DK172274B1 - HTLV-III-virusprotein, DNA-sekvens, der koder herfor, fremgangsmåde til fremstilling heraf, fremgangsmåde til detektion af AIDS-virus samt antistoffer mod AIDS-virus - Google Patents
HTLV-III-virusprotein, DNA-sekvens, der koder herfor, fremgangsmåde til fremstilling heraf, fremgangsmåde til detektion af AIDS-virus samt antistoffer mod AIDS-virus Download PDFInfo
- Publication number
- DK172274B1 DK172274B1 DK166087A DK166087A DK172274B1 DK 172274 B1 DK172274 B1 DK 172274B1 DK 166087 A DK166087 A DK 166087A DK 166087 A DK166087 A DK 166087A DK 172274 B1 DK172274 B1 DK 172274B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- ala
- leu
- gin
- gly
- glu
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 120
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 86
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 40
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title claims description 18
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 title claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 69
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims description 65
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 claims description 51
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 claims description 50
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 claims description 50
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 claims description 49
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 48
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 38
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 18
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 15
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 108010058683 Immobilized Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 241001288713 Escherichia coli MC1061 Species 0.000 claims description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 101000582398 Staphylococcus aureus Replication initiation protein Proteins 0.000 claims description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 claims 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims 3
- CAVMESABQIKFKT-IUCAKERBSA-N Glu-Gly-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N CAVMESABQIKFKT-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 2
- FZWVCYCYWCLQDH-NHCYSSNCSA-N Ile-Leu-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N FZWVCYCYWCLQDH-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims 2
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 2
- 108010066427 N-valyltryptophan Proteins 0.000 claims 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 claims 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 claims 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims 2
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 claims 2
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N Ala-Ala-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- SKHCUBQVZJHOFM-NAKRPEOUSA-N Ala-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SKHCUBQVZJHOFM-NAKRPEOUSA-N 0.000 claims 1
- SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N Ala-Asn-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SHYYAQLDNVHPFT-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N Ala-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N 0.000 claims 1
- YEVZMOUUZINZCK-LKTVYLICSA-N Ala-Glu-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O YEVZMOUUZINZCK-LKTVYLICSA-N 0.000 claims 1
- VNYMOTCMNHJGTG-JBDRJPRFSA-N Ala-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VNYMOTCMNHJGTG-JBDRJPRFSA-N 0.000 claims 1
- MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N Ala-Leu-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O MNZHHDPWDWQJCQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N Ala-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MAZZQZWCCYJQGZ-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- FFZJHQODAYHGPO-KZVJFYERSA-N Ala-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C)N FFZJHQODAYHGPO-KZVJFYERSA-N 0.000 claims 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims 1
- XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N Ala-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O XSLGWYYNOSUMRM-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims 1
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 claims 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N Arg-Asp-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N Arg-Glu-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O HPSVTWMFWCHKFN-GARJFASQSA-N 0.000 claims 1
- PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PNIGSVZJNVUVJA-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- AGVNTAUPLWIQEN-ZPFDUUQYSA-N Arg-Ile-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AGVNTAUPLWIQEN-ZPFDUUQYSA-N 0.000 claims 1
- FLYANDHDFRGGTM-PYJNHQTQSA-N Arg-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FLYANDHDFRGGTM-PYJNHQTQSA-N 0.000 claims 1
- HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N Arg-Pro-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- XOZYYXMHMIEJET-XIRDDKMYSA-N Arg-Trp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XOZYYXMHMIEJET-XIRDDKMYSA-N 0.000 claims 1
- POZKLUIXMHIULG-FDARSICLSA-N Arg-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N POZKLUIXMHIULG-FDARSICLSA-N 0.000 claims 1
- CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N Arg-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CGWVCWFQGXOUSJ-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 1
- SWLOHUMCUDRTCL-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N SWLOHUMCUDRTCL-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O XWGJDUSDTRPQRK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims 1
- MEFGKQUUYZOLHM-GMOBBJLQSA-N Asn-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MEFGKQUUYZOLHM-GMOBBJLQSA-N 0.000 claims 1
- DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- WQSCVMQDZYTFQU-FXQIFTODSA-N Asn-Cys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O WQSCVMQDZYTFQU-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N 0.000 claims 1
- RGGVDKVXLBOLNS-JQWIXIFHSA-N Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 RGGVDKVXLBOLNS-JQWIXIFHSA-N 0.000 claims 1
- DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N Asn-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O DXHINQUXBZNUCF-MELADBBJSA-N 0.000 claims 1
- XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N Asn-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XEGZSHSPQNDNRH-JRQIVUDYSA-N 0.000 claims 1
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 claims 1
- DZQKLNLLWFQONU-LKXGYXEUSA-N Asp-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O DZQKLNLLWFQONU-LKXGYXEUSA-N 0.000 claims 1
- KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N Asp-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KTTCQQNRRLCIBC-GHCJXIJMSA-N 0.000 claims 1
- CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N Cys-Ser-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- SYELGNBERZZXAG-JQWIXIFHSA-N Cys-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CS)N)C(O)=O)=CNC2=C1 SYELGNBERZZXAG-JQWIXIFHSA-N 0.000 claims 1
- LTUVYLVIZHJCOQ-KKUMJFAQSA-N Glu-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LTUVYLVIZHJCOQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O MUSGDMDGNGXULI-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- CXRWMMRLEMVSEH-PEFMBERDSA-N Glu-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CXRWMMRLEMVSEH-PEFMBERDSA-N 0.000 claims 1
- KRRFFAHEAOCBCQ-SIUGBPQLSA-N Glu-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KRRFFAHEAOCBCQ-SIUGBPQLSA-N 0.000 claims 1
- IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N Glu-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims 1
- LPHGXOWFAXFCPX-KKUMJFAQSA-N Glu-Pro-Phe Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)O LPHGXOWFAXFCPX-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- PEKRLYMGPZFTCB-WNHJNPCNSA-N Glu-Trp-Asp-Arg Chemical compound N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O PEKRLYMGPZFTCB-WNHJNPCNSA-N 0.000 claims 1
- SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims 1
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- QSDKBRMVXSWAQE-BFHQHQDPSA-N Gly-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN QSDKBRMVXSWAQE-BFHQHQDPSA-N 0.000 claims 1
- LPCKHUXOGVNZRS-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LPCKHUXOGVNZRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 claims 1
- NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N Gly-Pro-Gly Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O NSVOVKWEKGEOQB-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 claims 1
- RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N Gly-Val-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 1
- DCRODRAURLJOFY-XPUUQOCRSA-N His-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O DCRODRAURLJOFY-XPUUQOCRSA-N 0.000 claims 1
- IWXMHXYOACDSIA-PYJNHQTQSA-N His-Ile-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IWXMHXYOACDSIA-PYJNHQTQSA-N 0.000 claims 1
- YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- FLXCRBXJRJSDHX-AVGNSLFASA-N His-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FLXCRBXJRJSDHX-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- NBWATNYAUVSAEQ-ZEILLAHLSA-N His-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O NBWATNYAUVSAEQ-ZEILLAHLSA-N 0.000 claims 1
- WECYRWOMWSCWNX-XUXIUFHCSA-N Ile-Arg-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WECYRWOMWSCWNX-XUXIUFHCSA-N 0.000 claims 1
- WZDCVAWMBUNDDY-KBIXCLLPSA-N Ile-Glu-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N WZDCVAWMBUNDDY-KBIXCLLPSA-N 0.000 claims 1
- PHIXPNQDGGILMP-YVNDNENWSA-N Ile-Glu-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N PHIXPNQDGGILMP-YVNDNENWSA-N 0.000 claims 1
- XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N Ile-Glu-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N XLCZWMJPVGRWHJ-KQXIARHKSA-N 0.000 claims 1
- RWYCOSAAAJBJQL-KCTSRDHCSA-N Ile-Gly-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N RWYCOSAAAJBJQL-KCTSRDHCSA-N 0.000 claims 1
- RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 claims 1
- UYNXBNHVWFNVIN-HJWJTTGWSA-N Ile-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=CC=C1 UYNXBNHVWFNVIN-HJWJTTGWSA-N 0.000 claims 1
- BZUOLKFQVVBTJY-SLBDDTMCSA-N Ile-Trp-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N BZUOLKFQVVBTJY-SLBDDTMCSA-N 0.000 claims 1
- WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N Ile-Trp-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N WKSHBPRUIRGWRZ-KCTSRDHCSA-N 0.000 claims 1
- IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N L-Leucyl-L-Arginyl-L-Proline Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JUWJEAPUNARGCF-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- FIJMQLGQLBLBOL-HJGDQZAQSA-N Leu-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FIJMQLGQLBLBOL-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N Leu-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KTFHTMHHKXUYPW-ZPFDUUQYSA-N 0.000 claims 1
- MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- ZFNLIDNJUWNIJL-WDCWCFNPSA-N Leu-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZFNLIDNJUWNIJL-WDCWCFNPSA-N 0.000 claims 1
- POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N Leu-Gly-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O POZULHZYLPGXMR-ONGXEEELSA-N 0.000 claims 1
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N Leu-Ser-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- SXOFUVGLPHCPRQ-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Cys Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O SXOFUVGLPHCPRQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N Lys-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IOQWIOPSKJOEKI-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- UUWCIPUVJJIEEP-SRVKXCTJSA-N Phe-Asn-Cys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N UUWCIPUVJJIEEP-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N Phe-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 AFNJAQVMTIQTCB-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- DZZCICYRSZASNF-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DZZCICYRSZASNF-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- ZSKJPKFTPQCPIH-RCWTZXSCSA-N Pro-Arg-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ZSKJPKFTPQCPIH-RCWTZXSCSA-N 0.000 claims 1
- NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NGNNPLJHUFCOMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N Pro-Glu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPEVBAUSTBWQHN-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims 1
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKLSMYYLJHYPHH-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 1
- IBGCFJDLCYTKPW-NAKRPEOUSA-N Pro-Ile-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 IBGCFJDLCYTKPW-NAKRPEOUSA-N 0.000 claims 1
- DWPXHLIBFQLKLK-CYDGBPFRSA-N Pro-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 DWPXHLIBFQLKLK-CYDGBPFRSA-N 0.000 claims 1
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 claims 1
- YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N Ser-Glu-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O YRBGKVIWMNEVCZ-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 1
- GDUZTEQRAOXYJS-SRVKXCTJSA-N Ser-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GDUZTEQRAOXYJS-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N 0.000 claims 1
- MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N 0.000 claims 1
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 claims 1
- CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N Thr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAJFZCICSVBOJK-SHGPDSBTSA-N 0.000 claims 1
- VIBXMCZWVUOZLA-OLHMAJIHSA-N Thr-Asn-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O VIBXMCZWVUOZLA-OLHMAJIHSA-N 0.000 claims 1
- XOTBWOCSLMBGMF-SUSMZKCASA-N Thr-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XOTBWOCSLMBGMF-SUSMZKCASA-N 0.000 claims 1
- DJDSEDOKJTZBAR-ZDLURKLDSA-N Thr-Gly-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DJDSEDOKJTZBAR-ZDLURKLDSA-N 0.000 claims 1
- PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N Thr-Ile-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N PAXANSWUSVPFNK-IUKAMOBKSA-N 0.000 claims 1
- ADPHPKGWVDHWML-PPCPHDFISA-N Thr-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N ADPHPKGWVDHWML-PPCPHDFISA-N 0.000 claims 1
- AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N Thr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N 0.000 claims 1
- SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N Thr-Lys-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 claims 1
- NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N Thr-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N 0.000 claims 1
- NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N Thr-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NDZYTIMDOZMECO-SHGPDSBTSA-N 0.000 claims 1
- AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N Trp-Ala-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N 0.000 claims 1
- TWJDQTTXXZDJKV-BPUTZDHNSA-N Trp-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O TWJDQTTXXZDJKV-BPUTZDHNSA-N 0.000 claims 1
- DNUJCLUFRGGSDJ-YLVFBTJISA-N Trp-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N DNUJCLUFRGGSDJ-YLVFBTJISA-N 0.000 claims 1
- KBKTUNYBNJWFRL-UBHSHLNASA-N Trp-Ser-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 KBKTUNYBNJWFRL-UBHSHLNASA-N 0.000 claims 1
- SYFHQHYTNCQCCN-MELADBBJSA-N Tyr-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)C(=O)O SYFHQHYTNCQCCN-MELADBBJSA-N 0.000 claims 1
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N Val-Asp-Arg Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N XQVRMLRMTAGSFJ-QXEWZRGKSA-N 0.000 claims 1
- PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N Val-Gly-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 1
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 claims 1
- SJLVYVZBFDTRCG-DCAQKATOSA-N Val-Lys-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N SJLVYVZBFDTRCG-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- NSUUANXHLKKHQB-BZSNNMDCSA-N Val-Pro-Trp Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 NSUUANXHLKKHQB-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims 1
- PQSNETRGCRUOGP-KKHAAJSZSA-N Val-Thr-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O PQSNETRGCRUOGP-KKHAAJSZSA-N 0.000 claims 1
- JPBGMZDTPVGGMQ-ULQDDVLXSA-N Val-Tyr-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N JPBGMZDTPVGGMQ-ULQDDVLXSA-N 0.000 claims 1
- NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N Val-Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NLNCNKIVJPEFBC-DLOVCJGASA-N 0.000 claims 1
- AOILQMZPNLUXCM-AVGNSLFASA-N Val-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN AOILQMZPNLUXCM-AVGNSLFASA-N 0.000 claims 1
- STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N Valyl-Serine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 claims 1
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 claims 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims 1
- 108010009297 diglycyl-histidine Proteins 0.000 claims 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 claims 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 claims 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 claims 1
- 108010007811 human immunodeficiency virus p17 gag peptide Proteins 0.000 claims 1
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 claims 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 claims 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 claims 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 claims 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 claims 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 34
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 19
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 17
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 15
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 15
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 15
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 10
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 10
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 10
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 8
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 7
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 6
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 6
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 5
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 5
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 5
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 5
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 4
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000009746 Adult T-Cell Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 208000016683 Adult T-cell leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 3
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 201000006966 adult T-cell leukemia Diseases 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000001759 immunoprophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000714195 Aids-associated retrovirus Species 0.000 description 2
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 2
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 2
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 238000005422 blasting Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 1-Hexadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCN FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYAFUXYGTYWWBP-UHFFFAOYSA-N 19-methoxynonadecane-1,2,3-triol Chemical compound COCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)CO PYAFUXYGTYWWBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran Chemical compound C1OC=CC=C1 MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYFYWXLKKQIOKO-UHFFFAOYSA-N 3,3-diaminopentan-1-ol Chemical compound CCC(N)(N)CCO LYFYWXLKKQIOKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 1
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000045576 Lactoperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 241001625930 Luria Species 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylglycine Chemical compound CN(C)CC(O)=O FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 102100029251 Phagocytosis-stimulating peptide Human genes 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000702208 Shigella phage SfX Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000030538 Thecla Species 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108010084754 Tuftsin Proteins 0.000 description 1
- LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N [(3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] (Z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108700003601 dimethylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N iodane Chemical compound [125IH] XMBWDFGMSWQBCA-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940044173 iodine-125 Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- -1 pyran Chemical class 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N tuftsin Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IESDGNYHXIOKRW-LEOABGAYSA-N 0.000 description 1
- 229940035670 tuftsin Drugs 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
- C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/14011—Deltaretrovirus, e.g. bovine leukeamia virus
- C12N2740/14022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
- Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/826—Viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
DK 172274 B1
Den foreliggende opfindelse angår et protein med betegnelsen gag/env, hvilket protein omfatter kerneproteinet (gag) og kappeproteinet (env) fra HTLV-III-virus, som er det ætiologiske agens for akvisit immun-defektsyndrom (AIDS). Dette protein fremstilles ved organiske 5 syntesemetoder eller ved anvendelse af rekombinante DNA-teknikker, ved hvilke de relevante gensekvenser indsættes ved hjælp af en hensigtsmæssig DNA-vektor i en kompatibel encellet værtsorganisme.
