NL1017114C1 - Composition for treating collagenase-linked degenerative diseases, e.g. cancer, atherosclerosis, infections and other inflammatory disorders, comprises ascorbate and a fibrinolysis inhibitor - Google Patents

Abstract

Composition for treating collagenase-linked degenerative diseases comprises ascorbate, a fibrinolysis inhibitor and a carrier.

Description

!!

Synergetische samenstellingen die ascorbaat en lysine bevatten, voor toestanden die in verband staan met de degeneratie van de extracellulaire matrixSynergistic compositions containing ascorbate and lysine, for states associated with extracellular matrix degeneration

Uit onderzoeken van ovulatie in zoogdieren blijkt dat 5 gondadotropinen, prostaglandinen en bepaalde andere substanties de afgifte van plasminogeen acivator (PA) uit follikel-cellen die zijn ingebed in het stroma van het ovarium, stimuleren (Strickland, S., et al. (1976) J. Biol. Chem. 751: 5694-5702) (figuur 1) . PA stimuleert dan de extracellulaire 10 activering van plasminogeen tot piasmine. Het is bekend dat piasmine procollagenase tot collagenase activeert, dat daarna collageen degradeert.Studies of ovulation in mammals show that gondadotropins, prostaglandins and certain other substances stimulate the release of plasminogen activator (PA) from follicle cells embedded in the stroma of the ovary (Strickland, S., et al. (1976 J. Biol, Chem. 751: 5694-5702 (Figure 1). PA then stimulates the extracellular activation of plasminogen to plasmin. Plasmine procollagenase is known to activate collagenase, which then degrades collagen.

Een bijzondere rol in het regelen van dit mechanisme is voorgesteld voor lipoproteïne (a) (Lp(a)), een lagedichtheid 15 lipoproteïne-achtig deeltje dat een unieke glycoproteine draagt, dat apoproteïne (a) (apo(a)) wordt genoemd. Er wordt beweerd dat dit deeltje participeert in het helen van wonden en algemene cellenreparatie (Brown, M. et al.. (1987) Nature 330:113-114) . De cDNA-sequentie van apo(a) vertoont een 20 opvallende homologie met plasminogeen, met verscheidene herhalingen van kringle 4, één kringle 5, en een protease domein. De isovormen van apo(a) variëren binnen het bereik van 300 tot 800 kDa en verschillen hoofdzakelijk in hun genetisch bepaalde aantal kringle-4 structuren (McLean, J.W.A special role in controlling this mechanism has been proposed for lipoprotein (a) (Lp (a)), a low-density lipoprotein-like particle that carries a unique glycoprotein, which is called apoprotein (a) (apo (a)). It is claimed that this particle participates in wound healing and general cell repair (Brown, M. et al. (1987) Nature 330: 113-114). The cDNA sequence of apo (a) shows striking homology with plasminogen, with several repeats of kringle 4, one kringle 5, and a protease domain. The isoforms of apo (a) vary within the range of 300 to 800 kDa and differ primarily in their genetically determined number of kringle-4 structures (McLean, J.W.

25 et al. (1987) Nature 300:132-137). Terwijl apo(a) geen plasmine-achtige protease-activiteit bezit (Eaton, D.L., et al (1987) Proc. Natl . Acad. Sci. USA 84.:3224-3228), is wel serine protease-activiteit aangetoond (Salonen, E., et al (1989) EMBO J. 8^.4035-4040) .25 et al. (1987) Nature 300: 132-137). While apo (a) has no plasmin-like protease activity (Eaton, DL, et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84.:3224-3228), serine protease activity has been demonstrated (Salonen, E., et al (1989) EMBO J. 8 ^ .4035-4040).

30 Ondanks het ontbreken van functionele homologie ervan, is de grote structurele gelijkenis met plasminogeen beslissend in het begrijpen van de fysiologische en pathologische rol van Lp(a). Net als plasminogeen blijkt Lp(a) lysine- sefarose, geïmmobiliseerd fibrine en fibrinogeen, en de 1017114 2 plasminogeen receptor op endotheliale cellen te binden (Harpel, P.C. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 3847-3851; Gonzalez-Gronow, M. et al. (1989) Biochemistry 28j_23 74 - 2 3 77 Miles, L. et al. (1989) Nature 339:301-302 5 Hajjar, K.A., et al. (1989) Nature 339:303-305) . Verder is gebleken dat Lp(a) zich ook bindt met andere bestanddelen van de slagaderwand zoals fibronectine en glycosaminogly-cans. De precieze aard van deze bindingen is echter niet duidelijk. Lp(a) plasma-niveaus blijken hoger te zijn bij 10 kanker, atherosclerose en andere ziekten. Omgekeerd, worden lage niveaus ascorbaat geassocieerd met een hoge mate van het optreden van deze ziekten (Knox, E.A. (1973) Lancet, d.w.z. 1465-1467; Wright, L.C. et al. (1989) Int. J. Cancer 43.:241-244). Op basis van deze en andere waarnemingen werd 15 verondersteld dat Lp(a) een surrogaat voor ascorbaat is (Rath, M. & L. Pauling (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 6204-630-7) .................Despite its lack of functional homology, the great structural similarity with plasminogen is decisive in understanding the physiological and pathological role of Lp (a). Like plasminogen, Lp (a) lysine sepharose, immobilized fibrin and fibrinogen, and the 1017114 2 plasminogen receptor appear to bind to endothelial cells (Harpel, PC et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 3847 Gonzalez-Gronow, M. et al. (1989) Biochemistry 28, 23 74-2367 Miles, L. et al. (1989) Nature 339: 301-302 Hajjar, KA, et al. (1989) Nature 339: 303-305). It has further been found that Lp (a) also binds with other components of the artery wall such as fibronectin and glycosaminoglycans. However, the precise nature of these bonds is not clear. Lp (a) plasma levels appear to be higher in cancer, atherosclerosis and other diseases. Conversely, low levels of ascorbate are associated with a high rate of occurrence of these diseases (Knox, EA (1973) Lancet, ie 1465-1467; Wright, LC et al. (1989) Int. J. Cancer 43.:241- 244). Based on these and other observations, Lp (a) was believed to be a surrogate for ascorbate (Rath, M. & L. Pauling (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 6204-630-7). ................

