MX2011000051A - Nuevos compuestos, composiciones farmaceuticas que contienen los mismos, metodos para usar los mismos, y metodos para preparar los mismos. - Google Patents

Nuevos compuestos, composiciones farmaceuticas que contienen los mismos, metodos para usar los mismos, y metodos para preparar los mismos.

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Abstract

La presente invención se refiere a una nueva clase de compuestos que comprenden la fórmula I, en donde n es ya sea O ó 1. A es NR1, O, y S, en donde R1 es H, hidroxilo, alquilo alcoxi C1-C10, alquenilo, arilo, alquilarilo o arilalquilo. X es un residuo carboxilato, fosfonato, o un residuo fosfato, o un residuo alquilo C1-C10 opcionalmente sustituido con un residuo carboxilato, fosfonato o fosfato. Y es alquilo C1-C20, alquenilo, haluro, hidroxilo, alcoxi C1-C20, arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, o un anillo heterocíclico y es opcionalmente sustituido con uno o más haluros. Z es H, un grupo hidroxilo, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico y es opcionalmente sustituido con uno o más grupos alquilo C1-C10, grupos alcoxi C1-C10, grupos hidroxilo, grupos ciano, grupos carboxilato, haluros, grupos arilo, grupos alquilarilo, grupos arilalquilo, grupos cicloalquilo, grupos cicloalquenilo o un anillo heterocíclico.

Description

NUEVOS COMPUESTOS, COMPOSICIONES FARMACEUTICAS QUE CONTIENEN LOS MISMOS, METODOS PARA USAR LOS MISMOS, Y METODOS PARA PREPARAR LOS MISMOS Campo de la Invención La presente invención se refiere a nuevos compuestos, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos, y métodos para usar una variedad de usos terapéuticamente valiosos que incluyen, pero no se limitan a, tratamiento de obesidad inhibiendo la actividad de Glicerol 3 -fosfato aciltransferasa (GPAT) .
Antecedentes de la Invención La incidencia de obesidad y otras enfermedades asociadas con una masa incrementada de triacilglicerol es incrementadamente reconocida como un problema de salud pública importante. La obesidad es actualmente estimada por la Organización Mundial de la Salud por afectar al menos 400 millones de adultos alrededor del mundo. En los Estados Unidos solamente, existen estimados que aproximadamente dos tercios de los adultos están con sobre peso u obesos. Varias enfermedades están asociadas con la obesidad, que incluyen diabetes tipo-2, hipertensión, enfermedades cardiovasculares, enfermedad de hígado graso no alcohólico, y ciertos tipos de cáncer .
Aunque existe una clara necesidad para terapéuticos Ref.: 216588 anti-obesidad efectivos y ampliamente disponibles, solamente dos de tales fármacos están aprobados para uso a largo plazo en los Estados Unidos: El Orlistat que funciona bloqueando la absorción de grasa en la dieta, y sibutramina que afecta el sistema nervioso central, reduciendo la absorción de energía e incrementando el uso de energía. Aunque no son completamente inefectivos, cada uno de estos fármacos exhibe eficacia limitada y produce efectos secundarios indeseables.
Los fármacos anti-obesidad actualmente en desarrollo utilizan una amplia variedad de mecanismos, que involucran objetivos tanto centrales como periféricos. La alteración del metabolismo lípido, reduciendo la síntesis de novo de triglicéridos mientras se incrementa la oxidación de grasas almacenadas, es un mecanismo periférico. Este procedimiento, basado en los efectos de peso observados con los compuestos C75, cerulenina, y hGH(177-i91) , puede ser altamente valioso en el desarrollo de fármacos anti-obesidad.
La Glicerol 3-fosfato aciltransferasa (GPAT) cataliza la etapa limitante de velocidad de la biosíntesis de Glicerolípido, la acilación de Glicerol 3-fosfato con acil-CoAs de cadena larga saturada. En la actualidad, existen cuatro miembros de la familia GPAT identificados: GPAT1, una isoforma mitocondrial que cataliza el volumen de la síntesis de triglicérido hepático; GPAT2 , una segunda isoforma mitocondrial que sintetiza triglicéridos pero es menos sensible al control de dieta; GPAT3 , localizado en el retículo endoplásmico, es sensible para el volumen de síntesis de triglicérido en adipocitos, intestino delgado, riñón, y corazón; y GPAT4 , una isoforma microsomal cuya función no está completamente elucidada. La isoforma mitocondrial de Glicerol-3-fosfato aciltransferasa-1 (mtGPAT) cataliza la esterificación de acil-CoAs de cadena larga con sn-glicerol-3-fosfato para producir ácido lisofosfatídico (LPA) . Esta reacción se piensa constituye la primera etapa de limitación de velocidad y comprometida de biosíntesis de Glicerolípido . El mecanismo supuesto de esta reacción es similar a aquel de una serina proteasa, con el grupo hidroxilo primario de Glicerol-3 -fosfato tomando el lugar de serina en la triada catalítica. Después, el LPA es esterificado además para producir ácido fosfatídico, un precursor de varios fosfolípidos que incluye triacilglicerol (TAG), el componente principal de grasa animal. Además de la obesidad, los altos niveles de TAG en la corriente sanguínea se han ligado a varias enfermedades, notablemente aterosclerosis y pancreatitis.
Se ha mostrado que el mtGPAT 1 despliega una fuerte preferencia para incorporar palmitoil-CoA (16:0), con ello produciendo principalmente fosfolípidos saturados, mientras las otras dos enzimas no son selectivas. Una de las tres isoformas de GPAT, solamente mtGPATl es afectada por cambios en dieta o ejercicio. Cuando están disponibles excesos de calorías a partir de una dieta alta en carbohidratos, la expresión de ARNm de mtGPATl incrementa, resultando en actividad de mtGPATl mayor. Se ha mostrado que ratones que permanecen estacionarios por diez horas después de un régimen de ejercicio prolongado experimentan un incremento en actividad de mtGPATl comprado con ratones que no hacían ejercicio, resultando en un rebasamiento de la síntesis de triacilglicerol (TAG) . El ratón deficiente de MtGPATl exhibe niveles TAG hepáticos inferiores y secreta menos lipoproteínas de baja densidad (VLDL) que el ratón de control. Por el contrario, hepatocitos de rata con actividad de mtGPATl 2.7 veces incrementada demuestran un incremento significante en la síntesis de novo de diacilglicerol . La sobre expresión de mtGPATl in vivo, como se esperaba a partir de los resultados previos, causa que los niveles de TAG acumulado y diacilglicerol (DAG) en hígado de ratón se eleven dramáticamente a 12 veces y 7 veces la de los niveles normales. Además de producir una cierta cantidad de TAG dependiente de la cantidad de enzima activa presente, la actividad de mtGPATl es esencial para controlar la división de acil-CoAs graso a ß-oxidación o síntesis glicerolípida .
Tanto la mtGPATl como la carnitina palmitoiltransferasa-l (CPT-1) , la enzima que cataliza la etapa limitante de velocidad de ß-oxidación, están localizadas en la membrana mitocondrial exterior. Esto sugiere que existe una competencia entre estas enzimas para sustratos acil-CoA grasos. La AMP activada por proteína cinasa (AMPK) , la cual inactiva acetil-CoA carboxilasa (ACC) por fosforilación, parece regular actualmente ambas enzimas. La inactivación de ACC por AMPK previene la acumulación de malonil-CoA, un supresor alostérico de CPT-1, resultando en un incremento en ß-oxidación. La AMPK inhibe a mtGPATl también, con ello reduciendo la cantidad de TAG producida. La relación entre estos dos procesos se ha demostrado in vivo. La alimentación a ratones agénicos-mtGPATl de una dieta alta en grasas, alta en azúcares para inducir obesidad resulta en un incremento de oxidación ya que los sustratos acil-CoA de cadena larga se dividieron lejos de la trayectoria sintética de TAG hacia CPT-1 y ß-oxidación. La sobreexpresión de MtGPATl en hepatocitos de rata produce una reducción del 80% en oxidación de ácido graso acoplada con un incremento en la biosíntesis de fosfolípido. La sobre expresión in vivo resulta en una reducción en ß-oxidación también.
La evidencia sugiere que una caída en la actividad de mtGPAT conduce a una reducción en los niveles de TAG así como también en un incremento en la cantidad de ß-oxidación sugiere que la inhibición de esta enzima con una molécula pequeña puede ser un tratamiento efectivo para obesidad, diabetes, y otros problemas de salud asociados con síntesis de TAG incrementada. Existe una necesidad, por lo tanto, de moléculas pequeñas las cuales puedan inhibir mtGPAT y otras isoformas de GPAT. Tales compuesto podrían utilizarse para tratar obesidad o inducir pérdida de peso.
Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a una nueva clase de compuestos que comprenden la fórmula I: en donde n es ya sea 0 ó 1. A se selecciona a partir del grupo que consiste de NR1, O, y S, en donde R1 es ya sea un H, hidroxilo, alquilo Ci-C10, alcoxi Ci-Ci¿, alquenilo, arilo, alquilarilo o arilalquilo. X se selecciona a partir del grupo que consiste de un residuo carboxilato, un residuo fosfonato, un residuo fosfato, o un residuo alquilo Ci-Cio el cual es opcionalmente sustituido con uno o más residuos de carboxilato, fosfonato o fosfato. Y se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo CI-C20Í alquenilo, haluro, hidroxilo, alcoxi Ci-C2o, arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, o un anillo heterocíclico y puede ser opcionalmente sustituido en una o más posiciones con un haluro. Z se selecciona a partir del grupo que consiste de un H, un grupo hidroxilo, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico. En modalidades, en donde Z es un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico, la porción de anillo puede ser sustituida con uno o más grupos sustituyentes seleccionados a partir de un grupo alquilo C1-C10, un grupo alcoxi Ci-C10, un grupo hidroxilo, un grupo ciano, un grupo carboxilato, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico .
Basado en lo mencionado anteriormente, uno o más compuestos de la presente invención, ya sea solos o en combinación con otro ingrediente activo, puede ser sintetizado y administrado como una composición terapéutica usando formas de dosificación y rutas de administración contempladas aquí o de otro modo conocidas en la técnica. La dosificación y duración dependerá además de los factores proporcionados aquí y aquellos ordinariamente considerados por uno de habilidad en la técnica. Con este fin, la determinación de cantidades terapéuticamente efectivas está también dentro de las capacidades de aquellos expertos en la técnica, especialmente en vista de la descripción detallada y ejemplos proporcionados aquí.
Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 ilustra un primer esquema de reacción para manufacturar compuestos de la presente invención, particularmente compuestos 5a- 5d descritos en la presente.
La Figura 2 ilustra un segundo esquema de reacción para manufacturar compuestos de la presente invención, particularmente compuestos 5e-5f descritos en la presente.
La Figura 3 ilustra un tercer esquema de reacción para manufacturar compuestos de la presente invención, particularmente compuestos 13a- 13f descritos en la presente.
La Figura 4 ilustra un cuarto esquema de reacción para manufacturar compuestos de la presente invención, particularmente compuestos 15a- 15i descritos en la presente.
La Figura 5 ilustra un quinto esquema de reacción para manufacturar compuestos dé la presente invención, particularmente compuestos 17a- 17f descritos en la presente.
La Figura 6 ilustra un sexto esquema de reacción para manufacturar compuestos de la presente invención, particularmente compuestos 2la-21c descritos en la presente.
La Figura 7 ilustra un primer esquema de reacción para manufacturar compuestos de la presente invención, particularmente compuestos 24a- 24f descritos en la presente.
La Figura 8 ilustra un esquema de reacción para manufacturar compuestos 4a-t, descritos en la presente.
La Figura 9 ilustra un esquema de reacción para manufacturar compuestos 7a-t.
Las Figuras 10a a 10c ilustran la inhibición de FSG67 de la síntesis de acilglicérido en adipocitos 3T3-L1. La concentración dependiente de la reducción de síntesis de triglicérido es reflejada en fotomicrografías en fase de contrasto de células cultivadas que muestran una reducción correspondiente en acumulación de gotitas lipidas (x 400) .
Las Figuras lia a lie ilustran el tratamiento de FSG67 agudo de consumo de alimento reducido y peso corporal reducido de ratones DIO y flacos sin aversión de sabor condicionada. El peso corporal y absorción de alimento se midieron después de una dosis ip única de 20 mg/kg de FSG67 en ratones DIO o flacos, 8 por grupo, la figura lia ilustra los ratones flacos tratados con FSG67 pierden (barra gris) 3.7 ± 0.9% (1.0 ± 0.2 g) ; ratones ayunados pierden 15.5 ± 0.7% (3.9 ± 0.2 g) (barra negra) . La reducción en masa corporal de ambos ratones ayunados y tratados fue significantemente comparada con el ratón de control de vehículo (barra blanca) que ganó 2.5 + 0.5% (0.6 ± 0.1 g) (p<0.0001 prueba-t de 2 colas). La figura 11b ilustra el tratamiento de FSG67 reduce el consumo de alimento a' 33% de vehículo de control (1.4 + 0.2 g, barra gris, contra 4.2 + 0.2 g barra blanca, p<0.0001, prueba-t de 2 colas) . La figura 11c ilustra los ratones DIO tratados con FSG67 (barra gris) pierden 4.3 ± 0.5% (1.7 ± 0.2 g) de masa corporal, ratones ayunados (barra negra) pierden 5.3 ± 0.4% (2.1 + 0.2 g) y controles de vehículo (barra blanca) pierden 2.5 ± 0.6% (1.0 + 0.2 g) . Comparado con controles de vehículo, el peso corporal fue significante en tanto los ratones tratados con FSG67 (p= 0.026, prueba-t de 2 colas) como ayunados (p=0.002, prueba-t de 2 colas) , la figura lid muestra cómo el FSG67 reduce el consumo de alimento a 41.6% de control de vehículo (0.5 ± 0.1 g, barra gris contra 1.2 ± 0.3 g, barra blanca, p=0.043, prueba-t de 2 colas) . La figura lie muestra que el FSG67 no induce aversión de sabor condicionada en ratones. Las pruebas de CTA usando un paradigma de elección de dos botellas en grupos de 9 ratones flacos no produce una reducción significante en la ingesta de sacarina a 5 mg/kg (p=0.12) o 20 mg/kg (p=0.10) (prueba-t de 2 colas). De este modo, el efecto de FSG67 en la ingesta de alimento fue probablemente un efecto específico en el apetito en lugar de una inducción de conducta de enfermedad. Todos los datos son expresados como medias ± SEM. (*, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001) .
Las Figuras 12a a 12f muestran que el tratamiento de FSG67 crónico de ratones DIO reduce reversiblemente el peso corporal e ingesta de alimento mientras intensifica la oxidación de ácido graso, la figura 12a muestra los ratones DIO, 4 por grupo, se trataron con 5 mg/kg ip (rojo) de FSG67 diariamente o control de vehículo (negro) por 20 d (la flecha negra indica la terminación del tratamiento) y se dejaron entonces ganar nuevamente su peso. Los ratones tratados con FSG67 pierden 10.3 ± 0.6% de masa corporal durante el tratamiento (días 0-19) comparado con un incremento de 4.0 ± 0.5% para controles de vehículo (p>0.0001, análisis A OVA de 2 vías) . La pérdida de peso por FSG67 fue reversible con animales tratados que regresaron a su peso original al día 32. La figura 12b muestra el consumo de alimento fue significantemente reducido durante el tratamiento con FSG67 (2.6 + 0.1 g/d) comparado con controles de vehículo (3.1 ± 0.1 g/d) (p=0.0008, ANOVA de 2 vías). Después de la suspensión del tratamiento al día 20, el consumo de alimento se incrementó en el grupo de tratamiento con FSG67 a 3.5 ± 0.1 g/d representando un incremento significante en la ingesta de alimento comparado con controles de vehículo 3.2 + 0.1 g/d (p=0.006, ANOVA de 2 vías) . La figura 12c muestra que después de 3 días de aclimatación en el calorímetro, 8 ratones DIO por grupo se trataron con 5 mg/kg ip (rojo) FSG67 o control de vehículo (negro) diariamente por 16 días, junto con un grupo de alimentación pareada a los animales tratados con FSG67 (azul) . Los animales tratados con FSG67 pierden 9.5 ± 0.6% y de alimentación pareada pierden 5.5 ± 0.9% de masa corporal mientras los controles de vehículo incrementan por 3.5 + 1.3%. La pérdida de peso en los animales tratados con FSG67 fue significantemente comparada con tanto con animales de alimentación pareada como de controles de vehículo (p<0.0001, A OVA de 2 vías). La figura 12d muestra que el tratamiento con FSG67 (rojo) reduce el consumo de alimento diario promedio por 33% (2.0 ± 0.1 g/d) comparado con controles de vehículo (negro) 3.1 ± 0.1 g/d (p<0.0001, ANOVA de 2 vías) . La figura 12e muestra el tratamiento con FSG67 incrementa el promedio de V02 a 106.5 + 1.1% del valor de pre-tratamiento (línea roja) comparado con una reducción de 89.9 ± 1.1% para el grupo de alimentación pareada (línea azul) (p<0.0001 ANOVA de 2 vías) consistente con utilización de energía incrementada, la figura 12f, por el contrario, muestra el RER promedio fue más bajo para los ratones DIO tratados con FSG67 (0.732 ± 0.002) (línea roja) comparados con (0.782 ± 0.006) (línea azul) para el grupo de alimentación pareada (p<0.0001, ANOVA de 2 vías) indicando dependencia de ácidos grasos por energéticos.
