MX2008002524A - Conjugados polimericos de k-252a y sus derivados. - Google Patents

Conjugados polimericos de k-252a y sus derivados.

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Domenico Barone
Valentina Mainero
Silvio Traversa
Luisa Bertarione Rava Rossa
Chiara Lorenzetto
Raffaella Bagnod
Alessandra Marconi
Cecilia Oderda
Carlo Pincelli
Luca Beccaria
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Abstract

La presente invencion se refiere a nuevos conjugados polimericos de K-252a y a sus derivados y a su uso para la preparacion de una composicion farmaceutica util para la prevencion, alivio y tratamiento de patologias asociadas con cinasa. En particular, la presente invencion se refiere a la prevencion, alivio y tratamiento de patologias asociadas con HMGB-l. En un aspecto particular, la invencion se refiere al uso de los nuevos conjugados polimericos de K-252a y sus derivados en la preparacion de una composicion farmaceutica util para la prevencion, alivio y tratamiento de trastornos neurologicos, neuropatias y trastornos neurodegenerativos del sistema nervioso central y periferico. En un aspecto preferido adicional, la invencion se refiere al uso de los conjugados polimericos en la preparacion de una composicion farmaceutica util para la prevencion, alivio y tratamiento de patologias dermicas, en particular patologias dermicas asociadas con una proliferacion excesiva de queratinocitos, en particular psoriasis. En un aspecto adicional, la invencion se refiere al uso de los conjugados polimericos en la prevencion, alivio y tratamiento de dolor relacionado con NGF. Mas especificamente, la presente invencion se refiere a un conjugado polimerico de K-252a y sus derivados, en donde el polimero es polietilenglicol o metoxi-polietilenglicol de la formula (1).

Description

CONJUGADOS POLIMERICOS DE K-252A Y SUS DERIVADOS DESCRIPCIÓN La presente invención se refiere a conjugados poliméricos de K-252a y a sus derivados, y a su uso para la preparación de una composición farmacéutica útil para la prevención, alivio y tratamiento de patologías asociadas con cinasa. En particular, la presente invención se refiere a la prevención, alivio y tratamiento de patologías asociadas con HMGB-1. En un aspecto particular, ' la, invención se refiere al uso de los nuevos conjugados poliméricos de K-252a y sus derivados en la preparación de una composición farmacéutica útil para la prevención, alivio y tratamiento de trastornos neurológicos, neuropatías y trastornos neurodegenerativos del sistema nervioso central y periférico. En un aspecto preferido adicional, la invención se refiere al uso de los conjugados poliméricos en la preparación de una composición farmacéutica útil para la prevención, alivio y tratamiento de patologías dérmicas, en particular patologías dérmicas asociadas con una proliferación excesiva de queratinocitos, en particular psoriasis. En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de los conjugados poliméricos en la prevención, alivio y tratamiento de dolor relacionado con NGF (factor de crecimiento nervioso) . Más específicamente, la presente invención se refiere a un conjugado polimérico de K-252a y sus derivados, en donde el polímero es polietilenglicol o metoxi-polietilenglicol. El K-252a es un alcaloide lipofílico para la primera ocasión, aislado de hongo de la tierra Nocardiopsis sp (WO 97/38120) , que tiene un esqueleto de indolocarbazol representado por la siguiente fórmula: K-252a inhibe fuertemente la proteína cinasa C (PKC por sus siglas en inglés) , que juega un papel central en la regulación de funciones celulares, y tiene varias actividades tales como la acción de inhibir la contracción de músculo liso (Jpn. 3. Pharmacol. 43 (supl.): 284, 1987), la acción de inhibir la secreción de serotonina (Yamada et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 144:35-40, 1987), la acción de inhibir el alargamiento de neuroaxón (Koizumi et al., J. Neurosci. Res. 8:715, 1988), la acción de inhibir la liberación de histamina (Morita et al., Allergy 43:100- 104, 1988), la acción de inhibir la cinasa de cadena ligera de miosina de músculo liso (Nakanishi et al., J. Biol. Chem. 263:6215-6219, 1988), acción antiinflamatoria (Papp et al., Acta Physiol. Hung. 80: 423-425, 1992), la actividad de supervivencia celular (Glicksman et al., J. Neurochem. 64:1502-1512, 1995) etc. También se ha descrito en Grove et al., Exp. Cell Res., 193: 175-182, 1991 que K- 252a tiene la actividad de inhibir la producción de IL-2. También se ha logrado la síntesis completa de K-252a (Wood et al., J. Am. Chem. Soc. 117: 10413-10414, 1995). El factor de crecimiento nervioso (NGF) es la neurotrofina mejor caracterizada y se requiere para el desarrollo y función normal de ciertas neuronas sensoriales y colinérgicas (Levi-Montalcini, Annu. Rev. Neurosci. 5:341-362, 1982). Los receptores neurotróficos con alta afinidad, trks, comprenden una familia de proteínas que consisten de trk A, trk B, y trk C (Knusel et al., J. Neurochem. 59:715-722, 1992). Los miembros de esta familia de receptores son proteínas asociadas con membranas que muestran actividad de tirosina-cinasa. La interacción de un ligando de neurotrofinas con trks inducen la fosforilación de residuos de tirosina específicos sobre el receptor. La fosforilación de trks es una respuesta inmediata al enlace de neurotrofina. Es un requerimiento absoluto para la activación de las rutas enzimáticas que regulan las respuestas funcionales para las neurotrofinas por la célula (Klein et al., Cell 65:189-197, 1991; Lamballe et al., Cell 66:967-979, 1991). K-252a es un inhibidor de varias enzimas, que incluyen trks. De manera consistente con este efecto, K-252a bloquea la supervivencia de las células mediadas por NGF en algunos ensayos celulares in vitro (Koizumi et al., J. Neurosci. 8:715-721, 1988; Doherty et al., Neurosci. Lett. 96: 1-6, 1989; Matsuda et al., Neurosci. Lett. 87: 11-17, 1988), ya que influye en el estado de fosforilación de trks. En la literatura, se ha mostrado el potencial terapéutico de K-252a y sus derivados, por ejemplo como, el análogo de bis-etil-tiometilo CEP-1347 en enfermedades neurodegenerativas (Annu. Rev. Pharmacol Toxicol. 2004; 44: 451-74; Neurochem Int. 2001 Nov-Dic; 39(5-6): 459-68; Neuroport. 9 Nov 2000; 11 (16) : 3453-6; Neuroscience. 1998 Sep; 86(2) :461-72; Brains Res. 4 de Julio de 1994; 650(1): 170-4) . Los queratinocitos, un componente celular clave tanto para la homeostasis y procesos patofisiológicos de la piel, secretan diversas citocinas y se estimulan por varios factores del crecimiento. NGF se sintetiza en la piel y estimula significativamente la proliferación de queratinocitos humanos normales en cultivo, de una manera dependiente de la dosis. Este efecto se puede prevenir mediante la adición de K-252a, que es un inhibidor específico del receptor de NGF (trk) de alta afinidad, sugiriendo de este modo que el efecto de NGF sobre los queratinocitos humanos es mediado por el receptor de NGF de alta afinidad. Así, NGF podría actuar como una citocina en la piel humana y tomar parte en trastornos de proliferación de queratinocitos (Pincelli et al., J. Invest. Dermatol. 103:13-18, 1994). La inflamación neurogénica y el papel de NGF se han estudiado intensamente en la psoriasis. Existen niveles incrementados de NGF en los queratinocitos y en la suprarregulación del receptor de NGF en los nervios cutáneos de placas psoriáticas. NGF puede influir del todo en los eventos patológicos notorios, observados en la psoriasis, tales como la proliferación de queratinocitos, angiogénesis, activación de células T, expresión de moléculas de adhesión, proliferación de nervios cutáneos, y suprarregulación de neuropéptidos. En un estudio controlado por placebo, en doble ciego, el papel de NGF y el receptor de NGF en psoriasis, se dirigió en un sistema in vivo utilizando el modelo de piel de ratón-humana inmunodeficiente, combinado, severo (SCID) de psoriasis. Las placas psoriáticas trasplantadas sobre los ratones SCID se trataron con K-252a. La psoriasis se mejoró significativamente después de dos semanas de terapia (Raychaudhuri et al., J. Invest. Dermatol. 122: 812-819, 2004) . También se ha reportado que NGF tiene un papel crucial en la generación de dolor e hiperalgesia en varios estados de dolor, agudos y crónicos. La expresión de NGF es alta en tejidos inflamados y dañados, y la activación del receptor de NGF, tirosina-cinasa TrkA sobre activadores de neuronas nociceptivas y potencia en la señalización de dolor por múltiples mecanismos . Se espera que el antagonismo de NGF sea un procedimiento terapéutico muy efectivo en muchos estados de dolor, y que esté libre de los efectos adversos de los fármacos analgésicos tradicionales [Hefti FF et al. Trends Pharmacol . Sci . (2006) 27: 85-91]. La evidencia indica que los receptores de TrkA se requieren para las acciones nociceptivas de NGF. La mayoría de los inhibidores del receptor tirosina-cinasa bloquean el enlace de ATP al dominio catalítico de tirosina-cinasa [Madhusudan S et al. Clin . Biochem. (2004) 37: 618-635]. El alcaloide K-252a inhibe la señalización de Trk con alta potencia y atenúa la hipersensibilidad en un modelo animal de dolor pancreático [Winston JH et al . J. Pain (2003) 4:329- 337]. No obstante, K-252a carece de selectividad para TrkA, ya que es un inhibidor potente para varias cinasas. Esto significa que probablemente K-252a tiene muchos efectos adversos que no están relacionados con la inhibición de TrKA. La solicitud de patente WO 2005/014003 describe el uso de inhibidores de tirosina-cinasa de origen microbiano que pertenecen a la familia K-252, para preparar medicamentos tópicos, capaces de inhibir la proliferación excesiva de queratinocitos, característica de trastornos tales como psoriasis y tumores de la piel. La Solicitud de Patente Internacional PCT/EP2005/008258 describe el uso de K-252a y sus derivados en la prevención y tratamiento de patologías asociadas por HMGB1. HMGB1 es una quimiocina proinflamatoria liberada por células necróticas o en proceso de muerte, que conduce a una cascada inflamatoria de citosina en varias patologías humanas. En una modalidad preferida, las Solicitudes de Patente de los Estados Unidos, mencionadas describen el uso nuevo de K-252a y sus derivados como agente terapéutico para la prevención y tratamiento de restenosis. KI-252a de hecho tiene la capacidad de bloquear/inhibir la migración y proliferación de células de músculo liso arterial inducidas por HMGB1, eventos que son la base de la formación de restenosis. Para este fin, K-252a y sus derivados se cargan como recubrimiento superficial por enlace, incrustación o adsorción en un dispositivo médico, en particular en un sfce-nt, con el fin de tener al agente activo liberado in si tu .
