MX2014010991A - Inhibidores de cinasa de fosfoinositida 3 cristalina. - Google Patents

Abstract

Se proporciona inter alia 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenii)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3, 4-dihidroquinazolin-5-il)-N,N-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida en la forma de un hidrato cristalino sólido y en forma anhidra cristalina sólida; también se proporcionan composiciones farmacéuticas en polvo seco para inhalación que contienen tales formas cristalinas sólidas.

Description

INHIBIDORES DE CINASA DE FOSFOINOSITIDA 3 CRISTALINA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona formas cristalinas novedosas de un compuesto que inhibe cinasas de fosfoinositida 3 (cinasas PI3), y su uso en terapia, especialmente en el tratamiento de enfermedades inflamatorias como COPD y asma. Las formas cristalinas novedosas son adecuadas para usarse en formulaciones de polvo seco para inhalación.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las cinasas lipídicas catalizan la fosforilación de lípidos para producir especies involucradas en la regulación de una amplia gama de procesos fisiológicos, incluyendo migración y adhesión celulares. Las cinasas PI3 son proteínas asociadas de membrana y pertenecen a la clase de enzimas que catalizan la fosforilación de lípidos, ellos mismos asociados con membranas celulares. La isoenzima delta de la cinasa PI3 (cinasa d PI3) es una de cuatro isoformas de cinasas PI3 de tipo I responsables de generar varias fosfoinositidas 3'-fosfor¡ladas, que median la señalización celular y ha estado implicada en inflamación, señalización de factor de crecimiento, transformación maligna e inmunidad [Véase Review por Rameh, L. E. y Cantley, L. C. J. Biol. Chem., 1999, 274:8347-8350].

La participación de las cinasas PI3 en el control de la inflamación se ha confirmado en varios modelos que usan inhibidores de cinasa pan-PI3, como LY-294002 y wortmannin [Ito, K. et al., J Pharmacol. Exp. Ther., 2007, 321 :1-8]. Se han conducido estudios recientes usando inhibidores selectivos de cinasa PI3 o en ratones knock-out que carecen de una isoforma enzimática específica. Estos estudios han demostrado el papel de trayectorias controladas por enzimas cinasas PI3 en la inflamación. Se encontró que el inhibidor selectivo de cinasa d PI3 IC-87114 inhibe la híper respuesta de las vías respiratorias, liberación de IgE, expresión pro-inflamatoria de citocina, acumulación celular inflamatoria en el pulmón y permeabilidad vascular en ratones sensibilizados con ovoalbúmina, desafiados con ovoalbúmina [Lee, K. S. et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2006, 118:403-409 y Lee, K. S. ef al., FASEB J., 2006, 20:455-65]. Además, IC-87114 disminuyó la acumulación de neutrófilos en los pulmones de ratones y la función de neutrófilos, simuladas por TNFa [Sadhu, C. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 2003, 308:764-9]. La isoforma de cinasa d PI3 es activada por insulina y otros factores de crecimiento, así como por medio de citocinas inflamatorias y de señalización de proteína acoplada de proteína G. Recientemente se reportó que el inhibidor de cinasa doble d/? PI3 TG100-115 inhibe la eosinofilia pulmonar y a la interleucina-13, así como la acumulación de mucina e híper respuesta de las vías respiratorias en un modelo de murino, cuando de administra por aerosolización. Los mismos autores también reportaron que el compuesto era capaz de inhibir la neutrofilia pulmonar provocada por LPS o humo de cigarro [Doukas, J. et al., J Pharmacol. Exp. Ther., 2009, 328.758-765] Ya que también se activa por estrés oxidativo, es probable que la isoforma de cinasa d PI3 sea relevante como un objetivo para la intervención terapéutica en aquellas enfermedades en donde está implicado un alto nivel de estrés oxidativo. Los mediadores descendentes de la trayectoria de transducción de la señal de cinasa PI3 incluyen Akt (una proteína cinasa de serina/treonina) y el objetivo mamífero de rapamicina, la enzima mTOR. Un estudio reciente ha sugerido que la activación de la cinasa d PI3, que conduce a la fosforilación de Akt, es capaz de inducir un estado de resistencia a corticoesteroides en células de otra forma sensibles a corticoesteroides [To, Y. et al., Am. J. Respir. Crít. Care Med., 2010, 182:897-904]. Estas observaciones han conducido a la hipótesis de que esta cascada de señalización podría ser un mecanismo responsable de la insensibilidad a corticoesteroides de la inflamación observada en los pulmones de pacientes que padecen de COPD, así como aquellos asmáticos que fuman, sometiendo así a sus pulmones a estrés oxidativo incrementado. De hecho, se ha sugerido que la teofilina, un compuesto usado en el tratamiento tanto de COPD como de asma, invierte la insensibilidad a esferoides a través de mecanismos que involucran la interacción con trayectorias controladas por cinasa d PI3 [To, Y. et al., Am. J. Respir. Crít. Care Med., 2010, 182:897-904].

La solicitud de patente internacional WO20 1/0481 11 divulga muchos compuestos que son inhibidores de cinasas PI3, particularmente cinasa d PI3, incluyendo 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1 /-/-pirazolo[3,4- d]pirimidin-1-il) met¡l)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazol¡n-5-¡l)-A/,A/-bis(2-metoxietil)hex-5-¡namida en la forma de base libre que se divulga en la misma como el Ejemplo 83. Este compuesto también se divulga en WO2012/052753.

El compuesto antes mencionado es referido en la presente como "compuesto de la fórmula (I)" o "compuesto de base libre de la fórmula (I)".

Antes de la divulgación más reciente del solicitante (WO2011/048111), los inhibidores de cinasa PI3 descritos a la fecha típicamente han estado pensados para administración oral. Sin embargo, una consecuencia no deseada de este enfoque es que los tejidos corporales no-objetivos, especialmente el hígado y el intestino, tienen probabilidades de estar expuestos a concentraciones farmacológicamente activas del fármaco. Una estrategia alternativa es diseñar regímenes de tratamiento en los que el fármaco se dosifique directamente en el órgano inflamado por medio de terapia tópica. En el caso de controlar la inflamación (o proporcionar otro efecto terapéutico) en los pulmones, esto se puede lograr por medio de inhalación del fármaco, lo cual tiene el beneficio de retener el fármaco predominantemente en los pulmones, minimizando así los riesgos de toxicidad sistémica. Para lograr una duración sostenida de acción, se puede usar una formulación apropiada que genere un "depósito" del fármaco activo.

El compuesto de la fórmula (I), en consecuencia, ha sido descrito como útil para la administración tópica en el pulmón (véase WO2011/048111).

Así como para proporcionar afinidad para el órgano objetivo y eficacia sostenida, un fármaco para administración tópica en el pulmón por medio de inhalación también se debe formular para proporcionar una dosis predecible del fármaco, el cual a su vez debe tener propiedades predecibles y reproducibles. El lograr estabilidad química y física aceptable y reproducible del fármaco en la formulación es una meta clave en el desarrollo de producto de productos farmacéuticos para todos los tipos de formas de dosificación farmacéuticas. Se prefieren las formas cristalinas, ya que son formas sensibles a la micronización.

Para uso por inhalación, hay 3 formas de dosificación principales - un inhalador de polvo seco (DPI), un inhalador de dosis medida (MDI) y un nebulizador de base acuosa (portátil o de sobremesa). Sin embargo, la mayoría de las ventas globales de productos para inhalación son DPIs y así proporcionan una forma bien aceptada de suministrar fármacos por inhalación. Hay numerosos productos comercializados de DPI, como Flixotide (propionato de fluticasona), Advair (propionato de fluticasona / salmeterol), Symbicort (budesonida / formoterol), Pulmicort (budesonida), Serevent (salmeterol), Foradil (formoterol).

Las formulaciones para inhalación de polvo seco típicamente consisten en una mezcla de partículas de fármaco (de tamaño inferior a 10 micrómetros y normalmente por debajo de 5 micrómetros) con un diluyente, típicamente lactosa. Debido a que las dosis usuales requeridas para terapias inhaladas están en el intervalo de los microgramos, el diluyente facilita el procesamiento farmacéutico y la dispensación de dosis individuales, por ejemplo, en cápsulas o blisteres o la medición de dosis a partir de un depósito a granel, para la administración subsecuente al paciente. Por lo tanto, típicamente, la masa del diluyente (siendo el más común la lactosa) puede ser mayor que la de la sustancia del fármaco. En este ambiente, las formulaciones aceptables de algunos productos se pueden lograr simplemente mezclando el producto de fármaco con lactosa. Otros productos pueden requerir otros excipientes adicionales u otros pasos de procesamiento para que el producto cumpla con los requerimientos de las autoridades regulatorias. Por ejemplo, US7186401 B2 (Jagotec AG et al.) divulga que la adición de estearato de magnesio a formulaciones de polvo seco para la inhalación mejora la resistencia a la humedad de las formulaciones y permite que una dosificación de partícula altamente fina o fracción de partícula fina se mantenga bajo condiciones húmedas. WO00/53157 (Chiesi) describe estearato de magnesio como lubricante para emplearse en formulaciones de polvo seco para inhalación que es capaz de incrementar la dosis de partícula fina de ciertos fármacos. US2006/0239932 (Monteith) divulga una formulación farmacéutica sólida inhalable que comprende ciertas sustancias de ingrediente activo susceptibles a interacción química con lactosa, estearato de magnesio y de lactosa. Se divulga que el estearato de magnesio inhibe la degradación inducida por lactosa del ingrediente activo, presumiblemente por medio de la reacción de Maillard que involucra la reacción de un grupo amino sobre el ingrediente activo con lactosa. US2012/0082727 (Chiesi) divulga un método para inhibir o reducir la degradación química de un ingrediente activo que posee un grupo susceptible a hidrólisis seleccionado del grupo que consiste en un grupo carbonato, un grupo carbamato y un grupo éster ¾n una formulación en polvo para inhalación que comprende partículas de portador (como partículas de lactosa), dicho método comprende revestir al menos una porción sobre la superficie de dichas partículas de portador con estearato de magnesio.

Así, permanece la necesidad de proporcionar formas de inhibidores selectivos de cinasa PI3 para usarse en terapia por inhalación que tengan potencial para proporcionar eficacia terapéutica en asma, COPD y otras enfermedades inflamatorias de los pulmones. En particular, permanece el objetivo de proporcionar un compuesto de la fórmula (I) en una forma cristalina que tenga estabilidad física y química apropiada, preferiblemente sensible a micronización, y compatible con excipientes farmacéuticos para terapia por inhalación, especialmente lactosa.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula (I) que es 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1 -il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-5-il)-/ /,/ /-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida en la forma de un hidrato cristalino sólido.

En un segundo aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula (I) que es 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]p¡rimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobenc¡l)-4-oxo-3,4-dihidroqu¡nazol¡n-5-il)-/V,/\/-b¡s(2-metoxiet¡l)hex-5-inam¡da en la forma de anhidro cristalino sólido.

Tales sustancias se refieren en lo sucesivo como "formas cristalinas sólidas de la invención". Las formulaciones farmacéuticas que contienen las formas cristalinas sólidas de la invención (opcionalmente micronizadas) se refieren en lo sucesivo como "formulaciones de la invención".

Como se explica en los Ejemplos, las formas cristalinas sólidas de la invención tienen punto de fusión alto (alrededor de 183 °C o mayor), parecen tener buena estabilidad física (como se determinó por medio de análisis de XRPD, TGA, DSC, DVS e IR) y tienen buena estabilidad química (como se determinó por medio de análisis de HPLC). Las formas cristalinas sólidas de la invención tienen buena estabilidad física cuando se combinan con lactosa. La forma de hidrato cristalino sólido tiene buena estabilidad química cuando se combina con lactosa. La forma anhidra cristalina sólida tiene buena estabilidad química cuando se combina con lactosa en presencia de una sal metálica de ácido esteárico como estearato de magnesio.

La forma de hidrato cristalino sólido y la forma anhidra cristalina sólida parecen tener estructuras de cristal relacionadas (pero distintas).

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 muestra un patrón de XRPD adquirido sobre una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido.

La Figura 2 muestra un patrón de XRPD adquirido sobre una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido.

La Figura 3 muestra una gráfica de isotermo DVS de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido.

La Figura 4 muestra un cambio de DVS en gráfico de masa de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido.

La Figura 5 muestra una gráfica de isotermo DVS de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido.

La Figura 6 muestra un cambio de DVS en el gráfico de masa de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido.

La Figura 7 muestra un espectro IR de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido.

La Figura 8 muestra un espectro IR de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido.

La Figura 9 muestra el análisis térmico de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido por medio de DSC.

La Figura 10 muestra el análisis térmico de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido por medio de DSC.

La Figura 11 muestra el análisis térmico de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido por medio de TGA.

La Figura 12 muestra el análisis térmico de una muestra del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido por medio de TGA.

