NO167402B - Fremgangsmaate for fremstilling av teicoplanin a2<selektivt anriket paa enhver av dens hovedkomponenter. - Google Patents

Fremgangsmaate for fremstilling av teicoplanin a2<selektivt anriket paa enhver av dens hovedkomponenter. Download PDF

Info

Publication number
NO167402B
NO167402B NO861986A NO861986A NO167402B NO 167402 B NO167402 B NO 167402B NO 861986 A NO861986 A NO 861986A NO 861986 A NO861986 A NO 861986A NO 167402 B NO167402 B NO 167402B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
amount
toxic
microorganism
salts
bases
Prior art date
Application number
NO861986A
Other languages
English (en)
Other versions
NO167402C (no
NO861986L (no
Inventor
Francesco Assi
Anacleto Gianantonio
Giancarlo Lancini
Original Assignee
Lepetit Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lepetit Spa filed Critical Lepetit Spa
Publication of NO861986L publication Critical patent/NO861986L/no
Publication of NO167402B publication Critical patent/NO167402B/no
Publication of NO167402C publication Critical patent/NO167402C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/006—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure
    • C07K9/008—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence being part of a ring structure directly attached to a hetero atom of the saccharide radical, e.g. actaplanin, avoparcin, ristomycin, vancomycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/045—Actinoplanes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/827—Actinoplanes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Seasonings (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører fremgangsmåte for fremstilling av teicoplanin A2 (også betegnet teicoplanin A-2 kompleks) for selektiv økning av forholdet for de enkelte av dens hovedkomponenter.
Teicoplanin (tidl. betegnet teicomycin) er et glykopeptid-antibiotikum fremstilt ved dyrking av Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121. Dette antibiotikum er aktivt hovedsakelig mot infeksjoner av gram-positive bakterier.
Ifølge fremgangsmåten beskrevet i US patent 4.239.751 isoleres teicoplanin fra dyrkningsmedlene av den produserende stammen som et kompleks inneholdende tre faktorer betegnet A^ , A2 og A3. Faktor A2 er tilstede i overveiende mengde i det antibiotiske komplekset utvunnet fra fermenteringen av den ovenfor nevnte stamme og er den viktigste på grunn av dens biologiske effekter. Faktor A^ og faktor A3 er bare tilstede i mindre mengde.
Ifølge US patent 4.239.751 isoleres teicoplanin A2 (T-A2) fra de andre faktorene i teicoplanin-kompleks ved kolonne-kromatografi på Sephadex<R> LH-20, som er et hydroksypropyl-derivat av en kryssbundet polydekstrangel med en eksklusjons-grense ved molekylvekt ca. 4000.
Fra fremstillings- og renseoperasjoner i stor målestokk (eksempler på dette er gitt i publisert EP patentsøknad 0122969), oppnås vanligvis et teicomycinprodukt som vesentlig består av teicoplanin A2 ledsaget av en liten mengde teicoplanin A3. Dette produktet er egnet for praktisk bruk i terapeutiske anvendelser. Se: Drugs of the Future: vol. 9, nr. 6, 1984, s. 429-430, utgitt av J.R. Prous Publishers, Barcelona, Spania.
En artikkel publisert av A. Borghi, C. Coronelli et al., i Journal of Antibiotics, vol. 37, nr. 6, s. 615-620, juni 1984, angir at teicoplanin faktor A2 (T-A2) er en blanding av fem nær beslektede hovedkomponenter av meget lik polari-tet .
Disse komponenter, betegnet T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5, ble isolert ved bruk, i et første trinn, av reversert faseskillekromatografi ved normaltrykk på en silanert silisiumdioksydgelkolonne. Rensingen av komponentene T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5 nødvendiggjorde et tidligere trinn med anvendelse av semipreparativ HPLC på en Whatman Partisil^ ODS M-9-kolonne eluert med en 0,2$ vandig ammoniumformiat-acetonitril-blanding (76:24). Alle nevnte komponenter har blitt karakterisert kjemisk og biologisk. Se også publisert GB patentsøknad 2.121.401.
Strukturelle belysninger rapportert av J.C.J. Barna, D.M. Williams et al. i J. Am. Soc. 1984, 106, 4895-4902, viser at teicoplanin A2~hovedkomponentene kan representeres ved følgende strukturformel: hvor:
T-A2-1: R' - -CO-(CH2)2-CH=CH-(CH2)4-CH3
((Z )-4-decenoyl)
In vitro- og in vivo-tester rapportert i ovennevnte publi-serte GB patentsøknad 2.121.401, viser at hver av T-A2-2-, T-A2-3-, T-A2-4- og T-A2-5-komponentene er mer aktive enn teicoplanin A2-komplekset som et hele.
