kopiantallet varierer generelt fra omtrent 1 til 200. Når det gjelder høy-kopi-antall vektorer, vil det generelt være minst 10, fortrinnsvis minst 20, og vanligvis ikke mere enn omtrent 150, vanligvis ikke over omtrent 100, kopiantall. Avhengig av gen<*> kan enten høye eller lave kopiantall være ønskelige, avhengig av effekten av vektoren på verten. Hvor nærvær av ekspresjonsproduktet til vektoren kan ha en ødeleggende effekt på levedyktigheten til verten, kan et lavt kopiantall være tilrådelig.
Forskjellige verter kan bli anvendt, spesielt mutanter som har ønskede egenskaper. En bør merke seg at avhengig av produksjonshastigheten til ekspresjonsproduktet til konstruksjonen, kan det hende at prosesseringsenzymet enten er tilstrekkelig eller ikke er tilstrekkelig for prosessering ved det produksjonsnivået. En mutant som har forsterket produksjon av prosesseringsenzymet (Dipeptidyl Amino Pepti-dase A og/eller lys-arg endopeptidase) kan være nødvendig eller forsterket produksjon av enzymet kan bli tilveiebragt ved anvendelse av en vektor. Produksjonen av enzymet bør generelt være lavere enn produksjonen av det ønskede ekspre-sj onsproduktet.
Det kan alternativt være situasjoner hvor intracellulær prosessering ikke er ønskelig. I denne situasjonen kan det være nyttig å ha en mutant, hvor utskilling oppstår, men hvor produktet ikke "blir prosessert. På denne måten kan produktet deretter bli prosessert in vitro.
Vertsmutanter som tilveiebringer kontrollert regulering av ekspresjonen kan med fordel bli anvendt. For eksempel, når det gjelder konstruksjonen ifølge oppfinnelsen hvor et sammenkoblet protein blir uttrykt, vokser transformantene sakte som et resultat av toksisiteten til det sammenkoblede proteinet. Ved inhibering av ekspresjonen i løpet av veksten, kan verten bli latt vokse til en høy tetthet før betingelsene blir forandret til tillatte betingelser for ekspresjon.
Som tidligere nevnt kan gen<*> ha en mengde sekvenser i tandem, enten de samme sekvensene eller forskjellige sekvenser, med mellomliggende prosesseringssignaler. På denne måten kan produktet bli prosessert helt eller delvis, med det resultat at en vil oppnå de forskjellige sekvensene enten i seg selv eller in tandem for påfølgende prosessering. I mange tilfeller kan det være ønskelig å tilveiebringe forskjellige sekvenser, hvor hver av sekvensene er en subenhet til et bestemt proteinprodukt.
Gen<*> kan kode for et hvilket som helst polypeptid som er av interesse. Polypeptidet kan være så lite som et oligopeptid på 8 aminosyrer eller være på 100.000 daltons eller høyere, vanligvis vil enkeltkjedene være på mindre enn omtrent 300.000 daltons, vanligvis mindre enn omtrent 150.000 daltons. Av spesiell interesse er polypeptider på omtrent 5.000 til 150.000 daltons, spesielt på omtrent 5.000 til 100.000 daltons. Illustrerende polypeptider som er av interesser innbefatter hormoner og faktorer, såsom vekst-hormon, somatomediner, og epidermal vekstfaktor; endokrine utskillinger, såsom luteiniserende hormon, tyroid-stimuler-ende hormon, oksytocin, insulin, vasopressin, renin, kalsi-tonin, folikkelstimulerende hormon, prolaktin osv.; hemato-poietiske faktorer, f.eks. erytropoietin, kolonistimulerende faktor, osv.; lymfokiner; globiner; globuliner, f.eks. immunoglobuliner; albuminer, f.eks. serumalbuminer såsom humant serumalbumin; interferoner, såsom a, p og S; repres-sorer; enzymer, f.eks. chymosin eller dets zymogener, a- og g-amylase, glukoamylase, pullulanase, xylanase, glukos-isomerase, cellulase, lipase, fosfolipase, osv; endorfiner, f.eks. P-endorfin, encefalin, dynorfin, osv.
Når man har fremstilt vektorene som inneholder konstruksjonen ifølge foreliggende oppfinnelse, kan man deretter innføre disse inn i gjaerverten. Slekten og spesies av gjær er ikke kritisk. Eksempler på gjaerverter er Kluyveromyces og Saccharomyces. Innføringsmåten er konvensjonell, da det eksisterer mange forskjellige måter å innføre DNA inn i gjaerverten på. Se for eksempel Hinnen et al., Proe. Acad. Nati. Sei. USA
(1978) 75:1919-1933 eller Das et al., J. Bacteriol. (1984) 158:1165-1167 eller Stinchcomb et al., EPA 0 045 573. De resulterende transformantene kan deretter bli latt vokse i et egnet næringsmedium, hvor hensiktsmessig selektivt trykk blir opprettholdt på transformantene. Når ekspresjonen er induser-bar, kan man la gjæren vokse til høy tetthet og deretter indusere ekspresjonen. I de tilfellene hvor en vesentlig mengde av produktet kan bli opprettholdt i periplasma-området, kan man frigjøre produktet ved behandling av gjærcellene med et enzym såsom zymolase eller lyticase.
Produktet kan bli høstet på en hvilken som helst hensiktsmessig måte, innbefattende rensing av proteinet ved kromato-grafi, elektroforese, dialyse, oppløsningsmiddel-oppløsnings-middelekstraksjon, osv.
Følgende fremgangsmåte kan bli utført for å tilveiebringe gener som koder for a-faktorene fra Kluyveromyces spesies-stammene forskjellig fra K. lactis-stammen som er eksempli-fisert nedenfor. En radioaktivt merket oligonukleotidprobe som har en av strukturene som er ført opp i figur 1 blir fremstilt og anvendt for å føre spaltinger av genomisk DNA inn i plasmid og å anvende disse plasmidene for å transformere E. coli eller andre bakterielle stammer for å oppnå et plasmid-bibliotek. DNA fra koloniene kan deretter hensiktsmessig bli hybridisert til proben på nitrocellulosefiltrene.
DNA-segmentene identifisert ved hybridisering til probene identifisert ovenfor blir deretter spaltet med forskjellige restriksjonsenzymer og de resulterende fragmentene blir analysert ved Southern blot eller lignende analysemetoder ved anvendelse av de samme hybridiseringsprobene for å identifisere restriksjonsfragmentene med en størrelse som er egnet for DNA-sekvensanalyse. Identifiserte fragmenter blir deretter renset og klonet ved anvendelse av hensiktsmessige vektorer slik at tilstrekkelig DNA kan bli fremstilt for DNA-sekvensanalyse .
Ved anvendelse av disse teknikkene, kan Kluyveromyces a-faktorgener bli tilveiebragt fra stammer som er forskjellige fra de som er spesifikt identifisert heri.