La Figura 13 muestra una gráfica de isotermo DVS de una muestra del compuesto micronizado de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido.

La Figura 14 muestra un espectro IR de una muestra de una mezcla del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido y Lactohale200®.

La Figura 15 muestra un patrón de XRPD adquirido sobre una muestra de una mezcla del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido y Lactohale200®.

La Figura 16 muestra un espectro IR de una muestra de una mezcla del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido (micronizado) y Lactohale200®.

La Figura 17 muestra un patrón de XRPD adquirido sobre una muestra de una mezcla del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido (micronizado) y Lactohale200®.

La Figura 18 muestra un espectro IR de una muestra de una mezcla del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido (micronizado), Lactohale200® y estearato de magnesio.

La Figura 19 muestra un patrón de XRPD adquirido sobre una muestra de una mezcla del compuesto de la fórmula (I) en la forma de un anhidro cristalino sólido (micronizado), Lactohale200® y estearato de magnesio.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Compuesto de la fórmula (I) como ingrediente activo El compuesto de la fórmula (I) es un inhibidor dual de PI3K delta y PI3K gamma, en donde el término inhibidor como se emplea en la presente está pensado para referirse a un compuesto que reduce (por ejemplo, por al menos 50 %) o elimina la actividad biológica de la proteina objetivo, por ejemplo, la isoenzima de PI3K delta, en un ensayo enzimático in vitro. El término inhibidor delta/gamma como se emplea en la presente se refiere al hecho de que el compuesto inhibe, hasta cierto punto, ambas isoformas enzimáticas, aunque no necesariamente al mismo grado. El compuesto de la fórmula (I) está activo en sistemas de cribado basados en células y por tanto demuestra que posee propiedades adecuadas para penetrar las células y por tanto ejercer efectos farmacológicos intracelulares.

Los procesos genéricos para sintetizar el compuesto de la fórmula (I) se divulgan en WO2011/048111 , el contenido de la cual se incorpora como referencia en su totalidad, y se puede emplear un método similar al del Ejemplo 1. Véase también WO20 2/052753, el contenido de la cual se incorpora como referencia en su totalidad, en donde se proporciona un método específico para sintetizar el compuesto de la fórmula (I) en el Ejemplo.

El compuesto adecuado de la fórmula (I) está protegido de la luz durante y después de la síntesis, por ejemplo, por medio del uso de cristalería ámbar o empacado impermeable a la luz (por ejemplo, empacado de papel aluminio).

La formulación farmacéutica de la invención comprende un compuesto de la fórmula (I) como ingrediente activo en una cantidad terapéuticamente efectiva. Una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula (I) está definida como una cantidad suficiente, para una dosis dada de una pluralidad de dosis divididas, para lograr un efecto terapéuticamente significativo en un sujeto cuando se administra a dicho sujeto en un protocolo de tratamiento.

Las formulaciones farmacéuticas de la invención son formulaciones farmacéuticas en polvo seco adecuadas para inhalación.

En una modalidad, la formulación farmacéutica en polvo seco comprende de aproximadamente 0.004 % en peso a aproximadamente 50 % en peso del compuesto de la fórmula (I) basándose en el peso de la formulación farmacéutica en polvo seco y basándose en el peso del compuesto de la fórmula (I) como base libre; por ejemplo, de aproximadamente 0.02 % en peso a aproximadamente 50 % en peso, de aproximadamente 0.02 % en peso a aproximadamente 25 % en peso, o de aproximadamente 0.02 % en peso a aproximadamente 15 % en peso o de aproximadamente 0.02 % en peso a aproximadamente 20 % en peso. Preferiblemente, la formulación farmacéutica en polvo seco comprende de aproximadamente 0.1 % en peso a aproximadamente 20 % en peso, por ejemplo, de aproximadamente 0.1 % en peso a aproximadamente 5 % en peso del compuesto de la fórmula (I) basándose en el peso de la formulación farmacéutica en polvo seco.

Una formulación farmacéutica de la invención puede contener el compuesto de la fórmula (I) como único ingrediente activo. Sin embargo, la formulación farmacéutica puede contener ingredientes activos adicionales. La formulación farmacéutica también se puede co-administrar junto con uno o más ingredientes activos distintos (o una o más formulaciones farmacéuticas que contienen uno o más ingredientes activos). Los ingredientes activos adicionales ejemplares se mencionan más adelante.

El compuesto de la fórmula (I) se prepara adecuadamente en forma particulada de modo que sea adecuado para inhalación de polvo seco.

Una formulación farmacéutica de la invención típicamente puede contener partículas de fármaco que tienen un diámetro mediano de volumen (D50) de aproximadamente 0.5 µ?t? a aproximadamente 10 pm, particularmente de aproximadamente 1 µ?t? a aproximadamente 5 pm.

Un método adecuado para determinar el tamaño de partícula es la difracción láser, por ejemplo, usando un instrumento Mastersizer 2000S de Malvern Instruments. Los instrumentos también están disponibles en Sympatec. Para las distribuciones de tamaño de partícula, el valor mediano D50 es el tamaño en micrómetros que divide la distribución de tamaño de partícula con la mitad arriba y la mitad abajo. El resultado primario obtenido de la difracción láser es una distribución de volúmenes, por lo tanto, D50 de hecho es Dv50 (mediana para una distribución de volúmenes) y como se usa en la presente se refiere a distribuciones de tamaño de partícula obtenidas usando difracción láser. Los valores D10 y D90 (cuando se usan en el contexto de difracción láser, tomados para representar los valores Dv10 y Dv90) se refieren al tamaño de partícula en donde el 10 % de la distribución se encuentra debajo del valor D10, y el 90 % de la distribución se encuentra debajo del valor D90, respectivamente.

Las partículas de tamaño adecuado para usarse en una formulación para inhalación en polvo seco se pueden preparar por medio de cualquier método adecuado conocido para el experto en la técnica. Las partículas de fármaco de tamaño adecuado para inhalación se pueden preparar por medio de métodos de reducción de tamaño de partícula que incluyen fresado o más preferiblemente micronización, por ejemplo, usando un dispositivo de micronización de molino de chorro (por ejemplo, fabricado por Hosokawa Alpine). Alternativamente, los particulados de tamaño adecuado se pueden producir en primera instancia por medio de secado por aspersión, congelamiento por aspersión, enfoques de cristalización controlada, por ejemplo, precipitación controlada, cristalización fluida súper crítica, sonocristalización u otro procedimiento de cristalización adecuado, por ejemplo, en un aparato de cristalización continua. Así, un aspecto de la invención proporciona un compuesto de la fórmula (I) en forma micronizada.

Solvatos - forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) En una modalidad se proporciona un compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato. En particular, se proporciona un compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido obtenido por cristalización del compuesto de la fórmula (I) a partir de diclorometano, opcionalmente mezclado con metanol (por ejemplo, que contiene hasta 20 %, por ejemplo, hasta 10 %, por ejemplo, 4.8 % v/v de metanol) a temperatura ambiente, por ejemplo, alrededor de 22 °C. No se encontró que la formación del hidrato requiriera la adición de agua a la mezcla de reacción (es decir, cualquier agua residual en el solvente, o continuada en el producto de un paso de reacción previo y/o la humedad en la atmósfera es suficiente). Sin embargo, se puede agregar agua al solvente, por ejemplo, se puede agregar de 0.1 a 5 % se agua. La preparación detallada de tal hidrato cristalino sólido del compuesto de la fórmula (I) se proporciona en el Ejemplo 1.

En una modalidad se proporciona una forma de hidrato cristalino sólido del compuesto de la fórmula (I) que tiene un patrón de XRPD sustancialmente como se muestra en la Figura 1. El método para obtener los datos de XRPD se describe en los Procedimientos Generales y los datos se discuten en el Ejemplo 3.

Así, se proporciona una forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) en una forma cristalina que tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X con al menos un (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece o todos los catorce) picos en 5.6, 7.6, 9.6, 11.1 , 12.2, 12.6, 13.3, 13.9, 15.9, 17.0, 18.9, 20.3, 21.8, 23.1 (± 0.2 grados, valores 2-theta), estos picos son característicos de la forma de hidrato cristalino. Los picos en 9.6, 13.3, 13.9, 17.0, 18.9, 20.3 y 23.1 son particularmente característicos de la forma de hidrato y por lo tanto se prefiere ver al menos uno (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o todos los siete) de estos picos.

Sin estar limitados por la teoría, la forma de hidrato cristalino sólido del compuesto de la fórmula (I) puede ser una forma de hidrato de canal. Alternativamente, puede residir agua en poros en el cristal o en la superficie del cristal. En cualquier caso, como se muestra en los Ejemplos, el agua no forma una parte esencial de la red cristalina y la forma de cristal es estable para eliminación o adición de agua.

Se investigaron las estabilidades físicas y químicas de la forma de hidrato cristalino sólido del compuesto de la fórmula (I) divulgado en la presente.

Para evaluar la estabilidad física se almacenaron muestras de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) en contenedores abiertos a la atmósfera ambiental a diferentes temperaturas y humedades relativas. La estabilidad física de las muestras se investigó usando análisis termogravimétrico (TGA), calorimetría de barrido diferencial (DSC), sorción de vapor dinámica (DVS), espectroscopia infrarroja (IR) y difracción de polvo de rayos X (XRPD). Los procedimientos experimentales completos se proporcionan en la sección de Procedimientos Generales y los resultados se resumen en el Ejemplo 4 (Cuadro 3). Como se discute en el Ejemplo 4, se encontró que la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) tiene buena estabilidad física en general. Sin embargo, bajo análisis de DVS se registró una pérdida de peso del 2.2 % y se encontró que el producto seco obtenido es higroscópico. Se observaron pequeñas diferencias en los datos de IR y XRPD para las muestras bajo condiciones más secas. Sin embargo, estas diferencias se atribuyeron a la pérdida de agua observada en los estudios de DVS y la integridad de la estructura cristalina se retuvo después de la pérdida de agua y la subsecuente rehidratación.

Para evaluar la estabilidad química se prepararon muestras de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) en metanol y se analizaron por medio de HPLC. Los resultados se resumen en el Ejemplo 5 (Cuadro 6), en donde se indica que se encontró que la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) es químicamente estable, aunque se detectó algo de sensibilidad a la luz.

Las formulaciones farmacéuticas en polvo seco típicamente comprenden lactosa como portador adecuado para el ingrediente activo. Por lo tanto, se investigó la compatibilidad de la lactosa de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I).

Se investigaron las compatibilidades tanto físicas como químicas de la forma de hidrato cristalino sólido de la fórmula (I) con lactosa.

Para evaluar la compatibilidad física se prepararon composiciones de alta concentración de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) y lactosa, y después se analizaron a varias temperaturas y humedades, como se resume en el Ejemplo 6. Es evidente que las mezclas puestas a prueba fueron físicamente compatibles bajo todas las condiciones investigadas.

Para evaluar la compatibilidad química se prepararon composiciones de concentración inferior (en relación con aquellas usadas en los estudios de compatibilidad física) de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) con lactosa en metanol y se analizaron por medio de HPLC. Los resultados se resumen en el Ejemplo 7 (Cuadro 9), en donde se indica que la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) y la lactosa son químicamente compatibles.

Como resultado de los estudios de los inventores, se puede concluir que la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) tiene buena estabilidad física y química. La combinación de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) con lactosa tiene estabilidad tanto química como física, indicando idoneidad para usarse en una formulación farmacéutica.

Forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) En una modalidad se proporciona un compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra. En particular se proporciona un compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra cristalina sólida, obtenido por cristalización de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) de 1 -propanol. Adecuadamente, el 1-propanol es seco, por ejemplo, conteniendo un máximo de alrededor de 0.9 % p/p de agua. En una modalidad, el 1-propanol tiene un máximo de 0.8 %, 0.7 %, 0.6 %, 0.5 %, 0.4 %, 0.3 %, 0.2 % o 0.05 % p/p de agua. Adecuadamente, el 1-propanol tiene un máximo de 0.2 % p/p de agua. Adecuadamente, la cristalización se realiza en presencia de un eliminador de metales. Los eliminadores de metales adecuados son materiales que adsorben el metal mientras que son fácilmente separables del compuesto de interés (es decir, el compuesto de la fórmula (I)). Por ejemplo, los sílices funcionalizados son particularmente útiles como eliminadores de metales, ya que una vez que el metal se ha adsorbido, el complejo de metal-sílice entonces se puede separar fácilmente del compuesto de interés por medio de filtración. Los grupos funcionales que forman complejos estables con iones metálicos incluyen grupos que contienen uno o más centros de nitrógeno y/o azufre, y los expertos en la técnica los conocen bien.

