KR20210120037A - 수포제 및 가성 가스의 독성 영향 경감 방법 - Google Patents

Abstract

이를 필요로 하는 대상체에서 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하기 위한 방법 및 키트가 기술된다. 구체적으로, RWJ-800088 또는 로미플로스팀과 같은 트롬보포이에틴(TPO) 모방체의 유효량이 수포제 및 가성 가스의 독성 영향을 경감하기 위해 사용된다.

Description

수포제 및 가성 가스의 독성 영향 경감 방법

관련된 출원에 관한 상호 참조

본 출원은 2019년 1월 25일자로 출원된 미국 출원 제62/796,754호에 대한 우선권을 주장하며, 상기 출원의 기재사항은 전체가 본 명세서에 참조로 통합된다.

전자적으로 제출된 서열 목록에 관한 참조

본 출원은 서열 목록을 포함하며, 서열 목록은 형성일자 2020년 1월 23일 및 약 3.6 kb의 크기를 가지는 파일명 “Sequence Listing for 688097.0953/457WO”의 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-Web을 통하여 전자적으로 제출되었다. 상기 EFS-Web을 통하여 제출된 서열 목록은 명세서의 일부이며 본 명세서에 전체가 참조로서 통합된다.

발명의 기술분야

본 출원은 이를 필요로 하는 대상체에서 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하기 위한 방법 및 키트에 관한다. 구체적으로, 본 출원은 대상체에 유효량의 트롬보포이에틴(TPO) 모방체를 투여하는 것을 포함하는 방법은 물론, 유효량의 TPO 모방체 및 약제학적 허용 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 키트에 관한다.

발명의 배경기술

화학적 위협 대비를 조율하는 군사 전략가는 수포제 및 가성 가스의 사용을 수반하는 테러 행위의 위험이 증가할 것으로 예상한다. 이러한 물질의 생산에는 낮은 기술력과 저렴한 시약 및 장비를 필요로 하여 본토 및 전장에서 테러 공격을 수행하는 급진적 그룹의 사용 가능성이 높아진다.

수포제 및 가성 가스에 대한 흡입 노출은 부종, 미세출혈, 세포 유입 및 내피/상피 세포 손상을 특징으로 하는 급성 폐 손상을 유발하는 것으로 알려져 있다. 기록된 인체 노출 사례 중 독성 가스 수준이 단기간 내에 사망에 이를 정도로 높은 것은 적은 비율이었다. 그러나 노출 사고의 훨씬 더 많은 비율의 생존자들에게 쇠약하게 하는 급성 영향은 장기적 이환(morbidity)에 기여하는 비가역적 폐 섬유증에 이르는 전섬유화 과정의 수반되는 발병과 함께 점진적으로 진정된다.

노출을 방지하기 위해 개인 보호 장비(즉, 방독면)를 사용할 수 있고 환경으로 방출된 후 이러한 반응성 물질을 중화하기 위한 특정 유형의 대응제가 개발되고 있지만, 사람에 노출된 직후에 이들 물질의 독성 영향를 경감하기 위한 옵션은 제한적이다.

예를 들어, 미국 특허출원공개공보 제2003/0083321호는 소포형 반응을 유발하는 머스타드 가스 및 기타 작용제와 같은 수포제의 악영향를 최소화하거나 회피하기 위한 조성물 및 방법을 개시한다. 상기 조성물은 바람직하게는 적어도 하나의 프로테아제 억제제와 조합된 적어도 하나의 매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제를 포함한다.

국제특허출원 공개공보 제WO 2014028509호에는 머스타드 가스 및 질소 머스타드에 노출되어 골수 손상을 입은 대상체를 치료하는 방법이 개시된다. 상기 방법은 트롬보포이에틴(TPO) 모방체와 같은 c-Mpl 수용체 작용제를 투여하는 것을 포함한다. 국제특허출원공개 제WO 2008/086025호에도 에리트로포이에틴 활성 또는 트롬보포이에틴(TPO) 활성을 갖는 화합물을 투여하여 호흡기 장애를 치료하는 방법이 개시된다.

TPO는 거핵구(혈소판 성숙을 자극하기 위해) 및 기존 혈소판(음성 피드백 제공) 상의 c-MPL에 결합하여 혈소판 수준을 조절하는 것으로 알려져 있다(Mitchell and Bussell, Semin. Hematol. 52(1):46-52 (2015)). TPO는 또한 혈관 내피 세포 상에 위치한 c-mpl 수용체에 결합하여 혈관계에 직접 작용할 수 있다(Langer et al., J. Mol. Cell Cardiol. 47(2):315-25 (2009)). 독소루비신 매개 심혈관 손상(Chan et al., Eur. J. Heart Fail. 13(4):366-76 (2011)), 심혈관 허혈 재관류 손상(Baker et al., Cardiovasc. Res. 77(1):44-53 (2008)) 및 뇌졸중(Zhou et al., J. Cereb Blood Flow Metab. 31(3):924-33 (2011))의 동물 모델에서 트롬보포이에틴의 직접적인 혈관 보호 효과를 입증하는 여러 연구가 있었다. 그러나, 재조합 인간 TPO(rhTPO)는 만성 혈소판 감소증을 유발할 수 있는 내인성 TPO에 대한 교차 반응성 항체의 유도로 인해 인간에서 실행 가능한 치료법이 아니다(Li et al., Blood 98(12):3241-8(2001)).

수포제 및 가성 가스의 인간 노출 후 독성 영향을 경감하기 위한 새로운 방법이 필요하다.

발명의 간단한 요지

트롬보포이에틴(TPO) 모방체가 수포제 유도 손상의 수많은 평가변수(endpoint)에 상당한 경감 효과를 갖는다는 것이 금번에 발견되었다. 이러한 평가변수 중 다수는 TPO 모방체가 혈관 보호제로 기능하는 능력과 관련된다.

따라서, 일반적인 일 양태에서, 본 출원은 수포제 또는 가성 가스에 노출된 대상에서 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 유효량의 트롬보포이에틴(TPO) 모방체를 투여하는 것을 포함하고, 바람직하게는 TPO 모방체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, 보다 바람직하게는 TPO 모방체는 RWJ-800088 또는 로미플로스팀(romiplostim)이다.

특정 구현예에서, 상기 대상체는 수포제의 독성 영향의 경감을 필요로 한다. 상기 수포제는 예를 들어, 증류 머스타드, 머스타드 가스, 머스타드/루이사이트(mustard/lewisite), 머스타드/T(mustard/T), 질소 머스타드(nitrogen mustard), 세스퀴 머스타드(sesqui mustard), 황 머스타드(sulfur mustard), 포스겐 옥심(phosgene oxime), 칸타리딘(cantharidin) 및 푸라노쿠마린(furanocoumarin )으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

특정 구현예에서, 대상체는 가성 가스의 독성 영향의 경감을 필요로 한다. 상기 가성 가스는 예를 들어 황화수소, 플루오르화수소, 염화수소, 브롬화수소, 시안화수소, 아르신, 포스핀, 산화질소, 이산화질소, 이산화황, 오존, 염소, 메틸아민 및 암모니아로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. .

특정 구현예에서, 독성 영향은 혈관 손상, 미세출혈, 세포 유입, 폐 섬유증, 사망 및 이환으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이고, 여기서 독성 영향은 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 의해 유도된다. 바람직하게는, 독성 영향은 폐 미세출혈이다.

급성 폐 손상(Acute Lung Injury) 및 급성 호흡곤란 증후군(Acute Respiratory Distress Syndrome )은 폐에서 수포제 및 화학 독성 물질로 생성되는 것과 유사한 활성 산소 종의 생성과 관련된 병인을 갖는다. 화학적 손상과 유사하게 급성 폐 손상(ALI) 및 가장 심각한 형태의 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)과 같은 병리학적 상태에서 산소 라디칼이 과도하게 생성되면 내피 투과성 증가, 혈관 미세 혈관의 접합 완전성 손실, 및 폐포 내강의 용질 및 체액의 이동으로 이어진다. 따라서, 본 명세서는 이를 필요로 하는 대상체에서 산화 스트레스의 독성 영향을 경감하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 TPO 모방체의 유효량을 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 또한, 이를 필요로 하는 대상체에서 내피 손상의 독성 영향을 경감하는 방법이 개시되며, 상기 방법은 TPO 모방체의 유효량을 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구현예는 이를 필요로 하는 대상체에서 산화 스트레스 및 내피 손상의 독성 영향을 경감하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 TPO 모방체를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 제공되는 산화 스트레스 또는 내피 손상의 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 유효량의 TPO 모방체를 투여하는 것을 포함하며, TPO 모방체 일부 구현예에서 서열번호 1의 아미노산 서열을 가질 수 있고; TPO 모방체는 대안적으로 RWJ-800088일 수 있고; 투여되는 TPO 모방체는 또한 로미플로스팀일 수 있다.

본 명세서에 제공되는 바와 같이, RWJ-800088 또는 로미플로스팀과 같은 기술된 TPO 모방체는 화학 수포제 또는 가성 가스에 대한 노출에 수반된 독성 영향을 경감하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다.

다른 일반적인 양태에서, 본 출원은 수포제 또는 가성 가스에 노출된 대상체에서 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감시키는 키트에 관한 것이다. 키트는 유효량의 TPO 모방체 및 약제학적 허용 담체, 및 소포 손상을 경감하기 위한 하나 이상의 부가적 치료제 또는 장치를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 선택적으로, 키트는 대상에게 TPO 모방체를 투여하기 위한 도구를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 키트는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 TPO 모방체, 보다 바람직하게는 RWJ-800088 또는 로미플로스팀의 TPO 모방체를 포함한다.

