MXPA06006061A - Metodos y composiciones para el tratamiento y manejo de la hemoglinopatia y la anemia. - Google Patents

Abstract

La presente invencion esta dirigida al uso de compuestos inmunomoduladores, particularmente miembros de la clase de compuestos conocidos como IMiDsTM, y mas especificamente los compuestos 4-(amino)-2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-isoindolina-1,3-diona y 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidroisoindol-2-il)-piperidin-2,6-diona, para inducir la expresion de genes de hemoglobina fetal, los genes esenciales para la eritropoiesis, y los genes que codifican la proteina estabilizadora de la alfa-hemoglobina, dentro de una poblacion de celulas CD34+. Estos compuestos se usan para tratar las hemoglobinopatias tales como anemia de las celulas falciformes o (-talassemia, o anemias provocadas por enfermedades, cirugia, accidentes, o la introduccion o ingestion de toxinas, venenos o farmacos.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO Y MANEJO DE LA HEMOGLOBI?OPATÍA Y LA ANEMIA 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se dirige a métodos para tratar, prevenir y/o manejar las hemoglobinopatías, tales como la anemia de células falciformes y otras anemias, tales como las anemias inducidas por enfermedades o fármacos, mediante la administración de miembros de la clase de los análogos de talidomida conocidos como IMiDs™, en particular la IMiDs™ 4- (amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona (conocida también como a- (3 -aminoftalimido) glutarimida; Celgene Corporation) y 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona (conocida también como 3-4'aminoisoindolino-l' -ona) -l-piperidino-2, 6-diona; Celgene Corporation) , y las composiciones farmacéuticas gue comprenden tales compuestos . 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 2.1. ANEMIA DE CÉLULAS FALCIFORMES Y OTRAS HEMOGLOBINOPATÍAS La anemia de células falciformes ("SCA") es una anemia hemolítica asociada con las hemoglobinas anormales, designadas hemoglobina S . Se reporta que la enfermedad se debe a una carga eléctrica disminuida en la hemoglobina S debida a una substitución de aminoácidos, la cual a su vez resulta en baja solubilidad de la hemoglobina S substituida. The Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 17v Ed. , Merck Research Laboratoires, Whitehouse Station, NJ, página 878 (1999) . La hemoglobina S menos soluble forma un gel semi-sólido de tactoides similares a varillas que motiva a las células sanguíneas a sumir una forma de arco o media luna, similar a una hoz. Estas células sanguíneas rojas deformadas e inflexibles se adhieren al endotelio vascular y obstruyen las arteriolas pequeñas y los capilares, lo cual lleva a oclusiones e infartos. Como las células rojas falciformes son demasiado frágiles para soportar la presión mecánica de la circulación sanguínea, ocurre la hemolisis cuando estas entran a la circulación. La SCA se asocia por lo general con un grupo étnico específico, es decir, los Afroamericanos y otras personas descendientes de poblaciones africanas del sur del Sahara. Los pacientes sufren de dolor agudo provocado por las oclusiones debidas a las células rojas sanguíneas falciformes. La vida útil de de las células sanguíneas rojas falciformes es de aproximadamente dos semanas, en tanto que la vida útil promedio de las células rojas sanguíneas normales es de aproximadamente cuatro semanas. Esta vida útil acortada lleva a su vez a anemia crónica.

Los síntomas de la SCA incluyen el deterioro del crecimiento y del desarrollo; y mayor susceptibilidad a las infecciones; un cráneo con forma de torre; cambios óseos tales como adelgazamiento cortical, densidades irregulares del hueso y nueva formación de hueso dentro del canal medular; bazos pequeños debidos a la autoesplenectomía; probabilidad aumentada de enfermedades reumáticas o cardiacas congénitas; reducción progresiva de las funciones los pulmones y el hígado; y síndrome agudo respiratorio. El síndrome agudo respiratorio es la causa principal de muerte, y se caracteriza por ataques repentinos de fiebre, dolor de pecho, leucocitosis y infiltrados parenquimatosos pulmonares en rayos X del pecho . Las técnicas actuales para el tratamiento de la SCA incluyen la inducción de hemoglobina fetal, relajación de los vasos sanguíneos, la reducción de la adhesión de eritrocitos, y el uso de antagonistas del canal de Gardos . Iyamu y Asakura, Expert Opin. Ther. Patents, 13 (6) : 807-813 (2003). El canal de Gardos es un canal de potasio activado por calcio descrito por Gardos (Curr. Top. Membr. Transp. 10:217-277 (1978) y Nature London 279:248-250 (1979)). El tratamiento de SCA más estudiado y usado es la administración oral de hidroxiurea (HU) . Se cree que la HU ejerce su efecto induciendo la producción de hemoglobina fetal (HbF) . La HU, sin embargo, no es efectiva en todos los pacientes; algunos pacientes no responden a toda la HU, en tanto que otros experimentan mielosupresión. Iyamu y Asakura, supra. La SCA también de ha tratado con un extracto herbario natural conocido como HEMOXIN™ (llamado anteriormente NIPRISAN™) , el cual parece ejercer su efecto anti-falciforme enlazándose covalentemente a la HbS . Véase la Patente Norteamericana ?o . 5,800,819. Iyamu y Asakura, supra. La HEMOXI?™ no ha sido aprobada aun por la FDA para usarse en el tratamiento de la SCA. Un grupo está explorando actualmente el uso del crotrimazol y otros bloqueadores del canal de Gardos en un esfuerzo para reducir la deshidratación característica de los eritrocitos falciformes. Iyamu y Asakura, supra. La eficacia de tales compuestos, sin embargo, no se ha demostrado aun. Otros tratamientos para la SCA incluyen soluciones intravenosas de glucosa y electrolitos, analgésicos narcóticos, y transfusiones para los casos extremadamente severos de anemia. Dado el estado en desarrollo de la mayoría de las terapias de SCA, es necesaria una terapia más segura y efectiva para el tratamiento y el manejo de la SCA. Los tratamientos que aumentan la producción de hemoglobinas fetales son atractivos porque estos aumentan la cantidad de hemoglobina total disponible para un individuo que sufre de una hemoglobinopatía o de anemia. En los adultos, predominan dos tipos de hemoglobina, la hemoglobina a y la hemoglobina ß, casi a la exclusión de los otros tipos de hemoglobina. En contraste, dos hemoglobinas adicionales, la hemoglobina e y la hemoglobina ?, están presentes en el feto. La hemoglobina e es una forma predominante en el desarrollo temprano, pero deja de estar presente en el feto aproximadamente a las ocho semanas de desarrollo. La hemoglobina ?, en contraste, esta presente tempranamente en el desarrollo, alcanzando un porcentaje máximo de la hemoglobina total, de aproximadamente 45%, a aproximadamente 6-30 semanas de la gestación. Después reduce su porcentaje de la hemoglobina total desde aproximadamente 6 semanas antes del nacimiento a aproximadamente 40 semanas después del nacimiento . En tanto que esta presente en un individuo después de las 40 semanas de edad, esta constituye menos del 2% de la hemoglobina total presente en el flujo sanguíneo después de eso. 2.2. IMIDS™ Se ha identificado una clase compuestos, conocidos como IMiDs™ (Celgene Corporation) o Fármacos Inmunomoduladores, los cuales muestran la inhibición potente de la TNFa e inhibición marcada de la producción de IL-lß e IL-12 de los monocitos inducidas por LPS. La IL-6 inducida por LPS también se inhibe por los compuestos inmunomoduladores, aunque parcialmente. Estos compuestos son estimulantes potentes de la IL-10 inducida por LPS . Se ha demostrado que los IMiDs™ modulan la diferenciación de las células CD34+ a lo largo de las vías mieloide y eritroide. Véase la Publicación de la Solicitud de Patente Norteamericana ?o. 2003/0235909, publicada el 25 de diciembre del 2003, la cual se incorpora por ese motivo en su totalidad. Los ejemplos particulares de IMiDs™ incluyen, pero no se limitan a las 2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) ftalimidas y los 2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -1-oxoisoindoles substituidos, descritos en las Patentes Norteamericanas Nos . 6,281,230 y 6,316,471, ambas de G. W. Muller, et al. Las IMiDs™ no se han identificado previamente como candidatos para el tratamiento de las hemoglobinopatías o la anemia, o como moduladores de los genes involucrados en la eritropoiesis . 3. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a métodos para tratar individuos que tienen anemia, una hemoglobinopatía, que comprenden administrar una cantidad efectiva de un compuesto de la invención. Por lo tanto, en una modalidad, la invención proporciona un método para tratar a un individuo que tiene anemia o una hemoglobinopatía, dicho método que comprende administrar a dicho individuo un compuesto inmunomodulador, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato o profármaco aceptable farmacéuticamente del mismo. En una modalidad específica, dicha anemia es una anemia inducida por o relacionada con la administración de un fármaco o quimioterapia. En otra modalidad específica, dicho compuesto inmunomodulador es una talidomida amino-substituida. En una modalidad más específica, dicho compuesto inmunomodulador es un IMiD™. En una modalidad más específica, dicho IMiD™ es una a- (3-aminoftalimido) glutarimida (conocida también como 4~ (amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) -isoindolino-1, 3-diona) ; un análogo o profármaco de a- (3-aminoftalimido) glutarimida; 3- (4' aminoisoindolino-1' -ona) -1-piperidino-2, 6-diona; un análogo o profármaco de 3- (4' aminoisoindolino-1' -ona) -1-piperidino- 2,6-diona, o un compuesto de la fórmula En otra modalidad más específica, dicho IMiD es l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina, l-oxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina, l-oxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -6-aminoisoindolina, • l-oxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina, 1, 3dioxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina, o 1, 3dioxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina .

En otra modalidad específica, el método de tratamiento comprende adicionalmente tratar a dicho individuo con un segundo compuesto, en donde dicho segundo compuesto es un compuesto que índice la hemoglobina fetal, un compuesto que relaja los vasos sanguíneos, un compuesto que cuando se enlaza a la hemoglobina S reduce la auto-agregación de la hemoglobina S, un compuesto que es un antagonista del canal de Gardos, o un compuesto que reduce la adhesión de células sanguíneas rojas. En una modalidad más específica, dicho segundo compuesto es hidroxiurea, un derivado de guanidino, óxido nitroso, butirato o un derivado de butirato, un aldehido o un derivado de aldehido, un extracto vegetal que tiene actividad anti-falciforme (por ejemplo, NIPRISAN™ (HEMOXI?™) ) , clotrimazol, un derivado de triarilmetano, un anticuerpo monoclonal o un derivado de polietilen glicol. En otra modalidad específica, el método de tratamiento comprende adicionalmente tratar a dicho individuo con al menos una citocina. En una modalidad más específica, dicha al menos una citocina es eritropoietina (Epo) , SCF, GM-CSF, Flt-3L, T?Fa, IL-3, o cualquier combinación de las mismas. En otra modalidad específica del método, dicho individuo es un mamífero. En una modalidad más específica, dicho individuo es un humano .

En otra modalidad, la invención proporciona un método para modular la diferenciación de las células madre o precursoras CD34+ a un linaje eritroide que comprende diferenciar dichas células bajo condiciones deseables y en presencia de un compuesto inmunomodulador, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato o profármaco aceptable farmacéuticamente del mismo. En una modalidad más específica, dicho compuesto inmunomodulador es una talidomida amino-substituida. En otra modalidad más específica, dicho compuesto inmunomodulador es un IMiD. En una modalidad aun más específica, dicho IMiD es a- (3-aminoftalimido) glutarimida (conocida también como 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona; un análogo o profármaco de a-(3-aminoftalimido) glutarimida; 3- (4' aminoisoindolino-1' -ona) -1-piperidino-2, 6-diona; un análogo o profármaco de 3- (4' aminoisoindolino-1' -ona) -l-píperidino-2 , 6-diona, o un compuesto de la fórmula En otra modalidad aun más específica, dicho IMiD es 1-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina, l-oxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina, l-oxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -6-aminoisoindolina, l-oxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina, 1, 3dioxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina, o 1, 3dioxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina. En otra modalidad específica, dichas células madre o precursoras de CD34+ son células in vitro. En otra modalidad específica, dichas células madre o precursoras de CD34+ son células in vivo. En otra modalidad específica, el método comprende adicionalmente poner en contacto dichas células con al menos una citocina. En una modalidad más específica, dicha al menos una citocina es eritropoietina, SCF, GM-CSF, Flt-3L, TNFa, IL-3, o cualquier combinación de las mismas. La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención y otro compuesto o citocina. Por lo tanto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende en un portador aceptable farmacéuticamente una IMiD™ y un segundo compuesto, en donde dicho segundo compuesto es un compuesto que induce la hemoglobina fetal, un compuesto que relaja los vasos sanguíneos, un compuesto que cuando se enlaza covalentemente a la hemoglobina s reduce la auto-agregación de la hemoglobina S, un compuesto que es un antagonista del canal de Gardos, o un compuesto que reduce la adhesión de las células sanguíneas rojas. En una modalidad más específica, dicho segundo compuesto es hidroxiurea, un derivado de gunidino, óxido nitroso, butirato o un derivado de butirato, un aldehido o un derivado de aldehido, un extracto vegetal que tiene actividad anti-falciforme (por ejemplo, HEMOXIN™) , clotrimazol, un derivado de triarilmetano, un anticuerpo monoclonal o un derivado de polietilenglicol. La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende en un portador aceptable farmacéuticamente una IMiD™ y al menos una citocina. En una modalidad específica, dicha citocina es eritropoietina (Epo) , SCF, GM-CSF, Flt-3L, TNFa, IL-3, o cualquier combinación de las mismas. La invención proporciona además un método para tratar a un individuo que tiene una hemoglobinopatía o anemia, dicho método que comprende administrar a dicho individuo un compuesto en una cantidad y por un tiempo suficientes para provocar un aumento detectable en el nivel de la proteína estabilizante de alfa hemoglobina (AHSP) . En una modalidad del método, dicho compuesto es un IMiD™. En una modalidad específica, dicho compuesto es a- (3 -aminoftalimido) glutarimida (conocida también como 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona) o 3- (4'aminoisoindolino-l' -ona) -1 -piperidino-2, 6-diona. Como se usa aquí, el término "hemoglobinopatía" significa cualquier defecto en la estructura o la función de cualquier hemoglobina de un individuo, e incluye los defectos en la estructura primaria, secundaria, terciaria o cuaternaria de la hemoglobina, provocado por alguna mutación, tales como mutaciones de eliminación o mutaciones de substitución en las regiones codificantes de algún gen de hemoglobina, o mutaciones en, o eliminaciones de, los promotores o los mejoradores de tales genes que provoquen una reducción en la cantidad de hemoglobina producida, en comparación con una condición normal o estándar. El término además incluye alguna reducción en la cantidad o la efectividad de la hemoglobina, ya sea normal o anormal, provocada por factores externos tales como enfermedades, quimioterapia, toxinas, venenos, o los similares . Como se usa aquí, "anemia" significa alguna reducción en la cantidad de hemoglobina en el flujo sanguíneo, cuando se compara con la condición normal, tal reducción se puede deber a una pérdida de células sanguíneas, un déficit de fierro, toxinas, venenos, enfermedades, o cualquier otra causa fisiológica.