Un ejemplo de un eliminador de metal adecuado y comercialmente disponible es SiliaMetS® Tiol (un gel de sílice derivado de tiol adecuado para eliminar una variedad de metales incluyendo Pd, Pt, Cu, Ag y Pb). Adecuadamente, el eliminador de metal está presente en una cantidad suficiente para asegurar que la concentración resultante del ion metálico esté por debajo de 20 ppm, preferiblemente por debajo de 10 ppm. En una modalidad, el eliminador de metal está presente de 1 a 10 % p/p, por ejemplo, de 2 a 8 % p/p o 5 % p/p basándose en el peso del compuesto de la fórmula (I). La cristalización adecuada se realiza enfriando la solución del compuesto de la fórmula (I) y el solvente desde temperatura elevada, continuamente (es decir, enfriamiento continuo) o por etapas (es decir, alternando entre enfriamiento y sosteniendo la solución a una temperatura particular). Los gradientes adecuados de temperatura (continuos o separados) para enfriamiento incluyen 95-15 °C, 95-20 °C, 90-20 °C, 80-20 °C 95-90 °C, 95-85 °C, 95-80 °C 90-85 °C, 80-20 °C. En una modalidad, la solución se enfría desde 80-95 °C hasta temperatura ambiente (por ejemplo, alrededor de 20-22 °C). La preparación detallada de tal forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) se proporciona en el Ejemplo 2.

En una modalidad se proporciona una forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) que tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X sustancialmente como se muestra en la Figura 2. El método para obtener los datos de XRPD se describe en los Procedimientos Generales y los datos se discuten en el Ejemplo 3.

Así, se proporciona un compuesto de la fórmula (I) en una forma anhidra cristalina que tiene un patrón de XRPD con al menos un (por ejemplo, uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o los diez) picos en 5.6, 7.9, 11.2, 12.3, 15.6, 17.6, 18.4, 21.4, 22.5, 24.2 (± 0.2 grados, valores 2-theta), estos picos son característicos de la forma anhidra cristalina. Los picos en 17.6, 18.4, 22.5 y 24.2 son particularmente característicos de la forma anhidra y por lo tanto se prefiere ver al menos uno (por ejemplo, uno, dos, tres o los cuatro) de estos picos.

Se investigaron las estabilidades física y química del compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra cristalina sólida.

Para evaluar la estabilidad física se almacenaron muestras de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) en forma no micronizada y micronizada en contenedores abiertos a la atmósfera ambiental a diferentes temperaturas y humedades relativas. La estabilidad física se investigó usando TGA, DSC, DVS, IR y XRPD como se describió anteriormente para la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I). Los resultados se resumen en el Ejemplo 4.

Como se discute en el Ejemplo 4, se encontró que la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (tanto no micronizada como micronizada) es físicamente estable en todas las condiciones investigadas.

Para evaluar la estabilidad química se prepararon muestras de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (no micronizada y micronizada) en metanol y se analizaron por medio de HPLC. Los resultados se resumen en el Ejemplo 5 (Cuadros 7 y 8), en donde se indica que se encontró que la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (tanto no micronizada como micronizada) es químicamente estable, aunque se detectó algo de sensibilidad a la luz. Es evidente que la estabilidad química de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) es comparable con la estabilidad química de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I).

Se investigó la compatibilidad de la lactosa de la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I).

Se investigó la compatibilidad tanto física como química de la forma anhidra del compuesto (I) con lactosa.

Para evaluar la compatibilidad física se prepararon composiciones de alta concentración de la forma anhidra (micronizadas) del compuesto de la fórmula (I) y lactosa, y después se analizaron a varias temperaturas y humedades, como se resume en el Ejemplo 6. Es evidente que las mezclas puestas a prueba fueron físicamente compatibles bajo todas las condiciones investigadas.

Para evaluar la compatibilidad química se analizaron, por medio de HPLC, composiciones de concentración inferior (en relación con aquellas usadas en los estudios de compatibilidad física) de la forma anhidra (micronizada) del compuesto de la fórmula (I) con lactosa. Los resultados se resumen en el Ejemplo 7 (Cuadro 10), en donde se indica que bajo ciertas condiciones la composición de la forma anhidra y lactosa se sometieron a degradación. Los productos de degradación se investigaron y el degradante principal se identificó por medio de espectrometría de masas como una o ambas de las dos sustancias mostradas como D019328.

D019328 C39H41CIN805 FM = 752.2838 Este producto de degradación tiene probabilidad de ser el resultado de la adición de agua a través del enlace triple alquino y puede existir como una de dos formas (o puede existir en ambas formas) dependiendo de la orientación de la adición de agua a través del enlace triple. Se ha observado el mismo degradante durante la degradación forzada de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) con iones metálicos. Como resultado de estudios adicionales, parece ser que la degradación de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) requiere iones metálicos y agua y se acelera a temperatura elevada.

La investigación adicional que involucra la prueba de estabilidad acelerada (es decir, exposición de la sustancia del fármaco a 80 °C en un frasco cerrado, véase el Ejemplo 10) ha conducido a los inventores a confirmar que al menos se genera el producto de degradación mostrado como D019492 en el Esquema 1 (más adelante). Además, los inventores también concluyeron que un producto de degradación adicional (D019493) puede resultar de la escisióYi hidrolítica del anillo de pirimidinona y la subsecuente reacción intramolecular con el grupo alquino. Se presume que D0193349 es un producto de degradación intermedio que se observó en ciertas circunstancias de temperatura y HR en pruebas de estabilidad (datos no mostrados).

ESQUEMA 1 Se investigó la adición de estearato de magnesio a la combinación de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) y lactosa. Se encontró que la combinación de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) con lactosa y estearato de magnesio es físicamente estable (Ejemplo 8).

Sin embargo, sorprendentemente, se encontró que la adición de estearato de magnesio causó un incremento en la estabilidad química de la combinación de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) y lactosa (Ejemplo 9). Se encontró un efecto estabilizador similar usando otras sales metálicas de ácido esteárico, específicamente estearato de sodio y estearato de calcio (Ejemplo 10).

Sin desear estar limitados por la teoría, parece ser que la sal metálica de ácido esteárico como estearato de magnesio puede actuar como un agente protector contra la degradación química del grupo alquino en el compuesto de la fórmula (I) y contra la degradación química del anillo de pirimidinona en el compuesto de la fórmula (I) que se observa cuando la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) está en una mezcla con lactosa.

En resumen, los inventores han descubierto que la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) tiene estabilidad física mayor que la forma de hidrato cristalino sólido del compuesto de la fórmula (I) en aislamiento, pero encontraron que la forma anhidra era menos estable con lactosa. Sin embargo, los inventores han descubierto que este problema se puede superar mediante la adición de una sal metálica de estearato como estearato de magnesio. Los inventores extrapolan estos descubrimientos con sales metálicas de ácido esteárico a sales metálicas de estearil fumarato.

Formulaciones farmacéuticas para inhalación La invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden las formas cristalinas sólidas de la invención mezcladas con uno o más diluyentes o portadores. Adecuadamente, la composición contiene lactosa como diluyente o portador.

Como se usa en la presente, el término "lactosa" se refiere a un componente que contiene lactosa, incluyendo monohidrato de a-lactosa, monohidrato de ß-lactosa, a-lactosa anhidra, ß-lactosa anhidra y lactosa amorfa. Los componentes de lactosa se pueden procesar por micronización, tamizado, fresado, compresión, aglomeración o secado por aspersión. Las formas de lactosa comercialmente disponibles en varias formas también están abarcadas, por ejemplo, productos de Lactohale® (lactosa de grado de inhalación; Frieslandfoods), lnhaLac®70 (lactosa tamizada para inhalador de polvo seco; Meggle) y Respitose®. En una modalidad, el componente de lactosa se selecciona del grupo que consiste en monohidrato de a-lactosa, a-lactosa anhidra y lactosa amorfa. Preferiblemente, la lactosa es un monohidrato de a-lactosa.

Para penetrar lo suficientemente lejos en los pulmones, el ingrediente activo particulado (en este caso el compuesto de la fórmula (I)) debe ser de un tamaño adecuado como se describió anteriormente. Estas partículas pequeñas tendrán la tendencia a aglomerarse. El uso de un portador como la lactosa previene esta aglomeración y puede mejorar la fluidez. Adicionalmente, el uso de un portador asegura que una dosificación correcta y consistente alcance los pulmones. El ingrediente activo usualmente formará una monocapa sobre la partícula más grande de lactosa, entonces durante la inhalación el ingrediente activo y el portador se separan y el ingrediente activo se inhala, mientras que la mayoría del portador no. Como tal, el uso de lactosa particulada como portador para el ingrediente activo asegura que cada dosis de la formulación farmacéutica en polvo seco libere la misma cantidad del ingrediente activo.

Generalmente, para prevenir aglomeración de las partículas pequeñas activas, se usa un portador como lactosa con un tamaño de partícula de aproximadamente o al menos diez veces que el del ingrediente activo (por ejemplo, se usa lactosa que tiene un D50 aproximadamente o al menos diez veces que el del ingrediente activo).

En una modalidad, la formulación en polvo seco de la presente invención comprende lactosa particulada que tiene D50 en el intervalo de 40 a 150 µp?.

La formulación farmacéutica en polvo seco de la presente invención comprende lactosa particulada como portador en una cantidad suficiente para asegurar que la dosificación correcta y consistente del ingrediente activo alcance los pulmones. En una modalidad, la formulación farmacéutica en polvo seco comprende de aproximadamente 40 % en peso a aproximadamente 99.88 ó 99.98 % en peso, por ejemplo de aproximadamente 50 % en peso a aproximadamente 99.88 o 99.98 % en peso, de aproximadamente 65 % en peso a aproximadamente 99.88 o 99.98 % en peso, o de aproximadamente 75 % en peso a aproximadamente 99.88 o 99.98 % en peso de lactosa particulada basándose en el peso de la formulación farmacéutica en polvo seco. Preferiblemente, la formulación farmacéutica en polvo seco comprende de aproximadamente 80 % en peso a aproximadamente 99.98 % en peso, por ejemplo, de aproximadamente 80 % en peso a aproximadamente 99.9 % en peso, por ejemplo, de aproximadamente 85 % en peso a aproximadamente 99.88 o 99.98 % en peso, por ejemplo, de aproximadamente 95 % en peso a aproximadamente 99 % en peso de lactosa particulada basándose en el peso de la formulación farmacéutica en polvo seco.

Opcionalmente (y especialmente cuando se usa la forma anhidra cristalina sólida) la composición contiene un agente estabilizador seleccionado de sales metálicas de ácido esteárico como estearato de magnesio y sales metálicas de estearil fumarato.

Una sal metálica ejemplar de ácido esteárico es estearato de magnesio. Las sales metálicas alternativas de ácido esteárico que se pueden emplear incluyen sales de ácido esteárico formadas con metales del Grupo I y otros del Grupo II, como estearato de sodio, estearato de calcio y estearato de litio. Otras sales metálicas de ácido esteárico que se pueden mencionar incluyen estearato de cinc y estearato de aluminio.

Las sales metálicas de estearil fumarato (por ejemplo, estearil fumarato de sodio) parecen tener propiedades similares a las de aquellas sales metálicas de ácido esteárico (véase Shah et al, Drug development and Industrial pharmacy 1986, Vol. 12 No. 8-9, 1329-1346). En la opinión de los inventores, se pueden emplear como una alternativa a las sales metálicas de ácido esteárico en la presente invención.

Como se usa en la presente, el término "estearato de magnesio" incluye trihidrato de estearato de magnesio, dihidrato de estearato de magnesio, monohidrato de estearato de magnesio y estearato de magnesio amorfo. El estearato de magnesio como se define en la presente incluye una tolerancia en donde cualquier material definido como "estearato de magnesio" puede contener hasta 25 % (por ejemplo, hasta 10 %, por ejemplo, hasta 5 %, por ejemplo, hasta 1 %) de sal de palmitato.

Más generalmente, las sales metálicas de ácido esteárico o sales metálicas de estearil fumarato se pueden emplear en forma anhidra o como un hidrato y pueden contener hasta 25 % (por ejemplo, hasta 10 %, por ejemplo, hasta 5 %, por ejemplo, hasta 1 %) de sal de palmitato.

Como se usa en la presente, la expresión "agente estabilizador seleccionado de sales metálicas de ácido esteárico como estearato de magnesio y sales metálicas de estearil fumarato" puede incluir una mezcla de sales metálicas de ácido esteárico y/o estearil fumarato, aunque se preferiría el uso de una sola sal.

La sal metálica de ácido esteárico como estearato de magnesio o sal metálica de estearil fumarato típicamente se obtiene como un polvo fino que no necesita micronizarse. Adecuadamente, el D50 de la sal metálica de ácido esteárico como estearato de magnesio o sal metálica de estearil fumarato es mayor que 5 µ?t?, por ejemplo, alrededor de 10 pm o mayor que 0 pm, por ejemplo, en el intervalo de 5 a 100 pm, por ejemplo, de 5 a 50 , por ejemplo, de 5 a 20 pm, por ejemplo, de 10 a 20 pm. El estearato de magnesio puede, por ejemplo, obtenerse de Avantor (marca Hyqual 2257) o Peter Greven. El estearato de sodio y el estearato de calcio pueden, por ejemplo, obtenerse de Sigma-Aldrich. El estearil fumarato de sodio puede, por ejemplo, obtenerse de ScienceLab.

