MXPA05001120A

MXPA05001120A - Eritropoyetina para la estimulacion de celulas precursoras endoteliales.

Info

Publication number: MXPA05001120A
Application number: MXPA05001120A
Authority: MX
Inventors: Hermann Haller
Original assignee: Epoplus Gmbh & Co Kg
Priority date: 2002-07-26
Filing date: 2003-07-25
Publication date: 2005-08-03
Also published as: CN1681526A; DE10234192B4; CY1110713T1; ATE468132T1; DK1526867T3; HRP20050065A2; SI1779862T1; CN101099860B; EP1779862B1; DE50312729D1; CN101099731A; DE50307140D1; SI1526867T1; EA009463B1; CN101099860A; EA200500281A1; IL166401A0; EA013966B1; JP2010280670A; NO20051002L

Abstract

La invencion se relaciona con el uso de eritropoyetina para la estimulacion de la movilizacion fisiologica, proliferacion y diferenciacion de celulas precursoras endoteliales, para la estimulacion de vasculogenesis, para el tratamiento de enfermedades relacionadas con una disfuncion de celulas precursoras endoteliales y para la produccion de composiciones farmaceuticas para el tratamiento de semejantes enfermedades y composiciones farmaceuticas comprendiendo eritropoyetina y otros agentes convenientes para la estimulacion de celulas precursoras endoteliales.

Description

ERITROPOYETINA PARA LA ESTIMULACIÓN DE CÉLULAS PRECURSORAS ENDOTELIALES DESCRIPCION . La presente invención se relaciona con el uso de eritropoyetina para la estimulación de la movilización fisiológica, proliferación y diferenciación de células precursoras endoteliales, para la estimulación de la vasculogénesis , la terapia de enfermedades que están relacionadas con una disfunción de células precursoras endoteliales y para la producción de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de semejantes enfermedades, así como composiciones farmacéuticas que comprenden eritropoyetina y otras sustancias convenientes para la estimulación de células precursoras endoteliales. El endotelio vascular es una capa de células que cubren los vasos sanguíneos. El endotelio separa la sangre de las demás capas vasculares, siendo que el endotelio no solo representa una barrera pasiva, sino interfiere activamente en la regulación del tono vascular. Correspondientemente, se habla también de una vasodilatación dependiente del endotelio. En base a su posición, el endotelio está expuesto permanentemente al estrés hemodinámico y el estrés metabólico. En situaciones patógenas, por ejemplo, presión sanguínea aumentada, valores LDL (lipoproteínas de baja densidad, por sus siglas en inglés) aumentados, función renal restringida o azúcar sanguíneo aumentado, se presentan por lo tanto frecuentemente defectos funcionales del endotelio que pueden ser seguidos frecuentemente por daños morfológicamente captables como la formación de placas ateroscleróticas . Una señal muy temprana de una función endotelial alterada respectivamente reducida, respectivamente una disfunción endotelial, es una disminución de la vasodilatacion dependiente del endotelio. En el caso de enfermedad coronaria cardiaca (KHK, por sus siglas en alemán) , pero también en factores de riesgo presentes sin KHK, por ejemplo, hipertonía, iperlipoproteinemia o diabetes, los defectos funcionales de endotelio son expresados como producción reducida de NO (=ED F; factor de relajamiento derivado del endotelio, por sus siglas en inglés) y una producción aumentada de endotelina. Altos niveles en el plasma de endotelina causan uniones anormales entre células, inflamaciones, crecimientos excrecencias vasculares y fuerte estrechamiento vascular. Disfunciones endoteliales son caracterizadas además por una producción aumentada de moléculas de adhesión como ICAM-1 y VCAM-1, a causa de lo cual los trombocitos y monocitos. se adhieren en mayor grado al endotelio. A causa de esto se presenta un aumento del tono vascular. Debido a esto se forma en diferentes sistemas un desequilibrio que favorece la vasoconstricción, aterosclerosis y aterotrombosis . Aún estrés mental causa una disfunción endotelial medible que puede durar hasta 4 horas . Células del endotelio participan también en la formación de nuevos vasos sanguíneos . La formación de vasos sanguíneos es de importancia en una multitud de eventos, por ejemplo, la embriogénesis, el ciclo reproductivo femenino, el saneamiento de heridas, el crecimiento de tumores y la neovascularización de regiones isquémicas. Originalmente, la formación de vasos sanguíneos postnatal, es decir, la formación de vasos sanguíneos después del nacimiento, es debido principalmente a procesos angiogénicos . Por angiogénesis se entiende la formación de nuevos vasos sanguíneos debido a la brotación de capilares de un sistema vascular ya existente. En la angiogénesis se desintegra primeramente la membrana basal que envuelve los vasos sanguíneos mediante enzimas proteolíticos y se fragmenta la matriz extracelular en el espacio perivascular . Los estímulos angiogénicos liberados en esto tienen el efecto que células endoteliales , separadas por diferenciación, ya presentes migran hacia el estímulo quimiotáctico, siendo que simultáneamente proliferan y cambian de estructura. Mediante la adhesión de células endoteliales se forman entonces nuevos lazos vasculares con un lumen capilar. Después inicia la síntesis de una nueva membrana basal . Investigaciones más . recientes, sin embargo, muestran que la formación de nuevos vasos sanguíneos en organismos adultos no está basada en angiogénesis , sino en mecanismos vasculogénicos . Por vasculogénesis se entiende la formación de nuevos vasos de células precursoras endoteliales que se diferencian in Situ. El dogma de que la vasculogénesis está limitada a la embriogénesis fue refutada por la prueba de células precursoras endoteliales (EPC, por sus siglas en inglés) en la sangre periférica de hombres y animales sanos . Por el uso de modelos animales pudo mostrarse que las células precursoras endoteliales originarias de la médula ósea tienen participación activa en la neovascularización. Se mostró también que en regiones isquémicas se asienta un subgrupo específico CD34-positivo de leucocitos que expresa los ' antigenes específicos para el endotelio. Adicionalmente es posible obtener células precursoras endoteliales (EPC) in Vítxo de células CD133+ y CD34+, que contribuyen de manera significativa a la formación de de vasos sanguíneos en organismos adultos (Asahara et al., Science, 275 (1997), 964-967; Crosby et al., Circ. Res., 87 (2000), 728-730; Gehling et al., Blood, 95 (2000) , 3106-3112) . Se mostró además que la inyección de células CD34+ o de células precursoras endoteliales cultivadas acelera la reconstrucción del flujo sanguíneo en ratones diabéticos (Schatteman et al., J. Clin. Invest . , 106 (2000) , 571-578) y mejora la neovascularizacion in Vivo (Asahara et al., Circ . Res., 85 (1999), 221-228; Crosby et al., Circ. Res., 87 (2000), 728-730; Murohara et al., J. Clin. Invest., 105 (2000), 1527-1536). Adicionalmente pudo mostrarse que una neovascularización inducida por células CD34+ mejora la función cardiaca (Kocher et al., Nat . Med., 7 (2001) , 430-436) . Los mecanismos básicos para la movilización y diferenciación de células precursoras endoteliales aún no se han aclarado del todo. Investigaciones de biología molecular y celular parecen indicar que diferentes citocinas y factores de crecimiento angiogénico actúan de manera estimulante sobre la movilización de células precursoras endoteliales en la médula ósea. Así se sabe que factores proangiogénicos como VEGF y GM-CSF pueden incrementar la cantidad de células precursoras endoteliales (Asahara et al., EMBO J. , 18 (1999), 3964-3972; Takahashi et al., Nat. Med., 5 (1999), 434-438). VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular, por sus siglas en inglés) es una proteína presente en diferentes isoformas que se liga con ambos receptores de tirosinkinasa VEGF-R1 (flt-1) y VEGF-R2 (flk-1) , que están presentes, por ejemplo, en células endoteliales que crecen en la superficie (Wernert et al., Angew. Chemie, 21 (1999), 3432-3435). La activación de los receptores VEGF causa, mediante la ruta de la Ras-Raf-MAP-kinasa, la expresión de proteinasas y de integrinas específicas en la superficie de células endoteliales, respectivamente de células precursoras endoteliales, y finalmente la iniciación de la proliferación y migración de estas células en dirección del estímulo angiogénico. GM-CSF (factor de estímulo de colonias de granulocitos-macrófagos, por sus siglas en inglés) es una citocina que se conocía hasta ahora principalmente por la estimulación de leucocitos incluyendo neutrófilos, macrófagos y eosinófilos. Se sabe de PIGF (factor de crecimiento de placenta, por sus siglas en inglés) que estimula la movilización de las células precursoras endoteliales, pero no su proliferación. Se desprende de investigaciones de Llevador et'al. (J. Clin. Invest . , 108 (2001), 399-405) que unos inhibidores de HMG-CoA-reductasa, particularmente estatina, que se emplean como medicamentos reductores de lípidos y que reducen la morbididad y mortandad de una enfermedad coronaria, pueden movilizar células precursoras endoteliales., Dimmeler et al. (J. Clin. Invest., 108 (2001) , 391-397) podían mostrar además, que estatinas como Atorvastatin y Símvastatin mejoran la diferenciación de células precursoras endoteliales en células mononucleares y células madres CD34+ que se aislaron de sangre periférica tanto in Vitro como ín Vivo de manera significativa. Por ejemplo, el tratamiento de ratones con estatinas produjo una cantidad mayor de células precursoras endoteliales diferenciadas, siendo que estatinas mostraron un efecto de igual potencia como VEGF . La estimulación de la . movilización y/o diferenciación de células precursoras endoteliales representa una estrategia terapéutica nueva importante para aumentar la neovascularización postnatal, particularmente de la vasculogénesis, y para el tratamiento de enfermedades relacionadas con una disfunción de células precursoras endoteliales y/o de células endoteliales. La presente invención se basa en el problema técnico de ofrecer medios y métodos para la estimulación mejorada de células precursoras endoteliales y para la terapia de enfermedades que se relacionan particularmente con una disfunción de células precursoras endoteliales . La presente invención resuelve este problema técnico mediante la enseñanza de usar eritropoyetina y/o sus derivados para la estimulación de la movilización fisiológica de células precursoras endoteliales, la proliferación de células precursoras endoteliales, la diferenciación de células precursoras endoteliales para convertirse en células endoteliales y/o la migración de células precursoras endoteliales en dirección de un estimulo angiogénico o vasculogénico en un cuerpo humano o animal . La presente invención resuelve este problema técnico también mediante la enseñanza de que eritropoyetina y/o sus derivados pueden usarse para . la terapia de enfermedades o padecimientos que están relacionados con una disfunción de células precursoras endoteliales y/o células endoteliales . Se verificó inventivamente de manera sorprendente que el tratamiento con eritropoyetina produce la movilización fisiológica. de células precursoras endoteliales,. siendo que la cantidad de células precursoras endoteliales se incrementa , y se induce su diferenciación, particularmente en dosis de EPO relativamente bajas. Además se compensan en determinados estados patógenos las carencias funcionales de células precursoras endoteliales que se presentan. Se pudo mostrar inventivamente que en pacientes con enfermedades renales crónicas en estado terminal, la cantidad dé células madres en- circulación era exactamente del mismo nivel como en probandos sanos, pero estas habían perdido la capacidad de diferenciación en células endoteliales a través de células precursoras endoteliales. Así, en pacientes con enfermedad renal crónica, la cantidad de células, capaces de adhesión y que muestran un fenotipo de célula .endotelial, es claramente menor en comparación con probandos sanos . Se ha determinado ahora inventivamente que después del tratamiento de estos pacientes con eritropoyetina, la cantidad de células madres en circulación incrementa de manera significativa por más de 50%. En esto se incrementa en particular dramáticamente la cantidad de células que desarrollan un fenotipo endotelial . Como se comprobó mediante un ensayo funcional de cultivo de células, la capacidad afectada en pacientes con enfermedad renal crónica de adhesión de células precursoras endoteliales aumenta por el triple mediante el tratamiento con eritropoyetina. La capacidad de adhesión de células precursoras endoteliales en diferenciación respectivamente . de células endoteliales es una de las condiciones básicas para la formación de tejidos y/o vasos nuevos . Eritropoyetina puede inducir de esta manera la neovascularización, particularmente la vasculogénesis, en tejidos y órganos, en los cuales se liberan estímulos vasculogénicos o angiogénicos correspondientes . Eritropoyetina (llamado en lo subsiguiente EPO) puede usarse inventivamente para la estimulación de la movilización fisiológica de células precursoras endoteliales, la proliferación de células precursoras endoteliales, la diferenciación de células precursoras endoteliales para convertirse en células endoteliales y/o la migración de células precursoras endoteliales en dirección de un estímulo angiogénico o vasculogénico en un cuerpo humano o animal, particularmente en un organismo adulto. Eritropoyetina puede emplearse, consecuentemente, de manera ventajosa para la estimulación de formación de nuevos vasos mediante vasculogénesis en tej idos u órganos en los que se presentan alteraciones vasculares patógenas . Gracias a la estimulación de células precursoras endoteliales mediante eritropoyetina puede inducirse además también la formación de tejido endotelial. Eritropoyetina puede emplearse inventivamente, por lo tanto, también para el tratamiento de enfermedades del cuerpo humano o animal que se relacionan con una disfunción de células precursoras endoteliales y/o células endoteliales. En relación con la presente invención, por "eritropoyetina" respectivamente ????" se entiende una sustancia que controla el crecimiento, la diferenciación y la maduración de células madre, pasando por eritroblastos , en eritrocitos. Eritropoyetina · es una glicoproteína que tiene 166 aminoácidos, tres posiciones de glicosilación y un peso molecular de aproximadamente 34,000 Da. En el marco de una diferenciación de células precursoras de eritrocitos inducida por EPO' se induce la síntesis de globina y la síntesis del complejo hemo asi como la cantidad de receptores de ferritina. Gracias a esto, la célula puede absorber mayor cantidad de hierro y sintetizar hemoglobina funcional. En los eritrocitos maduros, la hemoglobina es la que liga el oxígeno. En consecuencia, los eritrocitos, respectivamente l hemoglobina contenida en ellos, ocupan un papel clave para el suministro de oxígeno del organismo. Estos eventos son iniciados por el efecto recíproco de EPO con un receptor correspondiente en la superficie celular de las células precursoras endoteliales (Graber und Krantz, Ann. Rev. Med. 29 (1978), 51-56). La eritropoyetina es formada principalmente en el riñon, pero en proporciones menores también por el hígado y en el cerebro. Eritropoyetina se encuentra también en pequeñas cantidades en el suero y se elimina en condiciones fisiológicas al menos parcialmente en la orina. Pacientes con insuficiencia renal ' pueden formar eritropoyetina (llamada en los subsiguiente EPO) sólo en cantidades insuficientes y sufren, en consecuencia, de una anemia. Es conocido suplir la insuficiencia de eritropoyetina con administración de eritropoyetina. Otras aplicaciones clínicas de eritropoyetina se encuentran en la administración de eritropoyetina en anemia iatrogénica después de quimioterapia. o terapia con radiación de enfermedades malignas o de infecciones virales (EP 0 456 153 Bl) . De US 4,732,889 se conoce la aplicación de composiciones conteniendo eritropoyetina para el tratamiento de anemia asociada con artritis reumatoide . De WO 88/03808 se conoce el tratamiento de hemocromatosis mediante composiciones conteniendo EPO. El término "eritropoyetina" empleado aqui comprende EPO de cualquier origen, particularmente EPO humano o animal . El término aquí empleado incluye no solamente las formas de existencia natural, es decir silvestre, de EPO, sino también sus derivados, análogos, modificaciones, muteinas, mutantes u otras, mientras que muestren la actividad biológica" de eritropoyetina de tipo silvestre. En relación con la presente invención, se comprende por "derivados" los equivalentes funcionales o descendientes de eritropoyetina que se obtienen, preservando la estructura básica de eritropoyetina, mediante sustitución de uno o varios átomos o grupos de molécula respectivamente radicales, particularmente mediante sustitución de cadenas de azúcares como etilenglicol y/o cuyas secuencias de aminoácidos se diferencian de ' la proteína .de - eritropoyetina humana o animal de existencia natural en al menos una posición, pero que tiene esencialmente el mismo alto grado de homología en el nivel de aminoácido y una actividad biológica comparable. Derivados de eritropoyetina, tal como se pueden usar, por ejemplo, en el marco de la presente invención, son conocidos, entre otros, de WO 94-/25055, de EP 0 148 605 "Homología" significa en particular una identidad de secuencia de al menos 80%, preferentemente al menos 85% y de particular preferencia en más de 90%, 95%, 97% y 99%. La expresión "homología" conocida por el perito designa, por lo tanto, el grado de familiaridad entre dos o más moléculas de polipéptidos que se determina mediante la congruencia entre las secuencias. Congruencia puede ser, en esto, una congruencia idéntica o también una intercambio de aminoácidos conservativo. El concepto "derivado" -comprende inventivamente también proteínas de fusión, en las que están presentes en el extremo N terminal respectivamente C terminal dominios funcionales de otra proteína. En una modalidad de la invención, esta otra proteína puede ser, por ejemplo, GM-CSF, VEGF, PIGF, una estatina u otro factor que tenga un efecto estimulante sobre las células precursoras endoteliales . En otra modalidad de la invención, la otra proteína puede ser también un factor que tiene un efecto estimulante sobre células endoteliales ya diferenciadas, por ejemplo angiogenina .o bFGF (factor de crecimiento de fibroblastos básico, por sus siglas en inglés) . Se sabe de bFGF que este factor de crecimiento ejerce una actividad mitógena y quimiotáctica fuerte sobre las células endoteliales .

