NL1027737C2 - Chromatografische analyse-inrichting en test kit. - Google Patents

Description

1 f

Titel: Chromatografische analyse-inrichting en test kit

De uitvinding heeft betrekking op een chromatografische analyse-inrichting voor de detectie van celcomponenten van in bloed van humane of dierlijke oorsprong circulerende cellen, in een monster van een dergelijke cellen bevattende lichaams-5 vloeistof, omvattende een stripvormig chromatografisch medium dat een monster-opbrengzone, een afzuigzone, en tenminste één detectiezone bezit, waarbij opbrengzone, afzuigzone en detectiezone(s) onderling steeds van elkaar zijn gescheiden door ten minste een scheidingszone.

10 Een dergelijke analyse-inrichting wordt toegepast voor de snelle diagnose of therapeutische controle van een aantal aandoeningen. Het chromatografische medium is daarbij meer in het bijzonder een zogenaamd dunne-laag systeem, waarbij een vloeistof die de te analyseren lichaamsvloeistof bevat, 15 tijdens het uitvoeren van de test, over het absorberende medium loopt.

In het geval van celcomponenten van erythrocyten vond de detectie gewoonlijk plaats op basis van agglutinatie. Een dergelijke bepaling bleek echter tamelijk onnauwkeurig vanwege 20 de in het erythrocyten bevattende monster aanwezige verontreinigingen. Aangezien voor een analyse gewoonlijk slechts een hoeveelheid van 3 - 5 μΐ van het te analyseren monster wordt toegepast, is een grote detectiegevoeligheid van de analyse-inrichting van groot belang. Daarnaast is er een ' 25 toenemende behoefte om, op eenvoudige wijze, direct, dat wil zeggen binnen enkele seconden, erythrocyten van humane of dierlijke oorsprong te kunnen detecteren, om aldus de bloedgroep te kunnen vaststellen. Een dergelijke bepaling is, vooral op humaan gebied, van belang bij bloedtransfusies. Op 30 veterinair gebied is het bepalen van de bloedgroep tevens van belang, zoals bijvoorbeeld bij katten, waar het het optreden van het "Feline Neonatale Erythrolyse Syndroom" (door de bepaling van de bloedgroepen van eventuele ouders) kan helpen voorkomen. Dit syndroom wordt namelijk veroorzaakt door niet- 1027737 I f 2 overeenkomende bloedgroepen bij katten, en heeft lysis van de rode bloedcellen van de kat direct na de geboorte tot gevolg. Overigens kan tijdens of na een bloedtransfusie een zogenaamde hemolytische transfusiereactie optreden, waarbij ook lysis van 5 de rode bloedcellen optreedt ten gevolge van incompatibele bloedgroepen.

Gevonden is nu een chromatografische analyse-inrichting voor de detectie van celcomponenten van in bloed circulerende cellen van humane of dierlijke oorsprong, die een snelle 10 detectie mogelijk maakt, en bovendien een grote gevoeligheid bezit.

Meer in het bijzonder is gevonden dat wanneer lysis van dergelijke cellen wordt voorkomen, dit een snelle en betrouwbare test mogelijk maakt.

15 De chromatografische analyse-inrichting van het in de aanhef genoemde type wordt derhalve hierdoor gekenmerkt dat de scheidingszone(s) is (zijn) voorzien van een lysis van celcomponenten van in bloed circulerende cellen verhinderend materiaal.

20 In een voorkeursuitvoeringsvorm bestaat het lysis van de celcomponenten verhinderende materiaal uit een dispergeer-middel, in het bijzonder een poloxameer.

Volgens een andere voorkeursuitvoeringsvorm bestaat het de lysis van celcomponenten verhinderende materiaal uit een 25 celcomponenten-aggregerend materiaal, in het bijzonder een koolhydraat, zoals bijvoorbeeld lactose.