Er bestaat behoefte aan een therapeutische samenstelling voor het reduceren van de degradatie van de extracellu-20 laire matrix, die in het bijzonder te wijten is aan de door respectievelijk piasmine en vrije radicalen geïnduceerde proteolyse en fibrinolyse. Van bijzondere waarde zou zijn een samenstelling die gelijktijdig de degradatie reduceert en zorgt voor verhoging van de collageensynthese, de belang-25 rijkste component van de extracellulaire matrix, en daardoor de proliferatie van ziekten helpt te voorkomen.There is a need for a therapeutic composition for reducing the degradation of the extracellular matrix, which is particularly due to the proteolysis and fibrinolysis induced by plasmin and free radicals, respectively. Of particular value would be a composition that simultaneously reduces degradation and increases collagen synthesis, the most important component of the extracellular matrix, and thereby helps prevent the proliferation of diseases.

Er is voorzien in een farmaceutische samenstelling voor het behandelen van degeneratieve ziekten waarvan de oorsprong ligt in de vernietiging van de extracellulaire ma-30 trix, omvattende het toedienen van een therapeutische samenstelling die ten minste één fybrinolyse-inhibitor bevat in een hoeveelheid die toereikend is voor het verlagen van door piasmine en vrije radicalen overgebrachte productie van collagenase, aan een persoon die de behandeling nodig heeft.A pharmaceutical composition is provided for treating degenerative diseases whose origin lies in the destruction of the extracellular matrix, comprising administering a therapeutic composition containing at least one phybrinolysis inhibitor in an amount sufficient for reducing the production of collagenase mediated by plasmin and free radicals to a person in need of treatment.

1017114 31017114 3

Een ander aspect van de uitvinding is een samenstelling die een activator bevat die geschikt is voor het verhogen van collageen synthese.Another aspect of the invention is a composition containing an activator suitable for enhancing collagen synthesis.

Een ander aspect van de uitvinding voorziet in een 5 samenstelling die ascorbaat bevat, en naar keuze een of meer antioxidanten. De term antioxidant als gehanteerd in de beschrijving en conclusies is bedoeld om ascorbaat uit te sluiten, dat zelf een krachtige antioxidant is.Another aspect of the invention provides a composition containing ascorbate, and optionally one or more antioxidants. The term antioxidant as used in the description and claims is intended to exclude ascorbate, which is itself a powerful antioxidant.

Ook verschaft als een aspect van de onderhavige uitvin-10 ding is een therapeutische samenstelling die ten minste één fibrinolyse inhibitor bevat, een collageen synthese activator, ascorbaat, en naar keuze een of meer antioxidanten, in hoeveelheden die toereikend zijn om de door piasmine en vrije radicalen overgebrachte productie van collagenase te 15 verlagen.Also provided as an aspect of the present invention is a therapeutic composition containing at least one fibrinolysis inhibitor, a collagen synthesis activator, ascorbate, and optionally one or more antioxidants, in amounts sufficient to inhibit piasmine and free to reduce radiated radiated collagenase production.

Deze en andere aspecten van de uitvinding zullen sneller duidelijk worden bij het bekijken van de volgende tekeningen en de uitvoerige beschrijving van uitvoeringsvormen van de uitvinding.These and other aspects of the invention will become clearer sooner when viewing the following drawings and the detailed description of embodiments of the invention.

20 Korte beschrijving van de tekeningenBrief description of the drawings

Figuur 1 is een routeschema van door piasmine geïnduceerde weefseldegradatie onder fysiologische omstandigheden die tot ovulatie leiden; figuur 2 is een routeschema van de fysiologie van de 25 genese van degeneratie van de extracellulaire matrix als een gevolg van de door vrije radicalen geïnduceerde proteolyse; figuur 3 is een routeschema dat de fysiologische rol van apo(a) in de gemeenschappelijke regeling van door piasmine en vrije radicalen geïnduceerde proteolyse; en 30 figuur 4 is een routeschema van het synergetische effect van ascorbaat en fibrinolyse inhibitoren in de therapie van door piasmine en vrije radicalen geïnduceerde proteolyse .Figure 1 is a route diagram of plasmin induced tissue degradation under physiological conditions leading to ovulation; Figure 2 is a physiology route diagram of the genesis of extracellular matrix degeneration as a result of free-radical induced proteolysis; Figure 3 is a route diagram showing the physiological role of apo (a) in the common control of plasmin and free radical-induced proteolysis; and Figure 4 is a route diagram of the synergistic effect of ascorbate and fibrinolysis inhibitors in the therapy of plasmin and free radical induced proteolysis.