Las Figuras 13a a 13b muestran que la inhibición de GPAT farmacológica reduce la adiposidad y expresión de gen lipogénico regulada descendentemente en ratones DIO, la figura 13a muestra análisis de Q-NMR de animales tratados con FSG67 o de control de vehículo 10 por grupo. Animales tratados con FSG67 (barras verificadas) exhiben una reducción significante en masa grasa (4.0 g) comparada con controles de vehículo (barra blancas) mientras la masa acuosa y magra fueron no afectadas (p<0.0001, prueba-t de 2 colas). En la conclusión del experimento, el ratón de control de vehículo pesó 4.4 g más que los controles de FSG67 (p=0.0014, prueba-t de 2 colas) . La figura 13b muestra el análisis de RT-PCR en Tiempo-Real de expresión de gen lipogénico en ratones DIO tratados con FSG67 (barras verificadas) , control de vehículo (barra blancas) , y de alimento pareado . (barra negras) (a partir del experimento mostrado en la Fig. 4) . El FSG67 reduce la expresión de ACC1 (p=0.0005 contra control, p=0.0004 contra alimento pareado), FAS (p=0.0001 contra control, p=0.0007 contra alimento pareado), PPARy (p=0.032 contra control, p=0.0019 contra alimento pareado), y GPAT (p=0.0034 contra control, p=0.0002 contra alimento pareado) fueron todos regulados descendentemente en tejido adiposo blanco. Los datos son analizados con la prueba-t de 2 colas. (*, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001).
Las Figuras 14a a 14d ilustran que el tratamiento de FSG67 reduce la esteatosis hepática y triglicéridos del suero y niveles de glucosa. Secciones histológicas de hígado teñidas de aceite rojo de (figura 14a) control de vehículo, (figura 14b) alimento pareado, y (figura 14c) ratones DIO tratados con FSG67 a partir del experimento de tratamiento de 16 días en la Fig. 4. Se observa la acumulación de gotitas de grasa grandes y pequeñas intracitoplásmicas más prominentes en el control de vehículo (figura 14a) . La alimentación pareada reduce la esteatosis, mientras los animales tratados con FSG67 muestran casi alivio completo de acumulación de grasa, la figura 14d muestra las mediciones promedio de triglicéridos en suero, colesterol y glucosa a partir de ratones de control de vehículo, tratados con FSG67, y de alimento pareado de los mismos animales. Los animales tratados con FSG67 tienen niveles de suero en glucosa significantemente reducidos (153.3 + 10.5 mg/dL) comparados con ratones con alimento pareado (189.0 ± 20.3 mg/dL, p=0.047) y controles de vehículo (200.6 ± 22.2 mg/dL, p=0.031 A OVA de 2 vías) . La reducción en niveles de triglicéridos no fue estadísticamente significante; nos niveles de colesterol no se afectaron. Los datos son expresados como medias + SEM. (*, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001).
Las Figuras 15a a 15d muestran que el tratamiento con FSG67 intracerebroventricular (icv) reduce el consumo de alimento y peso corporal, se administró (figuras 15a y 15c) FSG67 o vehículo icv a grupos de 6 ratones magros. Un día después del tratamiento, el peso del ratón fue significantemente reducido por dosis de 100 (barras verticales) y 320 nmole (barra verificada) (p=0.016, p=0.0003, prueba-t de 2 colas). Las figuras 15b y 15d muestran una reducción significante en la ingesta de alimento ocurre solamente en el grupo de 320 nmole (barra verificada) (p=0.005, prueba-t de 2 colas). (*, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001) .
Las Figuras 16a a 16b muestran que el tratamiento FSG67 crónico y agudo altera la expresión del neuropéptido hipotalámico, la figura 16a ilustra los análisis de RT-PCR en Tiempo Real de neuropéptidos hipotalámicos se condujeron en ratones flacos tratados con una dosis única de 20 mg/kg de FSG67 (de la Fig. 3a) . El NPY fue significantemente reducido en el grupo tratado con FSG67 (barra gris) comparado con ratones ayunados (barra negra) (p=0.016), mientras la expresión de AGRP se disminuyó comparada con tanto el control de vehículo (barra blanca) (p=0.02) como los ratones ayunados (p=0.0009). La expresión de POMC y CART no fueron afectadas, la figura 16b muestra el análisis similar de ratones DIO tratados (de la Fig. 4) mostró una reducción de la expresión de NPY en tanto controles tratados con FSG67 (p=0.0074) como de alimento pareado (p=0.0057). La expresión de AGRP, POMC, y CART no fue afectada. Los datos son analizados con la prueba-t de 2 colas. (*, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001).
La Figura 17 ilustra respuesta de dosis de FSG67 en ratones DIO. Grupos de ratones DIO fueron tratados diariamente con FSG67 ip a dosis o vehículo indicados. Sobre al 5 día de curso, 5 mg/kg fue la dosis mínima que conduce a una pérdida de peso significante de 3.9% comparada con controles de vehículo (p=0.008, ANOVA de 2 vías). (* p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001) .
La Figura 18 ilustra el tratamiento con FSG67 de ratones DIO para análisis de Q-NMR. Ratones DIO (10 por grupo) tratados diariamente por 10 d con FSG6 (5 mg/kg) pierden masa corporal significante (6.1 g, 13.1%) comparado con controles de vehículo (1.1 g, 2.4%) (p<0.0001, ANOVA de 2 vías).
Las Figuras 19a a 19b muestran que el tratamiento con FSG67 incrementa la expresión de UCP2 en hígado y WAT. Análisis de expresión de TR-PCR en Tiempo-Real de expresión de LCPT-1 y UCP2 en hígado y tejido adiposo blanco. La expresión de UCP2 se incrementó en el (figura 19a) hígado (p=0.043 contra control) y (figura 19b) WAT (p=0.013, contra alimento pareado) de ratones DIO tratados con FSG67 por 16 d (véase Fig. 4C) . La expresión de L-CPT-1 no se afectó por el tratamiento de FSG67 o alimentación pareada. Los datos se analizaron con pruebas-t de dos colas, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001.
La Figura 20 ilustra que el tratamiento con FSG67 regula descendentemente los genes lipogénicos hepáticos. Los análisis de expresión de RT-PCR en Tiempo-Real de expresión de gen lipogénico en el hígado de ratones DIO tratados con FSG67 por 16 d (véase Fig. 12c) . La expresión de FAS se reduce comparada con tanto animales de vehículo como de alimento pareado (p=0.0016 contra control, p=0.018 contra alimento pareado) mientras el ACC1 se reduce comparado con animales con alimento pareado (p=0.037) . La expresión de GPAT no fue afectada. Los datos se analizaron con dos pruebas-t de dos colas, p<0.05; **, p<0.01; ***, p<0.001.
Descripción Detallada de la Invención Definiciones Como se usa en la presente, "un grupo alquilo" denota tanto cadenas de carbono rectas como ramificadas con uno o más átomos de carbono, pero la referencia a un radical individual tal como "propilo" abarca solamente el radical de cadena recta, un isómero de cadena ramificada tal como "isopropilo" específicamente se refiere a solamente el radical de cadena ramificada. Un "alquilo sustituido" es un grupo alquilo en donde uno o más hidrógenos del grupo alquilo son sustituidos con uno o más grupos sustituyentes como se define de otro modo en la presente.
Como se usa en la presente, "un grupo alcoxi" se refiere a un grupo de la fórmula alquilo-O-, en donde alquilo es como se define en la presente. Un "alcoxi sustituido" es un grupo alcoxi en donde uno o más hidrógenos son sustituidos con uno o más de los grupos sustituyentes definidos de otro modo en la presente.
Como se usa en la presente, "alquenilo" se refiere a un radical alquilo parcialmente insaturado derivado por la remoción de uno o más átomos de hidrógeno a partir de una cadena alquilo de manera que contiene al menos un enlace doble carbono-carbono.
Como se usa en la presente, "un grupo arilo" denota una estructura derivada de un anillo aromático que contiene seis átomos de carbono. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a un radical fenilo o bencilo y derivados de los mismos.
Como se usa en la presente, "arilalquilo" denota un grupo arilo que tiene uno o más grupos alquilo no en el punto de unión del grupo arilo.
Como se usa en la presente, "alquilarilo" denota un grupo arilo que tiene un grupo alquilo en el punto de unión.
Como se usa en la presente "carboxilato" denota una sal o éster de un ácido orgánico, que contiene el radical -COOR, en donde R puede ser, pero no se limita a, un H, un grupo alquilo, un grupo alquenilo, o cualquier residuo de otro modo conocido en la técnica.
Como se usa en la presente, "ácido carboxilico" denota un grupo funcional orgánico que comprende la siguiente estructura: -COOH o -C02H.
Como se usa en la presente, "ciano" denota un grupo funcional orgánico que comprende la siguiente estructura: -C=N.
Como se usa en la presente, "cicloalquilo" se refiere a un grupo cíclico no aromático monovalente o policíclico saturado o parcialmente insaturado que contiene todos los átomos de carbono en la estructura del anillo, la cual puede ser sustituida con uno o más grupos sustituyentes definidos en la presente. En ciertas modalidades no limitantes el número de carbonos que comprende el grupo cicloalquilo puede ser entre 3 y 7.
Como se usa en la presente, "cicloalquenilo" se refiere a un radical cicloalquilo parcialmente insaturado derivado por la remoción de uno o más átomos de hidrógeno a partir de un sistema de anillo cicloalquilo de manera tal que contiene al menos un enlace doble carbono-carbono.
Como se usa en la presente, "halógeno" o "haluro" denota uno cualquiera o más de un átomo de fluoro, cloro, bromo o yodo.
Como se usa en la presente, "heterocíclico" se refiere a un grupo de anillo carbono aromático o no aromático cíclico monovalente saturado o parcialmente insaturado el cual contiene al menos un heteroátomo, en ciertas modalidades entre 1 a 4 heteroátomos, los cuales pueden ser pero no se limitan a uno o más de los siguientes: nitrógeno, oxígeno, azufre, fósforo, boro, cloro, bromo, o yodo. En modalidades no limitantes adicionales, el anillo heterocíclico puede estar comprendido de entre 1 y 10 átomos de carbono.
Como se usa en la presente, "hidroxilo" denota un grupo funcional orgánico que comprende la siguiente estructura: -OH.
Como se usa en la presente, "fosfonato" denota un grupo funcional orgánico que comprende la siguiente estructura: -P03H2 o -PO(OH)2.
Como se usa en la presente, "fosfato" denota un grupo funcional orgánico que comprende la siguiente estructura: -OPO3H2 o -0P0(0H)2.
La presente invención se refiere a nuevos compuestos, composiciones farmacéuticas que contienen los mismos, y métodos de uso inhibiendo la actividad enzimática de Glicerol 3-fosfato aciltransferasa (GPAT) . Tales compuestos, composiciones, y métodos tienen una variedad de usos terapéuticamente valiosos que incluyen, pero no se limitan a, tratamiento de obesidad. Las clases de compuestos de la presente invención están comprendidas de la fórmula I : en donde n es ya sea 0 ó 1. A se selecciona a partir del grupo que consiste de R1, 0, y S, en donde R1 es ya sea un H, hidroxilo, alquilo Ci-Ci0, alcoxi Ci-Ci0, alquenilo, arilo, alquilarilo o arilalquilo. X se selecciona a partir del grupo que consiste de un residuo carboxilato, un residuo fosfonato, un residuo fosfato, o un residuo alquilo Ci-Ci0 el cual es opcionalmente sustituido con uno o más residuos de carboxilato, fosfonato o fosfato. Y se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo Ci-C2o/ alquenilo, haluro, hidroxilo, alcoxi Ci-C2o, arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, o un anillo heterocíclico. En modalidades en donde Y es un alquilo C1-C20/ alquenilo, alcoxi C1-C20, arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, o un anillo heterocíclico, es opcionalmente sustituido en una o más posiciones con un haluro. Z se selecciona a partir del grupo que consiste de un H, un grupo hidroxilo, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico. En modalidades, en donde Z es un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico, la porción de anillo puede ser sustituida con uno o más grupos sustituyentes seleccionados a partir de un grupo alquilo Ci-C10, un grupo alcoxi C1-C10, un grupo hidroxilo, un grupo ciano, un grupo carboxilato, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico.
En ciertas modalidades, X está comprendido de ya sea un residuo de ácido carboxílico o un residuo fosfonato. En modalidades alternativas, X puede incluir un grupo alquilo Ci-Ci0, el cual es sustituido en una o más posiciones con ya sea un residuo fosfonato o carboxilato. En modalidades adicionales, el grupo alquilo puede comprender entre 1 y 3 carbonos. En cualquiera de lo mencionado anteriormente, X puede ser posicionado en el anillo fenilo en ya sea la posición orto, meta o para con respecto al enlazador sulfonilo. Como se muestra abajo, en ciertas modalidades no limitantes X ocupa ya sea la posición orto o meta.
En modalidades no limitantes adicionales, Y está comprendido de un grupo alquilo Ci-C20/ el cual puede ser ya sea un CH3, C5Hn, C8H17, C9Hi9, C14H29, y Ci6H33. Alternativamente, Y puede estar comprendido de un sistema de anillo arilo, el cual es opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno. En aún modalidades alternativas adicionales, Y está comprendido de un residuo alquilarilo, en donde la porción alquilo conecta el anillo arilo a la posición Y. La cadena alquilo puede tener entre 1 a 3 átomos de carbono, con ciertas modalidades que tienen 1 o 2 átomos de carbono. El residuo arilo en esta última modalidad puede ser sustituido con uno o más átomos de halógeno.
En aún modalidades no limitantes adicionales, Z es ya sea un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo, un átomo de halógeno, un grupo arilo opcionalmente sustituido o un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido. En cualquiera de lo mencionado anteriormente, Z puede estar en la posición en el anillo fenilo en ya sea la posición orto, meta o para con respecto al enlazador sulfonilo. Como se muestra abajo, en ciertas modalidades no limitantes Z ocupa ya sea la posición meta o para con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo. En aún modalidades adicionales, Z ocupa ya sea la posición meta o para con respecto a tanto el enlazador sulfonilo y posiciones X.
Basado en lo mencionado anteriormente, un compuesto de la presente invención es C-67 o FSG67 y está comprendido de la siguiente estructura: En otra modalidad, los compuestos de la presente invención pueden estar comprendidos de las siguientes estructuras : En una modalidad aún adicional, los compuestos de la presente invención pueden estar comprendidos de uno o más de los siguientes: ?? Basado en lo mencionado anteriormente, en ciertas modalidades no limitantes de la fórmula I, A está comprendido de NR1 en donde R1 es cualquiera de las modalidades definidas anteriormente. En modalidades adicionales R es un átomo de hidrógeno. Con este fin, ciertas modalidades de los compuestos de la presente invención pueden ser representadas por la fórmula II: en donde cada uno de n, X, Y, y Z son cualquiera de las modalidades definidas anteriormente.
En modalidades alternativas de la fórmula I, n está comprendido de 0. Con este fin, ciertos compuestos de la presente invención pueden ser representados por la fórmula en donde cada uno de A, X, Y, y Z son cualquiera de las modalidades definidas anteriormente.
En aún modalidades adicionales de la fórmula I, X está comprendido de un residuo de ácido carboxílico en ya sea las posiciones orto, meta o para con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo. Por consiguiente, ciertos compuestos de la presente invención pueden ser representados por la fórmula IVa: en donde cada uno de n, A, Y, y Z son cualquiera de las modalidades definidas anteriormente.
Mientras el residuo de ácido carboxílico puede ocupar ya sea las posiciones orto, meta o para, en ciertas modalidades ocupa la posición orto con respecto al enlazador sulfonilo. Con este fin, ciertos compuestos de la presente invención pueden ser representados por la fórmula IVb: en donde cada uno de n, A, Y, y Z son cualquiera, de las modalidades definidas anteriormente.
De manera similar, aunque puede ocupar ya sea las posiciones orto, meta o para, en ciertos compuestos de la presente invención Z ocupa ya sea las posiciones meta o para con respecto a tanto el enlazador sulfonilo como X, como se expone abajo en las fórmulas IVc y IVd: en donde cada uno de n, A, Y, y Z son cualquiera de las modalidades definidas anteriormente.
Basado en lo mencionado anteriormente las estructuras de las fórmulas IVc-d, los compuestos de la presente invención pueden estar comprendidos de uno o más de los siguientes: En modalidades adicionales de la fórmula I, X está comprendido de ya sea un grupo fosfato o un residuo alquilo que tiene 1 a 3 átomos de carbono, el cual es sustituido con un grupo fosfonato. Tales compuestos de la presente invención pueden ser representados por la fórmula V: en donde m está comprendido de ya sea 0, l, 2, ó 3 y cada uno de n, A, Y y Z son cualquiera de las modalidades definidas anteriormente.
Por consiguiente, los compuestos de la presente invención pueden estar comprendidos de uno o más de los siguientes : Sin la intención de limitar el campo posible de uso de los compuestos mencionados anteriormente, las indicaciones terapéuticas clínicas contempladas incluyen, pero no se limitan a, tratamiento de obesidad o la inducción de pérdida de peso. Una o más moléculas pequeñas, o sales farmacéuticas de los mismos, de la presente invención pueden ser sintetizadas y administradas como una composición usada para tratar y/o prevenir la obesidad dirigiendo la actividad de GPAT, en particular la actividad de mtGPAT, y/o estimulando la oxidación de ácido graso. Los compuestos de la presente invención pueden ser sintetizados usando métodos conocidos en la técnica o como se especifica de otro modo en la presente.
