KR20220113794A

KR20220113794A - 치매증의 예방 또는 치료제

Info

Publication number: KR20220113794A
Application number: KR1020227024169A
Authority: KR
Inventors: 도시히데 야마시타; 다카히데 이토카즈; 히로키 우노; 히로카즈 이시다
Original assignee: 고꾸리쯔 다이가꾸 호우징 오사까 다이가꾸; 미쓰비시 타나베 파마 코퍼레이션
Priority date: 2020-01-15
Filing date: 2021-01-15
Publication date: 2022-08-16
Also published as: AR121065A1; IL294769A; TW202140555A; AU2021207010A1; MX2022008588A; WO2021145435A1; JPWO2021145435A1; EP4091633A4; CN114945385A; EP4091633A1; BR112022013944A2; CA3168209A1; US20230090965A1

Abstract

RGMa 저해 물질을 포함하는, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제를 제공한다.

Description

치매증의 예방 또는 치료제

본 발명은, RGMa 저해 물질을 포함하는, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증의 예방 또는 치료제에 관한 것이다.

고령화에 수반하여 당뇨병 및 치매증 환자가 매년 증가하고, 당뇨병을 발증(發症)하고 있는 경우에는 알츠하이머병이나 혈관성 치매증의 발증 리스크가 증대되고, 양 질환 사이에는 밀접한 병태학적 관련성이 있는 것이 명백하게 되었다(비특허문헌 1, 비특허문헌 2). 또한, 치매증이 합병되고 있지 않은 당뇨병 환자에서는, 비당뇨병 환자와 비교하여 인지 기능의 저하가 인지되는 않고， 그와 같은 당뇨병 환자의 인지 기능 장해로서, 주의-집중력의 저하, 시각성 기억 또는 언어성 기억의 저하나 미니 멘탈 스테이트 검사(Mini-Mental State Examination; MMSE)의 저하 등이 보고되고 있다(비특허문헌 3).

최근, 당뇨병을 수반하는 치매증의 분류로서, 알츠하이머병이나 혈관성 치매증 이외에, 당대사 이상(異常)이 치매증의 발증에 깊이 관여하는 당뇨병성 치매증 이라는 임상병형이 제창되고 있다(비특허문헌 4, 비특허문헌 5). 당뇨병성 치매증은, 알츠하이머병의 특징적인 뇌화상 소견(해마의 위축 등)을 보이는 경우는 적지만, 미소 경색 병변(病變) 등의 혈관성 병변의 합병예가 보다 많이 보여지고(비특허문헌 6), 임상적으로는 다소 고령이고, 당뇨병의 컨트롤이 불량하며, 기억 장해보다 주의·집중력 저하나 수행 기능의 장해가 눈에 띄고, 진행은 다소 완만하다는 특징을 가진다.

한편, 혈관성 치매증은 주로 뇌혈관 질환에 기인하는 치매증이며, 특히, Binswanger병이나 다발 라쿠나 병변 등의 뇌소혈관병을 주된 원인으로 하고, (1) 치매증이 있고, (2) 뇌혈관 질환이 있고, (3) 양자에 인과 관계가 있는 것으로 정의되고 있다.

임상 진단 기준인 NINDS-AIREN(National Institute of Neurological Disorders and Stroke-Association International pour la Recherche et l' Enseignement en Neurosciences)에 의한 병형 분류로서, (1) 다발 경색성, (2) 단일 병변성, (3) 소혈관 병변성, (4) 저관류성(低灌流性), (5) 뇌출혈성의 5가지를 들 수 있다. 그러나, 이들 각 병형은 병인적, 임상적으로도 불균일하다는 문제점이 있으므로, 혈관성 치매증은 다양한 병태를 포함하는 heterogeneous한 질환 개념으로 생각되고 있다(비특허문헌 7, 비특허문헌 8).

또한, 혈관성 치매증의 위험 인자로서 당뇨병이 포함되는 것은 널리 알려져 있다(비특허문헌 8, 비특허문헌 9).

RGM(repulsive guidance molecule)은 당초 시각계의 축색 유도 분자로서 동정(同定)된 막 단백질이다(비특허문헌 10). RGM 패밀리에는 RGMa, RGMb 및 RGMc로 불리는 3종류의 멤버가 포함되고(비특허문헌 11), 적어도 RGMa와 RGMb는 동일한 시그널 전달 기구(機構)에서 작용하는 것이 알려져 있다(비특허문헌 12). RGMc는 철 대사에 있어서 중요한 역할을 발휘한다.

그 후의 연구에 의해, RGM은, 제노프스 및 닭 배아에서의 축색 유도 및 라미나(lamia) 형성, 및 마우스 배아에서의 두부 신경관의 폐쇄의 제어 등의 기능을 가지는 것이 명백하게 되고 있다(비특허문헌 13). 특허문헌 1에는 항RGM 중화 항체를 유효 성분으로서 함유하는 축색 재생 촉진제가 개시되어 있다.

발생 단계의 기능에 더하여, 성인 인간 및 래트(rat)의 중추 신경계 손상 후에 재발현하는 것, 래트에 있어서 RGMa 저해가 척수 손상 후의 축색 성장을 항진하고, 기능 회복을 촉진하는 것으로부터(비특허문헌 14), RGMa는 중추 신경계 손상 후의 축색 재생 저해 물질이라고 생각되고 있다. RGMa를 중화하는 구체적인 항체로서는, 예를 들면 특허문헌 2(예를 들면, 5F9, 8D1), 특허문헌 3(예를 들면, AE12-1, AE12-1Y) 및 특허문헌 4(예를 들면, r116A3, r70E4, r116A3C, rH116A3)에 기재되어 있다.

또한, 특허문헌 2에는, 항RGMa 항체의 치매증의 치료 용도가 개시되어 있다.

이와 같이 중추 신경계 손상에서는 RGMa의 역할이 명백하게 되어 있지만, 특히, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증의 치료에서의 RGMa의 관여는 동정되어 있지 않고, 그와 같은 치료약은 알려져 있지 않다.

국제공개 WO2005/087268호 국제공개 WO2009/106356호 국제공개 WO2013/112922호 국제공개 WO2016/175236호

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본 발명은, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증에 대한 유효한 약제를 제공하는 것을 과제로 한다.

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 연구를 거듭 행한 결과, RGMa 저해 물질, 특히, 항RGMa 중화 항체가 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증에 대한 개선 효과를 나타내는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은 이하와 같다.

[1] RGMa 저해 물질을 포함하는, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방제 또는 치료제.

[2] RGMa 저해 물질을 포함하는, 당뇨병성 치매증의 예방제 또는 치료제.

[3] RGMa 저해 물질을 포함하는, 혈관성 치매증의 예방제 또는 치료제.

[4] RGMa 저해 물질이 항RGMa 중화 항체인, [1]∼[3] 중 어느 항에 기재된 예방 또는 치료제.

[5] 항RGMa 중화 항체가 인간화 항체인, [4]에 기재된 예방 또는 치료제.

[6] 항RGMa 중화 항체가 서열번호 16, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 39로부터 선택되는 아미노산 서열을 인식하는 항체인, [4] 또는 [5]에 기재된 예방 또는 치료제.

[7] 항RGMa 중화 항체가, 하기 (a)∼(l):

(a) 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄(輕鎖) 가변 영역, 및, 서열번호 8에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 9에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄(重鎖) 가변 영역을 포함한하는 항RGMa 중화 항체,

(b) 서열번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 13에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 SFG를 아미노산 서열에 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(c) 서열번호 17에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 18에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 19에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 21에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(d) 서열번호 23에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 25에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 26에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 27에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(e) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 31에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(f) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(g) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(h) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 41에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(i) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 42에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(j) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 43에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,

(k) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체, 및

(l) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 45에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체로부터 선택되는 항체인, [4]∼[6] 중 어느 항에 기재된 예방 또는 치료제.

[8] 치료를 요하는 포유 동물에 대하여 유효량의 RGMa 저해 물질을 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료 방법.

[9] RGMa 저해 물질이 항RGMa 중화 항체인, [8]에 기재된 예방 또는 치료 방법.

[10] RGMa 저해 물질의, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제의 제조를 위한 사용.

[11] RGMa 저해 물질이 항RGMa 중화 항체인, [10]에 기재된 사용.

본 발명에 의하면, RGMa 저해 물질, 특히 항RGMa 중화 항체가, 예를 들면 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제로서 유용하다.

[도 1] 도 1은 당뇨병(DM) 병태 발증 후 4주 경과 시점에서의 항RGMa 중화 항체(단지 항RGMa 항체로 기재하는 경우가 있음) 투여군, 아이소타입 컨트롤 항체 투여군으로부터 각각 취득한 Discrimination Index(DI)값, 및 건강한 마우스의 DI값을 나타내는 도면이다.
[도 2] 도 2는 비당뇨병(non-DM) 마우스 또는 당뇨병(DM) 마우스에 항RGMa 중화 항체 또는 아이소타입 컨트롤 항체를 투여했을 때의 doublecortin 양성 세포수를 나타내는 도면이다. doublecortin 양성 세포수는 해마 치상회(齒狀回) 면적으로 표준화했다.
[도 3] 도 3은 만성 뇌 저관류 모델에서의 항RGMa 중화 항체 투여군, 아이소타입 컨트롤 항체 투여군으로부터 각각 취득한 Discrimination Index(DI)값, 및 Sham 마우스에서의 아이소타입 컨트롤 항체 투여군으로부터 취득한 DI값을 나타내는 도면이다.

이하, 본 발명에 사용되는 용어를 설명한다.

[중화]

본원에 있어서 중화란 목적으로 하는 표적에 결합하고, 또한, 그 표적의 어느 기능을 저해할 수 있는 작용을 말한다. 예를 들면, RGMa 저해 물질은 RGMa로의 결합의 결과, RGMa의 생물 활성을 저해하는 작용을 나타내는 물질을 말한다.

[에피토프]

본원에 있어서 에피토프란, 면역 말단 영역 또는 T세포 수용체에 대하여 특이적으로 결합할 수 있는 폴리펩티드 결정기를 포함한다. 어떤 실시형태에서는, 에피토프는 분자의 화학적으로 활성인 표면기(예를 들면, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 술포닐)을 포함하고, 어떤 실시형태에서는 특정한 3차원 구조 특성 및/또는 특정한 전하 특성을 가질 수 있다. 에피토프는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이다.

[단리된]

본원에 있어서 단리된 RGMa 저해 물질(예를 들면, 항체 등) 등의 「단리된」이란, 동정되고, 또한, 분리된, 및/또는, 자연 상태에서의 성분으로부터 회수된다는 의미이다. 자연 상태에서의 불순물은, 그 항체의 진단적 또는 치료적 사용을 방해할 수 있는 물질이며, 효소, 호르몬 및 기타의 단백질성의 또는 비단백질성의 용질을 들 수 있다. 일반적으로, RGMa 저해 물질 등을 단리하기 위해서는, 적어도 1개의 정제 공정에 의해 정제하면 되고, 적어도 1개의 정제 공정에 의해 정제된 RGMa 저해 물질을 「단리된 RGMa 저해 물질」이라고 할 수 있다.

[항체]

본원에 있어서 항체란, 광의로는 면역 글로불린(Ig) 분자의 실질적으로 에피토프에 결합하는 특징을 유지하고 있는 2개의 중쇄(H쇄)와 2개의 경쇄(L쇄)의 4개의 폴리펩티드쇄로 이루어지는 Ig 분자를 나타낸다.

[인간 항체]

본원에 있어서 인간 항체란, 경쇄, 중쇄 모두 인간 면역 글로불린 유래의 항체를 말한다. 인간 항체는 중쇄의 정상 영역의 상이에 의해, γ쇄의 중쇄를 가지는 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함함), μ쇄의 중쇄를 가지는 IgM, α쇄의 중쇄를 가지는 IgA(IgA1, IgA2를 포함함), δ쇄의 중쇄를 가지는 IgD, 또는 ε쇄의 중쇄를 가지는 IgE를 포함한다. 또한 원칙으로서 경쇄는 κ쇄와 λ쇄 중 어느 한쪽을 포함한다.

