MXPA04003758A - Inhibidores de proteina - cinasas y proteina-fosfatasas, metodos para disenarlos y metodos para usarlos. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona un metodo para identificar inhibidores de proteina-cinasas y/o proteina-fosfatasas. Tambien se proporcionan metodos para inhibir la actividad de proteina-cinasas y/o proteina-fosfatasas. Se proporcionan inhibidores de proteina - tirosina - cinasas y/o proteina-fosfatasas-peptidicos, especificos. Los inhibidores de proteina-cinasas o proteina-fosfatasas de la presente invencion se pueden usar para tratar varias condiciones en pacientes, que incluyen cancer, psoriasis, arterosclerosis, actividades del sistema inmunitario, diabetes, u obesidad. Ademas, la presente invencion proporciona un metodo para proteger contra o tratar perdida de audicion en un sujeto. Este metodo comprende la administracion de una cantidad efectiva de un inhibidor de proteina-tirosina-cinasa al sujeto para proteger contra o tratar la perdida de audicion.

Description

INHIBIDORES DE PROTEÍNA-CINASAS Y PROTEÍNA- FOSFATASAS. ÉTODOS PARA DISEÑARLOS Y MÉTODOS PARA USARLOS Antecedentes de la Invención Las proteína-cinasas son una amplia clase de enzimas que catalizan la transferencia del ?-fosfato de ATP al grupo hidroxilo en la cadena lateral de Ser/Thr o Tyr en proteínas y péptidos y están comprendidas íntimamente en el control de varias funciones celulares importantes, quizá de forma más notable: transducción de señales, diferenciación, y proliferación. Se estima que hay aproximadamente de 2,000 proteína-cinasas distintas en el cuerpo humano (Hunter, 1987, 1994, Hanks & Hunter, 1995), y aunque cada una de éstas fosforila sustratos particulares entre proteína/péptido, se unen todas al mismo ATP de segundo sustrato en una cavidad altamente conservada. Las proteína-fosfatasas catalizan la transferencia de fosfato en la dirección opuesta. Los inhibidores de varias proteína-cinasas o proteína-fosfatasas conocidas pueden tener una variedad de aplicaciones terapéuticas con suficiente selectividad, y se pueden incorporar propiedades farmacológicas in vivo aceptables en estos inhibidores (Levitzki, 1996a). Quizá el uso terapéutico potencial más promisorio para los inhibidores de proteína-cinasas o proteína-fosfatasas es EF: 155533 como agentes anti-cáncer. Esta aplicación potencial para los inhibidores de proteína-tirosina-cinasa ("PTK") se ha resaltado en muchas revisiones recientes (por ejemplo Lawrence & Hiu, 1998, Kolibaba & Druker, 1997, Showalter & Kraker, 1997, Patrick & Heimbrook, 1996, Ground aker et al., 1996, Levitzki, 1995) . El fundamento para esta aplicación se basa parcialmente en el hecho que cerca de 50% de los productos oncogénicos conocidos son PTK y su actividad de cinasa se ha mostrado que conduce a transformación celular (Yamamoto, 1993) . Las PTK se pueden clasificar en dos categorías (Courtneidge, 1994), las PTK de receptor de membrana (por ejemplo, PTK del receptor de factor de crecimiento) y las PTK de no receptor (por ejemplo, la familia Src de productos proto-oncogénicos) . Hay al menos 9 miembros de la familia de Src de las PTK de no receptor con pp60c"src (referida posteriormente en la presente como simplemente "Src") que es la PTK de prototipo de la familia en donde los dominios catalíticos de aproximadamente 300 aminoácidos están altamente conservados (Rudd et al., 1993, Courtneidge, 1994) . La hiperactivación de Src se ha reportado en varios cánceres humanos, incluyendo aquellos del Colon (Mao et al., 1997, Talamonti, et al., 1993), mama (Luttrell et al., 1994), pulmón (Mazurenko et al., 1992), vejiga (Fanning et al., 1992) y piel (Barnekow et al., 1987), así como en cáncer gástrico (Takeshima et al., 1991), leucemia de células pilosas (Lynch et al., 1993), y neuroblastoma (Bjelfman et al., 1990)'. Las señales de proliferación sobre-estimulada de células de receptores de transmembrana (por ejemplo EGFR y pl85HER2/Neu) al interior de la célula también parecen pasar a través de Src (Mao et al., 1997, Parsons & Parsons, 1997, Bjorge et al., 1996, Taylor & Shalloway, 1996) . En consecuencia, se ha propuesto recientemente que Src es un objetivo universal para la terapia de cáncer (Levitzki, 1996), debido a que su hiperactivación (sin mutación) está comprendida en el inicio, progreso y metástasis tumoral para tipos tumorales humanos muy importantes . En vista del gran y creciente potencial de los inhibidores de varias proteína-cinasas y proteína-fosfatasas, se necesitan una variedad de planteamientos para obtener inhibidores útiles. El estado de descubrimiento de inhibidores de PTK (Lawrence & Niu, 1988, Showalter & Kraker, 1997, Patrick & Heimbrook, 19996, Groundwater et al., 1996, Budde et al., 1995, Levitzki & Grazit, 1995; Frame, 2002; Sawyer et al., 2001; Haskell et al., 2001, Martin, 2001; Bridges, 2001; Blume-Jensen et al., 2001; Biscardi et al., 2000; Susa & Teti, 2000; Susa et al., 2000; Irby et al., 2000; Schlessinger, 2000; Abram et al., 2000; Garcia-Echeverria et al., 2000; Sedlacek, 2000; Sridhar et al., 2000; Biscardi et al., 1999) se ha revisado de forma extensiva. Han sido exitosos los esfuerzos de detección aleatoria en la identificación de inhibidores no peptídicos de proteína-cinasas , pero la vasta mayoría de estos se unen en el sitio de unión de ATP, altamente conservado. Un reciente ejemplo notable de estos inhibidores no peptídicos, competitivos a ATP, son las 4-anilinoquinazolinas , y análogos, que se muestra que son efectivos contra la PTK del receptor del factor de crecimiento epidérmico (PTK de EGFR) (por ejemplo, Rewcastle et al., 1996) . Aunque esta clase de inhibidores se reportó que es selectiva para la PTK de EGFR contra seis PTK diferentes (incluyendo Src, Fry et al., 1994) , se desconoce que su efecto está en la mayoría de las 2,000 proteína-cinasas restantes que se unen a ATP así como un gran número de otros ATP, ADP, GTP, GDP, etc., que utilizan proteínas en el cuerpo. Por lo tanto, aún es una cuestión seria los efectos laterales potenciales de los fármacos inhibidores de PTK imitan a ATP, que se pueden descubrir solamente después de estudios costosos de toxicidad en animales o ensayos clínicos en humanos. También, aunque esta clase de compuestos fue un bonito descubrimiento y está sufriendo algo de exploración, no proporcionan una solución racional y general para obtener inhibidores no peptídicos para cualquier PTK deseada, por ejemplo, en este caso Src. El riesgo de especificidad insuficiente in vivo con inhibidores de PTK competitivos con ATP también se ha señalado por otros, junto con la reducción en un tercer orden en magnitud, inherente, de la potencia que exhiben estos inhibidores cuando compiten con los niveles en m de ATP intracelular en lugar de los niveles en µ? en los ensayos con enzimas aisladas (por ejemplo, ver Lawrence & Niu, 1998, Hanke et al., 1996, Kelloff et al., 1996) . Una clase más antigua, y más extensivamente estudiada, de inhibidores no peptídicos de PTK es erbstatina y las tirfostinas relacionadas (ver, revisiones) . Esta clase de inhibidores son activos contra las PTK de receptor y su modo de inhibición es complejo pero no parece estar comprendido en la unión én las regiones del sitio de especificidad del sustrato peptídico del sitio activo (Hsu et al., 1992, Posner et al., 1994). Además, son inactivos contra la PTK aislada cuando se reemplaza el metal Mn2+ de ensayo no natural con Mg2+ natural (Hsu et al., 1992), son químicamente inestables (Budde et al., 1995, Ramdas et al., 1995 & 1994) , y se conoce que son citotóxicos a las células normales y neoplásticas por las proteínas de reticulación (Stanwell et al., 1995 & 1996) así como inhiben el crecimiento celular al perturbar la mitocondria en lugar de la inhibición de PTK (Burger et al., 1995). Una contribución importante al campo de las proteína-cinasas ha sido el trabajo estructural con rayos x con la proteína-cinasa ( "PKA" ) dependiente de cAMP de serina-proteasa, unida al péptido del residuo 20 derivado de la proteína inhibidora estable al calor, PKI (5-24), y Mg2ATP (Taylor et al., 1993) . Este trabajo estructural es particularmente valioso debido a que la PKA se considera que es un prototipo para la familia completa de proteína-cinasas puesto que ha evolucionado de una proteína-cinasa ancestral, única. Las alineaciones de secuencia de la PKA con otras serina- y tirosina-cinasas han identificado un núcleo catalítico conservado de aproximadamente 260 residuos y 11 residuos altamente conservados dentro de este núcleo (Taylor et al., 1993). Dos residuos altamente conservados de interés particular para el trabajo propuesto en la presente son la base general Asp-166 que se propone que interactúa con el OH del sustrato y el residuo positivamente cargado, Lys-168 para serina-cinasas y una Arg para tirosina-cinasas ( nighton et al., 1993), si se propone que interactúa con la ?-fosfata de ATP para ayudar a catalizar la transferencia de este fosfato. Se han reportado dos estructuras cristalinas importantes adicionales de PKA (Madhusudan et al., 1994), una para el complejo ternario PKA : ADP : PKI (5- 4) en donde se ha reemplazado PKI Ala 21 con Ser (llegando a ser de este modo un sustrato) y una para el complejo binario PKA:PKI{5-24) en donde se ha reemplazado PKI Ala 21 con fosfoserina (un inhibidor de producto terminal) . El complejo ternario muestra el OH de serina que dona un enlace de H a Asp-166 y que acepta un enlace de H desde la cadena lateral de Lys 168. El complejo binario muestra el grupo fosfato de fosfo-serina que forma un puente de sal con la cadena lateral de Lys-168 y dentro de la distancia de unión de H del grupo carboxilo de Asp-166. Estas estructuras soportan los papeles anteriormente propuestos para Asp-166 y Lys-168 en el mecanismo catalítico. Las estructuras de rayos x de PKA muestran que la enzima consiste de dos lóbulos, en donde el lóbulo más pequeño se une a ATP y el lóbulo más grande al sustrato peptídico. La catálisis se presenta en la hendidura entre los lóbulos. Los estudios estructurales en solución y cristalográficos con PKA han indicado que la enzima sufre cambios conformacionales mayores desde una forma catalíticamente activa "abierta" a la "cerrada" conforme se une a los sustratos (Cox et al., 1994) . Estos cambios de conformación se presume que comprenden el cierre de la hendidura entre los dos lóbulos conforme los sustratos se unen uniendo el ?- fosfato de ATP y el OH de Ser en proximidad cercana para transferencia directa del fosfato. Sin embargo, muchos inhibidores de proteína-cinasas y proteína-fosfatasas aún carecen de la especificidad y potencia deseada para uso terapéutico.

Debido a los papeles claves jugados por las proteína-cinasas y las proteína- fosfatasas en varias enfermedades diferentes, se incluye cáncer, psoriasis, arterosclerosis , diabetes tipo II, obesidad, y su papel en la regulación de la actividad del sistema inmunitario, se necesitan inhibidores de proteína-cinasas y proteína-fosf tasas específicas. La presente invención proporciona un nuevo planteamiento para diseñar inhibidores de proteína-cinasas y/o proteína-fosfatasas y los inhibidores resultantes de proteína-cinasas y/o proteína-fosfatasas, que pueden ser más específicos para las rutas seleccionadas como objetivo. La presente también proporciona un nuevo planteamiento para proteger contra o tratar pérdida de audición.

Breve Descripción de la Invención La invención proporciona un inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa y/o un inhibidor no peptídico de proteína- fosfatasa, que tiene la fórmula: en donde X es un halógeno, y Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbR0, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP(0)ORbORc, NRaP(0)ORbR0, NRaP (0) ORbORc , SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2/ halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo (ramificado, cíclico, o no ramificado) , que tiene de manera preferente de 1 a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo, o R5 y R6 se forman conjuntamente de un compuesto heterocíclico. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo . Se entiende que todas las posiciones de sustitución abiertas en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales. En una modalidad, al menos uno de R5 o R6 es en donde R7* es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, CH2CH0H, CH(CH3)R, o CH(CH3)S, y cada uno de R8 hasta R12 pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (O) ORbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo (ramificado, cíclico, o no ramificado) , que tiene de manera preferente de 1 a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y sustituido opcionalmente con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo . Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que cualquiera de Rs hasta Ri2 puede estar sustituido o no sustituido . En otra modalidad, al menos uno de R5 o R6 es en donde el asterisco indica el punto de unión al hidrógeno.

La presente invención también proporciona un inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa y/o inhibidor no peptídico de proteína-fosfatasa que tiene la fórmula : en donde X es un halógeno, de manera preferente flúor, y Ri hasta R4 son elementos de cadena lateral de especificidad. En una modalidad, Ri es H, R2 es R3 es H, y R4 es H. El compuesto puede estar sustituido en cualquier otra posición en el anillo de indol . La presente invención proporciona un método para identificar inhibidores de proteína-cinasas . El método comprende proporcionar al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de unión covalente o no covalente a los residuos catalíticos de la proteína-cinasa , en donde al menos uno de uno o más grupos funcionales es un halógeno, combinando al menos un primer módulo con al menos un segundo módulo se proporciona un núcleo no peptídico para formar una o más combinaciones del primero y segundo módulos, detectar la una o más combinaciones del primero y segundo módulos para la inhibición de proteína-cinasas, y seleccionar combinaciones del primero y segundo módulos que inhiben la actividad de proteína-cinasa. Como se usa en la presente, un módulo es una entidad molecular única o una colección de grupos funcionales. Como se usa en la presente, un núcleo no peptídico es una molécula que puede incluir enlaces peptídicos, en tanto que un parte de la molécula no es un péptido . La presente invención también proporciona un método para inhibir una proteína-cinasas. La proteína-cinasas se pone en contacto por un compuesto que comprende al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa, en donde uno o más grupos funcionales comprenden un halógeno, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. La combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-cinasa. En aún otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar una condición, sensible a un inhibidor de proteína-cinasa, en un sujeto. Se administra a un sujeto un inhibidor de proteína-cinasa. El inhibidor de proteína-cinasa tiene al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa, en donde uno o más grupos funcionales comprenden un halógeno, y un segundo módulo que comprende un núcleo no peptídico. La combinación de al menos un primer módulo y el segundo módulo inhibe la actividad de proteína-cinasa en un sujeto. En una modalidad adicional, la presente invención proporciona un método para identificar inhibidores de proteína-fosfatasas . El método comprende proporcionar al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, combinando al menos un primer módulo con al menos un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico para formar una o más combinaciones del primero y segundo módulos, detectar la una o dos combinaciones del primero y segundo módulos para inhibición de fosfatasa, y seleccionar combinaciones del primero y segundo módulos que inhiben la actividad de proteína-fosfatasa. Otro aspecto de la presente invención es un método para inhibir una proteína-fosfatasa. La proteína-fosfatasa se pone en contacto por un compuesto que comprende al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales y cada uno capaces de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. La combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-fosfatasa. En aún otra modalidad, la presente invención proporciona un método para tratar una condición, sensible a un inhibidor de proteína-fosf tasa, en un sujeto. Se administra al sujeto un inhibidor de proteína-fosfatasa. El inhibidor de proteína-fosfatasa tiene al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. La combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-fosfatasa en un sujeto. La presente invención también se refiere a un método para proteger contra o tratar pérdida de audición en un sujeto. Este método comprende la administración de una cantidad efectiva de un inhibidor de proteína-tirosina-cinasa al sujeto para protegerlo contra o tratar la pérdida de audición. De acuerdo con el método para proteger contra o tratar la pérdida de audición de la presente invención, se puede administrar una baja concentración del inhibidor de proteína-tirosina-cinasa al sujeto para lograr el efecto deseado. Además, los inhibidores de proteína-tirosina-cinasa descritos en la presente exhiben baja toxicidad y por lo tanto son adecuados para el tratamiento de la pérdida de audición. Además, los inhibidores de proteína-tirosina-cinasa se pueden administrar en una cantidad efectiva para proteger contra o tratar pérdida de audición, así como para tratar otros trastornos sensibles a inhibidores de proteína-cinasa, tal como cáncer, psoriasis, arterosclerosis , o actividad del sistema inmunitario. En particular, los inhibidores de proteína-tirosina-cinasa pueden proporcionar un efecto sinérgico con ciertos fármacos contra cáncer. Por ejemplo, los inhibidores promisorios se pueden detectar en ensayos de tejido tumoral humano primario, particularmente para buscar sinergia con otros fármacos anti-cáncer conocidos. Además, los inhibidores de proteína-cinasas pueden reducir la toxicidad de ciertos fármacos contra cáncer (por ejemplo, fármacos basados en platino que son tóxicos a cóclea y riñon) , permitiendo de este modo una dosis más grande.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 representa la estrategia modular para desarrollar inhibidores no peptidicos de proteína-cinasas. El paso 1 utiliza uno o más primeros módulos ("Mi") para identificar los núcleos no peptidicos promisorios. El paso 2 mejora la potencia al adicionar elementos de especificidad. Durante este paso se validan los núcleos. También se puede determinar si el inhibidor es no competitivo a ATP. En el paso 3, se mejoran adicionalmente la potencia y selectividad usando bibliotecas de combinación para optimizar Mi y elementos de especificidad. La Figura 2 proporciona una representación de la estructura de rayos x del inhibidor de (PKA) : g2ATP:pseudosustrato. La Figura 3 proporciona características de diseño del módulo general Mi para la unión a la región catalítica conservada de proteína-cinasa . La Figura 4 muestra que los "inhibidores" 21 y 22 de ácido borónico se mostró que son sustratos para PKA. La Figura 5 demuestra las interacciones de unión para el sustrato Ac-Ile-Tyr-Gly-Glu-Phe-NH2 de Src (SEQ ID No. 1) en el modelo en el sitio activo Src. La Figura 6 muestra el diseño de núcleos de inhibidor de Src basados en naftaleno. La Figura 7 muestra el diseño de núcleos de inhibidor de Src basados en isoquinolina e indol La Figura 8 proporciona un ejemplo de la química usada para preparar los inhibidores de naftaleno, que se describen en Marsilje 2000. Se puede poner funcionalidad de ácido borónico en lugar de grupos hidroxilo de Mi en los inhibidores de Src a partir de la Tabla V usando la metodología de acoplamiento cruzado catalizada por Pd (0) en donde se puede acoplar ya sea un triflato de arilo (Ishiyama et al., 1997) o un haluro de arilo (Ishiyama, 1995) con el éster de pinacol de diboro comercialmente disponible. La Figura 9 muestra un esquema sintético que se puede seguir a fin de unir elementos de selectividad de S2 hidrófobos al núcleo de naftaleno. La Figura 10 muestra las reacciones modelo, exitosas con química de naftaleno, que se pueden convertir a la fase sólida en la preparación para sintetizar bibliotecas de combinación de este núcleo en un formato de placa de 96 cavidades. La química se llevará a cabo en el regioisómero de naftaleno menos activo representado por 4 _, debido a que este compuesto se obtiene fácilmente a partir de ácido 3,5-dihidroxi-2-naftoico comercialmente disponible, como se describe en Marsilje 2000. La Figura 11 proporciona una posible estrategia para modificar el núcleo de naftaleno en bibliotecas de combinación. La Figura 12 muestra la conversión de la funcionalidad de triflato formada en la reacción 2 a partir del compuesto intermedio 6J3 (Figura 11) a una amina (Wolfe et al, 1997) y entonces una serie de amidas u otros derivados de amina.

La Figura 13 muestra el modelado de una serie de análogos que contienen hidroxi del grupo Mi de ácido borónico mostrado en los sitios activos de Src e IRTK (proteína-tirosina-cinasa de receptor de insulina) . La Figura 14 muestra resultados de la prueba del inhibidor «-meta de Src no peptídico (Tabla V) en las líneas celulares LA25 y NRK. La Figura 15 es una gráfica que muestra la dosis tolerada máxima (MTD) de dos inhibidores de Src (la del Ejemplo 1 y 2k del Ejemplo 4) en ratones SCID. La Figura 16A muestra una comparación de taxol y doxorubicina (son más efectivos que etopósido y cisplatina en este cultivo de células tumorales) con tres inhibidores de Src (45, _3-meta- y 49-meta de la Tabla V) utilizando células tumorales ováricas del tumor N015. La Figura 16B muestra los resultados de las pruebas de los inhibidores de Src para la inhibición del crecimiento celular normal de fibroblastos humanos. No se encontró inhibición de crecimiento celular normal (tanto sub-confluente como confluente; se observó crecimiento algo mejorado en cambio), indicando que estos inhibidores no son tóxicos a células normales aún a una concentración mayor de 10 veces. La Figura 16C muestra los resultados de estas pruebas de dos de los inhibidores de Src para la inhibición del crecimiento de células LA25 estimuladas con ts v-Src. La Figura 16D muestra los resultados de pruebas de dos de los inhibidores de Src para la inhibición del crecimiento de células normales de riñón de rata. La Figura 16E proporciona las estructuras de los inhibidores 45, 43_-meta, y 49-meta. Las Figuras 17A-17B son gráficas que muestra la citotoxicidad in vitro de células PC-3-LN de próstata, malignas, con una variedad de cada uno de los cuatro inhibidores de proteína-tirosina-cinasa de Src y un control inactivo (KLM 2-25) . Las Figuras 18A-18B muestran a la análisis Western de proteínas en células de cáncer de próstata PC-3-LN malignas tratadas con _5 y detectadas usando ya sea anticuerpos anti-fosfotirosina (Figura 18A) o anti-paxilina (Figura 18B) . La Figura 19 es una gráfica que muestra la cuantificación de dos sustratos distintos fosforilados para el complejo de adhesión focal (paxilina y pl30 cas) y un tercer sustrato desconocido. La Figura 20 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a un ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2kHz, 4 kHz, y 8 kHz antes de la manipulación experimental . La Figura 21 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a un ruido en la banda de 0.5 kHz en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental. La Figura 22 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a un ruido en la banda de 1 kHz en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental . La Figura 23 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a ruido en la banda de 2 kHz en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental . La Figura 24 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición al ruido en la banda de 4 kHz en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental . La Figura 25 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a un ruido en la banda de 8 kHz en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental. La Figura 26 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral en (dB) en cócleas de chinchilla en el día 20 para orejas de control y tratadas. La Figura 27 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz y 8 kHz antes de la manipulación experimental. La Figura 28 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz y 8 kHz en el día 1 después de la manipulación experimental . La Figura 29 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz y 8 kHz en día 3 después de la manipulación experimental . La Figura 30 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz y 8 kHz en el día 7 después de la manipulación experimental de la manipulación experimental . La Figura 31 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz y 8 kHz en el día 20 después de la manipulación experimental de la manipulación experimental . La Figura 32 es una gráfica que muestra los desplazamientos promedio de umbral (dB) en cócleas de chinchilla después de la exposición a 8000 Hz en el día 1, día 3 , día 7 y día 20. Las Figuras 33A-33F son imágenes de SEM de cócleas de chinchilla. La Figura 33A muestra una división (marcada por S) de la lámina reticular después de la exposición a un ruido de impulso. La Figura 33B muestra la tinción de cinasa de adhesión focal (FAK) en una cóclea expuesta a un ruido en la banda octava (OBN) centrado a 4 kHz a 105 dB (SPL) . La Figura 33C muestra una pequeña lesión con unos pocos núcleos apoptóticos (marcados con flecha) de una cóclea expuesta a OBN a 110 dB. La Figura 33D muestra tinción de FAK par la lesión mostrada en la Figura 33C. La Figura 33E muestra el nivel de exploración confocal a unas pocas mieras por abajo de lo de la Figura 33D, demostrando que la lesión se extiende bien por abajo de la placa cuticular y en el cuerpo celular (marcado con flecha) . La Figura 33F muestra la tinción de FAK en una cóclea expuesta a ruido de impulso a 155 dB (SPL) . En esta figura, muchas otras células pilosas han perdido su integridad de placa cuticular. Las restantes células pilosas exteriores muestran fuerte fluorescencia de FAK en las placas cuniculares. Las Figuras 34A-34B son imágenes confocales de cócleas de chinchilla expuestas a alto nivel de ruido. En la Figura 34, la cóclea de chinchilla se pre-trató con la (ver Tabla VI, Ejemplo 1) . En la Figura 34B, la cóclea de chinchilla se dejó sin tratar.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención proporciona inhibidores de proteína-cinasas y/o proteína-fosfatasas . En una modalidad, el inhibidor de proteína-cinasa y/o proteína-fosfatasa es un inhibidor no peptidico que tiene la siguiente fórmula: en donde X es un halógeno, y Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb< NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP(0)ORbORc, NRaP(0)ORbRc, NRaP (0) 0Rb0Rc , SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaR , S (0) 2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico , y alquilo (ramificado, cíclico, o no ramificado) , que tiene de manera preferente de 1 a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y sustituido opcionalmente con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo, o R5 y R6 forman conjuntamente un compuesto heterocíclico. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abiertas en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales. Los ejemplos de grupos R adecuados se proporcionan en la Tabla VI, posterior.

En una modalidad, al menos uno de R5 ó Re es: en donde R7* es el punto de unión y es (CH2)X> en donde X es de 0 a 10, C¾CH0H, CH(CH3)R, o CH(CH3)S, y cada uno de R8 hasta pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC (O) SRbí NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS (0) ORb, NRaS (0) 2ORb, NRaP (0) ORbORc , NRaP (0) ORbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaR , P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo (ramificado, cíclico, o no ramificado), que tiene de manera preferente de 1 a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y sustituido opcionalmente con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico, éster carboxxlico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales. En una modalidad preferida, cada uno de R8 hasta R12 se selecciona del grupo que consiste de OCH3, OC¾CH3, H , CH3, OH, CH2OH, CF3, OCF3, CFO, C6H5, OC6H5, OCH2C6H5, OCH2CH2C¾, CHO, C02H, C02CH3 , CH2C02H, CH2C02CH3, N02 y halógeno. En otra modalidad, al menos uno de R5 ó Rs es en donde el asterisco indica el punto de unión al nitrógeno.

En una modalidad preferida, el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa pp60c src, tirosina-cinasa pp56lclc o tirosina-cinasa ??55£??. En otra modalidad preferida, el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de la proteína-tirosina-fosfatasa IB (PTP-1B) . Otro inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa y/o proteína-fosfatasa de la presente invención tiene la siguiente fórmula: hasta R4 son elementos de especificidad. Como se usa en la presente, los elementos de especificidad o las cadenas laterales de especificidad son cadenas laterales que se unirán en cavidades de unión únicas para proteína-cinasas individuales. De esta manera, las cadenas laterales usadas dependerán de la proteína-cinasa o proteína-fosfatasa particular que se va a inhibir. Para identificar cadenas laterales adecuadas, se pueden usar cadenas laterales de unión a péptido, conocidas, para identificar análogos que entonces se usan en técnicas de química de combinación para expandir la biblioteca de las posibles cadenas laterales.

En una modalidad, Ri es H, R2 es: R3 es H, y R4 es H. El compuesto puede estar sustituido en cualquier otra posición en el anillo de indol. Los compuestos de la presente invención proporcionan actividad contra tirosina-cinasas , tal como pp60c"s c, y se espera que mejoren la capacidad del compuesto para inhibir las tirosina-cinasas in vivo, puesto que se ha removido un grupo OH fácilmente metabolizado . En particular, se ha sustituido un grupo OH en la posición 5 en el anillo de indol con un halógeno. El halógeno es un aceptor de unión de hidrógeno, útil con residuos catalíticos que son donadores de unión a hidrógeno. Además, el halógeno no se metaboliza en el metabolismo de fase II y es electronegativo, conduciendo a beneficios in vivo (ver, por ejemplo Park et al., 2001). Algunos miembros de esta clase también son inhibidores de enzimas de posición, es decir, fosfotirosina-fosfatasas . Estos compuestos son inhibidores de pp60c_sr , del crecimiento de células de cáncer de próstata, altamente metastáticas, y son no tóxicos en ratones en la administración i.p., aguda de alta dosis, como se describe en el Ejemplo 1, posterior. Algunos de estos compuestos se puede encontrar que tienen otras actividades biológicas en prueba más amplia (por ejemplo, inhiben glicógeno-fosforilasa para diabetes Tipo II, transcriptasa invertida del VIH o tromboxano-sintasa) . De esta manera, estos compuestos se pueden usar como inhibidores de tirosina-cinasas para aplicaciones terapéuticas, tal como cáncer. Los inhibidores de tirosina-cinasa tienen otras aplicaciones terapéuticas potenciales también (por ejemplo inmuno-supresores en el caso de p561ck) e inhibidores de tirosina-fosfatasa PTP-1B pueden proporcionar fármacos para tratar diabetes Tipo II u obesidad. La presente invención también proporciona un método para identificar inhibidores de proteína-cinasas . La estrategia modular general para el desarrollo de inhibidores de PTK no peptídicos se resume en la Figura 1. Básicamente, al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales para la unión a residuos catalíticos de la proteína-cinasa (en una modalidad preferida, al menos uno de los grupos funcionales es un halógeno) se combina con al menos un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. El (los) grupo (s) funcional (es) de al menos un primer módulo son capaces cada uno de la unión covalente o no covalente con residuos catalíticos de la proteína-cinasa. De esta manera, cada grupo funcional de cada primer módulo es capaz de la formación de enlaces reversibles o irreversibles, ya sea de manera covalente o no covalente, a residuos catalíticos de la proteina-cinasa cuando la proteína-cinasa, y el primer módulo se combinan bajo condiciones efectivas para esta unión. Entonces se seleccionan combinaciones del primer residuo módulos que inhiben la actividad de proteína-cinasa. El paso 1 comienza con la información del inhibidor de proteína-cinasa que se generó ya, es decir, núcleos pentapeptídicos que se unen en los sitios de especificidad del sustrato de PKA o Src se han usado ya para colocar varios grupos funcionales racionalmente diseñados (es decir, módulo "Mi." o "primer módulo") para interactuar con los residuos catalíticos conservados, MgATP o MgADP . Ahora se ha identificado una selección de grupos funcionales preferidos de esta manera para servir como el módulo Mi inicial para el paso 1. Estos grupos funcionales Mi se han utilizado para identificar núcleos no peptxdicos promisorios para inhibidores de Src en el Paso 1. Se anticipó que estos núcleos no peptídicos descubiertos, con sólo un apéndice de Mi, tendrían baja afinidad de unión y serían relativamente no selectivos entre las proteína-tirosina-cinasas (PTK) . Se ve una carencia de selectividad al nivel del paso 1 como una ventaja para el desarrollo de una estrategia en general que se puede volver aplicar a las PTK adicionales. Por lo tanto, se puede reciclar la suite de núcleos no peptídicos identificados en el paso 1 para el uso contra PTK adicionales al detectarlas y llevar las mejores a través de los pasos 2 y 3, todo usando el nuevo objetivo de PTK. La potencia de estos núcleos descubiertos del Paso 1 se puede incrementar de forma suficiente por la unión de uno o dos elementos de especificidad iniciales (Sn) para permitir la validación del núcleo como no competitivo a ATP y tratable a mejoras de potencia adicionales usando química de combinación de una manera racionalmente guiada. Los núcleos de M2 (segundo módulo) no peptídicos, de Src, promisorios, identificados en el Paso 1, se han sometido al Paso 2 y exhibieron un incremento en la potencia de un orden de magnitud de uno a dos contra Src así como uniendo competitiva con relación a ATP. La validación de los núcleos al nivel del Paso 2 antes de emprender la síntesis de bibliotecas de combinación, de intensiva en recursos y la prueba del Paso 3 es importante por tres razones: 1) para desarrollar la química para anexar las cadenas laterales del elemento de especificidad (Sn) ; 2) para determinar que estos inhibidores no son competitivos a ATP y 3) para determinar que la potencia es en respuesta a las propiedades de la cadena lateral Sn y los puntos de unión como se esperará en base al modelo de trabajo para el complejo de Src : inhibidor (esto proporciona alguna confianza que se pueden hacer elecciones racionalmente guiadas para las variedades de elementos Sn de selectividad, individuales, para incluir en las bibliotecas enfocadas del paso 3) . Es en el Paso 3 que se anticipa la alta potencia y especificidad para una PTK particular debido a las numerosas combinaciones de los grupos funcionales de Mi (y análogos cercanos Mi' ) con elementos de selectividad (Sn) se valoran experimentalmente vía química de combinación y detección de alto rendimiento. Se puede incrementar adicionalmente la potencia y selectividad, si es necesario, al anexar elementos de especificidad adicionales (ver, Sn opcionales en la Figura 1) . En cada uno de los Pasos 1-3, los estudios de lado molecular con la estructura cristalina de IRTK:péptido:AMP-PNP, el modelo del complejo de Src:péptido y los modelos para el complejo de Src con las familias individuales de inhibidores basadas en un núcleo particular se usarán como guías cualitativas. Estos estudios de modelado han sido notablemente útiles hasta ahora de esta manera en la guía de los esfuerzos de diseños de inhibidores como se detalla posteriormente. Combinando con las tecnologías de química de combinación y de diseño basado en estructuras de esta manera, se proporciona una sinergia en donde las deficiencias individuales principales de estas tecnologías usadas en aislamiento se afrontan por las resistencias de los otros. La mayor deficiencia en el diseño basado en la estructura es la dificultad en predecir de forma cuantitativa las afinidades de unión a ligando, que es particularmente desafiante debido a los efectos complejos de solvación y entropía (Ajay & urcko, 1995) . La fuerza principal del diseño basado en la estructura en su capacidad para predecir qué tipo de moléculas, probablemente van a ser buenos ligandos. El diseño basado en la estructura puede determinar los limites aproximados (proteínas tienen alguna flexibilidad que necesitan ser tomadas en cuenta) para el tamaño y forma molecular así como indicativo donde probablemente van a ocurrir interacciones hidrófobas, de unión a H e iónica. Por otra parte, la principal deficiencia de la química de combinación es que "el espacio molecular" para las moléculas con tamaño de fármaco (es decir, peso molecular de aproximadamente 500 o menos) es grande de modo que no se puede tener esperanza en muestrear todo este espacio molecular con una alta densidad de cobertura en una biblioteca de combinación de tamaño razonable. Un reciente estimado (Bohacek et al., 1996) del posible número de compuestos que contienen hasta 30 átomos elegidos sólo de carbono, nitrógeno, oxigeno y azufre (además de los H) es de 1060 compuestos. Esto está en el intervalo de peso molecular de moléculas típicas de fármacos y aún no incluye diversidad adicional proporcionada por otros átomos, por ejemplo por los halógenos. En consecuencia necesitan ser usadas restricciones adicionales para identificar regiones del espacio molecular en donde se van a localizar probablemente candidatos particulares de fármacos el diseño basado en la estructura puede reducir de manera drástica el volumen del espacio molecular que se va a explorar al identificar los tipos de molécula que tienen una mayor probabilidad de ser buenos ligandos. La incapacidad para predecir de manera cuantitativa cual de estos miembros "enfocados" de la biblioteca de combinación en realidad serán los ligandos de unión más unidos a la prueba (es decir, el problema de cuantificación) entonces se resuelve al emplear una síntesis de combinación eficiente y prueba de alto rendimiento de la biblioteca . En los esfuerzos anteriores de diseño de inhibidores de serina- y tirosina-cinasas , basados en péptidos, se usó PKA como un modelo cualitativo conveniente para diseñar el módulo Mx de inhibidores de proteína-cinasas para la interacción con los residuos catalíticos conservados. Hay mucha más información estructural y cinética disponible para PKA que para cualquier otra proteína-cinasa . La estructura cristalina de PKA vuelta compleja con Mg2ATP y un pseudosustrato (es decir, OH reemplazado con H) inhibidor de péptido (amida PKI 5-24) se ha solucionado (Zheng et al., 1993) y las interacciones del sitio activo cerca de P 0 Ala de este inhibidor se muestran en la Figura 2. Esta estructura cristalina mostró Mg2ATP unido al lóbulo pequeño de PKA y un inhibidor peptídico de pseudosustrato de 20 residuos unido al lóbulo grande con la conformación total de la enzima en el estado cerrado (es decir, los dos lóbulos están tocándose) y activado. Las distancias entre el carbono de la cadena lateral de P 0 Ala y los átomos pesados cercanos en el complejo se muestran en Á en la Figura 2. Estas distancias muestran que la cadena lateral de Ala está dentro de la distancia de contacto de van der aals de los contactos circundantes se indica que hay poco espacio para anexar grupos funcionales Mi voluminosos a la cadena lateral de Ala. Sin embargo, PKA es una enzima flexible con conformaciones abiertas, cerradas e intermedias (Cox et al., 1994) y estas conformaciones más abiertas darán por resultado una parte posterior de retracción del ?- fosfato de ATP del inhibidor Ala, creando de este modo una cavidad de unión para los grupos funcionales de i anexos. Además, PKA se une a MgADP con la misma afinidad como MgATP (Whitehouse et al., 1983) y la relación de ATP/ADP en células es típicamente 10/1 (Alberts, et al., 1994) . Por lo tanto, en equilibrio, aproximadamente 10% de la proteína-cinasa celular está en el estado unido a MgADP y esta forma de la enzima también se puede seleccionar como objetivo con un inhibidor para drenar toda la enzima del ciclo catalítico en un complejo inactivo de PKA : MgADP : inhibidor . Puesto que los residuos catalíticos de PKA Asp-166 y Lys-168 están completamente conservados en todas las serina-proteasas , y las tirosina-cinasas sólo difieren por la sustitución de Arg para Lys-168 (Taylor et al., 1993), esta región del sitio activo se eligió, junto con la MgATP o MgADP de unión, para seleccionar como objetivo una selección de grupos funcionales de inhibidor que se servirán como Mi y serán ampliamente útiles para desarrollar inhibidores para la familia completa de proteína-cinasas . Al dirigir Mx a la región del sitio activo adyacente al nucleótido, se proporciona un punto de orientación para los inhibidores no peptídicos que puede extenderse a los sitios de especificidad de unión de péptido sin competir siempre con la unión de ATP/ADP. Una selección de grupos funcionales que se podría utilizar como Mi se modificó primero debido a que, aunque esta región del sitio activo está muy altamente conservada, se esperó que cada proteína-cinasa particular exhibiera aún algunas preferencias diferentes a través de su selección debido a pequeñas variaciones en las conformaciones del sitio activo y los residuos de unión. Además, la preferencia del orden de clasificación entre esta selección de Mi puede cambiar algo puesto que el módulo i se adapta a diferentes núcleos no peptídicos. Esta expectación se basa en el potencial para cada núcleo no peptídico para unirse en orientaciones algo diferentes con cada proteína-cinasa individual y con cada conjunto particular de cadenas laterales de elemento de selectividad (Sn) . Se eligieron núcleos peptapeptídicos para la detección inicial de grupos funcionales para Mi debido a que la orientación de unión de estos núcleos peptídicos más grandes probablemente va a ser muy consistente y predecible (es decir, asemejándose cercanamente que el observado por rayos x) a todo lo largo de la serie se puede asumir más confidencialmente para colocar cada funcionalidad Mi probada adyacente a los residuos catalíticos conservados como se propone. En consecuencia, el objetivo de este trabajo anterior basado en péptidos e identificar una colección de grupos funcionales i que se pueden usar, no sólo para la detección inicial de los núcleos no peptídicos (Paso 1) , sino también como un conjunto inicial de cadenas laterales de i que se pueden expandir adicionalmente vía análogos cercanos y optimizar este modo de forma simultánea con las otras cadenas laterales en las bibliotecas de combinación, no peptídicas, finales (Paso 3) . A fin de modelas los grupos funcionales Mi candidatos en esta región catalítica conservada del sitio activo de PKA, ae construyeron en la posición P 0 Ala en la estructura ternaria de PKA usando el paquete del modelado molecular SYBYL (Tripos) en una estación de trabajo de Silicone Graphics como se indica en la Figura 3. No estuvo disponible una estructura de cristal de PKA con MgATP y un inhibidor unido en una conformación más "abierta" , de modo que se llevaron a cabo estudios de modelado inicial en la forma unida a MgADP de la PKA derivada del complejo ternario ilustrado en la Figura 2 al suprimir simplemente la ?-fosfato de ATP. Se usaron estudios de modelado inicial para proporcionar guía cualitativa para identificar grupos funcionales ? potenciales, interesantes para la familia de proteína-cinasas antes de la síntesis y prueba. Los algoritmos de cómputo más avanzados para predecir de manera cuantitativa la energía libre de unión, tal como los métodos de Perturbación de Energía Libre, son métodos de cómputo intensivo que no son prácticos en este punto de tiempo para el uso por rutina por los no especialistas. Aún, los métodos más avanzados pueden ser inexactos debido a las dificultades en el muestreo, inexactitudes en los campos de fuerza/parámetros de la mecánica molecular, y un entendimiento incompleto de la electroestática en agua (Ajay & Murcko, 1995) . Los métodos de cómputo menos rigurosos (y más fáciles de usar) tienden a ser inseguros en la elaboración de predicciones cuantitativas de las afinidades de unión, especialmente cuando se trata con múltiples interacciones polares e iónicas tal como aquellas comprendidas en la unión de Mi. A fin de permitir que se realicen cálculos de mecánica molecular con la estación de trabajo de Silicone Graphics en una cantidad razonable de tiempo, se diseñaron dos capas de residuos a partir de la estructura ternaria de PKA que están circundando el sitio activo de PKA, junto con el inhibidor peptídico y Mg2ADP. Los grupos funcionales i entonces se anexaron a la cadena lateral de P 0 Ala y el complejo completo de sitio activo de PKA :Mg2ADP: inhibidor peptídico modificado entonces se sometió a 300 iteracciones de minimización de mecánica molecular usando el campo de fuerza Tripos con una constante dieléctrica dependiente de la distancia después de asignar cargas formales apropiadas y calcular las cargas puntuales de Gasteiger arsili usando SYBYL. El ajuste del número máximo de interacciones a 300 fue suficiente para remover cualquier tensión seria en los complejos y no permitir aún que la estructura completa se "derivara" de forma significada de la estructura de rayos x de inicio si no se alcanza convergencia. Estos complejos minimizados entonces se evaluaron visualmente para determinar si los grupos funcionales i individuales, anexos fueron capaces de acoplarse en interacciones favorables con los residuos catalíticos conservados y/o Mg2ADP esta evaluación visual comprendió, entre otras evaluaciones normales de interacción, la medición de las distancias átomo-átomo para determinar si se estuvieron formando favorablemente enlaces de hidrógeno e interacciones iónicas.

