NO162179B - Monoklonale antistoffer for anvendelse in vitro. - Google Patents
Monoklonale antistoffer for anvendelse in vitro. Download PDFInfo
- Publication number
- NO162179B NO162179B NO843293A NO843293A NO162179B NO 162179 B NO162179 B NO 162179B NO 843293 A NO843293 A NO 843293A NO 843293 A NO843293 A NO 843293A NO 162179 B NO162179 B NO 162179B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- atcc
- deposited
- sporozoites
- clone
- antigens
- Prior art date
Links
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 29
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 29
- 210000003046 sporozoite Anatomy 0.000 claims description 29
- 241000223932 Eimeria tenella Species 0.000 claims description 20
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 17
- 241000223924 Eimeria Species 0.000 claims description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 6
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 210000003936 merozoite Anatomy 0.000 description 4
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 4
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 210000003250 oocyst Anatomy 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 210000001563 schizont Anatomy 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 2-(4-octylphenoxy)ethanol Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=C(OCCO)C=C1 BHNQPLPANNDEGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 1
- 108010087765 Antipain Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N antipain Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 210000000973 gametocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 244000000040 protozoan parasite Species 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000006557 surface reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/20—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans from protozoa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
- C07K14/455—Eimeria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Den her beskrevne oppfinnelse vedrører monoklonale antistoffer som reagerer spesifikt mot sporozoitter av parasitten Eimeria tenella. Det beskrives hybridomakulturer som produserer antistoffer mot E. tenella. Slike antistoffer fås ved hjelp av hybridomateknologi. Sporozoitt-antigener identifiseres og karakteriseres.
Nærmere bestemt vedrører oppfinnelsen monoklonale antistoffer for bruk in vitro fremstilt ved hjelp av hybridomas dannet ved sammensmelting av celler fra en mus-uiyelomalinje og miltceller fra en mus som tidligere er blitt immunisert med sporozoitter av Eimeria tenella. Antistoffene er karakterisert ved at de (a) reagerer spesifikt med antigener fra Eimeria spp. sporozoitter, (b) reagerer spesifikt med antigener fra Eimeria tenella som har en molekylvekt på omtrent 13 til 150 kd, og (c) de er fremstilt fra hybridomas dannet ved sammen-smelting av p3 x 63.Ag8.653 myelomaceller og miltceller fra BALB/c-mus som tidligere er blitt immunisert med E. tenella sporozoitter, hvilke hybridomas betegnes klon nr. s5E5 og er deponert som ATCC nr. HB8403; klon nr. slC4 og er deponert som ATCC nr. HB83 33; klon nr. s2G8 og er deponert som ATCC nr. HB8405; klon nr. s5B9 og er deponert som ATCC nr. HB8402; klon nr. slA og er deponert som ATCC nr. HB8404; klon nr. s3D3 og er deponert som ATCC nr. HB8331; eller klon nr. slE4 og er deponert som ATCC nr. HB8332.
Coccidiose er en sykdom hos dyr forårsaket av mange forskjellige protozo-parasitter. Fugle-coccidiose er en ødeleggende sykdom hos fjærfe forårsaket av mange forskjellige arter av slekten Eimeria. Denne sykdommen har en komplisert livssyklus bestående av både aseksuelle og seksuelle stadier. Kyllinger infiseres i utgangspunktet med sykdommen etter inntak av frittlevende oocyster som vanligvis er forbundet med avføringsmateriale. Oocyster utvikler seg til invaderende aseksuelle sporozoitter i kyllingens fordøyelseskanal. Sporozoittene infiserer epitelceller og utvikler seg til flerkjernede former kjent som schizonter. Hver schizont modnes og frigjør eventuelt flere invaderende, aseksuelle former kjent som merozoitter. Disse merozoittene forlater den infiserte cellen og invaderer på nytt andre epitelceller. De flerfoldige invaderende aseksuelle stadiene som omfatter sporozoitter og merozoitter, svarer for mye av patologien ved coccidiose. Coccidioses seksuelle syklus startes opp når merozoitter differensieres til gametocytter. Befruktning skjer, og befruktningsprodukter kjent som oocyster frigjøres i avføringen. Parasittens livssyklus er følgelig komplisert. Hos kyllinger fullføres livssyklusen til Eimeria tenella, en representativ art, i løpet av ca. 7 til 9 dager.