Como se usa aquí, los términos "síntomas de una hemoglobinopatía" y "síntomas de la anemia" significan cualquier síntoma fisiológico o biológico asociado con alguna hemoglobinopatía o la anemia, incluyendo pero no limitados a mareos, falta de aliento, pérdida de conciencia, cansancio, debilidad, hemolisis, dolores asociados con la hemoglobina anormal, conteos reducidos de eritrocitos (es decir, hematocrito reducido) , una habilidad reducida de un volumen dado de sangre para transportar oxígeno, en comparación con un volumen de sangre normal, deformidades de los eritrocitos visibles bajo un microscopio, etc. El término también incluye síntomas sicológicos negativos tales como depresión, baja autoestima, percepción de malestar, percepción de capacidad física limitada, etc. Como se usa aquí, el término "IMiD" significa aquella clase de compuestos descritos en la Sección 5.2, de abajo, que incluye los compuestos 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1,3-diona (conocida también como a- (3-aminoftalimido) glutarimida) y 3- (4' aminoisoindolino-1' -ona) -1-piperidino-2, 6-diona. Como se usan aquí, los términos "CC-5013" y "Revimid™" significan el compuesto 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol- \ 2-il) -piperideno-2 , 6-diona (conocido también como 3-(4' aminoisoindolino-1' -ona) -l-piperidino-2 , 6-diona) . Como se usan aquí, los términos "CC-4047" y "Actimid™" significan el compuesto 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona (también conocido como a- (3-aminoftalimido) glutarimida) . Como se usan aquí, el término "células CD34+" significa células madre, progenitoras o precursoras de CD34+. Como se usan aquí, los términos HEMOXIN™ y NIPRISAN™ se refieren a los extractos vegetales como se describen en la Patente Norteamericana No . 5,800,819, caracterizados por una mezcla de aproximadamente 12 a aproximadamente 17 partes en peso de semillas de Piper guiñéense, desde aproximadamente 15 a aproximadamente 19 partes en peso de tallos de Pterocarpus osun, de aproximadamente 12 a aproximadamente 18 partes en peso de frutas de Eugenia caryophyllata, y de aproximadamente a aproximadamente 32 partes en peso de hojas de Sorghum bicolor, y opcionalmente 15-22 partes en peso de potasa, en donde la mezcla se extrae con agua fría. Este extracto vegetal tiene actividad anti-falciforme. 4. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La FIG. 1 representa la línea de tiempo de diferenciación de células CD34+ en presencia de SCF, Flt3-L, GM-SCF y TNFa, ya sea en presencia de DMSO (control) o 4-(Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona. La FIG. 2 representa la inducción de la expresión de los genes de hemoglobina fetal, hemoglobina Sx, y hemoglobina ?B en respuesta al DMSO (control) o la 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona. También se representa el efecto de la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1,3-diona (CC-4047) sobre la inducción de ESTs relacionados con la hemoglobina ex . 1 La FIG. 3 representa el nivel del marcador glicoforina A en las células CD34+ en presencia de 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona o 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona 0, 0.01, 0.1, 1.0, 10 o 100 µM, después de seis días de cultivo. La FIG. 4 representa el nivel de hemoglobina fetal en las ceñudas CD34+ en presencia de 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona o 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona 0, 0.01, 0.1, 1.0, 10 o 100 µM, después de seis días de cultivo. La FIG. 5 representa una porción de un microarreglo que muestra los niveles de expresión relativa de los genes específicos de eritroides a los 0, 3 y 6 días de cultivo en medio que contiene SCF, Flt3-L, GM-CSF y TNFa . Los niveles de expresión se determinaron por hibridación de ARNc etiquetado con biotina derivada de AR? con un microarreglo Affymetrix U133A. La FIG. 6 representa la línea de tiempo de la expresión de células CD34+ en presencia de SCF, Flt3-L e IL-3, seguido por la diferenciación en presencia de SCF y eritropoietina , ya sea en presencia de DMSO (control) o 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona. La FIG. 7 representa los resultados de un análisis FACS que muestran una ligera reducción en la expresión de glicoforina A después de la diferenciación en presencia de Epo y SCF, en presencia de 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3 -piperidil) ) -isoindolino-1,3 -diona o DMSO (control). Los números en cada cuadrante indican el porcentaje de células que expresan la glícoforina A y/o CD71. La FIG. 8 representa el aumento en la expresión de hemoglobina fetal en las células CD34+ diferenciadas por 6 días en presencia de 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona, en comparación con un control de DMSO, y SCF (50 ng/ml) +Epo (4 unidades/ml) . Las concentraciones de 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona se variaron desde 0.001 µM a 10 µM. Los puntos de datos indican el porcentaje de células identificadas por citometría de flujo, que expresan la hemoglobina fetal. La FIG. 9 representa un análisis FACS que muestra que el aumento en la expresión de hemoglobina fetal (Eje Y) se asocia con una reducción en la expresión de hemoglobina de adulto. Los números en cada cuadrante indican el porcentaje de células que expresan la hemoglobina fetal y/o la hemoglobina de adulto. Las células se diferenciaron por 6 días en presencia de Epo, SCF, y ya sea 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona o DMSO. La FIG. 10 representa el aumento en la expresión de hemoglobina fetal debido a la 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona sobre aquella inducida por la hidroxiurea o la 5-azacitidina. Las células se cultivaron por seis días en presencia de SCF (50 ng/ml) y Epo (2 U/ml) , y ya sea DMSO (control), 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona (0.1, 1, 10 µM) , 5-azacitidina (0.1, 1 µM; toxica a 10 µM) o hidroxiurea (0.1, 1, 10 µM) . Las barras indican el porcentaje de células que demuestran expresión de hemoglobina fetal . La FIG. 11 representa el análisis de citometría de flujo que muestra una sinergia entre la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona y la hidroxiurea al aumentar la expresión de hemoglobina fetal. Las células CD34+ se diferenciaron por seis días en presencia de SCF y Epo, como arriba, y ya sea 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona o 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona (véase la Sección 5.2) . Los números en cada panel indican el porcentaje de células que expresan la hemoglobina fetal . La FIG. 12 representa los geles de STAT5 de UT-7 en presencia o ausencia de Epo, y ya sea con 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3 -piperidil) ) -isoindolino-1, 3 -diona o DMSO (control). Panel inferior: nivel absoluto de proteína STAT5. Panel superior: nivel de proteína STAT5 fosforilada. 5. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN 5.1 DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS CD34+ A UN LINAJE ERITROIDE La presente invención proporciona métodos para modular la diferenciación de células madre, precursoras o progenituras de CD34+ a un linaje predominantemente eritroide. Los inventores han descubierto que la clase de compuestos inmunomoduladores conocidos como IMiDs™, cuando se ponen en contacto con tales células bajo las condiciones apropiadas, provocan un desplazamiento en la diferenciación hacia un linaje eritroide. Este desplazamiento en la diferenciación está evidenciado por los cambios distintivos en la expresión genética, incluyendo, pero no limitados a aumentos en la expresión de los genes que codifican la glicoforina A, y las hemoglobinas fetales, tales como la hemoglobina ? y la hemoglobina e. Por lo tanto, el método de la presente invención es sumamente útil porque proporciona un medio para aumentar la producción de una población de células que producen hemoglobina, las cuales pueden sustituir la población de origen natural de las células que producen hemoglobina de un individuo. Los IMiDs™ también provocan el aumento en la expresión en las células CD34+ diferenciadas, de la proteína estabilizante de hemoglobina alfa, una proteína que preferencialmente se enlaza a la hemoglobina alfa, pero no a la hemoglobina beta o la hemoglobina A (Hba2ß2) . Esto es ventajoso puesto que la hemoglobina alfa en exceso de hemoglobina beta tiende a formar precipitados que dañan las células sanguíneas rojas. En si, se predice que la AHSP, y un aumento en la expresión de AHSP mediada por IMiD, modulan los estados patológicos del exceso de hemoglobina alfa, incluyendo la talasemia beta. Tal efecto sobre la expresión de AHSP, acoplado con la elevación de la expresión de hemoglobina fetal, es una ventaja en el tratamiento de IMiD versus otros fármacos que aumentan la expresión de hemoglobina fetal .

Por lo tanto, la invención proporciona primero un método para modular la diferenciación de las células CD34+ a un linaje eritroide que comprende diferenciar dichas células bajo condiciones adecuadas y en presencia de un compuesto inmunomodulador tal como un IMiD, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato o profármaco del mismo. Los ejemplos de IMiDs™ que se pueden usar en la presente invención se describen en detalle en la Sección 5.2 de abajo. Sin embargo, los IMiDs™ preferidos particularmente son la 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona y la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona. Las células CD34+ pueden ser cualquier tipo de células madre, progenituras, o dedicadas capaces de diferenciarse en células eritroides . Tañes células pueden ser de capacidad ilimitada, o pueden estar dedicadas a un linaje hematopoietico. Las células CD34+ se pueden derivar de cualquier fuente; las particularmente preferidas son las células madre "similares a embrionarias" derivadas de la placenta. Para una descripción de tales células madre similares a embrionarias y los métodos para obtenerlas, véase la Publicación de la Solicitud Norteamericana ?o. US 2003/0180269 Al, publicada el 5 de septiembre del 2003, la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. Otras células CD34+ útiles para los métodos de la invención incluyen las células madre obtenidas de cualquier tejido (tales como, por ejemplo, las células madre hematopoieticas o las células madre embrionarias) y las células progenitoras no dedicadas de cualquier tejido. Tales células CD34+ pueden ser heterólogas o autólogas con referencia al receptor pretendido, cuando se usan tales células, la diferenciación de las cuales se modula de acuerdo con los métodos de la presente invención, para tratar la anemia o una hemoglobinopatía. La diferenciación de las células CD34+ puede tener lugar típicamente durante el curso de 3-6 días. En los ensayos in vitro en los cuales se cultivan las células CD34+ en presencia de un IMiD (descrito en los Ejemplos) , los cambios en la expresión genética que indican la diferenciación a lo largo de una vía eritroide fueron evidentes en el tercer día del cultivo. La expresión del gen específico de eritroides se aumento significativamente, y las características fenotípicas de las células eritroides estaban presentes en las células CD34+ en el día 6 del cultivo. De acuerdo con la invención, por lo tanto, las células CD34+ se pueden cultivar in vitro en presencia de un compuesto de la invención, tal como un compuesto inmunomodulador, específicamente un IMiD, por un periodo de días suficiente para la expresión genética específica de eritroides, en particular la expresión del gen de hemoglobina fetal, y/o para que aparezcan las características celulares. En varias modalidades, las células CD34+ se pueden cultivar por 3, 6, 9, o 12 días, o más. El compuesto de la invención se puede introducir una vez al inicio del cultivo, y el cultivo continua hasta que la diferenciación está substancialmente completa, o por 3, 6, 9, 12, o más días. Alternativamente, el compuesto de la invención se puede administrar a un cultivo de células CD34+ una pluralidad de veces durante el cultivo. Las células CD34+ se pueden cultivar y se diferencian en presencia en un sólo compuesto de la invención, o en presencia de una pluralidad de diferentes compuestos de la invención. Los compuestos de la invención se puede usar a cualquier concentración desde 0.01 µM - 10 mM. Preferiblemente, la concentración para la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona es entre 0.01-10 µM, y para la 3- (4-amino-l-oxo-l,3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona es preferiblemente de 0.01-100 µM. Además de diferenciar las células CD34+ in vitro, tales células se pueden diferenciar en un individuo, in vivo. Tal individuo preferiblemente es un mamífero, aun más preferiblemente un humano. Como con la diferenciación in vitro de las células CD34+, las células CD34+ dentro de un individuo se pueden diferenciar por la administración de uno o más de los compuestos inmunomoduladores de la invención. Tal administración puede ser en forma de una dosis individual. Alternativamente, al individuo se pueden administrar el uno o más compuestos de la invención una pluralidad de veces. Tal administración se puede llevar a cabo, por ejemplo, durante un periodo de 3 , 6, 9, 12 o más días, y puede seguir el (los) régimen (es) de dosificación y las formas descritas en la Sección 5.4 de abajo. Cuando la diferenciación de las células CD34+ se debe completar in vivo, la diferenciación se puede completar usando los compuestos inmunomoduladores individualmente, o una combinación de los compuestos inmunomoduladores y una o más citocinas. Por ejemplo, para un individuo que tiene una hemoglobinopatía tal como la anemia de células falciformes o una talasemia, quien tiene un nivel mayor que el normal de SCF y/o eritropoietina, la diferenciación in vivo se puede completar por la administración de uno o más de los compuestos inmunomoduladores (por ejemplo, la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona) . Por el contrario, cuando un individuo sufre una anemia que es resultado de, o se caracteriza por, un nivel menor que el normal de citocinas eritropoieticas (por ejemplo, SCF o eritropoietina) , tales citocinas se pueden administrar junto con, o antes de, la administración del compuesto inmunomodulador. Por ejemplo, a un individuo que sufre de anemia inducida por quimioterapia se le pueden administrar una o más citocinas (por ejemplo, la combinación de SCF, Flt-3L e IL-3) por ejemplo, 3-6 días, seguido por la administración, por ejemplo, durante 3-6 días, de uno o más compuestos inmunomoduladores de la invención, en particular con SCF y eritropoietina, en una cantidad suficiente para provocar un aumento detectable en la expresión de hemoglobina fetal en las células CD34+ de dicho individuo. Alternativamente, a tal individuo se le pueden administrar células CD34+ puestas en contacto con una o más citocinas in vitro (por ejemplo, SCF, Flt-3L e IL-3) , por ejemplo durante 3-6 días, seguido por la administración de las células al individuo, junto con SCF y eritropoietina en una cantidad suficiente para provocar un aumento detectable en la expresión de hemoglobina fetal en las células CD34+. Tal administración se puede llevar a cabo una sola vez o múltiples veces, y una o más de tales administraciones puede estar acompañada por la administración de un compuesto de la invención (véase la Sección 5.3), un segundo compuesto (véase abajo), o una combinación de los tres . Algunos de los compuestos de la invención (por ejemplo, la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona o la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2,6-diona) se puede poner en contacto con las células madre, progenitoras o precursoras de CD34+ para inducir uno o más genes en las células que están asociados con o son necesarios para la eritropoiesis y/o la hematopoyesis, en particular, uno o más genes que codifican una hemoglobina fetal. En una modalidad, la invención proporciona un método para inducir uno o más genes asociados con o esenciales para la eritropoiesis o la hematopoyesis, que comprende poner en contacto células madre, progenitoras o precursoras hematopoieticas con un compuesto inmunomodulador en presencia de eritropoietina y el factor de células madre, en donde dicho compuesto inmunomodulador está presente en una cantidad suficiente para provocar que dichas células madre, progenitoras o precursoras hematopoieticas expresen uno o más genes que codifican la hemoglobina fetal. En una modalidad específica, dichas células madre, progenitoras o precursoras hematopoieticas son células CD34+. En otra modalidad específica, dicho uno o más genes asociados con o esenciales para la eritropoiesis o la hematopoyesis son genes que codifican el factor eritroide 1 similar a Kruppel; la glicoproteina asociada con el grupo sanguíneo rhesus; la glicoforina B; la integrina alfa 2b; el factor asociado con eritroides; la glicoforina A; el precursor del grupo sanguíneo Kell ; la hemoglobina a2 ; el portador soluto 4; intercambiadores de aniones; Ihemoglobina ?A de anhidrasa carbónica; hemoglobina ?G; hemoglobina el; o cualquier combinación de los anteriores . En otra modalidad específica, dicho agente inmunomodulador es un IMiD™. En una modalidad más específica, dicho IMiD™ es una a- (3-aminoftalimido) glutarimida; un análogo o profármaco de a- (3-aminoftalimido) glutarimida; 3- (4 ' aminoisoindolino-1' -ona) -1-piperidino-2, 6-diona; un análogo o profármaco de 3- (4' aminoisoindolino-1' -ona) -l-piperidino-2 , 6-diona; o un compuesto de la formula Además del uno o más compuestos de la invención, las células CD34+ se pueden diferenciar adicionalmente, ya sea in vivo o in vitro, en presencia de una o más citocinas. las citocinas útiles para dirigir las células CD34+ a lo largo de una vía de diferenciación de eritroides incluye, pero no se limita a, eritropoietina (Epo) , TNFa, factor de células madre (SCF) , Flt-3L, y factor estimulantes de las colonias de macrófagos granulositos (GM-SCF) . La Epo y el SCF se conocen por ser citocinas eritropoieticas . Por lo tanto, en una modalidad, las células CD34+ se diferencian en presencia de Epo o SCF. En otra modalidad preferida, las células CD34+ se diferencian en presencia de Epo y SCF. En otra modalidad, las células CD34+ se diferencian en presencia de la combinación de TNFa, SCF, Flt-3L y GM-SCF. En otra modalidad, dichas células que se diferencian son una o más células en un cultivo celular. En otra modalidad, dichas células son células dentro de un individuo. En una modalidad de diferenciación in vitro, una o más de Epo, TNFa, SCF, Flt-3L y GM-SCF se ponen en contacto con uno o más IMiDs™. En una modalidad de diferenciación in vivo, una o más de Epo, SCF, Flt-3L y GM-CSF se administran a un individuo en el mismo régimen de tratamiento que el uno o más IMiDs™. Las citocinas usadas en los métodos de la invención pueden ser citocinas de formación natural. Por ejemplo, los análogos o derivados de eritropoietina que se pueden usar en combinación con los compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a Aranesp™ y Darbopoietina™. Las citocinas usadas pueden ser purificadas de fuentes naturales o se producen recombinantemente. Los ejemplos de citocinas recombinantes que se pueden usar en los métodos de la invención incluyen filgrastim, o el factor estimulante de la colonia de granulositos (G-CSF) recombinante, la cual se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial Neupogen® (Amgen, Thousand Oaks, CA) ; Sargramostim, o GM-CSF recombinante, las cuales se venden en los Estados Unidos bajo el nombre comercial Leukine® (Immunex, Seattle, WA) ; epo recombinante, la cual se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial Epogen® (Amgen, Thousand Oaks, CA) ; y el factor de células madre de metionilo (SCF) , la cual se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial Ancestim. Las formas recombinante y mutada de GM-CSF se pueden preparar como se describe en las Patentes Norteamericanas Nos . 5,391,485; 5,393,870; y 5,229,496; todas las cuales se incorporan aquí como referencia. Las formas recombinante y mutada de G-CSF se pueden preparar como se describe en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,810,643; 4,999,291; 5,528,823; y 5,580,755; todas las cuales se incorporan aquí como referencia. Se pueden utilizar otras citocinas las cuales estimulan la sobrevivencia y/o la proliferación de las células precursoras hematopoieticas y las células poieticas activas in vitro o in vivo, o las cuales estimulan la división y la diferenciación de los progenitores eritroides en células in vitro o ín vivo. Tales citocinas incluyen, pero no se limitan a, interleucinas, tales como IL-2 (incluyendo IL-II recombinante ("rIL2") y canarypox IL-2) , IL-10, IL-12, e IL-18; interferonas, tales como interferona alfa-2a, interferona alfa-2b, interferona alfa-nl, interferona alfa-n3, interferona beta-la, e interferona gamma-Ib; y G-CSF. Cuando se administran a una persona que tiene hemoglobinopatía, los compuestos de la invención, en particular en presencia de Epo, en particular en presencia de la combinación de TNFa, SCF, Flt-3L y GM-SCF, y más particularmente en presencia de Epo y SCF, inducen la producción de eritrocitos, y la producción de hemoglobina fetal así como la producción de AHSP. Como se señala arriba, las citocinas usadas pueden incluir las formas purificadas y recombinantes, o los análogos o derivados de citocinas especificas . Los compuestos de la invención también se pueden administrar en conjunción con uno o más segundos compuestos conocidos por tener, los cuales se sospecha que tienen, un efecto benéfico sobre la hemoglobinopatía. En este contexto, "efecto benéfico" significa alguna reducción de cualquiera de los síntomas de una hemoglobinopatía o anemia. Por ejemplo, con referencia específica a la anemia de células falciformes de hemoglobinopatía, el segundo compuesto puede ser un compuesto diferente de un compuesto de la invención, el cual se sabe o se sospecha que induce la producción de hemoglobina fetal . Tales compuestos incluyen hidroxiurea, y butiratos o derivados de butirato. El segundo compuesto también puede ser un compuesto que relaje los vasos sanguíneos, tales como óxido nitroso, por ejemplo óxido nitroso aplicado o administrado exógenamente . El segundo compuesto también puede ser un compuesto que enlace directamente la hemoglobina S, evitando que se asuma la conformación que induce el aspecto falciforme. Por ejemplo, el extracto vegetal conocido como HEMOXIN™ (NIPRISAN™; véase la Patente Norteamericana No. 5,800,819), el cual es un extracto de una mezcla de aproximadamente 12 a aproximadamente 17 partes en peso de semillas de Piper guiñéense, de aproximadamente 15 a aproximadamente 19 partes en peso de tallos de Pterocarpus osun, de aproximadamente 12 a aproximadamente 18 partes en peso de frutas de Eugenia caryphyllata, y de aproximadamente 25 a aproximadamente 32 partes en peso de hojas de Sorghum bicolor, y opcionalmente 15-22 partes en peso de potasa, en donde la mezcla se extrae con agua fría, el cual tiene actividad anti-falciforme. El segundo compuesto también puede ser un antagonista del canal de Gardos. Los ejemplos de antagonistas del canal de Gardos incluyen los derivados de clotrimazol y triaril metano. El segundo compuesto también puede ser uno que reduzca la adhesión de las células sanguíneas rojas, reduciendo por ello la cantidad de coagulación predominante en la anemia de células falciformes. Otras hemoglobinopatías se pueden tratar con un segundo compuesto el se sabe o se sospecha que es eficaz para la condición específica. Por ejemplo, la ß talasemia se puede tratar adicionalmente con los segundos compuestos Deferoxamina, un quelante de fierro que ayuda a prevenir la acumulación de fierro en la sangre, o folato (vitamina B9) . La talasemia o anemia de células falciformes también se puede tratar con la proteína C como el segundo compuesto (Patente Norteamericana No . 6,372,213). Existe alguna evidencia de que los remedios herbales pueden aliviar los síntomas de las hemoglobinopatías, por ejemplo, la talasemia; tales remedios y algunos de los compuestos activos específicos contenidos en los mismos, también se pueden usar como un segundo compuesto en el método de la invención. Véase, por ejemplo, Wu Zhikui et al . , "The effect of Bushen Shenxue Fang on ß-thalassemia at the Gene Level", Journal of Tradicional Chínese Medicine 18(4): 300-303 (1998); la Patente Norteamericana No . 6,538,023 "Therapeutic Uses of Green Tea Polyphenols for Sickle Cell Disease" . El tratamiento de la anemia hemolítica autoinmune puede incluir los corticosteroides como el Segundo compuesto.

