ES2224299T3 - Dispersion liposomal de eritroyetina. - Google Patents

Dispersion liposomal de eritroyetina.

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ES2224299T3
ES2224299T3 ES98103111T ES98103111T ES2224299T3 ES 2224299 T3 ES2224299 T3 ES 2224299T3 ES 98103111 T ES98103111 T ES 98103111T ES 98103111 T ES98103111 T ES 98103111T ES 2224299 T3 ES2224299 T3 ES 2224299T3
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Sandro Delmenico
Andre Wetter
Frank-Ulrich Flother
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Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A UNA FORMULACION BASADA EN UN LIPOSOMA DE ERITROPOIETINA QUE COMPRENDE: A) UNA CANTIDAD EFECTIVA DE UNA ERITROPOIETINA; B) UNA FASE LIPIDICA QUE COMPRENDE: I) LECITINA O LECITINA HIDROGENADA; II) OPCIONALMENTE, UN COMPUESTO DE LIPIDOS DE CARGA ELECTROPOSITIVA O ELECTRONEGATIVA; Y III) COLESTEROL O UN DERIVADO DEL MISMO SELECCIONADO ENTRE ESTERES DE COLESTEROL, DERIVADOS DE GLICOL DE POLIETILENO DEL COLESTEROL (PEG-COLESTEROLES), Y DERIVADOS DE ACIDOS ORGANICOS DE COLESTEROLES; Y C) UN NEUTRALIZADOR DE FOSFATO. LA FORMA DE DOSIFICACION PARENTERAL BASADA EN LOS LIPOSOMAS SE PREPARA POR MEDIO DE UNA TECNICA DE INYECCION DE ETANOL. LA COMPOSICION EVITA LA NECESIDAD DE UTILIZAR ALBUMINA DEL SUERO HUMANO Y EXHIBE UNA ESTABILIDAD SUPERIOR.

Description

Dispersión liposomal de eritropoyetina.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a una formulación de eritropoyetina a base de liposomas. En particular, la invención se refiere a una forma farmacéutica parenteral de eritropoyetina a base de liposomas preparada por medio de una técnica de inyección de etanol que muestra una estabilidad superior.
Antecedentes de la invención
La eritropoyetina (EPO) es una glucoproteína que hace la función del principal factor implicado en la regulación de la síntesis de los eritrocitos. La eritropoyetina se produce en el riñón y actúa estimulando a las células precursoras en la médula ósea, provocando que se dividan y se diferencien en eritrocitos maduros. La glucoproteína de 165 aminoácidos producida de un modo recombinante ha estado disponible durante algún tiempo como un agente terapéutico eficaz en el tratamiento de diversas formas de anemia, incluyendo las anemias asociadas con la insuficiencia crónica renal, con los pacientes infectados con VIH tratados con zidovidina, y con los pacientes con cáncer en quimioterapia. La glucoproteína se administra parenteralmente, o bien como una inyección intravenosa (IV) o bien subcutánea (SC).
Actualmente, las formulaciones parenterales en uso son soluciones acuosas tamponadas y estériles ordinarias para la inyección IV o SC, que contienen seroalbúmina humana (HSA) como vehículo. Tales formulaciones se comercializan en los Estados Unidos con los nombres comerciales de EPOGEN® y PROCRIT®. Estos productos contienen eritropoyetina en una dosis única de 1 ml, sin conservantes o en viales de 2 ml de dosis múltiples con conservantes.
Aunque se ha comprobado que estas formulaciones son muy exitosas, ciertas desventajas están asociadas con el uso de la seroalbúmina humana como vehículo. Como la HSA se obtiene a partir de fuentes naturales puede ser un peligro potencial como vehículo de agentes de enfermedades infecciosas tales como VIH o hepatitis y debe realizarse un análisis cuidadoso del material. Además, la disponibilidad de HSA de la calidad apropiada puede ser un problema frecuentemente. Por tanto, hay una necesidad de una formulación inyectable de eritropoyetina que elimine el uso de HSA como vehículo.
De acuerdo con esto, se han hecho tentativas para proporcionar una formulación mejorada de eritropoyetina que elimine el uso de HSA como vehículo. Al mismo tiempo, la formulación debe ser estable y proporcionar una semivida ampliada. Además, la formulación debe evitar los problemas asociados con la adherencia del ingrediente activo a la superficie del vial en el que está contenido.