Opfindelsen angår endvidere isolering og oprensning af gag/env-pro-teinet og fremgangsmåder til detektion af AIDS-antistoffer eller vira 10 i humane sera eller andre biologiske væsker og til immunoprofylaktisk beskyttelse af mennesker mod AIDS baseret på anvendelse af proteinet. Opfindelsen angår endvidere testsæt til bestemmelse af antistoffer mod AIDS-vira eller til bestemmelse af AIDS-virus.
I 1985 blev næsten 8000 mennesker diagnosticeret til at lide af AIDS, 15 og antallet er steget støt. Det forventes, at der vil blive diagnosticeret yderligere 15.000 tilfælde i 1986, og antallet af tilfælde kan meget vel blive fordoblet i 1987 (New York Times Magazine, 2. marts 1986, s. 42). AIDS er blevet karakteriseret ved opståen af alvorlige opportunistiske infektioner, der er sekundære i forhold til 20 indvirkning på kroppens immunsystem (Gottlieb et al., New Eng. J.
Med., 305, 1981, s. 1425). Sygdommen er fundet hos homoseksuelle mænd, patienter, som modtager blodprodukter, sprøjtenarkomaner og personer, som stammer fra Haiti og Centralafrika (Piot et al.,
Lancet, 11, 1984, s. 65).
25 Det kausative agens blev mistænkt for at være af viral oprindelse, fordi det epidemiologiske mønster af AIDS stemte overens med en sygdom, som kunne overføres. Der er isoleret mindst tre retrovira fra dyrkede T-celler fra adskillige patienter med AIDS eller fra hvide blodlegemer hos personer, der risikerer at få sygdommen. Der blev 30 opdaget et hidtil ukendt humant retrovirus, som blev betegnet lymfa-denopatiforbundet virus (LAV), og dets egenskaber var konsistente med en ætiologisk rolle for AIDS. Dette virus blev isoleret fra en patient med lymfadenopati, hvoraf navnet (Montagnier et al., i Human T-Cell Leukemia/Lymphoma Virus, R.C. Gallo et al., red., Cold Spring 35 Harbor Laboratory, 1984, s. 363-370).
DK 172274 B1 2
Andre humane retrovira, især to undergrupper af human T-celleleu-kæmi/lymfoma/lymfotrop virus type I (Poiesz et al., Proc. Natl. Acad.
Sci., USA, 77, 1980, s. 7415) og III (Popovic et al., Science, 224, 1984, s. 497) er også blevet isoleret. Endnu et virus, der betegnes 5 AIDS-forbundet retrovirus (ARV), er blevet foreslået som det kausa- tive agens (Levy et al., Science, 225, 1984, s. 840). Både HTLV-III-og ARV-retroviraene udviser biologiske og seroepidemiologiske egenskaber, som svarer til LAV (Levy et al., supra, Popovic et al., supra) . Således er mindst tre retrovira foreslået som det etiologiske 10 agens for AIDS: LAV, ARV og HTLV-III. Til nærværende formål betegnes disse vira kollektivt som AIDS-vira. Da HTLV-III er prototypeviruset for den gruppe, er det underforstået, at udtrykket "antigendeterminant svarende til sekvenserne af et HTLV-III-virusprotein" i virkeligheden betegner sekvenserne af et hvilket som helst af AIDS-15 virusproteinerne.
Én årsag til vanskeligheden ved at bestemme det virkelige ætiologiske agens for AIDS har været forskellige retrovirale antigeners krydsreaktivitet med serumprøver fra AIDS-patienter. Fx har serunprøver fra AIDS-patienter vist sig at reagere med antigener fra både HTLV-I 20 (Essex et al., Science, 220, 1983, s. 859) og HTLV-III (Sarngadharan et al., Science, 224, 1984, s. 506). HTLV-Kappegenprodukter har udvist antigeniciteter, som er krydsreaktive med antistoffer i sera fra voksne T-celleleukæmipatienter (Kiyokawa et al., Proc. Natl.
Acad. Sci., USA, 81, 1984, s. 6202). Voksne T-celleleukæmier (ATL) 25 adskiller sig fra akvisit immundefektsyndrom (AIDS) ved, at HTLV-I forårsager T-celleondartetheder, som er karakteriseret ved en kontrolleret vækst af T-celler. Ved AIDS forekommer der celledød i stedet for cellevækst. Faktisk var denne cytopatiske egenskab ved HTLV-III kritisk for den endelige bestemmelse af sygdommens speci-30 fikke retrovirale oprindelse.
Det ætiologiske agens for AIDS blev isoleret under anvendelse af udødeliggjorte humane neoplastiske T-cellelinjer (HT) inficeret med det cytopatiske retrovirus, der var karakteristisk for AIDS, og som var isoleret fra patienter, der led af AIDS. Seroepidemiologiske as-35 says under anvendelse af dette virus viste en fuldstændig korrelation DK 172274 B1 3 mellem AIDS og tilstedeværelsen af antistoffer mod HTLV-III-virusantigener (Montagnier et al., supra; Sarngadharan et al., supra;
Schupbach et al., Science, 224, 1984, s. 503). Desuden viste næsten 85% af patienter med lymfadenopatisyndrom og et signifikant antal 5 asymptomatiske homoseksuelle mænd i områder, hvor AIDS var endemisk, sig også at bære cirkulerende antistoffer mod HTLV-III. Alt i alt implicerer disse data HTLV-III som det væsentligste ætiologiske agens for AIDS.
Før AIDS-viruset med held var blevet dyrket under anvendelse af H-9-10 cellelinjen, var AIDS-virusets env-AIDS-protein ikke blevet isoleret, karakteriseret eller syntetiseret. Dette skyldtes hovedsagelig, at viruset er cytopatisk, og isolering af viruset var således ikke mulig (Popovic et al., supra). Da først en human T-cellelinje, som var modstandsdygtig over for virusets cytopatiske virkninger var blevet 15 opdaget, kunne den molekylære kloning af proviral AIDS-DNA imidlertid udføres.
Behovet for følsomme og hurtige metoder til diagnose af AIDS i menneskeblod og andre biologiske væsker og for en fremgangsmåde til forebyggelse af sygdommen ved vaccination er meget stort. Stort set 20 alle de for tiden tilgængelige assays og tests er behæftet med fejl. Faktisk har Center for Disease Control (CDC) angivet, at de for tiden tilgængelige tests udelukkende bør anvendes til screening af blodenheder for tilstedeværelsen af antistoffer mod HTLV-III. CDC er endog gået endnu videre ved at angive, at de for tiden tilgængelige 25 enzymbundne immunosorbentassay-(ELISA)-tests ikke bør anvendes til generel screening af højrisikopopulationer eller som diagnostisk test for AIDS (Federal Register, 50 (48), 12. marts 1985, s. 9909).
Fejlene ved de hidtil anvendte AIDS-tests er blevet tilskrevet det forhold, at man ikke har anvendt et specifikt antigenprotein fra det 30 ætiologiske agens for AIDS. De hidtil anvendte proteiner stammer fra et viruslysat. Da lysatet fremstilles ud fra menneskeceller inficeret med viruset, dvs. de celler, der anvendes til at dyrke viruset, ville lysatet indeholde menneskeproteiner tillige med virusproteiner. Fremstillingen af et rent antigen af viralt protein er således meget van-35 skelig. De hidtil anvendte antigener har således frembragt både DK 172274 B1 4 falske positive og falske negative resultater (Budiansky, Nature, 312, 1984, s. 583). De fejl, som er opstået som følge af anvendelsen af sådanne lysatproteiner/peptider, kan undgås ved at anvende en komposition til binding af AIDS-antistoffer, der er i det væsentlige 5 fri for de ikke-AIDS-specifikke proteiner. Kompositioner af i det væsentlige rent AIDS-kappe- og kerne-protein kan anvendes som antigener.
Både kappe- og kemeproteineme fra HTLV-III har bevarede antigendeterminanter, hvilket skulle muliggøre deres anvendelse til screen-10 ing for, diagnose af og/eller beskyttelse ved vaccination mod AIDS-viraene. Desuden kan personer, som er blevet udsat for HTLV-III, og som således risikerer at få AIDS eller som har sygdommen, identificeres ved hjælp af tilstedeværelsen af antistoffer mod det virale kerneprotein (gag) og/eller kappeproteinet (env) i deres blod (Sam-15 gadharan et al., Science, 224, 1984, s. 506).
Tilgængeligheden af en pålidelig test for tilstedeværelsen af selve AIDS-viruset eller partikler derfra i blod eller andre biologiske væsker er også vigtig. Groopman et al., (Blood, 66, 1985, s. 742) har beskrevet, at antistoffer mod AIDS-vira ikke altid findes i AIDS-of-20 renes blod. Groopman et al. har undersøgt én patient med AIDS og en anden med beslægtede lidelser (ARC), fra hvilke der kunne tages blodprøver, som var antistof-negative, men fra hvilke HTLV-III kunne dyrkes.
Rekombinant DNA-teknologi er for nylig blevet anvendt på AIDS-pro-25 blemet. Den molekylære kloning og udtrykkelse af env-genet fra HTLV-III er beskrevet (Crowl et al., Cell, 41, 1985, s. 979; Chang et al., Biotechnology, 3, 1985, s. 905). Dowbenko et al. (Rroc. Natl. Acad.
Sci., USA, 82, 1985, s. 7748) har udtrykt HTLV-III-kerneproteinet i E. coli.
30 Ved anvendelse af sådanne genetiske manipulationsteknikker er opren-sede virusantigener, som er sikre, pålidelige og mindre kostbare at fremstille, blevet tilgængelige. Det ville imidlertid være en endnu større fordel, hvis et viralt protein med antigendeterminanter, som findes på både env- og gag-proteinerne, var tilgængelige. Et sådant DK 172274 B1 5 protein ville være et exceptionelt kraftigt værktøj til detektion af AIDS-antistoffer, og det kunne tjene som grundlag for en række følsomme diagnostiske tests og en mulig vaccine mod AIDS-viruset.
Der er derfor tilvejebragt et hidtil ukendt protein med betegnelsen 5 gag/env, hvilket protein har en aminosyresekvens, som svarer til mindst én antigendeterminant fra et HTLV-III-gag-protein og fra et HTLV-III-env-protein, hvilket protein muliggør screening for, diagnose af og/eller beskyttelse ved vaccination mod AIDS-viruset. Det hidtil ukendte gag/env-protein kan udgøres af hele eller en del af 10 den i fig. 2 viste aminosyresekvens eller en funktionel ækvivalent deraf.
Opfindelsen angår endvidere de relevante DNA-sekvenser, der koder for gag/env-polypeptidet ifølge opfindelsen, rekombinante vektorer, der indeholder sådanne DNA-sekvenser, og encellede organismer, som er 15 nyttige til fremstilling af gag/env-protein ifølge opfindelsen ved rekombinant DNA-teknologi, samt fremgangsmåder til fremstilling af sådanne DNA-sekvenser, rekombinante vektorer og éncellede organismer. Desuden angår opfindelsen metoder til ekspression og isolering af gag/env-proteinet ifølge opfindelsen. Det således fremstillede 20 gag/env-protein kan ifølge opfindelsen anvendes til en række vigtige immunologiske processer.
