NL192275C - Eiwit van het AIDS-virus. - Google Patents
Eiwit van het AIDS-virus. Download PDFInfo
- Publication number
- NL192275C NL192275C NL8700795A NL8700795A NL192275C NL 192275 C NL192275 C NL 192275C NL 8700795 A NL8700795 A NL 8700795A NL 8700795 A NL8700795 A NL 8700795A NL 192275 C NL192275 C NL 192275C
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- ala
- protein
- leu
- gin
- lys
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 116
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 82
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 title claims description 9
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 66
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 claims description 54
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 claims description 53
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 claims description 53
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 claims description 52
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 45
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 45
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 42
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 37
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 20
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 18
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 18
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 15
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 11
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 10
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 7
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 claims description 6
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 6
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 claims description 5
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 4
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 claims description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 3
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 2
- 101000582398 Staphylococcus aureus Replication initiation protein Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 2
- SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 2
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 claims 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 claims 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 claims 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 claims 2
- YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 claims 1
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- VBDMWOKJZDCFJM-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N VBDMWOKJZDCFJM-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 claims 1
- DVWVZSJAYIJZFI-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DVWVZSJAYIJZFI-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N Ala-Asn-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N Ala-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N 0.000 claims 1
- OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N Ala-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N OBVSBEYOMDWLRJ-BFHQHQDPSA-N 0.000 claims 1
- LDLSENBXQNDTPB-DCAQKATOSA-N Ala-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N LDLSENBXQNDTPB-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- AWNAEZICPNGAJK-FXQIFTODSA-N Ala-Met-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AWNAEZICPNGAJK-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims 1
- QOIGKCBMXUCDQU-KDXUFGMBSA-N Ala-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O QOIGKCBMXUCDQU-KDXUFGMBSA-N 0.000 claims 1
- XPBVBZPVNFIHOA-UVBJJODRSA-N Ala-Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)=CNC2=C1 XPBVBZPVNFIHOA-UVBJJODRSA-N 0.000 claims 1
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 claims 1
- FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N Arg-Asp-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N OGUPCHKBOKJFMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N Arg-Leu-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O LVMUGODRNHFGRA-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N Arg-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ISJWBVIYRBAXEB-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 1
- SWLOHUMCUDRTCL-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N SWLOHUMCUDRTCL-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N Asn-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N Asn-His Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- COWITDLVHMZSIW-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O COWITDLVHMZSIW-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N Asn-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- BCADFFUQHIMQAA-KKHAAJSZSA-N Asn-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BCADFFUQHIMQAA-KKHAAJSZSA-N 0.000 claims 1
- DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N Asn-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N 0.000 claims 1
- WSOKZUVWBXVJHX-CIUDSAMLSA-N Asp-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WSOKZUVWBXVJHX-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 claims 1
- CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- 241001473877 Biserrula isolate Species 0.000 claims 1
- SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N Glu-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BUZMZDDKFCSKOT-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- OQXDUSZKISQQSS-GUBZILKMSA-N Glu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OQXDUSZKISQQSS-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- LPHGXOWFAXFCPX-KKUMJFAQSA-N Glu-Pro-Phe Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)O LPHGXOWFAXFCPX-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N 0.000 claims 1
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 claims 1
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- YZACQYVWLCQWBT-BQBZGAKWSA-N Gly-Cys-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O YZACQYVWLCQWBT-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QCTLGOYODITHPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-His Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims 1
- LPCKHUXOGVNZRS-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LPCKHUXOGVNZRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- QSVMIMFAAZPCAQ-PMVVWTBXSA-N Gly-His-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QSVMIMFAAZPCAQ-PMVVWTBXSA-N 0.000 claims 1
- GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N Gly-Lys-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O GMTXWRIDLGTVFC-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MHXKHKWHPNETGG-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GAAHQHNCMIAYEX-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 1
- RJVZMGQMJOQIAX-GJZGRUSLSA-N Gly-Trp-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RJVZMGQMJOQIAX-GJZGRUSLSA-N 0.000 claims 1
- GWCJMBNBFYBQCV-XPUUQOCRSA-N Gly-Val-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GWCJMBNBFYBQCV-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims 1
- RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N Gly-Val-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 1
- DCRODRAURLJOFY-XPUUQOCRSA-N His-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O DCRODRAURLJOFY-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims 1
- MJICNEVRDVQXJH-WDSOQIARSA-N His-Arg-Trp Chemical compound N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O MJICNEVRDVQXJH-WDSOQIARSA-N 0.000 claims 1
- YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- PGRPSOUCWRBWKZ-DLOVCJGASA-N His-Lys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 PGRPSOUCWRBWKZ-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- FLXCRBXJRJSDHX-AVGNSLFASA-N His-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FLXCRBXJRJSDHX-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N L-Leucyl-L-Arginyl-L-Proline Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N L-alanyl-L-prolylglycine zwitterion Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- FOEHRHOBWFQSNW-KATARQTJSA-N Leu-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O FOEHRHOBWFQSNW-KATARQTJSA-N 0.000 claims 1
- RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N Leu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RVVBWTWPNFDYBE-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N Leu-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WIDZHJTYKYBLSR-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 1
- QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O QNBVTHNJGCOVFA-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- SXOFUVGLPHCPRQ-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Cys Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O SXOFUVGLPHCPRQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N Leu-Tyr-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BTEMNFBEAAOGBR-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 claims 1
- KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N Lys-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- RLZDUFRBMQNYIJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Cys-Gly Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)O)N RLZDUFRBMQNYIJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N Lys-Glu-Gly Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CCC([O-])=O)C(=O)NCC([O-])=O GCMWRRQAKQXDED-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N Lys-Gly-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O DKTNGXVSCZULPO-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- CTVJSFRHUOSCQQ-DCAQKATOSA-N Met-Arg-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CTVJSFRHUOSCQQ-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- SBSIKVMCCJUCBZ-GUBZILKMSA-N Met-Asn-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N SBSIKVMCCJUCBZ-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N Met-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- KMSMNUFBNCHMII-IHRRRGAJSA-N Met-Leu-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN KMSMNUFBNCHMII-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- YYEIFXZOBZVDPH-DCAQKATOSA-N Met-Lys-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YYEIFXZOBZVDPH-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- ILKCLLLOGPDNIP-RCWTZXSCSA-N Met-Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ILKCLLLOGPDNIP-RCWTZXSCSA-N 0.000 claims 1
- FXBKQTOGURNXSL-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FXBKQTOGURNXSL-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- VEKRTVRZDMUOQN-AVGNSLFASA-N Met-Val-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 VEKRTVRZDMUOQN-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N N-L-methionyl-L-tyrosine Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 claims 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Val Chemical compound N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O SEPNOAFMZLLCEW-UBHSHLNASA-N 0.000 claims 1
- AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- BRDYYVQTEJVRQT-HRCADAONSA-N Phe-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O BRDYYVQTEJVRQT-HRCADAONSA-N 0.000 claims 1
- QCHNRQQVLJYDSI-DLOVCJGASA-N Phe-Asn-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 QCHNRQQVLJYDSI-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- UUWCIPUVJJIEEP-SRVKXCTJSA-N Phe-Asn-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N UUWCIPUVJJIEEP-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- DBNGDEAQXGFGRA-ACRUOGEOSA-N Phe-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N DBNGDEAQXGFGRA-ACRUOGEOSA-N 0.000 claims 1
- BNBBNGZZKQUWCD-IUCAKERBSA-N Pro-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 BNBBNGZZKQUWCD-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- QSKCKTUQPICLSO-AVGNSLFASA-N Pro-Arg-Lys Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O QSKCKTUQPICLSO-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N Pro-Glu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims 1
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- APIAILHCTSBGLU-JYJNAYRXSA-N Pro-Met-Phe Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 APIAILHCTSBGLU-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims 1
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- AJJDPGVVNPUZCR-RHYQMDGZSA-N Pro-Thr-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)O AJJDPGVVNPUZCR-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 claims 1
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YUSRGTQIPCJNHQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N Ser-Glu-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N Ser-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO FLONGDPORFIVQW-XGEHTFHBSA-N 0.000 claims 1
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 claims 1
- XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XSLXHSYIVPGEER-KZVJFYERSA-N 0.000 claims 1
- VIBXMCZWVUOZLA-OLHMAJIHSA-N Thr-Asn-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O VIBXMCZWVUOZLA-OLHMAJIHSA-N 0.000 claims 1
- DJDSEDOKJTZBAR-ZDLURKLDSA-N Thr-Gly-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DJDSEDOKJTZBAR-ZDLURKLDSA-N 0.000 claims 1
- AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- IMDMLDSVUSMAEJ-HJGDQZAQSA-N Thr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IMDMLDSVUSMAEJ-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N 0.000 claims 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 claims 1
- XNTVWRJTUIOGQO-RHYQMDGZSA-N Thr-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XNTVWRJTUIOGQO-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 claims 1
- RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N Thr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMNUBQWPVOUKH-HEIBUPTGSA-N 0.000 claims 1
- WOAQYWUEUYMVGK-ULQDDVLXSA-N Tyr-Lys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WOAQYWUEUYMVGK-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 1
- FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N Tyr-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FMXFHNSFABRVFZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims 1
- PMHLLBKTDHQMCY-ULQDDVLXSA-N Tyr-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O PMHLLBKTDHQMCY-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 1
- WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N Tyr-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N 0.000 claims 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- XPYNXORPPVTVQK-SRVKXCTJSA-N Val-Arg-Met Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N XPYNXORPPVTVQK-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N Val-Asp-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N 0.000 claims 1
- SJLVYVZBFDTRCG-DCAQKATOSA-N Val-Lys-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N SJLVYVZBFDTRCG-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- PQSNETRGCRUOGP-KKHAAJSZSA-N Val-Thr-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O PQSNETRGCRUOGP-KKHAAJSZSA-N 0.000 claims 1
- IRAUYEAFPFPVND-UVBJJODRSA-N Val-Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)=CNC2=C1 IRAUYEAFPFPVND-UVBJJODRSA-N 0.000 claims 1
- JPBGMZDTPVGGMQ-ULQDDVLXSA-N Val-Tyr-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N JPBGMZDTPVGGMQ-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 1
- NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N Val-Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N Valyl-Serine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 claims 1
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 claims 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010009297 diglycyl-histidine Proteins 0.000 claims 1
- RDYMFSUJUZBWLH-UHFFFAOYSA-N endosulfan Chemical compound C12COS(=O)OCC2C2(Cl)C(Cl)=C(Cl)C1(Cl)C2(Cl)Cl RDYMFSUJUZBWLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 claims 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108010038983 glycyl-histidyl-lysine Proteins 0.000 claims 1
- 108010008671 glycyl-tryptophyl-methionine Proteins 0.000 claims 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 claims 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 claims 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 claims 1
- 108010007811 human immunodeficiency virus p17 gag peptide Proteins 0.000 claims 1
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 claims 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010085203 methionylmethionine Proteins 0.000 claims 1
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 16
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 14
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 11
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 9
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 8
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 7
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 5
- 101150048348 GP41 gene Proteins 0.000 description 5
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 5
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 4
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 3
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 3
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000001759 immunoprophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000714195 Aids-associated retrovirus Species 0.000 description 2
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 2
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 2
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 1-Hexadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCN FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYAFUXYGTYWWBP-UHFFFAOYSA-N 19-methoxynonadecane-1,2,3-triol Chemical compound COCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)CO PYAFUXYGTYWWBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBPRNJUWBYEBSP-UHFFFAOYSA-N 2-[1-[2-hydroxyethyl(octadecyl)amino]propyl-octadecylamino]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCO)C(CC)N(CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OBPRNJUWBYEBSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran Chemical compound C1OC=CC=C1 MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 1
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 1
- 208000009746 Adult T-Cell Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000016683 Adult T-cell leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241001288713 Escherichia coli MC1061 Species 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylglycine Chemical compound CN(C)CC(O)=O FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 101000980463 Treponema pallidum (strain Nichols) Chaperonin GroEL Proteins 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- 108010042810 VDR interacting protein complex DRIP Proteins 0.000 description 1
- 244000284012 Vetiveria zizanioides Species 0.000 description 1
- 235000007769 Vetiveria zizanioides Nutrition 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 201000006966 adult T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700003601 dimethylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000652 homosexual effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N iodane Chemical compound [125IH] XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N tuftsin Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
- C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/14011—Deltaretrovirus, e.g. bovine leukeamia virus
- C12N2740/14022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/826—Viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
1 192275
Eiwit van het AIDS-virus
De uitvinding heeft betrekking op een eiwit dat wordt aangeduid als gag/env, dat ten minste een antigene H determinant van het kemeiwit (gag) en tegelijkertijd ten minste een antigene determinant van het I 5 omhullingseiwit (env) omvat van het HTLV-lll-virus, de veroorzaker van het verworven afweergebrek H (acquired immune deficiency syndrome, AIDS). Dit eiwit wordt bereid door middel van organisch- I synthetische werkwijzen of door gebruikmaking van recombinant-DNA-technieken waarbij de vereiste I gensequenties door middel van een geschikte DNA-vector in een daarmee verenigbaar eencellig gastheer- organisme worden ingelast.
H 10 De uitvinding heeft verder betrekking op het isoleren en zuiveren van het gag/env-eiwit en op werkwijzen voor het opsporen van AIDS-antilichamen of -virussen in menselijk serum of andere biologische vloeistoffen en voor de immunoprofylactische bescherming van mensen tegen AIDS, op basis van het gebruik van het eiwit.