Los liposomas son pequeñas vesículas que comprenden lípidos anfipáticos dispuestos en bicapas esféricas. Los liposomas pueden contener muchas bicapas lipídicas concéntricas separadas por canales acuosos (vesículas multilamelares o MLV) o, alternativamente, pueden contener una única bicapa membranosa (vesículas unilamelares), que pueden ser vesículas unilamelares pequeñas (SUV) o vesículas unilamelares grandes (LUV). La bicapa lipídica está compuesta de dos monocapas lipídicas que tienen una región hidrófoba a modo de "cola" y una región hidrófila a modo de "cabeza". En la bicapa membranosa, las "colas" hidrófobas de las monocapas lipídicas se orientan hacia el centro de la bicapa, mientras que las "cabezas" hidrófilas se orientan hacia la fase acuosa.
Los liposomas pueden usarse para encapsular una diversidad de sustancias atrapando los compuestos hidrófilos en el interior acuoso o entre las bicapas, o atrapando los compuestos hidrófobos dentro de la bicapa. Como tales, son particularmente útiles para liberar sustancias biológicamente activas encapsuladas o compuestos que muestren una pobre solubilidad acuosa o que muestren una toxicidad inaceptable a las dosis terapéuticas.
Un método específico para la producción de liposomas con sólo una doble capa se describe en el documento EP 253619. Se conocen hace años las formulaciones a base de liposomas de diversos agentes activos y se han propuesto preparaciones de liposomas de eritropoyetina. Por ejemplo, Maitani y col., J. Pharm. Sci., 85: 440-445 (1996) describen formulaciones de eritropoyetina a base de liposomas destinadas a la administración oral en las que los liposomas se preparan mediante el método de evaporación de fase inversa para vesículas. Puesto que esta formulación está destinada a la administración oral, se prefiere un alto porcentaje de incorporación de EPO en los liposomas. Sin embargo, las formulaciones como éstas que muestran una alta velocidad de encapsulación en vesículas pequeñas pueden mostrar concentraciones en el hígado, que conducen a toxicidad. Además, los procedimientos de fabricación usados requieren materias primas especiales (por ejemplo, fosfolípidos con poliglicerina) y el uso de disolventes orgánicos. Adicionalmente, el procedimiento de fase inversa usado con esto sufre de una pérdida alta de EPO sin encapsular, lo que es caro y no deseable.
Se conoce una eritropoyetina que contiene una composición de liposomas (administrada subcutáneamente a ratas) del documento JP0231417. Dicha composición comprende, aparte de la eritropoyetina, al menos una de la lecitina, cefalina y esfingomielina naturales o sintéticas y, opcionalmente, esteroles y/o glucósidos de esteroles. Realmente, lo que se describe es una composición que comprende fosfatidilcolina de dipalmitoilo y esterol de soja así como los disolventes CHCl_{3}, (i-Pr) y solución salina tamponada con fosfato. La eritropoyetina se añade antes de la formación de los liposomas.
El documento US 5.569.464 describe una dispersión acuosa que contiene liposomas con fármacos encapsulados en dichos liposomas. Dicha composición de liposomas comprende el fármaco encapsulado, lecitina de vitelo o lecitina de soja, un aditivo formador de membranas seleccionado entre esteroles, aminas alifáticas y ácidos grasos, y un ácido hidroxílico así como un ácido amínico.
Por tanto, el objetivo de la presente invención fue proporcionar una formulación parenteral adecuada para la EPO, que evitara el uso de HSA como vehículo, que proporcionara una estabilidad aceptable a largo plazo para una semivida ampliada, y que pudiera ser fabricada por medio de un procedimiento apreciado en la fabricación a gran escala.
Resumen de la invención
Una composición parenteral a base de liposomas que comprende:
(a)
una cantidad eficaz de un ingrediente activo que comprende eritropoyetina o sus derivados farmacéuticamente aceptables que tiene la propiedad biológica de provocar que las células de la médula ósea incrementen la producción de reticulocitos y eritrocitos;
(b)
una fase lipídica que comprende:
(i)
lecitina o lecitina hidrogenada;
(ii)
un compuesto lipídico cargado eléctricamente positiva o negativamente; y
(iii)
colesterol o un derivado del mismo seleccionado entre ésteres de colesterol, derivados polietilenglicolados de colesterol (PEG-colesteroles), y derivados ácidos orgánicos de colesteroles; y
(c)
una solución acuosa tamponada.
