MXPA97008611A - Compuestos de dialquiltiacumicina - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos que tienen la fórmula (I) asícomo composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos y métodos para el tratamiento de infección causada por bacterias y colitis, a través de la administración de los mismos.

Description

COMPUESTOS DE DIALQUILTIACUMICINA CAMPO TÉCNICO La presente se refiere a compuestos antibióticos alquilados derivados de antibióticos de tiacumicina y a métodos para la preparación de dichos compuestos, así como composiciones farmacéuticas que contiene tales compuestos y su uso para tratar infecciones.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Ciertos antibióticos que son activos contra una amplia escala de bacterias Gram-positivas y otras bacterias se sabe que son producidos por especies de microorganismos aislados de muestras de tierra a través del mundo. Sin embargo, exista una necesidad creciente para nuevos agentes antimicrobianos, los cuales muestran actividad mejorada , tienen espectro de eficacia mejorado o específico, y/o exhiben propiedades farmacocinéticas más deseables cuando se administran a un paciente. Una venida de búsqueda ha implicado la derivatización de antibióticos en un esfuerzo para mejorar sus propiedades antimicrobianas . En el caso de colitis asociada con antibacterianos u otros nosocómicos, existe la necesidad particular para agentes antimicrobianos que ofrezcan una mejora a un régimen de cura a largo plazo, es decir los cuales reduzcan la incidencia de recaída por lo general vista con fármacos comúnmente utilizados tales como vancomicina o metronidazol. La colitis asociada con antibióticos, que puede surgir cuando la flora gastrointestinal normal ha sido suprimida por terapia antibiótica, por lo general es causada por el organismo Clostridium difficile. Por lo tanto, es un objeto de la presente invención proveer agentes antimicrobianos, los cuales sean particularmente activos contra Clostridium, mientras que siga permitiendo el re-establecimiento de parte o de toda la flora normal .

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN Ahora se ha considerado que los agentes antimicrobianos novedosos pueden ser obtenidos mediante modificación química de tiacumicinas, las cuales son antibióticos aislados del caldo de fermentación y micelio de Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis subsp. nov. Los antibióticos de tiacumicina se describen el la patente de E. U .A. No . 4, 918, 174 (expedida el 17 de Abril de 199 e incorporada aquí por referencia), y comprenden los compuestos tiacumicina A, tiacumicina B, tiacumicina C, tiacumicina D, tiacumicina E y tiacumicina F. Los compuestos de la presente invención , los cuales son derivados de las tiacumicinas anteriores,, se encuentra que tienen , in vitro, actividad contra una variedad de patógenos bacterianos y en particular contra Clostridium, cuando se evalúan en un análisis utilizando agar de Wiikins-Chalgren en condiciones anaeróbicas. Por lo tanto, se espera que estos compuestos serán útiles en el tratamiento de infecciones bacterianas en mamíferos, y en particular en el tratamiento de ciertos casos de colitis. Por consiguiente, en un aspecto de la presente invención, se describen compuestos que tienen la fórmula, así como sus profármacos farmacéuticamente aceptables, en donde R es un substituyente de la fórmula: en donde R . 31 R32 y R33 se seleccionan independientemente de hidrógeno y de alcanoi lo de Ci a C4 R1 es hidrógeno o hidroxi ; y R2 es hidrógeno o un substituyente de la fórmula: en donde uno de R41 y R42 es hidrógeno y el otro es un radical de la fórmula: 9™ en donde R es alquilo inferior en cada ocurrencia. En un aspecto más de la presente invención , se describen composiciones farmacéuticas, las cuales comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto de la invención se describe un método para tratar un infección por bacteria Gram-positiva , y particularmente una causada por Clostridium difficile, en un paciente con la necesidad de dicho tratamiento, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención. En un aspecto más de la invención se describe un método para tratar colitis en un paciente con la necesidad de dicho tratamiento, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la invención. En otro aspecto más de la presente invención se describe un procedimiento para preparar los compuestos de la invención, el cual comprende los pasos de, (a) aislar tiacumicina de un medio de fermentación; (b) purificar tiacumicina mediante precipitación u otros métodos; y (c)alquilar las posiciones 3"'- y 5'"- de tiacumicina.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La siguiente descripción de la presente invención será más fácilmente apreciada junto con los dibujos anexos, en los cuales: de hidrógeno La Figura 1 es un espectro de resonancia magnética nuclear' de 3"'-,5"'-di-O-metiltiacumicina B en metanol d4- La Figura 2 es un espectro de resonancia magnética nuclear de carbono de 3",,5'"-di-O-metiltiacumicina B en metanol d4. La Figura 3 es el espectro infrarrojo de 3"', 5'"-di-O-metiltiacumicina B neta (adquisición microscópica).