Los segundos compuestos que son proteínas también puede ser derivados o análogos de otras proteínas. Tales derivados pueden incluir, pero no se limitan a, proteínas que carecen de las porciones de carbohidratos presentes normalmente en su formas de formación natural (por ejemplo, las formas no glicosiladas) , los derivados pegilados y las proteínas de fusión, tales como las proteínas formadas fusionando la IgGl o la IgG3 con la proteína o la porción activa de la proteína de interés. Véase, por ejemplo, Penichet, M. L. y Morrison, S. L., J. Immunol. Methods 248:91-101 (2001). Las citocinas y/u otros compuestos potencialmente útiles en el tratamiento de la anemia o una hemoglobinopatía se pueden administrar al mismo tiempo que los compuestos inmunomoduladores útiles en la presente invención. A este respecto, las citocinas u otros compuestos se pueden administrar como formulaciones separadas de los compuesto inmunomodulador, o cuando sea posible, se pueden combinar con los compuestos inmunomoduladores para la administración como una sola composición farmacéutica. Alternativamente, las citocinas, los otros compuestos, o ambos, se pueden administrar por separado de los compuestos inmunomoduladores usados en los métodos de la invención, y pueden seguir los mismos o diferentes itinerarios de dosificación. En una modalidad preferida, los compuestos inmunomoduladores, por ejemplo los IMiDs™, las citocinas y algunos otros compuestos útiles para tratar la anemia o una hemoglobinopatía, se administran al mismos tiempo, pero en formulaciones farmacéuticas separadas por flexibilidad de la administración. Además de las combinaciones de tratamientos resumida arriba, el individuo tratado puede recibir transfusiones. Tales transfusiones pueden ser de sangre, preferiblemente sangre compatible, o un substituto de sangre tal como Hemospan™ o Hemospan™ PS (Sangart) . En algunas de las combinaciones de tratamiento descritas aquí el individuo tratado es eucariótico. Preferiblemente, el individuo tratado es un mamífero, y aun más preferiblemente, humano . Los métodos de la invención se pueden usar para tratar alguna anemia, incluyendo la anemia que resulta de una hemoglobinopatía. Las hemoglobinopatías y las anemias tratables por los métodos de la invención pueden ser de origen genético, tales como la anemia de células falciformes o las talasemias. La hemoglobinopatía se puede deber a una enfermedad, tales como cáncer, incluyendo, pero no limitados a, canceres de los sistemas hematopoietico o linfático. Otras condiciones tratables usando los métodos de la invención incluyen hiperplenismo, esplenectomia, resección del intestino, infiltración de la medula ósea. Los métodos de la presente invención también se pueden usar para tratar la anemia que resulta de la introducción deliberada o accidental de un veneno, toxina o fármaco. Por ejemplo, las anemias que resultan de quimioterapias de cáncer se pueden tratar usando los métodos y los compuestos de la invención. En si, los métodos de la invención se pueden emplear cuando la anemia o una hemoglobinopatía es la condición primaria a ser tratada, o es la condición secundaria provocada por una enfermedad o régimen de tratamiento subyacentes . 5.2 LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN Los compuestos de la invención se pueden comprar comercialmente o bien se preparar de acuerdo con los métodos descritos en las patentes o publicaciones de patentes descritas aquí. Además, las composiciones ópticamente puras se pueden sintetizar asimétricamente o resolver usando los agentes de resolución conocidos o columnas quirales así como otras técnicas estándar de la química orgánica sintética. Los compuestos usados en la invención pueden incluir compuestos inmunomoduladores que son racemicos, enriquecidos esteromericamente o estereomericamente puros, y las sales solvatos, estereoisómeros, y profármacos de los mismos. Los compuestos preferidos usados en la invención son moléculas orgánicas pequeñas que tienen un peso molecular menos a aproximadamente 1,000 g/mol, y no son proteínas, péptidos, oligonucleótidos, oligosacáridos, u otras macromoléculas . Como se usa aquí y a menos que se indique de otra manera, los términos "compuestos inmunomoduladores" e "IMiDs™" (Celgene Corporation) abarcan las moléculas orgánicas pequeñas que inhiben marcadamente la TNF-a, IL Iß y la IL 12 de monocitos inducida por LPS, y parcialmente inhiben la producción de IL6. Los compuestos inmunomoduladores específicos se discuten abajo. La TNF-a es una citocina inflamatoria producida por los macrófagos y los monolitos durante la inflamación aguda. La TNF-a es responsable por una amplia gama de eventos de señalización en las células. Sin estar limitados por la teoría, uno de los efectos biológicos ejercidos por los compuestos inmunomoduladores de la invención, es la reducción de la síntesis de TNF-a. Los compuestos inmunomoduladores de la invención mejoran la degradación del ARNm de TNF-a. Además, sin estar limitados por la teoría, los compuestos inmunomoduladores usados en la invención también son co-estimulantes potentes de las células T y aumentan dramáticamente la proliferación celular en una manera dependiente de la dosis. Los compuestos inmunomoduladores de la invención también pueden tener un mayor efecto co-estimulante sobre el subconjunto de células T CD8+ que sobre el subconjunto de células T CD4+. Además, los compuestos preferiblemente tienen propiedades antiinflamatorias, y coestimulan eficientemente las células T. Además, sin estar limitados por una teoría particular, los compuestos inmunomoduladores usados en la invención pueden ser capaces de actuar tanto indirectamente a través de la activación de citocinas y directamente sobre las células Asesinas Naturales ("?K"), y aumentan la habilidad de la células ?K para producir citocinas benéficas tales como, pero no limitadas a, IF?-?. Los ejemplos específicos de compuestos inmunomoduladores incluyen, pero no se limitan a los derivados de ciano y carboxi de estírenos substituidos tales como aquellos descritos en la Patente Norteamericana No. 5,929,117; l-oxo-2- (2, 6-dioxo-3-fluoropiperidin-3il) isoindolinas y l,3-dioxo-2- (2, 6-dioxo-3-fluoropiperidin-3il) isoindolinas tales como aquellas descritas en las Patentes Norteamericanas Nos . 5,874,448 y 5,955,476; las 2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -1-oxoisoindolinas tetrasubstituidas descritas en la Patente Norteamericana No. 5,798,368; 1-oxo y 1, 3-dioxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) isoindolinas (por ejemplo, los derivados de 4-metilo de talidomida) , incluyendo, pero no limitados a aquellos descritos en la Patentes Norteamericanas Nos. ,635,517, 6,476,052, 6,555,5554 y 6,403,613; 1-oxo y 1,3-dioxoisoindolinas substituidas en la posición 4 o 5 del anillo de indolina (por ejemplo, acido 4- (4-amino-l, 3-dioxoisoindolin-2-il) -4-carbamoilbutanoico) descrito en la Patente Norteamericana No. 6,380,239; isoindolin-1-ona e isoindolino-1, 3-diona substituidas en la posición 2 con 2,6-dioxo-3-hidroxipiperidin-5-il (por ejemplo, 2- (2, 6-dioxo-3-hidroxi-5-fluoropiperidin-5-il) -4-aminoisoindolin-1-ona) descritos en la Patente Norteamericana No. 6,458,810; una clase de amidas cíclicas no polipeptídicas descritas en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,698,579 y 5,877,200; aminotalidomida, así como los análogos, productos de la hidrólisis, metabolitos, derivados y precursores de aminotalidomida, y las 2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) ftalimidas substituidas y los 2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -1-oxoisoindoles substituidos tales como aquellos descritos en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,281,230 y 6,316,471; y los compuestos de isoindol-imida tales como aquellos descritos en la solicitud de patente norteamericana no. 09/972,487 presentada en 5 de octubre del 2001, la solicitud de patente Norteamericana no. 10/032,286, presentada en 21 de diciembre del 2001, y la Solicitud Internacional ?o. PCT/US01/50401 (Solicitud Internacional ?o. WO 02/059106) . Las totalidades de cada una de las patentes y solicitudes de patente identificadas aquí, se incorporan aquí como referencia. Los compuestos inmunomoduladores no incluyen la talidomida. Otros compuestos inmunomoduladores de la invención incluyen, pero no se limitan a, 1-oxo y l,3-dioxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) isoindolinas substituidas con amino en el anillo benzo como se describen en la Patente Norteamericana No. 5,635,517, la cual se incorpora aquí como referencia. Estos compuestos tienen la estructura I : en la cual una de X e Y es C=0, la otra de X e Y es C=0 o CH2, y R2 es hidrógeno o alquilo inferior, en particular metilo. Los compuestos inmunomoduladores incluyen, pero no se limitan a: l-oxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -6-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -7-aminoisoindolina; l,3-dioxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina; y l,3-dioxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina. Otros compuestos inmunomoduladores específicos de la invención pertenecen a una clase de 2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) ftalimidas substituidas y 2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -1-oxoisoindoles substituidos, tales como aquellos descritos en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,281,230; 6,316,471; 6,335,349; y 6,476,052, y la Solicitud de Patente Internacional No. PCT-US97/13375 (Solicitud Internacional No. WO 98/03502) , cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula: en la cual : una de X e Y es C=0 y la otra de X e Y es C=0 o CH2; (i) cada una de R1, R2, R3, y R4, independientemente de las otras es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o (ii) una de R1, R2, R3, y R4 es -NHR5 y el resto de R1, R2, R3, y R4 son hidrógeno; R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono; R6 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, o halo; siempre y cuando R6 sea diferente de hidrógeno si X e Y son C=0 y (i) cada una de R1, R2, R3, y R4 sea flúor o (ii) una de R1, R2, R3, o R4 sea amino. Los compuestos representativos de esta clase son de las fórmulas : en donde R1 es hidrógeno o metilo. En una modalidad separada, la invención abarca el uso de las formas enantiomericamente puras (por ejemplo, los enantiómeros (R) o (S) ópticamente puras) de estos compuestos. Aun otros compuestos inmunomoduladores de la invención pertenecen a una clase de isoindol-imidas descritas en las Publicaciones de las Solicitudes de Patentes Norteamericanas Nos. 2003/0096841 y US 2003/0045552, y la Solicitud Internacional No. PCT/US01/50401 (Publicación Internacional No. WO 02/059106) , cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula II : y las sales, hidratos, solvatos, clatratos, enantiómeros, diastereómeros, racematos, aceptables farmacéuticamente y las mezclas de estereoisómeros de los mismos, en donde: una de X e Y es C=0 y la otra es CH2 o C=0; R1 es H, alquilo de (C?-C8) , cicloalquilo de (C3-C7) , alquenilo de (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , bencilo, arilo, alquil (C0-C4) -heterocicloalquilo (C?-C6) , alquil (C0-C4) -heteroarilo (C2-C5) , C(0)R3, C(S)R3, c(0)0R4, alquil (d-C8) -N(R6)2/ alquil (C?-C8) -OR5, alquil ( L-CS) -C (O) OR5, C(0)NHR3, C(S)NHR3, C(0)NR3R3', C(S)NR3R3' o alquil (C?-C8) -O (CO) R5; R2 es H, F, bencilo, alquilo de (C?-C8) , alquenilo de (C2-C8) , o alquinilo de (C2-C8) ; R3 y R3' son independientemente alquilo de C?-C8, cicloalquilo de (C3-C7) , alquenilo de (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , bencilo, arilo, alquil (C0-C) -heterocicloalquilo (C?-C6) , alquil (C0-C4) -heteroarilo (C2-C3) , alquil (C0-C4) -N(R6) 2, alquil (d-Cg) -OR5, alquil (C?-C8) -C (O) OR5, (alquil (Cx-C8) -O (CO) R5, o C(0)OR5; R4 es alquilo de ( L-C8) , alquenilo de (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , alquil (Cx-C4) -0RS, bencilo, arilo, alquil (C0-C4) -heterocicloalquilo (C?-C6) , o alquil (C0-C ) -heteroarilo (C2-C3) ; R5 es alquilo de (C?-C8) , alquenilo de (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , bencilo, arilo, o heteroarilo de (C2-C5) ; cada aparición de R5 es independientemente H, alquilo de (d-C8) , alquenilo de (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , bencilo, arilo, heteroarilo de (C2-C5) o alquil (C0-C8) -C (O) O-R5 o los grupos R6 se pueden unir para formar un grupo heterocicloalquilo; n es 0 o 1; y * representa un centro de carbono quiral . En los compuestos específicos de la fórmula II, cuando n es 0 entonces R1 es cicloalquilo de (C3-C7) , alquenilo e (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , bencilo, arilo, alquil (C0-C4) -heterocicloalquilo (C?-C6) , alquil (C0-C4) -heteroarilo (C2-C5) , C(0)R3, C(0)OR4, alquil (d-Cs) -N(R6) 2, alquil (Cx-C8) -OR5, alquil (Ca-C8) -C (O) OR5, C (S) NHR3 , o alquil (d-C8) -O (CO) R5; R2 es H o alquilo de (d-C8) ; y R3 es alquilo de (C?-C8) , cicloalquilo de (C3-C7) , alquenilo de (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , bencilo, arilo, alquil (C0-C4) -heterocicloalquilo (C?-C5) , alquil (C0-C4) -heteroarilo (C2-C5) , alquil (C5-C8) -?(R6) 2; alquil (C0-C8) -?H-C (O) R-R5; alquil (C?-C8)-OR5, alquil (C?-Cß) -C (O) OR5, alquil (C?-C8) -o(CO)R5, o C(0)OR5; y las otras variables tienen las mismas definiciones . En otros compuestos específicos de la fórmula II, R2 es H o alquilo de (C?-C4) . En otros compuestos específicos de la fórmula II, R1 es alquilo de (d-C8) o bencilo. En otros compuestos específicos de la fórmula II, R1 es H, alquilo de (C_.-C8) , bencilo, CH2OCH3, CH2CH2OCH3, o In otra modalidad de los compu.estos de la fórmula II, R1 es en donde Q es 0 o S, y cada aparición de R7 es independientemente H, alquilo de (C?-C8) , cicloalquilo de (C3-C7) , alquenilo de (C2-C8) , alquinilo de (C2-C8) , bencilo, arilo, halógeno, alquil (C0-C4) -heterocicloalquilo (C?-C6) , alquil (C0-C4) -heteroarilo (C2-C5) , alquil (C0-C8) -N (R6) 2, alquil (C?-C8) -OR5, alquil (d-C8) -C (O) OR5, alquil (Ca-C8) -O (CO) R5, o C(0)OR5, o las apariciones adyacentes de R7 se pueden tomar juntas para formar un anillo de alquilo o arílo bicíclico. En otros compuestos específicos de la fórmula II, R1 es C(0)R3. En otros compuestos específicos de la fórmula II, R3 es alquil (C0-C4) -heteroarilo (C2-C5) , alquilo de C?-C8) , arilo, o alquil (C0-C4) -OR5. En otros compuestos específicos de la fórmula II, el heteroarilo es piridilo, furilo, o tienilo. En otros compuestos específicos de la fórmula II, R1 es C(0)OR4. En otros compuestos específicos de la fórmula II, el H de C (0) NHC (0) se puede reemplazar con alquilo de (C?-C4) , arilo, o bencilo. Otros ejemplos de los compuestos en esta clase incluyen, pero no se limitan a: [2- (2, 6-dioxo-piperidin-3-il) -1, 3-dioxo-2, 3-dihidro-lH-isoindol-4-ilmetil] -amida; terbutil éster de ácido (2- (2,6-dioxo-piperidin-3-il) -1, 3-dioxo-2 , 3-dihidro-1H-isoindol-4-ilmetil) -carbamico; 4- (aminometil) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-dione; ?- (2- (2, 6-dioxo-piperidin-3-il) -1, 3-dioxo-2,3-dihidro-lH-isoindol-4-ilmetil) -acetamida; ?- { (2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il) metil} ciclopropil-carboxamida; 2-cloro-?-{ (2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il) metil}acetamida; ?- (2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il) -3-piridilcarboxamida; 3-{l-oxo-4- (bencilamino) isoindolin-2-il}piperidino-2-il} -diona; 2- (2,6-dioxo (3-piperidil) ) -4- (bencilamino) isoindolino-1, 3-diona; N- { (2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) } -1, 3-dioxoisoindolin-4-il) metil}propanamida; ?- { (2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il) metil} -3-piridilcarboxamida; N- { (2- (2,6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il)metil}heptanamida; ?- { (2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -1,3-dioxoisoindolin-4-il) metil } -2-furilcarboxamida; acetato de {?- (2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il) carbamoil}metil; ?- (2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -1,3-dioxoisoindolin~4-il)pentanamida; ?- (2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il) -2-tienilcarboxamida; ?- { [2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il] metil } (butilamino) carboxamida; ?-{ [2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il] metil} (octilamino) carboxamida; y ?-{[2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -1, 3-dioxoisoindolin-4-il] metil} (bencilamino) carboxamida. Aun otros compuestos inmunomoduladores específicos de la invención pertenecen a una clase de isoindol-imidas descritas en las Publicaciones de las Solicitudes de Patentes Nos. US 2002/0045643, La Publicación Internacional No. WO 98/54170, y la Patente Norteamericana No. 6,395,743, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula III : y las sales, hidratos, solvatos, clatratos, enantiómeros, diastereómeros, racematos, aceptables farmacéuticamente y las mezclas de estereoisómeros de los mismos, en donde; una de X e Y es C=0 y la otra es CH2 o C=0; R es H o CH20C0R' ; (i) cada una de R1, R2, R3, o R4, independientemente de las otras, es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o (ii) una de R1, R2, R3, o R4 es nitro o -NHR5 y el resto de R2, R2, R3, o R4 son hidrógenos ; R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono R6 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, benzo, cloro, o flúor; R' es R7-CHR10-N (R8R9) ; R7 es m-fenileno o p-fenileno o - (CnH2n) - en el cual n tiene un valor de 0 a 4 ; cada una de R8 y R9 tomada independientemente de la otra es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, o R8 y R9 tomadas juntas son tetrametileno, pentametileno, hexametileno, o -CH2CH2X?CH2CH2- en la cual Xx es -0-, -S-, o -NH- ; R10 es hidrógeno, alquilo de 8 átomos de carbono, o fenilo; y * representa un centro de carbono quiral . Otros compuestos representativos son de la fórmula: en donde : una de X e Y es C=0 y la otra es CH2 o C=0; (i) cada una de R1, R2, R3, o R4, independientemente de las otras, es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o (ii) una de R1, R2, R3, y R4 es -NHR5 y el resto de R2, R2, R3, o R4 son hidrógenos; R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono; R6 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, benzo, cloro, o flúor; R' es R7-CHR10-N(R8R9) ; R7 es m-fenileno o p-fenileno o - (CnH2n) - en el cual n tiene un valor de 0 a 4; cada una de R8 y R9 tomada independientemente de la otra es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, o R8 y R9 tomadas juntas son tetrametileno, pentametileno, hexametileno, o -CH2CH2X1CH2CH2- en la cual X1 es -0-, -S-, o -NH-; R10 es hidrógeno, alquilo de 8 átomos de carbono, o fenilo. Otros compuestos representativos son de la fórmula: en la cual una de X e Y es C=0 y la otra es C=0 o CH2; cada una de R1, R2, R3, o R4, independientemente de las otras, es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o (ii) una de R1, R2, R3, y R4 es nitro o amino protegido y el resto de R2, R2, R3, o R4 son hidrógenos; y R6 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, benzo, cloro, o flúor. Otros compuestos representativos son de la fórmula: en la cual -. una de X e Y es C=0 y la otra es C=0 o CH2; (i) cada una de R1, R2, R3, o R4, independientemente de las otras, es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o (ii) una de R1, R2, R3, y R4 es -NHR5 y el resto de R2, R2, R3, o R4 son hidrógenos; R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, o CO-R7-CH(R10)NR8R9 en la cual cada uno de R7, R8, R9, y R10 son como se definen aquí; y R6 es alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, benzo, cloro, o flúor. Los ejemplos específicos de los compuestos son de la fórmula: en la cual : una de X e Y es C=0 y la otra de X e Y es C=0 o CH2; R6 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, bencilo, cloro, o flúor; R7 'es m-fenileno, p-fenileno o - (CnH2n) - en la cual n tiene un valor de 0 a 4; cada una de R8 y R9 tomada independientemente de la otra es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, o R8 y R9 tomadas juntas son tetrametileno, pentametileno, hexametileno, o -CH2CH2X1CH2CH2- en la cual X1 es -O-, -S. o -NH-; y R10 es hidrógeno alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, o fenilo. Los compuestos inmunomoduladores preferidos de la invención con la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona y la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona. Los compuestos se pueden obtener vía los métodos sintéticos estándar (véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 5,635,517, incorporada aquí como referencia) . Los compuestos están disponibles de Celgene Corporation, Warren, NJ. La 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona tiene la siguiente estructura química: el compuesto 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) piperideno-2, 6-diona tienen la siguiente estructura quimica: En otra modalidad, los compuestos inmunomoduladores de la invención abarcan las formas polimorfitas de la 3- (4-amino-1-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona tales como la forma A, B, C, D, E, F, G y H descritas en la Solicitud provisional No. 60/499,723, presentada el 4 de septiembre del 2003, y la solicitud norteamericana no provisional correspondiente, presentada el 3 de septiembre del 2004, ambas de las cuales se incorporan aquí como referencia. Por ejemplo, la Forma A de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona es un material cristalino no solvatado que se puede obtener a partir de sistemas de solventes no acuosos. La Forma A tiene un patrón de difracción en polvo de rayos X que comprende máximos significativos a aproximadamente 8, 14.5, 16, 17.5, 20.5, 24 y 26 grados 2?, y tiene una temperatura de fusión de calorimetría diferencial de barrido máxima de aproximadamente 270°C. La Forma A es débilmente o no giroscópica y parece ser el polimorfo anhidro termodinámicamente más estable de la 3- (4-amino-1-oxo-1, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona descubierto hasta ahora. La forma B de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona es un material cristalino, hemihidratado que se puede obtener a partir de varios sistemas de solventes, incluyendo, pero no limitados a hexano, tolueno, y agua. La Forma B tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende máximos significativos en aproximadamente 16, 18, 22, y 27 grados 2?, y tiene endotermas de la curva de DSC de aproximadamente 146 a 268°C, las cuales identifican la deshidratación y fusión por experimentos de microscopia de etapa caliente. Los estudios de interconversión muestran que la Forma B se convierte a la Forma E en sistemas de solventes acuosos, y se convierte a otras formas en acetona y otros sistemas anhidros. La Forma C de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona es un material cristalino hemisolvatado que se puede obtener de solventes tales como, pero no limitados a acetona. La Forma C tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende máximos significativos a aproximadamente 15.5 y 25 grados 2?, y tiene una temperatura de fusión de calorimetría diferencial de barrido máxima de aproximadamente 269°C. La Forma C no es giroscópica debajo de aproximadamente 85% RH, peso se puede convertir a la Forma B a humedades relativas mayores. La Forma D de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona es un polimorfo solvatado, cristalino preparado a partir de una mezcla de acetonitrilo y agua. La Forma D tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende máximos significativos a aproximadamente 27 y 28 grados 2?, y tienen una temperatura de fusión de calorimetría diferencial de barrido máxima de aproximadamente 270°C. La Forma D es ya sea poco o no giroscópica, pero típicamente se convertirá a la forma B cuando se somete a humedades relativas mayores . La Forma E de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona es un material cristalino, deshidratado que se puede obtener suspendiendo la 3- (4-amino-1-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2, 6-diona en agua y por una evaporación lenta de la 3- (4-amino-l-oxo-l,3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona en un sistema de solventes con una relación de aproximadamente 9:1 de acetona :agua . La Forma E tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende máximos significativos a aproximadamente 20, 24.5 y 29 grados 2T, y tiene una temperatura de fusión de calorimetría diferencial de barrido máxima de aproximadamente 269°C. La Forma E se puede convertir a la Forma C en un sistema de solventes de acetona y a la Forma G en un sistema de solventes de THF. En sistemas de solventes acuoso, la Forma E parece ser la forma más estable. Los experimentos de Desolvatación llevados a cabo sobre la Forma E muestran que tras el calentamiento a aproximadamente 125°C por aproximadamente cinco minutos, la Forma E se puede convertir a la Forma B. Por calentamiento a 175°C durante aproximadamente cinco minutos, la Forma B se puede convertir a la Forma F. La Forma F de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroispindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona es un material cristalino no solvatado que se puede obtener de a deshidratación de la Forma E. La Forma F tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende máximos significativos a aproximadamente 19, 19.5 y 25 grados 2?, y tiene una temperatura de fusión de calorimetría diferencial de barrido máxima de aproximadamente 269°C. La Forma G de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona es un material cristalino, no-solvatado que se puede obtener suspendiendo las formas B y e en un solvente tal como, pero no limitado a tetrahidrofurano (THF) . La Forma G tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende máximos significativos en aproximadamente 21, 23, y 24.5 grados 2?, y tiene una temperatura de fusión de calorimetría diferencial de barrido máxima de aproximadamente 267°C.

