MXPA05000060A - Citocinas protectoras de tejido para la proteccion, restauracion y mejora de celulas, tejidos y organos respondedores. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan metodos y composiciones para tratar un mamifero que tiene una inflamacion, mediante la proteccion o mejora de una celula, tejido, organo o parte del cuerpo respondedor que presenta inflamacion o asociado con la inflamacion, por medio de la administracion sistemica o local de una composicion que comprende una citocina protectora de tejido. La invencion abarca tambien tratamientos de combinacion que incluyen la administracion de una composicion que comprende una citocina protectora de tejido de la invencion y la administracion de por lo menos un agente antiinflamatorio o agente inmunomodulacior.

Description

TSurasian patont (AM, ??, BY, KG, Z, D, U, TJ, TM), For two-letter codes and other abbreviations, refer to the "G id- European patent (AT, BE, BG, CH, CY, CZ, DE, DK, EE, ance Notes on Codes and Abbreviations" appearing at the begin- ES, FI, FR, GB, GR, HU, IE, GG, LU, C, L, PT, RO, ning ofeach regular issue ofthe PCT Gazette. SE, SI, SK, TR), OAPI patent (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GQ, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG). Published: — witho t International search repon and to be republished upan receipt oj that report 1 CITOCINAS PROTECTORAS DE TEJIDO PAPA LA PROTECCIÓN, RESTAURACIÓN Y MEJORA DE CÉLULAS, TEJIDOS Y ÓRGANOS RESPONDEDORES REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad de la Solicitud de Patente Norteamericana No. 10/188,905, presentada el dia 3 de junio de 2002, que se. incorpora aquí en su totalidad. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Durante muchos años, la única función fisiológica clara de la eritropoyetina había sido el control de la producción de eritrocitos. Recientemente, varias líneas de evidencia sugieren que la eritropoyetina, un miembro de la superfamilia de las citocinas, desempeña otras funciones fisiológicas importantes que pueden ser mediadas a través de la interacción. con el receptor para eritropoyetina (eritropoyetina-R) .' Estas acciones incluyen la mitogénesis, modulación del influjo de calcio en células de músculo liso y células neurales, producción de ' eritrocitos, hiperactivación de plaquetas y efectos sobre el metabolismo intermedio. Se cree que la eritropoyetina proporciona respuestas compensatorias que sirven para mejorar los microentornos celulares hipóxicos así como para modular la muerte programada de las células causada, por estrés metabólico. Aún cuando estudios han establecido que la eritropoyetina inyectada' en forma intracraneal protege las neuronas contra 2 una lesión neuronal hipóxica, la administración intracraneal es una via de administración impráctica y en general inaceptable para uso terapéutico, especialmente en el caso de individuales normales. Además, estudios previos de pacientes anémicos que recibieron eritropoyetina han llegado a la conclusión que la eritropoyetina administrada periféricamente no es transportada al cerebro (Marti y colaboradores, 1997, idney Int. 51:416-8; Juul y colaboradores, 1999, Pediatr. Res. 46:543-547; Bueirii y colaboradores, 2000, Nephrol . Dial. Transplant. 15:422-433). Varias formas modificadas de eritropoyetina han sido descritas con actividades enfocadas hacia la mejora de la actividad eritropoyética de la molécula, tales como las que alteran los aminoácidos en el extremo carboxi descrito en la patente norteamericana No. 5,457,089 y en la patente norteamericana No. 4,835,260; isoformas de eritropoyetina con varios números de residuos de ácido siálico por molécula, tales como las descritas en la patente norteamericana No. 5,856,298; polipéptidos descritos en la patente norteamericana No. 4,703,008; agonistas descritos en la patente norteamericana No. 5,767,078; péptidos que se unen al receptor para eritropoyetina de conformidad con lo descrito en las patentes US 5,773,569 y 5,830,851; y miméticos de moléculas pequeñas de conformidad con lo descrito en la patente norteamericana No. 5,835,382. 3 La presente invención se refiere a citocinas protectoras de tejido generadas por la modificación química de la eritropoyetina y sus usos para la protección, mantenimiento, mejora o restauración de células respondedoras a la eritropoyetina y células, tejidos y órganos asociados in situ así como ex vivo, y a la administración de una citocina protectora de tejido a través de una barrera de células endoteliales para el propósito de proteger y mejorar las células respondedoras a la eritropoyetina y células, tejidos y órganos asociados distantes de la vasculatura, o bien para transportar moléculas asociadas a través de una barrera de células endoteliales. COMPENDIO DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención se enfoca al uso de citocinas protectoras de tejido, eritropoyetinas modificadas químicamente que no tienen uno o varios aspectos de las eritropoyetinas que afectan la médula ósea, para la preparación de composiciones farmacéuticas para la protección, mantenimiento, mejora, o restauración de la función o viabilidad de células de mamífero respondedoras y sus células, tejidos u órganos asociados. En un aspecto particular, las células de mamífero respondedoras y sus células, tejidos u órganos asociados son distantes de la vasculatura en virtud de una barrera estrecha de células endoteliales. En otro aspecto particular, las células, 4 tejidos, órganos y otras partes corporales están asiladas del cuerpo de un mamífero, como por ejemplo cuando se contemplan para transplante o re-fijación. A título de ejemplos no limitativos, las células o tejidos respondedores pueden ser células o tejidos neuronales, retínales, musculares, cardiacos, pulmonares, hepáticos, renales, de intestino delgado, de corteza adrenal, de médula adrenal, endoteliales capilares, de testículos, de ovarios, de páncreas, de hueso, de piel, o células o tejidos endometriales . Además, ejemplos no limitativos de células respondedoras incluyen células de fotorreceptores (bastoncitos y conos), ganglios, bipolares, horizontales, amacrinas, de Müeller, de miocardio, de marcapaso, de nodos sinoatrial, de nodos sinusal, de tejido de unión, de nodo atrioventricular, de fascículo de His, de hepatocitos, esteladas, de upffer, mesangiales, epiteliales renales, intersticiales tubulares, de Goblet, de glándula intestinal (criptas), entérales, endocrinas, glomurolosas, fasciculares, reticulares, de cromafina, pericito, Leydig, Sertoli, esperma, folículo Grafiano, folículo primordial, isletas de Langerhans, células , células ß, células ?, células F, células osteoprogenitoras, osteoclastos, osteoblastos, estroma endometrial, células endometriales, células progenitoras y células endoteliales. Estos ejemplos de células respondedoras son simplemente ilustrativos. En un aspecto, la célula respondedora o sus células, tejidos, u 5 órganos asociados no son células, tejidos u órganos excitables o no comprenden predominantemente células o tejidos excitables. En una modalidad particular, la célula, tejido u órgano de mamífero para el cual se utiliza una citocina protectora de tejido mencionada arriba son las células, tejidos u órganos de mamífero que han pasado o pasarán un período de tiempo bajo por lo menos una condición adversa para la viabilidad de la célula, tejido u órgano. Tales condiciones incluyen hipoxia in situ traumática, disfunción metabólica, hipoxia in situ inducida quirúrgicamente o disfunción metabólica, o bien exposición a toxina in situ; esto último puede asociarse con quimioterapia o radioterapia. En una modalidad, las condiciones adversas son el resultado de desvío cardiaco pulmonar (máquina corazón-pulmón) , como se utiliza para ciertos procedimientos quirúrgicos . Las citocinas protectoras de tejido de la presente invención son útiles para el tratamiento terapéutico o profiláctico de enfermedades humanas del sistema nervioso central y del sistema nervioso periférico que tienen síntomas primariamente neurológicos o psiquiátricos, así como enfermedades oftálmicas, enfermedades cardiovasculares, enfermedades cardiopulmonares, enfermedades respiratorias, enfermedades renales, urinarias y reproductivas, enfermedades gastrointestinales así como anormalidades endocrinas y 6 metabólicas, e inflamación. La invención se enfoca también a composiciones farmacéuticas que comprenden citocinas protectoras de tejido particulares para su administración en un mamífero, preferentemente un ser humano. Tales composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas para administración oral, intranasal o parenteral, o en forma de una solución de perfusado para el mantenimiento de la viabilidad de células, tejidos u órganos ex vivo. Las citocinas protectoras de tejido útiles para los propósitos mencionados arriba y las composiciones farmacéuticas incluyen eritropoyetinas que han sido alteradas por lo menos por una modificación en comparación con la eritropoyetina nativa, y preferentemente en comparación con la eritropoyetina humana nativa. La por lo menos una modificación puede ser una modificación de por lo menos un aminoácido de la molécula de eritropoyetina, o una modificación de por lo menos un carbohidrato de la molécula de eritropoyetina. Evidentemente, moléculas de citocinas protectoras de tejido útiles para los propósitos de la presente invención pueden tener varias modificaciones en comparación con una molécula nativa, como por ejemplo múltiples modificaciones de la porción de aminoácido de la molécula, múltiples modificaciones de la porción carbohidrato de la molécula, o bien por lo menos una modificación de la porción de aminoácido de la molécula y por lo menos una 7 modificación de la porción carbohidrato de la molécula. La molécula de citocina protectora de tejido conserva su capacidad de proteger, mantener, mejorar o restaurar la función de viabilidad de células de mamífero respondedoras, sin embargo, una o varias propiedades de la molécula de eritropoyetina no relacionadas con la característica deseable antes mencionada pueden estar ausentes en comparación con la molécula nativa. En una modalidad preferida, la citocina protectora de tejido no tiene los efectos de la eritropoyetina sobre la médula ósea, es decir, niveles incrementados de hematócritos (eritropoyesis) , vasoconstricción (presión sanguínea alta) , presión sanguínea incrementada, hiperactivación plaquetaria, actividades procoagulantes, y producción incrementada de trombocitos . Con mayor preferencia, las citocinas protectoras de tejido no tienen eritropoyesis; de manera especialmente preferida, las citocinas protectoras de tejido no tienen ninguno de los efectos de la eritropoyetina sobre la médula ósea. A título de ejemplo, la citocina protectora de tejido de la invención puede ser una sialoeritropoyetina. En otro ejemplo, la citocina protectora de tejido de la invención puede ser una eritropoyetina o asialoeritropoyetina gue ha reaccionado con uno o varios reactivos que modifican uno o varios grupos amino de residuos de aminoácidos de eritropoyetina nativa o asialoeritropoyetina. En una modalidad preferida, la citocina 8 protectora de tejido es no es eritropoyética. En una modalidad, la citocina protectora de tejido es una eritropoyetina que no tiene porciones de ácido siálico. En una modalidad preferida, la citocina protectora de tejido es asialoeritropoyetina, y con mayor preferencia, una asialoeritropoyetina humana. En otra modalidad, la citocina protectora de tejido tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, ó 13 porciones de ácido siálico. Tales eritropoyetinas parcialmente desialiladas se conocen a continuación con hiposialoeritropoyetinas . Pueden prepararse por modificación química o enzimática de eritropoyetina nativa, o bien pueden obtenerse mediante la expresión en un sistema que ya sea no sialilato la molécula en absoluto o bien sialilata solamente parcialmente la eritropoyetina. La asialoeritropoyetina y la hiposialoeritropoyetina de la invención están abarcadas independientemente del medio a través del cual se preparan las moléculas. En otra modalidad preferida, la citocina protectora de tejido comprende por lo menos uno o varios residuos de lisina modificados o una modificación del grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina, tales modificaciones son las modificaciones que resultan de la reacción del grupo epsilon amino de lisina o del grupo amino N-terminal con un agente modificador de. grupo amino o con varios agentes modificadores de grupo amino. El residuo de lisina modificado o el grupo 9 amino N-terminal modificado puede producirse químicamente. En una modalidad preferida, una eritropoyetina es biotinilada, carbamilada, succinilada, o acetilada en uno o varios grupos lisina o en el extremo N. En otra modalidad preferida, la lisina reacciona con un aldehido o azúcar reductor para formar una imina, la cual opcionalmente estabilizada por reducción química como por ejemplo mediante la utilización de cianoborohidruro de sodio para formar un residuo de lisina N-alquilado como por ejemplo glucitolil lisina, o bien que en el caso de azúcares reductores puede estabilizarse a través de un reacomodo de Amadori o Heyns para formar una alfa-desoxi alfa-azúcar como por ejemplo alfa-desoxi-alfa-fructosillisina. En otra modalidad preferida, la lisina o grupo amino N-terminal es carbamilado (carbamoilado) , como por ejemplo en virtud de una reacción con ion cianato, alquil-carbamilado, aril-carbamilado, o aril-tiocarbamilado con un alquil-isocianato, aril-isocianato, o aril-isotiocianato, respectivamente, o bien puede ser acilado por un derivado reactivo de ácido alquilcarboxílico o arilcarboxílico, como por ejemplo mediante reacción con anhídrido acético, anhídrido succínico o anhídrido ftálico. Por lo menos un grupo lisina del grupo amino N-terminal puede también ser modificado con trinitrofenilo por reacción con un ácido trinitrobencensulfónico, o preferentemente con una de sus sales. En otra modalidad, residuos de lisina pueden ser 10 modificados por reacción con un glioxal, como por ejemplo con reacción con glioxal metilglioxal o 3-desoxiglucosona para formar los derivados correspondientes de alfa-carboxialquilo . En otra modalidad, una citocina protectora de tejido puede ser generada mediante la modificación de por lo menos un residuo de tirosina de eritropoyetina mediante la utilización de un reactivo electrofilico, como por ejemplo, sin limitarse a este ejemplo, mediante la modificación por nitración o yodinación, con el objeto de modificar una posición de anillo aromático. Como se indicó arriba, el agente protector de tejido útil para los propósitos de la presente invención pueden tener por o menos una de las modificaciones mencionadas arriba, pero pueden tener más que una de las dichas modificaciones. A titulo de ejemplo de citocinas protectoras de tejido con una modificación a la porción de aminoácido de la molécula y modificación opcional a la porción carbohidrato de la molécula, una citocina protectora de tejido es carbamoileritropoyetina, carbamoilasialoeritropoyetina, carbamoilhiposialoeritropoyetina, acetileritropoyetina, acetilasialoeritropoyetina, acetilhipoasialoeritropoyetina, succinileritropoyetina, succinilasialoeritropoyetina, succinil iposialoeritropoyetina, biotinileritropoyetina, biotinilasialoeritropoyetina, biotinilhiposialoeritropoyetina, yodoeritropoyetina, yodoasialoeritropoyetina, 11 yodohiposialoeritropoyetina, N-epsilon-carboximetileritropoyetina, N-epsilon-carboximetileritropoyetina, N-epsilon-carboximetilhiposialoeritropoyetina, y glucitolilasialoeritropoyetina, glucitolilasialohipoeritropoyetina. Estos compuestos son simplemente ejemplos de la eritropoyetinas modificadas de la invención. Los nombres triviales antes mencionados son simplemente representantes de las modificaciones de la molécula de eritropoyetina nativa y como se describió arriba, la modificación del grupo amino puede encontrarse en uno o varios grupos epsilon amino de residuos de lisina, o bien en el grupo amino N-terminal, o bien, en el caso de eritropoyetinas, nitro- o yodo- modificadas, de uno o varios residuos de tirosina. Cualquier combinación de los anteriores se encuentra abarcada dentro del marco de la presente invención. LO presente invención abarca también composiciones, incluyendo composiciones farmacéuticas que comprenden una o varias de las citocinas protectoras de tejido mencionadas arriba. Cualquiera de estas composiciones puede también incluir eritropoyetina nativa. En otro aspecto de la invención, se proporciona un método para la protección, mantenimiento, mejora, o restauración de la función de viabilidad de células de mamífero respondedoras y sus células, tejidos y órganos asociados, mediante la 12 administración de una cantidad efectiva de una o varias de las citocinas protectoras de tejido mencionada arriba. En un aspecto particular del método, las células de mamífero respondedoras y sus células, tejidos u órganos asociados están distantes con relación a la vasculatura debido a una barrera estrecha de células endoteliales . En otro aspecto particular, la célula, tejido u órgano y otras partes del cuerpo están aislados del cuerpo del mamífero, como por ejemplo las células, tejidos, órganos u otras partes del cuerpo contemplados para transplante o re-fijación. A título de ejemplos no limitativos, la célula o tejido respondedor puede ser una célula o tejido neuronal, retinal, muscular, cardiaco, pulmonar, hepático, renal, del intestino delgado, de corteza adrenal, de médula adrenal, endotelial capilar, de testículos, de ovario, de páncreas, de piel, de hueso, o endometriales . Estos ejemplos de células respondedoras son simplemente ilustrativos. En una modalidad particular, la célula respondedora o sus células, tejidos, u órganos asociados no son células, tejidos u órganos excitables, o bien no comprenden predominantemente células o tejidos excitables. En otra modalidad particular, la célula, tejido, ú órgano de mamífero al cual se puede administrar una citocina protectora de tejido mencionada arriba son las células, tejidos, u órganos de mamífero que han pasado o pasarán un perxodo de tiempo bajo por lo menos una condición 13 adversa a la viabilidad de las células, tejidos u órganos. Dichas condiciones pueden incluir hipoxia traumática in situ o bien disfunción metabólica, hipoxia in situ inducida quirúrgicamente o disfunción metabólica o bien exposición a toxina in situ; este último caso puede asociarse con quimioterapia o radioterapia. En una modalidad, la invención protege contra las condiciones adversas que resultan de desvío cardiopulmonar . En otro aspecto de la invención, cualquiera de las citocinas protectoras de tejido mencionadas arriba puede emplearse en la composición farmacéutica para tratamiento ex vivo de células, tejidos y órganos con el objeto de proteger, mantener, mejorar o restaurar la función o viabilidad de células de mamífero respondedoras y sus células, tejidos y órganos asociados. Dicho tratamiento ex vivo es útil, por ejemplo, para la conservación de células, tejidos u órganos para transplante, ya sea para autotransplante o bien para xenotransplante . Las células, tejidos u órganos pueden estar bañados en una solución que comprende citocinas protectoras de tejido, o bien el perfusado puede ser instilado en el órgano a través de la vasculatura o de otras formas, con el objeto de mantener el funcionamiento celular durante el período el cual las células, tejidos u órganos no están integrados con la vasculatura del donador o del receptor. La administración del perfusado puede efectuarse a un donador 14 antes de cosechar el órgano, así como al órgano cosechado y al receptor. Además, el uso antes mencionado de cualquier citocina protectora de tejido es útil cuando una célula, tejido u órgano es aislado de la vasculatura del individuo y por consiguiente existe esencialmente ex vivo durante un lapso de tiempo, el término aislado refiriéndose a la restricción o fijación con grapa de la vasculatura de al célula, tejido u órgano o parte corporal, o bien hacia la células, tejido, órgano o parte del cuerpo, colmo se podría efectuar durante intervención quirúrgica, incluyendo, en particular, una intervención de desvío cardiopulmonar, desvío de la vasculatura de la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo; remoción de la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo del cuerpo de mamífero, como se puede efectuar antes de un xenotransplante o antes y durante autotransplante; o bien amputación traumática de una célula, tejido, órgano parte del cuerpo. Así, este aspecto de la invención se refiere a la perfusión con una citocina protectora de tejido tanto in situ y ex vivo. Ex vivo, la eritropoyetina puede ser proporciona en una solución de conservación de célula, tejido u órgano. Para cualquier aspecto, la exposición puede ser a través de perfusión continua, perfusión pulsátil, infusión, baño, inyección, o cateterización. En otro aspecto adicional, la invención se enfoca a un método para proteger, mantener, mejorar o restaurar la viabilidad de 15 una célula, tejido, órgano o parte del cuerpo de mamífero que incluye una célula o tejido respondedor, en donde la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo es aislado del cuerpo del mamífero. El método incluye por lo menos la exposición de la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo de mamífero a una cantidad de una citocina protectora de tejido mencionada arriba, durante un lapso de tiempo efectivo para proteger, mantener, mejorar o restaurar la viabilidad mencionada arriba. En ejemplos no limitativos, el término aislado se refiere a la restricción o fijación con grapa de la vasculatura de la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo o bien hacia la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo, como se puede efectuar durante una intervención quirúrgica, particularmente una intervención de desvío cardiopulmonar; desvío de la vasculatura de la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo; remoción de la célula, tejido, órgano o parte del cuerpo del cuerpo de mamífero, como se puede efectuar antes de un xenotransplante o antes y durante un autotransplante; o amputación traumática de una célula, tejido, órgano o parte del cuerpo. Así, este aspecto de la invención se refiere tanto a perfusión como citocina protectora de tejido in situ como ex vivo. Ex vivo, la citocina protectora de tejido puede proporcionarse en una solución de preservación de célula, tejido u órgano. Para cualquier aspecto, la exposición puede efectuarse a través de perfusión continua, perfusión 16 pulsátil, infusión, baño, inyección, o cateterización. A titulo de ejemplos no limitativos, la célula o tejido respondedor ex vivo mencionado arriba puede ser o comprender células o tejidos neuronales, retínales, musculares, cardiacos, pulmonares, hepáticos, renales, de intestino delgado, de corteza adrenal, de médula adrenal, endotelial capilar, de testículos, de ovarios, de páncreas, de piel, de hueso, de médula ósea, de sangre de cordón umbilical o células o tejidos endometriales . Estos ejemplos de células respondedoras son simplemente ilustrativos. Todos los métodos y usos mencionados arriba son aplicables preferentemente a seres humanos, pero son útiles también para cualquier mamífero, como por ejemplo pero sin limitarse a estos ejemplos, a mascotas, animales domesticados, ganado y animales de jardines zoológicos. Las vías de administración de las composiciones farmacéuticas antes mencionadas incluyen administración oral, intravenosa, intranasal, tópica, intraluminal, por inhalación o parenteral, esta última vía de administración incluyendo administración intravenosa, intraarterial, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, submucosal o intradérmica. Para uso ex vivo, se prefiere un perfusado o solución de baño. Esto incluye la perfusión de una porción aislada de la vasculatura in situ. En otro aspecto de la invención, cualquiera de las citocinas protectoras de tejido mencionadas arriba son útiles para 17 preparar una composición farmacéutica para restaurar una célula, ejido u órgano disfuncional cuando se administra después del inicio de la enfermedad o condición responsable de la disfunción. A titulo de ejemplo no limitativo, la administración de una composición farmacéutica que comprende citocinas protectoras de tejido restaura la función cognoscitiva en animales que han tenido previamente un trauma cerebral, aún cuando se administra mucho después que el trauma haya desaparecido (por ejemplo, tres dias, cinco días, una semana, un mes, o más) . En otra modalidad, la invención ofrece métodos para el uso de la citocina protectora de tejido mencionada arriba para restaurar una célula, tejido u órgano disfuncional cuando se administra después del inicio de la enfermedad o condición responsable de la disfunción. A titulo de ejemplo no limitativo, métodos para la administración de una composición farmacéutica que comprende una citocina protectora de tejido restaura la función cognoscitiva en animales que han sido previamente sometidos a trauma cerebral, aún cuando se administra mucho después de la desaparición del trauma, (por ejemplo, tres dias, cinco dias, una semana, un mes, o más) . Citocinas protectoras de tejido útiles para tales métodos incluyen cualquiera de las eritropoyetinas modificadas especificas mencionadas arriba. En otro aspecto adicional de la presente invención, se 18 proporcionan métodos para facilitar la transcitosis de una molécula a través de una barrera de células endoteliales en un mamífero mediante la administración de una composición de una molécula en asociación con una citocina protectora de tejido de conformidad con lo descrito arriba. La asociación entre la molécula a transportar y la citocina protectora de tejido puede ser, por ejemplo, un enlace covalente lábil, un enlace covalente estable o una asociación no covalente con un sitio de enlace para la molécula. Barreras de células endoteliales pueden ser la barrera hemato-encefálica, la barrera hemato-ocular, la barrera hemato-testicular, la barrera hemato-ovárica y la barrera hemato-placental . Moléculas adecuadas para transporte por el método de la presente invención incluyen hormonas como por ejemplo hormona de crecimiento, factor de crecimiento de nervio (NGF) , factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF) , factor neurotrófico ciliar (CNTF) , factor de crecimiento de fibroblasto básico (bFGF) , factor de crecimiento transformante ß? (TGF31) , factor de crecimiento transformante ß2 {TGF 2) , factor de crecimiento transformante ß3 {TGF$3) , interleucina 1, interleucina 2, interleucina 3, e interleucina 6, AZT, anticuerpos contra factor de necrosis tumoral, agentes antivirales e inmunosupresores tales como ciclosporina. Además, colorantes o marcadores pueden fijarse sobre la eritropoyetina o una de las citocinas protectoras de tejido 19 de la presente invención con el objeto de visualizar células, tejidos u órganos dentro del cerebro y otros órganos con barrera para propósitos de diagnóstico. En otro aspecto adicional de la presente invención para proporcionar una composición para facilitar la transcitosis de una molécula a través de una barrera de células endoteliales en un mamífero, la composición comprende la molécula en asociación con una citocina protectora de tejido según lo mencionado arriba. La asociación puede ser, por ejemplo, un enlace covalente lábil, un enlace covalente estable, o una asociación no covalente con un sitio de enlace para la molécula. Barreras de células endoteliales pueden ser la barrera hemato-encefálica, la barrera hemato-ocular, la barrera hemato-testicular, la barrera hemato-ovárica y la barrera emato-piacental . Moléculas adecuadas para transporte a través del método de la presente invención incluyen hormonas, como por ejemplo, hormonas de crecimiento, factor de crecimiento de nervio (NGF) , factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF) , factor neurotrófico ciliar (CNTF) , factor de crecimiento de fibroblasto básico (bFGF) , factor de crecimiento transformante ß? (TGF l), factor de crecimiento transformante ß2 (TGF32), factor de crecimiento transformante ß3 (???ß3) , interleucina 1, interleucina 2, interleucina 3, e interleucina 6, ???, anticuerpos contra factor de necrosis tumoral, agentes anti irales e inmunosupresores tales como 20 ciciosporina. Además, colorantes y marcadores pueden fijarse sobre la erltropoyetina o una de las citocinas protectoras de tejido de la presente invención con el objeto de visualizar células, tejidos u órganos en eí cerebro y otros órganos con barrera para propósitos de diagnóstico. En otro aspecto adicional de la presente invención, cualquiera de las citocinas protectoras de tejido antes mencionadas es útil para preparar una composición farmacéutica para facilitar la transcitosis de una molécula a través de una barrera de células endoteliales en un mamífero. La asociación puede ser, por ejemplo, un enlace covalente lábil, un enlace covalente estable o una asociación no covalente con un sitio de enlace para la molécula. Barreras de células endoteliales pueden ser la barrera hemato-encefálica, la barrera hemato-ocular, la barrera hemato-testicular, la barrera hemato-ováríca y la barrera hemato-placental. Moléculas adecuadas para transporte por el método de la presente invención incluyen íaormonas, como por ejemplo, hormona de crecimiento, antibióticos, antivirales, colorantes, marcadores y agentes anti-cáncer, solamente para mencionar algunos ejemplos no limitativos. En una modalidad, la composición farmacéutica de la presente invención comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido, por lo menos un agente anti-inflamatorio y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 21 En una modalidad relacionada, el agente anti-inflamatorio se selecciona dentro del grupo que consiste de cortícosteroides, glucocorticoides, esferoides, fármacos anti-inflamatorios no esferoides, beta-agonistas, agentes anti colinérgicos, metil xantinas, inyecciones de oro, sulfasalazina, penicilamina, agentes anti-angiogénicos, dapsona, psoralenos, agentes anti malaria, agentes antivirales, y antibióticos. En una modalidad, la invención ofrece una composición farmacéutica de la invención que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido, por lo menos un agente anti-inflamatorio y/o por lo menos un agente inmunomodulador, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, a condición que el agente anti-inflamatorio o el agente inmunomodulador no sea aMSH ni un agente anti-TNF. En una modalidad relacionada, el agente anti-inflamatorio o el agente inmunomodulador no es un anticuerpo . En una modalidad, la invención ofrece una composición farmacéutica de la presente invención que consiste esencialmente de una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido y que comprende por lo menos un agente anti-inflamatorio y/o por lo menos un agente inmunomodulador, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención ofrece una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una 22 cítocina protectora de tejido, por lo menos un agente inmunomodulador, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad relacionada, el agente anti-inflamatorio se selecciona del grupo que consiste de metotrexato, leflunomído, cíclofosfamida citoxano, Immurano, ciclosporina A, minociclina, azatioprina, antibióticos, metilprednisoíona, corticosteroides, esteroides, micofenolato mofetil, rapamicina, mizoribina, desoxispergualina, brequinar, malononitriloamidas, moduladores de receptor células T, · y moduladores de receptor de citocina. La invención ofrece también una composición farmacéutica de conformidad con lo descrito arriba, en donde la citocina protectora de tejido se selecciona dentro del grupo que consiste de i) una eritropoyetina que no tiene porciones de ácido siálico; ii) una eritropoyetina que no tiene un número carbohidratos enlazados con N o carbohidratos enlazados con O; iii) una eritropoyetina que tiene un contenido reducido de carbohidrato por tratamiento de citocina nativa con por lo menos un glicosidasa; iv) una eritropoyetina que tiene por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados; v) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados que es químicamente reducida; - vi) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de arginina modificados; vii) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de lisina 23 modificados o una modificación del grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina; viii) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de tirosina modificado; ix) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de ácido aspártico o un residuo de ácido glutámico modificado; •x) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo triptófano modificado; xi) una eritropoyetina que tiene por lo menos un grupo amino removido; xii) una eritropoyetina que comprende por lo menos una abertura de por lo menos uno de los enlaces de cistina en la molécula de eritropoyetina; y xiii) una eritropoyetina truncada. En una modalidad, un método para el tratamiento de la inflamación en un mamífero que comprende células, tejidos y/u órganos, respondedores, comprende la administración a un mamífero de una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad relacionada, la citocina protectora de tejido no por lo menos una actividad selecciona dentro del grupo que consiste de niveles incrementados de hematócritos, vasoconstricción, híperactivacíón plaquetaria, actividad procoagulante y producción incrementada de trombocitos. En otra modalidad, un método para de tratamiento de la inflamación en un mamífero que comprende células, tejidos y/o órganos respondedores, comprende la administración de una 24 composición farmacéutica que comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido y un vehicuio farmacéuticamente aceptable a un mamífero que lo requiere, y la administración al mamífero de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o varios agentes anti-infíamatoríos o agentes inmunomoduiadores . En una modalidad, el agente antiinflamatorio se selecciona dentro del grupo que consiste de un fármaco corticosteroíde, glucocorticoide, esferoide, anti- inflamatorio no esferoide, un