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Entre los compuestos de la presente invención , los ejemplos preferidos incluyen aquellos que tienen las fórmulas: Cl y cualquier profármaco farmacéuticamente aceptables. Entre los compuestos preferidos de la presente invención se encuentran aquellos en donde Rs es metilo o etilo, y muy particularmente aquellos en los cuales R5 es metilo. Los ejemplos representativos de los compuestos de la presente invención con los siguientes derivados de tiacumicina: 3"',5'"-d -O-metiltiacumicina B; 3"\5"'-d -O-metiltiacumicina C; 3,",5'"-d -O-metiltiacumicina D; 3"',5'"-d -O-metiltiacumicina E; 3,,,,5'"-d -O-metiltiacumicina F; 3"',5'"-d -O-etiltiacumicina B; 3"\5'"-d -O-etiltiacumicina C; 3"',5'"-d -O-etiltiacumicina D; 3"',5'"-d?-O-etiltiacum?cina E 3,", 5",-di-O-etiltiacumicina F, y los profármacos farmacéuticamente aceptables de los mismos. De estos, y muy preferidos entre los compuestos de la presente invención, está el compuesto 3"', 5'"-di-O-etiltiacumicina B, la cual tiene la fórmula estructural: y está considerada como el mejor modo para llevar a cabo la invención. Como se utiliza a través de esta especificación y las reivindicaciones anexas, los siguientes términos tienen los significados especificados: El término "alquilo" , como se utiliza en la presente, se refiere a un radical hidrocarburo de cadena recta o de cadena ramificada , monovalente, de 1 a 12 átomos de carbono incluyendo, pero no limitándose a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo , heptilo y similares.

