MXPA00001944A - Analogos opticamente puros de camptotecina, intermediario sintetico opticamente puro y su proceso de preparacion - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a nuevos análogos de la camptotecina y en particular a los productos de las fórmulas siguientes:(+)-5-etil-9, 10-difluoruro-5-hidroxi- 4, 5, 13, 15-tetrahidro-1H, 3H-oxepino-[3', 4':6,7]-ondolizino-[1,2-b]-quinolino-3, 15-diona;(+)-cloruro de 1-[9-cloro-5-etil-5-hidroxi-10-metil-3, 15-dioxo- 4,5,13,15-tetrahidro- 1H, 3H-oxepino-[3', 4'6,7]-indolizino-[1,2-b].quinolin-12-il-metil]-4- metilhexahidropiridinio;a su aplicación como medicamentos a composicionesfarmacéuticas que los contienen y a su uso para la preparación de medicamentos antitumorales, antivirales o antiparasitarios. Asímismo, la presente invención se refiere a un nuevo intermediario en la síntesis de los productos anteriormente mencionados, asícomo a un procedimiento de preparación de dicho intermediario.

Description

ANÁLOGOS ÓPTICAMENTE PUROS DE CAMPTOTECINA, INTERMEDIARIO SINTÉTICO ÓPTICAMENTE PURO Y SU PROCESO DE PREPARACIÓN.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La camptotecina es un compuesto natural que fue aislado por primera vez de las hojas y la corteza de la planta china denominada camptotheca acuminata (véase Wall et al . , J. 7Amer. Che . Soc, 88: 3888 (1996)). La camptotecina es un compuesto pentaciclico constituido por un fragmento indolizino- [1, 2-b] -quinolina fusionado con una a-hidroxilactona con seis enlaces. El carbón en la posición 20, que es portador del grupo a-hidroxi, es asimétrico y le confiere un poder rotatorio a la molécula. La forma natural de la camptotecina tiene una configuración absoluta "S" con respecto al carbono 20 y corresponde a la siguiente Fórmula: La camptotecina tiene una actividad antiproliferativa en varias lineas de células cancerosas, incluyendo las lineas celulares de tumores humanos del colon, pulmón y mama (Suffness, M. et al . .' The Alkaloids REF.: 32776 Chemistry and Pharmacology, Bross A., ed., Vol. 25, p. 73 (Academic Press, 1985) ) . Se sugiere que la actividad proliferativa de la camptotecina está relacionada con su actividad inhibitoria sobre la ADN topoisomerasa I. Se ha indicado que la a-hidroxilactona era un requerimiento absoluto tanto para la actividad in vivo como la actividad in vi tro de la camptotecina (Camptothecins: New Anticancer Agents, Putmesil, M. et al . , ed. , p. 27 (CRC Press, 1995); Wall M. et al . , Cáncer Res. 55: 753 (1995); Hertzberg et al . , J . Med. Chem., 32: 715 (1982) y Crow et al . , J. Med. Chem., 35: 4160 (1992)). Más recientemente, el solicitante ha perfeccionado una nueva clase de análogos de la camptotecina, en la cual una ß-hidroxilactona reemplaza a la a-hidroxilactona natural de la camptotecina (cf . Solicitud de Patente WO 97/00876) . Un objeto de la presente invención es un nuevo proceso de preparación para un intermediario sintético enantioméricamente puro, asi como para nuevos análogos enantioméricamente puros de la camptotecina. Primeramente, un objeto de la presente invención, por lo tanto, son nuevos análogos de la camptotecina que son diferentes de cualquier compuesto conocido, caracterizados porque tienen las respectivas Fórmulas (I) y (II) representadas a continuación o caracterizados porque son sales del compuesto de la Fórmula (II) tal como por ejemplo aquel de la Fórmula (III) que representa a continuación Un intermediario clave en la síntesis de este tipo de compuestos ópticamente puros, es un producto de la Fórmula General M que se representa a continuación M en donde R representa un radical alquilo de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 10 átomos de carbono. De preferencia, R representa un radical etilo. Los compuestos de las Fórmulas (I) y (II) se pueden preparar de la siguiente manera: el compuesto de la Fórmula (+)-EHHOPD es acoplado respectivamente con uno u otro de los compuestos de la Fórmula N o N2, que se representan a continuación: Ni N2 con el fin de producir el compuesto de la Fórmula Oí ó el compuesto de la Fórmula 02, respectivamente: Oí o2 después, el compuesto de la Fórmula O? es ciclizado y se obtiene el compuesto de la Fórmula (I) ; la ciclización del compuesto de la Fórmula 02 produce el compuesto de la (II), el cual, después de una salificación, produce el compuesto de la Fórmula (III) . La formación de los compuestos de las Fórmulas Oí u 02 partiendo del compuesto de la Fórmula General M para el cual R representa un radical etilo y Ni ó N2 es llevado a cabo con un tratamiento conocidos para los técnicos en la materia con el nombre de reacción de Mitsunobu (refiérase a Mitsunobu, 0., et al . , Synthesis, p. 1 (1981)). La función hidroxilo del compuesto N es desplazada por un nucleófilo tal como el compuesto M o un derivado desprotonado de éste último, mediante un tratamiento con una fosfina, por ejemplo trifenilfosfina y un derivado azodicarboxilato, por ejemplo azodicarboxilato de dietilo o de diisopropilo, en un disolvente aprótico tal como, por ejemplo, tetrahidrofurano o N,N-dimetilformamida . La ciclización de los compuestos de las Fórmulas Oí y 02 con el fin de producir los compuestos de las Fórmulas (I) y (II), de preferencia se lleva a cabo en presencia de un catalizador de paladio (por ejemplo diacetato de paladio), en condiciones básicas (proporcionadas por ejemplo por un acetato alcalino opcionalmente combinado con un agente de transferencia de fase, tal como por ejemplo bromuro de tetrabutilamonio) , en un disolvente aprótico tal como acetonitrilo o N,N-dimetil formamida, a una temperatura comprendida entre 50 y 120°C (R. Grigg et al . , Tetrahedron 46, página 4003 (1990) ) . La presente invención también ofrece, como nuevo producto industrial, un compuesto de la Fórmula General M tal como el previamente definido. Este producto se puede utilizar para la manufactura de medicamentos. El compuesto de la Fórmula M es sintetizado de conformidad con un nuevo proceso que es parte de la presente invención que incluye las siguientes etapas sucesivas : el t-butiléster racémico representado a continuación (para su preparación, refiérase en particular a la solicitud de patente WO 97/00876) se trata con ácido trifluoroacético durante 18 horas a temperatura ambiente, con el fin de producir el correspondiente ácido carboxílico; después, la sal quinidina del ácido previamente obtenido se calienta en alcohol isopropílico a una temperatura mayor de 30 °C y de preferencia aproximadamente a 50 °C, antes de dejar que el medio de reacción se enfríe hasta la temperatura ambiente, para que la sal de uno de los enantiómeros del ácido anteriormente mencionado se cristalice, mientras que la sal del otro enantiómero, cuyo anión está representado a continuación, permanezca en solución la solución en alcohol isopropílico de la sal del enantiómero que no ha cristalizado, se concentra y se trata con ácido clorhídrico y se agita, produciéndose el compuesto de la Fórmula General A que se representa a continuación el compuesto de la Fórmula General A, posteriormente, se pone en contacto con paladio en carbón, después o se agrega formiato de amonio o ácido fórmico a la mezcla de reacción, con el fin de producir el producto desbencilado de la Fórmula Gjeneral B que se representa a continuación B posteriormente, el compuesto de la Fórmula General B se cicliza mediante la acción de diciclohexilcarbodiimida, con el fin de obtener el compuesto lactónico de la Fórmula General C que se representa a continuación finalmente, el grupo -OCH3 del compuesto lactónico de la Fórmula General C es transformado en un carbonilo mediante la acción de yoduro de sodio y cloruro de trimetilsililo, con el fin de obtener un compuesto de la Fórmula General M, tal como se representa a continuación.

