NO169958B - Fremgangsmaate for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel - Google Patents

Fremgangsmaate for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel Download PDF

Info

Publication number
NO169958B
NO169958B NO885199A NO885199A NO169958B NO 169958 B NO169958 B NO 169958B NO 885199 A NO885199 A NO 885199A NO 885199 A NO885199 A NO 885199A NO 169958 B NO169958 B NO 169958B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
drug
group
carbon atoms
substituted
amino group
Prior art date
Application number
NO885199A
Other languages
English (en)
Other versions
NO885199L (no
NO885199D0 (no
NO169958C (no
Inventor
Peter D Senter
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of NO885199D0 publication Critical patent/NO885199D0/no
Publication of NO885199L publication Critical patent/NO885199L/no
Publication of NO169958B publication Critical patent/NO169958B/no
Publication of NO169958C publication Critical patent/NO169958C/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel og et monoklonalt antistoff hvor konjugatet er innrettet for å
avgi cytotoksiske midler til tumorceller.
Det er i de senere år blitt rettet betydelig oppmerk-somhet mot anvendelsen av tumor-tilknyttede monoklonale antistoffer som bærere for cytotoksiske midler (Moller, 1982). Formålet med mye av dette arbeid har vært å forbedre effektiviteten av anticancerlegemidler samtidig med at de uønskede og ofte toksiske bivirkninger forminskes. Undersøkelser med henblikk på å forbedre effektiviteten ved anvendelse av antistoff-legemiddelkonjugater hvor antistoffet tjener til å levere anticancerlegemidlet til tumoren, har vært foretatt eller foreslått.
For at en slik fremgangsmåte skal være virknings-full, er det nødvendig at antistoffet er meget tumorselek-tivt og at legemidlet avgis i en aktiv, cytotoksisk form. Legemidler som methotrexat (Endo, 1987), daunomycin (Gallego et al., 1984), mitomycin C (MMC) (Ohkawa et al., 1986) og vincaalkaloider (Rowland et al., 1986) er bundet til antistoffer, og de fremkomne konjugater er undersøkt med henblikk på antitumoraktiviteter. I mange tilfeller kan de sporadiske aktiviteter av slike konjugater tillegges den forminskede aktivitet av legemidlet når dette er kovalent bundet til antistoffet. I teknikken forekommer mange eksempler som illustrerer bindingen mellom antistoffer og legemidler ved hjelp av forholdsvis stabile kjemiske bindinger som gjennom-går langsom ikke-spesifikk nedbrytning, f.eks. hydrolyse.
Ytterligere problemer kan imidlertid oppstå når legemidlet frigis fra antistoffet i en kjemisk modifisert form. Selv om legemidlet nå kan ha adgang til dets virk-ningssete, kan det kjemisk modifiserte legemiddel være vesentlig mindre virkningsfullt.
På grunn av disse forhold foreligger et behov for utvikling av nye bindingsstrategier, dvs. hittil ukjente legemiddel-antistoffkonjugater som kan frigjøre kjemisk umodifisert legemiddel fra antistoffet på en slik måte at legemidlet kan utøve sitt maksimale aktivitetsnivå. Under-søkelser har vist at prolegemiddelforbindelser som er benzylcarbamat-disulfidderivater av mitomycin C (MMC), mitomycin A (MMA) og daunomycin, frigjør kjemisk umodifisert legemiddel når disulfidbindingen reduseres (se US patentsøknad nr. 124.314, fig. 1).
Det har vist seg at en prolegemiddelstrategi som av-henger av disulfidbindingsreduksjon for frigivelse av legemiddel, kan være velegnet for levering av legemidler til tumorer med tumor-tilknyttede antistoffer, fordi mange faste tumorer har vist seg å forekomme i oxygenmanglende omgivelser og å være i besittelse av forhøyede innhold av reduksjonsmidler som glutathion, NADH og NADPH (Sartorelli, 1986). Disse reduksjonsmidler kan fremkalle frigivelsen av et fritt legemiddel fra benzylcarbamatdisulfid-legemiddelkonjugater ved reduksjon av disulfidbindingen.
Anvendelsen av benzylcarbamatdisulfidlinkere til legemiddel-antistoffkonjugater kan også være anvendelig ved intracellulær frigivelse av legemidler i tilfeller hvor antistoffet tas opp inne i cellen ved reseptor-formidlet endocytose. Intracellulære thioler som glutathion, vil deretter kunne redusere de disulfidbundne konjugater.
Foreliggende oppfinnelse angår et legemiddel-antistof f kon jugat hvor antistoffet og legemidlet er forbundet ved anvendelse av disulfidbenzylcarbamat, f.eks. et MMC-antistoffkonjugat, eller disulfidbenzylcarbonat, f.eks. et etoposid-antistoffkonjugat.
Ifølge et annet aspekt angår oppfinnelsen en fremgangsmåte for levering av et aktivt antitumorlegemiddel til setet for tumorceller hos et pattedyr, ved å administrere til pattedyret et legemiddel-monoklonalt antistoffkonjugat ifølge oppfinnelsen.