El término "alcanoilo", como se utiliza en la presente, se refiere a un radical monovalente de la fórmula -C(O)R" , en donde R" es hidrógeno o un grupo alquilo como se definió anteriormente, incluyendo, pero no limitándose a acetilo, propionilo, isobutirilo y similares. El término "alcanoilo de Ci a C4", como se utiliza en la presente, se refiere a un radical alcanoilo como se definió anteriormente, en done R" es hidrógeno o un grupo alquilo de 1 a 3 átomos de carbono. El término "alquilo inferior", como se utiliza en la presente, se refiere a un radical alquilo, como se definió anteriormente, que tiene de 1 a 6 átomos de carbono. El término "profármacos farmacéuticamente aceptables" , como se utiliza en la presente, se refiere a aquellos profármacos de los compuestos de la presente invención los cuales son , dentro del alcance del juicio médico, adecuados ara utilizarse en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores sin toxicidad , irritación , respuesta alérgica, indebidas, y similares, en proporción a una relación de beneficio/riesgo, y efectivos para su uso pretendido, as í como formas zwiteriónicas, cuando es posible, de los compuestos de la invención . El término "profármaco" se refiere a compuestos que son rápidamente transformados, in vivo, para producir el compuesto paterno de la fórmula anterior, por ejemplo mediante hidrólisis en la sangre. U na discusión más completa se provee por T. H iguchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems. Vol . 14 de A. C.S Symposium Series, y por Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmacuetical Association y Pergamon Press, 1987, ambos incorporados aquí por referencia. Cuando es apropiado, los profármacos de derivados de compuestos de la presente invención pueden ser preparados mediante cualquier método adecuado. Para aquellos compuestos en les cuales la porción de profármaco es una funcionalidad de aminoácido o de péptido, la condensación del grupo amino con aminoácidos y péptidos puede ser efectuada de acuerdo con métodos de condensación convencionales tales como el método de azida, el método de anhídrido de ácido mezclado, el método DCC (diciclohexil-carbidiimida), el método de éster activo (método de éster p-nitro-fenílico, el método de imida-éster de ácido N-hidroxi-succínico, el método de éster cianometílico y similares), el método K de reactivo de Woodward, el método de DCC-HOBT (1-hidroxi-benzotriazol), y similares. Los métodos clásicos para las reacciones de condensación de aminoácido se describen por M. Bodansky, Y.S. Klausner y M.A. Ondetti, Peptide Svnthesis, 2a. edición, NY, 1976. En los compuestos de la presente invención pueden existir centros asimétricos. Excepto en donde de observe lo contrario, la presente invención contempla los varios estereoisómeros y mezclas de los mismos. Por consiguiente, cada vez que un enlace esté representando no estereoespecíficamente, éste pretende abarcar ambas orientaciones. Cuando se utiliza en los tratamientos anteriores u otros tratamientos, una cantidad terapéuticamente efectiva de uno de los compuestos de la presente invención puede ser empleado en forma pura o, en donde existan dichas formas, en una sal, éster o forma de profármaco farmacéuticamente aceptable. Alternativamente, el compuesto puede ser administrado como composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto de interés en combinación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Por una "cantidad terapéuticamente efectiva" del compuesto de la invención se quiere dar a entender una cantidad suficiente del compuesto para tratar el trastorno objetivo, a una relación razonable de beneficio/riesgo aplicable a cualquier tratamiento médico. Sin embargo, se entenderá que el uso total diario de los compuestos y composiciones de la presente invención será decidido por el médico que atiende dentro del alcance del juicio médico. El nivel de dosis terapéuticamente efectivo específico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores que incluyen el trastorno que se está tratando y la severidad del trastorno; la actividad del compuesto específico empleado; la composición específica empleada; la edad , el peso del cuerpo, la salud en general, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración, ruta de administración , y régimen de excreción del compuesto específico empleado; la duración del tratamiento; los fármacos utilizados en combinación o coincidentes con el compuesto específico empleado; y factores similares bien conocidos en la técnica de la medicina. Por ejemplo, está dentro de la experiencia de la técnica comenzar con dosis del compuesto a niveles más bajos que los requeridos para obtener el efecto terapéutico deseado y para gradualmente incrementar la unidad de dosis hasta que se logre el efecto deseado. La dosis total diaria de los compuestos de esta invención administrados a un ser humano o animal inferior a través de administración oral puede variar de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 100 mg/kg/día. Las dosis muy preferidas pueden estar en la escala de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 mg/kg/día. Si se desea, la dosis diaria efectiva puede ser suministrada en dosis múltiples para propósitos de administración; consecuentemente, las composiciones de dosis individual pueden contener dichas cantidades o submúltiplos de las mismas como para hacer la dosis diaria. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden un compuesto de la invención y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable, el cual puede ser administrado oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitonel, tópica (a través de polvos, ungüentos o gotas), bucalmente, o como una aspersión oral o nasal. Por "vehículo farmacéuticamente aceptable" se quiere dar a entender un llenador semi-sólido, líquido, sólido no tóxico, diluyente, material de encapsulación o auxiliar de formulación de cualquier tipo. El término "parenteral", como se utiliza en la presente, se refiere a modos de administración, los cuales incluyen inyección intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, subcutánea e intra-articular e infusión.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención para inyección parenteral incluyen soluciones no acuosas o dispersiones no acuosas estériles, farmacéuticamente aceptables, suspensiones o emulsiones, así como polvos estériles para reconstitución a soluciones o dispersiones inyectables estériles justo antes de uso. Ejemplos de vehículos, diluyentes, solventes o portadoras acuosos y no acuosos, adecuados, incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, glicol propilénico, glicol polietilénico, y similares), carboximetilcelulosa y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales (tales como aceite de oliva), y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de materiales de revestimiento tales como lecitina, o a través del mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersiones, y a través del uso de agentes tensoactivos. Estas composiciones también pueden contener auxiliares tales como conservadores, agentes de humectación, agentes emulsificantes y agentes dispersantes. La prevención de la acción de microorganismos puede ser asegurada a través de la inclusión de varios agentes antibacterianos y contra hongos, por ejemplo, paraben, clorobutanol, ácido fenol sórbico y similares. También puede ser posible incluir agentes isotónicos tales como azúcares, cloruro de sodio y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede ser originada por la inclusión de agentes, los cuales retrasan la absorción, tales como monoestearato de aluminio y gelatina. En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto del fármaco, es deseable reducir la absorción del fármaco de la inyección subcutánea o intramuscular. Esto puede lograrse a través del uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo con una pobre solubilidad en agua. El régimen de absorción del fármaco entonces depende de su velocidad de disolución, la cual, a su vez, puede depender del tamaño de cristal y la forma cristalina. Alternativamente, la absorción retrasada de una forma de fármaco parenteralmente administrada se logra disolviendo o suspendiendo el fármaco en un vehículo de aceite. Las formas inyectables de depósito se hacen formando matrices microencapsuladas del fármaco en pol ímeros biodegradables tales como poliláctida-poliglicolida. Dependiendo de la relación de fármaco a pol ímero y de la naturaleza del polímero particular empleado, la velocidad de liberación del fármaco puede ser controlada. Ejemplos de otros pol ímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhídridos) . Las formulaciones inyectables de depósito también son preparadas atrapando el fármaco en liposomas o microemulsiones , las cuales son compatibles con tejidos del cuerpo.