I henhold til hensikten med oppfinnelsen, kan man tilveiebringe utskilling av en mengde forskjellige polypeptider, for å øke produktutbyttet, forenkle rensing, minimalisere degradering av det ønskede produktet og forenkle prosessering, utstyr, og konstruksjonsnødvendigheten. Anvendelse av næringsmidler basert på produktiviteten kan bli forsterket, slik at man oppnår mere økonomisk og mere effektiv produksjon av polypeptidene. Anvendelse av gjær har mange fordeler når det gjelder unngåing av endotoksiner, som kan være tilstede med prokaryoter og anvending av kjente teknikker, som er blitt utviklet for gjær over lengre tid, og teknikkene innbefatter isolering av gjærprodukter.
Følgende eksempler illustrerer oppfinnelser ytterligere.
EKSEMPLER
Identifikasjon og isolasjon av K. lactis a- faktor
Biologiske analyser av kultursupernatanter ble utført som beskrevet Julius et al., Cell (1983) 32:839; ved anvendelse av S. cerevisiae Mat a sst2-3 stamme RC687 som teststamme. K. lactis stamme CBS 141(a) ble latt vokse i et medium bestående av 0, 5% glukose, 0,17$ gjærnitrogenbase uten ammoniumsulfat (Difco), 0,002$ ammoniumsulfat. Etter fjerning av cellene ved sentrifugering, ble eddiksyre tilsatt til kultursupernatanten til en konsentrasjon på 0,1 M og kultursupernatanten ble sendt gjennom en Bio-Rex 70 kolonne (Biorad). Kolonnen ble vasket med 0,1 M eddiksyre, og deretter ble a-faktoren eluert med 80% EtOH/10 mM HC1. Eluatet ble fordampet til tørrhet og deretter løst opp i 0, 1% TFA/20% acetonitril og applisert på en revers-fase HPLC guard-kolonne. Kolonnen ble trinnvis vasket med oppløsninger inneholdende 0, 1% TFA og 20%, 40%, b0% og 80% acetonitril. b0%- fraksjonen, inneholdende a-faktoraktiviteten, ble deretter applisert på en analytisk C-18 HPLC kolonne og eluert med en gradient bestående av 20% til 80% acetonitril i 0, 1% TFA. Fraksjonene ble samlet og analysert for a-faktoraktivitet. Fraksjonene inneholdende a-faktoren ble tørket og utsatt for aminosyresekvensanalyse ved anvendelse av Applied Biosystems gassfase-proteinsekvensator modell 470A koblet til en 120A PTH-analysator-modell.
Hybridisasjonsscreening av plasmidbibliotekene.
Blandinger av oligonukleotider ble merket ved anvendelse av 7 [<32>P]-ATP og T4 polynukleotid-kinase. Disse oligonukleotid-probene ble anvendt for å probe Southern blot eller bakterielle kolonier ved 42° C i den følgende hybridiseringsoppløs-ningen: 4xSSC, 50 mM KH2P04 pH 7, 1% sarkosyl, 10% dekstransulf at, 200 jjg/ml sonikert, denaturert laksesperm DNA. Filtrene ble vasket i 2xSSC, 0, 1% SDS ved 42°C.
Et plasmidbibliotek i kloningsvektoren pJS109 (andre standard kloningsvektorer kan bli anvendt såsom pUC18 og pBR322 istedenfor pJS109), inneholdende innskudd som resulterer fra en begrenset Sau3AI spalting av genomisk DNA fra K. lactis-stamme SD11 (a trpl l_ac4), størrelse-fraksjonert for å rense fragmentene >5000 bp, ble screenet med disse probene ved utsåing av transformantene til E. coli stamme HB101 i en tetthet på 500-2000 kolonier pr. 80 mm skål L-agar inneholdende 100 jag/ml ampicillin. DNA ble overført fra koloniene til nitrocellulosefiltrene og disse filtrene ble hybridisert som beskrevet ovenfor. Områdene på de opprinnelige skålene som korresponderer med områdene med hybridiseringssignalene på filtrene ble plukket og på nytt utsådd og deretter på nytt testet ved hybridisering for å isolere enkelte kolonier med plasmider som inneholder hybridiseringssekvensene. Positive kolonier ble videre testet ved Southern blot analyse av DNA som var renset fra små kulturer.
Plasmider renset fra hybridiseringspositive kolonier ble spaltet med forskjellige restriksjonsenzymer og de resulterende fragmentene ble analysert ved Southern blot analyser ved anvendelse av de samme hybridiseringsprobene for å identifisere restriksjonsfragmentene med størrelser som egner seg for DNA-sekvensanalyse. Fragmentene som dermed ble identifiserte ble renset ved agarosegelelektroforese og klonet inn i hensiktsmessige MP18 og MP19 vektorer og DNA-sekvensanalyse ble utført.
Chymosinanalvser av kultursupernatantene
Cellene ble fjernet fra kulturene ved sentrifugering og de resulterende supernatantene ble surgjort til pH 2 ved tilsetting av 1 M H2SO4 og inkubert i 2 timer ved romtempera-tur. Oppløsningene ble deretter nøytralisert til pH 6 ved tilsetting av 2 M Tris base. Et volum på 50 pl av den hensiktsmessige fortynningen ble tilsatt til 200 pl av en suspensjon av 12% ikke-fet tørrmelk i 10 mM CaCl2 og inkubert ved 37°C helt til en klump ble dannet. En enhet chymosin-aktivitet er definert som mengden av aktivt chymosin som er nødvendig for å produsere en klump i løpet av 10 min. under disse betingelsene.
Resultater
De første 10 aminosyrene til K. lactis a-faktoren viste en bestemt homologi til den fra S. cerevisiae, med 6 identiske residier. Denne sekvensen er vist nedenfor:
Trp-Ser-Trp-Ile-Thr-Leu-Arg-Pro-Gly-Gln.
Denne proteinsekvensen ble anvendt for å konstruere et sett av oligonukleotider avledet til å være komplementær til det strukturelle genet som vist i figur 1. Oligonukleotider innbefattende alle mulige kodoner for et segment til a-faktor peptidet ble syntetisert som to grupperinger på 96 og 48 forskjellige molekyler.
Disse to grupperingene ble merket radioaktivt ved anvendelse av "y-[<32>P]-ATP og T4 polynukleotid-kinase og hver av disse ble anvendt for å probe et Southern blot av en restriksjons-spalting av K. lactis DNA. Gruppering 2 viste seg å tilveiebringe sterk hybridisering til et enkelt fragment i flere forskjellige spaltinger. Gruppering 2 ble dermed valgt for å screene plasmidbiblioteker av K. lactis genomt DNA.
Anvendelse av disse probene for å screene plasmidbibliotekene resulterte i isolasjon av et antall hybridiseringskloner. DNA-sekvensanalyse av en av disse klonene, afkl8b, viste at denne koder for et a-faktor-relatert peptid som ligner veldig mye på forløperen til S. cerevisiae a-faktor-peptidet. Det hybridiserende segmentet viste seg å være på et Pstl-EcoRI fragment på omtrent 1000 bp. Sekvensen av dette fragmentet er vist i figur 2.