La Forma H de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperideno-2 , 6-diona es un material cristalino hidratado parcialmente (aproximadamente 0.25 moles) el cual se puede obtener exponiendo la Forma E a humedad relativa de 0%. La Forma H tiene un patrón de difracción de rayos X en polvo que comprende máximos significativos a aproximadamente 15, 26 y 31 grados 2?, y tiene una temperatura de fusión de calorimetría diferencial de barrido máxima de aproximadamente 269°C. Otros compuestos inmunomoduladores específicos de la invención incluyen, pero no se limitan a las l-oxo-2- (2 , 6-dioxo-3-fluoropiperidin-3-il) isoindolinas y las l,3-dioxo-2- (2, 6-dioxo-3-fluoropiperidin-3-il) isoindolinas tales como aquellas descritas en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,874,448 y 5,955,476, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula: en donde Y es oxígeno o H2 y cada una de R1, R2, R3, y R4, independientemente de las otras, es hidrógeno, halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, o amino. Otros compuestos inmunomoduladores específicos de la invención incluyen, pero no se limitan a, las 2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -1-oxoindolinas tetrasubstituidas descritas en la Patente Norteamericana No. 5,798,368, la cual se incorpora aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula: en donde cada una de Rx, R2, R3, y R4, independientemente de las otras, es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono. Otros compuestos inmunomoduladores específicos de la invención incluyen, pero no se limitan a las 1-oxo y 1,3-dioxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) isoindolinas descritas en la Patente Norteamericana No. 6,403,613, la cual se incorpora aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula: en la cual Y es oxígeno o H2, una primera de R1 y R2 es halo, alquilo, alcoxi, alquilamino, dialquilamino, ciano, o carbamoilo, la segunda de R1 y R2, independientemente de la primera es hidrógeno, halo, alquilo, alcoxi, alquilamino, dialquilamino, ciano, o carbamoilo, y R3 es hidrógeno, alquilo, o bencilo. Los ejemplos específicos de los compuestos son de la fórmula: en donde una primera de R1 y R2 es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, dialquilamino en el cual cada alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono, ciano, o carbamoilo, la segunda de R1 y R2, independientemente de la primera es hidrógeno, halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, alquilamino en el cual el alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono, dialquilamino en el cual cada alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono, ciano, o carbamoílo, y R3 es hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o bencilo. Los ejemplos específicos incluyen, pero no se limitan a, l-oxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -4-metilisoindolina. Otros compuestos representativos son de la fórmula: en donde una primera de R1 y R2 es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, dialquilamino en el cual cada alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono, cíano, o carbamoilo, la segunda de R1 y R2, independientemente de la primera es hidrógeno, halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, alquilamino en el cual el alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono, dialquilamino en el cual cada alquilo es de 1 a 4 átomos de carbono, ciano, o carbamoilo, y R3 es hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o bencilo. Los ejemplos específicos incluyen, pero no se limitan a l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -4-metilisoindolina. Otros compuestos inmunomoduladores específicos de la invención incluyen, pero no se limitan a, 1-oxo y 1,3-dioxoisoindolinas substituidas en la posición 4 o 5 de anillo de indolina, descritos en la Patente Norteamericana No. 6,380,239 y la solicitud Norteamericana No. 10/900,270 en tramitación junto con la presente, presentada el 28 de julio del 2004, las cuales se incorporan aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula: en la cual el átomo de carbono designado C* constituye un centro de quiralidad (cuando n no es cero y R1 no es lo mismo que R2) ; una de X1 y X2 es amino, nitro, alquilo de uno a seis carbonos, o NH-Z, y la otra de X1 o X2 es hidrógeno; cada una de R1 y R2 independiente de la otra es hidroxi o NH-Z; R3 es hidrógeno, alquilo de uno a seis átomos de carbono, halo, o haloalquilo; Z es hidrógeno, arilo, alquilo de uno a seis carbonos, formilo, o acilo de uno a seis carbonos; y n tiene un valor de 0, 1, 0 2; con la provisión de que si X1 es amino, y n es 1 o 2 , entonces R1 y R2 no son ambas hidroxi ; y las sales de los mismos. Otros compuestos representativos son de la fórmula: en la cual el átomo de carbono designado C* constituye un centro de quiralidad cuando n no es cero y R1 no es R2; una de X1 y X2 es amino, nitro, alquilo de uno a seis carbonos, o NH-Z, y la otra de X1 o X2 es hidrógeno; cada una de R1 y R2 independiente de la otra es hidroxi o NH-Z; R3 es alquilo de uno a seis átomos de carbono, halo, o hidrógeno; Z es hidrógeno, arilo, o un alquilo o acilo de uno a seis carbonos,; y n tiene un valor de 0, 1, o 2. Los ejemplos específicos incluyen, pero no se limitan a ácido 2- (4-amino-l-oxo-l,3-dihidro-isoindol-2-il) -4-carbamoil-butírico y ácido 4- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2~il) -4-carbamoil-butírico, los cuales tienen las siguientes estructuras, respectivamente, y las sales solvatos, profármacos, y estereoisómeros aceptables farmacéuticamente de los mismos : Otros compuestos representativos son de la fórmula: en la cual el átomo de carbono designado C* constituye un centro de quiralidad cuando n no es cero y R1 no es R2; una de X1 y X2 es amino, nitro, alquilo de uno a seis carbonos, o NH-Z, y la otra de X1 o X2 es hidrógeno; cada una de R1 y R2 independiente de la otra es hidroxi o NH-Z; R3 es alquilo de uno a seis átomos de carbono, halo, o hidrógeno; Z es hidrógeno, arilo, o un alquilo o acilo de uno a seis carbonos,; y n tiene un valor de 0, 1, o 2; y las sales de los mismos. Los ejemplos específicos incluyen, pero no se limitan a, ácido 4-carbamoil-4-{4- [ (furan-2-il-metil) -amino] -1,3-dioxo-l,3-dihidro-isoindol-2-il}butirico, ácido 4-carbamoil-2- {4- [ (furan-2-il-metil) -amino] -1, 3-dioxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il} -butírico, ácido 2- {4- [ (furan-2-il-metil) amino] -1, 3-dioxo-l,3-dihidro-isoindol-2-il} -4-fenilcarbamoil-butírico, y ácido 2-{4- [furan-2-ilmetil) -amino] -1, 3-dioxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il}-pentanodioico, los cuales tienen las siguientes estructuras, respectivamente, y las sales, solvatos, profármacos, y estereoisómeros aceptables farmacéuticamente de los mismos : Otros ejemplos específicos de los compuestos de la fórmula: en donde una de X1 y X2 es nitro, o NH-Z, y la otra de X1 o X2 es hidrógeno; cada una de R1 y R2 independiente de la otra es hidroxi o NH-Z; R3 es alquilo de uno a seis átomos de carbono, halo, o hidrógeno; Z es hidrógeno, fenílo, un acilo de uno a seis carbonos, o un alquilo de uno a seis carbonos; y n tiene un valor de 0, 1, o 2; siempre que si una de X1 y X2 sea nitro, y n sea 1 o 2, entonces R1 y R2 son diferentes de hidroxi; y si -COR2 y -(CH2YCOR1 son diferentes, el átomo de carbono designado C* constituye un centro de quiralidad. Otros compuestos representativos son de la fórmula: en donde una de X1 y X2 es alquilo de uno a seis carbonos ; cada una de R1 y R2, independiente de la otra es hidroxi o NH-Z ; R3 es alquilo de uno a seis carbonos, halo, o hidrógeno; Z es hidrógeno, fenilo, un acilo de uno a seis carbonos, o un alquilo de uno a seis carbonos; y ? tiene un valor de 0, 1, o 2; y Si -COR2 y - (CH.JYCOR1 son diferentes, el átomo de carbono designado C* constituye un centro de quiralidad. Aun otros compuestos inmunomoduladores específicos de la invención incluyen, pero no se limitan a, isoindolin-1-ona e isoindolin-1, 3-diona substituidas en la posición 2 con 2,4-dioxo-3-hidroxipiperidin-5-ilo, descritos en la Patente Norteamericana No . 6,458,810, la cual se incorpora aquí como referencia. Los compuestos representativos son de la fórmula: en donde : los átomos de carbono designados * constituyen centros de quiralidad; X es -C(0) - o -CH2-; R1 es alquilo de 1 a 8 átomos de carbono o -NHR3; R2 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, o halógeno; y R3 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, no substituido o substituido con alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, halo, amino, o alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono; cicloalquilo de 3 a 18 átomos de carbono, fenilo, no substituido o substituido con alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, halo, amino, o alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono, bencilo, no substituido o substituido con alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, halo, amino, o alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono, o -COR4 en el cual R4 es hidrógeno, alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, no substituido o substituido con alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, halo, amino, o alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono, cicloalquilo de 3 a 18 átomos de carbono, fenilo, no substituido o substituido con alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, halo, amino, o alquilamino de 1 a 4 átomos de carbono, o bencilo, no substituido o substituido con alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 8 átomos de carbono, halo, amino, o alquilamino dé 1 a 4 átomos de carbono. Los compuestos de la invención se pueden comprar comercialmente o bien se preparan de acuerdo con los métodos descritos en las patentes o las publicaciones de patentes descritas aquí. Además, los compuestos ópticamente puros se pueden sintetizar o resolver asimétricamente usando los agentes de resolución conocidos o columnas quirales así como otras técnicas estándar de la química orgánica sintética. Como se usa aquí y a menos que se indique de otra manera, el término "sal aceptable farmacéuticamente" abarca las sales de adición de ácidos y bases no toxicas del compuesto al cual se refiere el término. Las sales de adición de ácidos no toxicas incluyen aquellas derivadas de los ácidos orgánicos e inorgánicos conocidos en la técnica, los cuales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metansulfonico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido maleico, ácido sórbico, ácido aconitíco, ácido salicílico, ácido ftálico, ácido embolico, ácido enántico, y los similares. Los compuestos que son de naturaleza acida son capaces de formar sales con varias bases aceptables farmacéuticamente. Las bases que se pueden usar para preparar las sales de adición de base aceptables farmacéuticamente de tales compuestos ácidos son aquellas que forman sales de adición de base no toxicas, es decir, sales que contienen cationes aceptables farmacológicamente tales como, pero no limitadas a, sales de metales alcalinos o alcalinotérreos y las sales de calcio, magnesio, sodio o potasio en particular. Las bases orgánicas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, N,N-dibenciletilendiamina, cloroprocaina, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumaina (N-metulglucamina) , lisina y procaína. Como se usa aquí, y a menos que se especifique de otra manera, el término "solvato" significa un compuesto de la presente invención o una sal del mismo, que incluye además una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de solvente enlazada por fuerzas intermoleculares no covalentes . Cuando el solvente es agua, el solvato es un hidrato.