M Para el proceso anteriormente descrito, la reacción que conduce del compuesto de la Fórmula General A al compuesto de la Fórmula General B de preferencia se llevará a cabo en metanol y preferiblemente calentando el medio de reacción a una temperatura de aproximadamente 40°C después de la adición del for iato de amonio. La ciclización del compuesto de la Fórmula General B con el fin de producir el compuesto de la Fórmula C, se puede llevar a cabo en tetrahidrofurano (THF) , de preferencia a una temperatura de aproximadamente 50°C, mientras que la reacción preferiblemente se llevará a cabo a temperatura ambiente con acetonitrilo como disolvente en la reacción que conduce del compuesto de la Fórmula General C al compuesto de la Fórmula General M. En el caso particular en donde R representa un grupo etilo, el compuesto de la Fórmula M se sintetiza de conformidad con el proceso constituido por las siguientes etapas sucesivas: - el t-butiléster racémico representado a continuación (para su preparación, refiérase en particular a la Solicitud de Patente WO 97/00876) se trata con ácido trifluoroacético durante 18 horas a temperatura ambiente, con el fin de producir el correspondiente ácido carboxílico; la sal quinidina del ácido 3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil) -3-hidroxipentanoico se calienta en alcohol isopropílico a una temperatura mayor de 30°C y de preferencia a aproximadamente 50°C, antes de dejar que el medio de reacción se enfríe hasta la temperatura ambiente, para que la sal del enantiómero (+ ) del ácido 3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil) -3-hidroxipentanoico se cristalice, mientras que la sal del isómero (-), cuyo anión se representa a continuación, permanezca en solución la solución en alcohol isopropílico de la sal del enantiómero (-) del ácido 3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil) -3-hidroxipentanoico se concentra y se trata con ácido clorhídrico y se agita, produciéndose el compuesto de la Fórmula A' que se representa a continuación A' el compuesto de la Fórmula A' , posteriormente, se pone en contacto con paladio en carbón y después se agrega formiato de amonio o ácido fórmico a la mezcla, con el fin de producir el producto desbencilado de la Fórmula B' que se representa a continuación.

B' posteriormente, el compuesto de la Fórmula B' es ciclizado mediante la acción de diciclohexilcarbodiimida, con el fin de obtener el compuesto lactónico de la Fórmula C que se representa a continuación C finalmente, el grupo -OCH3 del compuesto lactónico de la Fórmula C , es transformado en el correspondiente carbonilo mediante la acción de yoduro de sodio y cloruro de trimetilsililo, con el fin de obtener (+) -5-etil-5-hidroxi-l, 3,4,5,8, 9-hexahidrooxepino- [3, -c] -piridin-3, 9-diona (o (+)-EHHOPD), el cual se representa a continuación (+)-EHHOPD El compuesto de la Fórmula i se puede obtener empezando con la anilina de la Fórmula Pi que se representa a continuación de conformidad con el siguiente proceso: la anilina de la Fórmula Pi es N-acetilada mediante un tratamiento con un agente acetilante tal como por ejemplo anhídrido acético. La acetanilida así obtenida se trata a una temperatura comprendida entre 50 y 100°C, de preferencia 75°C, con un reactivo conocido para los técnicos en la materia con el nombre de reactivo de Vilsmeyer (obtenido mediante la acción del oxicloruro de fosforilo sobre la N,N-dimetilformamida, a una temperatura comprendida entre 0 y 10°C) con el fin de producir el correspondiente 2-cloro-3-quinolinocarbaldehído (por ejemplo, refiérase a Meth-Cohn et al . , J. Chem. Soc . , Perkin Trans . 1 , p. 1520 (1981); Meth-Cohn et al . , J. Chem. Soc . , Perkin Trans . 1 , p. 2509 (1981); y Nakasimhan et al . , J. Am. Chem. Soc. , 112, p. 4431 (1990)). El 2-cloro-6,7-difluoro-3-quinolinocarbaldehído es fácilmente reducido al correspondiente 2-cloro-6, 7-difluoro-3-quinolinometanol de la Fórmula i, bajo condiciones estándar conocidas para los técnicos en la materia, tales como el tratamiento en un disolvente alcohólico (por ejemplo metanol) , con borohidruro de sodio a una temperatura comprendida entre 0 y 40°C. El compuesto de la Fórmula N2 se puede obtener de conformidad con el siguiente proceso. La anilina de la Fórmula P2 representada a continuación es orto-acetilada mediante una reacción con cloroacetonitrilo en presencia de tricloruro de boro y otro ácido de Lewis, tal como tricloruro de aluminio, tetracloruro de titanio o cloruro de dietilaluminio, en un disolvente aprótico o en una mezcla de disolventes apróticos, seguido por una hidrólisis (cf. Sugasawa T. et al . , J. Am. Chem. Soc . 100, p. 4842 (1978)). El intermediario así obtenido se trata posteriormente con cloruro de etilmalonilo en un disolvente aprótico tal como acetonitrilo, en presencia de una base tal como trietilamina, después se trata con un alcoholato alcalino, por ejemplo metilato de sodio en metanol, con el fin de producir el 7-cloro-4-clorometil-6-metil-2-oxo-l, 2-dihidro-3-quinolinocarboxilato de etilo. Éste último es transformado en el 2, 7-dicloro-4-clorometil-6-metil-3-quinolinocarboxilato de etilo mediante un tratamiento con oxicloruro de fosforilo. Después, se lleva a cabo una substitución nucleofílica mediante un tratamiento con 4-metilpiperidina. La función carboxilato de etilo, posteriormente, es reducida con hidruro de diisobutilaluminio en un disolvente aprótico tal como diclorometano, con el fin de producir el compuesto de la Fórmula N2. El orden en el cual se llevan a cabo las últimas dos etapas, opcionalmente podría ser invertido. Se han descrito análogos de los compuestos intermediarios tipo Ni o N2 en la literatura científica y en particular en la Solicitud de Patente PCT 95/05427. El compuesto de la Fórmula (II) se puede transformar en una forma de sales farmacéuticamente aceptables de conformidad con los métodos usuales. Las sales aceptables incluyen, a manera de ejemplo y de manera no limitativa, las sales de adición con ácidos inorgánicos tales como clorhidrato, sulfato, fosfato, difosfato, bromhidrato y nitrato; o con ácidos orgánicos tales como acetato, maleato, fumarato, tartrato, succinato, citrato, lactato, metansulfonato, p-toluensulfonato, pamoato, salicilato, oxalato y estearato. Para otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables, uno se puede referir a "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 66: 1 (1977). Los compuestos de la presente invención poseen propiedades farmacológicas útiles. Así pues, los compuestos de la presente invención tienen un efecto inhibitorio sobre la topoisomerasa I y/o II y una actividad antitumoral. El estado de la técnica sugiere que los compuestos de conformidad