A menos que se especifique de otro modo, una referencia a un compuesto particular de la presente invención incluye todas las formas isoméricas del compuesto, para incluir todos los diastereómeros , tautómeros, enantiómeros , mezclas racémicas y/o otras de los mismos. A menos que se especifique de otro modo, una referencia a un compuesto particular también incluye formas iónicas, sal, solvato (por ejemplo hidrato), protegidas y profármacos de los mismos. Con este fin, puede ser conveniente o deseable preparar, purificar y/o manejar una sal correspondiente del compuesto activo, por ejemplo, una sal farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se discuten en Berge et al., 1977, "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol . 66, pp. 1-19, los contenidos de la cual se incorporan en la presente por referencia.
Basado en lo mencionado anteriormente, uno o más compuestos de la presente invención, ya sea solos o en combinación con otro ingrediente activo, pueden ser sintetizados y administrados como una composición terapéutica. Las composiciones de la presente invención pueden ser presentados para administración a humanos y otros animales en formas de dosificación unitaria, tales como tabletas, cápsulas, pildoras, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles, soluciones o suspensiones orales, emulsiones aceite en agua y agua en aceite que contienen cantidades adecuadas del compuesto, supositorios y en suspensiones o soluciones fluidas. Con este fin, las composiciones farmacéuticas pueden ser formuladas para adecuar una ruta seleccionada de administración, y pueden contener ingredientes específicos a la ruta de administración. Las rutas de administración de tales composiciones farmacéuticas son usualmente divididas en cinco grupos generales: inhalado, oral, transdermal, parenteral y supositorio. En una modalidad, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser adecuadas para administración parenteral por medio de inyección tal como inyección intravenosa, intradermal, intramuscular, intratecal o subcutánea. Alternativamente, la composición de la presente invención puede ser formulada para administración oral como se proporciona en la presente o se conoce de otro modo en la técnica.
Como se usa en esta especificación, los términos "diluyente farmacéutico" y "portador farmacéutico", tienen el mismo significado. Para administración oral, pueden ser preparadas formas de dosificación unitaria sólidas o fluidas. Para preparar composiciones sólidas tales como tabletas, el compuesto puede ser mezclado con ingredientes convencionales tales como talco, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, silicato de aluminio y magnesio, sulfato de calcio, almidón, lactosa, acacia, metilcelulosa y materiales funcionalmente similares como diluyentes o portadores farmacéuticos. Las cápsulas pueden ser preparadas mezclando el compuesto con un diluyente farmacéutico inerte y llenar la mezcla en una cápsula de gelatina dura de tamaño apropiado. Las cápsulas de gelatina suave son preparadas por encapsulación a máquina de una suspensión del compuesto con un aceite vegetal aceptable, petrolato líquido ligero u otro aceite inerte.
Formas de dosificación unitaria fluidas o de administración oral tales como jarabes, elíxires, y suspensiones, pueden ser preparadas. Las formas pueden ser disueltas en un vehículo acuoso junto con azúcar u otro endulzante, agentes saborizantes aromáticos y preservativos para formar un jarabe. Las suspensiones pueden ser preparadas con un vehículo acuoso con la ayuda de un agente de suspensión tal como acacia, tragacanto, metilcelulosa y similares .
Para formas de dosificación unitaria fluida para administración parenteral pueden ser preparadas utilizando el compuesto y un vehículo estéril. En la preparación de las soluciones el compuesto puede ser disuelto en agua para inyección y filtrado esterilizado antes del llenado en un vial adecuado o ampolleta y sellado. Adyuvantes tales como un anestésico local, preservativo y agentes amortiguadores pueden ser disueltos en el vehículo. La composición puede ser congelada después del llenado en un vial y el agua removida bajo vacío. El polvo liofilizado puede entonces ser elaborado a escala en el vial y reconstituido previo al uso.
La dosis y duración de la terapia dependerá de una variedad de factores, que incluye (1) la edad del paciente, peso corporal y función de órgano (por ejemplo, función hepática y renal) ; (2) la naturaleza y magnitud del proceso de enfermedad a ser tratado, así como también cualquiera de las medicaciones concomitantes y de co-morbidez significante existente siendo tomadas, y (3) parámetros relacionados con el fármaco tales como la ruta de administración, la frecuencia y duración de dosificación necesaria para efectuar una cura, y el índice terapéutico del fármaco. En general, la dosis será elegida para lograr niveles en suero de 1 ng/ml hasta 100 ng/ml con el objetivo de lograr concentraciones efectivas en el sitio objetivo de aproximadamente 1 gg/ml a 10 yg/ml . Usando factores tales como estos, una cantidad terapéuticamente efectiva puede ser administrada para asi aliviar los síntomas objetivo de y/o tratar o prevenir la obesidad o enfermedades relacionadas a estos. La determinación de una cantidad terapéuticamente efectiva está también dentro de las capacidades de aquellos expertos en la técnica, especialmente en vista de la descripción detallada y ejemplos proporcionados en la presente.
Ejemplos Ejemplo 1- Síntesis Química de los compuestos 5a-5d La síntesis de los compuestos 5a- 5d se realizó usando el Esquema de Reacción l, como se ilustra en la figura 1 en la presente.
Condiciones de reacción: (a) NBS, hv, CH3CN; (b) NaN3f EtOH, reflujo; (d) C9Hi9S02Cl o C5HH.SO2CI, piridina, CH2CI2, 0°C a temperatura ambiente; (e) K+0"t-Bu, Et20, H20, 0°C a temperatura ambiente.
La primera serie de compuestos se derivó de los metilbenzoatos de metilo diversamente sustituidos . Las meta y/o para-aminas se elaboraron siguiendo un protocolo de literatura. (Okada, Y. et al., Bromination by means of sodium monobromoisocyanurate (SMBI) . Org. Biomolec. Chem. 2003, 1, 2506-2511) . Después de la bromación radical del grupo metilo con NBS en CH3CN, el bromo se desplazó por reflujo con NaN3 en EtOH. Bajo condiciones Staudinger, la azida se redujo a la amina libre 3, la cual puede entonces ser acoplada a cloruro de 1-pentano- o 1-nonansulfonilo, preparado como se describe. (Blotny, G. , A new, mild preparation of sulfonyl chlorides, Tet. Lett. 2003, 44, 1499-1501). Finalmente, el éster metílico 4 se convirtió al producto carboxilato 5 por reacción con t-butóxido de potasio en Et20 con agua presente .
Procedimiento General para 4a-d. A una solución agitada de la amina apropiada 3a-c (1.2 mmol) en CH2C12 (4 mL) a 0°C, el cloruro de sulfonilo (1.3 mmol) se agregó por goteo, seguido por Et3N (1.3 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente, en donde se agitó por 2-3 h. Se agregó solución saturada de NH4C1 para apagar la reacción, y la mezcla se extrajo con 3 x 10 mL de CH2C12. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04, concentraron in vacuo, y los productos se purificaron por cromatografía instantánea (20% EtOAc en hexanos) .
Procedimiento General para 5a-d. A una suspensión agitada de t-butóxido de potasio (5.88 mmol) en Et20 (15 mL) enfriada a 0°C, se agregó agua (1.4 mmol) vía jeringa. La suspensión se agitó por 5 min, y se agregó 4a-d (0.67 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que el material de partida desapareció por análisis de TLC (20% EtOAc en hexanos) . Se agregó agua helada hasta que se forman 2 capas claras. La capa acuosa se separó y acidificó con 1 M HC1. El producto se extrajo entonces con Et20 (3 x 20 mL) y evaporó in vacuo para proporcionar 5a-d. Ácido 4- (Pentilsulfonamidometil) benzoico 5a. pf = 188-189 °C; ?? NMR ( eOD) d 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 4.31 (s, 2H) , 2.95 (t, J = 8.1 Hz, 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.33 (m, 4H) , 0.91 (t, J= 6.9 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 169.5, 145.0, 131.1, 131.0, 128.8, 53.6, 47.2, 31.4, 24.3, 23.2, 14.0; HRMS (FAB) caled para Ci3H20NO4S [M + H]+, 286.11131; encontrado, 286.1111. Ácido 4- (Nonilsulfonamidometil) benzoico 5b. pf = 178-180°C; XH NMR (MeOD) d 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.51 (d, J= 8.1 Hz, 2H) , 4.32 (s,. 2H) , 2.94 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 1.71 (m, 2H) , 1.30 (m, 12H) , 0.92 (t, J= 6.9 Hz, 3H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 167.0, 143.6, 129.5, 129.3, 127.5, 51.5, 45.4, 31.2, 28.6, 28.5, 28.4, 27.4, 23.0, 22.0, 13.9; HRMS (FAB) caled para C17H28 O4S [M + H]+, 342.17391; encontrado, 342.17447. Ácido 3- (Pentilsulfonamidometil) benzoico 5c. pf = 160-161 °C; ?? NMR (MeOD) d 8.08 (s, 1H) , 7.97 (d, J= 7.8 Hz, 1H) , 7.63 (d, J= 7.8 Hz, 1H) , 7.48 (t, J= 7.8 Hz, 1H) , 4.31 (s, 2H) , 2.92 (t, J = 8.1 Hz , 2H) , 1.72 (m, 2H) , 1.33 (m, 4H) , 0.91 (t, J= 6.9 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 169.5, 140.2, 133.5, 132.3, 130.1, 129.8, 129.7, 53.6, 47.1, 31.4, 24.3, 23.1, 14.0; HRMS (FAB) caled para Ci3H18N03S [M - OH]+, 268.10074; encontrado, 268.09988. Ácido 3- (Nonilsulfonamidometil) benzoico 5d. pf 150- 151 °C; XH NMR (MeOD) d 8.08 (s, 1H) , 7.97 (d, J= 7.6 Hz, 1H) , 7.63 (d, J= 7.6 Hz, 1H) , 7.48 (t, J= 7.6 Hz , 1H) , 4.31 (s, 2H) , 2.91 (t, J = 8.0 Hz , 2H) , 1.70 (m, 2H) , 1.28 (m, 12H) , 0.92 (t, J= 7.2 Hz) ; 13C NMR (MeOD) d 169.5, 140.2, 133.5, 132.3, 130.1, 129.9, 129.7, 53.7, 47.2, 32.9, 30.4, 30.3, 30.1, 29.2, 24.6, 23.6, 14.4; HRMS (FAB) caled para Ci7H28N04S [M + H]+, 342.17391; encontrado, 342.17333.
Ejemplo 2 - Síntesis de los compuestos 5e y 5f La síntesis de los compuestos 5e-5f se realizó usando el Esquema de Reacción 2, como se ilustra en la figura 2 en la presente.
Condiciones de reacción: (a) NH3, MeOH, reflujo; (b) NaH, RS02C1, DMF, 0°C a temperatura ambiente; (c) NaOH, THF/H20, 0°C a temperatura ambiente.
Los carboxilatos orto- sustituidos requieren un procedimiento diferente que los compuestos meta y para. La indolinona 6, formada en una reacción entre el orto-bromuro y gas amoníaco en MeOH, (Kovtunenko, V. A., et al . ; Condensation of o- (bromomethyl) benzoic acid with amines, Ukrainskii Khimicheskii Zhurnal 1983, 49, 1099-1103) se acopló a los cloruros de sulfonilalcano con NaH en DMF, y el enlace ?-lactama resultante fue fácilmente desdoblado con NaOH en THF/H20 para producir los ácidos carboxílicos 5e y 5f .
Procedimiento General para 7a-b. 1.5 mmol de 6 se agregó a DMF (8 mL) , y la solución se enfrió a 0°C. Se agregó NaH (1.65 mmol), seguido por el cloruro de sulfonilo (1.8 mmol) , y la mezcla se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (25% MeOH en CHC13) . Cuando se completó, se agregó solución saturada de cloruro de amonio (80 mL) , el producto se extrajo con EtOAc (3 x 20 mL) , se secó sobre MgS04, y evaporó in vacuo. El producto se purificó por cromatografía instantánea (2% MeOH en CHC13) .
Procedimiento General para 5e-f. 7a-b (0.66 mmol) se disolvió en THF (3 mL) , y la solución se enfrió a 0°C. Se agregó entonces NaOH 1M (1 mL, 10 equiv) , y la solución se agitó y calentó a temperatura ambiente . El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (1:1 EtOAc : hexanos ) . Cuando el material de partida se ha hecho reaccionar completamente, se agregó NaHC03 saturado (30 mL) , y la solución se lavó con EtOAc. La fase acuosa se acidificó a pH 3 con HC1 1M( y el producto se extrajo con EtOAc, se secó sobre MgS04, y evaporó in vacuo. Ácido 2 - (Pentilsulfonamidometil) benzoico 5e. pf = 100°C; XH NMR (DMSO-d6) d 13.0 (s, 1H) , 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 7.60 (m, 2H) , 7.39 (m, 2H) , 4.51 (d, J = 6.3 Hz , 2H) , 2.92 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 1.61 (m, 2H) , 1.25. (m, 4H) , 0.84 (t, J= 6.9 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 170.3, 140.8, 133.6, 132.3, 131.3, 130.7, 128.8, 53.6, 46.5, 31.3, 24.3, 23.1, 14.0; HRMS (FAB) caled para C13H20 O4S [M + H]+, 286.11131; encontrado, 286.11103. Ácido 2 - (Nonilsulfonamidometil) benzoico 5f. pf 79-82 °C; LH NMR (CDC13) d 8.04 (d, J= 7.2 Hz, 1H) , 7.60 (m, 2H) , 7.43 (t, J= 6.8 Hz, 1H) , 4.60 (s, 2H) , 2.89 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.66 (m, 2H) , 1.28 (m, 12H) , 0.92 (t, J= 7.2 Hz , 3H) ; 13C NMR (DMS0-d5) d 168.3, 139.7, 132.1, 130.4, 129.8, 129.0, 127.2, 51.7, 44.1, 31.3, 28.7, 28.6, 28.5, 27.6, 23.1, 22.1, 14.0; HRMS (FAB) caled para Ci7H28N04S [M + H]\ 342.17391; encontrado, 342.17478.
Ejemplo 3 - Síntesis de los compuestos 13a-13f La síntesis de los compuestos 13a- 13f se realizó usando el Esquema de Reacción 3, como se ilustra en la figura 3 en la presente.
Condiciones de reacción: (a) NBS, hv, CH3CN; (b) P(OEt)3, reflujo; (c) H2S04, EtOH, reflujo; (d) C9H19S02C1 o C5H11SO2CI , piridina, CH3CN, 0°C a temperatura ambiente; (e) TMSBr, CH2C12, temperatura ambiente.
La síntesis de los fosfonatos de alquilo 13a- f comenzó con la protección de las toluidinas de partida como la anilina bis-acilada 8 (Brown, J. J. ; Brown, R. K. Preparation of o- and p-acetamidobenzaldehydes , Can. J. Chem. 1955, 33, 1819-1823) . La bromación libre de radical con NBS en CH3CN proporcionó bromuro de bencilo 9, el cual se convirtió a fosfonato 10 a través de la reacción Arbuzov con trietilfosfito . La anilina fue no enmascarada por exposición a una solución acídica a reflujo de EtOH. Después del acoplamiento de la amina con el cloruro de alcansulfonilo para producir la sulfonamida 12, la porción de ácido fosfónico se reveló por tratamiento con TMSBr en CH2C12 seguido por metanólisis.
Procedimiento General para 9a-c. 8a-c (31.3 mmol) se disolvió en CH3CN (150 mL) y se agregó NBS (31.3 mmol) . La solución se calentó entonces a reflujo con una Lámpara solar de 275 W. El progreso de la reacción se monitoreo por TLC (30% EtOAc en hexanos) . La solución se enfrió entonces, evaporó in vacuo, y la mezcla se purificó por cromatografía instantánea (30% EtOAc en hexanos) .
Procedimiento General para lOa-c. Se disolvió 9a-c (22.2 mmol) en P(0Et)3 (25 mL, 6.6 equiv) , y la solución se calentó a reflujo por 18 h con un condensador a reflujo calentado a 50 °C. El progreso de la reacción se monitoreo por TLC (30% EtOAc en hexanos) . La mezcla de reacción se enfrió entonces, y el P(OEt)3 se removió in vacuo. El producto se purificó entonces por cromatografía instantánea (.2% MeOH en CHCI3) .
Procedimiento General para lla-c. Se agregó H2S04 concentrado (3 mL) a una solución agitada de lOa-c (9.7 mmol) en EtOH (60 mL) . La solución se calentó a reflujo por 18 h. El progreso de la reacción se monitoreo por TLC (5% MeOH en CHCI3) . La solución se diluyó con agua (100 mL) , lavó con EtOAc (30 mL) , y la fase acuosa se llevó a pH 9 con solución saturada de NaHC03. El producto se extrajo con EtOAc (3 x 30 mL) , las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04 , el solvente se removió in vacuo.
Procedimiento General para 12a-b. Se disolvió lia (1.36 mmol) en CH3CN (3.3 mL) , después se agregó piridina (10.8 mmol) . La solución se enfrió a 0°C, y el cloruro de sulfonilo (1.63 mmol) se agregó lentamente por jeringa. La solución se dejó calentar a temperatura ambiente. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (5% MeOH en CHC13) . Cuando se completó, la reacción se apagó agregando solución saturada de NaHC03. El producto se extrajo con EtOAc (3 x 5 mL) , lavó con HCl 1N, y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgS04 y concentraron in vacuo. El producto se purificó por cromatografía instantánea (2% MeOH en CHC13) .
