NL8001292A

NL8001292A - Carcinostatisch en immunostimulerend middel.

Info

Publication number: NL8001292A
Application number: NL8001292A
Authority: NL
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 1979-03-05
Filing date: 1980-03-04
Publication date: 1980-09-09
Also published as: GB2046092B; DE3008082A1; DE3008082C2; SE8001685L; IT8048066A0; GB2046092A; US4372949A; CA1145260A; FR2450608B1; SE459228B; FR2450608A1; IT1145357B

Description

•l

Carcinostatisch en immunostimulerend middel.

De uitvinding heeft betrekking op een carcinostatisch en immunostimulerend middel, dat een lysofosfolipide en een fosfolipide bevat en op een werkwijze voor hetbereiden daarvan, alsmede op een werkwijze voor het behandelen van 5 kwaadaardige aandoeningen door toediening van dit middel.

Lysofosfolipiden hebben een uitstekende carcinostatische en immunostimulerende werking. Anderzijds vertonen zij ook een sterke hemolyse. De lysofosfolipiden vormen dan ook op zichzelf een groot probleem in verband met 10 een veilig gebruik in farmaceutische produkten. Ook raken lysofosfolipiden onder inaktivering sterk gebonden aan serum-proteïnen (bijna altijd albumine), waardoor hun carcinostatische , -en immunostimulerende werking verloren gaat. Aldus zijn er nog geen carcinostatische en immunostimulerende middelen bekend, die 15 lysofosfolipiden bevatten en een stof, die de voornaamste werking van de lysofosfolipiden niet inaktiveert, maar de hemolyse van de lysofosfolipiden kan verminderen.

Onder deze omstandigheden zijn verdere onderzoekingen uitgevoerd, waarbij werd gevonden, dat een preparaat, 20 dat zowel lysofosfolipide als fosfolipide bevat uitstekende eigenschappen als carcinostatisch en immunostimulerend middel heeft en als geneesmiddel kan worden gebruikt voor kanker bij zoogdieren, in het bijzonder bij de mens. Er werd ook gevonden, dat een carcinostatisch en immunostimulerend middel, dat een 25 vette olie of een vet emulsie naast genoemd preparaat van lysofosfolipide en fosfolipide bevat, of een carcinostatisch en immunostimulerend middel dat een lysofosfolipide en een vetemulsie bevat, waarbij de vetemulsie overeenkomt met fosfolipide plus vet en olie, ook deze eigenschappen heeft.

30 De uitvinding heeft dan ook betrekking op een 900 1 2 92 2 carcinostatisch en iramunostimulerend middel, dat lysofosfolipiden bevat, waarin de hemolyse van lysofosfolipiden onder druk is zonder dat hun carcinostatisch en immunostimulerend effekt is onderdrukt en die men met grote veiligheid en zonder enige 5 vasculaire moeilijkheden te veroorzaken kan gebruiken, zelfs wanneer men het middel continu door parenterale toediening toepast.

De uitvinding heeft ook betrekking op een werkwijze voor het bereiden van een dergelijk carcinostatisch en immunostimulerend middel. De uitvinding heeft voorts betrekking 10 op een werkwijze voor het behandelen van kanker door dit middel toe te dienen.

Volgens de uitvinding voorziet men in een carcinostatisch en immunostimulerend middel, dat een lysofosfo-lipide en een fosfolipide en eventueel een vetemulsÊ en een 15 vette olie omvat.

Het verdient in het carcinostatische en immuno-stimulerende middel van de uitvinding, dat een lysofosfolipide bevat de voorkeur, dat het lysofosfolipide gedispergeerd is in de vorm van micellen of vetlaagjes en het verdient in het 20 bijzonder de voorkeur, dat de gedispergeerde deeltjes een grootte hebben van ten hoogste 1,0 jx, liefst van ten hoogste 0,5 ƒ!.

Voor zover het lysofosfolipide is gedispergeerd in de vorm van micellen heeft toevoeging van serumproteïnen (albumine) aan de dispersie geen enkele nadelige invloed op de carcinostatische 25 en immunostimulerende werking van de lysofosfolipiden.

Het bij de uitvinding gebruikte fosfolipide kan afkomstig zijn uit natuurprodukten als eierdooier, sojabonen, katoenzaad, koolzaad, mais, pinda's, enz., of kan een zuiver synthetisch fosfolipide zijn. Ook kan een fosfolipide met een 30 onverzadigde vetzuurrest door een geschikte bewerking, bij voorkeur door hydrogenering, in een type met een verzadigde vetzuurrest worden omgezet. Voorbeelden van te gebruiken fosfolipiden zijn lecithine, fosfatidyl ethanolamine, fosfa-tidyl serine, sfingomyeline, fosfatidyl inositol, fosfatidezuur, 35 enz. en men kan deze stoffen afzonderlijk of vermengd met elkaar 80 0 1 2 92 \ 3 gebruiken. De voorkeur verdient lecithine, dat is afgeleid van een natuurprodukt, in het bijzonder eierdooier.

De bij de uitvinding te gebruiken lysofosfo-lipiden zijn bijvoorbeeld glycerofosfolipiden (fosfoglyceriden), 5 waaruit slechts êên vetzuur is verwijderd, bijvoorbeeld lysoleci- thine, lysocefaline, lysoplasmalogeen, lysofosfatidezuur, lysofosfatidyl inositol, enz., alsmede verbindingen met de formule op bijgaand formuleblad waarin een 22 acy^oxy C5-22 voorstelt, Rg een waterstofatoom of een hydroxyl-, ΊΟ C1 ^ acyloxy- of ^ alkoxygroep voorstelt en R^ een waterstofatoom of een C1 alkylgroep voorstelt, waarbij R1 en Rg onderling verwisselbaar zijn. Deze lysofosfolipiden kunnen zijn afgeleid van natuurprodukten, bijvoorbeeld varkenscerebrum» of kunnen enzymatisch of door chemische synthese van het fosfo-15 lipide afgeleid zijn. Voorbeelden van C^_gg acyloxygroepen,, die door R^ in bijgaande formule worden voorgesteld, zijn C5-22 alkanoyloxy- en 22 alkenoyloxygroepen. Voorkeursvoorbeelden van deze lysofosfolipiden ten gebruike bij de uitvinding zijn lysolecithine met een C^_1g alkanoyloxy- of alkenoyloxy- 20 groep en lysolecithine van het ethertype (een verbinding met bovengenoemde formule, waarin R1 een octadecyloxygroep, Rg een methoxygroep en Rg een methylgroep voorstelt).