1017114 41017114 4

Gedetailleerde beschrijving van de uitvinding De onderhavige uitvinding heeft betrekking op werkwijzen en samenstellingen die de degradatie van de extracellu-laire matrix vertragen of verhinderen, waardoor ze bruikbaar 5 blijken voor de behandeling van kanker, generatieve ziekten, infecties of andere ontstekingsziekten of pathologische toestanden die verband houden met de degradatie van de extracellulaire matrix. Een aantal ziekten blijkt te ontstaan of te verergeren als een gevolg van de degradatie van 10 de extracellulaire matrix. Kanker bijvoorbeeld wordt uiterst levensbedreigend nadat een afzonderlijke tumor is gemetasta-seerd, dat wil zeggen, nadat afzonderlijke cellen zijn losgekomen van de extracellulaire matrix en zijn weggevoerd naar andere gedeelten van het lichaam waar ze kunnen proli-15 fereren. Behalve kanker, hebben ook andere degeneratieve ziekten zoals voortgeschreden atherosclerose soortgelijke mechanismen waardoor de ziekte prolifereert. Zoals hierin gebruikt behelst de term "collagenase-gekoppelde degenera-tieve ziekten" degeneratieve ziekten, neoplastische ziekten, 20 infecties of andere ontstekingsziekten of pathologische toestanden die verband houden met de degradatie van de extracellulaire matrix. Zoals weergegeven in figuur 2, zijn twee fundamentele pathomechanismen door piasmine geïnduceerde en vrije radicalen geïnduceerde proteolyse, die synerge-25 tisch kunnen werken bij foudroyante progressie van de ziekte. In het bijzonder in het geval van kanker wordt de behandeling gericht op het verwijderen of doden van tumoren en wordt weinig aandacht besteed aan het verhinderen van de proliferatie of het vinden van andere methoden van tumorbe-30 dwinging dan chirurgie. Deze bedwinging kan worden gerealiseerd door substanties die deze pathomechanismen storen of blokkeren, zoals fibrinolyse-inhibitoren. In enkele gevallen is tranexaminezuur toegediend in een poging om de kanker-proliferatie te stoppen, met onovertuigende resultaten 35 (Marcus, G. (1984) Sem. Thromb. Hemost. 10:61-70).DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to methods and compositions that delay or prevent degradation of the extracellular matrix, making them useful for the treatment of cancer, generative diseases, infections or other inflammatory diseases or pathological conditions associated with the degradation of the extracellular matrix. A number of diseases appear to arise or worsen as a result of the degradation of the extracellular matrix. Cancer, for example, becomes extremely life-threatening after an individual tumor has been metastasized, that is, after individual cells have become detached from the extracellular matrix and have been transported to other parts of the body where they can proliferate. In addition to cancer, other degenerative diseases such as advanced atherosclerosis have similar mechanisms through which the disease proliferate. As used herein, the term "collagenase-linked degenerative diseases" includes degenerative diseases, neoplastic diseases, infections or other inflammatory diseases or pathological conditions associated with degradation of the extracellular matrix. As shown in Figure 2, two fundamental pathomechanisms are plasmin-induced and free radical-induced proteolysis, which can act synergistically in the event of severe disease progression. Particularly in the case of cancer, treatment is aimed at removing or killing tumors and little attention is paid to preventing proliferation or finding other methods of tumor constraint than surgery. This restraint can be achieved by substances that interfere with or block these pathomechanisms, such as fibrinolysis inhibitors. In some cases, tranexamic acid has been administered in an attempt to stop cancer proliferation, with inconclusive results (Marcus, G. (1984) Sem. Thromb. Hemost. 10: 61-70).

1017114 51017114 5

De onderhavige uitvinding is ten dele gebaseerd op de ontdekking dat door piasmine geïnduceerde proteolyse een fundamenteel fysiologisch kenmerk in mensen is dat verantwoordelijk is voor de regeling van veel verschillende, 5 schijnbaar niet-verwante fysiologische processen. In het bijzonder scheiden kankercellen en ook normale weefsels binnen het lichaam PA af dat piasmine activeert en daardoor resulteert in collageen-degradatie waarbij een degeneratie van de extracellulaire matrix bevorderlijk is voor het 10 afscheidingsweefsel. Bijvoorbeeld het stroma van de follikel van het menselijke ovarium moet degenereren teneinde het ovum af te geven in het voortplantingskanaal. Follikelcellen scheiden PA af dat plasminogeen activeert om piasmine te vormen. Piasmine bevordert de collagenase die dan de extra-15 cellulaire matrix van het stroma proteolyseert, waardoor de follikel het ovum kan uitrekken, scheuren en losmaken. Vele kankercellen produceren ook grote hoeveelheden PA die dan binnen dezelfde fysiologische weg werkt en uiteindelijk leidt tot de degeneratie van de collageen en de extracellu-20 laire matrix. Behalve in dit geval heeft degeneratie het schadelijke effect dat afzonderlijke cellen binnen een tumor zichzelf kunnen bevrijden zodat ze naar verre delen van het lichaam kunnen worden gevoerd. Het blijkt dat metastase in alle kankers in hoge mate afhankelijk is van de degradatie 25 van de extracellulaire matrix. Zoals uitvoeriger uiteengezet in US-octrooiaanvrage serienr. 07/533,129 is ook ontdekt dat bepaalde substanties met plasminogeen en Lp(a) wedijveren voor het binden van locaties op de endotheliale cellen van bloedvatwanden. Nu is ontdekt dat deze substanties, die 30 eerder Lp(a)-binding inhibitoren werden genoemd en hierin worden aangeduid als fybrinolyse inhibitoren, antagonistisch zijn tegen piasmine bij diens conversie van procollagenase naar collagenase. Bijgevolg wordt onthuld dat het toedienen van deze fibrinolyse inhibitoren, in het bijzonder in combi-35 natie met ascorbaat dat collageen synthese bevordert, de degradatie van de extracellulaire matrix die te wijten is <*017 114 6 aan een verhoogde activering van piasmine, kan voorkomen of ten minste kan vertragen.The present invention is based in part on the discovery that plasmin induced proteolysis is a fundamental physiological characteristic in humans that is responsible for the control of many different, apparently unrelated physiological processes. In particular, cancer cells and also normal tissues within the body secrete PA that activates plasmin and thereby results in collagen degradation in which a degeneration of the extracellular matrix is conducive to the secretory tissue. For example, the stroma of the human ovary follicle must degenerate to release the ovum into the reproductive tract. Follicle cells secrete PA that activates plasminogen to form plasmin. Plasmin promotes the collagenase which then proteolyses the extracellular matrix of the stroma, allowing the follicle to stretch, rupture, and release the ovum. Many cancer cells also produce large amounts of PA that then work within the same physiological pathway and ultimately lead to the degeneration of the collagen and the extracellular matrix. Except in this case, degeneration has the damaging effect that individual cells within a tumor can free themselves so that they can be transported to distant parts of the body. It appears that metastasis in all cancers is highly dependent on the degradation of the extracellular matrix. As more fully set forth in U.S. Patent Application Serial No. 07 / 533,129, it has also been discovered that certain substances compete with plasminogen and Lp (a) for binding sites on the endothelial cells of blood vessel walls. It has now been discovered that these substances, previously referred to as Lp (a) binding inhibitors and herein referred to as phybrinolysis inhibitors, are antagonistic to plasmin in its conversion of procollagenase to collagenase. Consequently, it is disclosed that the administration of these fibrinolysis inhibitors, especially in combination with ascorbate that promotes collagen synthesis, can prevent the degradation of the extracellular matrix due to increased activation of piasmine. or at least delay.