Det er derfor tydelig at en fremgangsmåte for selektiv forøkning av produksjonen av hver av hovedkomponentene 1 teicoplanin A2 er et primært formål i industriell teicoplanin-fermentering. Den betydelige tekniske fordel som den kan gi angår både formålet med isolering av de enkelte T-A2-hovedkomponentene i en ren form og muligheten for oppnåelse av et T-A2-kompleks som er anriket på de mer aktive komponentene. Muligheten for å modulere forholdet for de enkelte T-A2-hovedkomponentene i T-A2-komplekset i den industrielle fermentering i stor målestokk, gir dessuten et nyttig verktøy for å holde sammensetningen av fermenteringsproduktet, som må tilfredsstille standard spesifikasjoner, konstant. Med andre ord, når den prosentvise sammensetning av de enkelte komponentene av en eller annen grunn (f.eks. en modifikasjon av det industrielle kulturmedium til anvendelse av billigere materialer) har tendens til å avvike fra standard sammensetning, representerer muligheten for selektiv økning av hver av T-A2-hovedkomponentene et nyttig verktøy når det gjelder å korrigere en slik defekt.
Formålet med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe en fremgangsmåte for selektiv økning av forholdet for de enkelte T-A2-hovedkomponentene i T-A2-komplekset. Formålet med foreliggende oppfinnelse gjelder mer spesielt en fremgangsmåte for oppnåelse av teicoplanin A2 selektivt anriket med henblikk på enhver av dets hovedkomponenter T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5, som består i tilsetning til kulturmediet av Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 som produserer T-A2-kompleks gjennom det samme metaboliske kretsløp, av en selektivt effektiv mengde av en hensiktsmessig forløper for den karakteristiske acylgruppen bundet til en glukosamindel i T-A2 (se de ovenfor angitte betydninger for R')i 1 det følgende betegnet: "hensiktsmessig forløper for den respektive acylgruppen i glukosamindelen i T-A2".
Ifølge foreliggende oppfinnelse er det således tilveiebragt en fremgangsmåte for fremstilling av teicoplanin A2 (T-A2) selektivt anriket på enhver av dens hovedkomponenter T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5, og denne fremgangsmåten er kjennetegnet ved at det ved fermentering ved en temperatur mellom 25 og 35°C, og fortrinnsvis mellom 27 og 35°C, av Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 tilsettes en selektivt effektiv mengde av en forløper, fortrinnsvis 24-48 timer etter at fermenteringen er startet, for den respektive acylgruppen i glukosamindelen i T-A2, hvor:
a) forløperen for økning av forholdet for T-A2-1 i T-A2-kompleks velges fra linolsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-15 g/l. b) forløperen for økning av forholdet for T-A2-2 i T-A2-kompleks velges fra (i) valin, dens salter med syrer og baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, (ii) alfa-keto-isovalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-5 g/l. (lii) isosmørsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-15 g/l, eller (iv) isobutanol og dens estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, I en mengde på 0,5-5 g/l, c) forløperen for økning av forholdet for T-A2-3 i T-A2 kompleks velges fra oleinsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganimen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydoksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-15 g/l. d) forløperen for økning av forholdet for T-A2-4 i T-A2-kompleks velges fra (i) isoleucin, dens salter med syrer og baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, (ii) alfa-keto-betametylvalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i respektive mengder på 0,5-5 g/l; (ili) 2-metylsmørsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,0 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler i en mengde på 0,5-15 g/l, eller (iv) 2-metylbutanol og dens estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, e) forløperen for økning av forholdet for T-A2-5 i T-A2-kompleks velges fra (i) leucin, dens salter med syrer og baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, (ii) isovalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler i en mengde på 0,5-15 g/l,
(Hi) alfa-keto-isokapronsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler i respektive mengder på 0,5-5 g/l; eller
(Iv) isoamylalkohol og dens estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l.
Salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen er salter hvori typen og konsentrasjonen av det gitte kation er slik at det ikke svekker veksten av mikroorganismekulturen eller produksjonen av det ønskede antibiotiske stoff i særlig grad. Eksempler på nevnte kationer er natrium, kalium, ammonium og lignende.
Estere med enverdige og flerverdige laverealkanoler er (C^_
(j)alkanoler med 1, 2, 3, 4, 5 eller 6 hydroksyfunksJoner pr. molekyl.
Når (C4-C5)alkanoler anvendes, må de være forskjellige fra de som virker som forløpere for andre T-A2-hovedkomponenter (f.eks. isobutanol, isoamylalkohol og 2-metylbutanol) med mindre samtidig økning av en eller flere av de nevnte komponenter er ønsket.