La formulación farmacéutica en polvo seco de la presente invención opcionalmente comprende un agente estabilizador particulado seleccionado de sales metálicas de ácido esteárico como estearato de magnesio y sales metálicas de estearil fumarato en una cantidad suficiente para asegurar la estabilidad química de la formulación ("una cantidad estabilizadora"). La estabilidad química es, por ejemplo, demostrada cuando la producción de degradante D019328 (una o ambas sustancias) está al nivel de menos de 0.2 % en peso después del almacenamiento de la composición que contiene el Compuesto de la fórmula (I) por 4 semanas a 50 °C. Alternativamente o de forma adicional, la estabilidad química es, por ejemplo, demostrada cuando la producción de degradante D019493 está al nivel de menos de 0.5 % en peso después del almacenamiento de la composición que contiene el Compuesto de la fórmula (I) por 2 semanas a 80 °C. Alternativamente, o de forma adicional, la estabilidad química es, por ejemplo, demostrada cuando la producción de degradante D019492 está al nivel de menos de 0.4 % en peso después del almacenamiento de la composición que contiene el Compuesto de la fórmula (I) por 2 semanas a 80 °C. En una modalidad, la formulación farmacéutica en polvo seco comprende de aproximadamente 0.01 % en peso a aproximadamente 15 % en peso, por ejemplo, de 0.1 % en peso a aproximadamente 10 % en peso, 10 % en peso 5 % en peso, 2 % ó 1 % en peso de sal metálica particulada de ácido esteárico como estearato de magnesio o sal metálica de estearil fumarato basándose en el peso de la formulación farmacéutica en polvo seco. Preferiblemente, la formulación farmacéutica en polvo seco comprende de aproximadamente 0.5 % en peso a aproximadamente 5 % en peso, por ejemplo, de 1 a 2 % p/p de sal metálica particulada de ácido esteárico como estearato de magnesio o sal metálica de estearil fumarato basándose en el peso de la formulación farmacéutica en polvo seco. Adecuadamente, la sal metálica de ácido esteárico como estearato de magnesio o sal metálica de estearil fumarato está presente en una cantidad suficiente para asegurar la estabilidad física de la formulación. La estabilidad física es, por ejemplo, demostrada cuando el espectro IR y el patrón de XRPD de la composición (especialmente en relación con picos característicos del Compuesto de la fórmula (I)) están sustancialmente inalterados después del almacenamiento de la composición que contiene el Compuesto de la fórmula (I) por 4 semanas a 50 °C.

En una modalidad, la formulación farmacéutica en polvo seco para inhalación de la presente invención comprende: (i) De aproximadamente 0.02 a 50 % en peso de 6-(2-((4-amino- 3-(3-hidrox¡fenil)-1/-/-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-5-il)-A/,A/-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida en forma anhidra cristalina sólida en forma particulada como ingrediente activo; (ü) de aproximadamente 40 a aproximadamente 99.88 % en peso de lactosa particulada; y (iii) de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 % en peso de agente estabilizador particulado seleccionado de sales metálicas de ácido esteárico (como estearato de magnesio) y sales metálicas de estearil fumarato.

En una modalidad adicional, la formulación farmacéutica en polvo seco para inhalación de la presente invención comprende: (i) De aproximadamente 0.02 a 50 % en peso de 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo- 3,4-dihidroquinazolin-5-il)-/V,/\/-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida en la forma de un hidrato cristalino sólido en forma particulada como ingrediente activo (ii) de aproximadamente 40 % en peso a aproximadamente 99.98 % en peso de lactosa particulada; y (iii) opcionalmente de aproximadamente 0.1 % en peso a aproximadamente 10 % en peso de agente estabilizador particulado seleccionado de sales metálicas de ácido esteárico (como estearato de magnesio) y sales metálicas de estearil fumarato.

Usos farmacéuticos y métodos de administración Se proporciona, de conformidad con un aspecto de la presente invención, el uso de formas cristalinas sólidas de la invención para usarse como medicamento.

En una modalidad se proporciona el uso de una formulación farmacéutica de la invención para el tratamiento de COPD y/o asma, en particular COPD o asma severa, por inhalación, es decir, por administración tópica al pulmón. Ventajosamente, la administración al pulmón permite que se realicen los efectos benéficos de los compuestos mientras se minimizan los efectos secundarios para los pacientes.

En una modalidad, la formulación farmacéutica de la invención es adecuada para sensibilizar a los pacientes al tratamiento con un corticoesteroide.

Las formulaciones farmacéuticas se pueden administrar convenientemente en forma de unidad de dosificación y se pueden preparar por medio de cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica farmacéutica, por ejemplo, como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17ma ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985).

La administración tópica al pulmón se logra mediante el uso de un dispositivo de inhalación.

Así, un aspecto de la invención incluye un dispositivo de inhalación que comprende una o más dosis de una formulación farmacéutica de conformidad con la invención. Los dispositivos de inhalación para formulaciones en polvo seco típicamente se operan con el aliento, de modo que la dosis se retira del dispositivo y se administra al sujeto usando la energía de los pulmones del sujeto inhalando desde una boquilla. Sin embargo, opcionalmente, se puede proporcionar energía externa para asistir en la administración de la dosis. Típicamente el dispositivo de inhalación comprenderá una pluralidad de dosis de una formulación farmacéutica de conformidad con la invención, por ejemplo, 2 ó 4 u 8 ó 28 ó 30 ó 60 o más dosis. Así el dispositivo de inhalación puede comprender el abastecimiento de dosis de un mes. En una modalidad, una dosis se mide en una cápsula para usarse una por una en un dispositivo de inhalación adaptado para suministrar el contenido de una cápsula a un sujeto tras la inhalación. Opcionalmente, las dosis están divididas, por ejemplo, de modo que una dosis se administre usando dos (o más) inhalaciones del dispositivo de inhalación. De conformidad con una modalidad de la invención, las dosis de la formulación se pre-miden en el dispositivo de inhalación. Por ejemplo, las dosis pre-medidas pueden estar contenidas en las bolsas de una tira o disco de blisteres o dentro de cápsulas. De conformidad con otra modalidad de la invención, las dosis de la formulación se miden al usarse. Así, el dispositivo de inhalación contiene un depósito de polvo seco y el dispositivo mide una dosis de polvo (típicamente sobre una base de volumen fijo) antes o en el momento de la administración.

Los dispositivos de inhalación de polvo seco ejemplares incluyen SPINHALER, ECLIPSE, ROTAHALER, HANDIHALER, AEROLISER, CYCLOHALER, BREEZHALER/NEOHALER, FLOWCAPS, TWINCAPS, X-CAPS, TURBOSPIN, ELPENHALER, DISKHALER, TURBUHALER, MIATHALER, TWISTHALER, NOVOLIZER, DISKUS, SKYEHALER, inhalador de polvo seco ORIEL, MICRODOSE, ACCUHALER, PULVINAL, EASYHALER, ULTRAHALER, TAIFUN, PULMOJET, OMNIHALER, GYROHALER, TAPER, CONIX, XCELOVAIR, PROHALER y CLICKHALER. Otro ejemplo es el inhalador MONODOSE.

Opcionaimente, el dispositivo de inhalación se puede envolver para almacenamiento para protegerlo contra el ingreso de humedad. Opcionaimente se puede emplear un desecante dentro de una envoltura o dentro del dispositivo. Adecuadamente, la formulación farmacéutica de conformidad con la invención en el dispositivo de inhalación está protegida de la luz.

Las formulaciones farmacéuticas de conformidad con la invención también pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos respiratorios que incluyen COPD, bronquitis crónica, enfisema, asma, asma pediátrica, fibrosis quística, sarcoidosis y fibrosis pulmonar idiopática y especialmente asma, bronquitis crónica y COPD.

Las formulaciones farmacéuticas de conformidad con la invención pueden comprender el compuesto de la fórmula (I) como el único ingrediente activo, o pueden comprender ingredientes activos adicionales, por ejemplo, ingredientes activos adecuados para tratar las condiciones anteriormente mencionadas. Por ejemplo, las combinaciones posibles para el tratamiento de trastornos respiratorios incluyen combinaciones con esteroides (por ejemplo, budesonida, dipropionato de beclometasona, propionato de fluticasona, furoato de mometasona, furoato de fluticasona, flunisolida, ciclesonida, triamcinolona), agonistas beta (por ejemplo, terbutalina, bambuterol, salbutamol, levalbuterol, salmeterol, formoterol, clenbuterol, fenoterol, broxaterol, indacaterol, reproterol, procaterol, vilanterol) y/o xantinas (por ejemplo, teofilina), antagonistas muscarínicos, (por ejemplo, ipratropio, tiotropio, oxitropio, glicopirronio, glicopirrolato, aclidinio, trospio), antagonistas de leucotrieno (por ejemplo, zafirlukast, pranlukast, zileuton, montelukast) y/o un inhibidor de cinasa p38 MAP. Se entenderá que cualquiera de los ingredientes activos anteriormente mencionados se puede emplear en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

En una modalidad, la formulación farmacéutica de la invención se administra en combinación con un agente antiviral, por ejemplo, aciclovir, oseltamivir (Tamiflu®), zanamivir (Relenza®) o interferón.

En una modalidad, la combinación del compuesto de la fórmula (I) y otro(s) ingrediente(s) activos(s) se co-formula en la formulación farmacéutica de la invención. En otra modalidad, el(los) otro(s) ingrediente(s) activo(s) se administra(n) en una o más formulaciones farmacéuticas separadas.

En una modalidad, el compuesto de la fórmula (I) se co-formula en la formulación farmacéutica de la invención o se co-administra en una formulación separada con un corticoesteroide, por ejemplo, para usarse en terapia de mantenimiento de asma, COPD o cáncer de pulmón que incluye la prevención de éste último.

En una modalidad, la formulación farmacéutica de la invención se administra por inhalación y un corticoesteroide se administra oralmente o por inhalación ya sea en combinación o separadamente.

La formulación farmacéutica de la invención también puede re-sensibilizar la condición de los pacientes al tratamiento con un corticoesteroide, cuando la condición del paciente previamente se había vuelto refractaria al mismo.

En una modalidad de la invención, una dosis de la formulación farmacéutica empleada es igual a aquella adecuada para usarse como monoterapia pero administrada en combinación con un corticoesteroide.

En una modalidad, se emplea una dosis de formulación farmacéutica que sería sub-terapéutica como un solo agente, y se administra en combinación con un corticoesteroide, restaurando por tanto la respuesta del paciente a éste último, en casos en donde el paciente ya previamente se había vuelto refractario al mismo.

Adicionalmente, la formulación farmacéutica de la invención puede exhibir actividad antiviral y ser útil en el tratamiento de exacerbaciones virales de condiciones inflamatorias como asma y/o COPD.

La formulación farmacéutica de la presente invención también puede ser útil en la profilaxis, tratamiento o mejora del virus de la influenza, rinovirus y/o virus sincicial respiratorio.

En una modalidad, las formulaciones farmacéuticas actualmente divulgadas son útiles en el tratamiento o prevención del cáncer, en particular del cáncer de pulmón, especialmente por administración tópica al pulmón.

Así, en un aspecto adicional, la presente invención proporciona una formulación farmacéutica como se describe en la presente para usarse en el tratamiento de una o más de las condiciones anteriormente mencionadas.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una formulación farmacéutica como se describe en la presente para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una o más de las condiciones anteriormente mencionadas.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un método de tratamiento de las condiciones anteriormente mencionadas que comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de una formulación farmacéutica de la invención de la misma.

Las formulaciones farmacéuticas descritas en la presente también se pueden usar en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una o más de las enfermedades anteriormente identificadas.

La palabra "tratamiento" está pensada para abarcar profilaxis, así como tratamiento terapéutico.

A menos que se especifique de otra manera, los valores en porcentaje como se usan en la presente son valores en porcentaje en peso (porcentaje en peso).

Las formas cristalinas sólidas de la invención, y las formulaciones farmacéuticas que las contienen, pueden tener la ventaja de que tienen cristalinidad mejorada (por ejemplo, medida por medio de XRPD), estabilidad física mejorada (por ejemplo, medida por medio de análisis de XRPD, IR, DVS, DSC, o TGA), estabilidad química mejorada (por ejemplo, medida por medio de HPLC), compatibilidad física mejorada con lactosa (opcionalmente cuando se combina con otros excipientes), compatibilidad química mejorada con lactosa (opcionalmente cuando se combina con otros excipientes), distribución mejorada de tamaño de partícula en la administración (como se evidencia por la masa mejorada de partícula fina) o pueden tener otras propiedades favorables en comparación con formas sólidas de la técnica previa del compuesto de la fórmula (I).