[인간화 항체]

본원에 있어서 인간화 항체는, 비인간 동물 유래 항체의 상보성 결정 영역과, 인간 항체 유래의 프레임 워크 영역으로 이루어지는 가변 영역, 및 인간 항체 유래의 정상 영역으로 이루어지는 항체를 말한다.

[키메라 항체]

본원에 있어서 키메라 항체란, 경쇄, 중쇄, 또는 그 양쪽이 비인간 유래의 가변 영역과, 인간 유래의 정상 영역으로 이루어지는 항체를 말한다.

[단일특이적 항체]

본원에 있어서 단일특이적 항체란, 단일의 항원특이성을 가지는, 단일의 독립된 항원 인식 부위를 가지고 있었던 항체이다. 본 명세서 중에 있어서는, 예를 들면 RGMa를 인식하는 단일특이적 항체를 RGMa 단일특이적 항체로 호칭하는 경우가 있다.

[다중특이적 항체]

본원에 있어서 다중특이적 항체란, 2개 이상의 상이한 항원특이성을 가지는 2개 이상의 독립된 항원 인식 부위를 가지고 있었던 항체이며, 2개의 항원특이성을 가지는 이중특이적 항체, 3개의 항원특이성을 가지는 삼중특이적 항체 등을 들 수 있다.

[상보성 결정 영역(CDR)]

상보성 결정 영역(CDR)이란 면역 글로불린 분자의 가변 영역 중, 항원 결합 부위를 형성하는 영역을 말하며, 초가변 영역으로도 불리고, 면역 글로불린 분자마다 특히 아미노산 서열의 변화가 큰 부분을 말한다. CDR에는 경쇄 및 중쇄 각각에 3개의 CDR이 있다. 경쇄에 포함되는 3개의 CDR을 각각 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 중쇄에 포함되는 3개의 CDR을 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3으로 호칭하는 경우가 있다. 예를 들면, 면역 글로불린 분자의 CDR은 카바트(Kabat)의 넘버링 시스템(Kabat 등, 1987, Sequences of Proteins of I㎜unological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA)에 따라서 결정된다.

[유효량]

유효량이란, 장해 또는 그 하나 이상의 증상의 중증도 및/또는 기간을 경감 또는 개선시키거나, 장해의 진행을 예방하거나, 장해를 후퇴시키는, 장해와 관련된 하나 이상의 증상의 재발, 발생, 발증 또는 진행을 예방하거나, 장해를 검출하거나, 혹은 별도의 치료(예를 들면, 예방약 또는 치료 약)의 하나 이상의 예방 또는 치료 효과를 강화 또는 향상시키는 데에 충분한 예방 또는 치료제의 양을 나타낸다.

[아미노산 서열의 퍼센트(%) 동일성]

가변 영역 등의 후보 폴리펩티드 서열의 아미노산 서열의, 참조 폴리펩티드 서열의 아미노산 서열에 관한 「퍼센트(%) 동일성」이란, 서열을 정렬시키고, 최대의 % 동일성을 얻기 위해 필요하다면 간극을 도입하고, 어떠한 보존적 치환도 서열 동일성의 일부라고 생각하지 않는다고 한 후의, 특정한 참조 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 중의 아미노산 잔기의 %로서 정의된다. % 동일성을 측정하는 목적을 위한 정렬(alig㎚ent)은, 당업자의 기량의 범위에 있는 각종 방법, 예를 들면 BLAST, BLAST-2, ALIGN, 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용함으로써 달성 가능하다. 당업자라면, 비교되는 서열의 완전 길이에 대하여 최대의 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나, 여기에서의 목적을 위해서는, % 동일성 값은, 페어와이즈(pairwise) 정렬에 있어서, 서열 비교 컴퓨터 프로그램 BLAST를 사용함으로써 얻어진다.

아미노산 서열 비교에 BLAST가 사용되는 상황에서는, 주어진 아미노산 서열 A의, 주어진 아미노산 서열 B와의 % 동일성은 다음과 같이 계산된다:

분률 X/Y의 100배

여기에서, X는 서열 정렬 프로그램 BLAST의 A 및 B의 프로그램 정렬에 의해 동일하다고 일치한 스코어의 아미노산 잔기의 수이며, Y는 B의 전아미노산 잔기수다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 상이한 경우, A의 B에 대하다 % 동일성은, B의 A에 대한 % 동일성과는 상이한 것은 이해될 것이다. 특별히 한정하지 않는 한은, 여기서의 모든 % 동일성 값은, 바로 위의 단락에 나타낸 바와 같이 BLAST 컴퓨터 프로그램을 사용하여 얻어진다.

[보존적 치환]

보존적 치환이란, 펩티드의 활성을 실질적으로 개변하지 않도록, 아미노산 잔기를 다른 화학적으로 유사한 아미노산 잔기로 치환하는 것을 의미한다. 예를 들면, 어떤 소수성 잔기를 다른 소수성 잔기에 의해 치환하는 경우, 어떤 극성 잔기를 같은 전하를 가지는 다른 극성 잔기에 의해 치환하는 경우 등을 들 수 있다. 이와 같은 치환을 행할 수 있는 기능적으로 유사한 아미노산의 예로서, 비극성(소수성) 아미노산으로서는, 알라닌, 발린, 이소류신, 류신, 프롤린, 트립토판, 페닐알라닌, 메티오닌 등을 들 수 있다. 극성(중성) 아미노산으로서는, 글리신, 세린, 트레오닌, 티로신, 글루타민, 아스파라긴, 시스테인 등을 들 수 있다. 양전하를 가지는 (염기성)아미노산으로서는, 아르기닌, 히스티딘, 리진 등을 들 수 있다. 또한, 음전하를 가지는 (산성)아미노산으로서는, 아스파라긴산, 글루타민산 등을 들 수 있다.

이하, 본 발명의 실시형태에 대하여, 상세하게 설명한다.

본 발명은, RGMa 저해 물질이 신규한 용도인 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제를 제공한다.

또한, 본 발명은, 치료를 필요로 하는 포유 동물에 대하여, 유효량의 RGMa 저해 물질을 포함하는 예방 또는 치료제를 투여하는 스텝을 포함하는, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 RGMa 저해 물질은 RGMa 자체에 작용하여, RGMa의 활성(이하, 본 명세서 중에 있어서, 단지 「RGMa 활성」라는 경우가 있음)을 저해 또는 감약(減弱)하는 물질이면 되고, 예를 들면, RGMa에 결합하여 직접적으로 RGMa 활성을 저해(감약)하는 활성, 혹은 RGMa와 수용체의 결합을 저해하여 간접적으로 RGMa 활성을 저해(감약)하는 활성을 가지는 물질(예를 들면, 후술하는 화합물이나 항체 등)을 본 발명의 RGMa 저해 물질로 칭한다.

또한, 본 발명의 RGMa 저해 물질은 RGMa의 발현을 억제하는 물질이어도 되고, 예를 들면 RGMa의 발현을 저해하고, RGMa 활성을 저해(감약)하는 물질(예를 들면, 후술하는 핵산 분자 등)도 본 발명의 RGMa 저해 물질에 포함된다.

RGMa는 중추 신경계에서의 신경돌기 성장 저해 단백질로서 동정되고, 인간 RGMa 단백질은 서열번호 1에 나타낸 바와 같이 450아미노산으로 이루어지는 전구 단백질로서 생합성된다. N 말단에 존재하는 시그널 펩티드 Met1∼Pro47(N 말단측으로부터 1번째의 메티오닌 잔기로부터 47번째의 프롤린 잔기까지의 펩티드를 가리키며, 이후 동일하게 기재)가 제거되고, Asp168과 Pro169 사이의 펩티드 결합이 절단되어 N 말단 도메인이 생성되고, Pro169보다 C 말단측의 플래그먼트의 C 말단 펩티드 Ala425∼Cys450이 더 제거되고 또한, C 말단이 된 Ala424의 C 말단 카르복실기에 GPI 앵커가 부가되어, C 말단측 도메인이 생성된다. 인간 RGMa 단백질은, 상기 N 말단측 도메인(Cys48∼Asp168)과 C 말단측 도메인(Pro169∼Ala424)이 디설파이드 결합에 의해 연결된 성숙 단백질로서, GPI 앵커를 통하여 세포막 상에 발현한다.

본 발명에 있어서 RGMa는, 어느 동물 유래인 것이어도 되지만, 바람직하게는 인간 RGMa이다. 인간의 RGMa의 전구 단백질은 서열표의 서열번호 1에 나타내는 아미노산 서열로 이루어진다. 마우스의 RGMa의 전구 단백질은 서열표의 서열번호 2에 나타내는 아미노산 서열, 래트의 RGMa의 전구 단백질은 서열표의 서열번호 3에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지지만, C 말단 펩티드가 제거되므로, 성숙 단백질로서는 동일한 아미노산 서열이 된다.

RGMa 유전자로서는, 예를 들면 서열번호 4에 나타내어지는 염기 서열로 이루어지는 인간 RGMa 유전자 등을 들 수 있지만, 이것에 한정되는 것은 아니다. 각종 생물 유래의 RGM 유전자의 염기 서열은 공지의 데이터베이스(GenBank 등)으로부터 용이하게 취득할 수 있다.

본 발명의 RGMa 저해 물질로서는, 구체적으로는, 저분자 화합물, 항RGMa 중화 항체, 그의 기능 개변 항체, 그의 컨쥬게이트 항체 또는 이들의 항원 결합 단편 등을 들 수 있고, 또한, RGMa의 핵산 분자인 siRNA(short interfering RNA), shRNA(short hairpin RNA) 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드 등을 들 수 있다. 이들 RGMa 저해 물질 중, 바람직하게는 항RGMa 중화 항체, 그의 기능 개변 항체, 그의 컨쥬게이트 항체 및 이들의 항원 결합 단편이고, 보다 바람직하게는 항RGMa 중 화 항체 또는 그의 항원 결합 단편이며, 특히 항RGMa 중화 항체가 바람직하다.

<항RGMa 중화 항체>

본 발명에 있어서, 항RGMa 중화 항체란, RGMa에 결합하여 RGMa 활성을 중화하는 항체이면 되고, 폴리클로날 항체라도 되고 모노클로날 항체라도 된다. 본 발명에 있어서 바람직하게는 모노클로날 항체이다. 또한, 본 발명의 항RGMa 중화 항체는 RGMa 단일특이적 항체라도 되고 RGMa 및 다른 항원을 복수 인식하는 다중특이적 항체라도 되지만, 바람직하게는 RGMa 단일특이적 항체이다.

또한, 구체적인 에피토프로서는, 인간 RGMa에 있어서, 서열번호 16(서열번호 1의 아미노산번호 47-69), 서열번호 36(서열번호 1의 아미노산번호 298-311), 서열번호 37(서열번호 1의 아미노산번호 322-335), 서열번호 38(서열번호 1의 아미노산번호 349-359), 서열번호 39(서열번호 1의 아미노산번호 367-377) 중, 1개 이상인 것이 바람직하고, 서열번호 36 및 37의 조합이 보다 바람직하고, 서열번호 36, 37 및 39의 조합이 특히 바람직하다.

본 발명의 항RGMa 중화 항체는, RGMa 단백질 또는 그의 부분 단편(예를 들면, 상기한 에피토프 단편)을 항원으로 하여, 해당 항원을 마우스 등의 포유 동물에게 면역시켜 얻어지는 폴리클로날 항체 및 모노클로날 항체, 유전자 재조합 기술을 이용하여 제조되는 키메라 항체 및 인간화 항체, 및 인간 항체 산생 트랜스제닉 동물 등을 사용하여 제조되는 인간 항체 등이 포함된다. 본 발명의 항체를 의약으로서 인간에게 투여하는 경우에는, 부작용의 관점에서, 인간화 항체 또는 인간 항체가 바람직하다.

본 발명의 항RGMa 중화 항체로서, 구체적으로는, 하기 (a)∼(l)의 항체를 들 수 있고, 각각 제조 방법은 특허문헌 2-4에 기재된 방법을 이용할 수 있다.

(a) 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 8에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 9에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 36, 37 및 39를 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(b) 서열번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 13에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 SFG를 아미노산 서열에 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 36, 37 및 38을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(e) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 31에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(f) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(g) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(h) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 41에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(i) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 42에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(j) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 43에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함),

(k) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함), 및

(l) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 45에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체(해당 항RGMa 중화 항체는, 서열번호 16을 에피토프로 하는 항체도 더 포함함)로부터 선택되는 항체를 들 수 있다.

