MX2007015822A - Plantas que tienen rendimiento incrementado y un metodo para efectuar las mismas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se relaciona a un metodo para incrementar el rendimiento de las plantas al modular la expresion en una planta de un acido nucleico que codifica un polipeptido que tiene dos dominios de WRKY o un homologo de tal polipeptido. Tal metodo comprende introducir en una planta un acido nucleico de dos dominios de WRKY o variante del mismo. La invencion tambien se relaciona a plantas transgenicas que tienen introducidas en las mismas un acido nucleico de dos dominios de WRKY o variante del mismo, cuyas plantas tienen rendimiento incrementado con relacion a plantas control. La presente invencion se relaciona tambien a construcciones utiles en los metodos de la invencion. La invencion se relaciona adicionalmente a secuencias de acido nucleico especificas que codifican las proteinas antes mencionadas que tienen la actividad para mejorar el crecimiento de plantas antes mencionadas, construcciones de acido nucleico, vectores y plantas que contienen tales secuencias de acido nucleico.

Description

PLANTAS QUE TIENEN RENDIMIENTO INCREMENTADO Y UH MÉTODO PARA EFECTUAR LAS MISMAS La presente invención se relaciona en general al campo de la biología molecular y tiene que ver con un método para incrementar el rendimiento de plantas con relación a plantas control. Más específicamente, la presente invención tiene que ver con un método para incrementar el rendimiento de plantas que comprende modular la expresión en una planta de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo de tal polipéptido. La presente invención también se relaciona a plantas que tienen expresión modulada de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo de tal polipéptido, cuyas plantas han incrementado el rendimiento con relación a plantas control. La invención también proporciona construcciones útiles en los métodos de la invención. La invención se relaciona adicionalmente a secuencias de ácido nucleico especificas que codifica para las proteínas antes mencionadas que tienen la actividad que mejora el crecimiento de plantas antes mencionadas, construcciones de ácido nucleico, vectores y plantas que contienen tales secuencias de ácido nucleico. La población mundial cada vez mayor y el abastecimiento decreciente de tierra de cultivo para la búsqueda de combustibles agrícolas realizan una investigación para mejorar la eficiencia de la agricultura. Medios convencionales de cultivo y mejoras hortícolas utilizan técnicas de reproducción selectiva para identificar plantas que tienen caracteristicas deseables. Sin embargo, tales técnicas de reproducción selectivas tienen varias desventajas, es decir que estas técnicas normalmente requieren mucha mano de obra y resultan en plantas que a menudo contienen componentes genéticos heterogéneos que pueden no siempre resultar en el rasgo deseable que se transmite de las plantas progenitoras. Avances en biología molecular han permitido a la humanidad modificar el material genético de animales y plantas. La ingeniería genética de las plantas implica el aislamiento y la manipulación de material genético (normalmente en la forma de ADN o ARN) y la introducción subsecuente de ese material genético en la planta. Tal tecnología tiene la capacidad para presentar cultivos o plantas que tienen varios rasgos económico, agronómico u hortícolas mejorados. Un rasgo de interés económico particular es el rendimiento. El rendimiento se define normalmente como la producción medible del valor económico, relacionada necesariamente a un cultivo especifico, área y/o periodo de tiempo. Esto puede definirse en términos de cantidad y/o calidad. El rendimiento es dependiente normalmente de varios factores, por ejemplo, el número y el tamaño de los órganos, arquitectura de la planta (por ejemplo, el número de ramas), producción de semillas y más. El desarrollo de raices, incorporación de nutrientes y tolerancia a la tensión pueden ser también factores importantes para determinar el rendimiento. Optimizar uno de los factores antes mencionados puede por lo tanto contribuir a incrementar el rendimiento del cultivo. La biomasa de la planta es el rendimiento para cultivos forrajeros como alfalfa, maiz ensilado y heno. Muchos sustitutos han sido utilizados para rendimiento en cultivos forrajeros. Lo más importante entre éstos son la estimación del tamaño de la planta. El tamaño de la planta puede medirse de muchas formas, dependiendo de la especie y la etapa de desarrollo, pero incluye el peso seco total de la planta, el peso seco molido anterior, el peso fresco molido anterior, el área de la hoja, el volumen del tallo, la altura de la planta, el diámetro del florón, la longitud de la hoja, la longitud de la raiz, la masa de la raiz, el número de retoños y el número de hojas. Muchas especies mantienen una relación conservadora entre el tamaño de diferentes partes de la planta en una etapa de desarrollo dada. Estas relaciones alométricas se utilizan para extrapolar desde una de estas mediciones de tamaño a otra (por ejemplo, Tittonell et al 2005 Agrie Ecosy & Environ 105:213). El tamaño de la planta en cualquier etapa de desarrollo temprana se correlacionará normalmente con el tamaño subsecuente de la planta en desarrollo. Una planta más grande con un área de hojas mayor puede absorber normalmente más luz y dióxido de carbono que una planta más pequeña y por lo tanto ganará probablemente un mayor peso durante el mismo periodo (Fasoula íi Tollenaar 2005 Maydica 50:39). Esto es además de la continuación potencial de la ventaja microambiental o genética que la planta tuvo para conseguir el tamaño más grande inicialmente. Existe un fuerte componente genético para el tamaño de la planta y la velocidad de crecimiento (por ejemplo, ter Steege et al 2005 Plant Physiology 139:1078), y de esta manera para un rango del tamaño de planta de diversos genotipos bajo una condición ambiental que probablemente se correlaciona con el tamaño bajo otro (Hittlamani et al 2003 Theoretical Applied Genetics 107:679). De esta manera, el ambiente estándar se utiliza como un sustituto para ambientes diversos y dinámicos encontrados en diferentes ubicaciones y tiempos por cultivos en el campo. El Índice de cosecha, la relación del rendimiento de semillas al peso seco molido anterior, es relativamente estable bajo muchas condiciones ambientales y de esta manera una fuerte correlación entre el tamaño de la planta y el rendimiento del grano con frecuencia pueden obtenerse (por ejemplo, Rebetzke et al 2002 Crop Science 42:739). Estos procesos se enlazan intrínsecamente debido a que la mayoria de biomasa del grano es dependiente de la productividad fotosintético actual o almacenada por las hojas y el tallo de la planta (Gardener et al 1985 Physiology of Crop Plant. Iowa State University Press, ppß8-73) . Por lo tanto, la selección del tamaño de la planta, incluso en etapas tempranas de desarrollo, se ha utilizado como un indicador para rendimiento potencial futuro (por ejemplo, Tittonell et al 2005 Agrie Ecosys & Environ 105: 213) . Cuando se prueba el impacto de diferencias genéticas en la tolerancia a la tensión, la capacidad para estandarizar propiedades de suelo, temperatura, agua y capacidad de nutrientes e intensidad de luz es una ventaja intrínseca del invernadero o de los ambientes de la cámara de crecimiento de la planta comparados al campo. Sin embargo, limitaciones artificiales en el rendimiento debido a pobre polinización se deben a la ausencia de aire o insectos, o insuficiente espacio para el crecimiento de raices maduras o dosel, pueden restringir el uso de estos ambientes controlados para probar las diferencias de rendimiento. Por lo tanto, las mediciones del tamaño de la planta en el desarrollo temprano, bajo condiciones estandarizadas en una cámara de crecimiento o invernadero, son prácticas estándares para proporcionar indicación de ventajas de rendimiento genético potenciales. La capacidad para incrementar el rendimiento de las plantas tendría muchas aplicaciones en áreas tales como agricultura, incluyendo en la producción de plantas ornamentales, arboricultura, horticultura y silvicultura. El rendimiento incrementado puede también encontrar uso en la producción de algas para uso en bio-reactores (para la producción biotecnológica de sustancias tales como farmacéuticos, anticuerpos o vacunas, o para la bio-conversión de desecho orgánico) y otras áreas. Los polipéptidos del factor de transcripción se definen usualmente como proteinas que muestran afinidad de enlace de ADN específico de secuencia y que son capaces de activar y/o reprimir la transcripción. Las proteínas WRKY son una familia grande de factores de transcripción específicos de plantas, que funcionan ya sea solos o como una parte de complejos de ADN de proteína multimérica. La mayoría de estas proteínas están implicadas en la defensa contra ataque de un amplio rango de patógenos (Eulgem et al., EMBO J., 18, 1999: 4689 - 4699, Deslandes et al., Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 99, 2002: 2404 - 2409, Li et al., Plant Cell 16, 2004: 319 -331) . Además, las proteínas WRKY están implicadas en respuestas a tensiones abióticas tales como lesiones (Yoda et al., Mol. Genet. Genomics, 267, 2002: 154 - 161), sequía, calor y frío (Fowler et al., Plant Cell, 14, 2002: 1675 -1690, Mare et al., Plant Mol. Biol., 55, 2004: 399 - 416). Algunos miembros de esta familia han demostrado también que juegan papeles reguladores importantes en la formación de tricoma (Johnson et al., Plant Cell, 14, 2002: 1359 - 1375), envejecimiento orgánico (Hinderhofer et al., Planta, 213, 2001 : 469 - 473, Guo et al., Plant Cell Environ., 27, 2004: 521 - 549), letargo y trayectorias metabólicas. Las proteínas WRKY son una familia multigenética . En arabidopsis thaliana se conocen más de 74 miembros de la familia (Uelker et al., Curr. Op. In Plant Biol., 7, 2004: 491 - 498). Contienen al menos un dominio de WRKY altamente conservado, el cual consiste normalmente de aproximadamente 60 aminoácidos conservados. El dominio de WRKY comprende en su extremo amino terminal y un heptapéptido característico WRKYGQK (en donde Q en casos raros puede reemplazarse por E o K) y en su extremo carboxi terminal un motivo de dedo de zinc distinto de otros motivos de dedo de zinc conocidos. Para regular la expresión genética (por activación y/o represión) , el dominio de WRKY se enlaza a elementos de actuación cis en el promotor de genes objetivo, con una preferencia para el bloque W, pero también para otros tales como los elementos SURE o SP8 (para revisión, véase Eulgem et al . (2000) Trends Plant Sci 5(5): 199-206). El enlace de AND puede bloquearse con queladores metálicos tales como EDTA u o-fenatrolina y restaurarse agregando iones de zinc. Los factores de transcripción WRKY pertenecen a los genes de "respuesta temprana inmediata" así llamados, que significa que están implicados en las rápidas respuestas de las plantas a lesiones, a patógenos o a inductores de resistencia a enfermedades . Las proteínas WRKY han sido clasificadas en tres grupos mayores basados en el número de dominio de WRKY y en las caracteristicas de su motivo de dedo de zinc asociado.

- Grupo I comprende proteínas con dos dominios de WRKY y un motivo de dedo de zinc Cys2His2 (o C2-H2) (más precisamente C- X4-5-C-X22-_3-H-X?-H) o un motivo de dedo de zinc Cys2HisCys (o un C2-HC) (más precisamente C-X7-C-X23-H-X?-C) , en donde C es Cys, H es His, y X es cualquier aminoácido); - Grupo II (el grupo más grande) comprende proteinas con un dominio de WRKY y el mismo motivo de dedo de zinc Cys2His2 como en el grupo 1; - Grupo III comprende proteínas con un dominio de WRKY, pero un motivo de dedo de zinc Cys2HisCys (o un C2-HC) (más específicamente C-X-5-C-X2_-23-H-X?-C o C-X7-C-X23-H-X?-C, en donde C es Cys, H es His, y X es cualquier aminoácido) en lugar de CyS2HiS2. Se piensa que el genoma de arroz codifica más de 100 proteínas con al menos un dominio total de WRKY, y se reporta que al menos 12 de éstos contienen dos dominios de WRKY (Zhang & Wang (2005) BMC Evolutionary Biology 5:1). En estos 12, el dominio de WRKY carboxi terminal es el sitio de la actividad de enlace de ADN, mientras que el dominio de WRKY amino terminal facilita el enlace de ADN o se acopla en las interacciones de proteína-proteína. El motivo de dedo de zinc en cada dominio de RKY puede estar implicado en el enlace ya sea en ADN o las proteinas. Como otros factores de transcripción, las proteínas WKRY tienen una abundancia de activación de transcripción potencial o dominios de represión. Una característica común de muchos dominios que afectan la transcripción es el predominio de ciertos aminoácidos, incluyendo alanina (Ala) , glutamina (Glu), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr) y aminoácidos cargados. Otra característica común encontradas probablemente en proteínas WKRY es una señal de Vocalización nuclear (NLS) , la cual usualmente consiste de un corto tramo de residuos de aminoácido básicos. Se ha encontrado ahora que modular la expresión en una planta de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios de WKRY o un homólogo de tal péptido da plantas que tienen rendimiento incrementado con relación a plantas control. De acuerdo con una modalidad de la presente invención, se proporciona un método para incrementar el rendimiento con relación a las plantas control, que comprende modular la expresión en una planta de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido.