De acuerdo con la invención, la composición comprende liposomas con bicapa única hechos preparando una solución alcohólica de la fase lipídica e inyectando la solución a presión en una solución acuosa tamponada contenida en un homogeneizador de alta velocidad. Los liposomas preparados de este modo se incuban con el ingrediente activo de eritropoyetina para formar la dispersión de liposomas de la invención.
El ingrediente activo es eritropoyetina y sus derivados que tiene la propiedad biológica de provocar en las células de la médula ósea el incremento de la producción de reticulocitos y eritrocitos. La glucoproteína EPO puede obtenerse a partir de fuentes naturales o producirse de un modo recombinante usando los procedimientos conocidos como se describen en las patentes de Estados Unidos 4.703.008, 5.441.868, 5.547.933, 5.618.698 y 5.621.080.
De acuerdo con la presente invención, se ha descubierto, bastante inesperadamente, que las composiciones a base de liposomas de EPO preparadas en las condiciones suaves descritas en el presente documento muestran una estabilidad mejorada, es decir, los liposomas por sí mismos son estables y, al mismo tiempo, la degradación química y la agregación de la sustancia biológicamente efectiva se reducen al mínimo. Como ventaja adicionalmente inesperada, el ingrediente activo de EPO no se adhiere a la superficie del vial que la contiene o a los tubos de IV incluso aunque la EPO no esté incorporada sustancialmente dentro de los liposomas, pero en cambio esté contenida esencialmente en el fluido intersticial en forma de una dispersión de liposomas.
Descripción detallada
El ingrediente activo usado en la presente invención es eritropoyetina y sus derivados que tiene la propiedad biológica de provocar en las células de la médula ósea el incremento en la producción de reticulocitos y eritrocitos. La dispersión de liposomas de la presente invención es útil como formulación parenteral para tratar trastornos de la sangre caracterizados por una producción de eritrocitos baja o insuficiente tales como diversas formas de anemia, incluyendo las anemias asociadas con la insuficiencia crónica renal, con los pacientes infectados con VIH tratados con zidovidina, y con los pacientes con cáncer en quimioterapia. También puede tener aplicación en el tratamiento de una diversidad de estados de enfermedad, trastornos y estados de irregularidad hematológica tales como la anemia drepanocítica, \beta-talasemia, fibrosis quística, trastornos del embarazo y menstruales, anemia temprana de los prematuros, lesiones de la médula espinal, vuelos espaciales, pérdida aguda de sangre, envejecimiento y similares. La composición de EPO de la presente invención se administra parenteralmente (por ejemplo, IV, IM, SC o IP). Se espera que las dosis eficaces varíen considerablemente dependiendo de la dolencia a ser tratada y de la ruta de administración pero se espera que estén en el intervalo de 0,1 (\sim7 U) a 100 (\sim7000 U) \mug / kg de peso corporal de la sustancia activa. La dosis preferida para el tratamiento de las dolencias anémicas es, aproximadamente, 50 a, aproximadamente, 300 unidades / kg, tres veces a la semana.
Las dispersiones a base de liposomas de EPO de la presente invención contienen, generalmente, de, aproximadamente, 200.000 unidades a, aproximadamente, un millón de unidades de la glucoproteína EPO por 100 g de composición. El ingrediente activo de EPO se dispersa en una suspensión de liposomas formada a partir de
(a)
una fase lipídica que comprende:
(i)
lecitina o lecitina hidrogenada;
(ii)
un compuesto lipídico cargado eléctricamente positiva o negativamente; y
(iii)
colesterol o un derivado del mismo seleccionado entre ésteres de colesterol, derivados polietilenglicolados de colesterol (PEG-colesteroles) y derivados ácidos orgánicos de colesteroles; y
(b)
una solución acuosa tamponada.
Tal formulación, producida, de un modo particular, de acuerdo con el procedimiento descrito en el documento EP0253619, que se incorpora en el presente documento como referencia, muestra características que la hacen un sustituto adecuado de las composiciones que contienen HSA de la técnica anterior.