이들 중, 특히 바람직하게는 (a)에 기재되는 항체를 들 수 있다.

본 발명의 항RGMa 중화 항체의 제조 방법은, 기존에 일반적으로 이용되는 제조 방법을 이용할 수 있다. 항원은 그대로 면역에 사용해도 되고, 수송 단백질과의 복합체로서 사용해도 된다. 항원과 수송 단백질의 복합체의 조제에는 글루타르알데히드, 카르보디이미드, 말레이미드 활성 에스테르 등의 축합제를 사용할 수 있다. 수송 단백질은 소 혈청 알부민, 사일로글로불린, 헤모시아닌, KLH 등이 예시된다.

면역되는 포유 동물로서는, 마우스, 래트, 햄스터, 모르모트, 토끼, 고양이, 개, 돼지, 염소, 말 혹은 소 등을 들 수 있고, 접종 방법은 피하, 근육 혹은 복강내의 투여를 들 수 있다. 투여에 있어서는 완전 프로인트 보조제나 불완전 프로인트 보조제와 혼화하여 투여해도 되고, 투여는 통상 2∼5주마다 1회씩 행해진다. 면역된 동물의 비장 혹은 림프절로부터 얻어진 항체 산생 세포는 골수종(미엘로마) 세포와 세포융합시키고, 하이브리도마로서 단리된다. 골수종 세포로서는 포유 동물 유래, 예를 들면 마우스, 래트, 인간 등 유래의 것이 사용된다.

<폴리클로날 항체>

폴리클로날 항체는, 예를 들면, 전술한 바와 같은 항원을, 필요에 따라 프로인트 보조제(Freund's Adjuvant)와 함께, 상기와 같은 포유 동물에게 면역시킴으로써 해당 면역 감작 동물로부터 얻은 혈청으로부터 취득할 수 있다.

<모노클로날 항체>

모노클로날 항체는, 구체적으로는 하기와 같이 하여 취득할 수 있다. 즉, 전술한 바와 같은 항원을 면역원으로 하고, 그 면역원을, 필요에 따라 프로인트 보조제(Freund's Adjuvant)와 함께, 상기와 같은 포유 동물의 피하, 근육내, 정맥내, 후드패드내 혹은 복강내에 1∼수회 주사하거나 혹은 이식함으로써 면역 감작을 실시한다. 통상, 초회 면역으로부터 약 1∼14일마다 1∼4회 면역을 행하고, 최종 면역보다 약 1∼5일 후에 면역 감작된 해당 포유 동물로부터 항체 산생 세포가 취득된다.

모노클로날 항체는, 당업자에게 주지 방법을 이용하여 얻을 수 있다(예를 들면, 『Current Protocols in Molecular Biology』 (John Wiley & Sons(1987)), Antibodies: A Laboratory Manual, Ed.Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory(1988)).

모노클로날 항체를 분비하는 「하이브리도마」의 조제는, 쾰러 및 밀스타인 등의 방법(네이처(Nature), 256, 495, 1975) 및 그것에 준하는 수식 방법에 따라서 행할 수 있다. 즉, 면역 감작된 포유 동물로부터 취득되는 비장 등에 포함되는 항체 산생 세포와, 포유 동물, 바람직하게는 마우스, 래트 또는 인간 유래의 자기 항체 산생 능력이 없는 미엘로마 세포를 세포융합시킴으로써 조제된다.

세포융합에 사용되는 미엘로마 세포로서는, 예를 들면 마우스 유래 미엘로마 P3/X63-AG8.653(653), P3/NSI/1-Ag4-1(NS-1), P3/X63-Ag8.U1(P3U1), SP2/0-Ag14(Sp2/O, Sp2), PAI, F0 혹은 BW5147, 래트 유래 미엘로마 210RCY3-Ag. 2.3., 인간 유래 미엘로마 U-266AR1, GM1500-6TG-A1-2, UC729-6, CEM-AGR, D1R11 혹은 CEM-T15 등을 사용할 수 있다.

융합 촉진제로서는 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있고, 통상적으로는, 20∼50% 정도의 농도의 폴리에틸렌글리콜(평균 분자량 1000∼4000)을 사용하여 20∼40℃, 바람직하게는 30∼37℃의 온도 하, 항체 산생 세포수와 골수종 세포수의 비는 통상 1:1∼10:1 정도로 하고, 약 1∼10분간 정도 반응시킴으로써 세포융합을 실시할 수 있다.

모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마 클론의 스크리닝은, 하이브리도마를 예를 들면 미량정량판(microtiter plate) 내에서 배양하고, 웰의 배양 상청의 면역 항원에 대한 반응성을 ELISA 등의 면역화학적 방법에 의해 측정함으로써 행할 수 있다.

항체 산생 하이브리도마의 스크리닝에 있어서는, RGMa 단백질과의 결합 앗세이에 더하여, 해당 항체가 본 발명의 RGMa 활성을 저해하는지의 평가도 행한다. 이들 스크리닝 방법에 의해, 본 발명의 항RGMa 중화 항체를 선택할 수 있다.

또한 목적으로 하는 항체를 산생하는 하이브리도마를 포함하는 웰로부터, 한계 희석법에 의해 클로닝을 행하고, 클론을 얻을 수 있다. 하이브리도마의 선별, 육종은 통상, HAT(히포크산틴, 아미노프테린, 티미딘)을 첨가하여, 10∼20% 소태아혈청을 포함하는 동물세포용 배지에서 행해진다.

하이브리도마로부터의 모노클로날 항체의 제조는, 하이브리도마를 인 비트로(in vitro)에서 배양할 것인지, 또는 마우스, 래트 등의 포유 동물의 복수(腹水) 중 등의 인 비보(in vivo)에서 증식시키고, 얻어진 배양 상청, 또는 포유 동물의 복수로부터 단리함으로써 행할 수 있다.

인 비트로에서 배양하는 경우에는, 배양하는 세포종의 특성 및 배양 방법 등의 각종 조건에 맞추어, 하이브리도마를 증식, 유지 및 보존시켜, 배양 상청 중 에 모노클로날 항체를 산생시키는 데에 적합한 영양 배지를 이용하는 것이 가능하다. 영양 배지는, 공지의 영양 배지 또는 기본 배지로부터 조제되는 영양 배지 등을 들 수 있다.

기본 배지로서는, 예를 들면 Ham'F12 배지, MCDB153 배지 혹은 저칼슘 MEM 배지 등의 저칼슘 배지 및 MCDB104 배지, MEM 배지, D-MEM 배지, RPMI1640 배지, ASF104 배지 혹은 RD 배지 등의 고칼슘 배지 등을 들 수 있고, 해당 기본 배지는 목적에 따라, 예를 들면 혈청, 호르몬, 사이토카인 및/또는 각종 무기 혹은 유기 물질 등을 함유시킬 수 있다.

모노클로날 항체의 단리, 정제는, 전술한 배양 상청 혹은 복수를, 포화 황산암모늄, 유글로불린 침전법, 카프로산법, 카프릴산법, 이온 교환 크로마토그래피(DEAE 또는 DE52 등), 항면역글로불린 컬럼 혹은 프로틴 A 컬럼 등의 친화성(affinity) 컬럼 크로마토그래피에 제공하는 것 등에 의해 행할 수 있다. 구체적으로는, 모노클로날 항체의 정제는 면역 글로불린의 정제법으로서 기지의 방법을 이용하면 되고, 예를 들면, 유안 분획법, PEG 분획법, 에탄올 분획법, 음이온 교환체의 이용, 또한 RGMa 단백질을 사용하는 친화성 크로마토그래피 등의 수단에 의해 용이하게 달성할 수 있다.

모노클로날 항체는 파지 디스플레이법에 의해 취득할 수도 있다. 파지 디스플레이법에서는, 임의의 파지 항체 라이브러리로부터 선별한 파지를, 원하는 면역원을 이용하여 스크리닝을 행하고, 면역원에 대한 원하는 결합성을 가지는 파지를 선택한다. 다음으로, 파지 내에 포함되는 항체 대응 서열을 단리 또는 서열 결정하고, 단리된 서열 또는 결정된 서열 정보에 기초하여, 항체 또는 항원 결합 도메인을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 구축한다. 그리고, 이러한 발현 벡터를 트랜스펙션된 세포주를 배양함으로써, 모노클로날 항체를 발생시킬 수 있다. 파지 항체 라이브러리로서, 인간 항체 라이브러리를 사용함으로써, 원하는 결합성을 가지는 인간 항체를 산생할 수 있다.

<핵산 분자>

본 발명의 항RGMa 중화 항체 또는 그 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 분자는, 예를 들면 이하의 방법에 의해 얻을 수 있다. 먼저, 하이브리도마 등의 세포로부터, 시판되고 있는 RNA 추출 키트를 이용하여 전체 RNA를 조제하고, 랜덤 프라이머 등을 사용하여, 역전사 효소에 의해 cDNA를 합성한다. 이어서, 기지의 인간 항체 중쇄 유전자, 경쇄 유전자의 가변 영역에 있어서, 각각 보존되어 있는 서열의 올리고뉴클레오티드를 프라이머에 사용한 PCR법에 의해, 항체를 코딩하는 cDNA를 증폭시킨다. 정상 영역을 코딩하는 서열에 대해서는, 기지의 서열을 PCR법으로 증폭함으로써 얻을 수 있다. DNA의 염기 서열은, 서열 결정용 플라스미드에 삽입하는 등, 상법에 의해 결정할 수 있다.

혹은, 가변 영역 또는 그 일부의 서열을 화학 합성하고, 정상 영역을 포함하는 서열에 결합함으로써도 본 발명의 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA를 얻을 수 있다.

해당 핵산 분자는 중쇄와 경쇄의 정상 영역과 가변 영역 모두를 코딩하는 것이어도 되지만, 중쇄와 경쇄의 가변 영역만을 코딩하는 것이어도 된다. 정상 영역과 가변 영역 모두를 코딩하는 경우에서의 중쇄 및 경쇄의 정상 영역의 염기 서열은, Nucleic Acids Research vol. 14, p1779, 1986, The Journal of Biological Chemistry vol. 257, p1516, 1982 및 Cell vol. 22, p197, 1980에 기재된 것이 바람직하다.

<기능 개변 항체>

항RGMa 중화 항체의 기능 개변 항체는, 다음과 같은 방법으로 조제된다. 예를 들면, 본원 항RGMa 중화 항체를, 숙주 세포로서 α1,6-푸코오스 전이 효소(FUT8) 유전자를 파괴한 CHO 세포를 사용하여 제조하면, 당쇄의 푸코오스 함량이 저하되어 세포 살상 기능이 높아진 항체가 얻어지고, FUT8 유전자를 도입한 CHO 세포를 숙주 세포로서 제조하면, 세포 살상 기능이 낮은 항체가 얻어진다(국제공개 제2005/035586호, 국제공개 제2002/31140호, 국제공개 제00/61739호). 또한, Fc 영역의 아미노산 잔기를 개변함으로써 보체 활성화 기능을 조절할 수 있다(미국 특허 제6737056호, 미국 특허 제7297775호, 미국 특허 제7317091호). 또한, Fc 수용체의 하나인 FcRn으로의 결합을 향상시킨 Fc 영역의 이변체를 사용하는 것에 의해, 혈중 반감기의 연장을 도모할 수 있다(하시구치 슈헤이 등, 생화학, 2010, Vol. 82(8), p710). 이들 기능 개변 항체는 유전자공학적으로 제조할 수 있다. Fc 수용체의 하나인 FcRn으로의 결합을 향상시킨 Fc 영역의 이변체를 사용함으로써, 혈중 반감기의 연장을 도모할 수 있다(하시구치 슈헤이 등, 생화학, 2010, Vol. 82(8), p710). 이들 기능 개변 항체는 유전자공학적으로 제조할 수 있다.