På grunn av de voldsomme økonomiske tapene som påføres fjærfenæringen av Eimeria-arter, er era vaksine mot parasitten svært ønskelig. På grunn av. kompleksiteten til parasittens livssyklus og variasjonen i mengde antigener til stede i hvert stadium, er det imidlertid tidligere blitt observert at de aktiverte eller drepte parasitter ikke har frembragt homogen immunitet. En løsning på dette problemet er å isolere og karakterisere bestemte antigener fra parasitten og administrere disse i en tilstrekkelig mengde til å tjene som et immuniserende middel. Slike antigener vil fortrinnsvis gis beskyttelse mot infeksjon fra alle viktige arter. Det er kjent at forskjellige arter av Eimeria, såvel som forskjellige stadier i livssyklusen til de samme artene, både har felles og spesifikke antigener (Cerna, Z., Folia Prasitologica (Prague) 17: 135-140 (1970; Davis et al., Immunol..34: 879-888 (1978); Rose, M.E., Immunol. 2: 112-122 (1959),;, Rose et al., Immunol. 5: 79-92 (1963); og Tanielian et al'. „ Acta Parasitol. Yugosl. 7: 79-84 (1976)). Det er også kjent at utvikling* av immunitet mot Eimeria er arts-spesifikk ogj at. det hos noen arter av tamme fugler er betydelig stammespesifikk immunitet ('Jfe-ffers", T.K. ; In Long, P..L. et al. ;(eds.),. Avian Coccidiosis, s. 57-125, Proe. 13th Poultry Sei. Symp. (1978); Joyner, L.P., Parasitol. 59: 725-732 (1969); Long, P.L., Parasitol. 69: 337-347 (1974) og Long et al., Parasitol. 79: 451-457 (1979)). Aktuelle immunogener fra Eimeria-arter som er i stand til å stimulere beskyttende immunitet hos fjærfe- eller pattedyr-verter er ennå ikke blitt isolert eller identifisert. Slike Eimeria-immunogener vil sannsynligvis gi vellykket immunisering mot coccidiose. ;Utviklingen av lymfocytt-hybridoma-teknologi gir et ;redskap for å produsere forholdsvis store mengder spesifikke antistoffer mot forskjellige antigener hos Eimeria. Ved å ;smelte sammen bestemte antistoff-produserende celler (miltceller) med celler fra en myeloma-tumor er det mulig å produsere hybridoma-celler som utskiller monoklonale antistoffer rettet spesifikt mot det opprinnelige sensibiliserende antigen. ;(Kohler & Milstein, Nature (London) 256: 495-497 (1975)). ;Forskjellige patenter vedrørende hybridomakulturer og monoklonale antistoffer er kjent (US-patentskrift nr. 4.172.124; 4.196.265; 4.271.145; 4.361.549; 4.631.550; 4.364.932: 4.364.933; 4.364.934; 4.364.935; 4.364.936; 4.381.292; og 4.381.295). ;Et formål ved foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe nye og anvendelige monoklonale antistoffer mot sporozoitter fra slekten Eimeria. Et ytterligere formål er å isolere og identifisere spesifikke antigener fra E. tenella. Disse formålene trer frem i den følgende beskrivelse og er spesielt skissert i kravene. ;Det brukes et preparat av E. tenella sporozoitter til å immunisere mus for eventuelt å frembringe monoklonale antistoffer ved å følge fremgangsmåten til Kohler og Milstein slik den er beskrevet nedenunder. De monoklonale antistoffene brukes til å identifisere antigener hos parasitten. Antigenene som utløser monoklonale antistoffer som reagerer med sporozoitter, og gir nøytralisering av parasittvekst, anses som beskyttende antigener. ;Oppløselige antigener fås fra sporozoitter av E. tenella. Disse oppløselige antigenene separeres elektroforetisk etter molekylvekt, og de som reagerer spesifikt