Het met de onderhavige inrichting te analyseren testmonster is in het bijzonder volledig bloed, bij voorkeur erythrocyten. Het kan echter ook worden toegepast voor de 30 analyse van andere lichaamsvloeistoffen die bloedcellen bevatten of kunnen bevatten, zoals urine, cerebrospinale vloeistof e.d.

De uitvinding wordt hierna toegelicht met de detectie van celcomponenten van erythrocyten (=rode bloedcellen). De 35 uitvinding is daartoe echter niet beperkt. Ook andere cellen die in de circulatie terecht zijn gekomen, kunnen worden gedetecteerd. De selectie vindt ook dan plaats op basis van celoppervlaktemarkers, zoals bijvoorbeeld adhesiemoleculen (EP-CAM, N-CAM (=CD56), andere CD markers (I-CAM, PECAM, H- 1027737"" 3 CAM) , DAF, Fibronectinereceptor, Lamininereceptor, etc.), maar ook andere celoppervlakte moleculen zoals bijvoorbeeld mucines (MUC1, MUC2, MUC3, etc.), bepaalde CD markers, tumor markers (CEA, CA15.3, CA125, CA19.9, AFP, PSA, BRCA1, BRCA2, enz.), 5 groei- dan wel groeiremmingsfactorreceptoren (TGF, EGF, TNF, INF, FGF, "Insulin like growfactor", enz.), antilichamen (myelomas), MHC moleculen, bepaalde virale celoppervlakte-antigenen (Griepvirussen, SARS, HIV, HPV, EBV), specifieke glycosyleringspatronen (T, Tn, Sialyl-Tn, etc.),T- cel 10 receptors voorkomende en tot expressie komende op lymfoide cellen na infectie of contact met infectieuze organismen zoals virussen (SARS, HPV, EBV etc) of bacteriële organismen (TBC, Toxoplasma, E. cuniculi etc) of parasitaire organismen (Leismania, Schistosomia ,malaria etc), verder 15 intracellulaire elementen die bij beschadiging van de cel aantoonbaar worden zoals intermediaire filamenten (keratines, zoals bijvoorbeeld keratine 19), vimentine, desmine, neuro-filamenten, "glial fibrillaric acid") die, alle met behulp van monoclonale/polyclonale antistoffen, dan wel lectines, worden 20 geselecteerd en gedetecteerd.

Van belang in de onderhavige uitvinding is het derhalve dat de te detecteren cellen intact blijven tijdens de detectie zelf; alleen een oppervlakte-eigenschap van de cel wordt voor de detectie benut.

25 Erythrocyten of rode bloedcellen bezitten een buiten membraan dat koolhydraatgroepen bevat. Deze koolhydraten ofwel suikergroepen zijn specifiek voor de immunologische eigenschappen van de betreffende rode bloedcel, en vormen de basis van de indeling van rode bloedcellen binnen een bloed-30 groepensysteem.

Doordat de rode bloedcel gedurende de test intact wordt gelaten is het mogelijk om, door een geschikte keuze van reagentia in de detectiezone(s), binding van de diverse cel-componenten rechtstreeks zichtbaar te maken.

35 Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm is daartoe de detectiezone van de chromatografische analyse-inrichting volgens de uitvinding voorzien van een lectine of een anti-bloedcel antilichaam bevattend materiaal.

1027737 4

Dankzij het feit dat de erythrocyten intact worden gelaten, kunnen zij zelf als indicator worden gebruikt in de detectiezone.

Opgemerkt wordt dat lectines bestaan uit proteïnen die 5 specifiek en niet-covalent binden aan suikergroepen die aanwezig zijn op het oppervlak van bloedcellen.

Hoewel er veel verschillende soorten lectines bestaan, is het in de detectiezone van de onderhavige analyse-inrichting aanwezige lectine bij voorkeur bloedcelgroep specifiek.

10 Voorbeelden daarvan zijn concanavaline A, Helix aspersa lectine, Gambucus nigra lectine en Triticum vulgaris lectine.

Opgemerkt wordt dat het lectine of het anti-bloedcel antilichaam niet-covalent kan zijn gebonden aan het chromato-grafische medium, dan wel covalent daaraan kan zijn verknoopt.