<컨쥬게이트 항체>

본 발명의 항RGMa 중화 항체의 개변 분자로서, 컨쥬게이트 항체를 들 수 있다. 컨쥬게이트 항체로서는, 항RGMa 중화 항체에 폴리에틸렌글리콜(PEG) 등의 비펩티드성 폴리머, 방사성 물질, 독소, 저분자 화합물, 사이토카인, 성장 인자(TGF-β, NGF, Neurotrophin 등), 알부민, 효소, 다른 항체 등의 본원의 항RGMa 중화 항체 이외의 기능 분자를 화학적 또는 유전자공학적으로 결합한 컨쥬게이트 항체를 들 수 있다.

기능 분자로서 PEG를 결합하는 경우, PEG는 비한정적으로 분자량 2000 내지 100000Da, 보다 바람직하게는 10000 내지 50000Da의 것을 사용할 수 있고, 직쇄형이어도 되고, 브랜치형인 것이어도 된다. PEG는 예를 들면 NHS 활성기를 이용함으로써, 항RGMa 중화 항체의 아미노산의 N 말단 아미노기 등에 결합할 수 있다.

기능 분자로서 방사성 물질을 사용하는 경우, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ⁶⁴Cu, ⁹⁹Tc, ⁷⁷Lu 또는 ²¹¹At 등이 사용된다. 방사성 물질은 클로라민 T법 등에 의해 항RGMa 중화 항체에 직접 결합시킬 수 있다.

기능 분자로서 독소를 사용하는 경우, 세균 독소(예를 들면, 디프테리아 독소), 식물 독소(예를 들면, 리신), 저분자 독소(예를 들면, 겔다나마이신), 메이탄시노이드, 및 칼리키아마이신 등을 사용할 수 있다.

기능 분자로서 저분자 화합물을 사용하는 경우, 다우노마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 미토마이신, 네오카르지노스타틴, 빈데신 및 FITC 등의 형광 색소 등을 들 수 있다.

기능 분자로서, 효소를 사용하는 경우, 루시페라제(예를 들면, 반딧불이 루시페라제 및 세균 루시페라제; 미국 특허 제4737456호), 말산 디하이드로게나제, 우레아제, 퍼옥시다제(예를 들면, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRPO)), 알칼리성 포스파타아제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라아제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다제(예를 들면, 글루코오스 옥시다제, 갈락토오스 옥시다제, 및 글루코오스-6-포스페이트디하이드로게나제), 복소환식 옥시다제(예를 들면, 우리카아제 및 크산틴 옥시다제 등), 락토퍼옥시다제, 마이크로퍼옥시다제 등을 사용할 수 있다.

독소, 저분자 화합물 또는 효소를 화학적으로 결합할 때 사용하는 링커로서는, 2가 라디칼(예를 들면, 알킬렌, 아릴렌, 헤테로아릴렌), -(CR₂)_nO(CR₂)_n-(R은 임의의 치환기, n은 양의 정수)로 표시되는 링커나 알콕시의 반복 단위(예를 들면, 폴리에틸렌옥시, PEG, 폴리메틸렌옥시 등) 및 알킬아미노(예를 들면, 폴리에틸렌 아미노, Jeffamine(상표)), 및, 2산에스테르 및 아미드(숙시네이트, 숙신아미드, 디글리콜레이트, 말로네이트 및 카프로아미드 등을 들 수 있음)을 들 수 있다. 기능 분자를 결합시키는 화학적 수식 방법은 이 분야에 있어서 이미 확립되어 있다 (D.J.King., Applications and Engineering of Monoclonal antibodies., 1998 T.J. International Ltd, Monoclonal Antibody-Based Therapy of Cancer., 1998 Marcel Dekker Inc; Chari et al., Cancer Res., 1992 Vol152:127; Liu et al., Proc Natl Acad Sci USA., 1996 Vol 93: 8681).

<항원 결합 단편>

본 발명의 실시형태에 있어서, 항체의 「항원 결합 단편」이란, 전술한 바와 같은 항체의, 항원 결합성을 가지는 일부분의 영역을 의미하고, 구체적으로는 F(ab')₂, Fab', Fab, Fv(variable fragment ofantibody), 디설피드 결합 Fv, 1본쇄항체(scFv), 및 이들의 중합체 등을 들 수 있고, 또한, 항원 결합 단편에는 폴리에틸렌글리콜(PEG) 등의 비펩티드성 폴리머, 방사성 물질, 독소, 저분자 화합물, 사이토카인, 성장 인자(TGF-β, NGF, Neurotrophin 등), 알부민, 효소, 다른 항체 등의 본원의 항RGMa 중화 항체 이외의 기능 분자를 화학적 또는 유전자공학적으로 결합하고 있는 컨쥬게이트 프래그먼트가 포함된다.

「F(ab')₂」 및 「Fab」는, 면역 글로불린을, 단백질 분해 효소인 펩신 혹은 파파인 등으로 처리함으로써 제조되고, 힌지 영역 중의 2개의 중쇄 사이에 존재하는 디설피드 결합의 전후에서 소화되어 생성되는 항체 플래그먼트를 의미한다. 예를 들면, IgG를 파파인으로 처리하면, 힌지 영역 중의 2개의 중쇄 사이에 존재하는 디설피드 결합의 상류에서 절단되어 VL(경쇄 가변 영역)과 CL(경쇄 정상 영역)으로 이루어지는 경쇄, 및 VH(중쇄 가변 영역)과 CHγ1(중쇄 정상 영역 중의 γ1 영역)으로 이루어지는 중쇄 플래그먼트가 C 말단 영역에서 디설피드 결합에 의해 결합한 상동한 2개의 항체 플래그먼트를 제조할 수 있다. 이들 2개의 상동한 항체 플래그먼트를 각각 Fab라고 한다. 또한 IgG를 펩신으로 처리하면, 힌지 영역 중의 2개의 중쇄 사이에 존재하는 디설피드 결합의 하류에서 절단되어 상기 2개의 Fab가 힌지 영역에서 연결된 것보다 약간 큰 항체 플래그먼트를 제조할 수 있다. 이 항체 플래그먼트를 F(ab')₂라고 한다.

<키메라 항체>

본 발명의 항RGMa 중화 항체의 바람직한 태양(態樣)으로서 키메라 항체를 들 수 있다. 「키메라 항체」란, 가변 영역이 비인간 동물(마우스, 래트, 햄스터, 닭 등)의 면역 글로불린 유래의 가변 영역이고, 정상 영역이 인간 면역 글로불린 유래의 정상 영역인, 키메라 항체가 예시된다. 예를 들면, 항원을 마우스에 면역시키고, 그 마우스 모노클로날 항체의 유전자로부터 항원과 결합하는 가변 영역을 잘라내고, 인간 골수 유래의 항체 정상 영역과 결합하여 제작할 수 있다. 인간 면역 글로불린 유래의 정상 영역은, IgG(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA(IgA1, IgA2), IgD 및 IgE 등의 아이소타입에 의해 각각 고유의 아미노산 서열을 가지지만, 본 발명에서의 재조합 키메라 항체의 정상 영역은 어느 쪽의 아이소타입에 속하는 인간 면역 글로불린의 정상 영역으로 해도 된다. 바람직하게는, 인간 IgG의 정상 영역이다. 이와 같이 제작한 키메라 항체의 유전자를 사용하여 발현 벡터를 제작할 수 있다. 해당 발현 벡터에 의해 숙주 세포를 형질 전환함으로써 키메라 항체 생산 형질 전환 세포를 얻고, 그 형질 전환 세포를 배양함으로써 배양 상청 중에서 목적으로 하는 키메라화 항체를 얻는다.

<인간화 항체>

본 발명의 항RGMa 중화 항체의 다른 바람직한 태양으로서 인간화 항체를 들 수 있다. 본 발명에서의 「인간화 항체」는, 마우스 등의 비인간 동물 항체의 항원 결합 부위(CDR; 상보성 결정 영역)의 DNA 서열만을 인간 항체 유전자에 이식(CDR 그라프팅)한 항체이다. 예를 들면, 일본 특표 평4-506458호 공보 및 특허 2912618호 명세서 등에 기재된 방법을 참조하여 제작할 수 있다. 구체적으로는, 그 CDR의 일부 또는 전부가 비인간 포유 동물(마우스, 래트, 햄스터 등)의 모노클로날 항체에 유래하는 CDR이고, 그 가변 영역의 프레임 워크 영역이 인간 면역 글로불린 유래의 가변 영역의 프레임 워크 영역이며, 또한 그 정상 영역이 인간 면역 글로불린 유래의 정상 영역인 것을 특징으로 하는 인간화 항체를 의미한다.

본 발명에서의 인간화 항체는, 예를 들면 다음과 같이 하여 제조할 수 있다. 그러나, 그와 같은 제조 방법에 한정되는 것이 아닌 것은 말할 필요도 없다.

예를 들면, 마우스 모노클로날 항체에 유래하는 재조합 인간화 항체는, 일본특표 평4-506458호 공보 및 일본공개특허 소62-296890호 공보 등을 참조하여, 유전자공학적으로 제작할 수 있다. 즉, 마우스 모노클로날 항체를 산생하는 하이브리도마로부터, 마우스 중쇄 CDR 부분의 DNA와 마우스 경쇄 CDR 부분의 DNA를 단리하고, 인간 면역 글로불린 유전자로부터 인간 중쇄 CDR 이외의 전영역의 인간 중쇄 유전자와, 인간 경쇄 CDR 이외의 전영역의 인간 경쇄 유전자를 단리한다.

단리한 마우스 중쇄 CDR 부분의 DNA를 이식한 인간 중쇄 유전자를 발현 가능한 것 같이 적당한 발현 벡터에 도입하고, 마찬가지로 마우스 경쇄 CDR 부분의 DNA를 이식한 인간 경쇄 유전자를 발현 가능한 것 같이 적당한 또 하나의 발현 벡터에 도입한다. 또는, 마우스의 CDR을 이식한 인간의 중쇄 및 경쇄 유전자를 동일한 발현 벡터에 발현 가능하도록 도입할 수도 있다. 이와 같이 하여 제작된 발현 벡터에의해 숙주 세포를 형질 전환함으로써 인간화 항체 생산 형질 전환 세포를 얻고, 그 형질 전환 세포를 배양함으로써 배양 상청 중에서 목적으로 하는 인간화 항체를 얻는다.

<인간 항체>

본 발명의 항RGMa 중화 항체의 다른 바람직한 태양으로서 인간 항체를 들 수 있다. 인간 항체란, 면역 글로불린을 구성하는 중쇄의 가변 영역 및 중쇄의 정상 영역 및 경쇄의 가변 영역 및 경쇄의 정상 영역을 포함하는 모든 영역이 인간 면역 글로불린을 코딩하는 유전자에 유래하는 면역 글로불린으로 되어 있는 항체로서, 인간 항체 유전자를 마우스에 도입하여 제작할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들면 적어도 인간 면역 글로불린 유전자를 마우스 등의 인간 이외의 포유 동물의 유전자좌중에 삽입하는 것에 의해 제작된 트랜스제닉 동물을, 항원으로 면역 감작함으로써, 전술한 폴리클로날 항체 혹은 모노클로날 항체의 제작법과 동일하게 하여 제조할 수 있다.

예를 들면, 인간 항체를 산생하는 트랜스제닉 마우스는 Nature Genetics, Vol. 7, p.13-21, 1994; Nature Genetics, Vol. 15, p.146-156, 1997; 일본 특표 평4-504365호 공보; 일본 특표 평7-509137호 공보; 국제공개 WO94/25585호 팜플렛; Nature, Vol. 368, p.856-859, 1994; 및 일본 특표 평6-500233호 공보 등에 기재된 방법에 따라서 제작할 수 있다. 보다 구체적으로는, HuMab(등록상표) 마우스(Medarex, Princeton NJ), KMTM 마우스(Kirin Pharma Company, Japan), KM(FCγRIIb-KO) 마우스 등을 들 수 있다.

본 발명의 항RGMa 중화 항체로서, 구체적으로는, 중쇄 가변 영역에 특정한 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 가지고, 경쇄 가변 영역에 특정한 아미노산 서열을 포함하는 CDR을 가지는 것(바람직하게는, 전술한 (a)∼(l)의 항RGMa 중화 항체)를 들 수 있다.