Procedimiento General para 12c- f. Cloruro de sulfonilo (4.9 mmol) se agregó por goteo a una solución de 11b-c (3.3 mmol) en CH3CN (13 mL) a 0°C. Se agregó Et3N (3.63 mmol) por goteo, y la solución se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (10% MeOH en CHC13) . Cuando se completó (aproximadamente 2 h) , la reacción se apagó agregando solución saturada de bicarbonato de sodio. El producto se extrajo con EtOAc (3 x 10 mL) , y los extractos orgánicos combinados^ se secaron sobre MgS04 y concentraron in vacuo. La cromatografía instantánea (2% MeOH en CHC13) proporcionó el producto .
Procedimiento General para 13a- f. Se agregó TMSBr (8.6 mmol) a una solución de 12a- f (0.277 mmol) en CH2C12 (2 mL) , y la solución se agitó a temperatura ambiente. Después de 24 h, la reacción se apagó agregando MeOH (3 x 1.6 mL) . La solución se concentró ín vacuo, y disolvió en solución saturada de NaHC03 (10 mL) . Esta solución se lavó con Et20 (5 mL) , después se acidificó con HC1 1N. El producto se extrajo con Et20 (3 x 5 mL) , y los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgS04 y secaron in vacuo. Ácido 2- (Pentilsulfonamido) bencilfosfónico 13a. XH MR (DMSO d6) d 9.73 (s, 1H) , 7.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.25 (ra, 2H) , 7.13 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 3.14 (t, J= 8.0 Hz, 2H) , 3.10 (d, J= 20.8 Hz, 2H) , 1.71 (m, 2H) , 1.32 (m, 4H) , 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 136.2 (d, J = 5.8 Hz) , 131.6 (d, J= 6.4 Hz) , 127.6 (d, J = 10.0 Hz), 127.1 (d, J = 3.4 Hz) , 125.0 (d, J = 2.8 Hz) , 123.7 (d, J = 3.0 Hz), 52.3, 32.5 (d, J = 130.3 Hz) , 29.4, 22.7, 21.3, 13.3.
Acido 2 - (Nonilsulfonamido) bencilfosfónico 13b. pf = 104-106 °C; XH NMR (DMSO-d6) d 9.80 (s, 1H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.25 (m, 2H) , 7.15 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 3.14 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 3.09 (d, J = 21.2 Hz, 2H) , 1.68 (m, 2H) , 1.35 (m, 2H) , 1.22 (m, 8H) , 0.85 (t, J = 6.8 Hz) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 136.3 (d, J= 5.7 Hz), 131.8 (d, J= 6.5 Hz), 127.7 (d, J = 8.7 Hz) , 127.3 (d, J = 3.3 Hz) , 125.2 (d, J = 2.6 Hz) , 123.8 (d, J = 3.0 Hz) , 52.3, 32.6 (d, J = 130.5 Hz) , 31.2, 28.6, 28.5, 28.4, 27.4, 23.2, 22.0, 13.9. Ácido 3 - (Pentilsulfonamido) bencilfosfónico 13c. pf = 127-128 °C; XH NMR (MeOD) d 7.27 (t, J= 8.0 Hz, 1H) , 7.22 (s, 1H) , 7.11 (m, 2H) , 3.11 (d, J = 21.6 Hz, 2H) , 3.09 (t, J= 7.8 Hz, 2H) , 1.78 (m, 2H) , 1.38 (ra, 4H) , 0.91 (t, J= 6.4 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 139.5 (d, J= 3.3 Hz) , 136.0 (d, J= 9.3 Hz), 130.3 (d, J = 3.4 Hz), 126.8 (d, J= 5.9 Hz), 122.5 (d, J = 6.5 Hz) , 119.3 (d, J = 3.4 Hz), 51.9, 35.8 (d, J = 134.2 Hz), 31.2, 24.2, 23.1, 14.0; HRMS (FAB) caled para Ci2H21N05PS [M + H]+, 322.08781; encontrado, 322.08830. Ácido 3- (Nonilsulfonamido) bencilfosfónico 13d. pf = 149-150°C; XH NMR (MeOD) d 7.27 (t, J= 8.0 Hz, 1H) , 7.22 (s, 1H) , 7.11 (m, 2H) , 3.11 (d, J = 21.6 Hz, 2H) , 3.08 (t, J= 7.6 Hz, 2H) , 1.77 (m, 2H) , 1.33 (ra, 12H) , 0.91 (t, J= 6.4 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 139.5 (d, J = 3.0 Hz) , 130.3 (d, J= 3.0 Hz), 126.8 (d, J= 6.1 Hz) , 122.5, (d, J= 6.3 Hz) , 119.3 (d, J= 3.5 Hz), 51.9, 35.8 (d, J = 134.0 Hz) , 32.9, 30.3, 30.2, 30.1, 29.1, 24.5, 23.6, 14.3; HRMS (FAB) caled para Ci6H29N05PS [M + H]+, 378.15041; encontrado, 378.14975. Ácido 4 - (Pentilsulfonamido) bencilfosfónico 13e. pf = 198-200°C; XH NMR (MeOD) d 7.29 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 2H) , 7.20 (d, J= 8.4 Hz, 2H) , 3.10 (d, J= 21.6 Hz, 2H) , 3.05 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.78 (m, 2H) , 1.34 (m, 4H) , 0.90 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 137.9 (d, J = 3.7 Hz), 131.8 (d, J= 6.3 Hz) , 130.6 (d, J= 9.6 Hz) , 121.4 (d, J= 2.9 Hz), 51.8, 35.1 (d, J= 134.6 Hz) , 31.2, 24.2, 23.1, 14.0; HRMS (FAB) caled para C12H20NO5PS [M]+, 321.07998; encontrado, 321.07934. Ácido 4 - (Nonilsulfonamido) bencilfosfónico 13f. pf = 201-203 °C; H NMR (MeOD) d 7.29 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 2H) , 7.20 (d, J= 8.4 Hz, 2H) , 3.09 (d, J= 21.2, 2H) , 3.05 (t, J= 8.0 Hz, 2H) , 1.77 (m, 2H) , 1.29 (m, 12H) , 0.91 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 137.9 (d, J = 3.3 Hz), 131.8 (d, J= 6.5 Hz), 130.6 (d, J= 9.3 Hz) , 121.4 (d, J= 3.0 Hz), 51.8, 35.1 (d, J= 134.5 Hz) , 32.9, 30.3, 30.2, 30.1, 29.1, 24.5, 14.4; HRMS (FAB) caled para Ci6H29N05PS [M + H] \ 378.15041; encontrado, 378.14945.
Ejemplo 4 - Síntesis de los compuestos 15a-15i La síntesis de los compuestos 15a-15i se realizó usando el Esquema de Reacción 4, como se ilustra en la figura 4 en la presente .
Condiciones de reacción: (a) RS02C1, piridina, CH2C12, 0°C a ta; (b) K+0"t-Bu, Et20, H20, 0°C a temperatura ambiente .
Los compuestos 15a-i se sintetizaron por acoplamiento de la anilina de partida comercialmente disponible con una variedad de cloruros de sulfonilo. Las sulfonamidas resultantes 14a- i se convirtieron entonces a los productos finales por hidrólisis con t-butóxido de potasio y agua en éter. Los cloruros de sulfonilo aromáticos se usaron así como también la cadena C9 saturada en un intento para imitar la porción CoA del sustrato acil-CoA, contrario a la cadena alquilo.
Procedimiento General para 14a-i. A una solución agitada del material de partida anilina (3.3 mmol) en CH2C12 (12 mL) a 0o C se agregó piridina (7.5 equiv) . El cloruro de sulfonilo (1.2 equiv) se agregó entonces lentamente vía jeringa. La solución se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (20% EtOAc en hexanos) . Cuando se completó, la reacción se vertió en solución saturada de NaHC03 (45 mL) , se extrajo con CH2C12 (3 x 15 mL) , y lavó con HCl 1M (50 mL) . Las fases orgánicas combinadas se concentraron in vacuo, y la recristalización de EtOAc/hexanos proporcionó 14a-i.
Procedimiento General para 15a-i. A una suspensión agitada de t-butóxido de potasio (5.88 mmol) en Et20 (15mL) enfriada a 0°C, se agregó agua (1.4 mmol) vía jeringa. La suspensión se agitó por 5 min, y se agregó 14a-i (0.67 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que el material de partida desapareció por análisis de TLC (20% EtOAc en hexanos) . Se agregó agua helada hasta que se forman 2 capas claras. La capa acuosa se separó y acidificó con HCl 1M. El producto se extrajo entonces con Et20 (3 x 20 mL) y evaporó in vacuo para proporcionar 15a- i. Ácido 4- (Nonilsulfonamido) benzoico 15a. pf = 193- 194 °C; XH NMR (MeOD) d 7.99 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 3.17 (t, J= 8.0 Hz , 2H) , 1.78 (m, 2H) , 1.40 (m, 2H) , 1.28 (m, 10H) , 0.89 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 169.3, 144.3, 132.3, 126.7, 118.8, 52.4, 32.9, 30.2, 30.2, 30.0, 28.9, 24.4, 23.6, 14.3; HRMS (FAB) caled para Ci6H25 04S [M]\ 327.15043; encontrado, 327.14957. Ácido 4- (Fenilsulfonamido) benzoico 15b. pf = 186-188 °C; XH N R (DMSO-ds) d 12.72 (br s, 1H) , 10.82 (br s, 1H) , 7.80 (m, 4H) , 7.61 (t, J= 6.8 Hz, 1H) , 7.56 (t, J= 8.0 Hz , 2H) , 7.20 (t, J= 7.2 Hz, 2H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 166.6, 141.9, 142.0, 133.2, 130.7, 129.4, 126.6, 125.6, 118.2.; HRMS (FAB) caled para Ci3H1:LN0S [M]+, 277.04088; encontrado, 277.04077. Ácido 4- (4 -Clorofenilsulfonamido) benzoico 15c. pf = 254-256 °C; XH NMR (DMS0-d6) d 12.76 (br s, 1H) , 10.86 (br s, 1H) , 7.81 (d, J = 6.4 Hz, 4H) , 7.65 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 7.18 (d, J = 6.8 Hz, 2H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 166.6, 141.5, 138.1, 138.0, 130.7, 129.5, 128.5, 125.9, 118.4; HRMS (FAB) caled para Ci3HnClN04S [M + H]+, 312.00973; encontrado, 312.00859. Ácido 3 - (Nonilsulfonamido) benzoico 15d. pf = 183- 184 °C; XH NMR (DMSO-d6) d 13.03 (br s, 1H) , 9.98 (s, 1H) , 7.81 (s, 1H) , 7.64 (m, 1H) , 7.44 (m, 2H) , 3.07 (t, J= 7.6 Hz, 2H) , 1.65 (m, 2H) , 1.21 (m, 12H) , 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (DMSO-de) d 166.8, 138.7, 131.8, 129.5, 124.3, 123.2, 119.7, 50.5, 31.1, 28.5, 28.5, 28.3, 27.1, 22.9, 22.0, 13.8; HRMS (FAB) caled para CX6H26N04S [M + H]+, 328.15826; encontrado, 328.15640. Ácido 3- (Fenilsulfonamido) benzoico 15e. pf = 203- 204 °C; XH NMR (DMSO- d6) d 13.02 (br s, 1H) , 10.51 (br s, 1H) , 7.75 (d, J = 7.2 Hz, 2H) , 7.68 (s, 1H) , 7.56 (m, 4H) , 7.34 (m, 2H) ; 13C NMR (DMSOd6) d 166.6, 139.2, 137.9, 133.0, 131.7, 129.4, 129,3, 126.5, 124.8, 124.0, 120.5; HR S (FAB) caled para Ci3HnN04S [M]+, 277.04088; encontrado, 277.04054. Ácido 3- (4 -Clorofenilsulfonamido) benzoico 15f. pf = 242-243 °C; ?? NMR (MeOD) d 7.76 (d, J = 8.8 Hz, 4H) , 7.52 (d, J= 8.4 Hz, 2H) , 7.34 (m, 2H) ; 13C NMR (MeOD) d 168.9, 140.2, 139.5, 139.0, 133.0, 130.3, 130.3, 129.8, 127.0, 126.4, 123.1; HRMS (FAB) caled para Ci3H10ClNO4S [M]+, 311.00191; encontrado, 311.00152.
C67 - Ácido 2- (Nonilsulfonamido) benzoico 15g. pf = 122-124 °C; XH NMR (MeOD) d 8.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.73 (d, J= 8.4 Hz, 1H) , 7.59 (t, J= 7.6 Hz, 1H) , 7.16 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 3.18 (t, J= 8.0 Hz, 2H) , 1.71 (ra, 2H) , 1.24 (ra, 12H) , 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 171.3, 142.4, 135.7, 133.1, 123.8, 118.8, 117.0, 52.3, 32.9, 30.2, 30.1, 29.9, 28.8, 24.4, 23.6, 14.4; HRMS (FAB) caled para Ci6H25 04S [M]+, 327.15043; encontrado, 327.15044. Ácido 2 - (Fenilsulfonamido) benzoico 15h. pf = 213-215 °C; XH NMR (MeOD) d 7.95 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H) , 7.56 (t, J= 7.6 Hz, 1H) , 7.49 (m, 3H) , 7.09 (t, J= 7.6 Hz, 1H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 169.7, 139.7, 138.5, 134.4, 133.5, 131.5, 129.4, 126.8, 123.3, 118.4, 116.7; HRMS (FAB) caled para Ci3H 04S [M]+, 277.04088; encontrado, 277.04124. Ácido 2- (4 -Clorofenilsulfonamido) benzoico 15i. pf = 202-203 °C; ?? NMR (DMSO-d6) d 13.98 (br s, 1H) , 11.12 (br s, 1H) , 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.63 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.54 (t, J = 1.6 Hz , 1H) , 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.14 (t, J = 7.2 Hz, 1H) ; 13C NMR (MeOD) d 171.1, 141.3, 140.6, 139.0, 135.4, 132.8, 130.3, 129.9, 124.7, 120.6, 118.3; HRMS (FAB) caled para Ci3H10ClNO4S [M]+, 311.00191; encontrado, 311.00136.
Ejemplo 5 - Síntesis de los compuestos 17a-17f La síntesis de los compuestos 17a- 17f se realizó usando el Esquema de Reacción 5, como se ilustra en la figura 5 en la presente.
Condiciones de reacción: (a) RS02C1, piridina, CH2C12, 0°C a ta; (b) K+0"tBu, Et20, H20, 0°C a temperatura ambiente .
Los compuestos 17a- f fueron designados para probar el efecto de los enlazadores de diferentes longitudes en la porción arilsulfonamida de la molécula. Estos se producen en la misma manera como los compuestos 15a- i, partiendo con la anilina comercialmente disponible y acoplamiento a ya sea bencilcloruro de sulfonilo o feniletilcloruro de sulfonilo con piridina en cloruro de metileno para proporcionar las sulfonamidas 16a-f. Los ásteres de metilo se convirtieron entonces a los ácidos carboxílicos 17a-f con t-butóxido de potasio y agua en éter.
Procedimiento General para 16a- f. A una solución agitada del material de partida anilina (3.3 mmol) en CH2C12 (12 mL) a 0°C se agregó piridina (7.5 equiv) . El cloruro de sulfonilo (1.2 equiv) se agregó entonces lentamente vía jeringa. La solución se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (20% EtOAc en hexanos) . Cuando se completó, la reacción se vertió en solución saturada de NaHC03 (45 mL) , se extrajo con CH2C12 (3 x 15 mL) , y lavó con HC1 1M (50 mL) . Las fases orgánicas combinadas se concentraron in vacuo, y el sólido resultante se recristalizó de EtOAc/hexanos para proporcionar 16a-f.
