LU503193B1 - Method for detecting monosaccharides in apple pulp cell wall by high performance liquid chromatography - Google Patents
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1. Ein Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, umfassend: (1) Extraktion der Polysaccharide in der Zellwand von Apfelpulpe; Säurehydrolyse: Abwiegen von jeweils 10 mg Polysacchariden AIR-Proben aus Apfelpulpe, dre: Wiederholungen in einer Gruppe, insgesamt drei Gruppen, Einfüllen in ein Glasrôhrchen, Zugabe von 3 ml 2 mol/l Trifluoressigsäure, Zugabe von Stickstoff, Versiegeln, Schütteln in einem Wasserbadschüttler mit konstanter Temperatur von 70-90°C für 65-75 Stunden, dann Herausnehmen und Einstellen des pH-Werts; (2) Enzymolyse: Zugabe von 25ul VL9 Reverse Transkriptase in die Lösung, Erhitzen der Lôsung auf 45 - 55°C, Schütteln in einem Schüttler für 20 - 26 h, Herausnehmen und Sieden für 12 - 20 Minuten nach dem Schütteln; (3) Derivatisierung von Monosacchariden: Entnahme von 100ul der in Schritt (2) erhaltenen Flüssigkeit, Zugabe von 100ul Natriumhydroxid in die Flüssigkeit, dann Zugabe von 200ul 0,6mol/L PMP, gleichmäfBiges Mischen, Durchführung eines Wasserbads der gemischten Flüssigkeit bei 65°C - 75°C für 90 Minuten - 110 Minuten, Herausnehmen und Schützen vor Licht 8 - 12 Minuten lang, dann Zugabe von 100 ul Salzsäure und gleichmäBiges Mischen; Zugabe von Chloroform zur Extraktion 2 - 3 mal, Entnahme des Überstandes, Durchlaufen durch eine Membran und Geben in eine Probenflasche; (4) Geben der Probe in der Probenflasche zur Detektion mit Hochleistungsflüssigkeitschromatographie: die Detektionsbedingungen der HPLC sind wie folgt: mobile Phase-Phosphatpuffer mit pH 6,85 wird verwendet, Gradientenelution mit Acetonitril wird durchgeführt, und Säulentemperatur der HPLC ist auf 30 - 40°C eingestellt.
2. Das Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von 7503799 Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie nach Anspruch 1, wobei in Schritt (1), wenn PH eingestellt wird, der PH-Wert der Lösung mit 1mol/L NaOH-Lösung bzw. 0,1mol/L NaOH-Lösung auf 5,0 eingestellt wird.
3. Das Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie nach Anspruch 1 oder 2, wobei in Schritt (1) 72 Stunden lang bei 80°C in einem Wasserbadschüttler mit konstanter Temperatur geschüttelt wird.
4. Das Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie nach Anspruch 1 oder 2, wobei in Schritt (2) die Lösung auf 50°C erhitzt und 24 Stunden lang in einem Schüttler geschüttelt wird.
5. Das Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie nach Anspruch 1 oder 2, wobei es in Schritt (2) nach dem Schütteln entnommen und 15 Minuten lang gekocht wird.
6. Das Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie nach Anspruch 1 oder 2, wobei in Schritt (3) die gemischte Lösung 100 Minuten lang in ein Wasserbad bei 70°C gelegt wird, dann herausgenommen und 10 Minuten lang vor Licht geschützt wird.
7. Das Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie nach Anspruch 1 oder 2, wobei in Schritt (3) Chloroform zur dreimaligen Extraktion zugegeben wird.
8. Das Verfahren zum Nachweis von Monosacchariden in der Zellwand von Apfelpulpe durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie nach Anspruch 1 oder 2, wobei in Schritt (4) die Säulentemperatur der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie auf 35°C eingestellt wird.
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