Ved anvendelse som diagnostisk agens kan gag/env-proteinet anvendes til at detektere tilstedeværelsen af antistoffer mod AIDS-vira i menneskesera eller i andre biologiske væsker såsom tårer, sæd, 25 vaginalsekreter og spyt. Da proteinet kan fremstilles i homogen form, elimineres problemer med uspecifikke reaktioner, som har plaget anvendelsen af diagnostiske reagenser baseret på relativt rå HTLV-III -virusproteinisolater.
Anvendt som immunogen kan gag/env-proteinet anvendes til frembrin-30 gelse af antistoffer i dyr mod de antigene determinanter, som er indeholdt deri. Sådanne antistoffer kern sammen med gag/env-proteinet, der er hensigtsmæssigt mærket, anvendes i et radioimmunoassay (RIA) eller enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) til detektion af tilstedeværelsen af HTLV-III-vira eller partikler derfra i menneske DK 172274 B1 6 serum eller andre biologiske væsker såsom tårer, sæd, vaginalsekreter og spyt. Partikler (eller fragmenter) som kan detekteres ved disse metoder, omfatter selvfølgelig stykker af viruskerne- eller kappeproteinerne .
5 Ved inkorporering i et hensigtsmæssigt vaccinepræparat kan gag/env-proteinet ifølge opfindelsen endvidere anvendes til bekæmpelse af spredningen af AIDS ved profylaktisk immunisering.
Der er vigtige fordele ved anvendelse af gag/env-proteinet ifølge opfindelsen sammenlignet med anvendelse af gag- og env-proteinerae 10 hver for sig. Selve env-proteinet er meget uopløseligt, hvilket gør oprensning vanskelig. Kombination af de to proteiner fører til et produkt, som lettere solubiliseres og derfor lettere kan oprenses. Produktion og oprensning i stor målestok forenkles naturligvis også, da kun en enkelt forbindelse skal isoleres. Endelig muliggør gag/env-15 proteinet udviklingen af et diagnostisk kit, som virker bedre i et antigen-sandwichassay end gag- og env-proteinerae hver for sig.
Selv om gag/env-proteinet stammer fra HTLV-III, er det klart, at de her omhandlede diagnostiske og immunoprofylaktiske metoder også kan anvendes til detektion af et hvilket som helst af de andre virale 20 agentier, som er impliceret i eller forbundet med AIDS såsom lymf-adenopatiforbundet virus (LAV) og AIDS-forbundet retrovirus (ARV).
Dette skyldes, at Crowl et al. (Cell, 41, 1985, s. 979) har påvist, at proteiner fra disse virale agentier er immunologisk beslægtede med proteiner fra HTLV-III og har fælles aminosyresekvenssegmenter.
25 Opfindelsen forklares nærmere under henvisning til den nedenstående detaljerede beskrivelse og tegningen, hvor fig. 1 skematisk viser ekspressionsplasmider, som styrer syntesen af gag-proteiner (øverst) og gag/env-proteiner (nederst). Restriktions-endonucleasesteder, som afgrænser gag- og env-geneme er vist, og det 30 skraverede område betegner env-segmentet i gag/env-fusionsgenet. I begge plasmider kontrolleres transkription af λ-PL-promotoren, og translationsinitieringssignalerne stammer fra plasmidet pEV-vrf2; DK 172274 B1 7 fig. 2 viser gag/env-fusionsgenets nucleinsyresekvens (idet udvalgte positionsnumre og restriktionsendonucleasesteder er vist) og amino-syresekvensen af gag/env-proteinet, som er deduceret på grundlag heraf; og 5 fig. 3 viser resultaterne af SDS-polyacrylamidgelelektroforeseanalyse af det i E. coli dannede gag/env-protein. Billede 1 viser Coomassie-blåfarvede totale celleproteiner fra celler, som indeholder det rekombinante plasmid, der bærer gag/env-fusionsgenet, og fra kontrol -celler. Billede 2 og 3 er Western blots af totalt celleprotein probet 10 med enten kaninantistoffer mod env-peptid 500-511 (billede 2) eller fåreantistoffer mod gag p24 (billede 3). Immuncomplexerne i billede 2 og 3 blev visualiseret med et andet antistof mærket med peberrods-peroxidase. I alle tre billeder betegner g/e gag-env-proteinet, og c betegner en negativ kontrolprøve, som anvendes til at vise specifici-15 tet. Mobiliteterne af molekylvægtstandarder (i kD) er vist, og positionen af gag/env-proteinbåndet i gelerne er angivet med pile.
Fremgangsmåderne ifølge opfindelsen omfatter en række trin, der i logisk rækkefølge omfatter 1) identifikation og isolering af de gener, som indkoder gag- og env-proteinerne eller fragmenter deraf, 20 2) indsætning af disse gener eller genfragmenter i en egnet klonings- vektor til fremstilling af en rekombinant vektor, som indeholder et gag/env-fusionsgen, 3) overførsel af den rekombinante kloningsvektor til en kompatibel encellet værtsorganisme, 4) udvælgelse og vækst af korrekt modificerede værter, som kan replikere og udtrykke de ind-25 satte gensekvenser, 5) identifikation og oprensning af genproduktet, 6) anvendelse af genproduktet til detektion af antistoffer mod HTLV-III eller beslægtede vira eller som immunogen til frembringelse af antistoffer, der kam anvendes til at detektere selve viraene eller fragmenter deraf i menneskesera eller i andre biologiske væsker, og 30 7) anvendelse af gag/env-proteinet i et vaccinepræparat til mulig immunoprofylaktisk beskyttelse mod AIDS.
Isolerede HTLV-III-virioner kunne anvendes som kilde til både gag- og env-generne ifølge opfindelse. Fx har Dowbenko et al. (Proc. Natl.
Acad. Sci., USA, 82, 1985, s. 7748) anvendt et 2,2 kilobaser (kb) 35 langt fragment fra virusgenomets 5'-område som kilde til gag- genet.
DK 172274 B1 8
Alternativt kan genomisk DNA fra celler, i hvilke HTLV-III'b pro-virale genom er blevet integreret, være genkilden (Shaw et al.,
Science, 226, 1984, s. 1165). Crowl et al. (Cell, 41, 1985, s. 979) har anvendt genomisk DNA fra H9-celler inficeret med HTLV-III til 5 isolering af env-genet.
Alternativer til isolering af gag- og env-generne omfatter, men er ikke begrænsede til, kemisk syntese af gensekvenseme og fremstilling af DNA, der er komplementært med messenger RNA'et dannet ud fra generne.
10 Uanset kilden kan DNA, som indkoder gag- og env-proteinerne klones i bakterier, og kloner, der indeholder gag- eller env-generne kan identificeres ved velkendte metoder. Fx kan der til generne fremstilles komplementære DNA-(cDNA)-prober, som kan anvendes til at detektere kloner, der bærer generne, ved hybridiseringsteknikker.
15 I en foretrukken udførelsesform for den foreliggende opfindelse klones et genombibliotek, som er konstrueret ved Xbal-spaltning af de ovenfor beskrevne HTLV-III-inficerede H9-cellers DNA under anvendelse af en fag X-vektor, og kloner, som bærer det HTLV-III-provirale genom identificeres ved hybridisering med HTLV-III-cDNA. Én sådan klon fik 20 betegnelsen XHXB-3, og et 1700 basepar langt fragment, som indkoder det meste af gag-precursorproteinet, blev isoleret ved Clal/HincII-spaltning af DNA'et fra denne klon.
Den umiddelbare kilde til env-gensekvenser, som anvendes i den foretrukne udførelsesform for opfindelsen, var et derivat af plasmid- 25 et pEV3/env 44-640, i hvilket env-kodoner svarende til aminosyre- resterne 514-524 er slettet. Denne sletning medfører overraskende en signifikant forøgelse i ekspressionen af env-genet. env-Sekvenser, som indeholder kodonerne 467-640 fås ved Bglll/Hindlll-spaltning af plasmidet pEV3/env 44-640.
30 De identificerede og isolerede gag- og env-gener fra HTLV-III indsættes i en hensigtsmæssig ekspressionsvektor, som indeholder de nødvendige elementer for transkription og translation af de indsatte gensekvenser. Nyttige kloningsvektorer kan bestå af segmenter af DK 172274 B1 9 chromosomale, ikke-chromosomale og syntetiske DNA-sekvenser såsom forskellige kendte bakterielle plasmider, fag DNA, kombinationer af plasmider og fag DNA såsom plasmider, som er blevet modificeret til anvendelse af fag DNA- eller andre ekspressionskontrolsekvenser, 5 eller gærplasmider. Specifikke kloningsvektorer, som kan anvendes, omfatter, men er ikke begrænset til pEV-vrf-plasmideme (pEV-vrfl,- 2 og -3), SV40, adenovirus, gær, X-gt-WES-X-B, Charon 4A og 28, X-gt-l-X-B, M13-afledte vektorer såsom pUC8, 9, 18 og 19, pBR313, 322 og 325, pAC105, pVA51, pACY177, pKH47, pACYC184, pUBHO, pMB9, ColEl, 10 pSCIOl, pml21, RSF2124, pCRl eller RP4.
Indsætningen af gag- og env-geneme i en kloningsvektor udføres let, når både generne og den ønskede kloningsvektor er blevet spaltet med det eller de samme restriktionsenzymer, da der derved dannes komplementære DNA-terminaler. Hvis dette ikke kan lade sig gøre, kan det 15 være nødvendigt at modificere de spaltede ender, der dannes, ved nedbrydning af det enkeltstrengede DNA til dannelse af stumpe ender, eller man kan opnå det samme resultat ved at udfylde de enkeltstrengede terminaler med en hensigtsmæssig DNA-polymerase. Herved kan der udføres stumpende li gat i on med et enzym såsom T4 DNA-ligase. Al tema -20 tivt kan et hvilket som helst ønsket sted frembringes ved at ligere nucleotidsekvenser (linkere) til DNA-terminalerne. Sådanne linkere kan omfatte specifikke oligonucleotidsekvenser, som indkoder restriktionssted-genkendelsessekvenser. Den spaltede vektor og gag- og env-genfragmenterne kan også modificeres ved homopolymer haledannelse som 25 beskrevet af Morrow (Methods in Enzymology, 68, 1979, s. 3).
Når enten gag- eller env-genet eller et fragment deraf er blevet indsat i en egnet kloningsvektor, kan det andet gen eller genfragment indføres i vektoren ved skånsom restriktionsendonucleasespaltning til anbringelse af det andet gen eller genfragment ved siden af det 30 første, hvorved der dannes et fusionsgen. Hvis gag- og env-generne syntetiseres kemisk, kan fusionsgenet naturligvis fremstilles direkte og indføres som et enkelt DNA-fragment i kloningsvektoren.
I den foretrukne udførelsesform for opfindelsen blev Cla/HincII-spaltningsfragmentet, som indeholdt det ovenfor beskrevne gag-gen fra 35 XHXB-3, ligeret ind i plasmidet pEV-vrf2, som var spaltet med Clal og DK 172274 B1 10
PuvII, til dannelse af et rekombinant ekspressionsplasmid pEV2/gag 15-512 (fig. 1 øverst), som styrer syntesen af et 56 Kd stort protein, som omfatter gag-resterne 15-512. gag-Sekvenserne neden for et Bglll-sted nær rest 437 blev derefter erstattet med env-sekvenser 5 i et Bglll/Hindlll-fragment fra det ovenfor beskrevne derivat af plasmidet pEV3/env 44-640 (hvori resterne 514-524 er slettet), til dannelse af plasmidet pEV2/gag 15-436/env 467-640 Δ 514-524 som bærer gag/env-fusionsgenet (fig. 1 nederst).
Denne konstruktion er detaljeret beskrevet nedenfor i eksemplet, især 10 afsnit B-E. Nucleinsyresekvensen af gag/env-genet i den foretrukne udførelsesform (bestemt ved den af Maxam et al., Methods in Enzymo-logy, 65, 1980, s. 499, beskrevne kemiske spaltningsmetode) og den herudfra deducerede aminosyresekvens af gag/env-proteinet er vist i fig. 2.
15 Mange af de kloningsvektorer, der kan anvendes ifølge opfindelsen, indeholder én eller flere markøraktiviteter, der kan anvendes til at selektere for ønskede transformanter, såsom ampicillin- og tetracyc-linresistens i pBR322, ampicillinresistens og j8-galactosidaseaktivi-tet i pUC8 og ampicillinresistens i pEV-vrf2. Selektion af værtscel-20 ler, hvori sådanne vektorer er blevet indsat, er stærkt forenklet, når værtscellerne i øvrigt mangler de aktiviteter, som vektorerne bidrager med.
Det er klart, at nucleotidsekvenserne af gag- og env-genfragmenterne indsat på et bestemt sted i en kloningsvektor kan omfatte nucleotid-25 er, som ikke er en del af de faktiske strukturgener. Alternativt indeholder genfragmenterne eventuelt kun en del de komplette gener.
Alt hvad der kræves er, at de genfragmenter, som indsættes i kloningsvektoren, er i stand til i en hensigtsmæssig værtsorganisme at styre produktionen af et polypeptid eller protein, som har mindst én 30 antigendeterminant svarende til sekvenserne af gag- og env-pro-teinerne.
