JPH05508388A

JPH05508388A - リポソーム製剤

Info

Publication number: JPH05508388A
Application number: JP3507024A
Authority: JP
Inventors: 伊賀　勝美; 一宏大河内; 泰亮小川
Original assignee: 武田薬品工業株式会社
Priority date: 1990-04-18
Filing date: 1991-04-12
Publication date: 1993-11-25
Anticipated expiration: 2016-08-20
Also published as: CA2073680A1; EP0525188A1; EP0525188B1; CA2073680C; ATE119034T1; DE69107844T2; WO1991016040A1; DE69107844D1; JP3199728B2; US5252336A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】リポソーム製剤技術分野本発明はリポソーム製剤に関する。

ｌ匙珠人一般にインビトロ（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）において有効性を示す薬物のなかには、生体に投与した彼達やかに代謝を受け標的部位で十分に作用を発揮しないうちに消失してしまうものが多い。そのような薬物を対象に薬物をより効果的に標的部位で作用させる手段として種々の薬物送達システム（Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍ、　ＤＤＳ）が検討されている。中でもリポソームに薬物を封入するＤＤＳは、薬物の血中濃度の持続化、薬物の標的指向化に用いることができ、有効な製剤と考えられる。しかしながら、そのようなリポソームは必ずしもすべてが投与された後にＤＤＳとしての機能を十分に発揮出来るものではなく、それはリポソームの製造条件や用いられるリポソームの膜脂質成分の種類に大きく依存する。

リポソームの大きな問題点としては薬物の封入効率、封入された薬物を長時間保持するためのリポソーム膜の安定性、リポソームの分散性が指摘される。一般的にリン脂質等の脂質を用いて作成したリポソームは分散性に乏しく、短時間に凝集を引き起こし、リポソームの薬物封入特性や安定性に悪影響を及ぼす場合が多い。またそのようなリポソームは投与された後、速い時期に網内系にとりこまれ、ＤＤＳとしての機能を果たさない場合が多い。

従って、リポソームを用いたＤＤＳ開発にとって、分散性を良くし、安定なリポソームを製造することが重要である。

発明の目的リポソーム膜組成を改質することにより、分散性が良く封入性の高い、また、より安定性の高いリポソームの開発は未だ不十分である。

かかる状況に鑑み、本発明者等はリポソーム膜組成を改質することにより、分散性が良く封入性の高い、また、より安定性の高いリポソームを作成するための方法をリポソーム膜組成に膜脂質成分を添加することにもとめて、種々検討し、本発明を完成した。

すなわち、本発明の主な目的は分散性が良く封入性の高い、また、より安定性の高い新規リポソームを提供することにある。

この目的ならびに本発明の他の目的および利点は、添付図面を讐照し、以下の記載から当業者に明らかであろう。

図面の簡単な説明第１図は、下記実施例４に示すリポソーム製剤の投与後の血中脂質濃Ｒの推移を示し、−１・、○、−および−一一一はそれぞれ下記実施例；２．３．４．５およびサンプル１のリポソーム製剤を示す。

第２図は、下記実験例４に示すリポソーム製剤の投与後の血中脂質ｉ！１１度の推移を示り１、○、■、・および　、−−−はそれぞれｆ記実＆Ｊｔ１６．．７．８およびサ用ジノ１川のリポソーム製剤を示す。

発明の概要本発明は、リポソート膜が一般式。

Ｘ−０３−（ＣＨ，ＣＨ，○）ｎ−Ｙ（１）「式中、Ｘはアルカノイル基またはアルキル基を、Ｙはアニオン形成基を、ｎは２〜５０の整数を示す。］で表されるポリオキシエチレン誘導体とリン脂質とを含有してなるリポソーム製剤を提供する上記ポリオキシエチレン誘導体に関し、Ｘで表されるアルカノイル基としては炭素数５〜３０の直鎖状または分枝状のアルキルカルボニル基が好ましく、例えばバレリル、イソバレリル、ピバロイル１、ラウロイル、ミリストイル、バルミトイル、ステアロイルなどが挙げられ、とりわけ直鎖状のＣＩ、−４゜アルカ、ノイル基が好ましい。Ｘて表されるアルキル基としては炭素数５〜３０の直鎖状または分枝状のアルキル基が好ましく、例えば、ペンチル、ヘキシル、オクチル、デシル、ドデンル（ラウリル）、トリデシル、ヘギサデシル（七千ル）、イクタデシル、エイコシルなとが挙げられ、とりわけ直鎖状のＣＩ！−’。アルキル基が好ましい。