15 Dergelijke procedures zijn in de techniek algemeen bekend.

Overigens kan het voor het chromatografische medium toegepaste materiaal bestaan uit een al dan niet geweven weefsel, papier, cellulose, glasvezel, polyester of een ander polymeermateriaal, of een combinatie daarvan.

20 Ter versterking van het detecterende vermogen van de detectiezone is deze zone bij voorkeur voorzien van een zout met een tweewaardig overgangsmetaal. Chloriden van calcium en mangaan bleken hiervoor uitstekende effecten te verschaffen, in het bijzonder in aanwezigheid van een lectine.

25 De uitvinding heeft voorts betrekking op een test kit, die een chromatografische inrichting zoals hierboven omschreven, een monsterhouder voorzien van een erythrocyten stabiliserende oplossing en desgewenst een houder met verdunningsvloeistof, omvat.

30 Voorkeursuitvoeringsvormen van de onderhavige test kit zijn weergegeven in de conclusies 9-14.

De uitvinding zal hierna nader worden toegelicht aan de hand van bijgaande tekening, waarin 35 figuur 1 schematisch de opbouw van een analyse-inrichting volgens de uitvinding toont, en figuur 2 schematisch een bovenaanzicht van een houder waarin een analyse-inrichting volgens de uitvinding is opgenomen, toont.

1027737 5

In figuur 1 is schematisch een chromatografische analyse-inrichting (1) voor de detectie van celcomponenten van erythrocyten van humane of dierlijke oorsprong weergegeven. De 5 detectie-inrichting (1) bestaat meer in het bijzonder uit een langwerpige vlakke strook (3) van materiaal dat geschikt is als medium voor dunne-laag chromatografie, zoals nitro-cellulose, cellulose-acetaat, nylon, rayon, polyester of papier, in het bijzonder een polyester. Om verlies van test-10 materiaal tijdens een test te voorkomen en ter ondersteuning, is de detectie-inrichting (1) bij voorkeur voorzien van een voor vloeistof ondoordringbare ruglaag (2) op de achterzijde van de inrichting. Deze ruglaag (2) kan bestaan uit bijvoorbeeld polystyreen met een lijmachtige tussenlaag.

15 De uiteinden van de strookvormige testinrichting (1) zijn voorzien van een opbrengzone (4) respectievelijk afzuigzone (5). Beide zones kunnen zijn gevormd uit elk absorberend materiaal, dat gewoonlijk voor dit doel wordt toegepast, zoals bijvoorbeeld filterpapier. De grootte en vorm van de zones 20 wordt gekozen, afhankelijk van het volume van de in de analyse toegepaste vloeistof.

Zoals bekend is, wordt in een chromatografische testinrichting, vloeistof door capillaire werking aangezogen. Voor het verkrijgen van een goed reproduceerbaar testresultaat is 25 het doelmatig gebleken om de opbrengzone (4) te voorzien van stromingsvertragende middelen, bijvoorbeeld in de vorm van kanalen die zich in hoofdzaak dwars op de langsrichting van de testinrichting (1) bevinden. Het materiaal van de opbrengzone (4) en afzuigzone (5) kan hetzelfde zijn als van strook (3).

30 Bij voorkeur bestaan opbrengzone en afzuigzone uit een verdikt gedeelte van strook (3); dit is echter niet vereist.

Opgemerkt wordt dat de testinrichting bijvoorbeeld een lengte van 3-8 cm, en een breedte van 2 - 8,5 mm kan bezitten; het zal echter duidelijk zijn dat andere afmetingen 35 eveneens kunnen worden toegepast.