Las formaciones inyectables pueden ser esterilizadas, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro de retención de bacterias, o incorporando agentes de esterilización en la forma de composiciones sólidas estériles, las cuales pueden ser disueltas o dispersadas en agua estéril u otro medio inyectable estéril justo antes de uso. Las formas de dosis sólidas para administración oral incluyen cápsulas, tabletas, pildoras, polvos, y granulos. En tales formas de dosis sólidas, el compuesto activo se mezcla con por lo menos un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable tal como citrato de sodio o fosfato dicálcico y/o, a) llenadores o extensores tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol, y ácido salicílico, b) aglutinantes tales como, por ejemplo, carboximetil celulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y acacia, c) humectantes tales como glicerol, d) agentes desintegradores tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de papa o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos y carbonato de sodio, e) agentes de retraso de solución tales como parafina, f) aceleradores de absorción tales como compuestos de amonio cuaternario, g) agentes humectantes tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, h) absorbentes tales como caolín y arcilla de bentonita, e i) lubricantes tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, glicoles polietilénicos sólidos y lauril sulfato de sodio, y mezclas de los mismos. En el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, la forma de dosis también puede comprender agentes reguladores de pH. Las composiciones sólidas de tipo similar también pueden ser empleadas como llenadores en cápsulas de gelatina suave y dura, utilizando dichos excipientes como lactosa o azúcar de leche así como glicoles polietilénicos de peso molecular alto, y similares.