Abreviaturas ac acuoso COPD enfermedad pulmonar obstructiva crónica d doblete DCM diclorometano DMAP 4-dimetilaminopiridina DMSO dimetil sulfóxido DPI inhalador de polvo seco DSC calorimetría de barrido diferencial DVS sorción de vapor dinámica EDC.HCI clorhidrato de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida (ES+) ionización por electroaspersión, modo positivo EtOAc acetato de etilo HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento HPLC-MS espectrometría de masa por cromatografía líquida de alto rendimiento hr hora(s) IR infrarrojo LPS lipopolisacárido (M+H)+ ion molecular protonado MDI inhalador de dosis medida MeOH metanol MEK metiletilcetona MHz megahertz min minuto(s) mm Milímetro(s) ms espectrometría de masas mTOR objetivo mamífero de rapamicina m/z relación de masa con carga NH4OAc acetato de amonio RMN resonancia magnética nuclear (espectroscopia) Pd(dppf)CI2 1 ,1 '-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(ll) ppm partes por millón q cuarteto quin quinteto HR humedad relativa RRT tiempo relativo de retención Rl tiempo de retención TA temperatura ambiente s singlete t triplete TBDMSCI cloruro de terc-butildimetilsilil TGA análisis termogravimétrico TNFa factor alfa de necrosis tumoral XRPD difracción de polvo de rayos X EJEMPLOS Procedimientos Generales HPLC-MS Realizada sobre sistemas Agilent HP1200 usando columnas Agilent Extend C18, (1.8 pm, 4.6 x 30 mm) a 40 °C y una velocidad de flujo de 2.5-4.5 mL min"1, eluyendo con un gradiente de H20-MeCN que contiene 0.1 % v/v de ácido fórmico por 4 min. Información de gradiente: 0-3.00 min, llevada a 95 % de H20-5 % de MeCN a 5 % de H20-95 % de MeCN; 3.00-3.01 min, sostenida a 5 % de H2O-95 % de MeCN, la velocidad de flujo se incrementó a 4.5 mL min"1; 3.01-3.50 min, sostenida a 5 % de H20-95 % de MeCN; 3.50-3.60 min, regresada a 95 % de H20-5 % de MeCN; velocidad de flujo reducida a 3.50 mL min"1; 3.60-3.90 min, sostenida a 95 % de H20-5 % de MeCN; 3.90-4.00 min, sostenida a 95 % de H20-5 % de MeCN, velocidad de flujo reducida a 2.5 mL min"1. La detección de UV se realizó a 254 nm usando un detector de longitud de onda variable Agilent G1314B.

Espectros de masa (MS) Se obtuvieron usando ionización por electroaspersión (ESI) sobre el intervalo de 60 a 2000 m/z a una velocidad de muestreo de 1.6 seg/ciclo usando un Agilent G1956B, sobre 150 a 850 m/z a una velocidad de muestreo de 2 Hz usando un Waters ZMD o sobre 100 a 1000 m/z a una velocidad de muestreo de 2 Hz usando un sistema Shimadzu 2010 LC-MS.

Espectros de RMN Los espectros de 1H RMN (excepto por los del Ejemplo 10) se adquirieron sobre un espectrómetro Bruker Avance III a 400 MHz usando solvente no deuterado residual como referencia.

El espectro de 1H RMN para el Ejemplo 10 se adquirió sobre un espectrómetro Bruker Avance a 600 MHz usando solvente no deuterado residual como referencia.

Sorción de vapor dinámica (DVS) Se obtuvo usando un modelo de sorción de vapor dinámica de Sistemas de Medición Superficiales DVS-1. Usando aproximadamente 19 mg de la muestra, el cambio de peso registrado con respecto a la humedad atmosférica a 25 °C se determinó usando los siguientes parámetros: secado: 60 minutos bajo nitrógeno seco equilibrio: 0.01 %/minuto por minuto: 15 minutos y máximo: 60 minutos intervalo de datos: 0.05 % o 2.0 minutos puntos de medición de HR (porcentaje): primer conjunto: 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 0, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 segundo conjunto: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5, 0.

Difracción de Polvo de Rayos X (XRPD) Los patrones de XRPD se adquirieron sobre un difractometro PANalyticai (Philips) X'PertPRO MPD equipado con un tubo de rayos X Cu LFF (45 kV¡ 40 mA; Bragg-Brentano; etapa de ruleta) se adquirieron usando radiación de Cu Ka y las siguientes condiciones de medición: modo de barrido: continuo intervalo de barrido:3 a 50 ° 2T tamaño de paso: 0.02 paso tiempo de conteo: 30 seg/paso tiempo de revolución de ruleta: 1 seg tipo de radiación: CuKcc Trayectoria de haz de incidencia rendija de divergencia programada 15 mm rendija soller: 0.04 rad máscara de haz: 15 mm rendija de anti-dispersión 1o cuchilla de haz: + Trayectoria de haz difractado escudo largo de anti-dispersión: + Rendija soller: 0.04 rad Filtro Ni + detector: X'Celerator Las muestras se prepararon esparciendo sobre un sujetador de muestra de fondo cero.

Espectrometría Infrarroja (IR) Se usó la Reflectancia Total Micro-Atenuada (microATR) y la muestra se analizó usando un accesorio microATR adecuado y las siguientes condiciones de medición: aparato: Espectrómetro Thermo Nexus 670 FTIR número de barridos: 32 resolución: 1 cm"1 intervalo de longitud de onda: 4000 a 400 cm"1 detector: DTGS con ventanas KBr divisor de haz: Ge sobre KBr accesorio micro ATR: Guisante Partido de Harrick con cristal de Si Calorimetría de Barrido Diferencial (DSC) Los datos de DSC se recolectaron sobre TA-Instruments Q2000 MTDSC equipado con una unidad de enfriamiento RCS. Típicamente se calentaron 3 mg de cada compuesto, en una charola de muestra estándar de aluminio TA-Instrument a 10 °C/min de 25 °C a 250/300 °C. Se mantuvo una purga a 50 ml/min sobre la muestra.

Análisis Termoqravimétrico (TGA) Los datos de TGA se recolectaron sobre un termogravímetro TA-Instruments Q500, 10 mg de cada muestra se transfirieron en una charola de aluminio pre-pesada y se calentaron a 20 °C/min de temperatura ambiente a 300 °C o < 80 [porcentaje p/p] a menos que se especifique de otra manera.

Estabilidad química - HPLC El análisis de HPLC se llevó a cabo usando las siguientes condiciones de operación: Columna Waters Xbridge C18 (150 x 3.0 x 3.5 mm) o equivalente (una columna se considera equivalente si se cumple con el rendimiento como está especificado en SST y si se demuestra una separación comparable de todos los compuestos relevantes).

Temperatura de columna 35 °C Temperatura de muestra 10 °C Velocidad de flujo 0.45 ml/min Volumen de inyección. El volumen de inyección se puede ajustar siempre y cuando los límites de calificación del sistema no se excedan (detector e inyector) y la forma del pico del compuesto principal sea aceptable.

Como guía, 30 µ? se considera adecuado.

Detección detección UV a 255 nm Fase móvil Preparación y composición: A acetato de amonio 10 mM (0.771 g/l) + 0.1%, v/v de ácido trifluoroacético en agua B Acetonitrilo Gradiente El tiempo de corrida analítica es de 41 minutos Con este método de HPLC, el degradante D019492 eluye a RRT0.86.

Estabilidad química - Cromatografía Líquida de Presión Ultra Alta (UPLC) El análisis de UPLC se llevó a cabo usando las siguientes condiciones de operación: Columna Acquity BEH Ci8; 2.1 x 150 mm; 1.7 µ?? o equivalente (una columna se considera equivalente si se cumple con el rendimiento como está especificado en SST y se demuestra una separación comparable de todos los compuestos relevantes) Temperatura de columna 35 °C Temperatura de muestra 10°C Velocidad de flujo 0.40 ml/min Volumen de inyección. El volumen de inyección se puede ajusfar siempre y cuando los límites de calificación del sistema no se excedan (detector e inyector) y la forma del pico del compuesto principal sea aceptable. Como guía, 4 µ? se considera adecuado.

Detección detección UV a 255 nm Fase móvil Preparación y composición: A acetato de amonio 10 mM (0.771 g/l) + 0.1%, v/v de ácido trifluoroacético en agua B Acetonitrilo Gradiente El tiempo de corrida analítica es de 23 minutos.

Con este método de UPLC, el degradante D019492 eluye RRT0.92-0.93 y el degradante D019493 eluye a RRT 0.86-0.87.

Reactivos v abastecedores Lactohale200®: Tamaño de partícula (Sympatec): D10: 5-15 pm D50: 50-100 pm; D90: 120-160 pm.

Estearato de magnesio: Grade Hyqual 2257; provisto por Avantor. Tamaño de partícula: D10: típicamente 3 µ??; D50: típicamente 11.5 pm (10.5 - 16.5 pm); D90: típicamente 24 pm (18 - 28 pm). Provisto como un polvo fino.

EJEMPLO 1 Preparación de 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1 H-pirazolor3,4- dlpirimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-5-il)- /V,/V-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida (Compuesto de la fórmula (I)) en la forma de un hidrato cristalino sólido 5-Bromo-3-(2-clorobencil)-2-(clorometil)quinazolin-4(3H)-ona (2) A una solución agitada de ácido 2-amino-6-bromo-benzoico (3.06 g, 14.2 mmoles) en tolueno (75 mL) enfriado a 0°C en un baño con hielo se agregó piridina (0.60 mL, 7.10 mmoles) seguido por una solución de cloruro de cloroacetilo (2.26 mL, 28.4 mmoles) en tolueno (75 mL) gota a gota durante 1 hr. La mezcla de reacción se dejó entibiar a TA y se calentó a 115 °C durante 3 hr y luego se dejó enfriar a TA. El volumen del solvente se redujo por la mitad por evaporación in vacuo. Después de dejar reposar durante la noche, el producto se precipitó y se recolectó por filtración para producir ácido 2-bromo-6-(2-cloroacetamido)benzoico (1a, X = Cl) (1.44 g) como un sólido blanco: m/z 290/292 (M+H)+ (ES+). El filtrado se concentró in vacuo y el residuo se trituró con etanol/heptano para producir ácido 2-bromo-6-(2-hidroxiacetamido) benzoico (1b X =OH) (1.02 g, rendimiento combinado, 59 %): m/z 274/276 (M+H)+ (ES+). Tanto 1a como 1b se pueden usar sin purificación adicional en el siguiente paso.

A una mezcla agitada del compuesto (1a) (7.50 g, 27.4 mmoles), 2-clorobencilamina (5.00 mL, 41.05 mmoles) y trietilamina (5.70 mL, 41.1 mmoles) en tolueno (250 mL) se agregó una solución de tricloruro de fósforo (2.60 mL, 30.1 mmoles) en tolueno (250 mL) gota a gota durante 1 hr. La mezcla de reacción se calentó a 110 °C por 24 hr, con lo cual la solución caliente se decantó y concentró in vacuo. El residuo se trituró con propan-2-ol (50 mL) para producir el compuesto del título (2) (6.41 g, 59 %) como un sólido amarillo: Rl 2.67 min; m/z 397/399 (M+H)+ (ES+). 3-(3-(terc-Butildimetilsililoxi)fen¡n-1 H-pirazolor3.4-dlpirimid¡n-4-amina (6) A una suspensión agitada de 3-yodo-1/-/-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (3) (8.22 g, 31.5 mmoles) se agregaron ácido 3-fenol borónico (13.0 g, 94.5 mmoles) y fosfato de potasio (10.0 g, 47.3 mmoles) en DMF/agua desgasificada (3:2, 140 mL) Pd(dppf)CI2 (13.0 g, 15.7 mmoles). La mezcla de reacción se enjuagó con nitrógeno, se calentó a 20 °C por 2 horas y luego se dejó enfriar a TA. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (500 mL) y ácido clorhídrico (2 M, 500 mL) y la suspensión resultante se filtró. El filtrado se extrajo con ácido clorhídrico (2 M, 2 x 500 mL). Los extractos acuosos combinados se basificaron con una solución acuosa saturada de carbonato de sodio a pH 10. El precipitado formado se filtró y el filtrado se extrajo con EtOAc (3 L). Los extractos orgánicos combinados se secaron, se filtraron y el solvente se eliminó in vacuo para producir un sólido gris. Todos los materiales sólidos generados durante el procedimiento de elaboración se combinaron y trituraron con DCM para producir 3-(4-amino-1 H-pirazolo[3,4-c0pirimidin-3-il)fenol (5) (6.04 g, 84 %) como un sólido gris: m/z 228 (M+H)+ (ES+).