Las diferencias entre el derivado de eritropoyetina y la eritropoyetina nativa pueden haberse originadas, por ejemplo, mediante mutaciones, como por ejemplo deleciones, sustituciones, inserciones, adhesiones, intercambio de bases y/o recombinaciones de las secuencias de nucleótidos que codifican para las secuencias de aminoácidos de eritropoyetina. Desde luego es posible que se trata en esto de variaciones de secuencias que se presentan naturalmente, por ejemplo secuencias que mutaron de manera natural, o mutaciones que se introdujeron deliberadamente en las secuencias de nucleótidos que codifican para eritropoyetina con la ayuda de medios conocidos en el arte, por ejemplo agentes químicos y/o agentes físicos. En relación con la invención, el concepto "derivado" comprende, por lo tanto, también moléculas de eritropoyetina mutadas, es decir, muteínas de eritropoyetina . Inventivamente pueden emplearse también análogos de péptidos o proteínas de eritropoyetina. En el contexto de la presente invención, el término "análogos" comprende compuestos que no tiene ninguna secuencia de aminoácidos idéntica a la secuencia de aminoácidos de eritropoyetina, pero cuya estructura tridimensional es muy parecida a aquella de eritropoyetina y que tienen, por lo tanto, una actividad biológica parecida. Los análogos de eritropoyetina pueden ser, por ejemplo, compuestos que contienen los radicales de aminoácidos responsables de la liga de eritropoyetina en sus receptores y que pueden, por lo tanto, imitar las propiedades de superficie esenciales del área de liga de eritropoyetina. Semejantes compuestos se describen, por ejemplo, en Wrighton et al., Science, 273 (1996) , 458. La EPO usada inventivamente puede producirse de diferentes maneras, por ejemplo, mediante aislamiento de la orina humana o de orina y plasma (incluyendo suero) de pacientes que sufren anemia aplástica (Miyake et al., J. B. C. 252 (1977), 5558). EPO humana puede obtenerse, por ejemplo, de cultivos de tejidos de células de cáncer de riñón humano (JA-OS 55790/1979) , de células de linfoblastos humanos que tienen la capacidad de formar EPO humana y de cultivos de hibridomas obtenidos mediante fusión celular de una linea celular humana. EPO puede, producirse también mediante métodos, de ingeniería genética, siendo que se p.roduce mediante ADN o ARN conveniente que codifica para la secuencia de aminoácido correspondiente de la EPO, la proteína deseable mediante ingeniería genética, por ejemplo, en una bacteria, una levadura, una línea celular vegetal o animal. Semejantes métodos son descritos, por ejemplo, en EP 0 148 605 B2 o EP 0 205 564 B2 así como EP 0 411 678 Bl .

La presente invención se refiere particularmente al uso de eritropoyetina (llamada EPO en lo subsiguiente) y/o sus derivados para la estimulación de la movilización fisiológica de células - precursoras endoteliales, la proliferación de células precursoras endoteliales, la diferenciación de células precursoras endoteliales en células endoteliales y/o la migración de células precursoras endoteliales en dirección de un estímulo vasculogénico o angiogénico en un cuerpo humano o animal, particularmente en un organismo adulto. En relación con la presente invención se entienden por "células precursoras endoteliales" (células progenitores endoteliales; EPC) células que circulan en la circulación de la sangre que tienen la capacidad de diferenciarse en células endoteliales. Las células precursoras endoteliales presentes en el desarrollo embrionario son angioblastos . Las células precursoras endoteliales presentes en el organismo adulto son células parecidas a angioblastos que. pueden obtenerse de células mononucleares , particularmente CD34"CD14+ monocitos y/o células madres CD34+, aisladas de sangre periférica. En relación con la presente invención, se entiende por "proliferación" la capacidad de células de aumentar de tamaño seguido por división en dos o más células hijas. La estimulación mediada por EPO de células precursoras endoteliales se refiere, por lo tanto, particularmente a la cantidad y con esto el comportamiento de división de células precursoras endoteliales. En el contexto de la presente' invención se entiende por "diferenciación" de células precursoras endoteliales el desarrollo de células mononucleares originarias de la médula ósea a través de células precursoras endoteliales en células endoteliales. Por "células endoteliales" se entienden las células que forman el endotelio, es decir, el revestimiento celular de una capa de vasos y cavidades suerosas. Células endoteliales se caracterizan porque liberan las sustancias activas de vasos, por. ejemplo sustancias vasodilatadores como EDRF (factor de relajamiento derivado del endotelio) o sustancias restringentes como endotelina, factores para la inhibición o activación de la coagulación sanguínea y factores para la regulación de la permeabilidad vascular. Células endoteliales sintetizan también componentes del tejido conjuntivo subendotelial , particularmente colágenos del tipo IV y V, proteínas de adhesión celular como laminina, fibronectina y trombospondina, factores de crecimiento, por ejemplo para células de musculatura lisa y factores para la formación neovascular. En relación con la presente invención se entiende por "migración" de las células precursoras endoteliales que las células precursoras endoteliales presentes en la circulación sanguínea migran en dirección de un estímulo vasculogenico o angiogénico y que se concentran en la región del estímulo vasculogénico o angiogénico. Por un "estímulo vasculogénico" se entiende un estímulo químico en un tejido o vaso sanguíneo de un cuerpo humano o animal que actúa específicamente en células precursoras endoteliales y que causa su migración al sitio del cuerpo del cual se origina el estímulo químico. Debido al estímulo vasculogénico se induce de esta manera el proceso de vasculogénesis . Por un "estímulo angiogénico" se entiende un estímulo químico en un tejido o un vaso sanguíneo en un cuerpo humano o animal que actúa específicamente sobre células endoteliales diferenciadas y que causa su migración al sitio del cuerpo del cual se origina el estímulo químico. El estímulo angiogénico causa de esta manera una inducción de angiogénesis . En otra modalidad de la invención, se está previendo el uso de eritropoyetina y/o sus derivados para aumentar la capacidad de adhesión de células precursoras endoteliales en proceso de diferenciación. En particular se usa eritropoyetina inventivamente para mejorar la capacidad de células precursoras endoteliales para la adhesión, es decir, la adhesión de célula a célula. La adhesión de células precursoras endoteliales en proceso de diferenciación, respectivamente células endoteliales diferenciadas es una de . las condiciones básicas para la formación de vasos nuevos o de un nuevo tejido endotelial. La adhesión celular es mediada por moléculas de proteína'. La presente invención se refiere también al uso de eritropoyetina para la estimulación de formación de vasos nuevos, particularmente para la estimulación de vasculogénesis . En relación con la presente invención se entiende por "vasculogénesis" la formación de vasos nuevos de células precursoras endoteliales en proceso de diferenciación in Situ. Inventivamente se logra, entonces, mediante el uso de eritropoyetina que las células precursoras endoteliales participan de manera más importante en una formación de vasos nuevos respectivamente una formación de vasos nuevos locales para la reconstitución de regiones de vasos lastimados. Es decir, inventivamente se está previendo que el uso de eritropoyetina y/o de sus derivados fomenta la formación de nuevos vasos sanguíneos y/o la sustitución de regiones de vasos lastimados mediante formación de vasos sanguíneos nuevos . En otra modalidad de la invención se está previendo el uso de eritropoyetina y/o de sus derivados para la estimulación de células precursoras endoteliales para la formación de tejido endotelial.