整数ｎで表されるポリオキシエチレンのユニット数は２〜３０であることが好ましい。

Ｙで表されるアニオン形成基としては、例えば酢酸残基（−ＣＨ，ＣＯ，Ｈ）　、プロピオン酸残基（−ＣＨ，ＣＯ，Ｈ）　、硫酸残基（−０ＳＯ８Ｈ）　、スルホン酸残基（−ＣＨ，ＳＯ，Ｈｌ−ＣＨｌＣＨ，ＳＯ，Ｈなど）、リン酸残基（−０ＰＯ，Ｈ）などのような負電荷を有する化合物の残基が挙げられる。これらのアニオン形成基は塩を形成していてもよく、例えばアルカリ金属（カリウム、ナトリウムなど）やアルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウムなと）との塩が挙げられる。

上記したポリオキシエチレン誘導体自体は、公知物質で市販品として入手できるか、公知物質から公知方法によって製造することができる。

本発明のリポソーム製剤に用いられるリン脂質としては、天然あるいは半合成、あるいは、全合成的に得られるｊノン脂質が用いられる。天然により得られるリン脂質としては、例えば、卵黄シンチンや、大豆シンチン等のグリセロリン脂質あるいはスフィンコリン脂質が用いられる。また、半合成、あるいは、全合成的に得られるリン脂質としては、アルカノイル基が飽和アルカメイル基、あるいは、一部、不飽和アルカメイル基であるグリセロリン脂質またはスフィンゴリン脂質が用いられる。好ましくは飽和アルカノイル基をもつグリセロリン脂質またはスフィンゴリン脂質が用いられる。またその飽和アルカノイル基の炭素数は１２〜２ｏが好ましい。

本発明においては、上記のようなリン脂質およびポリオキシエチレン誘導体を構成成分としてリポソーム膜を構成させる。

本発明におけるリン脂質とポリオキシエチレン誘導体の使用割合は、一般にリン脂質の１００重量部に対しポリオキシエチレン誘導体を約０．５〜２００重量部、好ましくは約２〜５０重量部、さらに好ましくは５〜２０重量部である。

本発明はリポソーム膜の構成成分として上記のようなリン脂質およびポリオキシエチレン誘導体を用いることが特徴であって、リポソーム製剤の製法には公知の技術が用いられる。例えば、上記のグリセロリン脂質とポリオキシエチレン誘導体を含むリポソーム膜構成成分をジエチルエーテル、イソプロピルエーテルまたはクロロホルムなどの有機溶媒に溶解した後、さらに薬物水溶液を加えて乳化し、Ｗ１０型エマルションを得て、適度の温度く相転移温度よりやや高め）下の減圧下で有機溶媒を蒸発除去してすＲ−ス・フェイズ・エバポレイジョンベシクル（ＲＥＶ）を得ることができる。また上記脂質有機溶媒溶液の有機溶媒を減圧下で蒸発除去して薄膜とした後に、薬物溶液を加えて、上記と同様の温度で混合することによって、マルチラメラ−ベシクル（ＭＬＶ）を得ることができる。またさらに、ＭＬＶをプローブ型超音波振盪機で振盪することによってスモールユニラメラ−ベシクル（ＳＵＶ）を得ることができる。さらに他のリポソーム製法としてはステイブル・プルリメラー・ベシクル（ＳＰＬＶ）法（特開昭５９−５００９５２）　や、デ／Ｘ４ＦＬ／イション・レバイドレイジョン・ベシクル法［シー・クルビー（Ｃ，Ｋｉｒｂｙ）ら、バイオテクノロジー（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）　、ｌ　１月号、９７９　（１９８４）］が挙げられる。また上記のようにポリオキシエチレン誘導体を有機溶媒に溶解させるかわり１こ薬物水溶液（こ分散して用いることもできる。さらに、リン脂質で予め薬物を封入するリポソームを調製した後に、これをリン脂質を含む分散液に加えて加温下で混合することにより、既にできたリポソーム膜にポリオキシエチレン誘導体を配列させる方法を採用することもできる。

また、脂溶性であって水への溶解度が低い薬物の場合は、薬物を上記脂質有機溶媒溶液に溶かして薬物を封入するリポソームを得ることができる。このようにして得られる薬物を封入したリポソームは所望により好ましい粒子サイズに調製することができる。このリポソームはそのまま使用してもよいが、例えば、遠心分離、ゲル濾過あるいは透析によって封入されない遊離の薬物を分離除去した後に使用するのが好ましい。本発明において使用される薬物は、シス。