그리고, RGMa와의 결합능을 가지고, RGMa의 활성을 저해(중화)한다는 본 발명의 항체의 특성이 유지되는 한, 항RGMa 중화 항체(바람직하게는, 전술한 (a)∼(l)의 항RGMa 중화 항체)의 아미노산 서열에 있어서, 1개 또는 수개의 아미노산 (1∼20개, 1∼10개 또는 1∼5개, 바람직하게는 1 내지 2개)의 치환, 결실, 부가 또는 삽입이 있어도 된다. 이와 같은 치환, 결실, 부가는 CDR에 도입되어도 되지만, CDR 이외의 영역에 도입되는 것이 바람직하다. 또한, 해당 아미노산 치환은 본 발명의 특성을 유지하기 위해 보존적 치환인 것이 바람직하다.

아미노산 서열에 있어서 치환, 결실 등이 포함된 본 발명의 항RGMa 중화 항체(바람직하게는, 전술한 (a)∼(l)의 항RGMa 중화 항체)의 아미노산 서열은, 예를 들면 아미노산 서열 개변 후의 중쇄 가변 영역이 개변 전의 아미노산 서열과 90% 이상(보다 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상)의 % 동일성을 가지는 아미노산 서열이고, 아미노산 서열 개변 후의 경쇄 가변 영역이 개변 전의 아미노산 서열과 90% 이상(보다 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상)의 % 동일성을 가지는 아미노산 서열이다.

본 발명에 있어서, siRNA란 표적이 되는 유전자(본 발명에 있어서는 RGMa 유전자)의 발현을 억제할 수 있는 짧은 2본쇄 RNA다. 본 발명의 RGMa 활성을 저해하는 siRNA로서 기능하는 한에 있어서, 염기 서열이나 길이(염기 길이)는 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 약 30염기 미만, 보다 바람직하게는 약 19∼27염기, 더욱 바람직하게는 약 21∼25염기다.

본 발명에 있어서, shRNA란 1본쇄 RNA에서 부분적으로 회문상(回文狀)의 염기 서열을 포함함으로써, 분자 내에서 2본쇄 구조를 취하고, 3' 말단에 돌출부를 가지는 짧은 헤어핀 구조로 이루어지는 약 20염기쌍 이상의 분자를 말한다. 그와 같은 shRNA는 세포 내에 도입된 후, 세포 내에서 약 20염기(대표적으로는, 예를 들면, 21염기, 22염기, 23염기)의 길이로 분해되고, siRNA와 마찬가지로 표적이 되는 유전자의 발현을 억제할 수 있다.

본 발명에 있어서는, 전술한 siRNA 및 shRNA는 RGMa 유전자의 발현을 억제할 수 있는 것이면 어떠한 형태라도 된다.

본 발명에 있어서, siRNA 또는 shRNA는 인공적으로 화학 합성할 수 있다. 또한, 예를 들면 T7RNA 폴리머라제 및 T7 프로모터를 이용하여, 주형 DNA로부터 안티 센스 및 센스의 RNA를 인 비트로 합성할 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는, RGMa 유전자의 DNA 서열 중의 연속하는 5 내지 100의 염기 서열에 대하여 상보적이거나, 또는 교잡하는 뉴클레오티드라면 되고, DNA 또는 RNA 중 어느 것이라도 된다. 또한, 기능에 지장이 없는 한 수식된 것이어도 된다. 안티센스 올리고뉴클레오티드는 상법에 의해 합성할 수 있고, 예를 들면, 시판되고 있는 DNA 합성 장치에 의해 용이하게 합성할 수 있다.

바람직한 서열은 통상의 선택 방법을 이용하여 선택할 수 있고, 본 발명에서의 siRNA 또는 shRNA로서는, 기능성 RGMa의 발현 저해를 평가함으로써 확인할 수 있다.

<당뇨병성 치매증>

본 발명에서의 당뇨병성 치매증이란, 당 대사 이상에 의해 야기되는 치매증이며, 전형적으로는 당뇨병에 수반되는 치매증을 들 수 있다. 그의 발증 메커니즘으로서는, 뇌경색이나 동맥 경화 등의 혈관 요인에 더하여, 당독성이나 산화 스트레스, AGE(advanced glycation end-product) 등에 의한 가령 변화의 촉진, 또한, 고인슐린혈증, 인슐린 저항성, 인슐린 시그널 전달의 장해가 관여한다고 추정되고 있다(Lancet Neurol, 5: 64-74, 2006). 당뇨병성 치매증은, 임상적으로는 당대사 이상과의 밀접한 관련이 나타내어지거나, 또는 시사되는 것에 대하여, 알츠하이머병의 병리 변화나 혈관성 병변이 인지되지 않거나, 또는 보다 경미한 치매증이다. 또한, 이와 같은 당뇨병성 치매증은, 당대사 장해(고혈당 등을 포함함)에 의한 신경 장해가 관여하는 치매증도 포함된다. 본 발명에서의 당뇨병성 치매증에는, 치매증에 이르지 않는 경도의 인지 기능 장해인 당뇨병성 인지 기능 장해도 포함한다.

<혈관성 치매증>

본 발명에서의 혈관성 치매증이란, 뇌혈관 질환에 기인하는 치매증이며, 뇌혈관 질환과 치매증 사이에 인과 관계가 존재하는 것을 의미한다. 혈관성 치매증의 원인으로서는, 뇌경색, 뇌출혈, 지주막하출혈에 더하여, 뇌순환 부전, 저관류, 백질 병변 등의 병형도 포함된다. 본 발명에서의 혈관성 치매증에는, 치매증에 이르지 않는 경도의 인지 기능 장해인 혈관성 인지 기능 장해도 포함한다. 또한, 혈관성 치매증에 관한 진단 기준에 준하여, 본 발명의 혈관성 치매증을 특정할 수도 있다 (비특허문헌 8).

본 발명에서의 치료 대상(바람직하게는 포유 동물, 특히 인간)은, 당뇨병성 치매증 또는 혈관성 치매증을 발증한 환자가 대상이 되고, 본 발명의 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제를 이들 환자에게 투여할 수 있다.

여기에서, 「치료」란, 치료 대상, 바람직하게는 포유 동물, 특히 인간의 질환의 임의의 치료를 포함하고, 질환 및 증상의 진행을 저지하고, 그와 같은 질환 및 증상을 소멸, 치유, 경감 또는 완화시키는 것을 포함한다.

또한, 「예방」이란, 치료 대상, 바람직하게는 포유 동물, 특히 인간에 있어서, 상기 질환의 발증을 방지 또는 억제하는 것을 포함한다. 또한, 본 발명에서의 「예방」에는, 치료 대상, 바람직하게는 포유 동물, 특히 인간에 있어서, 관해(寬解), 재발을 반복하는 상기 질환의 재발을 방지하는 「재발 예방」이 포함된다.

<의약 조성물>

본 발명에서의 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제는 통상, 전신적 또는 국소적으로, 경구 또는 비경구의 형태로 투여된다.

본 발명에서의 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제는 RGMa 저해 물질을 유효 성분으로 하고, 약학적으로 허용되는 담체 또는 첨가제를 적절히 배합하여 제제화할 수 있다. 그와 같이 제제화한 의약 조성물을 경구 또는 비경구의 형태로 투여할 수 있다. 구체적으로는, 정제(錠劑), 피복 정제, 환제, 산제(散劑), 과립제, 캡슐제, 액제, 현탁제, 유제 등의 경구제로 할 수 있고, 또한, 주사제, 수액, 좌제, 연고, 패치제 등의 비경구제로 할 수 있다. 담체 또는 첨가제의 배합 비율에 대해서는, 의약품 분야에 있어서 통상 채용되고 있는 범위에 기초하여 적절히 설정하면 된다. 배합할 수 있는 담체 또는 첨가제는 특별히 제한되지 않지만, 예를 들면 물, 생리식염수, 기타의 수성 용매, 수성 또는 유성 기제 등의 각종 담체, 예를 들면 부형제, 결합제, pH 조정제, 붕괴제, 흡수 촉진제, 활택제, 착색제, 교미제(矯味劑), 향료 등의 각종 첨가제를 들 수 있다.

RGMa 저해 물질이 항RGMa 중화 항체, 그의 기능 개변 항체, 그의 컨쥬게이트 항체 또는 이들의 항원 결합 단편인 경우, 약학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화된 주사제 또는 수액으로 하여, 비경구 투여 경로, 예를 들면 정맥내, 근육내, 피부내, 복강내, 피하 또는 국소에 투여하는 것이 바람직하다.

예를 들면, 항RGMa 중화 항체를 포함하는 주사제 또는 수액은 용액, 현탁액또는 유탁액으로서 사용할 수 있다. 그 용제로서, 예를 들면 주사용 증류수, 생리식염수, 포도당 용액 및 등장액(예를 들면, 염화나트륨, 염화칼륨, 글리세린, 만니톨, 소르비톨, 붕산, 붕사, 프로필렌글리콜 등의 용액) 등을 사용할 수 있다.

또한, 이와 같은 항RGMa 중화 항체를 포함하는 주사제 또는 수액은 안정제, 용해 보조제, 현탁화제, 유화제, 무통화제, 완충제, 보존제, 방부제, pH 조정제 등을 포함해도 된다.

안정제로서는, 예를 들면 알부민, 글로불린, 젤라틴, 만니톨, 글루코오스, 덱스트란, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 아스코르브산, 아황산수소나트륨, 티오황산나트륨, EDTA 나트륨, 시트르산나트륨, 디부틸하이드록시톨루엔 등을 사용할 수 있다.

용해 보조제로서는, 예를 들면 알코올(예를 들면, 에탄올 등), 폴리알코올 (예를 들면, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜 등), 비이온 계면활성제 예를 들면 폴리소르베이트 80(등록상표), HCO-50 등을 사용할 수 있다.

현탁화제로서는, 예를 들면 모노스테아르산글리세린, 모노스테아르산알루미늄, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시메틸셀룰로오스, 라우릴황산나트륨 등을 사용할 수 있다.

유화제로서는, 예를 들면 아라비아 검, 알긴산나트륨, 트라가칸트 등을 사용할 수 있다.

무통화제로서는, 예를 들면 벤질알코올, 클로로부탄올, 소르비톨 등을 사용할 수 있다.

완충제로서는, 예를 들면 인산 완충액, 아세트산 완충액, 붕산 완충액, 탄산 완충액, 시트르산 완충액, 트리스 완충액 등을 사용할 수 있다.

보존제로서는, 예를 들면 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필, 파라옥시벤조산부틸, 클로로부탄올, 벤질알코올, 염화벤잘코늄, 디하이드로아세트산나트륨, 에데트산나트륨, 붕산, 붕사 등을 사용할 수 있다.

방부제로서는, 예를 들면 염화벤잘코늄, 파라옥시벤조산, 클로로부탄올 등을 사용할 수 있다.

pH 조정제로서는, 예를 들면 염산, 수산화나트륨, 인산, 아세트산 등을 사용할 수 있다.

RGMa 저해 물질이 핵산(siRNA, shRNA, 안티센스 올리고뉴클레오티드 등)인 경우, 비(非)바이러스 벡터 또는 바이러스 벡터의 형태로 투여할 수 있다. 비바이러스 벡터 형태의 경우, 리포솜을 이용하여 핵산 분자를 도입하는 방법(리포솜법, HVJ-리포솜법, 카티오닉리포솜법, 리포펙션법, 리포펙타민법 등), 마이크로인젝션법, 유전자총(Gene Gun)에 의해 캐리어(금속 입자)와 함께 핵산 분자를 세포에 이입하는 방법 등을 이용할 수 있다. 예를 들면, siRNA 또는 shRNA를 바이러스 벡터를 이용하여 생체에 투여하는 경우에는, 재조합 아데노바이러스, 레트로바이러스 등의 바이러스 벡터를 이용할 수 있다. 무독화한 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 수반 바이러스, 헤르페스바이러스, 백시니아바이러스, 폭스바이러스, 폴리오바이러스, 신드비스바이러스, 센다이바이러스, SV40 등의 DNA 바이러스 또는 RNA 바이러스에, siRNA 또는 shRNA를 발현하는 DNA를 도입하고, 세포 또는 조직(組織)에 이 재조합 바이러스를 감염시킴으로써, 세포 또는 조직 내에 유전자를 도입할 수 있다.