Se observarán para el nuevo inhibidor las interacciones intermoleculares favorables entre una funcionalidad Mi individual y los residuos catalíticos conservados por Mg2ADP no significa necesariamente afinidad de unión mejorada. La desolvación desfavorable tanto de la funcionalidad Mi polar como de los residuos de sitio activo de PKA polares (así como efectos de entropía complejos) no se incluyen en este análisis y pueden reducir la afinidad de unión neta al punto que el inhibidor modificado puede ser aún menos potente que el inhibidor de P 0 Ala correspondiente, aunque la funcionalidad Mi anexa esté interactuando con los residuos catalíticos conservados y/o MgADP (o MgATP) como se propone. Aún en casos donde la penalidad por desolvación dé por resultado nada de incremento en la afinidad de unión, estos grupos funcionales de Mi aún son útiles como grupos de orientación para colocar correctamente los análogos de inhibidores -no peptídicos en el sitio activo de protexna-cinasa . La colocación de estos grupos funcionales polares en otro lugar dentro del sitio activo (asumiendo que se unen para no ser capaces de extenderse en el solvente volumétrico en tanto que el núcleo se une favorablemente en el sitio activo) probablemente va a dar por resultado afinidad de unión reducida debido a que se diseñaron de manera especifica y se seleccionaron en base a su capacidad demostrada (en tanto que se unen apropiadamente a núcleos de tentapéptido) que se van aceptar adyacentes a los residuos catalíticos conservados y MgADP/MgATP . Si una funcionalidad Mi particular no coloca correctamente un núcleo no peptídico en el Paso 1 entonces probablemente fallarán los intentos para mejorar la potencia al anexar racionalmente elementos de especificidad inicial en el Paso 2. Ninguno de los procedimientos de ensayo proteína -cinasas de la literatura contuvieron ADP adicionado. Un procedimiento de ensayo de la literatura de PKA típico (Glass et al., 1989) se modificó al adicionar 10% tanto como ADP como la concentración de ATP usada para reflejar la relación 1/10 natural en la célula. Este ensayo de proteína-cinasa se refiere posteriormente en la presente como el ensayo " imético de Literatura" . Se ha usado para PKA así como para el Src. Un examen de la literatura, y de los ensayos de proteína-cinasas comercialmente disponibles, mostró que hay poca consistencia de laboratorio a laboratorio y de compañía a compañía y que todos estos ensayos usan condiciones fisicoquímicas que difieren considerablemente de aquellas conocidas como que existen dentro de laa células. Puesto que la inhibición de las proteína-cinasas intracelulares es el objetivo final para el descubrimiento de fármacos, se han desarrollado nuevos ensayos de proteína-cinasas que llegan a estar mucho más cerca de imitar las condiciones físico-químicas citosólicas completas conocidas como que existen dentro de las células. El desarrollo de estos ensayos de proteína-cinasas "Mimético Celulares", se describe en la presente, junto con un nuevo método para determinar qué forma de una proteína-cinasa se une mejor a un inhibidor dado (el método de STAIRe) . Se recolectaron datos que correlacionan la actividad de los nuevos inhibidores de Src no peptídicos en el ensayo Mimético Celular con aquellos obtenidos en la línea de células transformadas Src de LA25 (ver posteriormente) . Cuando se aplicaron estas dos condiciones de ensayo a algunos de los inhibidores de PKA basados en pentapéptidos, que se diseñaron como se ilustra en la Figura 3, se obtuvieron los resultados mostrados en la Tabla I. Las mismas condiciones de ensayo también se aplicaron a los inhibidores de Src basados en pentapéptidos diseñados de forma análoga y se obtuvieron resultados mostrados en la Tabla II.

Tabla I sultadoe de detección de Mj. iniciales en tanto que se anexa al núcleo pentapeptídico de PKA = Punto de Unión K¡ ( uM>. Condiciones1^ * Ií=Mimético de Literatura * L= imético de Literatura C=Mimético Celular C=Mimérico Celular _6X=C02H ¾75X La estructura identificada en la Tabla I como Ac-Arg-Arg-Gly-Ala unida a Mi-Ile-NH2 es la SEQ ID No . 2.

Tabla II Resultados de detección de Mi inicial en tanto que se anexa al núcleo de pentapéptido de src Inhibidor m I de Ensayo o Mimético de Literatura Mimético de Literatura Mimético Celular oV" 36 20 Ml=NH^ Q La estructura identificada en la Tabla II como Ac-Ile-Tyr unida a Mx-Gly-Glu-Phe-NHj es SEQ ID No. 3. La secuencia pentapeptídica normal elegida para la mayoría de los inhibidores de PKA en la Tabla I se derivó de la secuencia de pseudosustrato del inhibidor peptídico que se unió a PKA, cuando la estructura cristalina ilustrada en la Figura 1 se resolvió. La secuencia pentapeptídica normal usada para Src en la Tabla II, Ac-Ile-Xaa-Gly-Glu-Phe-NH2 (SEQ ID No. 3), se describió en Nair, im et al., 1995. Algo de la química usada para preparar los inhibidores de PKA se describen en Nair, Lee & Hangauer 1995. La metodología de síntesis usada para desarrollar varios inhibidores de Src se describen en Lai et al., 1998. Los resultados colectivos en las Tablas I y II muestran que tanto la serina-cinasa PKA como Src de P A pueden acomodar una variedad de grupos funcionales i polares, grandes en la posición de fosforilación P 0. Además, usando la metodología de STAI e (ver Choi et al. 1996) , el inhibidor 8_ de ácido sulfámico, e inhibidores relacionados, se mostró que se une realmente mejor cuando también se une MgATP (no MgADP ni nucleótidos) . Esto fue un resultado algo sorprendente puesto que estos inhibidores son análogos de los "inhibidores del producto final" 1 y 12 que deben unirse simultáneamente con MgADP justo después de la transferencia de sulfato en el mecanismo de reacción en general aceptado para las proteína-cinasas . Estos resultados también demuestran que tanto PKA como Src pueden mostrar una gran diferencia en la afinidad de unión para inhibidores estructuralmente muy similares. Por ejemplo el inhibidor 8_ de PKA de ácido sulfámico (Tabla I) tiene una i de 0.16 µ? bajo las condiciones (L) del ensayo Mimético de Literatura en tanto que la sulfonamida 7 isostérica es 1.875 X menos potente (Ki = 300 µ?) . El inhibidor 8 de ácido sulfámico también es isostérico con el inhibidor 1 de fosfato de producto final que aún se une mucho más fuertemente bajo las condiciones de ensayo Mimético de Literatura (31 X) como de las condiciones del ensayo Mimético Celular (C) (108 X) . El efecto benéfico de un átomo de oxigeno colocado de forma análoga a aquel en el Ser de sustrato se ilustra por comparación del fosfonato 2 al fosfato 1 y también el éter 6 o fosfato 1^. Este átomo de oxigeno también se puede colocar como una cadena lateral de OH tipo serina y mejorar la unión (comparar 2 a 3A y 4A) en donde el limitador 4A de serina más cercano es el más activo. La diferencia en la actividad de los inhibidores 3A o B diastereoméricos y 4A o B sugiere una interacción específica con el residuo Asp-166 catalítico del sitio activo puede estar presentándose en realidad como se propone en el diseño de Mi (Figura 3) . Los resultados de inhibición de Src (Tabla II) muestran que el inhibidor 12_ del producto final cae en la actividad al ir desde las condiciones de ensayo Mimético de Literatura a las condiciones de ensayo Mimético Celular de concentración iónica m s alta, análogo al inhibidor 1 del producto final de PKA. Sin embargo, en tanto que todos los inhibidores de PKA con grupos funcionales Mi polares son menos activos bajo condiciones de ensayo Mimético Celular, tres de los inhibidores 14^ 15, y 17 de Src retienen su actividad bajo estas condiciones de ensayo de concentración iónica más alta. También, el inhibidor 13_ de Src de hidroxifosfonato (una mezcla de los diastereómeros R y S) es análogo al inhibidor 3A de PKA y ambos están aproximadamente en el mismo intervalo de actividad como sus correspondientes inhibidores 12 y 1 del producto final, como sus correspondientes inhibidores 12: y 1, del producto final, respectivamente, bajo las condiciones del ensayo Mimético de Literatura. El acortamiento de la longitud de la cadena lateral en el inhibidor 13^ de Src de fosfonato por un átomo de carbono (ir removiendo necesariamente el OH anexo al mismo tiempo) para dar 14 mejoró la actividad (análogo al inhibidor de PKA, comparación a ) y de manera más importante, dio por resultado actividad equivalente bajo condiciones de ensayo Mimético Celular. Los resultados de Src con 16-19 (particularmente 7, ver posteriormente para un análogo de Mi de ácido oí-tricarbonilo análogo anexo a los inhibidores de Src no peptídico) , también sugiere que las amidas similares pueden ser grupos funcionales i para explorar con inhibidores de Src no peptídicos. Se prefieren inhibidores de Src no peptídicos a los compuestos basados en el núcleo peptídico, parcialmente debido a que algunos de estos inhibidores tiene un efecto dual en Src. Por ejemplo, el inhibidor 14_ de fosfonato no sólo inhibe Src por unión competitiva en el sitio activo sino también activa Src por la unión al sitió SH2, liberando de este modo el mecanismo de autoinhibición intramolecular (Xu et al., 1997). Este efecto opuesto da una curva de IC50 inusual para 1_4, en donde a bajas concentraciones de inhibidor, Src se estimula (a un máximo de 70%) de una manera suave en respuesta a la dosis (debido a al unión de SH2 más fuerte, inicial) seguido por una curva de inhibición de IC50 típica a mayores concentraciones de inhibidor (debido a menor bloqueo de afinidad del sitio activo) . Este efecto de activación opuesta de los inhibidores pentapeptídicos los hace parecer inhibidores de sitio activo menos potentes que lo que son en realidad y hace difícil clasificar realmente los grupos Mi en tanto que están anexos a este núcleo pentapeptídico . Sin embargo, los mejores grupos de x identificados con el núcleo pentapeptídico de Src se deben aún acomodar en la región catalítica del sitio activo y por lo tanto son grupos útiles de orientación para los estudios de inhibidor de Src, no peptídicos, actuales como se propone. Puesto que PKA no tiene un dominio de S¾, esta complicación no es un factor en la interpretación de los datos de prueba de Mi del inhibidor de pentapéptido de PKA.

Los resultados en las Tablas I y II también muestran cuánto efecto las condiciones de ensayo pueden tener en ambas potencias de los inhibidores y el orden de clasificación de actividad. Por ejemplo, como se muestra en la Tabla I, el cambio de las condiciones del ensayo Mimético de Literatura (L) a las condiciones del ensayo Mimético Celular (C) pueden cambiar la potencia desde tan poco como tres veces (inhibidor 10) a tanto como 180 veces (inhibidor 1) . También, en tanto que el inhibidor 1_0 es menos potente que 1 bajo condiciones del ensayo Mimético de Literatura, es más potente bajo condiciones del ensayo Mimético Celular. Los datos del inhibidor de Src presentados en la Tabla II muestran que la mayoría de los inhibidores tienen en su potencia al ir desde las condiciones del ensayo Mimético de Literatura a las condiciones del ensayo Mimético Celular. El orden de clasificación de la potencia contra Src también es sensible a las condiciones del ensayo. En tanto que el inhibidor 1_8 es más potente que el inhibidor 1T_ bajo las condiciones del ensayo Mimético de Literatura, lo opuesto es válido bajo las condiciones del ensayo Mimético Celular. Puesto que la actividad dentro de las células es el objetivo, se seleccionó el ensayo de Src Mimético Celular como el ensayo estándar para probar los inhibidores potenciales de Src no peptídicos. La actividad dentro del ensayo Mimético Celular es una condición necesaria, pero no suficiente, para la actividad dentro de las células. Como se describirá posiblemente, el ensayo de Src Mimético Celular se seguirá con ensayos de cultivo celular en donde la penetración celular, metabolismo y unión a otros componentes celulares también son factores en la potencia medida. La siguiente clase de funcionalidad de Mi que se exploró fue el grupo de ácido borónico. Este grupo funcional es un candidato integrante para i por varias razones: 1) Puede existir en un estado no iónico de modo que no se debe impedir la absorción pasiva de los inhibidores no peptídicos a través de las membranas celulares. 2) Los ácidos de boro, planos, trigonales deben formar complejos de borato covalentes tetrahídricos , reversibles (una propiedad bien conocida de los ácidos borónicos, ver Loomis & Durst, 1992) a través de sus orbitales 2p vacantes con aniones presentes en el sitio activo de proteína-cinasas , tal como el grupo carboxílico de Asp catalítico, o los oxígenos de fosfato terminales de ATP/ADP. Esta capacidad para formar complejo de borato con nucleófilos de sitio activo sabe utilizar de manera extensiva para desarrollar inhibidores de unión lenta de serina-proteasas (ver, por ejemplo Kettner & Shenvi, 1984) , en donde el OH de serina nucleófilo forma un enlace covalente con el orbital 2p vacante en el ácido borónico dando por resultado un complejo de borato tetraédrico (por ejemplo ver Skordalakes et al., 1997) . También, un complejo intramolecular de un ácido borónico con una urea N¾ se usó para preparar inhibidores de análogos de estado de transición de dihidroorotasa (Kinder et al., 1990) . 3) Ácidos borónicos actúan como ácido de Lewis y se convierten a hidratos tetraédricos en agua al formar complejos de borato con agua en iones de hidróxido . Por lo tanto, también es posible que estos hidratos de ácido borónico puedan funcionar como imitadores de fosfato y módulos Mi como se propone en la Figura 2. Esta propiedad de hidratación se utilizó por Baggio et al. (1997) en donde un ácido borónico hidratado funcionalizado como una funcionalidad para arginasa de inhibidor de análogo de estado de transición. Estos investigadores evaluaron el complejo inhibido por rayos x y mostraron que la funcionalidad hidratada de ácido borónico formó dos enlaces de hidrógeno con la cadena lateral de carboxilo Glu-277 catalítica del sitio activo y uno de los otros OH hidratados de ácido borónico interactuó con dos Mn2+ catalíticos en el sitio activo. Estas interacciones de unión son cercanamente análogas a aquellas propuestas en los sitios activos de proteína-cinasas , es decir, enlaces de H al grupo carboxilo de la cadena lateral de Asp catalítica e iteracciones con el sitio activo Mg2+ (ver Figuras 2 y 4) . El uso de ácidos borónicos para inhibidores de proteína-cinasas no se ha explorado de forma breve . En el área de inhibidores de PKA basados en pentapéptido, se ha preparado y probado la funcionalidad de ácido borónico como un módulo de Mi potencial utilizando los cuatro inhibidores 2_l-24^ mostrados en la Tabla III (ver Hsiao & Hangauer, 1998, para algo de la química usada para preparar estos compuestos) .

Tabla III Resultados de inhibición de P A con inhibidores peptíd que contienen ácido borónico * Curva de IC50 muy distorsionada sugieren inhibidor también es un sustrato. L = condiciones de ensayo Mimetico de Literatura C = condiciones de ensayo Mimetico Celular Inh =inhibición Sti = Estimulación La estructura identificada en la Tabla Ili como Ac-RRGXI-N¾ es SEQ ID No. 4.

En tanto que se prueban estos inhibidores de PKA que contienen ácido borónico, en el correspondiente inhibidor 20 de pseudosustrato pentapeptídico se incluyó como un control interno en tanto que se investiga la inhibición dependiente del tiempo como se muestra en la Tabla III. Bajo condiciones de ensayo Mimético de Literatura, y no preincubación, los resultados iniciales sugirieron que el L-aminoácido 2JL de cadena más corta se unió con la misma afinidad como el inhibidor 20 de pseudosustrato (es decir, ki aproximadamente 9 µ?) . Conforme se incrementó esta cadena lateral en su longitud (a 23 y luego 2?) pareció disminuir la afinidad de unión. Cuando la estereoquímica del aminoácido no natural se invirtió desde L en 2_1 a D en 2_2, la afinidad de unión pareció incrementarse 3 veces. Esta mejora en la unión parece presentarse como resultado que el OH del ácido borónico 2JL se coloca a la misma longitud de cadena como la L-homoserina, en tanto que el sustrato natural, L-serina, tiene una cadena lateral más corta de un carbono. Los resultados de modelado con la estructura ternaria de PKA indicaron que el OH de ácido borónico se puede recargar de regreso a algo al invertir la estereoquímica del a-carbono desde L en 21 a D en 22^ y luego recolocando la cadena lateral para imitar más cercanamente la colocación del OH de L-serina del sustrato, natural, adyacente a los residuos catalíticos (Asp-166 y Arg-168) .

Los resultados del modelado se soportaron de manera subsiguiente por el hallazgo que, en la incubación de PKA, con estos inhibidores hasta cuatro horas sin adicionar el sustrato peptídico competidor (Kemptamida : LRRASLG- H2 (SEQ ID No. 5)) , tanto 21 como 2_2 funcionan como sustrato con el D-diastereómero _22 que se fosforila más rápidamente. El hecho que estos inhibidores de ácido borónico también son sustratos, llego a ser mucho más será obvio por las curvas de IC50 distorsionadas en su mayor parte obtenidas bajo las condiciones de ensayo Mimético Celular, tanto como sin pre-incubación (tanto PKA como Src son enzimas más activas bajo las condiciones Mimético Celulares que bajo las condiciones Mimético de Literatura) . En el ensayo usado para obtener estos resultados, el producto de Kemptamida fosforilada con P32 (25 generado a partir de ATP de ?-?32) se aisló al final del periodo de incubación del sustrato por la unión a un papel filtro de fosfocelulosa vía los tres grupos catiónicos (dos Arg y el N-término) y el nivel del producto fosforilado aislado en el papel entonces se mide por conteo con escintilación líquida (cmp) . Los inhibidores 21-24 de ácido borónico tienen dos Arg en su secuencia también y por lo tanto se unirán al papel de fosfocelulosa además de Kemptamida (aunque no tan consistentemente ni completamente debido a menos carga positiva) . En consecuencia, cuando se analizaron como inhibidores, la cantidad de Kemptamida fosforilada, producida, no se contó únicamente, sino también la cantidad de inhibidor fosforilado producido de forma simultánea (por ejemplo, ver 26 posterior) . El resultado neto es que se obtuvieron curvas de IC50 distorsionadas que muestran "estimulación" neta a mayores concentraciones de inhibidor en algunos casos. El diastereómero D 2_2 da la "estimulación" aparente más grande (71%) cuando se pre-incubó con PKA durante cuatro horas bajo condiciones de ensayo imético Celular seguido por el diastereómero L 21 (19%) y luego el homólogo de un carbono 2_3 (5%) indicando que los tres son sustratos para PKA (Tabla III) . El comportamiento del sustrato subyacente de estos "inhibidores" hace que una medición exacta de su potencia de inhibición sea imposible con el ensayo actual. Sin embargo, parece a partir de los datos que la homologación de la funcionalidad de ácido borónico con sólo grupos C¾ (homologaciones con inhibidores de Src no peptídicos de ácido borónico también se pueden llevar a cabo) disminuye la afinidad de unión y la capacidad para funcionar como un sustrato .

Kemptamida fosforílada fosforílada 22 La Kemptamida fosforílada es la SEQ ID No. 6. 22 fosforilado es SEQ ID No . 4. Los "inhibidores" 21 y 22 de ácido borónico demostraron que son sustratos para PKA al correr el mismo ensayo, pero sin adicionar Kemptamida, y deteniendo la reacción en varios puntos de tiempo como se muestra en la Figura 4. Las gráficas muestran sus respectivas velocidades y niveles de fosforilación con la pérdida típica de cinética de velocidad inicial con el tiempo (debido al agotamiento del sustrato y la inhibición del producto final) , análogo a un sustrato de L-Ser a normal tal como Kemptamida. La comparación de 21 a 22 mostrada se realizó en la misma corrida de ensayo, a idénticas concentraciones del sustrato de ácido borónico, y con idénticas soluciones de ensayo Mimético Celular de modo que se pueden comparar directamente los cpm. Las gráficas muestran que las condiciones de velocidad inicial se perdieron en el espacio de una hora para el isómero D 22 en tanto que la linealidad parece haberse perdido algo más lentamente con el isómero L 21 sugiriendo un menor consumo del material de inicio. Que la porción de ácido borónico se fosforilada por PKA fue sorprendente, pero aún más sorprendente es que el anhídrido mezclado de ácido fosfónico-borónico, producido (por ejemplo 26) fue suficientemente estable para sobrevivir a la incubación del ensayo de pH de 7.2/37°C y luego ser aislado por unión a papel de fosfocelulosa después del enfriamiento con ácido de la reacción con TCA al 10% y lavando el papel de fosfocelulosa con ácido fosfónico 25 mM (3X) . Se corrió una búsqueda de sub-estructura de STN en los anhídridos mezclados de los ácidos fosfórico y borónico y se encontraron sólo tres referencias a los experimentos y cálculos teóricos para el anhídrido putativo (pero no probado) análogo, formado a partir de ácido bórico y ácido fosfórico como un catalizador impregnado en superficie sólida para la oxidación parcial de etano a acetaldehído a 823°kHz (Zhanpeisov & Otsuka, 1992, Otsuka et al., 1992, Murakami et al., 1990) . Sin embargo, este anhídrido altamente inusual nunca se ha simplificado hasta ahora libre de una superficie sólida, se ha aislado o se ha caracterizado. De esta manera, ésta es una nueva reacción enzimática y entidad química con posibilidades interesantes para diseños de inhibidores de proteína-cinasas . La siguiente clase de funcionalidad de Mi que se exploró fue el grupo de halógeno. Este grupo funcional es un candidato intrigante para Mx por varias razones: 1) es un buen aceptor de enlace de hidrógeno; y 2) reduce la velocidad del metabolismo, conduciendo a beneficios in vivo.

La funcionalidad de halógeno se ha preparado y probado como un módulo x no potencial utilizando el inhibidor mostrado posteriormente (ver ejemplo 1, para la química usada para preparar éste compuesto) .

Este inhibidor se probó para la inhibición de Src usando el procedimiento de ensayo expuesto en el Ejemplo 1. Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla VII, que indica una IC50 de 40 µ? para el inhibidor anterior (la en la Tabla VII) , Este inhibidor incluye un núcleo no peptídico (indol) que se eligió en base al método de detección descrito posteriormente. Las evaluaciones de Mi unidas al núcleo pentapeptídico de Src y PKA, descritas anteriormente, han dado por resultado la identificación de una variedad de grupos Mi de orientación que se podrían usar para detectar núcleos no peptídicos potenciales como se indica en el paso 1 (Figura 1) . El ácido borónico (a partir de 22) , el fosfonato (de 14) Y el ácido sulfámico (de 8) se eligieron del menú de los Mx potenciales para la detección del núcleo no peptídico de Src. Entre estas elecciones, el grupo Mi de ácido borónico ha probado ser efectivo para la detección del Paso 1 de núcleos no peptídicos. Las estructuras cristalinas más útiles disponibles para el diseño de inhibidores de Src no peptídicos, que no compiten con ATP, son la estructura de Src nativa y la estructura ternaria de IRTK:péptido : AMP-PNP . Para todos los estudios de modelado analizados posteriormente, el paquete de programa de cómputo de modelado molecular es SYBYL se usó en una estación de trabajo del Silicone Graphics. Puesto que las estructuras de Src e IRTK se usan solo como guías cualitativas en el diseño de los núcleos no peptídicos y bibliotecas de combinación, los sitios activos junto con dos capas de residuo circundantes se idearon de las estructuras ternarias de Src y IRTK nativas, análogos a los estudios previos de modelado de PKA. La región del sitio activo de la estructura ternaria de IRT :péptido: AMP-PNP que se usó como la estructura de plantilla para guiar la construcción de la secuencia 424-418 de resido de Src de regreso en la estructura de Src usando la técnica de modelado por homología comparativa (ver Hutchins & Greer, 1991) . Estos estudios se desordenaron en la estructura cristalina de Src, nativas y por lo tanto no son visibles por rayos x. Se re-int oduj eron debido a que ayudan a formar los sitios de unión P+l a P+3 para los sustratos peptídicos que son importantes para algunos de los estudios de modelado. Los residuos análogos en la estructura ternaria de IRTK, se ve por rayos x e interactúan directamente con el sustrato peptídico unido. En realidad, es probablemente la presencia del sustrato peptídico unido lo que induce el orden en la colocación de esta secuencia de modo que es visible por rayos x. El sustrato pentapeptídico de Src Ac-Ile-Tyr-Gly-Glu-Phe-NH2 (SEQ ID No. 1) (Nair Et al., 1995) entonces se reencontró en el sitio activo de Src usando nuevamente la estructura ternaria de IRTK como una plantilla. Entonces deshicieron manualmente ajustes pequeños para limpiar parcialmente este complejo, todos los átomos de hidrogeno se adicionaron, se adicionaron cargas normales y parciales apropiadas (calculadas vía el método de Gasteiger Marsili) y luego se sometió el complejo a 300 interacciones de minimización de mecánica molecular usando el campo de fuerza de Tripos, análogo al procedimiento de modelado de PKA previo. Una representación esquemática de este complejo modelado se da en la Figura 5. Cualquier inexactitud en estos modelos de Src :péptidos : y Src : inhibidor se acomodan al evaluar experimentalmente una variedad de cadenas laterales, el número de diversidad en las cuales se pone a escala aproximadamente al nivel de incertidumbre para la estructura de su región particular de unión en el sitio activo del modelo de Src (ver posteriormente) de una manera de combinación. Como se muestra en la Figura 5, los residuo 424-418 construidos de regreso en el Src interactúan con los residuos de ¦ sustrato P+1 a P+3, Gly-Glu-Phe-NH2 respectivamente, a través de las interacciones de unión de hidrogeno tipo beta-lámina con la cadena principal de sustrato (análoga al sustrato peptídico de IRTK) . Lys 423 se acopla en dos importantes interacciones: 1) el ß y yCH2 plegado sobre la parte superior del anillo de fenilo de P O Tyr se acopla en la interacción de unión hidrófoba y luego 2) el CH2-CH2-NH3+ restante de esta cadena lateral se extiende para formar un puente de sal con la cadena lateral de P+2 Glu como se indica. El resto de la cavidad de unión hidrófoba P 0 Tyr se forma por Pro 425 bajo el anillo de fenilo y parte de la cadena lateral de Cys 277 por arriba del anillo de fenilo. Usando una biblioteca de sustrato de Src de péptido de combinación, grande, Songyang et al. (1995) encontró que la cadena lateral más comúnmente elegida para la posición P+1 fue Gly seguido por Glu. El presente modelo indica que una cadena lateral de P+1 Glu puede formar un puente de sal con cerca de Arg 469 como se indica en la Figura 5. De forma previa, los investigadores encontraron que sólo se eligió Glu para la posición P+2 y el presente modelo indica que esta cadena lateral forma un puente de sal con la cadena lateral de Lys 423. En la posición P+3, Phe se prefirió muy fuertemente y el modelo indica que esta cadena lateral forma una interacción de apilamiento con la cadena lateral de Phe . En la posición P-1, Songyang et al., encontró que lie fue el residuo más preferido seguido por Val y luego Leu. El modelo mostró una cavidad hidrófoba para la unión de la cadena lateral P-1 formada principalmente por Trp 428, Ala 390 y Leu 347. Se espera que la cadena principal lateral de P 0 Tyr, interactuará fuertemente (a través de la unión de hidrógeno) con el sitio activo en un complejo catalíticamente competente debido a que las enzimas forman frecuentemente interacciones más críticas en esta región cerca a donde se presentará la reacción. El complejo ternario de IRTK no muestra un buen enlace de hidrogeno a ya sea P 0 Tyr H o carbonilo. El residuo candidato más cerca para esta interacción en la estructura de IRTK es Asn 1215, en donde la cadena lateral N¾ es 3.71 Á a partir del oxigeno de carbonilo de Tyr. Cuando la estructura ternaria de IRTK se reviste en la estructura nativa de Src, usando los cuatro residuos mencionados en la sección de antecedentes y significado, el Asn 468 de la estructura de Src se encontró que se coloca muy cercano al Asn 1215 de IRTK análogo. Esto sugiere que este residuo conservado está realizando un papel importante y puede moverse un poco más cerca (es decir, aproximadamente 1 Á) al sustrato P 0 NH y carbonilo en un complejo catalíticamente activo y forma las interacciones de unión a hidrógeno indicadas en la Figura 5. Finalmente, los Arg 388 y Asp 386 catalíticos se colocan correctamente en el modelo de Src para catalizar la transferencia del ?- fosfato desde el ATP al Tyr OH. El complejo de Src ¡sustrato peptídico ahora se puede usar para modelar núcleos no peptídicos potenciales y determinar posiciones de sustitución preferidas para los elementos de especificidad, todo con una funcionalidad Mi material apropiadamente unida, antes de elegir nuevos núcleos para evaluar experimentalmente . La estructura ternaria I TK:péptido:AMP-PNP también se puede usar para modelar estos núcleos potenciales y posiciones de sustitución preferidas. Estos núcleos tienen amplia utilidad para el desarrollo de los inhibidores de PTK selectivos a desarrollarlos además con elementos de especificidad apropiados siguiendo la estrategia resumida en la Figura 1.