ブラチン、アトリヤマイシン、マイトマイシンＣ１アクチノマイシン、アンサマイトシン、プレオマイシン、５−ＦＵ、メトトレキセートのような抗癌剤、天然型あるいは遺伝子組換え型インターフェロン（α、β、γ）や天然型あるいは遺伝子組換え型インターロイキン２のようなリンホカイン類、マンガンスーツく− オキサイドデスムターゼ（Ｓ　ＯＤ）あるいはその誘導体であるスー／く−オキサイドデスムターゼＰＥＧ　（ＰＥＧ−５０００）（特開昭５７−１３２６５８）のような生理活性ペプチド類、スルフアゼシンのようなベータラクタム系抗生物質、ゲンタマイシン、ストレプトマイシン、カナマイシンのようなアミノ配糖体系抗生物質、シアノツバラミン、ユビキノンのようなビタミン類、アンチモン酸メグルミンのような抗原虫薬、アルカリホスファターゼ等の酵素剤、ヘパリン等の抗血液凝固剤、アモキサノクス等の抗アレルギー剤、ムラミルジペプチド、ムラミルトリペプチド、ＴＭＤ−６６（特開昭５７−１３２６５８）のような免疫賦活剤、プロプラノロール、グルタチオンのような一般薬が挙げられる。

以下に実施例および実験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明する。以下の実施例および実験例中、ポリオキシエチレン誘導体について、例えば化合物（■）（ここにＸはステアリル、ｎは２、ＹはＳＯ，Ｎａを示す。）をステアリル０ＰＯＥｔＳＯｚＮａと略記することがある。

実施例１２２５ｍｇのジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、２５ｍｇのジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）および２５＋ａｇノステ７リル０ＰＯＥｔＳＯｚＮａをｌす、ターのビーカー内でクロロホルムとイソプロピルエーテルの１：１の混合溶液９０ｍ１に溶解させた。それにあらかじめ生理食塩液と同じ浸透圧となるように調製しておいたシスプラチン（ＣＤＤＰ）生理食塩溶液（１ｍｇ／ａ＋１）を１４ｍ１加えバス復起音波振盪ｍｃラボラトリ−・サブライズ社（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　５ｕｐｐｌｉｅｓ　Ｇｏ、）にューヨーク）製］で乳化し、Ｗ１０型エマルジョンを作製した。超音波の照射は２０分間行った。

このようにして得たエマルジョンをロータリーエバポレーターにかけて、６０° Ｃ１減圧下で有機溶媒を留去しＲＥＶを得た。エバポレーターの真空度は初めは高く、有機溶媒の蒸発が進むにつれて真空度をさげて突沸しないように調節した。その後さらにＲＥＶ中に残存する少量の有機溶媒を窒素ガスをふきつけることにより留去した。

さらに得られたＲＥＶに適当量の生理食塩溶液を加え１４ｍ１とし、１２ミクロンのフィルター［アクロディスク（Ａｃｒｏｄ　１ｓｃ）、ケルマン（Ｇｅｉ、ｍａｎ）］で濾過し、透析膜「スペクトラボール（Ｓｐｅｃｔｒａｐｏｒ）、７ゝり１う４°メディカル（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ　Ｍｅｄｉｃａｌ）コを用いて生理食塩溶液下で２４時間透析することによりＣＤＤＰを封入した本発明のリポソームを得た。