Het is de bedoeling dat de term fibrinolyse inhibitor in de beschrijving en conclusies alle substanties omvat die 5 fungeren als een antagonist tegen door piasmine geïnduceerde proteolytische activiteit, in het bijzonder door fibrinolyse geïnduceerde productie van collagenase. Sommige van deze verbindingen zijn in hoge doses in klinisch gebruik voor de behandeling van hyperfibrinolytische toestanden.The term fibrinolysis inhibitor is intended in the specification and claims to include all substances that act as an antagonist to plasmin-induced proteolytic activity, in particular fibrinolysis-induced production of collagenase. Some of these compounds are in high doses in clinical use for the treatment of hyperfibrinolytic conditions.

10 Bij het begin en de propagatie van de meeste pathologi sche toestanden spelen geactiveerde macrofagen een belangrijke rol. Wanneer ze zijn geactiveerd, scheiden deze cellen een verscheidenheid aan producten af, waaronder enzymen zoals procollagenasen. Zoals weergegeven in figuur 2 schei-15 den ze bovendien reactieve zuurstof-tussenproducten af, zoals superoxide, waterstofperoxide, en hydroxyl radicaal, hierna aangeduid als “vrije radicalen11. Nathan, d. (1587) J. Clin. Invest. 79:319-326. Zo wordt een ander mechanisme van ziekte proliferatie overgebracht door peroxyl vrije radica-20 len. Deze oxidatieve radicalen kunnen worden gegenereerd door geactiveerde macrofagen en andere cellen, in het bijzonder onder pathologische omstandigheden. Net als door piasmine geïnduceerde proteolyse induceren vrije radicalen de degradatie van de extracellulaire matrix en bevorderen 25 daardoor de progressie van de ziekte. Het is bekend dat vrije radicalen op verscheidene manieren proteolyse veroorzaken, waarvan een belangrijke manier de activering van procollagenase tot collagenase is. Ascorbaat is een krachtige antioxidant en is dus een belangrijk therapeutisch middel 30 voor het beperken van vrije radicalen proteolyse. Zoals weergegeven in figuur 4, suggereren de gunstige effecten van ascorbaat dat ascorbaat in combinatie met deze fibrinolyse inhibitoren een synergetisch effect heeft en geïnduceerd piasmine evenals door vrije radicalen veroorzaakte proteoly-35 se remt. Ascorbaat bevordert de productie van collageen (Murad, et al. 1981 Proc. Natl . Acad. Sci. USA 78:2879-Activated macrophages play an important role in the onset and propagation of most pathological states. When activated, these cells secrete a variety of products, including enzymes such as procollagenases. Moreover, as shown in Figure 2, they separated reactive oxygen intermediates, such as superoxide, hydrogen peroxide, and hydroxyl radical, hereinafter referred to as "free radicals". Nathan, d. (1587) J. Clin. Invest. 79: 319-326. Thus, another mechanism of disease proliferation is transmitted by peroxyl free radicals. These oxidative radicals can be generated by activated macrophages and other cells, in particular under pathological conditions. Just like plasmin induced proteolysis, free radicals induce the degradation of the extracellular matrix and thereby promote disease progression. Free radicals are known to cause proteolysis in various ways, one of which is the activation of procollagenase to collagenase. Ascorbate is a powerful antioxidant and is therefore an important therapeutic agent for limiting free radical proteolysis. As shown in Figure 4, the beneficial effects of ascorbate suggest that ascorbate in combination with these fibrinolysis inhibitors has a synergistic effect and inhibits induced plasmin as well as free radical induced proteolysis. Ascorbate promotes collagen production (Murad, et al. 1981 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 2879-

1017 1 H1017 1 H

7 2882), en stimuleert ook de productie van lymfocyten die van nut kunnen zijn bij het bestrijden van reeds gevormde kankercellen (Yonemoto, et. al. 1976 Proc. Amer. Assoc. Canc. Res. 17:288).7 2882), and also stimulates the production of lymphocytes that may be useful in combating cancer cells that have already been formed (Yonemoto, et. Al. 1976 Proc. Amer. Assoc. Canc. Res. 17: 288).

5 Fibrinolyse-inhibitoren remmen de oplossing van bloed- stolsels, en hebben dus een pro-coagulatieve werking. Deze eigenschappen hebben tot dusver de toepassing van deze middelen bij het behandelen van kanker en andere ziekten beperkt of voorkomen, aangezien het bekend is dat neoplasmen 10 herhaaldelijk worden geassocieerd met thrombo-embolische complicaties. Van ascorbaat is bekend dat het anti-coagula-tieve eigenschappen heeft door het stimuleren van bijvoorbeeld prostracycline en het remmen van thromboxaanvorming.Fibrinolysis inhibitors inhibit the solution of blood clots, and thus have a pro-coagulative effect. These properties have hitherto limited or prevented the use of these agents in treating cancer and other diseases, since it is known that neoplasms are repeatedly associated with thromboembolic complications. Ascorbate is known to have anti-coagulative properties by stimulating, for example, prostracycline and inhibiting thromboxane formation.

