KR20210107904A - Composition for treating viral infection - Google Patents

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KR20210107904A
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antiviral
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로버트 에이. 뉴먼
오티스 씨. 애딩턴
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피닉스 바이오테크놀러지 인코포레이티드.
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Abstract

필로비리대 과, 플라비비리대 또는 토가비리대 과의 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염을 치료하는 방법이 제공된다. 적어도 하나의 강심 배당체를 갖는 조성물이 바이러스 감염을 치료하기 위해 사용된다. 조성물은 적어도 하나의 트리테르펜을 추가적으로 포함할 수 있다. A method of treating a viral infection caused by a virus of the family Philoviridae, Flaviviridae or Togaviridae is provided. A composition having at least one cardiac glycoside is used to treat a viral infection. The composition may further comprise at least one triterpene.

Description

바이러스 감염 치료를 위한 조성물{COMPOSITION FOR TREATING VIRAL INFECTION}Composition for treating viral infection {COMPOSITION FOR TREATING VIRAL INFECTION}

본 발명은 포유동물에서 플라비비리대 감염, 토가비리대 감염 또는 필로비리대 감염의 치료를 위한 항 바이러스 조성물 및 그 사용에 관한 것이다. 일부 실시 예는 출혈성 바이러스 감염의 치료에 관한 것이다.The present invention relates to an antiviral composition and its use for the treatment of a Flaviviridae infection, a Togaviridae infection or a Pilobiridae infection in a mammal. Some embodiments relate to the treatment of hemorrhagic viral infections.

네리움(Nerium) 종의 일원인 네리움 올리앤더(Nerium oleander)는 아열대 아시아, 미국 남서부 및 지중해에 널리 분포된 관상용 식물이다. 그것의 의학적 및 독성학적 특성은 오랫동안 인식되어 왔다. 예를 들어, 치질, 궤양, 나병, 뱀 물림, 암, 종양, 신경계 장애, 세포 증식성 질환의 치료에 사용하도록 제안되어 왔다.Yes Solarium (Nerium) a member of four meander up Leeum (Nerium oleander) is a species of ornamental plant widely distributed in subtropical Asia, the southwestern United States and the Mediterranean. Its medicinal and toxicological properties have long been recognized. For example, it has been proposed for use in the treatment of hemorrhoids, ulcers, leprosy, snake bites, cancer, tumors, neurological disorders, cell proliferative diseases.

네리움 종의 식물로부터 성분의 추출은 전통적으로 끓는 물, 냉수 또는 유기 용매를 사용하여 수행되어 왔다.Extraction of components from plants of the Nerium species has traditionally been performed using boiling water, cold water or organic solvents.

상업적으로 입수 가능한 ANVIRZEL™(Ozel의 미국 특허 제 5,135,745 호)은 네리움 올리앤더의 열탕(hot-water) 추출물의 농축 형태 또는 분말 형태를 함유한다. Muller et al. (Pharmazie.(1991) Sept. 46(9), 657-663)은 네리움 올리앤더의 물 추출물 분석에 관한 결과를 개시한다. 그것들은 존재하는 다당류가 주로 갈락투론산이라고 보고한다. 다른 당류들에는 람노오스, 아라비노오스 및 갈락토스가 포함된다. 네리움 올리앤더의 열탕 추출물 내의 다당류 함량 및 다당류의 개별 당 조성은 또한 Newman et al.(J. Herbal Pharmacotherapy,(2001) vol 1, pp.1-16)에 의해 보고된 바 있다. Selvaraj et al.의 미국 특허 제 5,869,060 호는 네리움 종의 추출물 및 생산 방법에 관한 것이다. 추출물을 준비하기 위해 식물 재료를 물에 넣고 끓인다. 그 다음, 조(crude) 추출물을 식물 재료로부터 분리하고, 여과에 의해 멸균시켰다. 이어서, 생성된 추출물을 동결 건조시켜 분말을 제조할 수 있다. 미국 특허 제 6,565,897 호(Selvaraj et al.의 미국 특허전 공개 제 20020114852 호 및 PCT 국제 공개 제 WO 2000/016793 호)는 실질적으로 멸균된 추출물의 제조를 위한 열탕 추출 공정을 개시한다.The commercially available ANVIRZEL™ (US Pat. No. 5,135,745 to Ozel) contains a concentrated or powdered form of a hot-water extract of Nerium oleander. Muller et al. ( Pharmazie . (1991) Sept. 46(9), 657-663) discloses results regarding the analysis of water extracts of Nerium oleander. They report that the polysaccharide present is mainly galacturonic acid. Other sugars include rhamnose, arabinose and galactose. Polysaccharide content and individual sugar composition of polysaccharides in boiling water extract of Nerium oleander have also been reported by Newman et al. (J. Herbal Pharmacotherapy , (2001) vol 1, pp. 1-16). U.S. Pat. No. 5,869,060 to Selvaraj et al. relates to an extract of Nerium sp. and a method of production. To prepare the extract, the plant material is put in water and brought to a boil. The crude extract was then separated from the plant material and sterilized by filtration. Then, the resulting extract may be freeze-dried to prepare a powder. U.S. Patent No. 6,565,897 (Pre-Patent Publication No. 20020114852 to Selvaraj et al. and PCT International Publication No. WO 2000/016793) discloses a hot water extraction process for the preparation of substantially sterile extracts.