In 1985 werd bij bijna 8.000 mensen AIDS vastgesteld en sindsdien is het aantal gestaag toegenomen.
I 15 Verwacht wordt dat in 1986 nog eens 15.000 gevallen worden gediagnostiseerd en dit aantal zou in 1987 I wel eens opnieuw kunne verdubbelen [New York Times Magazine, 2 maart 1986, blz. 42]. AIDS is gekenmerkt door het optreden van zware opportunistische infecties na een effect op het afweersysteem van I het lichaam [Gottlieb e.a., New. Eng. J. Med. 305, 1425 (1981)]. De aandoening is gevonden bij homosexuele mannen, patiënten die bloedproducten krijgen toegediend, spuitverslaafden en personen I 20 afkomstig van Haiti en Midden-Afrika [Piot e.a., Lancet ;M, 65 (1984)].
I Vermoed werd dat de veroorzaker van virale oorsprong was omdat het epidemiologische patroon van I AIDS overeenstemde met dat van een overdraagbare ziekte. Ten minste drie retrovirussen zijn geïsoleerd I uit gekweekte T-cellen van verscheidene AIDS-patiënten of uit witte bloedlichaampjes van mensen met kans I op de ziekte. Er werd een nieuw menselijk retrovirus dat met iymfadenopathie geassocieerd virus (LAV) 25 werd genoemd ontdekt en de eigenschappen daarvan stemden overeen met een ziekte veroorzakende rol I bij AIDS. Het virus werd geïsoleerd uit een patiënt met Iymfadenopathie en vandaar de naam [Montagnier I e.a. in Human T-Cell Leukemia/Lymphoma Virus, R.C. Gallo e.a. eds., Cold Spring Harbor Laboratory, blz.
363-370 (1984)].
Ook zijn andere menselijke retrovirussen geïsoleerd, in het bijzonder twee deelgroepen van het menselijk 30 T-cel leukemie/lymfoom/lymfotropisch virus, typen I [Poiesz e.a., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77, 7415 I (1980)] en III [Popovic e.a., Science 224, 497 (1984)]. Nog een ander virus, het met AIDS-geassocieerde I retrovirus (ARV) genaamd, is als veroorzaker voorgesteld [Levy e.a., Science 225, 840 (1984)]. Zowel het I HTLV-lli als het ARV retrovirus vertonen soortgelijken biologische en seroepidemiologische eigenschappen I als LAV [Levy e.a., zie boven, Popovic e.a., zie boven]. Er zijn dus ten minste drie retrovirussen gepostu- I 35 leerd als veroorzaker van AIDS: LAV, ARV en HTLV-III. Voor deze aanvrage worden deze virussen I tezamen aangeduid als de AIDS-virussen. Aangezien HTLV-III het prototypische viius voor deze groep is dienen onder de term ’’antigene determinant overeenkomend met de sequenties van een eiwit van een HTLV-lll-virus” feitelijk te worden verstaan de sequenties van de eiwitten van elk van de AIDS-virussen.
Een oorzaak van de moeilijkheid de werkelijke veroorzaker van AIDS te bepalen was de reactiviteit van I 40 verschillende retrovirale antigenen met serummonsters van AIDS-patiënten. Zo bleken serummonsters van AIDS-patiënten te reageren met antigenen van zowel HTLV-I [Essex e.a., Science 220, 859 (1983)] als HTLV-III [Samgadharan e.a., Science 224, 506 (1984)]. Omhullings-genproducten van HTLV vertoonden I antigeniteiten die kruiselings reactief waren met antilichamen in serums van volwassen T-cel-leukemie- I patiënten [Kiyokawa e.a., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6202 (1984)]. T-cel leukemie bij volwassenen I 45 (ATL) verschilt van AIDS doordat HTLV-I kwaadaardigheid van T-cellen veroorzaakt, gekenmeikt door een I ongeremde groei van T-cellen. Bij AIDS vindt er in plaats van celgroei celafsterving plaats. Dit cytopatische I kenmerk van HTLV-III was essentieel voor het uiteindelijk kunnen bepalen van de specifieke retrovirale I oorsprong van de ziekte.
I De vetooizaker van AIDS werd geïsoleerd door gebruikmaking van geïmmortaliseerde menselijke 50 neoplatische T-cellijnen (HT) geïnfecteerd met het voor AIDS kenmerkende cytopatische retrovirus dat uit I aan AIDS lijdende patiënten werd geïsoleerd. Seroepidemiologisch onderzoek met dit virus toonde een I volledige correlatie aan tussen AIDS en de aanwezigheid van antilichamen tegen virale antigenen van I HTLV-III [Montagnier e.a., zie boven; Samgadharan e.a., zie boven; Schüpbach e.a., Science 224, 503 I (1984)]. Bovendien werd gevonden dat bijna 85% van de patiënten met lymfadenopathiesyndroom en een I 55 belangrijk deel van de asymptomatische homosexuele mannen in gebieden met endemisch AIDS drcule- I rende antilichamen tegen HTLV-III droegen. Deze gegevens bij elkaar wijzen op HTLV-III als de belangrijk- I ste veroorzaker van AIDS.
1192275 2
Totdat het AIDS-vims met gebruikmaking van de H-9 cellijn met succes werd gekweekt, was het env-AIDS-eiwit van het AIDS-virus niet geïsoleerd, gekarakteriseerd of gesynthetiseerd. Dit was grotendeels een gevolg van het feit dat het virus cytopatisch is en isolering van het viius niet mogelijk was [Popovic e.a., zie boven]. Toen eenmaal een menselijke T-cellijn was ontdekt die tegen de cytopatische effecten van het 5 virus bestand was, kon het moleculair klonen van proviraal DNA van AIDS worden uitgevoerd.
De behoefte aan gevoelige en snelle methoden voor de diagnose van AIDS is menselijk bloed en andere biologische vloeistoffen en vooreen methode voor het voorkomen van de ziekte door vaccinatie is zeer groot. Vrijwel alle thans beschikbare bepalingen en proeven zijn behept met fouten. Het Center for Disease Control (CDC) heeft te kennen gegeven dat de thans beschikbare tests uitsluitend dienen te worden 10 gebruikt voor het testen van eenheden bloed op de aanwezigheid van antilichamen tegen HTLV-III. Het CDC is zelfs nog verder gegaan door te verklaren dat de thans beschikbare tests voor enzymgebonden immunosorptiebepaling (ELISA) niet dienen te worden gebruikt voor algemeen onderzoek van populaties met hoog risico of als diagnostische test voor AIDS [Federal Register 50 (48), 9909,12 maart 1985].
De fouten in voorheen gebruikte AIDS-tests zijn teruggevoerd op het niet gebruiken van een specifiek 15 antigeen eiwit van de veroorzaker van AIDS. De vroeger gebruikte eiwitten waren afkomstig van een viraal lysaat. Aangezien het lysaat bereid is uit met het virus geïnfecteerde menselijke cellen, d.w.z. met cellen waarin het virus is gekweekt, zal het lysaat zowel menselijke als virale eiwitten bevatten. Bereiding van een zuiver antigeen van viraal eiwit is zeer moeilijk. De tot nu toe gebruikte antigenen produceren daarom zowel ten onrechte positieve als ten onrechte negatieve resultaten [Budiansky, Nature 312, 583 (1984)]. De fouten 20 als gevolg van het gebruik van dergelijke lysaateiwitten/peptiden zouden kunnen worden vermeden door gebruikmaking van een samenstelling voor het binden van AIDS-antilichamen die zo goed als geen niet voor AIDS specifieke eiwitten bevat. Samenstellingen van vrijwel zuiver omhullings- en kemeiwit van AIDS kunnen als antigenen worden gebruikt.
Zowel de omhullings- als de kemeiwitten van HTLV-III hebben antigene determinanten behouden 25 waarmee het mogelijk zou moeten zijn onderzoek te doen naar de aanwezigheid van AIDS-virussen, deze vast te stellen en/of er door vaccinatie bescherming tegen te bieden. Eik individu dat aan HTLV-III is blootgesteld en derhalve het gevaar loopt AIDS op te doen of de ziekte heeft, kan worden herkend aan de hand van de aanwezigheid in het bloed van antilichamen voor het virale kemeiwit (gag) en/of het omhullingseiwit (env), [Samgadharan e.a., Science 224, 506 (1984)].
30 De beschikbaarheid van een betrouwbare en gevoelige test op de aanwezigheid in het bloed of in andere biologische vloeistoffen, van het AIDS-virus zelf of van deeltjes daarvan is ook van belang. Groopman e.a. [Blood 66, 742 (1985)] hebben gemeld dat antilichamen tegen AIDS-virussen niet altijd in het bloed van AIDS-slachtoffers aanwezig zijn. Zij hebben een patiënt met AIDS en een andere met verwante aandoenin- — — gen (ARC) onderzocht en van hen bloedmonsters genomen die negatief op antilichamen waren maar____ 35 waaruit wel HTLV-III kon worden gekweekt.
De recombinant DNA-technologie wordt sinds kort op het AIDS-probleem toegepast. Van de moleculaire kloning en expressie van het env-gen van HTLV-III is melding gemaakt [Crowl e.a., Cell 979 (1985);
Chang e.a., Biotechnology 3, 905 (1985)]. Dowbenko e.a. [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82, 7748 (1985)] hebben het kemeiwit van HTLV-III in E. coli tot expressie gebracht.
40 In Biotechnology, vol. 4, nr. 2 van februari 1986 wordt op pagina’s 128-132 de bacteriële expressie van een deel van het veronderstelde GP41 env en de serologische karakterisatie ervan beschreven. In dit artikel wordt geen suggestie gedaan omtrent een fusie-eiwit van GP41 en manteleiwit met een kemeiwit. Er wordt zelfs gesuggereerd dat in gevallen waarbij sera wel met P24 (kemeiwit) reactie vertoonde maar niet met GP41 (manteleiwit) te wijten waren aan een foute positieve reactie van P24 met een ARC complex, een 45 cytamegalovitus of een Epstein Barr virus. In dit artikel wordt aangevoerd dat dergelijke fout-positieve detectie met GP41 niet voorkomen en wordt niet ingezien dat een combinatie van P24 met GP41 wellicht zou leiden tot betere detectie van besmetting met AIDS-vims.
Als gevolg van het gebruik van dergelijke genetische technieken zijn gezuiverde virale antigenen beschikbaar gekomen die veilig, betrouwbaar en goedkoper te bereiden zijn. Gunstiger nog zou echter de 50 beschikbaarheid van een viraal eiwit zijn met antigene determinanten die zowel op het env- als op het gag-eiwit aanwezig zijn. Een dergelijk eiwit zal een bijzonder krachtig instrument zijn voor het opsporen van AIDS-antilichamen en zou kunnen dienen als basis voor een reeks gevoelige diagnostische tests en voor een mogelijk vaccin tegen het AIDS-vims.
Daarom is er een nieuw eiwit, aangeduid als gag/env, met een met ten minste een antigene determinant 55 van een HTLV-lll-gag-eiwit en tevens met een met ten minste een antigene determinant van een HTLV-III-env-eiwit overeenkomende aminozuursequentie verschaft, waarbij onderzoek (’’screening”) kan worden 13 192275 vaccinatiebescherming tegen het virus kan worden geboden. Het nieuwe gag/env-eiwit kan worden weergegeven door het geheel of een gedeelte van de in figuur 2 afgebeelde aminozuursequentie of een functioneel equivalent daarvan. Een functioneel equivalent kan een enigszins gewijzigde aminozuursequentie (substitutie) bevatten. Als enig voorbehoud geldt dat een aldus gewijzigd eiwit en de daarin 5 aanwezige antigene determinanten nog door antilichamen worden herkend. Dit kan eenvoudig experimenteel worden vastgesteld. Voor zowel een functioneel equivalent als voor een gedeelte van de in figuur 2 afgebeelde sequentie geldt dat het eiwit ten minste het aantal aminozuren omvat dat vereist is om een env-en een gagdeterminant voor te stellen.
De uitvinding verschaft verder de vereiste DNA-sequenties die voor het gag/env-polypeptide volgens de 10 uitvinding coderen, recombinant-vectoren die dergelijke DNA-sequenties bevatten en eencellige organismen die bruikbaar zijn voor de bereiding door middel van recombinant DNA-technologie van het gag/env-eiwit volgens de uitvinding alsmede werkwijzen voor de bereiding van dergelijke DNA-sequenties, recombinant-vectoren en eencellige organismen. Daarnaast worden methoden beschreven voor de expressie en isolatie van het gag/env-eiwit volgens de uitvinding. Het aldus bereide gag/env-eiwit kan volgens werkwijzen van de 15 uitvinding worden gebruikt voor een aantal belangrijke immunologische processen.
Als diagnostisch reagens kan het gag/env-eiwit worden gebruikt voor het opsporen van de aanwezigheid van antilichamen tegen AIDS-virussen in menselijk serum of in andere biologische vloeistoffen zoals tranen, zaad, vaginale afscheiding en speeksel. Omdat het eiwit in homogene vorm kan worden bereid, worden problemen met niet-specifieke reacties die in het verleden het gebruik van diagnostische middelen op basis 20 van betrekkelijk ruwe eiwitfracties van HTLV-lll-virussen teisterden, vermeden.