A una solución agitada de fenol (5) (4.69 g, 20.66 mmoles) e imidazol (2.10 g, 30.99 mmoles) en DMF seco (100 mL) se agregó TBDMSCI (4.70 g, 30.99 mmoles). Después de 16 hr, se agregaron alícuotas adicionales de imidazol (2.10 g, 30.99 mmoles) y TBDMSCI (4.70 g, 30.99 mmoles) y la mezcla se agitó por 48 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (120 mL) y se extrajo con DCM (2 x 200 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua (2 x 200 mL), se secaron, se filtraron y el volumen se redujo a aproximadamente 100 mL por evaporación in vacuo. El lodo resultante se filtró y el sólido se lavó con heptano (50 mL) para producir el compuesto del título (6) (6.05 g, 85 %) como un sólido blanquecino: m/z 343 (M+H)+ (ES+).

Intermediario A: 2-((4-Amino-3-(3-hidroxifenil)-1 H-pirazolor3,4-dlpirimidin-1-il)metil)-5-bromo-3-(2-clorobencil)quinazolin-4(3H)-ona Intermediario A A una mezcla agitada de 5-bromo-3-(2-clorobencil)-2-(clorometil)quinazolin-4(3/-/)-ona (2) (100 mg, 0.25 mmoles) y carbonato de potasio (42 mg, 0.30 mmoles) en DMF (2.5 mL) se agregó una solución de 3-(3-(terc-butildimetilsililoxí)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (6) (94 mg, 0.28 mmoles) en DMF (2.5mL) y la mezcla de reacción se agitó a TA por 18 horas. Carbonato de potasio (3 x 35 mg, 0.75 mmoles) se agregó en tres porciones por 30 hr. después de lo cual el solvente se eliminó in vacuo y el material crudo se purificó por cromatografía de columna instantánea, eluyendo con 4.5 % de metanol en DCM, para producir el compuesto del título, Intermediario A, (94 mg, 64 %) como un sólido blanquecino: Rl 2.01 min; m/z 588/590 (M+H)+, (ES+).

Intermediario B: N,N-bis(2-Metoxietil)hex-5-inamida A una solución de ácido hex-5-inoico (7.11 g, 63.4 mmoles), EDC.HCI (14.0 g, 72.9 mmoles) y DMAP (387 mg, 3.17 mmoles) en DCM (600 mL) a 0 °C se agregó 6/'s(2-metox¡etil)amina (9.3 mL, 63 mmoles). La mezcla resultante se calentó a TA por 20 horas y después se lavó con ácido clorhídrico (1 M, 2 x 500 mL) y con agua (500 mL). La capa orgánica se secó y se evaporó in vacuo para producir el compuesto del título, Intermediario B, como un aceite amarillo (16 g, 97 %): 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d: 1.88 (3H, m), 2.26 (2H, m), 2.49 (2H, m), 3.32 (6H, s), 3.51 (4H, m), 3.55 (4H, m) 6-(2-((4-amino-3-(3-h¡droxifenil)-1H-pirazolo[3^-dlpirimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-5-il)-/\/,A/-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida (I) El Intermediario A ((2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1 /- -pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il)metil)-5-bromo-3-(2-clorobencil)quinazolin-4(3 -/)-ona (65.7 g, 1.0 eq.)), yoduro de cobre(l) (1.06 g, 0.05 moles/mol), b¡s(trifen¡lfosfina)cloruro de paladio(ll) (3.92 g, 0.05 moles/mol), el Intermediario B (N,N-b¡s(2-metoxietil)hex-5-inamida (63.42 g, 2.5 moles/mol) y dletilamina (837.05 mL; 591.21 g, 7.5 L/mol) se agregaron a un reactor de 2 L y la mezcla se desgasificó con purgado con argón. La mezcla de reacción se calentó a 55 °C (temperatura de reflujo) por 30 minutos y después se agitó a 55 °C. Después de 2 horas, la mezcla se enfrío a 22 °C antes de concentrarse in vacuo para producir un residuo semi sólido pardo obscuro (201.0 g). Después el residuo se disolvió en MEK (781 mL) y se agregó agua (223 mL). Después de agitar fuertemente por 5 minutos, las capas se separaron y la capa acuosa se desechó. La capa orgánica se lavó con NH4OAc acuoso al 10 % p/v (300 mL) y NaCI acuoso al 2 % p/v (1 12 mL) antes de ser parcialmente concentrada in vacuo a una mezcla homogénea en MEK (230 g). La mezcla se agitó por 16 horas y después se filtró, y el precipitado se lavó con MEK (3 x 25 mL). El sólido resultante se secó a 50 °C in vacuo por 18 horas para dar 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-5-il)-/\/,/S/-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida "cruda" (compuesto de la fórmula (I)) (54.13 g; 0.66 equiv; 65.97 % de rendimiento).

El compuesto crudo de la fórmula (I) (53.5 g; 1.00 equiv), metanol (7.28 mL, 0.1 L/mol) y diclorometano (145.53 mL, 2 L/mol) se agitaron en un reactor de 250 mL a 22 °C. Después de 4 horas el sólido se filtró y se lavó con diclorometano (29 mL) antes de secarse in vacuo a 40 °C por 18 horas para obtener el compuesto de la fórmula (I) (el compuesto del título) en la forma de un hidrato (45.3 g; 0.85 equiv; 84.67 % de rendimiento de cristalización) como un sólido blancuzco.

EJEMPLO 2 Preparación del Compuesto de la fórmula (? en forma anhidra cristalina sólida Todas las reacciones descritas dentro de este ejemplo se llevaron a cabo bajo un flujo de gas nitrógeno. El compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato, como se preparó en el Ejemplo 1 (14.0 g) y 1- propanol (210 ml_, 25 L/kg) se agregaron a un recipiente de cristalización de 400 mi. La mezcla heterogénea resultante se agitó y calentó a 90 °C (con la mezcla volviéndose homogénea a 85 °C). Una vez que la solución había alcanzado los 90 °C, un eliminador de metal (SiliaMetS® Tiol 0.7 g (5 % p/p)) se agregó y la mezcla se calentó a 95 °C. Después de agitación por 15 minutos a 95 °C, la mezcla se enfrió a 90 °C y se agitó por 2 horas adicionales a 90 °C. El eliminador de metal después se filtró y el filtrado homogéneo se agitó una vez más y se calentó a 95 °C, antes de enfriarse a 85 °C y agitarse por 8 horas. Después el filtrado se enfrió durante 8 horas a 20 °C y se agitó por 6 horas adicionales a 20 °C. Después el producto se filtró y lavó con 1-propanol (6 mi) antes de secarse in vacuo a 50 °C por 18 horas para producir el compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra (12.6 g, 90 %) como un sólido blanco.

El método anterior opcionalmente se puede adaptar para facilitar la cristalización con pre-selección.

EJEMPLO 3 Análisis de XRPD del Compuesto de la fórmula (? en forma de hidrato cristalino sólido y en forma anhidra El análisis de XRPD de las formas de hidrato y anhidra del compuesto de la fórmula (I) se realizó usando el método descrito en los Procedimientos Generales. Los patrones resultantes de difracción se muestran en las Figuras 1 y 2. Ambos patrones de XRPD mostraron picos de difracción sin la presencia de un halo, indicando por tanto que ambos materiales son cristalinos. Los picos e intensidades de las dos formas se dan más adelante en los Cuadros 1 y 2: CUADRO 1 Picos característicos de XRPD para el compuesto de la fórmula (I) en una forma de hidrato Pico de XRPD (± 0.2 grados, valores 2- theta) 5.6 7.6 9.6 11.1 12.2 12.6 13.3 13.9 15.9 17.0 18.9 20.3 21.8 23.1 CUADRO 2 Picos característicos de XRPD para la forma anhidra del compuesto (I) Pico de XRPD (± 0.2 grados, valores 2- theta) 5.6 7.9 11.2 12.3 17.6 18.4 21.4 22.5 24.2 Las dos formas cristalinas sólidas tienen algunos picos en común que indican que parecen tener estructuras de cristal relacionadas (pero distintas).

EJEMPLO 4 Análisis térmico del compuesto de la fórmula (I) en forma de hidrato y anhidra (forma anhidra con y sin micronización) El análisis térmico de la forma de hidrato y de la forma anhidra (la forma anhidra sin micronizar y micronizada) del compuesto de la fórmula (I) se realizó usando TGA, DVS, XRPD, IR y DSC como se describe en los Procedimientos Generales. En donde fue apropiado se comparó una muestra a temperatura y humedad relativa ambientales (muestra de referencia/ "0 días") con muestras almacenadas a varias temperaturas y humedades relativas (muestras comparativas).

La forma anhidra micronizada del compuesto de la fórmula (I) se preparó usando un dispositivo de micronización de molino de chorro (1.5 bares) (fabricado por Hosokawa Alpine). La Distribución de Tamaño de Partícula se midió usando difracción láser (instrumento Malvern Mastersizer). La forma anhidra micronizada del compuesto de la fórmula (I) tuvo la siguiente distribución de tamaño de partícula: D10 de 1.40 pm; D50 de 2.77 pm y D90 de 5.29 pm.

Las condiciones de almacenamiento probadas fueron 4 semanas a TA <5 % HR, TA 56 % HR, TA 75 % HR, 50 °C y 40 °C 75 % HR. Los datos de XRPD e IR también se adquirieron después de 1 semana a 80 °C.

Forma de hidrato cristalino sólido TGA: La muestra de referencia (t = 0) y las muestras comparativas (expuestas a diferentes condiciones de almacenamiento) se calentaron a 20 °C/min de TA a 300 °C. La curva de TGA de la muestra de referencia (t = 0) se ilustra en la Figura 1 y los resultados para todas las muestras se ilustran en el Cuadro 3. A partir de la Figura 11 es evidente que la pérdida de peso de 1.1 % se observó en la región de temperatura de TA hasta 45 °C debido a la evaporación de solvente libre o agua higroscópica (evidenciada por el primer pico entre 29.39 °C y 44.82 °C). La pérdida de peso de 1.5 % se observó entre 45 °C y 190 °C debido a la evaporación de solvente unido, y la pérdida de peso por arriba de 190 °C se debió a la evaporación y descomposición del producto. Al comparar este perfil de pérdida de peso con los de las muestras comparativas en el Cuadro 3, no se observaron diferencias significativas.

DVS: El gráfico de isotermo de DVS para la muestra de referencia se ilustra en la Figura 3 y el cambio de DVS en el gráfico de masa se ilustra en la Figura 4. Durante el paso de secado inicial, se registró una pérdida de peso de 2.2 % y se encontró que el producto seco obtenido es higroscópico. El producto higroscópico adsorbió hasta 2.1 % de humedad dependiendo de la humedad atmosférica y se secó completamente durante el ciclo de desorción. El producto obtenido después de la adsorción/desorción se investigó con XRPD e IR y se encontró que es comparable con la muestra de referencia. Estos datos indican que la forma de hidrato es higroscópica.

XRPD e IR: El patrón de difracción de XRPD de la muestra de referencia (t = 0) se ilustra en la Figura 1 y el rastro IR se ilustra en la Figura 7. Este patrón de difracción y rastro IR se compararon con los de las muestras comparativas (expuestas a diferentes condiciones de almacenamiento) y los resultados se ilustran en el Cuadro 3. Los patrones de difracción y rastros IR fueron idénticos o muy similares para la mayoría de las muestras. Sin embargo, se observaron algunas pequeñas diferencias en los patrones de difracción de XRPD y rastros IR después del almacenamiento a temperaturas elevadas de 50 °C y 80 °C y bajo condiciones secas (TA/< 5 % HR), cuando se comparan con la muestra de referencia (evidenciado por las entradas "±Ref en el Cuadro 3). Estas mismas pequeñas diferencias también se observaron en el patrón de XRPD y el rastro IR de la muestra de referencia después de DVS, sugiriendo que las diferencias observadas en las muestras de 50 °C, 80 °C y TA < 5 % HR se debieron al secado del producto.

DSC: La muestra de referencia (t = 0) y las muestras comparativas (expuestas a diferentes condiciones de almacenamiento) se calentaron a 10 °C/min de 25 °C a 300 °C. La curva de DSC de la muestra de referencia se ilustra en la Figura 9 y los resultados para todas las muestras se ilustran en el Cuadro 3. A partir de la Figura 9 es evidente que la muestra de referencia se fundió con descomposición a aproximadamente 183.5 °C con una señal endotérmica a 64.5 °C debido a la evaporación del solvente.

En resumen, es evidente que el hidrato tiene buena estabilidad física. El producto parece ser higroscópico y experimenta algo de pérdida de agua bajo condiciones secas. Sin embargo, la forma cristalina parece ser estable a la pérdida de agua y a la ganancia de agua.