Además del K-252a mismo, se han sintetizado y probado para la actividad biológica varios derivados de K- 252a. Como un ejemplo, CEP1347, un derivado de K-252a, retiene propiedades neuroprotectoras pero no inhiben TrkA. Se ha mostrado que CEP1347 inhibe directamente MAPKKKs, que incluye MLK3 (Roux et al., J. Biol. Chem. 277:49473-49480, 2002) . Otro derivado de K-252a, KT5926, se ha investigado contra la replicación del virus de estomatitis vesicular (VSV) en células BHK-21 (Kim et al., Biol. Pharm. Bull. 21: 498-505, 1998) . Se sabe que los análogos de K-252a con sustituciones conservadoras en C3' retienen potencia contra una gama de cinasas (Schneider et al., Org. Lett. 7: 1695- 1698, 2005) . La eficacia de los fármacos administrados sistémicamente se puede dificultar in vivo por factores tales como la escasa solubilidad a pH fisiológico y la eliminación rápida por filtración glomerular, depuración celular y metabolismo. En muchos casos, tales efectos desventajosos impiden un uso terapéutico efectivo de tales agentes. Una estrategia exitosa para mejorar tanto la eficacia como la duración de los efectos de los agentes y para reducir los efectos toxicológicos potenciales es el enlace covalente de un agente biológicamente activo a diversos polímeros. Uno de los polímeros que se utiliza más frecuentemente para mejorar las propiedades farmacológicas y toxicológicas de un agente activo es el polialquilenóxido-polietilenglicol, para abreviar PEG. Los polímeros de polietilenglicol (PEG) , que son anfifílicos, no tóxicos, e inertes inmunológicamente, se pueden conjugar a productos farmacéuticos para manipular muchas de las propiedades farmacocinéticas y toxicológicas. En el área de la administración de fármacos, los derivados de PEG se han utilizado ampliamente en acoplamiento covalente (por ejemplo, "PEGilación") a proteínas con el fin de reducir la inmunogenicidad, proteólisis y depuración renal y para mejorar la solubilidad (Zalipsky, Adv. Drug Del. Rev. 16: 157-182, 1995). Similarmente, PEG se ha acoplado a fármacos relativamente hidrofóbicos de bajo peso molecular, con el fin de reducir la toxicidad, alterar la biodistribución, y mejorar la solubilidad. Los productos farmacéuticos pegilados pueden ser más eficaces que sus fármacos progenitores sin modificar gracias a las propiedades de PEG que se transfieren a los conjugados (Molineux, Pharmacotherapy 23: 3S-8S, 2003). El objetivo de la presente invención fue aprovechar las características peculiares de algunos polímeros, en particular del polietilenglicol (PEG) con el fin de desarrollar formas de administración terapéuticamente útiles de miembros de la familia de indolocarbazol . Fue el objetivo de los inventores de la invención obtener a través de la modificación de PEG, un desempeño farmacocinético y toxicológico mejorado del compuesto indolocarbazol conjugado a polímero. Además, un cambio en la actividad y/o perfil de toxicidad de los nuevos compuestos conjugados fue el centro de la invención, también. Uno de los problemas específicos subyacentes a la presente invención fue aprovechar las características peculiares de algunos polímeros, en particular de PEG, con el fin de desarrollar formas de administración de K-252a que permita un desempeño mejorado farmacocinético y toxicológico, logrando la mejor biodisponibilidad de K-252a o de su derivado en las diversas rutas de aplicación posible. En un aspecto particular de la presente invención, el problema fue aprovechar las características del polímero con el fin de lograr, en el caso de una administración tópica, una absorción disminuida del K-252a o sus derivados y por lo tanto una reducción incluso eliminación de posibles efectos secundarios y/o toxicidad sistémica. La presente invención por lo tanto está enfocada en nuevos conjugados poliméricos de miembros de los compuestos indolocarbazol y en particular de K-252a o de sus derivados, su preparación y su uso, en donde el conjugado polimérico tiene una solubilidad en agua incrementada, una maleabilidad farmacéutica mejorada, una farmacocinética mejorada y biodisponibilidad y/o una toxicidad disminuida y/o inmunogenicidad en comparación con los compuestos de indolocarbazol no conjugados o con el compuesto K-252a o sus derivados. En un aspecto preferido particular, la presente invención está enfocada en un conjugado polimérico de K-252a o de sus derivados, su preparación y su uso, en donde, después de la administración tópica, la absorción sistémica está limitada y por lo tanto se reducen e incluso se eliminan la toxicidad sistémica y/o los efectos secundarios . Un primer aspecto de la presente invención es por lo tanto un conjugado polimérico de un compuesto de indolocarbazol de la fórmula general (I) : y preferentemente de la fórmula general (II) en donde Ra y Rb son independientemente un hidrógeno o un residuo orgánico seleccionado entre el grupo que consiste de alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi o alcoxicarbonilo; o Ra y Rb conjuntamente forman una estructura cíclica de 5-7 miembros, preferentemente de 5 miembros, fusionada directamente a la estructura nuclear de indolo [2, 3-a] carbazol, que contiene 0, 1 ó 2 heteroátomos, preferentemente átomos de nitrógeno, y contiene opcionalmente un grupo carbonilo y la estructura cíclica no está sustituida o está sustituida, preferentemente por al menos un grupo sustituyente seleccionado entre un grupo carbonilo o Wn. ó W2 y en donde si un miembro del heteroátomo de la estructura cíclica es nitrógeno, el nitrógeno está sustituido por el residuo R3; y en donde Rc y Rd son (a) independientemente hidrógeno o un residuo orgánico seleccionado entre el grupo que consiste de alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi o alcoxicarbonilo; o uno de Rc y Rd se selecciona entre hidrógeno, alquilo e hidroxi inferior sustituido o sin sustituir, mientras que el otro de Rc y Rd es una porción cíclica de 3-7 miembros, preferentemente de 5 ó 6 miembros, preferentemente una porción de carbohidrato cíclico en donde la porción cíclica está sin sustituir o sustituida, preferentemente sustituida por al menos un grupo funcional adecuado para la conjugación de una porción polimérica, más preferentemente sustituida en al menos una, preferentemente dos y hasta tres y hasta todas las posiciones del ciclo por hidroxi, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino inferior, alquilaminocarbonilo inferior o grupo oxima; o (b) Rc y Rd conjuntamente forman una porción cíclica de 3-7 miembros, preferentemente de 5 ó de 6 miembros, preferentemente una porción de carbohidrato cíclico, en donde la porción cíclica está sin sustituir o sustituida, preferentemente sustituida por al menos un grupo funcional adecuado para la conjugación de una porción polimérica, más preferentemente sustituida en al menos una, preferentemente dos o tres, y hasta todas las posiciones del ciclo por hidroxi, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino inferior, alquilaminocarbonilo inferior y/o grupo oxima, y en donde los residuos Rlf R2, R3, Wi y W2 se definen como se describen más adelante; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los compuestos (I) y (II) tienen al menos un grupo funcional al cual está conjugada una porción polimérica, preferentemente ubicada en el radical Rc y/o Rd. El conjugado puede comprender una o varias porciones poliméricas, por ejemplo una, dos, tres ó más porciones poliméricas. Preferentemente, los compuestos conjugados de la presente invención comprenden una porción polimérica. La porción cíclica de 3-7 miembros, preferentemente la porción de carbohidrato cíclico está enlazada al compuesto de indolocarbazol por acoplamiento a un nitrógeno del indol o por acoplamiento para ambos nitrógenos del indol de la estructura de indolocarbazol. Aquí, el acoplamiento puede incluir un indol simple o dos índoles y se proporciona preferentemente por uno o dos enlaces N-glucosídicos .
Preferentemente, la porción cíclica de 3-7 miembros, preferentemente la porción de carbohidrato cíclico, es un grupo furano sustituido o un pirano sustituido. Aquí, los compuestos conjugados a polímeros preferidos son compuestos de indolocarbazol ciclofuranosilados o compuestos de indolocarbazol ciclopiranosilados . Los compuestos de indolocarbazol ciclofuranosilados preferidos que de acuerdo a la invención se conjugan a una porción polimérica, se pueden seleccionar entre K-252a, K-252b, ICP-1. Los compuestos de indolocarbazol ciclopiranosilados preferidos se pueden seleccionar entre Estaurosporina, K-252d, TAN-1030a, RK-286c, MLR-52, Rebecamicina, UNC-01, UNC-02 y RK-1409B. Al menos una porción polimérica está conjugada al compuesto de las fórmulas (I) y/o (II) por un enlace químico covalente con el fin de proporcionar un conjugado estable. En particular, la porción polimérica está enlazada a los compuestos de las fórmulas generales (I) y/o (II) por acoplamiento sobre un grupo funcional seleccionado entre hidroxi, amino, carboxi, alcoxicarbonilo o aminocarbonilo. En la modalidad muy preferida de la invención, la porción polimérica está acoplada al compuesto de las fórmulas generales (I) y/o (II) sobre uno de los residuos Rc y Rd, particularmente de manera preferida en la porción de carbohidrato cíclico identificada por los residuos Rc y Rd. La porción polimérica del compuesto de la invención así como el enlace químico preferido mediante el cual se puede acoplar el polímero al compuesto de indolocarbazol de las fórmulas (I) y/o (II) se describen enseguida. Un aspecto muy preferido de la presente invención es un conjugado polimérico, que está representado por la siguiente fórmula (III) : Fórmula (III) en donde R1 y R2 son los mismos o un residuo diferente y cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste de: (a) hidrógeno, halógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, acilo, nitro, carbamoílo, alquilaminocarbonilo inferior, -NR5R6, en donde cada uno de R5 y R6 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, aralquilo sustituido o sin sustituir, alquilaminocarbonilo inferior sustituido o sin sustituir, arilaminocarbonilo inferior sustituido o sin sustituir, alcoxicarbonilo, carbamoílo, acilo o R5 y R6 están combinados con un átomo de nitrógeno de un grupo heterocíclico, (b) -CO(CH2)jR4, en donde j es 1 a 6, y R4 se selecciona entre el grupo que consiste de (i) hidrógeno, halógeno, -N3, (ii) NR5R6, en donde R5 y Re son como se definen anteriormente, (iii) -SR7, en donde R7 se selecciona entre el grupo que consiste de hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, aralquilo sustituido o sin sustituir, - (CH2) aC02R10 (en donde a es 1 ó 2, y en donde R10 se selecciona entre el grupo que consiste de hidrógeno y alquilo inferior sustituido o sin sustituir) , y (CH2) aC02NR5R6 (en donde a y R5 y Rs son como se definen anteriormente) (iv) -OR8, -OCOR8, en donde R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir c) -CH(OH) (CH2) jR4 en donde j y R4 son como se definen anteriormente; d) - (CH2)dCHR11C02R12 ó - (CH2) aCHR^CONR^6, en donde d es 0 a 5, R11 es hidrógeno, -CONR5R6, ó -C02R13 (en donde R13 es hidrógeno o un alquilo inferior sustituido o sin sustituir) y R12 es hidrógeno o un alquilo inferior sustituido o sin sustituir; e) -(CH2) R14 en donde k es 2 a 6 y R14 es halógeno, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, -COOR15, -OR15, (en donde R15 es hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir o acilo) , -SR7 (en donde R7 es como se define anteriormente) , CONR5R6, -NR5R6 (en donde R5 y R6 son como se definen anteriormente) o -N3; f) -CH=CH(CH2)mR16, en donde m es 0 a 4, y R16 es hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, -COOR15, -OR15 (en donde R15 es como se define anteriormente) -CONR5Re ó -NR5R6 (en donde R5 y R6 son como se definen anteriormente) ,- g) -CH=C(C02R12) 2 , en donde R12 es como se define anteriormente ; h) -C=C (CH2)nR16, en donde n es 0 a 4 y R16 es como se define anteriormente; (i) -CH2OR22, en donde R22 es tri-alquil-sililo inferior en donde los tres grupos alquilo inferior son los mismos o diferentes o en donde R22 tiene el mismo significado de R8; (j) -CH(SR23)2 y -CH2-SR7 en donde R23 es alquilo inferior, alquenilo inferior o alquinilo inferior y en donde R7 es como se define anteriormente; R3 es hidrógeno, halógeno, acilo, carbamoílo, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir o amino; X representa -L1-X/ E Y representa -L2-Y' en donde al menos uno X' e Y' es un polímero, ya sea lineal o ramificado, que está enlazado por L1 y/o L2 a la porción tetrahidrofurano del compuesto de la fórmula (III) ; L1 y/o L2 son un enlace químico covalente o un grupo enlazador que enlaza la porción de tetrahidrofurano al polímero X' y/o Y'; cuando Y' es un polímero, y X' no es un polímero, L1 es un enlace químico covalente y X' se selecciona entre el grupo que consiste de (a) hidrógeno, hidroxialquilo inferior, acilo, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, (b) -CONR17aR17b, en donde cada uno de R17a y R17b se selecciona independientemente entre (i) hidrógeno, alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, (ii) -CH2R18; en donde R18 es hidroxi, o (iii) -NR19R20, en donde cada uno de R19 ó R20 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior o R19 ó R20 son independientemente el residuo de un a-aminoácido en donde el grupo hidroxi del grupo carboxilo está excluido, o R19 ó R20 están combinados con un átomo de nitrógeno para formar un grupo heterocíclico; y (c) -CH=N-R21, en donde R21 es hidroxi, alcoxi inferior, amino, guanidino, o imidazolilamino; cuando X' es polímero, e Y' no es un polímero, L2 es un enlace químico covalente e Y' se selecciona entre hidroxi, alcoxi inferior, aralquiloxi, o aciloxi; W1 y W2 son independientemente hidrógeno, hidroxi o W1 y W2 conjuntamente representan oxígeno; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El término "alquilo inferior" , cuando se utiliza solo o en combinación con otros grupos, significa un grupo alquilo inferior de cadena lineal o ramificada que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, preferentemente 1-5, más preferentemente 1-4 y especialmente de manera preferida 1-3 ó 1-2 átomos de carbono. Estos grupos incluyen en particular metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, amilo, isoamilo, neopentilo, 1-etilpropilo, hexilo, y similares. La porción de alquilo inferior del "alcoxi inferior" el "alcoxicarbonilo inferior" , el "alquilaminocarbonilo inferior", "hidroxialquilo inferior" y los grupos "tri-alquilsililo inferior" tienen el mismo significado que "alquilo inferior" definido anteriormente. Los grupos "alquenilo inferior" se definen como grupos alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono que pueden ser de cadena lineal o ramificada y pueden estar en la forma Z ó E. Tales grupo incluyen vinilo, propenilo, 1-butenilo, isobutenilo, 2-butenilo, 1-pentinilo, (Z) -2-pentinilo, (E) -4-metil-2-pentinilo, pentadienilo, por ejemplo, 1,3 ó 2,4-pentadienilo, y similares. Los grupos alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono más preferidos son grupos alquenilo de 2 a 5 átomos de carbono, de 2 a 4 átomos de carbono y aún más preferidos son los grupos alquenilo de 2 a 3 átomos de carbono. El término grupos "alquinilo inferior" se refiere a grupos alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono que pueden ser de cadena lineal o ramificada e incluyen etinilo, propinilo, 1-butinilo, 2-butinilo, 1-pentinilo, 2-pentinilo, 3-metil-l-pentinilo, 3-pentinilo, 1-hexinilo, 2- hexinilo, 3-hexinilo y similares. Los grupos alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono más preferidos son grupos alquinilo de 2 a 5 átomos de carbono, de 2 a 4 átomos de carbono y aún más preferidos son los grupos alquinilo de 2 a 3 átomos de carbono. El término grupo "arilo" se refiere a grupos arilo de 6 a 14 átomos de carbono que contienen desde 6 hasta 14 átomos de carbono en el anillo. Estos grupos pueden ser mono-, bi- o tricíclicos son anillos fusionados. Los grupos arilo preferidos incluyen fenilo, bifenilo, naftilo, antracenilo, fenantrenilo y similares. La porción arilo del "arilcarbonilo" y los grupos "arilaminocarbonilo" tienen el mismo significado que el definido anteriormente. El término grupos "heteroarilo" puede contener de 1 a 3 heteroátomos seleccionados independientemente entre nitrógeno, azufre u oxígeno y se refiere a grupos heteroarilo de 3 a 13 átomos de carbono. Estos grupos pueden ser mono-, bi- o tricíclicos. Los grupos heteroarilo 3 a 13 átomos de carbono de la presente invención incluyen grupos heteroaromáticos y heterocíclicos saturados y parcialmente saturados. Estos heterocíclicos pueden ser monocíclicos, bicíclicos, tricíclicos. Los grupos heterocíclicos de 5 ó 6 miembros, preferidos son tienilo, furilo, pirrolilo, piridilo, piranilo, morfolinilo, pirazinilo, metilpirrolilo y piridazinilo. El heteroarilo de 3 a 13 átomos de carbono puede ser un grupo heterocíclico bicíclico. Los grupos heterocíclicos bicíclicos preferidos son benzofurilo, benzotienilo, indolilo, imidazolilo, y pirimidinilo. Los heteroarilos de 3 a 13 átomos de carbono más preferidos son furilo y piridilo. El término "alcoxi inferior" incluye grupos alcoxi que contienen de 1 a 6 átomos de carbono, preferentemente de 1 a 5, más preferentemente de 1 a 4 y especialmente de manera preferida de l a 3 ó de l a 2 átomos de carbono y pueden ser de cadena lineal o ramificada. Estos grupos incluyen metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, isopropoxi, ter-butoxi, pentoxi, hexoxi, y similares . El término "acilo" incluye alcanoílo inferior que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, preferentemente de 1 a 5, de 1 a 4, de l a 3 ó de l a 2 átomos de carbono y puede ser de cadena lineal o ramificada. Estos grupos incluyen preferentemente formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, butirilo terciario, pentanoílo y hexanoílo. La porción acilo del grupo "aciloxi" tiene el mismo significado que el definido anteriormente. El término "halógeno" incluye flúor, cloro, bromo, yodo, y similares. El término grupo "aralquilo" se refiere a aralquilo de 7 a 15 átomos de carbono, en donde el grupo alquilo está sustituido por un arilo. El grupo alquilo y arilo se puede seleccionar entre los grupos alquilo de 1 a 6 átomos de carbono y los grupos arilo de 6 a 14 átomos de carbono como se define anteriormente, en donde el número total de átomos de carbono está entre 7 y 15. Los grupos aralquilo de 7 a 15 átomos de carbono, preferidos son bencilo, feniletilo, fenilpropilo, fenilisopropilo, fenilbutilo, difenilmetilo, 1, 1-difeniletilo, 1,2-difeniletilo. La porción aralquilo de los grupos "aralquiloxi" tiene el mismo significado que el definido anteriormente . Los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo inferiores sustituidos tienen de 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente, tales como alquilo inferior, hidroxi, alcoxi inferior, carboxilo, alcoxicarbonilo inferior, nitro, halógeno, amino, mono- o di-alquilamino inferior, dioxolano, dioxano, ditiolano, y ditiona. La porción sustituyente del alquilo inferior sustituido, grupos alquenilo y alquinilo, y la porción alquilo inferior del alcoxi inferior, el alcoxicarbonilo inferior, y los sustituyentes mono- o di-alquilamino inferior de los grupos alquilo, alquenilo y alquinilo inferior sustituidos tienen el mismo significado que "alquilo inferior" definido anteriormente. Cada uno de los grupos arilo sustituido, heteroarilo sustituido y aralquilo sustituido, tiene de 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente, tales como alquilo inferior, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, nitro, amino, mono- o di-alquilamino inferior, y halógeno. La porción alquilo inferior del alquilo inferior, el alcoxi inferior, el alcoxicarbonilo inferior, y los grupos mono- o dialquilamino inferior entre los sustituyentes, tienen los mismos significados que el alquilo inferior definido anteriormente. El grupo heterocíclico formado por R5 y R6 combinado con un átomo de nitrógeno incluye pirrolidinilo, piperidinilo, piperidino, morfolinilo, morfolino, tiomorfolino, N-metilpiperizinilo, indolilo, e isoindolilo. Los grupos a-aminoácido incluyen glicina, alanina, prolina, ácido glutámico y lisina, que pueden estar en la forma L, la forma D o en la forma de un racemato . Preferentemente, R1 y R2 se seleccionan independientemente entre el grupo que consiste de hidrógeno, halógeno nitro, -CH2OH, -(CH2)kR14, -CH=CH(CH2)mR16, -C=C(CH2)nR15, -CO(CH2)jR4 en donde R4 es -SR7, CH20-alquilo inferior (sustituido o sin sustituir) (en donde el alquilo inferior sustituido es preferentemente metoximetilo, metoxietilo o etoximetilo), -NR5R6. En los significados preferidos anteriores de R1 y R2, el residuo R14 se selecciona preferentemente entre fenilo, piridilo, imidazolilo, tiazolilo, tetrazolilo, -COOR15, -OR15 (en donde R15 se selecciona preferentemente entre hidrógeno, metilo, etilo, fenilo o acilo) -SR7 (en donde R7 se selecciona preferentemente entre alquilo inferior sustituido o sin sustituir, 2-tiazolina y piridilo) y -NR5R6 (en donde R5 y R6 se seleccionan independientemente entre hidrógeno, metilo, etilo, fenilo, carbamoílo y alquilamino carbonilo inferior) . Además, el residuo R16 se selecciona preferentemente entre hidrógeno, metilo, etilo, fenilo, imidazol, tiazol, tetrazol, -COOR15, -OR15 y -NR5R6 (en donde los residuos R15, R5 y R6 tienen los significados preferidos como los descritos anteriormente) . En los significados anteriormente preferidos de R1 y R2, el residuo R7 se selecciona preferentemente entre el grupo que consiste de alquilo inferior sustituido o sin sustituir, fenilo sustituido o sin sustituir, piridilo, pirimidinilo, tiazol y tetrazol. Además, k es preferentemente 2, 3 ó 4, j es preferentemente 1 ó 2 y m y n son independientemente de manera preferida 0 ó 1. Preferentemente, R3 es hidrógeno o acetilo, más preferentemente hidrógeno. Preferentemente, cada uno de W1 y W2 es hidrógeno. Cuando Y' es un polímero, y X' no es un polímero, X' se selecciona preferentemente entre carboxi, hidroximetilo o un alcoxicarbonilo inferior, con metoxicarbonilo y carboxilo que son particularmente preferidos . Cuando X' es polímero, e Y' no es un polímero, Y' se selecciona preferentemente entre hidroxi o acetiloxi, más preferentemente hidroxi. Una modalidad muy preferida de la presente invención se refiere al compuesto K252-a conjugado en la posición X y/o Y a un polímero. Por lo tanto, en una modalidad muy preferida de la presente invención, el conjugado polimérico de la fórmula (III) está representado por un compuesto en donde Ri, R2, R3, i, y W2 son hidrógeno y al menos de uno de X' e Y' es un polímero, mediante lo cual si Y' es un polímero, y X' no es un polímero, X' es metoxicarbonilo, y si X' es un polímero, e Y' no es un polímero, Y' es hidroxi. Una modalidad muy preferida de la presente invención se refiere al compuesto K252-b conjugado en la posición X y/o Y a un polímero. Por lo tanto, en una modalidad muy preferida de la presente invención, el conjugado polimérico de la fórmula (III) está representado por un compuesto en donde Rlf R2, R3, Wi, y W2 son hidrógeno y al menos uno de X' e Y' es un polímero, mediante lo cual si Y' es un polímero, y X' no es un polímero, X' es carboxilo, y si X' es un polímero, e Y' no es un polímero, Y' es hidroxi. Los compuestos de la presente invención se pueden preparar como sales farmacéuticamente aceptables que incluyen sales de ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, yodhídrico, bromhídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico y ácido sulfúrico así como sales de ácidos orgánicos, tales como ácido tartárico, acético, cítrico, málico, benzoico, glicólico, glucónico, succínico, aril-sulfónico (por ejemplo, ácidos p-toluen-sulfónico, bencensulfónico), fosfórico, malónico, y similares. Ácidos adecuados para la formación de sales farmacéuticamente aceptables, son conocidos por una persona experta en la técnica. Además, las sales farmacéuticamente aceptables del compuesto de la presente invención se pueden formar con un catión farmacéuticamente aceptable. Los cationes farmacéuticamente aceptables son conocidos por una persona experta en la técnica e incluyen cationes alcalinos (Li+, Na-i-, K+) , cationes alcalinotérreos (Mg2+, Ca2+, Ba2+) , cationes de amonio y orgánicos, tales como cationes de amonio cuaternario. La porción polimérica de acuerdo a la presente invención, la cual, por ejemplo, está representada en la fórmula general (III) por X' y/o Y' , tiene que ser biocompatible, puede ser de origen natural o semisintético o sintético y puede tener una estructura lineal o ramificada. Polímeros ejemplares incluyen sin limitación polialquilenglicoles óxidos de polialquileno, ácido poliacrílico, poliacrilato, poliacrilamida o derivados de N-alquilo de los mismos, ácido polimetacrílico, polimetacrilatos, ácido polietilacrílico, polietilacrilatos, polivinilpirrolidona, alcohol polivinílico, ácido poliglicólico, ácido poliláctico, ácido poli (láctico-co-glicólico) , dextrano, quitosán, poliaminoácidos. En una modalidad muy preferida de la presente invención, el polímero es un grupo polietilenglicol (PEG) , en donde el grupo OH terminal opcionalmente puede estar modificado por ejemplo con alquilo de 1 a 5 átomos de carbono o grupos acilo de 1 a 5 átomos de carbono, preferentemente con grupos alquilo de 1 átomo de carbono, de 2 átomos de carbono o de 3 átomos de carbono o grupos de 1, de 2 ó de 3 átomos de carbono. Preferentemente, el polietilenglicol modificado es metoxi-polietilen-glicol (mPEG) . El polímero utilizado de acuerdo a la presente invención tiene un peso molecular que oscila desde 100 hasta 100,000 Da, preferentemente desde 200 hasta 50,000 Da, y más preferentemente de 500 hasta 10,000 Da. De acuerdo a un aspecto preferido de la invención, el polímero es un PEG de cadena corta que preferentemente tiene un OH terminal y/o grupo metoxi con un peso molecular que oscila desde 200 hasta 1500 Da, preferentemente desde 400 hasta 1200 Da y aún más preferentemente desde 550 hasta 1100. En la modalidad más preferida, el PEG de cadena corta tiene un peso molecular promedio de 550 Da ó de 1100 Da. De acuerdo a un aspecto preferido de la invención, el polímero es un PEG de cadena larga que preferentemente tiene un OH terminal y/o grupo metoxi, con un peso molecular que oscila desde 4000 hasta 6000 Da, y preferentemente desde 4,500 hasta 5,500 Da. En la modalidad más preferida de este aspecto de la invención, se utiliza un PEG de cadena larga o mPEG con un peso molecular promedio de 2,000 Da ó de 5,000 Da. La cadena polimérica del conjugado polimérico de las fórmulas (I) , (II) y/o (III) se conjuga por un enlace químico covalente al agente activo con el fin de proporcionar un conjugado estable. Las figuras la y Ib muestran por ejemplo el conjugado polimérico preferido de las fórmula (III) . El polímero puede estar enlazado directamente al compuesto de las fórmulas (I) ó (II) o al derivado K-252a de la fórmula (III) . En este caso de la fórmula (III), L1 y L2 son un enlace covalente. En una modalidad preferida de la presente invención, la porción polimérica está enlazada al derivado de indolocarbazol mediante el uso de un grupo enlazado. En la modalidad preferida del compuesto de la fórmula (III) , la porción polimérica X' y/o Y' están enlazadas por un grupo enlazador, mediante lo cual en esta modalidad, L1 y L2 representan el grupo enlazador. En la modalidad preferida de la fórmula (III) de la presente invención, el término grupo enlazador L1 y/o L2 significa un grupo que se obtiene por la reacción química del residuo en la posición C3 de la porción tetrahidrofurano de la fórmula (III) y el grupo reactivo sobre la porción polimérica. Por lo tanto, L1 y L2, que acoplan las porciones poliméricas X' e Y' al anillo de tetrahidrofurano, pueden representar un grupo enlazador como se define anteriormente. El grupo enlazador puede ser cualquier residuo conocido por los expertos en la técnica de la conjugación polimérica, obtenido mediante la reacción del grupo funcional adecuado para la conjugación sobre los compuestos indolocarbazol de las fórmulas (I) ó (II) , preferentemente sobre la porción cíclica Rc y/o Rd, o sobre el sustituyente en el anillo de tetrahidrofurano de la fórmula (III) y el polímero o el polímero activado por un grupo reactivo. Grupo de enlazador ejemplar, por ejemplo grupos L1 y/o L2 ejemplares, incluyen sin restricción éster, éter, acetal, cetal, éter vinílico, carbamato, urea, amina, amida, enamina, imina, oxima, amidina, iminoéster, carbonato, ortoéster, fosfonato, fosfinato, sulfonato, sulfinato, sulfuro, sulfato, disulfuro, sulfinamida, sulfonamida, tioéster, arilo, silano, siloxano, heterociclos, tiocarbonato, tiocarbamato, y enlaces fosfonamida. Preferentemente, los grupos enlazadores o en particular L1 y L2 se seleccionan entre un enlace carbamato, un éter, un éster, un carbono, una amida y/o una amina. Además, el grupo enlazador opcionalmente puede contener uno o varios grupos espaciadores . En el contexto de la presente invención, un grupo espaciador se define como un grupo bifuncional, que tiene sobre ambos extremos un grupo extremo funcional reactivo. Con un grupo extremo reactivo, el espaciador reacciona con la porción polimérica, por ejemplo X' e Y' , o con el grupo reactivo sobre la porción polimérica. Con el grupo funcional adicional sobre el otro extremo, el grupo espaciador se enlaza al grupo funcional adecuado para la conjugación sobre los compuestos indolocarbazol de las fórmulas (I) ó (II) , preferentemente sobre la porción cíclica Rc y/o Rd, o al anillo de tetrahidrofurano de la fórmula (III) , preferentemente con el residuo de la posición C3 del anillo de tetrahidrofurano de la fórmula (III) . Grupos espaciadores adecuados son conocidos por los expertos en la técnica. Ejemplos de grupos espaciadores incluyen, sin restricción moléculas o polímeros pequeños hetero-, bifuncionales. Por ejemplo, el grupo espaciador puede estar representado por