KR20220006519A - 항체 약물 접합체 - Google Patents

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스티브 피. 랭스턴
홍 명 이
리팅 마
잔 시
스테판 비스코실
지아닝 왕
헤 수
유타카 니시모토
유미코 이시이
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다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤
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Abstract

본 개시내용은 STING 조절제를 포함하는 항체 약물 접합체를 제공한다. 또한 항체 약물 접합체를 포함하는 조성물이 제공된다. 상기 화합물 및 조성물은 이들이 필요한 대상체에서의 면역 반응을 자극하는 데 유용하다.
Figure pct00225

Description

항체 약물 접합체
전자적으로 제출된 서열목록에 대한 언급
전자적으로 제출된 서열목록의 내용(파일명: 3817_053PC03_Seqlisting_ST25; 용량: 7,104 바이트 및 생성일: 2020년 4월 22일)은 본 명세서에 그 전체가 참조에 의해 원용된다.
기술분야
본 개시내용은 STING 조절제를 포함하는 항체 약물 접합체를 제공한다. 또한 항체 약물 접합체를 포함하는 조성물이 제공된다. 상기 화합물 및 조성물은 이들이 필요한 대상체에서의 면역 반응을 자극하는 데 유용하다.
빠르게 성장하는 표적 치료제 부류인 항체 약물 접합체(antibody drug conjugate: ADC)는 약물의 선택성 및 세포독성 활성을 개선시키는 것에 대해 유망한 새로운 접근을 나타낸다. 이들 치료제는 페이로드(payload) 약물에 연결되어 면역접합체를 형성할 수 있는 항체(또는 항체 단편)으로 이루어진다. 항체는 ADC가 표적 세포에 결합하도록 지시한다. 이어서, ADC는 내재화될 수 있고, 세포에 대한 치료를 제공하는 이의 페이로드를 방출한다. ADC는 이의 표적화된 세포로 향하기 때문에, 접합 약물의 부작용은 동일한 제제를 전신 투여할 때 발생되는 것보다 낮을 수 있다.
어댑터(adaptor) 단백질 STING(인터페론 유전자의 자극제(Stimulator of Interferon Gene))는 선천성 면역계에서 어떤 역할을 하는 것으로 나타났다. STING 경로의 활성화는 종양을 수축시키는 특이적 살해 T-세포의 생성을 초래하는 면역 반응을 촉발하며, 종양이 재발되지 않도록 장기 지속되는 면역을 제공할 수 있다. 활성화된 STING 경로는 또한 바이러스와 싸우고 선천성 면역계와 적응 면역계를 둘 다 동원하는 항바이러스 및 전염증 사이토카인을 생성함으로써 항바이러스 반응에 기여하고, 궁극적으로 병원성 바이러스에 대한 장기 지속되는 면역을 초래한다. 선천성 면역계와 적응 면역계를 둘 다 향상시키는 것의 잠재적인 치료적 이점은 STING를 약물 발견을 위한 매력적인 표적으로 만든다. 환식 다이뉴클레오타이드는 STING 작용제로서 작용할 수 있으며, 임상 시험에서 시험 중에 있다. 그러나, 이들의 음이온성 특성은 이들의 막 침투성을 불량하게 만드는데, 이는 세포 내에서 이들이 STING에 맞물리는 능력을 제한할 수 있고, 종종 혈류 내에서 이들 화합물의 원치않는 분포를 야기한다.
새로운 STING 작용제뿐만 이들을 표적화된 세포에 전달하는 개선된 방법에 대한 필요가 여전히 있다.
제1 양상에서, 본 개시내용은 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00001
,
식 중:
a는 1 내지 20의 정수이고;
b는 1 내지 20의 정수이며;
m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
n은 0 또는 1이며;
D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
각각의 R1은 C1-C4알킬, O-C1-C4알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며;
R2는 C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
R3 및 R3'는 각각 독립적으로 수소 및 C1-C3알킬로부터 선택되며;
L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
제1 양상의 제1 실시형태에서, a는 1 내지 4의 정수이고; b는 1 내지 10의 정수이며; m은 0이다.
제1 양상의 제2 실시형태에서, a는 1 내지 4의 정수이고; m은 0이며; n은 0이고; R3 및 R3'는 각각 수소이다.
제1 양상의 제3 실시형태에서, L은
Figure pct00002
이되,
여기서:
Figure pct00003
는 질소 원자에 대한 부착 지점이며;
Figure pct00004
는 Ab에 대한 부착 지점이며;
t는 1 내지 10의 정수이며;
W는 존재하지 않거나 또는 자기-희생기(self-immolative group)이고;
Z는 존재하지 않거나 또는 2 내지 5개 아미노산의 펩타이드이며;
U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이고; 그리고
Q는 이형이작용성 기이며;
단, W와 Z가 둘 다 존재하지 않음은 아니다.
제1 양상의 제4 실시형태에서, W는
Figure pct00005
로부터 선택된 자기-희생기이되;
여기서:
Figure pct00006
는 카보닐기에 대한 부착 지점이며;
Figure pct00007
는 Z에 대한 부착 지점이다.
제1 양상의 제5 실시형태에서, W는
Figure pct00008
로부터 선택된다.
제1 양상의 제6 실시형태에서, W는
Figure pct00009
이다.
제1 양상의 제17 실시형태에서, Z는 효소적으로 절단될 수 있는 펩타이드이다. 제8 실시형태에서, Z는 카텝신 절단성(cathepsin cleavable)이다. 제9 실시형태에서, Z는 Val-Cit, Cit-Val, Val-Ala, Ala-Val, Phe-Lys 및 Lys-Phe로부터 선택된 2-아미노산 펩타이드이다. 제1 양상의 제10 실시형태에서, Z는 Val-Ala 또는 Ala-Val이다.
제1 양상의 제11 실시형태에서, U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는
Figure pct00010
Figure pct00011
로부터 선택되되;
여기서:
Figure pct00012
는 Z에 대한 부착 지점이며;
Figure pct00013
는 Q에 대한 부착 지점이고;
p는 1 내지 6의 정수이며;
q는 1 내지 20의 정수이고;
X는 O 또는 -CH2-이며; 그리고
각각의 r은 독립적으로 0 또는 1이다.
제1 양상의 제12 실시형태에서, U'는 존재하지 않고, U는
Figure pct00014
이다.
제1 양상의 제13 실시형태에서, Q는 화학적 또는 효소-매개 접합을 통해 Ab에 부착될 수 있는 이형이작용성 기이다. 제14 실시형태에서, Q는
Figure pct00015
로부터 선택되되;
여기서,
Figure pct00016
는 U에 대한 부착 지점이거나, 또는 U가 존재하지 않을 때, Z에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00017
는 U'에 대한 부착 지점이거나, 또는 U'가 존재하지 않을 때, Ab에 대한 부착 지점이다.
제1 양상의 제15 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공하되, 식 중 L은
Figure pct00018
이고,
t는 1이며; W는 존재하지 않거나 또는 자기-희생기이고; Z는 존재하지 않거나 또는 2개 아미노산의 펩타이드이다.
제1 양상의 제16 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공하되, 식 중, R2는 -CH3 또는 -(CH2CH2O)s-CH3이고, s는 1 내지 10의 정수이다.
제1 양상의 제7 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공하되, D-NH2는 STING 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물이다. 제1 양상의 제18 실시형태에서, STING 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물은 구아닌 또는 아데닌 유도체를 포함한다.
제19 실시형태에서, STING 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물은 하기 화학식(II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00019
,
식 중:
X10은 SH 또는 OH이고;
X20은 SH 또는 OH이며;
Ya는 O, S 또는 CH2이고;
Yb는 O, S, NH 또는 NRa이되, Ra는 C1-C4알킬이며;
R10은 수소, 플루오로, OH, NH2, ORb 또는 NHRb이고;
R20은 수소 또는 플루오로이며;
R30은 수소이고; R40은 수소, 플루오로, OH, NH2, ORb 또는 NHRb이거나; 또는 R30 및 R40은 함께 CH2O를 형성하고;
R50은 수소 또는 플루오로이며;
Rb는 C1-C6알킬, 할로(C1-C6)알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
고리 A10은 N, O 또는 S로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 5 또는 6-원 단환식 헤테로아릴, 또는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 9 또는 10원 이환식 헤테로아릴 고리이되; 고리 A10은 고리에 적어도 1개의 N 원자를 포함하고, Yb는 고리 A10의 탄소 원자에 부착되며; 그리고
고리 B10은 N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 9 또는 10-원 이환식 헤테로아릴 고리이되; 고리 B10은 고리에 적어도 2개의 N 원자를 포함하고;
단, 고리 A10 또는 고리 B10은 -NH-기를 통해 화학식(I)의 카보닐기에 부착된다.
제20실시형태에서, STING 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물은
Figure pct00020
또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이고;
식 중,
Figure pct00021
는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 부착 지점이다.
제1 양상의 제21 실시형태에서, STING 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물은 하기 화학식(III)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00022
;
식 중,
X10은 SH 또는 OH이고;
X20은 SH 또는 OH이며;
Yc는 O, S 또는 CH2이고;
Yd는 O, S 또는 CH2이며;
B100은 하기 화학식(B 1 -A) 또는 화학식(B 1 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00023
;
R13, R14, R15, R16 및 R17은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
R1000은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
Y11, Y12, Y13, Y14, Y15 및 Y16은 각각 독립적으로 N 또는 CR1a이되, R1a는 수소 또는 치환체이며;
Z11, Z12, Z13, Z14, Z15 및 Z16은 각각 독립적으로 N 또는 C이고;
R105는 수소 원자 또는 치환체이며;
B200은 하기 화학식(B 2 -A) 또는 화학식(B 2 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00024
;
R23, R24, R25, R26 및 R27은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
R100'은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 및 Y26은 각각 독립적으로 N 또는 CR2a이되, R2a는 수소 또는 치환체이며;
Z21, Z22, Z23, Z24, Z25 및 Z26은 각각 독립적으로 N 또는 C이고; 그리고
R205는 수소 원자 또는 치환체이되; R105 및 R205는 각각 독립적으로 이들이 각각 부착된 5-원 고리의 2- 또는 3- 위치에 부착되며;
단:
B100 또는 B200 중 하나는 -NH-기를 통해 화학식(I)의 카보닐기에 부착된다.
제1 양상의 제22 실시형태에서, STING 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물은 하기 화학식(IIIa)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00025
;
식 중
B100은 하기 화학식(B 1 -A) 또는 화학식(B 1 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00026
;
R13, R14, R15, R16 및 R17은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
R1000은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
Y11, Y12, Y13, Y14, Y15 및 Y16은 각각 독립적으로 N 또는 CR1a이되, R1a는 수소 또는 치환체이며;
Z11, Z12, Z13, Z14, Z15 및 Z16은 각각 독립적으로 N 또는 C이고;
R105는 수소 원자 또는 치환체이며;
B200은 하기 화학식(B 2 -A) 또는 화학식(B 2 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00027
;
R23, R24, R25, R26 및 R27은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
R100'은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 및 Y26은 각각 독립적으로 N 또는 CR2a이되, R2a는 수소 또는 치환체이며;
Z21, Z22, Z23, Z24, Z25 및 Z26은 각각 독립적으로 N 또는 C이고; 그리고
R205는 수소 원자 또는 치환체이되; R105 및 R205는 각각 독립적으로 이들이 각각 부착된 5-원 고리의 2- 또는 3- 위치에 부착되며;
단:
B100 또는 B200 중 하나는:
Figure pct00028
이고;
식 중:
R18은 수소 또는 C1-6 알킬이며; 그리고
R19는 할로겐 원자이고;
나머지는 -NH-기를 통해 화학식(I)의 카보닐기에 부착된다.
제1 양상의 제23 실시형태에서, STING 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물은:
Figure pct00029
또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이고;
식 중,
Figure pct00030
는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 부착 지점이다.
제2 양상에서, 본 개시내용은 화학식(IV)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00031
;
식 중:
a는 1 내지 20의 정수이고;
b는 1 내지 20의 정수이며;
k는 0, 1, 2 또는 3이고;
m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
R2는 H, C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
R4는 수소 및 임의의 천연 유래 아미노산 측쇄로부터 선택되며;
R5는 C1-C4알킬 및 O-C1-C4알킬로부터 선택되고;
L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
제2 양상의 제1 실시형태에서, L은
Figure pct00032
이고,
여기서:
Figure pct00033
는 카보닐기에 대한 부착 지점이고;
Figure pct00034
는 Ab에 대한 부착 지점이며;
W는 자기-희생기이고;
Z는 존재하지 않거나 또는 2 내지 5개 아미노산의 펩타이드이며; 그리고
U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이고; 그리고
Q는 이형이작용성 기이다.
제3 양상에서, 본 개시내용은 하기 화학식(V)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00035
;
식 중:
D-NH-는
Figure pct00036
이고;
X는 O 또는 CH2이며;
f는 1 내지 10의 정수이고;
g는 1 내지 20의 정수이며;
U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이고;
Q는 이형이작용성 기이며; 그리고
Ab는 항체이고, Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
제3 양상의 제1 실시형태에서, X는 O이다.
제4 양상에서, 본 개시내용은 하기 화학식(VI)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure pct00037
,
식 중:
a는 1 내지 20의 정수이고;
m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
n은 0 또는 1이며;
D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
각각의 R1은 C1-C4알킬, O-C1-C4알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며;
R2는 C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
R3 및 R3'는 각각 독립적으로 수소 및 C1-C3알킬로부터 선택되며;
L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
LP는 지질이다.
제4 양상의 제1 실시형태에서, 지질은 콜레스테롤 또는 인지질이다. 제4 양상의 제2 실시형태에서, 지질은 인지질이다. 제4 양상의 제3 실시형태에서, 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 스핑고마이엘린, 대두 인지질, 및 난황 인지질로부터 선택된다. 제4 양상의 제5 실시형태에서, 인지질은 포스파티딜에탄올아민이되, 포스파티딜에탄올아민은 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포릴에탄올아민이다.
제4 양상의 제6 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식(VI)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 지질 복합체를 제공한다. 제7 실시형태에서, 지질 복합체는 리포좀의 형태이다.
제4 양상의 제8 실시형태에서, 지질 복합체는 하나 이상의 인지질을 추가로 포함한다. 제9 실시형태에서, 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 스핑고마이엘린, 대두 인지질 및 난황 인지질로부터 선택된다. 제10 실시형태에서, 인지질은 포스파티딜콜린이되, 포스파티딜콜린은 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린이다.
제4 양상의 제11 실시형태에서, 지질 복합체는 지방 알코올 및/또는 콜레스테롤을 추가로 포함한다.
제4 양상의 제12 실시형태에서, 지질 복합체는 적어도 하나의 페길화된(PEGylated) 지질을 추가로 포함한다. 제13 실시형태에서, 페길화된 지질은　페길화된 인지질 및 페길화된 다이아실글리세롤로부터 선택된다. 제14 실시형태에서, 페길화된 지질은 N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민이다.
제5 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 화합물 또는 복합체, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
제6 양상에서, 본 개시내용은 암 치료가 필요한 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약제학적으로 허용 가능한 양의 본 명세서에 기재된 화합물 또는 복합체를 대상체에 투여하는 단계를 포함한다.
제7 양상에서, 본 개시내용은 면역 반응 자극이 필요한 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약제학적으로 허용 가능한 양의 본 명세서에 기재된 화합물 또는 복합체를 대상체에 투여하는 단계를 포함한다.
도 1은 추계적(stochastic) 시스테인 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조를 도시한 도면.
도 2는 트랜스글루타미나제 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조를 도시한 도면.
도 3은 트랜스글루타미나제 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조를 도시한 도면.
도 4는 소르타제 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조를 도시한 도면. (서열번호 3 및 서열번호 4)
도 5는 트라이토솜 분석(tritosomal assay)에서 ADC-1의 페이로드 방출을 도시한 도면.
도 6은 트라이토솜 분석에서 ADC-3의 페이로드 방출을 도시한 도면.
도 7은 트라이토솜 분석에서 ADC-9의 페이로드 방출을 도시한 도면.
도 8은 GCC 발현 CT26 보유 Balb/C 마우스에서의 ADC-1의 혈장 PK(0.1㎎/kg 페이로드 용량)를 도시한 도면.
도 9는 GCC 발현 CT26 보유 Balb/C 마우스에서의 ADC-8의 혈장 PK(0.055㎎/kg 페이로드 용량, 방출된 CDN BLQ)를 도시한 도면.
도 10은 GCC 발현 CT26 보유 Balb/C 마우스에서의 ADC-9의 혈장 PK(0.05㎎/kg 페이로드 용량, 방출된 CDN BLQ)를 도시한 도면.
도 11은 GCC 발현 CT26 보유 Balb/C 마우스에서의 ADC-1의 효능(페이로드 용량을 나타냄)을 도시한 도면.
도 12는 GCC 발현 CT26 보유 Balb/C 마우스에서의 ADC-5의 효능(페이로드 용량을 나타냄)을 도시한 도면.
도 13은 GCC 발현 CT26 보유 Balb/C 마우스에서의 ADC-8의 효능(페이로드 용량을 나타냄)을 도시한 도면.
도 14는 GCC 발현 CT26 보유 Balb/C 마우스에서의 ADC-9의 효능(페이로드 용량을 나타냄)을 도시한 도면.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 본 명세서에 지칭된 모든 특허 및 간행물은 이들의 전문이 참조에 의해 원용된다.
단수 형태는 문맥에서 달리 지시되지 않는 한 복수의 대상을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "또는"은 논리합(즉, 및/또는)이며, 분명하게 표시되지 않는 한, 배타적인 논리합, 예컨대 용어 "둘 중 하나", "~하지 않다면", "대안적으로" 및 유사한 효과의 단어를 나타내지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "약"은 ±10%를 지칭한다.
항체 약물 접합체
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다,
Figure pct00038
,
식 중:
a는 1 내지 20의 정수이고;
b는 1 내지 20의 정수이며;
m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
n은 0 또는 1이며;
D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
각각의 R1은 C1-C4알킬, O-C1-C4알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며;
R2는 C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
R3 및 R3'는 각각 독립적으로 수소 및 C1-C3알킬로부터 선택되며;
L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식(IV)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다,
Figure pct00039
;
식 중:
a는 1 내지 20의 정수이고;
b는 1 내지 20의 정수이며;
k는 0, 1, 2 또는 3이고;
m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
R2는 H, C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
R4는 수소 및 임의의 천연 유래 아미노산 측쇄로부터 선택되며;
R5는 C1-C4알킬 및 O-C1-C4알킬로부터 선택되고;
L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식(V)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다,
Figure pct00040
;
식 중:
D-NH-는
Figure pct00041
이고;
X는 O 또는 CH2이며;
f는 1 내지 10의 정수이고;
g는 1 내지 20의 정수이며;
U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이고;
Q는 이형이작용성 기이며; 그리고
Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
화학식(I) 및 (IV)의 화합물에서, 아미노 치환된 화합물 D-NH2는 임의의 아미노-함유 약물일 수 있다. 특정 실시형태에서, D-NH2는 면역조절제이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "면역조절제"는 면역 반응이 필요한 대상체에서 면역 반응을 생성하는 화합물을 지칭한다. 면역조절제의 예는 IDO 저해제, MEK 저해제, STING 조절제, CCR4 길항제, PD-1/PD-L1 저해제, TLR7/8 작용제 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, D-NH2는 STING 조절제이다. 일부 실시형태에서, D-NH2는 구아닌 또는 아데닌 유도체를 포함한다. 일부 실시형태에서, STING 조절제는 하기 화학식의 환식 다이뉴클레오타이드, 또는 환식 다이뉴클레오타이드-유사 화합물(각각 CDN)이다:
Figure pct00042
식 중, A' 및 A"는 각각 독립적으로 뉴클레오사이드 또는 이의 합성 유사체이고; Q, Q', Q2 및 Q2'의 각각은 독립적으로 산소 또는 황이다. 일부 실시형태에서, Q' 및 Q2'는 황이다. 본 개시내용의 범주 이내인 환식 다이뉴클레오타이드 및 환식 다이뉴클레오타이드-유사 화합물을 포함하는 CDN의 예는 미국 특허 제9,724,408호, 미국 특허 제10,106,574호, 미국 특허 제9,549,944호, 미국 특허 제 9,695,212호, 미국 특허 제9,718,848호, 미국 특허 제9,994,607호, 미국 특허 제10,047,115호, 미국 특허 공개 제20180230178호, 미국 특허 공개 제20180064745호, 미국 특허 공개 제2018028132호, 미국 특허 공개 제20180002369호, 미국 특허 공개 제20180186828호, 미국 특허 공개 제20190016750호, 미국 특허 공개 제20180162899호, 미국 특허 공개 제20180369268호, 미국 특허 공개 제2018273578호, 미국 특허 공개 제20180092937호, WO2017/027646 및 WO2018/100558에 개시된 것뿐만 아니라 화합물, 예컨대 c-다이-GMP, 2'3'-cGAMP 및 SB 11285(Spring Bank Pharmaceuticals)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
특정 실시형태에서, STING 조절제는 하기 화학식(II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00043
,
식 중:
X10은 -SH 또는 -OH이고;
X20은 -SH 또는 -OH이며;
Ya는 -O-, -S- 또는 -CH2-이고;
Yb는 -O-, -S-, -NH- 또는 -NRa-이되, Ra는 C1-C4알킬이며;
R10은 수소, 플루오로, -OH, -NH2, -ORb 또는 -NHRb이고;
R20은 수소 또는 플루오로이며;
R30은 수소이거나; R40은 수소, 플루오로, -OH, -NH2, -ORb 또는 -NHRb이거나; 또는 R30 및 R40은 함께 -CH2O-를 형성하고;
R50은 수소 또는 플루오로이며;
Rb는 C1-C6알킬, 할로(C1-C6)알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
고리 A10은 N, O 또는 S로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 5 또는 6-원 단환식 헤테로아릴, 또는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 9 또는 10원 이환식 헤테로아릴 고리이되; 고리 A10은 고리에 적어도 1개의 N 원자를 포함하고, Yb는 고리 A10의 탄소 원자에 부착되며; 그리고
고리 B10은 N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 9 또는 10-원 이환식 헤테로아릴 고리이되; 고리 B10은 고리에 적어도 2개의 N 원자를 포함한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은, 고리 A10 및 고리 B10은 1개 이상의 치환체를 함유할 수 있고, 따라서, 선택적으로 치환될 수 있다. 헤테로아릴기의 불포화 탄소 원자 상의 적합한 치환체는 -할로, -NO2, -CN, -R+, -C(R+)=C(R+)2, -C≡C-R+, -OR+, -SR°, -S(O)R°, -SO2R°, -SO3R+, -SO2N(R+)2, -N(R+)2, -NR+C(O)R+, -NR+C(S)R+, -NR+C(O)N(R+)2, -NR+C(S)N(R+)2, -N(R+)C(=NR+)-N(R+)2, -N(R+)C(=NR+)-R°, -NR+CO2R+, -NR+SO2R°, -NR+SO2N(R+)2, -O-C(O)R+, -O-CO2R+, -OC(O)N(R+)2, -C(O)R+, -C(S)R°, -CO2R+, -C(O)-C(O)R+, -C(O)N(R+)2, -C(S)N(R+)2, -C(O)N(R+)-OR+, -C(O)N(R+)C(=NR+)-N(R+)2, -N(R+)C(=NR+)-N(R+)-C(O)R+, -C(=NR+)-N(R+)2, -C(=NR+)-OR+, -N(R+)-N(R+)2, -C(=NR+)-N(R+)-OR+, -C(R°)=N-OR+, -P(O)(R+)2, -P(O)(OR+)2, -O-P(O)-OR+ 및 -P(O)(NR+)-N(R+)2를 포함하고, 일반적으로 이들로부터 선택되되, R+는 독립적으로, 수소 또는 선택적으로 치환된 지방족, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로지방족 또는 헤테로사이클릴기이거나, 또는 R+의 2가지 독립적 발생은 이들의 개재 원자(들)와 함께 선택적으로 치환된 5 내지 7원 아릴, 헤테로아릴, 사이클로지방족 또는 헤테로사이클릴을 형성한다. 일부 실시형태에서, R+는 독립적으로 수소, C1-6 지방족 또는 C3-6 사이클로지방족이다. 각각의 R°는, 독립적으로, 선택적으로 치환된 지방족, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로지방족 또는 헤테로사이클릴기이다.
상기 상세히 설명한 바와 같이, 일부 실시형태에서, R+(또는 본 명세서 및 청구범위에서 유사하게 정의되는 임의의 다른 변수)의 2가지 독립적 발생은 이들의 개재 원자(들)와 함께 3 내지 13원 사이클로지방족, 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 갖는 3 내지 12원 헤테로사이클릴, 6 내지 10원 아릴, 또는 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 갖는 5 내지 10원 헤테로아릴로부터 선택된 단환식 또는 이환식 고리를 형성한다.
일부 실시형태에서, STING 조절제는 하기 화학식(IIA)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00044
,
식 중, R10 및 R40은 각각 독립적으로 수소, 플루오로, -OH 또는 -OCH2CF3이고, 고리 A10 및 B10은 화학식(II)의 화합물에 대해 정의된 바와 같고, 단, 고리 A10 또는 고리 B10 중 하나는 화합물 (I), (IV) 또는 (V) 모 분자 모이어티의 카보닐기에 -NH-기를 통해 부착된다.
일부 실시형태에서, 고리 A10은 1, 2 또는 3개의 질소 원자를 함유하는 선택적으로 치환된 6-원 단환식 헤테로아릴 고리이다.
일부 실시형태에서, 고리 B10은:
Figure pct00045
이고;
식 중:
Z10, Z20, Z30, 및 Z40은 각각 독립적으로 N 또는 CR200이고;
R210은 수소 또는 C1-C6알킬, 할로(C1-C6)알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이며;
R230은 수소 또는 -NH2이고; 그리고
R200, R220 및 R240은 각각 독립적으로 수소, 할로겐, -OH, -NH2, -CN, C1-C6알킬, 할로(C1-C6)알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이다.
일부 실시형태에서, STING 조절제는:
Figure pct00046
또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이고;
식 중,
Figure pct00047
는 모 분자 모이어티의 카보닐기에 대한 부착 지점이다.
특정 실시형태에서, STING 조절제는 하기 화학식(X)의 환식 다이뉴클레오타이드 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이고:
Figure pct00048
,
식 중:
하기 화학식(A-1)로 표시되는 부분적 구조:
Figure pct00049
는 하기 화학식(Z-A) 또는 화학식(Z-B)로 표시되는 부분적 구조이며:
Figure pct00050
;
R105 및 R205는 각각 독립적으로 하이드록시기 또는 할로겐 원자이고;
B100은 하기 화학식(B 1 -A) 또는 화학식(B 1 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00051
;
R13, R14, R15, R16 및 R17은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
Y11, Y12, Y13, Y14, Y15 및 Y16은 각각 독립적으로 N 또는 CR1a이고;
Z11, Z12, Z13, Z14, Z15 및 Z16은 각각 독립적으로 N 또는 C이고;
R1a는 수소 원자 또는 치환체이며;
B200은 하기 화학식(B 2 -A) 또는 화학식(B 2 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00052
;
R23, R24, R25, R26 및 R27은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 및 Y26은 각각 독립적으로 N 또는 CR2a이고;
Z21, Z22, Z23, Z24, Z25 및 Z26은 각각 독립적으로 N 또는 C이며;
R2a는 수소 원자 또는 치환체이고;
X1 및 X2는 각각 독립적으로 산소 원자 또는 황 원자이며; 그리고
Q1a, Q2a, Q3a 및 Q4a는 각각 독립적으로 산소 원자 또는 황 원자이고; 그리고
B100 또는 B200 중 하나는 -NH-기를 통해 모 구조의 5-원 고리에 부착된다.
다른 실시형태에서, B100 또는 B200 중 하나는:
Figure pct00053
이고;
식 중:
R18은 수소 또는 C1-6 알킬이고; 나머지는 -NH-기를 통해 모 구조의 5원 고리에 부착되며; 그리고
R19는 할로겐 원자이고; 나머지는 -NH-기를 통해 화학식(I)의 카보닐기에 부착된다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체 약물 접합체를 제공한다.
본 명세서에 기재된 바와 같은, 특정 R기는 수소 및 치환체로부터 선택된다. 치환체의 예는 할로겐 원자, 사이아노기, 나이트로기, 선택적으로 치환된 탄화수소기, 선택적으로 치환된 복소환식기, 아실기, 선택적으로 치환된 아미노기, 선택적으로 치환된 카바모일기, 선택적으로 치환된 티오카바모일기, 선택적으로 치환된 설파모일기, 선택적으로 치환된 하이드록시기, 선택적으로 치환된 설파닐(SH)기 및 선택적으로 치환된 실릴기를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 본 명세서에서, "탄화수소기"("선택적으로 치환된 탄화수소기"의 "탄화수소기"를 포함)의 예는 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C2-6 알킨일기, C3-10 사이클로알킬기, C3-10 사이클로알켄일기, C6-14 아릴기 및 C7-16 아랄킬기를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 탄화수소기"의 예는 하기를 포함하는 다음의 치환체 기 A로부터 선택된 치환체(들)를 선택적으로 갖는 탄화수소기를 포함한다:
(1) 할로겐 원자,
(2) 나이트로기,
(3) 사이아노기,
(4) 옥소기,
(5) 하이드록시기,
(6) 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알콕시기,
(7) C6-14 아릴옥시기(예를 들어, 페녹시, 나프톡시),
(8) C7-16 아랄킬옥시기(예를 들어, 벤질옥시),
(9) 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴옥시기(예를 들어, 피리딜옥시),
(10) 3- 내지 14-원 비방향족 헤테로사이클릴옥시기(예를 들어, 몰폴린일옥시, 피페리딘일옥시),
(11) C1-6 알킬-카보닐옥시기(예를 들어, 아세톡시, 프로판오일옥시),
(12) C6-14 아릴-카보닐옥시기(예를 들어, 벤조일옥시, 1-나프토일옥시, 2-나프토일옥시),
(13) C1-6 알콕시-카보닐옥시기(예를 들어, 메톡시카보닐옥시, 에톡시카보닐옥시, 프로폭시카보닐옥시, 뷰톡시카보닐옥시),
(14) 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일옥시기(예를 들어, 메틸카바모일옥시, 에틸카바모일옥시, 다이메틸카바모일옥시, 다이에틸카바모일옥시),
(15) C6-14 아릴-카바모일옥시기(예를 들어, 페닐카바모일옥시, 나프틸카바모일옥시),
(16) 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐옥시기(예를 들어, 니코틴오일옥시),
(17) 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐옥시기(예를 들어, 몰폴린일카보닐옥시, 피페리딘일카보닐옥시),
(18) 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬설폰일옥시기(예를 들어, 메틸설폰일옥시, 트라이플루오로메틸설폰일옥시),
(19) C1-6 알킬기에 의해 선택적으로 치환된 C6-14 아릴설폰일옥시기(예를 들어, 페닐설폰일옥시, 톨루엔설폰일옥시),
(20) 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬티오기,
(21) 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기,
(22) 3- 내지 14-원 비-방향족 복소환식기,
(23) 폼일기,
(24) 카복시기,
(25) 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬-카보닐기,
(26) C6-14 아릴-카보닐기,
(27) 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐기,
(28) 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐기,
(29) C1-6 알콕시-카보닐기,
(30) C6-14 아릴옥시-카보닐기(예를 들어, 페닐옥시카보닐, 1-나프틸옥시카보닐, 2-나프틸옥시카보닐),
(31) C7-16 아랄킬옥시-카보닐기(예를 들어, 벤질옥시카보닐, 펜에틸옥시카보닐),
(32) 카바모일기,
(33) 티오카바모일기,
(34) 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기,
(35) C6-14 아릴-카바모일기(예를 들어, 페닐카바모일),
(36) 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카바모일기(예를 들어, 피리딜카바모일, 티에닐카바모일),
(37) 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카바모일기(예를 들어, 몰폴린일카바모일, 피페리딘일카바모일),
(38) 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬설폰일기,
(39) C6-14 아릴설폰일기,
(40) 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴설폰일기(예를 들어, 피리딜설폰일, 티에닐설폰일),
(41) 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬설핀일기,
(42) C6-14 아릴설핀일기(예를 들어, 페닐설핀일, 1-나프틸설핀일, 2-나프틸설핀일),
(43) 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴설핀일기(예를 들어, 피리딜설핀일, 티에닐설핀일),
(44) 아미노기,
(45) 모노- 또는 다이-C1-6 알킬아미노기(예를 들어, 메틸아미노, 에틸아미노, 프로필아미노, 아이소프로필아미노, 뷰틸아미노, 다이메틸아미노, 다이에틸아미노, 다이프로필아미노, 다이뷰틸아미노, N-에틸-N-메틸아미노),
(46) 모노- 또는 다이-C6-14 아릴아미노기(예를 들어, 페닐아미노),
(47) 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴아미노기(예를 들어, 피리딜아미노),
(48) C7-16 아랄킬아미노기(예를 들어, 벤질아미노),
(49) 폼일아미노기,
(50) C1-6 알킬-카보닐아미노기(예를 들어, 아세틸아미노, 프로판오일아미노, 부탄오일아미노),
(51) (C1-6 알킬)(C1-6 알킬-카보닐) 아미노기(예를 들어, N-아세틸-N-메틸아미노),
(52) C6-14 아릴-카보닐아미노기(예를 들어, 페닐카보닐아미노, 나프틸카보닐아미노),
(53) C1-6 알콕시-카보닐아미노기(예를 들어, 메톡시카보닐아미노, 에톡시카보닐아미노, 프로폭시카보닐아미노, 뷰톡시카보닐아미노, tert-뷰톡시카보닐아미노),
(54) C7-16 아랄킬옥시-카보닐아미노기(예를 들어, 벤질옥시카보닐아미노),
(55) C1-6 알킬설폰일아미노기(예를 들어, 메틸설폰일아미노, 에틸설폰일아미노),
(56) C1-6 알킬기에 의해 선택적으로 치환된 C6-14 아릴설폰일아미노기(예를 들어, 페닐설폰일아미노, 톨루엔설폰일아미노),
(57) 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬기,
(58) C2-6 알켄일기,
(59) C2-6 알킨일기,
(60) C3-10 사이클로알킬기,
(61) C3-10 사이클로알켄일기, 및
(62) C6-14 아릴기.
"선택적으로 치환된 탄화수소기"에서 상기 언급한 치환체의 수는, 예를 들어, 1 내지 5개, 전형적으로는 1 내지 3개이다. 치환체의 수가 2개 이상일 때, 각각의 치환체는 동일 또는 상이할 수 있다.
본 명세서에서, "복소환식기"("선택적으로 치환된 복소환식기"의 "복소환식기"를 포함)의 예는 (i) 방향족 복소환식기, (ii) 비-방향족 복소환식기 및 (iii) 7- 내지 10-원 브리지 복소환식기를 포함하며, 각각은 탄소 원자 이외의 고리-구성 원자로서, 질소 원자, 황 원자 및 산소 원자로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유한다.
본 명세서에서, "방향족 복소환식기"("5- 내지 14-원 방향족 복소환식기"를 포함)의 예는 탄소 원자 이외의 고리-구성 원자로서, 질소 원자, 황 원자 및 산소 원자로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 5- 내지 14-원(전형적으로 5- 내지 10-원) 방향족 복소환식기를 포함한다.
"방향족 복소환식기"의 적합한 예는 5- 또는 6-원 단환식 방향족 복소환식기, 예컨대, 티에닐, 퓨릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 아이소티아졸릴, 옥사졸릴, 아이소옥사졸릴, 피리딜, 피라진일, 피리미딘일, 피리다진일, 1,2,4-옥사다이아졸릴, 1,3,4-옥사다이아졸릴, 1,2,4-티아다이아졸릴, 1,3,4-티아다이아졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 트라이아진일 등; 및
8- 내지 14-원 축합된 다환식(전형적으로 이- 또는 삼환식) 방향족 복소환식기, 예컨대, 벤조티오페닐, 벤조퓨란일, 벤즈이미다졸릴, 벤족사졸릴, 벤즈아이속사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈아이소티아졸릴, 벤조트라이아졸릴, 이미다조피리딘일, 티에노피리딘일, 퓨로피리딘일, 피롤로피리딘일, 피라졸로피리딘일, 옥사졸로피리딘일, 티아졸로피리딘일, 이미다조피라진일, 이미다조피리미딘일, 티에노피리미딘일, 퓨로피리미딘일, 피롤로피리미딘일, 피라졸로피리미딘일, 옥사졸로피리미딘일, 티아졸로피리미딘일, 피라졸로트라이아진일, 나프토[2,3-b]티에닐, 페녹사티닐, 인돌릴, 아이소인돌릴, 1H-인다졸릴, 퓨린일, 아이소퀴놀릴, 퀴놀릴, 프탈라진일, 나프티리딘일, 퀴녹살린일, 퀴나졸린일, 신놀린일, 카바졸릴, β-카보린일, 페난트리딘일, 아크리딘일, 페나진일, 페노티아진일, 페녹사진일 등을 포함한다.
본 명세서에서, "비-방향족 복소환식기"("3- 내지 14-원 비-방향족 복소환식기"를 포함)의 예는 탄소 원자 이외의 고리-구성 원자로서, 질소 원자, 황 원자 및 산소 원자로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 3- 내지 14-원(전형적으로 4- 내지 10-원) 비-방향족 복소환식기를 포함한다.
"비-방향족 복소환식기"의 적합한 예는 3- 내지 8-원 단환식 비-방향족 복소환식기, 예컨대, 아지리딘일, 옥시란일, 티란일, 아제티딘일, 옥세탄일, 티에탄일, 테트라하이드로티에닐, 테트라하이드로퓨란일, 피롤린일, 피롤리딘일, 이미다졸린일, 이미다졸리딘일, 옥사졸린일, 옥사졸리딘일, 피라졸린일, 피라졸리딘일, 티아졸린일, 티아졸리딘일, 테트라하이드로아이소티아졸릴, 테트라하이드로옥사졸릴, 테트라하이드로아이소옥사졸릴, 피페리딘일, 피페라진일, 테트라하이드로피리딘일, 다이하이드로피리딘일, 다이하이드로티오피란일, 테트라하이드로피리미딘일, 테트라하이드로피리다진일, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 몰폴린일, 티오몰폴린일, 아제판일, 다이아제판일, 아제핀일, 옥세판일, 아조칸일, 다이아조칸일 등; 및
9- 내지 14-원 축합된 다환식(전형적으로 이환식 또는 삼환식) 비-방향족 복소환식기, 예컨대, 다이하이드로벤조퓨란일, 다이하이드로벤즈이미다졸릴, 다이하이드로벤족사졸릴, 다이하이드로벤조티아졸릴, 다이하이드로벤즈아이소티아졸릴, 다이하이드로나프토[2,3-b]티에닐, 테트라하이드로아이소퀴놀릴, 테트라하이드로퀴놀릴, 4H-퀴놀리진일, 인돌린일, 아이소인돌린일, 테트라하이드로티에노[2,3-c]피리딘일, 테트라하이드로벤즈아제핀일, 테트라하이드로퀴녹살린일, 테트라하이드로페난트리딘일, 헥사하이드로페노티아진일, 헥사하이드로페녹사진일, 테트라하이드로프탈라진일, 테트라하이드로나프티리딘일, 테트라하이드로퀴나졸린일, 테트라하이드로신놀린일, 테트라하이드로카바졸릴, 테트라하이드로-β-카보린일, 테트라하이드로아크리딘일, 테트라하이드로페나진일, 테트라하이드로티옥산텐일, 옥타하이드로아이소퀴놀릴 등을 포함한다.