CUADRO 3 Datos de estabilidad para la forma de hidrato del compuesto de la fórmula fl) * temperatura ambiente y humedad relativa Ref. Crist.: referencia cristalina ~Ref: idéntico a la referencia cristalina +/- Ref: comparable con la muestra cristalina Forma anhidra cristalina sólida (no micronizada) TGA (Cuadro 4 y Figura 12): La muestra de referencia y las muestras comparativas se calentaron a 20 °C/min de temperatura ambiente a 300 °C. La curva de TGA de la muestra de referencia (t = 0) se ilustra en la Figura 12 y los resultados para todas las muestras se ilustran en el Cuadro 4. A partir de la Figura 12 es evidente que, para la muestra de referencia, la pérdida de peso de 0.2 % se observó en la región de temperatura de temperatura ambiente hasta 100 °C debido a la evaporación de solvente libre y/o agua higroscópica. La pérdida de peso de 0.4 % se observó entre 100 °C y 200 °C, probablemente debido a la evaporación y descomposición del producto. Al comparar este perfil de pérdida de peso con los de las muestras comparativas - se observaron diferencias bajo condiciones secas de TA/< 5 % HR, en donde ocurrieron pérdidas de peso de porcentaje inferior de 0.7 % y 0.9 %.

DVS: El gráfico de isotermo de DVS para la muestra de referencia se ilustra en la Figura 5 y el cambio de DVS en el gráfico de masa se ilustra en la Figura 6. Durante el paso de secado inicial se registró una pérdida de peso de 0.1 %. El producto seco obtenido no exhibió comportamiento higroscópico y permaneció en la misma forma de estado sólido durante la prueba.

XRPD e IR: El patrón de difracción de XRPD de la muestra de referencia se ilustra en la Figura 2 y el rastro IR se ilustra en la Figura 8. Este patrón de difracción y rastro IR se compararon con los de las muestras comparativas y los resultados se ilustran en el Cuadro 4. Se encontró que los patrones de difracción y rastros IR son idénticos para todas las muestras, indicando que no ocurrieron cambios del estado sólido después del almacenamiento bajo diferentes condiciones.

DSC: La muestra de referencia y las muestras comparativas se calentaron a 10 °C/min de 25 °C a 250°C. La curva de DSC de la muestra de referencia se ilustra en la Figura 10 y los resultados para todas las muestras se ilustran en el Cuadro 4. A partir de la Figura 10 es evidente que la muestra de referencia se fundió (con posible descomposición) a aproximadamente 187.0 °C. Al comparar los datos de DSC de la muestra de referencia con los datos para las muestras comparativas, es evidente que las condiciones de almacenamiento no han alterado el punto de fusión de la sustancia.

En resumen, es evidente que la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) fue físicamente estable bajo todas las condiciones investigadas.

CUADRO 4 Datos de estabilidad para la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (sin micronizar) Forma anhidra cristalina sólida (micronizada) TGA: La muestra de referencia y las muestras comparativas se calentaron a 20 °C/min de temperatura ambiente a 300 °C y los resultados para todas las muestras se ilustran en el Cuadro 5.

DVS: El gráfico de isotermo de DVS para la muestra de referencia se ilustra en la Figura 13. Durante el paso de secado inicial se registró una pérdida de peso de 0.1 %. Se observó que el producto es ligeramente higroscópico, adsorbiendo hasta 0.9 % de humedad dependiendo de las condiciones atmosféricas. Durante el ciclo de desorción se encontró que el producto se secó completamente.

XRPD e IR: Este patrón de difracción y rastro IR de la muestra de referencia se compararon con los de las muestras comparativas y los resultados se ilustran en el Cuadro 5. Se encontró que los patrones de difracción y rastros IR son idénticos para todas las muestras, indicando que no ocurrieron cambios del estado sólido después del almacenamiento bajo diferentes condiciones.

DSC: La muestra de referencia y las muestras comparativas se calentaron a 10 °C/min de 25 °C a 250°C. Los resultados para todas las muestras se ilustran en el Cuadro 5. La curva de DCS para la muestra de referencia mostró la fundición del producto (con posible descomposición) a aproximadamente 186 °C. Se observó una señal exotérmica extra a aproximadamente 124 °C probablemente debido a la recristalización del material amorfo o artefactos de cristal presentes en la muestra generada durante el fresado.

En resumen, es evidente que la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) en forma micronizada fue físicamente estable bajo todas las condiciones investigadas, aunque es ligeramente higroscópica.

CUADRO 5 Datos de estabilidad para la forma anhidra del compuesto de la fórmula (1) (micronizada) EJEMPLO 5 Análisis de HPLC del Compuesto de la fórmula (I) en forma de hidrato cristalino sólido y forma anhidra cristalina sólida (forma anhidra - sin micronizar y micronizada) La estabilidad química de la forma de hidrato cristalino sólido y la forma anhidra cristalina sólida (forma anhidra tanto no micronizada como micronizada) del compuesto de la fórmula (I) se determinó comparando una muestra a temperatura y humedad relativa ambiente (muestra de referencia) con muestras almacenadas a varias temperaturas y humedades relativas (muestras comparativas). Las muestras se almacenaron bajo varias condiciones por 1 , 4 u 8 semanas como se muestra en los Cuadros 6, 7 y 8. Después las muestras se analizaron por medio de HPLC usando el método en los Procedimientos Generales y por medio de inspección visual.

Forma de hidrato A partir de los datos proporcionados en el Cuadro 6, es evidente que la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) es químicamente estable, aunque se observó algo de sensibilidad a la luz.

CUADRO 6 Datos de estabilidad para la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (\) *luz de día estimulada (gabinete de luz 700W/m2) Forma anhidra (sin micronizar) A partir de los datos proporcionados en el Cuadro 7, es evidente que la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) es sensible a la luz. Después del almacenamiento en luz ICH por 0.3 días, se observó un producto de degradación a RRT 1.12 y RRT .24.

CUADRO 7 Datos de estabilidad para la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (estado sólido) Forma anhidra (micronizada) A partir del Cuadro 8, es evidente que la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) en forma micronizada es sensible a la luz. Después del almacenamiento en luz ICH por 0.3 días, se observó un producto de degradación a RRT 1.12.

CUADRO 8 Datos de estabilidad para la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (micronizada) Los estudios de HPLC indican que las estabilidades químicas de las formas de hidrato y anhidra (tanto no micronizadas como micronizadas) del compuesto de la fórmula (I) son comparables, aunque todas las formas muestran algo de sensibilidad a la luz.

EJEMPLO 6 Análisis de XRPD/IR del Compuesto de la fórmula (I) en forma de hidrato con lactosa y en forma anhidra con lactosa Se prepararon mezclas de la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) con lactosa, y la forma anhidra (micronizada) del compuesto de la fórmula (I) con lactosa (en cada caso 50 %/50 %), usando LactoHale® como fuente de lactosa (proporcionada por DOMO®/Frieslandfoods). Las mezclas se almacenaron bajo diferentes temperaturas y humedades y se analizaron por medio de XRPD e IR en tiempo cero y después de 1 semana y 4 semanas de almacenamiento. Los espectros IR y los patrones de XRPD de las muestras de estabilidad de 1 semana y 4 semanas se compararon con el espectro IR y el patrón de XRPD generados en el tiempo cero.

Hidrato cristalino sólido Preparación de la mezcla: se agregaron aproximadamente 250 mg del compuesto de la fórmula (I) en forma de hidrato y 250 mg de Lactohale200® a un mortero de ágata antes de mezclarse usando una maja y una hoja de plástico (Feton) por 5 minutos. Las mezclas físicas se llenaron en frascos pardos de vidrio de 10 mL con tapa roscada (cerrados) y sin tapa (abiertos). Se usaron las siguientes condiciones de almacenamiento: 80 °C: 1 semana cerrados; 50 °C: 1 y 4 semanas cerrados; 40 °C/75 % HR: 1 y 4 semanas abiertos.

Un espectro IR de referencia de una muestra de una mezcla de la forma de hidrato cristalino sólido con lactosa se muestra en la Figura 14. Los espectros IR se adquirieron después de varias condiciones de almacenamiento. No se observaron diferencias entre los espectros IR de las muestras de estabilidad de 1 y 4 semanas y el espectro IR en el tiempo cero. No se observó interacción entre la forma de hidrato y la lactosa y la forma de hidrato se mantuvo estable bajo todas las condiciones de almacenamiento.

Un patrón de XRPD de referencia de una muestra de una mezcla de la forma de hidrato cristalino sólido con lactosa se muestra en la Figura 15. Los patrones de XRPD se adquirieron después de varias condiciones de almacenamiento. Los patrones de XRPD generados de las muestras de estabilidad de 1 semana y 4 semanas fueron similares a los patrones de difracción en el tiempo cero. Fue claramente visible que los picos típicos de difracción de la forma de hidrato no cambiaron en presencia de Lactohale200® indicando que la forma de hidrato es físicamente estable en presencia de lactosa.

Los espectros IR no mostraron interacción entre la forma de hidrato y la lactosa, y los resultados de XRPD mostraron que no había conversión de estado sólido de la forma de hidrato. Como tal, se puede concluir que la forma de hidrato es físicamente compatible con la lactosa.

Forma anhidra cristalina sólida Preparación de la mezcla: se agregaron aproximadamente 500 mg del compuesto anhidro de la fórmula (I) (micronizado) y 500 mg de Lactohale200® a un mortero de ágata antes de mezclarse usando una maja y una hoja de plástico (Feton) por 5 minutos. Las mezclas físicas se llenaron en frascos pardos de vidrio de 10 mL con tapa roscada (cerrados) y sin tapa (abiertos). Se usaron las siguientes condiciones de almacenamiento: 80 °C: 1 semana cerrados; 50 °C: 1 y 4 semanas cerrados; 40 °C/75 % HR: 1 y 4 semanas abiertos.

Un espectro IR de referencia de una muestra de una mezcla de la forma anhidra cristalina sólida (micronizada) con lactosa se muestra en la Figura 16. Los espectros IR se adquirieron después de varias condiciones de almacenamiento. No se observaron diferencias entre los espectros IR de las muestras de estabilidad de 1 y 4 semanas y el espectro IR en el tiempo cero. No se observó interacción entre la forma anhidra y la lactosa y la forma anhidra se mantuvo estable bajo todas las condiciones de almacenamiento.

Un patrón de XRPD de referencia de una muestra de una mezcla de la forma anhidra cristalina sólida (micronizada) con lactosa se muestra en la Figura 17. Los patrones de XRPD se adquirieron después de varias condiciones de almacenamiento. Los patrones de XRPD generados de las muestras de estabilidad de 1 semana y 4 semanas son similares al patrón de difracción en el tiempo cero. Es claramente visible que los picos típicos de difracción de la forma anhidra no cambiaron en presencia de Lactohale200®, indicando que la forma anhidra es físicamente estable en presencia de lactosa.

Los espectros IR no mostraron interacción entre la forma anhidra y la lactosa, y los resultados de XRPD mostraron que no había conversión de estado sólido de la forma anhidra. Como tal, se puede concluir que la forma anhidra es físicamente compatible con la lactosa.

EJEMPLO 7 Análisis de HPLC del Compuesto de la fórmula (I) en forma de hidrato cristalino sólido con lactosa y en forma anhidra cristalina sólida con lactosa La compatibilidad química de la forma de hidrato y de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) en combinación con lactosa se determinó por medio de análisis de HPLC.

Hidrato Preparación de la mezcla: Se agregaron 2 mg de forma de hidrato y 2 mg de Lactohale200® a un mortero de ágata antes de mezclarse usando una maja y una hoja de plástico (Feton) por 5 minutos. Se mezclaron alícuotas adicionales de Lactohale200® (iniciando en 4 mg) en la mezcla, duplicando cada vez el volumen de la mezcla, hasta que la mezcla contenía 6000 mg de Lactohale200® en total.

Después las mezclas se analizaron por medio de HPLC en tiempo cero y después de diferentes condiciones de almacenamiento. Las muestras se almacenaron bajo las siguientes condiciones: (i) 1 , 2 y 3 semanas a 50 °C (ii) 1 semana a 80 °C (iii) 1 , 2 y 3 semanas a 40 °C / 75 % HR. A partir del Cuadro 9 es evidente que la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) es estable en combinación con lactosa por hasta 3 semanas, indicando su compatibilidad química.

CUADRO 9 Datos de estabilidad para la forma de hidrato del compuesto de la fórmula (I) con lactosa 'Porcentaje de área por medio de HPLC en el RRT indicado. El compuesto de la fórmula (I) tiene un RRT = 1.0 Anhidra (micronizada) La forma anhidra micronizada del compuesto de la fórmula (I) se preparó como se describe en el Ejemplo 4.

El lote de prueba se tomó del suministro que contiene 3.519 mg de forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (micronizada) y 6006.64 mg de Lactohale200®.

Después las mezclas se analizaron por medio de HPLC en tiempo cero y después de diferentes condiciones de almacenamiento. Las muestras se almacenaron bajo las siguientes condiciones: (i) 1 , 2, 3 y 4 semanas a 50 °C (ii) 1 semana a 80 °C (iii) , 2, 3 y 4 semanas a 40 °C / 75 % HR.