grupos alquilo de 6 a 12 átomos de carbono bifuncionales o grupos alquilo heterobifuncionales que contienen 1-3 heteroátomos seleccionados entre N, S y O, o una cadena PEG bifuncional corta intermediaria. En una modalidad más preferida, el polímero, representado en la fórmula general (III) por X' o Y' , preferentemente se enlaza covalentemente directamente o mediante un grupo espaciador a un átomo de oxígeno derivado del grupo hidroxi en la posición C3 de la porción de tetrahidrofurano del derivado K-252a. En esta modalidad preferida, en la fórmula general (III) , Y' representa la porción polimérica y L2 es preferentemente un enlace carbamato o un éter (figura la) . En una modalidad más preferida, alternativa, el polímero está conjugado covalentemente directamente o por un grupo espaciador a un grupo carbonilo derivado del grupo éster metílico en la posición C3 de la porción de tetrahidrofurano del derivado K-252a. En esta modalidad alternativa, en la fórmula general (III) , X' representa la porción polimérica y L1 es preferentemente un enlace amida o amina (figura Ib) . El acoplamiento covalente de la porción polimérica a los compuestos de indolocarbazol de las fórmulas (I) , (II) , ó (III) se obtiene por síntesis química conocida. En particular, el acoplamiento covalente del polímero a K-252a o sus derivados para obtener los compuestos de la fórmula (III) se puede lograr mediante técnicas de síntesis química, conocidas. Por ejemplo, en una modalidad ejemplar de la presente invención, la conjugación polimérica de K-252a o sus derivados se puede lograr haciendo reacción a un polímero activado con isocianato, con K-252a o sus derivados bajo condiciones de reacción adecuada como se describe generalmente por el siguiente esquema de reacción: Polímero-NCO + HO-Fármaco ? Polímero-NH-CO-O-Fármaco De acuerdo a este esquema de síntesis, la figura 2 muestra un ejemplo de la presente invención, en donde un compuesto de la fórmula (III) se obtiene mediante la reacción de la reacción polimérica Y' que es un PEG activado con isocianato y el grupo hidroxi en la posición C3 de la posición tetrahidrofurano de K-252a. La conjugación entre el polímero y K-252a aquí se obtiene por el grupo enlazador L2 que es un grupo enlazador carbamato. En la presente invención, sorprendentemente se descubrió que comparado con los miembros de compuestos indolocarbazol y en particular con K-252a o sus derivados, los compuestos de la fórmulas (I) , (II) y/o (III) muestran un desempeño mejorado farmacocinético y toxicológico debido a su solubilidad incrementada, que conduce a una biodisponibilidad mejorada. En otro aspecto de la presente invención, sorprendentemente se descubrió que los compuestos de la fórmulas (I) , (II) y/o (III) muestran una absorción sistémica limitada después de la administración tópica, debido a su tamaño molecular e hidrofilicidad incrementados, reduciendo de esta manera la toxicidad sistémica y/o efectos secundarios (ver ejemplo 2 ) . También se ha descubierto sorprendentemente por los inventores de la presente solicitud que los conjugados poliméricos de K-252a de las fórmulas (I) , (II) y/o (III) muestran un incremento significativo en la selectividad, en la actividad inhibidora contra TrKA-tirosina-cinasa en comparación con la actividad inhibidora de cinasa no selectiva de los compuestos indolocarbazol mismos y en particular de K-252a y sus derivados (ver ejemplo 3) . Por lo tanto, la conjugación de un compuesto indolocarbazol y en particular de K-252a a una molécula polimérica de acuerdo a la invención, conduce a la provisión de un agente activo, selectivo con respecto a su objetivo terapéutico con la disminución consecuente de los efectos secundarios no deseados . Aquí, un aspecto adicional de la presente invención es el uso de compuestos de las fórmulas (I) , (II) y/o (III) como agentes activos en un medicamento. En un aspecto preferido de la invención, los compuestos de las fórmulas (I) , (II) y/o (III) se utilizan como agentes activos en un medicamento para la administración sistémica y tratamiento. En un aspecto preferido adicional, la invención se refiere al uso de compuestos de las fórmulas (I) , (II) , y/o (III) como agentes activos en un medicamento tópico. En particular, los compuestos poliméricos conjugados de la presente invención se utilizan como agentes activos en un medicamento útil para la prevención, alivio y tratamiento de patologías asociadas con HMGBl. Una patología asociada con HMGBl es una condición en un paciente en donde una concentración incrementada de la proteína nuclear HMGBl y/o de proteínas homologas HMGBl en la forma acetilada o no acetilada, está presente en los fluidos y tejidos biológicos, comparada con la concentración en sujetos normales en donde estas proteínas nucleares HMGBl son prácticamente indetectables. Las HMGBls, extracelulares, actúan como quimiocinas proinflamatorias quimiotácticas potentes. Las patologías asociadas con HMGBl por lo tanto son patologías con una fuerte base inflamatoria, patologías que resultan de la estimulación de citosina tales como TNF-alfa, IL-1, IL-6, etc. o patologías que resultan de eventos tóxicos tales como intoxicación, infección, quemadura, etc. En particular, se han encontrado altas concentraciones de la proteína HMGBl y proteínas homologas y se determinaron en plasma de pacientes con sepsis, en plasma y fluido sinovial en pacientes con artritis reumatoide, en cerebros de pacientes con la enfermedad de Alzheimer, en plasma y tejidos en pacientes con melanoma, en plasmas de pacientes con lupus eritematoso sistémico, en placas ateroscleróticas de pacientes ateroscleróticos, etc. La determinación y evidencia de la proteína HMGBl y/o proteínas homologas en fluidos biológicos y tejidos se puede detectar por herramientas para diagnóstico comunes, conocida por los expertos en la técnica, que incluyen, por ejemplo, la detección por ensayos ELISA, etc. Por lo tanto, una gama de enfermedades están caracterizadas por la presencia relevante de HMGBl extracelular, que en particular incluyen sin restricción enfermedades inflamatorias, estenosis, restenosis, aterosclerosis, artritis reumatoide, enfermedades autoinmunitarias, tumores, enfermedades infecciosas, sepsis, lesión pulmonar inflamatoria aguda, lupus eritematoso, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades del sistema nervioso central y periférico y esclerosis múltiple. En una modalidad especialmente preferida, los compuestos poliméricos conjugados de las fórmulas (I) , (II) y/o (III) se utilizan para la prevención, alivio y tratamiento de enfermedades cardiovasculares, particularmente aterosclerosis y/o restenosis que ocurren durante o después de la angioplastia. Más preferentemente, el medicamento se utiliza para bloquear, retardar y/o deteriorar la regeneración de tejido conectivo en restenosis durante o después de angioplastia. En un aspecto particularmente preferido de la invención, los compuestos poliméricos conjugados de las fórmulas (I) , (II) y/o (III) son eficientes para el uso como agente activo en un medicamento para la prevención, alivio y tratamiento de trastornos neurológicos, neuropatías y trastornos neurodegenerativos del sistema nervioso central y periférico. También se mostró por los inventores que los nuevos compuestos conjugados poliméricos son capaces de reducir y/o inhibir la secreción de citosina en plasma mediante tratamiento sistémico. Por lo tanto, los compuestos conjugados poliméricos se utilizan como agentes activos en un medicamento para la administración sistémica, útil para la prevención, alivio y/o tratamiento de patologías en donde está implicado un incremento de la secreción de citosina en plasma. Estas patologías son preferentemente patologías, en donde una secreción de TNF- a, IFN-?, MCP-1, MIP-1 y/o RANTES están implicadas principalmente. En particular, en el contexto de la presente invención, las patologías que están asociadas con una secreción de citosina en plasma incrementada incluyen sin restricción enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, lesión por repercusión después de trasplante de órgano, afecciones cardiovasculares, enfermedades obstétricas y ginecológicas, enfermedades infecciosas, enfermedades alérgicas y atópicas, patologías de tumor sólido y líquido, enfermedades por rechazo de trasplante, enfermedades congénitas, enfermedades dermatológicas, enfermedades neurológicas, caquexia, enfermedades renales, condiciones de intoxicación iatrogénica, enfermedades metabólicas e idiopáticas, y enfermedades oftalmológicas. En una modalidad más preferida, los compuestos de la invención se utilizan como agentes activos en un medicamento para el tratamiento sistémico, útil para la prevención, alivio y/o tratamiento de la enfermedad de Behcet, síndrome de Sjógren, vasculitis, uveítis, retinopatía. En otro aspecto particular de la invención, se prefiere que los compuestos poliméricos conjugados de la presente invención se utilicen como agentes activos en un medicamento tópico, útil para la prevención, alivio y/o tratamiento de patologías dérmicas. Las patologías dérmicas preferidas en el contexto de la presente invención son patologías caracterizadas por hiperproliferación de los queratinocitos, tales como psoriasis, dermatitis atópica, eczema crónico, acné, pitiriasis rubra pilaris, queloides, cicatrices hipertróficas y tumores de la piel, tales como queratoacantoma, carcinoma celular escamoso, carcinoma de células básales. En una modaliclad más preferida, los compuestos de la presente invención se utilizan como agentes activos en un medicamento tópico útil para la prevención, alivio y tratamiento de psoriasis. Debido a la selectividad incrementada de los compuestos de la invención en la inhibición de TrkA, un aspecto adicional de la invención es el uso de tales compuestos conjugados en la prevención, alivio y tratamiento de patología en las cuales TrkA juega un papel crucial en el mecanismo patofisiológico, que conduce al desarrollo de las patologías. En este contexto, en una modalidad muy preferida de la invención, los compuestos poliméricos de K-252a conjugados de las fórmulas (I) , (II) , y/o (III) se utilizan como agentes activos en un medicamento para la prevención, alivio y tratamiento de dolor e hiperalgesia relacionados con NGF. Por lo tanto, un aspecto adicional de la presente invención es el uso de un compuesto de las fórmulas (19, (II) , y/o (III) opcionalmente como se definen anteriormente para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de patología como las definidas anteriormente . Los compuestos de las fórmulas (I) , (II) , y/o (III) se pueden utilizar solos o en combinación con uno o varios agentes activos adicionales. En particular, los compuestos conjugados poliméricos de la invención~~se~pueden- utilizar en combinación con al menos un agente adicional, capaz de inhibir un mediador temprano de la cascada inflamatoria de citosina, por ejemplo un antagonista o inhibidor de una citosina seleccionada entre el grupo que consiste TNF, IL-la, IL-lß, IL-Ra, IL-8, MlP-la, MIF-lß, MIP-2, MIF e IL-6. Agentes adicionales que se pueden utilizar en combinación con los compuestos poliméricos de la invención son por ejemplo antagonistas y/o inhibidores de RAGE, antagonistas y/o inhibidores de HMGBl, antagonistas y/o inhibidores de la interacción de un receptor similar a Toll (TCR) con HMGBl, el dominio similar a lectina N-terminal funcional (DI) o trombomodulina y/o una molécula análoga de ácido nucleico o ácido nucleico de doble hebra sintético, con una estructura doblada, como se describe en la solicitud de patente internacional WO 2006/002971. El compuesto de las fórmulas (I) , (II) , y/o (III) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables se puede administrar tal como esté, o en la forma de varias composiciones farmacéuticas de acuerdo a la actividad farmacológica y al propósito de administración. Otro aspecto más de la presente invención es una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de al menos un compuesto de las fórmulas (I) , (II) , y/o (III) opcionalmente junto con portadores, adyuvantes, diluyentes y/o aditivos farmacéuticamente aceptables. Los portadores, adyuvantes, diluyentes y/o aditivos farmacéuticos son conocidos por una persona experta en la técnica y por lo tanto se pueden aplicar en la formulación de la composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención. La composición farmacéutica de la presente invención se puede administrar de una manera conveniente, conocida por una persona experta en la técnica, por ejemplo por un médico. En particular, la composición farmacéutica de la invención se puede administrar por inyección o infusión, en particular por inyección o infusión intravenosa, intramuscular, transmucosa, subcutánea o intraperitoneal y/o por aplicación oral, tópica, dérmica, nasal, inhalación, aerosol y/o rectal, etc. La administración puede ser local o sistémica. Preferentemente, la administración del compuesto y la composición farmacéutica de la invención se pueden realizar por administración parenteral, particularmente en la forma de soluciones o suspensiones líquidas; o administración oral, particularmente en la forma de tabletas o cápsulas, o intranasalmente, particularmente en la forma de polvo, gotas nasales, o aerosoles; o dérmicamente, a través, por ejemplo, de ungüentos, cremas, aceites, liposomas o parches transdérmicos . De acuerdo a un aspecto de la invención, la composición farmacéutica se administra sistémicamente. En particular, los compuestos conjugados poliméricos se pueden administrar por inyección o infusión, en particular por inyección o infusión intravenosa, intramuscular, transmucosa, subcutánea o intraperitoneal y/o por administración oral.
En una modalidad aún más preferida, la composición farmacéutica de la presente invención se administra por aplicación tópica, en particular por aplicación dérmica. En caso de una aplicación dérmica, la administración de los compuestos de la presente invención se puede realizar en la forma de liposoma. En una modalidad más preferida adicional de la invención, las composiciones farmacéuticas se administran inmovilizadas de manera inversa sobre la superficie de un dispositivo médico, en particular por unión, recubrimiento y/o incrustación del compuesto y composición de la invención y un dispositivo médico, tal como pero no limitado a, stents, catéteres, instrumentos quirúrgicos, cánulas, válvulas cardiacas, o prótesis vasculares. Después de poner en contacto el dispositivo médico con el fluido corporal o el tejido corporal, se liberan los compuestos inmovilizados de manera inversa. Por consiguiente, los dispositivos médicos recubiertos actúan como dispositivos para el suministro del fármaco, eluyendo el medicamento, con ello se puede controlar la cinética de distribución del fármaco, proporcionando una liberación inmediata o una liberación controlada, retrasada o sostenida del fármaco, por ejemplo. Las tecnologías de recubrimiento de dispositivos médicos son muy conocidas para la persona experta en la técnica.