본 명세서에서, "7- 내지 10-원 브리지 복소환식기"의 적합한 예는 퀴뉴클리딘일 및 7-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄일을 포함한다.
본 명세서에서, "질소-함유 복소환식기"의 예는 고리-구성 원자로서 적어도 1개의 질소 원자를 함유하는 "복소환식기"를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 복소환식기"의 예는 선택적으로 상기 언급한 치환체 기 A로부터 선택된 치환체(들)를 갖는 복소환식기를 포함한다.
"선택적으로 치환된 복소환식기"에서 치환체의 수는, 예를 들어, 1 내지 3개이다. 치환체의 수가 2개 이상일 때, 각각의 치환체는 동일 또는 상이할 수 있다.
본 명세서에서, "아실기"의 예는 폼일기, 카복시기, 카바모일기, 티오카바모일기, 설피노기, 설포기, 설파모일기 및 포스포노기를 포함하고, 각각은 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C3-10 사이클로알켄일기, C6-14 아릴기, C7-16 아랄킬기, 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기 및 3- 내지 14-원 비-방향족 복소환식기로부터 선택된 1 내지 2개의 치환체를 갖고, 이들 각각은 선택적으로 할로겐 원자, 선택적으로 할로겐화된 C1-6 알콕시기, 하이드록시기, 나이트로기, 사이아노기, 아미노기 및 카바모일기로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 가진다.
"아실기"의 예는 또한 탄화수소-설폰일기, 헤테로사이클릴설폰일기, 탄화수소-설핀일기 및 헤테로사이클릴설핀일기를 포함한다.
본 명세서에서, 탄화수소-설폰일기는 탄화수소기-결합 설폰일기를 의미하고, 헤테로사이클릴설폰일기는 복소환식기-결합 설폰일기를 의미하며, 탄화수소-설핀일기는 탄화수소기-결합 설핀일기를 의미하고, 헤테로사이클릴설핀일기는 복소환식기-결합 설핀일기를 의미한다.
"아실기"의 적합한 예는 폼일기, 카복시기, C1-6 알킬-카보닐기, C2-6 알켄일-카보닐기(예를 들어, 크로토노일), C3-10 사이클로알킬-카보닐기(예를 들어, 사이클로부탄카보닐, 사이클로펜탄카보닐, 사이클로헥산카보닐, 사이클로헵탄카보닐), C3-10 사이클로알켄일-카보닐기(예를 들어, 2-사이클로헥센카보닐), C6-14 아릴-카보닐기, C7-16 아랄킬-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐기, 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐기, C1-6 알콕시-카보닐기, C6-14 아릴옥시-카보닐기(예를 들어, 페닐옥시카보닐, 나프틸옥시카보닐), C7-16 아랄킬옥시-카보닐기(예를 들어, 벤질옥시카보닐, 펜에틸옥시카보닐), 카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기, 모노- 또는 다이-C2-6 알켄일-카바모일기(예를 들어, 다이알릴카바모일), 모노- 또는 다이-C3-10 사이클로알킬-카바모일기(예를 들어, 사이클로프로필카바모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-카바모일기(예를 들어, 페닐카바모일), 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일기, 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카바모일기(예를 들어, 피리딜카바모일), 티오카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-티오카바모일기(예를 들어, 메틸티오카바모일, N-에틸-N-메틸티오카바모일), 모노- 또는 다이-C2-6 알켄일-티오카바모일기(예를 들어, 다이알릴티오카바모일), 모노- 또는 다이-C3-10 사이클로알킬-티오카바모일기(예를 들어, 사이클로프로필티오카바모일, 사이클로헥실티오카바모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-티오카바모일기(예를 들어, 페닐티오카바모일), 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-티오카바모일기(예를 들어, 벤질티오카바모일, 펜에틸티오카바모일), 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴티오카바모일기(예를 들어, 피리딜티오카바모일), 설피노기, C1-6 알킬설핀일기(예를 들어, 메틸설핀일, 에틸설핀일), 설포기, C1-6 알킬설폰일기, C6-14 아릴설폰일기, 포스포노기 및 모노- 또는 다이-C1-6 알킬포스포노기(예를 들어, 다이메틸포스포노, 다이에틸포스포노, 다이아이소프로필포스포노, 다이뷰틸포스포노)를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 아미노기"의 예는 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C6-14 아릴기, C7-16 아랄킬기, C1-6 알킬-카보닐기, C6-14 아릴-카보닐기, C7-16 아랄킬-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐기, 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐기, C1-6 알콕시-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기, 카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기, 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일기, C1-6 알킬설폰일기 및 C6-14 아릴설폰일기로부터 선택된 1 내지 2개의 치환체를 갖는 아미노기를 포함하며, 이들 각각은 선택적으로 치환체 그룹 A로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 가진다.
선택적으로 치환된 아미노기의 적합한 예는 아미노기, 모노- 또는 다이-(선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬) 아미노기(예를 들어, 메틸아미노, 트라이플루오로메틸아미노, 다이메틸아미노, 에틸아미노, 다이에틸아미노, 프로필아미노, 다이뷰틸아미노), 모노- 또는 다이-C2-6 알켄일아미노기(예를 들어, 다이알릴아미노), 모노- 또는 다이-C3-10 사이클로알킬아미노기(예를 들어, 사이클로프로필아미노, 사이클로헥실아미노), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴아미노기(예를 들어, 페닐아미노), 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬아미노기(예를 들어, 벤질아미노, 다이벤질아미노), 모노- 또는 다이-(선택적으로 할로겐화된 C1-6 알킬)-카보닐아미노기(예를 들어, 아세틸아미노, 프로피온일아미노), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-카보닐아미노기(예를 들어, 벤조일아미노), 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카보닐아미노기(예를 들어, 벤질카보닐아미노), 모노- 또는 다이-5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐아미노기(예를 들어, 니코틴오일아미노, 아이소니코틴오일아미노), 모노- 또는 다이-3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐아미노기(예를 들어, 피페리딘일카보닐아미노), 모노- 또는 다이-C1-6 알콕시-카보닐아미노기(예를 들어, tert-뷰톡시카보닐아미노), 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴아미노기(예를 들어, 피리딜아미노), 카바모일아미노기, (모노 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일) 아미노기(예를 들어, 메틸카바모일아미노), (모노 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일) 아미노기(예를 들어, 벤질카바모일아미노), C1-6 알킬설폰일아미노기(예를 들어, 메틸설폰일아미노, 에틸설폰일아미노), C6-14 아릴설폰일아미노기(예를 들어, 페닐설폰일아미노), (C1-6 알킬)(C1-6 알킬-카보닐) 아미노기(예를 들어, N-아세틸-N-메틸아미노) 및 (C1-6 알킬)(C6-14 아릴-카보닐) 아미노기(예를 들어, N-벤조일-N-메틸아미노)를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 카바모일기"의 예는 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C6-14 아릴기, C7-16 아랄킬기, C1-6 알킬-카보닐기, C6-14 아릴-카보닐기, C7-16 아랄킬-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐기, 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐기, C1-6 알콕시-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기, 카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기 및 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일기로부터 선택된 1 내지 2개의 치환체를 갖는 카바모일기를 포함하며, 이들 각각은 선택적으로 치환체 그룹 A로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 가진다.
선택적으로 치환된 카바모일기의 적합한 예는 카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기, 모노- 또는 다이-C2-6 알켄일-카바모일기(예를 들어, 다이알릴카바모일), 모노- 또는 다이-C3-10 사이클로알킬-카바모일기(예를 들어, 사이클로프로필카바모일, 사이클로헥실카바모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-카바모일기(예를 들어, 페닐카바모일), 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카보닐-카바모일기(예를 들어, 아세틸카바모일, 프로피온일카바모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-카보닐-카바모일기(예를 들어, 벤조일카바모일) 및 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카바모일기(예를 들어, 피리딜카바모일)를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 티오카바모일기"의 예는 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C6-14 아릴기, C7-16 아랄킬기, C1-6 알킬-카보닐기, C6-14 아릴-카보닐기, C7-16 아랄킬-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐기, 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐기, C1-6 알콕시-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기, 카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기 및 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일기로부터 선택된 1 내지 2개의 치환체를 갖는 티오카바모일기를 포함하며, 이들 각각은 선택적으로 치환체 그룹 A로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 가진다.
선택적으로 치환된 티오카바모일기의 적합한 예는 티오카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-티오카바모일기(예를 들어, 메틸티오카바모일, 에틸티오카바모일, 다이메틸티오카바모일, 다이에틸티오카바모일, N-에틸-N-메틸티오카바모일), 모노- 또는 다이-C2-6 알켄일-티오카바모일기(예를 들어, 다이알릴티오카바모일), 모노- 또는 다이-C3-10 사이클로알킬-티오카바모일기(예를 들어, 사이클로프로필티오카바모일, 사이클로헥실티오카바모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-티오카바모일기(예를 들어, 페닐티오카바모일), 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-티오카바모일기(예를 들어, 벤질티오카바모일, 펜에틸티오카바모일), 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카보닐-티오카바모일기(예를 들어, 아세틸티오카바모일, 프로피온일티오카바모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-카보닐-티오카바모일기(예를 들어, 벤조일티오카바모일) 및 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴티오카바모일기(예를 들어, 피리딜티오카바모일)를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 설파모일기"의 예는 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C6-14 아릴기, C7-16 아랄킬기, C1-6 알킬-카보닐기, C6-14 아릴-카보닐기, C7-16 아랄킬-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐기, 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐기, C1-6 알콕시-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기, 카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기 및 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일기로부터 선택된 1 내지 2개의 치환체를 갖는 설파모일기를 포함하며, 이들 각각은 선택적으로 치환체 그룹 A로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 가진다.
선택적으로 치환된 설파모일기의 적합한 예는 설파모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-설파모일기(예를 들어, 메틸설파모일, 에틸설파모일, 다이메틸설파모일, 다이에틸설파모일, N-에틸-N-메틸설파모일), 모노- 또는 다이-C2-6 알켄일-설파모일기(예를 들어, 다이알릴설파모일), 모노- 또는 다이-C3-10 사이클로알킬-설파모일기(예를 들어, 사이클로프로필설파모일, 사이클로헥실설파모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-설파모일기(예를 들어, 페닐설파모일), 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-설파모일기(예를 들어, 벤질설파모일, 펜에틸설파모일), 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카보닐-설파모일기(예를 들어, 아세틸설파모일, 프로피온일설파모일), 모노- 또는 다이-C6-14 아릴-카보닐-설파모일기(예를 들어, 벤조일설파모일) 및 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴설파모일기(예를 들어, 피리딜설파모일)를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 하이드록시기"의 예는 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C6-14 아릴기, C7-16 아랄킬기, C1-6 알킬-카보닐기, C6-14 아릴-카보닐기, C7-16 아랄킬-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐기, 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐기, C1-6 알콕시-카보닐기, 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기, 카바모일기, 모노- 또는 다이-C1-6 알킬-카바모일기, 모노- 또는 다이-C7-16 아랄킬-카바모일기, C1-6 알킬설폰일기 및 C6-14 아릴설폰일기로부터 선택된 치환체를 갖는 하이드록시기를 포함하며 이들 각각은 선택적으로 치환체 그룹 A로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 가진다.
선택적으로 치환된 하이드록시기의 적합한 예는 하이드록시기, C1-6 알콕시기, C2-6 알켄일옥시기(예를 들어, 알릴옥시, 2-뷰텐일옥시, 2-펜텐일옥시, 3-헥센일옥시), C3-10 사이클로알킬옥시기(예를 들어, 사이클로헥실옥시), C6-14 아릴옥시기(예를 들어, 페녹시, 나프틸옥시), C7-16 아랄킬옥시기(예를 들어, 벤질옥시, 펜에틸옥시), C1-6 알킬-카보닐옥시기(예를 들어, 아세틸옥시, 프로피온일옥시, 뷰티릴옥시, 아이소뷰티릴옥시, 피발로일옥시), C6-14 아릴-카보닐옥시기(예를 들어, 벤조일옥시), C7-16 아랄킬-카보닐옥시기(예를 들어, 벤질카보닐옥시), 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴카보닐옥시기(예를 들어, 니코틴오일옥시), 3- 내지 14-원 비-방향족 헤테로사이클릴카보닐옥시기(예를 들어, 피페리딘일카보닐옥시), C1-6 알콕시-카보닐옥시기(예를 들어, tert-뷰톡시카보닐옥시), 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴옥시기(예를 들어, 피리딜옥시), 카바모일옥시기, C1-6 알킬-카바모일옥시기(예를 들어, 메틸카바모일옥시), C7-16 아랄킬-카바모일옥시기(예를 들어, 벤질카바모일옥시), C1-6 알킬설폰일옥시기(예를 들어, 메틸설폰일옥시, 에틸설폰일옥시) 및 C6-14 아릴설폰일옥시기(예를 들어, 페닐설폰일옥시)를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 설파닐기"의 예는 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C6-14 아릴기, C7-16 아랄킬기, C1-6 알킬-카보닐기, C6-14 아릴-카보닐기 및 5- 내지 14-원 방향족 복소환식기로부터 선택된 치환체를 갖는 설파닐기를 포함하며, 이들 각각은 선택적으로 치환체 그룹 A로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체 및 할로겐화된 설파닐기를 가진다.
선택적으로 치환된 설파닐기의 적합한 예는 설파닐(-SH)기, C1-6 알킬티오기, C2-6 알켄일티오기(예를 들어, 알릴티오, 2-뷰텐일티오, 2-펜텐일티오, 3-헥센일티오), C3-10 사이클로알킬티오기(예를 들어, 사이클로헥실티오), C6-14 아릴티오기(예를 들어, 페닐티오, 나프틸티오), C7-16 아랄킬티오기(예를 들어, 벤질티오, 펜에틸티오), C1-6 알킬-카보닐티오기(예를 들어, 아세틸티오, 프로피온일티오, 뷰티릴티오, 아이소뷰티릴티오, 피발로일티오), C6-14 아릴-카보닐티오기(예를 들어, 벤조일티오), 5- 내지 14-원 방향족 헤테로사이클릴티오기(예를 들어, 피리딜티오) 및 할로겐화된 티오기(예를 들어, 펜타플루오로티오)를 포함한다.
본 명세서에서, "선택적으로 치환된 실릴기"의 예는 선택적으로 C1-6 알킬기, C2-6 알켄일기, C3-10 사이클로알킬기, C6-14 아릴기 및 C7-16 아랄킬기로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 갖는 실릴기를 포함하며, 이들 각각은 선택적으로 치환체 그룹 A로부터 선택된 1 내지 3개의 치환체를 가진다. 선택적으로 치환된 실릴기의 예는 트라이-C1-6 알킬실릴기(예를 들어, 트라이메틸실릴, tert-뷰틸(다이메틸)실릴)를 포함한다.
일부 실시형태에서, STING 조절제는 하기 화학식(III)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure pct00054
;
식 중:
R105 및 R205는 각각 독립적으로 하이드록실기 또는 할로겐 원자이며;
B100은 하기 화학식(B 1 -A) 또는 화학식(B 1 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00055
;
R13, R14, R15, R16 및 R17은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
R1000은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
Y11, Y12, Y13, Y14, Y15 및 Y16은 각각 독립적으로 N 또는 CR1a이고;
Z11, Z12, Z13, Z14, Z15 및 Z16은 각각 독립적으로 N 또는 C이고;
R105 및 R205는 각각 독립적으로 하이드록실기 또는 할로겐 원자이며;
R1a는 수소 원자 또는 치환체이며;
B200은 하기 화학식(B 2 -A) 또는 화학식(B 2 -B)로 표시되는 기이고:
Figure pct00056
;
R23, R24, R25, R26 및 R27은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
R100'은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 및 Y26은 각각 독립적으로 N 또는 CR2a이고;
Z21, Z22, Z23, Z24, Z25 및 Z26은 각각 독립적으로 N 또는 C이며;
R2a는 수소 원자 또는 치환체이고;
X1 및 X2는 각각 독립적으로 산소 원자 또는 황 원자이며; 그리고
Q1, Q2, Q3 및 Q4는 각각 독립적으로 산소 원자 또는 황 원자이다.
단:
B100 또는 B200 중 하나는:
Figure pct00057
이되;
식 중:
R18은 수소 또는 C1-6 알킬이며; 그리고
R19는 할로겐 원자이고, B100 또는 B200 중 나머지 하나는 -NH-기를 통해 모 구조의 5-원 고리에 부착된다.
일부 실시형태에서, STING 조절제는 화학식(III)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이며, R205는 F이고 B100은
Figure pct00058
이다.
일부 실시형태에서, 환식 다이뉴클레오타이드는:
Figure pct00059
또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이되;
Figure pct00060
는 모 분자 모이어티의 카보닐기에 대한 부착 지점이다.
"L"기는 절단 가능한 링커이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "링커"는 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편(Ab)을 화학식(I) 내지 (IV)의 화합물 내의 약물-함유 모이어티에 연결할 수 있는 화학적 모이어티를 지칭한다. 링커는 분지될 수 있고, 1 내지 20개의 약물-함유 모이어티로 치환될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 1 내지 10개의 약물-함유 모이어티로 치환될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 1 내지 5개의 약물-함유 모이어티로 치환될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 1 또는 2개의 약물-함유 모이어티로 치환될 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 1개의 약물-함유 모이어티로 치환될 수 있다.
링커 "L"은 절단성이다. 특정 실시형태에서, 링커는 약물 및/또는 항체가 활성으로 남아있을 수 있는 조건 하에 산-유도 절단, 광-유도 절단, 효소 절단 등의 영향을 받기 쉬울 수 있다. 일부 실시형태에서, 절단 가능한 링커는 효소적으로 절단될 수 있다. 일부 실시형태에서, 절단 가능한 링커는 프로테아제, 펩티다제, 에스터라제, 글리코시다제, 포스포다이에스터라제, 포스파타제 또는 리파제에 의해 절단될 수 있다. 일부 실시형태에서, 절단 가능한 링커는 프로테아제에 의해 절단될 수 있다. 프로테아제의 예는 카텝신 B, VAGP 테트라펩타이드 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 링커는 전문이 참조에 의해 원용된 PCT 공개 WO 2018/200812, WO 2018/100558에 개시된 임의의 것일 수 있다.
특정 실시형태에서, "L"은 하기 화학식을 가진다:
Figure pct00061
;
식 중:
Figure pct00062
는 질소 원자에 대한 부착 지점이며; 그리고
Figure pct00063
는 Ab에 대한 부착 지점이다.
일부 실시형태에서, "L"은 하기 화학식을 가진다:
Figure pct00064
,
식 중:
Figure pct00065
는 질소 원자에 대한 부착 지점이며;
Figure pct00066
는 항체에 대한 부착 지점이고;
"W" 기는 존재하지 않거나 또는 자기-희생기이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "자기-희생기"는 부착된 기의 방출을 초래하는 전자 캐스케이드를 겪는 기를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 자기-희생기는 1,4-제거, 1,6-제거, 1,8-제거, 1,6-고리화 제거, 1,5-고리화 제거, 1,3-고리화 제거, 분자내 5-엑소-트리그(exo-trig) 고리화 및/또는 6-엑소-트리그 고리화를 겪을 수 있는 하나 이상의 기를 포함한다. 특정 실시형태에서, 자기-희생기는 전문이 참조에 의해 원용된 PCT 공개 WO 2018/200812, WO 2018/100558에 개시된 임의의 것일 수 있다.
"Z" 기는 존재하지 않거나 또는 2 내지 5개 아미노산의 펩타이드이다. 특정 실시형태에서, 펩타이드는 링커의 절단 부위이며, 세포내 프로테아제, 예컨대, 라이소좀 효소에 대한 노출 시 약물 방출을 촉진시킨다(Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784). 2개의 아미노산을 갖는 펩타이드의 예는 알라닌-알라닌(ala-ala), 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌(af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-라이신(fk 또는 phe-lys); 페닐알라닌-호모라이신(phe-homolys); 및 N-메틸-발린-시트룰린(Me-val-cit)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 3개의 아미노산을 갖는 펩타이드의 예는 글리신-발린-시트룰린(gly-val-cit) 및 글리신-글리신-글리신(gly-gly-gly)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 상기 아미노산 조합은 또한 역순(즉, cit-val)으로 존재할 수 있다.
본 개시내용의 펩타이드는 천연-유래 및/또는 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 용어 "천연-유래 아미노산"은 Ala, Asp, Cys, Glu, Phe, Gly, His, He, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gin, Arg, Ser, Thr, Val, Trp 및 Tyr을 지칭한다. "비천연 아미노산"(즉, 아미노산이 자연적으로 생기지 않음)은, 비제한적 예로서, 호모세린, 호모알기닌, 시트룰린, 페닐글리신, 타우린, 아이오도타이로신, 셀레노- 시스테인, 노르류신("Nle"), 노르발린("Nva"), 베타-알라닌, L- 또는 D-나프트알라닌, 오르니틴("Orn") 등을 포함한다. 펩타이드는 특정 효소, 예를 들어, 종양-관련 프로테아제, 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의한 효소 절단을 위해 설계되고, 최적화될 수 있다.
아미노산은 또한 천연 및 비천연 아미노산의 D-형태를 포함한다. "D-"는 천연 유래("L-") 아미노산에서 입체배치와 대조적으로 "D"(우선성) 입체배치를 갖는 아미노산을 표기한다. 천연 및 비천연 아미노산은 상업적으로(Sigma Chemical Co., Advanced Chemtech) 구입될 수 있거나 또는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 합성될 수 있다.
"U" 및 "U'"기는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "스페이서"는 연결기로서 작용하는 화학적 모이어티를 지칭한다. 본 개시내용에서, 스페이서는 항체, 항체 단편, 또는 항원 단편을 이형이작용성 기에 연결할 수 있고/있거나, 이형이작용성 기를 펩타이드 "Z"에 또는, "Z"가 존재하지 않을 때, "W" 기에 연결할 수 있다. 비제한적인 예시적인 스페이서는 -NH-, -S-, -O-, -NHC(=O)CH2CH2-, -S(=O)2-CH2CH2-, -C(=O)NHNH-, -C(=O)O-, -C(=O)NH-, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2=CH2-, -C≡C-, -CH=N-O-, 폴리에틸렌 글리콜(PEG),
Figure pct00067
을 포함한다.
본 개시내용의 화합물에서, "U"가 존재할 때, 이는 1 내지 10개의 "-C(O)-W-Z-" 기로 치환되는 분지된 기일 수 있다. 일부 실시형태에서, "U"는 1 내지 5개의 "-C(O)-W-Z-" 기에 의해 치환된다. 일부 실시형태에서, "U"는 1 또는 2개의 "-C(O)-W-Z-" 기로 치환된다. 일부 실시형태에서, "U"는 1개의 "-C(O)-W-Z-" 기로 치환된다. 특정 실시형태에서, 스페이서는 전문이 참조에 의해 원용된 PCT 공개 WO 2018/200812, WO 2018/100558에 개시된 임의의 것일 수 있다.
"Q"기는 이형이작용성 기이다. 본 개시내용에서, 용어 "이형이작용성 기"는 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편에 대한 부분인 링커를 연결하는 화학적 모이어티를 지칭한다. 예를 들어, WO 2017/191579 참조. 이형이작용성 기는 화학적 모이어티의 말단 중 하나에서 상이한 반응기를 갖는 것을 특징으로 한다. 이형이작용성 기는 "Ab"에 직접 부착될 수 있거나 또는 대안적으로 링커 "U'"를 통해 연결될 수 있다. "Ab"에 대한 부착은 화학적 또는 효소 접합, 또는 둘 다의 조합을 통해 달성될 수 있다. 화학적 접합은 "Q" 또는 "U'" 상의 반응 핸들을 이용하는 항체 표면 상에서 접근 가능한 아미노산 잔기의 제어된 반응을 수반한다. 화학적 접합의 예는 라이신 아마이드 결합, 시스테인 결합 및 유전자 조작에 의해 혼입된 비천연 아미노산을 통한 결합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않되, 목적하는 반응 핸들을 갖는 비천연 아미노산 잔기는 "Ab" 상에 설치된다. 효소 접합에서, 효소는 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편 상에서 접근 가능한 아미노산 잔기와 링커의 결합을 매개한다. 효소 접합의 예는 소르타제를 이용하는 펩타이드 전달, 미생물 트랜스글루타미나제를 이용하는 펩타이드 전달 및 N-글리칸 조작을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 화학적 접합 및 효소 접합은 또한 순차적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 효소 접합은 또한 후속적 화학적 접합에서 이용될 "Ab" 상의 독특한 반응 핸들을 설시하는 데 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 이형이작용성 기는 전문이 참조에 의해 원용된 PCT 공개 WO 2018/200812, WO 2018/100558에 개시된 임의의 것일 수 있다.
일부 실시형태에서, "Q"는,
Figure pct00068
Figure pct00069
로부터 선택되고;
식 중,
Figure pct00070
는 U에 대한 부착 지점이거나, 또는 U가 존재하지 않을 때, Z에 대한 부착 지점이고; 그리고
Figure pct00071
는 U'에 대한 부착 지점이거나, 또는 U'가 존재하지 않을 때, Ab에 대한 부착 지점이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식(XX)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다,
Figure pct00072
,
식 중, n, m, a, t, D-NH-, R1, R2, R3, R3', W, Z 및 U는 본 명세서에 기재된 바와 같고, 여기서, Q*는 항체, 항체 단편, 또는 항원-결합 단편에 접합할 수 있는 반응성 작용기이다. 적합한 Q* 기의 예는 활성화된 카복실산, 예컨대, 산염화물 -C(O)-Cl 및 산 무수물, 할로아세트아마이드, 말레이미드, 알킨, 사이클로알킨, 예컨대, 사이클로옥틴, 옥사노보라다이엔, 노보넨, 아자이드, 다이아릴 테트라진, 모노아릴 테트라진, 알데하이드, 케톤, 하이드록실아민, 비닐설폰 및 아지리딘을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.　특정 실시형태에서, 반응성 작용성기는 전문이 참조에 의해 원용된 PCT 공개 WO 2018/200812, WO 2018/100558에 개시된 임의의 것일 수 있다.
"Ab"기는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다. 항체는 특정 항원을 인식하고 결합할 수 있는 면역계에 의해 생성되는 단백질이다. 표적 항원은 일반적으로 다중 항체 상에서 CDR에 의해 인식되는 에피토프로도 불리는 수많은 결합 부위를 가진다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각 항체는 상이한 구조를 가진다. 따라서, 하나의 항원은 하나 초과의 대응하는 항체를 가질 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타낸다면, 단클론성 항체, 단일 도메인 항체, 다클론성 항체, 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체) 및 항체 단편을 구체적으로 아우른다. 항체는 뮤린, 인간, 인간화, 키메라일 수 있거나, 다른 종으로부터 유래될 수 있다(Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) I㎜uno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York).
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "항체"는 또한 전장 면역글로불린 분자 또는 전장 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 즉, 관심 대상의 표적 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 지칭하며, 이러한 표적은 암세포 또는 자가면역질환과 관련된 자가면역항체를 생성하는 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 개시된 면역글로불린은 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA), 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 면역글로불린 분자의 하위부류를 가질 수 있다. 면역글로불린은 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 그러나, 일 양상에서, 면역글로불린은 인간, 뮤린 또는 토끼 유래이다.
나노바디로도 알려진 "단일 도메인 항체"라는 용어는 분자량이 약 12kDa 내지 약 15kDa인 단일 단량체 가변 항체 도메인으로 이루어진 항체 단편이다. 단일 바디 항체는 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄에 기반할 수 있다. 단일 도메인 항체의 예는 VHH 단편 및 VNAR 단편을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, 문헌[Harmsen M. M. et al. Applied Microbiology and Biotechnology 77 (1): 13-22] 참조.
"항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 일반적으로 항원 결합 또는 이의 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 다이어바디(diabody); 선형 항체; Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편, 항-이디오타입(항-Id) 항체, CDR(상보성 결정 영역), 및 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원, 단일쇄 분자에 면역특이적으로 결합하는 임의의 상기의 에피토프-결합 단편; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체를 포함한다.
"무손상 항체"는 항원-결합 가변 영역뿐만 아니라 경쇄 불변 도메인(CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 얻은 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개개 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 유래 돌연변이를 제외하고 동일하다. 단클론성 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위로 향한다. 더 나아가, 상이한 결정소(에피토프)로 향하는 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제조와 대조적으로, 각각의 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정소로 향한다. 이들의 특이성에 추가로, 단클론성 항체는 다른 항체에 의한 오염없이 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어 "단클론성"은 항체의 실질적으로 균질한 집단으로부터 얻어지는 바와 같은 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의해 항체 집단을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 예를 들어, 본 개시내용에 따라 사용될 단클론성 항체는 문헌[Kohler et al (1975) Nature 256:495]에 의해 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 생성될 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 생성될 수 있다(미국 특허 제4,816,567호 참조). "단클론성 항체"는 또한, 예를 들어, 문헌[Clackson et al (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 기재된 기법을 이용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
본 명세서의 단클론성 항체는 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래된 항체에서 대응하는 서열과 동일하거나 상동성이거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 반면, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 유래된 항체에서 대응하는 서열과 동일하거나 상동성이거나 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 "키메라" 항체를 특이적으로 포함한다(미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌[Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855]). 본 명세서의 관심 대상의 키메라 항체는 비인간 영장류(예를 들어, 구세계 원숭이, 유인원 등) 및 인간 불변 영역 서열로부터 유래된 가변 도메인 항원-결합 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
단클론성 항체(MAb)를 생성하기 위해 다양한 방법이 사용되었다. 단일 유형의 항체를 생성하는 클로닝된 세포주를 지칭하는 하이브리도마 기술은 마우스(뮤린), 햄스터, 랫트 및 인간을 포함하는 다양한 종의 세포를 사용한다. MAb를 제조하기 위해 사용되는 다른 방법은 재조합 DNA 기법을 포함하는 유전자 조작을 사용한다. 이들 기법으로부터 생성된 단클론성 항체는 특히 키메라 항체 및 인간화된 항체를 포함한다. 키메라 항체는 한 가지 초과 유형의 종으로부터의 영역을 암호화하는 DNA를 조합한다. 예를 들어, 키메라 항체는 마우스로부터의 가변 영역 및 인간으로부터의 불변 영역으로부터 유래될 수 있다. 인간화된 항체는 비인간 부분을 포함한다고 해도 대체로 인간으로부터 유래된다. 키메라 항체와 같이, 인간화된 항체는 완전 인간 불변 영역을 함유할 수 있다. 키메라 항체와 달리, 가변 영역은 인간으로부터 부분적으로 유래될 수 있다. 인간화된 항체의 비인간, 합성 부분은 종종 뮤린 항체에서의 CDR로부터 유래된다. 임의의 사건에서, 이들 영역은 항체가 특정 항원을 인식하고 이에 결합하는 것을 가능하게 하는 데 결정적이다. 진단 및 단기간 요법에 대해 유용하지만, 뮤린 항체는 유해한 면역원성 반응의 위험을 증가시키는 일 없이 장기간 동안 사람에게 투여될 수 없다. 인간 항-마우스 항체(HAMA)로 불리는 이 반응은 인간 면역계가 뮤린 항체를 이물질로서 인식하고 이를 공격할 때 일어난다. HAMA 반응은 독성 쇼크 또는 심지어 사망을 야기할 수 있다.
키메라 및 인간화된 항체는 투여된 항체의 비인간 부분을 최소화함으로써 HAMA 반응 가능성을 감소시킨다. 더 나아가, 키메라 및 인간화된 항체는 2차 인간 면역 반응, 예컨대, 항체 의존적 세포의 세포독성을 활성화시키는 추가적인 이점을 가질 수 있다.
무손상 항체는 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 해당 생물학적 활성을 지칭하는 하나 이상의 "효과기 기능"을 가질 수 있다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합; 보체 의존적 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다.
이들의 중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 무손상 항체는 상이한 "부류"가 부여될 수 있다. 무손항 항체의 5가지 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM가 있으며, 이들 중 몇몇은 "하위부류"(아이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 다시 분할될 수 있다. 상이한 부류의 항체에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다. 상이한 부류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 입체배치는 잘 공지되어 있다.
유용한 비-면역반응성 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드 항체는 트랜스페린, 표피성장인자("EGF"), 봄베신, 가스트린, 가스트린-방출 펩타이드, 혈소판-유래 성장인자, IL-2, IL-6, 전환 성장 인자("TGF"), 예컨대, TGF-α 및 TGF-β, 백시니아 성장인자("VGF"), 인슐린 및 인슐린-유사 성장인자 I 및 II, 렉틴 및 저밀도 리포단백질로부터의 아포단백질을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
유용한 다클론성 항체는 면역화된 동물의 혈청으로부터 유래된 항체 분자의 이질적 집단이다. 당업계에 잘 공지된 다양한 절차는 관심 대상의 항원에 대한 다클론성 항체의 생성을 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 다클론성 항체의 생성을 위해, 토끼, 마우스, 랫트 및 기니피그를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 다양한 숙주 동물은 관심 대상의 항원 또는 이의 유도체에 의한 주사에 의해 면역화될 수 있다. 숙주종에 따라 면역학적 반응을 증가시키기 위해 다양한 아주반트가 사용될 수 있으며, 프로인트(완전 및 불완전) 아주반트, 미네랄 겔, 예컨대, 수산화알루미늄, 표면 활성 물질, 예컨대, 라이소레시틴, 플루로닉 폴리올, 다가 음이온, 펩타이드, 오일 에멀션, 구멍삿갓조개 헤모시아닌, 다이나이트로페놀 및 잠재적으로 유용한 인강 아주반트, 예컨대, BCG(바실루스 칼메트-게링(bacille Calmette-Guerin)) 및 코리네박테리움 파붐(corynebacterium parvum)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 아주반트는 또한 당업계에 잘 공지되어 있다.
유용한 단클론성 항체는 특정 항원 결정소(예를 들어, 암세포 항원, 바이러스 항원, 미생물 항원, 단백질, 펩타이드, 탄수화물, 화학물질, 핵산 또는 이들의 단편)에 대한 항체의 균질한 집단이다. 관심 대상의 항원에 대한 단클론성 항체(mAb)는 배양물에서 연속적 세포주에 의해 항체 분자의 생성을 제공하는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용함으로써 제조될 수 있다. 이들은 본래 Kohler 및 Milstein에 의해 기재된 하이브리도마 기법(1975, Nature 256, 495-497), 인간 B 세포 하이브리도마 기법(Kozbor et al., 1983, I㎜unology Today 4:72), 및 EBV-하이브리도마 기법(Cole et al., 1985, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA 및 IgD을 포함하는 임의의 면역글로불린 부류 및 이들의 임의의 하위부류를 가질 수 있다. 본 개시내용에서 사용되는 mAb를 생성하는 하이브리도마는 시험관내 또는 생체내에서 배양될 수 있다.
유용한 단클론성 항체는 인간 단클론성 항체, 인간화된 단클론성 항체, 항체 단편, 또는 키메라 인간-마우스(또는 다른 종) 단클론성 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 인간 단클론성 항체는 당업계에 공지된 임의의 수많은 기법에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, 문헌[Teng et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80, 7308-7312; Kozbor et al., 1983, I㎜unology Today 4, 72-79; 및 Olsson et al., 1982, Meth. Enzymol. 92, 3-16]).
항체는 또한 이중특이성 항체일 수 있다. 이중특이성 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장 이중특이성 항체의 전통적인 생성은 두 면역글로불린 중쇄-경쇄쌍의 공동발현에 기반하며, 여기서, 두 쇄는 상이한 특이성을 가진다(Milstein et al., 1983, Nature 305:537-539). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류(assortment) 때문에, 이들 하이브리도마(쿼드로마)는 10가지 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생성하며, 이 중 하나만이 정확한 이중특이성 구조를 가진다. 보통 친화도 크로마토그래피 단계를 이용하여 수행되는 정확한 분자의 정제는 오히려 복잡하며, 생성물 수율이 낮다. 유사한 절차가 WO 93/08829, 및 문헌[Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.
상이한 접근에 따르면, 목적하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인(항체-항원 조합 부위)는 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 힌지, CH2, 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과의 융합일 수 있다. 제1 중쇄 불변 영역(CH1)은 융합 중 적어도 하나에 존재하는 경쇄 결합에 필수적인 부위를 함유할 수 있다. 면역글로불린 중쇄 융합 및, 필요하다면, 면역글로불린 경쇄를 암호화하는 서열을 갖는 핵산은 별개의 발현 벡터에 삽입되며, 적합한 숙주 유기체에 공동 형질감염된다. 이는 작제물에서 사용되는 3개의 폴리펩타이드 쇄의 동일하지 않은 비가 최적의 수율을 제공할 때, 실시형태에서 3개의 폴리펩타이드 단편의 상호 비율을 조정함에 있어서 큰 유연성을 제공한다. 그러나, 동일한 비의 적어도 2개의 폴리펩타이드 쇄의 발현이 고수율을 초래할 때, 또는 비가 특정 유의도를 가질 때, 하나의 발현 벡터에서 2 또는 모두 3개의 폴리펩타이드 쇄에 대해 암호화 서열을 삽입할 수 있다.
이중특이성 항체는 하나의 아암에서 제1 결합 특이성을 갖는 혼성 면역글로불린 중쇄, 및 다른 아암에서 혼성 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제2 결합 특이성을 제공)을 가질 수 있다. 이 비대칭 구조는 원치않는 면역글로불린 쇄 조합물로부터의 목적하는 이중특이성 화합물의 분리를 용이하게 하는데, 이중특이성 분자 중 절반에서만 면역글로불린 경쇄의 존재가 손쉬운 분리 방법을 제공하기 때문이다(WO 94/04690; 문헌[Suresh et al., Methods in Enzymology, 1986, 121:210; Rodrigues et al., 1993, J. of I㎜unology 151:6954-6961; Carter et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167; Carter et al., 1995, J. of Hematotherapy 4:463-470; Merchant et al., 1998, Nature Biotechnology 16:677-681]). 이러한 기법을 이용하여, 이중특이성 항체는 본 명세서에 정의된 바와 같은 질환의 치료 또는 예방에서 ADC로서 접합을 위해 제조될 수 있다.
혼성체 또는 이작용성 항체는 생물학적으로, 즉, 세포 융합 기법에 의해, 또는 화학적으로, 가교제 또는 이황화물-브리지 형성 시약에 의해 유래될 수 있으며, 전체 항체 또는 이의 단편을 포함할 수 있다(유럽 특허 제105360호; WO 83/03679; 유럽 특허 제217577호).
항체는 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 종양 세포 또는 기질에 결합된 다른 항체의 기능적으로 활성인 단편, 유도체 또는 유사체일 수 있다. 이와 관련하여, "기능적으로 활성인"은 단편, 유도체 또는 유사체가, 단편, 유도체 또는 유사체가 유래된 항체가 인식하는 것과 동일한 항원을 인식하는 항-이디오타입 항체를 유발할 수 있다는 것을 의미한다. 구체적으로는, 예시적인 실시형태에서, 면역글로불린 분자의 이디오타입의 항원성은 항원을 특이적으로 인식하는 CDR 서열에 대해 C-말단인 CDR 서열 및 프레임워크에 의해 향상될 수 있다. CDR 서열이 항원에 결합하는지를 결정하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 결합 분석 방법에 의한 항원에 의한 결합 분석(예를 들어, BIA 코어 분석)에서 CDR 서열을 함유하는 합성 펩타이드가 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of I㎜unological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md.; Kabat E et al., 1980, J. of I㎜unology 125(3):961-969] 참조).
