KR20220066346A - 항-il-27 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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KR20220066346A
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제이미 스트랜드
조나단 힐
데반 무들리
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서피스 온콜로지, 인크.
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Abstract

본 개시내용은 항-IL-27 항체 및 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여함으로써 암과 같은 질환의 하나 이상의 증상을 치료 또는 개선하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한, 예를 들어, 대상체 또는 샘플에서 IL-27을 검출하는 방법에 관한 것이다.

Description

항-IL-27 항체 및 이의 용도
EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일(파일명: 4416_009PC02_Seqlisting_ST25.txt; 크기: 156,863 바이트; 및 생성일: 2020년 9월 25일)의 전자적으로 제출된 서열 목록의 내용은 그 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
관련 출원에 대한 상호 참조
본 PCT 출원은 2019년 9월 25일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/906,008호; 및 2020년 9월 22일자로 출원된 제63/081,705호의 우선권을 주장하며; 이들 각각은 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
기술 분야
본 개시내용은 일반적으로 IL-27 신호전달을 조절하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 개시내용은 IL-27에 결합하고 IL-27 신호전달을 조절하는 면역원성 조성물(예를 들어, 항체, 항체 단편 등)에 관한 것이다.
최근 몇 년 동안, 면역계가 종양 형성 및 진행에 대한 중요한 장벽으로 작용한다는 것을 시사하는 일련의 증거가 증가하고 있다. 항-종양 가능성 또는 활성을 갖는 자연 발생적 T 세포가 암 환자에서 존재한다는 원리는 종양학에서 면역치료 접근법의 개발을 합리화하였다. T 세포, 대식세포 및 자연 살해 세포와 같은 면역 세포는 항-종양 활성을 나타내며 악성 종양의 발생 및 성장을 효과적으로 제어할 수 있다. 종양-특이적 또는 종양-관련 항원은 악성 종양을 인식하고 제거하기 위해 면역 세포를 유도할 수 있다(문헌[Chen & Mellman, (2013) Immunity 39(1):1-10]). 종양-특이적 면역 반응의 존재에도 불구하고, 악성 종양은 종종 다양한 면역조절 메커니즘을 통해 면역 공격을 피하거나 회피하여 종양 발생 및 진행을 제어하는데 실패한다(문헌[Motz & Coukos, (2013) Immunity 39(1):61-730]). 실제로, 암의 새로운 특징은 이러한 면역조절 메커니즘의 이용과 항-종양 면역 반응의 비활성화로, 결과적으로 종양 회피 및 면역학적 살해로부터의 도피를 초래한다(문헌[Hanahan and Weinberg (2011) Cell 144(5):646-674]).
IL-27은 2개의 서브유닛(EBI3 및 IL-27p28)으로 구성된 이종이량체 사이토카인이다. IL-27은 IL-12 및 IL-6 사이토카인 패밀리 둘 다와 구조적으로 관련이 있다. IL-27은 주로 STAT1 및 STAT3을 통해 신호전달을 매개하는 IL-27Rα(WSX1) 및 gp130 사슬로 구성되는 이종이량체 수용체에 결합하여 신호전달을 매개한다. 초기 보고서는 IL-27을 CD4+ T 세포 증식, T 헬퍼(Th)1 세포 분화 및 IFN-γ 생산을 지원하고 종종 IL-12와 함께 작용하는 면역-강화 사이토카인으로 특성화하였다. 후속 연구는 IL-27이 복잡한 면역조절 기능을 나타내어 생물학적 맥락 및 사용되는 실험적 모델에 따라 전염증성 또는 항-염증성 효과를 초래함을 보여주었다. IL-27은 인간 암 세포에서 다양한 면역-조절성 분자의 발현을 유도할 수 있으며, 이는 생체내 면역 반응의 국부적 교란을 지원할 수 있다(문헌[Fabbi et al., (2017) Mediators Inflamm 3958069. Published online 2017 Feb 1. doi:10.1155/2017/3958069] 및 본 명세서에 포함된 참고문헌).
암 치료 및 관리에서 상당한 발전이 이루어지고 있음에도 불구하고, 암을 치료 및 관리하기 위한 새롭고 효과적인 요법에 대한 계속적인 요구가 있다.
IL-27을 길항하고, (i) 서열번호 2(IL-27p28)에 상응하는 37번 내지 56번 아미노산, (ii) 서열번호 2(IL-27p28)에 상응하는 142번 내지 164번 아미노산 또는 (iii) (i)과 (ii) 모두 중 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본 명세서에 개시된다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 또는 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Asp146, Arg149 및/또는 Phe153을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 His150 및/또는 Leu156을 더 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Leu142 및/또는 Glu164를 더 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Glu46, Val49, Ser50 및/또는 Leu162를 더 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Leu53, Lys56, Asp143, Arg145, Leu147, Arg152, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161 또는 Pro163의 하나 이상의의 아미노산을 더 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
다른 양태에서, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 서열번호 9, 10 및 11에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 18 및 19에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (ii) 각각 서열번호 31, 32 및 33에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 39, 40 및 41에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (iii) 각각 서열번호 53, 54 및 55에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 61, 62 및 63에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (iv) 각각 서열번호 75, 76 및 77에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 83, 84 및 85에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (v) 각각 서열번호 97, 98 및 99에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 105, 106 및 107에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는 (vi) 서열번호 119, 120 및 121에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다.
다른 양태에서, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 서열번호 12, 13 및 14에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 20, 21 및 22에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (ii) 각각 서열번호 34, 35 및 36에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 42, 43 및 44에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (iii) 각각 서열번호 56, 57 및 58에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 64, 65 및 66에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (iv) 각각 서열번호 78, 79 및 80에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 86, 87 및 88에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; (v) 각각 서열번호 100, 101 및 102에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 108, 109 및 110에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는 (vi) 각각 서열번호 122, 123 및 124에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 144)로 구성되지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 146)로 구성되지 않는다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 148)로 구성되지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 149)로 구성되지 않는다.
다른 양태에서, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-ISSSXXYI-C(서열번호 147)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 121에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는 (ii) N-FTFXXXXMN-C(서열번호 150)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 151)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 124에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-IXXXXXXX-C(서열번호 152)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 N-AR[X]n=6-15DX-C(서열번호 153)로 구성되는 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C(서열번호 154)로 구성되는 경쇄 CDR1, N-XXS-C(서열번호 155)로 구성되는 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 156)로 구성되는 경쇄 CDR3 서열을 포함하지 않는다.
다음 특성 중 적어도 하나 이상을 나타내는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본 명세서에 개시된다: (i) 15nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합함; (ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단함; (iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킴; (iv) 세포에서 CD161 발현의 IL-27-매개성 저해를 저해하거나 또는 감소시킴; (v) 세포에서 IL-27-매개성 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킴; 및 (vi) 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해하거나 또는 감소시킴.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 15nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합한다.
다른 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 면역 세포 또는 암 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 감소시킨다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 면역 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시킨다.
다른 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 면역 세포 또는 암 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 암 세포에서 PD-L1 발현을 저해하거나 또는 감소시킨다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD1-매개성 분비를 유도하거나 또는 향상시킨다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IFNg(IFNγ), IL-17, TNFa(TNFα) 또는 IL-6이다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1 IgA2, IgD 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1 항체 또는 IgG4 항체이다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함한다. 또한, 기재된 단리된 항체 중 어느 하나 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 개시된다. 또한, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 둘 다를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산이 개시된다. 핵산을 포함하는 발현 벡터가 본 명세서에 개시된다. 발현 벡터로 형질전환된 세포가 추가로 개시된다.
본 개시내용은 또한 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 발현을 허용하는 조건하에 발현 벡터로 형질전환된 세포를 유지시키는 단계를 포함하는, 인간 IL-27 또는 이의 항원 결합 부분에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하는 방법을 제공한다. 일부 양태에서, 방법은 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 수득하는 단계를 더 포함한다.
세포를 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해 또는 감소시키는 방법이 본 명세서에 개시되되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킨다.
세포를 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해 또는 감소시키는 방법이 추가로 개시되되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시킨다.
또한, 세포를 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해 또는 감소시키는 방법이 개시되되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해한다.
또한, 세포를 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하는 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 분비를 유도하거나 또는 향상시키는 방법이 개시되되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개성 분비를 유도하거나 또는 향상시킨다.
유효량의 개시된 단리된 항체 또는 항원 결합 단편 또는 개시된 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법이 추가로 개시된다.
유효량의 개시된 단리된 항체 또는 항원 결합 단편 또는 개시된 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 추가로 개시된다.
대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법이 본 명세서에 개시된다. 방법은 유효량의 개시된 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 개시된 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체, 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물이 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법이 추가로 개시된다. 방법은 유효량의 개시된 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 개시된 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체, 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법이 추가로 개시된다. 방법은 유효량의 개시된 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 개시된 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체, 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법이 추가로 개시된다. 방법은 유효량의 개시된 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 개시된 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체, 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
일부 양태에서, 방법에 의해 치료되는 암은 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암), 육종, 고환암, 난소암, 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중-음성 유방암), 흑색종, 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 결장직장암, 방광암, 자궁내막암, 전립선암, 갑상선암, 간세포 암종, 위암, 뇌암, 림프종(예를 들어, DL-BCL), 백혈병(예를 들어, AML) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어, 신장 투명 세포 암종)으로부터 선택된다.
항-PD-1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는(예를 들어, PD-1-매개성 사이토카인 분비를 향상시킴; 항-PD-1 매개성 TNFα 분비를 향상시킴; 항-PD-1 항체에 노출된 세포로부터 항-PD-1 매개성 IL-6 분비를 향상시킴) 방법이 본 명세서에 개시된다. 방법은 세포를 항-PD-1 항체와 동시에 또는 순차적으로 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 노출시켜 항-PD1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는 단계를 포함한다.
항-PD-1 항체, 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 추가로 개시된다.
또한, 동시 또는 순차적 투여를 위한 항-PD-1 항체, 및 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 이의 사용 설명서를 포함하는 키트가 개시된다.
개시된 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합하여 투여되는, 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 개시된 방법 중 어느 하나가 본 명세서에 개시된다. 제2 치료제 또는 절차는 화학요법, 표적화된 항암 요법, 종양세포 용해성 약물, 세포독성제, 면역-기반 요법, 사이토카인, 외과적 절차, 방사선 절차, 공자극성 분자의 활성제, 저해성 분자의 저해제, 백신 또는 세포 면역요법 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, PD-L1 저해제, TIM-3 저해제, LAG-3 저해제, TIGIT 저해제, CD112R 저해제, TAM 저해제, STING 효능제, 4-1BB 효능제, 타이로신 카이네이스 저해제, 아데노신 축을 표적으로 하는 작용제(예를 들어, CD39 길항제, CD73 길항제 또는 A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제), CCR8 길항제, CTLA4 길항제, VEG-F 저해제 또는 이들의 조합이다. 다른 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PDR001, 니볼루맙(nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), 피딜리주맙(pidilizumab), MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 및 AMP-224로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, PD-L1 저해제는 FAZ053, 아테졸리주맙(Atezolizumab), 아벨루맙(Avelumab), 더발루맙(Durvalumab) 및 BMS-936559로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 수니티닙(Sunitinib)(SUTENT®), 카보잔티닙(Cabozantinib)(CABOMETYX®), 악시티닙(Axitinib)(INLYTA®), 렌바티닙(Lenvatinib)(LENVIMA®), 에베롤리무스(Everolimus)(AFINITOR®), 베바시주맙(Bevacizumab)(AVASTIN®), 에파카도스타트(epacadostat), NKTR-214(CD-122-기반 효능제), 티보자닙(Tivozanib)(FOTIVDA®), 아벡시노스타트(abexinostat), 이필리무맙(Ipilimumab)(YERVOY®), 트레멜리무맙(tremelimumab), 파조파닙(Pazopanib)(VOTRIENT®), 소라페닙(Sorafenib)(NEXAVAR®), 템시롤리무스(Temsirolimus)(TORISEL®), 라무시루맙(Ramucirumab)(CYRAMZA®), 니라파립(niraparib), 사볼리티닙(savolitinib), 보롤라닙(vorolanib)(X-82), 레고라페닙(Regorafenib)(STIVARGO®), 도나페닙(Donafenib)(멀티카이네이스 저해제), 캄렐리주맙(Camrelizumab)(SHR-1210), 펙사스티모겐 데바시렙벡(pexastimogene devacirepvec)(JX-594), 라무시루맙(Cyramza®), 아파티닙(apatinib)(YN968D1), 캡슐화된 독소루비신(doxorubicin)(THERMODOX®), 티반티닙(Tivantinib)(ARQ197), ADI-PEG 20, 비니메티닙(binimetinib), 아파티닙 메실레이트, 닌테다닙, 리릴루맙(lirilumab), 니볼루맙(OPDIVO®), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®), 아테졸리주맙(TECENTRIQ®), 아벨루맙(BAVENCIO®), 더발루맙(IMFIMZI®), 세미플리맙-rwlc(Cemiplimab-rwlc)(LIBTAYO®), 티슬레리주맙(tislelizumab) 및 스파르탈리주맙(spartalizumab)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIM-3 저해제이되, 선택적으로 TIM-3 저해제는 MGB453 또는 TSR-022이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 LAG-3 저해제이되, 선택적으로 LAG-3 저해제는 LAG525, BMS-986016 및 TSR-033으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIGIT 저해제이다. 다른 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD112R 저해제이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TAM(Axl, Mer, Tyro) 저해제이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 4-1BB 효능제이다. 다른 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 타이로신 카이네이스 저해제(Tyrosine Kinase Inhibitor: TKI)이다. 일부 양태에서, TKI는 이마티닙(imatinib), 다사티닙(dasatinib), 닐로티닙(nilotinib), 보수티닙(bosutinib) 또는 포나티닙(ponatinib)으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 작용제는 아데노신 축을 표적으로 하는 작용제이다. 일부 양태에서, 아데노신 축을 표적으로 하는 작용제는 CD39 길항제, CD73 길항제, A2AR 길항제, A2BR 길항제 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제로부터 선택된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD39 길항제이다. CD39 길항제의 예는 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US2019/0284295(서페이스 온콜로지 인코포레이티드(Surface Oncology, Inc.))에 기술되어 있는 것들을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD73 길항제이다. CD73 길항제의 예는 AB421(아커스(Arcus))과 같은 소분자 CD73 저해제, MEDI9447(메드이뮨(Medimmune)), BMS-986179(브리스톨 마이어스 스퀴브(Bristol Meyers Squibb))와 같은 CD73에 결합하는 CD73 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US2018/0009899(커버스(Corvus))에 기술된 것과 같은 것들을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 A2AR 길항제, A2BR 길항제 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제이다. A2AR, A2BR 및 이중 A2AR/A2BR 길항제의 예는 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Hodgson et al., (2009) J Pharmacol Exp Ther 330(1):294-303]에 기술되어 있는 프렐라데난트(Preladenant)/SCH 420814(머크(Merck)/쉐링(Schering), CAS 등록 번호: 377727-87-2); 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 특허 제9,133,197호에 기술되어 있는 ST-4206(레디언트 바이오사이언시스(Leadiant Biosciences)); 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[LeWitt et al., (2008) Ann Neurol 63(3):295-302]에 기술되어 있는 KW-6356(쿄와 하코 코교(Kyowa Hakko Kogyo)), 토자데난트(Tozadenant)/SYN-115(아코르다(Acorda)), 이스트라데파일린(Istradefylline)/KW-6002(쿄와 하코 코교, CAS 등록 번호: 155270-99-8); 테오필린(theophylline)(CAS 등록 번호: 58-55-9), NIR178(노바티스(Novartis)); 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 WO2011/095625에 기술되어 있는 AB928(아커스 바이오사이언시스), GBV-2034(글로바비어(Globavir)), 비파데난트(Vipadenant)(레독스(Redox)/주노(Juno)), AZD4635/HTL-1071(아스트라제네카(AstraZeneca)/헵타레스(Heptares)); 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 WO 2009/156737에 기술되어 있는 CPI-444/V81444(커버스/제넨테크(Genentech)); 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US 8,796,284 및 WO 2017/025918에 기술되어 있는 PBF509(팔로바이오파마(Palobiofarma)/노바티스); 이들 전부가 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 US8114845, US9029393, US20170015758 또는 US20160129108에 기술되어 있는 A2AR 길항제; 및 ATL-444, MSX-3, SCH-58261, SCH-412,348, SCH-442,416, VER-6623, VER-6947, VER-7835, CGS-15943 또는 ZM-241,385를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CCR8 길항제이다. 일부 양태에서, CCR8 길항제는 소분자 및 항체로부터 선택된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CTLA4 길항제이다. 일부 양태에서, CTLA4 길항제는 Yervoy®(이필리무맙 또는 항체 10D1, PCT 공개 WO 01/14424에 기술되어 있음), 트레멜리무맙(이전에는 티실리무맙(ticilimumab), CP-675,206), 임의의 다음 간행물 WO 98/42752; WO 00/37504; 미국 특허 제6,207,156호; 문헌[Hurwitz et al. (1998) Pro. Natl. Acad. Sci. USA 95(17): 10067-10071]; 문헌[Camacho et al. (2004) J. Clin. Oncology 22(145): antibodies tract No. 2505 (antibody CP-675206)]; 및 문헌[Mokyr et al. (1998) Cancer Res. 58:5301-5304]에 기술되어 있는 단일클론 또는 항-CTLA-4 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. WO2013/173223에 개시되어 있는 임의의 항-CTLA-4 항체가 또한 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 VEG-F 저해제이다. 일부 양태에서, VEG-F 저해제는 카보잔티닙, 파오파닙(paopanib), 베바시주맙, 수니티닙, 악시티닙, 렌반티닙(lenvantinib), 소라페닙, 레고라페닙, 포나티닙, 카보잔티닙, 반데타닙(vandetanib), 라무시루맙 또는 베바시주맙으로부터 선택된다.
대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 대상체에서 암을 치료하기 위한, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 함께 사용하기 위한 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 개시된 약제학적 조성물의 용도가 본 명세서에 개시된다.
대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 대상체에서 암을 치료하는데 사용하기 위한 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 개시된 약제학적 조성물 및 설명서, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 함께 사용하기 위한 설명서를 포함하는 키트가 추가로 개시된다.
또한, 대상체로부터의 샘플에서 IL-27을 검출하는데 사용하기 위한 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 설명서, 선택적으로 대상체에서 IL-27-관련 암을 검출하는데 사용하기 위한 설명서를 포함하는 키트가 개시된다.
정의
특허청구범위 및 명세서에서 사용되는 용어는 달리 명시되지 않는 한 아래에 제시되는 바와 같이 정의된다.
명세서 및 첨부된 특허청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태는 문맥에서 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 참조를 포함한다는 점에 유의하여야 한다.
본 명세서에서 사용되는 "약"은 당업자에 의해 이해될 것이며, 그것이 사용되는 맥락에 따라 어느 정도 달라질 것이다. 해당 용어가 사용되는 맥락에서 당업자에게 명확하지 않은 용어가 사용되는 경우, "약"은 특정 값의 최대 ±10%를 의미할 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "효능제"는 본 명세서에 개시된 천연 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 촉진하거나, 유도시키거나, 증가시키고/시키거나 활성화하는 임의의 분자를 지칭한다. 적합한 효능제 분자는 구체적으로 효능제 항체 또는 항체 단편, 천연 폴리펩타이드의 단편 또는 아미노산 서열 변이체, 펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, 효능제의 존재하에서 활성화는 용량-의존적 방식으로 관찰된다. 일부 양태에서, 측정된 신호(예를 들어, 생물학적 활성)는 비슷한 조건하에서 음성 대조군으로 측정된 신호보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100% 더 높다. 또한, 본 개시내용의 방법에 사용하기에 적합한 효능제를 확인하는 방법이 본 명세서에 개시된다. 예를 들어, 이러한 방법은 결합 검정, 예컨대, 효소-연결 면역-흡착 검정(enzyme-linked immuno-absorbent assay: ELISA), FORTE BIO® 시스템 및 방사면역검정(radioimmunoassay: RIA)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이들 검정은 관심 폴리펩타이드(예를 들어, 수용체 또는 리간드)에 결합하는 효능제의 능력을 결정하므로 폴리펩타이드의 활성을 촉진하거나, 증가시키거나 또는 활성화하는 효능제의 능력을 나타낸다. 효능제의 효능은 또한 폴리펩타이드의 기능을 활성화 또는 촉진하는 효능제의 능력과 같은 기능적 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 기능적 검정은 폴리펩타이드를 후보 효능제 분자와 접촉시키는 단계 및 일반적으로 폴리펩타이드와 관련된 하나 이상의 생물학적 활성의 검출 가능한 변화를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 효능제의 효능은 일반적으로 이의 EC50 값(효능제 반응의 50%를 활성화하는데 필요한 농도)으로 정의된다. EC50 값이 낮을수록 효능제의 효능은 더 커지고, 최대 생물학적 반응을 활성화하는데 필요한 농도는 낮아진다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "알라닌 스캐닝"은 주어진 단백질 또는 폴리펩타이드의 안정성 또는 기능(들)(예를 들어, 결합 친화성)에 대한 특정 야생형 잔기의 기여를 결정하기 위해 사용되는 기법을 지칭한다. 기법은 폴리펩타이드에서 야생형 잔기를 알라닌 잔기로 치환하는 것에 이어 알라닌-치환된 유도체 또는 돌연변이체 폴리펩타이드의 안정성 또는 기능(들)(예를 들어, 결합 친화성)을 평가하고, 야생형 폴리펩타이드와 비교하는 것을 포함한다. 폴리펩타이드에서 야생형 잔기를 알라닌으로 치환하는 기법은 당업계에 공지되어 있다.
용어 "개선하는"은 예방, 중증도 또는 진행의 감소, 관해 또는 치료를 포함하는 질환 상태, 예를 들어, 암의 치료에서 임의의 치료학적으로 유익한 결과를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "아미노산"은 자연 발생 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연 발생적 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생적 아미노산은 유전자 코드에 의해 암호화되는 것들뿐만 아니라 추후 변형되는 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생적 아미노산과 동일한 기본적 화학 구조를 갖는 화합물, 즉, 수소, 카복실기, 아미노기 및 R기에 결합된 탄소, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩타이드 골격을 갖지만, 자연 발생적 아미노산과 동일한 기본적 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적 화학 구조와는 상이한 구조를 갖지만, 자연 발생적 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화학 화합물을 지칭한다.
아미노산은 본 명세서에서 일반적으로 알려진 세 글자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학적 명명 위원회(IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission)에 의해 권장되는 한 글자 기호로 지칭될 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오타이드는 일반적으로 인정되는 한 문자 코드로 언급될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "아미노산 치환"은 미리 결정된 아미노산 서열(출발 폴리펩타이드의 아미노산 서열)에서 적어도 하나의 기존의 아미노산 잔기를 제2의 상이한 "대체" 아미노산 잔기로 대체하는 것을 지칭한다. "아미노산 삽입"은 적어도 하나의 추가적인 아미노산을 미리 결정된 아미노산 서열에 혼입시키는 것을 지칭한다. 삽입은 일반적으로 1개 또는 2개의 아미노산 잔기의 삽입으로 구성될 것이지만, 더 큰 "펩타이드 삽입", 예를 들어, 약 3개 내지 약 5개, 또는 심지어 최대 약 10개, 15개 또는 20개의 아미노산 잔기의 삽입도 또한 이루어질 수 있다. 삽입된 잔기(들)는 위에 개시된 바와 같이 자연 발생적 또는 비-자연 발생적일 수 있다. "아미노산 결실"은 미리 결정된 아미노산 서열로부터 적어도 하나의 아미노산 잔기의 제거를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "양" 또는 "수준"은 가장 넓은 의미로 사용되며, 물질(예를 들어, 대사산물, 소분자, 단백질, mRNA, 마커)의 양, 농도 또는 존재비를 지칭한다. 대사산물 또는 소분자(예를 들어, 약물)를 언급할 때, 용어 "양", "수준" 및 "농도"는 일반적으로 상호교환적으로 사용되며, 일반적으로 생물학적 샘플에서 검출 가능한 양을 지칭한다. "상승된 수준" 또는 "증가된 수준"은 대조군 샘플, 예컨대, 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 앓고 있지 않은 개체 또는 개체들, 또는 내부 대조군에 비해 샘플 내 물질의 양, 농도 또는 존재비의 증가를 지칭한다. 일부 양태에서, 샘플 내 물질(예를 들어, 약물)의 상승된 수준은 당업계에 공지된 기법(예를 들어, HPLC)에 의해 결정되는 바와 같이 대조군 샘플 내 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 증가를 지칭한다. "감소된 수준"은 대조군, 예컨대, 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 앓고 있지 않은 개체 또는 개체들, 또는 내부 대조군에 비해 개체에서 물질(예를 들어, 약물)의 양, 농도 또는 존재비의 감소를 지칭한다. 일부 양태에서, 감소된 수준은 검출 가능한 양, 농도 또는 존재비가 거의 없거나 또는 전혀 없다. 일부 양태에서, 샘플 내 물질(예를 들어, 약물)의 감소된 수준은 당업계에 공지된 기법(예를 들어, HPLC)에 의해 결정되는 바와 같이 대조군 샘플 내 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 감소를 지칭한다.
본 명세서에 기재된 것들과 같은 단백질, mRNA 또는 마커를 언급할 때, 일반적으로 용어 "발현의 수준" 또는 "발현 수준"은 상호교환적으로 사용되며, 일반적으로 생물학적 샘플에서 단백질, mRNA 또는 마커의 검출 가능한 양을 지칭한다. 일부 양태에서, 단백질, mRNA 또는 마커의 검출 가능한 양 또는 검출 가능한 수준은 본 명세서에 기재된 것과 같은 작용제에 대한 반응의 가능성과 관련이 있다. "발현"은 일반적으로 유전자 내에 포함된 정보가 세포에 존재하고 작동하는 구조(예를 들어, PD-L1과 같은 단백질 마커)로 전환되는 과정을 지칭한다. 따라서, 본 명세서에서 사용되는 "발현"은 폴리뉴클레오타이드로의 전사, 폴리펩타이드 또는 심지어 폴리뉴클레오타이드 및/또는 폴리펩타이드 변형으로의 번역(예를 들어, 폴리펩타이드의 번역후 변형)을 지칭한다. 전사된 폴리뉴클레오타이드, 번역된 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 폴리펩타이드 변형(예를 들어, 폴리펩타이드의 번역후 변형)의 단편은 또한 대안적 스플라이싱에 의해 생성된 전사체 또는 분해된 전사체로부터 유래되거나 또는, 예를 들어, 단백질 가수분해에 의한 폴리펩타이드의 번역후 과정으로부터 유래되는지 여부에 관계없이 발현된 것으로 간주되어야 한다. "발현된 유전자"는 mRNA로서 폴리뉴클레오타이드로 전사된 다음 폴리펩타이드로 번역되는 것, 및 또한 RNA로 전사되지만 폴리펩타이드로 번역되지 않은 것(예를 들어, 운반 및 리보솜 RNA)을 포함한다. "상승된 발현", "상승된 발현 수준" 또는 "상승된 수준"은 대조군 샘플, 예컨대, 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 앓고 있지 않은 개체 또는 개체들, 또는 내부 대조군에 비해 샘플 내 물질의 증가된 발현 또는 증가된 수준을 지칭한다. 일부 양태에서, 샘플 내 물질(예를 들어, PD-L1과 같은 단백질 마커)의 상승된 발현은 당업계에 공지된 기법(예를 들어, FACS)에 의해 결정되는 바와 같이 대조군 샘플 내 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 증가를 지칭한다. "감소된 발현", "감소된 발현 수준" 또는 "감소된 수준"은 대조군, 예컨대, 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 앓고 있지 않은 개체 또는 개체들, 또는 내부 대조군에 비해 개체에서 물질(예를 들어, 단백질 마커)의 발현의 감소 또는 감소된 수준을 지칭한다. 일부 양태에서, 감소된 발현은 발현이 거의 없거나 또는 전혀 없는 것이다. 일부 양태에서, 샘플 내 물질(예를 들어, 단백질 마커)의 감소된 발현은 당업계에 공지된 기법(예를 들어, FACS)에 의해 결정되는 바와 같이 대조군 샘플 내 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 감소를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "혈관신생(angiogenesis)" 또는 "신혈관 형성(neovascularization)"은 기존 혈관으로부터 새로운 혈관이 발생하는 과정을 지칭한다(문헌[Varner et al., (1999) Angiogen. 3:53-60; Mousa et al., (2000) Angiogen. Stim. Inhib. 35:42-44; Kim et al., (2000) Amer. J. Path. 156:1345-1362; Kim et al., (2000) J. Biol. Chem. 275:33920-33928; Kumar et al. (2000) Angiogenesis: From Molecular to Integrative Pharm. 169-180]). 기존 혈관 또는 순환하는 내피 줄기 세포로부터의 내피 세포(문헌[Takahashi et al., (1995) Nat. Med. 5:434-438; Isner et al., (1999) J. Clin. Invest. 103:1231-1236])는 성장 인자 또는 호르몬 신호(cue) 또는 저산소 또는 허혈성 병태에 대한 반응으로 내강이 있는 구조로 이동, 증식 및 분화하도록 활성화되어 새로운 혈관을 형성한다. 암에서 발생하는 것과 같은 허혈 동안, 산소 공급 및 영양소의 전달을 증가시킬 필요는 분명하게 영향을 받은 조직에 의한 혈관형성 인자의 분비를 유도하며; 이러한 인자는 새로운 혈관 형성을 자극한다. 몇 가지 추가적인 용어가 혈관신생과 관련이 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "길항제"는 표적 분자의 저해제를 지칭하며, 본 명세서에서 용어 "저해제"와 동의어로 사용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "길항제"는 본 명세서에 개시된 천연 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 차단, 저해 또는 중화하는 임의의 분자를 지칭한다. 적합한 길항제 분자는 구체적으로 길항제 항체 또는 항체 단편, 천연 폴리펩타이드의 단편 또는 아미노산 서열 변이체, 펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 일부 양태에서, 길항제의 존재하에서 저해는 용량-의존적 방식으로 관찰된다. 일부 양태에서, 측정된 신호(예를 들어, 생물학적 활성)는 비슷한 조건하에서 음성 대조군으로 측정된 신호보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100% 낮다. 또한, 본 개시내용의 방법에서 사용하기에 적합한 길항제를 확인하는 방법이 본 명세서에 개시된다. 예를 들어, 이들 방법은 결합 검정, 예컨대, 효소-연결 면역-흡착 검정(ELISA), ForteBio®시스템, 방사면역검정(RIA), 중규모 디스커버리 검정(Meso Scale Discovery assay)(예를 들어, 중규모 디스커버리 전기화학발광(Meso Scale Discovery electrochemiluminescence: MSD-ECL) 및 비드-기반 Luminex® 검정을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이들 검정은 관심 폴리펩타이드(예를 들어, 수용체 또는 리간드)에 결합하는 길항제의 능력을 결정하므로, 폴리펩타이드의 활성을 저해, 중화 또는 차단하는 길항제의 능력을 나타낸다. 길항제의 효능은 또한 폴리펩타이드 또는 효능제의 기능을 저해하는 길항제의 능력과 같은 기능적 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 기능적 검정은 폴리펩타이드를 후보 길항제 분자와 접촉시키는 것 및 일반적으로 폴리펩타이드와 관련된 하나 이상의 생물학적 활성의 검출 가능한 변화를 측정하는 것을 포함할 수 있다. 길항제의 효능은 일반적으로 이의 IC50 값(효능제 반응의 50%를 저해하는데 필요한 농도)에 의해 정의된다. IC50 값이 낮을수록 길항제의 효능은 커지고, 최대 생물학적 반응을 저해하는데 필요한 농도는 낮아진다.
본 명세서에서 사용되는 어구 "인간 IL-27을 길항하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분"은, 예를 들어, 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상인 인간 IL-27 활성의 감소(decrease)(또는 감소(reduction))와 관련하여 인간 IL-27의 적어도 하나의 당업계에서 인정된 활성(예를 들어, IL-27 신호전달 또는 기타 IL-27-매개성 기능에 의해 매개되는 IL-27 생물학적 활성 및/또는 하류 경로(들))을 길항하는 항체를 지칭한다. IL-27 신호전달 또는 기타 IL-27-매개성 기능에 의해 매개되는 IL-27 생물학적 활성 및/또는 하류 경로(들)의 추가적인 예는 아래의 추가적인 상세한 설명 및 본 명세서의 다른 곳에 기재되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항-IL-27 길항제 항체"(상호교환적으로 "항-IL-27 항체")는 IL-27에 특이적으로 결합하고, IL-27 신호전달 또는 다른 IL-27-매개성 기능에 의해 매개되는 IL-27 생물학적 활성 및/또는 하류 경로(들)를 저해하는 항체를 지칭한다. 항-IL-27 길항제 항체는 IL-27 신호전달 또는 기능에 의해 매개되는 하류 경로, 예컨대, 수용체 결합 및/또는 IL-27 또는 이의 대사산물에 대한 세포 반응의 유도를 포함하여 IL-27 생물학적 활성(예를 들어, 리간드 결합, 효소적 활성)을 차단, 길항, 억제, 저해 또는 감소시키는 항체를 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항-IL-27 길항제 항체는 인간 IL-27에 결합하고, 이의 동족 또는 정상 수용체(예를 들어, IL-27 수용체) 또는 하나 이상의 수용체 서브유닛(예를 들어, gp130 및/또는 IL-27Rα(WSX1/TCCR로도 알려짐))에 대한 인간 IL-27의 결합을 방지, 차단 또는 저해한다. 일부 양태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 gp130에 대한 인간 IL-27의 결합을 방지, 차단 또는 저해한다. 일부 양태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 IL-27Rα에 대한 인간 IL-27의 결합을 방지, 차단 또는 저해한다. 일부 양태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 IL-27 단량체의 이량체화를 방지, 차단 또는 저해한다. 일부 양태에서, 항-IL-27 항체는 EBI3 단량체에 특이적으로 결합하지 않는다. 일부 양태에서, 항-IL-27 항체는 IL-27p28 단량체에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 P28을 포함하는 비-연속 에피토프에 특이적으로 결합하지만, EBI3 단량체에는 결합하지 않는다. 일부 양태에서, 항-IL-27 항체는 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 항-IL-27 항체는 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시킨다(예를 들어, 세포에서 CD161 발현의 IL-27 매개성 저해를 개선하거나 또는 완화시킴). 일부 양태에서, 항-IL-27 항체는 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 항-IL-27은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 인간 IL-27에 결합하고, 항-종양 반응을 자극하거나 또는 향상시킨다. 일부 양태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 15nM 이하의 친화성으로 인간 IL-27에 결합한다. 일부 양태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 인간 IL-27에 결합하고, 야생형 또는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 야생형 또는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 항-IL-27 길항제 항체의 예는 본 명세서에 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 2개의 경쇄 폴리펩타이드 및 2개의 중쇄 폴리펩타이드를 포함하는 전체 항체를 지칭한다. 전체 항체는 IgM, IgG, IgA, IgD 및 IgE 항체를 비롯한 다양한 항체 아이소타입을 포함한다. 용어 "항체"는 다중클론 항체, 단일클론 항체, 키메라화 또는 키메라 항체, 인간화 항체, 영장류화 항체, 탈면역화 항체 및 완전 인간 항체를 포함한다. 항체는 임의의 다양한 종, 예를 들어, 인간, 비-인간 영장류(예를 들어, 오랑우탄, 개코원숭이 또는 침팬지), 말, 소, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼, 기니피그, 저빌, 햄스터, 래트 및 마우스와 같은 포유동물에서 만들어지거나 또는 이로부터 유래될 수 있다. 항체는 정제되거나 또는 재조합 항체일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "항체 단편", "항원-결합 단편" 또는 유사한 용어는 표적 항원(예를 들어, IL-27)에 결합하는 능력을 보유하고, 표적 항원의 활성을 저해하는 항체의 단편을 지칭한다. 이러한 단편은, 예를 들어, 단일쇄 항체, 단일쇄 Fv 단편(scFv), Fd 단편, Fab 단편, Fab' 단편 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. scFv 단편은 scFv가 유래되는 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 둘 다를 포함하는 단일 폴리펩타이드 사슬이다. 또한, 인트라바디, 미니바디, 트라이어바디 및 다이어바디가 또한 항체의 정의에 포함될 수 있으며, 본 명세서에 기재된 방법에서 사용하기에 적합하다. 예를 들어, 각각의 개시내용 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Todorovska et al., (2001) J. Immunol. Methods 248(1):47-66; Hudson and Kortt, (1999) J. Immunol. Methods 231(1):177-189; Poljak, (1994) Structure 2(12):1121-1123; Rondon and Marasco, (1997) Annu. Rev. Microbiol. 51:257-283] 참조.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체 단편"은 또한, 예를 들어, 낙타화 단일 도메인 항체와 같은 단일 도메인 항체를 포함한다. 예를 들어, 모두 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Muyldermans et al., (2001) Trends Biochem. Sci. 26:230-235; Nuttall et al., (2000) Curr. Pharm. Biotech. 1:253-263; Reichmann et al., (1999) J. Immunol. Meth. 231:25-38]; PCT 공개 WO 94/04678 및 WO 94/25591; 및 미국 특허 제6,005,079호 참조. 일부 양태에서, 본 개시내용은 단일 도메인 항체가 형성되도록 변형된 2개의 VH 도메인을 포함하는 단일 도메인 항체를 제공한다.
일부 양태에서, 항원-결합 단편은 중쇄 폴리펩타이드의 가변 영역 및 경쇄 폴리펩타이드의 가변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항원-결합 단편은 항체의 경쇄 및 중쇄 폴리펩타이드의 CDR을 포함한다.
용어 "항원 제시 세포" 또는 "APC"는 표면에 MHC와 복합체화된 외래 항원을 나타내는 세포이다. T 세포는 T 세포 수용체(T cell receptor: TCR)를 사용하여 이러한 복합체를 인식한다. APC의 예는 B 세포, 수지상 세포(dendritic cell: DC), 말초 혈액 단핵 세포(말초 혈액 단핵 cell: PBMC), 단핵구(예컨대, THP-1), B 림프아구성 세포(예컨대, C1R.A2, 1518 B-LCL) 및 단핵구-유래 수지상 세포(DC)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 APC는 식균작용 또는 수용체-매개성 세포내 섭취에 의해 항원을 내재화한다.
용어 "항원 제시"는 APC가 항원을 포획하고 T 세포, 예를 들어, MHC-I 및/또는 MHC-II 접합체의 구성성분으로서 T 세포에 의한 항원 인식을 가능하게 하는 과정을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포자멸사"는 다세포 유기체(예를 들어, 인간)에서 발생하는 예정된 세포사의 과정을 지칭한다. 세포자멸사를 초래하는 고도로 조절된 생화학적 및 분자적 이벤트는 막 기포형성, 세포 부피 수축, 염색체 DNA 응축 및 단편화 및 mRNA 붕괴를 포함하여 세포에 관찰 가능하고 특징적인 형태학적 변화를 초래할 수 있다. 세포자멸사를 겪고 있는 T 세포를 포함하여 세포를 확인하는 일반적인 방법은 세포를 형광단-접합 단백질(아넥신 V)에 노출시키는 것이다. 아넥신 V는 일반적으로 세포자멸사의 과정을 겪고 있다는 초기 지표인 원형질막의 외부 리플릿(outer leaflet)에 있는 포스파티딜세린에 결합하는 능력에 의해 세포자멸 세포를 검출하는데 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "B 세포"(대안적으로 "B 림프구")는 림프구 하위유형의 백혈구 유형을 지칭한다. B 세포는 항체를 분비함으로써 후천성 면역계의 체액성 면역 성분에서 기능한다. B 세포는 또한 항원을 제시하고 사이토카인을 분비한다. 다른 두 클래스의 림프구 T 세포 및 자연 살해 세포와는 달리 B 세포는 세포 막 상에 B 세포 수용체(B cell receptor: BCR)를 발현한다. BCR은 B 세포가 항체 반응을 개시할 때 특정 항원에 결합하도록 한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "고정된 IL-27에 결합하는"은, 예를 들어, 세포의 표면에서 발현되거나 또는 고체 지지체에 부착된 IL-27에 결합하는 본 개시내용의 항체의 능력을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "이중특이성" 또는 "이중작용성 항체"는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체를 지칭한다. 이중특이성 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Songsivilai & Lachmann, (1990) Clin. Exp. Immunol. 79:315-321; Kostelny et al., (1992) J. Immunol. 148:1547-1553] 참조.
전통적으로, 이중특이성 항체의 재조합 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 동시-발현을 기반으로 하며, 2개의 중쇄/경쇄 쌍은 상이한 특이성을 갖는다(문헌[Milstein and Cuello, (1983) Nature 305:537-539]). 목적하는 결합 특이성(항체-항원 조합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합될 수 있다. 중쇄 가변 영역의 융합은 바람직하게는 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과의 융합이다. 이중특이성 항체를 생성하기 위한 현재 알려진 방법에 대한 추가 세부사항에 대해, 예를 들어, 문헌[Suresh et al., (1986) Methods Enzymol. 121:210; PCT 공개 WO 96/27011; Brennan et al., (1985) Science 229:81; Shalaby et al., J. Exp. Med. (1992) 175:217-225; Kostelny et al., (1992) J. Immunol. 148(5):1547-1553; Hollinger et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Gruber et al., (1994) J. Immunol. 152:5368; 및 Tutt et al., (1991) J. Immunol. 147:60] 참조. 이중특이성 항체는 또한 가교 또는 이종접합체 항체를 포함한다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 적합한 가교제는 당업계에 잘 알려져 있으며, 다수의 가교 기법에 따라 미국 특허 제4,676,980호에 개시되어 있다.