De bij de uitvinding gebruikte fosfolipiden en lysofosfolipiden komen gewoonlijk voor in D-, L- of DL-vorm 25 en men kan al deze vormen gebruiken, hoewelde L-vorm de bijzondere voorkeur verdient.

De mengverhouding van fosfolipide tot lyso-fosfolipide in het carcinostatische en immunostimulerende middel van de uitvinding bedraagt bij voorkeur 1,0-500 tot 1, bij voor-30 keur 5-20 tot 1, berekend op het gewicht.

Het carcinostatische en immunostimulerende middel van bovengenoemde samenstelling kan verder vette olie bevatten. Men kan allerlei typen vette oliën bij de uitvind-ding gebruiken, mits zij farmaceutisch aanvaardbaar zijn, maar het 35 is gewenst een eetbare olie te gebruiken als katoenzaadolie, 800 1 2 92 1+ sojaolie, maïsolie, kokosolie, raapolie, sesamolie of pinda-olie. In dit geval is de mengverhouding van lysofosfolipide, fosfolipide en vette olie bij voorkeur zodanig, dat per 1 gew.deel lypofosfo-lipide de hoeveelheden fosfolipide en vette olie resp. 1,0 tot 5 500 gew.delen en ten hoogste 200 gew.delen bedragen en liefst resp. 5 tot 20 gew.delen en ten hoogste 20 gew.delen.

De vetemulsies, die men in het carcinostatische en immunostimulerende middel van de uitvinding kan gebruiken, zijn bijvoorbeeld die, bestaande uit 0,1 tot 50 gew.delen emulga-10 tor als genoemd fosfolipide en 5,0 tot 200 gew.delen water per 10 gew.delen vette olie. Voorkeursvoorbeelden van dergelijke vetemulsies zijn Intrafat en Intralipid (beide geregistreerde handelsmerken), die bestaat uit 10 gew.delen sojaolie, 1,2 gew. delen eigeelfosfolipide, 86,3 gew.delen water en 2,5 gew.delen ge-* 15 concentreerde glycerol, dat een isotoonmiddel is, Fatgen (geregistreerd handelsmerk), Lipofundin-S (handelsmerk van Braun Melsungen, Bondsrep. Duitsland), Lipihysan (handelsmerk van Egic, Frankrijk), enz. In dit geval kan de mengverhouding van lysofosfolipide tot vetemulsie zodanig zijn, dat er 0,1 tot 20 50 mg lysofosfolipide aanwezig is per ml vetemulsie en het ver dient de voorkeur, dat het preparaat het lysofosfolipide bevat in een hoeveelheid van 1 tot 10 mg per ml vetemulsie, die 5-30 gew.? lipide bevat.

Als het carcinostatische en immunostimulerende 25 middel van de uitvinding lysofosfolipide, fosfolipide en bovengenoemde vetemulsie omvat, kan de hoeveelheid vetemulsie zodanig zijn, dat er ten hoogste 5000 ml aanwezig is per mg lysofosfolipide van het mengsel van lysofosfolipide en fosfolipide.

Het carcinostatische en immunostimulerende 30 middel van de uitvinding kan ook naast bovengenoemde bestanddelen andere toevoegsels bevatten, die men gewoonlijk in medische preparaten toepast als isotone middelen, bijvoorbeeld glycerol, sorbitol, xylitol, natriumchloride, dextrose, enz., antioxydanten als vitamine A, vitamine E, enz., cholesterol, stearylamine, di-35 cetylfosfaat, dextran, methionine, glutathion, enz., in overeen- 80 0 1 2 92 *· -4 5 stemming met het doel. Het preparaat kan ook een isotone oplossing bevatten als water, een 5 % dextrose-oplossing, fysiologische zoutoplossing, enz. Het toepassen en bijmengen van de bestanddelen kan op elke handzame wijze geschieden.

5 De farmakologische effekten van het carcino- statische en immunostimulerende middel van de uitvinding zullen thans worden beschreven.

A. Hemolyse.

Men bepaalde de hemolyse als volgt: Een suspensie 10 van konijnen erythrocieten en de te beproeven verbinding werd 1 uur vermengd en geschud bij 37°C en men mat de optische dichtheid (in het vervolg O.D. genoemd) bij 550 ιημ van de bovenstaande vloeistof van de gecentrifugeerde oplossing. De optische dichtheid bij volkomen hemolyse met gedestilleerd water werd 15 op 100 % gesteld en de dichtheid van de te beproeven verbinding bij 50 % hemolyse werd gebruikt als index voor het aangeven van de hemolysegraad. Als de O.D. niet kon worden gemeten beoordeelde men de hemolyse met het blote oog en drukte haar uit met tekens (+) en (-). De resultaten zijn weergegeven in tabellen 20 A en B, 800 1 2 92 6

° I I I I I

o « 1 1 1 1 t

CU

+1 I I I I

on

cO

» + I I I I

t-

^ + I I I I

UN +

*1 X I I « I

1— + on un + ,, • +1111 CM +

NO

< UN + .

CM + I I I I

H r— +

<U

I £ t I I I

CM + O +111 + UN + o + + o + I I I + o + r— o + + o + I I I + o +

CM

0 + + O +)11 + o + -a·

to I

ta ·η ego •h aJ « C > H ^ Ö 0 H «> 9 « u « S c

^ h *H

ί) H *rl bo Λ « <U I Λ +> !> j + o 1 ö o *- CM on j· «Η -H W * * X * »ou) >j <- cm on -=r

O ^ Ö · H U V-rJ Ο I

ft t» >Ö C 1-3 80 0 1 2 92 + Λ 7

Opmerkingen: Ο D bij 550 ιπμ: +++ = 100-80 Kt ++ = 8θ-6θ $> + = 60-30 %9 + * 30-10 #, - = <(10 %.

*1: De bij onderstaand bereidingsvoorbeeld VIII

5 verkregen oplossing weird als basis oplossing gebruikt.

*2: De bij onderstaand bereidingsvoorbeeld VI verkregen oplossing werd als basis-oplossing gebruikt.

*3: De bij onderstaand bereidingsvoorbeeld II verkregen oplossing werd als basisoplossing gebruikt.

10 De vetemulsie (die 2,5 gew.delen geconcen treerde glycerol, 1,2 gew.delen eigeel fosfolipide en 86,3 gew. delen water per 10 gew.delen sojaolie bevat) is in een concentratie van 0 ,25 ml in de eindoplossing aanwezig.

15 800 1 2 92 8 -=t °Λ 1 I I I I t I + o a

<D

ω o .