Sammenligning av de avledete a-faktor forløperne til dette fragmentet er vist i figurene 3 og 4. Disse viser at de har ledersekvenser (aminosyrene 1-83 i figur 3) med identisk lengde med betraktelig sekvenshomologi. K. lactis forløperen inneholder derimot bare to seter for tilsetting av N-bundete karbohydratkjeder (figur 4). Spacerene til K. lactis repeterende sekvensene er i tillegg lengre enn de repeterende sekvensene til S. cerevisiae og viser en mere uensartet sekvens med X-Ala/Pro mønsteret istedenfor Glu/Asp-Ala sekvensene som finnes i S. cerevisiae. En sammenligning av DNA-sekvensene (figur 5) viser også en sterk grad av homologi i den kodende regionen.
En serie plasmider som er vist i figur 6 ble konstruert for å tilveiebrigne en fusjon av K. lactis a-faktor lederen til prochymosin uttrykt under transkripsjonen kontroll av en sterk promoter. Først ble et 673 bp SspI-EcoRI fragment fra afkl8b modifisert ved fylling av EcoRI overhenget med Klenow-enzym og tilsetting av Bglll-linkere til de butte endene. Dette fragmentet ble deretter satt inn i Bglll-setet som knytter promoteren og terminatorregionene til S. cerevisiae glyceraldehyd-3-fosfat dehydrogenasegenet (GAP) sammen. Denne kassetten ble klonet som et BamHI-fragment i pUC18, resulterende i pAB 307.
Fusjon av sekvensene som koder for a-lederen og bovint prochymosin ble deretter utført. Først ble pAB307 spaltet med Ncol og de kohesive endene ble gjort butte ved behandling med mungbønne-nuklease. Det resulterende produktet ble deretter spaltet med Sali. Til denne ble et EcoRV-Sall fragment på 2000 bp ligert (sekvensene vist i figur 7 og 8) inneholdende sekvenser som koder for prochymosin og S. cerevisiae GAP transkripsjonen termineringsregion. Dette fragmentet var avledet fra plasmid pJSlll hvori en Xbal-BamHI-adaptor var blitt satt til 5'-enden av et fragment inneholdende prochymosin cDNA festet til S. cerevisiae GAP transkripsjonen termineringsregion. Denne ligeringsblandingen ble anvendt for å transformere E. coli stamme HB101 og en transformant som inneholder pAB309 ble isolert. Sekvensene rundt forbindelses-punktet til denne fusjonen er vist i figur 7, og sekvensen til hele BamHI-Sall innskuddet til pAB309 er vist i figur 8.
For å tillate transformering av K. lactis-stammene, ble et 3560 bp Hindlll fragment inneholdende E. coli kanamycin-resistensgen under transkripsjonen kontroll av S. cerevisae ADH1 promoteren satt inn innenfor 3'-regionen til K. lactis LAC4-genet satt inn i pAB309 for å tilveiebringe plasmid pAB312. Screening for innskuddet ble tilveiebragt ved restriksjonsspaltingsanalyse og undersøkt for riktig orient-ering.
3560 bp HindIII-fragmentet var avledet fra plasmid pGB901, og et diagram er vist i figur 9. Plasmid pGB901 ble konstruert ved ligering av (1) 3,6 kb Xbal-HaelI-fragment inneholdende laktasepromoteren til omtrent posisjon -90 fra laktase ATG-startkodonet isolert fra pUCla56 (beskrevet nedenfor), (2) et Haell-Sall-fragment med følgende nukleotidsekvens:
(3) et 5,1 kb SalI-Xbal-fragment som koder for prochymosin og et gen som utviser resistens mot antibiotika G418 fra pGB900 (beskrevet nedenfor), og (4) pUC19 spaltet med Xbal.
I løpet av konstruksjonen av plasmidet ble CG-sekvensen fjernet fra Haell-setet, og dannet dermed et Hindlll-sete ved denne posisjonen.
Plasmid pUCla56 ble konstruert som følger. Kromosomalt DNA ble isolert fra K. lactis-stamme CBS 2360, spaltet med Xhol, og separert i henhold til størrelse på en sukrosegradient. Fraksjoner som inneholdt laktasegenet ble detektert med en LAC4-probe etter applisering av DNAet på et nitrocellulose-filter. DNA som inneholdt LAC4-genet ble klonet inn i Xhol-setet til plasmid pPA153-215 (P.M. Andreoli, Mol. Gen. Genet.
(1985) 199:372-380). Dette tilveiebragte plasmid pPA31. Et Xbal-fragment fra pPA31 inneholdende laktasegenet ble subklonet inn i Xbal-setet til pUC19 (Yanisch-Perron et al., Gene (1985) 33:103-119) som tilveiebringer plasmid pUCla56.
Plasmid pGB900 ble konstruert ved ligering av (1) et 3,6 kb Hindlll-Xbal-fragment fra plasmid pGBTeG418 (vist i figur 10 og beskrevet nedenfor) inneholdende det G418 resistensgenet og (2) et Sal I-Hindi11-fragment fra plasmid pGB123 inneholdende prochymosingenet i pUC19 spaltet med Sali og Xbal. Plasmid pGB123 er beskrevet i Europa patentsøknad EPA 0 096 430.
Plasmid pGBTeG418 (figur 10) består av plasmid pPA215 som beskrevet av Andreoli, Mol. Gen. Genet. (1985) 199:372-380) og et 5,6 kb fragment bestående av det 3,7 kb BamHI K. lactis laktase-terminator-fragmentet (Breunig et al., Nucleic Acids Res. (1984) 12:2327-2341) og Tn5-genet (Reiss et al., EMBO J.
(1984) 3:3317-3322) som medfører resistens til G418 under ledelse av promoter alkohol-dehydrogenase I (ADHI) fra gjær, slik som det som er beskrevet av Bennetzen og Hall, J. Biol. Chem. (1982) 257:3018-3025). Plasmid pGBTeG418 ble deponert til CBS i februar 26, 1987 under nummer CBS 184.87.
Plasmid pAB312 ble spaltet med EcoRV (for å tilveiebringe integrering til LAC4-regionen til K. lactis-genomet) og ble deretter anvendt for å transformere K. lactis-stamme 2UV21 (a ura3 trpl Iac4 [kil_°_] ) til G418 resistens ved anvendelse av LiCl-teknikken beskrevet av Das et al., J. Bacteriol. (1984) 158: 1165-1167).
Et antall av disse transformantene, samt en ikke-transformert kontrollstamme, ble latt vokse i 36 t i 1 ml medium bestående av 1% gjærekstrakt, 2% pepton, 2% glukose, 0, 17% gjærnitrogenbase, 50 pg/ml tryptofan og 50% pg/ml uracil. Kultursupernatantene ble deretter analysert for chymosin-aktivitet etter syreaktivering. Alle transformantene viste seg å skille ut mellom 100 og 120 enheter/ml aktiverbar chymosin.
Fjerning av spacer- kodoner ved in vitro mutagenese
Et 1900 bp Sacl-Hindlll fragment ble isolert fra pAB309 og klonet inn i MP19 (Yanisch-Perron et al., Gene (1985) 33:103). Enkelt-trådet fag DNA ble fremstilt og anvendt som templat for in vitro mutagenese med oligonukleotidprimerne vist i figur 11. M13 fag MP19/akll.5 og MP19/akl2.2 ble preparert ved anvendelse av Primer #1 og Primer #2, respek-tivt .