재조합 세포 배양으로부터 직접 이중특이성 항체 단편을 제조하고 단리하기 위한 다양한 기법이 또한 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이성 항체는 류신 지퍼를 사용하여 생산되었다. 예를 들어, 문헌[Kostelny et al. (1992) J Immunol 148(5):1547-1553] 참조. Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결될 수 있다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성한 다음, 재산화되어 항체 이종이량체를 형성할 수 있다. 이러한 방법은 또한 항체 동종이량체의 생산에 이용될 수 있다. 문헌[Hollinger et al. (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:6444-6448]에 기술되어 있는 "다이어바디" 기술은 이중특이성 항체 단편을 제조하는 것에 대한 대안적 메커니즘을 제공하였다. 단편은 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 사이의 페어링을 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결되는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 페어링함으로써 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-사슬 Fv(scFv) 이량체를 사용하여 이중특이성 항체 단편을 제조하기 위한 또 다른 전략이 또한 보고되었다. 예를 들어, 문헌[Gruber et al. (1994) J Immunol 152:5368] 참조. 대안적으로, 항체는, 예를 들어, 문헌[Zapata et al. (1995) Protein Eng. 8(10):1057-1062]에 기술되어 있는 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 간략하게는, 이들 항체는 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 탠덤 Fd 세그먼트(VH-CH1-VH-CH1)의 쌍을 포함한다. 선형 항체는 이중특이성 또는 단일특이성일 수 있다.
2개 이상의 원자가를 갖는 항체(예를 들어, 삼중특이성 항체)가 상정되며, 예를 들어, 문헌[Tutt et al. (1991) J Immunol 147:60]에 기술되어 있다.
본 개시내용은 또한 문헌[Wu et al. (2007) Nat Biotechnol 25(11): 1290-1297]에 기술되어 있는 이중 가변 도메인 면역글로불린(dual variable domain immunoglobulin: DVD-Ig) 분자와 같은 다중-특이성 항체의 변이체 형태를 포함한다. DVD-Ig 분자는 2개의 상이한 모 항체로부터의 2개의 상이한 경쇄 가변 도메인(VL)이 탠덤으로 직접 또는 재조합 DNA 기법에 의해 짧은 링커를 통해 연결되고, 이어서 경쇄 불변 도메인이 연결되도록 설계된다. 유사하게는, 중쇄는 탠덤으로 연결된 2개의 상이한 중쇄 가변 도메인(VH)에 이어서 불변 도메인 CH1 및 Fc 영역을 포함한다. 2개의 모 항체로부터 DVD-Ig 분자를 제조하는 방법은, 예를 들어, PCT 공개 WO 08/024188 및 WO 07/024715에 추가로 기술되어 있다. 일부 양태에서, 이중특이성 항체는 제2 특이성을 갖는 경쇄 가변 영역이 전체 항체의 중쇄 가변 영역에 융합된 Fab-인-탠덤 면역글로불린(Fab-in-Tandem immunoglobulin)이다. 이러한 항체는, 예를 들어, 국제특허 공개 WO 2015/103072에 기술되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 "암 항원" 또는 "종양 항원"은 (i) 종양-특이적 항원, (ii) 종양-관련 항원, (iii) 종양-특이적 항원을 발현하는 세포, (iv) 종양-관련 항원을 발현하는 세포, (v) 종양 상의 배아 항원, (vi) 자가 종양 세포, (vii) 종양-특이적 막 항원, (viii) 종양-관련 막 항원, (ix) 성장 인자 수용체, (x) 성장 인자 리간드 및 (xi) 암과 관련된 임의의 다른 유형의 항원 또는 항원-제시 세포 또는 물질을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "암-특이적 면역 반응"은 종양, 암 세포 또는 암 항원의 존재에 의해 유도되는 면역 반응을 지칭한다. 소정의 양태에서, 반응은 암 항원 특이적 림프구의 증식을 포함한다. 소정의 양태에서, 반응은 항체 및 T-세포 수용체의 발현 및 상향조절과 림포카인, 케모카인 및 사이토카인의 형성 및 방출을 포함한다. 선천성 및 후천성 면역계 둘 다 종양, 암 세포 또는 암 항원에 대한 항원 반응을 개시하기 위해 상호작용한다. 소정의 양태에서, 암-특이적 면역 반응은 T 세포 반응이다.
용어 "암종"은 당해 분야에서 인식되며, 호흡기계 암종, 위장계 암종, 비뇨생식계 암종, 고환 암종, 유방 암종, 전립선 암종, 내분비계 암종 및 흑색종을 포함하는 상피 또는 내분비 조직의 악성 종양을 지칭한다. 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체는 신장 암종 또는 흑색종 또는 임의의 바이러스 질환을 포함하는 임의의 유형의 암이 있거나, 이를 갖는 것으로 의심되거나 또는 이의 발병 위험이 높을 수 있는 환자를 치료하는데 사용될 수 있다. 예시적인 암종은 자궁, 폐, 전립선, 유방, 두경부, 결장 및 난소의 조직으로부터 형성되는 것을 포함한다. 용어는 또한 암종 및 육종 조직으로 구성된 악성 종양을 포함하는 암육종을 포함한다. "선암종"은 선상 조직으로부터 유래되는 암종 또는 종양 세포가 인식 가능한 선상 구조를 형성하는 암종을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "CD112R"은 폴리오바이러스 수용체-유사 단백질의 구성원을 지칭하며, 인간 T 세포에 대한 공동-저해성 수용체이다. CD112R은 T 세포와 NK 세포에 의해 주로 발현되는 저해성 수용체이며, 활성화 수용체 CD226과 CD112 결합에 대해 경쟁한다. CD112와 CD112R의 상호작용은 CD226보다 친화성이 높기 때문에 CD226 매개된 세포 활성화를 효과적으로 조절한다. CD112와의 상호작용을 차단하는 항-CD112R 길항제는 CD112와 CD226의 상호작용을 증가시켜 더 큰 면역 세포 활성화를 촉진하는 동시에 CD112R의 직접 하류에서 저해성 신호전달을 제한한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "CD112R 저해제"는 CD112R의 생물학적 기능 또는 활성을 파괴, 차단 또는 저해하는 작용제를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "CD137"(대안적으로 "4-1BB")은 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor: TNF) 수용체 슈퍼패밀리의 구성원을 지칭한다. 4-1BB는 주로 활성화된 T 세포에 대한 공동-자극 면역 관문 분자이다. CD137의 가교결합은 T 세포 증식, IL-2 분비, 생존 및 세포용해 활성을 향상시킨다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "4-1BB 효능제"는 4-1BB의 하나 이상의 기능을 자극, 유도 또는 증가시키는 작용제를 지칭한다. 예시적인 4-1BB 효능제는 T 세포를 자극하기 위해 이 4-1BB를 표적으로 하는 완전한 인간 IgG2 단일클론 항체인 유토밀루맙(Utomilumab)(PF-05082566)이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "CD161"(대안적으로, 살해 세포 렉틴-유사 수용체 하위패밀리 B, 구성원 1(KLRB1); NK1.1 또는 NKR-P1A로 알려짐)은 C-유형 렉틴 슈퍼패밀리의 구성원을 지칭한다. CD161은 T 세포의 마커이며, CD161 발현은 다수의 상이한 암 유형에 대한 종양 미세환경으로의 T 세포 침윤과 관련이 있다. CD161은 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 문헌[Fergusson et al., (2014) Cell Reports 9(3):1075-1088]에 추가로 기술되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "IL-27" 또는 "인터류킨 27"은 IL-27 사이토카인을 지칭한다. IL-27은 IL-6/IL-12 사이토카인 패밀리와 관련이 있으며, 엡스타인-바 바이러스 유도 유전자 3(EBI3; IL-27 서브유닛 β 및 IL-27B로도 알려져 있음)으로 알려져 있는 제1 서브유닛 및 IL-27p28(IL30, IL-27 서브유닛 α 및 IL-27A로도 알려져 있음)로 알려져 있는 제2 서브유닛을 포함하는 이종이량체 사이토카인이다. IL-27은 주로 단핵구, 내피 세포 및 수지상 세포를 포함하는 활성화된 항원-제시 세포에 의해 합성된다(문헌[Jankowski et al. (2010) Arch Immunol. Ther. Exp. 58:417-425, Diakowski et al. (2013) Adv. Clin. Exp. Med. (2013) 22(5): 683-691]). IL-27은 전염증성 효과를 가질 수 있지만, 많은 연구에서 면역억제제로서 IL-27의 중요한 역할을 시사한다(문헌[Shimizu et al. (2006) J. Immunol. 176:7317-7324, Hisada et al. (2004) Cancer Res. 64:1152-1156, Diakowski (2013) 상기]). IL-27은 처음에는 Th1 반응의 개시를 촉진하는 인자로서 설명되었지만, 나중에 Th1 반응을 제한하고, Th2 및 Th17 세포 분화를 저해하고, Tr1 및 다른 T 조절성 세포 집단의 발달을 조절함으로써 주요 T-세포 억제 기능을 하는 것으로 밝혀졌다(문헌[Dietrich et al. (2014) J. Immunol. 192:5382-5389]). 면역조절제로서의 역할 외에도, IL-27은 또한 혈관신생, 조혈 및 파골세포형성도 조절한다(Id.).
IL-27은 WSX1로 알려져 있는 제1 서브유닛(IL-27 수용체 서브유닛 α IL-27RA, T-세포 사이토카인 수용체 유형 1(T-Cell Cytokine Receptor Type 1: TCCR) 및 사이토카인 수용체-유사 1(T-Cell Cytokine Receptor Type 1: CRL1)로도 알려져 있음) 및 gp130으로 알려져 있는 제2 서브유닛(인터류킨-6 신호 변환기(Interleukin-6 Signal Transducer: IL6ST), 인터류킨-6 수용체 서브유닛 β(Interleukin-6 Receptor Subunit β: IL-6RB) 및 온코스타틴 M 수용체로도 알려져 있음)를 포함하는 이종이량체 유형 I 사이토카인 수용체(IL-27 수용체 또는 IL-27R)를 통해 신호를 전달한다. gp130은 또한 IL-6 패밀리 사이토카인에 대한 수용체 서브유닛이다(문헌[Liu et al. (2008) Scan. J. Immunol. 68:22-299, Diakowski (2013) 상기]). IL-27R을 통한 IL-27 신호전달은 JAK-STAT 및 p38 MAPK 경로를 포함한 여러 신호전달 캐스케이드를 활성화한다.
EBI3은 또한 p28 또는 IL-27 이종이량체와 무관한 생물학적 기능을 갖는 것으로 여겨진다. 예를 들어, EBI3은 또한 이종이량체 사이토카인 IL-35를 형성하기 위해 p35와 상호작용하고(문헌[Yoshida et al. (2015) Annu. Rev Immunol. 33:417-43]), p28 또는 IL-27의 상승하는 증가 없이 소정의 세포 유형에서 선택적으로 과발현되는 것으로 나타났다(문헌[Larousserie et al. (2005) Am. J. Pathol. 166(4):1217-28]).
예시적인 인간 EBI3 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 1에 제공된다(NCBI 참조 서열: NP_005746.2; N-mtpqlllalvlwascppcsgrkgppaaltlprvqcrasrypiavdcswtlppapnstspvsfiatyrlgmaarghswpclqqtptstsctitdvqlfsmapyvlnvtavhpwgssssfvpfitehiikpdppegvrlsplaerqlqvqweppgswpfpeifslkywirykrqgaarfhrvgpieatsfilravrpraryyvqvaaqdltdygelsdwslpatatmslgk-C). 예시적인 인간 p28 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 2에 제공된다(NCBI 참조 서열: NP_663634.2; N-mgqtagdlgwrlsllllplllvqagvwgfprppgrpqlslqelrreftvslhlarkllsevrgqahrfaeshlpgvnlyllplgeqlpdvsltfqawrrlsdperlcfisttlqpfhallgglgtqgrwtnmermqlwamrldlrdlqrhlrfqvlaagfnlpeeeeeeeeeeeeerkgllpgalgsalqgpaqvswpqllstyrllhslelvlsravrellllskaghsvwplgfptlspqp-C). 예시적인 인간 WSX1 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 3에 제공된다(NCBI 참조 서열: NP_004834.1; N-mrggrgapfwlwplpklallpllwvlfqrtrpqgsagplqcygvgplgdlncsweplgdlgapselhlqsqkyrsnktqtvavaagrswvaipreqltmsdkllvwgtkagqplwppvfvnletqmkpnaprlgpdvdfseddpleatvhwapptwpshkvlicqfhyrrcqeaawtllepelktipltpveiqdlelatgykvygrcrmekeedlwgewspilsfqtppsapkdvwvsgnlcgtpggeeplllwkapgpcvqvsykvwfwvggrelspegitcccslipsgaewarvsavnatswepltnlslvcldsasaprsvavssiagstellvtwqpgpgeplehvvdwardgdpleklnwvrlppgnlsallpgnftvgvpyritvtavsasglasassvwgfreelaplvgptlwrlqdappgtpaiawgevprhqlrghlthytlcaqsgtspsvcmnvsgntqsvtlpdlpwgpcelwvtastiagqgppgpilrlhlpdntlrwkvlpgilflwglfllgcglslatsgrcyhlrhkvlprwvwekvpdpansssgqphmeqvpeaqplgdlpileveemepppvmessqpaqatapldsgyekhflptpeelgllgpprpqvla-C). 예시적인 인간 gp130 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 4에 제공된다(NCBI 참조 서열: NP_002175.2; N-mltlqtwlvqalfiflttestgelldpcgyispespvvqlhsnftavcvlkekcmdyfhvnanyivwktnhftipkeqytiinrtassvtftdiaslniqltcniltfgqleqnvygitiisglppekpknlscivnegkkmrcewdggrethletnftlksewathkfadckakrdtptsctvdystvyfvnievwveaenalgkvtsdhinfdpvykvkpnpphnlsvinseelssilkltwtnpsiksviilkyniqyrtkdastwsqippedtastrssftvqdlkpfteyvfrircmkedgkgywsdwseeasgityedrpskapsfwykidpshtqgyrtvqlvwktlppfeangkildyevtltrwkshlqnytvnatkltvnltndrylatltvrnlvgksdaavltipacdfqathpvmdlkafpkdnmlwvewttpresvkkyilewcvlsdkapcitdwqqedgtvhrtylrgnlaeskcylitvtpvyadgpgspesikaylkqappskgptvrtkkvgkneavlewdqlpvdvqngfirnytifyrtiignetavnvdsshteytlssltsdtlymvrmaaytdeggkdgpeftfttpkfaqgeieaivvpvclafllttllgvlfcfnkrdlikkhiwpnvpdpskshiaqwsphtpprhnfnskdqmysdgnftdvsvveieandkkpfpedlksldlfkkekinteghssgiggsscmsssrpsisssdenessqntsstvqystvvhsgyrhqvpsvqvfsrsestqplldseerpedlqlvdhvdggdgilprqqyfkqncsqhesspdishferskqvssvneedfvrlkqqisdhisqscgsgqmkmfqevsaadafgpgtegqverfetvgmeaatdegmpksylpqtvrqggympq-C).
동일한 에피토프에 대한 결합을 위해 경쟁하는 항원-결합 단백질(예를 들어, 면역글로불린, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 맥락에서 사용될 때, 본 명세서에서 사용되는 용어 "경쟁하다"는 검정(예를 들어, 경쟁적 결합 검정; 교차-차단 검정)에 의해 결정되는 바와 같이 항원-결합 단백질 간의 상호작용을 지칭하되, 테스트 항원-결합 단백질(예를 들어, 테스트 항체)은 공통 항원(예를 들어, IL-27 또는 이의 단편)에 대한 참조 항원-결합 단백질(예를 들어, 참조 항체)의 특이적 결합을 저해(예를 들어, 감소 또는 차단)한다.
지정된 폴리펩타이드 또는 단백질로부터 "유래된" 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열은 폴리펩타이드의 기원을 지칭한다. 바람직하게는, 특정 서열로부터 유래되는 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열은 해당 서열 또는 이의 일부와 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖되, 부분은 적어도 10개 내지 20개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 20개 내지 30개의 아미노산, 더 바람직하게는 적어도 30개 내지 50개의 아미노산으로 구성되거나 또는 그렇지 않으면 당업자가 서열에 그 기원을 갖는 것으로 확인할 수 있다. 또 다른 펩타이드로부터 유래되는 폴리펩타이드는 출발 폴리펩타이드에 대해 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어, 또 다른 아미노산 잔기로 치환되거나 또는 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입 또는 결실을 갖는 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다.
폴리펩타이드는 자연 발생적이 아닌 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이러한 변이체는 반드시 분자와 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 갖는다. 소정의 양태에서, 변이체는, 예를 들어, 변이체 분자의 길이에 걸쳐 출발 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 약 75% 내지 100% 미만의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성, 더 바람직하게는 약 80% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 85% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 90% 내지 100% 미만(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) 및 가장 바람직하게는 약 95% 내지 100% 미만의 아미노산 서열을 가질 것이다.
소정의 양태에서, 본 개시내용의 항체는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 본 발명의 뉴클레오타이드 서열은 클로닝, 유전자 요법, 단백질 발현 및 정제, 돌연변이 도입, 이를 필요로 하는 숙주의 DNA 백신 접종, 예를 들어, 수동 면역화를 위한 항체 생성, PCR, 프라이머 및 프로브 생성 등을 포함하는 다수의 적용에 유용할 수 있다.
당업자는 본 명세서에 개시된 방법에 사용하기에 적합한 항체는 천연 서열의 바람직한 활성은 유지하면서 이들이 유래되는 자연 발생적 또는 천연 서열과 서열이 달라지도록 변경될 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, "비-필수" 아미노산 잔기에서 보존적 치환 또는 변화를 야기하는 뉴클레오타이드 또는 아미노산 치환을 생성할 수 있다. 돌연변이는 부위-지정 돌연변이 유발 및 PCR-매개성 돌연변이 유발과 같은 표준 기법에 의해 도입될 수 있다.
본 명세서에 개시된 방법에 사용하기에 적합한 항체는 하나 이상의 아미노산 잔기, 예를 들어, 필수 또는 비-필수 아미노산 잔기에 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 타이로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지된 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)을 포함하여 당업계에서 정의되었다. 따라서, 결합 폴리펩타이드의 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게는 동일한 측쇄 패밀리로부터의 또 다른 아미노산 잔기로 대체된다. 소정의 양태에서, 아미노산의 스트링은 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성이 다른 구조적으로 유사한 스트링으로 대체될 수 있다. 대안적으로, 소정의 양태에서, 돌연변이는 포화 돌연변이 유발에 의해서와 같이 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 생성된 돌연변이체는 본 발명의 결합 폴리펩타이드에 혼입되고 목적하는 표적에 결합하는 능력에 대해 스크리닝될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 항원 "교차-제시"는 APC 상의 MHC 클래스 I 및 클래스 II 분자를 통한 T 세포에 대한 외인성 단백질 항원의 제시를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "교차-반응"은 다양한 종으로부터의 IL-27에 결합하는 본 개시내용의 항체의 능력을 지칭한다. 예를 들어, 인간 IL-27에 결합하는 본 개시내용의 항체는 또한 또 다른 종의 IL-27에 결합할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 교차-반응성은 결합 검정(예를 들어, SPR, ELISA)에서 정제된 항원과의 특이적 반응성을 검출하거나, 또는 IL-27을 생리학적으로 발현하는 세포에 결합시키거나 또는 그렇지 않으면 이와 기능적으로 상호작용시킴으로써 측정된다. 교차-반응성을 결정하는 방법은, 예를 들어, Biacore™ 2000 SPR 기기(비아코어 에이비(Biacore AB), 스웨덴 웁살라 소재) 또는 유세포 분석 기법을 사용하는 Biacore™ 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance: SPR) 분석에 의한 본 명세서에 기재된 바와 같은 표준 결합 검정을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포독성 T 림프구(CTL) 반응"은 세포독성 T 세포에 의해 유도되는 면역 반응을 지칭한다. CTL 반응은 주로 CD8+ T 세포에 의해 매개된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "수지상 세포" 또는 "DC"는 골수(bone marrow: BM)-유래 백혈구인 항원-제시 세포의 유형을 지칭하며, 항원-제시 세포의 가장 강력한 유형이다. DC는 T 세포에 의해 인식되는 주요 조직적합성 복합체(major histocompatibility complex: MHC) 분자 상에 제시되는 펩타이드로 전환하는 포획 및 처리 항원이다. DC는, 예를 들어, 골수구성 및 형질세포양 DC와 같이 이종이며; 모든 DC가 미경험 T 세포에 대한 항원 흡수, 처리 및 제시가 가능하지만, DC 하위유형은 고유한 마커를 가지며, 위치, 이동 경로, 상세한 면역학적 기능 및 생성에 대한 감염 또는 염증성 자극에 대한 의존성이 다르다. 후천성 면역 반응이 발달하는 동안, DC의 표현형 및 기능은 내성, 기억 및 분극화된 T-헬퍼 1(Th1), Th2 및 Th17 분화를 시작하는 역할을 한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "수지상 세포 활성화"는 미성숙 수지상 세포에서 성숙한 수지상 세포로의 전환을 지칭하며; 활성화된 수지상 세포는 전환 과정에서 성숙한 수지상 세포 및 수지상 세포를 포함하되, 공자극성 신호를 유도하는 CD80 및 CD86의 발현은 활성화 자극에 의해 상승된다. 성숙한 인간 수지상 세포는 CD40, CD80, CD86 및 HLA-클래스 II(예를 들어, HLA-DR)의 발현에 대해 양성인 세포이다. 미성숙한 수지상 세포는, 예를 들어, CD80 및 CD86으로 이루어진 군으로부터 선택되는 마커에 기초하여 성숙한 수지상 세포와 구별될 수 있다. 미성숙한 수지상 세포는 이들 마커에 대해 약하게 양성이고 바람직하게는 음성인 반면, 성숙한 수지상 세포는 양성이다. 성숙한 수지상 세포의 판별은 당업자에 의해 일상적으로 수행되며, 위에 기재된 각각의 마커 및 발현을 측정하는 방법도 또한 당업자에게 잘 알려져 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "EC50"은 최대 반응의 50%, 즉, 최대 반응과 기준선 사이의 중간인 시험관내 또는 생체내 검정에서 반응을 유도하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 농도를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "유효 용량" 또는 "유효 투여량"은 목적하는 효과를 달성하거나 또는 적어도 부분적으로 달성하기에 충분한 양으로 정의된다. 용어 "치료학적 유효 용량"은 이미 질환을 앓고 있는 환자에서 질환 및 이의 합병증을 치료하거나 또는 적어도 부분적으로 저지하기에 충분한 양으로 정의된다. 이러한 사용에 효과적인 양은 치료되는 장애의 중증도 및 환자 자신의 면역계의 일반적인 상태에 따라 다를 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "에피토프" 또는 "항원 결정기"는 면역글로불린 또는 항체가 특이적으로 결합하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 용어 "에피토프 매핑"은 표적 단백질 항원에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 부위 또는 에피토프를 확인하는 과정 또는 방법을 지칭한다. 에피토프 매핑 방법 및 기법이 본 명세서에 제공된다. 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 나란히 놓이는 연속 아미노산 또는 비연속 아미노산 둘 다에 의해 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출에서 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매를 이용한 처리로 유실된다. 에피토프는 전형적으로 고유한 공간 형태에 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산을 포함한다. 예를 들어, 면역블로팅 및 면역침강 검정을 포함하는 주어진 항체(즉, 에피토프 매핑)에 의해 결합되는 에피토프를 결정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, IL-27로부터의 중첩 또는 연속 펩타이드는 주어진 항-IL-27 항체와의 반응성에 대해 테스트된다. 에피토프의 공간 형태를 결정하는 방법은 당해 분야의 기법 및 본 명세서에 기재된 바와 같은 것들, 예를 들어, x-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다(예를 들어, 문헌[Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)] 참조).
또한, 본 명세서에 기재된 특정 항체에 의해 인식되는 에피토프의 전부 또는 일부(예를 들어, 동일하거나 또는 중첩되는 영역 또는 사이의 영역 또는 걸쳐있는 영역)를 포함하는 IL-27 상의 에피토프에 결합하는 항체가 본 개시내용에 포함된다.
또한, 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및/또는 본 명세서에 기재된 항체와 인간 IL-27에 대한 결합에 대해 경쟁하는 항체가 본 개시내용에 포함된다. 동일한 에피토프를 인식하거나 또는 결합에 대해 경쟁하는 항체는 일상적인 기법을 사용하여 확인될 수 있다. 이러한 기법은, 예를 들어, 한 항체가 표적 항원에 대한 또 다른 항체의 결합을 차단하는 능력을 보여주는 면역검정, 즉, 경쟁적 결합 검정을 포함한다. 경쟁적 결합은 테스트 중인 면역글로불린이 IL-27과 같은 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 저해하는 검정에서 결정된다. 수많은 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어, 고체상 직접 또는 간접 방사면역검정(radioimmunoassay: RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소 면역검정(enzyme immunoassay: EIA), 샌드위치 경쟁 검정(문헌[Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(문헌[Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)] 참조); 고체상 직접 표지 검정, 고체상 직접 표지 샌드위치 검정(문헌[Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)] 참조); I-125 표지를 사용하는 고체상 직접 표지 RIA(문헌[Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(문헌[Cheung et al., Virology 176:546 (1990)]); 및 직접 표지 RIA(문헌[Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)])가 알려져 있다. 전형적으로, 이러한 검정은 이러한 표지되지 않은 테스트 면역글로불린 및 표지된 참조 면역글로불린 중 하나를 포함하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 포함한다. 경쟁적 저해는 테스트 면역글로불린의 존재하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정된다. 일반적으로, 테스트 면역글로불린은 과량으로 존재한다. 일반적으로, 경쟁 항체가 과량으로 존재할 때, 이는 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 적어도 50% 내지 55%, 55% 내지 60%, 60% 내지 65%, 65% 내지 70%, 70% 내지 75% 이상 저해할 것이다.
다른 기법은, 예를 들어, 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 x-선 분석 및 항원:항체 상호작용의 형태 및 동역학을 연구하는 수소/중수소(H/D) 교환과 결합된 질량 분석법과 같은 에피토프 매핑 방법을 포함한다. 다른 방법은 항원 단편에 대한 항체의 결합 또는 항원 서열 내의 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 손실이 종종 에피토프 성분의 표시로 간주되는 항원의 돌연변이된 변이를 모니터링한다. 또한, 에피토프 매핑을 위한 컴퓨터 조합 방법도 또한 사용될 수 있다. 이러한 방법은 조합 파지 디스플레이 펩타이드 라이브러리로부터 특정한 짧은 펩타이드를 친화성으로 단리하는 관심 항체의 능력에 의존한다. 그런 다음, 펩타이드는 펩타이드 라이브러리를 스크리닝하는데 사용되는 항체에 상응하는 에피토프의 정의를 위한 후보물질(lead)로 간주된다. 에피토프 매핑을 위해, 구조적 불연속 에피토프를 매핑하는 것으로 나타난 컴퓨터 알고리즘도 또한 개발되었다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "Fc-매개성 효과기 기능" 또는 "Fc 효과기 기능"은 항체의 주요 기능 및 목적 이외의 항체의 생물학적 활성을 지칭한다. 예를 들어, 치료적 불가지론(therapeutic agnostic) 항체의 효과기 기능은 표적 단백질 또는 경로의 활성화 이외의 생물학적 활성이다. 항체 효과 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개성 세포독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향조절; Fc 수용체를 발현하는 혈소판의 활성화 부족; 및 B 세포 활성화를 포함한다. 많은 효과기 기능이 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합으로 시작된다. 일부 양태에서, 종양 항원-표적화 항체는 효과기 기능, 예를 들어, ADCC 활성을 갖는다. 일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 종양 항원-표적화 항체는 불변 영역의 비변형된 형태에 비해 증가된 효과기 기능(예를 들어, ADCC를 매개하는 증가된 능력)을 갖는 변이체 불변 영역을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "Fc 수용체"는 항체의 Fc 영역에 의해 결합되는 면역 효과기 세포의 표면에서 발견되는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 양태에서, Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. Fcγ 수용체 3개의 하위클래스, FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FγcRIII(CD16)이 있다. 4가지의 모든 IgG 아이소타입(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)은 Fc 수용체 FcγRI, FcγRIIA 및 FcγRIIIA에 결합하고 이를 활성화한다. FcγRIIB는 저해성 수용체이므로, 이 수용체에 대한 항체 결합은 보체 및 세포 반응을 활성화하지 않는다. FcγRI는 단량체 형태로 IgG에 결합하는 고친화성 수용체인 반면, FcγRIIA 및 FcγRIIA는 다량체 형태로만 IgG에 결합하는 저친화성 수용체이며, 약간 낮은 친화성을 갖는다. Fc 수용체 및/또는 C1q에 대한 항체의 결합은 Fc 영역 내의 특정 잔기 또는 도메인에 의해 좌우된다. 결합은 또한 항체의 힌지 영역 및 CH2 부분 내에 위치한 잔기에 의존한다. 일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 효능 작용 및/또는 치료적 활성은 Fc 수용체(예를 들어, FcγR)에 대한 Fc 영역의 결합에 의존한다. 일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 효능 작용 및/또는 치료적 활성은 Fc 수용체(예를 들어, FcγR)에 대한 Fc 영역의 결합에 의해 향상된다.
본 개시내용에서 사용되는 소정의 Fc 수용체 서열의 목록은 아래 표 13에 제시되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "글리코실화 패턴"은 단백질, 보다 구체적으로 면역글로불린 단백질에 공유적으로 부착된 탄수화물 단위의 패턴으로 정의된다. 당업자가 이종 항체의 글리코실화 패턴이 이식유전자의 CH 유전자가 유래된 종보다 비인간 트랜스제닉 동물의 종의 글리코실화의 상기 패턴과 더 유사한 것으로 인식할 때, 이종 항체의 글리코실화 패턴은 비인간 트랜스제닉 동물의 종에 의해 생성된 항체에서 자연적으로 발생하는 글리코실화 패턴과 실질적으로 유사한 것으로 특징지어질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열의 가변 및 불변 영역(존재하는 경우)을 갖는 항체를 포함한다. 본 개시내용의 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다(예를 들어, 문헌[Lonberg et al., (1994) Nature 368(6474): 856-859); Lonberg, (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg & Huszar, (1995) Intern. Rev. Immunol. 13:65-93, 및 Harding & Lonberg, (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci. 764:536-546] 참조). 그러나, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 또 다른 포유동물 종의 생식세포계열로부터 유래되는 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 이식된 항체(즉, 인간화된 항체)를 포함하지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "이종 항체"는 이러한 항체를 생산하는 트랜스제닉 비-인간 유기체와 관련하여 정의된다. 이 용어는 트랜스제닉 비-인간 동물로 구성되지 않은 유기체에서 발견되는 것과 상응하는 아미노산 서열 또는 암호화 핵산 서열을 갖는 항체를 지칭하며, 일반적으로 트랜스제닉 비-인간 동물 이외의 종으로부터 유래한다.
용어 "면역 반응을 유도하는" 및 "면역 반응을 향상시키는"은 상호교환적으로 사용되며, 특정 항원에 대한 면역 반응(즉, 수동 또는 적응)의 자극을 지칭한다. CDC 또는 ADCC를 유도하는 것과 관련하여 사용되는 용어 "유도하다"는 특정 직접 세포 살해 메커니즘의 자극을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역원성 세포 사멸"(대안적으로 "면역원성 세포자멸사"로도 알려짐)은 종양 세포로부터의 손상된-관련 분자 패턴(damaged-associated molecular pattern: DAMP) 분자(예를 들어, 아데노신 트라이포스페이트, ATP)의 사전-부검(pre-mortem) 발현 및 방출을 유도하여 종양 세포의 면역원성 및 면역원성 방식(예를 들어, 식균작용)의 종양 세포의 사멸을 증가시키는 하나 이상의 신호전달 경로의 활성화와 관련된 세포 사멸 양상을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "면역원성 세포 사멸-유도제"는 면역원성 세포 사멸 과정, 경로 또는 양상을 유도하는 화학적, 생물학적 또는 약리학적 작용제를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "저해하다", "감소시키다" 또는 "차단하다"(예를 들어, 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3의 인간 IL-27-매개성 인산화의 저해 또는 감소를 지칭함)는 상호교환적으로 사용되며, 부분적 및 완전한 저해/차단 둘 다를 포함한다. IL-27의 저해/차단은 저해 또는 차단 없이 발생하는 정상 수준 또는 유형의 활성을 감소시키거나 변경한다. 저해 및 차단은 또한 항-IL-27 항체와 접촉하지 않은 IL-27과 비교하여 항-IL-27 항체와 접촉할 때 IL-27의 결합 친화성에서 임의의 측정 가능한 감소를 포함하는 것으로 의도되며, 예를 들어, 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%까지 IL-27의 결합을 저해한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "혈관신생을 저해하는", "혈관신생을 줄이는", 및 "혈관신생을 감소시키는"은 조직에서의 혈관신생의 수준을 상응하는 대조군 조직에서의 양보다 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이하인 양으로 감소시키는 것을 지칭하며, 가장 바람직하게는 대조군 조직에서 관찰되는 것과 동일한 수준이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "성장을 저해하는"(예를 들어, 세포에 관하여)은 세포의 성장에서의 임의의 측정 가능한 감소, 예를 들어, 세포의 성장의 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% 또는 100%까지의 저해를 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "예방을 필요로 하는", "치료를 필요로 하는" 또는 "이를 필요로 하는" 대상체는 적절한 의료 종사자(예를 들어, 인간의 경우 의사, 간호사 또는 임상 간호사; 비-인간 포유동물의 경우 수의사)의 판단에 따라 주어진 치료(예컨대, 항-IL-27 항체를 포함하는 조성물을 이용한 치료)로부터 합리적으로 혜택을 받을 수 있는 대상체를 지칭한다.
용어 "생체내"는 살아있는 유기체에서 일어나는 과정을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하도록 의도된다(예를 들어, 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 IL-27 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 상이한 종의 다른 IL-27 단백질과 교차-반응성을 가질 수 있다. 그러나, 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 특정 결합 검정에서 인간 IL-27에 대한 특이적 결합을 계속해서 나타낸다. 또한, 단리된 항체는 전형적으로 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없다. 일부 양태에서, 상이한 IL-27 특이성을 갖는 "단리된" 항체의 조합은 잘-정의된 조성물로 조합된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단리된 핵산 분자"는 IL-27에 결합하는 항체 또는 항체 부분(예를 들어, VH, VL, CDR3)을 암호화하는 핵산을 지칭하고, 항체 또는 항체 부분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 IL-27 이외의 항원에 결합하는 항체 또는 항체 부분을 암호화하는 다른 뉴클레오타이드 서열이 없으며 다른 서열이 자연적으로 인간 게놈 DNA의 핵산 옆에 있을 수 있는 핵산 분자를 지칭하도록 의도된다. 예를 들어, 표 12에 제시된 서열로부터 선택되는 서열은 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체 단일클론 항체의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL) 가변 영역을 포함하는 뉴클레오타이드 서열에 상응한다.
본 명세서에서 사용되는 "아이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화되는 항체 클래스(예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG1 아이소타입의 것이다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG2 아이소타입의 것이다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG3 아이소타입의 것이다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG4 아이소타입의 것이다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 항체 아이소타입(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE)의 확인은 당업계에서 일상적이며, 일반적으로 공지된 항체, 공개된 Fc 변이체 서열 및 보존된 서열과의 서열 정렬의 조합을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "아이소타입 전환"은 항체의 클래스 또는 아이소타입이 하나의 Ig 클래스에서 다른 Ig 클래스 중 하나로 변경되는 현상을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "KD" 또는 "KD"는 항체와 항원 사이의 결합 반응의 평형 해리 상수를 지칭한다. KD 값은 항체 오프-레이트 상수(kd) 대 항체 온-레이트 상수(ka)의 비의 수치적 표현이다. KD 값은 항원에 대한 항체의 결합 친화성과 반비례한다. KD 값이 작을수록 항원에 대한 항체의 친화성이 커진다. 친화성은 리간드에 대한 단일 분자의 결합 강도이고, 전형적으로 평형 해리 상수(KD)에 의해 측정되고 보고되며, 이는 이분자 상호작용의 순서 강도를 평가하고 순위를 매기는데 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "kd" 또는 "kd"(대안적으로 "koff" 또는 "koff")는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 오프-레이트 상수를 지칭하도록 의도된다. kd 값은 초당 붕괴 또는 해리되는 복합체의 비율을 수치적 표현이며, sec-1의 단위로 표시된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "ka" 또는 "ka"(대안적으로 "kon" 또는 "kon")는 항체와 항원의 회합에 대한 온-레이트 상수를 지칭하는 것으로 의도된다. ka 값은 항체와 항원의 1 몰(1M) 용액에서 초당 형성되는 항체/항원 복합체의 수의 수치적 표현이며, M-1sec-1의 단위로 표시된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "백혈구"는 감염성 유기체 및 외래 물질에 대해 신체를 방어하는데 관여하는 백혈구의 유형을 지칭한다. 백혈구는 골수에서 생성된다. 5가지 주요 유형의 백혈구가 있으며, 다형핵 백혈구(호중구, 호산구, 호염기구) 및 단핵 백혈구(단핵구 및 림프구)의 2가지 주요 그룹으로 세분화된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "림프구"는 신체의 면역 방어에 관여하는 백혈구 또는 백혈구의 유형을 지칭한다. 2가지 주요 유형의 림프구: B-세포 및 T-세포가 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "연결된", "융합된" 또는 "융합"은 상호교환적으로 사용된다. 이러한 용어는 화학적 접합 또는 재조합 수단을 포함하는 모든 수단에 의해 2개 이상의 요소 또는 성분 또는 도메인을 함께 연결하는 것을 지칭한다. 화학 접합의 방법(예를 들어, 이종이작용성 가교제를 사용)은 당업계에 공지되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 "국부 투여" 또는 "국부 전달"은 혈관계를 통한 의도된 표적 조직 또는 부위로의 조성물 또는 작용제의 수송에 의존하지 않는 전달을 지칭한다. 예를 들어, 조성물은 조성물 또는 작용제의 주사 또는 이식 또는 조성물 또는 작용제를 포함하는 장치의 주사 또는 이식에 의해 전달될 수 있다. 표적 조직 또는 부위의 부근에서 국부 투여 후, 조성물 또는 작용제, 또는 이의 하나 이상의 성분은 의도된 표적 조직 또는 부위로 확산될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "MHC 분자"는 2가지 유형의 분자, MHC 클래스 I 및 MHC 클래스 II를 지칭한다. MHC 클래스 I 분자는 특정 CD8+ T 세포에 항원을 제시하고, 및 MHC 클래스 II 분자는 특정 CD4+ T 세포에 항원을 제시한다. APC에 외인성으로 전달된 항원은 주로 MHC 클래스 II와의 회합을 위해 처리된다. 대조적으로, APC에 내인성으로 전달된 항원은 주로 MHC 클래스 I과의 회합을 위해 처리된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단일클론 항체"는 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체를 지칭한다. 따라서, 용어 "인간 단일클론 항체"는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래되는 가변 및 선택적 불변 영역을 갖는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 지칭한다. 일부 양태에서, 인간 단일클론 항체는 트랜스제닉 비-인간 동물, 예를 들어, 불멸화된 세포에 융합된 인간 중쇄 이식유전자 및 경쇄 이식유전자를 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 마우스로부터 얻어진 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "단핵구"는 백혈구의 유형을 지칭하며, 면역 반응을 수행하기 위해 대식세포 및 수지상 세포로 분화할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "자연 살해(natural killer: NK) 세포"는 세포독성 림프구의 유형을 지칭한다. 이들은 소정의 종양 세포를 죽이고, 바이러스 및 다른 세포내 병원체에 대한 선천성 면역뿐만 아니라 항체-의존적 세포-매개성 세포독성(ADCC)에 중요한 역할을 하는 크고 일반적으로 과립형인 비-T, 비-B 림프구이다.