Ventajosamente, el desempeño de los métodos de acuerdo a la presente invención resulta en plantas que tienen rendimiento incrementado, particularmente el rendimiento de semillas, con relación a las plantas control. De preferencia, el polipéptido utilizado en el método inventivo tiene dos dominios de WRKY o el homólogo comprende desde el término amino al término carboxi: (i) un dominio rico en Pro-Ser; y (ii) dos dominios de WRKY incluyendo un motivo de C2-H2 de dedo de zinc. La elección de plantas control ventajosa es una parte rutinaria de una configuración experimental y puede incluir plantas de tipo silvestre correspondientes o plantas correspondientes sin el gen de interés. La planta control puede también ser un nulicigoto de la planta que se compara. Los nulicigotos son individuos que pierden el transgen por segregación. De preferencia, la plana control es de la misma especie, más preferiblemente de la misma variedad como la planta que se compara. Una "planta control" como se utiliza en la presente se refiere a plantas completas, pero también a partes de la planta, incluyendo semillas y partes de la semilla . Una "referencia", "planta de referencia", "control", "planta control", "tipo silvestre" o "planta de tipo silvestre" es en particular una célula, un tejido, un órgano, una planta, o una parte de la misma, la cual no se produjo de acuerdo al método de la invención. Por consiguiente, los términos "tipo silvestre" "control" o "referencia" son intercambiables y pueden ser una célula o una parte de la planta tal como un organelo o tejido, o una planta, la cual puede no modificarse o tratarse de acuerdo al método descrito en la presente de acuerdo con la invención. Por consiguiente, la célula o parte de la planta tal como un organelo o una planta utilizada como tipo silvestre, control o referencia corresponde a la célula, planta o parte de la misma o tanto como sea posible y está en cualquier otra propiedad, pero en el resultado del proceso de la invención es tan idéntica a la materia objeto de la invención como es posible. De este modo, el tipo silvestre, control o referencia se trata de manera idéntica o tan idéntica como sea posible, es decir que sólo condiciones o propiedades podrían ser diferentes las cuales no influencian la calidad de la propiedad deseada. Eso significa en otras palabras que el tipo silvestre denota (1) una planta, la cual porta la forma inalterada o no modulada de un gen o alelo o (2) el material de partida/planta de la cual se derivan las plantas producidas por el proceso o método de la invención. De preferencia, cualquier comparación entre las plantas de tipo silvestre y las plantas producidas por el método de la invención se lleva a cabo bajo condiciones análogas. El término "condiciones análogas" significa que todas las condiciones tales como, por ejemplo, condiciones de cultivo o crecimiento, condiciones de prueba (tales como composición de tamponación, temperatura, sustratos, cepa de patógenos, concentraciones y similares) se mantienen idénticas entre los experimentos que se comparan. La "referencia", "control" o "tipo silvestre" es de preferencia un objeto, por ejemplo, un organelo, una célula, un tejido, una planta, la cual no se moduló, modificó o trató de acuerdo con el proceso descrito en la presente de la invención y está en cualquier otra propiedad tan similar a la materia objeto de la invención como sea posible. La referencia, control o tipo silvestre está en su genoma, transcriptoma, proteoma o metaboloma tan similar como sea posible al objeto de la presente invención. De preferencia, el término organelo, célula, tejido o planta de "referencia", "control" o "tipo silvestre" se relaciona a un organelo, célula, tejido o planta, la cual es casi genéticamente idéntica al organelo, célula, tejido o planta de la presente invención o una parte de la misma, de preferencia 95%, de mayor preferencia son 98%, incluso de mayor preferencia son 99.00%, en particular 99.10%, 99.30%, 99.50%, 99.70%, 99.90%, 99.99%, 99.999% o más. Más preferible, la "referencia", "control" o "tipo silvestre" es de preferencia un objeto, por ejemplo, un organelo, una célula, un tejido, una planta, la cual es genéticamente idéntica a la planta, tejido, célula, organelo utilizado de acuerdo con el método de la invención excepto que las moléculas de ácido nucleico o el producto genético codificado por éstas se cambian, modulan o modifican de acuerdo con el método inventivo. En el caso de un control, referencia o tipo silvestre que difiere del objeto de la presente invención, no puede proporcionarse solamente al no ser objeto del método de la invención, un control, referencia o tipo silvestre puede ser una planta en la cual la causa para la modulación de la actividad que confiere el incremento de los metabolitos es como se describe bajo los ejemplos. El término "rendimiento" en general significa un producto medible de valor económico, relacionado necesariamente a un cultivo específico, a un área y a un periodo de tiempo. Partes individuales de la planta contribuyen directamente al rendimiento basado en su número, tamaño y/o peso. Mientras que el rendimiento actual es el rendimiento por acre para un cultivo y año, el cual se determina al dividir la producción total (incluye tanto la producción cosechada como estimada) por acres plantados. Los términos "incremento", "mejora" o "mejorar" son intercambiables y significarán en el sentido de la aplicación al menos un 5%, 6%, 7%, 8%, 9% ó 10%, de preferencia al menos 15% ó 20%, más preferiblemente 25%, 30%, 35% ó 40% de más rendimiento y/o crecimiento en comparación a la planta de tipo silvestre como se define en la presente. El incremento referido a la actividad de las cantidades de polipéptido en una célula, un tejido, un organelo, un órgano o un organismo o una parte de la misma de preferencia es al menos 5%, de preferencia al menos 10%, o al menos 15%, especialmente, de preferencia al menos 20%, 25%, 30% o más, muy especialmente de preferencia son al menos 40%, 50% ó 60%, más preferiblemente son al menos 70% o más en comparación al control, referencia o tipo silvestre. El término "rendimiento incrementado" como se define en la presente se toma para significar un incremento en cualquiera o más de lo siguiente, cada uno con relación a las plantas control: (i) biomasa incrementada (peso) de una o más partes de una planta, particularmente partes superficiales (cosechables) , biomasa de raíz incrementada o biomasa incrementada de cualquier otra parte cosechable, (ii) rendimiento total incrementado de la semilla, el cual incluye un incremento en biomasa de la semilla (peso de la semilla) y el cual puede ser un incremento en el peso de la semilla por planta o sobre una base individual de la semilla; (iii) número incrementado de flores ("florecillas") por panícula (iv) número incrementado de semillas (rellenas) ; (v) tamaño incrementado de semillas, el cual puede también influenciar la composición de las semillas; (vi) volumen incrementado de semillas, el cual puede influenciar también la composición de semillas (incluyendo el contenido y la composición total de aceite, proteínas y carbohidratos); (vii) área individual incrementada de las semillas; (viii) longitud y/o ancho individual incrementada de las semillas; (ix) índice incrementado de la cosecha, el cual se expresa como una relación del rendimiento de las partes cosechables, tales como semillas, sobre la biomasa total; y (x) peso incrementado de mil semillas (TKW) , el cual se extrapola desde el número de semillas rellenas contadas y su peso total. Un TKW incrementado puede resultar de un tamaño incrementado de semillas y/o el peso de semillas. Un TKW incrementado puede resultar de un incremento en el tamaño del embrión y/o el tamaño del endosperma. El término "expresión" o "expresión genética" significa la transcripción de un gen específico o genes específicos. De preferencia, esta expresión conduce a la aparición de un rasgo fenotípico. El término "expresión" o "expresión genética" en particular significa la transcripción de un gen o genes en el ARN estructural (ARNr, ARNt) o ARNm con traducción subsecuente del último en una proteína. El proceso incluye la transcripción de ADN, procesamiento del producto de ARNm resultante y su traducción en una proteína activa . El término "modulación" significa en relación a la expresión o expresión genética, un proceso en el cual el nivel de expresión se cambia por la expresión genética en comparación a la planta control, de preferencia el nivel de expresión se incrementa. La expresión no modulada, original, puede ser de cualquier clase de expresión de un ARN estructural (ARNr, ARNt) o ARNm con traducción subsecuente. El término "que modula la actividad" significará cualquier cambio de la expresión de las secuencias de ácido nucleico de proteinas codificadas, lo cual conduce al rendimiento incrementado y/o crecimiento incrementado de las plantas. Tomando maiz como ejemplo, un incremento en el rendimiento puede manifestarse como uno o más de lo siguiente: el incremento en el número de plantas por hectárea o por acre, un incremento en el número de espigas por planta; un incremento en el número de hileras, número de semillas por hilera, peso de la semilla, TKW, longitud/diámetro de la espiga, entre otros. Tomando el arroz como un ejemplo, un incremento de rendimiento puede manifestarse por un incremento en uno o más de lo siguiente: número de plantas por hectárea o acre, número de panículas por planta, número de espiguillas por panícula, número de flores por panícula, incremento en el Índice de llenado de la semilla, incremento en TKW, entre otros. Un incremento en el rendimiento puede resultar también en arquitectura modificada, o puede ocurrir como un resultado de arquitectura modificada. De acuerdo con una característica preferida, el desempeño de los métodos de la invención resulta en plantas que tienen rendimiento incrementado de semillas con relación a las plantas control. En particular, tal rendimiento incrementado de semillas incluye TKW incrementado, área individual incrementada de semillas, longitud individual incrementada de semillas, ancho individual incrementado de semillas, número incrementado de semillas y número incrementado de flores por panícula, cada uno con relación a las plantas control. Ya que las plantas transgénicas de acuerdo con la presente invención tienen rendimiento incrementado, es probable que estas plantas exhiban una tasa de crecimiento incrementada (durante al menos parte de su ciclo de vida) , con relación a la tasa de crecimiento de las plantas control en una etapa correspondiente en su ciclo de vida. La tasa de crecimiento incrementada puede ser específica para una o más partes de una planta (incluyendo semillas), o puede estar sustancialmente en toda la planta completa. Una planta que tiene una tasa de crecimiento incrementada puede incluso exhibir su floración en forma temprana. La floración retrasada no es usualmente un rasgo agronómico deseable. El incremento en la tasa de crecimiento puede tener lugar en una o más fases en el ciclo de vida de una planta o en el transcurso de sustancialmente el ciclo de vida completo de la planta. La tasa de crecimiento incrementada en el transcurso de las fases iniciales en el ciclo de vida de una planta puede reflejar vigor intensificado. El incremento en la tasa de crecimiento puede alterar el ciclo de cosecha de una planta lo que permite a las plantas sembrarse después y/o cosecharse más pronto de lo que podría ser posible de otra manera. Si la tasa de crecimiento se incrementa en forma suficiente, puede permitir la siembra adicional de semillas de la misma especie de planta (por ejemplo la siembra y cosecha de plantas de arroz seguida por siembra y cosecha de plantas de arroz adicionales todas dentro de un período de crecimiento convencional) . Similarmente, si la tasa de crecimiento se incrementa en forma suficiente, puede permitir la siembra adicional de semillas de diferentes especies de plantas (por ejemplo la siembra y cosecha de plantas de arroz seguida, por ejemplo, por la siembra y cosecha opcional de soya, papa o cualquier otra planta) . Los tiempos adicionales de cosecha del mismo rizoma en el caso de algunas plantas de cultivo también pueden ser posibles. Alterar el ciclo de cosecha de una planta puede conducir a un incremento en la producción de biomasa anual por acre (debido a un incremento en el número de veces (digamos en un año) que alguna planta particular puede cultivarse y cosecharse) . Un incremento en la tasa de crecimiento también puede permitir el cultivo de plantas transgénicas en un área geográfica más amplia que sus contrapartes de tipo silvestre, ya que las limitaciones territoriales para hacer crecer un cultivo con frecuencia se determinan por las condiciones ambientales adversas ya sea en el tiempo de la plantación (temporada temprana) o en el tiempo de la cosecha (temporada tardía) . Tales condiciones adversas pueden evitarse si el ciclo de cosecha se acorta. La tasa de crecimiento puede determinarse al derivar diversos parámetros a partir de curvas de crecimiento, tales parámetros pueden ser: T-Mid (el tiempo tomado por las plantas para alcanzar 50% de su tamaño máximo) y T-90 (tiempo tomado por las plantas para alcanzar 90% de su tamaño máximo) entre otros. El desempeño de los métodos de las plantas dadas de la invención, tiene de preferencia una tasa de crecimiento incrementada. Por lo tanto, de acuerdo con la presente invención, se proporciona un método para incrementar la tasa de crecimiento en plantas, cuyo método comprende modular la expresión en una planta de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido. Un incremento en el rendimiento y/o tasa de crecimiento ocurre si la planta está bajo condiciones sin tensión o si la planta se expone a varias tensiones comparadas a las plantas control. Las plantas normalmente responden a la exposición a tensión por crecimiento más lentamente. En condiciones de tensión severa, la planta puede incluso detener el crecimiento por completo. La tensión moderada por otro lado se define en la presente como siendo cualquier tensión a la cual una planta se expone lo cual no resulta en que la planta deje de crecer por completo sin la capacidad de reactivar el crecimiento. La tensión moderada en el sentido de la invención conduce a una reducción en el crecimiento de las plantas tensas de menos de 40%, 35% ó 30%, de preferencia menos de 25%, 20% ó 15%, más preferiblemente menos de 14%, 13%, 12%, 11% ó 10% o menos en comparación a la planta control bajo condiciones sin tensión. Debido a los avances en prácticas agrícolas (irrigación, fertilización, tratamientos con pesticidas) no se encuentran a menudo tensiones severas en plantas forrajeras cultivadas. Como una consecuencia, el crecimiento comprometido inducido por tensión moderada es a menudo una característica indeseable para la agricultura. Las tensiones moderadas son las tensiones típicas a las cuales una planta puede exponerse, tal como tensiones bióticas y/o abióticas (ambiental) cada día. Las tensiones abióticas o ambientales típicas incluyen tensiones por temperatura provocadas por calor atípico o temperaturas frías/de congelamiento; tensión salina; tensión acuosa (sequía o agua en exceso) . Los químicos pueden provocar también tensiones abíóticas. Las tensiones bióticas son típicamente aquellas tensiones provocadas por patógenos, tales como bacterias, virus, hongos, nematodos e insectos. De preferencia, un incremento en el rendimiento y/o tasa de crecimiento ocurre de acuerdo con el método de la invención bajo condiciones sin tensión o de tensión abiótica o biótica moderada, de preferencia condiciones de tensión abiótica. Las características antes mencionadas pueden modificarse ventajosamente en cualquier planta. El término "planta" como se usa en la presente abarca plantas completas, ancestros y progenie de las plantas y partes de la planta, incluyendo semillas, retoños, tallos, hojas, raices (incluyendo tubérculos) , frutos, vastagos, plántulas, flores y células, tejidos y órganos, en donde cada uno de los mencionados anteriormente comprende el material genético no encontrado en una planta de tipo silvestre de la misma especie, variedad o cultivo. El material genético puede ser un transgen, un episodio de mutagénesis insercional, una secuencia de etiquetado de activación, una secuencia mutada o un episodio de recombinación homólogo. El término "planta" también abarca cultivos de suspensión, tejido calloso, embriones, regiones meristemáticas, gametofitos, esporofitos, polen y microesporas, donde nuevamente cada uno de los mencionados anteriormente comprenden el material genético no encontrado en una planta de tipo silvestre de la misma especie, variedad o cultivo. Las plantas que son particularmente útiles en los métodos o procesos de la invención incluyen todas las plantas que pertenecen a la superfamilia Viridiplantae, en particular plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas incluyendo forraje o leguminosas forrajeras, plantas ornamentales, cultivos alimenticios, árboles o arbustos seleccionados de la lista que comprende Acacia spp. , Acer spp. , Actinidia spp. , Aesculus spp., Agathis australis, Albizia amara, Alsophila tricolor, Andropogon spp. , Arachis spp, Areca catechu , Astelia fragrans , Astragalus cicer, Baikiaea plurijuga , Betula spp., Brassica spp., Bruguiera gymnorrhiza , Burkea africana , Butea frondosa , Cadaba farinosa , Calliandra spp, Camellia sinensis, Canna indica, Capsicum spp., Cassia spp., Centroema pubescens, Chaenomeles spp., Cinnamomum cassia, Coffea arábica, Colophospermum mopane, Coroníllia varia, Cotoneaster serótina, Crataegus spp., Cucumis spp., Cupressus spp., Cyathea dealbata, Cydonia oblonga, Cryptomeria japónica, Cymbopogon spp., Cynthea dealbata, Cydonia oblonga, Dalbergia monetaria, Davallia divaricata, Desmodium spp., Dicksonia squarosa , Diheteropogon amplectens , Dioclea spp, Dolichos spp. , Dorycnium rectum, Echinochloa pyramidalis , Ehrartia spp., Eleusíne coracana, Eragrestis spp., Erythrina spp., Eucalyptus spp., Euclea schimperi, Eulalia villosa, Fagopyrum spp., Feijoa sellowiana, Fragaria spp., Flemingia spp, Freycinetia banksii, Geranium thunbergií, Ginkgo biloba, Glycine javanica , Gliricidia spp, Gossypium hirsutum, Grevillea spp., Guibourtia coleosperma, Hedysarum spp., Hemarthía altissima , Heteropogon contortus, Hordeum vulgare, Hyparrhenia rufa, Hyper i cum erectum, Hyperthelia dissoluta , índigo íncarnata , Iris spp., Leptarrhena pyroli folia, Lespediza spp., Lettuca spp., Leucaena leucocephala , Loudetia simplex, Lotonus bainesii, Lotus spp., Macrotyloma axillare, Malus spp., Manihot esculenta , Medicago sativa, Metasequoia glyptostroboides , Musa sapientum, Nicotianum spp. , Onobrychis spp. , Ornithopus spp. , Oryza spp. , Peltophorum africanu , Pennisetum spp., Persea gratissima, Petunia spp., Phaseolus spp. , Phoenix canariensis , Phormium cookíanum, Photinia spp. , Pícea glauca, Pinus spp., Pisum sativum, Podocarpus totara, Pogonarthria fleckii, Pogonarthria squarrosa , Populus spp., Prosopis cineraria , Pseudotsuga menziesii , Pterolobium stellatum, Pyrus communis, Quercus spp., Rhaphiolepsis umbellata, Rhopalostylis sápida, Rhus natalensis , Ribes grossularia, Ribes spp., Robinia pseudoacacia , Rosa spp., Rubus spp., Salix spp., Schyzachyrium sanguineum, Sciadopitys verticillata, Sequoia sempervirens , Sequoiadendron giganteum, Sorghum bicolor, Spinacia spp., Sporobolus fimbriatus , Stiburus alopecuroides , Stylosanthos humilis , Tadehagi spp, Taxodium distichum, Themeda triandra, Tn folium spp., Tri ticum spp. , Tsuga heterophylla , Vaccinium spp. , Vicia spp. , Vitis vínifera , Watsonia pyramidata , Zantedeschía aethiopica , Zea mays , amaranto, alcachofa, brócoli, col de Bruselas, col, cañóla, zanahoria, coliflor, apio, repollo verde, lino, col rizada, lenteja, colza oleaginosa, calalú, cebolla, papa, arroz, soya, fresa, remolacha azucarera, caña de azúcar, girasol, tomate, chayóte, té y algas, entre otros. De acuerdo con una modalidad preferida de la presente invención, la planta es una planta forrajera tal como soya, girasol, cañóla, alfalfa, semilla de colza, algodón, tomate, papa o tabaco. Además de preferencia, la planta es una planta monocotiledónea, tal como caña de azúcar. Más preferiblemente, la planta es un cereal, tal como arroz, maíz, trigo, cebada, mijo, centeno, sorgo o avena. Otras plantas ventajosas se seleccionan del grupo que consiste de Asteracea tal como el género Helianthus, Tagetes, por ejemplo, la especie Helianthus annus [girasol], Tagetes lucida, Tagetes erecta o Tagetes tenuifolia [Caléndula] . Brassicaceae tal como el género Brassica, Arabadopsis, por ejemplo, la especie Brassica napus, Brassica rapa ssp. [cañóla, colza oleaginosa, nabo] o Arabidopsis thaliana. Fabaceae tal como el género Glycine por ejemplo, la especie Glycine max, Soja hispida o Soja max [soya] . Linaceae tal como el género Linum, por ejemplo, la especie Linum usitatissimum, [lino, linaza] ; Poaceae tal como el género Hordeum, Sécale, Avena, Sorghum, Oryza, Zea, Triticum, por ejemplo, la especie Hordeum vulgare [cebada] ; Sécale cereale [avena] , Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantina, Avena fatua var. Sativa, Avena hybrida [avena], Sorghum bicolor [Sorgo, mijo], Oryza sativa, Oryza latifolia [arroz], Zea mays [elote, maiz] , Triticum aestivum, Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha, Triticum sativum o Triticum vulgare [trigo, trigo blando, trigo común] , Solanaceae tal como el género Solanum, Lycopersicon, por ejemplo, la especie Solanum tuberosum [papa], Lycopersicon esculentum, Lycopersicon lycopersicum. , Lycopersicon pyriforme, Solanum integrifolium o Solanum lycopersicum [tomate] . El término "polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido" como se define en la presente, se refiere a un polipéptido que comprende del término amino al término carboxi: (i) un dominio rico en Pro-Ser y (ii) dos dominios de WRKY incluyendo un motivo de C2-H2 de dedo de zinc. Normalmente, el polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal péptido puede además comprender uno o más de lo siguiente (i) un tramo acídico entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) una NLS putativa entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con al menos 50%, 60% ó 70%, de preferencia 75% u 80%, más preferiblemente 90%, incluso más preferiblemente 91%, 92%, 93%, 94% ó 95%, más preferiblemente 96%, 97%, 98% ó 99% de identidad a la SEQ ID NO: 39. El polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido puede también comprender un motivo de LXSP dentro del dominio rico en Pro-Ser (en donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y X es cualquier aminoácido) . Además, el dominio rico en Pro-Ser puede ser al menos dos veces tan rico en Pro y Ser comparado a la composición de aminoácido promedio (en %) de proteínas del banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Además, el polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido se refiere a cualquier secuencia de aminoácidos la cual, cuando se utiliza en la construcción de un árbol filogenético de polipéptidos que comprende uno o dos dominios de WRKY, forma parte del grupo el cual incluye polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY y un dominio rico en Pro-Ser (véase la Figura 2). Un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogos de tal polipéptido se codifica por un ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY. Por lo tanto, el término "ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY" como se define en la presente es cualquier ácido nucleico/gen que codifica un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido como se define anteriormente. Polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY u homólogos de tales polipéptidos pueden identificarse fácilmente utilizando técnicas de rutina bien conocidas en el arte, tales como alineación de secuencia. Los métodos para alineación de secuencias se conocen bien en la técnica, tales métodos incluyen GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA y TFASTA. GAP usa el algoritmo de Needleman y Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453] para encontrar la alineación de dos secuencias completas que maximiza el número de coincidencias y minimiza el número de huecos. El algoritmo BLAST calcula identidad de secuencias en porcentajes y realiza un análisis estadístico de la similitud entre las dos secuencias. El software para realizar análisis BLAST se encuentra públicamente disponible a través del Centro Nacional para la Información en Biotecnología. Homólogos de un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY pueden identificarse fácilmente utilizando por ejemplo, el algoritmo de alineación de secuencia múltiple ClustalW (versión 1.83) disponible de Kyoto University Bioinformatics Center, con los parámetros de alineación en pares predefinidos, y un método de clasificación en porcentaje. Puede requerirse alguna corrección mínima del manual en algunos casos para optimizar los alineamientos de motivo específico; esto se lleva a cabo comúnmente por la persona experimentada en la técnica. Los valores de identidad de secuencia, los cuales se indican anteriormente como un porcentaje en donde se determinaron sobre el dominio conservado completo utilizando los programas mencionados anteriormente utilizando los parámetros predefinidos. Una persona experimentada en la técnica podría determinar fácilmente si cualquier secuencia de aminoácido en cuestión cae dentro de la definición antes mencionada de un "polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido" utilizando técnicas y software conocido para elaborar un árbol filogenético, tal como el paquete GCG, EBI o CLUSTAL, utilizando parámetros predefinidos. En la construcción de tal árbol filogenético, el agrupamiento de secuencias con el grupo de polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY y un dominio rico en Pro-Ser (véase la flecha en la Figura 2, después de Eulgem et al . , 2000, Trends Plant Sci 5(5): 199-206) se considerará que cae dentro de la definición de un "polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido". Los ácidos nucleicos que codifican tales secuencias serán útiles para realizar los métodos de la invención. El término "dominio" se refiere a un conjunto de aminoácidos conservados en posiciones específicas a lo largo de una alineación de secuencias de proteínas evolutivamente relacionadas. Mientras que los aminoácidos en otras posiciones pueden variar entre homólogos, los aminoácidos que son altamente conservados en posiciones específicas indican aminoácidos que son esenciales en la estructura, la estabilidad o la actividad de una proteína. Identificados por su alto grado de conservación en secuencias alineadas de una familia de homólogos de proteínas, pueden usarse como identificadores para determinar si cualquier polipéptido en cuestión pertenece a una familia de polipéptidos previamente identificada (en este caso, la familia de polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY) . El término "motivo" se refiere a una región conservada corta en una secuencia de proteínas. Los motivos con frecuencia son partes altamente conservadas de dominios, pero pueden también incluir solamente parte del dominio, o estar fuera del dominio conservado (si todos los aminoácidos del motivo cae fuera de un dominio definido) . Bases de datos especiales existen para la identificación de los dominios. Los dominios WKRY en un polipéptido pueden identificarse utilizando por ejemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244; presentado por EMBL at Heidelberg, Germany), InterPro (Mulder et al., (2003) Nucí. Acids. Res. 31, 315-318; presentado por European Bioinformatics Institute (EBI) in the United Kingdom) , Prosite (Bucher and Bairoch (1994). Una sintaxis de perfil generalizado para motivos de secuencia biomolecular y su función en interpretación de secuencia automática. (In) ISMB-94; Proceedings 2a International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D. , Karp P., Lathrop R., Searls D. , Eds., pp53-61, AAAIPress, Menlo Park; Hulo et al., Nucí. Acids. Res. 32: D134-D137, (2004). El servidor de proteómica ExPASy se proporciona como un servicio a la comunidad científica (presentado por el Instituto Suizo de Bioinformática (SIB) en Suiza) de Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002), presentado por Sanger Institute in the United Kingdom) . En la base de datos InterPro, el dominio de WRKY se designa por IPR003657, PF03106 en la base de datos Pfam y PS50811 en la base de datos PROSITE. Además, la presencia de un dominio rico en Pro-Ser puede también identificarse fácilmente. La composición de aminoácido primario (en %) para determinar si un dominio de polipéptido es rico en aminoácidos específicos puede calcularse utilizando programas de software del servidor ExPASy; en particular la herramienta ProtParam (Gasteiger E et al . (2003) ExPASy: el servidor proteómico para conocimiento y análisis de proteína detalladamente. Nucleic Acids Res 31:3784-3788). La composición de la proteína de interés puede entonces compararse a la composición de aminoácido promedio (en %) en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Dentro de este banco de datos, el contenido de Pro (P) promedio) es de 4.85%, el contenido de Ser (S) promedio es de 6.89%. Como un ejemplo, el dominio rico en Pro-Ser de la SEQ ID NO: 2 comprende 22.03% de Pro (más de 5 veces enriquecido) y 20.34% de Ser (más de 3 veces enriquecido) . Como se define en la presente, un dominio rico en Pro-Ser tiene un contenido de Pro y Ser (en %) mayor que aquel en la composición de aminoácido promedio (en %) en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Además, de preferencia, el dominio rico en Pro-Ser como se define en la presente tiene un contenido de Pro y Ser (en %) que es al menos lo doble del promedio de la composición de aminoácido (en %) en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Más preferiblemente, el dominio rico en Pro-Ser como se define en la presente, tiene un contenido de Pro y Ser (en %) que es al menos 2.1; 2.2; 2.3; 2.4 ó 2.5; más preferiblemente 2.6; 2.7; 2.8; 2.9. 3.0, 3.1 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0 o más tanto como la composición de aminoácido promedio (en %) de la clase de la secuencias de proteína, las cuales se incluyen en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot.///// Además, el polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido se refiere a cualquier secuencia de aminoácidos la cual, cuando se utiliza en la construcción de un árbol filogenético de polipéptidos que comprende uno o dos dominios de WRKY, forma parte del grupo el cual incluye polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY y un dominio rico en Pro-Ser (véase la Figura 2) . Un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogos de tal polipéptido se codifica por un ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY. Por lo tanto, el término "ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY" como se define en la presente es cualquier ácido nucleico/gen que codifica un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido como se define anteriormente. Polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY u homólogos de tales polipéptidos pueden identificarse fácilmente utilizando técnicas de rutina bien conocidas en el arte, tales como alineación de secuencia. Los métodos para alineación de secuencias se conocen bien en la técnica, tales métodos incluyen GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA y TFASTA. GAP usa el algoritmo de Needleman y Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453] para encontrar la alineación de dos secuencias completas que maximiza el número de coincidencias y minimiza el número de huecos. El algoritmo BLAST calcula identidad de secuencias en porcentajes y realiza un análisis estadístico de la similitud entre las dos secuencias. El software para realizar análisis BLAST se encuentra públicamente disponible a través del Centro Nacional para la Información en Biotecnología. Homólogos de un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY pueden identificarse fácilmente utilizando por ejemplo, el algoritmo de alineación de secuencia múltiple ClustalW (versión 1.83) disponible de Kyoto University Bioinformatics Center, con los parámetros de alineación en pares predefinidos, y un método de clasificación en porcentaje. Puede requerirse alguna corrección mínima del manual en algunos casos para optimizar los alineamientos de motivo específico; esto se lleva a cabo comúnmente por la persona experimentada en la técnica. Los valores de identidad de secuencia, los cuales se indican anteriormente como un porcentaje en donde se determinaron sobre el dominio conservado completo utilizando los programas mencionados anteriormente utilizando los parámetros predefinidos. Una persona experimentada en la técnica podría determinar fácilmente si cualquier secuencia de aminoácido en cuestión cae dentro de la definición antes mencionada de un "polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido" utilizando técnicas y software conocido para elaborar un árbol filogenético, tal como el paquete GCG, EBI o CLUSTAL, utilizando parámetros predefinidos. En la construcción de tal árbol filogenético, el agrupamiento de secuencias con el grupo de polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY y un dominio rico en Pro-Ser (véase la flecha en la Figura 2, después de Eulgem et al . , 2000, Trends Plant Sci 5(5): 199-206) se considerará que cae dentro de la definición de un "polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido". Los ácidos nucleicos que codifican tales secuencias serán útiles para realizar los métodos de la invención. El término "dominio" se refiere a un conjunto de aminoácidos conservados en posiciones específicas a lo largo de una alineación de secuencias de proteínas evolutivamente relacionadas. Mientras que los aminoácidos en otras posiciones pueden variar entre homólogos, los aminoácidos que son altamente conservados en posiciones específicas indican aminoácidos que son esenciales en la estructura, la estabilidad o la actividad de una proteína. Identificados por su alto grado de conservación en secuencias alineadas de una familia de homólogos de proteínas, pueden usarse como identificadores para determinar si cualquier polipéptido en cuestión pertenece a una familia de polipéptidos previamente identificada (en este caso, la familia de polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY) . El término "motivo" se refiere a una región conservada corta en una secuencia de proteínas. Los motivos con frecuencia son partes altamente conservadas de dominios, pero pueden también incluir solamente parte del dominio, o estar fuera del dominio conservado (si todos los aminoácidos del motivo cae fuera de un dominio definido) . Bases de datos especiales existen para la identificación de los dominios. Los dominios WKRY en un polipéptido pueden identificarse utilizando por ejemplo, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244; presentado por EMBL at Heidelberg, Germany), InterPro (Mulder et al., (2003) Nucí. Acids. Res. 31 ,14 315-318; presentado por European Bioinformatics Institute (EBI) in the United Kingdom) , Prosite (Bucher and Bairoch (1994), Una sintaxis de perfil generalizado para motivos de secuencia biomolecular y su función en interpretación de secuencia automática. (In) ISMB-94; Proceedings 2a International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R. , Brutlag D. , Karp P., Lathrop R. , Searls D. , Eds., pp53-61 , AAAIPress, Menlo Park; Hulo et al., Nucí. Acids. Res. 32: D134-D137, (2004), El servidor de proteómica ExPASY se proporciona como un servicio a la comunidad científica (presentado por el Instituto Suizo de Bioinformática (SIB) en Suiza) de Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002), presentado por Sanger Institute in the United Kingdom) . En la base de datos InterPro, el dominio de ERKY se designa por IPR003657, PF03106 en la base de datos Pfam y PS50811 en la base de datos PROSITE. Además, la presencia de un dominio rico en Pro-Ser puede también identificarse fácilmente. La composición de aminoácido primario (en %) para determinar si un dominio de polipéptido es rico en aminoácidos específicos puede calcularse utilizando programas de software del servidor ExPASy; en particular la herramienta ProtParam (Gasteiger E et al . (2003) ExPASy: el servidor proteómico para conocimiento y análisis de proteína detalladamente. Nucleic Acids Res 31:3784-3788). La composición de la proteina de interés puede entonces compararse a la composición de aminoácido promedio (en %) en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Dentro de este banco de datos, el contenido de Pro (P) promedio) es de 3,85%, el contenido de Ser (S) promedio es de 6,89%. Como un ejemplo, el dominio rico en Pro-Ser de la SEQ ID NO: 2 comprende 22,03% de Pro (más de 5 veces enriquecido) y 20,34% de Ser (más de 3 veces enriquecido) . Como se define en la presente, un dominio rico en Pro-Ser tiene un contenido de Pro y Ser (en %) mayor que aquel en la composición de aminoácido promedio (en %) en el banco de datos de la Secuencia de Proteina Swiss-Prot. Además, de preferencia, el dominio rico en Pro-Ser como se define en la presente tiene un contenido de Pro y Ser (en %) que es al menos lo doble del promedio de la composición de aminoácido (en %) en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Más preferiblemente, el dominio rico en Pro-Ser como se define en la presente, tiene un contenido de Pro y Ser (en %) que es al menos 2,1; 2,2; 2,3; 2,4 ó 2,5; más preferiblemente 2,6; 2,7; 2,8; 2,9, 3,0, 3,1 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0 o más tanto como la composición de aminoácido promedio (en %) de la clase de la secuencias de proteína, las cuales se incluyen en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Ejemplos de polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY u homólogos de tales polipéptidos incluyen (codificados por el número de registro de la secuencia de polinucleótido en paréntesis; véase también Tabla 1) : Oryza sa tiva Orysa_WRKY53 (BK005056) SEQ ID NO: 2, Oryza sa tiva Orysa_WRKY24 BK005027) SEQ ID NO 4, Oryza sa tiva Orysa_WRKY70 BK005073) SEQ ID NO 6, Oryza sa tiva Orysa WRKY78 (AK070537 SEQ ID NO 8, Oryza sa tiva Orysa_WRKY30 (AY870610) SEQ ID NO: 10, Oryza sativa Orysa_WRKY35 (BK005038) SEQ ID NO: 12, Arabidopsis thaliana Arath_WRKY25 (NMJ28578) SEQ ID NO: 14, Arabidopsis thaliana Arath_WRKY26 (AK117545) SEQ ID NO: 16, Arabidopsis thaliana Arath_WRKY33 (N M_129404) SEQ ID NO: 18, Arabidopsis thaliana Arath_WRKY2 (AF418308) SEQ ID NO: 20, Arabidopsis thaliana Arath_WRKY34 (AY052649) SEQ ID NO: 22, Arabidopsis thaliana Arath_WRKY20 (AF425837) SEQ ID NO: 24, Glycine max Glyma_WRKY 2X (contig. de varios ESTs entre los cuales BM143621.1, BU578260.1, CO036102.1) SEQ ID NO: 26, Solanum chacoense Solca_WRKY 2X (AY366389) SEQ ID NO: 28, Ipomoea ba ta tas lpoba_WRKY 2X (D30038) SEQ ID NO: 30, Nicotiana a ttenua ta Nieta WRKY 2X (AY456272) SEQ ID NO: 32, Saccharum officinarum Sacof_WRKY 2X SEQ ID NO: 34, Tri ticum aestivum Triae_WRKY 2X (contig. de varios ESTs entre los cuales BM135197.1 , BM138255.1 , BT009257.1) SEQ ID NO: 36, Hordeum vulgare Horvu_WRKY 2X (AY323206) SEQ ID NO: 38, Zea mays Zeama_WRKY 2X (contig. de CG310251.1 , DR959456.1 , DY235298.1) SEQ ID NO: 45, Lycopersi con esculen tum Lyces_WRKY 2X (contig. de CN385869.1 , BI422509.1 , CN38497745) SEQ ID NO: 47 y Lycopersicon esculentum Lyces WRKY 2X II (contig. de BI422692.1 , BI923269.1 , BI422137.1) SEQ ID NO: 49 y la mencionada en el protocolo de secuencia bajo la SEQ ID NO: 51 de Zea mays .