con la presente invención tienen una actividad antiparasitaria y/o antiviral. De esta manera, los compuestos de conformidad con la presente invención se pueden utilizar en diferentes aplicaciones terapéuticas. Una ilustración de las propiedades farmacológicas de los compuestos de la presente invención, se encontrará más adelante en la parte experimental. Los compuestos pueden inhibir la topoisomerasa, por ejemplo de tipo I y/o II, en un paciente, por ejemplo un mamífero tal como un ser humano, mediante la administración a este paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o de la Fórmula (II) o de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la Fórmula (II) o también cualquier mezcla de estos últimos compuestos. Los compuestos de conformidad con la presente invención tienen actividad antitumoral. Se pueden utilizar para el tratamiento de tumores, por ejemplo tumores que expresan una topoisomerasa, en un paciente mediante la administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula (I) o de la Fórmula (II) o de una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la Fórmula (II), o también cualquier mezcla de estos últimos compuestos. Ejemplos de tumores o cáncer incluyen cáncer del esófago, de estómago, intestinal, del recto, de la cavidad oral, faríngeo, laríngeo, del pulmón, de colon, mamario, cervicouterino, del cuerpo endometrial, ovárico, prostético, de testículo, de vejiga, de riñon, de hígado, de páncreas, de hueso, del tejido conectivo, de piel, de ojo, de cerebro y del sistema nervioso central, así como cáncer de la tiroides, leucemia, enfermedad de Hodgkin, linfomas diferentes a los relacionados con Hodgkin, mielomas múltiples y otros. También se pueden utilizar para el tratamiento de infecciones parasitarias mediante la inhibición de los hemoflagelados (por ejemplo en infecciones por tripanosomas o leishmania) o mediante la inhibición de plasmodios (tales como por ejemplo en el paludismo) , pero también el tratamiento de infecciones y enfermedades virales. Estas propiedades hacen que los productos de las Fórmula (I) y (II) sean adecuados para su uso farmacéutico. Un objetivo de la presente solicitud también, como medicamentos, son los productos de las Fórmulas (I) y (II) tal como las anteriormente definidas, así como las sales de adición con ácidos minerales u orgánicos farmacéuticamente aceptables del producto de la Fórmula (II), tales como por ejemplo la sal de la Fórmula (III) previamente descrita o también cualquier mezcla de estos últimos compuestos. De manera similar, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen cuando menos uno de los medicamentos tal como los anteriormente definidos como ingrediente activo. Por lo tanto, la presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de conformidad con la presente invención o una sal de adición con un ácido farmacéuticamente aceptable de la misma, en combinación con un soporte farmacéuticamente aceptable de conformidad con el método de administración seleccionado (por ejemplo oral, intravenoso, intraperitoneal, intramuscular, transdérmico o subcutáneo) . La composición farmacéutica (por ejemplo terapéutica) puede estar en forma de un sólido, líquido, liposoma o micelas lipídicas. La composición farmacéutica puede estar en forma sólida, tal como por ejemplo polvos, pildoras, granulos, tabletas, liposomas, cápsulas de gelatina o supositorios. La pildora, tableta, o cápsula de gelatina se puede revestir con una substancia que sea capaz de proteger la composición de la acción del ácido gástrico o de las enzimas gástricas en el estómago del sujeto, durante un periodo suficiente, para permitir que esta composición pase en forma no digerida al intestino delgado del paciente. El compuesto también se puede administrar localmente, por ejemplo, en la misma ubicación que el tumor. El compuesto también se puede administrar de conformidad con un proceso de liberación sostenida (por ejemplo una composición de liberación sostenida o una bomba de fusión) . Los soportes sólidos apropiados pueden ser, por ejemplo, fosfato de calcio, estearato de magnesio, carbonato de magnesio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, polivinilpirrolidona y cera. Las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de conformidad con la presente invención, también se pueden presentar en forma líquida tal como por ejemplo soluciones, emulsiones, suspensiones o una formulación de liberación sostenida. Los soportes líquidos apropiados pueden ser por ejemplo agua, disolventes orgánicos tales como glicerol o glicoles tales como polietilenglicol, similarmente sus mezclas, en proporciones variadas, en agua. Un objeto de la presente invención también es el uso de los productos de las Fórmulas (I) y (II) tal como las anteriormente definidas o sales de adición con ácidos minerales u orgánicos farmacéuticamente aceptables de un producto de la Fórmula (II), tales como por ejemplo la sal de la Fórmula (III) previamente descrita, o también una mezcla de estos compuestos, para la preparación de medicamentos que tienen la intención de inhibir la topoisomerasa y más particularmente las topoisomerasas tipo l o tipo II, medicamentos que se pretenden para el tratamiento de tumores, medicamentos que se pretenden para el tratamiento de infecciones parasitarias, así como medicamentos que se pretenden para el tratamiento de infecciones o enfermedades virales. La dosis de un compuesto de conformidad con la presente invención para el tratamiento de las enfermedades o trastornos anteriormente mencionados, varía de conformidad con el método de administración, la edad y peso corporal del sujeto por ser tratado, así como el estado de éste último y serán decididos definitivamente por el médico o veterinario que atiende al paciente. Tal cantidad determinada por el médico o veterinario, en la presente se denominará como "cantidad terapéuticamente efectiva". A menos de que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por un especialista ordinario en la materia a la cual pertenece la invención. De manera similar, todas las publicaciones, Solicitudes de Patente, todas las Patentes y las demás referencias mencionadas en la presente, se incorporan como referencia. Los siguientes Ejemplos se presentan para ilustrar los anteriores procedimientos y en ningún caso se deben considerar como una limitantes de los alcances de la presente invención. PARTE EXPERIMENTAL: EJEMPLO 1 (+) - 5 -etil- 5 -hidroxi- 1 , 3, 4, 5, 8, 9-hexahidrooxep±im?