본 출원의 바람직한 실시예에 대한 다음의 상세한 설명뿐만 아니라 전술한 요약은 첨부된 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 그러나, 적용이 도면에 도시된 정확한 실시예에 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
도 1a 및 1b는 기관지 폐포 세척액(Broncho-Alveolar Lavage, BAL)의 광학 밀도 및 BAL의 WBC 수에 의해 평가된 출혈에 대한 TPOm 처리의 효과를 나타낸다. 연구에서 수컷 Wistar 래트 군은 질소 머스타드(NM)를 투여받았다. 6시간 후, 래트는 비히클 또는 TPOm으로 처리되었다. 3일차에 NM 노출에 의해 유도된 폐부종의 정도를 특성화하기 위해 FSE(T2-가중) 시퀀스를 사용하여 래트에 대한 MRI 스캔을 수행했다. 영상 촬영 후, 래트를 안락사시키고 폐를 PBS로 세척하고 적혈구(RBC), 백혈구(WBC)의 수준, 및 성장 인자 베타 1(TGF-1b)을 변형시키는 전섬유화 인자의 농도를 BAL(Broncho-Alveolar Lavage) 유체에서 표준 방법론을 사용하여 결정하였다. 도 1a는 RBC 함량을 나타내고 도 1b는 WBC 함량을 나타내며, 이는 TPOm 투여가 NM 노출에 의해 유도된 폐의 미세 출혈 및 중공(airspace)으로의 WBC 유입을 감소시킨다는 것을 나타낸다. 도 1c는 NM +/- TPOm으로 처리한 후 BAL 유체에서 TGF-1b의 농도를 나타내며, 이는 TPOm이 TGF-1b의 NM 유도 상승을 감소시켰음을 나타낸다(p < 0.05).
도 2a-2c는 TPOm과 비교하여 기관지 폐포 세척액(BAL)의 세포 성분에서 관찰된 로미플로스팀 처리의 혈관 보호 효과를 나타낸다. 연구에서 수컷 Wistar 래트 군은 질소 머스타드(NM)를 투여받았다. 6시간 후, 래트를 비히클, 로미플로스팀 또는 TPOm으로 처리하였다. 4일째에 BAL에서 적혈구의 상대적 수준을 BAL의 디지털 이미지로 시각화하고(도 2a) 540 nm에서 샘플의 흡광도를 측정하여 정량화하고(도 2b), 백혈구(WBC) 숫자는 혈구 계수에 의해 결정되었다(도 2c). 도 2a는 BAL(RBC 함량을 나타냄)의 적색(B&W에서 더 어두운 회색으로 표시됨)을 나타나고 도 2b는 RBC 함량의 표지인 광학 밀도 차이를 나타낸다. 도 2c는 로미플로스팀과 TPOm 투여 모두 NM 노출에 의해 유도된 폐의 미세 출혈 및 중공으로의 WBC 유입을 감소시키는 WBC 함량을 나타낸다.
도 3a 내지 3c는 부검에서 육안적 기관 병리학으로 관찰된 TPOm의 혈관 보호 효과를 나타낸다. 앞서 언급한 연구에서 래트를 안락사시킨 후, 흉강을 외과적으로 개방하고 하행 혈관을 절단하였다. 허탈된 폐 외부의 혈액 유체를 인산염 완충 식염수(PBS)로 부드럽게 헹구고 습윤 수술 패드로 닦아냈다. PBS로 폐 혈관계를 관류하지 않고 폐를 디지털 방식으로 촬영했다. 도 3a는 폐 혈관계에 포함된 혈액을 반영하는 비히클 대조군 래트의 폐를 보여주고, 도 3b는 감소된 관류로 둘러싸인 수많은 서브복수(sub-plural) 미세 출혈(화살표) 부위를 보여주는 NM에 노출된 래트의 폐를 나타낸다. 도 3c는 미세 출혈 부위의 심각도 및 갯수가 NM 단독으로 처리된 쥐에 비해 현저히 감소되었음을 나타낸다(도 3b). 이러한 결과는 TPOm이 NM 노출 후 미세 출혈 및 세포 유입의 발병과 관련된 심각한 혈관 손상을 예방한다는 것을 나타낸다.
도 4는 T2 강조 시퀀스를 사용한 MR 영상화로 측정된 NM 노출 후 발병 및 회복하는 3일, 42일 및 70일의 NM-유도 폐부종에 대한 TPOm의 효과를 나타낸다. NM 노출 6시간 후에 TPOm을 단일용량으로 투여한 경우 3일차에 평균 부종 부피가 1736 mm³로부터 NM 처리군에서 1592로, 그리고 NM/TPOm 처리군에서 1387 mm³로 감소하지만 이 효과는 통계적으로 유의하지 않다. 차후 시점에서 7일, 또는 7일 및 14일에 TPOm의 두 번째 용량투여한 경우 평균 폐부종 부피는 NM 단독에 노출된 시험군과 비교하여 42일 및 70일에 NM 노출 후 TPOm으로 처리된 래트에서 더 낮다(6시간 및 7일째의 경우 p = 0.0104, 6시간, 7일 및 14일 TPOm 군에서 p = 0.0770), 이는 TPOm이 부종의 해소를 가속화함을 시사한다.
도 5a 및 5b는 NM-유도 폐 섬유증에 대한 TPOm의 효과를 나타낸다. 폐 섬유증의 발병에 대한 TPOm의 영향을 조사하는 확장된 만성 연구에서 래트에 NM 수포제를 처리한 후 TPOm을 복수 용량 투여했다(2 또는 3 용량). 그 후 폐부종의 수준을 평가하기 위해 노출 후 연장된 기간 동안 MRI를 주기적으로 수행하였다. 노출 후 70일차에, 래트의 폐는 자연 폐 용적을 유지하기 위해 원위치에서(in situ) 팽창 고정되었다. 그 후 폐를 절제하고 포르말린에서 밤새 고정하고 콜라겐에 대한 높은 결합 친화도를 나타내는 마이크로CT 방사선 조영제인 인텅스텐산(Phosphotungstic Acid, PTA)으로 평형화하여 생체외(ex vivo) 마이크로CT 이미징을 위해 처리했다. 이 PTA 처리 방법을 사용하면 폐에서 발생하는 섬유증을 2차원 및 3차원에서 정량화하고 시각화할 수 있다. microCT 스캐닝 후, 인텅스텐산(PTA)을 제거하기 위해 폐를 70% 에탄올로 4일 동안 옮기고 조직학적 평가를 위해 처리했다. 도 5a는 TPOm이 NM-노출된 폐에서 섬유증 상태의 수많은 요소를 유의하게 감소시켰음을 나타내는 데이터를 표로 나타낸다(섬유증 점수 TPOm 처리군에 대해 2.11 및 1.89 대 비히클 대조군에 대해 4.33). 도 5b는 PTA 처리된 폐의 방사선 밀도를 나타내는 회색조 CT 이미지를 나타내며, 이는 TPOm이 NM 노출 래트의 폐에서, 폐 전체에 분포된 반점상 연회색 병소로 나타나는 콜라겐 함유 섬유성 병변의 수를 감소시키고 분포를 변화시켰음을 나타낸다.
도 6은 NM-유도 사망의 영향을 나타낸다. 래트 군은 LD50으로 예상되는 용량의 NM으로 처리되었다. 동물을 정상 슈박스 하우징(normal shoebox housing)으로 복귀시키고 매일 체중을 측정하고 연구 기간 동안 자주 관찰했다. 도 6은 NM 노출 후 TPOm 투여가 수명을 연장하고 사망을 줄일 수 있음을 나타낸다. TPOm 처리와 관련된 현저한(5%~7%, ~20 g) 체중 감소 보호를 갖는 NM/TPOm 처리군과 비교하여 NM/Veh에서 체중 감소가 더 컸으며, 이는 또한 이 제제의 이환에 대한 경감 효과를 시사한다.

본 명세서는 적어도 부분적으로 이를 필요로 하는 대상체에서 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하기 위한 치료제로서의 트롬보포이에틴(TPO) 모방체의 확인에 기반한다. TPO 모방체는 제형화 및 독성 영향으로부터 보호하기 위해 수포제 또는 가성 가스에 노출되거나 노출될 대상체에 투여될 수 있다.

다양한 간행물, 기사 및 특허가 배경기술 및 명세서 전체에 걸쳐 인용되거나 설명된다. 이들 참고문헌 각각은 그 전체가 참조로서 본 명세서에 포함된다. 본 명세서에 포함된 문서, 행위, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 발명의 맥락을 제공하기 위한 것이다. 이러한 논의는 이러한 문제 중 일부 또는 전부가 개시되거나 청구된 발명과 관련하여 선행 기술의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것은 아니다.

달리 정의되지 않는 한, 여기에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에서 사용된 특정 용어는 명세서에 기재된 의미를 갖는다.

본 명세서 및 첨부되는 청구항에서 사용되는 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백히 달리 나타내지 않는 한 복수의 언급을 포함함이 주지되어야 한다.