Om met de testinrichting (1), celcomponenten van erythrocyten te kunnen detecteren is de inrichting voorzien van één of meer detectiezones (6, 7), die elk een voor een bepaalde celcomponent specifiek detectiemiddel bevatten. Dit detectie- 1U27737 6 middel is volgens op zichzelf bekende wij2e aangebracht, zoals door impregneren, drukken of vernevelen van een oplossing van het detectiemiddel in een geschikt oplosmiddel, zoals water, gevolgd door verwijdering van het oplosmiddel.

5 Het detectiemiddel voor de detectie van celcomponenten van erythrocyten is in het bijzonder een lectine of een anti-bloedcel antilichaam.

Lectines zijn proteïnen die worden geproduceerd door planten en enkele dieren, en binden specifiek en niet-covalent 10 aan suikergroepen, zoals die ook aanwezig zijn op het oppervlak van bloedcellen.

Het lectine is in het bijzonder, doch niet daartoe beperkt: concanavaline A, abrine, limuline, of één van de lectines die worden geproduceerd door Agaricus bisporus, 15 Anguilla anguilla, Arachis hypogaea, Bandeiraea simplicifolia, Bauhinia purpurea, Caragana arborescens, Cicer arietinum, Codium fragile, Datura stramoniuim, Dolichos biflorus, Erythrina corallodendron, Erythrina cristagalli, Euonymnus europaeus, Glycine max, Helix aspersa, Helix pomatia, Lathyrus 20 odoratus, Lens culinaris, Licopersicon esculentum, Maclura pomifera, Momordica charantia, Micoplasma gallisepticum, Naja mocambigue, Naja kaouthia, Perseun americana, Phaseolus coccineus, Phaseolus limesis, Phaseolus vulgaris, Phytolacca americana, Pisum sativum, Pseudomonas aeruginosa, Psophocarpus 25 tetragonolobus, Ptilota plumosa, Ricinus communis, Robinia pseudoacacia, Sambucus nigra, Solanum tuberosum, Sophora japonica, Tetragonolobus purpureas, Triticum vulgaris, Ulex europaeus, Vicia faba, Vicia sativa, Vicia villosa, Vigna radiata, Viscum album en Wis teria floribunda.

30 In het geval van de bloedgroepbepaling van katten wordt het lectine bij voorkeur gekozen uit concanavaline A, of het lectine dat wordt geproduceerd door Helix aspersa, Sambucus nigra, of Triticum vulgaris.

Wanneer het detectiemiddel een antilichaam is, dan kan 35 zowel een monoklonaal als polyklonaal antilichaam worden toegepast. De keuze van een bepaald antilichaam is de deskundige bekend en behoeft derhalve niet nader te worden toegelicht.

1027737 "I

7

Opgemerkt wordt dat de analyse-inrichting volgens de uitvinding bij voorkeur tevens is voorzien van een controle-detectiezone (niet weergegeven), die een combinatie van de detectiemiddelen van de diverse detectiezones bevat, of, bij 5 voorkeur een lectine of antilichaam dat bindt aan alle in de analyse-inrichting (1) te detecteren celcomponenten.

Bij voorkeur zijn de detectiezones (6, 7), bij toepassing van een lectine zoals bijvoorbeeld concanavaline A, tevens behandeld met een oplossing van één of meer zouten met één of 10 meer tweewaardige overgangsmetaalionen, in het bijzonder MgCl2, MnCl2 en/of CaCl2.

Alternatief kan de detectiezone zijn geïmpregneerd met een koolhydraat dat erythrocyten kan agglomereren. Een dergelijke koolhydraat is bijvoorbeeld mannitol, sorbitol, 15 glucose, lactose, maltose of saccharose. Bij voorkeur wordt lactose toegepast.

Omdat de bloedcellen zelf als indicator kunnen fungeren in de analyse-inrichting volgens de uitvinding, is een afzonderlijke indicator in de detectiezones en/of controlezone 20 niet vereist. Uiteraard kunnen afzonderlijke indicatoren, zoals indicatoren op basis van koolstof, goud of latex worden toegepast. Verwezen wordt daarvoor naar EP 0.032.270.