En una modalidád particularmente preferida de la invención, se está previendo el uso de eritropoyetina y/o de sus derivados para la terapia de padecimientos o de enfermedades del cuerpo humano o animal que están relacionados con una disfunción de células precursoras endoteliales. En el contexto de la presente invención se entiende por "padecimientos" , "padecimientos" o "enfermedades" interrupciones de los procesos vitales en órganos o en el organismo en general con la consecuencia de alteraciones -. físicas respectivamente mentales subjetivamente percibidas respectivamente objetivamente detectables. Inventivamente se trata particularmente de enfermedades que están asociadas con una disfunción de células precursoras endoteliales, es decir, enfermedades, que son la consecuencia de semejante disfunción de estas células o que son mediadas por estas células . Por "enfermedades consecuenciales" se entienden enfermedades secundarias, es decir, un- segundo padecimiento que se adiciona al cuadro clínico' primario . En el contexto de la presente invención, se entiende por una "disfunción" de células precursoras endoteliales una interrupción de funciones celulares esenciales, como procesos de metabolismo, respuesta a estímulos, motilidad, comportamiento de división o comportamiento de diferenciación de estas células. Una disfunción de células precursoras endoteliales puede consistir, por ejemplo, en que estas células no proliferan o que lo hagan de manera insuficiente. Como mediante el uso de eritropoyetina- se estimula la proliferación de células precursoras endoteliales, puede compensarse con esto el comportamiento de división deficitario tanto de las células precursoras endoteliales como también de células endoteliales ya diferenciadas y aumentarse la cantidad de células precursoras endoteliales respectivamente de células endoteliales. Una disfunción de células precursoras endoteliales puede consistir, por ejemplo, en una capacidad interrumpida de estas células de diferenciarse para formar células endoteliales. La disfunción de células precursoras endoteliales puede estar condicionada también por su capacidad interrumpida de adhesión y/o su capacidad interrumpida de migrar en dirección de un estímulo angiogénico o vasculogénico . Disfunciones semejantes de células precursoras endoteliales pueden tener como consecuencia que, por ejemplo, la formación de tejido endotelial nuevo y/o vasculogénesis es afectada o inhibida. Una disfunción de células precursoras endoteliales puede estar también de condición patógena, por ejemplo, a causa de hipertonía, hiperlipoproteinemia, uremia o diabetes. La disfunción de células precursoras endoteliales puede hacerse notar, por ejemplo, en una producción reducida de NO (=EDRF) por NO-sintasa (NOS) de L-arginina, producción incrementada de . endotelina y/o en una producción incrementada de moléculas de adhesión como ICAM-1 y VCAM-1. Inventivamente, las enfermedades relacionadas con una disfunción de células precursoras endoteliales son particularmente hipercolesterolemia, diabetes melitus, enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio como inflamaciones vasculares, endoteliosis incluyendo reticuloendoteliosis , aterosclerosis, enfermedades cardiacas coronarias, isquemia de miocardio, angina de pecho, enfermedades cardiovasculares debidas a la edad, enfermedades isquémicas de las extremidades, la enfermedad de Raynaud, preeclampsia, hipertonía inducida por el embarazo, insuficiencia renal crónica o aguda, particularmente insuficiencia renal terminal, insuficiencia cardiaca, saneamiento de heridas así como enfermedades consecuenciales de estas. Una "hipercolesterolemia" se caracteriza por concentraciones mayores de colesterol en la sangre. La forma más frecuente de la hipercolesterolemia primaria es la hipercolesterolemia poligénica. Hipercolesterolemias secundarias se presentan frecuentemente en el caso de diabetes melitus, síndrome nefrótico, hipotireosis y enfermedades hepáticas .