Las formas de dosis sólidas de tabletas, grageas, cápsulas, pildoras y granulados pueden ser preparadas con revestimientos o cubiertas, tales como revestimientos entéricos u otros revestimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica. Estos pueden contener opcionalmente agentes opacadores y también pueden ser una composición que libere los ingredientes activos sólo, o preferencialmente, en cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente, en una forma retrasada. Ejemplos de composiciones de inmbibición, las cuales pueden ser utilizadas incluyen substancias y ceras poliméricas. Los compuestos activos también pueden estar en forma micro-encapsulada, si es apropiado, con uno o más de los excipientes antes mencionados antes mencionados. las formas de dosis líquidas para administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elíxires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas de dosis líquidas pueden contener diluyentes inertes comúnmente utilizados en la técnica tales como, por ejemplo, agua y otros solventes, agentes de solubilización y emulsificantes tales como alcohol cetílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, glicol propilénico, glicol 1 ,3-butilénico, dimetil formamida, aceites (en particular, aceites de semillas de algodón, de nuez molida, de maíz, de germen, de oliva, de ricino y de ajonjolí), glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, glicoles polietilénicos y esteres de ácido graso, y mezclas de los mismo. Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir auxiliares tales como agentes humectantes, agentes emulsificantes y de suspensión , y agentes edulcorantes, saborizantes y suministradores de perfume. Las suspensiones, además de los compuestos activos, pueden contener agentes de suspensión tales como, por ejemplo, alcoholes ísoestearílicos etoxilados, polioxietilen sorbitol esteres de sorbitán , celulosa microcristalina, meta-hidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar, y tragacanto y mezclas de los mismos. La administración tópica incluye la administración a la piel y mucosa, incluyendo superficies del pulmón y ojos. Las composiciones para administración tópica , incluyendo aquellas para inhalación, pueden ser preparadas como un polvo seco, el cual puede ser presurizado o no presurizado. En composiciones en polvo presurizadas, el ingrediente activo, en forma finamente dividida, puede ser utilizado en mezcla con un veh ículo inerte farmacéuticamente aceptable que comprende partículas que tienen un tamaño, por ejemplo, de hasta 100 micrómetros en diámetro. vehículos inertes adecuados incluyen azúcares tales como lactosa . Deseablemente, por lo menos el 95% en peso de las partículas del ingrediente activo tiene un tamaño de partícula efectivo en la escala de 0.01 a 10 micrómetros. Alternativamente, la composición puede ser presurizada y contener un gas comprimido, tal como nitrógeno o un propulsor de gas licuado. El medio propulsor de gas licuado y en realidad la composición total es preferiblemente tal que el ingrediente activo no se disuelve en el mismo a ningún grado substancial. La composición presurizada también puede contener un agente tensoactivo. El agente tensoactivo puede ser un agente tensoactivo no iónico líquido o sólido o puede ser un agente tensoactivo aniónico sólido. Se prefiere utilizar el agente tensoactivo aniónico sólido en la forma de una sal de sodio. Las composiciones para administración rectal o vaginal son preferiblemente supositorios, los cuales pueden ser preparados mezclando los compuestos de esta invención con excipientes o vehículo no irritantes adecuados tales como mantequilla de cacao, glicol polietilénico o una cera para supositorio, los cuales son sólidos a temperatura ambiente pero líquido a la temperatura del cuerpo y, por lo tanto, se funden en el recto o cavidad vaginal y liberan el ingrediente activo. Los compuestos de la presente invención también pueden ser administrados en la forma de liposomas. Como es conocido en la técnica, los liposomas generalmente se derivan de fosfolípidos u otras substancias lípidas. Los liposomas se forman a través de cristales líquidos hidratados mono- o multi-laminares, que son dispersados en un medio acuoso. Se puede utilizar cualquier lípido fisiológicamente aceptable y metabolizable, no tóxico capaz de formar liposomas. Las composiciones de la presente en forma de liposoma pueden contener, además de un compuesto de la presente invención, estabilizadores, conservadores, excipientes y similares. Los lípidos preferidos son los fosfolípidos y las fosfatidil colinas (lecitinas), tanto naturales como sintéticos. Los métodos para formar liposomas son conocidos en la técnica. Ver, por ejemplo, Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volumen XIV, Academic Press, Nueva York, 1976, pág. 33 et seg. Los compuestos de la invención pueden ser preparados utilizando uno o más de los procedimientos que siguen. Las tiacumicinas utilizadas como materiales de partida están disponibles a través de fermentación como se describe en la patente de E.U.A. No. 4,918,174, antes referenciada. Las tiacumicinas pueden ser alquiladas a través de una variedad de métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica, siempre que, sin embargo, la alquilación pueda requerir un material de partida de alta pureza y metodología adecuada para alquilación selectiva. La purificación de las tiacumicinas puede lograrse a través de precipitación a partir de la solución. El material no purificado primero se disuelve en u solvente apropiado y después se precipita en forma purificada mediante la adición de un co-solvente orgánico apropiado. Los solventes orgánicos adecuados incluyen halogenuros de alquilo tales como diclorometano, dicloroetano y similares y solventes polares de alquilo tales como metanol, acetato de etilo, acetona y similares. Los cosolventes adecuados incluyen éteres y alcanos no polares. La tiacumicina purificada puede ser fácilmente alquilada con diazometano, sulfato de dimetilo, bromuro de etilo, sulfato de dietilo, yoduro de metilo y similares. El diazometano, por ejemplo, puede ser generado a través de una variedad de métodos comúnmente conocidos, y es un agente de alquilación preferido. La preparación de los compuestos de la presente invención se muestra en los Esquemas I y II a continuación . De acuerdo con el Esquema I , un compuesto de la fórmula 1 (tal como tiacumicina B, tiacumicina C, tiacumicina E, o tiacumicina F) puede ser selectivamente alquilado en el an illo de fenol aromático para dar u compuesto de la fórmula 2. (La tiacumicina D puede ser alquilada en una forma análoga) . De acuerdo con el Esquema I I , la tiacumici na B (3) puede ser tratada con diazometano para dar 3"' , 5'"-di-O-metiltiacumicina B (4).