La lecitina puede usarse como lecitina natural en la forma purificada o bien, preferentemente, como la más estable lecitina hidrogenada, porque el uso de la última permite una reducción de la concentración de los agentes de estabilización. Generalmente, el componente de lecitina está presente en una cantidad de, aproximadamente, 0,5 a 5,0 g por 100 g de composición. Preferentemente, la lecitina hidrogenada debe ser de buena calidad sin niveles detectables de catálisis que pueden influir en la estabilidad de la EPO y de los liposomas de una manera negativa.
El colesterol se emplea como agente de estabilización de los liposomas en cantidades que varían de 0,1 a 1,0 g por 100 g de composición. Además del colesterol, pueden emplearse otros derivados de colesterol tales como ésteres de colesterol, derivados polietilenglicolados de colesterol (PEG-colesteroles), así como derivados ácidos orgánicos de colesteroles, por ejemplo, hemisuccinato de colesterol.
El lípido electropositivo o electronegativo es un compuesto lipídico que tiene un componente cargado positiva o negativamente. Los lípidos electropositivos son la amina oleílica o la amina estearílica. Los lípidos electronegativos son los ácidos oleicos, ácidos fosfatídicos tales como ácido fosfatídico de dipalmitoilo (DPPA), dipalmitoilglicerol (DPPG), ácido fosfatídico de diestearoilo (DSPA), o ácido fosfatídico de dimiristoilo (DMPA). El uso de tales lípidos cargados proporciona liposomas cargados que garantizan una dispersión opalescente que impide la sedimentación de los liposomas. Como se indica, el resultado es bastante inesperado ya que la glucoproteína de eritropoyetina activa no se adhiere a las paredes de vidrio del recipiente o a los tubos de silicona para su administración aunque el ingrediente activo no esté incorporado dentro de los liposomas pero exista simplemente como una dispersión con los liposomas cargados.
Generalmente, se incluye en la composición un componente alcohólico que comprende un alcanol inferior de uno a seis átomos de carbono, tal como metanol, etanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol y similares en cantidades que varían de 0,5 a, aproximadamente, 5,0 g por 100 g de composición, preparado usando la técnica de inyección de etanol. El etanol es el preferido.
El componente acuoso tamponado se selecciona entre las sales ácidas típicas usadas ordinariamente como tampones en las composiciones parenterales. Los ejemplos incluyen los citratos, acetatos y fosfatos. Un tampón de fosfato es el preferido. Los ejemplos incluyen dihidrogenofosfato sódico dihidratado o hidrogenofosfato disódico dihidratado, y mezclas de los mismos. Preferentemente, se usa una mezcla de dihidrogenofosfato sódico dihidratado e hidrogenofosfato disódico dihidratado en cantidades que varían de 0 a 2,0 g / 100 g.
Opcionalmente, puede añadirse a la composición un estabilizante tal como la glicina para impedir la formación de agregados. Sin embargo, en la mayoría de los casos tales estabilizantes no son necesarios porque los liposomas actúan como estabilizantes así como vehículos en la composición.
Las composiciones a base de liposomas de la presente invención se preparan aplicando los métodos conocidos en la técnica para la fabricación de composiciones de liposomas descrita en el documento EP 253619, que se incorpora en el presente documento como referencia. En este método, se preparan liposomas con bicapa única preparando una solución etanólica de un fosfolípido y el ingrediente activo e inyectando la solución a presión en una solución acuosa tamponada contenida en un homogeneizador de alta velocidad. Los liposomas se forman espontáneamente proporcionando liposomas que tienen un diámetro de menos de 1 \mum. En particular, de acuerdo con el método de la presente invención, los liposomas se fabrican formando una solución acuosa tamponada en agua pura. Separadamente, se disuelven la lecitina, el colesterol y el componente lipídico cargado en una solución alcohólica tal como etanol. La solución acuosa se conecta a un homogeneizador de alta resolución para efectuar la circulación y la solución alcohólica se inyecta directamente en el homogeneizador. Se forman espontáneamente liposomas de menos de 1 \mum. Los liposomas formados de este modo se incuban, seguidamente, con el ingrediente activo de EPO para formar una dispersión de liposomas de la invención.