agente beta-agonista, un agente ¦ anti colinérgíco, una metil xantinas, inyección de oro, sulfasalazina, penicilamina, un agente anti-angiogénico, dapsona, psoraleno, un agente anti malaria, un agente antiviral, y un antibiótico. En una modalidad, la invención ofrece un método para el tratamiento de un inflamación en un mamífero que comprende células, tejidos y/u órganos respondedores, que comprende la administración de una composición farmacéutica que comprende una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido y un vehículo farmacéuticamente aceptable a un mamífero que lo requiere, y la administración a dicho mamífero de una cantidad profiláctica terapéuticamente efectiva de uno o varios agentes antiinflamatorios o agentes inmunomoduiadores, a condición que el agente anti-inflamatorio o el agente inmunomodulador no sea 25 c¿MSH o un anti-TNF. En una modalidad relacionada, el agente anti-inflamatorio o el agente inmunomodulador no es un anticuerpo . En otra modalidad, el agente inmunomodulador se selecciona dentro del grupo que consiste de un agente proteinaceo, un mimético de péptido, un anticuerpo, una molécula de ácido nucleico, una molécula pequeña, un compuesto orgánico, un compuesto inorgánico, metotrexato, leflunomido, ciclofosfamida, citoxano, Immurano, ciclosporina A, minoclina, azatioprina, antibiótico, metilprednisolona (MP) , corticosteroide, esteroide, micofenolato mofetil, rapamicina, mizoribina, desoxisperguaíina, brequinar, una malononitriioamida, un modulador de receptor de células T, y un modulador de receptor de citocina. La invención ofrece un método de conformidad con lo descrito aquí, en donde dicha citocina protectora de tejido es i) una eritropoyetina que no tiene porciones de ácido siálico; ii) una eritropoyetina que no tiene carbohidratos enlazados con N o carbohidratos enlazados con O; iii) una eritropoyetina que tiene un contenido reducido de carbohidrato mediante tratamiento de una eritropoyetina nativa con por lo menos una glicosidasa; iv) una eritropoyetina que tiene por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados; v) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados químicamente reducidos; vi) una eritropoyetina que 26 comprende por lo menos uno o varios residuos de arginina modificados; viij una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de lisina modificados o una modificación del grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina; viii) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de tirosina modificado; ix) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico modificado; x) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de triptófano modificado; xi) una eritropoyetina que tiene por lo menos un grupo amino removido; xii) una eritropoyetina que comprende por lo menos una abertura de por lo menos uno de los enlaces de cistina en la molécula de eritropoyetina; y xiii) una eritropoyetina truncada. En una modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones y métodos descritos arriba es asialoeritropoyetina o fenilglioxal-eritropoyetina. En otra modalidad, la citocina protectora de tejido es capaz de atravesar una barrera de células endoteliales. La barrera de células endoteliales puede seleccionarse dentro del grupo que consiste de barrera hematoencefálica, barrera hemato-ocular, barrera hemato-testicular, barrera hemato-ovárica, y barrera hemato-uterina . En una modalidad, las células, tejidos y/u órganos respondedores en el mamífero que son el blanco de las 27 composiciones farmacéuticas y métodos de la invención se seleccionan dentro del grupo que consiste de células neuronales, células musculares, células de corazón, pulmón, hígado, riñon, intestino delgado, corteza adrenal, médula adrenal, células capilares, células endoteliales, testículos, ovario, células endometriales, y células progenitoras . En otra modalidad, las células de mamífero respondedoras comprenden además células seleccionadas dentro del grupo que consiste de células de foto-receptor, células de ganglio, células bipolares, células horizontales, células amacrinas, células de Müeller, células de miocardio, células de marcapaso, células de nodo sinoatrial, células de nodo sínusal, células de nodo atrioventricular, fascículos de células de His, células de hepatocito, células esteladas, células de upffer, células mesángrales, células de Goblet, células de glándula intestinal, células endocrinas entérales, células glomerulosa, células fasciculadas, células reticulares, células de cromafína, células de pericito, células de Leydig, células de Sertoli, células de esperma, células de folículo Grafiano, células de folículo primordial, células de estroma endometrial y células endometriales. La invención ofrece también una composición farmacéutica y métodos para el tratamiento de la inflamación en un mamífero de conformidad con lo descrito arriba, en donde dicha citocina protectora de tejido es una asíaloeritropoyetina. En 28 modalidades preferidas, la asialoeritropoyetina es asialoeritropoyetina humana. La citocina protectora de tejido es preferentemente una eritropoyetina sin carbohidratos enlazados con N. La citocina protectora de tejido es preferentemente una eritropoyetina sin carbohidratos enlazados a 0. En una modalidad, la citocina protectora de tejido es una eritropoyetina tratada con por lo menos una glicosidasa. En otra modalidad, la citocina protectora de tejido es una eritropoyetina oxidada con periodato. La eritropoyetina oxidada con periodato es preferentemente reducida químicamente con cianoborohidruro de sodio. En una modalidad, la citocina protectora de tejido es una eritropoyetina que comprende una por R-glioxal en uno o varios residuos de arginina, en donde R es una porción arilo o una porción alquilo. La eritropoyetina es preferentemente fenilglioxal-eritropoyetina . En otra modalidad, la citocina protectora de tejido es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de arginina es modificado por reacción con una dicetona vecina seleccionada dentro del grupo que consiste de 2, 3-butandiona, y ciclohexandiona . En otra modalidad, la citocina protectora de tejido de la invención es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de arginina reacciona con 3-desoxiglucosona . En otra modalidad, la citocina protectora de tejido es una molécula de eritropoyetina que comprende por lo menos una lisina 29 biotiniiada o un grupo amino N-terminal. La molécula de eritropoyetina puede ser una eritropoyetina biotiniiada. La invención ofrece también una composición farmacéutica y métodos para el tratamiento de una inflamación en un mamífero, que comprende una citocina protectora de tejido que es una glucitolil lisina eritropoyetina o una fructosil lisina eritropoyetina. En una modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención es una eritropoyetina que tiene por lo menos un residuo de lisina carbamilado. En otra modalidad, la eritropoyetina carbamilada se selecciona dentro del grupo que consiste de alfa-N-carbamoileritropoyetina; alfa-N-carbamoílo, N-epsílon-carbamoileritropoyetina; alfa-N-carbamoilasíaloeritropoyetína; N-epsilon-carbamoilasialoeritropoyetina; alfa-N-carbamoilo, N-epsilon-carbamoílasialoeritropoyetina; alfa-N-carbamoilhiposialoeritropoyetina; N-epsilon-carbamoilhíposialoeritropoyetina; y alfa-N-carbamoilo, N-epsilon-carbamoilhiposialoeritropoyetina. En una modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de lisina es acilado. En otra modalidad, un residuo de lisina de dicha eritropoyetina es acetilado. En otra modalidad, la 30 eritropoyetina acetilad'a se selecciona dentro del grupo que consiste de alfa-N-acetilerítropoyetina; N-epsilon-acetileritropoyetina; alfa-N-acetilo, N-epsilon-acetileritropoyetina; alfa-N-acetilasialoeritropoyetina; N-epsilon-acetilasialoeritropoyetina; alfa-N-acetilo, N-epsilon-acetilasialoeritropoyetina; alfa-N-acetilñiposialoeritropoyetina; N-epsilon-acetilhiposialoeritropoyetina; y alfa-N-acetilo, N-epsilon-acetilhiposialoeritropoyetina . En una modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención es una eritropoyetina que comprende un residuo de lisina succinilado. En una modalidad, la eritropoyetina se selecciona dentro del grupo que consiste de alfa-N-succinileritropoyetina; N-epsilon-succinileritropoyetina; alfa-N-succinilo, N-epsilon-succinileritropoyetina; alfa-N-succinilasialoeritropoyetina; N-epsilon-succinilasialoeritropoyetina; alfa-N-succinilo, N-epsilon-succinilasialoeritropoyetina; alfa-N-succinilhiposialoeritropoyetina; contra-epsilon-succinil iposialoeritropoyetina; y alfa-N-succinilo, N-epsilon-succinilhiposialoeritropoyetina . En una modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención es una eritropoyetina con por lo menos un residuo de lisina 31 modificado por una sal de ácido 2,4,6-trinitrobencensulfónico. En un aspecto de la invención, la sal es 2, 4, 6-trinitrobencensulfonato de sodio. En otra modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de tirosina es nitrado y/o yodinado. En otra modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención es una eritropoyetina en la cual un residuo de ácido aspártico y/o ácido glutámico reacciona con una carbodiimida seguido por reacción con una amina. En un aspecto de la invención, la amina es glicinamida. En una modalidad, la citocina protectora de tejido de las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención descrita arriba se utiliza en el tratamiento de inflamación que resulta de una condición de enfermedad o trauma. En una modalidad, el trauma se selecciona dentro del grupo que consiste de angitis, bronquitis crónica, pancreatitis, osteomielitis, artritis reumatoide, glomerulonefritis, neuritis óptica, arteritis temporal, encefalitis, meningitis, mielitis transversa, dermatomiositis, polimiositis, fascilitis necrotizante, hepatitis y enterocolitis necrotizante . En una modalidad, la citocina protectora de tejido de las 32 composiciones farmacéuticas y métodos de la invención inhiben la inflamación que resulta de citocinas producidas por células gliales. En otra modalidad, la inflamación es activada por apóptosis. De conformidad con un aspecto de la invención, una citocina protectora de tejido puede ser utilizada para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la inflamación en un mamífero que comprende células, tejido, y/u órganos respondedores. De conformidad con ciertos aspectos, la citocina protectora de tejido no presenta por lo menos una actividad seleccionada dentro del grupo que consiste de niveles incrementados de hematócritos, vasoconstricción, hiperactivación plaquetaria, actividad pro-coagulante y producción incrementada de trombocitos . En una modalidad, la inflamación resulta de una condición de enfermedad o trauma. En otra modalidad, el trauma es causado por un trastorno de ataques, esclerosis múltiple, apoplejía, hipotensión, paro cardiaco, isquemia, infarto del miocardio, pérdida de la función congnoscitiva relacionada con la edad, daño por radiación, parálisis cerebral, enfermedad neurodegenerativa, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Leigh, demencia por SIDA, pérdida de memoria, esclerosis lateral amiotrófica, alcoholismo, trastorno del humor, trastorno de ansiedad, trastorno de déficit de atención, autismo, enfermedad de Creutzfeld-Jakob, trauma cerebral, 33 trauma de la médula espinal, isquemia cerebral, isquemia de médula espinal, desvío cardiaco-pulmonar, insuficiencia cardiaca crónica, degeneración macular, neuropatía diabetina, retinopatía diabética, glaucoma, isquemia retinal o trauma retinal. La invención proporciona el uso de una citocina protectora de tejido para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de inflamación en un mamífero que comprende células, tejidos y/u órganos respondedores, en donde la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido; por lo menos un agente anti-inflamatorio o agente inmunomodulador; y un vehículo farmacéutica aceptable. En una modalidad, la citocina protectora de tejido es i) una eritropoyetina que no tiene porciones de ácido siálico; ii) una eritropoyetina que no tiene carbohidratos enlazados con N o enlazados con 0; iii) una eritropoyetina que tiene un contenido reducido de carbohidrato por tratamiento de eritropoyetina nativa con por lo menos una glicosidasa; iv) una eritropoyetina que tiene por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados; v) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados químicamente reducidos; vi) una eritropoyetina que comprende por lo menos un o varios residuos de arginina modificados; vii) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios 34 residuos de lisina modificados o una modificación de grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina; viii) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de tirosina modificado; ix) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de ácido glutámico o ácido aspártico modificado; x) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de triptófano modificado; xi) una eritropoyetina que tiene por lo menos un grupo amino removido; xii) una eritropoyetina que comprende por lo menos una abertura de por lo menos uno de los enlaces de cistína en la molécula de eritropoyetina; y xiii) una eritropoyetina truncada. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra la distribución de receptor para eritropoyetina en cerebro humano normal, en secciones delgadas teñidas con un anticuerpo anti-eritropoyetina . La figura 2 es una amplificación con potencia mayor de la imagen de la figura 1. La figura 3 muestra, utilizando anticuerpos secundarios marcados con oro, la distribución ultramicroscópica de receptores para eritropoyetina. La figura 4, preparada de manera semejante a la figura 3, muestra receptores para eritropoyetina de alta densidad en las superficies luminales y anti-luminales de capilares cerebrales humanos. La figura 5 compara la eficacia in vitro de la eritropoyetina 35 y de la asialoeritropoyetlna sobre la viabilidad de células P19 con deprivación de suero. La figura 6 es otro experimento que compara la eficacia in vitxo de la eritropoyetina y asialoeritropoyetlna sobre la viabilidad de células P19 con deprivación de suero. La figura 7 muestra la protección de eritropoyetina y asialoeritropoyetlna en un modelo de isquemia cerebral focal de rata. La figura 8 muestra una dosis-respuesta que compara la eficacia de eritropoyetina humana y asialoeritropoyetlna humana en oclusión de arteria cerebral media en un modelo de ataque isquémico. La figura 9 muestra la actividad de eritropoyetina yodinada en el ensayo de P19. La figura 10 muestra el efecto de eritropoyetina biotinilada y asialoeritropoyetlna biotinilada en el ensayo de P19. La figura 11 compara la eficacia in vitro de la eritropoyetina y de eritropoyetina modificada con fenilglioxal sobre la viabilidad de células P19 con deprivación de suero. La figura 12 muestra el efecto de citocinas protectoras de tejido en ensayo de intoxicación con agua. La figura 13 muestra la translocación de eritropoyetina administrada parenteralmente en el fluido cerebroespinal. La figura 14 muestra el mantenimiento de la función de un 36 corazón preparado para transplante, por eritropoyetin . La figura 15 muestra la protección del miocardio contra daño isquémico, por eritropoyetina, después de oclusión vascular temporal . Las figuras 16A-16D muestran los efectos de tratamiento con eritropoyetina en modelo de glaucoma de rata. La figura 17 muestra la magnitud de la conservación de la función retinal por la eritropoyetina en el modelo de glaucoma de rata. La figura 18 muestra la restauración de la función cognoscitiva después de trauma cerebral mediante la administración de eritropoyetina empezando cinco dias después del trauma. La figura 19 muestra la restauración de la función cognoscitiva después de trauma cerebral por administración de eritropoyetina empezando 30 dias después del trauma. La figura 20 muestra la eficacia de la asialoeritropoyetina humana en un modelo de kainato de toxicidad cerebral. La figura 21 muestra la eficacia de citocinas protectoras de tejido en un modelo de lesión de médula espinal de rata. La figura 22 muestra la eficacia de citocinas protectoras de tejido dentro de un modelo de lesión de médula espinal de conejo . Las figuras 23A-23C muestran una sección coronal de la capa cortical cerebral teñida por hematoxilina y eosina. 37 Las figuras 24A-24C muestran secciones coronales de corteza frontal adyacente a la región de infarto teñido por anticuerpo GFAP. Las figuras 25A y 25C muestran secciones coronales de capa de corteza cerebral teñida por anticuerpo OX-42. La figura 26A y la figura 26B muestran secciones coronales de capa de corteza cerebral adyacente a la región de infarto teñida por anticuerpo OX-42. La figura 27 muestra la eficacia de eritropoyetina contra inflamación en un modelo de EAE. La figura 28 compara los efectos de la dexametasona y eritropoyetina sobre la inflamación en un modelo EAE. La figuras 29? y 29B muestran que la eritropoyetina suprime la inflamación asociada con muerte neuronal . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los métodos de la invención ofrecen la protección local o sistémica o la mejora de células, tejidos y órganos en el cuerpo de un mamífero, en una amplia gama de condiciones normales y adversas, o protección de las células, tejidos y órganos contemplados para relocación en el cuerpo de otro mamífero. Además, se proporciona también la restauración o regeneración de disfunción. Como se mencionó arriba, la capacidad de una eritropoyetina para atravesar una barrera hermética de células endoteliales y ejercer sus efectos positivos sobre células respondedoras (así como otros tipos 38 de células) distantes de la vasculatura ofrece el potencial de prevenir asi como de tratar una amplia gama de condiciones y enfermedades que por otra parte provocan un daño celular y tisular significativo en un animal, incluyendo un ser humano y además, permiten el éxito de procedimientos quirúrgicos que hasta ahora no podían intentarse porque el riesgo tradicionalmente era mayor que el beneficio . La eritropoyetina es una hormona glicoproteína que en seres humanos tiene un peso molecular de aproximadamente 34 kDa. La proteína madura comprende 165 aminoácidos y los residuos de glicosilo conforman aproximadamente el 40% del peso de la molécula. Una eritropoyetina puede obtenerse comercialmente, por ejemplo, bajo las marcas comerciales PROCRIT, disponible en Ortho Biotech Inc., Raritan, NJ, y EPOGEN, disponible en Amgen, Inc., Thousand Oaks, CA. Además, una amplia gama de sistemas huéspedes pueden utilizarse para expresión y producción de eritropoyetina recombinante, incluyendo, sin limitarse a estos ejemplos, sistemas de células de bacterias, levadura, insectos, plantas y mamíferos, incluyendo seres humanos. Por ejemplo, una eritropoyetina recombinante producida en bacterias que no glicosila ni sialata el producto podría emplearse para producir formas no glicosiladas de eritropoyetina. Alternativamente, una eritropoyetina recombinante puede ser producida en otros sistemas que glicosilan células vegetales por ejemplo, incluyendo también células humanas. Las formas de eritropoyetina útiles en la práctica de la presente invención abarcan modificaciones químicas y/o modificaciones de glicosilación mediadas por sistema de expresión de formas naturales, sintéticas y recombinantes de eritropoyetinas humanas y de otros mamíferos. La expresión célula respondedora" se refiere a una célula de mamífero cuya función o viabilidad puede ser mantenida, promovida, mejorada, regenerada o bien puede obtener un beneficio de alguna otra forma, mediante la exposición a una eritropoyetina. Ejemplos no limitativos de tales células incluyen células neuronales, retínales, musculares, cardiacas, pulmonares, hepáticas, renales, de intestino delgado, de corteza adrenal, de médula adrenal, células endoteliales de capilares, testículo, ovarios, páncreas, piel, hueso y células endometriales . En particular, las células respondedoras incluyen, sin limitación, células neuronales; células retínales: fotoreceptores (bastoncitos y conos) , células de ganglio, bipolares, horizontales, amacrinas, y células de Müeller; células musculares; células cardiacas: miocardio, marcapaso, nodo sinoatrial, nodo sinusal, y células de tejido de unión (nodo atrioventricular y fascículo de His) ; células pulmonares; células hepáticas; hepatocitos, células esteladas, y células de Kupffer; células renales: células mesangiales, epiteliales renales, e 40 intersticiales tubulares; células de intestino delgado; células de Goblet, células de glándula intestinal (criptas) y células endocrinas entérales; células de corteza adrenal : células glomerulosa, fasciculadas, y reticulares; células de médula adrenal: células de cromafina; células capilares: células de pericito; células de testículo: células de Leydig, Sertoli y esperma y sus precursores; células de ovario: células de folículo Grafiano y células de folículo primordial; células endometriales : células de estroma endometrial y células endometriales; células de páncreas. Isleta de Langerhans, células a, células ß, células ? y células F; células cutáneas; células óseas: células osteoprogenitoras, osteoblasto y osteoblasto; así como las células progenitoras y células endoteliales presentes en los órganos listados arriba. Además, tales células respondedoras y los beneficios proporcionados por una eritropoyetina pueden extenderse con el objeto de proporcionar protección o mejora indirectamente a otras células no directamente respondedora, o bien a tejidos u órganos que contienen tales células no respondedoras. Estas otras células o tejidos u órganos que se benefician directamente de la mejora de las células respondedoras presentes como parte de las células, tejido u órgano como células, tejidos y órganos "asociados". Así, los beneficios de una eritropoyetina de conformidad con lo descrito aquí pueden proporcionarse como resultado de la 41 presencia de un pequeño número o pequeña proporción de células respondedoras en un tejido u órgano, por ejemplo, un tejido excitable o neuronal presente en dicho tejido, o bien las células de Leydig de los testículos, que forman la testosterona. En un aspecto, la célula respondedora o sus células, tejidos u órganos asociados no son células, tejidos u órganos excitables, ni comprenden predominantemente células o tejidos excitables. La duración y grado de condiciones adversas inducidas a propósito para un beneficio final, como por ejemplo una quimioterapia de alta dosis, una radioterapia, una supervivencia de transplante ex vivo prolongada, y períodos prolongados de isquemia inducida por intervención quirúrgica, pueden llevarse a cabo aprovechando la presente invención. Sin embargo, la invención no se limita a esto sin que incluye como un aspecto, métodos o composiciones en donde las células respondedoras blanco son distantes con relación a la vasculatura debido a una barrera de células endoteliales o uniones herméticas endoteliales. En general, la invención se dirige a cualquier célula respondedora y células, tejidos y órganos asociados que puedan beneficiarse de una exposición a la eritropoyetina . Además, una disfunción celular, tisular u orgánica puede ser restaurada o regenerada después de un evento adverso agudo (como por ejemplo trauma) mediante exposición a la eritropoyetina. 42 La invención se enfoca generalmente al uso de eritropoyetina para la preparación de composiciones farmacéuticas para los propósitos mencionados arriba en donde la función celular es mantenida, promovida, mejorada, regenerada o bien obtiene un beneficio de otra forma. La invención se enfoca también a métodos para mantener, mejorar, promover, o regenerar la función celular mediante la administración a un mamífero de una cantidad efectiva de eritropoyetina de conformidad con lo descrito aquí. La invención se enfoca además a métodos para mantener, promover, mejorar o regenerar la función celular ex vivo mediante la exposición de células, tejido u órgano a eritropoyetina. La invención se enfoca también a una composición de perfusado que comprende eritropoyetina para su uso en la preservación de órgano o tejido. Los varios métodos de la invención utilizan una composición farmacéutica que incluye por lo menos eritropoyetina en una cantidad efectiva para la vía particular y duración específica de exposición para ejercer efectos positivos o beneficios sobre células respondedoras dentro del cuerpo de un mamífero o bien fuera del cuerpo de un mamífero. Cuando las células, tejidos u órganos blanco de la terapia contemplada requieren de eritropoyetina para atravesar una barrera de células endoteliales, la composición farmacéutica incluye eritropoyetina en una concentración que puede, después de atravesar la barrera de células endoteliales, 43 ejercer sus efectos deseables sobre las células respondedoras . Moléculas capaces de interactuar con el receptor para eritropoyetina y modular la actividad del receptor se conocen aquí como moduladores de actividad de eritropoyetina o receptor de eritropoyetina, son útiles en el contexto de la presente invención. Estas moléculas pueden ser, por ejemplo, formas naturales, sintéticas o recombinantes de las moléculas de eritropoyetina, de conformidad con lo descrito arriba, u otras moléculas que pueden no necesariamente parecerse a la eritropoyetina de ninguna manera, excepto para modular la actividad de células respondedoras a la eritropoyetina, de conformidad con lo descrito aquí . Además de los atributos de protección tisular identificados arriba, la eritropoyetina se asocia más comúnmente con sus efectos sobre la médula ósea, es decir, unos niveles incrementados de ematócritos (eritropoyesis) , vasoconstricción (alta presión sanguínea) , hiperactivación plaquetaria, actividad pro-coagulante, y producción incrementada de trombocitos . Sin embargo, estos efectos sobre la médula ósea pueden plantear un riesgo en la administración crónica y aguda de eritropoyetina para tratar las disfunciones celulares, tisulares u orgánicas comentadas arriba. Por consiguiente, la invención se enfoca generalmente al uso de citocinas protectoras de tejido que consisten de 44 eritropoyetina químicamente modificada que preferentemente no tienen uno o varios de los efectos de la eritropoyetina sobre la médula ósea. Con mayor preferencia, las citocinas protectoras de tejido no presentan eritropoyesis; de manera especialmente preferida, las citocinas protectoras de tejido no presentan ninguno de los efectos de la eritropoyetina sobre la médula ósea. En otras modalidades, la citocina protectora de tejido presenta dos de los efectos mencionados arriba o tres de los efectos mencionados arriba. Además, las citocinas protectoras de tejido deseables para los usos descritos aquí pueden ser generadas por guanidinación, amidinación, carbamilación (carbamoilación) , trinitrofenilación, acetilación, succinilación,' nitración o modificación de residuos de arginina, lisina, tirosina, triptófano o cisteína o grupos carboxilo entre otros procedimientos, tales como proteólisis limitada, remoción de grupos amino y/o sustitución mutacional de residuos de arginina, lisina, tirosina, triptófano o cisteína de eritropoyetina por técnicas biológicas moleculares . Preferentemente, estas modificaciones químicas afectan las cuatro regiones de receptor reconocidas - VLQRY (SEQ ID NO: 1), TKVNFYAW (SEQ ID NO: 2), SGIRSLTTL (SEQ ID NO: 3), o bien SNFLRG (SEQ ID NO: 4) . Más preferentemente, estas regiones de receptor, que son básicas por naturaleza, son modificadas por modificación química de los aminoácidos básicos, arginina y 45 lisina, dentro de estas regiones. Además, las áreas de la molécula que rodean estas regiones de receptor pueden ser químicamente modificadas también para afectar las características cinéticas o propiedades de enlace con receptor de la molécula. Esto produce citocinas protectoras de tejido que mantienen un nivel adecuado de actividades para órganos y tejidos específicos pero no para otros, como por ejemplo eritrocitos (por ejemplo, Satake y colaboradores; 1990, Biochim. Bíophys. Acta 1038:125-9; que se incorporan aquí por referencia en su totalidad) . Un ejemplo no limitativo de conformidad con lo descrito abajo es la modificación de residuos de arginina de eritropoyetina por reacción con un glioxal como por ejemplo fenilglioxal (según el protocolo de Takahashi, 1977, J. Biochem. 81:395-402). Como se observará abajo, dicha molécula de citocina protectora de tejido conserva totalmente su efecto neurotrófico . Dichas moléculas de citocinas protectoras de tejido están totalmente abarcadas para los varios usos y composiciones descritos aquí. La actividad (en unidades) de eritropoyetina y moléculas de tipo eritropoyetina se define tradicionalmente con base en su efectividad para estimular la producción de células rojas en modelos de roedores (y como se deriva por estándares internacionales de eritropoyetina) . Una unidad (U) de eritropoyetina regular (peso molecular de aproximadamente 46 34, 000) es de aproximadamente 8 ng de proteína (1 mg de proteína es aproximadamente 125,000 U) . Sin embargo, puesto que el efecto sobre la eritropoyesis es incidental para las actividades deseadas aquí y puede no necesariamente ser una propiedad detectable de algunas de las citocinas protectoras de tejido de la invención, una definición de la actividad de ciertas citocinas protectoras de tejido de la presente invención basada en actividad eritropoyética es inapropiada. Por consiguiente, como se emplea aquí, la unidad de actividad de eritropoyetina o las citocinas protectoras de tejido se define como la cantidad de proteína que se requiere para provocar la misma actividad en sistemas celulares neurales u otros sistemas celulares respondedores tal como se provoca por la eritropoyetina de estándar internacional de la organización mundial de la salud en el mismo sistema. La persona con conocimientos en la materia determinará fácilmente las unidades de una eritropoyetina no eritropoyética o molécula de citocína protectora de tejido relacionada siguiendo los lineamientos contenidos aquí . Además de las citocinas protectoras de tejido antes mencionadas, los comentarios siguientes amplían las varias citocinas protectoras de tejido de la invención. Una citocina protectora de tejido de la invención puede consistir de eritropoyetina que por lo menos no tiene porciones de ácido siálico, que se conocen como 47 asialoeritropoyetina. Preferentemente, una citocina protectora de tejido de la invención es una asialoeritropoyetina humana. Puede prepararse mediante la desialilación de eritropoyetina empleando una sialidasa, como se describe en el empaque del fabricante para Sialydase A de ProZyme Inc., San Leandro, California. Típicamente, PROZYME® GLYCOPRO® SIALYDASE AMR de grado de secuenciamiento (N-acetilneuraminato glicohidrolasa, EC 3.2.1.18) se utiliza para disociar todos los residuos de ácido siálico terminales no reductores de carbohidratos complejos y glicoproteínas tales como eritropoyetina. Disociará también ácidos siálicos ramificados (enlazados a un residuo interno) . Sialydase A se aisla de un clon de Arthrobacter ureafaciens. En un ejemplo no limitativo del procedimiento mencionado arriba, la eritropoyetina puede ser sometida a desialilación por sialidasa (0.025 U/mg EPO) a 37°C durante 3 horas, después de lo cual se puede remover la sal de la eritropoyetina y se puede concentrar. Después de pasar en una columna de intercambio de iones utilizando el sistema AKTAPRIMEMR (Amersham Pharmacia Biotech) , y después de elusión con amortiguadores seleccionados, las fracciones que contienen solamente las dos bandas superiores identificadas por inmunoelectroforesis (migración a i ~ 8.5 y ~ 7.9 en gel IEF) se seleccionan. No se debe detectar ninguna cantidad significativa de ácido siálico en esta preparación de la 48 citocina protectora de tejido. En modalidades alternativas, la citocina protectora de tejido de la invención puede ser una eritropoyetina que tiene por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ó 13 residuos de ácido siálico, mediante desilación parcial por el método mencionado arriba. Estas citocinas protectoras de tejido que resultan de la desialilación parcial de la eritropoyetina pueden también mencionarse aqui como hiposialoeritropoyetinas, y pueden ser una composición homogénea, por ejemplo 2 ácidos siálicos por molécula de eritropoyetina, o bien pueden ser una mezcla heterogénea de varios grados diferentes de sialilación o bien, por ejemplo, pueden tener un número bajo, como por ejemplo de aproximadamente 1 a aproximadamente 4 moléculas de ácido siálico en promedio por eritropoyetina, o bien, en otro ejemplo, un número mayor como por ejemplo aproximadamente 10 a aproximadamente 13 ácidos siálicos en promedio por molécula de eritropoyetina. Tales mezclas pueden incluir asialoeritropoyetina o eritropoyetina. Una eritropoyetina para los usos antes mencionados puede tener por lo menos uno o varios residuos de arginina modificados. Por ejemplo, la eritropoyetina modificada puede comprender una porción R-glioxai en el residuo de arginina o en los varios residuos de arginina, en donde R puede ser un grupo arilo, heteroarilo, alquilo inferior, alcoxi inferior, 49 o cicloalquilo, o un grupo alfa-desoxiglicitolílo . Como se emplea aquí, el término "alquilo" inferior se refiere a un grupo hidrocarburo alifático saturado de cadena recta o ramificada que comprende preferentemente de 1 a 6 átomos de carbono. Ejemplos representativos de tales grupo son metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, butilo, pentilo, hexilo y similares. El término "alcoxi" se refiere a un grupo alquilo inferior de conformidad con lo definido arriba adjuntado al resto de la molécula por oxígeno. Ejemplos de alcoxi incluyen metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi y similares. El término "cicloalquilo" se refiere a un grupo alquilo cíclico con de 3 hasta aproximadamente 8 átomos de carbono, incluyendo, por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo y similares. El término "arilo" se refiere a grupos fenilo y naftilo. El término heteroarilo se refiere a grupos heterocíclicos que contienen de 4 a 10 miembros de anillo y de 1 a 3 heteroátomos seleccionados dentro del grupo que consiste de oxígeno, nitrógeno y azufre. Ejemplos incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, isoxazolilo, fenilisoxazolilo, furrio, pirimidinilo, quinolilo, tetrahidroquinolilo, piridilo, imidazolilo, pirrolidinilo, 1, 2, -triazolilo, triazolilo, tienilo y similares. El grupo R puede estar sustituido, como por ejemplo el grupo 2, 3, 4-trihidroxibutílo de 3-desoxiglucosona. Ejemplos típicos de compuestos R-glioxal son glioxal, metilglioxal, 3-desoxiglucosona y fenilglioxal . 