•H * l I I I » I +1 +

OT O

<1> VD

® I I I I +! +1 + + > o § > r- ” ^ I I I +[ +1 + + + ω o •ri ie •P .¾ ö * ι ι i +1 + + + + 8 o a

" ° LA

*Q> Ö II +1+ + + + + n vu t— Λ « to s ^ +i +i +i + + + + + § w

JS

a <U la + + + + + + + +

BJ

ai <u P fi

+> *H

° + + + + + + + + CÖ ·Η ϋ

G O W rH

eg o + + + + + + + + 1%

U I

ϋ H-l I

> .H

U I 0) <0 C5«H Η Ο +>·^~> Ο O 0} H η Φ h E >» C -P > Η·Η S hi I λ « a ^ +5 ΙΛ CM *“ I I V * * * _ H a ·Η Ο LA Ο ΙΑ CM VO PO Ο a ο +> Ον t— Ά CM r- e o d « k·'-' I * +JW.

+> V S'—' «•HO > m o 800 1 2 92 • * 9

Opmerking: +: gehemolyseerd, +: gedeeltelijk gehemolyseerd, niet gehemolyseerd; * De vetemulsie bevat 2,5 gew.delen geconcentreerde glycerol, 1,2 gew.delen eigeelfosfolipide en 86,3 gev.delen water per 10 gev.delen sojaolie.

B. Minimuminhibitieconcentratie van kanker- cellen (MIC)_

Het antitumoreffekt van elke proefverbinding werd bepaald onder de volgende omstandigheden onder gebruikmaking van de Hëla-S-3 stam en ascitestumorcellen van Ehrlich, 1(.

elk in een populatie van 2 x 10 cellen/ml.

(1) Cultuurmedium: MEM van Eagle + 20 % runderembryoserum (2) Cultuurtijd: 96 uur (3) Microplaatproef: in 12 trappen verdund vanaf 5000 yUg/ml __ (4) Beoordelingsmethode: de proefverbinding concentratie, waarbij de celgroei voor meer dan 50 % geinhibiteerd werd bij Giemsavlekken werd als MIC genomen.

De resultaten zijn in tabel C weergegeven.

proef- cellen Mc verbin- Hela Ehrlich ding no 1 156 156 5* 156 313 6** 78 313 L-lysolecithine 156 156 800 1 2 92 10

Opmerking: : Een verbinding van de in onderstaand bereidings- voorbeeld V verkregen oplossing.

XX t · : Een verbinding van de m onderstaand bereiding svoorbeeld I verkregen oplossing.

C. Eretoedieningseffekt op L-1210 (L-1210 allograft)_

Elke proefverbinding werd intraperitoneaal (in een dosis van U0 mg/kg, berekend als L-lysolecithine) toegediend aan muizen van de dcLN-stam (mannelijk, 6 weken oud) gedurende een periode van 7 dagen en na 1 week zonder toediening entte men intraperitoneaal eenmaal 10^ L-1210 leukemiecellen en bepaalde het gemiddelde aantal overlevingsdagen van het proefdier.

De resultaten zijn weergegeven in tabellen D en E.

Tabel D

Proefverbinding n Gemiddeld aantal (dieren) overlevingsdagen controle 6 9*0 L-lysolecithine 6 ^21,0 1 6 >21,0 (Elke proefverbinding werd zodarig toegediend, dat de hoeveelheid L-lysolecithine ko mg/kg bedroegj) 800 1 2 92 ψ % 11

Tabel Ε

Proef verbinding Aantal overlevings- Aantal over- Aantal no. dagen (gem. + S.E.) levenden na proef- 21 dagen muizen 5 controle 12,0 £ 3,^ 0/6 L-lysolecithine* 21,0 6/6 & 18,5 + 2,5 5/6

Opmerkingen: *: Gegeven in een dosis van Uo mg/kg 10 **: U0 mg/kg L-lysolecithine + 20 ml/kg vetemul- sie

Samenstelling vetemulsie: sojaolie 10 glycerol 2,5 15 eigeelfosfolipide 1,2 water 86,3 D. Inhibiterend effekt tegen metastase van longkanker van Lewis.

Men diende aan vrouwelijke, 13 weken oude muizen 20 . 6 van de BDF^-stam intraveneus 1 x 10 Lewis longkankercellen toe en na 2k uur intraperitoneaal kO mg/kg L-lysolecithine toe, terwijl men intraveneus een mengsel toediende van 20 ml/kg vetemulsie en ^0 mg/kg L-lysolecithine, elk herhaaldelijk gedurende een periode van 10 dagen en op de 11e dag sneed men de borst van elke proefmuis open en mat het droge gewicht van de long (mg gemiddeld + S.E.). Het inhibiterend effekt werd gemeten aan de verhouding met de controlegroep (T/C). De verkregen resultaten waren weergegeven in tabel F.

800 1 2 92 12

Tabel F

ProefVer- n droog long- toegenomen T/C

binding (dieren) gewicht gewicht {%) no. (mg gem. (mg gem.

+S.E.) +S.E.) onbehandelde groep 6 29,6 + 0,4 controle 8 44,9 +, 5,6 16,3 + 5,6 100 L-lyso- lecithine 6 34,3 + 1,6 4,7 £ 1 ,6 29,0 7 6 34,4 + 1,7 5,0 + 1,7 30,7 E. Genezend effekt op ascites tumor van Ehrlich Men entte intraperitoneaal bij vrouwelijke,

6 weken oude muizen van de ddN-stam ascites tumorcellen van Ehrlich en 24 uur na deze enting diende men elke proefverbinding herhaaldelijk intraperitoneaal (i.p.) toe gedurende een periode van 7 dagen of intraveneus (i.p.) gedurende een periode van 13 dagen en onderzocht de levenverlengende en tumorgenezende effekten. De verkregen resultaten zijn weergegeven in tabel G

80 0 1 2 92 13 O'-' C— t~- ^ t r~ t— [H w CM <M *- I ·

ra H

60 · t— 'O

d M * *

•H O CVI

h !u + +l +l B rl ö ! ΙΛ «Λ .