달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 "약"이라는 용어에 의해 변형되는 것으로 이해되어만 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로, 인용된 값의 ± 10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v)의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v)를 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 수치 범위의 사용은 문맥상 명백히 달리 나타내지 않은 한, 모든 가능한 하위 범위, 상기 범위 내의 정수를 포함한 그 범위 내의 모든 개별 수치 값 및 그 값의 분수를 명백히 포함한다.

달리 나타내지 않는 한, 일련의 요소들 앞에 있는 "적어도"라는 용어는 일련의 모든 요소들을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 당업자는 통상의 실험만을 사용하여 본원에 기재된 본 발명의 구체적 구현예에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "포함하다(comprises)", "포함하는(comprising)", “포함하다(includes)”, “포함하는(including)”, “가지다(has), “갖는(having)”, "포함하다(contains)", "포함하는(containing)" 또는 이들의 임의의 다른 활용형은 언급된 정수 또는 정수의 그룹을 포함하는 것을 암시하지만 다른 정수 또는 정수 그룹의 배제는 암시하지 않으며 비독점적이거나 개방적일 것을 의도한다. 예를 들어, 구성 요소 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치는 반드시 해당 구성 요소에만 제한되는 것이 아니며 명시적으로 나열되지 않거나 그러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품, 또는 장치에 고유하지 않은 다른 구성 요소를 포함할 수 있다. 또한, 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, "또는"은 배타적 또는 배타적이지 않은 포괄적인 또는을 나타낸다. 예를 들어 조건 A 또는 B는 다음 중 어느 하나에 의해 충족된다: A는 참(또는 존재)이고 B는 거짓(또는 부존재), A는 거짓(또는 부존재)이고 B는 참(또는 존재) , 그리고 A와 B는 모두 참(또는 존재)이다.

본 명세서에 사용되는, 복수의 요소들 간의 연결 용어 "및/또는"은 개별 옵션 및 결합된 옵션 모두를 포괄하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 두 요소가 "및/또는"으로 결합된 경우, 첫 번째 옵션은 두 번째 요소가 없는 첫 번째 요소가 적용될 수 있음을 나타낸다. 두 번째 옵션은 첫 번째 요소 없이 두 번째 요소가 적용될 수 있음을 나타낸다. 세 번째 옵션은 첫 번째 요소와 두 번째 요소가 적용될 수 있음을 나타낸다. 이들 옵션들 중 임의의 하나는 의미 내에 포함되는 것으로 이해되고, 따라서 본 명세서에서 사용된 "및/또는"이라는 용어의 요구 사항을 만족시킨다. 하나 이상의 옵션에 대한 동시 적용 가능성은 또한 그 의미 내에 해당되므로 "및/또는"이라는 용어의 요구 사항을 만족시킨다.

명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, 본 명세서에 사용된 용어 "~로 구성된다(consists of)" 또는 "~로 구성되는(consist of)" 또는 "~로 구성되는(consisting of)"과 같은 활용형은 언급된 정수 또는 정수 그룹의 포함을 나타내지만, 특정된 방법, 구조 또는 조성물에 추가적 정수 또는 정수 그룹을 추가할 수 없다.

본 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 용어 "본질적으로 ~로 구성된(consists essentially of)", 또는 "본질적으로 ~로 구성된(consist essentially of)" 또는 "본질적으로 ~로 구성된(consisting essentially of)"과 같은 활용형은 언급된 정수 또는 정수 그룹의 포함을 나타내며, 그리고 명시된 방법, 구조 또는 조성물의 기본 또는 신규 특성을 실질적으로 변경하지 않는 인용된 정수 또는 정수 그룹의 선택적 포함을 나타낸다. M.P.E.P §2111.03를 참조.

본 명세서에 사용되는 "대상체"는 그에 대해 본 발명의 구현예에 따른 방법에 의해 백신접종될 것이거나 처치된 임의의 동물, 바람직하게는 포유류, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "포유류"는 임의의 포유류를 포괄한다. 포유류의 예는 비제한적으로 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼, 기니아피그, 원숭이, 인간 등, 보다 바람직하게는 인간을 포함한다.

단어 "우측", "좌측", "하부" 및 "상부"는 참조되는 도면에서 방향을 지정한다.

바람직한 발명의 구성요소의 치수 또는 특징을 언급하는 경우 본원에 사용된 용어 "약", "대략", "일반적으로", "실질적으로" 등은 당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 기재된 치수/특징이 엄격한 경계 또는 파라미터가 아니고 기능적으로 동일하거나 유사한 이로부터의 작은 변화를 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 최소한, 수치 파라미터를 포함하는 그러한 언급은 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리 (예를 들어, 반올림, 측정 또는 다른 시스템 오류, 제조 공차 등)를 사용하여 최소 유효 숫자를 변화시키지 않는 변화를 포함할 것이다.

본원에 사용된 용어 "독성 영향"은 수포제 또는 가성 가스에 노출된 후 대상체에서의 수포제 또는 가성 가스의 급성 및/또는 만성 독성을 지칭한다. 용어 "독성 영향"은 다음을 비제한적으로 지칭한다: 부종, 혈관 손상, 미세 출혈, 예컨대 폐 미세 출혈, 세포 유입, 내피/상피 세포 손상 또는 폐 섬유증. 용어 "독성 영향"은 사망 또는 이환(morbidity)일 수도 있다.

본원에 사용되는 용어 "수포제(vesicant)"는 독성이 있고 일반적으로 화합물과 접촉하거나 화합물을 둘러싸는 조직에 장기간 지속적 손상을 일으키는 화합물을 지칭한다. 수포제는 심한 피부, 눈 및 점막 통증과 자극을 유발할 수 있다. 수포제의 예에는 증류 머스타드, 머스타드 가스, 루이사이트, 머스타드/루이사이트, 머스타드/T, 질소 머스타드, 세스퀴 머스타드, 황 머스타드, 포스겐 옥심, 칸타리딘 또는 푸라노쿠마린이 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 수포제에는 심한 화학적 화상을 유발하여 영향 받는 대상의 신체에 고통스러운 물집을 유발하는 능력으로 알려진 수포제도 포함될 수도 있다.

대부분의 수포제는 3가지 그룹 중 하나로 분류된다: 머스타드 가스를 포함하는 황계 작용제 계열인 황 머스타드; 황 머스타드와 유사하지만 황 대신 질소를 기본으로 하는 작용제 계열인 질소 머스타드; 1차 세계 대전 중에 개발되었지만 사용되지 않은 초기의 수포제인 루이사이트(lewisite). 쐐기풀 작용제(발진작용제, urticant)라고도 하는 포스겐 옥심(Phosgene oxime)도 수포제에 포함된다. "수포제"라는 용어는 화학 물질 유출이나 화학전 작용제(chemical warfare agent)에 의한 대규모 화상과 관련하여 종종 사용되지만, 칸타리딘과 같은 일부 천연 역시 물집 생성 물질(blister-producing agents)(수포제)이기도 하다. 또 다른 천연 수포제인 푸라노쿠마린은 또한 피부 감광성을 크게 증가시켜 간접적으로 수포제 효과를 일으킬 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "가성 가스(caustic gas)"는 접촉 시 화학 반응에 의해 신체 조직을 태우거나 부식시킬 수 있는 가스를 의미한다. 가성 가스의 예는 황화수소, 플루오르화수소, 염화수소, 브롬화수소, 시안화수소, 아르신, 포스핀, 산화질소, 이산화질소, 이산화황, 오존, 염소, 메틸아민 또는 암모니아를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 가성 가스는 접촉 시 화학 반응에 의해 신체 조직을 태우거나 부식시킬 수 있다. 일반적으로 가성 가스에는 산성 가스, 염기성 가스 및 산화성 가스의 세 가지 유형이 있다.

본원에 사용되는 용어 "부가적 치료제"는 TPO 또는 TPO 모방체와 함께 투여될 때 유리한 특성을 나타내거나 알려진 임의의 화합물 또는 치료제를 지칭한다. 이러한 제제의 예는 진통제, 방부제, 다른 TPO 모방체, 다른 사이토카인, 가용성 mpl 수용체, 조혈 인자, 인터루킨, 성장 인자 또는 항체, 및 화학요법제를 포함할 수 있지만 이에 국한되지 않는다. 다른 사이토카인은 줄기 세포 인자(SCF), 인터루킨 3(IL-3) 또는 Flt-3 리간드일 수 있다. Ku et al., Blood, 87:4544-4551 (1996); Sitnicka et al., Blood, 87:4998-5005 (1996). 특히, 부가적 치료제는 아트로핀(atropine), 아트로핀 설페이트(atropine sulfate), 호마트로핀(homatropine), 마약성 진통제(narcotic analgesics), 또는 N-아세틸시스테인(N-acetylcysteine, NAC)일 수 있다.