ESQUEMA I ESQUEMA II Los compuestos, procedimientos y usos de la presente invención serán mejor entendidos con relación a los siguientes ejemplo, los cuales son pretendidos como ilustración y no como una limitación del alcance de la invención. Tanto más adelante como a través de la especificación , se pretende que las citas a la literatura estén expresamente incorporadas por referencia.

EJEMPLO 1 Purificación de Tiacumicina B Se disolvieron 0.61 g (0.578 mmoles) de tiacumicina B (obtenida mediante fermentación)en 2 ml de cloruro de metileno. La solución color ámbar obscuro resultante se añadió gota a gota a una solución agitada de 15 ml de hexano a temperatura ambiente. Después de que se completó la adición , la mezcla se calentó justo por abajo del punto de ebullición y después se dejó enfriar a temperatura ambiente, dando como resultado la precipitación de tiacumicina B. El material purificado se recogió mediante filtración y se lavó con hexano para dar 158 mg de un sólido de color canela pálido. P.f. 106- 1 10°C (descomposición) . La RMN de protón fue consistente con la estructura asignada.

EJEMPLO 2 3" '.5 '"-Di -O-metiltiacumicina B Se preparó una solución de diazometano, (a) añadiendo 2.5 g de Diazald® (N-meti-N-nitroso-p-toluensulfonamida) en 25 ml de éter dietílico a una solución, calentada a 60-65°C, de 2.5 g de hidróxido de potasio disuelto en 4 ml de agua y 5 ml de etanol , y (b) recogiendo el destilado . Después, se añadieron 4.5 ml del destilado de diazometano a una solución de 158 mg del compuesto resultante del Ejemplo 1 disuelto en 4.5 ml de cloruro de metileno a temperatura ambiente. Después de agitar durante 15 minutos, la solución se aereó con nitrógeno y se concentró bajo presión reducida para dar 410 mg del compuesto del título como un sólido color canela. P.f. 101 - 107°C (descomposición). La RMN de protón , RMN de carbono y espectros infrarrojos , mostrados en las Figuras 1 -3 de la presente, fueron consistentes con la fórmula estructural asignada .

EJEMPLO 3 Análisis In Vitro de la Actividad Antibiótica Contra Bacterias Aeróbicas y Facultativas Para la clasificación primaria de los compuestos de la invención contra bacteria aeróbicas y facultativas , se determinaron concentraciones inhibidoras mínimas (MICs) a través del siguiente método de dilución en agar: Se añadieron series de dos veces de diluciones de los compuestos de prueba a agar de infusión de corazón de cerebro. Las placas de agar fueron inoculadas con aproximadamente 104 organismos por lugar de cada uno de los organismos que serán probados. Estas placas de agar inoculadas se incubaron después a 37°C durante aproximadamente 20 horas . Las MICs fueron determinadas como la concentración mínima del compuesto de prueba (en µg/ml) que inhibieron el desarrollo visible. Los datos, mostrados en el Cuadro 1 , demuestran que el compuesto de la presente invención, di-O-metiltiacumicina B, es substancialmente menos activo q ue el material de partida de tiacumicina B contra dos bacterias comúnmente encontradas en la flora gastrointestinal normal , Enterococcus faecium y Streptococcus agalactiae.

