MX2008013489A - Vacuna de virus de papiloma basado en hpv-18 (virus de papiloma humano 18). - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con el uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) incipiente(s) del virus del papiloma humano (HPV)-18 o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) incipientes(s) de HPV-18 para la fabricación de un medicamento para la prevención o tratamiento de una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma diferente del HPV-18. La invención es de interés muy especial en inmunoterapia, en particular en la prevención o tratamiento de las infecciones persistentes de HPV que conducen posiblemente al una neoplasia intraepitelial cervical (CIN) y en última instancia al cáncer cervical.

Description

VACUNA DE VIRUS DE PAPILOMA BASADO EN HPV-18 (VIRUS DE PAPILOMA HUMANO 18) Campo de la Invención La presente invención se relaciona al uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) incipiente(s) del virus del papiloma humano (HPV)-18 o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) incipientes de HPV-18 para la fabricación de un medicamento para prevenir o tratar una infección o una condición patológica causada por lo menos, por un virus del papiloma diferente del HPV-18. La invención es de muy especial interés en inmunoterapia, en particular en la prevención o tratamiento de las infecciones persistentes de HPV que posiblemente conducen a la neoplasia intraepitelial cervical (CIN) y en última instancia al cáncer cervical. Antecedentes de la Invención Los virus del papiloma son pequeños virus de ADN que se han identificado en un número de organismos más altos incluyendo seres humanos (ver por ejemplo a Pfister, 1987, en The papovaviridae: The Papillomaviruses, Salzman and Howley edition, Plenum Press, New York, p 1-38)). Ellos están asociados a condiciones patológicas que se van desde tumores benignos a los tumores malignos. En tumores benignos, el genoma viral es episomático mientras que en los tumores malignos, el ADN del HPV está integrado en los cromosomas anfitriones (Stoler, 2000, Int. J. Gynecol. Path. 19, 16-28). Los virus del papiloma poseen un ADN bicatenario circular de aproximadamente 7900 pares base que está rodeada por una proteína de la cápsida. El genoma una región incipiente (E) que contiene los marcos de lectura E1-E7 y una región avanzada (L). La región avanzada codifica las proteínas estructurales L1 y L2 y que forman la cápsida viral mientras que los genes incipientes codifican las proteínas reguladoras que se encuentran predominantemente en el núcleo. E1 codifica dos proteínas importantes en el mantenimiento y replicación viral del genoma. E2 codifica las proteínas activadoras y represoras qúe regulan al promotor viral que dirige la trascripción E6 y E7 (Bechtold y colaboradores, 2003, J. Virol. 77, 2021-2028). La proteína codificada E4 enlaza e interrumpe la red citoplásmica de la queratina y puede desempeñar un papel en la maduración viral. El papel de la proteína E5 sigue siendo polémico y su expresión se pierde a menudo durante la integración viral en los cromosomas del anfitrión. Los genes codificados E6 y E7 productos de los genotipos de HPV asociados al cáncer están implicados en la transformación oncogénica de las células infectadas (Kanda y colaboradores, 1988, J. Virol. 62, 610-613; Vousden y colaboradores, 1988, Oncogene Res. 3, 1-9; Bedell y colaboradores, 1987, J. Virol. 61, 3635-3640), lo que es presumiblemente debido a la capacidad de estas proteínas virales de enlazar productos del gen supresor de tumor cerebral p53 y retinoblastoma (Rb), respectivamente. Los residuos del aminoácido implicados en el enlace del polipéptido nativo E6 de HPV-16 a p53 se han definido claramente de los residuos 118 a 122 (+1 que son el primer residuo Met o de los residuos 111 a 115 que empiezan con el segundo residuo Met preferiblemente usado) (Crook y colaboradores, 1991, Cell 67, 547-556) y esos implicados en el enlace del polipéptido nativo E7 de HPV-16 al Rb están localizados de los residuos 21 a 26 (Munger y colaboradores, 1989, EMBO J. 8, 4099-4105; Heck y colaboradores, 1992, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89, 4442-4446). Tales regiones de enlace también se conservan en E6 y E7 de HPV-18 (Pim y colaboradores, 1994, Oncogene 9, 1869-1876; Heck y colaboradores, 1992, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89, 4442-4446). Actualmente, arriba de 100 genotipos del virus del papiloma humano (HPV) han sido clonados y secuenciado (Stoler, 2000, Int. J. Gynecol. Path 19, 16-28). Solamente 40 genotipos de HPV infectan la mucosa genital con aproximadamente 15 de los cuales pongan a mujeres en riesgo de tumores malos del tracto genital. Más específicamente, los dos genotipos más frecuentes, HPV-16 y HPV-18, son detectados en más del 70% del carcinoma cervical invasor mientras que HPV-31, HPV-33 y HPV-45 juntos contabilizan el 10% de los casos (Cohén y colaboradores, 2005, Science 308, 618-621 ).