Tabla 1: Secuencias que son parte de la definición del "polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido".

Se entenderá que las secuencias que son parte de la definición de un "polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido" son van a limitarse a las secuencias de aminoácido dadas en la Tabla 1 y mencionadas en el protocolo de secuencia, pero que cualquier polipéptido que comprende del término amino al término carboxi: (i) un dominio rico en Pro-Ser y (ii) dos dominios de WRKY incluyendo un motivo de C2-H2 de dedo de zinc, pueden ser adecuados para uso para realizar los métodos de la invención. Además, el polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido puede comprender también uno o más lo siguiente: (i) un tramo acídico entre los dos dominios de WRKY en donde al menos de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) una NLS putativa entre al menos 3 de 6 aminoácidos en donde al menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con al menos 50%, 60% ó 70%, de preferencia 75% u 80%, más preferiblemente 90%, incluso más preferiblemente 91%, 92%, 93%, 94% ó 95%, más preferiblemente 96%, 97%, 98% ó 99% de idendiad a la SEQ ID NO: 39 (ejemplificada además en el Ejemplo 4). Incluso más preferiblemente, el polipéptido que tiene dos dominios de WRKY u homólogo de tal polipéptido puede comprender además un motivo de LXSP dentro del dominio rico en Pro-Ser (en donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y en donde X es cualquier aminoácido) . Más preferiblemente, el polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido comprende un dominio rico en Pro-Ser al menos dos veces tan rico en Pro y Ser comparado a la composición de aminoácido promedio (en %) de las proteínas del banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot. Más preferiblemente, el dominio rico en Pro-Ser como se define en la presente tiene un contenido de Pro y Ser (en %) que es al menos 2,1; 2,2; 2,3; 2,4 ó 2,5, más preferiblemente 2,6; 2,7; 2,8; 2,9, 3,0, 3,1 , 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1 , 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0 o más tanto como la composición de aminoácido promedio (en %) de tal clase de secuencias de proteínas, las cuales se incluyen en el banco de datos de la Secuencia de Proteína Swiss-Prot . Ejemplos de ácidos nucleicos de dos dominios de WRKY incluyen, pero no se limitan a los ácidos nucleicos dados en la Tabla 1 y los mencionados en el protocolo de secuencia. Ácidos nucleicos/genes de dos dominios de WRKY y variantes de los mismos pueden ser útiles para practicar los métodos de la invención. Ácidos nucleicos/genes de dos dominios de WRKY variantes incluyen porciones de un ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY y/o ácidos nucleicos incluyen porciones de un ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY y/o ácidos nucleicos capaces de hibridizar con un ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY. SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 50 o variantes de las mismas se prefieren para uso en los métodos de la presente invención. Una modalidad adicional de la invención es una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste de: a) una molécula de ácido nucleico aislada como se describe en la SEQ ID NO: 50; b) una molécula de ácido nucleico aislada que codifica la secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID NO: 51 c) una molécula de ácido nucleico aislada cuya secuencia puede deducirse de una secuencia de polipéptido como se describe en la SEQ ID NO: 51 como un resultado de la degeneración del código genético; d) una molécula de ácido nucleico aislada la cual codifica un polipéptido el cual tiene al menos 80% de identidad con la secuencia de aminoácido del polipéptido codificada por la molécula de ácido nucleico (a) a (c) ; e) una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un homólogo, derivado o fragmento activo de la molécula de aminoácido como se describe en la SEQ ID NO: 51, cuyo homólogo, derivado o fragmento es de origen vegetal y comprende ventajosamente (i) un tramo acídico entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 6 aminoácidos soy ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) una NLS putativa entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con al menos 50%, 60% ó 70%, de preferencia 75% u 80%, más preferiblemente 90%, incluso más preferiblemente 91%, 92%, 93%, 94% ó 95%, más preferiblemente 96%, 97%, 98% ó 99% de identidad a la SEQ ID NO: 39; (f) una molécula de ácido nucleico aislada capaz de hibridizar con un ácido nucleico de (a) a (c) anteriormente, o su componente, en donde la secuencia de hibridación o el complemento de la misma codifica la proteína de la planta (a) a (e); por lo que la molécula de ácido nucleico tiene actividades cada vez mayores de rendimiento y/o crecimiento. Para los propósitos de la invención, "transgénico", "transgen" o "recombinante" significa, con respecto a, por ejemplo, una secuencia de ácido nucleico, un cásete de expresión (= construcción genética) o un vector que comprende la secuencia de ácido nucleico o un organismo transformado con las secuencias de ácido nucleico, casetes de expresión o vectores de acuerdo con la invención, todas aquellas construcciones efectuadas por los métodos recombinantes en los cuales, ya sea a) las secuencias de ácido nucleico de acuerdo con la invención, o b) secuencias de control genético las cuales se enlazan en forma operable con la secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la invención, por ejemplo, un promotor, o c) a) y b) no se localizan en su ambiente genético natural o se han modificado por métodos recombinantes, es posible para la modificación tomar la forma de, por ejemplo una sustitución, adición, eliminación inversión o inserción de uno o más residuos de nucleótido. Se entiende que el ambiente genético natural significa el lugar genómico o cromosomal natural en la planta original o la presencia de una biblioteca genómica. En el caso de una biblioteca genómica, el ambiente genético natural de la secuencia de ácido nucleico se retiene de preferencia, al menos en parte. El ambiente flanquea la secuencia de ácido nucleico al menos en un lado y tiene una longitud de secuencia de al menos 50 pb, de preferencia al menos 500 pb, especialmente de preferencia al menos 1000 pb, más preferiblemente al menos 5000 pb. Un cásete de expresión de origen natural - por ejemplo, la combinación de origen natural del promotor natural de las secuencias de ácido nucleico con la secuencia de ácido nucleico correspondiente que codifica un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido -se vuelve un cásete de expresión transgénica cuando este cásete d expresión se modifica por métodos sintéticos no naturales ("artificiales") tales como por ejemplo, tratamiento mutagénico. Métodos adecuados se describen por ejemplo, en la US 5,564,350 o WO 00/15815. Una planta transgénica para los propósitos de la invención se entiende por lo tanto como significando, como en lo anterior, que los ácidos nucleicos utilizados en el método de la invención no están en su sitio natural en el genoma de la planta, siendo posible para los ácidos nucleicos que se expresan homologa o heterólogamente . Sin embargo, como se menciona, transgénica también significa que, mientras los ácidos nucleicos de acuerdo con la invención o utilizados en el método inventivo están en su posición natural en el genoma de una planta, la secuencia se ha modificado con respecto a la secuencia natural, y/o que las secuencias reguladoras de las secuencias naturales se han modificado. La expresión transgénica se entiende de preferencia como significando la expresión de los ácidos nucleicos de acuerdo con la invención en un lugar no natural en el genoma, es decir, homólogo, o de preferencia, expresión heteróloga de los ácidos nucleicos que tiene lugar. Las plantas transgénicas preferidas se mencionan en la presente.

Plantas huéspedes para los ácidos nucleicos, el cásete de expresión o el vector utilizado en el método de acuerdo con la invención o para los ácidos nucleicos inventivos, el cásete de expresión o construcción o vector son, en principio ventajosamente todas las plantas, las cuales son capaces de sintetizar los polipéptidos utilizados en el método inventivo. A menos que se especifique de otra manera, los términos "polinucleótidos", "ácido nucleico" y "molécula de ácido nucleico" como se utiliza en la presente son intercambiablemente. A menos que se especifique de otra manera, los términos "péptido", "polipéptido" y "proteína" son intercambiablemente en el presente contexto. El término "secuencia" puede relacionarse a polinucleótidos, ácidos nucleicos, moléculas de ácido nucleico, aminoácidos, péptidos, polipéptidos y proteínas, dependiendo del contexto en el cual el término "secuencia" se utilice. Los términos "gen (es)", "polinucleótido", "secuencia de ácido nucleico", "secuencia de nucleótido" o "molécula (s) de ácido nucleico" como se utiliza en la presente, se refieren a una forma polimérica de nucleótidos de cualquier longitud, ya sea ribonucleótidos o desoxiribonucleótidos . Los términos se refieren solamente a la estructura primaria de la molécula. De este modo, los términos "gen (es)", "polinucleótido", "secuencia de ácido nucleico", "secuencia de nucleótido" o "molécula (s) de ácido nucleico" como se utiliza en la presente incluye ADN y ARN de doble y sencilla hebra. También incluyen tipos conocidos de modificaciones, por ejemplo, metilación, "cubiertas" sustituciones de uno o más de los nucleótidos de origen natural con un análogo. De preferencia, la secuencia de ADN o ARN de la invención comprende una secuencia de codificación que codifica el polipéptido definido en la presente. Una "secuencia de codificación" es una secuencia de nucleótido, la cual se transcribe en el ARN o ARNm estructural y/o se traduce en un polipéptido cuando se coloca bajo el control de secuencias reguladoras apropiadas. Los límites de la secuencia de codificación se determinan por un codón de inicio de traducción en el término 5' y un codón de detención de traducción en el término 3' . Una secuencia de codificación puede incluir, pero no se limitan a ARNm, ADNc, secuencias de nucleótido recombinante o ADN genómico, mientras los intrones pueden presentarse también bajo ciertas circunstancias . Un polinucleótido "aislado" o molécula de ácido nucleico se separa de otros polinucleótidos o moléculas de ácido nucleico, las cuales se presentan en la fuente natural de la molécula de ácido nucleico. Una molécula de ácido nucleico aislada puede ser un fragmento cromosomal de varios kb, o de preferencia, una molécula de ácido nucleico puede ser un fragmento cromosomal de varios kb, o de preferencia, una molécula sólo comprende la región de codificación del gen. Por consiguiente, una molécula de ácido nucleico aislada de la invención puede comprender regiones cromosomales, las cuales son 5' y 3' adyacentes o regiones cromosomales adyacentes adicionales, pero de preferencia comprende sustancialmente pocas secuencias las cuales flanquean naturalmente la secuencia de la molécula de ácido nucleico en el contexto genómico o cromosomal en el organismo a partir del cual la molécula de ácido nucleico se origina (por ejemplo, secuencias las cuales están adyacentes a las regiones que codifican las 5' y 3'-UTRs de la molécula de ácido nucleico) . En varias modalidades, la molécula de ácido nucleico aislada utilizada en el proceso de acuerdo con la invención puede, por ejemplo, comprender menos de aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0.5 kb ó 0.1 kb de secuencias de nucleótido las cuales flanquean naturalmente de la molécula de ácido nucleico en el ADN genómico de la célula a partir de la cual se origina la molécula de ácido nucleico. Una molécula de ácido nucleico que abarca una secuencia completa de las moléculas de ácido nucleico utilizadas en el proceso, por ejemplo, el polinucleótido de la invención, o una parte del mismo pueden aislarse adicionalmente por reacción de cadena de polimerasa, cebadores de oligonucleótido con base en esta secuencia o en partes de la misma que se utilizan. Por ejemplo, la molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia completa o parte de la misma puede aislarse por reacción de cadena de polimerasa. Por ejemplo, el ARNm puede aislarse de las células (por ejemplo, por medio del método de extracción de tiocianato de guanidinio de Chirgwin et al. (1979) Biochemistry 18:5294-5299) y el ADNc puede generarse por medio de transcriptasa inversa (por ejemplo, Moloney MLV reverse transcriptase, disponible de Gibco/BRL, Bethesda, MD o AMV reverse transcriptase, obtenible de Seikagaku America, Inc., St. Petersburg, FL) . Las moléculas de ácido nucleico las cuales son ventajosamente para el proceso de acuerdo con la invención pueden aislarse con base en su homología de las molécula de ácido nucleico descritas en la presente utilizando la secuencia o parte de las mismas como sonda de hibridación y siguiendo técnicas de hibridación estándares bajo condiciones de hibridación rigurosas. En este contexto, es posible utilizar, por ejemplo, moléculas de ácido nucleico aisladas de al menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60 ó más nucleótidos, de preferencia de al menos 15, 20 ó 25 nucleótidos de longitud los cuales hibridizan bajo condiciones con las moléculas de ácido nucleico descritas anteriormente, en particular con aquellas las cuales abarcan una secuencia de nucleótido de la molécula de ácido nucleico utilizada en el método de la invención o que codifica una proteína utilizada en la invención o de la molécula de ácido nucleico de la invención. Las moléculas de ácido nucleico con 30, 50, 100, 250 o más nucleótidos pueden utilizarse. Las secuencias de ácido nucleico utilizadas en el proceso de la invención, las cuales se describen en el protocolo de secuencia en particular la SEQ ID NO: 1 ó 50 se introducen ventajosamente en una construcción de ácido nucleico, de preferencia un cásete de expresión, el cual hace posible la expresión de las moléculas de ácido nucleico en una planta. Por consiguiente, la invención también se relaciona a una construcción de ácido nucleico, de preferencia a una construcción de expresión, que comprende la molécula de ácido nucleico de la presente invención funcionalmente enlazada a uno o más elementos o señales reguladoras . Como se describe en la presente, la construcción de ácido nucleico puede comprender también genes adicionales, los cuales van a introducirse en los organismos o células. Es posible y ventajoso introducir dentro y expresar en los genes reguladores de organismos huéspedes tales como genes para inductores, represores o enzimas, los cuales debido a su actividad enzimática, se acoplan en la regulación de uno o más genes de una trayectoria metabólica. Estos genes pueden ser de origen heterólogo u homólogo. Además, los genes de biosíntesis adicional pueden ventajosamente presentarse, o de otra manera estos genes pueden localizarse en una o más construcciones de ácido nucleico. Los genes, los cuales se emplean ventajosamente son genes los cuales influyen el crecimiento de las plantas tales como secuencias reguladoras o factores. Una mejora de los elementos reguladores puede tener lugar ventajosamente en el nivel de transcripción utilizando señales de transcripción fuertes tales como promotores y/o mejoradores. Además, sin embargo, una mejora de traducción es también posible, por ejemplo, incrementando la estabilidad de ARNm o insertando una secuencia mejoradora de traducción. En principio, la construcción de ácido nucleico puede comprender las secuencias reguladoras descritas en la presente y secuencias adicionales relevantes para la expresión de los genes comprendidos. De este modo, la construcción de ácido nucleico de la invención puede utilizarse como un cásete de expresión y de este modo puede utilizarse directamente para la introducción en la planta, o incluso pueden introducirse en un vector. Por consiguiente, en una modalidad la construcción de ácido nucleico es un cásete de expresión que comprende un promotor de microorganismo o un terminador de microorganismo o ambos. En una modalidad, el cásete de expresión abarca un promotor viral o un terminador viral o ambos. En otra modalidad, el cásete de expresión abarca un promotor de planta o un terminador de planta, o ambos. Para introducir una molécula de ácido nucleico en una construcción de ácido nucleico, por ejemplo, como parte de un cásete de expresión, el segmento genético se somete ventajosamente a una reacción por amplificación y ligación en la manera conocida por una persona experimentada. Se prefiere seguir un procedimiento similar al protocolo para la Pfu ADN polimerasa de una mezcla de Pfu/Taq ADN polimerasa. Los cebadores se seleccionan de acuerdo con la secuencia que se amplifica. Los cebadores deben elegirse apropiadamente de tal manera que el amplificado comprenda la secuencia codogénica a partir del inicio del codón de detención. Después de la amplificación, el amplificado se analiza apropiadamente. Por ejemplo, el análisis puede considerar la calidad y cantidad y llevarse a cabo siguiendo la separación por electroforesis en gel. Más adelante, el amplificado puede purificarse siguiendo un protocolo estándar (por ejemplo, Qiagen) . Una alícuota del amplificado particular está entonces disponible para la etapa de clonación subsecuente. El técnico experimentado generalmente conoce los vectores de clonación adecuados. Éstos incluyen, en particular vectores los cuales son capaces de replicación fáciles para manejar sistemas de clonación similares como sistemas con base en levadura bacteriana o células de insectos (por ejemplo, expresión de baculovirus) , en otras palabras especialmente vectores los cuales aseguran la clonación eficiente en cepas de E. Coli o Agrobacterium, y los cuales hacen posible transformar establemente las plantas. Los vectores, los cuales deben mencionarse, en particular son varios sistemas de vector binario y co-integrado, los cuales son adecuados para la transformación mediada por T-ADN. Tales sistemas de vectores se caracterizan en general porque contienen al menos los genes vir, los cuales se requieren para la transformación mediada por Agrobacterium, y las secuencias de borde de T-ADN. En general, los sistemas de vector también comprenden de preferencia además regiones reguladoras cis tales como promotores y terminadores y/o marcadores de selección por medio de los cuales organismos apropiadamente transformados pueden identificarse. Mientras los genes vir y las secuencias de T-ADN se localizan en el mismo vector en el caso de los sistemas de vector co-integrados, los sistemas binarios se basan en al menos dos vectores, uno de los cuales producen genes vir, pero no T-ADN, mientras un segundo produce T-ADN, pero no genes vir. Debido a este hecho, los vectores mencionados al final son relativamente pequeños, fáciles de manipular y capaces de replicación en cepas de E.