Foretrukne eksempler på flerverdige alkanoler er glyserol og propylenglykol.
Når den laverealkanolen er tilstede I forskjellige enantio-mere og epimere former, er i foreliggende sammenheng ment både hver enkelt form separat og blandingen av de enkelte formene i et hvilket som helst mengdeforhold.
Estere som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen er (C2-C22)alkanoylestere hvori typen og konsentrasjonen av alkanoyldelen i fermenter ingsmediet er slik at den ikke svekker veksten av mikroorganismekulturen eller produksjonen av det ønskede antibiotiske stoff i særlig grad. Generelt foretrekkes rettkjedede (C2-C4)alkanoler.
Fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse innbefatter dyrkning av ovennevnte stamme i et vandig næringskulturmedium inneholdende en assimilerbar kilde for karbon, en assimilerbar kilde for nitrogen og uorganiske salter under de ovennevnte betingelser med den forbedring at den angitte, selektive, effektive mengde av nevnte forløper tilsettes til fermenteringsmediet før inokulering av stammen eller under fermenteringsprosessen for på selektiv måte å øke produksjonen av en eller flere av teicoplanin A2~komponentene T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5.
Den definerte forløper vil, når den er tilsatt til kulturmediet, gi en konsentrasjon av selektiv forløper som er tilstrekkelig til å frembringe den selektive økning av en spesifikk komponent i T-A2-kompleks uten å forårsake toksiske effekter overfor mikroorganismen.
De nærende fermenteringsmediene som er egnet for fermenteringen av T-A2-produserende stamme som kan anvendes i utførelsen av foreliggende oppfinnelse inneholder vanligvis: en egnet karbonkilde som f.eks. kan velges fra sukkere, (f.eks. glukose, sukrose, maltose), polysakkarider (f.eks. stivelse, dekstran), polyalkoholer (f.eks. glyserol, propylenglykol); en egnet nitrogenkilde som f.eks. kan være valgt fra ammoniumsalter, asparagin, peanøttmel, soyabønnemel, kjøttekstrakt, trypton, pepton, gjærhydrolysat, gjærekstrakt og maisstøpevæske; sure mineralsalter slik som natriumklorid, kalsiumkarbonat, magnesiumsulfat.
Fermenteringen utføres i en tid varierende fra 50 til 200 timer under aerobe betingelser ved en temperatur mellom 25 og 35"C, fortrinnsvis mellom 27 og 33°C. Tilsetningen av den angitte mengde av forløperen kan foretas til de fermentative mediene før inokulering av den produserende stammen, men den foretas imidlertid fortrinnsvis 24-48 timer etter at fermenteringen har startet. Tilsetningen kan foretas i en eller flere porsjoner eller på en kontinuerlig måte.
Ifølge et typisk forsøk som representerer utførelse av foreliggende oppfinnelse, blir Actinoplanes teichomyceticus-stammen holdt på havremel-skråagar inokulert i en kolbe inneholdende 100 ml vegetativt medium. Etter 36 timer anvendes prøver av kulturen (5 ml) for å inokulere en serie fermenteringskolber inneholdende 100 ml fermentativt medium. Etter 24-48 timers fermentering tilsettes den selektive effektive mengde forløper slik det passer. Dersom samtidig økning av to eller flere hovedkomponenter i T-A2-komplekset er ønsket, kan to eller flere forløpere tilsettes til den samme fermenteringskolben. Fermenteringen fortsettes i ytterligere 60-150 timer, mediet frasentrifugeres og prøver av buljongen analyseres med henblikk på konsentrasjon av T-A2-hovedkomponenter ved høyeffektiv væskekromatografi (HPLC).
Tilsetningen av forløperen foretas generelt på en måte som ikke kan endre den forutbestemte pH-verdien for fermenteringsmediet. Således, når f.eks. forløpere bestående av fri syre tilsettes direkte til mediet, holdes pH-verdien regulert ved å behandle mediet med buffer eller ved umiddel-bar nøytralisering med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen.
Når forløperen som skal tilsettes er en aminosyre, kan den tilføres til fermenteringsmediet som en vandig oppløsning av dens salt med syrer eller baser som ikke er toksiske overfor den produserende mikroorganismen, hydroklorider og natriumsalter. Både racemiske blandinger og optisk aktive isomerer kan benyttes som forløpere. I det minste i noen tilfeller gir imidlertid tilsetningen av L-formen høyere utbytter enn den tilsvarende D-formen.
Ved bruk av L-aminosyre-forløperen for forøkelse av konsentrasjonen av T-A2-2 (valin, et salt eller en ester derav), T-A2-4 (L-isoleucin, et salt eller en ester derav) og/eller T-A2-5 (L-leucin, et salt eller en ester derav) i teicoplanin A2-kompleks, er det mulig å øke prosentandelen av T-A2-2, T-A2-4 eller T-A2-5 i fermenteringsproduktet opptil 90-955É av komplekset.