이와 같이 하여 얻어지는 제제는, 예를 들면 인간이나 다른 포유 동물(예를 들면, 래트, 마우스, 토끼, 양, 돼지, 소, 고양이, 개, 원숭이 등)에 대하여, 그 유효량을 투여함으로써, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증을 예방 또는 치료할 수 있다. 투여량은 목적, 질환의 중독도(重篤度), 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 유효 성분의 종류 등을 고려하여, 적절히 설정된다. 예를 들면, 유효 성분이 항RGMa 중화 항체인 경우, 약 65∼70kg의 체중을 가지는 평균적인 인간을 대상으로 한 경우, 1일당 0.02mg∼4000mg 정도가 바람직하고, 0.1mg∼200mg 정도가 보다 바람직하다. 1일당의 총투여량은 단일 투여량이어도 되고 분할 투여량이어도 된다.

<다른 약제 또는 치료와의 병용>

본 발명에 있어서, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제는 항당뇨 병약과의 병용으로 투여할 수 있다. 병용되는 항당뇨병약의 치료제로서는, 예를 들면 인슐린 저항성 개선약 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제는, 항혈전요법이나 강압제와의 병용으로 투여할 수 있다. 병용되는 강압제로서는, 예를 들면 안지오텐신II 수용체 길항제(칸데사르탄 등), ACE 저해제(페린도프릴 등) 등을 들 수 있다.

상기 다른 약제 또는 치료는, 본 발명의 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제의 투여 전 또는 투여 후에 투여 또는 실시해도 되고, 또한, 동시에 투여 또는 실시해도 된다.

[실시예]

이하, 본 발명에 대하여 실시예를 들어 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들에 한정되는 것은 아니다.

그리고, 항RGMa 중화 항체로서, 본 명세서에 기재한 (a)의 아미노산 서열(서열번호 5∼10)을 포함하는 항RGMa 중화 항체를 각 실시예에서 사용했다.

[실시예1]

약제 유도성 1형 당뇨병 모델 마우스를 이용하여, 인지 기능 장해에 대한 항RGMa 중화 항체의 치료 효과를, 신기(新奇) 물체 인식 시험에 의해 검토했다.

<당뇨병의 유도>

7∼8주령의 C57BL/6J 암컷의 성질 마우스를 실험에 사용했다. 당뇨병 유도군에는 스트렙토조신(STZ: Sigma-Aldrich Co. LLC, St. Louis, MO, USA) 20 mg/ml를 10 ml/kg의 용량으로 1회 복강내 투여하고, 비당뇨병 유도군에는 용매를 10 ml/kg의 용량으로 투여했다. 선행 연구를 참고로 하고(참고 문헌 1, 2), 당뇨병 유도로부터 1주일 후에 혈당값 측정을 행하고, 혈당값이 300 mg/dl에 충족되지 않은 개체는 제외했다.

<군분류, 항체 투여 스케쥴>

구입한 마우스를 「당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」 또는 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군」의 2군으로 나누고, 양쪽 군 모두 당뇨병 유도 3일 후로부터 항체 투여를 개시했다. 어느 항체나 6 mg/ml의 농도로 조정한 후, 30 mg/kg의 용량으로 각 주 1회, 계 4회 미정맥내 투여했다. 「당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」은 14마리, 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군」은 15마리 물체 인식 시험에 이용했다. 물체 인식 시험의 기준을 충족한 「당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」 10마리, 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군」 8마리를 해석에 이용했다. 또한 비당뇨병 마우스(건강한 마우스)에서의 DI값의 산출에는 7마리를 이용했다.

<신기 물체 인식 기억 시험>

길들임(핸들링)을 3일간 행하고, 다음날, 오픈 필드에 각 개체를 넣고, 15분간 자유 탐색시킴으로써 필드로의 순화를 행했다{길들임 시행(試行) 1}. 다음날로부터 획득 시행을 행했다. 획득 시행에 선행하여 각 개체에 대하여, 5분간의 필드 자유 탐색(길들임 시행 2)을 실시했다. 길들임 시행 2를 실시 후, 일시적으로 각 개체를 거주 케이지로 되돌리고, 블록을 사용하여 제작한 동일한 형상을 가지는 물체(물체 A)를 필드의 대각선상 좌측 상부 및 우측 하부의 2개소에 설치한 후, 각 개체를 필드로 되돌려 자유 탐색시켰다(획득 시행). 획득 시행 종료 후, 12시간의 인터벌(사전의 조건 검토에 의해 결정)을 두고 테스트 시행을 실시했다. 테스트 시행 시에는, 필드의 대각선상 우측 하부에 배치하고 있었던 물체 A 대신에 신기 물체로서 불투명한 비즈를 넣은 보틀(물체 B)을 배치했다. 한편으로 필드 대각선상 좌측 상부의 물체 A는 획득 시행과 동일하게 배치했다. 테스트 시행에서는, 각 개체를 상기 물체 A 및 B를 배치한 필드로 되돌리고, 10분간 자유 탐색시켰다. 그리고, 물체 A 및 물체 B는 선행 연구에 기초하여 제작했다(참고 문헌 3). 전체 시행을 비디오카메라에 의해 녹화하고, 행동 시험 종료 후에 각 시행에서의 각 개체의 양 물체로의 탐색 시간을 각각 산출했다. 탐색 행동에는 각 물체로의 냄새를 맡는 행동 및 물체에 접촉하는 행동을 포함하고, 물체에 오르는 행동은 제외했다. 해석에는 선행 연구를 참고로 하여 산출한, 테스트 시행에서의 Discrimination Index(DI)를 이용했다(참고 문헌 4). DI는 {(물체 B로의 탐색 시간)-(물체 A로의 탐색 시간)}/ {(물체 B로의 탐색 시간)+(물체 A로의 탐색 시간)}으로 정의된다. 테스트 시행에서의 물체 A 및 B로의 탐색 시간의 합계가 30초에 충족하지 않은 개체는 해석에는 이용하지 않았다. 그리고, 기준으로 되는 건강한 마우스의 DI는, 16주령 비당뇨병 마우스에 있어서 본 행동 시험을 실시하고, 산출했다.

<결과>

당뇨병 병태 발증 후 4주 경과 시점에서의 항RGMa 중화 항체 투여군, 아이소타입 컨트롤 항체 투여군으로부터 각각 취득한 DI값, 및 건강한 마우스의 DI값을 도 1에 나타낸다. 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군」에서는 건강한 마우스와 비교하여 유의한 DI의 저하가 보여졌다(p<0.05, Tukey's multiple comparisons test). 한편, 「당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」에서는 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군」과 비교하여 유의한 DI값의 상승이 보여지고(p<0.05, Tukey's multiple comparisons test), 건강한 마우스와의 비교에서는 차이는 보여지지 않았다(p=0.8640, Tukey's multiple comparisons test). 이 결과로부터 항RGMa 중화 항체 투여에 의해, 당뇨병에 의해 장해되는 물체 기억 장해를 개선할 수 있는 것을 알 수 있었다.

이상의 결과로부터, RGMa 저해 물질, 특히 항RGMa 중화 항체는 당뇨병성 치매증에 대한 약효를 나타내는 것이 명백하게 되었다.

[실시예 2]

당뇨병의 동물 모델에서의 해마 의존성의 인지 기능 장해의 원인으로서, 해마에서의 신경 신생 장해가 지적되고 있다(참고 문헌 6). 약제 유도성 1형 당뇨병 모델 마우스를 이용하여, 당뇨병에 의해 야기되는 해마 치상회 신경 신생의 억제에 대한 항RGMa 중화 항체의 치료 효과를 면역 조직 화학 염색법에 의해 검토했다.

<당뇨병의 유도>

7∼8주령의 C57BL/6J 자성 마우스를 실험에 사용했다. 당뇨병 유도군에는 스트렙토조신(STZ: Sigma-Aldrich Co. LLC, St. Louis, MO, USA) 20 mg/ml를 10 ml/kg의 용량으로 1회 복강내 투여하고, 비당뇨병 유도군에는 용매를 10 ml/kg의 용량으로 투여했다. 선행 연구를 참고로 하고(참고 문헌 1, 2), 당뇨병 유도로부터 1주일 후에 혈당값 측정을 행하고, 혈당값이 300 mg/dl에 충족하지 않은 개체는 제외했다.

<항체 투여>

구입한 마우스를 「비당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」, 「비당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군」, 「당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」, 및 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군」의 4군으로 나누고, 당뇨병군에는 STZ 용액, 비당뇨병 유도군에는 용매를 투여하고, 3일 후로부터 항RGMa 중화 항체 혹은 아이소타입 컨트롤 항체의 투여를 개시했다. 어느 항체나 6 mg/ml의 농도로 조정한 후, 30 mg/kg의 용량으로 각 주 1회, 계 6회 미정맥내 투여했다.

<조직 제재·면역 조직 화학 염색>

마우스 뇌의 채재(採材)를 당뇨병 유도 6주일 후에 실시했다. 충분한 마취 후, 4% 파라포름알데히드(PFA)에 의한 관류 고정을 행한 후에 뇌를 적출하고, 4% PFA 중에서 후(後)고정을 행했다. 다음으로, PBS를 용매로 한 30% 수크로스 용액 중에 조직을 옮기고, 4℃에서 2일 내지 3일간 정치(靜置) 후 OCT compound(Sakura Finetek USA Inc., Torrance, CA, USA)를 이용하여 포매(包埋)했다. 크라이오스탯을 사용하여 뇌를 두께 30㎛로 얇게 절단하고, 제작한 절편을 MAS 코트 슬라이드 글라스에 첩부하고, 면역 염색에 제공했다. 3% Normal Donkey Serum(NDS), 0.3% Triton X-100을 포함한 PBS(블록킹 용액)에 의해 상온에서 1시간 블록킹하고 PBS 세정한 후, 1차 항체로서 항마우스 doublecortin 항체(1:100; abcam, Cambridge, UK, 블록킹 용액으로 희석)을 이용하여 4℃에서 밤새 반응시켰다. PBST로 세정 후, 2차 항체로서 Alexa Fluor 568 donkey 항rabbit IgG (H+L)항체(1:500; Invitrogen, Waltham, MA, USA, 블록킹 용액으로 희석)을 이용하여 실온에서 1시간 반응시켰다. PBST로 세정 후, DAPI(1μg/ml)를 이용하여 핵염색을 행한 후 봉입했다. 공초점 레이저 현미경 FV3000(Olympus, Tokyo, Japan)을 사용하여 해마 치상회 전체를 촬상하고, doublecortin 양성 신경 전구 세포의 세포체수를 계측했다. 각 개체 6절편씩 해마 치상회의 계측을 행했다. doublecortin 양성 세포수는, ImageJ를 사용하여 측정한 해마 치상회의 면적으로 표준화했다.

<결과>

해마 치상회 면적으로 표준화한 doublecortin 양성 세포수를 도 2에 나타낸다. 비당뇨병 유도군 사이에서는 투여한 항체의 종류에 관계없이, doublecortin 양성 세포수에 변화는 없었다(p>0.9999, Tukey's multiple comparisons test). 또한, 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군」에서는 「비당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」 및 「비당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군」과 비교하여 유의하게 doublecortin 양성 세포수가 감소하고 있었다(vs 「비당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군」; p<0.001, Tukey's multiple comparisons test, vs 「비당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」; p<0.001, Tukey's multiple comparisons test). 한편으로, 「당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」에서는 「당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군」과 비교하여 유의하게 doublecortin 양성 세포수가 개선됐다(p<0.05, Tukey's multiple comparisons test). 「당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」은 「비당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군」 및 「비당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군」과 비교하여 doublecortin 양성 세포수에 유의한 차는 보여지지 않았다(vs 비당뇨병-아이소타입 컨트롤 항체 투여군; p=0.1071, Tukey's multiple comparisons test, vs 비당뇨병-항RGMa 중화 항체 투여군; p=0.1130, Tukey's multiple comparisons test). 이들의 결과로부터, 당뇨병에 기인하는 해마 치상회에서의 doublecortin 양성 신경 전구 세포에 의한 신경 신생의 감소를, 항RGMa 중화 항체를 투여함으로써 개선시킬 수 있는 것을 알 수 있었다.

이상의 결과로부터, RGMa 저해 물질, 특히 항RGMa 중화 항체는, 당뇨병성 치매증의 원인의 하나인 해마에서의 신경 신생의 장해에 대한 약효를 나타내는 것이 명백하게 되었다.

[실시예3] 항RGMa 중화 항체를 이용한 치료 개입에 의한 신기 물체 인식 기억에 대한 영향

양측 내경동맥 마이크로 코일 유치(留置)에 의해 유도되는 만성 뇌 저관류 모델 마우스(Bilateral co㎜on carotid artery stenosis model: BCAS model)의 인지 기능 장해에 대한 항RGMa 중화 항체의 치료 효과를 신기 물체 인식 시험에 의해 검토했다.

<만성 뇌 저관류 모델의 유도>

9주령 내지 10주령의 C57BL/6J 웅성 마우스를 실험에 사용했다. Isoflurane흡입 마취(도입 4%, 유지 1.5%) 하에서, 복와위로서 마우스를 고정하고 Laser speckle flowmetry에 의해 뇌혈류를 계측했다. 계측 중은 heat pad를 사용하여 직장 온도를 35.0∼36.5℃로 관리했다. 그 후, 복와위로 고정하고 경부를 절개하고, Carotid sheath를 해방 후에 양측 내경동맥에 micro-coil을 유치했다(참고 문헌 5). BCAS 유도로부터 1일 후에 뇌혈류 측정을 행하고, 뇌혈류가 수술 전과 비교하여 90% 이하로 저하되고 있지 않은 개체는 제외했다. 뇌혈류의 측정에는 OZ-3(Omegawave, Tokyo, Japan)을 사용했다.

<신기 물체 인식 기억 시험>

오픈 필드에 각 개체를 넣고, 15분간 자유 탐색시킴으로써 필드로의 순화를 행했다(길들임 시행 1). 다음날, 획득 시행에 선행하여 각 개체에 대하여 5분간의 필드 자유 탐색(길들임 시행 2)를 실시했다. 길들임 시행 2를 실시 후, 일시적으로 각 개체를 거주 케이지로 되돌리고, 블록을 이용하여 제작한 동일한 형상을 가지는 물체(물체 A)를 필드의 대각선상 좌측 상부 및 우측 하부의 2개소에 양면 테이프를 사용하여 벽으로부터 10cm의 거리에 설치한 이후, 각 개체를 필드로 되돌려 자유 탐색시켰다(획득 시행). 획득 시행 종료 후, 12시간의 인터벌을 두고, 테스트 시행을 실시했다. 테스트 시행에서는 필드의 대각선상 우측 하부에 배치하고 있었던 물체 A 대신에 신기 물체로서 불투명의 비즈를 넣은 보틀(물체 B)를, 벽으로부터 10cm의 위치에 양면 테이프를 이용하여 배치했다. 한편으로 필드 대각선상 좌측 상부의 물체 A는 획득 시행과 마찬가지로 배치했다. 인터벌 경과 후, 각 개체를 상기물체 A 및 B를 배치한 필드로 되돌리고, 10분간 자유 탐색시켰다(테스트 시행). 각 시행에 사용한 물체 A 및 물체 B는 선행 연구를 기초로 제작했다(참고 문헌 3). 인터벌 동안, 각 개체는 거주 케이지에서 물, 모이 모두 자유섭취로 했다. 모든 시행을 비디오카메라로 녹화하고, 행동 시험 종료 후에 각 시행에서의 각 개체의 물체로의 탐색 시간을 산출했다. 탐색 행동에는 각 물체로의 냄새를 맡는 행동 및 물체에 접촉하는 행동을 포함하고, 물체에 오르는 행동은 제외했다. 해석에는 테스트 시행에서의 Discrimination Index(DI)를 이용했다. DI는 {(물체 B로의 탐색 시간)-(물체 A로의 탐색 시간)}/{(물체 B로의 탐색 시간)+(물체 A로의 탐색 시간)}으로 정의된다. 테스트 시행에서의 물체 A 및 B로의 탐색 시간의 합계가 30초에 충족하지 않은 개체는 해석에는 이용하지 않았다.

<항체 투여>

구입한 마우스를 BCAS-항RGMa 중화 항체 투여군, BCAS-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군, Sham-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군의 3군으로 나누고, 3군 모두 BCAS 수술 혹은 Sham 수술 3일 후로부터 항체 투여를 개시했다. 어느 항체나 2 mg/ml의 농도로 조정한 후, 체중 의존적으로 10 mg/kg의 용량으로 각 주 2회, 계 7회 복강내 투여했다. 각 군의 마리수는 이하와 같다.

BCAS-항RGMa 중화 항체 투여군 13마리

BCAS-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군 9마리

Sham-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군 9마리

<결과>

BCAS-아이소타입 컨트롤 항체군에서는 Sham-아이소타입 컨트롤 항체(Palivizumab) 투여군과 비교하여 유의한 DI의 저하가 보여졌다(p<0.001, Tukey's multiple comparisons test). 한편으로 BCAS-항RGMa 중화 항체 투여군에서는 BCAS-아이소타입 컨트롤 항체군과 비교하여 유의하게 DI가 상승했다(p<0.001, Tukey's multiple comparisons test). 이로부터 항RGMa 중화 항체 투여에 의한 치료 개입은, 만성 허혈에 의해 장해되는 물체 인식 기억 장해를 유의하게 개선하는 것을 알 수 있었다.(도 3)

이상의 결과로부터, RGMa 저해 물질, 특히 항RGMa 중화 항체는, 혈관성 치매증에 대한 약효를 나타내는 것이 명백하게 되었다.

[참고 문헌]

1. Deeds MC, Anderson JM, Armstrong AS, et al. Single dose streptozotocin-induced diabetes: Considerations for study design in islet transplantation models. Lab Anim. 2011; 45(3):131-140. doi:10.1258/la. 2010.010090

2. O'brien PD, Sakowski SA, Feldman EL. Mouse models of diabetic neuropathy. ILAR J. 2014;54(3):259-272. doi:10.1093/ilar/ilt052

3. Leger M, Quiedeville A, Bouet V, et al. Object recognition test in mice. Nat Protoc. 2013;8(12):2531-2537. doi:10.1038/nprot. 2013.155

4. Grinan-Ferre C, Puigoriol-Illamola D, Palomera-avalos V, et al. Enviro㎚ental enrichment modified epigenetic mechanisms in SAMP8 mouse hippocampus by reducing oxidative stress and infla㎜aging and achieving neuroprotection. Front Aging Neurosci. 2016; 8(OCT). doi:10.3389/fnagi. 2016.00241

5. Hattori Y et al, Gradual Carotid Artery Stenosis in Mice Closely Replicates Hypoperfusive Vascular Dementia in Humans.Journal of the American Heart Association 2016 2 Feb. 22; 5(2):e002757.DOI:10.1161/JAHA. 115.002757

6. Stranahan, A., Arumugam, T., Cutler, R. et al. Diabetes impairs hippocampal function through glucocorticoid-mediated effects on new and mature neurons. Nat Neurosci 11, 309-317(2008). https://doi.org/10.1038/nn2055

<서열표의 설명>

서열번호 1: 인간 RGMa 전구 단백질의 아미노산 서열

서열번호 2: 마우스 RGMa 전구 단백질의 아미노산 서열

서열번호 3: 래트 RGMa 전구 단백질의 아미노산 서열

서열번호 4: 인간 RGMa 유전자의 DNA 서열

서열번호 5: 항RGMa 중화 항체 r116A3의 LCDR1의 아미노산 서열

서열번호 6: 항RGMa 중화 항체 r116A3의 LCDR2의 아미노산 서열

서열번호 7: 항RGMa 중화 항체 r116A3의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 8: 항RGMa 중화 항체 r116A3의 HCDR1의 아미노산 서열

서열번호 9: 항RGMa 중화 항체 r116A3의 HCDR2의 아미노산 서열

서열번호 10: 항RGMa 중화 항체 r116A3의 HCDR3의 아미노산 서열

서열번호 11: 항RGMa 중화 항체 r70E의 LCDR1의 아미노산 서열

서열번호 12: 항RGMa 중화 항체 r70E의 LCDR2의 아미노산 서열

서열번호 13: 항RGMa 중화 항체 r70E의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 14: 항RGMa 중화 항체 r70E의 HCDR1의 아미노산 서열

서열번호 15: 항RGMa 중화 항체 r70E의 HCDR2의 아미노산 서열

서열번호 16: 인간 RGMa의 에피토프의 아미노산 서열

서열번호 17: 항RGMa 중화 항체 5F9의 LCDR1의 아미노산 서열

서열번호 18: 항RGMa 중화 항체 5F9의 LCDR2의 아미노산 서열

서열번호 19: 항RGMa 중화 항체 5F9의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 20: 항RGMa 중화 항체 5F9의 HCDR1의 아미노산 서열

서열번호 21: 항RGMa 중화 항체 5F9의 HCDR2의 아미노산 서열

서열번호 22: 항RGMa 중화 항체 5F9의 HCDR3의 아미노산 서열

서열번호 23: 항RGMa 중화 항체 8D1의 LCDR1의 아미노산 서열

서열번호 24: 항RGMa 중화 항체 8D1의 LCDR2의 아미노산 서열

서열번호 25: 항RGMa 중화 항체 8D1의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 26: 항RGMa 중화 항체 8D1의 HCDR1의 아미노산 서열

서열번호 27: 항RGMa 중화 항체 8D1의 HCDR2의 아미노산 서열

서열번호 28: 항RGMa 중화 항체 8D1의 HCDR3의 아미노산 서열

서열번호 29: 항RGMa 중화 항체 AE12-1의 LCDR1의 아미노산 서열

서열번호 30: 항RGMa 중화 항체 AE12-1의 LCDR2의 아미노산 서열

서열번호 31: 항RGMa 중화 항체 AE12-1의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 32: 항RGMa 중화 항체 AE12-1의 HCDR1의 아미노산 서열

서열번호 33: 항RGMa 중화 항체 AE12-1의 HCDR2의 아미노산 서열

서열번호 34: 항RGMa 중화 항체 AE12-1의 HCDR3의 아미노산 서열

서열번호 35: 항RGMa 중화 항체 AE12-1Y의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 36: 인간 RGMa의 에피토프의 아미노산 서열

서열번호 37: 인간 RGMa의 에피토프의 아미노산 서열

서열번호 38: 인간 RGMa의 에피토프의 아미노산 서열

서열번호 39: 인간 RGMa의 에피토프의 아미노산 서열

서열번호 40: 항RGMa 중화 항체 AE12-1F의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 41: 항RGMa 중화 항체 AE12-1H의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 42: 항RGMa 중화 항체 AE12-1L의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 43: 항RGMa 중화 항체 AE12-1V의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 44: 항RGMa 중화 항체 AE12-1I의 LCDR3의 아미노산 서열

서열번호 45: 항RGMa 중화 항체 AE12-1K의 LCDR3의 아미노산 서열

[산업상의 이용 가능성]

본 발명은, RGMa 저해 물질이 당뇨병성 치매증 또는 혈관성 치매증의 예방 또는 치료에 유용한 것으로부터, 의약품 산업에 있어서 높은 이용 가치를 가진다.