Aunque existen programas de investigación cervicales, casi medio millón de mujeres por todo el mundo son diagnosticadas con cánceres cervicales cada año y más de 270,000 mueren según los datos de la Agencia Internacional para la Investigación sobre el cáncer. Los métodos convencionales siguen siendo cirugía y radioterapia, pero las nuevas estrategias vaccíneas han sido diseñadas por los últimos 15 años, por ejemplo vaccíneas basadas en péptidos (Feltkamp y colaboradores, 1993, Eur. J. Immunol. 23, 2242-2249), vaccíneas de partículas tipo virus (VLP), vaccíneas de ADN (Osen y colaboradores, 2001, Vaccine 19, 4276-4286; Smahel y colaboradores, 2001, Virology 281, 231-238) y vaccíneas de vector viral (EP 462.187, Daemen y colaboradores, 2000, Gene Ther. 7: 1859-1866; He y colaboradores, 2000, Virology 270, 146-161; Borysiewicz y colaboradores, 1996, Lancet 347, 1523-1527). Conceptualmente, hay dos métodos para las vaccíneas de HPV, profiláctico y terapéutico. El método profiláctico busca prevenir la infección viral, es decir bloquear el virus antes de que penetre en las células hospedadoras principalmente a través de la inducción de anticuerpos neutralizantes. Generalmente, las vaccíneas profilácticas apuntan a las proteínas de la cápsida expresadas en la superficie del virus. La mayoría de ellas se basan en VLPs producidos de forma recombinante de las proteínas L1 o mezcla de VLPs de los tipos más frecuentes de HPV. Las pruebas clínicas de fase III exitosas han sido reportadas recientemente por Merck y GlaxoSmithKIine (GSK) con 100% de eficacia en la prevención de infecciones cervicales de tipo específico). Protección cruzada contra los genotipos oncogénicos HPV-31 y HPV-45 ha sido descrita después de la administración de una mezcla de los VLPs HPV-16 y HPV-18 (WO 2004/056389). Sin embargo, no se espera que las vacunas preventivas basadas en VLP induzcan la regresión de las condiciones patológicas que se desarrollan después de la infección de HPV. El método terapéutico busca tratar infecciones de HPV establecidas e induce la regresión de las condiciones patológicas precancerosas y cancerosas asociadas al HPV principalmente a través de la inducción de una inmunorespuesta celular. Generalmente, la estrategia terapéutica se basa en la inmunización dirigida a las oncoproteínas E6 y/o E7 que son expresadas por las células del tumor de HPV inducido. Hasta ahora, la inmunidad proporcionada por los antígenos de HPV E6 y E7 es considerada de genotipo específico y las vacunas terapéuticas actuales en desarrollo clínico o preclínico se enfocan principalmente en el oncogénico HPV-16 más frecuente y a una menor extensión de HPV-18. Sin embargo, una vacuna terapéutica ideal debería permitir proporcionar protección no solamente contra los genotipos de HPV más frecuentes sino también contra los otros genotipos de HPV de menor importancia implicados en el 30% restante de cánceres cervicales. Esto se puede alcanzar a través del desarrollo de candidatos vaccíneos alternativos dirigidos a cada genotipo de HPV oncogénico. Sin embargo, esta estrategia es probable que no sea muy atractiva en consideración del costo de desarrollos clínicos y preclínicos requeridos por las autoridades reguladoras contra el número limitado de pacientes expuestos a los genotipos de HPV de menor importancia. Uno puede esperar que el HPV continúe siendo una seria amenaza global de la salud por muchos años debido a la naturaleza crónica y persistente de la infección, de su alto predominio y de la significativa morbilidad de los cánceres de HPV inducidos. Por lo tanto, hay una necesidad de desarrollar una vacuna que ofrezca una cobertura más amplia que sea capaz de proteger y/o tratar contra los genotipos múltiples de HPV que incluyan además del HPV-18 otros genotipos de HPV potencialmente oncogénicos y menores. Así, la presente invención representa un avance significativo para mejorar la prevención y tratamiento de las infecciones del virus del papiloma o de las lesiones pre-malignas y malignas asociadas al virus del papiloma en países industrializados así como en países en vías de desarrollo. Este problema técnico es solucionado por la disposición de las modalidades según lo definido en las reivindicaciones. Otros y adicionales aspectos, características y ventajas de la presente invención serán aparentes de la siguiente descripción de las modalidades actualmente preferidas de la invención. Estas modalidades se dan con el propósito de descripción. Por consiguiente, en un primer aspecto, la presente invención proporciona el uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes o de un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes para la fabricación de un medicamento para prevenir o tratar una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma diferente de HPV-18. Más particularmente, la presente invención se relaciona con el uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes o de un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptid o(s) de HPV-18 incipientes para la fabricación de un medicamento para tratar una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma humano diferente del HPV-18. La presente invención también se relaciona con un método para tratar una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma humano diferente del HPV-18, el método que comprende administrar a un organismo anfitrión una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes. Según lo utilizado en la presente a través de toda la solicitud, los términos "uno" y "unos" se utilizan en el sentido que significan "por lo menos uno", "por lo menos un primer", "uno o más" o "una pluralidad" de los compuestos referidos o las etapas, a menos que el contexto lo dicte de otra manera. Por ejemplo, el término "una célula" incluye una pluralidad de células que incluyen una mezcla de las mismas. Más específicamente, "por lo menos uno" y "uno o más" significa un número que sea uno o mayor de uno, con una preferencia especial por uno, dos o tres. El término "y/o" donde sea utilizado en la presente incluye el significado de "y", "o" y "todos los o cualquier otra combinación de los elementos conectados por dicho término". El término "aproximado" o "aproximadamente" como es usado en la presente significa dentro del 20%, preferiblemente dentro del 10%, y más preferiblemente dentro del 5% de un valor o intervalo dado. El término "aminoácidos" y "residuos" son sinónimos. Estos términos se refieren a los aminoácidos naturales, artificiales y/o sintéticos, incluyendo los isómeros ópticos D o L, los aminoácidos modificados y a los análogos del aminoácido. Los términos "polipéptido", "péptido" y "proteína" son utilizados de manera alternativa para referirse a los polímeros de los residuos del aminoácido que comprenden nueve o más aminoácidos enlazados vía enlaces péptidos. El polímero puede ser lineal, ramificado o cíclico y puede comprender análogos del aminoácido y/o que ocurren naturalmente y pueden ser interrumpir por los ácidos no aminados. Como indicación general, si el polímero del aminoácido es largo (por ejemplo más de 50 residuos del aminoácido), se refiere preferiblemente a un polipéptido o una proteína. Dentro del contexto de la presente invención, los términos "ácido nucleico", "molécula del ácido nucleico", "polinucleótido" y "secuencia del nucleotido" se utilizan alternativamente y definen un polímero de cualquier longitud tanto de los polideoxiribonucleótidos (ADN) (por ejemplo, cADN, ADN genómico, plásmidos, vectores, genomas virales, ADN aislado, sondas, cebos y cualquier mezcla de los mismos) o moléculas poliribonucleótidas (ARN) (por ejemplo, mARN, ARN antisentido) o los poliribo-polideoxiribinucleótidos mezclados. Ellos comprenden polinucleótidos monocatenarios o bicatenarios, lineares o circulares, naturales o sintéticos. Por otra parte, un polinucleótido puede comprender nucleótidos que no ocurren naturalmente, tales como nucleótidos desnaturalizados y análogos del nucleotido (ver los documentos US 5,525,711, US 4,711,955 o EPA 302 175 como ejemplos de modificaciones) y pueden ser interrumpidos por componentes no-nucleótidos. Si están presentes, modificaciones al nucleotido puede impartirse antes o después de la polimerización. Según lo utilizado en la presente, el término "que comprende" cuando es utilizado para definir productos, composiciones y métodos, se consideran para significar que los productos, las composiciones y los métodos incluyen los compuestos referidos o las etapas, pero no excluyendo otros, "que consiste esencialmente de" deberá significar que excluye otros compuestos o etapas de cualquier significación esencial. Así, una composición que consiste esencialmente de los compuestos mencionados no excluirá trazas de contaminantes y portadores farmacéuticamente aceptables. "Que consiste de" deberá significar que excluye más que las trazas de elementos de otros compuestos o etapas. Por ejemplo, un polipéptido "consiste de" una secuencia del aminoácido cuando el polipéptido no contiene ningún aminoácido sino la secuencia del aminoácido mencionada. Un polipéptido "consiste esencialmente de" una secuencia del aminoácido de cuando tal secuencia del aminoácido está presente junto con solamente algunos residuos del aminoácido adicionales, típicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 o así de residuos adicionales. Un polipéptido "comprende" una secuencia del aminoácido cuando la secuencia del aminoácido es por lo menos parte de la secuencia del aminoácido final del polipéptido. Tal polipéptido puede tener desde algunos hasta varios cientos de residuos de aminoácidos adicionales. Tales residuos del aminoácido adicionales pueden desempeñar un papel en el tráfico polipéptido, facilitan la producción o purificación del polipéptido; prolongan la vida media, entre otras cosas. Lo mismo se puede aplicar para las secuencias del nucleótido. Según lo utilizado en la presente, el término "aislado" se refiere a una proteína, polipéptido, péptido o a un ácido nucleico que es purificado o removido de su ambiente natural. El término "purificado" se refiere a una proteína, polipéptido, péptido o a un ácido nucleico que es separado de por lo menos un otro componente(s) con el cual está naturalmente asociado. El término "célula hospedadora" se debe entender ampliamente sin ninguna limitación respecto a una organización particular en el tejido, órgano, o células aisladas. Tales células pueden ser de un tipo único de células o un grupo de diversos tipos de células y comprender líneas de células cultivadas, células primarias y células proliferativas. El término "organismo anfitrión" se refiere a un vertebrado, particularmente un miembro de la especie mamífera y especialmente animales domésticos, animales de deporte, y primates incluyendo seres humanos. "HPV" significa "virus del papiloma humano". Su clasificación se basa en el grado de afinidad de sus genomas. Más de 100 genotipos de HPV se han identificado actualmente y han sido numerados siguiendo el orden cronológico de su aislamiento. Por convención, dos aislantes constituyen tipos distintos si comparten menos que el 90% de identidad en las cerca de 2000 porciones largas de los nucleotidos de su genoma que contiene los marcos de lectura E6, E7 y L1. Un árbol filogenético fue construido de la alineación de la secuencia disponible del nucleótido (Van Ranst y colaboradores, 1992, J. Gen. Virol. 