Dobbelttrådet RF DNA ble preparert fra disse fagene, og 1100 bp SacI-StuI-fragmenter ble isolert fra hver. Disse fragmentene ble ligert til et 7100 bp SacI-Stul-fragment fra pAB312. De resulterende plasmidene pAB313 og pAB314 ble isolert med de sekvensforandringene som er illustrert i figur 12.
Plasmidene pAB313 og pAB314 ble anvendt for å transformere stammen 2UV21 til G418-resistens. Kulturene av transformantene 2UV21::pAB312, 2UV21::pAB313 og 2UV21::pAB314 ble dyrket og kultursupernatantene ble analysert for chymosinaktivitet som ovenfor. Resultatene av disse analysene er rapportert i tabell 1, nedenfor.
Hver av transformantene viste seg å utskille et enkelt prochymosin-relatert spesies bestemt ved SDS-polyakrylamidgelelektroforese av trikloreddiksyre-utfelte kultursupernatanter. Prochymosin-relatert protein utskilt av pAB312 transformantene viste seg å ha en noe høyere molekylvekt enn de som ble utskilt fra pAB313 og pAB314 transformantene bestemt ut i fra den elektroforetiske mobiliteten.
Celle-pelletene fra stammene ovenfor ble analysert for chymosin-aktivitet og ble funnet å inneholde mindre enn 2% av aktiviteten som ble målt i supernatantene. Kluyveromyces a-faktoren er omtrent 98% effektiv når det gjelder leding av utskillingen av prochymosin fra Kluyveromyces lactis.
Hovedspesies utskilt fra KRN303-1 og KRN304-4 ble renset ved preparativ SDS-polyakrylamidgelelektroforese og utsatt for gassfase-aminosyresekvensanalyse. N-terminalsekvensene til disse spesies er gitt nedenfor:
Disse resultatene indikerer at prochymosin-relaterte spesies utskilt fra KRN303-1 ikke har vært utsatt for noen prosessering av den amino-terminale spacer-sekvensen, mens spesies utskilt fra KRN304-4 har den autentiske modne prochymosin-aminoterminus.
Følgende organismer ble deponert til American Type Culture Collection 30. juni, 1987: HB101 pAB307, ATCC aksesjonsnr. 67454; HB101 pAB312, ATCC aksesjonsnr. 67455.
Claims (18)
1.
DNA-konstruksjon, karakterisert ved at den koder for et protein med en aminosyresekvens som omfatter en funksjonell sekresjons-ledende Kluyveromyces a-faktor ledersekvens bundet til en heterolog polypeptidsekvens, et gjærprosesseringssignal for prosessering av nevnte protein til nevnte heterologe polypeptid mellom nevnte ledersekvens og nevnte heterologe polypeptidsekvens og en gjaerpromoter ved 5'-enden av nevnte ledersekvens.
2.
DNA-sekvens ifølge krav 1, karakterisert ved a t nevnte ledersekvens er full-lengde ledersekvensen til villtype Klu<y>verom<y>ces a-faktor.
3.
DNA-sekvens ifølge krav 2, karakterisert ved at nevnte ledersekvens er ledersekvensen vist i figur 2.
4.
DNA-sekvens ifølge krav 1, karakterisert ved
at nevnte ledersekvens er et funksjonelt fragment av full-lengde ledersekvensen til villtype Kluyveromyces a-faktor.
5 .
DNA-sekvens ifølge krav 4, karakterisert ved at nevnte full-lengde sekvens er ledersekvensen vist i figur 2.
6.
DNA-sekvens ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte Kluyveromyces a-faktor ledersekvens er en Kluyveromyces lactis a-faktor ledersekvens.
7 .
DNA-sekvens ifølge krav 1, karakterisert ved at gjærprosesseringssignalet omfatter et basisk dipeptid spaltingssete og en spacer.
8.
DNA-sekvens ifølge krav 1, karakterisert ved at gjærprosesseringssignalet innbefatter et basisk dipeptid spaltingssete som er direkte bundet til N-terminus til nevnte heterologe polypeptid og mangler en spacer.
9.
DNA-sekvens ifølge krav 7 eller 8, karakterisert ved at nevnte basiske dipeptid spaltingssete omfatter minst en arginin.
10.
DNA-sekvens ifølge krav 9, karakterisert ved at nevnte basiske dipeptid spaltningssete er lysin-arginin eller arginin-arginin.
11.
DNA-konstruksjon ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte gjærpromoter er en a-faktor promoter eller en GAP promoter, i det nevnte Kluyveromyces a-faktor ledersekvens er en Kluyveromyces lactis a-faktor ledersekvens, og nevnte Kluyveromyces lactis a-faktor ledersekvens er koblet til nevnte heterologe polypeptidsekvens via et gjærprosesseringssignal som omfatter et lycin-arginin spaltningssete og en spacer.
12.
DNA-konstruksjon ifølge krav 11, karakterisert ved at nevnte heterologe polypeptid er prochymosin.
13.
DNA-konstruksjon ifølge krav 1, karakterisert ved at nevnte gjærpromoter er en a-faktor promoter eller en GAP promoter, nevnte Kluyveromyces a-faktor ledersekvens er en Kluyveromyces lactis a-faktor ledersekvens og nevnte Kluyveromyces lactis a-faktor ledersekvens er koblet til nevnte heterologe polypeptid sekvens via et gjærprosesseringssignal som innbefatter et. lysin-arginin spaltningssete koblet direkte til nevnte heterologe polypeptid og mangler en spacer.
14.
DNA-konstruksjon ifølge krav 13, karakterisert ved at nevnte heterologe polypeptid er prochymosin.
15.
Ekspresjonsvektor, karakterisert ved at den omfatter et replikativt eller integrativt system for å tilveiebringe stabil opprettholdelse i gjær og en DNA-konstruksjon i henhold til et hvilket som helst av kravene 1 til 14.
16.
Fremgangsmåte til fremstilling av et heterologt polypeptid i gjær, karakterisert ved at den omfatter: dyrking av gjær inneholdende en ekspresjonsvektor ifølge krav 15 i dyrkningsmedium under betingelser hvorved nevnte heterologe polypeptid blir uttrykt i og utskilt av nevnte gjær som et pro-polypeptid som i det minste blir delvis prosessert til nevnte heterologe polypeptid.
17.
Fremgangsmåte for fremstilling av et heterologt polypeptid i gjær ifølge krav 16, karakterisert ved at nevnte heterologe polypeptid blir utskilt under ledelse av en Kluyveromyces a-faktor ledersekvens.
18.