実施例２〜１３第１表に示す処方により実施例１と同様の方法で本発明のリポソーム製剤を製造した。

第１表ポリオキシエチレン誘導体（１）実施例番号　添加量　封入薬物　ＤＰＰＣＤＳＰＣｌ　ステアリル２　５ＯＪａ　２５　ＣＤＤＰ　２２５　２５２　セ＋　ル２　５ＯＪａ　２５　ＣＤＤＰ　２２５　２５３　Ｘ＋７’Ｊル３　５ＯｓＮａ　２５　ＣＤＤＰ　２２５　２５４　セチル３　Ｃ１１ｓＣＯＪａ　２５　ＣＤＤＰ　２２５　２５５　７、＋７ ’Ｊル２　Ｃ１１ｓＣＯＪａ　２５　ＣＤＤＰ　２２５　２５６　Ｘ＋７’）ル２　５ＯＪａ　１２．５　ＣＤＤＰ　２２５　２５７　スｙ７’Ｊ／’　２　５ＯＪａ　３７．５　ＣＤＤＰ　２２５　２５８　ステア１Ｊル２　５ＱＪａ　７５　ＣＤＤＰ　、２２５　２５９　ステアリル３　５ＯＪａ　２５　ＣＤＤＰ　１７５　７５１０　スｆ７’Ｊル２　ＳＯ３Ｎａ　１２．５　ＣＤＤＰ　１７５　７５１１　セチル　３　ＣｌｌＩＣ０Ｊａ　２５　ＣＤＤＰ　１．７５　７５１２　ステアリル２　ＣＨｔＣＯＪａ　２５　ＣＤＤＰ　１２５　１２５１３　ステアリル　２　ＣＬＣＯｔＮａ　２５　ＣＤＤＰ　２５０□−評剛１−−＾響甲−１−−□６納□１時呻−一□町−−−１阿−−！−１−−轡一闇一、、、。

、□□、１１，１酬−一甲１−ｈ慟咄□■ 実施例１４実施例１３で用いられるＤＳＰＣの代わりに卵黄ホスファチジルコリン（Ｅｇｇ　ＰＣ）を用いて、実施例１３と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例１５実施例１で用いられるステアリル０ＰＯＥ、ＳＯ３Ｎａの代わりにステアリル０ＰＯＥ、。ＣＨ，ＣＯＯＮａを用いて、実施例１と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例１６実施例１で用いられるステアリル０ＰＯＥ、ＳＯ，Ｎａの代わりにステアリル０ＰＯＥ、。ＣＨ，ＣＯＯＮａを用いて、実施例１と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例１７実施例１で用いられるステアリル０ＰＯＥ、ＳＯ３Ｎａの代わりにラウロイル０ＰＯＥｔＣＨ，Ｓｏ、Ｎａを用いて、実施例１と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例１８実施例１で用いられるステアリルＯＰ　ＯＥ　ｔ　Ｓ　Ｏ−Ｎ　ａの代わりにラウロイル０ＰＯＥ、ＣＨ，Ｓｏ、Ｎａを用いて、実施例１と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例１９実施例１で用いられるステアリル０ＰＯＥ、ＳＯ，Ｎａの代わりにフルキ／Ｌ、０ＰＯＥ、ＣＨ，ＣＯＯＮａ　［二、７）−ル　ＮＥＳ−２０３＝２７、日光ケミカル（株）（東京）製］を用いて、実施例１と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２０実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに２００μｇ／ｍｌの５−フルオロウラシール（５−ＦＵ）を用いて、実施例５と同じ方法で５−ＦＵを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２１実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに５００μｇ／−１の９−メルカプト− ９−デオキシメイタンシン（ＴＡＣ８０５）を用いて、実施例５と同じ方法でＴＡＣ８０５を封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２２実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに５００μｇ／ＩＩｌのシト／ンアラビ／シト（Ａｒａ−Ｃ）を用いて、実施例５と同じ方法でΔｒａ−Ｃを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２３実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに２００μｇ／＋＊ｌのマイトマイシン −〇　（ＭＭＣ）を用いて、実施例５と同じ方法でＭＭＣを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２４実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに１．　ｍｇ／■ｌのダウノマイシンを用いて、実施例Ｓと同じ方法でダウノマイシンを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２５実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに５００μｇ／＠ｌのビスクロロエチルニトロソウレア（ＢＣＮＵ）を用いて、実施例５と同じ方法でＢＣＮＵを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２６実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに５００μｇ／ｍｌのクロロエチルンクロへ牛／ルニトロンウレア（ＣＣＮＵ）　を用いて、実施例５と同じ方法でＣＣＮＵを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２７実施例５で用いられるＣＤＤＰの代わりに３０８μｇ７ｍｌのヒトインターロイキン−２（ＩＬ−２）を用いて、実施例５と同じ方法でＩ　Ｌ−２を封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。