Coli y de Agrobacterium. Estos vectores binarios incluyen vectores a partir de las series pBIB-HYG, pPZP, pBecks, pGreen. Aquellos los cuales se utilizan de preferencia de acuerdo con la invención son Binl9, pBHOl, pBinAR, pGPTV y pCAMBIA. Una visión general de vectores binarios y su uso se da por Hellens et al, Trends in plant Science (2000), 5, 446-451. Los vectores se modifican de preferencia de tal manera, que contienen previamente los ácidos nucleicos de la invención, de preferencia las secuencias de ácido nucleico que codifican los polipéptidos como se describe en la SEQ ID NO: 1 y la SEQ ID NO: 50. En un vector de expresión recombinante, "enlazamiento operable" significa que la molécula de ácido nucleico de interés se enlaza a las señales reguladoras de tal manera que la expresión de la molécula de ácido nucleico es posible; se enlazan entre sí de tal manera que las dos secuencias cumplen la función prevista asignada a la secuencia (por ejemplo, en un sistema de transcripción/traducción in vitro, o en una célula huésped si el vector de introduce en la célula huésped) . El término porción como se define en la presente se refiere a una pieza de ADN que codifica un polipéptido que realiza la misma o funciones biológicas similares al polipéptido intacto. Por ejemplo, una porción de dos dominios de WRKY puede codificar un polipéptido que comprende un motivo estructural reconocible y/o dominio funcional tal como un sito de enlace de ADN o dominio que se enlaza a una región promotora de ADN, un dominio de activación o represión, un dominio para las interacciones de proteína-proteína, un dominio de localización y puede también tener la capacidad para iniciar o inhibir la transcripción. Una porción puede prepararse por ejemplo, haciendo una o más eliminaciones a un ácido nucleico de dos dominios de WKRY. Las porciones pueden utilizarse en forma aislada o pueden combinarse a otras secuencias de codificación (o sin codificación) con el fin de por ejemplo, producir una proteína que combine varias actividades. Cuando se combina a otras secuencias de codificación, el polipéptido resultante producido en la traducción puede ser más grande que aquel previsto para la porción de dos dominios de WRKY. Ejemplos de porciones pueden incluir los nucleótidos que codifican un polipéptido que comprende desde el término amino al término carboxi: (i) un dominio rico en Pro-Ser, y (ii) dos dominios de WRKY incluyendo un motivo de C-H2 de dedo de zinc. Las opciones pueden comprender opcionalmente cualquiera o más de lo siguiente: (i) un tramo acidico entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) un NLS putativa entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; e (iii) un dominio conservado con al menos 50%, 60% ó 70%, de preferencia 75% u 80%, más preferiblemente 90%, incluso más preferiblemente 50%, 60% ó 70%, de preferencia 75% u 80%, más preferiblemente 90%, incluso más preferiblemente 91%, 92%, 93%, 94% ó 95%, más preferiblemente 96%, 97%, 98% ó 99% de identidad a la SEQ ID NO: 39. La porción puede además comprender un motivo de LXSP dentro del dominio rico en Pro-Ser (en donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y X es cualquier aminoácido) . La porción es normalmente al menos 300, 400, 500, 600 ó 700 nucleótidos de longitud, de preferencia al menos 750, 900, 850, 900 ó 950 nucleótidos de longitud, más preferiblemente al menos 1000, 1100, 1200 ó 1300 nucleótidos de longitud y más preferiblemente al menos 1350, 1400, 1450, 1500, 1550 ó 1600 nucleótidos o más de longitud. De preferencia, la porción es una porción de cualquiera de los ácidos nucleicos dados en la Tabla 1 y/o mencionados en el protocolo de secuencia. Más preferiblemente, la porción es una porción de un ácido nucleico como se representa por la SEQ ID NO: 1 ó la SEQ ID NO: 50. Los términos "fragmento", "fragmento de una secuencia" o "parte de una secuencia", "porción" o "porción de la misma" significan una secuencia truncada de la secuencia original indicada. La secuencia truncada (secuencia de ácido nucleico o de proteína) puede variar ampliamente en longitud; el tamaño minimo es una secuencia de tamaño suficiente para proporcionar con una secuencia con al menos una función comparable y/o la actividad de la secuencia original indicada o que hibridiza con la molécula de ácido nucleico de la invención o se utiliza en el proceso de la invención bajo condiciones severas, mientras el tamaño máximo no es crítico. En algunas aplicaciones, el tamaño máximo usualmente no es sustancialmente mayor que aquel requerido para proporcionar la actividad deseada y/o función (es) de la secuencia original. Una función comparable significa al menos 40%, 45% ó 50%, de preferencia al menos 60%, 70%, 80% ó 90% o más de la secuencia original. Otra variante del ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY es un ácido nucleico capaz de hibridizar bajo condiciones severas reducidas, de preferencia bajo condiciones severas, más preferiblemente bajo condiciones altamente severas, con un ácido nucleico/gen de dos dominios de WRKY como se define anteriormente. La secuencia de hibridación puede incluir los nucleótidos que codifican un polipéptido que comprende desde el término amino al término carboxi: (i) un dominio rico en Pro-Ser, y (ii) dos dominios de WRKY incluyendo un motivo de C2-H2 de dedo de zinc. La secuencia de hibridación puede comprende opcionalmente cualquiera o más de lo siguiente: (i) un tramo acídico entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) una NLS putativa, entre los dos dominios de WRKY en donde al menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con al menos 50%, 60% ó 70%, de preferencia 75% u 80%, más preferiblemente 90%, incluso más preferiblemente 91%, 92%, 93%, 94% ó 95%, más preferiblemente 96%, 97%, 98% ó 99% de identidad a la SEQ ID NO: 39. La secuencia de hibridación puede comprender además un motivo de LXSP dentro del dominio rico en Pro-Ser (en donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y X es cualquier aminoácido) . La secuencia de hibridación es normalmente al menos 100, 125, 150, 175, 200 ó 225 nucleótidos de longitud, de preferencia al menos 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450 ó 475 nucleótidos de longitud, de preferencia al menos 500, 525, 550, 575, 600, 625, 650, 675, 700 ó 725 nucleótidos de longitud, de preferencia al menos 750, 800, 900, 1000, 1100, 1200 ó 1300 nucleótidos de longitud y más preferiblemente al menos 1400 nucleótidos o más de longitud. De preferencia, la secuencia de hibridación es aquella que es capaz de hibridizar a cualquiera de los ácidos nucleicos dados en la Tabla 1 y/o mencionados en el protocolo de secuencia, o a una porción de cualquiera de las secuencias de ácido nucleico antes mencionadas. Más preferiblemente, la secuencia de hibridación de un ácido nucleico hibridiza con un ácido nucleico como se representa por la SEQ ID NO: 1 o la SEQ ID NO: 50. El término "hibridación" como se define en la presente es un proceso en donde las secuencias de nucleótido complementarias sustancialmente homologas se fijan entre sí. El proceso de hibridación puede ocurrir completamente en solución, es decir, ambos ácidos nucleicos complementarios están en solución. El proceso de hibridación puede ocurrir también con uno de los ácidos nucleicos complementarios inmovilizados a una matriz tal como perlas magnéticas. Perlas de Sepharose o cualquier otra resina. El proceso de hibridación puede ocurrir también con uno de los ácidos nucleicos complementarios inmovilizados a un soporte sólido tal como una membrana de nitrocelulosa o nylon o inmovilizados por ejemplo, por fotolitografía a por ejemplo, un soporte de vidrio silíceo (el último conocido como disposiciones o microdisposiciones de ácido nucleico o como fragmentos de ácido nucleico) . Con el fin de permitir que la hibridación ocurra, las moléculas de ácido nucleico se desnaturalizan en general térmica o químicamente para fundir una doble hebra en dos hebras sencillas y/o para remover horquillas u otras estructuras secundarias a partir de ácidos nucleicos de una sola hebra. La severidad de hibridación está influenciada por condiciones tales como temperatura, concentración salina y composición de tampón de hibridación. "Condiciones de hibridación severas" y "condiciones de lavado de hibridación severas" en el contexto de experimentos de hibridación de ácido nucleico tales como hibridizaciones Southern y Northern son secuencias dependientes y son diferentes bajo diferentes parámetros ambientales. El técnico experimento tiene conocimiento de varios parámetros los cuales pueden alterarse durante la hibridación y lavado y los cuales mantendrán o cambiarán las condiciones severas . La Tm es la temperatura bajo resistencia iónica definida y pH, en la cual 50% de la secuencia objetivo hibridiza a una sonda perfectamente acoplada. La Tm es dependiente de las condiciones de solución y la composición base y la longitud de la sonda. Por ejemplo, las secuencias más largas hibridizan específicamente a temperaturas más elevadas. La tasa máxima de hibridación se obtiene de aproximadamente 16°C a 32°C debajo de la Tm. La presencia de cationes monovalentes en la solución de hibridación reduce la repulsión electrostática entre las dos hebras de ácido nucleico por lo que se promueve la formación de híbridos; este efecto es visible para concentraciones de sodio de hasta 0.4M. La formamida reduce la temperatura de fusión de duplos de ADN-ADN y de ADN-ARN con 0.6 a 0.7°C para cada porcentaje de formamida, y además el 50% de formamida permite la hibridación que se realice de a 30 a 45°C, aunque la tasa de hibridación se disminuirá. Los desacoplamientos de pares de bases reducen la tasa de hibridación y la estabilidad térmica de los duplos. En promedio y para grandes sondas, la Tm disminuye aproximadamente 1°C por % de desacoplamiento base.

La Tm puede calcularse utilizando las siguientes ecuaciones, dependiendo de los tipos de híbridos: 1. Híbridos de ADN-ADN (Meinkoth y Wahl, Anal. Biochem., 138: 267-284, 1984): Tm = 81.5°C + 16. dxlog [Na+] + 0.41x% [G/Cb] -500x[Lc]_1 - 0.61x% de formamida 2. Híbridos de ADN-ARN o ARN-ARN: Tm = 79.8 + 18.5 (log?0[Na+]a) + 0.58 (%G/Cb) + 11.8 (%G/Cb)2 -820/Lc 3. Híbridos de oligo-ADN u oligo-ARNd: Para <20 nucleótidos: Tm = 2 (in) Para 20-35 nucleótidos: Tm = 22 + 1.46 (/n) a o para otro catión monovalente, pero sólo exacto en el rango 0.01-0.4 M. b sólo exacto para % de GC en el intervalo de 30% a 75%. CL = longitud de duplos en pares de bases. d Oligo, oligonucleótido; ln, longitud efectiva del cebador = 2x(no. de G/C)-(no. de AT/C) Nota : para cada 1% de formamida, la Tm se reduce por aproximadamente 0.6 a 0.7°C, mientras la presencia de urea 6M reduce la Tm por aproximadamente 30 °C. La especificidad de hibridación es normalmente la función de lavados de post-hibridación. Para remover el fondo que resulta de la hibridación inespecífica, las muestras se lavan con soluciones salinas diluidas. Los factores críticos de tales lavados incluyen la fuerza iónica y temperatura de la solución de lavado final: a menor concentración de sal y mayor temperatura de lavado, mayor la severidad de lavado. Las condiciones de lavado típicamente se realizan en o por debajo de la severidad de hibridación. Generalmente, condiciones severas adecuadas para ensayos de hibridación de ácido nucleico o procedimientos de detección de amplificación genética como se establece anteriormente. Las condiciones de mayor o menor severidad pueden seleccionarse también. Generalmente, las condiciones de severidad baja se seleccionan para ser aproximadamente 50°C debajo del punto de fusión térmico (Tm) para la secuencia específica en una resistencia iónica definida y ph. Las condiciones severas medias son cuando la temperatura de 20 °C debajo de Tra, y las condiciones de severidad elevada son cuando la temperatura está 10°C debajo de la Tm. Por ejemplo, las condiciones severas son aquellas que son al menos tan severas como por ejemplo, condiciones A-L; y condiciones de severidad reducidas son al menos tan severas como por ejemplo, condiciones M-R. El enlace no específico puede controlarse utilizando cualquiera de un número de técnicas tales como por ejemplo, bloqueando la membrana con soluciones que contiene proteínas, adiciones de ARN, ADN y SDS heterólogos al tampón de hibridación, y tratamiento con ARNase. Ejemplos de hibridación y condiciones de lavado se listan en la Tabla 2 posteriormente Tabla 2: Ejemplos de hibridación y condiciones de lavado * La "longitud del híbrido" es la longitud anticipada para el ácido nucleico de hibridación. Cuando los ácidos nucleicos de secuencia conocida se hibridan, la longitud del híbrido puede determinarse al alinear las secuencias e identificar las regiones conservadas descritas en la presente. + SSPE (1 SSPE es 0.15M NaCl, lOmM NaH2P04, y 1.25mM EDTA, pH7.4) puede sustituirse por SSC (1 SSC es 0.15M NaCl y 15mM de citrato de sodio) en los tampones de hibridación y lavado; los lavados se realizan durante 15 minutos después de que termina la hibridación. Las hibridaciones y lavados pueden incluir adicionalmente 5 reactivo de Denhardt, 0.5-1.0% de SDS, 100 µg/ml de ADN de esperma de salmón fragmentado, desnaturalizado, 0.5% de pirofosfato de sodio, y hasta 50% de formamida. Tb-Tr: La temperatura de hibridación para los híbridos que se anticipan de menos de 50 pares de bases en longitud debe ser 5-10°C menor que la temperatura de fusión Tm de los híbridos; la Tm se determina de acuerdo con las ecuaciones mencionadas en lo anterior. 1 La presente invención también abarca la sustitución de cualquiera, o más de los socios híbridos de ADN o ARN, ya sea con un ANP o un ácido nucleico modificado. Para propósitos de definir el nivel de astringencia, puede hacerse referencia a Sambrook et al . (2001) Molecular Cloning: a laboratoy manual, 3a Edición Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York o a Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989) . El ácido nucleico con dominio WRKY doble o variante del mismo puede derivarse de cualquier fuente natural o artificial. El ácido nucleico/gen o variante del mismo puede aislarse a partir de una fuente microbiana, tales como levaduras, hongos u hongos micilaginosos, o a partir de una fuente vegetal, de musgos, de algas o animal (incluyendo humanos) . Este ácido nucleico puede modificarse a partir de su forma activa en composición y/o ambiente genómico a través de la manipulación humana deliberada. El ácido nucleico de preferencia es de origen vegetal, ya sea a partir de la misma especie vegetal (por ejemplo, para aquella en la cual se introducirá) o de una especie vegetal diferente. El ácido nucleico puede aislarse a partir de una especie monocotiledónea, de preferencia de la familia Poaceae, además preferentemente de Oryza sativa o Zea mays. Más preferentemente, el ácido nucleico de dominio WRKY doble aislado de Oryza sativa o Zea mays se representa por la SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO. 50, y la secuencia de polipéptido que tiene dos dominios WRKY es como se representa por la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 51. La expresión de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo del mismo puede modularse al introducir una modificación genética, dentro del lugar de un gen de dominio WRKY doble, o en cualquier otro lugar en el genoma de la planta. El lugar de un gen como se define en la presente se considera que significa una región genómica, la cual incluye el gen de interés y 10 kb corriente arriba o abajo de la región codificante . La modificación genética puede introducirse, por ejemplo, por cualquiera (o más) de los siguientes métodos: activación de ADN-T, TILLING, recombinación homologa, mutagénesis dirigida y evolución dirigida o al introducir y expresar en una planta un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo de tal polipéptido. Después de la introducción de la modificación genética, se sigue una etapa para seleccionar la expresión modulada de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo del mismo, cuya modulación de la expresión da plantas que tienen rendimiento incrementado con relación a las plantas control. El etiquetado de activación de ADN-T (Hayashi et al . Science (1992) 1350-1353) implica la inserción de ADN-T que usualmente contiene un promotor (también puede ser un mejorador de traducción o un intrón) , en la región genómica (lugar) del gen de interés o 10 kb corriente arriba o abajo de la región de codificación de un gen en una configuración tal que el promotor dirija la expresión del gen objetivo. Típicamente, la regulación de la expresión del gen objetivo por su promotor natural se interrumpe y el gen cae bajo el control del promotor recientemente introducido. El promotor se incrusta típicamente en un ADN-T. Este ADN-T se inserta al azar dentro del genoma de la planta, por ejemplo, a través de infección por Agrobacterium y conduce a sobreexpresión de los genes cercanos al ADN-T insertado. Las plantas transgénicas resultantes muestran fenotipos dominantes debido a la sobreexpresión de los genes cercanos al promotor introducido. El promotor que debe introducirse puede ser cualquier promotor capaz de dirigir la expresión de un gen en el organismo deseado, en este caso una planta. Por ejemplo, los promotores constitutivos, preferidos de tejido, preferidos del tipo de célula e inducibles son todos adecuados para su uso en la activación de ADN-T. Una modificación genética puede introducirse también en el lugar de un gen de domino WRKY doble utilizando la técnica de TILING (Lesiones Locales Inducidas Dirigidas En Genomas) . Esta es una tecnología de mutagénesis útil para generar y/o identificar, y para aislar eventualmente variantes mutagenizadas de un ácido nucleico de dominio WRKY doble capaz de exhibir actividad WRKY modulada. Las variantes mutantes pueden también exhibir expresión de WRKY modificada, en potencia y en perfil de expresión (tiempo y lugar) que aquella exhibida por el gen en su forma natural. TILLING también permite la selección de plantas que transportan tales variantes mutantes. TILLING combina mutagénesis de alta densidad con métodos de selección de rendimiento elevado. Las etapas seguidas típicamente en TILLING son: (a) mutagénesis de EMS (Redei GP and Koncz C (1992) En Methods in Arabidopsis Research, Koncz C, Chua NH, Schell J, eds. Singapore, World Scientific Publishing Co, pp. 16-82; Feldmann et al . , (1994) En Meyerowitz EM, Somerville CR, eds, Arabidopsis. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp 137-172; Lightner J and Caspar T (1998) En J Martinez-Zapater, J Salinas, eds, Methods on Molecular Biology, Vol. 82. Humana Press, Totowa, NJ, pp 91-104); (b) preparación de ADN y agrupación de individuos; (c) amplificación por PCR de una región de interés; (d) desnaturalización y fijación para permitir la formación de heteroduplos; (e) DHPLC, en donde la presencia de un heteroduplo en un grupo se detecta como un pico extra en el cromatograma; (f) identificación del individuo mutante; y (g) secuenciación del producto de PCR mutante. Los métodos para TILLING se conocen bien en la técnica (McCallum et al . , (2000) Nat Biotechnol 18: 455-457; revisado por Stemple (2004) Nat Rev Genet 5(2): 145-50). La recombinación homologa permite la introducción en un genoma de un ácido nucleico seleccionado en una posición seleccionada definida. La recombinación homologa es una tecnología estándar utilizada de modo rutinario en las ciencias biológicas para organismos inferiores tales como levaduras o el musgo Physcomi trella . Los métodos para realizar recombinación homologa en plantas se han descrito no sólo para plantas modelo (Offringa et al . (1990) EMBO J 9(10): 3077-84), sino también para plantas de cultivo, por ejemplo arroz (Terada et al . (2002) Nat Biotech 20(10): 1030-4; Iida and Terada (2004) Curr Opin Biotech 15(2): 132-8). El ácido nucleico que debe dirigirse (el cual puede ser un ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo como se define anteriormente) no necesita dirigirse al lugar de un gen de domino WRKY doble, pero puede introducirse, por ejemplo, en regiones de alta expresión. El ácido nucleico que debe dirigirse puede ser un alelo mejorado utilizado para reemplazar el gen endógeno o puede introducirse además del gen endógeno. La mutagénesis dirigida puede utilizarse para generar variantes de ácidos nucleicos de dominio WRKY doble. Varios métodos están disponibles para lograr mutagénesis dirigida, los más comunes son métodos basados en PCR (Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Eds. 33 http: //www . ulr . com/products/currentprotocols/index . html) . La evolución dirigida puede también utilizarse para generar variantes de ácidos nucleicos de dominio WRKY doble.

