MX2011011023A - Tratamiento de cancer de ovarios usando un agente anti-cancer conjugado con un analogo de angiopep-2. - Google Patents

Abstract

El cáncer de ovarios es tratado con conjugados de un agente anti-cáncer y un análogo de polipéptido Angiopep-2 (es decir, un polipéptido comprendiendo una secuencia de aminoácidos por lo menos 80% idéntica a la SEQ ID NO: 97). Tal tratamiento incluye utilidad para tratar cáncer de ovarios metastásico y para tratar a pacientes que han exhibido previamente resistencia a agentes quimioterapéuticos estándar. Agentes anti-cáncer preferidos incluyen taxanos mientras que el conjugado preferido es ANG1005, un conjugado que comprende tres moléculas de paclitaxel conjugadas al péptido Angiopep-2.

Description

TRATAMIENTO DE CÁNCER DE OVARIOS USANDO UN AGENTE AN I-CÁNCER CONJUGADO CON UN ANÁLOGO DE ANGIOPEP Antecedentes de la Invención La invención se refiere a métodos para el tratamiento de cáncer de ovarios .

El cáncer de ovarios es un problema serio a la salud; muertes debidas a cáncer de ovarios en 2008 en los Estados Unidos se estimaron por el National Cáncer Institute (Instituto Nacional del Cáncer) siendo mas de 15,000, con mas de 21,000 nuevos casos anualmente. Esta es la causa principal de muertes a partir de cánceres ginecológicos y la quinta causa mas común de muertes de cáncer en mujeres. Con base en estos números, se estima que las mujeres tienen un riesgo de por vida de 1.39% de desarrollar cáncer de ovarios.

El cáncer de ovarios es difícil de diagnosticar temprano, pues los síntomas tempranos son frecuentemente no específicos para la enfermedad. Por ende, solamente 19% de los cánceres de ovarios son diagnosticados antes de que el cáncer se ha extendido a partir de los ovarios; de hecho, 2/3 de los diagnósticos ocurren solamente después de que el cáncer se ha metastasizado a ubicaciones distantes en el cuerpo. Una vez que el cáncer se ha metastasizado, la tasa de supervivencia relativa de cinco años (según se compara con la población como un todo) es solamente 30.6%.

Por estas razones, tratamientos mas efectivos para cáncer de ovarios, especialmente aquellos que tienen cáncer metastásico, son necesarios.

Compendio de la Invención Se ha descubierto que el cáncer de ovarios metastásico se trató exitosamente por administración de ANG1005, un terapéutico el cual incluye tres moléculas de paclitaxel conjugadas con el péptido Angiopep-2 (SEQ ID NO: 97) . Este conjugado es capaz de tratar cáncer metastásico teniendo metástasis tanto fuera y dentro del cerebro, aun donde el paciente no responde a agentes quimioterapéuticos estándar. Debido a que ANG1005 es apuntado de manera efectiva a las células de cáncer, puede, en ciertos casos, administrarse a dosis equivalentes mas bajas que paclitaxel por si mismo y retener eficacia. De manera similar, debido a que el paclitaxel conjugado de ANG1005 puede ser menos tóxico que el agente no conjugado, ANG1005 puede también administrarse en dosis mayores que paclitaxel solo y exhibe menos efectos secundarios.

En la base de este descubrimiento, la invención presenta un método para tratar a un paciente (v.gr., un humano) teniendo cáncer originándose del ovario (v.gr., un carcinoma epitelial de ovario o adenocarcinoma de ovario, o forma metastá-sica del mismo) . El método incluye administrar al paciente una cantidad efectiva de un conjugado incluyendo (a) un agente anti-cáncer, y (b) un polipéptido incluyendo una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a un polipéptido incluyendo la secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NOs: 1-105 y 107-116 (v.gr., SEQ ID NO: 97), una forma modificada del mismo (v.gr. , como se describe en la presente) , o un fragmento del mismo, donde el polipéptido, forma modificada o fragmento se conjugan al agente anti-cáncer. En ciertas formas de realización, el agente anti-cáncer se selecciona a partir del grupo que consiste en paclitaxel, vinblastina, vincristina, etopósido, doxorubicina, ciclofosfamida, taxotere, melfalano, y clorambuci-lo. En formas de realización particulares, el agente anti-cáncer es paclitaxel. En ciertas formas de realización, el polipéptido incluye una secuencia de aminoácidos por lo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, o 100% idéntica a la secuencia de la SEQ ID NO: 97. El conjugado puede ser administrado en una dosis de alrededor de 1, 10, 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1,000, 1,200, 1,400, 1,600, 1,800, 2,000, 2,500, o 3,000 mg/m2, o cualquier rango entre estos números. En ciertas formas de realización, la dosis es entre 100 mg/m2 y 2,000 mg/m2 o entre 300 mg/m2 y 1,000 mg/m2. El conjugado puede ser adminis-trado por cualquier medio conocido en la materia, v.gr. , intravenosamente, oralmente, intra-arterialmente , intranasalmen-te, intraperitonealmente , intramuscularmente , sub-cutáneamente , trans -dérmicamente, o per os al paciente.

El cáncer de ovarios puede estar en cualquier etapa (v.gr., Etapa IA, IB, IC, HA, IIB, IIC, IIIA, IIIB, IIIC, o IV) o cualquier grado de morfología (v.gr., Grado 1, Grado 2, o Grado 3) como se describe en la presente. El cáncer puede estar en uno o ambos ovarios. El cáncer puede confinarse al interior del ovario, o puede aparecer en la superficie externa del ovario. En ciertas formas de realización, células de cáncer se encuentran en el útero, trompas de Falopio, o ambos. En otras formas de realización, el cáncer se ha esparcido a órganos pélvicos tales como el colon, vejiga, o recto. En otras formas de realización, células de cáncer se encuentran en el abdomen (v.gr. , visibles a simple vista (v.gr., mayores o menores que 2 cm a través), o visibles solamente bajo un microscopio) . El cáncer puede también haber sido metastasizado al revestimiento del abdomen o pelvis (peritoneo), órganos del abdomen tal como el intestino, vejiga, útero, hígado y pulmones, o el cerebro. El cáncer puede haber metastasizado a por lo menos una ubicación por fuera del ovario (v.gr., al cerebro, pulmón, o ambos) . En ciertas formas de realización, el cáncer está en el sistema linfático. En ciertas formas de realización, el paciente tiene por lo menos una metástasis por fuera del cerebro, pulmón, hígado, riñon, u ojo.

En formas de realización particulares, el cáncer puede ser resistente a fármacos o incluir células resistentes a fármacos (v.gr., células que expresan DR1) . El cáncer puede ser o puede incluir células que son resistentes a cualquier agente quimioterapéutico incluyendo paclitaxel , carboplatina, cisplati-na, doxorubicina, topotecano, gemcitabina, docetaxel, u derivado de taxano, o cualquier agente descrito en la presente.

En otras formas de realización, el método incluye administración de una segunda terapia anti-cáncer (v.gr., cualquier terapia descrita en la presente) . En ciertas formas de realización, el paciente puede haber recibido previamente otro agente quimioterapéutico (v.gr., paclitaxel, un agente de platino tal como carboplatina, cisplatina, doxorubicina , topotecano, gemcitabina, docetaxel, o cualquier agente descrito en la presente) y puede opcionalmente ser resistente a fármacos con respecto a ese terapéutico. En formas de realización particulares, el paciente previamente recibió terapia de combinación de carboplatina-paclitaxel .

El paciente también puede tener factores de riesgo para desarrollar cáncer de ovarios (v.gr., cualquier factor de riesgo descrito en la presente) .

En cualquiera de las formas de realización anteriores, el polipéptido puede ser de cualquier longitud, por ejemplo, por lo menos 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 25, 35, 50, 75, 100, 200, o 500 aminoácidos. En ciertas formas de realización, el polipéptido es de 10 a 50 aminoácidos de longitud. El conjugado puede ser sustancialmente puro. El polipéptido puede producirse por tecnología genética recombinante o síntesis química. El conjugado puede formularse con un portador farmacéuticamente aceptable.

El polipéptido puede incluir una secuencia de aminoáci-dos teniendo la fórmula: En cualquiera de los aspectos anteriores, el vector de péptido puede incluir una secuencia de aminoácidos teniendo la fórmula: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17- X18-X19 donde cada uno de X1-X19 (v.gr. , X1-X6, X8 , X9, X11-X14, y X16-X19) es, de manera independiente, cualquier aminoácido (v.gr., un aminoácido tal como aparece en la naturaleza tal como Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, lie, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, y Val) o ausente y por lo menos uno (v.gr., 2 o 3) de XI , X10, y X15 es arginina . En algunas formas de realización, X7 es Ser o Cys; o X10 y X15 cada uno de manera independiente es Arg o Lys. En algunas formas de realización, los residuos de XI a X19, inclusive, son sustancialmente idénticos a cualquiera de las secuencias de aminoácidos de cualquiera de las SEQ ID NOs:l-105 y 107-116 (v.gr., Angiopep-1, Angiopep-2, Angiopep-3, Angiopep-4a, Angiopep-4b, Angiopep-5, Angiopep-6, y Angiopep-7) . En algunas formas de realización, por lo menos uno (v.gr., 2, 3, 4, o 5) de los aminoácidos X1-X19 es Arg. En algunas formas de realización, el polipéptido tiene uno o mas residuos de cisteína adicionales en la terminal N del polipéptido, la terminal C del polipéptido, o ambas.

En ciertas formas de realización de cualquiera de los aspectos anteriores, el polipéptido es modificado (v.gr., como se describe en la presente) . El polipéptido puede ser amidado, acetilado, o ambos. Tales modificaciones a polipéptidos pueden estar en las terminales amino o carboxi del polipéptido. Los conjugados de la invención también pueden incluir peptidomiméti -eos de cualquiera de los polipéptidos descritos en la presente. El polipéptido puede estar en una forma multimérica, por ejemplo, forma dimérica (v.gr. , formado por enlace de disulfuro a través de residuos de cisteína) .

En ciertas formas de realización, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos descrita en la presente con por lo menos una sustitución de aminoácidos (v.gr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 sustituciones). El polipéptido puede contener, por ejemplo, l a 12, l a 10, l a 5, o l a 3 sustituciones de aminoácidos, por ejemplo, 1 a 10 (v.gr., 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2) sustituciones de aminoácidos. Las sustituciones de aminoácidos pueden ser conservadoras o no conservadoras. Por ejemplo, el polipéptido puede tener una arginina en una, dos, o tres de las posiciones correspondientes a las posiciones 1, 10, y 15 de la secuencia de aminoácidos de cualquiera de la SEQ ID NO: 1, Angiopep-1, Angiopep-2, Angiopep-3, Angiopep-4a, Angiopep-4b, Angiopep-5, Angiopep-ß, y Angiopep-7.

En cualquiera de los aspectos anteriores, el compuesto puede específicamente excluir un polipéptido incluyendo o consistiendo de cualquiera de las SEQ ID NOs : 1-105 y 107-116 (v.gr., Angiopep-1, Angiopep-2, Angiopep-3, Angiopep-4a, Angiopep-4b, Angiopep-5, Angiopep-6, y Angiopep-7) . En algunas formas de realización, los polipéptidos y conjugados de la invención excluyen los polipéptidos de las SEQ ID NOs : 102, 103, 104, y 105.

En algunas formas de realización, la secuencia de aminoácidos tiene por lo menos 35%, 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, o 95% de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada a partir del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 1-105 y 107-116, o un derivado funcional de la misma. En ciertas formas de realización, la secuencia de aminoácidos tiene por lo menos 35%, 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, o 95% de identidad con una secuencia de aminoácidos seleccionada a partir del grupo que consiste en Angiopep-2 (SEQ ID NO: 97), Angiopep-4b, Angiopep-5, Angiopep-6, y Angiopep-7 (SEQ ID NOs: 109-116). En aun otras formas de realización, la secuencia de aminoácidos tiene por lo menos 35%, 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, o 95% de identidad con una secuencia de aminoácidos de Angiopep-2 (SEQ ID NO: 97) .