El primer núcleo no peptídico evaluado con este modelo de Src ¡sustrato peptídico fue el núcleo de naftaleno. Este es el primer uso de núcleos aromáticos bicíclicos para inhibidores de PTK no peptídicos, que no compite con ATP. La utilidad del núcleo de naftaleno para este propósito se demostró al desarrollar un inhibidor no peptídico de la PTK del receptor de EGF que IRTK (Saperstein ET al., 1989) . Los complejos ternarios de IRTK se usaron subsecuentemente para adaptar este núcleo para la inhibición de Src (ver Marsilje et al., 2000) . El núcleo de naftaleno se recortó en el sitio activo de Src para llevar a cabo primero un ajuste por mínimos cuadrados de los átomos a-b en el sustrato peptídico como se indica en la Figura 6. De esta manera, el núcleo de naftaleno se relaciona al sustrato peptídico por la ciclización mostrada por la flecha en la Figura 6 y el OH anexo como un sustituto para el sustrato y Tyr NH. Este es el inicialmente el mismo proceso usado para recortar este núcleo en la estructura de IRTK como se describe en Marsilje 2000. El sustrato peptídico entonces se suprimió en el sitio activo, varios grupos funcionales ?? y elementos de especificidad S2 y S3 entonces se adicionaron al núcleo como se indica y los compré complejos entones se redujeron al mismo inhibidor individualmente durante 300 iteracciones . Este mismo proceso también se usó para diseñar los núcleos de isoquinolina e indol cuyos modos de unión se indican en la Figura 7. En todos estos complejos modelados, el elemento de selectividad S2 consiste de varias cadenas laterales hidrófobas que pueden unirse en la misma cavidad como la cadena lateral de P-l lie del sustrato y el elemento de selectividad S3 consiste de varios fragmentos moleculares que pueden unirse en la región P+l a P+3 de los sitios de unión del sustrato peptídico (Figura 5) . Puesto que la región del sitio activo, donde i se une está altamente conservada entre todas las proteína-cinasas , el menú pequeño de los grupos funcionales Mi previamente identificados usando los núcleos peptídicos servidos como grupos Mx iniciales para la unión a los núcleos en las posiciones iniciales. De los dos sitios de unión elementos de selectividad, la estructura de la actividad de unión hidrófoba para S2 se conoce con mayor confianza en el modelo de Src que es la región de unión P+1=P3 para S3. Esto es debido a que el sitio de unión de S3 se construyó parcialmente por modelado de homología comparativa en tanto que el sitio S2 está sin cambio en su mayor parte de la estructura determinada por rayos x para Src nativo. En vista de estos niveles variados de confianza en los sitios de unión modelados para Mi, S2 y Si, la diversidad de la biblioteca de combinación se puso a escala tal que la mayor variedad y el número de cadenas laterales en las bibliotecas de combinación están en el sitio S3 seguido por el sitio S2 y luego Mi. Los resultados de Src usando grupos funcionales de i para identificar experimentalmente núcleos no peptídicos potenciales se listan en la Tabla IV.

Tabla IV Resultados de paso 1 inicial % de inhibición de src en ensayo mimético celular % de Inhibición de FiR-src 2 mM % de Inhibición de RR-src 2 mM a Concentración de inhibidor Q a Concentración de Inhibidor () NH2 No competitivo 62 (500 µ?) 0 (100 µ?) con ATP Los datos en la Tabla IV permiten que se tracen varias conclusiones: 1) Se puede obtener una potencia de inhibición baja, pero medible, con un grupo Mi apropiado unido a un núcleo (por ejemplo 2_7 y 38) . 2) Las concentraciones de inhibidor de 1 mM para este tipo de detección son mayores que las deseables pero 100 µ? es demasiado bajo. La detección de colores que tienen el grupo Mi se llevará a cabo de forma óptima a 500 µ?. 3) Los grupos funcionales Mi de cido borónico, ácido sulfámico y ácido fosfónico, que se han identificado usando el núcleo pentapeptídico de PKA (22, Tabla III y 8, Tabla I) o el núcleo pentapeptídico de Src (14, Tabla II), respectivamente dan la actividad medible cuando se colocan en la posición 2 del anillo de naftaleno (2_7, 2_8 y 3_0< respectivamente) , la posición preferida para Mi identificado en el complejo de inhibidor de naftaleno 2 Src de modelo (Figura 6) . El movimiento de los grupos Mx de ácido borónico o ácido fosfónico a la posición (3_2 o 3_3) redujo la actividad) . 4) La funcionalidad de sulfonamida de Mi relacionada, que fue pobre en el núcleo de pentapeptídico de PKA (7 y 9, Tabla I) también es pobre cuando se anexa a la posición 2 (31) o 1 (34 ) del núcleo de naftaleno. El análogo de ácido sulfúrico en la posición 2 (29) de naftaleno es completamente inactiva, aún a 1 mM. 5) El núcleo de naftaleno se puede reemplazar con un núcleo de benzofurano (3_5) o un benzotiofeno (3_6) en una reducción perceptible en la actividad cuando el grupo Mi de ácido borónico se coloca en análogo a la posición 2 en el naftaleno. El grupo Mi de ácido borónico también proporciona con pasos activos cuando se anexan a los núcleos de isoquinolina (.37) o indol (3_8) en las posiciones indicadas por los resultados de modelado (Figura 7) . Sin embargo, el núcleo de indol se favorece claramente sobre el núcleo de isoquinolina sugiriendo que una capacidad de donación de enlace de hidrógeno a Asn 468 (ver Figura 7) es importante para mayor actividad (esto requerirá la isoquinolina protonada que se desfavorece por el grupo éster de retiro de electrones, adyacente) . Esta conclusión también se soporta al considerar que un sustrato peptldico puede colocar un enlace NH peptídico donador de enlace de hidrógeno en una posición similar (Figura 6) y al encontrar que un OH fenólico equivalentemente colocado (Figura 6) mejora la potencia (OH fenólico son mucho mejores donadores de enlace H que los aceptores) . 8) Cuando se comparan directamente a otros grupos Mi, el grupo de ácido borónico es superior (por ejemplo, 2J7 contra 28-31, 3_8 contra 3_9) . 9) Un núcleo de bifenilo modelado en los sitios activos de Src e IRTK y encontraron modos de unión promisorios para este núcleo. Se desarrollaron bibliotecas de combinación con el núcleo de bifenilo (ver Pavia et al . , 1996), y los resultados del modelado fueron alentadores. Por lo tanto, los isómero para (40) y meta (41) se evaluaron con el grupo M1 de ácido borónico. Ambos compuestos de bifenilo mostraron potencia equivalente al mejor ácido borónico de naftaleno (27) y por lo tanto proporcionan otra geometría de núcleo (los dos anillos de fenilo no son planos) para evaluación adicional y desarrollo. Puesto que los núcleos descubiertos, con sólo un grupo Mi anexo, tienen frecuentemente baja penalidad de unión, la IC50 y la ki para los inhibidores de ácido 2-naf aleno-borónico y ácido sulfámico se determinaron para asegurar que se obtiene una curva de IC5o de dosis/respuesta típica. Este análisis proporcionó las curvas de dosis/respuesta de forma típica vista con los inhibidores más potentes. Las IC5o y las K¿ de estos inhibidores simples también confirmaron que el inhibidor de 2_7 de ácido borónico es más potente que el análogo 28 de ácido sulfámico y tiene una Ki de aproximadamente 554 µ?. La siguiente cuestión afrontada con estos inhibidores simples antes de que procediera a elaborarlos fue además su modo de inhibición, específicamente si son inhibidores competitivos a ATP. En el caso de inhibidores 2_7 y 2_8 de naftaleno, sus ICS0 se monitorizaron conforme se incrementó la concentración de ATP en los tres pasos hasta 1 mM. Como una comparación, la IC50 del inhibidor 14 de Src de ácido fosfónico de pentapéptido (Tabla II) también se monitorizó. Si cualquiera de estos inhibidores está compitiendo con ATP, entonces sus IC50 se deben haber incrementado proporcionalmente con la concentración de ATP (es decir, línea discontinua) . Como se muestra, las IC50 para los tres inhibidores permanecieron esencialmente constantes conforme se incrementó la concentración de ATP demostrando que no son inhibidores competitivos de ATP. Un análisis muy similar, pero mucho menos costoso (Src comercial es costoso) se llevó a cabo con el inhibidor 38 de ácido borónico de indol . En este caso, se monitorizó el por ciento de inhibición con 38 a una concentración constante de inhibidor de 500 µ? pero con concentraciones crecientes de ATP de 200, 500 y 1,000 µ?. Una vez más nuevamente, no se redujo la potencia del inhibidor al incrementar la concentración de ATP demostrando que 38 tampoco es competitivo para ATP. Los resultados iniciales obtenidos en el Paso 1 sugieren que es posible identificar núcleos promisorios para elaboración adicional con este procedimiento. La incertidumbre más grande con el Paso 1 es que algunos de los núcleos identificados de esta manera no pueden unirse de la manera sugerida por las evaluaciones del modelado anteriores. Esto es esencialmente un problema "positivo falso" . Estos "positivos falsos" fallarán probablemente en el Paso 2, cuando se evalúen para unión mejorada usando los complejos modelados como una guía. Algunos resultados positivos falsos se pueden aceptar en el Paso 1 debido a que se obtienen fácilmente los núcleos descubiertos con sólo el grupo Mi unido. Para el desarrollo adicional de los inhibidores, se puede regresar al Paso 1 cada vez que se necesiten ambos núcleos para llegar hasta los Pasos 2 y 3. El mejor Mi generado se puede usar cada vez que se repita el Paso 1. Actualmente, se ha usado el grupo Mi de ácido borónico puesto que ha probado capacidad para dar actividad medible con núcleos descubiertos. También el grupo Mi de ácido borónico ofrece múltiples posibilidades interesantes a las interacciones covalentes y no covalentes con los residuos catalíticos conservados puesto que pueden: 1) hidratarse, 2) formar complejos de borato con átomos de sitio activo ricos en electrones, y/o 3) ser fosforilados y entonces reaccionar con nucleófilos de sitio activo o acoplarse en interacciones no covalentes adicionales. A partir de los datos en la Tabla IV, los núcleos de naftaleno e indol se eligieron como M2 para los primeros esfuerzos en el Paso 2 (el núcleo de bifenilo también es un núcleo preferido) . También es importante mencionar que la naftilalanina y análogos pueden sustituir exitosamente para la tirosina P 0 en los estratos peptídicos de Src (ver, por ejemplo Alf ro-Lopez et al., 1998) que soporta además la noción que los núcleos naftaleno y relacionados pueden unirse en el sitio P 0.

Al comparar los resultados del núcleo de naftaleno contra indol con un grupo Mi de ácido borónico (es decir, 27 contra 38, Tabla IV) el enlace de hidrógeno de indol que dona NH y/o el grupo éster adyacente pareció ser la razón para la potencia mejorada. En consecuencia, para el Paso 2. en los primeros intentos fue adicionar un grupo de hidroxilo y una amida (con S2) el núcleo de naftaleno en las posiciones adyacentes sugeridas por los resultados ' del modelado (Figura 6) . Para el núcleo de indol, una prioridad fue preparar algunos análogos de amida para ver si se puede incrementar la. potencia con el elemento de especificidad de S2 (Figura 7) . A fin de facilitar la síntesis de estos análogos iniciales, un OH se sustituyó temporalmente para el grupo Mi de ácido borónico. El grupo OH entonces se conoce que interactúa con los residuos catalíticos, como se requiere para un grupo Mi, debido a que es el sustrato natural Mi cuya velocidad de fosforilación se acelera por las interacciones con los residuos catalíticos. Los resultados obtenidos para algunos de los análogos iniciales se dan en la Tabla V junto con una comparación lado a lado, en el ensayo Mimético Celular de Src, a dos inhibidores 5_0 y 51 de Src de la literatura, que se reporta que son no competitivos a ATP. Al menos estos resultados y análogos adicionales, se describen en Marsilje 2000.

Tabla Resultados de paso 2 inicial Ensayo mimético celular de % de inhibición src El inhibidor 50 y análogos (Huang, et al., 1995), fueron de interés particular debido a que el núcleo de iminocrameno está cercanamente relacionado al núcleo de naftaleno y su modo de unión se esperará que sea muy similar en base al modelo (Figura 6) . Debido parcialmente a esta analogía cercana, las amidas de las hidroxianilinas con el naftaleno y los núcleos de indol se examinaron como se muestra en la Tabla V. También, los estudios de modelado con estos derivados de hidroxianilina-amida en el sitio activo de Src indicaron que el grupo hidroxilo puede ser capaz de acoplarse en interacciones de unión a hidrógeno con las uniones peptídicas de la estructura Src Phe 424-Ala 422, análogas a los sustratos peptídicos (ver Figura 5) . Estos estudios de modelado también indicaron que las hidroxibencilamidas homologas deben ser activas y de manera más importante, proporcionan una posición de sustitución (es decir, el carbono bencílico) para anexar cadenas laterales para unirse · en la cavidad de la cadena lateral P-l (por ejemplo, a Arg 469, Figura 5) Los datos en la Tabla V permiten que se redacten las siguientes conclusiones: 1) La adición de una extensión de amida tanto en el núcleo de naftaleno como de indol puede incremental la potencia como se predice por los modelos para estos núcleos unidos en el sitio activo Src (aproximadamente 5 veces en los casos de 42 contra 43-meta y 47 contra 48) . 2) La adición de grupo hidroxilo al núcleo de naftaleno adyacente a la amida incrementa la potencia (aproximadamente 5 veces, «-meta contra 4_4) como se predice por el modelo de Src, y también sugiere que Asn 468 hace enlace de hidrógeno con este OH. 3) El movimiento del grupo OH de Mx desde la posición prevista que es mejor en el modelo de Src a la posición adyacente reduce la potencia por un orden de magnitud (_43-meta a 4_5) . 4) El núcleo de indol es menos sensible al núcleo de naftaleno a la regioquímica de la extensión de hidroxianilina (4_8 contra 4_3) . 5) Los núcleos de naftaleno e indol aceptan la homologación de un carbono proporcionada al usar hidroxibencilamidas (4_6 versus 43 y 49 versus 4_8) . 6) Los dos regioisómeros de hidroxi de Mi del núcleo de naftaleno son ambos no competitivos a ATP (ver Marsilje 2000) . 7) Todos los inhibidores de metil-hidroxianilina e hidroxi -bencilamida se encontró que son menos activos sugiriendo que el grupo hidroxilo en la extensión de amida está funcionando como un donador de enlace de hidrógeno. A este respecto, es aconsejable mencionar que en otro estudio de bibliotecas de combinación de sustratos peptídicos de Src, se identificaron Ser y Thr como dos de los residuos más preferidos en la posición P+2 (Alfaro-Lopez et al., 1998), sugiriendo que hubo otras oportunidades de unión para un OH de extensión de extensión de amida que a los enlaces peptídicos de Phe 424 -Ala 422 sugeridos por los estudios de modelado. 8) El inhibidor de Src, no peptídico, no competitivo a ATP, más potente, descrito previamente en la literatura (50) no es tan claramente potente como se reporta cuando se probó bajo condiciones de ensayo mimético celular (IC50 = 118 nM reportado por Huang et al., 1995 versus sólo 30 % de inhibición a 100 µ?) y es menos potente que varios inhibidores actuales (especialmente 43^-meta) incluyendo el inhibidor más análogo (5 versus. 45_) . La relación de estructura-actividad (SAR) reportada para los regioisómeros de hidroxi de 5_0 en su ensayo (Huang et al., 1995) tampoco corresponde con la SAR que se obtuvo para los inhibidores de naftaleno relacionados. Por ejemplo, su análogo de iminocromeno del inhibidor 43_-meta de naftaleno más potente es 230 veces menos potentes que 5_0 en su ensayo de Src. Una ventaja importante del núcleo de naftaleno con respecto al núcleo de iminocromeno es que permite que se adicione un elemento de especificidad S2 altamente deseable para tener acceso al sitio hidrófobo P-l (ver Figura 6) en tanto que no se puede sustituir la posición análoga en el núcleo de iminocromeno debido a que está ocupada por el átomo de oxígeno del anillo. Las potencias de inhibidor en el ensayo Mimético Celular de Src se pueden calibrar adicionalmente contra otros inhibidores de Src, no peptídicos, no de ATP, de la literatura. Dos ejemplos adicionales son 51 (ST 638, Shiraiahi et al., 1989) que es un miembro de la familia de "Tirfostina" de análogos de erbstatina (ver Lawrence & Niu, 1998) y el inhibidor de PTK de producto natural, piceatanol 52 (Thakkar et al., 1993). En el ensayo mimético celular, todos estos inhibidores conocidos son menos potentes que lo que se ha informado, sugiriendo que el ensayo es particularmente demandante en términos de logro de alta potencia. La prueba inicial de inhibidores de Src se lleva a cabo usando una concentración única (en triplicado) debido a que Src comercial es demasiado costoso para realizar las curvas completas de IC50 en cada inhibidor. Sin embargo, se debe mencionar que la curva de respuesta a la dosis de IC 0 no es lineal y la diferencia entre aproximadamente 50 % de inhibición a 100 µ? y una inhibición de aproximadamente 90 % a 100 µ? ¦ es realmente un factor de 10 y no un factor de 2 (por ejemplo, 45i versus 4_3-meta) . En consecuencia, los inhibidores 5_0-5_2_ de SRC de la literatura son mayores que un orden de magnitud menos activo que el inhibidor 4J3 -meta actualmente menos potente. Las discrepancias encontradas dentro de la literatura que reporta la potencia de estos inhibidores, la sensibilidad para valorar las condiciones descritas anteriormente con los inhibidores de PKA y la carencia de consistencia entre numerosos laboratorios y los varios equipos comerciales de ensayo de proteínas-cinasa, resaltan este problema olvidado, pero crucial, en el campo. Aunque los inhibidores producidos por la presente invención pueden ser más potentes bajo otras condiciones de ensayo, se debe usar el ensayo mimético celular, que imita las condiciones física-químicas intracelulares tan cercanamente como sea posible, como la potencia primaria y la guía del orden de clasificación para evaluar los inhibidores antes de elegir compuestos para proseguir a los ensayos de tejido o células enteras. Como se analizará en más detalle posteriormente, el inhibidor basado en naftaleno, más potente, de esta manera a partir del ensayo Mimético Celular (es decir, 43-meta, IC50=18 µ? y K = 10 µ?) también es efectivo en el bloqueo específico de la proliferación celular estimulada por pp60v" sr con una IC50 similar de aproximadamente 25 µ?. Esto sugiere que no sólo es el ensayo Mimético Celular de Src predictivo, sino que también esta clase de inhibidores basados en naftaleno puede pasar fácilmente a través de las membranas celulares e inhibir la Src celular. Se pueden preparar análogos de varios inhibidores de naftaleno e indol con el ácido borónico o el grupo Mx de halógeno en lugar de OH de Mx y/o con un elemento de especificidad hidrófoba de S2 unido para la unión en el sitio P-l de Src como se ilustra en las Figuras 6 y 7. Los núcleos de naftaleno e indol entonces se pueden llevar hasta el Paso 3 como se describe posteriormente . Cada vez que se repite el Paso 2 con nuevos núcleos del Paso 1, los elementos S2 y/o S3 de mejor selectividad que se han descubierto con los núcleos previos se usarán en las bibliotecas de combinación del Paso 3. Aunque la combinación óptima de Mi, S2 y S3 probablemente va hacer diferente para cada núcleo, aquellos encontrados óptimos con el núcleo previo relacionado (por ejemplo, yendo desde el núcleo de naftaleno al núcleo de indol), debe ser adecuado para la utilización como los mejores elementos iniciales de especificidad en el Paso 2 con el nuevo núcleo. El mismo proceso se repetirá cada vez que exista la necesidad de probar otro núcleo hasta que se logren una potencia suficiente, buena selectividad y propiedades farmacéuticas adecuadas para los inhibidores de Src o de manera subsiguiente, para inhibidores de las PTK adicionales, terapéuticamente importantes. Algo de la química usada para preparar los inhibidores de naftaleno se describe en Marsilje 2000. Para unir una funcionalidad de ácido borónico en lugar de un grupo hidroxilo .de i en los inhibidores de Src a partir de la Tabla V, se usó la metodología de acoplamiento cruzado catalizada por Pd (0) en donde se puede acoplar ya sea un triflato de arilo (Ishiyama et al., 1997) o un haluro de arilo (Ishiyama et al., 1995) con el éster de pinacol de diboro comercialmente disponible. Un ejemplo ilustrativo completado recientemente se da en la Figura 8. El ejemplo mostrado en la Figura 8 demuestra que es posible triflar de forma selectiva el OH menos impedido en la posición Mi y esto se ha probado por su remoción a 56 con la subsiguiente verificación por R N^H del patrón de sustitución. El monotriflato 53 entonces se llevó al ácido borónico deseado 5_5 como se indica. La misma secuencia de reacción también trabaja bien para el regioisómero de 4_2 que corresponde al inhibidor 45_ de la Tabla V. El esquem sintético mostrado en la Figura 9 se puede seguir, a fin de unir elementos de selectividad de S2 hidrófobos al núcleo de naftaleno . La química de naftaleno se puede convertir a la fase sólida en preparación para sinterizar bibliotecas de combinación de este núcleo en un formato de placa de 96 cavidades. Hasta ahora, se ha llevado a cabo la química de modelo en el regioisómero de naftaleno menos activo representado por 4_4 debido a que este compuesto se obtiene fácilmente de ácido 3 , 5-dihidroxi-2-naftoico comercialmente disponible como se describe en Marsilje 2000. Las reacciones de modelo exitosas a la fecha se muestran en la Figura 10. Estas reacciones de modelo demuestran que es posible acoplar el núcleo de naftaleno a la resina de ang (63) y entonces llevar a cabo la química en el triflato [en el caso del acoplamiento cruzado catalizado por Pd (0) al éster borónico 64j seguido por escisión bajo condiciones moderadas (65) . El éster en £3 también se puede saponificar para las reacciones subsiguientes de acoplamiento para formar amidas que contienen elementos de selectividad de S3.

El núcleo de naftaleno proporciona actualmente tres sitios de diversidad que se van a explorar en las bibliotecas de combinación, x, M2 y S3. La química de combinación de fase sólida con reactores de placa de 96 cavidades similares a aquellos usados en los estudios previos se puede usar (Pavía et al., 1996) . El número más grande y la diversidad más grande de canales laterales se usarán para S3 seguido por S2 y entonces i por las razones analizadas anteriormente. Una posible estrategia de síntesis completa, basada en los estudios de modelo sintético anteriores, para preparar estas bibliotecas se muestra en la Figura 11. Por supuesto, si surgen problemas con esta ruta hay muchas otras posibilidades. Por ejemplo, si el acoplamiento de Mitsunobu para dar 61_ lo sigue a un rendimiento demasiado bajo (debido a la congestión esférica incrementada del grupo alilo adyacente adicionado, pero quizá no un problema da la carga de 92 % obtenida en la Figura 10), entonces el núcleo se puede unir a una resina a través del grupo carboxilo, en lugar del OH, usando el ligador de acilsulfonamida "captura de seguridad" de (Backes et al., 1996) y para formar finalmente las amidas (las amidas en exceso se pueden remover después de la escisión al filtrar a través de una resina acida) . Igualmente, se pueden usar otros ligadores y/o resinas si la reducción del alqueno en la presencia de éteres bencílicos {67_ a 68) se desea pero es problemática. El primer uso de la química propuesta en la Figura 11 será preparar simplemente una biblioteca de 96 amidas, que contiene el grupo ?? de ácido borónico, sin tener la cadena lateral de alilo en su lugar de modo que las dos complicaciones potenciales sino se ha dado un problema inicialmente y se pueden identificar rápidamente los elementos S3 más promisorios. Al menos 14 cadenas laterales hidrófobas de S2 (incluye lineal, ramificada y cíclica) se identifican para estudio adicional (28 si se explotan los alquenos correspondientes) en base al modelado de las cadenas laterales candidatas en el sitio P-i del modelo de Src (Figura 6) y en la disponibilidad comercial de los haluros necesarios parar preparar los reactives de Wittig correspondientes. A menos 96 aminas comercialmente disponibles están disponibles que proporcionarán elementos de especificidad de S3 potenciales que incluyen: 1) hidrocarburos (4), 2) grupos alquilo que contienen aceptores de enlace de hidrógeno (4), 3) grupos alquilo que contienen tanto aceptores como donadores de enlace de hidrógeno (19) , 4) grupos alquilo/arilo que contienen aceptores y donadores de enlace de hidrógeno (25) , 5) aceptores y donadores de enlace de aril -hidrógeno (10) , 6) aceptores y donadores de enlace de hidrógeno, heterocíclicos (20) , 7) cadenas laterales que contienen grupos catiónicos (4) , 8) cadenas laterales que contienen grupos aniónicos (9) , y la cadena lateral de 3-amino-fenol del inhibidor 4^3 -meta con un control interno para la actividad de Src. Un amplio intervalo de aminas se incluyó para S3, a fin de no alterar demasiado la biblioteca debido al mayor nivel de incertidumbre para este sitio de unión en el modelo de Src.

El núcleo de indol se puede desarrollar en una biblioteca de combinación de la misma manera. En este caso, el NH de indol se usará como el punto de unión para la unión a la resina de Wang (u otra) puesto que se conoce la reacción de Mitsunobu análoga (Bhagwat & Gude, 1994) . Se ha desarrollado una gran cantidad de metodología de síntesis para la síntesis de índoles sustituidos y se ha diseñado una ruta para incluir la cadena lateral hidrófoba de S2 (ver Figura 7) (Ezquerra et al., 1996). La funcionalidad de triflato formada en la reacción 2 a partir del compuesto intermedio 6_9 (Figura 8) se puede convertir a una amina (Wolfe et al., 1997) y entonces una serie de amidas u otros derivados de amina después de la secuencia de reacción mostrada en la Figura 12. En realidad, triflato es un mango sintético versátil y se puede convertir en otros grupos funcionales también. Cuando la amina 72 está disponible, los x conocidos (por e emplo, el ácido sulfámico del inhibidor 28_ de Src, Tabla V, y amida-ácido 17 Tabla III) se pueden evaluar con este núcleo más desarrollado y evaluar algunos nuevos derivados de amina como potenciales Mi. Por ejemplo, el grupo Mi de tricarbonil -amida, hidratado, mostrado en la estructura 73_ (y su precursor no hidratado) es accesible vía la metodología de síntesis (ver Lai et al., 1996) y puede formar una variedad de interacciones interesantes con los residuos catalíticos conservados. Siguiendo, el procedimiento de modelado descrito anteriormente, se modelaron una serie de análogos que contienen hidroxi del grupo Mi de ácido borónico mostrado en las Figura 13 en los sitios activos de Src e IRTK y las interacciones ilustradas/modos de unión se encontraron como algunas de las posibilidades interesantes. Al fosforilar el ácido borónico, están disponibles posibilidades interesantes adicionales (por ejemplo, inhibición tipo suicida vía reacción del anhídrido mezclado resultante con un nucleófilo de sitio activo) . La presencia de grupos hidroxi adicionales en el anillo de fenilo Tyr-mimético es necesario y común entre muchos inhibidores de PTK (por ejemplo, Piceatanol 52 , Tabla V) y se mostró que es benéfico en el lado de la cadena con los inhibidores de PKA-fosfonato (por ejemplo, 2 versus . 3 y 4, Tabla 2. En consecuencia, la adición de uno ó más OH al diseño de Mi de inhibidor de ácido borónico como se ilustra en la Figura 13 puede mejorar considerablemente la potencia. Estos grupos de OH también extenderán la cadena lateral de ácido borónico más allá de los residuos catalíticos de Asp y Arg sin sufrir una penalidad para convertirlos con hidrocarburo como fue probablemente el caso con los homólogos de ácido borónico de PKA (23 y 24 Tabla III) . Una posible ruta a los ácidos hidroxiborónicos 76 y 77 utiliza la metodología de homologación de éster borónico quiral de Matteson (ver, por ejemplo Matteson et al., 1987, 1988 & 1990) . De esta manera, en una modalidad preferida de la invención, el primer módulo se produce al unir el primer módulo a un núcleo de péptido. Se identifican uno o más grupos funcionales que se unen preferencialmente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa, en donde al menos uno de uno o más grupos funcionales es un halógeno. Además, el primer módulo se combina con el segundo módulo de modo que el segundo módulo sustituye el núcleo peptídico. Los primeros módulos preferidos tienen dos o más grupos funcionales, incluyendo halógeno y uno o más grupos funcionales adicionales tales como grupo de ácido borónico, un grupo hidroxilo, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo guanidino, ácido carboxílico, un aldehido, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico. Los grupos funcionales adicionales más preferidos son grupos de ácido borónico, un grupo hidroxilo, o un grupo amida. Un grupo amida aun más preferido es una trxcarbonil -amida vicinal. Los segundos módulos preferidos incluyen indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina, benzofurano y benzotiofeno . Los segundos módulos más preferidos son un indol o naftaleno. En algunas modalidades de la invención, se puede unir más de un primer módulo al segundo módulo. Además, el primer módulo puede tener una cadena lineal que comprende entre uno a tres átomos de carbono que enlazan el primer módulo al segundo módulo. En modalidades alternativas, uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre. Los métodos y compuestos de la invención son ampliamente aplicables a cualquier proteína-cinasa . Las proteína-cinasas preferidas son proteína-tirosina-cinasa y proteína-serina-cinasa (a.k.a. serina-treonina-cinasas) . Las proteína-tirosina-cinasas preferidas son pp60c"src, p56l k, p55fyn, ZAP cinasa, tirosina-cinasa de receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, Bcr-Abl, tirosina-cinasa, del receptor de VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular) , tirosina-cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico, y tirosína-cinasas tipo receptor de factor de crecimiento epidérmico. Una proteína-tirosina-cinasa más preferida es pp60c~3rc. Las serina-proteína-cinasas preferidas incluyen cinasa de MAP (proteína activada por mitógeno) , proteína-cinasa C, y CDK (proteína-cinasa dependiente de ciclina) . El método de la presente invención puede consistir además de adicionar uno o más elementos de cadena lateral de especificidad a la combinación del primero y segundo módulos, como se describe anteriormente. Las cadenas laterales de especificidad pueden incrementar la potencia y especificidad del inhibidor. Las cadenas laterales de especificidad adecuadas se describen anteriormente (grupos R para las estructuras anteriores) y en los Ejemplos, que siguen . Una vez que se identifica un segundo módulo promisorio es necesario repetir todos, los pasos del método. Más bien, el primer módulo, las cadenas laterales de especificidad, o una combinación de los dos se pueden modificar para mejorar el inhibidor original, es decir, un inhibidor que tiene una capacidad incrementada para inhibir la actividad de proteína-cinasa cuando se compara al primer inhibidor no modificado. La presente invención se diseña para proporcionar de manera preferencial inhibidores de proteínas-cinasas que no actúan al inhibir la unión a ATP a la proteína-cinasa . Los inhibidores de proteínas-cinasas que actúan para inhibir la unión a ATP pueden ser potentes pero carecen frecuentemente de especificidad y por lo tanto frecuentemente no son buenos candidatos a fármacos. Por lo tanto, los inhibidores de proteína-cinasas que inhiben la actividad de proteína-cinasa pero no inhiben o sólo inhiben débilmente la unión al ATP de la proteína-cinasa se prefieren . En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para inhibir una proteína-cinasa. La proteína-cinasa se pone en contacto con un compuesto que tiene al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales capaces de unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa, en donde los grupos funcionales comprenden un halógeno, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. En la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-cinasa. La presente invención proporciona además un método para tratar una condición, sensible a un inhibidor de proteína-cinasa, en un sujeto. Una dosis efectiva de un inhibidor de proteína-cinasa se administra a un sujeto. El inhibidor de proteína-cinasa tiene al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína cinasa, en donde uno o más grupos funcionales comprenden un halógeno, y un segundo módulo que proporciona un segundo núcleo no peptídico, en donde la combinación de al menos un primer módulo y el segundo módulo inhibe la actividad de proteína-cinasa . Otro aspecto de la presente invención es un método para identificar inhibidores de proteína-fosfatasas . El método comprende proporcionar al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales capaces de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa, combinando al menos un primer módulo con al menos un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico para formar una o más combinaciones del primero y segundo módulos, detectar la una o más combinaciones del primero y segundo módulos para la inhibición de proteína-fosfatasa, y seleccionar combinaciones del primero y segundo módulos que inhiben la actividad de proteína-fosfatasa . El primero y segundo módulos adecuados de los grupos funcionales se describen anteriormente. En una modalidad preferida, al menos un primer módulo comprende un halógeno, de manera más preferente flúor. Los ejemplos de inhibidores de proteína-fosfatasa no peptídicos adecuados se muestran en la Tabla VIII posterior.

Las proteínas fosfatasas adecuadas incluyen de manera enunciativa y sin limitación PTB-1B. Se describen otras proteínas-fosfatasas adecuadas, por ejemplo en Zhang, 2002 ; McCluskey et al., 2002 et al., 2002a; Zhang 2001; McCluskey et al., 2001; Pestell et al., 2000; Moller et al., 2000; Ripka, 2000; Kennedy, 1999; Johnson et al., 2002; McCluskey 2002b. Como se describe anteriormente, el método se diseña para proporcionar de manera preferencial inhibidores de fosfatasa que se unen al sitio de unión de péptido de sustrato . La presente invención también se refiere a un método para inhibir una proteina-fosfatasa . La proteína-fosfatasa se contacta por un compuesto que comprende al menos un primer módulo que tiene un primero o más grupos funcionales cada uno capaz de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. La combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-fosfatasa. En una modalidad, el compuesto tiene la siguiente fórmula : Ri en donde Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes y se selecciona del grupo de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0) SRa, OH, 0Ra OC(0)Ra, OC (0) 0Ra, NH2, NRaRb, NRaC(0) Rb, NRaC (0)NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0) SRb, NRaS (0) R , NRaS(0)2Rb, NRaS (0) 0Rb , NRaS ( O ) 20Rb , NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (0) 0RRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb( B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo (ramificado, cíclico ó no ramificado) , de manera preferente que tiene de uno a 20 átomos de carbono, opcionalmente un doble o triple enlace y sustituido opcionalmente con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfota, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo, o R5 y Rs forman conjuntamente un compuestos heterocíclico. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc pueden estar sustituidos o insustituidos . En una modalidad preferida, R3 es un halógeno, de manera preferente, flúor. En otra modalidad, al menos uno de R6 o R7 es en donde R * es el punto de unión y es (CH2)X donde X es de 0 a 10, CH2CH0H, CH(CH3)R, o CH(CH3)S y cada uno de R9 hasta R13 son los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)2ORb, NRaP(0)0Rb0Rc, NRaP (0) 0RbRo , NRaP (0) ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb/ S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que tiene de manera preferente uno a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que cualquiera de R9 hasta Ri3 y Ra hasta Rc pueden estar sustituidos o insustituidos . En una modalidad preferida, cada uno de R9 hasta Ri3 se pueden seleccionar del grupo que consiste de 0CH3, OCH2CH3, H, C¾, OH, C¾OH, CF3, OCF3, CFO, CSH5, OC6H5, 0CH2C6H5, OCH2C¾CH3, CHO, C02H, CO2CH3, CH2C02H, CH2C02CH3, N02 y halógeno. En una modalidad adicional, al menos uno de R6 y es en donde el asterisco indica el punto de unión al nitrógeno. En aun una modalidad adicional, el compuesto tiene la fórmula : en donde Rx hasta R7 son cada uno los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb/ NRaP (0) ORbORc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRh, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que tiene de manera preferente de uno a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico áster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo . Ra, ¾ y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales . Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para tratar una condición, sensible a un inhibidor de proteína-fosfatasa, en un sujeto. Un inhibidor de proteína-fosfatasa se administra a un sujeto. El inhibidor de proteína-fosfatasa tiene al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales capaces de la unión covalente o no covalente para residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. La combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-fosfatasa en el sujeto. Se pueden usar inhibidores de proteína-fosfatasa en varias técnicas terapéuticas, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, tratamiento de diabetes Tipo II, obesidad y cáncer (Zhang, 2002; McCluskey et al., 2002a; Zhang 2001; McCluskey et al., 2001; Pestell et al., 2000; Moller et al., 2000; Ripka, 2000; Kennedy, 1999; Johnson et al., 2002; McCluskey 2002b). Los ejemplos de otros compuestos adecuados para los métodos descritos anteriormente y los siguientes métodos de la invención incluyen: en donde cualquiera de los R individuales pueden ser un Mi que contiene halógeno, y los grupos R restantes pueden ser H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRhRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP(0)ORbORc, NRaP (0)ORbRc, NRaP (O) ORbORc , SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb, S (0) 2NRaRb, P(O)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico ó no ramificado)-, opcionalmente que contiene un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales; Ri R? en donde cualquiera de loa R individuales pueden ser Mi, y los grupos R restantes pueden ser H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa/ NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0)NRbRc, NRaC (0) 0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rbí NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (O) 0Rb0Rc , NRaP (O) 0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc; SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRh, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y alquilo (ramificado, cíclico ó no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo . Se entiende que todas las posiciones de sustitución abiertas en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales: en donde cualquiera de los R individuales pueden ser Mi, y los grupos R restantes pueden ser H, C(0)Ra; C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC (O) 0Ra, NH2 , NRaRb, NRaC (0) Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (O) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (0) 0RbRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Raí S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico ó no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abiertas en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales; en donde cualquiera de los R individuales pueden ser Mj , y los grupos R restantes puede ser H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(O)0Ra, NH2 , NRaRbí NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (O) ORORc, NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfinico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales · tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abiertas en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales; en donde cualquiera de los R individuales pueden ser Mi, y los grupos R restantes pueden ser H, . C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0)NRbRc, NRaC(0)0R , NRaC(0)SRbí NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0R0Rc , NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abiertas en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales; en donde cualquiera de los R individuales pueden ser i, y los grupos R restantes pueden ser H, C(0)Ra, C(0)NRaR , C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) ORbORc , NRaP (0) 0RbRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S (0) 0Ra; S (0) 20Ra, S (0) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales; en donde cualquiera de los R individuales pueden ser Mi y los grupos R restantes pueden ser H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, MRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP (0) 0RbRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S (0) Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0}0Ra0Rb( B(0H)2í halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones y sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales; en donde cualquiera de los R individuales pueden ser Mi y los grupos R restantes pueden ser H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0)NRbRo, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb) NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS (0) 20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (0) 0RbRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRh) S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y R0 pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales; en donde cualquiera de los R individuales pueden ser Mx y los grupos R restantes pueden ser H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, 0C(0)Ra, OC (0) 0Ra, NH2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (O) R , NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (0) 0RbRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y/o un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo . Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales. La presente invención también proporciona un método para probar compuestos para la capacidad para inhibir la actividad de proteína-cinasa ó proteína- fosfatasa . Se producen compuestos como se describe anteriormente. La actividad de la proteína-cinasa o proteína-fosfatasa se mide en la presencia de un inhibidor a la misma temperatura, pH, concentración iónica, osmolaridad y concentración de magnesio libre como se encuentra en una célula que expresa la proteína-cinasa a proteína- fosf tasa . El nivel de actividad de proteína-cinasa ó proteína-fosfatasa se compara al nivel de actividad de la proteína-cinasa o proteína-fosfatasa sin la presencia del inhibidor. Este sistema de ensayo que imita las condiciones fisiológicas proporciona los datos de inhibición más pertinentes . El ensayo se puede llevar a cabo en un sistema de ensayo automatizado. Además, el ensayo se puede combinar en un método de química de combinación para detectar rápidamente numerosos candidatos .