Procedimiento General para 17a- f. A una suspensión agitada de t-butóxido de potasio (5.88 mmol) en Et20 (15 mL) enfriada a 0°C, se agregó agua (1.4 mmol) vía jeringa. La suspensión se agitó por 5 min, y se agregó 16a-f (0.67 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que el material de partida desapareció por análisis de TLC (20% EtOAc en hexanos) . Se agregó agua helada hasta que se forman 2 capas claras. La capa acuosa se separó y acidificó con HC1 1M. El producto se extrajo entonces con Et20 (3 x 20 mL) y evaporó in vacuo para proporcionar 17a- f. Ácido 4 - (Fenilmetilsulfonamido) benzoico 17a. pf = 221-223 °C; XH NMR (DMSO-d6) d 12.72 (br s, 1H) , 10.29 (s, 1H) , 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.33 (m, 3H) , 7.24 (m, 4H) , 4.56 (s, 2H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 166.8, 142.7, 130.9, 130.8, 129.2, 128.3, 128.3, 124.8, 117.2, 57.1; HRMS (FAB) caled para Ci4H14N04S [M + H]+, 292.06435; encontrado, 292.06397. Ácido 4 - (2 -Feniletilsulfonamido) enzoico 17b. pf = 222-223 °C; ? NMR (DMSO-d6) d 12.74 (br s, 1H) , 10.38 (s, 1H) , 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.26 (m, 2H) , 7.23 (m, 2H) , 7.18 (m, 3H) , 3.48 (t, J = 6.4, 2H) , 2.98 (t, J = 6.4 Hz, 2H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 166.8, 142.4, 137.8, 130.8, 128.4, 128.3, 126.5, 125.2, 117.8, 51.9, 29.0; HRMS (FAB) caled para Ci5H16N04S [M + H]+, 306.08000; encontrado, 306.07892. Ácido 3- (Fenilmetilsulfonamido) benzoico 17c. pf = 205-206 °C; XH NMR (DMSO-d6) d 13.02 (br s, 1H) , 10.06 (s, 1H) , 7.79 (s, 1H) , 7.64 (d, J= 7.2 Hz , 1H) , 7.42 (m, 2H) , 7.33 (m, 3H) , 7.25 (m, 2H) , 4.48 (s, 2H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 166.9, 138.7, 131.8, 130.9, 129.4, 129.3, 128.3, 128.2, 124.1, 122.9, 119.4, 57.0; HRMS (FAB) caled para C14H14N04S [M + H]+, 292.06435; encontrado, 292.06448. Ácido 3- (2-Feniletilsulfonamido)benzoico 17d. pf = 199-200°C; XH NMR (DMS0-C16) d 13.06 (s, 1H) , 10.11 (s, 1H) , 7.85 (S, 1H) , 7.67 (d, J = 6.8 Hz, 1H) , 7.48 (m, 2H) , 7.24 (m, 2H) , 7.17 (m, 3H) , 3.38 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 2.99 (t, J = 8.0 Hz, 2H) ; 13C NMR (DMSO- Ci6) d 166.8, 138.5, 137.9, 131.9, 129.6, 128.4, 128.3, 126.5, 124.6, 123.8, 120.2, 51.7, 29.0; HRMS (FAB) caled para Ci5Hi6N04S [M + H] +, 306.08000; encontrado, 306.08051. Ácido 2 - (Fenilmetilsulfonamido) benzoico 17e. pf = 216-219 °C; XH NMR (D SO-d6) d 13.86 (br s, 1H) , 10.68 (s, 1H) , 7.99 (d, J= 7.6 Hz, 1H) , 7.58 (m, 2H) , 7.32 (m, 3H) , 7.19 (m, 3H) , 4.69 (s, 2H) ; 13C MR (DMSO-d6) d 169.6, 140.7, 134.6, 131.5, 130.7, 128.8, 128.4, 128.3, 122.4, 117.2, 115.4, 57.2; HRMS (FAB) caled para C14H13N04S [M]+, 291.05653; encontrado, 291.05655. Ácido 2- (2 -Feniletilsulfonamido) benzoico 17f. pf = 157-159 °C; ? NMR (DMSO-dg) d 13.90 (br s, 1H) , 10.74 (br S, 1H) , 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.61 (d, J = 4.4 Hz, 2H) , 7.20 (m, 2H) , 7.16 (m, 4H) , 3.61 (t, J= 8.0 Hz, 2H) , 2.98 (t, J= 8.0 Hz, 2H) ; 13C NMR (DMSO-d6) d 169.7, 140.3, 137.5, 134.6, 131.6, 128.3, 128.2, 126.5, 122.6, 117.7, 115.9, 52.0, 28.9; HRMS (FAB) caled para Ci5H16N04S [M + H]+, 306.08000; encontrado, 306.07886.
Ejemplo 6 - Síntesis de los compuestos 21a-21c La síntesis de los compuestos 21a-21c se realizó usando el Esquema de Reacción 6, como se ilustra en la figura 6 en la presente.
Condiciones de reacción: (a) dietil fosfito, Et3N, Pd(PPh3)4, EtOH, reflujo; (b) H2S04, EtOH, reflujo; (c) C8Hi7S02Cl, Et3N, CH2C12, 0°C a temperatura ambiente; (d) TMSBr, CH2C12, temperatura ambiente.
La síntesis de los ácidos arilfosfónicos 21a-c se muestra en el Esquema de Reacción 6. Bromuro de arilo 18 se sometió a acoplamiento de arilhaluro catalizado por paladio con dietil fosfito para instalar la funcionalidad fosfonato. (GooBen, L. J., et . al.; Dezfuli, M. K. Practical Protocol for the Palladium-Catalyzed Synthesis of Arylphosphonates from Bromoarenes and Dietil Phosphite, Synlett 2005, 3, 445) . La anilina entonces se desprotegió por reflujo en etanol acídico, y la amina libre se acopló con octancloruro de sulfonilo comercialmente disponible para producir 20. El compuesto final se obtuvo entonces desprotegiendo el dietil fosfonato con TMSBr.
Procedimiento General para 19a-c. El bromuro de partida 18 (1.96 mmol) se agregó a un matraz de fondo redondo que contiene dietil fosfito (2.35 mmol), tetraquis (trifenilfosfina)paladio (0) (0.04 mmol), Et3N (2.94 mmol) , y EtOH (8 mL) , y la solución se calentó a reflujo durante la noche (16 h) . La solución se diluyó entonces con 30 mL de EtOAc, lavó con 50 mL de solución saturada de NaHC03, 50 mL de H20, se secó sobre MgS04, y concentró in vacuo. El producto se purificó entonces por cromatografía instantánea (EtOAc) . Ácido 4- (Octilsulfonamido) fenilfosfónico 21a. pf = 185-187 °C; XH N R ( eOD) d 7.75 (dd, J = 12.8, 8.0 Hz, 2H) , 7.33 (dd, J= 8.0, 3.2 Hz, 2H) , 3.15 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.78 (m, 2H) , 1.39 (m, 2H) , 1.28 (m, 8H) , 0.90 (t, J= 7.2 Hz , 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 143.0 (d, J= 3.6 Hz) , 133.4 (d, J= 11.0 Hz) , 127.7 (d, J= 190 Hz) , 119.1 (d, J= 15.2 Hz) , 52.4, 32.8, 30.0, 29.9, 29.0, 24.5, 23.6, 14.3; HRMS (FAB) caled para C14H25NO5PS [M + H]+, 350.11911; encontrado, 350.11869. Ácido 3 - (Octils lfonamido) fenilfosfónico 21b. pf = 112-114 °C; XH NMR (MeOD) d 7.72 (d, J = 14.8 Hz, 1H) , 7.55 (m, 1H) , 7.44 (m, 2H) , 3.12 (t, J= 8.0 Hz, 2H) , 1.78 (m, 2H) , 1.39 (m, 2H) , 1.27 (m, 8H) , 0.90 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 139.6 (d, J = 18.2 Hz) , 134.5 (d, J = 184 Hz) , 130.5 (d, J = 16.1 Hz) , 127.3 (d, J= 9.5 Hz) , 123.8 (d, J= 3.0 Hz) , 122.8 (d, J= 11.6 Hz) , 52.2, 32.7, 30.0, 29.9, 29.0, 24.4, 23.5, 14.3; HRMS (FAB) caled para C14H25N05PS [M + H]+, 350.11911; encontrado, 350.11879. Ácido 2- (Octilsulfonamido) fenilfosfónico 21c. pf = 92-94 °C; XH NMR (MeOD) d 7.70 (m, 2H) , 7.54 (t, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.21 (t, J= 7.5 HZ, 1H) , 3.18 (t, J= 7.8 Hz , 2H) , 1.77 (m, 2H) , 1.23 (m, 10H) , 0.89 (t, J= 7.5 Hz , 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 141.8 (d, J= 7.0 Hz) , 134.3 (d, J= 2.7 Hz) , 134.1 (d, J= 6.8 Hz) , 120.4 (d, J= 178 Hz), 119.6 (d, J = 10.8 Hz) , 52.6, 32.8, 29.9, 29.9, 29.0, 24.3, 23.5, 14.3; HRMS (FAB) caled para C14H25NO5PS [M + H]+, 350.11911; encontrado, 350.11826.
Ejemplo 7 - Síntesis de los compuestos 24a-24f La síntesis de los compuestos 24a-24f se realizó usando el Esquema de Reacción 7, como se ilustra en la figura 7 en la presente.
Condiciones de reacción: (a) RS02C1, piridina, CH2C12/ 0°C a temperatura ambiente; (b) K+0"t-Bu, Et20, H20, 0°C a temperatura ambiente.
Los compuestos 24a-c, basados en 15g, fueron designados como sondas para examinar el efecto de instalar diferentes longitudes de alquilsulfonamidas en los análogos orto- sustituidos . Se cree que el compuesto con la cadena saturada Ci6 (24c) podría exhibir actividad inhibidora significantemente mayor que 15g, ya que la enzima demuestra una marcada preferencia por palmitoil-CoA sobre otros acil-CoAs de cadena larga. 13Los compuestos 24d-f fueron designados para examinar el papel de un grupo electronegativo en la posición-4 del anillo benceno, el cual podría posiblemente imitar la densidad del electrón del alcohol secundario en Glicerol-3-fosfato. Todos estos compuestos (24a-f) se produjeron con la misma secuencia de reacción para producir 15a-f y 17a-f.
Procedimiento General para 23a- f. A una solución agitada del material de partida anilina (3.3 mmol) en CH2C12 (12 mL) a 0°C se agregó piridina (7.5 equiv) . El cloruro de sulfonilo (1.2 equiv) se agregó entonces lentamente vía jeringa. La solución se agitó y se dejó calentar a temperatura ambiente. El progreso de la reacción se monitoreó por TLC (20% EtOAc en hexanos) . Cuando se completó, la reacción se vertió en solución saturada de NaHC03 (45 mL) , se extrajo con CH2C12 (3 x 15 mL) , y lavó con HCl 1M (50 mL) . Las fases orgánicas combinadas se concentraron in vacuo, y separaron por cromatografía instantánea (20% EtOAc en hexanos) para proporcionar 23a-f .
Procedimiento General para 24a- f. A una suspensión agitada de t-butóxido de potasio (5.88 mmol) en Et20 (15 mL) enfriada a 0°C se agregó agua (1.4 mmol) vía jeringa. La suspensión se agitó por 5 min, y se agregó 23a-f (0.67 mmol) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que el material de partida desapareció por análisis de TLC (20% EtOAc en hexanos) . Se agregó agua helada hasta que se formaron dos capas claras. La capa acuosa se separó y acidificó con HCl 1M, y el producto se extrajo con Et20 (3 x 20 mL) y evaporó in vacuo. Si es necesario, el producto se recristalizó entonces (EtOAc/hexanos) para proporcionar 24a- f puro. Ácido 2- (Metilsulfonamido) benzoico 24a. pf = 187-189 °C; XH NMR (MeOD) d 8.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.70 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.60 (t, J= 7.2 Hz, 1H) , 7.17 (t, J= 7.6 Hz, 1H) , 3.08 (s, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 171.2, 142.2, 135.7, 133.0, 123.9, 119.2, 117.3, 39.9; HRMS (FAB) caled para C8H9N04S [M]+, 215.02523; encontrado, 215.02576. Ácido 2 - (Tetradecilsulfonamido) benzoico 24b. pf = 120-122 °C; ? NMR (MeOD) d 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.74 (d, J= 8.4 Hz, 1H) , 7.59 (t, J= 7.6 Hz, 1H) , 7.17 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 3.19 (t, J= 8.0 Hz , 2H) , 1.70 (m, 2H) , 1.29 (ni, 22H) , 0.91 (t, J= 6.8 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 171.4, 142.5, 135.7, 133.1, 123.8, 118.8, 117.0, 52.2, 33.0, 30.7, 30.7, 30.7, 30.6, 30.5, 30.4, 30.2, 29.9, 28.8, 24.4, 23.7, 14.4. Ácido 2- (Hexadecilsulfonamido) benzoico 24c. pf 126-128 °C; 2H NMR (MeOD) d 8.12 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.59 (t, J= 8.0 Hz, 1H) , 7.17 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 3.19 (t, J= 7.6 Hz , 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.23 (m, 26H) , 0.91 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 169.8, 140.7, 134.6, 131.6, 122.4, 117.3, 115.6, 50.9, 31.2, 29.0, 29.0, 29.0, 29.0, 29.0, 28.9, 28.8, 28.7, 28.5, 28.2, 27.0, 22.8, 22.0, 13.8; HRMS (FAB) caled para C23H40 O4S [M + H]+, 426.26781; encontrado, 426.26825. Ácido 5-Cloro-2- (nonilsulfonamido) benzoico 24d. pf = 101-103 °C; XH NMR (MeOD) d 8.05 (d, J = 2.8 Hz, 1H) , 7.74 (d, J = 9.2 Hz, 1H) , 7.59 (dd, J = 9.2, 2.8 Hz, 1H) , 3.21 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.72 (m, 2H) , 1.23 (m, 12H) , 0.90 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 170.1, 141.2, 135.5, 132.4, 128.9, 120.6, 118.0, 52.5, 32.9, 30.2, 30.1, 29.9, 28.8, 24.4, 23.6, 14.4; HRMS (FAB) caled para Ci6H24ClN04S [M] +, 361.11146; encontrado, 361.11063. Ácido 5-Hidroxi -2 - (octilsulfonamido) benzoico 24e. pf = 142-144 °C; XH NMR (MeOD) d 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.51 (d, J= 2.8 HZ, 1H) , 7.03 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H) , 3.07 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.68 (m, 2H) , 1.23 (m, 10H) , 0.89 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C N R (MeOD) d 171.0, 154.6, 134.1, 122.8, 121.9, 119.2, 118.5, 53.1, 32.8, 29.9, 29.8, 28.8, 24.3, 23.6, 14.4. Ácido 5-Fluoro-2- (octilsulfonamido) benzoico 24f. pf = 141-143 °C; JH N R (MeOD) d 7.77 (m, 2H) , 7.38 (m, 1H) , 3.17 (t, J= 8.0 Hz, 2H) , 1.71 (m, 2H) , 1.23 (m, 10H) , 0.88 (t, J= 7.2 Hz, 3H) ; 13C NMR (MeOD) d 170.2 (d, J= 1.8 Hz) , 159.2 (d, J= 241 Hz) , 138.6 (d, J= 2.7 Hz), 122.7 (d, J= 22.7 Hz), 121.5 (d, J = 7.6 Hz) , 119.0 (d, J= 6.9 Hz), 118.8 (d, J = 24.1 Hz) , 52.4, 32.8, 29.9, 29.9, 28.8, 24.4, 23.6, 14.3; HRMS (FAB) caled para Ci5H22FN04S [M]+, 331.12536; encontrado, 331.12445.
Ejemplo 8 - Síntesis de los compuestos 4a- t y 7a- t La síntesis de los compuestos 4a-t y 7a-t se realizó usando los Esquemas de Reacción ilustrados en las Figuras 8 y 9, respectivamente, en la presente.
Reacción Suzuki General Experimental -0.247 mmol de bromuro de arilo se colocó en un vial lavado a chorro con argón, y se agregó una solución de 10 mg de Pd(PPh3)4 en 0.40 mL de tolueno, seguido por 0.25 mL de solución Na2C03 2M. La solución se agitó a temperatura ambiente por 5 min, y después se agregó una solución del ácido borónico (1.25 equiv) en 0.40 mL de MeOH. El vial se tapó y calentó a 90°C por 24 h. La reacción se enfrió entonces a temperatura ambiente y diluyó con CH2C12, la fase orgánica se separó de la fase acuosa, y la fase orgánica se concentró in vacuo. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna (EtOAc/hexanos) para proporcionar el producto bis-arilo deseado .