En algunas formas de realización, la secuencia de aminoácidos comprende la secuencia de aminoácidos seleccionada a partir del grupo que consiste en las SEQ ID NOs : 1-105 y 107-116, o un derivado funcional de la misma. En ciertas formas de realización, la secuencia de aminoácidos es aquella de Angiopep-2 (SEQ ID NO: 97), Angiopep-4b, Angiopep-5, Angiopep-6, o Angiopep-7 (SEQ ID NOs: 109-112).

En aun otras formas de realización, la secuencia de aminoácidos comprende la secuencia de aminoácidos seleccionada a partir del grupo que consiste en las SEQ ID NOs : 1-105 y 107-116, o un derivado funcional de la misma. En ciertas formas de realización, la secuencia de aminoácidos es aquella de Angiopep-2 (SEQ ID NO: 97) , Angiopep-4b, Angiopep-5, Angiopep-6, o Angiopep- 7 (SEQ ID NOs : 109-112) .

Por "paciente" se entiende tratar un humano o animal no humano (v.gr. , un mamífero) .

Por "tratar" se entiende mejorar por lo menos un síntoma de una condición o enfermedad en un sujeto teniendo la condición o enfermedad (v.gr., un sujeto diagnosticado con un trastorno metabólico) , según se compara con un control no tratado equivalente. Tal reducción en el síntoma (v.gr., una reducción en niveles de glucosa sanguínea) es por lo menos 5%, 10%, 20%, 40%, 50%, 60%, 80%, 90%, 95%, o 100%, según se mide por cualquier técnica estándar.

Por "conjugado" se entiende un polipéptido (v.gr., aquellos descritos en la presente) enlazado a un agente anti-cáncer. La conjugación puede ser química en naturaleza, tal como mediante un enlazador, o genética en naturaleza por ejemplo por tecnología genética recombinante .

Por "una cantidad efectiva" se entiende una cantidad de un compuesto requerido para tratar o reducir cáncer de ovarios en una manera clínicamente relevante. Por ejemplo, una cantidad suficiente de un compuesto activo usado para practicar la presente invención para tratamiento terapéutico de cáncer de ovarios depende de la manera de administración, la edad, peso corporal, y extensión del cáncer. Finalmente, los prescriptores decidirán la cantidad apropiada y el régimen de dosificación.

Por "sustancialmente idéntico" se entiende un polipép-tido o ácido nucleico exhibiendo por lo menos 35%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 85%, 90%, 95%, o aun 99% de identidad a una secuencia de aminoácidos o ácido nucleico de referencia. Para polipéptidos , la longitud de secuencias de comparación general -mente será por lo menos 4 (v.gr., por lo menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 50, o 100) aminoácidos. Para ácidos nucleicos, la longitud de secuencias de comparación generalmente será por lo menos 60 nucleótidos, de preferencia por lo menos 90 nucleótidos, y mas preferentemente por lo menos 120 nucleótidos, o longitud completa. Se debe entender en la presente que espacios pueden encontrarse entre los aminoácidos de análogos los cuales son idénticos o similares a aminoácidos del polipéptido original. Los espacios pueden no incluir aminoácidos, uno o mas aminoácidos que no son idénticos o similares al polipéptido original. Análogos biológicamente activos de los vectores (polipéptidos) de la invención se abarcan con la presente. Identidad porcentual puede determinarse, por ejemplo, con un algoritmo GAP, BESTFIT, o FASTA en Wisconsin Genetics Software Package Reléase 7.0, usando ponderaciones de espacio predeterminados.

Por "fragmento" se entiende un polipéptido originando a partir de una porción de una secuencia original o progenitora o a partir de un análogo de dicha secuencia progenitora. Fragmentos abarcan polipéptidos teniendo truncaciones de uno o mas aminoácidos, en donde la truncación puede originarse a partir de la terminal amino (terminal N) , terminal carboxi (terminal C) , o a partir del interior de la proteína. Un fragmento puede incluir la misma secuencia como la porción correspondiente de la secuencia original. Fragmentos funcionales del vector (polipéptido) descrito en la presente se abarcan por la invención. Fragmentos pueden ser de por lo menos 5 (v.gr., por lo menos 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 25, 28, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 75, 100, o 150) aminoácidos. Fragmentos de la invención pueden incluir, por ejemplo, un polipéptido de 7 , 8, 9 o 10 aminoácidos a 18 aminoácidos. Fragmentos pueden contener cualquiera de las modificaciones descritas en la presente (v.gr., acetilación, amidación, sustituciones de aminoácidos) .

Por un cáncer "resistente a fármacos" se entiende un cáncer que no responde, o exhibe una respuesta disminuida a, uno o mas agentes quimioterapéutico (v.gr., cualquier agente descrito en la presente) .

Un cáncer "determinado a ser resistente a fármacos" se entiende que el cáncer es resistente a fármacos, con base en una falta de respuesta o respuesta disminuida a un agente quimiotera-péutico, o se predice que es resistente a fármacos con base en un ensayo de prognosis (v.gr. , un ensayo de expresión de genes) .

Otras características y ventajas de la invención serán aparentes a partir de la siguiente Descripción Detallada, los dibujos, y las reivindicaciones.

Breve Descripción de los Dibujos La figura 1 es un diagrama esquemático de la estructura ANG1005. ANG1005 incluye tres moléculas de paclitaxel conjugadas al péptido Angiopep-2 (SEQ ID NO: 97) .

Las figuras 2A y 2B son imágenes mostrando una exploración CT del cerebro del paciente previo a (figura 2A) y después de (figura 2B) tratamiento con ANG1005.

Las figuras 3A-3D son imágenes mostrando una exploración CT del pulmón del paciente previo a (figuras 3A y 3C) y después de (figuras 3B y 3D) tratamiento con ANG1005.

Las figuras 4A y 4B son imágenes mostrando una exploración CT del abdomen del paciente, incluyendo hígado, previo a (figura 4A) y después de (figura 4B) tratamiento con ANG1005.

Las figuras 5A y 5B son imágenes mostrando una exploración CT de la pelvis del paciente previo a (figura 5A) y después de (figura 5B) tratamiento con ANG1005.

Las figuras 6A y 6B son gráficas mostrando inhibición de ANG1005 por el péptido Angiopep-2 (figura 6A) o por proteína asociada a receptor (RAP) o aprotinina (figura 6B) .

La figura 7 es una gráfica mostrando expresión de LRP en varios tipos de células y líneas celulares. Datos son tomados a partir del Gene Expression Atlas de Genetics Institute of the Novartis Research Foundation (disponible en línea en http : //expression. gnf . org/cgi-bin/ índex. cgi#Q) .

Descripción Detallada Se ha descubierto que administración de un conjugado péptido-fármaco, como se ejemplifica por A G1005 (figura 1), es capaz de tratar cáncer de ovarios en un paciente, y, en particular, es capaz de encoger dramáticamente tumores metastásicos , tanto aquellos dentro del cerebro, así como aquellos por fuera del cerebro (v.gr., en el pulmón) del paciente después de solamente dos tratamientos con ANG1005. De hecho, el cáncer de este paciente en particular pareció resistente a quimioterapéuti-cos estándar incluyendo docetaxel, carboplatina, gemcitabina, topotecano, y doxorubicina, pues el cáncer del paciente continuó progresando aun después de recibir estos agentes. Debido a que el cáncer de ovarios, en particular el cáncer de ovarios metastási-co, ha probado ser difícil de tratar de manera efectiva, y dado que tales cánceres frecuentemente desarrollan resistencia a terapias estándar, hay una necesidad por terapéuticos y regímenes terapéuticos capaces de tratar cánceres originándose a partir del ovario, particularmente donde el cáncer se ha metastasizado . Tratamiento con conjugado en un paciente que sufre de cáncer de ovarios Un paciente de 73 años diagnosticado con cáncer de ovarios metastásico fue seleccionado para participación en una prueba clínica de ANG1005. El paciente fue diagnosticado originalmente en Noviembre de 2006 con cáncer de ovarios. Previo a la prueba clínica, el paciente recibió tratamiento de Enero de 2007 a Abril de 2007 con Taxotere (docetaxel) y carboplatina . De Febrero de 2008 a Marzo de 2008, el paciente recibió una combinación de Gemzar (gemcitabina) y Hycamtin (topotecano) . Al paciente fue de nuevo dada una combinación de Taxotere (docetaxel) y carboplatina de Marzo de 2008 hasta Julio de 2008. En Noviembre de 2008, al paciente se le administró Doxil (doxorubi-cina) . Como el cáncer del paciente continuó progresando aun ante administración de estos agentes, el cáncer pareció resistente a estos agentes.

El paciente entró a la prueba clínica en Enero de 2009. Exploraciones CT llevadas a cabo el 7 de Enero de 2009, previo a tratamiento con ANG1005, indicaron la presencia de metástasis en el cerebro (figura 2A) , pulmones (figuras 3A y 3C) , e hígado (figura 4A) . Las metástasis también se detectaron en los nodos linfáticos. Exploraciones CT del hígado y la pelvis también se llevaron a cabo (figuras 4A y 5A) . El 8 de Enero de 2009, se administró al paciente una sola dosis de ANG1005 de manera intravenosa. Tres semanas después, una segunda dosis de 650 mg/m2 fue administrada. Después de estas administraciones, una reducción sorprendente en el volumen del tumor ocurrió. La exploración CT llevada a cabo el 13 de Febrero de 2009 indicó que una reducción sustancial en el tamaño de metástasis de cerebro (figura 2B) así como metástasis de pulmón (figuras 3B y 3D) e hígado (figura 4B) . Exploraciones CT de la pelvis (figura 5B) también se muestran. El paciente recibió la tercer dosis de ANG1005 el 19 de Febrero de 2009. Con base en estas observaciones, se cree que A G1005 es sorprendentemente bien adecuado para tratamiento de cáncer metastásico, particularmente donde el paciente es resistente o se determina siendo resistente a agentes quimioterapéuticos estándar.

Resultados de pruebas clínicas El paciente descrito anteriormente es un participante en una de dos pruebas FDA corrientes para el terapéutico ANG1005. El estado de la primera prueba clínica se resume en la Tabla 1 siguiente. Estas pruebas se llevaron a cabo para determinar la seguridad de ANG1005. La primera prueba involucró a pacientes teniendo varios cánceres del cerebro: oligodendroglioma anaplás-tico (AO) , oligoastrocitoma (OA) , astrocitoma anaplástico (AA) , y glioblastoma multiforme (GBM) .