Bajo "diabetes melitus" se resumen diferentes formas de disfunciones del metabolismo de glucosa con diferentes etiologías y síntomas. La génesis de complicaciones diabéticas con causas vasculares se debe particularmente al sistema AGE-RAGE. AGEs (productos terminales de glicación avanzada, por sus siglas en inglés) se generan mediante una serie de reacciones complejas después de. una exposición de larga duración de proteínas o lípidos con azúcares reductivas, por ejemplo, glucosa. La formación de AGEs se presenta durante el proceso de envejecimiento normal así como de manera más intensa en diabetes melitus y la enfermedad de Alzhei er. Mediante la ligación de AGEs se presenta estrés oxidativo, la activación del factor de transcripción NF-kB y con esto una interrupción de la homeostasis endotelial . "Enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio" son enfermedades o estados de un cuerpo humano o animal que se basan en una reacción de defensa del organismo y sus tejidos sobre estímulos nocivos, siendo que determinadas moléculas de señal alteran las propiedades de células endoteliales, de manera que junto con la activación de otros tipos de células, los leucocitos se adhieren a las células endoteliales, penetran finalmente el tejido y causan allí .inflamaciones. Un ejemplo de una inflamación mediada por el endotelio es la vasculitis leucocítica. Un papel central tiene el factor de transcripción NF-KB en la activación de un evento inflamatorio mediado por endotelio. Otro sistema que causa la generación de inflamación mediada por células endoteliales es el sistema AGE-RAGE. Por "endoteliosis" se entienden alteraciones del endotelio degenerativas y proliferativas en la púrpura no trombopénica . Por "reticuloendoteliosis" se entienden enfermedades del sistema reticulohistiocitario, como retículo, reticulosis, reticulohistiocitosis y la enfermedad de Hand-Schüller-Christian. Por "isquemia de miocardio" se entiende la carencia de sangre o irrigación reducida, es decir una interrupción de la irrigación sanguínea de la pared muscular de corazón a causa de suministro de sangre arterial insuficiente o faltante. Un. "infarto cardiaco" o "infarto de miocardio" es una necrosis de una región del músculo cardiaco determinado que se presenta generalmente como complicación de presencia aguda en enfermedades cardiacas . coronarias crónicas. "Enfermedad cardiaca coronaria" o "enfermedad cardiaca isquémica" es una enfermedad coronaria degenerativa que causa una irrigación sanguínea disminuida del músculo cardiaco debido a una restricción o una oclusión de los vasos coronarios . Por "angina de pecho" se entiende una insuficiencia coronaria aguda o estenocardia que puede ser causada por una desproporción entre oferta y demanda de oxigeno en una enfermedad cardiaca coronaria, espasmos coronarias, interrupciones de flujo sanguíneo, arritmia cardiaca, hipertonía o hipotonía. Por "enfermedad de Raynaud" se entienden estados de isquemia causados por vasoconstricciones, es decir, espasmos vasculares que se presentan como crisis generalmente en las arterias de los dedos . La enfermedad de Raynaud primaria es una interrupción puramente funcional de los pequeños vasos que irrigan los extremos distales, mientras que la enfermedad de Raynaud secundaria está basada en otra enfermedad, por ejemplo, inflamaciones vasculares. La "preeclampsia" es una enfermedad endotelial y vascular del organismo materno y parece ser el efecto de sustancias endoteliotrópicas de la placenta. La preeclampsia es una enfermedad de sistemas múltiples que causa interrupciones funcionales de muchos órganos y que puede producir síntomas múltiples . Las interrupciones de irrigación sanguínea típicas de la . enfermedad son la consecuencia de una resistencia vascular incrementada que puede tener intensidad localmente diferenciada. Se tiene por asegurado respecto a la preeclampsia que una disfunción endotelial es un componente central de la patogénesis. Por "insuficiencia renal" se entiende en el contexto de la presente invención la capacidad disminuida de los ríñones para la excreción de sustancias obligatorias para lo orina, siendo que en estados avanzados se pierde también la capacidad de regular el equilibrio de electrolitos, agua y ácidos-bases. La insuficiencia renal se caracteriza por una pérdida de la función renal excretoria y endocrina. La insuficiencia renal puede ser, inventivamente, una insuficiencia renal aguda, que se designa también como falla renal, riñon en choque o choque de riñon. Insuficiencia renal aguda se caracteriza por una pérdida repentina parcial o total de la función renal excretoria como consecuencia de un daño renal generalmente reversible. La causa puede ser una perfusión disminuida debido a hipovolemia, hipotonía y deshidratación a consecuencia de pérdidas sanguíneas (trauma múltiple, sangrado gastrointestinal o de posparto, grandes intervenciones quirúrgicas en el corazón, vasos, abdomen o próstata) , choque (infarto de miocardio, embolia) , infecciones graves (sepsis, peritonitis, colecistitis) , hemolisis (síndrome hemolítico-urémico, hemoglobinuria paroxismal, accidente de transfusión) , miólisis (síndrome de contusión, rabdomiolisis , miositis, quemaduras) , pérdidas de agua y electrolitos (vómitos masivos, diarreas, sudar excesivamente, íleo, pancreatitis aguda) . Otras causas pueden ser nefrotoxinas como toxinas exógenas, por ejemplo anilina, compuestos de glicol, metanol y similares, o toxinas endógenas, por ejemplo mioglobxna y oxalato. Otras causas para insuficiencia renal aguda son enfermedades renales, por ejemplo nefropatias inflamatorias o reacciones de rechazo después de transplante de riñon. Insuficiencia renal puede causarse también por una congestión urinaria debido a una inhibición de excreción de orina. El tratamiento inventivo de insuficiencia renal aguda con eritropoyetina conduce inventivamente a la inhibición o al menos a la reducción del avance de la insuficiencia renal aguda . La insuficiencia renal puede ser inventivamente también una insuficiencia renal crónica. Causas de la insuficiencia renal crónica son enfermedades vasculares, glomerulares y tubulointersticiales, infecciones así como defectos estructurales congénitos o adquiridos . Causas de la insuficiencia renal crónica son, entre otras, glomerulopatia crónica, pielonefritis crónica, nefropatia analgésica, uropatía obstructiva así como arteriesclerosis y arteriolosclerosis . La insuficiencia renal crónica se transforma terminalmente en la uremia. El tratamiento inventivo de insuficiencia renal crónica con eritropoyetina conduce inventivamente a la reducción de la progresión de insuficiencia renal crónica. En relación con la presente invención se entiende por "insuficiencia cardiaca" un cuadro clínico que se designa también como insuficiencia del miocardio o debilidad del músculo cardiaco. Insuficiencia cardiaca se caracteriza por una función insuficiente del corazón, en la que el corazón ya no es capaz de producir la potencia de bombeo correspondiente a la demanda. La clasificación de la insuficiencia cardiaca puede realizarse según diversos puntos de vista. Según la sección de corazón afectada, se realiza, por ejemplo, una clasificación en insuficiencia cardiaca derecha, insuficiencia cardiaca izquierda e insuficiencia cardiaca de ambos lados (insuficiencia cardiaca global) . Según la estabilidad de un equilibrio influenciado por mecanismos fisiológicos y terapéuticos se diferencia entre insuficiencia cardiaca compensada y descompensada . Según el curso, se realiza una clasificación en insuficiencia cardiaca aguda y crónica. Causas para una insuficiencia cardiaca son entre otras infarto cardiaco, cardiomiopatía, lesión cardiaca congénita o adquirida, hipertonía arterial o pulmonar, arritmia cardiaca, enfermedad cardiaca coronaria o miocarditis. En relación con la presente invención se entiende por "saneamiento de heridas" los procesos fisiológicos para regenerar tejido destruido , respectivamente el cierre de una herida, particularmente la formación de tejido conjuntivo y capilares nuevos. En el saneamiento de heridas puede tratarse de un saneamiento de herida primario (sanatio per primam intentionem) que se caracteriza por un cierre rápido y sin complicaciones y una Restitutio ad integrum gracias a formaciones nuevas de tejido conjuntivo mínimas entre bordes de heridas con buena irrigación sanguínea y eventualmente adaptadas de una herida limpia. En heridas con bordes de herida más alejadas, particul rmente contusionadas o necróticas, respectivamente infecciones de heridas, se presenta un saneamiento secundario retardado (sanatio per. secundara intentionem) , donde se presenta un relleno del defecto de tejido con tejido de granulación y una formación de tejido cicatrizado. La formación de epitelio desde los bordes significa la terminación del saneamiento de herida. El saneamiento de herida es subdividido en las tres fases, a saber, la fase latente, la fase de proliferación y la fase de reparación. La fase latente, a su vez, es subdividida en la fase exsudatíva con formación de costra, particularmente en las primeras horas después de la generación de la herida, y una fase resortiva con autolisis catabólica que se extiende por un período de uno a tres días después de la generación de la herida. La fase de proliferación es caracterizada por una reparación anabólica con formación de colágeno por fibroblastos y se presenta entre el cuarto y séptimo día después de la generación de la herida. A partir del octavo día después de la generación de la herida se presenta la fase de reparación que se caracteriza por, la transformación del tejido de granulado en una cicatriz. Por una "herida" se entiende en el contexto de la presente invención una interrupción de la cohesión de tejidos corporales con o sin pérdida de sustancia, que es causada por lastimadura mecánica o lesión física de células. Formas de heridas son heridas mecánicas, heridas térmicas, heridas químicas, heridas causadas por radiación y heridas causadas por enfermedades . Heridas mecánicas se generan mediante aplicación de violencia externa y se presentan sobre todo como heridas cortantes y punzantes, heridas por contusión, reventón, desgarre y excoriación, heridas por garras y mordedura y heridas de bala. Heridas térmicas se generan por la acción de calor o frío. Heridas químicas se generan principalmente por contacto con ácidos o lejías. Heridas debido a radiación se generan, por ejemplo, por la acción de radiación actínica e ionizante. Heridas causadas por enfermedades son particularmente heridas debidas a congestión, heridas traumáticas, heridas diabéticas, etc. Inventivamente se está previendo en particular que se aplique eritropoyetina para el saneamiento de heridas preferentemente en forma tópica o intravenosa . La presente invención se relaciona, por lo tanto, al uso de eritropoyetina para la terapia de hipercolesterolemia, diabetes melitus, enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio, endoteliosis incluyendo reticuloendoteliosis, aterosclerosis , enfermedad cardiaca coronaria, isquemia de miocardio, angina de pecho, enfermedades cardiovasculares debido a la vejez, enfermedades isquémicas de las extremidades, preeclampsia, enfermedad de Raynaud, hipertonía inducida por embarazo, insuficiencia renal crónica y aguda, particularmente insuficiencia renal terminal, insuficiencia cardiaca, saneamiento de heridas y enfermedades consecuenciales de estos . Inventivamente se está previendo que se administra eritropoyetina en una dosis terapéuticamente efectiva a un paciente que es suficiente para curar una de las enfermedades precedentemente mencionadas, particularmente de una enfermedad que se relaciona con una disfunción de células precursoras endoteliales o de prevenir este estado, de detener el progreso de semejante enfermedad y/o de aliviar los síntomas de semejante enfermedad. La dosis que debe aplicarse a un paciente depende de muchos factores, por ejemplo la edad, el peso corporal y el sexo del paciente, la gravedad de la enfermedad, etc.. Inven ivamente se prefiere en particular que eritropoyetina se use en cantidades muy pequeñas en todas las aplicaciones, métodos y composiciones de la presente enseñanza, que se encuentran por debajo de las cantidades usadas de manera conocida, siendo que particularmente ín Vivo, es decir por paciente, se aplican dosis de EPO de 200 a 2000 unidades (IU, Unidades Internacionales, por sus siglas en inglés) /semana, preferentemente dosis de 500 a 200 IU/semana, según la gravedad de la enfermedad y en función de la función renal . Las dosis previstas inventivamente de 200 a 2000 unidades (IU) /semana y por paciente, particularmente de 500 a 20.00 IU/semana y por paciente, son dosis subpolicitémicas , es decir, dosis que no causan eritrocitosis · con valores de hematocrito superiores a 50%. Las dosis subpolicitémicas inventivamente previstas corresponden a dosis semanales de aproximadamente 1 a 90 unidades (IU) EPO/kg peso corporal, particularmente 1 a 45 IU EPO/kg peso corporal, o una dosis semanal comparable de Aranesp de 0.005 a 0.45 g/kg peso corporal, particularmente 0.005 a 0.225 µg/kg peso corporal. Aranesp es un EPO con doble PEG. La dosis de 200 a 2000 unidades/semana por paciente, particularmente de 500 a 2000 IU/semana y por paciente que está prevista inventivamente para el tratamiento de enfermedades o padecimientos acompañados de una disfunción de células precursoras endoteliales , es muy baja en comparación con la dosis inicial administrada usualmente para la terapia de anemia renal de 50-150 IU/kg peso corporal/semana (normalmente empezando con 4000-8000 IU/semana, pero también sustancialmente mayor en casos de resultados terapéuticos insatisfactorios) . Una modalidad particularmente preferida de la invención se refiere al uso de eritropoyetina y/o de sus derivados como sustancia activa para la producción de una composición farmacéutica o de enfermedades que están relacionadas con una disfunción de células precursoras endoteliales . Inventivamente se entiende por "sustancia activa" una sustancia endógena o exógena que influye unas funciones determinadas de órganos y organismos de manera diferenciada al hacer contacto con moléculas objetivo o células objetivo o tejidos objetivo. Es decir, inventivamente se está previendo que eritropoyetina influya, como sustancia activa de las composiciones farmacéuticas inventivas, al hacer contacto con" células precursoras endoteliales en el comportamiento de proliferación, diferenciación y/o migración de estas en un organismo humano o animal de manera tal que se equilibren disfunciones de células precursoras endoteliales y se combatan, alivien o eliminen las enfermedades que se presentan a consecuencia de esta disfunción, respectivamente, que se puedan prevenir estas enfermedades de manera efectiva. En relación con la presente invención, se entiende por "composición farmacéutica" o "medicamento" una mezcla empleada para fines diagnósticos, terapéuticos y/o preventivos, es decir, que promueve o reestablece la salud de un cuerpo humano o animal que contiene al menos una sustancia activa natural o producida sintéticamente que causa el efecto terapéutico. La composición farmacéutica puede estar presente tanto como mezcla sólida como también líquida. Por ejemplo, una composición" farmacéutica comprendiendo la sustancia activa puede contener uno o varios componentes ' farmacéuticamente compatibles. Adicionalmente , la composición farmacéutica puede comprender sustancias adicionales usuales en el arte, por ejemplo, estabilizadores, medios de producción, medios de separación, medios detonantes, agentes de emulsión u otras sustancias · usualraente empleadas para la preparación de una composición farmacéutica. Inventivamente se está previendo" en particular el uso de eritropoyetina y/o de un derivado de esta como sustancia activa para la producción de un medicamento para la terapia de hipercolesterolemia, diabetes melitus, enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio como inflamaciones vasculares, endoteliosis incluyendo reticuloendoteliosis , aterosclerosis , enfermedades cardiacas coronarias, isquemia de miocardio, angina de pecho, enfermedades cardiovasculares debidas a la edad, enfermedades isquémicas de las extremidades, la enfermedad de Raynaud, preeclampsia, hipertonía inducida por el embarazo, insuficiencia renal crónica o aguda, particularmente insuficiencia renal terminal, insuficiencia cardiaca, saneamiento de heridas asi como enfermedades consecuenciales de estas. La composición farmacéutica inventiva puede estar conveniente tanto para la administración tópica como sistémica . En una modalidad preferida de la invención se está previendo que la composición farmacéutica se usa para la administración parenteral, particularmente intravenosa, intramuscul r, intracutánea o subcutánea. Preferentemente, el medicamento conteniendo la eritropoyetina tiene la forma de una inyección o infusión. En otra modalidad está previsto que la composición farmacéutica conteniendo eritropoyetina se está administrando en forma oral. Por ejemplo, el medicamento conteniendo eritropoyetina se administra en una forma de administración liquida como una solución, suspensión o emulsión, o en forma de administración sólida como un comprimido . En otra modalidad se está previendo que la composición farmacéutica es conveniente para la administración pulmonar o para la inhalación. Inventivamente se está previendo, pues, que se administre la eritropoyetina de forma terapéuticamente activa directamente a los pulmones del paciente. Esta forma de administración de eritropoyetina permite un suministro rápido de la dosis de eritropoyetina a un paciente sin que se tenga que poner una inyección. Al absorber eritropoyetina por la vía de los pulmones se pueden suministrar cantidades significativas de eritropoyetina en la circulación sanguínea por la vía de los pulmones, lo que conduce a cantidades de eritropoyetina mayores en la circulación sanguínea. En una modalidad preferida de la invención, la composición farmacéutica que debe absorberse por vía de los pulmones es una solución acuosa o no acuosa o un polvo seco. Al estar presente el medicamento conteniendo eritropoyetina por administrar por la vía pulmonar en forma de un polvo seco, este comprende preferentemente partículas conteniendo eritropoyetina, siendo que las partículas tienen un diámetro inferior a 10 µt?, de manera que el medicamento puede llegar también a regiones distales del pulmón del paciente. En una versión particularmente preferida de la invención se está previendo que el medicamento administrado por la vía pulmonar está presente en forma de un aerosol .