TPO 모방체

본 명세서에 사용된 "TPOm", "TPO 모방체" 또는 "트롬보포이에틴 모방체"는 트롬보포이에틴 수용체에 결합하고 이를 활성화할 수 있는 펩티드를 포함하는 화합물을 지칭한다. 바람직하게는, 본 발명에 유용한 TPO 모방체에서, 트롬보포이에틴 수용체에 결합하고 이를 활성화할 수 있는 펩티드는 트롬보포이에틴(TPO)과 상당한 상동성을 갖지 않는다. TPO와의 상동성의 결여는 TPO 항체의 생성 가능성을 감소시킨다. TPO 모방체에 유용한 이러한 펩티드의 예는 미국 공개공보 제2003/0158116; 2005/0137133; 2006/0040866; 2006/0210542; 2007/0148091; 2008/0119384호; 미국 특허공보 제5,869,451; 7,091,311; 7,615,533; 8,227,422호; 국제 특허 공개공보 제WO2007/021572; WO2007/094781; 및 WO2009/148954호(그 전체 내용은 참조로서 본 명세서에 포함됨)에 기술된 것을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 보다 바람직하게는, 본 발명에 유용한 TPO 모방체에서, 트롬보포이에틴 수용체에 결합하고 이를 활성화할 수 있는 펩티드는 펩티드의 하나 이상의 특성을 개선하는 모이어티에 공유결합된다. 비제한적인 예로서, 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리락트산 및 폴리글리콜산을 포함하며 이에 제한되지 않는 친수성 중합체일 수 있다. 모이어티는 또한 Fc 영역 또는 알부민과 같은 폴리펩티드일 수 있다.

바람직한 구현예에서, 본 발명에 유용한 TPO 모방체는 IEGPTLRQXaaLAARYaa(서열번호 1)의 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 포함하며, 여기서 Xaa는 트립토판(W) 또는 β-(2-나프틸)알라닌(본 명세서에서 "2-Nal"로 지칭됨)이고, Yaa는 알라닌(A) 또는 사르코신(본 명세서에서 "Sar"로 지칭됨)이다. 바람직하게는, 서열번호 1의 펩티드는 PEG에 공유결합되거나 Fc 도메인에 융합된다.

일부 실시양태에서, 본 발명에 유용한 TPO 모방체는 PEG, 바람직하게는 약 5,000 내지 약 30,000 달톤의 평균 분자량을 갖는 PEG에 공유결합된 서열번호 1의 펩티드를 포함한다. 바람직하게는, PEG는 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜(MePEG-OH), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-숙시네이트(MePEG-S), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-숙신이미딜 숙시네이트(MePEG-S-NHS), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-아민(MePEG-NH2, 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-트레실레이트(MePEG-TRES), 및 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-이미다졸릴-카르보닐(MePEG-IM)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 펩티드의 PEG화는 효능의 손실 없이 화합물의 제거를 감소시킨다. 예를 들어, 미국 특허 제7,576,056호를 참조하고, 그 전체 내용은 참조로서 본 명세서에 포함된다.

한 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 유용한 TPO 모방체는 RWJ-800088 또는 그의 유도체이다. 본 명세서에서 사용된 "RWJ-800088"은 다음과 같이 리신아미드 잔기에 의해 결합된 2개의 동일한 14량체(서열번호 2)를 갖고:

및 각각의 N-말단 이소류신에 공유결합된 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)(MPEG)을 갖는 29량체 펩티드, 또는 그의 약학적 허용염 또는 에스테르를 지칭한다. 따라서 RWJ-800088은 서열번호 1의 2개의 14개 아미노산 펩티드 사슬로 구성되며, 여기서 Xaa는 2-Nal이고 Yaa는 Sar이며, 리신아미드에 의해 결합되고, 각 N-말단 이소류신은 메톡시 폴리에틸렌 글리콜(MPEG) 사슬에 결합된다. 따라서 RWJ-800088은 (MPEG-Ile-Glu-Gly-Pro-Thr-Leu-Arg-Gln-(2-Nal)-Leu-Ala-Ala-Arg-(Sar))₂- Lys-NH₂의 축약된 분자 구조를 가지며; 여기서 (2-Nal)은 베타-(2-나프틸)알라닌이고, (Sar)는 사르코신이고 MPEG는 메톡시폴리(에틸렌 글리콜), 또는 그의 약학적 허용염 또는 에스테르이다. 바람직하게는, MPEG는 약 20,000 달톤 분자량을 가지거나 메톡시폴리에틸렌 글리콜20000을 나타낸다.

한 실시양태에서, RWJ-800088은 하기 화학식 (I)의 분자 구조, 또는 그의 약학적 허용염 또는 에스테르를 갖는다:

[화학식 (I)]

바람직한 구현예에서, RWJ-800088의 MPEG는 메톡시폴리에틸렌글리콜20000이고, RWJ-800088은 메톡시폴리에틸렌글리콜20000-프로피오닐-L-이소류실-L-글루타밀-글리실-L-프롤릴-L-트레오닐-L-류실-L-아르기닐-L-글루타미닐-L-2-나프틸알라닐-L-류실-L-알라닐-L-알라닐-L-아르기닐-사르코실-Ne-(메톡시폴리에틸렌글리콜20000-프로피오닐-L-이소류실-L-글루타밀-글리실-L-프롤릴-L-트레오닐-L-류실-L-아르기닐-L-글루타미닐-L-2-나프틸알라닐-L-류실-L-알라닐-L-알라닐-L-아르기닐-사르코실-)-라이신아미드 (methoxypolyethyleneglycol20000-propionyl-L-Isoleucyl-L-Glutamyl-Glycyl-L-Prolyl-L-Threonyl-L-Leucyl-L-Arginyl-L-Glutaminyl-L-2-Naphthylalanyl-L-Leucyl-L-Alanyl-L-Alanyl-L-Arginyl-Sarcosyl-Ne-(methoxypolyethyleneglycol20000-propionyl-L-Isoleucyl-L-Glutamyl-Glycyl-L-Prolyl-L-Threonyl-L-Leucyl-L-Arginyl-L-Glutaminyl-L-2-Naphthylalanyl-L-Leucyl-L-Alanyl-L-Alanyl-L-Arginyl-Sarcosyl-)-Lysinamide)의 전체 화학명을 가지며, 또는 그의 약학적 허용염 또는 에스테르이다. PEG가 없는 펩타이드의 분자량은 3,295달톤이고 2개의 20,000달톤 MPEG 사슬이 있는 경우 약 43,295달톤이다.

일부 구현에서, 본 발명에 유용한 TPO 모방체는 Fc 도메인에 융합된 서열번호 1의 펩티드를 포함한다. 펩티드를 Fc 도메인에 융합시키면 생체내에서 펩티드를 안정화시킬 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제6,660,843호를 참조, 이의 전체 내용은 참조로서 본 명세서에 포함된다.

또 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명에 유용한 TPO 모방체는 로미플로스팀이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "로미플로스팀"은 서열번호 1의 펩티드의 N-말단 이소류신에 결합된 Fc 도메인을 갖는 융합 단백질을 지칭하며, 여기서 Xaa는 W이고 Yaa는 A이다. 특히, 로미플로스팀은 하기 아미노산 서열을 갖는다:

MDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGGIEGPTLRQWLAARAGGGGGGGGIEGPTLRQWLAARA (서열번호 4),

이것은 IEGPTLRQWLAARA(서열번호 3)의 트롬보포이에틴 수용체 결합 도메인 아미노산 서열을 갖는다.

투여량 및 투여

본 발명에서, 본 발명자들은 TPO 모방체가 수포제 또는 가성 가스의 인간 노출 후 독성 영향에 대해 상당한 경감 효과를 갖는다는 것을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 유효량의 TPO 모방체를 투여하는 것을 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체, 에컨대 수포제에 노출된 대상체 또는 가성 가스에 노출된 대상체에서, 혈관 손상, 폐 출혈, 폐 중공(air space) 내로의 염증 세포 유입, 폐에서 섬유화 사이토카인의 축적, 폐 섬유증의 발병, 수포제 유도성 부종, 수포제 유도성 사망 및 이환과 같은 NM-유도성 하나 이상의 급성 또는 만성 폐 손상의 평가변수에 대한 경감을 달성한다.

TPO 모방체는, 예를 들어, 약제학적 담체 또는 희석제와 함께 약제학적 조성물의 활성 성분으로서 투여될 수 있다. TPO 모방체는 경구, 폐, 비경구(근육내(IM), 복강내(IP), 정맥내(IV) 또는 피하 주사(SC)), 흡입(미세 분말 제형을 통해), 경피, 비강, 질, 직장, 또는 설하 투여 경로로 투여될 수 있고 각각의 투여 경로에 적합한 투여 형태로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 국제 공개 번호 제WO1993/25221호(Bernstein et al.)는 비경구 투여 또는 장내 투여, 바람직하게는 경구 투여에 의해 국소, 국부 또는 전신 투여될 수 있는 에리트로포이에틴(EPO)을 함유하는 생분해성 고분자 미소구체를 개시한다. WO1994/17784(Pitt et al.)는 EPO가 폐 경로를 통해 전신적으로 투여될 수 있고 그러한 전달이 다른 EPO 투여 방법과 비교하여 필적할만한 수준의 치료 이익을 초래한다고 개시한다. 유사한 조성물 및 방법을 본 명세서의 TPO 모방체의 투여에 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고체 투여 형태는 캡슐, 정제, 환제, 분말 및 과립을 포함한다. 이러한 고체 투여 형태에서, 활성 펩티드 화합물은 수크로스, 락토스 또는 전분과 같은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체와 혼합된다. 이러한 투여 형태는 또한 통상적인 실행과 같이 불활성 희석제 이외의 추가 물질, 예컨대 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제를 포함할 수 있다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우, 투여 형태는 또한 완충제를 포함할 수 있다. 정제 및 환제는 추가로 장용성 코팅제로 제조할 수 있다.