Zo zou het aspect van de uitvinding waarbij fibrinolyse 15 inhibitoren worden gecombineerd met ascorbaat het gebruik van deze therapie aanzienlijk doen toenemen, door het opheffen van de ongewenste neveneffecten van een monotherapie. De onderhavige uitvinding voorziet in werkwijzen en samenstellingen voor zowel het behandelen als voorkomen van ziekten 20 die samenhangen met de degradatie van de extracellulaire matrix. Elk van deze uitvoeringsvormen wordt hieronder besproken.For example, the aspect of the invention where fibrinolysis inhibitors are combined with ascorbate would significantly increase the use of this therapy by eliminating the undesirable side effects of monotherapy. The present invention provides methods and compositions for both treating and preventing diseases associated with degradation of the extracellular matrix. Each of these embodiments is discussed below.

Algemene toepassingenGeneral applications

De onderhavige uitvinding voorziet in een werkwijze en 25 samenstelling voor het behandelen en voorkomen van colla-geen-gekoppelde degeneratieve ziekten zoals kanker en vele andere, door aan een persoon een effectieve hoeveelheid van ten minste één fibrinolyse-inhibitor toe te dienen welke de door piasmine en vrije radicalen overgebrachte conversie van 30 procollagenase naar collagenase remt. Op deze wijze wordt de vernietiging van de extracellulaire matrix, die overwegend uit collageen gevormd is, gereduceerd of geëlimineerd. Geprefereerde fibrinolyse-inhibitoren zijn, maar zijn niet beperkt tot, e-aminocaprolnezuur (EACA), lysine, tranexami- 1017114 8 nezuur (4-aminomethylcyclohexaan carboxylzuur), p-aminome-thylbenzoïnezuur (PAMBA), p-benzylamine zwavelzuur, u-N-acetyllysine methylester, cis/trans-4-aminomethylcyclohexaan carboxylzuur- (1) (AMCHA), trans-4-aminomethylcyclohexaan 5 carboxylzuur (AMCA), en 4-aminomethyl-bicyclo-2, 2,2-octaan carboxylzuur (AMBOCA). Een effectieve hoeveelheid van een fibrinolyse-inhibitor of een mengsel van een of meer fibri-nolyse inhibitoren kan ook worden gebruikt. Door een combinatie van twee of meer fibrinolyse-inhibitoren zou men dus 10 de therapeutische werking potentieel kunnen verhogen, terwijl de giftigheid wordt verlaagd omdat de fibrinolytische substanties verschillende katabolische wegen kunnen hebben. Daarbij kunnen de onderhavige werkwijze en samenstelling ascorbaat in combinatie met de fibrinolyse inhibitoren 15 bevatten. Zoals hierin gebruikt omvat de term "ascorbaat" elk farmaceutisch acceptabel zout van ascorbaat, waaronder natrium.....ascorbaat, even a Is., ascorb Inez uur zelf.. Andere., bij... de behandeling van cardiovasculaire ziekte gebruikte substanties kunnen ook gelijk ermee worden toegediend, waaronder 20 antioxidanten, zoals tocoferol, caroteen, selenium, N-ace-tylcysteïne, probucol en verwante substanties; vitaminen, provitaminen; en sporenelementen. Ofschoon ascorbaat op zichzelf kan worden gebruikt vanwege de stimulerende effecten ervan op collageen synthese, wordt het geprefereerd om 25 bij het behandelen van een reeds bestaande degeneratieve ziekte ascorbaat te combineren met ten minste een van de fibrinolyse-inhibitoren en een van de antioxidanten in de doseringen (per kilogram lichaamsgewicht per dat (/kg BW/d) die zijn verschaft in Tabel 2. Er moet worden opgemerkt dat 30 Tabel 2 verschillende concentratie-bereiken van elk bestanddeel verschaft, afhankelijk van het feit of de samenstelling oraal of parenteraal moet worden toegediend. De variatie in doseringen weerspiegelt de variatie in ernstigheid van de ziekte. Men zal daarom begrijpen dat wanneer de persoon is 35 gediagnosticeerd op gevorderde stadia van een specifieke degeneratieve ziekte, doseringen aan het hogere einde van 1017114 9 dit bereik zouden kunnen worden gebruikt. Wanneer echter het voorkomen van collageen degradatie gewenst is voor het begin van ernstige symptomen, kunnen doseringen aan het lage einde van dit bereik worden gebruikt.The present invention provides a method and composition for treating and preventing collagen-linked degenerative diseases such as cancer and many others by administering to an individual an effective amount of at least one fibrinolysis inhibitor which is mediated by plasmin and inhibits free radical transferred conversion of procollagenase to collagenase. In this way, the destruction of the extracellular matrix, which is predominantly formed from collagen, is reduced or eliminated. Preferred fibrinolysis inhibitors include, but are not limited to, α-aminocaprolic acid (EACA), lysine, tranexamic acid (4-aminomethylcyclohexanecarboxylic acid), p-aminomethyl-benzoic acid (PAMBA), p-benzylamine, sulfuric acid, methyl ester, cis / trans-4-aminomethylcyclohexane carboxylic acid (1) (AMCHA), trans-4-aminomethylcyclohexane carboxylic acid (AMCA), and 4-aminomethyl-bicyclo-2, 2,2-octane carboxylic acid (AMBOCA). An effective amount of a fibrinolysis inhibitor or a mixture of one or more fibrosolysis inhibitors can also be used. Thus, a combination of two or more fibrinolysis inhibitors could potentially increase therapeutic efficacy while reducing toxicity because the fibrinolytic substances may have different catabolic pathways. In addition, the present method and composition may contain ascorbate in combination with the fibrinolysis inhibitors. As used herein, the term "ascorbate" includes any pharmaceutically acceptable salt of ascorbate, including sodium ... ascorbate, even a Is., Ascorb Inez hour itself .. Other., Substances used in the treatment of cardiovascular disease can also be administered directly with it, including antioxidants such as tocopherol, carotene, selenium, N-acetylcysteine, probucol and related substances; vitamins, provitamins; and trace elements. Although ascorbate can be used on its own because of its stimulating effects on collagen synthesis, it is preferred to combine ascorbate with at least one of the fibrinolysis inhibitors and one of the antioxidants in the dosages in the treatment of pre-existing degenerative disease. (per kilogram body weight per that (/ kg BW / d) provided in Table 2. It should be noted that Table 2 provides different concentration ranges of each component depending on whether the composition is to be administered orally or parenterally The variation in dosages reflects the variation in severity of the disease, and it will therefore be understood that when the person is diagnosed at advanced stages of a specific degenerative disease, doses at the higher end of 1017114 9 this range could be used. However, the prevention of collagen degradation is desirable before the onset of severe sym At the low end of this range, doses may be used.