Esto consiste de iteraciones de desordenamiento de ADN seguidas por elección y/o selección apropiada para generar variantes de ácidos nucleicos de dominio WRKY doble o porciones de los mismos que codifican polipéptidos que tienen dos dominios WRKY u homólogos o porciones de los mismos que tienen una actividad biológica modificada [Castle et al . , (2004) Science 30(5674): 1151-4; Patentes Norteamericanas 5,811,238 y 6,395,547] . La activación de ADN-T, TILLING, recombinación homologa, mutagénesis dirigida y evolución dirigida son ejemplos de tecnologías que permiten la generación de alelos novedosos y variantes de ácidos nucleicos de dominio WRKY doble . Un método preferido para introducir una modificación genética (la cual en este caso no necesita estar en el lugar de un gen de dominio WRKY doble) es introducir y expresar en una planta un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo de tal polipéptido. Los "homólogos" de un polipéptido que tiene dos dominios WRKY también pueden ser útiles en la presente invención. Los homólogos abarcan péptidos, oligopéptidos, polipéptidos, proteínas y enzimas que tienen sustituciones, eliminaciones y/o inserciones de aminoácidos con relación a la proteína no modificada en cuestión y que tienen actividad biológica y funcional similar como la proteína no modificada de la cual se derivan. Para producir tales homólogos, los aminoácidos de la proteína pueden reemplazarse por otros aminoácidos que tienen propiedades similares (tales como hidrofobicidad, hidrofilicidad, antigenicidad similares, propensión a formar o romper estructuras de hélices a o estructuras de láminas ß) . Las tablas de sustitución conservativa se conocen bien en la técnica (véase por ejemplo Creighton (1984) Proteins. W.H. Freeman and Company y la Tabla 3 en lo siguiente) . También se abarcan por el término "homólogos" dos formas especiales de homología, las cuales incluyen secuencias ortólogas y secuencias parálogas, las cuales abarcan conceptos evolutivos usados para describir las interrelaciones ancestrales de los genes. El término "parálogos" se relaciona con duplicaciones génicas dentro del genoma de una especie que conduce a genes parálogos. El término "ortólogos" se relaciona con genes homólogos en organismos diferentes debido a especiación. Ejemplos de homólogos de un polipéptido que tiene dos dominios WRKY se dan en la Tabla 1 o en el protocolo de secuencias anteriormente . Los ortólogos, por ejemplo, en especies vegetales monocotiledóneas, pueden encontrarse fácilmente al realizar una búsqueda denominada blast recíproca. Esto puede hacerse por una primera BLAST que involucra someter a BLAST una secuencia de interrogación (por ejemplo, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 51) contra cualquier base de datos de secuencias, tal como la base de datos NCBI públicamente disponible. BLASTN o TBLASTX (usando valores predeterminados estándar) pueden usarse cuando se inicia de una secuencia de nucleótidos y BLASTP o TBLASTN (usando valores predeterminados estándar) pueden usarse cuando se inicia de una secuencia polipeptídica. Los resultados de BLAST pueden filtrarse de manera opcional. Las secuencias completas, ya sea de los resultados filtrados o de los resultados no filtrados se someten nuevamente a BLAST (segundo BLAST) contra secuencias del organismo del cual se deriva la secuencia de interrogación (donde la secuencia de interrogación es SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 51, la segunda BLAST puede ser por lo tanto contra secuencias de Oryza o Zea ) . Los resultados de la primera y segunda búsquedas BLAST se comparan entonces. Un parálogo se identifica si una consulta de alto nivel de la primera BLAST es de la misma especie a partir de la cual se deriva la secuencia de interrogación, una BLAST inversa entonces resulta idealmente en la secuencia de interrogación como consulta de alto nivel (además de la secuencia paráloga misma) ; un ortólogo se identifica si una consulta de alto nivel en la primera BLAST no es de la misma especie a partir de la cual se deriva la secuencia de interrogación y de preferencia resulta en BLAST inversa en la secuencia de interrogación entre las consultas más altas. Las consultas de alto nivel son aquellas que tienen un valor E bajo. A menor valor E, la calificación es más significativa (o en otras palabras es menor la oportunidad de que la consulta se encuentre por casualidad) . El cálculo del valor E es bien conocido en la técnica. Además de los valores E, las comparaciones se califican también por porcentaje de identidad. El porcentaje de identidad se refiere al número de nucleótidos (o aminoácidos) idénticos entre las dos secuencias de ácido nucleico (o polipéptido) comparadas sobre una longitud particular. En el caso de grandes familias, puede usarse ClustalW, seguido por un análisis de árbol de asociación de vecinos, para ayudar a visualizar la agrupación. Un homólogo puede encontrarse en la forma de una "variante sustitucional" de una proteína, es decir donde por lo menos un residuo en una secuencia de aminoácidos se ha removido y un residuo diferente se ha insertado en su lugar. Las sustituciones de aminoácidos típicamente son de residuos sencillos, pero pueden agruparse dependiendo de las limitaciones funcionales colocadas con el polipéptido; las inserciones usualmente serán del orden de aproximadamente 1 a 10 residuos de aminoácido. Preferentemente, las sustituciones de aminoácidos comprenden sustituciones de aminoácidos conservativos. Las tablas de sustitución conservativa se encuentran fácilmente disponibles en la técnica. La tabla en lo siguiente da ejemplos de sustituciones de aminoácidos conservativos .

Tabla 2: Ejemplos de sustituciones de aminoácidos conservados Un homólogo también puede encontrarse en la forma de una "variante insercional" de una proteína, es decir donde uno o más residuos de aminoácido se introducen en un sitio predeterminado en una proteína. Las inserciones pueden comprender fusiones N-terminal y/o C-terminal así como también inserciones intrasecuencia de aminoácidos sencillos o múltiples. Generalmente, las inserciones dentro de las secuencias de aminoácidos serán más pequeñas que las fusiones N- o C-terminal, del orden de aproximadamente 1 a 10 residuos. Ejemplos de proteínas o péptidos de fusión N- o C-terminal incluyen el dominio de unión o dominio de activación de un activador transcripcional tal como se usa en el sistema de dos híbridos en levadura, proteínas de cubierta de fago, etiqueta de 6- (histidina) , etiqueta de glutatión S-transferasa, proteína A, proteína de unión a maltosa, dihidrofolato reductasa, epítopo Tag 100, epítopo c-myc, epítopo FLAG®, lacZ, CMP (péptido de unión a calmodulina) , epítopo HA, epítopo de proteína C y epítopo VSV. Los homólogos en la forma de "variantes por eliminación" de una proteína se caracterizan por la remoción de uno o más aminoácidos de una proteína. Las variantes de aminoácidos de una proteína pueden elaborarse fácilmente usando técnicas sintéticas de péptidos bien conocidas en la técnica, tal como síntesis de péptidos en fase sólida y similares, o por manipulaciones de ADN recombinante. Los métodos para la manipulación de secuencias de ADN para producir variantes de una proteína por sustitución, inserción o eliminación se conocen bien en la técnica. Por ejemplo, las técnicas para elaborar mutaciones por sustitución en sitios predeterminados en el ADN se conocen bien para aquellos experimentados en la técnica e incluyen mutagénesis con M13, mutagénesis in vi tro T7-Gen (USB, Cleveland, OH) , mutagénesis QuickChange Site-Directed (Stratagene, San Diego, CA) , mutagénesis dirigida mediada por PCR u otros protocolos de mutagénesis dirigida. El polipéptido que tiene dos dominios WRKY u homólogo del mismo puede ser un derivado. Los "derivados" incluyen péptidos, oligopéptidos, polipéptidos, proteínas y enzimas los cuales pueden comprender sustituciones, eliminaciones o adiciones de residuos de aminoácidos que se presentan de manera natural y no natural en comparación con la secuencia de aminoácidos de una forma de la proteína que se presenta de manera natural. Los "derivados" de una proteína abarcan péptidos, oligopéptidos, polipéptidos, proteínas y enzimas los cuales pueden comprender residuos de aminoácido alterados, glicosilados, acilados, prenilados, sumolizados que se presentan de manera natural o que se presentan de manera no natural en comparación con la secuencia de aminoácidos de una forma del polipéptido que se presenta en forma natural. Un derivado también puede comprender uno o más sustituyentes diferentes a aminoácidos en comparación con la secuencia de aminoácidos de la cual se derivan, por ejemplo una molécula reportera u otro ligando, unido en forma covalente o no covalente a la secuencia de aminoácidos, tal como una molécula reportera la cual se une para facilitar su detección, y residuos de aminoácidos que se presentan en forma no natural con relación a la secuencia de aminoácidos de una proteína que se presenta de manera natural. El polipéptido que tiene dos dominios WRKY u homólogo del mismo puede codificarse por una variante de empalme alternativo de un ácido nucleico/gen de dominio WRKY doble. El término "variante de empalme alternativa" como se usa en la presente, abarca variantes de una secuencia de ácido nucleico en la cual los intrones y/o exones seleccionados se han escindido, reemplazado o agregado, o en la cual los intrones se han acortado o alargado. Tales variantes serán aquellas en las cuales la actividad biológica de la proteína se retiene, lo cual puede lograrse al retener en forma selectiva los segmentos funcionales de la proteína. Tales variantes de empalme pueden encontrarse en la naturaleza o pueden hacerse por el hombre. Los métodos para elaborar tales variantes de empalme se conocen en la técnica. La variante de empalme puede incluir los nucleótidos que codifican un polipéptido que comprende de amino-terminal a carboxi-terminal: (i) un dominio rico en Pro-Ser, y (ii) dos dominios WRKY que incluyen un motivo C2-H2 de dedos de zinc. La variante de empalme puede comprender opcionalmente cualquiera o más de los siguientes: (i) un tramo ácido entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) un NLS putativo entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con por lo menos 50%, 60% o 70%, preferentemente 75% u 80%, más preferentemente 90%, incluso más preferentemente 91%, 92%, 93%, 94% o 95%, lo más preferentemente 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con la SEQ ID NO: 39. El empalme además puede comprender un motivo LXSP dentro del dominio rico en Pro-Ser (donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y X es cualquier aminoácido) . Las variantes de empalme preferidas son variantes de empalme de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY tal como se representa por cualquiera de los ácidos nucleicos dados en la Tabla 1 y/o en el protocolo de secuencias. La más preferida es una variante de empalme de un ácido nucleico tal como se representa por la SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 50. El homólogo también puede codificarse por una variante alélica de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY un homólogo del mismo. Las variantes alélicas existen en la naturaleza, y abarcado dentro de los métodos de la presente invención se encuentra el uso de estos alelos naturales. Las variantes alélicas abarcan Polimorfismos de un Solo Nucleótido (SNPs) , así como también Polimorfismos Pequeños de Inserción/Eliminación (INDELs) . El tamaño de los INDEL usualmente es menor de 100 bp. Los SNP y los INDEL forman el conjunto más grande de variantes de secuencias en cepas polimórficas que se presentan en forma natural de la mayor parte de los organismos. La variante alélica puede incluir los nucleótidos que codifican un polipéptido que comprende de amino-terminal a carboxi-terminal: (i) un dominio rico en Pro-Ser, y (ii) dos dominios WRKY que incluyen un motivo C2-H2 de dedos de zinc. La variante alélica puede comprender opcionalmente cualquiera o más de los siguientes: (i) un tramo ácido entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) un NLS putativo entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con por lo menos 50%, 60% o 70%, preferentemente 75% u 80%, más preferentemente 90%, incluso más preferentemente 91%, 92%, 93%, 94% o 95%, lo más preferentemente 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con la SEQ ID NO: 39. La variante alélica además puede comprender un motivo LXSP dentro del dominio rico en Pro-Ser (donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y X es cualquier aminoácido) . Las variantes alélicas preferidas son variantes alélicas de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY tal como se representa por cualquiera de los ácidos nucleicos dados en la Tabla 1 y/o en el protocolo de secuencias. La más preferida es una variante alélica de un ácido nucleico tal como se representa por la SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 50. Las variantes de empalme y las variantes alélicas de los ácidos nucleicos que codifican un polipéptido que tiene dos dominios WRKY son ejemplos de ácidos nucleicos útiles para realizar los métodos de la presente invención. De acuerdo con un aspecto preferido de la presente invención, se visualiza la expresión modulada del ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo. Los métodos para incrementar la expresión de los genes o productos génicos se documentan bien en la técnica e incluyen, por ejemplo, sobreexpresión dirigida por promotores apropiados, el uso de intensificadores de la transcripción o intensificadores de la traducción. Los ácidos nucleicos aislados los cuales sirven como elementos promotores o intensificadores pueden introducirse en una posición apropiada (típicamente corriente arriba) de una forma no heteróloga de un polinucleótido para sobreregular la expresión de un ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo. Por ejemplo, los promotores endógenos pueden alterarse in vivo por mutación, eliminación y/o sustitución (véase, Kmiec, Patente Norteamericana No. 5,565,350; Zarling et al . , PCT/US93/03868 ) , o los promotores aislados pueden introducirse en una célula vegetal en la orientación y distancia apropiadas a partir de un gen de la presente invención para controlar la expresión del gen. Los métodos para reducir la expresión de genes o productos génicos se documentan bien en la técnica e incluyen, por ejemplo, subregulación de la expresión por técnicas antisentido, cosupresión, técnicas de iRNA (usando los ARN de horquilla (hpRNA) , pequeños ARN de interferencia (siRNAs), microARN (miRNA) ) etc. Si se desea la expresión del polipéptido, es generalmente deseable incluir una región de poliadenilación en el extremo 3' de una región codificante del polinucleótido. La región de poliadenilación puede derivarse del gen natural, de una diversidad de otros genes vegetales, o de ADN-T. La secuencia del extremo 3' que se agregará puede derivarse de, por ejemplo, los genes de nopalina sintasa u octopina sintasa, o alternativamente de otro gen vegetal, o menos preferentemente de cualquier otro gen eucariótico. Una secuencia de intrones también puede agregarse a la región no traducida 5' o a la secuencia codificante de la secuencia codificante parcial para incrementar la cantidad del mensaje maduro que se acumula en el citosol. La inclusión de un intrón que puede empalmarse en la unidad transcripcional en construcciones de expresión vegetal y animal ha demostrado incrementar la expresión génica en niveles de ARNm y proteína hasta 1000 veces (Buchman and Berg (1988) Mol. Cell biol. 8:4395-4405; Callis et al . (1987) Genes Dev. 1 : 1183-1200). Tal intensificación intrónica de la expresión génica es típicamente mayor cuando se coloca cerca del extremo 5' de la unidad transcripcional. En la técnica se conoce el uso de los intrones Adhl-S de maíz, intrón 1, 2, y 6, el intrón Bronze-1. Véase en general, The Maize Handbook, Chapter 116, Freeling and Walbot, Eds., Springer, N.Y. (1994) . La invención también proporciona construcciones y vectores genéticos para facilitar la introducción y/o expresión de las secuencias de nucleótidos útiles en los métodos de acuerdo con la invención. Por lo tanto, se proporciona una construcción génica que comprende: (i) un ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo, como se define anteriormente; (ii) una o más secuencias de control capaces de conducir la expresión de la secuencia de ácido nucleico de (i) ; y opcionalmente (iii) una secuencia de terminación de la transcripción. Las construcciones útiles en los métodos de acuerdo con la presente invención pueden construirse usando tecnología de ADN recombinante bien conocida para personas experimentadas en la técnica. Las construcciones génicas pueden insertarse en vectores, los cuales pueden encontrarse comercialmente disponibles, adecuados para transformar en plantas y adecuados para la expresión del gen de interés en las células transformadas. La invención además proporciona el uso de una construcción génica como se define anteriormente en los métodos de la invención. Las plantas se transforman con un vector que comprende la secuencia de interés (es decir, un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY u homólogo de tal polipéptido) . La secuencia de interés se enlaza en forma operable a una o más secuencias de control (por lo menos a un promotor) . Los términos "elemento regulador", "secuencia de control" y "promotor" se usan en su totalidad en forma intercambiable en la presente y deben tomarse en un contexto amplio para referirse a secuencias reguladoras de ácidos nucleicos capaces de efectuar la expresión de las secuencias a las cuales se ligan. Las secuencias reguladoras transcripcionales derivadas de un gen de genoma eucariótico clásico (incluyendo la caja TATA la cual se requiere para la iniciación precisa de la transcripción, con o sin una secuencia de caja CCAAT) y los elementos reguladores adicionales (es decir, secuencias activadoras corriente arriba, intensificadores y silenciadores) los cuales alteran la expresión génica en respuesta al estímulo del desarrollo y/o externo, o de una manera específica de tejido, se abarcan por los términos mencionados anteriormente. También se incluye dentro del término una secuencia reguladora transcripcional de un gen procariótico clásico, en cuyo caso puede incluir una secuencia de caja -35 y/o secuencias reguladoras transcripcionales de caja -10. El término "elemento regulador" también abarca una molécula de fusión sintética o derivado que confiere, activa o intensifica la expresión de una molécula de ácido nucleico en una célula, tejido u órgano. El término "enlazado en forma operable" como se usa en la presente, se refiere a un enlazamiento funcional entre la secuencia promotora y el gen de interés, de modo que la secuencia promotora sea capaz de iniciar la transcripción del gen de interés . Promotores adecuados, los cuales son funcionales en plantas, se conocen en general. Estos pueden tener la forma de promotores constitutivos o inducibles. Los promotores adecuados pueden permitir la expresión específica del desarrollo y/o del tejido en eucariotes multicelulares; de esta manera, promotores específicos de hojas, raíces, flores, semillas, estoma, tubérculos o frutos pueden utilizarse ventajosamente en las plantas. Diferentes promotores vegetales que pueden usarse en plantas son promotores tales como, por ejemplo, el promotor USP, el LegB4-, el DC3 o el promotor de ubiquitina de perejil. Un promotor "vegetal" comprende elementos reguladores, los cuales median la expresión de un segmento de secuencia codificante en células vegetales. Por consiguiente, un promotor de planta no necesita ser de origen vegetal, pero puede originarse de virus o microorganismos, en particular por ejemplo de virus los cuales atacan células vegetales. El promotor "vegetal" puede originarse también de una célula vegetal, por ejemplo, de la planta, la cual se transforma con la secuencia de ácido nucleico que debe expresarse en el proceso inventivo y descrita en la presente. Esto también se aplica a otras señales reguladoras "vegetales" por ejemplo, en terminadores "vegetales". Para su expresión en plantas, la molécula de ácido nucleico, como se describe anteriormente, debe enlazarse en forma operable a, o comprender, un promotor adecuado el cual expresa el gen en el punto exacto en el tiempo y en una manera específica de célula o tejido. Los promotores que pueden usarse son promotores constitutivos (Benfey et al., EMBO J. 8 (1989) 2195-2202), tales como aquellos que se originan de virus vegetales, tales como 35S CAMV (Franck et al., Cell 21 (1980 285-294), 19S CaMV (véase también US 5352605 y WO 84/02913), 34S FMV (Sanger et al., Plant. Mol. Biol., 14, 1990: 433-443), o promotores vegetales tales como el promotor de ubiquitina de perejil, el promotor de la subunidad pequeña de Rubisco descrito en US 4,962,028 o los promotores vegetales PRP1 [Ward et al., Plant Mol. Biol. 22 (1993)], SSU, PGEL1, OCS [Leisner (1988) Proc Natl Acad SCi USA 85(5) :2553-2557] , lib4, usp, mas [Comai (1990) Plant Mol Biol 15(3) .373-381] , STLS1, ScBV (Schenk (1999) Plant Mol Biol 39(6) : 1221-1230) , B33, SAD1, SAD2 (promotores de lino, Jain et al., Crop Science, 39 (6), 1999: 1696-1701) o nos [Shaw et al. (1984) Nucleic Acids Res. 12 (20 ): 7831-7846] . Ejemplos adicionales de promotores vegetales constitutivos son los promotores de V-ATPasa de remolacha azucarera (WO 01/14572). Ejemplos de promotores constitutivos sintéticos son el Super promotor (WO 95/14098) y promotores derivados de cajas G (WO 94/12015) . Si es apropiado, promotores inducibles por químicos pueden también utilizarse adicionalmente, compárese EP-A 388186, EP-A 335528, WO 97/06268. La expresión constitutiva estable de las proteínas de acuerdo con la invención en una planta puede ser ventajosa. Sin embargo, la expresión inducible del polipéptido de la invención es ventajosa, si una expresión tardía antes de la cosecha es de ventaja, ya que la manipulación metabólica puede conducir al retardo en el crecimiento de la planta. La expresión de genes vegetales también puede facilitarse mediante un promotor inducible por químicos (para una revisión véase Gatz 1997, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 48:89-108). Los promotores químicamente inducibles son particularmente adecuados cuando se desea expresar el gen en una manera específica en el tiempo. Ejemplos de tales promotores son un promotor inducible por ácido salicílico (WO 95/19443) , y el promotor inducible por ácido abscísico (EP 335 528), un promotor inducible por tetraciclina (Gatz et al. (1992) Plant J. 2, 397-404), un promotor inducible por ciciohexanol o etanol (WO 93/21334) u otros como se describe en la presente. Otros promotores adecuados son aquellos que reaccionan a condiciones de estrés biótico o abiótico, por ejemplo, el promotor génico PRP1 inducido por patógenos (Ward et al., Plant. Mol. Biol. 22 (1993) 361-366), el promotor hspdO de tomate inducible por calor (US 5,187,267) el promotor de alfa-amilasa de papa inducible por frío (WO 96/12814) o el promotor pinll inducible por heridas (EP-A-0 375 091) u otros como se describe en la presente. Los promotores preferidos son en particular aquellos que aportan expresión génica en tejidos y órganos, en células de semillas, tales como células del endospermo y células del embrión en desarrollo. Los promotores adecuados son el promotor de gen napina de semilla de colza (US 5,608,152), el promotor USP de haba Vicia (Baeumlein et al., Mol. Ben Genet, 1991, 225(3): 459-67), el promotor de oleosina de Arabidopsis (WO 98/45461), el promotor de faseolina de Phaseolus vulgaris (US 5,504,200), el promotor Bce4 de Brassica (WO 91/13980) , el promotor arc5 de frijol, el promotor DcG3 de zanahoria, en el promotor B4 de Leguminosa (LeB4; Baeumlein et al., 1992, Plant Journal 2 (2):233-9), y promotores los cuales producen la expresión específica en semillas en plantas monocotiledóneas tales como maíz, cebada, trigo, centeno, arroz y similares. Promotores ventajosos específicos de semillas son el promotor de la proteína de unión a sacarosa (WO 00/26388), el promotor de faseolina y el promotor de napina. Promotores adecuados los cuales deben considerarse son el promotor del gen Ipt2 ó Ipt2 de cebada (WO 95/15389 y WO 95/23230), y los promotores descritos en WO 99/16890 (promotores del gen de hordeína de cebada, el gen de glutelina de arroz, el gen de orizina de arroz, el gen de prolamina de arroz, el gen de gliadina de trigo, el gen de glutelina de trigo, el gen de zeína de maíz, el gen de glutelina de avena, el gen de kasirina de sorgo y el gen de secalina de centeno) . Promotores adecuados adicionales son Amy32b, Amy 6-6 y Aleuraína [US 5,677,474] Bce4 (semilla de colza) [US 5,530,149], glicina (soya [EP 571 741], fosfoenolpiruvato carboxilasa (soya) [JP 06/62870], ADR12-2 (soya) [WO 98/08962], isocitrato liasa (semilla de colza) [US, 5,689,040] o a-amilasa (cebada) [EP 781 849]. Otros promotores los cuales están disponibles para la expresión de genes en plantas son promotores específicos de hojas tales como aquellos descritos en DE-A 19644478 o promotores regulados por luz tales como, por ejemplo, el promotor petE de chícharo. Promotores vegetales adecuados adicionales son el promotor FBPase citosólico o el promotor ST-LSI de papa (Stockhaus et al., EMBO J. 8, 1989, 2445) el promotor de fosforibosilpirofosfato amidotransferasa de Glycine max (No. de Registro GenBank U87999) o el promotor específico de nodo descrito en EP-A 0 249 676. En forma favorable, cualquier tipo de promotor puede usarse para conducir la expresión de la secuencia de ácido nucleico. El promotor puede ser un promotor inducible, es decir que tiene una iniciación de la transcripción inducida o incrementada en respuesta a un estímulo del desarrollo, químico, ambiental o físico. Un ejemplo de un promotor inducible es un promotor inducible por estrés, es decir un promotor activado cuando una planta se expone a diversas condiciones de estrés. Adicional o alternativamente, el promotor puede ser un promotor especifico de tejido, es decir uno que es capaz de iniciar la transcripción en forma preferencial en ciertos tejidos, tales como las hojas, raíces, tejido de la semilla, etc. En una modalidad, el ácido nucleico de domino WRKY doble o variante del mismo se enlaza en forma operable a un promotor constitutivo. Un promotor constitutivo es activo en forma transcripcional en el transcurso de la mayor parte de, pero no necesariamente todas, las fases de su crecimiento y desarrollo y se expresa sustancialmente en forma ubicua. Preferentemente, el promotor constitutivo es un promotor G0S2 (de arroz) (SEQ ID N0:2). Ejemplos de otros promotores constitutivos que también pueden usarse para conducir la expresión de un ácido nucleico de dominio WRKY doble se muestran en la Tabla 4 en lo siguiente.