하나의 대상에 적용되는 바와 같이 본 명세서에서 사용되는 용어 "자연 발생"은 대상이 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 지칭한다. 예를 들어, 자연의 공급원으로부터 단리될 수 있고 실험실에서 인간에 의해 고의적으로 변형되지 않은 유기체(바이러스 포함)에 존재하는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열은 자연 발생이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "비전환된 아이소타입"은 아이소타입 전환이 일어나지 않았을 때 생성되는 중쇄의 동형 클래스를 지칭하고; 비전환된 아이소타입을 암호화하는 CH 유전자는 전형적으로 기능적으로 재배열된 VDJ 유전자의 바로 하류에 있는 첫 번째 CH 유전자이다. 아이소타입 전환은 고전적 또는 비-고전적 아이소타입 전환으로 분류되었다. 고전적 아이소타입 전환은 이식유전자에서 적어도 하나의 전환 서열 영역을 포함하는 재조합 이벤트에 의해 발생한다. 비-고전적 아이소타입 전환은, 예를 들어, 인간 σμ와 인간 ∑μ(δ-관련 결실) 사이의 상동 재조합에 의해 발생할 수 있다. 특히 이식유전자내 및/또는 염색체내 재조합과 같은 대안적 비-고전적 전환 메커니즘이 발생하여 아이소타입 전환을 달성할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "핵산"은 단일-가닥 또는 이중-가닥 형태 중 하나의 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드 및 이들의 중합체를 지칭한다. 구체적으로 제한되지 않는 한, 용어는 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 갖고 자연 발생적 뉴클레오타이드와 유사한 방식으로 대사되는 천연 뉴클레오타이드의 공지된 유사체를 함유하는 핵산을 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체(예를 들어, 축퇴 코돈 치환) 및 상보적 서열뿐만 아니라 명백하게 표시된 서열을 함축적으로 포함한다. 구체적으로, 축퇴 코돈 치환은 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 제3 위치가 혼합-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환된 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다(문헌[Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka et al., Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985; 및 Cassol et al, 1992; Rossolini et al, Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994]). 아르기닌 및 류신의 경우, 제2 염기의 변형도 또한 보존적일 수 있다. 용어 핵산은 유전자, 유전자에 의해 암호화되는 cDNA 및 mRNA와 상호교환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 폴리뉴클레오타이드는 비변형된 RNA 또는 DNA, 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있는 임의의 폴리리보뉴클레오타이드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오타이드로 구성될 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 단일-가닥 및 이중-가닥 DNA, 단일-가닥과 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일-가닥 및 이중-가닥 RNA 및 단일-가닥과 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥 또는 보다 전형적으로, 이중-가닥 또는 단일-가닥과 이중-가닥 영역의 혼합물일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 하이브리드 분자로 구성될 수 있다. 또한, 폴리뉴클레오타이드는 RNA 또는 DNA, 또는 RNA와 DNA 둘 다를 포함하는 삼중-가닥 영역으로 구성될 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 또한 안정성을 위해 또는 다른 이유로 변형된 하나 이상의 변형된 염기, 또는 DNA 또는 RNA 백본을 포함할 수 있다. "변형된" 염기는, 예를 들어, 트라이틸화된 염기 및 이노신과 같은 특이한 염기를 포함한다. 다양한 변형이 DNA 및 RNA에서 만들어질 수 있고; 따라서, "폴리뉴클레오타이드"는 화학적으로, 효소적으로 또는 대사적으로 변형된 형태를 포함한다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓여 있을 때 "작동 가능하게 연결된다". 예를 들어, 프로모터 또는 인핸서가 서열의 전사에 영향을 주는 경우, 이는 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 전사 조절성 서열과 관련하여, 작동 가능하게 연결된 것은 연결되는 DNA 서열이 인접하고, 2개의 단백질 코딩 영역을 연결하는데 필요한 경우 인접하고 리딩 프레임에 있음을 의미한다. 전환 서열의 경우, 작동 가능하게 연결된 것은 서열이 전환 재조합에 영향을 미칠 수 있음을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 "비경구 투여", "비경구로 투여된" 및 다른 문법적으로 동등한 어구는 경장 및 국소 투여 이외의 투여 방식, 일반적으로 주사에 의한 투여 방식을 지칭하며, 제한 없이 정맥내, 비강내, 안내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관경, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외, 대뇌내, 두개내, 경동맥내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "환자"는 예방적 또는 치료적 치료를 받는 인간 및 다른 포유동물 대상체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "PD-1 길항제"는 PD-1 신호전달 경로를 저해하거나 또는 그렇지 않으면 세포(예를 들어, 면역 세포)에서 PD-1 기능을 저해하는 임의의 화학적 화합물 또는 생물학적 분자를 지칭한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1에 대한 PD-L1 및/또는 PD-1에 대한 PD-L2의 결합을 차단한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 특이적으로 결합한다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 맥락에서, 용어 "동일성 백분율"은 아래 기술된 서열 비교 알고리즘(예를 들어, BLASTP 및 BLASTN 또는 당업자가 사용할 수 있는 다른 알고리즘) 중 하나를 사용하거나 또는 육안 검사에 의해 측정된 바와 같이, 최대 관련성을 위해 비교되고 정렬되는 경우, 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 응용에 따라, "동일성 백분율"은 비교되는 서열의 영역, 예를 들어, 기능적 도메인 상에 존재할 수 있거나 또는 대안적으로 비교되는 2개의 서열의 전장에 존재할 수 있다. 서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 테스트 서열이 비교되는 참조 서열로서 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용할 때, 테스트 및 참조 서열은 컴퓨터에 입력되고, 필요한 경우 하위서열 좌표가 지정되며, 서열 알고리즘 프로그램 매개변수가 지정된다. 그런 다음, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 매개변수에 기초하여 참조 서열에 대한 테스트 서열(들)에 대한 서열 동일성 백분율을 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 예를 들어, 문헌[Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)]의 국부 상동성 알고리즘에 의해, 문헌[Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, 문헌[Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)]의 유사성 방법에 대한 조사에 의해, 알고리즘(위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지(Wisconsin Genetics Software Package)(위스콘신주 매디슨 575 사이언스 드라이브 제네틱스 컴퓨터 그룹)에서의 GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFASTA)의 컴퓨터 구현에 의해 또는 육안 검사(일반적으로 문헌[Ausubel et al.] 참조, 아래)에 의해 수행될 수 있다.
서열 동일성 및 서열 유사성 백분율을 결정하기에 적합한 알고리즘의 한 예는 문헌[Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)]에 기술되어 있는 BLAST 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 국립 생명공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information) 웹사이트를 통해 공개적으로 입수 가능하다.
본 명세서에서 일반적으로 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용 가능한"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직, 장기 및/또는 체액과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 지칭하며 이들을 포함한다. 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 염, 예를 들어, 산 부가염 또는 염 부가염을 포함할 수 있다(예를 들어, 문헌[Berge et al. (1977) J Pharm Sci 66:1-19] 참조).
본 명세서에서 사용되는 용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생적 아미노산의 인공 화학적 모방체인 아미노산 중합체뿐만 아니라 자연 발생적 아미노산 중합체 및 비-자연 발생적 아미노산 중합체에 적용된다.
병태와 관련하여 사용될 때, 본 명세서에서 사용되는 용어 "예방하는"은 조성물을 투여받지 않은 대상체에 비해 대상체에서 의학적 병태의 증상의 빈도를 감소시키거나 또는 증상의 발병을 지연시키는 조성물의 투여를 지칭한다.
본 명세서에 기재된 임의의 단백질(항체 또는 단편)에 적용되는 본 명세서에서 사용되는 용어 "정제된" 또는 "단리된"은 자연적으로 생성되는 성분(예를 들어, 단백질 또는 다른 자연 발생적 생물학적 또는 유기 분자), 예를 들어, 단백질을 발현하는 원핵생물에서의 다른 단백질, 지질 및 핵산으로부터 분리 또는 정제되는 폴리펩타이드를 지칭한다. 전형적으로, 폴리펩타이드는 샘플 내 총 단백질의 중량 기준으로 적어도 60%(예를 들어, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97% 또는 99%)를 구성할 때 정제된 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "예정세포사 단백질 1" 또는 "PD-1"은 CD28 패밀리에 속하는 면역-저해성 수용체인 예정세포사 단백질 1 폴리펩타이드를 지칭하며, 인간의 PDCD1 유전자에 의해 암호화된다. PD-1에 대한 대안적인 명칭 또는 동의어는 PDCD1, PD1, CD279 및 SLEB2를 포함한다. PD-1은 생체내에서 이전에 활성화된 T 세포, B 세포 및 골수구성 세포에서 주로 발현되고, 2개의 리간드인 PD-L1 및 PD-L2에 결합한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "PD-1"은 인간 PD-1(hPD-1), hPD-1의 변이체, 아이소형 및 종 상동체, 및 hPD-1과 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다. 완전한 hPD-1 서열은 GenBank 등록 번호 AAC51773에서 찾을 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "예정사 리간드-1" 또는 "PD-L1"은 PD-1에 대한 결합시 T 세포 활성화 및 사이토카인 분비를 하향조절하는 PD-1(다른 하나는 PD-L2임)에 대한 2개의 세포 표면 당단백질 리간드 중 하나이다. PD-L1에 대한 대안적 명칭 및 동의어는 PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 및 B7-H를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "PD-L1"은 인간 PD-L1(hPD-L1), hPD-L1의 변이체, 아이소형 및 종 상동체, 및 hPD-L1과 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다. 완전한 hPD-L1 서열은 GenBank 등록 번호 Q9NZQ7에서 찾을 수 있다.
PD-1은 TCR 신호를 음성으로 조절하는 면역-저해성 단백질로 알려져 있다(문헌[Ishida, Y. et al. (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. et al. (Epub 2006 Dec. 29) Immunol. Immunother. 56(5):739-745]). PD-1과 PD-L1 간의 상호작용은 면역 관문으로 작용할 수 있으며, 이는 T-세포 수용체 매개성 증식을 감소시킬 수 있다(문헌[Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100]). 면역 억제는 PD-L1 또는 PD-L2와 PD-1의 국부 상호작용을 저해함으로써 역전될 수 있고; PD-1과 PD-L2의 상호작용도 차단되면 효과가 상가된다(문헌[Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66]).
몇몇 암의 경우, 종양 생존 및 증식은 종양-매개성 면역 관문 조절에 의해 유지된다. 이러한 조절은 항암 면역계 기능의 붕괴를 초래할 수 있다. 예를 들어, 최근 연구는 종양 세포에 의한 PD-L1 또는 PD-L2와 같은 면역 관문 수용체 리간드의 발현이 특히 T 세포를 억제함으로써 종양 미세환경에서 면역계 활성을 하향조절하고 암 면역 회피를 촉진할 수 있음을 나타내었다. PD-L1은 다양한 인간 암에 의해 풍부하게 발현된다(문헌[Dong et al., (2002) Nat Med 8:787-789]). PD-L1, PD-1에 대한 수용체는 림프구(예를 들어, 활성화된 T 세포)에서 발현되며, 일반적으로 특히 T 세포를 억제함으로써 면역계를 하향조절하고 자기-관용(self-tolerance)을 촉진하는데 관여한다. 그러나, T 세포에서 발현된 PD-1 수용체가 종양 세포의 동족 PD-L1 리간드에 결합하는 경우, 그 결과로 인해 발생한 T 세포 억제는 종양에 대한 손상된 면역 반응(예를 들어, 종양 침윤 림프구의 감소 또는 암 세포에 의한 면역 회피의 확립)에 기여한다.
예를 들어, 난소, 신장, 결장직장, 췌장, 간 암 및 흑색종의 대량의 샘플 세트에서, PD-L1 발현은 후속 치료와 상관없이 불량한 예후예측 및 감소된 전체 생존과 상관관계가 있는 것으로 나타났다(예를 들어, 문헌[Dong et al., (2002) Nat Med 8(8):793-800; Yang et al., (2008) Invest Ophthalmol Vis Sci 49(6):2518-2525; Ghebeh et al., (2006) Neoplasia 8:190-198; Hamanishi et al., (2007) Proc Nat Acad Sci USA 104:3360-3365; Thompson et al., (2006) Clin Genitourin Cancer 5:206-211; Nomi et al., (2005) Clin Cancer Res 11:2947-2953; Inman et al., (2007) Cancer 109:1499-1505; Shimauchi et al., (2007) Int J Cancer 121:2585-2590; Gao et al., (2009) Clin Cancer Res 15:971-979; Nakanishi et al., (2007) Cancer Immunol Immunother 56:1173-1182; Hino et al., (2010) Cancer 116(7):1757-1766] 참조). 유사하게는, 종양 림프구에서 PD-1 발현은 유방암(문헌[Kitano et al., (2017) ESMO Open 2(2):e000150]) 및 흑색종(문헌[Kleffel et al., (2015) Cell 162(6):1242-1256])에서 기능장애 T 세포를 표시하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, PD-1/PD-L1/PD-L2 신호전달 축의 기능에 영향을 미치고/치거나 PD-1과 PD-L1 및/또는 PD-L2 간의 상호작용을 방해하는 것과 같은 PD-1 길항제가 개발되었으며, 이는 면역 세포-종양 세포 상호작용의 조절을 통해 기능하는 신규한 클래스의 항-종양 저해제를 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "재배열된" V 세그먼트가 각각 완전한 VH 또는 VL 도메인을 본질적으로 암호화하는 입체형태에서 D-J 또는 J 세그먼트에 바로 인접하여 위치하는 중쇄 또는 경쇄 면역글로불린 유전자좌의 배열을 지칭한다. 재배열된 면역글로불린 유전자 유전자좌는 생식세포계열 DNA와 비교하여 확인될 수 있고; 재배열된 유전자좌는 적어도 하나의 재조합된 7량체/9량체 상동성 요소를 가질 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "재조합 숙주 세포"(또는 간단히 "숙주 세포")는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 지칭하도록 의도된다. 이러한 용어는 특정 대상체 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 또한 지칭하는 것으로 의도됨을 이해하여야 한다. 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후속 세대에서 소정의 변형이 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 실제로 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만 여전히 본 명세서에서 사용되는 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체, 예컨대, (a) 인간 면역글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉 또는 트랜스염색체성인 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체 또는 이로부터 제조된 하이브리도마, (b) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포, 예를 들어, 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 단리된 항체, (c) 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 및 (d) 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 특정 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열이 생식세포계열 유전자에 의해 암호화되는 가변 및 불변 영역을 포함하지만, 예를 들어, 항체 성숙 동안 발생하는 후속 재배열 및 돌연변이를 포함한다. 당업계에 공지되어 있는 바와 같이(예를 들어, 문헌[Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9):1117-1125] 참조), 가변 영역은 외래 항원에 특이적인 항체를 형성하도록 재배열하는 다양한 유전자에 의해 암호화되는 항원 결합 도메인을 포함한다. 재배열 이외에, 가변 영역은 외래 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 다중 단일 아미노산 변화(체세포 돌연변이 또는 초돌연변이로 지칭됨)에 의해 추가로 변형될 수 있다. 불변 영역은 항원에 대한 추가 반응(즉, 아이소타입 전환)으로 변경될 것이다. 따라서, 항원에 반응하여 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩타이드를 암호화하는 재배열되고 체세포 돌연변이된 핵산 분자는 원래의 핵산 분자와 서열 동일성을 갖지 않을 수 있지만, 대신에 실질적으로 동일 또는 유사할 것이다(즉, 적어도 80%의 동일성을 가짐).
본 명세서에서 사용되는 용어 "참조 항체"("참조 mAb"와 상호교환적으로 사용됨) 또는 "참조 항원-결합 단백질"은 IL-27의 특정 에피토프에 결합하며 그 자체와 하나 이상의 별개의 항체 사이의 관계를 확립하는데 사용되는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하되, 관계는 IL-27 상의 동일한 에피토프에 대한 참조 항체 및 하나 이상의 별개의 항체의 결합이다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 경쟁자로서 본 명세서에 기재된 것과 같은 테스트 또는 검정(예를 들어, 경쟁적 결합 검정)에 유용한 항-IL-27 항체를 의미하되, 검정은 동일한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 별개의 항체의 발견, 확인 또는 개발에 유용하다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "특이적 결합", "선택적 결합", "선택적으로 결합하다" 및 "특이적으로 결합하다"는 미리 결정된 항원 상의 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다. 전형적으로, 항체는 피분석물로서 재조합 인간 IL-27 및 리간드로서 항체를 사용하는 BIACORE 2000 기기에서 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정되는 바와 같이, 대략 10-6 M 미만, 예컨대, 대략 10-7, 10-8 M, 10-9 M 또는 10-10 M 미만 또는 심지어 그보다 낮은 평형 해리 상수(KD)로 결합하고, 미리 결정된 항원 또는 밀접하게-관련된 항원 이외의 비-특이적 항원(예를 들어, BSA, 카제인)에 대한 결합에 대한 친화성보다 적어도 2-배 더 큰 친화성으로 미리 결정된 항원에 결합한다. 소정의 양태에서, 미리 결정된 항원에 대한 결합이 미리 결정된 항원 또는 밀접하게-관련된 항원 이외의 비-특이적 항원(예를 들어, BSA, 카제인)에 대한 결합에 대한 항체의 친화성보다 적어도 2-배 더 큰 친화성으로 발생하는 경우 IL-27에 특이적으로 결합하는 항체는 피분석물로서 재조합 인간 IL-27 및 리간드로서 항체를 사용하는 BIACORE 2000 기기에서 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정될 때, 대략 100nM(10-7 M) 미만, 선택적으로 대략 50nM(5×10-8 M) 미만, 선택적으로 대략 15nM(1.5×10-8 M) 미만, 선택적으로 대략 10nM(10-8 M) 미만, 선택적으로 대략 5nM(5×10-9 M) 미만, 선택적으로 대략 1nM(10-9 M) 미만, 선택적으로 대략 0.1nM(10-10 M) 미만, 선택적으로 대략 0.01nM(10-11 M) 미만 또는 심지어 그보다 낮은 평형 해리 상수(KD)로 결합한다. 어구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 본 명세서에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 상호교환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "STAT1 인산화"는 인간의 STAT1 유전자에 의해 암호화되는 전사 인자인, 전사 1의 신호 변환기 및 활성제(Signal Transducer and Activator of Transcription 1: STAT1) 폴리펩타이드의 인산화를 지칭한다. STAT 분자는 전사 인자로 작용하기 위해 핵으로 전위되는 동종- 또는 이종이량체를 형성함으로써 활성화 및 이량체화를 초래하는 수용체 관련 카이네이스에 의해 인산화된다. STAT1은 IL-27을 포함한 몇몇 리간드를 통한 신호전달에 반응하여 활성화(즉, 인산화)될 수 있다. IL-27R을 통한 IL-27 신호전달은 STAT1(pSTAT1)의 인산화를 초래한다. STAT1은 세포의 생존, 생존 능력 또는 병원체 반응과 관련된 유전자 발현에 핵심적인 역할을 한다. IL-27 신호전달의 결과로서 STAT1 인산화를 결정하는 방법은 인산화된 STAT1을 특이적으로 인식하는 항체로 표지된 세포의 유세포 분석을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다(예를 들어, 문헌[Tochizawa et al., (2006) J Immunol Methods 313(1-2):29-37] 참조).
본 명세서에서 사용되는 용어 "STAT3 인산화"는 인간의 STAT3 유전자에 의해 암호화되는 전사 인자인, 전사 3의 신호 변환기 및 활성제(Signal Transducer and Activator of Transcription 3: STAT3) 폴리펩타이드의 인산화를 지칭한다. STAT3은 세포 자극에 반응하여 다양한 유전자의 발현을 매개하므로, 세포 성장 및 세포자멸사와 같은 많은 세포 과정에서 핵심적인 역할을 한다. IL-27 신호전달의 결과로서 STAT3 인산화를 결정하는 방법은 인산화된 STAT3을 특이적으로 인식하는 항체로 표지된 세포 또는 세포 추출물의 분석을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다(예를 들어, 문헌[Fursov et al., (2011) Assay Drug Dev Technol 9(4):420-429] 참조).
본 명세서에서 사용되는 용어 "전환 서열"은 전환 재조합을 담당하는 DNA 서열을 지칭한다. 전형적으로 μ 전환 영역인 "전환 공여체" 서열은 전환 재조합 중에 결실되는 구성 영역의 5'(즉, 상류)일 것이다. "전환 수여체" 영역은 결실될 구성 영역과 대체 불변 영역(예를 들어, γ, ε 등)의 사이에 있을 것이다. 재조합이 항상 발생하는 특정 부위가 없기 때문에, 최종 유전자 서열은 전형적으로 구성에서 예측할 수 없을 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 방법 및 조성물은 면역 장애가 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물, 예컨대, 비-인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
핵산의 경우, 용어 "실질적인 상동성"은 최적으로 정렬되고 비교될 때, 적절한 뉴클레오타이드 삽입 또는 결실이 있는 2개의 핵산 또는 이의 지정된 서열이 뉴클레오타이드의 적어도 약 80%, 일반적으로 뉴클레오타이드의 적어도 약 90% 내지 95%, 보다 바람직하게는 적어도 약 98% 내지 99.5%에서 동일함을 나타낸다. 대안적으로, 세그먼트가 선택적 혼성화 조건하에 가닥의 상보체에 혼성화될 때 실질적인 상동성이 존재한다.
2개의 서열 사이의 동일성 백분율은 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하여 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 상동성% = 동일한 위치의 수/위치의 총 수×100). 서열의 비교 및 2개의 서열 사이의 동일성 백분율의 결정은 아래의 비제한적인 예에 기재되어 있는 바와 같은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
2개의 뉴클레오타이드 서열 사이의 동일성 백분율은 NWSgapdna.CMP 행렬 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 입수 가능함)의 GAP 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다. 2개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이의 동일성 백분율은 또한 PAM120 가중치 잔기 표(weight residue table), 12의 갭 길이 패널티 및 4의 갭 패널티를 사용하여 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합되어 있는 E. Meyers 및 W. Miller(문헌[CABIOS, 4:11-17(1989)])의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 2개의 아미노산 서열 사이의 동일성 백분율은 Blossum 62 행렬 또는 PAM250 행렬, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 입수 가능함)의 GAP 프로그램에 통합되어 있는 Needleman 및 Wunsch(문헌[J. Mol. Biol. (48):444-453(1970)]) 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
본 개시내용의 핵산 및 단백질 서열은, 예를 들어, 관련 서열을 확인하기 위해 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행하기 위해 "질의 서열"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌[Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 뉴클레오타이드 검색은 본 발명의 핵산 분자와 상동인 뉴클레오타이드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램, 점수 = 100, 단어 길이 = 12로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 본 발명의 단백질 분자와 상동인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, 점수 = 50, 단어 길이 = 3으로 수행될 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 얻기 위해, 문헌[Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402]에 기술되어 있는 바와 같이 갭 BLAST가 이용될 수 있다. BLAST 및 갭 BLAST 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 매개변수가 사용될 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov 참조.
핵산은 전체 세포, 세포 용해물, 또는 부분적으로 정제된 또는 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 알칼리/SDS 치료, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 기타 당업계에 잘 알려진 것을 비롯한 표준 기법에 의해 다른 세포 성분 또는 기타 오염 물질, 예를 들어, 다른 세포 핵산 또는 단백질로부터 정제될 때 "단리"되거나 또는 "실질적으로 순수하게 된다". 문헌[F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)] 참조.
본 개시내용의 핵산 조성물은 종종 천연 서열(변형된 제한 부위 등은 제외)에 있지만, cDNA, 게놈 또는 이들의 혼합물로부터 유전자 서열을 제공하기 위한 표준 기법에 따라 돌연변이될 수 있다. 코딩 서열의 경우, 이러한 돌연변이는 목적하는 바와 같이 아미노산 서열에 영향을 미칠 수 있다. 특히, 천연 V, D, J, 불변, 스위치 및 본 명세서에 기재된 기타 이러한 서열과 실질적으로 상동이거나 또는 이로부터 유래되는 DNA 서열이 상정된다(여기서 "유래되는"은 서열이 동일하거나 또는 또 다른 서열로부터 변형됨을 나타냄).
본 명세서에서 사용되는 용어 "STING"(대안적으로 TMEM173)은 직접적인 세포질 DNA 센서 및 어댑터 단백질 모두로서 기능하는 단백질인 인터페론 유전자의 자극제를 지칭한다. 인간에서, STING은 TMEM173 유전자에 의해 암호화된다. STING은 선천성 면역에서 중요한 역할을 한다. STING은 세포가 바이러스, 마이코박테리아 및 세포내 기생충과 같은 세포내 병원체에 감염될 때 유형 I 인터페론 생성을 유도한다. STING에 의해 매개되는 유형 I 인터페론은 이를 분비하는 동일한 세포와 주변 세포에 결합하여 감염된 세포 및 주변 세포를 국부 감염으로부터 보호한다. STING에 대한 예시적인 아미노산 서열은 등록 번호 NP_001288667로 NCBI Genbank 데이터베이스에 의해 제공된다.
용어 "T 세포"는 세포 표면 상의 T 세포 수용체의 존재에 의해 다른 백혈구와 구별될 수 있는 백혈구의 유형을 지칭한다. TH1, TH2, TH3, TH17, TH9 및 TFH 세포를 포함하는 T 헬퍼 세포(TH 세포 또는 CD4+ T 세포로도 알려짐) 및 하위유형, 세포독성 T 세포(TC 세포, CD8+ T 세포, 세포독성 T 림프구, T-살해 세포, 살해 T 세포로도 알려짐), 중심 기억 T 세포(TCM 세포), 효과기 기억 T 세포(TEM 및 TEMRA 세포) 및 상주 기억 T 세포(TRM 세포)를 포함하는 기억 T 세포 및 하위유형, CD4+ FOXP3+ Treg 세포, CD4+FOXP3- Treg 세포, Tr1 세포, Th3 세포 및 Treg17 세포를 포함하는 조절성 T 세포(Treg 세포 또는 억제 T 세포로도 알려짐) 및 하위유형, 자연 살해 T 세포(NKT 세포로도 알려짐), 점막 관련 불변 T 세포(MAIT) 및 Vγ9/Vδ2 T 세포를 포함하는 감마 델타 T 세포(γδ T 세포)를 을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 T 세포의 여러 서브세트가 있다. 전술한 또는 언급되지 않은 T 세포 중 임의의 하나 이상은 본 발명의 사용 방법을 위한 표적 세포 유형일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "T 세포-매개성 반응"은 효과기 T 세포(예를 들어, CD8+ 세포) 및 헬퍼 T 세포(예를 들어, CD4+ 세포)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 T 세포에 의해 매개되는 임의의 반응을 지칭한다. T 세포 매개성 반응은, 예를 들어, T 세포 세포독성 및 증식을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치료학적 유효량", 또는 "치료학적 유효 용량" 또는 본 명세서에서 사용되는 유사한 용어는 목적하는 생물학적 또는 의학적 반응(예를 들어, 암의 하나 이상의 증상의 개선)을 유도할 작용제(예를 들어, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 양을 의미하도록 의도된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "TAM 수용체"는 TAM 수용체 단백질 타이로신 카이네이스(TYRO3, AXL 및 MER)를 지칭한다. TAM 수용체는 면역계 항상성의 조절에 관여한다. 암 환경에서, TAM 수용체는 종양 발달의 시작 및 진행을 제어하는 동시에 다양한 면역 세포의 관련 항-종양 반응을 제어하는 이중 조절 역할을 한다. TAM 수용체에 대한 추가 설명은 문헌[Paolino and Penninger (2016) Cancers 8(97): doi:10.3390/cancers8100097]에서 찾을 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "TAM 수용체 저해제" 또는 "TAM 저해제"는 TAM 수용체의 기능 또는 활성을 저해, 차단 또는 감소시키는 작용제를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "TIGIT" 또는 "Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체"는 달리 표시되지 않는 한 영장류(예를 들어, 인간) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)와 같은 포유동물을 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 TIGIT를 지칭한다. TIGIT는 또한 당업계에서 DKFZp667A205, FLJ39873, V-set 및 면역글로불린 도메인-함유 단백질 9, V-set 및 막관통 도메인-함유 단백질 3, VSIG9, VSTM3 및 WUCAM으로도 알려져 있다. 용어는 또한 TIGIT의 자연 발생적 변이체, 예를 들어, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체를 포함한다. 예시적인 인간 TIGIT의 아미노산 서열은 UniProt 등록 번호 Q495A1에서 찾을 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 본 명세서에 기재된 치료적 또는 예방적 처치를 지칭한다. "치료" 방법은 장애 또는 재발성 장애의 하나 이상의 증상을 예방, 치료, 지연, 이의 중증도를 감소시키거나 또는 개선하기 위해, 또는 이러한 치료가 없을 때 예상되는 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시키기 위해, 본 개시내용의 인간 항체를 이러한 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어, 특정 항원에 대한 향상된 면역 반응을 필요로 하는 대상체 또는 궁극적으로 이러한 장애를 얻을 수 있는 대상체에게 투여하는 것을 이용한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "종양 미세환경"(대안적으로 "암 미세환경"; 약어로 TME)은 주변 혈관뿐만 아니라 면역 세포, 섬유아세포, 골수-유래 염증성 세포 및 림프구를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 비-암성 세포를 포함하여 종양 또는 신생물이 존재하는 세포 환경 또는 환경을 지칭한다. 신호전달 분자 및 세포외 매트릭스도 또한 TME를 포함한다. 종양과 주변 미세환경은 밀접하게 관련되어 있으며 끊임없이 상호작용한다. 종양은 세포외 신호를 방출하고, 종양 혈관신생을 촉진하며, 말초 면역 관용을 유도함으로써 미세환경에 영향을 미칠 수 있는 반면, 미세환경에서 면역 세포는 종양 세포의 성장 및 진화에 영향을 미칠 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "재배열되지 않은" 또는 "생식세포계열 배열"은 V 세그먼트가 D 또는 J 세그먼트에 바로 인접하도록 재조합되지 않은 배열을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "벡터"는 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하도록 의도된다. 벡터의 한 유형은 추가적인 DNA 세그먼트가 연결될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 지칭하는 "플라스미드"이다. 벡터의 또 다른 유형은 추가적인 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈에 연결될 수 있는 바이러스 벡터이다. 소정의 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자체 복제할 수 있다(예를 들어, 세균 복제 기점을 갖는 세균 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포로 도입시 숙주 세포의 게놈에 통합되어 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 더욱이, 소정의 벡터는 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간단히 "발현 벡터")로 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 플라스미드가 가장 일반적으로 사용되는 벡터의 형태이므로 상호교환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 동등한 기능을 하는 바이러스 벡터(예를 들어, 복제 결함성 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)와 같은 이러한 다른 형태의 발현 벡터를 포함하도록 의도된다.
달리 정의되지 않으면, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술 분야에서 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 또한 현재 개시된 방법 및 조성물의 실시 또는 테스트에 사용될 수 있지만, 바람직한 방법 및 물질이 아래에 기재되어 있다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고 문헌은 그 전문이 참조에 의해 원용된다.
도 1은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 결합할 수 있는 항-IL-27 항체에 대한 친화성 데이터를 제공하는 표이다. 친화성 측정은 포르테바이오 및 중규모 디스커버리 방법을 사용하여 수행되었다.
도 2a는 유세포 분석에 의해 측정된, 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 의한 인간 PBMC에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 2b는 유세포 분석에 의해 측정된, 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 의한 U937 세포에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 2c는 유세포 분석에 의해 측정된, 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 의한 HUT-78 세포에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화의 저해를 도시하는 그래프이다.
도 3은 본 개시내용의 항-IL-27 항체("항-IL-27 Ab1")가 인간 전혈 T 세포에서 IL-27-매개성 pSTAT1을 저해함을 보여주는 그래프이다.
도 4는 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체의 농도 범위에 의한 T 세포에서 IL-27-매개성 CD161 발현의 저해의 역전을 도시하는 그래프이다. CD161 발현은 유세포 분석을 사용하여 결정되었다.
도 5a는 ELISA에 의해 측정된 인간 PBMC에서 TNFα의 PD-1-매개성 분비를 향상시키는 항-IL-27 항체의 정도를 도시하는 그래프이다. 도 5b는 ELISA에 의해 측정된 인간 PBMC에서 IL-6의 PD-1-매개성 분비를 향상시키는 항-IL-27 항체의 정도를 도시하는 그래프이다. 도 5c 내지 도 5d는 IL-27이 PD-1 차단 후 사이토카인 생성(IL-17A, 도 5c; 및 IFNγ, 도 5d)을 저해하고, 항-IL-27 Ab1과 조합하여 회복됨을 보여준다(약어: Ctrl = 대조군, ns = 유의하지 않음, PBMC = 말초 혈액 단핵 세포, rhIL-27 = 재조합 인간 IL-27). 도 5e 내지 도 5h는 이러한 세포가 항-IL-27 Ab1 항체, αPD-1 항체 또는 항-IL-27 Ab1과 αPD-1 항체의 조합과 접촉하는 경우, 건강한 대조군 및 RCC, HCC 및 난소암 환자를 포함한 여러 개별 공여체로부터의 활성화된 PBMC 배양물에서 TNFα(도 5e), IFNγ(도 5f), IL-6(도 5g) 및 IL-17A(도 5h)의 관찰된 사이토카인 유도를 요약한다.
도 6a는 유세포 분석에 의해 결정되는 바와 같이 항-IL-27 항체로의 인간 단핵구의 처리에 의한 PD-L1의 IL-27-매개성 발현의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 6b는 유세포 분석에 의해 결정되는 바와 같이 항-IL-27 항체로의 인간 단핵구의 처리에 의한 TIM3의 IL-27-매개성 발현의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 6c는 유세포 분석에 의해 결정되는 바와 같이 항-IL-27 항체로의 휴지기 인간 T 세포의 처리에 의한 PD-L1의 IL-27-매개성 발현의 저해를 도시하는 그래프이다.
도 7a는 마우스로부터 단리된 폐의 결절의 시각적 계수에 의해 결정되는 바와 같이 표시된 바와 같은 항-IL27 항체(항-IL-27 Ab1), 아이소타입 대조군 항체, αWSX-1 항체 또는 조합된 αPD-1과 αCTLA-4 항체로 처리된 B16F10 종양-보유 마우스로부터의 표면 폐 B16F10 전이성 결절(폐 결절)의 수를 도시하는 점 도표이다. 도 7b는 생물발광 이미징 분석에 의해 결정되는 바와 같이 항-IL-27 항체(항-IL-27 Ab1) 또는 아이소타입 대조군 항체로 처리된 마우스에서 생물발광 B16-Luc 종양의 성장 동역학을 도시하는 그래프를 제공한다. 도 7c 내지 도 7f는 나타낸 바와 같은 항-IL27 항체(항-IL-27 Ab1)(도 7d), 아이소타입 대조군 항체(도 7c), αWSX-1 항체(도 7e) 또는 조합된 αPD-1과 αCTLA-4 항체(도 7f)로 처리된 B16F10 종양-보유 마우스로부터 단리된 헤마톡실린 및 에오신으로 염색된 고정되고, 절단된 폐 조직의 일련의 이미지를 보여준다. 도 7g는 이미지 분석 소프트웨어에 의해 결정되는 바와 같이 나타낸 바와 같은 항-IL27 항체(항-IL-27 Ab1), 아이소타입 대조군 항체, αWSX-1 항체 또는 조합된 αPD-1과 αCTLA-4 항체로 처리된 B16F10 종양-보유 마우스로부터 단리된 헤마톡실린 및 에오신으로 염색된 고정되고 절단된 폐 조직 B16F10 종양 조직의 전체 조직 면적의 백분율로서 전체 종양 면적을 도시하는 점 도표이다. IL-27RA(WSX-1) 매개성 항체 차단과 및 항-PD-1 + 항-CTLA-4 병용 요법에서 표면 폐 전이 수 및 총 종양 면적의 유사한 감소가 관찰되었다.
도 8a는 IL-27 미니서클로 처리한 후 IL-27을 과발현하는 마우스로부터 단리된 비장세포에서 발현 변화가 1.0 초과의 log2 배수 변화(검은색 점)를 나타내는 유전자의 마이크로어레이 데이터를 도시하는 볼케이노 플롯을 제공한다. x축은 유전자 발현(IL-27 미니서클 처리 대 대조군)의 log2 배수 변화를 보여준다. y축은 각 유전자에 대한 배수 변화의 확률을 나타내는 t 검정 p 값이다. 도 8b는 도 8a에서와 같이 비장세포에서 표시된 바와 같은 선택된 면역조절 유전자의 발현 수준을 도시하는 그래프를 제공한다. 도 8c 내지 도 8f는 인간 IL-27의 이소성 발현(ectopic expression)(유세포 분석에 의해)이 생체내에서 뮤린 T 세포에서 저해성 수용체 발현을 유도하고, 항-IL-27 Ab1이 IL-27 미니서클 처리 후 생체내에서 T 세포에서 저해성 수용체 발현을 감소시킴을 보여준다. 6주령 암컷 Balb/c 마우스에 빈 벡터(대조군) 또는 hIL-27 미니서클(도 8c 및 도 8d)이 주사되었다. PBMC 및 (도 8e 및 도 8f) 총 비장세포는 형질감염 5일 후에 수집되고, 세포가 염색되고, 유세포 분석에 의해 분석되었다. 표시된 마커의 발현은 CD4+ T 세포(도 8c 및 도 8e) 및 CD8+ T 세포(도 8d 및 도 8f)에서 분석되었다. 분석은 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 수행되었다. 도 8g는 항-IL-27 Ab1이 뮤린 혈장에서 미니서클-유래 인간 IL-27의 검출을 저해함을 보여준다.
도 9는 분자 대체 소프트웨어 Phaser(문헌[McCoy et al., (2007) J. Appl. Cyrst. 40: 658-74]) 및 Molrep(문헌[Vagin et al., (1997) J. Appl. Cyrst. 30: 1022-25])를 사용하여 결정된 IL-27 - 항-IL-27 Ab1 복합체의 결정 리본 구조이다. 중쇄, 경쇄, p28 및 EBI-3은 각각 노란색, 빨간색, 회색 및 녹색으로 표시된다. 도 9는 항-IL-27 Ab1이 IL-27의 p28 분자에 결합됨을 보여준다.
도 10a 내지 도 10b는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 항-IL-27 Ab1의 존재(진한 회색 선) 또는 부재(밝은 회색 선)하에 WSX-1(도 10a) 및 gp130(도 10b)에 대한 인간 IL-27 이종이량체 결합 친화성을 보여주는 그래프이다.
도 11은 항-IL-27 Ab1이 p28에 결합하는 잔기를 보여주는 p28의 리본 다이어그램이다. LC = 항-IL-27 Ab1의 경쇄; HC = 항-IL-27 Ab1의 중쇄
도 12는 IL-27/항-IL-27 Ab1 Fab와 IL-23/IL-23R(PDB ID: 5MZV)의 구조적 정렬의 리본 다이어그램이다. p28과 p19를 사용한 복합체의 중첩은 3차원 공간에 정렬되었다.
도 13은 IL-27/항-IL-27 Ab1 Fab와 IL-6/IL-6Ra/gp130의 구조적 정렬의 리본 다이어그램이다. p28과 IL-6을 사용한 복합체의 중첩은 3차원 공간에 정렬되었다.
도 14a 내지 도 14b는 p28과 EBI3의 결합 인터페이스의 리본 다이어그램이며, 도 14b는 p28과 EBI3 사이의 염 브리지 상호작용 및 방향족/소수성 상호작용의 위치를 예시하기 위한 도 14a의 확대도를 보여준다.
도 15a 내지 도 15b는 여러 동물 종에 걸친 p28(도 15a) 및 EBI3(도 15b)의 서열 정렬의 이미지이다. 화살표는 표시된 바와 같이 보존된 염 브리지 아미노산 및 보존된 소수성 아미노산을 가리킨다.
도 16a는 IL-27 이종이량체와 IL-6/IL-6Ra의 구조적 정렬을 예시하는 리본 다이어그램이다. 도 16b 내지 도 16c는 IL-27과 IL-6/IL-6Ra의 서열 정렬이다. 화살표는 보존된 염 브리지 아미노산 및 보존된 소수성 아미노산을 가리킨다. 도 16d는 IL-6Ra로 보존된 EBI3과의 여러 p28 상호작용을 예시하는 리본 다이어그램이다.
도 17은 인간 IL-27 및 gp130, WSX-1 및 항-p28 항체에 대한 결합 친화성 데이터를 제공하는 표이다.
도 18a는 마우스와 인간 p28 아미노산 서열의 서열 정렬이다. 도 18b는 162번 잔기(인간 서열에서는 Leu, 마우스 서열에서는 Cys)에 초점을 맞춘 리본 다이어그램이다.
도 19a는 인간 IL-27의 정전기적 표면 전위를 보여준다. 도 19b는 αA, αB, αC, αD 나선 및 폴리-Glu 서열을 갖는 풀리지 않는 CD 루프를 보여주는 인간 IL-27의 일차 서열을 보여준다.
도 20a는 RCC 종양(1) 및 정상 신장 조직(2)에서 EBI3, IL-27p28 및 IL-27RA의 차등 발현을 예시하는 그래프 표현이다. 도 20b 내지 도 20d는 EBI3(도 20b), IL-27p28(도 20c) 및 IL-27RA(도 20d)의 고발현(1) 또는 저발현(2)에 의해 계층화된 RCC 환자에 대한 카플란-마이어 곡선(일수에서 무사망 생존율의 백분율)이다. 데이터는 이전에 기재된 바와 같이 TCGA를 사용하여 생성되었다(예를 들어, 문헌[Li et al., Cancer Research. 2017;77(21):e108-e110; Li et al., Genome Biology 2016;17(1):174] 참조).
도 21a 내지 도 21b는 활성화된 인간 CD4+ T 세포에서 IL-27 유도성 유전자 발현 시그니처를 보여준다. 도 21a는 2개의 개별 공여체에 대한 비처리 대조군과 비교한 IL-27-처리된 CD4+ T 세포의 배수 변화 산점도이다. 도 21b는 CD4+ T 세포에서 IL-27 시그니처의 상위 31개의 유전자를 보여준다. 31개의 유전자 중 15개(별표로 표시됨)가 불량한 결과와 관련이 있었다. 데이터는 TCGA를 사용하여 생성되었다.
도 22a 내지 도 22b는 RCC(도 22a) 및 BRCA(도 22b) 종양 샘플에서 IL-27 시그니처 유전자의 발현과 관련된 전체 게놈 위험 비의 그래프 표현이다. 데이터는 TCGA를 사용하여 생성되었다.
도 23a는 EBI3-특이적 항체 쌍을 사용하여 측정된 건강한 공여체 혈청 및 임신한 여성(양성 대조군)으로부터의 혈청과 비교한 RCC 환자에서의 EBI3 혈장 수준의 그래프 표현이다. 도 23b는 종양 병기별로 분류된 RCC 환자의 별도의 코호트에서 EBI3 수준을 보여준다. 도 23c는 전체 생존을 보여주고, 도 23d는 혈청 EBI3 수준에 의해 계층화된 RCC 환자의 무질환 생존율을 보여준다.