Una modalidad particularmente preferida de la invención, se relaciona con el uso de eritropoyetina para la producción de una composición farmacéutica para la terapia de enfermedades relacionadas con una disfunción de células precursoras endoteliales , siendo que la composición farmacéutica contiene además de eritropoyetina como sustancia activa además otra sustancia activa adicional para estimular las células precursoras endoteliales. Preferentemente, la sustancia activa adicional es una sustancia activa que estimula particularmente la movilización fisiológica de células precursoras endoteliales originarias de la médula ósea. La sustancia activa adicional puede ser también, sin embargo, una sustancia activa que estimula comportamiento de división particulares, es decir, la proliferación de células precursoras endoteliales. Existe, sin embargo, también la posibilidad de que la sustancia activa adicional estimula particularmente el comportamiento de diferenciación y/o el comportamiento de migración de células precursoras endoteliales. La sustancia activa adicional que estimula células precursoras endoteliales es, de particular preferencia, VEGF, PIGF,- GM-CSF , un inhibidor de HMG-CoA-reductasa, particularmente una estatina como Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin, y/o un donador de NO, particularmente L-arginina.

Inventivamente se está previendo también que la como mínimo una sustancia adicional estimula particularmente células endoteliales ya diferenciadas, es decir, que estimule su proliferación y/o migración, pero no las células precursoras endoteliales. De manera particularmente preferida, estas son bFGF (factor básico de crecimiento de fibroblastos) o angiogenina. Otra modalidad de la invención se relaciona con el uso . de eritropoyetina y/o de sus derivados como sustancia activa para la producción de una composición farmacéutica para la estimulación de células precursoras endoteliales, particularmente para la estimulación de la movilización, proliferación, diferenciación en células endoteliales y/o migración en dirección de un estímulo vasculogénico o angiogénico. Inventivamente se está previendo además el uso de eritropoyetina y/o de sus derivados como sustancia activa para la producción de una composición farmacéutica para la estimulación de la vasculogénesis y/o formación de endotelio, particularmente en el organismo adulto humano o animal. La presente invención se relaciona, por lo tanto, también con composiciones farmacéuticas para la estimulación de células precursoras endoteliales, particularmente para la estimulación de la movilización, proliferación, diferenciación en células endoteliales y/o migración en dirección de un estímulo vasculogénico o angiogénico, para la estimulación de la vasculogénesis y/o formación de endotelio y para el tratamiento de enfermedades del cuerpo humano o animal que se relacionan con una disfunción de células precursoras endoteliales y/o células endoteliales. La invención se relaciona en particular con composiciones farmacéuticas o medicamentos que comprenden eritropoyetina como sustancia activa y al menos una otra sustancia activa para la estimulación de células precursoras endoteliales y/o células endoteliales ya diferenciadas. En modalidad preferida, la presente invención se relaciona composiciones farmacéuticas que contienen eritropoyetina y al menos una sustancia activa adicional seleccionada del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa, particularmente una estatina como Simvastatin, evastatin o Atorvastatin, un donador de NO, particularmente L-arginina, bFGG y angiogenina. Otra modalidad preferida de la invención se relaciona con el uso de eritropoyetina para la producción de un preparado trasplantable de células endoteliales. Inventivamente se está previendo en esto en particular que las células endoteliales se producen in Vitro mediante el cultivo de células precursoras endoteliales en presencia de eritropoyetina y que se transplantan a continuación a un organismo receptor, particularmente un organismo que sufre de una enfermedad que se relaciona con una disfunción de células precursoras endoteliales . Por ejemplo, es posible aislar células mononucleares ( NC) de la sangre mediante centrifugación de gradientes de densidad y cultivarlas in Vi tro en medios de cultivo convenientes. Métodos para el aislamiento y cultivo in Vitro de células mononucleares son descritos, por ejemplo en Asahara, Science, 275 (1997) , 964-967; Dimmeler et al., J. Clin. Invest . , 108 (2001), 391-397, und Llevadot et al., J. Clin. A continuación se cultivan las células mononucleares en presencia de eritropoyetina para estimular las células precursoras endoteliales contenidas en las M Cs respecto a su comportamiento de proliferación y diferenciación y particularmente para incrementar la cantidad de células endoteliales adherentes ya diferenciadas. Se está previendo inventivamente también que el cultivo de las MNCs se realice en presencia de eritropoyetina y al menos una sustancia adicional que estimula la proliferación y diferenciación de células precursoras endoteliales. Se emplea de manera particularmente preferente como sustancia adicional VEGF, PIGF, GM-CSF, un donador de NO como L-arginina o un inhibidor de HMG-CoA-reductasa, particularmente una estatina como Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin.