.p © Ö \0 -=S· Λ t~- C tl «Ml " * « ί> B M o o ®e o *0 w cvi rn c C5 ©

ö jl, vo \D MD VO

H © © ·Η ,α Ό

Eh

H © i C

Cd +S © © IA IA IA IA +3 C Λί H O O O O

βΐφβΗ - <- r- *“ ri D) ri d)

§ boiS o ><; x X X

%— 1— '— -— ra

bD

β ö P. _ > © I · = · •rt ·Η ·Η Ό © b0 0 © •P !» o—> bQ ra ©

•H <Ö J- CO CM

ra I » * " oh o o o Ó 1 c f« ©

> β O

η ·Η Jh

« Ό P

O β β ---- CM

U -H O

O. P © 800 1 2 92

1U

F. Effekt tegen P-388 leukemiecellen.

0,5 ml dispersie van proefverbinding no. 1 en 5 x 10^ P-388 leukemiecellen werden ein uur bij 37°C gemengd en geschud, waarna men met Trypan Blue vaststellen, dat er geen ^ destructie van de P-388 leukemiecellen was opgetreden. Daarna entte men 0,2 ml van de geschudde oplossing intraperitoneaal bij vrouwelijke, 12 weken oude muizen van de BDF^-stam en onder zócht het levenverlengende effekt van de verbinding. De verkregen resultaten zijn weergegeven in tabel H.

10 Tabel H

Proefver- overlevings- aantal over- aantal T/C

binding dagen levenden proef- {%) (gem. + S.E.) na 1*0 dagen muizen controle 12,1* + 0,2 0/8 15 2 (0,5 ml) 1*0 8/8 322 G. Acute toxiciteit

De resultaten van meting van acute toxiciteit aan sommige kenmerkende verbindingen van de uitvinding zijn 20 weergegeven in tabel I.

Tabel I

Proefverbinding no. LD^Q (mg/kg) L-lysolecithine 122 25 8* 188*** 9** 600*** (Proefdier: vrouwelijke muizen, intraveneuze injektie)

Opmerkingen: *: in bereidingsvoorbeeld IX bereide verbinding : m bereidingsvoorbeeld V bereide verbinding o(\ XXX · : hoeveelheid L-lysolecithine in het preparaat.

Uit tabellen A t/m I blijkt, dat het carcino-statische en immunostimulerende middel van de uitvinding aanzien- 800 1 2 92 15 lijk minder hemolyse veroorzaakt onder handhaving van het bijzondere carcinostatische en immunostimulerende effekt van de lysofosfolipiden, terwijl het ook zeer veilig in gebruik is.

De werkwijze voor het bereiden van het carcino-tj statische en immunostimulerende middel van de uitvinding wordt onder beschreven.

Hoewel men de preparaten van de uitvinding op gebruikelijke wijze kan bereiden, verdient het de voorkeur een methode toe te passen, die men gewoónlijk gebruikt voor het ver-10 krijgen van een uit fijne deeltjes bestaand preparaat.

Men gebruikt voor het verkrijgen van een uit fijne deeltjes bestaand mengsel in het algemeen ultracentrifu-gering, dialyse, gelkolomchromatografie of andere soortgelijke middelen, maar deze methoden zijn in de praktijk zeer ingewikkeld en ongewenst als massaproduktiemiddelen voor een handelsprodukt.

Er werd dan welnader gezocht naar een industrieel voordelige methode, waarbij men vond, dat de membraan foltermethode, waarbij de dispersie, die door vermenging van de verschillende componenten wordt verkregen, door een membraanfilter 2Q wordt geleid, dusdanige eigenschappen heeft, dat men er slechts zeer kleine deeltjes mee verkrijgt, zeer eenvoudig te hanteren is en tegelijkertijd een aseptische behandeling mogelijk maakt en dat het volgens deze methode verkregen preparaat aan het oogmerk van de uitvinding voldoet.

Deze methode wordt nu nader beschreven.

Men kan een carcinostatisch en immunostimulerend middel, dat een lysofosfolipide en een fosfolipide omvat, verkrijgen door het lysofosfolipide en het fosfolipide eerst onder een stikstofatmosfeer gelijkmatig op te lossen in een halogeenkool-2q waterstof als chloroform, methyleenchloride, enz., of een alkohol als methanol, ethanol, enz., of een mengsel daarvan en daarna het oplosmiddel af te destilleren en aan het restant water toe te voegen (indien nodig kan men in plaats van water een isotone oplossing als een 5 % dextrose-oplossing of een fysiologische zout-25 oplossing gebruiken), gevolgd door voldoende vermenging, of 800 1 2 92 16 eventueel door eerst het fosfolipide gelijkmatig in het organische oplosmiddel op te lossen, waarna het oplosmiddel af te destilleren en het restant toe te voegen aan een oplossing, die bereid is door een lysofosfolipide gelijkmatig in water op 5 te lossen ( indien nodig kan men in plaats van het water een isotone oplossing als een 3 1 dextrose-oplossing of een fysiologische zoutoplossing gebruiken), gevolgd door voldoende vermenging, of eventueel door het lysofosfolipide en het fosfolipide rechtstreeks aan water toe te voegen (indien nodig kan 10 men in plaats van het water een isotone oplossing of een 3 % dextrose-oplossing op een fysiologische zoutoplossing gebruiken), het mengsel te homogeniseren en daarna het geheel grondig doorheen te mengen. Men onderwerpt de aldus verkregen dispersie daarna aan een mechanische dispergeerbehandeling, 1^ bijvoorbeeld een supersone behandeling of een uitwerping onder druk teneinde de afmeting van de deeltjes te verkleinen, waarna men door een membraanfilter filtreert, waardoor men een goede dispersie verkrijgt. Men kancfeze dispersie onmiddellijk gebruiken, of, indien nodig, op de gebruikelijke wijze onder 20 vacuum tot een vast produkt vriesdrogen.

Bij het uitvoeren van bovengenoemde bewerking moet men de volgende instructies in achtnemen. De gebruikte hoeveelheid organisch oplosmiddel, die niet aan een bepaalde beperking onderhevig is, kan meer bedragen dan de hoeveelheid, 25 waarin de opgeloste stof volkomen kan oplossen.Men destilleert het gebruikte oplosmiddel bij zo laag mogelijke temperatuur af, bij voorkeur beneden U0°C. Daarna voegt men aan de oplossing water of een isotone oplossing toe, waarin een lysofosfolipide aanwezig Jan zijn en vermengt 30 min. tot 3 uur bij kamertempera-30 tuur. In dit geval is het teneinde de doelmatigheid van het mengen te verbeteren aan te bevelen een geschikte hoeveelheid glasparels toe te voegen en de houder zelf te roteren of lysofosfolipide en fosfolipide rechtstreeks toe te voegen aan water (indien nodig kan men in plaats van water een isotone 35 oplossing als een 5 % dextrose-oplossing of een farmacologische 80 0 1 2 92 r · 17 zoutoplossing gebruiken) en het mengsel daarna te mengen met een sneldraaiende menger en een mechanische dispergeerbehandeling als boven bedoeld.