Med forløpere av laverealkansyre (f.eks. isosmørsyre, 2-metylsmørsyre, isolvalerianesyre, a-keto-isovalerianesyre, a-keto-3-metylvalerianesyre og a-keto-isokapronsyre) kan tilsetningen foretas gjennom en vandig oppløsning av deres salter med ikke-toksiske baser; ammonium- og natriumsalter blir vanligvis foretrukket.
Når salter av umettede fettsyrer, slik som linolsyre og oleinsyre, anvendes som den hensiktsmessige forløperen, er natrium- og ammoniumsalter vanligvis foretrukket. Ethvert salt med en base som ikke er toksiske overfor den produserende stammen kan imidlertid benyttes.
Når estere av de ovenfor nevnte laverealkansyrer og umettede fettsyrer med enverdige laverealkanoler anvendes som forløpere, er nevnte estere vanligvis avledet fra metanol, etanol og propanol, skjønt estere med C^C^-alkanoler også kan benyttes. I dette tilfellet må C^C^-alkanolen være forskjellig fra de som kan virke som forløpere for andre T-A2-hovedkomponenter (isobutanol, isoamylalkohol og 2-metylbutanol) med mindre samtidig økning av en eller flere av nevnte komponenter er ønsket.
Foretrukne estere av ovennevnte laverealkansyrer og umettede fettsyrer med flerverdige laverealkanoler, er estrene med etylenglykol og glyserol, f.eks. triisobutyrin, tri-olein og tri-linolein.
Tilsetningen av umettede fettsyrer kan også utføres ved bruk av naturlige råmaterialer inneholdende nevnte syrer som sådan eller deres glyserider. Kommersiell soyabønneolje f.eks. inneholder vanligvis fra 20 til 35% oleinsyre og fra 50 til 605É linolsyre som triglyserider; spekk inneholder fra 40 til 5556 oleinsyre; bomullsf røol je inneholder fra 20 til 45% oleinsyre og fra 30 til 55% linolsyre; solsikkeolje inneholder fra 15 til 25% oleinsyre og fra 65 til 75% linolsyre.
Alkanol-forløpere slik som isobutanol, isoamylalkohol og 2-metylbutanol tilsettes vanligvis som sådan til fermenteringsmediet. De kan imidlertid også tilføres som estere av syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen. Disse syrene må være forskjellige fra de som kan virke som forløpere for andre T-A2-hovedkomponenter (f.eks. isosmørsyre, Isovalerianesyre, 2-metylsmørsyre, linolsyre, osv.) med mindre samtidig økning av en eller flere av nevnte komponenter er ønsket. Vanligvis er estere med lineære laverealkansyrer slik som eddiksyre, propionsyre og smørsyre foretrukket.
Den mengde som skal tilsettes til fermenteringsmediet ifølge oppfinnelsen avhenger av typen av forløper. Med estrene av de laverealkansyrene (isosmørsyre, 2-metylsmørsyre, isovalerianesyre) og estrene av umettede fettsyrer (linolsyre, oleinsyre), anvendes vanligvis mengder slik at det gis en konsentrasjon i fermenteringsmediet varierende mellom 0,5 og 15 g/l, idet området mellom 1 og 5 g/l er foretrukket. Med de laverealkanolene (isobutanol, 2-metylbutanol, isoamylalkohol) og deres estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, blir vanligvis mengder som gir en konsentrasjon varierende mellom 0,5 og 5 g/l benyttet, idet området mellom 1 og 2 g/l er foretrukket.
Med aminosyrene (f.eks. valin, leucin, isoleucin) og ketosyrene (a-keto-isovalerianesyre, a-keto-p<->metylvaleriane-syre, oc-keto-isokapronsyre) og deres salter med syrer og baser varierer den "selektive effektive mengde" som tilsettes til fermenteringsmediet vanligvis mellom 0,5 og 5 g/l, idet området mellom 1 og 3 g/l er foretrukket.
I tilfelle der de lavere alkansyrene (f.eks. isosmørsyre, 2-metylsmørsyre, isovalerianesyre), de umettede fettsyrene (f.eks. linolsyre, oleinsyre) eller deres salter tilsettes direkte til fermenteringsmediet, varierer den "selektive effektive mengde" vanligvis mellom 0,1 og 2,5 g/l, idet området mellom 0,3 og 1,5 g/l er foretrukket.
Høyere konsentrasjoner er fremdeles effektive når det gjelder å forbedre den selektive økning av T-A2-hovedkomponentene, men det totale utbyttet av T-A2-kompleks nedsettes på grunn av toksiske effekter på mikroorganismen.