73, 2653; De Villiers y colaboradores, 2004, Virology 324, 17-27). Según es utilizado en la presente, el término "polipéptido incipiente" se refiere a una proteína no estructural reconocida en el arte, seleccionada preferiblemente entre el grupo que consiste de los polipéptidos E1, E2, E4, E5, E6 y E7. En el contexto de la invención, el uno o más polipéptido(s) incipiente(s) incluido en la composición o codificado por el ácido nucleico incluido en la composición usada de acuerdo a la invención se originan del HPV-18. El término "origina" significa que se aisló, se reprodujo, se derivó o se relacionó. Así, de acuerdo con la presente invención, uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) pueden originarse de un polipéptido HPV-18 incipiente nativo ó un derivado del mismo. Un "polipéptido HPV-18 incipiente nativo" se refiere a una proteína, a un polipéptido o a un péptido que se puedan encontrar o aislar de una fuente en la naturaleza, a diferencia de haber sido artificialmente modificados o alterados por el hombre en el laboratorio. Tales fuentes en la naturaleza incluyen muestras biológicas (por ejemplo sangre, plasma, sueros, fluidos vaginales y cervicales, secciones de tejido, biopsias, muestras ginecológicas de pacientes infectados de HPV-18), células cultivadas, asi como materiales recombinantes (por ejemplo virus o genoma de HPV-18, bibliotecas genómicas o de cADN, plásmidos que contienen fragmentos del genoma de HPV- 18, polipéptidos de HPV-18 incipientes recombinantes y similares). Así, el término "polipéptido HPV-18 incipiente nativo" incluiría polipéptidos de HPV-18 incipientes que ocurren naturalmente y fragmentos de los mismos. Un fragmento es preferiblemente de por lo menos 9 residuos de aminoácido y comprende por lo menos un epítope inmunogénico y particularmente un epítope T. Tales fragmentos se pueden utilizar independientemente o en combinación (por ejemplo en fusión). Las secuencias del nucleótido y del aminoácido de los genes / polipéptidos de HPV-18 incipientes han sido descritos en la literatura y disponibles en bancos de datos especializados, por ejemplo en el Genbank bajo número de accesión NC_001357 y X05015, respectivamente. Sin embargo, los polipéptidos de HPV-18 incipientes nativos no se limitah a estas secuencias ejemplares. De hecho Las secuencias del aminoácido pueden variar entre diversos aislantes de HPV-18 y este alcance natural de la variación genética está incluido dentro del alcance de la invención. Un derivado de un polipéptido de HPV-18 incipientes incluye una o más modificaciones con respecto al polipéptido de HPV-18 incipiente nativo, tal como los definidos abajo. Las modificaciones pueden generarse por mutación y/o adición de las fracciones químicas (por ejemplo alquilación, acetilación, amidación, fosforilación y similares) o el etiquetado de fracciones. La mutación incluye la eliminación, substitución o adición de uno o más residuo(s) del aminoácido o cualquier combinación de estas posibilidades. Cuando varias modificaciones son contempladas, pueden referir residuos consecutivos y/o residuos no consecutivos. Las modificaciones se pueden hacer en un número de maneras conocidas para los expertos en la materia, tales como la mutagénesis de sitio dirigido (por ejemplo usando el sistema de mutagénesis in vitro de Sculptor™ de Amersham, Les Ullis, France), la mutagénesis de PCR y el mezclado de ADN. Ventajosamente, un polipéptido de HPV-18 incipiente modificado conserva un alto grado de identidad de la secuencia del aminoácido con el correspondiente polipéptido HPV-18 incipiente nativo sobre la longitud entera de la secuencia del aminoácido o un fragmento más corto del mismo (por ejemplo de por lo menos 9, 20, 30, 40, 50, 100 aminoácidos en longitud), que es mayor que 75%, ventajosamente mayor que 80%, deseablemente mayor que 85%, preferiblemente mayor que 90%, más preferiblemente mayor que 95%, aún más preferiblemente mayor que 97% (por ejemplo el 100% de la identidad de la secuencia). El porcentaje de identidad entre dos polipéptidos es una función del número de posiciones idénticas compartidas por las secuencias, considerando el número de hendiduras que necesitan ser introducidas para la alineación óptima y la longitud de cada hendidura. Varios programas de computadora y algoritmos matemáticos están disponibles en la técnica para determinar el porcentaje de identidades entre las secuencias del aminoácido como por ejemplo el software W2H HUSAR y el programa Blast (por ejemplo Altschul y colaboradores, 1997, Nucleic acids Res. 25, 3389-3402 de; Altschul y colaboradores, 2005, FEBS J. 272, 5101-5109) disponible en NCBI. Deseablemente, el polipéptido de HPV-18 incipiente modificado en uso de acuerdo con la invención conserva la actividad inmunogenética del polipéptido HPV-18 incipiente nativo tal como la capacidad de estimular una inmunorespuesta transmitida por células. En una modalidad, la composición es utilizada para el tratamiento de la infección de HPV y/o condiciones patológicas, especialmente en el tracto anogenital, la piel o la cavidad bucal, causada por lo menos por un genotipo de HPV diferente del HPV-18. En un aspecto, el genoma de por lo menos un virus del papiloma humano comparten menos del 90%, ventajosamente menos del 87% y deseable menos del 86% de la identidad de la secuencia del nucleótido con la porción del genoma de HPV-18 que codifica los polipéptidos E6 o E7 pero más del 50%, ventajosamente más del 55% y deseablemente más del 60% de la identidad de la secuencia del nucleótido con la porción del genoma de HPV-18 que codifica los polipéptidos E6 o E7. Comparte preferiblemente de aproximadamente 61% a aproximadamente 86% de la identidad del nucleótido con los ORFs E6 o E7 del HPV-18. El porcentaje de identidad entre los las porciones de los genomas de HPV es una función del número de las posiciones idénticas compartidas por las dos secuencias, tomando en la cuenta 15 el número de hendiduras que necesitan ser introducidas para la alineación óptima y la longitud de cada hendidura. Varios programas de computadora y algoritmos matemáticos están disponibles en la técnica para determinar el porcentaje de identidades entre las secuencias del nucleótido. Los ejemplos representativos de tales genotipos de HPV incluyen sin limitación HPV-13, HPV-18, HPV-30, HPV-32, HPV-39, HPV-40, HPV-42, HPV-44, HPV-45, HPV-51, HPV-56, HPV-59, HPV-61, HPV-64, HPV-68, HPV-70 y HPV-85. Preferiblemente, por lo menos un virus del papiloma humano diferente del HPV-18 es seleccionado entre el grupo que consiste en HPV-39, HPV-45, HPV-51, HPV-56, HPV-59, HPV-68, HPV-70, y HPV-85 o cualquier combinación posible de los mismos, con una preferencia especial para HPV-45. Las secuencias del nucleótido y del aminoácido de estos genotipos de HPV han sido descritas en la literatura y están disponibles en los bancos de datos especializados, según lo ilustrado en la tabla I. Tabla I: Números de accesión de Genbank HPV 18 X05015 HPV 39 62849 HPV 45 X74479 HPV 51 NC_001533 HPV 56 X74483 HPV 59 NC_001635 (X77858) HPV 68 X67161 HPV 70 U21941 HPV 85 AF131950 En otra modalidad, la composición usada de acuerdo con la invención comprende o codifica un polipéptido E6 de HPV-18, un polipéptido E7 de HPV-18 o ambos un polipéptido E6 de HPV-18 y un polipéptido E7 de HPV-18. Dadas las observaciones recordadas arriba en la energía de transformación de los polipéptidos E6 y E7, los polipéptidos modificados E6 y/o E7 de HPV-18 se utilizan preferiblemente que son variantes no oncogénicas mutadas en la región implicada en la interacción con los productos del gen supresor del tumor celular p53 y rb respectivamente. La presente invención comprende el uso de cualquier polipéptido E6 de HPV-18 que al unirse a p53 es alterado o por lo menos reducido significativamente y/o el uso de cualquier polipéptido E7 de HPV-18 que al unirse al rb es alterado o por lo menos se reduce perceptiblemente (Pim y colaboradores, 1994, Oncogene 9, 1869-1876; Heck y colaboradores, 1992, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89, 4442- 4446). Una variante no oncogénica de E6 de HPV-18 que es conveniente para el propósito de la presente invención es eliminada de uno o más residuos del aminoácido localizados aproximadamente de la posición 113 a aproximadamente la posición 117 (empezando desde el primer residuo de metionina del polipéptido E6 de HPV-18 nativo), con una preferencia especial por la eliminación completa de los residuos 113 a 117 (NPAEK). La variante no oncogénica más preferida del polipéptido E6 de HPV-18 comprende o alternativamente consiste esencialmente de, o consiste alternativamente de una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 1. Una variante E7 de HPV-18 no oncogénica que es conveniente para el propósito de la presente invención es eliminada de uno o más residuos del aminoácido localizados aproximadamente de la posición 24 aproximadamente a la posición 28 (+1 que representan el primer aminoácido del polipéptido E7 de HPV-18 nativo), con una preferencia especial por la eliminación completa de los residuos 24 a 28 (DLLCH). La variante no oncogénica más preferida del polipéptido E7 de HPV-18 comprende o alternativamente consiste esencialmente de, o alternativamente consiste en una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 2. En un aspecto preferido, uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes en uso en la invención es/son modificados adicionalmente para mejorar la presentación de la MHC clase I y/o de la MHC clase II, y/o estimular la inmunidad anti-HPV. Los polipéptidos E6 y E7 de HPV-18 son proteínas nucleares y se ha mostrado previamente que la presentación de la membrana permite mejorar la eficacia terapéutica de los polipéptidos de HPV-16 correspondientes (ver por ejemplo WO99/03885) . Así, puede ser recomendable modificar por lo menos uno de los polipéptido(s) HPV-18 incipientes para ser anclado a la membrana de la célula. El anclaje de la membrana puede ser alcanzado fácilmente incorporando en el polipéptido de HPV-18 incipiente una secuencia de anclaje de la membrana y si el polipéptido nativo la carece una secuencia secretora (es decir, péptido señal). Los polipéptido(s) E6 y/o E7 de HPV-18 es (son) modificados preferiblemente incorporando una secuencia de anclaje de membrana y una secuencia secretora. Las secuencias de anclaje de membrana y secretoras son conocidas en la técnica. Brevemente, las secuencias secretoras están presentes en el término de la membrana de los polipéptidos presentes o secretados e inician su paso en el retículo endoplásmico (ER). Comprenden generalmente 15 a 35 aminoácidos hidrofóbicos esencialmente que son posteriormente removidos por una endopeptidasa localizada de ER específica para dar el polipéptido maduro. Las secuencias de anclaje de membrana son generalmente altamente hidrofóbicas en la naturaleza y sirven para anclar los polipéptidos en la membrana de la célulá (ver por ejemplo Branden y Tooze, 1991, en Introduction to Protein Structure p. 202-214, NY Garland). La selección de las secuencias de anclaje de membrana y secretoras que pueden ser utilizadas en el contexto de la presente invención es extensa. Pueden ser obtenidas de cualquier polipéptido anclado a la membrana y/o secretado que las comprenda (por ejemplo los polipéptidos celulares o virales) tal como la glicoproteína de la rabia, de la glicoproteína que envuelve el virus de VIH o de la proteína del virus F del sarampión o pueden ser sintéticas. Las secuencias de anclaje de la membrana y/o secretoras insertadas en cada uno de los polipéptidos de HPV-18 incipientes usados de acuerdo con la invención pueden tener un origen común o diferente. El sitio preferido de inserción de la secuencia secretora es el término-N corriente abajo del codón de iniciación de la traducción y el de la secuencia de anclaje de la membrana es el término-C, por ejemplo inmediatamente contracorriente desde el codón de terminación. Por otra parte, un péptido de unión puede utilizarse para conectar la secuencia secretora con el polipéptido de HPV-18 incipiente en uso en la invención o para conectar el polipéptido de HPV-18 incipiente con la secuencia de anclaje de la membrana. Los péptidos de unión son conocidos en la técnica. Contienen típicamente desde 2 a 20 aminoácidos e incluyen alanina, glicina, prolina y/o serina. El polipéptido E6 de HPV-18 en uso en la presente invención es modificado preferiblemente por la inserción de señales secretoras y de anclaje de membrana de la proteína F del sarampión, con una preferencia especial por un polipéptido que comprende o que alternativamente consiste esencialmente en, o que consiste alternativamente en una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 3. Opcionalmente o en combinación, el polipéptido E7 de HPV-18 en uso en la presente invención es modificado preferiblemente por la inserción de señales secretoras y de anclaje de membrana de la glicoproteína de la rabia, con una preferencia especial por un polipéptido que comprende o que alternativamente consiste esencialmente en, o que consiste alternativamente en una secuencia del aminoácido que es homóloga o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 4. En otro y aun más preferido aspecto, la eficacia terapéutica de la composición en uso en la invención puede también ser mejorado usando uno o más polipéptido(s) immunopotenciador o uno o más ácidos nucleicos que codifican este polipéptido(s) immunopotenciador. Por ejemplo, puede ser ventajoso ligar el polipéptido(s) de HPV-18 incipiente a un polipéptido tal como calreticulina (Cheng y colaboradores, 2001, J. Clin. Invest. 108, 669-678), proteína de choque térmico 70 de Mycobacterium tuberculosis (HSP70) (Chen y colaboradores, 2000, Cáncer Res del. 60, 1035-1042), ubicuitina (Rodríguez y colaboradores, 1997, J. Virol. 71, 8497-8503) o una toxina bacteriana tal como el dominio de la translocación de la exotoxina A Pseudomonas aeruginosa (ETA(dlll)) (Hung y colaboradores, 2001 Cáncer Res. 61, 3698-3703). Alternativamente, la composición en uso en la presente invención puede comprender además una citosina o un ácido nucleico que codifica una citosina. Las citosinas convenientes incluyen sin limitación interleucina (IL)-2, IL-7, IL- 15, IL-18, IL-21 e IFNg, con una preferencia especial por IL-2.