50 Compuestos R-glioxal preferidos son metilglioxal o fenilglioxal. Un método de ejemplo para dicha modificación puede encontrarse en Werber y colaboradores., 1975, Isr. J. Med. Sci. 11{11): 1169-70, empleando fenilglioxal. En un ejemplo adicional, por lo menos un residuo de arginina puede estar modificado por reacción con una dicetona vecina como por ejemplo 2, 3-butandiona o ciclohexandiona, preferentemente en un amortiguador de borato 50 milimolar aproximadamente a pH 8-9. Un procedimiento para esta última modificación con 2, 3-butandiona puede efectuarse de conformidad con Riordan, 1973, Biochemistry 12(20): 3915-3923; y la modificación con ciclohexanona puede efectuarse de conformidad con Patthy y colaboradores, 1975, J. Biol . Chem 250 (2) : 565-9. Una citocina protectora de tejido de la presente invención puede comprender por lo menos uno o varios residuos de lisina modificados o una modificación del grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina, tales modificaciones como las modificaciones resultantes de la reacción del residuo de lisina con un agente modificador de grupo amino. Por ejemplo, una eritropoyetina o una asialoeritropoyetina o hiposialoeritropoyetina antes mencionada, puede ser modificada por acetilación, carbamilación, succinilación, oxidación y carboximetilsilisinación subsiguiente, entre otros métodos, para modificar los grupos amino. 51 En un ejemplo no limitativo, una citocina protectora de tejido puede ser generada por carbamilación de una eritropoyetina, o bien una eritropoyetina desialilada como por ejemplo una asialoeritropoyetina, con cianato de potasio recristalizado en amortiguador de borato, después de lo cual se efectúa una diálisis completa. De la misma manera, una eritropoyetina mencionada arriba puede ser succinilada por reacción con anhídrido succínico, seguido por diálisis para formar una citocina protectora de tejido de la presente invención. En otra modalidad, una citocina protectora de tejido puede ser generada por medio de la reacción de una eritropoyetina con anhídrido acético en amortiguador de fosfato para acetilar la eritropoyetina. Esta reacción puede ser detenida por diálisis contra agua. El método se describe en Satake y colaboradores, (1990) . Chemical Modificación of erythropoietin: an increase in in-vitro activity by guanidination [Modificación química de eritropoyetina: un incremento de la actividad in vitro por guanidinación] . Biochimica et Biophysica Acta. 1038:125-129'. En otra modalidad, las citocinas protectoras son aductos ?e- (carboximetil) lisina (CML) a partir de eritropoyetina o asialoeritropoyetina preparados por reacción con ácido glioxílico y NaBH3CN en amortiguador de fosfato de sodio, seguido por diálisis. Akhtar y colaboradores (1999), 52 Conformational study of NE- (carboxymethyl) lysine adducts of recombinant a-crystallins . Current Eye Research, 18:270-276. En otra modalidad, una citocina protectora de tejido es generada mediante la modificación de los residuos de lisina de eritropoyetina por reacción con derivados de glioxal, como una reacción con glioxal, metilglioxal y 3-desoxiglucosona para formar derivados de alfa-carboxialquilo . Ejemplos incluyen reacción con glioxal para formar un residuo de carboximetillisina como en Glomb y Monnier, 1995, J. Biol. Chem. 270 (17 ): 10017-26, o bien con metilglioxal para formar un residuo de (1-carboxietil) lisina como en Degenhardt y colaboradores, 1998, Cell . Mol. Biol. (Noisy-le-grand) 44 (7) : 1139-45. El residuo de lisina modificado puede ser además químicamente reducido. Por ejemplo, la eritropoyetina puede ser biotínilada a través de grupos lisina, como por ejemplo de conformidad con el método descrito en el ejemplo 2, en donde un éster N-hidroxisuccinimídico de ácido D-biotinoil-e-aminocaproico reaccionó con eritropoyetina, seguido por remoción de la biotina sin reaccionar por filtración en gel de una columna Centricon 10 de conformidad con lo descrito por Woj chowski y Caslake, 1989, Blood, 74(3): 952-8. En este documento, los autores utilizan tres métodos diferentes para biotinilar la eritropoyetina, cualquiera de dichos métodos puede ser utilizado para la preparación de las citocinas protectora de tejido para los 53 usos contemplados dentro del marco de la presente invención. Se puede agregar biotina a (1) las porciones de ácido siálico; (2) grupos carboxilato, o bien (3) grupos amino. En otra modalidad preferida, la lisina puede reaccionar con un aldehido o azúcar reductor para formar una imina, que puede ser estabilizada por reducción por ejemplo con cianoborohidruro de sodio para formar un residuo de lisina IT-alquilado como por ejemplo glucitolil lisina, o bien que en el caso de azúcares reductores puede ser estabilizada por reacomodo de Amadori o Heyns para formar un azúcar alfa-desoxi alfa-amino como por ejemplo un residuo alfa-desoxi-alfa-fructosillisina en la molécula de eritropoyetina. Como ejemplo, la preparación de una proteina modificada de fructosillisina por incubación con glucosa 0.5 M en amortiguador de fosfato de sodio a pH 7.4 durante 60 días se describe en Makita y colaboradores, 1992, J. Biol . Chem. 267:5133-5138. En otro ejemplo, el grupo lisina puede ser carbamilado como por ejemplo mediante reacción con ion cianato o alquil- o aril-carbamilado o -tiocarbamilado con un alquil- o aril-isocianato o -isotiocianato, o bien dicho grupo puede ser acilado a través de un derivado reactivo de ácido alquilcarboxilico o arilcarboxilico como por ejemplo con reacción con anhídrido acético o anhídrido succínico o anhídrido ftálico. Ejemplos son la modificación de grupos lisina con 4-sulfofenilisotiocianato o con anhídrido acético, 54 ambos describiéndose en Gao y colaboradores, 1994, Proc Nati Acad Sci USA 91 (25) : 12027-30. Los grupos lisina pueden también ser modificados con trinitrofenilo por reacción con ácido trinitrobencensulfónico o preferentemente sus sales. Tales métodos se describen abajo en el Ejemplo 2. Por lo menos un residuo de tirosina de una eritropoyetina puede ser modificado en una posición de anillo aromático por un reactivo electrofílico, como por ejemplo por nitración o yodinación para generar una citocina protectora de tejido. Por medio de ejemplo no limitativo, la eritropoyetina puede reaccionar con tetranitrometano (Nestler y colaboradores, 1985, J. Biol. Chem. 260(12): 7316-21); o bien puede ser yodinada de conformidad con lo descrito en el Ejemplo 3. Por ejemplo, se puede llevar a cabo una yodinación con un tubo de yodinación pre-revestido con Nal y IODO-GEN (Pierce, 28601) , utilizando eritropoyetina o asialoeritropoyetina en un amortiguador de fosfato de sodio. Por lo menos un residuo de ácido aspártico o de ácido glutámico de una eritropoyetina puede ser modificado, como por ejemplo por reacción con una carbodiimida seguido por reacción con una amina como por ejemplo glicinamida pero sin limitarse a este ejemplo. En otro ejemplo, un residuo de triptóf no de una eritropoyetina puede ser modificado, como por ejemplo con reacción con n-bromosuccinimida o n-clorosuccinimida, 55 siguiendo métodos tales como los descritos en Josse y colaboradores, Chem Biol Interact 1999 Mayo 14; 119-120. En otro ejemplo, una citocina protectora de tejido puede ser preparada mediante la remoción de por lo menos un grupo amino de una eritropoyetina nativa, tal como se puede alcanzar por reacción con nihidrina seguido por reducción del grupo carbonilo subsiguiente por reacción con borohidruro . En otro ejemplo adicional, una citocina protectora de tejido se proporciona la cual tiene por lo menos una abertura de por lo menos uno de los enlaces de cisterna en la molécula de eritropoyetina por reacción con un agente reductor como por ejemplo dítiotreitol, seguido por reacción de los sulfhidrílos subsiguientes con yodoacetamida, ácido yodoacético u otro electrófilo para prevenir la reformación de los enlaces disulfuro. Como se indicó arriba, de manera alternativa o en combinación, enlaces disulfuro pueden ser cancelados medíante la alteración de una molécula de cisterna que participa en la reticulación real o por lo menos otro residuo de aminoácido que resulta en la inhabilidad de la eritropoyetina para formar por lo menos uno de los enlaces disulfuro presentes en la molécula nativa. Una citocina protectora de tejido puede ser preparada mediante el hecho de someter una eritropoyetina a una proteólxsis química limitada que enfoca residuos específicos, por ejemplo, para disociar después de residuo de triptófano. 56 Dichos fragmentos de eritropoyetina resultantes están abarcados aquí. Como se indicó arriba, una citocina protectora de tejido útil para los propósitos de la presente invención puede tener por lo menos una de las modificaciones mencionadas arriba, pero puede tener más que una de las modificaciones mencionadas arriba. A titulo de ejemplo de una citocina protectora de tejido con una modificación a la porción carbohidrato de la molécula y una modificación a la porción de aminoácido, una citocina protectora de tejido puede ser una asialoeritropoyetina y tener sus residuos de lisina biotinilados o carbamilados . Además, la eritropoyetina químicamente modificada puede ser modificada adicionalmente por mutación de por lo menos un aminoácido de la eritropoyetina. Tales mutaciones pueden incluir sustituciones, deleciones, incluyendo deleciones internas, adiciones, incluyendo adiciones que proporcionan proteínas de fusión, o bien sustituciones conservadoras de residuos de aminoácido dentro y/o adyacente a la secuencia de aminoácidos, pero que resultan en un cambio "silencioso", en la medida en que el cambio produce una eritropoyetina con funcionalidad equivalente. Sustituciones conservadoras de aminoácidos pueden efectuarse con base en semejanza de polaridad, carga, solubilidad, hidrofobicidad, hidrofilicidad, y/o la naturaleza anfipática de los residuos 57 involucrados. Por ejemplo, aminoácidos no polares (hidrofóbico) incluyen alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptófano, y metionina; aminoácidos neutrales polares incluyen glicina, serina, treonina, cisterna, tirosina, asparagina, y glutamina; aminoácidos cargados positivamente (básico) incluye arginina, lisina e histidina; y aminoácidos cargados negativamente (ácidos) incluyen ácido aspártico y ácido glutámico. Alternativamente, cambios no conservadores de aminoácidos, e inserciones y deleciones de mayor tamaño pueden utilizarse para crear una eritropoyetina funcionalmente alterada. Tales mutantes pueden ser utilizados para alterar las propiedades de la eritropoyetina en formas deseables. Por ejemplo, en una modalidad, una eritropoyetina útil para la práctica de la presente invención puede ser alterada en uno o varios aminoácidos dentro de los cuatro dominios funcionales de la eritropoyetina que afectan el enlace con receptor: VLQRY (SEQ ID NO: 1) y/o T VNFYAW (SEQ ID NO: 2) y/o SGLRSLTTL (SEQ ID NO: 3) y/o SNFLRG (SEQ ID NO: 4) . En otra modalidad, eritropoyetinas que contienen mutaciones en las áreas aledañas de la molécula que afectan las características cinéticas o propiedades de enlace con receptor de la molécula pueden utilizarse. Estas modificaciones adicionales pueden ser utilizadas para incrementar el efecto protector de tejido, suprimir el efecto 58 sobre la médula ósea, o bien alterar las propiedades físicas como por ejemplo carga de la citocina protectora de tejido. Los métodos anteriores de ejemplo para la preparación de citocinas protectoras de tejido de la presente invención son simplemente ilustrativos y no limitativos, y estos métodos así como otros métodos pueden emplearse para preparar los compuestos de la invención. Los nombres mencionados arriba en donde el método de preparación está contenido dentro del nombre como por ejemplo "acetilado" o "biotinilado" se proporcionan aquí simplemente como un medio para entender cómo se preparó el compuesto, sin embargo la presente invención se enfoca a los compuestos que son productos de las reacciones mencionadas arriba. Una persona con conocimientos en la técnica podrá reconocer fácilmente los compuestos que son los productos de las reacciones mencionadas arriba. Hasta ahora los compuestos de la invención se han mencionado por sus nombres informales o triviales para proporcionar el alcance de las modificaciones de la invención y que pueden ocurrir en uno o varios sitios en la eritropoyetina o molécula de eritropoyetina modificada. A título de ejemplos no limitativos, los siguientes compuestos específicos son miembros del grupo de compuestos abarcados dentro del marco de la presente invención. 1. Eritropoyetinas carbamiladas : Los siguientes compuestos representan porciones carbamoilo en el aminoácido N-terminal 59 de una molécula de eritropoyetina ("alfa-N-carbamoil-") o bien en uno (o varios) grupos epsilon amino de residuos de lisilo de eritropoyetina ("N-epsilon-carbamoil-") .

Evidentemente, múltiples modificaciones de N-epsilon con o sin la modificación alfa-N- pueden estar presentes. i . alfa-N-carbamoileritropoyetina ii . N-epsilon-carbamoileritropoyetina iii. alfa-N-carbamoilo, N-epsilon- carbamoileritropoyetina iv. alfa-N-carbamoilasialoeritropoyetina v. N-epsilon-carbamoilasialoeritropoyetina vi. alf -N-carbamoilo, N-epsilon- carbamoiiasialoeritropoyetina vii . alf -N-carbamoilhiposialoeritropoyetina viii. N-epsilon-carbamoilhiposialoeritropoyetina, y ix. alfa-N-carbamoilo, N-epsilon- carbamoilhiposialoeritropoyetina 2. Eritropoyetinas succiniladas : Los siguientes compuestos representan porciones succinilo en el aminoácido N-terminal de una molécula de eritropoyetina ("alfa-N-succinil-") o bien en uno (o varios) grupos epsilon amino de residuos lisilo de eritropoyetina ("N-epsilon-succinil-") . Evidentemente múltiples modificaciones N-epsilon con o sin la modificación alfa-N- pueden estar presentes. i . alfa-N-succinileritropoyetina; 60 ii . N-epsilon-succinileritropoyetina; iii. alfa-N-succinilo, N-epsilon-succinileritropoyetina; iv. alfa-N-succinilasialoeritropoyetina; v. N-epsilon-succinilasialoeritropoyetina; vi. alfa-N-succinilo, N-epsilon- succinilasialoeritropoyetina; vii . alfa-N-succinilhiposialoeritropoyetina; viii. N-epsilon-succinilhiposialoeritropoyetina; y ix. alfa-N-succinilo, N-epsilon- succinilhiposialoeritropoyetina. 3. Eritropoyetinas acetiladas: Los siguientes compuestos representan porciones acetilo en el aminoácido N-terminal de una molécula de eritropoyetina ("alfa-N -acetil-") o en uno (o varios) grupos epsilon amino de residuos lisilo de eritropoyetina ("N-epsilon-acetil-" ) . Evidentemente múltiples modificaciones de N-epsilon con o sin la modificación alfa-N-pueden estar presentes. i. alfa-N-acetileritropoyetina; ii . N-epsilon-acetileritropoyetina; iii. alfa-N-acetilo, N-epsilon-acetileritropoyetina; iv. alfa-N-acetilasialoeritropoyetina; v. N-epsilon-acetilasialoeritropoyetina; vi. alfa-N-acetilo, N-epsilon- acetilasialoeritropoyetina; vii. alfa-N-acetilhiposialoeritropoyetina; 61 IH . N-epsilon-acetilhiposialoeritropoyetina y ix. alfa-N-acetilo, epsilon acetilhiposialoeritropoyetina . 4. Eritropoyetinas biotiniladas : Los siguientes compuestos representan porciones biotinilo en el aminoácido N-terminal de una molécula de eritropoyetina ("alfa-N-biotilin-" ) o en uno (o varios) grupos epsilon amino de residuos de lisilo de eritropoyetina ("N-epsilon-biotinil-^ ) . Evidentemente, múltiples modificaciones de N-epsilon con o sin la modificación alfa-N- pueden estar presentes. i . alfa-N-biotinileritropoyetina; ii . N-epsilon-biotinileritropoyetina; iii. alfa-N-biotinilO/ N-epsilon-biotinileritropoyetina; iv. alfa-N-biotinilasialoeritropoyetina; v. N-epsilon-biotinilasialoeritropoyetina; vi. alfa-N-biotinilo, N-epsilon- biotinilasialoeritropoyetina vii . alfa-N-biotinilhiposialoeritropoyetina; viii. N-epsilon-biotinilhiposialoeritropoyetina; y ix. alfa-N-biotinilo, N-epsilon- biotinilhiposialoeritropoyetina . 5. Eritropoyetinas yodinadas: Evidentemente, una persona con conocimientos ordinarios en la materia podrá reconocer que varios residuos de tirosina diferentes asi como combinaciones de residuo de tirosina dentro de una eritropoyetina pueden 62 ser yodinados y que los que se ofrecen son simplemente ilustrativos . i. Yodoeritropoyetina; ii. Yodoasialoeritropoyetina; y iii. Yodohiposialoeritropoyetina . 6. Carboximetilsilil-eritropoyetinas : Los siguientes compuestos representan porciones carboximetilo en uno (o varios) grupos epsilon amino de residuos de lisilo de eritropoyetina ("N-epsilon-carboximetil-") . Evidentemente múltiples modificaciones de N-epsilon pueden estar presentes. i . N-epsilon-carboximetileritropoyetina; ii. N-epsilon-carboximetilasialoeritropoyetina y iii . N-epsilon-carboximetilhiposialoeritropoyetina . Varios sistemas de huésped-vector de expresión pueden utilizarse para producir las eritropoyetinas y moléculas relacionadas con eritropoyetina de la presente invención. Tales sistemas de huésped-vector de expresión representan vehículos a través de los cuales las eritropoyetinas de interés pueden ser producidas y subsiguientemente purificadas, pero representan también células que pueden, cuando son transformadas o transfectada con las secuencias codificadoras de nucleótidos apropiadas, presentar el producto génico de eritropoyetina modificada in situ. Incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, sistemas de huésped de bacteria, insecto, planta, mamífero, incluyendo ser 63 humano, como por ejemplo, sin limitarse a estos ejemplos, sistemas de células de insecto infectadas con vectores de expresión viral recombinantes (por ejemplo baculovirus) que contienen secuencias codificadoras de producto de eritropoyetina modificada; sistemas de células vegetales infectadas con vectores de expresión viral recombinante (por ejemplo, virus del mosaico de la coliflor, CaMV; virus del mosaico del tabaco, TMV) o bien transformadas con vectores de expresión de plásmido recombinante (por ejemplo plásmido Ti) que contienen secuencias codificadoras de moléculas relacionadas con eritropoyetina; o bien sistemas de células de mamífero, incluyendo sistemas de células humanas (por ejemplo HT1080, COS, CEO, BHK, 293, 3T3) que contienen constructos de expresión recombinante que contienen promotores derivados del genoma de células de mamífero (por ejemplo, promotor de metalotioneína) o bien de virus de mamífero (por ejemplo, el promotor tardío de adenovirus; el promotor de 7.5K de virus de vaccinia) . Además, una cepa de célula huésped puede seleccionarse la cual modula la expresión de las secuencias insertadas, o modifica y procesa el producto génico en la forma específica deseada. Tales modificaciones (por ejemplo, glicosilación) y procesamiento (por ejemplo disociación) de productos de proteína pueden ser importantes para la función de la proteína. Diferentes células huéspedes tienen características 64 y mecanismos específicos para el procesamiento post-traslacional y modificación de proteínas y productos génicos. Líneas de células apropiadas o sistemas huéspedes apropiados pueden seleccionarse con el objeto de asegurar la modificación y procesamiento correctos de la proteína foránea expresada. Para este . propósito,- células huéspedes eucarióticas que poseen la maquinaria celular para un procesamiento apropiado del transcripto primario, glicosilación y fosforilación del producto génico pueden utilizarse. Tales células huéspedes de mamífero, incluyendo células huéspedes humanas, incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, HT1080, CHO, VERO, BHK, HeLa, COS, MDCK, 293, 3T3 y 138. Para una producción de alto rendimiento, largo plazo de proteínas recombinan es, se prefiere una expresión estable. Por ejemplo, líneas de células que expresan de manera estable el producto génico de molécula relacionada con eritropoyetina pueden ser manipuladas. En lugar de utilizar vectores de expresión que contienen origines virales de replicación, células huéspedes pueden ser transformadas con ADN controlado por elementos de control de expresión apropiados (por ejemplo, promotor, realzador, secuencias, terminadores de transcripción, sitios de poliadenilación, etc.) y un marcador seleccionable . Después de la introducción del ADN foráneo, se puede permitir que células manipuladas crezcan durante 1-2 65 días en un medio enriquecido, y después se cambian a un medio selectivo. El marcador seleccionable en el plásmido recombinante confiere resistencia a la selección y permite que las células integren de manera estable el plásmido en sus cromosomas y crezcan para formar foci que a su vez pueden ser clonados y expandidos en líneas de células. Este método puede ser utilizado de manera provechosa para manipular líneas de células que expresan el producto génico de molécula relacionada con eritropoyetina. Tales líneas de células manipuladas pueden ser particularmente útiles en el tamizado y la evaluación de compuestos que afectan la actividad endógena del producto génico de molécula relacionada con eritropoyetina . Alternativamente, la característica de expresión de un gen endógeno de eritropoyetina dentro de una línea de células o microorganismo puede ser modificada por inserción de un elemento regulador de ADN heterólogo en el genoma de una línea de células estables o microorganismo clonado de tal manera que el elemento regulador insertado esté enlazado operantemente con el gen de eritropoyetina endógeno. Por ejemplo, un gen de eritropoyetina endógeno que es normalmente "transcripcionalmente silencioso", es decir, un gen de eritropoyetina que es normalmente no expresado o bien expresado solamente a niveles muy bajos en una línea celular, puede ser activado por inserción de un elemento regulador 66 capaz de promover la expresión de un producto génico normalmente expresado en esta linea celular o microorganismo. Alternativamente, un gen de eritropoyetina endógeno, transcripcionalmente silencioso, puede ser activado por inserción de un elemento regulador promiscuo que funciona a través de tipos de células. Un elemento regulador heterólogo puede insertarse en una linea de célula estable o microorganismo clonado, de tal manera que esté enlazado operantemente con un gen de eritropoyetina endógeno, utilizando técnicas como por ejemplo recombinación homologa enfocada, bien conocidos por parte de las personas con conocimientos en la materia, y descritos por ejemplo, en la patente francesa No. 2646438 del Institut Pasteur, en la patente norteamericana No. 4,215,051 de Chappel; en la patente norteamericana No. 5,578,461 de Sherwin y colaboradores; en la solicitud internacional No. PCT/US92/09627 (WO93/09222) por Selden y colaboradores; y en la solicitud internacional No. PCT/US90/06436 (WO91/06667) por Skoultchi y colaboradores, que se incorporan aqui por referencia en su totalidad. En una modalidad de la invención, una citocina protectora de tejido es una molécula de eritropoyetina químicamente modificada deficiente en residuos siálicos o bien que presenta una falta total de residuos siálicos, y puede ser producida en una célula de mamífero, incluyendo una célula 67 humana. Tales células pueden ser manipuladas para presentar una deficiencia o una falta de las enzimas que agregan ácidos siálicos,- es decir, la actividad ß-galatosido OÍ 2,3 sialiltransferasa (AOÍ 2,3 dialiltransferasa@) y la actividad ß-galactosido 2,6 sialiltransferasa (AOÍ 2, 6 sialiltransferasa@) . En una modalidad, una célula de mamífero es utilizada en la cual cualquier de gen de 2,3 sialiltransferasa y/o gen OÍ 2,6 sialiltransferasa, o ambos genes, están borrados. Tales deleciones pueden ser construidas empleando técnicas de noqueo de genes bien conocidas. En otra modalidad, células de ovario de hámster chino (CHO) deficientes en dihidrofolato reductasa (DHFR) se utilizan como la célula huésped para la producción de moléculas relacionadas con eritropoyetina recombinante . Las células CHO no expresan la enzima OÍ 2, 6 sialiltransferasa y por consiguiente no agregan ácido siálico en el enlace 2,6 a oligosacáridos enlazados con N de glicoproteinas producidas en estas células. Como resultado, proteínas recombinantes producidas en células CHO no tienen ácido siálico en el enlace 2,6 con galactosa (Sasaki y colaboradores (1987; Takeuchi y colaboradores, supra; Mutsaers y colaboradores Eur. J. Biochem. 156,651 (1986); Takeuchi y colaboradores, J. Chromotgr. 400, 207 (1987) . En una modalidad, para producir una célula huésped para la producción de asialoeritropoyetina, el gen que codifica OÍ 2,3 68 sialiltransferasa en células CHO es borrado. Dichas células CHO noqueadas para ex 2,3 sialiltransferasa presentan una ausencia completa de actividad sialiltransferasa y como resultado son útiles para la expresión recombinante y la producción de una citocina protectora de tejido que consiste de asialoeritropoyetina . En otra modalidad, asialo glicoproteinas pueden ser producidas mediante interferencia con transporte de ácido siálico en el aparato de Golgi, por ejemplo, Eckhardt y colaboradores, 1998, J. Biol . Chem. 273:20189-95). Utilizando métodos bien conocidos por parte de las personas con conocimientos en la materia (por ejemplo, Oelmann y colaboradores, 2001, J. Biol. Chem. 276:26291-300), se puede lograr una mutagénesis del transportador de ácido siálico-CMP azúcar de nucleótido para producir mutantes de células de ovario de hámster chino. Estas células no pueden agregar residuos de ácido siálico a las glicoproteinas tales como eritropoyetina y producen solamente asialoeritropoyetina. Células de mamífero transfectadas que producen eritropoyetina producen también sialidasa citosólica la cual, si se fuga al medio de cultivo, degrada la sialoeritropoyetina con alta eficiencia (por ejemplo, Gramer y colaboradores, 1995 Biotechnology 13:692-698). Utilizando métodos bien conocidos por parte de las personas con conocimientos en la técnica (por ejemplo, a partir de la información proporcionada en 69 Ferrari y colaboradores, 1994, Glycobiology 4:367-373), lineas de células pueden ser transfectadas, imitadas o bien se puede provocar de otra forma que produzcan sialilasa constitutivamente. De esta forma, se puede producir una asialoeritropoyetina durante la fabricación de asialoeritropoyetina . Una citocina protectora de tejido de la presente invención tiene por lo menos una modificación de un residuo de aminoácido en eritropoyetina, independientemente del estado de glicosilación de la molécula. Como se mencionó arriba, la modificación química puede ser por lo menos una modificación de por lo menos un grupo amino de por lo menos un aminoácido, como por ejemplo un residuo de lisina o bien en el grupo amino N-terminal o bien yodinación de por lo menos un residuo de tirosina. Después de la fabricación de las citocinas recombinantes protectoras de tejido y citocinas recombinantes protectoras de tejido químicamente modificadas de la presente invención, una persona con conocimientos ordinarios en la materia puede verificar los atributos de protección a tejido de las citocinas y la ausencia de efectos sobre la médula ósea utilizando ensayos bien conocidos. Por ejemplo, el efecto no eritropoyético de una citocina recombinante protectora de tejido puede ser verificada a través del uso de un ensayo TF-1. En este ensayo, células TF- 70 1 son cultivadas en un medio RPMI completo suplementado con 5 ng/ml de GM-CSF y FCS al 10% durante un dia a 37°C en un incubador de C02. Las células son después lavadas y suspendidas a una densidad de 10ü células/ml durante 16 horas en un medio de deprivación (FCS al 5% sin GM-CSF) . Una placa de 96 pozos se prepara mediante: (1) agregar 100 µ? de agua estéril a los pozos externos para mantener la humedad; (2) agregar medio (FCS al 10% sin células ni GM-CSF) solo a 5 pozos; y (3) sembrar 25,000 células/pozo con medio conteniendo FCS al 10% y las citocinas recombinantes protectoras de tejido en los pozos restantes (5 pozos por citocina probada) . Si las células proliferan, la citocina recombinante protectora de tejido puede ser eritropoyética . El efecto in vivo del compuesto debe ser probado en un ensayo in vivo que monitorea un incremento de hematócritos debido a la citocina recombinante protectora de tejido. Un resultado -una ausencia de proliferación de células en el ensayo TF-1 in vitro o un incremento de los niveles de hematócritos en el ensayo in vivo - significa que la citocina recombinante protectora de tejido no es eritropoyética. Las propiedades protectoras de tejido de la citocina recombinante protectora de tejido pueden ser verificadas empleando un ensayo P-19 in vitro o bien a través de un ensayo in vivo de intoxicación con agua en ratas, ambos ensayos presentándose con mayores detalles abajo. Los ensayos 71 antes mencionados se proporcionan simplemente como ejemplos y otros ensayos adecuados para determinar el efecto de citocina sobre la médula ósea y protección tisular son conocidos por parte de los expertos en la materia y están contemplados también por la presente invención. En la práctica de un aspecto de la presente invención, una composición farmacéutica de conformidad con lo descrito arriba que contiene una citocina protectora de tejido puede administrarse a un mamífero por cualquier vía que proporciona un nivel suficiente de una citocina protectora de tejido en la vasculatura para permitir una translocación a través de una barrera de células endoteliales y para ofrecer efectos benéficos en células respondedoras. Cuando se utiliza para el propósito de perfusar un tejido u órgano, se desea resultados semejantes. En el caso en el cual la citocina protectora de tejido es utilizada para perfusión ex vivo, la citocina protectora de tejido puede ser cualquiera de las eritropoyetinas químicamente modificadas mencionadas arriba. En el caso en el cual las células o tejido no son vascularizados y/o en el caso en el cual la administración es mediante el hecho de bañar las células o tejido con la composición de la invención, la composición farmacéutica ofrece una cantidad efectiva benéfica para células respondedoras de una citocina protectora de tejido. Las barreras de células endoteliales a través de las cuales una 72 citocina protectora de tejido puede translocalizarse incluyen uniones herméticas, uniones perforadas, uniones fenestradas, y cualquier otro tipo de barreras endoteliales presentes en un mamífero. Una barrera preferida es una unión hermética de células endoteliales, pero la invención no se limita a este caso . Las citocinas protectoras de tejido mencionada arriba son útiles generalmente para el tratamiento terapéutico o profiláctico de enfermedades humanas del sistema nervioso central o del sistema nervioso periférico que tienen síntomas primariamente neurológicos o psiquiátricos, enfermedades oftálmicas, enfermedades cardiovasculares, enfermedades cardiopulmonares, enfermedades respiratorias, enfermedades renales, urinarias y reproductivas, enfermedades óseas, enfermedades cutáneas, enfermedades gastrointestinales y anormalidades metabólicas y endocrinas. En particular, tales condiciones y enfermedades incluyen condiciones hipóxicas que afectan de manera negativa los tejidos excitables, tales como los tejidos excitables en el tejido de sistema nervioso central, tejido de sistema nervioso periférico, tejido cardiaco o tejido retinal como por ejemplo cerebro, corazón, o retina/ojo. Por consiguiente, la invención puede ser utilizada para tratar o prevenir daño a tejido excitable como resultado de una condición hipóxica en varias condiciones y circunstancias. Ejemplos no limitativos de tales condiciones 73 y circunstancias se proporcionan en la tabla abajo. En el ejemplo de la protección de patologías de tejido neuronal tratables de conformidad con la presente invención, tales patologías incluyen las patologías que resultan de una oxigenación reducida de tejidos neuronales. Cualquier condición que reduce la disponibilidad de oxígeno al tejido neuronal, que resulta en estrés, daño y finalmente muerte de células neuronales, puede ser tratada por métodos de la presente invención. Conocidas generalmente como hipoxia y/o isquemia, estas condiciones provienen o incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, ataques, oclusión vascular, deprivación de oxígeno prenatal o postnatal, sofocación, asfixia, casi ahogamiento, envenenamiento por monóxido de carbono, inhalación de humo, trauma, incluyendo intervención quirúrgica y radioterapia, asfixia, epilepsia, hipoglicemia, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfisema, síndrome de depresión respiratoria de los adultos, choque hipotensivo, choque séptico, choque anafiláctico, choque de insulina, crisis de células falciformes, paro cardiaco, disritmia, narcosis por nitrógeno y déficits neurológicos causados por procedimientos de desvío corazón-pulmón. En una modalidad, por ejemplo, las composiciones de citocinas protectoras de tejido específicas pueden ser administradas para prevenir una lesión o daño tisular como resultado de riesgo de lesión o daño tisular durante intervenciones 74 quirúrgicas como por ejemplo resección tumoral o reparación de aneurisma. Otras patologías provocadas por hipoglicemia o resultantes de hipoglicemia que pueden ser tratadas por medio de los métodos descritos aquí incluyen sobredosis de insulina, que se conoce también como hiperinsulinemia iatrogénica, insulinoma, deficiencia de hormona de crecimiento, hipocortisolismo, sobredosis de droga, y ciertos tumores . Otras patologías que resultan de daño a tejido neuronal excitable incluyen trastornos de ataques como por ejemplo epilepsia, convulsiones, o trastornos de ataques crónicos. Otras condiciones tratables y enfermedades tratables incluyen enfermedades como por ejemplo apoplejía, esclerosis múltiple, hipotensión, paro cardiaco, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, parálisis cerebral, trauma cerebral o de médula espinal, demencia por SIDA, pérdida de la función cognoscitiva relacionada con la edad, pérdida