CUADRO 1 Datos de MIC (µg/ml) para Bacterias Aeróbicas y Facultativas Di-O-metil- Microorganismo Cultivo# Tiacumicina B tiacumicina B Vancomicina Staphylococcus aureus 1662 6.2 100 3.1 S. aureus 1664 6.2 50 1.56 S. aureus 1690 12.5 100 1.56 S. aureus 2130 12.5 >100 3.1 S. aureus 2498 6.2 >100 3.1 S. aureus 2124 6.2 >100 3.1 S . aureus (cipro res.) 3384 12.5 100 1.56 S. epidermidis 1666 3.1 50 3.1 Enterococccus faecium 1668 6.2 >100 3.1 Streptococcus bovis 1699 25 >100 0.78 S. agalactiae 1670 12.5 >100 3.1 S. pyogenes 1671 25 >100 3.1 S. pyogenes (const.) 1672 3.1 25 0.78 S. pyogenes (inducible) 2548 6.2 25 0.78 Micrococcus luteus 2517 0.2 0.1 3.1 M. luteus 2493 0.1 0.1 0.78 E. coliJuhl 1673 >100 >100 >200 E. coli SS 2489 >100 >100 50 E.coliDC-2 1674 >100 >100 >200 E. coli H560 1675 >100 >100 >200 E. coli KNK437 1676 >100 >100 >200 Enterobacter aerogenes 1677 >100 >100 >200 Klebsiella pneumoniae 2518 >100 >100 >200 Providencia stuartii 1831 >100 >100 >200 Pseudomonas 1679 >100 >100 >200 aeruginosa P. aeruginosa 1680 >100 >100 >200 P. aeruginosa 1681 >100 >1 0 >200 P. aeruginosa 1682 12.5 100 >200 P.cepacia 1684 >100 >100 >200 Acinetobacter 1845 >100 >100 >200 calcoaceticus P. aeruginosa (cipro R) 1919 >100 >100 >200 P. aeruginosa (cipro R) 1920 >100 >100 >200 Candida albicans 3622 >100 >100 Mycobacterium 5171 12.5 1.56 smegmatis Nocardia asteroides 5173 0.39 0.39 EJEMPLO 4 Análisis. ín Vitro. de Actividad Antibiótica Contra Bacteria Anaeróbica Para la clasificación primaria de los compuestos de la invención contra bacterias anaeróbicas tales como Clostridium, se determinaron concentraciones inhibidoras mínimas (MICs) a través del siguiente método de dilución en agar: Se añadieron series de dos veces de diluciones de los compuestos de prueba a agar de Wiikins-Chalgren. Las placas de agar fueron inoculadas con aproximadamente 105 organismos por lugar de cada uno de los organismos que serán probados. Estas placas de agar inoculadas se incubaron después a 37°C durante aproximadamente 48 horas. Las MICs fueron determinadas como la concentración mínima del compuesto de prueba (en µg/ml) que inhibieron el desarrollo visible. Los datos, mostrados en el Cuadro 2, demuestran que el compuesto de la presente invención, di-O-metiltiacumicina B, tiene actividad substancial contra patógenos anaeróbicos y en particular contra la especie Clostridium. cn Cuadro 2 Datos de MIC (µg/ml) para Bacterias Anaeróbicas Di-O-metil- Microorganismo Cultive* Tacumicina B tacumicina B Clindamicina Vancomicina Bacteriodes fragilis 1756 >128 >2 1 32 B. fragilis 1757 >128 >2 1 32 B. fragilis 1758 >128 >2 0.5 16 B. fragilis 1999 >128 >2 1 B. vulgatus 1762 >128 >2 0.03 32 B. disie s 1763 32 >2 0.015 32 co B. thetaiotaomicron 1764 >128 >2 4 >64 o B. thetaiotamicron 1765 >128 >2 4 >64 B. thetaiotaomicron 1766 >128 >2 4 >64 B. loescheii 1767 64 >2 0.06 32 B vulgatus 2481 >128 >2 0.03 64 B. bivius 2483 128 >2 0.015 32 Fusobacterium nucleatum 2478 >128 >2 0.12 >64 Fusobacterium species 1770 >128 >2 0.12 >64 Veillonella párvula 2479 64 >2 0.06 >64 Propionibacteríum acnés 1775 4 >2 0.06 0.5 cn Cuadro 2 (Continuación) Di-O-metil- Microorganismo Cultivo* Tacumicina B tacumicina B Clindamicina Vancomicina Peptostreptococcus lili 1 >2 0.03 1 asaccharolyticus P. magnus 1778 0.5 >2 1 0.5 P. species 1776 32 >2 0.06 1 P. anaerobius 1780 0.008 >2 0.06 0.5 Clostridium perfringens 1771 0.008 0.06 0.06 >64 C. peifringens 1772 0.03 0:06 0.5 0.5 co C. peifringens 1773 0.008 0.06 0.06 1 C. ramosum 2482 >128 >2 1 8 C. difficile 1496 0.06 0.25 >32 0.5 C. difficile 1497 0.06 0.5 >32 0.5 C. difficile 2025 0.06 0.5 4 0.5 C. difficile 2528 0.06 0.5 4 1 C. difficile 2529 0.06 0.5 4 1 C. difficile 1774 0.03 0.25 0.5 2 C. difficile 2480 0.06 0.25 4 >64 EJEMPLO 5 Actividad. In Vivo. Contra Colitis Inducida por Clostridium difficile Pseudomembranoso U no de los compuestos de la presente invención, di-O-metiltiacumicina B, se probó en un modelo de hámster, in vivo, como sigue: Se indujo una infección por Clostridium difficile en 32 hámsters a través de tratamiento oral con ciprofloxacina (200 mg/kg/d ía) durante 7 días consecutivos (días 1 -7). (La supresión de bacterias gastrointestinales normales a través de ciprofloxacina permitió que predominara C. difficile resistente al fármaco). Se segregaron cinco hámsters adicionales como un grupo de control no infectado. Los an imales infectados fueron divididos en tres grupos, comprendiendo (a) 10 animales no tratados; (b) 15 animales tratados con vancomicina (cada 5 a 20, 10 y 1 mg/kg/día oralmente en los días 8- 14); y (c) 10 animales tratados con el compuesto del Ejemplo 2 (cada 5 a 10 y 1 mg/kg/día en los días 8- 14) . Los animales se verificaron para (a) peso del cuerpo (los hámsters infectados perdieron una masa significativa del cuerpo), y (b) mortalidad (porcentaje de expiración en el día 20).