다른 유용한 항체는 항체의 단편을 포함하며, 예컨대, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 가변 영역, 경쇄 불변 영역 및 중쇄의 CH1 도메인을 함유하는 F(ab')2 단편은 항체 분자, 및 F(ab')2 단편의 이황화 브리지를 환원시킴으로써 생성될 수 있는 Fab 단편의 펩신 분해에 의해 생성될 수 있다. 다른 유용한 항체는 항체의 중쇄 및 경쇄 이량체, 또는 이들의 임의의 최소 단편, 예컨대, Fv 또는 단일쇄 항체(SCA)(예를 들어, 미국 특허 제4,946,778호; 문헌[Bird, 1988, Science 242:423-42; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; 및 Ward et al., (1989) Nature 334:544-54]에 기재됨), 또는 항체와 동일한 특이성을 갖는 임의의 다른 분자이다.
추가적으로, 표준 재조합 DNA 기법을 이용하여 제조될 수 있는 인간과 비인간 부분을 둘 다 포함하는 재조합 항체, 예컨대, 키메라 및 인간화된 단클론성 항체가 유용한 항체이다. 키메라 항체는 상이한 부분이 상이한 동물 종으로부터 유래된 분자, 예컨대, 뮤린 단클론성으로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 것이다. (예를 들어, Cabilly 등의 미국 특허 제4,816,567호; 및 Boss 등의 미국 특허 제4,816,397호). 인간화된 항체는 비인간 종으로부터의 하나 이상의 상보성 결정 영역(complementarity determining region: CDR) 및 인간 면역글로불린 분자로부터의 프레임워크 영역을 갖는 비인간 종으로부터의 항체 분자이다. (예를 들어, Queen의 미국 특허 제5,585,089호) 이러한 키메라 및 인간화된 단클론성 항체는 당업계에 공지된 재조합 DNA 기법에 의해, 예를 들어, WO 87/02671; 유럽 특허 제184,187호; 유럽 특허 제171496호; 유럽 특허 제173494호; WO 86/01533; 미국 특허 제4,816,567호; 유럽 특허 제12023호; 문헌[Berter et al., 1988, Science 240:1041-1043; Liu et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. I㎜unol. 139:3521-3526; Sun et al., 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Cancer. Res. 47:999-1005; Wood et al., 1985, Nature 314:446-449; 및 Shaw et al., 1988, J. Natl. Cancer Inst. 80:1553-1559; Morrison, 1985, Science 229:1202-1207; Oi et al., 1986, BioTechniques 4: 214]; 미국 특허 제5,225,539호; 문헌[Jones et al., 1986, Nature 321 :552-525; Verhoeyan et al. (1988) Science 239:1534; 및 Beidler et al., 1988, J. I㎜unol. 141:4053-4060]에 기재된 방법을 이용하여 생성될 수 있다.
완전 인간 항체는 내인성 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현시킬 수 없지만, 인간 중쇄 및 경쇄 유전자를 발현시킬 수 있는 유전자이식 마우스를 이용하여 생성될 수 있다. 유전자이식 마우스는 선택된 항원, 예를 들어, 본 개시내용의 폴리펩타이드의 모두 또는 일부를 이용하여 정상적인 방식에서 면역화된다. 항원으로 향하는 단클론성 항체는 통상적인 하이브리도마 기술을 이용하여 얻을 수 있다. 유전자이식 마우스에 의해 보유된 인간 면역글로불린 이식유전자는 B 세포 분화 동안 재배열되며, 후속적으로, 종류 변환(class switching) 및 체세포 돌연변이를 겪는다. 따라서, 이러한 기법을 이용하여, 치료적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생성할 수 있다. 인간 항체를 생성하기 위한 이 기술의 검토를 위해, Lonberg 및 Huszar의 문헌[1995, Int. Rev. I㎜unol. 13:65-93]을 참조한다. 인간 항체 및 인간 단클론성 항체를 생성하기 위한 이런 기술 및 이러한 항체를 생성하기 위한 프로토콜의 상세한 논의를 위해. 예를 들어, 미국 특허 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,569,825호; 제5,661,016호; 제5,545,806호 참조. 다른 인간 항체는, 예를 들어, Abgenix, Inc.(캘리포니아주 프리몬트에 소재) 및 Genpharm(캘리포니아주 새너제이에 소재)로부터 상업적으로 얻을 수 있다.
선택된 에피토프를 인식하는 완전 인간 항체는 "가이드된 선택(guided selection)"으로 지칭되는 기법을 이용하여 생성될 수 있다. 이 접근에서, 동일한 에피토프를 인식하는 완전 인간 항체의 선택을 가이드하기 위해 선택된 비인간 단클론성 항체, 예를 들어, 마우스 항체가 사용된다(Jespers et al. (1994) Biotechnology 12:899-903). 파지 디스플레이 라이브러리를 포함하는 당업계에 공지된 다양한 기법을 이용하여 인간 항체가 또한 생성될 수 있다(Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)).
항체는 항체의 융합 단백질, 또는 이의 기능적으로 활성인 단편일 수 있으며, 예를 들어, 이때 항체가 아닌 다른 단백질의 아미노산 서열(또는 이의 일부, 예컨대, 단백질의 적어도 10, 20 또는 50개의 아미노산 부분)에 대해 N-말단 또는 C-말단에서 항체가 공유 결합(예를 들어, 펩타이드 결합)을 통해 융합된다. 항체 또는 이의 단편은 불변 도메인의 N-말단에서 다른 단백질에 공유적으로 연결될 수 있다.
항체가 이의 항원 결합 면역특이성을 보유하는 것을 이러한 공유 부착이 가능하게 한다면, 항체는 변형된, 즉, 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 변형된 유사체 및 유도체를 포함한다. 예를 들어, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 항체의 유도체 및 유사체는, 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 포스포릴화, 아마이드화, 공지된 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질분해 절단, 세포 항체 단위에 대한 결합 또는 다른 단백질 등에 의해 추가로 변형된 것을 포함한다. 임의의 수많은 화학적 변형은 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 폼일화, 투니카마이신의 존재 하의 대사 합성 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 공지된 기법에 의해 수행될 수 있다. 추가적으로, 유사체 또는 유도체는 하나 이상의 비천연 아미노산을 함유할 수 있다.
항체 약물 접합체에서 항체는 Fc 수용체와 상호작용하는 아미노산 잔기에서 변형(예를 들어, 치환, 결실 또는 첨가)을 갖는 항체를 포함한다. 특히, 항체는 항-Fc 도메인과 FcRn 수용체 사이의 상호작용에 관련된 것으로 확인된 아미노산 잔기에서 변형을 갖는 항체를 포함한다(예를 들어, WO 97/34631 참조). 암세포 항원에 면역특이적인 항체는, 예를 들어, Genentech(캘리포니아주 샌프란시스코에 소재)로부터 상업적으로 얻거나 또는 당업자에게 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 화학적 합성 도는 재조합 발현 기법에 의해 생성될 수 있다. 암세포 항원에 면역특이적인 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은, 예를 들어, GenBank 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물로부터 또는 일상적인 클로닝 및 서열분석에 의해 얻을 수 있다.
ADC의 항체는 단클론성 항체, 예를 들어, 뮤린 단클론성 항체, 키메라 항체, 또는 인간화된 항체일 수 있다. 항체는 항체 단편, 예를 들어, Fab 단편일 수 있다.
암 치료 또는 예방을 위한 공지된 항체는 ADC로서 접합될 수 있다. 암세포 항원에 면역특이적인 항체는 상업적으로 얻을 수 있거나, 또는, 예를 들어, 재조합 발현 기법과 같이 당업자에게 공지된 임의의 방법에 의해 생성될 수 있다. 암세포 항원에 면역특이적인 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은, 예를 들어, GenBank 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물로부터 또는 일상적인 클로닝 및 서열분석에 의해 얻을 수 있다. 암 치료에 이용 가능한 항체의 예는 전이성 유방암을 갖는 환자의 치료를 위한 인간화된 항-HER2 단클론성 항체; 비호지킨 림프종을 갖는 환자의 치료를 위한 키메라 항-CD20 단클론성 항체인 RITUXAN.RTM.(리툭시맙;　Genentech); 난소암의 치료를 위한 뮤린 항체인 OvaRex(매사추세츠주에 소재한 AltaRex Corporation); 결장직장암의 치료를 위한 뮤린 IgG2a 항체인 Panorex(노스캐롤라이나주에 소재한 Glaxo Wellcome); 표피성장인자 양성암, 예컨대, 두경부암의 치료를 위한 항-EGFR IgG 키메라 항체인 세툭시맙 얼비툭스(뉴욕주에 소재한 Imclone Systems Inc.); 육종의 치료를 위한 인간화된 항체인 비탁신(Vitaxin)(메릴랜드주에 소재한 MedI㎜une, Inc.); 만성 림프구성 백혈병(CLL)의 치료를 위한 인간화된 IgG1 항체인 Campath I/H(매사추세츠주에 소재한 Leukosite); 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료를 위한 인간화된 항-CD33 IgG 항체인 Smart MI95(캘리포니아주에 소재한 Protein Design Labs, Inc.); 비호지킨 림프종의 치료를 위한 인간화된 항-CD22 IgG 항체인 LymphoCide(뉴저지주에 소재한 I㎜unomedics, Inc.); 비호지킨 림프종의 치료를 위한 인간화된 항-HLA-DR 항체인 Smart ID10(캘리포니아주에 소재한 Protein Design Labs, Inc.); 비호지킨 림프종의 치료를 위한 방사성표지된 뮤린 항-HLA-Dr10 항체인 Oncolym(캘리포니아주에 소재한 Techniclone, Inc.); 호지킨 질환 또는 비호지킨 림프종의 치료를 위한 인간화된 항-CD2 mAb인 Allomune(캘리포니아주에 소재한 BioTransplant); 폐 및 결장직장암의 치료를 위한 항-VEGF 인간화된 항체인 아바스틴(Avastin)(캘리포니아주에 소재한 Genentech, Inc.); 비호지킨 림프종의 치료를 위한 항-CD22 항체인 에프라투주맙(Epratuzamab)(뉴저지주에 소재한 I㎜unomedics, Inc. 및 캘리포니아주에 소재한 Amgen); 및 결장직장암의 치료를 위한 인간화된 항-CEA 항체인 CEAcide(뉴저지주에 소재한 I㎜unomedics)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
암 치료에서 유용한 다른 항체는 다음의 항원에 대한 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: CA125(난소), CA15-3(암종), CA19-9(암종), L6(암종), Lewis Y(암종), Lewis X(암종), 알파 태아단백질(암종), CA 242(결장직장), 태반 알칼리성 포스파타제(암종), 전립선 특이적 항원(전립선), 전립선 산성 포스파타제(전립선), 표피성장인자(암종), MAGE-1(암종), MAGE-2(암종), MAGE-3(암종), MAGE-4(암종), 항-트랜스페린 수용체(암종), p97(흑색종), MUC1-KLH (유방암), CEA (결장직장), gp100(흑색종), MART1(흑색종), PSA (전립선), IL-2 수용체(T-세포 백혈병 및 림프종), CD20(비호지킨 림프종), CD52 (백혈병), CD33(백혈병), CD22 (림프종), 인간 융모성 생식선 자극호르몬(암종), CD38(다발성 골수종), CD40(림프종), 뮤신(암종), P21(암종), MPG(흑색종), 및 Neu 종양유전자 생성물(암종). 일부 특이적인, 유용한 항체는 BR96 mAb(Trail, P. A., et al Science (1993) 261, 212-215), BR64(Trail, P A, et al Cancer Research (1997) 57, 100-105), CD40 항원에 대한 mAb, 예컨대, S2C6 mAb(Francisco, J. A., et al Cancer Res. (2000) 60:3225-3231), CD70 항원에 대한 mAb, 예컨대, 1F6 mAb, 및 CD30 항원에 대한 mAb, 예컨대, AC10(Bowen, M. A., et al (1993) J. I㎜unol., 151:5896-5906; Wahl et al., 2002 Cancer Res. 62 (13):3736-42)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 종양 관련 항원에 결합하는 다수의 다른 내재화 항체가 사용될 수 있고, 검토되었다(Franke, A. E., et al Cancer Biother Radiopharm. (2000) 15:459-76; Murray, J. L., (2000) Semin Oncol., 27:64-70; Breitling, F., and Dubel, S., Recombinant Antibodies, John Wiley, and Sons, New York, 1998).
항원 제시 세포와 관련된 항원에 결합하는 항체, 예컨대, CD40, OX40L, Endoglin, DEC-205, 4-1BBL, CD36, CD36, CD204, MARCO, DC-SIGN, CLEC9A, CLEC5A, Dectin 2, CLEC10A, CD206, CD64, CD32A, CD1A, HVEM, CD32B, PD-L1, BDCA-2, XCR-1 및 CCR2가 또한 ADC로서 접합될 수 있다.
자가면역 장애의 치료 또는 예방을 위한 공지된 항체는 ADC로서 접합될 수 있다. 자가면역 장애는 전신 홍반성 루프스(SLE), 류마티스 관절염, 쇼그렌 증후군, 면역혈소판감소증, 및 다발성 경화증을 포함한다. 자가면역 항체 생성을 초래하는 세포의 항원에 면역특이적인 항체는 당업자에게 공지된 임의의 방법, 예컨대, 화학적 합성 또는 재조합 발현 기법에 의해 얻을 수 있다. SLE는 인터페론-알파(IFN-α) 사이토카인 유전자(Bennett et al (2003) Jour. Exp. Med. 197:711-723)의 과발현에 의해 마킹된다. 1형 인터페론(IFN-α/β)은 루프스 발병에서 상당한 역할을 한다(Santiago-Raber (2003) Jour. Exp. Med. 197:777-788). 넉아웃(Knockout) 마우스(-IFN-α/β)는 유의하게 감소된 항-적혈구 자가항체, 적아구증, 용혈성 빈혈, 항-DNA 자가항체, 신장병 및 사망을 나타내었다. 이들 결과는 1형 IFN이 뮤린 루프스를 매개한다는 것과, 인간 상대에서 이들 활성의 감소가 유리할 수 있다는 것을 시사한다. 비스 1,8 나프탈이미드 약물 모이어티에 접합된 항-IFN Ab는 SLE 및 기타 자가면역 장애에 대해 효과적인 치료제일 수 있다.
다른 실시형태에서, ADC에서 유용한 항체는 자가면역질환의 치료에 면역특이적이며, 항-핵 항체; 항 ds DNA; 항 ss DNA, 항 카르디올리핀 항체 IgM, IgG; 항 인지질 항체 IgM, IgG; 항 SM 항체; 항 미토콘드리아 항체; 갑상선 항체; 마이크로솜 항체; 타이로글로불린 항체; 항 SCL-70; 항-Jo; 항-U.sub.1RNP; 항-La/SSB; 항 SSA; 항 SSB; 항 페리어틀(Anti Perital) 세포 항체; 항 히스톤; 항-RNP; C-ANCA; P-ANCA; 항 동원체; 항-피브릴라린, 및 항-GBM 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
ADC의 항체는 활성화된 림프구 상에서 발현된 수용체 또는 수용체 복합체 둘 다에 결합할 수 있다. 수용체 또는 수용체 복합체는 면역글로불린 유전자 슈퍼패밀리 구성원, TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원, 인테그린, 사이토카인 수용체, 케모카인 수용체, 주조직 적합성 단백질, 렉틴 또는 보체 조절 단백질을 포함할 수 있다. 적합한 면역글로불린 슈퍼패밀리의 비제한적 예는 CD2, CD3, CD4, CD8, CD 19, CD22, CD28, CD79, CD90, CD 152/CTLA-4, PD-1 및 ICOS이다. 적합한 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원의 비제한적 예는 CD27, CD40, CD95/Fas, CD134/OX40, CD137/4-1BB, TNF-R1, TNFR-2, RANK, TACI, BCMA, 오스테오프로테게린, Apo2/TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRAIL-R3, TRAIL-R4 및 APO-3이다. 적합한 인테그린의 비제한적 예는 CD11a, CD11b, CD11c, CD18, CD29, CD41, CD49a, CD49b, CD49c, CD49d, CD49e, CD49f, CD 103 및 CD 104이다. 적합한 렉틴의 비제한적 예는 C-형, S-형 및 I-형 렉틴이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "바이러스성 항원"은 면역반응을 유발할 수 있는 임의의 바이러스 펩타이드, 폴리펩타이드 단백질(예를 들어, HIV gp120, HIV nef, RSV F 당단백질, 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제, 인플루엔자 바이러스 혈구응집소, HTLV tax, 단순 포진 바이러스 당단백질(예를 들어, Gb, Gc, Gd 및 Ge) 및 B형 간염 표면 항원을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "미생물 항원"은 면역 반응을 유발할 수 있는 임의의 미생물 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질, 당류, 다당류, 또는 지질 분자(예를 들어, 박테리아, 진균, 병원성 원생동물, 또는 LPS 및 협막다당 5/8을 포함하는 효모 폴리펩타이드)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
바이러스 또는 미생물 항원에 면역특이적인 항체는 상업적으로, 예를 들어, BD Biosciences(캘리포니아주 샌프란시스코에 소재), Chemicon International, Inc.(캘리포니아주에 소재한 Temecula) 또는 Vector Laboratories, Inc.(캘리포니아주에 소재한 Burlingame)로부터 얻을 수 있거나, 또는 당업자에게 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 화학적 합성 도는 재조합 발현 기법에 의해 생성될 수 있다. 바이러스 또는 미생물 항원에 면역특이적인 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은, 예를 들어, GenBank 데이터베이스 또는 이와 유사한 데이터베이스, 문헌 간행물로부터 또는 일상적인 클로닝 및 서열분석에 의해 얻을 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 ADC에서 유용한 항체는 본 명세서에 개시된 방법에 따라 바이러스 또는 미생물 감염을 치료 또는 예방하는 것이다. 바이러스 감염 또는 미생물 감염의 치료에 유용한 이용 가능한 항체의 예는 RSV 감염에 의한 환자 치료에 유용한 인간화된 항-호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 단클론성 항체인 SYNAGIS(메릴랜드주에 소재한 MedI㎜une, Inc.); HIV 감염의 치료에 유용한 CD4 융합 항체인 PRO542(Progenics); B형 간염 바이러스의 치료에 유용한 인간 항체인 OSTAVIR(캘리포니아주에 소재한 Protein Design Labs, Inc.); 거대세포바이러스(CMV)를 치료하는 데 유용한 항체인 인간화된 IgG인 PROTOVIR(캘리포니아주에 소재한 Protein Design Labs, Inc.); 및 항-LPS 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
감염성 질환의 치료를 위한 ADC에서 유용한 다른 항체는 박테리아의 병원성 균주(스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 뉴모니애(Streptococcus pneumoniae), 네이세리아 고노레이아(Neisseria gonorrheae), 네이세리아 메닌기티디스(Neisseria meningitidis), 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheriae), 클로스트리둠 보툴리눔(Clostridium botulinum), 클로스트리듐 페르프린젠스(Clostridium perfringens), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 헤모필루스 인플루엔자(Hemophilus influenzae), 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae), 클렙시엘라 오자에나스(Klebsiella ozaenas), 클렙시엘라 리노셀로모티스(Klebsiella rhinoscleromotis), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 비브리오 콜레라(Vibrio colerae), 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 캄필로박터(비브리오) 페투스, 아에로모나스 하이드로필라(Aeromonas hydrophila), 바실러스 세레우스(Bacillus cereus), 에드워드시엘라 타르다(Edwardsiella tarda), 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica), 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis), 예르시니아 슈도주베르쿨로시스(Yersinia pseudotuberculosis), 쉬겔라 다이센테리아(Shigella dysenteriae), 쉬겔라 플렉스네이리(Shigella flexneri), 쉬겔라 손네이(Shigella sonnei), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 트레포네마 팔리둠(Treponema pallidum), 트레포네마 페르네뉴(Treponema pertenue), 트레포네마 카라테늄(Treponema carateneum), 보렐리아 빈센티(Borrelia vincentii), 보렐리아 부르도페리(Borrelia burgdorferi), 렙토스피라 익테로헤모라지(Leptospira icterohemorrhagiae), 마이코박테륨 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 뉴모시스티스 카르니(Pneumocystis carinii), 프란시셀라 눌라렌시스(Francisella tularensis), 브루셀라 아볼투스(Brucella abortus), 브루셀라 수이스(Brucella suis), 브루셀라 멜리텐시스(Brucella melitensis), 마이코플라즈마 종(Mycoplasma spp.), 리케차 프로바제키(Rickettsia prowazeki), 리케차 쯔쯔가무시(Rickettsia tsutsugumushi),클라미디아 종(Chlamydia spp.)); 병원성 진균(콕시디오이데스 이미티스(Coccidioides i㎜itis), 아스퍼질러스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 블라스토마이세스 더마티디스(Blastomyces dermatitidis), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 히스토플라즈마 캅술라툼(Histoplasma capsulatum)); 원생동물(이질아메바(Entomoeba histolytica), 톡소플라즈마 곤디(Toxoplasma gondii), 트리코모나스 테나스(Trichomonas tenas), 트리코모나스 호미니스(Trichomonas hominis), 트리코모나스 바기날리스(Trichomonas vaginalis), 트리오아노소마 감비엔스(Tryoanosoma gambiense), 트리파노소마 로데시엔스(Trypanosoma rhodesiense), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 리슈마니아 도노바니(Leishmania donovani), 리슈마니아 트로피카(Leishmania tropica), 리슈마니아 브라질리엔시스(Leishmania braziliensis), 슈모시스티스 뉴모니아(Pneumocystis pneumonia), 플라스모듐 비박스(Plasmodium vivax), 플라스모듐 팔시파룸(Plasmodium falciparum), 플라스모듐 말라리아(Plasmodium malaria)); 또는 연충(엔테로비우스 버미쿨라시스(Enterobius vermicularis), 트리쿠리스 트리치우라(Trichuris trichiura), 아스카리스 룸브리코이데스(Ascaris lumbricoides), 트리치넬라 스피랄리스(Trichinella spiralis), 스트론기로이데스 스테르코랄리스(Strongyloides stercoralis), 스키스토소마 자포니쿰(Schistosoma japonicum), 스키스토소마 만소니(Schistosoma mansoni), 스키스토소마 하에마토븀(Schistosoma haematobium) 및 구충)으로부터의 항원에 대한 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
바이러스 질환의 치료를 위한 ADC에서 유용한 다른 항체는 이하로 제한되지는 않지만 예로서 병원성 바이러스의 항원에 대한 항체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 폭소바이러스과(Poxviridae), 헤르페스바이러스과(Herpesviridae), 단순 포진 바이러스 1, 단순 포진 바이러스 2, 아데노바이러스과(Adenoviridae), 파보바바이러스과(Papovaviridae), 엔테로바이러스과(Enteroviridae), 피코르나바이러스과(Picornaviridae), 파보바이러스과(Parvoviridae), 레오바이러스과(Reoviridae), 레트로바이러스과(Retroviridae), 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 볼거리, 홍역, 호흡기 세포융합 바이러스, 풍진, 아르보바이러스과(Arboviridae), 랍도바이러스과(Rhabdoviridae), 아레나바이러스과(Arenaviridae), A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 비-A/비-B형 간염 바이러스, 리노바이러스과(Rhinoviridae), 코로나바이러스과(Coronaviridae), 로토바이러스과(Rotoviridae) 및 인간 면역결핍 바이러스.
용어 "아미노산 서열 변이체"는 천연 서열 폴리펩타이드와 일정 정도 다른 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 보통, 아미노산 서열 변이체는 천연 항체의 적어도 하나의 수용체 결합 도메인과 또는 천연 수용체의 적어도 하나의 리간드 결합 도메인과 적어도 약 70% 서열 동일성을 가질 것이며, 전형적으로, 이들은 이러한 수용체 또는 리간드 결합 도메인과 서열에 의해 적어도 약 80%, 더 전형적으로는, 적어도 약 90% 상동성일 것이다. 아미노산 서열 변이체는 천연 아미노산 서열의 아미노산 서열 내 특정 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 가진다. 아미노산은 통상적인 명칭, 1글자 및 3글자 암호에 의해 표기된다.
"서열 동일성"은 서열을 정렬하고, 필요하다면, 최대 서열 동일성 백분율을 달성하기 위해 갭을 도입한 후에 동일한 아미노산 서열 변이체 내 잔기의 백분율로서 정의된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당업계에 잘 공지되어 있다. 한 가지 이러한 컴퓨터 프로그램은 1991년 12월 10일자에 워싱턴 D.C. 20559에 소재한 미국 저작권청에 사용자 문서와 함께 제출된 Genentech, Inc.가 만든 "Align 2"이다.
용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재하는 데 사용된다. 예시적인 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 게다가, FcR은 IgG 항체에 결합하는 것(감마 수용체)일 수 있으며, 이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함하는, FcγRI, FcγRII, 및 Fcγ RIII 하위부류의 수용체를 포함한다. FcγRII 수용체는 주로 이의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("저해 수용체")를 포함한다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 이의 세포질 도메인에서 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 저해 수용체 FcγRIIB는 이의 세포질 도메인에서 면역수용체 타이로신-기반 저해 모티프(ITIM)를 함유한다. (문헌[M. in Daeron, Annu. Rev. I㎜unol., 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. I㎜unol., 9:457-92 (1991); Capel et al., I㎜unomethods, 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med., 126:330-41 (1995)]에서 검토되어 있다. 장래에 확인될 것을 포함하는 다른 FcR은 본 명세서에서 용어 "FcR"에 포함된다. 상기 용어는 또한 모계 IgG의 태아에 대한 전달을 초래하는 신생아 수용체인 FcRn을 포함한다(문헌[Guyer et al., J. I㎜unol., 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. I㎜unol., 24:249 (1994)]).
"보체 의존적 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에 분자가 표적을 용해하는 능력을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 동족 항원과 복합체화된 분자(예를 들어, 항체)에 대한 보체 시스템의 제1 성분(C1q)의 결합에 의해 저해된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어, 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. I㎜unol. Methods, 202:163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 분석이 수행될 수 있다.
"천연 항체"는 보통 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 약 150,000 달톤의 이형사량체 당단백질이다. 각 경쇄는 1개의 공유 이황화 결합에 의해 중쇄에 연결되는 한편, 이황화 결합의 수는 상이한 면역글로불린 아이소타입의 중쇄 중에서 변한다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적 간격을 갖는 쇄내 이황화 브리지를 가진다. 각 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VH)을 갖고, 이어서, 다수의 불변 도메인을 가진다. 각 경쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VL)을 갖고, 다른 말단에 불변 도메인을 가진다. 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인에 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인에 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.
용어 "변수"는 가변 도메인의 특정 부분이 항체 중 서열에서 광범위하게 다르며 특정 항원에 대한 각 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전체적으로 균일하게 분포되지 않는다. 이는 경쇄와 중쇄 가변 도메인 둘 다에서 초가변 영역으로 불리는 3개의 세그먼트에 집중된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR을 포함하며, 이는 주로 β-시트 입체배치를 채택하고, 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 β-시트 구조의 루프 연결을 형성하고, 이의 일부를 형성한다. 각 쇄에서 초가변 영역은 FR에 의해 근위에 함께 유지되며, 다른 쇄로부터의 초가변 영역과 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al (1991) Sequences of Proteins of I㎜unological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.] 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체 결합에 직접 관련되지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예컨대, 항체 의존적 세포의 세포독성(ADCC)에서 항체의 참여를 나타낸다.
본 명세서에 사용될 때 용어 "초가변 영역"은 항원-결합을 초래하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기(예를 들어, 경쇄 가변 도메인에서 잔기 24 내지 34(L1), 50 내지 56(L2) 및 89 내지 97(L3) 및 중쇄 가변 도메인에서 31 내지 35(H1), 50 내지 65(H2) 및 95 내지 102(H3); 문헌[Kabat et al 상기 참조]) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 잔기(예를 들어, 경쇄 가변 도메인에서 잔기 26 내지 32(L1), 50 내지 52 (L2) 및 91 내지 96(L3) 및 중쇄 가변 도메인에서 26 내지 32(H1), 53 내지 55(H2) 및 96 내지 101(H3); 문헌[Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917])을 포함한다. "프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본 명세서에 정의된 바와 같은 초가변 영역 잔기 이외의 해당 가변 도메인 잔기이다.
항체의 파파인 분해는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원-결합 단편을 생성하며, 각각은 단일 항원-결합 부위, 잔여 "Fc" 단편을 가지고, 이의 명칭은 이것이 용이하게 결정화하는 능력을 반영한다. 펩신 처리는 2개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원에 가교할 수 있는 F(ab')2 단편을 수득한다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단한, 비공유 결합에서 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 이 입체배치에서 각 가변 도메인의 3개의 초가변 영역은 VH-VL 이량체 표면 상에서 항원-결합 부위를 정하도록 상호작용한다. 총괄적으로, 6개의 초가변 영역은 항체에 대한 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도에도 불구하고, 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 3개의 초가변 영역만을 포함하는 Fv의 절반)조차 항원을 인식 및 결합하는 능력을 가진다.
Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에서 소수의 잔기의 첨가에 의해 Fab 단편과 다르다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 적어도 하나의 유리 티올기를 보유하는 Fab'에 대한 본 명세서의 표기이다. F(ab')2 항체 단편은 본래 이들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 결합이 또한 공지되어 있다.
임의의 척추동물 종으로부터의 항체의 "경쇄"는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 카파 및 람다로 불리는 2개의 분명히 별개인 유형 중 하나에 부여될 수 있다.
"단일쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하되, 이들 도메인은 단일 폴리펩타이드 쇄에 존재한다. Fv 폴리펩타이드는 scFv가 항원 결합의 목적하는 구조를 형성하는 것을 가능하게 하는 VH와 VL 도메인 사이에 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함할 수 있다. scFv의 검토를 위해, 문헌[Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994)]을 참조한다. 항-ErbB2 항체 scFv 단편은 WO 93/16185; 미국 특허 제5,571,894호; 및 제5,587,458호에 기재되어 있다.
용어 "다이어바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하며, 이 단편은 동일한 폴리펩타이드 쇄(VH-VL)에서 가변 경쇄 도메인(VL)에 연결된 가변 중쇄 도메인(VH)을 포함한다. 동일한 쇄 상의 두 도메인 사이에 짝지어지기에 너무 짧은 링커를 이용함으로써, 도메인은 다른 쇄의 상보성 도메인과 짝지어지게 하며, 2개의 항원-결합 부위를 생성한다. 다이어바디는, 예를 들어, 유럽 특허 제404,097호; WO 93/11161; 및 문헌[Hollinger et al (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448]에서 더 완전히 기재된다.
비-인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화된" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화는 뮤린 항체 결합 정보를 비-면역원성 인간 항체 수용체에 전달하는 방법이며, 다수의 치료적으로 유용한 약물을 초래한다. 인간화 방법은 일반적으로 인간 항체 프레임워크 상에 모두 6개의 뮤린 상보성 결정 영역(CDR)을 전달함으로써 시작된다(Jones et al, (1986) Nature 321:522-525). 이들 CDR-접합 항체는 일반적으로 항원 결합에 대한 이들의 본래 친화도를 보유하지 않으며, 사실, 친화도는 종종 심하게 손상된다. CDR 이외에, 선택 비-인간 항체 프레임워크 잔기는 또한 적절한 CDR 입체구조를 유지하도록 혼입되어야 한다(Chothia et al (1989) Nature 342:877). 접합된 CDR의 구조적 입체형태를 지지하기 위한 인간 억셉터(acceptor)에 대한 중요한 마우스 프레임워크 잔기의 전달은 항원 결합 및 친화도를 회복하는 것으로 나타났다(문헌[Riechmann et al., (1992) J. Mol. Biol. 224, 487-499; Foote and Winter, (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; Presta et al., (1993) J. I㎜unol. 151, 2623-2632; Werther et al., (1996) J. I㎜unol. Methods 157:4986-4995; 및 Presta et al (2001) Thromb. Haemost. 85:379-389]). 대부분에 대해, 인간화된 항체는 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 비-인간 종, 예컨대, 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 마우스, 랫트, 토끼 또는 비인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기(공여자 항체)로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 대응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 더 나아가, 인간화된 항체는 수용자 항체에서 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 항체 성능을 추가로 개선하기 위해 이들 변형이 이루어진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 모두를 포함할 것이며, 이때 초가변 루프의 모두 또는 실질적으로 모두는 비-인간 면역글로불린의 초가변 루프에 대응하며, FR의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 서열의 FR이다. 인간화된 항체는 선택적으로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가적인 상세한 설명을 위해, 미국 특허 제6,407,213호; 문헌[Jones et al (1986) Nature, 321:522-525; Riechmann et al (1988) Nature 332:323-329; 및 Presta, (1992) Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596]을 참조한다.
"모 항체"는 하나 이상의 아미노산 잔기가 하나 이상의 시스테인 잔기로 대체되는 아미노산 서열을 포함하는 항체이다. 모 항체는 천연 또는 야생형 서열을 포함할 수 있다. 모 항체는 항체의 다른 천연, 야생형 또는 변형된 형태에 대해 이미 존재하는 아미노산 서열 변형(예컨대, 첨가, 결실 및/또는 치환)을 가질 수 있다. 모 항체는 관심 대상의 표적 항원으로 향한다. 비폴리펩타이드 항원으로 향하는 항체(예컨대, 종양-관련 당지질 항원; 미국 특허 제5,091,178호 참조)가 또한 상정된다.
"단리된" 항체는 이의 천연 환경으로부터 확인되고/되거나 분리되고/되거나 회수된 것이다. 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 진단적 또는 치료적 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 (1) 로리법(Lowry method)에 의해 결정할 때, 95중량% 초과, 또는 99중량% 초과, (2) 기체상 단백질 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부의 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 얻기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마씨 블루 또는 은 염색을 이용하는 환원 또는 비환원 조건 하에 SDS-PAGE에 의한 균질성으로 정제될 것이다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내에서 인시투로 항체를 포함한다. 그러나, 보통, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
분자 표적 또는 관심 대상의 항원에 "결합하는" 항체는 해당 항원에 결합하여 항체가 항원을 발현시키는 세포를 표적화하는 데 유용하도록 충분한 친화도를 가질 수 있는 것이다.
용어 "치료하다" 또는 "치료"는 치료적 치료와 예방적 또는 방지적 척도를 둘 다 지칭하되, 목적은 원치않는 생리학적 변화 또는 장애, 예컨대 암의 발생 또는 확산을 방지하거나 늦추는(줄이는) 것이다. 본 개시내용의 목적을 위해, 유리한 또는 목적하는 임상 결과는 검출 가능하든 검출 가능하지 않든, 증상의 완화, 질환 정도의 감소, 안정화된(즉, 악화되지 않는) 질환 상태, 질환 진행의 지연 또는 늦춤, 질환 상태의 개선 또는 경감, 및 (부분적이든 전체적이든) 관해를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. "치료"는 또한 치료를 받지 않는다면 예상되는 생존에 비해 장기간의 생존을 의미할 수 있다. 치료가 필요한 대상체는 병태 또는 장애를 이미 갖는 대상체뿐만 아니라 병태 또는 장애를 갖는 경향이 있는 대상체 또는 병태 또는 장애가 예방될 대상체를 포함한다.
"파지 디스플레이"는 변이체 폴리펩타이드가 파지 표면 상의 외피 단백질, 예를 들어, 섬유성 파지, 입자에 융합단백질로서 나타나는 기술이다. 파지 디스플레이의 한 가지 효용은 무작위화된 단백질 변이체의 거대 라이브러리 고친화도로 표적 분자에 결합하는 것에 대해 빠르고 효율적으로 분류될 수 있다는 사실에 놓여있다. 파지 상의 펩타이드 및 단백질 라이브러리의 디스플레이는 특이적 결합 특성을 갖는 것에 대해 수백만개의 폴리펩타이드를 선별하는 데 사용되었다. 다가 파지 디스플레이 방법은, 전형적으로 섬유성 파지의 PIII 또는 PVIII 중 하나에 대한 융합을 통해 작은 무작위 펩타이드 및 작은 단백질을 나타내는 데 사용되었다. 문헌[Wells and Lowman, Curr. Opin. Struct. Biol., 3:355-362 (1992)], 및 이에 인용된 참고문헌. 1가 파지 디스플레이에서, 단백질 또는 펩타이드 라이브러리는 파지 외피 단백질 또는 이의 일부에 융합되고, 야생형 단백질의 존재 하에 저수준으로 발현된다. 결합활성(Avidity) 효과는 다가 파지에 비해 감소되며, 따라서 분류는 본래의 리간드 친화도에 기반하며, DNA 조작을 단순화하는 파지미드 벡터가 사용된다. 문헌[Lowman and Wells, Methods: A companion to Methods in Enzymology, 3:205-0216 (1991)]. 파지 디스플레이는 항체-유사 분자를 생성하기 위한 기법을 포함한다(Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) I㎜unobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, p 627-628).
"파지미드"는 박테리아의 복제기점, 예를 들어, Co1E1, 및 박테리오파지의 유전자 사이 영역의 복제물을 갖는 플라스미드 벡터이다. 파지미드는 섬유성 박테리오파지 및 람다형 박테리오파지를 포함하는 임의의 공지된 박테리오파지에 대해 사용될 수 있다. 플라스미드는 또한 일반적으로 항생제 내성을 위한 선택 가능한 마커를 함유할 것이다. 이들 벡터에 클로닝된 DNA의 세그먼트는 플라스미드로서 증식될 수 있다. 이들 벡터를 보유하는 세포가 파지 입자의 생성에 필수적인 모든 유전자를 구비할 때, 플라스미드의 복제 방식은 회전원 복제(rolling circle replication)로 변화하여 플라스미드 DNA의 한 가닥의 복제물을 생성하고, 파지 입자를 패키징한다. 파지미드는 감염성 또는 비감염성 파지 입자를 형성할 수 있다. 이 용어는 이종성 폴리펩타이드가 파지 입자 표면 상에 나타나도록 유전자 융합으로서 이종성 폴리펩타이드 유전자에 연결된 파지 외피 단백질 유전자 또는 이의 단편을 함유하는 파지미드를 포함한다.　본 명세서에 기재된 화합물은 약제학적으로 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 형태일 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 염은 무기 또는 유기산 또는 염기로부터 유래된다. 적합한 염의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Berge et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., A. Gennaro (ed.), Lippincott Williams & Wilkins (2000)]을 참조한다.
본 개시내용에서, "Ab"기(즉, 항체, 항체 단편, 및/또는 항원 단편)는 하나 초과의 약물-함유 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, "Ab"는 1 내지 20개의 약물-함유 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, "Ab"는 1 내지 10개의 약물-함유 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, "Ab"는 1 내지 5개의 약물-함유 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, "Ab"는 1 또는 2개의 약물-함유 모이어티에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, "Ab"는 1개의 약물-함유 모이어티에 접합될 수 있다.
본 명세서에 기재된 화합물은 약제학적으로 또는 약제학적으로 허용 가능한 염의 형태일 수 있다. 일부 실시형태에서, 이러한 염은 무기 또는 유기산 또는 염기로부터 유래된다. 적합한 염의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Berge et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., A. Gennaro (ed.), Lippincott Williams & Wilkins (2000)]을 참조한다.