- [3, 4-c] - piridin-3 , 9-diona [ (+) -EHHOPD] 1.a. Sal de quinidina del ácido 3- (3-benciloximetil-2- metoxi-4-piridil) -3-hidroxipentanoico: Se trató 3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil) - 3-hidroxipentanoato de tert-butilo (40 g, 100 mmol) con ácido trifluoroacético (150 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a 20°C. Después de la evaporación del ácido trifluoroacético, se agregó cloruro de metileno (200 ml) y se introdujo una solución saturada de bicarbonato de sodio hasta pH = 7.5-8. Después de decantar, la fase acuosa se lavó con 100 ml de cloruro de metileno. El pH de la fase acuosa posteriormente se ajustó a 1 mediante la adición de una solución de ácido clorhídrico 6 N. Después, el producto se extrajo de la fase acuosa con cloruro de metileno (2 veces, 200 ml) . La solución se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró. El ácido 3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridin) -3-hidroxipentanoico así obtenido (31.1 g, 90 mmol), se recogió con alcohol isopropílico (30 ml) , se trató con una solución de quinidina (29.2 g, 90 mmol) en alcohol isopropílico (30 ml) a 50°C bajo agitación, hasta su disolución completa. Posteriormente, la mezcla de reacción se dejó enfriar hasta una temperatura de 40°C, se detuvo la agitación y la temperatura se dejó caer hasta 20°C. Después el medio se llevó a 0°C sin agitación y se mantuvo a esta temperatura durante 16 horas. Posteriormente, la temperatura se dejó elevar hasta 20°C y se llevó a cabo una agitación hasta la cristalización. La mezcla de reacción se diluyó con alcohol isopropílico y después se filtró. El precipitado se enjuagó con alcohol isopropílico. La sal del enantiómero (+) se precipita (m = 26.6 g) , mientras que la sal del enantiómero (-) permanece en solución en el alcohol isopropílico. Así pues, el filtrado se recuperó y se concentró para obtener un aceite (34 g) , el cual se utilizó sin mayor purificación en la siguiente etapa. Los productos se analizaron por CLAR en una columna AGP CHIRAL 5 µ (10 cm x 4 mm) eluyendo con una mezcla 30/920/50 alcohol isopropílico/agua/solución reguladora de fosfato, pH = 6.5, a una velocidad de flujo de 1.2 ml/min, detección UV a 280 nm. Los tiempos de retención obtenidos fueron de 6.4 minutos para el enantiómero (-) y 2.8 minutos para el enantiómero (+) . La relación enantiómero (-) /enantiómero (+) fue de 83/17. l.b. Ácido (-) -3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil) -3- hidroxipentanoico: La solución en alcohol isopropílico de la sal de quinidina del enantiómero (-) del ácido 3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil) -3-hidroxipentanoico (Etapa 1.1) se concentró. El concentrado se recogió con 270 ml de cloruro de metileno y 270 ml de una solución 1 N de ácido clorhídrico. La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas a 20°C. Después de decantar, la fase orgánica se concentró, el concentrado se recogió con metanol con el fin de ser utilizado en la siguiente etapa. Se obtuvieron 13.5 g del producto (rendimiento del 87%) y una proporción del enantiómero (-) /enantiómero (+) de 85/15.

Los tiempos de retención en CLAR (mismo protocolo que en la Etapa 1.a) fueron: enantiómero (-) : 6.4 minutos enantiómero (+) : 2.8 minutos l.c. (+) -5-etil-5-hidroxi-l,3,4,5,8,9-hexahidrooxepino- [3 , 4-c] -piridin-3 , 9-diona: El ácido (-) -3- (3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil) -3-hidroxipentanoico (13.5 g, 39 mmol; Etapa l.b) se disolvió en 87 ml de metanol. Esta solución se vació bajo una atmósfera de nitrógeno en paladio al 10% al carbón al 50% (27.7 g; 13 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos, después se vació en una solución de formiato de amonio (11.5 g, 183 mmol) en 135 ml de metanol. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos mientras se dejaba elevar la temperatura, después se calentó a 40°C durante 30 minutos. Posteriormente, el medio de reacción se filtró en un lecho de Clarcel y se concentró. Se vaciaron 40 ml de tolueno y después se evaporó; esta operación se repitió con el fin de eliminar el metanol. El residuo así obtenido se recogió con 45 ml de THF. Después se agregó una solución de diciclohexilcarbodiimida (7.180 g, 34.5 mmol) en ml de THF. La mezcla de reacción se calentó a 50°C durante 1 hora. La mezcla se llevó a 20°C y después la diciclohexilurea se filtró. El filtrado se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en 46 ml de acetonitrilo, se agregaron 6.0 g (40.5 mmol) de yoduro de sodio y después 5.13 ml (40.5 mmol) de cloruro de trimetilsililo. La mezcla de reacción se mantuvo en agitación a temperatura ambiente durante 5 horas. Después, se agregaron 28 ml de acetonitrilo y 5.6 ml de agua. El precipitado obtenido se filtró y después se recogió con 1 ml de agua y el pH se ajustó a 7.5 mediante la adición de una solución de hidróxido de amonio. El sólido obtenido se filtró y se secó. Se obtuvieron m = 4.2 g del producto final con un rendimiento del 34% y una proporción de enantiómero (+) /enantiómero (-) de 88.4/11.6. El análisis por CLAR se llevó a cabo en una columna Chiralcel OD de 25 cm x 4.6 mm, los eluyentes utilizados fueron heptano 600 y etanol 400, la velocidad de flujo fue de 1 ml/min, 210 nm. Los tiempos de retención obtenidos fueron: enantiómero (-) : 7.1 minutos enantiómero (+) : 9 minutos El producto se recogió con acetona (40 ml) y después se agregó agua (150 ml) . La mezcla de reacción se dejó precipitar y se obtuvieron 3 g del producto con una proporción del enantiómero (+) /enantiómero (-) de 99.4/0.6. 1H RMN (250 MHz, DMSO D6) : 0.8 (t, 3H, CH.3-CH2); 1.65 {m, 2H, CH2-CH3 ) ; 3.00-3.35 (g, 1H+1H, -CH2-C=0) ; 5.3 (g, 2H, CH2-0) ; 5.7 (s, -OH); 6.35 (d, 1H aromático); 7.3 ( d, 1H aromático ) ; 11 . 7 ( s, N-H) . EJEMPLO 2 (+) -5-etil-9, 10-difluoro-5-hidroxi-4,5, 13, 15-tetrahidro- 1H, 3H-oxepino- [3 ' , 4 ' : 6, 7] -indolizino- [1 , 2-b] -quino lino - 3, 15-diona 2.a. N- (3, -difluorofenil) -acetamida: Una mezcla de 3, -difluoroanilina (50 ml, 0.5 mol) y trietilamina (70 ml, 0.5 mol) en diclorometano (1.5 1) se enfrió utilizando un baño de hielo. Se agregó anhídrido acético (71.5 ml, 0.75 mol) por goteo y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla obtenida se lavó repetidamente con agua, con una solución al 10% de bicarbonato de sodio y con una solución saturada de sal. La fracción orgánica se secó sobre sulfato de sodio y se concentró a presión reducida. El residuo se suspendió en pentano, se filtró y se secó, a presión reducida con el fin de obtener el producto del título (78 g, 91% de rendimiento) en forma de un sólido blancuzco (p.f. 126-127.5°C) . 2H RMN (DMSO): 2.15 (s, 3H) ; 7.10-7.65 (m, 2H) ; 7.65-8.10 ( , 1H) ; 10.30 (pico amplio, 1H) . 2.b. 2-cloro-6,7-difluoro-3-quinolin0-3-carbaldehido: Se utilizó el procedimiento general descrito por Meth-Cohn et al . , J. Chem. Soc. Perkin Trans . I, 1981, 1520 y 2509.