Se puede adaptar el método de ensayo de PTK por ELISA no radioactivo, en placa de 96 cavidades Pierce-96 a las condiciones de Ensayo Mimético celular para la detección inicial de Src de las bibliotecas de combinación de placa de 96 cavidades. Este ensayo de alto rendimiento utiliza el mismo sustrato peptídico de RR-SRC, excepto que está biotinilado de modo que se puede unir a las células revestidas con neutrAvidin en sus placas comerciales de 96 cavidades. Este ensayo de inhibición de alto rendimiento se puede correr al incubar Src con el sustrato de RR-SRC pre-unido a las cavidades seguido al adicionar su conjugado de anticuerpo anti-fosfotirosina (PY20) -peroxidasa de rábano (HRP) y su sustrato de HRP para cuantificar el nivel de fosfo-RR-SRC producida vía medición del nivel del producto de HRP con un lector de UV de placas de 96 cavidades. Se han usado ensayos radioactivos de P32-ATP de bajo rendimiento, normales, pero se prefiere el formato con placa de 96 cavidades, especialmente con un ensayo no radioactivo, si es posible. Conforme se desarrollan inhibidores de Src muy potentes, se puede establecer un panel de ensayos de proteína-cinasas con las proteína-cinasas comercialmente disponibles, usando las condiciones del ensayo de proteína-cinasa, mimético celular, y probar estos inhibidores a través del panel para obtener una valoración inicial de la especificidad. Una valoración de especificidad más completa, que comprende las aproximadamente 2,000 proteína-cinasas, necesitará ser llevado a cabo en cultivo celular e in vivo.

Se pueden estudiar inhibidores de Src activos en un conjunto de ensayos basados en célula lado por lado usando células de riñon de rata normales (NR ) y un transformante pp60v Src sensible a la temperatura de esta línea celular (LA25). El transformante LA25 se acopla en el crecimiento independiente de la fijación y del suero a la temperatura "permisible" de 33 °C debido a la activación de pp60v"src pero no a la temperatura "no permisible" de 40°C a la cual no se activa pp60v"arc (Li et al., 1996). El uso de este par en líneas celulares cercanamente relacionadas para la prueba de los inhibidores de Src a tanto la temperatura permisible como la no permisible permite determinar si un inhibidor dado de Src está bloqueando el crecimiento celular debido al bloqueo específico de la ruta de señalización de Src, por un mecanismo diferente o por un efecto citotóxico general. Los resultados de la prueba inicial del inhibidor no peptídico de Src 4J3-meta (Tabla V) en este par de líneas de células se muestran en la Figura 14. Como se muestra en esta gráfica, el crecimiento de las células LA25 a la temperatura permisible de 33 °C se inhibe por aproximadamente 50 % a una concentración de 25 µ? de 4_3-meta con relación al crecimiento de células LA25 a la temperatura no permisible de 40°C como un control. La carencia de toxicidad celular de 4_3-meta se pone en evidencia por el hecho que conforme se incrementa su concentración hasta 400 µ?, el crecimiento basal de las células no transformadas de NRK, las células LA25 a los 40°C no permisibles, y las células LA25 a la temperatura permisible de 33°C (pero con pp60v src completamente inhibido para 43_-meta) no sólo disminuye sino realmente se incrementa algo (presumiblemente debido a una actividad no relacionada a Src dé este compuesto) . Puesto que se prepararon soluciones de 4_3-meta con una baja concentración de DMSO para solubilización, un control con DMSO también se corrió a la misma concentración. Además, se pueden detectar inhibidores promisorios de Src en ensayos primarios de tejido tumoral humano, particularmente para buscar sinergia con otros fármacos anti-cáncer conocidos. Otro aspecto de la presente invención se refiere a un método para proteger contra o tratar pérdida de audición en un sujeto. Este método comprende administrar una cantidad efectiva de un inhibidor de proteína-tirosina-cinasa (PTK) al sujeto para proteger contra o tratar pérdida de audición.

El inhibidor de PTK en el método anterior de la presente invención puede ser un inhibidor de tirosina-cinasa de receptor o un inhibidor de tirosina-cinasa no de receptor (ver Hubbard et al., 2000) . En una modalidad preferida de la presente invención, el inhibidor de PTK es un inhibidor de PTK de la familia Src . En esta modalidad, el inhibidor de PTK puede inhibir la actividad de cualquier miembro de la familia de Src, incluyendo la tirosina cinasa pp60v"s c. En otra modalidad preferida, el inhibidor de PTK es un inhibidor de cinasa de adhesión focal. En una modalidad, el inhibidor de PTK es un inhibidor de PTK no peptídico. En una modalidad preferida, el inhibidor de PTK no peptídico tiene al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de la unión covalente o no covalente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico. La combinación del primero y segundos módulos inhibe la actividad de la proteína-cinasa en el sujeto.

Por ejemplo, los inhibidores de PTK no peptídicos, adecuados tienen la siguiente fórmula: en donde Ri o hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0) a, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP(0)0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP (0) 0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, bíarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado), que tiene de manera preferente de 1 a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y sustituido opcionalmente con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo , ó R5 y Rs forman conjuntamente un compuesto heterocíclico. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con uri heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxíllco, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales. Los ejemplos de grupos Re y R7 adecuados se proporcionan en la Tabla VI posterior. En una modalidad preferida, R3 es un halógeno, de manera preferente, flúor. En una modalidad, al menos uno de R6 o R7 es en donde R * es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, C¾CHOH, CH(CH3)R, o CH(CH3)S y cada uno de R9 hasta Ri3 puede ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP (O) 0RbRc , NRaP(0)ORbORc, SRa> S(0)Ra, S(0)2Ra, S (O) ORa, S(0)20Ra, S (O) RaR , S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que tiene de manera preferente uno a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxllico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo. Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que cualquiera de Rg hasta R13 y Ra hasta Rc pueden estar sustituidos o no sustituidos. En una modalidad preferida, cada uno de R9 hasta R13 se pueden seleccionar del grupo que consiste de 0CH3, OCH2CH3, H, CH3, OH, CH2OH, CF3, OCF3, CFO, C6HS, OC6¾, OCH2C6H5, OC¾CH2CH3, CHO, C02H, C02CH3, CH2C02H, CH2C02CH3, N02 y halógeno. En otra modalidad, al menos uno de R6 ó R7 es en donde el asterisco indica el punto de unión al nitrógeno.

Otro inhibidor de PTK no peptídico útil en el método de la presente invención tiene la siguiente fórmula: en donde X es un halógeno, de manera preferente, flúor y Ri hasta R son elementos de especificidad. En una modalidad, Ri es H, R2 es R3 es H, y R4 es H. El compuesto también puede estar sustituido en cualquier otra posición en el anillo de indol .

Un inhibidor de PTK no peptídico, adicional tiene la fórmula: en donde ¾ hasta R7 son cada uno los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb/ C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC (O) Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2R , NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S (0) 0Ra, S(0)20Ra, S (O) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , que tiene de manera preferente de 1 a 20 átomos de carbono, que contiene opcionalmente un doble o triple enlace y sustituido opcionalmente con un heteroátomo u otros grupos funcionales, tal como un ácido carboxílico éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido Eosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo, y heterobiarilo . a, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo (ramificado, cíclico o no ramificado) , opcionalmente sustituido con un heteroátomo u otros grupos funcionales tal como un ácido carboxílico, éster carboxílico, alcohol, éter, tioéter, amida, tioamida, urea, uretano, sulfóxido, sulfona, ácido fosfónico, éster fosfónico, ácido fosfínico, éster fosfínico, ácido borónico, arilo, heteroarilo, biarilo y heterobiarilo. Se entiende que todas las posiciones de sustitución abierta en las cadenas laterales anteriores pueden contener sustituciones adicionales. X es de manera preferente 0 ó 1. En aun otra modalidad, el inhibidor de PTK es un inhibidor peptídico de proteína-tirosina-cinasa . Los inhibidores peptídicos de PTK adecuados se describen, por ejemplo en Lai et al., 1998. En otra modalidad, el inhibidor de PTK en este método de la presente invención es un inhibidor dirigido del sustrato peptídico. Como se usa en la presente, un inhibidor dirigido del sustrato peptídico es un inhibidor que se une a los sitios de especificidad del sustrato peptidico del sitio activo de la tirosina-cinasa y no se une a ATK. Los inhibidores de PT no peptídicos, descritos anteriormente, son ejemplos de inhibidores dirigidos del sustrato peptídico . En otra modalidad, es un inhibidor de PTK es un inhibidor dirigido del sitio de ATP. Como se usa en la presente, un inhibidor dirigido del sitio de ATP es un inhibidor que se une a ATP para inhibir de manera competitiva a una PTK. En los ejemplos de inhibidores del sitio de ATP incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, flavanoides, genisteina y lavendustina A. Se describen ejemplos de los inhibidores del sitio de ATP (antagonistas), por ejemplo en Levitzki y Grazit, 1995. En aun otra modalidad, el inhibidor de PTK es el inhibidor del sitio de homología 2 (SHR) de Src . Un inhibidor del sitio de SH2 se une al sitio SH2 para inhibir la actividad de la PTK. Los ejemplos de inhibidores de SH2 adecuados se describen, por ejemplo en García- Echeverría, 2001, Muller, 2001, Fretz et al., 2000, y Vu, 2000. En una modalidad adicional, el inhibidor de PTK es un inhibidor del sitio de homología 3 (SH3) de Src. Un inhibidor del sitio de ??3 se une al sitio de SH3 para inhibir la actividad de la PTK. Los ejemplos de inhibidores de SH3 adecuados se describen, por ejemplo en Stein, 1998 y Sparks et al., 1994. En otra modalidad, el inhibidor de PTK es un inhibidor alostérico. Como se usa en la presente, un inhibidor alostérico se une a un sitio alostérico diferente del sitio activo de la PTK, cambiando de este modo la conformación de la PTK e inhibiendo la actividad de la PTK. Los inhibidores de PTK anteriores pueden unirse covalente o no covalentemente (y de manera reversible o irreversible) a sus respectivos sitios. Los inhibidores de PTK se pueden administrar de manera oral (por ejemplo en alimentos), de forma parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intreperitoneal , por instilación intranasal, por instilación intracavidad o intravesical , intraauditodialmente , intraarterialmente , intralesionalmente, por bomba de dosificación, o por aplicación a membranas mucosas. Se pueden administrar solos o con portadores, excipientes o estabilizadores farmacéuticos o fisiológicamente aceptables, y pueden estar en una forma sólida o líquida, tal como tabletas, cápsulas, polvos, soluciones, suspensiones o emulsiones. Las formas de dosis unitarias sólidas pueden ser del tipo convencional. La forma sólida puede ser una cápsula, tal como un tipo de gelatina urinaria que contiene el inhibidor de PTK y un portador, por ejemplo, lubricantes y rellenos inertes, tal como lactosa, sacarosa o almidón de maíz. En otra modalidad, estos inhibidores de PTK se pueden convertir en tableta con bases convencionales para tableta, tal como lactosa, sacarosa o almidón de maíz, en combinación con aglutinantes, tal como goma de acacia, almidón de maíz, o gelatina, agentes desintegrantes tal como almidón de maíz, almidón de patata o ácido algínico, y lubricantes, tal como ácido esteárico o estearato de magnesio. Los inhibidores de PTK también se pueden administrar en dosis inyectables por solución o suspensión de estos materiales en un diluyente fisiológicamente aceptable con un portador farmacéutico. Estos portadores incluyen líquidos estériles, tal como agua y aceite, con o sin la adición de un agente tensioactivo, adyuvantes, excipientes o estabilizadores. Los aceites ilustrativos son aquellos de petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, por ejemplo, aceite de cacahuate, aceite de soya, o aceite mineral. En general, agua, solución salina, dextrosa acuosa y soluciones relacionadas de azúcar, y glicoles, tal como propilenglicol o polietilenglicol , son portadores líquidos preferidos, particularmente para soluciones inyectables . Para el uso como aerosoles, el inhibidor de PTK en solución o suspensión se puede envasar en un recipiente presurizado de aerosol junto con propulsores adecuados, por ejemplo, propulsores de hidrocarburos tal como propano, butano o isobutano, y con adyuvantes convencionales. El inhibidor de PTK también se puede administrar en una forma no presurizada, tal como en un nebulizador o atomizador. Las dosis adecuadas se determinan en base a una variedad de factores, pero se pueden incluir de aproximadamente 50 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg de inhibidor de PTK, de manera preferente de aproximadamente 50 mg/kg a aproximadamente 400 mg/kg de inhibidor de PTK (ver, por ejemplo, Bakhtiar et al., 2002; Druker, 2002) . Los inhibidores de PTK descritos en la presente se pueden administrar a cualquier sujeto, tal como cualquier miembro de la clase de mamífero, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación, humanos, primates no humanos tal como chimpancés y otras especies de monos y changos; animales de granja incluyendo ganado vacuno, ovejas, cerdos, cabras y caballos; animales domésticos incluyendo perros y gatos; animales de laboratorio incluyendo roedores, tal como ratones, ratas y cobayos y similares. El término no denota urja edad o sexo particular. Como se describe en la presente, los inhibidores de PTK se pueden usar para proteger contra o prohibir la pérdida de audición en un sujeto. A fin de proteger contra la pérdida de audición, el inhibidor de PTK se puede administrar antes de la exposición al ruido o la exposición a un fármaco que induce pérdida de audición. Estos fármacos pueden incluir fármacos quimioterapéuticos (por ejemplo, fármacos basados en platino tal como células pilosas objetivo) y antibióticos de amino glicósido. De manera alternativa, los inhibidores de PTK se pueden usar para tratar pérdida de audición en un sujeto. En esta modalidad, el inhibidor de PTK se administra al sujeto de manera subsiguiente a la inserción de la pérdida de audición para reducir los niveles de pérdida de audición . Aunque no se desea que se una por teoría, se cree que la administración de los inhibidores de PTK impide la apoptosis de células pilosas cocleares, impidiendo de esta manera la pérdida de audición. En particular, después de la exposición a ruido, las uniones celulares herméticas entre las células pilosas cocleares, así como la interacción de la matriz extracelular-célula se rompen y tensan. El tensado de las uniones celulares herméticas inicia la apoptosis en las células a través de una ruta de señalización compleja, en la cual la familia de la Src de las PTK actúa como conmutadores moleculares, interactuando con la cinasa de adición focal para traducir las señales de las interrupciones célula-matriz a los núcleos. Se cree que la administración de los inhibidores de PTK impide la iniciación de la apoptosis en esta cascada. Como se describe anteriormente, los inhibidores descritos en la presente son inhibidores de pp60c-src, de crecimiento celular de cáncer de próstata altamente metastático, y son no tóxicos en ratones en la administración i.p. aguda de alta dosis. Algunos de estos compuestos se pueden encontrar que tienen otras actividades biológicas en la prueba más amplia (por ejemplo, inhiben glicógeno-fosforilasa para diabetes Tipo II, transcriptasa invertida del VIH, o tromboxano-sintasa) . De esta manera, estos compuestos se pueden usar como inhibidores de tirosina-cinasa en aplicaciones terapéuticas de combinación. Por ejemplo, el inhibidor de PTK se puede administrar a un sujeto en una cantidad y bajo condiciones efectivas para tratar o prevenir la pérdida de audición y para tratar el cáncer (por ejemplo, donde ese encuentre una actividad cinergística) . Los inhibidores de tirosina-cinasa tienen otras aplicaciones terapéuticas potenciales también (por ejemplo, inmunosupresores en el caso de p561ck) e inhibidores de la tirosina-fosfatasa PTP-1B pueden proporcionar fármacos para tratar diabetes Tipo II. Por lo pronto, los inhibidores de PTK descritos en la presente se pueden usar en variedad de terapias de combinación.

Ejemplos Ejemplo 1 - Síntesis y actividad de inhibidores de proteína-cinasa y/o proteína-fosfatasa derivados de indol Los siguientes resultados muestran la síntesis en fase de solución de bibliotecas de 5- fluoroindol-2 -carbaxamida, y prueba de inhibidores de protelna-cinasa y/o proteina-fosfatasa derivados de indol. Estos productos finales son ejemplos de inhibidores basados en indol en donde se ilustra la síntesis con un grupo 5-fluoro.

A. Síntesis de Compuestos Intermedios y Reactivos de Muestra : Ácido 5-fluoro-3-fenilindol-2-carboxílico (a) Preparación de metil Ester Una mezcla de ácido 5-fluoroindol-2-carboxílico (6 g, 33.5 mmol) y un HC1 metanólico recién preparado (100 mL) se agitó toda la noche a temperatura ambiente. El precipitado de éster se recolectó por filtración, se lavó con solución saturada de NaHC03, agua, y MeOH. El filtrado se trató con solución saturada de NaHC03 y se extrajo con EtOAc . La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (MgS04) , y se evaporó in vacuo. El producto de éster (6 g) fue un sólido blanquecino y se usó para el siguiente paso sin purificación adicional: p.f. 200-201 °C; RMN 1H (CDC13, 500 MHz) d 8.94 (br,lH), 7.3 3 (dd, 1H, J = 9.2 y 4.3 Hz) , 7.3 0 (dd, 1H, J = 2.2 y 9.2), 7.15 (d, 1H, J = 2.1Hz), 7.07 (ddd, 1H, J= 2.5, 8.9 y 9.1Hz), 3.92 (s, 3H) (b) Preparación -yodo Se disolvieron 4.22 g (21.8 mraol) del éster metílico en DMF (25 mL) . En otro matraz, una solución de yodo (6.09 g, 24 mmol) y KOH (4.65 g, 82.9 mmol) en DMF (25 mL) se agitó durante 30 minutos y se adicionó gota a gota a la solución de éster durante 5 minutos. Después de agitar durante 10 minutos a temperatura ambiente, la reacción se enfrió rápidamente al vaciar en una solución de NaHS03 (2.2 g) , NH0H (25% solución en ¾0) en 300 mL agua. La mezcla se agitó durante 30 minutos luego el producto sólido precipitado se recolectó por filtración y se lavó con H20: RMN 1H (CDCI3, 500 MHz) d 9.17 (br, 11-1), 7.33 (dd, 1H, J = 9.0 y 4.2 Hz) 7.21 (dd, 1H J = 9.0 y 2.0 Hz) , 7.12 (dt, 1H, J = 9.0 y 2.0 Hz) , 3.81 (a, 3H) .

El derivado de yodo se mezcló con ácido bencenoborónico (2.76 g, 22 mmol) , PdCl2(PPh3)2 (0.7 g, 1 mmol) , y 50 mL de Na2C03 2M en dioxano (200 mL) . La mezcla se agitó a 90 °C toda la noche. El solvente se evaporó bajo vacío. El producto se extrajo con EtOAc (3 x 200 mL) . El extracto combinado se lavó con salmuera, se secó con MgS04, y se purificó por cristalización (CH2Cl2-hexano) y se cromatografió en gel de sílice (Hexano-EtOAc 4:1): p.f. 189 °C; RMN XH (CDCI3 , 500 MHz) d 8.94 (br, 1H) , 7.51 (dd, 2H, J= 1.5 y 7.9 Hz) , 7.45 (ddd, 2H, J= 1.8, 7.3 y 7.8), 7.39-7.34 (complejo, 2H) , 7.25 (dd, 1H, J= 2.5 y 8.7 Hz) , 7.10 (ddd, IH, J= 2.5, 8.9 y 9.1Hz), 3.80 (s, 3H) . (d) Saponificación de éster metílico El éster descrito anteriormente (2.5 g, 9.28 mmol) se disolvió en THF (30 mL) . Una solución de LiOH (2.4 g, 100 mmol) en agua (20 mL) se adicionó y la mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y THF se removió por evaporación por vacío. La mezcla se trató con HC1 2M hasta volverse ácida. El producto se extrajo con EtOAc . La capa orgánica se lavó, se secó (salmuera, Na2S04) , y se concentró bajo vacío. El producto sólido crudo se redisolvió en NaHC03 (solución saturada) y se lavó varias veces con CH2C12. La capa acuosa se ácidificó con hielo y HC1 2M y se extrajo con EtOAc . Después se lavó, se secó, y rotoevaporó, el producto se recolectó como un sólido blanco (rendimiento 2.3 g, 97%) : p.f. 195-196 °C; RMN ?? (CDC13, 500 MHz) d 8.94 (br, 1H) , 7.52 (dd, 2H, J= 1.8 y 7.9 Hz) , 7.46 (ddd, 2H, J= 1.8, 7.3 y 7.6), 7.40 (ddd, 1H, J = 1.8, 7.4 y 7.8 Hz) , 7.37 (dd, 1H, J = 9.0 y 4.2 Hz) , 7.25 (dd, 1H, J = 2.5 y 8.7 Hz) , 7.12 (ddd, 1H, J= 2.4, 8.8 y 8.9. Hz) . 3 -benciloxi - 5 -hidroxibenzonitrilo A una mezcla de 3 , 5-dihidroxibenzonitrilo (1.08 g, 8 mmol) y K2C03 (1.104 g, 8 mmol) en CH3CN (50 mL) , se adicionó bromuro de bencilo (1.438 g, 8 mmol) . La mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas. El solvente se evaporó bajo vacío. El residuo se trató con EtOAc (200 mL) y HCl 1M (200 mL) . La capa orgánica se lavó, se secó, y se evaporó in vacuo. El residuo se cromatografió (gradiente, Hexanos-CH2Cl2 -MeOH) para dar 3 -benciloxi -5 -hidroxibenzonitrilo (529 mg, 29%), 3 , 5-dibenciloxibenzonitrilo (784 mg, 31%) y 256 mg (23.7 mg, 24%) del material de inicio. El producto 3-benciloxi-5-hidroxibenzonitrilo tuvo: p.f. 144-145 °C; RMN ¾ d 9.15 (S, 1H, OH), 7.47 (d, 2H, J = 7.0 Hz, 2 ' y 61 ) , 7.40 (ddd, 2H, J = 7.0, 7.0, 2.0 Hz, 3 ' y 51 ) , 7.34 (dd, 1H, J = 7.7 y 2.1Hz, 4'), 6.89 (dd, 1H, J = 1.5 Hz, 4)., 6.78 (d, 2H, J = 1.8 Hz) , 5.16 (s, 2H) . 3 , 5-dibenciloxibenzonitrilo Este compuesto tuvo p.f. 106 °C; RMN ¾ (CDC13, 500 MHz) d 7.38 (complejo, 1 OH), 6.83 (d, 2H, J = 2.1Hz), 6.79 (d, 1H, J = 2.1Hz) . 4 -benciloxi -3 -hidroxibenzonitrilo CN OH Una mezcla de 3 , -dihidroxibenzonitrilo (540 mg, 4 mmol) , 2C03 (552 mg, 4 mmol) y bromuro de bencilo (476 mg, 4 mmol) en acetona (20 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. La mezcla se evaporó bajo vacío y se sometió a cromatografía instantánea en columna (2% MeOH en tolueno-hexano, 2:1) para dar el producto deseado (224 mg, 25%) : p.f. 101 °C; RMN 1H (Acetona-d6, 500 MHz) d 8.55 (s, 1H) , 7.50 (d, 2H, J = 7.3 Hz) , 7.39 (dd, 2H, J = 7.0 y 7.3) , 7.34 (dd, 1H, J = 7.0 y 7.3), 7.2 (m, complejo, 3H) , 5.25 (s, 2H) . 3 -hidroxi -4 -propiloxibenzonitrilo Este compuesto se preparó siguiendo un procedimiento similar usado para preparar 4-benciloxi-3-hidroxibenzonitrilo en 27% de rendimiento: p.f. 99 °C; RMN H (Acetona-d6, 500 MHz) d 8.33 (s, 1H) , 7.21 (dd, 1H, J = 8.2 y 1.8 Hz) , 7.13 (d, 1H, J = 1.8 Hz) , 7.08 (d, 1H, J = 8.3 Hz) , 4.07 (t, 2H, J = 6.4 Hz) , 1.80 (m, 2H) , 1.01 (t, 3H, J = 7.3 Hz) . 3 -benciloxi -5-hidroxibencilamina 3-benciloxi-5-hidroxibenzonitrilo (225 mg, 1 mmol) se disolvió en 2 mL THF. 2 mL de BH3-THF (1.5 M en THF y éter) se adicionó gota a gota, luego la mezcla se calentó a temperatura de reflujo durante 3 horas. Después se enfrió, la mezcla se virtió cuidadosamente a 3M HCl (enfriado con hielo) y se permitió para agitar durante 20 horas a temperatura ambiente. La mezcla se naturalizó con NaHC03 sólido, de modo tal que el producto se precipitó como un sólido blanco. El producto se recolectó por filtración, se lavó con agua, y se secó (140 mg, 61%) : MP 164-166 °C (dec) ; RMN 1H (DMS0-d6, 400 MHz) 6 9.28 (br, 1H) , 7.41 (d, 2H, J = 6.9 Hz) , 7.36 (dd, 2H, J = 7.0 y 7.6 Hz) , 7.30 (dd, 1H, J = 7.0 y 6.6 Hz) , 6.43 (s, 1H) , 6.32 (s, 1H) , 6.21 (dd, 1H, J = 2.2 y 2.0 Hz) , 4.99 (S, 2H) , 3.57 (S, 2H) . 3 , 5-dibenciloxibencilamina Este compuesto se preparó de acuerdo al procedimiento usado en la preparación de 3-benciloxi-5-hidroxibencilamina . La reacción se enfrió rápidamente via adición de eOH y la mezcla se dejó para agitar toda la noche. El solvente se removió y el producto se obtuvo por cromatografía instantánea en columna (CH2C12 -Hexanos que contiene 5% de MeOH) como un aceite claro, delgado (90%) : RMN 1H (Acetona-d6, 500 MHz) d 7.46 (d, 4H, J = 7.6), 7.37 (dd, 4H, J = 7.3 y 7.6), 7.31 (dd, 2H, J = 7.3 y 7.0), 6.65 (d, 1H, J = 2.1Hz), 6.64 (d, 1H, J = 2.0 Hz) , 6.52 (dd, 1H, J = 2.0 y 2.2 Hz) , 5.07 (s, 4H) , 4.35 (s, 2H) , 1.97 <br, 1H) , 1.85 (br, 1H) . 4-benciloxi -3 -hidroxibencilamina Este compuesto se preparó de acuerdo al procedimiento usado en la preparación de 3,5-dibenciloxibencilamina, iniciado a partir de 4-benciloxi-3-hidroxibenzonitrilo . Rendimiento fue 33%. p.f. 122-125 °C; RMN ¾ (DMS0-d6, 400 MHz) d 8.9 (br, 1H) , 7.44 (d, 2H, J = 7.4 Hz) , 7.35 (dd, 2H, J = 7.0 y 7.7 Hz) , 7.28 (dd, 1H, J = 7.0 y 7.3), 6.85 (d, 1H, J = 7.6 Hz) , 6.77 (d, 1H, J = 2.1Hz), 6.61 (dd, 1H, J = 7.4 y 2.2 Hz) , 5.05 (s, 2H) , 3.55 (s, 1H) , 2.50 (br, 2H) . 3 -hidro i -4 - ro i1oxibenci1amina Este compuesto se preparó por reducción de 3-hidroxi-4-propiloxibenzonitrilo de acuerdo al procedimiento descrito en la preparación de 3 , 5-dibenciloxibencilamina . Rendimiento fue 48%: p.f. 110-113 °C (desc); RMN ¾ (CDCl3, 400 MHz) d 6.86 (s, 1H) , 6.77 (d, 1H, J = 8.4 Hz) , 6.74 (d, 1H, J = 8.1Hz), 3.95 (t, 1H, J = 6.6 Hz) , 3.74 (s, 2H) , 2.01 (br, 2H) , 1.82 (m, 2H) , 1.02 (t, 3H, J = 7.4 Hz) . -hidroximetilbencilamina Este compuesto se preparó por reducción de 4-cianobenzaldehído de acuerdo al procedimiento descrito en la preparación de 3 , 5-dibenciloxibencilamina . Rendimiento fue 46%: p.f. 102-123 °C; RMN ¾ (Acetona-d6, 500 Hz) 7.27 (m, complejo 4H) , 4.58 (s, 2H) , 3.72 (s, 2H) , 3.69 (s, 1H) 2.77 (br, 1H) , 2.45 (br, 1H) . 3 -hidroximetilbencilamina Este compuesto se preparó por reducción de 3-cianobenzaldehído de acuerdo al procedimiento descrito en la preparación de 3 , 5-dibenciloxibencilamina . Rendimiento fue 66%; RMN ¾ (Acetona-d6, 500 Hz) d 7.32 (s, 1H) , 7.23 (dd, 1H, J = 7.6 y 7.0), 7.19, complejo, 2H) , 4.59 (s, 2H) , 4.40 (s, 2H) , 4.10 (br, 1H) , 1.96 (br, 1H) , 1.88 (br, 1H) . 2-metoxi-5-nitrobenzaldeh£do metil hemiacetal 2-hidroxi-5-nitrobenzaldehído (3.34 g, 20 mmol) se disolvió en acetona (70 mL) ; K2C03 (5.53 g, 40 mmol) y yodometano (14.19 g, 100 mmol) se adicionó y la solución se calentó a reflujo toda la noche. El solvente se removió in vacuo y el residuo se disolvió en EtOAc. El producto resultante se lavó con NaOH 2M, agua, y salmuera y se secó. La remoción del solvente dio por resultado un producto sólido (2.5 g, 69%) de 2-metoxi-5-nitrobenzaldehído metil hemiacetal : p.f. 147-148 °C (89 °C se reportó para el aldehido); R N ¾ (CDCl3, 400 MHz) d 8.43 (d, 1H, J = 2.9 Hz) , 8.24 (dd, 1H, J = 2.6 y 9.1Hz), 7.78 (d, 1H, 16.5 Hz) , 6.99 (d, 1H, J = 9.1Hz), 6.83 (d, 1H, J = 16.4 Hz) . NOTE: Este RNM se tomó después de aproximadamente 10 meses y el hemiacetal aun existió y puro. 5-nitro-2-propiloxibenzaldeh£do Este compuesto se preparó por la reacción de 2-hidroxi-5-nitrobenzaldehído y 1-yodopropano usando un procedimiento similar como se describió en la preparación de 2-metoxi-5-nitrobenzaldehído metil hemiacetal. Rendimiento fue 72%: p.f. (51-52 °C) ; RMN ¾ (500 MHz , CDC13) d 10.46 (s, 1H) , 8.68 (d, 1H, J = 2.9 Hz) , 8.39 (dd, 1H, J = 2.7 y 9.1Hz), 7.08 (d, 1H, J = 9.1Hz), 4.16 (t, 2H, J = 6.2), 1.93 (m, 2H) , 1.98 (t, 3H, J = 7.37). 2 -hidroximetil-4 -nitrofenol Una solución de 2 -hidroxi -5-nitrobenzaldehído (5.01 g, 30 mmol) en una mezcla de 60 mL 1M NaOH y 30 mL MeOH se enfrió a 0 °C. NaBH4 (1.13 g, 30 mmol) solución en 15 mL NaOH 1M y 5 mL MeOH se adicionó lentamente. La mezcla de reacción se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. La mezcla se vació en enfriado con hielo HCl 2 y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó, se secó, y se evaporó in vacuo para dar el alcohol como un sólido amarillo (5.1g, 100%): p.f. (112-114 °C) ; RMN ¾ (DMSO-d6, 400 MHz) d 11.08 (s, 1H) , 8.18 (d, 1H, J = 2.5 Hz) , 8.00 (dd, 1H, J = 2.5 y 8.7 Hz) , 6.92 (d, 1H, J = 8.8 Hz) , 5.20 (br, 1H) , 4.49 (s, 2H) . 2 -metoxi -5 -nitrobencilalcohol Este compuesto se preparó por reducción de 2-metoxi-5-nitrobenzaldehído metil hemiacetal usando un método similar a aquel descrito para preparar 2 -hidroximetil -4-nitrofenol en 76% de rendimiento: p.f. 121-122 °C; RMN XH (DMS0-d6, 500 MHz) d 8.22 (d, 1H, J = 1.22 Hz) , 8.16 (dd, 1H, J = 2.7 y 9.1), 7.16 (d, 1H, J = 8.9 Hz) , 4.50 (s, 2H) , 3.90 3H) nitro-2 -propiloxi-bencilalcohol Este compuesto se preparó por reducción de 5-nitro-2 -propiloxibenzaldehído usando un método similar a aquel descrito para preparar 2 -hidroximetil - -nitrofenol en 93% de rendimiento: p.f. (no se dejó muestra para p.f.); R N ¾ (400 MHz, D SO-d6) 8.22 (d, 1H, J = 2.6 Hz) , 8.13 (dd, 1H, J = 2.9 y 9.2 Hz) , 7.14 (d, 1H, J = 9.2 Hz) , 5.41 (t, 1H, J = 5.5 Hz) , 4.52 (d, 2H, J = 5.8 Hz) , 4.08 (t, 2H, J = 6.2), 1.75 (m, 2H) , 0.98 (t, 3H, J = 7.6 Hz) . 2 -benciloxi - 5 -nitrobencilalcohol Este compuesto intermedio se preparó por alquilación de 2 -hidroximetil -4 -nitrofenol con bromuro de bencilo siguiendo el método descrito para la preparación de 2 -metoxi-5 -nitrobenzaldehído metil hemiacetal en un rendimiento de 84%: p.f. 81-83 °C; RMN ¾ d (DMS0-d6, 500 MHz) 8.26 (d, 1H, J = 2.9 Hz H-6), 8.15 (dd, 1H, J = 2.9 y 9.1Hz, H-4) , 7.46 (d, 2H, J = 7.0, 2' 6'-Hs) 7.41 (dd, 2H, J = 7.0 y 7.7, 3' , 5 ' -Hs) , 7.34 (d, 1H, J = 7 Hz, 41 -H) , 7.25 <d, 1H, J = 9.1Hz, 3-H), 5.4 (br, 1H, OH) , 5.29 (s, 2H, C¾) , 4.57 (s, 2H, C¾) . 3 -hidroximetil-4 -metoxianilina Una mezcla de 2-metoxi-5-nitrobencilalcohol (1.02 g, 6.03 mmol) y SnCl2.H20 (6.8 g, 30.15 mmol) en EtOH (20 mL) se calentó a 70 °C durante 1 hora. Después se enfrió, la mezcla se trató con NaOH 2M y se extrajo con éter. La capa orgánica se lavó con agua, se secó, y se evaporó bajo vacío para proporcionar 2.18 g (84%) de anilina 3-hidroximetil-4-metoxianilina: RMN (DMS0-d6, 500 MHz) d 6.66 (d, 1H, J = 2.2 Hz) , 6.61 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 6.38 (dd, 1H, J = 2.4 y 8.2 Hz) , 4.81 (t, 1H, J = 5.5 Hz) , 4.54 (br, 2H) , 4.37 (d, 2H, J = 5.8 Hz) , 3.61 (s, 3H) . 3 -hidroximetil-4-propiloxianilina Este compuesto se preparó por reducción de alcohol 5-nitro-2-propiloxi-bencílico usando el método descrito para la preparación de 3-hidroximetil-4-metoxianilina en 37% de rendimiento: RMN 1H (DMS0-d6, 500 MHz) d 6.66 (d, 1H, J = 2.5 Hz) , 6.60 (d, 1H, J = 8.6 Hz) , 6.35 (dd, 1H, J = 2.7 y 8.5 Hz) , 4.79 (t, 1H, J = 5.8 Hz) , 4.54 (br, 2H) , 4.37 (d, 2H, J = 6.1Hz), 3.74 (t, 2H, J = 6.4 Hz) , 1.65 (m, 2H) , 0.94 (t, 3H, J = 7.4 Hz) . 4-benciloxi -3 -hidroximeti1anilina Este compuesto se preparó por reducción de alcohol 2-benciloxi-5-nitrobencílico usando el método descrito para la preparación de 3-hidroximetil-4-metoxianilina en 86% de rendimiento: RMN ¾ (DMS0-d6, 500 MHz) d 7.40 (d, 2H, J = 7.3 Hz) , 7.36 (dd, 2H, J = 7.3 y 7.6 Hz) , 7.28 (dd, 1H, J = 7.0 y 7.4), 6.70 (d, 1H, J = 8.5 Hz) , 6.68 (d, 1H, J = 2.4 Hz) , 6.35 (dd, IH, J = 2.8 y 8.3 Hz) , 4.92 (s, 2H) , 4.84 (t, 1H, J = 5.8 Hz) , 4.59 (br, 2H) , 4.44 (d, 2H, J = 6.4 Hz) .