Det har vist seg at disulfidbindingsreduksjonen innleder en legemiddel-fragmenteringsprosess hvorved stam-legemidlet, dvs. det umodifiserte legemiddel, frigis i en aktiv, cytotoksisk form. Videre kan hastigheten av lege-middelfrigivelse kontrolleres ved sterisk hindring av disulfidet. Ved anvendelse av kjemien beskrevet i US patent-søknad nr. 124.314, forekom intet vesentlig tap i legemiddel-aktivitet. Vesentlig samme fremgangsmåte har vist seg å være anvendelig ved binding av amingruppeholdige legemidler og tilsvarende hydroxylgruppeholdige legemidler og protein-toksiner til antistoffer for sete-rettet immunterapi. Fig. 1 illustrerer reaksjonsveien for eliminering av MMC fra det tilsvarende pro-legemiddel. Fig. 2 illustrerer fremstillingen av et representa-tivt legemiddel-monoklonalt antistoffkonjugat ifølge oppfinnelsen. Fig. 3 illustrerer sammenlignende HPLC-analyse-resultater for et autentisk legemiddel og et konjugat i fravær og i nærvær av reduksjonsmiddel. Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel og et monoklonalt antistoff med den generelle formel
hvor
D er en antitumor-legemiddeldel hvor det til skjelettet av denne er knyttet en kjemisk reaktiv funksjonell gruppe, og ved hjelp av denne gruppe er legemiddelskjelettet bundet til di-sulf idbenzyloxycarbonylgruppen, idet D er avledet .fra gruppen bestående av en primær aminogruppe med formelen R<1>NH-, en sekundær aminogruppe med formelen R^N- og en alkoholgruppe med formelen R^ O-, hvor
R<1> er skjelettet av legemiddeldelen når D er avledet fra en primær aminogruppe, en sekundær aminogruppe eller en alkoholgruppe, hvor R<1> og R2 er innbyrdes uavhengige, i tilfelle av en sekundær aminogruppe,
R<2>, når R<1> og R<2> er innbyrdes uavhengig, er valgt blant usubstituerte og substituerte, forgrenede og uforgrenede alkylgrupper med 1-10 carbonatomer hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, usubstituert og substituert fenyl hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkylgrupper med 1-3 carbonatomer, 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, og usubstituert og substituert fenylalkyl hvor fenyldelen, i tilfelle av substitusjon, er substituert på samme måte som beskrevet ovenfor for substituert fenyl, og alkyldelen er en polyalkylengruppe med 1-3 carbonatomer, R<1> og R2 sammen i en funksjonell gruppe avledet fra et sekundært amin, represen-terer skjelettet av legemiddeldelen D hvor en divalent gruppe er bundet kjemisk til nitrogenatomet som inngår i den sekundære aminogruppe,
R3 og R<4> uavhengig er valgt blant H og usubstituerte og substituerte, forgrenede og uforgrenede alkylgrupper med 1-10 carbonatomer, hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, usubstituert og substituert fenyl eller difenyl hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkylgrupper med 1-3 carbonatomer, 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, og usubstituert og substituert fenylalkyl hvor fenyldelen, i tilfelle av substitusjon, er substituert som beskrevet ovenfor for substituert fenyl, og alkyldelen er en polyalkylengruppe med 1-3
carbonatomer,
m er 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 eller 10, og
Ab er et monoklonalt antistoff til hvilket er knyttet en aminogruppe, og substitusjonsstillingen for gruppe
på fenylringen av benzylcarbamatdelen er
valgt blant ortho- og para-stillinger.
Eksempler på aminogruppeholdige legemidler er mitomycin C, mitomycin A, daunomycin, adriamycin, aminopterin, actinomycin, bleomycin og derivater derav, og etoposid er et
eksempel på de alkoholgruppeholdige legemidler.
De anvendte forkortelser er som følger: MMC, mitomycin C; MMA, mitomycin A; DAU, daunomycin, PBS, fosfat-bufret, fysiologisk saltvann; HPLC, høytrykksvæskekromato-grafi, DDT, dithiothreitol; og Ab, monoklonalt antistoff.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er kjennetegnet ved at man omsetter en hydroxysuccinimidester med formelen
hvor
D, R<1>, R2, R<3>, R<4> og m har den ovenfor beskrevne betydning, med et monoklonalt antistoff Ab hvor det er tilknyttet en aminogruppe, i et inert organisk oppløsningsmiddel.
Konjugatet fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse kan tilveiebringes som et farmasøytisk preparat for å behandle en vert, spesielt en pattedyrvert, som f.eks. en forsøksdyr-vert, som er påvirket av en tumor. Det farmasøytiske preparat inneholder en antitumorvirksom mengde, dvs. en tumorvekst-inhiberende mengde, av konjugatet ifølge foreliggende oppfinnelse, og en farmasøytisk akseptabel bærer, og eventuelt konvensjonelle, farmasøytisk akseptable tilsetninger og hj elpestoffer.
Antistoffkomponentene av immunokonjugatet
omfatter et hvilket som helst antistoff som bindes spesifikt til et tumor-forbundet antigen. Eksempler på slike
antistoffer omfatter, men er ikke begrenset til, antistoffer som bindes spesifikt til antigener som finnes på carcin-omer, melanomer, lymfonomer og knokkel- og bløtdelssarcomer samt andre tumorer. Antistoffer som forblir bundet til celle-overflaten i lengre tidsrom eller som internaliseres, fore-trekkes. Disse antistoffer kan være polyklonale eller for-trinnsvis monoklonale og kan fremstilles ved velkjente fremgangsmåter i teknikken (se f.eks. R.A. DeWeger et al., "Eradication of Murine Lymphoma and Melanoma Cells by Chlorambucil-Antibody Complexes", Immunological Rev., 62,
s. 29-45 (1982) (tumor-spesifikke polyklonale antistoffer fremstilt og anvendt i konjugater), og M. Yeh et al., "Cell Surface Antigens of Human Melanoma Identified by Monoclonal Antibodies", Proe. Nati. Acad. Sei., 76./ s- 2927 (1979),
og J.P. Brown et al., "Structural Characterization of Human Melanoma-Associated Antigen p97 with Monoclonal Antibodies", J. Immunol., 127 (nr. 2), s. 539-546 (1986) (fremstilte tumorspesifikke monoklonale antistoffer)).
Den farmasøytiske bærer vil vanligvis foreligge i flytende tilstand for tilveiebringelse av flytende preparater, da flytende preparater vil forventes å være de mest foretrukne, fordi faste preparater vil forventes å ha lavere absorpsjon fra fordøyelseskanalen. De beskrevne konjugater kan tilveiebringes som sterile, oppløselige konjugater eller preparater som kan oppløses eller suspenderes i sterilt vann eller et annet flytende medium, for å tilveiebringe oppløs-ninger og suspensjoner og emulsjoner til oral eller parenteral administrering. Eksempler på flytende bærere som er egnet til oral administrering, omfatter vann, alkohol, polypropylenglycol, polyethylenglycol og blandinger av to eller flere av de ovennevnte midler. Eksempler på flytende bærere som er egnet for parenteral anvendelse, omfatter vann-til-injeksjon, fysiologisk saltvann og andre egnede, sterile injeksjonsmedier. Egnede buffere for anvendelse med den flytende bærer for å tilveiebringe en generelt egnet, bufret isotonisk oppløsning, omfatter trinatrium-orthofosfat, natriumbicarbonat, natriumcitrat, N-methylglucamin, L(+)-
lysin og L(+)-arginin.