Als immunogen kan het gag/env-eiwit worden gebruikt voor het produceren van antilichamen in dieren tegen daarin aanwezige antigene determinanten. Dergelijke antilichamen kunnen op hun beurt, in samenhang met het gag/env-eiwit dat op geschikte wijze is gemerkt, worden gebruikt in een radioimmunoassay (RIA) of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) voor het opsporen van de aanwezigheid van 25 HTLV-lll-virussen of deeltjes daarvan in menselijk serum of in andere biologische vloeistoffen zoals tranen, zaad, vaginale afscheiding en speeksel. Deeltjes (of brokstukken) die aldus kunnen worden aangetoond zijn uiteraard ondermeer stukken van de virale kem- of omhullingseiwitten.
Het gag/env-eiwit volgens de uitvinding kan, door opneming in een geschikte vaccinsamenstelling, verder worden gebruikt ter bestrijding van de verspreiding van AIDS door middel van preventieve immunisatie.
30 Belangrijke voordelen zijn verbonden aan het gebruik van het gag/env-eiwit volgens de uitvinding vergeleken met het gebruik van de gag/env-eiwitten afzonderlijk. Het env-eiwit zelf is zeer slecht oplosbaar waardoor zuivering moeilijk is. Combinatie van de twee eiwitten leidt tot een product dat gemakkelijker op te lossen is en derhalve eenvoudiger kan worden gezuiverd. Productie en zuivering op grote schaal worden uiteraard ook vereenvoudigd omdat slechts een enkele verbinding behoeft te worden geïsoleerd. Tenslotte 35 opent het gag/env-eiwit de mogelijkheid een diagnostisch pakket (kit) te ontwikkelen dat in een antigen-sandwich bepaling beter functioneert dan afzonderlijke gag- en env-eiwitten.
Opgemerkt dient te worden dat, hoewel het gag/env-eiwit werd verkregen uit HTLV-III, de hier beschreven diagnostische en immunoprofylactische methoden toepasbaar zijn op de opsporing van elk ander viraal agens dat zich bij AIDS voordoet of daarmee in verband is gebracht zoals het met lymfadenopathie 40 geassocieerde virus (LAV) en het met AIDS geassocieerde retrovirus (ARV). De grond hiervoor is dat Crowl e.a. [Cell 41, 979 (1985)] hebben aangetoond dat eiwitten van deze virale agentia immunologisch verwant zijn met die van HTLV-III en daarmee aminozuursequentiesegmenten gemeen hebben.
De uitvinding kan worden toegelicht op basis van de volgende uitvoerige beschrijving in samenhang met de 45 figuren.
Figuur 1 is een schematische weergave van expressieplasmiden die de synthese van gag-(boven) en gag/env-(onder)eiwitten richt. De restrictie-endonuclease-plaatsen die de gag- en env-genen karakteriseren zijn aangegeven en het gearceerde gedeelte duidt het env-segment aan van het gag/env-fusiegen. In beide plasmiden wordt de transcriptie geregeld door de λ PL promotor en zijn de translatie-startsignalen afkomstig 50 van het plasmide pEV-vrf2.
Figuur 2 geeft de nucleïnezuursequentie van het gag/env-fusiegen weer (waarbij bepaalde positie-nummers en restrictie-endonuclease-plaatsen zijn aangegeven), alsmede de aminozuursequentie van het gag/env-eiwit zoals daaruit voorspeld.
Figuur 3 geeft de resultaten weer van SDS-polyacryfamide-gel-electroforese van het in E. coli geprodu-55 ceerde gag/env-eiwit. Paneel 1 toont Coomassie-blauw gekleurde totale-celeiwitten uit cellen die het recombinantplasmide met daarin het gag/env-fusiegen herbergen en van controlecellen. Panelen 2 en 3 zijn Western blots van totale-celeiwit gesondeerd met konijn-antilichamen tegen env-peptide 500-511 (paneel 2) 192275 4 of schaap-antilichamen tegen gag p24 (paneel 3). De immuun-complexen op panelen 2 en 3 werden zichtbaar gemaakt met een tweede met mierikperoxidase gemerkt antilichaam. Bij alle drie panelen duidt g/e op het gag/env-eiwit en c op een negatief controlemonster dat werd gebruikt voor het aantonen van de specificiteit. De door moleculegewichtstandaarden (in kD) afgelegde afstand is weergegeven en de positie 5 van de band van het gag/env-eiwit op de genen is met de pijlen aangeduid.
De werkwijzen volgens de uitvinding houden een aantal stappen in en wel, in logische volgorde: (1) identificatie en isolering van de genen die de gag- en env-eiwitten of fragmenten daarvan coderen, (2) inlassing van deze genen of genfragmenten in een geschikte klonende drager ter bereiding van een recombinant-vector die een gag/env-fusiegen bevat, (3) overdracht van de recombinante klonende drager 10 naar een verenigbaar eencellig gastheerorganisme, (4) selectie en kweèk van aangepaste gastheren die de ingelaste gensequenties kunnen repliceren en tot expressie kunnen brengen, (5) identificatie en zuivering van het genproduct, (6) toepassing van het genproduct voor het opspoien van antilichamen tegen HTLV-III of verwante virussen of als immunogeen voor de bereiding van antilichamen die op hun beurt weer kunnen worden gebruikt voor het opsporen van de virussen zelf of van fragmenten daarvan in menselijke serum of 15 in andere biologische vloeistoffen, (7) toepassing van het gag/env-eiwit in een vaccinpreparaat voor — eventuele immunoprofylactische bescherming tegen AIDS.
Geïsoleerde HTLV-III virionen zouden kunnen worden gebruikt als bron zowel voor de gag- als voor de env-genen volgens de uitvinding. Dowbenko e.a. [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82, 7748 (1985)] hebben bijvoorbeeld een fragment van 2,2 kilobase (kb) van het 5'-gebied van het virale genoom gebruikt als bron 20 van het gag-gen. In plaats daarvan kan genomisch DNA uit cellen waarin het provirale genoom van HTLV-III is opgenomen, de genbron zijn [Shaw e.a., Science 226,1165 (1984)]. Crowl e.a. [Cell £[, 979 (1985)] hebben dergelijk genomisch DNA uit met HTLV-III geïnfecteerde H9-cellen gebruikt voor het verkrijgen van het env-gen.
Alternatieven voor het isoleren van de gag- en env-genen zijn onder meer de chemische synthese van 25 de gensequenties en de bereiding van DNA dat complementair is aan het uit de genen gevormde boodschapper-RNA.
Ongeacht de herkomst kan DNA dat de gag- en env-eiwitten codeert in bacteriën worden gekloond en kunnen de gag- of env-genen bevattende klonen kenbaar worden gemaakt met in de techniek bekende methoden. Bijvoorbeeld kunnen complementaire DNA (cDNA)-sondes uit de genen worden bereid en 30 worden gebruikt voor het opsporen van de klonen die de genen dragen door middel van hybridisatie-technieken.
In een voorkeursuitvoeringsvorm van de uitvinding werd een genomenbibliotheek die door Xbal afbraak van het DNA van de hierboven beschreven met HTLV-III geïnfecteerde H9-cellen is opgebouwd, met behulp van een faag λ-vector gekloond en werden de klonen die het HTLV-III provirale genoom droegen geïdentifi-35 ceerd door hybridisatie met HTLV-III cDNA. Een van die klonen werd aangeduid als λ HXB-3 en er werd een fragment van 1700 base-paren dat het grootste deel van het gag-precursor-eiwit codeert geïsoleerd door Clal/Hincll afbraak van het DNA uit deze kloon.
De in de voorkeursuitvoeringsvorm van de uitvinding gebruikte directe bron van env-gensequenties was een derivaat van plasmide pEV3/env 44-640 dat env-codonen had overeenkomende met de verwijderde 40 residuen 514-524. Verrassenderwijs is het gevolg van deze verwijdering een belangrijke toename van de expressie van het env-gen. Env-sequenties die de codonen 467-640 bevatten werden verkregen door middel van splitsing met Bglll/Hindlll van plasmide pEV3/env 44-640.
Eenmaal geïdentificeerd en geïsoleerd, worden de gag- en env-genen van HTLV-III ingevoegd in een geschikte expressiedrager die de voor transcriptie en translatie van de ingevoegde gensequenties 45 benodigde elementen bevat. Bruikbare klonende dragers kunnen bestaan uit segmenten van chromosomale, niet-chromosomale en synthetische DNA-sequenties zoals verschillende bekende bacteriële piasmi den, faag-DNA, combinaties van plasmiden en faag-DNA’s zoals plasmiden die voor het gebruik van faag-DNA of andere expressie regulerende sequenties zijn aangepast, of gistplasmiden. Bijzonder klonende dragers die zouden kunnen worden gebruikt zijn, onder meer, de pEV-vrf-plasmiden (pEV-vrf-1, -2 en -3), SV40, 50 adenovirus, gist, lambda-gt-WES-lambda B, Charon 4A en 28, lambda-gt-1-lambda B, van M13 afgeleide vectoren zoals pUC8, 9, 18 en 19, pBR313, 322 en 325, pAC105, pVA51, pACY177, pKH47, pACY184, pUB110, pMB9, Co1E1, pSC101, pm121, RSF2124, pCR1 of RP4.
De invoeging van de gag- en env-genen in een klonende vector geschiedt gemakkelijk wanneer zowel de genen als de gewenste klonende drager zijn geknipt met hetzelfde restrictie-enzym of -enzymen, omdat 55 daaibij complementaire DNA-einden wórden gevormd. Als dat niet mogelijk is, kan het nodig zijn de geproduceerde knipeinden te modificeren door enkelstrengig DNA terug te digereren tot afgekante einden of ιΗλΜ Ha AnUfiletrAnninA ι riteihHan mot oon noerhilHo DMA- 5 192275 polymerase worden opgevuld. Aldus kan binding van het afgekante einde worden uitgevoerd met een enzym zoals T4 DNA-ligase. In plaats daarvan kan elke geschikte positie worden verkregen door koppeling van nucleotide-sequenties (linkers) op DNA-einden. Dergelijke linkers kunnen specifieke oligonucleotide-sequenties omvatten die herkenningssequenlies voor het restrictiegebied coderen. De gesplitste vector en 5 de gag- en env-genfragmenten kunnen ook worden gemodificeerd door homopolymere staartvorming ("tailing") zoals beschreven door Morrow [Methods in Enzymology 68, 3 (1979)].
Wanneer eenmaal hetzij het gag- of env-gen hetzij een fragment daarvan in een geschikte klonende drager is ingevoegd kan het andere gen of genfragment in de drager worden aangebracht door voorzichtige splitsing met restrictie-endonuclease, zodat het tweede gen of genfragment naast het eerste terechtkomt en 10 een fusiegen ontstaat. Uiteraard kan het fusiegen, indien de gag- en env-genen chemisch worden bereid, rechtstreeks worden geproduceerd en als enkel DNA-fragment in de klonende drager worden ingevoerd.
In de voorkeursuitvoeringsvorm van de uitvinding werd het Clal/Hincll digestiefragment met daarin het eerder beschreven gag-gen van HXB-3 gekoppeld in pEV-vrf2 dat met Clal en Puvll was gesplitst onder vorming van een recombinant-expressie-plasmide pEV/gag 15-512 (figuur 1, boven) dat de synthese van 15 een eiwit van 56 Kd dat de gag-residuen 15-512 omvatte richtte. De gag-sequenties voorbij een Bglll gebied in de buurt van residu 437 werden vervolgens met env-sequenties herschikt in een Bgill/Hindlil fragment uit het bovenbeschreven derivaat van plasmide pEV/env 44-640 (waaruit de residuen 514-524 waren verwijderd) waarbij plasmide pEV2/gag 15-436/env 467-640 Δ 514-524 dat het gag-env-fusiegen droeg werd gevormd (figuur 1, onder).
20 Een volledige beschrijving van deze constructie is te vinden in het voorbeeld, in het bijzonder bij de onderdelen B-E. De nucleïnezuursequentie van het gag/env-gen volgens de voorkeursuitvoeringsvorm [bepaald met de chemische splitsingsmethode van Maxam e.a., Methods in Enzymology 65, 499 (1980)] en de op grond daarvan voorspelde aminozuurvolgorde van het gag/env-eiwit zijn afgebeeld in figuur 2.
Veel van de in de uitvinding bruikbare klonende dragers bevatten een of meer kenmerkende werkingen 25 die gebruikt kunnen worden voor het selecteren van gewenste transformanten zoals resistentie tegen ampicilline en tetracycline in pBR322, resistentie tegen ampicilline en β-galactosidase-actjviteit in pUC8 en ampiciiline-resistentie in pEV-vrf2. Selectie van gastheercellen waarin dergelijke vectoren zijn ingevoegd wordt aanzienlijk vergemakkelijkt wanneer de gastheercellen zelf de door de vectoren aangedragen werkingen missen.
30 Opgemerkt dient te worden dat de nucleotide-sequenties van de op een bepaalde plaats in een klonende drager ingevoegde gag- en env-genfragmenten nucleotiden kunnen bevatten die geen deel uitmaken van de feitelijke structurele genen. Andersom is het mogelijk dat genfragmenten slechts een deel van de volledige genen bevatten. Het enige dat vereist is, is dat de in de klonende drager ingevoegde genfragmenten in staat zijn de productie in een geschikt gastheerorganisme van een polypeptide of een eiwit met ten minste 35 een antigene determinant die overeenkomt met de sequenties van de gag- en env-eiwitten te richten.