경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 약제학적으로 허용되는 에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽을 포함하며, 엘릭시르(elixir)는 물과 같이 당업계에서 일반적으로 사용되는 불활성 희석제를 함유한다. 이러한 불활성 희석제 이외에, 조성물은 또한 습윤제, 유화제 및 현탁제, 및 감미제, 향미제 및 방향제와 같은 보조제를 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제는 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 또는 에멀젼을 포함한다. 비수성 용매 또는 비히클의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일 및 옥수수 오일과 같은 식물성 오일, 젤라틴 및 에틸 올리에이트와 같은 주사 가능한 유기 에스테르가 있다. 이러한 투여 형태는 또한 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 이들은 예를 들어 박테리아 보유 필터를 통한 여과, 조성물에 살균제 혼입, 조성물 방사선조사, 또는 조성물 가열에 의해 살균될 수 있다. 이것들은 또한 사용 직전에 멸균수 또는 기타 멸균 주사 가능한 매체를 사용하여 제조될 수 있다.

TPO 모방체의 투여는 전형적으로 근육내, 피하 또는 정맥내이다. 그러나 피부, 피내 또는 비강과 같은 다른 투여 방식도 고려될 수 있다. TPO 모방체의 근육내 투여는 주삿바늘을 사용하여 TPO 모방체 조성물의 현탁액을 주사하여 달성될 수 있다. 대안으로 무바늘 주사 장치를 사용하여 조성물(예컨대, Biojector™ 사용) 또는 TPO 모방 조성물의 동결 건조 분말을 투여하는 것이다.

정맥내, 피부 또는 피하 주사, 또는 통증 부위에서의 주사를 위해, TPO 모방 조성물은 발열원이 없고 적절한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용되는 수용액의 형태일 수 있다. 당업자는 예를 들어 염화나트륨 주사제, 링거 주사제, 젖산 링거 주사제과 같은 등장성 비히클을 사용하여 적절한 용액을 잘 제조할 수 있다. 필요에 따라 방부제, 안정제, 완충제, 항산화제 및/또는 기타 첨가제가 포함될 수 있다. 서방성 제제도 사용할 수 있다.

직장 또는 질 투여용 조성물은 바람직하게는, 활성 TPO 모방체에 더하여 코코아 버터 또는 좌약 왁스와 같은 부형제를 함유할 수 있는 좌약이다. 비강 또는 설하 투여용 조성물은 또한 당업계에 잘 알려진 표준 부형제로 제조된다.

전형적으로, 투여는 노출 전, 노출 동안 또는 노출 후에 대상체에서 수포제 또는 가성 가스의 독성 영향 경감을 위한 치료 및/또는 예방 목적을 가질 것이다. 치료적 적용에서, TPO 모방체 조성물은 수포제 또는 가성 가스에 노출되는 동안 또는 노출 후에 대상체에 투여되고, TPO 모방 조성물은 독성 영향을 치유하거나 적어도 부분적으로 경감을 제공하기에 충분한 양으로 투여된다. 예방적 적용에서, TPO 모방체 조성물은 그러한 노출 전에 수포제 또는 가성 가스에 대한 노출에 민감성이거나 또는 노출될 위험이 있는 대상체에 투여된다. 이러한 각 상황에서 TPO 모방체 조성물의 양은 노출 상태 및 특성(예컨대, 수포제 또는 가성 가스의 범주 및 농도, 노출 기간) 및 대상체의 신체적 특성(예컨대, 키, 체중 등)에 따라 달라질 것이다.

TPO 모방체를 함유하는 약제학적으로 허용되는 조성물은 대상체에 투여되어 대상체에서 수포제 또는 독성 가스의 독성 영향을 경감시킨다. 독성 영향을 경감시키기에 충분한 조성물의 양은 조성물의 "유효 용량" 또는 "유효량"으로 정의된다.

본 명세서에 제공된 방법을 위해 대상체에 투여되는 TPO 모방체의 유효량은 해당 대상체에 따라 달라질 수 있다. 효능의 종 차이는 문헌에서 다른 TPO 모방체에 대해 기술되었으며 수용체 친화도의 차이에 기인한다(Erickson-Miller CL, et al. Discovery and Characterization of the optional, nonpeptidyl thrombopoietin receptor agonist. Exp. Hematol. 2005; 33:85-93 및 Nakamura T, et al. “A novel non-peptidyl human c-Mpl activator stimulates human megakaryopoiesis and thrombopoiesis,” Blood. 2006;107:4300-7). 따라서, 일부 구현예에서 TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 1kg당 0.1 마이크로그램(μg) 내지 6 μg 의 양일 수 있다. 추가 구현예에서, TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 TPO 모방체의 2.25 μg 내지 4 μg 의 양일 수 있다. 소정 대상체의 경우, TPO 모방체의 유효량은 대상의 체중 1kg당 0.1 밀리그램(mg) 내지 6 mg의 양일 수 있다. 추가 구현예에서, TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 TPO 모방체의 2.25 mg 내지 4 mg의 양일 수 있다. 또 다른 대상체에서, TPO 모방체의 유효량은 대상의 체중 kg당 6 mg 내지 60 mg의 양일 수 있다. 추가 구현예에서, TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 TPO 모방체의 20 mg 내지 40 mg의 양일 수 있다.

투여되는 실제 양, 및 투여 속도 및 시간 경과는 치료 대상의 성질 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 치료 처방, 예컨대 복용량 등에 대한 결정은 일반 개업의 및 기타 의사, 또는 수의학적 맥락에서 수의사의 책임 내에 있으며, 일반적으로 치료할 장애, 개별 환자의 상태, 전달 부위, 투여 방법 및 개업의에게 알려진 기타 요인을 고려한다. 상기 언급한 기술 및 프로토콜의 예는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed., 1980에서 찾을 수 있다. 본 명세서에 기술된 투여 범위, 제공된 특정 투여예 및 상이한 종은 수용체 민감도에 기초한 투여량 조정이 필요할 수 있다는 이해를 기반으로, 당업자는 해당 대상체에 대한 유효 투여량을 결정할 수 있을 것이다.

특정 구현예에서, 대상체는 TPO 모방체의 유효량의 1 용량을 투여받는다.

특정 구현예에서, 대상체는 TPO 모방체의 유효량의 다중 용량을 투여받는다.

TPO 모방체의 생성 및 TPO 모방체의 조성물로의 선택적 제형화 후, 조성물은 개체, 특히 인간 또는 다른 영장류에게 투여될 수 있다. 인간, 또는 다른 포유동물, 예컨대, 마우스, 래트, 햄스터, 기니피그, 토끼, 양, 염소, 돼지, 말, 소, 당나귀, 원숭이, 개 또는 고양이에 투여될 수 있다. 비인간 포유동물에 대한 전달은 치료 목적일 필요는 없고, 예를 들어 TPO 모방체의 투여로 인한 혈관 완전성을 보호하는 기작의 조사와 같은 실험적 맥락에서 사용하기 위한 것일 수 있다.

본 발명의 TPO 모방체 조성물은 치료될 증상(condition)에 따라 단독으로 또는 동시에 또는 순차적으로 다른 치료와 조합하여 투여될 수 있다.

TPO 모방체 조성물은 원하는 경우 활성 성분을 함유하는 하나 이상의 단위 투여 형태를 함유할 수 있는 키트, 팩 또는 디스펜서로 제공될 수 있다. 예를 들어, 키트는 블리스터 팩과 같은 금속 또는 플라스틱 호일을 포함할 수 있다. 키트, 팩 또는 디스펜서는 투여 지침과 함께 제공될 수 있다. 키트는 독성 영향을 경감하기 위한 하나 이상의 부가적 치료제 또는 장치를 추가로 포함할 수 있다.

키트에 포함되는 부가적 치료제는 TPO 또는 TPO 모방체와 함께 투여될 때 유리한 특성을 나타내거나 알려져 있는 임의의 화합물 또는 치료제를 지칭한다. 이러한 제제의 예는 진통제, 방부제, 기타 TPO 모방체, 기타 사이토카인, 가용성 mpl 수용체, 조혈 인자, 인터루킨, 성장 인자 또는 항체, 및 화학요법제일 수 있지만 이에 국한되지 않는다. 기타 사이토카인은 줄기 세포 인자(SCF), 인터루킨 3(IL-3) 또는 Flt-3 리간드일 수 있다. Ku et al., Blood, 87:4544-4551 (1996); Sitnicka et al., Blood, 87:4998-5005 (1996).

키트에 포함된 장치는 예를 들어, 용기, 전달 비히클 또는 투여 장치일 수 있다.

구현예

본 발명은 또한 다음의 비제한적인 구현예를 제공한다.

구현예 1은 다음의 독성 영향을 경감하는 방법이다:

(i) 이를 필요로 하는 대상체에서 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하는 방법으로, 상기 방법은 대상체에 유효량의 트롬보포이에틴(TPO) 모방체를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 대상체에 대한 TPO 모방체의 유효량의 투여는 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하고; 또는

(ii) 이를 필요로 하는 대상체에서 산화 스트레스 또는 내피 손상의 독성 영향을 경감하는 방법으로, 상기 방법은 대상체에 유효량의 TPO 모방체를 투여하는 것을 포함하고, 대상체에 대한 유효량의 TPO 모방체의 투여는 독성 영향 산화 스트레스 또는 내피 손상을 경감시킨다.

구현예 1(a)는 구현예 1의 방법이며, 여기서 TPO 모방체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 포함한다.