Det farmasøytiske preparat vil inneholde en mengde av minst ett konjugat med formel (I) eller en blanding av én eller flere av forbindelsene eller en blanding derav med et annet antitumormiddel. Den antitumor-virksomme mengde av forbindelsen med formel (I) kan varieres eller innstilles innenfor et bredt område avhengig av den spesielle anvendelse, formen og styrken av det spesielle konjugat som anvendes, og den ønskede konsentrasjon av konjugat i prepar-atet. Mengden av aktiv bestanddel ligger vanligvis i området fra 0,5 til 90 vekt% basert på den samlede preparat-vekt.
Ved terapeutisk anvendelse for behandling av en pattedyrvert, f.eks. en forsøksdyrvert som er påvirket av en tumor, ondartet eller godartet, administreres konjugatene ifølge oppfinnelsen i en mengde som er virksom for å inhi-bere veksten av tumoren, dvs. en tumorvekst-inhiberende mengde i området fra 0,1 til 15 mg/kg kroppsvekt/dag. Det går tydelig frem at den faktisk foretrukne dose av konjugatet varierer i vidt omfang avhengig av behovene hos dyret som skal behandles, av det anvendte preparat samt adminis-treringsmåten. Mange faktorer som modifiserer virkningen av det anti-neoplastiske middel, vil tas i betraktning av den dyktige tekniker, f.eks. dyrevertens alder, legemsvekt og kjønn, samt diett, tidspunkt for administrering, ut-skillelseshastighet, vertens tilstand og sykdommens alvor. Administrering kan utføres på én gang eller periodisk innenfor den maksimalt tolererte dose. Optimal administrering (eller anvendelse) under gitte forhold kan lett fast-settes av den dyktige tekniker ved anvendelse av konvensjonelle dosebestemmelsestester.
De følgende eksempler belyser foreliggende oppfinnelse. Medmindre annet er anført, er alle deler og prosent-angivelser basert på vekt, og temperaturer er i grader Celsius. Forbindelsene og konjugatene er nummerert i over-ensstemmelse med fig. 1 og 2.
Protein A renset, monoklonalt antistoff benevnt
L6 (IgG2a), som virker som et glycolipidantigen på humane lungecarcinomer (Hellstrom et al., 1986) er tilveiebrakt av dr. K.E. og dr. I. Hellstrom (Oncogen, Seattle). Den humane tumorcellelinje A549, er tilveiebrakt av dr. J. Catino (Bristol-Myers Co., Wallingsford).
Konjugatbindingsforsøk
Immunokonjugater ble seriefortynnet i vekstmedium,
og 100 pliter aliquoter ble inkubert ved 4°C med lxlO<6> celler i 100 pliter vekstmedium. Etter 1 time ble cellene vasket to ganger og resuspendert i 100 yliter medium som inneholdt 1:40 fortynnet geit-anti-mus IgG-FITC (Boehringer-Mannheim)
i 20 minutter ved 4°C. Cellene ble vasket og analysert på et "Coulter Epics V"-fluorescens celleanalyseapparat. Til hvert forsøk ble det anvendt lignende fortynnet MAb som en ikke-konjugert, positiv bindingskontroll.
Cytotoksisitetsforsøk in vitro
A549-celler i 0,4 ml McCoys komplette medium ble anbrakt med 1000 celler/brønn på vevskulturplater med 12 brønner og inkubert natten over ved 37°C. Cellene ble vasket med RPMI-medium, og konjugat i 0,4 ml McCoys medium ble tilsatt. Med periodevise intervaller (1, 3, 6 og 24 timer) ble cellene vasket med RPMI for å fjerne eventuelt ubundet konjugat eller legemiddel, friskt McCoys medium ble tilsatt, og inkuberingen ble fortsatt ved 37°C i totalt 24 timer. Koloniene ble farget med krystallfiolett og tellet med et "Optimax 40.10"-bildeanalyseapparat.
Generell fremgangsmåte - Fremstilling av 1 og 2
En oppløsning av hhv. 137 mg (0,55 mmol) para-
eller ortho-mercaptobenzylalkohol og 0,044 ml pyridin (0,55 mmol) i 1 ml tørt dioxan ble i løpet av 3 minutter tilsatt til en omrørt oppløsning av 0,032 ml (0,275 mmol) tri-klormethylklorformiat i 0,5 ml dioxan. Etter omrøring i 15 minutter ble en oppløsning av MMC (92 mg, 0,275 mmol) og
triethylamin (0,153 ml, 1,1 mmol) i 4 ml dioxan tilsatt hurtig. Etter 5 minutter ble oppløsningsmidlene avdampet.,
og en oppløsning av bunnfallet i CH2C12 ble ekstrahert med mettet NaHC03, NaCl og tørket (MgS04). Produktet ble renset ved lynkromatografi på en 2 x 20 cm Si02~kolonne ved først å adskille upolart materiale med 30% ethylacetat i petroleumsether (300 ml) og deretter eluere carbamatet med 5% methanol i kloroform. Produktet, hhv. 1 og 2, ble erholdt som et
■ amorft, blått, fast stoff som ble oppløst i 3 ml CH2C12 og tilsatt dråpevis til 30 ml petroleumsether. Både i tilfelle av 1 og 2 ble et fast produkt med følgende egenskaper erholdt:
MMC benzylcarbamatdisulfid 1: utbytte 92% blått pulver,
smp. 99°C (dek.), "hl-NMR (pyr-d5) $ : 1,95 (s, 3H, CH3) ,
3,15 (s, 3H, 0CH3), 3,4-4,2 (m, 6H), 4,6-5,0 (m, 2H), 5,20 (s, 2H, ArCH2), 5,6 (dd, 1H), 6,9-7,8 (m, 7H, ArH), 8,35-8,5 (m, 1H, ArH), IR (KBr) : 3400, 2920, 1890, 1600, 1552 cm<-1>, uv/vis (CH30H) A maks. 356 nm (log 6 = 4,31).