SEQUENCE LISTING <110> Osaka University Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation <120> AGENT FOR PREVENTING OR TREATING DEMENTIA <130> A19098-1689 <150> JP2020-004403 <151> 2020-01-15 <160> 45 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 450 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gln Pro Pro Arg Glu Arg Leu Val Val Thr Gly Arg Ala Gly Trp 1 5 10 15 Met Gly Met Gly Arg Gly Ala Gly Arg Ser Ala Leu Gly Phe Trp Pro 20 25 30 Thr Leu Ala Phe Leu Leu Cys Ser Phe Pro Ala Ala Thr Ser Pro Cys 35 40 45 Lys Ile Leu Lys Cys Asn Ser Glu Phe Trp Ser Ala Thr Ser Gly Ser 50 55 60 His Ala Pro Ala Ser Asp Asp Thr Pro Glu Phe Cys Ala Ala Leu Arg 65 70 75 80 Ser Tyr Ala Leu Cys Thr Arg Arg Thr Ala Arg Thr Cys Arg Gly Asp 85 90 95 Leu Ala Tyr His Ser Ala Val His Gly Ile Glu Asp Leu Met Ser Gln 100 105 110 His Asn Cys Ser Lys Asp Gly Pro Thr Ser Gln Pro Arg Leu Arg Thr 115 120 125 Leu Pro Pro Ala Gly Asp Ser Gln Glu Arg Ser Asp Ser Pro Glu Ile 130 135 140 Cys His Tyr Glu Lys Ser Phe His Lys His Ser Ala Thr Pro Asn 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Leu 355 360 365 Pro Val Glu Asp Leu Tyr Tyr Gln Ala Cys Val Phe Asp Leu Leu Thr 370 375 380 Thr Gly Asp Val Asn Phe Thr Leu Ala Ala Tyr Tyr Ala Leu Glu Asp 385 390 395 400 Val Lys Met Leu His Ser Asn Lys Asp Lys Leu His Leu Tyr Glu Arg 405 410 415 Thr Arg Asp Leu Pro Gly Arg Ala Ala Ala Gly Leu Pro Leu Ala Pro 420 425 430 Arg Pro Leu Leu Gly Ala Leu Val Pro Leu Leu Ala Leu Leu Pro Val 435 440 445 Phe Cys 450 <210> 2 <211> 454 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Met Gln Pro Pro Arg Glu Arg Leu Val Val Thr Gly Arg Ala Gly Trp 1 5 10 15 Met Gly Met Gly Arg Gly Ala Gly Arg Ser Ala Leu Gly Leu Trp Pro 20 25 30 Thr Leu Ala Phe Leu Leu Cys Ser Phe Pro Ala Ala Ile Ser Pro Cys 35 40 45 Lys Ile Leu Lys Cys Asn Ser Glu Phe Trp Ser Ala Thr Ser Ser Gly 50 55 60 Ser His Ala Pro Ala Ser Asp Asp Val Pro Glu Phe Cys Ala Ala Leu 65 70 75 80 Arg Thr Tyr Ala Leu Cys Thr Arg Arg Thr Ala Arg Thr Cys Arg Gly 85 90 95 Asp Leu Ala Tyr His Ser Ala Val His Gly Ile Glu Asp Leu Met Ser 100 105 110 Gln His Asn Cys Ser Lys Asp Gly Pro Thr Ser Gln Pro Arg Val Arg 115 120 125 Thr Leu Pro Pro Ala Gly Asp Ser Gln Glu Arg Ser Asp Ser Pro Glu 130 135 140 Ile Cys His Tyr Glu Lys Ser Phe His Lys His Ser Ala Ala Pro Asn 145 150 155 160 Tyr Thr His Cys Gly Leu Phe Gly Asp Pro His Leu Arg Thr Phe Thr 165 170 175 Asp His Phe Gln Thr Cys Lys Val Gln Gly Ala Trp Pro Leu Ile Asp 180 185 190 Asn Asn Tyr Leu Asn Val Gln Val Thr Asn Thr Pro Val Leu Pro Gly 195 200 205 Ser Ala Ala Thr Ala Thr Ser Lys Leu Thr Ile Ile Phe Lys Asn Phe 210 215 220 Gln Glu Cys Val Asp Gln Lys Val Tyr Gln Ala Glu Met Asp Glu Leu 225 230 235 240 Pro Ser Ala Phe Ala Asp Gly Ser Lys Asn Gly Gly Asp Lys His Gly 245 250 255 Ala Asn Ser Leu Lys Ile Thr Glu Lys Val Ser Gly Gln His Val Glu 260 265 270 Ile Gln Ala Lys Tyr Ile Gly Thr Thr Ile Val Val Arg Gln Val Gly 275 280 285 Arg Tyr Leu Thr Phe Ala Val Arg Met Pro Glu Glu Val Val Asn Ala 290 295 300 Val Glu Asp Arg Asp Ser Gln Gly Leu Tyr Leu Cys Leu Arg Gly Cys 305 310 315 320 Pro Leu Asn Gln 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Asp Asp Val Pro Glu Phe Cys Ala Ala Leu 65 70 75 80 Arg Thr Tyr Ala Leu Cys Thr Arg Arg Thr Ala Arg Thr Cys Arg Gly 85 90 95 Asp Leu Ala Tyr His Ser Ala Val His Gly Ile Glu Asp Leu Met Ser 100 105 110 Gln His Asn Cys Ser Lys Asp Gly Pro Thr Ser Gln Pro Arg Val Arg 115 120 125 Thr Leu Pro Pro Ala Gly Asp Ser Gln Glu Arg Ser Asp Ser Pro Glu 130 135 140 Ile Cys His Tyr Glu Lys Ser Phe His Lys His Ser Ala Ala Pro Asn 145 150 155 160 Tyr Thr His Cys Gly Leu Phe Gly Asp Pro His Leu Arg Thr Phe Thr 165 170 175 Asp His Phe Gln Thr Cys Lys Val Gln Gly Ala Trp Pro Leu Ile Asp 180 185 190 Asn Asn Tyr Leu Asn Val Gln Val Thr Asn Thr Pro Val Leu Pro Gly 195 200 205 Ser Ala Ala Thr Ala Thr Ser Lys Leu Thr Ile Ile Phe Lys Asn Phe 210 215 220 Gln Glu Cys Val Asp Gln Lys Val Tyr Gln Ala Glu Met Asp Glu Leu 225 230 235 240 Pro Ser Ala Phe Ala Asp Gly Ser Lys Asn Gly Gly Asp Lys His Gly 245 250 255 Ala Asn Ser Leu Lys Ile Thr Glu Lys Val Ser Gly Gln His Val Glu 260 265 270 Ile Gln Ala Lys Tyr Ile Gly Thr 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tctctgcagc 120 ttccccgcag ccacctcccc gtgcaagatc ctcaagtgca actctgagtt ctggagcgcc 180 acgtcgggca gccacgcccc agcctcagac gacacccccg agttctgtgc agccttgcgc 240 agctacgccc tgtgcacgcg gcggacggcc cgcacctgcc ggggtgacct ggcctaccac 300 tcggccgtcc atggcataga ggacctcatg agccagcaca actgctccaa ggatggcccc 360 acctcgcagc cacgcctgcg cacgctccca ccggccggag acagccagga gcgctcggac 420 agccccgaga tctgccatta cgagaagagc tttcacaagc actcggccac ccccaactac 480 acgcactgtg gcctcttcgg ggacccacac ctcaggactt tcaccgaccg cttccagacc 540 tgcaaggtgc agggcgcctg gccgctcatc gacaataatt acctgaacgt gcaggtcacc 600 aacacgcctg tgctgcccgg ctcagcggcc actgccacca gcaagctcac catcatcttc 660 aagaacttcc aggagtgtgt ggaccagaag gtgtaccagg ctgagatgga cgagctcccg 720 gccgccttcg tggatggctc taagaacggt ggggacaagc acggggccaa cagcctgaag 780 atcactgaga aggtgtcagg ccagcacgtg gagatccagg ccaagtacat cggcaccacc 840 atcgtggtgc gccaggtggg ccgctacctg acctttgccg tccgcatgcc agaggaagtg 900 gtcaatgctg tggaggactg ggacagccag ggtctctacc tctgcctgcg gggctgcccc 960 ctcaaccagc agatcgactt ccaggccttc cacaccaatg ctgagggcac cggtgcccgc 1020 aggctggcag ccgccagccc tgcacccaca gcccccgaga ccttcccata cgagacagcc 1080 gtggccaagt gcaaggagaa gctgccggtg gaggacctgt actaccaggc ctgcgtcttc 1140 gacctcctca ccacgggcga cgtgaacttc acactggccg cctactacgc gttggaggat 1200 gtcaagatgc tccactccaa caaagacaaa ctgcacctgt atgagaggac tcgggacctg 1260 ccaggcaggg cggctgcggg gctgcccctg gccccccggc ccctcctggg cgccctcgtc 1320 ccgctcctgg ccctgctccc tgtgttctgc tag 1353 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Gln Gln Leu Asn Thr Leu Pro 1 5 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Asp Ala Trp Met Asp 1 5 <210> 9 <211> 19 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Glu Ile Arg Ser Lys Ala Asn Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Arg Asp Gly Ala Tyr 1 5 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 13 Ser Gln Ser Thr His Val Pro 1 5 <210> 14 <211> 6 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 14 Thr Ser Tyr Tyr Trp Asn 1 5 <210> 15 <211> 16 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 15 Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Asn 1 5 10 15 <210> 16 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Pro Cys Lys Ile Leu Lys Cys Asn Ser Glu Phe Trp Ser Ala Thr Ser 1 5 10 15 Gly Ser His Ala Pro Ala Ser 20 <210> 17 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 17 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Tyr Ser Asp Gly Tyr Thr Phe Leu Glu 1 5 10 15 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 18 Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 19 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 19 Phe Gln Ala Thr His Asp Pro Leu Thr 1 5 <210> 20 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 20 Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 21 Met Ile Tyr Tyr Asp Ser Ser Glu Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 22 Gly Thr Thr Pro Asp Tyr 1 5 <210> 23 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Asp Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Leu Gln Gly Tyr Ile Pro Pro Arg Thr 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Ser Tyr Val Met His 1 5 <210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 27 Tyr Ile Ile Pro Tyr Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 28 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Ala Arg Arg Asn Glu Tyr Tyr Gly Ser Ser Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 29 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Thr Gly Thr Ser Ser Ser Val Gly Asp Ser Ile Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Asp Val Thr Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Cys Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Ser His Gly Ile Ser 1 5 <210> 33 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Trp Ile Ser Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Val Gly Ser Gly Pro Tyr Tyr Tyr Met Asp Val 1 5 10 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Tyr Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5 <210> 36 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Glu Glu Val Val Asn Ala Val Glu Asp Trp Asp Ser Gln Gly 1 5 10 <210> 37 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Asn Gln Gln Ile Asp Phe Gln Ala Phe His Thr Asn Ala Glu 1 5 10 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Pro Thr Ala Pro Glu Thr Phe Pro Tyr Glu Thr 1 5 10 <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Lys Leu Pro Val Glu Asp Leu Tyr Tyr Gln Ala 1 5 10 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 40 Phe Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 41 His Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 42 Leu Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 43 Val Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 44 Ile Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 45 Lys Ser Tyr Ala Gly Thr Asp Thr Leu 1 5

Claims

RGMa 저해 물질을 포함하는, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제.
RGMa 저해 물질을 포함하는, 당뇨병성 치매증의 예방 또는 치료제.
RGMa 저해 물질을 포함하는, 혈관성 치매증의 예방 또는 치료제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
RGMa 저해 물질이 항RGMa 중화 항체인, 예방 또는 치료제.
제4항에 있어서,
항RGMa 중화 항체가 인간화 항체인, 예방 또는 치료제.
제4항 또는 제5항에 있어서,
항RGMa 중화 항체가 서열번호 16, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38 및 서열번호 39로부터 선택되는 아미노산 서열을 인식하는 항체인, 예방 또는 치료제.
제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
항RGMa 중화 항체가, 하기 (a)∼(l):
(a) 서열번호 5에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 6에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 7에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄(輕鎖) 가변 영역, 및, 서열번호 8에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 9에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 10에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄(重鎖) 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(b) 서열번호 11에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 12에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 13에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 14에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 15에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 SFG를 아미노산 서열에 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(c) 서열번호 17에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 18에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 19에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 20에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 21에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(d) 서열번호 23에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 24에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 25에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 26에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 27에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 28에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(e) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 31에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(f) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 35에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(g) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 40에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(h) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 41에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(i) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 42에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(j) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 43에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체,
(k) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 44에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체, 및
(l) 서열번호 29에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열번호 30에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 45에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및, 서열번호 32에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열번호 33에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 및 서열번호 34에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항RGMa 중화 항체
로부터 선택되는 항체인, 예방 또는 치료제.
치료를 요하는 포유 동물에 대하여 유효량의 RGMa 저해 물질을 투여하는 것을 포함하는, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료 방법.
제8항에 있어서,
RGMa 저해 물질이 항RGMa 중화 항체인, 예방 또는 치료 방법.
RGMa 저해 물질의, 당뇨병성 치매증 및 혈관성 치매증으로부터 선택되는 치매증의 예방 또는 치료제의 제조를 위한 사용.
제10항에 있어서,
RGMa 저해 물질이 항RGMa 중화 항체인, 사용.