De selectie van een geschikt gastheerorganisme wordt mede bepaald door een aantal bekende factoren. Deze factoren zijn onder meer bijvoorbeeld de verenigbaarheid met de gekozen vector, de toxiciteit van de door het hybride plasma gecodeerde eiwitten, het gemak waarmee het gewenste eiwit wordt gewonnen, de expressiekenmerken, de biologische veiligheid en de kosten. Tussen deze factoren moet het juiste 40 evenwicht worden gevonden en daarbij moet in aanmerking worden genomen dat niet alle gastheren even doeltreffend een bepaald recombinant DNA-molecule tot expressie brengen.
Geschikte eencellige gastheerorganismen die volgens de uitvinding kunnen woiden gebruikt zijn, onder meer, zoogdier- en gistcellen en bacteriën zoals Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus stearothermo-philus en Actinomyces. De door Casadaban e.a. [J. Mol. Biol. 138,179 (1980)] beschreven stam MC1061 45 van E. coli is even goed te gebruiken als elke andere stam van E. coll K-12 die het plasmide pRK248clts bevat. Het plasmide pRK248clts voor gebruik in andere E. coli K-12 stammen is vrij beschikbaar uit de American Type Culture Collection (ATCC) en heeft toegangsnummer ATCC 33766. De E. coli stam MC1061 is ook bij de ATCC gedeponeerd (toegangsnummer ATCC 53338) en is ook op verzoek vrij beschikbaar.
Overbrenging van de recombinante klonende vector naar de gastheercel kan op verscheidene {panieren 50 geschieden. Naar gelang van het gekozen vector/gastheercelsysteem kan die overbrenging plaatsvinden door transformatie, transductie of transfectie. Zodra een gemodificeerde gastheercel wordt geproduceerd kan de cel worden gekweekt en kan het eiwitexpressieproduct uit de kweek worden geïsoleerd.
Bij productie in E. coli is het gag/env-eiwit grotendeels beperkt tot cytoplasmische insluitingslichamen (onoplosbare eiwitaggiegraten) van de bacterie, waardoor de zuivering van het eiwit belangrijk wordt 55 vergemakkelijkt. Ter isolatie van het gag/env-eiwitproduct volgens de uitvinding worden de bacteriële cellen bij voorkeur opengebroken of ontbonden en wordt het onoplosbare eiwit door centrifugeren gewonnen. Een aanzienlijke zuivering kan worden verkregen door achtereenvolgens wassen van het neerslag met 1192275 6 toenemende concentraties ureum gevolgd door toepassing van standaardwerkwijzen voor de zuivering van eiwitten.
Voor geringe hoeveelheden materiaal zoals monsters voor polyacrylamidegel-elektroforese-analyse kunnen de cellen worden opengebroken door behandeling met een detergent zoals natriumdodecylsulfaat 5 (SDS). Grotere hoeveelheden van het eiwit kunnen het best worden gewonnen met behulp van geluidstrillin-gen of met andere mechanische splitsingstechnieken zoals de Franse drukcel.
Celverbreking kan ook geschieden langs chemische of enzymatische weg. Aangezien voor de instandhouding van het celmembaan dikwijls tweewaardige kationen vereist zijn, kan behandeling met geschikte chelaatvormende middelen zoals EDTA of EGTA voldoende openbreking geven om het uitlekken van het 10 eiwit uit de cellen te vergemakkelijken. Ook zijn enzymen zoals lysozym voor dit doel gebruikt. Dat enzym hydrolyseert het peptidoglycanskelet van de celwand. Ook kan beurtelings bevriezen en ontdooien in combinatie met behandeling met lysozym worden toegepast.
Wanneer het gag/env-eiwit uit de cel is bevrijd, kan het volgens elke bekende methode in het mengsel worden aangetoond. Bijvoorbeeld kan er een radioimmunoassay (RIA) of enzyme-linked immunosorbent 15 assay (ELISA) worden uitgevoerd onder gebruikmaking van antilichamen tegen het eiwit. Bij voorkeur wordt het eiwit geïdentificeerd door middel van elektroforese met SDS op polyacrylamidegel gevolgd door Western blot of soortgelijke analyse.
Het gag/env-eiwit volgens de uitvinding kan worden geconcentreerd door neerslaan met zouten zoals natrium- of ammoniumsulfaat, door ultrafiltreren of door gebruikmaking van andere voor de deskundige 20 bekende methoden. Verdere zuivering kan worden verkregen door gangbare eiwitzuiveringstechnieken zoals, onder meer, gelfiltratie, ionenuitwisselingschromatografie, preparatieve schijfgel- of gordijneiectrofo-rese, isoelektrische concentratie, fractionering met een organisch oplosmiddel bij lage temperatuur of tegenstroomverdeling.
Omdat het gag/env-eiwit antigene determinanten van twee belangrijke componenten van het HTLV-III-25 virus bevat en omdat dit virus de belangrijkste veroorzaker bij AIDS is en immunologisch verwant is met de overige virale agentia die een rol spelen bij of in verband gebracht zijn met AIDS of ARC, is het eiwit een krachtig diagnostisch instrument voor de opsporing van antilichamen tegen AlDS-vi russen in menselijk serum. De fusie kan op talrijke bekende wijzen voor dit doel worden gebruikt.
Het gag/env-eiwit kan bijvoorbeeld op een of andere wijze worden gemerkt, het gemerkte eiwit kan dan 30 aan een menselijk serummonster waarvan wordt vermoed dat het antilichamen tegen AIDS-virussen bevat worden toegevoegd onder vorming van gemerkte complexen van fusie-eiwit en antilichamen en de aldus gevormde complexen kunnen op geschikte wijze worden gedetecteerd. In een ander voorbeeld kan het eiwit op een vaste drager worden geïmmobiliseerd en vervolgens met het menselijke serummonster in contact worden gebracht. Antilichamen tegen AIDS-virussen in het monster zullen zich dan met het geïmmobili-35 seerde eiwit binden en de aldus gevormde complexen kunnen dan, nadat niet-gecomplexeerde eiwitten en antilichamen uitgewassen zijn, met behulp van een reagens zoals Staphylococcus aureus eiwit A (gemerkt met b.v. jodium 125) worden ontdekt. Veel variaties van deze mogelijkheden, waarvan er hieronder enkele worden aangegeven, zullen de deskundigen duidelijk zijn.
Op basis van het gebruik van antilichamen tegen het gag/env-eiwit kan een reeks diagnostische tests 40 voor de aanwezigheid van AIDS-virussen of deeltjes daarvan in menselijk serum of in andere biologische vloeistoffen worden ontworpen. Die antilichamen kunnen worden geproduceerd door injectie bij een zoogdier of een vogel van een voldoende hoeveelheid van een vaccinsamenstelling die het eiwit en een daarmee verenigbare farmaceutische drager omvat teneinde de productie van antilichamen tegen het eiwit op gang te brengen. De vereiste geschikte hoeveelheid eiwit is de deskundige bekend of kan op gebruikelijke wijze 45 proefondervindelijk worden bepaald. In verband met de uitvinding kan onder de term ’’farmaceutische drager" worden verstaan hetzij de standaardsamenstellingen die geschikt zijn voor toediening aan de mens of de gangbare bij diervaccinaties gebruikte adjuvantia.
Geschikte adjuvantia voor het vaccineren van dieren zijn onder meer Freund’s onvolledig of volledig adjuvans (niet geschikt voor gebruik bij de mens of bij vee), adjuvans 65 (dat arachide-olie, mannide-mono-50 oleaat en aluminiummonostearaat bevat) en minerale gelen zoals aluminiumhydroxide, aluminiumfosfaat en aluin; oppeivlakte-actieve stoffen zoals hexadecylamine, octadecylamine, lysolecithine, dimethyldioctade-cylammoniumbromide, N,N'-dioctadecyl-N,N'-bis(2-hydroxyethyl)-propaandiamine, methoxyhexadecylglycerol en ”pluronic”-polyolen; poly-anionen zoals pyran, dextransutfaat, poly-IC, polyacrylzuur, carbopol; peptiden zoals muramyldipeptide, dimethylglycine, tuftsin; en olie-emulsies. Het gag/env-eiwit kan ook worden 55 toegediend na opneming in liposomen of andere microdragers of na koppeling met polysacchariden, andere eiwitten en andere polymeren.
Typerend wordt de eerste vaccinering na enige weken gevolgd door een of meer "versterkings”- 7 192275 vaccinaties waarvan het netto effect is de productie van hoge concentraties antilichamen tegen het gag/env-eiwit, die op de gebtuikelijke wijze kunnen worden gewonnen.
Uiteraard kunnen monoklonale antilichamen tegen het eiwit volgens de huidige technologie worden geproduceerd om tot hetzelfde resultaat te komen. Somatische cellen met het vermogen antilichamen te 5 produceren zoals B-cellen kunnen worden gefuseerd met myeloom-cellijnen en dan hybridoomcellen produceren. Deze cellen kunnen in vitro of als ascites-tumoren oneindig worden gekweekt waardoor grote hoeveelheden specifieke antilichamen worden gevormd. Aangezien hybridoomcellen gemakkelijk kunnen worden gekloond is het mogelijk snel grote aantallen cellen te produceren die alle dezelfde specifieke antilichaammoleculen, gericht op een gemeenschappelijke antigens determinant, produceren. Deze 10 uitzonderlijke uniformiteit in antilichaamproductie kan voordelig zijn wanneer de antilichamen in specifieke diagnostische tests moeten worden gebruikt.
Lymfknobbels en milten van dieren geïnjecteerd met een antigen zijn geschikte bronnen van B-cellen, al is het even goed mogelijk deze cellen uit ongesensibiliseerde dieren te verwijderen en ze na isolatie in vitro te injecteren. Veel gebruikt bij de productie van hybridoom zijn B-lymfocyten van muis en rat, maar 'm plaats 15 daarvan kunnen ook cellen van konijnen, mensen, kikkers en andere dieren worden gebruikt.
Er zijn tal van gespecialiseerde myeloom-cellijnen ontwikkeld uit lymfocytische tumoren voor gebruik bij de hybridoomproductie [Kohier en Milstein, European J. Immunol. 6, 511 (1976); Shulman e.a., Nature 276, 269 (1978)]. Van de geproduceerde cellijnen worden P3/X63-Ag 8, P3/NSI/1-Ag 4-1, Sp2/0-Ag14en S194/5.XXO.BU.1 vaak gebruikt.
20 De fusie van de antilichaam producerende milt- of lymfknobbelcellen met myeloomcellen voor de productie van hybridomen geschiedt gewoonlijk met een overmaat splenocyten of lymfocyten ten opzichte van de myeloomcellen, welke overmaat tot 20:1 kan bedragen, al worden meestal lagere verhoudingen gebruikt. Fusie wordt vergemakkelijkt bij gebruik van een fusie-hulpmiddel zoals met UV gedeactiveerd Sendai virus of polyethyleenglycol (PEG). Gefter e.a [Somatic Cell Genet. 3, 231 (1977)] hebben gemeld dat 25 combinatie van dimethylsulfoxide met PEG de celfusie verder versnelt. Er zijn ook elektrische inrichtingen beschikbaar die cellen met een uitzonderlijk hoge doelmatigheid kunnen fuseren.
Wanneer de fusie eenmaal heeft plaatsgevonden moeten de hybridoomcellen uit de niet-gefuseerde moeder-celstammen worden geselecteerd. Deze selectie kan vlot plaatsvinden wanneer de cellen worden gekweekt in een medium dat de groei van hybridoomcellen wel maar die van moedercellen niet steunt. De 30 bij de fusie gebruikte somatische B-cellen hebben in cultuur een beperkte levensduur en gaan dus verloren bij veroudering en versterf, maar de moedermyeloomcellen die in cultuur een onbepeikte levensduur hebben moeten met speciale selectietechnieken worden verwijderd.
In een veel gebruikt systeem worden myeloomcellen zonder hypoxanthine-fosforibosyl-transferase (HPRT ) gebruikt. Deze cellen beschikken niet over de vangmogelijkheid voor het hergebruik van vrije 35 hypoxanthine-base en overleven niet indien een remmer zoals aminopterine wordt gebruikt om de nieuwbereiding van purinen te blokkeren. De myelome moedercellen kunnen dus worden geselecteerd door het fusiemengsel in een hypoxanthine/aminopterine/thymidine (HAT) medium te kweken, waarbij de hybridoomcellen als gevolg van de bijdrage van HPRT door de antilichaam producerende fusie-moedercellen overleven.
40 Na een periode van selectiekweek kunnen de overlevende hybridoomcellen worden gekloond en kunnen voorraden worden gekweekt volgens standaardcelkweekmethoden en de klonen die de gewenste specifieke immunoglobulinen produceren kunnen door middel van enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) of met andere proeven die zijn gebaseerd op het gebruik van het antigen waartegen de antilichamen zijn gericht worden gedetecteerd.