de memoria, esclerosis lateral amiotrófica, trastornos de ataques, alcoholismo, isquemia retinal, daño al nervio óptico como resultado de glaucoma, y pérdida neuronal. La composición específica y métodos de la presente invención pueden ser utilizados para tratar una información que resulte de condiciones de enfermedad o varios traumas, como por ejemplo una inflamación inducida física o químicamente. Tales traumas pueden incluir angitis, bronquitis crónica, 75 pancreatitis, osteomielitis, artritis reumatoide, glomerulonef itis, neuritis óptica, arteritis temporal, encefalitis, meningitis, mielitis transversa, dermatomiositis, polimiositis, fascilitis necrotizante, hepatitis, y enterocolitis necrotizante. La evidencia ha demostrado que los astrocitos activados pueden ejercer una función citotóxica con relación a las neuronas mediante la producción de neurotoxinas . Óxido nítrico, especies reactivas de oxígeno, y citocinas son liberados de las células gliales en respuesta de una isquemia cerebral (véase Becker, K. J. 2001. Targeting the central nervous system inflammatory response in ischemic stroke. Curr Opinión Neurol 14:349-353 y Mattson, M. P., Culmsee, C, y Yu, Z. F. 2000. Apoptotic and Antiapoptotic mechanisms in stroke. Cell TissueRes 301:173-187). Estudios han demostrado además que en modelos de neurodegeneración, la activación glial y la producción subsiguiente de citocinas inflamatorias depende del daño neuronal primario (véase Viviani, B., Corsini, E., Galli, C. L., Padovani, A., Ciusani, E., y Marinovich, M. 2000. Dying neural cells actívate glia through the reléase of a protease product. Glia 32:84-90 y Rabuffetti, M. Scioratti, C . , Tarozzo, G . , Clementi, E . , Manfredi, A. A., y Beltramo, M. 2000. Inhibition of caspase-1-like activity by Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-chloromethyl ketone includes longitud lasting neuroprotection in cerebral 76 ischemia through apoptosis reduction and decrease of proinflammatory cytokines. J. Neurosci 20:4398-4404) . La inflamación y activación glial es común a diferentes formas de trastornos neurodegenerativos, incluyendo isquemia cerebral, trauma cerebral y encefalomielitis alérgica experimental, trastornos en los cuales la eritropoyetina ejerce un efecto neuroprotector . La inhibición de producción de citocina por eritropoyetina podría, por lo menos en parte, mediar su efecto protector. Sin embargo a diferencia de las citocinas anti-inflamatorias "clásicas" como por ejemplo II-10 e IL-13, que inhiben la producción de factor de necrosis tumoral directamente, la eritropoyetina parece ser activa solamente en presencia de muerte neuronal. Mientras no se desea limitar a ninguna teoría particular, parece que esta actividad anti-inflamatoria puede ser explicada hipotéticamente a través de varias teorías no limitativas. Primero, puesto que la eritropoyetina previene la apóptosis, se evitarían eventos inflamatorios activados por la apóptosis. Además, la eritropoyetina puede prevenir la liberación de señales moleculares de neuronas agonizantes que estimulan las células glíales y podrían actuar directamente sobre las células gliales reduciendo su reacción a estos productos. Otra posibilidad es que la eritropoyetina enfoque miembros más próximos de la cascada inflamatoria (por ejemplo, caspasa 1, intermediarios de oxígeno reactivo o 77 nitrógeno) que activan tanto la apóptosis como la inflamación. Además, la eritropoyetina parece proporcionar una protección anti-inflamatoria sin el efecto de rebote típicamente asociado con los otros compuestos anti-inf1amatorios tales como dexametasona. Otra vez, sin desear limitarnos a ninguna teoría particular, parece que esto pueda deberse al efecto de la eritropoyetina sobre neurotoxinas de propósitos múltiples tales como óxido nítrico (NO) . Aun cuando los astrocitos activados y los microgliales producen cantidades neurotoxicas de NO en respuesta a varios traumas, el NO sirve a varios propósitos dentro del cuerpo incluyendo la modulación de funciones fisiológicas esenciales, así, aún cuando el uso de un anti-inflamatorio puede mitigar la inflamación mediante la supresión de NO u otras neurotoxinas, si el antiinflamatorio tiene una vida media excesivamente larga, puede también interferir con las funciones de estos químicos en la reparación el daño que resulta del trauma que causó la inflamación. Se plantea de manera hipotética que las citocinas protectoras de tejido de la presente invención pueden mitigar la inflamación sin interferir con las capacidades restaurativas de neurotoxinas tales como NO. La presente invención ofrece composiciones que comprenden una o varias citocinas protectoras de tejido y uno o varios agentes profilácticos o terapéuticos (es decir, agentes 78 activos) otros que citocinas protectoras de tejido, y métodos para prevenir, tratar y mejorar uno o varios síntomas asociados con la inflamación de células de mamífero respondedoras y sus células, tejidos y órganos asociados en un mamífero que comprende la administración a dicho mamífero de una o varias de dichas composiciones. La presente invención ofrece también composiciones que comprenden una o varias citocinas protectoras de tejido y métodos para prevenir, tratar o mejorar uno o varios síntomas asociados con la inflamación de células de mamíferos respondedoras y sus células, tejidos y órganos asociados en un mamífero que comprende la administración a dicho mamífero de una o varias de dichas composiciones, en donde las composiciones son administradas en combinación con uno o varios agentes profilácticos o terapéuticos otros que citocinas protectoras de tejido. La inflamación puede ser causada por lesión o enfermedad como por ejemplo, sin limitarse a estos ejemplos, asma, encefalitis, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) , artritis, o un trastorno alérgico. Agentes terapéuticos o profilácticos incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, péptidos, polipéptidos, proteínas de fusión, moléculas de ácido nucleico, pequeñas moléculas, agentes miméticos, fármacos sintéticos, moléculas inorgánicas y moléculas orgánicas. Cualquier agente que es conocido por ser útil o que ha sido 79 utilizado o está actualmente utilizado para la prevención, tratamiento o mejora de uno o varios sintomas asociados con la inflamación puede utilizarse en combinación con una citocina protectora de tejido de conformidad con la invención descrita aquí. Ejemplos de tales agentes incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, agentes dermatológicos para rashes e hinchazones (por ejemplo, agentes para fototerapia (por ejemplo, radiación ultravioleta B) , agentes para fotoquimioterapia (por ejemplo PUVA) y agentes tópicos tales como emolientes, ácido salicilico, alquitrán de carbón, esferoides tópicos, corticosteroides tópicos, análogos de vitamina D3 tópicos (por ejemplo, calcipotrieno) , tazaroteno, y retinoides tópicos), agentes anti-inflamatorios (por ejemplo corticosteroides (por ejemplo prednisona e hidrocortisona) , glucocorticoides, esferoides, fármacos antiinflamatorios no esferoides (por ejemplo aspirina, ibuprofeno, diclofenaco, e inhibidores de COX-2), beta-agonistas, agentes anticolinérgicos y metil xantinas) , agentes inmunomodu1adores (por ejemplo, moléculas orgánicas pequeñas, moduladores de receptores de célula T, moduladores de receptores de citocina, agentes de agotamiento de células T, antagonistas de citocinas, antagonistas de monoquinas, inhibidores de linfocitos, o agentes anti-cáncer) , inyecciones de boro, sulfasalazina, penicilamina, agentes anti-angiogénicos (por ejemplo, anglostatina, antagonistas de 80 TNF-a (por ejemplo anticuerpos anti-TNFa) , y endostatina) , dapsona, psolarenos (por ejemplo, metoxaleno y trioxaleno) , agentes anti-malaria (por ejemplo, hidroxicloroquina) , agentes anti-virales y antibióticos (por ejemplo, eritromicina y penicilina) . Cualquier agente inmunomodulador bien conocido por parte de una persona con conocimientos en la materia puede ser utilizado en los métodos y composiciones de la invención. Agentes inmunomoduladores pueden afectar uno o varios o todos los aspectos de la respuesta inmune en un sujeto. Aspectos de la respuesta inmune incluyen, sin limitarse a este ejemplo, la respuesta inflamatoria. En una modalidad preferida de la invención, la administración de un agente inmunomodulador a un sujeto inhibe o reduce uno o varios aspectos de las capacidades de respuesta inmune del sujeto. En una modalidad especifica de la invención, el agente inmunomodulador inhibe o suprime la respuesta inflamatoria en un sujeto. En una modalidad, una citocina protectora de tejido de la invención es administrada en combinación con uno o varios agentes inmunomoduladores para tratar, es decir, mejorar los síntomas de inflamación o prevenir la inflamación. Ejemplos de agentes inmunomoduladores incluyen, sin limitarse a esto ejemplos, agentes proteináceos tales como citocinas, miméticos de péptidos y anticuerpos (por ejemplo anticuerpos humanos, humanizados, quiméricos, monoclonales, policlonales, 81 fragmentos Fvs, ScFvs, Fab o F(ab)2 o bien fragmentos de enlace con epitopo) , moléculas de ácido nucleico (por ejemplo moléculas de ácido nucleico de antisentido y hélices triples) , pequeñas moléculas, compuestos orgánicos y compuestos inorgánicos, en particular, los agentes inmunomoduladores incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, metotrexato, leflunomido, ciclofosfamida, citoxano, Immuran, ciclosporina A, minociclina, azatioprina, antibióticos (por ejemplo FK506 (tacrolimo) ) , metilprednisolona (MP) , corticosteroides, esteroides, micofenolato mofetil, rapamicina (sirolimo) , mizoribina, desoxipergualina, brequinar, malononitriloamidas (por ejemplo, leflunamida) , moduladores de receptores de células T, y moduladores de receptores de citocinas, ejemplos de moduladores de receptores de células T, incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, anticuerpos anti-receptores de células T (por ejemplo, anticuerpos anti-CD4 (por ejemplo cM-T412 (Boeringer) , IDEC-CE9.1® (IDEC y SKB) , mAB 4162W94, Orthoclone y 0KTcdr4a (Janssen-Cilag) ) , anticuerpos anti-CD3, anticuerpos anti-CD5 (por ejemplo un inmunoconjugado enlazado a ricina anti-CD5) , anticuerpos anti-CD7 (por ejemplo CHH-380 (Novartis) ) , anticuerpos anti-CD8, anticuerpos monoclonales anti-ligando CD40, anticuerpos anti-CD52 (por ejemplo, CAMPATH 1H (Ilex) ) , anticuerpos monoclonales anti-CD2) y CTLA4-inmunoglobulina. 82 Ejemplos de moduladores de receptores de citocinas incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, receptores de citocina solubles (por ejemplo, el dominio extracelular de un receptor de TNF-OÍ o un fragmento del mismo, el dominio extracelular de un receptor de TNF-OÍ o un fragmento del mismo, el dominio extracelular de un receptor de IL-?ß o un fragmento del mismo, y el dominio extracelular de un receptor para IL-6 o un fragmento del mismo) , citocinas o fragmentos de las mismas (por ejemplo interleucina (IL) -2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, TNF-cx, TNF-ß, interferón (IFN)-a, IFN-ß, IFN-? y GM-CSF) , anticuerpos anti-receptores de citocina (por ejemplo, anticuerpos anti-receptor para IL-2, anticuerpos antireceptor para IL-4, anticuerpos anti-receptor para IL-6, anticuerpos anti-receptor para IL-10, y anticuerpos antireceptor para IL-12), anticuerpos anti-citocinas (por ejemplo, anticuerpos anti-receptor para 1FN, anticuerpos anti-TNF-a, anticuerpos anti-IL-?ß, anticuerpos anti-IL-6, y anticuerpo anti-IL-12) . En una modalidad especifica, un modulador de receptor de citocina es IL-4, IL-10, o un fragmento de la misma. En otra modalidad, un modulador de receptor para citocina es un anticuerpo anti-IL-?ß, anticuerpo anti-IL-6, anticuerpo anti-receptor para IL-12, anticuerpo anti-TNF-a. En otra modalidad, un modulador de receptores para citocina es el dominio extracelular de un 83 receptor para TNF-cx o un fragmento del mismo. En ciertas modalidades, un modulador de receptor para citocina no es un antagonista de TNF-a. En una modalidad preferida, proteínas, polipéptidos o péptidos (incluyendo anticuerpos) que se utilizan como agentes inmunomoduladores se derivan de la misma especie que el receptor de las proteínas, polipéptidos o péptidos con el objeto de reducir la probabilidad de una respuesta inmune para estas proteínas, polipéptidos o péptidos. En otra modalidad preferida, cuando el sujeto es un ser humano, las proteínas, polipéptidos o péptidos que son utilizados como agentes inmunomoduladores son humanos o humanizados . De conformidad con la invención, se administra uno o varios agentes inmunomoduladores a un sujeto con inflamación antes, después, o de manera concomitante con los agentes terapéuticos y/o profilácticos de la invención. Preferentemente, uno o varios agentes inmunomoduladores se administran a un sujeto con inflamación con el objeto de reducir o inhibir uno o varios aspectos de la respuesta inmune, según lo necesario. Cualquier técnica bien conocida por parte de una persona con conocimientos en la materia puede ser utilizada para medir uno o varios aspectos de la respuesta inmune en un sujeto particular, y por consiguiente determinar cuando es necesario administrar un agente 84 inmunomodulador a dicho sujeto. En una modalidad preferida, uno o varios agentes inmunomoduladores se administran a un sujeto con inflamación con el objeto de reducir o inhibir de manera transiente uno o varios aspectos de la respuesta inmune. Dicha inhibición o reducción transiente de uno o varios aspectos del sistema inmune puede durar durante horas, dias, semanas o meses. Preferentemente, la inhibición o reducción transiente en uno o varios aspectos de la respuesta inmune dura durante algunas horas (por ejemplo 2 horas, 4 horas, 6 horas, 8 horas, 12 horas, 14 horas, 16 horas, 18 horas, 24 horas, 36 horas o 48 horas) , algunos dias (por ejemplo, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 7 dias, o 14 dias), o bien algunas semanas (por ejemplo, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas o 6 semanas) . La reducción o inhibición transiente de uno o varios aspectos de la respuesta inmune incrementa las capacidades profilácticas y/o terapéuticas de una citocina protectora de tejido. En una modalidad de la invención, un agente inmunomodulador que reduce o agota las células T, preferentemente las células T de memoria, se administra a un sujeto con inflamación de conformidad con los métodos de la invención. Véase, por ejemplo, patente norteamericana No. 4,658,019. En otra modalidad de la invención, un agente inmunomodulador que desactiva células T CD8+ se administra a 85 un sujeto con inflamación de conformidad con los métodos de la invención. En una modalidad especifica, anticuerpos anti-CD8 se utilizan para reducir o agotar células T CD8+. La interacción ligando de CD40 (CD40L)-CD40 es un punto deseable para bloquear la respuesta inmune debido a su actividad amplia tanto en activación y función de células T auxiliares como en la ausencia de redundancia en su vía de señalización. Asi, en una modalidad especifica de la invención, la interacción de CD40L con CD40 es bloqueada de manera transiente al momento de la administración de uno o varios de los agentes inmunomoduladores . Esto puede lograrse mediante el tratamiento con un agente que bloque el ligando CD40 en la célula TH e interfiere con el enlace normal de ligando para CD40 en la célula T auxiliar con el antigeno CD40 en la célula B. Un anticuerpo para ligando CD40 (anti-CD40L) (disponible en Bristol-Myers Squibb Co; véase, por ejemplo, solicitud de patente europea 555,880, publicada el dia 18 de Agosto de 1993) o una molécula de CD40 soluble puede seleccionarse y utilizarse como un agente inmunomodulador de conformidad con los métodos de la invención. Otros ejemplos de agentes inmunomoduladores que pueden utilizarse de conformidad con la invención incluyen, sin limitarse estos ejemplos, corticosteroides, azatioprina, micofenolato mofetil, ciclosporina A, hidrocortisona, F 506, 86 metotrexato, leflunomida, y ciclofosfamida. Se ha demostrado que un tratamiento corto con ciclofosfamida interrumpe de manera exitosa la activación de células CD4+ como de células T CD8+ en la proteína de cápside adenoviral (Jooss y colaboradores, 1996, Hum. Gene Ther. 7:1555-1566). Un tratamiento con hidrocortisona o ciclosporina A, ha sido utilizado exitosamente para disminuir la inducción de citocinas, algunas de las cuales pueden participar en la depuración de infecciones bacterianas e inflamación. Moléculas de ácido nucleico que codifican proteínas, polipéptidos o péptidos con actividad inmunomoduladora o proteínas, polipéptidos o péptidos con actividad inmunomodulador pueden administrarse a un sujeto con inflamación de conformidad con los métodos de la invención. Además, moléculas de ácido nucleico que codifican derivados, análogos, fragmentos o variantes de proteínas, polipéptidos o péptidos con actividad inmunomoduladora o derivados, análogos, fragmentos o variantes de proteínas, polipéptidos o péptidos con actividad inmunomoduladora puedan administrarse a un sujeto con inflamación de conformidad con los métodos de la invención. Preferentemente, tales derivados, análogos, variantes y fragmentos conservan la actividad inmunomoduladora de la proteína, polipéptido o péptido de tipo silvestre de longitud completa. Proteínas, polipéptidos o péptidos que pueden 87 utilizarse como agentes inmunomoduladores pueden ser producidos por cualquier técnica bien conocida o descrita aqui. Véase, por ejemplo, Capitulo 16 Ausubel y colaboradores (eds.) 1999, Short Protocols in Molecular Biology, Cuarta Edición, John Wiley & Sons, NY, que describe métodos para producir proteínas, polipéptidos o péptidos y que se incorpora aqui por referencia en su totalidad. Anticuerpos que pueden ser utilizados como agentes inmunomoduladores pueden ser producidos, por ejemplo, por métodos descritos en la patente norteamericana No. 6,245,527 y en Harlow and Lañe Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988, que se incorpora aqui por referencia en su totalidad. Preferentemente, agentes comercialmente disponibles y conocidos por funcionar como agentes inmunomoduladores se utilizan en las composiciones y métodos de la invención. La actividad inmunomoduladora de un agente puede ser determinada in vitro y/o in vivo por cualquier técnica bien conocida por parte de una persona con conocimientos en la materia incluyendo, por ejemplo, por ensayos CTL, ensayos de proliferación e inmunoensayos (por ejemplo, ELISA) para la expresión de proteínas particulares como por ejemplo moléculas co-estimuladoras y citocinas. Las composiciones específicas y métodos de la presente invención pueden ser utilizados para tratar condiciones 88 de tejido retinal y daño al tejido retinal. Tales trastornos incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, isquemia retinal, degeneración macular, desprendimiento de retina, retinitis pigmentosa, retinopatia arteriosclerótica, retinopatia hipertensiva, bloque de arteria retinal, bloque de vena retinal, hipotensión, y retinopatia diabética. En otra modalidad, los métodos y principios de la invención pueden ser utilizados para proteger o tratar lesiones que resultan de daño por radiación a tejido excitable. Una utilidad adicional de los métodos de la presente invención se encuentra en el tratamiento de envenenamiento por neurotoxina como por ejemplo envenenamiento por marisco con ácido domóico, neurolatirismo, enfermedad de Guam, esclerosis lateral amiotrófica y enfermedad de Parkinson. Como se mencionó arriba, la presente invención se enfoca también a un método para incrementar la función de tejido excitable en un mamífero mediante la administración periférica de una citocina protectora de tejido de conformidad con lo descrito arriba. Varias enfermedades y condiciones se prestan para tratamiento utilizando este método y además, este método es útil para mejorar la función cognoscitiva en ausencia de una condición o enfermedad. Estos usos de la presente invención se describen con detalles adicionales abajo e incluyen mejoras del aprendizaje y de la 89 capacitación tanto en seres humanos como en mamíferos no humanos . Condiciones y enfermedades que pueden ser tratadas por los métodos de este aspecto de la presente invención enfocados al sistema nervioso central incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, trastornos del humor, trastornos de ansiedad, depresión, autismo, trastorno de hiperactividad y déficit de atención, asi como disfunción cognoscitiva. Estas condiciones se benefician de una mejora de la función neuronal . Otros trastornos que pueden ser tratados de conformidad con las enseñazas de la presente invención incluyen trastorno del sueño, por ejemplo apnea del sueño y trastornos relacionados con los viajes; sangrados subaracnoides y aneurismales, choque hipotensivo, lesión concusiva, choque séptico, choque anafiláctico, y secuelas de varias encefalitis y meningitis, por ejemplo, cerebritis relacionada con enfermedad de tejido conectivo como por ejemplo lupus. Otros usos incluyen la prevención o protección contra envenenamiento por neurotoxinas, como por ejemplo envenenamiento por mariscos con ácido domóico, neurolatirismo y enfermedad de Guam, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Parkinson; tratamiento postoperatorio para lesión embolica o isquémica; irradiación cerebral completa, crisis de células falciformes; y eclampsia. Un grupo adicional de condiciones que pueden ser 90 tratadas por los métodos de la presente invención incluyen disfunción mitocondrial, ya sea de naturaleza hereditaria o adquirida, que son la causa de varias enfermedades neurológicas tipificadas por lesión y muerte neuronal. Por ejemplo, enfermedad de Leigh (encefalopatía necrotizante sub-aguda) se caracteriza por una pérdida visual progresiva y encefalopatía, debido a una disminución neuronal, y miopatía. En estos casos, un metabolismo mitocondrial defectuoso no alcanza a suministrar suficientes sustratos de alta energía para activar el metabolismo de células excitables. Un modulador de actividad de receptor para eritropoyetina optimiza la función deficitaria en varias enfermedades mitocondriales . Como se mencionó arriba, condiciones hipóxicas afectan de manera negativa los tejidos excitables. Los tejidos excitables incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, tejido del sistema nervioso central, tejido de sistema nervioso periférico y tejido cardiaco. Además de las condiciones descritas arriba, los métodos de la presente invención son útiles para el tratamiento de envenenamiento por inhalación, como por ejemplo inhalación de monóxido de carbono y humo, asma severo, síndrome de depresión respiratoria de los adultos, y asfixia y casi ahogamiento. Condiciones adicionales que crean condiciones hipóxicas o bien que inducen un daño a los tejidos excitables por otros medios incluyen la hipoglicemia 91 que puede ocurrir en el caso de una dosificación inapropiada de insulina, o bien con neoplasmas productores de insulina (insulinomas) . Varios padecimientos neuropsicológicos que se creen provienen de daño a tejido excitable pueden ser tratados a través de los métodos de la presente invención. Trastornos crónicos en los cuales participa un daño neuronal y para los cuales se proporciona tratamiento a través de la presente invención incluyen trastornos que se relacionan con el sistema nervioso central y/o sistema nervioso periférico incluyendo la pérdida de la función cognoscitiva relacionada con la edad y demencia senil, trastornos de ataques crónicos, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, demencia, pérdida de memoria, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, esclerosis tuberosa, enfermedad de ilson, parálisis supranuclear cerebral y progresiva, enfermedad de Guam, demencia de cuerpo de Lewy, enfermedades causadas por priones, como por ejemplo encefalopatías espongiformes, por ejemplo enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, enfermedad de Huntington, distrofia miotónica, ataxia de Freidrich y otras ataxias, así como síndrome de Gilíes de la Tourette, trastornos de ataques tales como epilepsia y trastorno de ataques crónicos, apoplejía, trauma cerebral o trauma de la médula espinal, demencia por SIDA, alcoholismo, autismo, 92 isquemia retinal, glaucoraa, trastornos de la función autonómica, como por ejemplo hipertensión y trastornos del sueño, y trastornos neuropsiquiátricos que incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, esquizofrenia, trastorno esquizo-afectivo, trastorno de déficit de atención, trastorno distimico, trastorno depresivo mayor, mania, trastorno obsesivo-compulsivo, trastornos de uso de sustancias psicoactivas, ansiedad, trastorno de pánico, asi como trastornos afectivos unipolares y bipolares. Trastornos neuropsiquiátricos y neurodegenerativos adicionales incluye, por ejemplo, los trastornos listados en el Diagnostic and Statistical manual of Mental Disorders (DSM) , de la American Psychiatric Association, cuya versión más actualizada se incorpora aquí por referencia en su totalidad. En otra modalidad, moléculas de toxinas quiméricas recombinantes que comprenden eritropoyetina pueden ser utilizadas para la administración terapéutica de toxinas para tratar un trastorno proliferativo, como por ejemplo cáncer o trastorno viral, como por ejemplo panencefalitis esclerosante sub-aguda. La Tabla siguiente presenta una lista de indicaciones adicionales no limitativas de ejemplo de las varias condiciones y enfermedades que se prestan a un tratamiento a través de las citocinas protectoras de tejido mencionadas arriba. 93 Célula, Disfunción o Condición o Tipo tejido u patología enfermedad órgano Corazón Isquemia Enfermedad de Agudo, crónico, arteria estable, coronaria inestable Infarto del Síndrome de miocardio Dressler Angina Enfermedad Cardiopatia cardiaca valvular congénita Angina de Prinzmetal Ruptura cardiaca Perforación septal aneurismática Angiitis Arritmia Taqui-, Estable, bradiarritmia inestable, nodo Supraventricular de seno de , ventricular, carótida anormalidades de ipersensible la conducción 94 InsuficienIzquierda, Cardiomiopatías , cia cardiaca derecha, bi- como por ejemplo congestiva ventricular enfermedad de almacenamiento, metabólica, infecciosa, familiar idiopática, de iciencias, trastorno de tejido conectivo, e infiltración y granulomas, neurovascular Miocarditis Autoinmune, infectivo, idiopático Cor pulmonar rauma superficiales y penetrantes Toxinas Cocaína Vascular Hipertensión Primaria, secundaria 95 Enfermedad de descompresión Hiperplasia fibromus- cular Aneurisma Disección, roto, ampliado Pulmones Obstructiva Asma, bronquitis crónica, enfisema y obstrucción de las vias respiratorias Enfermedad Embolia pulmonar pulmonar, isquémica trombosis pulmonar, embolia por grasa Enfermedades pulmonares ambientales 96 97 Exocrina Insuficiencia Pancreatitis exócrina de páncreas Hueso Osteopenia Primaria, Hipogonadismo, secundaria inmovilización, Hiperparatiroi- dismo relacionado con la edad, postmenopáusico, hipertiroidismo, deficiencia de calcio, magnesio, fósforo y/o vitamina D Osteomielitis Necrosis Avascular Trauma Enfermedad de Paget 98 Piel Alopecia Areata Primaria Total secundaria alopecia de patrón masculino Vitíligo Localizado Primario generalizado secundario Ulceración diabética Enfermedad vascular periférica Lesiones por quemaduras Trastornos Lupus auto- eritematoide inmunes r Sjiogren, artritis reumatoide, glornerulo- nefritis, angiitis Histioci- tosis de Langerhans 99 Ojo Neuritis óptica Lesiones superficiales y penetrantes, infecciones, sarcoide, enfermedad de células falciformes, desprendimiento de retina, arteritis temporal 100 Isquemia retinal, degeneración macular, desprendimiento de retina, retinitis pigmentosa, retinopatia arterios-clerótica, retinopatia hipertensiva bloqueo de arteria retinal, bloqueo de vena retinal, hipotensión, retinopatia diabética 101 Trastornos Asfixia embriónicos y fetales Isquemia CNS Síndrome de Fatiga crónica, síndromes hipoosmo- lares e iper- osmolares agudos y crónicos , demencia por SIDA, Electrocución Encefalitis Rabia, Herpes Meningitis Hematoma Subdural Adicción a la nicotina 102 Abuso y Cocaína, retiro de heroína, crack, drogas marihuana, LSD, PCP, abuso de drogas múltiples, ecstasy, opioides, hipnóticos sedantes, anfetaminas , cafeína Trastornos obsesivos-compulsivos Estenosis espinal, mielitis transversa, Guillian Barre, trauma, compresión de raiz nerviosa, compresión tumoral, insolación 103 ENT Tinitus Si d ome de Meuniere Pérdida de oído Lesión traumática, barotraumas Riñon InsuficienAguda, crónica Enfermedad cia renal vascular/ isquémica, intersticial, enfermedad de riñon diabético, síndromes nefróticos, infecciones Henoch S . Púrpura Músculo Enfermedades Miastenia grave estriado auto-inmunes Dermatomiositis Polimiositis Miopatias Metabólica heredada, endocrina y tóxica 104 Insolación Lesión por aplastamiento Rabdomilosis Enfermedad mitocondrial Infección Fasciitis necrotizante Disfunción Central y Impotencia sexual periférica secundaria a medicación Hígado Hepatitis Viral, bacteriana, parásita Enfermedad isquémica Cirrosis, hígado graso Enfermedades infiltra- tivas/ metabólicas 105 GastroEnfermedad intestinal intestinal isquémica Enfermedad intestinal inflamatoria Enterocolitis necrotizante Transplante Tratamiento de órgano de donador y receptor Tracto Infertilidad Vascular reproducAuto-inmune tivo Anormalidades uterinas Trastornos de implante Endocrina Hiper- función e hipofunción glandular 106 Como se mencionó arriba, estas enfermedades, trastornos o condiciones son simplemente ilustrativas del rango de beneficios proporcionados por la citocinas protectoras de tejido de la invención. Por consiguiente, esta invención ofrece generalmente un tratamiento terapéutico o profiláctico de las consecuencias de trauma mecánico o de enfermedades humanas. Un tratamiento terapéutico o profiláctico para enfermedades, trastornos o condiciones del sistema nervioso central y/o sistema nervioso periférico se prefieren. Un tratamiento terapéutico o profiláctico para enfermedades, trastornos o condiciones que tienen un componente psiquiátrico se proporciona. Se proporciona un tratamiento terapéutico o profiláctico para enfermedades, trastornos o condiciones que incluyen, sin limitarse a estos, a las enfermedades, trastornos o condiciones que tienen un componente oftálmico, cardiovascular, cardiopulmonar, respiratorio, renal, urinario, reproductivo, gastrointestinal, endocrino o metabolico. Una persona con conocimientos ordinarios en la materia entenderá que la composición farmacéutica de la presente invención puede prepararse a partir de una mezcla de las citocinas protectoras de tejido de la presente invención asi como eritropoyetina. En una modalidad, dicha composición farmacéutica de eritropoyetina o citocina protectora de tejido puede 107 administrarse sistémicamente para proteger o mejorar las células, tejido u órgano blanco. Dicha administración puede ser parenteral, por inhalación, o transmucosal, como por ejemplo, oral, nasal, rectal, intravaginal, sublingual, submucosal, o transdérmica. Preferentemente, la administración es parenteral, como por ejemplo, a través de inyección intravenosa o intraperitoneal, e incluye también, sin limitarse a estos ejemplos, administración intraarterial, intramuscular, intradérmica y subcutánea. Para otras vías de administración, como por ejemplo mediante el uso de perfusado, inyección en un órgano, u otra administración local, una composición farmacéutica puede proporcionarse la cual resulta en niveles semejantes de citocina protectora de tejido como lo descrito arriba. Se prefiere un nivel de aproximadamente 15 pM -30 nM. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden comprender una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad específica, el término "farmacéuticamente aceptable" se refiere a aprobado por una agencia reguladora del gobierno federal o de un gobierno estatal o bien listado en la farmacopea norteamericana o en otra farmacopea extranjera generalmente reconocida para su uso en animales, y más particularmente en seres humanos. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo 108 con el cual se administra el agente terapéutico. Tales vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, como por ejemplo soluciones salinas en agua y aceites, incluyendo los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético como por ejemplo aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de sésamo o similar. Una solución salina es un vehículo preferido cuando la composición farmacéutica se administra en forma intravenosa. Las soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol pueden también emplearse como vehículos líquidos, especialmente en el caso de soluciones inyectables . Excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, glucosa, lactosa, sucrosa, gelatina, malta, arroz, harina, gis, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada seca, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. La composición, si se desea, puede también contener cantidades menores de agentes humectantes o emulsificantes, o bien agentes de amortiguamiento de pH. Estas condiciones pueden tomar la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, tabletas, pildoras, cápsulas, polvos, formulaciones de liberación prolongada y similares. La composición puede ser formulada como supositorio, con aglomerantes tradicionales y vehículos habituales tales como triglicéridos . Los compuestos de la invención pueden también formularse como forma neutral o forma de sal . Sales 109 farmacéuticamente aceptables incluyen las sales formadas con grupos amino libres tales como las derivadas de ácido clorhídrico, ácido fosfórico, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, etc., y las formadas con grupos carboxilo libres tales como las formas derivadas de hidróxidos de sodio, potasio, amonio, calcio, férricos, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína, etc. Ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se describen en "Remington' s Pharmaceutical Sciences" por E. W. Martin. Tales composiciones contendrán una cantidad terapéuticamente efectiva de compuesto, preferentemente en forma purificada, junto con una cantidad adecuada de vehículo con el objeto de proporcionar la forma para administración correcta al paciente. La formulación debe ser adecuada al modo de administración. Composición farmacéuticas adaptadas para administración oral pueden proporcionarse como cápsulas o tabletas; como polvos o gránulos; como soluciones, jarabes o suspensiones (en líquidos acuosos o no acuosos) ; como espumas comestibles o cremas, o como emulsiones. Tabletas o cápsulas de gelatina dura pueden comprender lactosa, almidón o derivados de los mismos, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio, ácido esteárico o sales de los mismos. Cápsulas de gelatina blanda pueden comprender aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semi-sólidos o líquidos, 110 etc. Soluciones y jarabes pueden comprender agua, polioles y azúcares . Un agente activo contemplado para administración oral puede estar cubierto o mezclado con un material que retarda la desintegración y/o absorción del agente activo en el tracto gastrointestinal (por ejemplo, monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo pueden utilizarse) . Asi, la liberación sostenida de un agente activo puede lograrse durante el transcurso de varias horas y, en caso necesario, el agente activo puede estar protegido contra degradación en el estómago. Composiciones farmacéuticas para administración oral pueden estar formuladas para facilitar la liberación de un agente activo en una ubicación gastrointestinal particular debido a un pH especifico o a condiciones enzimáticas especificas. Composiciones farmacéuticas adaptadas para administración transdérmica pueden proporcionarse como parches discretos contemplados para permanecer en contacto intimo con la epidermis del receptor durante un periodo prolongado de tiempo. Condiciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica pueden proporcionarse como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, rocíos, aerosoles o aceites. Para administración tópica a la piel, boca, ojo u otros tejidos externos, se utiliza preferentemente un ungüento tópico o una crema. 111 Cuando se formula en un ungüento, el ingrediente activo puede emplearse ya sea con una base de ungüento parafinico o miscible en agua. Alternativamente, el ingrediente activo puede formularse en una crema con una base de aceite en agua o una base de agua en aceite. Composiciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica para el ojo incluyen gotas para los ojos. En estas composiciones, el ingrediente activo puede disolverse o suspenderse en un vehículo adecuado como por ejemplo, en un solvente acuoso. Composiciones farmacéuticas adaptadas para administración tópica en la boca incluyen tabletas, pastillas y enjuagues bucales. Composiciones farmacéuticas adaptadas para administración nasal y pulmonar pueden comprender vehículos sólidos tales como polvos (preferentemente de un tamaño de partículas dentro de un rango de 20 a 500 mieras) . Los polvos pueden ser administrados de forma aspirada, por ejemplo, mediante inhalación rápida a través de la nariz a partir de un recipiente de polvo sostenido cerca de la nariz. Alternativamente, las composiciones adaptadas para administración nasal pueden comprender vehículos líquidos, como por ejemplo rocíos nasales o bien gotas nasales. Alternativamente, la inhalación de compuestos directamente en los pulmones puede lograrse mediante la inhalación profunda o instalación a través de una pieza bucal en la orofaringe. Estas composiciones pueden comprender soluciones acuosas o 112 aceitosas del ingrediente activo. Composiciones para administración por inhalación pueden ser suministradas en dispositivos especialmente adaptados incluyendo, sin limitarse a estos ejemplos, aerosoles presurizados, atomizadores o insufladores que pueden construirse para proporcionar dosificaciones predeterminadas del ingrediente activo. En una modalidad preferida, composiciones farmacéuticas de la invención se administran en la cavidad nasal directamente o bien en los pulmones a través de la cavidad nasal u orofaringe. Composiciones farmacéuticas adaptadas para administración rectal pueden proporcionarse como supositorios o enemas. Las composiciones farmacéuticas adaptadas para administración vaginal pueden proporcionarse como pesarías, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de tipo rocío. Composiciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen soluciones o suspensiones acuosas y no acuosas inyectables estériles que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostatos y solutos que vuelven las composiciones sustancialmente isotónicas con la sangre del receptor contemplado. Otros componentes pueden estar presentes en tales composiciones incluyen agua, alcoholes, polioles, glicerina y aceites vegetales, por ejemplo. Composiciones adaptadas para administración parenteral pueden presentarse en recipiente de dosis unitaria 113 o dosis múltiples, por ejemplo, ampolletas selladas y frascos, y pueden almacenarse en una condición liofilizada requiriendo solamente de adición de vehículo liquido estéril, como por ejemplo, solución salina estéril para inyección, inmediatamente antes de uso. Soluciones para inyección extemporánea y suspensiones pueden prepararse a partir de polvos estériles, gránulos y tabletas. En una modalidad, un auto-inyector que comprende una solución inyectable de una eritropoyetina puede proporcionarse para uso de emergencia por ambulancias, salas de emergencia, situaciones de campo de batalla, y hasta para auto-administración en un entorno doméstico, especialmente cuando la posibilidad de amputación traumática puede ocurrir, como por ejemplo en el caso del uso imprudente de un cortador de césped. La probabilidad que células y tejidos de un pie o dedo cortado sobrevivan después de su re-fijación puede ser incrementada mediante la administración de eritropoyetina o una citocina protectora de tejido en múltiples sitios de la parte cortada tan pronto como sea posible aún antes de la llegada del personal médico en el sitio, o antes de la llegada del individuo con el dedo cortado a la sala de emergencia. En una modalidad preferida, la composición se formula de conformidad con procedimientos de rutina como una composición farmacéutica adaptada para administración intravenosa a seres humanos. Típicamente, las composiciones para administración 114 intravenosa son soluciones en amortiguador acuoso isotónico estéril. En caso necesario, la composición puede incluir también un agente de solubilización y un anestésico local como por ejemplo lidocaina para mitigar el dolor en el sitio de la inyección. En general, los ingredientes se suministran ya sea separadamente o mezclados en forma de dosificación unitaria como por ejemplo en forma de un polvo liofilizado seco o concentrado libre de agua en un recipiente herméticamente sellado como por ejemplo ampolleta o sobre que indica la cantidad de agente activo. Cuando la composición debe ser administrada por infusión, puede proporcionarse con una botella para infusión que contiene solución salina o agua de grado farmacéutico estéril. Cuando la composición se administra por inyección, se puede proporcionar una ampolleta de solución salina estéril de tal manera que los ingredientes puedan mezclarse antes de la administración. Los supositorios contienen generalmente ingrediente activo dentro de un rango de 0.5% a 10% en peso; las formulaciones orales contienen preferentemente de 10% a 95% de ingrediente activo. Una composición de perfusado puede proporcionarse para su uso en baños para órganos trasplantados, para perfusión in situ o para administración a la vasculatura de un donador de órgano antes de cosechar el órgano. Tales composiciones farmacéuticas pueden comprender niveles de eritropoyetina, 115 citoclnas protectoras de tejido o una forma de eritropoyetina o citocina protectora de tejido no adecuada para administración local o sistémica, aguda o crónica a un individuo, pero tendrá las funciones contempladas aquí en un cadáver, baño de órgano, perfusado de órgano, o bien perfusado in situ antes de la remoción o reducción de los niveles de eritropoyetina contenida ahi antes de exposición o retorno del órgano o tejido tratado a la circulación regular. La eritropoyetina para este aspecto de la invención puede ser cualquier eritropoyetina, como por ejemplo formas que ocurren naturalmente tales como eritropoyetina humana, o cualquiera de las citocinas protectoras de tejido descritas arriba como por ejemplo asialoeritropoyetina y fenilglioxal-eritropoyetinas, como ejemplos no limitativos. La presente invención ofrece composiciones farmacéuticas para el tratamiento, profilaxis y mejora de uno o varios síntomas asociados con la inflamación. En una modalidad especifica, una composición comprende una o varias citocinas por vectores de tejido. En otra modalidad, una composición comprende una o varias citocinas protectoras de tejido y uno o varios agentes profilácticos o terapéuticos otros que citocinas protectoras de tejido, dichos agentes profilácticos o terapéuticos son conocidos por ser útiles o bien han sido utilizados o bien están siendo utilizados en la prevención, tratamiento o mejora de uno o varios síntomas asociados con la inflamación. 116 En una modalidad preferida, una composición de la presente invención es una composición f rmacéutica. Tales composiciones comprenden una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o varios agentes profilácticos o terapéuticos (por ejemplo, una citocina protectora de tejido u otro agente profiláctico o terapéutico), y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" significa incluyendo una cantidad de un agente que no es necesariamente efectiva cuando el agente se administra solo para que sea efectiva cuando el agente se co-administra con otro agente. La invención proporciona también un paquete o kit terapéutico que comprende uno o varios recipientes llenos con uno o varios de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas de la invención. Opcionalmente, se puede encontrar un folleto asociado con dicho (s) recipiente (s) en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos o biológicos, dicho folleto refleja la aprobación por parte de la agencia de la fabricación, uso o venta para administración humana. En particular, la invención ofrece que uno o varios de los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención esté empacado en un recipiente herméticamente sellado, como por ejemplo una ampolleta o un 117 sobre que indica la cantidad del agente. En una modalidad, uno o varios de los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención se suministra en un polvo liofilizado esterilizado seco o concentrado libre de agua en un recipiente herméticamente sellado y puede ser reconstituido, por ejemplo, con agua o solución salina en la concentración apropiada para su administración a un sujeto. Preferentemente, uno o varios de los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención se suministra en forma de un polvo liofilizado estéril seco en un recipiente herméticamente sellado en una dosificación unitaria de por lo menos 5 mg, con mayor preferencia 10 por lo menos 10 mg, por lo menos 15 mg, por lo menos 25 mg, por lo menos 35 mg, por lo menos 45 mg, por lo menos 50 mg, por lo menos 75 mg, o por lo menos 100 mg. Los agentes profilácticos o terapéuticos liofilizados o las composiciones farmacéuticas de la presente invención deben almacenarse a una temperatura comprendida entre 3°C y 8°C en su recipiente original y los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la presente invención deben administrarse dentro de una semana, preferentemente dentro de 5 dias, dentro de 72 horas, dentro de 48 horas, dentro de 24 horas, dentro de 12 horas, dentro de 6 horas, dentro de 5 horas, dentro de 3 horas, o dentro de 1 hora después de la reconstitución. En una modalidad alternativa, uno o varios de 118 los agentes profilácticos o terapéuticos, o composiciones farmacéuticas de la invención se suministra en forma liquida en un recipiente herméticamente sellado que indica la cantidad y concentración del agente. Preferentemente, la forma liquida de la composición administrada se suministra en un recipiente herméticamente sellado de por lo menos 0.25 mg/ml, con mayor preferencia por o menos 0.5 mg/ml, por lo menos 1 mg/ml, por lo menos 2.5 mg/ml, por lo menos 5 mg/ml, por lo menos 8 mg/ml, por lo menos 10 mg/ml, por lo menos 15 mg/ml, por lo menos 25 mg/ml, por lo menos 50 mg/ml, por lo menos 75 mg/ml, o por lo menos 100 mg/ml. La forma liquida debe estar almacenada a una temperatura comprendida entre 2°C y 8°C en su recipiente original. Las composiciones, si se desea, pueden estar presentadas en un paquete o dispositivo surtidor que puede contener una o varias formas de dosificación unitaria que contienen el ingrediente activo. El paquete puede comprender, por ejemplo, una hoja de metal o plástico, como por ejemplo un empaque tipo blister. El empaque o dispositivo surtidor puede estar acompañado de instrucciones para administración. En general, los ingredientes de las composiciones de la invención se derivan de un sujeto que es de la misma especie o reactividad de especie que el receptor de tales composiciones. Asi, en una modalidad preferida, anticuerpos humanos o humanizados se administran a un ser humano para 119 terapia o profilaxis. En otra modalidad, por ejemplo, una citocina protectora de tejido puede ser suministrada, en un sistema de liberación controlada. Por ejemplo, el polipéptido puede ser administrado empleando infusión intravenosa, una bomba osmótica implantable, un parche transdérmico, liposomas, en otros modos de administración. En una modalidad, se puede utilizar una bomba (véase Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201; Buchwald y colaboradores, 1980, Surgery 88:507; Saudek y colaboradores, 1989, N. Engl . J. Med. 321:574). En otra modalidad, el compuesto puede administrarse en una vesícula, en particular un liposoma (véase Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Treat y colaboradores, en Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cáncer, Lopez-Berestein y Fidler (eds.), Liss, New York, páginas 353-365 (1989) ; WO 91/04014; patente norteamericana No. 4,704,355; Lopez-Berestein, ibid, páginas 317-327; véase generalmente ibid.). En otra modalidad, materiales poliméricos pueden ser utilizados (véase Medical Applications of Controlled Reléase, Langer y Wise (eds.), CRC presiones; Boca Ratón, Florida, 1974; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen y Ball (eds.), Wiley: New York (1984); Ranger y Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol . Cheir 23:61, 1953; véase también Levy y colaboradores, 1985, Science 228:190; During y 120 colaboradores, 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard y colaboradores 1989, J. Neurosurg. 71:105). En otra modalidad, un sistema de liberación controlado puede colocarse en la cercanía del agente terapéutico, es decir, las células, tejido u órgano blanco, requiriéndose solamente una fracción de la dosis sistémica (véase por ejemplo, Goodson, páginas 115-138 en Medical Applications of Controlled Reléase, vol. 2, supra, 1984) . Otros sistemas de liberación controlada se comentan en la reseña de Langer (1990, Science 249:1527-1533). En otra modalidad, una citocina protectora de tejido, apropiadamente formulada, puede administrase por administración nasal, oral, rectal, vaginal o sublingual. En una modalidad específica, puede ser deseable administrar una eritropoyetina y/o las citocinas protectoras de tejido de la invención localmente al área de requiere de tratamiento; esto puede lograrse, por ejemplo, solamente a título de ejemplo y no limitativo, mediante infusión local durante una intervención quirúrgica, mediante aplicación tópica (por ejemplo, en combinación con un vendaje de heridas después de una intervención quirúrgica, por inyección, a través de un catéter, por medio de un supositorio, o bien a través de un implante, dicho implante siendo de un material poroso, no poroso, o gelatinoso, incluyendo membranas como por ejemplo membranas silásticas, o fibras. 121 La selección de la dosis efectiva preferida será fácilmente determinada por una persona con conocimientos en la materia con base en varios factores que son conocidos por parte de una persona con conocimientos ordinarios en la materia. Tales factores incluyen la forma particular de eritropoyetina o de la citocina protectora de tejido, y sus parámetros farmacocinéticos tales como biodisponibilidad, metabolismo, vida media, etc., que ha sido establecido mediante los procedimientos de desarrollo habituales típicamente empleados para obtener la aprobación de las autoridades reguladoras para un compuesto farmacéutico. Factores adicionales a tomar en cuenta para determinar la dosis incluyen la condición o enfermedad a tratar o bien el beneficio a lograr en un individuo normal, la masa corporal del paciente, la vía de administración, si la administración aguda o crónica, medicaciones concomitantes, y otros factores bien conocidos que afectan la eficacia de los agentes farmacéuticos administrados. Asi, la dosificación precisa debe ser decidida según el juicio del médico y las circunstancias de cada paciente, por ejemplo, dependiendo de la condición y del estado inmune del paciente individual y según las técnicas clínicas estándares. En otro aspecto de la invención, se proporciona un perfusado o solución de perfusión para perfusión y almacenamiento de órganos para transplante, la solución de perfusión incluye 122 una cantidad de eritropoyetina o de una citocina protectora de tejido efectiva para proteger células respondedoras y células, tejidos u órganos asociados. El transplante incluye, sin limitarse a estos ejemplos, xenotransplante cuando un órgano (incluyendo células, tejido u otras partes del cuerpo) es cosechado de un donador y transplantado en un receptor diferente; y autotransplante en el caso en el cual el órgano se toma de una parte del cuerpo y se coloca de nuevo en otra parte del cuerpo, incluyendo procedimientos quirúrgicos de banco, en donde un órgano puede ser removido y mientras se encuentra ex vivo, resecado, reparado, o manipulado de otra forma, como por ejemplo para remover un tumor, y después dicho órgano es devuelto a su ubicación original. En una modalidad, la solución de perfusión es la solución de la Universidad de Wisconsin (UW) (patente norteamericana No. 4,798,824) que contiene de aproximadamente 1 a aproximadamente 25 U/ml de eritropoyetina, 5% de almidón de hidroxietilo (que tiene un peso molecular de aproximadamente 200,000 a aproximadamente 300,000 y sustancialmente libre de etilenglicol, etilenclorohidrina, cloruro de sodio y acetona) ; KH2PO4 25 mM, glutationa 3 mM; adenosina 5 mM; glucosa 10 mM; amortiguador HEPES 10 mM; gluconato de magnesio 5 mM, CaClg 1.5 mM, gluconato de sodio 105 mM; 200,000 unidades de penicilina; 40 unidades de insulina; 16 mg de dexametasona; 12 mg de Fenol Rojo; y que tiene un pH de 123 7.4-7.5 y una osmolaridad de aproximadamente 320 mOsm/1. La solución se utiliza para mantener ríñones y páncreas de cadáveres antes de transplante. Utilizando la solución, la preservación puede ser extendida más allá del límite de 30 horas recomendado en el caso de la conservación de riñon proveniente de cadáver. Este perfusado particular es simplemente ilustrativo de numerosas soluciones de este tipo que pueden adaptarse para el uso presente por inclusión de una cantidad efectiva de eritropoyetina y/o de una citocina protectora de tejido. En una modalidad adicional, la solución de perfusado contiene de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg/ml de eritropoyetina, o bien de aproximadamente 40 a aproximadamente 320 mg/ml de eritropoyetina. Como se mencionó arriba, cualquier forma de eritropoyetina o citocinas protectoras de tejido puede emplearse en este aspecto de la invención. Mientras el receptor preferido de una citocina protectora de tejido para los propósitos aquí es un ser humano, los métodos aplican también a otros mamíferos, particularmente anímales domésticos, ganados, mascotas y animales de jardines zoológicos. Sin embargo, la invención no se limita a esto y los benéficos pueden ser aplicados a cualquier mamífero. En aspectos adicionales de la invención ex vivo la eritropoyetina y cualquier citocina protectora de tejido, por ejemplo las descritas arriba, pero sin limitarse a estos 124 ejemplos, pueden emplearse. En otro .aspecto de la invención, métodos y composiciones para mejorar la viabilidad de células, tejidos u órganos que no están aislados de la vasculatura por una barrera de células endoteliales se proporciona mediante exposición de las células, tejido u órgano directamente una composición farmacéutica que comprende eritropoyetina o una citocina protectora de tejido, o bien mediante la administración o puesta en contacto de una composición farmacéutica que contiene eritropoyetina o una citocina protectora de tejido a la vasculatura del tejido u órgano. Una actividad mejorada de células respondedoras en el tejido u órgano tratado es responsable de los efectos positivos ejercidos. De conformidad con lo descrito arriba, la invención se basa, en parte, en el descubrimiento que las moléculas de eritropoyetina pueden ser transportadas a partir de la superficie luminal hasta la superficie de la membrana basal de células endoteliales de los capilares de órganos con uniones herméticas de células endoteliales, Incluyendo, por ejemplo, el cerebro, la retina y los testículos, así, células respondedoras a través de una barrea son un blanco susceptible para los efectos benéficos de la eritropoyetina o citocinas protectoras de tejido, y otros tipos de células o tejidos u órganos que contienen y dependen total o parcial de células respondedoras ahí son blanco para 125 los métodos de la presente invención. Mientras no se desea limitar a ninguna teoría en particular, después de la transcitosis de la eritropoyetina o de la citocina protectora de tejido, la eritropoyetina o la citocina protectora de tejido puede interactuar con un receptor para eritropoyetina en una célula respondedora, como por ejemplo, célula neuronal, retinal, muscular, cardiaca, pulmonar, hepática, renal, de intestino delgado, de corteza adrenal, de médula adrenal, endotelial capilar, de testículo, de ovario o célula endometrial, y el enlace con el receptor puede iniciar una cascada de transducción de señales que resulta en la activación de un programa de expresión génica dentro de las célula o tejido respondedor, lo que resulta en la protección de la célula o tejido u órgano contra daño, como por toxinas, agentes quimioterapéuticos, radioterapia, hipoxia, etc. Así, métodos para proteger un tejido que contiene células respondedoras contra lesión o estrés hipóxico, y mejorar la función de dicho tejido se describen con detalles abajo. En la práctica de una modalidad de la invención, un paciente mamífero está sometido a una quimioterapia sistémica para tratamiento contra el cáncer, incluyendo radioterapia, que tiene habitualmente efectos adversos como por ejemplo daño a los nervios, pulmones, corazón, ovarios o testículos. La administración de una composición farmacéutica que comprende una eritropoyetina y/o una citocina protectora de tejido de 126 conformidad con lo descrito arriba se efectúa antes" y durante la quimioterapia y/o la radioterapia, para proteger varios tejidos y órganos contra daño por el agente quimioterapéutico como por ejemplo para proteger los testículos. El tratamiento puede proseguir hasta que los niveles circulantes del agente quimioterapéutico hayan bajado por debajo de un nivel de peligro potencial para el cuerpo del mamífero. En la práctica de otra modalidad de la invención, varios órganos se contemplan para ser cosechados de la victima de un accidente de automóvil para transplante en numerosos receptores, algunos de los cuales requieren de transporte sobre una distancia existencia y durante un período de tiempo importante. Antes de cosechar los órganos, la victima recibió una infusión de una composición farmacéutica que comprende eritropoyetina y/o citocinas protectoras de tejido de conformidad con lo descrito aquí. Los órganos cosechados para embarque fueron perfusados con un perfusado que contiene eritropoyetina y/o citocinas protectoras de tejido de conformidad con lo descrito aqui, y almacenados en un baño que comprende eritropoyetina y/o citocinas protectoras de tejido. Ciertos órganos fueron perfusados continuamente con un dispositivo de perfusión pulsátil, utilizando un perfusado que contiene eritropoyetina y/o citocinas protectoras de tejido de conformidad con la presente invención. Durante el transporte y durante el implante y reperfusión de los órganos 127 irt situ se observó un deterioro mínimo de la función de los órganos . En otra modalidad de la invención, un procedimiento quirúrgico para reparar una válvula cardiaca requirió de una cardioplegia temporal y oclusión arterial- Antes de la intervención quirúrgica, el paciente recibió una infusión de una citocina protectora de tejido, 4 µg de asialoeritropoyetina carbamilada por kg de peso corporal. Dicho tratamiento evitó un daño celular isquémico hipóxico, especialmente después de reperfusión. En otra modalidad de la invención, en cualquier intervención quirúrgica, como por ejemplo en una intervención quirúrgica de desvío cardiopulmonar, se puede utilizar una eritropoyetina que ocurre naturalmente o bien una citocina protectora de tejido de la presente invención. En una modalidad, la administración de una composición farmacéutica que comprende eritropoyetina y/o citocinas protectoras de tejido de conformidad con lo descrito arriba se efectúa antes, durante y/o después del procedimiento de desvío con el objeto de proteger la función del corazón, cerebro y otros órganos . En los ejemplos siguientes en los cuales se utiliza una eritropoyetina que ocurre naturalmente y/o una citocina protectora de tejido de la presente invención para aplicaciones e vivo o para tratar células respondedoras como 128 por ejemplo tejido neuronal, tejido retinal, células o tejidos de corazón, pulmón, e hígado, riñon, intestino delgado, corteza adrenal, médula adrenal, células endoteliales de capilares, testículos, ovarios, o células endometriales, la invención ofrece una ¦ composición farmacéutica en una forma de unidad de dosificación adaptada para proteger y mejorar las respuestas, tejidos u órganos respondedores distantes de la vasculatura, que comprende una cantidad dentro de un rango de aproximadamente 1 pg a 5 mg, de 500 pg a 5 mg, de 1 ng a 5 mg, de 500 ng a 5 mg, de 1 g a 5 mg, de 500 ]ig a 5 mg, o de 1 mg a 5 mg de una citocina protectora de tejido, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En una modalidad preferida, la cantidad de citocina protectora de tejido está dentro de un rango de aproximadamente 1 pg a 1 mg. En una modalidad preferida, l formulación contiene citocinas protectoras de tejido que no son eritropoyéticas . En un aspecto adicional, de la invención, la administración de citocinas protectoras de tejido restaura la función cognoscitiva en animales sometidos a trauma cerebral, después de un retardo ya sea de 5 días o de 30 días, la administración de eritropoyetina pudo todavía restaurar la función en comparación con animales tratados en forma ficticia, lo que indica la capacidad de una eritropoyetina para regenerar o restaurar la actividad cerebral. Así la 129 invención se enfoca también al uso de eritropoyetina y/o citocinas protectoras de tejido para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de trauma cerebral y otras disfunciones cognoscitivas, incluye un tratamiento mucho después de la lesión (por ejemplo, 3 días, 5 días, 1 semana, 1 mes, o más) . La invención se enfoca también a un método para el tratamiento de la disfunción cognoscitiva después de lesión por administración de una cantidad efectiva de una eritropoyetina y/o citocina protectora de tejido. Cualquier eritropoyetina y/o citocina protectora de tejido de conformidad con lo descrito aquí puede utilizarse para este aspecto de la invención. Además, este aspecto de restauración de la invención se enfoca al uso de cualquier eritropoyetina y/o citocina protectora de tejido aquí para la preparación de una composición farmacéutica para la restauración de disfunción celular, tisular u orgánica, en donde el tratamiento es iniciado después, y mucho después de la lesión inicial responsable de la disfunción. Además, el tratamiento utilizando eritropoyetina y/o citocinas protectoras de tejido de la invención puede abarcar el transcurso de la enfermedad o condición durante la fase aguda asi como una fase crónica. En el caso en el cual una eritropoyetina de la invención tiene una actividad eritropoyética, en una modalidad preferida, la eritropoyetina puede administrarse 130 sist micamente en una dosificación entre aproximadamente 1 ug y 100 pg/kg de peso corporal, preferentemente entre aproximadamente 5-50 g/kg de peso corporal, con mayor preferencia aproximadamente 30-50 µg/kg de peso corporal por administración. Esta dosis efectiva debería ser suficiente para lograr niveles séricos de eritropoyetina mayores que aproximadamente 10,000, 15,000 o 20,000 mU/ml (80, 120 ó 160 mg/ml) de suero después de administración de eritropoyetina. Tales niveles séricos pueden lograrse a aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ó 10 horas después de la administración. Tales dosificaciones pueden ser repetidas según lo necesario. Por ejemplo, la administración puede ser repetida diariamente, durante todo el tiempo clínicamente necesario, o después de un intervalo apropiado, por ejemplo, cada 1 a 12 semanas, preferentemente cada 1 a 3 semanas. En una modalidad, la cantidad efectiva de eritropoyetina y un vehículo farmacéuticamente aceptable puede estar empacada en un frasco de una sola dosis o en otro recipiente. En otra modalidad, las citocinas protectoras de tejido que son capaces de ejercer las actividades descritas aquí pero sin causar un incremento de la concentración de hemoglobina o hematócritos se utiliza. Tales citocinas protectoras de tejido se prefieren en casos en los cuales los métodos de la presente invención se contemplan para proporcionarse crónicamente. En otra modalidad, se administra una 131 eritropoyetina en una dosis mayor que la dosis necesaria para estimular óptimamente la eritropoyesis . Como se indicó arriba, una citocina protectora de tejido de la presente invención no tiene necesariamente una actividad eritropoyética, y por consiguiente, las dosificaciones antes mencionadas expresadas en unidades hematopoyéticas son simplemente ejemplos de eritropoyetinas que son eritropoyéticas ; arriba se proporcionan equivalentes en peso para dosificaciones que son aplicables a citocinas protectoras de tejido. En una modalidad, la cantidad de la composición de la invención que será efectiva para el tratamiento, prevención o mejora de uno o varios síntomas asociados con inflamación pueden determinarse por técnicas clínicas estándares. La dosis precisa a emplear en la formulación dependerá también de la vía de administración y de la gravedad de la condición, y se decidirá según el criterio del médico y las circunstancias del mamífero en cuestión. Dosis efectivas pueden ser extrapoladas a partir de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de prueba de modelo de animal o in vitro. En una modalidad específica, la dosificación de la composición de la invención o un agente profiláctico o terapéutico administrado para prevenir, tratar o mejorar uno o varios síntomas asociados con un trastorno inflamatorio en 132 un mamífero es 150 µg/kg o menos, preferentemente 125 g/kg o menos, 100 µg/kg o menos, 95 pg/kg o menos, 90 µg/kg o menos, 85 µg/kg o menos, 80 g/kg o menos, 75 µg/kg o menos, 70 µg/kg o menos, 65 µg/kg o menos, 60 µg/kg o menos, 55 µg/kg o menos, 50 g/kg o menos, 45 µg kg o menos, 40 g/kg o menos, 35 µg/kg o menos, 30 µg/kg o menos, 25 µg/kg o menos, 20 µg/kg o menos, 15 µg/kg o menos, 10 µg/kg o menos, 5 µg/kg o menos, 2.5 µg/kg o menos ,2 µg/kg o menos, 1.5 g/kg o menos, 1 g kg o menos, 0.5 g/kg o menos, o bien 0.5 µg/kg o menos del peso corporal de un mamífero. En otra modalidad, la dosificación de la composición en la invención o un agente profiláctico o terapéutico administrado para prevenir, tratar o mejorar uno o varios síntomas asociados con la inflamación en un mamífero es una dosis unitaria de 0.1 mg a 20 mg, de 0.1 m a 15 mg, de 0.1 mg a 12 mg, de 0.1 mg a 10 mg, de 0.1 mg a 8 mg, de 0.1 mg a 7 mg, de 0.1 mg a 5 mg, de 0.1 a 2.5 mg, de 0.25 mg a 20 mg, de 0.25 mg a 15 mg, de 0.25 mg a 12 mg, de 0.25 mg a 10 mg, de 0.25 mg a 8 mg, de 0.25 mg a 7 mg, de 0.25 mg a 5 mg, de 0.5 mg a 2.5 mg, de 1 mg a 20 m g, de 1 mg a 15 mg, de 1 mg a 12 mg, de 1 mg a 10 mg, de 1 mg a 8 mg, de 1 mg a 7 mg, de 1 mg a 5 mg, o bien de 1 mg a 2.5 mg. En otra modalidad, a un sujeto se le administra una o varias dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o varios agentes inmunomoduladores en donde la dosis de una cantidad profiláctica o terapéuticamente 133 efectiva de dicho (s) agente (s) administrada a dicho sujeto logra en dicho sujeto un conteo de linfocitos absoluto medio de aproximadamente 500 células /mmJ a menos que 1500 células/mm3, preferentemente menos de 1400 células/mm3, menos que 1300 células/mm3, menos que 1250 células/mm3, menos que 1200 células/mm3, menos que 1100 células/mm3 o menos que 1000 células/mm3. La presente invención se enfoca además a un método para facilitar el transporte de una molécula a través de una barrera de células endoteliales en un mamífero mediante la administración de una composición que comprende la molécula particular en asociación con una eritropoyetina o citocina protectora de tejido de conformidad con lo descrito arriba. Según lo descrito arriba, uniones herméticas entre células endoteliales en ciertos órganos en el cuerpo crean una barrera a la penetración de ciertas moléculas. Para el tratamiento de varias condiciones dentro del órgano protegido por la barrera, se desea un medio para facilitar el pasaje de los agentes farmacéuticos. La eritropoyetina o citocinas protectoras de tejido de la invención son útiles como vehículos para suministrar otras moléculas a través de la berrera hematoencefálica y otras barreras de un