B. Formación de Bibliotecas Estructura General R = H, Ph R2 H, alquilo, arilo, aralquilo, heterociclico 1. Procedimientos Generales para el Acoplamiento de Amida a. Método A A una mezcla fría (a 0 °C) de una amina (ver tabla VI abajo para aminas) (0.15 mL de solución 1M en CH2C12, 0.15 mmol), un ácido (ácido 5-fluoroindol-2-carboxílico o ácido 5-fluoro-3-fenilindol-2-carboxílico) (0.15 mmol como 0.15 mL de solución 1M en THF) en C¾Cl2 (0.5 mL) se adicionó y se enfrió a 0 °C. Subsecuentemente, una mezcla de l-(3-dimetilaminopropil) -3 -etilcarbodiimida (EDCI) (0.15 mmol) y Et3N (0.06 mmol) en CH2Cl2 (0.5 mL) se adicionó y la reacción se agitó en un agitador orbital Bohdan (Mettler-Toledo Bohdan, Vernon Hills, IL) a 0 °C durante 30 minutos luego a temperatura ambiente durante 18 horas. Después se adicionó 0.5 mL de CH2C12 y 0.5 mi, MeOH, la mezcla se pasó a través de un cartucho cargado con un resina catiónica de intercambio (Dowex 50wX4-200, Aldrich Chemical Co . , Milwaukee, WI , pre-se lavó con 1 HCI, H20, H20- eOH, MeOH, McOH-CH2Cl2) . El eluyente se pasó directamente a través de un cartucho de cromatografía que contiene gel de sílice mezclado con 10% Na2C03. El producto se eluyó con 2 mi, CH2Cl2-MeOH (2 mL) , C¾Cl2 (2 mL) , y CH2Cl2-MeOH (2 mL) . La(s) fracción (es) que contiene (n) producto puro se identificaron por TLC (EtOAc -Hexano, 1:1) . Los compuestos se caracterizaron y y su pureza relativa se estimó usando RMN ¾. b. Método B Una mezcla de una amina (ver tabla VI abajo para aminas) (0.1 mmol) , un ácido (ácido 5-fluoroindol-2-carboxílico o ácido 5-fluoro-3-fenilindol-2-carboxílico) (0.1 mmol como 0.1 mL de solución 1M en DMF) , y diisopropiletilamina (DIEA) (0.05 mL, 0.3 mmol) se enfrió a 0 °C. Se adicionó (benzotriazol-i-iloxi) tripirrolidino-fosfonio-hexafluorofosfato (PyBOP) (0.1 mmol como 0.1 mL de solución 1M en DMF) . La mezcla de reacción se agitó usando un agitador orbital a 0 °C durante 30 minutos luego a temperatura ambiente durante 18 horas. EtOAc se adicionó a la mezcla y la solución orgánica se lavó con HC1 1M (2 x 1 mL) , salmuera (1 mL) NaHC03 (2x1 mL) , y salmuera (1 mL) . La capa orgánica se pasó a través de un cartucho de gel de sílice que contiene una capa superior de MgS04 anhidro y se humedeció con hexano. El producto amida se eluyó con hexano (l x l mL) , hexano-EtOAc 2:1 (3 x 1 mL) , hexano-EtOAc 1:1 (2 x 2 mL) , y hexano-EtOAc 1:2 (1 x 2 mL) . La(s) fracción(es) que contiene (n) producto puro se identificaron por TLC (EtOAc-hexano 1:1 y EtOAc- hexano 1:2 en el caso de derivados de amida de ácido 5-fluoro-3-fenilindol-2-carboxílico) . Los compuestos se caracterizaron y su pureza relativa se estimó usando RMN 1H. c . Método C Una mezcla de una amina (ver tabla VI abajo para aminas) (0.1 mmol), ácido (ácido 5-fluoroindol-2-carboxílico o ácido 5-fluoro-3-fenilindol-2-carboxílico) (0.1 mmol como 0.1 mL de 1 M solución en THF) , y DIEA (0.05 mL, 0.3 mmol) en 0.4 mL de C¾C12-THF (3:1) se enfrió a 0 °C. Se adicionó PyBrOP (0.1 mmol) . La mezcla de reacción se agitó usando un agitador orbital a 0 °C durante 30 minutos luego a temperatura ambiente durante 48 horas (0.1 mL THF y 0.2 mL CH2C12 se adicionó después de 24 horas) . EtOAc se adicionó a la mezcla y la solución orgánica se lavó con HC1 1M (2 x 1 mL) , salmuera (1 mL) NaHC03 (2 1 mL) , y salmuera (1 mL) . La capa orgánica se pasó a través de un cartucho de gel de sílice que contiene una capa superior de MgS0 anhidro y se humedeció con hexano . El producto amida se eluyó con hexano (1 x 1 mL) , hexano-EtOAc 2:1 (3 x 1 mL) , hexano-EtOAc 1:1 (2x2 mL) , y hexano-EtOAc 1:2 (1 x 2 mL) . La(s) fracción(es) que contiene producto puro se identificaron por TLC (EtOAc-hexano 1:1 y EtOAc-hexano 1:2 en el caso de derivados de amidad de ácido 5-fluoro-3-fenilindol-2-carboxílico) . Los compuestos se caracterizaron por RMN 1H. d. Método D Preparación de cloruro de ácido 5 - fluoroindol-2 -carboxílico El ácido 5-fluoroindol-2-carboxílico (537 mg, 3 mmol) se disolvió en DME (8 mL) . 0.6 rtiL trietilamina se adicionó y la mezcla se enfrío a 0 °C. Cloruro de tionilo (0.44 mL, 6 mmol) se mezcló con 4 mi, DME se adicionó cautelosamente usando un embudo de adición durante 10 minutos mientras se agita. La mezcla se dejó agitar durante 30 minutos. El precipitado formado se filtró y el solvente se evaporó bajo presión reducida para dar un sólido amarillo del cloruro de ácido.

Reacción de aminas con cloruro del ácido 5-fluoroindol-2 -carboxílico Una mezcla de una amina (ver tabla VI abajo para aminas) (1 mmol) y piridina (0.18 mL) en 1 mi, DCM se enfrió a 0 °C. Se adicionó cloruro del ácido 5-fluoroindol-2-carboxílico (19.8 mg, 1 mmol), luego la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La amida resultante (en DCM) se lavó con HC1 1M, luego con salmuera. El producto crudo se purificó por cromatografía en gel de sílice. e. Ejemplos representativos de Métodos de acoplamiento de Amida Síntesis de Compuesto lz A una mezcla de 3-fluorobencilamina (2.03 g, 20 mmol) y ácido 5-Eluoroindol-2-carbox£lico (3.58g, 20 mmol) en DMF (50 mL) , se adicionó una solución de DIEA (6.98 mL, 40 mmol) en 15 mL CH2C12. La mezcla se enfrió a 0 °C y se adicionó una porción prudente de PyBOP (10.41 g, 20 mmol) . La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 30 minutos, luego a temperatura ambiente durante 4 horas. Se adicionó EtOAc (400 mL) a la mezcla y la solución orgánica se lavó con HC1 2M (4 x 200 mL) , salmuera (200 mL) , NaHC03 (4 x 200 mL) , y salmuera (2 x 200 mL) . La capa orgánica se secó (MgS04) y se concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo como sólido blanquecino. La recristalización de MeOH y CH2C12 proporcionado 5.36 g (93%) de lz como cristales blancos: p.f. 239-241 °C; RMN XH (DMSO-d6, 500 MHz) d 11.73 (s, 1H) , 9.12 (t, 1H, J = 6.1 Hz) , 7.39 (complejo, 3H) , 7.17 (complejo, 2H) , 7.07 (dd, 1 H, J = 2.2 y 9.5 Hz) , 7.07 (dd, 1H, J = 2.2 y 9.0 Hz) , 7.03 (ddd, 1H, J = 2.4, 9.1 y 9.2 Hz) , 4.52 (d, 2H, J= 6.1Hz); Anal.

(C16H12F2N20) C, 67.13; H, 4.23; N, 9.79; Encontrado; C, 66.91; H, 4.31; N, 9.81.

Síntesis de Compuesto la (a) Preparación de compuesto intermedio metoxi Siguiendo el mismo procedimiento mencionado anteriormente para la síntesis de lz, Este compuesto se preparó iniciando de 20 mmol de amina y ácido. La purificación con cromatografía instantánea en columna, dio 5.43 g (91%) del compuesto intermedio metoxi como sólido cristalino blanquecino: MP 192 °C. (b) Desmetilacion Una mezcla del compuesto intermedio metoxi (5 g, 16.7 mmol) y CH2C12 (80 ttiL) se colocó en un matraz de cuello múltiple, equipado con un embudo de goteo y un termómetro. El matraz se enfrió a 0°C en un baño de hielo/sal. Una solución de BBr3 en CH2C12 (80 mL) se adicionó gota a gota mientras se mantiene la temperatura a menos de 5 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Después adición de hielo y HC1 3M (200 mL) , la mezcla se dejó agitar toda la noche. El producto sólido precipitado se recolectó por filtración, se lavó con agua, y se secó. La cristalización de CH2C12 y MeOH proporcionó 4.2 g (88%) del compuesto la: p.f. 213 °C; RMN 1H (DMSO-d6, 400 MHz) d 11.68 (br, 1H) , 9.31 (br, 1H) , 9.01 (t, 1H, J = 6.0 Hz) , 7.39 (complejo, 2H) , 7.14 (s, 1H) , 7.09 (dd, 1H, J = 8.0 y 7.7 Hz) , 7.02 (ddd, 1H, J = 9.2, 8.9 y 2.5 Hz) , 6.72 (d, 2H, J = 7.3 Hz) , 6.61 (d, 1H, J = 8.4 Hz) , 4.41 (d, 2H, J = 5.9 Hz) , HRMS (El) : Requerido M+ para Ci6Hi3FN202, 284.0956; Encontrado, 284.0960; Anal. (Ci6Hi3FN202) C, 67.60; H, 4.61; F, N, 9.85; Encontrado C, 67.50; H, 4.65; F, N, 9.76. f. Otros Compuestos representativos obtenidos y datos de pureza relativa Los siguientes son ejemplos de compuestos obtenidos usando los métodos anteriores y sus datos de pureza relativa. Tabla VI, debajo, listas de compuestos obtenidos.

Compuesto lbb RMN ¾ (acetona-d6, 400 MHz) d 10.85 (br, 1H) , 8.29 (br, IH) , 7.53 (dd, 1H, J= 9.9 y 4.6 Hz) , 7.36 (d, 1H, J= 7.4), 7.30 (complejo, 3H) , 7.22 (dd, 1H, J= 7.3 y 7.0 Hz) , 7.12 (s, 1H) 7.02 (ddd, 1H, J = 2.6 y 9.2 y 9.1), 4.60 (d, 2H, J = 6.3 Hz) .

Compuesto Ice R N 1H (Acetona-d6, 500 MHz) d 10.74 (br, 2H) 8.01 (d, br, 1H, J = 9.0 Hz) , 7.45 (dd, 1H, J = 9.0 y 4.6 Hz) , 7.37 (d, 2H, J = 7.4 Hz) , 7.34 (d, 2H, J = 7.4 Hz) , 7.28 (dd, 1H, J = 9.5 y 2.5 Hz) , 7.24 to 7.10 (complejo m, 7H) , 6.99 (ddd, 1H, J = 9.3, 9.2 y 2.6 Hz) , 5.40 (dd, 1H, J = 9.0 y 6.4 Hz) , 5.20 (dd, 1H, J = 6.2 y 4.6 Hz) , 4.71 (d, 1H, J = 4.6 Hz) ; LRMS (El), m/z 356.1 (M+~H20) .

Compuesto ldd RMN K (Acetona-d6, 500 MHz) o 10.80 (br, 2H) 8.04 (d, br, 1H, J = 8.7 Hz) , 7.43 (dd, 1H, J = 9.0 y 4.8 Hz) , 7.38 (dd, 2H, J = 8.0 y 1.4 Hz) , 7.34 (dd, 2H, J = 8.0 y 1.4 Hz) , 7.28 (dd, 1H, J = 9.6 y 2.4 Hz) , 7.25 to 7.11 (complejo, m, 7H) , 6.98 (ddd, 1H, J = 9.2, 9.1 y 2.5 Hz) , 5.41 (dd, 1H, J = 8.8d 6.6 Hz) , 5.21 (dd, 1H, J = 6.2 y 4.8 Hz) , 4.71 (d, 1H, J = 4.6 Hz) .

Compuesto lbbb RMN 1H (acetona-d6, 500 MHz) d 10.89 (br, 1H) , 8.31 (br, 1H) , 7.54 (dd, 1H, J = 9.1 y 4.6 Hz) , 7.45 (dd, 1H, J = 7.7 y 7.7 Hz) , 7.29 (complejo, 2H) , 7.17-7.08 (complejo, 3H) , 7.03 (ddd, 1H, J= 9.2, 9.1 y 2.6 Hz) , 4.66 (d, 2H, J= 5.8 Hz) .

Compuesto lyyy RMN ¾ (Acetona-d6, 500 MHz) d 10.99 (br, 1H) , 9.57 (br, 1H) , 7.80 (s, 1H) , 7.76 (d, 1H, J = 8.3 MHz) , 7.57 (dd, 1H, J = 9.0 y 4.4 Hz) , 7.35 (dd, 1H, 9.2 y 2.4 Hz) , 3.34 (s, 1H) , 7.29 (dd, 1H, J = 7.7 y 7.8 Hz) , 7.09 (d, 1H, J = 8.8 Hz) , 7.06 (ddd, 1H, J = 9.2, 8.9 y 2..4 Hz) , 4.63 (d, 2H, J = 5.8 Hz) , 4.24 (t, 1H, J = 5.8 Hz) ; LRMS (El) m/z 284.1 (74%, M+) .

Compuesto lccc RMN 1H (acetona-d6, 500 MHz) d 10.96 (br, 1H) , 9.49 (br, 1H) , 7.79 (complejo, 2H) , 7.56 (dd, 1H, J= 8.9 y 4.5 Hz) , 7.34 (complejo, 2H) , 7.05 (ddd, 1H, J= 9.2, 9.1 y 2.4 Hz) , 6.92 (d, 1H, J = 8.6 Hz) , 4.65 (d, 1H, J = 7.0 Hz) , 4.06 (t, 1H, J = 5.8), 3.81 (s, 1H) ; LR S (El) m/z 314.12 (51%, M+) .

Compuesto loooo RMN XH (acetona-d6, 500 MHz) d 10.94 (br, 1H) , 8.31 (br, 1H) , 7.52 (dd, 1H, J= 8.9 y 4.6), 7.33 (d, 2H, J= 8.9), 7.30 (d, 2H, J= 8.5), 7.29 (dd, 1H, J= 9.6 y 2.6 Hz) , 7.13 (s, 1H) , 7.02 (ddd, 1H, J= 9.3, 9.1 y 2.4 Hz) , 4.60 (d, 4H, J= 5.8 Hz) , 4.15 (t, 1H, J= 5.8 Hz) ; LRMS (El) m/z 298.12 (100%, M+) .

RMN XH (acetona-d6, 500 MHz) d 11.12 (br, 1H) , 8.07 (br, 1H) , 7.66-77.60 (m, complejo, 5H) , 7.52 (m, 1H) , 7.36 (d, 1H, J= 2.2 Hz) , 7.30 (dd, 1H, J= 8.7 y 2.6), 7.15-7.09 (m, complejo, 2H) , 6.84 (d, 1H, J= 8.8 Hz) , 4.56 (d, 2H, J= 6.1Hz), 4.04 (t, lh, J= 5.8 Hz) , 3.77 (s, 3H) .

RMN XH (Acetona-d6, 500 MHz) d 11.02 (br, 1H) , 7.59 (dd, 1H, J = 9.7 y 4.6 Hz) , 7.53 (d, 1H, J = 9.8 Hz) , 7.47 (dd, 2H, J = 7.9 y 7.4 Hz) , 7.40 (m, 1H) , 7.31 (dd, 1H. J = 7.0 y 6.5 Hz) , 7.08 (complejo, 2H) , 7.03 (d, 1?, J = 7.7 Hz) , 6.99 (complejo, 2H) , 6.91 (br, 1H) , 4.48 (d, 2H, J = 5.8 Hz) ; LR S (El) m/z 362.14 (85%, M+) . Compuesto 2s RMN 1H (Acetona-d6, 500 Hz) d 11.03 (br, 1H) , 7.57-7.45 (complejo, 4H) , 7.544 10 (m, 1H) , 7.31-7.24 (complejo, 2H) , 7.13-7.055 (complejo, 4H) , 6.76 (br, 1H) , 4.50 (d, 2H, J = 5.2 Hz) ; LRMS (El) m/z 362.1 (95%, M+) .

Compuesto 3q RMN ¾ (Acetona-d6, 500 MHz) d 10.99 (br, 1H) , 8.26 (s, 1H) , 7.58 (dd, 1H, J = 9.5 y 4.6 Hz) , 7.51 (dd, 2H, J = 8.2 y 1.4 Hz) , 7.46 (dd, 2H, J = 7.7 y 7.3 Hz) , 7.38 (m, 1H) , 7.10-7.05 (complejo, 3H) , 6.72 (br, 1H) , 6.67 (complejo, 2H) , 6.62 (d, 1H, J = 7.6 Hz) , 4.38 (d, 2H, J = 6.2 Hz) ; LRMS (El) m/z 360.12 (100%, M+) . 2. Procedimiento General para la oxidación de derivados de Amida de Alcohol Bencílico a Benzaldehído : Preparación De Compuestos 3b, 3d, 3e, 3f, 3g, y 3h Los derivados de amida alcohol bencílico se disolvieron en una mezcla 1:1 de CH2C12 y THF (5 mL/mmol) , se adicionó clorocromato de piridinio (2 equivalentes molares) , y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 horas. Se adicionó EtOAc y agua. El sólido café se removió por filtración. La fase orgánica se lavó varias veces con NaHC03, salmuera, se secó, y se concentró. El producto de aldehido se purificó por cristalización y se confirmó por RMN 1H (la desaparición del metileno del alcohol bencílico y la aparición del pico de aldehido) . La siguiente tabla establece las estructuras hechas por los métodos anteriores : Tabla VI Biblioteca de compuestos 5-fluoroindol-2-carboxamida y método de preparación Código de odo de Compuesto Estructura Peso Mét Molecular Preparación Método A de lttt 35 .27 Acoplamiento de Amina Método A de luuu 286.28 Acoplamiento l de Amina Método A de lvw 282.31 Acoplamiento H l de Amina Br Método A de lwww 365.17 Acoplamiento de Amina " O F Método C de l xx 284.29 Acoplamiento de Amina Método B de lyyy 284.29 Acoplamiento de Amina Método C de lzzz 270.26 Acoplamiento de Amina Método C de laaaa 342.36 Acoplamiento de Amina Método C de lbbbb 390.41 Acoplamiento de Amina C. Inhibición de Línea de células H460 de cáncer humano y Src aislado Subsiguiente a la síntesis, varios de los compuestos anteriores se probaron para la inhibición del crecimiento de la línea de células H460 de cáncer de pulmón humano y la inhibición de Src aislado. Para probar la inhibición de H460, las células se siembran a 600 células/cavidad en placas de 96 cavidades en medio completo RP I-1640 que contiene FCS al 5 %, NuSuero IV al 5 %, L-glatamina 2 mM, HEPES 10 mM. Después de la incubación durante la noche, los compuestos que se solubilizaron en DMSO y diluyeron en RPMI-1640, se adicionaron a placas celulares. Después de 72 horas, las células se fijaron, se tiñeron, y se determinó la proteína total/cavidad. La concentración del compuesto que inhibió el crecimiento por 50% (ICso) se determinó y se reporta posteriormente. Para probar la inhibición de Src aislado, los compuestos se probaron usando el procedimiento de ensayo descrito en Lai et al., 1998, con los siguientes componentes de ensayo, concentraciones finales y condiciones: MOPS 50.0 mM, MgCl2 4.02 mM, K3 citrato 6.00 mM (usado como un amortiguador de Mg2+ para estabilizar los Mg2+ libres a 0.5 mM) , KC1 99.0 mM, 2-mercaptoetanol 10.0 mM, ADP 198 µ?, pp60°"src recombinante purificada humana de longitud completa (Upstate Biotechnology Inc., Lake Placid, new York), RR_SRC 2.00 mM, DMSO al 4.0 %, pH 7.2, 37°C. Estas condiciones de ensayo se han mostrado que reproducen las condiciones intercelulares de pH, temperatura, M2+ libre, concentración iónica, osmolalidad, ATP/ADP, y potencial de reducción. Los resultados están en la Tabla VII, a continuación.

Tabla VII Inhibición del crecimiento de línea de células h4S0 de cáncer de pulmón humano y la inhibición de src aislado Compuesto IC50 de H460a (µ?)13 IC50 de Src (µ?) la 35 ± 0.59 IC50 = 40 lz 15 ± 1.6 NT lbb 82 ± 3.5 NT ldd 33 ± 0.78 NT lyyy 104 ± 10 NT Ice 30 ± 0.66 NT lcccc > 100 NT loooo 74 ± 2.7 NT 2f 13 ± 0.46 NT 2s 26 ± 0.34 NT lbbb > 100 NT 2g 13 ± 0.56 NT 3q 30 ± 0.34 NT a células H460-NSCLC b Todos los compuestos se solubilizaron en DMSO y se diluyern adicionalmente en RP I 1640 que contiene FCS al 5%, NuSuero IV al 5 %, L-glutamina 2 mM, y HEPES 20 mM. c NT= No probado .

Estos resultados muestran que el uso de un grupo fenilo unido a la posición 3 de anillo de indol puede mojar significativamente la actividad del inhibidor.

D. Inhibición de tirosina-cinasa de receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFRTK) , p56 lck, p55 fyn y PTP-1B Los compuestos listados en la Tabla VIII posterior se probaron para la inhibición de EGFRTK, una tirosina-cinasa de receptor de transmembrana, p56 lck, un miembro de la familia de Src de tirosina-cinasas no de receptor, p55 fyn, otro miembro de la familia Src de tirosina-cinasas no de receptor., y PTP_1B, una fosfotirosina-fosfatasa, lo opuesto a una cinasa y un objetivo para diabetes tipo II y/o obesidad. Los datos en la tabla son el % de inhibición de la enzima indicada por el compuesto a una concentración de 10 micromolar. Los blancos para una enzima particular indican que la inhibición no se encontró.

Tabla VIII Inhibición de EGFRPTK, p56 lck, p55 fyn, y PTP- Estructura Peso Código de PTP-1B a EGFRTK a p56 Lck p55 fyn a Molecular compuesto 10 µ? 10 µ? a 10 µ? 10 µ? 428.4 2aa 5 QOCF3 378.8 2bb 10 430.4 2cc 15 F3C Estructura Peso Código de PTP-1B a EGFRTK a p56 Lck p55 fyn a Molecular compuesto 10 µ? 10 µ? a 10 µ? 10 µ? 430.4 2ii 5 F 362.4 2jj 10 F 389.4 2kk 24 15 N02 Estructura Peso Código de PTP-1B a EGFRTK a p56 Lck p55 fyn a Molecular compuesto 10 µ? 10 µ? a 10 µ? 10 µ? 374.4 2oo 15 E. Estudio de Toxicidad en Ratones La Figura 15 muestra los resultados de un estudio de dosis tolerada máxima ( TD, por sus siglas en inglés) con dos inhibidores de indol : 2k del Ejemplo 4 Estos compuestos se administraron a ratones SCID por administración intraperitoneal en tween80 :EtOH. Los resultados en la Figura 15 muestran que el compuesto la es menos tóxico en ratones que el compuesto 2k del Ejemplo 4 puesto, que los ratones exhibieron menos pérdida de peso cuando se administró el compuesto la.

Ejemplo 2.- Síntesis y Actividad de Inhibidores de Proteína-Cinasa del Derivado de Indol 7 -Sustituido . Se sintetizaron inhibidores de proteína-cinasa de derivados de indol 7-sustituido como se expone en el Esquema de Reacción 1 a continuación: (2-bromo-4-fluoro-fenil) -hidrazina (2) Se adicionó 2-bromo-4-fluoroanil na 1 comercialmente disponible (2.36 ml , 20.75 mmol) a una solución de agitación de ácido clorhídrico concentrado (40 ml) que se enfrió a -5°C. Esta solución se dejo envejecer en tanto que se agita durante 10 minutos. Se adicionó una solución acuosa de NaN02 durante 15 minutos. Se adicionó SnCl2/HCl (10.40 g, 46.1 mmol, 10 ml HC1) durante 15 minutos y se envejeció durante 30 minutos adicionales a 1 hora. La mezcla se filtró y se lavó con diclorometano . El sólido resultante se disolvió en HC1 1.0M y se extrajo 3 veces con diclorometano. La capa orgánica se secó al vacío durante la noche para dar 3.57 g (83 % de rendimiento). R N ¾ (400 Hz, CDC13) : 67.169 (dd, J=8 Hz, J=2.8 Hz 1H) , d 7.076 (dd, J=5.2 Hz, J=9.2 Hz, 1H) , d 6982 (td, J=8.4Hz, J=2 Hz 1H) , 55.540 (bs, 1H) , d 3.590 (bs, IH) .

Ester etílico del ácido 2- [ (2-bromo-4-fluoro-fenil) -hidrazono] -propiónico (3) Se adicionó ácido p-toluenosulfónico comercialmente disponible (38.37 mg, 0.217 mmol) a 60 mi de tolueno en un matraz de fondo redondo y astilla de agitación magnética. El matraz entonces se equipo con una trampa Dean Stara y condensador de reflujo. La solución entonces se dejo agitar durante 2 horas. Después de 2 horas, la solución se enfrió y se adicionó 2- (bromo-4 - fenil ) hidrazina (4.135 g, 20.17 mmol). La solución entonces se sometió a reflujo durante 1.5 horas adicionales usando el mismo aparato. Después de 1.5 hora, la solución se colocó en un evaporador giratorio para remover tolueno. Se dejo en el matraz una sustancia tipo alquitrán café oscura. Se adicionó una cantidad apropiada de hexanos al matraz y se sometió a reflujo para disolver la hidrazina pura. Los hexanos tomaron un color amarillo y luego se decantaron en caliente en otro matraz dejando detrás el subproducto tipo alquitrán. Esto se repitió. El matraz que contiene la solución de hexanos se sometió a reflujo para disolver la hidrazina de precipitación y se colocó en un congelador para formar cristales. 3.6g (11.9 mmol 87 % de rendimiento) de 3. R N ¾ (Acetona-d6) : d 12.369 (bs, IH) , d 7.646 (dd, J=9.2Hz, J=5.6Hz 1H) , d 7.449 (dd, J=8.2 Hz, J=2.8 Hz 1H) , d 7.22 (td, J=~8.6 Hz, J=2.8 Hz, 1H) , d 4.37 (q, J=7.2 Hz, 2H) , d 2.203 (s, 3H) , d 1.402 (t, 1=7.2 Hz, 3H) .

Ester etílico del ácido 7-bromo-5-fluoro-lH-indol-2-carboxílico (4) Se adicionó ácido p-toluenosulfónico dihidratado (2.26 g, 11.9 mmol) comercialmente disponible a 120 mi de tolueno y se secó bajo reflujo usando un aparato de Dean Stark durante 2 horas. Se adicionó éster etílico del ácido 2-[ (2-bromo-4-fluoro-fenil) -hidrazono] -propiónico (3.6 g, 11.9 mmol) , a la solución enfriada, y se sometió a reflujo durante 1.5 horas adicionales. Después de 1.5 horas, se enfrió la solución. El tolueno se removió bajo presión reducida. Entonces, el sólido se sometió a reflujo con hexano para aislar el éster de indol . La solución resultante de hexano se sometió a reflujo para disolver el indol de precipitación, y se colocó en el congelador para la cristalización. Después de la remoción del sobrenadante y el secado de los cristales dio 3.30 g, 11.543 mmol de 4 (97 % de rendimiento). R N ¾ (400MHz, Acetona-d6) : d 10.85 (bs, IH) , d 7.45 (dd, J=9.2 Hz, J=2.4 Hz, 1H) , d 7.39 (dd, J=9.2 Hz, J=2.0 Hz, IH) , d 7.28 (d, J=2.0 Hz, IH) , d 4.36 (g, J=6.8 Hz, 2H) , d 1.345 (t, J=6.8 Hz, 1H) . Ácido 7-bromo-5-fluoro-lH-indol-2-carboxílico (5) Se adicionaron tetrahidrofurano (35.2 mi), agua (23.5 mi), hidróxido de litio (2.61 g, 10.9 mmol) y éster etílico del ácido 7-bromo-5-fluoro-lH-indol-2 -carboxilico (3.11 g, 10.9 mmol) a un matraz de fondo redondo y se mezcló con un agitador magnético. Esta mezcla se sometió a reflujo durante 1 hora. El tetrahidrofurano se removió vía operador giratorio, y la solución acuosa se acidificó con HCl 1M, y se extrajo con acetato de etilo. RMN ¾ (DMSO-d6) : 5 13.206 (bs, 1H) , d 11.876 (s, 1H) , d 7.498-7.445 (m, 2H) , d 7.19 (d, J=2.0 Hz, 1.OH) . 3-metoxi-bencilamida de ácido 7-bromo-5-fluoro-lH-indol-2-carboxílico (6) A un matraz de fondo redondo que se ha secado con fuego, se lava con una corriente continua de argón, y se equipa con una pastilla de agitación, se adiciona DMF (4.8 mi). A esta solución 5 de agitación (600 mg, 2.33 mmol) , se combinó con metoxibencilamina (3.28µ?^, 2.56 mmol), y PyBOP (1.33 g, 2.56 mmol) . Esta solución entonces se enfrió a una temperatura de 0°C. Después de 2 minutos se adicionó diisopropilamina (1.7 mi, 9.67 mmol) y la solución completa se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción entonces se diluyó con aproximadamente 60 mi de acetato de etilo y se extrajo 3X con bicarbonato de sodio saturado, y 3X con HC1 1M en volúmenes apropiados para remover cualquier material de inicio sin reaccionar. La capa de acetato de etilo se aisló y se secó sobre sulfato de sodio. El acetato de etilo se removió usando un evaporador giratorio para producir una película pardusca en los lados del matraz. Se adicionaron hexanos al matraz y se sometieron a reflujo. Entonces un sólido se formó en los lados del matraz, y se removieron los hexanos vía evaporador giratorio para dar 709.0 mg de 6 (81 % de rendimiento). RMN ½ (400 Hz, DMSO-d6 d 11.537 (bs, 1H) , d 9.092 (t, J=5.6 Hz, 1H) , d 7.49 (dd, J=9.4 Hz, J=2.4 Hz 1H) , d (dd, J=8.8 Hz , J=2 Hz 1H) , d 7.268-7.228 (m, 2H) , d 6.91 (d, J=6.8 Hz, 2H) , d 6.82 (d, J=8.2 Hz, 1H) , d 4.48 (d, J=6 Hz , 2H) , d 3.729 (s, 3H) . 3-Hidroxi-bencilamina de ácido 7-bromo-5-fluoro-lH-indol-2-carboxílico (7) A una solución de agitación de cloruro de metileno (1 mi) se enfrió a -78 grados en un baño de acetona con hielo seco y se lavó con una corriente de argón. A esta solución fría en agitación se adicionó 6 (50 mg, 0.133 mmol) . Se adicionaron 7 equivalentes de BBr3 y se dejaron agitar a -78 grados durante 1 hora, y luego la solución se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. La reacción entonces se enfrió rápidamente con agua en exceso, luego se neutralizó con bicarbonato de sodio saturado, y se extrajo con cloruro de metileno. La capa de cloruro de metileno se secó sobre sulfato de sodio y se removió bajo presión reducida para producir 35.0 mg de 2 (70 % de rendimiento) . RMN 1H (400 MHz , Acetona~d6) d 10.633 (bs, 1H) , d 8.42 (d, J=15.6, 2H) , 7.48 (dd, J=9.2 Hz J=2.4Hz, 1H) , d 7.42 (dd, J=9 Hz, J=2.4 Hz, 1H) , d 7.373 (d, J=2.4 Hz, 1H) , d 7.217 (t, J=7.6 Hz, 1H) , d 6.932-6.898 (m, 2H) , d 6.80 (dd, J=2 Hz, 1=8 Hz, 1H) , 54.634 (d, J=5.6 Hz, 2H) . La desaparición del pico característico de metoxi a 3.7 ppm indica una desprotección exitosa.

E emplo 3 - Diseño, Síntesis y Actividad de Inhibidores de Derivado de Hidroxinaftaleno, no Competitivos con ATP, de la Tirosina-Cinasa pp60c~Src La estructura cristalina del dominio catalítico de IRTK, humano, autoinhibido (Hubbard et al., 1994) se usó para llevar a cabo estudios de modelado molecular cualitativo (SYBYL™, 6.4, Tripos Inc., St . Louis) en donde se sobrepuso un anillo de naftaleno en el IRTK Tyr 1, 162. La región de IRTK que contiene Tyr 1, 162 se plegó de regreso en el sitio activo, con Tyr 1, 162 colocado análogo a una Tyr fosforilable en un sustrato peptídico, autoinhibiendo de este modo la tirosina-cinasa . La súperimposición indicó que un carbonilo de amida se debe colocar en la posición 2 (Esquema 1) del anillo de naftaleno para imitar el carbonilo 1, 162 de Tyr y un grupo hidroxilo se debe colocar en la posición 6 para imitar el grupo hidroxilo 1,162 de Tyr. Estos estudios de modelado también indican que un grupo hidroxilo en la posición 3 puede imitar el NH 1,162 de Tyr.