5 Als een alternatief kan gebruik worden gemaakt van een farmaceutische samenstelling die identiek is aan die welke zojuist beschreven is, waaruit ascorbaat is weggelaten. Wanneer ascorbaat en fibrinolyse-inhibitoren in dezelfde samenstelling worden gebruikt, kunnen ze eenvoudig vermengd 10 of chemisch gecombineerd worden onder gebruikmaking van synthesemethodes die in de techniek bekend zijn, zoals verbindingen waarin ascorbaat en de inhibitor covalent gebonden zijn, of ionisch-gebonden zouten vormen. Ascorbaat kan bijvoorbeeld covalent gebonden worden aan lysine, andere 15 aminozuren, of e-aminocaproïnezuur door esterbindingen. Ascorbyl e-aminocaproaat of ascorbyl-aminomethylcyclohexaan carboxyl zuur zijn zulke voorbeelden. In deze vorm kan het ascorbaat-deel ook bijzonder effectief zijn bij het voorkomen van ongewenste lipiden-peroxidatie.As an alternative, use can be made of a pharmaceutical composition identical to that just described, from which ascorbate has been omitted. When ascorbate and fibrinolysis inhibitors are used in the same composition, they can easily be mixed or chemically combined using synthesis methods known in the art, such as compounds in which ascorbate and the inhibitor are covalently bonded, or form ionically bound salts. For example, ascorbate can be covalently bound to lysine, other amino acids, or ε-amino caproic acid through ester bonds. Ascorbyl ε-amino caproate or ascorbyl-aminomethylcyclohexane carboxylic acid are such examples. In this form, the ascorbate moiety can also be particularly effective in preventing unwanted lipid peroxidation.

20 Ascorbaat- en fibrinolyse-inhibitoren alleen of in een willekeurige combinatie kunnen samen gebruikt worden met andere middelen die worden gebruikt bij de chemotherapeuti-sche behandeling van kanker. Deze middelen zijn, maar zijn niet beperkt tot, verbindingen uit de groepen van antibioti-25 sche derivaten, anti-estrogenen, antimetabolica, hormonen, cytotoxische middelen, stikstof-mosterd derivaten of steroï-den, en combinaties ervan. In geval van orale toediening kan een farmaceutisch werkzame en anders inerte drager worden gebruikt. Bij orale toediening kunnen de actieve ingredi-30 enten dus worden toegediend in tabletvorm. Het tablet kan een bindmiddel bevatten zoals tragacanth, maïszetmeel, of gelatine; een afbreekmiddel, zoals een alginezuur, en/of een smeermiddel zoals magnesium stearaat. Wanneer toediening in vloeibare vorm gewenst is, kunnen zoet- en/of smaakmiddelen 35 worden gebruikt. Wanneer toediening plaatsvindt door paren-terale injectie, in isotonisch zout, kan een fosfaat-gebuf- 1017114 10 ferde oplossing of iets dergelijks worden gebruikt als farmaceutisch acceptabele drager.Ascorbate and fibrinolysis inhibitors alone or in any combination can be used in conjunction with other agents used in the chemotherapeutic treatment of cancer. These agents are, but are not limited to, compounds from the groups of antibiotic derivatives, anti-estrogens, antimetabolics, hormones, cytotoxic agents, nitrogen mustard derivatives or steroids, and combinations thereof. In the case of oral administration, a pharmaceutically active and otherwise inert carrier can be used. Thus, with oral administration, the active ingredients can be administered in tablet form. The tablet may contain a binder such as tragacanth, corn starch, or gelatin; a breakdown agent such as an alginic acid, and / or a lubricant such as magnesium stearate. When administration in liquid form is desired, sweetening and / or flavoring agents may be used. When administration is by parenteral injection, in isotonic salt, a phosphate buffered solution or the like can be used as a pharmaceutically acceptable carrier.

Verder kunnen het aminozuur proline, prolinezouten of synthetische proline analogons worden gebruikt bij het 5 voorkomen en het behandelen van de in dit octrooischrift beschreven pathologische toestanden.Furthermore, the amino acid proline, proline salts or synthetic proline analogs can be used in the prevention and treatment of the pathological conditions described in this patent.

Naast zijn rol als een inhibitor van LP (a)-bindend proline, is het ook nodig als een aminozuur-component voor proteïnensynthese. Collageen en andere extracellulaire 10 matrix proteïnen zijn bijzonder rijk aan lysine- en proline-residu's, die ongeveer 25% van de totale massa collageen uitmaken.In addition to its role as an inhibitor of LP (a) -binding proline, it is also needed as an amino acid component for protein synthesis. Collagen and other extracellular matrix proteins are particularly rich in lysine and proline residues, which make up about 25% of the total mass of collagen.