Tabla 1 Paciente Edad/ Dx Dosis Taxano # de Estado Evaluación Comentarios # Género (mg/m¡) Previo Ciclos Actual Global del Tumor 114 44/F AO 105 No 4 Retirado PD (12 sem. ) 115 43/M OA Mixto 105 No 4 Retirado PD (12 sem.) 117 43/M AO 105 NO 2 Retirado PD (6 sem.) 118 43/F AA 105 No 2 Retirado PD (6 sem.) 119 56/M GBM 200 No 2 Retirado PD ( 6 sem . ) 120 78/M GBM 200 No 2 Retirado PD ( 6 sem . ) 121 41/M AO 200 No 3 Retirado SD (6 sem.) SAE (7 días después del ciclo 3) ; Ataxia y hemorragia (no relacionados con ANG1005) MRI a 6 semanas muestra 1 22% 122 73/M GBM 200 No 1+1 Retirado Paciente de sub- estudio quirúrgico (continuará en estudio núcleo) 123 59/F GBM 300 No 4 Activo SD (6 sem.) 124 69/F GBM 300 No 2 Retirado PD (6 sem.) 125 63/F GBM 300 No 4 Activo SD (S aem.) Paciente experimentó Neutropenia Grado 2 (ANC= 1.2) 126 42/F GBM 300 No 2 Ret rado 200 127 30/F GBM 300 No 2 Retirado PD ( 6 sem . ) 128 51/M GBM 300 3 Activo SD (S sem.) 129 57/M GBM 300 1 Activo Fiebre & Neutropenia (Gr. 3) 130 33/M AO 420 2 Activo 131 49/F AO 420 2 Activo 132 66/F GBM 420 1 Activo Paciente experimentó Neutropenia Grado 3 (ANC= 0.65) PD (Enfermedad Progresiva) SD (Enfermedad Estable) Una segunda prueba corriente que involucra a pacientes que sufren de cáncer metastásico también comenzó. Resultados a partir de esta prueba se muestran en la Tabla 2 siguiente. El paciente de cáncer de ovarios descrito anteriormente se representa como el paciente 134 en la Tabla 2.

Tabla 2 Paciente Edad/ Dx Dosis Taxano # de Estado Evaluación Comentarios # Género (mg/m2) Previo Ciclos Actual Global del Tumor 127 41/F NSCLC 420 Si 10 Activo MR El investigador Met : 550 24 semanas recibió aprobación Cerebro 420 de incrementar dosis a 550 mg/m3 para el séptimo ciclo; el 10o. ciclo disminuyó a 420 mg/m2 debido a neuropatía periférica 129 38/M Melanoma 550 No 5 Retirado SD El paciente fue Met : 12 semanas admitido al hospiCerebro tal el 6 de febrero por dolor (poco probable que fuera relacionado con A G1005). El paciente no desea continuar en el estudio. 131 48/F Cáncer 650 No 2 Retirado PD Cl : neutropenia de colon 550 6 semanas febril (DLT) Met: C2 : retraso de doPulmón, sis y reducción a hígado 550 mg/m! Neutropenia febril reportada en D8 132 36/F NSCLC 650 Si 1 Retirado N/E Paciente hospitaliMet : zado dos veces (no hueso relacionado con ANG1005) . El paciente decidió retirarse del estudio y buscar tratamiento mas cerca de casa. Neutropenia grado 3. 133 60/F SCLC 650 No 2 Retirado N/E Paciente hospitali¬ Met : zado con neumotó- hígado, rax, falleció días cerebro después de alta.

Neutropenia grado 4 tratada con G-CSF. 134 73/F Cáncer 650 Si 4 Retirado PR Neutropenia grado 4 de ova6 semanas en día 8, tratada rios con G-CSF. 80% de Met : reducción en primapulmón, rio, también reduclinfas , ción en cerebro. cerebro Paciente progresó en 2 previo a curso de taxano. Fallecido. 135 60/M SCLC 650 No 4 Activo PR (6 sem.) Neutropenia grado 3 Met : 550 PD (12 sem.) en el día 8, grado cerebro 4 en el día 12 (sin tratar) , resuelta dentro de 7 días . Dosis reducida a 550 mg/m2. 136 53/M Melanoma 650 No 3 Ret rado SD Neutropenia grado 3 Met : en día 8, grado 2 pulmón en día 15. Reacción de infusión en ciclo 2, dosificación completada exitosamente . 137 66/M NSCLC 700 3 Activo SD Neutropenia grado 3 Met : en día 21. Neutrocerebro penia grado 4 en el 2. 138 44/F Cáncer 700 3 Activo SD Neutropenia grado 4 de pecho 650 el. 1.

Met : cerebro 139 28/M 140 49/F 141 81/F 142 49/F 143 45/F NSCLC: Cáncer pulmonar de células no pequeñas SCLC: Cáncer pulmonar de células pequeñas PR (Respuesta Parcial) ; MR (Respuesta Menor) ; SD (Enfermedad Estable) .

Cáncer de ovarios Los métodos de la invención incluyen tratamiento de un paciente teniendo cáncer de ovarios. El cáncer de ovarios comienza con formación de un tumor en el ovario de un paciente. Los ovarios incluyen tres tipos de tejidos diferentes, epitelial, germinal, y estromal, a partir de los cuales puede surgir un tumor. La mayoría de los cánceres de ovarios (85-90%) se derivan de tejido epitelial, los cuales son generalmente carcinomas o adenocarcinomas de ovarios. Otros cánceres de ovarios incluyen tumores de células germinales y tumores de células estromales. Factores de riesgo para cáncer de ovarios Los métodos de la invención pueden involucrar tratamiento de paciente que tiene uno o mas factores de riesgo para cáncer de ovarios. Factores de riesgo para desarrollar cáncer de ovarios incluyen edad, obesidad, e historia familiar de cáncer de ovarios, historia personal de cáncer de ovarios, dieta alta en grasas. Factores de riesgo genéticos incluyen mutaciones en los genes BRCA1 y BRCA2. Riesgo para cáncer de ovarios se reduce en individuos que han estado embarazados, han tomado anticonceptivos orales (pildoras de control natal) , y han tenido ligadura de trompas .

Etapas de cáncer de ovarios Los métodos de la invención pueden involucrar tratamiento de cualquier etapa o grado de cáncer de ovarios. El cáncer de ovarios se divide en etapas con base en tres categorías: las categorías T, N, y M, y se divide en grados además con base en la morfología celular. Las categorías T se basan en la ubicación del cáncer, es decir, si el cáncer está confinado al ovario u ovarios. N se evalúa con base en si el cáncer se ha esparcido a los nodos linfáticos, y se basa en si el cáncer se ha esparcido a órganos distantes. Estas categorías se describen en detalle mas adelante .

La categoría T se divide en tres sub-categorías : TI, donde el cáncer está confinado a uno o ambos ovarios; T2, donde el cáncer se extiende a partir de uno o ambos ovarios hacia tejidos pélvicos, y T3 , donde el cáncer está en uno o ambos ovarios y se ha expandido al revestimiento abdominal (peritoneo) por fuera de la pelvis.

Cada una de las categorías TI, T2 , y T3 es adicional -mente sub-dividida . TI se divide en Tía, Tlb, y Tic. En cáncer etapa Tía, el cáncer está solamente dentro de un ovario, no está en el exterior del ovario, no penetra al tejido que cubre al" ovario (la cápsula) , y no está en fluido tomado a partir de la pelvis. En cáncer de etapa Tlb, el cáncer está dentro de ambos ovarios, pero de otra forma tiene las características de cáncer de etapa Tía. En cáncer de etapa Tic, el cáncer está en uno o ambos ovarios y esta ya sea en el exterior de un ovario, ha crecido a través de la cápsula de un ovario, o está en fluido tomado a partir de la pelvis.

T2 es de la misma manera dividido en las sub-categorías T2a, T2b, y T2c. En cáncer de etapa T2a, el cáncer se ha metastasizado al útero o a las trompas de Falopio, pero las células de cáncer no se encuentran en fluido tomado a partir de la pelvis. En cáncer de etapa T2b, el cáncer se ha esparcido a tejidos pélvicos diferentes que el útero y trompas de Falopio, pero no está en fluido tomado a partir de la pelvis. En cáncer de etapa T2c, el cáncer se ha esparcido al útero, trompas de Falopio y/u otros te idos pélvicos y también está en fluido tomado a partir de la pelvis.

T3 también se divide en tres sub-categorías: T3a, T3b, y T3c. En cáncer de etapa T3a, las metástasis pueden observarse solamente bajo un microscopio. En cáncer de etapa T3b, las metástasis son visibles, pero ningún tumor es mayor de 2 cm. En cáncer de etapa T3c, las metástasis son mayores de 2 cm.

La categorización N se basa en si el cáncer se ha esparcido a nodos linfáticos regionales. El cáncer se califica NO si no hay involucramiento de nodos linfáticos y se califica NI si células de cáncer se encuentran en los nodos linfáticos cercanos al tumor de ovarios .

La categorización M se basa en si el cáncer se ha esparcido a órganos distantes, tales como el hígado, pulmones, o nodos linfáticos no regionales. Si no hay expansión distante, el cáncer se califica MO . Si el cáncer se ha esparcido a órganos distantes, incluyendo al interior del hígado y los pulmones, se califica MI.

Finalmente el cáncer se califica con base en su morfología, donde un mayor grado indica una mayor probabilidad de metastasisarse . Grado 1 indica un tumor bien diferenciado que parece similar a tejido de ovarios normal. Grado 2 indica un tumor que no está bien diferenciado; parece menos como tejido de ovarios que un tumor Grado 1. Un tumor Grado 3 se caracteriza como siendo pobremente diferenciado y no parece tejido de ovarios .

Una vez que las calificaciones T, N, y M de un paciente han sido determinadas, esta información se combina en un proceso llamado agrupamiento de etapas para determinar la etapa, expresada en números romanos de etapa I (la menos avanzada) a etapa IV (la mas avanzada) . La siguiente tabla señala las varias etapas de cáncer de ovarios.

Tabla 3 Etapa Sub-etapa T, N, M Descripción I IA Tía, NO, MO Cáncer en un ovario, confinado al interior del ovario sin cáncer en la superficie exterior del ovario. Células de cáncer no encontradas en lavados del abdomen y pelvis.

IB Tlb, NO, MO Igual que IA, con cáncer en ambos ovarios.

IC Tic, NO, MO IA o IB, con uno o mas de los siguientes: cáncer en la superficie externa de por lo menos un ovario; en el caso de tumores císticos, la cápsula se ha roto; células de cáncer encontradas en fluido o lavados a partir del abdomen .

II IIA T2a, NO, MO Cáncer se ha esparcido a o ha invadido el útero, trompas de Falopio, o ambos. Células de cáncer no encontradas en el abdomen.

IIB T2b, NO, MO Cáncer se ha esparcido a órganos pélvicos tales como la vejiga, colon sigmoideo, o recto. Células de cáncer no encontradas en el abdomen .

IIC T2c, NO, MO IIA o IIB, con células de cáncer encontradas en el abdomen .

III IIIA T3a, NO, MO Biopsias muestran depósitos de cáncer en el revestimiento del abdomen superior bajo el microscopio. Cáncer no se ha esparcido a nodos linfáticos .

IIIB T3b, NO, MO Depósitos de cáncer en el abdomen son suficientemente grandes para ver, pero menores que 2 cm a través. El cáncer no se ha esparcido a los nodos linfáticos.

IIIC Cualquier T, NI, MO Cáncer está en uno o ambos ovarios . Cáncer ya y T3c, NO, MO sea se ha esparcido a los nodos linfáticos (cualquier T, NI, MO) o está visible en depósitos mayores que 2 cm a través en el abdomen (T3c, NO, MO) .

IV n/d Cualquier T, Cáncer se ha esparcido por fuera del abdomen.

Cualquier N, MI Terapia estándar para cáncer de ovarios Los métodos de la invención pueden incluir, además de administración de conjugados descritos anteriormente, tratamiento usando opciones terapéuticas estándar, reconocidas en la materia, para un paciente teniendo cáncer de ovarios. La terapia o terapias estándar dependerán de la etapa del cáncer. Los métodos de la invención también pueden depender de la etapa del cáncer. Los métodos de la invención también pueden incluir administrar un conjugado después de tratamiento previo con una o mas terapias estándar para cáncer de ovarios (v.gr. , después de falla de la terapia estándar) .