적합한 산 부가염의 예는 아세트산염, 아디프산염, 알긴산염, 아스파르트산염, 벤조산염, 벤젠 설폰산염, 중황산염, 뷰티르산염, 시트르산염, 캄포산염, 캄포 설폰산염, 사이클로펜탄프로피온산염, 다이글루콘산염, 도데실황산염, 에탄설폰산염, 퓨마르산염, 루코헵탄산염, 글리세로인산염, 헤미황산염, 헵톤산염, 헥산산염, 염산염, 브로민화수소산염, 아이오딘화수소산염, 2-하이드록시에탄설폰산염, 락트산염, 말레산염, 메탄설폰산염, 2-나프탈렌설폰산염, 니코틴산염, 옥살산염, 파모산염, 펙틴산염, 과황산염, 3-페닐-프로피온산염, 피크르산염, 피발산염, 프로피온산염, 석신산염, 타르타르산염, 티오시안산염, 토실산염 및 운데칸산염을 포함한다.
적합한 염기 부가염의 예는 암모늄염; 알칼리금속염, 예컨대, 나트륨 및 칼륨염; 알칼리토금속 염, 예컨대, 칼슘 및 마그네슘염; 유기염기와의 염, 예컨대, 다이사이클로헥실아민염, N-메틸-D-글루카민; 및 아미노산, 예컨대, 알기닌, 라이신 등과의 염을 포함한다.
예를 들어, Berge는 다음의 FDA-승인된 상업적으로 시판되는 염을 열거한다: 음이온 아세트산염, 베실산염(벤젠설폰산염), 벤조산염, 중탄산염, 중타르타르산염, 브로민화물, 에데트산칼슘(에틸렌다이아민테트라아세트산), 캄실산염(캄퍼설폰산염), 탄산염, 염화물, 시트르산염, 중염산염, 에데트산염(에틸렌다이아민테트라아세트산염), 에디실산염(1,2-에탄다이설폰산염), 에스톨산염(라우릴황산염), 에실산염(에탄설폰산염), 퓨마르산염, 글루셉트산염(글루코헵톤산), 글루콘산염, 글루탐산염, 글리콜릴아르사닐산염(글리콜아미도페닐아르손산염), 헥실레조신산염, 하이드라바민(N,N'-다이(데하이드로아비에틸)에틸렌다이아민), 브로민화수소산염, 염산염, 하이드록시나프톤산, 아이오딘화물, 아세티온산(2-하이드록시에탄설폰산염), 락트산염, 락토바이온산염, 말레산염, 말레인산염, 만델산염, 메실산염(메탄설폰산염), 메틸브로민화물, 메틸질산염, 메틸황산염, 뮤케이트, 납실산염(2-나프탈렌설폰산염), 질산염, 파모산염(엠보산염), 판토텐산염, 인산염/이인산염, 폴리갈락투론산염, 살리실산염, 스테아르산염, 서브아세트산염, 석신산염, 황산염, 탄산염, 타르타르산염, 테오클레이트(8-클로로테오필린산염) 및 트라이에티오다이드; 유기 양이온 벤자틴(N,N'-다이벤질에틸렌다이아민), 클로로프로카인, 콜린, 다이에탄올아민, 에틸렌다이아민, 메글루민(N-메틸글루카민) 및 프로카인; 및 금속 양이온, 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨 및 아연.
Berge는 추가적으로 다음의 비-FDA 승인 상업적으로 시판되는(미국 이외) 염을 열거한다: 음이온 아디프산염, 알긴산염, 아미노살리실산염, 무수메틸렌시트르산염, 아레콜린, 아스파르트산염, 중황산염, 뷰틸브로마이드, 캄포산염, 다이글루콘산염, 다이하이드로브로마이드, 다이석시네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 하이드로플루오라이드, 하이드로아이오다이드, 메틸렌비스(살리실레이트), 나파다이실레이트(1,5-나프탈렌다이설포네이트), 옥살산염, 펙틴산염, 과황산염, 페닐에틸바르비투르산염, 피크르산염, 프로피온산염, 티오시안산염, 토실산염 및 운데칸산염; 유기 양이온 베네타민(N-벤질펜에틸아민), 클레미졸(1-p-클로로벤질-2-피롤리딘-1'-일메틸벤즈이미다졸), 다이에틸아민, 피페라진 및 트로메타민(트리스(하이드록시메틸)아미노메탄); 및 금속 양이온 바륨 및 비스무트.
본 명세서에 기재된 화합물은 또한 투여 방식에 따라 다를 수 있는 적합한 담체, 부형제 및 보조제를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 적합한 비경구 투약 형태로서 제형화될 수 있다. 상기 제형은 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 약제학적 조성물은 혈류에, 근육에 직접, 또는 기관에 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여를 위한 적합한 수단은 정맥내, 동맥내, 복강내, 척추강내, 심실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내 및 피하를 포함한다. 비경구 투여를 위한 적합한 장치는 바늘 주사기, 무바늘 주사기 및 주입 기법을 포함한다.
비경구 조성물은 전형적으로 부형제, 예컨대, 염, 탄수화물 및 완충제를 함유할 수 있는 수용액이다. 그러나, 조성물은 또한 멸균 비수성 용액으로서 또는 적합한 비히클, 예컨대 멸균 무발열원수와 함께 사용될 건조 형태로서 제형화될 수 있다.
멸균 조건 하에, 예를 들어, 동결건조에 의한 비경구 조성물의 제조는 당업자에게 잘 공지된 표준 기법을 이용하여 용이하게 달성될 수 있다.
비경구 투여를 위한 조성물은 즉시 및/또는 변형 방출되도록 제형화될 수 있다. 변형 방출 제형은 지연-, 지속-, 펄스-, 제어-, 표적화 및 프로그래밍된 방출을 포함한다. 따라서, 조성물은 활성제의 변형 방출을 제공하는 이식된 데포로서 투여하기 위한 고체, 반고체 또는 요변성 액체로서 제형화될 수 있다.
비경구 제형은 비경구 투약 형태로 사용되는 다른 적합한 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 예컨대, 이하로 제한되는 것은 아니지만, 보존제와 함께 혼합될 수 있다.
다른 실시형태에서, 약제학적 조성물은 적합한 경구 투약 형태, 예컨대, 정제, 캡슐, 분말, 펠릿, 현탁액, 용액, 에멀션 등으로서 제형화될 수 있다. 다른 적합한 담체, 예컨대, 붕해제, 희석제, 킬레이트제, 결합제, 활택제, 윤활제, 충전제, 증량제, 부착 방지제 등으로 제공될 수 있다.
경구 투약 제형은 또한 다른 적합한 약제학적 부형제, 예컨대, 감미제, 비히클/습윤제, 착색제, 향미제, 보존제, 점도 향상제/증점제 등을 함유할 수 있다.
본 개시내용의 약제학적 조성물의 용량은 개개 환자에게 맞춤될 수 있다.
지질 접합체
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식(VI)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공한다,
Figure pct00073
,
식 중:
a는 1 내지 20의 정수이고;
m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
n은 0 또는 1이며;
D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
각각의 R1은 C1-C4알킬, O-C1-C4알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며;
R2는 C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
R3 및 R3'는 각각 독립적으로 수소 및 C1-C3알킬로부터 선택되며;
L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
LP는 지질이다.
일부 실시형태에서, D-NH2는 STING 조절제이다. 일부 실시형태에서, D-NH2는 환식 다이뉴클레오타이드(CDN) 또는 CDN-유사 화합물이다. 일부 실시형태에서, D-NH2는 본 명세서에 기재된 화학식 중 하나이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 하기 화학식(VI)의 화합물을 제공하며, L은 하기 화학식을 갖고
Figure pct00074
;
식 중, W, Z, t, U, Q 및 U'는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
일부 실시형태에서, 화학식(VI)의 화합물은 지질 복합체와 회합된다. 용어 "지질 복합체"는 약제학적 화합물의 제조에서 당업계에 인식된 용어이다. 지질 복합체는 지질과 화학식(VI)의 화합물 사이의 비공유 결합을 특징으로 한다. 특정 이론으로 구속되는 일 없이, 화학식(VI)의 화합물은 정전기 상호작용, 친수성 상호작용, 소수성 상호작용 또는 이들의 임의의 조합을 통해 지질 복합체와 회합될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 지질 복합체는 지질 입자 형태를 취한다. 일 실시형태에서, 복합체는 지질 나노입자 형태이다. 일 실시형태에서, 복합체는 리포좀 형태이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 리포좀은 지질 단일층 또는 지질 다중층을 포함한다. 일부 실시형태에서, 리포좀은 지질 이중층 및 수성 코어를 포함한다. 일부 실시형태에서, 리포좀의 평균 입자 크기는 약 5㎚ 내지 약 1㎛이다. 일부 실시형태에서, 지질 나노입자 또는 리포좀의 평균 입자 크기는 약 5㎚ 내지 약 500㎚, 약 10㎚ 내지 약 150㎚, 및 약 30㎚ 내지 약 100㎚이다. 일부 실시형태에서, 화학식(V)의 화합물은 수성 코어, 지질 이중층, 또는 이들의 조합에 존재한다.
특정 실시형태에서, LP는 콜레스테롤 또는 인지질일 수 있다. 일부 실시형태에서, LP는 인지질이다. 일부 실시형태에서, 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 대두 인지질 및 난황 인지질로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 인지질은 포스파티딜에탄올아민이다. 일부 실시형태에서, 인지질은 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포릴에탄올아민이다.
일부 실시형태에서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 화학식(VI)의 화합물을 포함하는 지질 복합체를 제공한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 리포좀일 수 있다.
일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 0.5 내지 약 40㏖%의 화학식(VI)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 1 내지 약 35㏖%의 화학식(VI)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 1 내지 약 30㏖%의 화학식(VI)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 1 내지 약 20㏖%의 화학식(VI)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 1 내지 약 15㏖%의 화학식(VI)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함한다.
일부 실시형태에서, 지질 복합체는 1종 이상의 추가적인 인지질을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 스핑고마이엘린, 대두 인지질 및 난황 인지질로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 30 내지 약 90㏖%의 1종 이상의 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 40 내지 약 85㏖%의 1종 이상의 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 50 내지 약 80㏖%의 1종 이상의 인지질을 포함한다.
일부 실시형태에서, 지질 복합체는 지방 알코올 또는 콜레스테롤을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 5 내지 약 35㏖%의 콜레스테롤을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 5 내지 약 30㏖%의 콜레스테롤을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 5 내지 약 25㏖%의 콜레스테롤을 포함한다.
일부 실시형태에서, 지질 복합체는 적어도 1종의 페길화된 인지질을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 적어도 1종의 페길화된 지질은 페길화된 인지질이다. 일부 실시형태에서, 페길화된 인지질은 N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 5000)-1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-1,2-다이팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 5000)-1,2-다이팔미토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-1,2-다이미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 5000)-1,2-다이미리스토일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민, N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-다이스테아로일-rac-글리세롤, 및 N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 5000)-다이스테아로일-rac-글리세롤, 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 혼합물로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 페길화된 인지질은 N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민이다.
일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 0 내지 약 6㏖%의 1종 이상의 페길화된 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 0.5 내지 약 5㏖%의 1종 이상의 페길화된 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 1 내지 약 5㏖%의 1종 이상의 페길화된 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 3㏖%의 1종 이상의 페길화된 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 4㏖%의 1종 이상의 페길화된 인지질을 포함한다. 일부 실시형태에서, 지질 복합체는 약 5㏖%의 1종 이상의 페길화된 인지질을 포함한다.
화합물 및 조성물의 사용 방법
본 명세서에 기재된 특정 화합물은 STING 작용제이고, 따라서, 면역 반응의 자극이 필요한 대상체에서 면역 반응을 자극하는 데 유용하다. 조성물은 바이러스 치료에 사용될 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 STING 조절/작용제 활성을 나타낸다. 본 개시내용의 특정 화합물은 효능 발현, 약물동력학(예를 들어, 흡수, 분포, 대사, 배설), 용해도(예를 들어, 수 용해도), 다른 의약과의 상호작용(예를 들어, 약물-대사 효소 저해 작용), 안전성(예를 들어, 급성 독성, 만성 독성, 유전적 독성, 생식 독성, 심장독성, 발암성, 중추 독성) 및/또는 안정성(예를 들어, 화학적 안정성, 효소에 대한 안정성)에 관해 우수할 수 있으며, 의약으로서 유용할 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 포유류(예를 들어, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼, 고양이, 개, 소, 양, 원숭이, 인간)에서 STING 활성을 증가시키는 데 사용될 수 있다.
본 개시내용의 화합물은 STING에 의해 영향받을 수 있는 질환(본 명세서에서, 때때로 "STING-관련 질환"으로서 약칭됨), 예를 들어, 암 - 예를 들어, 결장직장암(예를 들어, 결장직장암, 직장암, 항문암, 가족성 결장직장암, 유전성 비용종성 결장직장암, 위장관 간질성 종양), 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 악성악성 중피종), 중피종, 췌장암(예를 들어, 췌장관 암종, 췌장 내분비 종양), 인두암, 후두암, 식도암, 위암(예를 들어, 유두모양샘암종, 점액성선암종, 샘평편상피암종), 십이지장암, 소장암, 유방암(예를 들어, 침윤성 유관암종, 비-침윤성 유관암종, 염증성 유방암), 난소암(예를 들어, 난소 상피암, 생식샘외종자세포종, 난소 배아 세포 종양, 난소 저등급 악성 종양), 고환 종양, 전립선암(예를 들어, 호르몬 의존적 전립선암, 비-호르몬 의존적 전립선암, 거세-저항성 전립선암), 간암(예를 들어, 간세포암, 원발성 간암, 간외담관암), 갑상선암(예를 들어, 갑상선 수질암), 콩팥암(예를 들어, 신세포암(예를 들어, 투명세포 신세포암), 신우 및 요관의 이행세포암), 자궁암(예를 들어, 자궁경부암, 자궁체암, 자궁 육종), 임신융모질환, 뇌 종양(예를 들어, 수모세포종, 신경교종, 송과성 우상종양, 모양세포성 성상세포종, 미만성 성상교종, 악성 성상세포종, 뇌하수체 선종), 망막모세포종, 피부암(예를 들어, 기저세포종, 악성 흑색종), 육종(예를 들어, 횡문근육종, 평활근육종, 연조직 육종, 방추 세포 육종), 악성 뼈 종양, 방광암, 혈액암(예를 들어, 다발성 골수종, 백혈병(예를 들어, 급성 골수성 백혈병), 악성 림프종, 호지킨병, 만성 골수증식성 질환), 원발부위 불명암의 예방 또는 치료를 위한 제제; 암 성장 저해제; 암 전이 저해제; 세포자멸사 촉진제; 전암성 병변(예를 들어, 골수형성이상 증후군)의 치료를 위한 제제 등과 같은 의약으로서 사용될 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용의 화합물은 결장직장암, 유방암, 피부암, 악성 림프종 또는 폐암에 대한 의약으로서 사용될 수 있다.
더 나아가, 본 개시내용의 화합물 또는 본 개시내용의 조합제는 비약물 요법과 동시에 사용될 수 있다. 정확함을 위해, 본 개시내용의 화합물 또는 본 개시내용의 조합제는 비-약물 요법, 예컨대, (1) 수술, (2) 안지오텐신 II 등을 이용하는 고혈압 화학요법, (3) 유전자 요법, (4) 온열요법, (5) 신장분사치료, (6) 레이저 소작(cauterization) 및 (7) 방사선요법과 조합될 수 있다.
예를 들어, 상기 언급한 수술 전에 또는 후에, 또는 이들의 둘 또는 세가지 종류의 조합 치료 전에 또는 후에 본 개시내용의 화합물을 이용함으로써, 저항성 출현의 방지, 무질환 생존의 연장, 암 전이 또는 재발의 억제, 수명 연장 등과 같은 효과가 얻어질 수 있다.
또한, 본 개시내용의 화합물 또는 본 개시내용의의 조합제에 의한 치료와 지지요법: (i) 다양한 감염성 질환에 의한 합병증에 대한 항생제(예를 들어, β-락탐형, 예컨대, 판스포린 등, 매크로라이드형, 예컨대, 클라리트로마이신 등) 투여, (ii) 영양실조 개선을 위한 고열량 투입, 아미노산 제제 또는 일반적 비타민 제제의 투여, (iii) 통증 완화를 위한 몰핀의 투여, (iv) 부작용, 예컨대, 구역, 구토, 식욕부진, 설사, 백혈구감소증, 혈소판 감소증, 감소된 헤모글로빈 농도, 탈모, 간장애, 신장병증, DIC, 발열 등을 개선시키기 위한 약제학적 제제의 투여 및 (v) 암의 다약제내성을 억제하기 위한 약제학적 제제의 투여 등을 조합할 수 있다.
실시예
일반적 합성 방법 및 중간체
본 개시내용의 화합물은 본 개시내용 및 당업계의 지식에 비추어 당업자에 의해, 그리고/또는 이하에 나타내는 반응식 및 합성 실시예를 참조로 하여 제조할 수 있다. 예시적인 합성 경로를 이하의 반응식 및 실시예에 제시한다. 다음의 반응식 및 실시예에 나타내는 변수(예를 들어, "R" 기)는 본 출원 어디에서나 나타나는 것과 독립적으로 해석되어야 한다는 것을 이해하여야 한다. 당업자는 이하에 나타내는 반응식 및 실시예가 본 명세서에 기재된 화합물의 제조를 설명할 수 있다는 것을 용이하게 이해한다.
반응식 1: 카복실산을 대응하는 산염화물 또는 (아이소뷰틸 카본) 프로피온 무수물로 전환시키기 위한 일반적 경로
Figure pct00075
반응식 1은 카복실산 i을 대응하는 산염화물 또는 (아이소뷰틸 카본) 프로피온 무수물, 예컨대, ii로 활성화시키기 위한 일반적 경로를 나타내며, 여기서, Yc는 알킬 또는 방향족 쇄이고, R6은 메틸 또는 폴리에터-함유 알킬쇄이다. ii의 제조(여기서, E는 OCO2CH2CH(CH3)2임)는 염기의 존재 하에 i을 아이소뷰틸 클로로포메이트로 처리함으로써 달성될 수 있다. E가 Cl일 때, ii의 형성은 i을 염화옥살릴로 또는 Ghosez 시약으로 처리함으로써 달성된다(문헌[α-Chloro enamines, reactive intermediates for synthesis: 1-Chloro-N,N,2-trimethylpropenylamine. Haveaux B., et al. Org. Synth. 1980, 59, 26.] 참조).
반응식 2: 단계 접근을 이용하여 약물 모이어티의 아미노기에 스페이서를 부착하기 위한 일반 경로
Figure pct00076
반응식 2는 약물 모이어티, 예컨대, iii에서 아미노기에 스페이서, 예컨대, ii를 부착하기 위한 일반적 방법을 나타낸다. 트라이메틸 실릴클로라이드 및 피리딘으로 처리함으로써 화합물 iii을 전반적 실릴 보호로 처리한 후에, 이를 활성화된 스페이서 ii와 반응시킨다. NEt3-3HF에 의한 실릴기의 제거는 iv를 제공한다. iv의 아민의 탈보호는 TFA 또는 HCl과 같은 산에 의한 처리에 의해 달성되며, 얻어진 아민 염은 활성화된 다이펩타이드 카보네이트 v로 처리되어 vi를 제공한다.
반응식 3: 단계 접근을 이용하여 약물 모이어티의 아미노기에 스페이서를 부착하기 위한 일반 경로
Figure pct00077
반응식 3은 약물 모이어티, 예컨대, iii-a에서 아미노기에 스페이서, 예컨대, ii를 부착하기 위한 일반적 방법을 나타내며, 여기서, X1 및 X2는 산소, 황 또는 CH2이고, X3은 질소 또는 CH이며, R3은 수소 또는 플루오로이며, R4는 하이드록실, 수소, 플루오로이거나, 또는 R3과 함께 OCH2를 형성하고, Rc는 OH 또는 SH이며, Rd는 메틸 또는 (CH2)3NHC(O)NH2이다. 트라이메틸 실릴클로라이드 및 피리딘으로 처리함으로써 화합물 iii-a를 전반적 실릴 보호로 처리한 후에, 이를 활성화된 스페이서 ii와 반응시킨다. NEt3-3HF에 의한 실릴기의 제거는 iv-a를 제공한다. iv-a의 아민의 탈보호는 TFA 또는 HCl과 같은 산에 의한 처리에 의해 달성되며, 얻어진 아민 염은 활성화된 다이펩타이드 카보네이트 v로 처리되어 vi-a를 제공한다.
반응식 4: 단계 접근을 이용하여 약물 모이어티의 아미노기에 스페이서를 부착하기 위한 일반 경로
Figure pct00078
반응식 4는 반응식 3에 기재한 일반적 방법 후에 약물 모이어티, 예컨대, iii-b에서 아미노기에 스페이서, 예컨대, ii를 부착하기 위한 일반적 방법을 나타낸다.
반응식 5: 스페이서 펩타이드 산염화물을 생성하기 위한 일반적 경로
Figure pct00079
반응식 5는 산염화물 viii의 제조를 위한 일반적 방법을 나타낸다. 산, 예컨대, TFA 또는 HCl을 이용하는 Boc-아민 i의 탈보호 다음에 활성화된 카보네이트 v에 의한 처리로 카복실산 vii를 제공한다. vii의 산염화물 viii로의 전환은 염화옥살릴 또는 염화설폰일에 의한 처리에 의해 달성될 수 있다.
반응식 6: 약물 모이어티의 아미노기에 스페이서를 부착하기 위한 대안의 일반적 경로
Figure pct00080
반응식 6은 페이로드 iii을 화합물 ix로 직접 전환하기 위한 대안의 일반적 방법을 나타낸다. 트라이메틸실릴 클로라이드에 의한 전반적 실릴 보호 후에, iii은 산염화물 viii로 처리된다. 실릴기의 제거로 ix를 제공한다.
반응식 7: 약물 모이어티의 아미노기에 스페이서를 부착하기 위한 대안의 일반적 경로
Figure pct00081
반응식 7은 반응식 6에 기재한 일반적 방법 후 페이로드 iii-a를 화합물 ix-a로 직접 전환하기 위한 대안의 일반적 방법을 나타낸다.
반응식 8: 약물 모이어티의 아미노기에 스페이서를 부착하기 위한 대안의 일반적 경로
Figure pct00082
반응식 8은 반응식 6에 기재한 일반적 방법 후에 약물 모이어티, 예컨대, iii-b에서 아미노기에 스페이서를 부착하기 위한 대안의 일반적 방법을 나타낸다.
반응식 9: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00083
반응식 9는 vi로부터 링커-페이로드 xi를 제조하기 위한 일반적 방법을 나타내며, 여기서, Yd는 선형 또는 분지형 알킬쇄 또는 폴리에터쇄이고, Z는 접합 핸들, 예컨대, 말레이미드, BCN 또는 DBCO이다. 산, 예컨대, TFA 또는 HCl에 의한 vi의 아민의 탈보호 다음에 활성화된 에스터 x와의 반응이 이어져서 링커-페이로드 xi를 제공한다.
반응식 10: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00084
반응식 10은 반응식 9에 기재된 일반적 방법 후 vi-a로부터 링커-페이로드 xi-a를 제조하는 일반적 방법을 나타낸다.
반응식 11: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00085
반응식 11은 반응식 9에 기재한 일반적 방법 후 화합물, 예컨대, vi-b에 접합 핸들을 부착하는 일반적 방법을 나타낸다.
반응식 12: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00086
반응식 12는 iv로부터 링커-페이로드 xi를 제조하는 대안의 방법을 나타낸다. 산, 예컨대, TFA 또는 HCl에 의한 iv의 아민의 탈보호 다음에 반응 xii이 이어져서 xi을 얻는다.
반응식 13: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00087
반응식 13은 반응식 12에 기재한 일반적 방법 후 iv-a로부터 링커-페이로드 xi-a를 제조하는 대안의 방법을 나타낸다.
반응식 14: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00088
반응식 14는 글루쿠로니데이트-함유 링커 페이로드 xvi를 제조하기 위한 일반적 방법을 나타낸다. 산, 예컨대, TFA 또는 HCl에 의한 iv의 아민의 탈보호 다음에 활성화된 카보네이트 xiii과의 반응이 이어져서 xiv를 제공한다. 염기, 예컨대, 수산화리튬에 의한 전반적 아세트산염 가수분해 및 xiv에서의 FMOC기의 제거로 xv를 제공한다. 활성화된 접합 핸들 x에 의한 xv의 처리로 글루쿠로니데이트-함유 링커 페이로드 xvi를 얻는다.
반응식 15: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00089
반응식 15는 반응식 14에 기재한 일반적 방법 후 글루쿠로니데이트-함유 링커 페이로드 xvi-a를 제조하기 위한 일반적 방법을 나타낸다.
반응식 16: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00090
반응식 16은 말단의 아민-함유 링커 페이로드 xviii을 제조하기 위한 일반적 방법을 나타내며, 여기서, Ye는 선형 알킬 쇄 또는 폴리에터-함유 알킬 쇄이다. 산, 예컨대, TFA 또는 HCl에 의한 vi의 아민의 탈보호 다음에 활성화된 접합 핸들 xvii과의 반응이 이어진다. 산, 예컨대, TFA에 의한 말단 보호기의 제거로 말단의 아민-함유 링커 페이로드 xviii을 얻는다.
반응식 17: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00091
반응식 17은 반응식 16에 기재된 일반적 방법 후 말단의 아민-함유 링커 페이로드 xviii-a를 제조하기 위한 일반적 방법을 나타낸다.
반응식 18: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00092
반응식 18은 다이펩타이드 스페이서를 혼입하는 링커 페이로드, 예컨대, xxii를 제조하는 일반적 방법을 나타내며, 여기서, R7은 수소, 알킬 또는 방향족 모이어티이다. 화합물 iii은 트라이메틸 실릴 클로라이드 및 피리딘으로 처리함으로써, 전반적으로 보호되고, 이어서, Boc-프롤린 석신이미드 에스터로 처리된다. 플루오라이드 공급원, 예컨대, NEt3-3HF에 의한 실릴기의 제거로 xix를 제공한다. 산, 예컨대, TFA 또는 HCl에 의한 xix의 아민의 탈보호 다음에 석신이미드 에스터 활성화된 아미노산 xx와의 반응으로 xxi을 제공한다. 산, 예컨대, TFA 또는 HCl에 의한 xxi의 탈보호 다음에 말레이미드 핸들의 설치로 링커 페이로드 xxii를 얻는다.
반응식 19: 링커-페이로드의 제조를 위한 일반적 경로
Figure pct00093
반응식 19는 반응식 18에 기재된 일반적 방법 후 링커 페이로드, 예컨대, xxii-a를 제조하기 위한 일반적 방법을 나타낸다.
예시적인 ADC 및 중간체의 제조
정의
AA 아세트산암모늄을 이용하는 LCMS 방법
Ac 아세트산염
ACN 아세토나이트릴
atm 대기
aq 수성
BCN 바이사이클로[6.1.0]노닌
BLQ 정량 하한
Bn 벤질
Boc tert-뷰톡시카보닐
tBu tert-뷰틸
Bz 벤조일
C 섭씨
calcd 계산치
Cbz 벤질옥시카보닐
DAR 약물 항체비
DBCO 다이벤조사이클로옥틴
DCC N,N-다이사이클로헥실카보다이이미드
DCM 다이클로로메탄
DIPEA N,N-다이아이소프로필에틸아민
DMAP 4-다이메틸아미노피리딘
DMA N,N-다이메틸아세트아마이드
DMB 2,4-다이메톡시벤질
DMF N,N-다이메틸폼아마이드
DMSO 다이메틸설폭사이드
DTT 다이티오트레이톨
ε 흡광 계수
E 0.1% 0.1% 용액 흡광 계수
EDC 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드
EDTA 에틸렌다이아민테트라아세트산
Et 에틸
EtOH 에탄올
EtOAc 에틸 아세테이트
FA 폼산을 이용하는 LCMS 방법
Fmoc 플루오렌일메틸옥시카보닐
h 시간
HATU 1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트
HIC 소수성 상호작용 크로마토그래피
HOAt 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸
HPLC 고압 액체 크로마토그래피
HRMS 고분해능 질량분석법
IC50 저해 농도 50%
LC 액체 크로마토그래피
LCMS 액체 크로마토그래피 질량분석법
m/z 질량 대 전하
㎒ 메가 헤르츠
Me 메틸
MeOH 메탄올
μM 마이크론
min 분
㎖ 밀리리터
MS 질량분석법
MWCO 분자량 컷오프
NMR 핵자기 공명
PBS 인산염 완충 식염수
PE 석유 에터
Ph 페닐
psi 평방인치당 파운드
psig 평방인치 게이지당 파운드
Pyr 피리딘
QTOF 사중극자 시간비행
rt 실온
SEC 크기 배제 크로마토그래피
SFC 초임계 유체 크로마토그래피
TBS tert-뷰틸다이메틸실릴
TCEP (트리스(2-카복시에틸)포스핀)
TEA 트라이에틸아민
TFA 트라이플루오로아세트산
THF 테트라하이드로퓨란
TIPS 트라이아이소프로필실릴
TMS 트라이메틸실릴
Tris 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄
UPLC 초성능 액체 크로마토그래피
분석 방법
NMR 조건:
달리 언급되지 않는 한 400 ㎒ Bruker 분광기 상에서 1H NMR 스펙트럼을 획득하였다. 달리 언급되지 않는 한 400 ㎒ Bruker 분광기 상에서 162 ㎒에서 31P NMR 스펙트럼을 기록하고, 1H 디커플링을 획득하였다. 달리 언급되지 않는 한 400 ㎒ Bruker 분광기 상에서 376 ㎒에서 19F NMR 스펙트럼을 기록하였다.
HRMS 조건:
Osaka Soda Capcell PAK C1 UG120(5㎛, 2.0㎜ ID×35 ㎜ 길이) 역상 칼럼을 갖는 Agilent 1260 Infinity II Bio-inert 멀티샘플러, Bio-inert 칼럼 구획, Bio-inert 쿼터너리 펌프, DAD 다파장 검출기 및 Agilent 6545 LC-QTOF 질량분석법 기기를 이용하여 HRMS 스펙트럼을 획득하였다. LC에 대한 용매 시스템은 이동상 A에 대해 수 중 0.1% 폼산, 및 이동상 B에 대해 아세토나이트릴 중 0.1% 폼산, 또는 동등한 용매 시스템으로 이루어진다. 전형적으로, 95%/5% 이동상 A/B 비에서 LC 용리를 시작하였다. 등용매 유동 간격, 전형적으로 0.5분 후에, 이동상을 1.5분의 선형 구배에 걸쳐 100% B로 바꾸었다. 유속은 5분 실행에 대해 0.7㎖/분이었다.
전형적으로, DMSO 중 2㎕의 1mM 용액을 질량 분광기에 주사하였다. QTOF 세팅: 기체 온도 35℃, 건조 기체 유동 속도 = 10ℓ/분, 네뷸라이저 압력 55 psig, 시스(sheath) 기체 온도 및 유동은 각각 35℃ 및 12ℓ/분이었다. 다음의 전압 세팅을 적용하였다: 모세관 전압 4500V, 노즐 전압 2000V, 단편화 전압 75V.
Agilent Mass Hunter 정성적 분석 소프트웨어, 버전 8.07.00 SP2를 이용함으로써 데이터를 분석하였다. 질량 오차[ppm]를 정확한 질량과 관찰된 질량 간의 차이를 정확한 질량으로 나누고 1×106을 곱하는 것으로 표현하였다.
LCMS 조건:
역상 C18 칼럼을 이용하여 Micromass 질량 분광기에 연결된 Hewlett-Packard HP1100 또는 Agilent 1100 Series LC 시스템 상에서 LCMS 스펙트럼을 기록하였다. 화합물을 최고로 특성규명하기 위해 다양한 구배 및 실행 시간을 선택하였다. 이동상은 ACN/물 또는 MeOH/물 구배에 기반하였고, 0.1% 폼산(FA로서 표시된 바와 같은 방법) 또는 10mM 아세트산암모늄(AA로서 표시된 바와 같은 방법) 중 하나를 함유하였다. 사용한 용매 구배의 일례는 16.5분 실행 동안 1㎖/분의 유속에서 100% 이동상 A(이동상 A = 99% 물 + 1% ACN + 0.1% 폼산) 내지 100% 이동상 B(이동상 B = 95% ACN + 5% 물 + 0.1% 폼산)였다.
일부 경우에, LCMS 스펙트럼을 Agilent 6130 질량 분광기에 연결된 Agilent 1290 Infinity UPLC 시스템, Waters Acquity SQ 질량 분광기에 연결된 Waters Acquity UPLC 시스템, 또는 역상 C18 칼럼을 이용하여 Waters Micromass ZQ 질량 분광기에 연결된 Agilent 1100 Series HPLC 시스템 상에서 기록하였다. 화합물을 최고로 특성규명하기 위해 다양한 구배 및 실행 시간을 선택하였다.　이동상은 ACN/물 또는 MeOH/물 구배에 기반하였고, 0.1% 폼산(FA로서 표시된 바와 같은 방법) 또는 10mM 아세트산암모늄(AA로서 표시된 바와 같은 방법) 중 하나를 함유하였다.　사용한 용매 구배의 일례는 5분 실행 동안 0.5㎖/분의 유속에서 95% 이동상 A(이동상 A = 99% 물 + 1% ACN + 0.1% 폼산) 내지 100% 이동상 B(이동상 B = 95% ACN + 5% 물 + 0.1% 폼산)였다.
분취 HPLC:
200㎚ 내지 400㎚로 설정한 UV/가시광선 155 검출기 촉발 분획과 함께 322 펌프에 의해 작동되는 Gilson 기기를 이용하여 물-ACN 구배로 용리하는 18x150㎜ Sunfire C-18 칼럼을 이용하여 분취 HPLC 분리를 수행하였다.　Agilent 1100 LC/MSD 기기 상에서 질량 개폐 분획 수집을 수행하였다.
당업자는 구배, 칼럼 길이 및 유속의 변형이 가능하며, 일부 조건은 분석 중인 화학적 종에 따라서, 다른 것보다 화합물 특성규명에 더 적합할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
분취 SFC:
0.3% 다이에틸아민, 0.3% TEA, 0.3% 폼산 중 하나를 함유하거나 또는 임의의 산 또는 염기 첨가제 없이 초임계 이산화탄소 및 알코올의 적절한 백분율로 용리하는 10, 20 또는 30㎜×250㎜ ChiralPak 칼럼(전형적으로 IA, IB, IC, ID, IE 및 IF), 10 또는 20㎜×250㎜ Phenomenex Lux 셀룰로스-4 또는 2-에틸피리딘 칼럼을 이용하여 분취 SFC를 수행하였다. 10 내지 100㎖/분 범위의 유속 및 40℃의 칼럼 온도를 갖는 등용매 조건이 전형적이다. 200㎚ 내지 400㎚로 설정한 UV/가시광선 촉발 분획 수집 및 10㎫로 설정한 배압 조절을 이용하는 Jasco SFC 분취 정제 시스템 상에서 분취 SFC를 수행한다.
당업자는 구배, 칼럼 길이 및 유속의 변형이 가능하며, 일부 조건은 분석 중인 화학적 종에 따라서, 다른 것보다 화합물 특성규명에 더 적합할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
분석 SEC 조건:
280㎚에서 SEC 칼럼(전형적으로 Tosoh Biosep TSK 겔, G3000SWxl; P/N 8541; 250A; 5㎛; 7.8㎜×300㎜)을 이용하는 다이오드 어레이 검출기를 갖는 Hewlett-Packard HP1100 또는 Agilent 1100 시리즈 LC 시스템 상에서 SEC 스펙트럼을 기록하였다. 이동상은 100mM 인산나트륨, 300mM 염화나트륨, pH 6.8, 10% 아세토나이트릴(v/v) 또는 1xPBS였다. 전형적 실행은 20분 동안 1㎖/분의 유속에서 등용매였다.
분석 HIC 조건:
280㎚에서 HIC 칼럼(전형적으로 Tosoh 뷰틸-NPR, 4.6×35 ㎜, 2.5 um, P/N: 14947)을 이용하는 다이오드 어레이 검출기를 갖는 Hewlett-Packard HP1100 또는 Agilent 1100 시리즈 LC 시스템 상에서 HIC 스펙트럼을 기록하였다. 이동상 A는 25mM 인산나트륨, 1.5 M 황산암모늄, pH 7이었고, 이동상 B는 75% 25mM 인산나트륨, pH 7, 25% 아이소프로판올이었다. 전형적인 20분 실행에 대해, 등용매 유동의 초기 간격과 최종 간격 사이에 95%/5% A/B 내지 100%B의 12분 선형 구배를 사용하였다.
LC-QTOF 조건:
80℃로 가열한 역상 칼럼(전형적으로 Agilent, PLRP-S, 5㎛, 1000Å, 2.1 ㎜×50㎜)을 이용하여 Agilent 6545 QTOF 질량 분광기에 연결된 Agilent 1260 Bioinert 시리즈 LC 시스템 상에서 LCMS 스펙트럼을 기록하였다. 화합물을 최고로 특성규명하기 위해 다양한 구배 및 실행 시간을 선택하였다. 이동상은 ACN/물 구배에 기반하고, 0.1% 폼산을 함유하였다. 사용한 용매 구배의 일례는 표 1에 나타내는 조건으로 95% 이동상 A(이동상 A = 99% 물 + 1% ACN + 0.1% 폼산) 내지 100% 이동상 B(이동상 B = 95% ACN + 5% 물 + 0.1% 폼산)였다.
Figure pct00094
샘플은 무손상 또는 환원(37℃에서 30분 동안 4㎕의 0.5M DTT 용액으로 처리한 20㎕의 1 내지 5㎎/㎖ ADC)이었다. 단백질 분자량(들)을 얻기 위해 Agilent BioConfirm 소프트웨어를 이용하여 적절한 질량 범위 내에서 원 데이터를 디콘볼팅하였고, Agilent DAR 계산기를 사용하여 DAR을 계산하였다.
LC/MS/MS 조건:
Shimadzu UFLC LC-20AD XR 이원 펌프 및 SIL-30AC MP 오토샘플러 시스템 및 AB SCIEX Triple Quad 4500 ESI 질량분석법을 이용하여 LC/MS/MS 분석을 수행하였다.
전형적으로, Waters Xselect C18 CSH 3.5u 2.1 ㎜ ID×30㎜ 칼럼을 통해 통과시킨 후에 5㎕ 샘플 분취액을 LC/MS/MS에 주사하였다. 이동상 A는 수 중 0.1% 폼산을 함유하였고, 이동상 B는 95% 아세토나이트릴과 함께 5% 물 중의 0.1% 폼산을 함유하였다. 총 실행 시간은 1.5분 유속에 걸쳐 100% A 내지 100% B의 선형 구배로 1.5㎖/분에서 3분이었다. 초기에, 기기는 0.5분 동안 100% 수성 이동상 용매에서 실행하였고, 이어서, 이를 다음 1.5분에 100% 유기 용매로 증가시켰다.
분취 SEC:
SEC 칼럼(전형적으로 GE Superdex 200 Increase 10/300 GL)을 이용하는 UV 검출기를 갖는 Gilson 분취 HPLC 시스템 상에서 분취 SEC 정제를 수행하였다. 이동상은 1xPBS(pH 7.4)였다. 전형적 실행은 30분 동안 1㎖/분의 유속에서 등용매였다. 분획 수집은 (214 및 280㎚에서) UV 역치에 기반하여 촉발되었다.
ADC 농도:
대응하는 링커-페이로드 작제물로부터의 UV 흡광도의 차감 후에 NanoDrop (2000c; Fisher Scientific) 상관계수에 의해 측정된 280㎚에서의 UV 흡광도로부터 ADC 농도를 계산하였다.