MMC benzylcarbamatdisulfid 2: utbytte 63% blått pulver,
smp. 96-98°C, <1>H-NMR (pyr-d5) $: 1,90 (s, 3H, CH3), 3,07
(s, 3H, 0CH3), 3,4-3,55 (m, 2H), 3,8-4,05 (m, 3H), 4,6-5,0 (m, 3H), 4,85 (s, 3H), 5,35-5,70 (m, 3H), 6,8-7,7 (m, 7H, ArH), 8,35 (d, 1H, ArH), IR (KBr) ^: 3400, 1692, 1600,
1552 cm"<1>, uv/vis (CH30H) A maks. 365 nm (log = 4,32).
Fremstilling av hydroxysuccinimidester 6
Til en oppløsning av 125 mg (0,205 mmol) av 1 i 5 ml aceton ble tilsatt 18 uliter (0,205 mmol) 3-mercaptopropionsyre. Ytterligere 18 uliter 3-mercaptopropionsyre ble tilsatt etter 1 time, og reaksjonen var fullstendig etter 1 1/2 time. Oppløsningsmidlet ble fjernet under vakuum, og bunnfallet ble renset ved lynkromatografi (Si02) under eluering med 10% methanol i methylenklorid. Syren (5) ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensning.
En oppløsning av syren (5, 0,186 mmol), N-hydroxysuccinimid (43 mg, 0,372 mmol) og dicyclohexylcarbodiimid (77 mg, 0,372 mmol) i 2 ml tørr DMF ble omrørt i 3 timer. Bunnfallet ble filtrert fra og vasket med ethylacetat. Etter at oppløsningmidlene var fjernet under vakuum ble bunnfallet renset ved preparativ TLC (Si02) under eluering med 10% isopropanol i methylenklorid. Hydroxysuccinimidesteren (6) ble erholdt som et fint blått, fast stoff (26 mg).
^"H-NMR (360 MHz, CDC13) S : 1,75 (s, 3H, CH3), 2,85 (s, 4H, succinimid CH2), 2,8-3,1 (m, 4H), 3,81 (s, 3H, 0CH3), 3,20 (m, 1H), 3,27-3,55 (m, 3H), 3,70 (q, 1H), 4,0 (br s, 1H), 4,33 (t, 1H), 4,40 (d, 1H), 4,6-5,4 (m, 6H), 7,4 (q, 4H, ArH).
Fremstilling av hydroxysuccinimidester 8
Hydroxysuccinimidesteren 8 ble fremstilt ut fra pyridyldisulfidet 1 og 2-mercapto-2-methylpropionsyre som beskrevet ved fremstillingen av 6. Det ble erholdt et fint blått, fast stoff (55 mg) ut fra 100 mg av 1.
<1>H-NMR (220 MHz, CDC13) S: 1,68 (s, 6H, 2CH3), 1,77 (s, 3H, CH3), 2,83 (s, 4H, succinimid CH2), 3,20 (s, 3H, 0CH3), 3,25-3,75 (m, 6H), 4,2-5,3 (m, 6H), 7,40 (q, 4H, ArH).
Fremstilling av hydroxysuccinimidester 10
Hydroxysuccinimidesteren 10 ble fremstilt ut fra pyridyldisulfidet 2 og 2-mercapto-2-methylpropionsyre som beskrevet for fremstillingen av 6. Produktet 10 ble erholdt som et blått, fast stoff (10 mg) ut fra 71 mg av 2.
<1>H-NMR (220MHz, CDC13) &: 1/53 (s, 3H, CH3), 1,61 (s, 3H, CH3), 1,78 (s, 3H, CH3), 2,90 (s, 4H, succinimid CH2), 3,20 (s, 3H, 0CH3), 3,4-3,8 (m, 6H), 4,21 (t, 1H),
4,40 (d, 1H), 4,50 (br s, 2H), 4,90 (q, 1H), 5,2-5,4
(m, 4H), 7,2-7,4 (m, 2H, ArH), 7,80 (d, 2H, ArH).
Fremstilling av legemiddel- antistoffkonjugater 11- 13
Oppløsninger av hydroxysuccinimidesterne 6, 8 og 10 (2,9-3,7 mM) i acetonitril ble tilsatt til L6-antistoff (2,61 mg/ml) i 1,5 ml 50 mM boratbuffer (pH 8,5) som inne-
holdt 100 mM NaCl ved 30°C. Hydroxysuccinimidesterne 8
og 10 (20-dobbelt samlet molart overskudd) ble tilsatt i 4 like store porsjoner med 10 minutters intervaller, mens 6 (10-dobbelt samlet molart overskudd) ble tilsatt i 2 like store porsjoner ved 0 og 10 minutter. Etter 40 minutter ble bunnfallet fjernet ved sentrifugering, og supernatantene ble dialysert natten over mot PBS ved 4°C. Dialysatene ble for-siktig rotert med ca. 0,5 g "SM-2"-polystyrenperler (BioRad) i 10 minutter ved 4°C, og ble deretter filtrert sterilt for. å fjerne eventuelt legemiddel som ikke var kovalent bundet til antistoffet. HPLC-analyser (beskrevet nedenfor) av konjugatene viste at fritt legemiddel eller frie legemiddel-derivater ikke var til stede. Sammensetningen av de således erholdte konjugater ble bestemt ved legemiddelabsorbansen ved 365 nm (£ = 21086) og antistoffabsorbansen ved 280 nm (Abs 280 nm, 1 mg/ml = 1,4) og viste følgende: 11, 0,86 mg/ml Ab (1,29 mg ialt), legemiddel/Ab = 4,38/1, 12, 0,70 mg/ml Ab (1,05 mg ialt), legemiddel/Ab = 5,14/1, 13, 1,07 mg/ml Ab (1,65 mg ialt), legemiddel/Ab = 5,25/1.
Et antitumor-legemiddel-antistoffkonjugat hvor lege-middelkomponenten er det alkoholgruppeholdige legemiddel etoposid som er bundet til disulfidbenzyldelen ved en car-bonatbinding istedenfor en carbamatbinding, ble fremstilt ved i det vesentlige å følge de ovennevnte fremgangsmåter ved at det først ble tilveiebrakt et etoposid-benzylcarbonat-disulfid ved å anvende etoposid (162 mg, 0,0275 mmol) istedenfor MMC, og deretter anvende det dannede etoposid-benzylcarbonat-disulfid istedenfor MMC-benzylcarbamat-disulfid under de resterende trinn av konjugatfremstillingen.