Daarna onderwerpt men de gemengde oplossing (na verwijdering van de glasparels indien men deze gebruikt heeft) aan een mechanische dispergeerbehandeling, bijvoorbeeld een supersone behandeling bij 9-200 KHz en 50-1500 W gedurende 10 minuten tot 10 uur, waarna men bij atmosferische druk, p onder druk (3 kg/cm of minder) of onder verlaagde druk filtreert onder gebruikmaking van een membraanfilter (bijvoorbeeld cellu- 10 % loseacetaat of tetrafluorethyleenpolymeer, enz.) met een maas- wgdte van ten hoogste 1 ji, bij voorkeur ten hoogste 0,5 ji·

Als men het substraat vriesdroogt geschat dit bij voorkeur in vacuum, waarbij men de temperatuur in de eindfase beneden 30°C houdt.

15

Als men een preparaat wenst te verkrijgen, dat naast genoemde componenten, vette olie bevat, voegt men vette toe aan de dispersie, die men op bovengenoemde wijze heeft verkregen of aan een dispersie, verkregen door een lyso-fosfolipide en een fosfolipide, onder een stikstofatmosfeer, 20 gelijkmatig op te lossen in een halogeenkoolwaterstof, bijvoorbeeld chloroform of methyleenchloride, of een alkohol, bijvoorbeeld methanol of ethanol, of een mengsel daarvan, het oplosmiddel af te destilleren, aan het aldus verkregen overblijfsel water toe te voegen (indien nodig kan men in plaats van water een isotone oplossing gebruiken, bijvoorbeeld een 5 % dextrose-oplossing of een fysiologische zoutoplossing) en het geheel daarna grondig te vermengen. Het verkregen grondige mengsel wordt daarna onderworpen aan een supersone behandeling en filtratie door een membraanfilter op de wijze als boven in 30 .. ...

verband met het verkrijgen van een dispersie is beschreven.

Eventueel lost men lysofosfolipide, fosfolipide en vette olie gelijkmatig op in een organisch oplosmiddel als bovengenoemd, destilleert het oplosmiddel af en voegt aan het overblijfsel water toe (indien nodig kan men in plaats van water een isotone 35 800 1 2 92 18 oplossing gebruiken, bijvoorbeeld een 5 % dextrose oplossing of een fysiologische zoutoplossing) en onderwerpt dit mengsel na voldoende vermenging aan een mechanische dispergeerbehandeling en filtratie door een membraanfilter op de wijze als boven 5 in verband net het verkrijgen van een dispersie is beschreven.

Ter verkrijging van een preparaat, dat in lysofosfolipide, een fosfolipide en een vetemulsie bevat, voegt men de vetemulsie toe aan een dispersie, die het lysofosfolipide en het fosfolipide bevat, waarbij de dispersie op boven 10 beschreven wijze is verkregen en schudt het verkregen mengsel enkele malen. Aangezien de gedispergeerde deeltjes klein van afmeting zijn kan men de dispergeerbehandeling en filtratie door een membraanfilter in dit geval uitvoeren als de omstandigheden er om vragen.

15 Ter verkrijging van een carcinostatisch en immunostimulerend middel, dat een lysofosfolipide en een vetemulsie bevat, lost men het lysofosfolipide op in water (indien nodig kan men in plaats van water een isotone oplossing gebruiken, bijvoorbeeld een 5 $ dextroseoplossing of een fysiologische 20 zoutoplossing) en voegt bij deze oplossing de vetemulsie, waarna men het verkregen mengsel enkele malen schudt. Aangezien de deeltjes in het algemeen klein van afmeting zijn kan men in dit geval de dispergeerbehandeling en filtratie door een membraanfilter indien nodig uitvoeren.iDë omstandigheden, waaronder 25 men deze bewerkingen uitvoert zijn dezelfde als bij bovengenoemde bereidingsmethoden.

Men kan het carcinóstatische en immunostimulerende middel van de uitvinding in allerlei gebruikelijke geneesmiddel-vormen bereiden onder gebruikmaking van algemeen bekende 30 toevoegsels als boven genoemd, rekening houdend met het doel of de vorm van het geneeskundige preparaat.

Men kan het carcinóstatische en immunostimulerende middel van de uitvinding gebruiken voor het behandelen van verschillende typen van kanker, bijvoorbeeld kanker van inwendige 35 organen als longen, lever, pancreas, spijsverteringsorganen, enz., 800 1 2 92 19 alsmede andere ziekten als leukemie en sarcom, bijvoorbeeld osteosarcom. De wijze van toedienen, het aantal malen van toediening en de dosis kunnen variëren met de toestand vancfe patient, maar gewoonlijk dient men bij een volwassene êën tot 5 viermaal daags een preparaat toe, dat 0,1 tot 200 mg/kg lyso- fosfolipide bevat oraal of parenteraal toe. Als toedieningsweg verdient intraveneuze of intramusculaire injektie, in het bijzonder intraveneus infuus de voorkeur.een

De volgende voorbeelden van geneeskundige 10 preparaten lichten de uitvinding nader toe.

Bereidingsvoorbeeld I

Men loste 9*6 g eigeel lecithine, 1,0 g L-lysolecithine en 1,0 g vitamine E op in Uo ml chloroform en 15 destilleerde de chloroform onder verlaagde druk bij een tempera tuur van ten hoogste ^0°C af, waarna men het overblijfsel bij kamertemperatuur 2 uur verder droogde in vacuum. Bij het verkregen produkt voegde men 100 g glasparels en 100 ml 5 % dextrose-oplossing per injektie en liet de houder ter verkrijging van een 20 dispersie 1,5 uur roteren.

Men filtreerde de glasparels af en onderwierp het filtraat 2,5 uur aan een supersoonbehandeling (2Ö KHz, 150 W) en filtreerde daarna onder druk onder gebruikmaking van een membraanfilter met maaswijdte 0,3 ji. Het verkregen filtraat 25 werd verder onderworpen aan een sterilisatiebehandeling en verdeelt over fiolen voor intraveneuze injektie van 25 ml en dichtte de fiolen af ter verkrijging van injektiepreparaten (troebelheid 6 % als gemeten met een bolmethode troebelheids-meter van het type SEP-PL, waarin het proefmonster werd 30 geplaatst in een cuvette met een doorgangsweg van 10 mm onder gebruikmaking van een lamp van 12 volt en 15 W.). Bereidingsvoorbeeld II

Men vermengde 50 ml dispersie voor intraveneuze injektie, verkregen volgens voorbeeld I en 50 ml apart bereide 35 vetemulsie (200 ml emulsie in water, die 20 g sojaolie, 5,0 g 800 1 2 92 20 geconcentreerde glycerol en 2,h g eigeel fosfolipide bevatte) en onderwierp het mengsel aan een supersoonbehandeling en filtratie door een membraanfilter op dezelfde wijze als in bereidings-voorbeeld I ter verkrijging van een infuus.