실시예 1
tert-뷰틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 1)
Figure pct00095
단계 1: 2-(((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)메틸)벤조산
1,4-다이옥산(136㎖) 중의 2-[(메틸아미노)메틸]벤조산(7.50g, 44m㏖) 및 물(182㎖) 중의 1N 수산화나트륨 용액에 다이-tert-뷰틸 다이카보네이트(19.2g, 88m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축시켜 유기 용매를 제거하고, 1N HCl을 이용하여 pH를 pH 3으로 조절하였다. 조질의 생성물을 EtOAc(3×)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4) 나서, 여과 후, 증발시켰다. 조질의 화합물을 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 50% EtOAc/DCM)에 의해 정제하여 2-(((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)메틸)벤조산(8.88g, 75%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 264.1 (M-H).
단계 2: tert-뷰틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트, 중간체 1
1-클로로-N,N,2-트라이메틸프로펜일아민(0.52㎖, 4.0m㏖)을 0℃에서 DCM(16㎖) 중 2-(((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)메틸)벤조산(525㎎, 2.0m㏖)의 용액에 서서히 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시켜 조질의 tert-뷰틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 1, 562㎎, 100%)를 제공하였다.
실시예 2
tert-뷰틸 N-[[2-(2-클로로-2-옥소-에틸)페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 2)
Figure pct00096
단계 1: 2-[2-[[tert-뷰톡시카보닐(`메틸)아미노]메틸]페닐]아세트산
THF(20㎖) 중 2-(2-(((tert-뷰톡시카보닐)아미노)메틸)페닐)아세트산(1.50g, 5.7m㏖) 용액에 아이오도메탄(2.8㎖, 45.2m㏖)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 수소화나트륨(광유 중 60% 분산물, 905㎎, 22.6m㏖)을 3부분으로 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 물로 반응 혼합물을 반응 중단시키고, 유기 용매를 농축에 의해 제거하였다. 수성상을 1N HCl을 이용하여 pH 3으로 산성화시키고, 조질의 생성물을 Et2O(2×)로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 후, 증발시켜 2-[2-[[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]메틸]페닐]아세트산(1.36g, 86%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 280.2 (M+H).
단계 2: tert-뷰틸 N-[[2-(2-클로로-2-옥소-에틸)페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 중간체 2
2-[2-[[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]메틸]페닐]아세트산(650㎎, 2.33m㏖)으로 시작하여 실시예 1, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여 조질의 중간체 2(693㎎, 100%)를 제공하였다.
실시예 3
아이소뷰톡시카보닐 4-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]뷰타노에이트(중간체 3)
Figure pct00097
단계 1: 4-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)부탄산
2-(2-(((tert-뷰톡시카보닐)아미노)메틸)페닐)아세트산 대신에 4-(tert-뷰톡시카보닐아미노)부탄산(2.92g, 14.4m㏖)을 이용하여 실시예 2, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여 4-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)부탄산(2.89g, 93%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 216.1 (M-H).
단계 2: 아이소뷰톡시카보닐 4-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]뷰타노에이트, 중간체 3
DCM(7㎖) 중에 용해시키고, 0℃까지 냉각시킨 4-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)부탄산(360㎎, 1.57m㏖) 및 트라이에틸아민(0.24㎖, 1.73m㏖)의 용액에 아이소뷰틸 클로로포메이트(0.22㎖, 1.73m㏖)를 적가하였다. 첨가 완료 시, 반응 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축건조시켜 조질의 아이소뷰톡시카보닐 4-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]뷰타노에이트(중간체 3, 499㎎, 100%)를 제공하였다.
실시예 4
4-(tert-뷰톡시카보닐아미노)부탄산을 표 2에 나타낸 출발 물질로 대체하여, 이하에 열거하는 화합물을 실시예 3에 기재한 바와 같이 제조하였다.
Figure pct00098
실시예 5
N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}-2-[(메틸아미노)메틸]벤즈아마이드(중간체 6)
Figure pct00099
단계 1: tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트
N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 2-아미노-9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-1,9-다이하이드로-6H-퓨린-6-온(화합물 I-5c, PCT/IB2018/058846 참조, 160㎎, 0.19m㏖)를 건조 피리딘 중에 용해시키고, 농축건조시키고(3×2㎖), 이어서, 15분 동안 진공 하에 두었다. 잔사를 피리딘(3㎖) 중에 아르곤 분위기 하에 용해시키고, 클로로트라이메틸실란(0.15㎖, 1.13m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 피리딘(3㎖) 중에 용해시킨 중간체 1(800㎎, 2.82m㏖)을 주사기를 통해 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 아르곤 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, MeOH(10㎖) 및 수산화암모늄(수 중 28 내지 30% 용액, 10㎖)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축건조시키고, 잔사를 MeOH(15㎖) 중에 용해시켰다. 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(0.12㎖, 0.75m㏖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 셀라이트 상에 흡착시키고, 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 50% ACN/수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM))에 의해 정제하여 N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(120㎎, 58%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 897.3 (M+H). 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ 8.70 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.41 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 1H), 7.33 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.85(d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.17 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.64 - 5.58 (m, 1H), 5.49 - 5.44 (m, 1H), 5.08 - 5.02 (m, 1H), 4.88 - 4.78 (m, 1H), 4.76 - 4.67 (m, 2H), 4.37 - 4.21 (m, 3H), 4.06 - 4.00 (m, 1H), 3.83 - 3.74 (m, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.60 - 2.32 (m, 4H), 1.54 - 1.46 (m, 1H), 1.42 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, CD3OD) δ 55.19 (s, 1P), 53.20 (s, 1P).
단계 2: N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}-2-[(메틸아미노)메틸]벤즈아마이드, 중간체 6
N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(50㎎, 0.045m㏖)를 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 트라이플루오로아세트산(0.24㎖, 3.2m㏖) 및 DCM(0.58㎖)의 용액을 주사기를 통해 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, 진공 하에 2시간 동안 두어서 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 중간체 6(41㎎, 100%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 797.1 (M+H).
실시예 6
4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 화합물 1(C-1)
Figure pct00100
단계 1: 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 중간체 7
DMF(0.38㎖) 및 트라이에틸아민(0.055㎖, 0.40m㏖) 중 tert-뷰틸옥시카보닐-발릴-알라닐-(4-아미노벤질)-(4-나이트로페닐)카보네이트(58㎎, 0.10m㏖) 및 4-다이메틸아미노피리딘(12㎎, 0.10m㏖)의 용액에 DMF(1.5㎖) 중 중간체 6(45㎎, 0.05m㏖)의 용액을 rt에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반하였다. 셀라이트를 첨가하고, 혼합물을 농축건조시켰다. 셀라이트 상에 흡후된 조질의 잔사를 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 40% ACN/수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM))에 의해 정제하여 N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(중간체 7, 10㎎, 16%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1216.3 (M+H). 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ 8.70 (s, 1H), 8.43 (brs, 1H), 8.40 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 3H), 7.42 - 7.38 (m, 1H), 7.32 - 7.19 (m, 3H), 6.84 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.15(d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.62 - 5.56 (m, 1H), 5.54 - 5.48 (m, 1H), 5.08 - 5.02 (m, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.88 - 4.83 (m, 1H), 4.81 - 4.76 (m, 2H), 4.53 - 4.47 (m, 1H), 4.37 - 4.22 (m, 3H), 4.08 - 4.03 (m, 1H), 3.92 - 3.89 (m, 1H), 3.82 - 3.74 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 2.58 - 2.30 (m, 4H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 1.54 - 1.47 (m, 1H), 1.46 - 1.44 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 0.98 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 31P NMR (162 ㎒, CD3OD) δ 55.01 (s, 1P), 53.03 (s, 1P).
단계 2: 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 중간체 8
tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 대신에 중간체 7(10㎎, 0.008m㏖)을 이용하여 실시예 5, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하고, rt에서 10분 동안 교반하여, 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(중간체 8, 9㎎, 100%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1116.3 (M+H).
단계 3: 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 화합물 C-1
THF(0.20㎖) 및 DMF(0.10㎖) 중 중간체 8(8㎎, 0.007m㏖) 및 N-석신이미딜 6-말레이미도헥사노에이트(3.1㎎, 0.010m㏖)의 용액에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(2.5㎕, 0.014m㏖)을 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 암모늄 아세테이트(10mM))에 의해 정제하여 암모늄 염으로서 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(C-1, 4.2㎎, 45%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1309.4 (M+H). HRMS (m/z): C55H66N12O18P2S2에 대한 [M+H]+ 계산치 1309.3607; 실측치, 1309.3639.
실시예 7
2-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]에틸 카보노클로리데이트(중간체 9)
Figure pct00101
단계 1: 2-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]에틸 카보노클로리데이트, 중간체 9
0℃로 냉각시킨 THF(4.2㎖) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(1㎖, 5.9m㏖) 중 tert-뷰틸 N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸카바메이트(296㎎, 1.69m㏖)의 용액에 트라이포스겐(752㎎, 2.53m㏖)을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 고체를 THF로 세척하고, 여과액을 농축건조시켜 조질의 2-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]에틸 카보노클로리데이트(중간체 9, 402㎎, 100%)를 제공하였다.
실시예 8
[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 10)
Figure pct00102
단계 1: 2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조산
표제 화합물을 중간체 6 대신 2-[(메틸아미노)메틸]벤조산 HCl(150㎎, 0.72m㏖)로 시작하여 실시예 6, 단계 1에 기재한 절차에 따라 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 25% MeOH/DCM)에 의한 정제 후에, 2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조산(306㎎, 67%)을 얻었다. LCMS (AA): m/z = 583.4 (M-H).
단계 2: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트, 중간체 10
0℃로 냉각시킨 THF(1.5㎖) 중 2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조산(295㎎, 0.50m㏖)의 용액에 염화옥살릴(DCM 중 2.0 M 용액, 0.25㎖, 0.50m㏖) 다음에 3방울의 DMF를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축건조시켜 조질의 중간체 10(304㎎, 100%)을 제공하였다.
실시예 8A
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 (4-클로로-4-옥소뷰틸)메틸카바메이트
(중간체 34)
Figure pct00103
단계 1: 메틸 4-[{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}(메틸)아미노]뷰타노에이트
중간체 6 대신 메틸 4-(메틸아미노)뷰타노에이트 HCl(1.44g, 8.16m㏖)로 시작해서 실시예 6, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 70% EtOAc/DCM)에 의한 정제 후에, 메틸 4-[{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}(메틸)아미노]뷰타노에이트(3.45g, 92%)를 얻었다. LCMS (AA): m/z = 549.3 (M-H).
단계 2: 4-[{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}(메틸)아미노]부탄산
THF(40.7㎖) 및 물(20.3㎖) 중 메틸 4-[{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}(메틸)아미노]뷰타노에이트(3.45g, 6.27m㏖)의 용액에 수산화리튬 일수화물(657㎎, 15.7m㏖)을 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 균질한 혼합물을 실온으로 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 염산(수 중 1.0㏖/ℓ, 1.83㎖)을 첨가하였다. 추가적인 1N HCl을 첨가함으로써 이 혼합물을 pH<4으로 조절하였다. 이 용액을 rt까지 가온시키고, EtOAc 및 물로 희석시킨다. 수성상을 EtOAc로 추가로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시켰다. 여과 및 용매 제거 후에, 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 10% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하였다. 용매의 제거로 4-[{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}(메틸)아미노]부탄산(3.17g, 94%)을 백색 고체로서 얻었다. LCMS (AA): m/z = 535.3 (M-H).
단계 3: 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 (4-클로로-4-옥소뷰틸)메틸카바메이트
2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐] 메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조산 대신에 4-[{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}(메틸)아미노]부탄산(387㎎, 0.721m㏖)으로 시작하여 실시예 8, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표지 화합물을 제조하여 반응 혼합물의 농축 시 조질의 중간체 34(400㎎, 100%)를 제공하였다.
실시예 9
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, (중간체 7)
Figure pct00104
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 중간체 7
tert-뷰틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 1)를 중간체 10으로 대체하여 실시예 5, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 50% ACN/수성 중탄산암모늄 (5mM))에 의해 조질의 생성물을 정제하여 중간체 7을 암모늄 염으로서 제공하였다. 이어서, 이 물질을 MeOH(2㎖) 중에 용해시키고, 트라이에틸아민(5㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 1분 동안 진탕시키고, 용매를 제거하고, 밤새 동결건조시켜, N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(147㎎, 48%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1216.3 (M+H). 실시예 6, 단계 1과 동일한 1H NMR.
실시예 10
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-(클로로카보닐)벤질]2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일카바메이트(중간체 11)
Figure pct00105
단계 1: 2-(2,5,8,11-테트라옥사-14-아자펜타데칸-15-일)벤조산
MeOH(15㎖) 중에 용해시킨 2-카복시벤즈알데하이드(1.10g, 7.3m㏖)의 용액에 2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-아민(1.82g, 8.8m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 수소화붕소나트륨(139㎎, 3.7m㏖)을 한 번에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 아세톤(0.65㎖)의 첨가에 의해 반응 중단시키고, 이어서, 농축건조시켰다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 25% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 2-(2,5,8,11-테트라옥사-14-아자펜타데칸-15-일)벤조산(2.25g, 87%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 342.3 (M+H).
단계 2: 2-(14-{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}-2,5,8,11-테트라옥사-14-아자펜타데칸-15-일)벤조산
용매로서 DCM을 이용하고 16시간 동안 교반하여, 중간체 6 대신에 2-(2,5,8,11-테트라옥사-14-아자펜타데칸-15-일)벤조산(764㎎, 2.24m㏖)으로 시작해서 실시예 6, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 25% MeOH/DCM)에 의한 정제 후에, 2-(14-{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}-2,5,8,11-테트라옥사-14-아자펜타데칸-15-일)벤조산(855㎎, 47%)을 얻었다. LCMS (AA): m/z = 759.4 (M-H).
단계 3: 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-(클로로카보닐)벤질]2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일카바메이트, 중간체 11
2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조산 대신에 2-(14-{[(4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질)옥시]카보닐}-2,5,8,11-테트라옥사-14-아자펜타데칸-15-일)벤조산(591㎎, 0.777m㏖)으로 시작하여 실시예 8, 단계 2에 기재한 절차 후에 표제 화합물을 제조하여, 반응 혼합물의 농축 시 조질의 중간체 11(605㎎, 100%)을 제공하였다.
실시예 11
tert-뷰틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 1)을 표에 나타낸 출발 물질로 대체하여, 이하의 표 3에 열거하는 화합물을 실시예 5에 기재한 바와 같이 제조하였다.
Figure pct00106
Figure pct00107
실시예 12
N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}-4-(메틸아미노)부탄아마이드(중간체 17)
Figure pct00108
단계 1: tert-뷰틸 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트
나트륨염으로서 7-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-14-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-15-플루오로-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-5-플루오로-3,7-다이하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온(화합물 번호 14, WO2018100558A2 참조, 200㎎, 0.265m㏖) 및 중간체 3(503㎎, 1.59m㏖)을 2-아미노-9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-1,9-다이하이드로-6H-퓨린-6-온 및 중간체 1 대신에 각각 이용하여 실시예 5, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 50%의 ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의한 정제로 암모늄염으로서 tert-뷰틸 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트(148㎎, 59%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 910.5(M+H). 1H NMR (400 ㎒, D2O) δ 8.70 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 6.56 (d, J = 16.1 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 51.0, 3.9 Hz, 1H), 5.18 - 4.99 (m, 2H), 4.82 - 4.77 (m, 1H), 4.63 - 4.58 (m, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 3H), 4.31 - 4.25(m, 1H), 4.12 - 4.06 (m, 1H), 3.43 - 3.36 (m, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.73 - 2.68 (m, 2H), 2.04 - 1.97 (m, 2H), 1.34 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, D2O) δ 55.47 (s, 1P), 52.07 (s, 1P). 19F NMR (376 ㎒, CD3OD) δ -165.50 (m, 1F), -203.45(m, 1F).
단계 2: N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}-4-(메틸아미노)부탄아마이드, 중간체 17
tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 대신에 암모늄염으로서 tert-뷰틸 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트(42㎎, 0.045m㏖)를 이용하고, rt에서 30분 동안 교반하여, 실시예 5, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}-4-(메틸아미노)부탄아마이드(중간체 17, 41㎎, 100%)를 얻었다. LCMS (AA): m/z = 810.2 (M+H).
실시예 13
아이소뷰톡시카보닐 4-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]뷰타노에이트(중간체 3)를 표 4에 나타낸 출발 물질로 치환하여, 실시예 12에 기재한 바와 같이 이하의 표 5에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00109
Figure pct00110
실시예 14
중간체 6을 표 6에 나타낸 출발 물질로 대체하여 실시예 6에 기재한 바와 같이 표 7에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00111
Figure pct00112
실시예 15
tert-뷰틸옥시카보닐-발릴-알라닐-(4-아미노벤질)-(4-나이트로페닐)카보네이트를 표에 나타낸 출발 물질로 대체하여 실시예 6, 단계 1에 기재한 바와 같이 표 8에 열거한 화합물(중간체 19)을 제조하였다.
Figure pct00113
실시예 16
중간체 7을 표 9에 나타낸 출발 물질로 대체하여 실시예 6, 단계 2 및 3에 기재한 바와 같이 표 10에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00114
Figure pct00115
실시예 17
N-석신이미딜 6-말레이미도헥사노에이트를 표 11에 나타낸 출발물질로 대체하여, 실시예 6, 단계 3에 기재한 바와 같이 표 12에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
Figure pct00119
Figure pct00120
Figure pct00121
실시예 18
중간체 7 및 N-석신이미딜 6-말레이미도헥사노에이트를 각각 표 13에 나타낸 출발 물질로 대체하여 실시예 6, 단계 2 및 3에 기재한 바와 같이 표 14에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00122
Figure pct00123
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
Figure pct00130
실시예 19
4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}아미노)-2,2-다이메틸-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트, 화합물 20(C-20)
Figure pct00131
단계 1: 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}아미노)-2,2-다이메틸-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트, 화합물 20
DMF(0.60㎖) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(26㎕, 0.15m㏖) 중 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산오일아미노]-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 (4-나이트로페닐) 카보네이트(47.9㎎, 0.037m㏖) 및 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸(4.08㎎, 0.03m㏖)의 용액에 DMF(0.54㎖) 중 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}-3,3-다이메틸-4-(메틸아미노)부탄아마이드(중간체 14, 20㎎, 0.02m㏖)의 용액을 rt에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 셀라이트를 첨가하고, 혼합물을 농축건조시켰다. 셀라이트 상에 흡수시킨 조질의 잔사를 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 암모늄 아세테이트(10mM))에 의해 정제하여 암모늄염으로서 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}아미노)-2,2-다이메틸-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트(C-20, 4㎎, 17%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1287.4 (M-H).
실시예 20
중간체 14 및 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산오일아미노]-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 (4-나이트로페닐) 카보네이트 각각을 표 15에 나타낸 출발 물질 A 및 B로 대체하여, 실시예 19에서 제조한 바와 같이 표 16에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00132
Figure pct00133
Figure pct00134
실시예 21
N-{(2S)-6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14-펜타옥사헵타데칸-17-아마이드(중간체 20)
Figure pct00135
단계 1: (19S)-19-[4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)뷰틸]-17-옥소-2,5,8,11,14-펜타옥사-18-아자이코산-20-온산
무수 DCM(10㎖) 중 1-[(17-옥소-2,5,8,11,14-펜타옥사헵타데칸-17-일)옥시]피롤리딘-2,5-다이온(4.0g, 10.5m㏖)의 용액에 DMF(40㎖) 중에 용해시킨 (S)-2-아미노-6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산산 하이드로클로라이드(3.4g, 12.9m㏖) 다음에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(6.9㎖, 42m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 농축건조시켰다. 조질의 잔사를 분취 HPLC에 의해 정제하여 (19S)-19-[4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)뷰틸]-17-옥소-2,5,8,11,14-펜타옥사-18-아자이코산-20-온산(1.26g, 24%)을 얻는다. LCMS (AA): m/z = 489.3 (M+H).
단계 2: N-{(2S)-6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14-펜타옥사헵타데칸-17-아마이드, 중간체 20
1,4-다이옥산(0.68㎖) 중 (19S)-19-[4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)뷰틸]-17-옥소-2,5,8,11,14-펜타옥사-18-아자이코산-20-온산(65㎎, 0.133m㏖) 및 N,N'-다이사이클로헥실카보다이이미드(30㎎, 0.145m㏖)의 용액에 N-하이드록시석신이미드(15.3㎎, 0.133m㏖)를 rt에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 셀라이트를 첨가하고, 혼합물을 여과시키고 나서, 1,4-다이옥산으로 린스하고, 농축건조시킨다. 셀라이트 상에 흡수된 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 중간체 20(14.6㎎, 19%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 586.3 (M+H).
실시예 22
표 17에 열거한 화합물을 중간체 10을 표에 나타낸 출발 물질을 대체하여 실시예 9에 기재한 바와 같이 제조하였다.
Figure pct00136
실시예 23
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-{2-[(3-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}-3,4,5-트라이하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산, 화합물 24(C-24)
Figure pct00137
단계 1: 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트라이아세톡시-6-{2-[(3-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}테트라하이드로-2H-피란-2-카복실레이트
염기로서 N,N-다이아이소프로필에틸아민을 이용하여 중간체 6 (104㎎, 0.094m㏖) 및 메틸(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트라이아세톡시-6-[2-[3-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)프로판오일아미노]-4-[(4-나이트로페녹시)카보닐옥시메틸]페녹시]테트라하이드로피란-2-카복실레이트(150㎎, 0.16m㏖)(합성에 대해, 문헌[Jeffrey, S.C. et al. Bioconjugate Chem. 2006, 17, 831-840] 참조)로 시작해서 실시예 6, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여 암모늄 염으로서 메틸(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트라이아세톡시-6-{2-[(3-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}테트라하이드로-2H-피란-2-카복실레이트(71㎎, 48%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1570.9 (M+H).
단계 2: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{2-[(3-아미노프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}-3,4,5-트라이하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산, 중간체 22
THF(13㎖) 중에 용해시킨 암모늄 염(66㎎, 0.042m㏖)으로서 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트라이아세톡시-6-{2-[(3-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}테트라하이드로-2H-피란-2-카복실레이트의 용액에 LiOH(0.5M 수용액, 1.25㎖, 0.625m㏖)를 rt에서 첨가하고, 반응 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1M HCl을 이용하여 pH 7로 중화시키고, 혼합물을 농축건조시켰다. 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 30% ACN/수성 중탄산암모늄 (5mM))에 의해 조질의 잔사를 정제하여 암모늄 염으로서 중간체 22(26㎎, 50%)를 제공하였다. 이어서, 이 물질을 MeOH(5㎖) 중에 용해시키고, 트라이에틸아민(1㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 1분 동안 진탕시켰다. 용매를 제거하고, 얻어진 잔사를 밤새 동결건조시켜, N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{2-[(3-아미노프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}-3,4,5-트라이하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(중간체 22, 30㎎, 100%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1209.0 (M+H).
단계 3: (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{2-[(3-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}-3,4,5-트라이하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산, 화합물 24
중간체 8 대신에 중간체 22(24㎎, 0.02m㏖)를 이용하여 실시예 6, 단계 3에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여, 암모늄염으로서 (2S,3S,4S,5R,6S)-6-{2-[(3-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}-3,4,5-트라이하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-카복실산(C-24, 17㎎, 71%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1402.4 (M+H). HRMS (m/z): C56H65N11O24P2S2에 대한 [M+H]+ 계산치1402.3193; 실측치, 1402.3232.
실시예 24
각각 N-석신이미딜 6-말레이미도헥사노에이트에 대해 표에 나타낸 출발 물질을 대체하여 표 18의 화합물(화합물 25)에 열거한 화합물을 실시예 23, 단계 3에 기재한 바와 같이 제조하였다.
Figure pct00138
C-25 구조:
Figure pct00139
실시예 25
4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 {2-[(2R)-2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}카바메이트, 화합물 26(C-26)
Figure pct00140
단계 1: 2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산오일아미노]-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐아미노]아세트산
트라이에틸아민(0.10㎖, 0.72m㏖), DMF(0.50㎖) 및 DMSO(0.50㎖) 중 글리신(24㎎, 0.32m㏖)의 용액에 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산오일아미노]-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 (4-나이트로페닐) 카보네이트(220㎎, 0.34m㏖)를 rt에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시켰다. 물(1㎖)을 첨가하고, 용액을 폼산의 첨가에 의해 pH 4로 산성화시켰다. 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0-100% ACN/수성 폼산(0.1%))에 의해 정제하여 2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산오일아미노]-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐아미노]아세트산(87㎎, 44%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 586.3 (M-H).
단계 2: 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 {2-[(2R)-2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}카바메이트, 화합물 26
DMF(1㎖) 중 2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산오일아미노]-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐아미노]아세트산(40㎎, 0.068m㏖) 및 트라이에틸아민(35㎕, 0.25m㏖)의 용액에 1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(46㎎, 0.12m㏖)를 rt에서 첨가하고, 반응 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 이어서, 이 용액에 DMF(0.60㎖) 중 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 (2R)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}피롤리딘-2-카복스아마이드 용액(중간체 15, 50㎎, 0.047m㏖)을 rt에서 적가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 물(1㎖)을 첨가하고, 용액을 폼산의 첨가에 의해 pH 4로 산성화시켰다. 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 폼산(0.1%))에 의해 정제하여 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 {2-[(2R)-2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}카바메이트(C-26, 32㎎, 50%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1316.4 (M+H). HRMS (m/z): C53H67N13O19P2S2에 대한 [M+H]+ 계산치 1316.3666; 실측치, 1316.3705.
실시예 26
(2R)-1-({[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}아세틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}피롤리딘-2-카복스아마이드, 화합물 27 (C-27)
Figure pct00141
단계 1: tert-뷰틸 {2-[(2R)-2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}카바메이트
DMF(1.6㎖) 중 중간체 15(60㎎, 0.05m㏖) 및 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 (tert-뷰톡시카보닐)글리시네이트(19㎎, 0.07m㏖)의 혼합물에 트라이에틸아민(50㎕, 0.355m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 반응 중단시키고, 셀라이트를 첨가하고, 반응 혼합물을 농축건조시켰다. 셀라이트 상에 흡수된 조질의 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의해 정제하였다. 트라이에틸아민(14㎕, 0.1m㏖)을 생성물의 수용액에 첨가하였다. 동결건조로 밤새 N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 tert-뷰틸 {2-[(2R)-2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}카바메이트(49㎎, 87%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 904.4 (M+H).
단계 2: (2R)-1-(아미노아세틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}피롤리딘-2-카복스아마이드
MeOH(1㎖) 중 N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 tert-뷰틸 {2-[(2R)-2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)피롤리딘-1-일]-2-옥소에틸}카바메이트(37㎎, 0.033m㏖)의 용액에 염산염(다이옥산 중 4M 용액, 1㎖, 4m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, 진공 하에 2시간 동안 두어서 염산염으로서 (2R)-1-(아미노아세틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}피롤리딘-2-카복스아마이드(37㎎, 100%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 804.2 (M+H).
단계 3: (2R)-1-({[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}아세틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-에타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}피롤리딘-2-카복스아마이드, 화합물 27
염산염으로서 (2R)-1-(아미노아세틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}피롤리딘-2-카복스아마이드(30㎎, 0.027m㏖) 및 (2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) (2S)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산오일아미노]-3-메틸-부탄오일]아미노]프로파노에이트(24㎎, 0.04m㏖)로 시작하여 실시예 26, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다(합성을 위해 미국 특허 공개 제20180015176A1호 참조). 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 폼산(0.1%))에 의한 정제로 (2R)-1-({[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}아세틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}피롤리딘-2-카복스아마이드(C-27, 20㎎, 64%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1167.1 (M+H). HRMS (m/z): C45H60N12O17P2S2에 대한 [M+H]+ 계산치 1167.3189; 실측치, 1167.3206.
실시예 27
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(아미노아세틸)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 화합물 28 (C-28)
Figure pct00142
단계 1: tert-뷰틸 (2-{[(2S)-1-{[(2S)-1-({4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}아미노)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]아미노}-2-옥소에틸)카바메이트
N-석신이미딜 6-말레이미도헥사노에이트 대신에 중간체 8(23㎎, 0.016m㏖) 및 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일(tert-뷰톡시카보닐)글리시네이트(11㎎, 0.039m㏖)로 시작해서 실시예 6, 단계 3에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 반응 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM))에 의한 정제로 tert-뷰틸 (2-{[(2S)-1-{[(2S)-1-({4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}아미노)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]아미노}-2-옥소에틸)카바메이트를 N,N-다이에틸에탄아민 염(13㎎, 57%)으로서 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1273.1 (M+H).
단계 2: 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(아미노아세틸)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 화합물 28
tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 대신에 N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 tert-뷰틸 (2-{[(2S)-1-{[(2S)-1-({4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}아미노)-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]아미노}-2-옥소에틸)카바메이트(6.6㎎, 0.005m㏖)로 시작하여 실시예 5, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 반응 혼합물을 rt에서 5분 동안 교반하여 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(아미노아세틸)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(C-28, 5.6㎎, 91%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1173.3 (M+H).
실시예 28
2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 (tert-뷰톡시카보닐)글리시네이트를 표 19에 나타낸 출발 물질로 대체하여 실시예 27에 기재한 바와 같이 표 20에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00143
Figure pct00144
실시예 29
tert-뷰틸 {14-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-14-옥소-3,6,9,12-테트라옥사테트라데크-1-일}카바메이트(중간체 23)
Figure pct00145
단계 1: tert-뷰틸 {14-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-14-옥소-3,6,9,12-테트라옥사테트라데크-1-일}카바메이트, 중간체 23
DCM(6.4㎖) 중에 용해시킨 2,2-다이메틸-4-옥소-3,8,11,14,17-펜타옥사-5-아자노나데칸-19-온산(120㎎, 0.32m㏖) 및 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드(78㎎, 0.49m㏖)의 용액에 N-하이드록시석신이미드(46㎎, 0.39m㏖)를 rt에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 반응을 중단시키고, DCM(3×)으로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 후 증발시켜 조질의 tert-뷰틸 {14-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-14-옥소-3,6,9,12-테트라옥사테트라데크-1-일}카바메이트(중간체 23, 146㎎, 100%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 447.2 (M-H).
실시예 30
tert-뷰틸 N-[(1S)-2-[(2-클로로카보닐페닐)메틸-[(2,4-다이메톡시페닐)메틸]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트(중간체 24)
Figure pct00146
단계 1: 2-[[(2,4-다이메톡시페닐)메틸아미노]메틸]벤조산
2-카복시벤즈알데하이드(6.0g, 40m㏖) 및 2,4-다이메톡시벤질아민(12㎖, 80m㏖)으로 시작해서 실시예 10, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여 2-[[(2,4-다이메톡시페닐)메틸아미노]메틸]벤조산(7.6g, 61%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 302.2 (M+H).
단계 2: 2-[[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)프로판오일]-[(2,4-다이메톡시페닐)메틸]아미노]메틸]벤조산
DMF(6㎖) 중 2-[[(2,4-다이메톡시페닐)메틸아미노]메틸]벤조산(380㎎, 1.26m㏖) 및 트라이에틸아민(0.5㎖, 3.55m㏖)의 용액에 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일(tert-뷰톡시카보닐)-L-알라니네이트(640㎎, 2.2m㏖)를 첨가하였다. 물(2㎖)을 첨가하여 반응 혼합물을 용해시키고, 이를 rt에서 1일 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 폼산(0.1%))에 의해 정제하여 2-[[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)프로판오일]-[(2,4-다이메톡시페닐)메틸]아미노]메틸]벤조산(322㎎, 51%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 473.3 (M+H).
단계 3: tert-뷰틸 N-[(1S)-2-[(2-클로로카보닐페닐)메틸-[(2,4-다이메톡시페닐)메틸]아미노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카바메이트, 중간체 24
2-(((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)메틸)벤조산 대신에 2-[[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)프로판오일]-[(2,4-다이메톡시페닐)메틸]아미노]메틸]벤조산(270㎎, 0.57m㏖)으로 시작해서 실시예 1, 단계2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여 조질의 중간체 24(280㎎, 100%)를 제공하였다.
실시예 31
2-({[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}메틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}벤즈아마이드, 화합물 31(C-31)
Figure pct00147
단계 1: tert-뷰틸 [(2S)-1-{[(2S)-1-{[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]아미노}-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]카바메이트
중간체 15 및 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일(tert-뷰톡시카보닐)글리시네이트 대신에 각각 중간체 16(45㎎, 0.53m㏖) 및 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일(tert-뷰톡시카보닐)-L-발리네이트(100㎎, 0.32m㏖)로 시작해서 실시예 26, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 암모늄 아세테이트(10mM))에 의한 정제로 암모늄 염으로서 tert-뷰틸 [(2S)-1-{[(2S)-1-{[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]아미노}-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]카바메이트(24㎎, 44%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1053.0 (M+H).
단계 2: 2-({[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}메틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}벤즈아마이드
tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 대신에 암모늄 염으로서 tert-뷰틸 [(2S)-1-{[(2S)-1-{[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]아미노}-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]카바메이트(24㎎, 0.023m㏖)로 시작해서 실시예 5, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여, 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 2-({[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}메틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}벤즈아마이드(24㎎, 97%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 953.1 (M+H).
단계 3: 2-({[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}메틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}벤즈아마이드, 화합물 31
중간체 8 대신에 2,2,2-트라이플루오로아세트산염으로서 2-({[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}메틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}벤즈아마이드(24㎎, 0.022m㏖)로 시작해서 실시예 6, 단계 3에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하여 암모늄 염으로서 2-({[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}메틸)-N-{9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}벤즈아마이드(C-31, 6.2㎎, 23%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1146.1 (M+H). HRMS (m/z): C46H57N11O16P2S2에 대한 [M+H]+ 계산치 1146.2974; 실측치, 1146.2998.
실시예 32
4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-6-옥소헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 4-나이트로페닐 카보네이트(중간체 25)
Figure pct00148
단계 1: 6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-(하이드록시메틸)페닐]아미노}-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]-6-옥소헥산아마이드
DMF(2㎖) 및 THF(5.5㎖) 중에 용해시킨 (2S)-2-아미노-N-[(1S)-2-[4-(하이드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]-3-메틸-부탄아마이드(240㎎, 0.82m㏖)의 용액에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.39㎖, 2.24m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 1-{[6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-6-옥소헥산오일]옥시}피롤리딘-2,5-다이온(320㎎, 0.75m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt까지 가온시키고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고, EtOAc(3×)로 추출하였다. 합한 유기상을 중탄산나트륨의 수성 포화 용액 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 후 증발건조시켰다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(50 내지 100% EtOAc/DCM)에 의해 정제하여 6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-(하이드록시메틸)페닐]아미노}-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]-6-옥소헥산아마이드(347㎎, 76%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 609.4 (M+H).
단계 2: 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-6-옥소헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 4-나이트로페닐 카보네이트, 중간체 25
0℃까지 생각시킨 THF(4.2㎖) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.37㎖, 2.1m㏖) 중 6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-N-[(2S)-1-{[(2S)-1-{[4-(하이드록시메틸)페닐]아미노}-1-옥소프로판-2-일]아미노}-3-메틸-1-옥소부탄-2-일]-6-옥소헥산아마이드(257㎎, 0.42m㏖)의 용액에 4-나이트로페닐 클로로포메이트(362㎎, 1.69m㏖)를 한 번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고, DCM(3×)으로 추출하였다. 합한 유기상을 중탄산나트륨의 수성 포화 용액 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 후 증발건조시켰다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 100% EtOAc/DCM)에 의해 정제하여 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-{[6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-6-옥소헥산오일]아미노}-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 4-나이트로페닐 카보네이트(중간체 25, 137㎎, 42%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 774.4 (M+H).
실시예 33
1-{[6-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-6-옥소헥산오일]옥시}피롤리딘-2,5-다이온을 표에 나타낸 출발 물질로 대체하여 실시예 32에 기재한 바와 같이 표 21(중간체 26)에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00149
실시예 34
(2S)-2-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-4-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-N-(2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사도코산-22-일)-4-옥소부탄아마이드(중간체 27) 및 (25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산(중간체 27A)
Figure pct00150
단계 1: tert-뷰틸 (25S)-25-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트
중간체 15 및 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일(tert-뷰톡시카보닐)글리시네이트 대신에 각각 tert-뷰틸 (3S)-3-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-4-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소뷰타노에이트(2.2g, 5.3m㏖) 및 2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사도코산-22-아민(2.0g, 5.9m㏖)로 시작해서 실시예 26, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 10% MeOH/DCM)에 의한 정제로 tert-뷰틸 (25S)-25-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(3.8g, 100%)를 제공하였다.
단계 2: tert-뷰틸 (25S)-25-아미노-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트
tert-뷰틸 (25S)-25-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(3.8g, 5.9m㏖)를 에탄올(100㎖) 중에 용해시켰다. 팔라듐(탄소 상 10%, 1.38g, 1.17m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 수소(15 psi) 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 메탄올로 세척하고 나서, 여과액을 증발건조시켜 tert-뷰틸(25S)-25-아미노-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(2.56g, 85%)를 제공하였다.
단계 3: tert-뷰틸 (25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트
DCM(50㎖) 중 tert-뷰틸 (25S)-25-아미노-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(3.32g, 6.5m㏖), 4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄산(1.5g, 4.91m㏖) 및 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸(884㎎, 6.57m㏖)의 용액에 0℃에서 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드(1.25g, 6.56m㏖) 및 트라이에틸아민(1.26㎖, 9.1m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc로 희석시키고, 탄산칼륨(20㎖, 수 중 4.0M)을 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반하고, 유기상을 단리시키고, 중탄산나트륨의 수성 포화 용액, 염수로 세척하고 나서, 건조시키고(Na2SO4), 여과 후 증발건조시켰다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 tert-뷰틸(25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(2.27g, 44%)를 제공하였다.
단계 4: (25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산
tert-뷰틸 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 대신에 tert-뷰틸 (25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(278㎎, 0.35m㏖)로 시작하여 실시예 5, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 20% MeOH/DCM)에 의한 정제로 (25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산(중간체 27A, 180㎎, 70%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 742.4 (M+H).
단계 5: (2S)-2-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-4-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-N-(2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사도코산-22-일)-4-옥소부탄아마이드, 중간체 27
2,2-다이메틸-4-옥소-3,8,11,14,17-펜타옥사-5-아자노나데칸-19-온산 대신에 (25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산(60㎎, 0.08m㏖)으로 시작해서 실시예 29에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 rt에서 교반하여 (2S)-2-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-4-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-N-(2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사도코산-22-일)-4-옥소부탄아마이드(중간체 27, 68㎎, 100%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 839.4 (M+H).
실시예 35
N-석신이미딜 6-말레이미도헥사노에이트를 표 22에 나타낸 출발물질로 대체하여, 실시예 6, 단계 3에 기재한 바와 같이 표 23에 열거한 화합물을 제조하였다.
Figure pct00151
Figure pct00152
실시예 36
tert-뷰틸 {(29S)-30-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-26,30-다이옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트라이아콘탄-29-일}카바메이트(중간체 30)
Figure pct00153
단계 1: (29S)-29-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트라이아콘탄-30-온산
용매로서 DMF를 이용하고 rt에서 2시간 동안 교반하여 (S)-2-아미노-6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)헥산산 하이드로클로라이드 및 1-[(17-옥소-2,5,8,11,14-펜타옥사헵타데칸-17-일)옥시]피롤리딘-2,5-다이온 대신에 (S)-3-아미노-2-((tert-뷰톡시카보닐)아미노)프로판온산(238㎎, 1.17m㏖) 및 1-[(26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)옥시]피롤리딘-2,5-다이온(300㎎, 0.58m㏖)으로 시작해서 실시예 21, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM))에 의한 정제로 (29S)-29-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트라이아콘탄-30-온산(344㎎, 99%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 599.4 (M+H).