MMA, daunomycin, adriamycin og de andre aminogruppeholdige legemidler kan naturligvis anvendes istedenfor MMC
i de ovenfor beskrevne eksempler.
Stabilitet av konjugater
Konjugatene 11-13 ble fortynnet med et tilsvarende volum vekstmedium som inneholdt RPMI og 10% serum fra kalvefoster. Oppløsningene ble inkubert ved 37°C. Porsjoner (0,25 ml) ble innført på protein-A-kolonner (0,25 ml) med periodevise intervaller, og kolonnene ble vasket med PBS for å fjerne eventuelt ubundet materiale. De bundne konjugater ble eluert med 100 mM eddiksyre som inneholdt 150 mM NaCl (0,5 ml) og hurtig nøytralisert. Spektrofotometrisk ana-lyse ble anvendt for å bestemme sammensetningen av konjugatene.
Reaksjon av konjugatene med dithiothreitol
Til en oppløsning av legemiddel-antistoffkonjugatene 11-13 i PBS ble det tilsatt dithiothreitol (sluttkonsentra-sjon 0,2 mM). Etter 19 timer ved romtemperatur ble aliquoter analysert med HPLC ved anvendelse av en 10 cm "Whatman Partasil 5 ODS-3" revers fase-C-18-kolonne og følgende gradi-entsystem: 30% CH30H i 0,1% acetat (pH 6) til 95% CH30H i 6 minutter, fortsatt i 8 minutter, gjennomstrømmingshastig-het 2 ml/minutt, påvisning ved 340 nm.
Fremstilling av konjugater
Hydroxysuccinimidesterne 6, 8 og 10 ble fremstilt fra mitomycin C benzylcarbamatpyridyldisulfider 1 og 2 ved en totrinns-fremgangsmåte som omfattet disulfidombytting med en thiolsubstituert syre etterfulgt av forestring av syren med N-hydroxysuccinimid (fig. 2). Reaksjon av hydroxysuccinimidesterne med antistoffet L6 ved pH 8,5 førte til dannelsen av antistoff-MMC-konjugater 11-13. Konjugatene var frie for eventuelt ikke-kovalent bundet MMC og ble karakterisert ved HPLC og uv/vis-spektroskopi. Det var mulig å binde inntil 6 MMC-molekyler til L6 under anvendelse av den beskrevne kjemi. Antagelig fortrengte aminogrupper på antistoffet hydroxysuccinimidesterne på de aktive legemidler, og amidbindinger ble dannet mellom antistoffet og legemiddel-derivatene.
Frigivelse av mitomycin C fra konjugatene
Benzylcarbamat-disulfid-legemiddelderivatenes evne til å gjennomgå legemiddeleliminering ved disulfidbindingsreduksjon er undersøkt i detalj (se Senter ovenfor). Den antatte mekanisme for fragmenteringsreaksjonen ved reduksjon av disulfidbindingen i konjugatene 11-13 ville føre til frigivelse av MMC.
L6-MMC-konjugatet 11 ble redusert med en overskyt-ende mengde dithiothreitol, og reaksjonen ble overvåket ved HPLC. Det ble iakttatt at MMC-frigivelse forekom, noe som ble dokumentert ved sammenligning med en autentisk prøve (fig. 3). I fravær av et reduksjonsmiddel var konjugatene i PBS fullstendig stabile under reaksjonsbetingelsene.
Det var av interesse å bestemme om sterisk hindring av disulfidbindingen ville ha noen virkning på stabiliteten av legemiddel-antistoffkonjugatene. Det er tidligere beskrevet at ricin-A-kjede-immunotoksier med hindrede di-sulfider var mer stabile in vitro enn tilsvarende ikke-hindrede immunotoksiner (Worrell et al., 1986).
Konjugatene ble inkubert ved 37°C i 1:1 oppløsninger av PBS og vekstmedier inneholdende RPMI og 10% serum fra kalvefoster. Den mengde legemiddel som forble bundet til antistoffet, ble bestemt etter at konjugatene var reisolert på en protein-A-affinitetskolonne. Etter 24 timer viste det seg at 11, 12 og 13 frigjorde hhv. 40%, 21% og 9% av det bundne legemiddel. Derfor kan forhøyet konjugatstabil-itet oppnås ved forhøyelse av graden av hindring av disulfidbindingen.
Binding og in vitro- cytotoksisitet av konjugatene
Konjugatene ble undersøkt med henblikk på deres
evne til å bindes til reseptorer på A549 lungecarcinom-cellelinjen.
Fluorescensaktivert cellesortering viste at alle tre konjugater bandt seg like godt til cellene som det umodifiserte antistoff. Kjemien anvendt til legemiddelbinding, påvirket tilsynelatende ikke virkningen av antistoffets egenskaper med hensyn til binding til cellereseptorene.
Den cytotoksiske aktivitet hos konjugatene overfor A549-cellelinjen ble bestemt for en rekke eksponeringstider (tabell 1). Det minst hindrede konjugat 11 utviste vesentlig vekstinhibering etter eksponering i 3 timer, mens det for de mer hindrede konjugater 12 og 13 gikk betydelig lengre tid før en cytotoksisk virkning kunne iakttas. Etter 24 timer var alle tre konjugater meget cytotoksiske. De erholdte IC5Q-verdier for konjugatene 11, 12 og 13 etter en ekspon-eringstid på 24 timer var hhv. 55 nM, 64 nM og 59 nM. IC,-0-verdiene for det frie MMC etter eksponering i 24 timer var 50 nM. Konjugasjonskjemien bevarer derfor aktiviteten av legemidlet.
Litteraturhenvisninger
N. Endo, Y. Kato, Y. Takeda, M. Saito, N. Umemoto,
K. Kishida og T. Hara: In vitro Cytotoxicity of a Human Serum-Albumin-Mediated Conjugate of Methotrexate with Anti-MM46 Monoclonal Antibody, Cancer Research 47, 1076-1080 (1987).
J. Gallego, M.R. Price og R.W. Baldwin: Preparation of
four Daunomycin-Monoclonal Antibody 791T/36 Conjugates with Antitumor Activity, Int. J. Cancer, 33, 737-744 (1984).
I. Hellstrom, P.L. Beaumier og K.E. Hellstrom: Antitumor Effects of Lb and IgG2A Antibody that Reacts with most Human Carcinomas, Proe. Nati. Acad. Sei. 83_, 7059-7063
(1986) .