En cáncer no metastásico bien diferenciado o moderadamente diferenciado (v.gr., Grado 1 o 2), remoción quirúrgica del tumor y tejido circundante (v.gr. , salpingo-oforectomia bilateral con omentectomia) es frecuentemente suficiente para tratamiento de enfermedad Etapa IA o IB. Si el tumor es Grado 3, densamente adherente, o Etapa IC, el tratamiento puede además incluir P-32 intraperitoneal o terapia de radiación o quimioterapia sistémica con base en platinos (v.gr. , carboplatina o cisplatina) solos o en combinación con un agente de alquilación. Otras terapias de primera línea incluyen quimioterapia sistémica con base en platinos (v.gr., carboplatina o cisplatina) con paclitaxel o administración de una mostaza de nitrógeno (v.gr. , ciclofosfamida, mecloretamina (mustina) , uramustina (mostaza de uracilo) , melfalano, clorambucilo, e ifosfamida) , nitrosoureas (v.gr., carmustina y estreptozocina) , alquil sulfonatos (v.gr., busulfa-no) , o doxorubicina .

Si la terapia de primera línea falla, topotecano y hexametilamina son aprobados por la FDA como terapias de segunda línea. Otros fármacos usados en terapia de segunda línea incluyen doxorubicina , Doxil (inyección de liposoma de doxorubicina HCl) , Hexalen (altretamina) , hexamtilmelamina, Ifex (ifosfamida) , VePesid (etopósido (VP-16) ) , 5-FU (5-fluorouracilo) , gemcitabina, y vinorelbina. Estos fármacos pueden ser administrados solos o en combinación entre sí, con agentes de primera línea, o con otros terapéuticos anti-cáncer (v.gr. , aquellos descritos en la presente.

Tratamiento de cáncer resistente a fármacos El paciente siendo tratado en un método de la presente invención puede tener un cáncer que es resistente a fármacos. Debido a que los conjugados de la invención tienen actividad aun en cánceres que han demostrado resistencia a agentes quimiotera-péuticos estándar, los métodos de la invención son particularmente útiles para tratar tales cánceres resistentes a fármacos.

Resistencia a fármacos típicamente surge de seguir tratamiento con un quimioterapéutico particular. Resistencia a múltiples fármacos (MDR) puede surgir cuando una célula sobre-produce al transportador de eflujo de p-glicoproteína (P-gp) . Como muchos fármacos quimioterapéuticos pueden ser sustratos de P-gp, incluyendo vinblastina, doxorubicina, etopósido, colquici-na, y paclitaxel, sobre-expresión de P-gp en una célula de cáncer puede llevar a resistencia de amplio espectro hacia agentes quimioterapéuticos .

Previamente se ha mostrado que paclitaxel conjugado a Angiopep-l o Angiopep-2 no son sustratos P-gp y por ende no deben ser sensibles a sobre-expresión de P-gp en células de tumores; ver, v.gr., páginas 46-47 y figura 9A de la publicación de solicitud internacional WO 2007/009229. Por ende, los conjugados de fármaco descritos en la presente son útiles para tratar a pacientes teniendo cáncer que son resistentes a fármacos quimioterapéuticos estándar.

Captación acrecentada hacia células expresando LRP Los métodos de la invención pueden ser especialmente útiles para tratar cánceres que expresan al receptor de proteína relacionada con lipoproteína (LRP) . El receptor de LRP se expresa en la superficie de células, y es capaz de ligarse a varios sustratos incluyendo aprotinina, ß-amiloide, activador de plasminógeno de tejido (tPA) , melano-transíerrina, y péptido relacionado con receptor (RAP) . Los péptidos descritos en la presente fueron diseñados con base en las secuencias de dominio kunitz de consenso que actúan como ligandos del receptor de LRP (ver, v.gr., publicación PCT WO 2004/060403). Captación de los conjugados incluyendo Angiopep-1 o Angiopep-2 se inhibe por ligandos LRP, con ello indicando el involucramiento de LRP en este proceso. Específicamente, los ligandos de LRP RAP (200 nM) y aprotinina (10 µ?) son capaces de reducir la captación cerebral de un conjugado de Angiopep. Angiopep-2 (10 o 100 µ?) es similarmente capaz de reducir la captación de los conjugados hacia las células (figuras 6A y 6B) .

Células de ovarios expresan altos niveles de LRP (figura 7) . De manera acorde, cánceres originándose a partir de células de ovarios son bien adecuados para tratamiento usando terapéuticos que apuntan a células expresando LRP.

Los resultados descritos en las figuras 4A y 4B se obtuvieron usando una perfusión cerebral de rata in situ. Ratas macho Sprague Dawley fueron anestesiadas con 40 m/kg i.p. de pentobarbital sódico (Nembutal, Abbott Laboratories, North Chicago, IL, EE. UU. ) . La región de cuello fue rasurada y la arteria carótida común se expuso. La arteria carótida externa fue ligada, pero la arteria pterigopalatina no fue ocludida. Un catéter PE-60 lleno con solución salina heparinizada al 0.9% (100 IU/mL) se insertó en la arteria carótida común ante ligación. Una tableta de calentamiento enlazada a dispositivo controlador de retroalimentación YSI (Yellow Spring Instruments, Yellow Springs, OH, EE . UU.) se usó para mantener la temperatura del cuerpo de rata a 37°C. El catéter PE-60 se unió a una jeringa de vidrio llena con el trazador; con o sin inhibidores, en una solución salina fisiológica regulada por bicarbonato (Smith QR, Pharm. Biotechnol . 8:285-307, 1996) montados en una bomba de infusión Harvard (Harvard Biosciences, South Natick, A, EE . UU.) mantenida a 37°C. Experimentos marcados duales se llevaron a cabo para estudiar la captación cerebral. [14C] Sacarosa se usó como un marcador de volumen vascular. Perfusión se comenzó ante corte al corazón para detener el flujo sanguíneo al cerebro. El fluido fue perfundido hacia la arteria carótida común a una tasa de 5 ml/min por un periodo de 15-300 s. Al final de la perfusión, la rata fue decapitada y el cerebro se cosechó. El hemisferio izquierdo del cerebro fue disectado en regiones como se describe previamente (Takasato et al., Am. J. Physiol . 247:H484-93, 1984). Las muestras se pesaron y se contaron usando al contador gamma (Cobra 600) para determinar al fármaco marcado con 12SI . En los estudios de inhibición, los ligandos de LRP o péptidos Angiopep fueron co-perfundidos en las concentraciones indicadas.

Terapia de combinación Los métodos de la invención pueden incluir administración de un segundo agente terapéutico o tratamiento con una segunda terapia (v.gr., un agente terapéutico o terapia que es estándar en la materia) . Agentes terapéuticos ejemplares incluyen abarelix, aldesleucina , alemtuzumab, alitertinoína , alopurinol, altretamina, amifostina, anakinra, anastrozola, trióxido de arsénico, asparaginasa, azacitidina, BCG Live, bevacuzimab, bexaroteno, bleomicina, bleomicina, bortezombi, bortezomib, busulfano, busulfano, calusterona, capecitabina, carboplatina , carmustina, celecoxib, cetuximab, clorambucilo, cisplatina, cladribina, clofarabina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, daunorubicina, daunomicina, decitabina, denileuci-na, denileucina difitox, dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina, propionato de dromostañoIon, eculizumab, epirubicina (v.gr., HC1) , epoctina alfa, eríotinib, estramustina, etopósido (v.gr., fosfato), exemestano, fenantilo (v.gr., citrato) , fligrastim, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, 5-FU, fulvestrant, gefitinib, gemcitabina (v.gr., HC1) , gemtuzumab ozogamicina, goserelina (v.gr., acetato), histrelina (v.gr., acetato), hidroxiurea, ibritumomab tiuxetano, idarubicina, ifosfamida, imatinib (v.gr., mesilato) , interferón alfa-2b, irinotecano, ditosilato de lapatinib, lenalidomida , letrozola, leucovorina, leurpolida (v.gr., acetato), levamisola, lomustina, CCNU, mecloretamina (mostaza de nitrógeno), megestrol, melfalano (L-PAM) , mercaptopurina (6-MP) , mesna, metotrexato, metoxsaleno, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, fenopropionato de nandrolo-na, nelarabina, nofetumomab, oprelvecina, oxaliplatina , paclita-xel, palifermina, pamidronato, panitumumab, pegademasa, pegaspar-gasa, pegfilgrastim, peginterferón alfa-2b, pemetrexed (v.gr., disódico) , pentostatina , pipobromano, plicamicina (mitramicina) , porfímero (v.gr. , sódico) , procarbazina, quinacrina, rasburicasa, rituximab, sargramostim, sorafenib, estreptozocina, sunitinib (v.gr., maleato) , talco, tamoxifeno, temozolomida, tenipósido (VM-26) , testolactona , talidomida, tioguanina (6-TG) , tiotepa, topotecano (v.gr., HCl) , toremifeno, Tositumomab/I -131 (tositumo-mab) , trastuzumab, tretinoína (ATRA) , mostaza de uracilo, valrubicina, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vorinostat, zoledronato, y ácido zoledrónico. Derivados ejemplares de paclitaxel se describen en la patente US 6,911,549, los contenidos enteros de la cual se incorporan en la presente por referencia .

Otros agentes que pueden usarse incluyen agentes de anti-estrógeno tales como tamoxifeno (v.gr., citrato) , raloxife-no, toremifeno, y SCH 57068.

Conjugados de polipéptido Los métodos de la invención incluyen administración de un conjugado de péptido-agente anti-cáncer, tal como aquellos descritos en las solicitudes de patente US 2006/0182684, y 2006/0189515, y la solicitud provisional US 61/008,880, solicitada el 20 de diciembre de 2007. Tales conjugados pueden incluir cualquier polipéptido descrito en la presente, un agente capaz de tratar cáncer de ovarios tal como paclitaxel o un análogo de paclitaxel (v.gr., aquellos descritos en la presente), y un enlazador (v.gr. , aquellos descritos en la presente) . Conjugados de paclitaxel se ejemplifican por A G1005, el cual incluye al péptido AngioPep-2 (SEQ ID NO: 97) conjugado a tres moléculas de paclitaxel a través de enlaces de éster en las terminales N, y a través de Usinas en las posiciones 10 y 15.

Los conjugados, en ciertas formas de realización, pueden cruzar la barrera hematoencefálica (BBB) o pueden de preferencia ser apuntados a ciertos tipos de células, tales como células de ovarios, hígado, pulmón, riñon, músculo o pueden apuntarse a células de tumor (de cualquier tipo celular descrito en la presente) . Estos agentes conjugados a estos péptidos pueden exhibir captación incrementada en las células apuntadas, por ejemplo, por endocitosis mediada por receptor (v.gr., a través de un receptor de LRP) . Los agentes conjugados pueden, ya sea alternativamente o además, exhibir estabilidad incrementada o expulsión reducida de la célula (v.gr., debido a eflujo mediado por P-glicoproteína) . Conjugados pueden además tener actividad en células de cáncer que son resistentes a quimioterapias estándar.

Polipéptidos Los métodos de la invención pueden incluir administración de un conjugado incluyendo cualquier polipéptido descrito en la presente, por ejemplo, cualquiera de los polipéptidos descritos en la Tabla 4 (v.gr., un polipéptido definido en cualquiera de las SEQ ID NOs: 1-105 y 107-116 tales como las SEQ ID NOs: 1-97, 99, 100, 101, o 107-116), o cualquier fragmento, análogo, derivado, o variante del mismo. En ciertas formas de realización, el polipéptido puede tener por lo menos 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, o aun 100% de identidad con un polipéptido descrito en la presente. El polipéptido puede tener una o mas (v.gr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o 15) sustituciones con relación a una de las secuencias descritas en la presente. Otras modificaciones se describen en mayor detalle mas adelante.