med monoklonale antistoffer ifølge foreliggende oppfinnelse, identifiseres. Ved å bruke passende standarder, karakteriseres så de reaktive antigenene på basis av molekylvekt. ;De følgende eksempler tjener ytterligere til å illustrere oppfinnelsen. ;EKSEMPEL 1 ;Konstruksjon av hvbridomalinier ;Sporozoitter av organismen Eimeria tenella fås vjed å frigjøre sporulerte occyster ved å bruke kjente fremgangsmåter ;(Doran et al., Proe. Helmintol. Soc. Wash. 34: 59-65 (1967)). Et således oppnådd sporozoitt-preparat av E. tenella brukes til å immunisere.^ 18 uker gamle BALB/c-mus av hunnkjønn ved hjelp av intraperitoneal injeksjon. Etter å ha fastslått at en immunisert mus produserer anti-sporozoitt-antistoffer ved å bruke en indirekte immunofluoresCensprøve-teknikk (IFA) som er kjent innenfor fagområdet, tas det ut miltceller fra mus og de smeltes sammen med myeloma-cellelinjen P3X63 Ag8.653 fra mus. Sammensmeltnings-fremgangsmåten utføres i nærvær av 30 til 35% polyetylenglykol (950* - 1050). Fremgangsmåten for frembringelse av hybridomas er tidligere blitt beskrevet (jfr. Kennett et al., Monoclonal Antibodies; — Plenum Press: 365-371, 1980). Hybridoma-sammensmeltingsprodukter dyrkes- i HAT-medium (Littlefield,
J.W. , Science, I4S>:: 7'09>-710 (1964)), som inneholder Iscove's modifiserte Dulbecco's' medium (IMDM); med 20% supplement av seruim fra kalvefoster. Dyrkningsmedier overvåkes med hensyn på anti-sporozoitt-antistoffproduksjon ved hjelp av indirekte immunofluorescensprøve (IFA) ved å bruke glutaraldehydfikserte sporozoitter av E. tenella som antigenkilde. Av alle de undersøkte kulturene ble 33 brønner påvist ved hjelp av IFA å være positive.
For å sikre at hybridomakulturene er monoklonale ble det brukt en begrensende fortynningsfremgangsmåte. Etter eksponering av E. tenella sporozoitter mot forskjellige monoklonale antistoffer ifølge oppfinnelsen iakttas tre viktige IFA-reaktivitetsmønstre på behandlende sporozoitter: (1) reaksjon på hele overflaten til sporozoittene; (2) overflatereaksjon som flekker på sporozoittene; (3) indre reaksjon rundt kjerne-membranene til sporozoittene. Disse reaksjonsmønstrene bekreftes vedi hg,elp av ferritin-merking og "transmission election"-mikroskopi (Speer et al., J. of Protozoology under trykning). Som, bekreftet ved hjelp av IFA, frembringer hybridomakulturer som her beskrevet identiske antistoffer etter kloning. Kloner dyrkes enten in vitro eller i BALB/c-mus som peritoneale tumorer, og bukhulevæsken inneholder antistoffer i en konsen-trasjon opptil omtrent 10 mg/ml.
EKSEMPEL 2
Fremstilling av antigener forbundet med sporozoitter av E. tenella
Nylig frisatte sporozoitter av E. tenella brukes til anti-genfremstillingen. Bestanddelene i den ytre membranen hos sporozoittene ekstraheres ved å bruke detergenter (dvs. 0,5% "Nonidet P40", 0,5 til 2% "CHAPS" eller 0,5% til 1% "Triton X-100") i 5 mM natriumfosfatbuffer med en pH på 7,8. Bufferen inneholder de følgende proteaseinhibitorer: aprotinin (2 trypsin-enheter/ml), antipain (25 yg/ml), leupeptin (25 yg/ml), fenyl-metylsulfonylfluorid (4 mM) (Yoshida et al., J. Exp. Med., 154: 1225 - 1236 (1981)). Materialet som er gjort oppløselig ved hjelp av detergenter, sentrifugeres ved 100 000 x g i 10 min for å fjerne faststoffer. Den klare supernatanten inneholder opplø-selige antigener forbundet med sporozoitter av E. tenella.