Según otra modalidad preferida, la composición en uso de acuerdo con la invención comprende un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes según lo definido arriba. Se prefiere un ácido nucleico que codifica por lo menos: - un polipéptido E6 de HPV-18 que comprende o que alternativamente consiste esencialmente en, o que consiste alternativamente en una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 1 o SEC ID NO: 3; y - un polipéptido E7 de HPV-18 que comprende o que alternativamente consiste esencialmente en, o que consiste alternativamente en una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 2 o SEC ID NO: 4. Si se necesita, la molécula del ácido nucleico en uso en la invención puede optimizarse para proporcionar expresión de alto nivel del polipéptido(s) de HPV-18 incipiente en una célula hospedadora particular u organismo, por ejemplo una célula hospedadora o un organismo humano. Típicamente, la optimización del codón es realizada sustituyendo un o más codón "nativo" (por ejemplo HPV) que corresponde a un codón utilizado infrecuentemente en la célula hospedadora del mamífero por uno o más codones que codifican el mismo aminoácido que es utilizado con más frecuencia. Esto se puede alcanzar por mutagénesis convencional o por técnicas sintéticas químicas (por ejemplo que resulten en un ácido nucleico sintético). No es necesario sustituir todos los codones nativos que corresponden a los codones infrecuentemente usados puesto que la expresión incrementada puede alcanzarse incluso con el reemplazo parcial. Por otra parte, algunas desviaciones de la adherencia terminante al uso optimizado del codón pueden hacerse para acomodar la introducción del sitio(s) de restricción.