도 24a 내지 도 24b는 동소형(orthotopic) Renca 모델에서 종양 성장 및 폐 전이에 대한 항-IL-27 Ab1의 효과의 그래프 표현이다. 도 24a 및 도 24b는 대조군 및 항-IL-27 Ab1-처리된 Renca 마우스에서 순 원발성 종양 무게(신장) 및 폐 전이의 수를 보여준다. (*P < 0.05; 독립표본 t-검정)
도 25a 내지 도 25b는 동소형 Hepa1-6-luc 종양 모델(도 25a)에서 아이소타입 대조군(도 25b)과 비교하여 평균 동소형 Hepa1-6 종양 플럭스에 대한 단일 작용제로서 항-IL-27 Ab1의 효과를 보여준다. 오차 막대는 표준 오차를 나타낸다.
도 26a 내지 도 26f는 항-IL-27 Ab1의 연속 투여 후 동소형 Hepa1-6 종양 성장의 용량-의존적 저해를 보여준다(도 26a). 도 26b는 대조군 및 항-IL-27 Ab1(5 ㎎/㎏, 25 ㎎/㎏ 및 50 ㎎/㎏) 투여에 대한 이식 후 제5일, 제8일, 제13일 및 제16일에 평균 생물발광 이미징("BLI", 광자(photon)/초)을 보여준다. 도 26c 내지 도 26f는 대조군(도 26c) 및 항-IL-27 Ab1 5 ㎎/㎏(도 26d), 25 ㎎/㎏(도 26e) 및 50 ㎎/㎏ 그룹(도 26f)의 개별 동물에 대한 이식 후 제5일, 제8일, 제13일 및 제16일에 BLI(광자/초)를 보여준다.
도 27a 내지 도 27c는 항-IL-27 Ab1의 투여 후 Hepa1-6 간에서 유전자 발현의 조절을 보여준다(도 27a 및 도 27b). 도 27c는 항-IL-27 Ab1 투여에 의해 조절된 유전자의 볼케이노 플롯이다. 아래 표 11A 내지 표 11B는 도 27b에 나타낸 상향조절 및 하향조절된 유전자의 목록을 제공한다.
도 28a 내지 도 28e는 항-IL-27 Ab1 투여 후 다양한 IL-27 성분 유전자(도 28a); CD274, TIGIT, LAG3, HAVCR2 및 PDCD1(도 28b); TGFA 및 TGFB1(도 28c); AFP(도 28d); 및 TNFRSF10B, TNFRSF1A 및 PDGFA(도 28e)의 발현을 예시하는 그래프 표현이다.
도 29a 내지 도 29b는 항-IL-27 Ab1 투여 후 종양 미세환경(TME)에서 다양한 대식세포 및 NK 전사체 마커 유전자의 상대적 발현의 그래프 표현이다.
도 30은 항-IL-27 Ab1 또는 아이소타입 대조군의 투여 후 NK-관련 수용체의 발현의 그래프 표현이다.
도 31은 IgG 아이소타입 대조군과 비교하여 항-IL-27 Ab1의 투여 후 다양한 세포 표면 마커의 상대적 발현을 보여준다. 비는 표적 마커 전사체 수준을 PTPRC 수준으로 정규화하여 얻어졌다. 방향성은 항-IL-27 Ab1 비와 IgG 비 사이의 차이로 표현된다.
도 32a 내지 도 32d는 IL-27(100 ng/㎖)의 존재 또는 부재하에 3일 동안 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 자극시킨 배양된 PBMC에서 IL17A(도 32a), IFNg(IFNγ)(도 32b), TNFa(TNFα)(도 32c) 및 IL-10(도 32d)의 발현을 보여주는 막대 그래프이다.
도 33a 내지 도 33d는 항-IL-27 Ab1(1 ㎍/㎖)의 존재 또는 부재하에 4일 동안 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 자극시킨 배양된 PBMC에서 IL17A(도 33a), IFNg(IFNγ)(도 33b), TNFa(TNFα)(도 33c) 및 IL-10(도 33d)의 발현을 보여주는 산점도이다.
도 34는 대조군(x-축)과 비교한 IL-27 저해 후 유전자 발현에서 log2 배수-변화 대 대조군(y-축)과 비교한 항-IL-27 Ab1로 처리한 후 유전자 발현 변화의 유의성(p-값)을 나타내는 볼케이노 플롯이다.
도 35는 항-IL-27 Ab1 또는 아이소타입 대조군(IgG)에서 배양한 후 활성화된 PBMC에서 TNFSF15 발현을 보여주는 산점도이다.
도 36a 내지 도 36b는 항-IL-27 Ab1(1 ㎍/㎖) 또는 아이소타입 대조군의 2개의 상이한 로트의 존재하에 배양된 활성화된(도 36a) 및 휴지기(도 36b) PBMC에서 TNFSF15 발현을 보여주는 막대 그래프이다.
도 37은 표시된 바와 같이 다양한 세포 유형에서 아이소타입 대조군과 비교하여 항-IL-27 Ab1로 IL-27 저해 후 TNFSF15 전사체의 배수 변화를 보여주는 막대 그래프이다.
도 38은 표시된 바와 같이 항-IL-27 Ab1, 항-CD39 항체 및 2개의 항-CD112R 항체로 처리한 후 TNFSF15 전사체의 배수 발현을 보여주는 막대 그래프이다.
도 39a 내지 도 39b는 지연된 동역학을 갖는 활성화된 PBMC에서 항-IL-27 Ab1으로 IL-27을 차단한 후 TNFSF15 전사체(도 39a) 및 분비된 TNFSF15 단백질(도 39b)을 보여주는 막대 그래프이다.
본 개시내용은 적어도 부분적으로 고친화성 및 특이성으로 인간 IL-27p28 상의 특정 에피토프에 결합하는 항체 분자를 제공한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "IL-27" 및 "IL27"은 2개의 상이한 유전자: 엡스타인-바 바이러스-유도성 유전자 3(EBI3) 및 IL-27p28에 의해 암호화되는 2개의 별개의 서브유닛으로 구성되는 이종이량체 사이토카인 IL-27을 상호교환적으로 지칭한다. IL-27은 조혈 및 비-조혈 세포에 다양한 효과와 함께 전-염증성 및 항-염증성 특성을 모두 갖는다.
따라서, 일 양태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27 또는 이의 항원 결합 부분에 특이적으로 결합하고 이를 길항하는 단리된 항체를 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본 명세서에 개시된 에피토프에 특이적으로 결합하며 다음 특성 중 적어도 하나 이상을 나타낸다:
(i) 15nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합함;
(ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단함;
(iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킴;
(iv) 세포에서 CD161 발현의 IL-27 매개성 저해를 저해하거나 또는 감소시킴;
(v) 세포에서 IL-27 매개성 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킴;
(vi) 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개성 분비를 유도하거나 또는 향상시킴; 그리고
(vii) (i) 내지 (vi)의 조합.
본 발명의 추가적인 양태는 항체 분자를 암호화하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 항체 분자를 제조하는 방법을 포함한다. 면역접합체, 다중- 또는 이중특이성 분자 및 항체 분자를 포함하는 약제학적 조성물이 또한 제공된다. 본 명세서에 개시된 항-IL-27 항체 분자는 암성 또는 악성 장애, 예를 들어, 고형 및 액상 종양(예를 들어, 백혈병, 예를 들어, 림프종, 예를 들어, AML), 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암), 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중-음성 유방암), 흑색종, 고환암, 육종, 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 간 암(예를 들어, 간세포 암종(HCC)), 결장직장암, 난소암, 뇌암(예를 들어, 다형성 교아종) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어, 신장 투명 세포 암종)을 치료, 예방 및/또는 진단하는데 사용될 수 있다.
항-IL-27 항체 및 이의 항원-결합 단편
본 개시내용은 IL-27p28에 특이적으로 결합하고 IL-27, 특히 인간 IL-27을 길항하는 항체 및 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
본 개시내용은 인간 IL-27 또는 이의 항원 결합 부분을 길항하는 단리된 항체에 관한 것이되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 서열번호 2(IL-27p28)에 상응하는 37번 내지 56번 아미노산, (ii) 서열번호 2(IL-27p28)에 상응하는 142번 내지 164번 아미노산 또는 (iii) (i)과 (ii) 모두 중 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 인간 IL-27 또는 이의 항원 결합 부분을 길항하는 본 개시내용의 단리된 항체는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 또는 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Asp146, Arg149 및/또는 Phe153을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Asp146, Arg149 및 Phe153을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Asp146, Arg149, His150 및 Phe153을 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Asp146, Arg149, Phe153 및 Leu156을 포함한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Asp146, Arg149, His150, Phe153 및 Leu156을 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156 및 Glu164를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Asp146, Arg149, His150, Phe153 및 Leu156을 포함한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156 및 Glu164를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156 및 Glu164의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164, 및 서열번호 2(IL-27p28)의 Leu53, Lys56, Asp143, Leu147, Arg152, Ala157, Gly159, Phe160 또는 Asn161로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 잔기를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164, 및 서열번호 2(IL-27p28)의 Leu53, Lys56, Asp143, Arg145, Leu147, Arg152, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161 또는 Pro163으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 잔기를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하고 인간 IL-27 또는 이의 항원 결합 부분을 길항하는 단리된 항체를 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음 특성 중 적어도 하나 이상을 나타낸다: (i) 15nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합함; (ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단시킴; (iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킴; (iv) 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시킴; (v) 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킴; (vi) 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개성 분비를 유도하거나 또는 향상시킴; 및 (vii) (i) 내지 (vi)의 조합.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 15nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 서열번호 2(인간 IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산의 에피토프에 결합한다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 재조합 인간 IL-27p28 또는 뮤린 IL-27p28에 결합한다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 양태에서, 세포는 암 세포이다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시킨다(예를 들어, 세포에서 CD161 발현의 저해를 개선하거나 또는 완화시킴). 일부 양태에서, 세포는 면역 세포이다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, PD-L1 발현은 저해되거나 또는 감소된다. 일부 양태에서, TIM-3 발현은 저해되거나 또는 감소된다. 일부 양태에서, PD-L1 발현 및 TIM-3 발현은 모두 감소된다. 일부 양태에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 양태에서, 항체는 단일클론 항체이다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해하거나 또는 감소시킨다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 TNFα이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IL-6이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 TNFα 및 IL-6이다. 일부 양태에서, 세포는 면역 세포이다.
일부 양태에서, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1 IgA2, IgD 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 항체는 IgG1 항체 또는 IgG4 항체이다. 일부 양태에서, 항체는 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 항체는 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 항체는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, 항체는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 항체는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 EU 넘버링에 따른 치환 S228P, L235E, L235A 또는 이들의 조합 중 어느 하나를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 전술한 양태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 실질적으로 동일한 IL-27 상의 에피토프에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 전술한 양태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 잔기 중 적어도 하나에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 에피토프(서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164)의 돌연변이는 전술한 양태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 항체 또는 이의 항원 결합 부분 둘 다에 대한 결합을 저해, 감소 또는 차단한다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, 경쇄 CDR1은 N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C로 구성된다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, 경쇄 CDR3은 N-XXXASAXXX-C로 구성된다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, 중쇄 CDR2는 N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C로 구성된다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, 중쇄 CDR3은 N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C로 구성되고, 여기서 X는 임의의 아미노산이다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, 경쇄 CDR1은 N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C로 구성되고, 경쇄 CDR3은 N-XXXASAXXX-C로 구성된다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, 중쇄 CDR2는 N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C로 구성되고, 중쇄 CDR3은 N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C로 구성되며, 여기에서 X는 임의의 아미노산이다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, 경쇄 CDR1은 N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C로 구성되고, 경쇄 CDR3은 N-XXXASAXXX-C로 구성되며, 중쇄 CDR2는 N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C로 구성되고, 중쇄 CDR3은 N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C로 구성되며, 여기서 X는 임의의 아미노산이다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 9, 10 및 11에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 17, 18 및 19에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 31, 32 및 33에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 39, 40 및 41에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 53, 54 및 55에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 61, 62 및 63에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 75, 76 및 77에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 83, 84 및 85에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 97, 98 및 99에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 105, 106 및 107에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(vi) 서열번호 119, 120 및 121에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 9, 10 및 11에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 17, 18 및 19에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 31, 32 및 33에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 39, 40 및 41에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 53, 54 및 55에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 61, 62 및 63에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 75, 76 및 77에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 83, 84 및 85에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 97, 98 및 99에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 105, 106 및 107에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(vi) 서열번호 119, 120 및 121에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 9, 10 및 11에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 17, 18 및 19에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 31, 32 및 33에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 39, 40 및 41에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 53, 54 및 55에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 61, 62 및 63에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 75, 76 및 77에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 83, 84 및 85에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 97, 98 및 99에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 105, 106 및 107에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(vi) 서열번호 119, 120 및 121에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 12, 13 및 14에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 20, 21 및 22에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 34, 35 및 36에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 42, 43 및 44에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 56, 57 및 58에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 64, 65 및 66에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 78, 79 및 80에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 86, 88 및 89에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 100, 101 및 102에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 108, 109 및 110에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(vi) 각각 서열번호 122, 123 및 124에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 12, 13 및 14에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 20, 21 및 22에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 34, 35 및 36에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 42, 43 및 44에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 56, 57 및 58에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 64, 65 및 66에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 78, 79 및 80에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 86, 88 및 89에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 100, 101 및 102에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 108, 109 및 110에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(vi) 각각 서열번호 122, 123 및 124에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 12, 13 및 14에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 20, 21 및 22에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 34, 35 및 36에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 42, 43 및 44에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 56, 57 및 58에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 64, 65 및 66에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 78, 79 및 80에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 86, 88 및 89에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 100, 101 및 102에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 108, 109 및 110에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(vi) 각각 서열번호 122, 123 및 124에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하고, 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 144)로 구성되지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 146)로 구성되지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하고, 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 144)로 구성되지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 146)로 구성되지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하고, 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 144)로 구성되지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 146)로 구성되지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하고, 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 148)를 포함하지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 149)를 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하고, 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 148)를 포함하지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 149)를 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하고, 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 148)를 포함하지 않고/않거나 중쇄 CDR2는 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 149)를 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음을 포함하지 않는다:
(i) N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-ISSSXXYI-C(서열번호 147)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 121에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(ii) N-FTFXXXXMN-C(서열번호 150)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 151)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 124에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음을 포함하지 않는다:
(i) N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-ISSSXXYI-C(서열번호 147)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 121에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(ii) N-FTFXXXXMN-C(서열번호 150)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 151)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 124에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음을 포함하지 않는다:
(i) N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-ISSSXXYI-C(서열번호 147)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 121에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
(ii) N-FTFXXXXMN-C(서열번호 150)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 151)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 124에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음을 포함하지 않는다: 각각 N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-IXXXXXXX-C(서열번호 152)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 N-AR[X]n=6-15DX-C(서열번호 153)로 구성되는 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C(서열번호 154)로 구성되는 경쇄 CDR1, N-XXS-C(서열번호 155)로 구성되는 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 156)로 구성되는 경쇄 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음을 포함하지 않는다: 각각 N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-IXXXXXXX-C(서열번호 152)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 N-AR[X]n=6-15DX-C(서열번호 153)로 구성되는 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C(서열번호 154)로 구성되는 경쇄 CDR1, N-XXS-C(서열번호 155)로 구성되는 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 156)로 구성되는 경쇄 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164를 포함하거나 또는 이로 구성되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음을 포함하지 않는다: 각각 N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-IXXXXXXX-C(서열번호 152)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 N-AR[X]n=6-15DX-C(서열번호 153)로 구성되는 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C(서열번호 154)로 구성되는 경쇄 CDR1, N-XXS-C(서열번호 155)로 구성되는 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 156)로 구성되는 경쇄 CDR3 서열.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 37, 59, 81, 103 및 125로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않으며; 경쇄 가변 영역은 서열번호 23, 45, 67, 89, 111 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열이 아니다:
(i) 각각 서열번호 15 및 65;
(ii) 각각 서열번호 37 및 45;
(iii) 각각 서열번호 59 및 67;
(iv) 각각 서열번호 81 및 89;
(v) 각각 서열번호 103 및 111; 및
(vi) 각각 서열번호 125 및 133.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 15, 37, 59, 81, 103 및 125로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 23, 45, 67, 89, 111 및 133으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 15 및 65;
(ii) 각각 서열번호 37 및 45;
(iii) 각각 서열번호 59 및 67;
(iv) 각각 서열번호 81 및 89;
(v) 각각 서열번호 103 및 111; 및
(vi) 각각 서열번호 125 및 133.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 25,47, 69, 91, 113 및 135로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않으며; 경쇄는 서열번호 20, 42, 71, 93 및 1115로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 25,47, 69, 91, 113 및 135로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않으며; 경쇄는 서열번호 20, 42, 71, 93 및 115로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 29, 51, 73, 95, 117 및 139로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않고; 경쇄는 서열번호 71, 49, 71, 93, 115 및 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 29, 51, 73, 95, 117 및 139로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않고; 경쇄는 서열번호 71, 49, 71, 93, 115 및 137로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄 및 경쇄는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 25 및 27;
(ii) 각각 서열번호 47 및 49;
(iii) 각각 서열번호 69 및 71;
(iv) 각각 서열번호 91 및 93;
(v) 각각 서열번호 113 및 115; 및
(vi) 각각 서열번호 135 및 137.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄 및 경쇄는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 25 및 27;
(ii) 각각 서열번호 47 및 49;
(iii) 각각 서열번호 69 및 71;
(iv) 각각 서열번호 91 및 93;
(v) 각각 서열번호 113 및 115; 및
(vi) 각각 서열번호 135 및 137.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄 및 경쇄는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 29 및 27;
(ii) 각각 서열번호 51 및 49;
(iii) 각각 서열번호 73 및 72;
(iv) 각각 서열번호 95 및 93;
(v) 각각 서열번호 117 및 115; 및
(vi) 각각 서열번호 139 및 137.
일부 양태에서, 본 개시내용은 IL-27을 길항하고, 서열번호 2(IL27-p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄 및 경쇄는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하지 않는다:
(i) 각각 서열번호 29 및 27;
(ii) 각각 서열번호 51 및 49;
(iii) 각각 서열번호 73 및 72;
(iv) 각각 서열번호 95 및 93;
(v) 각각 서열번호 117 및 115; 및
(vi) 각각 서열번호 139 및 137.
항-IL-27 항체 및 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법
본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 임의의 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법을 특징으로 한다. 일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항체를 제조하는 방법은 적절한 면역원으로 대상체(예를 들어, 비-인간 포유동물)를 면역화하는 단계를 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 임의의 항체를 생성하기 위한 적합한 면역원은 본 명세서에 제시되어 있다. 예를 들어, IL-27p28에 결합하는 항체를 생성하기 위해, 당업자는 IL-27로 적합한 대상체(예를 들어, 비-인간 포유동물, 예컨대, 래트, 마우스, 저빌, 햄스터, 개, 고양이, 돼지, 염소, 말 또는 비-인간 영장류)를 면역화할 수 있다. 일부 양태에서, 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 전장 인간 IL-27p28 단량체 폴리펩타이드는 면역원으로 사용된다.
적합한 대상체(예를 들어, 비-인간 포유동물)는 포유동물에 의한 항체의 생산을 유도하기에 충분한 수회의 후속 부스터 면역화와 함께 적절한 항원으로 면역화될 수 있다. 면역원은 보조제와 함께 대상체(예를 들어, 비-인간 포유동물)에게 투여될 수 있다. 대상체에서 항체를 생성하는데 유용한 보조제는 단백질 보조제; 세균 보조제, 예를 들어, 전체 세균(BCG, 코리네박테리움 파르붐(Corynebacterium parvum) 또는 살모넬라 민네소타(Salmonella minnesota)) 및 세포 벽 골격을 포함한 세균 성분, 트레할로스 다이마이콜레이트, 모노포스포릴 지질 A, 결핵균의 메탄올 추출 가능한 잔기(methanol extractable residue: MER), 완전 또는 불완전 프로인트 보조제; 바이러스 보조제; 화학 보조제, 예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드 및 아이오도아세테이트 및 콜레스테릴 헤미석시네이트를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 면역 반응을 유도하는 방법에 사용될 수 있는 다른 보조제는, 예를 들어, 콜레라 독소 및 파라폭스바이러스 단백질을 포함한다. 또한, 문헌[Bieg et al. (1999) Autoimmunity 31(1):15-24]을 참조한다. 또한, 예를 들어, 문헌[Lodmell et al. (2000) Vaccine 18:1059-1066; Johnson et al. (1999) J Med Chem 42:4640-4649; Baldridge et al. (1999) Methods 19:103-107; 및 Gupta et al. (1995) Vaccine 13(14): 1263-1276]을 참조한다.
일부 양태에서, 방법은 면역원에 결합하는 단일클론 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주를 제조하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 실험실 마우스와 같은 적합한 포유동물이 위에 기재된 바와 같은 IL-27 폴리펩타이드로 면역화된다. 면역화된 포유동물의 항체-생산 세포(예를 들어, 비장의 B 세포)는 면역원의 적어도 1회의 부스터 면역화 후 2일 내지 4일에 단리된 다음, 적합한 골수종 세포주의 세포와 융합되기 전에 배양물에서 잠시 성장시킬 수 있다. 세포는 예를 들어, 백시니아 바이러스 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 융합 촉진제의 존재하에 융합될 수 있다. 융합에 의해 얻어진 하이브리드 세포가 클로닝되고, 목적하는 항체를 분비하는 세포 클론이 선택된다. 예를 들어, 적합한 면역원으로 면역화된 Balb/c 마우스의 비장 세포는 골수종 세포주 PAI 또는 골수종 세포주 Sp2/0-Ag 14의 세포와 융합될 수 있다. 융합 후, 세포는 정상 골수종 세포가 목적하는 하이브리도마 세포를 과도하게 증식시키는 것을 방지하기 위해 일정한 간격으로 선택 배지, 예를 들어, HAT 배지가 보충된 적합한 배양 배지에서 증식된다. 그런 다음, 얻어진 하이브리드 세포는 목적하는 항체, 예를 들어, 인간 IL-27에 결합하는 항체의 분비를 위해 스크리닝되고, 일부 양태에서, 당업자는, 예를 들어, 미국 특허 제6,300,064호(Knappik 등; 모포시스 아게(Morphosys AG)) 및 문헌[Schoonbroodt et al. (2005) Nucleic Acids Res 33(9):e81]에 기술되어 있는 바와 같이 비-면역 기반 라이브러리로부터 항-IL-27 항체를 확인할 수 있다.
일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 방법은, 예를 들어, 파지 디스플레이 기술, 세균 디스플레이, 효모 표면 디스플레이, 진핵생물 바이러스 디스플레이, 포유동물 세포 디스플레이 및 무세포(예를 들어, 리보솜 디스플레이) 항체 스크리닝 기법(예를 들어, 문헌[Etz et al. (2001) J Bacteriol 183:6924-6935; Cornelis (2000) Curr Opin Biotechnol 11:450-454; Klemm et al. (2000) Microbiology 146:3025-3032; Kieke et al. (1997) Protein Eng 10:1303-1310; Yeung et al. (2002) Biotechnol Prog 18:212-220; Boder et al. (2000) Methods Enzymology 328:430-444; Grabherr et al. (2001) Comb Chem High Throughput Screen 4:185-192; Michael et al. (1995) Gene Ther 2:660-668; Pereboev et al. (2001) J Virol 75:7107-7113; Schaffitzel et al. (1999) J Immunol Methods 231:119-135; 및 Hanes et al. (2000) Nat Biotechnol 18:1287-1292] 참조)을 포함할 수 있거나 또는 이와 결합하여 사용될 수 있다.
다양한 파지 디스플레이 방법을 사용하여 항체를 확인하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능적 항체 도메인은 이를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 운반하는 파지 입자의 표면에 디스플레이된다. 이러한 파지는 Fab, Fv 또는 이황화-결합 안정화된 Fv 항체 단편과 같은 항체의 항원-결합 도메인을 디스플레이하는데 이용될 수 있으며, 이는 레퍼토리 또는 조합 항체 라이브러리(예를 들어, 인간 또는 뮤린)로부터 발현된다. 이러한 방법에 사용되는 파지는 전형적으로 fd 및 M13과 같은 사상성 파지이다. 항원 결합 도메인은 임의의 파지 외피 단백질 pIII, pVIII 또는 pIX에 재조합적으로 융합된 단백질로서 발현된다. 예를 들어, 문헌[Shi et al. (2010) JMB 397:385-396] 참조한다. 본 명세서에 기재된 면역글로불린 또는 이의 단편을 제조하는데 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는 문헌[Brinkman et al. (1995) J Immunol Methods 182:41-50; Ames et al. (1995) J Immunol Methods 184:177-186; Kettleborough et al. (1994) Eur J Immunol 24:952-958; Persic et al. (1997) Gene 187:9-18; Burton et al. (1994) Advances in Immunology 57:191-280]; 및 PCT 공개 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982 및 WO 95/20401에 개시되어 있는 것을 포함한다. 적합한 방법은 또한, 예를 들어, 미국 특허 제5,698,426호; 제5,223,409호; 제5,403,484호; 제5,580,717호; 제5,427,908호; 제5,750,753호; 제5,821,047호; 제5,571,698호; 제5,427,908호; 제5,516,637호; 제5,780,225호; 제5,658,727호; 제5,733,743호 및 제5,969,108호에 기술되어 있다.
일부 양태에서, 파지 디스플레이 항체 라이브러리는 면역화된 포유동물의 B세포로부터 수집된 mRNA를 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, B 세포를 포함하는 비장 세포 샘플은 위에 기재된 바와 같이 IL-27 폴리펩타이드로 면역화된 마우스로부터 단리될 수 있다. mRNA는 세포로부터 단리되고, 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 cDNA로 전환될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook et al. (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition," Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Harlow and Lane (1988), 상기; Benny K. C. Lo (2004), 상기; 및 Borrebaek (1995), 상기] 참조. 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드의 가변 영역을 코딩하는 cDNA는 파지 디스플레이 라이브러리를 구축하는데 사용된다. 이러한 라이브러리를 생성하는 방법은, 예를 들어, 문헌[Merz et al. (1995) J Neurosci Methods 62(1-2):213-9; Di Niro et al. (2005) Biochem J 388(Pt 3):889-894; 및 Engberg et al. (1995) Methods Mol Biol 51:355-376]에 기술되어 있다.
일부 양태에서, 선택 및 스크리닝의 조합은, 예를 들어, 하이브리도마-유래 항체의 집단 또는 파지 디스플레이 항체 라이브러리로부터 관심 항체를 확인하는데 사용될 수 있다. 적합한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Hoogenboom (1997) Trends in Biotechnology 15:62-70; Brinkman et al. (1995), 상기; Ames et al. (1995), 상기; Kettleborough et al. (1994), 상기; Persic et al. (1997), 상기; 및 Burton et al. (1994), 상기]에 기술되어 있다. 예를 들어, 각각 박테리오파지 외피 단백질(예를 들어, M13 파지의 pIII, pVIII 또는 pIX)의 융합 단백질 및 상이한 항원-결합 영역을 암호화하는 복수의 파지미드 벡터는 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 생성된 다음, 세균 집단(예를 들어, 대장균)에 도입된다. 세균에서 박테리오파지의 발현은, 일부 양태에서, 헬퍼 파지의 사용을 필요로 할 수 있다. 일부 양태에서, 헬퍼 파지는 필요하지 않다(예를 들어, 문헌[Chasteen et al., (2006) Nucleic Acids Res 34(21):e145] 참조). 세균으로부터 생성된 파지는 회수된 다음, 예를 들어, 고체 지지체에 결합된(고정된) 표적 항원에 접촉된다. 파지는 또한 용액 내 항원에 접촉될 수 있고, 복합체는 후속적으로 고체 지지체에 결합된다.
위의 방법을 사용하여 스크리닝된 항체의 하위집단은 당업계에 공지된 임의의 면역학적 또는 생화학 기반 방법을 사용하여 특정 항원(예를 들어, 인간 IL-27p28)에 대한 특이성 및 결합 친화성에 대해 특성화될 수 있다. 예를 들어, IL-27p28에 대한 항체의 특이적 결합은, 예를 들어, 위에 기재된 바와 같은 ELISA 검정, SPR 검정, 면역침강 검정, 친화성 크로마토그래피 및 평형 투석과 같지만 이들로 제한되지 않는 면역학적 또는 생화학 기반 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 항체의 면역-특이적 결합 및 교차-반응성을 분석하는데 사용될 수 있는 면역검정은 웨스턴 블롯, RIA, ELISA(효소 연결된 면역흡착 검정), "샌드위치" 면역검정, 면역침강 검정, 면역확산 검정, 응집 검정, 보체-고정 검정, 면역방사 검정, 형광 면역검정 및 단백질 A 면역검정과 같은 기법을 사용하는 경쟁적 및 비-경쟁적 검정 시스템을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 검정은 일상적이며 당업계에 잘 알려져 있다.
선택된 CDR 아미노산 서열이 짧은 서열(예를 들어, 10개 내지 15개 미만의 아미노산 길이)인 양태에서, CDR을 암호화하는 핵산은, 예를 들어, 문헌[Shiraishi et al. (2007) Nucleic Acids Symposium Series 51(1):129-130] 및 미국 특허 제6,995,259호에 기술되어 있는 바와 같이 화학적으로 합성될 수 있다. 수여체 항체를 암호화하는 주어진 핵산 서열에 대해, CDR을 암호화하는 핵산 서열의 영역은 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 화학적으로 합성된 핵산으로 대체될 수 있다. 화학적으로 합성된 핵산의 5' 및 3' 말단은 공여체 항체의 가변 영역을 암호화하는 핵산 내로 핵산을 클로닝하는데 사용하기 위한 점착성 말단 제한 효소 부위를 포함하도록 합성될 수 있다.
일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체는 상응하는 변경되지 않은 불변 영역에 비해 감소된(또는 전혀 없는) 효과기 기능을 갖는 변경된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 항-IL-27 항체의 불변 영역을 포함하는 효과기 기능은 불변 또는 Fc 영역의 특성을 변경함으로써 조절될 수 있다. 변경된 효과기 기능은, 예를 들어, 다음 활성 중 하나 이상의 조절을 포함한다: 항체-의존적 세포 세포독성(ADCC), 보체-의존적 세포독성(CDC), 세포자멸사, 하나 이상의 Fc-수용체에 대한 결합 및 전-염증성 반응. 조절은 불변 영역의 변경되지 않은 형태의 활성과 비교하여 변경된 불변 영역을 포함하는 대상 항체에 의해 나타나는 효과기 기능 활성의 증가, 감소 또는 제거를 지칭한다. 특정 양태에서, 조절은 활성이 폐지되거나 또는 완전히 없는 상황을 포함한다.
일 양태에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체는 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일 양태에서, IgG4 중쇄 불변 영역은 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역이다. 또 다른 양태에서, IgG4 불변 영역은, 예를 들어, EU 넘버링(문헌[Kabat, E.A., et al.], 상기)에 따른, 예를 들어, S228P 및 L235E 또는 L235A 중 하나 또는 두 개의 돌연변이를 포함한다. 일 양태에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체는 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일 양태에서, IgG1 중쇄 불변 영역은 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역이다. 또 다른 양태에서, IgG1 중쇄 불변 영역은 돌연변이를 포함한다.
변경된 FcR 결합 친화성 및/또는 ADCC 활성 및/또는 변경된 CDC 활성을 갖는 변경된 불변 영역은 불변 영역의 변경되지 않은 형태와 비교하여 향상 또는 감소된 FcR 결합 활성 및/또는 ADCC 활성 및/또는 CDC 활성을 갖는 폴리펩타이드이다. FcR에 대해 증가된 결합을 나타내는 변경된 불변 영역은 변경되지 않은 폴리펩타이드보다 더 큰 친화성으로 적어도 하나의 FcR에 결합한다. FcR에 대해 감소된 결합을 나타내는 변경된 불변 영역은 불변 영역의 변경되지 않은 형태보다 더 낮은 친화성으로 적어도 하나의 FcR에 결합한다. FcR에 대해 감소된 결합을 나타내는 이러한 변이체는 FcR에 대한 천연 서열 면역글로불린 불변 또는 Fc 영역의 결합 수준과 비교하여 FcR에 대해 인식할 수 있는 결합, 예를 들어, FcR에 대한 결합의 0% 내지 50%(예를 들어, 50%, 49%, 48%, 47%, 46%, 45%, 44%, 43%, 42%, 41%, 40%, 39%, 38%, 37%, 36%, 35%, 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만)를 거의 또는 전혀 보유하지 않을 수 있다. 유사하게는, 조절된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 나타내는 변경된 불변 영역은 변경되지 않은 불변 영역에 비해 증가된 또는 감소된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 일부 양태에서, 변경된 불변 영역을 포함하는 항-IL-27 항체는 불변 영역의 변경되지 않은 형태의 ADCC 및/또는 CDC 활성의 대략 0% 내지 50%(예를 들어, 50%, 49%, 48%, 47%, 46%, 45%, 44%, 43%, 42%, 41%, 40%, 39%, 38%, 37%, 36%, 35%, 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만)를 나타낼 수 있다. 감소된 ADCC 및/또는 CDC를 나타내는 변경된 불변 영역을 포함하는 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체는 ADCC 및/또는 CDC 활성이 감소되거나 또는 이를 전혀 나타내지 않을 수 있다.
일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체는 효과기 기능이 감소되거나 또는 이를 전혀 나타내지 않는다. 일부 양태에서, 항-IL-27 항체는 하이브리드 불변 영역 또는 이의 일부, 예컨대, G2/G4 하이브리드 불변 영역을 포함한다(예를 들어, 문헌[Burton et al. (1992) Adv Immun 51:1-18; Canfield et al. (1991) J Exp Med 173:1483-1491; 및 Mueller et al. (1997) Mol Immunol 34(6):441-452] 참조). 상기를 참조한다.
일부 양태에서, 항-IL-27 항체는 향상된 또는 감소된 보체 의존적 세포독성(CDC)을 나타내는 변경된 불변 영역을 포함할 수 있다. 조절된 CDC 활성은 항체의 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 도입함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,194,551호를 참조한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 시스테인 잔기(들)는 Fc 영역에 도입되어 이 영역에서 사슬간 이황화 결합 형성을 허용할 수 있다. 이렇게 생성된 동종이량체 항체는 개선 또는 감소된 내재화 능력 및/또는 증가 또는 감소된 보체-매개성 세포 살해를 가질 수 있다. 예를 들어, 문헌[Caron et al. (1992) J Exp Med 176:1191-1195 및 Shopes (1992) Immunol 148:2918-2922]; PCT 공개 WO 99/51642 및 WO 94/29351; 문헌[Duncan and Winter (1988) Nature 322:738-40]; 및 미국 특허 제5,648,260호 및 제5,624,821호 참조.
재조합 항체 발현 및 정제
본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 분자 생물학 및 단백질 화학의 다양한 당업계에 공지된 기법을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 중 하나 또는 둘 다를 암호화하는 핵산이, 예를 들어, 프로모터 서열, 리보솜 결합 부위, 전사 시작 및 종결 서열, 번역 시작 및 종결 서열, 전사 종결 신호, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서 또는 활성인자 서열을 포함하는 전사 및 번역 조절 서열을 포함하는 발현 벡터에 삽입될 수 있다. 조절성 서열은 프로모터와 전사 시작 및 종결 서열을 포함한다. 또한, 발현 벡터는 2종의 상이한 유기체, 예를 들어, 발현을 위한 포유동물 또는 곤충 세포 및 클로닝과 증폭을 위한 원핵생물 숙주에서 유지될 수 있도록 하나 이상의 복제 시스템을 포함할 수 있다.
포유동물 세포에서 핵산으로부터 클로닝된 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드의 발현을 위해 여러 가능한 벡터 시스템이 이용 가능하다. 벡터의 한 부류는 목적하는 유전자 서열의 숙주 세포 게놈으로의 통합에 의존한다. 안정적으로 DNA가 통합된 세포는 대장균 gpt(문헌[Mulligan and Berg (1981) Proc Natl Acad Sci USA 78:2072]) 또는 Tn5 neo(문헌[Southern and Berg (1982) Mol Appl Genet 1:327])와 같은 약물 저항성 유전자를 동시에 도입함으로써 선택될 수 있다. 선별 마커 유전자는 발현될 DNA 유전자 서열에 연결되거나 또는 동시-형질감염에 의해 동일한 세포에 도입될 수 있다(문헌[Wigler et al. (1979) Cell 16:77]). 두 번째 부류의 벡터는 염색체외 플라스미드에 자율적으로 복제하는 능력을 부여하는 DNA 요소를 이용한다. 이러한 벡터는 소 유두종바이러스(문헌[Sarver et al. (1982) Proc Natl Acad Sci USA, 79:7147]), 사이토메갈로바이러스, 폴리오마 바이러스(문헌[Deans et al. (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81:1292]) 또는 SV40 바이러스(문헌[Lusky and Botchan (1981) Nature 293:79])와 같은 동물 바이러스로부터 유래될 수 있다.
발현 벡터는 핵산의 후속 발현에 적합한 방식으로 세포에 도입될 수 있다. 도입 방법은 주로 아래에서 논의되는 표적화된 세포 유형에 의해 결정된다. 예시적인 방법은 CaPO4 침전, 리포솜 융합, 양이온성 리포솜, 전기천공, 바이러스 감염, 덱스트란-매개성 형질감염, 폴리브렌-매개성 형질감염, 원형질체 융합 및 직접 미세주입을 포함한다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편의 발현을 위한 적절한 숙주 세포는 효모, 세균, 곤충, 식물 및 포유동물 세포를 포함한다. 특히 관심 대상은 대장균과 같은 세균, 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae) 및 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)와 같은 균류, SF9와 같은 곤충 세포, 포유동물 세포주(예를 들어, 인간 세포주)뿐만 아니라 초대 세포주(primary cell line)이다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 단편은 형질전환 동물(예를 들어, 형질전환 포유동물)에서 발현되고 이로부터 정제될 수 있다. 예를 들어, 항체는, 예를 들어, 문헌[Houdebine (2002) Curr Opin Biotechnol 13(6):625-629; van Kuik-Romeijn et al. (2000) Transgenic Res 9(2):155-159; 및 Pollock et al. (1999) J Immunol Methods 231(1-2):147-157]에 기술되어 있는 바와 같이 트랜스제닉 비-인간 포유동물(예를 들어, 설치류)에서 생성되고 우유로부터 단리될 수 있다.
항체 및 이의 단편은 단백질을 발현하기에 충분한 조건 및 시간 동안 항체 또는 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 배양함으로써 세포로부터 생산될 수 있다. 단백질 발현을 위한 이러한 조건은 발현 벡터 및 숙주 세포의 선택에 따라 달라질 것이고, 일상적인 실험을 통해 당업자에 의해 용이하게 확인될 것이다. 예를 들어, 대장균에서 발현된 항체는 봉입체에서 다시 접힐 수 있다(예를 들어, 문헌[Hou et al. (1998) Cytokine 10:319-30] 참조). 세균 발현 시스템 및 이의 사용 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(문헌[Current 프로토콜 in Molecular Biology, Wiley & Sons, and Molecular Cloning--A Laboratory Manual --3rd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001)] 참조). 코돈, 적합한 발현 벡터 및 적합한 숙주 세포의 선택은 여러 인자에 따라 달라질 것이며, 필요에 따라 쉽게 최적화될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체(또는 이의 단편)는 포유동물 세포에서 또는 효모, 바큘로바이러스 및 시험관내 발현 시스템을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 다른 발현 시스템에서 발현될 수 있다(예를 들어, 문헌[Kaszubska et al. (2000) Protein Expression and Purification 18:213-220] 참조).
발현 후, 항체 및 이의 단편은 단리될 수 있다. 항체 또는 이의 단편은 샘플에 존재하는 다른 성분에 따라 당업자에게 공지된 다양한 방식으로 단리 또는 정제될 수 있다. 표준 정제 방법은 이온 교환, 소수성, 친화성 및 역상 HPLC 크로마토그래피를 포함한 전기영동, 분자, 면역학적 및 크로마토그래피 기법을 포함한다. 예를 들어, 항체는 표준 항-항체 칼럼(예를 들어, 단백질-A 또는 단백질-G 칼럼)을 사용하여 정제될 수 있다. 단백질 농도와 함께 한외여과 및 정용여과 기법도 또한 유용하다. 예를 들어, 문헌[Scopes (1994) "Protein Purification, 3rd edition," Springer-Verlag, New York City, New York] 참조. 필요한 정제 정도는 목적하는 용도에 따라 다를 것이다. 일부 경우에, 발현된 항체 또는 이의 단편의 정제가 필요하지 않을 것이다.