tipo semejante. Una composición que comprende una molécula que se desea cruce la barrera con eritropoyetina o citocina protectora de tejido se prepara y la administración 134 periférica de la composición resulta en la transcitosis de la composición a través de la berrera. La asociación entre la molécula a transportar a través de la barrera y la eritropoyetina o citocina protectora de tejido puede ser un enlace covalente lábil en cuyo caso la molécula es liberada de la asociación con la eritropoyetina o citocina protectora de tejido después de atravesar la barrera. Si la actividad farmacológica deseada de la molécula es mantenida o no afectada por asociación con eritropoyetina y/o citocina protectora de tejido, se puede administrar un complejo de este tipo. La persona con conocimientos en la materia conocerá varios medios para asociar moléculas con eritropoyetina o una citocina protectora de tejido de la invención y los demás agentes descritos arriba, por medios covalentes, no covalentes, y por otros medios. Además, la evaluación de la eficacia de la composición puede ser determinada fácilmente en un sistema experimental. La asociación de moléculas con eritropoyetina o una citocina protectora de tejido puede lograrse a través varios medios, incluyendo enlace lábil, enlace covalente, reticulación, etc. las interacción biotina/avidina pueden emplearse; por ejemplo, una eritropoyetina biotinilada de la invención puede formar un complejo con un conjugado lábil de avidina y una molécula que se desea transportar. Como se mencionó arriba una molécula 135 híbrida puede prepararse a través de un medio recombinante o sintético/ por ejemplo, un polipéptido de fusión o quimérico que incluye tanto el dominio de la molécula con actividad farmacológica deseada como el dominio responsable de la modulación de la actividad de receptor para eritropoyetina. Se pueden incluir en una molécula sitios de disociación de proteasa . Una molécula puede ser conjugada con eritropoyetina o una citocina protectora de tejido de la invención a través de una molécula polifuncional, es decir, un agente de reticulación polifuncional . Como se emplea aquí, el término "molécula polifuncional" abarca moléculas que tienen un grupo funcional que puede reaccionar más de una vez sucesivamente, como por ejemplo formaldehído así como moléculas con más de un grupo reactivo. Como se emplea aquí, el término "grupo reactivo" se refiere a un grupo funcional en el agente de reticulación que reacciona con un grupo funcional en una molécula (por ejemplo péptido, proteína, carbohidrato, ácido nucleico, particularmente una hormona, agente antibiótico o agente anti-cáncer a administrar a través de una barrera de células endoteliales ) con el objeto de formar un enlace covalente entre el agente de reticulación y la molécula. El término "grupo funcional" conserva su significado estándar en química orgánica. Las moléculas polifuncionales que pueden utilizarse son preferentemente enlazadores biocompatibles, es decir, que 136 no son carcinogénicos, no son tóxicos, y sustancialmente no son inmunogenieos in vivo. Agentes de reticulación polifuncionales tales como los conocidos en la técnica y descritos aqui pueden ser probados fácilmente en modelos de animal con el objeto de determinar su biocompatibilidad. La molécula polifuncional es preferentemente bifuncional. Como se emplea aqui, el término "molécula bifuncional" se refiere a una molécula con dos grupos reactivos. La molécula bifuncional puede ser enterobifuncional u homobifuncional . Un agente de reticulación heterobifuncional permite una conjugación vectoriana. Se prefiere particularmente para la molécula polifuncional que presente una solubilidad suficiente en agua para que las reacciones de reticulación ocurran en soluciones acuosas como por ejemplo en soluciones acuosas amortiguadas a pH 6 a 8, y para que el conjugado resultante permanezca soluble en agua para una biodistribución más efectiva. Típicamente, la molécula polifuncional se enlace co alentemente con un grupo amino o un grupo funcional sulfhidrilo. Sin embargo, las moléculas polifuncionales reactivas con otros grupos funcionales como por ejemplo ácidos carboxílicos o grupos hidroxilo se contemplan dentro del marco de la presente invención. Las moléculas homobifuncionales tienen por lo menos dos grupos funcionales reactivos que son los mismos. Los grupos funcionales reactivos en una molécula homobifuncional 137 incluye, por ejemplo grupos aldehido y grupos éster activos. Las moléculas homobifuncionales que tienen grupos aldehidos incluyen, por ejemplo, glutaraldehido y sub-araldehido. El uso de glutaraldehido como agente de reticulación fue divulgado por Poznansky y colaboradores, Science 223, 1304-1306 (1984) . Las moléculas homobifuncionales que tienen por lo menos dos unidades de éster activas incluyen ésteres de ácidos dicarboxilicos y N-hidroxisuccinimida. Algunos ejemplos de tale ésteres N-succinimidilicos incluyen suberato de disuccinimidilo y ditio-bis- (propionato de succinimidilo) , y sus sales de bis-sulfonato y ácido bis-sulfónico solubles tales como sus sales de sodio y potasio. Estos reactivos homobifuncionales están disponibles en Pierce, Rockford, Illinois . Las moléculas heterobifuncionales tienen por lo menos dos grupos reactivos diferentes. Los grupos reactivos reaccionan con grupos funcionales diferentes, por ejemplo, presentes en la eritropoyetina y la molécula. Estos dos grupos funcionales diferentes que reaccionan con el grupo reactivo en el agente de reticulación heterobifuncional son habitualmente un grupo amino, por ejemplo, el grupo epsilon amino de lisina; un grupo sulfhidrilo, por ejemplo el grupo tiol de cisteina, un ácido carboxilico, por ejemplo el carboxilato en ácido aspártico; o un grupo hidroxilo, por ejemplo el grupo hidroxilo en seria. 138 Evidentemente, algunas de las varias citocinas protectoras de tejido de la invención y eritropoyetina, pueden no tener grupos reactivos adecuados disponibles para su uso con ciertos agentes de reticulación; sin embargo, una persona con conocimientos en la materia tendrá un conocimiento amplio de la elección de agentes de reticulación con base en los grupos disponible para reticulación en la eritropoyetina o citocinas protectoras de tejido de la presente invención. Cuando un grupo reactivo de una molécula heterobifuncional forma un enlace covalente con un grupo amino, el enlace covalente será habitualmente un enlace amido o imido. El grupo reactivo que forma un enlace covalente con un grupo amino, puede ser, por ejemplo un grupo carboxilato activado, un grupo halocarbonilo o un grupo éster. El grupo halocarbonilo preferido es un grupo clorocarbonilo, los grupo éster son preferentemente grupos éster reactivos como por ejemplo un grupo éster N-hidroxisuccinimida . El otro grupo funcional típicamente es o bien un grupo tiol, un grupo capaz de ser convertido en un grupo tiol, o un grupo que forma un enlace covalente con un grupo tiol. El enlace covalente será habitualmente un enlace tioéter o un disulfuro, el grupo reactivo que forma un enlace covalente con un grupo tiol, puede ser, por ejemplo, un enlace doble que reacciona con grupos tiol o un disulfuro activado. Un grupo reactivo que contiene un enlace doble capaz de 139 reaccionar con un grupo tiol es el grupo maleimido, aún cuando otros grupos, como por ejemplo acrilonitrilo son también posibles. Un grupo disulfuro reactivo puede ser, por ejemplo, un grupo 2-piridilditio o un grupo 5, 5' -ditio-bis- (ácido 2-nitrobenzoico) . Algunos ejemplos de reactivos heterobifuncionales que contienen enlaces disulfuro reactivos incluyen 3- (2-piridil-ditio) ropionato de N-succinimidilo (Carlsson, y colaboradores 1978, Biochem J., 173:723-737), S-4-succinimidiloxicarbonil-alfa-metilbenciltiosulfato de sodio y 4-succinimidiloxicarbonil-alfa-metil- (2-piridiltio) tolueno . Se prefiere 3- (2-piridilditio)propionato de N-succinimidilo . Algunos ejemplos de reactivos heterobifuncionales que comprenden grupos reactivos que tienen un enlace doble que reacciona con un grupo tiol incluyen 4- (N-maleimidometil) ciclohexan-1-carboxilato de succinimidilo y m-maleimidobenzoato de succinimidilo. Otras moléculas heterobifuncionales incluyen 3- (maleimido) ropionato de succinimidilo, 4- (p-maleimido-fenil) butirato de sulfosuccinimidilo, 4- (N-maleimidometil-ciclohexan) -1-carboxilato de sulfosuccinimidilo, éster de maleimidobenzoil-N-hidroxi-succinimida . La sal de sulfonato de sodio de m-maleimidobenzoato de succinimidilo se prefiere. Muchos de los reactivos heterobifuncionales mencionados arriba y sus sales de sulfonato están disponibles en Pierce Chemical Co . , Rockford, Illinois EUA. 140 La necesidad que los conjugados descritos arriba sean reversibles o lábiles puede ser fácilmente determinado por la persona con conocimientos en la materia. Un conjugado puede ser probado in vitro tanto para la eritropoyetina como para la actividad farmacológica deseable. Si el conjugado conserva ambas propiedades, su carácter adecuado puede ser entonces probado in vivo. Si la molécula conjugada requiere de separación de la eritropoyetina o de la citocina protectora de tejido para actividad, será preferible un enlace lábil o una asociación reversible con eritropoyetina o con la citocina protectora de tejido. Las características de labilidad pueden también probarse empleando procedimientos estándares in vitro antes de llevar a cabo una prueba in vivo. Información adicional en cuando a cómo preparar y utilizar estos reactivos así como otros reactivos polifuncionales puede obtenerse a partir de las siguientes publicaciones u otras publicaciones disponibles en la técnica: 1. Carlsson, J. y colaboradores, 1978, Biochem. J. 173:723-737. 2. Cumber, J. A. y colaboradores, 1985, Methods in Enzymology 112:207-224. 3. Jue, R. y colaboradores, 1978, Biochem 17:5399-5405. 4. Sun, T.T. y colaboradores, 1974, Biochem. 13:2334-2340. 5. Blattler, W.A. y colaboradores, 1985, Biochem. 24:1517 141 -152. 6. Liu, F.T., y colaboradores, 1979, Biochem. 18:690-697. 7. Yo le, R. J. y Neville, D.M. Jr., 1980, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 77:5483-5486. 8. Lerner, R.A. y colaboradores, 1981, Proc. Nati. Acad.

Sci U.S.A. 78:3403-3407. 9. Jung, S.M. y Moroi, M., 1983, Biochem. Biophys . Acta 761-162. 10. Caulfield, M.P. y colaboradores, 1984, Biochem. 81:7772-7776. ll.Staros, J.V., 1982, Biochem. 21:3950-3955. 12. Yoshitake, S. y colaboradores, 1979, Eur. J. Biochem. 101:395-399. 13. Yoshitake, S. y colaboradores, 1982, J. Biochem. 92:1413-1424. 14. Pilch, P.F. y Czech, M.P., 1979, J. Biol. Chem. 254- 3375-3381. 15. Novick, D. y colaboradores, 1987, J. Biol. Chem. 262: 8483-8487. 16.Lomant, A.J. y Fairbanks, G. , 1976, J. Mol. Biol. 104 :243-261. 17. Hamada, H. y Tsuruo, T. , 1987, Anal. Biochem. 160:483- 488. 18. Hashida, S. y colaboradores, 1984, J. Applied Biochem. 6:56-63. 142 Además , métodos de reticulación son reseñados por Means y Feeney, 1990, Bioconjugate Chem. 1:2-12. Barreras atravesadas por los métodos descritos arriba y composiciones de la presente invención incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, la barrera hematoencefálica, la barrera hemato-ocular, la barrera hemato-testicular, la barrera emato-ovárica, y la barrera hemato-uterina . Moléculas candidatos para transporte a través de una barrera de células endoteliales, incluyen, por ejemplo, hormonas como por ejemplo hormona de crecimiento, factores neurotróficos, antibióticos, antivirales o antifungales tales como los normalmente excluidos del cerebro y otros órganos con barreras, radiofarmacéuticos de péptido, fármacos de antisentido, anticuerpos y antivirales contra agentes biológicamente activos, farmacéuticos y agentes anti-cáncer. Ejemplos no limitativos de tales moléculas incluyen hormonas tales como hormonas de crecimiento, factor de crecimiento nervioso (NGF) , factor neurotrófico derivado de cerebro (BDNF) , factor neurotrófico ciliar (CNTF) , factor de crecimiento de fibroblasto básico (bFGF) , factor de crecimiento transformante ß? (TGF i) , factor de crecimiento transformante ß2 (??Gß2) , factor de crecimiento transformante ß3 (?ߥ ) , interleucina 1, interleucina 2, interleucina 3, e interleucina 6, AZT, anticuerpos contra factor de necrosis tumoral asi como agentes inmunosupresores tales como 143 ciclosporina . Además, colorantes o marcadores pueden fijarse sobre la eritropoyetina o sobre una de las citocinas protectoras de tejido de la presente invención con el objeto de visualizar células, tejidos u órganos dentro del cerebro y otros órganos protegidos con barrera para propósitos de diagnóstico. Como ejemplo, un marcador utilizado para visualizar placa dentro del cerebro podría estar fijado sobre una eritropoyetina o una citocina protectora de tejido con el objeto de determinar la progresión de la enfermedad de Alzheimer dentro de un paciente. La presente invención se refiere también a una composición que comprende una molécula para ser transportada a través de transcitosis a través de una barrera de unión hermética de células endoteliales y una eritropoyetina o citocina protectora de tejido de conformidad con lo descrito arriba. La invención se refiere además al uso de un conjugado entre una molécula y una eritropoyetina o una citocina protectora de tejido de conformidad con lo descrito arriba para la preparación de una composición farmacéutica para la administración de la molécula a través de una barrera de conformidad con lo descrito arriba. En los ejemplos siguientes, varios modelos de animal y pruebas in vitro de neuroprotección y transcitosis se proporcionan para demostrar la efectividad de las citocinas protectoras de tejido de la invención. Tales modelos incluyen 144 modelos in vitro utilizando células P19 para determinar los efectos neuroprotectores de las citocinas protectoras de tejido, y modelo de intoxicación en agua in vivo en ratones para determinar los efectos neuroprotectores in vivo de las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. Para transcitosis, proteínas de modelo conjugadas con las eritropoyetinas de la presente invención se evalúa para transporte en el cerebro después de administración parenteral. Estas pruebas en modelos in vitro y modelos de animal son predictivas de la eficacia de los presentes compuestos en otras especies de mamífero incluyendo seres humanos. Además, el ejemplo 1 demuestra que el cerebro humano tiene una abundancia de receptores para eritropoyetina que ofrecen el mecanismo para la transcitosis de la eritropoyetina así como de citocinas protectoras de tejido.

La presente invención se entenderá mejor con referencia a los siguientes ejemplos no limitativos que se proporcionan como ejemplos de la invención. Los ejemplos siguientes se presentan con el objeto de ilustrar más cabalmente las modalidades preferidas de la invención. No deben considerarse de ninguna manera sin embargo como limitativos del alcance amplio de la invención. Ejemplo 1 DISTRIBUCIÓN DE RECEPTOR DE ERITROPOYETINA EN CEREBRO HUMANO Cerebros humanos normales removidos durante procedimientos 145 quirúrgicos (por ejemplo para proporcionar márgenes libres de tumor en recepciones tumorales) fueron fijados inmediatamente en acroleina al 5% en amortiguador de fosfato 0.1 M (pH 7.4) durante 3 horas. Sección fueron cortadas con un microtomo vibrante a un espesor de 40 micrómetros. Se efectuó una tinción inmunohistoquimica empleando seccione de flotación libre y el método indirecto de anticuerpo p'eroxidasa-antiperoxidasa empleando una dilución 1:500 del antisuero de receptor de eritropoyetina (obtenido de Santa Cruz Biotechnology) . Una actividad peroxidasa endógena fue apagada por pre-tratamiento de secciones de tejido con peróxido de hidrógeno (3% en metanol durante 30 minutos) . Controles tisulares fueron también efectuados por omisión de anticuerpo primaria y mediante el uso del péptido de bloqueo apropiado (de Santa Cruz Biotech.) para confirmar que la tinción era especifica para el receptor para eritropoyetina (EPO) . La figura 1 muestra que capilares del cerebro humano expresan niveles muy elevados de receptor EP de conformidad con lo determinado por inmunohistoquimica utilizando anticuerpos específicos anti-receptor de EPO. Esto proporciona un mecanismo a través del cual EPO puede penetrar en el cerebro a partir de la circulación sistémica, a pesar de la barrera hemato-encefálica . La figura 2 muestra que el receptor de EPO se localiza densamente dentro y alrededor de los capilares que forman la 146 barrera hematoencefálica en el cerebro humano. Un protocolo semejante como en el caso de las figuras 1 y 2 se llevó a cabo en el caso de la figura 3, excepto que ¦ secciones de 10 micrómetros fueron cortadas a partir de parafina, las secciones integradas fueron fijadas por inmersión en paraformaldehido al 4%. La figura 3 muestra que existe una alta densidad de receptor de EPO en las superficies luminales y anti-luminales de capilares cerebrales humanos, formando la base anatómica para el transporte de EPO desde la circulación hasta el cerebro. La figura fue obtenida siguiendo un protocolo semejante al protocolo de la figura 3 excepto que el tejido fue seccionado en un ultramicrotomo para microscopía electrónica y el anticuerpo secundario fue etiquetado con partículas de oro coloidal. Esta figura muestra que el receptor de EPO se encuentra en la superficie endotelial (*), en vesículas citoplásmicas (flechas) y en extremos gírales (+) en el cerebro humano, proporcionando la base anatómica para el transporte de EPO desde la circulación hasta el cerebro. Ejemplo 2 CITOCINAS PROTECTORAS DE TEJIDO Las citocinas protectoras de tejido deseables para los usos descritos aquí pueden ser generadas por guanidinación, carbamilación, amidinación, trinitrofenilación, acetilación, succinilación, nitración o modificación de residuos de 147 arginina o lisina o grupos carboxilo, entre otros procedimientos de conformidad con lo mencionado arriba, de eritropoyetina. Estas modificaciones producen citocinas protectoras de tejido que mantienen sus actividades para órganos y tejidos específicos para no para otros, como por ejemplo eritrocitos. Cuando la eritropoyetina es sometida a las reacciones anteriores, se ha encontrado que en general la molécula resultante son tiene una actividad eritropoyética in vivo e in vitro (por ejemplo Satake y colaboradores, 1990, Biochim. Biophys. Acta 1038:125-9). Algunos ejemplos de la preparación de citocinas protectoras de tejido se describen abajo. Aún cuando los ejemplos abajo utilizan eritropoyetina como material inicial, una persona con conocimientos ordinarios en la materia reconocerá que derivados de eritropoyetina tales como eritropoyetina desialilada, guanidinada, carbamilada, amidinada, trinitrofenilada, acetilada, succinilada y nitrada pueden también utilizarse. A. Producción de Citocinas Protectoras de Tejido por Desialilación de Eritropoyetina La eritropoyetina puede ser desialilada a través del procedimiento de ejemplo siguiente. Se obtiene sialidasa (aislada de Streptococcus sp 6646K.) en SEIKAGAKU AMERICA (No. de código 120050) . La eritropoyetina es sometida a desialilación por sialidasa (0.05 U/mg EPO) a una temperatura de 37°C durante 3 horas. La mezcla de la reacción es 148 desalinizada y concentrada empleando una unidad de filtro de centrifugación Ultrafree. La muestra es después aplicada a una columna de intercambio de iones en un sistema AK Aprimem. La proteina es eluida con amortiguadores seleccionados. Las fracciones eluidas que contienen una cantidad significativa de proteínas son después sometidas a análisis de gel IEF. Las fracciones que contienen solamente las dos bandas superiores (migración a pl ~8.5 y ~7.9 en gel IEF) son combinadas . El contenido de proteina de las fracciones combinadas fue determinado y se agregó 1/9 volumen de una solución 10 x sal (NaCl 1M, citrato de sodio 0.2M, ácido cítrico 3 mM) . El contenido de ácido siálico de la solución fue después determinado- No se debe detectar ningún contenido significativo de ácido siálico. La asialoeritropoyetina y la fenilglioxaleritropoyetina fueron tan eficaces como la eritropoyetina nativa para células neurales in vitro como se muestra en las Figuras 5-6. La prueba in vitro fue efectuada empleando células de carcinoma embrional de tipo neural (P19) que son sometidas a apóptosis con retiro de suero. Veinticuatro horas antes de la remoción del suero, se agregó a los cultivos 1-1000 ng/ml de eritropoyetina o una eritropoyetina modificada. Al día siguiente, el medio fue removido, las células fueron lavadas con medio fresco que no contenía suero, y el medio que contenía la sustancia de prueba (sin suero) fue agregado a 149 los cultivos durante 48 horas adicionales. Para determinar el número de células viables, se llevó a cabo un ensayo de reducción de tetrazolio (CellTiter 96; Promega, Inc.). Como se muestra en las figuras 5-6, la asialoeritropoyetina parece tener la misma potencia que la eritropoyetina misma para prevenir la muerte celular. La retención de la actividad neuroprotectora in vivo fue confirmada empleando un modelo de isquemia de focal de rata en donde una lesión reversible en el territorio de la arteria cerebral media se efectúa de conformidad con lo previamente descrito (Brines y colaboradores, 2000, Proc. Nat. Acad. Sci. EUA 97:10526-31) . Ratas Sprague-Dawley adultas, machos, recibieron una administración de asialoeritropoyetina o eritropoyetina (5000 U (40 g) /kgBW intraperitonealmente) o vehículo al principio de la oclusión arterial. 24 horas después, los animales fueron sacrificados y se removieron sus cerebros para propósitos de estudio. Secciones en serie fueron cortadas y teñidas con sales de tetrazolio para identificar las regiones vivas del cerebro. Como se muestra en la figura 7, la asialoeritropoyetina fue tan eficaz como la eritropoyetina nativa para proporcionar una neuroprotección de una hora después de la isquemia. La figura 8 muestra los resultados de otro modelo de isquemia focal en donde se efectuó un estudio de dosis-respuesta comparativo con eritropoyetina y asialoeritropoyetina. En la dosis más 150 baja de 250 U (2 ]ig) /kg, la asialoeritropoyetina proporcionó protección mientras que la eritropoyetina no modificada no proporcionó protección. B. Preparación de Citocinas Protectoras de Tejido mediante Carbamilación de Eritropoyetina Una eritropoyetina nativa puede ser utilizada para preparar las moléculas carbamiladas respectivas, de conformidad con el procedimiento siguiente, según lo descrito en Jin Zeng (1991) . Lysine modificatión of metallothionein by carbamylation and guanidination. Methods in Enzymology 205:433-437. Primero, se recristalizó cianato de potasio. Se preparó un amortiguador de borato 1 M (pH 8.8). Se mezcló una solución de eritropoyetina con un volumen igual de amortiguador de borato. Se agregó directamente cianato de potasio al tubo de la reacción a una concentración final de 0.5 M. La solución fue bien mezclada e incubada a 37°C durante 6 horas. La solución fue después dializada completamente utilizando agua destilada. El producto fue removido de la tubería de diálisis y recogido en un tubo fresco. El volumen fue medido en 1/9 volumen de una solución 10 X sal (NaCl 1 M, citrato de sodio 0.2 M, ácido cítrico 3 mM) se agrega a la solución. El contenido de proteína es determinado y se calcula la tasa de recuperación de producto. Los productos fueron analizados por gel IEF seguido por una prueba in vi tro con células TF-1. 151 C. Preparación de Citocinas Protectoras de Tejido por Succinilación de Eritropoyetina Se puede utilizar eritropoyetina nativa para preparar las moléculas succiniladas respectivas, de conformidad con el procedimiento siguiente, según lo descrito en Alcalde y colaboradores (2001) . La succinilación de ciclodextrina gicosiltransferasa a partir de Thermoanaerobacter sp. 501 incrementa su actividad transferasa empleando almidón como donador. La eritropoyetina (100 ug) en NaHC03 0.5 M (pH 8.0) fue incubada con un exceso 15 molar de anhídrido succínico a una temperatura de 15°C durante 1 hora. La reacción fue detenida por diálisis contra agua destilada. Otro método para succinilar eritropoyetina es disolver anhídrido succínico en acetona seca a 27 mg/ml. La reacción se efectúa en un tubo de Eppendorf en un amortiguador de fosfato de sodio 10 mM (pH 8.0) . La eritropoyetina y anhídrido succínico 50 M se agregan al tubo. La solución se mezcla completamente y el tubo es sometido a rotación a una temperatura de 4°C durante 1 hora. La reacción es detenida mediante diálisis contra amortiguador de fosfato de sodio 10 mM, empleando un cásete Dialysis (Slide-A-Laze 7K, Pierce 66373) . El producto es removido del cásete de diálisis y recogido en un tubo fresco. El tubo es medido y se agrega 1/9 volumen de una solución 10 X sal (NaCl 1M, citrato de sodio 0.2 M, ácido cítrico 3 mM) . Se determina el contenido de 152 proteína y se calcula la tasa de recuperación de producto. Los productos fueron analizados por gel IEF seguido por una prueba in vitro con células TF-1. D. Preparación de Citocina Protectora de Tejido por Acetilación de Eritropoyetina Se puede utilizar eritropoyetina nativa para preparar las moléculas acetiladas respectivas de conformidad con el procedimiento siguiente, según lo descrito en Satake y colaboradores (1990) . Chemical modification of erythropoietin: an increase in vitro activity by guanidination. Biochimica et Biophysica Acta. 1038:125-129. La reacción fue efectuada en un tubo de Eppendorf en amortiguador de fosfato de sodio 80 mM (pH 7.2). La eritropoyetina y una cantidad equimolar de anhídrido acético se agregaron al tubo. Después de mezclar completamente, la solución fue incubada en hielo durante 1 hora. La reacción fue detenida por diálisis contra agua, utilizando un cásete Dialysis (Slide-A-Laze 7K, Pierce 66373) . El producto fue removido del cásete de diálisis y recogido en un tubo fresco. Después de medir el volumen de producto, se agregó 1/9 volumen de solución 10 X sal (NaCl 1 M, citrato de sodio 0.2 M, ácido cítrico 3 mM) . El contenido de proteína es determinado, y se calcula la tasa de recuperación de producto. El producto fue analizado por gel IEF seguido por una prueba in vitro con células TF-1. 153 E. Preparación de Citocina Protectora de Tejido por Carboximetilación de Lisina de Eritropoyetina Se puede utilizar eritropoyetina nativa para preparar las moléculas modificadas ?e- (carboximetil) lisina (CML) respectivas en donde uno o varios residuos de lisilo de la eritropoyetina son modificados, de conformidad con el procedimiento siguiente, según lo descrito en Akhtar y colaboradores (1999) Conformational Study of ?e- (carboxymethyl) lysine adducts of recombinant a-crystallins . Current Eye Research, 18:270-276. Se preparó ácido glioxilico (200 mM) y NaB¾CN (120 mM) en amortiguador de fosfato de sodio (50 mM, pH 7.5). En un tubo de Eppendorf, se agregó eritropoyetina (en amortiguador de fosfato) . El equivalente de lisina en la solución (aproximadamente 8 residuos de lisina/mol) fue después calculado. Después, se agregaron cantidades 3 veces mayores de NaBH3CN y 5 ó 10 veces mayores de ácido glioxilico al tubo. Cada tubo fue después sometido a vórtice e incubado a una temperatura de 37°C durante 5 horas. Las muestras fueron dialisadas contra amortiguador de fosfato durante la noche a 4°C. El volumen de cada producto fue medido después de diálisis. La concentración de proteina fue determinada, y se calculó la tasa de recuperación de producto. El producto fue analizado por gel IEF seguido por una prueba in vitro con células TF-1. 154 F. Preparación de Citocina Protectora de Tejido por Yodinación de Eritropoyetina Se puede utilizar eritropoyetina nativa para preparar las moléculas yodinadas respectivas/ de conformidad con el procedimiento siguiente, según lo descrito en las instrucciones ofrecida por Pierce Chemical (Rockford, IL) para IODO-Gen Pre-Coated Ionidation Tubes (producto # 28601) . Primero, se preparó Nal 0.1 M, y se efectuó una yodinación en un tubo de yodinación pre-revestido IODO-Gen (Pierce (28601), con un volumen total de reacción de 0.1 mi/tubo en amortiguador de fosfato de sodio (40 mM, pH 7.4). El sustrato de proteina (eritropoyetina) fue mezclado con amortiguador de fosfato de sodio y después transferido a un Tubo de yodinación para revestir IODO-Gen. Se agregó Nal a una concentración final de 1-2 mM, haciendo que la proporción molar Nal/proteina sea 14-20. La solución fue después mezclada completamente e incubada a temperatura ambiente durante 15 minutos. Con agitación suave. La reacción fue detenida por remoción de la mezcla de la reacción y adición de un tubo que contenía 3.9 mi de amortiguador de sodio (es decir, una dilución 40 veces) . El producto fue concentrado a través de una unidad de filtro de centrifugación Ultrafree pre-humedecida. El volumen de concentrado fue medido y se agregó un volumen 1/9 de solución 10 X sal (NaCl 1 M, citrato de sodio 0.2 M, ácido cítrico 3 mM) . La concentración de 155 proteína fue determinada y se calculó después la recuperación del producto. Los productos fueron analizados por gel IEF seguido por una prueba in vitro con células TF-1. 2. Otro método para yodinar una eritropoyetina incluye la incubación de una perla Iodo Bead (Pierce, Rockford, II) en 100 ul de PBS (fosfato de sodio 20 mM, NaCl 0.15 M, pH 7.5) que contenía 1 mCi de Na125I libre durante 5 minutos. Se agregó después eritropoyetina (100 ug) en 100 ul de PBS a la mezcla. Después de un período de incubación de 10 minutos a temperatura ambiente, se detuvo la reacción mediante la remoción de la solución de 200 ul del recipiente de reacción (dejando atrás la perla yodo) . El exceso de yodo fue después removido por filtración en gel en una columna Centricon 10. Como se muestra en la figura 9, la yodo-eritropoyetína producida de esta forma es eficaz para proteger las células P19 contra el retiro de suero. 3. Se puede también yodinar una eritropoyetina empleando Chloramine T. Se agregó eritropoyetina (100 ug) en 100 ul de PBS a 500 uCi de Na12nIr y la mezcla fue después mezclada en un tubo Eppendorf. Se agregaron entonces 25 ul de Chloramines T (2 mg/ml) y la mezcla fue incubad durante 1 minuto a temperatura ambiente. Se agregaron después 50 ul de amortiguador de retención Choloramine T (2.4 mg/ml de metabisulfito de sodio, 10 mg/ml de tirosina, glicerol al 10%, xileno al 0.1% en PBS). La yodotirosina y la 156 eritropoyetina yodinada fueron después separadas por filtración en gel en una columna Centricon 10. G. Preparación de Citocina Protectora de Tejido por Biotilinación de Eritropoyetina 1. En "Blotinylated recomblnant human erythropoietins : Bioactivity and Utility as a receptor ligand" por Wojchowski y colaboradores, Blood, 1989, 74(3): 952-8, los autores utilizan tres métodos diferentes para biotinilar una eritropoyetina. Se agrega biotina a (1) las porciones de ácido siálico; (2) grupos carboxilato; y (3) grupos amino . Los autores utilizan un ensayo de proliferación de células de bazo de ratón para demostrar que (1) la adición de biotina a las porciones de ácido siálico no desactiva la actividad biológica de la eritropoyetina; (2) la adición de biotina a grupos carboxilato provoca una desactivación biológica sustancial de la eritropoyetina; (3) la adición de biotina a los grupos amino resultó en una desactivación biológica completa de la eritropoyetina. Estos métodos y modificaciones están totalmente abarcados aquí. La figura 10 muestra la actividad de eritropoyetina biotínilada y asialoeritropoyetina en el ensayo de P19 con deprivación de suero . 2. Adicionalmente, se puede utilizar una eritropoyetina nativa para preparar las moléculas biotiniladas respectivas, de conformidad con el procedimiento siguiente, según lo 157 descrito en las instrucción proporcionados por Pierce Chemical (Rockford, IL) para EZ-Link NHS-LC-Biotin (# de producto 21336) . Inmediatamente antes de la reacción, se disolvió EZ-Link NHS-LC-Biotin (Pierce, 21336) en DMSO a 2 mg/ml. La reacción fue efectuada en un tubo (17 x 100 mm) con un volumen total de 1 mi que contenia bicarbonato de sodio 50 mM (pH 8.3). Se agregó después eritropoyetina y <10% de EZ-Link NHS-LC-Biotin para generar una solución con una proporción molar entre biotina/proteina de ~20. La solución fue mezclada completamente e incubada en hielo durante 2 horas. La solución fue desalinizada y concentrada empleando una unidad de filtro de centrifugación Ultrafree. El producto fue después recogido en un tubo fresco. El volumen del producto fue medido y se agregó al producto un volumen de 1/9 de solución 10 x sal (NaCl 1 M, citrato de sodio 0.2 M, ácido cítrico 3 mM) . El contenido de proteína del producto fue determinado y se calculó la tasa de recuperación de producto. Los productos fueron analizados por gel IEF seguido por una prueba in vitro con células TF-1. 3. Los grupos amino libres de eritropoyetina pueden también ser biotinilados empleando el método siguiente. Primero, se disolvió 0.2 mg de éster N-hidroxisuccinimídico de ácido D-biotinoil-e-aminocaproico (Boehringer Mannheim #1418165) en 100 ul de DMSO. Esta solución fue después combinada con 400 158 ul de PBS que contenía aproximadamente 0.2 mg de eritropoyetina en un tubo cubierto con hoja. Después de incubar esta solución durante 4 horas a temperatura ambiente, la biotina sin reacción fue separada por filtración en gel en una columna Centricon 10. Se contempla que varias de estas modificaciones puedan efectuarse en eritropoyetina o un derivado de eritropoyetina con el objeto de llegar a una citocina protectora de tejido. Por ejemplo, una eritropoyetina puede ser desialilada de conformidad con el procedimiento mencionado arriba en el Ejemplo 2(A) y carbamilada según el procedimiento listado arriba en el ejemplo 2 (B) para generar una asíalo carbamoileritropoyetina . Ejemplo 3 PREPARACIÓN DE CITOCINAS PROTECTORAS DE TEJIDO POR OTROS MÉTODOS 1. Trinitrofenilación: se modificó eritropoyetina (100 ug) con 2, 4, 6-trinitrobencensulfonato de conformidad con lo descrito en Plapp y colaboradores ("Activity of bovine pancreatic deoxyribonuclease A with modified amino groups" 1971, J. Biol. Chem. 246, 939-845). 2. Modificaciones de arginina: se modificó una eritropoyetina con 2 , 3-butandiona, de conformidad con lo descrito en Riordan ("Functional arginyl residues in carboxypeptidase A.