En otra modalidad preferida de la invención se está previendo el uso de eritropoyetina para el tratamiento previo y/o continuado de tejidos y órganos que deben trasplantarse. Los transplantes se tratan en esto con eritropoyetina antes de la trasplantación, preferentemente inmediatamente antes, todavía en el organismo donador. El organismo receptor puede tratarse también con eritropoyetina a partir del momento de la trasplantación. Gracias a este tratamiento de los órganos o tejidos por trasplantar con eritropoyetina, tanto directamente antes como también después de la trasplantación, se logra inventivamente que en el transplante se formen rápidamente nuevos vasos sanguíneos en un cuerpo después de la realización de la trasplantación gracias a la vasculogénesis inducida y estos vasos sanguíneos de reciente formación se conecten rápidamente con el sistema sanguíneo del organismo receptor. Se logra también de esta manera rápidamente la formación de endotelios. El tratamiento de transplantes de órganos o tejidos con eritropoyetina causa, por lo tanto, una integración más rápida de estos sistemas a un cuerpo, por lo que se reduce considerablemente el riesgo de un rechazo. En otra modalidad de la invención se está previendo que los transplantes de órgano o tejido antes de la trasplantación se traten con eritropoyetina en combinación con al menos un otro factor que estimula las células precursoras endoteliales . Preferentemente, este factor es una sustancia del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, G -CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa, por ejemplo una estatina como Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin, o un donador de NO como L-arginina. En otra modalidad se está previendo que los transplantes de órganos o tejidos se traten antes de la trasplantación, en adición a eritropoyetina con una sustancia adicional que estimule la proliferación y migración de células endoteliales ya diferenciadas. De manera particularmente preferida, estas sustancias son angiogenina o bFGF. En otra modalidad se está previendo que el tratamiento previo de los transplantes de órganos o tejidos con eritropoyetina se realice con uso de células precursoras endoteliales aisladas y eventualmente expandidas in Vitro. En otra modalidad particularmente preferida de la invención se está previendo que eritropoyetina se usa para la producción de órganos o tejidos in Vitro implantables o trasplantables conteniendo células . Inventivamente se está previendo en particular que órganos o tejidos producidos in Vitro se tratan in Vitro antes de la trasplantación o implantación con eritropoyetina para estimular las células precursoras endoteliales presentes en el cuerpo del organismo receptor, particularmente su movilización fisiológica, . migración, proliferación y diferenciación. Preferentemente ' se continúa el tratamiento del organismo receptor después de la trasplantación respectivamente implantación del órgano o tejido in Vi tro con eritropoyetina en las dosis inventivas. Gracias al tratamiento del órgano o tejido in Vitro antes de la trasplantación respectivamente implantación con eritropoyetina y eventualmente el tratamiento posterior del organismo receptor con eritropoyetina se logra inventivamente que se forman rápidamente nuevos vasos sanguíneos en el sistema de órgano o tejido in Vitro después de la realización de la trasplantación o implantación gracias a la vasculogénesis inducida y estos vasos sanguíneos de reciente formación se conectan rápidamente con el sistema circulatorio del organismo receptor. De esta manera se logra también rápidamente la formación de endotelios y con esto una reconstitución del endotelio. El tratamiento de los sistemas de órganos o tejidos in Vitro con eritropoyetina tiene por lo tanto el efecto de una integración más rápida de estos sistemas en el cuerpo con lo que se reduce considerablemente el riesgo de un rechazo, y sirve para la protección del transplante. Por un "sistema de órgano o tejido in Vitro" se entiende un tejido u órgano trasplantable o implantable conteniendo células que se produce in Vitro mediante el uso de células definidas y/o tejidos definidos y en condiciones de cultivo definidas. Por un "sistema de órgano o tejido in Vi tro implantable" se entiende un sistema que comprende además de células materias exógenas . Por un "sistema de órgano o tejido in Vitro trasplantable" se entiende en particular un sistema conteniendo células que contiene además de células, tejidos u órganos del mismo o de otro individuo sustancias endógenas. Órganos o tejidos in Vitro se caracterizan en particular porque se corresponden respecto a su estructura ampliamente con los órganos o tejidos nativos que deben sustituir y pueden suplir, por lo tanto, las funciones de los órganos o tejidos sustituidos in Vivo. En un acondicionamiento inventivo se está previendo que los sistemas de órganos o tejidos in Vitro antes de la trasplantación respectivamente implantación son tratados con eritropoyetina en combinación con al menos un factor adicional que estimula las células precursoras endoteliales . Este factor es jpreferentemente una sustancia del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa, particularmente Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin, y un donador de NO. En otro acondicionamiento se está previendo que los sistemas órganos o tejidos in Vitro son tratados antes de la trasplantación respectivamente implantación, en adición a eritropoyetina con " una sustancia adicional que estimula la proliferación y migración de células endoteliales' ya diferenciadas. De manera particularmente preferida, esta sustancia es angiogenina o bFGF. En otro acondicionamiento se está previendo que los sistemas de órgano o tejidos in Vitro contienen adicionalmente células precursoras endoteliales aisladas y eventualmente expandidas in Vitro. Otra modalidad preferida de la invención se relaciona con el uso de eritropoyetina para la producción de prótesis vasculares o válvulas cardiacas, siendo que las prótesis vasculares o válvulas cardiacas antes de la inserción en un cuerpo, particularmente en un cuerpo humano, son recubiertas con eritropoyetina. Mediante el recubrimiento de las prótesis vasculares o válvulas cardiacas con eritropoyetina se logra que células precursoras endoteliales en el cuerpo del organismo receptor son estimuladas, siendo que se estimulan en particular su movilización en la médula ósea, su proliferación, su diferenciación en células endoteliales _y su migración hacia las prótesis vasculares o válvulas cardiacas insertadas. Después de la inserción de prótesis vasculares o válvulas cardiacas asi producidas en un cuerpo, este puede tratarse a continuación con eritropoyetina, particularmente en dosis inventivas. Gracias a esto se presenta con mayor rapidez una formación de capas endoteliales den las prótesis vasculares insertadas y una integración más rápida en las regiones afectadas del cuerpo. En un acondicionamiento preferido se está previendo que se emplean para el recubrimiento de las prótesis vasculares y válvulas cardiacas adicionalmente células precursoras endoteliales aisladas y eventualmente expandidas in Vi tro. La presente invención se relaciona también con un método para la estimulación de formación de células endoteliales in Vi tro, comprendiendo a) el aislamiento de poblaciones celulares conteniendo células precursoras endoteliales de sangre mediante centrifugación por gradientes de densidad, b) el cultivo de las poblaciones celulares conteniendo las células precursoras endoteliales aisladas en medio de cultivo celular, y c) el cultivo de las poblaciones celulares en presencia de eritropoyetina . Inventivamente, el cultivo de las poblaciones celulares puede realizarse en presencia de una sustancia adicional que estimula las células precursoras endoteliales . La presente invención se relaciona además con un método para el tratamiento de enfermedades que se relacionan con una disfunción de células precursoras endoteliales , mediante la administración de eritropoyetina en una dosis de 200 a 2000 IU/semana, particularmente en una dosis de 500 a 2000 IU/semana, a un paciente con semejante enfermedad. El método inventivo está previsto en particular para el tratamiento de enfermedades del cuerpo humano como hipercolesterolemia, diabetes melitus, enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio como inflamaciones vasculares, endoteliosis incluyendo reticuloendoteliosis , aterosclerosis, enfermedades cardiacas coronarias, isquemia de miocardio, angina de pecho, enfermedades cardiovasculares debidas a la edad, enfermedades isquémicas de las extremidades, la enfermedad de aynaud, preeclampsia, hipertonía inducida por el embarazo, insuficiencia renal crónica o aguda, particularmente insuficiencia renal terminal, insuficiencia cardiaca, saneamiento de heridas así como enfermedades consecuenciales de estas . En una modalidad- preferida del método inventivo para el tratamiento de enfermedades relacionadas con una disfunción de células precursoras endoteliales se está previendo que se le administre al paciente en adición a eritropoyetina al menos una sustancia activa adicional seleccionada del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa y un donador de NO. El inhibidor de HMG-CoA-reductasa es preferentemente una estatina como Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin. El donador de NO administrado es preferentemente una L-arginina . En otra modalidad preferida del método inventivo para el tratamiento de enfermedades que se relacionan con una disfunción de células precursoras endoteliales se está previendo aislar células precursoras endoteliales de la sangre de un organismo humano, expandirlas in Vitro mediante el uso -de eritropoyetina y diferenciarlas a células endoteliales y trasplantarlas de manera dirigida después de purificación y aislamiento de las células endoteliales ya diferenciadas respectivamente de las células precursoras endoteliales en proceso de diferenciación en una región del cuerpo, un tejido o un órgano de un paciente que está lesionado debido a la disfunción de células precursoras endoteliales y/o de células endoteliales, para inducir allí una neoformacion de endotelio local. De esta manera se permite lograr un tratamiento más dirigido y más rápido de las regiones de cuerpo, tejidos y/o órganos del paciente lesionados. Esta modalidad del método inventivo para el tratamiento de enfermedades que se relacionan con una disfunción de células precursoras endoteliales, comprende las siguientes etapas : a) el aislamiento de poblaciones celulares conteniendo células precursoras endoteliales de sangre mediante centrifugación por gradientes de densidad, b) el cultivo de las poblaciones celulares conteniendo las células precursoras endoteliales aisladas en medio de cultivo celular, y c) el cultivo de las poblaciones celulares conteniendo células precursoras endoteliales en presencia de eritropoyetina para la estimulación de la proliferación de células precursoras endoteliales y/o su diferenciación en células endoteliales, d) el aislamiento y la purificación de las células endoteliales ya diferenciadas, y e) la trasplantación de las células endoteliales ya diferenciadas en un cuerpo con una enfermedad que está relacionada con una disfunción de células precursoras endoteliales . Después de la trasplantación de células endoteliales ya diferenciadas en un cuerpo, este puede continuar a recibir un tratamiento con eritropoyetina, particularmente en las dosis previstas inventivamente de 200 a 2000 IU/semana. Inventivamente pueden cultivarse las poblaciones conteniendo células precursoras endoteliales en presencia de al menos una sustancia activa adicional seleccionada del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa y un donador de NO. Preferentemente, el inhibidor de HMG-CoA-reductasa es una estatina como Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin . Otra modalidad preferida de la invención se refiere a un método para el tratamiento de enfermedades vasculares, comprendiendo: a) el aislamiento de poblaciones celulares conteniendo células precursoras endoteliales de sangre mediante centrifugación por gradientes de densidad, b) el cultivo de las poblaciones celulares conteniendo las células precursoras endoteliales en medio de cultivo celular, y c) el cultivo de las poblaciones celulares conteniendo células precursoras endoteliales en presencia de eritropoyetina para la estimulación de la proliferación de células precursoras endoteliales y/o su diferenciación en células endoteliales, d) el aislamiento y la purificación de las células endoteliales ya diferenciadas, y e) la trasplantación de las células endoteliales en un cuerpo con una enfermedad vascular. Después de la trasplantación de células endoteliales en un cuerpo con una enfermedad vascular, este puede continuar a recibir un tratamiento con eritropoyetina, particularmente en las dosis previstas inventivamente de 200 a 2000 IU/semana. Inventivamente existe la posibilidad de cultivar las poblaciones celulares conteniendo células precursoras endoteliales en presencia de al menos una sustancia activa adicional seleccionada del grupo consistiendo de VEGF. PIGF, GM-CSF y/o un inhibidor de HMG-CoA-reductasa . Preferentemente, el inhibidor de HMG-CoA-reductasa es una estatina como Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin. El método inventivo para el tratamiento de enfermedades vascular está previendo entonces, aislar células precursoras endoteliales de ' la sangre de un organismo humano, expandirlas in Vitro mediante el uso de eritropoyetina ' y diferenciarlas a células endoteliales y trasplantarlas de manera dirigida después de purificación y aislamiento de las células endoteliales ya diferenciadas respectivamente de las células precursoras endoteliales en proceso de diferenciación en vaso sanguíneo lesionado o una región isquémica, para inducir allí una neovascularización. De esta manera se permite lograr un tratamiento más dirigido y más rápido de los vasos sanguíneos o tejidos isquémicos lesionados. El método inventivo para el tratamiento de enfermedades vasculares es conveniente particularmente para el tratamiento de enfermedades vasculares como isquemia, particularmente isquemia cerebral, enfermedades isquémicas de las extremidades, isquemia del miocardio, infarto cardiaco, accidente cerebrovascular, enfermedad cardiaca coronaria, angina de pecho, oclusión arterial aguda, enfermedad de oclusión arterial, enfermedad de Raynaud y ergotismo. Otros acondicionamientos ventajosos de la invención resultan de las reivindicaciones dependientes . La invención se explica mediante las siguientes figuras y ejemplos más de cerca. Figura 1 muestra los resultados de un análisis FACS de células madres CD23+ (cSC) . (A-D) : Muestras de pacientes; (E-F) : controles isotópicos. cSC se identificó mediante la expresión adicional del marcador CD34 (B y F) , mediante la expresión del antigen CD45 característicamente baja a mediana " (C y G) y mediante las propiedades características de dispersión de luz (D y H) . La cantidad absoluta de cSC se calculó por 100,000 monocitos y linfocitos . Figura 2 muestra una determinación cuantitativa de células, madre en circulación mediante citometría de flujo. La figura muestra el efecto sobre tiempo de un tratamiento con eritropoyetina usando rhEPo (eritropoyetina humando recombinante) después de 0, 2, 4, 6 y 8 semanas. n=ll, los valores corresponden a valores medios +/-desviación estándar. La media se representa como línea. * : p < 0. 0.01 en comparación con 2 semanas; D. El. p < 0.05 en comparación a 4 semanas, #: p < 0.05 en comparación con 8 semanas . Figura 3 muestra una determinación cuantitativa de células precursoras endoteliales cultivadas (EPC) . La figura muestra que el tratamiento con rhEPO aumenta la cantidad relativa de · EPCs . EPCs se aislaron antes del tratamiento de pacientes renales con rhEPO, así como 2, 4, 6 y 8 semanas después del . tratamiento de los pacientes con rhEPO y se caracterizó mediante su capacidad de adhesión y los dos marcadores acLDL-Dil y UEA-1 FITC. n=ll, los valores corresponden a valores medios +/- desviación estándar. Los medios se presentaron como línea. *: p < 0.01 respecto al período antes del tratamiento #: p < 0.001 respecto al período antes del tratamiento . Figura 4 muestra la determinación de células precursoras endoteliales cultivadas - (EPC) . La figura muestra que la cantidad absoluta de EPCs antes del inicio de la terapia con rhEPO está reducida de manera significativa respecto a probandos sanos de edad y sexo iguales. Es decir, pacientes con anemia renal muestran una disfunción de EPC clara en relación con personas de control. 8 semanas antes del inicio de la terapia con rhEPO para la anemia renal se compensó esta cantidad disminuida de EPC funcionales. EPCs se aislaron antes del tratamiento de pacientes renales con rhEPO así como 2, 4, 6 y 8 semanas después del tratamiento de los pacientes con rhEPO y se caracterizaron mediante su capacidad de adhesión y los dos marcadores acLDL-Dil e UEA-1 FITC. n=ll. Se representa a guisa de ejemplo el curso de 8 semanas y todos los controles . Los valores absolutos están representados por un lado como valores individuales. Adicionalmente se representan los diagramas de caja regular (boxplots) (percentiles 90/75/50/25 y 10, así como valor medio) . Como control sano sirvieron probandos de edad y sexo emparejado, en los que se aislaron y caracterizaron EPCs de manera análoga (n=ll) . La figura 5 muestra el efecto de eritropoyetina sobre el saneamiento de heridas . La figura muestra que al tratar una herida de la piel estandarizada que se colocó en ratones mediante un punzón de tejido, la herida se había cerrada ya completamente con eritropoyetina después de siete a ocho días, mientras que al tratar la herida con una solución fisiológica de sal común (salina) la herida se había cerrada por completo solamente después de trece a catorce días . El tratamiento con eritropoyetina respectivamente solución fisiológica de sal común empezó 7 días antes de colocar la lesión de la piel. Eritropoyetina humano recombinante se administró una vez por semana mediante inyección (0.1 µg/kg de Aranesp) s.c. (subcutánea) (por grupo n = 5) . La figura 6 muestra que eritropoyetina reduce la pérdida de función renal después de una crisis renal aguda (insuficiencia renal aguda) . Se incluyeron ratas Sprague Dawley (250-300 g) en el ensayo. Las ratas se narcotizaron con cetamina (120 mg/kg) y rompun (10 mg/kg) . Uno de los grupos de ensayo recibió una vez al día antes de la inducción de la insuficiencia renal aguda. Como comparación sirvió un. grupo de animales de ensayo al que se le inyectó respectivamente en forma simultánea sal común s.c. Mediante colocación de una grapa arterial sobre las arterias renales derechas se interrumpió el flujo sanguíneo en el riñon durante 45 minutos. Durante este período se realizó en el lado izquierdo una nefrectomía. Se realizó una intervención simulada en otro grupo de control . Para esto se abrió el abdomen, se preparó la arteria renal izquierda para quedar libre pero no se interrumpió el suministro de sangre y se retiró el riñon contralateral derecho. Todos los animales se narcotizaron durante 60 min y se mataron 24 h después de la intervención.- La isquemia de 45 minutos seguido por reperfusión del riñon derecho remanente indujo en los animales tratados con sal común una pérdida de función renal aguda masiva. Este se refleja en un valor de creatinina en suero que 24 h después de la isquemia-reperfusión es 7 veces mayor que el valor antes de la isquemia-reperfusión (p < 0.05). En comparación con esto, los animales tratados con el análogo de eritropoye ina Aranesp mostraron sólo un incremento cuátruple de los valores de creatinina en suero un día después de la inducción de la lesión de isquemia reperfusión. En los animales con nefrectomía en el lado izquierdo e intervención simulada del riñon derecho no se presentó un incremento de los valores de retención. La figura muestra la concentración de creatinina en el suero de animales tratados con EPO (IR + EPO) , de animales tratados con NaCl (IR) y de animales operados simulada (OP-sim) antes de la lesión de isquemia-reperfusión y 24 horas después. De la figura se desprende que la concentración de creatinina en suero en animales tratados con Aranesp se reduce casi a la mitad 24 horas después de la lesión isquemia-reperfusión en comparación con el control sin (tratamiento con NaCl) . La figura 7 muestra una curva de supervivencia Kaplan-Mayer de dos grupos de ensayo después de inducción de una insuficiencia renal crónica que se trató o bien con Aranesp o NaCl . Se incluyeron ratas Sprague Dawley de 8 semanas en el ensayo. Las ratas se narcotizaron con cetamina (120 mg/kg) y rompun (10 mg/kg) . Se les retiró el día 0 el riñon derecho, mismo que se fijó inmediatamente después del retiro en formalina para un análisis histológico. En el riñon izquierdo se ligaron las arterias segméntales que alimentan el polo superior e inferior del riñon. Esto produce un infarto renal de las regiones renales correspondientes y sólo el tercio renal mediano sigue funcionando. Una vez por semana se les inyectó s.c. a las ratas Aranesp (0.1 µg/kg peso corporal) o NaCl . Los animales tratados con el análogo de eritropoyetina Aranesp tienen una ventaja de supervivencia significativa en comparación con los animales tratados con sal común (p = 0.027; ensayo Log Rank) . Las figuras 8-15 muestran secciones de ríñones de microscopio óptico 6 semanas después de inducción de una insuficiencia renal crónica de dos grupos de ensayo que fueron tratados o bien con Aranesp o con NaCl y que se presentaron en las curvas de supervivencia Kaplan-Mayer según figura 7. Figura 8 muestra una alteración histológica en una rata Sprague-Dawley con - insuficiencia renal crónica después tratamiento respectivamente una vez por semana con NaCl empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica por un periodo de 6 semanas. La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo. La figura muestra una arteria preglomerular de tamaño medio con proliferaciones de pared vascular característica en forma de cáscara de cebolla en grave lesión hipertensiva, una así llamada nefroesclerosis maligna con arteriitis terminal Fahr. Figura 9 muestra la alteración histológica en una rata Sprague-Dawley con insuficiencia renal crónica después de un tratamiento respectivamente una vez por semana con NaCl empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica durante un período de 6 semanas. La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo. La figura muestra una glomerulosclerosis focal-segmental florida como así llamado FSGS proliferante (glomerulo derecho) . El otro glomerulo (izquierdo) muestra un colapso isquémico del túbulo contorneado. En la imagen inferior puede apreciarse un pequeño vaso con lesión endotelial severa. Las alteraciones histológicas observadas corresponden a una lesión orgánica hipertensa respectivamente alteraciones en el marco de una nefropatia de sobrecarga después de necrotomía de 5/6. La figura 10 muestra la alteración histológica en una rata Sprague-Da ley con insuficiencia renal crónica después de un tratamiento respectivamente una vez por semana con NaCl empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica durante un período de 6 semanas . La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo. La figura muestra la esclerosis casi . completa respectivamente destrucción de un glomerulo aumentado como compensación con acentuada hialinosis respectivamente necrosis fibrinoidea de la arteriola aferente correspondiente. Figura 11 muestra las alteraciones histológicas en una rata Sprague-Dawley con insuficiencia renal crónica después de un tratamiento respectivamente una vez por semana con NaCl empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica durante un período de 6 semanas. La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo. La figura muestra una pequeña arteria preglomerular con proliferaciones de pared vascular característica en forma de cáscara de cebolla y necrosis de pared en grave lesión hipertensiva, una así llamada nefroesclerosis maligna (compárese la gráfica derecha) . A la izquierda se puede apreciar una arteriola normal (todavía) no lesionada.