정제된 항체 또는 이의 단편의 수율 또는 순도를 결정하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 브래드포드 검정, UV 분광법, 뷰렛 단백질 검정, 로우리 단백질 검정, 아미도 검은색 단백질 검정, 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 질량 분석법(MS) 및 겔 전기영동 방법(예를 들어, 쿠마시 블루 또는 콜로이드 은 염색과 같은 단백질 염색을 사용)을 포함한다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편의 변형
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 발현 및 정제 후 변형될 수 있다. 변형은 공유적 또는 비-공유적 변형일 수 있다. 이러한 변형은, 예를 들어, 폴리펩타이드의 표적화된 아미노산 잔기를 선택된 측쇄 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시킴으로써 항체 또는 단편에 도입될 수 있다. 변형에 적합한 부위는, 예를 들어, 항체 또는 단편의 구조적 분석 또는 아미노산 서열 분석을 포함하는 임의의 다양한 기준을 사용하여 선택될 수 있다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이종 모이어티에 접합될 수 있다. 이종 모이어티는, 예를 들어, 이종 폴리펩타이드, 치료제(예를 들어, 독소 또는 약물) 또는 방사성 표지, 효소적 표지, 형광 표지, 중금속 표지, 발광 표지 또는 친화성 태그, 예컨대, 바이오틴 또는 스트렙타비딘과 같지만 이들로 제한되지 않은 검출 가능한 표지일 수 있다. 항체 또는 단편을 정제하는데 사용하기 위한 적합한 이종 폴리펩타이드는, 예를 들어, 항원 태그(FLAG(DYKDDDDK(서열번호 141)), 폴리히스티딘(6-His; HHHHHH(서열번호 142), 헤마글루티닌(HA; YPYDVPDYA(서열번호 143)), 글루타티온-S-트랜스퍼레이스(GST) 또는 말토스-결합 단백질(MBP)을 포함한다. 이종 폴리펩타이드는 또한 진단 또는 검출 가능한 마커로서 유용한 폴리펩타이드(예를 들어, 효소), 예를 들어, 루시퍼레이스, 형광 단백질(예를 들어, 녹색 형광 단백질(GFP)) 또는 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼레이스(CAT)를 포함한다. 적합한 방사성 표지는, 예를 들어, 32P, 33P, 14C, 125I, 131I, 35S 및 3H를 포함한다. 적합한 형광 표지는 제한 없이 플루오레세인, 플루오레세인 아이소티오사이아네이트(FITC), 녹색 형광 단백질(GFP), DyLight™ 488, 피코에리트린(PE), 프로피듐 아이오다이드(PI), PerCP, PE-Alexa Fluor® 700, Cy5, 알로피코사이아닌 및 Cy7을 포함한다. 발광 표지는, 예를 들어, 임의의 다양한 발광 란타나이드(예를 들어, 유로퓸 또는 테르븀) 킬레이트를 포함한다. 예를 들어, 적합한 유로퓸 킬레이트는 다이에틸렌 트라이아민 펜타아세트산(DTPA) 또는 테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산(DOTA)의 유로퓸 킬레이트를 포함한다. 효소적 표지는, 예를 들어, 알칼리 포스파테이스, CAT, 루시퍼레이스 및 서양고추냉이 퍼옥시데이스를 포함한다.
2개의 단백질(예를 들어, 항체 및 이종 모이어티)은 임의의 다수의 공지된 화학 가교제를 사용하여 가교될 수 있다. 이러한 가교제의 예는 "방해된(hindered)" 이황화 결합을 포함하는 연결을 통해 2개의 아미노산 잔기를 연결하는 것이다. 이러한 연결에서, 가교 단위 내의 이황화 결합은, 예를 들어, 환원된 글루타티온 또는 효소 이황화 리덕테이스의 작용에 의해 환원으로부터 (이황화 결합의 양쪽에 있는 방해 그룹에 의해) 보호된다. 적합한 시약 중 하나인 4-석신이미딜옥시카보닐-α-메틸-α(2-피리딜다이티오) 톨루엔(SMPT)은 단백질 중 하나의 말단 라이신과 다른 하나의 말단 시스테인을 이용하여 두 단백질 사이에 연결을 형성한다. 각 단백질의 상이한 커플링 모이어티에 의해 가교되는 이종이작용성 시약도 또한 사용될 수 있다. 다른 유용한 가교제는 제한 없이 2개의 아미노기(예를 들어, N-5-아지도-2-나이트로벤조일옥시석신이미드), 2개의 설피드릴기(예를 들어, 1,4-비스-말레이미도뷰테인), 아미노기 및 설피드릴기(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스터), 아미노기 및 카복실기(예를 들어, 4-[p-아지도살리실아미도]뷰틸아민) 및 아르기닌의 측쇄에 존재하는 아미노기 및 구아니디늄기(예를 들어, p-아지도페닐 글리옥살 모노하이드레이트)를 연결하는 시약을 포함한다.
일부 양태에서, 방사성 표지는 항체의 아미노산 백본에 직접 접합될 수 있다. 대안적으로, 방사성 표지는 단백질 백본에 차례로 결합되는 더 큰 분자의 일부(예를 들어, 관련 단백질의 메타-아이오도페닐(mIP) 유도체를 형성하기 위해 유리 아미노기에 결합하는 메타-[125I]아이오도페닐-N-하이드록시석신이미드의 125I([125I]mIPNHS))(예를 들어, 문헌[Rogers et al. (1997) J Nucl Med 38:1221-1229] 참조) 또는 킬레이트(예를 들어, DOTA 또는 DTPA에 대한)로서 포함될 수 있다. 방사성 표지 또는 이를 포함하는 더 큰 분자/킬레이트를 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편에 접합시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 방법은 방사성 표지 또는 킬레이트의 단백질에 대한 결합을 촉진하는 조건(예를 들어, pH, 염 농도 및/또는 온도)하에 단백질을 방사성 표지와 함께 인큐베이션하는 단계를 포함한다(예를 들어, 미국 특허 제6,001,329호 참조).
형광 표지(때로는 "형광단"으로도 지칭됨)를 단백질(예를 들어, 항체)에 접합시키는 방법은 단백질 화학 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 형광단은 형광단에 부착된 석신이미딜(NHS) 에스터 또는 테트라플루오로페닐(TFP) 에스터 모이어티를 사용하여 단백질의 유리 아미노기(예를 들어, 라이신) 또는 설피드릴기(예를 들어, 시스테인)에 접합될 수 있다. 일부 양태에서, 형광단은 설포-SMCC와 같은 이종이작용성 가교제 모이어티에 접합될 수 있다. 적합한 접합 방법은 항체 단백질 또는 이의 단편을 단백질에 대한 형광단의 결합을 용이하게 하는 조건하에서 형광단과 함께 인큐베이션하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Welch and Redvanly (2003) "Handbook of Radiopharmaceuticals: Radiochemistry and Applications," John Wiley and Sons (ISBN 0471495603)] 참조.
일부 양태에서, 항체 또는 단편은 순환, 예를 들어, 혈액, 혈청 또는 기타 조직에서, 예를 들어, 항체의 안정화 및/또는 보호를 개선하는 모이어티로 변형될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 단편은, 예를 들어, 문헌[Lee et al. (1999) Bioconjug Chem 10(6): 973-8; Kinstler et al. (2002) Advanced Drug Deliveries Reviews 54:477-485; 및 Roberts et al. (2002) Advanced Drug Delivery Reviews 54:459-476]에 기술되어 있는 바와 같이 페길화되거나 또는 헤실화(프레지니우스 카비(Fresenius Kabi), 독일 소재; 예를 들어, 문헌[
Figure pct00001
et al. (2010) Int J Pharm 387(1-2):110-119] 참조)될 수 있다. 안정화 모이어티는 적어도 1.5배(예를 들어, 적어도 2배, 5배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 40배 또는 50배 이상)까지 항체(또는 단편)의 안정성 또는 보유를 개선할 수 있다.
일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 글리코실화될 수 있다. 일부 양태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 효소적 또는 화학적 처리를 받을 수 있거나, 또는 항체 또는 단편이 글리코실화가 감소되거나 없도록 세포로부터 생산될 수 있다. 글리코실화가 감소된 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 미국 특허 제6,933,368호; 문헌[Wright et al. (1991) EMBO J 10(10):2717-2723; 및 Co et al. (1993) Mol Immunol 30:1361]에 기술되어 있다.
약제학적 조성물 및 제형
소정의 양태에서, 본 발명은 항-IL-27 항체와 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
소정의 양태에서, 허용 가능한 제형 물질은 바람직하게는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이다. 소정의 양태에서, 제형 물질(들)은 피하 및/또는 I.V. 투여용이다. 소정의 양태에서, 약제학적 조성물은, 예를 들어, 조성물의 pH, 삼투압, 점도, 투명도, 색상, 등장성, 냄새, 무균성, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 흡착 또는 침투를 변형, 유지 또는 보존하기 위한 제형 물질을 함유할 수 있다. 소정의 양태에서, 적합한 제형 물질은 아미노산(예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신); 항균제; 항산화제(예컨대, 아스코르브산, 소듐 설파이트 또는 소듐 수소-설파이트); 완충액(예컨대, 보레이트, 바이카보네이트, Tris-HCl, 시트레이트, 포스페이트 또는 다른 유기산); 증량제(예컨대, 만니톨 또는 글리신); 킬레이트제(예컨대, 에틸렌다이아민 테트라아세트산(EDTA)); 착화제(예컨대, 카페인, 폴리바이닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 다른 탄수화물(예컨대, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질(예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체(예컨대, 폴리바이닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩타이드; 염-형성 반대이온(예컨대, 소듐); 보존제(예컨대, 벤잘코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 수소 퍼옥사이드); 용매(예컨대, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올(예컨대, 만니톨 또는 소르비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대, 플루로닉, PEG, 소르비탄 에스터, 폴리소르베이트, 예컨대, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트라이톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 향상제(예컨대, 수크로스 또는 소르비톨); 장성 향상제(예컨대, 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 소듐 또는 포타슘 클로라이드, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약제학적 보조제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. (문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1995)]). 소정의 양태에서, 제형은 PBS; 20mM NaOAC(pH 5.2), 50mM NaCl; 및/또는 10mM NAOAC(pH 5.2), 9% 수크로스를 포함한다. 소정의 양태에서, 최적의 약제학적 조성물은, 예를 들어, 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 목적하는 투여량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, 위의 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences]을 참조한다. 소정의 양태에서, 이러한 조성물은 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및/또는 항-IL-27 항체의 생체내 제거 속도에 영향을 미칠 수 있다.
소정의 양태에서, 약제학적 조성물의 1차 비히클 또는 담체는 사실상 수성 또는 비-수성일 수 있다. 예를 들어, 소정의 양태에서, 적합한 비히클 또는 담체는 주사용수, 생리 식염수 또는 인공 뇌척수액일 수 있으며, 가능하게는 비경구 투여를 위한 조성물에서 일반적인 다른 물질로 보충된다. 소정의 양태에서, 식염수는 등장성 포스페이트-완충 식염수를 포함한다. 소정의 양태에서, 중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 소정의 양태에서, 약제학적 조성물은 약 pH 7.0 내지 8.5의 Tris 완충액 또는 약 pH 4.0 내지 5.5의 아세테이트 완충액을 포함하며, 이는 소르비톨 또는 적합한 대체물을 추가로 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 항-IL-27 항체를 포함하는 조성물은 목적하는 정도의 순도를 갖는 선택된 조성물을 선택적 제형화제(위의, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences])와 혼합함으로써 동결건조된 케이크 또는 수용액의 형태로 보관하기 위해 제조될 수 있다. 또한, 소정의 양태에서, 항-IL-27 항체를 포함하는 조성물은 수크로스와 같은 적절한 부형제를 사용하여 동결건조물로 제형화될 수 있다.
소정의 양태에서, 약제학적 조성물은 비경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 소정의 양태에서, 조성물은 흡입 또는 경구와 같은 소화관을 통한 전달을 위해 선택될 수 있다. 이러한 약제학적으로 허용 가능한 조성물의 제조는 당업자의 능력 내에 있다.
소정의 양태에서, 제형 성분은 투여 부위에 허용 가능한 농도로 존재한다. 소정의 양태에서, 완충액은 생리학적 pH 또는 약간 더 낮은 pH, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에서 조성물을 유지하기 위해 사용된다.
소정의 양태에서, 비경구 투여가 상정되는 경우, 치료적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 비히클에 항-IL-27 항체를 포함하는 무발열원, 비경구로 허용 가능한 수용액의 형태일 수 있다. 소정의 양태에서, 비경구 주사를 위한 비히클은 항-IL-27 항체가 멸균 등장성 용액으로 제형화되어 적절하게 보존된 멸균 증류수이다. 소정의 양태에서, 제조는 데포 주사를 통해 전달될 수 있는 제품의 제어 또는 지연 방출을 제공할 수 있는 주사 가능한 마이크로스피어, 생분해성 입자, 중합체 화합물(예컨대, 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포솜과 같은 작용제를 이용한 목적하는 분자의 제형화를 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 하이알루론산이 또한 사용될 수 있으며, 이는 순환 지속 시간을 촉진하는 효과가 있다. 소정의 양태에서, 이식 가능한 약물 전달 장치가 목적하는 분자를 도입하기 위해 사용될 수 있다.
소정의 양태에서, 약제학적 조성물은 흡입을 위해 제형화될 수 있다. 소정의 양태에서, 항-IL-27 항체는 흡입을 위한 건조 분말로 제형화될 수 있다. 소정의 양태에서, 항-IL-27 항체를 포함하는 흡입 용액은 에어로졸 전달을 위한 추진체와 함께 제형화될 수 있다. 소정의 양태에서, 용액은 분무될 수 있다. 폐 투여는 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 기술하고 있는 PCT 출원 PCT/US94/001875에 추가로 기술되어 있다.
소정의 양태에서, 제형은 경구로 투여될 수 있는 것으로 상정된다. 소정의 양태에서, 이러한 방식으로 투여되는 항-IL-27 항체는 정제 및 캡슐과 같은 고체 투여 형태의 배합에 통상적으로 사용되는 담체와 함께 또는 담체 없이 제형화될 수 있다. 소정의 양태에서, 캡슐은 생체이용률이 최대화되고 전신적 분해가 최소화될 때 위장관의 위치에서 제형의 활성 부분을 방출하도록 설계될 수 있다. 소정의 양태에서, 항-IL-27 항체의 흡수를 촉진하기 위해 적어도 하나의 추가적인 작용제가 포함될 수 있다. 소정의 양태에서, 희석제, 향미제, 저융점 왁스, 식물성 오일, 윤활제, 현탁제, 정제 붕해제 및 결합제가 또한 사용될 수 있다.
소정의 양태에서, 약제학적 조성물은 정제의 제조에 적합한 무독성 부형제와의 혼합물에 유효량의 항-IL-27 항체를 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 정제를 멸균수 또는 또 다른 적절한 비히클에 용해시킴으로써, 용액은 단위-투여 형태로 제조될 수 있다. 소정의 양태에서, 적합한 부형제는 비활성 희석제, 예컨대, 칼슘 카보네이트, 소듐 카보네이트 또는 바이카보네이트, 락토스 또는 칼슘 포스페이트; 또는 결합제, 예컨대, 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 또는 윤활제, 예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
지속- 또는 제어-전달 제형에 항-IL-27 항체를 포함하는 제형을 포함하는 추가적인 약제학적 조성물은 당업자에게 명백할 것이다. 소정의 양태에서, 다양한 다른 지속- 또는 제어-전달 수단, 예컨대, 리포솜 담체, 생분해성 마이크로입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사를 제형화하기 위한 기법은 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 약제학적 조성물의 전달을 위한 다공성 중합체 마이크로입자의 제어 방출을 기술하고 있는 PCT 출원 PCT/US93/00829를 참조한다. 소정의 양태에서, 지속-방출 제제는 성형품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 지속 방출 매트릭스는 폴리에스터, 하이드로겔, 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호 및 EP 058,481), L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체(문헌[Sidman et al., Biopolymers, 22:547-556 (1983)]), 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트)(문헌[Langer et al., J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 (1981) 및 Langer, Chem. Tech., 12:98- 105 (1982)]), 에틸렌 바이닐 아세테이트(위의 문헌[Langer et al.]) 또는 폴리-D(-)-3-하이드록시뷰티르산(EP 133,988)을 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 지속 방출 조성물은 또한 당업계에 공지된 임의의 여러 방법에 의해 제조될 수 있는 리포솜을 포함할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Eppstein et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688-3692 (1985)]; EP 036,676; EP 088,046 및 EP 143,949 참조.
생체내 투여를 위해 사용되는 약제학적 조성물은 전형적으로 멸균이다. 소정의 양태에서, 이는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 소정의 양태에서, 조성물이 동결건조되는 경우, 이 방법을 사용하는 멸균은 동결건조 및 재구성 전 또는 후에 수행될 수 있다. 소정의 양태에서, 비경구 투여를 위한 조성물은 동결건조된 형태 또는 용액으로 보관될 수 있다. 소정의 양태에서, 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트가 있는 용기, 예를 들어, 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알에 넣어진다.
소정의 양태에서, 약제학적 조성물이 일단 제형화되면, 이는 용액, 현탁액, 겔, 에멀션, 고체로서 또는 탈수된 또는 동결건조된 분말로서 멸균 바이알에 보관될 수 있다. 소정의 양태에서, 이러한 제형은 즉시 사용 가능한 형태 또는 투여 전 재구성되는(예를 들어, 동결건조된) 형태로 보관될 수 있다.
소정의 양태에서, 단일-용량 투여 단위를 생산하기 위한 키트가 제공된다. 소정의 양태에서, 키트는 건조된 단백질이 담긴 제1 용기 및 수성 제형이 담긴 제2 용기를 모두 포함할 수 있다. 소정의 양태에서, 단일 및 다중-챔버 사전-충전 주사기(예를 들어, 액체 주사기 및 리오주사기)를 포함하는 키트가 포함된다.
소정의 양태에서, 치료학적으로 사용되는 항-IL-27 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량은, 예를 들어, 치료적 맥락 및 목적에 따라 달라질 것이다. 따라서, 당업자는 소정의 양태에 따른 치료를 위한 적절한 투여량 수준이 부분적으로 전달되는 분자, 항-IL-27 항체가 사용되는 적응증, 투여 경로 및 환자의 크기(체중, 체표면 또는 장기 크기) 및/또는 병태(연령 및 전반적인 건강)에 따라 달라질 것임을 이해할 것이다. 소정의 양태에서, 임상의는 최적의 치료적 효과를 얻기 위해 투여량을 적정하고 투여 경로를 수정할 수 있다.
소정의 양태에서, 투여 빈도는 사용된 제형에서 항-IL-27 항체의 약동학적 매개변수를 고려할 것이다. 소정의 양태에서, 임상의는 목적하는 효과를 달성하는 용량에 도달할 때까지 조성물을 투여할 것이다. 소정의 양태에서, 따라서 조성물은 시간 경과에 따라 단일 용량 또는 2회 이상의 용량(동일한 양의 목적하는 분자를 포함하거나 또는 포함하지 않을 수 있음)으로 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로 투여될 수 있다. 적절한 투여량의 추가 개선은 당업자에 의해 일상적으로 이루어지며, 그들이 일상적으로 수행하는 작업의 범위 내에 있다. 소정의 양태에서, 적절한 투여량은 적절한 용량-반응 데이터의 사용을 통해 확인될 수 있다.
소정의 양태에서, 약제학적 조성물의 투여 경로는, 예를 들어, 경구, 정맥내, 복강내, 대뇌내(실질내), 뇌실내, 근육내, 피하, 안구내, 동맥내, 문맥내 또는 병변내 경로에 의한 주사를 통해; 지속 방출 시스템 또는 이식 장치에 의한 공지된 방법과 부합한다. 소정의 양태에서, 조성물은 볼루스 주사에 의해, 또는 주입에 의해 연속적으로 또는 이식 장치에 의해 투여될 수 있다. 소정의 양태에서, 병용 요법의 개별 요소는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다.
소정의 양태에서, 조성물은 막, 스폰지 또는 목적하는 분자가 흡수되거나 또는 캡슐화된 또 다른 적절한 물질의 이식을 통해 국부적으로 투여될 수 있다. 소정의 양태에서, 이식 장치가 사용되는 경우, 장치는 임의의 적합한 조직 또는 장기에 이식될 수 있고, 목적하는 분자의 전달은 확산, 시간-방출 볼루스 또는 연속 투여를 통해 이루어질 수 있다. 소정의 양태에서, 생체외 방식으로 항-IL-27 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 예에서, 환자로부터 제거된 세포, 조직 및/또는 장기는 항-IL-27 항체를 포함하는 약제학적 조성물에 노출된 후, 세포, 조직 및/또는 장기는 후속적으로 환자에게 다시 이식된다.
소정의 양태에서, 항-IL-27 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 유전자 조작된 소정의 세포를 이식하여 폴리펩타이드를 발현 및 분비함으로써 전달될 수 있다. 소정의 양태에서, 이러한 세포는 동물 또는 인간 세포일 수 있고, 자가, 이종(heterologous) 또는 이종(xenogeneic)일 수 있다. 소정의 양태에서, 세포는 불멸화될 수 있다. 소정의 양태에서, 면역학적 반응의 가능성을 줄이기 위해, 세포는 주변 조직의 침윤을 피하기 위해 캡슐화될 수 있다. 소정의 양태에서, 캡슐화 물질은 전형적으로 단백질 산물(들)의 방출은 허용하지만 환자의 면역계 또는 주변 조직의 다른 유해한 요인에 의한 세포의 파괴를 방지하는 생체적합성, 반투과성 중합체 인클로저(enclosure) 또는 막이다.
적용
본 명세서에 기재된 조성물은 다수의 진단적 및 치료적 적용에 사용될 수 있다. 예를 들어, 검출 가능하게 표지된 항원-결합 분자가 샘플(예를 들어, 생물학적 샘플)에서 표적 항원의 존재 또는 양을 검출하기 위한 검정에 사용될 수 있다. 조성물은 표적 항원 기능의 저해를 연구하기 위한 시험관내 검정에 사용될 수 있다. 예를 들어, 조성물이 보체 단백질에 결합하여 이를 저해하는 일부 양태에서, 조성물은 보체 활성을 저해하거나 또는 그렇지 않으면 보체-관련 장애를 치료하는데 유용한 추가적인 신규한 화합물을 확인하도록 설계된 검정에서 양성 대조군으로 사용될 수 있다. 예를 들어, IL-27-저해 조성물은 IL-27 생성을 감소시키거나 또는 폐지하는 추가적인 화합물(예를 들어, 소분자, 압타머 또는 항체)를 확인하기 위한 검정에서 양성 대조군으로 사용될 수 있다. 조성물은 또한 아래에 설명된 바와 같이 치료적 방법에 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 (i) 항체 분자와 IL-27의 상호작용이 발생하도록 허용하는 조건하에서 샘플 또는 대상체(및 선택적으로, 참조 샘플 또는 대상체)를 임의의 본 명세서에 기재된 항체와 접촉시키는 단계 및 (ii) 항체 분자와 샘플 또는 대상체(및 선택적으로, 참조 샘플 또는 대상체) 사이의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 생물학적 샘플 또는 대상체에서 IL-27을 검출하는 방법을 제공한다.
키트
키트는 본 명세서에 개시된 바와 같은 항-IL-27 항체 및 사용 설명서를 포함할 수 있다. 키트는 적합한 용기에 항-IL-27 항체, 하나 이상의 대조군 및 다양한 완충액, 시약, 효소 및 당업계에 잘 알려져 있는 다른 표준 성분을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 항-IL-27 항체 또는 항원-결합 부분 및 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 대상체에서 암을 치료하는데 사용하기 위한 설명서, 선택적으로 본 명세서에 개시된 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합하여 사용하기 위한 설명서를 포함하는 키트를 제공한다.
용기는 적어도 하나의 바이알, 웰, 테스트 튜브, 플라스크, 병, 주사기 또는 항-IL-27 항체가 배치될 수 있고 및 일부 경우에, 적절하게 분취될 수 있는 다른 용기 수단을 포함할 수 있다. 추가적인 성분이 제공되는 경우, 키트는 이러한 성분이 배치될 수 있는 추가적인 용기를 포함할 수 있다. 키트는 또한 상업적 판매를 위해 밀폐된 항-IL-27 항체를 담기 위한 수단 및 임의의 다른 시약 용기를 포함할 수 있다. 이러한 용기는 목적하는 바이알이 유지되는 주사 또는 취입 성형 플라스틱 용기를 포함할 수 있다. 용기 및/또는 키트는 사용 설명서 및/또는 경고가 포함된 라벨이 포함할 수 있다.
사용 방법
본 발명의 조성물은 IL-27의 검출 및/또는 정량화 및/또는 IL-27 기능의 길항작용을 포함한 수많은 시험관내 및 생체내 유용성을 갖는다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킨다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시킨다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해 또는 감소시키는 방법을 제공하며, 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 분비를 유도하거나 또는 향상시키는 방법을 제공하며, 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개성 분비를 유도하거나 또는 향상시킨다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법을 제공하며, 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공되는 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 본 개시내용에 의해 제공되는 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편 또는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공되는 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
일부 양태에서, 암은 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암), 육종, 고환암, 난소암, 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중-음성 유방암), 흑색종, 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 결장직장암, 방광암, 자궁내막암, 전립선암, 갑상선암, 간세포 암종, 위암, 뇌암, 림프종(예를 들어, DL-BCL), 백혈병(예를 들어, AML) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어, 신장 투명 세포 암종)으로부터 선택된다.
위에 기재된 조성물은 특히 대상체에서 다양한 암을 치료 또는 예방하는 방법에 유용하다. 조성물은 부분적으로 투여 경로에 의존하는 다양한 방법을 사용하여 대상체, 예를 들어, 인간 대상체에 투여될 수 있다. 경로는, 예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입(IV), 피하 주사(SC), 복강내(IP) 주사, 근육내 주사(IM) 또는 척추강내 주사(IT)일 수 있다. 주사는 볼루스 또는 연속 주입일 수 있다.
투여는, 예를 들어, 국부 주입, 주사에 의해 또는 이식에 의해 달성될 수 있다. 이식은 막, 예컨대, 실라스틱 막 또는 섬유를 포함하는 다공성, 비-다공성 또는 젤라틴성 물질일 수 있다. 이식은 대상체에 대한 조성물의 지속적 또는 주기적 방출을 위해 구성될 수 있다. 예를 들어, 이들 각각의 개시내용 전체가 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 공개 제20080241223호; 미국 특허 제5,501,856호; 제4,863,457호; 및 제3,710,795호; EP488401; 및 EP 430539 참조. 조성물은, 예를 들어, 확산성, 침식성 또는 대류성 시스템, 예를 들어, 삼투 펌프, 생분해성 이식물, 전기확산 시스템, 전기삼투 시스템, 증기압 펌프, 전해 펌프, 발포성 펌프, 압전 펌프, 침식-기반 시스템 또는 전기기계 시스템에 기반한 이식 가능한 장치에 의해 대상체에게 전달될 수 있다.
일부 양태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 국부 투여에 의해 대상체에게 치료학적으로 전달된다.
대상체에서 암을 치료 또는 예방할 수 있는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 단편의 적합한 용량은, 예를 들어, 치료될 대상체의 연령, 성별 및 무게 및 사용되는 특정 저해제 화합물을 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 동일한 대상체를 치료하는데 필요한 IL-27-결합 Fab' 항체 단편의 용량과 비교하여 전체 항-IL-27 항체의 다른 용량이 암이 있는 대상체를 치료하는데 필요할 수 있다. 대상체에게 투여되는 용량에 영향을 미치는 다른 인자는, 예를 들어, 암의 유형 또는 중증도를 포함한다. 예를 들어, 전이성 흑색종이 있는 대상체는 교모세포종이 있는 대상체와 상이한 투여량의 항-IL-27 항체의 투여를 필요로 할 수 있다. 다른 인자는, 예를 들어, 대상체에 동시에 또는 이전에 영향을 미치는 기타 의학적 장애, 대상체의 일반적인 건강, 대상체의 유전적 소인, 식이, 투여 시간, 배설 속도, 약물 조합 및 대상체에게 투여되는 임의의 다른 추가적인 치료제를 포함할 수 있다. 임의의 특정 대상체에 대한 특정 투여량 및 치료 양생법은 치료하는 의료 종사자(예를 들어, 의사 또는 간호사)의 판단에 달려 있음을 이해하여야 한다. 적합한 투여량은 본 명세서에 기재되어 있다.
약제학적 조성물은 치료학적 유효량의 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 이러한 유효량은, 부분적으로, 투여된 항체의 효과 또는 하나 이상의 작용제가 사용되는 경우 항체 및 하나 이상의 추가적인 활성제의 조합 효과에 기초하여 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 단편의 치료학적 유효량은 또한 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 무게, 및 개체에서 목적하는 반응, 예를 들어, 종양 성장의 감소를 이끌어 내는 항체(및 하나 이상의 추가적인 활성제)의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 치료학적 유효량의 항-IL-27 항체는 특정 장애 및/또는 당업계에 공지되거나 또는 본 명세서에 기재된 특정 장애의 증상 중 어느 하나를 저해(이의 중증도의 감소 또는 발생의 제거) 및/또는 예방할 수 있다. 치료학적 유효량은 또한 조성물의 임의의 독성 또는 유해한 효과보다 치료학적으로 유익한 효과가 더 큰 양이다.
본 명세서에 기재된 임의의 항체 또는 이의 단편의 적합한 인간 용량은, 예를 들어, 1상 용량 증량 연구에서 추가로 평가될 수 있다. 예를 들어, 문헌[van Gurp et al. (2008) Am J Transplantation 8(8):1711-1718; Hanouska et al. (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1):523-531; 및 Hetherington et al. (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500] 참조.
일부 양태에서, 조성물은 조성물이 전체적으로 치료학적으로 효과적이도록 임의의 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 1종 이상(예를 들어, 2종, 3종, 4종, 5종, 6종, 7종, 8종, 9종, 10종 또는 11종 이상)의 추가적인 치료제를 포함한다. 예를 들어, 조성물은 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체 및 알킬화제를 포함할 수 있되, 항체 및 작용제는 조합될 때 대상체에서 암(예를 들어, 흑색종)을 치료 또는 예방하는데 치료학적으로 유효한 농도로 각각 존재한다.
이러한 조성물의 독성 및 치료적 효능은 세포 배양물 또는 실험적 동물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 임의의 암의 동물 모델)에서 공지된 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 이러한 절차는, 예를 들어, LD50(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료학적으로 유효한 용량)을 결정하는데 사용될 수 있다. 독성 효과와 치료적 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이며, 비 LD50/ED50의 비로 나타낼 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 조성물이 사용될 수 있지만, 영향을 받은 조직 부위에 이러한 화합물을 표적으로 하는 전달 시스템을 설계하고, 정상 세포에 대한 잠재적 손상을 최소화하여 부작용을 줄이기 위해 주의를 기울여야 한다.
세포 배양물 검정 및 동물 연구로부터 얻어진 데이터는 인간에서 사용하기 위한 투여량의 범위를 제형화하는데 사용될 수 있다. 이러한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여량은 일반적으로 독성이 거의 없거나 또는 전혀 없는 ED50을 포함하는 항체 또는 단편의 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투여 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다양할 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체의 경우, 치료학적 유효 용량은 초기에 세포 배양물 검정으로부터 추정될 수 있다. 용량은 세포 배양에서 결정된 바와 같이 IC50(즉, 증상의 최대 저해의 절반을 달성하는 항체의 농도)을 포함하는 순환하는 혈장 농도 범위를 달성하기 위해 동물 모델에서 제형화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에게 유용한 용량을 보다 정확하게 결정하는데 사용될 수 있다. 혈장 내 수준은, 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 일부 양태에서, 예를 들어, 국부 투여(예를 들어, 눈 또는 관절에)가 필요한 경우, 세포 배양 또는 동물 모델링은 국부 부위 내에서 치료학적으로 유효한 농도를 달성하는데 필요한 용량을 결정하는데 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 방법은 암에 대한 다른 요법과 함께 수행될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 방사선, 수술, 표적화된 또는 세포독성 화학요법, 화학방사선요법, 호르몬 요법, 면역요법, 유전자 요법, 세포 이식 요법, 정밀 의학, 게놈 편집 요법 또는 기타 약물요법과 동시에, 이전에 또는 이후에 대상체에게 투여될 수 있다.
위에 기재된 바와 같이, 본 명세서에 기재된 조성물(예를 들어, 항-IL-27 조성물)은 다음과 같지만 이들로 제한되지 않는 다양한 암을 치료하는데 사용될 수 있다: 카포시 육종, 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 골수아세포 전골수세포 골수단핵구 단핵구 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수구성(과립구) 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 맨틀 세포 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 버킷 림프종 및 변연부 B 세포 림프종, 진성다혈구증 림프종, 호지킨 질환, 비-호지킨 질환, 다발성 골수종, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 중쇄 질환, 고체 종양, 육종 및 암종, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 골육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 육종, 결장직장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두 암종, 유두 선암종, 낭포선암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간세포 암종(HCC), 간세포암, 담관 암종, 융모막 암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환 종양, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 비-소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 뇌실막종, 송과체종, 혈관모세포종, 청각 신경종, 희소돌기아교종, 수막종, 흑색종, 신경아세포종, 망막아세포종, 비인두 암종, 식도암종, 기저세포 암종, 담도암, 방광암, 골암, 뇌 및 중추 신경계(CNS) 암, 자궁경부암, 융모막 암종, 결장직장암, 결합조직암, 소화기암, 자궁내막암, 식도암, 눈암, 두경부암, 위암, 상피내 신생물, 신장 암, 후두암, 간 암, 폐암(소세포, 대세포), 흑색종, 신경아세포종; 구강암(예를 들어, 입술, 혀, 입 및 인두), 난소암, 췌장암, 망막아세포종, 횡문근육종, 직장암; 호흡기암, 육종, 피부암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 및 비뇨기계암.
병용 요법
일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 치료, 예를 들어, 암을 위한 또 다른 치료제 또는 치료와 조합될 수 있다. 예를 들어, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가적인 치료제와 조합하여 대상체(예를 들어, 인간 환자)에게 투여될 수 있되, 조합은 암이 있거나 또는 암이 발병할 위험이 있는 대상체에게 치료적 이점을 제공한다.
일부 양태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 하나 이상의 추가적인 치료제는 동일한 시간에(예를 들어, 동시에) 투여된다. 다른 양태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 처음으로 투여되고, 하나 이상의 추가적인 치료제는 두 번째로(예를 들어, 순차적으로) 투여된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제가 처음으로 투여되고, 항-IL-27 항체는 두 번째로 투여된다.
본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이전에 또는 현재 투여된 요법을 대체하거나 또는 증대시킬 수 있다. 예를 들어, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 치료할 때, 하나 이상의 추가적인 치료제의 투여는 중단되거나 감소될 수 있고, 예를 들어, 더 낮은 수준으로 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 이전 요법의 투여가 유지될 수 있다. 일부 양태에서, 이전 요법은 항-IL-27 항체의 수준이 치료적 효과를 제공하기에 충분한 수준에 도달할 때까지 유지될 것이다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공되는 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합하여 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 제2 치료제 또는 절차는 화학요법, 표적화된 항암 요법, 종양세포 용해성 약물, 세포독성제, 면역-기반 요법, 사이토카인, 외과적 절차, 방사선 절차, 공자극성 분자의 활성제, 저해성 분자의 저해제, 백신 또는 세포 면역요법 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, TIM-3 저해제, LAG-3 저해제, TIGIT 저해제, CD112R 저해제, TAM 저해제, STING 효능제, 4-1BB 효능제 또는 이들의 조합이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD39 길항제, CD73 길항제, CCR8 길항제 또는 이들의 조합이다. 일부 양태에서, 항-CD73은, 예를 들어, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 미국 공개 제2019/0031766 A1호에 개시되어 있는 임의의 항-CD73 항체이다. 일부 양태에서, 항-CD39는, 예를 들어, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있는 국제 공개 WO 2019/178269 A2에 개시되어 있는 임의의 항-CD39 항체이다.
일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PDR001, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 및 AMP-224로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-L1 저해제이다. 일부 양태에서, PD-L1 저해제는 FAZ053, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 및 BMS-936559로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 본 개시내용은 항-PD-1 항체의 하나 이상의 활성을 향상(예를 들어, 항-PD-1 항체에 노출된 세포로부터 PD-1-매개성 사이토카인 분비 향상; 항-PD-1 매개성 TNFα 분비 향상; 항-PD-1 매개성 IL-6 분비 향상)시키는 방법을 제공하며, 방법은 항-PD-1 항체와 동시에 또는 순차적으로, 세포를 본 개시내용에 의해 제공되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 노출시켜 항-PD1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 수니티닙(Sutent®), 카보잔티닙(CABOMETYX®), 악시티닙(INLYTA®), 렌바티닙(LENVIMA®), 에베롤리무스(AFINITOR®), 베바시주맙(AVASTIN®), 에파카도스타트, NKTR-214(CD-122-기반 효능제), 티보자닙(FOTIVDA®), 아벡시노스타트, 이필리무맙(YERVOY®), 트레멜리무맙, 파조파닙(VOTRIENT®), 소라페닙(NEXAVAR®), 템시롤리무스(TORISEL®), 라무시루맙(CYRAMZA®), 니라파립, 사볼리티닙, 보롤라닙(X-82), 레고라페닙(STIVARGO®), 도나페닙(멀티카이네이스 저해제), 캄렐리주맙(SHR-1210), 펙사스티모겐 데바시렙벡(JX-594), 라무시루맙(CYRAMZA®), 아파티닙(YN968D1), 캡슐화된 독소루비신(THERMODOX®), 티반티닙(ARQ197), ADI-PEG 20, 비니메티닙, 아파티닙 메실레이트, 닌테다닙, 리릴루맙, 니볼루맙(OPDIVO®), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®), 아테졸리주맙(TECENTRIQ®), 아벨루맙(BAVENCIO®), 더발루맙(IMFIMZI®), 세미플리맙-rwlc(LIBTAYO®), 티슬레리주맙 및/또는 스파르탈리주맙이다.
일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIM-3 저해제이되, 선택적으로 TIM-3 저해제는 MGB453 또는 TSR-022이다.
일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 LAG-3 저해제이되, 선택적으로 LAG-3 저해제는 LAG525, BMS-986016 및 TSR-033으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIGIT 저해제이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD112R 저해제이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TAM(Axl, Mer, Tyro) 저해제이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 STING 효능제이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 4-1BB 효능제이다.
일부 양태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 타이로신 카이네이스 저해제, 아데노신 축을 표적으로 하는 작용제(예를 들어, CD39 길항제, CD73 길항제 또는 A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제), CCR8 길항제, CTLA4 길항제, VEG-F 저해제 또는 이들의 조합이다.
화학치료제와의 조합
본 발명의 조성물과의 조합 및/또는 공동-투여에 적합한 화학치료제는, 예를 들어: 탁솔(taxol), 사이토칼라신 B(cytochalasin B), 그라미시딘 D(gramicidin D), 에티듐 브로마이드(ethidium bromide), 에메틴(emetine), 미토마이신(mitomycin), 에토포시드(etoposide), 테노포시드(tenoposide), 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 콜히친(colchicin), 독소루비신, 다우노루비신(daunorubicin), 다이하이드록시안트란신다이온(dihydroxyanthrancindione), 미톡산트론(mitoxantrone), 미트라마이신(mithramycin), 악티노마이신 D(actinomycin D), 1-데하이드로테스토스테론(1-dehydrotestosterone), 글루코코르티코이드(glucocorticoids), 프로카인(procaine), 테트라카인(tetracaine), 리도카인(lidocaine), 프로프라놀롤(propranolol) 및 퓨로마이신(puromycin) 및 이들의 유사체 또는 상동체를 포함한다. 추가의 작용제는, 예를 들어, 항대사산물(예를 들어, 메토트렉세이트(methotrexate), 6-머캅토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 사이타라빈(cytarabine), 5-플루오로우라실 데카바진(5-fluorouracil decarbazine)), 알킬화제(예를 들어, 메클로레타민(mechlorethamine), 티오TEPA, 클로람부실(chlorambucil), 멜팔란(melphalan), 카무스틴(carmustine)(BSNU), 로무스틴(lomustine)(CCNU), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 부설판(busulfan), 다이브로모만니톨(dibromomannitol), 스트렙토조토신(streptozotocin), 미토마이신 C, 시스-다이클로르다이아민 플라티늄(II)(cis-dichlordiamine platinum(II): DDP), 프로카바진(procarbazine), 알트레타민(altretamine), 시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 네다플라틴(nedaplatin), 사트라플라틴(satraplatin) 또는 트라이플라틴 테트라나이트레이트(triplatin tetranitrate)), 안트라사이클린(예를 들어, 다우노루비신(이전에는 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예를 들어, 닥티노마이신(dactinomycin)(이전에는 악티노마이신), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신 및 안트라마이신(anthramycin: AMC)) 및 항-유사분열제(예를 들어, 빈크리스틴 및 빈블라스틴) 및 테모졸로마이드(temozolomide)를 포함한다.
PD-1/PD-L1 길항제와의 조합
일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하고, PD-1/PD-L1 생물학적 활성 및/또는 하류 경로(들)를 저해하는 하나 이상의 PD-1 길항제 및/또는 인간 PD-1/PD-L1 신호전달 또는 다른 인간 PD-1/PD-L1-매개성 기능에 의해 매개되는 세포 처리와 조합(예를 들어, 조합하여 투여)된다.
따라서, PD-1/PD-L1에 대한 수용체 결합 및/또는 세포 반응의 유발과 같은 PD-1/PD-L1 신호전달에 의해 매개되는 하류 경로 및/또는 세포 과정을 포함하는 PD-1/PD-L1 생물학적 활성을 직접적으로 또는 다른자리입체성으로(allosterically) 차단, 길항, 억제, 저해 또는 감소시키는 PD-1 길항제가 본 명세서에 제공된다. 또한, 세포 또는 대상체에 의해 생산된 인간 PD-1 또는 PD-L1의 양(quantity) 또는 양(amount)을 감소시키는 PD-1 길항제가 본 명세서에 제공된다.
일부 양태에서, 본 개시내용은 인간 PD-1에 결합하고, PD-1에 대한 PD-L1 결합을 방지, 저해 또는 감소시키는 PD-1 길항제를 제공한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1을 암호화하는 mRNA에 결합하고 번역을 방지한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1을 암호화하는 mRNA에 결합하고, 분해 및/또는 턴오버를 유발한다.
일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1 신호전달 또는 기능을 저해한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L1, PD-L2 또는 PD-L1과 PD-L2 둘 다에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L1 및 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L2에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, PD-1 길항제는 동족 리간드에 대한 PD-1의 결합을 저해한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 대한 PD-1의 결합, PD-L2에 대한 PD-1의 결합 또는 PD-L1과 PD-L2 둘 다에 대한 PD-1의 결합을 저해한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 동족 리간드에 대한 PD-1의 결합을 저해하지 않는다.