Terwijl proline - in tegenstelling tot lysine - in het lichaam kan worden gesynthetiseerd, is de synthese - snelheid 15 van dit aminozuur in het bijzonder bij chronische ziekten suboptimaal. Bij deze pathologische toestanden waarbij sprake is van een overmaat aan eollageen degradatie die -......- maanden of zelfs jaren duurt, wordt de synthese van collageen en andere extracellulaire matrix moleculen, en de 20 toereikende beschikbaarheid van proline een kritische factor, waardoor een optimale productie van nieuw collageen ontstaat, en daardoor de progressie van ziekten in bedwang wordt gehouden.While proline - as opposed to lysine - can be synthesized in the body, the synthesis rate of this amino acid, particularly in chronic diseases, is suboptimal. In these pathological states where there is an excess of eollagen degradation that lasts for months or even years, the synthesis of collagen and other extracellular matrix molecules, and the adequate availability of proline becomes a critical factor, thereby creating an optimal production of new collagen, and thereby controlling the progression of diseases.

Daarom is het essentieel dat in het lichaam een adequate 25 hoeveelheid proline, prolinezouten en proline-analogons beschikbaar is.It is therefore essential that an adequate amount of proline, proline salts and proline analogs is available in the body.

De raadzaamheid van het gebruik van fibrinolyse-inhibi-toren bij het behandelen van kanker, angiohematoom en andere dergelijke ziekten zal tot op zekere hoogte afhangen van de 3 0 algemene gezondheid van de persoon, in het bijzonder met betrekking tot hyperfibrinolytische toestanden. De meeste fibrinolyse-inhibitoren (behalve lysine) worden klinisch gebruikt om zulke toestanden te behandelen. Daardoor wordt het controleren van de coagulatie- en fibrinolytische sys-35 teem van de persoon aanbevolen voor en tijdens de behandeling. Er moet echter worden opgemerkt dat hemostatisch 10 17 114 11 complicaties onwaarschijnlijk zijn, aangezien deze fibrino-lyse-inhibitoren algemene protease-inhibitoren zijn die ook de coagulatie blijken te remmen. Aoki, N. et al. (1978) Blood 52:1-12. Langdurige toediening van fibrinolyse-inhibi-5 toren zal formulaties vereisen waarbij de doseringen van de fibrinolyse-inhibitoren zich in het benedenliggende bereik van de in Tabel 2 gegeven doseringen bevinden. Zoals hierboven vermeld, is bekend dat ascorbaat prostaglandine- en prostacycline-synthese stimuleert en thromboxaan-niveaus 10 verlaagt, waardoor een anti-aggregaateffeet wordt uitgeoefend. Deze eigenschappen kunnen bijzonder wenselijk zijn in combinatie met het gebruik van fibrinolytische inhibitoren om potentiële coagulatieve neveneffecten tegen te werken.The advisability of using fibrinolysis inhibitors in the treatment of cancer, angihematoma and other such diseases will depend to a certain extent on the general health of the person, in particular with regard to hyperfibrinolytic conditions. Most fibrinolysis inhibitors (except lysine) are used clinically to treat such states. Therefore, monitoring the coagulation and fibrinolytic system of the person is recommended before and during treatment. It should be noted, however, that hemostatic complications are unlikely, since these fibrinysis inhibitors are general protease inhibitors that also appear to inhibit coagulation. Aoki, N. et al. (1978) Blood 52: 1-12. Prolonged administration of fibrinolysis inhibitors will require formulations wherein the doses of the fibrinolysis inhibitors are in the lower range of the dosages given in Table 2. As mentioned above, ascorbate is known to stimulate prostaglandin and prostacyclin synthesis and reduce thromboxane levels, thereby exerting an anti-aggregate effect. These properties may be particularly desirable in combination with the use of fibrinolytic inhibitors to counteract potential coagulative side effects.

Het hierboven beschreven ascorbaat en de fibrinolyse-15 inhibitoren kunnen afzonderlijk worden toegediend. Een verdere optimalisering van de therapeutische werking kan worden verkregen door gebruik te maken van een samenstelling met geleidelijke afgifte om over een periode relatief constante serumconcentraties van het middel te krijgen.The ascorbate described above and the fibrinolysis inhibitors can be administered separately. A further optimization of the therapeutic effect can be achieved by using a gradual release composition to achieve relatively constant serum concentrations of the agent over a period of time.

20 Tabel 2Table 2

Doseringen van bestanddelen in de Samenstellingen van de onderhavige uitvinding 0rale Parenterale toediening toediening 25 Ascorbaat: 5-500 mg/kg BW/d 25-2500 mg/kg EACA 1-1500 mg/kg BW/d zelfde tranexaminezuur 1-500 mg/kg BW/d zelfde para-aminomethyl benzoïnezuur 1-500 mg/kg BW/d zelfde 30 lysine 1-1500 mg/kg BW/d zelfde proline 1-1500 mg/kg BW/d zelfde 1017114 12Dosages of Components in the Compositions of the Present Invention Central Parenteral Administration Administration Ascorbate: 5-500 mg / kg BW / d 25-2500 mg / kg EACA 1-1500 mg / kg BW / d same tranexamic acid 1-500 mg / kg BW / d same para-aminomethyl benzoic acid 1-500 mg / kg BW / d same 30 lysine 1-1500 mg / kg BW / d same proline 1-1500 mg / kg BW / d same 1017114 12

Antioxidanten: tocoferol 0,1-500 IU/kg BW/d zelfde caroteen 0,1-10.1000 IU/kg BW/d zelfde N-acetyl cysteine 0,1-5000 mg/kg BW/d zelfde 5 Als we kijken naar figuur 3, is een ander aspect van de uitvinding de ontdekking dat Lp(a) een co-regelaar van door piasmine geïnduceerde proteolyse is die kritisch betrokken is bij weefseltransforraatie en weefselreparatie. Door de homologie ervan met plasminogeen en piasmine, is het een 10 fysiologisch concurrerende inhibitor van door piasmine veroorzaakte proteolyse. Bovendien heeft apoproteïne (a) meer dan 100 sulfidebindingen en fungeert daardoor als een antioxidant zoals andere proteïne-thiolen.Antioxidants: tocopherol 0.1-500 IU / kg BW / d same carotene 0.1-10.1000 IU / kg BW / d same N-acetyl cysteine 0.1-5000 mg / kg BW / d same 5 If we look at figure 3, another aspect of the invention is the discovery that Lp (a) is a co-regulator of plasmin-induced proteolysis that is critically involved in tissue transformation and repair. Due to its homology with plasminogen and plasmin, it is a physiologically competitive inhibitor of plasmin-mediated proteolysis. In addition, apoprotein (a) has more than 100 sulfide bonds and therefore acts as an antioxidant such as other protein thiols.