Los conjugados también pueden presentar fragmentos de estos polipéptidos (v.gr., un fragmento funcional) . En ciertas formas de realización, los fragmentos son capaces de ingresar o acumularse en un tipo de célula particular (v.gr., ovario, hígado, pulmón, riñon, bazo, o músculo) o capaces de cruzar la BBB. Truncaciones del polipéptido pueden ser de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8 , 9, 10 , 11 , 12 , o mas aminoácidos a partir de ya sea la terminal N del polipéptido, la terminal C del polipéptido, o una combinación de las mismas. Otros fragmentos incluyen secuencias donde porciones internas del polipéptido se suprimen.

Polipéptidos adicionales pueden identificarse mediante usar uno de los ensayos o métodos descritos en la publicación de solicitud de patente US 2006/0189515, la cual se incorpora en la presente por referencia, o por cualquier método conocido en la materia. Por ejemplo, un vector candidato puede ser producido por síntesis convencional de polipéptidos, conjugarse con Taxol y administrarse a un animal de laboratorio. Un vector biológicamente activo puede identificarse, por ejemplo, con base en su eficacia para incrementar la supervivencia de un animal inyectado con células de tumor y tratado con el conjugado según se compara con un control el cual no ha sido tratado con un conjugado (v.gr., tratado con el agente no conjugado) .

En otro ejemplo, un polipéptido biológicamente activo puede ser identificado con base en su ubicación en la parénquima en un ensayo de perfusión cerebral in situ. Ensayos de BBB in vitro, tales como el modelo desarrollado por CELLIAL Technolo-gies, pueden usares para identificar tales vectores.

Ensayos para determinar acumulación en otros tejidos pueden llevarse a cabo también. Conjugados marcados de un polipéptido pueden administrarse a un animal, y acumulación en diferentes órganos puede medirse. Por ejemplo, un polipéptido conjugado a un marcador detectable (v.gr., un marcador de espectroscopia de fluorescencia casi IR tal como Cy5.5) permite visualización in vivo. Tal un polipéptido puede administrarse a un animal, y la presencia del polipéptido en un órgano puede detectarse, por ende permitiendo la determinación de la tasa y cantidad de acumulación del polipéptido en el órgano deseado. En otras formas de realización, el polipéptido puede ser marcado con un isótopo radioactivo (v.gr. , 12SI) . El polipéptido es entonces administrado a un animal. Después de un periodo de tiempo, el animal se sacrifica y los órganos se extraen. La cantidad de radio- isótopo en cada órgano puede entonces medirse usando cualquier medio conocido en la materia. Mediante comparar la cantidad de un polipéptido candidato marcado en un órgano particular con relación a la cantidad de un polipéptido de control marcado, la habilidad del polipéptido candidato para obtener acceso a y acumularse en un tejido particular puede evaluarse. Controles negativos apropiados incluyen cualquier péptido o polipéptido conocido no por ser transportado de manera eficiente hacia un tipo de célula particular.

Tabla 4 SEQ ID NO: 1 T F V Y G G C R A K R N N F K S A E D 2 T F Q Y G G C M G N G N N F V T E K E 3 P F F Y G G C G G N R N N F D T E E Y 4 S F Y Y G G C L G N K N N Y L R E E E 5 T F F Y G G C R A K R N N F K R A K Y 6 T F F Y G G C R G K R N N F K R A K Y 7 T F F Y G G C R A K K N N Y K R A K Y 8 T F F Y G G C R G K K N N F K R A K Y 9 T F Q Y G G C R A K R N N F K R A K Y 10 T F Q Y G G C R G K K N N F K R A K Y 11 T F F Y G G C L G K R N N F K R A K Y 12 T F F Y G G S L G K R N N F K R A K Y 13 P F F Y G G C G G K K N N F K R A K Y 14 T F F Y G G C R G K G N N Y K R A K Y 15 P F F Y G G C R G K R N N F L R A K Y 16 T F F Y G G C R G K R N N F K R E K Y 17 P F F Y G G C R A K K N N F K R A K E 18 T F F Y G G C R G K R N N F K R A K D 19 T F F Y G G C R A K R N N F D R A K Y 20 T F F Y G G C R G K K N N F K R A E Y 21 P F F Y G G C G A N R N N F K R A K Y 22 T F F Y G G C G G K K N N F K T A K Y 23 T F F Y G G C R G N R N N F L R A K Y 24 T F F Y G G C R G N R N N F K T A K Y 25 T F F Y G G S R G N R N N F K T A K Y 26 T F F Y G G C L G N G N N F K R A K Y 27 T F F Y G G C L G N R N N F L R A K Y 28 T F F Y G G C L G N R N N F K T A K Y 29 T F F Y G G C R G N G N N F K S A K Y 30 T F F Y G G C R G K K N N F D R E K Y 31 T F F Y G G C R G K R N N F L R E K E 32 T F F Y G G C R G K G N N F D R A K Y 33 T F F Y G G S R G K G N N F D R A K Y 34 T F F Y G G C R G N G N N F V T A K Y 35 P F F Y G G C G G K G N N Y V T A K Y 36 T F F Y G G C L G K G N N F L T A K Y 37 S F F Y G G C L G N K N N F L T A K Y 38 T F F Y G G C G G N K N N F V R E K Y 39 T F F Y G G C M G N K N N F V R E K Y 40 T F F Y G G S M G N K N N F V R E K Y 41 P F F Y G G C L G N R N N Y V R E K Y 42 T F F Y G G C L G N R N N F V R E K Y 43 T F F Y G G C L G N K N N Y V R E K Y 44 T F F Y G G C G G N G N N F L T A K Y 45 T F F Y G G C R G N R N N F L T A E Y 46 T F F Y G G C R G N G N N F K S A E Y 47 P F F Y G G C L G N K N N F K T A E Y 48 T F F Y G G C R G N R N N F K T E E Y 4 9 T F F Y G G C R G K R N N F K T E E D 50 ? F F Y G G C G G N G N N F V R E K Y 51 S F F Y G G C M G N G N N F V R E K Y 52 ? F F Y G G C G G N G N N F L R E K Y 53 t F F Y G G C L G N G N N F V R E K Y 54 S F F Y G G C L G N G N N Y L R E K Y 55 t F F Y G G S L G N G N N F V R E K Y 56 t F F Y G G C R G N G N N F V T A E Y 57 t F F Y G G C L G K G N N F V s A E Y 58 t F F Y G G C L G N R N N F D R A E Y 59 t F F Y G G C L G N R N N F L R E E Y 60 t F F Y G G C L G N K N N Y L R E E Y 6 1 ? F F Y G G C G G N R N N Y L R E E Y 62 ? F F Y G G S G G N R N N Y L R E E Y 63 ? R ? D F C L E P P Y T G P C V A R I 64 A R I I R Y F Y N A K A G L C Q T F V 65 Y G G c R A K R N N Y K S A E D C M R 66 ? D F c L E P P Y T G P C V A R I I R 67 t F F Y G G C R G K R N N F K T E E Y 68 ? F F Y G G C R G K R N N F K T E E Y 69 t F Y Y G G C R G K R N N Y K T E E Y 70 t F F Y G G s R G K R N N F K T E E Y 71 C ? F F Y G c C R G K R N N F K T E E 72 t F F Y G G c R G K R N N F K T E E Y 73 C ? F F Y G s C R G K R N N F K T E E 74 t F F Y G G s R G K R N N F K T E E Y 75 ? F F Y G G c R G K R N N F K T E E Y 76 t F F Y G G c R G K R N N F K T K E Y 77 t F F Y G G K R G K R N N F K T E E Y 78 t F F Y G G c R G K R N N F K T K R Y 79 t F F Y G G K R G K R N N F K T A E Y 80 t F F Y G G K R G K R N N F K T A G Y 8 1 t F F Y G G K R G K R N N F K R E K Y 82 t F F Y G G K R G K R N N F K R A K Y 83 t F F Y G G c L G N R N N F K T E E Y 84 t F F Y G C G R G K R N N F K T E E Y 85 t F F Y G G R C G K R N N F K T E E Y 86 t F F Y G G C L G N G N N F D T E E E 87 t F Q Y G G C R G K R N N F K T E E Y 88 Y ? ? E F G T F N T K G C E R G Y R F 8 9 R F ? Y G G c L G N M N N F E T L E E 90 R F ? Y G G c L G N K N N F L R L K Y 91 R F ? Y G G c L G N K N N Y L R L K Y 92 ? ? ? R K R K K Q R V K I A Y E E I F 93 ? t ? R K R K K Q R V K I A Y 94 R G G R L S Y s R R F S T S T G R 95 R R L S Y S R R R F 96 R Q I K I F Q N R R K K K 97 T F F Y G G S R G K R N N F K T E E Y 98 ? R ? D F C L E P P Y T G P C V A R I I R Y F Y N A KA G L C Q t F V Y G G C R A K R N N F K S A E D C M R T C G G A 99 ? F F Y G G C R G K R N N F K T K E Y 100 R F ? Y G G C L G N K N N Y L R L K Y 101 ? F F Y G G C R A K R N N F K R A K Y 102 ? A ? A G L C Q T F V Y G G C L A K R N N F E S A E D C M R T C G G A 103 Y G G C R A K R N N F K S A E D C M R T 104 G L C Q T F V Y G G C R A K R N N F K s 105 L C Q T F V Y G G C E A K R N N F K S A 107 T F F Y G G S R G K R N N F K T E E Y 108 R F F Y G G S R G K R N N F K T E E Y 109 R F F Y G G S R G K R N N F K T E E Y 110 R F F Y G G S R G K R N N F R T E E Y 111 T F F Y G G S R G K R N N F R T E E Y 112 T F F Y G G S R G R R N N F R T E E Y 113 c T F F Y G G S R G K R N N F K T E E Y 114 T F F Y G G S R G K R N N F K T E E Y C 115 c T F F Y G G S R G R R N N F R T E E Y 116 T F F Y G G S R G R R N N F R T E E Y C El péptido No. 5 incluye la secuencia de la SEQ ID NO: 5 y es amidado en su terminal C (ver, por ejemplo, figura 1) .

El péptido No. 67 incluye la secuencia de la SEQ ID NO: 67 y es amidado en su terminal C (ver, por ejemplo, figura 1) .

El péptido No. 76 incluye la secuencia de la SEQ ID NO: 76 y es amidado en su terminal C (ver, por ejemplo, figura 1) .

El péptido No. 91 incluye la secuencia de la SEQ ID NO: 91 y es amidado en su terminal C (ver, por ejemplo, figura 1) .

El péptido No. 107 incluye la secuencia de la SEQ ID NO: 107 y es acetilado en su terminal N.

El péptido No. 109 incluye la secuencia de la SEQ ID NO: 109 y es acetilado en su terminal N.

El péptido No. 110 incluye la secuencia de la SEQ ID NO: 110 y es acetilado en su terminal N.

Los grupos amina de Angiopep-1 (SEQ ID NO: 67) y Angiopep-2 (SEQ ID NO: 97) han sido usados como sitios para conjugación de agentes. Para estudiar el rol de grupos amina en la conjugación y su impacto en la capacidad de transporte global de estos vectores, nuevos vectores, con base en secuencias Angiopep-1 y Angiopep-2, se diseñaron con grupos amina reactivos variables y carga global variable. Estos polipéptidos se muestran en la Tabla 5.

Tabla 5: Vectores con objetivos de grupo amina variables Nombre de Secuencias de Polipéptido Aminas Carga SEQ Polipéptido reactivas ID (posiciones) No.

Angiopep-3* Ac1-TFFYGGSRGKRN FKTEEY 2 (10, 15) + 1 107 Angiopep-4b RFFYGGSRGKRN FKTEEY 3 (1, 10, IB) +3 108 Angiopep-4a Ac'-RFFYGGSRGKRNNFKTEEY 2 (10, 15) +2 109 Angiopep-5 Ac1-RFFYGGSRGKRNNFRTEEY 1 (10) +2 110 Angiopep-6 TFFYGGSRGKR NFRTEEY 2 (1, 10) ' +2 111 Angiopep-7 TFFYGGSRGRRN FRTEEY 1 (1) +2 112 * Angiopep-3 es una forma acetilada de Angiopep-2 1 Ac representa acetilación.