Como se usa aquí, y a menos que se indique de otra manera, el término "profármaco" significa un derivado de un compuesto que se puede hidrolizar, oxidar, o reaccionar de otra manera bajo condiciones biológicas (in vitro o in vivo) para proporcionar el compuesto. Los ejemplos de profármacos incluyen, pero no se limitan a derivados de los compuestos inmunomoduladores de la invención que comprenden porciones biohidrolizables tales como aminas biohidrolizables, esteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, carbonatos biohidrolizables, ureidos biohidrolizables, y análogos de fosfato biohidrolizables. Otros ejemplos de profármacos incluyen los derivados de los compuestos inmunomoduladores de la invención que comprenden porciones -NO, -N02, -ONO, o -ON02. Los profármacos se pueden preparar típicamente usando los métodos bien conocidos, tales como aquellos descritos en 1 Burger' s Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolf ed. , 5ta ed. 1995), y Design of Prodrugs (H. Bundgaar ed. , Elsevier, Nueva York 1985) . Como se usan aquí, a menos que se indique de otra menara, los términos "amida biohidrolizable", "éster biohidrolizable", "carbamato biohidrolizable", "carbonato biohidrolizable", "ureida biohidrolizable", "fosfato biohidrolizable" significan una amida, éster, carbamato, carbonato, ureida, o fosfato, respectivamente, de un compuesto que, ya sea 1) no interfiere con la actividad biológica del compuesto pero puede conferir sobre ese compuesto propiedades ventajosas in vivo, tales como asimilación, duración de la acción, o inicio de la acción; o 2) es inactivo biológicamente pero se convierte in vivo en el compuesto activo biológicamente. Los ejemplos de esteres biohidrolizables incluyen, pero no se limitan a, esteres de alquilo inferior, esteres de aciloxialquilo inferior (tales como esteres de acetoximetilo, acetoxietilo, aminocarboxiloximetilo, pivaloiloximetilo, y pivaloiloxietilo) , lactonil esteres (tales como ftalidil y tioftalidil esteres) , esteres de alcoxiaciloxialquil inferior (tales como metoxicarbonil-oximetil, etoxicarboniloxietil e isopropoxicarboniloxietil esteres) , alcoxialquil esteres, colina esteres, y acilamino alquil esteres (tales como acetamidometil esteres) . Los ejemplos de amidas biohidrolizables incluyen, pero no se limitan a, amidas de alquilo inferior, amidas de a-aminoácidos. Alcoxiacil amidas, y alquilaminoalquilcarbonil amidas. Los ejemplos de carbamatos biohidrolizables incluyen, pero no se limitan a, alquilaminas inferiores, etilendiaminas substituidas, -amino ácidos, hidroxialquilaminas, aminas heterocíclicas y heteroaromáticas, y aminas de polieter. Como se usa aquí, a menos que se especifique de otra manera, el termino "estereoisómero" abarca todos los compuestos enantiomericamente/estereomericamente puros y enantiomericamente/estereomericamente enriquecidos de esta invención. Como se usan aquí, y a menos que se indique de otra manera, el termino "estereomericamente puro" o "enantiomericamente puro" significan que un compuesto comprende un estereoisómero y esta substancialmente libre de si contra estereoisómero o enantiómero. Por ejemplo, un compuesto es estereomericamente o enantiomericamente puro cuando el compuesto contiene 80%, 90%, o 05% o más de un estereoisómero y 2'%, 10%, o 15% o menos del contra estereoisómero. En ciertos casos, un compuesto de la invención se considera ópticamente activo o estereomericamente/enantiomerícamente puro (es decir, substancialmente la forma R o substancialmente la forma S) con respecto a un centro quiral cuando el compuesto es aproximadamente 80% ee (exceso enantiomérico) o más, preferiblemente igual a o mayor del 90% ee con respecto a un centro quiral particular, y más preferiblemente 95% ee con respecto a un centro quiral particular. Como se usa aquí, y a menos que se indique de otra manera, el termino "enriquecido estereomericamente" o "enriquecido enantiomericamente" abarca las mezclas racemicas así como otras mezclas de estereoisómeros de compuestos de esta invención (por ejemplo, R/S=30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 55/45, 60/40, 65/35 y 70/30) . Varios compuestos inmunomoduladores de la invención contienen uno o más centros quirales, y pueden existir como mezclas racemicas de enantiómeros o mezclas de diastereómeros. Esta invención abarca el uso de las formas estereomericamente puras de tales compuestos, así como el uso de mezclas de esas formas. Por ejemplo, las mezclas que comprenden cantidades iguales o desiguales de los enantiómeros de los compuestos inmunomoduladores particulares de la invención, se pueden usar en los métodos y las composiciones de la invención. Estos isómeros se pueden sintetizar asimétricamente o se resuelven usando las técnicas estándar tales como columnas quirales o agentes de resolución quirales. Véase, por ejemplo, Jacques, J. Et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, Nueva York, 1981); Wilen, S. H. , et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L. , Stereochemistry of Carbón Compounds (McGraw-Hill, N.Y. 1962); y Wilen, S. H. , Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E. L. Eliel, Ed. , Univ. Of Notre Dame Press, Notre Dame, IN 1972) . Se debe notar que si hay una discrepancia entre una estructura representada y un nombre dado a esa estructura, se debe asignar más peso a la estructura representada. Además, si la estereoquímica de una estructura o una porción de una estructura no se indica con, por ejemplo, líneas negritas o discontinuas, la estructura o la porción de la estructura se debe interpretar como abarcando todos los estereoisómeros de la misma. 5.3 COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y FORMAS DE DOSIFICACIÓN Las composiciones farmacéuticas se pueden usar en la preparación de formas de dosificación unitarias únicas, individuales. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la invención comprenden un compuesto inmunomodulador de la invención, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco aceptable farmacéuticamente del mismo. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la invención pueden comprender además uno o más excipientes . Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la invención pueden comprender también uno o más ingredientes activos adicionales. En consecuencia, las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la invención comprenden los ingredientes activos descritos aquí (por ejemplo, un compuesto inmunomodulador y un segundo agente activo) . Los ejemplos de segundos ingredientes activos, opcionales o adicionales se describen aquí (véase, por ejemplo, la Sección 5.1).