단계 2: tert-뷰틸 {(29S)-30-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-26,30-다이옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트라이아콘탄-29-일}카바메이트, 중간체 30
용매로서 DCM을 이용하고 rt에서 1시간 동안 교반하여 (19S)-19-[4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)뷰틸]-17-옥소-2,5,8,11,14-펜타옥사-18-아자이코산-20-온산 대신에 (29S)-29-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트라이아콘탄-30-온산(100㎎, 0.166m㏖)으로 시작해서 실시예 21, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 농축시켜 조질의 tert-뷰틸 {(29S)-30-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-26,30-다이옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자트라이아콘탄-29-일}카바메이트(중간체 30, 116㎎, 100%)를 제공하였다.
실시예 37
[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-하이드록시-테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 32)
Figure pct00154
단계 1: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-5-[[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시메틸]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트
2-아미노-9-[(2R,3R,5S)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-5-[[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시메틸]테트라하이드로퓨란-2-일]-1H-퓨린-6-온(1.62g, 3.27m㏖)(합성에 대해 문헌[Prakash, T.P. J. Med. Chem. 2005, 48, 1199-1210] 참조)을 건조 피리딘에 용해시키고, 농축건조시키고(3×3㎖), 이어서, 15분 동안 진공 하에 두었다. 잔사를 피리딘(43㎖) 중에 아르곤 분위기 하에 용해시키고, 피리딘(32㎖) 중의 중간체 10(5.91g, 9.80m㏖)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. MeOH(20㎖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 농축건조시켰다. MeOH(100㎖) 및 수산화암모늄(수 중 28 내지 30% 용액, 50㎖)을 첨가하고, 얻어진 혼합물을 60분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 셀라이트 상에 흡착시키고, 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-5-[[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시메틸]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(2.17g, 63%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1062.0 (M+H).
단계 2: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-3-하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트
폴리프로필렌관에 THF(27㎖) 중에 용해시킨 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-5-[[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시메틸]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(2.17g, 2.04m㏖)를 첨가하였다. 트라이에틸아민(2.26㎖, 16.1m㏖)을 첨가한 후에, 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(1.19㎖, 7.33m㏖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 중탄산나트륨의 수성 포화 용액의 첨가에 의해 반응을 중단시키고, 이어서, EtOAc로 희석시켰다. 유기상을 분리시키고, 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 여과 후 증발건조시켰다. 조질의 잔사를 리카겔 크로마토그래피(0 내지 20% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-3-하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(1.18g, 69%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 834.4 (M+H).
단계 3: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-하이드록시-테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트, 중간체 32
[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-3-하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(1.13g, 1.36m㏖)를 건조 피리딘 중에 용해시키고, 농축건조시켰다(3×15㎖). 잔사를 피리딘(13.3㎖) 중에 용해시키고, 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(650㎎, 1.9m㏖)를 첨가한 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(8㎎, 0.068m㏖)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축건조시키고, 셀라이트 상에 흡착시키고 나서, 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 5% MeOH/DCM, 0.5% NEt3를 이용)에 의해 정제하여 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-하이드록시-테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 32, 1.12g, 73%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1136.5(M+H).
실시예 38
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2S,5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-플루오로-2,10,10-트라이옥시도-14-(9H-퓨린-9-일)-2-설파닐데카하이드로-5,8-메타노퓨로[2,3-m][1,3,6,9,10,11,2]테트라옥사티아자포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 또는 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-플루오로-2,10,10-트라이옥시도-14-(9H-퓨린-9-일)-2-설파닐데카하이드로-5,8-메타노퓨로[2,3-m][1,3,6,9,10,11,2]테트라옥사티아자포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(중간체 33)
Figure pct00155
단계 1: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-4-플루오로-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-2-일]메틸설파모일옥시]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트
건조 DCM(13.6㎖) 중 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-하이드록시-테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(중간체 32, 1.1g, 0.97m㏖), (4-나이트로페닐) N-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-4-플루오로-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-2-일]메틸]설파메이트(667㎎, 1.17m㏖)(합성에 대해, 국제 특허 출원 PCT/IB2019/052364 참조), 4-다이메틸아미노피리딘(122㎎, 0.97m㏖) 및 4Å 분자체(1.74g)의 혼합물을 아르곤 하에 rt에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 트라이에틸아민(0.60㎖, 4.3m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 농축시키고 나서, 얻어진 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(10 내지 100% ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의해 정제하여 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-4-플루오로-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-2-일]메틸설파모일옥시]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(0.94g, 62%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1565.0 (M+H).
단계 2: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[[(2R,3R,4R,5R)-4-플루오로-3-하이드록시-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-2-일]메틸설파모일옥시]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트
폴리프로필렌 관에서 THF(12㎖) 중 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[tert-뷰틸(다이메틸)실릴]옥시-4-플루오로-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-2-일]메틸설파모일옥시]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(939㎎, 0.60m㏖)의 용액에 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(0.52㎖, 3.17m㏖) 및 트라이에틸아민(0.98㎖, 6.95m㏖)을 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하고, 이어서, 다이클로로메탄으로 희석시키고 나서, 포화 수성 NaHCO3 및 염수로 연속적으로 세척하였다. 유기상을 무수 MgSO4로 건조시키고, 여과 후, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(10-100% ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의해 정제하여 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[[(2R,3R,4R,5R)-4-플루오로-3-하이드록시-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-2-일]메틸설파모일옥시]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(795㎎, 89%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1452.2 (M+H).
단계 3: [(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,5S)-2-[2-[[2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조일]아미노]-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-3-일]옥시설폰일아미노]메틸]-4-플루오로-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-3-일]옥시포스핀산
다이페닐 포스파이트(0.225㎖, 1.17m㏖)를 피리딘(2㎖) 중 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[[2-[[9-[(2R,3R,5S)-5-[[비스(4-메톡시페닐)-페닐-메톡시]메틸]-3-[[(2R,3R,4R,5R)-4-플루오로-3-하이드록시-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-2-일]메틸설파모일옥시]테트라하이드로퓨란-2-일]-6-옥소-1H-퓨린-2-일]카바모일]페닐]메틸]-N-메틸-카바메이트(792㎎, 0.55m㏖)의 0℃ 용액에 첨가하였다. 첨가 완료 시, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 트라이에틸아민(0.62㎖, 4.37m㏖) 및 물(0.51㎖, 28.3m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 추가 60분 동안 rt에서 교반하고, 이어서, 농축건조시켰다. 이어서, 잔사를 아세트산(1.25㎖, 21.8m㏖) 및 물(0.33㎖, 18.6m㏖) 중에 용해시키고, rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 트라이에틸실란(4.3㎖, 26.2m㏖)의 첨가에 의해 반응을 중단시키고, rt에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(10 내지 100% ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의해 정제하여 암모늄염으로서 [(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,5S)-2-[2-[[2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조일]아미노]-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-3-일]옥시설폰일아미노]메틸]-4-플루오로-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-3-일]옥시포스핀산(396㎎, 59%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1213.4 (M+H).
단계 4: 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2S,5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-플루오로-2,10,10-트라이옥시도-14-(9H-퓨린-9-일)-2-설파닐데카하이드로-5,8-메타노퓨로[2,3-m][1,3,6,9,10,11,2]테트라옥사티아자포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 또는 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-플루오로-2,10,10-트라이옥시도-14-(9H-퓨린-9-일)-2-설파닐데카하이드로-5,8-메타노퓨로[2,3-m][1,3,6,9,10,11,2]테트라옥사티아자포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 중간체 33
다이페닐 포스포로클로리데이트(0.055㎖, 0.26m㏖)를 피리딘(1.6㎖)에 첨가하고, 이 용액을 -35℃까지 냉각시켰다. DCM(2.5㎖) 및 피리딘(3.2㎖) 중 암모늄 염으로서 [(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,5S)-2-[2-[[2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조일]아미노]-6-옥소-1H-퓨린-9-일]-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-3-일]옥시설폰일아미노]메틸]-4-플루오로-5-퓨린-9-일-테트라하이드로퓨란-3-일]옥시포스핀산(80㎎, 0.065m㏖)의 용액을 냉각시킨 반응 혼합물에 15분에 걸쳐 첨가하였다. 얻어진 용액을 -35℃에서 30분 동안 교반하였다. 고체 3H-1,2-벤조다이티올-3-온(25㎎, 0.15m㏖) 및 물(0.056㎖)을 각각 냉각시킨 반응 혼합물에 첨가하고, 이를 추가로 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 용액을 빙욕에서 0℃까지 냉각시키고, 수성 티오황산나트륨(수 중 0.2M, 0.14㎖, 0.70m㏖) 용액의 첨가에 의해 반응을 중단시켰다. 혼합물을 rt에서 5분 동안 교반하고, 감압 하에 농축시켰다. 얻어진 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(0 내지 50% ACN/수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM))에 의해 정제하여 N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2S,5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-플루오로-2,10,10-트라이옥시도-14-(9H-퓨린-9-일)-2-설파닐데카하이드로-5,8-메타노퓨로[2,3-m][1,3,6,9,10,11,2]테트라옥사티아자포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트 또는 4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5S,7R,8R,12aR,14R,15R,15aR)-15-플루오로-2,10,10-트라이옥시도-14-(9H-퓨린-9-일)-2-설파닐데카하이드로-5,8-메타노퓨로[2,3-m][1,3,6,9,10,11,2]테트라옥사티아자포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(중간체 33, 27㎎, 31%)를 얻었다. LCMS (AA): m/z = 1227.9 (M+H). 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ 9.14 (s, 1H), 8.75(s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.53 - 7.36 (m, 5H), 7.34 - 7.17 (m, 3H), 6.47 (d, J = 19.3 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.87 - 5.82 (m, 1H), 5.76 - 5.55(m, 1H), 5.50 - 5.40 (m, 1H), 5.00 (s, 2H), 4.79 - 4.75(m, 2H), 4.68 - 4.61 (m, 1H), 4.58 - 4.47 (m, 2H), 4.44 - 4.39 (m, 1H), 4.09 - 4.02 (m, 1H), 3.92 - 3.89 (m, 1H), 3.67 - 3.62 (m, 1H), 3.57 - 3.53 (m, 1H), 3.01 - 2.94 (m, 1H), 2.87 (s, 3H), 2.74 - 2.68 (m, 1H), 2.11 - 2.03 (m, 1H), 1.45 - 1.43 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 0.98 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.7 Hz, 3H). 31P NMR (162 ㎒, CD3OD) δ 57.35(s, 1P).
실시예 38A
4-{[(25S,29S,32S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-29-아이소프로필-32-메틸-24,27,30,33-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23,28,31-트라이아자트라이트라이아콘탄-33-일]아미노}벤질 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트(C-34)
Figure pct00156
4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노} 벤질 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10] 펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트(Int-35, 17.4㎎, 0.0154m㏖), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드 하이드로클로라이드(3.49㎎, 0.0182m㏖) 및 (25S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산(Int-27A)(10.4㎎, 0.0140m㏖)의 현탁액에 DCM(0.37㎖) 중 트라이에틸아민(0.004㎖, 0.0266m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 20분 동안 교반하고, 이어서, DMF(0.15㎖, 2.23m㏖)를 첨가하였다. 이 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반한 후에, 용매를 농축시켰다. 조질의 잔사를 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(0 내지 50% ACN/수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM))에 의해 정제하여 N,N-다이에틸에탄아민 염으로서 4-{[(25S,29S,32S)-25-{[4-(11,12-다이데하이드로다이벤조[b,f]아조신-5(6H)-일)-4-옥소부탄오일]아미노}-29-아이소프로필-32-메틸-24,27,30,33-테트라옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23,28,31-트라이아자트라이트라이아콘탄-33-일]아미노}벤질 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트(C-34)(2.0㎎, 6.9%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 926.9 (M/2+H). HRMS (m/z): C80H101F2N15O26P2S2에 대한 [M+H]+ 계산치 1852.6000; 실측치, 1852.6006.
실시예 38B
(1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 {(25S)-27-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-24,27-다이옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-25-일}카바메이트
(중간체 36)
Figure pct00157
단계 1: tert-뷰틸 (25S)-25-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트
중간체 15 및 2,5-다이옥소피롤리딘-1-일(tert-뷰톡시카보닐)글리시네이트 대신에 각각 tert-뷰틸 (3S)-3-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-4-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-4-옥소뷰타노에이트(2.2g, 5.3m㏖) 및 2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사도코산-22-아민(2.0g, 5.9m㏖)로 시작해서 실시예 26, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 10% MeOH/DCM)에 의한 정제로 tert-뷰틸 (25S)-25-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(3.8g, 100%)를 제공하였다.
단계 2: tert-뷰틸 (25S)-25-아미노-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트
tert-뷰틸 (25S)-25-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(3.8g, 5.9m㏖)를 에탄올(100㎖) 중에 용해시켰다. 팔라듐(탄소 상 10%, 1.38g, 1.17m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 수소(15 psi) 하에 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과시키고, 메탄올로 세척하고 나서, 여과액을 증발건조시켜 tert-뷰틸 (25S)-25-아미노-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(2.56g, 85%)를 제공하였다.
단계 3: (25S)-25-({[(1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메톡시]카보닐}아미노)-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산
DCM(11.3㎖) 중 (25S)-25-아미노-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-오에이트(587㎎, 1.15m㏖)의 용액에 TFA(11.3㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 톨루엔과 공비 혼합하고, 추가로 고진공 상에서 건조시켜 오일로서 조질의 중간체를 제공하였다. 조질의 오일 중간체에 1-({[(1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메톡시]카보닐}옥시)피롤리딘-2,5-다이온(279㎎, 0.959m㏖) 및 DCM(9.8㎖), 트라이에틸아민(1.34㎖, 9.59m㏖)을 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50㎖), 및 탄산칼륨 용액(10㎖, 수 중 4.0M)으로 희석시켰다. 분리된 유기층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과 후, 농축시켰다. 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(0 내지 100% ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의해 정제하였다. 목적하는 분획을 진공 하에 농축시켜 (25S)-25-({[(1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메톡시]카보닐}아미노)-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산(19㎎, 3.1% 수율)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 629.2 (M-H); 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ = 4.46 (dd, J = 5.7, 7.4 Hz, 1 H), 4.25 - 4.12 (m, 2 H), 3.68 - 3.51 (m, 28 H), 3.41 - 3.34 (m, 5 H), 2.80 - 2.60 (m, 2 H), 2.33 - 2.12 (m, 4 H), 1.69 - 1.54 (m, 2 H), 1.40 (quin, J = 8.7 Hz, 1 H), 1.02 - 0.89 (m, 2 H).
단계 4: (1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 {(25S)-27-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-24,27-다이옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-25-일}카바메이트(중간체 36)
2,2-다이메틸-4-옥소-3,8,11,14,17-펜타옥사-5-아자노나데칸-19-온산 대신에 (25S)-25-({[(1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메톡시]카보닐}아미노)-24-옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-27-온산으로 시작해서 실시예 29에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 rt에서 교반하여 (1R,8S,9s)-바이사이클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 {(25S)-27-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-24,27-다이옥소-2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사-23-아자헵타코산-25-일}카바메이트(중간체 36, 22㎎, 100%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 728.4 (M+H).
실시예 38C
2,5,8,11,14,17,20-헵타옥사도코산-22-아민(중간체 37 및 중간체 42) 및 메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트라이아세톡시-6-{2-[(3-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}프로판오일)아미노]-4-({[(4-나이트로페녹시)카보닐]옥시}메틸)페녹시}테트라하이드로-2H-피란-2-카복실레이트를 단계 1 및 단계 2에 나타낸 출발 물질로 대체하여 실시예 10에 기재한 바와 같이 표 22A에 열거한 화합물(중간체 37 및 중간체 42)을 제조하였다.
(중간체 42).
[표 22A]
Figure pct00158
실시예 38D
4-{[(2S,5S)-57-아미노-5-아이소프로필-2-메틸-4,7-다이옥소-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55-헥사데카옥사-3,6-다이아자헵타펜타콘탄-1-오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(C-37)
Figure pct00159
단계 1: 4-{[(53S,56S)-1-아지도-53-아이소프로필-56-메틸-51,54,57-트라이옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48-헥사데카옥사-52,55-다이아자헵타펜타콘탄-57-일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트
중간체 8(18.68㎎, 0.01674m㏖), 1-[(1-아지도-51-옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48-헥사데카옥사헨펜타콘탄-51-일)옥시]피롤리딘-2,5-다이온(32.3㎎, 0.03348m㏖), THF(0.6㎖) 및 DMF(0.2㎖)의 용액에 DIEA(0.044㎖, 0.2511m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 3시간 동안 교반하고, 이어서, MeOH(5㎖)로 반응을 중단시켰다. 대부분의 용매를 증발시킨 후에, 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(0 내지 50% ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의해 정제하였다. 목적하는 분획을 농축시키고, 동결건조시켜 표제 화합물(17.8㎎, 55%)을 백색 분말로서 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1915(M-H).
단계 2: 4-{[(2S,5S)-57-아미노-5-아이소프로필-2-메틸-4,7-다이옥소-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55-헥사데카옥사-3,6-다이아자헵타펜타콘탄-1-오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(C-37)
50㎖의 둥근 바닥 플라스크에 4-{[(53S,56S)-1-아지도-53-아이소프로필-56-메틸-51,54,57-트라이옥소-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48-헥사데카옥사-52,55-다이아자헵타펜타콘탄-57-일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(17.7㎎, 0.00923m㏖), THF(1.0㎖) 및 트라이페닐포스핀(24.2㎎, 0.0923m㏖)을 첨가하였다. 이 혼합물을 rt에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물에 수산화나트륨(0.0554㎖, 수 중 1.0 ㏖/ℓ)을 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 1시간 동안 교반한 후에, 이를 농축시켰다. 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(0 내지 50% ACN/수성 중탄산암모늄(5mM))에 의해 정제하였다. 목적하는 분획을 수집하고, 동결건조시켜 4-{[(2S,5S)-57-아미노-5-아이소프로필-2-메틸-4,7-다이옥소-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55-헥사데카옥사-3,6-다이아자헵타펜타콘탄-1-오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(C-37)(5.7㎎, 32%)를 백색의 거품같은 분말로서 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1889 (M-H). HRMS (m/z): C80H124N12O32P2S2에 대한 [M+H]+ 계산치 1891.7434; 실측치 1891.7433.
실시예 38E
N-{(2S)-6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-아마이드(중간체 39)
Figure pct00160
단계 1: (28S)-28-[4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)뷰틸]-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산
피리딘(21.0㎖) 중 (2S)-2-아미노-6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산산 하이드로클로라이드(1.05g, 4.00m㏖) 및 1-[(26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-일)옥시]피롤리딘-2,5-다이온(2.08g, 4.04m㏖)의 혼합물에 DIEA(1.43㎖, 8.20m㏖)를 첨가하고, 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하고, 이어서, 0℃로 냉각시키고, 밤새 교반하였다. 휘발성 용매를 제거하고, 잔사를 톨루엔 (3Х20㎖) 및 아세토나이트릴(10㎖)과 공비혼합하여 (28S)-28-[4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)뷰틸]-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산(4.00g, 100% 수율)을 무색 오일로서 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 619.3 (M-H).
단계 2: N-{(2S)-6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-아마이드(중간체 39)
DCM(76.7㎖, 1200m㏖) 중 N-하이드록시석신이미드(469㎎, 4.08m㏖), N,N'-다이사이클로헥실카보다이이미드(824㎎, 4.00m㏖), 및 단계 1로부터의 조질의 (28S)-28-[4-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)뷰틸]-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산(4.00g, 4.00m㏖)의 혼합물을 rt에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물로부터 나온 고체를 여과시키고, 여과액을 농축시켜 조질의 오일을 제공하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 20% IPA/DCM)에 의한 정제로 N-{(2S)-6-(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-아마이드(중간체 39)(1.70g, 52%)를 무색 오일로서 제공하였다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ ppm 1.42 - 1.55(m, 2 H) 1.64 (m, 2 H) 1.81 - 1.93 (m, 1 H) 1.94 - 2.01 (m, 1 H) 2.52 (m, 2 H) 2.81 - 2.86 (m, 4 H) 3.36 (s, 3 H) 3.51 - 3.57 (m, 4 H) 3.60 - 3.66 (m, 26 H) 3.68 - 3.76 (m, 2 H) 4.03 - 4.17 (m, 2 H) 4.74 - 4.80 (m, 1 H) 6.74 - 6.86 (s, 2 H).
실시예 38F
N-{(2S)-6-{[(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-아마이드(중간체 40)
Figure pct00161
단계 1: (28S)-28-{4-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]뷰틸}-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산
(2S)-2-아미노-6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산산 하이드로클로라이드 대신에 N6-(tert-뷰톡시카보닐)-L-라이신(0.49g, 1.99m㏖)을 대체하여 실시예 38E, 단계 1에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 역상 칼럼 크로마토그래피(0 내지 60% ACN/수성 폼산(0.1%))에 의한 정제로 (28S)-28-{4-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]뷰틸}-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산(1.14g, 90%)을 무색 오일로서 얻었다. LCMS (AA): m/z = 639.4 (M-H).
단계 2: (28S)-28-(4-{[(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}뷰틸)-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산
DCM(2.0㎖) 중 (28S)-28-{4-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]뷰틸}-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산(148㎎, 0.2310m㏖)의 용액에 TFA (2.0㎖)를 rt에서 첨가하였다. 혼합물을 rt에서 15분 동안 교반하고, 증발시키고, 이어서, 톨루엔(×3)과 공증발시켜 조질의 TFA 염을 제공하였다. 이 조질의 생성물을 고진공 하에 2시간 동안 추가로 건조시킨 후에, DCM(2650㎎, 2.00㎖, 31.2m㏖) 중 말레이미도아세트산 NHS 에스터(69.89㎎, 0.2772m㏖) 및 DIEA (0.121㎖, 0.6929m㏖)를 첨가하고, 이 반응물을 rt에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켰다. 역상 칼럼 크로마토그래피(10 내지 30% ACN/수성 암모늄 아세테이트(10mM))에 의한 정제로 (28S)-28-(4-{[(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}뷰틸)-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산(120㎎, 38%)을 오일로서 얻었다. LCMS (AA): m/z = 676.3 (M-H).
단계 3: N-{(2S)-6-{[(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-아마이드(중간체 40)
(28S)-28-(4-{[(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}뷰틸)-26-옥소-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사-27-아자노나코산-29-온산(311㎎, 0.459m㏖) 및 DCM(2.94㎖)을 함유하는 플라스크에 N,N'-다이사이클로헥실카보다이이미드(94.7㎎, 0.459m㏖) 및 N-하이드록시석신이미드(53.9㎎, 0.459m㏖)를 첨가하였다. 현탁액을 아르곤 분위기 하에 rt에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과시키고, MeCN으로 린스하였다. 여과액을 증발시켰다. 잔사를 DCM 중에 재용해시키고, 물(×2)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축시켜 N-{(2S)-6-{[(2,5-다이옥소-2,5-다이하이드로-1H-피롤-1-일)아세틸]아미노}-1-[(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시]-1-옥소헥산-2-일}-2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-아마이드(중간체 40)(300㎎, 84.4%)를 끈적한 오일로서 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 773.2 (M-H).
실시예 38G
메틸 (2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-트라이아세톡시-6-{2-[(3-{[(9H-플루오렌-9-일메톡시)카보닐]아미노}프로판오일)아미노]-4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10] 펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일) 벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페녹시}테트라하이드로-2H-피란-2-카복실레이트에 대해 표에 나타낸 출발 물질을 대체하여 실시예 23 단계 2 및 단계 3에 기재한 바와 같이 표 22C에 열거한 화합물(C-43)을 제조하였다.
[표 22B]
Figure pct00162
[표 22C]
Figure pct00163
실시예 38H
단계 1에서 (2S)-2-아미노-6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산산 하이드로클로라이드를 표 22D에 나타낸 출발 물질 (2R)-2-아미노-6-(2,5-다이옥소피롤-1-일)헥산산 하이드로클로라이드를 대체하여, 표 22D에 열거한 화합물 중간체-44를 실시예 38E에 기재한 바와 같이 제조하였다.
[표 22D]
Figure pct00164
실시예 39
추계적 시스테인 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조를 위한 절차(도 1에 도시)
50mM 히스티딘, 100mM 알기닌, pH 6.0 완충제 중 항-GCC 항체의 용액(클론 5F9, 국제 특허 출원 공개 WO 2011/050242 참조, 60㎎/㎖)에 용액의 pH가 7.5 내지 8.0이 될 때까지 0.5M Tris/25mM EDTA pH 8.0 완충제를 첨가하였다. 상기 용액에 TCEP(H2O 중 10mM 용액, 3 내지 5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 퍼지하고, rt 또는 37℃에서 2시간 동안 부드럽게 진탕하면서 인큐베이션시켰다. 이어서, 목적하는 링커-페이로드 작제물(DMA 중 10mM 용액, 5 내지 9 당량)을 상기 혼합물에 서서히 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 퍼지하고, 37℃에서 다시 1.5 내지 2시간 동안 부드럽게 진탕하면서 인큐베이션시켰다. 본 명세서에 기재한 분취 SEC 방법에 따라 반응 혼합물을 정제하여 ADC를 제공하였다. 분석 방법에 기재한 바와 같이 UV 흡광도, 분석 SEC 및 LC-QTOF에 의해 각각 ADC 농도, 응집 백분율 및 DAR을 결정하였다.
상기 절차를 사용하여 다른 항체 접합체를 제조할 수 있다.
실시예 40
출발 물질로서 나타낸 출발 링커-페이로드 작제물을 이용하여 실시예 39에 기재한 바와 같이 표 24에 열거한 항체 약물 접합체를 제조하였다.
Figure pct00165
Figure pct00166
실시예 41
트랜스글루타미나제 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조를 위한 절차(도 2에 도시)
탈글리코실화: 50mM 히스티딘, 100mM 알기닌, pH 6.0 완충제 중 항-GCC 항체 용액(클론 5F9, PCT 공개 번호 WO 2011/050242, 60㎎/㎖)을 동일한 용적의 pH 7.2 PBS로 희석시켰다. 용액에 N-글리코시다제 F(New England Biolabs, P0704S, 1㎎의 항체당 500,000개의 단위/㎖, 300개의 단위)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 부드럽게 혼합하면서 37℃까지 가열하였다. 얻어진 탈글리코실화된 5F9를 PBS pH 7.2와 완충제 교환하였다.
트랜스글루타미나제 접합: 상기 제조한 PBS 중 탈글리코실화된 5F9 용액(10 내지 20㎎/㎖)에 29-아지도-3,6,9,12,15,18,21,24,27-노나옥사노나코산-1-아민(아지도-PEG9-아민, BroadPharm, BP-23556, 40 당량)의 0.1M DMSO 용액 다음에 트랜스글루타미나제(ACTIVA™, Ajinomoto, 1㎎의 항체당 5 내지 10㎎)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 부드럽게 혼합하면서 37℃까지 가열하였다. 본 명세서에 기재한 분취 SEC 방법에 따라 생성물을 정제하여 5F9-NH-PEG-아자이드를 제공하였다.
변형-촉진된 아자이드-알킨 첨가 환화: 상기 제조한 5F9-NH-PEG-아자이드 접합체 용액(PBS 중 2 내지 15㎎/㎖)에 링커-페이로드 작제물(DMSO<10%의 총 용매 용적인 3 내지 5 당량)를 함유하는 변형-알킨의 4 내지 10mM DMSO 용액을 첨가하였다. 얻어진 용액을 rt에서 밤새 부드럽게 교반하였다. 본 명세서에 기재한 분취 SEC 방법에 따라 생성물을 정제하여 ADC를 제공하였다. 분석 방법에 기재한 바와 같이 UV 흡광도, 분석 SEC 및 LC-QTOF에 의해 각각 ADC 농도, 응집 백분율 및 DAR을 결정하였다.
상기 절차를 사용하여 다른 항체 접합체를 제조할 수 있다.
실시예 42
표에 출발 물질로서 나타낸 출발 링커-페이로드 작제물을 이용하여 실시예 41에 기재한 바와 같이 표 25에 열거한 항체 약물 접합체를 제조하였다.
Figure pct00167
실시예 43
트랜스글루타미나제 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조(도 3에 도시)
PBS 중 탈글리코실화된 5F9 용액(10 내지 20㎎/㎖, 실시예 41에 기재한 탈글리코실화 절차에 따라 제조)에 1M Tris, 5M NaCl, pH 8.0 완충제(총 용적의 10 내지 20%)를 첨가하여 pH를 8.0까지 조절하였다. 용액에 1차 아민-함유 링커-페이로드 작제물(20 당량) 다음에 트랜스글루타미나제(ACTIVA™, Ajinomoto, 1㎎의 항체당 100 내지 150㎎)의 10mM DMSO 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 부드럽게 혼합하면서 37℃까지 가열하였다. 20mM 인산염 pH 7.0로 처음 세척하고, 이어서, 0.1M 시트르산 pH 4.0으로 ADC를 용리시킴으로써 HiTrap 단백질 A HP 칼럼(GE Healthcare, 17-0402-01)을 이용하여 생성물을 정제하였다.
상기 절차를 사용하여 다른 항체 접합체를 제조할 수 있다.
실시예 44
표에 출발 물질로서 나타낸 출발 링커-페이로드 작제물을 이용하여 실시예 43에 기재한 바와 같이 표 26에 열거한 항체 약물 접합체를 제조하였다.
Figure pct00168
실시예 45
2-아미노-N-(2-((2-(2-아지도아세트아미도)에틸)아미노)-2-옥소에틸)아세트아마이드
Figure pct00169
단계 1: 벤질 (2,2-다이메틸-4,7,10-트라이옥소-3-옥사-5,8,11-트라이아자트라이데칸-13-일)카바메이트
DMF(8.0㎖) 중 Boc-Gly-Gly-OH(550㎎, 2.32m㏖), EDC·HCl (437㎎, 2.28m㏖) 및 HOAt(317㎎, 2.33m㏖)의 용액에 트라이에틸아민(0.340㎖, 2.44m㏖)을 0℃에서 첨가하였다. 얻어진 황색의 이질적 혼합물을 15분 동안 교반하였다. DMF(6.0㎖) 중 벤질(2-아미노에틸)카바메이트(500㎎, 2.44m㏖)의 용액을 서서히 첨가하였다. 10분에, 혼합물을 실온으로 가온시키고, 3일에 걸쳐 교반하였다. 반응 혼합물을 물(100㎖)과 EtOAc(50㎖)로 분할하였다. 분리된 수성층을 EtOAc(50㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 50㎖의 물, 이어서, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 6% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제하여 tert-뷰틸 N-[2-[[2-[2-(벤질옥시카보닐아미노)에틸아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(617㎎, 1.51m㏖, 65% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. LCMS (FA): m/z = 431.2 (M+Na). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 7.97-7.97 (m, 1H), 7.86-7.84 (m, 1H), 7.39-7.29 (m, 5H), 7.27-7.24 (m, 1H), 7.01-6.98 (m, 1H), 5.02 (s, 2H), 3.67 (d, J=5.62 Hz, 2H), 3.58 (d, J=5.87 Hz, 2H), 3.03-3.18 (m, 4H), 1.39 (s, 9H).
단계 2: tert-뷰틸 (2-((2-((2-아미노에틸)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-2-옥소에틸)카바메이트
에탄올(20.0㎖) 중 tert-뷰틸 N-[2-[[2-[2-(벤질옥시카보닐아미노)에틸아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(615㎎, 1.51m㏖)의 용액에 10% Pd/C(62.0㎎, 0.0583m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 H2(1atm)로 퍼지하고, 실온 3시간 동안 교반하였다. 셀라이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 셀라이트의 짧은 층에 걸쳐 슬러리를 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 잔사를 톨루엔과 공증발 다음에 고진공에 의해 건조시켜 tert-뷰틸 N-[2-[[2-(2-아미노에틸아미노)-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(407㎎, 1.48m㏖, 98.5% 수율)를 회백색 고체로서 제공하였다. LCMS (FA): m/z = 275.2 (M+H). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 8.05-7.89 (m, 1H), 7.80-7.63 (m, 1H), 7.08-6.96 (m, 1H), 3.67 (d, J=5.75 Hz, 2H), 3.56 (d, J=5.87 Hz, 2H), 3.06 (q, J=6.24 Hz, 2H), 2.59-2.53 (m, 2H), 1.87-1.61 (m, 2H), 1.39 (s, 9H).
단계 3: tert-뷰틸 N-[2-[[2-[2-[(2-아지도아세틸)아미노]에틸아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트
다이클로로메탄(2.70㎖) 중 EDC·HCl(57.6㎎, 0.300m㏖), HOAt(43.6㎎, 0.320m㏖) 및 2-아지도아세트산(27.0㎕, 0.315m㏖)의 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 빙욕에서 냉각시키고, 이어서, tert-뷰틸 N-[2-[[2-(2-아미노에틸아미노)-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(75.0㎎, 0.273m㏖)를 첨가한 후에, 수 분 안에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(55.8㎕, 0.320m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 0℃에서 교반하고, 이어서, rt에서 밤새 교반하였다. 물(2㎖) 및 EtOAc(5㎖)를 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 격렬하게 교반하였다. 혼합물을 EtOAc(25㎖)로 희석시키고, 이어서, 50% 염수/물(20㎖) 및 염수로 세척하였다. 분리된 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 8% MeOH/CH2Cl2)에 의한 정제로 tert-뷰틸 N-[2-[[2-[2-[(2-아지도아세틸)아미노]에틸아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(88.0㎎, 0.246m㏖, 90.1% 수율)를 유리 같은 고체로서 제공하였다. LCMS (FA): m/z = 356.2 (M-H). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 8.16-8.08 (m, 1H), 8.04-7.92 (m, 1H), 7.92-7.81 (m, 1H), 7.05-6.94 (m, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.67 (d, J=5.62 Hz, 2H), 3.58 (d, J=5.87 Hz, 2H), 3.10-3.19 (m, 4H), 1.39 (s, 9H).
단계 4: 2-아미노-N-[2-[2-[(2-아지도아세틸)아미노]에틸아미노]-2-옥소-에틸]아세트아마이드(중간체 34)
다이클로로메탄(4.0㎖) 중 tert-뷰틸 N-[2-[[2-[2-[(2-아지도아세틸)아미노]에틸아미노]-2-옥소-에틸]아미노]-2-옥소-에틸]카바메이트(86.0㎎, 0.241m㏖)의 용액에 트라이플루오로아세트산(1.00㎖, 8.77m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 5㎖의 톨루엔으로 희석시키고, 농축시켰다. 잔사를 5㎖의 물에서 취하고, 동결건조시켜 2-아미노-N-[2-[2-[(2-아지도아세틸)아미노]에틸아미노]-2-옥소-에틸]아세트아마이드 2,2,2-트라이플루오로아세트산 염(102㎎, 0.275m㏖, 정량적)을 무색 시럽으로서 제공하였다. LCMS (FA): m/z = 258.1 (M+H). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 8.55-8.62 (m, 1H), 8.12-8.20 (m, 1H), 8.02-8.09 (m, 1H), 7.90-8.02 (m, 3H), 3.74-3.82 (s, 2H), 3.80 (m, 2H), 3.55-3.68 (m, 2H), 3.11-3.19 (m, 4H).
실시예 46
5F9-LPETGG-His6의 생성 및 정제
Expi293FTM 세포, Expi293TM 발현 성장 배지 및 Expifect아민 293TM 형질감염 키트를 포함하는, Thermo Fisher, 카탈로그 번호 A14635로부터의 일시적 Expi293F 포유류 단백질 발현 시스템 키트를 이용하여 5F9-LPETGG-His6 단백질을 생성하였다. 5ℓ의 통기시킨 진탕 플라스크에서 2.8×106개의 세포/㎖의 밀도로 1.8 리터의 Expi293FTM 세포를 5.4㎖ 에피펙타민 293TM 형질감염 시약과 혼합한 0.666㎎의 경쇄 DNA + 0.334㎎의 중쇄 DNA로 형질감염시키고, 밤새 37℃, 8% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션시키고, 100rpm에서 진탕시켰다. 다음날 키트로부터의 10㎖의 인핸서 1 및 100㎖의 인핸서 2를 플라스크에 첨가하였다. 플라스크를 상기 조건에서 인큐베이션시키고, 형질감염 5일 후에 채취하였다. 세포를 9000rpm에서 10분 동안 4℃에서 교반시키고, 이어서, 필터를 0.22μM 필터 단위를 통해 멸균시키고, 새로 충전한 30㎖ MabSelect SuRe LX 단백질 A 칼럼(GE Healthcare, 카탈로그 번호 17-5474-03)을 거쳐 정제될 때까지 4℃에서 저장하였다. 정량펌프를 이용하여 칼럼을 거쳐서 상청액을 장입시킨 후에, 수지를 60㎖[2개의 칼럼 용적(CV])의 저염 완충제(25mM 시트르산삼나트륨 pH 7.6, 125mM NaCl)로 세척하고, 이어서, 60㎖(2CV)의 고염 완충제(25mM 시트르산삼나트륨 pH 7.6, 2M NaCl)로 세척한 후에, 다른 60㎖(2CV)의 저염 완충제로 세척하였다. 25mM 시트르산, 125mM NaCl pH8 내지 pH2.2로 pH 구배 용리에 의해 단백질을 용리시키고, 피크 분획을 수집하였다. 각 분획을 1M 시트르산삼나트륨 pH 8.2로 중화시켜, 대략 pH 6에 대해 70mM까지 만들었다. 주요 피크(2A5 내지 2C5)의 분획을 풀링하였다. 풀링한 분획을 농축시키고, 분자량 컷오프가 50kDa인 Sartorius VIVAFLOW200 카트리지를 이용하여 25mM 시트르산나트륨 pH 5.5, 125mM NaCl 완충제로 완충제 교환하였다. 이어서, 샘플을 0.22μM 주사기 필터 단위를 통해 여과시키고, 분취시키고 나서 -80℃에서 저장하였다. 최종 수율은 95% 초과의 순도 및 0.64 EU/㎖의 엔도톡신을 갖는 623㎎의 정제된 5F9-LPETGG-His6 항체였다.
Figure pct00170
실시예 47
소르타제 접합을 통한 Ab-STING 작용제 접합체의 제조를 위한 절차(도 4에 도시)
소르타제 접합: 실시예 46에 기재한 절차에 따라 중쇄의 C-말단에 LPETGG-His6을 함유하는 5F9 항체를 생성하였다. 단백질의 농도가 48μM이 되도록, 25mM 시트르산염, 125mM NaCl, pH 5.5 완충제 중 중쇄의 C-말단에서 LPETG-His6 태그를 함유하는 5F9(5F9-LPETGG-His6)의 용액을 50mM HEPES, 150mM NaCl, pH 7.45 완충제로 희석시켰다. 용액에 CaCl2(4mM 수용액, 80 대략 100 당량) 및 2-아미노-N-[2-[2-[(2-아지도아세틸)아미노]에틸아미노]-2-옥소-에틸]아세트아마이드(중간체 34, 0.1% DMSO와 함께 50mM HEPES, 150mM NaCl, pH 7.45 완충제 중의 800μM 용액, 20 당량) 다음에 소르타제 A Q60-K206-P94S-D160N-D165A-K196 His6을 첨가하였다(문헌[Antos, J. M., Ingram, J., Fang, T., Pishesha, N., Truttmann, M. C., Ploegh, H. L. (2017). Site-specific protein labeling via sortase-mediated transpeptidation. Current Protocols in Protein Science, 89, 15.3.1-15.3.19]에 기재한 바와 같이 표현, 50mM HEPES, 150mM NaCl, pH 7.45 완충제 중 2.0μM 용액, 0.03 당량). 반응 혼합물을 rt에서 4시간 동안 교반하였다. 생성물을 Capturem 니켈 칼럼(Takara제, PBS로 세척) 다음에 투석에 의해 정제하거나, 본 명세서에 기재하는 다음의 분취 SEC 방법으로 5F9-LPETG-아자이드를 제공한다.