EKSEMPEL 3
Antigenkarakterisering
Oppløselige antigener av E. tenella sporozoitter adskilles etter molekylvekt ved å bruke SDS-polyakrylamidgel-elektroforese (PAGE) (Laemmli, U.K., Nature 227: 680 - 685 (1970)). Proteinene som er adskilt ved hjelp av SDS-PAGE overføres elektroforetisk til nitrocellulosemembraner ved å bruke "Western blotting tech-nique" (Towbin et al., Proe, Nati. Acad. Sei. (USA) 76: 4350 - 4354 (1979)). Nitrocellulosefilteret omsettes så enten med for-tynnet bukhulevæske eller brukt hybridomakulturvæske som inneholder antistoffer. Bundede monoklonale antistoffer påvises så ved å bruke en radioimmunpåvisningsfremgangsmåte omfattende 125^ anti-mus IgG antistoff (New England Nuclear). Det andre anti-stoffet, som ikke er bundet, fjernes ved vasking og nitrocellu-losef Utrene eksponeres så med Kodak røntgenfilm "XAR-5".
Eventuelt identifiseres bestemte komplekser mellom antigen og monoklonalt antistoff ved hjelp av en ELISA-teknikk under anvendelse av pepperrot-peroksydase-forbundet IgG-antistoff fra kanin mot mus-immunoglobulin (Burnette et al., Anal. Biochem.
112: 195-203 (1981)). Prøvesettet "Bio-Rad Immuno Blot" anvendes.
De tilsynelatende molekylvektene til de reaktive sporozoitt-antigenene bestemmes ved å sammenligne de elektroforetiske Rf-verdiene til antigenene med Rf-verdiene til forbindelser med kjent molekylvekt kjørt som standarder sammen med antigenene i det samme systemet. Molekylvektdata funnet eksperimentelt for forskjellige antigener er vist i tabell I.
Hybridomcellelinjene nr. slC4, nr. s3D3, nr. slE4, nr. s5B9, nr. s5E5, nr. slA og nr. s2G8, isolert som beskrevet ovenfor, er blitt deponert ved American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Maryland og er der blitt tilført den permanente samlingen. Nr. slC4 er blitt tildelt nummeret HB8333; nr. s3D3 har nummeret HB8331, nr. slE4 er blitt betegnet med nr. HB8332, nr. s5B9 er blitt betegnet nr. HB8402, nr. s5E5 er blitt betegnet nr. HB 8403, nr. slA er blitt betegnet nr. HB8404 og nr. s2G8 er blitt betegnet nr. HB8405. Tilgang til antistoffene er tilgjengelig under behandlingen av foreliggende søknad for de som Comissioner of Patents and Trademarks bestemmer er berettiget til det under 37 CF.R. 1.14 og 35 U.S.C. 122, og alle restriksjoner på almenhetens tilgjengelighet til HB8331, HB8332, HB8333, HB8402, HB8403, HB8404 og HB8405 vil bli ugjenkallelig fjernet etter meddelelse av et patent på foreliggende søknad.
Nr. slC4, HB8333, nr. s3D3, HB8331 og nr. slE4 , HB8332 ble deponert ved ATCC 11. august 1983. De nye monoklonale antistoffene nr. s5B9, HB8402, nr. s5E5, HB8403, nr. slA, HB8404 og nr. s2G8, HB8405 ble deponert ved ATCC 1. november 1983.