CUADRO 3 Modelo de Hámster In vivo de Colitis Inducida por Clostridium difficile Pseudomembranoso Tratamiento Dosis (mg/kg) % de % del Cambio de Mortalidad Peso. Día 22 Comp. del Ej. 2 1 0 60 140 Comp. del Ej. 2 1 20 1 54 Vancomicina 20 100 N D Vancomicina 1 0 1 00 N D Vancomicina 1 1 00 N D Control I nfectado 90 1 39 Control no infectado 0 167 N D = sin datos; todos los animales murieron Los resultados, mostrados en el Cuadro 3 anterior, demuestran la habilidad del compuesto de prueba, di-O-metiltiacumicina B, para tratar efectivamente una colitis asociada con antibiótico. Entre los animales de control no tratados, hubo un 90% de mortalidad con animales infectados, la mayor parte de los cuales rápidamente desarrollaron una diarrea aguada y murieron aproximadamente en el día 20. Los hámsters tratados con vancomicina a 1 mg/kg presentaron una mortalidad más rápida que los hámsters tratados con 10 o 20 mg/kg; en general, la mayoría de los hámsters tratados con vancomicina murieron entre los días 17 y 22. El tratamiento con el compuesto del Ejemplo 2 , por otro lado , se asoció con un rég imen de sobrevivencia más alto que en cualquiera de los controles infectados no tratados o en hámsters tratados con vancomicina. Los hámsters infectados presentaron reducciones significativas de peso del cuerpo durante la enfermedad agua. En general, los animales sobrevivientes ganaron masa en cuerpo a un régimen normal después de la recuperación , pero aún quedando atrás de los controles no infectados en peso. Los hámsters tratados con el compuesto del Ejemplo 2 a 1 mg/kg mantuvieron la masa del cuerpo muy cerca de aquella de los controles no infectados. Se debe entender que la descripción detallada anterior y los ejemplos anexos son meramente ilustrativos y no deben ser tomados como limitaciones del alcance de la invención , la cual se define solamente por las reivindicaciones anexas y sus equivalentes. Varios cambios y modificaciones a las modalidades descritas serán evidentes para aquellos expertos en la técnica, y pueden hacerse sin apartarse del espíritu y del alcance de la misma .

Claims (7)

1. REIVINDICACIONES Un compuesto de la fórmula: o un profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde R es un substituyente de la fórmula: en donde R31, R32 y R33 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y alcanoilo de C1 a C ; R1 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno e hidroxi; y R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y un substituyente de la fórmula: en donde uno de R41 y R42 es hidrógeno y el otro es un radical de la fórmula: en donde R es un alquilo inferior en cada ocurrencia. 2 - Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste de: o un profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo. 3 - Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde Rs se selecciona del grupo que consiste de metilo o etilo. 4.- El compuesto 3"',5"'-di-O-metiltiacumicina B o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 5.- Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable. 6.- Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 3 en combinación con un veh ículo farmacéuticamente aceptable. 7.- Un método para el tratamiento de u na infección por bacterias en un paciente con la necesidad de d icho tratamiento, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3. 8.- Un método para el tratamiento de colitis en un paciente con la necesidad de dicho tratamiento, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3. 9. - Un método para el tratamiento de una infección causada por Clostridium difficile en un paciente con la necesidad de dicho tratamiento, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.