Fremgangsmåte ifølge krav 16 og 17, karakterisert ved at nevnte Kluyveromyces a-faktor ledersekvens er en Kluyveromyces lactis a-faktor ledersekvens.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/078,551 US5010182A (en) | 1987-07-28 | 1987-07-28 | DNA constructs containing a Kluyveromyces alpha factor leader sequence for directing secretion of heterologous polypeptides |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO883346D0 NO883346D0 (no) | 1988-07-28 |
NO883346L NO883346L (no) | 1989-01-30 |
NO180381B true NO180381B (no) | 1996-12-30 |
NO180381C NO180381C (no) | 1997-04-09 |
Family
ID=22144759
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO883346A NO180381C (no) | 1987-07-28 | 1988-07-28 | DNA-konstruksjoner inneholdende en Kluyveromyces alfa-faktor ledersekvens for utskillelse av heterologe polypeptider, ekspresjonsvektor og fremgangsmåte til fremstilling av et heterologt polypeptid i gjær |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5010182A (no) |
EP (1) | EP0301669B1 (no) |
JP (1) | JP2680054B2 (no) |
KR (1) | KR970004940B1 (no) |
CN (1) | CN1045620C (no) |
AT (1) | ATE90727T1 (no) |
AU (1) | AU623860B2 (no) |
CA (1) | CA1327762C (no) |
DE (1) | DE3881776T2 (no) |
DK (1) | DK175365B1 (no) |
ES (1) | ES2058238T3 (no) |
FI (1) | FI101232B (no) |
HU (1) | HU213015B (no) |
IE (1) | IE62261B1 (no) |
IL (1) | IL87255A (no) |
NO (1) | NO180381C (no) |
NZ (1) | NZ225596A (no) |
PT (1) | PT88115B (no) |
ZA (1) | ZA885535B (no) |
Families Citing this family (160)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1340772C (en) | 1987-12-30 | 1999-09-28 | Patricia Tekamp-Olson | Expression and secretion of heterologous protiens in yeast employing truncated alpha-factor leader sequences |
EP0763543A2 (en) | 1988-09-02 | 1997-03-19 | The Rockefeller University | A method for preparing an inflammatory cytokine (MIP-2) and diagnostic and therapeutic applications for the cytokine or its antibody |
GB9015825D0 (en) * | 1990-07-18 | 1990-09-05 | Ciba Geigy Ag | In vitro processing of fusion proteins |
WO1994004695A1 (en) * | 1992-08-14 | 1994-03-03 | The Rockefeller University | Herpesviral defective vector with rat preproenkephalin gene promoter |
US6500645B1 (en) | 1994-06-17 | 2002-12-31 | Novo Nordisk A/S | N-terminally extended proteins expressed in yeast |
IL114160A (en) * | 1994-06-17 | 2006-12-31 | Novo Nordisk As | Dna constructs encoding heterologous proteins and processes for the heterologous protein production in yeast |
US6998116B1 (en) | 1996-01-09 | 2006-02-14 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand |
US6046048A (en) * | 1996-01-09 | 2000-04-04 | Genetech, Inc. | Apo-2 ligand |
US20050089958A1 (en) * | 1996-01-09 | 2005-04-28 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand |
US6030945A (en) * | 1996-01-09 | 2000-02-29 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand |
US20020165157A1 (en) * | 1996-04-01 | 2002-11-07 | Genentech, Inc. | Apo-2LI and Apo-3 polypeptides |
US6469144B1 (en) * | 1996-04-01 | 2002-10-22 | Genentech, Inc. | Apo-2LI and Apo-3 polypeptides |
US6159462A (en) * | 1996-08-16 | 2000-12-12 | Genentech, Inc. | Uses of Wnt polypeptides |
US5851984A (en) * | 1996-08-16 | 1998-12-22 | Genentech, Inc. | Method of enhancing proliferation or differentiation of hematopoietic stem cells using Wnt polypeptides |
US6462176B1 (en) * | 1996-09-23 | 2002-10-08 | Genentech, Inc. | Apo-3 polypeptide |
US20020102706A1 (en) * | 1997-06-18 | 2002-08-01 | Genentech, Inc. | Apo-2DcR |
US6265186B1 (en) | 1997-04-11 | 2001-07-24 | Dsm N.V. | Yeast cells comprising at least two copies of a desired gene integrated into the chromosomal genome at more than one non-ribosomal RNA encoding domain, particularly with Kluyveromyces |
US6342369B1 (en) * | 1997-05-15 | 2002-01-29 | Genentech, Inc. | Apo-2-receptor |
US20100152426A1 (en) * | 1997-05-15 | 2010-06-17 | Ashkenazi Avi J | Apo-2 receptor fusion proteins |
EP1860187B1 (en) * | 1997-05-15 | 2011-07-13 | Genentech, Inc. | Apo-2 receptor |
CA2293724C (en) | 1997-06-05 | 2010-02-02 | Xiaodong Wang | Apaf-1, the ced-4 human homolog, an activator of caspase-3 |
JP2002508663A (ja) | 1997-06-18 | 2002-03-19 | ジェネンテク,インコーポレイテッド | Apo−2DcR |
DK1009817T3 (da) * | 1997-08-26 | 2010-01-18 | Genentech Inc | RTD-receptor |
US20030175856A1 (en) * | 1997-08-26 | 2003-09-18 | Genetech, Inc. | Rtd receptor |
US20040231011A1 (en) * | 2001-06-28 | 2004-11-18 | Genentech, Inc. | DcR3 polypeptide, a TNFR homolog |
DE69839401T2 (de) | 1997-09-18 | 2009-05-07 | Genentech Inc., San Francisco | Dcr3 polypeptid, ein tnfr homolog |
IL135051A0 (en) | 1997-10-10 | 2001-05-20 | Genentech Inc | Apo-3 ligand polypeptide |
IL135607A0 (en) | 1997-10-29 | 2001-05-20 | Genentech Inc | Wnt-1 inducible genes |
CA2306183A1 (en) | 1997-10-29 | 1999-05-06 | Genentech, Inc. | Wnt-1 induced secreted polypeptides: wisp-1, -2 and -3 |
ATE410512T1 (de) | 1997-11-21 | 2008-10-15 | Genentech Inc | Plättchen-spezifische antigene und deren pharmazeutische verwendung |
US7192589B2 (en) | 1998-09-16 | 2007-03-20 | Genentech, Inc. | Treatment of inflammatory disorders with STIgMA immunoadhesins |
WO1999036535A1 (en) | 1998-01-15 | 1999-07-22 | Genentech, Inc. | Apo-2 ligand |
US6727079B1 (en) * | 1998-02-25 | 2004-04-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | cDNA encoding a gene BOG (B5T Over-expressed Gene) and its protein product |
NZ525914A (en) | 1998-03-10 | 2004-03-26 | Genentech Inc | Novel polypeptides and nucleic acids encoding the same |
DK1064382T3 (da) | 1998-03-17 | 2008-12-08 | Genentech Inc | Homologe polypeptider til VEGF og BMP1 |
EP1865061A3 (en) | 1998-05-15 | 2007-12-19 | Genentech, Inc. | IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
EP3112468A1 (en) | 1998-05-15 | 2017-01-04 | Genentech, Inc. | Il-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
PT1076703E (pt) | 1998-05-15 | 2007-10-10 | Genentech Inc | ''utilizações terapêuticas de polipéptido homólogos de il-17'' |
ES2395693T3 (es) * | 1998-06-12 | 2013-02-14 | Genentech, Inc. | Anticuerpos monoclonales, anticuerpos que reaccionan de forma cruzada y procedimiento para la fabricación de los mismos |