Om de hechting van het detectiemiddel, zoals een lectine of een antilichaam, aan het chromatografische materiaal van 25 laag (3) van de onderhavige analyse-inrichting te versterken, kan laag (3), voordat het detectiemiddel wordt aangebracht, ter plaatse van de detectie- en eventuele controlezone, zijn behandeld met een oplossing of suspensie van een bifunctioneel verknopingsmiddel, gevolgd door verwijdering van het oplos-30 middel volgens op zichzelf bekende wijze, onder achterlating van een film van een bifunctioneel verknopingsmiddel. Voorbeelden van geschikte bifunctionele verknopingsmiddelen zijn polyethyleenglycolen met een molecuulgewicht van 500- 20.000, en hetero bifunctionele verknopingsmiddelen zoals 35 glutaaraldehyde, MBS, of ETA dicarbodiimide.

De scheidingszones (8a, 8b en 8c) zijn voorzien van een lysis van erythrocyten verhinderend materiaal. Een dergelijk materiaal bestaat bij voorkeur uit een dispergeermiddel, in het bijzonder een poloxameer, zoals Pluronic (handelsmerk van 1027737 8 BASF), of een erythrocyten-aggregerend materiaal, zoals een koolhydraat, bij voorkeur een lactose.

In figuur 2 is een op zichzelf bekende, uit 2 klemmend op elkaar passende delen bestaande houder (9), schematisch in 5 bovenaanzicht, voor een chromatografische analyse-inrichting volgens de uitvinding, weergegeven. In deze houder bevindt zich de analyse-inrichting. De bovenzijde (10) van de houder (9) is voorzien van opening (11), waaronder zich de opbreng-zone (4) van de analyse-inrichting bevindt. Voorts is de 10 bovenzijde van houder (9) voorzien van een opening (12) die zodanige afmetingen bezit dat de aanwezige detectiezone(s) en eventuele controlezone zichtbaar kunnen worden. De niet van openingen voorziene achterzijde van houder (9) is aan de binnenzijde voorzien van middelen voor het positioneren van de 15 analyse-inrichting volgens de uitvinding (niet weergegeven). Bovenzijde en achterzijde van houder (9) zijn klemmend met elkaar verbonden.

De uitvinding wordt verder toegelicht aan de hand van het 20 volgende, niet-beperkende uitvoeringsvoorbeeld.

Een chromatografische analyse-inrichting volgens figuur 1, bestaande uit een polyesterlaag (3), en voorzien van een polystyreen ruglaag (2), met een lengte van ongeveer 6 cm, breedte van ongeveer 0,5 cm en dikte van ongeveer 0,1 cm, werd 25 op de van de ruglaag afgekeerde zijde, op de uiteinden voorzien van een monsteropbrengzone (4) respectievelijk afzuigzone (5). Als materiaal voor beide zones werd polyester of glasvezel toegepast, met dien verstande dat voor de monsteropbrengzone (4) de kanalen respectievelijk vezels van 30 het materiaal in hoofdzaak evenwijdig aan de korte zijden (13) van de inrichting (1) verlopen.

Om deze analyse-inrichting geschikt te maken voor de bepaling van 2 bloedgroepen werden detectiezones (6) en (7) elk voorzien van een voor een bloedgroep specifiek lectine, 35 bijvoorbeeld zone (6): concanavaline A, en zone (7): het door . Triticum vulgaris geproduceerde lectine, die specifiek zijn voor bloedgroep A respectievelijk bloedgroep B bij katten.

Vervolgens werden de scheidingszones (8a, 8b en 8c) behandeld met een blokbuffer, om deze zones te voorzien van 1027737η 9 een lysis van erythrocyten verhinderend materiaal, in het bijzonder, een poloxameer, zoals Pluronic. De blokbuffer bestond meer in het bijzonder uit een waterige oplossing met 0,3 - 9 gew.%, bij voorkeur 1 gew.%, Pluronic, en 0,1-5 gew.%, 5 bij voorkeur 0,5 gew.%, runder serum albumine. Na opbrengen van de blokbuffer-oplossing, bijvoorbeeld door vernevelen, werd de analyse-inrichting (1) gedroogd ter verkrijging van de voor gebruik gerede analyse-inrichting.