La composición farmacéutica de la presente invención se puede utilizar para aplicaciones de diagnóstico o de terapéutica. Para aplicaciones de diagnóstico, el compuesto de las fórmulas (I) , (II) , y/o (III) puede estar presente en una forma marcada, por ejemplo en una forma que contiene un isótopo, por ejemplo un isótopo radioactivo o un isótopo que se puede detectar por resonancia magnética nuclear. Una aplicación terapéutica preferida es, en el caso de una aplicación tópica, la prevención, alivio y tratamiento de psoriasis, mientras que en el caso de una aplicación sistémica, es la prevención, alivio y tratamiento de regeneración de tejido conectivo en restenosis. Los compuestos de esta invención se pueden emplear como el agente activo solo en una composición farmacéutica. Alternativamente, éstos se pueden usar en combinación con otros ingredientes activos, por ejemplo otros ingredientes farmacéuticos activos en el tratamiento de las patologías definidas anteriormente. Las concentraciones de los compuestos de esta invención en la composición farmacéutica pueden variar. La concentración dependerá de factores tales como la dosificación total del fármaco que se va a administrar, las características químicas (por ejemplo, hidrofobicidad) de los compuestos empleados, la ruta de administración, la edad, el peso corporal y los síntomas de un paciente. Los compuestos de esta invención comúnmente se proporcionan en una solución amortiguadora fisiológica acuosa que contiene aproximadamente 0.1 hasta 10% p/v del compuesto para la administración parenteral. Los intervalos de dosis comunes están desde aproximadamente 1 µg hasta aproximadamente 1 g/kg de peso corporal por día; un intervalo de dosis preferido oscila desde aproximadamente 0.01 mg/kg hasta 100 mg/kg de peso corporal por día, y preferentemente desde aproximadamente 0.1 hasta 20 mg/kg una vez hasta cuatro veces por día. Una dosificación preferida del fármaco que se va a administrar probablemente depende de variables tales como el tipo y el grado de la progresión de la enfermedad o trastorno, el estado de salud general del paciente particular, la eficacia biológica relativa del compuesto seleccionado y la formulación del excipiente del compuesto, y su ruta de administración. Un aspecto adicional más de la invención es el uso de un compuesto K-252a no conjugado o un derivado del mismo, para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de la enfermedad de Behcet . Los derivados de K-252a preferidos incluyen compuestos modificados químicamente y/o sintéticos, por ejemplo compuestos que tienen sustituyentes del sistema de anillo, por ejemplo grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, compuestos en donde éster metílico se ha reemplazado por otro grupo éster, un grupo amida o por H ó un catión y/o compuestos, en donde el átomo de N en el grupo amida cíclica está sustituido con un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de carbono. La presente invención se ilustra adicionalmente por las siguientes figuras la a 12e y ejemplos. Las figuras la y Ib describe la estructura de los conjugados poliméricos de K-252a y sus derivados. La figura 2 describe la estructura de un conjugado de K-252a-PEG, en donde PEG está enlazado al fármaco por el enlace carbamato. La figura 3 es un cromatograma de la purificación de un conjugado de PEG, en donde PEG está enlazado a K-252a por enlace carbamato y la cadena de PEG tiene un peso molecular promedio de 2000 Da. En las inserciones, se muestran los espectros MALDI-TOF de los picos principales. La figura 4a muestra los resultados de la concentración plasmática promedio de K-252a detectada en fracción de plasma de ratones después de la administración tópica de K-252a. La figura 4b es una gráfica que muestra el perfil de la concentración plasmática media versus el tiempo después de una administración dérmica simple a una dosificación de aproximadamente 10 µmol/kg, correspondiente a 5.07 mg/kg, de K-252a. Las figuras 5a y 5b muestran la actividad antiproliferativa sobre queratinocitos de los compuestos conjugados K-252a-PEG(2K) en el ensayo MTT después de 48 y 96 horas de periodo de contacto. Las figuras 6a y 6b muestran la actividad antiproliferativa de queratinocitos de K-252a-PEG(2K) en el ensayo MTT. La figura 6a se refiere respectivamente a l, 2 y 4 horas de periodo de contacto con el conteo celular que se realiza después de 48 horas. La figura 6b se refiere respectivamente a l, 2 y 4 horas de periodo de contacto con el conteo celular que se realiza después de 96 horas. Las figuras 7a y 7b muestran la actividad antiproliferativa sobre queratinocitos de K-252a en el ensayo MTT. La figura 7a se refiere respectivamente a 1,2 y 4 horas de periodo de contacto con el conteo celular que se realiza después de 48 horas. La figura 7b se refiere respectivamente a 1,2 y 4 horas de periodo de contacto con el conteo celular que se realiza después de 96 horas. La figura 8 es una gráfica que compara la actividad antiproliferativa sobre queratinocitos en el ensayo MTT de K-252a y K-252a-PEG(2K) después de 4 horas de periodo de contacto y después de haber realizado el conteo celular después de 96 horas.
La figura 9 es una gráfica que muestra los perfiles de inhibición de cinasa para K-252a y K-252a- PEG(2K), respectivamente, y que reportan la comparación de la selectividad de la inhibición de cinasa de K-252a- PEG(2K) versus K-252a. Los datos reportados en la figura 10 están normalizados con respecto a la actividad de inhibición de TrkA. La figura 10 muestra el IC50 de K-252a y K-252a- PEG(2K) contra TrkA y la curva de inhibición respectiva. La figura 11 muestra la inhibición de secreción de TNF-a en el plasma de ratones tratados con K-252a-PEG(2K) antes de inducir endotoxemia con una inyección de dosis de LPS en comparación a ratones control que recibieron solamente una solución de vehículo antes del tratamiento con LPS. En la figura 11, las barras de error representan los datos SEM analizados por ANOVA bidireccional seguido por pruebas posteriores de Bonferroni . Las figuras 12a a 12e muestran la inhibición de secreción de TNF-a, IFN-?, MCP-1, MIP-1 y RANTES, respectivamente, en plasma de ratones tratados con K-252a sin conjugar antes de inducir endotoxemia con una inyección de dosis de LPS en comparación con ratones control que recibieron solamente una solución de vehículo antes del tratamiento de LPS. En las figuras 12c y 12e, el signo "§" significa los resultados del intervalo. EJEMPLOS En los siguientes ejemplos, el producto identificado con los términos "K-252a-PEG" , "K-252a- PEG(2K)" ó "CT327" corresponde a un compuesto de acuerdo a la presente invención, en donde K-252a está conjugado al grupo -OH de la porción tetrahidrofurano con una cadena de PEG lineal de 2 kDa por un enlace carbamato.
Ejemplo 1 Síntesis de un conjugado de K-252a-PEG(2K) (compuesto CT327) Se preparó una solución de 1 mg/ml de K-252a en diclorometano, disolviendo 1.5 mg de K-252a que (que corresponde a 3.208 µmol) en 1.5 ml de CH2CI2 con agitación suave . La solución se agregó a un matraz de vidrio que contenía 65.05 mg (32.525 µmol) de metoxi-PEG-isocianato 2K (M-PEG-isocianato con un peso molecular promedio de 2000 Da) y 100 µl de una solución de trietilamina 32.684 mg/ml en CH2C12 como catalizador básico. Tanto el polímero como el catalizador se utilizaron en una proporción molar de 10 veces comparados con K-252a. La mezcla se mantuvo a temperatura ambiente bajo agitación magnética (velocidad de giro de aproximadamente 500 rpm) y flujo de nitrógeno suave toda la noche (tiempo de reacción = 16 horas 40 minutos) . La solución se evaporó y el residuo sólido se trató con 300 µl de DMSO. La mezcla se purificó por RP-HPLC sobre una columna C18 con el fin de obtener el producto deseado (pico correspondiente a aproximadamente 59/41 de gradiente de ACN/agua) . Las fracciones correspondientes de cuatro procesos de purificación posteriores se combinaron y se secaron por evaporación de ACN y luego se liofilizaron. Un análisis MALDI-TOF confirmó la identificación del producto con conjugado K-252a-PEG (pico de masa polidispersa con un valor máximo m/z de 2468.81) [figuras 2 y 3] .
Ejemplo 2 - estudios farmacocinéticos in vivo Ejemplo 2.1 Estudio de absorción dérmica en ratones de K-525a versus K- 252a-PEG.
El presente estudio se condujo con el objetivo de medir y evaluar la cinética de absorción después de la administración dérmica de K-252a-PEG en ratones, en comparación con la cinética de absorción de la molécula no conjugada, es decir no PEGilada, K-252a. El experimento se realizó utilizando una dosis de agente activo en ambas preparaciones de 3 mg/kg. Para el presente estudio, se efectuaron tres experimentos posteriores in vivo utilizando cada ocasión 6 ratones Balb/C adquiridos de Charles River (Calco, Italia) . Los ratones se subdividieron en los siguientes grupos experimentales (dos animales por grupo) : - Grupo 1 : Los ratones se trataron con 3 mg/kg de K-252-a, por administración dérmica y se sacrificaron después de 30 minutos. - Grupo 2 : Los ratones se trataron con 3 mg/kg de K-252-a por administración dérmica y se sacrificaron después de 60 minutos. - Grupo 3 : Los ratones se trataron con 3 mg/kg de K-252-a-PEG(2K) del ejemplo 1 por administración dérmica y se sacrificaron después de 60 minutos. Las formulaciones de K-252a y K-252a-PEG (2K) se prepararon respectivamente por dilución de la solución de reserva (solución de reserva K-252a de lote de Calbiochem número B50496, solución de 100 µg/214 µl de DMSO; K-252a-PEG(2K) solución de reserva es una solución de 0.226 mg de K-252a/ml de DMSO) con aceite de oliva, hasta que se alcanzó una concentración final de K-252a/ml de 0.3 mg/ml de aceite de oliva/DMSO al 60%. Las soluciones se prepararon respectivamente como sigue: 60 µl de K-252a 5 mg/ml de DMSO + 940 µl de aceite de oliva y 30 µl de K-252a-PEG(2K) , 5 mg/ml de DMSO + 470 µl de aceite de oliva.
Las preparaciones a base de aceite están en la forma de emulsiones, que se hacen homogéneas por sonicación repetida. En el lomo de cada animal (rasurado con rasuradora electrónica 72 horas antes del experimento) se aplicaron 240 µl de la solución de K-252a y 235 µl de la solución de K-252a-PEG (que corresponde a una dosis de 3 mg/kg con base en un peso corporal promedio de los ratones de 23-24 g) . La emulsión aplicada se masajeó suavemente en el lomo de los ratones para favorecer la absorción. Posteriormente a los ratones se les sacrificó respectivamente después de 30 ó 60 minutos bajo anestesia de éter y se recolectó la sangre de la aorta ventral con la jeringa de insulina (aproximadamente 1 ml/animal) . La sangre se transfirió posteriormente a un aparato Eppendorf que contenía 50 µl de una solución acuosa de EDTA al 5%. Entonces las muestras sanguíneas se centrifugaron a 2000 g durante 5 minutos en un centrífuga refrigerada (4°C) , se purificaron por extracción de fase sólida (SPE) y después se analizaron a través del análisis cuantitativo de HPLC (análisis RT-HPLC con columna C18 Xterra, agua eluyente/ACN) . Las muestras de plasma de los ratones tratados con K-252a mostraron una cierta concentración en plasma para ambos periodos de contacto. Los resultados se muestran en la figura 4a, a partir de la cual se puede lograr que la concentración de plasma de K-252a en los ratones del grupo 1, sacrificados después de 30 minutos, fuera de 23.33 ng/ml, mientras que la concentración de plasma promedio de K-252a en los ratones del grupo 2, sacrificados después de 60, fuera de 42.11 ng/ml. Esto muestra la aparición de una adsorción sistémica para la administración dérmica de K-252a. Por otro lado, las muestras plasmáticas de los ratones tratados con administración dérmica del conjugado pegilado K-252a-PEG(2K) no mostraron alguna concentración plasmática del compuesto activo incluso después de 60 minutos de periodo de contacto. De hecho, no fue posible revelar algún pico cromatográfico en las muestras plasmáticas de los ratones del grupo 3 incluso después del análisis MALDI-TOF. Aquí, no se observó absorción a través de la piel del conjugado K-252a-PEG(2K) después de la administración dérmica. Estos datos se confirmaron por estudios experimentales adicionales sobre un grupo más grande de animales probados, así como con la administración dérmica de diferentes cantidades de dosificación de los agentes activos . Ejemplo 2.2 Estudio farmacocinético (PK) en ratones: dosis simple dérmica y administraciones repetidas de CT327 versus K-252a El propósito de este experimento fue evaluar la cinética de adsorción de CT327 en comparación con K-252a después de la administración dérmica de los dos compuestos en ratones después de una administración simple así como la cinética comparativa de los dos compuestos de prueba después de administraciones dérmicas repetidas . Animales : ratones (machos Balb/c, 7-9 semanas de edad, Charles River Italia, peso corporal promedio de 22.2- 22.4 g) ; 5 grupos experimentales (control, administración simple y repetida de K-252a, administración simple y repetida de CT327) , 4 animales/grupo, agrupados aleatoriamente . Materiales : K-252a (lote Cefalon No. 04274Fla) , CT327 (Alchemy lote No. ALC577.02), sulfóxido de dimetilo (DMSO) Hibri-max* (Sigma lote No. 114K2370) , vaselina blanca F.U. (AFOM Medical lote No. A908006570) , Tween 20 (Sigma lote NO.092K0055) , H20 MilliQ, plasma Murino (ceta CD1, 0F1 lote No. 50-18/12/05, suministrado por Charles River Laboratories Italia SpA, Calco) , Acetonitrilo (Merck lote No. 1260430545), Metanol (VWR BDH lote No. 05Z4034) EDTA (Fluka lote No. 393230/1) . Dosis administrada : K-252a 5.075 mg/kg y CT327 25.27 mg/kg (con base en la pureza de 78.5%, es decir 32.19 mg/kg, dosificación equimolar respecto a K-252a) para la administración dérmica simple; K-252a 1.03 mg/kg y CT327 5.06 mg/kg (con base en la pureza de 78.5%, es decir 6.45 mg/kg, dosificación equimolar respecto a K-252a) para la administración dérmica repetida (una vez al día durante 5 días) . Administración de los artículos de prueba : Para la administración dérmica, aproximadamente 0.25 g de crema de vaselina se esparcieron en el cuello de cada ratón (rasurado el día anterior al inicio del experimento, evitando la abrasión de la piel) . Los animales control recibieron el vehículo solo al mismo volumen de dosis. Formulación de elemento de prueba : DMSO 1.1%/crema de vaselina blanca para la administración dérmica simple y DMSO 023%/crema de vaselina blanca para la administración dérmica repetida. Sacrificio de animales y recolección sanguínea : las muestras sanguíneas se recolectaron en los siguientes puntos de tiempo después del tratamiento: - Administración dérmica simple: 1, 3, 6, 9, 18, 24, 36, 48 y 72 horas después de la administración de K-252a ó CT327 - Administración dérmica repetida: 3 horas y 24 horas después de la última administración de K-252a y CT327, respectivamente. En cada tiempo de muestreo, se recolectaron muestras sanguíneas de aproximadamente 0.4 ml provenientes de la aorta ventral de cada animal, utilizando una jeringa de insulina, bajo anestesia profunda de éter y se transfirieron en tubos Eppendorf de polietileno que contenían 50 µl de solución acuosa de EDTA al 5% para prevenir la coagulación de la sangre . Las muestras sanguíneas se mantuvieron en hielo hasta la centrifugación a 1400 g durante 5 minutos en una centrífuga refrigerada (2-4°C) . Posteriormente se recuperaron de cada una de las muestras de plasma del tubo, se pusieron en tubo Eppendorf nuevos y se congelaron a -20°C, hasta el análisis del HPLC. La figura 4b muestra los resultados del estudio de administración de dosis simple. Se muestra la curva de concentración de plasma de K-252a después de la administración dérmica simple del K-252a, reportada como valores medios ± error (95% Cl, intervalo de confianza) (4 ratones para cada punto de tiempo, análisis con duplicado) .