US20020172678A1 (en) | 2000-06-23 | 2002-11-21 | Napoleone Ferrara | EG-VEGF nucleic acids and polypeptides and methods of use |
EP2330198A1 (en) | 1998-12-23 | 2011-06-08 | Genentech, Inc. | IL-1 related polypeptides |
EP1978029A3 (en) | 1999-06-15 | 2008-10-15 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids endoding the same |
CA2389317A1 (en) | 1999-10-20 | 2001-04-26 | Frederic J. De Sauvage | Modulation of t cell differentiation for the treatment of t helper cell mediated diseases |
AU2055401A (en) | 1999-12-01 | 2001-06-12 | Genentech Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
EP1897947B1 (en) | 1999-12-23 | 2012-01-18 | Genentech, Inc. | IL-17 homologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
CA2395617C (en) | 1999-12-30 | 2012-10-30 | Genencor International, Inc. | Trichoderma reesei xylanase |
ATE424457T1 (de) * | 2000-01-13 | 2009-03-15 | Genentech Inc | Menschliche stra6 polypeptide |
US6992081B2 (en) | 2000-03-23 | 2006-01-31 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Compounds to treat Alzheimer's disease |
AU2001252958A1 (en) | 2000-03-23 | 2001-10-03 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods to treat alzheimer's disease |
DE60133884D1 (de) * | 2000-03-24 | 2008-06-19 | Genencor Int | Herstellung von sekretierten proteinen durch rekombinante eukaryotische zellen |
WO2004043361A2 (en) | 2002-11-08 | 2004-05-27 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of natural killer cell related diseases |
EP2168980A1 (en) | 2000-06-23 | 2010-03-31 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogensis |
EP2792747A1 (en) | 2000-06-23 | 2014-10-22 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of disorders involving angiogenesis |
US20030096864A1 (en) * | 2000-06-30 | 2003-05-22 | Fang Lawrence Y. | Compounds to treat alzheimer's disease |
ATE302751T1 (de) | 2000-06-30 | 2005-09-15 | Elan Pharm Inc | Verbindungen zur behandlung der alzheimerischen krankheit |
US6846813B2 (en) | 2000-06-30 | 2005-01-25 | Pharmacia & Upjohn Company | Compounds to treat alzheimer's disease |
PE20020276A1 (es) | 2000-06-30 | 2002-04-06 | Elan Pharm Inc | COMPUESTOS DE AMINA SUSTITUIDA COMO INHIBIDORES DE ß-SECRETASA PARA EL TRATAMIENTO DE ALZHEIMER |
DE60136281D1 (de) | 2000-08-24 | 2008-12-04 | Genentech Inc | Methode zur inhibierung von il-22 induziertem pap1 |
EP1944317A3 (en) | 2000-09-01 | 2008-09-17 | Genentech, Inc. | Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same |
US6673580B2 (en) * | 2000-10-27 | 2004-01-06 | Genentech, Inc. | Identification and modification of immunodominant epitopes in polypeptides |
US20070160576A1 (en) | 2001-06-05 | 2007-07-12 | Genentech, Inc. | IL-17A/F heterologous polypeptides and therapeutic uses thereof |
KR100607612B1 (ko) | 2001-06-20 | 2006-08-02 | 제넨테크, 인크. | 종양의 진단 및 치료를 위한 방법 및 이를 위한 조성물 |
US6982264B2 (en) * | 2001-06-27 | 2006-01-03 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Substituted alcohols useful in treatment of Alzheimer's disease |
PL368972A1 (en) | 2001-08-29 | 2005-04-04 | Genentech, Inc. | Bv8 nucleic acids and polypeptides with mitogenic activity |
EP2153843B1 (en) | 2001-09-18 | 2012-08-15 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
US20030228305A1 (en) | 2002-01-02 | 2003-12-11 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
EP2388265A1 (en) | 2002-02-22 | 2011-11-23 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
EP1571968A4 (en) | 2002-04-16 | 2007-10-17 | Genentech Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR DIAGNOSIS AND TREATMENT OF TUMORS |
EP2305710A3 (en) | 2002-06-03 | 2013-05-29 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
JP2005528905A (ja) * | 2002-06-07 | 2005-09-29 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 腫瘍の診断と治療のための組成物と方法 |
EP2383278A1 (en) | 2002-07-08 | 2011-11-02 | Genentech, Inc. | Method to determine B cell mediated diseases |
WO2004024072A2 (en) | 2002-09-11 | 2004-03-25 | Genentech, Inc. | Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
JP5401001B2 (ja) | 2002-09-11 | 2014-01-29 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 免疫関連疾患の治療のための新規組成物と方法 |
EP2444409A2 (en) | 2002-09-16 | 2012-04-25 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
US20070042945A1 (en) | 2002-09-25 | 2007-02-22 | Genentech, Inc. | Nouvelles compositions et methods de traitement du psoriasis |
EP1576137A4 (en) | 2002-10-29 | 2010-06-30 | Genentech Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING DISEASES RELATED TO THE IMMUNE SYSTEM |
US20070048301A1 (en) | 2002-11-26 | 2007-03-01 | Bodary-Winter Sarah C | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
ATE494367T1 (de) | 2002-12-18 | 2011-01-15 | Hoffmann La Roche | Rekombinante desoxyribonuclease i aus rinder- pankreas mit hoher spezifischer aktivität |
JP4912144B2 (ja) | 2003-03-12 | 2012-04-11 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 造血促進のためのbv8及び/又はeg−vegfの使用 |
CN1798575A (zh) | 2003-04-04 | 2006-07-05 | 健泰科生物技术公司 | 高浓度抗体和蛋白制剂 |
CN1802386B (zh) | 2003-06-12 | 2010-12-15 | 伊莱利利公司 | Glp-1类似物融合蛋白质 |
PL2784084T3 (pl) | 2003-07-08 | 2020-03-31 | Genentech, Inc. | Przeciwciała antagonistyczne wobec heterologicznych polipeptydów IL-17A/F |
WO2005019258A2 (en) | 2003-08-11 | 2005-03-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
DE10342794A1 (de) * | 2003-09-16 | 2005-04-21 | Basf Ag | Sekretion von Proteinen aus Hefen |
SI2161283T1 (sl) | 2003-11-17 | 2014-10-30 | Genentech, Inc. | Sestavki, ki obsegajo protitelesa proti CD79b, konjugirana na sredstvo, ki inhibira rast, ali na citotoksično sredstvo, in postopki za zdravljenje tumorja hematopoetskega izvora |
CA2550447A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-07-07 | The Regents Of The University Of California | Methods and materials for assessing prostate cancer therapies |
NZ550102A (en) * | 2004-02-24 | 2010-10-29 | Univ California | Methods and materials for assessing prostate cancer therapies and compounds (thiohydantoine derivatives) |
US7709517B2 (en) | 2005-05-13 | 2010-05-04 | The Regents Of The University Of California | Diarylhydantoin compounds |
AU2006255686A1 (en) | 2005-06-06 | 2006-12-14 | Genentech, Inc. | Transgenic models for different genes and their use for gene characterization |