45 De door toepassing van de uitvinding te verkrijgen anti-gag/env-eiwitantilichamen kunnen verder worden gebruikt voor het opstellen van een verscheidenheid aan diagnostische tests voor AIDS-virussen of deeltjes daarvan. Dergelijke diagnostische systemen kunnen de vorm hebben van een radioimmunoassay, hetzij in vrije oplossing hetzij in vaste toestand. In plaats daarvan kunnen ELISA-bepalingen worden verkregen alsmede bepalingen op basis van een immunoblot analyse. Deze bepalingen kunnen direct of indirect zijn, 50 met toepassing van een tweede antilichaam tegen de anti-gag/env-eiwitantilichamen. Aan de antilichamen kunnen tal van enzymatische werkingen worden gekoppeld, waarbij peroxidase, glucoseoxidase, β-galactosidase en alkalisch fosfatase slechts enige voorbeelden zijn.
Het basisprincipe van deze tests is dat een monster van menselijk serum of van een andere biologische vloeistof waarin de aanwezigheid van AIDS-virussen of fragmenten daarvan wordt vermoed tot reactie wordt 55 gebracht met een bekende titer aan antilichamen tegen het gag/env-eiwit ter vorming van antigen-antilichaamcomplexen. De aldus gevomtde complexen worden met geschikte middelen aangetoond.
De deskundige zal ook inzien dat er vele andere manieren zijn waarop het anti-gag/env-eiwitsenrm ____I _ 192275 8 diagnostisch kan worden gebruikt zoals in een of meer agglutinatietests. In dergelijke agglutinatiebepalingen kan de interactie van antilichamen en AIDS-virussen of virale fragmenten wórden opgespoord met behulp van systemen waarin deeltjes zijn bekleed met de anti-gag/env-eiwitlichamen. Dergelijke deeltjes kunnen latexfaalen, liposomen, erytrocyten, polyacrylamidekorrels of andere polymeren zijn.
5 Qe hierboven beschreven werkwijze voor het bepalen van AIDS-virus of van antilichamen tegen AIDS-virus kan worden uitgevoerd met een geschikt testpakket dat in een houder het gag/env-eiwit volgens de i itvinding of antilichamen tegen AIDS-viius die zijn opgewekt door het gag/env-eiwit volgens de uitvinding omvat. Een dergelijk testpakket kan deeltjes omvatten die zijn bekleed met de antilichamen tegen AIDS-virus die zijn opgewekt door een eiwit volgens de uitvinding. De hierboven beschreven testpaketten 10 vom ten tevens onderdeel van de onderhavige uitvinding.
[toor Crowl e.a. [Cell <M, 979-986 (1985)] is beschreven dat het serum van alle 50 AIDS-patiënten die met genetisch gemanipuleerd env-eiwit waren onderzocht sterk reactief was ten opzichte van het eiwit, dit ondanks het feit dat de helft van de patiënten afkomstig was van de westkust van de Verenigde Staten en de helft van de oostkust. Dat al de onderzochte serums reactief waren met het env-eiwit betekende dat de _ 15 virussen die de aldus reagerende antilichamen produceerden, ondanks de geografische scheiding en de waarschijnlijkheid van geringe genetische verschillen, ten minste een gemeenschappelijke of behouden antigene determinant in hun omhullende eiwitten moeten hebben gehad.
Het gag-kemeiwit van het AIDS-retrovirus blijkt bij een hoog percentage individuen die eerder aan een virus waren blootgesteld de vorming van antilichamen op gang te brengen [Montagnier e.a., zie boven; 20 Schüpbach e.a., zie boven; Samgadharan e.a., zie boven].
Samengevat doen de bovengenoemde waarnemingen vermoeden dat het gag/env-eiwit volgens de uitvinding, dat ten minste een antigene determinant heeft die met de sequenties van de gag- en env-eiwitten waaruit het is opgebouwd overeenkomt, immunogeen is bij de mens en bruikbaar kan zijn als AIDS-vaccin. Het gag/env-eiwit (geproduceerd op de wijze zoals hier beschreven dan wel chemisch gesynthetiseerd) 25 kan derhalve in een vaccinsamenstelling die het eiwit en een geschikte farmaceutische drager omvat worden gebruikt. Het eiwit kan in een dergelijke samenstelling in de verkregen gezuiverde vorm worden gebruikt of kan meer immunogeen worden gemaakt via in de techniek bekende modificaties. Het eiwit kan bijvoorbeeld in een sterk immunogene matrix worden omgezet door reactie met een verknopingsmiddel zoals 1,3-dicyclohexylcarbodiimide. Ook kan het eiwit covalent worden gekoppeld met een sterk immu-30 nogeen eiwitdragermolecule, hetzij rechtstreeks hetzij met een geschikt verbindingsmolecule. Bruikbare dragermoleculen zijn onder meer patella-hemocyanine en verschillende bacteriële toxoiden (inactieve toxinen) zoals difterietoxoide. Wanneer het gag/env-eiwit is gekoppeld aan een bacterieel toxoide kan een dubbel werkende vaccinsamenstelling worden geproduceerd die bescherming biedt zowel tegen AIDS als tegen de bacterie waaruit het toxoide afkomstig is.
35 Toedieningswegen, antigendoses, aantal en frequentie van injecties zijn factoren die tot de normale deskundigheid horen.
Voorbeeld
Het hierna volgende is een niet beperkend voorbeeld ter illustratie van de werkwijzen volgens welke een 40 recombinant-vector kan worden geproduceerd die het gag/env-eiwit van het HTLV-III virus codeert. In dit voorbeeld werden de volgende stappen uitgevoerd die in detail worden beschreven: (1) De DNA-sequentie die de residuen 15-512 (alle behalve de eerste 14 amino-eindstandige residuen) van het gag-gen codeert werd uit recombinant faag-kloon λΗΧΒ-3 geknipt en in E. coli expressieplasmide pEV-vrf2 gekoppeld onder vorming van plasmide pEV2/gag 15-512; 45 (2) De DNA-sequenties overeenkomende met de env-aminozuurresiduen 319-331 werden uit expressieplasmide pEV3/env 44-640 verwijderd door primer-gerichte mutagenese onder vorming van plasmide pEV/env 44-640 φ 319-331; (3) Op plasmide pEV/env 44-640 A 319-331 werd primer-gerichte mutagenese uitgevoerd waarbij de nucleotiden die aminozuurresiduen 514-524 coderen werden gedeleteerd en plasmide pEV3/env 44-640 φ 50 319-331 Δ 514-524 werd gevormd; en (4) Een restrictie-endonudease-fragment van het env-gen uit plasmide pEV/env 44-640 Δ 319-331 Δ 514-524 dat de env-residuen 467-640 Δ 514-524 codeert werd in gesplitst plasmide pEV/gag 15-512 gebonden onder vorming van een fusiegen dat gag-residuen 15-436 en env-residuen 467-640 Δ 514-524 codeert in plasmide pEV2/gag 15-436/env 467-640 Δ 514-524.
55 in elk stadium van de opbouw werden plasmiden gereproduceerd door transformatie in E. coli-stam MC1061 (pRK248clts).
9 192275 A. Algemene werkwijzen voor de bereiding van recombinant-vectoren DNA-bereiding Isolatie op kleine schaal van ptasmide-DNA uit 1 ml verzadigde culturen van één nacht vond plaats volgens de werkwijze van Bimboim e.a. [Nucleic Acids Research 7,1513 (1979)]. Volgens deze weikwijze kan een gëringe hoeveelheid DNA uit een bacteriéle kolonie worden geïsoleerd voor analytische doeleinden. Grotere 5 hoeveelheden plasmide DNA werden bereid met 1-liter culturen volgens een standaardwerkwijze met centrifugeren met cesiumchloride.
Omstandigheden voor enzymatische reacties
De gebiuikte restrictie-enzymen en het T4 DNA ligase waren producten van New England BioLabs, Beverly, 10 MA, USA. Deze enzymen werden gebruikt volgens methoden en onder omstandigheden zoals gepubliceerd door de fabrikant.
Voor de restrictie-endonucleasen is een eenheid van activiteit gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is voor een volledige omzetting van 1,0 pg DNA in 60 minuten in een totaal reactievolume van 0,05 ml waarbij de afbraak bij 37°C wordt uitgevoerd. De digestiemengels bevatten naast het te splitsen DNA, 15 100 pg/ml runderserum-albumine en de volgende buffercomponenten:
Elglll: 100 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI (pH 7,4), 10 mM MgCI2 en 10 mM 2-mercaptoethanol (2-ME) (/lal: 50 mM NaCI, 6 mM Tris-HCI (pH 7,9) en 6 mM MgCI2
Hindi: 100 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI (pH 7,4), 7 mM MgCI2 en 1 mM dithiotreitol (DTT) 20 Hindlll: 50 mM NaCI, 50 mM Tris-HCI (pH 8,0) en 10 mM MgCi2
Hpal: 6 mM KCI, 10 mM Tris-HCI (pH 7,4), 10 mM MgCI2 en 1 mM DTT
Pstl: 100 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI (pH 7,5) en 10 mM MgCI2
Pvull: 60 mM NaCI. 6 mM Tris-HCI (pH 7,5), 6 mM MgCI2 en 6 mM 2-ME
Stul: 100 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI (pH 8,0), 10 mM MgCI2 en 6 mM 2-ME
25 De T4 DNA-koppeling werd bij 16°C uitgevoerd in een mengsel dat het DNA en 50 mM Tris-HCI (pH 7,8), 10 mM MgCI2, 20 mM DTT, 1,0 mM ATP en 50 pg/ml runderserum-albumine bevatte. Een eenheid T4 DNA ligase-activiteit is gedefinieerd als de hoeveelheid die nodig is om 50% koppeling van Hindlll-fragmenten van lambda DNA te verkrijgen in 30 minuten bij 16°C in 20 pl incubatiemengsel en een concentratie aan 5'-DNA einden van 0,12 μΜ (300 pg/ml).
30
Zuivering van DNA-fragmenten in agarose
Na de splitsing met restrictie-endonuclease werden DNA-fragmenten voor het klonen geïsoleerd door elektroforese in 1% agarose. Na zichtbaarmaking met 1 pg/ml ethidiumbromide werden plakjes van het gel met daarin de gewenste DNA-fragmenten door een naald maat 21 geëxtrudeerd in 4 ml van een oplossing 35 die 10 mM Tris-HCI (pH 7,4), 1 mM EDTA en 300 mM NaCI bevatte. Dit mengsel werd vervolgens 3 uur bij -80°C ingevroren, 30 minuten bij 37°C ontdooid en 30 minuten bij 10.000 g gecentrifugeerd. De bovenstaande vloeistof werd dooreen 0,45 micron Millex filter gefiltreerd, tot 0,25 ml geconcentreerd met secbutanol en driemaal met ethanol met 10 pg E. coli tRNA/transfer RNA) als drager neergeslagen.
40 Kweekmedia
Het M9CA medium bevatte 10 g NaaHPO,,, 3 g KH2P04, 0,5 g NaCI en 1 g NH4CI per liter, en daarbij 1 mM ;MgS04, 0,5% glucose en 0,5% casaminozuren, ingesteld op pH 7,4.
Luria Broth (LB) bevatte 5 g Bacto-gistextract, 10 g Bacto-trypton en 10 g NaCI per liter, ingesteid op pH
7,5.
45 De antibiotica tetracycline en ampicilline werden tot eindconcentraties van respectievelijk 15 en 50 pg/fril, waar aangegeven, toegevoegd.
Transformatie en isolatie van recombinanten
De transformatie van E. coli-stam MC1061 (pRK248clts) werd uitgevoerd door middel van een gewijzigde 50 versie van de werkwijze van Kushner [in Genetic Engineering, eds. Boyer e.a., Elsevier/North-Holland, Amsterdam, blz. 17 (1978)], en wel in hoofdzaak als volgt.
Tweehonderd ml bacteriéle cellen werden bij 30°C in LB gekweekt tot een ΟΟ.^ tussen 0,5 en 1,0 waarna de cellen werden verzameld door centrifugeren bij 6000 g gedurende 5 minuten bij 4°C en opnieuw werden gesuspendeerd in 50 ml van een oplossing die 10 mM morfolinopropaansulfonzuur (MOPS; pH 7,0) 55 en 10 mM RbCI bevatte. De cellen werden nogmaals verzameld door centrifugeren en opnieuw gesuspendeerd in 30 ml van een oplossing die 10 mM MOPS (pH 6,5), 50 mM CaCI2 en 10 mM RbCI bevatte. Na incubatie bij 0° C gedurende 30 minuten werden de cellen verzameld, opnieuw in 6 ml 10 mM MOPS (pH
1192275 10 6,5) met 50 mM CaCI2, 10 mM RbCI en 15% glycerol gesuspendeerd en verdeeld over 40 Eppendorfbuizen (300 μΙ per buis) en bij -80°C ingevroren.
De transformatie werd uitgevoerd door ontdooien van een hoeveelheid van 100 μ! cellen en incuberen gedurende 30, 2 en 2 minuten bij respectievelijk 0°, 37° en 0°C in aanwezigheid van een 10 μΙ monster 5 ligeringsmengsel dat ongeveer 100 ng DNA bevatte en toevoegen van 0,1 tot 0,5 ml LB in de buis. De buis werd vervolgens 60 minuten bij 22°C geïncubeerd waarna 200 μΙ van de celsuspensie op een LB-plaat die ampicilline bevatte verspreid en 20 uur bij 30°C geïncubeerd.
Celkweek en inductie van genexpressie 10 Culturen van E. coli MC1061 die plasmide pRK248clts en een expressieplasmide bevatte werden in M9CA medium bij 30eC gekweekt tot de mid-logfase en vervolgens op 42°C gebracht ter deactivering van de XPL repressor. Na 2 uur incuberen bij 42°C werden cellen uit 1 ml van de geïnduceerde cultuur verzameld door centrifugeren en opnieuw in TG buffer die 10 mM Tris-HCi (pH 7,4) en 10% glycerol bevatte gesuspendeerd als voorbereiding op de analyse.