구현예 1(b)는 구현예 1(a)의 방법이며, 여기서 펩티드는 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는다.

구현예 1(c)는 구현예 1(a) 또는 1(b)의 방법이며, TPO 모방체는 펩티드에 공유 결합된 친수성 중합체를 추가로 포함한다.

구현예 1(d)는 구현예 1(c)의 방법이며, 여기서 친수성 중합체는 i) 폴리에틸렌 글리콜(PEG), ii) 폴리프로필렌 글리콜, iii) 폴리락트산, 또는 iv) 폴리글리콜산 중 어느 하나이다.

구현예 1(e)는 구현예 1(d)의 방법이며, 여기서 친수성 중합체는 PEG이다.

구현예 1(f)는 구현예 1(e)의 방법이며, 여기서 PEG는 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜(MePEG-OH), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-숙시네이트(MePEG-S), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-숙신이미딜 숙시네이트(MePEG-S-NHS), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-아민(MePEG-NH2), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-트레실레이트(MePEG-TRES), 또는 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-이미다졸릴-카르보닐(MePEG-IM)이다.

구현예 1(g)는 구현예 1(e)의 방법이며, 여기서 PEG는 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)(MPEG)이다.

구현예 1(h)는 구현예 1(g)의 방법이며, 여기서 TPO 모방체는 화학식 (I)의 분자 구조를 갖는 RWJ-800088이다.

구현예 1(h)(1)은 구현예 1(g)의 방법이며, 여기서 TPO 모방체가 화학식 I의 분자 구조를 갖는 RWJ-800088, 또는 그의 약학적 허용염 또는 에스테르이다.

구현예 1(i)은 구현예예 1(h) 또는 1(h)(1)의 방법이며, 여기서 RWJ-800088의 MPEG은 메톡시폴리에틸렌 글리콜20000이다.

구현예 1(j)는 구현예 1(a)의 방법이며, 여기서 펩티드는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는다.

구현예 1(k)는 구현예 1(j)의 방법이며, 여기서 펩티드는 폴리펩티드에 융합된다.

구현예 1(l)은 구현예 1(k)의 방법이며, 여기서 폴리펩티드는 Fc 도메인이다.

구현예 1(m)은 구현예 1(l)의 방법이며, 여기서 TPO 모방체는 로미플로스팀(romiplostim)이다.

구현예 1(m)(1)은 구현예 1(m)의 방법이며, 여기서 로미플로스팀은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다.

구현예 2는 구현예 1-1(m)(1) 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체는 대상체가 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 노출되기 전에 대상체에 투여된다.

구현예 3은 구현예 1-1(m)(1) 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체는 대상체가 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 노출된 후에 대상체에 투여된다.

구현예 4는 구현예 1-1(m)(1) 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체는 대상체가 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 노출되는 동안 대상체에 투여된다.

구현예 5는 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 상기 수포제는 증류 머스타드, 머스타드 가스, 루이사이트, 머스타드/루이사이트, 머스타드/T, 질소 머스타드, 세스퀴 머스타드, 황 머스타드, 포스겐 옥심, 칸타리딘 및 푸라노쿠마린으로 이루어진 군에서 선택된다.

구현예 6은 구현예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법이며, 가성 가스는 황화수소, 플루오르화수소, 염화수소, 브롬화수소, 시안화수소, 아르신, 포스핀, 산화질소, 이산화질소, 이산화황, 오존, 염소, 메틸아민 및 암모니아로 이루어진 군에서 선택된다.

구현예 7은 구현예 1 내지 6 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 대상체는 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향의 경감을 필요로 하고, 여기서 수포제는 증류 머스타드, 머스타드 가스, 루이사이트, 머스타드/루이사이트, 머스타드/T, 질소 머스타드, 세스퀴 머스타드, 황 머스타드, 포스겐 옥심, 칸타리딘 및 푸라노쿠마린으로 이루어진 군에서 선택되고; 상기 가성 가스는 황화수소, 플루오르화수소, 염화수소, 브롬화수소, 시안화수소, 아르신, 포스핀, 산화질소, 이산화질소, 이산화황, 오존, 염소, 메틸아민 및 암모니아로 이루어진 군에서 선택된다.

구현예 7(a)는 구현예 7의 방법이며, 여기서 대상체는 적어도 하나의 수포제의 독성 영향의 경감을 필요로 한다.

구현예 7(b)는 구현예 7의 방법이며, 여기서 대상체는 적어도 하나의 가성 가스의 독성 영향의 경감을 필요로 한다.

구현예 7(c)는 구현예 7의 방법이며, 여기서 대상체는 적어도 2개의 수포제의 독성 영향의 경감을 필요로 한다.

구현예 7(d)는 구현예 7의 방법이며, 여기서 대상체는 적어도 2개의 가성 가스의 독성 영향의 경감을 필요로 한다.

구현예 7(e)는 구현예 7의 방법이며, 여기서 대상체는 적어도 3개 이상의 수포제의 독성 영향의 경감을 필요로 한다.

구현예 7(f)는 구현예 7의 방법이며, 여기서 대상체는 적어도 3개 이상의 가성 가스의 독성 영향의 경감을 필요로 한다.

구현예 8은 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중을 기준으로 한다.

구현예 8(a)는 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 0.1 μg 내지 6 μg 의 범위 내에 있다.

구현예 8(b)는 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 2.25 μg 내지 4 μg의 범위 내에 있다.

구현예 8(c)는 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 0.1 mg 내지 6 mg의 범위 내에 있다.

구현예 8(d)는 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 2.25 mg 내지 4 mg의 범위 내에 있다.

구현예 8(e)는 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 대상체의 체중 kg당 6 mg 내지 60 mg 범위 내에 있다.

구현예 9는 구현예 1 내지 8(a) 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 독성 영향은 혈관 손상, 폐출혈, 폐 중공 내로의 염증 세포 유입, 폐의 섬유화촉진성 사이토카인 축적, 폐 섬유증, 폐부종, 사망 및 이환으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이며, 상기 독성 영향은 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 의해 유도된다.

구현예 9(a)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 혈관 손상이다.

구현예 9(b)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 폐출혈, 바람직하게는 폐 미세출혈이다.

구현예 9(c)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 폐 중공 내로의 염증 세포 유입이다.

구현예 9(d)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 폐에서의 섬유화촉진성 사이토카인의 축적이다.

구현예 9(e)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 폐 섬유증이다.

구현예 9(f)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 폐부종이다.

구현예 9(g)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 의해 유도된 사망(mortality)이다.

구현예 9(h)는 구현예 9의 방법이며, 여기서 독성 영향은 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 의해 유발된 이환(morbidity)이다.

구현예 10은 구현예 1-9(h) 중 어느 하나의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 정맥내, 근육내, 피내 또는 피하 주사 중 어느 하나에 의해 대상체에 투여된다.

구현예 10(a)는 구현예 10의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 피하 주사에 의해 대상체에 투여된다.

구현예 10(b)는 구현예 10의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 정맥내 주사에 의해 대상체에 투여된다.

구현예 10(c)는 구현예 10의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 근육내 주사에 의해 대상체에 투여된다.

구현예 10(d)는 구현예 10의 방법이며, 여기서 TPO 모방체의 유효량은 피하 주사에 의해 대상체에 투여된다.

구현예 11은 TPO 모방체의 유효량 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하기 위한 키트이다.

구현예 11(a)는 구현예 11의 키트이며, 여기서 TPO 모방체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 포함한다.

구현예 11(b)는 구현예 11의 키트이며, 여기서 펩티드는 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는다.

구현예 11(c)는 구현예 11(a) 또는 11(b)의 키트이며, 여기서 TPO 모방체는 펩티드에 공유 결합된 친수성 중합체를 추가로 포함한다.

구현예 11(d)는 구현예 11의 키트이며, 여기서 친수성 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리락트산 및 폴리글리콜산 중 어느 하나이다.

구현예 11(e)는 구현예 11(d)의 키트이며, 여기서 친수성 중합체는 PEG이다.

구현예 11(f)는 구현예 11(e)의 키트이며, 여기서 PEG는 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜(MePEG-OH), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-숙시네이트(MePEG-S), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-숙신이미딜 숙시네이트(MePEG-S-NHS), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-아민(MePEG-NH2), 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-트레실레이트(MePEG-TRES), 또는 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜-이미다졸릴-카르보닐(MePEG-IM)이다.

구현예 11(g)는 구현예 11(e)의 키트이며, 여기서 PEG는 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)(MPEG)이다.

구현예 11(h)는 구현예 11(g)의 키트이며, 여기서 TPO 모방체는 화학식 (I)의 분자 구조를 갖는 RWJ-800088, 또는 그의 약학적 허용염 또는 에스테르이다.

구현예 11(i)은 구현예 11(h)의 키트이며, 여기서 RWJ-800088의 MPEG는 메톡시폴리에틸렌 글리콜20000이다.

구현예 11(j)는 구현예 11(a)의 키트이며, 여기서 펩티드는 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는다.

구현예 11(k)는 구현예 11(j)의 키트이며, 여기서 펩티드는 폴리펩티드에 융합된다.

구현예 11(l)은 구현예 11(k)의 키트이며, 여기서 폴리펩티드는 Fc 도메인이다.

구현예 11(m)은 구현예 11(l)의 키트이며, 여기서 TPO 모방체는 로미플로스팀이다.

구현예 11(m)(1)은 구현예 11(m)의 키트이며, 여기서 로미플로스팀은 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함한다.