Preferiblemente, el ácido nucleico que codifica el polipéptido de HPV-18 incipiente en uso en la invención está en una forma conveniente para su expresión en una célula hospedadora u organismo, lo que significa que la secuencia del ácido nucleico que codifica el polipéptido E6 y/o la secuencia del ácido nucleico que codifica el polipéptido E7 están colocadas bajo el control de uno o más elementos reguladores necesarios para la expresión en la célula hospedadora u organismo. Como es utilizado en la presente, el término "elemento regulador" se refiere a cualquier secuencia que permite, contribuye o modula la expresión del ácido nucleico en una célula hospedadora, incluyendo réplica, duplicación, trascripción, separación, traducción, estabilidad y/o transporte del ácido nucleico o uno de sus derivados (es decir mRNA) en la célula hospedadora. Será apreciado por los expertos en la materia que la selección de los elementos reguladores pueda depender de factores tales como la célula hospedadora, el vector y el nivel de expresión deseados. El promotor es de especial importancia y la presente invención comprende el uso de promotores constitutivos que es expresión directa del ácido nucleico en muchos tipos de células hospedadora y las que es expresión directa solamente en ciertas células hospedadora o en respuesta acontecimientos específicos o factores exógenos (por ejemplo por la temperatura, aditivo nutriente, hormona o a otro ligando). Promotores convenientes están extensamente descritos en literatura y uno puede citar más específicamente promotores virales tales como los promotores RSV (virus del sarcoma de Rous), SV40 (Simian Virus-40), CMV (Cytomegalo-virus) y MLP (promotor tardío mayor). Los promotores preferidos para el uso en un vector poxviral incluyen sin limitación los promotores de la vacuna 7.5K, H5R, TK, p28, p 11 y K1L, promotores quiméricos en medio de promotores poxvirales incipientes y tardíos así como promotores sintéticos tales como los descritos en Chakrabarti y colaboradores (1997, Biotechniques 23, 1094-1097), Hammond y colaboradores (1997, J. Virological Methods 66, 135-138) y Kumar y Boyle (1990, Virology 179, 151-158). Los expertos en la materia apreciarán que los elementos reguladores que controlan la expresión del ácido nucleico pueden comprender además elementos adicionales para la apropiada iniciación, regulación y/o terminación de la trascripción (por ejemplo secuencias de terminación de la trascripción poliA) transporte de mRNA (por ejemplo secuencias de señal de localización nuclear), procesamiento (por ejemplo señales de separación), estabilidad (por ejemplo intrones y secuencias no codificantes 5' y 3'), y traducción (por ejemplo secuencias tripartitas líderes, sitios de enlace de ribosoma, secuencias de Shine-Dalgamo, etc.) en la célula hospedadora u organismo. Según otra modalidad preferida, el ácido nucleico usado de acuerdo con la presente invención está comprendido en un vector. El término "vector" según es utilizado en la presente se refiere vectores virales así como no virales (por ejemplo ADN plasmídico), incluyendo vectores extracromosomales (por ejemplo episoma), multicopia e integral (es decir para ser incorporado en los cromosomas anfitriones). Particularmente importantes en el contexto de la invención son los vectores de terapia del gen (es decir, que son capaces de entregar el ácido nucleico a un organismo anfitrión) así como los vectores de la expresión para el uso en varios sistemas de expresión. Los vectores no virales convenientes incluyen plásmidos tales como pREP4, pCEP4 (Invitrogene), pCI (Promega), pCDM8 (Seed, 1987, Nature 329, 840), pVAX y pgWiz (Gene Therapy System, Inc.; Himoudi y colaboradores, 2002, J. Virol. 76, 12735-12746). Los vectores virales convenientes pueden derivarse de una variedad de diversos virus (por ejemplo retrovirus, adenovirus, AAV, poxvirus, virus del herpes, virus del sarampión, virus espumoso, y similares). Según es utilizado en la presente, el término "vector viral" comprende el vector de ADN así como partículas virales generadas del mismo. Los vectores virales pueden ser réplica- competentes, o pueden ser genéticamente deshabilitados para ser réplica-defectuosos o réplica-deteriorados. El término "réplica-competente" según es utilizado en la presente comprende vectores virales réplica-selecti os y condicionalmente-replicativos que son modificados para replicar mejor o selectivamente en células hospedadoras específicas (por ejemplo células tumorales). En un aspecto, el vector en uso en la invención es un vector adenoviral (para una revisión, ver "Adenoviral vectors for gene therapy", 2002, Ed D. Curiel y J. Douglas, Academic Press). Este puede ser derivado de una variedad de fuentes humanas o animales y cualquier serotipo puede utilizarse de los serotipos de adenovirus 1 a 51. Particularmente preferido son los adenovirus humanos 2 (Ad2), 5 (Ad5), 6 (Ad6), 11 (Ad11), 24 (Ad24) y 35 (Ad35). Tal adenovirus está disponible de la American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, Md.) y ha sido el tema de numerosas publicaciones que describen su secuencia, organización y métodos de producción, permitiendo que el experto los aplique (ver por ejemplo los documentos US 6,133,028; US 6,110,735; WO 02/40665; WO 00/50573; EP 1016711; Vogels y colaboradores, 2003, J. Virol. 77, 8263-8271). El vector adenoviral en uso en la presente invención puede ser réplica-competente. Numerosos ejemplos de vectores adenovirales réplica-competentes están fácilmente disponibles para los expertos en la técnica (Hernandez-Alcoceba y colaboradores, 2000, Human Gene Ther. 11, 2009-2024; Nemunaitis y colaboradores, 2001, Gene Ther. 8, 746-759; Alemany y colaboradores, 2000, Nature biotechnology 18, 723-727). Por ejemplo, pueden ser diseñados de un genoma de adenovirus tipo salvaje por la eliminación en el dominio E1A CR2 (por ejemplo el documento WO00/24408) y/o por el reemplazo de los promotores nativos E1 y/o E4 con los promotores del tejido, tumor o estado específico de la célula (por ejemplo US5,998,205, WO99/25860, US5,698,443, WO00/46355, WO00/15820 y WO01/36650). Alternativamente, el vector adenoviral en uso en la invención es réplica-defectuoso (ver por ejemplo W094/28152; Lusky y colaboradores, 1998, J. Virol 72, 2022-2032). Los vectores adenovirales réplica-defectuosos preferidos son E1-defectuoso (por ejemplo US 6,136,594 y US 6,013,638), con una eliminación del E1 que se extiende desde aproximadamente las posiciones 459 a 3328 o de aproximadamente las posiciones 459 a 3510 (por referencia a la secuencia del adenovirus humano tipo 5 descrito en el GeneBank bajo el número de accesión M 73260 y en Chroboczek y colaboradores, 1992, Virol. 186, 280-285). La capacidad de clonación puede ser mejorada adicionalmente eliminando la(s) porción(es) adicional(es) del genoma adenoviral (todo o una parte de la región no esencial E3 o de otras regiones esenciales E2, E4). La inserción del ácido nucleico puede realizarse a través de la recombinación homologa en cualquier localización del genoma adenoviral como está descrito en Chartier y colaboradores (1996, J. Virol. 70, 4805-4810). Por ejemplo, el ácido nucleico que codifica el polipéptido E6 de HPV-18 se puede insertar en reemplazo de la región del E1 y el ácido nucleico que codifica el polipéptido E7 de HPV-18 en reemplazo de la región E3 o viceversa. En otro aspecto preferido, el vector en uso en la invención es un vector poxviral (ver por ejemplo Cox y colaboradores en "Viruses in Human Gene Therapy" Ed J. M. Hos, Carolina Academic Press). Este puede ser obtenido de cualquier miembro de los poxviridae, en particular el virus canarypox, fowlpox y vaccinia, el último es preferido. Los virus vaccinia convenientes incluyen sin limitación la cepa de Copenhague (Goebel y colaboradores, 1990, Virol. 179, 247-266 y 517-563; Johnson y colaboradores, 1993, Viro). 196, 381-401), la cepa de Wyeth y la cepa de Ankara modificada altamente atenuada (MVA) (Mayr y colaboradores, 1975, infección 3, 6-16). La determinación de la secuencia completa del genoma de MVA y de la comparación con el genoma de Copenhague ha permitido la identificación exacta de siete eliminaciones (I a VII) que ocurrieron en el genoma de MVA (Antoine y colaboradores, 1998, Virology 244, 365-396), cualquiera de los cuales puede utilizarse para insertar el ácido nucleico que codifica el polipéptido de HPV-18 incipientes. La técnica básica para insertar el ácido nucleico y los elementos reguladores asociados requeridos para la expresión en un genoma poxviral se describe en numerosos documentos accesibles al experto en la técnica (Paul y colaboradores, 2002, Cáncer Gene Ther. 9, 470-477; Piccini y colaboradores, 1987, Methods of Enzymology 153, 545-563; US 4,769,330; US 4,772,848; US 4,603,112; US 5,100,587 y US 5,179,993). Generalmente, uno procede con la recombinación homologa entre las secuencias traslapadas (es decir flanqueando el sitio deseado de inserción) ambas presentes en el genoma viral que tiene un plásmido que lleva el ácido nucleico que se insertará. El ácido nucleico es insertado preferiblemente en un locus no esencial del genoma poxviral, para que el poxvirus recombinante siga siendo viable e infeccioso. Las regiones no esenciales son las regiones intergénicas de no codificantes o cualquier gen para el cual la inactivación o la eliminación no deteriore perceptiblemente el crecimiento, réplica o infección viral. Uno puede también considerar la inserción en un locus viral esencial a condición de que la función defectuosa se provea en el transporte durante la producción de partículas virales, por ejemplo usando una linea de células ayudantes que lleva las secuencias de complementación correspondientes a los eliminados en el genoma poxviral. Al usar el virus vaccinia de Copenhague, el ácido nucleico que codifica el polipéptido de HPV-18 incipiente se inserta preferiblemente en el gen de timidinquinasa (tk) (Hruby y colaboradores, 1983, Proc. Nati. Acad. Sci USA 80, 3411-3415; Wier y colaboradores, 1983, J. Virol. 46, 530-537). Sin embargo, otros sitios de inserción son también apropiados, por ejemplo en el gen de hemaglutinina (Guo y colaboradores, 1989, J. Virol. 63, 4189-4198), en el locus K1L, en el gen u (Zhou y colaboradores, 1990, J. Gen. Virol. 71, 2185-2190) o en el extremo izquierdo del genoma del virus vaccinia donde una variedad de eliminaciones espontáneas o dirigidas se han reportado en la literatura (Altenburger y colaboradores, 1989, Archives Virol. 105, 15-27; Moss y colaboradores 1981, J. Virol. 40, 387-395; Panicali y colaboradores, 1981, J. Virol. 37, 1000-1010; Perkus y colaboradores, 1989, J. Virol. 63, 3829-3836; Perkus y colaboradores, 1990, Virol. 179, 276-286; Perkus y colaboradores, 1991, Virol. 180, 406-410). Al usar MVA, el ácido nucleico que codifica el polipéptido de HPV-18 incipiente puede ser insertado en cualquier persona de las eliminaciones identificadas I a VII así como en el locus D4R, pero la inserción en la eliminación II o III es preferida (Meyer y colaboradores, 1991, J. Gen. Virol. 72, 1031-1038; Sutter y colaboradores, 1994, Vaccine 12, 1032-1040). Al usar el virus fowlpox, aunque la inserción dentro del gen de timidinquinasa puede ser considerada, el ácido nucleico el polipéptido de HPV-18 incipiente es introducido preferiblemente en la región intergénica situada entre ORFs 7 y 9 (ver por ejemplo EP 314569 y US 5,180,675). Según lo descrito arriba, la composición en uso en la invención puede comprender además un ácido nucleico que exprese citosina. Este puede ser llevado por el vector que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipientes o por un vector independiente que puede ser igual o de un diferente origen. Una modalidad preferida de la invención está dirigida al uso de una composición que comprende un vector de MVA que codifica el polipéptido E6 de HPV-18 colocado debajo del promotor 7.5K, el polipéptido E7 de HPV-18 colocado debajo del promotor 7.5K y el gen humano IL-2 colocado bajo control del promotor H5R. Preferiblemente, los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido E6 de HPV-18, el polipéptido E7 de HPV-18 y el IL-2 humano son insertados en la eliminación III del genoma de MVA. Además, la composición en uso en la invención puede incluir una o más sustancias estabilizadoras, tal como lípidos (por ejemplo lípidos cationicos, liposomas, lípidos según lo descrito en W098/44143), inhibidores de nucleasa, hidrogel, hialuronidasa (W098/53853), colagenasa, polímeros cationicos, polisacáridos, agentes quelantes (EP890362), para preservar su degradación dentro del cuerpo de animal/humano y/o mejorar la transfección/infección del vector en la célula hospedadora u organismo. Tales sustancias pueden utilizarse solamente o en combinación (por ejemplo lípidos cationicos y neutrales). Las partículas virales infecciosas que comprenden el ácido nucleico descrito arriba o vectores pueden producirse por proceso rutinario. Un proceso ejemplar comprende las etapas de: (a) introducir el vector viral en una línea de células conveniente, (b) cultivar la línea de células bajo condiciones convenientes para permitir la producción de la partícula viral infecciosa, (c) recuperar la partícula viral infecciosa producida del cultivo de la línea de células, y (d) opcionalmente purificar la partícula viral infecciosa recuperada. Cuando el vector viral es defectuoso, las partículas infecciosas son producidas generalmente en una línea de células de complementación o vía el uso de un virus ayudante, que provee en el transporte los genes virales no funcionales. Por ejemplo, la línea de células conveniente para complementar los vectores adenovirales eliminados de E1 incluyen las 293 células (Graham y colaboradores, 1997, J. Gen. Virol. 36, 59-72) así como las células PER-C6 (Fallaux y colaboradores, 1998, human Gene Ther. 9, 1909-1917). Las células apropiadas para propagar los vectores del poxvirus son células aviares, y más preferiblemente los fibroblastos primarios del embrión de pollo (CEF) preparados de embriones de pollo obtenidos de los huevos fertilizados. Las partículas virales infecciosas pueden recuperarse del cultivo sobrenadante o de las células después de la lisis (por ejemplo por medios químicos, congelando/descongelando, choque osmótico, choque mecánico, sonicación y similares). Las partículas virales se pueden aislar con rondas consecutivas de purificación de la placa y después purificadas usando los métodos de la técnica (métodos cromatográficos, ultracentrifugación en cloruro de cesio o gradiente de la sucrosa). La presente invención también comprende el uso de vectores o partículas virales que han sido modificados para permitir marcar de forma preferencial a una célula hospedadora objetivo particular (ver por ejemplo Wickam y colaboradores, 1997, J. Virol. 71, 8221-8229; Arnberg y colaboradores, 1997, Virol. 227, 239-244; Michael y colaboradores, 1995, Gene Therapy 2, 660-668; W094/10323; WO02/96939 y EP 1 146 125). Un rasgo característico de los vectores marcados y de las partículas virales es la presencia en su superficie de un ligando capaz de reconocer y enlazarse a un componente celular expuesto en la superficial tal como un marcador de célula específico (por ejemplo una célula de HPV infectada), un marcador de tejido específico (por ejemplo un marcador de cerviz específico), así como un antígeno viral (por ejemplo HPV). Los ejemplos de ligandos convenientes incluyen anticuerpos o fragmentos de los mismos dirigidos a un dominio antigénico de HPV. El ligando genético es normalmente insertado genéticamente en un polipéptido presente en la superficie del virus (por ejemplo fibra adenoviral, penton, producto del gen pIX o vaccinia pl4). La composición en uso en la presente invención puede producirse por cualquier método conveniente, por ejemplo, por las técnicas de sintetización estándar directas del péptido (por ejemplo Bodanszky, 1984 en Principies of peptide synthesis, Springer- Verlag) y por tecnología de ADN recombinante en células hospedadoras apropiadas. Por ejemplo, la codificación del ácido nucleico para los polipéptidos E6 y E7 de HPV-18 incipientes puede ser aislada directamente de las células que contengan HPV, DCNcA y bibliotecas genómicas, los genomas virales o cualquier vector de la técnica anterior conocidos que lo incluyan, por biología molecular convencional o por las técnicas de PCR. Si es necesario, puede ser modificada adicionalmente por técnicas de mutagénesis rutinarias. Alternativamente, el ácido nucleico en uso en la invención se puede también ser generado por síntesis química en procesos automatizados (por ejemplo montado los oligonucleótidos sintéticos traslapados como es descrito por ejemplo en Edge, 1981, Nature 292, 756; Nambair y colaboradores, 1984, Science 223, 1299; Jay y colaboradores, 1984, J. Biol. Chem. 259, 6311). Los expertos en la técnica están informados de los numerosos sistemas de expresión disponibles para producir los polipéptidos de HPV-18 incipientes en células hospedadoras apropiadas y de los métodos para introducir un vector o una partícula viral infecciosa en una célula hospedadora.