Procedimiento General para 4a-t y 7a- t. A una suspensión agitada de t-butóxido de potasio (2.00 mmol) en Et20 (8 mL) enfriada a 0°C, se agregó agua (0.4 mmol) vía jeringa. La suspensión se agitó por 5 min, y se agregó 3a-t o 6a-t (0.2 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente hasta que el material de partida desapareció por análisis de TLC (20% EtOAc en hexanos) . Se agregó agua helada hasta que se forman 2 capas claras. La capa acuosa se separó y acidificó con HC1 1M. El producto se extrajo entonces con Et20 (3 x 20 mL) y evaporó in vacuo para proporcionar 4a-t y 7a-t. Si la purificación adicional fue necesaria, el producto se purificó por cromatografía instantánea (1:1:8 AcOH:EtOAc: hexanos) . (4a) XH NMR (DMSO-d6) d 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.57 (m, 1H) , 7.48 (s, 1H) , 7.41 (m, 3H) , 6.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 3.08 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.60 (m, 2H) , 1.18 (m, 8H) , 0.80 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4b) ¾ NMR (MeOD) d 8.21 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.97 (s, 1H) , 7.68 (s, 1H) , 7.62 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.49 (m, 2H) , 3.25 (t, J = 8.4 Hz, 2H) , 1.76 (m, 2H) , 1.38 (m, 2H) , 1.23 (m, 8H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4c) XH NMR (MeOD) d 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.89 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.65 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 7.49 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 7.35 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H) , 3.14 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.74 (m, 2H) , 1.35 (m, 2H) , 1.22 (m, 8H) , 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (4d) XH NMR (MeOD) d 8.26 (m, 1H) , 8.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.07 (m, 1H) , 8.01 (d, J = 1.5 Hz , 1H) , 7.92 (m, 1H) , 7.66 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.49 (dd, J = 8.4, 1.8 Hz, 1H) , 3.23 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 2.69 (s, 3H) , 1.77 (m, 2H) , 1.40 (m, 2H) , 1.22 (m, 8H) , 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4e) H NM (DMSO-d6) d 8.08 (m, 3H) , 7.82 (m, 3H) , 7.46 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 3.27 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 2.60 (s, 3H) , 1.60 (m, 2H) , 1.30 (m, 2H) , 1.16 (m, 8H) , 0.79 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (4f) XH NMR (MeOD) d 8.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.03 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.87 (m, 4H) , 7.50 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz , 1H) , 3.24 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.76 (m, 2H) , 1.38 (m, 2H) , 1.23 (m, 8H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4g) XH NMR (MeOD) d 8.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.45 (m, 5H) , 7.23 (m, 5H) , 7.12 (dd, J = 8.0, 1.2 Hz , 1H) , 2.61 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.56 (m, 2H) , 1.26 (m, 10H) , 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4h) XH NMR (DMSOd6) d 8.08 (d, J = 8.4 Hz , 1H) , 7.81 (ra, 7H) , 7.49 (m, 3H) , 7.39 (t, J = 7.2 Hz, 1H) , 3.31 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.64 (m, 2H) , 1.31 (m, 2H) , 1.18 (m, 8H) , 0.79 (t, J = 6.8 ??, 3H) . (4i) XH NMR (MeOD) d 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.93 (s, 1H) , 7.40 (m, 2H) , 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.11 (m, 2H) , 3.85 (s, 3H) , 3.25 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 1.71 (m, 2H) , 1.22 (m, 10H) , 0.87 (t, J = 6.9 Hz, 3H) . (4j) *H NMR (MeOD) d 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.60 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 7.37 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H) , 7.02 (d, J = 6.8 Hz, 2H) , 3.84 (s, 3H) , 3.20 (t, J = 7.6 HZ, 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.36 (m, 2H) , 1.24 (m, 8H) , 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4k) XH NMR (MeOD) d 8.17 (m, 1H) , 7.93 (m, 1H) , 7.52 (m, 1H) , 7.44 (m, 1H) , 7.32 (m, 2H) , 7.22 (m, 1H) , 3.22 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.75 (m, 2H) , 1.34 (2H) , 1.22 (m, 8H) , 0.83 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (41) *H NMR (MeOD) d 8.19 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.97 (s, 1H) , 7.50 (m, 2H) , 7.43 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.16 (m, 1H) , 3.22 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.76 (m, 2H) , 1.37 (m, 2H) , 1.23 (m, 8H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4m) XH NMR (MeOD) d 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.71 (ra, 2H) , 7.40 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H) , 7.22 (t, J = 8.8 Hz, 2H) , 3.21 (t, J = 7.6 Hz , 2H) , 1.75 (m, 2H) , 1.37 (m, 2H) , 1.24 (ra, 8H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4n) XH NMR (MeOD) d 8.12 (m, 1H) , 8.01 (m, 1H) , 7.34 (m, 2H) , 7.22 (m, 1H) , 6.93 (m, 2H) , 3.26 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.35 (m, 2H) , 1.18 (m, 8H) , 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4o) XH NMR (MeOD) d 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.95 (s, 1H) , 7.38 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.29 (t, J = 7.6 Hz , 1H) , 7.11 (m, 2H) , 6.85 (m, 1H) , 3.20 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.74 (m, 2H) , 1.35 (m, 2H) , 1.24 (m, 8H) , 0.85 (t, J = 7.2 Hz , 3H) . (4p) 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.92 (S, 1H) , 7.53 (m, 2H) , 7.36 (m, 1H) , 6.89 (m, 2H) , 3.19 (t, J = 7.6 Hz , 2H) , 1.72 (m, 2H) , 1.34 (m, 2H) , 1.19 (m, 8H) , 0.84 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (4q) H NMR (MeOD) d 8.10 (t, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.53 (m, 2H) , 7.43 (m, 1H) , 7.18 (m, 1H) , 3.22 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.74 (m, 2H) , 1.36 (m, 2H) , 1.19 (m, 8H) , 0.82 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4r) XH NMR (MeOD) d 8.84 (s, 1H) , 8.57 (s, 1H) , 8.21 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 8.13 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.56 (m, 1H) , 7.40 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H) , 3.15 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.77 (m, 2H) , 1.36 (m, 2H) , 1.22 (m, 8H) , 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (4s) H NMR (MeOD) d 8.15 (d, J = 8.4 Hz , 1H) , 7.88 (s, 1H) , 7.52 (s, 2H) , 7.42 (s, 1H) , 7.33 (d, J = 8.0 Hz , 1H) , 3.22 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.72 (m, 2H) , 1.35 (m, 2H) , 1.23 (m, 8H) , 0.84 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (4t) ? NMR (MeOD) d 8.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.79 (S, 1H) , 7.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.43 (m, 2H) , 7.19 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H) , 3.23 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.74 (m, 2H) , 1.36 (m, 2H), 1.21 (m, 8H) , 0.87 (t, J = 7.2 Hz , 3H) . (7a) K NMR (MeOD) d 8.17 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 7.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.60 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz , 1H) , 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.37 (m, 3H) , 3.21 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.76 (m, 2H) , 1.20 (m, 10H) , 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7b) ?? NMR (MeOD) d 8.29 (s, 1H) , 7.81 (m, 2H) , 7.57 (m, 1H) , 7.52 (d, J = 7.6 Hz, 1H) , 7.42 (t, J = 8.0 Hz , 1H) , 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 3.22 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.72 (m, 2H) , 1.23 (m, 10H) , 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7c) XH NMR (MeOD) d 8.32 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.81 (m, 2H) , 7.58 (d, J = 8.8 Hz, 2H) , 7.43 (d, J = 8.4 Hz , 2H) , 3.22 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.35 (m, 2H) , 1.20 (m, 8H) , 0.84 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7d) ¾ NMR (MeOD) d 8.37 (s, 1H) , 8.19 (s, 1H) , 7.97 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.81 (m, 3H) , 7.57 (t, J = 7.5 Hz, 1H) , 3.21 (t, J = 7.8 Hz, 2H) , 2.66 (s, 3H) , 1.74 (m, 2H) , 1.20 (m, 10H) , 0.83 (t, J = 7.2 Hz , 3H) . (7e) XH NMR (MeOD) d 8.42 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 8.12 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.99 (d, J = 8.4 Hz , 1H) , 7.89 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 3.29 (t, J = 8.0 Hz , 2H) , 2.66 (s, 3H) , 1.77 (m, 2H) , 1.37 (m, 2H) , 1.24 (m, 8H) , 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7f) 2H NMR (MeOD) d 8.40 (s, 1H) , 7.89 (m, 1H) , 7.80 (m, 5H) , 3.23 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.36 (m, 2H) , 1.21 (m, 8H) , 0.84 (t, J = 6.8 Hz , 3H) . (7g) *H NMR (MeOD) d 7.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.51 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.38 (m, 4H) , 7.19 (m, 4H) , 7.09 (m, 2H) , 3.10 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.65 (m, 2H) , 1.21 (m, 10H) , 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (7h) Hí MR (DMSO-d6) d 8.31 (d, J = 2.4 Hz , 1H) , 8.01 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H) , 7.74 (m, 7H) , 7.48 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.38 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 3.33 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.63 (m, 2H) , 1.31 (m, 2H) , 1.20 (m, 8H) , 0.81 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (7i) XH NMR (MeOD) d 8.24 (s, 1H) , 7.71 (ra, 2H) , 7.28 (m, 2H) , 6.98 (m, 2H) , 3.77 (s, 3H) , 3.17 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.70 (ra, 2H) , 1.19 (m, 10H) , 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7j) XH NMR (MeOD) d 8.26 (s, 1H) , 7.71 (ra, 2H) , 7.46 (d, J = 8.8 HZ, 2H) , 6.93 (d, J = 8.8 Hz , 2H) , 3.79 (s, 3H) , 3.15 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.70 (m, 2H) , 1.20 (m, 10H) , 0.81 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7k) ¾ NMR (MeOD) d 8.27 (s, 1H) , 7.78 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 7.70 (d, J = 8.4 Hz , 1H) , 7.42 (t, J = 8.0 Hz , 1H) , 7.32 (m, 1H) , 7.19 (m, 2H) , 3.19 (t, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.71 (m, 2H) , 1.32 (m, 2H) , 1.16 (m, 8H) , 0.81 (t, J = 7.2 Hz , 3H) . (71) XH NMR (MeOD) d 8.31 (t, J = 1.2 Hz, 1H) , 7.79 (s, 2H) , 7.41 (m, 2H) , 7.30 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H) , 7.05 (dt, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H) , 3.20 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.71 (m, 2H) , 1.22 (m, 2H) , 1.16 (m, 8H) , 0.81 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (7m) ¾ NMR ( eOD) d 8.28 (d, J = 2.0 Hz, 1H) , 7.74 (m, 2H) , 7.57 (dd, J = 8.8, 4.8 Hz, 2H) , 7.12 (t, J = 8.4 Hz, 2H) , 3.17 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.70 (m, 2H) , 1.31 (m, 2H) , 1.18 (m, 8H) , 0.81 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (7n) XH NMR (MeOD) d 8.33 (s, 1H) , 7.75 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H) , 7.69 (d, J = 8.4 Hz , 1H) , 7.28 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H) , 7.15 (dt, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H) , 6.90 (m, 2H) , 3.17 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.75 (m, 2H) , 1.23 (m, 10H) , 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7o) XH NMR (MeOD) d 8.31 (s, 1H) , 7.77 (s, 2H) , 7.24 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.04 (m, 2H) , 6.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 3.19 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.72 (m, 2H) , 1.33 (m, 2H) , 1.21 (m, 8H) , 0.82 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . (7p) ?? NMR (MeOD) d 8.32 (s, 1?) , 7.64 (m, 2H) , 7.46 (m, 2H) , 6.86 (m, 2H) , 3.13 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.73 (m, 2H) , 1.34 (m, 2H) , 1.20 (m, 8H) , 0.83 (t, J = 6.8 Hz , 3H) . (7q) ¾ NMR (MeOD) d 8.36 (d, J = 2.4 Hz , 1H) , 7.80 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H) , 7.73 (d, J = 8.4 Hz , 1H) , 7.39 (m, 2H) , 7.10 (dd, J = 5.2, 3.6 Hz, 1H) , 3.19 (t, J = 8.0 Hz , 2H) , 1.74 .(m, 2H) , 1.38 (m, 2H) , 1.22 (m, 8H) , 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7r) 8.86 (s, 1H) , 8.55 (d, J = 4.4 Hz, 1H) , 8.42 (s, 1H) , 8.17 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 7.90 (m, 2H) , 7.57 (m, 1H) , 3.25 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.77 (m, 2H) , 1.37 (m, 2H) , 1.24 (m, 8H) , 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7s) XH NMR (MeOD) d 8.21 (s, 1H) , 7.75 (m, 2H) , 7.45 (d, J = 1.6 Hz, 2H) , 7.32 (t, J = 1.6 Hz , 1H) , 3.22 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.74 (m, 2H) , 1.33 (m, 2H) , 1.19 (m, 8H) , 0.83 (t, J = 7.2 Hz, 3H) . (7t) H NMR (MeOD) d 8.16 (d, J = 2.4 Hz, 1H) , 7.74 (d, J = 8.8 Hz, 1H) , 7.54 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H) , 7.50 (s, 1H) , 7.34 (s, 2H) , 3.20 (t, J = 8.0 Hz, 2H) , 1.75 (m, 2H) , 1.34 (ra, 2H) , 1.20 (m, 8H) , 0.84 (t, J = 6.8 Hz, 3H) .
Ejemplo 8 - Pruebas in vi tro Los compuestos producidos como se describe anteriormente, se evaluaron por su capacidad para inhibir la acilación de Glicerol-3 -fosfato in vitro. La reacción de acilación entre Glicerol-3-fosfato y palraitoil-CoA etiquetados, iniciada agregando mtGPAT, se midió en la presencia de concentraciones diversas del inhibidor por conteo de escintilación como se describe en más detalle abajo .
Una preparación mitocondrial de Glicerol 3-fosfato aciltransferasa se agregó a la mezcla de incubación que contiene Glicerol 3-fosfato, palmitoil-CoA 14C-etiquetados , concentraciones diversas de inhibidor para iniciar la reacción. Después de diez minutos, la reacción se terminó agregando cloroformo, metanol, y 1% de ácido perclórico. Cinco minutos después, se agregaron más cloroformo y ácido perclórico, y la capa acuosa superior se removió. Después de lavar tres veces con 1% de ácido perclórico, la capa orgánica se evaporó bajo nitrógeno, y la cantidad de 14C presente se contó para determinar la extensión de inhibición de la reacción. Los puntos de datos se registraron por triplicado, y los valores IC50 se calcularon con base en la cantidad de inhibidor de prueba necesario para producir 50% de actividad de mtGPAT observada en la ausencia de inhibidor pero en la presencia de control de vehículo de DMSO.
Los resultados para los compuestos 5a- f, 13a- f, 15a-i, 17a-f, 21a-c, y 24a-f son resumidos en las Tablas 1-3 abajo. Los resultados para cada uno de los compuestos 4a-t y 7a-t se resumen abajo individualmente.
Tabla 1. Actividad in vi tro de Anti-mtGPATl de Sulfonamidas 5a- f y 13a- f 5c w-C02H C5H11 1 88.5 ± 1.7 5d ffi-C02H C9H19 1 28.5 ± 1.6 5e o-C02H C5H11 1 61.9 ±13.5 5f 0-CO2H C9H1 1 22.7 ± 1.1 13a 0-CH2PO3H2 C5H11 0 41.4 ±8.4 13b 0-CH2PO3H2 C9H19 0 30.6 ±6.2 13c m-CH2P03H2 C5H11 0 45.3 + 9.0 13d m-CH2P03H2 C9H19 0 23.7 + 0.7 13e P-CH2PO3H2 C5H11 0 47.7 ± 9.6 13f P-CH2PO3H2 C9H1 0 30.7 ±5.4 Los datos obtenidos de ácidos benzoicos 5a- f indican que en todos los casos, con respecto a la posición del carboxilato con respecto a la sulfonamida, la cadena alquilo C9 más larga resulta en inhibición mayor que la cadena saturada C5. La orientación más efectiva entre el ácido y sulfonamida parece ser la sustitución-orto, como 5f (IC50 = 22.7 µ?) es un mejor inhibidor que ya sea 5b (IC50 = 43.9 µ?) o 5d (IC50 = 28.5 µ?) . Los datos de ensayo a partir de ácidos fosfónicos 13a-f también indican que la cadena alquilo C9 más larga es más efectiva. En esta serie de compuestos, sin embargo, no existe diferencia significante en actividad entre las orientaciones diferentes del ácido fosfónico y la porción alquilsulfonamida . El compuesto más activo de esta clase fue 13d (IC50 = 23.7 µ?) , el ácido fosfónico meta- sustituido, aunque no es mucho sobre 13b (IC5 30.6 µ?) y 13f (IC50 = 30.7 µ?) .
Tabla 2. Actividad in vitro de Anti-mtGPATl Sulfonamidas 15a-i y 17a-f La distancia entre el anillo benceno y la sulfonamida azufre no parece tener un efecto significante en la actividad inhibidora de estos compuestos, ya que no existe una diferencia efectivamente entre un metileno y dos enlazadores de metileno. Es aparente, sin embargo, que los compuestos orto - sust ituidos que contienen estos metilenos enlazadores (17e-f) son más efectivos que los otros ácidos benzoicos sustituidos (17a-d) . Para los compuestos meta y para, la actividad inhibidora es mayor que cuando el anillo benceno está directamente unido al azufre, aunque los compuestos orto son todos similares. La adición de un clorurópara en el anillo benceno conduce a un ligero incremento en actividad para los compuestos para-(15c) , meta- (15f ) , y orto- (15i) . Los compuestos 15a, 15d, y 15g fueron objetivos fácilmente obtenibles, los cuales permiten examinación del efecto del enlazador metileno entre el anillo benceno y la sulfonamida en 5a-f. Para cada sustitución, estos compuestos fueron los inhibidores GPAT más efectivos, con el compuesto-orto (15g, C67) que demuestra la actividad más grande (IC50 = 8.1 µ?) . Basados en estos resultados, una cadena alquilo larga es preferible a un anillo benceno simple.
Tabla 3. Actividad in vitro de Anti-mtGPATl Sulfonamidas 21a-c y 24a-f En vista de la actividad inhibidora incrementada de 15g, se prepararon otras dos series de compuestos. El primer, 21a-c, prueba la efectividad de un ácido aril fosfónico en lugar de la porción de ácido benzoico. El ácido orto-sustituido in vitro (21c) es menos activo que I5g, y la sustitución de la porción de ácido fosfónico no parece afectar significantemente la actividad (Tabla 3) . Los otros compuestos producidos (24a-f) indican la importancia de la longitud de cadena de la alquilsulfonamida, así como también el efecto de agregar heteroátomos para- a la sulfonamida. Parece que la cadena más larga es muy importante a la actividad de estos compuestos, ya que una cadena Cx (24a) resulta en significantemente menos pérdida en actividad in vitro que la cadena C9. Los compuestos 24b y 24c fueron producidos para determinar si la cadena Ci6 naturalmente favorecida es preferida en estos compuestos sobre cadenas de otras longitudes, que incluyen la cadena Ci4. En este caso, no existe una preferencia observada para el compuesto C16 sobre otras cadenas largas, contrario a aquella observada con los sustratos acil-CoA naturales.