구현예 12는 구현예 11-11(m)(1) 중 어느 하나의 키트이며, 독성 영향을 경감하기 위한 하나 이상의 부가적 치료제 또는 장치를 추가로 포함한다.

구현예 13은 구현예 12의 키트이며, 여기서 부가적 치료제는 진통제, 방부제, 기타 TPO 모방체, 기타 사이토카인, 가용성 mpl 수용체, 조혈 인자, 인터루킨, 성장 인자 또는 항체, 및 화학요법제로 이루어진 군에서 선택된다.

실시예

실시예 1: NM-유도 폐 손상에 대한 TPOm의 효과

재료 및 방법

동물: 수컷 Wistar 래트(300-320g)를 NM/Veh 및 NM/TPOm의 2개 그룹으로 나누었다.

질소 머스타드 노출: 이 연구에서, 비-기체 질소 머스타드(NM)인 메클로레타민(mechlorethamine)을 황 머스타드에 대한 대용물로서 사용하여, 실험실 동물을 수포제에 노출시키는 것을 용이하게 하고 연구자에 대한 위험을 감소시켰다. NM을 사용하는 이러한 연구에서 얻은 정보는 황 머스타드 가스의 노출과 관련된 제안된 연구에서 설계를 안내하고 관심 평가변수(endpoint)를 정의하는 데 직접 적용될 수 있다. 특히, 수컷 Wistar 래트(300-320g) 그룹은 0일째에 기관 점적을 통해 황 머스타드 대용물인 0.125 mg/kg의 메클로레타민을 투여받았다.

TPOm 합성 및 처리: TPOm은 상술한 바와 같이 Janssen Pharmaceuticals에 의해 합성되었다(예컨대, 미국 특허 제7,576,056호 참조). TPOm을 멸균 식염수에 재구성하고, 멸균 여과하고, 분취하고, 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다. TPOm은 질소 머스타드(NM)에 노출된 후 6시간에 피하 주사(0.3 mg/kg)를 통해 단일 용량으로 투여되었다. 이 용량은 다중 시점에 투여했을 때 플라시보와 비교하여 상당한 생존 이점을 제공한 래트 전신 방사선 연구의 효과를 기반으로 선택되었다.

자기공명영상(MRI) 측정: 3일차에, NM 노출에 의해 유도된 폐부종의 정도를 특성화하기 위해 FSE(T2-가중) 시퀀스를 사용하여 래트에 대해 MRI 스캔을 수행하였다.

기관지-폐포 세척액(BAL) 측정: MRI 스캐닝 후, 래트를 안락사시키고 PBS의 분취량(3x5 ml)으로 폐를 세척하고 기관지-폐포 세척액(BAL)에서 적혈구(RBC), 백혈구(WBC), 변형 성장 인자 베타 1(TGF-1b) 수준을 표준 방법론을 사용하여 측정하였다. 특히, 각 래트에서 회수된 세척 부피를 모아 디지털 사진으로 RBC 함량을 기록했다. BAL 샘플을 부드럽게 혼합하고 샘플의 WBC 수를 표준 트립판 블루 배제 방법론 및 혈구 계수기를 사용하여 결정했다. 다양한 처리군에서 수집된 BAL을 원심분리하고 TGF-1b ELISA를 사용하여 무세포 상청액에서 TGF-1b의 농도를 측정했다.

총 장기 병리학 측정: 래트를 안락사시킨 후, 흉강을 외과적으로 개방하고 하행 혈관을 절단하였다. 허탈된 폐 외부의 혈액액을 PBS로 부드럽게 헹구고 습윤 수술 패드로 닦아냈다. PBS로 폐 혈관계를 관류하지 않고 폐를 디지털 방식으로 촬영했다.

결과

TPOm 및 Romiplostim은 NM 노출에 따른 미세출혈 및 세포 유입으로부터 보호한다.

TPOm 처리의 혈관 보호 효과(0.3 mg/kg, NM 주입 후 6시간)는 기관지-폐포 세척액(BAL)의 세포 성분에서 관찰되었다. BAL의 RBC(광학 밀도로 측정한 도 1a) 및 WBC(혈구계측기로 측정한 도 1b, p < 0.05) 함량은 TPOm 투여가 NM 노출에 의해 유도된 미세 출혈 및 폐의 중공 냉로의 WBC 유입을 감소시킨다는 것을 나타낸다. TPOm은 또한 BAL 유체에서 TGF-1b 농도의 NM 유도성 상승을 감소시키는 것으로 밝혀졌다(도 1c, p < 0.05).

로미플로스팀 처리의 혈관 보호 효과(0.1 & 1.0 mg/kg, NM 주입 후 6시간)는 TPOm과 비교하여 BAL의 세포 성분에서 관찰되었다. BAL의 RBC 함량(도 2a - 육안 검사 및 2b-광학 밀도) 및 WBC 함량(도 2c)의 평가에 의해 나타난 바와 같이, 로미플로스팀 및 TPOm 투여는 모두 NM 노출에 의해 유발된 미세 출혈 및 폐 중공 내로의 WBC 유입을 감소시킨다는 것을 나타낸다.

TPOm의 혈관 보호 효과는 또한 부검에서 육안적 기관 병리학으로 관찰되었다. 도 3a-3c에 나타난 바와 같이, 비히클 대조군의 래트로붙터의 폐는 부검에서 폐 혈관계에 함유된 혈액을 반영하는 균일한 착색을 나타내는 반면, NM에 노출된 래트의 폐는 감소된 관류의 창백한 영역으로 둘러싸인 다수의 흉막하(sub pleural) 미세 출혈 부위(화살표)를 나타낸다. TPOm을 투여받은 NM 노출 래트는 얼룩덜룩한 외관을 나타내지만, 미세출혈 부위의 심각도와 수는 NM 단독 투여 래트에 비해 현저히 감소했다. 이러한 결과는 TPOm이 NM 노출 후 미세 출혈 및 세포 유입의 발생(development)과 관련된 심각한 혈관 손상을 예방한다는 것을 나타낸다.

NM 노출 후 폐부종에 대한 TPOm의 효과

폐부종에 대한 TPOm의 효과는 NM 노출 후 6시간에 TPOm의 단일 용량(0.3 mg/kg) 후 3일차에, 그리고 NM 노출 후 6시간 및 7일차에 TPOm 용량 또는 NM 노출 후 6시간, 7일차 및 14일차에 TPOm의 용량 후 평가되었다. NM 노출 후 6시간에 TPOm 단일용량 투여했을 때 3일차에 평균 부종 부피는 1736mm3으로부터 NM 처리군에서 1592로, NM/TPOm 처리군에서 1387mm3로 감소했지만 이 효과는 통계적으로 유의하지 않다. 차후 시점에서 7일, 또는 7일 및 14일에 TPOm의 두 번째 용량의 경우 평균 폐부종 부피는 NM 단독에 노출된 시험군과 비교하여 42일 및 70일에 NM 노출 후 TPOm으로 처리된 쥐에서 더 낮다(6시간 및 7일의 경우 p = 0.0104, 6시간, 7일 및 14일 TPOm 군에서 p = 0.0770), 이는 TPOm이 부종의 해소를 가속화함을 시사한다.

실시예 2: NM-유도 폐 섬유증에 대한 42일 및/또는 70일에서의 TPOm의 효과

재료 및 방법

동물. 수컷 Wistar 래트(300-320g)를 NM/Veh 및 NM/TPOm의 2개 군으로 나누었다.

질소 머스타드 노출: 이 연구에서, 수컷 Wistar 래트군은 0일에 기관 점적을 통해 0.125 mg/kg의 황 머스타드 대용물인 메클로레타민을 투여받았다.

TPOm 합성 및 처리: TPOm은 상술한 바와 같이 Janssen Pharmaceuticals에 의해 합성되었다(예컨대, 미국 특허 제7,576,056호 참조). TPOm을 멸균 식염수에 재구성하고, 멸균 여과하고, 분취하고, 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다. 70일째까지의 폐 섬유증 발병에 대한 TPOm의 영향을 조사하는 이 확장 연구에서 래트는 NM 수포제 처리 후 두 가지 다른 투여 시간 일정(6시간, 6시간 & 7일 vs. 6시간, 7일 & 14일)으로 여러 용량의 TPOm(0.3mg/kg)을 투여받았다.

자기 공명 영상(MRI) 측정: 폐부종의 수준을 평가하기 위해 노출 후 연장된 기간에 걸쳐 MRI를 주기적으로 수행하였다. 노출 후 70일째에, 래트의 폐는 자연 폐 용적을 유지하기 위해 원위치에서(in situ) 팽창 고정되었다. 그 후 폐를 절제하고 포르말린에서 밤새 고정하고 콜라겐에 대한 높은 결합 친화도를 나타내는 마이크로CT 방사선 조영제인 인텅스텐산(Phosphotungstic Acid, PTA)으로 평형화하여 생체외(ex vivo) 마이크로CT 이미징을 위해 처리했다. 이 PTA 처리 방법을 사용하면 폐에서 발생하는 섬유증을 2차원 및 3차원에서 정량화하고 시각화할 수 있다. 각 폐에는 콜라겐 특이적 조영제인 인텅스텐산(PTA)으로 생체외(ex vivo) 처리된 폐의 3차원 CT 이미지에 나타나는 섬유성(fibrotic), 방사선조밀(radiodense) 병소의 수와 분포를 기반으로 하는 다중 매개변수 채점 시스템을 사용하여 폐의 PTA 대조 3D microCT 이미지를 기반으로 한 섬유증 점수가 할당되었다. 여기에서 방사선조밀 섬유성 조직이 정상 폐 실질(밝은 회색) 전체에서 관찰되어 폐 섬유증의 양과 분포를 나타낸다.