Tabla 4: Ejemplos de promotores constitutivos En otra modalidad, el ácido nucleico de dominio de dos WRKY o variante de los mismos se une operablemente a un promotor específico de semilla, preferiblemente un promotor de embrión y/o aleurona específica. Preferiblemente, el promotor de embrión y/o aleurona es un promotor oelosina, más preferiblemente el promotor de embrión y/o aleurona es un promotor de oleosina kDa, además preferiblemente el promotor específico de embrión y/o aleurona es un promotor de rico en oelosina kDa (Wu et al. (1998) J Biochem 123(3): 386-91), más preferiblemente el embrión y/o promotor específico de aleurona es sustancialmente similar a la secuencia como se representó por la SEQ ID No: 43 o es como se representa por la SEQ ID NO: 3. Ejemplos de otros promotores específicos de semilla que también pueden ser utilizados para accionar la expresión de ácido nucleico de dominio de dos WRKY como se muestran en la Tabla 5 siguiente.

Tabla 5: Ejemplos de promotores específicos de semilla Debe aclararse que la aplicabilidad de la presente invención no se restringe al ácido nucleico de dominio WRKY doble representado por la SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 50, ni la aplicabilidad de la invención se restringe a la expresión de un ácido nucleico de dominio WRKY doble cuando se conduce por el promotor GOS2 o un promotor de oleosina. Opcionalmente, una o más secuencias terminadoras puede utilizarse también en la construcción introducida en una planta. El término "terminador" abarca una secuencia control la cual es una secuencia de ADN en el extremo de una unidad transcripcional la cual señala el procesamiento y la poliadenilación 3' de un transcrito primario y la terminación de la transcripción. Los elementos reguladores adicionales pueden incluir intensificadores transcripcionales asi como también traduccionales . Aquellos experimentados en la técnica se percatarán de las secuencias terminadoras e intensificadoras que pueden ser adecuadas para su uso al realizar la invención. Tales secuencias pueden conocerse o pueden obtenerse fácilmente por una persona experimentada en la técnica. Las construcciones genéticas de la invención además pueden incluir una secuencia de origen de replicación que se requiere para el mantenimiento y/o replicación en un tipo celular específico. Un ejemplo es cuando una construcción genética se requiere mantener en una célula bacteriana como un elemento genético episomal (por ejemplo, molécula de plásmido o cósmido) . Los orígenes de replicación preferidos incluyen, pero no se limitan a, el fl-ori y colEl. Para la detección y/o selección de la transferencia exitosa de las secuencias de ácido nucleico como se representan en el protocolo de secuencias y se usan en el proceso de la invención, es favorable usar genes marcadores (= genes reporteros) . Estos genes marcadores permiten la identificación de una transferencia exitosa de las moléculas de ácido nucleico mediante una serie de diferentes principios, por ejemplo, mediante identificación visual con la ayuda de fluorescencia, luminiscencia o en el intervalo de longitud de onda de la luz la cual es discernible para el ojo humano, por una resistencia a herbicidas o antibióticos, mediante lo que se conoce como marcadores nutritivos (marcadores de auxotrofía) o marcadores antinutritivos, a través de ensayos enzimáticos o a través de fitohormonas . Ejemplos de tales marcadores los cuales pueden mencionarse son GFP (= proteína fluorescente verde) ; el sistema de luciferina/luciferasa, la ß-galactosidasa con sus sustratos coloreados, por ejemplo, X-Gal, las resistencias a herbicida a por ejemplo, imidazolinona, glifosato, fosfinotricina o sulfonilurea, las resistencias a antibióticos para por ejemplo, bleomicina, higromicina, estreptomicina, kanamicina, tetraciclina, cloranfenicol, ampicilina, gentamicina, geneticina (G418), espectinomicina o blasticidina, por mencionar sólo algunos, marcadores nutritivos tal como la utilización de mañosa o xilosa, o marcadores antinutritivos tales como la resistencia a 2-desoxiglucosa. Esta lista es un número pequeño de posibles marcadores. El trabajador experto se familiariza mucho con tales marcadores. Se prefieren diferentes marcadores, dependiendo del organismo y el método de selección. Por lo tanto, la construcción genética puede comprender opcionalmente un gen marcador seleccionable. Como se usa en la presente, el término "marcador seleccionable o gen marcador seleccionable" incluye cualquier gen que confiere un fenotipo en una célula en la cual se expresa para facilitar la identificación y/o selección de células que se transfectan o transforman con una construcción de ácidos nucleicos de la invención. Los marcadores adecuados pueden seleccionarse de marcadores que confieren resistencia a antibióticos o herbicidas, que introducen un nuevo atributo metabólico o que permiten selección visual. Ejemplos de genes marcadores seleccionables incluyen genes que confieren resistencia a antibióticos (tales como nptll que fosforila neomicina y kanamicina, o hpt, que fosforila higromicina), a herbicidas (por ejemplo bar el cual proporciona resistencia a Basta; aroA o gox que proporcionan resistencia contra glifosato) , o genes que proporcionan un atributo metabólico (tal como manA que permite a las plantas usar mañosa como única fuente de carbono) . Los genes marcadores visuales resultan en la formación de color (por ejemplo ß-glucuronidasa, GUS) , luminiscencia (tal como luciferasa) o fluorescencia (Proteína Verde Fluorescente, GFP, y derivados de la misma) . Se sabe acerca de la integración estable o transitoria de ácidos nucleicos en células vegetales que sólo una minoría de las células acepta el ADN extraño y, si lo desea, lo integra en su genoma, dependiendo del vector de expresión utilizado y la técnica de transfección utilizada.

Para identificar y seleccionar estas integrantes, un gen que codifica un marcador seleccionable (como se describe en los anterior, por ejemplo, resistencia a antibióticos) se introduce usualmente en las células huésped junto con el gen de interés. Los marcadores seleccionables preferidos en plantas comprenden aquellos que confieren resistencia a un herbicida tal como glifosato o glufosinato. Otros marcadores adecuados son, por ejemplo, marcadores, los cuales codifican genes implicados en rutas biosintéticas de, por ejemplo, azúcares o aminoácidos, tales como ß-galactosidasa, ura3 o Hv2. Los marcadores, los cuales codifican genes tales como luciferasa, gfp u otros genes de fluorescencia, son así mismo adecuados. Estos marcadores y los marcadores antes mencionados pueden utilizarse en mutantes en quienes estos genes no son funcionales ya que, por ejemplo, se han eliminado por métodos convencionales. Adicionalmente, moléculas de ácido nucleico, las cuales codifican un marcador seleccionable, pueden introducirse en una célula huésped en el mismo vector que aquellas, las cuales codifican los polipéptidos de la invención o se utilizan en el proceso o incluso en un vector separado. Las células las cuales se han transfectado establemente con el ácido nucleico introducido pueden identificarse por ejemplo por selección (por ejemplo, las células que han integrado el marcador seleccionable sobreviven mientras que las otras células mueren) .

Ya que los genes marcadores, como regla específicamente el gen para resistencia a antibióticos y herbicidas, ya no se requieren más o son indeseados en la célula huésped transgénica una vez que los ácidos nucleicos se han introducido exitosamente, el proceso de acuerdo con la invención para introducir los ácidos nucleicos emplea ventajosamente técnicas las cuales permiten la remoción, o escisión, de estos genes marcadores. Un método tal es lo que se conoce como cotransformación. El método de cotransformación emplea dos vectores simultáneamente para la transformación, un vector que porta el ácido nucleico de acuerdo con la invención y un segundo que porta el o los genes marcadores. Una gran proporción de transformantes recibe o, en el caso de plantas, comprende (hasta 40% de las transformantes y más), ambos vectores. En el caso de la transformación con Agrobacterias, las transformantes usualmente reciben sólo una parte del vector, la secuencia flanqueada por el ADN-T, la cual usualmente representa el cásete de expresión. Los genes marcadores pueden removerse subsecuentemente de la planta transformada al realizar cruzas. En otro método, los genes marcadores integrados en un transposón se utilizan para la transformación junto con el ácido nucleico deseado (conocido como la tecnología Ac/Ds) . Las transformantes pueden cruzarse con un recurso de transposasa o las transformantes se transforman con una construcción de ácido nucleico que confiere expresión de una transposasa, transitoriamente o estable. En algunos casos (aproximadamente 10%) , el transposón salta del genoma de la célula huésped una vez que la transformación ha tenido lugar exitosamente y se pierde. En un número adicional de casos, el transposón salta a una ubicación diferente. En estos casos, el gen marcador debe eliminarse al realizar cruzas. En microbiología, se desarrollaron técnicas las cuales hacen posible, o facilitan, la detección de tales eventos. Un método ventajoso adicional depende de lo que se conoce como sistemas de recombinación; cuya ventaja es puede prescindirse de la eliminación por cruzas. El sistema mejor conocido de este tipo es el que se conoce como el sistema Cre/lox. Creí es una recombinasa, la cual remueve las secuencias ubicadas entre las secuencias loxP. Si el gen marcador se integra entre las secuencias loxP, éste se remueve, una vez que la transformación ha tenido lugar exitosamente, por la expresión de la recombinasa. Sistemas de recombinación adicionales son el sistema HIN/HIX, FLP/FRT y REP/STB (Tribble et al., J. Biol. Chem. 275, 2000:22255-22267; Velmurugan et al., J. Cell Biol., 149, 2000:553-566). Es posible una integración específica de sitio en el genoma de la planta de las secuencias de ácido nucleico de acuerdo con la invención. Naturalmente, estos métodos pueden aplicarse también a microorganismos tales como levaduras, hongos o bacterias.

La presente invención también abarca plantas que pueden obtenerse por los métodos de acuerdo con la presente invención. La presente invención por lo tanto proporciona plantas, partes de plantas (incluyendo semillas) y células vegetales que pueden obtenerse por el método de acuerdo con la presente invención, cuyas plantas, partes de plantas y células vegetales tienen introducido en las mismas un ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo. La invención también proporciona un método para la producción de plantas transgénicas que tienen rendimiento incrementado con relación a las plantas control, que comprende la introducción y expresión en una planta de un ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo. Más específicamente, la presente invención proporciona un método para la producción de plantas transgénicas que tienen rendimiento incrementado con relación a plantas control, método que comprende: (i) introducir y expresar en una planta o célula vegetal un ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo como se define en la presente; y (ii) cultivar la célula vegetal bajo condiciones que promueven el crecimiento y desarrollo de la planta. El ácido nucleico puede introducirse directamente en una célula vegetal o en la planta misma (incluyendo introducción en un tejido, órgano o cualquier otra parte de una planta) . De acuerdo con una característica preferida de la presente invención, el ácido nucleico de preferencia se introduce en una planta por transformación. El término "introducción" o "transformación" como se refiere en la presente, abarca la transferencia de un polinucleótido exógeno en una célula huésped, sin importar el método usado para la transferencia. El tejido vegetal capaz de propagación clonal subsecuente, ya sea por organogénesis o embriogénesis, puede transformarse con una construcción genética de la presente invención y regenerarse una planta completa a partir del mismo. El tejido particular elegido variará dependiendo de los sistemas de propagación clonal disponibles para, y mejor adaptados a, la especie particular que se transforma. Los objetivos de tejido ejemplares incluyen discos de hoja, polen, embriones, cotiledones, hipocotilos, megagametofitos, tejido de callo, tejido meristemático existente (por ejemplo, meristemo apical, brotes axilares, y meristemos radicales), y tejido de meristemo inducido (por ejemplo, meristemo de cotiledón y meristemo de hipocotilo) . El polinucleótido puede introducirse en forma transitoria o estable en una célula huésped y puede mantenerse no integrado, por ejemplo, como un plásmido. Alternativamente, puede integrarse en el genoma huésped. La célula vegetal transformada resultante puede entonces usarse para regenerar una planta transformada en una manera conocida para las personas experimentadas en la técnica. La transferencia de genes extraños en el genoma de una planta se llama transformación. Al hacer esto, los métodos descritos para la transformación y regeneración de plantas a partir de tejidos vegetales o células vegetales se utilizan para transformación transitoria o estable. Un método de transformación ventajoso es la transformación in planta. Para este fin es posible, por ejemplo, permitir a las agrobacterias actuar sobre las semillas de las plantas o inocular el meristemo de la planta con agrobacterias. Ha demostrado ser particularmente conveniente de acuerdo con la invención permitir a una suspensión de agrobacterias transformadas actuar sobre la planta intacta o al menos la primera etapa de la flor. La planta se cultiva subsecuentemente hasta que las semillas de la planta tratada se obtienen (Clough and Bent, Plant J. (1998) 16, 735-748). Para seleccionar plantas transformadas, el material vegetal obtenido en la transformación, como regla general, se somete a condiciones selectivas de manera que las plantas transformadas puedan distinguirse de las plantas no transformadas. Por ejemplo, las semillas obtenidas en la manera descrita en lo anterior pueden plantarse y, después de un periodo de crecimiento inicial, someterse a una selección adecuada por aspersión. Una posibilidad adicional consiste en cultivar las semillas, si es apropiado después de la esterilización, en placas de agar utilizando un agente de selección adecuado de manera que sólo las semillas transformadas puedan crecer en las plantas. Métodos de transformación ventajosos adicionales, en particular para plantas, se conocen por el trabajador experto y se describen en la presente en lo siguiente. La transformación de especies vegetales es actualmente una técnica bastante rutinaria. En forma favorable, cualquiera de varios métodos de transformación puede usarse para introducir el gen de interés en una célula predecesora adecuada. Los métodos de transformación incluyen el uso de liposomas, electroporación, químicos que incrementan la captación de ADN libre, inyección del ADN directamente en la planta, bombardeo de partículas, transformación usando virus o polen y microproyección. Los métodos pueden seleccionarse del método de calcio/polietilenglicol para protoplastos (Krens, F.A. et al., (1982) Nature 296, 72-74; Negrutiu I et al. (1987) Plant Mol Biol 8: 363-373); electroporación de protoplastos (Shillito R.D. et al., 1985 Bio/Technol 3, 1099-1102); micro inyección en material vegetal (Crossway A. et al., (1986) Mol. Gen Genet 202, 179-185); bombardeo de partículas recubiertas con ADN o ARN (Klein T.M. et al., (1987), Nature 327, 70) infección con virus (no integrativos) y similares.