Esquema de Reacción 2 A fin de probar estos conceptos de diseño de forma experimental, se anexo el grupo carbonilo de la posición 2 como ya sea un éster metílico o una serie de amidas (Tabla IX) . Las hidroxi-N-fenil (X=0) y N-bencil (X=l) amidas se eligieron en base al incremento en la potencia del inhibidor de pp60c arc observada con los análogos de iminocromeno que contienen cadenas laterales de hidroxi-N-fenil-amida anexas (Huang et al., 1995). Los análogos en donde el grupo 6-hidroxilo ya sea se suprimió o movió también se prepararon para determinar si se presenta una cadena en la potencia como se predice de los estudios de modelado. Las series de inhibidores de 2-carbonil-3, 5-hidroxi-naftaleno (la, 2a-2d, 2Í-21, 2o-2p) e inhibidores de 2-carbonil-3 , 7-dihidroxi-naf aleno (le, 2t-2u) se sintetizaron de ácido 3 , 5-dihidroxi-2-naftoico (Aldrich) y ácido 3, 7-dihidroxi-2-naftoico comercialmente disponibles, respectivamente. Los esteres metílicos la y le se obtuvieron al someter a reflujo los materiales de inicio ácidos respectivos durante 48 horas en metanol presaturado con gas de HC1. Las amidas (2a-2d, 2Í-21, 2o-2p, 2t-2u) se sintetizaron al acoplar el ácido carboxílico respectivo con aminas comercialmente disponibles (Aldrich o Lancaster) usando uno de los dos métodos. El primer método utilizó la metodología de NBS/PPh3 como se describe por Froyen (Froyen, 1997) . El segundo método utilizó IIDQ (Aldrich) como el reactivo de acoplamiento. El ácido carboxílico se hizo reaccionar primero con IIDQ 1.0 equivalentes en D F anhidra a temperatura ambiente durante 24 horas. La amina respectiva (2.0 equivalentes) entonces se adicionó pura y la reacción se calentó a 80°C durante 2-6 horas. Después del tratamiento acuoso, se logró la purificación por cromatografía en gel de sílice y la precipitación a partir de CH2Cl2/hexano, seguido por RP-HPLC C-18 preparativa (CH3CN/H20) , si es necesario. Las bencil -aminas estuvieron comercialmente disponibles sólo como sus éteres metílicos protegidos con hidroxilo, correspondientes. En consecuencia, después de la formación de las amidas, los grupos hidroxilo se desprotegieron por tratamiento con 6 equivalentes de BBr3 en DCM durante 1 minuto a -78°C seguido por 1 hora a temperatura ambiente .

Tabla IX Actividad inhibitoria de pp60°"src de derivados de hidroxinaftaleno e inhibidores publicados seleccionados a,b,c Comp. ¾ R2 R3 R4 R5 R6 R7 R8 % de inhibición IC50 a 100 µ (desv. (µ?) est . ) la OH OH H H N/A N/A N/A N/A 5 (+/-2) n.t Ib OH H OH H N/A N/A N/A N/A 47(+/-3) n. t le OH H H OH N/A N/A N/A N/A 19 (+/-6) n.t id N¾ H H H N/A N/A N/A N/A Inactivo n.t 2a OH OH H H OH H H 0 12 (+/-4) n.t 2b OH OH H H H OH H 0 5K+/-1) 150 2c OH OH H H H H OH 0 60 (+/-7) n.t 2d OH OH H H OH H OH 0 14 (+/-2) n.t 2e OH H OH H OH H H 0 39(+/-5) n.t 2f OH H OH H H OH H 0 89 (+/-1) 160 2g OH H OH H H H OH 0 23 (+/-5) n.t 2h OH H OH H OH H OH 0 56(+/-l) n.t 2i OH OH H H H OMe H 0 33 (+/-5) n.t 2j OH OH H H H H OMe 0 35 (+/-8) n.t 2k OH OH H H OMe H H 1 13 (+/-3) n.t 21 OH OH H H H H OMe 1 14(+/-2) n.t 2m OH H OH H OMe H H 1 inactivo n.t 2n OH H OH H H H OMe 1 4 (+/-7) n.t 2o OH OH H H OH H H 1 41 (+/-2) n.t 2p OH OH H H H H OH 1 49 (+/-4) n.t 2p OH H OH H OH H H 1 42 (+/-2) n.t 2r OH H OH H H OH H 1 55 (+/-3) n.t Comp. ¾ R2 R3 R4 R5 Rs R7 R8 % de inhibición IC50 a 100 µ (desv. (µ ) est. ) 2S OH H OH H H H OH 42(+/-3) n.t. 2t OH H H OH H OH H 68(+/-5) n.t. 2u OH H H OH H OH H 40(+/-3) n.t. 2v H H OH H H OH H 45(+/-5) n.t.

Iminocromeno 9Ta 30 (+/-15) Lits:0.118 Piceatanol 4K+/-2) Lit13:66 (lck) ST-638 37(+/-5) Emodind 22 ( +/-3) Tirofostina A47 43(+/-3) Notas Finales de la Tabla IX aEl procedimiento de ensayo previamente descrito (Lai et al., 1998) se usó con los siguientes componentes de ensayo, concentraciones finales y condiciones: MOPS 50.0 mM, MgCl2 4.02 mM, K3citrato 6.00 mM (usado como amortiguador de Mg2+ para estabilizar los Mg2+ libres a 0.5 mM) , KC1 99.0 mM, 2-mercaptoetanol 10.0 mM, ATP 198 µ?, ADP 19.8 µ?, pp60c~src, recombinante, purificado, humano de longitud completa 10 U (Upstate Biotechnology Inc.) RR-SRC 2.00 mM, DMSO 4.0 %, pH 7,2, 37°C. Estas condiciones de ensayo completos se han mostrado (Choi 1999) para reproducir las condiciones intracelulares de pH, temperatura, Mg ÷ libre (0.5 mM) , concentración iónica, osmoralidad, ATP/ADP y potencial de reducción . bTodos los nuevos compuestos se caracterizaron por RMN del protón, El ó FAB(+)MS y son puros por TLC. °N/A = No aplicable, n.t. = No probado. dATP-competitivo .

Las series de inhibidores de 2-carbonilo, 3,6-dihidroxi-naftaleno (lb,2e-2h, 3m-2n, 2q-2s) se sintetizaron a partir del ácido 3, 6-dihidroxi-2-naftoico 6 usando los métodos descritos anteriormente. La síntesis del compuesto intermedio 6 que se desarrolló se muestra en el Esquema de Reacción 3 comenzando con 2 , 7-dihidroxinaftaleno comercialmente disponible 3 (Aldrich) .

HO. -0H 1) NaH(l.leq),-10oC,30mm MOMO, OH 2) M0M-C1{1.1 eq),-10°C D F Anh. 4 32% TBDMS-C1(1.I eq) DMAP(5mol%) DDEA(1.1 eq) DMF Anh. 0 4h 1) t-BuU(1.3eq),0°C,90miti 2) Cl-C(OK>Me (1.5 eq), 0°C to ?, 60 min 1:1 Eter Anh. /Hra An , 3) pH=2 4}pH=12 5 MeOH,H20, 93% El compuesto Id se sintetizó a partir de ácido 3-amino-2 -naftoico (Aldrich) por reacción con T S-diazometano en DCM a temperatura ambiente. El compuesto 2v se sintetizó a partir de ácido 6 -hidroxi -2 -naftoico (Aldrich) usando el método de amidación descrito por Froyen (Froyen, 1997) . Las condiciones del ensayo de cinasa se ha mostrado que tienen influencia en la actividad inhibitoria medida (Lawrence et al., 1998). En consecuencia, a fin de determinar exactamente la potencia relativa de la recién diseñada clase de inhibidores de pp60c"src, la actividad inhibitoria de los cuatro inhibidores de PTK, no competitivos con ATP, previamente publicados, también se probó. Se eligieron Piceatanol, ST-638 y Tirfostina A47 debido a que están comercialmente disponibles (Sigma o Calbiochem) , y son representativos del espectro de inhibidores de PTK no competitivos con ATP, conocidos. La Emodina (Calbiochem) es competitiva a ATP cuando se analizó con la tirosina cinasa p56lck. De forma previa, el iminocromeno 9TA fue el inhibidor de pp60c~src no competitivo con ATP más potente reportado (Huang et al., 1995) . Puesto que el iminocromeno 9TA no estuvo comercialmente disponible, se sintetizó usando nueva ruta al convertir 3-Aminofenol al éter de TBDMS correspondiente (1.1 equivalentes de TBDMS-C1, 1.1 equivalente de DIEA, 5 % en mol de DMAP, DMF, 24 horas, a temperatura ambiente, 71 %) . La anilina resultante se acopló usando 2.0 equivalentes de ácido cianoacético (1.1 equivalente de EDCI , 1.1. equivalente de TEA, DMF, 18 horas, 75°C, 70 %) . La condensación de la amida resultante con 1.2 equivalentes de 2 , 3 -hidroxibenzaldehído (cat. piperidina, abs. EtOH, 2 h, 60°C) seguido por desprotección (1.1 equivalentes de TBAF, THF, 15 m, 43 % total) dio el iminocromeno 9TA con análisis elemental satisfactorio de FAB( +)MS y MN ¾ después de la purificación por cromatografía instantánea (DCM : MeOH 10:1). Las actividades inhibitorias mostradas en la Tabla IX para los compuestos la-d y 2a-2v se determinaron usando pp60c~3rc recombinante , humana, de longitud completa purificada. Debido al número de compuestos probados, y el costo asociado, sus potencias de orden de clasificación se determinaron primero a una concentración constante de inhibidor (100 µ?) . Como se prevé por los estudios de modelado, en base a la analogía al grupo hidroxilo 1,162 de Tyr 1 de IRTK, se observó una preferencia para la colocación del grupo hidroxilo de naftaleno en el carbón 6 contra 5 ó 7 tanto en la serie del éster (Ib, 47 % contra la, 5 % & le, 19 %) como en la serie de amida (por ejemplo, 2f, 89 % contra 2h, 51 % & 2t, 68 %) . La predicción que la unión de un grupo de hidroxilo al carbono 3 (imitando el NH 1,162 de Tyr) mejorará la potencia también se confirmó (2f, 89 % contra 2v, 45 %) . Finalmente, la predicción que la extensión del inhibidor como una amida en la posición 2 (imitando el enlace peptídico) puede mejorar adicionalmente la potencia se confirmó también (por ejemplo, 2f , 89 % contra Ib, 47 %) . Los datos proporcionados en la Tabla IX demuestran que el movimiento del grupo hidroxilo desde la posición 6 óptima al carbono 5 de naftaleno adyacente da por resultado un diferente perfil de actividad estructural con respecto a la colocación concurrente óptima de los grupos hidroxilo en la cadena lateral de amida (por ejemplo, 2f/2g, contra 2b/2c) . También se señala que el reemplazo del grupo hidroxilo de la cadena lateral de amida con un correspondiente grupo metoxi en los compuestos 2i-2n. En el caso de las N-fenil -amidas (2i-2j), su actividad, con relación a las hidroxi-amidas correspondientes (2b-2c) , no se redujo tan significativamente como en el caso de las N-bencil-amidas (2k-2a contra 2o-2q, 2s) . Esto sugiere que en los derivados de bencilo, los grupos hidroxilo de cadena lateral de amida interactúan ya sea con la enzima como donadores de enlace de hidrógeno, o los grupos metoxi son demasiado largos para ajustarse en el sitio de unión. Un análisis más cuantitativo de la selectividad para la colocación de un grupo hidroxilo en el carbono 6 contra 5 se proporciona al comparar las IC5o de 2f (16 µ?) contra 2b (150 µ?) , respectivamente. Estos resultados también confirman que una caída en el % de inhibición de aproximadamente 90 % a aproximadamente 50 % representa una diferencia de orden de magnitud e impotencia, como se espera. De manera similar, una caída en el % de inhibición de aproximadamente 50 % a 10 % representará otra diferencia de orden de magnitud en la potencia. Una comparación directa del inhibidor más potente de esta serie, el compuesto 2f, con los cinco inhibidores de PTK previamente reportados, mostrados en la Tabla IX demuestra que, bajo estas condiciones de ensayo, 2f es más potente por una o dos ordenes de magnitud. De manera interesante, se reportó previamente que el iminocromeno 9TA (Huang et al., 1995) tiene una IC50 de 118 n contra pp50c"src, y fue el inhibidor de pp60c"src no competitivo con ATP conocido más potente, pero bajo las condiciones actuales de ensayo sólo una inhibición de 30 % a 100 µ? se observó. Estos resultados re-enfatizan (Lawrence et al., 1998) la importancia de comparar los inhibidores de proteína-cinasa bajo condiciones idénticas de ensayo. Un objetivo de esto estudios fue obtener inhibidores de pp60c"src no peptídicos que no compiten con ATP. En consecuencia, el % de inhibición de pp60c_src por 2f y 2b a concentraciones constantes de inhibidor se monitorizó como una función de [ATP] creciente hasta un nivel 1 mm mimético celular. Puesto que el [ATP] tiene poco efecto en el % de inhibición, tanto 2f como 2b son inhibidores no competitivos con respecto a ATP. El % de inhibición se midió usando concentraciones de ATP de 200, 500 y 1000 µ? en tanto que se mantiene constante la concentración del inhibidor. Si el inhibidor es directamente competidor con ATP, entonces este incremento total de 5 veces en [ATP] es equivalente a la disminución de la concentración del inhibidor 5 veces en términos del efecto en el % de inhibición. En consecuencia, el % de inhibición debe disminuir al valor observado en la curva de respuesta a la dosis de IC50 (obtenida con ATP 200 µ?) para 1/5 de la concentración establecida en el inhibidor usada en este experimento si se está presentando competición directa con ATP. Para el inhibidor 2f (ajustado a 25 µ?) a 62 % (+/-5), 54 % (+/-3) y 50 % (+/-) de inhibición a 200 µ?, 500 µ y 1,000 µ? de ATP, respectivamente, se obtuvieron en tanto que el nivel de inhibición debe haber caído a aproximadamente 20 % a 1,000 µ? de ATP si se esta presentando competición directa con ATP. De manera similar, para el inhibidor 2b (ajustado a 300 µ?) a 84 % (+/-1) , 81 % (+/-1) y 77 % (+/-2) de inhibición a 200 µ?, 500 µ? y 1,000 µ? de ATP, respectivamente, se obtuvo. El alto costo de mucha cinasas ha estimulado a otros investigadores a monitorizar la potencia de inhibidor como una función del incremento [ATP] para el mismo propósito (Saperstein et al., 1989; Burke et al., 1993; Davis et al., 1989; Davis et al., 1992; Faltynek et al., 1995; y Sawutz et al., 1996).

En resumen, el diseño basado en la estructura ha producido una serie de inhibidores no peptídicos de pp60c~src de hidroxinaftaleno que no compiten con ATP. Los resultados con los compuestos de esta serie en ensayos basados en células, así como estudios cinéticos detallados bajo varias condiciones de ensayo, se reportarán en el transcurso. Una extensión de estos conceptos de diseño del núcleo de naftaleno a un núcleo de indol se reporta en el siguiente ejemplo.

Ejemplo 4 - Diseño, Síntesis y Actividad de Inhibidores de Derivado de Hidroxi- indol no Competitivos con ATP de la Tirosina-Cinasa pp60c_sr . En el ejemplo precedente se describe, el diseño basado en la estructura de una serie de inhibidores de pp60c" src que utiliza un núcleo de naftaleno. Estos compuestos se diseñaron para unirse en el sitio de sustrato peptídico debido al potencial para mayor selectividad y eficacia en un ambiente celular con relación al sitio alternativo del sustrato de ATP. Este ejemplo representa una extensión de estos conceptos de diseño a una serie de inhibidores de pp60c~ src en base a un núcleo de indol. Una vez más nuevamente, la estructura cristalina del PTK (IRT ) del receptor de insulina auto-inhibido (IRTK) se usó para llevar a cabo estudios de modelado molecular cualitativo, excepto en este caso se sobrepuso un anillo de indol en IRKT Tyr 1,162. Esta súperimposición indico que el NH de indol puede imitar el NH 1,62 de Tyr, que un carbonilo se debe colocar en la posición 2, y un grupo idroxilo en la posición 5 para imitar el carbonilo de 1,162 de Tyr y OH, respectivamente (Esquema de Reacción 4) .

Esquema de reacción 4 La ciclización conceptual de Tyr 1,162 al anillo de 5 miembros más pequeños de un indol ilustrado en el Esquema de reacción 4, con relación a un anillo de 6 miembros en el caso del núcleo de naftaleno (Karni et al., 1999), da por resultado un movimiento de la colocación óptima del OH desde el carbono 6 en el núcleo de naftaleno al carbono 5 en el núcleo de indol . Los derivados de indol -amida que contienen cadenas laterales de hidroxi-fenilo/bencilo 2d-f, 2j-l (Tabla IX) respectivamente, se seleccionaron en base al incremento en la potencia del inhibidor de pp60c"3rc, observada para las hidroxi-fenil-amidas basadas en naftaleno soportadas en el Ejemplo previo. Los éteres metílicos correspondientes 2a-c,g- i,v son precursores en la síntesis. Los análogos adicionales mostrados en la Tabla X se prepararon para empezar a expandir el intervalo de cadenas laterales más allá de los grupos hidroxi/metoxi que ahora se han probado extensivamente tanto con los núcleos de indol como de naftaleno. Las indol -amidas que contienen sólo cadenas laterales de hidroxi o metoxi se sintetizaron como se ilustra : Esquema de Reacción 5 El derivado de ácido 2-indolcarboxílico, la metoxifenil-amina (1.1 eq. Aldrich, Lancaster o Fluka) , y el reactivo de acoplamiento PyBOP (benzotriazol -1-iloxi) tripirrolidino-fosfonio-hexafluorofosfato) (1 eq, Fluka) se disolvieron en DMF anhidra. La solución se enfrío a 0°C bajo argón y luego se adicionó diisopropiletilamina (DIEA, 3 eq) . La reacción se agitó a 0°C durante lm seguido por 1 hora a temperatura ambiente. Después del tratamiento, el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice. Los éteres metílicos se escindieron con tribromuro de boro (1 M en DCM, Aldrich) cuando se desearon. El éter metílico de amida de indol se disperso en DCM seco y se enfrió a -78°C bajo argón. Un equivalente de BBr3 se adicionó para cada heteroátomo en el material de inicio más un equivalente en exceso. La solución roja oscura resultante se agitó a -78° durante 30 m y luego a temperatura ambiente durante 1-2 horas. La reacción se enfrió rápidamente con agua (10 minutos) antes del tratamiento.

Tabla X Actividad inhibitoria de pp60c_sr de derivados de hidroxiindol .a' 'c Comp. Ri R2 R3 R4 % de inhibición 100 µ? (desv. est . la H OH H CH3 N/A N/A N/A 40 (+/-5) 500 UM] Com . Ri 2 R3 R4 Rs 6 R7 % de inhibición a 100 µ (desv . est . ) Ib H OH OH CH2CH2 N/A N/A N/A 28 ( +/-3) 2a H OH H -- OCH3 H H 3 (+/-1) 2b H OH H -- H OCH3 H 21 (+/-2) 2c H OH H -- H H OCH3 39 ( +/-9) 2d H OH H -- OH H H 43(+/-l) 2e H OH H -- H OH H 30 (+/-6) 2f H OH H -- H H OH 45 (+/-3) 2g H OH H CH2 OCH3 H H 2K+/-5) 2h H OH H c¾ H OCH3 H 7(+/-6) 2i H OH H CH2 H H OCH3 18 (+/-4) 2j H OH H CH2 OH H H 24 (+/-3) 2k H OH H CH2 H OH H 74 (+/-2) [?05?=38µ?] 21 H OH H C¾ H H OH 5 (+/-2) 2m H OH H CH2CH2 H H OH 21 (+/-7) 2n H OH H CH2 H H C02H no activo 2o H OH H CH2 H H C02CH3 11 (+/-4) 2p H OH H -- H H CH2C02H 7 (+/-6) 2q H OH H -- H H CH2C02CH3 32 (+/-7) 2r H OH H -- H F H 21 (+/-7) 2s H OH H CH2 H F H 57(+/-6) 2t H OH OH CH2 H OH H 26 (+/-2) Comp . Ri R4 5 Rs R7 % de inhibición a 100 µ? (desv. est.) 2u H H OH CH2 H OH H 56 (+/-2) 2v H H H CH2 H H OCH3 4 (+/-4) 2w H H H CH2 H H OH 36 (+/-4) 2x OH H H CH2 H OH H 60 (+/-3) 2y H OH H CH(CH3)R H OH H 15 (+/-3) 2z H OH H CH(CH3) s H OH H 13 ( +/-7) aTodos los compuestos se probaron como se describen en el Ejemplo Precedente.5 bTodos los compuestos se caracterizaron por R N del protón, FAB (+) MS y son puros por TLC. CN/A = No aplicable.

Usando esta ruta de síntesis, la serie de inhibidores 2a-m,y,z de amida de 5-hidroxiindol se prepararon a partir de ácido 5-hidroxi-2-indolcarboxílico. Las 4- y 6-hidroxiindol -amidas (2x, u, respectivamente) se sintetizaron a partir de 4-metoxi-2-indolcarboxilato de metilo y 6-metoxi-2-indolcarboxilato de metilo, respectivamente. Las 5,6-dihidroxiindol-amida 2t se prepararon a partir de 5,6-dimetoxiindol-2-carboxilato de etilo. El tratamiento con sonido de los esteres en NaOH 1N durante 1 hora proporcionó los ácidos carboxílicos correspondientes para el acoplamiento. Las des -hidroxi-indol -amidas 2v, w se sintetizaron a partir de ácido indol-2-carboxílico. Todos los materiales de inicio de indol estuvieron comercialmente disponibles (Aldrich o Lancaster) . Los inhibidores de fluoro 2r, s se prepararon igualmente a partir de las fluorofenil-aminas correspondientes (Aldrich) . Los inhibidores que contienen esteres o ácidos carboxílicos en la cadena lateral de amida, 2n-q, se prepararon a partir de los ácidos aminocarboxílicos correspondientes (Aldrich) . El ácido carboxilico de cadena lateral se protegió primero como un éster metílico (MEOH anhídrido pre-saturado con HC1, reflujo, Id), seguido por acoplamiento con PyBOP (como antes) , entonces la saponificación regreso al ácido carboxilico cuando se desea . El éster metílico la se preparó al someter a reflujo una solución de ácido carboxilico durante la noche en metanol anhidro pre-saturado con gas de HC1. El éster etílico Ib se preparó por desprotección de BBr3 de 5, 6-dimetoxiindol-2 -carboxilato de etilo como antes. Todos los inhibidores listados en la Tabla X se purificaron por cromatografía en gel de sílice. Como en Marsilje 2000, la actividad en el orden de clasificación de esta serie de inhibidores de pp60c~src se determinó primero a una concentración constante de inhibidor (Tabla X) . Se usó la misma concentración de inhibidor (100 µ?) para la serie actual de indol de inhibidores, la serie previa de naftaleno de inhibidores, y 5 inhibidores de PTK de literatura, no competitivos, con ATP (ver ejemplo precedente) . Esto permitió una cooperación eficiente en el orden de clasificación de los 59 compuestos en total bajo condiciones idénticas de ensayo. Los estudios de modelado predijeron que un grupo de hidroxi en el carbono 5 del núcleo de indol sería óptimo. La comparación del inhibidor 2k de 5-hidroxiindol (74 %) con el inhibidor 2u de 6-hidroxi-indol análogo (56 %) y el inhibidor 2x de 4 -hidroxi -indol (60 %) confirma esta predicción, aunque no es fuerte la preferencia. La predicción que un grupo hidroxi en el carbono 5 mejorará la actividad (sin relación a ningún grupo hidroxi) se confirma al comparar el inhibidor 25 de 5 -hidroxi-indol (54 %) con el inhibidor 2w de des-hidroxi correspondiente (36 %) . La extensión los inhibidores de indol como aril-amidas en el carbono 2 mejoró la potencia como se esperaba en base a los inhibidores de naftaleno previos. Por ejemplo, el indol 2k de meta-hidroxibencil -amida da 74 % de inhibición a 100 µ? en tanto que el éster metílico la da solo 40 % de inhibición a 500 µ?. De manera interesante, comparando el éster etílico, de 5 , 6-dihidroxi Ib (28 %) a la aril-amida correspondiente 2t (26 %) mostró que la presencia simultánea del segundo hidroxi en el carbono 6 impide la mejora de potencia normalmente proporcionada por la cadena lateral de meta-hidroxibencilamida, de otro modo preferida. Esta cadena lateral de amida fue lo mejor de la serie actual cuando está presente sólo el grupo 5-hidroxi (2k, 74 %) y da aun buena inhibición cuando esta presente sólo un grupo 6-hidroxi (2u, 56 %) . También, la presencia simultánea de los grupos hidroxi en los carbonos 5 y 6 parece ser bien intolerada en la ausencia de una cadena lateral de amida (Ib contra la y 2c) . Estos datos sugieren que un cambio en la orientación de unión del núcleo de indol puede haber ocurrido debido a la presencia del segundo grupo hidroxi y que ahora puede ser preferido una diferente cadena lateral de amida. La combinación óptima de cadenas laterales en los carbonos 4-7 (incluyendo reemplazos de grupos funcionales para grupos hidroxi (Lai et al., 1999)) y las cadenas laterales de amina están actualmente bajo investigación. En general, las relaciones de estructura-actividad ("SAR") del núcleo de indol reveladas por los datos en la Tabla X son paralelas con las informadas en el ejemplo precedente para el núcleo de naftaleno. En ambos casos la colocación de un grupo hidroxi en el núcleo análogo al OH 1,162 de Tyr 1, como se identificó por estudios de modelado, proporcionó a la potencia más alta. El movimiento de este grupo hidroxi a uno de los carbonos adyacentes redujo la potencia, pero no de manera dramática, en ambos casos. La extensión de ambos núcleos con aril-amidas en la posición identificada por los estudios de modelado para imitar la unión peptídica de Tyr 1.162 mejoró la potencia. Con ambos núcleos, la sustitución de un grupo metoxi por los grupos hidroxi en la cadena lateral de amida redujo usualmente la potencia, y lo hizo a un mayor grado con la cadena lateral de bencilamida más larga (por ejemplo, 2K, 74 % versus .2h, 7 % en comparación a 2e, 30 % versus 2b, 21 %) La principal diferencia en las SAR para estos dos núcleos es que el núcleo de 5-hidroxiindol refiere la cadena lateral de m-hidroxibencil-amida más larga (2k, 74 % contra 2e, 30 %) en tanto que el núcleo de 3 , 6-dihidroxinaftaleno análogo prefiere la cadena lateral de amida más corta derivada de m-hidroxianilina. El núcleo de 5-hidroxiindol no mostró esencialmente preferencia para la posición del grupo hidroxilo en la cadena lateral de amida más corta (2d-f) en tanto que con la cadena lateral de hidroxibencil -amida más larga se observó una significativa preferencia para la posición meta (2j-l) . En el caso del núcleo de 3,6-dihidroxinaftaleno se observó lo opuesto. Se llevaron a cabo estudios de modelado molecular adicionales para sondear adicionalmente la preferencia para una cadena lateral de amida más larga con el núcleo de indol. El inhibidor 3 de naftaleno más activo del informe previo se usó como una plantilla en la cual se sobrepusieron el inhibidor 2e de indol análogo y el inhibidor 2k de indol homologado. Los tres grupos funcionales de cadena lateral más importantes en el inhibidor 3 de naftaleno se consideran que son el grupo 6-hidroxi (donador y aceptor de enlace de H) , el hidrógeno del grupo 3-hidroxi (donador de enlace de H) , y el grupo hidroxi de cadena lateral (aceptor de enlace H) en base al diseño racional y SAR para ambas series de inhibidores . Este modelo de farmacoforo de tres puntos se identifica en ambas series por asteriscos en el Esquema de Reacción 6.

Esquema de Reacción 6 La minimización de energía "de multiajuste" y la cuestión de "ajuste de átomo" dentro de SYBYL™ (6.4, Tripos, St . Louis) se usaron en secuencia para sobreponer 2e y 2k en 3. Este proceso completo de ajuste se lleva a cabo con constantes de muelle (multiajuste) y los pesos (átomos de ajuste) se eligieron tal que el énfasis más alto fue en la sobreposición óptima de los 0 y H del farmacoforo de núcleo (100) , seguido por los 0 de la cadena lateral (10) y luego el enlace de amida (1) de intervención. El proceso de "multiaj usté" ajustó las conformaciones para el máximo ajuste del farmacoforo. La subsiguiente minimización produjo las conformaciones de energía mínima, locales, más cercanas y finalmente el proceso de "átomos de ajuste" produjo la mejor sobreposición del farmacoforo de estas conformaciones minimizadas. Como se espera, los 0 y H de farmacoforo de ajuste tanto de 2e y 2k sobrepuestos cercanamente de manera similar en los átomos correspondientes en 3 (todas dentro de aproximadamente 0.50 Á) . Sin embargo, los O de farmacoforo de cadena lateral de 2e y 2k difirieron significativamente en su súperimposición o sobreposición en el O correspondiente de 3, con los desplazamientos de 1.8 Á contra sólo 0.08 Á, respectivamente. Este ajuste cercano de los tres sitios clave de farmacoforo entre 2K y 3 proporciona una racionalización para su potencia que difiere por sólo un factor de 2.4 (IC50 38 µ? versus 16 µ?, respectivamente) . La extensión de la cadena lateral de amida por otro átomo de carbono redujo la actividad (2m, 21 % contra 21, 54 %) . Adicionando un grupo metilo al carbono bencílico de 2k, ya sea en estereoquímica, redujo en su mayor parte la actividad (2y, 15 % y 2z, 13 % contra 2k, 74 %) . El reemplazo del grupo de hidroxi de cadena lateral (en la posición para) con un anión de carboxilato (2n, 0 % versus 21, 54 % y 2p, 7 % versus 2f, 45 %) redujo la actividad en tanto que los ésteres metílicos correspondientes (2o, 11 % y 2q, 32 %, respectivamente) mostró una pérdida más pequeña de potencia. De manera importante, el reemplazo del grupo hidroxi de cadena lateral con un flúor mantuvo mucho de la potencia (2s, 57 contra 2k, 74 % y 2r, 21 % contra 2e, 30 %) . En consecuencia, el análogo 2s de fluoro tiene sólo un grupo hidroxi dejado para el metabolismo de Fase II potencial (por ejemplo, formación de glucurónido) , y este grupo hidroxi restante es un objetivo actual para el reemplazo (Lai et al., 1998) . El uso del mismo método como en el ejemplo precedente (Marsilje, 2000) , el inhibidor más potente de la serie de indol actual (2k) se analizó para la competición de ATP al monitorizar el % de inhibición en el incremento [ATP] en tanto que se mantiene constante la concentración del inhibidor. Puesto que el [ATP] tiene poco efecto en el % de inhibición (el % de inhibición fue 1.46 % y 41 % con 2k a 45 µ? y [ATP] a 200 µ? o 1, 000 µ?, respectivamente), 2k es no competitivo con respecto a ATP bajo estas condiciones de ensayo . En resumen, se ha diseñado un núcleo de indol y se llevo a cabo una SAR inicial, para el desarrollo de inhibidores de pp60c_src no competitivos con ATP. La potencia del mejor inhibidor basado en indol de la serie actual se encontró que está cerca de aquel del mejor inhibidor basado en naftaleno. El % de inhibición fue de 46 % y 41 % con 2k a 45 µ? y [ATP] a 200 µ? ó 1,000 µ?, respectivamente.

Ejemplo 5 - Síntesis de Inhibidores de Proteínas-Cinasas de Derivado de Indol Adicionales. Los siguientes resultados muestran la síntesis de prueba de los inhibidores de proteína-cinasas derivados de indol. Se proporcionan cuatro esquemas de reacción y se siguen de forma separada por los detalles experimentales para la preparación del producto final de cada uno de estos esquemas de reacción. Estos productos finales son ejemplos de inhibidores de tirosina-cinasa basados en indol en donde la síntesis con los grupos R preferidos se ilustra (ácido borónico, Esquema de Reacción 7; OH Esquema de Reacción 8 ; una extensión de amida alifática, Esquema de Reacción 9; y ácido fosfónico, Esquema de Reacción 10) .

Esquema de Reacción 7 dletanolamina Metil-5-hidroxi-2- indolcarboxilato (1) Se disolvieron 3.50 g de ácido 5-hidroxi-2-indolcarboxílico en MeOH anhidro presaturado con gas de HCI. Se sometió a reflujo durante 48 horas. Se concentró in vacuo y se trituro con AcCN x3 para remover ácido residual. Filtrado a través de un tapón de sílice con EtOAc para remover contaminación de línea base. Se recuperaron 4.32 g, (rendimiento cuantitativo) TLC Rf = .78 (EtOAc) RMN ¾ (D SO-d 3.82 (s, 3H) , 6.78 (d, J=8.8 Hz, 1H) , 6.88 (s, 1H) , 6.93 (s, 1H) , 7.23 (d, J=8.8 Hz, 1H) , 8.90 (s, 1H) 11.62 (s, 1H) FAB (+) MS m/e 191.9 (M+l) . 5- [ (trifluorometil) sulfoniloxi] indol-2-carboxilato de metilo (2) Se adicionaron 150 mi de DCM anhidra a 3.24 g (17 mmol) de 5-hidroxi-2-indolcarboxilato de metilo (1) y 6.67 g (18.7 itim) de n-fenil-trifluorometano-sulfonamida a 0°C. Se adicionaron 2.6 mi de trietilamina gota a gota punto en el cual se formó una solución amarilla clara. Se agitó a 0°C durante 1 hora. Se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. Se concentró in vacuo y se purificó a través de columna de gel de sílice (EtOAc/hexanos) . Se recuperaron 4.69 g (86 %) . TLC Rf=.63 (l/l EtOAc/hexanos) . HPLC R£ = 20.879 RMN ½ (DMSO-d6) : 3.87 (s, 3H) , 7.25 (s, 1H) , 7.31 (d, J=9.2 Hz, 1H) , 7.55 (d, J=9.2 Hz, 1H) , 7.80 (s, 1H) , 12.34 s, 1H) FAB (+) MS m/e 323.1 (M+l).

Metil -5-metilindol -2 -carboxilato, 4,4,5, 5-tetrametil - 1,3,2-dioxaborolanometilo (3) . Se adicionaron a un matraz 500 mg, 1.55 mmol de 5-[ (trifluorometil) sulfoniloxi-2 -carboxilato de metilo (2), 37.9 mg (.05 mmol) de PdCl2 (dppf) , 4.32 mg (1.7 mmol) de bispinacolatodiboro, 4.58 mg (4.65 mmol) de acetato de potasio y 25.7 mg (.05 mmol) dppf y se secó al vacío a 40°C durante 2 horas. Se adicionaron 20 mi de dioxano anhidro y se calentó a 80°C durante la noche. La reacción se volvió negra conforme precipitó negro de Pd. La filtración del catalizador y se corrió el tapón de sílice para remover las impurezas de línea base. TLC R£=.51 (1/4 EtOAc/Hexano) . Se llevó el producto crudo a la siguiente reacción. 5-Boronilindol-2-carboxilato de metilo (4) Se disolvieron 391.2 mg (1.3 mmol) de 5-metilindol-2-carboxilato de metilo, 4 , 4 , 5 , 5-tetrametil-l , 3 , 2 -dioxoborolanometilo (3) en EtOAc. Se adicionaron 0.25 mi (2.6 mmol) de dietanolamina, y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El ppt blanco que se formó se filtro y se trató con sonido en HC1 1N. El ppt blanco resultante se filtró, se disolvió en eOH y se concentró in vacuo. Se recuperaron 36.6 mg (13 %) . HPLC R£ =13.912, RMN 1H (DMS0-d5) 3.85 (s, 3H) , 7.15 s, (1H), 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1H) , 7.67 (d, J= 8.4 Hz, 1H) , 7.87 (s, 1H) , 8.14 (s, 1H) , 11.91 (s, 1H) .