15
Elektroforese met SDS op polyacrylamidegel en western blöt analyse
In Tris-glycine (TG)-buffer gesuspendeerde geïnduceerde cellen werden met een gelijk volume 2x monsterbuffer gemengd [Laemmli, Nature 227, 680 (1970)], 5 minuten bij 95°C geïncubeerd en op de door Laemmlï beschreven wijze aan polyacrylamidegel-elektroforese met SDS in 12,5% gelen onderworpen. Na 20 de elektroforese werden de eiwitten uit het gel aan elektroblotting onderworpen op een nitrocellulosemem-braan van 0,1 micron bij 95 volt gedurende 6 uur in 12,5 mM Tris en 96 mM glycine met 20% methanol en 0,01% SDS bij pH 7,5. Vervolgens werd een Western blotanalyse uitgevoerd zoals beschreven doorTowbin e.a. [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 76, 4350 (1979)].
25 Primer-gerichte mutagenese
Primer-gerichte, plaatsspecifieke mutagenese werd uitgevoerd volgens de door Morinaga e.a. beschreven werkwijzen [Biotechnology 2, 636 (1984)]. De voor de uitvoering van de mutagenese gebruikte synthetische oligonucleotiden werden volgens de fosfietmethode [Beaucage e.a., Tetrahedron Lett. 22,1859 (1981); Matteucci e.a., J. Am. Chem. Soc. 103, 3185 (1981)] bereid met behulp van een geautomatiseerd 30 synthese-apparaat en door middel van polyacrylamidegel elektroforese volgens de werkwijze van Maxam e.a., [Methods in Enzymology 65, 499 (1980)] gezuiverd.
Kolonie-hybridisaties
Kolonie-hybridisaties werden uitgevoerd volgens de werkwijze van Grunstein e.a. [Proc. Natl. Acad. Sci., 35 U.S.A., 72, 3961 (1975)]. Hetzelfde oligonucleotide dat was gebruikt voor de primer-gerichte plaatsspecifieke mutagenese werd gebruikt als sonde voor de hybridisaties na marking van het 5'-einde met 32p-(-ATP) met behulp van polynucleotide-kinase zoals beschreven door Maniatis e.a. [Cell 1_5, 687 (1978)].
B. Opbouw van plasmide pEV2/gag 15-512 40 Zoals eerder aangegeven werde de opbouw van een uiteindelijk expressieplasmide dat het gag/env-fusie-eiwit tot expressie brengt gestart met de constructie van een plasmide (pEV2/gag 15-512) dat nucleotiden bevat dat alle behalve de eerste 14 amino-eindstandige residuen coderen. Enkele van de nucleotiden die de carboxyl-eindstandige gag-residuen coderen werden vervolgens door env-sequenties vervangen waarbij het uiteindelijke fusieproduct werd verkregen.
45 Voor het bereiden van plasmide pEV2/gag 15-512 werd de DNA-sequentie die de residuen 15-512 van het gag-eiwit codeert verkregen uit 50 μΙ recombinant faag lambda kloon λΗΧΒ-3 die het HTLV-III provirale genoom bevat, door splitsing met 50 eenheden Clal en 50 eenheden Hindi gedurende 120 minuten bij 37°C onder vorming van een fragment van 1700 baseparen. Dit DNA-fragment werd geïsoleerd door middel van preparatieve gel-elektroforese op agarose en opnieuw in 0,1x TE buffer [1 mM Tris-HCI (pH 7,4) met 0,1 50 mM EDTA] gesuspendeerd tot een eindconcentratie van 0,03 pmol/μΙ.
Voor het verkrijgen van het gag-DNA-fragment werd 2 pg van het expressieplasmide pEV-vrf2 van E.coli gedurende 60 minuten bij 37°C gesplitst met 5 eenheden Clal en 5 eenheden Pvull en werd een fragment van 1700 baseparen met daarin de XPL-promotor door elektroforese in 1% agarosegel geïsoleerd en na precipitatie met ethanol opnieuw gesuspendeerd tot een eindconcentratie van 0,03 pmol/μΙ.
55 Het bij deze opbouw gebruikte plasmide pEV-vrf2 is een derivaat van het gemakkelijk beschikbare plasmide pBR322 [ATCC 31344]. De opbouw van plasmide pEV-vrf2 is in detail beschreven door Crawl e.a. [Gene 38, 31 (1985)]. De bij deze constructie gebruikte recombinante faag lambda kloon λΗΧΒ-3 is door 11 192275
Shaw e.a. beschreven [Science 226, 1165 (1984)]. Deze kloon werd met behulp van standaard recombinant DNA technieken verkregen uit de hierboven beschreven met HTLV-III geïnfecteerde H9 cellijn. Een met HTLV-III geïnfecteerde menselijke cellijn, aangeduid als H9/HTLV-IIIB, die geschikt is voor gebruik volgens de uitvinding, is bij de American Type Culture Collection gedeponeerd met toegangsnummer CRL 8543.
5 Aangezien Shaw e.a. de sequentie van het HTLV-III genoom hebben gepubliceerd kan een DNA-sonde met behulp van die gegevens gemakkelijk worden geconstrueerd en worden gebruikt ter isolatie van het genoom van H9 of van elke andere lijn die in staat is het virus te vermeerderen.
0,03 (300) pmol van het gag/Clal-Hincll fragment werden gemengd met 0,03 pmol van het pEV-vrt2/Clal-Pvull fragment en met 200 eenheden T4 DNA ligase 18 uur bij 15°C in een eindvolume van 10 pl gekop-10 peld. Het koppelingsproduct werd vervolgens in E.coli-stam MC106T (pRK248clts) getransformeerd en de transformanten werden geselecteerd door kweek op LB-agaiptaten met ampicilline na incubatie gedurende 18 uur bij 30°C. De recombinante plasmide-DNA’s werden na splitsing met Bglll, Pstl of Hindlll geanalyseerd op de juiste afmeting van het restrictiefragment. De met DNA-maatanalyse positieve geïsoleerde fracties werden vervolgens onderzocht voor de synthese van het voorlopende gag-polypeptide door middel 15 van polyacrylamidegel-elektroforese met SDS en Western blot-analyse.
Culturen die plasmide pEV2/gag 15-512 bevatten werden bij 40°C geïnduceerd en van de geïnduceerde cellen werden duplomonsters bereid voor analyse door middel van SDS-polyacrylamidegel-elektroforese. Na elektroforese werd het gel in tweeën gesneden en werd de helft van het gel gekleurd met Coomassie briljantblauw, terwijl de andere helft werd onderworpen aan elektroblotting en Western blot-analyse met 20 behulp van anti-gag antilichamen.
Uit de analyse bleek dat de geïnduceerde cellen eiwitten produceerden die zich in de gelen als twee hoofdbanden met schijnbare moleculegewichten van ongeveer 56 en 53 Kd verplaatsten. De omvang van het volledige gag 15-512 eiwit is ongeveer 56 Kd. De beide belangrijkste eiwitten reageren met de anti-gag antilichamen. Tevens werd een aantal minder belangrijke eiwitten met lager moleculegewicht, die met de 25 antilichamen reageerden, waargenomen.
C. Opbouw van plasmide pEV3/env 44-640 Δ 319-331
De in het uiteindelijke voorbeeldplasmide volgens de uitvinding aanwezige env-sequenties werden in twee fasen verwerkt (beschreven in deze afdeling en in afdeling D verderop) waarbij in beide gevallen specifieke 30 korte nucleotidesequenties door middel van primer-gerichte, plaatsspecifieke mutagenese werden gedele-teerd. De eerste van deze deleties (beschreven in deze afdeling) was nodig voor het produceren van plasmide pEV3/env 44-640 Δ 319-331 Δ 514-524 (afdeling D).
Het expressieplasmide pEV3/env 44-640, waarvan de opbouw uit λΗΧΒ-3 en de pEV-vrf plasmiden is beschreven door Crowl e.a. [Cell 41, 979 (1985)] stuurt de synthese van een HTLV-III env-spedfiek eiwit 35 van 68 Kd in E. coli. Met de env-aminozuurresiduen 319-331 overeenkomende DNA-sequenties werden gedeleteerd door primer-gerichte mutagenese met behulp van een 18-mer synthetisch oligonucleotide met sequentie 5' GCA TTT GTT AAC ATT AGT 3'. Dit oligonudeotide werd ontworpen als complement op de env-sequenties zodat de nucleotiden die residu 318 coderen werden gekoppeld aan die welke residu 332 coderen. Als gevolg van het samenvoegen van deze sequenties werd een nieuwe unieke Hpai-plaats in 40 plasmide-DNA geïntroduceerd terwijl 39 baseparen werden gedeleteerd. De Stul en Hindlll plaatsen in plasmide pEV3/env 44-640 werden gebruikt voor het vormen van het ”gat” voor het heteroduplexmolecuut.
DNA uit geïsoleerde kolonies die op hybridisatie met het met ^ gemerkte synthetische oligonudeotide tijdens kolonie-onderzoek positief waren werden in MC1061 (pRK248clts) getransformeerd en geanafyseerd op de aanwezigheid van de nieuwe, unieke Hpal plaats.
45 D. Opbouw van plasmide pEV3/env 44-640 Δ 319-331 Δ 514-524
Een tweede deletie binnen de env coderende sequenties werd tot stand gebracht door middel van primer-gerichte mutagenese met behulp van een synthetisch oligonudeotide met de sequentie 5' AGA GCA GTG GCA GCA GGA 3'. Dit oligonudeotide plaatste sequenties die residu 513 van het env-eiwit coderen 50 naast die welke residu 525 coderen en vergemakkelijkte de deletie van de nucleotiden die residuen 514-524 coderen. Deze deletie werd in het plasmide tot stand gebracht met behulp van de restrictie-plaatsen Hpal en Hindlll onder vorming van een enkelstrengs gat binnen het env-gebied.
Na retransformatie werd DNA uit positieve isolatiefradies die waren geïdentificeerd met de met ^ gemerkte oligonucleotide-sonde, geanalyseerd op de deletie van 33 baseparen door middel van restridie-55 splitsing met Hpal en Hindlll gevolgd door elektroforese in 1% agarose. Deze verwijdering werd ook bevestigd door DNA-sequentiëring na de chemische splitsingsmethode van Maxam en Gilbert [Methods in Enzymology 65, 499 (1980)].
Claims (23)
1. Eiwit met een aminozuursequentie die overeenkomt met ten minste een antigene determinant van een 45 HTLV-III gag-eiwit en tegelijkertijd met een antigene determinant van een HLTV-III env-eiwit.
2. Eiwit volgens conclusie 1 met de aminozuursequentie: Met Asn Arg He Arg lie His Arg Trp Glu Lys lie Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Lys His He Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro Gly Leu Leu Glu
50 Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gin He Leu Gly Gin Leu Gin Pro Ser Leu Gin Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gin Arg He Glu He Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu Asp Lys He Glu Glu Glu Gin Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala Gin Gin Ala Ala Ala Asp Thr Gly His Ser Ser Gin
55 Val Ser Gin Asn Tyr Pro lie Val Gin Asn He Gin Gly Gin Met Val His Gin Ala He Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys 13 192275 Val Val Glu Glu Lys Ala Pha Ser Pro Glu Val He Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gin Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gin Ala Ala Met Gin Met Leu Lys