Udvælgelsen af en hensigtsmæssig værtsorganisme påvirkes af en række kendte faktorer. Disse faktorer omfatter fx kompatibilitet med den valgte vektor, toxicitet med proteiner, som indkodes af det hybride DK 172274 B1 11 plasmid, den lethed, hvormed det ønskede protein isoleres, ekspressionsegenskaber, biosikkerhed og omkostninger. Der skal nås en ligevægt mellem disse faktorer og det er klart, at ikke alle værter er lige effektive til ekspression af et bestemt rekombinant DNA-mole-5 kyle.
Egnede encellede værtsorganismer, der kan anvendes ifølge opfindelsen, omfatter, men er ikke begrænset til, plante-, pattedyr- eller gærceller og bakterier såsom Escherichia coli, Bacillus subtilis,
Bacillus stearothermophilus og Actinomyces. Escherichia coli stamme 10 MC1061, der er beskrevet af Casadaban et al., (J\ Mol. Biol., 138, 1980, s. 179), kan anvendes, hvilket også gælder en hvilken som helst anden stamme af E. coli K-12, der indeholder plasmidet pRK248cIts. Plasmidet pRK24 8cIts til anvendelse i andre E. coli H12-stammer er frit tilgængelige fra American Type Culture Collection (ATCC) og har 15 deponeringsnummeret ATCC 33766. E. coli stamme MC1061 er også deponeret i ATCC (deponeringsnummer ATCC 53338) og er også frit tilgængelig på anmodning.
Overførsel af den rekombinante kloningsvektor til værtscellen kan udføres på mange måder. Afhængig af det bestemte udvalgte vektor/-20 værtscellesystem, kan en sådan overførsel udføres ved transformation, transduktion eller transfektion. Når der er fremstilles en sådan modificeret celle, kan cellen dyrkes og proteinekspressionsproduktet kan isoleres fra kulturen.
Som det dannes i E. coli, er gag/env-proteinet i det store og hele 25 begrænset til cytoplasmiske inklusionslegemer (uopløselige proteinaggregater) i bakterien, hvilket er et forhold, scan i høj grad letter oprensning af proteinet. Til isolering af gag/env-proteinproduktet ifølge opfindelsen, sprænges bakteriecellerne fortrinsvis eller lyseres, og det uopløselige protein isoleres ved centrifugering.
30 Betydelig oprensning kan derefter opnås ved sekventiel vask af bundfaldet med stigende koncentrationer urinstof efterfulgt af anvendelsen af standardproteinoprensningsteknikker.
Til små mængder materiale såsom prøver, der tages til polyacrylamid-gelelektroforeseanalyse, kan cellerne sprænges ved behandling med et DK 172274 B1 12 detergent såsom natriumdodecylsulfat (SDS). Større mængder af proteinet isoleres bedst ved sonikering eller ved andre metoder til mekanisk sprængning såsom ved hjælp af en fransk pressecelle.
Cellesprængning kan også udføres ad kemisk eller enzymatisk vej. Da 5 divalente kationer ofte kræves til cellemembranintegritet, kan behandling med hensigtsmæssige chelateringsmidler såsom EDTA eller EGTA vise sig at have tilstrækkelig stor sprængevne til at lette lækningen af proteinet fra cellerne. Tilsvarende er enzymer såsom lysozym blevet anvendt til at opnå det samme resultat. Dette enzym 10 hydrolyserer cellevæggens peptidoglycanskelet. Anvendelse af alternerende frysning og optøning sammen med lysozymbehandling kan også anvendes.
Når gag/env-proteinet er frigivet fra cellerne, kan det identificeres i blandingen ved en hvilken som helst af de inden for fagområdet 15 kendte metoder. Fx kan der udføres et radioimmunoassay eller et enzymbundet immunosorbentassay under anvendelse af antistoffer mod proteinet. Fortrinsvis identificeres proteinet ved SDS-polyacrylamid-gelelektroforese efterfulgt af Western-blot eller tilsvarende analyse.
20 gag/env-Proteinet ifølge opfindelsen kan koncentreres ved udfældning med salte såsom natrium- eller ammoniumsulfat, ved ultrafiltrering eller ved anvendelse af andre metoder, som er velkendte for fagfolk, yderligere oprensning kan opnås ved konventionelle proteinoprensningsteknikker, herunder, men ikke begrænset til gelfiltrering, 25 ionbytningschromatografi, præparativ pladegel- eller vertikal elektroforese, isoelektrisk fokusering, fraktionering ved lav temperatur i et organisk opløsningsmiddel eller modstrømsdistribution.
Da gag/env-proteinet indeholder antigendeterminanter fra to hoved-30 komponenter i HTLV-III-viruset, og da dette virus er det vigtigste ætiologiske agens for AIDS og er immunologisk beslægtet med de andre virale agentier, som er involveret i eller forbundet med AIDS eller ARC, er proteinet et kraftigt diagnostisk værktøj til detektion af DK 172274 B1 13 antistoffer mod AIDS-vira i humant serum. Fusionen kan anvendes til dette formål på adskillige velkendte måder.
Fx kan gag/env-proteinet mærkes på en hvilken som helst af en række måder, det mærkede protein kan sættes til en menneskeserumprøve, som 5 mistænkes for at indeholde antistoffer mod AIDS-viruser til dannelse af mærkede protein-antistof-fusionscomplexer, og de således dannede complexer kan detekteres på hensigtsmæssig måde. Til yderligere eksemplificering kan proteinet immobiliseres på et fast underlag og derefter bringes i kontakt med en menneskeserumprøve. Antistoffer mod 10 AIDS-virusprøven binder til et immobiliseret protein, og de således dannede complexer kan detekteres under anvendelse af et reagens såsom Staphylococcus aureus protein A (mærket med fx iod 125) eller et andet anti-humant IgG-antistof (fx mærket med en radioisotop eller med peberrods- eller lactoperoxidase) efter at ikke-complexerede 15 proteiner og antistoffer er blevet bortvasket. Mange variationer over dette tema vil være åbenlyse for fagfolk, og nogle af dem er beskrevet nedenfor.
Der kan udformes en række diagnostiske tests for tilstedeværelsen af AIDS-vira eller partikler derfra i menneskeserum eller andre biolo-20 giske væsker ud fra anvendelsen af antistoffer mod gag/env-proteinet. Sådanne antistoffer kan dannes ved injektion af et pattedyr eller en fugl med en tilstrækkelig mængde af et vaccinepræparat, som omfatter proteinet og en kompatibel farmaceutisk bærer, for at fremkalde dannelsen af antistoffer mod proteinet. Den relevante mængde af 25 proteinet, som vil være fornøden, vil være kendt for fagfolk eller kan bestemmes ved rutinemæssige forsøg. I nærværende sammenhæng betegner udtrykket "farmaceutisk bærer", enten standardkompositioner, som egner sig til human administration eller til typiske adjuvanser, som anvendes til dyrevaccinationer.
30 Egnede adjuvanser til vaccination af dyr omfatter, men er ikke begrænset til Freunds komplette eller ukomplette adjuvans (egner sig ikke til brug til mennesker eller husdyr) adjuvans 65 (indeholder jordnøddeolie, mannid-monooleat og aluminiummonostearat) og mineral-geler såsom aluminiumhydroxid, aluminiumphosphat og aluminiumsulfat; 35 overfladeaktive midler såsom hexadecylamin, octadecylamin, lysoleci- DK 172274 B1 14 thin, dimethyldioctadecylammoniumbromid, N^N-dioctadecyl-N'-N-bis(2-hydroxyethyl-propandiamin), methoxyhexadecylglycerol og pluroniske polyoler; polyanioner såsom pyran, dextransulfat, poly-IC, polyacrylsyre, carbopol; peptider såsom muramyldipeptid, dimethyl-5 glycin, tuftsin; og olieemulsioner. gag/env-Proteinet kan også administreres efter inkorporering i liposomer eller andre mikrobærere eller efter konjugation til polysaccharider, proteiner eller andre polymerer.
Den indledende vaccination efterfølges typisk nogle uger senere af én 10 eller flere "booster"-vaccinationer, hvis totale effekt er dannelsen af høje titre af antistoffer mod gag/env-proteinet, hvilke antistoffer kan høstes på den sædvanlige måde.
Der kan naturligvis ved hjælp af almindelig tilgængelig teknologi fremstilles monoklonale antistoffer mod proteinet til opnåelse af det 15 samme resultat. Somatiske celler, som er i stand til at danne antistoffer, såsom B-celler, kan fusioneres med nvyelomacellelinjer til dannelse af hybridomaceller. Disse celler kan dyrkes in vitro eller som ascitestumorer i ubegrænset tid til fremstilling af store mængder specifikke antistoffer. Da hybridomaceller let kan klones, er det 20 muligt hurtigt at fremstille store antal celler, der alle danner de samme specifikke antistofmolekyler rettet mod en fælles antigendeterminant . Denne exceptionelle ensartethed i antistofdannelsen kan være en fordel, når antistofferne skal anvendes i specifikke diagnostiske tests.
25 Lymfeknuder og milte fra dyr, som er primet ved injektion af et antigen, er hensigtsmæssige kilder til B-celler, selv om det ligeledes er muligt at fjerne disse celler fra usensiticerede dyr og prime dem in vitro efter isolering. Muse- og rotte-B-lymfocytter anvendes oftest til hybridomafremstilling, men celler fra kaniner, 30 mennesker, frøer og andre dyr kan anvendes i stedet.
Ud fra lymfocytiske tumorer er der udviklet talrige specialiserede myelomacellelinjer til anvendelse til hybridomafremstilling (Kdhler og Milstein, European J. Immunol., 6, 1976, s. 511; Shulman et al.,
Nature, 276, 1978, s. 269) . Af de mange sådanne cellelinjer, der er DK 172274 B1 15 fremstillet, er P3/X63-Ag 8, P3/NSI/l-Ag 4-1, Sp2/0-Agl4 og S194/5.XXO.BU.l ofte blevet anvendt.
Fusionen af de antistofdannende milt- eller lymfeknudeceller med myelomaceller til dannelse af hybridomaer udføres sædvanligvis med et 5 overskud af splenocytter eller lymfocytter i forhold til myelomaceller, hvilket overskud kan være så højt som 20:1, selv om der typisk anvendes mindre forhold. Fusionen lettes ved anvendelse af et fusionsfremmende middel såsom UV-inaktiverede Sendaivirus eller poly-ethylenglycol (PEG). Gefter et al. (Somatic Cell Genet., 3, 1977, s.
10 231) angiver, at en kombination af dimethylsulfoxid og PEG yderligere forøger cellefusion. Der findes også elektriske indretninger, som kan fusionere celler med en exceptionel høj grad af effektivitet.
Når fusionen er indtruffet, skal hybridomacellerne udvælges fra de ufusionerede forældrecellestammer. Denne selektionsproces kan let 15 udføres ved at dyrke cellerne i et medium, som støtter hybridoma-, men ikke forældrecellevækst. De somatiske B-celler, som anvendes i fusionen har begrænset levetid i kultur og går således tabt, efterhånden som de gennemgår sensecens og død, men forældremyelomaceller-ne, der har en ubestemmelig kulturlevetid, skal elimineres ved 20 specielle udvælgelsesteknikker.
I et almindeligt anvendt system anvendes myelomaceller, som mangler hypoxanthin-phosphoribosyltransferase (HPRT-). Disse celler mangler enzym-vejen til genudnyttelse af hypoxanthin som fri base og kan ikke overleve, hvis en inhibitor såsom aminopterin anvendes til at blokere 25 de novo purin-syntesevejene. Myelomacellerne kan således modselekteres ved dyrkning af fusionsblandingen i hypoxanthin/aminopterin/-thymidin (HAT) -medium, medens hybridomacelleme vil overleve som følge af de antistofdannende fusionsforældrecellers bidrag med HPRT.
Efter en periode med selektionsdyrkning kan de overlevende hybrido-30 maceller klones, der kan opdyrkes standardpopulationer ved standardcel ledyrkningsmetoder, og kloner, som danner ønskede specifikke immunoglobuliner, kan detekteres ved enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) eller ved andre tests baseret på anvendelsen af det antigen, mod hvilket antistofferne er rettet.
DK 172274 B1 16
De her omhandlede anti-gag/env-proteinantistoffer, kan yderligere anvendes til fremstilling af en række diagnostiske tests for AIDS-vira eller partikler derfra. Sådanne diagnostiske systemer kam have form af et radioimmunoassay enten i fri opløsning eller fast til-5 stamd. Alternativt kam der udføres enzymbundne immunosorbentassays tillige med assays baseret på immunoblotanalyse. Disse assays kan være direkte eller indirekte, med anvendelse af et amdet antistof rettet mod amti-gag/env-proteinantistoffer. Til antistofferne kam der kobles adskillige enzymaktiviteter, idet peroxidase, glucoseoxi-10 dase, /?-galactosidase og basisk phosphatase blot er nogle få eksempler herpå.
Det grundlæggende princip, som danner basis for mamge af disse tests er, at en prøve af menneskeserum eller en amden biologisk væske, som mistænkes for at indeholde AIDS-vira eller fragmenter deraf, reageres 15 med en kendt titer af antistoffer mod gag/env-proteinet til dannelse af antigen-antistofcomplexer. De således dannede complexer kan detekteres på hensigtsmæssig måde.
Det er også klart for fagfolk, at der er mamge andre måder, hvorpå anti-gag/env-protein-antiserum kam anvendes til diagnostiske formål 20 såsom i én af flere agglutinationstests. I sådanne agglutinations-assays kan interaktionen af antistoffer og AIDS-vira eller virusfragmenter detekteres under anvendelse af systemer, i hvilke partikler overtrækkes med anti-gag/env-protein-antistofferne. Sådanne partikler kan være latexkugler, liposomer, erythrocytter, polyacryl-25 amidkugler eller en hvilken som helst af en række egnede polymerer.