Følgende eksempler beskriver i detalj noen spesifikke utførelser av foreliggende oppfinnelse.
Eksempel 1
Generell metode
En havremel-skråagar av Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 ble inokulert 1 en 500 ml kolbe Inneholdende 100 ml av følgende vegetative medium:
Oppløsning A: 10% natriumklorid (vekt/vol.)
Oppløsning B: 10% kalsiumklorid (vekt/vol.)
Oppløsning C: H3BO3: 50 mg; CuS04: 4 mg; Kl: 10 mg; FeCl3: 20 mg; MgS04: 40 mg; FeS04: 40 mg;
(NH4)2Mo04: 20 mg; i 100 ml destillert vann.
Etter 36 timers vekst på en roterende rysteinnretning, ble 5 ml av kulturen benyttet for å inokulere testkolbene og standardkolbene inneholdende hver 100 ml fermenteringsmedium med følgende sammensetning:
Oppløsninger A, B og C som angitt ovenfor.
Fermenteringen ble foretatt ved 28-30°C på en roterende rysteinnretning. Etter 24 timer ble den hensiktsmessige •forløperen tilsatt. Kulturen ble sentrifugert etter 72 timer og prøver av 50 pl av buljongen ble analysert med henblikk på konsentrasjon av T-A2-hovedkomponenter.
Analysen ble foretatt i overensstemmelse med følgende HPLC-metode: a. Separering ved reversert gradient- faseskilling Instrument: pumpe Varlan 5000 A;
detektor Varlan ved 254 pm;
lnjektor: Rheodyne modell 7125;
integrator: Spectra Physics modell 4000;
Kolonne: Zorbax<R> ODS 5 pm, 4,6 x 150 mm; (Du Pont)
Mobil fase: A) CH3CN : 0,025 M NaH2P04 1:9, pH 6,0
B) CH3CN : 0,025 M NaH2P04 7:3, pH 6,0
Gradient profil: lineær fra 0% av B til 50* av B på 30 min.
Strømningshastighet 2 ml/min.
In. 1eks. 1on: 50 pl av fermenteringsmedium
Retensjonstider (minutter)
T-A2-1 =16,9
T-A2-2 = 18,0
T-A2-3 =18,6
T-A2-4 =20,5
T-A2-5 = 20,9
Indre standard: 3,5-dIhydroksytoluen (r.t. 6,3 minutter).
b. Prosentvis fordeling
Komponentene ble separert ved hjelp av den ovenfor angitte metode og deres relative fordeling ble oppnådd som en prosent av det totale av fem topper ved arealprosentmetoden.
Tri-olein (inneholdende 10 vekt-* tri-linolein)
Ved å følge den ovenfor angitte metode i et ytterligere sett av forsøk, ble følgende data oppnådd.
Eksempel 2
Generell metode
Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 ble fordyrket i en 500 ml rystekolbe inneholdende 100 ml av følgende medium:
Kolbene ble rystet i 24 timer ved 28-30°C og deretter ble forkulturen benyttet for å inokulere krukke-fermentorer hver inneholdende 10 liter av følgende næringsmedium: Fermentorene ble Inkubert aerobt under omrøring i 24 timer og deretter ble den hensiktsmessige forløperen tilsatt. Fermenteringen ble fortsatt i ytterligere 90 timer, hvoretter fermentorene ble høstet. Prøver av buljongen (100 ml) ble filtrert ved pH 11 (pH-verdien ble justert ved tilsetning av 205É (vekt/vol.) natr iumhydr oksyd) og analysert ifølge metoden beskrevet i eksempel 1 ved injeksjon av 40 pl av hver filtrerte prøveoppløsning hvis pH var justert til 7,38 med en 0,1M fosfatbuffer. For sammenligningsformål ble myristinsyre, tripalmitin og tristearin tilsatt til fire krukke-fermentorer ved en konsentrasjon på 1 g/l, 5 g/l og 10 g/l respektivt, under de samme betingelser som angitt ovenfor. Ingen økende effekt av noen av T-A2-hovedkomponentforholdene ble observert.
Eksempel 3
Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 ble fordyrket som beskrevet i eksempel 2. Kolbene av forkulturen ble benyttet for inokulere en krukke-fermentor inneholdende 10 liter av næringsmediet angitt i eksempel 2.
Fermentoren ble inkubert aerobt under omrøring ved 25 °C i 24 timer og deretter ble 2 g/l L-valin tilsatt. L-valinen hadde på forhånd blitt oppløst i vann (2 g/15 ml) ved tilsetning av svovelsyre for oppnåelse av pH 3 og den oppnådde oppløsning hadde blitt omrørt ved 120°C i 10 minutter.