Por el contrario, no se detectó perfil de concentración plasmático para la administración dérmica simple de CT327.
De hecho, el análisis de muestras plasmáticas de ratones que recibieron una administración dérmica simple de CT327 a dosificación equimolar en comparación a los ratones tratados con K-252, no reveló niveles del compuesto de prueba por arriba del límite de detección (70.6 nM) en cualquier punto de tiempo. Posteriormente se realizó la introducción en computadora de los datos de cada grupo experimental por el programa NCOMP versión 3.1 (P.B Laub et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 1996, 85(4): 393-395). Los valores para el área bajo la concentración plasmática con perfil de tiempo, T?/2, Tma?/ Cmax, etc. se calcularon con fórmulas convencionales descritas previamente (Gibaldi et al., Pharmacokinetics, 1982, Marcel Dekker, Inc., New York) . Estos parámetros de PK se estimaron durante la correspondencia de los datos de concentración en plasma de K-252a y CT327 que se enlistan en la siguiente tabla 1.
Tabla 1: Parámetros de farmacocinética estimada en plasma de K-252a y CT327 después de administración dérmica simple en ratones (10 µmol/kg) Abreviaturas : AUC0~ = área bajo la curva desde el tiempo cero hasta el infinito, T^ = vida media, Cma? = nivel plasmático máximo, Tmax = tiempo hasta el nivel plasmático máximo, ND = no detectado.
Los resultados de este estudio confirmaron que después de una administración dérmica simple K-252a resulta detectable en plasma al menos hasta 9 horas después de la administración (con una vida media de 63 minutos) , mientras que CT327 a una dosis equivalente a aquella de la dosificación de K-252a, resulta indetectable al nivel plasmático hasta por un periodo de contacto de 72 horas. La tabla 2 muestra los resultados del estudio de administración repetida dérmica. En particular, la tabla 2 muestra los resultados del análisis por HPLC de los niveles plasmáticos medios para la administración repetida de K-252a y CT327. Como se muestra, K-252a presenta una concentración plasmática detectable y cuantificable mientras que, en lo que respecta a CT327, no se reveló nivel detectable del compuesto de prueba en la sangre recolectada después de las administraciones repetidas . Tabla 2: concentraciones plasmáticas medias de K-252a y CT327 después de una administración dérmica repetida (QD por 5 días) a una dosificación de 1.03 mg/kg y 5.06 mg/kg respectivamente (aproximadamente 2 µmol/kg) Aquí, en este segundo estudio, se evaluó la absorción después de una administración dérmica repetida (una "vez al día durante 5 días consecutivos) a una menor dosificación (2 µmol/kg) . Incluso en este caso, ningún pico cromatográfico correspondiente a la molécula PEGilada CT327 es detectable en la muestra de plasma murino. Se eligió un punto de tiempo suficientemente prolongado para la recolección de la sangre (24 horas) con el fin de poner en evidencia una absorción muy lenta eventual. No obstante, los presentes datos permiten concluir que no ocurre absorción alguna a través de la piel después de la administración dérmica de K-252a-PEG(2K) . Respecto al compuesto K-252a por el contrario, el nivel plasmático resultante de K-252a después de 3 horas de la última administración dérmica, es de 110.2 nM, que incluso es ligeramente superior si se compara con la concentración encontrada a la misma dosificación y punto de tiempo para la administración dérmica simple (72.9 nM ± 32.5, como valor ± 95% Cl) . En conclusión, los resultados de los presentes estudios confirman la eficacia de la conjugación polimérica de K-252a al evitar la absorción sistémica de K-252a ya sea después de una administración dérmica simple a una dosis superior o después de un tratamiento tópico de 5 días a una dosificación inferior.
Ejemplo 3 Farmacología in vitro Ejemplo 3.1 Estudios in vi tro para caracterizar la actividad antiproliferativa de K-252a-PEG(2K) como inhibidor de Trka sobre queratinocitos humanos.
Se realizó un ensayo MTT metabólico como prueba de la vitalidad celular. El ensayo MTT se efectuó utilizando un protocolo muy conocido y validado, con ello los resultados se cuantificaron a través de una lectura espectrofotométrica, el número de células vivas es directamente proporcional a la cantidad del producto formazan formado como producto de reducción de MTT ( [3- (4 , 5-dimetiltiazol-2-il) -2 , 5-difeniltetrazoliobromuro] ) (Mosmann T. , Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays. J. Immunol . Methods. 16 Dic. 1983, 65(1-2): 55-63). En el presente estudio, se realizó el ensayo MTT sobre cultivos subconfluentes de queratinocitos sembrados en placas de 96 pozos para cultivo celular (8000 células/pozos) . Después de que las células se expusieron a la sustancia que se iba a analizar, las células se incubaron durante 4 horas a 37°C con MTT (0.05%) en medio de desarrollo de queratinocitos sin suero (KGM Clonetics Corp. San Diego, CA, EUA) . Después de la solubilización de las células con detergente, se detectó la formación del colorante formazan utilizando un espectrofotómetro para placa de múltiples pozos a 540 nm. Los resultados se proporcionan como unidad de densidad óptica (OD) . Se probó la actividad antiproliferativa del producto de conjugación K-252a-PEG (2K) con el ensayo MTT, para un tiempo de contacto de los queratinocitos aislados en los pozos con la solución del compuesto que se iba a probar, de 48 horas y 96 horas respectivamente y para concentraciones de K-252a-PEG (2K) de 5, 10, 50 y 100 nM. Todos los experimentos se efectuaron al menos tres ocasiones. El análisis estadístico de los resultados del ensayo MTT se realizó mediante el uso del modelo ANOVA (las barras de error representan el intervalo de confianza del 95%, ?=0.05). Las figuras 5a y 5b muestran el resultado del ensayo MTT con K-252a-PEG (2K) . Se muestra claramente que el K-252a-PEG presenta una acción inhibidora sobre los queratinocitos para concentraciones < a 10 nM después de 48 horas de periodo de contacto, mientras que el efecto inhibidor se muestra para cualquier concentración después de un periodo de contacto de 96 horas. Estos resultados muestran que la conjugación de K-252a con el polímero PEG no influye en la actividad antiproliferativa de la molécula activa K-252a (figuras 5a y 5b) .
De hecho, después de un periodo de contacto tanto de 48 horas como de 96 horas, se demostró una acción inhibidora sobre la proliferación de los queratinocitos. Aqui se efectuó un análisis adicional de ensayo MTT para probar, que la ausencia o el retraso de la absorción sistémica K-252a conjugado a PEG después de la administración tópica (como se muestra en el ejemplo 2) y la actividad inhibidora retrasada sobre la proliferación de los queratinocitos, presumiblemente podría ser el resultado de una entrada retrasada del compuesto K-252a-PEG (2K) conjugado hacia la célula de queratinocito, debido a la conjugación, por ejemplo pegilación. Por lo tanto, el ensayo MTT in vi tro se efectuó como se describe anteriormente, tanto con K-252a como con K-252a-PEG (2K) como compuesto que se iba a probar, para probar la actividad antiproliferativa de queratinocitos, en donde aunque los tiempos de contacto del compuesto activo con los queratinocitos en los pozos se habían reducido. La concentración de K-252a y K-252a-PEG (2K) fue de 25, 50 y 100 nM respectivamente. Los periodos de contacto fueron para cada concentración 1, 2 y 4 horas respectivamente. El conteo celular se efectuó después de 48 horas y después de 96 horas. Los resultados del ensayo MTT con K-252a-PEG (2K) se muestran en las figuras 6a y 6b. Después de 48 horas y de 96 horas, el efecto sobre la proliferación de queratinocitos del compuesto conjugado K-252a-PEG(2K) no pareció diferente estadísticamente al efecto obtenido con la muestra control (figura 6a y figura 6b) . Se condujo al mismo ensayo MTT con K-252a no conjugado, los resultados se muestran en la figura 7a (conteo celular después de 48 horas) y figura 7b (conteo celular después de 96 horas) . Estos resultados mostraron una acción antiproliferativa estadísticamente significativa de K-252a, para cualquier tiempo de contacto, a concentración = 200 nM y a un conteo celular después de 48 horas. Cuando se realiza el conteo celular después de 96 horas, se obtiene incluso una actividad antiproliferativa para cualquier concentración probada y cualquier tiempo de contacto. La figura 8 muestra una comparación de los datos de la actividad inhibidora de K-252a 100 nM y de K-252a-PEG(2K) respectivamente para el ensayo MTT descrito anteriormente con un tiempo de contacto de 4 horas y un conteo celular realizado después de 96 horas. Estos resultados revelan que, de manera contraria al compuesto K-252a no conjugado, un tiempo de contacto de 4 horas no es suficiente para K-252a-PEG(2K) para evolucionar su acción antiproliferativa para concentraciones = 100 nM (incluso cuando el conteo celular se aprovecha después de 96 horas) . Al comparar con el no conjugado, es decir K-252a no pegilado, para concentraciones inferiores de K-252a-PEG(2K) se requiere de un periodo de contacto más prolongado para obtener el efecto de inhibición deseado sobre la actividad proliferativa de queratinocitos. Para K-252a-PEG(2K) se mostró un retraso claro en su capacidad de entrar a la célula y por lo tanto un retraso para pasar la membrana celular, resultado de la pegilación de la molécula de K-252a. Esto parece confirmar además la hipótesis de que el compuesto K-252a y sus derivados aprovechan su actividad después de la acumulación intracelular del compuesto K-252a y sus derivados y la posterior liberación lenta de las moléculas activas incluso después de la eliminación del medio de cultivo.
Ejemplo 3.2 Evaluación in vi tro del perfil de inhibición de cinasa para K-252a y CT327 Es muy conocido en la literatura que K-252a es un potente inhibidor de varias cinasas. En el presente estudio, se evaluó la actividad inhibidora de K-252a contra tirosina-cinasas comunes seleccionadas y serina/treonina- cinasas. Se condujo un experimento similar para evaluar la actividad inhibidora de CT327. K-252a (Acros lote A020265401) se disolvió en DMSO para producir una solución de reserva 1 mM que después se diluyó con DMSO para obtener una solución 20 µM, después se diluyó con el amortiguador de ensayo para lograr una concentración de 0.8 µM. K-252a se probó a una concentración de 200 nM. La preparación de CT327 y los compuestos de referencia se condujo siguiendo un procedimiento similar. CT327 también se probó a una concentración de 200 nM. Como compuestos de referencia de la invención, se utilizaron inhibidores de la proteína cinasa muy conocidos en la técnica, tales como estaurosporina, 5-yodotubericidina, inhibidor II de NK y SB202190 (como se muestra en la tabla 3) .
Tabla 3 : Compuestos de referencia Se realizaron los estudios de inhibición de cinasa para K-252a y CT327 utilizando ensayos estándares para la cinasa respectiva.
Los resultados de la inhibición de tirosina-cinasa y la inhibición de serina/treonina-cinasa para K-252a, se muestran en las tablas 4 y 5 respectivamente.
Tabla 4: Inhibición de Tirosina-cinasa por K-252a cinasa HS ABL -14.2 86.2 Estaurosporina (1000) ARG 0.1 89.6 Estaurosporina (3000) TNK1 94.8 89.2 Estaurosporina (3) ALK 69.5 93.8 Estaurosporina (30) AXL 51.5 85.1 Estaurosporina (3000) MER 80.8 90.7 Estaurosporina (100) CSK 43.0 88.8 Estaurosporina (300) EGFR 16.4 91.4 Eslaurosporina (10000) HER2 7.7 65.6 Estaurospopna (10000) HER4 39.4 94.1 Estaurosporina (10000) EphA2 8.9 93.7 Estaurosporina (10000) EphB2 0.4 83.7 Estaurosporina (1000) EphB4 13.3 9Z7 Estaurosporina (10000) FAK 53.5 90.4 Estaurosporina (100) FGFR1 57.9 91.4 Estaurosporina (100) FGFR2 67.2 96.7 Estaurosporina (100) IGF1R 40.6 98.6 Estaurosporina (3000) INSR 38.0 93.3 Estaurosporina (1000) JAK1 83.1 82.8 Estaurosporina (30) JAK2 99.5 96.3 Estaurosporina (3) JAK3 100.4 97.8 Estaurosporina (3) TYK2 98.1 94.5 Eslaurosporina (3) MET 83.2 87.0 Estaurosporina (300) RON 5.2 81.6 Estaurosporina (10000) FLT3 95.8 94.0 Estaurosporina (3) CSFR 55.7 69.1 Estaurosporina (30) K1T 87.3 B.7 Eslaurosporina (10) PDGFRa 96.1 93.5 Estaurosporina (3) PDGFRß 98.1 3.7 Estaurosporina (0.3) RET 94.2 88.1 Estaurosporina (30) Continuación Tabla 4 Tabla 5: Inhibición Serina/treonina-cinasa por K252a Continuación Tabla 5 La actividad inhibidora de CT327 contra la tirosina-cinasa y serina/treonina-cinasa probadas se muestran en las tablas 6 y 7, respectivamente. El valor de lectura del control de reacción (con ATP) se estableció como un 0% de inhibición y el valor de lectura del antecedente (sin ATP) se estableció como un 100% de inhibición.