Alle in dit stuk geciteerde publicaties en octrooiaan-15 vragen zijn hierin opgenomen door verwijzing alsof elke afzonderlijke publicatie of octrooiaanvrage specifiek en afzonderlijk zou zijn aangegeven om door verwijzing te worden opgenomen. Het is nu duidelijk dat de samenstellingen en therapeutische werkwijzen volgens de onderhavige uitvin-20 ding voor het voorkomen en behandelen van pathologische toestanden die verband houden met degeneratie van de extra-cellulaire matrix opmerkelijke verbeteringen boven bekende werkwijzen vertonen en dat men moet begrijpen dat hoewel bepaalde voorkeuruitvoeringsvormen hierboven zijn onthuld, 25 weergegeven en beschreven, ook andere uitvoeringsvormen mogelijk zijn zonder af te wijken van hetgeen de hierin beschreven uitvinding vormt. Het is daarom de bedoeling dat de uitvinding wordt gedefinieerd door de conclusies die zullen volgen, evenals de equivalenten ervan.All publications and patent applications cited herein are incorporated herein by reference as if each individual publication or patent application were specifically and individually indicated to be incorporated by reference. It is now clear that the compositions and therapeutic methods of the present invention for the prevention and treatment of pathological conditions associated with degeneration of the extracellular matrix show remarkable improvements over known methods and that it is to be understood that although certain preferred embodiments above have been disclosed, shown and described, other embodiments are possible without departing from what constitutes the invention described herein. It is therefore intended that the invention be defined by the claims that will follow, as well as its equivalents.

30 - conclusies - 101711430 - claims - 1017114

Claims (7)

1. Farmaceutische samenstelling bestaande uit ascor-baat, ten minste een fibrinolyse-inhibitor en een farmaceutisch acceptabele drager, waarbij ascorbaat en fibrinolyse 5 collagenase inhibitor aanwezig zijn in hoeveelheden die toereikend zijn voor het behandelen van collagenase-gebonden degeneratieve ziekten.A pharmaceutical composition consisting of ascorbate, at least one fibrinolysis inhibitor and a pharmaceutically acceptable carrier, wherein ascorbate and fibrinolysis collagenase inhibitor are present in amounts sufficient to treat collagenase-linked degenerative diseases. 2. Samenstelling volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het ascorbaat is gekozen uit de groep die bestaat uit 10 farmaceutisch acceptabel ascorbaatzouten, ascorbinezuur en mengsels daarvan.2. A composition according to claim 1, characterized in that the ascorbate is selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable ascorbate salts, ascorbic acid and mixtures thereof. 3. Samenstelling volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de fibrinolyse-inhibitor ten minste een orgaan is dat is gekozen uit de groep die bestaat uit lysine, of een samen- 15 stelling die is gekozen uit lysinezouten of synthetische analogons ervan waaronder ë-aminocaproïnezuur, tranexamine-zuur, p-aminomethyl benzoïnezuur, p-benzylamine zwavelzuur, α-Ν-acetyl lysine methylester, cis/trans-4-aminomethylcyclo-hexaan carboxylzuur- (1) , trans-4-aminomethylcyclohexaan 20 carboxylzuur, en 4-aminomethyl-bicyclo-2, 2,2-octaan carboxylzuur .3. A composition according to claim 1, characterized in that the fibrinolysis inhibitor is at least one organ selected from the group consisting of lysine, or a composition selected from lysine salts or synthetic analogs thereof including β- amino caproic acid, tranexamic acid, p-aminomethyl benzoic acid, p-benzylamine sulfuric acid, α-Ν-acetyl lysine methyl ester, cis / trans-4-aminomethylcyclohexane carboxylic acid (1), trans-4-aminomethylcyclohexane 20 carboxylic acid, and 4- aminomethyl-bicyclo-2, 2,2-octane carboxylic acid. 4. Samenstelling volgens de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat ten minste één orgaan is gekozen uit de groep proline of farmaceutisch acceptabele zouten ervan of 25 synthetische proline-analogons.4. Composition according to the preceding claims, characterized in that at least one organ is selected from the group consisting of proline or pharmaceutically acceptable salts thereof or synthetic proline analogs. 5. Samenstelling volgens de voorgaande conclusies, die verder ten minste een antioxidant bevat.The composition of the preceding claims, further comprising at least one antioxidant. 6. Samenstelling volgens de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de antioxidant ten minste een orgaan is dat 1017114 is gekozen uit de groep die bestaat uit tocoferol, caroteen, selenium, N-acetylcysteïne, probucol en mengsels ervan.Composition according to the preceding claims, characterized in that the antioxidant is at least one organ selected from the group consisting of tocopherol, carotene, selenium, N-acetylcysteine, probucol and mixtures thereof. 7. Samenstelling volgens de voorgaande conclusies, die werkzame ingrediënten voor het voorkomen en behandelen van 5 met collageen-verbonden degeneratieve ziekten, welke ingrediënten zijn gekozen uit de groep die bestaat uit vitaminen, provitaminnen en sporenelementen. 10171147. A composition according to the preceding claims, comprising active ingredients for the prevention and treatment of collagen-linked degenerative diseases, which ingredients are selected from the group consisting of vitamins, provitamins and trace elements. 1017114