변형-촉진된 아자이드-알킨 첨가 환화: 상기 제조한 5F9-LPETGG-NH(CH2)2NHCOCH2-아자이드 접합체 용액(PBS 중 2 내지 15㎎/㎖)에 링커-페이로드 작제물(DMSO<10%의 총 용매 용적인 3 내지 5 당량)을 함유하는 변형-알킨의 4 내지 10mM DMSO 용액을 첨가하였다. 얻어진 용액을 rt에서 밤새 부드럽게 교반하였다. 본 명세서에 기재한 분취 SEC 방법에 따라 생성물을 정제하여 ADC를 제공하였다. 분석 방법에 기재한 바와 같이 UV 흡광도, 분석 SEC 및 LC-QTOF에 의해 각각 ADC 농도, 응집 백분율 및 DAR을 결정하였다.
상기 절차를 사용하여 다른 항체 접합체를 제조할 수 있다.
실시예 48
표에 출발 물질로서 나타낸 출발 링커-페이로드 작제물을 이용하여 실시예 47에 기재한 바와 같이 표 27에 열거한 항체 약물 접합체를 제조하였다.
Figure pct00171
실시예 49
생물학적 프로토콜 및 STING 세포 데이터
트라이토솜 분석 조건
시험 화합물(DMSO 중 121 uM 링커-페이로드 작제물 용액 또는 PBS 중 ADC 용액, 4.65㎕)을 125㎕ 랫트 간 트라이토솜(XenoTech로부터 구입) 및 433㎕의 수성 완충제 용액(54.7㎎/㎖ 인산염, 1.7㎎/㎖ EDTA, pH 6.0)의 혼합물에 섞고, 용액을 37℃에서 인큐베이션시켰다. 40㎕의 샘플을 10 및 30분, 1, 3, 5 및 24시간에 제거하고, 96-웰 플레이트 상에서 메탄올 용액 중의 0.1% 폼산 160㎕로 처리하고, 이어서, -80℃에서 저장하였다. 마지막 시점에 수집한 후에, 각 샘플을 해동시키고, 150nM 카부트아마이드(내부 표준)를 함유하는 메탄올 용액 중 0.1% 폼산의 200㎕로 처리하였다. 샘플을 4000g에서 10분 동안 원심분리시키고, 본 명세서에 기재한 LC/MS/MS 방법에 따라 분석하였다. Excel-Fit 프로그램을 사용하여 t1/2를 계산하였다. 계산한 t1/2를 표 28에 보고한다. 표 28에 나타낸 바와 같이, 24시간 이내에 이 트라이토솜 분석에서 ADC-3으로부터의 유리 페이로드 방출이 관찰된 반면, 동일한 페이로드를 갖는 ADC-9는 7시간의 t1/2에 의한 페이로드를 성공적으로 방출시켰는데, 이는 ADC-9의 링커가 ADC-3에 비해 대리 세포 방출 조건 하에 페이로드 유리의 현저하게 개선된 속도를 야기한다는 것을 나타낸다.
Figure pct00172
표 28에 ADC-1, ADC-3 및 ADC-9에 대해 시간에 따른 페이로드 방출의 그래프 표현을 도 5, 도 6 및 도 7에 나타낸다.
혈장 안정성 분석 조건
시험 화합물을 10㎍/㎖의 농도로 1㎖의 혈장과 섞고, 이어서, 5 등가 용적의 분취액을 2㎖의 에펜도르프 마이크로퓨지관(0, 24, 48, 72 및 96시간을 라벨링)에 제공하였다. 0시간 샘플관을 -80℃에 즉시 저장하고, 남아있는 관을 보통으로 진탕하면서 37℃에서 인큐베이션시켰다. 분취액을 이들의 대응하는 시점에 인큐베이터로부터 제거하고, -80℃에서 저장하였다. 모든 샘플을 수집한 후에, 이들을 rt에서 해동시키고, 젖은 얼음 상에 두었다. 50㎕의 각 샘플을 96-웰 미량정량판에 3회 제공하였다. 50nM의 내부 표준을 함유하는 200㎕의 빙랭 메탄올로 샘플의 반응을 중단시켰다. 샘플을 2분 동안 교반하고, 이어서, 3000rpm에서 10분 동안 원심분리시켰다. 185㎕의 상청액을 깨끗한 주사 플레이트에 옮기고, 이어서, 40℃에서 N2 기체 하에 건조시켰다. 건조시킨 샘플 추출물을 100㎕의 LCMS 등급수로 재구성하고, 이어서, LC-MS/MS 분석을 위한 제조에서 1분 동안 교반하였다.
물(용매 A) 중 0.1% 폼산 및 아세토나이트릴(용매 B) 중 0.1% 폼산으로 이루어진 구배를 이용하여 40℃에서 Synergi 2.5μ Polar-RP 100A C18 칼럼(2.0㎜ X 30㎜), (Phenomenex®)을 이용하여 역상 HPLC에 의해 각 샘플을 분리시켰다. SCIEX API 4500 QTRAP 기기를 이용하여 다중-반응 모니터링(MRM) 모드에서 양이온 분무에 의해 분석물을 검출하였다. 다양한 시점에 인간, 영장류 및 마우스 혈장의 페이로드 상실 백분율을 표 29에 보고한다.
Figure pct00173
THP1 이중 Lucia 리포터 유전자 분석 조건
THP1-Dual™ KI-hSTING-R232 세포(InvivoGen #thpd-r232)는 내인성 인간 HAQ STING 유전자의 안정한 이중대립유전자 넛아웃 및 인간 STING의 R232 변이체의 넉인에 의해 인간 THP-1 단핵구 세포주로부터 유래되었다. 이들 세포는 또한 5가지 IFN-자극 반응 요소(ISRE)와 함께 ISG54 (인터페론-자극 유전자) 최소 프로모터의 제어 하에 유도성 분비된 Lucia 루시퍼라제 리포터 유전자를 안정하게 발현시킨다. 리포터 유전자의 발현은 Lucia 루시퍼라제의 활성을 평가함으로써 IFN 조절 인자(IRF) 경로 연구를 가능하게 한다. 인간 STING 및 루시퍼라제에 추가로, 이들 세포를 인간 구아닐릴 사이클라제 C(GCC)를 안정하게 발현시키도록 조작하여 IRF 경로의 표적-매개 활성화 연구를 가능하게 하였다. 비-GCC 발현 벡터 세포를 대조군으로서 사용하였다.
실험일에, 세포를 성장 배지(RPMI 1640, 2mM L-글루타민, 25mM HEPES, 10% 열-비활성화 소 태아 혈청, 100㎍/㎖ Normocin™, 100U/㎖-100㎍/㎖ Pen-Strep, 10㎍/㎖의 블라스티시딘, 100㎍/㎖의 Zeocin, 및 1㎍/㎖의 퓨로마이신)에서 웰 밀도당 15,000개의 세포/25㎕로 백색, 384-웰 플레이트(Corning 356661)에 플레이팅하였다. 세포 플레이트에 5㎕의 GCC-표적화-ADC 샘플을 투약하고, 이어서, 37℃에서 20분 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션의 마지막에, 10㎕/웰의 QUANTI-Luc™(InvivoGen # rep-qlc1)을 첨가하고, LeadSeeker를 이용하여 발광을 즉시 측정하였다.
상기 기재한 분석 방법에 대해, 다양한 농도에서 각 시험 ADC에 대한 발광 신호 유도%를 비처리 및 대조군 처리 샘플에 대해 계산하였다. 신호 유도 곡선 백분율에 대한 화합물 농도를 적합화시켜 EC50 값을 생성하였다. 당업자는 EC50 값으로서 생성된 값이 실험 변동의 대상임을 인식할 것이다. 관찰된 EC50 및 Emax를 표 30에 보고한다. 이하의 표 30에 입증하는 바와 같이, ADC-16은 벡터 THP1 세포에서 ADC-15보다 약 21배 더 강하였는데, 이는 ADC-15에 비해 ADC-16으로부터의 더 빠른 세포내 페이로드 방출로 인한 것일 가능성이 있다.
Figure pct00174
실시예 50
마우스에서의 약물동력학 평가
GCC-발현 CT26 결장 암종 마우스 종양을 보유하는 Balb/C 마우스에서의 ADC의 생체내 평가를 위해, 6 내지 8주령의 암컷 Balb/C 마우스(Jackson Laboratory로부터 구입)를 사용하였다. CT26.WT 모 세포를 ATCC, 카탈로그 번호 CRL-2638로부터 얻었다. GCC-발현 CT26 세포를 CT26.WT를 인간 GCC 유전자를 함유하는 렌티바이러스 벡터 pLenti6.3으로 형질도입함으로써 Takeda에 의해 작제하여 CT26 pLenti6.3 GCC 클론 A5를 얻었다. CT26 pLenti6.3 GCC 클론 A5 세포를 5% CO2와 함께 12 내지 14일 동안 37℃ 인큐베이터에서 멸균 조건 하에 성장시켰다. 세포를 10% 소 태아 혈청을 갖는 RPMI-1640 배지에서 성장시켰다. 세포를 분리시키기 위해 세포를 0.05% 트립신/EDTA를 이용하여 3 내지 4일마다 계대시켰다. 이식일에, 세포를 들어올리고, 0.5×106개 세포/100㎕의 농도로 RPM-1640 무혈청 배지에서 재현탁시켰다. 27 게이지 바늘(마우스당 0.5×106개의 세포/100㎕ 주사 용적)을 이용하여 마우스 하부 옆구리에 피하 주사에 의해 CT26 pLenti6.3 GCC 클론 A5 세포를 이식하였다. 세포 이식 후에, 캘리퍼에 의해 종양을 측정하고, 일단 종양이 만져지면, 마우스를 주당 2회 체중을 쟀다. 종양을 2차원으로 측정하였다. (L×W2)/2를 이용하여 캘리퍼 측정을 계산하였다. 마우스에 보통식(normal diet)을 공급하고, 실험 동물의 관리 및 사용에 관한 지침(Guide for Care and Use of Laboratory Animals) 및 실험동물운영위원회(Institutional Animal Care and Use Co㎜ittee)의 규제에 따라 SPF 동물 시설에 수용하였다. 동물을 18 내지 26℃의 온도, 50±20%의 상대 습도 및 12시간의 간헐적 명암 주기에서 유지하고, 사료 및 물은 임의로 이용 가능하였다.
평균 종양 용적(MTV)이 500 내지 800㎣에 도달되었을 때, CT26-GCC 종양을 보유하는 Balb/C 마우스(n=3/처리군)에 ADC의 주사 후에 ADC의 약물동력학을 연구하였다. 혈청 샘플을 다양한 시점에 취하고, 분석을 위해 냉동 저장하였다.
총 항체 및 접합 페이로드의 마우스 혈장 수준을 Sciex 6500 QTRAP 질량 분광기에 접속된 Shimadzu UHPLC 시스템 상의 2-인-1 면역포획 기반 LC/MS 분석에 의해 측정하였다. 간략하게, 마우스 혈장 샘플을 실온에서 45분 동안 항-인간 IgG 코팅 자기 비드와 함께 인큐베이션시키고, 이어서, PBST(pH 7.4의 PBS 완충제, 0.05% tween 20을 함유) 및 PBS 완충제로 자기 비드를 연속해서 세척함으로써 비특이적으로 결합된 단백질을 제거하였다. 이 후에, 네이키드(naked) 항체(DAR=0)와 ADC(DAR≥1)를 둘 다 자기 비드로부터 0.1% 트라이플루오로아세트산에 용리시켰다. 안정한 동위원소 표지 내부 표준에서 용리액을 중화시키고, 섞은 후에, 샘플의 하나의 분취액을 피펫팅하고, 파파인으로 1시간 동안 37℃에서 분해시키고, 이어서, 접합 페이로드의 LC/MS 분석을 위해 사용하였다. 남아있는 샘플을 트립신/lys-C 분해로 1시간 동안 70℃에서 처리하고, 이어서, 총 항체의 LC/MS 분석을 위해 사용하였다.
또한 혈장 단백질 침전을 수행한 후에 LC/MS에 의해 순환에서 유리 페이로드를 측정하였다. 간략하게, 마우스 혈장을 안정한 동위원소 표지 내부 표준을 함유하는 8용적의 메탄올과 혼합하고, 이어서 상청액을 약한 질소 증기 하에 40℃에서 증발건조시켰다. 최종적으로, LC/MS 분석 전에 LC/MS 등급수에서 잔기를 재구성하였다. ADC-1, ADC-8 및 ADC-9의 PK 프로파일을 표 31에 요약한다. 혈장 PK의 그래프 표현을 도 12, 도 13 및 도 14에 나타낸다. 표 24에 나타낸 바와 같이, ADC-1, ADC-8 및 ADC-9의 DAR 값은 각각 4.5, 3.9 및 4.3이며, 이는 도 8 내지 10에 나타낸 총 Ab의 농도보다 0시점에 얻은 접합 CDN의 모다 높은 몰 농도를 야기하였다. 그러나, 도 8에 나타낸 바와 같이, ADC-1로부터의 접합 CDN의 몰 농도는 총 Ab보다 더 빨리 하락하였고, 두 농도를 제7일 합하고(해당 일에 약 1의 DAR를 야기함), 이는 ADC-1의 DAR이 이의 링커의 보다 낮은 안정성으로 인해 시간에 따라 감소된다는 것을 나타낸다. 대조적으로, 도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, ADC-8과 ADC-9 둘 다로부터의 접합된 CDN의 몰 농도는 실험 과정 내내 이들 각각의 총 Ab보다 계속해서 더 높았다. 또한, 표 31에서 입증된 바와 같이 ADC-1에 비해 ADC-8 및 ADC-9로부터의 접합 페이로드/CDN의 보다 긴 반감기는 ADC-8 및 ADC-9에서 향상된 링커 안정성의 결과일 가능성이 있다. 요약하면, 이 실험은 ADC-8 및 ADC-9의 링커가 ADC-1에 비해 마우스 혈장에서 개선된 안정성을 가진다는 것을 나타낸다.
Figure pct00175
실시예 51
마우스에서의 항종양 활성 평가
GCC-발현 CT26 결장 암종 마우스 종양을 보유하는 Balb/C 마우스를 실시예 50에 기재한 바와 같이 생성하였다.
평균 종양 용적(MTV)이 대략 75㎣에 도달되면, 동물을 몇 개의 처리군(n=8/그룹)으로 무작위화시키고, ADC의 다양한 용량의 ADC로 정맥내 경로에 의해 1회 투약하였다. 종양은 1주 2회 측정을 계속하였다. 종양 용적을 측정하고 비히클 처리 종양을 비교함으로써 종양 성장에 대한 ADC 처리 효과를 평가하였다.
종양 크기가 동물 체중의 10% 용적 또는 직경 2㎝에 도달되었을 때, 효능 연구에 대한 종점이 달성되었다. 주사 후에, 또한 마우스를 임상 악화 징후에 대해 면밀히 모니터링하였다. 임의의 이유로 마우스가 호흡곤란, 구부정한 자세, 감소된 활동, 뒷발 마비, 흉막 삼출에 대한 징후로서 빈호흡, 20% 또는 15%에 접근하는 체중 감소 + 다른 징후를 포함하는 임의의 이환율 징후를 나타내었다면, 또는 정상 활동(먹이주기, 이동성)을 수행하는 능력이 손상된다면, 마우스를 안락사시켰다.
ADC-1, ADC-5, ADC-8 및 ADC-9에 대해 관찰된 항종양 활성의 그래프 표현을 각각 도 7, 도 8, 도 9 및 도 10에 나타낸다.
지질 접합체:
약어:
AA 암모늄 아세테이트를 이용하는 LCMS 방법
Ac 아세트산염
ACN 아세토나이트릴
atm 대기
aq 수성
BBN 보라바이사이클로(3.3.1)노난
Bn 벤질
Boc tert-뷰톡시카보닐
(Bpin)2 비스(피나콜라토)다이보론
tBu tert-뷰틸
Bz 벤조일
C 섭씨
CAD 하전된 에어로졸 검출
cGAMP 환식 구아노신 일인산염-아데노신 일인산염
DBAD 다이-tert-뷰틸 아조다이카복실레이트
DBU 1,8-다이아자바이사이클로[5.4.0]운데크-7-엔다이클로로아세트산
DCA 다이클로로아세트산
DCE 다이클로로에탄
DCM 다이클로로메탄
DEAD 다이에틸 아조다이카복실레이트
DIAD 다이아이소프로필 아조다이카복실레이트
DIPEA N,N-다이아이소프로필에틸아민
DMAP 4-다이메틸아미노피리딘
DMF N,N-다이메틸폼아마이드
DMSO 다이메틸설폭사이드
DMTr 4,4'-다이메톡시트라이틸
DOTMA 1,2-다이-O-옥타데센일-3-트라이메틸암모늄 프로판
DPPC 1,2-다이팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린
DSPC 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린
Et 에틸
EtOH 에탄올
EtOAc 에틸 아세테이트
FA 폼산을 이용하는 LCMS 방법
h 시간
Int 중간체
HPLC 고압 액체 크로마토그래피
HRMS 고분해능 질량분석법
IC50 저해 농도 50%
IPA 아이소프로필 알코올
IPC 다이아이소피노캄페닐
LCMS 액체 크로마토그래피 질량분석법
LC/MS/MS 액체 크로마토그래피/이중질량분석법
LDA 리튬 다이아이소프로필아마이드
LHMDS 리튬 비스(트라이메틸실릴)아마이드
m/z 질량 대 전하
㎒ 메가 헤르츠
Me 메틸
MeOH 메탄올
min 분
㎖ 밀리리터
MMP 메틸몰폴린
MS 질량분석법
nBu n-부탄
NMP 1-메틸-2-피롤리딘온
NMR 핵 자기 공명
PE 석유 에터
Ph 페닐
psi 평방인치당 파운드
pyr 피리딘
rt 실온
SFC 초임계 유체 크로마토그래피
T3P 2,4,6-트라이프로필-1,3,5,2,4,6-트라이옥사트라이포스포리난-2,4,6-트라이옥사이드
TDA-1 트리스[2-(2-메톡시에톡시)에틸]아민
TBAF 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드
TBS tert-뷰틸다이메틸실릴
TBTU O-(벤조트라이아졸-1-yl)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트
TEA 트라이에틸아민
TFA 트라이플루오로아세트산
TIDPSi 1,1,3,3-테트라아이소프로필다이실록산
TIPS 트라이아이소프로필실릴
THF 테트라하이드로퓨란
UPLC 초성능 액체 크로마토그래피
Xantphos 4,5-비스(다이페닐포스피노)-9,9-다이메틸잔텐
분석 방법:
NMR 조건:
달리 언급되지 않는 한, Bruker Avance III 400 분광기 400㎒ 1H 주파수 상의 NMR 스펙트럼을 기록하였다. 분광기 상에서 162㎒ 및 376㎒에서 각각 31P NMR 및 19F NMR 스펙트럼을 실행하였다. 달리 언급되지 않는 한, 1H 디커플링을 이용하여 모든 이종핵 실험을 획득하였다.
LCMS 조건:
역상 C18 칼럼을 이용하여 Micromass 질량 분광기에 연결된 Hewlett-Packard HP1100 또는 Agilent 1100 Series LC 시스템 상에서 LCMS 스펙트럼을 기록하였다. 화합물을 최고로 특성규명하기 위해 다양한 구배 및 실행 시간을 선택하였다. 이동상은 ACN/물 또는 MeOH/물 구배에 기반하였고, 0.1% 폼산(FA로서 표시된 바와 같은 방법) 또는 10mM 아세트산암모늄(AA로서 표시된 바와 같은 방법) 중 하나를 함유하였다. 사용한 용매 구배의 일례는 16.5분 실행 동안 1㎖/분의 유속에서 100% 이동상 A(이동상 A = 99% 물 + 1% ACN + 0.1% 폼산) 내지 100% 이동상 B(이동상 B = 95% ACN + 5% 물 + 0.1% 폼산)였다.
일부 경우에, LCMS 스펙트럼을 Agilent 6130 질량 분광기에 연결된 Agilent 1290 Infinity UPLC 시스템, Waters Acquity SQ 질량 분광기에 연결된 Waters Acquity UPLC 시스템, 또는 역상 C18 칼럼을 이용하여 Waters Micromass ZQ 질량 분광기에 연결된 Agilent 1100 Series HPLC 시스템 상에서 기록하였다. 화합물을 최고로 특성규명하기 위해 다양한 구배 및 실행 시간을 선택하였다. 이동상은 ACN/물 또는 MeOH/물 구배에 기반하였고, 0.1% 폼산(FA로서 표시된 바와 같은 방법) 또는 10mM 아세트산암모늄(AA로서 표시된 바와 같은 방법) 중 하나를 함유하였다. 사용한 용매 구배의 일례는 5분 실행 동안 0.5㎖/분의 유속에서 95% 이동상 A(이동상 A = 99% 물 + 1% ACN + 0.1% 폼산) 내지 100% 이동상 B(이동상 B = 95% ACN + 5% 물 + 0.1% 폼산)였다.
분취 HPLC:
200㎚로부터 400㎚까지 설정한 UV/가시광선 155 검출기 촉발 분획 수집과 함께 322 펌프에 의해 작동되는 Gilson 기기를 이용하여 용매 A(99% 10mM 암모늄 아세테이트/1% 아세토나이트릴)/용매 B(5% 10mM 암모늄 아세테이트/95% 아세토나이트릴) 구배로 용리하는 Phenomenex 5 마이크론 C5 21.2×250㎜를 이용하여 분취 HPLC를 수행한다. Agilent 1100 LC/MSD 기기 상에서 질량 개폐 분획 수집을 수행하였다.
당업자는 구배, 칼럼 길이 및 유속의 변형이 가능하며, 일부 조건은 분석 중인 화학적 종에 따라서, 다른 것보다 화합물 특성규명에 더 적합할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
분취 SFC:
0.3% 다이에틸아민 또는 0.3% TEA 또는 0.3% 폼산을 함유하거나 또는 임의의 산 또는 염기 첨가제 없이 초임계 이산화탄소 및 알코올의 적절한 백분율로 용리하는 10, 20 또는 30㎜×250㎜ ChiralPak 칼럼(전형적으로 IA, IB, IC, ID, IE 및 IF), 10 또는 20㎜×250㎜ Phenomenex Lux 셀룰로스-4 또는 2-에틸피리딘 칼럼을 이용하여 분취 SFC를 수행하였다. 10 내지 100㎖/분 범위의 유속 및 40℃의 칼럼 온도를 갖는 등용매 조건이 전형적이다. 200㎚ 내지 400㎚로 설정한 UV/가시광선 촉발 분획 수집 및 10㎫로 설정한 배압 조절을 이용하는 Jasco SFC 분취 정제 시스템 상에서 분취 SFC를 수행한다.
당업자는 구배, 칼럼 길이 및 유속의 변형이 가능하며, 일부 조건은 분석 중인 화학적 종에 따라서, 다른 것보다 화합물 특성규명에 더 적합할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
실시예 B에 대한 HPLC 조건:
용매 A(80% 물/10% 50mM 암모늄 아세테이트/10% 아세토나이트릴)/용매 B (10% 50mM 암모늄 아세테이트/90% 아세토나이트릴) 구배, 1㎖/분의 유속, 40℃의 칼럼 온도 및 254㎚에서의 UV 검출로 용리하는 SHISEIDO 3 마이크론 C18 4.6×75 ㎜를 갖는 SHIMADZU LC-2010C를 이용하여 HPLC 분석을 수행하였다.
실시예 B에 대한 LC/MS/MS 조건:
AB SCIEX 4500 또는 AB SCIEX 5500 Triple Quad 질량분석법, 또는 동등한 시스템과 연결된 Shimadzu UltraFast 액체 크로마토그래피 및 오토샘플러를 이용하여 LC/MS/MS 분석을 수행하였다.
화합물 번호 14 및 화합물 I-5c의 분석을 위해, 99% 수 중 10mM 암모늄 아세테이트 및 수 중 1% 아세토나이트릴 또는 0.1% 폼산을 이동상 A 용매로서 제조하고, 5% 수 중 10mM 암모늄 아세테이트 및 5% 수 중 95% 아세토나이트릴 또는 0.1% 폼산 및 95% 아세토나이트릴을 이동상 B 용매로서 사용하였다. 액체 크로마토그래피를 3분 동안 1.5㎖/분에서 구배로 실행하였다. HPLC 칼럼은 2.1㎜ ID×30㎜ 길이를 갖는 Waters Xselect C18 CSH 3.5 마이크론 칼럼이었고, 칼럼 온도는 실온이었다.
화합물 CP-1의 분석을 위해, 99% 물 및 1% 아세토나이트릴 중의 10mM 암모늄 아세테이트를 이동상 A 용매로서 제조하고, 5% 물 및 95% 아세토나이트릴 중의 10mM 암모늄 아세테이트를 이동상 B 용매에 대해 제조하였다. 액체 크로마토그래피를 3.5분 동안 1.5㎖/분에서 구배로 실행하였다. HPCL 칼럼은 Osaka Soda Capcell PAK C1 UG120 5 마이크론, 2.0㎜ I.D.×35㎜ 길이였고, 칼럼 온도는 실온이었다.
Analyst 소프트웨어 1.7을 사용하여 MS/MS 피크 면적을 분석하고, 샘플 농도를 계산하였다.
UPLC-CAD 조건:
0.8㎖/분의 유속 및 35℃의 칼럼 온도를 이용하여 용매 A(수 중 10mM 암모늄 아세테이트, 4ℓ 중 2.6㎖ 수산화암모늄)/용매 B(메탄올 중 10mM 암모늄 아세테이트, 4ℓ 중 2.6㎖ 수산화암모늄 95%)를 이용하는 구배 방법으로 용리하는 ACE Excel C4 2 마이크론 2.1×100㎜ 또는 유사한 칼럼을 갖는 Thermo Scientific™ Dionex™ Corona™ Veo™ RS(빠른 분리) 하전 에어로졸 검출기 및 Waters ACQUITY UPLC 시스템을 이용하여 UPLC-CAD 분석을 수행하였다. UPLC-CAD 분석으로부터 최대 ±20%의 변화가 초래될 수 있다.
실시예 A1
tert-뷰틸 [4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸]메틸카바메이트 TEA 염, 중간체-1
Figure pct00176
화합물 번호 14(300㎎, 0.40m㏖)를 건조 피리딘에 용해시키고, 농축건조시켰다(5㎖×3회). 잔사를 아르곤 분위기 하에 피리딘(6.41㎖) 중에 용해시키고, 빙수욕으로 냉각시킨 클로로트라이메틸실란(0.30㎖, 2.38m㏖)으로 처리하였다. 반응물을 rt까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하여 TMS 보호된 화합물 번호 14를 생성하였다. 테트라하이드로퓨란(10.7㎖) 중 4-((tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노)부탄산(520.0㎎, 2.27m㏖)의 빙수욕 냉각 용액에 별개로(실온에서 상기 반응물을 대략 30분 교반한 후에) 4-메틸몰폴린(0.28㎖, 2.50m㏖)를 첨가한 후에, THF 중의 아이소뷰틸 클로로포메이트(0.29㎖, 2.27m㏖)를 서서히 첨가하였다. 혼탁한 현탁액을 rt까지 가온시키고, 1시간 동안 교반하고, 이어서, 상기 TMS 보호된 중간체를 주사기를 통해 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 밤새 교반하였다. MeOH(10㎖)를 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 농축시켰다. 잔사를 MeOH(3.8㎖) 중에 재용해시켰다. 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(0.26㎖, 1.59m㏖)를 빙수욕 냉각시킨 반응 혼합물에 첨가하고, rt까지 가온시키고 나서, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토(Celite®)(1 g) 상에 흡수시키고, 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM) 중 0 내지 50% ACN)에 의해 정제하여 TEA 염으로서 중간체-1(214.0㎎, 48.5%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 910.2 (M+H). 1H NMR (D2O) δ 8.55(s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.14 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.5d (dd, J = 4.0, 52.0 Hz, 1H), 5.04-4.93 (m, 1H), 4.91-4.86 (m, 1H), 4.66 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.33-4.25(m, 3H), 4.14 (dd, J = 4.0, 12.0 Hz, 1H), 3.94 (dd, J = 4.0, 8.0 Hz, 1H), 3.25(br, m, 2H), 3.05(q, J = 8.0 Hz, 15H), 2.73 (s, 3H), 2.59-2.54 (m, 1H), 1.90-1.82 (m, 1H), 1.20 (s, 9H), 1.13 (t, J = 8.0 Hz, 22H). 31P NMR (D2O) δ 55.46 (s, 1P), 52.06 (s, 1P). 19F NMR (D2O) δ -164.19 (s, br, 1F), -200.75 내지 -200.99 (m, 1F).
실시예 A2
[(2R)-3-[하이드록시-[2-[[5-[[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(하이드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]카바모일]-2-메틸-프로필]아미노]-5-옥소-펜탄오일]아미노]에톡시]포스포릴]옥시-2-옥타데칸오일옥시-프로필] 옥타데카노에이트, 중간체-2
Figure pct00177
바이알에서 (2S)-2-아미노-N-[(1S)-2-[4-(하이드록시메틸)아닐리노]-1-메틸-2-옥소-에틸]-3-메틸-부탄아마이드(112.1㎎, 0.38m㏖)를 톨루엔 중에 현탁시키고, 증발건조시켰다(1㎖×3). 잔사를 DMF(1.5㎖) 중에 용해시키고, DIPEA(88.9㎕, 0.51m㏖)로 처리하였다. 이어서, DMF 용액을 DCM(15㎖) 중 나트륨[(2R)-2,3-다이(옥타데칸오일옥시)프로필] 2-[[5-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시-5-옥소-펜탄오일]아미노]에틸 포스페이트(250.0㎎, 0.25m㏖)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 4시간 동안 교반하였다. 대부분의 용매(DCM)를 증발시키고, 잔여 용액(DMF)을 빙랭 HCl 수용액(0.1 N, 5㎖))에 부었다. 여과에 의해 고체를 수집하고, 물(3㎖×3) 및 DCM(3㎖×3)으로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 중간체-2(247.0㎎, 85.2%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1137.8 (M+H). 1H NMR (MeOD/CDCl3) δ 7.55(안쪽에 묻힌 CDCl3 피크, 2H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.25-5.22 (m, 1H), 4.53-4.49 (안쪽에 묻힌 MeOD 잔류 물 피크, 3H), 4.40 (dd, J = 4.0, 12.0 Hz, 1H), 4.19-4.00 (m, 6 H), 3.49-3.39 (m, 2H), 2.35-2.30 (m, 6H), 2.22 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.17-2.09 (m, 1H), 1.97-1.89 (m, 2H), 1.65-1.58 (m, 4H), 1.45(d, J = 8.0 Hz, 3H), 1.35-1.28 (br, m, 56H), 0.99-0.97 (m, 6H), 0.89-0.86 (6H). 31P NMR (MeOD/CDCl3) δ 0.77 (s, 1P).
실시예 A3
[(2R)-3-[하이드록시-[2-[[5-[[(1S)-2-메틸-1-[[(1S)-1-메틸-2-[4-[(4-나이트로페녹시)카보닐옥시메틸]아닐리노]-2-옥소-에틸]카바모일]프로필]아미노]-5-옥소-펜탄오일]아미노]에톡시]포스포릴]옥시-2-옥타데칸오일옥시-프로필] 옥타데카노에이트, 중간체-3
Figure pct00178
바이알에 중간체-2(247.0㎎, 0.22m㏖), THF(4.0㎖) 및 DIPEA(83.3㎕, 0.48m㏖)를 첨가하였다. 용액을 N2 분위기 하에 빙수욕으로 냉각시키고, 이어서, 비스(4-나이트로페닐)카보네이트(97%, 74.9㎎, 0.24m㏖)를 한 번에 첨가하였다. 연한 황색 용액을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 추가적인 비스(4-나이트로페닐)카보네이트(97%, 145.3㎎, 0.48m㏖)를 첨가하고, 50℃에서 1시간 동안 교반하고, 이어서, rt에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 빙랭 HCl 수용액(0.05 N, 30㎖)에 부었다. 여과에 의해 고체를 수집하고, 물(10㎖×3) 및 EtOAc(8㎖×6)로 세척하여 고체 중간체-3(282.8㎎, 79.5%)을 제공하였다. LCMS (FA): m/z = 1302.8 (M+H). 1H NMR (MeOD/CDCl3) δ 8.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.65(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42-7.38 (m, 4H), 5.25-5.22 (m, 3H), 4.53-4.49 (안쪽에 묻힌 MeOD 잔류 물 피크, 1H), 4.38 (dd, J = 4.0, 12.0 Hz, 1H), 4.19-4.02 (m, 6 H), 3.61-3.387 (m, 2H), 2.35-2.29 (m, 6H), 2.22-2.20 (m, 2H), 2.17-2.08 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.64-1.56 (m, 4H), 1.46 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 1.35-1.28 (br, m, 56H), 0.99-0.97 (m, 6H), 0.89-0.85(6H). 31P NMR (MeOD/CDCl3) δ 0.74 (s, 1P).
실시예 A4
(2S,5S,19R)-2-({4-[({[4-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}아미노)-4-옥소뷰틸](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}카바모일)-16-하이드록시-5-아이소프로필-16-옥시도-4,7,11-트라이옥소-19-(스테아로일옥시)-15,17-다이옥사-3,6,12-트라이아자-16람다~5~-포스파이코산-20-일 옥타데카노에이트, CP-1
Figure pct00179
중간체-1(15.0㎎, 0.013m㏖)을 1,4-다이옥산(0.29㎖) 중에 용해시키고, 1,4-다이옥산(0.15㎖, 0.6m㎖) 중 4M HCl로 rt에서 1시간 동안 처리하였다. 휘발물을 제거하고, 진공 하에 1시간 동안 건조시켜 4-A를 조질의 생성물로서 제공하고, 다음 단계를 위해 직접 사용하였다. 별도로, 바이알을 중간체-3(17.6㎎, 0.013m㏖), DMAP(3.3㎎, 0.027m㏖), TEA(0.015㎖, 0.11m㏖) 및 DCM(0.35㎖)으로 채웠다. 이 혼합물에 DMF(0.42㎖) 중 4-A의 용액을 서서히 첨가하였다. 반응물을 rt에서 15분 동안 교반하고, 적은 용적(대략 0.5㎖)까지 농축시켰다. 조질의 화합물을 분취 HPLC(20㎖/분의 유속에서 16분에 60% B 내지 100% B의 용매 A[99% 10mM 암모늄 아세테이트/1% 아세토나이트릴]/용매 B[5% 10mM 암모늄 아세테이트/95% 아세토나이트릴]로 용리하는 Phenomenex 5 마이크론 C5 21.2×250㎜)에 의해 정제하여 암모늄염으로서 CP-1(11.0㎎, 40.3%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1972.8 (M+H). 1H NMR (MeOD) δ 8.55(br, s, 1H), 8.28 (br, s, 1H), 7.75(br, s, 1H) 7.52-7.42 (m, 2H), 7.24-7.17 (m, 3H), 6.43-6.36 (m, 2H), 5.60 (dd, J = 4.0 및 52.0 Hz, 1H), 5.17-5.12 (m, 1H), 5.10-5.00 (m, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.95-4.89 (m, 1H), 4.78-4.76 (안쪽에 묻힌 MeOD 잔류 물 피크, 1H), 4.48-4.28 (m, 6H), 4.23 (m, 1H), 4.13-4.09 (m, 2H), 3.96-3.82 (m, 5H), 3.42-3.33 (m, 4H), 2.91 (s, 3H), 2.73-2.64 (m, 2H), 2.31-2.16 (m, 8H), 2.11-2.03 (m, 1H), 1.99-1.92 (m, 2H), 1.89-1.82 (m, 2H), 1.57-1.47 (m,4H), 1.49 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 1.27-1.28 (br, 56H), 0.93-0.91 (m, 6H), 0.85-0.81 (m, 6H). 31P NMR (MeOD) δ 57.00 (s, 1P), 52.26 (s, 1P), -0.20 (s, 1P). 19F NMR (MeOD) δ -165.24 내지 -165.46 (s, br, 1F), -202.98 내지 -203.24 (m, 1F). HRMS (C88H138F2N13O25P3S2) 예상치: 1972.8622; 관측치: 1972.8674
실시예 A5
2-[(tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노]에틸 {9-[(1R,3R,6R,8R,9R,10R,12R,15R,17R,18R)-9-플루오로-17-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-18-하이드록시-3,12-다이옥시도-3,12-다이설파닐-2,4,7,11,13,16-헥사옥사-3,12-다이포스파트라이사이클로[13.2.1.0~6,10~]옥타데크-8-일]-9H-퓨린-6-일}카바메이트, 중간체-4
Figure pct00180
단계 1: 2-[tert-뷰톡시카보닐(메틸)아미노]에틸 카보노클로리데이트(5-A)
피리딘(1.26㎖)과 함께 DCM(100㎖) 중 tert-뷰틸(2-하이드록시에틸)(메틸)카바메이트(1.40g, 7.99m㏖)를 -78oC에서 톨루엔(16㎖, 22.4m㏖) 중 15% 포스겐 용액에 서서히 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 가온시키고, 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 농축건조시켜 조질의 5-A(1.90g, 100%)를 제공하였다.