일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 단리된 항체(mAb) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-L1에 결합하고 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 저해하는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 결합하고 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 저해하는 항체 또는 항원 결합 단편이다.
PD-1과 이의 리간드 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 이들 모두 사이의 상호작용을 저해하거나 또는 방해하는 여러 면역 관문 길항제가 임상 개발 중이거나 또는 현재 암을 치료하기 위해 임상의가 이용 가능하다.
본 개시내용에 의해 제공되는 임의의 조성물, 방법 및 용도에서 PD-1 길항제를 포함할 수 있는 항-인간 PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 예는 다음을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: KEYTRUDA®(펨브롤리주맙, MK-3475, h409A11; US8952136, US8354509, US8900587 및 EP2170959 참조, 이들 모두 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음; 머크), OPDIVO®(니볼루맙, BMS-936558, MDX-1106, ONO-4538; US7595048, US8728474, US9073994, US9067999, EP1537878, US8008449, US8779105 및 EP2161336 참조, 이들 모두 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음; 브리스톨 마이어스 스퀴브(Bristol Myers Squibb)), MEDI0680(AMP-514), BGB-A317 및 BGB-108(베이진(BeiGene)), 244C8 및 388D4(WO2016106159 참조, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음; 에누메랄 바이오메디칼(Enumeral Biomedical)), PDR001(노바티스) 및 REGN2810(리제네론(Regeneron)). 따라서, 일부 양태에서 PD-1 길항제는 펨브롤리주맙이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 니볼루맙이다.
본 개시내용에 의해 제공되는 임의의 조성물, 방법 및 용도에서 PD-1 길항제를 포함할 수 있는 항-인간 PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 예는 다음을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: BAVENCIO®(아벨루맙, MSB0010718C, WO2013/79174 참조, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음; 머크/화이자(Pfizer)), IMFINZI®(더발루맙, MEDI4736), TECENTRIQ®(아테졸리주맙, MPDL3280A, RG7446; WO2010/077634 참조, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음; 로슈(Roche)), MDX-1105(BMS-936559, 12A4; US7943743 및 WO2013/173223 참조, 이들 모두 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음; 메다렉스(Medarex)/BMS) 및 FAZ053(노바티스). 따라서, 일부 양태에서 PD-1 길항제는 아벨루맙이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 더발루맙이다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 아테졸리주맙이다.
일부 양태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 면역접합체(immunoadhesin), 예를 들어, 면역글로불린 분자의 Fc 영역과 같은 불변 영역에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 융합 단백질이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 면역접합 분자의 예는 WO2010/027827 및 WO2011/066342에 기술되어 있으며, 이들 모두 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 PD-L2-FC 융합 단백질인 AMP-224(B7-DCIg로도 알려져 있음)이다.
당업자는 PD-1 또는 PD-L1에 결합하고 PD-1/PD-L1 신호전달 경로를 방해하는 임의의 PD-1 길항제가 본 명세서에 개시된 조성물, 방법 및 용도에 적합하다는 것을 이해할 것이다.
일부 양태에서, PD-1/PD-L1 길항제는 소분자, 핵산, 펩타이드, 펩타이드 모방체, 단백질, 탄수화물, 탄수화물 유도체 또는 글리코폴리머이다. 예시적인 소분자 PD-1 저해제는 문헌[Zhan et al., (2016) Drug Discov Today 21(6):1027-1036]에 기술되어 있다.
TIM-3 저해제와의 조합
일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIM-3 저해제와 조합(예를 들어, 조합으로 투여)된다. TIM-3 저해제는 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질 또는 올리고펩타이드일 수 있다. 일부 양태에서, TIM-3 저해제는 MGB453(노바티스), TSR-022(테사로(Tesaro)) 또는 LY3321367(엘리 릴리(Eli Lilly))로부터 선택된다. 일부 양태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 MGB453과 조합하여 투여된다. 일부 양태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TSR-022와 조합하여 투여된다.
LAG-3 저해제와의 조합
일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 LAG-3 저해제와 조합(예를 들어, 조합으로 투여)된다. LAG-3 저해제는 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질 또는 올리고펩타이드일 수 있다. 일부 양태에서, LAG-3 저해제는 LAG525(노바티스), BMS-986016(브리스톨-마이어스 스퀴브), TSR-033(테사로), MK-4280(머크 앤 코(Merck & Co)) 또는 REGN3767(리제네론)로부터 선택된다.
기타 조합
일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT 저해제, 카이네이스 저해제(예를 들어, 타이로신 카이네이스 저해제(TKI)), CD112R 저해제, TAM 수용체 저해제, STING 효능제 및/또는 4-1BB 효능제 또는 이들의 조합과 조합(예를 들어, 조합으로 투여)된다. 일부 양태에서, 본 개시내용에 의해 제공되는 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 타이로신 카이네이스 저해제, 아데노신 축을 표적으로 하는 작용제(예를 들어, CD39 길항제, CD73 길항제 또는 A2AR, A2BR 또는 이중 A2AR/A2BR 길항제), CCR8 길항제, CTLA4 길항제, VEG-F 저해제 또는 이들의 조합과 조합(예를 들어, 조합으로 투여)된다.
검출 방법
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 생물학적 샘플에서 인간 IL-27의 검출 및/또는 정량화 방법에 사용될 수 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 환자에서 질환(예를 들어, 암)의 진행을 진단, 예후예측 및/또는 결정하는데 유용하다.
본 명세서에 정의된 바와 같이 암의 개선을 위해 대상체(예를 들어, 인간 환자)를 모니터링하는 것은 질환 매개변수의 변화, 예를 들어, 종양 성장의 감소에 대해 대상체를 평가하는 것을 의미한다. 일부 실시형태에서, 평가는 투여 후 적어도 한(1)시간, 예를 들어, 적어도 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 12시간, 24시간 또는 48시간 또는 적어도 1일, 2일, 4일, 10일, 13일, 20일 이상 또는 적어도 1주, 2주, 4주, 10주, 13주, 20주 이상 후에 수행된다. 대상체는 다음 기간 중 하나 이상에서 평가될 수 있다: 치료 시작 전; 치료 중; 또는 하나 이상의 치료 요소가 투여된 후. 평가는 추가의 치료의 필요성을 평가하는 것, 예를 들어, 투여량, 투여 빈도 또는 치료 기간이 변경되어야 하는지 여부를 평가하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 선택된 치료 양식을 추가 또는 중단할 필요성을 평가하는 것, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 암에 대한 임의의 치료법을 추가 또는 중단하는 것을 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체로부터의 샘플에서 IL-27을 검출하는 방법을 제공하며, 방법은 (a) IL-27이 샘플에 존재하는 경우 검출 항체가 검출 항체-IL-27 복합체를 형성하도록 하는 조건하에서 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계로서, 검출 항체는 본 개시내용에 의해 제공되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인, 상기 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계; 및 (b) 만약 있다면, (a) 단계에서 생성된 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 IL-27-관련 암을 검출하는 방법을 제공하며, 방법은 (a) IL-27이 샘플에 존재하는 경우 검출 항체가 검출 항체-IL-27 복합체를 형성하도록 하는 조건하에서 IL-27-관련 암이 있는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플과 검출 항체를 접촉시키는 단계로서, 검출 항체는 본 개시내용에 의해 제공되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, 상기 IL-27-관련 암이 있는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플과 검출 항체를 접촉시키는 단계; 및 (b) 만약 있다면, (a) 단계에서 생성된 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 검출 항체는 검출 가능한 표지에 커플링된다. 일부 실시형태에서, 방법은 IL-27이 샘플에 존재하는 경우, 샘플을 포획 항체와 접촉시켜 IL-27 및 포획 항체를 포함하는 복합체를 생성하는 단계를 더 포함하되, 포획 항체는 본 개시내용에 의해 제공되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.
일부 실시형태에서, 포획 항체는 고체 지지체에 고정된다. 일부 실시형태에서, 샘플은 검출 항체 전에 포획 항체와 접촉된다. 일부 실시형태에서, 샘플은 체액 샘플이다. 일부 실시형태에서, 유체 샘플은 혈액, 혈청, 혈장, 세포 용해물 또는 조직 용해물이다.
일부 실시형태에서, 암은 신장 세포 암종(RCC), 간세포 암종, 폐암, 위식도암, 난소암, 자궁내막암, 흑색종, 백혈병 및 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 신장 세포 암종(RCC)이다. 다른 실시형태에서, 암은 간세포 암종(HCC)이다. 일부 실시형태에서, 암은 백혈병 및 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 급성 골수구성 백혈병(AML)이다.
실시예
본 개시내용이 이의 특정 양태를 참조하여 설명되었지만, 본 개시내용의 진정한 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 다양한 변경이 이루어질 수 있고 균등물이 대체될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해되어야 한다. 또한, 특정 상황, 물질, 물질의 조성, 과정, 과정 단계 또는 단계들을 본 개시내용의 목적, 사상 및 범위에 적합화시키기 위해 많은 수정이 이루어질 수 있다. 이러한 모든 수정은 본 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.
실시예 1: 인간 IL-27의 P28 서브유닛에 특이적으로 결합하는 효모에서의 항-IL-27 항체의 생성
다중 에피토프 빈(bin)을 나타내는 항-IL-27 항체를 아래 기술된 방법을 사용하여 8개의 미경험 인간 합성 효모 라이브러리로부터 선택하였다.
물질 및 방법
약 109개의 다양성의 각각의 8개의 미경험 인간 합성 효모 라이브러리를 이전에 기술된 바와 같이 번식시켰다(예를 들어, 문헌[Xu et al., (2013) Protein Eng Des Sel 26(10):663-670]; WO2009036379; WO2010105256; 및 WO2012009568 참조, 이들 모두 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음). 처음 두 라운드의 선택을 위해, 이전에 기술된 바와 같이 Miltenyi MACS 시스템을 이용하는 자기 비드 분류 기법을 수행하였다(예를 들어, 문헌[Siegel et al. (2004) J Immunol Methods 286(1-2):141-153] 참조, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용되어 있음).
간략하게는, 효모 세포(약 1010개 세포/라이브러리)를 세척 완충액(포스페이트-완충 식염수(PBS)/0.1% 소 혈청 알부민(BSA))에서 30℃에서 30분 동안 3㎖의 100nM 바이오티닐화된 항원(재조합 인간 IL-27; 알앤디 시스템즈(R&D Systems))과 인큐베이션하였다. 40㎖의 얼음-냉각 세척 완충액으로 한 번 세척한 후, 세포 펠릿을 20㎖의 세척 완충액에 현탁시키고, 스트렙타비딘 마이크로비드(500㎕)를 효모에 첨가하고, 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 효모 세포를 펠릿화하고, 20㎖의 세척 완충액에 재현탁시키고, Miltenyi LS 칼럼에 로딩하였다. 20㎖을 로딩한 후, 칼럼을 3㎖의 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 그런 다음, 칼럼을 자기장에서 제거하고, 효모 세포를 5㎖의 성장 배지로 용리한 다음, 밤새 성장시켰다. 유세포 분석을 사용하여 다음 라운드의 선택을 수행하였다. 대략 2×107개의 효모 세포를 펠릿화하고, 세척 완충액으로 3회 세척하고, 평형 조건하에서 감소하는 농도의 바이오티닐화된 항원(100nM 내지 1nM), 종 교차-반응성을 얻기 위한 상이한 종의 30nM 바이오티닐화된 항원 또는 선택으로부터 비-특이적 항체를 제거하기 위한 다중-특이성 고갈 시약(poly-specificity depletion reagent: PSR)과 함께 30℃에서 인큐베이션하였다. PSR 고갈을 위해, 라이브러리를 바이오티닐화된 PSR 시약의 1:10 희석액과 함께 인큐베이션하였다.
그런 다음, 효모 세포를 세척 완충액으로 2회 세척하고, LC-FITC(1:100 희석됨) 및 SA-633(1:500 희석됨) 또는 EAPE(1:50 희석됨) 2차 시약으로 4℃에서 15분 동안 염색하였다. 세척 완충액으로 2회 세척한 후, 세포 펠릿을 0.3㎖의 세척 완충액에 재현탁시키고, 여과기-캡이 있는 분류 튜브로 옮겼다. FACS ARIA 분류기(비디 사이언시스(BD Biosciences))를 사용하여 분류를 수행하고, 목적하는 특성을 갖는 항체를 선택하기 위해 분류 게이트(sort gate)를 결정하였다. 목적하는 모든 특성을 가진 집단이 얻어질 때까지 선택 라운드를 반복하였다. 분류의 마지막 라운드 후, 효모 세포를 플레이팅하고, 특성화를 위해 개별 콜로니를 선택하였다.
경쇄 다양화
항체의 추가 발견 및 개선을 위해 1차 발견 단계에서 경쇄 다양화 프로토콜을 사용하였다.
경쇄 배취 다양화 프로토콜: 미경험 선택 산출물(selection output)로부터의 중쇄 플라스미드를 스매시 및 그랩을 통해 효모에서 추출하고, 증식시킨 후 대장균으로부터 정제하고, 5×106의 다양성을 갖는 경쇄 라이브러리로 형질전환시켰다. 미경험 발견과 동일한 조건을 이용하여 1라운드의 MACS 및 4라운드의 FACS로 선택을 수행하였다.
항체 최적화
아래 기재된 바와 같이 중쇄 및 경쇄 가변 영역에 다양성을 도입함으로써 항체의 최적화를 수행하였다.
CDRH1 및 CDRH2 선택: 단일 항체의 CDRH3을 1×108의 다양성의 CDRH1 및 CDRH2 변이체를 포함하는 미리 만들어진 라이브러리로 재조합하고, 미경험 발견에 기술된 바와 같이 1라운드의 MACS 및 4라운드의 FACS로 선택을 수행하였다. 상이한 FACS 라운드에서, 적정 또는 모 Fab 사전-복합체화에 의한 PSR 결합, 종 교차-반응성 및 친화력 압력에 대해 라이브러리를 조사하였고, 목적하는 특성을 가진 집단을 얻기 위해 분류를 수행하였다.
항체 생산 및 정제
효모 클론을 포화 상태로 성장시킨 다음, 진탕하면서 30℃에서 48시간 동안 유도하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠릿화하고, 정제를 위해 상청액을 수확하였다. 단백질 A 칼럼을 사용하여 IgG를 정제하고, 아세트산(pH 2.0)으로 용리하였다. 파파인 소화에 의해 Fab 단편을 생성하고, KappaSelect(지이 헬스케어 라이프사이언시스(GE Healthcare LifeSciences))를 통해 정제하였다.
포르테바이오 K D 측정
일반적으로 이전에 기술된 바와 같이 Octet RED384에서 포르테바이오(ForteBio) 친화성 측정을 수행하였다(예를 들어, 문헌[Estep et al, High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. Mabs 5(2), 270-278 (2013)] 참조, 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용됨). 간략하게는, AHQ 센서에 온라인으로 IgG를 로딩하여 포르테바이오 친화성 측정을 수행하였다. 센서를 30분 동안 검정 완충액에서 오프라인으로 평형화한 다음, 기준선 설정을 위해 60초 동안 온라인으로 모니터링하였다. 로딩된 IgG가 있는 센서를 3분 동안 100nM 항원에 노출시킨 후, 오프-레이트 측정을 위해 3분 동안 검정 완충액으로 옮겼다. 모든 동역학은 1:1 결합 모델을 사용하여 분석하였다. 재조합 인간 IL-27 단백질(알앤디 시스템즈 Cat: 2526-IL)을 항원으로 사용하였다. 항-IL-27 항체에 대한 친화성 측정은 도 1에 나타나 있다.
포르테바이오 에피토프 비닝/리간드 차단
표준 샌드위치 형식 교차-차단 검정을 사용하여 에피토프 비닝/리간드 차단을 수행하였다. 대조군 항-표적 IgG를 AHQ 센서에 로딩하고, 센서의 비어 있는(unoccupied) Fc-결합 부위를 관련 없는 인간 IgG1 항체로 차단하였다. 그런 다음, 센서를 100nM 표적 항원에 노출시킨 후 제2 항-표적 항체 또는 리간드에 노출시켰다. 항원 회합 후 제2 항체 또는 리간드에 의한 추가적인 결합은 비어 있는 에피토프(비-경쟁자)를 나타내는 반면, 결합 없음은 에피토프 차단(경쟁자 또는 리간드 차단)을 나타낸다.
MSD-SET 동역학 검정
이전에 기술된 바와 같이 평형 친화성 측정을 수행하였다(문헌[Estep et al., 2013]). 10pM 내지 100pM에서 일정하게 유지된 항원과 함께 PBS + 0.1% IgG-유리 BSA(PBSF)에서 용액 평형 적정(Solution equilibrium titration: SET)을 수행하고, 5nM 내지 100nM에서 시작하는 항체의 3-배 내지 5-배 연속 희석액과 함께 인큐베이션하였다(실험 조건은 샘플에 따라 다름). 항체(PBS 중 20nM)를 4℃에서 밤새 또는 실온에서 30분 동안 표준 결합 MSD-ECL 플레이트에 코팅하였다. 그런 다음, 플레이트를 700rpm에서 진탕하면서 30분 동안 차단한 후, 세척 완충액(PBSF + 0.05% Tween 20)으로 3회 세척하였다. SET 샘플을 적용하고, 700rpm에서 진탕하면서 150초 동안 플레이트 상에서 인큐베이션한 후 1회 세척하였다. 플레이트 상에 포획된 항원을 플레이트 상에서 3분 동안 인큐베이션함으로써 PBSF에서 250 ng/㎖ 설포태그-표지된 스트렙타비딘으로 검출하다. 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척한 다음, 계면활성제가 포함된 1× 판독 완충액 T를 사용하여 MSD Sector Imager 2400 기기에서 판독하였다. 유리 항원의 백분율을 Prism에서 적정된 항체의 함수로 플로팅하고, KD를 추출하기 위한 2차 방정식에 피팅하였다. 처리량을 개선하기 위해, SET 샘플 준비를 포함한 MSD-SET 실험 전반에 걸쳐 액체 핸들링 로봇을 사용하였다.
실시예 2: 재조합 인간 IL-27에 대한 항-IL-27 항체의 결합
재조합 인간 IL-27에 결합하는 실시예 1에 기재된 항-IL-27 항체의 능력을 ELISA에 의해 평가하였다. 간략하게는, 눙크(Nunc) MaxiSorp ELISA 플레이트(Affymetrix #44-2404-21)를 100㎕/웰 재조합 인간 IL-27(알앤디 시스템즈 #2526-IL/CF)(PBS에 희석된 0.5 ㎍/㎖)로 코팅하여 밀봉하고, 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 플레이트를 100 ㎕/웰의 세척 완충액(PBS + 0.01% Tween)으로 3회 세척하였다. 그런 다음, 플레이트를 200 ㎕/웰의 차단 완충액(PBS + 0.1% BSA + 0.01% Tween)으로 실온(RT)에서 1시간 동안 진탕하면서 차단하였다. 차단 완충액을 따라내고, 표시된 대로 희석된 대조군 및 항-IL-27 항체의 웰당 100㎕를 첨가하였다. 1 ㎍/㎖의 최고 농도에서 시작하여 항체를 1:10으로 희석하여 각 항체에 대해 10-포인트 연속 희석액을 만들었다. 플레이트를 진탕하면서 실온에서 1시간 내지 2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 100 ㎕/웰의 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 100 ㎕/웰의 항-인간 IgG 제2 항체(서던바이오테크(SouthernBiotech); Cat. # 2014-05)를 첨가하였다(차단 완충액에 1:5000 희석됨). 그런 다음, 플레이트를 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 인큐베이션 후, 플레이트를 100 ㎕/웰의 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 플레이트를 발색시키기 위해, 100 ㎕/웰의 TMB 완충액(라이프 테크놀로지스(Life Technologies) #00-2023)을 첨가하였다. 표준 곡선의 웰에서 청색의 발색이 관찰되었고, 희석된 대조군 항체의 최고 농도가 진한 청색에 도달하자마자(5분 내지 10분), 50 ㎕/웰의 STOP 용액(써모 피셔(Thermo Fisher) #SS04)을 첨가하였다(색상은 황색으로 변할 것임). 발색된 플레이트를 반응을 중지한 후 30분 이내에 450㎚(파장 보정을 위해 570㎚를 뺌)에서 판독하였다.
예를 들어, 생화학 친화성 및 특이성 연구는 항-IL-27 항체 항-IL-27 Ab1이 이종이량체 사이토카인 IL-27의 p28 서브유닛(EBI3 서브유닛이 아님)에 결합함을 보여준다. 항-IL-27 Ab1은 인간, 비인간 영장류 및 설치류 재조합 IL-27에 결합하였으며, 결합의 정도는 종마다 달랐다. IL-27에 대한 항 IL 27 Ab1의 결합 특이성은 약 4500개의 세포 표면 및 가용성 분자의 패널에 대한 테스트에 의해 확인하였으며, 표적외 결합은 관찰되지 않았다. 수용체 IL-27RA(WSX-1)에 대한 IL-27의 결합 특이성도 또한 확인하였다; 다른 세포 표면 수용체는 인간 IL-27에 결합하지 않았다. 인간 IL-27과 IL-27RA(WSX-1) 간의 상호작용을 차단하는 항-IL-27 Ab1의 능력을 표면 플라스몬 공명에 의해 확인하였다.
본 명세서에 개시된 항체의 결합을 여러 모델 시스템에서 평가하였다. 인간 IL-27은 마우스 세포에서 생물학적으로 활성이므로, DNA 미니서클 전달을 사용한 마우스에서 인간 IL-27의 전신 과발현을 전체-게놈 마이크로어레이 분석, 유세포 분석 및 혈청 사이토카인 분석에 의해 생체내 IL-27-매개성 효과를 분석하는데 사용하였다. 생체내 IL-27에 의해 조절된 많은 마커는 인간 세포-기반 검정의 결과와 일치하였다. 항-IL-27 Ab3을 또한 파종성 B16 종양 모델에서 평가하였다. 해당 환경에서, 항-IL-27 Ab3을 이용한 처리는 IL-27 리간드(IL-27p28, EBI3) 또는 수용체(IL-27RA)의 다양한 성분이 결핍된 마우스에서 관찰된 표현형과 일치하는 결과를 보여주었다.
종합적으로, 이러한 연구는 항-IL-27 Ab1(및 이의 자손개체 항-IL-27 Ab3)이 단독으로 또는 PD-L1 차단제와의 조합하여 마우스에서 IL 27 결핍을 표현형 모사(phenocopy)하고, IL-27에 대해 높은 친화성으로 특이적으로 결합할 수 있으며, 면역억제 효과를 저해할 수 있음을 입증한다.
실시예 3: 항-IL27 항체는 시험관내에서 STAT1의 인산화를 저해한다
IL-27 수용체(IL-27R)를 통한 IL-27 신호전달은 신호 변환기 및 전사 활성제 1(STAT1) 폴리펩타이드(pSTAT1)의 인산화를 초래한다. 실시예 1에 기재된 항-IL-27 항체를 유세포 분석에 의해 인간 전혈, 인간 PBMC, U937 골수구성 세포(조직구성 림프종 세포주) 및 HUT-78 T 세포 림프종 세포에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화를 저해하는 능력에 대해 테스트하였다.
항-IL-27 항체를 인간 전혈에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화를 저해하는 능력에 대해 테스트하였다. 간략하게는, 실온에서 보관된 EDTA 항응고 인간 전혈을 이 검정에 사용하였다. 45㎕의 혈액을 둥근 바닥 플레이트(피닉스(Phenix) #850356) 깊은 웰의 각 웰에 분배하고, 플레이트 워머(에코썸(EchoTherm) IC20)의 37℃에서 또는 37℃ 인큐베이터에서 30분 동안 가온하였다. 항-IL-27 항체를 폴리프로필렌 V-바닥 플레이트(코닝(Corning) #3363)에서 내독소가 없는 PBS(테크노바(Teknova) #P0300)에 10× 최고 농도로 희석하였다. 항-IL-27 항체를 내독소가 없는 PBS에 원하는 대로 연속 희석하였다. 비자극 및 자극 대조군을 위해 PBS 만을 웰에 첨가하였다. 5㎕의 각 희석액을 45㎕의 혈액의 웰에 첨가하고, 플레이트 진탕기에서 15초 동안 1000RPM(에펜도르프(Eppendorf) Mix Mate)에서 진탕하여 혼합하였다. 플레이트를 플레이트 워머의 37℃에서 또는 37℃ 인큐베이터에서 60분 동안 인큐베이션하였다.
재조합 인간 IL-27(알앤디 시스템즈 # 2526-IL)의 10㎍ 바이알에 100㎕ PBS + 0.1% BSA(10% BSA 시그마(Sigma) #A1595로 제조)를 첨가하여 100 ㎍/㎖로 재구성하였다. 재조합 hIL-27(rhIL-27)의 작업 스톡을 내독소가 없는 PBS에 200 ng/㎖로 희석하여 준비하였다. 60-분 인큐베이션 후, 200 ng/㎖ rhIL-27의 5㎕을 자극된 혈액의 각 웰에 첨가하였다. 5㎕의 PBS를 비자극 대조군 웰에 첨가하였다. 플레이트를 플레이트 진탕기에서 1000RPM에서 15초 동안 진탕하였다. 플레이트를 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
30-분 인큐베이션 후, 세포를 고정하였다. Lyse/Fix 시약(BD #558049)을 멸균수(하이클론(Hyclone) #SH3052902)에 1:5로 희석하고, 수조에서 37℃로 가온하였다. 500㎕의 Lyse/Fix 시약을 깊은 웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 플레이트 진탕기에서 1000RPM에서 15초 동안 혼합하였다. 플레이트를 37℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다.
15-분 인큐베이션 후, 플레이트를 실온(에펜도르프 원심분리기 5810R)에서 5분 동안 1500RPM에서 원심분리하고, 상청액을 플리킹(flicking)하여 버렸다. 1㎖의 내독소가 없는 PBS를 웰당 첨가하고, 플레이트를 플레이트 진탕기에서 1000RPM에서 15초 동안 진탕하였다. 플레이트를 실온(에펜도르프 원심분리기 5810R)에서 5분 동안 1500RPM에서 원심분리하고, 상청액을 플리킹하여 버렸다. 세포 펠릿은 플레이트에 남아 있었다.
세포 펠릿을 FACS 완충액(PBS, 깁코(Gibco) #14190-144/2% FBS, 시그마 #F8317/1mM EDTA, 피셔(Fisher) #BP2482) 중 50㎕의 1:200 CD14-퍼시픽 블루(바이오레전드(Biolegend) #325616)에 재현탁시키고, U-바닥 96 웰 플레이트(코스터(Costar) #3799)로 옮겼다. 플레이트를 플레이트 실러(VWR #89134-432)로 밀봉하고, 암실에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
30분 인큐베이션 후, 150㎕의 FACS 완충액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 5분 동안 1500RPM에서 원심분리하였다. 그런 다음, 세포 펠릿을 피펫팅하면서 100㎕의 Perm III(-20℃에 보관됨)(BD #558050)에 재현탁시키고, 플레이트를 플레이트 실러 및 뚜껑으로 밀봉하였다. 플레이트를 -20℃에서 밤새 또는 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다.
인큐베이션 후, 150㎕의 PBS를 첨가하고, 플레이트를 실온에서 5분 동안 1500RPM에서 원심분리하였다. 상청액을 플리킹하여 플레이트로부터 버리고, 플레이트를 아래 표 6에 기재된 바와 같이 제조된 50㎕의 염색 칵테일에 재현탁시켰다:
Figure pct00002
플레이트를 암실에서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 인큐베이션 후, 100㎕의 FACS 완충액을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 5분 동안 1500RPM에서 원심분리하였다. 상청액을 플리킹하여 플레이트로부터 버리고, 플레이트를 유세포 분석에 의해 분석하기 위해 100㎕ FACS 완충액에 재현탁시켰다.
실시예 1에 기재된 항-IL-27 항체를 유세포 분석에 의해 풀링된 인간 PBMC에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화를 저해하는 능력에 대해 평가하였다. 간략하게는, 버피 코트(buffy coat)로부터 얻어진 인간 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)의 냉동된 저온바이알을 액체 질소 저장소에서 꺼내어 37℃ 수조에서 빠르게 해동시켰다. 각 저온바이알의 내용물을 P1000 피펫으로 제거하고, 15㎖의 원뿔형 팔콘 튜브로 옮겼다. 2㎖ 내지 3㎖의 완전한 RPMI-1640(깁코, 61870-036)을 해동된 세포에 천천히 첨가하고, 세포를 부드럽게 휘젓거나 플리킹하여 현탁시켰다. 원뿔형 튜브에 완전한 RPMI-1640으로 최대 10㎖까지 채우고, 튜브를 뒤집어서 혼합하였다. 원뿔형 튜브를 실온에서 8분 동안 1400RPM에서 원심분리하였다.
PBMC 세포를 따뜻한 무혈청 RPMI-1640에서 ㎖당 4백만 개 세포의 밀도로 재현탁시키고, 둥근 바닥 96-웰 플레이트(코스터, 3799)에서 웰(50㎕)당 200,000개 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 항-IL-27 항체를 96-웰 폴리프로필렌 플레이트의 첫 번째 줄에 있는 무혈청 RPMI-1640에 40 ㎍/㎖의 최고 농도(최종 10 ㎍/㎖일 것임)로 희석하였다. 플레이트의 처음 10개 행의 나머지 부분에 원하는 대로 연속 희석액(1:2, 1:3 등)을 만들었다. 50 마이크로리터(㎕)의 항체 스톡(4×)을 둥근 바닥 플레이트의 PBMC 세포의 플레이트의 처음 10개 행에 추가하였다. 11행 및 12행에, 50㎕의 무혈청 RPMI-1640 세포 배지를 첨가하였다. 그런 다음, 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다.
2-시간 인큐베이션 후, 무혈청 RPMI-1640 세포 배지에 희석된 50 ng/㎖ 재조합 인간 IL-27(알앤디 시스템즈, 2526-IL)의 100μ를 25 ng/㎖의 최종 농도를 위해 각 웰에 첨가하였다(무혈청 배지 단독 또는 항체 단독을 포함하는 대조군 웰 제외). 100㎕의 무혈청 RPMI-1640 세포 배지를 대조군 웰 또는 항체만 있는 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다.
20-분 인큐베이션 후, 탈이온수 중 50㎕의 4% PFA(피어스(Pierce), 28906)를 각 웰에 직접 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 5분 동안 인큐베이션하여 세포를 고정하였다. 플레이트를 2000RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 배지를 플리킹하여 버리고, 플레이트를 150㎕ DPBS로 세척하였다. 세척 단계를 2회 더 반복하였다. H2O에 희석된 50 μ 얼음 냉각된 90% 메탄올(MeOH)(시그마, 439193)을 12-채널 피펫을 사용하여 각 웰이 빠르게 첨가하였다. MeOH를 첨가할 때, 각 웰을 혼합하기 위해 특별한 주의를 기울였다. 플레이트를 20℃에서 적어도 15분 동안 인큐베이션하였다. 100㎕의 DPBS를 90% 메탄올의 상부에 있는 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 2000RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 플레이트 내용물을 플리킹하여 버리고, 플레이트를 이전에 기술된 바와 같이 3회 세척하였다. 마지막 세척 후, 세포 펠릿은 플레이트의 웰에 남아있었다.
펠릿화된 PBMC를 FACS 완충액(2% FBS, DPBS 중 2mM EDTA) 중 pSTAT1 PE(비디 포스플로우(BD Phosflow), 526069) 1:100으로 암실에서 실온에서 45분 동안 염색하였다. 염색을 추가할 때 12-채널 피펫으로 각 웰을 혼합하는데 특별한 주의를 기울였다. 45-분 인큐베이션 후, 100㎕ FACS 완충액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5분 동안 2000RPM에서 원심분리하였다. 상청액을 플리킹하여 버리고, 플레이트를 이전에 기재된 바와 같이 2회 세척하였다. 세포를 100㎕ FACS 완충액에 재현탁시키고, 유세포 분석에 의해 분석하였다.
도 2a에 나타낸 바와 같이, 항-IL-27 항체는 풀링된 인간 PBMC에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항-IL-27 항체 항-IL-27 Ab3은 풀링된 인간 PBMC에서 140.5 ng/㎖(n=2)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항-IL-27 항체 항-IL-27 Ab1은 풀링된 인간 PBMC에서 58.3 ng/㎖(n=3)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다.
본질적으로 도 2a에 대해 기재된 바와 같은 유세포 분석에 의해 Fc 수용체를 발현하는 것으로 알려진 세포주인 U937 세포에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화를 저해하는 능력에 대해 항-IL-27 항체를 추가로 테스트하였다. 도 2b에 나타낸 바와 같이, 항-IL-27 항체는 나타낸 바와 같이 U-937 세포에서 STAT1의 인산화를 저해한다. 항-IL-27 Ab3은 U937 세포에서 81 ng/㎖(n=2)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항체 항-IL-27 Ab1은 U937 세포에서 96 ng/㎖(n=2)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다.
본질적으로 도 2a에 대해 기재되어 있는 바와 같이 유세포 분석에 의해 세포 표면 Fc 수용체를 발현하지 않는 피부 T-세포 림프종 세포주 HUT-78에서 STAT1의 IL-27-매개성 인산화를 억제하는 능력에 대해 항-IL-27 항체를 테스트하였다. 도 2c에 나타낸 바와 같이, 항-IL-27 항체는 HUT-78 세포에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항-IL-27 Ab3은 HUT-78 세포에서 80 ng/㎖(n=1)의 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항체 항-IL-27 Ab1은 HUT-78 세포에서 95 ng/㎖(n=1)의 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다.
본 개시내용은 또한 전혈 검정에서 종에 걸친 항-IL-27 Ab1에 의한 IL-27 저해를 평가하였다. 종에 걸친 항-IL-27 Ab1 활성을 특성화하기 위해, 인간, 사이노몰구스 원숭이, 래트 및 마우스로부터의 재조합 IL-27을 이들 종으로부터 얻어진 전혈 샘플로부터의 T 림프구에서 pSTAT1 신호전달을 자극하여 테스트하였다(데이터 미제시).
간략하게는, 전혈을 37℃로 가온한 후 항-IL-27 Ab1과 함께 60분 사전-인큐베이션하고, 20 ng/㎖의 인간 IL-27을 첨가하였다. 샘플을 추가로 30분 더 인큐베이션하였다. 백혈구를 고정하고, 적혈구를 용해시켰다. 세척 후, 고정된 세포를 투과화하고, 항-CD3 및 항-포스포-STAT1(Y701)로 염색하였다. 1-시간 인큐베이션 후, 샘플을 세척하고, 유세포 분석을 위해 재현탁시켰다. 자극 및 비자극 대조군 웰을 사용하여 저해 백분율을 계산하고, GraphPad Prism을 사용하여 IC50 값을 계산하였다.
인간 T 세포에서 항-IL-27 Ab1 신호전달 저해에 대한 대표적인 데이터가 도 3에 나타나 있다. 상이한 종에 대한 항-IL-27 Ab1의 친화성에 대한 관찰과 일관되게, 항-IL-27 Ab1에 의한 IL-27 신호전달 저해의 효능은 인간에서 가장 강했고, 사이노몰구스 원숭이, 래트 및 마우스가 그 뒤를 이었다(예를 들어, 표 7 참조).
Figure pct00003
실시예 4: 항-IL-27 항체에 의한 CD161의 IL-27-매개성 저해의 감소
C-유형 렉틴 CD161은 IL-27에 의해 발현이 억제된 T 세포의 마커이다. 실시예 1에 기재된 항-IL-27 항체를 유세포 분석에 의해 풀링된 인간 PBMC 세포에서 CD161의 IL-27-매개성 저해를 역전시키는 능력에 대해 테스트하였다. 간략하게는, 버피 코트로부터 얻어진 풀링된 인간 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)의 냉동된 저온바이알을 액체 질소 저장소에서 꺼내어 37℃ 수조에서 빠르게 해동시켰다. 각 저온바이알의 내용물을 P1000 피펫으로 제거하고, 15㎖ 원뿔형 팔콘 튜브로 옮겼다. 2㎖ 내지 3㎖의 완전한 RPMI-1640(깁코, 61870-036)을 해동된 세포에 천천히 첨가하고, 세포를 부드럽게 휘젓거나 플리킹하여 현탁시켰다. 원뿔형 튜브를 완전한 RPMI-1640으로 최대 10㎖까지 채우고, 튜브를 뒤집어 혼합하였다. 원뿔형 튜브를 실온에서 8분 동안 1400RPM에서 원심분리하였다.
5-일 검정 동안 증발의 효과를 최소화하기 위해 외벽의 사용을 피하였다. 외부 웰은 DPBS(깁코, 14190-144)의 웰당 200㎕로 채워야 한다. PBMC 세포를 따뜻하고 완전한 RPMI-1640에 ㎖당 2백만 개의 세포 밀도로 재현탁시켰다. 정제된 인간 항-CD3 항체(바이오레전드, UCTH1, #300402)를 0.5 ㎍/㎖의 농도(이는 2×의 최종 농도임)로 첨가하였다. 둥근 바닥 96 웰 플레이트(코스터, 3799)에서 이 세포 혼합물(웰당 200,000개의 세포)의 웰당 100㎕을 플레이팅하였다.
항-IL-27 항체를 96 웰 폴리프로필렌 플레이트의 첫 번째 행에서 완전한 RPMI-1640에 40 ㎍/㎖의 최고 농도(최종 10 ㎍/㎖일 것임)로 희석하였다. 플레이트의 처음 10개 행의 나머지 부분에 원하는 대로 연속 희석액(1:2, 1:3 등)을 만들었다. 50㎕의 항체 스톡(4×)을 둥근 바닥 플레이트에서 PBMC 세포의 플레이트의 처음 10개 행에 첨가하였다. 11행 및 12행에, 50㎕의 완전한 RPMI-1640을 첨가하였다.
항-IL-27 항체를 첨가한 후, 완전한 RPMI-1640에 희석된 100 ng/㎖ 재조합 인간 IL-27(알앤디 시스템즈, #2526-IL)의 50㎕을 25 ng/㎖의 최종 농도를 위해 각 웰(무혈청 배지 또는 항체 단독이 포함된 대조군 웰 제외)에 첨가하였다. 50㎕의 완전한 RPMI-1640을 대조군 웰에 첨가하였다. 플레이트를 최소 간섭으로 조직 배양 인큐베이터에서 37℃에서 5일 동안 인큐베이션하였다.
5-일 인큐베이션 후, 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내어 600RPM에서 30초 동안 플레이트 진탕기에서 교반하였다. 플레이트를 5분 동안 1800RPM에서 원심분리하였다. 배지를 제거하고, 추가적인 검정을 위해 따로 보관하고, 플레이트를 150㎕ DPBS(깁코, #14190-144)로 세척하였다. 세척 단계를 2회 더 반복하였다. 세포 펠릿을 아래 표 8에 기재되어 있는 바와 같이 염색 칵테일의 웰당 50㎕로 염색하였다:
Figure pct00004
플레이트를 플레이트 진탕기에서 600RPM에서 30초 동안 교반하고, 플레이트를 암실에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
30-분 인큐베이션 후, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 플리킹하여 버렸다. 플레이트를 이전에 기재된 바와 같이 2회 세척하였다. 마지막 세척 후, 실온에서 10분 동안 증류수 중 50㎕의 4% PFA(피어스, 28906)를 첨가하여 세포 펠릿을 고정하였다. 100㎕의 FASC 완충액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5분 동안 1800RPM에서 원심분리하였다. 세포를 100㎕의 FACS 완충액에 재현탁시키고, 유세포 분석에 의해 판독하였다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체는 CD161의 IL-27 매개성 저해를 감소시킨다.
실시예 5: 항-IL-27 항체의 추가적인 시험관내 특성화를 포함한 항-IL-27 항체에 의한 TNFα, IL-6 및 기타 사이토카인의 PD-1-매개성 분비의 향상
항-IL-27 항체를 암 환자로부터의 인간 PBMC 세포에서 TNFα 및 IL-6의 PD-1-매개성 분비를 향상시키는 능력에 대해 테스트하였다. 암 환자로부터의 인간 PBMC 세포를 1 ㎍/㎖의 표시된 바와 같은 항-PD-1 항체가 담긴 웰을 추가하여 본질적으로 실시예 4에 기재된 바와 같이 배양하였다. 검정으로부터의 상청액을 인간 CBA Th1/Th2/Th17 키트(BD, 560484)를 사용하여 TNFα 및 IL-6에 대해 분석하였다. 도 5a 및 도 5b에 나타낸 바와 같이, 항-IL-27 항체는 풀링된 인간 PBMC 세포에서 TNFα 및 IL-6의 PD-1-매개성 분비를 향상시켰다.
본 명세서의 기법은 또한 인간 PBMC에서 항-IL-27 Ab1 단일요법 및 항-PD-1과의 조합의 사이토카인-유도 활성을 보여준다. IL-27은 몇몇 염증성 사이토카인의 발현을 음성적으로 조절하는 것으로 알려져 있다. 사이토카인 생산에 대한 IL-27 차단의 효과를 결정하기 위해, 건강한 공여자, RCC 환자 및 난소암 환자로부터의 인간 PBMC를 항-IL-27 Ab1의 존재 또는 부재하에 며칠 동안 항-CD3으로 활성화하고, IL-17, IFNγ(IFNg), TNFα(TNFa) 및 IL-6을 포함한 분비된 사이토카인의 수준에 대해 테스트하였다. 간략하게는, 4명의 건강한 공여자, 5명의 RCC 환자 및 2명의 난소암 환자의 신선한 전혈로부터 단리된 PBMC를 항-IL-27 Ab1(1 ㎍/㎖), 항 PD 1(펨브롤리주맙, 1 ㎍/㎖) 또는 두 항체 모두의 존재 또는 부재하에 0.25 ㎍/㎖의 항-CD3 항체로 활성화하였다. 5일 후, 상청액을 수집하고, MSD 또는 CBA에 의해 TNFα(A) 또는 IFNγ(B)의 수준에 대해 테스트하였다. 표시된 데이터는 항-CD3 자극 단독과 비교하여 사이토카인 생산의 배수-변화를 나타낸다. 통계는 대응표본 t-검정(paired t-test)에 의해 계산하였다(*p < 0.005).