CA2619577A1 (en) | 2005-08-15 | 2007-02-22 | Genentech, Inc. | Gene disruptions, compositions and methods relating thereto |
JP4860702B2 (ja) * | 2005-10-21 | 2012-01-25 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | ポリペプチドのリコンビナント発現のための方法 |
US20090293137A1 (en) | 2005-11-21 | 2009-11-26 | Genentech, Inc. | Novel Gene Disruptions, Compositions and Methods Relating Thereto |
EP1969003B8 (en) | 2005-12-14 | 2010-11-10 | Hermo Pharma Ltd. | Uses of a NEUROTROPHIC FACTOR PROTEIN |
US20080311107A1 (en) | 2006-02-17 | 2008-12-18 | Genetech, Inc. | Novel Gene Disruptions, Compositions and Methods Relating Thereto |
PT2656841T (pt) | 2006-03-27 | 2016-09-28 | Univ California | Modulador do recetor de androgénios para o tratamento de cancro da próstata e doenças associadas ao recetor de androgénios |
KR101600230B1 (ko) | 2006-03-29 | 2016-03-04 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 디아릴티오히단토인 화합물 |
EP2614839A3 (en) | 2006-04-05 | 2015-01-28 | Genentech, Inc. | Method for using BOC/CDO to modulate hedgehog signaling |
EP2082645A1 (en) | 2006-04-19 | 2009-07-29 | Genentech, Inc. | Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto |
JP2010507381A (ja) * | 2006-10-24 | 2010-03-11 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | ポリペプチド製造用の改良されたα因子シグナル・ペプチド |
US20080254512A1 (en) | 2006-11-02 | 2008-10-16 | Capon Daniel J | Hybrid immunoglobulins with moving parts |
WO2008103962A2 (en) | 2007-02-22 | 2008-08-28 | Genentech, Inc. | Methods for detecting inflammatory bowel disease |
PE20090481A1 (es) | 2007-07-16 | 2009-05-18 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-cd79b e inmunoconjugados humanizados y metodos de uso |
CN111499748A (zh) | 2007-07-16 | 2020-08-07 | 健泰科生物技术公司 | 抗cd79b抗体和免疫偶联物及使用方法 |
CN101361968B (zh) | 2007-08-06 | 2011-08-03 | 健能隆医药技术(上海)有限公司 | 白介素-22在治疗脂肪肝中的应用 |
PT2592148T (pt) | 2007-10-12 | 2018-11-12 | Hoffmann La Roche | Expressão proteica de múltiplos ácidos nucleicos |
EP2220050A2 (en) | 2007-10-26 | 2010-08-25 | The Regents Of The University Of California | Diarylhydantoin compounds as androgen receptor modulators |
EP3269737B1 (en) | 2008-01-31 | 2024-06-19 | Genentech, Inc. | Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates and methods of use |
KR101855381B1 (ko) | 2008-04-09 | 2018-05-09 | 제넨테크, 인크. | 면역 관련 질병의 치료를 위한 신규한 조성물 및 방법 |
CR20170001A (es) | 2008-04-28 | 2017-08-10 | Genentech Inc | Anticuerpos anti factor d humanizados |
FI20080326A0 (fi) | 2008-04-30 | 2008-04-30 | Licentia Oy | Neurotroofinen tekijä MANF ja sen käytöt |
JP6132548B2 (ja) | 2009-04-01 | 2017-05-24 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗FcRH5抗体および免疫接合体および使用方法 |
EP2258855A1 (en) | 2009-05-28 | 2010-12-08 | Universität für Bodenkultur Wien | Expression sequences |
EP2488643A4 (en) * | 2009-10-15 | 2013-07-03 | Hoffmann La Roche | CHIMERIC FIBROBLAST GROWTH FACTORS WITH CHANGED RECEPTOR SPECIFICITY |
CN102711826B (zh) | 2009-10-22 | 2017-03-29 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于调控巨噬细胞刺激性蛋白的hepsin活化的方法和组合物 |
WO2011056494A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations |
WO2011056502A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use |
WO2011056497A1 (en) | 2009-10-26 | 2011-05-12 | Genentech, Inc. | Activin receptor type iib compositions and methods of use |
WO2011060246A2 (en) | 2009-11-12 | 2011-05-19 | Genentech, Inc. | A method of promoting dendritic spine density |
PE20121584A1 (es) | 2009-11-30 | 2012-11-29 | Genentech Inc | Composiciones y metodos para el diagnostico y el tratamiento de tumores |
ES2668380T3 (es) | 2010-02-16 | 2018-05-17 | Aragon Pharmaceuticals, Inc. | Moduladores de receptores de andrógenos y sus usos |
AR080243A1 (es) | 2010-02-23 | 2012-03-21 | Genentech Inc | Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento de tumores |
MA34291B1 (fr) | 2010-05-03 | 2013-06-01 | Genentech Inc | Compositions et méthodes de diagnostic et de traitement d'une tumeur |
KR101768118B1 (ko) | 2010-06-25 | 2017-08-14 | 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) | 기도 감염의 치료를 위한 방법 및 약학 조성물 |
CN102380091A (zh) | 2010-08-31 | 2012-03-21 | 健能隆医药技术(上海)有限公司 | 白介素-22在治疗病毒性肝炎中的应用 |
CA2811403A1 (en) | 2010-09-15 | 2012-03-22 | Aligna Technologies, Inc. | Bioproduction of aromatic chemicals from lignin-derived compounds |
EP2782931B1 (en) | 2011-11-23 | 2016-12-14 | F. Hoffmann-La Roche AG | Cd40l expressing mammalian cells and their use |
BR112014025693B1 (pt) | 2012-04-17 | 2021-12-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Método de produção recombinante de um polipeptídeo em uma célula bacteriana |
SI3305285T1 (sl) | 2012-09-26 | 2021-03-31 | Aragon Pharmaceuticals, Inc. | Anti-androgeni za zdravljenje proti kastraciji odpornega ne-metastatskega raka |
HUE033282T2 (en) | 2012-10-29 | 2017-11-28 | Lonza Ag | Expression sequences |
WO2014088934A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods of use |
US9879245B2 (en) | 2012-12-07 | 2018-01-30 | Danisco Us Inc. | Polypeptides having beta-mannanase activity and methods of use |
JOP20200097A1 (ar) | 2013-01-15 | 2017-06-16 | Aragon Pharmaceuticals Inc | معدل مستقبل أندروجين واستخداماته |
SG11201507429TA (en) | 2013-03-15 | 2015-10-29 | Genentech Inc | Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use |
DK3611180T3 (da) | 2013-03-15 | 2022-02-28 | Biomolecular Holdings Llc | Hybrid immunoglobulin indeholdende ikke-peptidyl-binding |
US20160075766A1 (en) | 2013-05-21 | 2016-03-17 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Method for producing antibodies using ovine b-cells and uses thereof |
CN104623637A (zh) | 2013-11-07 | 2015-05-20 | 健能隆医药技术(上海)有限公司 | Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用 |
SG10201807877TA (en) | 2014-03-14 | 2018-10-30 | Daniel Capon | Hybrid immunoglobulin containing non-peptidyl linkage |
US20170211054A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-07-27 | Dansico Us Inc. | Compositions comprising beta mannanase and methods of use |
EP3201332A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-08-09 | Danisco US Inc. | Compositions comprising beta-mannanase and methods of use |