Claims (1)
- Monoklonale antistoffer for bruk in vitro fremstilt ved hjelp av hybridomas dannet ved sammensmelting av celler fra en mus-myelomalinje og miltceller fra en mus som tidligere er blitt immunisert med sporozoitter av Eimeria tenella, karakterisert ved at antistoffene (a) reagerer spesifikt med antigener fra Eimeria spp.sporozoitter,(b) reagerer spesifikt med antigener fra Eimeria tenella somhar en molekylvekt på omtrent 13 til 150 kd, og(c) de er fremstilt fra hybridomas dannet ved sammen-smelting av p3 x 63.Ag8.653 myelomaceller og miltceller fra BALB/c-mus som tidligere er blitt immunisert med E. tenellasporozoitter,hvilke hybridomas betegnes klon nr. s5E5 og er deponert som ATCC nr. HB8403; klon nr. slC4 og er deponert som ATCC nr.HB8333; klon nr. s2G8 og er deponert som ATCC nr. HB8405; klon nr. s5B9 og er deponert som ATCC nr. HB8402; klon nr. slA og er deponert som ATCC nr. HB8404; klon nr. s3D3 og er deponert som ATCC nr. HB8331; eller klon nr. slE4 og er deponert som ATCC nr. HB8332.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US52481983A | 1983-08-19 | 1983-08-19 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO843293L NO843293L (no) | 1985-02-20 |
| NO162179B true NO162179B (no) | 1989-08-14 |
| NO162179C NO162179C (no) | 1989-11-22 |
Family
ID=24090798
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO843293A NO162179C (no) | 1983-08-19 | 1984-08-17 | Monoklonale antistoffer for anvendelse in vitro. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0135712A3 (no) |
| JP (2) | JPS6067499A (no) |
| KR (1) | KR850001697A (no) |
| AU (1) | AU585484B2 (no) |
| CA (1) | CA1241923A (no) |
| DK (2) | DK397184A (no) |
| ES (4) | ES8607025A1 (no) |
| FI (1) | FI83667C (no) |
| IL (1) | IL72656A (no) |
| NO (1) | NO162179C (no) |
| NZ (1) | NZ209077A (no) |
| PT (1) | PT79075B (no) |
| ZA (1) | ZA846433B (no) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0135073A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozites of eimeria spp. |
| CA1340520C (en) * | 1984-06-05 | 1999-05-04 | Karel Z. Newman Jr. | Antigenic proteins and vaccines containing them and protective antibodies directed to them for prevention of coccidiosis caused by eimeria tenella and eimeria necatrix |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
| US5279960A (en) * | 1984-07-05 | 1994-01-18 | Enzon Corp. | 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella |
| EP0190254A4 (en) * | 1984-07-05 | 1987-03-09 | Genex Corp | GENE CLONE AND PROCESS FOR THE PREPARATION AND USE THEREOF. |
| US5273901A (en) * | 1984-07-05 | 1993-12-28 | Enzon Corp. | Genetically engineered coccidiosis sporozoite 21.5 Kb antigen, ac-6b |
| US4724145A (en) * | 1985-11-18 | 1988-02-09 | Merck & Co., Inc. | Eimeria acervulina immunogens |
| ES2091861T3 (es) | 1985-12-03 | 1996-11-16 | Solvay | Proteinas antigenicas y vacunas que las contienen para la prevencion de la coccidiosis. |
| EP0241139A3 (en) * | 1986-03-13 | 1989-04-19 | Merck & Co. Inc. | Anti-idiotypic vaccine for coccidiosis |
| CA1340838C (en) | 1986-08-14 | 1999-12-07 | Michael Wallach | Coccidiosis vacine |
| US5496550A (en) * | 1986-08-14 | 1996-03-05 | Chilwalner | Method of reducing the output of Eimeria oocysts from a newborn chick |
| ATE145245T1 (de) * | 1987-03-06 | 1996-11-15 | Amgen Boulder Inc | Polypeptide zur verwendung bei der diagnose von kokkidien-infektion und rekombinant-dns, verfahren zur herstellung derselben |
| ZA893740B (en) * | 1988-06-03 | 1990-02-28 | Hoffmann La Roche | Recombinant coccidiosis vaccines |