実施例２８実施例９で用いられる２５ｍｇのステアリル０ＰＯＥ、ＳＯＪＪａの代わりに５０ｍｇのステアリル０ＰＯＥ、ＣＨ，Ｃｏ、Ｎａを用いて、実施例９と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソーム製剤の製造を行った。封入率４１．５％実施例２９実施例って用いられる２５＠ｇのステアリルＯＰ　ＯＥ　ｔ　Ｓ　Ｏｓ　Ｎ　ａの代わりに５０ｍｇのステアリル０ＰＯＥｓＣＨｔＣＯｔＮａを用１．１で、実施例９と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソ−ム製剤の製造を行った。封入＄４８．１％実施例３゜実施例って用いられる２５ｍｇのステアリル０ＰＯＥ、ＳＯ，Ｎａの代わりに５０ｏ＋ｇのステアリル○ＰＯＥｌａＣＨ２ＣＯｆＮａを用ｔ１て、実施例９と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明のリポソ−ム製剤の製造を行った。封入率２９．３％実施例３１実施例９で用いられる２５ｍｇのステアリルＯＰ　ＯＥ　ｔ　Ｓ　Ｏｓ　Ｎ　ａの代わりに５０ｍｇのステアリル０ＰＯＥ、、ＣＨｔＣＯ，Ｎａを用ｔ′Ｙで、実施例９と同じ方法でＣＤＤＰを封入する本発明の１フボ゛ノーム製剤］の製造を行った。封入率２３４％実験例１実施例１で用いられるステアリル０ＰＯＥ、ＳＯ，Ｎａを添加しない対照リポソーム製剤およびステアリルＯＰ　ＯＥ　ｔ　Ｓ　Ｏ−Ｎ　ａの代わりに第２表に示される添加物を用いて、実施例１と同じ方法でＣＤＤＰを封入するリポソーム製剤を作製し実験サンプルとした。

第２表本発明以外のポリオキシエチレン誘導体含有リポソームサンプルサンプル　添加物 −（添加量：２５ｍｇ）１（対照）　無添加２　ＰＯＥｔセチル・エーテル３　ＰＯＥ、。セチル・エーテル４　ＰＯＥ４゜セチル・エーテル５　ＰＯＥ、モノステアレート６　ＰＯＥ、。モノステアレート７　ＰＯＥ、。モノステアレート第２表において、例えばＰＯＥ、セチル・エーテルは、１（−（ＯＣｌｆ、ＣＬ）−〇−セチルを表す。

実験例２上記実施例１〜１３で調製されたリポソーム製剤および第２表のサンプル１〜７を用いて、ＣＤＤＰの封入率（註１）および４℃１力月保存後の安定性（註２）を調べてみると第３表の結果となり、本発明のリポソーム製剤は対照リポソーム製剤（サンプルｌ）と比べて同等かより高い封入率を示し、また長期保存後も安定であることがわかった。一方、負電荷基を有しないＰＯＥ誘導体を添加したリポソーム製剤では（サンプル２〜７）薬物封入率が対照リポソーム製剤の１／４以下の低い値を示した。

註１：リポソーム中の封入ＣＤＤＰの量は、該製剤の製造に用いた総ＣＤＤＰ量から未封入のＣＤＤＰ量を差し引くことによりめた。未封入のＣＤＤＰ量はあらかじめリポソーム製剤を生理食塩液で２ｏ倍希釈したものを、フィルター（セントリザルト）で濾過し、その濾液をさらに蒸留水で希釈し原子吸光（日立：Ｆ７０００）でプラチナ量を定量することによりめた。また、総ＣＤＤＰ量は上記２０倍希釈サンプルを直接水で希釈し原子吸光でプラチナ濃度含量を定量することによりめた。

註２・安定性はリポソームに封入されているＣＤＤＰ濃度を定量することによりめた。

第３表リポソーム製剤の封入率と安定性封入率（％）　安定性（４℃、ＩＭ）（％）実施例１　３９．５　９８．５実施例２　４４．３　９９．２実施例３　３０．７　９９．３実施例４　２８．４　９９．５実施例５　３０．３　９９．６実施例６　２０．３　９９．７実施例７　１ｇ、　２　９８．０実施ｇｉｑ８　２４，５　９４．５実施例９　２３．９　９９．０実施例＋０　２０．９　９８．８実施例１１　２２．９　９８．８実施例１２　３１．２　９９．７実施例１３　２Ｂ、　９　９９．４サンプルｌ　２５．１　９６．７サンプル２　９．８　ＮＤサンプル３　５．５　ＮＤサンプル４　６．１　ＮＤサンプル５　６．８　ＮＤサンプル６　１０．６　ＮＤサンプル７　５．８　ＮＤ実験例３上記実施例１〜１３で調製されたリポソーム製剤およびサンプル１〜７を用いて光散乱によるリポソームの分散性の経時変化を調べる方法（註３）でリポソームの凝集沈降の割合を調べてみると第４表の結果となり、ＰＯＥ誘導体を添加しないリポソーム製剤（サンプル１）や負電荷基を有しないＰＯＥ誘導体を添加したリポソーム製剤では（サンプル２）短時間に凝集が認められたのに対し、本発明のリポソーム製剤は長時間分散状態を維持することが認められた。