El producto de la Etapa 2.a (32 g, 220 mmol) fue agregado a un reactivo de Vilsmeyer, obtenido mediante la adición por goteo de una atmósfera de oxicloruro de fósforo (103 ml, 1.1 mol) en dimetilformamida (DMF) anhidra (34 ml, 440 mmol) , enfriando en un baño de hielo y agitando durante 30 minutos antes de dejar que la temperatura se elevara hasta la temperatura ambiente. La mezcla así obtenida se agitó a 70°C durante 16 horas. Después de que la mezcla de reacción regresó a la temperatura ambiente, fue agregada por goteo a una mezcla de agua-hielo (400 ml) y se agitó durante 2 horas. El precipitado obtenido se filtró y se lavó con agua y después se secó con el fin de obtener el producto del título (9 g, 18% de rendimiento) en forma de un sólido amarillo (p.f. 226.5-229°C) . XH RMN (DMSO): 8.17 (dd, 1H) ; 8.39 (dd, 1H) ; 8.97 (d, 1H) ; 10.34 (d, 1H) . IR (KBr) : 888, 1061, 1262, 1507, 1691 cm"1. 2.c. 2-cloro-6,7-difluoro-3- quinolilmetanol : Una suspensión del producto de la Etapa 2.b (9 g, 39 mmol) en metanol (400 ml) , se trató con borohidruro de sodio (2 g, 53 mmol) a temperatura ambiente durante media hora. El exceso de borohidruro se destruyó con ácido acético (2 ml) . Las substancias volátiles se eliminaron a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (500 ml) , y la mezcla obtenida se lavó sucesivamente con una solución diluida de bicarbonato de sodio, con agua y con salmuera, seguido por un secado sobre sulfato de magnesio y concentración a presión reducida. El residuo se recristalizó en 1, 2-dicloroetano con el fin de obtener el producto del título (8 g, 80% de rendimiento) en forma de un sólido de color beige (p.f. 166.5-167°C) . XH RMN (DMSO): 4.67 (d, 2H) ; 5.80 (t, 1H) ; 8.01 (dd, 1H) ; 8.22 (dd, 1H) ; 8.48 (s, 1H) . IR (KBr) : 871, 1038, 1253, 1513) cm"1. 2.d. (+) -8- (2-cloro-6, 7-di luoro-3-quinolinometanol) -5- etil-5-hidroxi-l,3,4 , 5 , 8 , 9-hexahidrooxepino- [3,4-c] - piridin-3, 9-diona: Se agregó dietilazodicarboxilato (1.24 ml, 7.87 mmol) por goteo a temperatura ambiente y bajo una atmósfera de argón, a una solución de (+)-EHHOPD (1.58 g, 7.08 mmol; Etapa l.c), el producto de la Etapa 2.c (1.62 g, 7.06 mmol) y tributilfosfina (1.91 ml; 7.87 mmol), en DMF anhidra (30 ml) . La mezcla así obtenida se agitó durante 16 horas. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en una columna de gel de sílice (eluyente: acetato de etilo). El sólido obtenido se recogió con éter dietílico, se filtró y se secó con el fin de obtener el producto del título (1.56 g, 51% de rendimiento) en forma de un sólido blancuzco (p.f. 196°C) .

XH RMN (DMSO): 0.84 (t, 3H) ; 1.74 (m, 2H) ; 3.02 (d, 1H) ; 3.34 (d, 1H) ; 5.29 (s, 2H) ; 5.31 (dd, 2H) ; 5.75 (s, 1H) ; 6.51 (d, 1H) ; 7.80 (d, 1H) ; 8.03 (dd, 1H) ; 8.07 (s, 1H) ; 8.17 (dd, 1H) . IR (KBr) : 875, 1057, 1360, 1507, 1574, 1647, 1749 cm-1. 2. e. (+) -5-etil-9, 10-difluoro-5-hidroxi-4,5,13, 15- tetrahidro-lH,3H-oxepino-[3' ,4' : 6, 7] -indolizino- [1 ,2- b] -quinolino-3,15-diona: Una mezcla del producto de la Etapa 2.d (1.53 g, 3.52 mmol; Etapa 2.d), bromuro de tetrabutilamonio (1.25 g, 3.87 mmol), acetato de potasio (520 mg, 5.28 mmol), trifenilfosfina (180 mg, 0.70 mmol) y acetato de paladio (II) (79 mg, 0.35 mmol) se agitó bajo una atmósfera de argón en acetonitrilo anhidro y se calentó a reflujo durante 22 horas. Después de que la mezcla de reacción regresó a la temperatura ambiente, se concentró a presión reducida y se sometió a una cromatografía en una columna de gel de sílice (eluyente: CH2Cl2/MeOH, mezcla 98/2) . Se obtuvo el producto del título (960 mg, rendimiento 68%; pureza determinada por CLAR: 97.1%): Este producto se recogió con CH2C12 anhidro (100 ml) y se agitó durante 24 horas, seguido por una filtración y deshidratación a presión reducida, con el fin de obtener el producto purificado del título (850 g; 61% de rendimiento; pureza determinada por CLAR: 99.6%) en forma de un sólido blanco. XH RMN (DMSO): 0.87 (t, 3H) ; 1.85 (m, 2H) ; 3.08 (d, 1H) ; 3.44 (d, 1H) ; 5.26 (s, 2H) ; 5.39 (d, 2H) ; 5.52 (d, 2H) ; 5.99 (pico amplio, 1H) ; 7.39 (s, 1H) ; 8.15 (dd, 1H) ; 8.23 (dd, 1H) ; 8.68 (s, 1H) . IR (KBr) : 871, 1261, 1512, 1579, 1654, 1746 cm"1. EJEMPLO 3 Cloruro de (+) 1- [9-cloro-5-etil-5-hidroxi-10-metil-3, 15- d±oxo-4 , 5, 13, 15-tetrah±dro-lH, 3H-oxepino- [3 ' , 4 ' : 6, 7] - indolizino- [1 , 2-b] -qu±nolin-12-il-metil] -4- m ti lhexahi dropiri din±o 3.a. 1- (2-amino-4-cloro-5-metilfenil) -2-cloroetanona: Se enfrió en un baño de hielo y bajo una atmósfera de argón, 3-cloro-4-metilanilina (44.4 ml; 0.366 mol) en 1, 2-dicloroetano (440 ml) . Lo siguiente se agregó por goteo en el orden de esta mezcla: tricloruro de boro (1 M en heptano; 400 ml, 0.4 mol), cloroacetonitrilo (28 ml, 0.44 mol) y cloruro de dietilaluminio (1 M en heptano; 400 ml, 0.4 mol). Para la adición, la temperatura se mantuvo por abajo de 20 °C. La mezcla resultante posteriormente se calentó a reflujo durante 3 horas y después se enfrió hasta 10°C. Se llevó a cabo una hidrólisis de la mezcla de reacción cuidadosamente utilizando ácido clorhídrico 2 N (240 ml) y se calentó a reflujo durante 1 hora. Se añadieron agua (1 1) y acetato de etilo (1 1), la mezcla obtenida se agitó durante 15 minutos antes de separar las fases. La fase acuosa se sometió nuevamente a extracción con acetato de etilo (200 ml) y las fases orgánicas se combinaron y el combinado se lavó con agua (500 ml) . Después de secar sobre sulfato de magnesio, la fase orgánica se concentró. El residuo se recogió con éter de petróleo (fracción con un punto de ebullición de 45 a 60°C, 150 ml) y la mezcla así obtenida se dejó durante 16 horas a 4°C. El precipitado resultante se recogió por filtración, se lavó con éter de petróleo y se secó a presión reducida a fin de obtener el producto del título (25 g, 31% de rendimiento). p.f. 129-130°C. XH RMN (DMSO): 2.20 (s, 3H) ; 4.98 (s, 2H) ; 6.90 (s, 1H) ; 7.15 (pico amplio, 2H) ; 7.70 (s, 1H) . IR (KBr) : 871, 1018, 1183, 1225, 1270, 1533, 1577, 1619, 1662 cm"1. 3.b. 7-cloro-4-clorometil-6-metil-2-oxo-l ,2-dihidro-3- quinolinocarboxilato de etilo: El producto de la Etapa 3.a (25 g, 0.11 mol) y trietilamina (30.6 ml; 0.22 mol) se mezclaron con acetonitrilo (520 ml) se agregó cloruro de etilmalonilo (28.1 ml, 0.22 mol) a temperatura ambiente y bajo una atmósfera de argón. La mezcla obtenida se calentó durante 3 horas. Se añadió etanolato de sodio (preparado mediante la disolución de 3 g, i.e. 0.13 mol, de sodio en 140 ml de etanol absoluto) por goteo y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. El precipitado se colectó por filtración, se lavó sucesivamente con etanol, agua, etanol y éter. Después se secó a presión reducida a 70°C sobre pentóxido de fósforo, con el fin de obtener el producto del título (28.6 g, 83% de rendimiento) en forma de un sólido blancuzco. XH RMN (DMSO): 1.30 (t, 3H) ; 2.40 (s, 3H) ; 4.35 (q, 2H) ; 4.85 (s, 2H) ; 7.41 (s, 1H) ; 7.91 (s, 1H) ; 12.15 (pico amplio, 1H) . IR (KBr) : 879, 1108, 1250, 1288, 1483, 1664, 1721 cm"1. 3.c. 2,7-dicloro-4-clorometil-6-metil-3- quinolinocarboxilato de etilo: El producto de la Etapa 3.b (28.4 g, 90 mmol) se calentó durante 4 horas a reflujo en oxicloruro de fósforo (400 ml). La mezcla obtenida se concentró a presión reducida (20 mmHg) a 80°C. El residuo se recogió con éter diisopropílico (400 ml) . El precipitado resultante se colectó por filtración, se lavó con éter y con éter de petróleo y después se secó a presión reducida con el fin de obtener el producto del título (25.4 g, 85% de rendimiento) en forma de un polvo blancuzco (p.f. 126-127°C). XH RMN (DMSO): 1.37 (t, 3H) ; 2.58 (s, 3H) ; 4.49 (q, 2H) ; 5.14 (s, 2H) ; 8>16 (s, 1H) ; 8.35 (s, 1H) . IR 8KBr) : 874, 1006, 1163, 1243, 1278, 1577, 1723 cm"1. 3.d. 2, 7-dicloro-4-clorometil-6-metil-3-quinolilmetanol : El producto de la Etapa 3.c (25.2 g, 76.5 mmol) se mezcló bajo una atmósfera de argón con dicloroetano (630 ml) . Se agregó por goteo hidruro de diisobutilaluminio (1 M en diclorometano; 307 ml; 307 mmol) mientras que la mezcla de reacción se agitaba y la temperatura se mantenía por abajo de 20°C. Posteriormente, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y después se vació en una solución acuosa de tartrato de potasio (concentrado al 20% en peso; 1.5 1) . La emulsión así obtenida se agitó vigorosamente durante 1 hora, se filtró en celita y se separaron las dos fases. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (200 ml) y las fases orgánicas se combinaron y el combinado se lavó con una solución acuosa de cloruro de sodio (concentrado al 20% en peso, 500 ml) . La fase orgánica obtenida se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se recogió con éter dietílico (50 ml) y el precipitado resultante se colectó por filtración. Después de secar a presión reducida, se obtuvo el producto del título (18.3 g, 93% de rendimiento) en forma de un polvo blancuzco (p.f. 169-170°C) .