Para conseguir una dispersión de liposomas transparente que tenga liposomas con un diámetro bien definido, es preferible hacer pasar los liposomas a través de filtros con poros de, aproximadamente, 0,05-0,08 mm, lo que da como resultado liposomas con un diámetro de aproximadamente 80-100 nm. Esta etapa adicional de selección de tamaño de partículas se utiliza para garantizar una solución transparente para detectar fácilmente cualquier agregación y para ampliar el tiempo de circulación en la sangre.
Tal como se indica anteriormente, las composiciones de eritropoyetina que están atualmente en el mercado tienen estabilizantes tales como Tweens, aminoácidos, etcétera, o se guardan liofilizadas para mantener la estabilidad y tienen una semivida limitada. Se ha encontrado que las composiciones de liposomas de la presente invención muestran una estabilidad excelente, es decir, los liposomas por sí mismos son estables y, al mismo tiempo, están reducidas al mínimo la descomposición y la agregación de la sustancia biológicamente efectiva. Se ha conseguido una semivida de hasta 2 años, lo que es muy importante para las aplicaciones industriales. Esta estabilidad mejorada puede ser atribuida a la superior tecnología de fabricación suave de la presente invención y a los ingredientes y composición de la formulación superiores (tanto desde el punto de vista cualitativo como cuantitativo cuando se compara con las formulaciones descritas en la bibliografía).
La estabilidad de la composición puede intensificarse adicionalmente mediante la adición de antioxidantes tales como el tocoferol, hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, palmitato de ascorbilo, o edetatos tales como, por ejemplo, edetato disódico, con los edetatos uniendo adicionalmente metales pesados posiblemente presentes. Más aún, la estabilidad puede intensificarse mediante la adición de agentes conservantes tales como ácido benzoico y parabenos, por ejemplo, metilparaben y/o propilparaben.
Las composiciones preferidas son las de la siguiente fórmula general:
1
Las ventajas particulares de la presente invención se ilustran adicionalmente mediante los siguientes ejemplos:
Ejemplo 1 Dispersión a base de liposomas
Se produjo una dispersión a base de liposomas de la siguiente composición de acuerdo con el método descrito en el documento EP 0253619:
Composición
2
Procedimiento
Los liposomas se fabrican formando una solución acuosa electrolítica (tampón) de dihidrogenofosfato sódico dihidratado, hidrogenofosfato disódico dihidratado y cloruro sódico en agua para inyectar a 80ºC. Separadamente, se disuelven la lecitina y el colesterol en una solución alcohólica tal como etanol a 55ºC-70ºC. La solución acuosa se conecta a un homogeneizador de alta resolución para efectuar la circulación (depósito 1) y la solución alcohólica (depósito 2) se inyecta directamente en el homogeneizador. La solución de etanol se purga con nitrógeno durante todo el procedimiento. Se forman espontáneamente liposomas de menos de 1 \mum. Para formar liposomas con un diámetro bien definido la dispersión de liposomas se hace pasar a través de filtros de nucleoporos con poros definidos (por ejemplo, 0,8 y 0,5 \mum). Se incuba la eritropoyetina con la dispersión de liposomas y después se esteriliza mediante filtración. El llenado de los viales se hizo en condiciones asépticas.
Datos técnicos
Velocidad del homogeneizador: hasta 13.000 rpm
Velocidad de flujo de la solución de etanol: 20-100 ml / s
Ejemplo 2 Dispersión a base de liposomas Composición
3
Procedimiento
La dispersión de liposomas del ejemplo 2 se prepara de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 1 con la excepción de que se añade DPPA-Na a la solución de etanol junto con la lecitina y el colesterol antes de realizar la inyección de etanol.
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(Tabla pasa a página siguiente)
Ejemplo 3 Dispersión a base de liposomas Composición
4
Procedimiento
La dispersión de liposomas del ejemplo 3 se prepara de acuerdo con el procedimiento del ejemplo 2.
Ejemplo 4 Prueba de estabilidad
Se fabricaron dos lotes de la formulación de eritropoyetina a base de liposomas de acuerdo con los ejemplos 1 y 2. Los lotes se analizaron en su estabilidad en diversos intervalos de tiempo. Los procedimientos para los análisis biológicos in vitro e in vivo empleados se indican más adelante. Los resultados se indican en las tablas 1 y 2.