Den ovenfor beskrevne fremgangsmåde til bestemmelse af AIDS-vira eller antistoffer mod AIDS-virus kan udføres i hensigtsmæssige testkits, som i en beholder omfatter gag/env-proteinet ifølge opfindelsen eller antistoffer mod AIDS-virus, som fremkaldes af gag/env-proteinet 30 ifølge opfindelsen.
Crowl et al. (Cell, 41, 1985, s. 979-986) har beskrevet, at serum fra 50 AIDS-patienter, hvilket serum er testet med genetisk manipuleret env-protein, var særdeles reaktivt med proteinet. Dette var DK 172274 B1 17 tilfældet på trods af det forhold, at halvdelen af disse patienter var fra USA's vestkyst og halvdelen fra østkysten. Det forhold, at alle de testede sera var reaktive med env-proteinet, viste, at de vira, som dannede de således reagerede antistoffer, må have haft 5 mindst én fælles eller bevaret antigendeterminant i deres kappeproteiner, selv om de var geografisk adskilte og uden tvivl genetisk noget forskellige.
gag-Kemeproteinet fra AIDS-retrovirus har vist sig at inducere antistofdanneIse i en stor procentdel af personer, som tidligere er 10 blevet udsat for viruset (Montagnier et al., supra; SchCipbach et al., supra; Sarngadharan et al., supra).
Alt i alt tyder de ovennævnte iagttagelser på, at gag/env-proteinet ifølge opfindelsen, som har mindst én antigendeterminant svarende til de sekvenser af gag- og env-proteinerne, som det består af, vil være 15 immunogent i mennesker og kan være nyttigt som en AIDS-vaccine.
Således kan gag/env-proteinet (enten fremstillet som beskrevet i nærværende beskrivelse eller syntetiseret kemisk) anvendes i et vaccinepræparat, som omfatter proteinet og en kompatibel farmaceutisk bærer. Proteinet kan anvendes i oprenset form i sådanne præparater, 20 eller det kan gøres mere immunogent ved hjælp af kendte modifikationer. Fx kan proteinet konverteres til en særdeles immonogen matrix ved reaktion med et tværbindingsmiddel såsom 1,3-dicyclohexylcarbo-diimid. Alternativt kan proteinet være covalent bundet til et særdeles immunogent proteinbæremolekyle, enten direkte eller via et 25 hensigtsmæssigt forbindelsesmolekyle. Anvendelige bæremolekyler omfatter fx limpet-hæmocyanin og forskellige bakterielle toxoider (inaktive toxiner) såsom difteritoxoid. Når gag/env-genet er konjugeret med et bakterielt toxoid, kan der fremstilles et divalent vaccinepræparat, som meddeler beskyttelse mod både AIDS og den 30 bakterie, hvorfra toxoidet stammer.
Administrationsveje, antigendoeis, og antallet af injektioner er alle faktorer, som er kendte inden for teknikken.
DK 172274 B1 18
EKSEMPEL
Følgende eksempel viser de metoder, ved hvilke en rekombinant vektor, som indkoder gag/env-proteinet fra HTLV-III-virus, kan fremstilles. I dette eksempel blev der udført følgende trin, som hver især er 5 beskrevet i detaljer nedenfor: 1) DNA-Sekvensen, som koder for resten af 15-512 (alle undtagen de første 14 aminoterminale rester) af gag-genet, blev skåret ud fra den rekombinante fagklon λΗΧΒ-3 og ligeret ind i E. coli-ekspressionsplasmidet pEV-vrf2 til 10 dannelse af plasmidet pEV2/gag 15-512; 2) DNA-sekvenser svarende til env-aminosyreresterne 319-331 blev slettet fra ekspressionsplasmidet pEV3/env 44-640 ved primer-styret mutagenese til dannelse af plasmidet pEV/env 44-640 Φ 319-331; 15 3) primer-styret mutagenese blev udført på plasmidet pEV/env 44-640 Φ 319-331 til dannelse af en sletning af nucleotid-er, som indkoder aminosyreresterne 514-524 og til dannelse af plasmidet pEV3/env 44-640 Φ 319-331 Δ 514-524; og 4) et restriktionsendonucleasefragment af env-genet fra 20 plasmidet pEV/env 44-640 Δ 319-331 Δ 514-524 som indkoder env-resterne 467-640 Δ 514-524, blev ligeret ind i det spaltede plasmid pEV2/gag 15-512, hvorved der dannes et fusionsgen, som indkoder gag-resterne 15-436 og env-resterne 467-640 Δ 514-524 i plasmidet pEV2/gag 15-436/env 25 467-640 Δ 514-524.
I hvert konstruktionstrin blev plasmider reproduceret ved transformation ind i E. coli stamme MC1061 (pRK248cIts).
A. Generelle metoder til fremstilling af rekombinante vektorer DNA-Præparation DK 172274 B1 19
Isolering af plasmid-DNA i lille målestok ud fra 1 ml mættede overnatskulturer blev udført i henhold til Bimboim et al. (Nucleic Acids Research, 7, 1979, s. 1513) . Denne procedure muliggør isolering af en lille mængde DNA fra en bakteriekoloni til analyseformål. Større 5 mængder plasmid-DNA blev præpareret under anvendelse af 1-liters kulturer ved at gå frem efter en standard-protokol med cæsiumchlo-ridcentrifugering.
Betingelser for enzymreaktioner
Restriktionsenzymerne og T4 DNA-ligasen, der blev anvendt, var alle 10 fremstillet af New England BioLabs, Beverly, Massachusetts, USA.
Metoderne og betingelserne for anvendelse af disse enzymer var som publiceret af fabrikanten.
For restriktionsendonucleasemes vedkommende defineres én aktivitetsenhed som den mængde enzym, der er nødvendig til at frembringe en 15 fuldstændig spaltning af 1,0 μg DNA på 60 minutter i et samlet reaktionsvolumen på 0,05 ml, hvor spaltningen er udført ved 37°C. Spaltningsblandingerne indeholdt ud over det DNA, der skulle spaltes, 100 μg/ml bovint serumalbumin og følgende bufferkomponenter:
Bglll: 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7,4), 10 mM MgCl2 og 10 mM
20 2-mercaptoethanol (2-ME)
Clal: 50 mM NaCl, 6 mM Tris-HCl (pH 7,9) og 6 mM MgCl2
Hindi: 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7,4), 7 mM MgCl2 og 1 mM
dithiothreitol (DTT)
HindiII: 50 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 8,0) og 10 mM MgCl2
25 Hpal: 6 mM KC1, 10 mM Tris-HCl (pH 7,4), 10 mM MgCl2 og 1 mM DTT
PstI: 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7,5) og 10 mM MgCl2
PvuII: 60 mM NaCl, 6 mM Tris-HCl (pH 7,5), 6 mM MgCl2 og 6 mM 2-
ME
DK 172274 B1 20
Stul: 100 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mM MgCl2 og 6 mM
2-ME.
T4 DNA-Ligation blev udført ved 16°C i en blanding, som indeholdt DNA'et og 50 mM Tris-HCl (pH 7,8), 10 mM MgCl2, 20 mM DTT, 1,0 mM ATP 5 og 50 μg/ml bovint serumalbumin. Én enhed T4 DNA-ligaseaktivitet defineres som den mængde, der er nødvendig til at give 50%'s ligation af Hindlll-fragmenter af X-DNA på 30 minutter ved 16°C i 20 μΐ inkubationsblanding og en 5'-DNA-endekoncentration på 0,12 μΜ (300 μg/ml).
10 Oprensning af DNA-fragmenter i agarose
Efter restriktionsendonucleasespaltning blev DNA-fragmenter til kloning isoleret ved elektroforese i 1% agarose. Efter visualisering med 1 μg/ml ethidiumbromid blev skiver af gelen, som indeholdt de ønskede DNA-fragmenter, ekstruderet gennem en kanyle størrelse 21 ud i 4 ml 15 af en opløsning, som indeholdt 10 mM Tris-HCl (pH 7,4), 1 mM EDTA og 300 mM NaCl. Denne blanding blev derefter frosset i 3 timer ved -80°C, tøet op i 30 minutter ved 37°C og centrifugeret ved 10.000 x g i 30 minutter. Supernatantvæsken blev filtreret gennem et 0,45 μΜ Millex-filter, koncentreret til 0,25 ml ved hjælp af sek-butanol og 20 ethanol udfældede tre gange med 10 μg E. coli tRNA (transfer RNA) som bærer.
Dyrkningsmedier M9CA-Medium indeholdt 10 g Na2HP04, 3 g KH2P04, 0,5 g NaCl og 1 g NH4C1 pr. liter med 1 mM MgS04, 0,5% glucose og 0,5% casaminosyrer 25 indstillet til pH 7,4.
Luria-væske (LB) indeholdt 5 g bactogærekstrakt, 10 g bactotrypton og 10 g NaCl pr. liter, indstillet til pH 7,5.
Antibiotikaene tetracyclin og ampicillin blev, når dette er angivet, tilsat i slutkoncentrationer på henholdsvis 15 og 50 μg/ml.
DK 172274 B1 21
Transformation og isolering af rekombinanter
Transformation af E. coli stamme MC1061 (pRK248cIts) under anvendelse af en modifikation af den af Kushner (i Genetic Engineering, red.
Boyer et al., Elsevier/North-Holland, Amsterdam, 1978, s. 17) 5 beskrevne protokol, i det væsentlige som følger.
200 ml af bakteriecellerne blev dyrket ved 30°C i LB til en Ο°600 på mellem 0,5 og 1,0, hvorefter cellerne blev indsamlet ved centrifugering ved 6.000 x g i 5 minutter ved 4°C og resuspenderet i 50 ml af en opløsning, som indeholdt 10 mM morpholinopropan-sulfonsyre (MOPS; 10 pH 7,0) og 10 mM RbCl. Cellerne blev på ny indsamlet ved centrifugering og resuspenderet i 30 ml af en opløsning, som indeholdt 10 mM MOPS (pH 6,5), 50 mM CaCl2 og 10 mM RbCl. Efter inkubation ved 0°C i 30 minutter blev cellerne indsamlet, resuspenderet i 6 ml 10 mM MOPS (pH 6,5) indeholdende 50 mM CaCl2, 10 mM RbCl og 15% glycerol, sat 15 portionsvis til 40 Eppendorf-rør (300 μΐ/rør) og frosset ved -80°C.
Transformation blev udført ved optøning af en 100 μΐ alikvot af cellerne og inkubering i 30, 2 og 2 minutter ved henholdsvis 0, 37 og 0°C i nærværelse af en 10 μΐ prøveligationsblanding indeholdende ca.
100 ng DNA og tilsætning af 0,1-0,5 ml LB til røret. Røret blev 20 derefter inkuberet ved 22°C i 60 minutter, hvorefter 200 μΐ af cellesuspensionen blev bredt ud på en LB-plade, som indeholdt ampicillin, og inkuberet ved 30°C i 20 timer.
Cellevækst og induktion af genekspression
Kulturer af E. coli MC1061 indeholdende plasmidet pRK248Its og et 25 ekspressionsplasmid blev dyrket i M9CA-medium til midtlogaritmisk fase ved 30°C og derefter overført til 42°C for at inaktivere X P^-repressoren. Efter 2 timers inkubation ved 42°C blev celler fra 1 ml af den inducerede kultur indsamlet ved centrifugering og resuspenderet i TG-puffer indeholdende 10 mM Tris-HCl (pH 7,4) og 10% glycerol 30 som forberedelse til analyse.
SDS-Polyacrylamidgelelektroforese og Westem-blot-analyse DK 172274 B1 22
Inducerede celler resuspenderet i Tris-glycin (TG)-puffer blev blandet med et lige så stort volumen af 2 gange prøvepuffer (Laemmli,
Nature, 227, 1970, s. 680), inkuberet ved 95°C i 5 minutter og underkastet SDS-polyacrylamidgelelektroforese i 12,5% geler som 5 beskrevet af Laemmli. Efter elektroforese blev proteiner fra gelen elektroblottet over på en 0,1 μπι nitrocellulosemembran i 6 timer ved 95 volt i 12,5 mM Tris og 96 mM glycin med 20% methanol og 0,01% SDS ved pH 7,5. Western-blot-analyse blev derefter udført som beskrevet af Towbin et al. (Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 76, 1979, s. 4350) .
10 Primer-styret mutagenese
Primer-styret stedspecifik mutagenese blev udført som beskrevet af Morinaga et al. (Biotechnology, 2, 1984, s. 636). Syntetiske oligo-nucleotider, der blev anvendt til udførelse af mutageneseproceduren, blev fremstillet ved hjælp af phosphitmetodologi (Beaucage et al, 15 Tetrahedron Lett., 22, 1981, s. 1859; Matteucci et al., J. Am. Chem.
Soc., 103, 1981, s. 3185) under anvendelse af et automatiseret synteseapparat og oprenset ved polyacrylamidgelelektroforese som beskrevet af Maxam et al., (Methods in Enzymology, 65, 1980, s. 499).
Kolonihybridiseringer 20 Kolonihybridiseringer blev udført som beskrevet af Grunstein et al.
(Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 72, 1975, s. 3961). Det samme oligonuc-leotid, der blev anvendt til primer-styret stedspecifik mutagenese, blev anvendt som probe for hybridiseringerne efter 5'-endemærkning *5 <y med ^ P- (-ATP) under anvendelse af polynucleotidkinase som beskrevet 25 af Maniatis et al. (Cell, 15, 1978, s. 687).