XH RMN (DMSO): (t, 3H) ; 4.84 (s, 2H) ; 5.36 (s, 2H) ; 8.06 (s, 1H) ; 8.27 (s, 1H) . IR (KBr) : 870, 1022, 1102, 1304, 1482, 1567 c "1. 3.e. 2,7-dicloro-6-metil-4- (4-metilpiperidinometil) -3- quinolilmetanol : Una solución del producto de la Etapa 3.b (16.2 g, 55.7 mmol) en THF (70 ml), se trató con una solución de 4-metilpiperidina (23 ml, 195 mmol) . El producto obtenido se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregaron agua (200 ml) y dicloroetano (200 ml) . La fase orgánica se lavó con una solución acuosa de cloruro de sodio (concentrado al 20% en peso, 100 ml) , se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida (después de cristalizar el residuo en éter dietílico, se obtuvo el producto del título (18.3 g, 93% de rendimiento) en forma de un sólido cristalino blanco (p.f. 170-171. t°C) . XH RMN (CDC13) : 0.88 (d, 3H) ; 1.17 (m, 2H) ; 1.42 (m, 1H) ; 1.60 ( , 2H) ; 2.19 (t, 2H) ; 2.56 (s, 3H) ; 2.82 (d, 2H) ; 4.02 (s, 2H) ; 4.93 (s, 2H) ; 6.36 (pico amplio, 1H) ; 7.95 (s, 1H) ; 8.02 (s, 1H) . IR (KBr): 971, 1013, 1105, 1293, 1479, 1559 cm"1. 3.f. (+) 8- [2, 7-dicloro-6-metil-4- (4-metilpiperidinometil) - 3-quinolilmetil ] -5-etil-5-hidroxi-l ,3,4,5,8,9- hexahidrooxepino- [3,4-c] -piridin-3, 9-diona: Una suspensión de (+)-EHHOPD (obtenido en la Etapa l.c; 1.56 g, 7.0 mmol) en dioxano anhidro (70 ml) se trata sucesivamente, bajo una atmósfera de argón, con el producto de la Etapa 3.e (2.47 g, 7.0 mmol), trifenilfosfina (2.02 g, 7.7 mmol) y azodicarboxilato de diisopropilo (1.07 ml, 10.5 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 16 horas. Las substancias volátiles se evaporan a presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía en una columna de gel de sílice (eluyente: acetato de * etilo) . El sólido obtenido se recoge con éter dietílico, se filtra y se seca para obtener el producto del título (1.96 g, 50% de rendimiento) en forma de un sólido blancuzco (p.f. 182°C) . 1H RMN (DMSO): 0.89 (m, 8H) ; 1.23 (m, 1H) ; 1.41 (t, 2H) ; 1.64 (m, 2H) ; 2.09 (qm, 2H) ; 2.59 (m, 5H) ; 3.15 (dd, 2H) ; 4.06 (dd, 2H) ; 5.31 (dd, 2H) ; 5.35 (dd, 2H) ; 5.75 (s, 1H) ; 6.29 (d, 1H) ; 7.17 (d, 1H) ; 8.06 (s, 1H) ; 8.46 (s, 1H) . IR (KBr) : 878, 1053, 1275, 1474, 1572, 1648, 1747 cm"1. 3.g. (+)-9-cloro-5-etil-5-hidroxi-10-metil-12-(4- metilpiperidinometil) -4,5, 13, 15-tetrahidro-lH,3H- oxepino-[3' ,4' : 6,7] -indolizino- [1 ,2-c] -quinolino- 3, 15-diona: Una mezcla del producto de la Etapa 3.f (3.80 g, 6.80 mmol), bromuro de tetrabutilamonio (2.42 g, 7.5 mmol), acetato de potasio (1.00 g, 10.2 mmol), trifenilfosfina (890 mg, 3.4 mmol) y acetato de paladio (II) (220 mg, 0.68 mmol) se agitó bajo una atmósfera de argón en acetonitrilo anhidro (85 mg) a reflujo durante 24 horas. Después de enfriar hasta la temperatura ambiente, el precipitado resultante se colectó por filtración y se lavó sucesivamente con acetonitrilo, con agua, con acetona y con éter dietílico, para obtener, después de secar a presión reducida, el producto del título (2.5 g, 70% de rendimiento) en forma de un polvo blancuzco. XH RMN (DMSO): 0.86 (m, 6H) ; 1.12 (q, 2H) ; 1.36 (m, 1H) ; 1.56 (d, 2H) ; 1.84 (q, 2H) ; 2.12 (t, 2H) ; 2.56 (s, 3H) ; 2.83 (dd, 2H) ; 3.26 (dd, 2H) ; 4.03 (dd, 2H) ; 5.28 (dd, 2H) ; 5.45 (dd, 2H) ; 6.04 (s, 1H) ; 7.34 (s, 1H) ; 8.14 (s, 1H) ; 8.38 (s, 1H) . IR (KBr) : 870, 1058, 1208, 1280, 1477, 1593, 1655, 1749 cm"1. 3.h. Cloruro de (+) -1- [ (5R) -9-cloro-5-etil-5-hidroxi-10- metil-3 , 15-dioxo-4 ,5,13, 15-tetrahidro-lH, 3H-oxepino- [3' ,4' : 6,7] -indolizino- [1,2-c] -quinolin-12-il-metil] - 4-metilhexahidropiridinio : Una mezcla del producto de la Etapa 3.g (2.3 g, 7.7 mmol) y etanol absoluto (300 ml) se sometió a ultrasonido durante 2 minutos. La suspensión lechosa obtenida se agitó y se trato con ácido clorhídrico (solución 1 N, 13.2 ml, 13.2 mmol) con el fin de producir una solución de color amarillo claro la cual, después de reposar, forma un precipitado de tipo gel. El precipitado se colectó por filtración en un embudo de Büchner y se lavó sucesivamente con etanol y con éter, después se secó a presión reducida con el fin de obtener el producto del título (2.1 g, 85% de rendimiento). 1H RMN (DMSO): 0.87 (m, 6H) ; 1.59 (m, 5H) ; 1.84 (q, 2H) ; 2.64 (s, 3H) ; 3.28 (dd, 2H) ; 3.45 (s, 2H) ; 4.93 (s, 2H) ; 5.47 (dd, 2H) ; 5.61 (s, 2H) ; 6.04 (pico amplio, 1H) ; 7.41 (s, 1H) ; 8.28 (s, 1H) ; 8.63 (s, 1H) ; 10.30 (pico amplio, 1H) . IR (KBr) : 1043, 1212, 1479, 1585, 1655, 1751 cm . ESTUDIO FARMACOLÓGICO DE LOS PRODUCTOS DE LA INVENCIÓN Prueba sobre la proliferación celular. Se utilizaron cinco líneas de células tumorales en este estudio: SW620 (adenocarcinoma de colon humano), OVCAR-5 (adenocarcinoma ovárico humano) , PC-3 y DU 145 (línea celular de próstata humana) y NCI-H69 (adenocarcinoma pulmonar humano) . Estas líneas estuvieron en el Centro de Investigación y Desarrollo de Cáncer NCI/Frederick (Frederic, MD) . Estas líneas se cultivaron en medio complejo conteniendo RMPI-1640 enriquecido con 10% de suero fetal de ternera y L-glutamina 2 mM. Se incubaron a 37 °C en una atmósfera humidificada con 5% de C02. Las células adherentes se desprendieron mediante un tratamiento con una solución de tripsina al 0.25% y AEDT al 0.2% (Worthington Biochemical Corp., Freehold, NJ) durante 5 minutos a 37 °C. La cuenta de estas células se llevó a cabo utilizando un contador Coulter Zl (Coulter Corp., Hialea, FL) . La viabilidad se evaluó mediante la tinción de las células con yoduro de propidio y después se contaron con un citómetro de flujo EPICS Élite (Coulter) . El compuesto de los Ejemplos 2 y 3 a ser probado, se disolvió a una concentración de 5 mM en una solución de N,N-dimetilacetamina (DMA, Aldrich). Se llevaron a cabo subsecuentes diluciones con el medio de cultivo. Las concentraciones molares finales probadas fueron: 1 x 10 , 2 x 10"7m 4 x 10~8, 8 x 10"9, 1.6 x 10"9, 3.2 x 10"10, 6.4 x "11, 1.28 x 10"11, 2.56 x 10"12 y 5.12 x 10"13. Cada concentración se probó en 8 pozos. La verificación de la influencia de la DMA se llevó a cabo en todas las líneas celulares. El resultado de estas verificaciones es que a la concentración máxima utilizada (0.02%), la DMA no tiene efecto. Se utilizó doxorrubicina a concentraciones de 1 x -7 M y 2 x 10-7 M como control positivo. 