Polipéptidos modificados Los métodos de la invención también pueden incluir administración de un conjugado que incluye un polipéptido con una modificación a una secuencia de aminoácidos descrita en la presente (v.gr., polipéptido teniendo una secuencia descrita en cualquiera una de las SEQ ID NOs : 1-105 y 107-112 tal como AngioPep-3, -4a, -4b, -5, -6, o -7). En ciertas formas de realización, la modificación no destruye significativamente una actividad biológica deseada. En algunas formas de realización, la modificación puede ocasionar una reducción en la actividad biológica (v.gr., por al menos 5%, 10%, 20%, 25%, 35%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, o 95%) . En otras formas de realización, la modificación no tiene efecto en la actividad biológica o puede incrementar (v.gr., por al menos 5%, 10%, 25%, 50%, 100%, 200%, 500%, o 1,000%) la actividad biológica del polipéptido original. El polipéptido modificado puede tener o puede optimizar una o mas de las características de un polipéptido de la invención las cuales, en algunas instancias pueden ser necesarias o deseables. Tales características incluyen estabilidad in vivo, bio-disponi-bilidad, toxicidad, actividad inmunológica , o identidad inmunoló-gica .

Polipéptidos usados en la invención pueden incluir aminoácidos o secuencias modificadas ya sea por procesos naturales, tales como procesamiento post-translacional , o por técnicas de modificación química conocidas en la materia. Modificaciones pueden ocurrir en cualquier punto en un polipéptido incluyendo el esqueleto del polipéptido, las cadenas secundarias de aminoácidos y las terminales amino o carboxi . El mismo tipo de modificación puede estar presente en los mismos o variables grados en varios sitios en un polipéptido dado, y el polipéptido puede contener mas de un tipo de modif cación. Polipéptidos pueden ramificarse como resultado de ubiquitinacion, y pueden ser cíclicos, con o sin ramificación. Polipéptidos cíclicos, ramificados, y ramificados cíclicos pueden resultar de procesos naturales post -translacionales o pueden hacerse sintéticamente. Otras modificaciones incluyen pegilación, acetilación, acilación, adición de grupo acetomidometilo (Acm) , ADP-ribosilación, alquilación, amidación, biotinilación, carbamoilación, carboxietilación, esterificación, unión covalente a fiavina, unión covalente a una fracción heme, unión covalente de un nucléot do o derivado de nucleótido, unión covalente del fármaco, unión covalente de un marcador (v.gr., fluorescente o radioactivo) , unión covalente de un lípido o derivado de lípido, unión covalente de fosfatidilinositol , reticulación, ciclización, formación de enlace de disulfuro, desmetilación, formación de reticulaciones covalentes, formación de cistina, formación de piroglutamato, formilación, gamma-carboxilación, glicosilación, formación de ancla de GPI, hidroxilación, yodación, metilación, miristoilación, oxidación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, senoilación, sulfatación, adición mediada por ARN de transferencia de aminoácidos a proteínas tales como arginilacion y ubiquitinacion.

Un polipéptido modificado también puede incluir una inserción, supresión, o sustitución de aminoácidos, ya sea conservadora o no conservadora (v.gr., D-aminoácidos , desaminoácidos) en la secuencia de polipéptido (v.gr., donde tales cambios no alteran sustancialmente la actividad biológica del polipéptido) .

Sustituciones pueden ser conservadoras (es decir, en donde un residuo se reemplaza por otro del mismo tipo o grupo general) o no conservadoras (es decir, en donde un residuo se reemplaza por un aminoácido de otro tipo) . Además, un aminoácido que no se presenta en la naturaleza puede ser sustituido por un aminoácido que se presenta en la naturaleza (es decir, una sustitución de aminoácidos conservadora que no se presenta en la naturaleza o una sustitución de aminoácidos no conservadora que no se presenta en la naturaleza) .

Polipéptidos hechos de manera sintética pueden incluir sustituciones de aminoácidos no codificados naturalmente por ADN (v.gr., aminoácido no como se presenta en la naturaleza o no natural) . Ejemplos de aminoácidos no como se presentan en la naturaleza incluyen D-aminoácidos , un aminoácido teniendo un grupo acetilaminometilo unido a un átomo de azufre de una cisteína, un aminoácido pegilado, los aminoácidos omega de la fórmula NH2 (CH2) nCOOH donde n es 2-6, aminoácidos no polares neutros, tales como sarcosina, t-butil alanina, t-butil glicina, N-metil isoleucina, y norleucina. Fenilglicina puede sustituirse por Trp, Tyr, o Phe ; citrulina y sulfóxido de metionina son no polares neutros, ácido cisteico es ácido, y ornitina es básico. Prolina puede sustituirse con hidroxiprolina y retener las propiedades que confieren conformación.

Análogos pueden generarse por mutagénesis de sustitución y retener la actividad biológica del polipéptido original. Ejemplos de sustituciones identificadas como "sustituciones conservadoras" se muestran en la Tabla 3. Si tales sustituciones resultan en un cambio no deseado, entonces otro tipo de sustituciones, denominadas "sustituciones ejemplares" en la Tabla 6, o como se describe adicionalmente en la presente en referencia a clases de aminoácidos, se introducen y los productos se clasifi-can.

Modificaciones sustanciales en función o identidad inmunológica se logran mediante seleccionar sustituciones que difieren significativamente en su efecto sobre mantener (a) la estructura del esqueleto de polipéptido en el área de sustitución, por ejemplo, como una conformación de hoja o hélice, (b) la carga o hidrofobia de la molécula en el sitio objetivo, o (c) el volumen de la cadena secundaria. Residuos que aparecen en la naturaleza se dividen en grupos con base en propiedades de cadena secundaria comunes : (1) hidrófobos: norleucina, metionina (Met) , alanina (Ala) , valina (Val) , leucina (Leu) , isoleucina (lie) , histidina (His) , triptofano (Trp) , tirosina (Tyr) , fenilalanina (Phe) , (2) hidrófilos neutros : cisteína (Cys) , serina (Ser) , treonina (Thr) , (3) ácidos/cargados negativamente: ácido aspártico (Asp) , ácido glutámico (Glu) , (4) básicos: asparagina (Asn) , glutamina (Gln) , histidina (His) , lisina (Lys) , arginina (Arg) , (5) residuos que tienen influencia en orientación de cadena: glicina (Gly) , prolina (Pro), (6) aromáticos: triptofano (Trp), tirosina (Tyr), fenilalanina (Phe) , histidina (His) , (7) polares: Ser, Thr, Asn, Gln, (8) básicos cargados positivamente: Arg, Lys, His; y (9) cargados: Asp, Glu, Arg, Lys, His.

Otras sustituciones conservadoras de aminoácidos se listan en la Tabla 3.

Tabla 6: Sustituciones de aminoácidos Residuo original Sustitución ejemplar Sustitución conservadora Ala (A) Val, Leu, lie Val Arg ( ) Lys, Gln, Asn Lys Asn (N) Gln, His, Lys, Arg Gln Asp (D) Glu Glu Cys (C) Ser Ser Gln (Q) Asn Asn Glu (E) Asp Asp Gly (G) Pro Pro His (H) Asn, Gln, Lys, Arg Arg He (I) Leu, Val, Met, Ala, Phe, norleucina Leu Leu (L) Norleucina, He, Val, Met, Ala, Phe He Lys (K) Arg, Gln, Asn Arg Met (M) Leu, Phe, lie Leu Phe (F) Leu, Val, lie, Ala Leu Pro (P) Gly Gly Ser (S) Thr Thr Thr (T) Ser Ser Trp (W) Tyr Tyr Tyr (Y) Trp, Phe, Thr, Ser Phe Val (V) He, Leu, Met, Phe, Ala, norleucina Leu Análogos adicionales Los conjugados usados en la invención pueden incluir cualquier análogo de polipéptido de aprotinina conocido en la materia. Por ejemplo, la patente US 5,807,980 describe inhibidores derivados de Inhibidor de Tripsina Pancreática Bovina (aprotinina) así como un método para su preparación y uso terapéutico, incluyendo al polipéptido de la SEQ ID NO: 102. Estos polipéptidos han sido usados para el tratamiento de una condición caracterizada por una apariencia o cantidad anormal de factor e tejido y/o factor Villa tal como trombosis anormal. La patente US 5,780,265 describe inhibidores de serina proteasa capaces de inhibir kalikreína de plasma, incluyendo SEQ ID NO: 103. La patente US 5,188,668 describe variantes de Inhibidor de Tripsina Pancreática Bovina, incluyendo la SEQ ID NO: 105. La secuencia de aminoácidos de aprotinina (SEQ ID NO: 98) , la secuencia de aminoácidos de Angiopep-1 (SEQ ID NO: 67) , y la SEQ ID NO: 104, así como algunas secuencias de análogos biológicamente activos pueden encontrarse en la publicación de solicitud internacional O 2004/060403.

Una secuencia de nucleótidos ejemplar que codifica un análogo de aprotinina se ilustra en la SEQ ID NO: 106 (atgagaccag atttctgcct cgagccgccg tacactgggc cctgcaaagc tcgtatcatc cgttacttct acaatgcaaa ggcaggcctg tgtcagacct tcgtatacgg cggctgcaga gctaagcgta acaacttcaa atccgcggaa gactgcatgc gtacttgcgg tggtgcttag; número de acceso Genbank X04666) . Esta secuencia codifica una lisina en la posición 16 en lugar de una valina, como se encuentra en la SEQ ID NO: 98. Una mutación en la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO: 106 puede introducirse por métodos conocidos en la materia para cambiar el producto del polipéptido de la SEQ ID NO: 98 teniendo una valina en la posición 16. Mutaciones o fragmentos adicionales pueden ser obtenidos usando cualquier técnica conocida en la materia.

Otros ejemplos de análogos de aprotinina pueden encontrarse mediante llevar a cabo un BLAST de proteínas (Genbank: www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/) usando la secuencia de aprotinina sintética (o porción de la misma) divulgada en la solicitud internacional PCT/CA2004/000011. Análogos de aprotinina ejemplares también se encuentran bajo los números de acceso CAA37697 (GI:58005) y 1405218C (GI : 3604747) .

Conjugados Los polipéptidos descritos en la presente o derivados de los mismos se conjugan a un agente anti-cáncer (v.gr., cualquiera conocido en la materia) . Cada polipéptido puede ser conjugado a por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, o 7 agentes. En otras formas de realización, cada agente tiene por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 20, o mas polipéptidos unidos al mismo. Los conjugados de la invención pueden ser capaces de promover acumulación (v.gr., debida a captación incrementada o remoción removida) del agente en un tipo de célula o tejido particular tal como ovario, hígado, pulmón, riñon, bazo o músculo de un sujeto.

El agente puede ser liberable a partir del vector después de transporte hacia un tipo de célula particular o a través de la BBB. El agente puede liberarse, por ejemplo, por disociación enzimática u otra descomposición de un enlace químico entre el vector y el agente. El agente liberado puede entonces funcionar en su capacidad pretendida en ausencia del vector.