B. Konstruktion af plasmidet pEV2/GAG 15-512
Som angivet ovenfor blev konstruktionen af et færdigt ekspressions-plasmid, der udtrykker gag/env-fusionsproteinet, indledt med konstruktion af et plasmid (pEV2/gag 15-512), som indeholdt nucleotider, 30 der indkoder alle andre end de første fjorten aminoterminale rester.
Nogle af de nucleotider, som indkoder de carboxyterminale gag-rester, DK 172274 B1 23 blev derefter erstattet med env-sekvenser til dannelse af det færdige fusionsprodukt.
Til fremstilling af plasmidet pEV2/gag 15-512 vandtes DNA-sekvensen, der indkoder resterne 15-512 i gag-proteinet, ud fra 50 μg af den 5 rekombinante X-fagklon XHXB-3, som indeholder det HTLV-IlI-provirale genom, ved spaltning med 50 enheder Clal og 50 enheder Hindi i 120 minutter ved 37°C til dannelse af et 1700 bp langt fragment. Dette DNA-fragment blev isoleret ved præparativ agarosegelelektroforese og resuspenderet i 0,1 x TE-puffer [1 mM Tris-HCl (pH 7,4) med 0,1 mM 10 EDTA] til en slutkoncentration af 0,03 pmol/μΐ.
Til modtagelse af gag DNA-fragmentet blev 2 ^g af E. coli-ekspres-sionsplasmidet pEV-vrf2 spaltet med 5 enheder Clal og 5 enheder PvuII i 60 minutter ved 37°C, og der blev ved elektroforese i en 1% agarosegel isoleret et 1700 langt fragment, som indeholder X-PL-pro-15 motoren, hvilket fragment efter ethanoludfældning blev resuspenderet til en slutkoncentration af 0,03 pmol/μΐ.
Det i denne konstruktion anvendte plasmid pEV-vrf2 er et derivat af det almindeligt tilgængelige plasmid pBR322 (ATCC 31344) . Konstruktionen af plasmidet pEV-vrf2 er beskrevet i detaljer af Crowl et al.
20 (Gene, 38, 1985, s. 31). Den rekombinante X-fagklon XHXB-3, som anvendes i denne konstruktion, er beskrevet af Shaw et al. (Science, 226, 1984, s. 1165). Denne klon blev opnået under anvendelse af standard-rekombinant DNA-teknikker ud fra den ovenfor beskrevne HTLV-III-inficerede H-9-cellelinje. En HTLV-III-inficeret human cellelinje 25 med betegnelsen H9/HTLV-IIIB, der egner sig til anvendelse ifølge opfindelsen, er deponeret i American Type Culture Collection under deponeringsnummeret CRL8543. Efter at Shaw et al. har publiceret HTLV-III-genomet, kan en DNA-probe let konstrueres under anvendelse af disse data, der kan anvendes til at isolere genomet fra H-9 eller 30 fra en hvilken som helst anden cellelinje, der er i stand til at propagere viruset.
Tre hundrededele (0,03) pmol af gag/Clal-Hindi-fragmentet blev blandet med 0,03 pmol af pEV-vrf2/ClaI-PvuII-fragmentet og ligeret med 200 enheder T4-DNA-ligase i 18 timer ved 15°C i et slutvolumen af DK 172274 B1 24 10 μΐ. Ligationsproduktet blev derefter transformeret til E. coli stamme MC1061 (pRK248cIts), og transformanter blev udvalgt ved vækst på LB-agarplader med ampicillin efter inkubation ved 30°C i 18 timer.
De rekombinante plasmid DNA'er blev analyseret for korrekt restrik-5 tionsfragmentstørrelse efter spaltning med Bglll, PstI eller Hindlll. Isolater, der var positive ved DNA-størrelsesanalyse, blev derefter bedømt for syntese af gag-precursorpolypeptidet ved SDS- polyacryl-éimidgelelektroforese og Western-blot-analyse.
Kulturer, som indeholder plasmidet pEV2/gag 15-512 blev induceret ved 10 40°C, og duplikatprøver af de inducerede celler blev præpareret til analyse ved SDS-polyacrylamidgelelektroforese. Efter elektroforese blev gelen skåret i to stykker, og halvdelen af gelen blev farvet med Coomassie brilliant blue, medens den anden side af gelen blev underkastet elektroblotting og Western-blot-analyse under anvendelse af 15 anti-gag-antistoffer.
Analysen viste, at de inducerede celler dannede proteiner, som vandrede som to hovedbånd i gelerne med tilnærmede molekylvægte på ca.
56 og 53 Kd. Størrelsen af det komplette gag 15-512-protein er ca. 56 Kd. Begge hovedproteinerne reagerede med anti-gag-antistoffer. Et 2C antal mindre lavmolekylære proteiner, som var reaktive med antistofferne, blev også iagttaget.
C. Konstruktion af plasmidet pEV3/env 44-640 Δ 319-331
De env-sekvenser, der er til stede i slutplasmidet ifølge opfindelsen, blev oparbejdet i to trin (beskrevet i dette afsnit og afsnit D 25 nedenfor), som hver især indebar sletning af specifikke korte nucleotidsekvenser ved primer-styret stedspecifik mutagenese. Den første af disse sletninger (beskrevet i dette afsnit) var nødvendig til fremstilling af plasmidet pEV3/env 44-640 Δ 319-331 Δ 514-524 (afsnit D).
30 Ekspressionsplasmidet pEV3/env 44-640, hvis konstruktion ud fra \HXB-3 og pEV-vrf-plasmiderne er beskrevet af Crowl et al. (Cell, 41, 1985, s. 979), styrer syntesen af et 68 kd stort HTLV-III-env-specifikt protein i E. coli. DNA-sekvenser, der svarer til env-amino- DK 172274 B1 25 syreresterne 319-331, blev slettet ved primer-styret mutagenese under anvendelse af et 18-mert syntetisk oligonucleotid med sekvensen 5' GCA TTT GTT AAC ATT AGT 3'. Dette oligonucleotid blev udformet, således at det komplementerer env-sekvenser, hvorved nucleotider, der 5 indkoder resten 318, blev sammenføjet med nucleotider, der indkoder resten 332. Som følge af sammenføjningen af disse sekvenser, blev der indført et nyt unikt Hpal-sted i plasmid-DNA'et, medens 39 bp blev slettet. Stul og Hindlll-stederne i plasmidet pEV3/env 44-640 blev anvendt til dannelse af "hullet" til det heteroduplexe molekyle.
10 DNA fra isolerede kolonier, der var positive for hybridisering til det med 32P-mærkede syntetiske oligonucleotid under koloniscreening, blev transformeret til MC1061 (pRK248Its) og analyseret for tilstedeværelsen af det nye, unikke Hpal-sted.
D. Konstruktion af plasmidet pEV3/env 44-640 A 319-331 Δ 514-524 15 En anden deletion i de env-kodende sekvenser blev frembragt ved primer-styret mutagenese under anvendelse af et syntetisk oligonucleotid med sekvensen 5' AGA GCA GTG GCA GCA GGA 3'. Dette oligonucleotid anbragte sekvenser, der indkoder resten 513 i env- proteinet, ved siden af sekvenser, som indkoder resten 525, hvorved 20 sletningen af nucleotiderne, som indkoder resterne 514-524, blev lettet. Denne sletning blev frembragt i plasmidet under anvendelse af restriktionsstederne Hpal og Hindlll til frembringelse af et enkelt-strenget hul i env-området.
Efter gentransformation blev DMA fra positive isolater, som var iden-25 tificeret ved hjælp af den 32P-mærkede oligonucleotidprobe, analyseret for 33 bp-deletionen ved hjælp af restriktionsspaltning med Hpal og Hind III efterfulgt af elektroforese i IV agarose. Denne deletion blev også bekræftet ved DNA-sekventering i henhold til Maxam og Gilberts kemiske spaltningsmetode (Methods in Enzymology, 65, 30 1980, s. 499).
Som tidligere angivet forårsager Δ 514-524-sletningen en signifikant forøgelse i ekspressionen af env.
DK 172274 B1 26 E. Konstruktion af plasmidet pEV2/gag 15-436/env 467-640 Δ 514-524 2 μg pEV2/gag 15-512 blev dobbeltspaltet med enten 5 enheder Clal og 4 enheder Bglll til dannelse af et ca. 1300 bp langt fragment, som indkoder gag-resterne 15-436, eller med 10 enheder PstI og 5 enheder 5 Clal til dannelse af et ca. 1 kb langt fragment, som indeholder \-PL-promotoren. 3/10 μg pEV3/env 44-640 Δ 319-331 Δ 514-524 blev spaltet med 10 enheder PstI og 4 enheder Bglll til dannelse af et ca. 4 Kb langt fragment, som indkoder env-resterne 467-640 Δ 514-524. De forskellige således fremstillede DNA-fragmenter blev separeret i 1% 10 agarose og isoleret som beskrevet ovenfor.
3/100 pmol af hver af de isolerede DNA-fragmenter blev blandet og ligeret i 18 timer ved 15°C i nærværelse af 200 enheder T4 DNA-ligase . Produkterne af ligationsblandingen blev derefter transformeret til MC1061 (pRK248cIts), og transformanter blev udvalgt på LB-agar-15 plader indeholdende ampicillin. Plasmid DNA blev præpareret ud fra unikke kolonier og analyseret for den korrekte restriktionsfragmentstørrelse efter spaltning med PvuII.
11 af 12 isolater var positive ved DNA-analyse positive for de forventede 3505 og 2882 bp lange PvuII-fragmenter. 2 positive 20 isolater blev yderligere bedømt for syntese af gag/env-fusionspro-teinet. Disse kulturer blev induceret, og celleprøver blev udtaget til analyse ved SDS-polyacrylamidgelelektroforese, elektroblotting og Western-blot, idet resultaterne er vist i fig. 3.
Felt 1 i fig. 3 viser Coomassie blue-farvede totale celleproteiner 25 fra celler, som indeholder det rekombinante plasmid, der bærer gag/env- fusionsgenet (g/e) og fra kontrolceller (c). Felt 2 og 3 viser resultaterne af duplikatprøver, der er underkastet Western blot-analyse under anvendelse af kanin-polyklonale antistoffer mod et syntetisk peptid svarende til env-resterne 500-511 (felt 2) eller 30 under anvendelse af fåre-polyklonale antistoffer mod gag-proteinet p24, der er kommercielt tilgængeligt (felt 3; se Dowbenko et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 82, 1985, s. 7748 for en beskrivelse af p24-proteinet) . I fig. 3 blev immuncomplexeme i felt 2 og 3 visualiseret med et andet antistof mærket med peberrodsperoxidase, og DK 172274 B1 27 molekylvægtstandardernes mobilitet (i Kd) er vist. Positionen af gag/env-proteinbåndene i gelerne er vist med pile.
Der kan foretages mange modifikationer og variationer af den foreliggende opfindelse uden derved at afvige fra dens ånd og omfang, 5 hvilket vil være klart for fagfolk. Fx kan der foretages nucleinsy-resubstitutioner i det gen, som koder for gag/env-proteinet ifølge opfindelsen (under anvendelse af de her viste sekvensdata som reference) , og der ville kunne fremstilles et noget anderledes (men funktionelt ækvivalent) fusionsprotein ud fra dette. Et sådant ændret 10 produkt er stadigvæk omfattet af opfindelsen, i det omfang at det indeholder mindst én antigendeterminant svarende til sekvenserne af et gag- og env-protein fra et HTLV-III-virus. Tilsvarende kan selve proteinets aminosyresekvens manipuleres direkte med samme resultat.
Claims (19)
1. Protein, kendetegnet ved, at det har en aminosyresekvens, som svarer til mindst én antigendeterminant fra et HTLV-III-gag-protein 5 og mindst én antigendeterminant fra et HTLV-III-env-protein.
2. Protein ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det har aminosyresekvensen . Met Asn Arg Ile Arg Ile His Arg Trp Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Lys His Ile Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gin Ile Leu Gly Gin Leu Gin Pro Ser Leu Gin Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gin Arg Ile Glu Ile Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gin Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala Gin Gin Ala Ala Ala Asp Thr Gly His Ser Ser Gin Val Ser Gin Asn Tyr Pro Ile Val Gin Asn Ile Gin Gly Gin Met Val His Gin Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gin Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gin Ala Ala Met Gin Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Val His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gin Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu Gin Glu Gin Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gin Gly Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gin Ala Ser Gin Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gin Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gin Gly Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gin Val Thr Asn Thr Ala Thr Ile Met Met Gin Arg Gly Asn Phe Arg Asn Gin Arg Lys Met Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Thr Ala Arg Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly DK 172274 B1 29 Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly His Gin Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gin Ala Asn Phe Leu Gly Lys Ile Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp Met Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys Ile Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg Arg Val Val Gin Arg Glu Lys Arg Ala Val Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Met Thr Leu Thr Val Gin Ala Arg Gin Leu Leu Ser Gly Ile Val Gin Gin Gin Asn Asn Leu Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gin Gin His Leu Leu Gin Leu Thr Val Trp Gly Ile Lys Gin Leu Gin Ala Arg Ile Leu Ala Val Glu Arg Tyr Leu Lys Asp Gin Gin Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu Leu Cys Thr Thr Ala Val Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn Lys Ser Leu Glu Gin Ile Trp Asn His Thr Thr Trp Met Glu Trp Asp Arg Glu Ile Asn Asn Tyr Thr Ser Phe Asn Ala Val Val Tyr His Ser eller en del deraf med samme biologiske egenskaber.