Un uso preferido de la composición de acuerdo con la invención es tratar una variedad de enfermedades y condiciones patológicas, especialmente aquellas asociadas a una infección de HPV causada por lo menos por uno de los genotipos de HPV enumerados arriba. Aunque la invención también comprende profilaxis, esta es especialmente útil para terapia, por ejemplo para la infección persistente de HPV, condiciones precancerosas así como cancerosas que pueden convertirse en pacientes infectados con HPV. Ejemplos de las condiciones cancerosas asociadas a HPV incluyen carcinoma cervical, carcinoma anal y cáncer oral. Las condiciones precancerosas asociadas a HPV se extienden lesiones de grado menor a las lesiones de alto grado incluyendo neoplasia intra-epitelial cervical (CIN) de grado 1, 2 ó 3. Preferiblemente, a la administración en un organismo hospedador de acuerdo a las modalidades descritas en la presente, la composición de la invención proporciona un beneficio terapéutico al organismo hospedador tratado. El beneficio terapéutico puede evidenciarse por un número de maneras con respecto a antes del tratamiento, por ejemplo en un nivel de población por una disminución de la frecuencia de infecciones de HPV, por un retraso en el desarrollo de una condición patológica asociada típicamente a la infección de HPV (por ejemplo retraso en el desarrollo de lesiones CIN o cánceres cervicales) o a nivel individual por una disminución del viremia de HPV, y/o una inhibición de la expresión viral del gen (por ejemplo una disminución de RNAs que expresan HPV E6 o E7) y/o por una mejora del resultado clínico (por ejemplo estabilización, regresión parcial o total de una lesión asociada a HPV) y/o por un estímulo del sistema inmune resultando en el desarrollo de una respuesta anti-HPV ya sea humoral o celular o ambos (por ejemplo producción anticuerpos anti-HPV y/o inmunidad transmitida por células T) y/o por una respuesta mejorada del organismo hospedador a las terapias convencionales. Por ejemplo, la composición usada de acuerdo con la invención proporciona un beneficio cuando su administración a mujeres positivas de HPV es seguida por (i) una detección negativa de HPV que sigue una o más detecciones positivas, (ii) una regresión de las lesiones CIN2/3 de alto grado a las de menor grado CIN 1 ó (iii) una estabilización o una regresión de un carcinoma cervical invasor. Un seguimiento regular de los pacientes después del tratamiento es recomendado por un mínimo de 6 meses. La presencia de HPV puede determinarse en el fluido biológico (por ejemplo, fluidos vaginales o cervicales, sangre, suero, plasma), las muestras ginecológicas recogidas usando el dispositivo de muestreo convencional cervical, secciones del tejido, y biopsias. Una variedad de métodos está disponible para los expertos en la técnica para evaluar la presencia de ADN de HPV y RNA en una muestra, tal como el sistema LiPA (W099/14377; Labo Biomedical Products, Netherlands) , pre Tect HPV Proofer (NorChip AS, Norway), el sistema irbid Capture II (Digene Corp, USA), Thin Prep System (Cytyc Corporate; Marlborough, MA) y sistemas PCR/RT-PCR. Cebadores convenientes son conocidos para la persona experta o pueden ser sintetizados fácilmente en base de la secuencia del nucleótido del genotipo de HPV de interés. Uno puede también proceder por los ensayos de inmunogeneticidad (por ejemplo ELISA) que usan anticuerpos convenientes. La regresión o la estabilización de una lesión inducida por HPV- puede ser determinada midiendo el tamaño real de la lesión durante un período de tiempo. La observación directa (por ejemplo colposcopia) , métodos de imagen radiológica, métodos de imagen inmunológica o ultrasonido pueden utilizarse para estimar el tamaño de la lesión en un cierto plazo. Además, una variedad de métodos in vitro puede utilizarse para predecir la estabilización o regresión de una lesión asociada a HPV en un organismo hospedador, tal como análisis citológico e histológico para estimar la presencia de células anormales. La estimulación de una inmunorespuesta anti-HPV puede estimarse un número de técnicas rutinarias tales como las descritas abajo en conexión con el uso de la composición para inducir o estimular una inmunorespuesta. Convenientemente, la composición de la invención además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable para proporcionar una composición farmacéutica. Como es utilizado en la presente, "un vehículo farmacéuticamente aceptable" se pretende que incluya cualquiera y todos los portadores, solventes, diluyentes, excipientes, coadyuvantes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes anti-bacterianos y antifungicidas, y agentes retardantes de absorción, y similares, compatibles con la administración farmacéutica. El(los) vehiculo(s) farmacéuticamente aceptable incluido en la composición debe también permitir preservar su estabilidad bajo condiciones de fabricación y almacenamiento de largo plazo (es decir por lo menos un mes) a temperatura de congelamiento (por ejemplo de -70°C, -20°C), refrigerada (por ejemplo 4°C) o ambiente (por ejemplo 20°C) o en un estado liofilizado. La composición en uso en la invención es tamponada convenientemente para ser apropiada para el uso humano en un pH fisiológico o levemente básico (por ejemplo entre aproximadamente pH 7 a aproximadamente pH 9). Los tampones convenientes incluyen sin limitación tampón de fosfato (por ejemplo PBS), tampón de bicarbonato y/o tampón Tris. Además puede comprender un diluyente apropiado para el uso humano o animal. Tal diluyente es preferiblemente isotónico, hipotónico o hipertónico débil y tiene una fuerza iónica relativamente baja. Ejemplos representativos incluyen agua estéril, salina fisiológica (por ejemplo cloruro de sodio), solución Ringer, glucosa, trehalosa o soluciones de sacarosa, solución de Hank, y otras soluciones de sal acuosas balanceadas fisiológicamente (ver por ejemplo la edición más actual de Remington: The Science and Practice of Pharmacy, A. Gennaro, Lippincott, Williams&Wilkins). La composición puede también contener otros excipientes farmacéuticamente aceptables para proporcionar características farmacéuticas o farmacodinámicas deseables, incluyendo por ejemplo la modificar o mantener la osmolalidad, viscosidad, claridad, color, esterilidad, estabilidad, índice de disolución de la formulación, modificando o manteniendo la liberación o absorción en el organismo humano o animal, promoviendo el transporte a través de la barrera de la sangre o la penetración en un órgano particular (por ejemplo hígado). Los excipientes convenientes incluyen aminoácidos. Además, la composición se puede utilizar conjuntamente con el adyuvante(s) convencional conveniente para la aplicación sistémica o mucosa en seres humanos. La composición puede administrarse al organismo hospedador por una variedad de modos de administración, incluyendo la administración sistémica, tópica y localizada. Las rutas de administración convenientes incluyen sin limitación la inyección subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, intratumoral, ¡ntravascular, e intraarterial. Las inyecciones pueden estar hechas con jeringas y agujas convencionales, o cualquier otro dispositivo apropiado disponible en la técnica. Alternativamente la composición se puede administrar vía una ruta mucosa, tal como oral/alimentario, nasal, intratraqueal, intrapulmonar, intravaginal o ruta intra-rectal. La administración tópica puede también ser realizada usando medios transdérmicos (por ejemplo parches y similares). En el contexto de la invención, la administración intramuscular y subcutánea constituyen las rutas preferidas. La administración puede ocurrir en una sola dosis o una dosis repetida una o varias veces después de un cierto intervalo de tiempo que varía desde un día a un año. Deseablemente, los intervalos son una cuestión de una semana a un mes. La dosificación apropiada se puede adaptar en función de varios parámetros, en particular el modo de administración; la composición empleada; la edad, la salud, y peso del organismo hospedador; la naturaleza y el grado de síntomas; clase de tratamiento concurrente; la frecuencia del tratamiento; y/o la necesidad de prevención o terapia. El refinamiento adicional de los cálculos necesarios para determinar la dosificación apropiada es hecho rutinariamente por un médico, a la luz de las circunstancias relevantes. Para guía general, la dosificación conveniente para una composición que contiene vaccinia varía de aproximadamente 104 a 109 pfu (unidades de formado de placa), deseablemente de aproximadamente 105 y 108 pfu mientras que la composición que comprende el adenovirus varía de aproximadamente 105 a 1013 iu (unidades infecciosas), deseablemente de aproximadamente 107 y 1011 iu. Una composición basada en plásmidos del vector puede administrarse en dosis de entre 10 pg y 20 mg, ventajosamente entre 100 pg y 2 mg. Una composición de la proteína puede administrarse en dosis entre 10 pg y 20 mg, con una preferencia especial por una dosificación de aproximadamente 0.1 pg a aproximadamente 2 mg por kg de peso corporal. En una modalidad preferida, la composición en uso en la invención comprende el vector de MVA descrito anteriormente y es administrada en tres dosis del 5x105 pfu a 5x107 pfu por la ruta subcutánea en intervalos semanales. Si es deseado, el uso de la invención se puede realizar conjuntamente con unas o más modalidades terapéuticas convencionales (por ejemplo radiación, quimioterapia y/o cirugía).