Figura 12 muestra las alteraciones histológicas en una rata Sprague-Dawley con insuficiencia renal crónica después de un tratamiento respectivamente una vez por semana con Aranesp (EPO) (0.1 µg/kg Aranesp) empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica durante un período de 6 semanas . La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo . La figura muestra un glomérulo normal con vaso aferente delgado. En el intersticio de túbulo no se puede detectar una condición patológica. Figura 13 muestra las alteraciones histológicas en una rata Sprague-Dawley con insuficiencia renal crónica después de un tratamiento respectivamente una vez por semana con Aranesp (EPO) (0.1 g/kg Aranesp) empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica durante un período de 6 semanas . La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo. La figura muestra un glomérulo normal con vaso aferente delgado (aumento 630 veces) . No se puede detectar condición patológica en el intersticio del túbulo. La figura 14 muestra las alteraciones histológicas en una rata Sprague-Dawley con insuficiencia renal crónica después de un tratamiento respectivamente una vez por semana con Aranesp (EPO) (0.1 µg/kg Aranesp) empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica durante un período de 6 semanas. La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo. La figura muestra un glomérulo normal con vaso aferente delgado. No se puede detectar condición patológica en el intersticio del túbulo. La figura 15 muestra las alteraciones histológicas en una rata Sprague-Dawley con insuficiencia renal crónica después de un tratamiento respectivamente una vez por semana con Aranesp (EPO) (0.1 g/kg Aranesp) empezando directamente después de la inducción de la insuficiencia renal crónica durante un período de 6 semanas . La insuficiencia renal crónica resulta del retiro del riñon derecho y -de la ligadura de arterias segméntales que alimentan los polos superior e inferior del riñon izquierdo. La figura muestra un glomérulo normal con vaso aferente delgado. No se puede detectar condición patológica en el intersticio del túbulo. Ejemplo 1 Efecto de EPO en pacientes con anemia renal Se investigó el efecto de eritropoyetina en pacientes con anemia renal (Hb < 10.5 g/dl) como consecuencia de enfermedad renal en estado terminal (insuficiencia renal preterminal ; separación de creatinina < 35 ml/min) . 11 pacientes recibieron un tratamiento intravenoso respectivamente subcutáneo con eritropoyetina en dosis semanales de 5000 IU rhEPO (eritropoyetina humana recombinante) en promedio durante un período de al menos 8 semanas. Después de tratamiento con eritropoyetina se analizaron las células precursoras endoteliales en la sangre de los pacientes durante un período de 20 semanas, siendo que las células precursoras endoteliales fueron analizadas respecto a su cantidad y su estado de diferenciación mediante citometría, de flujo y un ensayo de cultivo después de 0, 2, 4, 6 y 8 semanas. Células madre sanguíneas de circulación periférica (CPBSC) son una población celular pequeña que expresan tanto el antigen CD34 como también el antígen CD45. En base a las recomendaciones ISHAGE se desarrolló un ensayo para determinar la cantidad de CPBSC mediante citometría de flujo (Sutherland et al., J. Hematother. , 5 (1996) , 213-226) . Mediante este ensayo se determinó tanto esta muestra de expresión de células CD34 y CD45 como la morfología de las células madre . De esta manera se determinó tanto la cantidad absoluta de CPBSC por µ? como la cantidad en por cientos de CPBSC en" la cantidad total de leucocitos. Figura 1 muestra los resultados de un análisis FACS de células madre CD-34+ en circulación en base a las recomendaciones ISHAGE. Figura 2 muestra la cantidad de las células madre CD-34+ encontradas mediante análisis FACS durante un período de 8 semanas . Ensayo de cultivo celular Células sanguíneas periféricas mononucleares (PBMCs) se aislaron mediante centrifugación por densidad en un gradiente de Ficoll de muestras de sangre humana según el método descrito en Asahara, Science, 275 (1997) , 964-967. Las células se colocaron en placas de cultivo con fibronectina y se mantuvieron en medio basal EC. Medio basal EC consiste de medio basal EBM-2 (Cía. Clonetics) y EGM-2 Quots. (hEGFM GA-1000 (Gentamicin, Amphotercin-B) FBS, VEGF, hFGF (c/heparina) , 3-IGF-1, ácido ascórbico, heparina) . Después de cultivado de 4 días se retiraron las células no adherentes mediante lavado de las placas. Las células adherentes remanentes se trataron con tripsina y se sembraron de nuevo. A continuación se cultivaron por otros 3 días. Células con fenotipo endotelial fueron identificados mediante coloración positiva respecto a dos marcadores endoteliales diferentes en el día 7 después de aislamiento. En esto se trata de, lipoproteína acetilada de baja densidad marcada con Dil (acLDL-Dil) e Ulex euroaeus-Aglutinin-1 (UEA-1) . Los resultados de estos análisis son representados en figura 3. Los resultados muestran que eritropoyetina puede movilizar células precursoras endoteliales y aumentar la cantidad de células precursoras endoteliales en circulación. En esto se compensan deficiencias funcionales que se presentan en determinados estados patológicos, como anemia renal. Estos resultados son representados en figura 4. Mediante citometría de flujo se determinó que en pacientes con enfermedad renal en estado final la cantidad de células madre CD34+ en circulación se corresponde con la cantidad de células madre CD34+ en la sangre de probandos sanos . Después de iniciar el tratamiento con eritropoyetina se incrementa la cantidad de células madre CD34+ en la circulación sanguínea significativamente por más de 50%. Mediante empleo del ensayo de cultivo celular se determinó que después del tratamiento con eritropoyetina se incrementa en forma dramática la cantidad de células que desarrollan un fenotipo endotelial. En un ensayo de cultivo celular funcional, la capacidad fuertemente afectada de células precursoras endoteliales se incrementó más de tres veces.

Ej emplo 2 Saneamiento de heridas mejorado por el uso sistémico de rhEPO Ratones FVB/N se narcotizaron mediante anestesia inhalativa con isoflorano. Se retiró el pelo de ambas patas traseras con la ayuda de una loción de depilación y se desinfectó con alcohol de 70%. Se colocó respectivamente una lesión de piel en el flanco derecho de los ratones mediante un punzón de tejido biopsia desechable de 4mm. El lado opuesto sirvió como control interno. Una vez se aplicó una protección antibiótica postoperatoria ' con penicilina G (20000 unidades/kg) . Durante todo el período de investigación se aplicaron inyecciones subcutáneas una vez por semana del análogo de eritropoyetina humana recombinante Aranesp (0.1 g/kg peso corporal) durante todo el período de estudio. El tratamiento inició siete días antes de retirar el punzón de tejido. Los resultados están representados en figura 5. Muestran que la administración de EPO acelera el proceso de saneamiento de lesiones considerablemente. Ej emplo 3 Disminución del progreso de insuficiencia renal crónica mediante tratamiento con eritropoyetina Ratas Sprague-Da ley de ocho semanas se narcotizaron con cetamina (120 mg/kg) y rompun (10 mg/kg) .