5 Voorbeeld III

Men voegde 20 ml dispersie voor intraveneuze injektie, verkregen volgens bereidingsvoorbeeld I toe aan 200 ml in de handel verkrijgbare vetemulsie (intrafat) en schudde het mengsel twee tot driemaal ter verkrijging van een infuus.

10 Bereidingsvoorbeeld IV

Men vriesdroogde 10 ml dispersie voor intraveneuze injektie, verkregen in bereidingsvoorbeeld I, in vacuum ter verkrijging van een infuus, dat men bij gebruik op de nodige concentratie kon instellen.

15 Bereidingsvoorbeeld V

Men loste 1 g L-lysolecithine, 9,6 g eigeel lecithine en 1 g sesamolie op in Uo ml chloroform en destilleerde de chloroform onder verlaagde druk bij een temperatuur van ten hoogste l+0°C af, waarna men het overblijfsel 2 uur in vacuum bij 2o kamertemperatuur verder droogde. Men vermengde het verkregen produkt met 100 g glasparels en 100 ml 5 % dextrose-oplossing voor injektie en roteerde de houder 1,5 uur ter verkrijging van een dispersie. Men filtreerde de glasparels af en onderwierp het filtraat aan een supersoonbehandeling (28 KHz, 150 W) gedurende 25 2,5 uur, waarna men onder druk filtreerde onder gebruikmaking van een membraanfilter met een maaswijdte van 0,3 γ. en onderwierp het verkregen filtraat daarna aan een sterilisatiebehandeling en verdeelde het over fiolen voor intraveneuze injektie van 2 ml en dichtte de fiolen af onder verkrijging van injektieprepara-30 ten (troebelheid 20 %).

Bereidingsvoorbeeld VI

Men loste 9,6 g eigeel lecithine en 1,6 g L-lysolecithine op in Uo ml chloroform en destilleerde de chloroform onder verlaagde druk bij een temperatuur van ten hoogste Uo°C af, 35 waarna men het overblijfsel 2 uur bij kamertemperatuur in vacuum 800 1 2 92 21 droogde. Daarna voegde men bij dit produkt 100 g glasparels en 100 ml 5 % dextroseoplossing ter injektie en roteerde de houder 1,5 uur ter verkrijging van een dispersie. De glasparels werden afgefiltreerd en het filtraat werd 2,5 uur onderworpen aan een 5 supersoonbehandeling (28 KHz, 150 W) en daarna gefiltreerd door een membraanfilter met maasopeningen van 0,3 γ. en het verkregen filtraat werd verder onderworpen aan een sterilisatiebehandeling en verdeeld over fiolen voor intraveneuze injektie van 2 ml, waarna de fiolen tot injektiepreparaten werden afgedicht.

10 Bereidingsvoorbeeld VII

Men voegde 20 ml dispersie voor intraveneuze injektie, verkregen volgens bereidingsvoorbeeld I, toe aan 200 ml in de handel verkrijgbare vetemulsie (intrafat) en schudde het mengsel 2 tot 3 uur ter verkrijging van een infuus. 15 Bereidingsvoorbeeld VIII

Men loste 9,6 g eigeel lecithine en 1 g L-lysolecithine op in ko ml chloroform en destilleerde de chloroform onder verlaagde druk bij ten hoogste ^0°C af, waarna men het overblijfsel 2 uur bij kamertemperatuur in 20 vacuum droogde. Bij het verkregen produkt voegde men 100 g glasparels en 100 ml 5 % dextrose-oplossing ter injektie en roteerde de houder 1,5 uur ter verkrijging van een dispersie. Daarna filtreerde men de glasparels en onderwierp het filtraat aan een supersoonbehandeling (28 KHz, 150 W) gedurende 2,5 uur 25 waarna men filtreerde door een membraanfilter met maasopeningen 0,3 jx en het verkregen filtraat verder onderwierp aan een sterilisatiebehandeling, verdeelde over fiolen voor intraveneuze injektie van 2 ml, waarna men de fiolen afdichtte tot injektiepreparaten.

30 Bereidingsvoorbeeld IX

Men loste 1,0 g gesteriliseerde L-lysolecithine op in 100 ml fysiologische zoutoplossing ter injektie en onderwierp de oplossing aan aseptische filtratie en bracht haar in afgedichtte 2 ml ampullen ter injektie.

35 Men voegde de inhoud van 10 ampullen toe aan een 800 1 2 92 22 apart "bereide vetemulsie (200 ml oplossing in water, die 20 g sojaolie, 5*0 g geconcentreerde glycerol en 2,k g eigeel fosfolipide bevatte) en schudde de gemengde oplossing twee tot driemaal ter verkrijging van een infuus.

5 Bereidingsvoorbeeld X

Een ampuloplossing voor infuus (reeds.onderworpen aan aseptische filtratie), bestaande uit 200 mg L-lyso-lecithine, opgelost in 20 ml fysiologische zoutoplossing, werd toegevoegd aan 500 ml in de handel verkrijgbare vetemulsie 10 (intrafat) en de gemengde oplossing werd twee tot driemaal geschud ter verkrijging van een infuus.

Bereidingsvoorbeeld XI

Men loste 15 g sojalecithine, 1,0 g L-lyso-lecithine en 1,0 g vitamine E op in ^0 ml chloroform en destil-15 leerde de chloroform onder verlaagde druk bij een temperatuur van ten hoost e 1+0°C af, waarna men het overblijfsel 2 uur bij kamertemperatuur verder droogde in vacuum. Bij het verkregen produkt voegde men 100 g glasparels en 100 ml 5 % dextrose-oplossing per injektie en roteerde de houder 1,5 uur ter 20 verkrijging van een dispersie. De glasparels werden afgefiltreerd en het filtraat werd onderworpen aan een supersoonbehandeling (19 KHz, 1200 W) gedurende 2,5 uur en onder druk gefiltreerd door een membraanfilter met maasopeningen van 0,5 jl en het verkregen filtraat werd verder onderworpen aan een sterilisatie-25 behandeling en verdeeld over fiolen voor intraveneuze injektie van 25 ml, waarna de fiolen werden afgedicht.