Voor het uitvoeren van de detectie werd bloed of een 10 bloed bevattende lichaamsvloeistof opgenomen in een waterige bufferoplossing, bestaande uit een antistollingsmiddel, zoals EDTA, bij voorkeur 5-15 gew.%, in het bijzonder ongeveer 11 gew.% van een 100 mM oplossing; een proteïne digererend enzym, bij voorkeur bromeline, in een concentratie van 0,01 - 9 15 gew.%, bij voorkeur 2 gew.%; Pluronic (BASF PE6400) als lysis verhinderend materiaal in een concentratie van 0,2-9 gew.%, bij voorkeur 0,3-5 gew.%, in het bijzonder 1-1,9 gew.%, meer bij voorkeur ongeveer 1,9 gew.%; alsmede ongeveer 0,01 M fosfaat gebufferde zoutoplossing ter verkrijging van een pH 20 van 5-9, bij voorkeur ongeveer 7,4.

Opgemerkt wordt dat in de praktijk bleek dat, omdat de onderhavige analyse is gebaseerd op de detectie van suikergroepen aan erythrocyten, bromeline een duidelijkere detectie mogelijk maakte, wellicht door het toegankelijk maken 25 van bepaalde suikergroepen die anders niet of onvolledig toegankelijk zijn.

Alternatief kan het bloedmonster worden opgenomen in een waterige bufferoplossing, bestaande uit een conserveringsmiddel (zoals natriumazide), α-lactose en natriumbifosfaat, 30 met een pH van 5-9, waarbij de concentratie a-lactose 0,3 -6%, bij voorkeur 2,5% bedraagt. Ter verbetering van het detecterende vermogen van de inrichting kan een combinatie van α-lactose en Pluronic worden toegepast, waarbij de totale concentratie van beide stoffen 0,3 - 6%, bij voorkeur 2,5% is. 35 De natriumazide concentratie is doelmatig ongeveer 0,005%.

Nadat een hoeveelheid bloedmonster bevattende, waterige bufferoplossing van ± 60 μΐ is aangebracht op de monster-opbrengzone (4) van de chromatografische analyse-inrichting volgens de uitvinding, eventueel gevolgd door 2x 60 μΐ 1027737 10 verdunningsbuffer (zoals hierna omschreven), zal de buffer-oplossing zich verspreiden over de diverse zones en worden aangezogen door afzuigzone (5). Bij aanwezigheid van bloedgroep A zal ter plaatse van detectiezone (6) een rode band 5 ontstaan, en bij aanwezigheid van bloedgroep B, zal bij detectiezone (7) een rode band ontstaan, vanwege het feit dat erythrocyten als indicator kunnen worden benut. Indien voor een ander detectiemiddel wordt gekozen zullen de kleuren van de banden hiervan kunnen afwijken.

10 Desgewenst kan een verdunningsbuffer worden toegepast, met dezelfde samenstelling als bovengenoemde waterige buffer-oplossing, doch uiteraard zonder een proteïne digererend enzyme.

Zoals hierboven is toegelicht kan de onderhavige 15 chromatografische analyse-inrichting worden toegepast voor de bloedgroepenbepaling op humaan en veterinair gebied. Afhankelijk van het aantal bloedgroepen, en de exacte bloedgroepen die men wenst te detecteren, zal het aantal detectie-zones van de analyse-inrichting overeenkomstig worden 20 aangepast, en elk worden voorzien van een voor een bloedgroep geschikt detectiemiddel. Een dergelijke wijziging van de inrichting ligt echter binnen het bereik van een deskundige en zal niet nader worden toegelicht.

t 1 U 2 7 7 3 7 ;l|l

Claims (14)