| ZA902147B (en) * | 1989-03-28 | 1990-12-28 | Akzo Nv | Coccidiosis vaccine |
| JPH06504187A (ja) * | 1990-09-12 | 1994-05-19 | ジェネックス・コーポレーション | 遺伝子操作されたコクシジウム症ワクチン |
| US6008342A (en) * | 1991-07-12 | 1999-12-28 | Roche Vitamins Inc. | DNA encoding eimeria antigen |
| US5403581A (en) * | 1991-07-12 | 1995-04-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Coccidiosis vaccines |
| EP0872486A1 (en) * | 1997-04-09 | 1998-10-21 | Akzo Nobel N.V. | Eimeria proteins as vaccines |
| US6680061B1 (en) | 1998-10-07 | 2004-01-20 | Theodorus Cornelis Schaap | Coccidiosis vaccines |
| ZA200400479B (en) | 2001-07-06 | 2006-05-31 | Abic Biolog Lab Teva | Nucleic acids encoding recombinant 56 a 82 KDA antigens from gametocytes of Eimeria maxima and their use |
| BR0210850A (pt) | 2001-07-06 | 2004-12-07 | Biolog Lab Teva Ltd | ácidos nucléicos que codificam um antìgeno de 250 kda recombinante de esporozoìtos/merozoìtos de eimeria máxima e seus usos |
| JP2003088370A (ja) * | 2001-09-03 | 2003-03-25 | Avicore Biotechnology Institute Inc | 鳥類コクシジウム症を誘発するアイメリア種のスポロゾイトの表面抗原に対するｓｃＦｖ組換え抗体 |
| JP6155758B2 (ja) * | 2013-03-29 | 2017-07-05 | 株式会社Ihi | 低温液体タンク |
| CN106046136B (zh) * | 2016-06-03 | 2019-02-22 | 山东农业大学 | 一种鸡柔嫩艾美尔球虫微线蛋-2突变体EtMIC2-2119 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5649323A (en) * | 1979-09-29 | 1981-05-02 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Coccidiostat |
| EP0135073A3 (en) * | 1983-08-19 | 1987-05-27 | American Cyanamid Company | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozites of eimeria spp. |
| US4639372A (en) * | 1984-06-29 | 1987-01-27 | Merck & Co., Inc. | Coccidiosis vaccine |
-
1984
- 1984-07-27 EP EP84108925A patent/EP0135712A3/en not_active Ceased
- 1984-07-31 AU AU31332/84A patent/AU585484B2/en not_active Ceased
- 1984-08-01 NZ NZ209077A patent/NZ209077A/xx unknown
- 1984-08-09 FI FI843142A patent/FI83667C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-12 IL IL72656A patent/IL72656A/xx unknown
- 1984-08-13 PT PT79075A patent/PT79075B/pt unknown
- 1984-08-16 ES ES535203A patent/ES8607025A1/es not_active Expired
- 1984-08-17 DK DK397184A patent/DK397184A/da not_active Application Discontinuation
- 1984-08-17 JP JP59170518A patent/JPS6067499A/ja active Pending
- 1984-08-17 NO NO843293A patent/NO162179C/no unknown
- 1984-08-17 ZA ZA846433A patent/ZA846433B/xx unknown
- 1984-08-17 CA CA000461242A patent/CA1241923A/en not_active Expired
- 1984-08-18 KR KR1019840004994A patent/KR850001697A/ko not_active Application Discontinuation
-
1985
- 1985-07-26 ES ES545607A patent/ES8606901A1/es not_active Expired
-
1986
- 1986-01-31 ES ES551497A patent/ES8802164A1/es not_active Expired
- 1986-01-31 ES ES551496A patent/ES8900008A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-12-21 DK DK304590A patent/DK162171C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-14 JP JP4208561A patent/JPH05317080A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES8900008A1 (es) | 1988-11-16 |
| PT79075A (en) | 1984-09-01 |
| AU3133284A (en) | 1985-02-21 |
| ES535203A0 (es) | 1986-06-01 |
| ES8607025A1 (es) | 1986-06-01 |
| KR850001697A (ko) | 1985-04-01 |
| JPS6067499A (ja) | 1985-04-17 |
| NO843293L (no) | 1985-02-20 |
| PT79075B (en) | 1986-07-22 |
| ES8802164A1 (es) | 1988-04-01 |
| IL72656A0 (en) | 1984-11-30 |
| AU585484B2 (en) | 1989-06-22 |
| DK162171C (da) | 1992-03-16 |
| EP0135712A3 (en) | 1987-05-27 |
| IL72656A (en) | 1989-06-30 |
| FI843142A (fi) | 1985-02-20 |