US20170233707A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-08-17 | Danisco Us Inc | Compositions comprising beta-mannanase and methods of use |
EP3201333A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-08-09 | Danisco US Inc. | Compositions comprising beta-mannanase and methods of use |
US20170211053A1 (en) | 2014-09-30 | 2017-07-27 | Danisco Us Inc. | Compositions comprising beta mannanase and methods of use |
WO2016100825A1 (en) | 2014-12-18 | 2016-06-23 | Danisco Us Inc | Engineered multifunctional enzymes and methods of use |
EP3234119A1 (en) | 2014-12-18 | 2017-10-25 | Danisco US Inc. | Engineered multifunctional enzymes and methods of use |
TWI726969B (zh) | 2016-01-11 | 2021-05-11 | 比利時商健生藥品公司 | 用作雄性激素受體拮抗劑之經取代之硫尿囊素衍生物 |
EP4273232A3 (en) | 2016-03-30 | 2024-01-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | B-cell cultivation method |
CN109328069B (zh) | 2016-04-15 | 2023-09-01 | 亿一生物医药开发(上海)有限公司 | Il-22在治疗坏死性小肠结肠炎中的用途 |
CN110121554B (zh) | 2017-01-02 | 2023-08-15 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | B细胞培养方法 |
WO2018152496A1 (en) | 2017-02-17 | 2018-08-23 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of zika virus infection |
EP3615569A1 (en) | 2017-04-25 | 2020-03-04 | The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Antibodies and methods for the diagnosis and treatment of epstein barr virus infection |
JP6978516B2 (ja) | 2017-05-19 | 2021-12-08 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 胸腺細胞上清を産生するための方法 |
CN109022478A (zh) * | 2017-06-09 | 2018-12-18 | 康码(上海)生物科技有限公司 | 一种用于高通量体外蛋白质合成的dna元件 |
WO2019018629A1 (en) | 2017-07-19 | 2019-01-24 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | ANTIBODIES AND METHODS FOR DIAGNOSING AND TREATING INFECTION WITH HEPATITIS B VIRUS |
JOP20200076A1 (ar) | 2017-10-16 | 2020-04-30 | Aragon Pharmaceuticals Inc | مضادات أندروجين لعلاج سرطان البروستاتا غير النقيلي المقاوم للاستئصال |
DK3743088T3 (da) | 2018-01-26 | 2022-12-19 | Hoffmann La Roche | IL-22 Fc-sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse |
EP3743437A1 (en) | 2018-01-26 | 2020-12-02 | F. Hoffmann-La Roche AG | Il-22 fc fusion proteins and methods of use |
CA3091139A1 (en) | 2018-02-21 | 2019-08-29 | Genentech, Inc. | Dosing for treatment with il-22 fc fusion proteins |
WO2019213416A1 (en) | 2018-05-02 | 2019-11-07 | The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Antibodies and methods for the diagnosis, prevention, and treatment of epstein barr virus infection |
WO2020260431A1 (en) | 2019-06-28 | 2020-12-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the production of an antibody |
WO2021207662A1 (en) | 2020-04-10 | 2021-10-14 | Genentech, Inc. | Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0116201B1 (en) * | 1983-01-12 | 1992-04-22 | Chiron Corporation | Secretory expression in eukaryotes |
AU2722184A (en) * | 1983-04-25 | 1984-11-01 | Genentech Inc. | Use of alpha sequences in yeast expression systems |
NZ207926A (en) * | 1983-04-25 | 1988-04-29 | Genentech Inc | Use of yeast #a#-factor to assist in expression of proteins heterologus to yeast |
JPS6156078A (ja) * | 1984-07-27 | 1986-03-20 | Suntory Ltd | 酵母を宿主とする分泌発現ベクタ− |
EP0301670B2 (en) * | 1987-07-28 | 2000-06-14 | Gist-Brocades N.V. | Kluyveromyces as a host strain |
CA1340772C (en) * | 1987-12-30 | 1999-09-28 | Patricia Tekamp-Olson | Expression and secretion of heterologous protiens in yeast employing truncated alpha-factor leader sequences |
-
1987
- 1987-07-28 US US07/078,551 patent/US5010182A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-07-27 PT PT88115A patent/PT88115B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-07-28 NZ NZ225596A patent/NZ225596A/en unknown
- 1988-07-28 JP JP63189552A patent/JP2680054B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-28 ZA ZA885535A patent/ZA885535B/xx unknown
- 1988-07-28 FI FI883541A patent/FI101232B/fi active IP Right Grant
- 1988-07-28 CN CN88104680A patent/CN1045620C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-28 DE DE88201631T patent/DE3881776T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-28 IL IL87255A patent/IL87255A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-07-28 KR KR1019880009541A patent/KR970004940B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-07-28 IE IE231388A patent/IE62261B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-07-28 HU HU884021A patent/HU213015B/hu unknown
- 1988-07-28 AU AU20136/88A patent/AU623860B2/en not_active Expired
- 1988-07-28 ES ES88201631T patent/ES2058238T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-28 CA CA000573342A patent/CA1327762C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-28 DK DK198804222A patent/DK175365B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-07-28 NO NO883346A patent/NO180381C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-07-28 AT AT88201631T patent/ATE90727T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-07-28 EP EP88201631A patent/EP0301669B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO180381B (no) | DNA-konstruksjoner inneholdende en Kluyveromyces alfa-faktor ledersekvens for utskillelse av heterologe polypeptider, ekspresjonsvektor og fremgangsmåte til fremstilling av et heterologt polypeptid i gjær | |
US4943529A (en) | Kluyveromyces as a host strain | |
EP0341215B1 (en) | Improvements in the production of polypeptides | |
KR970007024B1 (ko) | 숙주 균주로서의 클루이베로마이세스 | |
EP0096430B1 (en) | Cloning system for kluyveromyces species | |
NO178793B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av en Yarrowia lipolytica-transformant som ikke produserer alkalisk protease | |
US5217891A (en) | DNA constructs containing a kluyveromyces α factor leader sequence for directing secretion of heterologous polypeptides | |
NO179046B (no) | Fremgangsmåte for fremstilling av biologisk aktivt human enkelt kjede urokinase-type plasminogenaktivator | |
JPH0213377A (ja) | デスルファトヒルジン化合物の製造方法 | |
KR970005584B1 (ko) | 폴리 펩타이드의 개선된 제조방법 | |
Oshima et al. | Expression of Chemically Synthesized α-Neo-endorphin Genes under the Control of the PH05 Gene of Saccharomyces cerevisiae |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK1K | Patent expired |