Las plantas de arroz transgénico que expresan un ácido nucleico/gen de dominio WRKY doble se producen de preferencia mediante transformación mediada por Agroba cterium usando cualquiera de los métodos bien conocidos para transformación de arroz o maíz, tal como se describe en cualquiera de los siguientes: solicitud de patente Europea publicada EP 1198985 Al, Aldemita and Hodges (Planta, 199, 612-617, 1996); Chan et al . (Plant Mol Biol 22 (3) 491-506, 1993), Hiei et al . (Plant J. 6 (2) 271-282, 1994), cuyas descripciones se incorporan para referencia en la presente como si se establecieran por completo. En el caso de la transformación de maíz, el método preferido es como se describe ya sea en Ishida et al . (Nat. Biotechnol 14(6): 745-50, 1996) o Frame et al . (Plant Physiol. 129(1): 13-22, 2002), cuyas descripciones se incorporan para referencia en la presente como si se establecieran por completo. Tales métodos se describen además a manera de ejemplo en B. Jenes et al., Techniques for Gene Transfer, en: Transgenic Plants. Vol. 1, Engineering and Utilization, eds., S.D. Kung and R. Wu, Academic Press (1993) 128-143 y en Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225). Los ácidos nucleicos o la construcción que se expresa se clona de preferencia en un vector, el cual es adecuado para transformar Agrobacterium tumefaciens, por ejemplo, pBinl9 (Bevan et al., Nucí. Acids Res. 12(1984) 8711). Las agrobacterias transformadas por tal vector pueden entonces utilizarse en una manera conocida para la transformación de las plantas, en particular plantas de cultivo tales como, a modo de ejemplo, plantas de tabaco, por ejemplo, al bañar hojas lesionadas u hojas cortadas en trozos en una solución de agrobacterias y luego cultivarlas en un medio adecuado. La transformación de plantas por medio de Agrobacterium tumefaciens se describe, por ejemplo, por Hdfgen and Willmitzer en Nucí. Acid Res. (1988) 16, 9877 o se conoce inter alia de F.F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; en Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung y R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38. Generalmente, después de la transformación, las células vegetales o agrupaciones de células se seleccionan por la presencia de uno o más marcadores los cuales se codifican por genes que pueden expresarse en plantas cotransferidos con el gen de interés, después de lo cual el material transformado se regenera en una planta completa. Como se mencionó, las agrobacterias transformadas con un vector de expresión de acuerdo con la invención pueden utilizarse también en la manera conocida per se para la transformación de plantas tales como plantas experimentales como Arabidopsis o plantas de cultivo, tales como, por ejemplo, cereales, maíz, avenas, centeno, cebada, trigo, soya, arroz, algodón, remolacha azucarera, cañóla, girasol, lino, cáñamo, papa, tabaco, tomate, zanahoria, pimiento dulce, semilla de colza, tapioca, yuca, arrurruz, caléndula, alfalfa, lechuga y diversas especies de árboles, nuez, vid, en particular plantas de cultivo que contienen aceite tales como soya, cacahuate, planta de aceite de ricino, girasol, maíz, algodón, lino, semilla de colza, coco, palma de aceite, cártamo (Carthamus tinctorius) o granos de cacao, por ejemplo, al bañar hojas escarificadas o segmentos de hojas en una solución de agrobacterias y subsecuentemente cultivándolas en un medio adecuado. Además de la transformación de células somáticas, las cuales tienen entonces que regenerarse en plantas intactas, es posible también transformar las células de meristemos de plantas y en particular aquellas células las cuales se desarrollan en los gametos. En este caso, los gametos transformados siguen el desarrollo de natural de la planta, dando lugar a plantas transgénicas. De este modo, por ejemplo, semillas de Arabidopsis se tratan con agrobacterias y se obtienen semillas a partir de las plantas en desarrollo de las cuales una cierta proporción se transforma y de esta manera son transgénicas [Feldman, KA y Marks MD (1987). Mol Gen Genet 208:274-289; Feldmann K (1992). En: C Koncz, N-H Chua y J Shell, eds, Methods in Arabidopsis Research. Word Scienfitic, Singapore, pp. 274-289] . Métodos alternativos se basan en la remoción repetida de las inflorescencias y la incubación del sitio de escisión en el centro del florón con agrobacterias transformadas, por lo que semillas transformadas pueden así mismo obtenerse en un punto más tarde en el tiempo (Chang (1994). Plan J. 5: 551-558; Katavic (1994). Mol Gen Genet, 245:363-370). Sin embargo, un método especialmente efectivo es el método de infiltración por vacío con sus modificaciones tales como el método de "inmersión floral". En el caso de infiltración por vacío de Arabidopsis, plantas intactas bajo presión reducida se tratan con una suspensión de agrobacterias [Bechthold, N (1993) . C R Acad Sci Paris Life Sci, 316: 1194-1199], mientras en el caso del método de "inmersión floral" el tejido floral en desarrollo se incuba brevemente con una suspensión de agrobacterias tratada con tensioactivo [Clough, SJ und Bent, AF (1998). The Plant J. 16, 735-743] . Una cierta proporción de semillas transgénicas se cosechan en ambos casos, y estas semillas pueden distinguirse de las semillas no transgénicas al cultivarlas bajo las condiciones selectivas descritas anteriormente. Además la transformación estable de las plástidas es ventajoso debido a que las plástidas se heredan de forma maternal en la mayoría de los cultivos reduciendo o eliminó el riesgo de flujo transgénico a través del polen. La transformación del genoma de cloroplasto se consigue generalmente por un proceso el cual se ha desplegado esquemáticamente en Klaus et al., 2004, [Nature Biotechnology 22(2), 225-229)]. Brevemente, las secuencias que se transforman se clonan junto con un gen marcador seleccionable entre secuencias flanqueantes homologas al genoma del cloroplasto. Estas secuencias flanqueantes homologas dirigen la integración específica de sitio en el plastoma. La transformación plastidal se ha descrito para muchas especies vegetales diferentes y una visión general puede tomarse de Bock et al. (2001) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology, J Mol Biol. 2001 Sep 21; 312 (3) : 25-38 o Maliga, P (2003) Progress towards commercialization of plastid transformation technology. Trends Biotechnol. 21, 20-28. Progreso biotecnológico adicional se ha reportado recientemente en forma de transformantes de plástidas libres de marcador, las cuales pueden producirse por un gen marcador cointegrado transitorio (Klaus et al., 2004, Nature Biotechnology 22 (2) , 225-229). Las células vegetales genéticamente modificadas pueden regenerarse mediante todos los métodos con los cuales el obrero calificado está familiarizado. Métodos adecuados pueden encontrarse en las publicaciones antes mencionadas por S.D. Kung y R. Wu, Potrykus o Hófgen y Willmitzer. Después de la transferencia y regeneración de ADN, las plantas putativamente transformadas pueden evaluarse, por ejemplo usando análisis Southern, por la presencia del gen de interés, número de copias y/u organización genómica.

Alternativa o adicionalmente, los niveles de expresión del ADN recientemente introducido pueden monitorearse usando análisis Northern y/o Western y/o PCR cuantitativa, tales técnicas se conocen bien para las personas que tienen experiencia ordinaria en el arte. Las plantas transformadas generadas pueden propagarse por una variedad de medios, tal como por propagación clonal o técnicas clásicas de reproducción. Por ejemplo, una planta transformada de primera generación (o TI) puede autofecundarse para dar transformantes de segunda generación (o T2) homocigóticas, y las plantas T2 propagarse además a través de técnicas clásicas de reproducción. Los organismos transformados generados pueden tomar una variedad de formas. Por ejemplo, pueden ser quimeras de células transformadas y células no transformadas; transformantes clónales (por ejemplo, todas las células se transforman para contener el cásete de expresión) ; injertos de tejido transformado y sin transformar (por ejemplo, en plantas, un patrón radical transformado injertado en un retoño sin transformar) . La presente invención claramente se extiende a cualquier célula vegetal o planta producida por cualquiera de los métodos descritos en la presente, y a todas las partes de la planta y propágulos de la misma. La presente invención se extiende además para abarcar la progenie de una célula, tejido, órgano o planta completa primaria transformada o transfectada que se ha producido por cualquiera de los métodos mencionados anteriormente, siendo el único requerimiento que la progenie exhiba la o las mismas características genotípicas y/o fenotípicas que aquellas producidas en el progenitor por los métodos de acuerdo con la invención. La invención también incluye células huésped que contienen un ácido nucleico de dominio WRKY doble aislado o variante del mismo. Las células huésped preferidas de acuerdo con la invención son células vegetales. La invención también se extiende a partes cosechables desde una planta tales como, pero no limitadas a, semillas, hojas, frutos, flores, cultivos de tallo, rizomas, tubérculos y bulbos. La invención además se relaciona con productos derivados de, de preferencia con productos directamente derivados de, una parte cosechable de tal planta, tales como granulos o polvos secos, aceite, grasa y ácidos grasos, almidón o proteínas. La presente invención también abarca el uso de ácidos nucleicos de dominio de dos WRKY o variantes de los mismos y el uso de polipéptidos que tienen dos dominios WRKY o homólogos de los mismos, como se define en la presente. Un uso se relaciona con mejorar el rendimiento, especialmente el rendimiento de la semilla. El rendimiento como se define de aquí en adelante y preferiblemente incluyen uno o más de los siguientes: TKW incrementado, longitud de semilla incrementada, ancho de semilla incrementado, área de semilla incrementada, número incrementado de semillas y número incrementado de flores por panícula. Los ácidos nucleicos de dominio de dos WRKY o variantes de los mismos, o los polipéptidos que tienen dominios de dos WRKY u homólogos de los mismos pueden encontrar uso en programas de reproducción en los cuales un marcador de ADN se identifica, el cual puede enlazarse genéticamente a un gen de dominio de dos WRKY o variante de los mismos. Los ácidos nucleicos/genes de dominio de dos WRKY o variantes de los mismos, o polipéptido que tienen dominios WRKY y homólogos de los mismos pueden usarse para definir un marcador molecular. Este marcador de ADN o proteína puede entonces usarse en programas de reproducción para seleccionar plantas que tienen rendimiento incrementado. El gen de dominio de dos WRKY o variante de los mismos puede, por ejemplo, ser un ácido nucleico como se representa por cualquiera de uno de los ácidos nucleicos dados en la Tabla 1 y/o en el protocolo de secuencia. Las variantes alélicas de un ácido nucleico de dominio de dos WRKY/gen pueden también encontrar uso en programas de reproducción asistidos por marcadores. Tales programas de reproducción algunas veces requieren la introducción de variación alélica por tratamiento mutagénico de las plantas, usando por ejemplo mutagénesis EMS; alternativamente, el programa puede iniciar con una colección de variantes alélicas de origen denominado "natural" provocadas de manera no intencionadas. La identificación de variante alélicas tiene lugar entonces por, por ejemplo, PCR. Esto se sigue por una etapa de selección para la selección de variantes alélicas superiores de la secuencia en cuestión y las cuales dan caracteristicas de crecimiento mejoradas en una planta. La selección se lleva a cabo típicamente al monitorear el desempeño en el crecimiento de plantas que contienen diferentes variante alélicas de la secuencia en cuestión, por ejemplo, diferentes variantes alélicas de cualquiera de uno de los ácidos nucleicos dados en la Tabla 1. El desempeño del crecimiento puede monitorearse en un invernadero o en el campo. Etapas opcionales posteriores incluyen cruzar las plantas, en las cuales la variante alélica superior se identificó, con otra planta. Esto puede usarse, por ejemplo, para elaborar una combinación de características fenotípicas interesantes. Un ácido nucleico de dominio de dos WRKY o variante de los mismos también puede usarse como sonda para mapear genética y físicamente los genes de los que son parte, y como marcadores de atributos enlazados a esos genes. Tal información puede ser útil en la reproducción vegetal a fin de desarrollar líneas con fenotipos deseados. Tal uso de los ácidos nucleicos de dominio de dos WRKY o variantes de los mismos requieren solo una secuencia de ácidos nucleicos de por lo menos 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 nucleótidos en longitud. Los ácidos nucleicos de dominio de dos WRKY o variantes de los mismos pueden usarse por marcadores de polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción (RFLP) . Análisis Southern (Sambrook J, Fritsch EF and Maniatis T (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual) de DNA genómico de planta de digestión restringida puede examinarse con los ácidos nucleicos de dominio de dos WRKY o variantes de los mismos. Los patrones de bandas resultantes pueden entonces someterse a análisis genético usando programas de computación tal como MapMaker (Lander et al. (1987) Genomics 1:174-181) a fin de construir un mapa genético. Además, los ácidos nucleicos pueden usarse para examinar un análisis de Southern que contiene los DNA genómicos tratados con endonucleasas de restricción de un conjunto de individuos que representan progenitores y progenie de una cruza genética definida. La segregación de los polimorfismos de ADN se observa y usa para calcular la posición del ácido nucleico de dominio de dos WRKY o de una variante del mismo en el mapa genético obtenido anteriormente usando esta población (Botstein et al. (1980) Am. J. Hum. Genet. 32:314-331). La producción y uso de sondas derivadas de genes vegetales para su uso en mapeo genético se describe en Bernatzky and Tanksley (1986) Plant Mol. Biol. Repórter 4:37-41. Numerosas publicaciones describen el mapeo genético de clones de ADNc específicos usando la metodología establecido en lo anterior o variaciones de la misma. Por ejemplo, poblaciones de entrecruzamiento F2, poblaciones de hibridación, poblaciones apareadas al azar, líneas isogénicas cercanas y otros conjuntos de individuos pueden usarse para el mapeo. Tales metodologías se conocen bien para aquellos con experiencia en la técnica. Las sondas de ácidos nucleicos también pueden usarse para mapeo físico (es decir, colocación de secuencias en mapa físico, véase Hoheisel et al. In: Non-mammalian Genomic Analysis: A Practical Guide, Academic press 1996, pp. 319-346, y referencias citadas en el mismo). En otra modalidad, las sondas de ácido nucleico pueden usarse en mapeo por hibridación in situ con fluorescencia directa (FISH) mapeo (Trask (1991) Trends Genet. 7:149-154). Aunque los métodos actuales del mapeo FISH favorecen el uso de grandes clones (varios a varios miles de kb; véase Laan et al. (1995) Genome Res. 5:13-20), las mejoras en la sensibilidad pueden permitir la realización de mapeo por FISH usando sondas más cortas. Una nueva variedad de métodos basados en amplificación de ácidos nucleicos para mapeo genético y físico puede llevarse a cabo usando los ácidos nucleicos. Los ejemplos incluyen amplificación específica de alelos (Kazazian (1989) J. Lab. Clin. Med 11:95-96), polimorfismo de fragmentos amplificados por PCR (CAPS; Sheffield et al. (1993) Genomics 16:325-332), ligación específica de alelos (Landegren et al. (1988) Science 241:1077-1080), reacciones de extensión de nucleótidos (Sokolov (1990) Nucleic Acid Res. 18:3671), Mapeo de Híbridos por Radiación (Walter et al. (1997) Nat. Genet. 7:22-28) y Mapeo Happy (Dear y Cook (1989) Nucleic Acid Res. 17:6795-6807). Para estos métodos, la secuencia de un ácido nucleico se usa para diseñar y producir pares de cebadores para su uso en la reacción de amplificación o en reacciones de extensión de cebador. El diseño de tales cebadores se conoce bien por aquellos con experiencia en la técnica. En los métodos que emplean mapeo genético basado en PCR, puede ser necesario identificar diferencias en secuencias de ADN entre los progenitores de la cruza de mapeo en la región correspondiente a la secuencia de ácidos nucleicos inmediata. Esto, sin embargo, generalmente no es necesario para los métodos de mapeo. Los métodos de acuerdo con la presente invención resultan en plantas que tienen características de crecimiento mejoradas, como se describe en la presente. Estas características de crecimiento favorable también pueden combinarse con otros atributos económicamente favorables, tales como atributos adicionales que intensifican el rendimiento, tolerancia a diversos factores de estrés, atributos que modifican diversas características arquitectónicas y/o bioquímicas y/o características fisiológicas .

DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La presente invención se describirá ahora con referencia a las siguientes figuras en las cuales: La Figura 1 muestra la estructura de dominio típica de un polipéptido que tiene dos dominios WRKY. El dominio rico en Pro-Ser se ubica en el N-terminal de la proteína; el motivo LXSP (L para Leu, S para Ser, P para Pro y X para cualquier aminoácido) se contiene en esta región y se indica. Los dominios WRKY dobles se encuadran en negro. Entre los dos dominios WRKY dobles está el tramo ácido (AC) y la señal de Vocalización nuclear putativa (NLS) . El motivo de la SEQ ID NO: 39 la cual representa el dominio WRKY carboxi-terminal se encuadra también. La Figura 2 es el análisis filogenético de 58 miembros de la familia Arath_WRKY (de Eulgem et al . (2000) Trends Plant Sci 5(5): 199-206). La flecha negra indica el grupo de polipéptidos que tiene dos dominios WRKY y un dominio rico en Pro-Ser en su amino-terminal. La Figura 3 muestra una alineación múltiple de varios polipéptidos que tienen dos dominios WRKY creada usando el programa de alineación múltiple VNTI AlignX, con base en un algoritmo ClustalW modificado (InforMax, Bethesda, MD, http://www.informaxinc.com), con ajustes predeterminados para una penalización de abertura de hueco de 10 y una extensión de hueco de 0.05). La edición manual menor también se llevó a cabo donde fue necesario para mejorar la posición de algunas regiones conservadas. Los dominios importantes de la terminal amino a terminal carboxi se encasillaron a través de los péptidos de planta: el dominio rico en Pro-Ser y su motivo LXSP (donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y X es cualquier aminoácido) , el dominio WRKY amino-terminal (y su heptapéptido) incluye su dominio de enlace de zinc C2H , el tramo acídico, el NLS, el motivo de SEQ ID NO: 39, y el dominio WRKY carboxi-terminal (y su heptapéptido) incluyendo su dominio de enlace de zinc C2H2 son ya sea encasilladas o escritas en negritas. El motivo LXSP de SEQ ID NO: 2 es de aminoácido a aminoácido, el tramo acídico de aminoácido 304 a aminoácido 309, el NLS de aminoácido 311 a aminoácido 314. La Figura 4 muestra un vector p0700 y p0709,para la expresión en Oryza sativa de una polipéoptido Oryza sativa que tiene dos dominios WRKY bajo el control de respectivamente un promotor G0S2 ( referencia interna PRO0129; representada como en la SEQ ID NO: 42) y un promotor de oleosina (referencia interna PRO0218; representada como en la SEQ ID NO: 43) .

La Figura 5 detalla los ejemplos de las secuencias útiles en la realización de los métodos de acuerdo a la presente invención, del codon de inicio al codon de detención en el caso de secuencias de polinucleótidos (longitud completa) que codifican los polipéptidos con los dos dominios WRKY.

EJEMPLOS La presente invención se describirá con referencia a los siguientes ejemplos, los cuales son a modo de ilustración únicamente. Manipulación DNA: al menos que se establezca de otra manera, las técnicas de ADN recombinantes se realizan de acuerdo a los protocolos estándar descritos en (Sambrook (2001) Molecular Cloning; a Laboratory Manual, 3er Edition Cold Spring Harbor Laboratory Press, CSH, New York) or in Volumes 1 and 2 of Ausubel et al. (1994), Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols. Materiales estándar y métodos para el trabajo molecular de planta se describen en Plant Molecular Biology Labfax (1993) por R.D.:d Croy, publicados por BIOS Scientific Poublications Ltd (UK) and Blackwell Scienbtific Publications (UK) .