En formas de realización particulares, el agente es paclitaxel o un análogo de paclitaxel (v.gr., aquellos descritos en la presente) . Otros agentes anti-cáncer incluyen abarelix, aldesleucina , alemtuzumab, alitertinoína, alopurinol, altretami-na, amifostina, anakinra, anastrozola, trióxido de arsénico, asparaginasa, azacitidina, BCG Live, bevacuzimab, bexaroteno, bleomicina, bleomicina, bortezombi, bortezomib, busulfano, busulfano, calusterona, capecitabina , carboplatina , carmustina, celecoxib, cetuximab, clorambucilo, cisplatina, cladribina, clofarabina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dactinomi-cina, daunorubicina, daunomicina, decitabina, denileucina, denileucina difitox, dexrazoxano, docetaxel, doxorubicina , propionato de dromostanolon, eculizumab, epirubicina (v.gr., HCl) , epoctina alfa, erlotinib, estramustina, etopósido (v.gr., fosfato), exemestano, fenantilo (v.gr., citrato) , fligrastim, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, 5-FU, fulvestrant, gefitinib, gemcitabina (v.gr., HCl), gemtuzumab ozogamicina, goserelina (v.gr., acetato), histrelina (v.gr., acetato), hidroxiurea, ibritumomab tiuxetano, idarubicina, ifosfamida, imatinib (v.gr., mesilato) , interferón alfa-2b, irinotecano, ditosilato de lapatinib, lenalidomida, letrozola, leucovorina, leurpolida (v.gr., acetato), levamisola, lomustina, CCNU, mecloretamina (mostaza de nitrógeno), megestrol, melfalano (L-PAM) , mercaptopurina (6-MP) , mesna, metotrexato, metoxsaleno, mitomicina C, mitotano, mitoxantrona, fenopropionato de nandrolo-na, nelarabina, nofetumomab, oprelvecina, oxaliplatina, paclita-xel, palifermina, pamidronato, panitumumab, pegademasa, pegaspar-gasa, pegfilgrastim, peginterferón alfa-2b, pemetrexed (v.gr., disódico) , pentostatina, pipobromano, plicamicina (mitramicina) , porfímero (v.gr., sódico), procarbazina, quinacrina, rasburicasa, rituximab, sargramostim, sorafenib, estreptozocina, sunitinib (v.gr., maleato) , talco, tamoxifeno, temozolomida, tenipósido (VM-26) , testolactona, talidomida, tioguanina (6-TG) , tiotepa, topotecano (v.gr., HC1) , toremifeno, Tositumomab/I-131 (tositumo-mab) , trastuzumab, tretinoína (ATRA) , mostaza de uracilo, valrubicina, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vorinostat, zoledronato, y ácido zoledrónico.

Otros agentes anti-cáncer incluyen anticuerpos. Conjugación de tales anticuerpos pueden lograrse usando cualquier medio conocido en la materia (v.gr., usando las estrategias de conjugación descritas en la presente) . Cualquier anticuerpo de diagnóstico o terapéutico puede conjugarse con uno o mas vectores (v.gr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, o mas) de la invención. Además, fragmentos de anticuerpos (v.gr., capaces de ligadura a un antígeno) también pueden conjugarse con los vectores de la invención. Fragmentos de anticuerpos incluyen las regiones Fab y Fe, cadena pesada, y cadena ligera de un anticuerpo (v.gr. , de cualquier anticuerpo descrito en la presente) . Anticuerpos ejemplares para uso en diagnóstico y terapia de cáncer incluyen ABX-EGF (Panitimumab) , OvaRex (Oregovemab) , The agyn (pemtumomabitrio-90) , Therex, Bivatuzumab, Panorex (Edrecolomab) , ReoPro (Abciximab) , Bexxar (Tositumomab) , MAb, I05AD7 idiotípico, Anti-EpCAM (Catumaxomab) , MAb de cáncer de pulmón (de citoclo-nal) , Herceptin (Trastuzumab) , Rituxan (Rituximab) , Avastin (Bevacizumab) , AMD Fab (Ranibizumab) , E-26 (IgE de 2a. generación) (Omalizumab) , Zevalin (Rituxan + itrio-90) (Ibritumomab tiutexano) , Cetuximab, BEC2 (Mitumomab) , IMC-IC11, nuC242-DMl, LymphoCide (Epratuzumab) , LymphoCide Y-90, CEA-Cide (Labetuzu-mab) , CEA-Cide Y-90, CEA-Scan (arcitumomab marcado con Tc-99m) , LeukoScan (sulesomab marcado con Tc-99m) , LymphoScan (bectumomab marcado con Tc-99m) , AFP-Scan (marcado con Tc-99m) , HumaRAD-HN (+ itrio-90) , HumaSPECT (Votumumab) , MDX-101 (CTLA-4) , MDX-210 (sobre-expresión de her-2) , MDX-210/MAK, Vitaxin, MAb 425, ISL-IL-2, Campath (alemtuzumab) , CD20 estreptavidina , Avidicin (albúmina + NRLU13) , Oncolym (+ yodo- 131) , Cotara (+ yodo-131) , C215 (+ enterotoxina de estafilococo) , MAb de cáncer de pul-món/riñón (de Pharmacia Corp.) , nacolomab tafenatox (enterotoxina de estafilococo C242), Nuvion (Visilizumab) , SMART M195, SMART 1D10, CEAVac, TriGem, TriAb, NovoMAb-G2 radiomarcado, Monopharm C, GlioMAb-H (+ toxina gelonina) , Rituxan (Rituximab) , e ING-1. Anticuerpos terapéuticos adicionales incluyen 5G1.1 (Ecluzimab), 5G1.1-SC (Pexelizumab) , ABX-CBL (G vilimomab) , ABX-IL8, Antegren (Natalizumab) , Anti-CDlla (Efalizumab) , Anti-CD18 (de Genentech) , Anti-LFAl , Antova, BTI-322, CDP571, CDP850, Corsevin M, D2E7 (Adalimumab) , Humira (Adalimumab) , Hu23F2G (Rovelizumab) , IC14, IDEC-114, IDEC-131, IDEC-151, IDEC-152, Infliximab (Remicade) , LDP-01, LDP-02, MAK-195F (Afelimomab) , MDX-33, MDX-CD4 , EDI-507 (Siplizumab) , 0KT4A, 0KT3 (Muromonab-CD3 ) , y ReoPro (Abeiximab) .

Enlazadores de conjugación El conjugado usado en la invención puede incluir usar cualquier reactivo o protocolo de reticulación (conjugación) conocido en la materia, muchos de los cuales están disponibles comercialmente . Tales protocolos y reactivos incluyen, reticula-dores reactivos con grupos amino, carboxilo, sulfhidrilo, carbonilo, carbohidrato y/o fenol. Las cantidades, tiempos y condiciones de tales protocolos pueden variarse para optimizar conjugación. Reactivos de reticulación contienen por lo menos dos grupos reactivos y son generalmente divididos en reticuladores homofuncionales (conteniendo grupos reactivos idénticos) y reticuladores heterofuncionales (conteniendo grupos reactivos no idénticos) . Los reticuladores de la invención pueden ser ya sea homobifuncionales y/o heterobifuncionales . Mas aun el reticulador puede incorporar un "separador" entre las fracciones reactivas, o las dos fracciones reactivas en el reticulador pueden enlazarse directamente . Enlaces pueden incluir enlaces de éster.

Enlazadores ejemplares incluyen BS3 ([Bis(sulfo-succinimidil) suberato] , NHS/EDC (N-hidroxisuccinimida y N-etil-(dimetilaminopropil) carbodiimida) , Sulfo-EMCS ([ácido N-e-maleimidocaproico] hidrazida) , SATA (N-succinimidil-S-actiltioa-cetato) , e hidrazida. BS3 es un éster de N-hidroxisuccinimida homobifuncional que apunta a aminas primarias accesibles. Un esquema de conjugación se ejemplifica en la figura 2. NHS/EDC permite para la conjugación de grupos amina primarios con grupos carboxilo. Sulfo-EMCS son grupos reactivos heterobifuncionales (maleimida y NHS-éster) que son reactivos hacia grupos sulfhidri-lo y amino . Acoplamiento de amina usando activación de sulfo-NHS/EDC puede usarse para reticular anticuerpos terapéuticos a polipéptidos . El conjugado resultante es estable y retiene la actividad biológica del anticuerpo. Mas aun, tiene una alta capacidad de conjugación que puede controlarse de manera confiable y una interacción no específica baja durante procedimientos de acoplamiento. SATA es reactivo hacia aminas y añade grupos sulfhidrilo protegidos. El NHS-éster reacciona con aminas primarias para formar enlaces amida estables. Grupos sulfhidrilo pueden ser desprotegidos usando hidroxilamina . Hidrazida puede usarse para enlazar grupos carboxilo a aminas primarias y pueden por lo tanto ser útiles para enlazar glicoproteínas .

Moléculas pequeñas tales como agentes terapéuticos pueden conjugarse a polipéptidos (v.gr., aquellos descritos en la presente) . La molécula pequeña ejemplar, paclitaxel, tiene dos posiciones estratégicas (posición C2 ' y C7) útiles para conjugación. Conjugación de un vector o vector de la invención a paclitaxel puede llevarse a cabo como sigue. Brevemente, paclitaxel se reacciona con anhídrido succínico piridina por tres horas a temperatura ambiente para unir un grupo succinilo en la posición 2 ' . El 2 ' -succinil paclitaxel tiene un enlace éster disociable en la posición 2 ' que puede simplemente liberar ácido succínico. Este enlace éster disociable puede usarse además para varias modificaciones con enlazadores, si se desea. El 2 ' -O-succinil -paclitaxel resultante entonces se reacciona con EDC/NHS en DMSO por nueve horas a temperatura ambiente, seguido por la adición del vector o vector en Ringer/DMSO por un tiempo de reacción adicional de cuatro horas a temperatura ambiente. La reacción de conjugación ilustrada en la figura 8 se monitoriza por HPLC. Cada intermediario, tal como paclitaxel , 2 ' -O-succinil-paclitaxel y 2 ' -O-NHS-succinil-paclitaxel , se purifica y valida usando enfoques diferentes tales como HPLC, cromatografía de líquidos delgada, RMN (intercambio de 13C o ¾) , punto de fusión, espectrometría de masas. El conjugado final se analiza por espectrometría de masas y electroforesis de gel de SDS-poliacri-lamida. Esto permite determinar el número de moléculas de paclitaxel conjugadas en cada vector.

Dosificaciones La dosificación de cualquier conjugado o composición presente depende de varios factores, incluyendo: el método de administración, la severidad de la enfermedad, si el cáncer va a ser tratado o prevenido, y la edad, peso, y salud del sujeto a ser tratado.

Con respecto a los métodos de tratamiento de la invención, no se tiene la intención de que la administración de un vector, conjugado, o composición a un sujeto se limite a un modo particular de administración, dosificación, o frecuencia de dosificación; la invención contempla todos los modos de administración. El conjugado, o composición puede administrarse al sujeto en una sola dosis o en múltiples dosis. Por ejemplo, un compuesto descrito en la presente o identificado usando métodos de análisis y selección de la invención puede conjugarse para administrarse una vez por semana por, v.gr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 15, 20, o mas semanas. Se debe entender que, para cualquier sujeto particular, regímenes de dosificación específicos deben ajustarse con el tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el juicio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de la composición. Por ejemplo, la dosificación de una composición puede incrementarse si la dosis mas baja no proporciona suficiente actividad en el tratamiento de una enfermedad o condición descrita en la presente (v.gr., cáncer) . Por el contrario, la dosificación de la composición puede disminuirse si la enfermedad (v.gr., cáncer) se reduce o elimina.