Fermenteringen ble fortsatt ved 25°C i ytterligere 50 timer, hvoretter fermentoren ble høstet.
Buljongen som ble filtrert ved pH 11 og analysert Ifølge metoden beskrevet i eksempel 1, inneholdt 220 pg/1 av T-A2 med følgende sammensetning: T-A2-1: 2% ; T-A2-2: 95*; T-A2-3: 3%.

Claims (8)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av teicoplanin A2 (T-A2) selektivt anriket på enhver av dens hovedkomponenter T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 og T-A2-5, karakterisert ved at det ved fermentering ved en temperatur mellom 25 og 35°C, og fortrinnsvis mellom 27 og 35°C, av Actinoplanes teicomyceticus nov. sp. ATCC 31121 tilsettes en selektivt effektiv mengde av en forløper, fortrinnsvis 24-48 timer etter at fermenteringen er startet, for den respektive acylgruppen i glukosamindelen i T-A2, hvor: a) forløperen for økning av forholdet for T-A2-1 1 T-A2-kompleks velges fra linolsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-15 g/l. b) forløperen for økning av forholdet for T-A2-2 i T-A2-kompleks velges fra (i) val in, dens salter med syrer og baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, (ii) alfa-keto-isovalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-5 g/l. (ili) isosmørsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-15 g/l, eller (iv) Isobutanol og dens estere med syrer som er Ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, c) forløperen for økning av forholdet for T-A2-3 i T-A2 kompleks velges fra oleinsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganimen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på 0,5-15 g/l, d) forløperen for økning av forholdet for T-A2-4 i T-A2-kompleks velges fra (i) isoleucin, dens salter med syrer og baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, (ii) alfa-keto-betametylvalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler, i respektive mengder på 0,5-5 g/l; (ili) 2-metylsmørsyre, dens salter med baser som er Ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,0 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler 1 en mengde på 0,5-15 g/l, eller (iv) 2-metylbutanol og dens estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, e) forløperen for økning av forholdet for T-A2-5 i T-A2-kompleks velges fra (i) leucin, dens salter med syrer og baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l, (ii) isovalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,1-2,5 g/l, og dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler i en mengde på 0,5-15 g/l, (lii) alfa-keto-isokapronsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, dens estere med mono- og polyhydroksylaverealkanoler I respektive mengder på 0,5-5 g/l; eller (iv) isoamylalkohol og dens estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på 0,5-5 g/l.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at forløperen som tilsettes under punkt a), er (i) linolsyre eller dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 0,3 og 1,5 g/l, eller (ii) en ester av linolsyre med en mono-eller polyhydroksylaverealkanol, i en mengde på mellom 1 og 5 g/l.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at forløperen som tilsettes under punkt b), er (i) valin eller dens salter med syrer og baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 1 og 3 g/l, (ii) isosmørsyre og dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 0,3 og 1,5 g/l, (ili) en ester av smørsyre med en mono- eller poly hydroksylaverealkanol, i en mengde på mellom 1 og 5 g/l, (iv) isobutanol eller dens estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 1 og 2 g/l, eller (v) alfa-keto-isovalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen eller dens estere med mono- eller polyhydroksylaverealkanoler, I en mengde på mellom 1 og 3 g/l.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at forløperen som tilsettes under punkt c), er (i) oleinsyre eller dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 0,3 og 1,5 g/l, eller (ii) en ester av oleinsyre med en mono- eller polyhydroksylaverealkanol, i en mengde på mellom 1 og 5 g/l.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at forløperen som tilsettes under punkt d), er (i) isoleucin eller dens salter med syrer og baser som er Ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 1 og 3 g/l, (ii) 2-metylsmørsyre eller dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 0,3 og 1,5 g/l, (lii) en ester av 2-metylsmørsyre med en mono- eller polyhydroksylaverealkanol, i en mengde på mellom 1 og 5 g/l, (iv) 2-metylbutanol eller dens ester med en syre som er lkke-toksisk overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 1 og 2 g/l, eller (v) alfa-keto-betametylvalerianesyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen eller dens estere med mono- eller polyhydroksylaverealkanoler, i en mengde på mellom 1 og 3 g/l.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at forløperen som tilsettes under punkt e), er (i) leucin eller dens salter med syrer og baser som er Ikke-toksiske overfor mikroorganismen, i en mengde på mellom 1 og 3 g/l, (II) lsovalerianesyre eller dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, I en mengde på mellom 0,3 og 1,5 g/l, (lii) lsovalerianesyre med en mono- eller polyhydroksylaverealkanol, i en mengde på mellom 1 og 5 g/l, (lv) Isoamylalkohol eller dens estere med syrer som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, 1 en mengde på mellom 1 og 2 g/l, eller (v) alfa-keto-isokapronsyre, dens salter med baser som er ikke-toksiske overfor mikroorganismen, eller dens estere med mono- eller polyhydroksylaverealkanoler, 1 en mengde på mellom 1 og 3 g/l.