항-PD-1 항체를 이 검정에서 대조군으로 사용하였고, PD-1 및 IL-27 차단의 조합을 도 5c에 나타낸 바와 같이 조사하였다. 항-IL-27 Ab1 처리는 4명의 건강한 공여자 중 2명, 5명의 RCC 환자 중 3명 및 2명의 난소암 환자 중 1명을 포함하여 테스트된 11개의 PBMC 샘플 중 6개에서 TNFα 생산을 증가시켰다(2배 초과의 증가로 결정됨). 공여자의 서브세트에서 테스트하였을 때, 이러한 활성은 항-IL-27 Ab1 용량 의존적이었다(데이터 미제시). 항-PD-1(펨브롤리주맙) 처리는 테스트된 11명의 공여자 중 2명(5명의 RCC 중 1명 및 2명의 난소암 중 1명)에서 TNFα의 증가를 보인 반면, 항-IL-27 Ab1 및 항-PD-1의 조합은 11명의 공여자 중 10명에서 증가를 보였다. 조합 치료 조건에서 나타난 증가된 TNFα는 10명의 반응자 중 8명에서 상가적인 것으로 나타났다. IFNγ 생산에 대한 상가적 효과가 항-IL-27 Ab1 및 항-PD-1 처리 후 이들 배양물에서 관찰되었다(11명의 공여자 중 10명); 그러나, 항-PD-1 치료 단독에 대한 반응은 항-IL-27 Ab1(11명의 공여자 중 2명)에 비해 더 자주 나타났다(11명의 공여자 중 10명). 더불어, 이들 데이터는 항-IL-27 Ab1이 건강한 공여자 및 암 환자로부터의 활성화된 PBMC 배양물에서 TNFα 수준을 증가시키고, 항-IL-27 Ab1 및 항-PD-1 처리의 조합이 단독 처리에 비해 더 높은 수준의 TNFα 및 IFNγ를 초래함을 시사한다.
IL-27 및 PD-1 차단의 역할을 추가로 조사하기 위해, 동일한 활성화된 PBMC 배양 시스템을 사용하여 IL-27이 PD-1 차단에 의해 유발된 증가된 사이토카인 생산의 효과를 직접 상쇄할 수 있는지 여부를 결정하였다. 간략하게는, 인간 전혈로부터 새로 단리된 PBMC를 0.25 ㎍/㎖의 항-CD3 항체로 활성화하였다. 세포를 대조군 IgG1(1 ㎍/㎖), αPD-1 항체(펨브롤리주맙, 1 ㎍/㎖) 단독, rhIL-27(25 ng/㎖) + αPD-1 또는 rhIL-27 + αPD-1과 항-IL-27 Ab1(1 ㎍/㎖)로 37℃에서 5일 동안 처리하였다. CBA 검출을 위해 상청액을 수집하였다. 4명의 건강한 공여자로부터의 예시적인 사이토카인(IL-17A 및 IFN)은 대조군에 대한 배수 변화로 나타내었다. 평균 및 표준 편차가 표시되었다. 통계는 대응표본 t-검정에 의해 계산하였다(*p<0.05, **p<0.01). 유사한 결과가 또한 RCC 환자로부터의 PBMC에서도 나타났다. PD-1 차단은 이들 배양물에서 IL-17 및 IFNγ를 모두 증가시켰고, IL-27은 이 활성을 완전히 저해할 수 있었으며, 반응은 도 5d에 나타낸 바와 같이 항-IL-27 Ab1의 존재하에서 역전되었다. 이들 데이터는 IL-27이 사이토카인 생산에 대한 항 PD-1 처리의 효과를 약화시킬 수 있음을 보여준다.
따라서, IL-27은 항-IL-27 Ab1에 의해 차단된 특성인 활성화된 인간 PBMC에서 항-PD-1 매개성 전-염증성 사이토카인 생산을 저해하는 것으로 나타났다. 더욱이, PD-1 차단과 함께 항-IL-27 Ab1은 건강한 공여자 및 RCC 환자로부터의 활성화된 PBMC에서 사이토카인 생산을 증가시켰다. 따라서, IL-27을 차단함으로써, 항-IL-27 Ab1은 면역조절성 수용체 발현을 변경하고 염증성 사이토카인 생산을 증가시켜 면역 세포 활성화를 향상시킨다.
항-IL-27 항체(여기에서, 항-IL-27 Ab1), αPD-1 항체 또는 조합된 항-IL-27 및 αPD-1 항체의 존재하에 개체 항-IL-27 항체의 추가적인 특성화에서, 사이토카인 유도/분비의 추가 특성화를 수행하였다(도 5e 내지 도 5h, 특히 TNFα, IFNγ, IL-6 및 IL-17A에 대해).
실시예 6: 항-IL-27 항체에 의한 PD-L1 및 TIM3의 IL-27-매개성 발현의 저해
실시예 1에 기재된 항-IL-27 항체를 유세포 분석에 의해 풀링된 인간 단핵구에서 IL-27-매개성 발현 PD-L1 및 TIM-3을 저해하는 능력에 대해 테스트하였다.
신선한 단핵구를 ROSETTESEP™ 인간 단핵구 농축 칵테일(스템셀(Stemcell) #15068)을 사용하여 인간 버피 코트로부터 단리하였다.
5일의 검정 동안 증발의 효과를 최소화하기 위해 외벽의 사용을 피하였다. 외부 웰은 DPBS(깁코, 14190-144)의 웰당 200㎕로 채워야 한다.
단핵구를 따뜻하고 완전한 RPMI-1640에 ㎖당 2백만 개의 세포의 밀도로 재현탁시켰다. 이 세포 혼합물의 웰당 100㎕를 둥근 바닥 96-웰 플레이트(코스터, 3799)에 플레이팅하였다(웰당 200,000개의 세포).
항-IL-27 항체를 96-웰 폴리프로필렌 플레이트의 첫 번째 행에서 완전한 RPMI-1640에 40 ㎍/㎖의 최고 농도(10 ㎍/㎖ 최종 농도)로 희석하였다. 플레이트의 처음 10개 행의 나머지 부분에 원하는 대로 연속 희석액(1:2, 1:3 등)을 만들었다. 50㎕의 항체 스톡(4×)을 둥근 바닥 플레이트에서 PBMC 세포의 플레이트의 처음 10개 행에 첨가하였다. 11행 및 12행에, 1250㎕의 완전한 RPMI-1640을 첨가하였다.
항-IL-27 항체의 첨가 후, 완전한 RPMI-1640에 희석된 80 ng/㎖ 재조합 인간 IL-27(알앤디 시스템즈, 2526-IL)의 50㎕을 20 ng/㎖의 최종 농도를 위해 각 웰에 첨가하였다(무혈청 배지 또는 항체 단독이 포함된 대조군 웰 제외). 100㎕의 무혈청 RPMI-1640을 대조군 웰에 첨가하였다. 플레이트를 최소한의 방해로 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다.
3-일 인큐베이션 후, 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내어 플레이트 진탕기에서 30초 동안 600RPM에서 교반하였다. 플레이트를 5분 동안 1800RPM에서 원심분리하였다. 배지 플리킹하여 버리고, 플레이트를 150㎕ DPBS(깁코, 14190-144)로 세척하였다. 세척 단계를 2회 반복하였다. 세포 펠릿을 아래 표 9에 기재된 바와 같은 염색 칵테일의 웰당 50㎕로 염색하였다:
Figure pct00005
플레이트를 플레이트 진탕기에서 30초 동안 600RPM에서 교반하고, 플레이트를 암실에서 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
30-분 인큐베이션 후, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 플리킹(flicking)하여 버렸다. 플레이트를 이전에 기재된 바와 같이 2회 세척하였다. 마지막 세척 후, 세포 펠릿을 탈이온수(DI) 중 50㎕ 4% PFA(피어스, 28906)를 실온에서 10분 동안 첨가하여 고정하였다. 100㎕의 FACS 완충액을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5분 동안 1800RPM에서 원심분리하였다. 세포를 100㎕의 FACS 완충액에 재현탁시키고, 유세포 분석에 의해 분석하였다.
도 6a 및 도 6b에 나타낸 바와 같이, 항-IL-27 항체는 풀링된 인간 단핵구에서 PD-L1 및 TIM3의 IL-27 매개성 발현을 강력하게 저해한다.
항-IL-27 항체를 도 6a 및 도 6b에 본질적으로 기재된 바와 같이 휴지기 T 세포(비활성화된)에서 PD-L1의 IL-27-매개성 발현을 저해하는 능력에 대해 추가로 테스트하였다. 휴지기 T-세포를 ROSETTESEP™ 인간 T 세포 농축 칵테일(스템셀 #15061)을 사용하여 인간 버피 코트로부터 단리하였다.
검정의 결론에서, 세포 펠릿을 아래 표 10에 기재된 바와 같은 염색 칵테일의 웰당 50㎕로 염색하였다:
Figure pct00006
플레이트를 플레이트 진탕기에서 30초 동안 600RPM에서 교반하고, 플레이트를 암실에서 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다.
30-분 인큐베이션 후, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 플리킹하여 버렸다. 플레이트를 이전에 기재된 바와 같이 2회 세척하였다. 마지막 세척 후 세포 펠릿을 탈이온수 중 50㎕ 4% PFA(피어스, 28906)를 실온에서 10분 동안 첨가하여 고정하였다. 100㎕의 FACS 완충액 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 5분 동안 1800RPM에서 원심분리하였다. 세포를 100㎕의 FACS 완충액에 재현탁시키고, 유세포 분석에 의해 판독하였다. 도 6c에 나타낸 바와 같이, 항-IL-27 항체는 풀링된 인간 휴지기 T 세포에서 PD-L1의 IL-27-매개성 발현을 강력하게 저해한다.
실시예 7: 흑색종의 파종성 B16F10 모델에서 항-IL-27 항체의 생체내 효능
임상 후보 항-IL-27 Ab1을 사용하여 IL-27 차단의 항종양 활성을 평가하기 위해 흑색종 폐 전이의 모델을 사용하였다. 파종성 B16F10 폐 전이의 성장은 EBI3 및 Il27ra(Wsx-1)-결핍 마우스에서 현저하게 감소되는 것으로 알려져 있다(문헌[Sauer et al., J. Immunology 181: 6148-6157]). 폐 결절 크기 및 성장 동역학은 전달된 B16F10 세포의 수에 의존하며 다양하고 빠르게 진행될 수 있기 때문에, 항-PD-1 및 항-CTLA-4의 조합을 치료적 활성에 대한 벤치마크로 연구하였다. 항-IL-27 Ab1 전-처리는 전체 종양 부담을 상당히 감소시켰다.
간략하게는, 6주령 내지 8주령의 암컷 C57BL/6 마우스(n=10/그룹)에 200㎕ 포스페이트-완충 식염수(PBS) 중 2.5×105개 B16F10 세포 또는 1×105개 B16-Luc 세포를 꼬리 정맥을 통해 정맥내로(i.v.) 접종하였다. 동물에게 항-IL-27 Ab1(1㎎ 용량)(우시(Wuxi); lot 2108SD170316K01X01I01) 또는 다중클론 인간 IgG 아이소타입 대조군(1㎎ 용량)(바이옥스셀(Bioxcell); BE0092; lot 658417D1)을 복강내로(i.p.) 주사하였다. 항체를 총 4회 투여(-7일, 0일, 7일 및 14일) 동안 종양 주사 7일 전부터 시작하여 매주 1회 투여하였다. 폐 전이의 시각적 계산을 위해, B16F10 종양 보유 마우스를 종양 세포 주입 18일 후 CO2 질식에 의해 안락사시키고, 폐를 심장 천자를 통해 PBS로 관류하여 제거하고, 10% 중성 완충 포르말린에서 24시간 동안 고정시켰다. 그런 다음, 고정된 폐를 70% 에탄올로 옮기고, 표면 폐 전이를 시각적으로 계수하였다. 면역조직화학 분석을 위해, 포르말린 고정된 폐(n=5/그룹)를 파라핀에 포매하여 절단하고, 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하여 각 절편의 총 조직 면적의 백분율로서 총 종양 면적을 정량화하였다. 폐 전이의 생체내 종양 이미징을 위해, B16-Luc 종양-보유 동물에게 200㎕ PBS(프로메가(Promega)) 중 3㎎의 VivoGlo D-루시페린을 꼬리 정맥을 통해 매주 2회 i.v.로 주사하였다. 루시페린 주사 5분 후, 동물을 마취하고, IVIS Lumina LT Series III imager를 사용하여 생물발광 이미징을 수행하였다. Living Image(버전 4.5.5) 소프트웨어를 사용하여 이미지를 분석하고, 광자/초 단위의 총 플럭스 측정값으로 나타내었다.
도 7a 내지 도 7g에 나타낸 바와 같이, B16F10 종양-보유 마우스를 항-IL-27 항체 항-IL-27 Ab1로 처리하면 표면 폐 전이의 총 수(# 폐 결절, 도 7a) 및 면역조직화학(IHC) 분석에 의한 폐 조직 절편에서 종양 면적의 감소(도 7c 내지 도 7f 및 도 7g) 둘 다에 의해 측정된 바와 같이 전체 종양 부담의 상당한 감소를 초래하였다. 항-IL-27 Ab1로 p28을 차단하면 아이소타입 대조군 처리에 비해 폐 B16 결절의 수가 42% 감소하였다. 항-IL-27 Ab1 처리는 아이소타입 대조군에 비해 B16F10 폐 전이의 성장(각각 21.6±8.4 대 37.6±10.9 폐 결절)을 유의하게(p=0.0079) 저해하였다. 항-IL-27 Ab1 처리는 IHC에 의해 측정된 바와 같이 전체 폐 종양 전이 면적의 83% 감소를 초래하였다(아이소타입 대조군 그룹에서 16.43±1.39% 대 항-IL-27 Ab1 치료 그룹에서 2.83±1.45%). 유사하게는, 생물발광 이미징은 항-IL-27 Ab1 처리가 B16-Luc 폐 전이의 성장을 유의하게(p=0.0062) 지연시킴을 보여주었다(도 7b). 표면 폐 전이 수 및 총 종양 면적에서 유사한 감소가 도 7g에 나타낸 바와 같이 IL-27RA(WSX-1) 매개성 항체 차단 및 항-PD-1 + 항-CTLA-4 조합 요법에서 관찰되었다. 이들 데이터는 항-PD-1 및 항-CTLA-4 벤치마크 조합이 항종양 활성을 보여주는 2개의 독립적인 실험으로부터 얻은 것이다. B16F10 세포(2.5×105)를 C57BL/6 마우스(n = 10/그룹)에 정맥내로 주사하였다. 마우스를 1㎎의 항-IL-27 Ab1, 항-IL-27RA(WSX-1) 또는 인간 IgG 아이소타입 대조군 항체(-7일, 0일, 7일, 14일) 중 하나로 IP 처리하였다. 일부 동물은 항-PD-1 및 항-CTLA-4(0일, 4일, 7일 및 11일)로 IP 처리하였다. 위에 기재된 바와 같이 처리된 B16F10 폐 전이를 보유하는 동물(n=5/그룹)로부터 폐를 수집하고 절단하여 H&E로 염색하였다. B16F10 종양 조직을 처리된 동물로부터의 H&E 염색된 폐 절편의 정상 폐 조직에 묘사하였다(도 7a). 종양 면적을 총 폐 면적의 백분율로 계산하였다(도 7g). 통계는 t-검정에 의해 계산하였다. 종합적으로, 이들 데이터는 항-IL-27 Ab1이 종양 모델에서 Il27ra(WSX-1) 및 EBI3 결핍을 표현형 모사할 수 있으며, PD-1 및 CTLA-4의 조합된 차단과 유사한 활성을 보여줌을 나타낸다.
이들 데이터는 항-IL-27 항체(항-IL-27 Ab1)를 이용한 치료가 항-종양 효과를 초래하여 IL-27에 결합하지 않는 아이소타입 대조군 항체를 사용한 치료보다 더 큰 정도로 종양 성장 및 전이 둘 다를 감소시킴을 입증한다.
실시예 8: 인간 IL-27 미니서클로 유체역학적으로 형질감염된 마우스로부터의 뮤린 비장세포의 유전자 발현 프로파일링
생체내 T 세포 표현형에 대한 IL-27의 효과를 조사하기 위해, IL-27을 암호화하는 DNA 미니서클을 사용하여 마우스에서 IL-27을 과발현시키고, T 세포 반응을 RNA-Seq 및 유세포 분석에 의해 평가하였다. 인간 IL-27은 종 교차-반응성인 것으로 알려져 있으며, 시험관내에서 뮤린 비장세포에서 pSTAT1 신호전달 및 PD L1을 유도할 수 있다. 이러한 종 교차-반응성을 사용하여 마우스에서 인간 IL-27 과발현의 효과 및 항-IL-27 Ab1에 의한 이의 저해를 연구하였다. 이를 위해, 인간 IL-27을 암호화하는 DNA 플라스미드 미니서클(글리신 세린 링커에 의해 EBI3에 연결된 p28)을 아래에 기재된 바와 같이 유체역학적 형질감염에 의해 마우스에 투여하여 높은 전신 수준의 IL-27을 생성하였다.
인간 IL-27 미니서클의 유체역학적 형질감염
6주령 암컷 BALB/c 마우스에 2㎖의 0.9% 정상 식염수 중 빈 벡터 또는 연결된 인간 IL-27 미니서클 DNA(시스템 바이오사이언시스(System Biosciences), 캘리포니아주 팰로앨토 소재)의 20㎍을 꼬리 정맥을 통해 5초 동안 주사하였다. 주사된 동물을 5분 동안 회복시키기 위해 가열 패드가 있는 빈 케이지로 옮겼다. 미니서클 주사 24시간 후 혈장 분리를 위해 전혈을 K2-EDTA 튜브에 수집하고, 혈장 IL-27 수준을 ELISA에 의해 확인하였다. 형질감염 5일 후에 PBMC 및 총 비장세포를 수집하고, 세포를 염색하고, 유세포 분석에 의해 분석하였다. 표시된 마커의 발현을 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포에서 분석하였다. 분석은 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 수행하였다.
유전자 발현 프로파일링
마우스 비장세포를 전체 비장의 기계적 해리에 이어 적혈구의 ACK 용해에 의해 제조하였다. 총 RNA를 RNEASY® 미니 키트(퀴아젠(Qiagen), Cat. No: 74104)로 비장세포로부터 추출하고, 뉴클레이스가 없는 물(퀴아젠, Cat. No: 19101)에서 20 ng/㎕로 조정하였다. Affymetrix GENECHIP™ 마우스 유전자 2.0 ST 어레이(어플라이드 바이오시스템스(Applied Biosystems), Cat. No: 902118)에서 유전자 발현 프로파일링을 수행하였다. RNA 샘플의 처리, 혼성화 및 어레이 스캐닝은 보스턴 대학 마이크로어레이 및 시퀀싱 리소스(Boston University Microarray and Sequencing Resource: BUMSR)에서 표준 Affymetrix GENECHIP™ 프로토콜을 사용하여 수행하였다. 모든 CEL 파일은 로버스트 다중-어레이 평균(Robust Multi-array Average: RMA)에 의해 정규화하였고(문헌[Irizarry et al., 2003]), 유전자 발현 데이터는 미발현된 프로브를 제거하고 복제간 분산 계수가 높은 전사체를 버림으로써 전처리하였다. 후속 분석(평균 발현, 배수 변화, t 검정)은 R(버전 R 3.6.2)에서 수행하였다.
유세포 분석
미니서클 주사 5일 후에 마우스로부터 전혈 및 비장을 수집하였다. 형질감염 5일 후에 IL 27-발현 마우스로부터 비장세포를 수집하였다. 단일 세포 비장세포 현탁액을 40㎛ 나일론 세포 여과기를 통한 기계적 해리에 이어 ACK 완충액에서 적혈구 용해에 의해 제조하였다. 전혈 세포를 직접 염색한 후 적혈구 용해하고, 제조업체의 지침(비디 사이언시스, 캘리포니아주 산 호세 소재)에 따라 BD Phosflow Lyse/Fix 완충액에 고정시켰다. FcγRIII/II를 2% FBS 및 2mM EDTA가 포함된 PBS 중 래트 항-마우스 CD16/CD32 mAb(백만 개의 세포당 1㎍; 바이오레전드, 캘리포니아주 샌디에고 소재)와 세포를 사전 인큐베이션하여 차단하였다. 세포를 뮤린 CD4(클론 GK1.5), CD8(53-6.7), PD-L1(10F.9G2), TIM3(RMT3-23), LAG3(C9B7W) 및 TIGIT(1G9)(바이오레전드)에 대해 APC-, PE-, 브릴리언트 바이올렛 510- 및 브릴리언트 바이올렛 711-접합 mAb로 염색하였다. 세포-관련 형광을 LSRFortessa X-20 유세포 분석기(비디 사이언시스)를 사용하여 측정하고, FlowJo 소프트웨어(트리 스타(Tree Star), 오리건주 애슐랜드 소재)를 사용하여 분석을 수행하였다.
통계적 분석
표시된 바와 같이 대응표본, 독립표본 또는 비 스튜던트 t 검정(ratio Student's t test)을 사용하여 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 통계적 유의성을 결정하였다. 비 t 검정을 사용할 때, 0이 아닌 값으로 만들기 위해 0 값에 0.1을 추가하였다. 0.05 미만의 P 값은 유의미한 것으로 간주하였다.
IL-27은 생체내에서 T 세포에 의한 저해성 수용체의 발현을 촉진한다
400개 초과의 유전자가 도 8a에 나타낸 바와 같이 IL-27의 투여에 반응하여 Log2배 이상으로 변경되었다. 이들 유전자의 서브세트는 표 11A 내지 표 11B에 나타나 있다. 이러한 유전자 중에는 면역 반응에서 핵심적인 역할을 하는 면역 저해성 수용체를 암호화하는 유전자가 있다. 도 8b에 나타낸 바와 같이, Ly6a(Sca-1을 암호화함), Lag3, Tigit 및 Il10은 IL-27에 반응하여 비장세포에서 상향조절되었다. 또한, 1-배 미만의 유도인 Ctla4 및 Cd274(PD-L1을 암호화함)의 IL-27-매개성 상향조절 경향이 있었다(데이터 미제시). 발현 데이터를 검증하기 위해, 유세포 분석을 이용하여 이들 마우스로부터의 T 세포에서 PD-L1, LAG-3, TIGIT 및 TIM-3의 단백질 발현을 평가하였다. IL-27 미니서클의 투여는 비장(Spleen) 및 말초 혈액(PBMC) CD4+ T 세포에서 PD-L1, LAG-3 및 TIGIT의 상향조절로 이어졌다. CD8+ T 세포에서, IL-27 미니서클은 PD-L1, LAG-3, TIGIT 및 TIM-3을 상향조절하였다. 도 8c 내지 도 8f에 나타낸 바와 같이, IL-27 미니서클의 투여는 비장 및 말초 혈액 CD4+ T 세포에서 PD-L1, Lag-3 및 Tigit의 상향조절로 이어졌다. CD8+ T 세포에서, IL-27 미니서클은 PD-L1, Lag-3, Tigit 및 Tim-3을 상향조절하였다. 이들 데이터는 IL-27이 생체내에서 면역조절성 수용체 발현을 유도하는데 중요한 역할을 할 수 있음을 시사한다.
생체내에서 미니서클-유래 인간 IL-27을 차단하는 항-IL-27 Ab1의 능력을 조사하기 위해, 효소-연결 면역흡착 검정(ELISA)에 의한 표적 결합(engagement) 및 비장세포에서의 면역조절성 수용체 발현 모두를 연구하였다. IL-27 형질감염 및 항-IL-27 Ab1(50 ㎎/㎏) 처리 5일 후, 마우스로부터 혈장을 수집하여 중규모 디스커버리(MSD)에 의해 IL-27 이종이량체 및 EBI3 수준을 분석하였다. IL-27 이종이량체 검정은 항-IL-27 Ab1 및 인간 특이적 EBI3 검출 항체를 교차 차단하는 p28 포획 항체를 이용하므로; 항-IL-27 Ab1이 IL-27에 결합한다면, 이의 검출은 차폐될 것이다. EBI3 검정은 인간 EBI3의 2개의 별개의 에피토프에 특이적인 포획 및 검출 항체를 모두 이용하며, 미니서클 유래 IL-27은 테더링된 이종이량체이기 때문에, 이 검정은 항-IL-27 Ab1 결합과 상관없이 총 IL 27을 검출할 수 있게 한다.
간략하게는, 6주령의 암컷 Balb/c 마우스에 빈 벡터(대조군) 또는 인간 IL-27을 주사하였다. 마우스를 미니서클 형질감염 7일 전 및 당일(-7일 및 0일)에 1㎎의 항-IL-27 Ab1 또는 항-DNP IgG1 아이소타입 대조군 항체로 처리하였다. 전혈을 수집하고, 중규모 디스커버리에 의해 IL-27(도 8g)에 대해 혈장을 분석하였다. 도 8g는 항-IL-27 Ab1 처리가 MSD에 의한 혈장 내 IL-27 검출을 완전히 저해한다는 것을 보여준다. 25 ㎎/㎏의 항-IL-27 Ab1의 용량을 테스트하였을 때 유사한 데이터가 나타났다. 이들 데이터는 25 ㎎/㎏ 이상의 용량에서 항-IL-27 Ab1이 생체내에서 미니서클 유래 IL-27을 완전히 포화시킬 수 있음을 시사한다. 이 완전한 표적 결합은 또한 pSTAT1 기능적 검정에서도 확인되었다.
생체내에서 IL-27의 활성을 차단하는 항-IL-27 Ab1의 능력을 평가하기 위해, PD L1, Tim-3, Lag-3 및 Tigit의 발현을 유세포 분석에 의해 뮤린 PBMC 및 비장세포에서 분석하였다. 항-IL-27 Ab1은 CD4+ PBMC에서 IL 27-유도성 PD-L1 및 Lag 3의 발현과 CD8+ PBMC에서 PD-L1, Tim-3, Lag-3 및 TIGIT의 발현을 유의하게 차단하였다. 항-IL-27 Ab1 처리는 또한 CD4+ 비장세포에서 IL 27 유도성 PD-L1, Lag-3 및 TIGIT의 발현과 CD8+ 비장세포에서 PD-L1 및 Lag 3의 발현도 차단하였다. 이들 데이터는 항-IL-27 Ab1이 생체내에서 인간 IL-27의 활성에 관여하고 이를 차단할 수 있음을 시사한다.
이들 결과는 생체내 IL-27의 이소성 발현이 T 세포에 의한 다중 저해성 수용체의 상향조절 및 비장세포에서 면역조절 활성을 갖는 여러 다른 분자를 유도함을 입증한다. 이들 데이터는 (예를 들어, 항-IL-27 항체로 처리함으로써) IL-27 길항작용이 T 세포에 대한 저해제 수용체의 발현을 감소시켜 면역 반응을 증가시킬 것임을 시사한다.
Figure pct00007
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실시예 9: 항-IL-27 Ab1 결합 특성 및 IL-27 수용체 차단
1 ㎍/㎖의 항-IL-27 Ab1 농도와 0 내지 5.0 ㎍/㎖ 범위의 농도에서 재조합 인간 IL-27의 결합 및 해리를 결정하였다. 최종 결합 동역학 매개변수는 데이터에 대한 모델 적합성을 입증하는 결합 모델 적합 매개변수(binding model fit parameter)(R2 및 χ2)와 함께 표 14에 나타나 있다.
인간 IL-27은 이 연구에서 테스트된 모든 종의 항-IL-27 Ab1에 대한 가장 강력한 결합 친화성을 나타내었다(3.86pM). 재조합 래트 및 사이노몰구스 원숭이 IL-27도 또한 인간 단백질보다 다소 약하지만 각각 80.9pM 및 37.4pM의 값으로 항-IL-27 Ab1에 대해 강한 친화성을 나타내었다. 재조합 마우스 IL-27은 인간 단백질과 비교하여 항-IL-27 Ab1에 대한 친화성이 가장 약했으며, 이 값은 더 느린 결합 및 더 빠른 해리 속도로 표시되는 바와 같이 nM 범위(4.43nM)의 값을 나타낸다.
Figure pct00033
실시예 10: CDR 서열 정렬
본 개시내용의 항-IL-27 항체의 다수의 하위-선택은 이의 CDR 영역에 걸쳐 서열 상동성을 공유하여 기능성을 유지하는 것으로 검증된 다양한 변이체 CDR 서열을 제공한다. 하기 컨센서스 CDR 서열이 본 개시내용에 의해 완전히 지지되고, 따라서 본 개시내용의 범위 내에 있다는 것이 본 명세서에서 명시적으로 상정된다.
항-IL-27 Ab1, 항-IL-27 Ab3, 항-IL-27 Ab4, 항-IL-27 Ab5, 항-IL-27 Ab6 및 항-IL-27 Ab7 항체의 경우, 이들 각각의 항-IL-27 항체의 CDR 서열의 정렬은 가변 잔기에 의해 구분되는 광범위한 상동성을 나타내었다. 특히, 중쇄 CDR1 정렬은 하기의 가변 잔기를 나타내었다:
Figure pct00034
따라서, 이러한 상동 항체에 대한 컨센서스 중쇄 CDR1(IMGT) 서열은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 144)이므로, 컨센서스 중쇄 CDR1(IMGT) 서열로서 본 명세서에서 보다 일반적으로 상정되는 서열은 N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)이고, 여기서 X는 임의의 아미노산 잔기이다.
항-IL-27 Ab1, 항-IL-27 Ab3, 항-IL-27 Ab4, 항-IL-27 Ab5, 항-IL-27 Ab6 및 항-IL-27 Ab7 항체 중쇄 CDR2(IMGT) 서열의 정렬은 다음을 나타낸다:
Figure pct00035
따라서, 이러한 상동 항체에 대한 컨센서스 중쇄 CDR2(IMGT) 서열은 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 146)이므로, 컨센서스 중쇄 CDR2(IMGT) 서열로서 본 명세서에서 보다 일반적으로 상정되는 서열은 N-ISSSXXYI-C(서열번호 147)이고, 여기서 X는 임의의 아미노산 잔기이다.
인간 CDR1(NT) 및 인간 CDR2(NT) 서열의 정렬은 또한 다음을 나타낸다:
Figure pct00036
Figure pct00037
따라서, 이러한 상동 항체에 대한 컨센서스 중쇄 CDR1(NT) 및 CDR2(NT) 서열은 각각 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 148) 및 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 149)이다. 이러한 컨센서스 서열의 관점에서, 컨센서스 중쇄 CDR1(NT) 및 CDR2(NT) 서열 N-FTFXXXXMN-C(서열번호 150) 및 N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 151) 각각이 보다 일반적으로 본 명세서에서 상정되며, 여기서 X는 임의의 아미노산 잔기이다.
중쇄 CDR3(IMGT 또는 NT) 및 경쇄 CDR CDR1(IMGT 또는 NT), CDR2(IMGT 또는 NT) 및 CDR3(IMGT 또는 NT)은 항-IL-27 Ab1, 항-IL-27 Ab3, 항-IL-27 Ab4, 항-IL-27 Ab5, 항-IL-27 Ab6 및 항-IL-27 Ab7 사이에서 완전히 보존되었다.
실시예 11: IL-27 - 항-IL-27 Ab1 Fab 복합체의 결정화 및 에피토프 결정
초기 결정화 시험을 25mM Tris(pH 7.5), 대략 30mM 소듐 클로라이드 및 5% 글리세롤에서 10.1 ㎎/㎖의 인간 IL-27 - 항-IL-27 Ab1 Fab 복합체로 설정하였다. 예비 결정화 조건은 PACT 스크린을 사용하여 확인하였다(문헌[Newman et al., (2005) Acta Cryst. D 61: 1426]).
PACT A2(0.1M SPG(석신산, 소듐 다이하이드로겐 포스페이트 및 글리신)(pH 5) 및 25% PEG 1500)를 포함한 여러 조건에서 결정을 얻었다. 이러한 결정을 사용하여 새로운 시드 스톡을 만들고, JCSG+ 스크린을 사용하여 마이크로 매트릭스 시딩(micro matrix seeding: MMS) 실험을 설정하였다(문헌[D'Arcy et al., (2007) Acta Cryst. D Biol Cryst. 63: 550-54]).
데이터 세트는 Eiger2 XE 16M 검출기가 장착된 station I04(다이아몬드 라이트 소스(Diamond Light Source), 영국 디드콧 소재)(λ= 0.9795Å)의 100K에서 수집하였다. 데이터는 autoPROC(문헌[Kabash, (2010) Acta. Cryst. D. Biol. Cyrst. 66: 125-32; Vonrhein et al., (2011) Acta Cryst. Biol. Cryst. 67: 292-302])를 사용하여 처리되었으며, Aimless 프로그램(문헌[Evans et al., (2013) Acta Cryst. Biol. Cryst. 69: 1204-14])을 또한 포함하는 STARANISO 소프트웨어(문헌[Tickle et al., STRANISO. Cambridge, United Kingdon: Global Phasing Ltd. (2018)])를 사용하여 이방성으로 절단(anisotropically truncated)되었다.
구조는 분자 대체 소프트웨어 Phaser(문헌[McCoy et al., (2007) J. Appl. Cyrst. 40: 658-74]) 및 Molrep(문헌[Vagin et al., (1997) J. Appl. Cyrst. 30: 1022-25])(도 9)을 사용하여 결정하였다. 도 9에 나타낸 바와 같이, 항-IL-27 Ab1 Fab는 IL-27의 p28 분자에 결합된다. 전체 에피토프-파라토프 영역에 대한 전자 밀도는 잘 정의되어 있다. 항-IL-27 Ab1과 p28 간의 상호작용은 표 15에 나타나 있다.
Figure pct00038
Figure pct00039
실시예 12: 추가적인 에피토프 매핑 연구
IL-27 - 항-IL-27 Ab1 Fab 복합체 결정 구조를 사용하여 추가의 에피토프 매핑 연구를 수행하였다. 항-IL-27 Ab1 Fab 분자와 IL-27 간의 상호작용 영역은 CCP4 패키지의 Qt-PISA 및 NCONT 프로그램을 사용하여 조사하였다(문헌[Winn, et al., (2011) Acta Cryst. D Biol. Cryst. 67: 235-42]). 데이터 분석을 위해 Coot(문헌[Emsley, et al., (2010) Acta Cryst. D Biol. Cyrst. 66: 486-501])를 사용하였다.
에피토프 잔기는 Fab 원자의 4Å 이내의 원자를 갖는 IL-27 아미노산으로 정의되었으며, CCP4에서 NCONT를 사용하여 평가되었다. 이전에 확인되고 표 15에 열거된 잔기뿐만 아니라, 이들 연구는 추가적인 에피토프 잔기를 발견하였다. 4Å 내에서 IL-27p28과 항-IL-27 Ab1 Fab 사이의 모든 상호작용은 아래 표 16A에 나타나 있다.
Figure pct00040
인간 IL-27 이종이량체에 대해 WSX-1 및 gp130 모두에 대한 결합 및 차단 연구를 SPR에 의해 수행하였다. WSX-1 및 항-IL-27 Ab1에 대해 높은 친화성으로 결합된 인간 IL-27은 결합을 완전히 저해할 수 있었다(도 10a). 인간 IL-27은 gp130에 대해 낮은 친화성으로 결합하였고, 항-IL-27 Ab1은 gp130에 대한 IL-27의 결합을 저해하지 않았다(도 10b).
항-IL-27 Ab1은 αA 및 αC 나선과 폴리-Glu 서열의 초기 부분과 상호작용한다(도 11). 중쇄 CDR의 2 및 3은 p28과 가장 광범위하게 접촉한다(표 16B).
Figure pct00041
도 12는 3차원 공간에서의 정렬을 위해 p28 및 IL6을 사용한 IL23/IL23R과 IL27/항-IL-27 Ab1의 복합체의 중첩을 보여준다. IL6 상의 gp130 결합 부위는 p28 상의 항-IL-27 Ab1 결합 부위와 중첩된다. 그러나, p19 상의 IL23R 결합 부위는 p28 상의 항-IL-27 Ab1 결합 부위와 중첩되지 않는다.
도 13은 3차원 공간에서의 정렬을 위해 p28 및 IL6을 사용한 IL27/항-IL-27 Ab1과 IL6/IL6Ra/gp130의 복합체의 중첩을 보여준다. 여기서, IL6 상의 gp130 결합 부위는 다시 p28 상의 항-IL-27 Ab1 결합 부위와 중첩된다. 또한, IL6Ra는 EBI-3과 일치한다.
다양한 동물에 걸친 서열 정렬은 EBI3과의 특이적 상호작용에 관여하는 p28 잔기가 잘 보존되어 있음을 나타내며, p28과의 특이적 상호작용에 관여하는 EBI3 잔기에 대해서도 마찬가지이다(도 14a 내지 도 15b). 이는 화살표로 표시된 몇몇 보존된 염 브리지 아미노산 잔기 및 여러 보존된 소수성 아미노산 잔기를 포함한다.
IL-27 이종이량체와 IL6/IL6RA의 구조적 정렬은 2차 구조, 도메인 및 알파 탄소 백본이 두 이종이량체에 대해 잘 정렬되고(도 16a 내지 도 16d), EBI3과의 여러 p28 상호작용이 IL6RA와 잠재적으로 보존된다는 것을 보여준다(도 16d).
인간 IL-27에 대한 결합 친화성 데이터는 p28이 gp130 또는 WSX-1 단독에 대해 결합이 약하거나 결합이 없음을 나타낸다(도 17). EBI3은 gp130 단독에 대해서는 결합이 없었지만, WSX-1에 대해서는 적당한 결합 친화성을 가졌다. 인간 IL27에 대한 높은 친화성 결합은 이종이량체가 조립되었을 때에만 관찰되었다. p28에 대한 EBI3의 친화성은 5nM이었다.
항-IL-27 Ab1 결합 상호작용을 갖는 인간 p28의 아미노산은 대부분 마우스 서열에서 보존되지만(도 18a); 항-IL-27 Ab1은 인간 p28에 대해 Gln37 및 Leu162 모두와 상호작용하고, Gln37은 마우스 서열에 존재하지 않으며, Leu162는 마우스 서열의 Cys에 상응한다(도 18b). 마우스 p28의 추가적인 이황화 결합은 또한 항-IL-27 Ab1 LC가 결합하는 국재화된 구조적 에피토프를 교란시킬 수 있다.
αC 나선에서 Arg 잔기로부터 양전하의 큰 영역을 포함하는 폴리-Glu 서열을 갖는 풀리지 않은 CD 루프가 또한 존재하였다(도 19a 내지 도 19b).
실시예 13: 신장 세포 암종에서 IL-27 발현의 표적화
IL-27의 발현은 정상 신장 조직에서 각각의 발현에 비해 RCC 종양 조직에서 증가된 수준의 EBI3, IL-27p28 및 IL-27RA와 함께 신장 세포 암종(RCC)에서 증가된다(도 20a). EBI3(도 20b), IL-27RA(도 20c) 및 IL-27p28(도 20d) 각각의 높은 발현은 이들 전사체 각각의 낮은 발현과 비교하여 인간 대상체에서 감소된 생존 확률과 상관관계가 있다.
IL-27은 활성화된 인간 CD4+ T 세포에서 재현 가능한 유전자 발현 시그니처를 유도한다. 개별 공여자로부터의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 항-CD3±재조합 인간 IL-27(rhIL-27)로 3일 동안 활성화하였다. CD4+ T 세포를 FACS 분류하고, 마이크로어레이에 의해 유전자 발현을 분석하였다. 상향 조절된 PDCD1, HAVCR2, CD274, LGALS9, GBP5, LAMP3, RGS1, IL12RB2, RSAD2, IFIT3 및 IFI44L과 하향 조절된 GZMA 및 CD200의 증가된 발현을 포함하여 CD3 및 rhIL-27로 활성화된 T 세포에서 수많은 유전자가 상향조절되거나 또는 하향조절되는 것으로 관찰되었다(도 21a). CD4+ T 세포에서 IL-27 시그니처의 상위 31개의 유전자는 도 21b에 열거되어 있다. 특히, 31개의 유전자 중 15개, 즉, AIM2, ALPK1, APOL1, GBP5, IFI44, IRF1, LAMP3, LOC400696, PARP3, RGS1, SAMD9L, SOCS1, STAT1, TNFSF13B 및 XAF1은 불량한 결과와 관련이 있었다. 상위 시그니처 유전자 중 12개(STAT1, GBP5, IFI44, XAF1 및 SOCS1을 포함)는 RCC에서 불량한 결과와 관련이 있었지만(도 22a), 이들 동일한 유전자는 유방암(BRCA)에서의 불량한 결과와는 관련이 없었다(도 22b).