3. Eiwit volgens conclusie 1 of 2 in nagenoeg zuivere vorm.
4. DNA-molecule met een sequentie die voor een eiwit volgens een der conclusies 1-3 codeert.
5 CCTAGGAAAA AGGGCTGTTG GAAATGTGGA AAGGAAGGAC ACCAAATGAA AGATTGTACT GAGAGACAGG CTAAI II 11 I AGGGAAGATC TTCAGACCTG GAGGAGGAGA TATGAGGGAC AATTGGAGAA GTGAATTATA TAAATATAAA GTAGTAAAAA TTGAACCATT AGGAGTAGCA CCCACCAAGG CAAAGAGAAG AGTGGTGCAG AGAGAAAAAA GAGCAGTGGC AGCAGGAAGC ACTATGGGCG
5. DNA-molecule volgens conclusie 4, met het kenmerk, dat deze het geheel of een gedeelte van de nucleïnezuursequentie ATGAATAGAA TTCGGATCCA TCGATGGGAA AAAATTCGGT TAAGGCCAAG GGGAAAGAAA AAATATAAAT TAAAACATAT AGTATGGGCA AGCAGGGAGC TAGAACGATT CGCAGTTAAT CCTGGCCTGT TAGAAACATC AGAAGGCTGT
40 AGACAAATAC TGGGACAGCT ACAACCATCC CTTCAGACAG GATCAGAAGA ACTTAGATCA TTATATAATA CAGTAGCAAC CCTCTATTGT GTGCATCAAA GGATAGAGAT AAAAGACACC AAGGAAGCTT TAGACAAGAT AGAGGAAGAG CAAAACAAAA GTAAGAAAAA AGCACAGCAA GCAGCAGCTG ACACAGGACA CAGCAGTCAG GTCAGCCAAA ATTACCCTAT AGTGCAGAAC ATCCAGGGGG
45 AAATGGTACA TCAGGCCATA TCACCTAGAA CTTTAAATGC ATGGGTAAAA GTAGTAGAAG AGAAGGCTTT CAGCCCAGAA GTAATACCCA TGTTTTCAGC ATTATCAGAA GGAGCCACCC CACAAGATTT AAACACCATG CTAAACACAG TGGGGGGACA TCAAGCAGCC ATGCAAATGT TAAAAGAGAC CATCAATGAG GAAGCTGCAG AATGGGATAG AGTACATCCA GTGCATGCAG GGCCTATTGC
50 ACCAGGCCAG ATGAGAGAAC CAAGGGGAAG TGACATAGCA GGAACTACTA GTACCCTTCA GGAACAAATA GGATGGATGA CAAATAATCC ACCTATCCCA GTAGGAGAAA TTTATAAAAG ATGGATAATC CTGGGATTAA ATAAAATAGT AAGAATGTAT AGCCCTACCA GCATTCTGGA CATAAGACAA GGACCAAAAG AACCTTTTAG AGACTATGTA GACCGGTTCT ATAAAACTCT AAGAGCCGAG
55 CAAGCTTCAC AGGAGGTAAA AAATTGGATG ACAGAAACCT TGTTGGTCCA AAATGCGAAC CCAGA7TGTA AGACTATTTT AAAAGCATTG GGACCAGCGG 1192275 14 CTACACTAGA AGAAATGATG ACAGCATGTC AGGGAGTAGG . AGGACCCGGC CATAAGGCAA GAGTTTTGGC TGAAGCAATG AGCCAAGTAA CAAATACAGC TACCATAATG ATGCAGAGAG GCAATTTTAG GAACCAAAGA AAGATGGTTA AGTGTTTCAA TTGTGGCAAA GAAGGGCACA CAGCCAGAAA TTGCAGGGCC
5 Glu Thr He Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Val His Pro Val His Ala Gly Pro lie Ala Pro Gly Gin Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp lie Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu Gin Glu Gin lie Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro He Pro Val Gly Glu He Tyr Lys Arg Trp lie lie Leu Gly Leu Asn Lys He Val Arg Met Tyr 1Q Ser Pro Thr Ser He Leu Asp He Arg Gin Gly Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gin Ala Ser Gin Glu Val Lys Asn Τφ Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gin Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr He Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gin Gly Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gin Val Thr Asn Thr Ala Thr lie Met Met Gin Arg Gly Asn Phe Arg Asn Gin Arg Lys Met Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Thr Ala Arg Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Τφ Lys Cys Gly Lys Glu Gly His Gin Met Lys Asp Cys Thr 2Q Glu Arg Gin Ala Asn Phe Leu Gly Lys lie Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp Met Arg Asp Asn Τφ Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys He Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg Arg Val Val Gin Arg Glu Lys Arg Ala Val Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Met Thr Leu Thr Val Gin Ala Arg Gin Leu Leu Ser Gly lie Val Gin Gin Gin Asn Asn Leu Leu Arg Ala He Glu Ala Gin Gin His Leu Leu Gin Leu Thr Val Τφ Gly lie Lys Gin Leu Gin Ala Arg He Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gin Gin Leu Leu Gly He Τφ Gly Cys Ser Gly Lys Leu Leu Cys Thr Thr Ala Val Pro Τφ Asn Ala Ser Τφ Ser Asn Lys Ser Leu Glu GJn He Τφ Asn His Tbr Thr Τφ Met Glu Τφ Asp Arg Glu He Asn Asn Tyr Thr Ser Phe Asn Ala Val Val Tyr His Ser of een functioneel deel of equivalent daarvan.
6. Recombinant-vector die een DNA-molecule volgens conclusie 4 of 5 omvat en in staat is de expressie van de DNA-sequentie in een verenigbaar eencellig gastheerorganisme te richten.
7. Recombinant-vector volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat deze het plasmide pEV2/gag 15-436/env 467-640 Δ 514-524 is.
8. Eencellig organisme dat een recombinant-vector volgens conclusie 6 of 7 bevat.
9. Werkwijze voor de bereiding van een eiwit volgens een der conclusies 1-3, met het kenmerk, dat men a. een eencellig organisme dat een recombinant-vector volgens conclusie 6 of 7 bevat, kweekt onder geschikte groeiomstandigheden zodanig dat het eiwit tot expressie wordt gebracht; en b. het eiwit uit de cultuur isoleert en indien gewenst zuivert.
10. Werkwijze volgens conclusie 9, met het kenmerk, dat het eencellige organisme een cel van E. coli is en 30 de recombinant-vector het plasmide pEV2/gag 15-436/env 467-640 Δ 514-524 is.
10 CAGCGTCAAT GACGCTGACG GTACAGGCCA GACAATTATT GTCTGGTATA GTGCAGCAGC AGAACAATTT GCTGAGGGCT ATTGAGGCGC AACAGCATCT GTTGCAACTC ACAGTCTGGG GCATCAAGCA GCTCCAGGCA AGAATCCTGG CTGTGGAAAG ATACCTAAAG GATCAACAGC TCCTGGGGAT TTGGGGTTGC TCTGGAAAAC TACTTTGCAC CACTGCTGTG CCTTGGAATG CTAGTTGGAG
11. Werkwijze voor het opsporen van de aanwezigheid van antilichamen tegen AIDS-virussen in menselijk serum, waarbij men a. een eiwit volgens een der conclusies 1-3 merkt;b. het gemeikte eiwit van stap a. laat reageren met een menselijk serummonster en in het reactiemengsel gemerkte eiwit-antiiichaamcomplexen laat 35 ontstaan, ene. de gemerkte eiwit-antilichaamcomplexen van stap b. bepaalt.
12. Werkwijze voor het opsporen van de aanwezigheid van antilichamen tegen AIDS-virussen in menselijk serum, waarbij men a. een eiwit volgens een der conclusies 1-3 op een vaste drager immobiliseert;b. een menselijk serummonster met het geïmmobiliseerde eiwit van stap a. in contact brengt en geïmmobiliseerde 40 eiwit-antilichaamcomplexen laat ontstaan;c. niet gebonden eiwit en antilichamen uit de complexen van stap b. wast; end. de complexen bepaalt door toevoeging van een gemerkt eiwit A van Staphylococcus aureus of een gemerkt tweede anti-menselijk-lgG antilichaam.
13. Weikwijze voor het opsporen van de aanwezigheid van AIDS-virussen of fragmenten daarvan in menselijk serum of een andere biologische vloeistof, waarbij men: 45 a. een monster van menselijk serum of van een andere biologische vloeistof laat reageren met een bekende titer van antilichamen die zijn opgewekt tegen een eiwit volgens een der conclusies 1-3;b. de antilichamen en het monster met elkaar laat reageren onder vorming van antigen-antilichaamcomplexen in het reactiemengsel; ene. de antigen-antilichaamcomplexen volgens stap b. opspoort.
14. Werkwijze volgens conclusie 13, met het kenmerk, dat de antilichamen met enzym gemerkt zijn en de 50 in het reactiemengsel gevormde antigen-antilichaamcomplexen worden opgespoord door middel van enzym gebonden immunosorbent-bepaling.
15. Werkwijze voor de bereiding van antilichamen tegen AIDS-virussen, met het kenmerk, dat men in een zoogdier of een vogel een voldoende hoeveelheid van een eiwit volgens een der conclusies 1-3 injecteert om tot productie van antilichamen tegen het eiwit aan te zetten en de antilichamen uit het serum van het 55 dier wint.
15 TAATAAATCT CTGGAACAGA TTTGGAATCA CACGACGTGG ATGGAGTGGG ACAGAGAAAT TAACAATTAC ACAAGCTTTA ATGCGGTAGT TTATCACAGT TAA of een functioneel equivalent daarvan omvat.
16. Antilichamen opgewekt tegen een eiwit volgens een der conclusies 1-3.
17. Toepassing van een eiwit voor de bereiding van antilichamen, met het kenmerk, dat men een eiwit 15 192275 volgens een der conclusies 1-3 voor de bereiding van antilichamen tegen AIDS-virussen toepast.
18. Toepassing van een eiwit voor het opsporen van antilichamen, met het kenmerk, dat men eiwit volgens een der conclusies 1-3 voor het opsporen van de aanwezigheid van antilichamen tegen AIDS-virussen in menselijk serum toepast.
19. Eiwit volgens een der conclusies 1-3 bereid volgens de werkwijze van conclusie 9.
20. Antilichamen volgens conclusie 16 bereid volgens de werkwijze van conclusie 15.
21. Testpakket voor de bepaling van antiiichaam tegen AIDS-virus welk testpakket in een houder een eiwit volgens één van de conclusies 1-3 omvat.
22. Een testpakket voor de bepaling van AIDS-virus welk testpakket in een houder antiiichaam gericht 10 tegen AIDS-virus die zijn opgewekt door een eiwit volgens één van de conclusies 1-3 omvat.
23. Een testpakket volgens conclusie 22 welke deeltjes omvat die zijn bekleed met de antilichamen tegen AIDS-virus die zijn opgewekt door een eiwit volgens één van de conclusies 1-3. Hierbij 4 bladen tekening
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US84867186 | 1986-04-04 | ||
US06/848,671 US4925784A (en) | 1986-04-04 | 1986-04-04 | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NL8700795A NL8700795A (nl) | 1987-11-02 |
NL192275B NL192275B (nl) | 1996-12-02 |
NL192275C true NL192275C (nl) | 1997-04-03 |
Family
ID=25303966
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NL8700795A NL192275C (nl) | 1986-04-04 | 1987-04-03 | Eiwit van het AIDS-virus. |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4925784A (nl) |
JP (1) | JP2625118B2 (nl) |
KR (1) | KR930001118B1 (nl) |
AT (1) | AT400442B (nl) |
AU (1) | AU599091B2 (nl) |
BE (1) | BE1001973A5 (nl) |
BR (1) | BR8701528A (nl) |
CA (1) | CA1341249C (nl) |
CH (1) | CH676004A5 (nl) |
DE (3) | DE3744827C2 (nl) |
DK (1) | DK172274B1 (nl) |
ES (3) | ES2004133A6 (nl) |
FR (1) | FR2606422B1 (nl) |
GB (1) | GB2188639B (nl) |
IL (1) | IL82088A (nl) |
IT (1) | IT1203851B (nl) |
NL (1) | NL192275C (nl) |
NO (1) | NO871409L (nl) |
NZ (1) | NZ219837A (nl) |
SE (1) | SE8701413L (nl) |
SG (1) | SG102792G (nl) |
SU (1) | SU1644720A3 (nl) |
ZA (1) | ZA871724B (nl) |
Families Citing this family (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9309574B1 (en) | 1984-08-22 | 2016-04-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Molecular cloning of HIV-1 from immortalized cell lines |
ES2054616T3 (es) * | 1985-12-17 | 1994-08-16 | Akzo Nv | Reactivo inmunoquimico. |
JPS62502868A (ja) * | 1985-12-24 | 1987-11-19 | アメリカ合衆国 | ヒトtリンパ球指向性ウイルスタイプ3のプラスミド及びファ−ジクロ−ン |
US4925784A (en) * | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
US4983387A (en) * | 1986-05-19 | 1991-01-08 | Viral Technologies Inc. | HIV related peptides, immunogenic antigens, and use therefor as subunit vaccine for AIDS virus |
US5142025A (en) * | 1986-08-01 | 1992-08-25 | Repligen Corporation | Recombinant HTLV-III proteins and uses thereof |
NZ221440A (en) * | 1986-08-20 | 1991-11-26 | Genetic Systems Corp | Composition containing monoclonal antibodies/peptides useful in treating and diagnosing hiv infections |
US5166050A (en) * | 1986-08-20 | 1992-11-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections |
US5041385A (en) * | 1986-11-01 | 1991-08-20 | Oxford Gene Systems Limited | Vector expressing fusion proteins and particles |
NZ223980A (en) * | 1987-03-23 | 1991-02-26 | Hiver Ltd | An aids-type virus vaccine comprising an antibody equivalent which recognises an epitope on a cd4 cell-marker |
AU615670B2 (en) * | 1987-09-04 | 1991-10-10 | Murex Diagnostics Corporation | Immunoassay and biological constructs for use therein |
EP0311228A3 (en) * | 1987-10-09 | 1990-05-02 | Repligen Corporation | Recombinant polypeptides and their uses, including assay for aids virus |
NO881501L (no) * | 1987-10-09 | 1989-04-10 | Repligen Corp | Rekombinante htlv-111-proteiner og anvendelser av disse. |
ES2054769T3 (es) * | 1987-11-16 | 1994-08-16 | Hoffmann La Roche | Polipeptidos hiv-2 recombinantes. |
US5780038A (en) * | 1987-11-16 | 1998-07-14 | Roche Diagnostic Systems, Inc. | HIV-2 envelope polypeptides |
JPH01179687A (ja) * | 1987-12-30 | 1989-07-17 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Hiv融合蛋白質 |
JP2559482B2 (ja) * | 1988-01-12 | 1996-12-04 | ジーンラブズ テクノロジーズ,インコーポレイテッド | Htlvーiペプチド抗原および分析法 |
EP0343132B1 (en) * | 1988-05-06 | 1994-08-17 | Ferropas Ag | Methods and systems for producing HIV antigens |
US5204259A (en) * | 1988-05-06 | 1993-04-20 | Pharmacia Genetic Engineering, Inc. | Methods and systems for producing HIV antigens |