1. Chromatografische analyse-inrichting (1) voor de detectie van celcomponenten van in bloed van humane of dierlijke oorsprong circulerende cellen, in een monster van een dergelijke cellen bevattende lichaamsvloeistof, omvattende een 5 stripvormig chromatografisch medium (3) dat een monster-opbrengzone (4), een afzuigzone (5), en tenminste één detectiezone (6, 7) bezit, waarbij opbrengzone, afzuigzone en detectiezone(s) onderling steeds van elkaar zijn gescheiden door ten minste een scheidingszone (8a, 8b, 8c) waarbij de 10 scheidingszone(s) is (zijn) voorzien van een lysis van de circulerende cellen verhinderend materiaal.

2. Chromatografische analyse-inrichting volgens conclusie 1, waarbij het lysis van circulerende cellen verhinderend 15 materiaal een dispergeermiddel is, in het bijzonder een poloxameer.

3. Chromatografische analyse-inrichting volgens conclusie 1, waarbij het lysis van circulerende cellen verhinderend 20 materiaal bestaat uit een circulerende cellen-aggregerend materiaal, in het bijzonder een koolhydraat.

4. Chromatografische analyse-inrichting volgens conclusie 1, waarbij de in bloed circulerende cellen bestaan uit 25 erythrocyten.

5. Chromatografische analyse-inrichting volgens conclusies 1-4, waarbij de detectiezone (6, 7) is voorzien van een lectine of een anti-bloedcel antilichaam bevattend materiaal. 30

6. Chromatografische analyse-inrichting volgens conclusie 5, waarbij het lectine is gekozen uit concanavaline A, Helix aspersa lectine, Sambucus nigra lectine en Triticum vulgaris lectine, bij voorkeur concanavaline A of Triticum vulgaris 35 lectine. 1027737 *

7. Chromatografische analyse-inrichting volgens conclusies 5 of 6, waarbij de detectiezone (6, 7) voorts tenminste één tweewaardig overgangsmetaalzout bevat, in het bijzonder het chloride van calcium of mangaan. 5

8. Chromatografische analyse-inrichting volgens conclusies 5-7, waarbij tussen de lectine of anti-bloedcel antilichaam bevattende film en het chromatografische medium, een film van een bifunctioneel verknopingsmiddel aanwezig is, in het 10 bijzonder een polyethyleenglycol.

9. Test kit voor de detectie van celcomponenten van in bloed van humane of dierlijke oorsprong circulerende cellen, omvattende een chromatografische inrichting zoals omschreven 15 in één of meer der conclusies 1 tot 8, een monster-houder voorzien van een dergelijke cellen-stabiliserende oplossing en desgewenst een houder met verdunningsvloeistof.

10. Test kit volgens conclusie 9, waarbij de in bloed 20 circulerende cellen bestaan uit erythrocyten.

11. Test kit volgens conclusie 9 - 10, waarbij de verdunningsvloeistof en/of de erythrocyten-stabiliserende oplossing zijn voorzien van een lysis van erythrocyten verhinderend 25 materiaal.

12. Test kit volgens conclusie 9-11, waarbij het lysis van erythrocyten verhinderend materiaal bestaat uit een erythrocyten- aggregerend materiaal, zoals een koolhydraat, of een 30 dispergeermiddel, zoals een poloxameer.

13. Test kit volgens conclusies 9-12, waarbij de erythro-cyten-stabiliserende oplossing voorts een proteïne digererend 1027737 enzym bevat, bij voorkeur een neuromidase, in het bijzonder bromeline.

13. Test kit volgens conclusie 9-12, waarbij het lysis van erythrocyten verhinderend materiaal aanwezig is in een concentratie van 0,2 - 9 gew.%, bij voorkeur 0,3 - 5 gew.%, 35 meer in het bijzonder 1-1,9 gew.%.

14. Test kit volgens conclusies 9 -13, waarbij de erythro-5 cyten-stabiliserende oplossing voorts een conserveringsmiddel bevat, zoals natriumazide. 1027737