KR20240058075A - Cd40을 특이적으로 식별하는 항체 및 이의 응용 - Google Patents
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Abstract
본 출원은 CD40를 특이적으로 식별하는 항체 또는 항원 결합 단편, 및 이의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.
Description
본 출원은 CD40을 특이적으로 식별하는 항체 또는 항원 결합 단편, 및 이의 제조 방법과 용도에 관한것이다.
[관련 출원의 교차 인용]
본 출원은 2021년 7월 14일에 중국 특허청에 제출한 출원번호가 202110793032.1이고, 발명의 명칭이 "CD40을 특이적으로 식별하는 항체 및 이의 응용"인 중국 특허 출원의 우선권을 주장하며, 그 전부 내용을 본 출원에 인용한다.
[서열목록 전자파일의 인용]
서열목록 전자파일(파일 명칭: CN_202106295612_SEQLIST. xml, 기록일자: 2022년 7월 12일, 파일사이즈: 141KB)의 전부 내용을 본 출원에 인용한다.
CD40은 종양괴사인자수용체(TNFR) 슈퍼패밀리에 속하는 공동 자극(costimulatory) 수용체 중의 하나이다(Croft, Michael et al. Nature reviews. Drug discovery vol. 12, 2 (2013): 147-68). CD40의 기능은 인간 B 림프구에서 처음으로 동정되었는데, CD40은 B 림프구에서 구성적으로 발현되고, CD40의 신호는B 세포의 활성화와 증식을 촉진한다(Clark, E A, and J A Ledbetter. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol. 83, 12 (1986): 4494-8). CD40은 단핵세포 및 수지상 세포(DC)와 같은 다른 조혈 세포에서 발현되어 세포의 생존과 사이토카인의 생성을 촉진할 수 있고(Stout, R D, and J Suttles. Immunology today vol. 17, 10 (1996): 487-92), 또한 CD40L를 발현하는 CD4+ T세포의 활성화, 증식 및 사이토카인의 생성을 유도하도록 신호를 송신할 수 있다(Grewal, I S, and R A Flavell. Immunology today vol. 17, 9 (1996): 410-4). CD40신호의 전달은 내피세포, 상피세포, 섬유아세포 및 신경원세포를 포함한 비조혈세포의 세포 응답에도 영향을 미칠 수 있다(Hollenbaugh, D et al. The Journal of experimental Medicine vol. 182, 1 (1995): 33-40; Karmann, K et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol. 92, 10 (1995): 4342-6; and Tan, Jun et al. The EMBO journal vol. 21, 4 (2002): 643-52).
CD40L는 활성화된 CD4+ T세포 표면에서 처음으로 동정되었는데(Hollenbaugh, D et al. The EMBO journal vol. 11, 12 (1992): 4313-21), B세포와 T세포 간의 CD40-CD40L의 인터랙션은 그가 배중심(GC)에서 응답하고, T의존성 항원의 동형 종류 변환에 응답함에 매우 중요하는 것으로 나타내었다(Kawabe, T et al. Immunity vol. 1, 3 (1994): 167-78). 또한, CD40L은 비만세포, 호염기구, B세포, 자연 살해(NK) 세포, 대식세포, 거핵구 및 혈소판을 포함한 다양한 세포에서 발현되는 것이 실증되었고, 이는 CD40경로의 세포 생물학적으로의 광범위한 역할을 뚜렷하게 나타내었다(Schφnbeck, U, and P Libby. Cellular and Molecular life sciences: CMLS vol. 58, 1 (2001): 4-43; and van Kooten, C, and J Banchereau. Journal of leukocyte biology vol. 67, 1 (2000): 2-17).
다수의 동물 모델에서, CD40L/CD40인터랙션이 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus)(Davidson, Anne et al. Annals of the New York Academy of Sciences vol. 987 (2003): 188-98), 실험적알레르기성뇌척수염(experimental allergic encephalomyelitis)(Toubi, Elias, and Yehuda Shoenfeld. Autoimmunity vol. 37, 6-7 (2004): 457-64), 콜라겐유발 관절염(collagen-induced arthritis)(Durie, F H et al. Science (New York, N. Y.) vol. 261, 5126 (1993): 1328-30), 면역거부반응(immunological rejection)(Goldwater, R et al. American journal of transplantation vol. 13, 4 (2013): 1040-1046), 죽상 동맥 경화로 인한 심혈관질환(atherogenesis-mediated cardiovascular disorders)(Jansen, Matthijs F et al. Basic research in cardiology vol. 111, 4 (2016): 38), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome)(Okimura, K et al. American journal of transplantation vol. 14, 6 (2014): 1290-9), 전신경화증(systemic sclerosis)(Boleto, Gonηalo et al. Frontiers in immunology vol. 9 2998. 18 Dec. 2018), 면역성혈소판감소성자반증(immune thrombocytopenic purpura)(Kuwana, Masataka et al. Blood vol. 103, 4 (2004): 1229-36), 염증성 장질환(inflammatory bowel disease)(Senhaji, Nezha et al. Frontiers in immunology vol. 6 529. 16 Oct. 2015), 당뇨병(diabetes)(Balasa, B et al. Journal of immunology (Baltimore, Md.: 1950) vol. 159, 9 (1997): 4620-7), RA(Gotoh, Haruhiko et al. The Journal of rheumatology vol. 31, 8 (2004): 1506-12) 및 암(cancer)(Li, Rui et al. Molecular biology reports vol. 39, 9 (2012): 8741-7; and Li, Rui et al. Immunology letters vol. 131, 2 (2010): 120-5)을 포함한 다양한 질환에 관여되는 것이 실증되었다.
따라서, CD40과 CD40L의 결합을 중화시키는 것은, CD40/CD40L경로에 의해 매개되는 질환 및 병증을 치료하기 위한 방법으로 사용될 수 있다. 특허 출원 WO200563981A1에서 항 인간 CD40 항체 ASKP1240(본출원의 실시예 부분에서 대조 항체로 사용됨)이 게시되었고; WO201265950A1에서 항 인간 CD40 항체 CFZ533(본출원의 실시예 부분에서 대조 항체로 사용됨)이 게시되었다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 및 공개된 특허 출원에 게시된 전부 내용은 참조로 본 출원에 인용된다.
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일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, GYX1VN(SEQ ID NO: 81)을 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1 - 여기서, X1은 L, T 또는 V임 -; X1IX2PX3X4GX5TX6YNQKFKG(SEQ ID NO: 82)를 포함한 HC-CDR2 - 여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 A, N 또는 V이며, X3은 E, K, L, M, R, S, T 또는 Y이고, X4는 H, N, S 또는 T이며, X5는 G 또는 R이고, X6은 A, S, T 또는 W임 -; 및 SX1X2X3X4PYAX5DY(SEQ ID NO: 83)를 포함한 HC-CDR3 - 여기서, X1은 G, I, L, M, P, R, S 또는 Y이고, X2는 W 또는 Y이며, X3은 S 또는 V이고, X4는 D, K, L, N, R, T 또는 V이며, X5는 A, G, M, N, Q 또는 S임 - 을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과, KASQNVHTX1VA(SEQ ID NO: 84)를 포함한 경사슬 상보성 결정 영역(LC-CDR)1 - 여기서, X1은 A, H, N 또는 R임 -; LX1SDRRT(SEQ ID NO: 85)를 포함한 LC-CDR2 - 여기서, X1은 A 또는 R임 -; 및 LQX1WX2X3PLT(SEQ ID NO: 86)를 포함한 LC-CDR3 - 여기서, X1은 A 또는 H이고, X2는 N, S 또는 T이며, X3은 A, Q, R, S 또는 Y임 - 을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개의 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개의 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 32 내지 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개의 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, SEQ ID NOs: 58 내지 61 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개의 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 66 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개의 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 77 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개의 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, (i) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (ii) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (iii) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (iv) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (v) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (vi) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (vii) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (viii) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; (ix) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고; 또는 (x) VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, (i)아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 9를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 58을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; (ii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 10을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; (iii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; (iv) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 73을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; (v) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 20을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 42를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; (vi) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 14를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 43을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; (vii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 51을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; (viii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 11을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 48을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; 또는 (ix) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 18을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 47을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, (i)아미노산 서열 SEQ ID NO: 87 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (ii)아미노산 서열 SEQ ID NO: 88 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (iii)아미노산 서열 SEQ ID NO: 89 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (iv)아미노산 서열 SEQ ID NO: 94 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (v)아미노산 서열 SEQ ID NO: 96 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (vi)아미노산 서열 SEQ ID NO: 101 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (vii)아미노산 서열 SEQ ID NO: 110 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (viii)아미노산 서열 SEQ ID NO: 114 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; (ix)아미노산 서열 SEQ ID NO: 115 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; 또는 (x)아미노산 서열 SEQ ID NO: 117 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NO: 120으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 139로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 139로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 5를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 54를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 140로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 140로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 6을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 28을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 55를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 63을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NO: 122로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 122로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 29를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 56을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 64를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 69를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NO: 123으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 123으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 142로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 142로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143으로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 30을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 57을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NO: 124로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 124로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 143으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 143으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 31을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 144로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 144로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체가 인간 CD40와의 결합의 Kd값은 0. 1 pM 내지 1 nM이다.
일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, 상기 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체와 경쟁하여 CD40과 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체와 상기 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체는 동일한 에피토프와 특이적으로 결합한다.
일부 실시예에서, 상술한 어느 하나의 단리된 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 단리된 항-CD40 항체는, Fc 단편을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-CD40 항체는 전장의 IgG 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-CD40 항체는 전장의 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-CD40 항체는 키메릭 항체, 인간 항체 또는 인간화 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 단리된 항-CD40 항체는 항원 결합 단편이고, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일사슬 항체 (scFv), Fv단편, dAb, Fd, 나노 항체(nanobody), 디아바디(diabody) 및 선형 항체로부터 선택된다.
일부 실시예에서, 단리된 핵산 분자를 제공하는 바, 상기 핵산 분자는 상기 어느 하나의 항-CD40 항체를 코딩한다. 일부 실시예에서, 벡터를 제공하는 바, 상기 벡터는 상기 어느 하나의 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시예에서, 숙주 세포를 제공하는 바, 상기 숙주 세포는 상기 어느 하나의 항-CD40 항체 및 상기 어느 하나의 핵산 분자 또는 상기 어느 하나의 벡터를 포함한다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체의 제조 방법을 제공하는 바, 상기 방법은, a) 항-CD40 항체를 효과적으로 발현할 수 있는 조건에서 상기 어느 하나의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 b) 상기 숙주 세포에서 발현된 항-CD40 항체를 획득하는 단계를 포함한다.
일부 실시예에서, 치료가 필요한 개체의 질환 또는 병증을 치료하는 방법을 제공하는 바, 상기 방법은 상기 개체에게 유효량의 상기 어느 하나의 항-CD40 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 어느 하나의 항-CD40 항체가 치료가 필요한 개체의 질환 또는 병증을 치료하는 약물 조성물을 제조함에 있어서의 용도를 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 어느 하나의 항-CD40 항체 또는 항-CD40 항체를 포함한 약물 조성물이 질환 또는 병증을 치료하기 위한 약물을 제조함에 있어서의 용도를 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은 CD40신호 경로와 관계가 있고, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환 또는 병증을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직의 이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군, 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변증, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, 리치-스트라우스(Rich-Strauss) 증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증으로부터 선택된다.
더불어, 본 출원은 상기 어느 하나의 항-CD40 항체를 포함하는 약물 조성물, 테스트 키트 및 제품을 더 제공한다.
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도 1A는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 Ramos세포에서 인간 CD40L에 의해 유발되는 CD95의 발현을 억제한 결과를 나타낸다. 도 1B는, 항 면역글로불린 항체의 가교 결합을 거친 후, 항-CD40 항체 D1, D7 및 대조 항체 ASKP1240이 CD40 경로를 활성화하는 부작용이 거의 없지만, 대조 항체 CFZ533은 특정한 작용제 활성(agonistic activity)을 나타낸다는 결과를 나타낸다.
도 2는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 PBMCs에서 CD40L에 의해 유발되는 CD23의 발현을 억제한 결과를 나타낸다.
도 3A 내지 3B는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 iDCs에서 CD40L에 의해 유발되는 사이토카인의 분비를 억제한 결과를 나타낸다. 도 3A는 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 iDCs에서 CD40L에 의해 유발되는 IL12p40의 분비를 억제한 결과를 나타낸다. 도 3B는 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 iDCs에서 CD40L에 의해 유발되는 TNF-α의 분비를 억제한 결과를 나타낸다.
도 4는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49가 인간 CD40L에 의해 유발되는 NF-κB 신호 경로의 활성화를 억제하는 결과를 나타낸다.
도 5A 내지 5B는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체의 다른 종 CD40과의 결합 친화도를 도시한 결과이다. 도 5A는 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49의 인간 CD40과의 결합 그래프를 도시하였다. 도 5B는 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49의 붉은털원숭이(rhesus Monkey) CD40와의 결합 그래프를 나타낸다.
도 6은 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49이 Ramos세포에서 인간 CD40L에 의해 유발되는 CD95의 발현을 억제하는 결과를 나타낸다.
도 7은 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42, D47이 PBMCs에서 CD40L에 의해 유발되는 CD23의 발현을 억제한 결과를 나타낸다.
도 8A 내지 8D는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 항-CD40 항체는 T세포 의존성 항체 반응에 대한 차단 작용을 나타낸 결과이다. 도 8A는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 3 Mpk의 사용량에서 MASP2 항원에 특이적인 IgG의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다. 도 8B는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 3 Mpk의 사용량에서 MASP2 항원에 특이적인 IgM의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다. 도 8C는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 1 Mpk의 사용량에서 KLH 항원에 특이적인 IgG의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다. 도 8D는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 1 Mpk의 사용량에서 KLH 항원에 특이적인 IgM의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다.
도 9는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47의 레트 체내에서의 약물 혈장 그래프를 나타낸 결과이다.
도 2는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 PBMCs에서 CD40L에 의해 유발되는 CD23의 발현을 억제한 결과를 나타낸다.
도 3A 내지 3B는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 iDCs에서 CD40L에 의해 유발되는 사이토카인의 분비를 억제한 결과를 나타낸다. 도 3A는 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 iDCs에서 CD40L에 의해 유발되는 IL12p40의 분비를 억제한 결과를 나타낸다. 도 3B는 항-CD40 항체 D1, D6 또는 D7이 iDCs에서 CD40L에 의해 유발되는 TNF-α의 분비를 억제한 결과를 나타낸다.
도 4는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49가 인간 CD40L에 의해 유발되는 NF-κB 신호 경로의 활성화를 억제하는 결과를 나타낸다.
도 5A 내지 5B는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체의 다른 종 CD40과의 결합 친화도를 도시한 결과이다. 도 5A는 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49의 인간 CD40과의 결합 그래프를 도시하였다. 도 5B는 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49의 붉은털원숭이(rhesus Monkey) CD40와의 결합 그래프를 나타낸다.
도 6은 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49이 Ramos세포에서 인간 CD40L에 의해 유발되는 CD95의 발현을 억제하는 결과를 나타낸다.
도 7은 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42, D47이 PBMCs에서 CD40L에 의해 유발되는 CD23의 발현을 억제한 결과를 나타낸다.
도 8A 내지 8D는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 항-CD40 항체는 T세포 의존성 항체 반응에 대한 차단 작용을 나타낸 결과이다. 도 8A는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 3 Mpk의 사용량에서 MASP2 항원에 특이적인 IgG의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다. 도 8B는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 3 Mpk의 사용량에서 MASP2 항원에 특이적인 IgM의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다. 도 8C는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 1 Mpk의 사용량에서 KLH 항원에 특이적인 IgG의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다. 도 8D는 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 1 Mpk의 사용량에서 KLH 항원에 특이적인 IgM의 생성을 거의 완전히 차단한 결과를 나타낸다.
도 9는 대조 항체 ASKP1240과 비교하여 볼 때, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47의 레트 체내에서의 약물 혈장 그래프를 나타낸 결과이다.
본 출원의 일 양태에서, 항-CD40 항체 분자를 제공한다. 하이브리도마 기술, scFv 파지 라이브러리 스크리닝, 인간화 기술, 친화도 성숙 및 적절하게 설계된 생화학적 및 생물학적 실험의 조합에 의해 인간 CD40에 결합하여 인간 CD40와 그의 수용체 간의 작용을 억제할 수 있는 효과적인 항체 분자를 동정하였다. 본 명세서에 제시된 결과로부터 본 출원의 항체가 공지된 항-CD40 항체 ASKP1240에 비해 더 높은 친화도로 인간 및/또는 원숭이의 CD40에 결합되는 것이 "P혀졌고, 놀라운 것은, 다양한 생물학적 실험에서 본 출원의 항체가 ASKP1240보다 더 효과적인 것이 실증되었다.
본 출원에서 제공되는 항-CD40 항체는, 예를 들면, 전장 항-CD40 항체, 항-CD40 단일사슬 항체(scFvs), 항-CD40 Fc융합 단백질, 다중특이성 (예를 들면, 이중 특이성) 항-CD40 항체, 항-CD40 면역 접합체(immunoconjugate) 등과 같은 것들을 포함한다.
일 양태에서, 본 출원은 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는, 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH는 하기를 포함한다. 즉, GYX1VN(SEQ ID NO: 81)을 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1 - 여기서, X1은 L, T 또는 V임 -; X1IX2PX3X4GX5TX6YNQKFKG(SEQ ID NO: 82)를 포함한 HC-CDR2 - 여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 A, N 또는 V이며, X3은 E, K, L, M, R, S, T 또는 Y이고, X4는 H, N, S 또는 T이며, X5는 G 또는 R이고, X6은 A, S, T 또는 W임 -; 및 SX1X2X3X4PYAX5DY(SEQ ID NO: 83)를 포함한 HC-CDR3 - 여기서, X1은 G, I, L, M, P, R, S 또는 Y이고, X2는 W 또는 Y이며, X3은 S 또는 V이고, X4는 D, K, L, N, R, T 또는 V이며, X5는 A, G, M, N, Q 또는 S임 -을 포함한다. 상기 VL은 하기를 포함한다. 즉, KASQNVHTX1VA(SEQ ID NO: 84)를 포함한 경사슬 상보성 결정 영역(LC-CDR)1 - 여기서, X1은 A, H, N 또는 R임 -; LX1SDRRT(SEQ ID NO: 85)를 포함한 LC-CDR2 - 여기서, X1은 A 또는 R임 -; 및LQX1WX2X3PLT(SEQ ID NO: 86)를 포함한 LC-CDR3 - 여기서, X1은 A 또는 H이고, X2는 N, S 또는 T이며, X3은 A, Q, R, S 또는 Y -을 포함한다.
일 양태에서, 본 출원은 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는, 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH는, DAYMH(SEQ ID NO: 4)를 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1; RIDPANGNTKYDPKFQG(SEQ ID NO: 27)를 포함한 HC-CDR2 및 NYYGSRYPFAY(SEQ ID NO: 53)를 포함한 HC-CDR3을 포함하며, 상기 VL은, SASSSVSYMH(SEQ ID NO: 62)를 포함한 LC-CDR1; STSNLAS(SEQ ID NO: 67)를 포함한 LC-CDR2 및QQGSSYPLT(SEQ ID NO: 78)를 포함한 LC-CDR3을 포함한다.
일 양태에서, 본 출원은 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH는, DSYMH(SEQ ID NO: 5)를 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1; RIDPANGNTKYDPKFQG(SEQ ID NO: 27)를 포함한 HC-CDR2 및 NYYGAAYPFAY(SEQ ID NO: 54)를 포함한 HC-CDR3을 포함하며; 상기 VL은, SASSSVSYMH(SEQ ID NO: 62)를 포함한 LC-CDR1; STSNLAS(SEQ ID NO: 67)를 포함한 LC-CDR2; 및 QQGSSYPLT(SEQ ID NO: 78)를 포함한 LC-CDR3 을 포함한다.
일 양태에서, 본 출원은 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH는, DSYIH (SEQ ID NO: 6)을 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1; RIDPTNGNTNFDPKFRG(SEQ ID NO: 28)를 포함한 HC-CDR2 및 NYYGSRYPFSY(SEQ ID NO: 55)를 포함한 HC-CDR3을 포함하며; 상기 VL은, SGSSSVSYMH(SEQ ID NO: 63)를 포함한 LC-CDR1; FTSNLAS(SEQ ID NO: 68)를 포함한 LC-CDR2; 및QQGSTYPLT(SEQ ID NO: 79)를 포함한 LC-CDR3을 포함한다.
일 양태에서, 본 출원은 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH는, DHGMH(SEQ ID NO: 7)를 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1; VISTSYGVATYNQKFKG(SEQ ID NO: 29)를 포함한 HC-CDR2; 및RDSKSPFDY(SEQ ID NO: 56를 포함한 HC-CDR3을 포함하며; 상기 VL은, SASSSISSNYLH(SEQ ID NO: 64)를 포함한 LC-CDR1; RTSNLAS (SEQ ID NO: 69)를 포함한 LC-CDR2; 및HQYHRSPLT(SEQ ID NO: 80)를 포함한 LC-CDR3을 포함한다.
일 양태에서, 본 출원은 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH는, DHAIH(SEQ ID NO: 8)를 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1; AISTNYGAATYNQKFKG(SEQ ID NO: 30)를 포함한 HC-CDR2 및 RGSHGDWFAY(SEQ ID NO: 57)를 포함한 HC-CDR3을 포함하며; 상기 VL은, SASSSVSYMH(SEQ ID NO: 62)를 포함한 LC-CDR1; STSNLAS(SEQ ID NO: 67)를 포함한 LC-CDR2; 및 HQYHRSPLT(SEQ ID NO: 80)를 포함한 LC-CDR3을 포함한다.
다른 일 양태에서, 본 출원은 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH은, DAYMH(SEQ ID NO: 4)를 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1; RIDPANGYTKSDPKFQG(SEQ ID NO: 31)를 포함한 HC-CDR2 및 NYYGSRYPFAY (SEQ ID NO: 53)를 포함한 HC-CDR3을 포함하며; 상기 VL은, SASSSVSYMH(SEQ ID NO: 62)를 포함한 LC-CDR1; FTSNLAS (SEQ ID NO: 68)를 포함한 LC-CDR2; 및 QQGSTYPLT(SEQ ID NO: 79)를 포함한 LC-CDR3을 포함한다.
더불어, 본 출원은 항-CD40 항체를 코딩하는 핵산, 항-CD40 항체를 포함한 조성물, 및 항-CD40 항체의 제조 방법과 사용 방법을 제공한다.
정의
본 명세서에 기재된 바와 같이, "치료(treatment)" 또는 "치료(treating)"는, 임상 결과를 포함한, 유익한 결과 또는 기대된 결과를 획득하는 방법의 일종으로서, 본 출원의 목적을 감안하면, 상기 유익한 결과 또는 기대된 임상 결과는 하기 중의 일종 이상을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 즉, 질환으로 인한 일종 이상의 증상을 완화시키는 것, 질환의 중증도를 약화시키는 것, 질환을 안정시키는 것(예를 들면, 질환의 악화를 예방하거나 지연시키는 것), 질환의 확산을 예방하거나 지연시키는 것(예를 들면, 전이), 질환의 재발을 예방하거나 지연시키는 것, 질환의 발전을 지연시키거나 완화시키는 것, 질환의 상태를 개선시키는 것, 질환(일부 또는 전부)을 완화시키는 것, 질환의 치료에 필요되는 일종 이상의 기타 약물의 사용량을 감소시키는 것, 질환의 발전을 지연시키는 것, 생활의 품질을 개선시키거나 향상시키는 것, 체중을 증가시키는 것 및/또는 생존기간을 연장시키는 것이다. 더불어, "치료"는 질환의 병리적 결과의 감소를 더(예를 들면, 암의 경우, 종양의 부피임)도 포함한다. 본 출원의 방법은 이러한 치료의 어느 일종 또는 복수종 양태를 고려하였다.
용어 "항체"는 전장 항체 및 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 전장 항체는 2개의 중사슬과 2개의 경사슬을 포함한다. 경사슬과 중사슬의 가변 영역은 항원의 결합을 담당한다. 두 사슬의 가변 영역은 통상적으로, 상보성 결정 영역(CDRs)으로 불리우는 3개의 초가변 루프(hypervariable loops) (경사슬(LC)CDRs은 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하고, 중사슬(HC)CDRs은 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함함)를 포함한다. 본 명세서에서 게시된 항체 또는 항원 결합 단편의 CDR 경계는 Kabat, Chothia 또는 Al-Lazikani 규약에 의해 정의하거나 식별할 수 있다(Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991). 중사슬 또는 경사슬의 3개의 CDR영역은 프레임워크 영역(Framework Regions, FRs)이라고 불리우는 측부 구간(flanking stretches)에 삽입되는 바, 상기 프레임워크 영역은 CDR 영역보다 더 높은 보수성을 갖고 있어, 초가변 루프(hypervariable loops)를 지지하는 스캐폴드(scaffold)를 형성한다. 중사슬과 경사슬의 불변은 항원과의 결합에 참여하지 않으나, 다양한 효과기 기능을 나타내고 있다. 항체는 그들의 중사슬의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라 분류된다. 항체의 5가지 주요한 종류 또는 동종형은 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이고, 그들의 특징은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ형의 중사슬을 가진 것이다. 몇가지 주요한 항체 종류는, 예를 들면, IgG1(γ1 중사슬), IgG2(γ2중사슬), IgG3(γ3중사슬), IgG4(γ4 중사슬), IgA1(α1 중사슬) 또는 IgA2(α2 중사슬)과 같은 서브클래스(subclasses)로 나눈다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, 용어 "항원 결합 단편"은, 예를 들면, 디아바디 (diabody), Fab, Fab', F(ab')2, Fv단편, 이황화결합 안정화된 Fv단편(dsFv), (dsFv)2, 이중특이성 dsFv(dsFv-dsFv'), 이황화결합 안정화된 디아바디(ds diabody), 단일사슬 Fv (scFv), scFv 이량체(2가 디아바디), 하나 이상의 CDRs를 포함한 항체 단편으로 이루어진 다중특이성 항체, 단일도메인 항체, 나노 항체(nanobody), 도메인 항체, 2가 도메인 항체 또는 항원과 결합 가능하나 완전한 항체 구조가 포함되지 않는 기타 임의의 항체 단편과 같은 항체 단편을 포함한다. 항원 결합 단편은 부모대 항체(parent antibody) 또는 부모대 항체 단편(예를 들면, 부모대 scFv임)과 동일한 항원에 결합 가능하다. 항원 결합 단편은 또한 상기 항체 단편을 포함한 융합 단백질을 포함한다. 일부 실시예에서, 항원 결합 단편은 특정 인간 항체에서 온 하나 이상의 CDRs를 포함할 수 있고, 상기 CDRs는 하나 이상의 각기 다른 인간 항체에서 온 프레임워크에 이식된다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, 용어 "에피토프"는 항체 또는 항체 모이어티에 결합된 항원 상의 특정 원자 또는 아미노산 그룹을 의미한다. 만약 두 가지 항체 또는 항체 모이어티가 어느 항원에 대해 경쟁적으로 결합되는 것으로 나타났을 때, 그들은 항원 상의 동일한 에피토프에 결합될 가능성이 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 동일한 몰농도에서, 제1 항체가 CD40 표적에 대한 제2 항체의 결합을 적어도 50%(예를 들면, 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%) 억제하는 경우, 제1 항체가 제2 항체와 CD40표적에 "경쟁"적으로 결합하는 것이고, 바꾸어 말해도 마찬가지이다. 교차 경쟁(cross-competition)에 기초한 비닝(binning) 항체의 "에피토프에 의한 분류" 방법에 대해서는PCT출판물 WO 03/48731에 기재되어 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, 용어 "특이적으로 결합", "특이적으로 식별" 또는 "...에 대해 특이적인 것(is specific for)"은 측정 가능한 또는 재현 가능한 인터랙션을 지칭하는 바, 예를 들면, 항체와 표적과의 결합은, 생물 분자를 포함한 이질적 분자 집단(heterogeneous population of Molecules)에 해당 표적이 존재함을 확정할 수 있다. 예를 들면, 항체가 어느 표적(에피토프일 수 있음)을 특이적으로 식별할 수 있다는 것은, 기타 표적과의 결합을 비교하여 볼 때, 해당 항체가 해당 표적과의 결합이 더 높은 친화도(affinity), 결합활성(avidity)을 가지고, 더 쉽게 결합하거나 또는 더 오래 결합할 수 있다는 것을 지칭한다. 일부 실시예에서, 항원을 특이적으로 식별하는 항체는 항원의 하나 이상의 항원 결정기(antigenic determinants)와 반응하는 바, 그들의 결합 친화도는 해당 항체와 기타 표적과의 결합 친화도에 비해 적어도 10배 된다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, "단리된" 항-CD40 항체는, 항-CD40 항체의 일종으로서, (1) 자연에 존재하는 단백질과 상관 없고,(2) 동일한 유래인 기타 단백질을 포함하지 않으며,(3) 다른 종 세포에 의해 발현되거나,(4) 자연계에 존재하지 않는 것들이다.
본 명세서에 기재된 바와 같이, 용어 "단리된 핵산"은, 게놈, cDNA 또는 합성 유래(synthetic origin) 핵산 또는 그들의 조합을 지칭한다. 그의 유래에 따라, 상기 "단리된 핵산"은, (1) 자연계에서 발견된 "단리된 핵산" 중의 전부 또는 일부 폴리뉴클레오티드과 상관 없고,(2) 자연 상태에서 그와 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드와 작동 가능하게 연결될 수 없거나, (3) 자연계에서 상대적으로 긴 서열의 일부로 존재하지 않는 것들이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은, 중사슬과 경사슬의 폴리펩티드의 가변영역 내에서 발견된 비연속적 항원 결합 부위이다. 이러한 특수 영역에 대해서는, 하기 문헌, Kabat et al., J. Biol. Chem. 252: 6609-6616(1977); Kabat et al., U. S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest"(1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196: 901-917(1987); Al-Lazikani B. et al., J. Mol. Biol., 273: 927-948(1997); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745(1996); Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839(2008); Lefranc M. P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27: 55-77(2003); 및 Honegger and Pl
ckthun, J. Mol. Biol., 309: 657-670(2001) 에 이미 기재되어 있는 것이고, 여기서, 상기 특정 영역을 서로 비교하여 볼 때, 이들의 정의에는 아미노산 잔기의 중첩(overlapping) 또는 서브세트(subsets)가 포함된다. 하지만, 어느 하나의 정의 방식을 적용하여 항체 또는 이식 항체 또는 그의 변이체의 CDR을 지시하든, 모두 본 명세서에서 정의 및 사용된 용어의 범위 내에 있다. 비교를 위해, 상기 인용된 각 참조 문헌에 의해 정의된 CDR에 포함되어 있는 아미노산 잔기의 위치를 표 1에 열거하였다. CDR의 예측 알고리즘과 결합 계면은 본 출원이 속하는 기술 분야에서 기지된 것인 바, 예를 들면, 하기 문헌 Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839(2008); Ehrenmann F. et al., Nucleic Acids Res., 38: D301-D307(2010); 및 Adolf-Bryfogle J. et al., Nucleic Acids Res., 43: D432-D438(2015)에 모두 기재되어 있다. 본 단락에서 인용된 참조 문헌의 전부 내용은 참조로서 본 출원에 인용되어 본 출원에 사용되고, 본 출원의 하나 이상의 청구항에 포함될 가능성이 있다.
표 1: CDR 정의
1아미노산 잔기의 번호는 상기 Kabat et al.의 명명법을 참조한다.
2아미노산 잔기의 번호는 상기 Chothia et al.의 명명법을 참조한다.
3아미노산 잔기의 번호는 상기 MacCallum et al.의 명명법을 참조한다.
4아미노산 잔기의 번호는 상기 Lefranc et al.의 명명법을 참조한다.
5아미노산 잔기의 번호는 상기 Honegger and Pl
ckthun의 명명법을 참조한다.
용어 "키메릭 항체"는, 중사슬 및/또는 경사슬의 일부가 특정 종(species)에서 온 항체거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 일치하거나 상동성을 가지고, 이러한 사슬의 나머지 부분이 별도의 종에서 온 항체거나 기타 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 일치하거나 상동성을 가지는 항체, 및 이러한 유형 항체들의 단편을 지칭하는 바, 본 출원에 따른 생물학적 활성을 가지면 된다(미국특허 제4,816,567호; 및 하기 문헌 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855(1984)을 참조함).
완전한 항원 식별 및 결합 부위를 포함한 최소 항체 단편이다. 해당 단편은 하나의 중사슬 가변 도메인과 하나의 경사슬 가변 도메인의 긴밀한 비공유 결합에 의해 형성된 이량체이다. 이 두 도메인의 폴딩(folding)을 통해 6개의 초가변 루프(경사슬과 중사슬의 각 3개 루프로 됨)가 형성하고, 상기 초가변 루프는 항체에게 항원과 결합하기 위한 아미노산 잔기를 제공하며, 항체와 항원이 결합되는 특이성을 부여한다. 한편, 단일한 가변 도메인(또는, 항원에 대해 특이성을 가지는 3개의 CDRs만을 포함한 Fv단편의 절반)은, 완전한 결합 부위에 비해 친화도가 낮지만, 여전히 항원 식별과 결합 기능을 가진다.
"단일사슬 Fv"은, 단일 폴리펩티드 사슬(single polypeptide chain)로 연결된 VH와 VL, 이 두 항체 도메인을 포함한 항체 단편으로서, "sFv" 또는 "scFv"로 줄여쓸 수도 있다. 일부 실시예에서, scFv 폴리펩티드는 VH와 VL, 이 두 도메인 사이를 연결하는 연결용 폴리펩티드를 추가로 포함하고, 상기 연결용 폴리펩티드는 scFv이 항원이 결합할 이상적 구조를 형성하도록 한다. scFv에 관한 개요는, 하기 문헌 Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994)를 참조한다.
용어 "디아바디(diabodies)"는, VH와 VL, 이 두 도메인 사이에서 짧은 링커(예를 들면, 5 내지 10개의 잔기임)로 scFv단편(상기 단락을 참조함)을 구축하여 제조된 일종의 작은 항체 단편을 지칭하는 바, 이로써, 가변 도메인은사슬 내(intra-chain)가 아닌 사슬 간(inter-chain)에서 페어링하여, 하나의 2가 단편, 즉, 2개의 항원 결합 부위를 가진 단편을 형성한다. 이중특이성 디아바디는2개의 "교차"된scFv단편의 이종 이량체이고, 여기서, 두 항체의 VH와 VL 도메인은 상이한 폴리펩티드 사슬에 위치한다. 디아바디에 대해서는 하기 문헌 EP 404, 097; WO 93/11161; Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448(1993) 에 전면적으로 기재되어 있다.
비-인간(예를 들면, 설치류) 항체의 "인간화(Humanized)" 형태는 키메릭 항체로서, 비-인간 항체에서 온 최소 서열을 포함한다. 대다수 경우, 인간화 항체는 인간 면역글로불린(수용체 항체)이고, 여기서, 수용체 항체의 초가변 영역(HVR) 잔기는 비-인간 종(species), 예를 들면, 마우스, 레트, 토끼 또는 비-인간 포유동물에서 유래되고 이상적인 항체 특이성, 친화도와 성능을 가진 초가변 영역 잔기에 의해 치환된다(공여체 항체). 어떤 경우, 인간 면역글로불린 프레임워크 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 치환된다. 또한, 인간화 항체는 수용체 항체나 공여체 항체에 모두 존재하지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형체(modifications)는 항체의 성능을 한층 더 개선시킬 수 있다. 통상적으로, 인간화 항체는 기본적으로 전부, 적어도 1개, 통상적으로 2개인 가변 도메인을 포함하고, 여기서, 전부 또는 기본적으로 전부의 초가변 루프는 모두 비-인간 면역글로불린의 초가변 루프와 대응되고, 전부 또는 실질적으로 전부의 프레임워크 영역은 모두 인간 면역글로불린 서열이다. 인간 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부를 선택적으로 추가 포함하는 바, 통상적으로는 인간 면역글로불린의 불변 영역이다. 구체적인 세부 내용에 대해서는 하기 문헌 Jones et al., Nature 321: 522-525(1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-329(1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596(1992)를 참조할 수 있다.
본 명세서에서 동정된 폴리펩티드와 항체 서열의 "아미노산 서열의 동일성 백분율(%)" 또는 "상동성"은, 보수적 치환이 서열 동일성의 일부분에 소속됨으로 인정되는 경우 서열을 비교하여, 후보 서열과 비교할 대상 폴리펩티드 서열에 동일한 아미노산 잔기가 차지하는 백분율로 정의된다. 아미노산 서열의 동일성 백분율은 본 출원이 속하는 기술 분야의 기술적 범위 내의 다양한 비교 방식에 따라 결정할 수 있는 바, 예를 들면, BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR), 또는 MUSCLE소프트웨어 등과 같은 공개적으로 획득 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용할 수 있다. 본 출원이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자는 서열 비교의 전장(full-length)에서 최대화 비교를 실현하기 위한 모든 알고리즘을 포함한, 측정 및 비교에 적합한 파라미터를 결정할 수 있다. 하지만, 본 출원의 목적을 실현하기 위하여, 아미노산 서열의 동일성 백분율 값은 서열 비교용 컴퓨터 프로그램 MUSCLE(Edgar, R. C., Nucleic Acids Research 32(5): 1792-1797, 2004; Edgar, R. C., BMC Bioinformatics 5(1): 113, 2004)에 의해 생성된다.
용어 "Fc수용체" 또는 "FcR"는 항체 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재하는데 사용된다. 일부 실시예에서, 본 출원에 기재된 FcR은 IgG 항체 (일종의 γ수용체임)에 결합하는 FcR으로서, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 서브클래스의 수용체를 포함하고, 이러한 수용체의 대립 형질 유전자 변이체(allelic variants)와 선택적 스플라이스 형태(alternatively spliced forms)를 포함한다. FcγRII수용체는 FcγRIIA("활성화성 수용체, activating receptor")와 FcγRIIB("억제성 수용체, inhibiting receptor)")를 포함하고, 이들은 유사한 아미노산 서열을 가지고, 주로 세포질 도메인에서 서로 다르다. 활성화성 수용체 FcγRIIA의 세포질 도메인에는 면역 수용체 티로신 기반 활성화 모티브(Immunoreceptor Tyrosine-Based Activation Motif, ITAM)가 포함되어 있고, 억제성 수용체 FcγRIIB의 세포질 도메인에는 수용체 티로신 억제 모티브((Immunoreceptor Tyrosine-Based Inhibition Motif, ITIM)가 포함되어 있다(M. in Daron, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234(1997)를 참조함). 상기 용어는 동종이형도 포함하는 바, 예를 들면, FcγRIIIA 동종이형은 FcγRIIIA-Phe158, FcγRIIIA-Val158, FcγRIIA-R131 및/또는 FcγRIIA-H131이다. FcRs에 대해서는, 하기 문헌 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92(1991) 및 Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); 그리고, de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41(1995)에 기재되어 있다. 본 출원에 기재된 용어 FcR은 미래에 동정될 FcRs을 포함한 기타 유형의 FcRs도 포괄되어 있다. 용어 FcR는 또한 신생아 수용체인 FcRn을 추가로 포함하는 바, 상기 FcRn는 모체의 IgGs를 신생아에게 이송시키는 역할을 한다(Guyer et al., J. Immunol. 117: 587(1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24: 249(1994)).
용어 "FcRn"은, 신생아 Fc수용체(FcRn)를 지칭한다. FcRn은 주요 조직 적합성 복합체(Major Histocompatibility Complex, MHC)와 구조상에서 유사하고, α사슬이 β2마이크로글로불린에 비공유 결합하는 것에 의해 구성된다. 신생아 Fc수용체 FcRn의 다양한 기능에 대해서는 하기 문헌 Ghetie and Ward(2000)Annu. Rev. Immunol. 18, 739-766에 기재되어 있다. FcRn은, 모체에서 신생아에게로의 면역글로불린 IgGs의 수동적 전달과 혈청 IgG수준의 조절에서 중요한 역할을 하고 있다. FcRn은 일종의 솔베이지 수용체(salvage receptor)로서, 세포 내 그리고 세포 간에서 음세포작용으로 유입된(pinocytosed) IgG를 완전한 형태로 결합하고 운송하며, 그들이 디폴트 분해 경로(default degradative pathway)를 회피하도록 도와준다.
인간 IgG Fc 영역의 "CH1도메인"은, 통상적으로 118위치의 아미노산에서 215위치의 아미노산까지 연장된 것을 지칭한다(EU 번호 체계에 따름).
"경첩 영역(Hinge region)"은, 통상적으로 인간 IgG1의 216위치의 Glu에서 230위치의 Pro까지 연장된 것으로 정의된다(Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206(1985)). 중사슬 간의 이황화 결합을 형성하는 최초 1개의 시스테인 잔기와 최종 1개의 시스테인 잔기를, IgG1과 동일한 위치에 배치하여, 기타 IgG의 동종형의 경첩 영역을 IgG1서열과 정렬화시킬 수 있다.
인간 IgG Fc 영역의 "CH2 도메인"은, 통상적으로231위치의 아미노산에서 340위치의 아미노산까지 연장된 것을 지칭한다. CH2 도메인의 특이한 점은, 다른 하나의 영역과 긴밀히 페어링하지 않고, 완전한 야생형 IgG분자의 두 CH2 도메인 사이에 두 개의 N말단 연결 분지 당쇄(N-linked branched carbohydrate chains)가 삽입된 것에 있다. 당류는 도메인과 도메인 사이의 페어링을 대신하여, CH2 도메인의 안정성을 유지하는데 유용한 것으로 추측된다. Burton, Molec. Immunol. 22: 161-206(1985).
"CH3"도메인은, Fc 영역 내에 C말단 잔기에서 CH2 도메인까지 연장된 것을 포함한다(341위치의 아미노산에서 항체 서열의 C말단까지, 통상적으로는 IgG의 446 또는 447위치의 아미노산 잔기까지임).
"기능성 Fc단편"은, 천연 Fc 영역 서열이 가지고 있는 "효과기 기능(effector function)"을 가진다. 예시적인 "효과기 기능"으로는, 보체 의존성 세포독성(Complement Dependent Cytotoxicity, CDC); Fc수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(Antibody-Dependent Cell-Mediated Cytotoxicity, ADCC); 식세포작용(phagocytosis); 세포 표면 수용체의 하향조절(down regulation)(예를 들면, B세포 수용체; BCR) 등을 포함한다. 이러한 효과기 기능은, 통상적으로 Fc 영역과 결합 도메인(예를 들면, 항체 가변 영역)의 결합이 필요되고, 본 출원이 속하는 기술분야에서 공지된 다양한 실험 방법을 사용하여 평가할 수 있다.
“변경된(altered)" FcR결합 친화도 또는 ADCC활성을 가진 IgG Fc변이체의 항체는, 부모대 폴리펩티드 또는 천연 Fc서열을 포함한 폴리펩티드에 비하여, FcR결합 활성 및/또는 ADCC활성이 증강되거나 저감된다. FcR에 대한 "증강된 결합력"을 보여준 Fc변이체는, 부모대 폴리펩티드 또는 천연 IgG Fc서열을 포함한 폴리펩티드에 비하여, 적어도 1종의 FcR에 대한 더 높은 결합 친화도(예를 들면, 더 낮은 겉보기 Kd 또는 IC50값)를 가진다. 일부 실시예에서, 부모대 폴리펩티드에 비하여, 그의 결합력은 3배, 예를 들면, 5배, 10배, 25배, 50배, 60배, 100배, 150배, 200배, 심지어 500배로 되게 증강되거나 결합력이 25% 내지 1000% 향상된다. FcR에 대한 "저감된 결합력"을 보여준 Fc변이체는, 부모대 폴리펩티드에 비하여, 적어도 1종의 FcR에 대한 더 낮은 친화도(예를 들면, 더 높은 겉보기 Kd 또는 IC50 값)를 가진다. 부모대 폴리펩티드에 비하여 그의 결합력은 40% 이상 저감된다.
"항체 의존성 세포 매개 세포독성(Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)" 또는 "ADCC" 는 일종의 세포독성 형태로서, 분비형의 Ig가 특정 세포독성 세포(예를 들면, 자연살해 세포(NK), 호중구 및 대식세포)상의 Fc수용체(FcRs)에 결합하여,이들의 세포독성 효과기 세포로 하여금 항원을 가진 표적 세포에 특이적으로 결합할 수 있도록 하고, 이어서, 세포 독소를 사용하여 표적 세포를 살해하는 것을 지칭한다. 항체는 세포독성 세포를 "무장"하는 역할을 하며 이러한 세포 살해에서 필수적인 것이다. ADCC를 매개하는 주요한 세포 유형 중, NK세포는 오로지 FcγRIII만 발현하고, 단핵세포는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포에서의 FcR의 발현에 대해서는, 하기 문헌 Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9: 457-92(1991) 제 464 페이지의 표 3에 요약되어 있다. 생체 외(in vitro) ADCC실험을 실행하여 관심 분자(molecule of interest)의 ADCC활성 평가할 수 있는 바, 이에 대해서는 미국특허 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 설명되어 있다. 이러한 실험에 적용되는 효과기 세포는 말초혈액 단핵세포(PBMC)와 자연 살해 세포(NK)를 포함한다. 선택적으로, 또는 이 외에, 관심 분자의 ADCC활성은 생체 내(in vivo)에서 평가할 수도 있는 바, 예를 들면, 하기 문헌 Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656(1998)에 게시된 동물 모델에 기재되어 있다.
Fc 영역 변이체를 포함한 폴리펩티드는, 야생형 IgG Fc을 포함한 폴리펩티드 또는 부모대 폴리펩티드에 비하여, 인간 효과기 세포의 존재 하에 "증강된 ADCC활성(exhibits increased ADCC)"을 보여주거나 또는 ADCC효과를 더 효과적으로 매개할 수 있으며, 실험 과정에서, 상기 Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩티드의 수량과 야생형 IgG Fc를 포함한 폴리펩티드(또는 부모대 폴리펩티드)의 수량이 실질적으로 동일할 경우, 생체 외에서든 생체 내에서든 막론하고 모두 ADCC를 더 효과적으로 매개할 수 있다. 상기 변이체는 통상적으로 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 임의의 생체 외 ADCC실험 방법, 예를 들면, ADCC 활성을 동정하는 실험 또는 방법, 예를 들면, 동물 모델에서의 실험 방법 등을 이용하여 동정할 수 있다. 일부 실시예에서, 이러한 변이체는, 야생형 Fc(또는 부모대 폴리펩티드)에 비하여, ADCC를 매개하는 효율을 5배 내지 100배, 예를 들면, 25 내지 50배로 향상시킬 수 있다.
"보체 의존성 세포독성(Complement dependent cytotoxicity)" 또는 "CDC"는, 보체의 존재 하에 표적 세포를 용해시키는 것을 지칭한다. 대표적인 보체 경로의 활성화는 보체 체계의 제1 성분(C1q)과 상동 항원에 결합된 항체(적절한 구조를 가진 서브클래스)와의 결합에 의해 개시된다. 보체의 활성화를 평가하기 위하여, CDC실험을 실행할 수 있는 바, 이에 대해서는, 문헌 Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163(1996)에 기재된 바와 같다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열을 가지고 C1q 결합력이 증강 또는 저감된 폴리펩티드 변이체에 대해서는, 미국특허 제 6,194,551B1호 및 WO99/51642에 설명되어 있다. 이러한 특허 출판물의 내용은 참조로서 본 출원에 명확적으로 인용된다. 문헌 Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184(2000)을 별도로 참조한다.
달리 명시되지 않는 한, 일종의 "아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열(nucleotide sequence encoding an amino acid sequence)"은 서로의 사이에서 서로 축퇴 형태(degenerate versions)이고 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 단백질 또는 RNA를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 인트론을 포함할 수도 있는 바, 예를 들면, 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 특정 형태에서 인트론을 포함한다.
용어 "작동 가능하게 연결(operably linked)"은, 조절 서열(regulatory sequence)과 이종 뉴클레오티드 서열(heterologous nucleic acid sequence) 간의 기능성 연결을 지칭하고, 이로써 이종 뉴클레오티드 서열을 발현시킨다. 예를 들면, 제1 번째 뉴클레오티드 서열과 제2 번째 뉴클레오티드 서열이 기능적 관계에 처하여 있을 때, 제1 번째 뉴클레오티드 서열과 제2 번째 뉴클레오티드 서열은 작동 가능하게 연결된다. 예를 들면, 프로모터가 코딩 서열(coding sequence)의 전사 또는 발현에 영향을 미치는 경우, 해당 프로모터와 코딩 서열은 작동 가능하게 연결된다. 통상적으로, 작동 가능하게 연결된 DNA서열은 연속적인 것이고, 필요할 경우, 동일한 해독구조(reading frame)에 2개의 단백질 코딩 영역이 연결될 수 있다.
"상동"은, 두 폴리펩티드 또는 두 핵산 분자의 서열 간의 서열 유사성 또는 서열 동일성을 지칭한다. 두 비교 서열의 동일한 위치가 같은 염기 또는 아미노산 단량체 서브유닛(amino acid Monomer subunit)일 경우, 예를 들면, 두 DNA분자의 동일한 위치의 염기가 모두 아데닌인 경우, 이 두 DNA분자는 해당 위치에서 상동적인 것이다. 두 서열 간의 상동 백분율(percent of homology)은 위치의 전체 수량에 대한 두 서열 공유 매칭 또는 상동 위치의 수량의 비의 값에 100을 곱한 함수이다. 예를 들면, 두 서열의 10개 위치에 6개 위치가 서로 매칭되거나 상동적인 경우, 이 두 서열의 상동성은 60%이다. 예를 들면, 말하자면, DNA서열 ATTGCC와 TATGGC는 50%의 상동성을 가진다. 두 서열를 비교할 때는 통상적으로 최대 상동성을 얻을 수 있도록 비교한다.
본 명세서에 게시된 항-CD40 항체 또는 조성물의 "유효량"은 특정 목적을 실현할 수 있는 양을 지칭한다. "유효량"은 경험에 따를 수도 있고, 기지된 상기 목적에 관련된 방법에 의해 결정할 수도 있다.
용어 "치료적 유효량"은, 본 명세서에 게시된 항-CD40 항체 또는 이의 조성물이 개체의 질환 또는 증상을 효과적으로 치료할 수 있는 사용량을 지칭한다. 즉, 질환 또는 이의 1종 이상의 증상의 중증도 및/또는 지속시간를 약화시키거나 개선하는데 충분한 양; 질환의 발전을 예방하고, 병증의 감퇴를 일으키며, 질환에 관련된 1종 이상의 증상의 재발, 발전, 발작 또는 진행을 예방하고, 질환을 검출하거나 다른 요법(예를 들면, 예방제 또는 치료제)의 예방 또는 치료 효과를 증강/개선하는데 충분한 양이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용 가능한" 또는 "약리학적으로 호환 가능한"은 생물학적 활성 또는 기타 바람직하지 않는 성질을 갖지 않은 재료를 지칭하는 바, 예를 들면, 상기 재료는 환자에게 투여하는 약물 조성물에 첨가할 경우, 현저한 바람직하지 않은 생물학적 반응을 일으키지 않거나 조성물에 포함된 기타 어느 성분과 해로운 방식으로 인터랙션하지 않는다. 약학적으로 허용 가능한 벡터 또는 부형제는 독성학 또는 제조 및 검측의 표준 요구 사항을 만족하는 것 및/또는 미국 식품의약국에 의해 편집된 비활성 성분 가이드에 포함되어 있는 것이 바람직하다.
본 명세서에 기재된 본 출원의 실시예는"......로 구성된(consisting of)" 및/또는 "실질적으로 ......로 구성된(consisting essentially of)" 실시예를 포함하는 것으로 이해해야 한다.
본 명세서에서 언급된 "약"은 하나의 값 또는 파라미터가 해당 값 또는 파라미터 자체에 대한 변경이 포함(그리고, 서술)된다는 것을 의미하는 바, 예를 들면, "약 X"에 관한 서술에는 "X"에 대한 서술이 포함된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 한 값 또는 파라미터가 "아닌(not)"것을 언급한 경우, 통상적으로는 어느 한 값 또는 파라미터를 "제외(other than)"한다는 것을 명시하거나 서술하는 것이다. 예를 들면, 상기 방법은 X형 암의 치료에 사용되지 않는다는 것은, 상기 방법이 통상적으로 X형 암을 제외한 기타 유형의 암의 치료에 사용된다는 것을 의미한다.
문맥에 따라 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서 및 첨부된 청구항에서 사용된 단수 형식의 "하나", "1개" 및 "해당"은 복수인 대상도 포함한다.
항-CD40 항체
일 양태에서, 본 출원은 CD40에 특이적으로 결합하는 항-CD40 항체를 제공한다. 상기 항-CD40 항체는, 인간화 항체, 키메릭 항체, 마우스 항체, 인간 항체, 및 본 명세서에 기재된 중사슬 및/또는 경사슬 CDRs를 포함한 항체 분자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일 양태에서, 본 출원은 CD40에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 예상된 항-CD40 항체는, 예를 들면, 전장 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 IgG1 또는 IgG4), 항-CD40 단일사슬 항체, 항-CD40 Fc융합 단백질, 다중특이성(예를 들면, 이중특이성) 항-CD40 항체, 항-CD40 면역 접합체 등과 같은 것들을 포함한다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체는 전장 항체(예를 들면, 전장 IgG1 또는 IgG4) 또는 이의 항원 결합 단편으로서, CD40에 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체는 Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일사슬 Fv (scFv), Fv단편, dAb, Fd, 나노 항체 (nanobody), 디아바디 (diabody) 또는 선형 항체이다. 일부 실시예에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체는, 비표적과의 결합 친화도에 비해, 항체 CD40에 결합하는 친화도가 적어도 10배 이상(예를 들면, 10, 102, 103, 104, 105, 106, 또는 107배를 포함함)인 것을 지칭한다. 일부 실시예에서, 비표적은, CD40이 아닌 항원을 지칭한다. 결합 친화도는 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 방법에 의해 측정될 수 있고, 예를 들면, ELISA, 형광 활성화 세포 선별(Fluorescence Activated Cell Sorting, FACS) 분석 또는 방사 면역 침전 분석(Radioimmunoprecipitation Assay, RIA)이 있다. Kd값은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 방법에 의해 측정될 수 있고, 예를 들면, 표면 플라스몬 공명(Surface Plasmon Resonance, SPR)기술 또는 생물층 간섭계(Biolayer Interferometry, BLI) 기술이 있다.
비록 본 명세서에서는 인간 서열을 포함한 항-CD40 항체(예를 들면, 인간 CDR서열을 포함한 인간 중사슬과 경사슬 가변 도메인)에 대해 광범위하게 논의하였으나, 비-인간항-CD40 항체도 본 출원의 고려 대상이다. 일부 실시예에서, 비-인간항-CD40 항체는 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체의 인간 CDR서열과 비-인간 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 비-인간 프레임워크 서열은 본 명세서에 기재된 1종 이상의 인간 CDR서열을 사용하여 중사슬 및/또는 경사슬 가변 도메인을 생성하는데 사용되는 모든 서열을 포함하는 바, 마우스, 레트(rat), 토끼, 돼지, 소(예를 들면, 암컷 소, 수컷 소, 물소), 사슴, 양, 염소, 닭, 고양이, 개, 페럿(ferret), 영장류(예를 들면, 마모셋(marmoset), 레서스 원숭이(rhesus Monkey) 등과 같은 포유동물의 프레임워크 서열이다. 일부 실시예에서, 비-인간 항-CD40 항체는 1종 이상의 본 명세서에 기재된 인간 CDR서열을 비-인간 프레임워크(예를 들면, 마우스 또는 닭의 프레임워크 서열)에 이식하여 생성된 항-CD40 항체이다.
예시적인 인간 CD40의 완전한 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 149로 표시되는 아미노산 서열 또는 SEQ ID NO: 149로 표시되는 아미노산 서열로 구성된다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 인간 CD40의 에피토프를 특이적으로 식별한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 인간을 제외한 기타 종의 CD40과 교차 반응을 한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 인간 CD40에 대해 완전히 특이적인 것이고, 기타 비-인간 종과 교차 반응이 일어나지 않는다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 CD40 단백질(또는 이의 단편)의 적어도 1종의 대립 형질 유전자 변이체와 교차 반응을 한다. 일부 실시예에서, 대립 형질 유전자 변이체는 자연에 존재하는 CD40 단백질(또는 이의 단편)에 비해, 최대 30개(예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30개)의 아미노산 치환(예를 들면, 보수적 치환)을 가진다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 CD40 단백질(또는 이의 단편)의 그 어떤 대립 형질 유전자 변이체와도 교차 반응이 일어나지 않는다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 CD40 단백질의 적어도 1종의 종간 변이체와 교차 반응을 일으킨다. 일부 실시예에서, 예를 들면, CD40 단백질(또는 이의 단편)은 인간 CD40이고, CD40 단백질(또는 이의 단편)의 종간 변이체는 게잡이원숭이의 변이체이다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 CD40 단백질의 그 어떤 종간 변이체와도 교차 반응이 일어나지 않는다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 어느 한 항-CD40 항체에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 항체 중사슬 불변 영역과 항체 경사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 IgG1형 중사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 IgG2형 중사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 IgG3형 중사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 IgG4형 중사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함한다(...로 구성되거나 실질적으로 ...로 구성되는 것도 포함함). 일부 실시예에서, 상기 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함한다(...로 구성되거나 실질적으로 ...로 구성되는 것도 포함함). 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 κ경사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함한다(...로 구성되거나 실질적으로 ...로 구성되는 것도 포함함). 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 λ경사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함한다(...로 구성되거나 실질적으로 ...로 구성되는 것도 포함함). 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 항체 중사슬 가변 도메인과 항체 경사슬 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 중사슬 가변 도메인(VH)과 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하고, 상기 VH은 하기를 포함한다. 즉, GYX1VN (SEQ ID NO: 81)을 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1 - 여기서, X1은 L, T 또는 V임 -; X1IX2PX3X4GX5TX6YNQKFKG (SEQ ID NO: 82)를 포함한 HC-CDR2 - 여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 A, N 또는 V이며, X3은 E, K, L, M, R, S, T 또는 Y이고, X4는 H, N, S 또는 T이며, X5는 G 또는 R이고, X6은 A, S, T 또는 W임 -; 및 SX1X2X3X4PYAX5DY (SEQ ID NO: 83)를 포함한 HC-CDR3 - 여기서, X1은 G, I, L, M, P, R, S 또는 Y이고, X2는 W 또는 Y이며, X3은 S 또는 V이고, X4는 D, K, L, N, R, T 또는 V이며, X5는 A, G, M, N, Q 또는 S 임 -을 포함한다. 상기 VL은 하기를 포함한다. 즉, KASQNVHTX1VA(SEQ ID NO: 84)를 포함한 LC-CDR1 - 여기서, X1은 A, H, N 또는 R임 -; LX1SDRRT (SEQ ID NO: 85)를 포함한 LC-CDR2 - 여기서, X1은 A 또는 R임 -; 및 LQX1WX2X3PLT (SEQ ID NO: 86)를 포함한 LC-CDR3 - 여기서, X1은 A 또는 H이고, X2는 N, S 또는 T이며, X3은 A, Q, R, S 또는 Y 임 -을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH를 포함하고, 상기 VH는, SEQ ID NOs: 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함한 변이체를 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함한 변이체를 포함한 HC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 32 내지 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함한 변이체를 포함한 HC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH를 포함하고, 상기 VH는, SEQ ID NOs: 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2 및SEQ ID NOs: 32 내지 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VL를 포함하고, 상기 VL은 하기를 포함한다. 즉, SEQ ID NOs: 58 내지 61 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 LC-CDR1 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -; SEQ ID NOs: 65 내지 66 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 LC-CDR2 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 77 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 LC-CDR3 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VL를 포함하고, 상기 VL은, SEQ ID NOs: 58 내지 61 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1, SEQ ID NOs: 65 내지 66 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 70 내지 77 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하고, 상기 VH는 하기를 포함한다. 즉, SEQ ID NOs: 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함하는HC-CDR1 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -; SEQ ID NOs: 9 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 HC-CDR2 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -; 및SEQ ID NOs: 32 내지 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 HC-CDR3 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -을 포함한다. 상기 VL은 하기를 포함한다. 즉, SEQ ID NOs: 58 내지 61 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 LC-CDR1 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -; SEQ ID NOs: 65 내지 66 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 LC-CDR2 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -; 및SEQ ID NOs: 70 내지 77 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 그의 변이체를 포함한 LC-CDR3 - 상기 변이체는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함함 -을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH를 포함하고, 상기 VH은, SEQ ID NOs: 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2 및SEQ ID NOs: 32 내지 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL은 SEQ ID NOs: 58 내지 61 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1, SEQ ID NOs: 65 내지 66 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 70 내지 77 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 9를 포함한 HC-CDR2, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 58을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 9를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 58을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 10을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 10을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 73을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 73을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 20을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 42를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 20을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 42를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 14를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 43을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 14를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 43을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 51을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 51을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 11을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 48을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 11을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 48을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 18을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 47을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 18을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 47을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 1 내지 3 , 9 내지 26, 32 내지 52 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 VH와, SEQ ID NOs: 58 내지 61, 65 내지 66, 70 내지 77 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함한 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 1 내지 3 , 9 내지 26, 32 내지 52 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VH와, SEQ ID NOs: 58 내지 61, 65 내지 66, 70 내지 77 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 9 및 32를 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 58, 65 및 70을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 9 및 32을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 58, 65 및 70서열을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 10 및 32를 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 10 및 32을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 13 및 34를 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 13 및 34을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 15 및 37을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 73을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 15 및 37을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 73을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 20 및 42를 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 20 및 42을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 14 및 43을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 14 및 43을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 15 및 51을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 15 및 51을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 70을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 11 및 48을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 71을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 11 및 48을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 71을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 18 및 47을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 71을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 1, 18 및 47을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 59, 65 및 71을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고; 상기 VL는 SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함한 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함한 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함한 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함한 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함한 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH와, SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체 는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 4, 27 및 53을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 67 및 78을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 4, 27 및 53을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 67 및 78을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 5를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 54를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 5를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 54를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 5, 27 및 54를 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 67 및 78을 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 5, 27 및 54를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 67 및 78을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 6을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 28을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 55를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 63을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 6을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 28을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 55를 포함한 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 63을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 6, 28 및 55를 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 63, 68 및 79를 포함하는 VL 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 6, 28 및 55를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 63, 68 및 79를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 29를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 56을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 64를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 69를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 29를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 56을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 64를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 69를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 7, 29 및 56을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 64, 69 및 80을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 7, 29 및 56을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 64, 69 및 80을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 30을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 57을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 30을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 57을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 8, 30 및 57을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 67 및 80을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 8, 30 및 57을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 67 및 80을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143으로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 31을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 31을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 4, 31 및 53을 포함하는 VH 또는 최대 약 5개 아미노산의 치환을 포함하는 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 68 및 79를 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 4, 31 및 53을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NOs: 62, 68 및 79를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125 중의 1개, 2개 또는 3개의 HC-CDRs를 포함한 VH를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144 중의 1개, 2개 또는 3개의 LC-CDRs를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144와 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 상기 아미노산 치환은 본 명세서의 표 4에 표시되는 "예시적인 치환"에 한정된다. 일부 실시예에서, 아미노산 치환은 본 명세서의 표 4에 표시되는 "바람직한 치환"에 한정된다.
일부 실시예에서, 기능성 에피토프는 알라닌 스캐닝법을 결합하는 것을 통해 분석할 수 있다. 이 과정에서, 알라닌 스캐닝 기술을 결합하는 것을 통해 CD40 단백질에서 항-CD40 항체와 인터랙션하는데 필수적인 아미노산을 동정할 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 에피토프는 배좌 에피토프이고, CD40 단백질과 결합하는 항-CD40 항체의 결정 구조를 사용하여 에피토프를 동정할 수 있다.
일부 실시예에서, 본 출원은 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체와 함께 CD40에 경쟁적으로 결합하는 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체와 함께 CD40상의 에피토프에 경쟁적으로 결합할 수 있는 항체를 제공한다. 일부 실시예에서, VH와 VL를 포함하는 항-CD40 항체 분자와 동일한 에피토프에 결합하는 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 VH은 SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, VH와 VL를 포함하는 항-CD40 항체와 CD40에 경쟁적으로 결합하는 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 VH은 SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시예에서, 경쟁 실험을 이용하여 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체와 함께 CD40에 경쟁적으로 결합하는 단클론 항체를 동정할 수 있다. 경쟁 실험은 동일한 에피토프 또는 공간적으로 중첩된 에피토프를 식별하거나 한 항체가 다른 한 항체의 항원과의 결합을 경쟁적으로 억제하는 것에 의해 두 항체가 동일한 에피토프에 결합하는지 여부를 확정할 수 있다. 어떤 실시예에서, 이러한 경쟁성 항체와 본 명세서에 기재된 항체는 동일한 에피토프에 결합한다. 일부 예시적인 경쟁 실험은, 예를 들면, Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch. 14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y.)에서 언급된 통상적인 실험을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 항체가 결합된 에피토프를 분석하기 위한 상세한 예시적인 방법은, 예를 들면, Morris (1996) "Epitope Mapping Protocols, " in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, N. J.)에 기재된 바와 같다. 일부 실시예에서, 만약 각각의 항체가 다른 한 항체의 결합을 50％ 이상 차단한다면, 그들은 동일한 에피토프에 결합하는 것이라 칭한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체와 경쟁하는 항체는 키메릭 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체이다.
예시적인 항-CD40 항체 서열은 표 2, 표 3에 표시한 바와 같고, 여기서, CDR의 번호는 Kabat의 정의 방식에 의해 매겨진다. 본 출원이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자라면 이미 알고 있는 다양한 알고리즘(Kabat 정의 방식)으로 CDR의 위치를 예측하고, 항체의 경사슬 가변영역과 중사슬 가변영역에 대하여 정의(define)를 내릴 수 있음을 알 수 있을 것이다. 본 명세서에 기재된 항체의 CDRs, VH 및/또는 VL 서열을 포함하지만, 예측 알고리즘에 기준한 것이라면, 하기 표에 예시되어 있는 항체가 아닌 것도 본 출원의 범위 내에 포함된다.
표 2 예시적인 항-CD40 항체의 CDR서열
표 3예시적인 서열
CD40
CD40은 45 내지 50kD의 I형 막 단백질의 하나이고, TNFR 슈퍼패밀리 구성원의 하나이기도 하다. CD40은 항원 제시 세포(예를 들면, B세포, 수지상 세포(DC), 대식세포 및 단핵세포)에서 발현할 수 있을 뿐만 아니라, 상피, 내피 및 간질세포(섬유모세포, 근섬유모세포, 윤활막세포, 성상세포 등), 혈소판 및 종양세포와 같은 비면역 세포에서도 발현할 수 있다(Schφnbeck, U, and P Libby. Cellular and Molecular life sciences: CMLS vol. 58, 1 (2001): 4-43). CD40분자는 막관통 신호전달인자로서, 세포 내에서 세포내 키나아제 및 전사인자의 활성화를 초래하고, 세포 및 체액 적응성 면역의 시작과 진행을 포함한 광범위한 분자 및 세포 과정의 조절에 참여한다. CD40의 세포내 영역에 내재된 키나아제의 활성이 부족하므로, 그의 신호는 주로 리간드 의존성에 의해 TNF 수용체 관련 인자(TRAF) 패밀리의 어댑터 단백질을 모집하는 것으로 전달된다. TRAF는 CD40을 세포내 신호 전달 성분에 결합시키고 나아가 해당 신호 복합체가 CD40에서 분리되어 세포질에 방출되도록 유발함으로써, 그가 E3 유비퀴틴 리가아제로서 근위 단백질 키나아제를 활성화시키도록 한다. CD40은, 세포외 신호 조절 단백질 키나아제(ERK), c-Jun 아미노 말단 키나아제(JNK) 및 p38 MAPK, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제(PI3K) 캐스케이드, 전사인자인 핵인자-kB(NF-kB), 및 신호 변환자-전사활성자(STAT)를 포함한 미토겐 활성화 단백질 키나아제(MAPK) 경로를 활성화시킬 수 있다(Loskog, Angelica S I, and Aristides G Eliopoulos. Seminars in immunology vol. 21, 5 (2009): 301-7; and Matsuzawa, Atsushi et al. Science (New York, N. Y.) vol. 321, 5889 (2008): 663-8). 이러한 경로는 시너지 역할을 하여 세포 유형 및 미세 환경 의존성 방식으로 CD40활성을 조정한다.
CD40과 CD40L 간의 인터랙션은, 세포 응격 관련 유전자의 발현과 B세포의 활성화(면역글로불린의 클래스 전환, 배중심의 형성 및 사이토카인의 생성)를 포함한 다양한 면역반응을 일으킨다(Belkhir, R et al. Scandinavian journal of immunology vol. 79, 1 (2014): 37-42; 및 Bensinger, William et al. British journal of haematology vol. 159, 1 (2012): 58-66). CD40-CD40L인터랙션은 T세포의 활성화, 만성염증성질환에서 염증반응관련 표면분자의 상향 조절, 및 사이토카인의 발현 과정에서도 중요한 역할을 하고 있다. 이러한 사이토카인은 인터루킨(IL)-2, IL-12, TNF-α, 인터페론(IFN)-α 및 IL-1과 IL-6을 포함한다(Sidiropoulos, P I, and D T Boumpas. Lupus vol. 13, 5 (2004): 391-7).
CD40-CD40L의 B세포-T세포 간 공동 자극 분자로서의 중요한 역할을 고려하여, 염증질환 또는 자가면역성질환(예를 들면, 건선, 루푸스 신염, 전신성 홍반성 루푸스(SLE) 및 류마티스 관절염(RA), 당뇨병, 면역거부반응 반응)에 대한 CD40-CD40L 길항제의 역할에 관심을 갖게 되었다.
CD40L
CD40L은 32 내지 39kDa의 II형 막관통 단백질이고, TNF리간드 슈퍼 패밀리(TNF ligand superfamily, TNFSF, 여기에 TNF, 림프독소, CD27L, CD30L 및 FasL를 포함됨)의 구성원 중의 하나이기도 하다. CD40L은 활성화된 CD4+ T세포 및 활성화된 B세포 및 혈소판에 의해 발현되지만, 염증성 조건에서 단핵세포, 자연 살해세포, 비만세포 및 호염기구의 가변 발현을 유도할 수 있다(Elgueta, Raul et al. Immunological reviews vol. 229, 1 (2009): 152-72). 보도에 따르면, 가용 형태의 CD40L(sCD40L)은 막관통 형태와 유사한 생물 활성을 나타내어 CD40L/CD40신호의 캐스케이드 반응을 촉발한다.
따라서, CD40과 CD40L의 결합을 중화시키는 것은, CD40-CD40L경로 관여 질환 및 병증을 치료하는 방법으로 될 수 있다.
전장 항-CD40 항체
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG불변 영역, 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 그의 변이체의 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 λ경사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 κ경사슬 불변 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 전장의 인간 항-CD40 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 마우스 면역글로불린 Fc서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 개변된 또는 기타 형태로 개변된 Fc서열을 포함하여, 그가 증강된 항체 의존성 세포 매개성 세포독성(ADCC) 및 보체 의존성 세포독성(CDC)의 효과기 기능을 갖도록 한다.
따라서, 예를 들면, 일부 실시예에서, IgG1불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 CD40과 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG2불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 CD40과 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG2는 인간 IgG2이다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG3불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 CD40과 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG3은 인간 IgG3이다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 CD40과 특이적으로 결합한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR1;, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR2; 및SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG2 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG2는 인간 IgG2이다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG3 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG3은 인간 IgG3이다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 HC-CDR3을 포함한 중사슬 가변 도메인과, b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 최대 약 3개(예를 들면, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인 또는 HC-CDR 서열에 최대 약 5개(예를 들면, 1, 2, 3, 4 또는 5개)의 아미노산의 치환을 포함하는 상기 중사슬 가변 도메인의 변이체와; b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인 또는 LC-CDR 서열에 최대 약 5개(예를 들면, 1, 2, 3, 4 또는 5개)의 아미노산의 치환을 포함하는 상기 경사슬 가변 도메인의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인 또는 HC-CDR 서열에 최대 약 5개(예를 들면, 1, 2, 3, 4 또는 5개)의 아미노산의 치환을 포함하는 상기 중사슬 가변 도메인의 변이체와; b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인 또는 LC-CDR 서열에 최대 약 5개(예를 들면, 1, 2, 3, 4 또는 5개)의 아미노산의 치환을 포함하는 상기 경사슬 가변 도메인의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) SEQ ID NOs: 1 내지 8 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 31 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 32 내지 57 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) SEQ ID NOs: 58 내지 64 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1; SEQ ID NOs: 65 내지 69 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2; 및 SEQ ID NOs: 70 내지 80 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 9를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b)아미노산 서열 SEQ ID NO: 58을 포함한 LC-CDR1; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2; 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 10을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b)아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b)아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b)아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 73을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 20을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 42를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b)아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 14를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 43을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 51을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 11을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 48을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 18을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 47을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 5를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 54를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 6을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 28을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 55를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 63을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 29를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 56을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 64를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 69를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 30을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 57을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 31을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 9를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 58을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 10을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 73을 포함한 LC-CDR3을 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 20을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 42를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 14를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 43을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 51을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 11을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 48을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b)아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 18을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 47을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 5를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 54를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 6을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 28을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 55를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 63을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 29를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 56을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 64를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 69를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 30을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 57을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 상기 항-CD40 항체는, a) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 31을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인과, b) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과, SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG2 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과, SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG2는 인간 IgG2이다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG3 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과, SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG3은 인간 IgG3이다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과, SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%(예를 들면, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%)의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과, SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 125 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과, SEQ ID NOs: 126 내지 144 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG1 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 제공하는 바, 여기서, 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 125와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성되고, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
결합 친화도
결합 친화도는 Kd, Koff, Kon 또는 Ka로 표시한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 Koff는 항원/항체 복합체에서 해리되는 항체의 해리 속도 상수(off-rate constant for dissociation)를 지칭하는 바, 동역학적 선별 장치(kinetic selection set up)를 통해 측정된다. 용어 Kon은 항체가 항원과 결합하여 항원/항체 복합체를 형성하는 결합 속도 상수(on-rate constant for association)를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 평형 해리 상수 Kd는 특정 항체 항원 인터랙션 시의 해리상수(dissociation constant)로서, 항체 분자 용액 중, 전체 항체 결합 부위(all of the antibody-binding domains)에 대한 항원의 결합이 절반을 차지하고 평형을 이루는데 필요되는 항원 농도를 지칭하는 바, 즉, Koff/Kon에 해당된다. Kd의 측정은, 모든 결합분자가 모두 용액 내에 존재한다고 가정하여 측정된다. 항체가 세포벽과 연결된 경우, 예를 들면, 효모 발현 체계에서, 상응되는 평형 해리 속도 상수는 EC50으로 표시되는 바, 이는 Kd에 대해서 양호한 근사값이고, 친화 결합 상수 Ka는 해리상수 Kd의 역수이다.
해리상수(Kd)는 항원에 대한 항체 모이어티의 친화도를 나타내는 지표로 될 수 있다. 예를 들면, Scatchard방법으로 다양한 마커가 표시된 항체와 Biacore기기(Amersham Biosciences에서 제조됨)를 사용하여 간단하게 분석하고, 사용자 설명서 또는 첨부된 테스트 키트를 기준하여, 표면 플라즈몬 공명을 통해 생물 분자 간의 인터랙션을 분석한다. 이러한 방법으로 얻어진 Kd 값은, 단위 M로 표시한다. 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 하기와 같은 Kd 값을 가질 수 있다. 즉, 예를 들면, ≤10-7 M, ≤10-8 M, ≤10-9 M, ≤10-10 M, ≤10-11 M, ≤10-12 M 또는 ≤10-13 M이다.
항체의 결합 특이성은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 방법을 통해 실험 및 측정할 수 있다. 이러한 방법은 Western blots, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIAcore 테스트 및 펩타이드 스캔(peptide scans) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 CD40 표적에 특이적으로 결합하고, 그의 Kd값은 10-7 M 내지 10-13 M(예를 들면, 10-7 M 내지 10-13 M, 10-8 M 내지 10-13 M, 10-9 M 내지 10-13 M 또는 10-10 M 내지 10-12 M임)이다. 따라서, 일부 실시예에서, 항-CD40 항체와 CD40간의 결합의 Kd값은 10-7 M 내지 10-13 M, 1Х10-7 M 내지 5Х10-13 M, 10-7 M 내지 10-12 M, 10-7 M 내지 10-11 M, 10-7 M 내지 10-10 M, 10-7 M 내지 10-9 M, 10-8 M 내지 10-13 M, 1Х10-8 M 내지 5Х10-13 M, 10-8 M 내지 10-12 M, 10-8 M 내지 10-11 M, 10-8 M 내지 10-10 M, 10-8 M 내지 10-9 M, 5Х10-9 M 내지 1Х10-13 M, 5Х10-9 M 내지 1Х10-12 M, 5Х10-9 M 내지 1Х10-11 M, 5Х10-9 M 내지 1Х10-10 M, 10-9 M 내지 10-13 M, 10-9 M 내지 10-12 M, 10-9 M 내지 10-11 M, 10-9 M 내지 10-10 M, 5Х10-10 M 내지 1Х10-13 M, 5Х10-10 M 내지 1Х10-12 M, 5Х10-10 M 내지 1Х10-11 M, 10-10 M 내지 10-13 M, 1Х10-10 M 내지 5Х10-13 M, 1Х10-10 M 내지 1Х10-12 M, 1Х10-10 M 내지 5Х10-12 M, 1Х10-10 M 내지 1Х10-11 M, 10-11 M 내지 10-13 M, 1Х10-11 M 내지 5Х10-13 M, 10-11 M 내지 10-12 M, 10-12 M 내지 10-13 M이다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체와 CD40 간의 결합의 Kd값은 10-7 M 내지 10-13 M이다.
일부 실시예에서, 항-CD40 항체와 비표적 간의 결합의 Kd값은 항-CD40 항체와 표적 간의 Kd값보다 높고, 본 명세서에서 인용된 일부 실시예에서, 항-CD40 항체와 표적(예를 들면, CD40) 간의 결합 친화도는 항-CD40 항체와 비표적 간의 결합 친화도보다 높다. 일부 실시예에서, 비표적은 비CD40 항원을 지칭한다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체와 CD40와의 결합의 Kd값은, 항-CD40 항체와 비 CD40표적과의 결합의 Kd값보다 적어도 10배, 예를 들면, 10-100배, 100-1000배, 103-104배, 104-105배, 105-106배, 106-107배, 107-108배, 108-109배, 109-1010배, 1010-1011배, 1011-1012배로 차이가 난다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체와 비표적과의 결합의 Kd값은 10-1 M 내지 10-6 M(예를 들면, 10-1 M 내지 10-6 M, 10-1 M 내지 10-5 M, 10-2 M 내지 10-4 M임)이다. 일부 실시예에서, 상기 비표적은 비 CD40 항원이다. 따라서, 일부 실시예에서, 항-CD40 항체와 비CD40표적과의 결합의 Kd값은 10-1 M 내지 10-6 M, 1Х10-1 M 내지 5Х10-6 M, 10-1 M 내지 10-5 M, 1Х10-1 M 내지 5Х10-5 M, 10-1 M 내지 10-4 M, 1Х10-1 M 내지 5Х10-4 M, 10-1 M 내지 10-3 M, 1Х10-1 M 내지 5Х10-3 M, 10-1 M 내지 10-2 M, 10-2 M 내지 10-6 M, 1Х10-2 M 내지 5Х10-6 M, 10-2 M 내지 10-5 M, 1Х10-2 M 내지 5Х10-5 M, 10-2 M 내지 10-4 M, 1Х10-2 M 내지 5Х10-4 M, 10-2 M 내지 10-3 M, 10-3 M 내지 10-6 M, 1Х10-3 M 내지 5Х10-6 M, 10-3 M 내지 10-5 M, 1Х10-3 M 내지 5Х10-5 M, 10-3 M 내지 10-4 M, 10-4 M 내지 10-6 M, 1Х10-4 M 내지 5Х10-6 M, 10-4 M 내지 10-5 M, 10-5 M 내지 10-6 M이다.
일부 실시예에서, 항-CD40 항체가 높은 결합 친화도로 CD40 표적을 특이적으로 식별하고, 낮은 결합 친화도로 비표적에 결합하는 것을 언급할 경우, 상기 항-CD40 항체와 CD40 표적과의 결합의 Kd값은 10-7 M 내지 10-13 M(예를 들면, 10-7 M 내지 10-13 M, 10-8 M 내지 10-13 M, 10-9 M 내지 10-13 M, 10-10 M 내지 10-12 M)이고, 비표적과의 결합의 Kd값은 10-1 M 내지 10-6 M(예를 들면, 10-1 M 내지 10-6 M, 10-1 M 내지 10-5 M, 10-2 M 내지 10-4 M)이다.
일부 실시예에서, 항-CD40 항체가 CD40을 특이적으로 식별하는 것을 언급할 경우, 상기 항-CD40 항체의 결합 친화도를 대조 항-CD40 항체(예를 들면, ASKP1240임)의 결합 친화도와 비교한다. 일부 실시예에서, 대조 항-CD40 항체와 CD40와의 결합의 Kd값은 본 출원에 기재된 항-CD40 항체와 CD40와의 결합의 Kd값의 적어도 2배, 예를 들면, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 10-100배, 100-1000배, 103-104배이다.
핵산
항-CD40 항체를 코딩하는 핵산 분자도 본 출원의 고려 대상이다. 일부 실시예에서, 전장 항-CD40 항체를 코딩하는 일종(또는 한 세트)의 핵산을 제공하는 바, 상기 핵산은 본 명세서에 기재된 어느 일종의 전장 항-CD40 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체의 핵산(또는 한 세트의 핵산)은 폴리펩티드 태그를 코딩하는 핵산 서열(예를 들면, 단백질 정제 태그, His태그, HA태그)을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 항-CD40 항체를 포함하는 단리된 숙주 세포, 항-CD40 항체 폴리펩티드 성분을 코딩하는 단리된 핵산, 또는 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체 폴리펩티드 성분을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터도 본 출원의 고려 대상이다.
본 출원은 이러한 핵산 서열의 변이체를 추가로 포함한다. 예를 들면, 변이체는 적어도 적당히 엄격한 혼성화 조건에서 본 출원에 따른 항-CD40 항체를 코딩하는 핵산 서열과 혼성화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 출원은 또한 본 출원에 따른 핵산 서열을 삽입 가능한 벡터를 추가로 제공한다.
요약하면, 항-CD40 항체를 코딩하는 천연 또는 합성된 핵산을 적절한 발현 벡터에 삽입시켜, 핵산을 5' 및 3' 말단의 조절 요소(regulatory elements)에 작동 가능하게 연결하는 바, 예를 들면, 프로모터(예를 들면, 림프세포 특이성 프로모터)와 3' 비번역 영역(untranslated region, UTR)을 포함하여, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 발현할 수 있다. 상기 벡터는 진핵 숙주세포에서의 복제와 인테그레이션(integration)에 적용될 수 있다. 전형적인 클론 및 발현 벡터(cloning and expression vectors)는 타겟 핵산 서열의 발현을 조절하는 전사 및 번역 터미네이터(transcription and translation terminators), 개시 서열(initiation sequences) 및 프로모터를 포함한다.
본 출원에 기재된 핵산은 표준화된 유전자 전달 수단을 사용하여, 핵산 면역과 유전자 치료에 사용될 수 있다. 핵산 전달 방법에 대해서는 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것으로, 예를 들면, 미국 특허 제5,399,346호, 제580,859호, 제589,466호를 참조하고, 이의 전부 내용은 참조로서 본 발명에 인용된다. 일부 실시예에서, 본 출원은 유전자 치료용 벡터를 추가로 제공한다.
핵산을 다양한 유형의 벡터에 클론할 수 있다. 예를 들면, 핵산을 벡터에 클론할 수 있는 바, 상기 벡터는 플라스미드, 파지미드, 파지 유도체, 동물 바이러스 및 코스미드를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 특히 관심을 끄는 벡터(Vectors of particular interest)로는, 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터 및 시퀀싱 벡터를 포함한다.
또한, 발현 벡터는 바이러스 벡터의 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 본 출원이 속하는 기술분야에서 숙지된 것이고, 예를 들면, 하기 문헌 Green and Sambrook (2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York), 및 기타 바이러스학 또는 분자 생물학 매뉴얼에 기재되어 있다. 벡터로 사용될 수 있는 바이러스로는, 역전사 바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 포진 바이러스 및 렌티바이러스(lentiviruses)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 통상적으로, 적절한 벡터는 적어도 일종의 생물체 내에서 작용을 일으키는 하나의 복제 시작점, 프로모터 서열, 편이한 제한 엔도뉴클레아제 효소 부위(restriction endonuclease sites) 및 하나 이상의 선별 마커(예를 들면, 문헌 WO 01/96584; WO 01/29058; 및 미국특허 제6,326,193호를 참조함)를 포함한다.
유전자를 포유동물 세포 내로 전달하기 위해, 많은 바이러스 기반 체계가 개발되었다. 예를 들면, 역전사 바이러스는 유전자 전달 체계를 위해 편이한 플랫폼을 제공하였다. 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 기술을 응용하여, 선정된 유전자를 벡터에 삽입시키고, 그를 역전사 바이러스 입자 내에 포장시킬 수 있다. 다음, 재조합 바이러스를 단리하여, 생체 내 또는 생체 외에서 피험자의 세포에게로 전달할 수 있다. 다수의 역전사 바이러스 체계는 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 일부 실시예에서, 아데노바이러스 벡터를 이용한다. 다수의 아데노바이러스 벡터도 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 일부 실시예에서, 렌티바이러스 벡터를 이용한다. 역전사 바이러스에서 유도된 벡터, 예를 들면, 렌티바이러스 벡터는, 이식된 유전자가 장기간 안정하게 인테그레이션하고, 자식대 세포에서 번식하도록 할 수 있어, 유전자의 장기간 전달을 실현하는데 적합한 도구이다. 렌티바이러스 벡터는, 간세포와 같은 비-증식성 세포(non-proliferating cells)의 형질도입(transduce)을 실현할 수 있어, 종양에서 유도되는 역전사 바이러스, 예를 들면, 마우스 백혈병 바이러스에 비해 추가적인 장점이 있다. 렌티바이러스 벡터는, 또한, 낮은 면역원성을 갖추는 추가적인 장점이 있다.
기타 프로모터 요소, 예를 들면, 증강자(enhancers)는 전사의 시작 빈도를 조절한다. 최근 발견에 따르면, 많은 프로모터에 시작 부위의 하류에 있는 기능 요소가 포함되어 있지만, 통상적으로 이들은 시작 부위 상류의 30 내지 110bp부위에 존재한다. 프로모터 요소 간의 간격은 통상적으로 융통성이 있으므로, 요소 간의 위치가 서로 교환되거나 이동되어도 여전히 프로모터의 기능을 유지할 수 있다. 티미딘 키나제(Thymidine Kinase, tk) 프로모터에서는, 프로모터 요소 간의 간격이 50bp로 증가되어야, 활성이 떨어지기 시작한다.
적절한 프로모터의 일 예로는, 즉시 초기 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus, CMV)의 프로모터 서열이다. 상기 프로모터 서열은, 그에 작동 가능하게 연결되는 임의의 폴리뉴클레오티드 서열의 고발현을 구동할 수 있는 일종 강한 구성적 프로모터 서열(strong constitutive promoter sequence)이다. 적절한 프로모터의 다른 일 예로는, 연장인자 1α(Elongation Factor-1α, EF-1α) 프로모터이다. 하지만, 기타 구성적 프로모터를 사용할 수도 있는 바, 시미안 바이러스 40(Simian Virus 40, SV40) 초기 프로모터, 마우스 유방암 바이러스(Mouse Mammary Tumor Virus, MMTV), 인간 면역 결여 바이러스(Human Immunodeficiency Virus) 긴 말단 반복 서열(HIV-LTR) 프로모터, MoMuLV프로모터, 조류 백혈병 바이러스(Avian Leukemia Virus) 프로모터, Epstein-Barr 바이러스 즉시 초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스(Rous sarcoma virus) 프로모터, 그리고, 액틴 프로모터, 마이오신 프로모터, 헤모글로빈 프로모터 및 크레아틴 키나제 프로모터과 같은 인간 유전자 프로모터를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 본 출원은 구성적 프로모터만을 사용하는 것에 제한되어서는 안된다. 유도성 프로모터도 본 출원의 고려 대상이다. 유도성 프로모터의 사용은 분자 스위치를 제공하는 바, 상기 분자 스위치는 이러한 발현이 필요할 경우에 프로모터에 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 시동하고, 상기 발현이 필요하지 않은 경우에 발현을 종결할 수 있다. 유도성 프로모터는, 메탈로티오닌(metallothionine) 프로모터, 글루코코르티코이드(glucocorticoid) 프로모터, 프로게스테론(progesterone) 프로모터 및 테트라사이클린(tetracycline) 프로모터를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시예에서, 항-CD40 항체의 발현은 유도 가능한 것이다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체를 코딩하는 핵산 서열은 예를 들면, 본 명세서에 기재된 어느 하나의 유도성 프로모터를 포함한 유도성 프로모터에 작동 가능하게 연결된다.
유도성 프로모터
유도성 프로모터의 사용은 분자 스위치를 제공하는 바, 상기 분자 스위치는, 발현이 필요할 경우에 프로모터에 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 시동하고, 발현이 필요하지 않은 경우에 발현을 종결할 수 있다. 진핵 세포에 적용되는 예시적 유도성 프로모터는, 호르몬 조절성 요소(hormone-regulated elements, 예를 들면, 문헌 Mader, S. and White, J. H.(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5603-5607을 참조함), 합성 리간드 조절성 요소(synthetic ligand-regulated elements, 문헌 Spencer, D. M. et al(1993) Science 262 : 1019-1024를 참조함) 및 이온화 방사 조절성 요소(ionizing radiation-regulated elements, 문헌 Manome, Y. et al.(1993) Biochemistry 32 : 10607-10613; Datta, R. et al.(1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 : 1014- 10153을 참조함)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 생체 내 또는 생체 외 포유동물 체계에 적용되는 기타 예시적 유도성 프로모터에 대해서는, 문헌 Gingrich et al. (1998) Annual Rev. Neurosci 21: 377-405를 참조한다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체의 발현에 적용되는 유도성 프로모터 체계는 Tet체계이다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체의 발현에 적용되는 유도성 프로모터 체계는 대장균(E. coli) lac 억제 체계(lac repressor system)이다.
본 출원에서 사용되는 일종 예시적 유도성 프로모터 체계는 Tet 체계이다. 상기 체계는 Gossen (1993) 등에 의해 제기된 Tet 체계이다. 일 예시적 실시예에서, 타겟 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의Tet 오퍼레이트(Tet operator, TetO) 부위를 포함하는 프로모터로 제어한다. 비활성화된 상태에서, Tet 억제자(Tet repressor, TetR)는 TetO부위에 결합하여 프로모터의 전사를 억제한다. 활성화된 상태에서, 테트라사이클린(tetracycline, Tc), 무수 테트라사이클린, 독시사이클린(Doxycycline, Dox) 또는 이의 활성 유사체와 같은 유도제가 존재하는 경우, 유도제는 TetO에서 TetR가 방출되도록 하여, 전사의 발생을 초래한다. 독시사이클린은 테트라사이클린 항생제 가족의 일원이고, 그의 화학 명칭은, 1-디메틸아미노-2,4a, 5,7-펜타하이드록시-11-메틸-4,6-디옥소-1,4a,11,11a,12,12a-헥사히드로테트라센-3-카르복사마이드이다.
일 실시예에서, TetR는 코돈의 최적화를 거쳐 마우스 또는 인간 세포와 같은 포유동물 세포의 발현에 사용된다. 유전 암호의 축퇴성으로 인해, 대다수의 아미노산은 하나 이상의 코돈으로 코딩되고, 이로써, 주어진 핵산 서열은 다량의 변이체를 갖고 있지만, 그에 의해 코딩되는 아미노산 서열에는 아무런 변화가 없다. 하지만, 많은 생물체들은 코돈 사용 면에서 차이가 있는 바, 이를 "코돈 선호도"(즉, 주어진 아미노산에 특정 코돈을 사용하는 선호도임)라고 한다. 코돈 선호도는 통상적으로 특정 코돈의 우세적 tRNA 종류의 존재와 관련되고, 코돈 선호도는 또한 결국 mRNA 번역의 효율을 향상시킨다. 따라서, 코돈의 최적화를 통해 특정 생물종(예를 들면, 원핵 생물)에서 유래된 코딩 서열을 맞춤 제작(tailored)함으로써, 상기 코딩 서열의 다양한 생물종(예를 들면, 진핵 생물)에서의 발현을 향상시킬 수 있다.
Tet 체계의 기타 구체적 변이체는, 아래의 "Tet-Off"과 "Tet-On" 체계를 포함한다. Tet-off 체계에서, 전사는 Tc 또는 Dox가 존재하는 경우에 불활성화된다. 상기 체계에서, TetR가 단순포진바이러스(Herpes simplex virus) 유래 VP16의 강한 전사활성화 도메인(strong transactivating domain of VP16)에 융합되어 구성된, 테트라사이클린 조절성 전사활성화 단백질(tetracycline-controlled transactivator protein, tTA)은, 테트라사이클린 반응성 프로모터 요소(tetracycline-responsive promoter element, TRE)의 전사 제어에 의해 표적 핵산의 발현을 조절한다. TRE요소는 TetO 서열 직렬 연쇄체(TetO sequence concatamers)가 프로모터(통상적으로는, 인간 사이토메갈로바이러스 즉시 초기 프로모터에서 유래된 최소 프로모터 서열임)에 융합되어 구성된 것이다. Tc 또는 Dox가 존재하지 않은 경우, tTA는 TRE에 결합하여 표적 유전자의 전사를 활성화시킨다. Tc 또는 Dox가 존재하는 경우, tTA는 TRE에 결합할 수 없어서, 표적 유전자를 발현할 수 없다.
한편, Tet-On 체계에서, 전사는 Tc 또는 Dox 존재하는 경우에 활성화된다. Tet-On 체계는 역방향 테트라사이클린 조절성 전사활성화 인자(reverse tetracycline-controlled transactivator, rtTA)이다. tTA와 마찬가지로, rtTA는 TetR억제자와 VP16 전이활성 도메인(VP16 transactivation domain)으로 구성된 융합 단백질이다. 하지만, TetR의 DNA 결합 모이어티의 4개의 아미노산이 변화됨에 따라 TetR의 결합 특성이 변화되었고, 이로써, rtTA는 Dox가 존재하는 경우, 표적 유전자 이식 TRE 상의 tetO서열만을 식별할 수 있다. 따라서, Tet-On 체계에서, rtTA는 다만 Dox가 존재하는 경우에서, TRE 조절성 표적 유전자(TRE-regulated target gene)의 전사를 활성화시킬 수 있다.
다른 일종 유도성 프로모터 체계는 대장균(E. coli)의 lac억제자 체계(lac repressor system, 문헌 Brown et al., Cell 49: 603-612(1987)을 참조함)이다. Lac억제자 체계는 lac오퍼레이트(lacO)를 포함하는 프로모터에 작동 가능하게 연결된 타겟 폴리뉴클레오티드의 전사를 조절하는 것을 통해 기능을 발휘한다. Lac억제자(lacR)는 LacO에 결합하여, 타겟 폴리뉴클레오티드의 전사를 억제한다. 적절한 유도제, 예를 들면, 이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노사이드(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)를 통해 타겟 폴리뉴클레오티드의 발현을 유도한다.
폴리펩티드 또는 그의 일부의 발현을 평가하기 위하여, 도입 대기 세포의 발현 벡터는, 바이러스 벡터로 형질주입하거나 감염된 세포 집단으로부터 발현 세포를 식별하고 선별할 수 있도록 선별 마커 유전자(selectable marker gene) 또는 보고 유전자(reporter gene) 또는 이 양자를 추가로 포함할 수 있다. 다른 양태에서, 단리된 DNA 단편(separate piece of DNA)에 운반된 선별 마커는 동시 트랜스펙션 실험(co-transfection procedure)에 사용될 수 있다. 선별 마커 유전자 또는 보고 유전자는 모두 적절한 조절 서열의 측부에 연결(flanked)되어, 그가 숙주세포에서 발현하도록 할 수 있다. 유용한 선별 마커로는, 예를 들면, neo 및 그에 유사한 유전자와 같은 항생제 내성 유전자(antibiotic-resistance genes)가 있다.
보고 유전자는 잠재적 트랜스펙션 세포를 동정하고 조절 서열의 기능을 평가하는데 사용될 수 있다. 통상적으로, 보고 유전자는 수용체 생물체 또는 조직에 존재하지 않거나 수용체 생물체 또는 조직에 의해 발현되지 않는 유전자이고, 상기 보고 유전자는 일종의 폴리펩티드를 코딩하고, 그의 발현은 용이하게 검출될 수 있는 어떤 특성, 예를 들면, 효소 활성으로 나타난다. DNA가 수용체 세포에 도입된 경우, 적절한 시간에서 보고 유전자의 발현을 검출한다. 적절한 보고 유전자로는 루시페라아제(luciferase), 베타-갈락토시다아제(β-galactosidase), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라아제(chloramphenicol acetyl transferase), 분비형 알칼라인 포스파타아제(secreted alkaline phosphatase) 또는 녹색형광단백질(green fluorescent protein)을 코딩하는 유전자를 포함할 수 있다(문헌 Ui-Tel et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82를 참조함). 적절한 발현 체계는 공지된 것이고, 기지된 기술로 제조하거나 또는 상업 경로를 통해 획득될 수 있다. 통상적으로, 보고 유전자의 최고 발현 수준을 나타낼 수 있는 최소 5' 측부 영역을 구비한 구조체를 프로모터로 인정한다. 이러한 프로모터 영역은 보고 유전자에 연결되고, 프로모터에 의해 구동되는 전사를 조절하는 특정 물질의 기능을 평가하는데 사용된다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 어느 하나의 전장 항-CD40 항체를 코딩하는 핵산을 제공한다. 일부 실시예에서, 상기 핵산은 전장 항-CD40 항체 중사슬 및 경사슬을 코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 하나 이상의 핵산 서열은 각각 별도의 벡터에 포함된다. 일부 실시예에서, 적어도 일부의 핵산 서열이 동일한 벡터에 포함된다. 일부 실시예에서, 모든 핵산 서열은 동일한 벡터에 포함된다. 벡터는, 예를 들면, 포유 동물 발현 벡터 및 바이러스 벡터(예를 들면, 역전사 바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 포진 바이러스 및 렌티바이러스에서 유래되는 벡터)로부터 선택될 수 있다.
유전자를 세포에 도입하여 발현하는 방법은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 발현 벡터에 관련되는 문맥에서, 벡터는 본 출원이 속하는 기술분야의 임의의 방법을 통해 용이하게 포유동물 세포, 세균, 효모 또는 곤충 세포와 같은 숙주세포에 도입할 수 있다. 예를 들면, 발현 벡터는 물리적, 화학적 또는 생물적 방법으로 숙주세포에 도입할 수 있다.
폴리뉴클레오티드를 숙주세포에 도입하는 물리적 방법으로는, 인산칼슘 침전법(calcium phosphate precipitation), 리포펙션법(lipofection), 유전자총법(particle bombardment), 미세주입법(microinjection), 전기천공법(electroporation) 등과 같은 것들을 포함한다. 벡터 및/또는 외래 핵산을 포함하는 세포의 제조 방법은 본 출원이 속하는 기술분야에서 숙지된 것이다. 예를 들면, 문헌 Green and Sambrook(2013, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)을 참조한다. 일부 실시예에서, 인산칼슘 트랜스펙션법(calcium phosphate transfection)으로 폴리뉴클레오티드를 숙주세포에 도입한다.
타겟 폴리뉴클레오티드를 숙주세포에 도입하는 생물학적 방법으로는 DNA와 RNA 벡터를 사용하는 것을 포함한다. 바이러스 벡터, 특히 역전사 바이러스 벡터는, 유전자를 포유동물 세포, 예를 들면, 인간 세포에 도입하는데 가장 늘리 사용되는 방법이다. 기타 바이러스 벡터로는 렌티바이러스, 폭스바이러스(poxviruses), 단순포진바이러스 1형, 아데노바이러스 및 아데노 관련 바이러스 등에서 유래된 것일 수 있다. 예를 들면, 미국특허 제5,350,674호 및 제5,585,362호를 참조한다.
폴리뉴클레오티드를 숙주세포에 도입하는 화학적 방법으로는, 예를 들면, 고분자복합체(macromolecule complexes), 나노캡슐(nanocapsules), 마이크로스페어(microspheres), 비즈(beads) 등과 같은 콜로이드 분산 체계(colloidal dispersion systems)와, 수중유 에멀젼(oil-in-water emulsions), 미셀(micelles), 혼합 미셀(mixed micelles) 및 리포솜(liposomes) 등과 같은 지질 기반 체계(lipid-based systems)를 포함한다. 생체 내와 생체 외에서 전달 벡터로 사용되는 일종 예시적 콜로이드 체계는 리포솜(예를 들면, artificial membrane vesicle, 인공 세포막 소낭)이다.
비-바이러스 전달체계를 사용하는 경우, 예시적인 전달 벡터는 리포솜이다. 지질 제제를 사용하여 핵산을 숙주세포(생체 외, 탈체 또는 생체 내)에 도입하는 것을 고려한다. 다른 양태에서, 상기 핵산은 지질에 결합할 수 있다. 지질에 결합하는 핵산은 리포솜의 수용성 내부(aqueous interior)에 캡슐화되어, 리포솜의 지질 이중층 내에 산재할 수 있고, 리포솜과 올리고뉴클레오티드를 결합시키는 연결분자(linking molecule)를 통해 리포솜에 연결될 수 있고, 리포솜 내에 포획되어 리포솜과 복합체를 이루고, 지질 함유 용액에 분산되며, 지질과 혼합, 지질에 결합, 또는 지질에 현탁될 수 있으며, 미셀(micelle)에 포함되거나 미셀과 혼합, 또는 기타 형태로 지질과 결합할 수 있다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터에 관련되는 조성물은 용액 중에서 그 어떤 특정 구조를 가질 것을 제한하지 않는다. 예를 들면, 이들은 이중층 구조(bilayer structure), 미셀 또는 "함몰된(collapsed)" 구조로 존재할 수도 있고, 간단하게 용액에 분산되어, 크기 또는 형태가 불균일한 집합체(aggregates)를 형성할 수도 있다. 지질은 지방 물질로서 자연적으로 존재하거나 합성된 지질일 수 있다. 예를 들면, 지질은 세포질에 자연적으로 존재하는 지방방울(fatty droplets), 그리고, 지방산, 알코올, 아민, 아미노알코올 및 알데히드 등을 함유하는 장쇄 지방성 탄화수소와 이들의 유도체를 함유하는 화합물을 포함한다.
그 어떤 방법을 사용하여 외생 핵산을 숙주세포에 도입하거나 기타 수단으로 세포를 본 출원에 따른 억제제에 노출시키는 것을 막론하고, 숙주세포에 재조합 DNA 서열이 존재되어 있음을 확인하기 위해 다양한 실험을 수행할 수 있다. 이러한 실험으로는, 예를 들면, 본 출원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진자가 잘 알고 있는 "분자생물학" 실험, 예를 들면 Southern과 Northern blotting, RT-PCR 및 PCR이고; 어느 한 특정 폴리펩티드가 존재하는 지 또는 부재하는 지를 검출하는 "생화학" 실험, 예를 들면, ELISAs 및 Western blots 등 면역학 방법 또는 본 명세서에 기재된 실험을 통해 물질 동정을 실행하는 것 등을 포함하고, 이 모든 것들은 모두 본 출원의 범위 내에 포괄된다.
항-CD40 항체의 제조
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 단클론 항체이거나 단클론 항체에서 유래된다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 단클론 항체에서 유래되는 VH와 VL, 또는 이의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 단클론 항체에서 유래되는 CH1과 CL영역, 또는 이의 변이체를 추가로 포함한다. 단클론 항체는 예를 들면, 하이브리도마 세포 방법(hybridoma methods), 파지 디스플레이 방법(phage display methods)을 포함한 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 방법을 사용하거나 DNA 재조합 방법(urecombinant DNA methods)을 사용하여 제조될 수 있다. 또한, 예시적인 파지 디스플레이 방법에 대해서는, 본 명세서 및 하기 실시예에 기재된다.
하이브리도마 세포 방법에서는, 통상적으로 면역제로 햄스터, 마우스 또는 기타 적절한 숙주 동물을 면역화시켜, 면역제에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 생성 가능하도록 림프세포를 유도(elicit)한다. 또는, 생체 외에서 림프세포를 면역화시킬 수도 있다. 면역제는 타겟 단백질의 폴리펩티드 또는 융합 단백질을 포함할 수 있다. 통상적으로, 인간 세포가 필요할 경우에는, 말초혈액 림프세포(PBLs)를 사용하고, 비-인간 포유동물 유래 세포가 필요할 경우에는, 비장 세포 또는 림프절 세포를 이용한다. 적당한 융합제, 예를 들면, 폴리에틸렌글리콜을 사용하여 림프세포를 불멸화 세포주(immortalized cell line)과 융합시켜, 하이브리도마 세포를 형성한다. 불멸화 세포주는 통상적으로 형질 전환된 포유동물 세포이고, 특히는 설치류, 소과 및 인간의 골수종 세포이다. 통상적으로 레트 또는 마우스의 골수종 세포주를 이용한다. 하이브리도마 세포는 적절한 배지에서 배양할 수 있고, 상기 배지는 미융합된 불멸화 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 일종 이상의 물질을 함유하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 부모대 세포에 히포크산틴-구아닌포스포리보실 전달효소(HGPRT 또는 HPRT)가 결핍된 경우, 하이브리도마 세포의 배지는 통상적으로 히포크산틴(hypoxanthine), 아미노프테린(aminopterin) 및 티미딘(thymidine)(HAT 배지)를 포함하고, 상기 배지는 HGPRT 결핍 세포의 성장을 억제할 수 있다.
일부 실시예에서, 불멸화 세포주는 효과적으로 융합되고, 선별된 항체 생성 세포(selected antibody-producing cells)를 통해 항체의 안정적 고발현을 확보하며, 특정 배지, 예를 들면, HAT 배지에 대해 민감하다. 일부 실시예에서, 불멸화 세포주는 마우스 골수종 세포주이고, 예를 들면, 캘리포니아주 샌디에이고의 솔크 세포보관소(Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California) 및 버지니아주 매너서스의 미국형 배양물 보관소(American Type Culture Collection, Manassas, Virginia)에서 획득할 수 있다. 또한, 인간 골수종(Human myeloma)과 마우스-인간 하이브리도마 골수종 세포주(mouse-human heteromyeloma cell lines)는 인간 단클론 항체의 제조에 사용될 수 있는 것으로 기재되어 있다.
다음, 하이브리도마 세포를 배양하는 배지에 폴리펩티드에 대한 단클론 항체가 존재하는 지를 측정할 수 있다. 하이브리도마 세포에 의해 생성되는 단클론 항체의 결합 특이성(binding specificity)은 면역침전법 또는 생체외 결합 실험, 예를 들면, 방사 면역 측정법(Radioimmunoassay, RIA) 또는 효소 결합 면역 부착 측정법(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)을 통해 결정할 수 있다. 이러한 기술 또는 분석 방법들은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 단클론 항체의 결합 친화도는 예를 들면, 문헌 Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107: 220(1980) 에 기재된 스캐차드(Scatchard) 분석을 통해 결정할 수 있다.
원하는 하이브리도마 세포를 동정한 후, 제한 희석법(limiting dilution procedures)을 통해 타겟 클론(clones)에 대해 서브클론(sub cloned)을 실행할 수 있고, 표준 방법을 통해 배양할 수 있다. 이런 목적에 적용되는 배지로는, 예를 들면, 개량된 Eagle배지(DMEM) 및 RPMI-1640배지가 있다. 또는, 하이브리도마 세포는 포유동물 생체 내에서 복수(ascites)의 형태로 성장한다.
서브클론에서 분비된 단클론 항체는 통상적인 이뮤노글로불린정제법(immunoglobulin purification procedures), 예를 들면, 단백질 A-세파로스 겔(protein A-Sepharose), 히드록시아파타이트 크로마토그래피(hydroxylapatite chromatography), 겔상 전기영동(gel electrophoresis), 투석(dialysis) 또는 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)을 통해 배지 또는 복수(ascites)에서 단리되거나 정제된다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체에 따르면, 상기 항-CD40 항체는 항체 라이브러리(예를 들면, scFv 또는 Fab 단편을 디스플레이하는 파지 라이브러리)로부터 선택되는 클론의 서열을 포함한다. 상기 클론은 조합 라이브러리(combinatorial libraries)에서 원하는 활성을 가진 항체 단편을 스크리닝(screening)하는 방법을 통해 동정할 수 있다. 예를 들면, 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 다양한 방법을 파지 디스플레이 라이브러리(phage display libraries)를 생성하는데 사용할 수 있고, 이러한 라이브러리에 대한 스크리닝을 통해 원하는 결합 특성을 가진 항체를 획득할 수 있다. 상기 방법은, 예를 들면, 문헌 Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, N. J., 2001) 에 요약되어 있고, 예를 들면, 하기 문헌 McCafferty et al., Nature 348: 552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628(1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597(1992); Marks and Bradbury, Methods in Molecular Biology 248: 161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N. J., 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310(2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093(2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472(2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004) 에 더 상세하게 기재되어 있다.
어떤 파지 디스플레이 방법에서는, 중합효소 연쇄반응(PCR)으로 VH와 VL유전자의 전부의 구성 성분을 각각 클론하고, 파지 라이브러리에서 랜덤으로 재조합한 후, 그 중에서 결합 항원에 결합 가능한 파지를 스크리닝하는 바, 예를 들면, 문헌 Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)에 기재한 바와 같다. 파지는 통상적으로 scFv단편 또는 Fab단편의 형태로 항체 단편을 디스플레이한다. 면역된 소스(immunized sources)에서 유래된 라이브러리는, 하이브리도마 세포를 구축할 것 없이, 면역원에 대해 고친화도가 있는 항체를 제공한다. 또는, 아무 면역도 할 것 없이, 나이브 레퍼토리(naive repertoire, 예를 들면, 인간에서 온 것)를 클론하여 다양한 비자가 항원(non-self-antigens)과 자가 항원(self-antigens)에 대한 항체의 단일 소스(single source of antibodies)를 제공할 수 있고, 예를 들면, 문헌 Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734(1993)에 기재된 바와 같다. 최종적으로, 나이브 라이브러리(naive libraries)는 줄기세포에서 온 비-재배열(unrearranged) V-gene단편을 클론하여, 랜덤 서열을 포함하는 PCR 프라이머(primers)를 사용하여 CDR3 초가변 영역을 코딩하고 생체외에서 재배열을 완성하는 방법으로 제조될 수도 있고, 예를 들면, 문헌 Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388(1992)에 기재된 바와 같다. 인간 항체 파지 라이브러리가 기재된 특허 출판물로는, 예를 들면, 미국특허 제5,750,373호와 미국특허 공개 제2005/0079574호, 제2005/0119455호, 제2005/0266000호, 제2007/0117126호, 제2007/0160598호, 제2007/0237764호, 제2007/0292936호 및 제2009/0002360호가 있다.
파지 디스플레이를 통해 라이브러리에서 표적CD40에 특이적으로 결합할 수 있는 항-CD40 항체 모이어티를 스크리닝하는 방법을 사용하여 상기 항-CD40 항체를 제조할 수 있다. 상기 라이브러리는 인간 scFv 파지 디스플레이 라이브러리(human scFv phage display library)로서, 적어도 1Х109(예를 들면, 적어도 1Х109, 2.5Х109, 5Х109, 7.5Х109, 1Х1010, 2.5Х1010, 5Х1010, 7.5Х1010 또는 1Х1011임) 종의 다이버시티을 가진 독특한 인간 항체 단편일 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 인간 나이브 라이브러리로서, 건강한 피험자의 PMBCs(Perturbed Membrane-Binding Compounds, 교란된 막 결합 화합물)과 비장에서 추출한 DNA로 구축된 것이고, 모든 인간의 중사슬과 경사슬의 서브패밀리(subfamilies)를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 인간 나이브 라이브러리로서, 자가면역질환 환자(autoimmune diseases), 암환자(cancer patients) 및 감염성 질환(infectious diseases) 환자 등과 같은 다양한 질환 환자 생체내에서 단리된 PMBCs로부터 추출된 DNA에 의해 구축된 것이다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 반합성된 인간 라이브러리(semi-synthetic human library)이고, 여기서, 중사슬 CDR3은 완전 랜덤적인 것이고, 모든 아미노산(시스테인을 제외함)은 동일한 확률로 주어진 위치에 존재한다(예를 들면, 문헌 Hoet, R. M. et al., Nat. Biotechnol. 23(3): 344-348, 2005를 참조함). 일부 실시예에서, 반합성된 인간 라이브러리의 중사슬 CDR3의 길이는 5 내지 24개(예를 들면, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24개)의 아미노산이다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 완전 합성된 파지 디스플레이 라이브러리(fully-synthetic phage display library)이다. 일부 실시예에서, 상기 라이브러리는 비-인간 파지 디스플레이 라이브러리이다.
표적CD40에 대해 고친화도를 가진 파지의 클론은 파지와 표적CD40와의 반복 결합(iterative binding)을 통해 스크리닝할 수 있는 바, 상기 표적CD40은 고상 지지체(solid support, 예를 들면, 용액 패닝에 사용되는 비드 또는 세포 패닝에 사용되는 포유동물 세포임)에 결합되고, 그 다음에, 미결합된 파지를 제거하며, 특이적으로 결합된 파지를 용출시킨다. 이어서, 결합된 파지 클론을 용출하여, 적절한 숙주 세포, 예를 들면, E. coli XL1-Blue를 감염시키는데 사용하고, 발현 및 정제를 수행한다. 예를 들면, 용액 패닝, 세포 패닝 또는 양자를 결합한 다중(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6 또는 더 이상의 횟수) 패닝을 거쳐, CD40에 특이적으로 결합하는 파지 클론을 풍부화시킨다(to enrich). 풍부화된 파지 클론은 표적CD40에 특이적으로 결합되어,예를 들면, ELISA 및 FACS과 같은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 임의의 방법으로 검출될 수 있다.
항체 라이브러리를 스크리닝하는 다른 일종의 방법으로는, 효모 세포 표면에서 단백질을 디스플레이하는 것이다. Wittrup 등(미국 특허 제6,699,658호 및 제6,696,251호)은, 효모 세포로 라이브러리를 디스플레이하는 방법을 개발하였다. 이러한 효모 디스플레이 체계에서, 한 성분은 효모 세포벽에 고정되어 있는 효모 응집소 단백질(Aga1)을 포함하고, 다른 한 성분은, 응집소 단백질 Aga2의 2번째의 서브 유닛을 포함하고, 해당 서브 유닛은 이황화 결합을 통해 Aga1 단백질에 결합되고, 나아가 효모 세포 표면에 디스플레이된다. Aga1 유전자를 효모 염색체에 인테그레이션하는 것으로 Aga1단백질을 발현시킨다. 단일사슬 가변단편(scFv) 라이브러리와 효모 디스플레이 플라스미드 중의 Aga2 유전자를 융합시키고, 형질 전환시킨 경우, 해당 라이브러리는 추가적인 영양 마커를 사용하여 효모에 보유될 수 있다. Aga1 및 Aga2 단백질은 모두 갈락토스 유도성 프로모터의 제어 하에서 발현된다.
인간 항체 V유전자 레퍼토리(VH와 VK 단편)는, 한 세트의 축퇴 프라이머(degenerate primers)를 사용한 PCR 방법으로 획득한다(Sblattero, D. and Bradbury, A. Immunotechnology 3, 271-278 1998). PCR 템플릿은, PBMC, 비장, 림프절, 골수 및 편도선을 포함한 RNA 또는 cDNA를 시판 구매를 통해 얻을 수 있다. 독립된 VH와 VK PCR 라이브러리를 합병시킨 후, 중첩 연장 PCR를 통해 그것을 scFv형태로 조립한다(Sheets, M. D. et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 6157-6162 1998). 효모 scFv디스플레이 라이브러리를 구축하기 위하여, 상동 재조합을 통해 얻어진 scFv PCR 생성물을 효모 내의 효모 디스플레이 플라스미드에 클론시킨다(Chao, G, et al, Nat Protoc. 2006; 1(2): 755-68. Miller KD, et al. Current Protocols in Cytometry 4.7.1-4.7.30, 2008).
포유 동물 세포 디스플레이 체계를 이용하여 항-CD40 항체를 스크리닝할 수 있는데, 여기서, 항체 모이어티는 세포 표면에 디스플레이되고, 항원 유도 스크리닝 방법을 통해 CD40을 특이적으로 표적화하는 항체를 단리한다(미국 특허 제7,732,195B2호에 기재된 바와 같음). 대규모 인간 IgG 항체 유전자를 디스플레이하는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 라이브러리를 구축하여, 이를 고친화도의 항체 유전자를 발현하는 클론을 발견하는데 사용할 수 있다. 다른 일종의 디스플레이 체계를 개발하였는데, 해당 체계는 선택적 접합(alternative splicing)을 사용하여 동일한 단백질을 세포 표면에 동시에 디스플레이하고 분비하도록 하며, 여기서, 디스플레이되는 단백질의 표현형은 유전자형과의 연계를 유지하고, 이에 따라 상기 분비된 가용성 항체를 생물 물리학적 분석과 세포 기능에 기반한 분석에서 동시에 특성화할 수 있다. 상기 방법은 종래의 포유 동물 세포 디스플레이 방법의 많은 한계를 극복하여, 전장의 글리코실화된 IgGs 형태의 항체를 직접 스크리닝하고 성숙화할 수 있다(Peter M. Bowers, et al, Methods 2014, 65: 44-56). 일시적 발현 체계는, 항체 유전자 회복(recovery) 전에 수행된 단일 라운드 항원 선택(single round of antigen selection)에 적용되므로, 상대적으로 작은 라이브러리에서 항체를 선택하는데 가장 유용하다. 안정적인 에피솜 벡터(episomal vectors)는 매력적인 선택을 제공하였다. 에피솜 벡터는 고효율적으로 형질 주입되고(be transfected), 낮은 복제수로 안정하게 유지될 수 있어, 다중 라운드의 패닝과 더 복잡한 항체 라이브러리의 해석을 허가한다.
IgG라이브러리는 인간 공여체 패널(a panel of human donors)에서 단리된 생식 계열 서열(germline sequence) V유전자 단편과 재배열된 (D) J영역의 연결에 기반하여 구축된 것이다. 2000개의 인간 혈액 샘플에서 수집된 RNA를 cDNA로 역전사하고, VH와 VK에 특이적인 프라이머(primers)를 사용하여 VH와 VK의 단편을 증폭시키고, 겔 추출을 통해 정제시킨다. VH와 VK의 단편은 IgG1 또는 K불변 영역을 포함하는 디스플레이 벡터에 각각 서브클론 된후, 293T 세포에 전기천공법으로 도입시키거나 형질 도입시켜, IgG 라이브러리를 제조한다. scFv항체 디스플레이 라이브러리를 제조하기 위하여, VH와 VK를 연결하여 scFv를 생성한 후, 그것을 디스플레이 벡터에 서브클로닝한 다음, 293T세포에 전기천공법으로 도입시키거나 형질도입시킨다. 공지된 바와 같이, IgG라이브러리는 공여체 패널에서 단리된 생식 계열 서열 V 유전자 단편과 재배열된 (D) J영역에 기반하여 구축된 것이고, 공여체는 마우스, 레트, 토끼 또는 원숭이일 수 있다.
단클론 항체는DNA의 재조합 방법으로 제조될 수도 있는 바, 예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같다. 본 출원에 따른 단클론 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 방법(예를 들면, 마우스 유래 항체의 경사슬과 중사슬을 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합 가능한 올리고뉴클레오티드 프로브를 통하는 방법)으로 용이하게 단리되고 시퀀싱될 수 있다. 상술한 하이브리도마 세포 또는 본 출원의 CD40 특이성 파지 클론(CD40-specific phage clones)은 이러한 DNA의 소스로 사용될 수 있다. 단리된 후, DNA를 발현 벡터에 삽입한 후, 상기 벡터를 시미안 COS세포, 중국 햄스터 난소암(CHO) 세포 또는 면역글로불린을 생성하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포에 형질 주입(transfected into)시킴으로써, 재조합된 숙주 세포에서 합성된 단클론 항체를 획득한다. 상기 DNA는 또한 변형될 수도 있는 바, 예를 들면, 코딩 서열로 인간 중사슬과 경사슬 불변 영역을 치환 및/또는 프레임워크 영역으로 상동성 비-인간 서열을 대체하거나(미국 특허 제4,816,567호; Morrison et al., supra), 공유 결합을 통해 면역글로불린의 코딩 서열의 전부 또는 일부 비-면역글로불린 폴리펩티드의 코딩 서열을 연결할 수 있다. 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드는 본 출원에 따른 항체의 불변 영역을 치환하거나 본 출원에 따른 항체 가변 도메인의 하나의 항원 결합 부위를 치환하여 키메릭 2가 항체를 형성할 수 있다.
상기 항체는 1가 항체일 수 있다. 1가 항체를 제조하는 방법은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 예를 들면, 면역글로불린 경사슬과 변형된 중사슬의 재조합 발현 방법이 관련된다. 통상적으로 Fc 영역의 임의의 위치에서 중사슬을 절단하여(truncated), 중사슬 간의 가교 결합을 방지한다. 또는, 관련된 시스테인 잔기는 기타 아미노산 잔기로 치환되거나 결실되어 가교 결합을 방지한다.
생체외 방법도 1가 항체의 제조에 적용된다. 항체를 소화시켜 항체 단편, 특히 Fab단편을 생성하는 것은, 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 임의의 방법으로 완성될 수 있다.
원하는 결합 특이성(항체-항원 결합 부위)을 가진 항체 가변 도메인은 면역글로불린 불변 영역에 융합될 수 있다. 바람직하게는, 적어도 경첩부(part of the hinge), CH2 및 CH3영역을 포함하는 면역글로불린 중사슬 불변 영역에 융합된다. 일부 실시예에서, 경사슬 결합 필수 부위(site necessary for light-chain binding)를 포함하는 제1 중사슬 불변 영역(CH1)은 적어도 일종의 융합체에 나타난다. 면역글로불린 중사슬 융합체를 코딩하는 DNA는, 필요시, 면역글로불린 경사슬을 코딩하는 DNA를 추가로 포함하여, 별도의 발현 벡터(separate expression vectors)에 삽입시켜, 적절한 숙주 생물에 공동 형질주입(co-transfected)시킬 수 있다.
인간 항체 및 인간화 항체
상기 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)는 인간 항체 또는 인간화 항체일 수 있다. 비-인간(예를 들면, 마우스)항체 모이어티의 인간화 형태는 키메릭 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(예를 들면, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, scFv 또는 항체의 기타 항원 결합 서브서열)이고, 통상적으로 비-인간 면역글로불린에서 유래되는 최소의 서열을 포함한다. 인간화 항체는 인간 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(수용체 항체)을 포함하고, 여기서, 수용체 CDR의 잔기는 원하는 특이성, 친화도 및 성능을 가진 비-인간 (공여체 항체) CDR잔기, 예를 들면, 마우스, 레트 또는 토끼의 CDR로 치환된다. 일부 실시예에서, 인간 면역글로불린 Fv프레임워크 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 치환된다. 인간화 항체는 수용체 항체에 해당되지도 않고, 도입된 CDR 또는 프레임워크 서열에도 존재하지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 통상적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 통상적으로는 2개의 가변 도메인을 포함하고, 여기서, 전부 또는 실질적으로 전부의 CDR영역은 비-인간 면역글로불린의 CDR영역에 대응되고, 전부 또는 실질적으로 전부의 프레임워크는 인간 면역글로불린의 공동 서열이다.
통상적으로, 인간화 항체는 비-인간 소스에서 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 함유한다. 이러한 비-인간 아미노산 잔기는 통상적으로 "임포트(import)" 잔기로 불리우고, 통상적으로 "임포트" 가변 도메인에서 온다. 일부 실시예에 따르면, 인간화는 실질적으로 Winter 및 그의 동료의 하기 방법에 따라 실행하고(Jones et al., Nature, 321: 522-525(1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-327(1988); Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536(1988)), 설치 동물의 CDRs 또는 CDR서열로 인간 항체의 상응하는 서열을 치환한다. 따라서, 이로한 "인간화" 항체 모이어티(미국 특허 제4,816,567호), 완전한 인간 항체보다 실질적으로 적고, 이의 가변 도메인은 비-인간 소스에서 오는 상응하는 서열로 치환된다. 실제 과정에서, 인간화 항체 모이어티는 전형적인 인간 항체 모이어티이고, 여기서, 일부의 CDR잔기와 가능한 일부 프레임워크 잔기는 설치류 항체에서 유래되는 유사한 부위의 잔기로 치환된다.
인간 항체는 인간화된 일종 대체 형태이다. 예를 들면, 현재, 면역 한 후에 완전한 인간 항체 라이브러리를 생성할 수 있으나 내원성 면역글로불린을 생성하지 않는 유전자 이식 동물(예를 들면, 마우스)이 제조 가능하게 되었다. 예를 들면, 키메릭 및 생식 계열 돌연변이 마우스의 항체 중사슬 연결영역(antibody heavy-chain joining region, JH) 유전자의 동형접합체 결손(homozygous deletion)에 의해, 내원성 항체의 생성이 완전히 억제되었음으로 보도되었다. 인간 생식 계열 면역글로불린 유전자 어레이(human germ-line immunoglobulin gene array)는, 이러한 생식 계열 돌연변이 마우스 체내로 전달되어, 항원의 자극 하에서 인간 항체를 생성할 수 있는 바, 예를 들면, 문헌 akobovits et al., PNAS USA, 90: 2551(1993); Jakobovits et al., Nature, 362: 255-258(1993); Bruggemann et al., Year in Immunol., 7: 33(1993); 미국 특허 제5,545,806, 제5,569,825호, 제5,591,669호, 제5,545,807호; 및 WO 97/17852를 참조한다. 또는, 인간 면역글로불린 유전자좌를 유전자 이식 동물(예를 들면, 내원성 면역글로불린 유전자의 일부 또는 전부가 불활성화된(inactivated) 마우스)에 도입하여, 인간 항체를 제조할 수 있다. 항원 자극 후의 인간 항체의 생성 과정은 유전자 재배열, 조립 및 항체 라이브러리를 포함한 모든 면에서 인간 체내에서의 생성과정과 매우 유사한 것이 발견되었다. 이러한 방법은 예를 들면, 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호, 다음 하기 문헌 Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783(1992); Lonberg et al., Nature, 368: 856-859(1994); Morrison, Nature, 368: 812-813(1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology, 14: 845-851(1996); Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826(1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol., 13: 65-93(1995)에 기재되어 있다.
인간 항체는 생체외에서 B세포를 활성화시키거나(미국 특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호), 파지 디스플레이 라이브러리를 포함한 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 다양한 기술을 사용하여 생성할 수 있다. 하기 문헌 Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381(1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581(1991). Cole et al. 및 Boerner et al. 등에 기재된 기술도 인간 단클론 항체의 제조에 사용될 수 있다. 하기 문헌 Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77(1985) and Boerner et al., J. Immunol., 147(1): 86-95(1991)을 참조한다.
항-CD40 항체 변이체
일부 실시예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-CD40 항체 변이체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)의 아미노산 서열도 본 출원의 고려 대상이다. 예를 들면, 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 생물학적 활성을 개선해야 할 가능성이 있다. 항체 변이체의 아미노산 서열은 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형(modifications)을 도입하거나 펩타이드 합성(peptide synthesis)을 통해 제조될 수 있다. 이러한 변형은 예를 들면, 항체 아미노산 서열 중의 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 아미노산 잔기의 결실, 삽입 및 치환 중의 어느 하나의 조합을 통해 최종의 구축을 완성함으로써, 그가 원하는 특징, 예를 들면, 항원 결합력을 가지도록 할 수 있다.
일부 실시예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 가진 항-CD40 항체 변이체를 제공하는 바. 치환 돌연변이(substitutional mutagenesis)에 대한 타겟 부위는 초가변 영역(HVRs)과 프레임워크 영역(FRs)을 포함한다. 타겟 항체에 아미노산 치환를 도입하여, 원하는 활성, 예를 들면, 개선된 생물 활성, 유지/개선된 항원 결합력, 저감된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC를 가진 생성물을 스크리닝할 수 있다.
보수적 치환은 하기 표 4에 표시된 바와 같다.
표 4 보수적 치환
측쇄의 특성에 따라, 아미노산을 하기와 같이 분류한다. 즉,
A. 소수성 아미노산: 노르루신 Norleucine, 메티오닌 Met, 알라닌 Ala, 발린 Val, 류신 Leu, 이소류신 Ile;
b. 중성 친수성 아미노산: 시스테인 Cys, 세린 Ser, 트레오닌 Thr, 아스파라긴 Asn, 글루타민 Gln;
c. 산성 아미노산: 아스파르트산 Asp, 글루탐산 Glu;
d． 염기성 아미노산: 히스티딘 His, 라이신 Lys, 아르기닌 Arg;
e. 사슬 방향에 영향을 주는 아미노산 함유: 글리신 Gly, 프롤린 Pro;
f. 방향족 아미노산: 트립토판 Trp, 티로신 Tyr, 페닐알라닌 Phe이 있다.
비 보수적 아미노산의 치환은 상술한 일종 아미노산을 다른 일종의 아미노산으로 치환하는 것을 포함한다.
일 예시적인 치환 변이체는 친화도가 성숙된 항체(affinity matured antibody)이고, 예를 들면, 파지 디스플레이에 기초한 친화도 성숙 기술에 의해 용이하게 생성될 수 있다. 간단히 말하자면, 하나 이상의 CDR잔기를 돌연변이시켜, 변이체 항체 모이어티(variant antibody moieties)를 파지에 디스플레이하여, 특정 생물 활성(예를 들면, HEK-BlueTM CD40L NF-κB 활성화 실험에 기초한 생물학적 활성 또는 결합 친화도)을 가진 변이체를 스크리닝하는 것이다. HVRs영역에서 변화(예를 들면, 치환)를 일으켜, HEK-BlueTM CD40L NF-κB 활성화 실험에 기초한 개선된 생물학적 활성 또는 항체 친화도를 획득할 수 있다. HVR의 "핫스팟 영역(hotspots)", 즉, 생체 세포의 성숙과정에서 고주파 돌연변이가 발생된 코돈이 코딩하는 잔기(예를 들면, 문헌 Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179-196(2008)을 참조함), 및/또는 특이한 결정성 잔기(Specificity Determining Residues, SDRs)에서 변화를 일으켜, 얻어진 변이체 VH 및 VL의 결합 친화도를 검출할 수 있다. 2차 라이브러리(secondary libraries)로부터의 구축 및 재선택에 의한 친화도 성숙(Affinity maturation by constructing and reselecting) 방법에 대해서는 일부 문헌에 이미 기재되어 있는 것이고, 예를 들면, 문헌Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))을 참조한다.
일부 친화도 성숙의 실시예에서, 다양한 방법 중의 하나(예를 들면, 에러-프로운 PCR(error-prone PCR), 사슬 셔플링(chain shuffling) 또는 올리고뉴클레오티드 부위지정 돌연변이(oligonucleotide-directed mutagenesis))를 사용하여, 선택된 친화도 성숙용 가변 유전자에게 다이버시티(diversity)를 도입한다. 그런 후, 2차 라이브러리를 작성한다. 상기 라이브러리에 대해 스크리닝하여, 원하는 친화도를 가진 항체 변이체를 동정한다. 다이버시티를 도입하는 다른 하나의 방법으로는HVR 부위 지정 방식(HVR-directed approaches)을 포함하고, 여기서, 몇개의 HVR 잔기(예를 들면, 1회당 4개 내지 6개 잔기)일 지는 랜덤으로 된 것이다. 예를 들면, 알라닌 스캐닝 유도(alanine scanning mutagenesis) 또는 모델링(modeling)에 의해 항원 결합에 참여하는 HVR잔기가 특이적으로 식별된다. 통상적으로 CDR-H3 및 CDR-L3영역은 특히 중요한 표적이다.
일부 실시예에서, 치환, 삽입 또는 결실은, 이러한 변화에 의해 항원에 대한 항체의 결합력이 실질적으로 저감되지 않은 한, 하나 이상의 HVRs 내에서 일어날 수 있는 바, 예를 들면, HVRs 내에서 결합 친화도를 실질적으로 저감시키지 않은 보수적인 변화(예를 들면, 본 명세서에서 제공되는 보수적 치환임)가 일어날 수 있다. 이러한 변화는 HVR"핫스팟 영역" 또는 SDRs영역 외에서도 일어날 수 있다. 일부 실시예에서, 위에서 제공된 변이체 VH 및 VL 서열은, 각각의 HVR은 변화가 일어나지 않거나 1개, 2개 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 포함한다.
항체의 표적화된 돌연변이를 유도할 수 있는(an antibody that may be targeted for mutagenesis) 아미노산 잔기 또는 영역을 동정하는데 유용한 일종의 방법은 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유도(alanine scanning mutagenesis)"라고 칭하는 바, 예를 들면, 문헌 Cunningham and Wells(1989) Science, 244: 1081-1085에 기재되어 있다. 상기 방법에서, 하나 또는 한 세트의 타겟 잔기(예를 들면, 아르기닌, 아스파르트산, 히스티딘, 라이신 및 글루탐산과 같은 하전된 잔기임)를 중성 또는 음이온을 지닌 아미노산(예를 들면, 알라닌 또는 글루탐산임)으로 치환시킴으로써, 항체와 항원의 인터랙션이 영향을 받고 있는지 여부를 결정한다. 아미노산 위치에 치환을 추가 도입하여, 해당 위치가 최초 치환에 대해 기능적 민간성을 갖고 있음을 증명할 수 있다. 또는/또한, 항원-항체 복합체의 결정체 구조를 통해 항체와 항원 간의 접촉 부위를 동정할 수 있다. 이러한 접촉 부위 잔기 및 인접한 잔기는 치환 후보(candidates for substitution)로서 표적화되거나 제거(eliminated)될 수 있다. 변이체를 스크리닝하여, 그들이 원하는 특성을 갖고 있는지 여부를 확인한다.
아미노산 서열의 삽입은, 아미노 말단 및/또는 카르복실 말단의 융합을 포함하고, 길이 범위는 1개 잔기에서 100개 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩티드까지이며, 이외에 또한 서열 내에 1개 이상의 아미노산 잔기를 삽입하는 것을 추가로 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N말단에 메티오닐 잔기를 가진 항체를 포함한다. 항체 분자의 기타 삽입 변이체는, 항체 분자의 N-말단 또는 C-말단에 하나의 효소(예를 들면, ADEPT) 또는 항체의 혈청 반감기가 증가된 폴리펩티드가 융합된 것을 포함한다.
Fc 영역 변이체
일부 실시예에서, 하나 이상의 아미노산 변형을 본 명세서에 기재된 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체 또는 항-CD40 항체 융합 단백질)의 Fc 영역에 도입함으로써, Fc 영역 변이체를 생성한다. 일부 실시예에서, Fc 영역 변이체는 증강된 ADCC 효과기 기능(enhanced ADCC effector function)을 가지고, 통상적으로 Fc의 수용체 (FcRs)와의 결합에 관련된다. 일부 실시예에서, Fc 영역 변이체는 저감된 ADCC 효과기 기능을 가진다. Fc서열의 변화 또는 돌연변이로 인해 Fc 영역 변이체의 효과기 기능이 영향을 받는 예는 매우 많으며, 예를 들면, 문헌 WO 00/42072 및 Shields et al. J Biol. Chem. 9(2): 6591-6604(2001)에서, FcRs에 결합하여 증강되거나 약화된 항체 변이체가 기재되어 있다. 이러한 출판물의 전부 내용은 참조로서 본 발명에 인용된다.
항체 의존성 세포 매개성 세포독성 작용(ADCC)은 치료성 항체(therapeutic antibodies)가 종양세포에 대한 작용 메커니즘이다. ADCC는, 세포에 의해 매개되는 면역 방어로서, 표적 세포의 막 표면 항원(membrane-surface antigens)에 특이성 항체(예를 들면, 항-CD40 항체)가 결합된 경우에 시동되고, 면역계의 효과기 세포(effector cell)는 표적 세포(예를 들면, 암세포)를 적극적으로 용해시킨다(actively lyses). 통상적으로 ADCC효과기는 항체에 의해 활성화되는 NK세포에 관련된다. NK세포는 Fc수용체 CD16을 발현한다. 상기 수용체는 표적 세포 표면에 결합된 항체 분자의 Fc부분(portion)을 식별하고 그에 결합한다. NK세포 표면의 가장 흔한 Fc수용체는 CD16 또는 FcγRIII이다. Fc수용체에 대한 항체 Fc 영역의 결합은 NK세포의 활성화, 세포 용해 과립의 방출, 그리고 표적 세포의 사멸을 초래한다. ADCC에 의한 종양세포에 대한 살해 작용은 고친화도의 FcR을 형질주입시키는 NK-92세포에 대한 특이성 실험을 통해 측정할 수 있다. 그 결과를 FcR을 발현하지 않는 야생형 NK-92와 비교한다.
일부 실시예에서, 본 출원은 항-CD40 항체 변이체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체 변이체)를 추가로 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체 변이체는 전부가 아닌 일부의 효과기 기능을 가진 Fc 영역을 포함함으로써, 생체 내에서 연장된 반감기를 가지게 되었고, 특정된 효과기 기능(예를 들면, CDC 또는 ADCC)은 비필수적인 것이고 해로운 것일 수 있고, 이러한 항-CD40 항체는 본 출원의 이상적인 후보가 된다. 생체외 및/또는 생체내에서 세포 독성 검출을 수행함으로써 CDC 및/또는 ADCC활성이 저감(reduction)/감손(depletion)되었는지 확인한다. 예를 들면, Fc수용체 (FcR) 결합 실험을 통해 항체가 FcγR결합력이 결여하지만(따라서, ADCC활성이 결여할 가능성 있음), 여전히 FcRn 결합력이 보유되고 있다. ADCC를 매개하는 주요한 세포 중, NK세포는 FcγRIII만을 발현하고, 단핵세포는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈세포에 대한 FcR의 발현에 대해서는, 문헌 Ravetch and Kinet Annu. Rev. Immunol. 9: 457-492(1991) 제464페이지의 표 3에 요약되어 있다. 생체외에서 관심 분자의 ADCC활성을 평가하는 비제한적 예에 대해서는, 미국 특허 제5,500,362호에 기재되어 있다(예를 들면, 문헌 Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83: 7059-7063 (1986) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82: 1499-1502 (1985); 미국 특허 제5,821,337호(Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166: 1351-1361(1987)를 참조함). 또는, 비-방사성 검출 방법(예를 들면, ACTITM 유동 세포 분석 비-방사성 세포독성 검출(CellTechnology, Inc. Mountain View, Calif.) 및 CYTOTOX 96TM 비-방사성 세포독성 검출(Promega, Madison, Wis.)을 참조함)을 사용할 수도 있다. 이러한 검출 실험에서 사용되는 효과기 세포는 말초혈액 단핵세포(PBMC) 및 자연 살해세포(NK)를 포함한다. 또는, 이 외에, 관심 분자의 ADCC활성을 생체 내에서 검출하는 바, 예를 들면, 동물 모델에서, 예를 들면, 문헌 Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95: 652-656(1998)에 기재된 바와 같다. 더불어, C1q결합 실험을 수행함으로써, 항체가 C1q에 결합될 수 없어서 CDC활성이 결여함을 확인할 수 있다. 예를 들면, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서, C1q 및 C3c가 ELISA에 결합하는 것을 참조한다. 보체 활성화 상황을 평가하기 위하여, CDC검출을 수행할 수 있다(예를 들면, 문헌 Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163(1996); Cragg, M. S. et al., Blood 101: 1045-1052(2003); 및 Cragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood 103: 2738-2743(2004)를 참조함). 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 방법을 사용하여 FcRn결합 및 생체내 클리어런스(in vivo clearance)/반감기를 측정할 수 있다(예를 들면, 문헌 Petkova, S. B. et al., Int'l. Immunol. 18(12): 1759-1769(2006)을 참조함).
저감된 효과기 기능을 가진 항체는, Fc 영역의 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329위치에서 하나 이상의 잔기가 치환된 것을 포함한다(미국 특허 제6,737,056호). 이러한 Fc변이체는 265, 269, 270, 297 및 327위치에서 2개 이상의 잔기가 치환된 Fc변이체를 포함하는 바, 265 및 297 위치의 잔기가 알라닌으로 치환되어 "DANA"로 불리우는 Fc변이체를 포함한다(미국 특허 제7,332,581호).
이러한 FcRs와 결합하는 능력이 향상되거나 저감된 항체 변이체가 이미 설명되어 있다(예를 들면, 미국 특허 제6,737,056호; WO 2004/056312, 및 문헌 Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604(2001)을 참조함).
일부 실시예에서, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체) 변이체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체 변이체는ADCC효과를 증강시킬수 있는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, Fc 영역 변이체는 ADCC효과를 증강시킬 수 있는 하나 이상의 아미노 치환을 포함하고, 이러한 치환된 위치는 Fc 영역의 298, 333 및/또는 334위치(EU잔기 번호)에 있다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체) 변이체는 Fc 영역의 S298A, E333A 및 K334A 위치의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시예에서, Fc 영역의 변화는 C1q결합 및/또는 보체 의존성 세포 독성(CDC)의 변화(즉, 증강 또는 저감)를 초래하고, 미국 특허 제6,194,551호, WO 99/51642, 및 문헌 Idusogie et al., J. Immunol. 164: 4178-4184(2000)에서의 기재를 참조한다.
일부 실시예에서, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체) 변이체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체 변이체는 하나 이상의 아미노산 치환을 가진 Fc 영역 변이체를 포함하여, 반감기를 연장하거나 Fc수용체(FcRn)에 대한 결합을 증강할 수 있다. 연장된 반감기 및 개선된 FcRn결합을 가진 항체에 대해서는 US 2005/0014934A1(Hinton 등)에 기재되어 있다. 이러한 항체 Fc 영역은 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하여, Fc 영역과 FcRn의 결합을 증강시켰다. 이러한 Fc변이체는 Fc 영역에서 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434위치의 잔기 중의 하나 이상의 치환을 포함하는 바, 예를 들면, Fc 영역 434위치의 잔기 치환을 포함한다(미국 특허 제7,371,826호임).
더불어, 문헌 Duncan & Winter, Nature 322: 738-40(1988); 미국 특허 제5,648,260호; 미국 특허 제5,624,821호 및 WO 94/29351에서 기타 Fc 영역 변이체의 예를 제공한다.
본 출원은 본 명세서에 기재된 어느 하나의 Fc변이체 또는 이의 조합을 포함하는 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 고려 대상으로 한다.
글리코실화 변이체
일부 실시예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 변화시킴으로써, 항 NGF항체의 글리코실화 정도를 증강시키거나 저감시킨다. 항 NGF항체 또는 이의 폴리펩티드 부분의 아미노산 서열을 변화시키는 것으로 하나 이상의 글리코실화 부위를 증가시키거나 제거(decrease)함으로써, 항-CD40 항체 상의 글리코실화 부위를 용이하게 첨가하거나 삭제할 수 있다.
여기서, 항-CD40 항체는 Fc 영역을 포함함으로써, 그에 연결된 당을 변화시킬 수 있다. 포유 동물 세포에서 생성되는 천연적인 항체는 통상적으로 분지형 바이안테나리 올리고당(biantennary oligosaccharide)을 포함하고, 상기 올리고당은 통상적으로N-연결을 통해 Fc 영역 CH2 도메인의 Asn297에 연결하는 바, 예를 들면, 문헌 Wright et al., TIBTECH 15: 26-32(1997)을 참조한다. 상기 올리고당은 다양한 당류(carbohydrates), 예를들면, 만노즈, N-아세틸글루코사민(GlcNAc), 갈락토오스 및 시알산, 그리고, 바이안테나리 올리고당 구조 "줄기(stem)"부의 GlcNAc에 연결된 푸코오스를 포함할 수 있다. 일부 실시예에서, 본 출원의 항-CD40 항체에 대해 올리고당 변형을 일으켜, 특정 특성이 개진된 항-CD40 항체 변이체를 생성할 수 있다.
Fc 영역의 CH2도메인에 연결된 N-글리칸은 이질적(heterogeneous)인 것이다. CHO 세포에서 생성된 항체 또는 Fc 융합 단백질은 푸코실트랜스퍼라제(fucosyltransferase)의 활성에 의해 푸코실화(fucosylated)되는 바, 문헌 Shoji-Hosaka et al., J. Biochem. 2006, 140: 777-83을 참조한다. 통상적으로, 인간 혈청에서 천연적으로 존재하는 소량의 어푸코실화된(afucosylated) IgGs이 검출될 수 있다. Fc 영역의 N-글리코실화는 그가 FcγR와의 결합에 대해 매우 중요하고; 어푸코실화된 N-글리칸은 Fc가 FcγRIIIa와의 결합력을 증강시켰다. FcRIIIa와 결합력이 증강한 것은, ADCC효과를 증강시킬 수 있는 바, 이는 세포 독성이 바람직한 특정 항체 치료 응용(antibody therapeutic applications)에 유리하다.
일부 실시예에서, Fc 매개-세포독성이 바람직하지 않은 경우, 증강된 효과기 기능(enhanced effector function)은 해로울 수 있다. 일부 실시예에서, Fc단편 또는 CH2도메인은 비글리코실화된 것이다. 일부 실시예에서, CH2도메인 중의 N-글리코실화 부위의 돌연변이를 일으킴으로써 그의 글리코실화를 방지한다.
일부 실시예에서, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체) 변이체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체 변이체는 Fc 영역을 포함하고, 여기서, Fc 영역에 연결된 당류 구조는 감소된 푸코오스 또는 결핍된 푸코오스를 갖고 있는 바, 이는 ADCC기능을 증강시킬 수 있다. 구체적으로, 본 명세서는 항-CD40 항체를 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체는 야생형 CHO세포에서 생성되는 동일한 항-CD40 항체에 비해 감소된 푸코오스를 갖고 있다. 즉, 상기 항-CD40 항체는, 천연 CHO세포(예를 들면, 야생형 글리코실화 형태를 생성하는 CHO세포, 천연 FUT8 유전자를 함유하는 CHO세포임)에서 생성되는 항체에 비해, 더 적은 양의 푸코오스를 갖고 있음을 특징으로 한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체의 N-연결 글리칸은 50%, 40%, 30%, 20%, 10% 또는 5% 미만인 푸코오스를 갖고 있다. 예를 들면, 상기 항-CD40 항체의 푸코오스 함량은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체의 N-연결 글리칸은 푸코오스를 포함하지 않는다. 즉, 여기서, 항-CD40 항체는 푸코오스를 전혀 포함하지 않거나 푸코오스가 없거나 또는 어푸코실화(afucosylated)된 것이다. 푸코오스의 함량은, MALDI-TOF질량 분석기로 측정된, Asn297에 연결된 모든 당구조(예를 들면, 복합, 혼성화 또는 만노즈 구조임)의 합계양에 대한, Asn297에 연결된 당사슬내 푸코오스의 평균 함량을 산출하는 것을 통해 결정된 것인 바, 예를 들면, WO 2008/077546에 기재된 바와 같다. Asn297은 Fc 영역 297위치에 위치한 아스파라긴 잔기(EU Fc 영역 잔기번호 체계)를 지칭한다. 하지만, 항체의 사소한 서열(minor sequence)이 변화됨에 따라, Asn297은 297위치의 상류 또는 하류 ±3개의 아미노산, 즉, 294에서 300위치에 이르는 구간에 위치할 수도 있다. 이러한 푸코실화(fucosylated) 변이체는 증강된 ADCC기능을 가질 수 있다. 예를 들면, 미국특허 공개 US 2003/0157108 (Presta, L.), US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)를 참조한다. "데코실화된(defucosylated)(fucosylated)" 또는 "푸코오스 결핍(fucose-deficient)"된 항체 변이체에 관한 출판물의 예로는, US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336: 1239-1249(2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614(2004)을 포함한다. 데푸코실화된 항체를 생성할 수 있는 세포주는, 단백질 푸코실화(protein fucosylation) 기능 결여 Lec13 CHO세포(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249: 533-545(1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11을 참조함), 그리고 예를 들면, α-1, 6-푸코실트랜스퍼라제 유전자 , FUT8유전자를 넉아웃한 CHO세포의 유전자 넉아웃 세포주(knockout cell lines)(Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614(2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4): 680-688(2006); 및 WO2003/085107를 참조함)를 포함한다.
항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체) 변이체는 이등분된 올리고당을 추가로 제공하는 바, 예를 들면, 여기서, 항-CD40 항체 Fc 영역에 연결된 바이안테나리 올리고당은 GlcNAc에 의해 등분된다. 이러한 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체) 변이체는 저감된 푸코실화 및/또는 증강된 ADCC기능을 가질수 있다. 이러한 항체 변이체의 예는 WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); 미국 특허 No. 6, 602, 684 (Umana et al.); US 2005/0123546 (Umana et al., 및 Ferrara et al., Biotechnology and Bioengineering, 93(5): 851-861 (2006)에 기재되어 있다. 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체) 변이체를 추가로 제공하는 바, 상기 항-CD40 항체 변이체는 Fc 영역에 연결된 올리고당에서 적어도 하나의 갈락토스 잔기가 포함되어 있다. 이러한 항-CD40 항체 변이체는 증강된 CDC기능을 가질 수 있다. 이러한 변이체는 예를 들면, WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.) ; 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)에 기재되어 있다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체) 변이체는 FcγRIII에 결합 가능한 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시예에서, Fc 영역을 포함하는 상기 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체) 변이체는 인간 효과기 세포(예를 들면, T세포) 존재 하에 ADCC활성을 가지거나 인간 효과기 세포 존재 하에 인간 야생형 IgG1 Fc 영역을 가진 기타 동일한 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)에 비해 증강된 ADCC활성을 가진다.
시스테인 엔지니어링 변이체
일부 실시예에서, 시스테인 엔지니어링화된 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 제조하는 것이 바람직하고, 상기 항체 중 하나 이상의 아미노산 잔기가 시스테인 잔기로 치환되었다. 일부 실시예에서, 잔기의 치환은 항-CD40 항체의 접근 가능한 부위(accessible sites)에 나타날 수 있다. 시스테인으로 상기 잔기를 치환할 경우, 활성을 가진 티올 작용기가 항-CD40 항체의 접근 가능한 부위에 위치하므로, 이것을 이용해 상기 항-CD40 항체와 기타 모이어티, 예를 들면, 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티를 결합시켜(conjugate), 본 명세서에서 추가로 기재된 항-CD40 면역 접합체를 제조할 수 있다. 시스테인 엔지니어링화된 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)는 예를 들면, 미국 특허 제7,521,541호에 기재에 따라 제조할 수 있다.
유도체
일부 실시예에서, 본 명세서에서 제공되는 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)는 추가로 변형되어, 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지되어 있고 용이하게 획득 가능한 기타 비-단백질 모이어티(non-proteinaceous moieties)을 포함할 수 있다. 항-CD40 항체의 유도체화(derivatization)에 적용되는 모이어티는, 수용성 중합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적 예로는, 폴리에틸렌글리콜(PEG), 에틸렌글리콜/프로필렌글리콜 공중합체, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌-무수말레산 공중합체, 폴리아미노산(호모폴리머 또는 랜덤공중합체), 덱스트란 또는 폴리(n-비닐피롤리돈) 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 호모폴리머, 프로필렌/에틸렌옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예를 들면, 글리세롤), 폴리비닐알코올 및 이들의 혼합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 폴리에틸렌글리콜프로피온알데히드는 수중에서 안정성을 갖고 있으므로, 제조에 유리하다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지형 또는 비-분지형일 수 있다. 항-CD40 항체에 연결되는 중합체의 수량은 변화 가능하고, 연결되는 중합체가 하나를 초과하는 경우, 이들의 중합체는 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 통상적으로, 유도체화(derivatization)에 사용되는 중합체의 수량 및/또는 유형은, 하기 고려 요소에 따라 확정될 수 있는 바, 그 요소는 개선하려는 항-CD40 항체의 특성 또는 기능, 항-CD40 항체 유도체가 특정된 조건에서 치료에 사용될 수 있는지 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
약물 조성물
본 명세서에서는 어느 하나의 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체), 항체를 코딩하는 핵산, 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터 또는 본 명세서에 기재된 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 조성물(예를 들면, 약물 조성물, 본 명세서에서는 제제라고도 칭함)을 추가로 제공한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체 및 약학적으로 허용가능한 벡터를 포함한 약물 조성물을 제공한다.
원하는 순도를 가진 항-CD40 항체를 선택적인 약학적으로 허용가능한 벡터, 부형제(excipients) 또는 안정화제(stabilizers)를 혼합시킴으로써(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.(1980)), 적절한 항-CD40 항체 제제를 획득할 수 있고, 동결건조 제제 또는 액체 제제의 형태로 제조될 수 있다. 허용가능한 벡터, 부형제 또는 안정화제는사용된 사용량과 농도에서 수용자에 대해 무독성적인 것으로, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산과 메티오닌을 포함한 항산화제; 방부제(예를 들면, 옥타데실디메틸벤질암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀; 부틸알코올 또는 벤질알코올; 메틸파라벤 또는 프로필파라벤과 같은 알킬파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올 및 m-크레졸); 저분자량(10개 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질 - 예를 들면, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린 -; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 글루코스, 만노즈 또는 덱스트린를 포함한 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 슈크로오스, 만니톨, 트레할로스(trehalose) 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염형성 반대 이온(salt-forming counter-ions); 금속 복합체(예를 들면, 아연-단백질 복합체); 및 / 또는 TWEENTM, PLURONICS?? 또는 폴리에틸렌글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제; 예시적인 제제는 WO98/56418에 기재된 바와 같고, 이의 전부 내용은 참조로서 명시적으로 본 출원에 인용된다. 피하투여에 적합한 동결건조 제제는 WO97/04801에 기재되어 있다. 이러한 동결건조 제제는 적절한 희석제를 사용하여 고단백질 농도의 제제로 재구성(reconstituted)될 수 있고, 재구성된 제제는 피하투여의 형태로 본 출원의 치료 대상 개체에게 투여된다. 리포펙틴(lipofectins) 또는 리포솜(liposomes)은 본 출원의 항-CD40 항체를 세포에게로 전달하는데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 제제는 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체) 외에, 1종 이상의 특정 병증의 치료에 필요되는 기타 활성 물질을 추가로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 상호 보완적인 활성을 가지고 서로에게 불리한 반응을 일으키지 않는 활성 물질이다. 예를 들면, 항-CD40 항체 외에, 면역 억제제, 면역 조정제 또는 항염제를 추가로 포함하여야 한다. 이러한 분자는 예기한 목적에 효과적인 양의 조합으로 존재한다. 기타 물질의 유효량은 제제 중 항-CD40 항체의 함량, 질환 또는 병증 또는 치료의 유형, 그리고 상술한 기타 요소에 의해 결정된다. 이러한 약물은 통상적으로 본 명세서에 기재된 동일한 사용량 및 투여 경로로 사용하거나 현재 사용된 투여량의 1% 내지 99%로 이용된다.
상기 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)는예를 들면, 각각 콜로이드성 약물 전달 체계(예를 들면, 리포솜, 알부민마이크로스페어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼에 들어있는 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐과 같은, 코아세르베이션 기술(coacervation techniques) 및 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐에 포획될 수도 있고, 서방성 제제로 제조될 수도 있다.
항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)의 서방성 제제를 제조할 수 있다. 서방성 제제의 적절한 예로는 항체 (또는 이의 단편)를 함유하는 고체 소수성 중합체 반투과성 매트릭스를 포함하고, 이러한 매트릭스는 성형품의 형태, 예를 들면, 필름 또는 마이크로캡슐이다. 서방성 매트릭스의 예로는, 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들면, 폴리(2-하이드록시에틸메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, LUPRON DEPOTTM(락트산-글리콜산 공중합체와 류프롤라이드아세테이트(leuprolide acetate)로 구성된 주사 가능한 마이크로스페어)과 같은 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 폴리-D(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산을 비롯한 중합체는 분자의 방출이 100일을 초과하도록 할 수 있지만, 특정 하이드로겔은 더 짧은 기간 내에 단백질을 방출할 수 있다. 캡슐화된 항체는 생체내에서 장기간 남아 있으면, 37 
의 습한 환경에 노출되어 변질되거나 응집되어(denature or aggregate), 생물 활성을 상실하거나 면역원성의 변화가 발생할 수 있다. 관련된 메커니즘에 따라, 합리적인 전략을 설계하여 항-CD40 항체를 안정화시킨다. 예를 들면, 응집 메커니즘에서 티오-디설파이드 교환(thio-disulfide interchange)에 의해 분자 간의 S-S결합이 형성됨을 발견한 경우, 설프하이드릴(sulfhydryl) 잔기의 변형, 산성 용액에서의 동결건조, 수분 함유량의 제어, 적당한 첨가제의 사용, 및 특정 폴리머 매트릭스 조성물의 개발 등을 통해 안정화를 실현할 수 있다.
일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)는, 구연산염, 염화나트륨, 아세트산염, 숙신산염, 글리신, 폴리소르베이트 80(Tween 80) 또는 상술한 임의의 조합을 함유하는 완충액에 제제화(formulated)된다.
생체내에 투여하는 제제는 반드시 무균상태여야 한다. 이것은, 예를 들면, 무균 여과막을 사용하여 여과하는 것으로 용이하게 달성할 수 있다.
항-CD40 항체를 사용하는 치료방법
항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체) 및/또는 본 출원에 기재된 조성물은 개체(예를 들면, 인간과 같은 포유 동물)에게 투여되어, CD40신호 경로 실조에 기인한 질환 및/또는 병증(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)를 치료할 수 있는 바, 이러한 질환은, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직 이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군, 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변증, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, 본 출원의 일부 실시예에서 CD40신호 경로 실조에 기인한 질환 및/또는 병증(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 개체에게 유효량의 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 포함하는 조성물(예를 들면, 약물 조성물)을 투여하는 것, 예를 들면, 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 투여하는 것을 포함하고, 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40신호 경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)이 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 인간 CD40상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함하는 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 에피토프는 인간 CD40의 아미노산 잔기이다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직 이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군 , 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변증, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함하는 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는, GYX1VN (SEQ ID NO: 81)을 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1 - 여기서, X1은 L, T 또는 V임 -; X1IX2PX3X4GX5TX6YNQKFKG (SEQ ID NO: 82)를 포함하는 HC-CDR2 - 여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 A, N 또는 V이며, X3은 E, K, L, M, R, S, T 또는 Y이고, X4는 H, N, S 또는 T이며, X5는 G 또는 R이고, X6은 A, S, T 또는 W임 -; 및 SX1X2X3X4PYAX5DY (SEQ ID NO: 83)를 포함한 HC-CDR3 - 여기서, X1은 G, I, L, M, P, R, S 또는 Y이고, X2는 W 또는 Y이며, X3은 S 또는 V이고, X4는 D, K, L, N, R, T 또는 V이며, X5는 A, G, M, N, Q 또는 S임 -을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과; KASQNVHTX1VA (SEQ ID NO: 84)를 포함한 LC-CDR1 - 여기서, X1은 A, H, N 또는 R임 -; LX1SDRRT (SEQ ID NO: 85)를 포함한 LC-CDR2 - 여기서, X1은 A 또는 R임 -; 및 LQX1WX2X3PLT(SEQ ID NO: 86)를 포함한 LC-CDR3 - 여기서, X1은 A 또는 H이고, X2는 N, S 또는 T이며, X3은 A, Q, R, S 또는 Y임 -; 을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은, 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군 , 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 -비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이관련 질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함하는 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NOs: 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1, SEQ ID NOs: 9 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2 및SEQ ID NOs: 32 내지 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는, HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, SEQ ID NOs: 58 내지 61 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1, SEQ ID NOs: 65 내지 66 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2 및 SEQ ID NOs: 70 내지 77 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, CD40신호 경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와; SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, IgG1 또는 IgG4불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 9를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 58을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 10을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 73을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이한다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 20을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 42를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 14를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 43을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 51을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 11을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 48을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 18을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 47을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다. 일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함한 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH) 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL) 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은, 예를 들면, 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -,장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군 , 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NO: 120으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 139로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 139로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함한 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 5를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 54를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH) 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL) 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은, 예를 들면, 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군, 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 140로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 140로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함한 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 6을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 28을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 55를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH) 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 63을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL) 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은, 예를 들면, 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군, 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NO: 122로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 122로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함한 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 29를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 56을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH) 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 64를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 69를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL) 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은, 예를 들면, 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군 , 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NO: 123으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 123으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 142로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 142로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함한 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 30을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 57을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH) 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL) 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은, 예를 들면, 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부: 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병, 다발성 경화증, 고IgE 증후군 , 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는 종양, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NO: 124로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 124로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 143으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 143으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
예를 들면, 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를 포함한 유효량의 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 항체는, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 31을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH) 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL) 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함한다. 일부 실시예에서, 상기 항-CD40 항체는 전장 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 전장 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4항체이다. 일부 실시예에서, 상기 질환 또는 병증은, 예를 들면, 예를 들면, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군 , 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다.
일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 개체를 위한 치료 방법을 제공하는 바, 상기 치료 방법은, 상기 개체에게, 항-CD40 항체를 포함한 유효량의 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 여기서, 상기 항체는, SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 144로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 144로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함한다.
일부 실시예에서, 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체는 IgG1 또는 IgG4 불변 영역을 포함하는 전장 항-CD40 항체이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG1은 인간 IgG1이다. 일부 실시예에서, 상기 IgG4는 인간 IgG4이다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 145를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 중사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 146을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 147을 포함하거나 이로 구성된다. 일부 실시예에서, 경사슬 불변 영역은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 148을 포함하거나 이로 구성된다.
일부 실시예에서, 상기 개체는 포유 동물(예를 들면, 인간, 비-인간 영장류, 레트, 마우스, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이 등)이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 인간이다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 임상환자, 임상실험 자원봉사자, 실험동물 등이다. 일부 실시예에서, 상기 개체의 나이는 60세 미만(예를 들면, 50, 40, 30, 25, 20, 15 또는 10세 미만을 포함함)이다. 일부 실시예에서, 상기 개체의 나이는 60세를 초과한다(예를 들면, 70, 80, 90 또는 100세를 초과함). 일부 실시예에서, 상기 개체는 본 명세서에 기재된 1종 이상의 질환 또는 병증(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)으로 앓고 있는 것으로 진단되었거나, 유전학적으로 이환할 가능성이 높다. 일부 실시예에서, 상기 개체는 본 명세서에 기재된 1종 이상의 질환 또는 병증에 관련되는 1종 이상의 리스크 인자를 갖고 있다.
일부 실시예에서, 본 출원은 개체에게 항-CD40 항체(예를 들면, 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체, 예를 들면, 단리된 항-CD40 항체)를 전달하는 방법을 제공하는 바, 상기 항체는, 표면에서 CD40을 발현하는 개체의 세포에게로 전달되고, 상기 방법은 해당 개체에게 항-CD40 항체를 포함한 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환 또는 CD40의 이상 발현을 나타낸 기타 임의의 질환에 대한 다양한 진단 방법 및 이러한 질환에 대한 임상 설명(clinical delineation)에 대해서는 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 이러한 방법은, 예를 들면, 면역조직화학, PCR 및 형광제자리부합법(fluorescent in situ hybridization, FISH)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 실시예에서, 본 출원에 따른 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체) 및/또는 조성물은 제2, 제3 또는 제4 약제(예를 들면, 면역억제제 및/또는 면역조정제 및/또는 항염제)와 병용하여 CD40 신호경로 관련 질환을 치료한다.
항-CD40 항체의 면역 억제 활성의 방법은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 예를 들면, 약물의 개입이 있거나 없는 경우, 생체내 이식 장기의 생존 기간으로 면역반응의 억제 효과를 정량 평가하는 것이다. 또한, 생체외 측정, 예를 들면, 혼합림프구반응(Mixed Lymphocyte Reaction, MLR)을 이용한 측정(예를 들면, 문헌 Fathman등, J. Immunol. 118: 1232-8, 1977을 참조함); CD3 측정(항 CD3 항체(예를 들면, OKT3)에 의해 특이적으로 면역세포를 활성화함)(예를 들면, 문헌 Khanna 등, 이식 67: 882-9, 1999년; Khanna 등 (1999) 이식 67: S58을 참조함); 및 IL-2R 측정(외원성으로 첨가된 사이토카인 IL-2가 면역세포에 대하여 특이적으로 활성화함)(예를 들면, 문헌 Farrar 등, J. Immunol. 126: 1120-5, 1981을 참조함)을 이용할 수 있다.
자가면역질환 및/또는 염증성질환에 대한 항-CD40 항체의 치료 효과를 평가하는 방법은 본 출원이 속하는 기술분야에서 기지된 것이다. 유익한 치료 효과는 치료받는 피험자의 염증성사이토카인, 접착분자, 프로테아제, 면역글로불린, 또는 그들 조합의 수준이 저감되고, 항염 단백질의 생성이 증가되며, 자가반응성 세포의 수량이 감소되고, 면역내성이 증가되며, 자가반응성 세포의 생존에 대한 억제, 및/또는 CD154가 CD40을 발현하는 세포 자극에 의해 매개되는 1종 이상의 증상의 약화를 포함한다. 항-CD40 항체의 투여는 약물 투여 경로에 의해 제한되지 않으며, 공여체, 공여체 조직(예를 들면, 장기 관류), 숙주, 또는 그의 조합 등에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.
임상반응은 자기공명영상(MRI) 스캔, x선사진영상, 컴퓨터단층촬영(CT) 스캔, 유동 세포 분석 또는 형광 활성화 세포 분류기(FACS) 분석, 조직학, 대체병리학 및 혈액화학과 같은 스크리닝 기술을 사용하여 평가할 수 있고, ELISA, RIA, 크로마토그래피 등에 의해 검출될 수 있는 변화를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다.
항-CD40 항체의 투여 사용량 및 방법
개체(예를 들면, 인간)에게 투여하는 항-CD40 항체(예를 들면, 단리된 항-CD40 항체) 조성물의 사용량은 특정 조성물, 투여방식 및 치료할 질환의 유형이 다름에 따라 다를 수 있다. 일부 실시예에서, 조성물(예를 들면, 항-CD40 항체를 포함한 조성물)의 양은 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환의 치료에서 객관적인 응답(response, 예를 들면, 일부 응답 또는 완전 응답)을 효과적으로 일으킬 수 있다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체 조성물의 양은 개체에서 완전 응답을 일으키기에 충분하다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체 조성물의 양은 개체에서 일부 응답을 일으키기에 충분하다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체 조성물의 투여량(예를 들면, 단독 투여시)은 항-CD40 항체 조성물을 사용하여 치료하는 개체 군에서 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 64%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 또는 90%를 초과한 총 반응률을 일으키기에 충분하다. 본 명세서에 기재된 치료방법에 대한 개체의 응답에 대해서는, 예를 들면, 염증성 사이토카인의 감소를 통해 확정활 수 있다.
일부 실시예에서, 조성물(예를 들면, 단리된 항-CD40 항체를 포함한 조성물)의 양은 개체의 무진행생존기간를 연장하기에 충분하다. 일부 실시예에서, 조성물의 양은 개체의 전체생존기간을 연장하기에 충분하다. 일부 실시예에서, 항-CD40 항체 조성물를 사용하여 치료하는 개체 군에서, 조성물의 양(예를 들면, 단독 투여시)은 50%, 60%, 70% 또는 77%를 초과한 임상 유익점을 일으킬 수 있다.
일부 실시예에서, 조성물(예를 들면, 단리된 항-CD40 항체를 포함한 조성물)의 양은, 단독 사용 또는 제2 , 제3, 및/또는 제4 약제와 병용시, 동일한 피험자의 치료전에 비해 또는 치료를 받지 않은 기타 피험자의 해당 질환 파라미터에 비해, 증상의 중증도, 증상의 양 또는 재발의 빈도가 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 완화되거나 약화되기에 충분하다. 예를 들어 생체외 검사, 세포 기반 검사, 동물 모델 또는 인체 실험과 같은 표준 방법을 이용해 상기 치료 효과의 정도를 측정할 수 있다.
일부 실시예에서, 조성물을 개체에게 투여시, 조성물 중 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)의 양은 독성효과(즉, 임상에서 허용가능한 독성 수준을 초과한 효과)를 일으키는 수준보다 낮거나 잠재적인 부작용이 제어 가능하거나 극복 가능한 수준에 처한 양이다.
일부 실시예에서, 동일한 투여 방안에 따라, 조성물의 양은 조성물의 최대 내성량(maximum tolerated dose, MTD)에 접근한다. 일부 실시예에서, 조성물의 양은 MTD의 80%, 90%, 95% 또는 98%보다 많다.
일부 실시예에서, 조성물 중 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)의 함량은 0.001 μg 내지 1000 μg의 범위내에 있다.
상술한 어느 하나의 실시예에서, 조성물 중 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)의 유효량은, 체중을 기준으로 계산시, 0.1 μg/kg 내지 100Mg/kg의 범위내에 있다.
항-CD40 항체 조성물은 다양한 경로를 통해 개체(예를 들면, 인간)에게 투여할 수 있는 바, 상기 투여 경로는 예를 들면, 정맥주사, 동맥내투여, 복강주사, 폐내투여, 경구투여, 흡입투여, 혈관내투여, 근육주사, 기관지내투여, 피하주사, 안내투여, 경막내투여, 경점막투여 또는 경피투여를 포함한다. 일부 실시예에서, 조성물의 서방성 제제를 사용한다. 일부 실시예에서, 조성물은 정맥을 통해 투여한다. 일부 실시예에서, 조성물은 동맥을 통해 투여한다. 일부 실시예에서, 조성물은 복막내로 투여한다. 일부 실시예에서, 조성물은 간내로 투여한다. 일부 실시예에서, 조성물은 간동맥을 통해 주입/주사 투여한다. 일부 실시예에서, 조성물은 최초 질병 부위(first disease site)로부터 원격한 부위에 투여한다.
제품 및 테스트 키트
본 출원의 일부 실시예에서, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)을 치료하는데 사용되거나 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를, 표면에서CD40를 발현하는 세포에게로 전달하는데 유용하는 물질을 포함하는 제품을 제공한다. 상기 제품은 용기와, 용기에 부착되거나 용기 포장에 첨부된 라벨 또는 사용설명서(package insert)가 포함될 수 있다. 적절한 용기로는, 예를 들면, 병, 바이알, 주사기 등을 포함한다. 용기는, 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 제조될 수 있다. 통상적으로, 상기 용기에는 본 명세서에 기재된 질환 또는 병증을 효과적으로 치료할 수 있는 조성물이 담겨져 있고, 하나의 멸균 접근 포트(예를 들면, 상기 용기는 정맥내 수액 주머니(intravenous solution bag) 또는 피하투여용 주사침을 꽂을 수 있는 마개를 가진 바이알일 수 있음)를 가진다. 일부 실시예에서, 조성물 중의 적어도 1종의 활성물질은 본 출원에 기재된 항-CD40 항체이다. 라벨 또는 첨부된 사용 설명서(package insert)에는 상기 조성물에 의한 치료에 적용되는 특정 병증(particular condition)이 표시되어 있다. 라벨 또는 첨부된 사용 설명서에는 환자를 위한 항-CD40 항체 조성물의 투여 지침서가 추가로 포함되어 있다. 병용 요법을 위한 제품 및 테스트 키트를 포함한 모든 것들도 본 출원의 고려 범위 내에 있다.
첨부된 사용 설명서는 통상적으로 치료 제품의 상업용 포장에 첨부된 설명서를 지칭하는 바, 상기 첨부된 사용 설명서에는 상기 치료 제품의 사용에 관련된 적응증, 용법, 사용량, 투여, 금기 및/또는 경고 등 정보가 포함되어 있다. 일부 실시예에서, 첨부된 사용 설명서는 해당 조성물이 CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)의 치료하는데 사용될 수 있음을 명시하였다. 일부 실시예에서, 첨부된 설명서에 해당 조성물이 하기 질환의 치료에 적용 가능함이 명시되어 있다. 즉, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군 , 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 -비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증을 포함한다.
또한, 상기 제품은 예를 들면, 주사용 정균수(bacteriostatic water for injection, BWFI), 인산염 완충액, 링거 용액 또는 덱스트로스(dextrose) 용액과 같은 약학적으로 허용가능한 완충액을 담은 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 상기 제품은, 또한, 상업적으로 또는 사용자 관점에서 원하는 기타 완충액, 희석액, 여과기, 침 및 주사기를 포함한 기타 재료를 추가로 포함할 수 있다.
본 출원은, 또한, 다양한 목적으로 사용되는 테스트 키트를 추가로 제공하는 바, 예를 들면, CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)의 치료에 사용되거나 항-CD40 항체(예를 들면, 전장 항-CD40 항체)를, 표면에서 CD40를 발현하는 세포에게로 전달하는데 사용되는 것이고, 임의로 선택하여 제품과 조합하여 사용할 수 있다. 본 출원의 테스트 키트는 항-CD40 항체 조성물(또는 단위 제형 및/또는 제품)이 담긴 하나 이상의 용기를 포함하고, 일부 실시예에서는, 다른 일종 약물(예를 들면, 본 명세서에 기재된 약물) 및/또는 본 명세서에 기재된 어느 하나의 방법과 일치하는 사용 설명서가 추가로 포함되어 있다. 상기 테스트 키트는 치료에 적합한 개체의 선택에 대한 묘사가 추가로 포함할 수 있다. 본 출원의 테스트 키트에는 첨부된 사용 설명서는 통상적으로 라벨 또는 첨부된 사용 설명서 상의 서면 지침(예를 들면, 테스트 키트에 첨부된 지면를 포함함)이고, 기계판독 가능한 지침(예를 들면, 자기 또는 광 저장 디스크에 저장된 지침)도 허용된다.
예를 들면, 일부 실시예에서, 테스트 키트는 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 포함하는 조성물을 포함한다. 일부 실시예에서, 테스트 키트는, a) 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체를 포함하는 조성물과, b) 항-CD40 항체의 효과(예를 들면, 치료효과, 검출효과)를 증강시킬 수 있는 적어도 1종의 유효량의 기타 약제를 포함한다. 일부 실시예에서, 테스트 키트는, a)본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체를 포함하는 조성물과, 개체에게 항-CD40 항체 조성물을 투여하여 CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)을 치료하는데 사용되는 사용 설명서를 포함한다. 일부 실시예에서, 테스트 키트는, a) 본 명세서에 기재된 어느 하나의 항-CD40 항체를 포함하는 조성물과, b) 항-CD40 항체의 효과(예를 들면, 치료 효과, 검출효과)를 증강시킬 수 있는 적어도 1종의 유효량의 기타 약제와, c) 개체에게 항-CD40 항체 조성물 및 기타 물질을 투여하여 CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)을 치료하는데 사용되는 사용 설명서를 포함한다. 상기 항-CD40 항체와 기타 물질은 별도의 용기 또는 동일한 용기에 존재할 수 있다. 예를 들면, 상기 테스트 키트는 일종의 특정 조성물을 포함할 수도 있고, 2종 이상의 조성물을 포함할 수도 있으며, 그 중 일종의 조성물에 항-CD40 항체가 포함되어 있고, 다른 일종의 조성물에 다른 일종의 약제가 포함되어 있다.
일부 실시예에서, 테스트 키트는 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 코딩하는 일종(또는 일 세트)의 핵산을 포함한다. 일부 실시예에서, 테스트 키트는, a) 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 코딩하는 일종(또는 일 세트)의 핵산과, b) 핵산(또는 일 세트의 핵산)을 발현하는 일종의 숙주 세포를 포함한다. 일부 실시예에서, 테스트 키트는, a) 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 코딩하는 일종(또는 일 세트)의 핵산과 b) 사용 설명서를 포함하고, 상기 사용 설명서는, i) 숙주 세포에서 항-CD40 항체를 발현하는 것, ii) 항-CD40 항체를 포함한 조성물을 제조하는 것, 및 iii) 개체에게 항-CD40 항체를 포함한 조성물을 투여하여 CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)을 치료하는 것에 적용된다. 일부 실시예에서, 테스트 키트는, a) 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 코딩하는 일종(또는 일 세트)의 핵산, b) 일종 핵산(또는 일 세트의 핵산)을 발현하는 숙주 세포, 및 c)사용 설명서를 포함하고, 상기 사용 설명서는, i) 숙주 세포에서 항-CD40 항체를 발현하는 것, ii) 항-CD40 항체를 포함한 조성물을 제조하는 것, 및 iii) 개체에게 항-CD40 항체를 포함한 조성물을 투여하여 CD40 신호경로 관련 질환(예를 들면, 자가면역성질환 및/또는 염증성병증 및/또는 암 및/또는 이식관련질환)을 치료하는 것에 적용된다.
본 출원에 기재된 테스트 키트는 적절한 형태로 포장된다. 적절한 포장은 바이알, 병(bottles), (아가리가 넓은 jars)병, 유연성 포장(예를 들면, 밀봉된 폴리에스테르 필름 또는 플라스틱백) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 테스트 키트는 완충액, 해석 정보(interpretative information)와 같은 추가 구성 요소(additional components)를 임의로 선택하는 것을 통해 제공할 수 있다. 따라서, 본 출원은 바이알(예를 들면, 밀봉된 바이알), 병(bottles), (아가리가 넓은 jars)병, 유연성 포장(예를 들면, 밀봉된 폴리에스테르 필름 또는 플라스틱백) 등과 같은 제품을 추가로 제공한다.
항-CD40 항체 조성물에 관한 사용 설명서에는, 통상적으로 사용량, 투여주기 및 투여경로 등과 같은 일련의 정보가 포함되어 있다. 용기는 단위 사용량, 벌크 포장(bulk packages, 예를 들면, 다중 사용량 포장(multi-dose packages)) 또는 서브유닛 사용량으로 된 것이다. 예를 들면, 충분한 사용량의 본 명세서에 기재된 항-CD40 항체(예를 들면, 전장의 항-CD40 항체)를 포함하는 테스트 키트를 제공함으로써, 개체에게 장기간 효과적인 치료를 제공하는 바, 예를 들면, 1주, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 3주, 4주, 6주, 8주, 3개월, 4개월, 5개월, 7개월, 8개월, 9개월 또는 그 이상 시간 동안 효과적이다. 테스트 키트는 또한 다중 단위 사용량의 항-CD40 항체, 약물 조성물 및 사용 설명서를 포함할 수도 있으며, 병원 약국 그리고 조제 약국과 같은 약국에서 보관하거나 사용하기에 충분한 양으로 포장된다.
본 출원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면, 본 출원의 범위 및 취지 내에서 여러 가능한 실시예를 알게 될 수 있다. 이제, 아래의 비제한적 실시예를 참조하여 본 출원을 더욱 상세하게 설명할 것이다. 본 출원은 아래의 실시예로부터 더욱 명확하게 이해될 수 있을 것이지만, 본 출원의 범위는 그 어떤 방식에 의해 제한된 것으로 해석되어서는 안된다.
구체적인 실시예
아래에 공개된 실시예에서, 하기 약어가 적용된다. CD40 (Clusters of differentiation 40, 분화 클러스터 40); Bavih-hCD40(Biotin-hCD40-Avi-10His)
실시예 1: 재조합CD40/CD40L의 제조 및 항-CD40 단일사슬 항체(scFv)의 스크리닝
재조합 CD40세포외 영역/CD40L항원의 제조
서브클로닝을 통해 인간 CD40(human CD40, hCD40) 세포외 영역(Shanghai Generay Biotech Co.,Ltd에 의해 합성됨)을 포유 동물 세포발현벡터에 구축하여, 293F세포에서 발현한다. 인간 CD40 세포외 영역에 His태그, 마우스 Fc태그, 인간 Fc태그, Avi태그 또는 본 출원이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자들이 통상적으로 사용하는 기타 태그를 각각 첨가하고, 상기 몇가지 형태의 재조합 CD40세포외 영역 항원을 함유하는 융합 단백질을 구축하고 발현하는 바, 상기 융합 단백질은 CD40-His, CD40-Avi-His, CD40-mFc 및 CD40-hFc을 포함한다. 여기서, "his 또는 His"는 His태그를 대표하고, "mFc"는 마우스 Fc태그를 대표하며, "hFc"는 인간 Fc태그를 대표하고, "Avi"는 아비딘(Avidin) 태그를 대표한다.
상기 방법과 같이, 붉은털원숭이 CD40(Rhesus Monkey CD40, RheCD40) 세포외 영역의 재조합 발현 벡터를 구축하고 그를 293F세포에서 발현시킨다.
또한, 서브클로닝를 통해 인간 전장 CD40L(Nanjing Genscript Biotech Co., Ltd.에 의해 합성됨)를 포유 동물 세포발현벡터에 구축하고, 그를 293F세포에서 발현시킨다. 인간 CD40L에 Fc태그 또는 본 출원이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자들이 통상적으로 사용하는 기타 태그를 첨가한다. 이량체 형태의 재조합Fc-CD40L융합 단백질(본 명세서에서는 Fc-3*G4S-CD40L로 명명함)을 구축하여 형성시킨다.
제조업체의 프로토콜에 따라, 재조합 CD40세포외 영역 또는 CD40L융합 단백질을 발현하고 정제하는 바, 상기 융합 단백질은 인간 또는 붉은털원숭이 CD40-His, CD40-Avi-His, CD40-mFc, CD40-hFc 및 Fc-3*G4S-CD40L를 포함한다. 간단히 말하자면, 상기 융합 단백질 유전자를 함유하는 발현벡터를 293F세포에 각각 형질주입하고, 상기 세포를 37 
, 5% CO2, 120 rpm조건에서 5일 동안 배양한다. 세포 배양액을 각각 수집한다.
제조업체의 프로토콜에 따라, 니켈 컬럼(Ni)을 사용하여 His태그를 가진 재조합 단백질을 정제한다. 구체적인 작업은 다음과 같다. 즉, QIAGEN회사의 Ni-NTA를 사용하여 고정화 금속 친화성 크로마토그래피(Immobilized Metal Affinity Chromatography, IMAC)를 수행한다. 우선, 완충액 A1(Na3PO4 50 mM, NaCl 0.15 M, pH7.2)을 사용하여 유속 150 cm/h로 니켈 컬럼을 평형화(equilibration)시키고, pH를 7.2로 조정된 배양액 상등액을 실온에서 유속 150 cm/h로 컬럼에 통과시킨다(flowed through the column). 이어서, 6배의 컬럼부피의 A1완충액을 사용하여 유속 150 cm/h로 상기 컬럼을 재평형화시킨다. 마지막에, 10배의 컬럼부피의 PB용액(NaCl 0.15 M과 이미다졸0.2M를 포함함, pH 7.2) 50 mM를 사용하여 용출하여, 용출액을 수집한다.
프로토콜에 따라, 단백질A 수지를 사용하여 Fc태그를 가진 융합 단백질을 정제한다. 구체적인 작업은 다음과 같다. 즉, 우선, 6배의 컬럼부피의 PBS완충액(PBS 50 mM와 NaCl 0.15 M을 포함함, pH7.2)을 사용하여 유속 150 cm/h로 단백질A 컬럼을 평형화시킨다. 배양액 상등액 pH를 7.2로 조절하고, 실온에서 유속 150 cm/h로 컬럼에 통과시킨다. 완전히 평형화된 후, 구연산나트륨염 50 mM(pH3.5)을 첨가하여 용출하고, 용출액을 수집한다.
바이오틴화 CD40세포외 영역 항원의 제조
프로토콜에 따라, 바이오틴 연결효소 B0101A(GeneCopoeia)를 사용하여 hCD40-Avi-His를 바이오틴화 라벨링한다.간단히 말하자면, hCD40-Avi-His에 BufferA/B 및 BirA연결 효소를 첨가한 후 30℃에서 2시간 인큐베이션한다. 바이오틴화된 hCD40-Avi-His를 Bavih-hCD40로 명명한다. ELISA방법을 통해 바이오틴화 효율을 검출하고, 바이오틴화 효율이 적어도 70%임을 확인한다.
항-CD40 단일사슬 항체(scFv)의 스크리닝
scFv항체 파지 디스플레이 라이브러리의 구축: 인간 CD40 세포외 영역을 항원으로 하여 보조제와 함께 사용하여 Balb/c마우스를 면역화시키고, 면역화된 동물 혈청을 채취하고, ELISA로 IgG 타이터(titer)를 검출한다. 복수회 면역화시킨 후, 말초혈액, 림프절 및 비장을 사용하여, 파지 디스플레이 라이브러리를 구축한다. 간단히 말하자면, 면역화된 마우스의 말초혈액, 림프절 및 비장을 채취하고, RNA를 추출하며, 역전사를 통해 cDNA를 획득한다. VH와 VK 특이성 프라이머(primers)를 사용하여 VH와 VK 단편을 증폭시키고, 젤에 통과시켜 회수 정제한 후, VH와 VK에 연결하고, scFv를 구축하여 그를 파지 디스플레이 플라스미드 pDAN5에 클로닝한다. 전기 천공법을 사용하여 scFv를 발현하는 플라스미드를 TGl 수용성 세포(TG1 competent cells)에 도입하여, scFv항체 파지 디스플레이 라이브러리를 획득한다.
항-CD40 단일사슬 항체 (scFv)의 스크리닝: 일련의 반복 스크리닝 단계를 거쳐, 파지 디스플레이 라이브러리에서 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 scFv항체를 단리하여 획득한다. 간단히 말하자면, 파지 scFv라이브러리 2×1011 PFU를 채취하여 Bavih-hCD40에 첨가하고, 37 ℃에서 2시간 인큐베이션한다. hCD40에 결합하는 파지는 스트렙타비딘이 피복된 자기 구슬에 의해 포획되고, 미결합된 파지는 세척에 의해 제거된다. TBST용액을 사용하여 8 내지 15번 세척(스크리닝 횟수가 증가됨에 따라, 세척 횟수가 증가됨)한 후, Glycine-HCl 용액 (pH2.2)을 사용하여 hCD40에 특이적으로 결합하는 파지를 용출시킨다. 이러한 파지로 지수성장기의 TG1세포를 감염시키고, 암피실린을 첨가하여 1시간 배양시킨 후, 보조 파지를 첨가하고, 28 ℃, 200 rpm에서 밤새 쉐이킹 배양한다. 다음날에 배양액을 수집하고, 원심분리 후 상등액을 획득하고, 다음 회의 스크리닝에 진입하되, 양성 scFv항체 라이브러리를 획득할 때까지 수행한다.
ELISA를 이용한 CD40단일사슬 항체(scFv)의 스크리닝: MACS를 패닝하여 풍부화된 파지에 대해 ELISA스크리닝을 수행한다. 간단히 말하자면, 인간 CD40항원을 PBS용액에 용해시키고, 0.1 μg/웰에 따라 96웰 플레이트를 피복시키고, 4 ℃에서 밤새 방치한다. 항체를 첨가하기 전에, PBST용액을 사용하여 96웰 플레이트를 세척한다. 각 웰에 4% 탈지 분유를 함유하는 PBS 90 μL를 첨가하고, 이어서 대응하는 웰에 phage-scFv 발현 상등액 10μL를 첨가하며, 37℃에서 1 내지 2시간 인큐베이션한다. PBST용액을 사용하여 세척한 후, HRP로 라벨링된 항-M13 1차 항체(Sino Biological, 11973-MM05T-H)를 100 μL/웰 첨가하고, 37℃에서 1h 인큐베이션한다. PBST로 플레이트를 3번 세척하고, TMB발색액 100 μL/웰 첨가하며, 실온의 어둠 속에서 10 min 인큐베이션한다. 2M H2SO4을 사용하여 발색 반응을 종료하고, 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader)를 사용하여 450 nm에서의 흡광도를 판독한다. 양성 클론균(Positive phages)을 골라 시퀀싱하고, 시퀀싱이 정확한 양성 클론균(Positive phages)을 증폭 배양한 후, 파지 디스플레이 플라스미드를 추출하고, 사용을 위해 준비한다. 스크리닝 공정이 종료된 후, 일련의 양성 scFv항체를 획득한다.
실시예 2: 전장의 CD40키메릭 항체의 제조 및 특성화
전장의 항-CD40 키메릭 항체의 제조
획득된 양성 scFv항체로 인간 IgG1 또는 IgG4를 가진 중사슬 불변 영역과 kappa경사슬 불변 영역을 가진 키메릭 항체 분자를 재구성한다. 파지 발현 벡터로부터 VL와 VH를 증폭시켜, 진핵 발현 벡터 pTT5-L(kappa 경사슬 불변 영역을 포함함) 및 pTT5-H1(IgG1 중사슬 불변 영역을 포함함) 또는 pTT5-H4(IgG4 중사슬 불변 영역을 포함함)에 각각 도입하여 구축한다. 별도로 추출된 경사슬 또는 중사슬 발현 플라스미드를, 293F세포에 공동 형질주입시켜, 37 ℃, 8% CO2, 120 rpm에서 5일 동안 배양하고, Protein A친화성 크로마토그래피 컬럼을 사용하여 배양액을 정제한다. 간단히 말하자면, 우선, 6배 컬럼 부피의 PBS완충액(0.15 M NaCl을 포함함, pH7.2) 50 mM를 사용하여 150 m/h의 유속으로 단백질A 컬럼을 평형화시킨다. 배양액 상등액(pH7.2로 조정함)을 150 cm/h유속으로 컬럼에 통과시킨다. 상기 컬럼을 재평형화시키고, 50 mM구연산 나트륨염 완충액(pH3.5)을 사용하여 용출시키고, 용출액을 수집한다. 획득된 전장 항체에 대해 생화학 및 생물 활성 분석을 추가로 수행한다.
HEK-BlueTM CD40L NF-κB 활성화 실험: HEK-BlueTM CD40L 세포주(InvivoGen)는 인간 CD40 및 NF-κB 유발 분비형 배아 알칼리성 포스파타제(embryonic alkaline phosphatase, SEAP)를 안정적으로 발현한다. HEKBlueTM CD40L세포에서 CD40의 활성화는 하류신호의 형질도입을 유발하여, NF-κB의 활성화를 초래하였고, 이로써 SEAP가 분비되는데, 이는 QUANTI-BlueTM 기질 전환율에 의해 측정될 수 있다. 간단히 말하자면, 제조업체의 프로토콜에 따라, HEK-BlueTM CD40L 세포를 배양하여, 96웰 배양 플레이트에 접종하는 바, 각 웰에 100μL씩(1×105개 세포/mL) 접종하고; 다음, Fc-3*G4S-CD40L(0.32 μg/mL) 50 μL와 시작 농도가 1.2 μg/mL인 CD40 항체의 구배 희석액을 사전에 혼합하여, 96웰 배양 플레이트에 첨가하고, 37℃ , 5% CO2에서 24시간 인큐베이션한다. 다음, 상등액 40μL와 예열된 QUANTI-BlueTM(Invivogen)용액 160μL를 혼합하여, 60-90분간 인큐베이션하고, 650 nm에서의 흡광도를 판독한다. PRISM를 통해 IC50값을 계산한다.
결과는 표 5에 표시된 바와 같이, 잠재력이 가장 높은 항-CD40 항체 D1-D7를 스크리닝하였고, 이는 인간 CD40L에 의해 유발되는 NF-
B의 활성화를 억제하고, 그의 억제 효과는 대조 항체 ASKP1240(항-CD40 항체, Kyowa Kirin)에 비해 더욱 우수하거나 그에 필적하다.
표 5
ELISA결합 실험: 스크리닝하여 얻은 전장 단클론 항체 D1, D2, D3, D5, D6, D7을 상이한 종(species)의 CD40 세포외 영역 항원과 결합 실험을 수행하고, 상기 실험은 항체가 상이한 종(species)의 CD40와의 교차반응을 동정하기 위한 것이다. 간단히 말하자면, 실시예 1에서 제조된 인간 또는 붉은털원숭이 CD40 세포외 영역 항원을 PBS용액에 용해시키고, 0.1 μg/웰에 따라 96웰 플레이트를 피복시킨 후, 4℃에서 밤새 방치한다. 항체를 첨가하기 전에, TBST용액을 사용하여96웰 플레이트를 세척하고, 5% 우유를 사용하여 37℃에서 1 내지 2시간 블로킹(blocked)시킨 다음, TBST용액을 사용하여 세척한다. 우선, 각 항체 샘플을 10 μg/mL까지 희석하고, 이어서, 1 : 3의 비율로 구배 희석(gradient dilution)을 수행한다. 구배 희석된 샘플을 96웰 플레이트에 각각 첨가하는 바, 각 웰에 100 μL 첨가하고, 37 ℃에서 1시간 인큐베이션한다. 이어서, TBST용액으로 6번 세척한다. 2차 항체(secondary antibody, goat anti-human IgG-HRP, 염소 항 인간 IgG-HRP(Sigma회사, A8667))를 각 웰에 100 μL씩 첨가하고, 37℃에서 1시간 인큐베이션한다. TBST용액을 사용하여 3번 세척한다. TMB를 각 웰에 100 μL씩 첨가하고, 37℃에서 10 내지 20분간 인큐베이션하며, 2M H2SO4로 반응을 종료하여, 450 nm에서의 흡광도를 판독한다. ELISA결과를 분석하고, PRISM를 통해 결합 그래프를 생성한다.
결과는 표 6에 표시한 바와 같이, 선택된 항-CD40 항체 및 대조 항체 ASKP1240는 양자 모두 인간 CD40 및 붉은털원숭이 CD40에 잘 결합할 수 있었다.
표 6
Ramos세포에서의 CD95의 발현에 대한 항-CD40 항체의 억제:
Ramos세포는 인간 버킷 림프종 유래 세포주의 일종이고, 그의 세포 표면에서 CD40 및 CD95(Fas) 발현된다. CD40L는, Ramos세포 표면의 CD95의 발현양의 증가를 유발할 수 있다. 하기 방안에 따라, 항-CD40 항체 D1, D6, D7 또는 대조 항체 ASKP1240가 Ramos세포에서 Fc-3*G4S- CD40L에 의해 유발되는 CD95의 발현에 대한 억제 능력을 확인한다.
농도가 1.0×106개 세포/mL인 Ramos세포 현탁액을 96웰 플레이트에 접종하는 바, 각 웰에 100 μL씩 접종한다. Fc-3*G4S-CD40L(4 μg/mL) 50 μL와, 1 μg/mL을 시작 농도로 하는 CD40 항체의 구배 희석액을 사전에 각각 혼합시킨 후 세포를 함유하는 96웰 측정플레이트에 첨가하고, 37 
, 5% CO2에서 24시간 인큐베이션한다. 다음, 세포를 수집한다. APC로 라벨링된 항-CD95항체(BioLegend, 305612)를 이용하여 수집된 세포를 라벨링하고, 이어서, FACS분석을 수행하여, 다른 항체 농도에 따른 평균 형광 강도(Mean Fluorescence Intensity, MFI)를 획득한다.
결과는 도 1A에 도시한 바와 같이, 항-CD40 항체 D1, D6, D7는 세포에서 인간 CD40L에 의해 유발되는 CD95의 발현을 억제하고, 억제 효과는 대조 항체 ASKP1240에 비해 더욱 우수하거나 그에 필적하다.
항-면역글로불린 항체의 가교 효과:
CD40은 TNF 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이고, 그가 세포 표면에서의 다중결합체(multimerization)는 CD40경로의 활성화를 초래할 수 있다. 본 발명에 따른 항체가 항체의 가교를 활성화하는 부작용을 일으킬 수 있는지 검출하기 위하여, 항-인간 IgG 항체를 처리하여, 항-CD40 항체를 가교시킨다. 만약 인간 IgG 항체와 본 발명에 따른 항-CD40 항체의 공동 처리에 의해 Ramos세포 표면 CD95의 발현양이 증가된 경우, 세포의 CD40 경로가 활성화되었음을 나타내고, 이는 항-CD40 항체가 항체의 가교를 활성화하는 부작용을 갖고 있음을 보여준다. 하기 방안에 따라, Ramos세포에서의 CD95의 발현을 확인한다.
농도가 1.0×106개 세포/mL인 Ramos세포 현탁액을 96웰 플레이트에 접종하고, 각 웰에 100 μL씩 접종한다. 항-인간 IgG 항체 (4 μg/mL)(Sigma, A8667) 50 μL와 10 μg/mL를 시작 농도로 하는 CD40 항체 D1, D7, ASKP1240 또는 CFZ533의 구배 희석액을 사전에 각각 혼합시킨 후 세포를 함유하는 96웰 측정플레이트에 첨가하고, 37 
, 5% CO2에서 24시간 인큐베이션한다. 다음, 세포를 수집한다. APC로 라벨링된 항-CD95항체(BioLegend, 305612)를 이용하여 수집된 세포를 라벨링하고, 이어서, FACS분석을 수행하여, 다른 항체 농도에 대응하는 평균 형광 강도(MFI)를 획득한다.
결과는 도 1B에 도시한 바와 같이, 가교된 후에도, 항-CD40 항체 D1, D7 또는 ASKP1240은 CD40효능 활성(agonistic activity)을 거의 나타내지 않았지만, 대조 항체 CFZ533은 소정의 효능 활성을 나타낸다.
PBMCs에서의 CD23의 발현에 대한 항-CD40 항체의 억제:
인간 말초혈액 단핵 세포(PBMC)는 B세포를 포함하여, 항-CD40 항체가 B세포의 활성화에 대한 영향을 특성화하는데 사용될 수 있다. CD40L은 CD23의 발현을 유발할 수 있고, CD23의 발현은 B세포가 활성화된 상징이다. 하기 방안에 따라, 항-CD40 항체 D1, D6, D7 및 ASKP1240가 B세포에서 Fc-3*G4S- CD40L에 의해 유발되는 CD23의 발현에 대한 억제 능력을 확인한다.
농도가 8.0×106개 세포/mL인 PBMCs세포를 96웰 플레이트에 접종하는 바, 각 웰에 100 μL씩 접종한다. Fc-3*G4S-CD40L(4 μg/mL) 50 μL와 1.2 μg/mL를 시작 농도로 하는 항-CD40 항체 D1, D6 , D7 또는 ASKP1240의 구배 희석액을 사전에 각각 혼합시킨 후 세포를 함유하는 96웰 측정플레이트에 첨가한다. 37 
, 5% CO2에서 48시간 인큐베이션한다. 다음, 세포를 수집하고, APC로 라벨링된 항-CD19항체(Biolegend, 302212)와 FITC로 라벨링된 항-CD23항체(Biolegend, 338506)를 이용하여 수집된 세포를 각각 라벨링하고, 이어서, FACS분석을 수행하여, 항체 농도에 따른 평균 형광 강도(MFI)를 획득한다.
결과는 도 2에 도시한 바와 같이, CD40 항체 D1, D6 및 D7은 B세포에서 CD40L에 의해 유발되는 CD23의 발현에 대한 억제하는 면에서, 대조 항체 ASKP1240에 필적하는 효과를 나타낸다.
ELISA방법을 이용한 IL12p40 및 TNF-α의 측정:
Manual EasySepTM(STEMCELL, Vancouver, Canada)의 프로토콜에 따라, PBMC에서 단핵 세포를 단리한다. 단리된 단핵세포를 IL-4(100ng/mL)와 GM-CSF(50ng/mL)를 함유하는 완전 배지에 넣고, 37 
, 5% CO2에서 6일 동안 배양하고, 격일에 배지를 교환하고, 신선한 배지에 동일한 농도의 사이토카인을 함유하도록 한다. 배양한지 6일째에 iDCs(미성숙된 수지상세포)를 수확한다. CD40L 자극 24시간 지난 후, iDC세포는 IL12 p40과 TNF-α를 분비한다. 하기 방안에 따라, iDCs에서, 항-CD40 항체 D1, D6, D7 또는 ASKP1240이 Fc-3*G4S-CD40L에 의해 유발되는 IL12p40 및 TNF-α의 분비에 대한 억제 능력을 확인한다.
농도가 1.0×107개/mL인 iDC세포 현탁액을 96웰 플레이트에 접종하는 바, 각 웰에 100 μL씩 접종한다. Fc-3*G4S-CD40L(4 μg/mL) 50 μL와 40 μg/mL를 시작 농도로 하는 항-CD40 항체의 구배 희석액을 사전에 각각 혼합시킨 후 세포를 함유하는 96웰 측정 플레이트에 첨가한다. 37 
, 5% CO2에서 24시간 인큐베이션한다. 다음, 상등액을 수집한다. 인간 IL-12 (p40) ELISA테스트 키트(biolegend, 430704)와 인간 TNF-α ELISA 테스트 키트(biolegend, 430204)를 사용하여 ELISA검출을 수행하고, 이어서, OD450에서의 흡광도를 판독한다. 여기서, 무관련 항체 AMG157(TSLP항체, Amgen)를 음성 대조군으로 하고, ASKP1240를 양성 대조군으로 한다.
결과는, 항-CD40 항체 D1, D6 및 D7은, IL12p40(도 3A)과 TNF-α(도 3B)의 생성을 억제할 수 있고, 억제 효과는 대조 항체 ASKP1240의 억제 효과에 필적하고, 음성 대조 항체 AMG157에 무관련된 억제 활성을 보여주었다.
실시예 3: 항-CD40 항체의 인간화
획득된 마우스 항체 D1의 VH/VL CDR 전형 구조를 기초로 하여, 중사슬, 경사슬 가변 영역의 서열을 항체 생식 계열 데이터 베이스 중의 배열과 비교하여(aligned), 상동성이 높은 인간 생식 계열 템플릿(human germline templates)을 획득한다. 마우스 항체의 CDR영역을 선정된 인간 생식 계열 템플릿에 이식하여 인간화된 가변 영역을 생성하고, 나아가 해당되는 인간 IgG불변 영역(바람직하게는, IgG4 중사슬 및 
경사슬)과 재조합시킨다. 이어서, 마우스 항체의 3차원 구조를 기초로 하여, 포매된 잔기, CDR영역과 직접 인터랙션하는 잔기 및 VH와 VL의 형태(conformation)에 대해 중요한 영향이 있는 잔기에 대해 역돌연변이(reverse-mutated)를 수행하고, CDR영역의 화학적 불안정한 아미노산 잔기를 최적화함으로써, 최종의 인간화 분자 D11을 획득한다. D11의 중사슬 가변 영역 서열은 SEQ ID NO: 88에 표시된 바와 같고, 경사슬 가변 영역 서열은 SEQ ID NO: 127에 표시된 바와 같다.
실시예 4: 인간화 항체의 특성화
실시예 2 중의 상응하는 실험 방안을 사용하여, 인간화 항-CD40 항체 D11의 생물 활성을 검출하는 바, 상기 방안은, HEK-BlueTM CD40L NF-κB 활성화 실험, 항-CD40 항체가 Ramos세포에서 CD95의 발현에 대한 억제 실험을 포함한다.
결과는, 인간화된 항-CD40 항체 D11의 생물 활성, 친화도 및 해리상수는 그의 부모대 항체 D1에 비해 약간 저하된 것으로 나타내었다(결과는 미표시됨).
실시예 5: 항체의 친화도 및 생물학적 활성의 향상
인간화 후 항-CD40 항체의 친화도 및 활성을 향상시키기 위하여, D11을 출발 항체로 선택하여 친화도 성숙을 수행한다. D11의 scFv를 사용하여, 그의 CDR 영역에서 돌연변이를 일으켜, 상응하는 파지scFv디스플레이 라이브러리를 생성하고, 스크리닝을 통해 높은 친화도와 낮은 해리 속도로 인간 CD40에 결합된 항체를 획득하며, HEK-BlueTM CD40L NF-κB 활성화 실험을 통해 그의 생물 활성을 평가한다. 실시예 2에 기재된 방법에 따라, 높은 친화도 또는 양호한 생물 활성을 나타낸 scFv항체로 전장 항체를 재구성하고, HEK-BlueTM CD40L NF-κB 활성화 실험을 사용하여 전장 항체를 스크리닝하여, 최적화된 항체(D21-D51)를 선택하여 내고, 생화학 및 생물 활성 분석을 추가로 수행한다.
HEK-Blue TM CD40L NF-κB 활성화 실험:
실시예 2에 기재된 방안을 사용하여, 인간화 항체 친화도가 성숙된 후의 전장 항체에 대해 HEK-BlueTM CD40L NF-κB 활성화 실험을 수행하여, 최적화된 항체(인간 IgG4 형태로 재구성됨)가 NF-κB의 활성화를 억제하는 능력을 검출한다.
결과는 표 7 및 도 4에 표시된 바와 같이, 최적화된 항체가 모두 CD40L에 의해 유발되는 NF-κB의 활성화를 양호하게 억제하는 능력을 나타내었고, 그의 억제 효과는 대조 항체 ASKP1240에 비해 더욱 우수하거나 그에 필적하다.
표 7
항-CD40 항체의 친화도
최적화된 항-CD40 항체의 결합 친화도 및 해리상수(Kd)의 특성화:
Biacore 8K(GE)를 사용하여 최적화된 항-CD40 항체가 인간 CD40와의 결합 친화도를 특성화한다. 항-CD40 항체를 센서 칩 CM5에 고정시키고, 상이한 농도에서의 항체와 인간 CD40와의 친화도를 검출하고, SPR기술을 이용하여 항체의 결합 속도와 해리속도를 측정하며, 결합 친화도를 확인한다.
결과는 표 8에 표시된 바와 같이, 최적화된 항-CD40 항체의 해리 속도가 현저히 저감되고, D21, D26, D33, D42, D47, D49와 인간 CD40과의 결합 친화도는 대조 항체 ASKP1240보다 우수하거나 대조 항체 ASKP1240에 필적하다.
표 8
CD40 ELISA 결합 실험:
실시예 2에 기재된 방안에 따라, ELISA실험을 사용하여 최적화된 전장 항-CD40 항체와 인간 또는 붉은털원숭이 CD40와의 친화도를 평가하는 바, ASKP1240을 대조로 한다.
결과는 도 5A 내지 5B에 도시된 바와 같이, 인간화 항체 D11가 친화도 성숙을 거쳐 생성된 최적화한 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49(인간 IgG4 형태로 재구성됨)가 인간 CD40(도 5A) 또는 붉은털원숭이 CD40(도 5B)과의 친화도는 대조 항체 ASKP1240에 필적하다.
Ramos세포에서의 CD95의 발현에 대한 항-CD40 항체의 억제 효과:
실시예 2에 기재된 방안에 따라, FACS를 사용하여 최적화 후의 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47, D49 또는 대조 항체 ASKP1240(인간 IgG4 형태로 재구성됨)가 Ramos세포에서 Fc-3*G4S- CD40L에 의해 유발되는 CD95의 발현에 대한 억제 능력을 확인한다.
결과는 도 6에 도시된 바와 같이, 최적화된 항-CD40 항체 D21, D26, D33, D42, D47 또는 D49는 인간 CD40L에 의해 유발되는 CD95의 발현를 억제하는 면에서, 대조 항체 ASKP1240보다 우수한 효과를 나타내었다.
항-면역글로불린 항체 가교 효과:
실시예 2에 기재된 방안에 따라, FACS를 사용하여, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47(인간 IgG4 형태로 재구성됨)이 항체의 가교를 활성화하는 부작용을 일으킬 수 있는지 확인한다.
결과는, 항-인간 IgG 항체가 가교된 후, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42, D47 또는 ASKP1240이 CD40효능 활성(결과는 미표시됨)을 나타내지 않았음을 보여주었다.
항-CD40 항체의 교차반응성:
항-CD40 항체와 CD40 상동 단백질와의 교차반응성: 잘 알려진 바와 같이, TNFR슈퍼패밀리 구성원 사이의 상동성은 상대적으로 높은 바, 그를 CD40 서열과 상동성 비교를 행할 때 상동성이 가장 높은 것은 TNFRSF11A(상동성이 38.95%임) 및 TNFR2(상동성이 37.20%임)이다. ELISA방법을 사용하여 항-CD40 항체와 이들과의 교차반응성을 검출한다. 간단히 말하자면, 인간 TNFRSF11A(Sino Biological, 16078-H08H), 인간 TNFR2(Sino Biological, 10417-H08H) 또는 실시예 1에서 제조된 인간 CD40 세포외 영역 단백질을 ELISA플레이트에 피복시켜, 4 ℃에서 밤을 새운다. 최적화된 전장 항-CD40 항체를 배율로 희석시킨 후 96웰 플레이트에 각각 첨가하여 인큐베이션하고, TBST로 세척한 후, 항-인간 IgG-HRP항체를 첨가한다. 실온에서 인큐베이션하고, TBST로 세척한 후, 웰에 TMB를 첨가하여 발색하며, 이어서, 450 nm에서의 흡광도를 판독한다.
결과는, 10 μg/mL의 높은 농도에서도, 최적화된 항체 D33, D42 또는 D47(인간 IgG4 형태로 재구성됨)이 TNFRSF11A 또는 TNFR2와 교차반응이 일어나지 않음(결과는 미표시됨)을 보여주었다.
PBMCs에서의 CD23의 발현에 대한 항-CD40 항체의 억제:
실시예 2에 기재된 방안에 따라, FACS를 사용하여, 최적화 후의 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47(인간 IgG4 형태로 재구성됨)이 PBMCs에서 Fc-3*G4S- CD40L에 의해 유발되는 CD23 발현을 억제하는 능력을 확인한다.
결과는 도 7에 도시된 바와 같이, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 인간 CD40L에 의해 유발되는 B세포 CD23 발현을 억제하는 면에서, 대조 항체 ASKP1240에 필적하는 효과를 나타내었다.
실시예 6: 인간 CD40유전자 이식 마우스의 T세포 의존성 항체 반응:
인간 CD40유전자 이식 마우스에서 T세포 의존성 항체 반응(T-Cell Dependent Antibody Response, TDAR) 분석을 수행한다. 0일째에, 만노스 결합 렉틴(Mannose-binding lectin) 연관 세린 프로테아제 2(MBL Associated Serine Protease 2, MASP2)를 완전 프로인트 보조제에서 유화시키고, 각 동물에게 100 μg씩 투여한다. 0, 7, 14일째에, 각 실험군의 마우스에게 3 mpk의 사용량으로 항-CD40 항체(예를 들면, D33, D42 또는 D47)를 정맥주사하고, 대조군 마우스에게 동등 부피의 PBS를 주사한다. (MASP2 투여 후) 7, 14 및 21일째에 각 동물의 혈청 샘플을 채취하고, ELISA실험을 통해 항-MASP2 IgM 및 IgG 항체의 타이터(titer)를 분석하여, 혈청 타이터로 표시한다.
결과는, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42, D47이 3 mpk의 사용량에서 항-MASP2 IgG(도 8A) 및 IgM(도 8B)항체의 생성을 거의 완전히 차단한다.
1 mpk의 사용량에서, 항-CD40 항체 D33, D42 또는 D47이 여전히 T세포 의존성 항체 반응을 억제할 수 있는지를 진일보하여 평가하기 위하여, 하기 실험을 수행한다. 0일째에, 키홀-림펫 헤모사이아닌(Keyhole Limpet Hemocyanin, KLH)을 완전 프로인트 보조제 속에서 유화시키고, 각 동물에게 100 μg씩 투여한다. 0, 7, 14일째에, 각 실험군 마우스에게 1 mpk의 사용량으로 항-CD40 항체(예를 들면, D33, D42, D47 또는 ASKP1240)를 정맥주사하고, 대조군 마우스에게 동등 부피의 PBS를 주사한다. (KLH 투여 후) 7, 14, 21일째에, 각 동물의 혈청 샘플을 채취하고, ELISA를 통해 항-KLH IgM 및 IgG 항체의 타이터를 분석하여, 혈청 타이터로 표시한다.
결과는, 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42, D47이 1 mpk의 사용량에서 항-KLH IgG(도 8C) 및 IgM(도 8D) 항체의 생성을 차단하고, 차단 효과는 대조 항체 ASKP1240에 필적한다.
실시예 7: 항-CD40 항체의 약동학
SD 레트 생체내의 PK값: 12마리의 암컷 SD 레트를 랜덤으로 4개 군으로 나누어, 한개 군에 3마리씩 나눈다. 각 군의 레트에게 각각 D33, D42, D47 또는 ASKP1240 10 mpk를 정맥주사한다. 우선, 주사하기 전에 혈액을 채취하고, 이어서 주사 후 5min, 1h, 5h, 1d, 3d, 7d, 10d, 14d 및 17d에 혈액을 채취하며, 원심분리하여 혈장을 획득한다. ELISA법으로 항체 농도를 분석한다. WinNonlin® 소프트웨어 6.0버전을 사용하여, 비구획분석(Non-Compartmental Analysis, NCA)을 통해 약동학 파라미터를 확인한다. 각 항체의 각각의 평균 농도 값을 사용하여, 선형 사다리꼴 규칙(linear trapezoidal rule) 그리고 선형 보간법(linear interpolation)과 균일 가중화(uniform weighting)으로 최대 혈청 농도(Cmax), 반감기(T1/2), 겉보기 분포 용적(Vd), 제거율(Cl), 평균 체류 기간(MRTlast) 및 투여가 시작되는 시각부터 최종 측정 가능 농도까지의 곡선 아래 면적(AUClast)을 포함한 모든 PK 파라미터를 측정한다.
결과는, 실험 과정에서, 투여 관련 이상 임상 표현이 확인되지 않았다. 최적화된 항-CD40 항체 D33, D42, D47 및 ASKP1240은 동물 체내에서, 유사한 약물 혈청 농도 곡선(도 9)을 나타내었다. 기타 약동학 파라미터는 모두 통계학적으로 유의적인 차이가 확인되지 않았다(결과는 미표시됨).
Claims (38)
- 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
GYX1VN(SEQ ID NO: 81)을 포함한 중사슬 상보성 결정 영역(HC-CDR)1 - 여기서, X1은 L, T 또는 V임 -;
X1IX2PX3X4GX5TX6YNQKFKG(SEQ ID NO: 82)를 포함한 HC-CDR2 - 여기서, X1은 L 또는 M이고, X2는 A, N 또는 V이며, X3은 E, K, L, M, R, S, T 또는 Y이고, X4는 H, N, S 또는 T이며, X5는 G 또는 R이고, X6은 A, S, T 또는 W임 -; 및
SX1X2X3X4PYAX5DY(SEQ ID NO: 83)를 포함한 HC-CDR3 - 여기서, X1은 G, I, L, M, P, R, S 또는 Y이고, X2는 W 또는 Y이며, X3은 S 또는 V이고, X4는 D, K, L, N, R, T 또는 V이며, X5는 A, G, M, N, Q 또는 S임 -을 포함하는 중사슬 가변 도메인(VH)과;
KASQNVHTX1VA(SEQ ID NO: 84)를 포함한 경사슬 상보성 결정 영역(LC-CDR)1 - 여기서, X1은 A, H, N 또는 R임 -;
LX1SDRRT(SEQ ID NO: 85)를 포함한 LC-CDR2 - 여기서, X1은 A 또는 R임 -; 및
LQX1WX2X3PLT(SEQ ID NO: 86)를 포함한 LC-CDR3 - 여기서, X1은 A 또는 H이고, X2는 N, S 또는 T이며, X3은 A, Q, R, S 또는 Y임 -을 포함하는 경사슬 가변 도메인(VL)을 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
SEQ ID NOs: 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR1 또는 이의 최대 약 3개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체;
SEQ ID NOs: 9 내지 26 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR2 또는 이의 최대 약 3개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체; 및
SEQ ID NOs: 32 내지 52 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 HC-CDR3 또는 이의 최대 약 3개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함하는 VH와,
SEQ ID NOs: 58 내지 61 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR1 또는 이의 최대 약 3개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체;
SEQ ID NOs: 65 내지 66 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR2 또는 이의 최대 약 3개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체; 및
SEQ ID NOs: 70 내지 77 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열을 포함한 LC-CDR3 또는 이의 최대 약 3개 아미노산의 치환을 포함하는 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나의 아미노산 서열로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 9를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 58을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개의 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체;
(ii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 10을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 32를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체;
(iii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 13을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 34를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체;
(iv) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 37을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 73을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체;
(v) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 20을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 42를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체;
(vi) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 14를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 43을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체;
(vii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 15를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 51을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 70을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체;
(viii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 11을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 48을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체; 또는
(ix) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 1을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 18을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 47을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 59를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 65를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 71을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 87 내지 119 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체와; SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NOs: 126 내지 138 중 어느 하나로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 5 항에 있어서,
(i) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 87과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 126과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(ii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 88과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 127과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(iii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 89와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(iv) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 94와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(v) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 96과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 132와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(vi) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 101과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(vii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 110과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(viii) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 114와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 128과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL;
(ix) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 115와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL; 또는
(x) 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 117과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129 또는 이의 아미노산 서열 SEQ ID NO: 129와 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 139로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 7 항에 있어서,
아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 7 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
SEQ ID NO: 120으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 120으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 139로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 139로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 121로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 140로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 10 항에 있어서,
아미노산 서열 SEQ ID NO: 5를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 27을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 54를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와; 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 78을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 10 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 121로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 140로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 140로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 122로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 141로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 13 항에 있어서,
아미노산 서열 SEQ ID NO: 6을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 28을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 55를 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 63을 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 13 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
SEQ ID NO: 122로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 122로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 141로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 123으로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 142로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 16 항에 있어서,
아미노산 서열 SEQ ID NO: 7을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 29를 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 56을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 64를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 69를 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 16 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
SEQ ID NO: 123으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 123으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 142로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 142로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
VH와 VL를 포함하되, 상기 VH는 아미노산 서열 SEQ ID NO: 124로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하고, 상기 VL은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 143으로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 19 항에 있어서,
아미노산 서열 SEQ ID NO: 8을 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 30을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 57을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 67을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 80을 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 19 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
SEQ ID NO: 124로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 124로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 143으로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 143으로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 있어서,
아미노산 서열 SEQ ID NO: 125로 표시되는 VH에 포함된 HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3을 포함하는 VH와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 144로 표시되는 VL에 포함된 LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3을 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 22 항에 있어서,
아미노산 서열 SEQ ID NO: 4를 포함한 HC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 31을 포함한 HC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 53을 포함한 HC-CDR3을 포함하는 VH 또는 HC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VH의 변이체와, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 62를 포함한 LC-CDR1, 아미노산 서열 SEQ ID NO: 68을 포함한 LC-CDR2 및 아미노산 서열 SEQ ID NO: 79를 포함한 LC-CDR3을 포함하는 VL 또는 LC-CDRs에 최대 약 5개 아미노산의 치환이 포함된 상기 VL의 변이체를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 22 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 125로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VH와, SEQ ID NO: 144로 표시되는 아미노산 서열 또는 이의 SEQ ID NO: 144로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 약 90%의 서열 동일성을 가진 변이체를 포함하는 VL를 포함하는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편에 Fc단편이 포함되는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 25 항에 있어서,
상기 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편이 전장의 IgG 항체인, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 26 항에 있어서,
상기 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편이 전장의 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4항체인, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 1 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편이 키메릭, 인간화된 또는 인간 항체인, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 제 1항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 단편은, Fab, Fab', F(ab)'2, Fab'-SH, 단일사슬 항체(scFv), Fv단편, dAb, Fd, 나노 항체(nanobody), 디아바디 (diabody) 및 선형 항체로부터 선택되는, 단리된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편. - 핵산 분자에 있어서,
제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 따른 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는, 핵산 분자. - 벡터에 있어서,
제 30 항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터. - 단리된 숙주 세포에 있어서,
제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 따른 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편, 제 30 항에 따른 핵산 분자 또는 제 31 항에 따른 벡터를 포함하는, 단리된 숙주 세포. - 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편의 제조 방법에 있어서,
a) 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편을 효과적으로 발현할 수 있는 조건에서 제 32 항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
b) 숙주 세포에서 발현된 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편을 획득하는 단계를 포함하는, 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편의 제조 방법. - 약물 조성물에 있어서,
제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 따른 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편, 제 30 항에 따른 핵산 분자, 제 31 항에 따른 벡터 또는 제 32 항에 따른 단리된 숙주 세포 및 약학적으로 허용 가능한 벡터를 포함하는, 약물 조성물. - 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 따른 항-CD40 항체 또는 항원 결합 단편, 제 30 항에 따른 핵산 분자, 제 31 항에 따른 벡터, 제 32 항에 따른 단리된 숙주 세포, 제 33 항에 따른 방법에 의해 제조된 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제 34 항에 따른 약물 조성물이 치료가 필요한 개체의 질환 또는 병증을 치료하기 위한 약물을 제조함에서의 용도.
- 질환 또는 병증의 치료 방법에 있어서,
치료가 필요한 개체에게 유효량의 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편, 제 30 항에 따른 핵산 분자, 제 31 항에 따른 벡터, 제 32 항에 따른 단리된 숙주 세포, 제 33 항에 따른 방법에 의해 제조된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제 34 항에 따른 약물 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 병증의 치료 방법. - 제 35 항에 따른 용도 또는 제 36 항에 있어서,
상기 질환 또는 병증은 자가면역성질환, 염증성병증, 암 및/또는 이식관련질환인, 용도 또는 질환 또는 병증의 치료 방법. - 제 35 항에 따른 용도 또는 제 36 항의 질환 또는 병증의 치료 방법에 있어서,
상기 질환 또는 병증은 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 원판상 홍반성 루푸스, 루푸스 신염, 염증성 관절염 - 청소년 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 강직성 척추염 및 통풍성 관절염을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 장기 또는 조직이식 거부 - 초급성, 급성 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 편대 숙주병 임 -, 다발성 경화증, 고IgE 증후군, 결절성 다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 장질환, 크론병, 복강 질환(글루텐 민감성 장질환), 자가면역성 간염, 악성 빈혈, 자가면역성 용혈성 빈혈, 피부경화증, 중증 근육무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 자가면역성 갑상선염, 그레이브스병(Grave's disease), 하시모토 갑상선염(Hasimoto's thyroiditis), 면역복합질환, 만성 피로 증후군의 면역기능장애(CFIDS), 다발성근염, 피부근염, 한랭글로불린혈증, 혈전용해, 심근병증, 심상성 천포창, 간질성 폐섬유증, 제1형 및 제2형 당뇨병, 제1형, 제2형, 제3형 및 제4형 지연형 과민반응, 알레르기 또는 알레르기질환, 치료 단백질에 대한 불필요하거나 원하지 않는 면역반응(예를 들면, 혈우병의 인자 VII), 천식, Rich-Strauss증후군(알레르기성 육아종증), 아토피성 피부염, 알레르기성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE 매개 알레르기, 죽상 동맥 경화, 혈관염, 특발성 염증성 근육병증, 용혈성 질환, 알츠하이머병, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경병증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's disease), 건선, 화농성 한선염, 화농성 요도염, 유육종증, 궤양성 결장염, 종양 - 비호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, B세포 림프종, 고/중/저 등급 B세포 림프종, 급성 B세포 림프구성 백혈병, 과립구성 백혈병 및 호지킨병 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않음 -, 신장염, 호흡곤란 증후군, 부고환염, 사구체신염 및 갑상선 기능 항진증로부터 선택되는, 용도 또는 질환 또는 병증의 치료 방법.
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