Las formas de dosificación unitarias de la invención son adecuadas para la administración oral, mucosal (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal, o rectal) parenteral (por ejemplo, subcutánea, intravenosa, inyección de bolo, intramuscular, o intraarterial), tópica, (por ejemplo, gotas para los ojos u otras preparaciones oftálmicas) , transdérmica, o transcutánea a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a: tabletas; capsuletas; cápsulas, tales como cápsulas de gelatina blanda; bolsitas; pastillas; comprimidos; dispersiones; supositorios; polvos; aerosoles (por ejemplo, rociadores nasales o inhaladores) ; geles, formas de dosificación liquidas adecuadas para la administración oral o mucosal a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua, o emulsiones liquidas de agua en aceite) , soluciones, y elixires; formas de dosificación líquidas adecuadas para la administración parenteral a un paciente; gotas para los ojos u otras preparación exoftálmicas adecuadas para la administración tópica; y sólidos estériles (por ejemplo, sólidos cristalinos o amorfos) que se pueden reconstituir para proporcionar formas de dosificación líquidas adecuadas para la administración parenteral a un paciente .

La composición, la forma, y el tipo de las formas de dosificación de la invención variará típicamente dependiendo de su uso. Por ejemplo, una forma de dosificación usada en el tratamiento agudo de una enfermedad puede contener cantidades mayores de uno o más de los ingredientes activos que la comprenden que una forma de dosificación usada en el tratamiento crónico de la misma enfermedad. De manera similar, una forma de dosificación parenteral puede contener cantidades menores de uno o más de los ingredientes activos que la comprenden que una forma de dosificación oral usada para tratar la misma enfermedad. Estos y otros modos en los cuales variaran las formas de dosificación especificas una de la otra serán fácilmente aparentes para aquellas personas experimentadas en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18va ed., Mack Publishing, Easton PA (1990) . Las composiciones y formas de dosificación típicas comprenden uno o más excipientes . Los excipientes adecuados son bien conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica de la farmacia, y los ejemplos no limitantes de excipientes adecuados se proporcionan aquí. Si un excipiente particular es adecuado para su incorporación en una composición farmacéutica o forma de dosificación depende de una variedad de factores bien conocidos en la técnica incluyendo, pero no limitados a, la menara en la cual se administrará la forma de dosificación a un paciente. Por ejemplo, las formas de dosificación orales tales como tabletas pueden contener excipientes no adecuados para usarse en las formas de dosificación parenterales. La conveniencia de un excipiente particular también puede depender de los ingredientes activos específicos en la forma de dosificación. Por ejemplo, la descomposición de algunos ingredientes activos puede ser acelerada por algunos excipientes tales como la lactosa, o cuando se exponen al agua. Los ingredientes activos que comprenden aminas primarias o secundarias son particularmente susceptibles a tal descomposición acelerada. En consecuencia, esta invención abarca las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación que contienen poca si no es que nada de lactosa, otros mono- o disacáridos. Como se usa aquí, el termino "libre de lactosa" significa que la cantidad de lactosa presente, si existe, es insuficiente para aumentar substancialmente la velocidad de degradación de un ingrediente activo. Las composiciones libres de lactosa de la invención pueden comprender excipientes que son bien conocidos en la técnica y están listados, por ejemplo, en la Pharmacopeia de los Estados Unidos (USP) 25-NF20 (2002) . En general, las composiciones libres de lactosa comprenden ingredientes activos, un aglutinante/rellenador, y un lubricante en cantidades compatibles farmacéuticamente y aceptables farmacéuticamente. Las formas de dosificación libres de lactosa preferidas comprenden ingredientes activos, celulosa microcristalina, almidón pre-gelatínizado, y estearato de magnesio. Esta invención abarca además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación anhidras que comprende los ingredientes activos, ya que el agua puede facilitar la degradación de algunos compuestos. Por ejemplo, la adición de agua (por ejemplo, 5%) está ampliamente aceptada en las artes farmacéuticas como un medio para simular el almacenamiento a largo plazo para determinar las características tales como la vida media de almacenamiento o la estabilidad de las formulaciones a través del tiempo. Véase, por ejemplo, Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principies & Practice, 2d. Ed. , Marcel Dekker, NY, NY 1995, pp 379-80. En efecto, el agua y el calor aceleran la descomposición de algunos compuestos. Por lo tanto, el efecto del agua sobre una formulación puede ser de gran importancia ya que la humedad se encuentra comúnmente durante la fabricación, manejo, empacado, almacenamiento, embarque y uso de las formulaciones . Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación anhidras de la invención se pueden preparar usando ingredientes anhidros o que contienen poca humedad y en condiciones de poca humedad. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación que comprenden lactosa y al menos un ingrediente activo que comprende amina primaria o secundaria son preferiblemente anhidras si se espera un contacto substancial con la humedad durante la fabricación, empacado, y/o almacenamiento. Una composición farmacéutica anhidra se debe preparar y almacenar de modo tal que se mantenga su naturaleza anhidra. Por consiguiente, las composiciones anhidras se empacan preferiblemente usando materiales conocidos por prevenir la exposición al agua, de modo tal que estas pueden estar incluidas en equipos de formulación adecuados. Los ejemplos de empaques adecuados incluyen, pero no se limitan a, hojas metálicas delgadas selladas herméticamente, plásticos, recipientes de dosis unitarias (por ejemplo, frascos) , empaques de burbuja, y paquetes de tiras. La invención abarca además composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden uno o más compuestos que reducen la velocidad con la cual de decompondrá un ingrediente activo. Tales compuestos, los cuales se conocen aquí como "estabilizadores" incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes tales como ácido ascórbico, amortiguadores de pH, o amortiguadores salinos.

Como las cantidades y los tipos de excipientes, las cantidades y los tipos específicos de ingredientes activos en una forma de dosificación pueden diferir dependiendo de factores tales como, pero no se limitan a la ruta por la cual se debe administrar a los pacientes. Sin embargo, las formas de dosificación típicas de la invención comprenden un compuesto inmunomodulador de la invención o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco aceptable farmacéuticamente del mismo en una cantidad de desde aproximadamente 0.10 a aproximadamente 150 mg. Las formas de dosificación típicas comprenden un compuesto inmunomodulador de la invención o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco aceptable farmacéuticamente del mismos en una cantidad de aproximadamente 0.1, 1, 2, 5, 7.5, 10, 12.5, 15, 17.5, 20, 25, 50, 100, 150, o 200 mg. En una modalidad particular, una forma de dosificación comprende 4- (amino) -2-2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona (es decir, a- (3-aminoftalimido) glutarimida) en una cantidad de aproximadamente 1, 2, 5, 10, 25 o 50 mg. En una modalidad especifica, una forma de dosificación preferida comprende 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidino-2 , 6-diona en una cantidad de aproximadamente 5, 10, 25, o 50 mg. Las formas e dosificación típicas comprenden el segundo ingrediente activo en una cantidad de 1 a aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 10 a aproximadamente 350 mg, o de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg. Por supuesto, la cantidad especifica de fármaco anticancerígeno dependerá del agente específico usado, el tipo de cáncer a ser tratado o manejado, y la cantidad de un compuesto inmunomodulador de la invención y cualquiera de los agentes activos adicionales administrados concurrentemente al paciente. Cuando uno o más compuestos de la invención se administran a un individuo con una citocina, la citocina se puede usar en cualquier forma de dosificación aceptable farmacéuticamente o concentración aceptable, como se describe en otra parte aquí. Típicamente, por ejemplo, el Neupogen se administra como un bolo inyectable a una dosis desde aproximadamente 4 a aproximadamente 8 microgramos/kg/día hasta que se alcanza un conteo de neutrofilos de 10,000/mm3. La Ancestina (factor de células madre humanas de metionilo recombinante) se administra típicamente vía inyección subcutánea (pero no inyección intravenosa) desde 1-20 microgramos/kg/día por 9-12 días; el factor de células madre humanas recombinante se puede administrar a una dosis similar. El Sargramostim se administra típicamente a una dosis de hasta aproximadamente 250 microgramos/m2/día, intravenosamente o subcutáneamente, hasta el momento cuando los conteos de células sanguíneas blancas excede 50,000/mm2. El Pegfilgrastim (Neulasta™) se administra típicamente a una dosis de aproximadamente 6 miligramos subcutáneos, según sea necesario. Las dosis apropiadas de citocinas que afectan el número de células sanguíneas blancas en la sangre se puede determinar en una base por paciente determinando el número la población de células sanguíneas blancas particular, o el número de células sanguíneas blancas totales. La IL-3 recombinante se puede obtener, por ejemplo, de R&D Systems, Inc. (Minneapolis, MN) . La IL-3 recombinante tiene un ED50 de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.4 ng/ml in vitro, y se puede usar a una concentración equivalente un vivo. El factor de células madre humano recombinante (SCF) se puede obtener, por ejemplo, de BioSource International (Camarillo, CA) . El SCF recombinante tiene un ED50 de aproximadamente 2 a aproximadamente 5 ng/ml in vitro, y se puede usar a una concentración equivalente un vivo. El Ligando de Tirosina Cinasa-3 similar a Fms humano recombinante (Flt-3L) se puede obtener, por ejemplo, de Pro-Spec-Tany TechnoGene LTD (Rehoboth, Israel) o US Biological (Swampscott, MA) . El Flt-3L humano recombinante tiene un ED50 de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 ng/ml in vitro, y se puede usar a una concentración equivalente in vivo. Las concentraciones de trabajo actuales de cualquiera de los anteriores se pueden determinar en una base individual determinando los cambios a través del tiempo en el número de células sanguíneas blancas o células sanguíneas rojas en un cultivo o en muestras de sangre extraídas de un individuo, de acuerdo con las practicas conocidas en la técnica. La diferenciación de las células CD34+ a lo largo de una vía eritroide, y la expresión de los genes de hemoglobina fetal, se pueden evaluar usando las técnicas conocidas (por ejemplo, detección mediada por PCR o mediada por anticuerpos, de transcriptos de hemoglobina fetal o de hemoglobina fetal) . La eritropoietina (por ejemplo, Epogentm) se administra típicamente a una dosis desde aproximadamente 12.5 U/kg a 525 U/kg, frecuentemente aproximadamente 100 U/kg o menos, intravenosamente o subcutáneamente. Una variante de la eritropoietina, Aranesp™, se administra típicamente a una dosis similar. Para la eritropoietina y los análogos de eritropoietina, la dos apropiada es la dosis que resulta en un hematocrito de entre 10 g/dL y aproximadamente 12 g/dL, y la cual evita una elevación de mayor de 1.0 g/dL en algún periodo de 2 semanas . 5.3.1 FORMAS DE DOSIFICACIÓN ORAL Las composiciones farmacéuticas de la invención que son adecuadas para la administración oral se pueden presentar como formas de dosificación discretas, tales como, pero no limitadas a, tabletas (por ejemplo, tabletas masticables) , capsuletas, cápsulas, y líquidos (por ejemplo, jarabes con sabor) . Tales formas de dosificación contienen cantidades predeterminadas de los ingredientes activos, y se pueden preparar por los métodos de la farmacia bien conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica. Véase en general, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18va ed. , Mack Publishing, Easton PA (1990) . Las formas de dosificación orales típicas de la invención se preparan combinando los ingredientes activos en una mezcla intima con al menos un excipiente de acuerdo con las técnicas de formulación farmacéutica convencionales. Los excipientes pueden tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Por ejemplo, los excipientes adecuados para usarse en formas de dosificaciones líquidas orales o en aerosol incluyen, pero no se limitan a agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservadores, y agentes colorantes. Los ejemplos de excipientes adecuados para usarse en formas de dosificación orales sólidas (por ejemplo, polvos, tabletas, cápsulas, y capsuletas) incluyen, pero no se limitan a almidones, azucares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes y agentes desintegradores .

Debido a su facilidad de administración las tabletas y las cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosas, en cuyo caso, se emplean excipientes sólidos. Si se desea, las tabletas pueden ser revestidas mediante las técnicas acuosas o no acuosas estándar. Tales formas de dosificación se pueden preparar mediante alguno de los métodos de la farmacia. En general, las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación se preparan mezclando uniformemente e íntimamente los ingredientes activos con portadores líquidos, portadores divididos finamente, o ambos, y después moldeando el producto en la presentación deseada, si es necesario. Por ejemplo, las tabletas se pueden preparar por compresión o moldura. Las tabletas comprimidas se pueden preparar comprimiendo en una maquina adecuada los ingredientes activos en una forma de flujo libre, tales como polvos o granulos, mezclados opcionalmente con un excipiente. Las tabletas moldeadas se pueden preparar moldeando en una maquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo, humedecida con un diluyente líquido inerte. Los ejemplos de excipientes que se pueden usar en las formas de dosificación orales de la invención incluyen, pero no se limitan a, aglutinantes, rellenadores, desintegradores, y lubricantes . Los aglutinantes adecuados para usarse en las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a almidón de maíz, almidón de papa, y otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, ácido algínico, otros alginatos, tragacanto pulverizado, goma de guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, etil celulosa, acetato de celulosa, carboximetil celulosa de calcio, carboximetil celulosa de sodio) , polivinilpirrolidona, metil celulosa, almidón pre-gelatinízado, hidroxipropil metil celulosa, (por ejemplo, Nos. 2208, 2906, 2910), celulosa microcristalina, y mezclas de los mismos. Las formas adecuadas de celulosa microcristalina incluyen, pero no se limitan a, los materiales vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 , AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (disponibles de FMC Corporation, American Viseóse División, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) , y mezclas de los mismos. Un aglutinante específico es una mezcla de celulosa microcristalina y carboximetil celulosa de sodio vendida como AVICEL RC-581. Los excipientes o aditivos anhidros o de baja humedad incluyen AVICEL-PH-103™ y almidón 1500 LM. Los ejemplos de rellenadores adecuados para usarse en las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación descritas aquí incluyen, pero no se limitan a talco, carbonato de calcio (por ejemplo, granulos o polvo) , celulosa microcristalina, celulosa pulverizada, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pregelatinizado, y mezclas de los mismos. El aglutinante o el rellenador en las composiciones farmacéuticas de la invención típicamente está presente desde aproximadamente 50 a aproximadamente 99 por ciento en peso de la composición farmacéutica o la forma de dosificación. Los desintegradores se usan en las composiciones de la invención para proporcionar tabletas que se desintegran cuando se exponen a un ambiente acuoso. Las tabletas que contienen demasiado desintegrante se pueden desintegrar durante el almacenamiento, en tanto que aquellas que contienen muy poco o se desintegran a una velocidad deseada o bajo las condiciones deseadas. Por lo tanto, se debe usar una cantidad suficiente de desintegrados que no es ni demasiada ni muy poca para alterar perjudicialmente la liberación de los ingredientes activos, para las formas de dosificación orales sólidas de la invención. La cantidad de desintegrados usada varia con base en el tipo de formulación, y se puede discernir fácilmente por aquellas personas con experiencia ordinaria en la técnica. Las composiciones farmacéuticas típicas comprenden desde aproximadamente 0.5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de desintegradores, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 por ciento en peso de desintegradores.