Bereidingsvoorbeeld XII

Men loste 9,6 g eigeel lecithine en 1,0 g 1-octadecyl-2-methyl-3-fosforylcholine op in Uo ml chloroform 30 en destilleerde de chloroform bij verlaagde druk bij een temperatuur van ten hoogste ^0°C af, waarna men het overblijfsel 2 uur bij kamertemperatuur verder droogde in vacuum. Na toevoeging van 100 g glasparels en 100 ml fysiologische zoutoplossing roteerde men de houder 2 uur ter verkrijging van een dispersie.

35 Daarna filtreerde men de glasparels af en onderwierp het filtraat 80 0 1 2 92 23 aan een supersoonbehandeling (28 KHz, 150 W) gedurende 2,5 uur en filtreerde onder druk door een membraanfilter met maas-openingen van 1 jx en onderwierp het verkregen filtraat verder aan een sterilisatiebehandeling en verdeelde het over fiolen voor 5 intraveneuze injektie van 25 ml, waarna men de fiolen afdichtte.

Bereidingsvoorbeeld XIII

50 ml dispersie voor intraveneuze injektie, verkregen volgens bereidingsvoorbeeld I en 50 ml afzonderlijk bereide vetemulsfe (200 ml emulsie in water, die 20 g sesamolie, 5*0 g geconcentreerde glycerol en 2,U g eigeel fosfolipide bevatte) werden vermengd en het mengsel werd onderworpen aan een supersoonbehandeling onder dezelfde omstandigheden als in bereidingsvoorbeeld I en daarna gefiltreerd door een membraanfilter met maasopeningen van 0,2 jx ter verkrijging van een infuus.

15 Bereidingsvoorbeeld XIV

9,6 g eigeel lecithine en 1,0 g L-lysolecithine werden toegevoegd aan 90 ml 5 % dextroseoplossing voor injektie en het mengsel werd gehomogeniseerd met een snel draaiende menger gedurende 30 min. De·, verkregen dispersie werd 1 uur 20 onderworpen aan een supersoonbehandeling (19 KHz, 1200 W) en 2 daarna gefiltreerd onder druk (0,5 - 1 kg/cm ) onder gebruikmaking van een membraanfilter van celluloseacetaat met maasopeningen van 0,2 ƒ1. Het verkregen filtraat werd verder onderworpen aan een sterilisatiebehandeling en verdeeld over 25 fiolen voor intraveneuze injektie van 25 ml.