7. Fremgangsmåte ifølge hvilket som helst av kravene 1-6, karakterisert ved at de umettede fettsyrene eller deres estere tilsettes som naturlige råmaterialer inneholdende nevnte syrer eller deres glycerider.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 1, for anrikning av teicoplanin A2 med henblikk på dens komponenter 2, 4 eller 5, i en prosentandel opptil 95*, karakterisert ved at valin, Isoleucin eller leucin, respektivt, tilsettes til fermenteringsmediet hver i mengder på 0,5-5 g/l.
NO861986A 1985-05-21 1986-05-20 Fremgangsmaate for fremstilling av teicoplanin a2<selektivt anriket paa enhver av dens hovedkomponenter. NO167402C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB858512795A GB8512795D0 (en) 1985-05-21 1985-05-21 Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO861986L NO861986L (no) 1986-11-24
NO167402B true NO167402B (no) 1991-07-22
NO167402C NO167402C (no) 1991-10-30

Family

ID=10579438

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO861986A NO167402C (no) 1985-05-21 1986-05-20 Fremgangsmaate for fremstilling av teicoplanin a2<selektivt anriket paa enhver av dens hovedkomponenter.

Country Status (23)

Country Link
US (1) US4927754A (no)
EP (1) EP0204179B1 (no)
JP (1) JP2506082B2 (no)
KR (1) KR940005656B1 (no)
CN (1) CN1029321C (no)
AR (1) AR243238A1 (no)
AT (1) ATE47883T1 (no)
AU (1) AU597251B2 (no)
CA (1) CA1249785A (no)
DE (1) DE3666839D1 (no)
DK (1) DK165703C (no)
ES (1) ES8708017A1 (no)
FI (1) FI87234C (no)
GB (1) GB8512795D0 (no)
GR (1) GR861226B (no)
HU (1) HU195858B (no)
IE (1) IE58961B1 (no)
IL (1) IL78832A (no)
NO (1) NO167402C (no)
NZ (1) NZ216231A (no)
PH (1) PH23805A (no)
PT (1) PT82612B (no)
ZA (1) ZA863400B (no)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8512795D0 (en) * 1985-05-21 1985-06-26 Lepetit Spa Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex
GB8621912D0 (en) * 1986-09-11 1986-10-15 Lepetit Spa Increasing ratio of components of anti-biotic complex
GB8621911D0 (en) * 1986-09-11 1986-10-15 Lepetit Spa Increasing ratio of components of anti-biotic complex
GB8715735D0 (en) * 1987-07-03 1987-08-12 Lepetit Spa De-mannosyl teicoplanin derivatives
US5135857A (en) * 1987-07-03 1992-08-04 Gruppo Lepetit S.P.A. Process for the preparation of de-mannosyl teicoplanin derivatives
GB8720980D0 (en) * 1987-09-07 1987-10-14 Lepetit Spa Derivatives
ATE158306T1 (de) 1990-03-28 1997-10-15 Lepetit Spa Verfahren zur herstellung von mannosylteicoplaninderivaten und mannosylteicoplaninaglykon
CA2250578C (en) 1996-04-23 2003-06-24 Versicor Inc. Improved chemical process for preparing amide derivatives of antibiotic a 40926
US5916873A (en) * 1997-04-17 1999-06-29 Eli Lilly And Company Teicoplanin derivatives
KR100321305B1 (ko) * 1999-04-17 2002-03-18 박호군 변이주 액티노플라네스 테이코마이세티커스 ｍｓｌ 2211 및 그로부터 생산되는 테이코플라닌
KR100515186B1 (ko) * 2002-04-23 2005-09-16 주식회사 바이오앤진 테이코플라닌 고생산 변이주 에티노플레네스 테이코마이세티쿠스를 이용한 테이코플라닌의 발효 제조방법
US20060074014A1 (en) 2002-11-18 2006-04-06 Vicuron Pharmaceuticals Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
MXPA05005338A (es) 2002-11-18 2005-12-14 Vicuron Pharm Inc Metodos para administrar dalbavancin para el tratamiento de infecciones bacterianas.