Tabla 6 : Inhibición de Tirosina-cinasa por CT327 Continuación Tabla 6 Tabla 7: Inhibición Serina/treonina-cinasa por CT327 Continuación Tabla 7 K-252a mostró a una concentración de 200 nM una actividad inhibidora muy fuerte mayor del 90% contra 16 de las cinasas probadas (TNK1, JAK2, JAK3 , TYK2, FLT3 , PDGFRa, PDGFRß, RET, TrkA, TrkB, TrkC, CHKl, CHK2 , JNK1, J K2 , AurA y MAP2K3) y una fuerte inhibición entre el 80% y el 90% contra otras 7 de las cinasas probadas (MER, JAK1, MET, KIT, BLK, FGR y CaMK2a) . Por el contrario, CT327 mostró, a una concentración equivalente en comparación con K-252a (200 n ) una fuerte actividad inhibidora (< 50%) solamente contra TrkA dentro de la tirosina-cinasas probadas. Se mostró una baja actividad por CT327 contra JAK2, JAK3 y FLT3 (entre 20% y 30%) , mientras que se observó una actividad muy baja contra TNK1, EphB4, PDGFRß, BLK, LCK, TrkB y TrkC (entre 10% y 20%) . No se observó del todo inhibición para la mayoría de las tirosina-cinasas probadas . Dentro de la serina/treonina-cinasas, CT327 mostró una actividad inhibidora fuerte (>40%) solamente contra MAP2K3, muy baja (14%) contra JNK3 (marcada con verde) y ninguna actividad inhibidora del todo contra las otras serina/treonina-cinasas probadas. La figura 9 reporta la comparación de la selectividad de CT327 versus K-252a. Los resultados muestran claramente un mejoramiento dramático en la selectividad de inhibición de cinasa de CT327 versus K-252a. En particular, los resultados demuestran una selectividad incrementada en la actividad de cinasa de CT327 con respecto a TrkA en el grupo de la tirosina-cinasa y con respecto a MAP2K3 en el grupo de la serina/treonina-cinasas. Estos datos sugieren que la selectividad de inhibición de CT327 está dirigida en particular a los objetivos principales TrKA y MAP2K3, con la disminución potencial consecuente de los efectos biológicos indeseables, como consecuencia de la actividad de inhibición contra otras cinasas. Aquí, se inhiben las otras cinasas menores, probablemente porque es la molécula menos tóxica. En resumen, los resultados de los estudios descritos en los ejemplos 2 y 3 hacen de los conjugados poliméricos de K-252a de la fórmula (I) , y en particular de K-252a-PEG(2K) , candidatos promisorios como agentes activos en un medicamento, debido a la actividad biológica intacta y al riesgo reducido concomitante de los efectos adversos.
Ejemplo 3.3 Evaluación in vi tro del IC50 contra TrKA para K-252a y CT327 El propósito de este estudio fue medir los valores IC50 para CT327 y K-252a contra TrkA-cinasa. Las soluciones de compuesto de pruebas se diluyeron con DMSO para lograr concentración menor a 100 veces y después se diluyeron adicionalmente 25 veces con el amortiguador de ensayo (Tris-HCl 15 mM, pH 7.5, Tween-20 al 0.01% DTT 2 mM) para obtener las soluciones de prueba finales. CT327 y K- 252a se probaron a las siguientes concentraciones: 1000 nM, 300 nM, 100 nM, 30 nM, 10 nM, 3 nM, 1 nM, 0.3 nM, 0.1 nM, 0.03 nM. La preparación del compuesto de referencia (Estaurosporinas) se condujo con un método similar a uno utilizado para la preparación de los compuestos de prueba.
La Estaurosporina se probó a las siguientes concentraciones: 100 nM, 30 nM, 10 nM, 3 nM, 1 nM, 0.3 nM, 0.1 nM, 0.03 nM, 0.01 nM y 0.003 nM. El procedimiento de ensayo es el siguiente: ELISA Solución compuesto Solución ATP/Sustrato Solución cinasa (10 Til) (10 µl) (20 µl) Incubar durante 1 hora a t---------peratura ambiente Lavar 4 veces -. Agregar amortiguador bloqueo (200 µl) Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente Desechar amortiguador bloqueo < Agregar anticuerpo detección (100 µl/cada uno) Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente Lavar 4 veces (100 µl) Incubar durante S minutos a temperatura ambiente (100 µl) Lectura (00450) El valor de lectura del control de reacción (con ATP) se estableció como una inhibición del 0%, y el valor de lectura del antecedente (sin ATP) se estableció como una inhibición del 100%, después se calculó la inhibición porcentual de cada solución de prueba. Se calculó el valor IC50 a partir de las curvas de concentración versus % de inhibición mediante el ajuste a una curva logística de cuatro parámetros. Los valores IC50 de K-252a y CT327 contra TrkA fueron 0.50 nM y 186 nM, respectivamente. El valor IC50 correspondiente del compuesto de referencia (Estaurosporina) contra TrkA puede ser 0.12 nM. Estos resultados se resumen en la figura 10.
Ejemplo 4 Estudio de toxicidad de dosis simple aguda en ratones para CT327 versus K-252a El propósito de este estudio fue realizar un estudio de toxicidad no clínico, con el fin de evaluar la toxicidad de CT327 cuando se administra como una dosis simple en ratones mediante la ruta intraperitoneal y mediante administración oral, en comparación con su precursor K-252a. Un total de 70 ratones (Balb/c, 35 machos y 35 hembras) se dividieron en 14 subgrupos (7 grupos compuestos por 5 machos y 7 grupos compuestos por 5 hembras) para recibir los siguientes niveles de dosis de los elementos de prueba: - K-252a: 30, 45, 60, 75, y 90 mg/Kg - CT327: 316.68 y 475.02 mg/Kg (correspondiente a 60 y 90 mg de K-252a, respectivamente) .
Las observaciones, que incluyen signos clínicos y cambios en el comportamiento, se efectuaron cada 30 minutos en las primeras 6 horas después de la administración, y dos veces al día durante los siguientes 7 días. Entre los grupos de machos tratados con K-252a, solamente aquellos a los que se les administró la dosis más baja (30 mg/kg) sobrevivieron, mientras que todos los otros se encontraron muertos dentro de las 22 horas después de la dosificación. El LD50 resultante fue de 37.74 mg/kg. También, los ratones hembras a los que se les administró la dosis más baja de K-252a sobrevivieron y, como a los machos que se les dio la misma dosis, mostraron sedación muy leve/leve que desapareció en el lapso de 8-10 horas. Una hembra sobrevivió a las cinco administraciones de 45 mg/kg y una entre aquellas que recibieron 60 mg/kg. Dosis superiores de K-252a fueron letales para todos los ratones hembras. El LD50 para las hembras fue de 41.44 mg/kg. El LD50 promedio para machos y hembras juntos por lo tanto fue de 39.02 mg/kg. Dosis de CT327 igual a 316.68 y 475.02 mg/kg, que corresponden a 60 y 90 mg/kg de K-252a, respectivamente, no indujeron algún signo de comportamiento y/o clínico de toxicidad en alguno de los grupos tratados, ya sea dentro de las horas inmediatamente después de la dosificación o durante el 7 día del periodo de observación.
Se obtuvieron resultados similares después de la administración oral. En particular, se encontró LD50 para K-252al de 78 mg/kg, mientras que no se observó mortalidad hasta la dosis máxima de 790 mg/kg de CT327. Ejemplo 5 Se realizó un estudio con el objeto de determinar cuantitativamente un panel de 24 citocinas en el plasma de ratones a diferentes puntos de tiempo, después endotoxemia inducida por LPS y comparar los perfiles obtenidos con aquellos de ratones endotoxémicos previamente tratados con CT327.
Protocolo del Estudio: Los animales se dividieron en dos grupos experimentales (55 ratones/grupos) que se trataron de acuerdo a este esquema: Inducción de Endotoxemia: en el tiempo 0, ambos grupos recibieron una dosis de LPS que corresponde a 4 mg/kg, ip.
Tratamientos con CT327: el grupo experimental "tratado" recibió una dosis simple de CT327 que corresponde a 105.56 mg/kg, ip. Esta dosis se administró 15 minutos antes de la inducción de endotoxemia con LPS (tiempo 0) . Al mismo tiempo, el grupo "control" recibió un volumen equivalente de solución de vehículo. Cada grupo experimental se dividió en 11 subgrupos con 5 ratones/subgrupo. Cada subgrupo se sacrificó en diferentes puntos de tiempo y se recolectaron muestras sanguíneas . Los puntos de tiempo para la recolección de muestras sanguíneas fueron: Tiempo: tiempo 0 (basal) ; antes de tratamiento con LPS Tiempo: + 30 minutos; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 1 hora; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 2 horas; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 3 horas; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 6 horas; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 12 horas; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 18 horas; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 24 horas; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 48 horas; después de tratamiento con LPS Tiempo: + 72 horas; después de tratamiento con LPS Se recolectaron muestras sanguíneas en tubos de citrato de sodio (100 µl de citrato de sodio 0.1 M/900 µl de sangre) y se centrifugaron a 1000 g a 4°C durante 10 minutos. Se recolectaron muestra de plasma y se congelaron 50 µl/muestra a -80°C hasta la prueba para el perfil de múltiples citocinas. Las muestras se analizaron por duplicado a través del Sistema Bio-Plex (Bio-Rad) utilizando el panel 23-plex en el Departamento de Genética, Biología y Bioquímica, Universidad de Torino, conducido por el Profesor Silengo. Se determinaron los niveles de plasma de las siguientes citocinas: IL-Ia, IL-Ib, IL-2, IL-3, IL-4,IL-5, IL-6, IL-10, IL-12(p40), IL-12(p70), IL-17, G-CSFi GM-CSF, IFN-?, KC, MIP-1-a, RANTES, TNF-a, IL-9, IL-13, eotaxina, MCP-1, MIP-1-a Los resultados más significativos se muestran en las figuras 11 y 12a a 12e. En particular, la figura 11 muestra la reducción significativa de la secreción de TNF- a en los niveles plasmáticos de ratones pretratados con el compuesto CT327 de acuerdo a la invención. Las figuras 12a-12e muestran más bien los resultados del experimento paralelo efectuado con K-252a. Una reducción significativa no solamente de TNF-a, sino también de IFN-?, MCP-1, MlP-a y RANTES.
Ejemplo 6 Síntesis de K-252a-PEG (1100) (compuesto CT336) 1) síntesis de m-PEGnoo-0-CH2-COOEt En matraz de reacción adecuado, bajo una atmósfera inerte, se agregó t-BuOK (11.2 g, 100.00 mmol) a THF anhidro (70.0 ml) a temperatura ambiente con agitación. Cuando se completó la disolución, se agregó MeO- PEGnoo-OH (22.0 g, 20.0 mmol) y después se agregó BrCH2C02Et (16.7 g, 100.0 mmol) por goteo durante 30 minutos y el matraz de reacción se enfrió con un baño de agua. Después de 2 horas, el solvente se eliminó al vacío a 40°C. El residuo obtenido (aproximadamente 65 g) se disolvió en H20 (lOOml) y la solución se extrajo rápidamente con CH2CI2 (3 x 100 ml) . La capa orgánica se anhidrificó (Na2S0) y el solvente se eliminó al vacío a 40°C. 2) Síntesis de m-PEG?10o-OCH2-COOH El m-PEG-OCH2-COOEt crudo (aproximadamente 20 g) obtenido como se describe anteriormente, se disolvió en NaOH acuoso (1 N, 200 ml) y se calentó a 60°C durante 3 horas con agitación. Posteriormente la mezcla de reacción se acidificó a pH 3 utilizando HCl acuoso (1 N, aproximadamente 165 ml) y después se dividió con CH2CI2 (5 x 100 ml) . Los extractos orgánicos recolectados se anhidrificaron (Na2S0) y el solvente se eliminó al vacío a 40°C. El aceite viscoso resultante (aproximadamente 18 g) se goteó en Et20 anhidro frío (75 ml) , y el precipitado blanco se filtró, se recolectó y el solvente residual se evaporó al vacío a temperatura ambiente (15 g) . 3) Síntesis de m-PEGnoo-0-CH2-NCO En un matraz de reacción adecuado, m-PEGnoo-0-CH2-COOH (10.0 g, 9.1 mmol) se disolvió en tolueno (80 ml) con agitación. Aproximadamente 15 ml de solvente se destilaron con el fin de secar la mezcla por destilación azeotrópica.