또한, RCC 환자에서 EBI3의 혈장 수준은 결과를 예측할 수 있다. 신장 절제술 시 RCC 환자로부터 혈청 샘플을 수집하고, EBI3-특이적 항체 쌍을 사용하여 EBI3 수준을 측정하였다. 평균 EBI3 수준은 건강한 공여자로부터의 혈청과 비교하여 RCC 환자로부터의 혈청에서 상승하였다(도 23a). 임신한 공여자로부터의 혈청을 양성 대조군으로 포함시켰다. EBI3 수준은 2기 또는 3기에 비해 4기 RCC 대상체에서 가장 높았고(도 23b); 및 전체 생존(도 23c) 및 무질환 생존율(도 23d)은 혈청 EBI3 수준이 낮은 RCC 환자에서 더 높았다.
RCC 뮤린 모델에서 항-IL-27 Ab1 처리의 생체내 효능을 테스트하기 위해, Renca 세포를 왼쪽 신장에 동소 이식하였다. 이식 3일 후, 마우스를 항-IL-27 Ab1 또는 인간 IgG1 아이소타입 대조군(50 ㎎/㎏ 매주 2회)으로 2주 동안 복강내 처리하였다. 21일 후, 조직을 수확하고, 두 신장의 무게를 측정하여 순 종양 무게를 계산하고, 폐 전이를 시각적으로 계산하였다. 평균 종양 무게는 대체로 일정하게 유지되었지만(도 24a), 폐 전이는 아이소타입 대조군-처리된 마우스와 비교하여 항-IL-27 Ab1-처리된 마우스에서 유의하게 감소되었다(도 24b).
이들 데이터는 RCC 환자로부터의 종양에서 증가된 IL-27p28, EBI3 및 IL-27RA 전사체 수준이 불량한 예후예측과 관련이 있음을 보여준다. 항-IL-27 Ab1은 생체내 RCC의 동소형 모델에서 단일-작용제 활성을 입증하며, 항-IL-27 Ab1을 이용한 IL-27의 차단은 순환하는 EBI3의 수준이 높은 RCC 환자를 위한 유망한 전략임을 나타낸다.
실시예 14: 동소형 Hepa1-6 HCC 마우스 모델에서 항-IL-27 Ab1을 사용한 IL-27의 생체내 표적화
간 암 모델에서 항-IL-27 Ab1 항체의 생체내 효능을 연구하기 위해, Hepa1-6-Luc 종양 세포를 마우스의 간에 주사하고, 동물에 이식 후 제5일, 제8일, 제12일 및 제15일에 50 ㎎/㎏의 항-IL-27 Ab1을 IP 주사에 의해 투여하였다(도 25a). 총 플럭스는 hIgG1 아이소타입 대조군-처리된 마우스와 비교하여 항-IL-27 Ab1 처리된 마우스에서 기준선 근처에서 감소하였다(도 25b).
마우스 모델에서 항-IL-27 Ab1에 대한 반응성은 용량 의존적이었다. 마우스를 이식 후 제5일, 제8일, 제12일 및 제15일에 아이소타입 대조군, 5 ㎎/㎏ 항-IL-27 Ab1, 25 ㎎/㎏ 항-IL-27 Ab1 또는 50 ㎎/㎏ 항-IL-27 Ab1로 처리하였다(도 26a). 종양 성장은 25 ㎎/㎏ 또는 50 ㎎/㎏ 항-IL-27 Ab1로 처리된 마우스에서 기준선 근처에서 가장 낮았다(도 26b 내지 도 26f).
항-IL-27 Ab1에 의해 유도된 유전자 발현의 사전 정의된 전임상 변화가 이 모델과 관련이 있는지 여부를 결정하기 위해, 바이오마커 유전자의 어레이의 발현을 항-IL-27 Ab1의 투여 후 검정하였다(도 27a 내지 도 27c). 상위 200개의 억제된 유전자는 표 17A에 나타나 있고, 상기 200개의 유도된 유전자는 표 17B에 나타나 있다. 상향조절 및 하향조절된 유전자의 전체 목록은 상기 표 11A 내지 표 11B에 나타나 있다.
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
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Figure pct00046
Figure pct00047
특히, 항-IL-27 Ab1은 PD-L1, TIGIT 및 AFP 발현을 포함하여 여러 주요 저해성 유전자를 하향조절하는 것으로 밝혀졌으며(도 28b 내지 도 28d), EBI3, IL-27 및 IL27RA의 발현에는 유의한 변화가 없었다(도 28a). TGFβ경로는 또한 TNFRSF10B, TNFRSF1a 및 PDGFA의 감소된 발현과 함께 항-IL-27 Ab1 투여 후 억제되는 것으로 밝혀졌다(도 28c 및 도 28e).
또한, 항-IL-27 Ab1을 사용한 치료는 종양 면역 세포 침윤을 변경하였다. 항-IL-27 Ab1은 종양 미세환경(TME; 도 29a)에서 대식세포 및 NK 전사체의 풍부함을 촉진한다. 특히, 항-IL-27 Ab1은 주요 대식세포 관련 마커인 CD206 및 CD163(도 29b)을 풍부하게 하고; 항-IL-27 Ab1은 특정 NK-관련 수용체를 조절하는 것으로 밝혀졌다(도 30). NK 마커 조절의 이질성은 항-IL-27 Ab1이 HEPA1-6 종양의 침윤뿐만 아니라 NK 기능에도 영향을 미침을 시사한다. 또한, 다양한 다른 세포 표면 마커는 항-IL-27 Ab1로 처리 후 조절된 발현을 나타내었다(도 31).
실시예 15: IL-27 저해의 바이오마커로서 TNFSF15
TL1A(TNF 유사 리간드 1A) 또는 VEGFI(혈관 내피 성장 인자 저해제)로도 알려져 있는 TNFSF15(종양 괴사 인자 가용성 인자 15)는 혈관신생을 저해하는 역할을 하는 것으로 알려진 종양 괴사 인자 패밀리 내의 사이토카인이며(참조: 종양 괴사 인자 패밀리의 신규한 사이토카인인 VEGI는 생체내에서 결장 암종의 성장을 억제하는 혈관신생 저해제임. 문헌[FASEB J.1999], 휴먼 게놈 사이언시스 인코포레이티드(Human Genome Sciences, Inc)), 염증성 사이토카인의 생산을 유도함으로써 T 세포 공동-자극제로서 기능할 수 있다(문헌[Migone et al., Immunity 16(3):479-92 (March 2002); Jin et al., Mucosal Immunology 6:886-99 (December 19, 2012)]). TNFSF15는 IL-27 저해제로 치료한 후에 IL-27을 차단한 후 상향조절되는 것으로 나타났으며, 이는 IL-27을 저해하기 위한 치료제의 투여 후 IL-27 저해 효과를 평가하는데 있어서 바이오마커로서의 유용성을 확립하였다.
IL-27은 활성화된 PBMC에서 사이토카인 IL-17A, IFNγ(또는 IFNg) 및 TNFα(또는 TNFa)의 생성을 저해하였다. 3명의 공여자로부터의 풀링된 인간 PBMC를 IL-27(100 ng/㎖)의 존재 또는 부재하에 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 3일 동안 자극하였다. 상청액을 수확하고, 세포측정 비드 어레이에 의해 IL-17A, IFNγ, TNFα 및 IL-10에 대한 효과를 테스트하였으며; IL-27은 IL-17A, IFNγ 및 TNFα의 생산을 감소시켰고, IL-10의 생산에는 영향을 미치지 않았다(도 32a 내지 도 32d).
반대로, 활성화된 PBMC에서 항-IL-27 Ab1로 IL-27을 차단하면 사이토카인 생성이 증가한다. 3명 내지 4명의 개별 공여자로부터의 PBMC를 항-IL-27 Ab1(1 ㎍/㎖)의 존재 또는 부재하에 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 4일 동안 자극하였다. 상청액을 수확하고, 세포측정 비드 어레이에 의해 IL-17A, IFNγ, TNFα 및 IL-10에 대한 효과를 테스트하였으며; 항-IL-27 Ab1은 IL-17A, IFNγ 및 TNFα의 생성을 증가시켰다(도 33a 내지 도 33d).
항-IL-27 Ab1 활성의 약동학적 또는 바이오마커로서 추적될 수 있는 유전자 발현의 다른 변화를 결정하기 위해, 활성화된 PBMC에서 마이크로어레이 분석에 의해 유전자 발현 프로파일링을 수행하였다. 3명의 개별 공여자로부터의 PBMC를 항-IL-27 Ab1(1 ㎍/㎖)과 함께 또는 없이 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 24시간 동안 자극하였다. 각 샘플로부터 RNA를 단리하고, 마이크로어레이에 의한 유전자 발현 프로파일링을 위해 처리하여 IL-27 저해의 효과를 결정하였다. 표 18에 나타낸 바와 같이, MMP1, MMP10 및 TNFSF15를 포함하는 아이소타입 대조군과 비교하여 항-IL-27 Ab1을 이용한 IL-27 저해 이후 볼케이노 플롯 분석에 의해 여러 유전자가 차등적으로 발현되었다. 도 34는 대조군(x-축)과 비교하여 IL-27 저해 후 유전자 발현에서 log2 배수-변화 대 대조군(y-축)과 비교하여 항-IL-27 Ab1 처리 후 유전자 발현 변화의 유의성(p-값)을 나타내는 볼케이노 플롯을 보여준다. TNFSF15 전사체는 IL-27 차단 후 유의하게 증가하였다. TNFSF15는 도 35에 나타낸 바와 같이 3명의 개별 공여자 모두에서 아이소타입 대조군으로 처리한 것과 비교하여 항-IL-27 Ab1로 처리한 후 유전자 발현 수준에 재현 가능한 증가를 보여주었다.
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
후속 실험에서, 풀링된 인간 PBMC를 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 24시간 동안 자극하거나 또는 2개의 상이한 로트의 항-IL-27 Ab1(1 ㎍/㎖) 또는 아이소타입 대조군의 존재하에 자극하지 않은 채로 두었다. RNA를 수확하고, 유전자 특이적 Taqman 프로브를 사용하여 TNFSF15 전사체를 측정하여 qPCR에 의해 TNFSF15 상대량(relative quantity: RQ)을 결정하였다. 그 결과, IL-27 저해 후 TNFSF15 발현의 증가가 확인되었으며, 이는 도 36a 내지 도 36b에 나타낸 바와 같이 휴지기 PBMC에서 항-IL-27 Ab1로 처리 후에도 TNFSF15 발현이 증가하지 않았기 때문에 면역 세포 활성화에 의존하는 것으로 밝혀졌다.
TNFSF15 전사체의 상대적인 증가는 단핵구가 PBMC 배양물에 보충될 때 추가로 향상되었다. 풀링된 인간 PBMC는 휴지기(휴지기 PBMC), PBMC로 풍부해진 단핵구의 1:2의 비가 보충된 PBMC(휴지기 PBMC + 단핵구), 휴지기로 남아 있는 단핵구 단독(휴지기 단핵구), 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 활성화된 PBMC(활성화된 PMBC) 또는 1:2의 비의 단핵구가 보충되고 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 활성화된 PBMC(활성화된 PMBC + 단핵구)로 남겨졌다. 세포를 24시간 동안 배양한 다음, qPCR에 의해 TNFSF15 수준을 결정하기 위해 RNA를 단리하였다. 도 37의 값은 아이소타입 대조군과 비교하여 항-IL-27 Ab1을 이용한 IL-27 저해 후 TNFSF15 전사체의 배수 변화를 나타낸다.
TNFSF15 전사체 향상 효과는 도 38에 나타낸 바와 같이 IL-27 차단에 특이적이었으며, CD39 또는 CD112R을 표적으로 하는 다른 항체에서는 관찰되지 않았다. 여기에서, 풀링된 인간 PBMC에 단핵구 유래 대식세포를 보충하고, IgG1 대조군 항체, 항-IL-27 항체(항-IL-27 Ab1, 1 ㎍/㎖), 항-CD39 IgG4 항체(1 ㎍/㎖), 항-CD112R IgG1 항체(1 ㎍/㎖) 또는 항-CD112R IgG4 항체(1 ㎍/㎖)의 존재하에 24시간 동안 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 자극하였다. 24시간에 RNA를 수확하고; 인간 TL1A/TNFSF15 DuoSet ELISA(알앤디 시스템즈)를 사용하여 세포 배양 상청액에서 TNFSF15 전사체를 측정하였다.
또한, 도 39a 및 도 39b에 나타낸 바와 같이, 분비된 TNFSF15 단백질의 증가는 또한 전사체와 비교하여 지연된 동역학을 갖는 활성화된 PBMC에서 항-IL-27 Ab1으로 IL-27을 차단한 후에 관찰되었다(도 39a 내지 도 39b). 풀링된 인간 PBMC에 단핵구 유래 대식세포를 보충하고, IgG1 대조군 또는 항-IL-27 항체(항-IL-27 Ab1, 1 ㎍/㎖)의 존재하에 항-CD3(0.25 ㎍/㎖)으로 자극하였다. 제1일, 제2일 및 제5일에 RNA를 수확하고, 각 시점에 대해 qPCR에 의해 TNFSF15 전사체 상대량(RQ)을 결정하였다. 배양 상청액을 상이한 시간에 수확하고; TNFSF15 단백질을 샌드위치 ELISA를 사용하여 측정하였다.
SEQUENCE LISTING <110> SURFACE ONCOLOGY, INC. <120> ANTI-IL-27 ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> WO2021062244 <140> PCT/US2020/052849 <141> 2020-09-25 <150> US 63/081,705 <151> 2020-09-22 <150> US 62/906,008 <151> 2019-09-25 <160> 156 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 229 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human EBI3 protein <400> 1 Met Thr Pro Gln Leu Leu Leu Ala Leu Val Leu Trp Ala Ser Cys Pro 1 5 10 15 Pro Cys Ser Gly Arg Lys Gly Pro Pro Ala Ala Leu Thr Leu Pro Arg 20 25 30 Val Gln Cys Arg Ala Ser Arg Tyr Pro Ile Ala Val Asp Cys Ser Trp 35 40 45 Thr Leu Pro Pro Ala Pro Asn Ser Thr Ser Pro Val Ser Phe Ile Ala 50 55 60 Thr Tyr Arg Leu Gly Met Ala Ala Arg Gly His Ser Trp Pro Cys Leu 65 70 75 80 Gln Gln Thr Pro Thr Ser Thr Ser Cys Thr Ile Thr Asp Val Gln Leu 85 90 95 Phe Ser Met Ala Pro Tyr Val Leu Asn Val Thr Ala Val His Pro Trp 100 105 110 Gly Ser Ser Ser Ser Phe Val Pro Phe Ile Thr Glu His Ile Ile Lys 115 120 125 Pro Asp Pro Pro Glu Gly Val Arg Leu Ser Pro Leu Ala Glu Arg Gln 130 135 140 Leu Gln Val Gln Trp Glu Pro Pro Gly Ser Trp Pro Phe Pro Glu Ile 145 150 155 160 Phe Ser Leu Lys Tyr Trp Ile Arg Tyr Lys Arg Gln Gly Ala Ala Arg 165 170 175 Phe His Arg Val Gly Pro Ile Glu Ala Thr Ser Phe Ile Leu Arg Ala 180 185 190 Val Arg Pro Arg Ala Arg Tyr Tyr Val Gln Val Ala Ala Gln Asp Leu 195 200 205 Thr Asp Tyr Gly Glu Leu Ser Asp Trp Ser Leu Pro Ala Thr Ala Thr 210 215 220 Met Ser Leu Gly Lys 225 <210> 2 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human p28 protein <400> 2 Met Gly Gln Thr Ala Gly Asp Leu Gly Trp Arg Leu Ser Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Pro Leu Leu Leu Val Gln Ala Gly Val Trp Gly Phe Pro Arg Pro 20 25 30 Pro Gly Arg Pro Gln Leu Ser Leu Gln Glu Leu Arg Arg Glu Phe Thr 35 40 45 Val Ser Leu His Leu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Val Arg Gly Gln 50 55 60 Ala His Arg Phe Ala Glu Ser His Leu Pro Gly Val Asn Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Leu Pro Leu Gly Glu Gln Leu Pro Asp Val Ser Leu Thr Phe Gln Ala 85 90 95 Trp Arg Arg Leu Ser Asp Pro Glu Arg Leu Cys Phe Ile Ser Thr Thr 100 105 110 Leu Gln Pro Phe His Ala Leu Leu Gly Gly Leu Gly Thr Gln Gly Arg 115 120 125 Trp Thr Asn Met Glu Arg Met Gln Leu Trp Ala Met Arg Leu Asp Leu 130 135 140 Arg Asp Leu Gln Arg His Leu Arg Phe Gln Val Leu Ala Ala Gly Phe 145 150 155 160 Asn Leu Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu 165 170 175 Arg Lys Gly Leu Leu Pro Gly Ala Leu Gly Ser Ala Leu Gln Gly Pro 180 185 190 Ala Gln Val Ser Trp Pro Gln Leu Leu Ser Thr Tyr Arg Leu Leu His 195 200 205 Ser Leu Glu Leu Val Leu Ser Arg Ala Val Arg Glu Leu Leu Leu Leu 210 215 220 Ser Lys Ala Gly His Ser Val Trp Pro Leu Gly Phe Pro Thr Leu Ser 225 230 235 240 Pro Gln Pro <210> 3 <211> 636 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human WSX1 <400> 3 Met Arg Gly Gly Arg Gly Ala Pro Phe Trp Leu Trp Pro Leu Pro Lys 1 5 10 15 Leu Ala Leu Leu Pro Leu Leu Trp Val Leu Phe Gln Arg Thr Arg Pro 20 25 30 Gln Gly Ser Ala Gly Pro Leu Gln Cys Tyr Gly Val Gly Pro Leu Gly 35 40 45 Asp Leu Asn Cys Ser Trp Glu Pro Leu Gly Asp Leu Gly Ala Pro Ser 50 55 60 Glu Leu His Leu Gln Ser Gln Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Thr Gln Thr 65 70 75 80 Val Ala Val Ala Ala Gly Arg Ser Trp Val Ala Ile Pro Arg Glu Gln 85 90 95 Leu Thr Met Ser Asp Lys Leu Leu Val Trp Gly Thr Lys Ala Gly Gln 100 105 110 Pro Leu Trp Pro Pro Val Phe Val Asn Leu Glu Thr Gln Met Lys Pro 115 120 125 Asn Ala Pro Arg Leu Gly Pro Asp Val Asp Phe Ser Glu Asp Asp Pro 130 135 140 Leu Glu Ala Thr Val His Trp Ala Pro Pro Thr Trp Pro Ser His Lys 145 150 155 160 Val Leu Ile Cys Gln Phe His Tyr Arg Arg Cys Gln Glu Ala Ala Trp 165 170 175 Thr Leu Leu Glu Pro Glu Leu Lys Thr Ile Pro Leu Thr Pro Val Glu 180 185 190 Ile Gln Asp Leu Glu Leu Ala Thr Gly Tyr Lys Val Tyr Gly Arg Cys 195 200 205 Arg Met Glu Lys Glu Glu Asp Leu Trp Gly Glu Trp Ser Pro Ile Leu 210 215 220 Ser Phe Gln Thr Pro Pro Ser Ala Pro Lys Asp Val Trp Val Ser Gly 225 230 235 240 Asn Leu Cys Gly Thr Pro Gly Gly Glu Glu Pro Leu Leu Leu Trp Lys 245 250 255 Ala Pro Gly Pro Cys Val Gln Val Ser Tyr Lys Val Trp Phe Trp Val 260 265 270 Gly Gly Arg Glu Leu Ser Pro Glu Gly Ile Thr Cys Cys Cys Ser Leu 275 280 285 Ile Pro Ser Gly Ala Glu Trp Ala Arg Val Ser Ala Val Asn Ala Thr 290 295 300 Ser Trp Glu Pro Leu Thr Asn Leu Ser Leu Val Cys Leu Asp Ser Ala 305 310 315 320 Ser Ala Pro Arg Ser Val Ala Val Ser Ser Ile Ala Gly Ser Thr Glu 325 330 335 Leu Leu Val Thr Trp Gln Pro Gly Pro Gly Glu Pro Leu Glu His Val 340 345 350 Val Asp Trp Ala Arg Asp Gly Asp Pro Leu Glu Lys Leu Asn Trp Val 355 360 365 Arg Leu Pro Pro Gly Asn Leu Ser Ala Leu Leu Pro Gly Asn Phe Thr 370 375 380 Val Gly Val Pro Tyr Arg Ile Thr Val Thr Ala Val Ser Ala Ser Gly 385 390 395 400 Leu Ala Ser Ala Ser Ser Val Trp Gly Phe Arg Glu Glu Leu Ala Pro 405 410 415 Leu Val Gly Pro Thr Leu Trp Arg Leu Gln Asp Ala Pro Pro Gly Thr 420 425 430 Pro Ala Ile Ala Trp Gly Glu Val Pro Arg His Gln Leu Arg Gly His 435 440 445 Leu Thr His Tyr Thr Leu Cys Ala Gln Ser Gly Thr Ser Pro Ser Val 450 455 460 Cys Met Asn Val Ser Gly Asn Thr Gln 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ccctgccctt cctgccctgc ccctgagttc 720 ctgggcggac cttccgtgtt cctgttccct ccaaagccca aggacaccct gatgatctcc 780 cggacccctg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc aggaagatcc cgaagtccag 840 ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900 cagttcaact ccacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960 aacggcaaag agtacaagtg caaagtgtcc aacaagggcc tgccctccag catcgaaaag 1020 accatctcca aggccaaggg ccagccccgc gagccccaag tgtacaccct gcctcccagc 1080 caggaagaga tgaccaagaa tcaagtgtcc ctgacttgtc tggtcaaggg cttctacccc 1140 tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260 tcccggtggc aggaaggcaa cgtcttctcc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320 cactacaccc agaagtccct gtccctgtct ctgggc 1356 <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR1 <400> 53 Gly Phe Thr Phe Ser Arg Thr Gly 1 5 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR2 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ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttccgt agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtagta gtggtagtta catatactac 180 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300 ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360 ttggtcaccg tctcctcagc gagcaccaaa ggcccgagcg tgtttccgct ggcgccgagc 420 agcaaaagca ccagcggcgg caccgcggcg ctgggctgcc tggtgaaaga ttattttccg 480 gaaccggtga ccgtgagctg gaacagcggc gcgctgacca gcggcgtgca tacctttccg 540 gcggtgctgc agagcagcgg cctgtatagc ctgagcagcg tggtgaccgt gccgagcagc 600 agcctgggca cccagaccta tatttgcaac gtgaaccata aaccgagcaa caccaaagtg 660 gataaaaaag tggaaccgaa aagctgcgat aaaacccata cctgcccgcc gtgcccggcg 720 ccggaactgc tgggcggccc gagcgtgttt ctgtttccgc cgaaaccgaa agataccctg 780 atgattagcc gcaccccgga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgagcca tgaagatccg 840 gaagtgaaat ttaactggta tgtggatggc gtggaagtgc ataacgcgaa aaccaaaccg 900 cgcgaagaac agtataacag cacctatcgc gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcatcag 960 gattggctga acggcaaaga atataaatgc aaagtgagca acaaagcgct gccggcgccg 1020 attgaaaaaa ccattagcaa agcgaaaggc cagccgcgcg aaccgcaggt gtataccctg 1080 ccgccgagcc gcgatgaact gaccaaaaac caggtgagcc tgacctgcct ggtgaaaggc 1140 ttttatccga gcgatattgc ggtggaatgg gaaagcaacg gccagccgga aaacaactat 1200 aaaaccaccc cgccggtgct ggatagcgat ggcagctttt ttctgtatag caaactgacc 1260 gtggataaaa gccgctggca gcagggcaac gtgtttagct gcagcgtgat gcatgaagcg 1320 ctgcataacc attataccca gaaaagcctg agcctgagcc cgggcaaa 1368 <210> 137 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain <400> 137 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 His Ala Ser Ala Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 138 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA Light CHain <400> 138 gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agtccagcca gagtgtttta ttcagctcca acaataagaa ctacttagct 120 tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcagca cgccagtgcc 300 cctcctactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaac gtacggtggc cgctccctcc 360 gtgttcatct tcccaccctc cgacgagcag ctgaagtccg gcaccgcctc cgtcgtgtgc 420 ctgctgaaca acttctaccc tcgcgaggcc aaagtgcagt ggaaagtgga caacgccctg 480 cagtccggca actcccagga atccgtcacc gagcaggact ccaaggacag cacctactcc 540 ctgtcctcca ccctgaccct gtccaaggcc gactacgaga agcacaaagt gtacgcctgc 600 gaagtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaagt ccttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 139 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain <400> 139 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Ser Ser Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp 100 105 110 Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 115 120 125 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr 130 135 140 Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 145 150 155 160 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 165 170 175 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 180 185 190 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr 195 200 205 Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val 210 215 220 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 325 330 335 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Gly 450 <210> 140 <211> 1356 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA Heavy Chain <400> 140 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttccgt agctatggga tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtagta gtggtagtta catatactac 180 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagagatggt 300 ggaagaacgt cctacaccgc cacagcccac aattggttcg acccctgggg acagggtaca 360 ttggtcaccg tctcctcagc ttccaccaag ggcccctccg tgttccctct ggccccttgc 420 tcccggtcca cctccgagtc taccgccgct ctgggctgcc tcgtgaagga ctacttcccc 480 gagcccgtga ccgtgtcctg gaactctggc gccctgacct ccggcgtgca caccttccct 540 gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtccagcg tcgtgaccgt gccctcctcc 600 agcctgggca ccaagaccta cacctgtaac gtggaccaca agccctccaa caccaaagtg 660 gacaagcggg tggaatctaa gtacggccct ccctgccctt cctgccctgc ccctgagttc 720 ctgggcggac cttccgtgtt cctgttccct ccaaagccca aggacaccct gatgatctcc 780 cggacccctg aagtgacctg cgtggtggtg gacgtgtccc aggaagatcc cgaagtccag 840 ttcaattggt acgtggacgg cgtggaagtg cacaacgcca agaccaagcc cagagaggaa 900 cagttcaact ccacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960 aacggcaaag agtacaagtg caaagtgtcc aacaagggcc tgccctccag catcgaaaag 1020 accatctcca aggccaaggg ccagccccgc gagccccaag tgtacaccct gcctcccagc 1080 caggaagaga tgaccaagaa tcaagtgtcc ctgacttgtc tggtcaaggg cttctacccc 1140 tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260 tcccggtggc aggaaggcaa cgtcttctcc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320 cactacaccc agaagtccct gtccctgtct ctgggc 1356 <210> 141 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FLAG <400> 141 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 142 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6-HIS <400> 142 His His His His His His 1 5 <210> 143 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic HA <400> 143 Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala 1 5 <210> 144 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR1 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Wherein Xaa can be Ser, Ala, or Arg <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Wherein Xaa can be Ser or Arg <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Wherein Xaa can be Thr or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Wherein Xaa can be Gly or Ser <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 144 Asn Gly Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 145 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR1 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 145 Gly Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 146 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Wherein Xaa can be Ser or Gly <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Wherein Xaa can be Ser or ALa <400> 146 Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile 1 5 <210> 147 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (5)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 147 Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile 1 5 <210> 148 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR1 <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Wherein Xaa can be Ser, Ala, or Arg <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Wherein Xaa can be Ser, or Arg <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Wherein Xaa can be Thr or Tyr <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Wherein Xaa can be Gly or Ser <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 148 Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Met Asn 1 5 <210> 149 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Wherein Xaa can be Gly or Ser <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Wherein Xaa can be Gly or Ser <220> <221> misc_feature <222> (7)..(7) <223> Wherein Xaa can be Ser or Ala <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Wherein Xaa can be Leu or Tyr <400> 149 Xaa Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 150 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR1 <220> <221> misc_feature <222> (4)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 150 Phe Thr Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Met Asn 1 5 <210> 151 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus heavy chain CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(7) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (10)..(10) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 151 Xaa Ile Ser Ser Ser Xaa Xaa Tyr Ile Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 152 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (2)..(8) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 152 Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 153 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain CDR3 <220> <221> misc_Feature <222> (3)..(3) <223> Wherein Xaa can be any amino acid and can repeat between 6 and 15 times <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 153 Ala Arg Xaa Asp Xaa Cys 1 5 <210> 154 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR1 <220> <221> Misc_feature <222> (3)..(3) <223> Wherein Xaa can be any amino acid and repeat itself between 1 and 3 times <220> <221> Misc_feature <222> (6)..(6) <223> Wherein Xaa can be any amino acid and repeat itself between 0 and 4 times <400> 154 Gln Ser Xaa Ser Ser Xaa Tyr 1 5 <210> 155 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 155 Xaa Xaa Ser 1 <210> 156 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain CDR3 <220> <221> misc_feature <222> (3)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (8)..(8) <223> Wherein Xaa can be any amino acid and repeat itself 0 to 1 times <400> 156 Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr 1 5

Claims (80)

  1. 인간 IL-27을 길항하는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 서열번호 2(IL-27p28)에 상응하는 37번 내지 56번 아미노산, (ii) 서열번호 2(IL-27p28)에 상응하는 142번 내지 164번 아미노산 또는 (iii) (i)과 (ii) 모두 중 하나 이상의 아미노산을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 또는 Glu164의 하나 이상의 아미노산을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Asp146, Arg149 및/또는 Phe153을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  4. 제3항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 His150 및/또는 Leu156을 더 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Leu142 및/또는 Glu164를 더 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Glu46, Val49, Ser50 및/또는 Leu162를 더 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu142, Asp146, Arg149, His150, Phe153, Leu156, Leu162 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Leu53, Lys56, Asp143, Leu147, Arg152, Ala157, Gly159, Phe160 또는 Asn161의 하나 이상의 아미노산을 더 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Leu53, Lys56, Asp143, Arg145, Leu147, Arg152, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161 또는 Pro163의 하나 이상의 아미노산을 더 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  11. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 에피토프는 서열번호 2(IL-27p28)의 Gln37, Leu38, Glu42, Glu46, Val49, Ser50, Leu53, Lys56, Leu142, Asp143, Arg145, Asp146, Leu147, Arg149, His150, Arg152, Phe153, Leu156, Ala157, Gly159, Phe160, Asn161, Leu162, Pro163 및 Glu164로 구성되거나 또는 본질적으로 구성되는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3을 포함하되, (i) 경쇄 CDR1은 N-XXXXXXLFSSNXKXYXX-C로 구성되고, 경쇄 CDR3은 N-XXXASAXXX-C로 구성되며, 중쇄 CDR2는 N-XXSSSXSYXYXXXXXXX-C로 구성되고, 중쇄 CDR3은 N-XXXXGRTSYTATXHNXXXX-C로 구성되며, 상기 X는 임의의 아미노산인, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하지 않는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
    (i) 각각 서열번호 9, 10 및 11에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 17, 18 및 19에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (ii) 각각 서열번호 31, 32 및 33에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 39, 40 및 41에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iii) 각각 서열번호 53, 54 및 55에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 61, 62 및 63에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iv) 각각 서열번호 75, 76 및 77에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 83, 84 및 85에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (v) 각각 서열번호 97, 98 및 99에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 105, 106 및 107에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (vi) 서열번호 119, 120 및 121에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는 중쇄 및 경쇄를 포함하지 않는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
    (i) 각각 서열번호 12, 13 및 14에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 20, 21 및 22에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (ii) 각각 서열번호 34, 35 및 36에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 42, 43 및 44에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iii) 각각 서열번호 56, 57 및 58에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 64, 65 및 66에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iv) 각각 서열번호 78, 79 및 80에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 86, 87 및 88에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (v) 각각 서열번호 100, 101 및 102에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 108, 109 및 110에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (vi) 각각 서열번호 122, 123 및 124에 제시되는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 144)로 구성되지 않고/않거나 상기 중쇄 CDR2는 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 146)로 구성되지 않는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 148)로 구성되지 않고/않거나 상기 중쇄 CDR2는 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 149)로 구성되지 않는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음을 포함하지 않는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
    (i) N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-ISSSXXYI-C(서열번호 147)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 121에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 127, 128 및 129에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (ii) N-FTFXXXXMN-C(서열번호 150)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 151)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 서열번호 124에 제시되는 중쇄 CDR3 서열; 및 각각 서열번호 130, 131 및 132에 제시되는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 N-GFTFXXXX-C(서열번호 145)로 구성되는 중쇄 CDR1, N-IXXXXXXX-C(서열번호 152)로 구성되는 중쇄 CDR2 및 N-AR[X]n=6-15DX-C(서열번호 153)로 구성되는 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C(서열번호 154)로 구성되는 경쇄 CDR1, N-XXS-C(서열번호 155)로 구성되는 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 156)로 구성되는 경쇄 CDR3 서열을 포함하지 않는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음 특성 중 적어도 하나 이상을 나타내는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
    (i) 15nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합함;
    (ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단시킴;
    (iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시킴;
    (iv) 세포에서 CD161 발현의 IL-27-매개성 저해를 저해하거나 또는 감소시킴;
    (v) 세포에서 IL-27-매개성 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시킴; 및
    (vi) 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해하거나 또는 감소시킴.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 15nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시키는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  22. 제21항에 있어서, 상기 세포는 면역 세포 또는 암 세포인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시키는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  24. 제23항에 있어서, 상기 세포는 면역 세포인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시키는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  26. 제25항에 있어서, 상기 세포는 면역 세포인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  27. 제26항에 있어서, 상기 세포는 암 세포인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  28. 제27항에 있어서, 상기 세포는 암 세포이되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 암 세포에서 PD-L1 발현을 저해하거나 또는 감소시키는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해하거나 또는 감소시키는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  30. 제29항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 IFNg(또는 IFNγ), IL-17 또는 TNFa(또는 TNFα)인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1 IgA2, IgD 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  32. 제31항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 항체 또는 IgG4 항체인, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는, 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  34. 약제학적 조성물로서, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  35. 핵산으로서, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 경쇄, 중쇄 또는 경쇄와 중쇄 둘 다를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 핵산.
  36. 제35항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  37. 제36항의 발현 벡터로 형질전환된 세포.
  38. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 생산하는 방법으로서, 상기 방법은 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 발현을 허용하는 조건하에서 제37항에 따른 세포를 유지하는 단계를 포함하는, 방법.
  39. 제38항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 얻는 단계를 더 포함하는, 방법.
  40. 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시키는, 방법.
  41. 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 또는 감소시키는, 방법.
  42. 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하는, 방법.
  43. 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 분비를 유도하거나 또는 향상시키는 방법으로서, 상기 방법은 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개성 분비를 유도하거나 또는 향상시키는, 방법.
  44. 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제34항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  45. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제34항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  46. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제34항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약제학적 조성물은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는, 방법.
  47. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제34항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약제학적 조성물은 세포에서 CD161 발현을 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는, 방법.
  48. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제34항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약제학적 조성물은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는, 방법.
  49. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제34항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물을 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개성 분비를 저해하거나 또는 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는, 방법.
  50. 제45항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 폐암(예를 들어, 비-소세포 폐암), 육종, 고환암, 난소암, 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중-음성 유방암), 흑색종, 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 결장직장암, 방광암, 자궁내막암, 전립선암, 갑상선암, 간세포 암종, 위암, 뇌암, 림프종(예를 들어, DL-BCL), 백혈병(예를 들어, AML) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어, 신장 투명 세포 암종)으로부터 선택되는, 방법.
  51. 항-PD-1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는(예를 들어, PD-1-매개성 사이토카인 분비를 향상시킴; 항-PD-1 매개성 TNFα 분비를 향상시킴; 항-PD-1 항체에 노출된 세포로부터 항-PD-1 매개성 IL-6 분비를 향상시킴) 방법으로서, 상기 방법은 세포를 항-PD-1 항체와 동시에 또는 순차적으로 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 노출시켜 항-PD1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는 단계를 포함하는, 방법.
  52. 약제학적 조성물로서, 항-PD-1 항체 및 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  53. 키트로서, 동시 또는 순차적 투여를 위한 항-PD-1 항체 및 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 사용 설명서를 포함하는, 키트.
  54. 제44항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합하여 투여되되, 상기 제2 치료제 또는 절차는 화학요법, 표적화된 항암 요법, 종양세포 용해성 약물, 세포독성제, 면역-기반 요법, 사이토카인, 외과적 절차, 방사선 절차, 공자극성 분자의 활성제, 저해성 분자의 저해제, 백신 또는 세포 면역요법 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  55. 제54항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, PD-L1 저해제, TIM-3 저해제, LAG-3 저해제, TIGIT 저해제, CD112R 저해제, TAM 저해제, STING 효능제, 4-1BB 효능제 또는 이들의 조합인, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제인, 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 PDR001, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 및 AMP-224로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  58. 제55항에 있어서, 상기 PD-L1 저해제는 FAZ053, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 및 BMS-936559로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  59. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 수니티닙(SUTENT®), 카보잔티닙(CABOMETYX®), 악시티닙(INLYTA®), 렌바티닙(LENVIMA®), 에베롤리무스(AFINITOR®), 베바시주맙(AVASTIN®), 에파카도스타트, NKTR-214(CD-122-기반 효능제), 티보자닙(FOTIVDA®), 아벡시노스타트, 이필리무맙(YERVOY®), 트레멜리무맙, 파조파닙(VOTRIENT®), 소라페닙(NEXAVAR®), 템시롤리무스(TORISEL®), 라무시루맙(CYRAMZA®), 니라파립, 사볼리티닙, 보롤라닙(X-82), 레고라페닙(STIVARGO®), 도나페닙(멀티카이네이스 저해제), 캄렐리주맙(SHR-1210), 펙사스티모겐 데바시렙벡(JX-594), 라무시루맙(CYRAMZA®), 아파티닙(YN968D1), 캡슐화된 독소루비신(THERMODOX®), 티반티닙(ARQ197), ADI-PEG 20, 비니메티닙, 아파티닙 메실레이트, 닌테다닙, 리릴루맙, 니볼루맙(OPDIVO®), 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®), 아테졸리주맙(TECENTRIQ®), 아벨루맙(BAVENCIO®), 더발루맙(IMFIMZI®), 세미플리맙-rwlc(LIBTAYO®), 티슬레리주맙 및 스파르탈리주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  60. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIM-3 저해제이되, 선택적으로 상기 TIM-3 저해제는 MGB453 또는 TSR-022인, 방법.
  61. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 LAG-3 저해제이되, 선택적으로 상기 LAG-3 저해제는 LAG525, BMS-986016 및 TSR-033으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  62. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIGIT 저해제인, 방법.
  63. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD112R 저해제인, 방법.
  64. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 TAM(Axl, Mer, Tyro) 저해제인, 방법.
  65. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 4-1BB 효능제인, 방법.
  66. 제55항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 타이로신 카이네이스 저해제(TKI)인, 방법.
  67. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 대상체에서 암을 치료하기 위한, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합하여 사용하기 위한 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 제34항의 약제학적 조성물의 용도.
  68. 키트로서, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 제34항의 약제학적 조성물, 및 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 대상체에서 암을 치료하는데 사용하기 위한 설명서, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합하여 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 키트.
  69. 키트로서, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 대상체로부터의 샘플에서 IL-27을 검출하는데 사용하기 위한 설명서, 선택적으로 대상체에서 IL-27-관련 암을 검출하는데 사용하기 위한 설명서를 포함하는, 키트.
  70. 제54항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 타이로신 카이네이스 저해제, CD39 길항제, CD73 길항제, A2AR 길항제, A2BR 길항제, 이중 A2AR/A2BR 길항제, CCR8 길항제, CTLA4 길항제, VEG-F 저해제 또는 이들의 조합인, 방법.
  71. 제54항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, PD-L1 저해제, TIM-3 저해제, LAG-3 저해제, TIGIT 저해제, CD112R 저해제, TAM 저해제, STING 효능제, 4-1BB 효능제, 타이로신 카이네이스 저해제, CD39 길항제, CD73 길항제, A2AR 길항제, A2BR 길항제, 이중 A2AR/A2BR 길항제, CCR8 길항제, CTLA4 길항제, VEG-F 저해제 또는 이들의 조합인, 방법.
  72. 제71항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, PD-L1 저해제, VEG-F 저해제 또는 이들의 조합인, 방법.
  73. 제44항 내지 제51항, 제54항 내지 제66항 및 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 후 TNFSF15의 발현을 측정하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 투여 전 TNFSF15의 발현을 측정하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  75. 제75항에 있어서, 투여 전 TNFSF15의 발현과 비교하여 투여 후 TNFSF15의 발현에 변화가 없거나 또는 감소된 발현을 나타내는 상기 대상체에게 추가적인 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  76. 제74항에 있어서, 투여 전 TNFSF15의 발현과 비교하여 투여 후 TNFSF15의 증가된 발현을 나타내는 상기 대상체에게 추가적인 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  77. 인간 IL-27을 길항하는 작용제의 효능을 결정하는 방법으로서, 대상체로부터 얻어진 샘플에서 TNFSF15의 발현을 측정하는 단계, 인간 IL-27을 길항하는 상기 작용제를 상기 대상체에게 투여하는 단계 및 투여 후 상기 대상체로부터 얻어진 샘플에서 TNFSF15의 발현을 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
  78. 인간 IL-27을 길항하는 작용제의 효능을 결정하는 방법으로서, 세포 배양물에서 TNFSF15의 발현을 측정하는 단계, 상기 세포 배양물의 하나 이상의 세포를 대상체에 대해 인간 IL-27을 길항하는 상기 작용제를 접촉시키는 단계 및 접촉 후 세포 배양물에서 TNFSF15의 발현을 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
  79. 제73항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TNFSF15의 발현은 mRNA 수준, 단백질 수준 또는 임의의 이들의 조합을 측정함으로써 측정되는, 방법.
  80. 제73항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TNFSF15의 발현은 정량적 PCR("qPCR"), 인시추(in situ) 혼성화, 면역조직화학 또는 임의의 이들의 조합에 의해 측정되는, 방법.
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