Los resultados para los compuestos 4a- t y 7a- t, los cuales se desarrollaron usando los métodos descritos anteriormente, incluyen los siguientes: Ejemplo 9 - Pruebas in vivo Procedimientos Experimentales Modelos de ratón flaco y DIO. Toda la experimentación animal se hizo de conformidad con los lineamientos en cuidado y uso animal como se establece por la Johns Hopkins University School of Medicine IACUC. Ratones macho C57BL6J DIO se obtuvieron a partir de Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) y alimentaron con una dieta sintética comprendida de 60% de calorías de grasas, 20% de carbohidratos, y 20% de proteínas (5.2 kcal/g) post-destete a través de los procedimientos experimentales (D12492Í, Research Diets, Inc., New Brunswick, NJ) . Para estudios de animales flacos, ratones macho C57BL6J de doce semanas de edad (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) se alimentaron con comida para roedor comprendida de 13% de calorías de grasas, 58% de carbohidratos, y 29% de proteínas (4.1 kcal/g) (Prolab RMH 2500, PMI Nutrition International Inc., Brentwood, MO) . Los ratones se mantuvieron en un ciclo de 12 horas luz-oscuridad a 25°C por 1 semana para aclimatación previo al tratamiento. En todos los estudios, se disolvió FSG67 (FAS gen, Inc., Baltimore, MD) en RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) .
Para estudios agudos, se trataron 6 ratones flacos o con una dosis única de FSG67 (20 mg/kg, i.p.) aproximadamente 3 hrs después de encender las luces. Los pesos y consumo de alimento de los animales se midieron 18 h después del tratamiento. Después de la eutanasia, los hipotálamos se recolectaron para medir la expresión del gen neuropéptido orexigénico y anorexigénico . En los estudios crónicos, ratones DIO, 4-10 animales por grupo, se trataron diariamente con FSG67 (5 mg/kg, i.p.) o con vehículo RPMI por los días indicados. El peso corporal e ingesta de alimento se midieron diariamente. en un estudio, una agrupación de ratones fue de alimento pareado con cantidades consumidas por los animales tratados con FSG67 y los ratones se monitorearon con calorimetría indirecta (Oxymax Equal Flow System®, Columbus Instruments, Columbus, OH) . Las mediciones de V02 (ml/kg/hr) y VC02 (ml/kg/hr) se realizaron y registraron cada 15 min. La relación de intercambio respiratorio (RER) se calculó por software Oxymax, versión 5.9, y se define como la relación de VC02 a V02 33. Después de la terminación del curso de tratamiento, los animales se eutanizaron por inhalación de C02 4 hrs después de la dosis final de FSG67. Los tejidos se recolectaron inmediatamente por extracción de R A; el suero se recolectó y analizó para mediciones de glucosa, colesterol y triglicéridos (Bioanalytics , Gaithersburg, MD) . Tejido fresco de hígado se congeló a presión en N2 líquido, seccionó y tiñó con hematoxilina y Aceite Rojo 0 para visualizar las gotitas de triglicéridos.
Cánulas cerebroventriculares laterales crónicas . Para experimentos que requieren administración intracerebroventricular (i.c.v.) de los compuestos, los ratones fueron equipados de una manera unilateral con cánulas crónicas permanentes indicadas en el cerebroventrículo lateral. Después los ratones se recuperaron de las cirugías por una semana, las colocaciones de la cánula se valoraron midiendo la ingesta de alimento en respuesta al neuropéptido Y i.c.v. (NPY, American Peptide Co. , CA) . A los ratones se les dieron NPY (0.25 nmol/2 µ? de inyección) o vehículo de salina estéril a. 0.9% vía la cánula i.c.v., y se dejaron 1-h con acceso a pelotillas a base de grano durante la fase de luz. Los ratones que comieron al menos 0.5 g de alimento después de NPY, se usaron en los experimentos. A cada ratón se les dio una inyección de 2 de RP I-1640 sin glucosa (Cambrex, MD) para control de vehículo. Tres días después, los seis ratones recibieron una dosis de 100 nmole de FSG67 en el vehículo mientras 5 ratones recibieron 320 nmoles de compuesto .
Valoración por Q-NMR de adiposidad. Después de 10 días de tratamiento con FSG67 o vehículo por administración ip, los ratones DIO fueron eutanizados y sus canales se almacenaron a -80- °C. Los canales se descongelaron para análisis de Q-NMR. La medición de grasa, masa magra y masa de agua se realizó usando un EchoMRI-100™ (Echo Medical Systems, Houston, TX) en el Centro de Fenotipado de Patobiología Molecular y Comparativa.
Aversión de sabor condicionada. Diez días antes de las pruebas, ochenta ratones macho C57/BL6 se colocaron en un programa de 2h del día con acceso a agua. En el día del estudio, los ratones se dividieron en tres grupos y se les dio acceso a 0.15% de sacarina de sodio en lugar de agua por 30 min. Inmediatamente después del acceso a sacarina, los ratones se inyectaron ip con vehículo RPMI o FSG67 (5 y 20 mg/kg de peso corporal) y se dejaron a acceso de agua por los restantes 90 min. Veinticuatro horas después, a los ratones se les dio 2 horas de acceso a una prueba de elección de dos botellas de 0.15% de sacarina contra agua. La ingesta de ambas soluciones se registró y los datos se expresaron como preferencia de sacarina (100 X ingesta de sacarina/ingesta de sacarina + ingesta de agua) .
RT-PCR en Tiempo-real. El hipotálamo, hígado y WAT de ratones DIO y flaco se recolectaron e inmediatamente congelaron en nitrógeno líquido. El ARN total se aisló y se realizó RT-PCR cuantitativo en tiempo real como se describe previamente (13) . Pares cebadores específicos del gen fueron designados usando software Primer3 (http://www-genome.wi.mit.edu/cgi-bin/primer/primer3_www.cgi/) . Las secuencias de los pares cebadores se listan en la Tabla 1 de Datos Complementarios .
Adipocitos 3T3-L1. Células 3T3-L1 se diferenciaron en adipocitos como se describe 34. Siete días posterior a la diferenciación, las células se trataron con FSG67 a concentraciones indicadas por 18 h, después se etiquetaron con [14C] palmitato por 2 h. Después de cada extracción Folch, los lípidos se sometieron a cromatografía de capa delgada polar y no polar 35. Las fracciones de triglicéridos y fosfatidilcolina se cuantificaron con fosforimagen (Storm 840, Molecular Dynamics, Piscataway, NJ) .
Análisis estadísticos . Todos los datos son representados como medias + error estándar de la media. Las determinaciones de IC50 se realizaron con regresión lineal. Se realizaron pruebas -t no apareadas de dos colas o pruebas ANOVA de dos vías como se indica, usando Prism 4.0 (Graph Pad Software, San Diego, CA) .
FSG67 reduce la síntesis de acilglicérido en adipocitos 3T3-L1 de ratón Se usaron Adipocitos 3T3-L1 de ratón para probar el efecto de FSG67 en la síntesis de acilglicéridos in vitro. Los adipocitos 3T3-L1, a 7 días posteriores a la diferenciación, se trataron con FSG67 a concentraciones de 7.6 µ? a 61 µ? (2.5 - 20 µ?/???) y los valores IC50 para inhibición de triglicéridos y síntesis de fosfatidilcolina se determinaron usando regresión lineal. Los valores IC50 fueron 33.9 µ? para síntesis celular de triglicéridos (p=0.023, r2 = 0.86, n=3) y 36.3 µ? para síntesis de fosf tidilcolina (p=0.015, r2 = 0.89, n=3). Como la fosfatidilcolina fue el fosfolípido predominante sintetizado en los adipocitos 3T3-Ll, es representativo de la síntesis de fosfolípido celular total. Estos valores IC50 son similares a los valores IC50 reportados de 24.7 µ? para actividad GPAT mitocontrial de ratón 12. Consistente con su inhibición de síntesis de acilglicéridos , las figuras 10a a 10c muestran la reducción dependiente de dosis de acumulación de triglicéridos en adipocitos 3T3-L1 48h después del tratamiento con FSG67. Se observa la reducción en gotitas lípidas en las células tratadas con FSG67 comparada con los controles tratados con vehículos. De este modo, el FSG67 inhibe la síntesis de acilglicérido celular con un IC50 similar a su inhibición de actividad GPAT en preparaciones mitocondriales . De acuerdo con estas observaciones bioquímicas, el FSG67 reduce sustancialmente la acumulación de triglicéridos en adipocitos cultivados. Tomados juntos, estos resultados demuestran que el FSG67 inhibe la actividad celular de GPAT.
El tratamiento agudo de FSG67 de ratones DIO y flacos reduce el peso corporal, e incrementa el consumo de alimento sin aversión de sabor condicionada. Puesto que el FSG67 reduce la síntesis de acilglicérido in vitro, se probaron tanto ratones flacos como DIO con una dosis única de FSG67 (20 mg/kg i.p.) para examinar el efecto agudo en el peso animal y comportamiento de alimentación. Además, se realizaron pruebas de aversión de sabor condicionada (CTA) para determinar si el FSG67 activa una respuesta CTA que podría sugerir malestar como la causa de ingesta reducida de alimento. Ocho ratones DIO y flacos se trataron con FSG67 al comienzo del ciclo de oscuridad. Dentro de 24 h, los ratones flacos inyectados con FSG67 pierden 3.7 + 0.9% (1.0 + 0.2 g) de masa corporal mientras los ratones ayunados pierden 15.5 + 0.7% (3.9 + 0.2 g) (Fig. lia). La reducción en masa corporal de ambos grupos fue significantemente comparada con control de vehículos los cuales ganaron 2.5 ± 0.5% (0.6 ± O.lg) (p<0.0001, prueba-t de 2 colas). El tratamiento de FSG67 también reduce la ingesta de alimento a 33% de control de vehículo (p<0.0001 prueba-t de 2 colas) (Fig. lib) .
La inhibición de GPAT con FSG67 reduce el peso corporal en ratones DIO que consumen una dieta alta en grasas. Ratones DIO tratados con FSG67 pierden 4.3 + 0.5% (1.7 + 0.2 g) de masa corporal contra una pérdida de 5.3 + 0.4% (2.1 ± 0.2 g), para ratones ayunados (Fig. 11c). Comparado con el ratón de control de vehículo el cual pierde 2.5 + 0.6% (1.0 ± 0.2 g) el peso corporal fue significante en tanto el ratón tratado con FSG67 (p= 0.026, prueba-t de 2 colas) como el ratón ayunado (p=0.002, prueba-t de 2 colas) : El FSG67 reduce significantemente el consumo de alimento en los ratones DIO a 41.6% de control de vehículo (Fig. lid). Mientras el promedio de ingesta de alimento entre los grupos de control de vehículo DIO y flacos es sustancialmente diferente (1.2 y 4.2 g, respectivamente) (p<0.0001, prueba-t de 2 colas) , la reducción relativa de ingesta de alimento después del tratamiento con FSG67 no es diferente entre los ratones DIO (41.6% de control de vehículo) y flacos (33% de control de vehículo) (p=0.19, prueba exacta . Fisher) . Se probó CTA en grupos de 8 ratones flacos usando paradigma de elección de dos botellas que muestra que el FSG67 falla al producir una reducción significante en ingesta de sacarina a 5 mg/kg (p=0.12) o 20 mg/kg (p=0.10, prueba-t de 2 colas). De este modo, la reducción en ingesta de alimento a partir de FSG67 no fue debido a conducta de enfermedad (Fig. lie) . No se notó sobre toxicidad a partir del tratamiento con FSG67 a ratones flacos o DIO. Estos datos demuestran un claro efecto anorexigénico de inhibición farmacológica de GPAT en tanto ratones flacos como DIO con reducción acompañante en peso animal .
Tratamiento crónico de FSG67 de ratones DIO reduce reversiblemente el peso corporal y consumo de alimento, e incrementa la oxidación de ácido graso. Para determinar la dosis de FSG67 adecuada para tratamiento crónico, se realizó un estudio de valoración dé dosis de 5 días en ratones DIO, cuatro por grupo, con dosis intraperitoneales diarias de 1, 2, y 5 mg/kg (Fig. 17) . La dosis de 5 mg/kg conduce a pérdida de peso significante de 3.9% comparada con controles de vehículo (p=0.008, ANOVA de 2 vías). Esta dosis se eligió para los experimentos de tratamiento crónico subsecuentes .
El primer experimento de tratamiento crónico se designó para probar si la pérdida de peso inducida por FSG67 fue reversible . Cuatro ratones DIO por grupo se trataron con FSG67 o vehículo por 20 días. Para el ensayo total de 32 d, se registraron el peso y consumo de alimento diariamente hasta que los animales tratados con FSG67 ganaron nuevamente su peso original. Durante el tratamiento con FSG67 (días 0-20), los ratones perdieron 10.3 ± 0.6% de su masa corporal mientras los controles ganaron 4.0 ± 0.5% (p<0.0001, ANOVA de 2 vías) (Fig. 12a) . El consumo de alimento promedio se reduce durante el tratamiento con FSG67 (2.6 ± 0.1 g/d, días 1-20) comparado con controles de vehículo (3.1 ± 0.1 g) (p=0.0008, ANOVA de 2 vías) (Fig. 12b) . Después de la suspensión del tratamiento, el consumo de alimento se incrementó en el grupo de tratamiento con FSG67 a un promedio de 3.5 + 0.1 g/d (días 21-32) que representa un incremento significante en ingesta de alimento comparado con controles de vehículo 3.2 ± 0.1 g/d (p=0.006, ANOVA de 2 vías). Los animales tratados con FSG67 lograron su peso promedio pre-tratamiento 11 días después de la terminación del tratamiento (Fig. 12a) .
En el segundo estudio de tratamiento crónico, se utilizó calorimetría indirecta para estudiar cambios en el metabolismo durante la inhibición de GPTA. Se trataron ratones DIO (8 por grupo) con FSG67 (5 mg/kg, ip) , o alimento pareado a animales tratados con FSG67. Se utilizó calorimetría indirecta para medir cambios en la relación de consumo de oxígeno (V02) e intercambio respiratorio (RER) entre alimento pareado y animales tratados. Después de 16 días de tratamiento, los ratones tratados con FSG67 pierden 9.5 + 0.6% de masa corporal, de alimento pareado pierden 5.5 + 0.9%, mientras los controles de vehículo ganan 3.5 ± 1.3% (Fig. 12c). La pérdida de peso en los animales tratados con FSG67 fue significantemente comparada con animales tanto de controles de vehículo como de alimento pareado (p<0.0001, ANOVA de 2 vías). El tratamiento con FSG67 nuevamente reduce significantemente el consumo de alimento por 33%, 2.0 ± 0.1 g/d en el grupo tratado con FSG67 comparado con 3.1 ± 0.1 g/d para controles de vehículo (p<0.0001, ANOVA de 2 vías) (Fig. 12d) . El tratamiento con FSG67 incrementa el promedio de V02 a 106.5 ± 1.1% del valor de pre- tratamiento . Este valor fue significantemente incrementado comparado con ratones de alimento pareado, los cuales exhiben una reducción en V02 a 89.9 ± 1.1% del valor de pre- tratamiento (p<0.0001, ANOVA de 2 vías) (Fig. 12e) . Se reduce el RER en ratones tratados con FSG67 (0.732 + 0.002) comparado con los de alimento pareado (0.782 + 0.006) (p<0.0001, ANOVA de 2 vías) (Fig. I2f) indicando el uso incrementado de ácidos grados para energía en los animales tratados con FSG67. La combinación de incremento de V02 y RER reducido en los animales tratados con FSG67 es consistente con oxidación incrementada de ácido graso y utilización de energía lo cual probablemente contribuye a su masa corporal reducida comparada con los controles de alimento pareado.
Inhibición farmacológica de GPAT reduce la adiposidad y expresión de gen lipogénico regulado descendentemente en ratones DIO. Puesto que el FSG67 incrementa la oxidación de ácido graso y reduce la ingesta de alimento en ratones DIO, se usó después análisis de Q-NMR para medir la masa magra, grasa y agua en ratones de control y tratados con FSG67 para determinar la composición de la pérdida de tejido con el tratamiento con FSG67. En un experimento adicional de tratamiento crónico, 10 ratones DIO se trataron con FSG67 (5 mg/kg/d, ip) y 10 recibieron vehículo por 10 días. Los ratones tratados con FSG67 pierden 6.1 ± 0.9 g (13.1 + 1.9%) mientras los controles de vehículo pierden 1.1 + 0.4 g (2.3 + 0.8%) (p<0.0001. ANOVA de 2 vías) . (Fig. 18) El análisis de Q-NMR demostró una reducción de 4.0 g en masa grasa en los animales tratados con FSG67 comparada con el control de vehículo (p<0.0001, prueba-t de 2 colas) pero sin cambio significante en la masa magra o agua (Fig. 13a) . En la conclusión del experimento, los ratones tratados con FSG67 pesaron 4.4 g menos que los controles de vehículo, lo cual podría ser considerado por la diferencia de 4.0 g en masa grasa. De este modo, la inhibición de GPAT selectivamente reduce la adiposidad en ratones DIO.