3. Protein ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at det er i det væsentlige ren form.
4. DNA-sekvens, 5 kendetegnet ved, at den koder for et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, og at den fx har hele eller en del af nucleinsyresekvensen ATGAATAGAA TTCGGATCCA TCGATGGGAA AAAATTCGGT TAAGGCCAGG GGGAAAGAAA AAATATAAAT TAAAACATAT AGTATGGGCA AGCAGGGAGC TAGAACGATT CGCAGTTAAT CCTGGCCTGT TAGAAACATC AGAAGGCTGT AGACAAATAC TGGGACAGCT ACAACCATCC CTTCAGACAG GATCAGAAGA ACTTAGATCA TTATATAATA CAGTAGCAAC CCTCTATTGT GTGCATCAAA GGATAGAGAT AAAAGACACC AAGGAAGCTT TAGACAAGAT AGAGGAAGAG CAAAACAAAA GTAAGAAAAA AGCACAGCAA GCAGCAGCTG ACACAGGACA CAGCAGTCAG GTCAGCCAAA ATTACCCTAT AGTGCAGAAC ATCCAGGGGG AAATGGTACA TCAGGCCATA TCACCTAGAA CTTTAAATGC ATGGGTAAAA GTAGTAGAAG AGAAGGCTTT CAGCCCAGAA GTAATACCCA TGTTTTCAGC DK 172274 B1 30 ATTATCAGAA GGAGCCACCC CACAAGATTT AAACACCATG CTAAACACAG TGGGGGGACA TCAAGCAGCC ATGCAAATGT TAAAAGAGAC CATCAATGAG GAAGCTGCAG AATGGGATAG AGTACATCCA GTGCATGCAG GGCCTATTGC ACCAGGCCAG ATGAGAGAAC CAAGGGGAAG TGACATAGCA GGAACTACTA GTACCCTTCA GGAACAAATA GGATGGATGA CAAATAATCC ACCTATCCCA GTAGGAGAAA TTTATAAAAG ATGGATAATC CTGGGATTAA ATAAAATAGT AAGAATGTAT AGCCCTACCA GCATTCTGGA CATAAGACAA GGACCAAAAG AACCTTTTAG AGACTATGTA GACCGGTTCT ATAAAACTCT AAGAGCCGAG CAAGCTTCAC AGGAGGTAAA AAATTGGATG ACAGAAACCT TGTTGGTCCA AAATGCGAAC CCAGATTGTA AGACTATTTT AAAAGCATTG GGACCAGCGG CTACACTAGA AGAAATGATG ACAGCATGTC AGGGAGTAGG AGGACCCGGC CATAAGGCAA GAGTTTTGGC TGAAGCAATG AGCCAAGTAA CAAATACAGC TACCATAATG ATGCAGAGAG GCAATTTTAG GAACCAAAGA AAGATGGTTA AGTGTTTCAA TTGTGGCAAA GAAGGGCACA CAGCCAGAAA TTGCAGGGCC CCTAGGAAAA AGGGCTGTTG GAAATGTGGA AAGGAAGGAC ACCAAATGAA AGATTGTACT GAGAGACAGG CTAATTTTTT AGGGAAGATC TTCAGACCTG GAGGAGGAGA TATGAGGGAC AATTGGAGAA GTGAATTATA TAAATATAAA GTAGTAAAAA TTGAACCATT AGGAGTAGCA CCCACCAAGG CAAAGAGAAG AGTGGTGCAG AGAGAAAAAA GAGCAGTGGC AGCAGGAAGC ACTATGGGCG CAGCGTCAAT GACGCTGACG GTACAGGCCA GACAATTATT GTCTGGTATA GTGCAGCAGC AGAACAATTT GCTGAGGGCT ATTGAGGCGC AACAGCATCT GTTGCAACTC ACAGTCTGGG GCATCAAGCA GCTCCAGGCA AGAATCCTGG CTGTGGAAAG ATACCTAAAG GATCAACAGC TCCTGGGGAT TTGGGGTTGC TCTGGAAAAC TACTTTGCAC CACTGCTGTG CCTTGGAATG CTAGTTGGAG TAATAAATCT CTGGAACAGA TTTGGAATCA CACGACGTGG ATGGAGTGGG ACAGAGAAAT TAACAATTAC ACAAGCTTTA ATGCGGTAGT TTATCACAGT TAA S. Rekombinant vektor, kendetegnet ved, at den omfatter en DNA-sekvens ifølge krav 4, og at den er i stand til at styre ekspressionen af DNA-sekvensen i en kompatibel encellet værtsorganisme, idet vektoren fx er 5 plasmidet pEV2/gagl5-436/env 467-640 Δ 514-524. DK 172274 B1 31
6. Encellet organisme, fx en prokaryot eller eukaryot celle, kendetegnet ved, at den indeholder en rekombinant vektor ifølge krav 5.
7. Encellet organisme ifølge krav 6, 5 kendetegnet ved, at den er en Escherichia coli-celle, fx en Escherichia coli MC 1061-celle.
8. Fremgangsmåde til fremstilling af et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at 10 a) en encellet organisme, fx en E. coli-celle, der indeholder en rekombinant vektor ifølge krav 5, fx plasmidet pEV2/gag-15-436/env 467-640 Δ 514-524, dyrkes under hensigtsmæssige vækstbetingelser, således af proteinet udtrykkes, og b) proteinet isoleres fra kulturen og oprenses om ønsket.
9. Fremgangsmåde til fremstilling af en encellet organisme ifølge krav 6 eller 7, kendetegnet ved, at en rekombinant vektor ifølge krav 5, indsættes i en encellet organisme, fx ved transformation, trans-duktion eller transfektion.
10. Fremgangsmåde til detektion af tilstedeværelsen af antistoffer mod AIDS-vira i menneskeserum, kendetegnet ved, at a) et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3 mærkes, b) det mærkede protein fra trin a) omsættes med en menneskeserum-25 prøve, og mærkede protein/antistofcomplexer lades danne sig i reaktionsblandingen, og c) de mærkede protein/antistofcomplexer fra trin b) bestemmes. DK 172274 B1 32
11. Fremgangsmåde til detektion af tilstedeværelsen af antistoffer mod AIDS-vira i menneskeserum, kendetegnet ved, at a) et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3 immobili-5 seres på et fast underlag, b) en menneskeserumprøve bringes i kontakt med det immobiliserede protein fra trin a), og immobiliserede protein/antistofcomplexer lades danne sig, c) ubundet protein og antistoffer vaskes væk fra complexeme fra trin 10 b), og d) sådanne complexer bestemmes ved tilsætning af et reagens valgt blandt mærket Staphylococcus aureus protein A og et mærket anti-humant IgG-antistof.
12. Fremgangsmåde til detektion af tilstedeværelsen af AIDS-vira 15 eller fragmenter deraf i menneskeserum eller en anden biologisk væske, kendeteget ved, at a) en menneskeserum- eller anden biologisk væskeprøve omsættes med en kendt titer af antistoffer, som er dannet mod et protein ifølge et 20 hvilket som helst af kravene 1-3, b) antistoffer og prøven lades reagere til dannelse af antigen/anti-stofcomplexer i reaktionsblandingen, og c) antigen/antistofcomplexeme fra trin b) detekteres.
13. Fremgangsmåde ifølge krav 14, 25 kendetegnet ved, at antistofferne er enzymmærkede, og at antigen/antistof complexeme, der dannes i reaktionsblandingen, detekteres ved enzymbundet immunosorbentassay, eller at en kendt mængde af et protein ifølge krav 1-3 mærket med en radioaktiv markør sættes til en serum- eller anden biologisk væskeprøve, og at de i reaktions DK 172274 B1 33 blandingen dannede antigen/antistofcomplexer detekteres ved radioimmunoassay.
14. Fremgangsmåde til fremstilling af en vaccine, kendetegnet ved, at et protein ifølge et hvilket som helst 5 af kravene 1-3 blandes med en fysiologisk acceptabel bærer.
15. Fremgangsmåde til fremstilling af antistoffer mod AIDS-vira, kendetegnet ved, at en tilstrækkelig mængde af et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3 injiceres i et pattedyr eller en fugl til fremkaldelse af dannelsen af antistoffer mod dette 10 protein, og antistofferne isoleres fra dyrenes serum.
16. Vaccinepræparat, kendetegnet ved, at det omfatter et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3 og en kompatibel farmaceutisk bærer.
17. Antistoffer, 15 kendetegnet ved, at de er dannet mod et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, idet antistofferne fx er mono-klonale antistoffer.
18. Anvendelse af et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3 til fremstilling af en beskyttende immuniserende vaccine, til 20 fremstilling af antistoffer mod AIDS-vira eller til detektion af tilstedeværelsen af antistoffer mod AIDS-vira i menneskeserum.
19. Testkit til bestemmelse af antistoffer mod AIDS-vira, kendetegnet ved, at det i en beholder omfatter et protein ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3.
20. Testkit til bestemmelse af AIDS-virus, kendetegnet ved, at det i en beholder omfatter antistoffer mod AIDS-virus fremkaldt af et protein ifølge et hvilket som helst af kravene l- 3.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US84867186 | 1986-04-04 | ||
US06/848,671 US4925784A (en) | 1986-04-04 | 1986-04-04 | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK166087D0 DK166087D0 (da) | 1987-04-01 |
DK166087A DK166087A (da) | 1987-10-05 |
DK172274B1 true DK172274B1 (da) | 1998-02-16 |
Family
ID=25303966
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK166087A DK172274B1 (da) | 1986-04-04 | 1987-04-01 | HTLV-III-virusprotein, DNA-sekvens, der koder herfor, fremgangsmåde til fremstilling heraf, fremgangsmåde til detektion af AIDS-virus samt antistoffer mod AIDS-virus |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4925784A (da) |
JP (1) | JP2625118B2 (da) |
KR (1) | KR930001118B1 (da) |
AT (1) | AT400442B (da) |
AU (1) | AU599091B2 (da) |
BE (1) | BE1001973A5 (da) |
BR (1) | BR8701528A (da) |
CA (1) | CA1341249C (da) |
CH (1) | CH676004A5 (da) |
DE (3) | DE3744827C2 (da) |
DK (1) | DK172274B1 (da) |
ES (3) | ES2004133A6 (da) |
FR (1) | FR2606422B1 (da) |
GB (1) | GB2188639B (da) |
IL (1) | IL82088A (da) |
IT (1) | IT1203851B (da) |
NL (1) | NL192275C (da) |
NO (1) | NO871409L (da) |
NZ (1) | NZ219837A (da) |
SE (1) | SE8701413L (da) |
SG (1) | SG102792G (da) |
SU (1) | SU1644720A3 (da) |
ZA (1) | ZA871724B (da) |
Families Citing this family (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9309574B1 (en) | 1984-08-22 | 2016-04-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Molecular cloning of HIV-1 from immortalized cell lines |
ES2054616T3 (es) * | 1985-12-17 | 1994-08-16 | Akzo Nv | Reactivo inmunoquimico. |
JPS62502868A (ja) * | 1985-12-24 | 1987-11-19 | アメリカ合衆国 | ヒトtリンパ球指向性ウイルスタイプ3のプラスミド及びファ−ジクロ−ン |
US4925784A (en) * | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
US4983387A (en) * | 1986-05-19 | 1991-01-08 | Viral Technologies Inc. | HIV related peptides, immunogenic antigens, and use therefor as subunit vaccine for AIDS virus |
US5142025A (en) * | 1986-08-01 | 1992-08-25 | Repligen Corporation | Recombinant HTLV-III proteins and uses thereof |
NZ221440A (en) * | 1986-08-20 | 1991-11-26 | Genetic Systems Corp | Composition containing monoclonal antibodies/peptides useful in treating and diagnosing hiv infections |
US5166050A (en) * | 1986-08-20 | 1992-11-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections |
US5041385A (en) * | 1986-11-01 | 1991-08-20 | Oxford Gene Systems Limited | Vector expressing fusion proteins and particles |
NZ223980A (en) * | 1987-03-23 | 1991-02-26 | Hiver Ltd | An aids-type virus vaccine comprising an antibody equivalent which recognises an epitope on a cd4 cell-marker |
AU615670B2 (en) * | 1987-09-04 | 1991-10-10 | Murex Diagnostics Corporation | Immunoassay and biological constructs for use therein |
EP0311228A3 (en) * | 1987-10-09 | 1990-05-02 | Repligen Corporation | Recombinant polypeptides and their uses, including assay for aids virus |
NO881501L (no) * | 1987-10-09 | 1989-04-10 | Repligen Corp | Rekombinante htlv-111-proteiner og anvendelser av disse. |
ES2054769T3 (es) * | 1987-11-16 | 1994-08-16 | Hoffmann La Roche | Polipeptidos hiv-2 recombinantes. |
US5780038A (en) * | 1987-11-16 | 1998-07-14 | Roche Diagnostic Systems, Inc. | HIV-2 envelope polypeptides |
JPH01179687A (ja) * | 1987-12-30 | 1989-07-17 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | Hiv融合蛋白質 |
JP2559482B2 (ja) * | 1988-01-12 | 1996-12-04 | ジーンラブズ テクノロジーズ,インコーポレイテッド | Htlvーiペプチド抗原および分析法 |
EP0343132B1 (en) * | 1988-05-06 | 1994-08-17 | Ferropas Ag | Methods and systems for producing HIV antigens |
US5204259A (en) * | 1988-05-06 | 1993-04-20 | Pharmacia Genetic Engineering, Inc. | Methods and systems for producing HIV antigens |
FR2632310B1 (fr) * | 1988-06-06 | 1992-04-10 | Pasteur Institut | Peptides ayant des proprietes protectrices d'un virus pathogene du type hiv dans des cellules sensibles |
US6197496B1 (en) * | 1988-06-09 | 2001-03-06 | Institut Pasteur | Immunological reagents and diagnostic methods for the detection of human immunodeficiency virus type 2 utilizing multimeric forms of the envelope proteins gp300, p200, and p90/80 |
CA2003383A1 (en) | 1988-11-23 | 1990-05-23 | Sushil G. Devare | Synthetic dna derived recombinant hiv antigens |
US5817318A (en) * | 1989-05-03 | 1998-10-06 | Connaught Laboratories Limited | Synthetic peptides for an HIV-1 vaccine |
GB8923123D0 (en) * | 1989-10-13 | 1989-11-29 | Connaught Lab | A vaccine for human immunodeficiency virus |
DE69131513T3 (de) * | 1990-03-21 | 2005-05-25 | Geneart Gmbh | Für abgeänderte retrovirale GAG-Polypeptide kodierende DNA-Sequenzen und diese enthaltende Impfstoffe oder Aggregate davon |