G. Moller (red.): Antibody Carriers of Drugs and Toxins in Tumor Therapy, Immunol. Rev., jv2 (1982).
K. Ohkawa, Y. Tsukada, N. Hibi, N. Umemoto og T. Hara: Selective in vitro and in vivo Growth Inhibition against Human Yolk Sac Tumor Cell Lines by Purified Antibody against Human a-fetoprotein Conjugated with Mitomycin C via Human Serum Albumin, Cancer Immunol. Immunother. 23_, 81-86 (1986) .
G.F. Rowland, R.G. Simmonds, V.A. Gore, C.H. Marsden og
W. Smith: Drug Localisation and Growth Inhibition Studies of Vindesine-monoclonal Anti-CEA Conjugates in a Human Tumor Xenograft, Cancer Immunol. Immunother. 2_1, 183-187
(1986) .
A.C. Sartorelli: The Role of Mitomycin Antibiotics in the Chemotherapy of Solid Tumors, Biochem. Pharm. 3_5, 67-69
(1986).
N.R. Worrell, A.J. Cumber, G.D. Parnell, A. Mirza,
J.A. Forrester og W.C.J. Ross: Effect of Linkage Variation
in Normal Rats, Anti-cancer Drug Design 1, 179-188 (1986).

Claims (5)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel og et monoklonalt antistoff med den generell formel
hvor D er en antitumor-legemiddeldel hvor det til skjelettet av denne er knyttet en kjemisk reaktiv funksjonell gruppe, og ved hjelp av denne gruppe er legemiddelskjelettet bundet til di-sulf idbenzyloxycarbonylgruppen, idet D er avledet fra gruppen bestående av en primær aminogruppe med formelen R^-NH-, en sekundær aminogruppe med formelen R<X>R<2>N- og en alkoholgruppe med formelen R<1>©-, hvor R<1> er skjelettet av legemiddeldelen når D er avledet fra en primær aminogruppe, en sekundær aminogruppe eller en alkoholgruppe, hvor R<1> og R2 er innbyrdes uavhengige, i tilfelle av en sekundær aminogruppe,R<2>, når R<1> og R2 er innbyrdes uavhengig, er valgt blant usubstituerte og substituerte, forgrenede og uforgrenede alkylgrupper med 1-10 carbonatomer hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, usubstituert og substituert fenyl hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkylgrupper med 1-3 carbonatomer, 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, og usubstituert og substituert fenylalkyl hvor fenyldelen, i tilfelle av substitusjon, er substituert på samme måte som beskrevet ovenfor for substituert fenyl, og alkyldelen er en polyalkylengruppe med 1-3 carbonatomer, R<1> og R<2> sammen i en funksjonell gruppe avledet fra et sekundært amin, represen-terer skjelettet av legemiddeldelen D hvor en divalent gruppe er bundet kjemisk til nitrogenatomet som inngår i den sekundære aminogruppe, R<3> og R4 uavhengig er valgt blant H og usubstituerte og substituerte, forgrenede og uforgrenede alkylgrupper med 1-10 carbonatomer, hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, usubstituert og substituert fenyl eller difenyl hvor substituenten er valgt blant 1-3 alkylgrupper med 1-3 carbonatomer, 1-3 alkoxygrupper med 1-3 carbonatomer og 1-3 halogenatomer, og usubstituert og substituert fenylalkyl hvor fenyldelen, i tilfelle av substitusjon, er substituert som beskrevet ovenfor for substituert fenyl, og alkyldelen er en polyalkylengruppe med 1-3 carbonatomer, m er 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 eller 10, og Ab er et monoklonalt antistoff til hvilket er knyttet en aminogruppe, og substitusjonsstillingen for gruppe -S-S-(CR<3>R<4>)m-C-NHAb på fenylringen av benzylcarbamatdelen er II 0 valgt blant ortho- og para-stillinger, karakterisert ved at man omsetter en hydroxysuccinimidester med formelen hvor D, R1, R<2>, R3, R<4> og m har den ovenfor beskrevne betydning, med et monoklonalt antistoff Ab hvor det er tilknyttet en aminogruppe, i et inert organisk oppløsningsmiddel.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at man ved omsetningen anvender en legemiddeldel D som er valgt blant legemidler som inneholder primære eller sekundære aminer.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at man ved omsetningen anvender en legemiddeldel D som er valgt blant mitomycin C, mitomycin A, daunomycin, adriamycin, aminopterin, actinomycin, bleomycin eller derivater derav.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at man ved omsetningen anvender en legemiddeldel D som er en alkohol av formel F^OH hvori R<1> har den i krav 1 angitte betydning.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4, karakterisert ved at man ved omsetningen som legemiddeldel D anvender etoposid.
NO885199A 1987-11-23 1988-11-22 Fremgangsmaate for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel NO169958C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/124,313 US4952394A (en) 1987-11-23 1987-11-23 Drug-monoclonal antibody conjugates

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO885199D0 NO885199D0 (no) 1988-11-22
NO885199L NO885199L (no) 1989-05-24
NO169958B true NO169958B (no) 1992-05-18
NO169958C NO169958C (no) 1992-08-26

Family

ID=22414122

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO885199A NO169958C (no) 1987-11-23 1988-11-22 Fremgangsmaate for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel

Country Status (16)

Country Link
US (1) US4952394A (no)
EP (1) EP0317957B1 (no)
JP (1) JPH02111731A (no)
KR (1) KR910005887B1 (no)
AT (1) ATE81986T1 (no)
AU (1) AU617380B2 (no)
CA (1) CA1303524C (no)
DE (1) DE3875700T2 (no)
DK (1) DK651088A (no)
FI (1) FI885361A (no)
GR (1) GR3006211T3 (no)
IL (1) IL88428A0 (no)
NO (1) NO169958C (no)
NZ (1) NZ226955A (no)
PT (1) PT89062B (no)
ZA (1) ZA886811B (no)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5149782A (en) * 1988-08-19 1992-09-22 Tanox Biosystems, Inc. Molecular conjugates containing cell membrane-blending agents
US5171563A (en) * 1988-09-30 1992-12-15 Neorx Corporation Cleavable linkers for the reduction of non-target organ retention of immunoconjugates
US5155210A (en) * 1990-09-11 1992-10-13 Brunswick Corporation Methods of conjugating actinomycin d
AU8730691A (en) * 1990-09-28 1992-04-28 Neorx Corporation Polymeric carriers for release of covalently linked agents
US5776458A (en) * 1990-12-05 1998-07-07 Pharmacia & Upjohn S.P.A. Anthracycline-conjugates
FR2676058B1 (fr) * 1991-04-30 1994-02-25 Hoechst Lab Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers.
ATE412769T1 (de) * 1994-04-05 2008-11-15 Morre D James Nadh-oxidase als zielmolekül in diagnose und therapie
US20030119724A1 (en) * 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
EP0932390A1 (en) 1996-10-11 1999-08-04 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method
US6207805B1 (en) 1997-07-18 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Prostate cell surface antigen-specific antibodies
US7157418B1 (en) 1998-07-22 2007-01-02 Osprey Pharmaceuticals, Ltd. Methods and compositions for treating secondary tissue damage and other inflammatory conditions and disorders
US20030215421A1 (en) * 1999-07-21 2003-11-20 Mcdonald John R. Methods and compositions for treating secondary tissue damage and other inflammatory conditions and disorders
US6299860B1 (en) * 1998-10-15 2001-10-09 Fluoro Probe, Inc. Method for viewing diseased tissue located within a body cavity
US6652836B2 (en) 1998-10-15 2003-11-25 Fluoroprobe, Inc. Method for viewing tumor tissue located within a body cavity
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
US7303760B2 (en) 1999-04-23 2007-12-04 Alza Corporation Method for treating multi-drug resistant tumors
US7112337B2 (en) 1999-04-23 2006-09-26 Alza Corporation Liposome composition for delivery of nucleic acid
AU769425B2 (en) * 1999-04-23 2004-01-29 Alza Corporation Conjugate having a cleavable linkage for use in a liposome
IL146047A0 (en) * 1999-04-23 2002-07-25 Alza Corp Releasable linkage and compositions containing same
CN1110322C (zh) * 1999-07-21 2003-06-04 中国医学科学院医药生物技术研究所 单克隆抗体Fab'－平阳霉素偶联物及其抗肿瘤作用
AU2001227679A1 (en) * 2000-02-25 2001-09-03 General Atomics Mutant nucleic binding enzymes and use thereof in diagnostic, detection and purification methods
WO2001071352A2 (en) * 2000-03-17 2001-09-27 The Salk Institute For Biological Studies Compositions associated with complex formation
US6610504B1 (en) 2000-04-10 2003-08-26 General Atomics Methods of determining SAM-dependent methyltransferase activity using a mutant SAH hydrolase
EP1282714A2 (en) * 2000-05-10 2003-02-12 Bristol-Myers Squibb Company Modified inosine 5'-monophosphate dehydrogenase polypeptides and uses thereof
JP2004536027A (ja) 2000-12-01 2004-12-02 ジョーンズ・ホプキンス・ユニーバーシティー グリコシル化／ガラクトシル化ペプチドの接合体、二官能性リンカー、およびヌクレオチドのモノマー／ポリマー、および関連する組成物および使用方法
US7589180B2 (en) 2001-05-11 2009-09-15 Abbott Laboratories Inc. Specific binding proteins and uses thereof
US20100056762A1 (en) 2001-05-11 2010-03-04 Old Lloyd J Specific binding proteins and uses thereof
CN101671335A (zh) * 2001-05-31 2010-03-17 梅达莱克斯公司 细胞毒素、其有用的前体药物、连接基团和稳定剂
US7053188B2 (en) 2002-02-22 2006-05-30 Purdue Research Foundation Monoclonal antibodies specific for neoplasia-specific NADH:disulfide reductase
US7384760B2 (en) * 2004-04-30 2008-06-10 General Atomics Methods for assaying inhibitors of S-adenosylhomocysteine (SAH) hydrolase and S-adenosylmethionine (SAM)-dependent methyltransferase
RU2402548C2 (ru) * 2004-05-19 2010-10-27 Медарекс, Инк. Химические линкеры и их конъюгаты
NZ550934A (en) * 2004-05-19 2010-05-28 Medarex Inc Chemical linkers and conjugates thereof
US7541330B2 (en) * 2004-06-15 2009-06-02 Kosan Biosciences Incorporated Conjugates with reduced adverse systemic effects
JP5198063B2 (ja) * 2004-08-26 2013-05-15 アッパラオ・サティアム 新規バイオ開裂性リンカー
EP1851250B1 (en) * 2005-02-18 2012-06-06 Medarex, Inc. Human monoclonal antibody to prostate specific membrane antigen (psma)
US7714016B2 (en) * 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
NZ566982A (en) * 2005-09-26 2011-06-30 Medarex Inc Duocarmycin drug conjugates
PL1940789T3 (pl) 2005-10-26 2012-04-30 Squibb & Sons Llc Metody i związki do otrzymywania analogów cc-1065
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
MX338185B (es) 2007-01-25 2016-04-05 Dana Farber Cancer Inst Inc Uso de anticuerpos anti-egfr en el tratamiento de enfermedad mediada por egfr mutante.
EP2121667B1 (en) * 2007-02-21 2016-06-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
WO2008115404A1 (en) 2007-03-15 2008-09-25 Ludwing Institute For Cancer Research Treatment method using egfr antibodies and src inhibitors and related formulations
WO2008148063A1 (en) 2007-05-24 2008-12-04 The Regents Of The University Of California Intranuclear protein transduction through a nucleoside salvage pathway
EP2188311B1 (en) 2007-08-14 2016-10-05 Ludwig Institute for Cancer Research Ltd. Monoclonal antibody 175 targeting the egf receptor and derivatives and uses thereof
EP3492488A1 (en) 2007-08-22 2019-06-05 The Regents of The University of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
US8463365B2 (en) * 2007-09-19 2013-06-11 Oncofluor, Inc. Method for imaging and treating organs and tissues
KR20180118250A (ko) 2008-05-27 2018-10-30 젠자임 코포레이션 알파-멜라노사이트 자극 호르몬의 펩티드 유사체
MX2011005967A (es) 2008-12-05 2011-06-30 Abraxis Bioscience Llc Peptidos enlazados a sparc y usos de los mismos.