Los desintegradores que se pueden usar en las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la invención incluyen, pero no se limitan a, agar-agar, ácido algínico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica, crospovidona, polacrilina potásica, almidón glicolato de sodio, almidón de papa o tapioca, otros almidones, almidón pregelatinizado, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas y mezclas de los mismos. Los lubricantes que se pueden usar en las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la invención incluyen, pero no se limitan a estearato de calcio, esterato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, ácido esteárico, lauril sulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de semillas de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz, y aceite de soya) , estearato de zinc, oleato de etilo, laureato de etilo, agar, y mezclas de los mismos. Los lubricantes adicionales incluyen, por ejemplo, una gel de sílice siloide (AEROSIL 200, fabricado por W. R. Grace Co. de Baltimore, MD) , un aerosol coagulado de sílice sintética (vendido por Degussa Co. de Plano, TX) , CABO-SIL (un producto de dióxido de silicio vendido por Cabot co. de Boston, MA) , y mezclas de los mismos. Si se usan todos, los lubricantes se usan típicamente en una cantidad menor de aproximadamente 1 por ciento en peso de las composiciones farmacéuticas o las formas de dosificación en las cuales se incorporan. Una forma de dosificación oral sólida preferida de la invención comprende un compuesto inmunomodulador de la invención, lactosa anhidra, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílice anhidra coloidal, y gelatina. 5.3.2. FORMAS DE DOSIFICACIÓN DE LIBERACIÓN RETARDADA Los ingredientes activos de la invención se pueden administrar por medio de liberación controlada o por dispositivos de administración de son bien conocidos por aquellas personas con experiencia ordinaria en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a aquellos descritos en las Patentes Norteamericanas os. 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; y 4,008,719, 5,674,533, 5,059,595, 5,591,767, 5,120,548, 5,073543, 5,639,476, 5,354,556, y 5,733,566, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Tales formas de dosificación se pueden usar para proporcionar liberación lenta o controlada de uno o más ingredientes activos usando, por ejemplo, sistemas osmóticos, revestimientos multicapa, micropartículas, liposomas, microesferas, o una combinación de los mismos, para proporcionar el perfil de liberación deseado en proporciones variantes . Las formulaciones de luiberacion controlada adecuadas, conocidas por aquellas personas con experiencia ordinaria en la técnica, incluyendo aquellas descritas aquí, se pueden seleccionar fácilmente para usarse con los ingredientes activos de la invención. La invención abarca por lo tanto formas de dosificación unitarias adecuadas para la administración oral, tales como pero no limitadas a tabletas, cápsulas, cápsulas de gel, y capsuletas que se adaptan para la liberación controlada.} Todos los productos farmacéuticos de liberación controlada tienen un objetivo común de mejorar loa terapia de fármacos sobre la que se logra por sus contrapartes no controladas. Idealmente, el uso en el tratamiento medico de una preparación de liberación controlada diseñada óptimamente se caracteriza por un mínimo de la sustancia farmacológica empleada para curar o controlar la condición en una cantidad mínima de tiempo. Las ventajas de las formulaciones de liberación controlada incluyen actividad extendida del fármaco, frecuencia de dosificación reducida, y complacencia del paciente. Además, las formulaciones de liberación controlada se pueden usar para afectar el tiempo de inicio de la acción u otras características, tales como los niveles sanguíneos del fármaco, y por lo tanto pueden afectar la aparición de efectos secundarios (por ejemplo, adversos) . La mayoría de las formulaciones de liberación controlada se diseñan para liberar inicialmente una cantidad de fármaco (el ingrediente activo) que produce rápidamente el efecto terapéutico deseado, y la liberación gradualmente y continuamente de otras cantidades de fármaco para mantener este nivel de efecto terapéutico o profiláctico durante un periodo prolongado de tiempo. Para mantener este nivel constante del fármaco en el cuerpo, el fármaco se debe liberar desde la forma de dosificación a una velocidad que reemplazará la cantidad de fármaco que se metaboliza y se excreta del cuerpo. La liberación controlada de un ingrediente activo se puede similar para varias condiciones incluyendo, pero no limitadas a, pH, temperatura, enzimas, agua, u otras condiciones fisiológicas o compuestos. 5.3.3. FORMAS DE DOSIFICACIÓN PARENTERAL Las formas de dosificación parenteral se pueden administrar a los pacientes por varias rutas incluyendo, pero no limitadas a la subcutánea, intravenosa (incluyendo inyección de bolo), intramuscular, e intraarterial. Puesto que su administración típicamente evita las defensas naturales de los pacientes contra los contaminantes, las formas de dosificación parenterales son preferiblemente estériles o capaces de ser esterilizadas antes de la administración a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificación parenterales incluyen, pero no se limitan a soluciones listas para inyección, productos secos listos para ser disueltos o suspendidos en un vehículo aceptable farmacéuticamente para inyección, suspensiones listas para inyección, y emulsiones. Los vehículos adecuados que se pueden usar para proporcionar las formas de dosificación parenteral de la invención son bien conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: Agua para Inyección USP; vehículos acuosos tales como, pero no limitados a, Inyección de Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio e Inyección de Ringer lactada; vehículos miscibles en agua tales como, pero no limitados a alcohol etílico, polietilenglicol, y polipropilenglicol; y vehículos no acuoso tales como, pero no limitados a, aceite de maíz, aceite de semillas de algodón, aceite de cacahuate, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo, y benzoato de bencilo. Los compuestos que aumentan la solubilidad de uno o más de los ingredientes activos descritos aquí se pueden incorporar también en las formas de dosificación parenteral de la invención. Por ejemplo, la ciclodextrina y sus derivados se pueden usar para aumentar la solubilidad de un compuesto inmunomodulador de la invención y sus derivados. Véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana ?o. 5,134,127, la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. 5.3.4. FORMAS DE DOSIFICACIÓN TÓPICAS Y MUCOSALES Las formas de dosificación tópicas y mucosales de la invención incluyen, pero no se limitan a, rociadores, aerosoles, soluciones, emulsiones, suspensiones, gotas para los ojos y otras preparaciones oftálmicas, u otras formas conocidas por una persona con experiencia en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington Pharmaceutical Sciences, 16va y 18va eds., Mack Publishing, Easton PA (1980&1990) ; e Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4ta ed. , Lea & Febiger, Philadelphia (1985) . Las formas de dosificación adecuadas para tratar los tejidos mucosales dentro de la cavidad oral, se pueden formular como enjuagues bucales o como geles orales. Los excipientes adecuados (por ejemplo, portadores y diluyentes) y otros materiales que se pueden usar para proporcionar las formas de dosificación tópicas y mucosales abarcadas por esta invención son bien conocidas por aquellas personas experimentadas en las técnicas farmacéuticas, y dependen del tejido particular al cual se aplicará una composición farmacéutica o forma de dosificación dada. Con este hecho en mente, los excipientes típicos incluyen, pero no se limitan a, agua, acetona, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1, 3 -diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral y mezclas de los mismos para formas soluciones, emulsiones o geles, los cuales no son tóxicos y son aceptables farmacéuticamente. Los humidificantes o humectantes también se pueden agregar a las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación si se desea. Los ejemplos de tales ingredientes adicionales son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington Pharmaceutical Sciences, 16va y 18va eds., Mack Publishing, Easton PA (1980 & 1990) . El pH de una composiciones farmacéutica o forma de dosificación también se puede ajustar para mejorar el suministro de uno o más ingredientes activos. De modo similar, la polaridad de un portador solvente, su fuerza iónica, o tonicidad, se pueden ajustar para mejorar el suministro. Los compuestos tales como los estearatos se pueden agregar también a las composiciones farmacéuticas o las formas de dosificación para alterar ventajosamente la hidrofilicidad o lipofilicidad del uno o más ingredientes activos, para mejorar el suministro. A este respecto, los estearatos pueden servir como un vehículo lipídico para la formulación, como un agente emulsificante o surfactante, y como un agente mejorador del suministro o mejorador de la penetración. Diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos se pueden usar para ajustar adicionalmente las propiedades de la composición resultante. 5.3.5. EQUIPOS Típicamente, los ingredientes activos de la invención se administran preferiblemente a un paciente al mismo tiempo y por diferentes rutas de administración, pero se pueden administrar en diferentes momentos o por la misma ruta de administración. Esta invención abarca por lo tanto equipos, los cuales, cuando se usan por los profesionales médicos, pueden simplificar la administración de las cantidades apropiadas de los ingredientes activos a un paciente. Un equipo típico de la invención comprende una forma de dosificación de un compuesto inmunomodulador de la invención, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, profármaco, o clatrato farmacéuticamente aceptable del mismo. Preferiblemente, el compuesto inmunomodulador proporcionado con el equipo es la 4- (amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona o la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-1-il) -piperidino-2 , 6-diona o un compuesto que tiene la formula : Los equipos abarcados por esta invención pueden comprender además citocinas y/o derivados de citocina tales como G-SCF, GM-SCF, Epo, Flt-3L, SCF, IFN, IL2 , IL8 , IL18, etc., y/o otros compuestos, incluyendo pero no limitados a otros compuestos conocidos o sospechosos de tener efectos benéficos sobre la anemia o la hemoglobinopatía, oblimersen (Genasene ) , emlfalan, topotecan, dacarbazina, irinotecan, taxotero, inhibidor de COX-2, pentoxifilina, ciprofloxacina, dexametasona, Ara-C, vinorelbina, isotretinoina, ácido 13- cis retionoico, o un mutante activo farmacológicamente o derivado del mismo, o una combinación de los mismos. Otros compuestos que se pueden incluir en un equipo incluyen uno o más de : un compuesto que induce la hemoglobina fetal ; un compuesto que relaja los vasos sanguíneos; un compuesto que cuando se enlaza covalentemente a la hemoglobina S reduce la autoagregación de la hemoglobina S ; un compuesto que es un antagonista del canal de Gardos; y un compuesto que reduce la adhesión de las células sanguíneas rojas. En una modalidad más especifica, dicho segundo compuesto es hidroxiurea, un derivado de guanidino, óxido nitroso, butirato un derivado de butirato, un aldehido, o un derivado de aldehido, un extracto vegetal que tiene actividad anti-falciforme (por ejemplo, NIPRISAN™ (HEMOXIN™) ) , clotrimazol, un derivado de triarilmetano, un anticuerpo monoclonal o un derivado de polietileno. Los ejemplos de los ingredientes activos adicionales incluyen, pero no se limitan a, aquellos descritos aquí (véase, por ejemplo, la sección 5.1) . Cuando algunos componentes de un curso de tratamiento de una hemoglobinopatía se deben tomar oralmente (por ejemplo, los compuestos inmunomoduladores, por ejemplo, los IMiDs™, por ejemplo, la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1,3-diona o la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2, 6-diona; extractos) y otros se deben administrar por otra ruta común, por ejemplo, la intravenosa o la subcutánea, un equipo de acuerdo con la invención puede comprender los componentes o los compuestos a ser administrados, diferentes de los compuestos inmunomoduladores de la invención, para usarse como un adjunto a los compuestos inmunomoduladores . Los equipos de la invención pueden comprender además los dispositivos que se utilizan para administrar los ingredientes activos. Los ejemplos de tales dispositivos incluyen, pero no se limitan a jeringas, bolsas de goteo, parches, e inhaladores .

Los equipos de la invención pueden comprender además células o sangre para transplantes así como los vehículos aceptables farmacéuticamente que se pueden usar para administrar uno o más ingredientes activos. Por ejemplo, si se proporciona un ingrediente activo en una forma sólida que debe ser reconstituida para la administración parenteral, el equipo puede comprender un recipiente sellado de un vehículo adecuado en el cual se puede disolver el ingrediente activo para formar la solución estéril libre de particulados que es adecuada para la administración parenteral. Los ejemplos de vehículos aceptables farmacéuticamente incluyen, pero no se limitan a: Agua para Inyección Patente Norteamericana; vehículos acuosos tales como, pero no limitados a, Inyección de Cloruro de Sodio, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Déxtrosa y Cloruro de Sodio, e Inyección de Ringer Lactada; vehículos miscibles en agua, tales como, pero no limitados a alcohol etílico, polietilenglicol, y propilenglicol; y vehículos no acuosos tales como, pero no limitados a, aceite de maíz, aceite de semillas de algodón, aceite de cacahuate, aceite de sésamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo, y benzoato de bencilo. 6. EJEMPLOS 6.1 Ejemplo 1: Diferenciación de células progenitoras hematopoieticas CD34+ derivadas de Medula Ósea a células dendríticas que muestran genes específicos de eritroides sobrerregulados Las células BM-CD34"1" se obtuvieron de Cambrex (East Rutherford, NJ) y se cultivaron en DMD de Iscove con BIT 95000 (StemCell Technologies, UK) en presencia del factor de células madre (SCF) , Flt-3L, factor estimulante de la colonia de macrófagos granulositos (GM-CSF) y T?Fa por 6 días. Para estudiar el efecto de la 4- (Amino) -2 - (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona sobre la generación de las células dendríticas, las células progenitoras de CD34+ se cultivaron con o sin la 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1,3-diona por un periodo de 6 días. La caracterización fenotípica de las células para los marcadores eritroides (CD36, CD71, glicoforina A y hemoglobina fetal) se estableció por citometría de flujo después de seis días de cultivo. Se monitoreó la expresión genética por análisis de microarreglos en el día 1, el día 3, y el día 6 de la diferenciación de CD34+ (FIG. 1) .

La purificación del AR? y el análisis de microarreglos. Se aisló el AR? total de las células CD34+ usando RNAeasy (Qiagen) . Los chips genéticos Affymetix U133A se usaron para el análisis de expresión genética. Brevemente, se sintetizó el AD?c de doble hebra usando 5 µg de AR? total, el AR?c etiquetado con biotina se sintetizó usando el equipo MessageAmp aRNA (Ambion) , se fragmentaron 15 µg de AR?c y se hibridaron con cada arreglo. Los procedimientos de arriba se hicieron dos veces por cada muestra de AR? para obtener sondas etiquetadas con biotina duplicadas. Los resultados de los chips duplicados se promediaron para al calculo de las diferencias de plegamiento. Resultados. El tratamiento con 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona sobrerregula el perfil de expresión genética de los genes específicos de eritroides durante la diferenciación de CD34+ en presencia de SCF, Flt3-L, GM-CSF y T?Fa. De manera importante la 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona aumenta la expresión del gen de hemoglobina fetal tras la diferenciación de las células CD34+, con un aumento específico de la hemoglobina e embriónica de 18 veces en el día 6, y un aumento de la hemoglobina ? de siete veces en el día 6 (FIG. 2) . La caracterización fenotípica por citometría de flujo de las células CD34+ diferenciadas en presencia o ausencia de 4- (Amino) -2- (2, 6~dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona o 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2 , 6-diona muestra modulación de los marcadores de eritroides y hemoglobina. La expresión de la glicoforina A (FIG. 3) y la hemoglobina fetal, aumentaron (FIG. 4) en una manera dependiente de la dosis. La 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1,3-diona también induce otros genes específicos de eritroides (FIG. 5) . También se encontró que la expresión de los genes que codifican la glicoforina B, la glicoproteína asociada con el grupo sanguíneo rhesus, el precursor asociado con el grupo sanguíneo Kell, EDRF/AHSP (proteína estabilizante de alfa hemoglobina) , y el factor de transcripción similar a Kruppel, cada uno requerido absolutamente para la eritropoiesis normal, estaba sobrerregulada en las células CD34+ diferenciadas en presencia de la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona. Muchos de los genes específicos de eritroides aumentados por la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona tienen un papel claro al mejorar la anemia. El aumento en los niveles de hemoglobina y la proteína estabilizante de al-hemoglobina (AHSP) mejorarían ambos la capacidad de transportar oxígeno en tanto que protegen las células que tienen niveles e alfa-hemoglobina de exceso, lo cual puede dañar las células sanguíneas rojas. Los efectos de los IMiD al aumentar la eritropoiesis en general, y los genes señalados arriba en particular, sería útil al superar los efectos anémicos de la quimioterapia, así como las condiciones enfermizas en las cuales el conteo bajo de células sanguíneas rojas es un síntoma o un efecto del tratamiento.