註３゛リボンーム製剤を生理食塩液で約１００倍希釈し、よく撹拌した後サンプルキ二ベノトにとり、サブミクロンアナライザー［コウルター（Ｃｏｕｌｔｅｒ）社］で光散乱を測定し、撹拌直後の散乱を１００とし、一定時間静置後の散乱強度の減少率をめることにより、リポソーム製剤の分散性を評価した（凝集沈降が生じると散乱強度減少）。

第４表１週間後のリポソームの分散性分散性（％）実施例１９８実施例２９８実施例３２．１実施例４９９実施例５８７実施例６６１実施例７１０Ｇ実施例８８７実施例９　１．０２実施例１０８７実施例１１　７１実施例１２８５実施例１３８２サンプル３　２０サンプル６８３サンプル７９６実験例４上記実験例１で調製されたリポソーム製剤（１ｍ）をラットに投与した後の血中の脂質濃度（註４）推移を調べてみると第１図（実絶倒２．３．４および５）および第２図（実施例６．７および８）のような結果となり、無添加の対照リポソーム製剤に比べ、リポソーム製剤はより長時間血中に留まることが示された。

註４：採取したヘパリン処理血液を生理食塩液で１０倍希釈し、よく撹拌後、遠心分離し、その上清をとりクロロホルムで抽出し、その抽出物中のＤＰＰＣＪＩＩｉをＨＰＬＣ［カラムごウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社製、μボンダスフイア（Ｂｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ）　Ｃ４−Ｉ　Ｑ　ＱＡ１溶離液：ｐＨ７’Ｊン酸緩衝液／メタノール＝１／９、検出器：シヲーデ、クス・屈折計）で定量することにより血中脂質濃度をめた。

以上の結果、ポリオキシエチレン誘導体を加えて、脂質組成とする本発明のリポソーム製剤は、分散性の点で著しい改善効果が認められ、薬物封入性も高く、長期保存後も安定であり、また静脈内に投与しても長時間薬物を血中に持続させる特性を有することが示された。

上記のとおり、本発明のリポソーム製剤は、分散性が良く、また薬物の封入性が高く、さらに安定性が高いので医薬品等の製剤として有利に用いられる。

Ｆｉｇ、１時間（ｈ　ｒ）Ｆユ９．　２時間（ｈ　ｒ）要約リポソーム膜の構成成分として一般式％式％（１）［式中、Ｘはアルカノイル基またはアルキル基を、Ｙは負電荷を有する化合物の残基を、ｎは２〜５０の整数を示す。］で表されるポリオキシエチレン誘導体とリン脂質を用いることによりリポソーム製剤を得る。該リポソーム製剤は、良好な分散性、高い薬物封入性および高い安定性を有する。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成４年　７月２０日

Claims

【特許請求の範囲】

１．リボソーム膜が一般式：Ｘ−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｙ［式中、Ｘはアルカノイル基またはアルキル基を、Ｙはアニオン形成基を、ｎは２〜５０の整数を示す。］で表されるポリオキシエチレン誘導体とリン脂質とを含有してなるリボソーム製剤。
２．Ｘが炭素数５〜３０の直鎖状または分枝状のアルキルカルボニルである請求項１記載のリボソーム製剤。
３．Ｘが炭素数５〜３０の直鎖状または分枝状のアルキルである請求項１記載のリボソーム製剤。
４．アニオン形成基が負電荷を有する化合物の残基である請求項１記載のリボソーム製剤。
５．アニオン形成基が−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、−ＯＳＯ２Ｈ、− ＣＨ２ＳＯ３Ｈ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ３Ｈ、−ＯＰＯ３Ｈまたはその塩である請求項４記載のリボソーム製剤。
６．リン脂質かグリセロリン脂質またはスフィンゴリン脂質である請求項１記載のリボソーム製剤。
７．リン脂質が、炭素数が１２〜２０の飽和アルカノイル基を有するグリセロリン脂質またはスフィンゴリン脂質である請求項７記載のリボソーム製剤。
８．ポリオキシエチレン誘導体に対するリン脂質の割合が、リン脂質の１００重量部に対してポリオキシエチレン誘導体が約０．５〜２００重量部である請求項１記載のリボソーム製剤。