3 Las células se seleccionaron a 5 x 10 células por pozo en una microplaca de 96 pozos (Costar Corporation, Cambridge, MA) . Las células se incubaron durante 24 horas 37°C con el fin de permitir la multiplicación celular. El compuesto de los Ejemplos 2 y 3 a ser probado, se agregó a las concentraciones anteriormente indicadas y las células se incubaron a 37 °C en una atmósfera humidificada, con 5% de C02, durante 3 días para las células adherentes (SW620, OVCAR-5, PC-3 y DU 145) y durante 5 días para las células en suspensión (NCI-H69) . Las células adherentes se probaron por el método SRB (descrito por L.V. Rubenstein, R.H. Shoemaker, K.D. Paull, R.M. Simón, S. Tosini, P. Skedan, D.A. Scudiero, A. Monks y M.R. Boyd, "Comparison of in vi tro anticancer-drug-screening data generated with tetrazolium assay versus a protein assay against a diverse panel of human tumor cell lines", J. Na t . Cáncer Inst . , 82: 1113-1118, 1990). Después de incubar durante 3 días, el sobrenadante fue eliminado y se agregaron 200 µl de RPMI-1640 sin suero fetal de ternera. Las células se fijaron mediante la adición de 50 µl de ácido trifluoroacético al 50% (concentración final del ácido tricloroacético, 10%) y se incubaron a 4°C durante 1 hora. Los pozos fueron lavados 5 veces y después teñidos con 50 µl de una solución de sulforodamina B al 0.4% (SRB, Sigma) en ácido acético al 1%, a temperatura ambiente durante 10 minutos. La tinción se solubilizó con 100 µl de solución reguladora TRIS a 10 mM, pH 10, durante aproximadamente 5 minutos con agitación, las microplacas se leyeron por espectrofotometría a 570 nm. Las células en suspensión se probaron por el método XTT (descrito por D.A. Scudiero, R.H. Shoemaker, K.D. Paull, A. Monks, S. Tierney, T.H. Nofziger, M.J. Currens, D. Seniff y M.R. Boyd: "Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines", Cáncer Research 48: 4827-4833) . Después de la incubación en presencia del compuesto de los Ejemplos 2 y 3 a ser probados, se agregaron XTT [sal sódica de 2,3-bis-(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil) -2H-tetrazolio-5-carboxanilida (Sigma) ] y metasulfato de fenazina (PMS, Sigma) disuelto en solución salina reguladora de fosfatos y las células se incubaron durante 4 horas a 37 °C en una atmósfera con 5% de C02. Las concentraciones finales de XTT y PMS fueron de 50 y 0.38 µg/pozo, respectivamente. La producción de formazan se detuvo mediante la adición de 10 µl de dodecilsulfato de sodio al 10% (Sigma) y se leyó la absorbancia por espectrofotometría a 450 nm con un filtro de referencia a 600-650 nm.

Resultados: Las concentraciones molares de los compuestos de los Ejemplos 2 y 3 que causaron una inhibición de la proliferación celular de un 50%, se presentan en la siguiente Tabla: Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (8)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecedente, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Un producto caracterizado porque tiene como fórmula una de las Fórmulas (I) o (II) representadas a continuación o sales de un compuesto de la Fórmula (II) tales como por ejemplo aquella de la Fórmula (III) representada a continuación
2. 2. Como producto industrial novedoso, un producto de la Fórmula General M representada a continuación M caracterizado porque R representa un radical etilo.
3. 3. Un procedimiento de preparación de un producto de la Fórmula General M representada a continuación M en donde R representa un radical etilo, caracterizado porque está constituido por las siguientes etapas sucesivas: el éster t-butílico racémico representado a continuación se trata con ácido trifluoroacético durante 18 horas a temperatura ambiente, para obtener el correspondiente ácido carboxílico; después se calienta en alcohol isopropílico la sal de quinidina del ácido obtenido, a una temperatura superior a 30°C y de preferencia de aproximadamente 50°C, y después se deja enfriar el medio de reacción hasta la temperatura ambiente, de tal manera que la sal de uno de los enantiómeros del ácido anteriormente mencionado se cristaliza, mientras que la sal del otro enantiómero, cuyo anión está representado a continuación, permanece en solución - la solución en alcohol isopropílico de la sal del enantiómero que no cristalizó, se concentra y se trata con ácido clorhídrico y se agita, obteniéndose el compuesto de la Fórmula General A que se representa a continuación el compuesto de la Fórmula General A se pone en contacto con paladio en carbón húmedo y después se agrega formiato de amonio o ácido fórmico a la mezcla, para obtener el producto desbencilado de la Fórmula B, que se representa a continuación B - después, el compuesto de la Fórmula General B se cicliza mediante la acción de diciclohexil-carbodiimida, para obtener el compuesto lactónico de la Fórmula General C que se representa a continuación finalmente, el grupo -OCH3 del compuesto lactónico de la Fórmula General C, se transforma en carbonilo mediante la acción de yoduro de sodio y cloruro de trimetilsililo, para obtener un compuesto de la Fórmula General M que se representa a continuación. M
4. 4. Como medicamento, un producto caracterizado porque tiene como fórmula una de las Fórmulas (I) o (II) que se representan a continuación o una sal de adición con ácidos minerales u orgánicos farmacéuticamente aceptables del producto de la Fórmula (II), tal como por ejemplo aquella de la Fórmula (III) que se representa a continuación o una mezcla de cualquiera de estos últimos compuestos .
5. 5. Una composición farmacéutica que contiene como principio activo, cuando menos uno de los compuestos de conformidad con la reivindicación 4.
6. 6. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, para la preparación de medicamentos antitumorales .
7. 7. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , para la preparación de medicamentos antivirales .
8. 8. El uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, para la preparación la medicamentos antiparasitarios .