FR2632310B1 (fr) * | 1988-06-06 | 1992-04-10 | Pasteur Institut | Peptides ayant des proprietes protectrices d'un virus pathogene du type hiv dans des cellules sensibles |
US6197496B1 (en) * | 1988-06-09 | 2001-03-06 | Institut Pasteur | Immunological reagents and diagnostic methods for the detection of human immunodeficiency virus type 2 utilizing multimeric forms of the envelope proteins gp300, p200, and p90/80 |
CA2003383A1 (en) | 1988-11-23 | 1990-05-23 | Sushil G. Devare | Synthetic dna derived recombinant hiv antigens |
US5817318A (en) * | 1989-05-03 | 1998-10-06 | Connaught Laboratories Limited | Synthetic peptides for an HIV-1 vaccine |
GB8923123D0 (en) * | 1989-10-13 | 1989-11-29 | Connaught Lab | A vaccine for human immunodeficiency virus |
DE69131513T3 (de) * | 1990-03-21 | 2005-05-25 | Geneart Gmbh | Für abgeänderte retrovirale GAG-Polypeptide kodierende DNA-Sequenzen und diese enthaltende Impfstoffe oder Aggregate davon |
US6228608B1 (en) | 1991-02-28 | 2001-05-08 | Aquila Biopharmaceuticals, Inc. | Recombinant FIV glycoprotein 160 and P24 gag protein |
JP3327549B2 (ja) * | 1991-08-21 | 2002-09-24 | アボツト・ラボラトリーズ | C100領域に対する組換え抗原を利用したc型肝炎アッセイ |
GB9208218D0 (en) * | 1992-04-14 | 1992-05-27 | British Bio Technology | Hybrid particles |
DE69231705T2 (de) * | 1992-06-04 | 2001-10-18 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University, Suita | Gag-Env Fusion-Antigen aus HIV |
US5580773A (en) * | 1992-06-17 | 1996-12-03 | Korea Green Cross Corporation | Chimeric immunogenic gag-V3 virus-like particles of the human immunodeficiency virus (HIV) |
KR0172970B1 (ko) * | 1992-06-17 | 1999-02-01 | 김영길 | Aids백신에 유용한 키메릭 단백 및 그의 제조방법 |
ATE243755T1 (de) * | 1992-08-07 | 2003-07-15 | Wyeth Corp | Rekombinente adenoviren-impfstoffe |
EP0702693A1 (en) * | 1993-06-09 | 1996-03-27 | Connaught Laboratories Limited | Tandem synthetic hiv-1 peptides |
ES2196018T3 (es) * | 1993-08-11 | 2003-12-16 | Wyeth Corp | Vacunas de adenovirus recombinantes. |
US6025141A (en) * | 1993-12-10 | 2000-02-15 | The Canadian Red Cross Society | Immunofluorescence assay for the detection of antibodies using recombinant antigens in insoluble form |
DE4405810A1 (de) | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
AU2517895A (en) * | 1994-05-20 | 1995-12-18 | Microgenesys, Inc. | Hiv polyprotein immunogens |
FR2726576B1 (fr) * | 1994-11-07 | 1997-01-31 | Pf Medicament | Production de peptides analogues de peptides hydrophobes, peptide recombinant, sequence d'adn correspondante |
US6846905B2 (en) | 1997-08-15 | 2005-01-25 | Abbott Laboratories | Antigen constructs useful in the detection and differentiation of antibodies to HIV |
NO311807B1 (no) | 1999-03-04 | 2002-01-28 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV |
DE10106295C1 (de) * | 2001-02-02 | 2002-08-22 | Gaifar German American Inst Fo | Protein mit mehreren Antigen-Epitop-Sequenzen, welches immobilisiert ist |
EP2858667A1 (en) | 2012-06-06 | 2015-04-15 | Bionor Immuno AS | Hiv vaccine |
CA2951616A1 (en) | 2014-07-11 | 2016-01-14 | Bionor Immuno As | Method for reducing and/or delaying pathological effects of human immunodeficiency virus i (hiv) or for reducing the risk of developing acquired immunodeficiency syndrome (aids) |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4237224A (en) * | 1974-11-04 | 1980-12-02 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University | Process for producing biologically functional molecular chimeras |
DE2814039C3 (de) * | 1978-03-31 | 1981-02-19 | Gesellschaft Fuer Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf), 3300 Braunschweig | Verfahren zur Herstellung von Hybrid-Bakterien |
GB8423659D0 (en) * | 1984-09-19 | 1984-10-24 | Pasteur Institut | Cloned dna sequences |
GB8324800D0 (en) * | 1983-09-15 | 1983-10-19 | Pasteur Institut | Antigens |
IE58321B1 (en) * | 1984-04-23 | 1993-09-08 | Us Health | Isolation of proteins of HTLV-III, serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with aids and pre-aids conditions, and detection of HTLV-III infection bi/immuno-assays using HTLV-III infection by immuno-assays using HTLV-III and its proteins |
WO1986000930A1 (en) * | 1984-07-20 | 1986-02-13 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Retroviral vaccines and vectors and methods for their construction |
IL76082A (en) * | 1984-08-22 | 1991-07-18 | Us Health | Molecular clones of the genome of htlv-iii and a process for the preparation thereof |
CA1340878C (en) * | 1984-10-26 | 2000-01-25 | Takis S. Papas | Production of human t-cell leukemia (lymphotropic) retrovirus (htlv-i) envelope protein fragments in bacteria and use in seroepidemiological survey of human lymphoid malignancies |
CA1341482C (en) * | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
DE3588134T2 (de) * | 1984-12-24 | 1997-03-20 | Genentech Inc | Fusionen von AIDS-verwandten Polypeptiden |
US4774175A (en) * | 1985-03-01 | 1988-09-27 | Centocor, Inc. | Immunochemical methods for the detection of antibody against HTLV-III |
US4751180A (en) * | 1985-03-28 | 1988-06-14 | Chiron Corporation | Expression using fused genes providing for protein product |
ES8706824A1 (es) * | 1985-04-08 | 1987-07-01 | Genetic Systems Corp | Un metodo para preparar proteinas que son inmunologicamente reactivas con anticuerpos para virus asociados con linfadenopatia. |
DK171119B1 (da) * | 1985-04-19 | 1996-06-17 | Hoffmann La Roche | AIDS-viruskappeprotein, ekspressionsvektor bærende viruskappeproteinet, transformanter transformeret med ekspressionsvektoren, fremgangsmåde til fremstilling af viruskappeproteinet, fremgangsmåde til detektion af AIDS-antistoffer, fremgangsmåde til bestemmelse af AIDS-virus, vaccine mod AIDS, antistoffer mod viruskappeproteinet samt anvendelse af dette til fremstilling af en vaccine og til testnin |
KR910002374B1 (ko) * | 1985-04-29 | 1991-04-20 | 제네틱 시스템즈 코포레이션 | Aids 관련질병의 검출을 위한 합성항원 |
EP0213894A3 (en) * | 1985-08-23 | 1987-10-21 | Advanced Genetics Research Institute | Defective viral particle vaccines and methods for their use |
JP2564268B2 (ja) * | 1985-08-28 | 1996-12-18 | 協和醗酵工業株式会社 | 融合抗原ポリペプチド |
JP2702911B2 (ja) * | 1985-09-11 | 1998-01-26 | ユナイテツド・バイオメデイカル・インコ−ポレ−テツド | 合成ペプチド、並びにそれを用いたエイズおよびプリ・エイズの検出方法 |
NZ217645A (en) * | 1985-09-25 | 1991-11-26 | Oncogen | Recombinant viruses expressing lav/htlv-iii related epitopes and vaccine formulations |
GB8525615D0 (en) * | 1985-10-17 | 1985-11-20 | Hoffmann La Roche | Polypeptides |
EP0245362B1 (en) * | 1985-10-24 | 1994-06-29 | Ronald C. Kennedy | Synthetic peptides and use for diagnosis and vaccination for aids and arc |
AU6713287A (en) * | 1986-01-06 | 1987-07-09 | F. Hoffmann-La Roche & Co. | Expression of htlv-iii gag-gene |
US4753873A (en) * | 1986-02-03 | 1988-06-28 | Cambridge Bioscience Corporation | Peptides for the diagnosis of HTLV-III antibodies, their preparation and use |
US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
US4808536A (en) * | 1986-02-27 | 1989-02-28 | Centocor, Inc. | Immunochemical method for detection of antibody against HTLV-III core protein based upon recombinant HTLV-III gag gene encoded protein |
US4925784A (en) * | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
GB8629116D0 (en) * | 1986-12-05 | 1987-01-14 | Hoffmann La Roche | Env/gag polypeptides |
-
1986
- 1986-04-04 US US06/848,671 patent/US4925784A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-03-05 CH CH816/87A patent/CH676004A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-03-10 ZA ZA871724A patent/ZA871724B/xx unknown
- 1987-04-01 DK DK166087A patent/DK172274B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-04-01 CA CA000533563A patent/CA1341249C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-04-01 NZ NZ219837A patent/NZ219837A/xx unknown
- 1987-04-02 DE DE3744827A patent/DE3744827C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-02 IL IL82088A patent/IL82088A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-04-02 DE DE3744825A patent/DE3744825C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-02 DE DE19873711016 patent/DE3711016A1/de active Granted
- 1987-04-02 FR FR878704625A patent/FR2606422B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-02 JP JP62082197A patent/JP2625118B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-03 GB GB8707971A patent/GB2188639B/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-03 BR BR8701528A patent/BR8701528A/pt not_active Application Discontinuation
- 1987-04-03 SE SE8701413A patent/SE8701413L/xx not_active Application Discontinuation
- 1987-04-03 KR KR1019870003168A patent/KR930001118B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 NL NL8700795A patent/NL192275C/nl not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 AU AU71032/87A patent/AU599091B2/en not_active Ceased
- 1987-04-03 ES ES8700968A patent/ES2004133A6/es not_active Expired
- 1987-04-03 BE BE8700350A patent/BE1001973A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 NO NO871409A patent/NO871409L/no unknown
- 1987-04-03 AT AT0082487A patent/AT400442B/de not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 IT IT19973/87A patent/IT1203851B/it active
- 1987-04-03 SU SU874202330A patent/SU1644720A3/ru active
-
1988
- 1988-10-14 ES ES8803113A patent/ES2016426A6/es not_active Expired - Fee Related
- 1988-10-14 ES ES8803112A patent/ES2009350A6/es not_active Expired
-
1992
- 1992-10-07 SG SG1027/92A patent/SG102792G/en unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NL192275C (nl) | Eiwit van het AIDS-virus. | |
JP3569766B2 (ja) | Htlv−iiidnaのクローニングおよび発現 | |
JP4029107B2 (ja) | Hiv−グループの免疫不全ウイルスに対する抗体を検出するキット及び方法 | |
Aldovini et al. | Synthesis of the complete trans-activation gene product of human T-lymphotropic virus type III in Escherichia coli: demonstration of immunogenicity in vivo and expression in vitro. | |
US5866320A (en) | Nucleic acids encoding for non-infectious, replication-defective, self-assembling HIV-1 viral particles containing antigenic markers in the gag coding region | |
US6342228B1 (en) | Diagnostic kits comprising genetically engineered human immunodeficiency virus-like particles containing heterologous antigenic markers | |
US20030165535A1 (en) | Retrovirus-like particles made non-infectious by a plurality of mutations | |
DE3752170T2 (de) | Synthetisches Antigen zum Nachweis von mit AIDS in Zusammenhang stehenden Krankheiten | |
US6518030B1 (en) | Antigentically-marked non-infectious retrovirus-like particles | |
JPS63503513A (ja) | Lavウィルス変異株、これらのdnaおよびタンパク成分ならびに、特に診断目的および免疫原性組成物製造用のそれらの用途 | |
JPH02131576A (ja) | Hiv―2ウイルス変異株 | |
JP3851480B2 (ja) | Hivグル−プに属するレトロウイルス、mvp−2901/94、およびその変異体を検出する診断方法及びそのための試験キット並びにワクチン | |
EP0245456A1 (en) | Aids virus gene expression | |
PADBERG et al. | Recombinant polypeptides from the human immunodeficiency virus reverse transcriptase define three epitopes recognized by antibodies in sera from patients with acquired immunodeficiency syndrome | |
KR910000748B1 (ko) | 사람 면역결핍증 바이러스의 gag-암호화된 단백질 | |
Marcus-Sekura et al. | Reactivity of an HIV gag gene polypeptide expressed in E. coli with sera from AIDS patients and monoclonal antibodies to gag | |
DE3744826C2 (de) | Verfahren zum Nachweis von Antikörpern gegen AIDS-Viren in menschlichen Seren und entsprechenden Test Kits | |
JP2002509437A (ja) | 診断予防及び治療的使用のための、特に多発性硬化症及び/又は慢性関節リウマチに関連した、レトロウイルス核材料及びヌクレオチドフラグメント | |
JPS63500353A (ja) | ヒトtリンパ球指向性ウイルス3からのsor遺伝子生産物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
BA | A request for search or an international-type search has been filed | ||
BB | A search report has been drawn up | ||
CNR | Transfer of rights (patent application after its laying open for public inspection) |
Free format text: HOFFMANN-LA ROCHE AG. F. - |
|
BC | A request for examination has been filed | ||
V1 | Lapsed because of non-payment of the annual fee |
Effective date: 20031101 |