US7119061B2 (en) 2002-11-18 2006-10-10 Vicuron Pharmaceuticals, Inc. Dalbavancin compositions for treatment of bacterial infections
DE60310717T2 (de) * 2003-09-17 2007-10-11 Alpharma Aps Teicoplanin-Zubereitung mit verbesserter antibiotischer Wirkung
EP1671640A1 (en) * 2004-12-17 2006-06-21 Biongene Co. Ltd. Mutant strain of Actinoplanes teichomyceticus for the production of teicoplanin
KR100965652B1 (ko) * 2008-02-21 2010-06-23 일동제약주식회사 테이코플라닌을 생산하는 신규한 미생물
CN106854670B (zh) * 2017-01-10 2020-03-10 鲁南制药集团股份有限公司 一种发酵法生产替考拉宁并调控其组分含量的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1496386A (en) * 1975-03-05 1977-12-30 Lepetit Spa Antibiotics
FI73697C (fi) * 1982-06-08 1987-11-09 Lepetit Spa Foerfarande foer framstaellning av individuella faktorer 1, 2, 3, 4 och 5 av teikomysin a2.
US4696817A (en) * 1983-10-11 1987-09-29 The Dow Chemical Company Extraction of teichomycin A2 from whole culture fermentation broth
GB8512795D0 (en) * 1985-05-21 1985-06-26 Lepetit Spa Increasing ratio of components of teicoplanin a2 complex

Also Published As

Publication number Publication date
FI87234B (fi) 1992-08-31
HUT42528A (en) 1987-07-28
AU597251B2 (en) 1990-05-31
ES555133A0 (es) 1987-09-01
ES8708017A1 (es) 1987-09-01
FI87234C (fi) 1992-12-10
IL78832A (en) 1991-06-30
DE3666839D1 (en) 1989-12-14
EP0204179A1 (en) 1986-12-10
PH23805A (en) 1989-11-23
DK165703B (da) 1993-01-04
ZA863400B (en) 1987-06-24
IE861334L (en) 1986-11-21
DK233086A (da) 1986-11-22
KR940005656B1 (ko) 1994-06-22
ATE47883T1 (de) 1989-11-15
PT82612B (pt) 1988-03-03
JPS61268195A (ja) 1986-11-27
GR861226B (en) 1986-09-11
HU195858B (en) 1988-07-28
FI861834A0 (fi) 1986-04-30
EP0204179B1 (en) 1989-11-08
DK233086D0 (da) 1986-05-20
NO167402C (no) 1991-10-30
NO861986L (no) 1986-11-24
GB8512795D0 (en) 1985-06-26
AU5710186A (en) 1986-11-27
AR243238A1 (es) 1993-07-30
US4927754A (en) 1990-05-22
CA1249785A (en) 1989-02-07
NZ216231A (en) 1989-07-27
FI861834A (fi) 1986-11-22
PT82612A (en) 1986-06-01
JP2506082B2 (ja) 1996-06-12
CN1029321C (zh) 1995-07-12
DK165703C (da) 1993-06-07
IL78832A0 (en) 1986-09-30
IE58961B1 (en) 1993-12-01
CN86103528A (zh) 1986-11-26
KR860009130A (ko) 1986-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO167402B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av teicoplanin a2&lt;selektivt anriket paa enhver av dens hovedkomponenter.
KR960016135B1 (ko) L-이소로이신(l-isoleucine)의 제조법
US5925550A (en) Method for selectively increasing the ratio of single major components of antibiotic A/16686 complex
KR960013575B1 (ko) 항생물질 a 40926 복합체 중 단일 주성분의 비율을 선택적으로 증가시키는 방법
KR101579766B1 (ko) 일종의 사이클릭 리포펩티드 화합물의 제조방법
CA1192157A (en) Fermentative preparation of l-leucine
US5232853A (en) Method for producing (2r,3s)-3-hydroxy-2-methylbutyrate by microbial reduction
US3907764A (en) Pepsinostrepins, novel protease inhibitors from streptomyces
CA2144331C (en) Process for the selective increase of production of antibiotic ge 2270 factor a
CH654850A5 (de) Fermentative herstellung von l-leucin.
AU675076C (en) Process for the selective increase of production of antibiotic GE 2270 factor A
US2965547A (en) Process for the production of l-6-diazo-5-oxonorleucine
Nimi et al. Effect of arginine on gramicidin S biosynthesis by Bacillus brevis
NO124729B (no)
JPS5928481A (ja) 抗生物質ｙ−０２０３９ｈおよびその製造法
JPH06327487A (ja) 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法
JPH0751597B2 (ja) ダイトサイジン類及びその生産方法
EP0247587A2 (en) A method for enhancing the yield of depsipeptide antibiotics by fermentation
DE3518212A1 (de) Kulturbruehe von myxococcus (corallococcus) coralloides ncib 12063, wirkstoffextrakt, wirkstoffgemisch, wirkstoffe und herstellungsverfahren

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired