KR20230110539A - Cns 장애의 예방 및/또는 치료 - Google Patents

Cns 장애의 예방 및/또는 치료 Download PDF

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Abstract

아데노신 수용체(예를 들어, A2A 및/또는 A1 수용체) 길항제 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 조성물이 개시된다. 본 개시내용은 또한 생물학적 시스템에서 A2A 및/또는 A1 수용체를 조절(예를 들어, 억제 또는 길항)하기 위해 상기 화합물 및 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 상기 화합물 및 조성물은 중추신경계 또는 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 치료를 포함하는 다양한 치료적 적용에서 용도를 가진다. 상기 화합물 및 조성물은 또한 암 치료 및 면역-종양학을 포함하는 다양한 치료 적용에서 용도를 찾을 수 있다.

Description

CNS 장애의 예방 및/또는 치료
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 11월 19일에 출원된 미국 가출원 번호 63/115,972의 우선권 이익을 주장하며, 그 내용은 전체적으로 참조로 여기에 포함됩니다.
아데노신은 특정 세포 수용체를 통해 많은 생물학적 기능을 수행하며 면역 기능 및 염증을 비롯한 다양한 생물학적 활성과 연관되어 있다.
아데노신 수용체에는 4가지 유형(A1, A2A, A2B, A3)이 있으며, 이들은 헤테로머 G 단백질에 연결된다. A2A 수용체와 A2B 수용체는 각각 Gα 단백질의 Gs 서브타입에 연결되어 있다. 이러한 수용체가 자극되면 수용체 형태가 바뀌고 이러한 변화는 Gβ ρ 이량체에 의해 활성화된 Gs 서브유닛의 방출을 유도한 다음 세포에서 아데노신 삼인산(ATP)의 가수분해를 유도하여 고리형 아데노신 일인산(cAMP)을 생성한다. cAMP 합성은 단백질 키나아제 A(PKA)와 다른 단백질의 인산화를 활성화한다. T 세포에서는 주로 T 세포 수용체(TCR) 주변에 I형 PKA 아이소폼(type I PKA isoform)이 존재하며, cAMP 수준의 증가로 인해 PKA의 활성화가 증가하면 TCR 신호 전달 과정이 억제되어 각종 질병의 발병에 기여한다.
암세포는 정상 세포에서 생산하는 것보다 훨씬 더 많은 아데노신을 생산한다. 암세포에서 고밀도 아데노신은 A2A 수용체의 활성화를 유도하여 면역 체계를 억제하고 세포를 보호한다. 종양의 미세 환경에서 아데노신의 농도는 50μM로 정상 세포보다 증가할 수 있으며 T 세포 기능 및 활성화의 면역 억제로 이어질 수 있다. A2A 수용체 길항제는 암세포의 면역 체계 억제를 조절하여 항암 효과를 유도하는 데 사용할 수 있다.
A2A 수용체 길항제는 면역-항암 요법(immuno-oncology therapy)을 위해 개발 중이다. A2A 수용체 길항제는 항종양 면역을 향상시킬 수 있다. A2A 수용체는 백혈구에서 널리 생성된다. T 세포의 A2A 수용체가 활성화되면 TCR 매개 세포독성 및 사이토카인 생성이 감소하고 T 세포의 증식이 억제되며 Treg 세포의 확장이 유도된다. 면역 항암제(immuno-oncology)로서 PD-1 또는 PD-L1의 면역 관문 억제제(immunity checkpoint inhibitor)(예: 항체 억제제)가 널리 사용된다. 그러나 통계적으로 환자의 20 내지 30%만이 PD-1/PD-L1을 생산하므로 이러한 억제제의 효과를 얻지 못하는 환자가 많다. A2A 수용체 길항제와 면역 관문 억제제의 조합과 관련한 치료법이 관심을 받고 있다.
아데노신 수용체의 조절은 다양한 적응증의 치료에 중요하다. 아데노신 A1 수용체의 활성을 조절하는 것은 신경계 장애, 천식, 심부전, 신부전 등의 치료에 중요하다. 아데노신 A2A 수용체를 길항하는 것은 파킨슨병 등의 치료에 중요하다. 아데노신 A2B 수용체의 활성을 조절하는 것은 천식과 같은 만성 폐 질환, 암의 치료, 면역 항암제 등에서 중요하다. 그리고 아데노신 A3 수용체를 조절하는 것은 천식 및 만성 폐쇄성 폐 질환, 녹내장, 암, 뇌졸증 등의 치료에 중요하다.
본 개시내용은 아데노신 수용체(예를 들어, A2A 및/또는 A1 수용체) 길항제 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시내용은 또한 생물학적 시스템에서 A2A 및/또는 A1 수용체를 조절(예를 들어, 억제 또는 길항)하기 위해 상기 화합물 및 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 상기 화합물 및 조성물은 중추신경계 또는 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 치료를 포함하는 다양한 치료적 적용에서 용도를 발견한다. 일부 실시양태에서, 상기 화합물 및 조성물은 암 치료 및 면역-종양학을 포함하는 다양한 치료 적용에서 용도를 발견한다.
요약
본 개시내용은 아데노신 수용체(예를 들어, A2A 및/또는 A1 수용체) 길항제 화합물 및 상기 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시내용은 또한 생물학적 시스템에서 A2A 및/또는 A1 수용체를 조절(예를 들어, 억제 또는 길항)하기 위해 상기 화합물 및 조성물을 사용하는 방법을 제공한다. 상기 화합물 및 조성물은 중추신경계 또는 파킨슨병과 같은 신경퇴행성 질환의 치료를 포함하는 다양한 치료적 적용에서 용도를 발견한다. 일부 실시양태에서, 상기 화합물 및 조성물은 암 치료 및 면역-종양학을 포함하는 다양한 치료 적용에서 용도를 발견한다.
제1 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (Ia)의 A2A 및/또는 A1 길항제 화합물, 또는 그의 용매화물, 수화물, 전구약물, 및/또는 입체이성질체, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
여기에서:
R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
Y1 내지 Y4는 CR10 및 N으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8) 알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜이다.
제2 측면에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 (예를 들어, 화학식 (I) 내지 (III)의 화합물), 및 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
제3 측면에서, 본 개시내용은 시료 또는 세포 또는 생물학적 시스템을 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화합물(예를 들어, 화학식 (I) 내지 (III)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염)과 접촉시키는 것을 포함하는 아데노신 A2A 및/또는 A1 수용체를 조절(예를 들어, 억제 또는 길항)하는 방법을 제공한다.
또한 중추신경계 또는 신경퇴행성 질환이 있거나 이러한 위험이 있는 대상체에게 치료적 유효량의 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 화학식 (I) 내지 (III)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염)을 투여하는 것을 포함하는 중추신경계 또는 신경퇴행성 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 또한 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물(예를 들어, 본원에 기술된 바와 같음)의 치료적 유효량을 암을 가진 대상체(subject)에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 면역 체크포인트 억제제와 같은 추가 활성제를 대상체에게 공동 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 (i) 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도-인지 장애, 주의력 결핍 과잉 행동 장애(ADHD), 다발성 경화증, 혈관성 치매, 근위축성 측삭 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중추신경계(CNS) 장애의 치료 방법; (ii) 폐쇄성 두부 손상(closed head injury), 둔기 외상(blunt trauma), 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈(cerebral ischemia), 척추 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상(여기서 손상은 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화 및 수술 절차로 인한 신경 손상)으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경 변성(neuronal degeneration)을 일으키는 손상 또는 질병의 치료 방법; 또는 (iii) 운동 장애의 치료 방법에서 선택된 방법을 제공하고, 여기에서 상기 방법은 유효량의 본원에 기재된 화학식 (Ia)의 아데노신 수용체(예를 들어, A2A 및/또는 A1) 길항제 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 상기 언급된 방법에서, A2A 및/또는 A1 길항제 화합물은 화학식 (I)-(III)의 화합물일 수 있다. 상기 언급된 방법에서, CNS 장애, 신경퇴행성 질환 또는 운동 장애는 아데노신 수용체(예를 들어, A2A 및/또는 A1 수용체)와 연관된 것일 수 있다.
본 발명의 전술한 및 기타의 장점 및 목적이 달성되는 방식을 설명하기 위해, 첨부된 도면에 도시된 특정 실시양태들을 참조하여 위에서 간략하게 설명된 본 발명의 보다 구체적인 설명이 제공될 것이다. 이들 도면은 본 발명의 전형적인 실시양태만을 도시하고 따라서 그 범위를 제한하는 것으로 간주되지 않음을 이해하고, 첨부된 도면을 사용하여 추가의 특이성 및 세부 사항과 함께 본 발명이 묘사되고 설명될 것이다:
도 1은 전체 치료 기간 동안 각 치료군의 주간 체중을 나타내는 그래프이다. 데이터는 평균 ± SEM으로 표시된다. 통계: 그룹 B 대 C의 양방향 ANOVA에 이은 처치(treatment)의 Bonferroni의 후-테스트(Bonferroni´s posttest).
도 2A 및 2B는 시간에 따른 ALO AIMS 평가를 나타내는 그래프이다. 그래프는 그룹당 ALO AIM의 평균 점수를 나타낸다. 데이터는 평균 ± SEM의 막대 그래프로 표시된다. 통계: 그룹 B 대 C의 양방향 ANOVA에 이은 처치(treatment)의 Bonferroni의 후-테스트.
도 3A 및 3B는 실린더 테스트 결과를 나타내는 그래프이다. 도 3A는 경구 위관영양(gavage)당(PO) 투여된 동물에 의한 반대측 앞다리 사용의 백분율(%)을 나타낸다. 통계: 모든 그룹들 비히클 (MTC) 그룹의 한방향 ANOVA에 이은 처치의 Bonferroni´s posttest. 도 3B는 비강(IN) 투여된 동물에 의한 반대측 앞다리 사용의 백분율(%)을 보여준다. 통계: 모든 그룹들 대 비히클 (DMSO) 그룹의 Kruskal0Walls에 이은 처치의 Dunn의 후-테스트. 데이터는 그룹당 평균 ± SEM으로 표시된다.
상세한 설명
아데노신 수용체 길항제 화합물
상기 요약된 바와 같이, 본 개시내용은 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물, 조성물, 및 이들의 용도를 제공한다. 화합물은 목적 세포 및 생물학적 시스템에서 아데노신 A2A 및/또는 A1 수용체를 조절할 수 있다. 이 화합물은 중추신경계 또는 신경퇴행성 질환, 예컨대 파킨슨병의 치료, 및 암의 치료 및 면역-항암(immuno-oncology)을 비롯한 다양한 치료 응용 분야에서 사용된다.
본 개시내용의 화합물은 5원 헤테로사이클 고리에 융합된 2-아미노-피리미딘 고리를 갖는 코어 구조(core structure)를 포함하는 시아노-치환 융합된 피리미딘 화합물로 설명될 수 있다. 코어 구조 자체는 벤조니트릴 치환기(예, 3-시아노-페닐) 또는 이의 유도체(예, 시아노-피리딜 치환기)로 추가로 치환될 수 있다. 융합된 5원 헤테로사이클 고리는 임의로 치환된 벤질기로 추가로 치환될 수 있다. 일부 경우에, 화합물은 본원에 기재된 바와 같이 추가로 치환된 1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine-6-amine) 코어 구조를 갖는다. 화학식 (I) 및 (Ia)의 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물은 WO2021099837A에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 화합물은 예를 들어 하기 화학식의 벤조니트릴-치환된 융합 피리미딘 화합물:
또는 이의 유도체(예를 들어, 3-벤조니트릴기가 시아노-피리딜기로 대체된 유도체 화합물)이고, 여기서 Cy는 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로 원자를 함유하는 융합된 5원 헤테로사이클 고리(예: 헤테로아릴 또는 헤테로사이클로알킬 고리)이고; R은 임의로 치환된 페닐기이고; R10은 하나 이상의 선택적 치환기이다. 일부 실시양태에서, R은 할로겐, 하이드록실기, 티올기, 카르보닐기, 아미드기, 니트로기, 아미노기, 치환 또는 비치환된(C1-C5)알킬기, 치환 또는 비치환된 (C2-C5)알케닐기, 치환 또는 비치환된 (C2-C5)알키닐기, 치환 또는 비치환된 (C1-C3)할로알킬기, 및 치환 또는 비치환된 (C1-C3)아미노알킬기 또는 치환 또는 비치환된 (C1-C5)알콕시기로부터 각각 독립적으로 선택된 R11, R12, 및/또는 R13에 의해 치환된 페닐이고, R10은 수소, 할로겐, 하이드록실기, 티올기, 치환 또는 비치환된 (C1-C5)알킬기, 치환 또는 비치환된 (C2-C5)알케닐, 치환 또는 비치환된 (C2-C5)알키닐기, 치환 또는 비치환된 (C1-C3)할로알킬기, 치환 또는 비치환된 (C1-C5)알콕시기, 또는 시아노기로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기이다.
일부 실시양태에서, 상기 언급된 R11 및 R13은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, (C1-C5)알킬기 또는 (C1-C3)할로알킬기이고, 상기 언급된 R12는 수소 또는 아미노 기이고, 상기 언급된 R10은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, (C1-C5)알킬기, 또는 시아노기이다. 상기 화학식의 추가 실시양태가 본원에 기재되어 있다.
본 개시내용의 측면은 하기 화학식 (I)의 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물, 또는 그의 용매화물, 수화물, 전구약물, 및/또는 입체이성질체, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다:
여기서
Z1 및 Z2는 CR 및 N으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Z1 및 Z2 중 적어도 하나는 N이고;
R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
Y1 내지 Y4는 CR10 및 N으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜이다.
화학식 (I)의 일부 실시양태에서, Y1 내지 Y4는 CR10 및 N으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 3개는 독립적으로 CR10이다.
화학식 (I)의 일부 실시양태에서, Z1은 N이고 Z2는 CR인 하기 화학식 (Ia)로 표시되는 화합물:
또는 그의 용매화물, 수화물, 전구약물, 및/또는 입체이성질체, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염.
화학식 (Ia)의 일부 실시양태에서, R은 (C1-C3)알킬이다. 화학식 (Ia)의 일부 실시양태에서, R은 H이다.
화학식 (I) 내지 (Ia)의 일부 실시양태에서, A는 페닐이다. 화학식 (I) 내지 (Ia)의 일부 실시양태에서, A는 치환된 페닐이다. 화학식 (I) 내지 (Ia)의 일부 실시양태에서, A는 페닐 또는 1개, 2개 또는 3개의 R20기로 치환된 페닐이고, 각각의 R20은 독립적으로 (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드 및 티올로부터 선택된다.
화학식 (I) 내지 (Ia)의 일부 실시양태에서, A는 피리딜이다. 화학식 (I) 내지 (Ia)의 일부 실시양태에서, A는 치환된 피리딜이다. A는 2-피리딜, 3-피리딜 또는 4-피리딜인 임의로 치환된 피리딜일 수 있다. 화학식 (I) 내지 (Ia)의 일부 실시양태에서, A는 1개, 2개 또는 3개의 R20기로 치환된 피리딜 또는 피리딜이고, 각각의 R20은 독립적으로 (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드 및 티올로부터 선택된다.
화학식 (I) 내지 (Ia)의 일부 실시양태에서, Ra 및 Rb는 각각 H이다.
화학식 (Ia)의 일부 실시양태에서, Y1 내지 Y4는 CR10 및 N으로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 3개는 독립적으로 CR10이다.
화학식 (Ia)의 일부 실시양태에서, 화합물은 본원에 기술된 화학식 (II) 또는 (III)의 화합물이다.
화학식 (I)-(Ia)의 일부 실시예에서, R은 H이고; Ra 및 Rb는 각각 H이고; A는 2개의 R20기로 치환되고, 여기서 R20은 -H, NH2, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되고; Y1 내지 Y4는 CR10이고, 여기서 각각의 R10은 H 또는 할로겐이다. 화학식 (I)-(Ia)의 일부 실시양태에서, R은 H이고; Ra 및 Rb는 각각 H이고; A는 2개의 R20 그룹으로 치환되고, 여기서 R20은 H, NH2, CH3 및 CF3에서 선택되며; Y1 내지 Y4는 CR10이고, 여기서 각 R10은 H 또는 할로겐이고, 이들 중 3개 또는 4개의 R10은 H이다.
화학식 (III)의 일부 실시양태에서, R21 및 R22는 각각 H이고, R5 및 R9는 각각 H이고, R6 및 R8은 독립적으로 H, F, CH3 및 CF3로부터 선택된다. 화학식 (III)의 일부 실시양태에서, R6이 CF3일 때, R8은 H이거나, 또는 R6이 H일 때, R8은 CF3이다.
화학식 (I)의 일부 실시양태에서, 화합물은 다음으로부터 선택된다:
3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴; 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸벤조니트릴; 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴; 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴; 및 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴.
본원에 기재된 화합물, 예를 들어 화학식 (I)-, 특히 표 1에 나타낸 것들의 염, 및/또는 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체의 모든 변형은 본 개시내용에 포함되는 것으로 의도된다. 따라서, 본원에 기재된 임의의 화합물은 또한 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 그의 제약상 허용되는 염으로 지칭될 수 있다.
일부 실시양태에서, 화합물은 표 1의 화합물 중 하나, 또는 그의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 그의 염 (예를 들어, 약학적으로 허용되는 염)의 구조로 표시된다. 본 개시내용은 표 1 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 염, 및/또는 이의 용매화물, 수화물, 전구약물, 단일 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물 및/또는 동위원소 표지된 형태를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 본원에 기술되거나 (예를 들어, 화학식 (I)의) 표 1에 나타낸 화합물의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체 형태의 염은 본 개시내용에 포함되는 것으로 의미된다.
WO 2021099837 A에 기술된 상기 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물의 유사체, 염, 이성질체, 전구약물의 CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애의 예방 및/또는 치료에서의 용도는 또한 본 출원에 포함된다. 실시양태들에서, CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애는 A2A 및/또는 A1 수용체와 연관된다.
약학적 조성물
본 개시내용의 화합물은 약학적 조성물로 제제화될 수 있다. 약학적 조성물은 하나 이상의 이러한 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음) 및 적어도 하나의 첨가제(예를 들어, 약학적으로 허용가능한 첨가제)를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 화합물은 A2A 및/또는 A1 수용체 활성의 억제 또는 길항이 바람직한 다양한 치료 적용에서 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위한 약학적 조성물에서의 용도를 찾을 수 있다.
따라서, 실시양태들에서, 본 개시내용은 본원에 기재된 적어도 하나의 화합물, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. "약학적으로 허용가능한 첨가제(excipient)"라는 문구는 본 명세서에 기재된 본 발명의 화합물 이외의 임의의 성분(예를 들어, 활성 화합물, 또는 임의의 다른 편리한 약학적으로 허용가능한 담체, 첨가제(excipient) 또는 부가제(additive)를 현탁시키거나 용해할 수 있는 비히클)을 나타내며, 환자에게 실질적으로 비독성 및 비염증성인 특성을 갖는다. 첨가제는 예를 들어 부착 방지제, 항산화제, 결합제, 코팅제, 압축 보조제, 붕해제, 염료(색소), 연화제, 유화제, 충전제(희석제), 필름 형성제 또는 코팅제, 향료, 방향제, 활택제(흐름 향상제), 윤활제, 보존제, 인쇄 잉크, 흡착제, 분배제 또는 분산제, 감미제 및 수화수(waters of hydration)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 화합물, 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구약물을 치료적 유효량으로 포함한다.
약학적 조성물은 임의의 편리한 방법에 따라 제형화될 수 있으며, 정제, 환제, 분말, 나노입자, 캡슐제, 시럽제, 현탁액제, 에멀젼 및 마이크로에멀젼과 같은 경구 투여를 위한 다양한 형태 또는 근육내, 정맥내 또는 피하 투여를 위한 제제(preparation)와 같은 비경구 투여를 위한 형태로 제조될 수 있다. 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 경구(경장) 투여, 비경구(주사에 의한) 투여, 직장 투여, 경피 투여, 피내 투여, 척수강내 투여, 피하(SC) 투여, 정맥내(IV) 투여, 근육내(IM) 투여 및 비강내 투여를 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 경로에 의해 투여될 수 있다.
특정 예에서, 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 첨가제 또는 부가제를 함유할 수 있다. 약학적 조성물은 통상적인 방법으로 의약품으로 제조할 수 있으며, 정제, 환제, 분말제, 캡슐제, 시럽제, 에멀젼, 마이크로에멀젼 등과 같은 다양한 경구용 의약품으로 제조될 수도 있거나, 근육 주사, 혈관 주사 또는 피하 주사와 같은 비경구 의약품으로도 제조될 수도 있다.
용어 "담체", "아쥬반트", "비히클" 및 "첨가제"는 본원에서 교환가능하게 사용되며, 본 개시내용의 화합물은 담체와 함께 투여된다. 담체는 고체 담체 또는 유동성 담체이다. 적합한 약제학적 담체는 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005)에 기술된 것들을 포함한다.
약학적 조성물이 경구용 의약품의 형태로 제조되는 경우, 사용되는 첨가제 또는 담체의 예로는 셀룰로오스, 규산칼슘, 옥수수전분, 유당, 자당, 덱스트로스, 인산칼슘, 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘, 젤라틴, 탈크, 계면 활성제, 현탁액, 유화제, 희석제 등을 들 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물이 주사제의 형태로 제조되는 경우, 첨가제 또는 담체는 물, 식염수, 포도당 수용액, 유사한 당 용해성 용액, 알코올, 글리콜, 에테르(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 400), 오일, 지방산, 지방산 에스테르, 글리세리드, 계면활성제, 현탁액, 유화제 등을 들 수 있다.
일부 실시양태에서, 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에 대한 비경구 투여를 위해 제제화된다. 일부 비경구 실시양태에서, 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 정맥내 투여를 위해 제제화된다. 일부 비경구 실시양태에서, 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 대상체에게 피하 투여를 위해 제제화된다.
A2A 및/또는 A1 수용체를 조절하는 방법
본 개시내용의 측면은 생물학적 시스템 또는 시료에서 A2A 및/또는 A1 수용체의 활성을 조절하는 방법을 포함한다. 일부 실시양태에서, A2A 및/또는 A1 수용체의 활성을 조절하는 것은 시료에서 A2A 및/또는 A1 수용체를 억제하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, A2A 및/또는 A1 수용체의 활성을 조절하는 것은 세포 또는 생물학적 시스템에서 A2A 및/또는 A1 수용체의 활성을 길항하는 것을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 상기 방법은 시료를 A2A 및/또는 A1 수용체 활성을 조절할 수 있는 본 개시내용의 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 세포 또는 생물학적 시스템을 A2A 및/또는 A1 수용체 활성을 조절할 수 있는 본 개시내용의 화합물과 접촉하는 것을 포함한다.
본 개시내용은 A2A 및/또는 A1 수용체 조절 활성, 예를 들어, A2A 및/또는 A1 수용체 억제 및/또는 길항 활성을 갖는 화합물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 화합물은 A2A 수용체 억제 및/또는 길항제 활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물은 A2A 및 A1 수용체 억제 및/또는 길항제 활성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 화합물은 A1 수용체 억제 및/또는 길항제 활성을 갖는다. A2A 및/또는 A1 수용체 활성을 조절하는 화합물의 능력은 다양한 분석을 사용하여, 예를 들어 A2A 및/또는 A1 수용체 결합 분석 및/또는 A2A 및/또는 A1 수용체 기능 분석에 의해 특성화될 수 있다. 예를 들어, 실험 섹션은 A2A 수용체 결합 분석을 설명한다. 본 발명의 화합물이 분석 시스템에서 인간 A2A 수용체에 대한 특이적 결합을 제공할 수 있음을 나타내기 위해 본 발명의 예시적인 화합물을 평가하고 Ki 값을 측정하였다. 또한, 실험 섹션은 인간 재조합 A2A 수용체 안정 세포주(human recombinant A2A receptor stable cell line)에서 생성된 cAMP 신호 모니터링을 포함하는 A2A 기능 분석을 설명한다. 본 개시내용의 예시적인 화합물을 평가하고 IC50 값을 얻었으며, 이는 화합물이 분석 시스템에서 인간 A2A 수용체를 길항할 수 있음을 나타낸다.
본 개시내용의 측면은 본원에 기재된 화합물을 사용하여 A2A 및/또는 A1 수용체를 조절(예를 들어, 억제 또는 길항)하는 방법을 포함한다. 이러한 방법은 이러한 시스템을 화합물(예를 들어, 화학식 (I)에 따른 구조를 갖는 화합물 또는 표 1의 화합물)과 접촉시킴으로써 생물학적 시스템에서 A2A 및/또는 A1 수용체를 조절하는 방법을 포함할 수 있다. 생물학적 시스템은 세포, 조직, 기관, 체액, 유기체, 비포유동물 대상체 및 포유동물 대상체(예, 인간, 개, 고양이, 생쥐, 쥐, 토끼, 기니피그, 양, 염소, 소, 말, 원숭이, 침팬지 및 유인원과 같은 영장류, 특히 인간)을 포함할 수 있지만 이에 국한되지 않는다.
일부 실시양태에서, A2A 및/또는 A1 수용체를 억제하거나 길항하는 방법은 A2A 및/또는 A1 수용체를 포함하는 생물학적 시스템 또는 시료를 유효량의 본원에 기재된 임의의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 본원에 기재된 바와 같은 약학적 조성물과 접촉하여 A2A 수용체를 억제하거나 길항하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 생물학적 시스템 또는 시료는 생체 외(in vitro)이다. 또 다른 실시양태에서, 생물학적 시스템 또는 시료는 생체내(in vivo)이다. 일부 실시양태에서, 시료는 세포 시료다. 일부 실시양태에서, A2A 및/또는 A1 수용체는 세포막에 결합된다.
일부 실시양태에서, 화합물은 A1 수용체에서 바람직한 수준의 억제 활성을 나타내는 A2A 수용체 길항제이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 A2A 수용체 및 A1 수용체의 이중 길항제이다. 일부 실시양태에서, A1 수용체 억제 활성의 바람직한 수준은 1mM 이하, 예컨대 300μM 이하, 100μM 이하, 30μM 이하, 10μM 이하, 3μM 이하, 또는 1μM 이하인 세포 모델에서 인간 A1 수용체에서 Ki 값(예를 들어, 실시예 2.1에서 평가된 바와 같은 것)을 갖는 화합물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 화합물은 A2A 수용체 및 A1 수용체에 대한 억제 활성을 나타낸다. 실험 섹션의 실시예 2, 표 2는 본 개시내용의 화합물이 이중 길항제로서 강력한 활성을 가질 수 있음을 나타내는 A2A 및 A1 수용체 억제 데이터를 제공한다. 이러한 경우에, 화합물은 CNS 및 신경퇴행성 질환의 치료에서의 용도를 찾을 수 있다.
염증성 질환
본 개시내용은 대상 화합물을 치료제로서 사용하는 대상체에서 염증성 질환을 치료 또는 예방하는 방법, 및 상기 화합물을 포함하는 조성물을 제공한다. A2A 수용체 길항제가 당업자에 의해 유용하다고 생각되는 임의의 염증성 질환은 단독요법으로서 또는 다른 치료제(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음)와 조합하여, 본 개시내용의 화합물을 사용하여 치료가능한 질환으로서 고려된다.
일부 실시양태에서, 방법은 염증성 질환을 갖는 대상체에게 치료적 유효량의 A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물(예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음)을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 류마티스 관절염(RA)과 같은 만성 염증성 질환이다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 급성 염증성 질환이다.
일부 실시양태에서, 방법은 염증성 질환을 앓고 있거나 염증성 질환의 위험이 있는 대상체를 확인하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 염증성 질환과 관련된 기저 질환 또는 상태를 확인하는 것을 추가로 포함한다.
CNS 및 신경퇴행성(Neurodegenerative) 장애 또는 질환
본 개시내용은 (i) 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도 인지 장애, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD), 다발성 경화증(MS), 혈관성 치매, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 우울증, 정신분열증 및 간질로 이루어진 군으로부터 선택되는 중추 신경계(CNS) 장애를 치료하는 방법; (ii) 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상(여기서 손상은 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화, 및 수술 절차로 인한 신경 손상)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 신경 변성을 야기하는 손상 또는 질병을 치료하는 방법; 또는 (iii) 운동 장애를 치료하는 방법 중에서 선택되는 방법을 제공하며, 여기에서 상기 방법은 유효량의 본원에 기재된 화학식 (Ia)의 아데노신 수용체(예를 들어, A2A 및/또는 A1) 길항제 화합물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 상기 언급된 방법에서, A2A 및/또는 A1 길항제 화합물은 화학식 (I)-(III)의 화합물일 수 있다. 상기 언급된 방법에서, CNS 장애 또는 신경퇴행성 질환은 아데노신 수용체(예를 들어, A2A 및/또는 A1 수용체)와 연관될 수 있다. 일부 실시양태에서, CNS 장애 또는 신경퇴행성 질환은 A2A 수용체와 연관될 수 있다.
본 개시내용의 측면은 본원에 개시된 화합물 및/또는 조성물을 사용하여 관심있는 치료 적응증(indication)에 대해 대상체를 치료하는 방법을 포함한다. 용어 "치료 적응증"은 어떤 형태의 치료 또는 다른 치료적 개입(예를 들어, A2A 및/또는 또는 A1 수용체 길항제 투여)에 의해 대상체 내에서 경감, 안정화, 개선, 치료 또는 다른 방식으로 처리될 수 있는 모든 증상, 상태, 장애 또는 질병을 의미한다.
A2A 및/또는 A1 수용체 생물학적 활성 및/또는 기능장애의 조절과 관련된 치료 적응증은 본원에서 "아데노신 수용체 관련 장애"로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 방법은 유효량의 본원에 개시된 화합물 및/또는 조성물(예를 들어, A2A 및/또는 A1 수용체 길항제 화합물)을 대상체에게 투여함으로써 아데노신 수용체-관련 적응증을 치료하는 것을 포함할 수 있다.
본 개시내용은 치료제로서 본 개시내용의 화합물, 또는 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 사용하여 대상체에서 중추신경계 (CNS) 또는 신경퇴행성 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, CNS 질환은 CNS의 신경퇴행성 질환 또는 장애로 지칭된다. 본 개시내용의 화합물 및 약학적 조성물을 사용한 예방 또는 요법의 대상인 CNS 및 신경퇴행성 질환은 파킨슨병, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증, 다발성 경화증, 헌팅턴병, 우울증, 정신분열증 및 간질을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 방법은 파킨슨병을 치료하거나 예방하는 방법이고, 파킨슨병을 갖거나 가질 위험이 있는 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 화합물은 A2A 수용체 및 A1 수용체 모두에서 이중 억제 활성을 갖는 것이다. 일부 경우에, 화합물은 A2A 수용체에서 억제 활성을 갖는 화합물이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에서는 운동 장애(근육 제어 이상과 관련된 과다운동성 운동 장애(hyperkinetic movement disorder)) 또는 떨림을 치료하는 방법을 제공한다. 예시적인 운동 장애 또는 떨림은 파킨슨병 및 파킨슨니즘(특히 서동증(bradykinesia)으로 정의됨), 근긴장이상(dystonia), 무도병(chorea) 및 헌팅턴병, 운동실조, 떨림(예를 들어, 본태성 떨림, 파킨슨형 떨림, 기립성 떨림, 생리적 떨림, 심인성 떨림), 간대성근경련(myoclonus) 및 놀람, 틱 및 뚜렛 증후군, 하지 불안 증후군(Restless legs syndrome), 경직된 사람 증후군(stiff person syndrome), 운동이상증 및 보행 장애를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
일부 실시양태에서, 방법은 CNS 또는 신경퇴행성 질환을 앓고 있거나 이에 걸릴 위험이 있는 대상체를 확인하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 CNS 또는 신경퇴행성 질환과 관련된 기저 질환 또는 상태를 확인하는 것을 추가로 포함한다.
상기 언급된 약학적 조성물의 투여량은 개체 또는 환자의 질병을 치료 또는 예방하기 위한 유효량이며, 목적에 따라 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 경구 투여시 유효 성분을 기준으로 투여되는 양은 체중 1kg당 0.01 내지 1,000mg, 보다 구체적으로 1kg당 0.1 내지 300mg이다. 비경구 투여의 경우, 1일 체중 1kg당 유효 성분 기준으로 0.01 내지 100mg을 투여하며, 보다 구체적으로 0.1 내지 50mg을 1회 또는 수회 투여한다. 특정 개체 또는 환자에 대해 투여되는 양은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이 요법, 투여 시간, 투여 방법, 질병의 중증도 등을 포함한 많은 관련 요인에 따라 결정될 수 있고, 상기 투여량은 전문가에 의해 적절히 증감될 수 있는 것으로 이해되며, 상기 투여량은 어떠한 방식으로도 본 개시내용의 범위를 제한하지 않는다. 약학적 조성물의 유효량은 관련 기술분야에 통상의 지식을 가진 의사 또는 수의사가 정하여 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 원하는 치료 효과를 달성하는 데 필요한 양보다 적은 양의 약학적 조성물에 사용된 본 개시내용에 따른 화합물의 양으로 시작하여 원하는 효과가 성취될 때까지 점차적으로 투여되는 양을 증가시킬 수 있다.
적합한 투여 경로의 예는 경구, 직장, 경점막(설하 및 협측 포함), 비강내, 국소, 경피 또는 장 투여; 근육내, 피하, 정맥내, 골수내 주사뿐만 아니라 척수강내, 직접 뇌실내 주사, 인간 뇌로의 직접 주사, 직접 심실내, 복강내, 비강내 또는 안구내 주사를 포함하는 비경구 전달을 포함한다. 화합물은 또한 나노입자, 데포 주사제, 삼투압 펌프, 전자 펌프, 알약, 경피(전기 수송 포함) 패치 등을 포함하는 지속 또는 제어 방출 투여 형태로 장기간 및/또는 미리 결정된 비율로 정해진 시간에 펄스 투여를 위해 투여될 수 있다. CNS 노출을 증가시키고 전신 노출을 최소화하기 위해 지속 또는 제어 방출 투여 형태를 사용할 수 있다. 적어도 2개의 상이한 투여 경로를 조합하는 것도 가능하다.
본 개시내용의 화합물 및 조성물은 단독으로, 본 개시내용의 또 다른 예에 따른 화합물과 조합하여, 또는 적어도 하나의 다른 치료제, 예를 들어 본원에 기술된 다른 약학적 유효 성분과 동시에, 개별적, 또는 순차적 동시 투여로 투여될 수 있다.
특정 예에서, 본 개시내용의 약학적 조성물은 유효 성분으로서 유효 치료량의 특정 예에 따른 하나 이상의 화합물, 또는 약학적 담체와 조합하여 함유되는 약학적 조성물을 그의 범위 내에 포함한다. 임의로, 본 개시내용의 실시양태에 따른 화합물은 독립적으로, 다른 특정 예에 따른 화합물과 조합하여, 또는 하나 이상의 다른 치료 약물, 예를 들어, 항암약물 (예로, 본 명세서에 기재된 바와 같이) 또는 활성 약학적 물질과 동시에, 개별적으로, 또는 연속적으로 조합하여 투여될 수 있다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 여기에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시가 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
여기에 제공된 정의는 상호 배타적이지 않은 것으로 이해된다. 따라서 일부 화학적 모이어티는 하나 이상의 용어 정의에 포함될 수 있다.
요소를 설명하는 맥락에서 "하나의(a)", "하나의(an)” 및 "그(the)"와 같은 단수 관사 및 유사한 지시어는 여기에 달리 표시되거나 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는 한 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 여기에서 값의 범위에 대한 언급은 여기에 달리 표시되지 않는 한 범위의 상한 및 하한을 포함하여 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 참조하는 약식 방법으로서 역할을 할 뿐이며, 각각의 개별 값은 본원에서 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 통합된다. 여기에 설명된 모든 방법은 여기에 달리 표시되지 않거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어(즉, "~와 같은")의 사용은 단지 실시예를 더 잘 설명하기 위한 것이며 달리 언급되지 않는 한 청구범위의 범위를 제한하지 않는다.
일부 실시양태에서, 용어 “약”의 사용이 정량적 값 앞에 있는 경우, 본 개시내용은 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 특정 정량적 값 자체도 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 “약”은 달리 표시되거나 추론되지 않는 한 공칭 값(nominal value)으로부터 ±10% 변동을 지칭한다. 조성물 내의 성분 또는 물질의 양과 관련하여 백분율이 제공되는 경우, 백분율은 문맥에서 달리 언급되거나 이해되지 않는 한 중량을 기준으로 한 백분율로 이해되어야 한다.
예를 들어, 중합체의 절대값이 아닌 분자량이 제공되는 경우, 분자량은 문맥에서 달리 언급되거나 이해되지 않는 한 평균 분자량으로 이해되어야 한다.
특정 동작을 수행하기 위한 단계의 순서 또는 순서는 본 개시내용이 작동 가능한 상태로 유지되는 한 중요하지 않음을 이해해야 한다. 또한 두 개 이상의 단계 또는 작업을 동시에 수행할 수 있다.
용어 "약학적으로 허용가능한 첨가제", "약학적으로 허용가능한 희석제", "약학적으로 허용가능한 담체” 및 “약학적으로 허용가능한 아주번트”는 상호교환적으로 사용되며, 일반적으로 안전하고 무독성이며 생물학적으로나 달리 바람직하지 않은 것이 아니며, 약학적 조성물을 제조하는데 유용한 첨가제, 희석제, 담체 또는 아주번트를 의미하고, 수의학적 사용 및 인간의 약학적 사용에 허용가능한 첨가제, 희석제, 담체 및 아주번트를 포함한다. “약학적으로 허용가능한 첨가제”라는 어구는 하나 이상의 첨가제, 희석제, 담체 및/또는 아주번트를 모두 포함한다.
용어 “약학적 조성물”은 포유동물, 특히 인간과 같은 대상체에 투여하기에 적합한 조성물을 포함하는 것을 의미한다. 일반적으로 “약학적 조성물”은 무균이고 바람직하게는 대상체 내에서 바람직하지 않은 반응을 유발할 수 있는 오염물이 없다(즉, 약학 조성물의 화합물(들)은 약학적 등급임). 약학적 조성물은 경구, 볼점막(buccal), 직장, 비경구, 복강내, 피내(intradermal), 기관내(intratracheal), 비강내, 근육내, 피하 등을 비롯한 다수의 상이한 투여 경로를 통해 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하도록 설계될 수 있다.
용어 "질병", "장애" 및 "상태"는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
투여가 고려되는 용어 "대상체(subject)"는 인간(즉, 모든 연령 그룹의 남성 또는 여성, 예를 들어, 소아 대상체(예를 들어, 유아, 아동, 청소년) 또는 성인 대상체(예를 들어, 청년, 중년 또는 고령자)) 및/또는 비인간 동물, 예를 들어 영장류(예를 들어, 시노몰구스 원숭이, 레서스 원숭이), 소, 돼지, 말, 양, 염소, 설치류와 같은 포유동물, 고양이 및/또는 개를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 특정 실시양태에서, 대상체는 비인간 동물이다. "인간", "환자" 및 "대상(체)"이라는 용어는 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 달리 명시되지 않는 한, "치료하다(treat)", "치료하는(treating)" 및 "치료(treatment)"라는 용어는 대상체가 특정 질병, 장애 또는 상태를 앓고 있는 동안 발생하는 행동(action)을 의미하며, 이는 질병, 장애, 또는 상태의 중증도를 감소시키거나, 또는 질병, 장애 또는 상태의 진행을 지연시키거나 느리게 한다. "치료" 또는 "치료하는"은 다음을 포함한다: (i) 질병, 장애 또는 상태의 예방, 즉 질병, 장애 또는 상태에 걸리거나, 노출될 수 있고/있거나 소인이 있을 수 있지만 아직 가지고 있는 것으로 진단되지 않았을 수 있거나; 또는 질병, 질병 또는 상태를 가진 것으로 진단되거나; 또는 그러한 질병, 장애 또는 상태가 발생할 위험이 있는 대상체에서 발생하는 질병, 장애 또는 상태의 발생률 감소 및/또는 효과 및/또는 지속 기간의 개선; (ii) 질병, 장애 또는 상태의 억제, 즉 질병, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상을 이미 앓고 있거나 가지고 있는 대상체에서 질병, 장애 또는 상태의 개시를 예방 또는 지연; 질병, 장애 또는 병태의 추가 발달 또는 진행을 저지; 또는 질병, 장애 또는 상태 악화의 위험 감소; (iii) 질병, 장애 또는 상태의 개선, 즉 질병, 장애 또는 상태 또는 이의 하나 이상의 증상을 약화, 완화, 역전 또는 제거.
본원에 사용된 바와 같이, 달리 명시되지 않는 한, 화합물의 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은 질병, 장애 또는 상태의 치료에서 치료적 이점을 제공하거나 또는 질병, 장애 또는 상태와 관련된 하나 이상의 증상을 지연 또는 최소화하기에 충분한 양이다. 화합물의 치료적 유효량은 질병, 장애 또는 상태의 치료에서 치료적 이점을 제공하는 치료제 단독 또는 다른 요법과 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "치료적 유효량"은 전체 요법을 개선하거나, 질병 또는 상태의 증상 또는 원인을 감소 또는 방지하거나, 다른 치료제의 치료 효능을 향상시키는 양을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 달리 명시되지 않는 한, 화합물의 "예방적 유효량(prophylactically effective amount)"은 질병, 장애 또는 상태, 또는 질병, 장애 또는 상태와 관련된 하나 이상의 증상을 예방하거나 이의 재발을 예방하기에 충분한 양이다. 예방적 유효량의 화합물은 질병, 장애 또는 상태의 예방에서 예방적 이점을 제공하는 치료제 단독 또는 다른 제제와 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "예방적 유효량"은 전반적인 예방을 개선하거나 다른 예방제의 예방 효능을 향상시키는 양을 포함할 수 있다.
예시적인 실시양태들
본 명세서에 기재된 바와 같이, 본문은 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법의 다양한 실시양태를 지칭한다. 설명된 다양한 실시예는 다양한 예시적인 예를 제공하기 위한 것이며 대안적인 종의 설명으로 해석되어서는 안 된다. 오히려, 여기에 제공된 다양한 실시예의 설명은 중복되는 범위를 가질 수 있다는 점에 유의해야 한다. 여기에서 논의된 실시예들은 단지 예시적인 것이며 본 기술의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
첨부된 청구범위에도 불구하고, 본 개시내용의 양태는 다음 조항에 의해 예시된다.
조항 1. 활성 성분으로 유효량의 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애를 갖는 대상체를 치료하기 위한 약학적 조성물:
여기에서,
R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
Y1 내지 Y4는 독립적으로 CR10 및 N으로부터 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜임.
조항 2. 조항 1에 있어서, A는 페닐 또는 1개, 2개 또는 3개의 R20 기로 치환된 페닐이고, 각각의 R20은 (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드 및 티올로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
조항 3. 조항 1에 있어서, R은 H인 약학적 조성물.
조항 4. 조항 1에 있어서, Ra 및 Rb는 각각 H인 약학적 조성물.
조항 5. 조항 2에 있어서, 상기 화합물은 하기 화학식 (II)인 약학적 조성물:
R1 내지 R9는 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드 및 티올로부터 독립적으로 선택됨.
조항 6. 조항 5에 있어서, R1 내지 R9는 독립적으로 H, (C1-C5)알킬, 치환된 (C1-C5)알킬, (C1-C3)할로알킬, (C1-C5)알콕시, 치환된 (C1-C5)알콕시, -NH2, 치환된 아미노, 할로겐 및 하이드록실로부터 선택되는 약학적 조성물.
조항 7. 조항 6에 있어서, R1 내지 R9는 독립적으로 H, NH2, F, CH3 및 CF3로부터 선택되는 약학적 조성물.
조항 8. 조항 5에 있어서, 상기 화합물은 화학식 (III)인 약학적 조성물:
여기서:
R21 및 R22는 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, SO2R30 및 COR30으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 R30은 (C1-C8)알킬 또는 치환된 (C1-C8)알킬임.
조항 9. 조항 8에 있어서, 여기에서
R21 및 R22는 각각 H이고;
R5, R6, R8 및 R9는 H, (C1-C5)알킬, 치환된 (C1-C5)알킬, (C1-C3)할로알킬, (C1-C5)알콕시, 치환된 (C1-C5)알콕시, 할로겐 및 하이드록실로부터 선택되고;
R2 내지 R4는 각각 H이고; 및
R1은 H, (C1-C5)알킬, 치환된 (C1-C5)알킬, (C1-C3)할로알킬, (C1-C5)알콕시, 치환된 (C1-C5)알콕시, 할로겐 및 하이드록실로부터 선택됨.
조항 10. 조항 9에 있어서, R1은 H, F, CH3 및 CF3로부터 선택되는 약학적 조성물.
조항 11. 조항 1에 있어서, 화학식 (Ia)의 화합물이 다음으로부터 선택되는 약학적 조성물.
조항 12. 조항 1에 있어서, 상기 CNS 장애는 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도-인지 장애, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD), 다발성 경화증, 혈관성 치매 및 근위축성 측삭 경화증으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
조항 13. 조항 1에 있어서, 상기 CNS 장애는 아데노신 수용체와 관련된 약학적 조성물.
조항 14. 조항 13에 있어서, 상기 아데노신 수용체는 아데노신 수용체 A2A 및/또는 A1인 약학적 조성물.
조항 15. 조항 1에 있어서, 상기 CNS 장애가 파킨슨병인 약학적 조성물.
조항 16. 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상(blunt trauma), 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈(cerebral ischemia), 척추 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경 변성을 초래하는 손상 또는 질병을 치료하는 약학적 조성물이며, 상기 조성물은 활성 성분으로 본원에 기술된 화학식 (Ia)의 화합물; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하고, 여기서 손상은 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된 1차 신경계 손상인, 약학적 조성물.
조항 17. 조항 16에 있어서, 상기 신경 변성을 유발하는 질환이 파킨슨병인 약학적 조성물.
조항 18. 본원에 기재된 화학식 (Ia)의 화합물의 치료학적 유효량을 포함하는, 운동 장애를 치료하기 위한 약학적 조성물.
조항 19. 조항 18에 있어서, 상기 운동 장애는 아데노신 수용체와 관련된 약학적 조성물.
조항 20. 조항 19에 있어서, 상기 운동 장애는 서동증, 근긴장이상, 무도병 및 헌팅턴병, 운동실조, 떨림, 간대성근경련 및 놀람, 틱 및 뚜렛 증후군, 하지 불안 증후군, 경직된 사람 증후군, 운동이상증 및 보행 장애로 이루어진 군으로부터 선택된 약학적 조성물.
조항 21. 치료적 유효량으로 화합물 또는 조성물을 투여함으로써 대상체를 치료하는데 있어서 본원에 기술된 화학식 (Ia)의 화합물 또는 상기 화합물을 포함하는 조성물의 용도로서, 여기에서
(i) 대상체는 CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애를 앓고 있으며, 여기서 CNS 장애는 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도 인지 장애, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD), 다발성 경화증, 혈관성 치매 및 근위축성 측삭 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
(ii) 대상체는 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경 변성을 야기하는 손상 또는 질병을 앓고 있으며, 여기서 손상은 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화 및 수술 절차에 의해 야기된 신경 손상을 포함하는 군으로부터 선택되는 1차 신경계 손상이고/이거나; 및/또는
(iii) 대상체는 운동 장애를 앓고 있으며, 여기서 운동 장애는 아데노신 수용체와 관련된 것인,
용도.
조항 22. 대상체를 치료하기 위한 의약품을 제조하는데 있어서의 본원에 기술된 화학식 (Ia)의 화합물 또는 상기 화합물을 포함하는 조성물의 용도로서, 여기에서 대상체는
(i) CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애를 앓고 있으며, 여기서 CNS 장애는 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도 인지 장애, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD), 다발성 경화증, 혈관성 치매 및 근위축성 측삭 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
(ii) 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경 변성을 야기하는 손상 또는 질병을 앓고 있으며, 여기서 손상은 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화 및 수술 절차에 의해 야기된 신경 손상을 포함하는 군으로부터 선택되는 1차 신경계 손상이고/이거나; 및/또는
(iii) 운동 장애를 앓고 있으며, 여기서 운동 장애는 아데노신 수용체와 관련된 것인,
용도.
실시예
하기 실시예는 본 개시내용을 예시하기 위해 제공되며 본 기술의 범위를 제한하는 것으로 어떤 식으로든 해석되어서는 안 된다. 기능적으로 동등한 모든 방법은 본 기술의 범위 내에 있다. 여기에 기술된 것 외에도 본 기술의 다양한 변형은 전술한 설명으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 그러한 변형은 첨부된 청구항의 범위에 속한다.
달리 명시되지 않는 한 모든 온도는 섭씨 온도이다. 사용된 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력했지만 일부 실험 오류 및 편차가 허용되어야 한다.
약어가 정의되지 않은 경우 일반적으로 허용되는 의미를 갖는다.
일반적인 합성 방법
최종 화합물은 고성능 액체 크로마토그래피/질량 분석(HPLC/MS) 분석에 의해 확인되었으며 순도 >90중량%인 것으로 결정되었다. 1H 핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼은 CDCl3 (잔여 내부 표준 CHCl3 = δ 7.26), 디메틸 술폭사이드(DMSO)-d6 (잔여 내부 표준 CD3SOCD2H = δ 2.50), 메탄올-d4 (잔여 내부 표준 CD2HOD = δ 3.30), 또는 아세톤-d6 (잔여 내부 표준 CD3COCD2H = δ 2.05)에 기록되었다. 보고된 화학적 이동(δ)은 백만분율(ppm)로 표시되고 커플링 상수(J)는 헤르츠(Hz)로 표시된다. 스핀 다중도(spin multiplicity)는 s = 단일선(singlet), bs = 광범위 단일선(broad singlet), bm = 광범위 다중선(broad multiplet), d = 이중선(doublet), t = 삼중선(triplet), q = 사중선(quartet), p = 오중선(pentuplet), dd = 이중선의 이중선, ddd = 이중선의 이중선의 이중선, dt = 삼중선의 이중선, td = 이중선의 삼중선, tt = 삼중선의 삼중선, m = 다중선(multiplet)로 보고된다.
HPLC-MS 분석은 기울기 용리(구배 용출)(gradient elution)로 수행되었다. 순상과 역상 모두에서 실리카겔 컬럼을 사용하여 중압 액체 크로마토그래피(MPLC)를 수행했다.
실시예 1: 화합물들의 제조
본 개시내용의 화합물은 하기 반응식 1 또는 2에 의해 예시된 방법에 따라 잘 알려진 화학적 전환을 적용함으로써 생성된다. 표 1의 몇몇 예시적인 화합물의 합성은 하기 실시예 1.1 내지 1.33에 기재되어 있다. 표 1의 몇몇 다른 화합물은 본원에 기재된 방법을 적용하여 제조하고 실시예 2에 기재된 생물학적 검정에 따라 평가하였다.
일반 반응식 1
반응식 1에 대한 예시적인 합성 방법은 하기에 상세히 설명되어 있다.
전술한 반응식 1을 참조하여 보다 구체적으로 설명하면, A-2 화합물을 테트라히드로푸란 및 H2O의 용매에 용해시키고, 상기 용액을 25℃ 내지 60℃에서 24시간 동안 히드라진 일수화물과 연쇄 반응(chain reaction)시켜 A-3의 화합물을 제조하는 제 1 단계; A-3 화합물을 N,N-디메틸포름아미드 용매에 용해시킨 후, 탄산칼륨 또는 탄산세슘이 제공되는 조건에서, 상기 용액을 25℃ 내지 60℃에서 24시간 동안 화학식 A-4의 화합물과 친핵성 치환 반응시켜 상기 반응식 A-5 화합물을 제조하는 제 2 단계; 및 상기 A-5 화합물을 1,4-디옥산 및 증류수에 용해시키고, 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴 및 그 유도체, 및 테트라키스(트리페닐포스핀) 팔라듐 및 탄산나트륨이 제공되는 조건에서, 상기 용액을 100℃ 내지 115℃에서 2시간 내지 24시간 동안 상기 반응식 A-6의 화합물과 스즈키 커플링 반응시켜 A 화합물을 제조하거나, 상기 용액이 동일한 조건에서 스즈키 커플링 반응되고, 상기 용액을 에탄올 용매에 용해시키고, 여기에 상기 용액을 염화주석(II) 이수화물 및 산 조건에서 환원 반응시켜 A 화합물을 제조하는 제 3 단계;를 포함하는 일련의 공정을 통하여, 상기 반응식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 것이 가능하다. 여기서, 전술한 반응식 1의 Ra1, Ra2, Ra3, Ra4 및 Ra5는 본 명세서에 기재된 화학식의 치환기, 예를 들어 화학식 (II)의 R1 내지 R9 및 시아노기에 해당한다.
실시예 1.1: 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 201)의 제조
1.1.1. 4-클로로-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민의 제조
시약 및 조건: (a) 히드라진, TEA, THF:H2O(3:1), 실온(r.t.) 내지 50℃, 3시간, 정량(quant); (b) 4-니트로벤질 브로마이드, K2CO3, DMF, 0℃ 내지 실온, 12시간, 58%.
단계 1: 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민의 제조
2-아미노-4,6-디클로로피리미딘-5-카브알데히드(S1, 4g, 20.83mmol)를 테트라히드로푸란(THF)과 H2O의 용매에 녹이고, 이에 히드라진 일수화물(0.78ml, 24.99mmol)과 트리에틸아민(TEA, 3.51ml, 24.99mmol)을 첨가하였다. 이후, 전술한 반응 혼합물을 50℃로 가열하고 3시간 동안 교반하고 농축하였다. 이후, 상기 농축물을 증류수로 세척하여 중간체 화합물(S2, 3.45g, 100%)을 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 13.25 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.14 (s, 2H).
단계 2: 4-클로로-1-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민의 제조
상기 단계 1에서 생성된 중간체 화합물(S2, 3.0g, 18.12mmol)을 디메틸포름아미드(DMF)에 녹이고, 4-니트로벤질브로마이드(3.92g, 18.12mmol)와 탄산칼륨(K2CO3, 3.75g, 27.18mmol)을 첨가하였다. 이후 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(EA)로 희석하고 증류수로 세척하였다. 황산마그네슘으로 건조한 후 여과하고 농축하였다. 이후 상기 농축물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물(S3, 3.2g, 58%)을 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.19(d, 2H), 8.09(s, 1H), 7.40-7.38(m, 4H), 5.56(s, 2H).
1.1.2. 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴(화합물 201)의 제조.
시약 및 조건: (c) 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴, Pd(PPh3)4, Na2CO3, 디옥산:H2O(8:1), 실온 내지 105℃, 12시간, 70%; (d) SnCl2·2H2O, 진한 염산(Conc. HCl), EtOH, 실온 내지 50℃, 3시간, 45%.
단계 1: 3-(6-아미노-1-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴의 제조
상기 실시예 1-1의 화합물(S3, 1.0g, 3.28mmol)을 1,4-디옥산과 H2O 용매에 녹이고, 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴(1.12g, 4.92mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐((0)(Pd(PPh3)4, 758mg, 0.65mmol) 및 탄산나트륨(Na2CO3, 695mg, 6.56mm)을 첨가하였다. 이후, 상기 반응 혼합물을 밀봉된 튜브를 이용하여 105℃에서 12시간 동안 교반한 후, 디클로로메탄(DCM)으로 희석하고 이를 증류수로 세척하였다. 이후 황산마그네슘으로 건조한 후 여과 및 농축한 후, 상기 농축물을 에틸 아세테이트/헥산(EA/Hex)으로 세척하여 중간체 화합물(S4, 852mg, 70%)을 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.54(s, 1H), 8.51-8.49(m, 2H), 8.08(dd, 1H), 7.80(t, 1H), 7.42(d, 2H), 7.15 (s, 2H), 5.62 (s, 2H).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴의 제조
상기 단계 1에서 생성된 중간체 화합물(S4, 400mg, 1.07mmol)을 에탄올(EtOH)에 녹이고, 염화주석(II) 이수화물(SnCl2·2H2O, 730mg, 3.23mmol) 및 진한 염산(Conc. HCl)(aq)(1.8mL, 21.54mmol)을 첨가했다. 이후, 전술한 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반한 후, 디클로로메탄(DCM)으로 희석하고 증류수로 세척하였다. 그 후 황산마그네슘으로 건조한 후 건조, 여과, 농축하였다. 이후, 상기 농축물을 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물(201, 161mg, 45%)을 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.50(s, 1H), 8.48-8.45(m, 1H), 8.35(s, 1H), 8.07-8.04(m, 1H), 7.79(t, 1H), 7.07(s, 2H), 6.95(d, 2H), 6.47(d, 2H), 5.23(s, 2H), 5.04(s, 2H).
실시예 1.2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸벤조니트릴 (화합물 205)의 제조
시약 및 조건: (a) 2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴, Pd(PPh3)4, Na2CO3, 디옥산:H2O (8:1), 실온 내지 105℃, 12시간, 81%; (b) SnCl2·2H2O, 진한 HCl, EtOH, 실온 내지 50℃, 3시간, 74%.
단계 1: 3-(6-아미노-1-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸벤조니트릴의 제조
전술한 실시예 1.1.2의 단계 1에서 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴(1.12g, 4.92mmol) 대신 2-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥시보롤란-2-일)벤조니트릴(120mg, 0.49mmol)을 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 1.1.2의 단계 1과 동일한 공정을 수행하였다. 중간체 화합물(S5, 103mg, 81%)을 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.21(d, 2H), 7.97(d, 1H), 7.90(s, 1H), 7.82(d, 1H), 7.56(t, 1H), 7.46(d, 2H), 7.13(s, 2H), 5.59(s, 2H), 2.52(s, 3H)
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-메틸벤조니트릴의 제조
상기 실시예 1.1.2의 단계 2에서, 염화주석(II) 이수화물(SnCl2·2H2O, 180mg, 0.80mmol) 및 진한 염산(Conc.HCl) (aq) (0.45ml, 5.34mmol)의 양을 변경한 것을 제외하고는 상기 실시예 1.1.2의 단계 2와 동일한 공정을 상기 단계 1의 중간체 화합물(S5,103mg, 0.26mmol)에 수행하여 원하는 화합물을 얻었다. (205,71mg, 74%). 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 7.95(d, 1H), 7.79(d, 1H), 7.77(s, 1H), 7.54(t, 1H), 7.05(s, 2H), 6.98(d, 2H), 6.48(d, 2H), 5.21(s, 2H), 5.04(s, 2H), 2.49(s, 3H).
실시예 1.3: 3-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 202)의 제조
시약 및 조건: (a) 2-플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴, Pd(PPh3)4, Na2CO3, 디옥산:H2O (8:1), 실온 내지 105℃, 12시간, 90%; (b) SnCl2·2H2O, 진한 염산(Conc. HCl), EtOH, 실온 내지 50℃, 3시간, 92%.
단계 1: 3-(6-아미노-1-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴의 제조
상기 실시예 1.1.2의 단계 1에서 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴(1.12g, 4.92mmol) 대신에 2-플루오로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조니트릴 (1.21g, 4.92mmol)을 사용하고, 테트라키스(triphenylphosphine)팔라듐(0) (Pd(PPh3)4,758mg, 0.65mmol)의 함량과 탄산나트륨(Na2CO3, 695mg, 6.56mmol)의 함량을 변경한 것을 제외하고는 상기 실시예 1.1.2의 단계 1과 동일한 공정을 수행하여 중간체를 얻었다. (S6,1.15g, 90%). 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.22-8.15(m, 4H), 8.10(d, 1H), 7.61(t, 1H), 7.43(d, 2H), 7.21(s, 2H), 5.60 (s, 2H).
단계 2: 3-(6-아미노-1-4(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴의 제조
상기 실시예 1.1.2의 단계 2에서, 염화주석(II) 이수화물(SnCl2.2H2O, 250mg, 1.11 mmol) 및 진한 염산(Conc. HCl)(aq)(0.62ml, 7.40mmol)의 양을 변경하는 것을 제외하고는 상기 실시예 1.1.2의 단계 2와 동일한 공정을 상기 단계 1의 중간체 화합물(S6, 144mg, 0.37mmol)에 대해 수행하여 원하는 화합물(202, 131mg, 92%)을 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 8.14(t, 2H) 7.96(d, 1H), 7.11(s, 2H), 6.96(d, 2H), 6.48(d, 2H), 5.22(s, 2H), 5.04(s, 2H).
실시예 1.4.: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 204)의 제조
1.4.1. 3-(6-아미노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (중간체 화합물 S7)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(PPh3)4, Na2CO3, 디옥산/H2O, 100℃, 16시간.
디옥산(20mL) 중 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(500mg, 1당량), (3-시아노페닐)보론산(519mg, 1.2당량), Pd(PPh3)4(340mg, 0.1당량) 및 Na2CO3(625mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100mL)와 물(30mL) 사이에 분배하였다. 유기상을 분리하고, 염수(20mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 감압 하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 조(crude) 생성물 3-(6-아미노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴(500mg, 조)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS: m/z = 237.1(M+1, ESI+).
1.4.2. 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 204)의 제조.
시약 및 조건: (a) K2CO3, DMF, 80℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 1시간.
단계 1: 3-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴의 제조
DMF(10mL) 중 4-(클로로메틸)-2-메틸-1-니트로-벤젠(500mg, 1.27당량) 및 중간체 화합물 S7 또는 3-(6-아미노-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴(500mg, 1당량)의 용액에 K2CO3(585mg, 2당량)에 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 40%-70%, 10분)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴(200mg, 수율 24%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.56 - 8.42(m, 3H), 8.10 - 8.06(m, 1H), 8.00 - 7.92(m, 1H), 7.86 - 7.76(m, 1H), 7.40 - 7.30(m, 1H), 7.24 - 7.08(m, 3H), 5.65 - 5.43(m, 2H), 2.49(s, 3H). MS: m/z = 386.0(M+1, ESI+).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴(화합물 204)의 제조
에탄올(12mL) 및 물(4mL) 중 3-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴(150mg, 1당량)의 용액에 철가루(108mg, 1.95mmol, 5당량) 및 NH4Cl(166mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm; 이동상: [물(0.225% FA)-ACN]; B%: 23%-53%, 10분)로 정제했다. 화합물 204 또는 3-[6-아미노-1-[(4-아미노-3-메틸-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴(54.26mg, 수율 38%, 순도 98.27%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.54 - 8.49(m, 1H), 8.49 - 8.45(m, 1H), 8.37 - 8.31(m, 1H), 8.09 - 8.01(m, 1H), 7.84 - 7.70(m, 1H), 7.16 - 6.99(m, 2H), 6.91 - 6.86(m, 1H), 6.86 - 6.80(m, 1H), 6.58 - 6.45(m, 1H), 5.33 - 5.14(m, 2H), 4.98 - 4.57(m, 2H), 2.02 - 1.96(m, 3H).
실시예 1.5: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 206)의 제조
1.5.1. 4-클로로-1-(3-메틸-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (중간체 화합물 S8)의 제조
시약 및 조건: (a) K2CO3, DMAc, 80℃, 16시간.
DMAc(50mL) 중 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(0.8g, 1당량) 및 4-(클로로메틸)-2-메틸-1-니트로-벤젠(720mg, 0.8)의 용액에 K2CO3(1.30g, 2당량)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 조(crude) 생성물 4-클로로-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(800mg, 조)을 황색 고체로 수득하고 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS: m/z = 354.9(M+1, ESI+).
1.5.2. 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 206)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(PPh3)4, K2CO3, 디옥산/H2O, 100℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 1시간.
단계 1: 3-(6-아미노-1-(3-메틸-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 (3-시아노-2-플루오로-페닐)보론산(434mg, 1.2당량), 중간체 화합물 S8 또는 4-클로로-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(700mg, 1당량), Pd(PPh3)4(253mg, 219.63μmol, 0.1당량) 및 Na2CO3(465mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 40mL/분으로 기울기 0~80%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 (800mg, 수율 90%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 386.0(M+1, ESI+).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴(화합물 206)의 제조
물(4mL) 및 에탄올(12mL) 중 3-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(200mg, 1당량)의 용액에 철가루(138mg, 5당량) 및 NH4Cl(212mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Synergi C18 150*25mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 16%-46%, 11분)로 정제하고, 1차 정제 후 순도 89%의 화합물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(칼럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm*10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 10분)로 정제했다. 화합물 206 또는 3-[6-아미노-1-[(4-아미노-3-메틸-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(111.35mg, 수율 59%, 순도 97.78%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.21 - 8.10(m, 2H), 8.00 - 7.94(m, 1H), 7.66 - 7.52(m, 1H), 7.16 - 7.07(m, 2H), 6.92 - 6.80(m, 2H), 6.56 - 6.46(m, 1H), 5.34 - 5.15(m, 2H), 4.93 - 4.67(m, 2H), 2.06 - 1.88(m, 3H).
실시예 1.6: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 210)의 제조
1.6.1. 4-클로로-1-(4-니트로-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (중간체 화합물 S9)의 제조
시약 및 조건: (a) K2CO3, DMAc, 80℃, 16시간.
DMF(20mL) 중 4-(클로로메틸)-1-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤젠(3.39g, 1.2당량) 및 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(2g, 1당량)의 용액에 K2CO3(3.26g, 2당량)를 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 DMF를 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 45mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 4-클로로-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(2g, 수율 45%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 373.3(M+1, ESI+)
1.6.2. 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 210)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(PPh3)4, K2CO3, 디옥산/H2O, 100℃, 15시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 3-(6-아미노-1-(4-니트로-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(1mL) 중 (3-시아노페닐)보론산(236mg, 1.5당량), 중간체 화합물 S9 또는 4-클로로-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1당량), Pd(PPh3)4(124mg, 0.1당량), K2CO3(296mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산 및 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴(300mg, 수율 63%)을 황색 오일로 얻었다. MS: m/z = 440.1(M+1, ESI+).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 210)의 제조
물(5mL) 및 에탄올(15mL) 중 3-[6-아미노-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴(290mg, 1당량)의 용액에 철가루(190mg, 5당량) 및 NH4Cl(292mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 에탄올을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 ㎛; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 43%-63%, 10분)에 의해 정제하였다. 화합물 210 또는 3-[6-아미노-1-[[4-아미노-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴(59.98mg, 수율 21%, 순도 99.14%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.52(s, 1H), 8.47(d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.38(s, 1H), 8.06(d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.79(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.30(d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.23 - 7.17(m, 1H), 7.10(s, 2H), 6.78(d, J = 8.4Hz, 1H), 5.59(s, 2H), 5.30(s, 2H).
실시예 1.7: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 211)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(PPh3)4, K2CO3, 디옥산/H2O, 100℃, 15시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 3-(6-아미노-1-(4-니트로-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(1mL) 중 (3-시아노-2-플루오로-페닐)보론산(265mg, 1.5당량), 중간체 화합물 S9 또는 4-클로로-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1당량), Pd(PPh3)4(124mg, 0.1당량), K2CO3(296mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산 및 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 (350mg, 수율 71%)을 황색 오일로 얻었다. MS: m/z = 458.3(M+1, ESI+).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 211)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 3-[6-아미노-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(300mg, 1당량)의 용액에 철가루(183mg, 5당량) 및 NH4Cl(280mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 에탄올을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 ㎛; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 43%-63%, 10분)로 정제하였다. 화합물 211 또는 3-[6-아미노-1-[[4-아미노-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(41.58mg, 수율 15%, 순도 98.23%)를 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.20 - 8.11(m, 2H), 8.00(d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.60(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.30(d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.23 - 7.17(m, 1H), 7.15(s, 2H), 6.78(d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.60(s, 2H), 5.29(s, 2H).
실시예 1.8: 3-(6-아미노-1-(2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 213)의 제조
시약 및 조건: (a) K2CO3, DMAc, 80℃, 16시간; (b) Pd(PPh3)4, K2CO3, 디옥산/H2O, 80℃, 16시간.
단계 1: 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (중간체 화합물 S10)의 제조
DMAc(100mL) 중 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(8g, 47.18mmol, 1당량) 및 2-(브로모메틸)-1,3-디플루오로-벤젠(11.72g, 56.61mmol, 1.2당량)의 용액에 K2CO3(13.04g, 94.36mmol, 2당량)를 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 80g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 60mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 중간체 화합물 S10 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(4g, 13.53mmol, 수율 29%)을 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.35 - 7.77(m, 1H), 7.53 - 7.41(m, 1H), 7.40 - 7.31(m, 2H), 7.19 - 6.98(m, 2H), 5.60 - 5.20(m, 2H).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 213)의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 (3-시아노-2-플루오로-페닐)보론산(251mg, 1.5당량), 중간체 화합물 S10 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(300mg, 1당량), Pd(PPh3)4(117mg, 0.1당량), K2CO3(280mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에서 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 45%-65%, 10분)로 정제했다. 화합물 213 또는 3-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 (118.51mg, 수율 30%, 순도 98.93%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.22 - 8.09(m, 2H), 7.95(d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.60(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.52 - 7.39(m, 1H), 7.19(s, 2H), 7.13(t, J = 8.0 Hz, 2H), 5.45(s, 2H).
실시예 1.9: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 209)의 제조
시약 및 조건: (a) K2CO3, DMAc, 60℃, 16시간; (b) Pd(PPh3)4, K2CO3, 디옥산/H2O, 80℃, 16시간; (c) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 80℃, 3시간.
단계 1: 4-클로로-1-(2-플루오로-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (중간체 화합물 S11)의 제조
DMF(20mL) 중 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(5.1g, 1당량) 및 1-(브로모메틸)-2-플루오로-4-니트로-벤젠(7g, 1당량)의 용액에 K2CO3(8.3g, 2당량)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 40g SepaFlash® 실리카 플래시 칼럼, 40mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 중간체 화합물 S11 또는 4-클로로-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(5g, 수율 52%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.15 - 8.11(m, 1H), 8.08 - 8.06(m, 1H), 8.05 - 8.01(m, 1H), 7.47 - 7.38(m, 2H), 7.33(t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.57(s, 2H). MS: m/z = 323.3(M+1, ESI+).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(2-플루오로-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 (3-시아노페닐)보론산(341mg, 1.5당량), 중간체 화합물 S11 또는 4-클로로-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(500mg, 1당량), Pd(PPh3)4(179mg, 0.1당량), K2CO3(428mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에서 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 45%-65%, 10분)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴 (200mg, 수율 33%, 순도 99%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.55 - 8.51(m, 1H), 8.49 - 8.46(m, 1H), 8.31 - 8.26(m, 1H), 8.18 - 8.01(m, 4H), 7.38 - 7.28(m, 1H), 7.22 - 7.05(m, 2H), 5.62(s, 2H). MS: m/z = 389.9(M+1, ESI+).
단계 3: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 209)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 3-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴(200mg, 513.69 μmol, 1당량)의 용액에 철가루(143mg, 5당량) 및 NH4Cl(219mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 에탄올과 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 30%-50%, 10분)로 정제했다. 화합물 209 또는 3-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴 (36.42mg, 수율 19%, 순도 97.66%)를 회백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.51(s, 1H), 8.49 - 8.44(m, 1H), 8.35(s, 1H), 8.08 - 8.01(m, 1H), 7.79(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.07(s, 2H), 6.88(t, J = 8.5 Hz, 1H), 6.36 - 6.22(m, 2H), 5.40(s, 2H), 5.28(s, 2H).
실시예 1.10: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴 (화합물 207)의 제조
시약 및 조건: (a1) NBS, AIBN, CCl4, 90℃, 15시간; (a2) K2CO3, DMAc, 80℃, 3시간; (b) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 2시간, MW; (c) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 80℃, 1시간.
단계 1: 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (중간체 화합물 S12)의 제조
테트라클로로메탄(50mL) 중 1,3-디플루오로-2-메틸-5-니트로-벤젠(2g, 11.55mmol, 1당량)의 용액에 NBS(3.08g, 17.33mmol, 1.5당량) 및 AIBN(190mg, 1.16mmol, 0.1당량)을 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 90℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물에 DMAc(50mL), 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(1.96g, 11.55mmol, 1당량) 및 K2CO3(3.19g, 23.11mmol, 2당량)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물에 물(130mL) 및 에틸 아세테이트(130mL)를 첨가하고, 층을 분리하였다. 수성 물질을 에틸 아세테이트(130mL x 2)로 추출하였다. 유기상을 합하여 염수(150mL x 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(40g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 60mL/분으로 기울기 0~30%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 중간체 화합물 S12 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (1.5g, 4.26mmol, 수율 37%, 순도 96.7%)를 황색 고체로 얻었다.
단계 2: 3-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴의 제조
중간체 화합물 S12 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (500mg, 1.47mmol, 1당량), (3-시아노페닐)보론산(323mg, 2.20mmol, 1.5당량), K2CO3(405mg, 2.94mmol, 2당량) 및 Pd(dppf)Cl2(107mg, 146.77μmol, 0.1당량)를 디옥산(6mL) 및 물(2mL) 중에 마이크로파 튜브에 넣었다. 밀봉된 튜브를 마이크로파 하에 2시간 동안 110℃에서 가열하였다. 그 후, 혼합물에 물(80mL) 및 에틸 아세테이트(80mL)를 첨가하고, 층을 분리하였다. 수성 물질을 에틸 아세테이트(80mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(20g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 50mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴 (200mg, 441.90 μmol, 수율 30%, 순도 90%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.49(d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.47 - 8.41(m, 1H), 8.35(s, 1H), 8.16 - 8.07(m, 2H), 8.06 (td, J = 1.3, 7.8 Hz, 1H), 7.79(t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.16(s, 2H), 5.55(s, 2H). MS: m/z = 408.0(M+1, ESI+).
단계 3: 3-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴 (화합물 207)의 제조
에탄올(8mL) 및 물(2mL) 중에 3-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴 (200mg, 491.00 μmol, 1당량)의 용액에 철가루(137mg, 2.45mmol, 5당량) 및 NH4Cl(210mg, 3.93mmol, 8당량)을 첨가했다. 그 다음, 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 그 후, 혼합물에 물(30mL)을 첨가한 다음, 에틸 아세테이트(30mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% 암모니아 수산화물)]; B%: 30%-70%, 15분)로 정제했다. 화합물 207 또는 3-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]벤조니트릴 (62.95mg, 163.33 μmol, 수율 33%, 순도 97.91%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.49(t, J = 1.4 Hz, 1H), 8.45(td, J = 1.4, 7.9 Hz, 1H), 8.29(s, 1H), 8.05(td, J = 1.3, 7.7 Hz, 1H), 7.79(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.07(s, 2H), 6.30 - 6.06(m, 2H), 5.80(s, 2H), 5.25(s, 2H).
실시예 1.11: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 203)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 80℃, 3시간.
단계 1: 3-(6-아미노-1-(2-플루오로-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 (3-시아노-2-플루오로-페닐)보론산(383mg, 2.33mmol, 1.5당량), 중간체 화합물 S11 또는 4-클로로-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(500mg, 1당량), Pd(PPh3)4(179mg, 0.1당량), K2CO3(428mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 30mL/분으로 기울기 0~80%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 (300mg, 수율 48%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 407.9(M+1, ESI+).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 203)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 3-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(209mg, 1당량)의 용액에 철가루(143mg, 5당량) 및 NH4Cl(219mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 에탄올을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 33%-53%, 10분)로 정제했다. 80% 순도의 원하는 화합물을 얻은 다음, 잔류물을 두 번째 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 22 %-52%, 7분)로 정제했다. 화합물 203 또는 3-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(62.37mg, 수율 31%, 순도 97.40%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.21 - 8.10(m, 2H), 7.98(d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.61(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14(s, 2H), 6.97 - 6.84(m, 1H), 6.32(s, 1H), 6.31 - 6.28(m, 1H), 5.42(s, 2H), 5.27(s, 2H).
실시예 1.12: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴(화합물 208)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl4, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 15시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 80℃, 1시간.
단계 1: 3-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴의 제조
물(2mL) 및 디옥산(8mL) 중 중간체 화합물 S12 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1.17mmol, 1당량)의 용액에 (3-시아노-2-플루오로-페닐)보론산(300mg, 1.82mmol, 1.55당량), Pd(dppf)Cl2(86mg, 117.41μmol, 0.1당량) 및 K2CO3(325mg, 2.35mmol, 2당량)을 첨가하였다. 그 다음, 혼합물을 110℃에서 15시간 동안 교반하였다. 그 후 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었고, 이를 플래시 실리카겔 크로마토그래피(12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 50mL/분으로 기울기 20~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 3-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(140mg, 322.25 μmol, 수율 27%, 순도 97.9%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.20 - 8.12(m, 2H), 8.12 - 8.05(m, 2H), 7.99(d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.60(t, J = 7.8, 1H), 7.22(s, 2H), 5.54(s, 2H). MS: m/z = 426.1(M+1, ESI+).
단계 2: 3-(6-아미노-1-(4-아미노-2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-2-플루오로벤조니트릴 (화합물 208)의 제조
에탄올(8mL) 및 물(2mL) 중 3-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴(140mg, 329.16μmol, 1당량)의 용액에 철가루(92mg, 1.65mmol, 5당량) 및 NH4Cl(140mg, 2.63mmol, 8당량)을 첨가했다. 그 다음, 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 혼합물에 물(50mL)을 첨가한 다음, 에틸 아세테이트(30mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)]; B%: 35%-75%, 15분)로 정제했다. 화합물 208 또는 3-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 (44.01mg, 109.41 μmol, 수율 33%, 순도 98.28%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.14(dd, J = 6.7, 7.7 Hz, 2H), 7.93(d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.60(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.13(s, 2H), 6.27 - 6.07(m, 2H), 5.80(s, 2H), 5.24(s, 2H).
실시예 1.13: 4-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (화합물 234)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 80℃, 16시간.
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 중간체 화합물 S10 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(300mg, 1당량), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카르보니트릴(279mg, 1.2당량), K2CO3(279mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2(74mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 μm; 이동상: [물(0.225% FA)-ACN]; B%: 38%-58%, 10분)로 정제했다. 화합물 234 또는 4-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(124.39mg, 수율 34%, 순도 99.96%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.96(d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.58(d, J = 0.6 Hz, 1H), 8.41 - 8.39(m, 1H), 8.39 - 8.36(m, 1H), 7.51 - 7.41(m, 1H), 7.25(s, 2H), 7.17 - 7.08(m, 2H), 5.47(s, 2H).
실시예 1.14: 4-(6-아미노-1-(4-아미노-2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 226)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 80℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 80℃, 2시간.
단계 1: 4-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 중간체 화합물 S12 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1.17mmol, 1당량)의 용액에 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카르보니트릴(540mg, 2.35mmol, 2당량), Pd(dppf)Cl2(86mg, 117.41μmol, 0.1당량) 및 K2CO3(325mg, 2.35mmol, 2당량)을 첨가하였다. 그 다음 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(20g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 50mL/분으로 기울기 0~60%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 4-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(300mg, 625.68 μmol, 수율 53%, 순도 85%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.96(d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.58(s, 1H), 8.43(s, 1H), 8.38(dd, J = 1.7, 5.1 Hz, 1H), 8.09(br d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.28(br s, 2H), 5.56(s, 2H). MS: m/z = 409.1(M+1, ESI+).
단계 2: 4-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (화합물 226)
물(3mL) 및 에탄올(9mL) 중 4-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(300mg, 734.72μmol, 1당량)의 혼합물에 철가루(205mg, 3.67mmol, 5당량) 및 NH4Cl(314mg, 5.88mmol, 8당량)을 첨가했다. 그 다음, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 혼합물에 물(30mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(30mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [헥산-에탄올(0.1% NH3·H2O)]; B%: 30%-70%, 15분)로 정제했다. 화합물 226 또는 4-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(70.80mg, 178.73 μmol, 수율 24%, 순도 95.51%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.96(dd, J = 0.8, 5.1 Hz, 1H), 8.58(dd, J = 0.8, 1.6 Hz, 1H), 8.46 - 8.24(m, 2H), 7.19(s, 2H), 6.29 - 6.08(m, 2H), 5.80(s, 2H), 5.26(s, 2H).
실시예 1.15: 4-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 230)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 3시간.
단계 1: 4-(6-아미노-1-(3-메틸-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 중간체 화합물 S8 또는 4-클로로-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(500mg, 1당량), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카르보니트릴(541mg, 1.5당량), K2CO3(433mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2(114mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소(N2) 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 30mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 4-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(500mg, 수율 82.49%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.99(dd, J = 0.7, 5.1 Hz, 1H), 8.56(s, 1H), 8.43(dd, J = 1.7, 5.1 Hz, 1H), 7.98 - 7.91 (m, 1H), 7.39 - 7.31(m, 1H), 7.30 - 7.07(m, 3H), 5.68 - 5.49(m, 2H), 2.49 - 2.47(m, 3H). MS: m/z = 387.1(M+1, ESI+).
단계 2: 4-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 230)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 4-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(400mg, 1당량)의 용액에 철가루(289mg, 5당량) 및 NH4Cl(443mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 15%-45%, 11.5 분)로 정제했다. 화합물 230 또는 4-[6-아미노-1-[(4-아미노-3-메틸-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(41.4mg, 수율 7%, 순도 95.38%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.97(dd, J = 0.6, 5.1 Hz, 1H), 8.60(d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.44(s, 1H), 8.40(dd, J = 1.7, 5.1 Hz, 1H), 7.17(s, 2H), 6.93 - 6.79(m, 2H), 6.52(d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.81(s, 2H), 1.99(s, 3H).
실시예 1.16: 6-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴(화합물 215)의 제조
시약 및 조건: (a) NaOMe, MeOH, 25℃, 0.5시간; (b) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간; (c) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 3시간.
단계 1: (6-시아노-2-피리딜)술피닐옥시 나트륨 (중간체 화합물 S13)의 제조
메탄올(10mL) 중 나트륨 메톡사이드(212mg, 1당량)의 용액에 메틸 3-[(6-시아노-2-피리딜)술포닐]프로파노에이트(1g, 1당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압하에 농축하여 메탄올을 제거하여 잔류물을 얻었다. 중간체 화합물 S13의 조(crude) 생성물 또는 (6-시아노-2-피리딜)술피닐옥시 나트륨 (1g, 조)을 황색 고체로서 수득하고 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS: m/z = 167.0(M+1, ESI+).
단계 2: 6-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴의 제조
디옥산(5mL) 중 중간체 화합물 S13 또는 4-클로로-1-[(4-니트로페닐) 메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(500mg, 1당량), (6-시아노-2-피리딜))술피닐옥시 나트륨(374mg, 1.2당량), 팔라듐 아세테이트(36mg, 0.1당량), Cy3P(92mg, 0.2당량) 및 K2CO3(453mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 70~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 6-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(200mg, 504.92 μmol, 수율 31%, 순도 94%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.66(dd, J = 1.3, 8.0 Hz, 1H), 8.50(s, 1H), 8.35 - 8.30(m, 1H), 8.28 - 8.24(m, 1H), 8.20(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.20(s, 2H), 5.64(s, 2H). MS: m/z = 373.1(M+1, ESI+).
단계 3: 6-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 215)의 제조
물(5mL) 및 에탄올(15mL) 중 6-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(200mg, 1당량)의 용액에 철가루(150mg, 5당량) 및 NH4Cl(230mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 에탄올과 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 10%-40%, 11.5 분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 89%로 얻었고, 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*50*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)];B%: 20%-60%, 15분)로 재정제하여, 원하는 화합물을 순도 91%로 얻었다. 그런 다음 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 16%-46%, 10분)로 정제했다. 화합물 215 또는 6-[6-아미노-1-[(4-아미노페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (21.55mg, 수율 11%, 순도 98.25%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.65(d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.39(s, 1H), 8.35 - 8.27(m, 1H), 8.26 - 8.22(m, 1H), 7.12(s, 2H), 6.94(br d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.48(br d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.25(s, 2H), 5.03(s, 2H).
실시예 1.17: 6-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (화합물 219)
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, THF/H2O, 80℃, 4시간.
단계 1: 6-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴의 제조
디옥산(5mL) 중 중간체 화합물 S13 또는 (6-시아노-2-피리딜)술피닐옥시 나트륨 (495.01mg, 2.60mmol, 1.2당량), 중간체 화합물 S11 또는 4-클로로-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(700mg, 2.17mmol, 1당량), 팔라듐 아세테이트(48.70mg, 216.93μmol, 0.1당량), Cy3P(121.67mg, 433.86μmol, 140.66 μL, 0.2당량) 및 K2CO3(599.64mg, 4.34mmol, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 40mL/분으로 기울기 10~50%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 6-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (220mg, 503.88 μmol, 수율 26%, 순도 89.4%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.66(dd, J = 1.1, 7.9 Hz, 1H), 8.49(s, 1H), 8.36 - 8.29(m, 1H), 8.28 - 8.23(m,1H), 8.16(dd, J = 2.3, 9.8 Hz, 1H), 8.04(dd, J = 1.8, 8.6 Hz, 1H), 7.29(t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.22(s, 2H), 5.64(s, 2H).
단계 2: 6-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (화합물 219)의 제조
THF(10mL) 및 물(2mL) 중 6-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(200mg, 512.39μmol, 1당량)의 혼합물에 철가루(143mg, 2.56mmol, 5당량) 및 NH4Cl(219.27mg, 4.10mmol, 8당량)을 첨가했다. 그 다음 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액에 50mL 포화 NaHCO3 수용액을 첨가하고, 에틸 아세테이트(50mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하여 잔류물을 제공하였다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)]; B%: 35%-75%, 15분)로 정제했다. 화합물 219 또는 6-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (56.69mg, 151.63 μmol, 수율 30%, 순도 96.38%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.65(dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 8.39(s, 1H), 8.34 - 8.29(m, 1H), 8.26 - 8.22(m, 1H), 7.13(s, 2H), 6.95 - 6.79(m, 1H), 6.31(dd, J = 1.8, 5.4 Hz, 1H), 6.28(s, 1H), 5.40(s, 2H), 5.29(s, 2H).
실시예 1.18: 6-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (화합물 223)
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, THF/H2O, 80℃, 5시간.
단계 1: 6-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴의 제조
디옥산(15mL) 중 중간체 화합물 S13 또는 나트륨 6-시아노피리딘-2-술피네이트(530mg, 2.79mmol, 2당량), 중간체 화합물 S12 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(470mg, 1.38mmol, 0.99당량), 팔라듐 아세테이트(31mg, 139.36μmol, 0.1당량), Cy3P(78mg, 278.72μmol, 0.2당량) 및 K2CO3(385mg, 2.79mmol, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(20g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 50mL/분으로 기울기 30~60%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 6-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(180mg, 290.95 μmol, 수율 21%, 순도 66%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.65(dd, J = 1.1, 8.0 Hz, 1H), 8.38(s, 1H), 8.35 - 8.33(m, 1H), 8.26 - 8.21(m,1H), 8.12 - 8.06(m, 2H), 7.22(s, 2H), 5.57(s, 2H). MS: m/z = 409.0(M+1, ESI+).
단계 2: 6-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (화합물 223)
THF(10mL) 및 물(3mL) 중 6-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(180mg, 290.95 μmol, 66% 순도, 1당량)의 혼합물에 철가루(81mg, 1.45mmol, 5당량) 및 NH4Cl(124mg, 2.33mmol, 8당량)을 첨가했다. 그 다음, 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액에 포화 NaHCO3 수용액(50mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(80mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% 암모니아 수산화물)]; B%: 40%-80%, 10분)로 정제했다. 화합물 223 또는 6-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (24.24mg, 60.94 μmol, 수율 21%, 순도 95.11%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.65(dd, J = 0.9, 8.0 Hz, 1H), 8.35(s, 1H), 8.34 - 8.29(m, 1H), 8.27 - 8.21(m,1H), 7.13(s, 2H), 6.18(d, J = 10.3 Hz, 2H), 5.80(s, 2H), 5.27(s, 2H).
실시예 1.19: 6-(6-아미노-1-(2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴(화합물 231)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 10시간, MW.
디옥산(2mL) 중 (6-시아노-2-피리딜)술피닐옥시나트륨(231mg, 1.2당량), 중간체 화합물 S10 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘 -6-아민(300mg, 1당량), 팔라듐 아세테이트(23mg, 0.1당량), Cy3P(57mg, 0.2당량) 및 K2CO3(280mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 마이크로웨이브 조건에서 120℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(칼럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 37%-67%, 11분)로 정제했다. 화합물 231 또는 6-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(70.52mg, 수율 18%, 순도 95.65%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.65(dd, J = 1.0, 8.0 Hz, 1H), 8.36(s, 1H), 8.33 - 8.27(m, 1H), 8.26 - 8.20(m, 1H), 7.51 - 7.41(m, 1H), 7.18(s, 2H), 7.12(t, J = 8.0 Hz, 2H), 5.48(s, 2H).
실시예 1.20: 6-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴(화합물 227)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 6-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴의 제조
디옥산(5mL) 중 중간체 화합물 S13 또는 (6-시아노-2-피리딜)술피닐옥시나트륨 (356mg, 1.2당량), 중간체 화합물 S8 또는 4-클로로-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(500mg, 1당량), 팔라듐 아세테이트(35mg, 0.1당량), Cy3P(88mg, 0.2당량) 및 K2CO3(433mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 24g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 50~80%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 6-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (300mg, 수율 40%, 순도 81%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.66(dd, J = 1.1, 7.9 Hz, 1H), 8.48(s, 1H), 8.37 - 8.29(m, 1H), 8.28 - 8.22(m, 1H), 7.95(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.32(s, 1H), 7.24 - 7.14(m, 3H), 5.55(s, 2H), 2.47(s, 3H). MS: m/z = 387.1(M+1, ESI+).
단계 2: 6-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 227)의 제조
물(5mL) 및 에탄올(15mL) 중 6-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(311mg, 1당량)의 용액에 철가루(225mg, 5당량) 및 NH4Cl(344mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 에탄올과 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 10%-40%, 11.5 분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 88%로 얻었고, 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-SiOH 250*50*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)];B%: 15%-55%, 15분)로 재정제하여, 원하는 화합물을 순도 90%로 얻었다. 그런 다음 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-SiOH 250*50*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)]; B%: 15%-55%, 15분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 91%로 얻었다. 마지막으로 잔류물을 분취HPLC(칼럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 21%-51%, 10분)로 정제했다. 화합물 227 또는 6-[6-아미노-1-[(4-아미노-3-메틸-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(30.69mg, 수율 10 %, 순도 98.87%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.65(dd, J = 1.1, 8.0 Hz, 1H), 8.39(s, 1H), 8.34 - 8.27(m, 1H), 8.26 - 8.20(m, 1H), 7.11(s, 2H), 6.86(s, 1H), 6.82(dd, J = 1.9, 8.1 Hz, 1H), 6.52(d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.80(s, 2H), 1.99(s, 3H).
실시예 1.21: 2-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴(화합물 216)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 2-(6-아미노-1-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴의 제조
디옥산(5mL) 중 나트륨 4-시아노피리딘-2-술피네이트(298mg, 1.2당량), 중간체 화합물 S3 또는 4-클로로-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민의 혼합물(400mg, 1당량), 팔라듐 아세테이트(29mg, 0.1당량), Cy3P(73mg, 0.2당량) 및 K2CO3(362mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징했다. 그 다음 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 30mL/분으로 기울기 70-90%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 2-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(300mg, 수율 55%, 순도 89%)은 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 373.1(M+1, ESI+).
단계 2: 2-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴 (화합물 216)의 제조
물(5mL) 및 에탄올(15mL) 중 2-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(300mg, 1당량)의 용액에 철가루(225mg, 5당량) 및 NH4Cl(345mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 에탄올과 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취 HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 18%-48%, 8분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 80%로 얻었다. 그런 다음 잔류물을 2차 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-SiOH 250*50*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)]; B%: 15%-55%, 15분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 80%로 얻었다. 마지막으로 잔류물을 3차 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 17%-47%, 10분)로 정제했다. 화합물 216 또는 2-[6-아미노-1-[(4-아미노페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(23.18mg, 수율 8%, 순도 95.02%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.54(d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.22(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.92(t, J = 2.1 Hz, 1H), 8.45(s, 1H), 7.13(s, 2H), 6.96(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.63 - 6.37(m, 2H), 5.25(s, 2H), 5.04(s, 2H). HRMS-TOF: 343.1408.
실시예 1.22: 2-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴 (화합물 220)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 1시간.
단계 1: 2-(6-아미노-1-(2-플루오로-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴의 제조
디옥산(5mL) 중 나트륨 4-시아노피리딘-2-술피네이트(424mg, 1.2당량), 중간체 화합물 S11 또는 4-클로로-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d ]피리미딘-6-아민(600mg, 1당량), 팔라듐 아세테이트(41mg, 0.1당량), Cy3P(104mg, 0.2당량) 및 K2CO3(513mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에서 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 30mL/분으로 기울기 70-90%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 2-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(300mg, 수율 41%, 순도 99%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.13 - 9.06(m, 1H), 8.68(dd, J = 0.9, 1.5 Hz, 1H), 8.55(s, 1H), 8.16(dd, J = 2.3, 9.9 Hz, 1H), 8.09(dd, J = 1.6, 4.9 Hz, 1H), 8.03(dd, J = 2.1, 8.5 Hz, 1H), 7.30(t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.21(s, 2H), 5.63(s, 2H).
단계 2: 2-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴 (화합물 220)의 제조
물(5mL) 및 에탄올(15mL) 중 2-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(300mg, 1당량)의 용액에 철가루(214mg, 5당량) 및 NH4Cl(328mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 농축하여 에탄올과 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH 컬럼: Welch Ultimate XB-SiOH 250*50*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)];B%: 15%-55%, 15분(0.1% NH3·H2O)];B%: 30%-70%, 15분)으로 정제하여, 분취HPLC 후 원하는 화합물을 순도 90%로 얻었고, 잔류물을 2차 분취HPLC(칼럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% 암모니아 수산화물)]; B%: 30%-70%, 15 분)로 정제했다. 화합물 220 또는 2-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(33.67mg, 89.81μmol, 96.12% 순도)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.08(dd, J = 0.7, 5.0 Hz, 1H), 8.68(d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.46(s, 1H), 8.08(dd, J = 1.6, 5.0 Hz, 1H), 7.13(s, 2H), 6.88(t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.33 - 6.30(m, 1H), 6.29(s, 1H), 5.40(s, 2H), 5.29(s, 2H).
실시예 1.23: 2-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴 (화합물 224)
시약 및 조건: (a) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 80℃, 3시간; (b) Pd(OAc)2, K2CO3, PCy3, 디옥산, 120℃, 16시간.
단계 1: 1-(4-아미노-2,6-디플루오로벤질)-4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민 (중간체 화합물 S14)의 제조
물(3mL) 및 에탄올(10mL) 중 중간체 화합물 S12 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(700mg, 1.38mmol, 67% 순도, 1당량)의 혼합물에 철가루(385mg, 6.88mmol, 5당량) 및 NH4Cl(590mg, 11.01mmol, 8당량)을 첨가했다. 이어서, 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 혼합물에 물(30mL)을 첨가하고 에틸 아세테이트(30mL x 3)로 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)]; B%: 20%-60%, 15분)로 정제했다. 중간체 화합물 S14 또는 1-(4-아미노-2,6-디플루오로벤질)-4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1.03mmol, 수율 75%, 순도 88%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 7.92(s, 1H), 7.32(s, 2H), 6.25 - 6.09(m, 2H), 5.80(s, 2H), 5.18(s, 2H).
단계 2: 2-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴 (화합물 224)
디옥산(10mL) 중 (4-시아노-2-피리딜)술피닐옥시 나트륨(550mg, 2.89mmol, 2.55당량), 중간체 화합물 S14 또는 1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]-4-클로로-피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1.13mmol, 88% 순도, 1당량), 팔라듐 아세테이트(25mg, 113.30μmol, 0.1당량), Cy3P(63mg, 226.59μmol, 73.46 μL, 0.2당량) 및 K2CO3(313mg, 2.27mmol, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(20g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 40mL/분으로 기울기 20~40%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 224 또는 2-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(70mg, 181.87 μmol, 수율 16%, 순도 98.30%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.07(dd, J = 0.8, 5.0 Hz, 1H), 8.67(dd, J = 0.9, 1.5 Hz, 1H), 8.41(s, 1H), 8.06(dd, J = 1.7, 5.0 Hz, 1H), 7.11(s, 2H), 6.27 - 6.11(m, 2H), 5.79(s, 2H), 5.26(s, 2H).
실시예 1.24: 2-(6-아미노-1-(2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴 (화합물 232)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간.
디옥산(5mL) 중 (4-시아노-2-피리딜)술피닐옥시나트륨(232mg, 1.2당량), 중간체 화합물 S10 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(300mg, 1당량), 팔라듐 아세테이트(23mg, 0.1당량), Cy3P(57mg, 0.2당량) 및 K2CO3(281mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에서 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3 μm; 이동상: [물(0.225% FA)-ACN]; B%: 43%-63%, 10분)로 정제했다. 화합물 232 또는 2-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴 (66.33mg, 수율 18%, 순도 99.34%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.06(d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.67(s, 1H), 8.44 - 8.38(m, 1H), 8.09 - 8.03(m, 1H), 7.51 - 7.39(m, 1H), 7.22 - 7.15(m, 2H), 7.14 - 7.09(m, 2H), 5.47(s, 2H).
실시예 1.25: 2-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴 (화합물 228)
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, K2CO3, Cy3P, 디옥산, 120℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 2-(6-아미노-1-(3-메틸-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴의 제조
디옥산(5mL) 중 (4-시아노-2-피리딜)술피닐옥시 나트륨 (215mg, 1.2당량), 중간체 화합물 S8 또는 4-클로로-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(300mg, 1당량), 팔라듐 아세테이트(21mg, 0.1당량), Cy3P(52mg, 0.2당량) 및 K2CO3(260mg, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 24g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 50~80%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 2-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(200mg, 수율 55%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 387.1(M+1, ESI+).
단계 2: 2-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)이소니코티노니트릴 (화합물 228)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 2-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(200mg, 1당량)의 용액에 철가루(145mg, 5당량) 및 NH4Cl(221mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 20%-50%, 8분)로 정제하고, 분취HPLC 후 순도 80%의 원하는 화합물을 얻었고, 잔류물을 2차 분취HPLC로 정제했다(컬럼: Shim-pack C18 150*25*10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 16%-46%, 10분). 화합물 228 또는 2-[6-아미노-1-[(4-아미노-3-메틸-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(19.65mg, 수율 10%, 순도 96.15%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.08(dd, J = 0.8, 4.9 Hz, 1H), 8.67(dd, J = 0.9, 1.6 Hz, 1H), 8.45(s, 1H), 8.07(dd, J = 1.6, 5.0 Hz, 1H), 7.10(s, 2H), 6.86(s, 1H), 6.82(dd, J = 1.9, 8.1 Hz, 1H), 6.51(d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.23(s, 2H), 4.80(s, 2H), 1.98(s, 3H).
[0001] 실시예 1.26: 5-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴 (화합물 217)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, THF/H2O, 60℃, 3시간.
단계 1: 5-(6-아미노-1-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 (5-시아노-3-피리딜)보론산(583mg, 1.5당량), 중간체 화합물 S3 또는 4-클로로-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(800mg, 1당량), K2CO3(726mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2(192mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 후, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 24g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 30mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 5-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(800mg, 수율 82%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.63 - 9.52(m, 1H), 9.37 - 9.31(m, 2H), 9.25 - 9.23(m, 1H), 9.15 - 9.12(m, 2H) 7.46 - 7.42(m, 2H), 5.65 - 5.60(m, 2H). MS: m/z = 373.1(M+1, ESI+).
단계 2: 5-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴 (화합물 217)의 제조
THF(15mL) 및 물(5mL) 중 5-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(300mg, 1당량)의 용액에 철가루(224mg, 5당량) 및 NH4Cl(344mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 THF 및 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 10%-40%, 11.5 분)로 정제했다. 화합물 217 또는 5-[6-아미노-1-[(4-아미노페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(27.63mg, 수율 7%, 순도 98.17%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.54(d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.22(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.92(t, J = 2.1 Hz, 1H), 8.45(s, 1H), 7.13(s, 2H), 6.96(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.63 - 6.37(m, 2H), 5.25(s, 2H), 5.04(s, 2H).
실시예 1.27: 5-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴 (화합물 221)
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 5-(6-아미노-1-(2-플루오로-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 (5-시아노-3-피리딜)보론산(343mg, 1.5당량), 중간체 화합물 S11 또는 4-클로로-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3, 4-d]피리미딘-6-아민(500mg, 1당량), K2CO3(428mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2(113mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 30mL/분으로 기울기 0~80%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 5-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(300mg, 수율 50%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 390.9(M+1, ESI+).
단계 2: 5-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴 (화합물 221)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 5-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(300mg, 1당량)의 용액에 철가루(214mg, 5당량) 및 NH4Cl(328mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 13%-43%, 11.5 분)로 정제했다. 화합물 221 또는 5-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(37.61mg, 수율 13%, 순도 94.57%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.54(d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.23(d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.91(t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.45(s, 1H), 7.14(s, 2H), 6.90(t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.31(d, J = 10.8 Hz, 2H), 5.41(s, 2H), 5.29(s, 2H).
실시예 1.28: 5-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴 (화합물 225)
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 100℃, 15시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 80℃, 2시간.
단계 1: 5-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 중간체 화합물 S12 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1.17mmol, 1당량)의 용액에 (5-시아노-3-피리딜)보론산(346mg, 2.34mmol, 2당량), Pd(dppf)Cl2(86mg, 117.00μmol, 0.1당량) 및 K2CO3(323mg, 2.34mmol, 2당량)를 첨가했다. 그 다음 혼합물을 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(20g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 50mL/분으로 기울기 0~60%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 225 또는 화합물 5-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(400mg, 852.27 μmol, 수율 73%, 순도 87%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.51(d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.21(d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.89(t, J = 2.1 Hz, 1H), 8.44(s, 1H), 8.09(d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.23(s, 2H), 5.55(s, 2H). MS: m/z = 409.0(M+1, ESI+).
단계 2: 5-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴 (화합물 225)
물(3mL) 및 에탄올(9mL) 중 5-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(400mg, 979.62μmol, 1당량)의 혼합물에 철가루(274mg, 4.90mmol, 5당량) 및 NH4Cl(420mg, 7.84mmol, 8당량)을 첨가했다. 그 다음, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 이어서, 혼합물에 물(30mL)을 첨가한 다음, 에틸 아세테이트(30mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)]; B%: 30%-70%, 15분)로 정제하여 불순한 생성물을 얻었다. 불순한 생성물을 분취HPLC(컬럼: Welch Ultimate XB-CN 250*50*10μm; 이동상: [Hexane-EtOH(0.1% NH3·H2O)]; B%: 25%-65%, 15 분)로 재정제했다. 화합물 225 또는 5-[6-아미노-1-[(4-아미노-2,6-디플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(113.05mg, 297.07 μmol, 수율 30%, 순도 99.42%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.52(d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.21(d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.89(t, J = 2.1 Hz, 1H), 8.38(s, 1H), 7.13(s, 2H), 6.18(d, J = 10.1 Hz, 2H), 5.25(s, 2H).
실시예 1.29: 5-(6-아미노-1-(2,6-디플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴 (화합물 233)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 16시간.
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 중간체 화합물 S10 또는 4-클로로-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(400mg, 1당량), (5-시아노-3-피리딜)붕소산(300mg, 1.5당량), K2CO3(373mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2(99mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에서 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Unisil 3-100 C18 Ultra 150*50mm*3μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 45%-65%, 10분)으로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 80%로 얻은 다음 두 번째 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Luna C18 150*25mm* 10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 31%-61% ,10 분)로 정제하였다. 화합물 233 또는 5-[6-아미노-1-[(2,6-디플루오로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(69.15mg, 수율 14%, 순도 97.76%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.96(d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.58(d, J = 0.6 Hz, 1H), 8.41 - 8.39(m, 1H), 8.39 - 8.36(m, 1H), 7.51 - 7.41(m, 1H), 7.25(s, 2H), 7.17 - 7.08(m, 2H), 5.47(s, 2H).
실시예 1.30: 5-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴 (화합물 229)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산, 110℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 5-(6-아미노-1-(3-메틸-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴의 제조
디옥산(10mL) 중 (5-시아노-3-피리딜)보론산(208mg, 1.5당량), 중간체 화합물 S8 또는 4-클로로-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(300mg, 1당량), K2CO3(260mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2(68.87mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 24g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 0~100%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 5-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(300mg, 수율 82%)을 황색 고체로 얻었다. MS: m/z = 386.9(M+1, ESI+).
단계 2: 5-(6-아미노-1-(4-아미노-3-메틸벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)니코티노니트릴 (화합물 229)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 5-[6-아미노-1-[(3-메틸-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(400mg, 1당량)의 용액에 철가루(289mg, 5당량) 및 NH4Cl(443mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Shim-pack C18 150*25*10μm; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 12%-42%, 10분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 92%로 얻은 다음 혼합물을 2차 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 암모니아 수산화물 v/v)-ACN]; B%: 14%-44%, 11.5분)로 정제했다. 화합물 229 또는 5-[6-아미노-1-[(4-아미노-3-메틸-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-3-카르보니트릴(58.12mg, 수율 15%, 순도 97.57%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.53(d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.22(d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.91(t, J = 2.1 Hz, 1H), 8.43(s, 1H), 7.12(s, 2H), 6.91 - 6.77(m, 2H), 6.52(d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.23(s, 2H), 4.80(s, 2H), 1.99(s, 3H).
실시예 1.31: 4-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 218)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 4-(6-아미노-1-(4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 중간체 화합물 S3 또는 4-클로로-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(800mg, 1당량), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카르보니트릴(906mg, 1.5당량), K2CO3(725mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2(192mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g Sepa Flash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 30~80%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 4-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(500mg, 수율 51%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.05 - 8.94(m, 1H), 8.84 - 8.71(m, 2H), 8.58(s, 1H), 8.43(dd, J = 1.8, 5.1 Hz, 1H), 8.09 - 8.07(m, 1H), 7.46 - 7.41(m, 2H), 7.31 - 7.24(m, 2H), 5.67 - 5.61(m, 2H). MS: m/z = 372.9(M+1, ESI+).
단계 2: 4-(6-아미노-1-(4-아미노벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 218)의 제조
물(5mL) 및 에탄올(15mL) 중 4-[6-아미노-1-[(4-니트로페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(300mg, 1당량)의 용액에 철가루(224mg, 5당량) 및 NH4Cl(344mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 감압 농축하여 에탄올과 물을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 12%-42%, 11.5 분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 80%로 얻은 다음, 잔류물을 2차 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 16%-46%, 8분)로 정제했다. 화합물 218 또는 4-[6-아미노-1-[(4-아미노페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (52.04mg, 수율 18%, 순도 95.28%)을 백색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.97(d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.60(d, J = 0.7 Hz, 1H), 8.44(s, 1H), 8.40(dd, J = 1.6, 5.1 Hz, 1H), 7.18(s, 2H), 6.96(d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.48(d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.25(s, 2H), 5.04(s, 2H).
실시예 1.32: 4-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 222)의 제조
시약 및 조건: (a) Pd(dppf)Cl2, K2CO3, 디옥산/H2O, 110℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 2시간.
단계 1: 4-(6-아미노-1-(2-플루오로-4-니트로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴의 제조
디옥산(10mL) 및 물(2mL) 중 중간체 화합물 S11 또는 4-클로로-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(1g, 1당량), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카르보니트릴(784mg, 1.1당량), K2CO3(856mg, 2당량), Pd(dppf)Cl2 (226mg, 0.1당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하여 디옥산을 제거하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(ISCO®; 12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 35mL/분으로 기울기 0~80%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 4-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴 (1g, 수율 83%)을 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.98(dd, J = 0.7, 5.1 Hz, 1H), 8.65 - 8.59(m, 2H), 8.56(s, 1H), 8.41(dd, J = 1.7, 5.1 Hz, 1H), 7.61 - 7.54(m, 1H), 7.34(t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 - 7.23(m, 2H), 5.63(s, 2H). MS: m/z = 391.1(M+1, ESI+).
단계 2: 4-(6-아미노-1-(4-아미노-2-플루오로벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피콜리노니트릴 (화합물 222)의 제조
에탄올(15mL) 및 물(5mL) 중 4-[6-아미노-1-[(2-플루오로-4-니트로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(500mg, 1당량)의 용액에 철가루(357mg, 5당량) 및 NH4Cl(548mg, 8당량)을 첨가했다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(칼럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 15%-45%, 11.5 분)로 정제하여, 원하는 화합물을 순도 79%로 얻었고, 잔류물을 2차 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 18%-48%,8min)로 정제하여, 원하는 화합물을 81% 순도로 얻었다. 마지막으로 잔류물을 3차 분취HPLC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30mm*3μm; 이동상: [물(0.05% 수산화암모니아 v/v)-ACN]; B%: 16%-46 %,11.5분)로 정제했다. 화합물 222 또는 4-[6-아미노-1-[(4-아미노-2-플루오로-페닐)메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-2-카르보니트릴(31.41mg, 95.76% 순도)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 8.97(dd, J = 0.8, 5.1 Hz, 1H), 8.60(dd, J = 0.8, 1.7 Hz, 1H), 8.44(s, 1H), 8.40(dd, J = 1.8, 5.1 Hz, 1H), 7.19(s, 2H), 6.89(t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.37 - 6.24(m, 2H), 5.46 - 5.37(m, 2H), 5.32 - 5.22(m, 2H).
실시예 1.33: 2-[6-아미노-1-[[4-아미노-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴 (화합물 235)
시약 및 조건: (a) Pd(OAc)2, Cy3P, K2CO3, 디옥산, 120℃, 16시간; (b) Fe, NH4Cl, EtOH/H2O, 60℃, 8시간.
단계 1: 2-[6-아미노-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴의 제조
디옥산(10mL) 중 나트륨 4-시아노피리딘-2-술피네이트(420mg, 2.21mmol, 2당량), 중간체 화합물 S9 또는 4-클로로-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-6-아민(435mg, 1.10mmol, 94.74% 순도, 1당량), 팔라듐 아세테이트(25mg, 110.49μmol, 0.1당량), Cy3P(62mg, 220.98μmol, 71.64μL, 0.2당량) 및 K2CO3(305mg, 2.21mmol, 2당량)의 혼합물을 질소로 3회 탈기 및 퍼징한 다음, 혼합물을 질소 분위기 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 플래시 실리카겔 크로마토그래피(12g SepaFlash® 실리카 플래시 컬럼, 40mL/분으로 기울기 30~60%의 에틸 아세테이트/페트롤리움 에테르 용리액)로 정제했다. 화합물 2-[6-아미노-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(160mg, 354.13 μmol, 수율 32%, 순도 97.46%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.09(d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.68(s, 1H), 8.57(d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.17 - 8.04(m, 2H), 7.96(s, 1H), 7.60(dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.20(s, 2H), 5.69(s, 2H). MS: m/z = 441.1(M+1, ESI+).
단계 2: 2-[6-아미노-1-[[4-아미노-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴 (화합물 235)
에탄올(10mL) 및 물(3mL) 중 2-[6-아미노-1-[[4-니트로-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(150mg, 340.65μmol, 1당량)의 용액에 철가루(95mg, 1.70mmol, 5당량) 및 NH4Cl(146mg, 2.73mmol, 8당량)을 첨가했다. 그 다음, 혼합물을 60℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액에 포화 NaHCO3 용액(50mL)을 첨가하고, 에틸 아세테이트(80mL x 3)로 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 분취HPLC(칼럼: Welch Ultimate XB-CN 250*70*10μm; 이동상: [헥산-에탄올(0.1% 암모니아 수산화물)]; B%: 20%-60%, 15분)로 정제했다. 화합물 235 또는 2-[6-아미노-1-[[4-아미노-3-(트리플루오로메틸)페닐]메틸]피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]피리딘-4-카르보니트릴(76.29mg, 180.52 μmol, 수율 53%, 순도 97.10%)를 황색 고체로 얻었다. 1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ = 9.08(dd, J = 0.7, 5.0 Hz, 1H), 8.67(d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.47(s, 1H), 8.07(dd, J = 1.6, 5.0 Hz, 1H), 7.28(d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.18(dd, J = 1.3, 8.6 Hz, 1H), 7.14(s, 2H), 6.77(d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.59(s, 2H), 5.31(s, 2H).
실시예 2: 피라졸로-피리미딘 화합물의 활성 평가
2.1 인간 아데노신 A1 수용체 결합 분석
일반적인 방법
시험 화합물을 칭량하고 DMSO에 용해시켜 10mM의 스톡 용액을 제조하고 DMSO로 희석하여 작업 용액을 제조한 다음 지시된 농도로 100배 희석한다. CHO-K1 세포에서 발현된 인간 재조합 아데노신 A1 수용체를 사용하여 인큐베이션 완충제(20mM HEPES(4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산) pH 7.4, 10mM MgCl2, 100mM NaCl)에서 멤브레인을 준비하였다. 시험 화합물 또는 비히클(2.2μL)을 200μL의 멤브레인에 첨가하고 20μL의 1nM [3H] DPCPX(8-사이클로펜틸-1,3-디프로필크산틴)과 함께 25℃에서 90분 동안 인큐베이션하였다. 비특이적 결합은 100μM R(-)-PIA((R)-N-(1-메틸-2-페닐에틸)아데노신)의 존재 하에 측정되었다. 수확기를 사용하여 0.3% PEI(폴리에틸렌이민) 사전 침지된 GF/B 필터 상에 진공 여과하여 인큐베이션을 정지한 후 빙냉한 50mM Tris-HCl, pH 7.4로 4회 세척하고, GF/B 필터매트의 방사능을 신틸레이션 계수기(scintillation counter)(PerkinElmer Topcount™)로 카운팅하여 [3H] DPCPX가 특이적으로 결합되었는지 확인한다. 비히클 DMSO의 최종 농도는 1%이다.
데이터는 Meth-IQ 소프트웨어(ID Business Solutions Ltd., UK)의 비선형 곡선 피팅 루틴을 사용하여 피팅된다. IC50은 청-프루소프(Cheng-Prusoff) 방정식에 의해 Ki로 변환된다.
Ki = IC50/(1+ [L]/KD) 여기서 [L]은 분석에 사용되는 방사성 표지된 리간드의 농도이다.
2.2 인간 아데노신 A2A 수용체 결합 분석
일반적인 방법
시험 화합물을 칭량하고 DMSO에 용해시켜 10mM의 스톡 용액을 제조하고 DMSO로 희석하여 작업 용액을 제조한 다음 지시된 농도로 100배 희석한다. HEK-293 세포에서 발현된 인간 재조합 아데노신 A2A 수용체를 사용하여 인큐베이션 완충액(50mM Tris-HCl, pH 7.4, 10mM MgCl2, 1mM EDTA, 2U/ml 아데노신 데아미나제(Adenosine Deaminase))에서 멤브레인을 준비했다. 시험 화합물 또는 비히클(2.2μL)을 200μL의 멤브레인에 첨가하고 20μL의 50nM [3H] CGS-21680과 함께 25℃에서 90분 동안 인큐베이션하였다. 비특이적 결합은 50μM NECA(5'-N-에틸카복스아미도아데노신)의 존재 하에 측정되었다. 수확기를 사용하여 0.3% PEI(폴리에틸렌이민) 사전 침지된 GF/B 필터 상에 진공 여과하여 인큐베이션을 정지하고, 이어서 빙냉한50mM Tris-HCl, pH 7.4로 4회 세척하고, GF/B 필터매트의 방사능을 신틸레이션 계수기(PerkinElmer Topcount™)를 사용하여 카운팅하여 특이적으로 결합된 [3H] CGS-21680을 측정하였다. 비히클 DMSO의 최종 농도는 1%이다.
데이터는 Meth-IQ 소프트웨어(ID Business Solutions Ltd., UK)의 비선형 곡선 피팅 루틴을 사용하여 피팅된다. IC50은 청-프루소프(Cheng-Prusoff) 방정식에 의해 Ki로 변환된다.
Ki = IC50/(1+ [L]/KD) 여기서 [L]은 분석에 사용된 방사성 표지된 리간드의 농도이다.
2.3 결과
선택된 화합물의 A2A 및 A1 수용체 결합 친화도를 실시예 2.1 및 2.2에서 상기 기재된 결합 분석을 사용하여 평가하였다. 참조 아데노신 수용체 길항제 화합물 이스트라데필린(Istradefylline)(CAS No. 155270-99-8)의 결합 친화도도 이 분석에서 측정하였다.
표 2: 예시적인 화합물의 A2A 및 A1 수용체 결합 친화도
A2A 수용체 결합 친화도의 경우:
A: K i ≤ 20nM,
B: 20nM < K i ≤ 200nM,
C: 200nM < K i ≤ 1000nM,
D: 1000nM < K i ≤ 5000nM.
A1 수용체 결합 친화도의 경우:
A: K i ≤ 0.1μM,
B: 0.1μM < K i ≤ 1μM,
C: 1μM < K i ≤ 10μM,
D: K i > 10μM.
표 2의 A2A 수용체 결합 분석 결과는 본 개시내용의 화합물이 A2A 수용체 길항제로서 작용할 수 있음을 나타낸다. 일부 화합물은 A2A 및 A1 수용체 둘 다의 이중 길항제로서 강력한 활성을 나타냈다. 예를 들어, 표 2의 화합물 203, 206, 207, 208, 211 및 213 참조한다.
생물학적 실시예 1: 동물모델에서 생체내( in vivo ) 신경퇴행성 질환 치료 활성 평가
1.1 방법 및 재료
파킨슨병(PD) 동물 모델을 생성하기 위해, 약 9주령의 암컷 Wistar Han 쥐 67마리에 편측성(unilateral) 6-하이드록시도파민(6-OHDA) 병변을 만들었다. 6-OHDA 병변을 유도하기 위해, 각 동물의 내측 전뇌 다발(medial forebrain bundle, MFB)에 2μl (4μg/μl)를 1회 주사했다. 6-OHDA는 PD의 모델로서 흑색선조체 도파민성 시스템을 손상시키는 데 널리 사용된다.
주사 3주 후, 6-OHDA 병변의 효능을 결정하기 위해 운동 비대칭(locomotor asymmetry) 평가를 위한 실린더 테스트를 수행하였다(4마리의 동물이 테스트 전에 사망함). 실린더 테스트 결과에 따라, 6-OHDA 병변 동물이 연구에 추가로 포함되었다. 화합물 단독 시험군(B+C)에서, 동물(n=52)에게 L-DOPA(레보도파 또는 L-3,4-디하이드록시페닐알라닌) 프라이밍(priming)을 제공하였다(2마리의 동물은 그룹 할당 전에 사망함). 증상을 나타내지 않는 동물(n=11)은 시험 화합물의 추가 투여 또는 조직 수집 없이 제거하였다.
실린더 시험에서 기준선 평가 후, 모든 동물을 연속 21일 동안 L-DOPA/벤세라자이드(10/15 mg/kg ip)로 치료했다. 행동 평가는 축(axial), 사지(limb) 및 구강설측(orolingual) 비정상적인 불수의 운동 점수(ALO AIM) 및 L-DOPA 유도 회전 테스트로 다시 수행되었다. 화합물 단독 시험 그룹에서 강력한 증상을 보이는 동물을 시험 그룹에 할당했다(그룹 B의 경우 n=12, 그룹 C의 경우 n=11). 증상을 나타내지 않은 그룹 B 및 C의 동물(n=27)은 시험 화합물의 추가 투여 또는 조직 수집 없이 제거하였다.
나머지 23마리의 동물에게는 하나의 비히클, 네 가지 다른 용량의 3-(6-아미노-1-(4-아미노-3-(트리플루오로메틸)벤질)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)벤조니트릴(화합물 210; "TI"라고도 함), 또는 표 3에 나타낸 바와 같은 참조 화합물 L-DOPA(벤세라자이드)를 경구(그룹 B 및 그룹 C에서 PO) 또는 비강내 경로(그룹에서 IN 그룹 C)로 총 6회 투여하였다.
각 처리 시점 후 모든 동물을 축, 사지 및 구강설측 비정상적 불수의 운동 점수(ALO AIM)에 대해 테스트했다. 추가로, 단독 치료를 받은 동물을 실린더 시험에서 시험하였다.
모든 테스트는 처리 후 정의된 기간 내에 시간 임계 방식(time critical manner)으로 수행되었다.
1.2 실린더 테스트
시험에 사용된 모든 동물을 대상으로 처리 일(L-DOPA 프라이밍 종료 4일 후)에 실린더 시험을 수행하였다. 동물들은 비히클, L-DOPA/벤세라지드, 및 화합물 210 (TI)의 IN 투여 후 1시간(+/- 5분) 및 시험 화합물의 PO 투여 후 3시간(+/- 5분)에 시험하였다. 실린더 테스트는 수직 탐색 활동(양육(Rearing))에서 앞다리 사용의 비대칭성을 평가하는 것을 목표로 한다. 동물을 직경 20cm, 높이 40cm의 실린더에 넣었다. 각 동물은 5분 동안 개별적으로 평가되었다. 오른쪽 발, 왼쪽 발 및 두 발이 동시에 실린더 벽에 닿는 횟수를 세었다. 결과는 백분율로 제공되었으며 계산은 다음과 같이 수행되었다: 오른쪽 발, 왼쪽 발 및 양쪽 발이 실린더 벽에 접촉한 테스트 총합이 100%이고, 이를 기반으로 각 결과에 대한 백분율 값을 계산했다 (Araujo, 2013).
1.3 축, 사지 및 구강설측(orolingual) 비정상적 불수의 운동 점수(ALO AIM) 테스트
ALO 테스트는 화합물 단독 테스트에 사용된 모든 동물을 대상으로 치료일(L-DOPA 프라이밍 종료 후 4일)에 수행되었다. ALO AIM은 비히클, L-DOPA/벤세라자이드, 및 시험 화합물의 IN 투여 후 5분(+/-분)부터 시작하여 시험 화합물의 PO 투여 후 2시간(+/- 5분) 및 그 후 3시간 동안 매 20분마다 채점되었다. 모든 동물을 침구류가 없는 빈 우리에 넣었다. ALO (Axial, limbs and oro-lingual) AIMS는 Cency 및 Lundblad(2007)에 의해 설명된 프로토콜에 따라 치료 맹검 관찰자에 의해 평가되었으며, 상기 프로토콜은 시간 기반(예: "지속 기간") 및 심각도 기반(예: "진폭")의 비정상적인 움직임의 평가를 모두 포함한다.
ALO AIM은 1분 동안, 180분 동안 20분마다 채점되었다. ALO AIM 지속 시간은 다음 척도에 따라 평가되었다: 0 = 이상운동증 없음; 1 = 관찰 기간의 50% 미만 동안 존재하는 운동이상증의 간헐적 징후; 2 = 관찰 기간의 50% 초과 동안 존재하는 운동이상증의 빈번한 징후; 3 = 전체 관찰 기간 동안 존재하지만 외부 자극에 의해 억제될 수 있는 이상운동증 및 4 = 외부 자극에 의해 억제될 수 없는 지속적인 이상운동증. 축(axial) AIMS 진폭은 다음 척도에 따라 평가된다: 1= ~30°각도에서 머리와 목의 지속적인 편차; 2 = 30°~60°의 각도에서 머리와 목의 지속적인 편차; 3 = 60°~90°사이의 각도에서 머리, 목 및 상부 몸통의 지속적인 비틀림; 및 4 = 90°이상의 각도로 머리, 목 및 몸통의 지속적인 비틀림; 쥐가 두발로 서 있는 자세에서 균형을 잃게 만듬.
사지 AIM 진폭은 다음 척도에 따라 평가되었다: 1 = 고정된 위치 주변에서 발의 작은 움직임; 2 = 팔다리 전체의 가시적 변위를 유발하는 움직임; 3 = 어깨 근육의 눈에 띄는 수축과 함께 사지 전체의 큰 변위 및 4 = 어깨와 신근 근육의 동시 수축과 함께 최대 진폭의 활발한 사지 변위.
구강설측 AIM 진폭은 다음 척도에 따라 평가되었다: 1 = 턱을 열지 않고 작은 저작 운동을 동반한 안면 근육의 연축(twitching); 2 = 턱이 벌어지는 저작 운동을 동반한 안면 근육의 연축; 3 = 잦은 턱 벌림과 때때로 혀 돌출과 함께 안면 및 저작 근육의 광범위한 개입이 있는 움직임 및 4 = 가능한 최대로 위의 모든 근육의 개입(involvement). 통합 ALO AIM은 이전에 설명한 대로(Ohlin et al., 2011) ALO AIM 진폭 x ALO AIM 지속 시간의 곱으로 정의되었으며, 누적 ALO AIM은 ALO AIM 지속 시간 또는 ALO AIM 진폭의 합을 다른 연속 측정 시점에 걸쳐 나타낸다. (Frouni et al., 2018).
1.4 동물의 체중
체중은 매주 기록되었고 결과는 도 1에 나와 있으며, 두 치료 그룹의 동물은 전형적인 체중 증가를 보였다. 생활기(life phase) 전체에 걸쳐 그룹 간에 통계적으로 유의미한 차이는 발견되지 않았다(도 1 참조).
1.5 결과
결과는 도 1-3B에 도시되어 있다. 결과(예를 들어, 테스트 기간 동안 동물을 그룹으로 할당한 마지막 L-DOPA 프라이밍 일에 측정된 ALO 점수)는 프라이밍 종료 시 모든 동물이 이상운동증을 나타냄을 나타낸다(도 2A). L-DOPA 프라이밍 휴약 기간 4일 후 AIM 점수에 의해 검사된 L-DOPA/벤세라지드-유도 운동이상증이 더 이상 관찰되지 않았으며(도 2B 참조), 이는 동물을 화합물 210(TI)으로 처리해도 적용 경로(경구 또는 비강 내)나 농도 측면에서 모두에서 L-DOPA/벤세라지드(Benserazide)가 이상운동증 유사 부작용을 유도하지 않는다는 것을 의미한다 (도 2B). 실린더 테스트 결과는 단독(stand-alone) 효능 연구의 테스트 기간 동안 모든 병변 동물이 병변 반대쪽의 감소된 앞다리 사용을 나타내었다. 그러나, 증가된 반대측 사지 사용에 대한 농도 관련 경향은 비히클 처리된 그룹과 비교하여 본 발명의 화합물(TI)-투여된 그룹(IN 경로 및 PO 경로)에서 관찰되었다. 그리고 비강내 투여는 PO 투여군에 비해 농도 관련 경향이 더욱 두드러졌다.
표 3
등가물 및 참조에 의한 통합
본 발명이 바람직한 실시예 및 다양한 대안적인 실시예를 참조하여 구체적으로 도시되고 설명되었지만, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 형태 및 세부사항의 다양한 변경이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서 이상에서 설명한 실시예들은 예시를 위한 것으로, 본 발명을 한정하는 것이 아님을 이해하여야 한다.
본 명세서의 본문 내에서 인용된 모든 참고 문헌, 발행된 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 여기에 포함된다.

Claims (22)

  1. 활성 성분으로 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애를 갖는 대상체를 치료하기 위한 약학적 조성물:

    여기에서,
    R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
    Y1 내지 Y4는 독립적으로 CR10 및 N으로부터 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
    각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
    A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜임.
  2. 청구항 1에 있어서, A는 페닐 또는 1개, 2개 또는 3개의 R20 기로 치환된 페닐이고, 각각의 R20은 독립적으로 (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드 및 티올로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, R은 H인 약학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, Ra 및 Rb는 각각 H인 약학적 조성물.
  5. 청구항 2에 있어서, 상기 화합물은 하기 화학식 (II)인 약학적 조성물:

    R1 내지 R9는 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드 및 티올로부터 독립적으로 선택됨.
  6. 청구항 5에 있어서, R1 내지 R9는 독립적으로 H, (C1-C5)알킬, 치환된 (C1-C5)알킬, (C1-C3)할로알킬, (C1-C5)알콕시, 치환된 (C1-C5)알콕시, -NH2, 치환된 아미노, 할로겐 및 하이드록실로부터 선택되는 약학적 조성물.
  7. 청구항 6에 있어서, R1 내지 R9는 독립적으로 H, NH2, F, CH3 및 CF3로부터 선택되는 약학적 조성물.
  8. 청구항 5에 있어서, 상기 화합물은 화학식 (III)인 약학적 조성물:

    여기서:
    R21 및 R22는 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, SO2R30 및 COR30으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 R30은 (C1-C8)알킬 또는 치환된 (C1-C8)알킬임.
  9. 청구항 8에 있어서, 여기에서
    R21 및 R22는 각각 H이고;
    R5, R6, R8 및 R9는 H, (C1-C5)알킬, 치환된 (C1-C5)알킬, (C1-C3)할로알킬, (C1-C5)알콕시, 치환된 (C1-C5)알콕시, 할로겐 및 하이드록실로부터 독립적으로 선택되고;
    R2 내지 R4는 각각 H이고; 및
    R1은 H, (C1-C5)알킬, 치환된 (C1-C5)알킬, (C1-C3)할로알킬, (C1-C5)알콕시, 치환된 (C1-C5)알콕시, 할로겐 및 하이드록실로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서, R1은 H, F, CH3 및 CF3로부터 선택되는 약학적 조성물.
  11. 청구항 1에 있어서, 화학식 (Ia)의 화합물이 다음으로부터 선택되는 약학적 조성물.



  12. 청구항 1에 있어서, 상기 CNS 장애는 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도-인지 장애, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD), 다발성 경화증, 혈관성 치매 및 근위축성 측삭 경화증으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  13. 청구항 1에 있어서, 상기 CNS 장애는 아데노신 수용체와 관련된 약학적 조성물.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 아데노신 수용체는 아데노신 수용체 A2A 및/또는 A1인 약학적 조성물.
  15. 청구항 1에 있어서, 상기 CNS 장애가 파킨슨병인 약학적 조성물.
  16. 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상(blunt trauma), 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈(cerebral ischemia), 척추 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경 변성을 초래하는 손상 또는 질병의 치료용 약학적 조성물이며, 상기 조성물은 활성 성분으로 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약학적 조성물:

    여기에서,
    R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
    Y1 내지 Y4는 독립적으로 CR10 및 N으로부터 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
    각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
    A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜임.
  17. 청구항 16에 있어서, 상기 신경 변성을 유발하는 질병이 파킨슨병인 약학적 조성물.
  18. 운동 장애의 치료용 약학적 조성물이며, 상기 조성물은 활성 성분으로 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약학적 조성물:

    여기에서,
    R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
    Y1 내지 Y4는 독립적으로 CR10 및 N으로부터 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
    각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
    A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜임.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 운동 장애는 아데노신 수용체와 관련된 약학적 조성물.
  20. 청구항 19에 있어서, 상기 운동 장애는 서동증, 근긴장이상, 무도병 및 헌팅톤병, 운동실조, 떨림, 간대성근경련 및 놀람, 틱 및 뚜렛 증후군, 하지 불안 증후군, 경직된 사람 증후군(stiff person syndrome), 운동이상증 및 보행 장애로 이루어진 군으로부터 선택된 약학적 조성물.
  21. 치료적 유효량으로 화합물 또는 조성물을 투여함으로써 대상체를 치료하는데 있어서 하기 화학식 (Ia)의 화합물, 또는 이의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이런 화합물을 포함하는 조성물의 용도로서:

    여기에서,
    R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
    Y1 내지 Y4는 독립적으로 CR10 및 N으로부터 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
    각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
    A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜이며;
    여기에서
    (i) 대상체는 CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애를 앓고 있으며, 여기서 CNS 장애는 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도 인지 장애, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD), 다발성 경화증, 혈관성 치매 및 근위축성 측삭 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    (ii) 대상체는 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경 변성을 야기하는 손상 또는 질병을 앓고 있으며, 여기서 손상은 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화 및 수술 절차에 의해 야기된 신경 손상을 포함하는 군으로부터 선택되는 1차 신경계 손상(primary nervous system injury)이고/이거나; 및/또는
    (iii) 대상체는 운동 장애를 앓고 있으며, 여기서 운동 장애는 아데노신 수용체와 관련된 것인,
    용도.
  22. 대상체를 치료하기 위한 의약품을 제조하는데 있어서의 하기 화학식 (Ia)의 화합물, 또는 이의 용매화물, 수화물, 전구약물 및/또는 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이런 화합물을 포함하는 조성물의 용도로서:

    여기에서,
    R은 H, (C1-C3)알킬, 또는 치환된 (C1-C3)알킬이고;
    Y1 내지 Y4는 독립적으로 CR10 및 N으로부터 선택되고, 여기서 Y1 내지 Y4 중 적어도 2개는 독립적으로 CR10이고;
    각각의 R10은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, 치환된 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 치환된 (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 치환된 (C2-C8)알키닐, (C1-C3)할로알킬, (C1-C8)알콕시, 치환된 (C1-C8)알콕시, -CONH2, 치환된 아미도, -NH2, 치환된 아미노, -CO2H, 시아노, 할로겐, 하이드록실, -NO2, -SO3H, -SO2NH2, 치환된 술폰아미드, 및 티올로부터 선택되고;
    Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, (C1-C3)알킬 및 치환된 (C1-C3)알킬로부터 선택되거나, 또는 Ra 및 Rb는 고리형으로 결합하고 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 또는 치환된 사이클로프로필을 형성하고;
    A는 페닐, 치환된 페닐, 피리딜 또는 치환된 피리딜이며;
    여기에서 대상체는
    (i) CNS 장애 또는 신경퇴행성 장애를 앓고 있으며, 여기서 CNS 장애는 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 정신분열증, 경도 인지 장애, 주의력 결핍 과잉행동 장애(ADHD), 다발성 경화증, 혈관성 치매 및 근위축성 측삭 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택되거나;
    (ii) 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화, 및 수술 절차에 의해 유발된 신경 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된 신경 변성을 야기하는 손상 또는 질병을 앓고 있으며, 여기서 손상은 폐쇄성 두부 손상, 둔기 외상, 관통 외상, 출혈성 뇌졸중, 허혈성 뇌졸중, 녹내장, 뇌 허혈, 척수 손상, 노화 및 수술 절차에 의해 야기된 신경 손상을 포함하는 군으로부터 선택되는 1차 신경계 손상이고/이거나; 및/또는
    (iii) 운동 장애를 앓고 있으며, 여기서 운동 장애는 아데노신 수용체와 관련된 것인,
    용도.
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