단계 2: 2-[(tert-뷰톡시카보닐)(메틸)아미노]에틸 {9-[(1R,3R,6R,8R,9R,10R,12R,15R,17R,18R)-9-플루오로-17-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-18-하이드록시-3,12-다이옥시도-3,12-다이설파닐-2,4,7,11,13,16-헥사옥사-3,12-다이포스파트라이사이클로[13.2.1.0~6,10~]옥타데크-8-일]-9H-퓨린-6-일}카바메이트, 중간체-4
화합물 번호 14(313㎎, 0.40m㏖)를 건조 피리딘에 용해시키고, 농축건조시켰다(3×5㎖). 잔사를 아르곤 분위기 하에 피리딘(6.70㎖) 중에 용해시키고, 빙수욕으로 냉각시킨 클로로트라이메틸실란(0.378㎖, 2.97m㏖)으로 처리하였다. 반응물을 rt까지 가온시키고, 20분 동안 교반하여 용액 중 TMS 보호된 화합물 번호 14를 생성하였다. 5-A(1.90g, 7.52m㏖)를 DCM(12.5㎖) 중에 용해시키고, 이어서, 주사기를 통해 상기 언급한 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 아르곤 분위기 하에 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시켰다. MeOH(10㎖) 및 수산화암모늄(수 중 28 내지 30% 용액, 10㎖)을 잔기에 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축건조시키고, 잔사를 MeOH(15㎖) 중에 용해시켰다. 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(0.12㎖, 0.75m㏖)를 첨가하고, 반응 혼합물을 rt에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 셀라이트 상에 흡착시키고, 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(수성 트라이에틸암모늄 아세테이트(10mM) 중 0 내지 50% ACN)에 의해 정제하여 TEA 염으로서 중간체-4(181㎎, 39.3%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 912.3 (M+H). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 12.06(br, s, 1H), 10.56 (br, s, 1H), 9.16 (br, 2H), 8.62 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.89(d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.35(dd, J = 4.0 및 12.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 52.0 Hz, 1H), 5.19-5.14 (m, 1H), 4.95-4.93 (m, 1H), 4.79-4.78 (m, 1H), 4.56 (br, s, 1H), 4.33 (br, s, 1H), 4.21-4.12 (m, 5H), 4.00-3.90 (m, 1H), 3.72-3.69 (m, 1H), 3.45-3.43 (m, 2H), 3.05(br, 12H), 2.86-2.83 (m, 3H), 1.34 (br, 9H), .115-1.11(m, 18H). 31P NMR (DMSO-d6) δ 54.04 (s, 1P), 47.46 (s, 1P). 19F NMR (DMSO-d6) δ -165.06 (s, br, 1F), -207.23 내지 -207.54 (m, 1F)
실시예 A6
(2S,5S,19R)-2-{[4-({[{2-[({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}카바모일)옥시]에틸}(메틸)카바모일]옥시}메틸)페닐]카바모일}-16-하이드록시-5-아이소프로필-16-옥시도-4,7,11-트라이옥소-19-(스테아로일옥시)-15,17-다이옥사-3,6,12-트라이아자-16람다~5~-포스파이코산-20-일 옥타데카노에이트, CP-2
Figure pct00181
중간체-1 대신 중간체-4(77.0㎎, 0.069m㏖)를 이용하여 실시예 A4에 나타낸 바와 유사한 절차를 이용하여 표제 화합물을 제조하여 암모늄염으로서 CP-2(42.0㎎, 30.0%)를 얻었다. LCMS (AA): m/z = 1974.6 (M+H). 1H NMR (MeOD) δ 8.52 (br, d, J = 12.0 Hz, 1H), 8.33 (br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.50 (br, d, J = 8.0 Hz 1H), 7.40 (br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (br, 1H), 7.24 (br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.43-6.34 (m, 2H), 5.56 (d, J = 52.0 Hz, 1H), 5.17-5.06 (m, 2H), 5.01-4.93 (m, 3H), 4.78-4.76 (안쪽에 묻힌 MeOD 잔류 물 피크, 1H), 4.47-4.29 (m, 8H), 4.21 (m, 1H), 4.13-4.09 (dd, J = 8.0 및 12.0 Hz, 2H), 3.95-3.82 (m, 5H), 3.63-3.58 (m, 2H), 3.33 (br, d, J = 8.0 Hz, 2H), 2.99 (s, 3H), 2.30-2.22 (m, 6H), 2.17 (t, d, J = 8.0 Hz, 2H), 2.10-2.04 (m, 1H), 1.88-1.81 (m, 2H), 1.56-1.48 (m,4H), 1.49 (br, d, J = 8.0 Hz, 3H), 1.27-1.21 (br, m, 56H), 0.93-0.90 (m, 6H), 0.84-0.81 (m, 6H). 31P NMR (DMSO-d6) δ 53.64 (s, 1P), 46.87 (s, 1P), -0.45(s, 1P). 19F NMR (MeOD) δ -165.49 내지 -165.66 (m, 1F), -203.23 내지 -203.70 (m, 1F). HR-MS (C87H136F2N13O26P3S2) 예상치: 1974.8415; 관측치: 1974.8455.
실시예 A7
[4-(하이드록시메틸)페닐] 4-(아미노메틸)벤조에이트, 중간체-5
Figure pct00182
단계 1: [4-(하이드록시메틸)페닐] 4-[(tert-뷰톡시카보닐아미노)메틸]벤조에이트
100㎖의 둥근 바닥 플라스크를 4-(Boc-아미노메틸)벤조산(503.0㎎, 1.98m㏖), 4-하이드록시벤질 알코올(97%, 304.3㎎, 2.38m㏖)로 채웠다. 이어서, 혼합물을 DCM(15㎖) 중에 현탁시키고, 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드(97%, 634.3㎎, 3.96m㏖)로 처리하였다. 반응물을 rt에서 2시간 동안 유지하고, 빙랭 HCl(0.1N, 10㎖), 다음에 물(10㎖) 및 포화 NaHCO3(10㎖)로 세척하고, 건조시키고, 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 100% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 7-A(385.0㎎, 54.4 %)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 356.00 (M-H). 1H NMR (DMSO-d6) δ 8.09 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 7.47-7.39 (m, 4H), 7.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.25(t, J = 8.0 Hz, 1H), 4.53 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.24 (br, d, J = 4.0 Hz, 2H), 1.41 (s, 9 H).
단계 2: [4-(하이드록시메틸)페닐] 4-(아미노메틸)벤조에이트, 중간체-5
[4-(하이드록시메틸)페닐] 4-[(tert-뷰톡시카보닐아미노)메틸]벤조에이트 7-A (100.0㎎, 0.28m㏖)를 DCM(2㎖) 중에 용해시키고, rt에서 30분 동안 TFA(0.8㎖, 10m㏖)로 처리하였다. 휘발물을 회전 증발에 의해 제거하고, 잔사를 MeOH(2㎖) 중에 재용해시키고, 37℃에서 90분 동안 유지시켰다. 휘발물을 완전히 제거한 후에, 잔사를 MeOH(2㎖×2) 및 DCM(4㎖×2)과 공증발시켜 TFA 염으로서 중간체-5(110.0㎎, 정량적 수율)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 258.20 (M+H). 1H NMR (DMSO-d6) δ 8.37 (br, 3H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.54 (s, 2H), 4.20 (br, s, 2H).
실시예 A8
(2R)-3-((하이드록시(2-(5-((4-((4-(하이드록시메틸)페녹시)카보닐)벤질)아미노)-5-옥소펜탄아미도)에톡시)포스포릴)옥시)프로판-1,2-다이일 다이스테아레이트, 중간체-6
Figure pct00183
[4-(하이드록시메틸)페닐] 4-(아미노메틸)벤조에이트 트라이플루오로아세트산 염(64.1㎎, 0.17m㏖)을 DMF(0.8㎖) 중에 용해시켰다. 용액을 DCM(3.2㎖) 중 나트륨[(2R)-2,3-다이(옥타데칸오일옥시)프로필] 2-[[5-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일)옥시-5-옥소-펜탄오일]아미노]에틸 포스페이트(113.0㎎, 0.115m㏖)의 다른 용액에 첨가하였다. 이어서, DIPEA(0.04㎖, 0.23m㏖)를 상기 혼합물에 첨가하고, 3.5시간 동안 rt에서 교반하였다. 대부분의 용매(DCM)를 증발시키고, 잔여 용액(DMF)을 빙랭 HCl 용액(0.1 N, 5㎖))에 부었다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 빙랭 HCl 용액(0.1N, 4㎖×6) 및 물(3㎖×6)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 중간체-6(106.0㎎, 83.6%)을 제공하였다. LCMS (AA): 약한 신호. 1H NMR (MeOD/CDCl3) δ 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 4H), 7.06 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.13-5.10 (m, 1H), 4.55(s, 2H), 4.37 (s, 2H), 4.07-4.05(m, 1H), 4.07-3.93 (m, 5H), 3.37-3.34 (br, 2H), 2.24-2.13 (m, 8H), 1.86-1.82 (m, 2H), 1.49 (br, 4H), 1.14 (br, 56H), 0.78 (m, 6H). 31P NMR (MeOD/CDCl3) δ 3.06 (s, 1P).
실시예 A9
(2R)-3-((하이드록시(2-(5-((4-((4-((((4-나이트로페녹시)카보닐)옥시)메틸)페녹시)카보닐)벤질)아미노)-5-옥소펜탄아미도)에톡시)포스포릴)옥시)프로판-1,2-다이일 다이스테아레이트, 중간체-7
Figure pct00184
중간체-6(106㎎, 0.096m㏖)을 THF(2㎖) 중에 용해시키고, DIPEA(0.037㎖, 0.21m㏖)로 처리하였다. 이 용액에 비스(4-나이트로페닐)카보네이트(64.4㎎, 0.21m㏖)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 rt에서 1시간 동안 유지하고, 이어서, 추가적인 비스(4-나이트로페닐)카보네이트(64.4㎎, 0.21m㏖) 및 DIPEA(0.037㎖, 0.21m㏖)를 첨가하였다. 반응물을 다시 1시간 동안 50oC에서 가열하였다. 반응 혼합물을 빙랭 HCl 용액(0.05N, 100㎖)에 첨가하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물(2㎖ x4)로 세척하였다. 고체를 EtOAc(3㎖)에서 현탁시키고, 5초 동안 초음파처리하고 나서, 여과시켰다. 고체를 EtOAc(2㎖×3)로 세척하여 고체를 중간체-7(121.9㎎, 57.4%)을 얻었다. LCMS (AA): 약한 신호. 1H NMR (MeOD/CDCl3) δ 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 4H), 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.29 (s, 2H), 5.21-5.18 (m, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.31 (dd, J = 4.0 및 12.0 Hz,1H), 4.14-4.01 (m, 5H), 3.45(br, t, J = 4.0 Hz, 2H), 2.32-2.23 (m, 8H), 1.96-1.92 (m, 2H), 1.57 (br, 4H), 1.22 (br, 56H), 0.84 (m, 6H).
실시예 A10
4-({[{2-[({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}카바모일)옥시]에틸}(메틸)카바모일]옥시}메틸)페닐 4-[(15R)-12-하이드록시-12-옥시도-3,7,18-트라이옥소-15-(스테아로일옥시)-11,13,17-트라이옥사-2,8-다이아자-12람다~5~-포스파펜타트라이아콘트-1-일]벤조에이트, CP-3
Figure pct00185
표제 화합물을 중간체-3 대신에 중간체-7(8.0㎎, 0.0072m㏖) 및 중간체-1 대신에 중간체-4(9.1㎎, 0.0072m㏖)를 이용하여 실시예 A4에 나타낸 것과 유사한 절차를 이용하여 표제 화합물을 제조하여 암모늄염으로서 CP-3(4.2㎎, 29.0%)을 얻었다. LCMS (AA): m/z = 1939.1 (M+H). 1H NMR (MeOD) δ 8.65-8.59 (m, 1H), 8.42 (br, d, J = 16.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.85(s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.48-7.39 (m, 3H), 7.20 (br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.2 및 8.0 Hz, 1H), 6.42 (br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.80-5.61 (m, 1H), 5.27-5.10 (m, 4H), 5.08-5.0 (m, 1H), 4.82 (m, 1H), 4.55-4.32 (m, 9H), 4.30 (br, 1H), 4.04-3.98 (m, 3H), 3.96-3.91 (m, 2H), 3.83-3.65(m, 2H), 3.44 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 3.10 (br, d, J = 12.0 Hz, 3H), 2.38-2.28 (m, 8H), 2.02-1.94 (m, 2H), 1.65-1.57 (m, 4H), 1.30 (br, 56H), 0.93-0.90 (m, 6H). 31P NMR (MeOD) δ 57.08 (s, 1P), 52.51 (s, 1P), 0.36 (s, 1P). 19F NMR (MeOD) δ -165.58 내지 -165.67 (m, 1F), -203.66 내지 -203.99 (m, 1F) HR-MS (C87H128F2N11O26P3S2) 예상치: 1938.7727; 관측치: 1938.7713
실시예 A11
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 중간체-8
Figure pct00186
단계 1: 2-[[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메톡시카보닐-메틸-아미노]메틸]벤조산, 11-A
데-Boc 중간체-1 대신 2-[(메틸아미노)메틸]벤조산 HCl(150㎎, 0.72m㏖)로 시작해서 실시예 A4, 단계 2에 기재한 절차에 따라 표제 화합물을 제조하였다. 실리카겔 크로마토그래피(0 내지 25% MeOH/DCM)에 의한 정제 후에 11-A(306㎎, 67%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 583.4 (M-H).
단계 2: [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-뷰톡시카보닐아미노)-3-메틸-부탄오일]아미노]프로판오일]아미노]페닐]메틸 N-[(2-클로로카보닐페닐)메틸]-N-메틸-카바메이트, 중간체-8
0℃로 냉각시킨 THF(1.5㎖) 중 11-A(295㎎, 0.50m㏖)의 용액에 염화옥살릴(DCM 중 2.0 M 용액, 0.25㎖, 0.50m㏖) 다음에 3방울의 DMF를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축건조시켜 조질의 중간체-8을 제공하고, 이를 다음 단계를 위해 직접 사용하였다(304㎎, 100%).
실시예 A12
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 중간체-9
Figure pct00187
화합물 번호 14(107㎎, 0.117m㏖)를 둥근 바닥 플라스크(50㎖)에 첨가하고, 건조 피리딘(2㎖×3회)과 공증발시켰다. 이어서, 이어서, 잔사를 건조 피리딘(4.26㎖, 52.7m㏖) 중에 재용해시키고, 클로로트라이메틸실란(0.121㎖, 0.934m㏖)으로 처리하고, rt에서 30분 동안 교반하였다. 상기 용액에 피리딘(1.89㎖, 23.4m㏖) 중 중간체-8(423㎎, 0.70m㏖)을 첨가하고, 밤새 rt에서 교반하였다. 반응 혼합물을 10㎖ MeOH로 반응을 중단시키고, 30분 동안 교반하고, 모든 용매를 제거하고 나서, 수산화암모늄(수 중 28 내지 30% 용액, 10㎖)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 조질의 진한 고체를 제공하였다. 고체를 MeOH(1.42㎖) 중에 재용해시키고, 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(0.12㎖, 0.75m㏖)로 0℃에서 처리하고, rt까지 30분 동안 가온시켰다. 혼합물을 증발시키고, 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(수성 중탄산암모늄(5mM) 중 0 내지 50% ACN)에 의해 정제하고 나서, 분취 HPLC(용매 A(99% 10mM 암모늄 아세테이트/1% 아세토나이트릴)/용매 B(5% 10mM 암모늄 아세테이트/95% 아세토나이트릴) 20㎖/분의 유속으로 16분에 60% B 내지 100% B로 용리하는 Phenomenex 5 마이크론 C5 21.2×250㎜)에 의해 추가로 정제하여 암모늄염으로서 중간체-9를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1277.8 (M+H). 1H NMR (MeOD) δ 8.68 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.82 (br, d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.52-7.39 (m, 4H), 7.39 (s, 1H), 7.23-7.26 (m, 3H), 6.50-6.43 (m, 2H), 5.74 (dd, J = 4.0 및 52.0 Hz, 1H), 5.25-5.15(m, 1H), 5.07-5.04 (m, 3H), 4.93-4.89 (m, 2H), 4.56-4.49 (m, 2H), 4.46-4.39(m, 3H), 4.30 (br, 1H), 4.03 (dd, J = 4.0 및 12.0 Hz, 1H), 3.95(d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.95(br, 3H), 2.13-2.11 (m, 1H), 1.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.45(s, 9H), 1.00 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 0.94 (J = 4.0 Hz, 3H), 31P NMR (MeOD) δ 56.91 (s, 1P), 52.36 (s, 1P). 19F NMR (MeOD) δ -165.65(s, 1F), -203.16 내지 -203.35(m, 1F).
실시예 A13
(2S,5S,19S)-2-({4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}카바모일)-16-하이드록시-5-아이소프로필-16-옥시도-4,7,11-트라이옥소-19-(스테아로일옥시)-15,17-다이옥사-3,6,12-트라이아자-16람다~5~-포스파이코산-20-일 옥타데카노에이트, (CP-4)
Figure pct00188
단계 1: 4-{[(2S)-2-{[(2S)-2-아미노-3-메틸부탄오일]아미노}프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트(13-A)
중간체-9(56㎎, 0.045m㏖)를 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 0℃로 냉각시켰다. 이어서, TFA(0.24㎖, 3.2m㏖) 및 DCM(0.58㎖)의 용액을 주사기를 통해 첨가하고, 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, 진공 하에 2시간 동안 두어서 TFA 염으로서 13-A(56㎎, 100%)를 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1177.0 (M+H).
단계 2: (2S,5S,19S)-2-({4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15R,15aR,16R)-15-플루오로-7-(5-플루오로-4-옥소-3,4-다이하이드로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-2,10-다이설파닐옥타하이드로-12H-5,8-메타노퓨로[3,2-l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-14-일]-9H-퓨린-6-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}카바모일)-16-하이드록시-5-아이소프로필-16-옥시도-4,7,11-트라이옥소-19-(스테아로일옥시)-15,17-다이옥사-3,6,12-트라이아자-16람다~5~-포스파이코산-20-일 옥타데카노에이트, CP-4
THF(1.4㎖) 및 DMF(0.7㎖) 중 13-A(56㎎, 0.037m㏖) 및 13-B(40.0㎎, 0.041m㏖)의 용액에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(65㎕, 0.37m㏖)을 적가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 농축건조시키고, 조질의 잔사를 분취 HPLC(20㎖/분의 유속으로 16분에 60% B 내지 100% B의 용매 A(99% 10mM 암모늄 아세테이트/1% 아세토나이트릴)/용매 B(5% 10mM 암모늄 아세테이트/95% 아세토나이트릴)로 용리하는 Phenomenex 5 마이크론 C5 21.2×250㎜)에 의해 정제하여 암모늄염으로서 CP-4(32.8㎎, 42%)를 제공하였다. LCMS (AA): ½ m/z = 1011.1 (M+H). 1H NMR (MeOD) δ 8.78 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.90-7.88 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.64-7.46 (m, 4H), 7.36 (s, 1H), 7.33-7.13 (m, 3H), 6.54-6.48 (m, 2H), 5.79 (dd, J = 4.0 및 52.0 Hz, 1H), 5.26-5.13 (m, 2H), 5.05-4.99 (m, 3H), 4.84 (m, 물 피크에 묻혀있는 2H), 4.78-4.77 (m, 1H), 4.59-4.36 (m, 6H), 4.30-4.29 (m, 1H), 4.22-4.17 (m, 2H), 4.03-3.92 (m, 5H), 3.43 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.89-2.24 (m, 8H), 2.20-2.12 (m, 1H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.67-1.56 (m, br, 4H), 1.48 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 1.30 (br, 56H), 1.02-0.99 (m, 6H), 0.93-0.90 (m, 6H). 31P NMR (MeOD) δ 57.47 (s, 1P), 52.87 (s, 1P), 0.12 (s, 1P). 19F NMR (MeOD) δ -165.91 내지 -166.08 (m, 1F), -203.70 내지 -203.94 (m, 1F). HR-MS (C92H138F2N13O25P3S2) 예상치: 2020.8622, 관측치: 2020.8601.
실시예 A14
4-{[(2S)-2-({(2S)-2-[(tert-뷰톡시카보닐)아미노]-3-메틸부탄오일}아미노)프로판오일]아미노}벤질 [2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질]메틸카바메이트, 중간체-10
Figure pct00189
표제 화합물을 화합물 I-5c를 TEA 염으로서 2-아미노-9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-1,9-다이하이드로-6H-퓨린-6-온(화합물 I-5c)(합성에 대해, PCT/IB2018/058846 참조)을 대체하여 실시예 A12에 기재한 절차에 따라 제조하였다. 조질의 생성물을 역상 플래시 칼럼 크로마토그래피(수성 중탄산암모늄(5mM) 중 0 내지 50% ACN)에 의해 정제하여 암모늄염으로서 중간체-10을 제공하였다. 염을 전환시키기 위해, 이어서, 이 물질을 MeOH(2㎖) 중에 용해시키고, 트라이에틸아민(5㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 1분 동안 진탕시켰다. 용매를 제거하고, 밤새 동결건조시켜 TEA 염으로서 중간체-10(147㎎, 48%)을 제공하였다. LCMS (AA): m/z = 1216.3 (M+H). 1H NMR (400 ㎒, MeOD) δ 8.70 (s, 1H), 8.43 (brs, 1H), 8.40 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 3H), 7.42 - 7.38 (m, 1H), 7.32 - 7.19 (m, 3H), 6.84 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.15(d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.62 - 5.56 (m, 1H), 5.54 - 5.48 (m, 1H), 5.08 - 5.02 (m, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.88 - 4.83 (m, 1H), 4.81 - 4.76 (m, 2H), 4.53 - 4.47 (m, 1H), 4.37 - 4.22 (m, 3H), 4.08 - 4.03 (m, 1H), 3.92 - 3.89 (m, 1H), 3.82 - 3.74 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 2.58 - 2.30 (m, 4H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 1.54 - 1.47 (m, 1H), 1.46 - 1.44 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 0.98 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.93 (d, J = 6.8 Hz, 3H). 31P NMR (162 ㎒, MeOD) δ 55.01 (s, 1P), 53.03 (s, 1P).
실시예 A15
(2S,5S,19R)-16-하이드록시-2-({4-[({[2-({9-[(2R,5R,7R,8R,10R,12aR,14R,15aS,16R)-16-하이드록시-2,10-다이옥시도-14-(피리미딘-4-일옥시)-2,10-다이설파닐데카하이드로-5,8-메타노사이클로펜타[l][1,3,6,9,11,2,10]펜타옥사다이포스파사이클로테트라데신-7-일]-6-옥소-6,9-다이하이드로-1H-퓨린-2-일}카바모일)벤질](메틸)카바모일}옥시)메틸]페닐}카바모일)-5-아이소프로필-16-옥시도-4,7,11-트라이옥소-19-(스테아로일옥시)-15,17-다이옥사-3,6,12-트라이아자-16람다~5~-포스파이코산-20-일 옥타데카노에이트, CP-5
Figure pct00190
중간체-9 대신에 중간체-10으로 시작해서 실시예 A13에 나타낸 바와 유사한 절차를 이용하여 표제 화합물을 제조하여 CP-5(96.0㎎, 2단계에 대해 48.8%)를 얻었다. LCMS (AA): m/z = 1959.8 (M+H). 1H NMR (MeOD) δ 8.58 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45-7.36 (m, 3H), 7.29 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (br, 3H), 6.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.48 (br, 1H), 5.38-5.33 (m, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 4.94-4.89 (m, 3H), 4.71 (안쪽에 묻힌 MeOD 잔류 물 피크, 1H), 4.67 (m, 2H), 4.42-4.38 (m, 1H), 4.34-4.30 (m, 1H), 4.25-4.04 (m, 5H), 3.95-3.91 (m, 1H), 3.87 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 3.82-3.78 (m, 2H), 3.69-3.62 (m, 1H), 3.29 (t, J = 4.0 Hz, 2H), 2.77 (s, 3H), 2.47-2.17 (m, 10H), 2.13 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.82-1.77 (m, 2H), 1.53-1.43 (br, m, 4H), 1.41-1.38 (m, 1H), 1.34 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 1.17 (br, 56H), 0.89-0.86 (m, 6H), 0.80-0.76 (m, 6H). 31P NMR (DMSO-d6) δ 55.29 (s, 1P), 53.05(s, 1P), 0.29 (s, 1P). HR-MS (C91H141N12O25P3S2) 예상치: 1959.8858, 관측치: 1959.8886.
상세한 설명 부문 및 발명의 내용 및 요약 부문은 청구범위를 해석하기 위해 사용될 것으로 의도된다는 것이 인식되어야 한다. 발명의 내용 및 요약 부문은 1회 이상 제시될 수 있지만, 본 발명자(들)에 의해 상정되는 바와 같은 본 개시내용의 모든 예시적인 실시형태를 제시하는 것은 아니며, 따라서, 본 개시내용 및 첨부하는 청구범위를 임의의 방법으로 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 개시내용은 구체화된 기능의 실행 및 이의 관계를 예시하는 기능적 빌딩 블록의 도움을 받아 상기 기재하였다. 이들 기능적 빌딩 블록의 경계는 설명의 편리함을 위해 본 명세서에 임의의 정의되었다. 구체화된 기능 및 이의 관계가 적절하게 수행되는 한, 교번의 경계가 정의될 수 있다.
구체적 실시형태의 앞서 언급한 설명은 본 개시내용의 일반적 특성을 완전히 나타낼 것이며, 다른 사람들은, 당업계의 기술 이내인 지식을 적용함으로써 과도한 실험을 하지 않고, 본 개시내용의 일반적 개념으로부터 벗어나는 일 없이, 다양한 적용을 위해 이러한 구체적 실시형태를 용이하게 변형 및/또는 적용할 수 있다. 따라서, 이러한 각색 및 변형은 본 명세서에 제시된 교시 및 가이드에 기반하여 개시된 실시형태의 동등물의 의미 및 범주 이내인 것으로 의도된다. 본 명세서의 어법 또는 용어는 설명을 목적을 위한 것이며, 제한이 아니므로, 본 명세서의 용어 또는 어법은 교시 및 가이드에 비추어 당업자가 해석하여야 한다.
본 개시내용의 폭 및 범주는 임의의 상기 기재한 예시적 실시형태에 의해 제한되어서는 안 되지만, 다음의 청구범위 및 이들의 등가물에 따라서만 정의되어야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> TAKEDA PHARMACEUTICAL COMPANY, LTD. <120> ANTIBODY DRUG CONJUGATES <130> WO/2020/229982 <140> PCT/IB2020/054400 <141> 2020-05-08 <150> US 62/952,768 <151> 2019-12-23 <150> US 62/855,367 <151> 2019-05-31 <150> US 62/846, 494 <151> 2019-05-10 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 485 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain <400> 1 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys 20 25 30 Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Phe Gly Gly Ser Phe 35 40 45 Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Asn His Arg Gly Asn Thr Asn Asp Asn Pro 65 70 75 80 Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln 85 90 95 Phe Ala Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr 100 105 110 Tyr Cys Ala Arg Glu Arg Gly Tyr Thr Tyr Gly Asn Phe Asp His Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 210 215 220 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly Lys Ala Gly Gly Gly Ser Leu Pro Glu Thr Gly Gly His 465 470 475 480 His His His His His 485 <210> 2 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain Sequence <400> 2 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val 20 25 30 Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val 35 40 45 Ser Arg Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 50 55 60 Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg 65 70 75 80 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser 85 90 95 Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Thr 100 105 110 Trp Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Thr 115 120 125 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 130 135 140 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 145 150 155 160 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 165 170 175 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 195 200 205 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 210 215 220 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region <400> 3 His His His His His His Gly Gly Thr Pro Glu Leu 1 5 10 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain constant region <400> 4 Leu Pro Glu Thr Gly Gly His His His His His His 1 5 10

Claims (43)

  1. 하기 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00191
    ,
    식 중:
    a는 1 내지 20의 정수이고;
    b는 1 내지 20의 정수이며;
    m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    n은 0 또는 1이며;
    D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 상기 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
    각각의 R1은 C1-C4알킬, O-C1-C4알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며;
    R2는 C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
    R3 및 R3'는 각각 독립적으로 수소 및 C1-C3알킬로부터 선택되며;
    L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
    Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
  2. 제1항에 있어서,
    a는 1 내지 4의 정수이고;
    b는 1 내지 10의 정수이며; 그리고
    m은 0인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    m은 0이고;
    n은 0이며; 그리고
    R3 및 R3'는 각각 수소인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, L은
    Figure pct00192
    이되;
    Figure pct00193
    는 질소 원자에 대한 부착 지점이며;
    Figure pct00194
    는 Ab에 대한 부착 지점이며;
    t는 1 내지 10의 정수이며;
    W는 존재하지 않거나 또는 자기-희생(self-im㏖ative)기이고;
    Z는 존재하지 않거나 또는 2 내지 5개 아미노산의 펩타이드이며;
    U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이고; 그리고
    Q는 이형이작용성 기이며;
    단, 상기 W와 Z가 둘 다 존재하지 않음은 아닌, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제4항에 있어서, W는
    Figure pct00195
    로부터 선택된 자기-희생기(self-immolative group)이되;
    Figure pct00196
    는 카보닐기에 대한 부착 지점이며;
    Figure pct00197
    는 Z에 대한 부착 지점인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  6. 제5항에 있어서, W는
    Figure pct00198
    로부터 선택된, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  7. 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 효소적으로 절단될 수 있는 펩타이드인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  8. 제7항에 있어서, Z는 카텝신 절단성(cathepsin cleavable)인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  9. 제4항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 Val-Cit, Cit-Val, Val-Ala, Ala-Val, Phe-Lys 및 Lys-Phe로부터 선택된 2-아미노산 펩타이드인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  10. 제4항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, U 및 U'는
    Figure pct00199
    로부터 독립적으로 선택되되;
    Figure pct00200
    는 Z에 대한 부착 지점이며;
    Figure pct00201
    는 Q에 대한 부착 지점이고;
    p는 1 내지 6의 정수이며;
    q는 1 내지 20의 정수이고;
    X는 O 또는 -CH2-이며; 그리고
    각각의 r은 독립적으로 0 또는 1인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  11. 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 화학적 또는 효소-매개 접합을 통해 Ab에 부착된 이형이작용성 기인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  12. 제11항에 있어서, Q는
    Figure pct00202
    로부터 선택되되;
    Figure pct00203
    는 U에 대한 부착 지점이거나, 또는 U가 존재하지 않을 때, Z에 대한 부착 지점이고; 그리고
    Figure pct00204
    는 U'에 대한 부착 지점이거나, 또는 U'가 존재하지 않을 때, Ab에 대한 부착 지점인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  13. 제4항에 있어서,
    t는 1이고;
    W는 존재하지 않거나 또는 자기-희생기이고; 그리고
    Z는 존재하지 않거나 또는 2개의 아미노산인, 화합물.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 -CH3, 또는 -(CH2CH2O)s-CH3이고, s는 1 내지 10의 정수인, 화합물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, D-NH2는 STING(인터페론 유전자의 자극제(Stimulator of Interferon Gene)) 활성을 조절하는 아미노-치환된 화합물인, 화합물.
  16. 제15항에 있어서, STING 활성을 조절하는 상기 아미노-치환된 화합물은 구아닌 또는 아데닌 유도체를 포함하는, 화합물.
  17. 제15항에 있어서, STING 활성을 조절하는 상기 아미노-치환된 화합물은 하기 화학식(II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 화합물:
    Figure pct00205
    ,
    식 중:
    X10은 SH 또는 OH이고;
    X20은 SH 또는 OH이고;
    Ya는 O, S 또는 CH2이고;
    Yb는 O, S, NH 또는 NRa이되, Ra는 C1-C4알킬이며;
    R10은 수소, 플루오로, OH, NH2, ORb 또는 NHRb이고;
    R20은 수소 또는 플루오로이며;
    R30은 수소이고; R40은 수소, 플루오로, OH, NH2, ORb 또는 NHRb이거나; 또는 R30 및 R40은 함께 CH2O를 형성하고;
    R50은 수소 또는 플루오로이며;
    Rb는 C1-C6알킬, 할로(C1-C6)알킬 또는 C3-C6사이클로알킬이고;
    고리 A10은 N, O 또는 S로부터 선택되는 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 5 또는 6-원 단환식 헤테로아릴, 또는 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 9 또는 10원 이환식 헤테로아릴 고리이되; 고리 A10은 상기 고리에 적어도 1개의 N 원자를 포함하고, Yb는 고리 A10의 탄소 원자에 부착되며; 그리고
    고리 B10은 N, O 또는 S로부터 선택된 2 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 선택적으로 치환된 9 또는 10-원 이환식 헤테로아릴 고리이되; 고리 B10은 상기 고리에 적어도 2개의 N 원자를 포함하고;
    단, 고리 A10 또는 고리 B10은 -NH-기를 통해 화학식(I)의 카보닐기에 부착된다.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, STING 활성을 조절하는 상기 아미노-치환된 화합물은
    Figure pct00206
    또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이되,
    Figure pct00207
    는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 부착 지점인, 화합물.
  19. 제15항에 있어서, STING 활성을 조절하는 상기 아미노-치환된 화합물은 하기 화학식(III)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 화합물:
    Figure pct00208
    ;
    식 중
    X10은 SH 또는 OH이고;
    X20은 SH 또는 OH이고;
    Yc는 O, S 또는 CH2이고;
    Yd는 O, S 또는 CH2이며;
    B100은 하기 화학식(B 1 -A) 또는 화학식(B 1 -B)로 표시되는 기이고:
    Figure pct00209
    ;
    R13, R14, R15, R16 및 R17은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
    R1000은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
    Y11, Y12, Y13, Y14, Y15 및 Y16은 각각 독립적으로 N 또는 CR1a이되, R1a는 수소 또는 치환체이며;
    Z11, Z12, Z13, Z14, Z15 및 Z16은 각각 독립적으로 N 또는 C이고;
    R105는 수소 원자 또는 치환체이며;
    B200은 하기 화학식(B 2 -A) 또는 화학식(B 2 -B)로 표시되는 기이고:
    Figure pct00210
    ;
    R23, R24, R25, R26 및 R27은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
    R100'은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
    Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 및 Y26은 각각 독립적으로 N 또는 CR2a이되, R2a는 수소 또는 치환체이며;
    Z21, Z22, Z23, Z24, Z25 및 Z26은 각각 독립적으로 N 또는 C이고; 그리고
    R205는 수소 원자 또는 치환체이되; R105 및 R205는 각각 독립적으로 이들이 각각 부착된 5-원 고리의 2- 또는 3- 위치에 부착되며;
    단:
    B100 또는 B200 중 하나는 -NH-기를 통해 화학식(I)의 카보닐기에 부착된다.
  20. 제19항에 있어서, 하기 화학식(IIIa)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00211

    식 중,
    B100은 하기 화학식(B 1 -A) 또는 화학식(B 1 -B)로 표시되는 기이고:
    Figure pct00212
    ;
    R13, R14, R15, R16 및 R17은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
    R1000은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
    Y11, Y12, Y13, Y14, Y15 및 Y16은 각각 독립적으로 N 또는 CR1a이되, R1a는 수소 또는 치환체이며;
    Z11, Z12, Z13, Z14, Z15 및 Z16은 각각 독립적으로 N 또는 C이고;
    R105는 수소 원자 또는 치환체이며;
    B200은 하기 화학식(B 2 -A) 또는 화학식(B 2 -B)로 표시되는 기이고:
    Figure pct00213
    ;
    R23, R24, R25, R26 및 R27은 각각 독립적으로 수소 원자 또는 치환체이며;
    R100'은 수소 또는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 결합이고;
    Y21, Y22, Y23, Y24, Y25 및 Y26은 각각 독립적으로 N 또는 CR2a이되, R2a는 수소 또는 치환체이며;
    Z21, Z22, Z23, Z24, Z25 및 Z26은 각각 독립적으로 N 또는 C이고; 그리고
    R205는 수소 원자 또는 치환체이되; R105 및 R205는 각각 독립적으로 이들이 각각 부착된 5-원 고리의 2- 또는 3- 위치에 부착되며;
    단:
    B100 또는 B200 중 하나는:
    Figure pct00214
    이되;
    R18은 수소 또는 C1-6 알킬이며; 그리고
    R19는 할로겐 원자이고;
    나머지는 -NH-기를 통해 화학식(I)의 카보닐기에 부착된다.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, STING 활성을 조절하는 상기 아미노-치환된 화합물은
    Figure pct00215
    또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이되,
    식 중,
    Figure pct00216
    는 화학식(I)의 카보닐기에 대한 부착 지점인, 화합물.
  22. 하기 화학식(IV)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00217
    ;
    식 중:
    a는 1 내지 20의 정수이고;
    b는 1 내지 20의 정수이며;
    k는 0, 1, 2 또는 3이고;
    m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 상기 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
    R2는 H, C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
    R4는 수소 및 임의의 천연 유래 아미노산 측쇄로부터 선택되며;
    R5는 C1-C4알킬 및 O-C1-C4알킬로부터 선택되고;
    L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
    Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
  23. 제22항에 있어서, L은
    Figure pct00218
    이되,
    Figure pct00219
    는 카보닐기에 대한 부착 지점이고;
    Figure pct00220
    는 Ab에 대한 부착 지점이며;
    W는 자기-희생기이고;
    Z는 존재하지 않거나 또는 2 내지 5개 아미노산의 펩타이드이며; 그리고
    U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이고; 그리고
    Q는 이형이작용성 기인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
  24. 하기 화학식(V)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00221

    식 중:
    D-NH-는
    Figure pct00222
    또는
    Figure pct00223
    이고;
    X는 O 또는 CH2이며;
    f는 1 내지 10의 정수이고;
    g는 1 내지 20의 정수이며;
    U 및 U'는 독립적으로 존재하지 않거나 또는 스페이서이고;
    Q는 이형이작용성 기이며; 그리고
    Ab는 항체, 항체 단편 또는 항원-결합 단편이다.
  25. 제24항에 있어서, X는 O인, 화합물.
  26. 하기 화학식(VI)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
    Figure pct00224
    ,
    식 중:
    a는 1 내지 20의 정수이고;
    m은 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    n은 0 또는 1이며;
    D-NH-는 아미노-치환된 화합물의 부분이되, 상기 아미노-치환된 화합물은 화학식 D-NH2를 갖고;
    각각의 R1은 C1-C4알킬, O-C1-C4알킬 및 할로겐으로부터 독립적으로 선택되며;
    R2는 C1-C4알킬 및 -(CH2CH2O)s-CH3으로부터 선택되되; s는 1 내지 10의 정수이고;
    R3 및 R3'는 각각 독립적으로 수소 및 C1-C3알킬로부터 선택되며;
    L은 절단 가능한 링커이고; 그리고
    LP는 지질이다.
  27. 제26항에 있어서, 상기 지질은 콜레스테롤 또는 인지질인, 화합물.
  28. 제27항에 있어서, 상기 지질은 인지질인, 화합물.
  29. 제28항에 있어서, 상기 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 스핑고마이엘린, 대두 인지질, 및 난황 인지질로부터 선택된, 화합물.
  30. 제28항에 있어서, 상기 인지질은 포스파티딜에탄올아민이되, 상기 포스파티딜에탄올아민은 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포릴에탄올아민인, 화합물.
  31. 제26항 내지 제30항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는, 지질 복합체.
  32. 제31항에 있어서, 상기 지질 복합체는 리포좀의 형태인, 지질 복합체.
  33. 제31항 또는 제32항에 있어서, 1종 이상의 인지질을 더 포함하는, 지질 복합체.
  34. 제33항에 있어서, 상기 하나 이상의 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 스핑고마이엘린, 대두 인지질 및 난황 인지질로부터 선택된, 지질 복합체.
  35. 제34항에 있어서, 상기 인지질은 포스파티딜콜린이되, 상기 포스파티딜콜린은 1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포콜린인, 지질 복합체.
  36. 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 지방 알코올을 더 포함하는, 지질 복합체.
  37. 제31항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 콜레스테롤을 더 포함하는, 지질 복합체.
  38. 제31항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 페길화된(PEGylated) 지질을 더 포함하는, 지질 복합체.
  39. 제38항에 있어서, 상기 페길화된 지질은 페길화된 인지질 및 페길화된 다이아실글리세롤로부터 선택된, 지질 복합체.
  40. 제39항에 있어서, 상기 페길화된 지질은 N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜 2000)-1,2-다이스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민인, 리포좀.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  42. 암 치료가 필요한 대상체에서의 암 치료 방법으로서, 약제학적으로 허용 가능한 양의 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 화합물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료 방법.
  43. 면역 반응의 자극이 필요한 대상체에서의 면역 반응의 자극 방법으로서, 약제학적으로 허용 가능한 양의 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항의 화합물, 지질 복합체 또는 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 면역 반응의 자극 방법.
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