Esquema de Reacción 8 Inhibición de pp60c-src: 74% a 100 µ? IC50 = 38 µ? (Incluido en el Manuscrito) (5-Hidroxiindol-2-il) -N- [ (3-metoxifenil) metil] carboxilamida (5) Se disolvieron 2.00 g (11.3 mmol) de ácido 5-hidroxi-2 -indolcarboxílico, 1.6 mi (12.4 mmol) de 3-metoxibencilamina, y 5.87 g (11.3 mmol) de PyBOP en 10 mi de DMF anhidra. Se enfrió a 0°C y se adicionaron 5.9 mi (33.9 mmol) de DIEA. Se agitó durante 5 minutos a 0°C y se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 hora. Se recuperaron 2.83 g (85 % de rendimiento) TLC R£=.34 (1/1 EtOAc/hexanos) RM ¾ (DMSO-d6) 3.70 (s, 3H) , 4.43 (d, J= 4.4 Hz, 2H) 6.69 (d, J= 8.8 Hz , 1H) , 6.78 (d, J= 7.7 Hz, 1H) , 6.83 (s, 1H) , 6.86 (s, 1H) , 6.94 (s, 1H) , 7.20 (m, 3H) , 8.92 (t, J=4.4 Hz, 1H) , 11.36 (s, 1H) FAB (+) MS m/e 297.3 (M+l) . (5-hidroxiindol-2-il) -N- [ (3 -hidroxifenil) metil] carboxiamida (6) Se adicionaron 20 mi de DCM anhidro a 200 mg (0.67 mmol) de (5-hidroxiindol-2-il) -N- [ (3 -metoxifenil) metil] -carboxiamida (5) y se enfrió a -78°C bajo argón. Se adicionaron 4.0 mi (4.0 mmol, 6 equivalente) de BBr3. Se mantuvo a -78°C durante 5 minutos y se calentó a temperatura ambiente. Después de 90 minutos a temperatura ambiente, se enfrió con H20 y se agitó durante 10 minutos. Se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc y se lavó con NaHC03 y salmuera. La capa orgánica se secó sobre MgS04 y se concentró in vacuo. Se corrió a través del tapón de sílice para remover la contaminación de la línea base se recuperaron X mg. (80 % de rendimiento) TLC, f = 0.21 (1/1 EtOAC/hexanos). RMN H (D SO-d6) : 4.38 (d, J= 4.8 Hz, 2H) , 6.59 (d, J=8.8 Hz, 1H) , 6.71 (m, 3H) 6.83 (d, J=l .8 Hz, 1H) , 6.94 (s, 1H) , 7.08 (dd, J=7.7 Hz, 1H) , 7.19 (d, J=8.8 Hz , 1H) , 8.84 (t, J=5.9 Hz), 11.28, (s, 1H) . FAB ( +) MS m/e 283.2 (M+l) .

Esquema de Reacción 9 L-isolsucinamida PyBOP, DIEA, D F 7 Inhibición de pp60c-src: 39% a 100 µ? N- (l-carbamoil-2-metilbutil) (5-hidroxiindol-2-il) carboxiamida (7) Se disolvieron bien en 1 mi de DMF anhidra 100 mg (0.56 mmol) de ácido 5-hidroxi-2-indolcarbox£lico, 103.4 mg (0.62 mmol, 1.1 equivalente) de L-isoleucinamida, y 291 mg (0.56 mmol, 1 equivalente) de PyBOP. La solución se enfrió a 0°C y se adicionó 0.3 mi (1.68 mmol, 3 equivalente) de DIEA. La mezcla de reacción se agitó durante 1 minuto a 0°C y a temperatura ambiente durante 1 hora. La reacción entonces se diluyó con EtOAc y se lavó con HC1 1N x3 y NaHC03 x3. La capa orgánica se secó sobre MgS04 , y se concentró in vacuo para dar 166.7 mg (91 % de rendimiento) TLC Rf = 0.08 (1/1 EtOAc/hexanos) . RMN XH (DMSO-ds 0.83 (m, 6H) , 1.15 (m, 2H) , 1.68 (m, 1H) , 1.83 (m, 1H) , 4.29 (t, J=8.8 Hz, 1H) , 6.69 (d, J=8.5 Hz, 1H) , 6.83 (s, 1H) , 7.01, (s, 1H) , 7.06 (s, 1H) , 7.19 (d, J=8.4 Hz, 1H) , 7.48, (s, 1H) , 8.00 (d, 9.2 Hz, 1H) , 8.76 (s, 1H) , 11.3, (s, 1H) . FAB(+)MS m/e 290.1 (M+l).

Esquema de Reacción 10 MeOH - HCI n-fenlltriflimida reflujo OCH3 TEA, DCM 9 inhibición de pp60osrc: 1 1% a 500 µ? 5-Dibencilfosforilindol-2-carboxilato de metilo (8) Se disolvieron todos en AcCN anhidro bajo argón 200 mg (0.62 mtnol) de 5- [ (trifluorometil) sulfoniloxi] indol-2-carboxilato de metilo (2), 195.8 mg (.74 mmol, 1.2 equivalente) de dibencilfosfita, 0.14 mi (0.81 mmol, 1.3 equivalente) de DIEA, y 35.7 mg (0.03 mmol, 5 % en mmol) de Pd(PPh3)4. La mezcla de reacción se calentó a 80°C durante la noche. El solvente se removió bajo presión reducida, y el compuesto del título se aisló por cromatografía en gel de sílice. 130 mg (50 % de rendimiento) . TLC Rf =0.28 (l/l EtOAc/hexanos) RMN XH (DMSO-d6) : 3.85 (s, 3H) , 4.98-5.01 (m, 4H) , 7.28-7.32 (m, 11H) , 7.53-7.55 (m, 2H) , 8.17 (d, J=14.6 Hz, 1H) RMN 31P (DMS0-d6 23.89. 5-Fosfonolindol-2-carboxilato de metilo Se disolvió 5 -dibencilfosforilindol-2-carboxilato de metilo (8) (125 mg) en 10 mi de MeOH . Se adicionaron 20 mg de Pd-C y la mezcla se hidrógeno en un aparato Parr durante la noche. El catalizador se filtró completamente y se removió el solvente bajo presión reducida. Se obtuvieron 72.5 mg (73 % de rendimiento) . TLC R£ = línea base en EtOAc . RMN 1H (DMSO-d6) : 3.84 (s, 3H) , 7.24 (s, 1H) , 7.44-7.49 (m, 2H) , 8.01 (d, J=14.3 Hz, 1H) 12.11 (s, 1H) N R 31P (DMSO-d6) : 17.22. Los compuestos de éster en este ejemplo se pueden incrementar en potencia al convertir el éster a una amida y/o al adicionar elementos de especificidad adicionales.

Ej emplo 6. - Síntesis de inhibidores Adicionales de Proteína-Cinasa Derivados de Indol . La síntesis de algunos de los inhibidores adicionales de indol elaborados se ilustra a continuación. Estas síntesis pueden dar por resultados compuestos con mayor potencia contra pp60c-src y otras tirosina-cinasas . El grupo de éster metílico se puede convertir de manera subsiguiente en varios derivados de amida para incrementar la potencia.

Esquema de Reacción 11 0 NaN3 O Br^0CH3 — MeOH reflujo ^ OCH3 Ejemplo 7 - Toxicidad de inhibidores de Src Existe un considerable soporte reciente de la literatura para seleccionar como objetivo ppSOc_3rc (Src) como un planteamiento en general útil para terapia de cáncer sin dar por resultado toxicidad seria. Por ejemplo, los tumores que exhiben señalización mejorada de PTK del receptor de EGF, o sobreexpresan el receptor Her-2/neu, relacionado, tienen invasión mejorada de tumor. La inhibición de Src en estas células se induce de tensión de crecimiento, activa la apoptosis, e invierte el fenotipo transformado (Karni et al., 1999) . Se conoce que la actividad de Src anormalmente elevada permite que las células transformadas crezcan de una manera independiente de la fijación. Esto se provoca aparentemente por el hecho que la señalización de matriz extracelular eleva la actividad de Src en la ruta de FAK/Src, de una manera coordinada con la señalización mitogénica, y bloquea de este modo un mecanismo apoptótico que se habría inactivado normalmente. En consecuencia, la inhibición de FAK/Src en células de tumor puede inducir apoptosis debido al mecanismo apoptótico que habría llegado a ser normalmente activado en la ruptura libre de la matriz extracelular se induciría (Hisano et al., 1997) . Adicionalmente, se señaló la expresión reducida de ARNm VEGF en la inhibición de Src y tumores derivados de estas líneas de células inhibidas por Src mostraron desarrollo angiogénico reducido (Ellis et al., 1998) . La cuestión de toxicidad potencial de inhibición de Src se ha afrontado con resultados muy promisorios . Por ejemplo, una aniquilación del gen Src en ratones condujo sólo a un defecto, específicamente los osteoclastos que fallan en formar límites enredados y en consecuencia no reabsorben hueso. Sin embargo, se rescató la función de resorción de hueso de osteoclastos en estos ratones al insertar un gen de Src defectuoso de cinasa (Schwartzberg et al., 1997). Esto sugirió que la actividad de Src-cinasa se puede inhibir in vivo sin activar la única toxicidad conocida debido a que la presencia de la proteína Src es aparentemente suficiente para enganchar y activar otras PTK (que son esenciales para el mantenimiento de la función de osteoclastos) en un complejo de señalización esencial de osteoclastos. Se ha propuesto que Src sea un objetivo "uni ersal" para la terapia contra cáncer puesto que se ha encontrado que se puede sobreactivar en un número creciente de tumores humanos, además de aquellos señalados anteriormente (Levitzki, 1996) . Los beneficios potenciales de la inhibición de Src para la terapia de cáncer parecen ser cuadruplicados en base a la literatura citada, adicional. Son: 1) Inhibición de crecimiento celular descontrolado provocado por efectos de la asa del factor de crecimiento autocrino, etc. 2) Inhibición de metástasis debido a activación del apoptosis en la liberación de la matriz celular. 3) Inhibición de angiogénesis de tumor vía niveles reducidos de VEGF . 4) Baja toxicidad . Los inhibidores de Src no peptídicos iniciales también ha mostrado resultados muy alentadores en cuatro diferentes series de los ensayos de cultivo celular. 1) En el ensayo de panel de células de tumor NIH 60, se vio amplia actividad (como se esperaría para un inhibidor de Src) contra las líneas de células de tumor, incluyendo las líneas de próstata. Por ejemplo, tres de los inhibidores dieron las siguientes IC50 de división de crecimiento contra las líneas de célula de cáncer de próstata NIH: 45 (PC-3, 15 µ?; DU-145, 38 µ ) , 43-meta (PC-3, 19 µ?) , 49-meta (PC-3, 39 µ ; DU-145, > 100 µ?) . 2) En la línea de células de riñon de rata normal transformadas con v-Src (LA25) 43-meta y 45_ bloquearon específicamente el crecimiento celular inducido por v-Src sin inhibir el crecimiento normal de las células no transformadas de origen. Este resultado mostró que los inhibidores no afectan las células normales sino que son efectivos en el bloqueo de la transformación celular inducida por Src. 3) Los inhibidores de Src se compararon a los fármacos de cáncer etopósido, taxol, doxorubicina y cisplatina en tumores ováricos de tres diferentes pacientes y un carcinoma abdominal de otro paciente. En todos los casos, los inhibidores de Src fueron al menos tan efectivos y típicamente más efectivos que los fármacos de cáncer conocidos, con eficiencia completa vista a la dosis más baja probada (3 µ?) . Como un ejemplo representativo, una comparación de taxol y doxorubicina (fueron más efectivos que etopósido y cisplatina en este cultivo particular de células tumorales) con los tres inhibidores de Src mencionados anteriormente (estructuras mostradas en la Figura 16E) se utilizan células de tumor ovárico del tumor N015 se muestra en la Figura 16A. 4) Los inhibidores de Src también se probaron para la inhibición del crecimiento anormal de células de humanas de fibroblasto y no se encontró inhibición del crecimiento celular normal (tanto sub-confluente como confluente; crecimiento algo mejorado se observó en cambio), indicando que estos inhibidores no son tóxicos a células normales aún a una concentración mayor de 10 veces. Un ejemplo de estos datos se da en la Figura 16B. 5) dos de los inhibidores de Src también se probaron para la inhibición del crecimiento de células LA25 estimulado con ts v-Src. Los resultados se muestran en la Figura 16C. Estos resultados muestran que los compuestos probados inhiben el crecimiento celular estimulado con Src. 6) Dos de los inhibidores de Src también se probaron para la inhibición de crecimiento normal de células de riñon de rata. Los resultados se muestran en la Figura 16D e ilustran que los inhibidores son citoprotectores para células normales.

En conjunto, los datos celulares obtenidos de esta manera hasta ahora muestran que puede esperarse que los inhibidores de Src, es decir, actividad amplia contra muchas líneas de células de cáncer con poca o ninguna toxicidad a células normales. Los inhibidores de Src preliminares son estructuras vía de las cuales es posible diseñar inhibidores más potentes y selectivos. Además de utilizar las estructuras cristalinas de tirosina-cinasa, se pueden llevar a cabo estudios de modelado molecular con el inhibidor de tirosina-cinasa de producto natural, damnacanthal (Faltynek et al., 1995) para investigar su modo de unión competitivo a péptido. Estos estudios de modelado adicionales son capaces de diseñar análogos adicionales de los inhibidores de Src en donde los elementos claves de farmacoforo de damnacanthal se incorporan en los nuevos inhibidores. Su síntesis se entenderá y la prueba de Src dada se realiza como se forma (Marsilje 2000) .

Ejemplo 8.- Desarrollo de Inhibidores de PTK de Src Para Tratamiento de Cáncer de Próstata Maligno. Se han reportado células de cáncer de próstata como que tienen tanto una sobreexpresion de paxilina y pl30cas así como están hiperfosforilados (Tremblay et al., 1996) y de esta manera pueden ser un objetivo principal para los inhibidores de Src. El cáncer de próstata es la malignidad más frecuente y es la segunda causa principal de mortalidad por cáncer entre los hombres. Cuando se localiza de forma clínica, se saca de manera más efectiva por cirugía o terapia con radiación (Dorkin et al., 1997). Para enfermedad avanzada, la supresión de andrógenos ha sido una base de la terapia durante décadas y se conoce que provoca cese de crecimiento celular y estimulación de la apoptosis en células de cáncer de próstata sensibles a andrógeno (Dorkin et al., 1997) . Sin embargo, debido a que el cáncer de próstata está compuesto de una población de células heterogéneas, el progreso de la enfermedad y la mortalidad resulta finalmente de la emergencia de células independientes de andrógeno puesto que no hay tratamiento para cáncer de próstata avanzado (Abate-Shen et al, 2000). La identificación de potentes inhibidores de las PTK activas contra cáncer de próstata altamente maligno proporcionará una herramienta valiosa en el tratamiento de la enfermedad avanzada.

Metodología Apoptosis - Medios de controles y células tratadas con fármaco se transfirieron a un tubo de 30 mi y se mantuvieron en hielo. Se lavaron suavemente las células adherentes con PBS y se tripnizaron durante 3 minutos a 37°C. Las células tripnizadas se combinaron con células flotantes y se contaron. Se transfirieron células (5 x 105) a un tubo cónico de 15 mi y se lavaron una vez con 5 mi de PBS frió y se redispersaron con Annexin V-FITC en amortiguador de unión durante 15 minutos en la oscuridad. Entonces se centrifugaron las células, se redispersaron en amortiguador de unión, y se adicionaron 10 µ? de yoduro de propidio. Se realizó el análisis por FACSCAN. Las células marcadas con Annexin se consideraron apoptóticas. Las células muertas se marcaron con yoduro de propidio y las células vivas se dejaron sin marcar. Los resultados se confirmaron por inmunohistoquímica . Análisis de inmunotransferencia Western - Se aislaron las proteínas totales de aproximadamente 5xl06 células y se Usaron en 1 mi de amortiguador de lisis [Tris-HCl 50 m , pH 8.0, Nací 100 mM, dodecilsulfato de sodio al 0.5 % (SDS) , desoxicolato de sodio al 0.5 %, Nonidet P40 al 0.5 %, ditiotreitol 10 mM, PMSF 1 mM y 0.4 U de aprotinina] . Se determinaron las concentraciones de proteína con un equipo de ensayo de proteína de DC. La expresión de las proteínas fosforiladas con tirosina se investigó por inmunotransferencia . La proteína de los lisados celulares (50 µg) se sometió a electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida al 10 % seguido por transferencia en un Medio de Transferencia Trans-Blot de 4.5 µ? usando membrana de nitrocelulosa . Las transferencias se incubaron con el anticuerpo secundario apropiado y se desarrollaron usando un equipo de reactivo de quimioluminiscencia . Se obtuvieron los Westerns para paxilina al usar despojo y re-sondeo normal de la membrana con un nuevo anticuerpo secundario. Cada transferencia es típica de múltiples corridas. Ensayo de Toxicidad - El ensayo de sulforodamina se diseña para asegurar la viabilidad celular en un formato de placa de 96 cavidades. Se contaron las células y se colocaron en placa a una concentración de 50,000 células/cavidad en 0.1 mL de FBS al 10 % en medio RPCI 1640. Las placas se cultivaron durante 2 días a fin de permitir que las células se unieran y luego se trataron con una concentración creciente de fármaco durante 72 horas . Los medios se removieron de las células y las placas se fijaron durante 1 hora con ácido tricloroacético al 10 %. Las cavidades se lavaron con PBS y se tiñeron con sulforodamina B al 0.4 % durante 15 minutos. El tinte no unido entonces se removió por lavado de las placas con una solución de ácido acético al 1 %, y el tinte unido (proteína) se extrajo usando Tris. 10 mM. Entonces se midió la absorbancia en un lector de placa de múltiples cavidades a una longitud de onda de 570nm. Cada punto es el promedio de 12 puntos ± S.D. y cada gráfica es representativa de múltiples análisis.

Resultados Se ha obtenido una cantidad considerable de datos para inhibidores de Src en células de cáncer . de próstata altamente maligna. Se muestran los datos representativos de la toxicidad (Figura 17A y B) después de 72 horas de exposición continua de cada uno de los cuatro fármacos y un control inactivo. La determinación del transcurso del tiempo y la respuesta apoptotica se ha realizado principalmente usando 45 (datos no mostrados) y 45_ se ha identificado como el compuesto más activo contra células de cáncer de próstata PC3-LN3 altamente malignas (Figuras 17A y B) . Un segundo análisis usando células LNCaP-LN malignas mostró una potencia casi igual de los dos compuestos 4_5 y 4j3-meta (datos no mostrados) . El KLM2-25 es un control negativo y muestra poca actividad en cualquier línea celular. La respuesta apoptotica a este compuesto fue inusual ya que sólo un pequeño porcentaje de células (menos de 5 %) sufrió apoptosis en cualquier punto de tiempo dado usando una concentración de LD50. Sin embargo, se observó una velocidad apoptotica de 20 % usando una concentración de LD90 durante 92 horas (datos no mostrados) . Además, se ha mostrado que 4_5 es un buen inhibidor de la actividad de tirosina-cinasa, aunque carece de especificidad para cualquier objetivo único de cinasa (Figura 18A) . El despojo de los anticuerpos de las membranas transferidas y la re-transferencia con un segundo anticuerpo para ya sea paxilina (Figura 18B) o pl30cas (no mostrado) ha dado por resultado la identificación exitosa de dos de las bandas afectadas de proteína en las transferencias Western.

El re-sondeo con un segundo anticuerpo proporciona identificación inequívoca de las bandas individuales de proteína debido a la identificación descrita con algunas marcas de tamaño molecular. En tanto 4_5 se ha caracterizado bien como que tiene una vida media corta in vivo, ha sido más útil en el desarrollo de una estrategia comprensiva para evaluar estos compuestos in vi tro. De manera subsiguiente, se cuantificaron dos sustratos fosforilados distintos para la cinasa de adhesión focal (paxilina y pl30 cas) y un tercer sustrato desconocido. Se realizó la cuantificación por exploración con densitometría de la película de análisis Western y se muestra en la Figura 19. Los tres sustratos fosforilados mostraron una inhibición dependiente de la dosis de la fosforilación.

Ejemplo 9 - Protección contra pérdida de audición inducida por ruido usando inhibidores de PTK. Se usaron chinchillas (N=8) en estudios de pérdida de audición inducido por ruido. Se midió la sensibilidad auditiva de los animales usando técnicas electrofílicas normales antes de la manipulación experimental. En particular, se midieron los umbrales de audición a través de los potenciales comprendidos de los electrodos de registro implantados de manera crónica en los colículos inferiores, siguiendo los procedimientos normales de laboratorio. Se anestesiaron los animales, se abrieron las vesículas auditivas, y se visualizaron las cócleas izquierda y derecha. La ventana redonda que conduce a la rampa timpánica de la cóclea se usó como punto de acceso para la aplicación del fármaco. Se trataron cuatro animales con 30 µ? de 45 3 mM, emulsionado en DMSO a 1000 mM de solución salina, que se colocó en la ventana redonda de una oreja y una solución de control de DMSO 3 mM a 1000 mM de solución salina, que se colocó en la ventana redonda de la otra oreja. Se trataron cinco animales con 30 µ? de la 3 mM (de la Tabla VI en el Ejemplo 1) , emulsionado en DMSO a 1000 mM de solución salina, que se colocó en la ventana redonda de la oreja y una solución de control de DMSO a 3 mM a 1000 mM de solución salina, que se colocó en la ventana redonda de la otra oreja (un animal se perdió antes del final del experimento) . En cada caso, la solución se dejó asentar en la ventana redonda durante 30 minutos, luego se cerró las vesículas auditivas. De manera subsiguiente, los animales se expusieron a un ruido en la banda de 4 kHz a SLP 105 dB durante 4 horas. Después del experimento de ruido, se probó la audición de los animales en el día 1, día 3, día 7, día 20 para determinar los desplazamientos comprendidos de los umbrales potenciales. El desplazamiento de umbral permanente se valoró en el día 20. Las cócleas se recolectaron en el día 20 para permitir el examen morfológico de las cócleas. Los datos para 45 se muestran en las Tablas XI-XIII y los datos para la (Ejemplo 1) se muestran en la Tabla XIV, a continuación. Tabla XI Tabla XII Tabla XIII 0.5kHz Cont ol 45 día 0 62.5 50 día 1 35 30 día 3 32.5 10 día 7 21.5 2.5 día 20 19 2.5 1kHz Control 45 día 0 55 55 día 1 42.5 40 día 3 40 12.5 día 7 30 5 día 20 22.5 5 2kHz Control 45 día 0 65 67.5 día 1 55 57.5 día 3 52.5 47.5 día 7 37.5 35 día 20 35 22.5 4kHz Control 45 día 0 70 72.5 día 1 65 70 día 3 52.5 55 día 7 40 32.5 día 20 37.5 20 8kHz Control 45 día 0 82.5 82.5 día 1 77.5 72.5 día 3 62.5 57.5 día 7 37.5 22.5 día 20 32.5 20 Tabla XIV Pre-Prueba 0.5kHz 1kHz 2kHz 4kHz 8kHz Control6821 30 20 25 15 7.5 Control6845 30 25 20 15 10 Control6850 27 25 15 10 0 Control6828 20 15 20 5 5 Control6829 20 20 20 20 5 Control 25.4 21 20 13 5.5 la 6821 30 22.5 25 20 10 la 6845 35 25 25 10 0 la 6850 25 25 10 12 0 la 6828 20 25 15 5 0 la 6829 23 25 25 15 10 la 26.6 24.5 20 12.4 4 Día 1 0.5kHz 1kHz 2kHz 4kHz 8kHz Control6821 5 25 50 60 72.5 Control6845 15 15 40 75 80 Control6850 8 10 25 65 55 Control6828 5 20 25 75 80 Control Dial 8.25 17.5 42.5 68.75 71.875 ctr 1 sd 4.716991 6.454972 13.22876 7.5 11.79248 la 6821 0 2.5 0 10 0 la 6845 5 20 25 35 30 la 6850 10 0 20 68 35 la 6828 0 5 55 55 25 la Día 1 3.75 6.875 25 42 22.5 4.787136 8.984941 22.7303 25.28504 15.54563 Día 3 0.5kHz 1kHz 2kHz 4kHz 8kHz Control6821 10 25 50 55 67.5 Control68 5 10 15 35 55 45 Control6850 3 5 15 25 15 Control6828 5 15 40 65 55 Control6829 20 20 35 45 45 Control Día3 9.6 16 35 49 45.5 6.580274 7.416198 12.74755 15.16575 19.39716 la 6821 5 7.5 0 10 0 la 6845 5 5 0 0 15 la 6850 5 2 15 25 15 la 6828 0 0 40 55 0 la 6829 12 20 35 45 45 la Día 3 5.4 6.9 18 27 15 4.27785 7.861298 18.90767 23.07596 18.37117 Día 7 0.5kHz 1kHz 2kHz 4kHz 8kHz Control6821 0 10 20 20 45 Control6845 10 15 25 45 45 Control6850 6 5 15 30 10 Control6828 10 20 37 65 60 Control6829 20 25 45 40 55 Control Día7 9.2 15 28.4 40 43 7.293833 7.905694 12.36123 16.95582 19.55761 la 6821 0 0 0 0 0 la 6845 5 15 0 5 20 la 6850 8 0 15 15 0 la 6828 15 0 40 55 30 la 6829 12 15 20 45 40 la Día 7 8 6 15 24 18 5.87367 8.215838 16.58312 24.59675 17.888854 Día 20 0.5kHz 1kHz 2kHz 4kHz 8kHz Control6821 0 10 25 35 7.5 Control6845 0 5 25 45 40 Control6850 8 0 10 20 10 Control6828 15 20 30 30 18 Control dla20 5.75 8.75 22.5 32.5 18.875 7.228416 8.539126 8.660254 10.40833 14.77822 la 6821 0 0 0 0 -5 la 6845 0 0 0 0 5 la 6850 5 0 15 11 0 la 6828 7 5 10 25 15 la Día 20 3 1.25 6.25 9 3.75 3.559026 2.5 7.5 11.80603 8.539126 0.5kHz 1kHz 2kHz 4kHz 8kHz Control Dial 8.25 17.5 42.5 68.75 71.875 Control Día3 9.6 16 35 49 45.5 Control Día7 9.2 15 28.4 40 43 Control Día20 5.75 8.75 22.5 32.5 18.875 la Día 1 3.75 6.875 25 42 22.5 la Día 3 5.4 6.9 18 27 15 la Día 7 8 6 15 24 18 la Día 20 3 1.25 6.25 9 3.75 Las figuras 20-26 muestran los desplazamientos de umbral promedio para animales tratados con 45. En particular, la figura 20 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz, y 8 kHz probado antes de la manipulación experimental (es decir, exposición a ruido en la banda de 4 kHz a 105 dB durante cuatro horas) . La figura 21 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental. La figura 22 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 1 kHz, en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental. La figura 23 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 2 kHz, en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental. La figura 24 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 4 kHz, en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental. La figura 25 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 8 kHz, en el día 0, día 1, día 3 y día 20 después de la manipulación experimental. La figura 26 muestra los desplazamientos de umbral promedio en dB en el día 20 para las orejas de control y tratadas. Como se muestra en las Figuras 21-26, los desplazamientos de umbral promedio en dB para orejas tratadas fue menor, indicando menor pérdida de audición. Las figuras 27-32 muestran los desplazamientos de umbral promedio para animales tratados con la (de Tabla VI en Ejemplo 1) . En particular, la figura 27 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz, y 8 kHz probado antes de la manipulación experimental. La figura 28 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz, y 8 kHz en el día 1, después de la manipulación experimental. La figura 29 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz, y 8 kHz en el día 7 después de la manipulación experimental. La figura 31 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición al ruido en la banda de 0.5 kHz, 1 kHz, 2 kHz, 4 kHz, y 8 kHz en el día 20 después de la manipulación experimental. La figura 32 muestra los desplazamientos de umbral promedio después de la exposición a 8000 kHz, en el día 0, día 1, día 3 y día 20. Como se muestra en las Figuras 28-32, los desplazamientos de umbral promedio en dB para orejas tratadas fue menor, indicando menor pérdida de audición. Como se muestra en las figuras 20-32, tanto 45 como la (Ej . 1) proporcionaron protección contra la exposición a ruido. Sin embargo, la (ej . 1) proporcionó! el mayor nivel de protección. En particular, los oídos tratados con el inhibidor de PTK tuvieron, en promedio, 15 a 25 dB menor pérdida de audición que los oidos de control y los animales no mostraron efectos laterales de la manipulación experimental .

Ej emplo 10. - Inhibición de apoptosis inducida por ruido en células pilosas de cócleas usando inhibidores de las PTK. Se expusieron chinchillas (N=3) a 75 pares de ruido de impulso a 155 dB pSPL. Los animales se sacrificaron 5 minutos después de la exposición al ruido. Las cócleas se examinaron para la activación del complejo de adhesión focal usando un anticuerpo contra cinasa de adhesión focal, que es un miembro intrínseco del complejo. Las Figuras 33A-33F muestran el efecto del ruido de impulso de alto nivel en las cócleas de las chinchias sin tratamiento con un inhibidor de PTK. En particular, la Figura 33A es una micrografía electrónica que muestra el daño cocleal después del ruido de impulso de alto nivel (155 dB) . La Figura 33A muestra una división en la lámina reticular (S) . La división parece estar entre la segunda y tercera fila de células pilosas exteriores. La Figura 33B representa una cóclea teñida de manera inmunohistoquímica para cinasa de adhesión focal (FAK) después de un ruido de banda octava de un nivel moderadamente alta (105 dB) . La tinción observada en la Figura 33B es un nivel relativamente bajo y se aproxima a aquel observado sin ruido. La tinción parece estar localizada principalmente en los procesos farangeales de las células Deiter y no en las células pilosas. En la elevación del nivel de ruido a 110 dB OBN, las células apoptóticas aparecieron, como se muestra en la Figura 33C. Estas células apoptóticas se localizan en dos regiones del cuadrante izquierdo superior de la figura y los núcleos parecen pillosos y altamente condensados, en tanto que los núcleos normales son grandes y de un color más difuso. En la Figura 33D es una fotografía de las mismas células teñidas con anticuerpo de cinasa de adhesión focal (FAK) (como en la Figura 33B; sin embargo, aquí el proceso farangeal parece estar circundando una lesión donde estaba ausente la célula) . Estas lesiones correponden a las áreas en la Figura 33C donde las células sufren apoptosis. La Figura 33C muestra la misma región pero a un plano vertical más inferior, demostrando que la lesión se extiende bien por debajo de la placa cuticular y el cuerpo celular. La Figura 33F muestra cócleas expuestas a ruido de impulso a 155 dB SPL. Las cócleas pierden su integridad en la placa cuticular y se tiñeron fuertemente de forma completa. Se ven muchas áreas oscuras, que representan áreas donde han muerto las células pilosas. La Figura 33A muestra una cóclea tratada con la (Ejemplo 1) , en tanto que la Figura 34B muestra una cóclea no tratada después de la exposición a un ruido de alto nivel (155 dB) . En la cóclea tratada (Figura 34A) , existe un alto nivel de tinción con FAK que se extiende más allá de los procesos farangeales de las células Deiter y bien en la placa cuticular. La naturaleza aguda de la tinción es indicativa de la formación de los complejos de adhesión focal de los cuales la FKAK es un miembro intrínseco. Además, las tres filas de núcleos de células pilosas (marcadas OHCI-3) parecen estar en orden e intactas y sin ninguna indicación de haber tomado lugar la apoptosis. Puesto que la FAK se muestra que es activa dentro de los complejos de adhesión focal, estos datos sugieren fuertemente que la FAK es activa después de una alta exposición al ruido. Se tiene como hipótesis que es la inhibición de la función de cinasa lo que se previene a través del tratamiento con la (Ejemplo 1) y da por resultado la supervivencia de células pilosas cocleares. En contraste, la Figura 34A, la Figura 34B demuestra un nivel algo menos de tinción de FAK, pero también muestra un nivel notablemente alto de muerte celular. En esta figura, casi la mitad de las células han muerto por apoptosis, como se indica por el número de núcleos condensados. Esto contrasta con la Figura 34A, donde no se observan núcleos apoptóticos con tratamiento. Puesto que la (Ejemplo 1) puede inhibir la fosforilación de varios sustratos de FAK, incluyendo paxilina y ppl30cas (ver Ejemplo 8) , se cree que la función de FAK de cinasa en la cóclea está jugando un papel protector en respuesta a exposición a ruido de alto nivel. Como se describe anteriormente, los sólidos tratados con inhibidor de PTK mostraron menos pérdida de células pilosas exteriores que los controles. Esto indica que la anoikis (desprendimiento de la matriz celular, dando por resultado la apoptosis) puede jugar un papel significativo en la pérdida de células pilosas inducida por ruido, y que el bloqueo de las señales apoptoticas generado en la matriz celular puede impedir la pérdida de células pilosas . De manera más específica, usando el modelo de animales con chinchilla anterior, se ha demostrado que se forman complejos de adhesión focal en respuesta al ruido con un nivel extremadamente alto. La FAK se activa en la formación de estos complejos y se conoce que inicia para el cascado de señalización, primero a través de una serie de eventos de autofosforilación y de manera subsiguiente a través de la fosforilación de sustratos peptídicos en etapas posteriores. Se ha demostrado que las células apoptoticas se ven dentro de la dirección circundada por complejo de adición focal. Además, la adición del inhibidor de pp60c_src previene la respuesta apoptotica sin prevenir la formación del complejo de adición focal. Estos datos sugieren que la señalización de etapas posteriores a través de la fosforilación de tirosina por FAK puede ser un paso temprano en la señalización apoptotica de células pilosas. Puesto que FAK se activa por tensión con esfuerzo en otros sistemas orgánicos, estas observaciones pueden representar la primera ruta de señalización identificada en el oído que se activa por tensión mecánica. Aunque se han representado modalidades preferidas y se han descrito en detalle en la presente, se entenderá por aquellos expertos en la técnica que se pueden hacer varias modificaciones, adiciones, sustituciones similares en que se aparten del espíritu de la invención y por lo tanto no se confieran dentro del alcance de la invención como se define en las reivindicaciones que siguen.

Literatura citada Las siguientes referencias que se citaron en la presente, se incorporan de este modo como referencia en su totalidad en esta solicitud: Abate-Shen, C . ; Shen, M.M. (2000) Molecular Genetics of Prostate Cáncer. Genes & Dev., 14, 2410-2434. Abram, C. L.,- Courtneidge, S.A. (2000) Src family tyrosine kinases and growth factor signaling. Experimental Cell Research 254, 1-13. Ajay, Murcko, M. A. (1995) Computational Methods to Predict Binding Free Energy in Ligand-Receptor Complexes. J. Med. Chem. , 38, 4953-4967. Alberts, B. , Bray, D., Lewis, J. , Raff, M. , Roberts, K. & atson, J. D. (1994) Molecular Biology Of The Cell, 3rd ed. , Garland Publishing, Inc., New York, p . 97, 508 & 667. Alfaro-Lopez, J., Yuan, W. , Phan, B. C, amath, J., Lou, Q. , Lam, K. S., Hruby, V. J. (1998) Discovery of a Novel Series of Potent and Selective Substrate-Based Inhibitors of p60c-src Protein Tyrosine Kinase: Conformational and Topographical Constraints in Peptide 231 Design. J. ed. Chem. , 41, 2252-2260. Backes, B. J., Virgilo, A. A. , Ellman, J. A . (1996) Activation Method to Prepare a Highly Reactive Acylsulfonamide "Safety-Catch" Linker for Solid-Phase Synthesis. J. Am. Chem. Soc . , 118, 3055-3056. Baggio, R . , Elbaum, D . , Kanyo, Z. F . , Carrol1, P. J., Cavalli, C, Ash, D. E . , Christianson, D. W. (1997) Inhibition of n2+ Arginase by Borate Leads to the Design of a Transition State Analog Inhibitor, 2 (S) -Amino-6-boronohexanoic Acid. J. Am. Chem. Soc . , 119, 8107-8108. Bakhtiar, R., Khemani , L., Hayes, M., Bedman, T., Tse, F. (2002) Quantification of the anti-leukemia drug STI571 (Gleevec) and its metabolite (CGP79588) in monkey plasma using a semi-automated solid phase extraction procedure and liquid chromatography-tándem mass spectrometry. J. Pharm. & Biomed. Anal., 2816, 1183-1194. Barnekow, A.; Paul, E . ; Schartl, M. (1987) Expression of the c-src protooncogene in human skin tumors . Cáncer Res., 47, 235-240. Benson, W. H., Birge, . J. , Dorough, H. W. (1984) Environ. Toxicol . Chem., 3, 209. Chem. Abstr. 101:124626g. Bhagwat, S. S., Gude, C. (1994) N-Alkylation of índole ring using Mitsunobu reaction. Tet . Left., 35, 1847-1850. Biscardi, J.S., Tice, D.A.; Parsons, S.J. (1999) c- Src, Receptor Tyrosine inases and Human Cáncer. Advances in Cáncer Research, 51-119. Biscardi, K.S., Ishizawar, R.C.; Silva, C.M.; Parsons, S. J. (2000) Tyrosine kinase signaling in breast cáncer: Epidermal growth factor receptor and c-Src interactions in breast cáncer. Breast Cáncer Res. 2, 203-210.