| ZA846433B (en) | 1985-03-27 |
| DK304590A (da) | 1990-12-21 |
| CA1241923A (en) | 1988-09-13 |
| FI843142A0 (fi) | 1984-08-09 |
| DK397184A (da) | 1985-02-20 |
| FI83667B (fi) | 1991-04-30 |
| DK304590D0 (da) | 1990-12-21 |
| NZ209077A (en) | 1988-08-30 |
| ES551497A0 (es) | 1988-04-01 |
| DK397184D0 (da) | 1984-08-17 |
| JPH05317080A (ja) | 1993-12-03 |
| ES8606901A1 (es) | 1986-05-16 |
| ES551496A0 (es) | 1988-11-16 |
| ES545607A0 (es) | 1986-05-16 |
| NO162179C (no) | 1989-11-22 |
| FI83667C (fi) | 1991-08-12 |
| CA1261285C (no) | 1989-09-26 |
| DK162171B (da) | 1991-09-23 |
| EP0135712A2 (en) | 1985-04-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO162179B (no) | Monoklonale antistoffer for anvendelse in vitro. | |
| US4710377A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of Eimeria spp. | |
| Vermeulen et al. | Sequential expression of antigens on sexual stages of Plasmodium falciparum accessible to transmission-blocking antibodies in the mosquito. | |
| US4650676A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of Eimeria spp. | |
| Quakyi et al. | The 230-kDa gamete surface protein of Plasmodium falciparum is also a target for transmission-blocking antibodies. | |
| US5001225A (en) | Monoclonal antibodies to a pan-malarial antigen | |
| Chulay et al. | Monoclonal antibody characterization of Plasmodium falciparum antigens in immune complexes formed when schizonts rupture in the presence of immune serum. | |
| US4837016A (en) | Protozoal antigen | |
| NO162797B (no) | Monoklonalt antistofff for anvendelse in vitro. | |
| CA1196282A (en) | Protozoal antigen | |
| US5028694A (en) | Antigenic proteins and vaccines containing them for prevention of coccidiosis caused by eimeria Eimeria necatrix and Eimeria tenella | |
| GB2099300A (en) | Antigens from parasites of the genus plasmodium | |
| Klotz et al. | A 60-kDa Plasmodium falciparum protein at the moving junction formed between merozoite and erythrocyte during invasion | |
| Nagasawa et al. | Plasmodium malariae: distribution of circumsporozoite protein in midgut oocysts and salivary gland sporozoites | |
| Hernández-Sánchez et al. | Giardia duodenalis: adhesion-deficient clones have reduced ability to establish infection in Mongolian gerbils | |
| JP3081208B2 (ja) | Ｍｃａ１６‐８８によって認識される抗原 | |
| Gabriel et al. | Identification of a Plasmodium chaubaudi antigen present in the membrane of ring stage infected erythrocytes | |
| De Water et al. | Ultrastructural localization of the circulating cathodic antigen in the digestive tract of various life-cycle stages of Schistosoma mansoni | |
| CA1261285A (en) | Antigens and monoclonal antibodies reactive against sporozoites of eimeria spp | |
| Fruit et al. | Trypanosoma cruzi: location of a specific antigen on the surface of bloodstream trypomastigote and culture epimastigote forms | |
| US4746612A (en) | Aotus interspecies hybridomas and monoclonal receptors produced thereby | |
| Masuda et al. | Monoclonal anti-gametocyte antibodies identify an antigen present in all blood stages of Plasmodium falciparum | |
| EP0141616A2 (en) | Hybrid cell lines producing monoclonal antibodies directed against trichomonas vaginalis determinants | |
| Procell et al. | Circumsporozoite protein of the human malaria parasite Plasmodium ovale identified with monoclonal antibodies | |
| WILLIAMS et al. | Characterization and Quantitation of Membrane Antigens of New World Leishmania Species by Using Monoclonal Antibodies in Western Blot and Flow Microfluorometric Assays 1 |