Para explorar además el mecanismo responsable de la reducción en masa de tejido adiposo, se usó RT-PCR en tiempo real para medir la expresión de los siguientes genes lipogénicos clave en tejido adiposo blanco a partir de ratones DIO de control de vehículo, alimento pareado, y tratados con FSG67 del segundo ensayo de calorimetría indirecta (véase Fig. 12c) : sintasa de ácido graso (FAS) , responsable de la síntesis reductiva de novo del ácido graso 13, acetil-CoA carboxilasa 1 (ACC1) , la forma citoplásmica de ACC expresada en órganos lipogénicos que sintetizan malonil-CoA usado como un sustrato de FAS para síntesis de ácido graso 14, receptor gama activado por proliferador de peroxisoma (PPARy) un factor de transcripción clave para adipogénesis 15, división de lípido 16, y almacenaje lípido postprandial 17 y GPAT. Después de 16 días de tratamiento, el análisis de RT-PCR en tiempo real de tejido adiposo blanco a partir de animales tratados con FSG67 mostró regulación descendente sustancial de ACC1 (p=0.0005 contra control, p=0.0004 contra alimento pareado), FAS (p=0.000l contra control, p=0.0007 contra alimento pareado), PPARY (p=0.032 contra control, p=0.0019 contra alimento pareado), y GPAT (p=0.0034 contra control, p=0.0002 contra alimento pareado) (Fig. 13b) . De manera interesante, la expresión de la proteína-2 desacoplante (UCP2) se incrementó en tanto hígado (p=0.043 contra control) como en tejido blanco adiposo (p=0.013, contra alimento pareado) de los animales tratados con FSG67 lo cual podría también contribuir a una oxidación incrementada de ácido graso 18; la expresión de L-CPT-I no fue afectada. (Figs. 19a a 19b). De este modo, la inhibición farmacológica de GPAT no solamente incrementa la oxidación de ácido graso y reduce la ingesta de alimento, sino que regula ascendentemente a UCP2 en hígado y tejido blanco adiposo mientras regula descendentemente la expresión del gen lipogénico en tejido blanco adiposo, todo lo cual debe favorecer una reducción selectiva en adiposidad.
El FSG67 reduce sustancialmente la glucosa en suero y niveles de triglicéridos mientras resuelve la esteatosis hepática en ratones DIO. Consistente con la reducción sistémica en adiposidad, la inhibición de GPAT invierte la esteatosis hepática en ratones DIO. El teñido con aceite rojo-0 de secciones congeladas de hígado muestran marcada esteatosis caracterizada por una gran acumulación y pequeñas gotas de triglicéridos en los animales tratados con vehículo (Fig. 14a) . La esteatosis se reduce en los animales con alimento (Fig. 14b) de resolución casi completa con tratamiento con FSG67 (Fig. 14c) . No se identificó inflamación, necrosis o lesión hepatocelular . El análisis de expresión por RT-PCR en tiempo real de los genes lipogénicos hepáticos, ACC1, FAS, y GPAT mostró una reducción significante en expresión de FAS (p=0.0016 contra control, p=0.018 contra alimento pareado) y ACC1 (p=0.037 contra alimento pareado) pero no en GPAT, indicando una regulación descendente de la síntesis de ácido graso de novo en tratamiento con FSG67. (Fig. 20) Además de la reducción de triglicéridos en tejido, se redujeron los niveles de glucosa en suero (153.3 ± 10.5 mg/dL) comparado con tanto ratones de control de vehículo (200.6 ± 22.2 mg/dL, p=0.03 ANOVA de 2 vías) como de alimento pareado (189.0 ± 20.3 mg/dL, p=0.04, ANOVA de 2 vías) . La reducción en niveles de triglicéridos en suero se observa en los ratones DIO tratados con FSG67 (111.3 + 10.9 mg/dL) comparada con alimento pareado (138.5 ± 9.8 mg/dL) o controles de vehículo (138.8 + 13.5 mg/dL) no fue estadísticamente significante. Los niveles de colesterol permanecen sin cambio (Fig. 14d) . La resolución de la esteatosis hepática en ratones tratados con FSG67 puede haber contribuido a la normalización de niveles de glucosa en sangre .
El Tratamiento con FSGF7 intracerebroventricular (icv) reduce el consumo de alimento y peso corporal. Se administró FSG67 icv para determinar si la inhibición de GPAT actúa centralmente para reducir la ingesta de alimento. Ratones flacos se trataron con FSG67 icv a dosis de 100 y 320 nmoles (aproximadamente 300- y 100 -veces menos que la dosis sistémica de día único de 5 mg/kg) . Dentro de 24 h, los ratones tratados con 100 nmoles pierden 0.75 ± 0.4 g (p=0.016) mientras el grupo de 320 nmole pierde 1.8 ± 0.3 g (p=0.0003); los controles de vehículo ganan 0.43 ± 0.1 g y 0.33 + 0.1 g respectivamente (Fig. 15a). El peso del animal se ganó nuevamente dentro de 48h sin un rebote significante (datos no mostrados) . La reducción significante en ingesta de comida ocurre solamente en el grupo de tratamiento de 320 nmoles (3.8 ± 0.1 g control, 2.5 ± 0.3 g FSG67, p=0.0051) (Fig. 15b) . Dentro de 48 h, los animales comenzaron a comer normalmente con ligera hiperfagia en el grupo de 320 nmole en los días 3 y 4 (datos no mostrados) . Estos datos indican que la reducción en consumo de alimento que acompaña la inhibición de GPAT puede tener una contribución significante a partir del CNS. Sin embargo, la ocurrencia de pérdida de peso sin una reducción de ingesta de alimento en el grupo de 100 nmole sugiere un efecto central en el metabolismo independiente de cambios en los comportamientos de ingesta de alimento .
El tratamiento agudo y crónico de FSG67 altera la expresión del neuropéptido hipotalámico . Se midió la expresión peptídica hipotalámica en los ratones flacos y DIO tratados con una dosis única de FSG67 (véase Figs . lia a lie) y en los ratones DIO crónicamente tratados (véase Figs. 12a a 12f) para valorar además el mecanismo responsable de ingesta reducida de alimento. En los ratones flacos tratados con una dosis única de FSG67, la expresión del neuropéptido hipotalámico orexigénico, neuropéptido Y (NPY) fue significantemente reducida comparada con los animales ayunados (p=0.012, prueba- t de 2 colas) mientras la expresión de proteína relacionada agutí (AgRP) fue sustancialmente disminuida comparada con tanto ayuno (p=0.020, prueba-t de 2 colas) como controles de vehículo (p=0.0009, prueba-t de 2 colas) consistente con la reducción aguda en ingesta de alimento (Fig. 16a) . Contrariamente, los niveles de neuropéptidos anorexigénicos, proopiomelanocortina (POMC) y ARNm transcripto relacionado con cocaína-anfetamina (CART) no fueron afectados por la privación de alimento o tratamiento agudo con FSG67. Contrario con los hallazgos en ratones flacos, el tratamiento con FSG67 de dosis única a ratones DIO incrementa significantemente la expresión de AgRP sobre aquella en los animales de controles de vehículo y privados de alimento (datos no mostrados) . Notablemente, la privación de alimento no resultó en niveles incrementados de mensaje de AgRP o NPY hipotalámico en ratones DIO como se observa con los animales flacos. Este patrón de expresión incrementada de neuropéptido orexigénico con tratamiento es consistente con una respuesta de hambre . y puede indicar un rebote de expresión de péptido orexigénico en los ratones DIO o podría representar un ejemplo adicional de señalización disregulada del neuropéptido en ratones DIO 19. En los ratones DIO crónicamente tratados, sin embargo, el análisis de neuropéptido hipotalámico mostró una reducción significante en la expresión de NPY en tanto animales FSG67 (p=0.0052, prueba-t de 2 colas) como de alimento pareado (p=0.0074, prueba-t de 2 colas) comparado con controles de vehículo (Fig. 16b) . Este perfil fue más similar a los ratones flacos tratados agudamente, y puede reflejar normalización de la respuesta de apetito en los ratones DIO crónicamente tratados .
Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (58)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Compuesto que comprende la fórmula I: caracterizado porque n es ya sea 0 ó 1; A se selecciona a partir del grupo que consiste de NR1, 0, y S, en donde R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de H, hidroxilo, alquilo Ci-Ci0, alcoxi i-Ci0, alquenilo, arilo, alquilarilo y arilalquilo,- X se selecciona a partir del grupo que consiste de un residuo carboxilato, un residuo fosfonato, un residuo fosfato, y un residuo alquilo Ci-Cio el cual es opcionalmente sustituido con uno o más residuos seleccionados a partir del grupo que consiste de un residuo carboxilato, un residuo fosfonato y un residuo fosfato; Y se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo Ci-C20, alquenilo, haluro, hidroxilo, alcoxi Ci-C2o( arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo y un anillo heterocíclico, cualquiera de los cuales son opcionalmente sustituidos en una o más posiciones con un halógeno; y Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, un grupo hidroxilo, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo y un anillo heterocíclico, cualquiera de los cuales son opcionalraente sustituidos en una o más posiciones con uno o una combinación de grupos de sustitución seleccionados a partir del grupo que consiste de un grupo alquilo Ci-C10, un grupo alcoxi Ci-Ci0, un grupo hidroxilo, un grupo ciano, un grupo carboxilato, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo- y un anillo heterocíclico .
2. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque A está comprendido de NR1 en donde R1 es un hidrógeno.
3. Compuesto de conformidad con la reivindicación I, caracterizado porque X está comprendido de un residuo de ácido carboxílico.
4. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X está comprendido de un residuo fosfonato .
5. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X está comprendido de un residuo metilo o etilo sustituido con un residuo fosfonato o residuo carboxilato .
6. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque X está en la posición orto o meta con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo.
7. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Y está comprendido de un grupo alquilo Ci-C2o seleccionado a partir del grupo que consiste de CH3 , C5H11, CeHi7, C9H19, C14H29, y C16H33.
8. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Y se selecciona a partir del grupo que consiste de un residuo arilo, alquilarilo, y arilalquilo, cualquiera de los cuales es opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
9. Compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque Y está comprendido de 4-ClPh.
10. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Y está comprendido de un residuo alquilarilo que tiene átomos de carbono C1-C3.
11. Compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la porción arilo del residuo alquilarilo es sustituida con uno o más átomos de halógeno.
12. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, F, Cl, o OH.
13. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Z está comprendido de un grupo arilo opcionalmente sustituido o un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido.
14. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque es seleccionado a partir del grupo que consiste de: sz ??t , y Compuesto que comprende una fórmula IVa caracterizado porque n es ya sea 0 ó 1;
A se selecciona a partir del grupo que consiste de NR1, O, y S, en donde R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de H, hidroxilo, alquilo Ci-Ci0/ alcoxi Ci-Cio, alquenilo, arilo, alquilarilo y arilalquilo; Y se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo C1 - C20 / alquenilo, haluro, hidroxilo, alcoxi C1 - C20 , arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo y un anillo heterocíclico, cualquiera de los cuales son opcionalmente- sustituidos en una o más posiciones con un halógeno ; y Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, un grupo hidroxilo, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo y un anillo heterocíclico, cualquiera de los cuales son opcionalmente sustituidos en una o más posiciones con uno o una combinación de grupos de sustitución seleccionados a partir del grupo que consiste de un grupo alquilo C1 - C10 , un grupo alcoxi C1 - C10 , un grupo hidroxilo, un grupo ciano, un grupo carboxilato, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo y un anillo heterocíclico.
16. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque A está comprendido de NR1 en donde R1 es un hidrógeno.
17. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque Y está comprendido de un grupo alquilo C1 - C20 seleccionado a partir del grupo que consiste de CH3 , C5H11, CsHi , C9H19, C14H29, y C16H33.
18. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque Y se selecciona a partir del grupo que consiste de un residuo arilo, alquilarilo, y arilalquilo, cualquiera de los cuales es opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno .
19. Compuesto de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque Y está comprendido de 4-ClPh.
20. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque Y está comprendido de un residuo alquilarilo que tiene átomos de carbono C1-C3.
21. Compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la porción arilo del residuo alquilarilo es sustituida con uno o más átomos de halógeno.
22. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, F, Cl, OH, un grupo arilo opcionalmente sustituido y un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido.
23. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque COOH está en la posición orto o meta con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo.
24. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque Z está en ya sea la posición meta o para con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo.
25. Compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque es seleccionado a partir del grupo que consiste de: ??
26. Compuesto que comprende una fórmula IVb: caracterizado porque n es ya sea 0 ó 1 ; A se selecciona a partir del grupo que consiste de NR1, 0, y S, en donde R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de H, hidroxilo, alquilo Ci-Ci0, alcoxi Ci-Ci0, alquenilo, arilo, alquilarilo y arilalquilo; Y se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo CJ.-C20/ alquenilo, haluro, hidroxilo, alcoxi C1-C20/ arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo y un anillo heterocíclico , cualquiera de los cuales son opcionalmente sustituidos en una o más posiciones con un halógeno; y Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, un grupo hidroxilo, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo y un anillo heterocíclico, cualquiera de los cuales son opcionalmente sustituidos en una o más posiciones con uno o una combinación de grupos de sustitución seleccionados a partir del grupo que consiste de un grupo alquilo Ci-Cio, un grupo alcoxi Ci-Ci0, un grupo hidroxilo, un grupo ciano, un grupo carboxilato, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo y un anillo heterocíclico.
27. Compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque A está comprendido de NR1 en donde R1 es un hidrógeno.
28. Compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque Y está comprendido de un grupo alquilo Ci-C2o seleccionado a partir del grupo que consiste de CH3, C5Hn, C8H1 , C9Hi9, Ci H29, y Ci6H33.
29. Compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque Y se selecciona a partir del grupo que consiste de un residuo arilo, alquilarilo, y arilalquilo, cualquiera de los cuales es opcionalmente sustituido con uno o más átomos de halógeno.
30. Compuesto de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque Y está comprendido de 4-ClPh.
31. Compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque Y está comprendido de un residuo alquilarilo que tienen átomos de carbono Ci-C3.
32. Compuesto de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque la porción arilo del residuo alquilarilo es sustituida con uno o más átomos de halógeno.
33. Compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, F, Cl, OH, un grupo arilo opcionalmente sustituido y un anillo heterocíclico opcionalmente sustituido.
34. Compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque Z está en una posición orto con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo.
35. Compuesto de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque es seleccionado a partir del grupo que consiste de: ??
36. Compuesto que comprende una fórmula V: caracterizado porque es ya sea 0 ó m es ya sea O, 1, 2, o 3; A se selecciona a partir del grupo que consiste de NR1, 0, y S, en donde R1 se selecciona a partir del grupo que consiste de H, hidroxilo, alquilo Ci - Ci0 , alcoxi Ci - Ci0 , alquenilo, arilo, alquilarilo y arilalquilo; Y se selecciona a partir del grupo que consiste de alquilo Ci- C2o , alquenilo, haluro, hidroxilo, alcoxi C!-C2o arilo, alquilarilo, arilalquilo, cicloalquilo, cicloalquenilo y un anillo heterocíclico, cualquiera de los cuales son opcionalmente sustituidos en una o más posiciones con un halógeno; y Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, un grupo hidroxilo, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico, cualquiera de los cuales son opcionalmente sustituidos en una o más posiciones con uno o una combinación de grupos de sustitución seleccionados a partir del grupo que consiste de un grupo alquilo Ci - Cio , un grupo alcoxi Ci - Cio , un grupo hidroxilo, un grupo ciano, un grupo carboxilato, un haluro, un grupo arilo, un grupo alquilarilo, un grupo arilalquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquenilo o un anillo heterocíclico.
37. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque A está comprendido de NR1 en donde R1 es un hidrógeno.
38. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque Y está comprendido de un grupo alquilo Ci-C2o seleccionado a partir del grupo que consiste de CH3, C5H11( C8Hi7, CsHxg, C14H29, y C16H33.
39. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque Y está comprendido de un residuo arilo.
40. Compuesto de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el residuo arilo es sustituido con uno o más átomos de halógeno.
41. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque Y está comprendido de un residuo alquilarilo que tiene átomos de carbono C1-C3.
42. Compuesto de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque la porción arilo del residuo alquilarilo es sustituida con uno o más átomos de halógeno.
43. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque Z se selecciona a partir del grupo que consiste de H, F, Cl, OH, un grupo arilo opc ionalmente sustituido y un anillo heterocíclico opc ionalmente sustituido.
44. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque (CH2)mP03H2 está en una posición orto con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo.
45. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque Z está en una posición para con respecto al enlazador sulfonilo del anillo fenilo.
46. Compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque es seleccionado a partir del grupo que consiste de:
47. Composición farmacéutica caracterizada porque comprende un diluyente farmacéutico y un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 15, 26, y 36
48. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 47, caracterizada porque el compuesto se selecciona a partir del grupo que consiste de: ?? , y
49. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 47, caracterizada porque el compuesto se selecciona a partir del grupo que consiste de:
50. Método para inducir pérdida de peso en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 47 al sujeto.
Método de conformidad con la reivindicación caracterizado porque la composición farmacéutica . incluye uno o más compuestos seleccionados a partir del grupo que consiste de:
52. Método de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado ??^µe la composición farmacéutica incluye uno o más compuestos seleccionados a partir del grupo que consiste de:
53. Método para inhibir la actividad de Glicerol 3-fosfato aciltransferasa dentro de un sujeto, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 47 al sujeto.
54. Método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la composición farmacéutica incluye uno o más compuestos seleccionados a partir del grupo que consiste de:
55. Método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la composición farmacéutica incluye uno o más compuestos seleccionados a partir del grupo que consiste de:
56. Método para incrementar la oxidación de ácido graso en un sujeto, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 47 al sujeto.
57. Método de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque la composición farmacéutica incluye uno o más compuestos seleccionados a partir del grupo que consiste de:
58. Método de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque la composición farmacéutica incluye uno o más compuestos seleccionados a partir del grupo que consiste de:
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