CN102482347B (zh) 2009-01-12 2017-04-26 希托马克斯医疗有限责任公司 修饰抗体组合物及其制备和使用方法
US9238878B2 (en) 2009-02-17 2016-01-19 Redwood Bioscience, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
CN102481341B (zh) 2009-02-23 2017-05-17 希托马克斯医疗有限公司 蛋白原及其使用方法
WO2010138769A1 (en) 2009-05-28 2010-12-02 The United States Government As Represented By The Department Of Veterans Affairs Amino acid sequences which enhance peptide conjugate solubility
US8871744B2 (en) 2010-07-21 2014-10-28 B & G Partyers, LLC Compounds and methods for selectively targeting tumor-associated mucins
GB201012410D0 (en) 2010-07-23 2010-09-08 Medical Res Council Intracellular immunity
EP2663647A4 (en) 2011-01-14 2015-08-19 Redwood Bioscience Inc POLYPEPTIDE IMMUNOGLOBULINS WITH ALDEHYDIC MARKING AND THEIR USE METHOD
GB201202268D0 (en) 2012-02-09 2012-03-28 Medical Res Council Intracellular immunity
CA2891280C (en) 2012-11-24 2018-03-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
PT3122757T (pt) 2014-02-28 2023-11-03 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Ligantes carregados e as suas utilizações em conjugação
US11053302B2 (en) 2014-11-05 2021-07-06 Nanyang Technological University Stabilized and autonomous antibody VH domain
EP3319936A4 (en) 2015-07-12 2019-02-06 Suzhou M-conj Biotech Co., Ltd. PLACES OF CONDUCT FOR THE CONJUGATION OF CELL BINDING MOLECULES
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
CA3019398A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
WO2017218824A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 Yale University Anti-guanosine antibody as a molecular delivery vehicle
AU2017286733B2 (en) 2016-06-15 2020-07-02 Yale University Antibody-mediated autocatalytic, targeted delivery of nanocarriers to tumors
JP7138350B2 (ja) 2016-11-14 2022-09-16 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ． 共役連結体、該連結体を含有する細胞結合分子－薬物共役体、並びに該共役体及び連結体の使用及び製造方法
US20210054102A1 (en) 2018-02-01 2021-02-25 Yale University Compositions and methods for enhancing nuclear translocation
EP4182475A2 (en) 2020-07-17 2023-05-24 Onena Medicines S.L. Antibodies against lefty proteins
EP4079327A1 (en) * 2021-04-22 2022-10-26 Centaurus Polytherapeutics Payloads for drug-conjugates and their use for treating cancer
EP4377338A2 (en) 2021-07-27 2024-06-05 Novab, Inc. Engineered vlrb antibodies with immune effector functions
WO2023056450A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Yale University Compositions and methods for the treatment of autosomal dominant polycystic kidney disease and other diseases having upregulated mtor activity
WO2024050524A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for directing apolipoprotein l1 to induce mammalian cell death
WO2024064752A2 (en) 2022-09-20 2024-03-28 Yale University Compositions of wet adhesives derived from vibrio cholerae biofilm adhesins and methods thereof

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4003792A (en) * 1967-07-01 1977-01-18 Miles Laboratories, Inc. Conjugates of acid polysaccharides and complex organic substances
AU8762982A (en) * 1981-07-02 1983-02-02 Walton, A.G. Glycosaminoglycan drug complexes
US4671958A (en) * 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
JPH0651643B2 (ja) * 1983-01-19 1994-07-06 帝人株式会社 殺細胞性修飾免疫グロブリン及びその製造方法
US4625014A (en) * 1984-07-10 1986-11-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Cell-delivery agent
DE3684887D1 (de) * 1985-11-29 1992-05-21 Biomatrix Inc Arzneistoffabgabesysteme auf basis von hyaluronan, dessen derivaten und salzen sowie verfahren zu deren herstellung.
GB8603537D0 (en) * 1986-02-13 1986-03-19 Parker D Conjugate compound

Also Published As

Publication number Publication date
CA1303524C (en) 1992-06-16
DK651088D0 (da) 1988-11-22
PT89062B (pt) 1993-07-30
EP0317957B1 (en) 1992-11-04
ATE81986T1 (de) 1992-11-15
US4952394A (en) 1990-08-28
AU617380B2 (en) 1991-11-28
NZ226955A (en) 1991-11-26
KR910005887B1 (ko) 1991-08-06
DK651088A (da) 1989-05-24
KR890007724A (ko) 1989-07-05
DE3875700D1 (de) 1992-12-10
NO885199L (no) 1989-05-24
DE3875700T2 (de) 1993-03-18
FI885361A0 (fi) 1988-11-18
AU2582488A (en) 1989-05-25
JPH02111731A (ja) 1990-04-24
EP0317957A3 (en) 1989-07-05
FI885361A (fi) 1989-05-24
IL88428A0 (en) 1989-06-30
ZA886811B (en) 1989-07-26
PT89062A (pt) 1989-11-30
GR3006211T3 (no) 1993-06-21
NO885199D0 (no) 1988-11-22
EP0317957A2 (en) 1989-05-31
NO169958C (no) 1992-08-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO169958B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av et konjugat av et antitumorlegemiddel
JP6021963B2 (ja) クロスリンカーおよびそれらの使用
KR960015398B1 (ko) 신규의 링커를 갖는 안트라사이클린 면역결합체 및 그의 제조방법
EP0457250B1 (en) Novel bifunctional linking compounds, conjugates and methods for their production
AU631802B2 (en) Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US5824805A (en) Branched hydrazone linkers
AU687795B2 (en) Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5475092A (en) Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of CC-1065
US4880935A (en) Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
NO324609B1 (no) Fremgangsmater for fremstilling av monomere calicheamicin-derivat/baerer-konjugater
CZ5793A3 (en) Thioether conjugates
AU2003259163A1 (en) Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
JP2013506709A5 (no)
US5241078A (en) Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
CN114053426A (zh) 一种双药链接组装单元及双药靶向接头-药物偶联物
CA1314245C (en) Process for the preparation of conjugates in which a monovalent carboxylic ionophore is associated by means of a covalent bond with a macromolecule, which are useful as immunotoxin potentiators
JP2018532780A (ja) 二官能性プロドラッグ