El residuo se enfrió a temperatura ambiente y se agregaron sucesivamente Et3N anhidro (1.1 g, 10.9 mmol) y azida de difenil-fosforilo [ (C6H50) 2P(0)N3] (2.7 g, 10.0 mmol) . Después de 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla se calentó a reflujo durante 2 horas, después el solvente se evaporó al vacío a 60°C. El aceite viscoso resultante (aproximadamente 9 g) se goteó en Et20 anhidro frío (200 ml) , el precipitado blanco se filtró, se recolectó y el solvente residual se eliminó al vacío a temperatura ambiente (6.0 g) . 4) Síntesis de un conjugado de K-252a-PEGnoo Una solución de 1 mg/ml de K-252a en DCM se preparó disolviendo 1.5 mg de K-252a (que corresponde a 3.2 µmol) en 1.5 ml de CH2CI2 con agitación suave. La solución se agregó en un matraz de vidrio que contenía 38.06 mg (32.5 µmol) de m-PEGnoo-0-CH2-NCO y 100 µl de una solución de trietilamina 32.8 mg/ml en CH2CI2 como catalizador básico. Tanto el polímero como el catalizador se utilizaron en una proporción molar de 10 veces en comparación con K-252a. La mezcla se mantuvo a temperatura ambiente bajo agitación magnética (velocidad de giro de aproximadamente 500 rpm) y flujo de nitrógeno suave toda la

Claims (35)

REIVINDICACIONES
1. Conjugado polimérico un compuesto de indolocarbazol de la fórmula general (I) : F?pnula (I) en donde Ra y Rb son independientemente un hidrógeno o un residuo orgánico seleccionado entre el grupo que consiste de alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi o alcoxicarbonilo; o Ra y Rb conjuntamente forman una estructura cíclica de 5-7 miembros, preferentemente de 5 miembros, fusionada directamente a la estructura nuclear de indolo [2, 3-a] carbazol, que contiene 0, 1 ó 2 heteroátomos, preferentemente átomos de nitrógeno, y contiene opcionalmente un grupo carbonilo y la estructura cíclica no está sustituida o está sustituida, preferentemente por al menos un grupo sustituyente seleccionado entre un grupo carbonilo o Wi ó 2 y en donde si un miembro del heteroátomo de la estructura cíclica es nitrógeno, el nitrógeno está sustituido por el residuo R3; y en donde Rc y Rd son (a) independientemente hidrógeno o un residuo orgánico seleccionado entre el grupo que consiste de alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi o alcoxicarbonilo; o uno de Rc y Rd se selecciona entre hidrógeno, alquilo e hidroxi inferior sustituido o sin sustituir, mientras que el otro de Rc y Rd es una porción cíclica de 3-7 miembros, preferentemente una porción de carbohidrato cíclico, en donde la porción cíclica está sin sustituir o sustituida, preferentemente sustituida por al menos un grupo funcional adecuado para la conjugación de una porción polimérica, más preferentemente sustituida en al menos una, preferentemente 2 y hasta 3 y hasta todas las posiciones del ciclo por hidroxi, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino inferior, alquilaminocarbonilo inferior o grupo oxima; o (b) Rc y Rd conjuntamente forman una porción cíclica de 3-7 miembros, preferentemente una porción de carbohidrato cíclico, en donde la porción cíclica está sin sustituir o sustituida, preferentemente sustituida por al menos un grupo funcional adecuado para la conjugación de una porción polimérica, más preferentemente sustituida en al menos una, preferentemente dos o tres, y hasta todas las posiciones del ciclo por hidroxi, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino inferior, alquilaminocarbonilo inferior y/o grupo oxima, y en donde R1 y R2 son los mismos o un residuo diferente y cada uno se selecciona independientemente entre el grupo que consiste de: (a) hidrógeno, halógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, hidroxi, alcoxi inferior, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, acilo, nitro, carbamoílo, alquilaminocarbonilo inferior, -NR5R6, en donde cada uno de R5 y R6 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, aralquilo sustituido o sin sustituir, alquilaminocarbonilo inferior sustituido o sin sustituir, arilaminocarbonilo inferior sustituido o sin sustituir, alcoxicarbonilo, carbamoílo, acilo o R5 y R6 están combinados con un átomo de nitrógeno de un grupo heterocíclico, (b) -CO(CH2)jR4, en donde j es 1 a 6, y R4 se selecciona entre el grupo que consiste de (i) hidrógeno, halógeno, -N3, (ii) NR5RS, en donde R5 y R6 son como se definen anteriormente, (iii) -SR7, en donde R7 se selecciona entre el grupo que consiste de hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, aralquilo sustituido o sin sustituir, - (CH2)aC02R10 (en donde a es 1 ó 2, y en donde R10 se selecciona entre el grupo que consiste de hidrógeno y alquilo inferior sustituido o sin sustituir) , y - (CH2)aC02NR5R6 (iv) -OR8, -OCOR8, en donde R8 se selecciona entre hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir c) -CH(OH) (CH2)jR4 en donde j y R4 son como se definen anteriormente; d) - (CH^dCHR^COsR12 ó - (CH2) ¿iCHR^CO R^6, en donde d es O a 5, R11 es hidrógeno, -CONR5R6, ó -C02R13, en donde R13 es hidrógeno o un alquilo inferior sustituido o sin sustituir, y R12 es hidrógeno o un alquilo inferior sustituido o sin sustituir; e) -(CH2)kR14 en donde k es 2 a 6 y R14 es halógeno, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, -COOR15, -OR15, (en donde R15 es hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir o acilo) , -SR7 (en donde R7 es como se define anteriormente) , -CONR5R6, -NR5R6 (en donde R5 y R6 son como se definen anteriormente) o -N3; f) -CH=CH(CH2)mR16, en donde m es 0 a 4, y R16 es hidrógeno, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo inferior sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, -COOR15, -OR15 (en donde R15 es como se define anteriormente) -CONR5R6 ó -NR5Re (en donde R5 y R6 son como se definen anteriormente) ; g) -CH=C(C02R12)2í en donde R12 es como se define anteriormente,- h) -C=C (CH2)nR16, en donde n es 0 a 4 y R1S es como se define anteriormente; (i) -CH2OR22, en donde R22 es tri-alquil-sililo inferior en donde los tres grupos alquilo inferior son los mismos o diferentes o en donde R22 tiene el mismo significado de R8, (j) -CH(SR23)2 y -CH2-SR7 en donde R23 es alquilo inferior, alquenilo inferior o alquinilo inferior y en donde R7 es como se define anteriormente; y R3 es hidrógeno, halógeno, acilo, carbamoílo, alquilo inferior sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo inferior sustituido o sin sustituir o amino; y 1 y 2 son independientemente hidrógeno, hidroxi ó 1 y 2 conjuntamente representan oxígeno; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, caracterizado porque el compuesto de la fórmula (I) tiene al menos un grupo funcional al cual está conjugada una porción polimérica.
2. Conjugado polimérico según la reivindicación 1, en donde el compuesto de indolocarbazol de la fórmula (I) es un compuesto de la fórmula general (II) : Fórmula (11)
3. Conjugado polimérico representado por la siguiente fórmula (III) : Fórmula (III) en donde Ri, R2, R3 y i y 2 son como se definen en la reivindicación 1; y en donde X representa -L1-X' e Y representa -L2-Y' en donde al menos uno X' e Y' es un polímero, ya sea lineal o ramificado, que está enlazado por L1 y/o L2 al anillo de tetrahidrofurano del compuesto de la fórmula (III) ; L1 y/o L2 son un enlace químico covalente o un grupo enlazador; cuando Y' es un polímero, y X' no es un polímero, L1 es un enlace químico covalente y X' se selecciona entre el grupo que consiste de (a) hidrógeno, hidroxialquilo inferior, acilo, carboxi, alcoxicarbonilo inferior, (b) -CONR17aR17b, en donde cada uno de R17a y R17b se selecciona independientemente entre (i) hidrógeno, alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, (ii) -CH2R18; en donde R18 es hidroxi, o (iii) -NR19R20, en donde cada uno de R19 ó R20 se selecciona independientemente entre hidrógeno, alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior o R19 ó R20 son independientemente el residuo de un a-aminoácido en donde el grupo hidroxi del grupo carboxilo está excluido, o R19 ó R20 están combinados con un átomo de nitrógeno para formar un grupo heterocíclico; y (c) -CH=N-R21, en donde R21 es hidroxi, alcoxi inferior, amino, guanidino, o imidazolilamino; cuando X' es polímero, e Y' no es un polímero, L2 es un enlace químico covalente e Y' se selecciona entre hidroxi, alcoxi inferior, aralquiloxi, o aciloxi; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el polímero es un polímero seleccionado entre polialquilenglicol, óxido de polialquileno, ácido poliacrílico, poliacrilato, poliacrilamida o derivados N-alquilo de los mismos, ácido polimetacrílico, polimetacrilato, ácido polietilacrílico, polietilacrilato, polivinilpirrolidona, alcohol polivinílico, ácido poliglicólico, ácido poliláctico, ácido poli (láctico-co-glicólico) , dextrano, quitosán o poliaminoácido .
5. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el polímero es un polímero seleccionado entre polietilenglicol (PEG) o metoxi-polietilenglicol (m-PEG) .
6. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el polímero es un polímero es un polímero que tiene un peso molecular entre 100 y 100,000 Da, preferentemente entre 200 y 50,000 Da.
7. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 6, en donde el polímero es PEG o mPEG con un peso molecular promedio de 2,000 Da ó 5,000 Da.
8. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 5 a 6, en donde el polímero es PEG o mPEG con un peso molecular promedio de 550 Da ó 1,100 Da.
9. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8 , en donde el enlace químico covalente entre el polímero y el compuesto de las fórmulas (I) ó (II) ó en donde L1 y/o L2 de la fórmula (III) se selecciona entre un enlace carbamato, un éter, un éster, un carbono, una amida y/o una amina.
10. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, en donde Rl t R2, R3/ Wi, y 2 son hidrógeno, Y' es un polímero y X' es metoxicarbonilo o carboxilo.
11. Conjugado polimérico según la reivindicación 10, en donde L2 es un enlace éter o carbamato.
12. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, en donde Ri, R2, R3, Wi# y w2 son hidrógeno, Y' es un polímero y X' es hidroxi.
13. Conjugado polimérico según la reivindicación 12, en donde L1 es un enlace amina o amida.
14. Conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, para utilizarse como un agente activo en un medicamento.
15. Conjugado polimérico según la reivindicación 14, para utilizarse como un agente activo en un medicamento tópico.
16. Conjugado polimérico según la reivindicación 14, para utilizarse como un agente activo en un medicamento para tratamiento sistémico.
17. Composición farmacéutica que comprende al menos un conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, opcionalmente junto con portadores, adyuvantes, diluyentes y/o aditivos farmacéuticamente aceptables.
18. Composición farmacéutica según la reivindicación 17, para aplicación de diagnóstico.
19. Composición farmacéutica según la reivindicación 17, para aplicación terapéutica.
20. Uso de un conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 , para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de patologías asociadas con HMGBl.
21. Uso según la reivindicación 20, en donde las patologías asociadas con HMGBl son estenosis, restenosis, aterosclerosis, artritis reumatoide, enfermedades autoinmunitarias, tumores, enfermedades infecciosas, sepsis, lesión pulmonar inflamatoria aguda, lupus eritematoso, enfermedades neurodegenerativas, enfermedades del sistema nervioso central y periférico y esclerosis múltiple.
22. Uso según la reivindicación 21, en donde la patología asociada con HMGBl es estenosis o restenosis.
23. Uso según las reivindicaciones 20 a 22, en donde el conjugado polimérico está inmovilizado inversamente sobre la superficie de un dispositivo médico.
24. Uso de un conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 , para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de trastornos neurológicos, neuropatías y trastornos neurodegenerativos del sistema nervioso central periférico.
25. Uso de un conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de patologías dérmicas .
26. Uso según la reivindicación 25, en donde las patologías dérmicas están caracterizadas por hiperproliferación de los queratinocitos.
27. Uso según la reivindicación 25 ó reivindicación 26, en donde las patologías dérmicas son psoriasis, dermatitis atópica, eczema crónico, acné, pitiriasis rubra pilaris, queloides, cicatrices hipertróficas y tumores de la piel.
28. Uso según la reivindicación 27, en donde la patología dérmica es psoriasis.
29. Uso de un conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 , para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de dolor e hiperalgesia relacionados con NGF.
30. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 25 a 29, en donde el medicamento se prepara para la administración tópica.
31. Uso según la reivindicación 30, en donde la administración se efectúa en forma de liposomas.
32. Uso de un conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, para la fabricación de un medicamento para prevención, alivio y/o tratamiento de enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunitarias, síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, lesión por reperfusión después de trasplante de órganos, afecciones cardiovasculares, enfermedades obstétricas y ginecológicas, enfermedades infecciosas, enfermedades alérgicas y atópicas, patologías de tumor líquido y sólido, enfermedades por rechazo de trasplante, enfermedades congénitas, enfermedades dermatológicas, enfermedades neurológicas, caquexia, enfermedades renales, condiciones de intoxicación iatrogénicas, enfermedades metabólicas e idiopáticas, y enfermedades oftalmológicas.
33. Uso de un conjugado polimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 , para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de la enfermedad de Behcet, síndrome de Sjógren, vasculits, uveítis, retinopatías.
34. Uso según las reivindicaciones 29, 32, ó 33, en donde el medicamento es para la administración sistémica.
35. Uso de K-252a para la fabricación de un medicamento para la prevención, alivio y/o tratamiento de la enfermedad de Behcet. RESUMEN La presente invención se refiere a nuevos conjugados poliméricos de K-252a y a sus derivados y a su uso para la preparación de una composición farmacéutica útil para la prevención, alivio y tratamiento de patologías asociadas con cinasa. En particular, la presente invención se refiere a la prevención, alivio y tratamiento de patologías asociadas con HMGB-1. En un aspecto particular, la invención se refiere al uso de los nuevos conjugados poliméricos de K-252a y sus derivados en la preparación de una composición farmacéutica útil para la prevención, alivio y tratamiento de trastornos neurológicos, neuropatías y trastornos neurodegenerativos del sistema nervioso central y periférico. En un aspecto preferido adicional, la invención se refiere al uso de los conjugados poliméricos en la preparación de una composición farmacéutica útil para la prevención, alivio y tratamiento de patologías dérmicas, en particular patologías dérmicas asociadas con una proliferación excesiva de queratinocitos, en particular psoriasis. En un aspecto adicional, la invención se refiere al uso de los conjugados poliméricos en la prevención, alivio y tratamiento de dolor relacionado con NGF. Más específicamente, la presente invención se refiere a un conjugado polimérico de K-252a y sus derivados, en donde el polímero es polietilenglicol o metoxi-polietilenglicol de la fórmula (I) .
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