Múltiples métodos terapéuticos proveen al paciente con una intervención basada más amplia. En una modalidad, el método de la invención puede ser precedido o preferiblemente seguido por una escisión quirúrgica de la lesión asociada a HPV (por ejemplo conisación). En otra modalidad, puede ser precedido o seguido por radioterapia (por ejemplo radiación gamma). Los expertos en la técnica pueden formular fácilmente protocolos apropiados de radioterapia y los parámetros que pueden ser utilizados (ver por ejemplo Pérez y Brady, Principios and Practice of Radiation Oncology, 2nd Ed. JB Lippincott Co; usando adaptaciones apropiadas y modificaciones como será evidente para aquellos expertos en el campo). En aun otra modalidad, el método o el uso de la invención está asociado a la quimioterapia con una o más drogas que son utilizadas convencionalmente para tratar o prevenir infecciones de HPV, condiciones patológicas asociadas a HPV. La composición puede también utilizarse conjuntamente con otros polipéptidos de HPV, tales como uno o más de los polipéptidos de HPV-16 incipientes, deseablemente los polipéptidos E6 y/o E7 de HPV-16 preferiblemente modificados según lo descrito en la técnica para ser no oncogénica y presentados en la membrana (ver WO99/03885). Tal composición que comprende los polipéptidos E6 y/o E7 de HPV-16 y HPV-18 o un ácido nucleico que codifica los polipéptidos E6 y/o E7 de HPV-16 y HPV-18 puede ser particularmente útil para tratar una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma diferente de HPV-16 y HPV-18, tal como cualquiera de HPV-31, HPV-33, HPV-35, HPV-52, y HPV-58 además de cualquiera de HPV-39, HPV-45, HPV-51, HPV-56, HPV-59, HPV-68, HPV-70, y HPV-85 o cualquier combinación de los mismos (por ejemplo HPV-31 y HPV-45). En otra modalidad, el uso de la invención se realiza de acuerdo con una modalidad terapéutica de cebado y refuerzo que comprende la administración secuencial de una o más composiciones de cebado y una o más composiciones de refuerzo. Normalmente, las composiciones de cebado y refuerzo utilizan diversos vehículos que comprendan o codifiquen por lo menos un dominio inmunogenético en común. La composición de cebado se administra inicialmente al organismo hospedador y la composición de refuerzo es administrada posteriormente después de un período de tiempo que varía a desde un día a doce meses. Por otra parte, las composiciones de cebado y refuerzo pueden administrarse en el mismo sitio o en sitios alternativos por la misma ruta o por diferentes rutas de administración. Por ejemplo, una composición de cebado basada en polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) puede administrarse por una ruta mucosa mientras que una composición de refuerzo basada en el vector del ácido nucleico es inyectada preferiblemente, por ejemplo inyección subcutánea para un vector de MVA, inyección intramuscular para un plásmido de ADN y para un vector adenoviral. La presente invención también pertenece al uso una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) o una ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) para inducir o estimular una inmunorespuesta contra por lo menos un virus del papiloma humano diferente de HPV-18. La invención también se relaciona con un método de inducir o de estimular en un mamífero una inmunorespuesta contra por lo menos un virus del papiloma humano diferente de HPV-18, el método comprende la administración al mamífero una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s). La inmunorespuesta es preferiblemente una inmunorespuesta celular dirigida un polipéptído de HPV incipiente, con una preferencia por un CD4 + , un CD8+ o ambos una inmunorespuesta mediada de un CD4+ y un CD8 + . La capacidad de inducir o de estimular una inmunorespuesta anti-HPV a la administración en un organismo animal o humano puede evaluarse in vitro o in vivo usando una variedad de ensayos que son estándares en la técnica. Para una descripción general de las técnicas disponibles para evaluar el inicio y estimulación de una inmunorespuesta, ver por ejemplo Coligan y colaboradores (1992 y 1994, Current Protocols in Inmunology; ed J Wiley & Sons Inc., National Institute of Health). La medición de la inmunidad celular puede realizarse por la medición de los perfiles de citosina secretados por las células inductoras activadas que incluyen ésos derivados de las células T CD4+ y CD8+ (por ejemplo la cuantificación de las células productoras de IL-IO o IFNg de ELIspot), por la determinación del estado de activación de las células inductoras inmunes (por ejemplo ensayos de la proliferación de la célula T por una absorción de timidina [3H] clásica) ensayando para los linfocitos T antígeno-específicos en un sujeto sensibilizado (por ejemplo tisis péptido-específica en un ensayo de la citotoxicidad), por la actividad citolítica anti-tumor medida por linfocito determinada por ejemplo, por un ensayo de liberación de 51Cr. La capacidad de estimular una respuesta humoral se puede determinar por los enlaces de anticuerpos y/o competición en enlazarse (ver por ejemplo Harlow, 1989, antibodies, Cold Spring Harbor Press) o por la generación in vitro de la inhibición del tumor mediada por anticuerpos específicos del crecimiento de la célula (Gazit y colaboradores, 1992, Cáncer Immunol. Immunother 35, 135-144). El método de la invención puede también ser adicionalmente validado en modelos animales estimulado con un agente inductor de tumor apropiado (por ejemplo HPV-18 las células TC1 que expresan E6 y E7de hpv- 8) para determinar actividad anti-tumor, reflejando una inducción o una estimulación de una inmunorespuesta anti-HPV. La invención ha sido descrita en una manera ilustrativa, y debe ser entendido que la terminología que ha sido utilizada está pensada para estar en la naturaleza de las palabras de descripción más que de limitación. Obviamente, muchas modificaciones y variaciones de la presente invención son posibles a la luz de las enseñanzas antes mencionadas. Debe por lo tanto ser entendido que dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas, la invención puede practicarse de una manera diferente de la que está específicamente descrita en la presente. Todas las descripciones arriba citadas de patentes, publicaciones y de entradas de base de datos son incorporados específicamente en la presente por referencia en su totalidad al mismo grado como si cada patente, publicación o entrada individual fueran indicadas específica e individualmente para ser incorporadas por referencia. Los siguientes ejemplos sirven para ilustrar la presente invención. EJEMPLOS EJEMPLO 1: Construcción de virus que expresan polipéptidos E6 y E7 de HPV-18 Las construcciones descritas abajo son realizadas de acuerdo con las técnicas genéticas dirigidas y de clonación molecular generales detalladas en Maniatis y colaboradores (1989, Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor NY) o según las recomendaciones del fabricante cuando se utiliza un kit comercial. Las técnicas de amplificación PCR son conocidas para la persona experta en la técnica (ver por ejemplo los protocolos de PCR - una guía a los métodos y aplicaciones, 1990, publicados por Innis, Gelfand, Sninsky and White, Academic Press). Las construcciones de los virus de vaccinia recombinantes son realizados de acuerdo con la tecnología convencional en el campo en los documentos antes mencionados y en Mackett y colaboradores (1982, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 79, 7415-7419) y Mackett y colaboradores (1984, J. Virol. 49, 857-864). El gen de selección gpt (fosforibosiltransferasa de guanina de xantina) de E. coli (Falkner y Moss, 1988, J. Virol. 62, 1849-1854) se utiliza para facilitar la selección de los virus de vaccinia recombinantes. Un virus de MVA recombinante que expresa variantes ancladas de la membrana y no oncogénicas de los polipéptidos E6 y E7 de HPV-18 (E6*TMF y E7*TM R) puede ser construido según lo descrito en WO99/03885 y US 6,884,786 (que describe a MVATG8042 que expresa las variantes ancladas de la membrana y no oncogénicas de los polipéptidos E6 y E7 de HPV-16). Preferiblemente, las secuencias del gen HPV-18 están ambas bajo el control del promotor p7.5K e insertadas en la región de la escisión III del genoma de MVA. Si la construcción incluye un gen immu nopotenciador, la preferencia se da al gen IL-2 conducido por el promotor H5R. La construcción que resulta es designada virus de MVA-HPV-18 las partículas del virus de MVA-HPV-18 pueden producirse en células CEF según técnicas convencionales. La reserva del virus será mantenida a -80°C hasta el día de la inyección. La suspensión viral será deshelada rápidamente, y diluida antes de administrarse en un tampón conveniente que contenga por ejemplo Tris-HCI 10 mM pH8, sacarosa 5% (w/v), y 50 mM NaCI, para obtener dosis virales de 5x107 pfu en un volumen de I00 µ?. EJEMPLO 2: Reactividad cruzada proporcionada por los polipéptidos E6 y E7de HPV-18 La reactividad cruzada puede ser determinada por el ensayo de IFNg ELISPOT en esplenocitos obtenidos de ratones inmunizados con MVATG HPV-18 según lo descrito abajo. Las secuencias del aminoácido E6 y E7 de diversos genotipos de HPV son alineados usando el programa de alineación múltiple de HUSAR (CLUSTAL) (https://genius.embnet.dkfz-heidelberg .de/menu/cgi- bin/w2h/w2h.start). Péptidos predichos de célula T reconocidos (H2 -restringidos) puede ser identificados usando el software obligatorio de enlace de péptidos de BIMAS disponible en la Internet (http://bimas.dcrt. nih.gov/molbio/hla bind/). Los péptidos que tienen una cuenta de enlace igual o arriba a la obtenida con un péptido de referencia descrito en la técnica siendo reconocido como E7 específico por CTL, serán analizados posteriormente. Los que muestren una o dos diferencias de aminoácido con respecto a la secuencia de aminoácidos de los polipéptidos E6 y E7 de HPV-18 serán seleccionados para este análisis de reactividad cruzada. Los péptidos seleccionados se pueden sintetizar por técnicas de síntesis convencionales y su capacidad de reaccionar de forma cruzada con los esplenocitos obtenidos de los ratones inmunizados con los polipéptidos E6 y E7 de HPV-18 se puede determinar como sigue. Ratones hembra C57B1/6 sanos de SPF serán obtenidos de un surtidor comercial y serán alojados bajo condiciones controladas (solos, cuarto exclusivo, aire acondicionado para proveer un mínimo de 11 cambios de aire por hora temperatura e intervalos de humedad relativa dentro de 18°C y 22°C y 40 a 70% respectivamente. La iluminación se controla automáticamente para dar un ciclo de 12 horas de luz y de 12 horas de oscuridad. El alimento y el agua son proporcionados a libertad a lo largo del estudio). Ratones hembra C57B1/6 (SPF) Libres de Patógeno Específico, de siete semanas de edad obtenidos de un surtidor comercial y alojados bajo las condiciones arriba definidas pueden ser inmunizados subcutáneamente 3 veces los días 0, 7 y 14 con 5xl07 pfu de MVATGN33 o de MVATG HPV-18. Inyecciones subcutáneas son preferiblemente realizadas cada vez en una localización diferente del flanco derecho de los animales. Los bazos pueden tomarse en el día 24 después de la última inmunización. Las células frescas del bazo se pueden preparar usando métodos convencionales en la técnica. Una placa de nitrocelulosa de 96 pozos puede ser recubierta con 3 pg/ml de anticuerpo monoclonal de rata anti-ratón IFNg (Clone R4-6A2; Pharmingen, Cat number 551216, 100 µ?/????) en Tampón de Carbonato de Sodio. Las placas pueden incubarse durante la noche a 4°C o 1h a 37°C. Las placas pueden lavarse tres veces con DMEM 10% FCS y saturado 2 horas a 37°C con 100 µ? de DMEM 10% FCS/pozo. Los esplenocitos se pueden poner en placas en una concentración de 106 células/100 pl. IL-2 se puede agregar a los pozos en una concentración 6U/50 µ?/???? (R&D Systems; 10ng/ml). Concanavalina A es generalmente utilizada como control positivo (5 pg/ml). Los péptidos predichos que presentan el epítope T se pueden sintetizar y proporcionar en DMSO a 10 mg/ml para el almacenaje a 4°C. El péptido de HPV-18 de referencia se utiliza como control positivo y un péptido irrelevante como control negativo. Los péptidos se pueden agregar a los pozos en una concentración de 5 pg/ml e incubados por 48 horas a 37°C en 5% de C02 Después de lavar una vez con PBS 1X y 5 veces con PBS-Tween 0.05%, IFNg anti-ratón biotinilado (clone XMG1.2, Pharmingen) se puede agregar a la concentración de 0.3 µg/100 µ?/???? e incubado 2 horas a la temperatura ambiente bajo agitación lenta. La placa puede lavarse 5 veces con PBS-Tween 0.05%. Extravidin AKP (Sigma, St. Louis, MO) diluido en 1/5000 en PBS-Tween 0.05%-FCS 1% también puede ser agregado a los pozos (100 µ?/????). La placa se puede incubar 45 minutos a la temperatura ambiente y después lavarse 5 veces con PBS-Tween 0.05%. La secreción de IFNg puede revelarse con el Biorad kit. Sustrato de 100 µ? (NBT+BClP) se puede agregar por pozo y la placa dejada a la temperatura ambiente por 0.5 horas. La placa puede ser lavada con agua y ponerse a secar durante la noche a temperatura ambiente. Los puntos pueden contarse usando un lector Elispot Bioreader 4000 Pro-X (BIOSYS-Gmbh; Serlabo Francia) . Se espera que el cultivo de esplenocitos inmunizados en la presencia del péptido de HPV-18 de referencia estimule la producción de IFNg mientras que la adición de los péptidos que no reaccionan cruzados (tal como el péptido irrelevante) en el cultivo de los esplenocitos no tendrá ningún efecto significativo (producción de IFNg bajo nivel básico). Se demuestra la reactividad cruzada cuando los péptidos no HPV-18 son reconocidos por CTL de ratones inmunizados, sugiriendo que la vacunación con los polipéptidos E6 y/o E7 de HPV-18 o vectores que lo expresan (por ejemplo MVATG HPV-18) podría también ser eficaz para el tratamiento de infecciones con otros genotipos de HPV.