800 1 2 92

Claims

2k
1. Carcinostatisch en immunostimulerend middel, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide en een fosfolipide bevat.
2. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide en het fosfolipide verkeren in de vorm van lipidebelletjes. '3. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat de lipide belletjes 10 een af-met.ing van ten hoogste 1,0 ji hebben. b. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens één der conclusies 1 tot 3, met het kenmerk, dat het fosfolipide lecithine, fosfatidyl ethanolamine, sphingomyeline, fosfatidylserine, fosfatidyl inositol of fosfatidinezuur is.
5. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens één der conclusies 1 tot b, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide een verbinding is met de formule op bijgaand formuleblad, waarin een C^ 22 acyloxy- of 22 alkoxygroep voorstelt, R2 een waterstofatoom of een hydroxyl-, C^ ^ 20 acyloxy- of C^ ^ alkoxygroep voorstelt en een waterstofatoom of een C^_^ alkylgroep voorstelt, waarbij R^ en Rg onderling verwisselbaar zijn.
6. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 5» met het kenmerk, dat het lysofosfolipide 25 lysolecithine is.
7. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat het lysolecithine in de L-vorm verkeert.
8. Carcinostatisch en immunostimulerend middel 30 volgens één der conclusies 1 tot 7» met het kenmerk, dat het middel onderworpen is aan vriesdrogen in vacuum. 9. carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens één der conclusies 1 tot 8, met het kenmerk, dat het een zodanige hoeveelheid fosfolipide bevat, dat de gewichts- 35 verhouding van deze stof tot lysofosfolipide 1,0-500 tot 1 800 1 2 92 c bedraagt.
10. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 1 tot 9» met het kenmerk, dat het bereid is door lysofosfolipide en fosfolipide gelijkmatig met 5 elkaar te vermengen, hieraan water of isotone oplossing toe te voegen, het mengsel te onderwerpen aan een mechanische dispergeer-behandeling en de oplossing daarna door een membraanfilter te filtreren.
11. Carcinostatisch en immunostimulerend middel 10 volgens één der conclusies 1 tot 9, met het kenmerk, dat het is verkregen door het fosfolipide toe te voegen aan een oplossing, bereid door het lysofosfolipide in water of een isotone oplossing toe te voegen, het mengsel daarna aan een mechanische disper-geerbehandeling te onderwerpen en het mengsel door een membraan- 15 filter te filtreren.
12. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 1 tot 9, met het kenmerk, dat het is verkregen door het lysofosfolipide en het fosfolipide aan water of een isotone oplossing toe te voegen, het mengsel met een 20 snel draaiende menger te mengen, het mengsel aan een mechanisch dispergeerbehandeling te onderwerpen en het mengsel daarna door een membraanfilter te filtreren.
13. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 10, 11 of 12, met het kenmerk, dat men de 25 filtratie uitvoert door een membraanfilter met maasopeningen van ten hoogste 1,0 ƒ1. 1U. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het voorts vette olie bevat.
15. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 1U, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide, het fosfolipide en vette olie verkeren in de vorm van lipide-belletjes.
16. Carcinostatisch en immunostimulerend middel 35 volgens conclusie 15, met het kenmerk, dat de lipide belletjes 80 0 1 2 92 een afmeting van ten hoogste 1,0 jx hebben.
17· Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 1^ tot 16, met het kenmerk, dat het fosfolipide lecithine, fosfatidyl ethanolamine, 5 sphingomyeline, fosfatidyl serine, fosfatidyl inositol of fosfatidinezuur is.
18. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 1¾ tot 17, met het kenmerk. dat het lysofosfolipide een verbinding is met de formule op 10 bijgaand formuleblad, waarin een ^ acyloxy- of C^ 22 alkoxygroep voorstelt, Rg een waterstofatoom of een hydroxyl-, C. _ acyloxy- of C, . alkoxygroep voorstelt en Κι-? 1-5 o een waterstofatoom of een C^ ^ alkylgroep voorstelt, waarbij R.j en R2 onderling verwisselbaar zijn. 15 19* Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 18, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide L-lysolecithine is.
20. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens êên der conclusies 1k tot 19, met het kenmerk, dat 20 de vette olie een eetbare olie is.
21. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens êên der conclusies 1U tot 19, met het kenmerk, dat het zodanige hoeveelheden fosfolipide en vette olie bevat, dat de gewichtsverhouding van fosfolipide tot lysofosfolipide 25 1,0-500 tot 1 bedraagt en de gewichtsverhouding van vette olie tot lysofosfolipide ten hoogste 200 tot 1 bedraagt.
22. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens êên der conclusies 1U tot 21, met het kenmerk, dat het is verkregen door lysofosfolipide en fosfolipide gelijkmatig te 30 vermengen, hieraan water of een isotone oplossing en vette olie toe te voegen, het verkregen mengsel aan een mechanische dispergeerbehandeling te onderwerpen en het mengsel daarna door een membraanfilter te filtreren.
23. Carcinostatisch en immunostimulerend middel 35 volgens een der conclusies 1U tot 21, met het kenmerk, dat het is 800 1 2 92 ψ ® verkregen door lysofosfolipide, fosfolipide en vette olie te vermengen, hieraan water of een isotone oplossing toe te voegen, het mengsel aan een mechanische dispergeerbehandeling te onderwerpen en het mengsel daarna door een membraanfilter 5 te filtreren. 2k. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 22 of 23, met het kenmerk, dat men de filtratie uitvoert door een membraanfilter met maasopeningen van ten hoogste 1,0 ji.
25. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het voorts een vet-emulsie bevat.
26. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 25, met het kenmerk, dat het fosfolipide 15 lecithine, fosfatidylethanolamine, sphingomyeline, fosfatidyl serine, fosfatidyl inositol of fosfatidinezuur is.
27. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 25 of 26, met het kenmerk, dat het lysofosfo-lipide een verbinding is met de formule op bijgaand formuleblad, 20 waarin R een C^ 22 acyloxy- of C^ 22 alkoxygroep voorstelt, R2 een waterstofatoom of een hydroxyl-, C^ ^ acyloxy- of C.j alkoxygroep voor stelt en een waterstofatoom of een alkylgroep voorstelt, waarbij R^ en Rg onderling verwisselbaar zijn.
28. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 27, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide L-lysolecithine is.
29. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 25 tot 28, met het kenmerk, dat de 30 vetemulsie een, berekend op het gewicht, 10:0,1-50:5,0-200 mengsel is van een vette olie, een emulgator en water,
30. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 25 tot 29, met het kenmerk, dat het een zodanige hoeveelheid fosfolipide bevat, dat de gewichts- 35 verhouding van deze stof tot lysofosfolipide 1,0-500 tot 1 80 0 1 2 92 bedraagt.
31· Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 25 tot 30, met het kenmerk, dat het is verkregen door lysofosfolipide en fosfolipide gelijkmatig 5 te vermengen, hieraan water of een isotone oplossing toe te voegen, het mengsel aan een mechanische dispergeerbehandeling te onderwerpen, het mengsel daarna door een membraanfilter te filtreren en het filtraat verder met de vette olie te vermengen in een hoeveelheid van ten hoogste 5000 ml per mg lysofosfolipide. 10 32. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens één der conclusies 25 tot 32, met het kenmerk,dat het is verkregen door aan het fosfolipide een oplossing toe te voegen, die bereid is door het lysofosfolipide op te lossen in water of een isotone oplossing, het mengsel aan een mechanische dispergeer-15 behandeling te onderwerpen, het mengsel door een membraanfilter te filtreren en het filtraat verder met de vetemulsie te vermengen in een hoeveelheid va n ten hoogste 5000 ml per mg lysofosfolipide .
33. Carcinostatisch en immunostimulerend middel 20 volgens conclusie 31 of 32, met het kenmerk, dat men het filtreren uitvoert door een membraanfilter met maasopeningen van ten hoogste 1,0^1. 3^. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 1U, met het kenmerk, dat fosfolipide en vette 25 olie door een vetemulsie vervangen zijn.
35. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 3^, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide bevat in een hoeveelheid van 0,1 tot 50 mg per ml vetemulsie.
36. Carcinostatisch en immunostimulerend middel 30 volgens conclusie 35, met het kenmerk, dat de vetemulsie bestaat uit een vette olie, glycerol, een fosfolipide en water.
37· Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 3^, met het kenmerk, dat de vetemulsie een, berekend op het gewicht 10:590—200:0,5—5»0:0,1—5*0 mengsel is 35 van een vette olie, water, glycerol en een fosfolipide. 80 0 1 2 92
38. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 37» met het kenmerk, dat de vetemulsie een, berekend op het gewicht, 10:86,3:2,5:1,2 mengsel is van sojaolie, water, glycerol en eigeel fosfolipide.
39. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens een der conclusies 3¾ tot 38, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide een verbinding is met de formule op bijgaand formuleblad, waarin R een C,_ acyloxy- of C_ alkoxygroep I ** voorstelt, een waterstofatoom of een hydroxyl-, acyloxy- 10 of C1 alkoxygroep voorstelt en R^ een waterstofatoom of een C^ ^ alkylgroep voorstelt, waarbij R^ en Rg onderling verwisselbaar zijn. Uo. Carcinostatisch en immunostimulerend middel volgens conclusie 39, met het kenmerk, dat het lysofosfolipide 15 L-lysolecithine is. Ui. Werkwijze voor het bereiden van een carcinostatisch en immunostimulerend middel, dat een lysofosfolipide en een fosfolipide bevat, met het kenmerk, dat men lysofosfolipide en fosfolipide gelijkmatig met elkaar vermengt en hieraan daarna 20 water of een isotone oplossing toevoegt of aan het fosfolipide een oplossing toevoegt, die bereid is door het lysofosfolipide in water of een isotone oplossing toe te voegen, onder verkrijging van een dispersie, deze dispersie aan een mechanische dispergeer-behandeling onderwerpt en het geheel daarna door een membraan-25 filter filtreert. k2* Werkwijze voor het behandelen van een aan kanker leidend zoogdier, met het kenmerk, dat men aan dit zoogdier een carcinostatisch doeltreffende hoeveelheid middel volgens conclusie 1 toedient. 800 1 2 92 V — Rt — Rj _0P(0) OCHjCHjN^Rj)^ (ƒ> TOYAMA, CHEMICAL COMPANY, LTD, te Tokio, Japan 800 1 2 92