Modification with butanedione" Roirdan, JF, Biochemistry 159 1973, 12(20): 3915-3923). 3. Eritropoyetina fue modificada con ciclohexanona como en Patthy y colaboradores ("Identification of functional arginine residues in ribonuclease A and lysozyme" Patthy, L, Smith EL, J. Biol. C em 1975 250 (2 ): 565-9) . 4. Se modificó una eritropoyetina con fenilglioxal de conformidad con lo descrito en Werber y colaboradores ("Proceedings : Carboxypeptidase B. Modification of functional arginyl residues" Weber, MM, Sokolovsky M Isr J Med Sci 1975 11 (11) : 1169-70) . La eritropoyetina modificada por fenilglioxal fue probada empleando el ensayo de células P19 de tipo neural descrito arriba. Como lo ilustra la figura 11, esta eritropoyetina modificada químicamente conserva totalmente sus efectos neuroprotectores. 5. Modificaciones de tirosina: se incubó eritropoyetina (100 ug) con tetranitrometano de conformidad con lo descrito previamente en Nestler y colaboradores "Stimulation of rat ovarían cell steroidogenesis by hígh density lipoproteins modified with tetranitromethane" Nestler JE, Chacko GK, Strauss JF 3rd. J Biol Chem 1985 Junio 25; 260 (12) : 7316-21) . 6. Modificaciones de ácido glutámico (y ácido aspártico) : Con el objeto de modificar grupos carboxilo, se incubó eritropoyetina (100 ug) con EDC 0.02 M en glicinamída 1 M a pH 4.5 a temperatura ambiente durante 60 minutos de conformidad con lo descrito en Carraway y colaboradores 160 "Carboxyl group modification in chymotrypsin and chymotrypsinogen". Carraway L, Spoerl P, Koshland DE Jr. J Mol Biol 1969 Mayo 28: 42(1): 133-7. 7. Modificaciones de residuo de triptófano: se incubó eritropoyetina (100 ug) con 20 uM de n-bromosuccinimida en amortiguador de fosfato de potasio 20 mM (pH 6.5) a temperatura ambiente de conformidad con lo descrito en Ali y colaboradores, J Biol Chem 1995 Marzo 3; 270 (9) : 4570-4. El número de residuos de triptófano oxidados fue determinado por el método descrito en Korotchkina (Korotchkina, LG y colaboradores Protein Expr Purif. 1995 Febrero; 6(l]:79-90). 8. Remoción de grupos amino : Para remover grupos amino de eritropoyetina (100 ug) se incubó en PBS (pH 7.4) que contenia nihidrina 20 mM (Pierce Chemical, Rockford, II) , a una temperatura de 37°C durante 2 horas como en Kokkini y colaboradores (Kokkini, G. y colaboradores "Modification of hemoglobin by ninhydrin" Blood, Vol. 556, No 4 1980: 701-705) . La reducción del aldehido resultante se logró mediante la reacción del producto con boro hidruro de sodio o hidruro de litio aluminio. Específicamente, se incubó eritropoyetina (100 ug) con borohidruro de sodio 0.1 M en PBS durante 30 minutos a temperatura ambiente. La reducción fue terminada mediante el hecho de enfriar las muestras en hielo durante 10 minutos y dializando contra PBS, tres veces, durante la noche. (Kokkini, G., Blood, Vol. 556, No 4 1980:701-705). La 161 reducción empleando hidruro de litio aluminio se logró mediante la incubación de eritropoyetina (100 ug) con hidruro de litio aluminio 0.1 M en PBS durante 30 minutos a temperatura ambiente. La reducción fue terminada mediante el enfriamiento de las muestras en hielo durante 10 minutos y dializando las muestras contra PBS, tres veces, durante la noche . 9. Reducción de disulfuro y estabilización: se incubó eritropoyetina (100 ug) con DTT 500 mM durante 15 minutos a una temperatura de 60°C. Se agregó después yodoacetamida en agua 20 M a la mezcla y se incubó durante 25 minutos, a temperatura ambiente, en oscuridad. 10. Proteólisis limitada: Se puede someter eritropoyetina a una proteólisis química limitada que se enfoca a residuos específicos. La eritropoyetina reaccionó con 2-(2-nitrofenilsulfenil) -3-metil-3' -bromoindolenina que disocia específicamente después de residuos de triptófano, en un exceso de 50 veces en ácido acético al 50% durante 48 horas en oscuridad a temperatura ambiente en tubos tapados bajo una presión de nitrógeno. La reacción fue terminada por apagamiento con triptófano y remoción de sal . Como se indicó arriba, la eritropoyetina o la asialoeritropoyetina pueden ser modificadas sin embargo varias modificaciones así como modificaciones adicionales de la molécula de eritropoyetina pueden también efectuarse sin 162 desviarse del espíritu de la presente invención. Cualquiera de los ejemplos anteriores puede efectuarse con una eritropoyetina parcialmente desialilada, que puede prepararse de conformidad con lo descrito abajo. Por ejemplo, cualquiera de las eritropoyetinas modificadas mencionadas arriba puede ser modificada en uno o varios residuos de arginina mediante la utilización, por ejemplo, de fenilglioxal de conformidad con el protocolo de Takahashi (1997, J. Bíochem. 81:395-402), que puede efectuarse durante períodos variables de tiempo dentro de un rango de 0.5 a 3 horas a temperatura ambiente. La reacción fue terminada mediante el hecho de dializar la mezcla de la reacción contra agua. El uso de tales formas modificadas de eritropoyetina se abarca totalmente aquí. EJEMPLO 4 LAS CITOCINAS PROTECTORAS DE TEJIDO TIENEN UN EFECTO NEUROPROTECTOR El efecto neuroprotector de la eritropoyetina químicamente modificada fue evaluado utilizando un ensayo de intoxicación con agua de conformidad con Manley y colaboradores, 2000, "Aquaporin-4 deletion in mice reduces grain edema after acute water intoxication and ischemic stroke" [La deleción de acuaporin-4 en ratones reduce el edema cerebral después de intoxicación acuosa aguda y ataque isquémico] Nat . Med. 2000 Feb; 6 (2) : 159-63. Se utilizaron ratones C3H/HEN hembras. Los ratones recibieron 20% de su peso corporal de agua IP con 400 163 ng/kg de peso corporal DDAVP (desmopresina) . Los ratones recibieron eritropoyetina (A) o una citocina protectora de tejido: asialoeritropoyetina (B) , asialoeritropoyetina carbamilada (C) ; asialoeritropoyetina succinilada (D) , asialoeritropoyetina acetilada (E) ; asialoeritropoyetina yodinada (F) ; asialoeritropoyetina carboximetilada (G) ; eritropoyetina carbamilada (H) ; eritropoyetina acetilada (I) ; eritropoyetina yodinada (J) o bien W carboxi metil eritropoyetina (K) . Los ratones recibieron una dosis de 100 microgramos/kg de eritropoyetina o bien eritropoyetina químicamente modificada intraperitonealmente 24 horas antes de la administración del agua y otra vez al momento de la administración del agua. Se utilizó una escala modificada de Manley y colaboradores para evaluar los ratones. La escala modificada es de conformidad con lo listado abajo: 1. Explora la jaula/mesa Sí 0 No 1 2. Rastrea visualmente objetos Sí 0 No 1 3. Movimiento de bigotes Presente 0 Ausente 1 4. Movimientos de pata-cola 164 Normal 0 Rígido 1 Paralizados 2 5. Retiro por dolor (pellizco de dedo) Sí 0 No 1 6. Coordinación de movimientos Normal 0 Anormal 1 7. Detención en borde de mesa Sí 0 No 1 Resultado total posible: 8 Los ratones fueron evaluados en los siguientes puntos de tiempo: 15, 30, 45, 50, 75, 90, 120, 150 y 180 minutos. El resultado graficado es el área bajo la curva de tiempo entera, como porcentaje de animales que recibieron una solución salina solamente. La Figura 12 representa gráficamente los resultados de los ratones que recibieron eritropoyetina o una de las citocinas protectoras de tejido de la presente invención como porcentaje del resultado obtenido por los ratones de control. Los ratones que recibieron las citocinas protectoras de tejido de la presente invención presentaron menos daño neurológico y por consiguiente presentaron un mejor resultado en la escala modificada. La Figura 12 muestra 165 que las citocinas protectoras de tejido de la presente invención protegen el tejido neuronal. Ejemplo 5 LA ERITROPOYETINA ATRAVIESA LA BARRERA HEMATO-CEREBRO-ESPINAL HERMÉTICA A LOS FLUIDOS Ratas Sprague-Dawley adultas, machos, fueron anestesiadas y recibieron una administración intraperitoneal de eritropoyetina humana recombinante . Se muestreó el fluido cerebro-espinal a partir de la cisterna magna a intervalos de 30 minutos durante hasta 4 horas y se determinó la concentración de eritropoyetina empleando un inmunoensayo enlazado a enzima sensible y especifico. Como se ilustra en la figura 13, la concentración de eritropoyetina de linea basal en el fluido cerebro-espina es de 8 mU/ml. Después de un retardo de varias horas, los niveles de eritropoyetina medidos en el fluido cerebro-espinal empezaron a elevarse y a las 2.5 horas y después son significativamente diferentes de la concentración de linea basal en el nivel p < 0.01. El nivel pico de aproximadamente 100 mU/ml se encuentra dentro del rango conocido por ejercer efectos protectores in vitro (de 0.1 a 100 mU/ml) . El tiempo hasta el pico ocurre a aproximadamente 3.5 horas, que es significativamente retardado de los niveles séricos picos (menos que 1 hora) . Los resultados de este experimento ilustran que niveles significativos de eritropoyetina pueden lograrse a través de 166 la unión celular hermética por medio de la administración parenteral en bolos de eritropoyetina en concentraciones apropiadas. Una persona con conocimientos ordinarios en la técnica reconocerá que resultados semejantes pueden esperarse de citocinas protectoras de tejido de la presente invención. EJEMPLO 6 MANTENIMIENTO DE LA FUNCIÓN EN CORAZÓN PREPARADO PARA TRANSPLANTE Ratas machos Wistar de un peso comprendido entre 300 y 330 gramos recibieron eritropoyetina (5000 U/kg de peso corporal) o vehiculo 24 horas antes de la remoción del corazón para estudio ex vivo, efectuados de conformidad con el protocolo Delcayre y colaboradores, 1992, Amer. J. Physiol. 263:H1537-45. Los animales son sacrificados con pentobarbital (0.3mL), y heparinizados de manera intravenosa (0.2 mL) . Se permite inicialmente que los corazones se equilibren durante 15 minutos. El globo ventricular izquierdo es después inflado a un volumen que proporciona una presión diastólica final de 8 MI Hg. Una curva de presión- olumen ventricular izquierdo se construye mediante el inflado incremental del volumen del globo por alícuotas de 0.02 mi. Un volumen cero es definido como el punto en el cual la presión diastólica final del ventrículo izquierdo es cero. Al terminar la curva de presión-volumen, el globo ventricular izquierdo es desinflado para ajusfar la presión diastólica final de nuevo a 8mmHg, y 167 el período de control es proseguido durante 15 minutos, después de revisar el flujo coronario. Después el corazón es parado con 50 mL de molécula Celsior + para reposar a 4°C bajo una presión de 60cm de ¾0. El corazón es después removido y almacenado durante 5 horas a una temperatura de 4 °C en un recipiente de plástico lleno de la misma solución y rodeado con hielo aplastado. Al terminar el almacenamiento, el corazón es transferido a un aparato de Langerdoff. El catéter de globo es reinsertado en el ventrículo izquierdo e inflado de nuevo al mismo volumen que durante el período pre-isquémico . El corazón es reperfusado por lo menos durante 2 horas a una temperatura de 37°C. La presión de reperfusión es ajustado a 50 cm de ¾0 durante 15 minutos de re-flujo y después de nuevo a 100 cm ¾0 durante las 2 horas siguientes. Se instituye de nuevo el ritmo del corazón (320 latidos por minuto) . Mediciones isovolumétricas de índice de contracción y presión diastólica se toman por triplicado a 25, 45, 60 y 120 minutos de reperfusión. En este punto de tiempo, se efectúan curvas de presión-volumen y efluente coronario durante la repercusión de 45 mn recogido para medir la fuga de creatina quinasa. Los dos grupos de tratamiento son comparados empleando una prueba t no apareada, y una regresión lineal empleando los datos de presión diastólica final para diseñar curvas de cumplimiento. Como se muestra en la Figura 12, ocurre una mejora 168 significativa de la presión del ventrículo izquierdo después de tratamiento con eritropoyetina, así como una curva de volumen-presión mejorada, disminución de la presión ventricular diastólica izquierda y disminución de la fuga de creatina quinasa. Resultados semejantes pueden esperarse del tratamiento con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. EJEMPLO 7 LA ERITROPOYETINA PROTEGE EL MIOCARDIO CONTRA LESIÓN ISQUÉMICA Ratas adultas, machos, que recibieron eritropoyetina humana recombinante (5000 U/kg de peso corporal) 24 horas antes son anestesiadas y preparadas para oclusión de arteria coronaria. Una dosis adicional de eritropoyetina se administra al inicio del procedimiento y la arteria coronaria principal izquierda permaneció ocluida durante 30 minutos y después fue liberada. La misma dosis de eritropoyetina se proporciona diariamente durante una semana después del tratamiento. Los animales son después estudiados para función cardiaca. Como lo ilustra la Figura 16, animales que reciben una inyección ficticia (solución salina) presentaron un incremento importante de la presión diastólica final izquierda, lo que indica un corazón rígido, dilatado, secundario a un infarto del miocardio. Al contrario, animales que recibieron eritropoyetina no presentaron una disminución de la función cardiaca, en 169 comparación con los controles operados de manera ficticia (diferencia significativa al nivel p<0.01). Resultados semejantes podrían esperarse de tratamiento con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. EJEMPLO 8 PROTECCIÓN DE ISQUEMIA RETINAL POR ERI ROPOYETINA ADMINISTRADA PERIFÉRICAMENTE Las células retínales son muy sensibles a la isquemia de la tal manera que muchas morirán después de 30 minutos de estrés isquémico. Además, una isquemia sub-aguda o crónica es la causa del deterioro de la vista que acompaña un gran número de enfermedades humanas comunes como por ejemplo, diabetes mellitus, glaucoma, y degeneración macular. Actualmente no hay ninguna terapia eficaz para proteger las células contra isquemia. Una barrera endotelial hermética existe entre la sangre y la retina que excluye la mayoría de las moléculas grandes. Para probar si la eritropoyetina administrada periféricamente protege las células sensibles a la isquemia, se utilizó un modelo de rata de glaucoma reversible, agudo o de conformidad con lo descrito en Rosenbaum y colaboradores (1997; Vis. Res. 37:3443-51). Específicamente, se inyectó una solución salina en la cámara anterior del ojo de ratas adultas, machos, a una presión superior a la presión arterial sistémica y se mantuvo durante 60 minutos. Los animales recibieron una solución salina de 5000 U de eritropoyetina/kg 170 de peso corporal intraperitonealmente 24 horas antes de la inducción de la isquemia, y se prosiguió con dosis diaria durante 3 días adicionales. Una eritrorretinografia fue efectuada en ratas adaptadas a la oscuridad 1 semana después del tratamiento. La Figura 16 y la Figura 17 ilustran que la administración de eritropoyetina se relaciona con una buena conservación del electrorretinograma (ERG) (Panel D) , en contraste con los animales tratados con solución salina sola (Panel C) , para los cuales permaneció muy poca función. La Figura 16 compara las amplitudes de onda a y de onda b de electrorretinograma después de 60 minutos de isquemia para el grupo tratado con eritropoyetina y el grupo tratado con solución salina, y muestra la protección significativa proporcionada por la eritropoyetina. Resultados semejantes pueden obtenerse a partir del tratamiento con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. EJEMPLO 9 EFECTOS DE RESTAURACIÓN DE LA ERITROPOYE INA SOBRE LA FUNCIÓN COGNOSCITIVA DISMINUIDA QUE PROVIENE DE UNA LESIÓN CEREBRAL. En un estudio para demostrar la capacidad de la eritropoyetina para restaurar una función cognoscitiva disminuida en ratones después de un trauma cerebral, ratones Balb/c hembras fueron sometidas a un trauma cerebral contundente de conformidad con lo descrito en Brines y colaboradores PNAS 2000, 97; 10295-10672 y cinco días después, 171 empezó la administración, diaria de eritropoyetina de 5000 U/kg de peso corporal, en forma intraperitoneal . Doce días después de la lesión, los animales fueron probados para determinar la función cognoscitiva en el laberinto de agua de Morris, con cuatro ensayos por día. Si bien tanto los animales tratados como los animales no tratados tuvieron un desempeño insatisfactorio en la prueba (con tiempos de nadado de aproximadamente 80 segundos de 90 segundos posibles), la Figura 18 muestra que los anímales tratados con eritropoyetina tuvieron un mejor desempeño (en esta presentación, un valor negativo mejor) . Aún si el inicio del tratamiento con eritropoyetina es retardado hasta 30 días después del trauma (Figura 19) , la restauración de la función cognoscitiva se observa también. Resultados semejantes pueden obtenerse a partir del tratamiento con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. EJEMPLO 10 MODELO DE ?????? En el modelo de neurotoxicidad de kainato, se administró asialoeritropoyetina de conformidad con el protocolo de Brines y colaboradores Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A.. 2000, 97; 10295-10672 a una dosis de 5000U/kg de peso corporal, con administración intraperitoneal 24 horas antes de la administración de 25 mg/kg de kainato y resulta ser eficaz que la eritropoyetina, como se muestra a través de la gráfica 172 de tiempo versus fallecimiento (Figura 20) . Resultados similares se requieren a partir del tratamiento con citocinas protectoras de tejido de la presente invención. EJEMPLO 11 MODELOS DE LESIÓN DE LA MÉDULA ESPINAL 1. Compresión de la Médula Espinal de Rata para Probar Eritropoyetina y Citocinas Protectoras de Tejido Ratas Wistar (hembras) de un peso comprendido entre 180-300g fueron utilizadas en este estudio. Los animales fueron sometidos a ayunas durante 12 horas antes de la intervención quirúrgica, y fueron restringidos y anestesiados de forma humanitaria con una inyección intraperitoneal de tiopental sólido (40 mg/kg de peso corporal) . Después de la infiltración de la piel (bupivacaina 0.25%), se efectuó una laminectomia completa de nivel único (T-3) a través de una incisión de 2 cm con la ayuda de un microscopio de disección. La lesión traumática la médula espinal fue inducida por aplicación extradural de una grapa temporal para aneurisma que ejerce una fuerza de cierre de 0.6 Newton (65 gramos) sobre la médula espinal durante 1 minuto. Después de la remoción de la grapa, la incisión cutánea fue cerrada y se permitió la recuperación completa de los animales de la anestesia y su retorno a sus jaulas. Las ratas fueron monitoreadas continuamente con palpación de la vejiga por o menos dos veces al día hasta que se reiniciara el vaciado 173 espontáneo . Cuarenta animales fueron divididos aleatoriamente en cinco grupos. Los animales en el grupo de control (I) (n = 8) recibieron una solución salina normal (a través de inyección intravenosa) inmediatamente después del cierre de la incisión. El grupo (II; n = 8) recibió r EP0@16 mierogramos/kg de peso corporal iv; el grupo (III) recibió una citocina protectora de tejido asialo de la presente invención (asialoeritropoyetina) @ 16 microgramos/kg de peso corporal iv, el grupo (IV) recibió una citocina protectora de tejido @ 30 microgramos/kg de peso corporal iv, y el grupo (V) recibió una citocina protectora de tejido asialo de la presente invención (asialoeritropoyetina) @ 30 microgramos/kg de peso corporal; todas como una inyección intravenosa de un solo bolo inmediatamente después de la remoción de la grapa para aneurisma. La función neurológica motriz de las ratas fue evaluada mediante el uso de la escala de calificación locomotriz de Basso y colaboradores. En esta escala, los animales fueron calificados en la escala de 0 (ausencia de movimientos observables de las patas traseras) a 21 (desplazamiento normal) . Las ratas serán probadas para déficits funcionales a 1, 12, 24, 48, y 72 horas y después a 1 semana después de la lesión por el mismo examinador ciego con relación al tratamiento recibido por cada animal. 174 La Figura 21 es una gráfica que demuestra las evaluaciones locomotrices de las ratas recuperándose del trauma a la médula espinal durante un periodo de treinta dias. Como se puede observar a partir de la gráfica, las ratas que recibieron eritropoyetina (grupo II) o citocinas protectoras de tejido (grupos III-V) se recuperaron de la lesión más fácilmente y demostraron una mejor recuperación global de la lesión que las ratas de control. Resultados similares podrían esperarse del tratamiento terapéutico con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. 2. Isquemia de Médula Espinal de Conejo para Probar Eritropoyetina y una Citocina Protectora de Tejido Treinta y seis conejos New Zealand White (de 8 a 12 meses de edad, machos) de un peso comprendido entre 1.5-2.5 kg se utilizaron dentro del marco de este estudio. Los animales fueron sometidos a ayunas durante 12 horas y restringidos de manera humanitaria. La inducción de la anestesia se llevó a cabo a través de halotano a un 3% en oxígeno al 100% y se mantuvo con halotano de 0.5 a 1.5% en una mezcla de oxígeno al 50% y aire al 50%. Un catéter intravenoso (calibre 22) fue colocado en la vena de la oreja izquierda. Se infusó lactato de inger a razón de 4 ml/kg peso corporal (bw) por hora durante la intervención quirúrgica. Preoperativamente, se administró en forma intravenosa cefazolina 10 mg/kg de peso corporal para profilaxis de la infección. Los animales fueron 175 colocados en la posición de decúbito lateral derecho, la piel fue preparada con povidona yodo, infiltrada con bupivacaina (0.25%) y se efectuó una incisión cutánea en el flanco de forma paralela a la espina dorsal al nivel de la 12a costilla. Después de la incisión de la piel y fascia toracolumbar subcutánea, los músculos longissimus lumborum e iliocostalis lumborum presentaron retracción. La aorta abdominal fue expuesta a través de un enfoque retroperitoneal izquierdo y movilizada justo debajo de la arteria renal izquierda. Un pedazo de tubería PE-60 fue colocado en forma de bucle alrededor de la aorta inmediatamente distal con relación a la aorta renal izquierda y ambos extremos pasaron a través de un tubo de hule de mayor tamaño. Jalando la tubería de PE, la aorta fue cerrada de manera no traumática durante 20 minutos. Se administró heparina (400 UI) en un bolo intravenoso antes de la inclusión aórtica. Después de 20 minutos de oclusión, se removieron el tubo y el catéter, la incisión fue cerrada y los animales fueron monitoreados hasta una recuperación completa y después evaluados en serie para función neurológica. Treinta y seis animales fueron divididos aleatoriamente en seis grupos. En un grupo de control (I), los animales (n = 6) recibieron una solución salina normal intravenosa inmediatamente después de la liberación de oclusión aórtica. El grupo (II) recibió rhEPO @ 6.5 microgramo/kg de peso 176 corporal; el grupo (III) recibió una citocina protectora de tejido (eritropoyetina carbamilada) @ 6.5 microgramos/kg de peso corporal; el grupo (IV) recibió otra citocina protectora de tejido (asialoeritropoyetina) @ 6.5 microgramos/kg de peso corporal; el grupo (V) recibió la misma citocina protectora de tejido que el grupo (IV) pero @ 20 microgramos/kg de peso corporal; y el grupo (VI) recibió otra citocina protectora de tejido (eritropoyetina asialocarbamilada) @ 20 microgramos/kg de peso corporal, todas de manera intravenosa inmediatamente después de la reperfusión (n = 67 para cada grupo) . La función motriz fue evaluada de conformidad con los criterios de Drummond y Moore por un investigador ciego en cuanto al tratamiento 1,24 y 48 horas después de la reperfusión, ün resultado de 0 a 4 fue asignado a cada animal de la manera siguiente: 0 = parapléjico sin evidencia de función motriz en las extremidades inferiores; 1 = función motriz limitada en las extremidades inferiores, movimiento antigravedad débil solamente; 2 = función moderada de las extremidades inferiores con buena resistencia antigravedad, pero inactividad para jalar las patas debajo del cuerpo; 3 = excelente función motriz con capacidad de jalar las patas debajo del cuerpo y saltar, pero no normalmente; 4 = función motriz normal. La vejiga urinaria fue evacuada manualmente en animales parapléjicos dos veces al día. La Figura 22 es una gráfica que muestra la función motriz de 177 los conejos en recuperación. La gráfica demuestra que aún durante un lapso de tiempo de solamente dos días, la eritropoyetina y las citocinas protectoras de tejido de la presente invención permiten la recuperación más completa de los conejos de la lesión de la médula espinal. Se podrían esperar resultados semejantes del tratamiento terapéutico con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. EJEMPLO 12 EFECTOS ANTI-INFLAMATORIOS DE LA ERITROPOYETINA Estudios in vivo: 1. Estudios de oclusión de arteria cerebral media MCAO en Ratas Ratas machos Crl:CD(SD)BR con un peso comprendido entre los 250 y los 280 g se obtuvieron de Charles River, Calco, Italia. Se efectuó una intervención quirúrgica en estas ratas de conformidad con las enseñanzas de Brines, M.L., Ghjezzi, P., Keenan, S., Agnello, D., de Lanerolle, N. C, Cerami, C, Itri, L. M., y Cerami, A. 2000 Erythropoietin crosses the blood-brain barrier to protect against experimental brain injury [La eritropoyetina atraviesa la barrera hematoencefálica para proteger contra lesión cerebral experimental], Proc. Nati. Acad. Sci. USA 97:10526-10531. En resumen, las ratas fueron anestesiadas con hidrato cloral (400 mg/kg de peso corporal, i.p.), las arterias carótidas fueron visualizadas, y la carótida derecha fue ocluida con dos suturas y cortadas. Un 178 orificio de perforación adyacente y rostral con relación a la órbita derecho emitió una visualización de MCA, que fue cauterizado distal con relación a la arteria rinal. Para producir una penumbra (zona de borde) que rodea esta lesión de MCA fija, la arteria carótida contralateral fue ocluida durante 1 hora mediante la utilización de tracción proporcionada por un fórceps fino y después re-abierta. Se administró PBS o rhEPO (5,000 U/kg de peso corporal, i.p.; se había demostrado previamente que era protector en este modelo (1) ) inmediatamente después de MCAO. Cuando se indicó, se cuantificaron TNF e IL-6 en homogenados de corteza cerebral de conformidad con lo previamente descrito (8) . Se midió MCP-1 en los homogenados utilizando un kit ELISA comercialmente disponible (biosource, Camarillo, CA) . Veinticuatro horas después de MCAO, las ratas fueron anestesiadas de conformidad con lo descrito arriba y sometidas a perfusión transcardialmente con 100 mi de solución salina seguida por 250 mi de una solución de paraformaldehído al 4% amortiguada con fosfato de sodio. Los cerebros fueron rápidamente removidos, fijados en una solución de paraformaldehído al 4% amortiguada por fosfato de sodio, transferidos a una solución de sucrosa al 20% en PBS durante la noche, y después en una solución de sucrosa al 30% hasta que se hundieran y fueron subsiguientemente congelados en 2-metilbutano a una temperatura de -45°C. Secciones (30 179 µ?a) fueron cortadas en un criostato (HM 500 OM, Microm) a -20°C en el plano transversal a través del cerebro y se seleccionó cada quinta sección para histoquímica contra los diferentes antígenos, o bien tinción por hematoxilina-eosina. Secciones de flotación libre fueron procesadas para inmuno-reactividad tanto con anticuerpo monoclonal de ratón anti proteina de ácido fibrilar glial (GFAP) (1:250, Boehringer Mannheim, Monza, Italia) como con anticuerpo monoclonal de ratón anti-cdllb (MRC OX-42) (1:50, Serotec, Reino Unido), de conformidad con los protocolos descritos por Houser y colaboradores y el protocolo del fabricante, respectivamente. Todas las secciones fueron montadas para microscopía de luz en solución salina en platinas revestidas, deshidratadas a través de alcoholes clasificados, fijadas en xileno y cubiertas empleando un montante DPX cubierto (BDH, Poole, Reino Unido) . Secciones adyacentes fueron teñidas con hematoxilina-eosina de conformidad con lo descrito en (10) . La Figura 23 muestra una sección coronal de la capa de corteza cerebral teñida con hematoxilina y eosina. Una rata de control (A) , rata isquémica tratada con PBS (B) , rata isquémica tratada con rhEPO (5,000 U/kg de peso corporal, i.p., inmediatamente después de MCAO) (C) . La sección B muestra una disminución notable de la tinción tisular lo que es consistente con inflamación, acompañada por una pérdida de componente neuronal en comparación con el control (A) . La 180 administración, sistémica de rhEPO reduce en gran medida el daño isquémico localizando la muerte celular o lesión en un área restringida (C) . (Amplificación 2.5x. Barra de tamaño = 800 um) . La Figura 24 muestra secciones coronales de corteza frontal adyacente a la región de infarto teñida por anticuerpo GFAP. Rata de control (A) , rata isquémica tratada con PBS (B) , y rata isquémica tratada con rhEPO (C) . Los astrocitos activados son visualizados por sus procesos positivos para GFAP (Panel B) . Obsérvese la reducción notable del número así como de la intensidad de tinción en un animal representativo tratado con rhEPO (Panel C) . (Amplificación lOx. Barra de tamaño = 200 um) . La Figura 25 muestra secciones coronales de capa de corteza cerebral teñida por anticuerpo OX-42. Rata isquémica tratada con PBS (A) , y rata isquémica tratada con rhEPO (B) . En el hemisferio cerebral isquémico, la tinción celular es especialmente prominente alrededor del tejido infartado en ambos grupos de tratamiento, pero es mucho más densa y se extiende adicionalmente en el grupo tratado con solución salina. (Amplificación 20x; Barra de tamaño = 100 um) . La Figura 26 muestra secciones coronales de capa de corteza cerebral adyacente a la región de infarto teñido por anticuerpo OX-42. Una densidad mucho mayor de las células inflamatorias mononucleares se observa en el tejido a partir 181 de una rata isquémica tratada con PBS (A) en comparación en una rata isquémica tratada con rhEPO (B) . Los leucocitos que se están infiltrando, con forma redonda típica, extenderán potencialmente el volumen de infarto. (Amplificación lOx; Barra de tamaño = 200 um) . Resultados similares pueden esperarse del tratamiento terapéutico con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. 