US6228608B1 (en) | 1991-02-28 | 2001-05-08 | Aquila Biopharmaceuticals, Inc. | Recombinant FIV glycoprotein 160 and P24 gag protein |
JP3327549B2 (ja) * | 1991-08-21 | 2002-09-24 | アボツト・ラボラトリーズ | C100領域に対する組換え抗原を利用したc型肝炎アッセイ |
GB9208218D0 (en) * | 1992-04-14 | 1992-05-27 | British Bio Technology | Hybrid particles |
DE69231705T2 (de) * | 1992-06-04 | 2001-10-18 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University, Suita | Gag-Env Fusion-Antigen aus HIV |
US5580773A (en) * | 1992-06-17 | 1996-12-03 | Korea Green Cross Corporation | Chimeric immunogenic gag-V3 virus-like particles of the human immunodeficiency virus (HIV) |
KR0172970B1 (ko) * | 1992-06-17 | 1999-02-01 | 김영길 | Aids백신에 유용한 키메릭 단백 및 그의 제조방법 |
ATE243755T1 (de) * | 1992-08-07 | 2003-07-15 | Wyeth Corp | Rekombinente adenoviren-impfstoffe |
EP0702693A1 (en) * | 1993-06-09 | 1996-03-27 | Connaught Laboratories Limited | Tandem synthetic hiv-1 peptides |
ES2196018T3 (es) * | 1993-08-11 | 2003-12-16 | Wyeth Corp | Vacunas de adenovirus recombinantes. |
US6025141A (en) * | 1993-12-10 | 2000-02-15 | The Canadian Red Cross Society | Immunofluorescence assay for the detection of antibodies using recombinant antigens in insoluble form |
DE4405810A1 (de) | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
AU2517895A (en) * | 1994-05-20 | 1995-12-18 | Microgenesys, Inc. | Hiv polyprotein immunogens |
FR2726576B1 (fr) * | 1994-11-07 | 1997-01-31 | Pf Medicament | Production de peptides analogues de peptides hydrophobes, peptide recombinant, sequence d'adn correspondante |
US6846905B2 (en) | 1997-08-15 | 2005-01-25 | Abbott Laboratories | Antigen constructs useful in the detection and differentiation of antibodies to HIV |
NO311807B1 (no) | 1999-03-04 | 2002-01-28 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV |
DE10106295C1 (de) * | 2001-02-02 | 2002-08-22 | Gaifar German American Inst Fo | Protein mit mehreren Antigen-Epitop-Sequenzen, welches immobilisiert ist |
EP2858667A1 (en) | 2012-06-06 | 2015-04-15 | Bionor Immuno AS | Hiv vaccine |
CA2951616A1 (en) | 2014-07-11 | 2016-01-14 | Bionor Immuno As | Method for reducing and/or delaying pathological effects of human immunodeficiency virus i (hiv) or for reducing the risk of developing acquired immunodeficiency syndrome (aids) |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4237224A (en) * | 1974-11-04 | 1980-12-02 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University | Process for producing biologically functional molecular chimeras |
DE2814039C3 (de) * | 1978-03-31 | 1981-02-19 | Gesellschaft Fuer Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf), 3300 Braunschweig | Verfahren zur Herstellung von Hybrid-Bakterien |
GB8423659D0 (en) * | 1984-09-19 | 1984-10-24 | Pasteur Institut | Cloned dna sequences |
GB8324800D0 (en) * | 1983-09-15 | 1983-10-19 | Pasteur Institut | Antigens |
IE58321B1 (en) * | 1984-04-23 | 1993-09-08 | Us Health | Isolation of proteins of HTLV-III, serological detection of antibodies to HTLV-III in sera of patients with aids and pre-aids conditions, and detection of HTLV-III infection bi/immuno-assays using HTLV-III infection by immuno-assays using HTLV-III and its proteins |
WO1986000930A1 (en) * | 1984-07-20 | 1986-02-13 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Retroviral vaccines and vectors and methods for their construction |
IL76082A (en) * | 1984-08-22 | 1991-07-18 | Us Health | Molecular clones of the genome of htlv-iii and a process for the preparation thereof |
CA1340878C (en) * | 1984-10-26 | 2000-01-25 | Takis S. Papas | Production of human t-cell leukemia (lymphotropic) retrovirus (htlv-i) envelope protein fragments in bacteria and use in seroepidemiological survey of human lymphoid malignancies |
CA1341482C (en) * | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
DE3588134T2 (de) * | 1984-12-24 | 1997-03-20 | Genentech Inc | Fusionen von AIDS-verwandten Polypeptiden |
US4774175A (en) * | 1985-03-01 | 1988-09-27 | Centocor, Inc. | Immunochemical methods for the detection of antibody against HTLV-III |
US4751180A (en) * | 1985-03-28 | 1988-06-14 | Chiron Corporation | Expression using fused genes providing for protein product |
ES8706824A1 (es) * | 1985-04-08 | 1987-07-01 | Genetic Systems Corp | Un metodo para preparar proteinas que son inmunologicamente reactivas con anticuerpos para virus asociados con linfadenopatia. |
DK171119B1 (da) * | 1985-04-19 | 1996-06-17 | Hoffmann La Roche | AIDS-viruskappeprotein, ekspressionsvektor bærende viruskappeproteinet, transformanter transformeret med ekspressionsvektoren, fremgangsmåde til fremstilling af viruskappeproteinet, fremgangsmåde til detektion af AIDS-antistoffer, fremgangsmåde til bestemmelse af AIDS-virus, vaccine mod AIDS, antistoffer mod viruskappeproteinet samt anvendelse af dette til fremstilling af en vaccine og til testnin |
KR910002374B1 (ko) * | 1985-04-29 | 1991-04-20 | 제네틱 시스템즈 코포레이션 | Aids 관련질병의 검출을 위한 합성항원 |
EP0213894A3 (en) * | 1985-08-23 | 1987-10-21 | Advanced Genetics Research Institute | Defective viral particle vaccines and methods for their use |
JP2564268B2 (ja) * | 1985-08-28 | 1996-12-18 | 協和醗酵工業株式会社 | 融合抗原ポリペプチド |
JP2702911B2 (ja) * | 1985-09-11 | 1998-01-26 | ユナイテツド・バイオメデイカル・インコ−ポレ−テツド | 合成ペプチド、並びにそれを用いたエイズおよびプリ・エイズの検出方法 |
NZ217645A (en) * | 1985-09-25 | 1991-11-26 | Oncogen | Recombinant viruses expressing lav/htlv-iii related epitopes and vaccine formulations |
GB8525615D0 (en) * | 1985-10-17 | 1985-11-20 | Hoffmann La Roche | Polypeptides |
EP0245362B1 (en) * | 1985-10-24 | 1994-06-29 | Ronald C. Kennedy | Synthetic peptides and use for diagnosis and vaccination for aids and arc |
AU6713287A (en) * | 1986-01-06 | 1987-07-09 | F. Hoffmann-La Roche & Co. | Expression of htlv-iii gag-gene |
US4753873A (en) * | 1986-02-03 | 1988-06-28 | Cambridge Bioscience Corporation | Peptides for the diagnosis of HTLV-III antibodies, their preparation and use |
US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
US4808536A (en) * | 1986-02-27 | 1989-02-28 | Centocor, Inc. | Immunochemical method for detection of antibody against HTLV-III core protein based upon recombinant HTLV-III gag gene encoded protein |
US4925784A (en) * | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
GB8629116D0 (en) * | 1986-12-05 | 1987-01-14 | Hoffmann La Roche | Env/gag polypeptides |
-
1986
- 1986-04-04 US US06/848,671 patent/US4925784A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-03-05 CH CH816/87A patent/CH676004A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-03-10 ZA ZA871724A patent/ZA871724B/xx unknown
- 1987-04-01 DK DK166087A patent/DK172274B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-04-01 CA CA000533563A patent/CA1341249C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-04-01 NZ NZ219837A patent/NZ219837A/xx unknown
- 1987-04-02 DE DE3744827A patent/DE3744827C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-02 IL IL82088A patent/IL82088A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-04-02 DE DE3744825A patent/DE3744825C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-02 DE DE19873711016 patent/DE3711016A1/de active Granted
- 1987-04-02 FR FR878704625A patent/FR2606422B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-02 JP JP62082197A patent/JP2625118B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-03 GB GB8707971A patent/GB2188639B/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-03 BR BR8701528A patent/BR8701528A/pt not_active Application Discontinuation
- 1987-04-03 SE SE8701413A patent/SE8701413L/xx not_active Application Discontinuation
- 1987-04-03 KR KR1019870003168A patent/KR930001118B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 NL NL8700795A patent/NL192275C/nl not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 AU AU71032/87A patent/AU599091B2/en not_active Ceased
- 1987-04-03 ES ES8700968A patent/ES2004133A6/es not_active Expired
- 1987-04-03 BE BE8700350A patent/BE1001973A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 NO NO871409A patent/NO871409L/no unknown
- 1987-04-03 AT AT0082487A patent/AT400442B/de not_active IP Right Cessation
- 1987-04-03 IT IT19973/87A patent/IT1203851B/it active
- 1987-04-03 SU SU874202330A patent/SU1644720A3/ru active
-
1988
- 1988-10-14 ES ES8803113A patent/ES2016426A6/es not_active Expired - Fee Related
- 1988-10-14 ES ES8803112A patent/ES2009350A6/es not_active Expired
-
1992
- 1992-10-07 SG SG1027/92A patent/SG102792G/en unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK172274B1 (da) | HTLV-III-virusprotein, DNA-sekvens, der koder herfor, fremgangsmåde til fremstilling heraf, fremgangsmåde til detektion af AIDS-virus samt antistoffer mod AIDS-virus | |
EP0199301B1 (en) | Recombinant acquired immune deficiency syndrome (AIDS) viral envelope protein fragments and method of testing for AIDS | |
JP3569766B2 (ja) | Htlv−iiidnaのクローニングおよび発現 | |
US5866320A (en) | Nucleic acids encoding for non-infectious, replication-defective, self-assembling HIV-1 viral particles containing antigenic markers in the gag coding region | |
US6544752B1 (en) | Anigenically-marked non-infectious retrovirus-like particles | |
EP0219106A2 (en) | Polypeptides that elicit antibodies against AIDS virus | |
WO1990003984A1 (en) | Hiv proteins and peptides useful in the diagnosis, prophylaxis or therapy of aids | |
NO870027L (no) | Ekspresjon av htlv-iii gag-gen. | |
US6518030B1 (en) | Antigentically-marked non-infectious retrovirus-like particles | |
CA2003383A1 (en) | Synthetic dna derived recombinant hiv antigens | |
EP0509006A1 (en) | Polypeptides selectively reactive with antibodies against human immunodeficiency virus and vaccines comprising the polypeptides | |
WO1991009872A1 (en) | Hiv-1 env fragment fusion protein | |
EP0306219A2 (en) | Novel HIV proteins and peptides useful in the diagnosis, prophylaxis or therapy of AIDS | |
Windheuser et al. | Characterization of immunoreactive epitopes of the HIV-1 p41 envelope protein using fusion proteins synthesized in Escherichia coli | |
PADBERG et al. | Recombinant polypeptides from the human immunodeficiency virus reverse transcriptase define three epitopes recognized by antibodies in sera from patients with acquired immunodeficiency syndrome | |
US5869233A (en) | Acquired immune deficiency syndrome (AIDS) viral envelope protein and method of testing for AIDS | |
KR910000748B1 (ko) | 사람 면역결핍증 바이러스의 gag-암호화된 단백질 | |
JPS63254983A (ja) | エイズの病原であるウイルスのp25蛋白質をコードするウイルスベクター及び組換DNA、感染された細胞培養物、得られる蛋白質、ワクチン及び得られる抗体 | |
Windheuser et al. | Use of trpE/gag fusion proteins to characterize immunoreactive domains on the human immunodeficiency virus type 1 core protein | |
Gairin et al. | Expression in yeast of a cDNA clone encoding a transmembrane glycoprotein gp41 fragment (aa 591–642) bearing the major immunodominant domain of human immunodeficiency virus | |
Mikhailov et al. | Antigenic determinants synthesized in a library of randomly cloned fragments of the HIV-1 genome | |
Sohn et al. | Overexpression and simple purification of human immunodeficiency virus-1 gag epitope derived from a recombinant antigen in E. coli and its use in ELISA | |
MORIMOTO et al. | Use of the recombinant chimera proteins, LacZ-Env and Gag-Env, for immunological studies on HIV-1 infection | |
EP0235923A1 (en) | Sor gene product from human t-cell lymphotropic virus III |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
B1 | Patent granted (law 1993) | ||
PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |