LU81679A1 - 3,4-dihydroxyzimtaldehydderivat,dessen herstellung und arzneimittel - Google Patents

Description

- 5 - 3,4-Dihydroxyzimtaldehydderivat, deseen Herstellung and Arzneimittel

Gegenstand der Erfindung ist die Verbindung der Formel !

Η v L JL i ..CH,OH

r' 0 CHo0H I

( c oier T

/\ ^oh

0 = C H

und deren Salze. Diese Verbindung vird "Americanin" genannt.

5 Diese Verbindung hat eine überraschend günstige antihepatotoxische Wirksamkeit, die eine willkommene Ergänzung des WirkungsSpektrums i der bekannten Lebermittel darstellt.

Man erhält diese neue Verbindung z. B. durch Extraktion und Fraktionierung aus Früchten der Phytolacca-Arten, insbesondere 10 der Phytolacca americana L., indem man fein vermahlene getrocknete Früchte von Phytolacca americana L. nach einer Behandlung mit Petroläther mit Aceton extrahiert, die Bückstände des eingedampften Extrakts mit Chloroform reinigt und in n-Butanol auflöst, die n-Butanol-Lösung mit Wasser reinigt, eindampft und 15 den Rückstand in Aceton auflöst, die Aceton-Lösung über / 7 - 6 - r • Sephadex LH 20 mit Aceton als Elutionsmittel in einer Säule chromatographiert, die pharmakologisch virksaaen Fraktionen vereinigt und eindampft und den Rückstand aus Methanol tm- kristallisiert.

5 Vorzugsweise verfährt man dabei so, daß man a) fein vermahlene, getrocknete Früchte von Phytolacca americana L. dreimal 0,5 bis 1,5 Stunden, bevorzugt 1 Stunde, mit jeweils der 2,5 bis 4,5-fachen, vorzugsweise der 3,5-fachen Gewichtsmenge Petroläther (Siede-I > 10 bereich 60 - 70 °C) bei .45 bis 55 °C, bevorzugt 50 °C, unter starkem Rühren extrahierend behandelt, b) die so vorbehandelte Droge dreimal 0,5 bis 1,5 Stunden, bevorzugt 1 Stunde, mit jeweile der 2,5 bis 4,5-fachen, vorzugsweise 3»5-fachen Gevichtsmenge Aceton bei 45 bis 15 55 °C, bevorzugt 50 °C, unter starkem Rühren extrahiert, c) den Aceton-Extrakt bei 35 bis 45 °C, bevorzugt 40 °C, im Vakuum bei 5 - 50, vorzugsweise 20 mbar eindampft, d) den erhaltenen Rückstand zweimal mit je l/4 bis l/2, bevorzugt l/3 Chloroform bezogen auf das Gewicht der 20 ursprünglichen Droge ausrührt und filtriert, e) den zurückbleibenden Feststoff im Verhältnis 1:10 bie ( 1:14, bevorzugt 1:12, in n-Butanol auflöst, f) die n-Butanol-Lösung 3 bis 5mal, bevorzugt 4mal, gegen l/3 bis 2/3, bevorzugt die halbe Volumenmenge 25 Vasser ausschüttelt, g) die n-Butanol-Phase bei 35 bis 45 °C, bevorzugt 40 °C, im Vakuum bei 5 - 50, vorzugsweise 20 mbar eindampft, h) den Rückstand in der 0,05 bis 0,15-fachen, vorzugsweise der 0,10-fachen Menge Aceton, bezogen auf das Gewicht 30 der ursprünglichen Droge, auflöst und filtriert, ß . / ^ l

J

- 7 - i) die Aceton-Lösung über Sephadex LH 20 unter Verwendung von Aceton als Elutionsmittel an einer Säule chromatographiert, j) die erhaltenen pharmakologisch wirksamen Fraktionen 5 vereinigt und hei 35 his 45 °C, bevorzugt 40 °C, im Vakuum bei 5 - 50, vorzugsweise 20 mbar eindampft, k) und den daraus resultierenden Rückstand aus Methanol umkristallisiert.

^Dae so erhaltene Produkt ist ein hellgelber kristalliner ‘ 10 Stofi mit folgenden Eigenschaften: Schmelzpunkt 246-7 °C

,-v » unter Zersetzung, Summenformel C^gH^gOg, Molmasse 328,

Elementaranalyse C 64,98 ¢, H 4,98 ¢, 0 28,3 Rf-Vert 0,17 bei Dünnschichtchromatographie unter Verwendung von Kiegelgel-60-Fertigplatten Merck und Chloroform/ 15 Aceton/Ameisensäure 9/2/1 (V/V/7) als Fließmittelsystem, praktisch unlöslich in Wasser, Chloroform, Benzol und Petroläther, löslich in Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid, Tetrahydrofuran, Dioxan und Aceton, optisches Drehungsvermögen Mi7 von + 23,7° sowie IR-Absorptionen bei Λ ** 4 20 3200 cm (-0H), l650 ein ( e6,ß-ungesätt. C = 0), l6l0 cm-1 ( = CC ) und 1580, 1510 sowie 1450 cm-1 (aromat. System).

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Das IR- und Massenspektrum des Produkts ist in Fig. 1 und 2 viedergegeben.

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L

- 8 - i

Diese neue Verbindung kann auch folgender Weise erhalten werden, daß man 3» 4-Dihydroxyzimtaldeh.yd und 3» 4-Dihydroxy-zimtalkohol mittels oxydative Addition dimerisiert.

Vorzugsveise verfährt man dabei so, 'daß man aquimolare 5 Mengen von 3i4-Dihydroxyzimtaldehyd und 3»4-Dihydroxyzimt-alkohol in der 5-fachen Menge der Gesamtreagenzien eines Lösungsmittels vie Benzol, Dioxan, Tetrahydrofuran oder Aceton bei 15 bis 30, vorzugsveise 23 °C vährend 1,5 bis 3» vorzugsveise 2 Stunden, unter Einwirkung von Silberoxyd 10 im Verhältnis von 0,5 bis 0,6 insbesondere 0,55 Mol pro i ‘ Mol Gesamtreagenzien, reagieren läßt, die filtrierte Beaktions- ‘ losung zur Trockne bringt und den Eückstand säulenchromato graphisch abtrennt.

Das hierzu synthetisch erhaltenen Produkt veist die gleichen 15 Charakteristika vie das durch Isolierung aus der Phytolacca- ✓

Arten gewonnene Produkt auf.

Diese neue Verbindung kann außerdem auf folgende Weise erhalten werden, daß man 3»4-Dihydroxyzimtaldehyd mit Allylbrenzcatechin in einem organischen Lösungsmittel mittels 20 oxydativer Addition reagieren läßt, das erhaltenen Zwischenprodukt acetyliert, säulenchromatographisch trennt, den ( Methylsubstituenten in der Benzodioxangruppe zu Alkoholfunktion oxydiert und die erhaltene Verbindung mit einem schwachen Alkali verseift, 25 Vorzugsveise verfährt man dahei so, daß man äquimolere Mengen von 3»4-Dihydroxyzimtaldehyd und Allylbrenzcatechin in der 5-fachen Menge der Gesamtreagenzien eines Lösungsmittels vie / - 9 -

Benzol, Dioxan, Tetrahydrofuran oder Aceton hei 15 Dis 50° 0» vorzugsweise 25° C, während 1,5 his 3» vorzugsweise 2 Stunden, unter Einwirkung von Silheroxyd im Verhältnis von 0,5 his.0,6, insbesondere 0,55 Mol pro Mol Gesamtreagenzien, reagieren läßt, 5 das gewonnene Produkt in bekannter Veise acetylier.t, säulenchromatographisch isoliert und anschließend den Methylsubstituenten an der Benzodioxangruppe zu Alkoholfunktion in bekannter Veise oxydiert.

Das hierzu synthetisch erhaltene Produkt weist die gleichen 10 Charakteristika wie das durch Isolierung aus den Phytolacca-Arten gewonnene Produkt auf.

( 0 ^J§X0H + W0H - 2 V^^OH 'HK in Benzol

v Q μ mit Spur CHjOH

H Allylhrenzcatechin 3,4-Dihydroxyzimtaldehyd 0 v.·’ ^^3 Γ/^νΤ j Oxydation -*

Nach Acetylierung und präparat, S.C, isolierbar ov-CH2oh

> 0 toT

Ajnericapin / - 10 -

Eine erste Strukiuraufklärung der erfindungsgemäßen Verbindung hat folgende Formel ergehen! jV” tr JL JL JL ___,ch2oh ^c>-v\h2oH hrv„« C oder UQf • 0=C/XH ^

Diese Verbindung wird "Americanin" genannt.

Diese Substanz kann auf übliche Weise in ihre physiologisch 5 verträglichen Salze überführt werden. Zur Salzbildung geeignete schwach-basische Agenzien sind beispielsweise Alkali- und Alkalihydrogencarbonate und Amine wie Tri-äthanolamin, Trimethylamin, Triäthylamin, Aminozucker usv.

[ Das erfindungsgemäße Produkt kann sowohl als Eoheitrakt als 10 auch als kristallines Produkt für medizinische Zwecke als

Lebertherapeutikum verwendet werden. Es kann in verschiedenen pharmazentischen Formen wie Tabletten, Kapseln, Granulaten, Dragees, Zäpfchen oder als flüssiges Präparat oral, anal oder parenteral znr Anwendung kommen. Die Dumandosis liegt bei 15 200 - 450 mg/Tag, je nach Schwere des Falles.

.U- · - 11 -

Bei dem Beechriebenen Wirkstoff Americanin sovie dessen Salze vnrde überraschenderweise "bei tierexperimentellen Untersuchungen eine ausgeprägte Schutzwirkung gegen leberschädigende Einflüsse gefunden. Americanin entfaltet einen besonders starken protek-5 tiven und stabilisierenden Effekt auf die zellulären und intrazellulären Biomembranen, insbesondere auf die Leberzellen, d. h. eine starke Leberschutzvirkung und kann daher beispielsweise bei der Behandlung von Lebererkrankungen Verwendung finden.

Zum Nachweis der antihepatotoxischen Wirksamkeit des erfindungs-10 gemäßen Produkts wurden weibliche Mäuse mit dem Lebergift ' * Phalloidin (3 mg/kg; i.p.) geschädigt (Kontrolltiere) und die

Testtiere zusätzlich mit Americanin behandelt.

Das Americanin wurde in DMSO + Polyäthylenglykol (lsl) gelöst, i.v. verabreicht, und zwar in Bosen von 50 hzw. 100 mg/kg eine 15 Stunde vor der Phalloidin-Injektion.

Ergebnisi

Von den mit Phalloidin vergifteten Mäusen starben 85 während die Tadesrate durch Behandlung mit 50 hzw. 100 mg/kg Americanin auf 60 hzw. 30 /£ gesenkt werden konnte (Beobachtungszeitraum: ^ 20 7 Tage; Anzahl: 20 Tiere je Gruppe).

Die Toxizität (i.v.) des erfindungsgemäßen neuen Wirkstoffes wurde hei männlichen hzw. weiblichen Mäusen geprüft. Dabei wurden Werte von 820 mg/^tg (für männliche Mäuse) bzw. 800 mg/kg (für weibliche Mäuse) gefunden.

25 Nachfolgend wird die Herstellung des erfindungsgemäßen Produkts an H&nd eines erläuternden Beispiels beschrieben:

L

Ix - 12 -

Beispiel 1 100 kg fein vermahlene, getrocknete Fruchte von Phytolacca americana L. verden mit Hilfe eines Ultra-Turrax-Gerätes dreimal je 1 Std. lang mit 400 1 Petroläther (Siedehereich 5 60 - 70 °C) hei 50 °C extrahiert. Die so vorbehandelte

Droge vird dann dreimal einer 1-stündigen Turrax-Extraktion mit je 400 1 Aceton bei 50 °C unterworfen. -Die vereinigten Aceton-Extrakte -werden bei 40 °C im Vakuum eingedampft. Der erhaltene Rückstand vird anschließend zweimal mit je 50 1 10 Chloroform ausgerührt. Die Mischung vird filtriert und der ^ zurückbleibende Feststoff im Verhältnis 1:12 in n-Butanol gelöst. Die n-Bntanol-Lösung wird viermal mit der halben Volumenmenge Wasser ausgeschüttelt. Danach wird die Butanol-Phase bei 40 °C im Vakuum eingedampft und der Rückstand in 15 10 1 Aceton gelöst. Nach Abtrennung der nicht gelösten Anteile vird die Lösnng über Sephadex LH 20 unter Verwendung von Aceton als Elutionsmittel in einer Säule chromaiographiert.

Die den Wirkstoff enthaltenden Fraktionen verden vereinigt und hei 40 °C im Vakuum eingedampft. Der Rückstand vird ans 20 Methanol umkristallisiert.

AIb Endprodukt vird eine Substanz mit folgenden chemischen und physikalischen Parametern erhalten:

Aussehen: hellgelber mikrokristalliner Feststoff Löslichkeit; löslich in Dimethylsulfoxid, Dimethylformamid 25 Tetrahydrofuran, Dioxan und Aceton, gering löslich in Methanol, Äthanol und Butanol, praktisch unlöslich in Waeser, Chloroform, Benzol und Petroläther

Schmelzpunkt: 246 - 7 °C (Zersetzung) ' /_ - 13 - Sïumnenf ornel t ^18^10^6

Molmasse: 328

Elementaranalyse : C 64,98 (ber. 65,85) H 4,98 (ber. 4,9l) 4 0 28,3 (ber. 29,24)

Dunnschichtchromatographie:

Kieselgel-Fertigplatten (Merck)

Fließmittelr Chloroform, Aceton, Ameisensäure 9/2/l (V/V/V) Entwicklung: unter Kammersattigung 10 Detektion: Sprühreagens 2,4-Dinitrophenylhydrazin/Schwefelsäure (l g 2,4-Dinitrophenylhydrazin in 2 ml konz. Schwefelsäure aufgeschlammt und mit Methanol auf 100 ml aufgefüllt)

Nach dem Besprühen der Platte wird 20 Minuten auf 15 120 °C erwärmt. Die Substanz erscheint als intensiv gelbe Zone auf hellgelbem Grund.

Ef-Vert: 0,17

Das IR-Spektrum und Massenspektrum wird in den angefügten Figuren 1 und 2 viedergegeben.

/ /i - 14 - r '.

Galenische Beispiele:

Her st e 1 lung_y°n_Tabl e tt en : 70 kg des erfindungsgemäßen Wirkstoffes verden mit folgenden Hilfsstoffen gemischt: 5 10,000 kg Polyvinylpyrrolidon 14.400 kg Mikrokristalline Zellulose 17.400 kg Amylum tritici 6,500 kg Aerosil 10,000 kg Stearinsäure 10 571,700 kg Laktose DIN 80

Anschließend verden Tabletten von 0,50 g (70 mg Wirkstoff enthaltend) gepreßt.

Herstellung von_injizierharen_Pragaraten (Ampullen);

Zur Herstellung von 10.000 Ampullen verden 1,5945 kg Methyl-15 glucaainsalz des erfindungsgemäßen Wirkstoffes in 48,6 Liter physiologischer Kochsalzlösung, der 4 Polyvinylpyrrolidon (M.G.^vIO.OOO) zugesetzt verden gelöst. Der pH-Wert soll 7,6 nicht unterschreiten. Die Lösung wird sterilfiltriert und in sterile braune 5 ml-Ampullen eingefüllt, bo daß der 20 Inhalt pro Ampulle 159,45 Hg N-Methylglucaminsalz, entsprechend * 100 mg des erfindungsgemäßen Wirkstoffes beträgt.

Herstellung von Zäpfchen: 318,9 g des Methylglucaminsalzes des erfindungsgemäßen Wirkstoffes verden mit 500 g geschmolzenem Hartfett DAß 7 25 angerieben. Unter Bühren werden 1.181,1 g geschmolzenes Hartfett DAB 7 hinzugegeben und aus der Masse Zäpfchen gegossen. Jedes Zäpfchen zu 2,0 g enthält 318,9 mg Methyl g lue aminsalz, entsprechend 200 mg des erfindungs-" gemäßen Wirkstoffes.

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Claims (6)

1. Verbindung der Formel rt'/X I ^.ch.oh c 0 CM« y 2 °der 'LA... 0=C H . 0H H und deren Salze.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man a) entveder fein vermahlene getrocknete Früchte von Phytolacca americana L. nach einer Behandlung mit Petroläther mit Aceton extrahiert, die Rückstände des eingedampften Extrakts mit Chloroform reinigt und in n-Butanol auflost, die n-Butanol-Lösung ait Wasser reinigt, eindaspft und den Rückstand in Aceton auflöst, die Aceton-Lösung über Sephadex LH 20 mit Aceton als Elutionsmittel in einer Säule chromatographiert, die pharmakologisch wirksamen Fraktionen vereinigt und ein-' dampft und den Rückstand aus Methanol umkristallisiert, oder i / -v f - 2 - r : b) 3>4“Dibydroxyzimtaldebyd und 3»^ Dihydroxyzimtalkohol mittels oxydative Addition dimerisiert, oder c) 3,4-Dihydroxyzimtaldehyd mit Allylbrenzcatechin in einem organischen Lösungsmittel mittels oxydativer Addition reagieren läßt, das erhaltene Zwischenprodukt acetyliert, säulenchromatographisch trennt, den Methylsubstituenten in der Benzodioxangruppe zu Alk oho 1 f unkt ion oxydiert und die erhaltene Verbindung mit einem schwachen Alkali verseift. (' ' 1

3. Verfahren nach Anspruch 2a), dadurch gekennzeichnet, daß man a) fein vermahlene, getrocknete Früchte von Phytolacea americana L. dreimal 0,5 bis 1,5 Stunden, bevorzugt

1 Stunde, mit jeweils der 2,5 bis 4,5-fachen, vorzugsweise der 3i5-fnchen Gevichtsmenge Petroläther (Siede-bereich 60 - 70 °C) bei 45 bis 55 °C, bevorzugt 50 °C, unter starkem Bühren extrahierend behandelt, b) die so vorbehandelte Droge dreimal 0,5 bis 1,5 Stunden, bevorzugt 1 Stunde, mit jeweils der 2,5 bis 4,5-fachen, vorzugsweise 3,5-îachen Gevichtsmenge Aceton bei 45 bis • 55 °C, bevorzugt 50 °C, unter starkem Bühren extrahiert, c) den Aceton-Extrakt bei 35 bis 45 °C, bevorzugt 40 °C, im Vakuum bei 5-50, vorzugsweise 20 mbar eindampft, d) den erhaltenen Eückstand zweimal mit je l/4 bis l/2, bevorzugt 1/3 Chloroform bezogen auf das Gewicht der ursprünglichen Droge ansrührt und filtriert, e) den zurückbleihenden Feststoff im Verhältnis 1:10 his 1:14, bevorzugt 1:12, in n-Butanol auflöst, L * - 3 - f) die n-Butanol-Lösung 3 bis 5mul» bevorzugt 4mal, gegen l/3 bis 2/3, bevorzugt die halbe Voluxaenmenge Wasser ausschüttelt, g) die n-Butanol-Phase bei 35 bis 45 °C, bevorzugt 40 °C, im Vakuum bei 5 - 50, vorzugsweise 20 mbar eindampft, h) den Rückstand in der 0,05 bis 0,15-fachen, vorzugsweise . der 0,10-fachen Menge Aceton, bezogen auf das Gewicht der ursprünglichen Droge, auflöst und filtriert, i) die Aceton-Lösung über Sephadei LH 20 unter Verwendung < von Aceton als Elutionsmittel in einer Säule » chromatographiert, j) die erhaltenen pharmakologisch wirksamen Fraktionen vereinigt und bei 35 bis 45 °C, bevorzugt 40 °C, im Vakuum bei 5-50, vorzugsweise 20 mbar eindampft, k) und den daraus resultierenden Rückstand aus Methanol umkristallisiert. '4. Verfahren nach Anspruch 2b), dadurch gekennzeichnet, daß man äquimolare Mengen von 3t4-Dihydroxyzimtaldehyd und 3,4-Dihydroxyzimtalkohol in der 5-fachen Menge der Gesamt— reagenzien eines Lösungsmittels wie Benzol, Dioxan, Tetrahydro-I furan oder Aceton bei 15 bis 50, vorzugsweise 23 °C wahrend 1,5 bis 3, vorzugsweise 2 Stunden, unter Einwirkung von Silberoxyd im Verhältnis von 0,5 bis 0,6, insbesondere 0,55 Mol pro Mol Gesamtreagenzien, reagieren läßt, die filtrierte Reaktione-löeung zur Trockne bringt und den Rückstand säulenchromato— graphisch abtrennt. ί / v ! / ; a ♦ - 4 - *

5. Verfahren nach Anspruch 2c), dadurch gekennzeichnet, daß man äcpiimolare Mengen von 3>4-Dihydroxyzimtaldehyd und Allylbrenzcatechin in der 5-facben Menge der Gesamtreagenzien eines Lösungsmittels vie Benzol, Dioxan, Tetrahydrofuran oder Aceton hei 15 his 30 °C, vorzugsweise 25 °C, während 1,5 his 31 vorzugsweise 2 Stunden, unter Einwirkung von Silberoxyd im Verhältnis von 0,5 bis 0,6, insbesondere 0,55 Mol pro Mol Gesamtreagenzien, reagieren laßt, das gewonnene Produkt in bekannter Weise acetyliert, säulenchromatographisch isoliert und anschließend den Methylsubstituenten an der Benzodioxan-(' gruppe zn Alkoholfunktion in bekannter Weise oxydiert.

6. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an Verbindung nach Anspruch 1, hebst üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln. \ ί ' ·" r \ Λ. A 1 \ f « »