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Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa o un inhibidor no peptídico de proteína-fosfatasa , que tiene la fórmula: caracterizado porque X es un halógeno; Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, ORa, OC (O) Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC (0) Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS (O) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS (O) 2ORb, NRaP (O) ORbORc, NRaP (0) ORbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa; S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo cíclico ramificado, o no ramificado; en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo cíclico ramificado, o no ramificado; o R5 y R6 se forman conjuntamente de un compuesto heterocíclico; y en donde cualquiera de Ri hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 2. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque al menos uno de R5 o R6 es en donde R7* es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, CH2CH0H, CH(C¾)R, o CH(CH3)S, y cada uno de R8 hasta R12 pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC (O) ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)ORbí NRaC(0)SRb, RaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS (O) ORb, NRaS (O) 2OR , NRaP (O) ORbORc , NRaP (0) ORbRc , NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S (O) NRaR , S(0)2NRaRb, P (O) ORaORb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo, en donde Ra, ¾ y Rc pueden ser los mismos diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alqui ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de Ra hasta Ri2 y Ra hasta está sustituido o insustituido . 3. El inhibidor no peptídico de conformidad con reivindicación 1, caracterizado porque al menos uno de R5 o es en donde el asterisco indica el punto de unión al hidrógeno. 4. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X es flúor. 5. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa pp60c"src. 6. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de proteína-tirosina-fosfatasa IB. 7. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa de receptor de factor de crecimiento epidérmico. 8. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa p56 lck. 9. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación X, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa p55 fyn. 10. Un inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa o inhibidor de proteína- fosfatase que tiene la fórmula : caracterizado porque X es un halógeno, Ri es H, R2 es R3 es H, y R4 es H 11. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque X es flúor. 12. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa pp60c"src. 13. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de proteína-tirosina-fosfatasa IB. 14. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa de receptor de factor de crecimiento epidérmico. 15. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa p56 lck. 16. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el inhibidor no peptídico inhibe la actividad de tirosina-cinasa p55 fyn. 17. Un método para identificar inhibidores de proteína-cinasas , caracterizado porque comprende: proporcionar al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de unión covalente o no covalente a los residuos catalíticos de la proteína-cinasa, en donde al menos uno de uno o más grupos funcionales es un halógeno; combinar al menos un primer módulo con al menos un segundo módulo se proporciona un núcleo no peptídico para formar una o más combinaciones del primero y segundo módulos ; detectar la una o más combinaciones del primero y segundo módulos para la inhibición de proteína-cinasas ; y seleccionar combinaciones del primero y segundo módulos que inhiben la actividad de proteína-cinasa . 18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque se proporciona al menos un primer módulo que comprende: unir al menos un primer módulo a un núcleo peptídico ; identificar uno o más grupos funcionales en el primer módulo que se une preferencialmente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa; y en donde la combinación de al menos un primer módulo y al menos un segundo módulo comprende : la sustitución de un segundo módulo para el núcleo peptídico . 19. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el halógeno es flúor. 20. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende dos o más grupos funcionales . 21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste de ácido borónico, un grupo hidroxilo, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo de guanidino, ácido carboxílico, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo de ácido borónico. 23. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo hidroxilo. 24. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo amida . 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el grupo amida es una tricarbonil-amida vicinal . 26. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque al menos un segundo módulo se selecciona del grupo que consiste de indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina, benzofurano, y benzotiofeno . 27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque al menos un segundo módulo comprende un indol . 28. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque al menos un segundo módulo comprende naf aleno . 29. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende una cadena lineal que comprende entre uno y tres átomos de carbono que enlazan al menos un primer módulo a al menos un segundo módulo. 30. El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un nitrógeno, oxígeno, o átomo de azufre. 31. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la proteína-cinasa es una proteína-tirosina-cinasa . 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la proteína-tirosina-cinasa se selecciona del grupo que consiste de pp60c"Brc, p56lck, p55fyn, ZAP cinasa, tirosina-cinasa de receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, Bcr-Abl, tirosina-cinasa, del receptor de VEGF, tirosina-cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico, y tirosina-cinasas tipo receptor de factor de crecimiento epidérmico. 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la proteína-tirosina-cinasa es PPS0c-3rc. 34. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la proteína-cinasa es una proteína-serina-cinasa . 35. El método de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la proteína-serina-cinasa se selecciona del grupo que consiste de cinasa de MAP, proteína-cinasa C, y cinasa CDK. 36. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque comprende además: unir adicionar uno o más elementos de cadena lateral de especificidad a la combinación de uno o más del primer y segundo módulos . 37. Un método para identificar inhibidores mejorados de proteína-cinasa, caracterizado porque comprende: proporcionar un primer inhibidor producido de acuerdo al método 17, modificar el por lo menos un primer módulo, elementos de cadena lateral de especificidad, o una combinación de los mismos del primer inhibidor; e identificar inhibidores modificados que tienen una capacidad incrementada para inhibir la actividad de proteína-cinasa cuando se compara al primer inhibidor no modificado. 38. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el inhibidor de proteína-cinasa inhibe actividad de proteína-cinasa, pero no inhibe la unión a ATP a la proteína-cinasa. 39. Un método para probar compuestos para la capacidad para inhibir la actividad de proteína-cinasa, caracterizado porque: proporcionar un inhibidor de proteína-cinasa de conformidad con la reivindicación 17, medir la actividad de la proteína-cinasa en la presencia de un inhibidor a la misma temperatura, pH, concentración iónica, osmolaridad y concentración de magnesio libre como se encuentra en una célula que expresa la proteína-cinasa; y comparar la actividad de proteína-cinasa a la actividad de la proteína-cinasa sin la presencia del inhibido . 40. Un método para inhibir la proteína-cinasa, caracterizado porque comprende: poner en contacto la proteína-cinasa con un compuesto que comprende al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales capaces de la unión covalente o no covalente para residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, en donde uno o más grupos funcionales comprende un halógeno, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico, en donde la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-cinasa . 41. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el halógeno es flúor. 42. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende dos o más grupos funcionales . 43. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste de ácido borónico, un grupo hidroxilo, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo de guanidino, ácido carboxílico, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico . 4 . El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo de ácido borónico. 45. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo hidroxilo . 46. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el segundo módulo se selecciona del grupo que consiste de indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina, benzofurano, y benzotiofeno . 47. El método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el segundo módulo comprende un indol . 48. El método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el segundo módulo comprende naftaleno . 49. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque un primer módulo comprende una cadena lineal que comprende entre uno y tres átomos de carbono que enlazan al menos un primer módulo a al menos un segundo módulo. 50. El método de conformidad con la reivindicación 49, caracterizado porque uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un nitrógeno, oxígeno, o átomo de azufre. 51. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque la proteína-cinasa es una proteína-tirosina-cinasa . 52. El método de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque la proteína-tirosina-cinasa se selecciona del grupo que consiste de pp60c"src, p56lck, p55£yn, ZAP cinasa, tirosina-cinasa de receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, Bcr-Abl, tirosina-cinasa, del receptor de VEGF, tirosina-cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico, y tirosina-cinasas tipo receptor de factor de crecimiento epidérmico. 53. El método de conformidad con la reivindicación 52, caracterizado porque la proteína-tirosina-cinasa es pp60 ~ 54. El método de conformidad con la reivindicación compuesto tiene la siguiente fórmul caracterizado porque X es un halógeno; Ri hasta Rs pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC (0) ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaOR , B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y. alquilo cíclico ramificado, o no ramificado; en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo cíclico ramificado, o no ramificado; o Rs y R6 se forman conjuntamente de un compuesto heterocíclico; y en donde cualquiera de Ri hasta RG y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 55. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque al menos uno de R5 o R6 es en donde R7* es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, CH2CH0H, CH(CH3)R, o CH(CH3)S, y cada uno de R8 hasta pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC (0) SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (O) 2ORb, NRaP (O) ORbORc, NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0R , B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo, en donde R¡ R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de R8 hasta Ri2 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 56. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque al menos uno de R5 o Re es en donde el asterisco indica el punto de unión al hidrógeno. 57. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque X es flúor. 58. El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque el compuesto tiene la siguiente fórmula : en donde X es un halógeno, Rx es H, R2 es .OH R3 es H, y R4 es H 59. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porgue X es flúor. 60. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque la proteína-cinasa es una proteína-serina-cinasa . 61. El método de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado porque la proteína-serina-cinasa se selecciona del grupo que consiste de cinasa de MAP, proteína-cinasa C, y cinasa CDK. 62. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el compuesto comprende además uno o más elementos de cadena lateral de especificidad a la combinación de uno o más del primer y segundo módulos. 63. Un método para tratar una condición, sensible a un inhibidor de proteína-cinasa, en un sujeto, caracterizado porque comprende : administrar una dosis efectiva de un inhibidor de proteína-cinasa a un sujeto, en donde el inhibidor de proteína-cinasa comprende al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de unión covalente o no covalente a los residuos catalíticos de la proteína-cinasa, en donde al menos uno de uno o más grupos funcionales comprende halógeno, y un segundo módulo se proporciona un núcleo no peptídico, en donde la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-cinasa . 64. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la condición se selecciona del grupo que consiste de actividad de cáncer, psoriasis, arterosclerosis , o sistema inmune. 65. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque el halógeno es flúor. 66. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque el primer módulo comprende dos o más grupos funcionales. 67. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste de ácido borónico, un grupo hidroxilo, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo de guanidino, ácido carboxílico, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico . 68. El método de conformidad con la reivindicación 67, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo de ácido borónico. 69. El método de conformidad con la reivindicación 67, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo hidroxilo . 70. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque el segundo módulo se selecciona del grupo que consiste de indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina , benzofurano, y benzotiofeno . 71. El método de conformidad con la reivindicación 70, caracterizado porque el segundo módulo comprende un indol . 72. El método de conformidad con la reivindicación 70, caracterizado porque el segundo módulo comprende naftaleno . 73. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque una cadena lineal que comprende entre uno y tres átomos de carbono que enlazan al menos un primer módulo a al menos un segundo módulo. 74. El método de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un nitrógeno, oxígeno, o átomo de azufre. 75. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la proteína-cinasa es una proteína-tirosina-cinasa . 76. El método de conformidad con la reivindicación 75, caracterizado porque la proteína-tirosina-cinasa se selecciona del grupo que consiste de pp60c src, p56lck, p55£yn, ZAP cinasa, tirosina-cinasa de receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, Bcr-Abl, tirosina-cinasa, del receptor de VEGF, tirosina-cinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico, y tirosina-cinasas tipo receptor de factor de crecimiento epidérmico. 77. El método de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado porque la proteína-tirosina-cinasa es pp60c'src. 78. El método de conformidad con la reivindicación 77, el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque X es un halógeno; Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb, NRaC (0) Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC (O) SRb, NRaS (0) Rb, MRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb( NRaP (O) 0Rb0Rc , NRaP (0) ORbRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb; B(0H}2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo cíclico ramificado, o no ramificado; en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo cíclico ramificado, o no ramificado; o R5 y R6 se forman conjuntamente de un compuesto heterocíclico; y en donde cualquiera de Rx hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 79. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque al menos uno de R5 o Re es en donde R7* es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, CH2CH0H, CH(CH3)R, o CH(CH3)S, y cada uno de R8 hasta R12 pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra OC (0) 0Ra, NH2, NRaRb, NRaC (0) Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC (0) SRb, NRaS (0) Rb , NRaS (0) 2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP <0) 0Rb0Rc , NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S (0) 0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico, y alquilo, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de R8 hasta R12 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 80. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque al menos uno de R5 o Rs es en donde el asterisco indica el punto de unión al hidrógeno. 81. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 78, caracterizado porque X es flúor. 82. El método de conformidad con la reivindicación 77, el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque X es un halógeno, Ri es H, R2 es R3 es H, y R es H 83. El inhibidor no peptídico de conformidad con la reivindicación 82, caracterizado porque X es flúor. 84. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque la proteína-cinasa es una proteína-serina-cinasa . 85. El método de conformidad con la reivindicación 84, caracterizado porque la proteína-serina-cinasa se selecciona del grupo que consiste de cinasa de MAP, proteína-cinasa C, y cinasa CDK. 86. El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque el compuesto comprende además uno o más elementos de cadena lateral de especificidad a la combinación de uno o más del primer y segundo módulos . 87. Un método para identificar inhibidores de protelna-fosfatasas , caracterizado porque comprende: proporcionar al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de unión covalente o no covalente a los residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa; combinar al menos un primer módulo con al menos un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico para formar una o más combinaciones del primero y segundo módulos ; detectar una o más combinaciones del primero y segundo módulos para la inhibición de proteína- fosfatasas ; y seleccionar combinaciones del primero y segundo módulos que inhiben la actividad de la proteina-fosfatasa. ¦ 88. El método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porgue se proporciona al menos un primer módulo que comprende: unir al menos un primer módulo a un núcleo peptídico,- identificar uno o más grupos funcionales en el primer módulo que se une preferencialmente a residuos catalíticos de la proteína-cinasa; y en donde la combinación de al menos un primer módulo y al menos un segundo módulo comprende: la sustitución de un segundo módulo para el núcleo peptídico . 89. El método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende dos o más grupos funcionales . 90. El método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste de ácido borónico, un grupo hidroxilo, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo de guanidino, ácido carboxílico, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico. 91. El método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un halógeno . 92. El método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo de ácido borónico. 93. El método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo hidroxilo. 94. El método de conformidad con la reivindicación 90, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo amida . 95. El método de conformidad con la reivindicación 94, caracterizado porque el grupo amida es una tricarbonil-amida vicinal . 96. El método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porque al menos un segundo módulo se selecciona del grupo que consiste de indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina, benzofurano, y benzotiofeno . 97. El método de conformidad con la reivindicación 96, caracterizado porque al menos un segundo módulo comprende un indol . 98. El método de conformidad con la reivindicación 96, caracterizado porque al menos un segundo módulo comprende naftaleno . 99. El método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende una cadena lineal que comprende entre uno y tres átomos de carbono que enlazan al menos un primer módulo a al menos un segundo módulo. 100. El método de conformidad con la reivindicación 99, caracterizado porque uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un nitrógeno, oxígeno, o átomo de azufre. 101. El método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porque la prote£na-fosfatasa es una protexna-tirosina-fosfatasa IB. 102. El método de conformidad con la reivindicación 87, caracterizado porque comprende: unir uno o más elementos de cadena lateral de especificidad a una o más combinaciones del primero y segundo módulos . 103. Un método para identificar inhibidores mejorados de proteína-cinasa, caracterizado porque comprende: proporcionar un primer inhibidor producido de acuerdo al método 8, modificar el por lo menos un primer módulo, elementos de cadena lateral de especificidad, o una combinación de los mismos del primer inhibidor; e identificar inhibidores modificados que tienen una capacidad incrementada para inhibir la actividad de proteína-cinasa cuando se compara al primer inhibidor no modificado. 104. Un método para probar compuestos para la capacidad para inhibir la actividad de proteína-cinasa, caracterizado porque comprende: proporcionar un inhibidor de proteína-cinasa de conformidad con la reivindicación 8, medir la actividad de la proteína-cinasa en la presencia de un inhibidor a la misma temperatura, pH, concentración iónica, osmolaridad y concentración de magnesio libre como se encuentra en una célula que expresa la proteína-cinasa; y comparar la actividad de proteína-cinasa a la actividad de la proteína-cinasa sin la presencia del inhibidor. 105. Un método para inhibir la proteína-cinasa, caracterizado porque comprende: poner en contacto la proteína-cinasa con un compuesto que comprende al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales capaces de la unión covalente o no covalente para residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, en donde uno o más grupos funcionales comprende un halógeno, y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico, en donde la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-cinasa . 106. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque el primer módulo comprende dos o más grupos funcionales. 107. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste de halógeno, ácido borónico, hidroxilo, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo de guanidino, ácido carboxílico, un aldehido, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico . 108. El método de conformidad con la reivindicación 107, caracterizado porque el primer módulo incluye un halógeno . 109. El método de conformidad con la reivindicación 107, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo de ácido borónico. 110. El método de conformidad con la reivindicación 107, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo hidroxilo . 111. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque el segundo módulo se selecciona del grupo que consiste de indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina, benzofurano, y benzotiofeno. 112. El método de conformidad con la reivindicación 111, caracterizado porque el segundo módulo comprende un indol . 113. El método de conformidad con la reivindicación 111, caracterizado porque el segundo módulo comprende naftaleno . 114. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque la cadena lineal comprende entre uno y tres átomos de carbono que enlazan al menos un primer módulo al segundo módulo. 115. El método de conformidad con la reivindicación 114, caracterizado porque uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un nitrógeno, oxígeno, o átomo de azufre. 116. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque la proteína-fosfatasa es una proteína-tirosina-fosfatasa IB. 117. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, RaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP(0)0Rb0Rc, NRaP(0)ORbR0, NRaP (0) 0R0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb( P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, o R6 y R7 conjuntamente forman un compuesto heterocíclico; y en donde cualquiera de Rx hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 118. El método de conformidad con la reivindicación 117, caracterizado porque R3 es halógeno. 119. El método de conformidad con la reivindicación 118, caracterizado porque R3 es flúor. 120. El método de conformidad con la reivindicación 117, caracterizado porque al menos uno de Rs o R7 es en donde R8* es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, CH2CH0H, CH(CH3)R, o CH(CH3)S y cada uno de R9 hasta Ri3 puede ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (0) NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, ORa, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (0) 20Rbí NRaP (0) 0Rb0R0 , NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S (0) 20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de R9 hasta R13 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 121. El método de conformidad con la reivindicación 117, caracterizado porque al menos uno de R6 o R7 es en donde el asterisco indica el punto de unión al nitrógeno. 122. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque el compuesto tiene la fórmula en donde Rj. hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (O) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS (0) 2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, ¾> y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido; y X es 0 6 1. 123. El método de conformidad con la reivindicación 105, caracterizado porque el compuesto comprende adicionalmente uno o más elementos de cadena lateral de especificidad, unidos a la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo. 124. Un método para tratar una condición, sensible a un inhibidor de proteína-fosfatasa , en un sujeto, caracterizado porque comprende: administrar una dosis efectiva de un inhibidor de proteína-fosfatasa a un sujeto, en donde el inhibidor de proteína-fosfatasa comprende al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de unión covalente o no covalente a los residuos catalíticos de la proteína-fosfatasa, en donde al menos uno de uno o más grupos funcionales comprende halógeno, y un segundo módulo se proporciona un núcleo no peptídico, en donde la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhibe la actividad de proteína-fosf tasa . 125. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque la condición se selecciona del grupo que consiste de cáncer, diabetes Tipo II, y obesidad. 126. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque el primer módulo comprende dos o más grupos funcionales. 127. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque el primer módulo comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste de ácido borónico, hidroxi, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo de guanidino, ácido carboxílico, un aldehido, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico . 128. El método de conformidad con la reivindicación 127, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un halógeno . 129. El método de conformidad con la reivindicación 127, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo de ácido borónico. 130. El método de conformidad con la reivindicación 127, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo hidroxilo. 131. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque al menos un segundo módulo se selecciona del grupo que consiste de indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina , benzofurano, y benzotiofeno . 132. El método de conformidad con la reivindicación 131, caracterizado porque al menos un segundo módulo comprende un indol . 133. El método de conformidad con la reivindicación 131, caracterizado porque al menos un segundo módulo comprende naftaleno. 134. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque una cadena lineal comprende entre uno y tres átomos de carbono que enlazan al menos un primer módulo a al menos un segundo módulo . 135. El método de conformidad con la reivindicación 134, caracterizado porque uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un nitrógeno, oxígeno, o átomo de azufre. 136. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque la proteína-fosfatasa es una proteína-tirosina-fosfatasa IB. 137. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque el compuesto tiene la siguiente fórmula : en donde Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (O) ORbORc, NRaP(0)ORbRc, NRaP (O) ORbORc, SRa, S(0)Ra, S (O) 2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S (O) NRaRb, S{0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, o R6 y R7 conjuntamente forman un compuesto heterocíclico; y en donde cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 138. El método de conformidad con la reivindicación 137, caracterizado porque R3 es halógeno. 139. El método de conformidad con la reivindicación 138, caracterizado porque R3 es flúor. 140. El método de conformidad con la reivindicación 137, caracterizado porque al menos uno de Rs o R es en donde R8* es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, C¾CH0H, CH(CH3)R, o CH(CH3)S y cada uno de R9 hasta R13 puede ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRbí C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC (O) Rb, NRaC (0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) ORORc, NRaP (0) 0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S (0) 20Ra, S (O) NRaRb , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de R9 hasta Rx3 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 141. El método de conformidad con la reivindicación 137, caracterizado porque al menos uno de R6 o R7 es en donde el asterisco indica el punto de unión al nitrógeno. 142. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque el compuesto tiene la fórmula en donde Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0) SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC ( O ) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0) SRb, NRaS (0) R , NRaS(0)2Rb, NRaS (O) 0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S (0) Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)20Ra, S (0) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, ¾> y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido; y X es 0 6 1. 143. El método de conformidad con la reivindicación 124, caracterizado porque el compuesto comprende adicionalmente uno o más elementos de cadena lateral de especificidad, unidos a la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo. 144. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta Re pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, 0C(0)0Ra, H2, NRaRb, NRaC(0)R , NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS (0) 2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP(0)ORbORc, NRaP(0)ORbRc, NRaP (0) 0Rb0Rc, SRa, S (0) Ra, S (O) 2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2< halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, b y Re pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta Re y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido; con la condición que al menos uno de Rx hasta Rs es halógeno. 145. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)2ORb, NRaP(0)0Rb0R0, NRaP(0)0RbRc, RaP (0) ORbORc, SRa, S(0)Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, ? (0) 2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de ¾. hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 146. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaR , C(0)ORa, C (O) SRa, OH, ORa, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0) SRb, NRaS(0)Rb, NRaS (0) 2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP(0)0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP (0) 0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S (0) 2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 147. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, H2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC ( O ) NRbR0 , NRaC(0)ORb, NRaC(0) SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S (0) 0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido. 148. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) R , NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rbí NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0R0/ SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaRb , S(0)2NRaRb; P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde R ¦¡a / R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 149. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R5 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (O) R , NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (0) 20Rb, NRaP (O) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S (O) Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R5 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 150. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta Ra pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, ORa, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2, NRaRb, NRaC (0) R , NRaC (0) NRRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (O) 20Rb, NRaP (0) 0Rb0RC( NRaP(0)0RbRc, NRaP (O) 0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S (O) 2Ra, S(0)ORa, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2( halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R8 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 151. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra( C(0)NRaRbí C(0)ORa/ C(0)SRa, OH, ORa, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rbí NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)20Rb, NRaP (O) ORbORc , NRaP(0)ORbRc, NRaP(0) ORbORc, SRa, S (O) Ra, S (O) 2Ra, S(0)ORa, S{0)20Ra, S (O) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde R -a / Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo-, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 152. El método de conformidad con la reivindicación 40, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta Rio pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC (0) SRb( NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (O) 2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde R ¦;a / Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R10 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 153. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R8 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc, NRaC(0)ORb, RaC (0) SRb NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (O) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y R0 pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de R2 hasta R3 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido; con la condición que al menos uno de ¾ hasta R8 es halógeno. 154. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra/ C(0)NRaRbí C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra OC(0)Ra/ OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) ORbORc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido. 155. El método de conformidad 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0) SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0) SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S (0) 0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb( B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 156. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta Rs pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC{0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP (0) 0RRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 157. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (0) NRaRb , C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2, NRaRb, NRaC (0) Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORbf NRaP (0) ORbORc, NRaP (O) 0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S (0) 0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 158. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R5 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (0) NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, H2, NRaRb, NRaC (O) R , NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS (0) 0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP (O) 0RbRc , NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado. cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R5 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 159. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta Re pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de Ri hasta R8 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 160. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (O) NRaRb , C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)OR , NRaS(0)2ORb, NRaP (O) ORbORc, NRaP(0)ORbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S (O) ORa, S(0)2ORa, S (O) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido. 161. El método de conformidad con la reivindicación 63, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta Rio pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRh, NRaC(0)R , NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) R , NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0RCí SRa, S(0)Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRbí S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta Ri0 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 162. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: R1 R8 caracterizado porque Rx hasta Re pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (0 ) NRaRb , C(0)ORa, C (0) SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (O) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra; S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R8 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido; con la condición que al menos uno de Ri hasta RB es halógeno. 163. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: Ri R7 caracterizado porque Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS (0) 2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)20Rb, NRaP(0)0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP (0) ORORc/ SRa, S (0) Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 164. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque ¾ hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2( NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (0) 20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0RC/ SRa, S(0)Ra( S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRbí S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb( B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de R± hasta R7 y Ra hasta R0 está sustituido o insustituido . 165. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (0) NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2 , NRaRb, NRaC (0) R , NRaC (0) NRbR0, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS (0) 20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP(0)ORbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 166. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC (O) SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (O) 20Rb, NRaP (0) 0R0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S (O) 2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de i hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 167. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ra hasta R5 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (O) R , NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (O) 2ORb, NRaP (O) OROR0, NRaP(0)ORbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb, S(0)2NRaR , P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ra hasta R5 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 168. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R8 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)0Ra, C(0) SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc , NRaC(0)0Rb, NRaC(0) SRbí NRaS (O) R , NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (O) 2ORb, NRaP (O) ORbORc, NRaP(0)ORbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de R-¡, hasta Ra y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido. 169. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque ¾ hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (O) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb< NRaS(0)2R , NRaS(0)ORb, NRaS (O) 2ORb, NRaP (O) ORbORc, NRaP(0)ORbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S (O) 2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S (O) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb, B(OH)2/ halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 170. El método de conformidad con la reivindicación 105, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta Rio pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra; C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)ORb NRaC(0)SRb, NRaS (0) R , NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (0) 20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb/ S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R10 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 171. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: R1 R8 caracterizado porque Ri hasta R8 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (O) ORbORc , NRaP(0)ORbRc, NRaP(0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S (0) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R8 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido con la condición que al menos uno de Ri hasta R8 es halógeno. 172. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: i ? caracterizado porque ¾ hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, N¾, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC (0) 0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS (0) 20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 173. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0) SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc; NRaC(0)0Rb, NRaC(0) SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de i hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 174. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta Rs pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (0) NRaR , C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, OC (0) 0Ra, NH2 , NRaRb, NRaC (0) R , NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2R , NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORbi NRaP (0) ORORc , NRaP(0)0RbRc, NRaP (0) 0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S (0) 2Ra, S(0)0Ra< S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 175. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque i hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C (O) NRaR , C(0)0Ra, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 NRaRb, NRaC (O) R , NRaC (O) NRbRc, NRaC (O) 0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb; NRaS(0)0Rb, NRaS (0) 20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2í halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Re pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Rx hasta R6 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 176. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque hasta R5 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb< C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbR0, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS (O) R , NRaS(0)2Rb, RaS(0)ORb, NRaS(0)20Rb, NRaP (O) ORbORc , NRaP(0)ORbRc, NRaP(0) ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)20Ra, S (O) NRaR , S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2( halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde R¡ ¾j y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R5 y Ra hasta R0 está sustituido o insustituido . 177. El método de conformidad con la reivindicación donde el compuesto tiene la siguiente fórmula caracterizado porque Ri hasta R8 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C{0) Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc , NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) ORbORc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S{0)20Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde R¡ Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R8 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido. 178. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: caracterizado porque Rx hasta R6 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, 0 NRaS (0) Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, 5 en donde Ra, Rb y Re pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R6 y Ra hasta Rc Q está sustituido o insustituido. 179. El método de conformidad con la reivindicación 124, en donde el compuesto tiene la siguiente fórmula: 5 caracterizado porque Ri hasta Rio pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C (0) SRa, OH, 0Ra, 0C(0)Ra, 0C(0)0Ra, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0) NRbRc, NRaC(0)0Rb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS (0) 0Rb, NRaS(0)20Rb, NRaP (0) 0Rb0Rc , NRaP(0)0RbRc, NRaP(0)0Rb0R0, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)20Ra; S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, y un grupo alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta Ri0 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 180. Un método para proteger contra o tratar pérdida de audición en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de un inhibidor de proteína-tirosina-cinasa a un sujeto para proteger contra o tratar pérdida de audición. 181. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa es un inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa . 182. El método de conformidad con la reivindicación 181, caracterizado porque el inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa comprende al menos un primer módulo que tiene uno o más grupos funcionales cada uno capaz de unión covalente o no covalente a los residuos catalíticos de la proteína-cinasa y un segundo módulo que proporciona un núcleo no peptídico, en donde la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo inhiben la actividad de la proteína-cinasa . 183. El método de conformidad con la reivindicación 182, caracterizado porque el por lo menos un primer módulo comprende dos o más grupos funcionales. 184. El método de conformidad con la reivindicación 182, caracterizado porque el por lo menos un primer módulo comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste de halógeno, un ácido borónico, un grupo hidroxilo, ácido fosfónico, ácido sulfámico, un grupo de guanidino, ácido carboxílico, un aldehido, una amida, y ácido hidroximetilfosfónico . 185. El método de conformidad con la reivindicación 184, caracterizado porque al menos un primer módulo incluye un halógeno. 186. El método de conformidad con la reivindicación 184, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo de ácido borónico. 187. El método de conformidad con la reivindicación 184, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo hidroxilo. 188. El método de conformidad con la reivindicación 184, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende un grupo amida. 189. El método de conformidad con la reivindicación 188, caracterizado porque el grupo amida es una tricarbonil-amida vicinal . 190. El método de conformidad con la reivindicación 182, caracterizado porque el segundo módulo se selecciona del grupo que consiste de indol, naftaleno, bifenilo, isoquinolina, benzofurano, y benzotiofeno . 191. El método de conformidad con la reivindicación 190, caracterizado porque el segundo módulo comprende un indol . 192. El método de conformidad con la reivindicación 190, caracterizado porque el segundo módulo comprende naftaleno . 193. El método de conformidad con la reivindicación 182, caracterizado porque al menos un primer módulo comprende adicionalmente una cadena lineal que comprende entre uno y tres átomos de carbono que enlazan al menos un primer módulo al segundo módulo. 194. El método de conformidad con la reivindicación 193, caracterizado porque uno de los átomos de carbono en la cadena lineal se sustituye con un nitrógeno, oxígeno, o átomo de azufre. 195. El método de conformidad con la reivindicación 182, caracterizado porque el inhibidor no peptído de proteína-cinasa comprende uno o más elementos de especificidad de cadena lateral unidos a la combinación de al menos un primer módulo y un segundo módulo. 196. El método de conformidad con la reivindicación 182, caracterizado porque el inhibidor no peptídico de proteína-tirosina-cinasa tiene la fórmula: donde Ri hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, H2 , NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC(0)NRbR0, NRaC(0)ORb, NRaC(0)SRb, NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0 ) ORbORc , NRaP (0 ) ORbRc , NRaP (0)ORbORc, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)ORa, S(0)2ORa, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)ORaORb B(OH)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; o R5 y Re conjuntamente forman un compuesto heterocíclico; y en donde cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido . 197. El método de conformidad con la reivindicación 196, caracterizado porque R3 es halógeno. 198. El método de conformidad con la reivindicación 197, caracterizado porque R3 es flúor. 199. El método de conformidad con la reivindicación 196, caracterizado porque al menos uno de R6 o R7 es en donde R8* es el punto de unión y es (CH2)X, en donde X es de 0 a 10, CH2CH0H, CH(C¾)R, o CH(CH3)S y cada uno de R9 hasta Ri3 puede ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, ORa, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2, NRaRb, NRaC(0)Rb, NRaC (0)NRbRc, NRaC(0)ORb, NRaC (O) SRb, NRaS (O) Rb, NRaS{0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) 0Rb0Rc, NRaP (0) 0RRc, NRaP(0)0Rb0R0, SRa, S(0)Ra, S(0)2Ra, S(0)0Ra, S(0)z0Ra, S(0)NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, R y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado; y en donde cualquiera de 9 hasta R13 y Ra hasta R0 está sustituido o insustituido . 200. El método de conformidad con la reivindicación 196, caracterizado porque al menos uno de R6 o R7 es en donde el asterisco indica el punto de unión al nitrógeno. 201. El método de conformidad con la reivindicación 182, en donde el inhibidor no peptídico de tirosina-cinasa tiene la fórmula: caracterizado porque X es un halógeno, Ri es H, R2 es R3 es H, y R4 es H 202. El método de conformidad con la reivindicación 201, caracterizado porque X es flúor. 203. El método de conformidad con la reivindicación 182, en donde el inhibidor no peptídico de tirosina-cinasa tiene la fórmula caracterizado porque ¾ hasta R7 pueden ser los mismos o diferentes, y se seleccionan del grupo que consiste de H, C(0)Ra, C(0)NRaRb, C(0)ORa, C(0)SRa, OH, 0Ra, OC(0)Ra, OC(0)ORa, NH2 , NRaRb , NRaC (0 ) Rb , NRaC (0 ) NRbRc , NRaC (0) 0Rb , NRaC (0 ) SRb , NRaS(0)Rb, NRaS(0)2Rb, NRaS(0)ORb, NRaS(0)2ORb, NRaP (0) ORbORc , NRaP(0)0RbRc/ NRaP (0)0Rb0Rc, SRa, S(0)Ra, S(0)zRa, S(0)0Ra, S(0)20Ra, S (0) NRaRb, S(0)2NRaRb, P(0)0Ra0Rb, B(0H)2, halógeno, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo, compuesto heterocíclico y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, en donde Ra, Rb y Rc pueden ser los mismos o diferentes y se seleccionan del grupo que consiste de H, arilo, heteroarilo, biarilo, heterobiarilo y alquilo ramificado, cíclico o no ramificado, y en donde cualquiera de Ri hasta R7 y Ra hasta Rc está sustituido o insustituido; y X es 0 ó 1. 204. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa es un inhibidor de péptido de proteína-tirosina-cinasa . 205. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa inhibe la actividad de proteína-tirosina-cinasa pero no inhibe la unión a ATP a la proteína-tirosina-cinasa. 206. El método de conformidad con la reivindicación 205, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa es un inhibidor que se dirige al sustrato peptídico. 207. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa es un inhibidor de SH2. 208. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa es un inhibidor de SH3. 209. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa es un inhibidor alostérico. 210. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa inhibe la unión a ATP a la proteína-tirosina-cinasa . 211. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque la proteína-tirosina-cinasa es una familia de Src de proteína-tirosina-cinasa. 212. El método de conformidad con la reivindicación 211, caracterizado porque la familia de la proteína-tirosina-cinasa es tirosina-cinasa de pp60c"ar . 213. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque la proeteína-tirosina-cinasa es una cinasa de adhesión focal. 214. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque la administración se lleva a cabo de manera oral, parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intreperitoneal , por instilación intranasal , por instilación intracavidad o intravesical , intraauditodialmente, intraarterialmente , intralesionalmente, por bomba de dosificación, o por aplicación a membranas mucosas . 215. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa se administra con un portador farmacéuticamente aceptable . 216. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa se administra antes de la iniciación de la pérdida de audición . 217. El método de conformidad con la reivindicación 180, caracterizado porque el inhibidor de proteína-tirosina-cinasa se administra después de la iniciación de la pérdida audición.