El Cuadro 10 indica que se observó degradación significativa después del almacenamiento por 1 semana a 80 °C y también se observó degradación después del almacenamiento a temperaturas elevadas de 50 °C.

Estos resultados sugieren que la forma anhidra (micronizada) del compuesto de la fórmula (I) no es químicamente estable en combinación con lactosa, por lo que los dos componentes no serían compatibles en una formulación farmacéutica.

El pico en el RRT 0.86 se ha atribuido al (los) derivado(s) hidratados D019328 mostrados anteriormente.

CUADRO 10 Datos de estabilidad para la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) (micronizada) con lactosa 'Porcentaje de área por medio de HPLC en el RRT indicado. El compuesto de la fórmula (I) tiene un RRT = 1.0 EJEMPLO 8 Análisis de XRPD/IR del Compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra cristalina sólida con lactosa y estearato de magnesio Se preparó una mezcla de la forma anhidra cristalina sólida (micronizada) del compuesto de la fórmula (I) con lactosa con la adición de 1 % de estearato de magnesio. Las mezclas se almacenaron bajo diferentes temperaturas y humedades y se analizaron por medio de XRPD e IR en tiempo cero y después de 1 semana y 4 semanas de almacenamiento.

Preparación de la mezcla: se agregaron aproximadamente 500 mg de Lactohale200® y aproximadamente 10 mg de estearato de magnesio a un mortero de ágata antes de mezclarse usando una maja y una hoja de plástico (Feton) por 5 minutos. Aproximadamente 500 mg del compuesto anhidro de la fórmula (I) (micronizado) se agregaron a la mezcla y la mezcla se mezcló por 5 minutos adicionales. Las muestras de la mezcla después se almacenaron bajo las varias condiciones descritas en el Ejemplo 6.

Un espectro IR de referencia de una muestra de una mezcla de la forma anhidra cristalina sólida (micronizada) con lactosa y estearato de magnesio se muestra en la Figura 18. Los espectros IR se adquirieron después de varias condiciones de almacenamiento. No se observaron diferencias entre los espectros IR de las muestras de estabilidad de 1 y 4 semanas y el espectro IR en el tiempo cero. No se observó interacción entre la forma anhidra, lactosa y estearato de magnesio y la forma anhidra se mantuvo estable bajo todas las condiciones de almacenamiento.

Un patrón de XRPD de referencia de una muestra de una mezcla de la forma anhidra cristalina sólida (micronizada) con lactosa y estearato de magnesio se muestra en la Figura 19. Los patrones de XRPD se adquirieron después de varias condiciones de almacenamiento. Los patrones de XRPD generados de las muestras de estabilidad de 1 semana y 4 semanas fueron similares a los patrones de difracción en el tiempo cero. Fue claramente visible que los picos típicos de difracción de la forma anhidra no cambiaron en presencia de Lactohale200® y estearato de magnesio, indicando que la forma anhidra es físicamente estable en presencia de lactosa y estearato de magnesio.

Los espectros IR no mostraron interacción entre la forma anhidra, la lactosa y el estearato de magnesio, y los resultados de XRPD mostraron que no había conversión de estado sólido de la forma anhidra. Como tal, se puede concluir que la forma anhidra es físicamente compatible con la lactosa y el estearato de magnesio.

EJEMPLO 9 Análisis de HPLC del Compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra con lactosa y estearato de magnesio La compatibilidad química de la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) en combinación con lactosa y 1 % de estearato de magnesio se determinó por medio de análisis de HPLC.

El lote de prueba se tomó del suministro que contiene 3.704 mg de forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (micronizada), 6017.90 mg de Lactohale200 y 67.33 mg de estearato de magnesio.

Los datos mostrados en el Cuadro 11 indican un incremento significativo en la estabilidad química en comparación con la misma composición con la ausencia de estearato de magnesio (véase el Cuadro 2), evidenciado por sólo una pequeña cantidad de degradación observada después del almacenamiento por 1 semana a 80 °C (véase, por ejemplo, RRT 0.86, 0.28 %). Estos resultados sugieren que la estabilidad química de la forma anhidra (micronizada) del compuesto de la fórmula (I) con lactosa se ve mejorada significativamente por medio de la adición de estearato de magnesio a la composición. Como tal, la adición de estearato de magnesio mejora la compatibilidad química de la forma anhidra (micronizada) del compuesto de la fórmula (I) en combinación con lactosa, de modo que puedan ser compatibles en una formulación farmacéutica.

CUADRO 11 Datos de estabilidad para la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) (micronizada) con lactosa y estearato de magnesio *Porcentaje de área por medio de UPLC en el RRT indicado. El compuesto de la fórmula (I) tiene un RRT = 1.0 EJEMPLO 10 Análisis de UPLC del Compuesto de la fórmula (!) en forma anhidra con lactosa y sales metálicas de ácido esteárico La compatibilidad química de la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) (micronizada) en combinación con lactosa y 1 % de sal metálica de ácido esteárico (estearato de magnesio, estearato de sodio y estearato de calcio) se determinó por medio de análisis de UPLC (micronización del compuesto de la fórmula (I) como se describe en el Ejemplo 4).

Las muestras de prueba se prepararon como se describe en el Cuadro 12 a continuación: CUADRO 12 Muestras de prueba para análisis de UPLC después de la prueba de estabilidad acelerada Las muestras se dispensaron en viales sellados con tapones y se mantuvieron a 80 °C por 1 ó 2 semanas. La muestra 1 se usó para los estudios de 1 semana y la muestra 2 se usó para los estudios de 2 semanas.

Los resultados se muestran en el Cuadro 13 a continuación: CUADRO 13 Resultados del análisis de UPLC después de la prueba de estabilidad acelerada *Porcentaje de área por medio de UPLC en el RRT indicado. El compuesto de la fórmula (I) tiene un RRT = 1.0 El análisis de espectroscopia de masas indica que la sustancia con RRT 0.87 es D019493 y la sustancia con RRT 0.92 es D0 9492 (confirmado por medio de RMN) (véase el Esquema 1). Las asignaciones de resonancia RMN para D019492 se dan en el Cuadro 14: CUADRO 14 Asignaciones de resonancia 1H RMN para D019492 Los datos mostrados en el Cuadro 13 indican un incremento significativo en la estabilidad química para formulaciones que contienen una sal metálica de ácido esteárico en comparación con la misma composición en ausencia de una sal metálica de ácido esteárico, evidenciado por medio de una cantidad comparativamente pequeña de degradación observada después del almacenamiento por 1 ó 2 semanas a 80 °C. Estos resultados sugieren que la estabilidad química de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) con lactosa se ve mejorada significativamente por medio de la adición de sales metálicas de ácido esteárico a la composición. Por lo tanto, la adición de sales metálicas de ácido esteárico mejora la compatibilidad química de la forma anhidra del compuesto de la fórmula (I) en combinación con lactosa, de modo que puedan ser compatibles en una formulación farmacéutica.

EJEMPLO 11 Preparación de formulaciones farmacéuticas de conformidad con la invención Una formulación farmacéutica ejemplar de la invención consiste en 0.5 % en peso del compuesto de la fórmula (I) (forma anhidra cristalina sólida, micronizada), 98.5 % en peso de monohidrato de lactosa (grado de inhalación) y 1.0 % en peso de estearato de magnesio, en donde el porcentaje en peso de todos los componentes está basado en el peso de la formulación farmacéutica seca.

Resumen de los resultados divulgados en los Ejemplos Las formas de hidrato y anhidra cristalinas sólidas del compuesto de la fórmula (I) se han identificado.

A partir de estudios de TGA, DVS, XRPD, IR y DSC, es evidente que la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) (en forma tanto no micronizada como micronizada) y la forma de hidrato cristalino sólido son estables, aunque la forma de hidrato tiene la tendencia a perder algo de agua bajo condiciones secas, aparentemente sin impacto sobre su estructura cristalina. Las estabilidades químicas de las formas de hidrato y anhidra del compuesto de la fórmula (I) son comparables.

Cuando las formas de hidrato y anhidra cristalinas sólidas se pusieron a prueba para su compatibilidad química con lactosa, aunque se encontró que ambas formas eran físicamente compatibles, se observó degradación química para la forma anhidra cristalina sólida en presencia de lactosa.

Sin embargo, se encontró sorprendentemente que la adición de estearato de magnesio, estearato de calcio o estearato de sodio (ejemplos de una sal metálica de ácido esteárico) a la combinación de la forma anhidra cristalina sólida del compuesto de la fórmula (I) y lactosa reduce significativamente la degradación química. Como tal, una formulación farmacéutica que comprende el compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra cristalina sólida, lactosa y una sal metálica de ácido esteárico como estearato de magnesio tiene buena estabilidad física y química.

Todas las referencias referidas en esta solicitud, incluyendo patentes y solicitudes de patente, se incorporan a la presente como referencia en la máxima extensión posible.

En la especificación y las siguientes reivindicaciones, a menos que el contexto indique otra cosa, se entenderá que la palabra "comprenden" y variaciones como "comprende" y "que comprende(n)" implican la inclusión de un entero establecido, paso, grupo de enteros o grupo de pasos, pero no la exclusión de cualquier otro entero, paso, grupo de enteros o grupo de pasos.

Claims (19)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de la fórmula (I) que es 6-(2-((4-am¡no-3-(3-h¡droxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]p¡rim¡d¡n-1-¡l) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-5-il)-A/,/V-bis(2-metoxietil)hex-5-inamida en forma anhidra cristalina sólida.

2.- Un compuesto de la fórmula (I) que es 6-(2-((4-amino-3-(3-hidroxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il) metil)-3-(2-clorobencil)-4-oxo-3,4-dihidroquinazolin-5-il)-N,N-b¡s(2-metox¡et¡l)hex-5-inamida en la forma de un hidrato cristalino sólido.

3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el compuesto de la fórmula (I) está en forma cristalina sólida que tiene el patrón de difracción de polvo de rayos X sustancialmente como se muestra en la Figura 2.

4. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el compuesto de la fórmula (I) está en forma cristalina sólida que tiene un patrón dé difracción de polvo de rayos X que contiene uno, dos, tres o cuatro picos seleccionados de (± 0.2) 17.6, 18.4, 22.5 y 24.2 grados 2-theta.

5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque el compuesto de la fórmula (I) está en forma cristalina sólida que tiene el patrón de difracción de polvo de rayos X sustancialmente como se muestra en la Figura 1.

6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque el compuesto de la fórmula (I) está en forma cristalina sólida que tiene un patrón de difracción de polvo de rayos X que contiene uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis o siete picos seleccionados de (± 0.2) 9.6, 13.3, 13.9, 17.0, 18.9, 20.3 y 23.1 grados 2-theta.

7. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para usarse como medicamento.

8. - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en mezcla con uno o más diluyentes o portadores farmacéuticamente aceptables.

9. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque contiene lactosa (por ejemplo, monohidrato de a-lactosa) como diluyente o portador.

10. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 8 ó 9, caracterizada además porque contiene un agente estabilizador seleccionado de sales metálicas de ácido esteárico y sales metálicas de estearil fumarato.

11. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque el agente estabilizador es una sal metálica de ácido esteárico como estearato de magnesio.

12. - La composición farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 , caracterizada además porque comprende el compuesto de la fórmula (I) en forma micronizada.

13. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, para usarse en el tratamiento o prevención de una condición seleccionada de: COPD (incluyendo bronquitis crónica y enfisema), asma incluyendo asma pediátrico, fibrosis quística, sarcoidosis, fibrosis pulmonar idiopática, caquexia e inhibición del crecimiento y metástasis de tumores pulmonares incluyendo carcinoma pulmonar de células no pequeñas.

14.- El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una condición seleccionada de: COPD (incluyendo bronquitis crónica y enfisema), asma incluyendo asma pediátrico, fibrosis quística, sarcoidosis, fibrosis pulmonar idiopática, caquexia e inhibición del crecimiento y metástasis de tumores pulmonares incluyendo carcinoma pulmonar de células no pequeñas.

15 - Un método de tratamiento de una condición seleccionada de: COPD (incluyendo bronquitis crónica y enfisema), asma incluyendo asma pediátrico, fibrosis quística, sarcoidosis, fibrosis pulmonar idiopática, caquexia e inhibición del crecimiento y metástasis de tumores pulmonares incluyendo carcinoma pulmonar de células no pequeñas que comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12.

16. - Un procedimiento par^i la preparación de un compuesto de la fórmula (I) en forma anhidra cristalina sólida de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 , 3 ó 4 que comprende el paso de cristalizar un compuesto de la fórmula (I) de -propanol seco.

17. - El procedimiento de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el paso de cristalización involucra enfriamiento desde temperatura elevada.

18. - Un procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula (I) en la forma de un hidrato cristalino sólido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2, 5 ó 6 que comprende el paso de cristalizar un compuesto de la fórmula (I) de diclorometano opcionalmente en mezcla con metanol.

19. - Un dispositivo de inhalación que comprende una o más dosis de una formulación farmacéutica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12.