Ejes?lo 1 : Clonación del gen de dos dominios de WRKY de Orysa sativa El gen de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva de la SEQ ID NO: 1 se amplificó por PCR utilizando como plantilla una biblioteca de ADNc de plántula de Oryza sa tiva (Invitrogen, paisley, UK) . Después de la transcripción inversa de ARN extraído de las plántulas, los ADNc se clonaron en pCMV Sport 6.0. El tamaño de inserto promedio del banco fue 1.66 kg y el número original de clones fue del orden de 2.67xl07 cfu. La concentración original se determinó para ser 3.34 x 106 cfu/ml, y después de una primera amplificación de 1010 cfu/ml. Después de la extracción del plásmido, se utilizó 200 ng de la plantilla en una mezcla de PCR de 50 µl . Los cebadores prm05769 (SEQ ID NO: 40; sentido, codón de inicio en negritas, sitio AttBl en cursivas: 5'- GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAAAC??'SGGCG?CC'TCGACG 3') y prm05770 (SEQ ID NO: 41; inversa, complementaria, sitio AttB2 en cursiva: 5' GGGGACCACTGGGGACAAGAAAGCGGGGGGGCTCGACT?GCAGAGGA 3'). la cual incluye los sitios AttB para recombinaciíon Gateway, se utilizaron para amplificación de PCR. Se realizó la PCR utilizando Hilfi Taq ADN polimerasa en condiciones estándares. Un fragmento de PCR de 1535 pb (incluyendo sitios attB) se amplificó y purificó también utilizando métodos estándares. La primera etapa del procedimiento de Gateway, la reacción de BP, se realizó entonces, durante la cual el fragmento de PCR recombina in vivo con el plásmido pDONR201 para producir, de acuerdo con la terminología Gateway, un "clon de entrada", p06983. El plásmido pDONR201 se adquirió de Invitrogen, como parte de la tecnología Gateway®.

Ejes?lo 2: Construcción de Vector El clon p68 de entrada se utilizó subsecuentemente en una reacción LR con p00640, un vector de destinación utilizado para transformación de Oryza sa tiva . Este vector contiene como elementos funcionales dentro de los bordes de ADN-T; un marcador seleccionable de planta, un cásete de expresión de marcador visual; y un cásete Gateway pretendido para recombinación in vivo de LR con la secuencia de interés ya clonada en el clon de entrada. Un promotor GOS2 de arroz (SEQ ID NO: 42) para expresión constitutiva (PRO0129) se localizó corriente arriba de este cásete Gateway. El clon de entrada p06983 se utilizó en una segunda reacción de LR con p00831, otro vector de destino utilizado para transformación de Oryza sa tiva . Un promotor de oleosina de arroz de 18 kDa (SEQ ID NO: 43) para expresión específica de embriones y/o aleurona (PRO0218) se localizó corriente arriba del cásete Gateway. Después de la etapa de recombinación de LR, los vectores de expresión resultantes p0700 y p0709 (Figura 4) se transformaron en forma separada en cepa LBA4044 de Agroba cteri um y subsecuentemente en forma separada a plantas de Oryza sa tiva . Se permitieron cultivar plantas de arroz transformadas y se examinaron después para los parámetros descritos en el Ejemplo 3.

Ejes?lo 3 : Evaluación y Resultados de las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sativa Se generaron aproximadamente 15 a 20 transformantes de arroz TO independientes. Se transfirieron las transformantes primarias a partir de una cámara de cultivo de tejido a un invernadero para el crecimiento y la cosecha de semillas TI. Cuatro a cinco casos, de los cuales la progenie TI segregó 3:1 para presencia/ausencia del transgen, se retuvieron. Para cada uno de estos casos aproximadamente 10 plántulas TI que contienen el transgen (hetero y homocigotos) y aproximadamente 10 plántulas TI que carecen del transgen (nulicigotos) , se seleccionaron al verificar la expresión de marcador visual. Las plantas transgénicas y los nulicigotos correspondientes se cultivaron lado a lado en posiciones aleatorias. A partir de la etapa de sembrado hasta la etapa de madurez las plantas se pasaron varias veces a través de una cabina de digitalización de imágenes. En cada punto de tiempo las imágenes digitales (2048x1536 pixeles, 16 millones de colores) se tomaron de cada planta por al menos 6 diferentes ángulos. Cuatro casos de TI se evaluaron además en la generación T2 siguiendo el mismo procedimiento de evaluación como para la generación TI, pero con más individuos por caso.

Análisis Estadístico: prueba F Un factor doble ANOVA (análisis de varianza) se utilizó como un modelo estadístico para la evaluación global de características fenotípicas de la planta. Se llevó a cabo una prueba F en todos los parámetros medidos de todas las plantas de todos los casos transformados con el gen de la presente invención. Se llevó a cabo la prueba F para verificar un efecto del gen sobre todos los casos de transformación y para verificar un efecto total del gen, también conocido como efecto genético global. El umbral de trascendencia para un efecto genético global real se establece en 5% del nivel de probabilidad para la prueba F. Puntos de valor de prueba F notables a un efecto genético, significa que no es sólo la presencia o posición del gen que está provocando las diferencias en el fenotipo.

Mediciones de parámetro relacionadas con las semillas Las panículas primarias maduras se cosecharon, se embolsaron, y se etiquetaron con código de barras y luego se secaron durante tres días en un horno a 37°C. Las panículas se trillaron entonces y todas las semillas se recolectaron y se contaron, dando el número total de semillas. El número total de semillas dividido por el número de panículas primarias provistas por un estimado del número de florecillas por panícula. Las cascaras llenas se separaron a partir de las vacías utilizando un dispositivo de sopladura de aire. Las cascaras vacías se desecharon y la fracción restante se contaron de nuevo. Las cascaras llenas se pesaron en una balanza analítica. El número de semillas llenas se determinaron contando el número de cascaras llenas que permaneció después de la etapa de separación. Se midió el rendimiento de semilla total pesando todas las cascaras llenas cosechadas de una planta. Se extrapoló el Peso de Mil Semillas (TKW) desde el número de semillas llenas contadas y su peso total. El índice de cosecha se derivó de la relación del rendimiento total de semillas y el área superficial (mm2) multiplicada por un factor 106. El número total de flores por panícula como se define en la presente invención es la relación entre el número total de semillas y el número de panículas primarias maduras. La tasa de relleno de semillas como se define en la presente invención es la proporción (expresada como un %) del número de semillas llenas sobre el número total de semillas (o florecillas) . Se determinó la superficie de la planta al contar el número total de pixeles de las pinturas de las partes de la planta superficial discriminada desde el fondo. Este valor se promedió para las pinturas tomadas en el mismo punto de tiempo desde los diferentes ángulos y se convirtió a un valor superficial físico expresado en mm cuadrado por calibración. Los experimentos muestran que el área de planta de fondo medidas de este modo se correlacionan con la bioma de la planta. 3.1 Eval uación y resul tados de las plan tas transgénicas de Oryza sativa con un promotor consti tutivo corriente arriba de un ácido nucleico que codifi ca un polipéptido con dos dominios de WRKY. La medición de TKW resulta de las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva se muestran en la Tabla 6. La diferencia de porcentaje entre los transgénicos y los nulicigotos correspondientes se muestra también. El número de casos con un incremento notable en TKW se indica, también como los valores P de la prueba F para las generaciones de TI y T2. El TK se incrementó notablemente en las generaciones TI y T2 para plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva comparadas as sus contrapartes inválidas (Tabla 6) .

Tabla 6: Resultados de mediciones de TKW en la generación TI y T2 de las plantas transgénicas de dos dominios de WKRY de Oryza sa tiva comparadas a sus contrapartes inválidas.

Parámetros individuales de semillas (ancho, largo y área) se midieron en las semillas desde las plantas T2, utilizando un dispositivo hecho a la medida que consiste de dos componentes principales, un dispositivo de medición de peso y de formación de imágenes, acoplado al software para análisis de imagen. Los resultados de medida del área individual de las semillas promedio, longitud y ancho de las semillas T3 (cosechadas de las plantas T2) para las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva se muestran en la Tabla 7. La diferencia de porcentaje entre los transgénicos y los nulicigotos correspondientes se muestra también. El número de casos con un incremento notable en un parámetro se indica, así como los valores p desde la prueba F. El área, longitud y ancho individual promedio de las semillas de las semillas T3 (cosechadas de las plantas T2) de las plantas transgénicas T2 de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva comparadas a sus contrapartes inválidas.

Longitud de 4 de 4 14 de 4 <0.001 semilla promedio Ancho de sem¡lla|4 de 4 <0.001 promedio 3. 2 Eval uación y resul tados de las plan tas transgénicas de Oryza sativa con un promotor específico de embrión y/o aleurona corrien te arriba de un ácido nucleico que codifica un polipéptido con dos dominios de WRKY El número total de resultados de medición de semillas de las plantas transgénicas de dos dominios de WKRY de Oryza sa tiva se muestran en la Tabla 8. La diferencia de porcentaje entre los transgénicos y los nulicigotos correspondientes se muestra también. El número de casos con un incremento notable en el número total de semillas se indica, así como también los valores P desde la prueba F para las generaciones de TI y T2. El número total de semillas se incrementó notablemente en las generaciones TI y T2 para las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva comparadas a sus contrapartes inválidas (Tabla 8).

Tabla 8: Resultados del número total de semillas medidas en la generación TI y T2 de las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva comparadas a sus contrapartes inválidas El número total de flores por resultados de medición de panícula para las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva se muestran en la Tabla 9. La diferencia de porcentaje entre los transgénicos y los nulicigotos correspondientes se muestra también. El número de casos con un incremento notable en el número total de semillas se indica, así como los valores P desde la prueba F para las generaciones TI y T2. El número total de flores por panícula se incrementó notablemente en las generaciones TI y T2 de las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva comparadas a sus contrapartes inválidas (Tabla 9) .

Tabla 9: Resultados de un número total de flores por mediciones de panícula en la generación TI y T2 de las plantas transgénicas de dos dominios de WRKY de Oryza sa tiva comparados a sus contrapartes inválidas. lo 4 : Determinación de similaridad e identidad global entre los polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY útiles para realizar los métodos de la invención Porcentajes globales de similaridad e identidad entre los polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY se determinaron utilizando uno de los métodos disponibles en la técnica, el software MatGAT (Herramienta de Alineación Global de Matriz) (BMC Bioinformatics. 2003 4:29, MatGAT: una aplicación que genera matrices de similaridad/identidad para secuencias de ADN o de proteína sin necesitar pre-alineación de los datos. El programa realiza una serie de alineaciones en forma de pares utilizando el algoritmo de alineación global de Myers y Miller (con una penalidad de extensión de abertura de 2), se calcula la similaridad y la identidad utilizando por ejemplo, Blosum 62 (para polipéptidos), y luego se colocan los resultados en una matriz de distancia. La secuencia de la SEQ ID NO: 2 está en al línea 17. Los resultados del análisis de software se muestran en la Tabla 10 para la similaridad y la identidad global sobre la longitud de la SEQ ID NO: 39 (dominio conservado de 75 aminoácidos) de los polipéptidos que tienen dos dominios de WRKY. La identidad de porcentaje se da sobre la diagonal y la similaridad de porcentaje se da debajo de la diagonal. La identidad de porcentaje entre los parálogos y los ortólogos tiene intervalos de dos dominios de WRKY entre 70 y 100% que refleja la conservación de identidad de secuencia elevada entre éstos dentro de este dominio conservado.

Tabla 10: Identidad y similaridad de porcentaje del dominio conservado (como se representa por la SEQ ID NO: 39) entre polipéptidos ortólogos y parálogos que tienen dos dominios de WRKY. La identidad de porcentaje se da sobre la diagonal y la similaridad de porcentaje se da debajo de la diagonal.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para incrementar el rendimiento de las plantas con relación a plantas control, caracterizado porque comprende modular la expresión en una planta de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo de tal polipéptido, y opcionalmente seleccionar plantas que tienen rendimiento incrementado, en donde el polipéptido que tiene dos dominios WRKY u homólogo comprende de amino-terminal a carboxi-terminal: (i) un dominio rico en Pro-Ser, y (ii) dos dominios WRKY que incluyen un motivo C2-H2 de dedos de zinc. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido que tiene dos dominios WRKY u homólogo además comprende uno o más de los siguientes: (i) un tramo ácido entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E) ; (ii) una NLS putativa entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con por lo menos 50%, 60% o 70%, preferentemente 75% u 80%, más preferentemente 90%, incluso más preferentemente 91%, 92%, 93%, 94% o 95%, lo más preferentemente 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con la SEQ ID NO: 39. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el polipéptido que tiene dos dominios WRKY u homólogo además comprende un motivo LXSP dentro del dominio rico en Pro-Ser (donde L es Leu, S es Ser, P es Pro y X es cualquier aminoácido) . . El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el dominio rico en Pro-Ser es por lo menos dos veces más rico en Pro y Ser en comparación con una composición de aminoácidos promedio (en %) de las proteínas del banco de datos Swiss-Prot Protein Sequence. 5. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la expresión modulada se efectúa al introducir una modificación genética preferentemente en el lugar de un gen que codifica un polipéptido que tiene dos dominios WRKY o un homólogo de tal polipéptido. 6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la modificación genética se efectúa por uno de: activación de ADN-T, TILLING, recombinación homologa, mutagénesis dirigida y evolución dirigida. 7. Un método para incrementar el rendimiento con relación a plantas control, caracterizado porque comprende introducir y expresar en una planta un ácido nucleico de dominio WRKY doble como se define en la reivindicación 1 o una variante del mismo. 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque la variante es una porción de un ácido nucleico de dominio WRKY doble o una secuencia capaz de hibridar con un ácido nucleico de dominio WRKY doble, cuya porción o secuencia de hibridación codifica un polipéptido que comprende de amino-terminal a carboxi-terminal: (i) un dominio rico en Pro-Ser; y (ii) dos dominios WRKY que incluyen un motivo C2-H de dedos de zinc. 9. El método de conformidad con la reivindicación 7 u 8, caracterizado porque el ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo se sobreexpresa en una planta. 10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizado porque el ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo es de origen vegetal, preferentemente de una planta monocotiledónea, además de preferencia de la familia Poaceae, más preferentemente el ácido nucleico es de Oryza sa tiva o Zea mays . 11. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, caracterizado porque la variante codifica un ortólogo o parálogo del polipéptido representado por la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 51. 12. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, caracterizado porque el ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo se enlaza en forma operable a un promotor constitutivo. 13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el promotor constitutivo es un promotor G0S2. 14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11, caracterizado porque el ácido nucleico de dominio WRKY doble o variante del mismo se enlaza en forma operable a un promotor específico de embrión y/o aleurona . 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el promotor específico de embrión y/o aleurona es un promotor de oleosina. 16. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque el rendimiento incrementado es rendimiento de semilla incrementado. 17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque el rendimiento incrementado se selecciona de uno o más de los siguientes: TKW incrementado, área de semilla individual incrementada, longitud de semilla individual incrementada, ancho de semilla individual incrementado, número incrementado de semillas, número incrementado de flores por panícula, cada uno con relación a plantas control. 18. Una planta, parte de la planta o célula vegetal que puede obtenerse por un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17. 19. Una molécula de ácido nucleico aislada, caracterizada porque comprende una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste de: a) una molécula de ácido nucleico aislada como se representa en la SEQ ID NO: 50; b) una molécula de ácido nucleico aislada que codifica la secuencia de aminoácidos como se representa en la SEQ ID NO: 51; c) una molécula de ácido nucleico aislada cuya secuencia puede deducirse a partir de una secuencia de polipéptido como se representa en la SEQ ID NO: 51 como resultado de la degeneración del código genético; d) una molécula de ácido nucleico aislada la cual codifica un polipéptido que tiene por lo menos 80% de identidad con la secuencia de aminoácidos del polipéptido codificado por la molécula de ácido nucleico de (a) a (c) ; e) una molécula de ácido nucleico aislada que codifica un homólogo, derivado o fragmento activo de la molécula de aminoácido como se representa en la SEQ ID NO: 51, cuyo homólogo, derivado o fragmento es de origen vegetal y comprende favorablemente (i) un tramo ácido entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 6 aminoácidos son ya sea Asp (D) o Glu (E); (ii) una NLS putativa entre los dos dominios WRKY donde por lo menos 3 de 4 aminoácidos son ya sea Lys (K) o Arg (R) ; y (iii) un dominio conservado con por lo menos 50%, 60% o 70%, preferentemente 75% u 80%, más preferentemente 90%, incluso más preferentemente 91%, 92%, 93%, 94% o 95%, lo más preferentemente 96%, 97%, 98% o 99% de identidad con la SEQ ID NO: 39; f) una molécula de ácido nucleico aislada capaz de hibridar con un ácido nucleico de (a) a (c) en lo anterior, o su complemento, en donde la secuencia de hibridación o el complemento de la misma codifica la proteína vegetal de (a) a (e); con lo cual la molécula de ácido nucleico tiene actividades de incremento del rendimiento y/o crecimiento en plantas. 20. Una construcción, caracterizada porque comprende : (i) un ácido nucleico de dominio WRKY doble de conformidad con la reivindicación 1 o variante del mismo; (ü) una o más secuencias de control capaces de conducir la expresión de la secuencia de ácido nucleico de (i) ; y opcionalmente (iii) una secuencia de terminación de la transcripción; o (iv) una secuencia de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 19. 21. La construcción de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porque la secuencia de control es un promotor constitutivo. 22. La construcción de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el promotor constitutivo es un promotor GOS2. 23. La construcción de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque el promotor GOS2 es como se representa por la SEQ ID NO: 42. 24. La construcción de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porque la secuencia de control es un promotor específico de embrión y/o aleurona. 25. La construcción de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada porque el promotor específico de embrión y/o aleurona es un promotor de oleosina . 26. La construcción de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada porque el promotor de oleosina es como se representa por la SEQ ID NO: 43. 27. Una planta, parte de la planta o célula vegetal transformada con una secuencia de ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 19 o con una construcción de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 26. 28. Un método para la producción de una planta transgénica que tiene rendimiento incrementado con relación a plantas control, el método está caracterizado porque comprende : (i) introducir y expresar en una planta o célula vegetal un ácido nucleico de dominio WRKY doble de conformidad con la reivindicación 1 o variante del mismo; (ii) cultivar la célula vegetal bajo condiciones que promueven el crecimiento y desarrollo de la planta. 29. Una planta transgénica que tiene rendimiento incrementado que resulta de un ácido nucleico de dominio WRKY doble o una variante del mismo introducido en la planta. 30. La planta de conformidad con la reivindicación 18, 27 ó 29, caracterizada porque la planta es una planta monocotiledónea, tal como caña de azúcar o en donde la planta es un cereal, tal como arroz, maíz, trigo, cebada, mijo, centeno, avenas o sorgo. 31. Unas partes cosechables de una planta de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18, 27, 29 ó 30. 32. Las partes cosechables de una planta de conformidad con la reivindicación 31, caracterizadas porque las partes cosechables son semillas. 33. Unos productos derivados directamente de una planta de conformidad con la reivindicación 30 y/o de las partes cosechables de una planta de conformidad con las reivindicaciones 31 ó 32. 34. Un uso de un ácido nucleico/gen de dominio WRKY doble de conformidad con la reivindicación 1 o variante del mismo, o uso de un polipéptido que tiene dos dominios WRKY de conformidad con la reivindicación 1 u homólogo de tal polipéptido, para mejorar el rendimiento, especialmente rendimiento en semilla, con relación a plantas control. 35. El uso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el rendimiento en semilla es uno o más de los siguientes: TKW incrementado, área de semilla individual incrementada, longitud de semilla individual incrementada, ancho de semilla individual incrementado, número total incrementado de semillas o número incrementado de flores por panícula. 36. El uso de un ácido nucleico/gen de dominio WRKY doble de conformidad con la reivindicación 1 o variante del mismo, o uso de un polipéptido que tiene dos dominios WKRY de conformidad con la reivindicación 1 u homólogo de tal polipéptido como un marcador molecular. RESUMEN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona a un método para incrementar el rendimiento de las plantas al modular la expresión en una planta de un ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene dos dominios de WRKY o un homólogo de tal polipéptido. Tal método comprende introducir en una planta un ácido nucleico de dos dominios de WRKY o variante del mismo. La invención también se relaciona a plantas transgénicas que tienen introducidas en las mismas un ácido nucleico de dos dominios de WRKY o variante del mismo, cuyas plantas tienen rendimiento incrementado con relación a plantas control. La presente invención se relaciona también a construcciones útiles en los métodos de la invención. La invención se relaciona adicionalmente a secuencias de ácido nucleico específicas que codifican las proteínas antes mencionadas que tienen la actividad para mejorar el crecimiento de plantas antes mencionadas, construcciones de ácido nucleico, vectores y plantas que contienen tales secuencias de ácido nucleico.