Se anticipa que los efectos de los IMiDs™ serán sinérgicos con aquellos de la eritropoietina. Los IMiDs™ parecen inducir la síntesis de los precursores eritroides tempranos, en tanto que la eritropoietina es crucial para la proliferación, sobrevivencia y diferenciación de los progenitores de eritroides en las etapas tardías de la diferenciación. 6.2 EJEMPLO 2: DIFERENCIACIÓN DE LAS CÉLULAS CD34+ A CÉLULAS ERITROIDES Diferenciación de las células progenitoras hematopoieticas de la medula ósea (BM) CD34+: se obtuvieron células progenitoras BM-CD34+ de Cambrex y se cultivaron en MDM de Iscove con BIT 95000 (substituto de suero; StemCell Technologies) en presencia de factores de crecimiento. Durante los primeros 6 días, las células CD34+ se expandieron son SCF (100 ng/ml) , Flt3-L (100 ng/ml) e il-3 (20 ng/ml) , y después se diferenciaron hacia el linaje eritroide por cultivo en presencia de SCF (50 ng/ml), y Epo ("U o 4U/ml) por 6 días.

Para estudiar el efecto de los IMiDs™, las células progenitoras de CD34+ se diferenciaron por un periodo de 6 días en presencia o ausencia de 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona o 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2, 6-diona. (FIG. 6).

Citometría de Flujo: Se analizó la expresión de antígenos de superficie por citometría de flujo (FACScan, Coulter) después de 6 días del cultivo. Las células se procesaron por teñido doble (30 min a 4°C) en el día 6, usando anticuerpos (mAbs) monoclonales conjugados a FIAC y PE. Los anticuerpos usados fueron: CD34-PE, CD36-FITC, CD71-FITC y Glicoforina A-PE, todos de BD Pharmingen (San Diego, CA) .

Después de 6 días del cultivo, las células se lavaron con solución salina amortiguada con fosfato (PBS) , se fijaron con paraformaldehído al 2%, se permeabilizaron con cytopermeafix (BD Pharmingen) y se tiñeron con HbF-PE (BD Pharmingen, San diego, CA) Hbe-FITC (Cortex Biochem, San Leandro, CA) mAbs y HbA-FITC (Perkin Elmer) y se analizaron por citometría de flujo (FACScan, Coulter o FCASAria, BD Pharmingen) . Resultados: los IMiDs™, 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona y 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2, 6-diona son inductores potentes de la hemoglobina F en los precursores de eritroides. Las células progenitoras de CD34+ se expandieron primero con una combinación de factores de crecimiento (SCF, Flt3-L e IL-3) por 6 días. Después de la expansión, las células CD34 se diferenciaron hacia el linaje eritroide con SCF y Epo, por 6 días, en presencia o ausencia de los IMiDs™ (FIG. 6) . La diferenciación de las células progenitoras de CD34+ en presencia de SCF y Epo se monitoreó por la expresión de los marcadores de superficie característicos de eritroides: la Glicoforina A (CD235) y el receptor de transferían (CD71) (FIG. 7) . El fenotipo de los eritroides se presentó cuando las células CD34+ se diferenciaron con o sin los IMiDs™. De manera interesante, la expresión de la Glicoforina A fue menor en las células tratadas con IMiD™, en tanto que la expresión de CD71 se mantuvo a un nivel alto en ambas condiciones. El porcentaje de células que expresan la hemoglobina fetal se monitoreo por citometría de flujo después de 6 días de cultivo con SCF y Epo. La expresión de hemoglobina fetal se aumentó en una manera dependiente de la dosis por las IMiDs™ (FIG. 8) . De manera importante, el aumento en la hemoglobina fetal (HbF) estaba asociado con una reducción en la hemoglobina adulta (HbA) . La relación de HbF/HbA aumenta en presencia de los IMiDs™. (FIG. 9) . Además de la mutación fenotípica la cantidad de hemoglobina, también se midió el estado de proliferación de las células. Los conteos de células se llevaron a cabo después de 6 días del cultivo con SCF y Epo. Los conteos de células totales se aumentaron en presencia de los IMiDs™ y se correlacionan bien con el estado de desarrollo de la población (es decir, menor madura) . 6.3 EJEMPLO 3: LOS IMIDS ACTÚAN SINERGÉTICAMENTE CON LAS TERAPIAS APROBADAS DE HEMOGLOBINA FETAL ACTUALES Como antes, las células progenitoras de CD34+ se expandieron primero con una combinación de factores de crecimiento (SCF, Flt3-L e IL-3) por 6 días, y después se indujo la diferenciación a eritroides con SCF y Epo por 6 días. Durante el periodo de diferenciación de eritroides, las células CD34+ se cultivaron en presencia o ausencia de los IMiDs™, individualmente o en combinación ya sea con hidroxiurea y 5-azacitidina, para comparar el efecto de los IMiDs™ con estos dos inductores conocidos de la síntesis de hemoglobina. En el día 6 de la diferenciación, se midió el contenido de hemoglobina por citometría de flujo. La hidroxiurea y la 5-azacitidina aumentan la expresión de hemoglobina fetal como reporta (FIG. 10) . La inducción de la producción de hemoglobina fetal fue, sin embargo, más pronunciada con el IMiD en comparación con la hidroxiurea o la 5-azacitidina, con una inducción de 10 veces en presencia de 10 µM de 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona. De manera interesante, la 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-l,3-diona mostró una sinergia notable en combinación con la hidroxiurea, resultando en una reactivación notable de la hemoglobina fetal (FIG. 11) . 6.4 EJEMPLO 4: EPO + IMIDS PROVOCAN UN AUMENTO EN LA FOSFORILACIÓN DE STAT5 Para caracterizar adicionalmente la sinergia de la Epo y los IMiDs™ sobre las células eritroides, hemos llevado a cabo experimentos de señalización en una línea celular UT-7, en particular, para determinar el efecto si los IMiDs sobre la expresión de STAT5, la cual se conoce por ser activada tras enlazar la Epo al receptor de eritropoietina (EpoR) . UT-7 es una línea celular de leucemia humana dependiente absolutamente de la eritropoietina para la proliferación, y se aisló de un paciente con leucemia mieloide aguda (AML M7) . El nivel de expresión de EpoR en estas células es de aproximadamente 60%.

Para estudiar el papel de los IMiDs™ en la señalización de Epo, estimulamos las células UT-7 con Epo en presencia o ausencia de 4- (Amino) -2- (2 , 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1,3-diona como sigue. Las células UT-7 se expandieron en medio RPMI con FBS al 10% y GM-CSF (ng/ml) . Las células se privaron de suero y factor de crecimiento durante toda la noche, después se pre-incubaron por 45 minutos con 10 µM de 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1, 3-diona o control de DMSO, y se estimularon con Epo (10 U/ml) por 10 minutos). La 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo (3-piperidil) ) -isoindolino-1,3-diona aumenta al doble la fosforilación de STAT5 inducida por Epo (FIG. 12) . Este efecto se detectó a los 10 minutos de estimulación con Epo. 6.5. EJEMPLO 5: ESTUDIOS TOXICOLÓGICOS Se investigaron los efectos de la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2, 6-diona sobre las funciones cardiovasculares y respiratorias, en perros anestesiados. Se usaron dos grupos de perros Sabuesos (2/sexo/grupo) . Un grupo recibe tres dosis de vehículo solamente y el otro recibe tres dosis ascendentes de 3- (4-amino-l-oxo-l,3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2 , 6-diona (2, 10, y 20 mg/kg). En todos los casos, las dosis de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2 , 6-diona o vehículo se administraron sucesivamente vía infusión a través de la vena yugular' separadas por intervalos de al menos 30 minutos. Los cambios cardiovasculares y respiratorios inducidos por la 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2,6-diona son mínimos a todas las dosis cuando se comparan con el grupo de control de vehículo. La única diferencia estadísticamente significativa entre los grupos de vehículo y de tratamiento es un pequeño aumento en la presión arterial sanguínea (de 94 mmHg a 101 mmHg) enseguida de la administración de la dosis baja de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidroisoindol-2-il) -piperidino-2, 6-diona. Este efecto dura aproximadamente 15 minutos y no se observa a dosis mayores.

Las desviaciones en el flujo sanguíneo femoral, los parámetros respiratorios, y el intervalo de Qtc son comunes tanto a los grupos de control y tratados y no se consideran relacionados con el tratamiento. Las modalidades de la invención descritas arriba se destinan para ser solamente ejemplificantes, y aquellas personas experimentadas en la técnica reconocerán, o serán capaces de determinar sin usar más que la experimentación de rutina, numerosos equivalentes de compuestos específicos, materiales y procedimientos. Todos los tales equivalentes se consideran para estar dentro del ámbito de la invención y están abarcados por las reivindicaciones anexas . 7. REFERENCIAS Todas las referencias citadas aquí se incorporan aquí como referencia en su totalidad y para todos los propósitos en la misma extensión en que si cada publicación individual, patente o solicitud de patente fuera indicada específicamente e individualmente para ser incorporada como referencia en su totalidad para todos los propósitos. La cita de alguna publicación es por su descripción antes de la fecha de presentación y no se debe considerar como una admisión de que la presente invención no esta tiene derechos para antedatar tal publicación en virtud de la invención previa.

Claims (30)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para tratar a un individuo que tiene una hemoglobinopatía o una anemia, dicho método, caracterizado porque comprende administrar a dicho individuo un compuesto inmunomodulador en una cantidad y por un tiempo suficientes para reducir uno o más síntomas de dicha hemoglobinopatía.
2. 2. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque dicha hemoglobinopatía es anemia de células falciformes o talasemia.
3. 3. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque dicha anemia es una anemia inducida o relacionada con la administración de una quimioterapia o fármacos.
4. 4. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque a dicho individuo se le administra una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato o profármaco aceptable farmacéuticamente de un compuesto inmunomodulador.
5. 5. El método de la reivindicación 4, caracterizado porque dicho compuesto inmunomodulador es una talidomida amino-substituida.
6. 6. El método de la reivindicación 4, caracterizado porque dicho compuesto inmunomodulador es una a-(3-aminoftalimido) glutarimida; un análogo o profármaco de a- (3-aminoftalimido) glutarimida; 3- (4' aminoisoindolino-1' -ona) -1-piperidino-2, 6-diona; un análogo o profármaco de (4'aminoisoindolino-l' -ona) -1-piperidino-2, 6-diona; un compuesto de la fórmula
7. 7. El método de la reivindicación 4, caracterizado porque, dicho compuesto inmunomodulador es l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3 -il) -4-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -6-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3 -il) -5-aminoisoindolina, l,3-dioxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina; o 1, 3-dioxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3 -il) -5-aminoisoindolina.
8. 8. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente tratar a dicho individuo con un segundo compuesto, caracterizado porque, dicho segundo compuesto es un compuesto que induce la hemoglobina fetal, un compuesto que relaja los vasos sanguíneos, un compuesto que cuando se enlaza covalentemente a la hemoglobina S reduce la auto agregación de la hemoglobina S, un compuesto que es un antagonista del canal de Gardos, o un compuesto que reduce la adhesión de las células sanguíneas rojas.
9. 9. El método de la reivindicación 8, caracterizado porque dicho segundo compuesto es hidroxiurea, un derivado de guanidino, óxido nitroso, butirato, o un derivado de butirato, un aldehido o un derivado de aldehido, un extracto vegetal que tiene actividad anti-falciforme, clotrimazol, un derivado de triarilmetano, un anticuerpo monoclonal o un derivado de polietilenglicol .
10. 10. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque comprende tratar a dicho individuo con al menos una citocina.
11. 11. El método de la reivindicación 10, caracterizado porque dicha al menos una citocina es eritropoietina (Epo) ; SCF; GM-CSF; Flt-3L; TNFa; IL-3; o cualquier combinación de las mismas .
12. 12. El método de la reivindicación 10, caracterizado porque dicho individuo se trata con Epo y SCF.
13. 13. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque dicho individuo es un mamífero.
14. 14. El método de la reivindicación 13, caracterizado porque dicho individuo es un humano .
15. 15. El método de la reivindicación 10, caracterizado porque dicho tratamiento comprende tratar a dicho individuo con una combinación del factor de células madre (SCF) , Flt-3L e IL-3, y tratar subsecuentemente a dicho individuo con una combinación de SCF y eritropoietina, en donde dicho tratamiento es suficiente para provocar un aumento detectable en la expresión de al menos un gen de hemoglobina fetal .
16. 16. Un método para modular la diferenciación de células madre o precursoras de CD34+ a un linaje eritroide, caracterizado porque comprende diferenciar dichas células bajo condiciones adecuadas y en presencia de un compuesto inmunomodulador.
17. 17. El método de la reivindicación 16, caracterizado porque dicha diferenciación se hace en presencia de una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato o profármaco farmacéuticamente aceptable de un compuesto inmunomodulador.
18. 18. El método de la reivindicación 17, caracterizado porque dicho compuesto inmunomodulador es una talidomida amino-substituida.
19. 19. El método de la reivindicación 17, caracterizado porque dicho compuesto inmunomodulador es una a- (3-aminoftalimido) glutarimida; un análogo o profármaco de a- (3-aminoftalimido) glutarimida; 3- (4'aminoisoindolina-l' -ona) -1-piperidino-2, 6-diona; un análogo o profármaco de 3- (4'aminoisoindolin-l' -ona) -l-piperidino-2, 6-diona o un compuesto de la fórmula
20. 20. El método de la reivindicación 17, caracterizado porque dicho compuesto inmunomodulador es l-oxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -6-aminoisoindolina; l-oxo-2- (2,6-dioxopiperidin-3-il) -5-aminoisoindolina, 1, 3-dioxo-2- (2 , 6-dioxopiperidin-3-il) -4-aminoisoindolina; o 1, 3-dioxo-2- (2, 6-dioxopiperidin-3 -il) -5-aminoisoindolina .
21. 21. El método de la reivindicación 16, caracterizado porque dichas células madre o precursoras de CD34+ son células in vitro.
22. 22. El método de la reivindicación 16, caracterizado porque, dichas células madre o precursoras de CD34+ son células in vivo.
23. 23. El método de la reivindicación 16, caracterizado porque, comprende adicionalmente poner en contacto dichas células con al menos una citocina.
24. 24. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque dicha al menos una citocina es eritropoietina (Epo) ; SCF; GM-CSF; Flt-3L; TNFa; IL-3; o cualquier combinación de las mismas.
25. 25. Una composición farmacéutica que comprende en un portador aceptable farmacéuticamente un primer compuesto inmunomodulador y un segundo compuesto, caracterizada porque, dicho segundo compuesto es un compuesto que induce la hemoglobina fetal, un compuesto que relaja los vasos sanguíneos, un compuesto que cuando se enlaza covalentemente a la hemoglobina S reduce la auto-agregación de la hemoglobina S, un compuesto que es un antagonista del canal de Gardos, o un compuesto que reduce la adhesión de células sanguíneas rojas .
26. 26. El método -de la reivindicación 25, caracterizado porque dicho segundo compuesto es hidroxiurea, un derivado de guanidino, óxido nitroso, butirato, o un derivado de butirato, un aldehido o un derivado de aldehido, un extracto vegetal que tiene actividad anti-falciforme, clotrimazol, un derivado de triarilmetano, un anticuerpo monoclonal o un derivado de polietilenglicol .
27. 27. Una composición farmacéutica que comprende en un portador aceptable farmacéuticamente un compuesto inmunomodulador y al menos una citocina, caracterizada porque, dicha al menos una citocina es eritropoietina (Epo) ; SCF; GM-CSF; Flt-3L; TNF-a; IL-3; o cualquier combinación de las mismas .
28. 28. Un método para tratar a un individuo que tiene hemoglobinopatía o anemia, dicho método, caracterizado porque, comprende administrar a dicho individuo un compuesto en una cantidad y por un tiempo suficiente para provocar un aumento •"_ detectable en el nivel de la proteína estabilizante de alfa hemoglobina (AHSP) .
29. 29. El método de la reivindicación 28, caracterizado porque, dicho compuesto es un compuesto inmunomodulador.
30. 30. El método de la reivindicación 29, caracterizado porque, dicho compuesto inmunomodulador es a-(3- aminoftalimido) glutarimida o 3- (4' aminoisoindolin-1' -ona) -1-piperidino-2 , 6-diona.