A las ratas se les retiró el riñon derecho que inmediatamente después de la extracción se fijó en formalina para una investigación histológica. En el riñon izquierdo se ligaron las arterias segméntales que alimentan los polos renales superior e inferior. A causa de esto se presenta un infarto renal de las regiones renales correspondientes, siendo que sólo el tercio medio del riñon permanece en estado funcional . Las ratas recibieron una vez por semana el análogo de eritropoyetina Aranesp en una dosis de 0.1 µg/k:g o para control NaCl en forma subcutánea (s.c.) . Figura 7 muestra la curva de supervivencia Kaplan-Mayer de ambos grupos de ensayos. Los animales tratados con Aranesp tienen una supervivencia claramente mejorada en comparación con animales de control tratados con sal común. En las figuras 12-15 se muestra que después del tratamiento con eritropoyetina, el tejido renal no muestra alteraciones patológicas, mientras _ que después de tratamiento con NaCl se pueden apreciar graves alteraciones patológicas (véase figuras 8-11) . Investigaciones histológicas adicionales dieron como resultado que en animales tratados con Aranesp se puede observar una densidad vascular claramente mayor que en los animales tratados con sal común (resultado no se muestra) .

E emplo 4 Reducción del progreso de insuficiencia renal aguda Para esta investigación se emplearon ratas Sprague-Dawley con un peso físico de 250 a 300 g. Uno de los grupos de ensayo recibió una vez en el día antes de la inducción de la crisis renal aguda Aranesp en una dosis de 0.1 g/kg peso físico. Las ratas se narcotizaron con cetamina (120 mg/kg peso corporal) y rompun (10 mg/kg) . Como comparación sirvió un grupo de animales de ensayo a los que se les inyectaron respectivamente en forma simultánea sal común s.c. El flujo sanguíneo hacia el riñon fue interrumpido aplicando una pinza arterial sobre la arteria renal derecha. En el mismo período se realizó una nefrectomía en el lado izquierdo. En otro grupo de control se realizó una operación simulada. Aquí se abrió el abdomen, se preparó la arteria renal izquierda para quedar libre, pero no se interrumpió el suministro de sangre y se extrajo el riñon derecho contralateral . Todos los animales se narcotizaron por un período de 60 minutos se mataron 24 horas después de la intervención. La isquemia de 45 minutos seguido por reperfusión del riñon derecho remanente indujo en los animales tratados con sal común una pérdida de función renal aguda masiva. Esta se expresó en un valor de suero creatina (p < 0.05) incrementado por el factor 7. Los animales tratados con el análogo de eritropoyetina Aranesp mostraron, en comparación con esto, un incremento sólo cuatro veces del valor de creatinina en suero un día después de la inducción de la lesión de isquemia-reperfusión. En los animales con nefrectomía del lado izquierdo con simulación de operación de riñon no se presentó un incremento de los valores de retención. Los resultados se representan en figura 6.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso de eritropoyetina para la producción de una composición farmacéutica conteniendo una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente para el tratamiento de insuficiencia renal crónica.

2. Uso de eritropoyetina para la producción de una composición farmacéutica conteniendo una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente para el tratamiento de insuficiencia renal aguda.

3. Uso de eritropoyetina para la producción de una composición farmacéutica conteniendo una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente para el saneamiento de heridas .

4. Uso de eritropoyetina para la producción de una composición conteniendo una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente para la terapia de hipercolesterolemia, diabetes melitus, enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio, endoteliosis incluyendo reticuloendoteliosis, aterosclerosis , enfermedad cardiaca coronaria, isquemia de miocardio, angina de pecho, enfermedades cardiovasculares debido a la edad, enfermedades isquémicas de las extremidades, preeclampsia, enfermedad de Raynaud, hipertonía inducida por embarazo o insuficiencia cardiaca.

5. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la composición farmacéutica es conveniente para la administración parenteral, particularmente intramuscular, ntracutánea o subcutánea.

6. Uso- según la reivindicación 5, caracterizado porque la composición farmacéutica está presente como inyección o infusión.

7. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la composición farmacéutica es conveniente para la administración pulmonar.

8. Uso según la reivindicación 7, caracterizado porque la composición farmacéutica está presente como solución acuosa, solución no acuosa o polvo.

9. Uso según la reivindicación 7 u 8, caracterizado porque la composición está presente en forma de un preparado de aerosol .

10. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la composición farmacéutica es conveniente para la administración oral .

11. Uso según la reivindicación 10, caracterizado porque la composición está presente como solución, suspensión, emulsión o comprimido.

12. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque la composición farmacéutica contiene al menos una sustancia activa adicional para la estimulación de células precursoras endoteliales.

13. Uso según la reivindicación 12, caracterizado porgue la sustancia activa adicional es VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa y/o un donador de NO, particularmente L-arginina.

14. Uso según la reivindicación 13, caracterizado porque el inhibidor de HMG-CoA-reductasa es una estatina como Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin.

15. Uso de eritropoyetina para la producción de un preparado de células endoteliales trasplantables .

16. Uso según la reivindicación 15, caracterizado porque unas células endoteliales se producen in Vitro mediante cultivo de células precursoras endoteliales en presencia de eritropoyetina.

17. Uso según la reivindicación 15 - a 16, caracterizado porque el cultivo de las células precursoras endoteliales se realiza en presencia de al menos una sustancia activa adicional seleccionado del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa, particularmente Simvastatin, Mevastatin o Atorvastatin, y un donador de NO, particularmente L-arginina .

18. Uso de eritropoyetina para el tratamiento previo y/o el tratamiento continuo de trasplantes de tejido u órgano .

19. Uso según la reivindicación 18, caracterizado porque el tratamiento continuo de los trasplantes de tejido u órgano se realiza bajo uso de células precursoras endoteliales aisladas.

20. Uso de eritropoyetina para la producción de sistemas trasplantables de órgano o tejido in Vitro conteniendo células, caracterizados porque los sistemas de órgano o tejido in Vitro son tratados antes de la trasplantación o implantación con eritropoyetina para la inducción de vasculogénesis y/o formación de células endoteliales.

21. Uso según la reivindicación 20, caracterizado porque los sistemas de órgano o tejidos in Vitro contienen células precursoras endoteliales.

22. Uso de eritropoyetina para la producción de prótesis de prótesis - vasculares o válvulas cardiacas, caracterizado porque las prótesis vasculares o las válvulas cardiacas se recubren con eritropoyetina.

23. Uso según la reivindicación 22, caracterizado porque el recubrimiento de las prótesis vasculares o válvulas cardiacas contiene células precursoras endoteliales .

24. Uso de eritropoyetina y/o derivados de esta en • una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente para la estimulación de la movilización fisiológica de células precursoras endoteliales, la proliferación de células precursoras endoteliales, la diferenciación de células precursoras endoteliales en células endoteliales y/o la migración de células precursoras endoteliales en dirección a un estímulo angiogénico o vasculogénico .

25. Uso según la reivindicación 24, caracterizado porgue se incrementa la capacidad de adhesión de las células precursoras endoteliales en diferenciación.

26. Uso según la reivindicación 24 o 25, caracterizado porque la estimulación de células precursoras endoteliales causa la formación de tejido endotelial.

27. Uso según una de las reivindicaciones 24 a 26, caracterizado porque la estimulación de células precursoras endoteliales causa la formación de nuevos vasos sanguíneos .

28. Uso de eritropoyetina y/o de derivados de esta en una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente para la estimulación de la formación de tejido endotelial.

29. Uso según una de las reivindicaciones 1 a 28, caracterizado porque la eritropoyetina es eritropoyetina humana o animal .

30. Uso según la reivindicación 29, caracterizado porque la eritropoyetina es un derivado, un análogo, una modificación o una muteína de eritropoyetina.

31. Uso según la · reivindicación 29 o 30, caracterizado porque la eritropoyetina es aislada de orina humana, la orina o el plasma de pacientes que sufren de anemia aplástica, cultivos de tejido de células de cáncer renal humanas, células de linfoblastos que tienen la capacidad de formar eritropoyetina humana o un cultivo de hibridoma obtenido mediante fusión celular de una linea de células humanas .

32. Uso según la reivindicación 29 o 30, caracterizado porque la eritropoyetina es una eritropoyetina producida mediante técnicas de ADN recombinante .

33. Composición farmacéutica para la estimulación de células precursoras endoteliales , para la estimulación de tejido endotelial, para la estimulación de la vasculogénesis y/o para el tratamiento de enfermedades o padecimientos relacionados con una disfunción de células precursoras endoteliales, comprendiendo eritropoyetina y/o un derivado, análogo, una modificación o una muteína de esta como sustancia activa en una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente, así como al menos una sustancia activa adicional seleccionada del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa y un donador de NO.

34. Composición farmacéutica para la prevención y/o terapia de hipercolesterolemia, diabetes melitus, enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio, endoteliosis incluyendo reticuloendoteliosis , aterosclerosis, enfermedad cardiaca coronaria, isquemia de miocardio, angina de pecho, enfermedades cardiovasculares debido a la edad, enfermedades isquémicas de las extremidades, preeclampsia, enfermedad de aynaud, hipertonía inducida por embarazo insuficiencia renal crónica o aguda, particularmente insuficiencia renal terminal, insuficiencia cardiaca, saneamiento de heridas y enfermedades consecuenciales de estos, comprendiendo eritropoyetina y/o un derivado, un análogo, una modificación o una muteína de esta como sustancia activa en una dosis de 500 a 2000 unidades/semana/paciente .

35. Composición farmacéutica según la reivindicación 34, comprendiendo además una sustancia activa adicional seleccionada del grupo consistiendo de VEGF, PIGF, GM-CSF, un inhibidor de HMG-CoA-reductasa o un donador de NO.

36. Composición farmacéutica según la reivindicación 33 o 35, caracterizada porque el inhibidor de HMG-CoA-reductasa es una estatina como Simvastatin, M vasta-tin o Atorvastatin.

37. Composición farmacéutica según la reivindicación 33 o 35, caracterizada porque el donador de NO es L-arginina .

38. Uso de eritropoyetina y/o derivados de esta en una dosis de 500 a 2000 unidades de EPO/semana/paciente para la estimulación de la vasculogénesis.

39. Uso de eritropoyetina en una dosis de 500 a 2000 unidades EPO/semana/paciente para la terapia de padecimientos o enfermedades del cuerpo humano o animal relacionados con una disfunción de células precursoras endoteliales .

40. Uso según la reivindicación 39, caracterizado porque la disfunción de las células precursoras endoteliales consiste en su capacidad interrumpida para la proliferación, su capacidad interrumpida para la diferenciación en células endoteliales, su capacidad interrumpida para la adhesión y/o su capacidad interrumpida para la migración en dirección de un estímulo vasculogénico o angiogénico.

41. Uso según la reivindicación 39 o 40, caracterizado porque la disfunción de las células precursoras endoteliales afecta o inhibe la formación de tejido endotelial y/o de vasos sanguíneos.

42. Uso según una de las reivindicaciones 39 a 41, caracterizado porque la disfunción de células precursoras endoteliales tiene causas patógenas.

43. Uso según una de las reivindicaciones 39 a 42, caracterizado porque los padecimientos o las enfermedades relacionadas con una disfunción de células precursoras endoteliales son hipercolesterolemia, diabetes melitus, enfermedades inflamatorias crónicas mediadas por el endotelio, endoteliosis incluyendo reticuloendoteliosis , aterosclerosis , enfermedad cardiaca coronaria, isquemia de miocardio, angina de pecho, enfermedades cardiovasculares debido a la edad, enfermedades isquémicas de las extremidades, preeclampsia, enfermedad de Raynaud, hipertonía inducida por embarazo insuficiencia renal crónica o aguda, particularmente insuficiencia renal terminal, insuficiencia cardiaca, saneamiento de heridas y enfermedades consecuenciales de estos .