TABLA 1
5
TABLA 2
6
Análisis biológico in vivo Ensayo biológico de eritropoyetina en ratón policitémico exhipóxico
Los ratones permanecen a presión reducida durante 18 horas. Las siguientes 6 horas los ratones permanecen a presión ambiental. Este procedimiento se repite los 14 días siguientes. Después de 3 días a presión ambiental se administra eritropoyetina a los ratones. Después de un día se inyecta una solución que contiene ^{59}FeCl_{3}. Después de otros dos días se analiza la sangre y se determina la incorporación de ^{59}FeCl_{3} en los eritrocitos.
Análisis biológico in vitro
El análisis biológico in vitro es un análisis biológico a base de células diseñado para cuantificar exactamente la actividad biológica de la epoetina alfa.
Las muestras se diluyen primero en medio de cultivo de tejidos y, seguidamente, se tratan con cultivos de células de HEP.G2. Esta línea celular adherente retiene la capacidad del tejido hepático en su capacidad de eliminar las proteínas desializadas. Se sabe que un proceso metabólico similar ocurre in vivo, lo que resulta en la actividad reducida de la eritropoyetina desializada. El tratamiento con células HEP.G2 no eliminará la eritropoyetina sializada en la epoetina alfa del medio. De este modo, el ensayo biológico in vitro imita al ensayo biológico in vivo en ratón.
En la segunda etapa, la eritropoyetina que queda se separa de las células HEP.G2 y se prueba en un ensayo de proliferación celular usando la línea celular B6SUtA. Estas células crecen en presencia de eritropoyetina y la extensión de su crecimiento es proporcional a la cantidad de eritropoyetina. Subsecuentemente, se mide el crecimiento celular mediante la cantidad de color producido cuando se añade MTT a las células. El color generado es directamente proporcional al número de células y la actividad reducida de las células B6SUtA.
Conclusión
Los datos muestran una buena estabilidad de hasta 24 meses en ambas formulaciones.

Claims (14)

1. Una composición parenteral a base de liposomas que comprende:
(a)
una cantidad eficaz de un ingrediente activo que comprende eritropoyetina o sus derivados farmacéuticamente aceptables que tiene la propiedad biológica de provocar en las células de la médula ósea el incremento de producción de reticulocitos y eritrocitos;
(b)
una fase lipídica que comprende:
(i)
lecitina o lecitina hidrogenada;
(ii)
un compuesto lipídico cargado eléctricamente positiva o negativamente y
(iii)
colesterol o un derivado del mismo seleccionado entre ésteres de colesterol, derivados polietilenglicolados de colesterol (PEG-colesterol), y derivados ácidos orgánicos de colesteroles; y
(c)
un tampón fosfato.
2. La composición de la reivindicación 1, en la que la composición comprende liposomas con bicapa única hechos preparando una solución de la fase lipídica en un disolvente alcohólico e inyectando la solución a presión en la solución acuosa tamponada contenida en un homogeneizador de alta velocidad.
3. La composición de la reivindicación 2, en la que dicha eritropoyetina o sus derivados farmacéuticamente aceptables no está incorporada sustancialmente dentro de los liposomas pero está contenida esencialmente en el fluido intersticial en forma de una dispersión de liposomas.
4. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque comprende adicionalmente un estabilizante.
5. La formulación a base de liposomas de la reivindicación 4, en la que el estabilizante es glicina.
6. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en la que la lecitina es lecitina hidrogenada.
7. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la que el compuesto lipídico cargado eléctricamente positiva o negativamente se selecciona entre ácido fosfatídico de dipalmitoilo (DPPA), dipalmitoilglicerol (DPPG), amina oleílica y amina estearílica.
8. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que el tampón se selecciona entre dihidrogenofosfato sódico dihidratado, hidrogenofosfato disódico dihidratado y mezclas de los mismos.
9. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque comprende adicionalmente un conservante.
10. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque comprende adicionalmente un antioxidante.
11. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizada porque comprende adicionalmente un agente de complejamiento.
12. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizada porque tiene la siguiente composición:
7
13. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 12, caracterizada porque tiene la siguiente composición:
8
14. La formulación a base de liposomas de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 para uso como una preparación farmacéutica para el tratamiento de la anemia.
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