TPOm은 장기적으로 NM-유도 폐 섬유증에 대해 보호한다

이 연구의 결과는 TPOm이 NM-유도 폐 섬유증의 평가변수에 영향을 미친다는 것을 나타낸다. 폐 섬유증의 평가를 위해 개발된 다중 매개변수 채점 시스템의 적용은 TPOm이 NM 노출된 폐에서 섬유증 증상(condition)의 수많은 요소를 유의하게 감소시키는 것으로 나타났다(도 5a). 또한, PTA 처리된 폐의 방사선 밀도를 반영하는 CT 이미지는 TPOm이 NM에 노출된 래트의 폐에서 수를 감소시키고 콜라겐 함유 섬유성 병변의 분포를 변경함을 나타냈다(도 5b).

실시예 3: NM-유도 사망에 대한 TPOm의 효과

재료 및 방법

동물. 수컷 Wistar 래트(300-320g)를 NM/Veh 및 NM/TPOm의 2개 군으로 나누었다.

질소 머스타드 노출: 일련의 예비 연구를 수행하여 2주 기간 내에 Wistar 래트를 사망에 이르게 하는 NM의 용량 범위를 결정하였다. 그리고 이러한 연구의 결과는 1.23 & 3.75 mg/kg 사이로 예상되는 LD50-LD70에 의한 동물 사망에 대한 매우 가파른 NM 용량을 나타냈다. 이러한 범위 찾기 연구에서 전신 관찰의 심각도을 기반으로 NM 유도 사망에 대한 TPOm의 영향을 조사하는 후속 연구를 위해 1.7 mg/kg NM의 용량이 선택되었다. 이 연구에서 수컷 Wistar 래트 군(10마리/군)은 0일째에 기관 점적을 통해, 황 머스타드 대용물인 메클로레타민의 LD50로 예상되는 NM 용량 1.7 mg/kg을 처리했다. 그런 다음 동물을 반환했다. 동물을 정상 슈박스 하우징(normal shoebox housing)으로 복귀시키고 매일 체중을 측정하고 연구 기간 동안 자주 관찰했다.

TPOm 합성 및 처리: TPOm은 상술한 바와 같이 Janssen Pharmaceuticals에 의해 합성되었다(예컨대, 미국 특허 제7,576,056호 참조). TPOm을 멸균 식염수에 재구성하고, 멸균 여과하고, 분취하고, 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다. TPOm은 질소 머스타드(NM)에 노출된 후 6시간 후에 피하 주사(0.3mg/kg)를 통해 단일 용량으로 투여되었다.

사망 및 체중 측정: 사망한 동물을 집계하고 빈사 상태의 래트를 안락사시키고 사망한 것으로 집계하고 데이터를 사용하여 생존 플롯을 구성하였다(도 6). 일일 체중 역시 NM/Veh 및 NM/TPOm 처리군 간에 5~7%(~20g)의 체중 감소 차이로 영향을 받았다.

결과

TPOm은 NM 유도 사망에 대해 보호한다

결과는 도 6에 도시된 바와 같이 플롯으로 제시된다. 생존 곡선(도 6)으로부터 이 연구에 대해 원하는 NM에 대한 예상 LD50이 초과되었음을 알 수 있다. 이것은 용량 반응의 가파름으로 인한 것으로 보이며 따라서 LD50 결정의 가변성 때문일 수 있다. 연구가 유의성(significance)을 해소할 만큼 충분히 뒷받침되지는 않았지만, NM 노출 후 6시간 후에 TPOm 투여가 수명을 연장하고 사망을 감소시키는 것으로 밝혀졌다는 점에 주목해야 한다. 또한, 체중 감소는 TPOm 처리와 관련된 현저한(5%에서 7%, ~20g) 체중 감소 보호로 NM/TPOm 처리군과 비교하여 NM/Veh에서 더 컸다. 상기 결과는 TPOm이 수포제로 인한 사망을 경감하고 노출 유도성 체중 감소로부터 보호함으로써 이환율을 감소시킨다는 것을 시사한다.

본 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 광범위한 본 발명의 개념을 벗어나지 않고 위에서 설명된 구현예에 변경이 이루어질 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 본 발명은 개시된 특정 구현예로 제한되지 않고, 본 설명에 의해 정의된 본 발명의 사상 및 범위 내에서 수정을 포함하도록 의도된 것으로 이해된다.

SEQUENCE LISTING <110> Janssen Pharmaceutica N.V. <120> METHODS OF MITIGATING TOXIC EFFECTS OF VESICANTS AND CAUSTIC GAS <130> 688097.0953/457WO <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> tryptophan or beta-(2-naphthyl)alanine <220> <221> X <222> (14)..(14) <223> alanine or sarcosine <400> 1 Ile Glu Gly Pro Thr Leu Arg Gln Xaa Leu Ala Ala Arg Xaa 1 5 10 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> X <222> (9)..(9) <223> beta -(2-naphthyl)alanine <220> <221> X <222> (14)..(14) <223> sarcosine <400> 2 Ile Glu Gly Pro Thr Leu Arg Gln Xaa Leu Ala Ala Arg Xaa 1 5 10 <210> 3 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 3 Ile Glu Gly Pro Thr Leu Arg Gln Trp Leu Ala Ala Arg Ala 1 5 10 <210> 4 <211> 269 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Recombinant peptide <400> 4 Met Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 1 5 10 15 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 35 40 45 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 50 55 60 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 65 70 75 80 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 85 90 95 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 100 105 110 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 115 120 125 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 130 135 140 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 145 150 155 160 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 195 200 205 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 210 215 220 Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Gly Ile Glu Gly Pro Thr Leu Arg 225 230 235 240 Gln Trp Leu Ala Ala Arg Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ile 245 250 255 Glu Gly Pro Thr Leu Arg Gln Trp Leu Ala Ala Arg Ala 260 265

Claims (17)

1. 대상체에 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 트롬보포이에틴(TPO) 모방체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 수포제(vesicant) 및 가성가스(caustic gas) 중 적어도 하나의 독성 영향을 경감하는 방법.
2. 제1항에 있어서,
   상기 TPO 모방체는 RWJ-800088인, 방법.
3. 제1항에 있어서,
   상기 TPO 모방체는 로미플로스팀인, 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 가성 가스는 황화수소, 플루오린화수소, 염화수소, 브롬화수소, 시안화수소, 아르신, 포스핀, 산화질소, 이산화질소, 이산화황, 오존, 염소, 메틸아민 및 암모니아로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 수포제는 증류 머스타드, 머스타드 가스, 루이사이트, 머스타드/루이사이트, 머스타드/T, 질소 머스타드, 세스퀴 머스타드, 황 머스타드, 포스겐 옥심, 칸타리딘 및 푸라노쿠마린으로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 방법.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 TPO 모방체의 유효량은 대상체가 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 노출되기 전에 대상체에 투여되는 것인, 방법.
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 TPO 모방체의 유효량은 대상체가 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 노출되는 동안 대상체에 투여되는 것인, 방법.
8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 TPO 모방체의 유효량은 대상체가 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 노출된 후에 대상체에 투여되는 것인, 방법.
9. 제9항에 있어서,
   상기 TPO 모방체의 유효량은 대상체가 수포제 및 가성 가스 중 적어도 하나에 노출된 후에 투여되는 것인, 방법.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성 영향은 수포제 및 가성가스 중 적어도 하나에 의해 유도된 혈관 손상인, 방법.
11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성 영향은 수포제 및 가성가스 중 적어도 하나에 의해 유도된 출혈, 바람직하게 미세출혈, 및 가장 바람직하게 폐 미세출혈, 또는 세포 유입인, 방법.
12. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성 영향은 수포제 및 가성가스 중 적어도 하나에 의해 유도된 폐 섬유증인, 방법.
13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 독성 영향은 수포제 및 가성가스 중 적어도 하나에 의해 유도된 사망 또는 이환(morbidity)인, 방법.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 TPO 모방체의 유효량은 정맥내, 근육내, 피내 또는 피하 주사에 의하여 대상체에 투여되는 것인, 방법.
15. 트롬보포이에틴(TPO) 모방체의 유효량 및 약제학적 허용 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서 수포제(vesicant) 및 가성가스(caustic gas) 중 적어도 하나의 독성 영향 경감용 키트로, 상기 TPO 모방체는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, 바람직하게 상기 TPO 모방체는 RWJ-800088 또는 로미플로스팀이고, 선택적으로, 상기 키트는 TPO 모방체를 대상체에 투여하기 위한 툴(tool)을 추가로 포함하는, 키트.
16. 제15항에 있어서,
    독성 영향을 경감하기 위한 부가적 치료제 또는 장치 중 적어도 하나를 추가로 포함하는, 키트.
17. 제16항에 있어서,
    상기 부가적 치료제는 진통제, 방부제, 다른 TPO 모방체, 다른 사이토카인, 가용성 mpl 수용체, 조혈 인자, 인터루킨, 성장 인자 또는 항체, 및 화학요법제로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 키트.
    
    

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