2. Encefalomielitis Alérgica Experimental Aguda (EAE) en ratas Le is Ratas Lewis hembras, de 6 a 8 semanas de edad, fueron compradas en Charles River (Calco, Italia) . Se indujo EAE en ratas mediante la inyección de 50 ]ig de MBP de conejillo de la india (Sigma, St. Louis, MO) en agua emulsificada en volúmenes iguales de adyuvante completo de Freund (CFA, Sigma) adicionado con 7 mg/ml de M. tuberculosis H37Ra (Difco, Detroit, MI) muerto con aplicación de calor en un volumen final de 100 µ bajo anestesia ligera con éter en ambos cojinetes de patas posteriores. Las ratas fueron examinadas en forma ciega para signos de EAE y calificadas de la siguiente manera: 0, ausencia de enfermedad, 1, cola flácida, 2, ataxia; 3, parálisis completa de las patas posteriores con incontinencia urinaria. Empezando desde el 3er día después de la inmunización, las ratas recibieron r-Hu-EPO (EPOetin alfa, Procrit, Ortho Biotec , Raritan, NJ) en 182 forma intraperitoneal (i.p.) una vez al día en las dosis indicadas, en PBS. Puesto que la albúmina sérica humana contenía EPO de grado clínico, los animales de control recibieron siempre PBS que contenía una cantidad idéntica de albúmina sérica humana. La administración diaria de 5,000 ü/kg peso corporal de EPO incrementó el nivel de hematócritos en 30%. Cuando se indicó, ratas fueron inyectadas s.c. una vez al día desde el día 3 hasta el día 18 con 1.3 mg/kg de peso corporal de sal disódica de fosfato de dexametascna (DEX) (Sigma) que corresponde a 1 mg/kg de peso corporal de DEX, disuelto en PBS. Cuando se indicó, se cuantificaron TNF e IL-6 en homogenados de cerebro y médula espinal de conformidad con lo previamente descrito [Agnello, 2000 #10] . La Figura 27 muestra el efecto de protección sobre los signos clínicos de Ei¾E de diferentes dosis de EPO, administradas desde el día 3 después de la inmunización con MBP hasta el día 18. EPO, en forma dependiente de la dosis, retardó el inicio de la enfermedad y disminuyó la severidad de la enfermedad. Pero no retardó el tiempo hasta la mayor severidad. En experimentos en donde el tratamiento de EPO fue discontinuado después de la regresión de la enfermedad y en donde las ratas fueron monitoreadas hasta durante dos meses, no se observó ninguna recaída, en contraste con DEX que induce una exacerbación de la enfermedad después de la 183 suspensión de su administración (Figura 28) . Resultados semejantes podrían esperarse del tratamiento terapéutico con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. Estudios in Vitro Cultivos primarios de células gliales fueron preparados a partir de ratas Sprague-Dawley recién nacidas de 1-2 día de edad. Los hemisferios cerebrales fueron liberados de las meninges y perturbados mecánicamente. Las células fueron dispersadas en una solución de tripsina al 2.5% y DNAasa al 1%, filtradas a través de una maya de nylon de 100 µ y colocadas en placas (140,000 células por plato de 35 mm) en medio esencial mínimo de Eagle suplementado con 10% de suero fetal de becerro, 0.6% de glucosa, estreptomicina (0.1 mg/ml) y penicilina (100 Ul/ml) . Cultivos gliales fueron alimentados dos veces por semana y cultivados a 37 °C en un incubador humidificado con C02 al 5%. Todos los experimentos fueron efectuados en cultivos de células gliales de 2-3 semanas de edad con 97% de astrocitos y 3% de microglia, de conformidad con lo evaluado por inmunoquímica de GFAP y Griffonia simplicifolia isolectina B . Los cultivos neuronales fueron establecidos a partir del hipocampo de fetos de rata de 18 días. Los cerebros fueron removidos y liberados de las meninges y se aisló el hipocampo. Las células fueron dispersadas por incubación durante 15-20 minutos a 37 °C en una solución de tripsina 2.5% seguida por titulación. La 184 suspensión de las células fue diluida en el medio utilizado para células gliales y las células fueron colocadas en placas en cubreobjetos revestidos con poliornitina a una densidad de 160,000 células por cubreobjetos. El día después de la colocación en placas, los cubreobjetos fueron transferidos a platos que contenían una monocapa glial en medio de mantenimiento de neuronas (medio Eagle modificado por Dulbecco y una mezcla de nutriente de Ham F12 suplementada con 5 um/ml de insulina, 100 g/ml de transferina, 100 µg/ml de putrescina, 30 nM de Na selenite, 20 nM de progesterona y penicilina 100 U/ml) suplementado con citocina arabinósido 5 uM. Los cubreobjetos fueron invertidos de tal manera que las neuronas hipocampales hicieran frente a la monocapa glial. Puntos de parafina se adhieren a los cubreobjetos soportándolos arriba de la capa glial, creando un espacio angosto que evitó que los dos tipos de células entraran en contacto entre ellas, pero permitió la difusión de sustancias solubles . Estas condiciones de cultivo permitieron el crecimiento de cultivos neuronales diferenciados con una homogeneidad mayor al 98%, de conformidad con lo evaluado por inmunoquímica de proteína asociada con microtúbulos 2 y GFAP. Las células fueron después tratadas durante 24 horas con Trimetil estaño (TMT) 1 um, en presencia o ausencia de rhEPO (10 U/ml), los sobrenadantes fueron utilizados para ensayo TNF y la viabilidad celular fue evaluada de conformidad con 185 lo descrito abajo. Cuando se indicó, células gliales fueron cultivadas en presencia de LPS durante 24 horas, con o sin rhEPO, y se midió TNF en los sobrenadantes cultivados. La viabilidad celular fue medida por el ensayo de bromuro de 3-(4, 5-dimetil~tiazol-2-il) -2, 5-difeniltetrazolio (MTT) .

Denizot, F., y Lang, R. 1986. Rapid colorimetric assay for cell growth and survival . Modifications to the tetrazolium dye procedure giving improved sensitivity and reliability [ensayo calorimétrico rápido para crecimiento celular y supervivencia. Modificaciones al procedimiento de colorante de tetrazolio proporcionando sensibilidad y conflabilidad me oradas]. J. Immunol. Methods 89:271-277. En resumen la sal de MTT tetrazolio fue disuelta en medio libre de suero a una concentración final de 0.75 mg/ml y se agregó las células al final del tratamiento durante 3 horas a 37 °C. El medio fue después removido y el formazano fue extraído con 1N HCl : risopropanol (1:24). Se leyó la absorbencia a 560 nm en un lector de microplacas. La Figura 29 muestra que rhEPO evita la producción de TNF inducida por muerte neuronal en cultivos mixtos neuronas-gliales. Panel A: Porcentaje de muerte de células neurales inducidas por TMT 1 uM sin o con tratamiento con rhEPO (10 U/ml) . Panel B: Liberación de TNF-a a partir de células gliales expuestas a TMT 1 uM en presencia (barras sombreadas) o ausencia (barras llenas) de neuronas, con o sin rhEPO (10 186 ü/ml) . Resultados semejantes podrían esperarse del tratamiento terapéutico con las citocinas protectoras de tejido de la presente invención. La invención no se limita en cuanto a su alcance a las modalidades específicas descritas que se contemplan como ilustraciones particulares de aspectos individuales de la invención, y métodos y componentes funcionalmente equivalentes están dentro del alcance de la invención. De hecho varias modificaciones de la invención, además de las mostradas y descritas aquí serán aparentes a las personas con conocimientos en la materia a partir de la descripción anterior y de los dibujos adjuntos. Tales modificaciones caen dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Todas las referencias mencionadas aquí se incorporan por referencia en sus totalidades y para todos los propósitos. 187 LISTADO DE SECUENCIAS <110> The Kenneth S. Warren Institute, Inc. <120> CITOCINAS PROTECTORAS DE TEJIDO PARA LA PROTECCIÓN, RESTAURACIÓN MEJORA DE CELOLAS, TEJIDOS Y ORGANOS RESPONDEDORES <130> 10165-026-228 <140> <141> <150> 10/188, 905 <151> 2002-07-03 <160> 4 <170> Patentln versión 3.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Descripción de la Secuencia Artificial: Dominios Funcionales <400> 1 Val Leu Gln Arg Tyr 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Descripción de la Secuencia Artificial: Dominios Funcionales <400> 2 Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Descripción de" la Secuencia Artificial: Dominios Funcionales <400> 3 Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Descripción de la Secuencia Artificial: Dominios Funcional' <400> 4 Ser Asn Phe Leu Arg Gly 1 5

Claims (1)

189 REIVINDICACIONES Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido; por lo menos un agente anti-inflamatorio; y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1, en donde el agente anti-inflamatorio se selecciona dentro del grupo que consiste de corticosteroides, glucocorticoides, esteroides, fármacos anti-inflamatorios no esferoides, beta-agonistas, agentes anti-colinérgicos, metil xantinas, inyecciones de oro, sulfasalazina, penicilamina, agentes anti-angiogénicos, dapsona, psoralenos, agentes anti-malaria, agentes antivirales, y antibióticos. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido, por lo menos un agente inmunomodulador; y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, en donde el agente anti-inflamatorio se selecciona dentro del grupo que consiste de metotrexato, leflunomida, ciclofosfamida, citoxano, Immuran, ciclosporina A, minociclina, azatioprina, antibióticos, metilprednisolona, corticosteroides, esteroides, micofenolato mofetil, rapamicina, 190 mizoribina, desoxispergualina, brequinar, malononitriloamidas, moduladores de receptores de células T, y moduladores de receptores de citocina. Una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 ó 3, en donde dicha citocina protectora de tejido se selecciona dentro del grupo que consiste de i) una eritropoyetina que no tiene porciones de ácido siálico; ii) una eritropoyetina que no tiene carbohidratos enlazados con N o carbohidratos enlazados con O; iii) una eritropoyetina que tiene un contenido reducido de carbohidrato por tratamiento de una citocina nativa con por lo menos un glicosidasa; iv) una eritropoyetina que tiene por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados; v) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados, la cual es químicamente reducida; vi) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de arginina modificados; vii) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de lisina modificados o una modificación del grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina; viii) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de tirosina modificado; ix) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de ácido aspártico o ácido glutámico modificado; x) una 191 eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de triptófano modificado; xi) una eritropoyetina que tiene por lo menos un grupo amino removido; xii) una eritropoyetina que comprende por lo menos una abertura de por lo menos uno de los enlaces de cistina en la molécula de eritropoyetina; y xiii) una eritropoyetina truncada . Un método para el tratamiento de inflamación en un mamífero que comprende células, tejidos y/u órganos respondedores, dicho método comprende la administración a un mamífero de una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de tejido y un vehículo farmacéuticamente aceptable. El método de conformidad con la reivindicación 6, en donde la citocina protectora de tejido no tiene por lo menos una actividad seleccionada dentro del grupo que consiste de niveles incrementados de hematócritos, vasoconstricción, hiperactivación plaquetaria, actividad pro-coagulante y producción incrementada de trombocitos . Un método para el tratamiento de la inflamación en un mamífero que comprende células, tejidos y/u órganos respondedores, dicho método comprende la administración a un mamífero que lo requiere de una composición 192 farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocxna protectora de tejido y un vehículo farmacéuticamente aceptable, y la administración al mamífero de una cantidad profiláctica o terapéuticamente efectiva de uno o varios agentes anti-inflamatorios o agentes inmunomoduladores. El método de conformidad con la reivindicación 8, en donde el agente anti-inflamatorio se selecciona dentro del grupo que consiste de un corticosteroide, un glucocorticoide, un esferoide, un fármaco antiinflamatorio no esferoide, un beta-agonista, un agente anti-colinérgico, una metil xantina, inyección de oro, sulfasalazina, penicilina, un agente anti-angiogénico, dapsona, psoraleno, un agente anti-malaria, un agente antiviral, y un antibiótico. El método de conformidad con la reivindicación 8, en donde el agente inmunomodulador se selecciona dentro del grupo que consiste un agente proteináceo, un mimético de péptido, un anticuerpo, una molécula de ácido nucleico, una molécula pequeña, un compuesto orgánico, un compuesto inorgánico, metotrexato, leflunomida, ciclofosfamida, citoxano, Immuran, ciclosporina A, minoclina, azatioprina, antibiótico, metilprednisolona (MP) , un corticosteroide, esferoide, micofenolato mofetil, rapamicina, mizoribina, 193 desoxispergualina, brequinar, una malononitriloamida, un modulador de receptor de células T, y un modulador de receptor de citocina. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es i) una eritropoyetina que no tiene porciones de ácido siálico; ii) una eritropoyetina que no tiene carbohidratos enlazados con N o enlazados con 0; iii) una eritropoyetina que tiene un contenido reducido de carbohidrato por tratamiento de una eritropoyetina nativa con por lo menos un glicosidasa; iv) una eritropoyetina que tiene por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados; v) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados, la cual es químicamente reducida; vi) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de arginina modificados; vii) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de lisina modificados o una modificación del grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina; viii) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de tirosina modificado; ix) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de ácido aspártico o ácido glutámico modificado; x) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de 194 triptófano modificado; xi) una eritropoyetina que tiene por lo menos un grupo amino removido; xii) una eritropoyetina que comprende por lo menos una abertura de por lo menos uno de los enlaces de cistina en la molécula de eritropoyetina; y xiii) una eritropoyetina truncada . El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es asialoeritropoyetina o fenilglioxal-eritropoyetina. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde la citocina protectora de tejido puede atravesar una barrera de células endoteliales. El método de conformidad con la reivindicación 13 en donde la barrera de células endoteliales se selecciona dentro del grupo que consiste de barrera hemato-encefálica, barrera hemato-ocular, barrera hemato-testicular, barrera hemato-ovárica, y barrera hemato-uterina . El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde células, tejido y/u órganos respondedores en mamífero, que se selecciona dentro del grupo que consiste de células neuronales, células musculares, células de corazón, pulmón, hígado, riñon, intestino delgado, corteza adrenal, médula adrenal, células capilares, células endoteliales, células de testículos, 195 ovario, células endometriales, y células progenitoras . El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde las células de mamífero respondedoras comprenden además células seleccionadas dentro del grupo que consiste de células fotorreceptoras, células de ganglios, células bipolares, células horizontales, células amacrinas, células de Müeller, células de miocardio, células de marcapaso, células de nodo sinoatrial, células de nodo sinusal, células de nodo atrioventricular, fascículo de células His, células de hepatocito, células esteladas, células de Kupffer, células mesangiales, células de Goblet, células de glándula intestinal, células endocrinas entérales, células glomurolosas, células fasciculadas, células reticulares, células de cromafina, células de pericito, células de Leydig, células de Sertoli, células de esperma, células de folículo Grafiano, células de folículo primordial, células de estroma endometrial, y células endometriales. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una asialoeritropoyetina . El método de conformidad con la reivindicación 17, en donde dicha asialoeritropoyetina es asialoeritropoyetina humana. 196 19. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina sin carbohidratos enlazados N. 20. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina sin carbohidrato enlazado con O. 21. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina tratada con por lo menos una glicosidasa. 22. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina oxidada con periodato. 23. El método de conformidad con la reivindicación 22, en donde dicha eritropoyetina oxidada con periodato es químicamente reducida con cianoborohidruro de sodio. 24. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina que comprende una porción R-glioxal en un residuo de arginina o en varios residuos de arginina, en donde R es una porción arilo o alquilo. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, en donde dicha eritropoyetina es fenilglioxal- eritropoyetina . 26. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, 197 en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de arginina es modificado por reacción con una dicetona vecina selecciona dentro del grupo que consiste de 2,3- butandiona y ciclohexandiona. 27. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de arginina reacciona con 3-desoxiglucosona. 28. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una molécula de eritropoyetina que comprende por lo menos un grupo amino N-terminal o una lisina biotinilada. 29. El método de conformidad con la reivindicación 28, en donde dicha molécula de eritropoyetina es eritropoyetina biotinilada. 30. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una glucitolil lisina eritropoyetina o una fructosil lisina eritropoyetina. 31. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina que tiene por lo menos un residuo de lisina carbamilada. 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, en 198 donde dicha eritropoyetina carbamilada se selecciona dentro del grupo que consiste de alfa-N-carbamoileritropoyetina; N-epsilon-carbamoileritropoyetina; alfa-N-carbamoil, -epsilon-carbamoileritropoyetina; alfa-N-carbamoilasialoeritropoyetina; N-epsilon-carbamoilasialoeritropoyetina; alfa-N-carbamoil,N-epsilon-carbamoilasialoeritropoyetina; alfa-N-carbamoilhiposialoeritropoyetina; N-epsilon-carbamoilhiposialoeritropoyetina; y alfa-N-carbamoil, N-epsilon-carbamoilhiposialoeritropoyetina. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de lisina es acilado. El método de conformidad con la reivindicación 33, en donde un residuo de lisina de dicha eritropoyetina es acetilado . El método de conformidad con la reivindicación 34, en donde dicha eritropoyetina acetilada se selecciona dentro del grupo que consiste de alfa-N-acetileritropoyetina; N-epsilon-acetileritropoyetina; alfa-N-acetil, N-epsilon-acetileritropoyetina; alfa-N-acetilasialoeritropoyetina; N-epsilon-acetilasialoeritropoyetina; alfa-N-acetil,N-epsilon- 199 acetilasialoeritropoyetina; alfa-N- acetilhiposialoeritropoyetina; N-epsilon- acetilhiposialoeritropoyetina; y alfa-N-acetil,N- epsilon-acetilhiposialoeritropoyetina. 36. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina que comprende un residuo de lisina succinilado . 37. El método de conformidad con la reivindicación 36, en donde dicha eritropoyetina se selecciona dentro del grupo que consiste de alfa-N-succinileritropoyetina; N- epsilon-succinileritropoyetina; alfa-N-succinil, - epsilon-succinileritropoyetina; alfa-N- succinilasialoeritropoyetina; N-epsilon- succinilasialoeritropoyetina; alfa-N-succinil,N- epsilon-succinilasialoeritropoyetina; alfa-N- succinilhiposialoeritropoyetina; N-epsilon- succinilhiposialoeritropoyetina; y alfa-N-succinil, N- epsilon-succinilhiposialoeritropoyetina. 38. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina con por lo menos un residuo de lisina modificado por una sal de ácido 2,4,6- trinitrobencensulfónico . 39. El método de la reivindicación 38, en donde la sal es 200 2,4, 6-trinitrobencensulfonatü de sodio. 40. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina en la cual por lo menos un residuo de tirosina es nitrado y/o yodinado. 41. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde dicha citocina protectora de tejido es una eritropoyetina en la cual un residuo de ácido aspártico y/o ácido glutámico reacciona con una carbodiimida seguido por reacción con una amida. 42. El método de conformidad con la reivindicación 41, en donde dicha amina es glicinamida. 43. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde la inflamación resulta de una condición de enfermedad o trauma. 44. El método de conformidad con la reivindicación 43, en donde el trauma se selecciona dentro del grupo que consiste de angitis, bronquitis crónica, pancreatitis, osteomielitis, artritis reumatoide, glomerulonefritis, neuritis óptica, artritis temporal, encefalitis, meningitis, mielitis transversa, dermatomiositis, polimiositis, fasciitis necrotizante, hepatitis, y enterocolitis necrotizante. 45. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde la citocina protectora de tejido inhibe la 201 inflamación que resulta de las citocinas producidas por las células gliales . 46. El método de conformidad con la reivindicación 6 u 8, en donde la inflamación es activada por apóptosis. 47. El uso de una citocina protectora de tejido para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una inflamación en un mamífero que comprende células, tejidos y/u órganos respondedores. 48. El uso de la reivindicación 47, en donde la citocina protectora de tejido no tiene por lo menos una actividad seleccionada entre el grupo que consiste de niveles incrementados de hematócritos, vasoconstricción, hiperactivación plaquetaria, actividad pro-coagulante, y producción incrementada de trombocitos. 49. El uso de la reivindicación 47, en donde la inflamación resulta de condición de enfermedad o trauma. 50. El uso de la reivindicación 49, en donde el trauma es causado por un trastorno de ataque, esclerosis múltiple, apoplejía, hipotensión, paro cardiaco, isquemia, infarto del miocardio, pérdida de la función cognoscitiva relacionada con la edad, daño por radiaciones, parálisis cerebral, enfermedad neurodegenerativa, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Leigh, demencia por SIDA, 202 pérdida de memoria, esclerosis lateral amiotrófica, alcoholismo, trastorno del humor, trastorno de ansiedad, trastorno de déficit de atención, autismo, enfermedad de Creutzfeld-Jakob, trauma cerebral, trauma de la médula espinal, isquemia cerebral, isquemia de médula espinal, desvio cardiaco-pulmonar, insuficiencia cardiaca crónica, degeneración macular, neuropatía diabética, retinopatía diabética, glaucoma, isquemia retinal, o trauma retinal. El uso de una citocina protectora de tejido para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de la inflamación en un mamífero que comprende de células, tejidos y/u órganos respondedores, en donde la composición farmacéutica comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de una citocina protectora de te ido; por lo menos un agente antiinflamatorio o agente inmunomodulador; y un vehículo farmacéuticamente aceptable . El uso de la reivindicación 47, en donde dicha citocina protectora de tejido es i) una eritropoyetína que no tiene porciones de ácido siálico; ii) una eritropoyetína que no tiene carbohidratos enlazados con N o enlazados con O; iii) una eritropoyetína que tiene un contenido reducido de carbohidrato por tratamiento de una eritropoyetína nativa con por lo menos una 203 glicosidasa; iv) una eritropoyetina que tiene por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados; v) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios carbohidratos oxidados, la cual es químicamente reducida; vi) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de arginina modificados; vii) una eritropoyetina que comprende por lo menos uno o varios residuos de Usina modificados o una modificación del grupo amino N-terminal de la molécula de eritropoyetina; viii) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de tirosina modificado; ix) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de ácido aspártico o un residuo de ácido glutámico modificado; x) una eritropoyetina que comprende por lo menos un residuo de triptófano modificado; xi) una eritropoyetina que tiene por lo menos un grupo amino removido; xii) una eritropoyetina que comprende por lo menos una abertura de por lo menos uno de los enlaces de cisterna en la molécula de eritropoyetina; y xiii) una eritropoyetina truncada.