Claims (25)

REIVINDICACIONES

1. Uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) para la fabricación de un medicamento para la prevención o tratamiento de una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma diferente de HPV-18.

2. Uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) para la fabricación de un medicamento para tratar una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma humano diferente de HPV-18.

3. Uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) para inducir una inmunorespuesta contra por lo menos un virus del papiloma humano diferente de HPV-18.

4. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde por lo menos un virus del papiloma humano diferente de HPV-18 es seleccionado entre el grupo que consiste en HPV-39, HPV-45, HPV-51, HPV-56, HPV-59, HPV-68, HPV-70, y HPV-85.

5. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde uno o más de (el/los) polipéptido(s) de HPV-18 inci piente(s) es un polipéptido E6, un polipéptido E7 o ambos un polipéptido E6 y un polipéptido E7.

6. Uso de conformidad con la reivindicación 5, en donde el (los) polipéptido(s) E6 y/o E7 de HPV-18 es (son) variante(s) no oncogénica(s).

7. Uso de conformidad con la reivindicación 6, en donde la variante no oncogénica del polipéptido E6 de HPV-18 comprende una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 1.

8. Uso de conformidad con la reivindicación 6, en donde la variante no oncogénica del polipéptido E7 de HPV-18 comprende una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 2.

9. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, en donde el polipéptido(s) E6 y/o E7 de HPV-18 es (son) modificado(s) para ser anclado(s) a la membrana de la célula que incorpora una secuencia de anclaje de membrana y una secuencia secretora.

10. Uso de conformidad con la reivindicación 9, en donde la secuencia de anclaje de membrana y/o la secuencia secretora se obtienen de la glicoproteína de la rabia, de la glicoproteína que envuelve el virus del VIH o de la proteína del virus F del sarampión.

11. Uso de conformidad con la reivindicación 10, en donde el polipéptido E6 de HPV-18 comprende una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 3.

12. Uso de conformidad con la reivindicación 10, en donde el polipéptido E7 de HPV-18 comprende una secuencia del aminoácido que es homologa o idéntica a la secuencia del aminoácido mostrada en SEC ID NO: 4.

13. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde la composición además comprende una citosina o un ácido nucleico que codifica una citosina .

14. Uso de conformidad con la reivindicación 13, en donde la citosina es IL-2.

15. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en donde el ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) de HPV-18 incipiente(s) está comprendido en un vector.

16. Uso de conformidad con la reivindicación 15, en donde el vector es un vector de vaccinia.

17. Uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el vector de vaccinia es un vector de MVA.

18. Uso de conformidad con la reivindicación 17, en donde el vector de MVA comprende un ácido nucleico que codifica el polipéptido E6 de HPV-18 colocado debajo del promotor 7.5K, un ácido nucleico que codifica el polipéptido E7 de HPV-18 colocado debajo del promotor 7.5K y el gen humano IL-2 colocado bajo control del promotor H5R.

19. Uso de conformidad con la reivindicación 18, en donde los ácidos nucleicos que codifican el polipéptido E6 de HPV-18, el polipéptido E7 de HPV-18 y gen humano IL-2 están insertados en la eliminación III del genoma de MVA.

20. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en donde la condición patológica es una infección persistente de HPV, una condición precancerosa o cancerosa.

21. Uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde la condición cancerosa asociada a HPV es un carcinoma cervical, un carcinoma anal o un cáncer oral.

22. Uso de conformidad con la reivindicación 20, en donde la condición precancerosa asociada a HPV es una neoplasia intra-epitelial cervical (CIN) de grado 1, 2 ó 3.

23. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22, en donde la composición es administrada por la ruta subcutánea o intramuscular.

24. Uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, en donde la composición es administrada en dosis que comprende desde 5x105 pfu a 5x107 pfu de vector de vaccinia. 25. Uso de conformidad con la reivindicación 24, en donde la composición comprende un vector de MVA según lo definido en la reivindicación 17, 18 o 19 y es administrado en tres dosis de 5xl05 pfu a 5xl07 pfu por la ruta subcutánea en intervalos semanales. RESUMEN La presente invención se relaciona con el uso de una composición que comprende uno o más polipéptido(s) incipiente(s) del virus del papiloma humano (HPV)-18 o un ácido nucleico que codifica uno o más polipéptido(s) ¡ncipiente(s) de HPV-18 para la fabricación de un medicamento para la prevención o tratamiento de una infección o una condición patológica causada por lo menos por un virus del papiloma diferente de HPV-18. La invención es de interés muy especial en inmunoterapia, en particular en la prevención o tratamiento de las infecciones persistentes de HPV que conducen posiblemente al una neoplasia intraepitelial cervical (CIN) y en última instancia al cáncer cervical. 1 LISTADO DE SEUENC1AS <110> TRANSGENE S.A. <120> vacuna papillomavirus basada en HPV-18 <130> TG175 <160> 4 <170> Patenteln versión 3.1 <210> 1 <211> 153 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> variante no oncogénica del polipéptido HPV-18 E6 <400> 1 Met Ala Arg Phe Glu Asp Pro Thr Arg Arg Pro Tyr Lys Leu Pro Asp 1 5 10 15 Leu Cys Thr Glu Leu Asn Thr Ser Leu Gln Asp lie Glu lie Thr Cys 20 25 30 Val Tyr Cys Lys Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Val Phe Glu Phe Ala 35 40 45 Phe Lys Asp Leu Phe Val Val Tyr Arg Asp Ser lie Pro His Ala Ala 50 55 60 Cys His Lys Cys lie Asp Phe Tyr Ser Arg lie Arg Glu Leu Arg His 65 70 75 80 Tyr Ser Asp Ser Val Tyr Gly Asp Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asn Thr 85 90 95 Gly Leu Tyr Asn Leu Leu lie Arg Cys Leu Arg Cys Gln Lys Pro Leu 100 105 110 Leu Arg His Leu Asn Glu Lys Arg Arg Phe His Asn lie Ala Gly His 115 120 125 Tyr Arg Gly Gln Cys His Ser Cys Cys Asn Arg Ala Arg Gln Glu Arg 130 135 140 Leu Gln Arg Arg Arg Glu Thr Gln Val 145 150 2 <210> 2 <211> 100 <212> PRT <213 secuencia artificial <220> <223> variante no oncogénica del polipéptido HPV-18 E7 <400> 2 Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp lle Val Leu His Leu Glu 1 5 10 15 Pro Gln Asn Glu lie Pro Val Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu 20 25 30 Asn Asp Glu lie Asp Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg 35 40 45 ??· Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu 50 55 60 Ala Arg lie Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala 65 70 75 80 Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys 85 90 95 15 Ala Ser Gln Gln 100 <210> 3 <211> 243 <212> PRT <213> secuencia artificial <220> <223> variante no oncogénica presentada en membrana del polipéptido HPV- 18 E6 <400> 3 20 Met Gly Leu Lys Val Asn Val Ser Ala lie Phe Met Ala Val Leu Leu 1 5 10 15 Thr Leu Gln Thr Pro Thr Gly Gln lie His Trp Gly Met Ala Arg Phe 20 25 30 Glu Asp Pro Thr Arg Arg Pro Tyr Lys Leu Pro Asp Leu Cys Thr Glu 35 40 45 25 Leu Asn Thr Ser Leu Gln Asp lie Glu lie Thr Cys Val Tyr Cys Lys 3 50 55 60 Thr Val Leu Glu Leu Thr Glu Val Phe Glu Phe Ala Phe Lys Asp Leu 65 70 75 80 Phe Val Val Tyr Arg Asp Ser lie Pro His Ala Ala Cys His Lys Cys 85 90 95 lie Asp Phe Tyr Ser Arg lie Arg Glu Leu Arg His Tyr Ser Asp Ser 100 105 110 Val Tyr Gly Asp Thr Leu Glu Lys Leu Thr Asn Thr Gly Leu Tyr Asn 115 120 125 Leu Leu lie Arg Cys Leu Arg Cys Gln Lys Pro Leu Leu Arg His Leu 0 130 135 140 Asn Glu Lys Arg Arg Phe His Asn lie Ala Gly His Tyr Arg Gly Gln 145 150 155 160 Cys His Ser Cys Cys Asn Arg Ala Arg Gln Glu Arg Leu Gln Arg Arg 165 170 175 Arg Glu Thr Gln Val Gly Leu Ser Ser Thr Ser lie Val Tyr lie Leu 15 180 185 190 lie Ala Val Cys Leu Gly Gly Leu lie Gly lie Pro Ala Leu lie Cys 195 200 205 Cys Cys Arg Gly Arg Cys Asn Lys Lys Gly Glu Gln Val Gly Met Ser 210 215 220 Arg Pro Gly Leu Lys Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ser Lys Ser Tyr Val 225 230 235 240 Arg Ser Leu < 210> 4 < 211> 193 < 212> PRT < 213 > secuencia artificial <220> <223> variante no oncogénica presentada en membrana del polipéptido

25. HPV- 18 E76 <400> 4 Met Val Pro Gln Ala Leu Leu Phe Val Pro Leu Leu Val Phe Pro Leu 1 5 10 15 Cys Phe Gly Lys Phe Pro lie Gly Ser Met His Gly Pro Lys Ala Thr 20 25 30 Leu Gln Asp lie Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu lie Pro Val 35 40 45 Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu Asn Asp Glu lie Asp Gly Val 50 55 60 Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr 65 70 75 80 Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg lie Glu Leu Val Val 85 90 95 Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn 100 105 110 Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Arg Ser Tyr 115 120 125 Val Leu Leu Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ala Leu Met Leu lie lie Phe 130 135 140 Leu Met Thr Cys Cys Arg Arg Val Asn Arg Ser Glu Pro Thr Gln His 145 150 155 160 Asn Leu Arg Gly Thr Gly Arg Glu Val Ser Val Thr Pro Gln Ser Gly 165 170 175 Lys lie lie Ser Ser Trp Glu Ser His Lys Ser Gly Gly Glu Thr Arg 180 185 190 Leu