Aunque el médico que atiende finalmente decidirá la cantidad apropiada y régimen de dosificación, una cantidad terapéuticamente efectiva de un vector, conjugado, o composición descrita en la presente, puede estar, por ejemplo, en el rango de 0.0035 \ig a 20 pg/kg de peso corporal/día o 0.010 µg a 140 g/kg de peso corporal/semana. Deseablemente, una cantidad terapéuticamente efectiva está en el rango de 0.025 pg a 10 µg/kg, por ejemplo, por lo menos 0.025, 0.035, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, o 9.0 pg/kg de peso corporal administrados diariamente, cada otro día, o dos veces a la semana. Además, una cantidad terapéuticamente efectiva puede estar en el rango de 0.05 g a 20 pg/kg, por ejemplo, por lo menos 0.05, 0.7, 0.15, 0.2, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 10.0, 12.0, 14.0, 16.0, o 18.0 g/kg de peso corporal administrados semanalmente , cada otra semana, cada tres semanas o una vez al mes. Mas aun, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto puede estar, por ejemplo, en el rango de 0.1 mg/m2 a 2,000 mg/m2 administrados cada otro día, una vez a la semana, cada otra semana o cada tres semanas. Por ejemplo, 7ANG1005, puede administrarse a 50, 100, 200, 300, 400, 420, 500, 600, 650, 700, 800, o 1,000 mg/m2 cada uno, dos, tres, cuatro semanas, o cada mes o cada otro mes. ANG1005 se administra a 300 mg/m2 o 420 mg/m2 cada tres semanas. En otra forma de realización, la cantidad terapéuticamente efectiva está en el rango de 1,000 yg/m2 a 20,000 pg/m2, por ejemplo, por lo menos 1,000, 1,500, 4,000, o 14,000 ug/m2 del compuesto administrados diariamente, cada otro día, dos veces a la semana, semanalmente, o cada otra semana .

Formulación de composiciones farmacéuticas La administración de un conjugado descrito en la presente o una composición conteniendo al conjugado puede ser por cualquier medio adecuado que resulta en una concentración del compuesto que trata cáncer de ovarios. El conjugado puede estar en cualquier cantidad apropiada de cualquier sustancia portadora apropiada, y generalmente está presente en una cantidad de 1-95% por peso del peso total de la composición. La composición puede ser provista en una forma de dosificación que es adecuada para la ruta de administración oral, parenteral (v.gr., de manera intravenosa o de manera intramuscular), rectal, cutánea, nasal, vaginal, inhalante, piel (parche), tópica, ocular, o intra-craneana. Por ende, la composición puede estar en la forma de, v.gr., tabletas, cápsulas, pildoras, polvos, granulados, suspensiones, emulsiones, soluciones, geles incluyendo hidroge-les, pastas, ungüentos, cremas, yesos, compresas, dispositivos de entrega osmóticos, supositorios, enemas, inyectables, implantes, rocíos, o aerosoles. Las composiciones farmacéuticas pueden formularse de acuerdo con la práctica farmacéutica convencional (ver, v.gr., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a. edición, 2000, ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick y J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, Nueva York) .

Composiciones farmacéuticas pueden formularse para liberar al conjugado inmediatamente ante administración o en cualquier momento o periodo de tiempo predeterminado después de administración. Los últimos tipos de composiciones son generalmente conocidos como formulaciones de liberación controlada, las cuales incluyen (i) formulaciones que crean concentraciones sustancialmente constantes de los conjugados dentro del cuerpo sobre un periodo de tiempo extendido; (ii) formulaciones que después de un tiempo de retraso predeterminado crean concentraciones sustancialmente constantes del conjugado dentro del cuerpo sobre un periodo de tiempo extendido; (iii) formulaciones que sostienen la acción del conjugado durante un periodo de tiempo predeterminado mediante mantener un nivel relativamente constan-te, efectivo, del conjugado en el cuerpo con minimización concurrente de efectos secundarios no deseables asociados con fluctuaciones en el nivel en plasma del conjugado (patrón cinético de sierra) ; (iv) formulaciones que localizan acción del conjugado, v.gr., colocación espacial de una composición de liberación controlada adyacente a o en el tejido u órgano enfermo; (v) formulaciones que logran conveniencia de dosificación, v.gr., administrando la composición una vez por semana o una vez cada dos semanas; y (vi) formulaciones que apuntan la acción del conjugado mediante usar portadores o derivados químicos para entregar al compuesto a un tipo de célula objetivo particular. Administración del conjugado en la forma de una formulación de liberación controlada es especialmente preferida para conjugados teniendo una ventana de absorción estrecha en el tracto gastro- intestinal o una media vida biológica relativamente corta.

Cualquiera de un número de estrategias puede perseguirse para obtener liberación controlada en la cual la tasa de liberación supera a la tasa de metabolismo de los conjugados en cuestión. En un ejemplo, liberación controlada se obtiene por selección apropiada de varios parámetros e ingredientes de formulación, incluyendo, v.gr., varios tipos de composiciones de liberación controlada y revestimientos. Por ende, los conjugados se formulan con excipientes apropiados en una composición farmacéutica que, ante administración, libera a los conjugados en una manera controlada. Ejemplos incluyen composiciones de tableta o cápsula de una sola o múltiples unidades, soluciones de aceite, suspensiones, emulsiones, micro-cápsulas, complejos moleculares, micro-esferas, nano-partículas , parches, y liposomas.

Formulación de composiciones farmacéuticas La administración de un conjugado descrito en la presente o una composición conteniendo al conjugado puede ser por cualquier medio adecuado que resulta en una concentración del compuesto que trata cáncer de ovarios. El conjugado puede estar en cualquier cantidad apropiada de cualquier sustancia portadora apropiada, y generalmente está presente en una cantidad de 1-95% por peso del peso total de la composición. La composición puede ser provista en una forma de dosificación que es adecuada para la ruta de administración oral, parenteral (v.gr., de manera intravenosa o de manera intramuscular), rectal, cutánea, nasal, vaginal, inhalante, piel (parche), tópica, ocular, o intracraneana. Por ende, la composición puede estar en la forma de, v.gr., tabletas, cápsulas, pildoras, polvos, granulados, suspensiones, emulsiones, soluciones, geles incluyendo hidroge-les, pastas, ungüentos, cremas, yesos, compresas, dispositivos de entrega osmóticos, supositorios, enemas, inyectables, implantes, rocíos, o aerosoles. Las composiciones farmacéuticas pueden formularse de acuerdo con la práctica farmacéutica convencional (ver, v.gr., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a. edición, 2000, ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, Filadelfia, y Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick y J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, Nueva York) .

Composiciones f rmacéuticas pueden formularse para liberar al conjugado inmediatamente ante administración o en cualquier momento o periodo de tiempo predeterminado después de administración. Los últimos tipos de composiciones son generalmente conocidos como formulaciones de liberación controlada, las cuales incluyen (i) formulaciones que crean concentraciones sustancialmente constantes de los conjugados dentro del cuerpo sobre un periodo de tiempo extendido; (ii) formulaciones que después de un tiempo de retraso predeterminado crean concentraciones sustancialmente constantes del conjugado dentro del cuerpo sobre un periodo de tiempo extendido; (iii) formulaciones que sostienen la acción del conjugado durante un periodo de tiempo predeterminado mediante mantener un nivel relativamente constante, efectivo, del conjugado en el cuerpo con minimización concurrente de efectos secundarios no deseables asociados con fluctuaciones en el nivel en plasma del conjugado (patrón cinético de sierra) ; (iv) formulaciones que localizan acción del conjugado, v.gr., colocación espacial de una composición de liberación controlada adyacente a o en el tejido u órgano enfermo; (v) formulaciones que logran conveniencia de dosificación, v.gr., administrando la composición una vez por semana o una vez cada dos semanas; y (vi) formulaciones que apuntan la acción del conjugado mediante usar portadores o derivados químicos para entregar al compuesto a un tipo de célula objetivo particular. Administración del conjugado en la forma de una formulación de liberación controlada es especialmente preferida para conjugados teniendo una ventana de absorción estrecha en el tracto gastro-intestinal o una media vida biológica relativamente corta .

Cualquiera de un número de estrategias puede perseguirse para obtener liberación controlada en la cual la tasa de liberación supera a la tasa de metabolismo de los conjugados en cuestión. En un ejemplo, liberación controlada se obtiene por selección apropiada de varios parámetros e ingredientes de formulación, incluyendo, v.gr., varios tipos de composiciones de liberación controlada y revestimientos. Por ende, los conjugados se formulan con excipientes apropiados en una composición farmacéutica que, ante administración, libera a los conjugados en una manera controlada. Ejemplos incluyen composiciones de tableta o cápsula de una sola o múltiples unidades, soluciones de aceite, suspensiones, emulsiones, micro-cápsulas, complejos moleculares, micro-esferas, nano-partículas , parches, y liposomas.

Otras formas de realización Todas las patentes, solicitudes de patente, y publicaciones mencionadas en esta especificación se incorporan en la presente por referencia al mismo grado como si cada patente independiente, solicitud de patente, o publicación se indicara específicamente e individualmente para incorporarse por referen-

Claims (24)

REIVI DICACIONES

1. Un método para tratar a un paciente teniendo un cáncer que se originó en el ovario, dicho método comprendiendo administrar a dicho paciente una cantidad efectiva de un conjugado que comprende: (a) un agente anti-cáncer; y (b) un polipéptido comprendiendo una secuencia de aminoácidos por lo menos 80% idéntica a TFFYGGSRGKRN FKTEEY (SEQ ID NO: 97) , en donde dicho polipéptido se conjuga a dicho agente anti-cáncer .

2. El método de la reivindicación 1, en donde dicho agente anti-cáncer se selecciona a partir del grupo que consiste en paclitaxel , vinblastina, vincristina, etopósido, doxorubicina, ciclofosfamida, taxotere, melfalano, y clorambucilo .

3. El método de la reivindicación 2, en donde dicho agente anti-cáncer es paclitaxel.

4. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde dicho polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos por lo menos 90% idéntica a la secuencia de la SEQ ID NO: 97.

5. El método de la reivindicación 4, en donde dicho polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 97.

6. El método de la reivindicación 5, en donde dicho polipéptido consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID O: 97.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde dicho conjugado se administra en una dosificación de entre 100 mg/m2 y 2,000 mg/m2.

8. El método de la reivindicación 7, en donde dicho conjugado se administra en una dosificación de entre 300 mg/m2 y 1,000 mg/m2.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 8, en donde dicho conjugado se administra de manera intravenosa.

10. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 9, en donde dicho cáncer se ha metastasizado a por lo menos una ubicación por fuera del ovario y dicho método es efectivo para tratar dicha metástasis.

11. El método de la reivindicación 10, en donde dicho cáncer se ha metastasizado a por lo menos una ubicación por fuera del cerebro de dicho paciente.

12. El método de la reivindicación 10, en donde dicho cáncer se ha metastasizado por fuera de la pelvis de dicho paciente .

13. El método de la reivindicación 10, en donde dicho cáncer se ha metastasizado al cerebro, pulmón, hígado, o una combinación de los mismos.

14. El método de la reivindicación 10, en donde dicho cáncer se ha metastasizado hacia el sistema linfático.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en donde dicho cáncer comprende células determinadas a ser resistentes a fármacos.

16. El método de la reivindicación 15, en donde dichas células de cáncer expresan MDR1.

17. El método de las reivindicaciones 15-16, en donde dichas células son resistentes a tratamiento con paclitaxel o a tratamiento con un derivado de taxano.

18. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 17, en donde dicho método además incluye administración de una segunda terapia anti-cáncer.

19. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 18, en donde dicho paciente ha recibido previamente otro agente quimioterapéutico .

20. El método de la reivindicación 19, en donde dicho cáncer es resistente a dicho agente quimioterapéutico recibido previamente .

21. El método de las reivindicaciones 19 o 20, en donde dicho agente quimioterapéutico previamente recibido es paclitaxel, un agente a base de platino, un agente de alquila-ción, o una combinación de los mismos.

22. El método de la reivindicación 21, en donde dicho agente a base de platino es carboplatina o cisplatina.

23. El método de las reivindicaciones 21 o 22, en donde dicho paciente previamente recibió terapia de combinación de carboplatina-paclitaxel .

24. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-21, en donde dicho cáncer es un carcinoma epitelial de ovarios o adenocarcinoma de ovarios, o una forma metastásica del mismo.