Erdemoglu et al.(J. Ethnopharmacol.(2003) Nov. 89(1), 123-129)는 항-통각 및 항-염증 활성에 기초하여, 네리움 올리앤더를 포함하는 식물의 수용(aqueous) 및 에탄올 추출물의 비교 결과를 개시한다. Erdemoglu et al. ( J. Ethnopharmacol. (2003) Nov. 89(1), 123-129) based on anti-nociceptive and anti-inflammatory activity, aqueous and Comparative results of ethanol extracts are disclosed.

네리움 올리앤더의 유기 용매 추출물은 또한 Adome et al.(Afr. Health Sci.(2003) Aug. 3(2), 77-86; 에탄올 추출물), el-Shazly et al.(J. Egypt Soc. Parasitol.(1996), Aug. 26(2), 461-473; 에탄올 추출물), Begum et al.(Phytochemistry(1999) Feb. 50(3), 435-438; 메탄올 추출물), Zia et al.(J. Ethnolpharmacol.(1995) Nov. 49(1), 33-39; 메탄올 추출물) 및 Vlasenko et al.(Farmatsiia.(1972) Sept.-Oct.21(5), 46-47; 알콜성 추출물)에 의해 개시된다. Organic solvent extracts of Nerium oleander were also obtained from Adome et al. (Afr. Health Sci. (2003) Aug. 3(2), 77-86; ethanol extract), el-Shazly et al. (J. Egypt Soc. Parasitol. (1996), Aug. 26(2), 461-473; ethanol extract), Begum et al. (Phytochemistry (1999) Feb. 50(3), 435-438; methanol extract), Zia et al. ( J. Ethnolpharmacol. (1995) Nov. 49(1), 33-39; methanol extract) and Vlasenko et al. (Farmatsiia. (1972) Sept.-Oct. 21(5), 46-47; alcoholic extract) is initiated by

네리움 종의 초임계 유체 추출물은 공지되어 있고(US 8394434, US 8187644, US 7402325), 신경계 장애(US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143A1) 및 세포 증식성 장애(US 8367363)를 치료하는 데 효능을 나타냈다.Supercritical fluid extracts of Nerium species are known (US 8394434, US 8187644, US 7402325), and are used to treat neurological disorders (US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143A1) and cell proliferative disorders (US 8367363). showed efficacy in

트리테르펜은 매우 다양한 치료 활성을 갖는 것으로 알려져있다. 공지된 트리테르펜 중 일부는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산, 바독솔론, 마슬린산 등을 포함한다. 트리테르펜의 치료 활성은 트리테르펜의 조합보다는 개별적으로 주로 평가되었다.Triterpenes are known to have a wide variety of therapeutic activities. Some of the known triterpenes include oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid, bardoxolone, maslinic acid, and the like. The therapeutic activity of triterpenes was primarily evaluated individually rather than in combination with triterpenes.

올레아놀산은 선천적 세포 상(cellular phase) 2 해독 경로의 강력한 활성화제인 것으로 밝혀진 바독솔론과 같은 화합물로 대표되는 트리테르페노이드 부류에 있으며, 여기서 전사 인자 Nrf2의 활성화는 항산화 전사 반응 요소(ARE)를 함유하는 다운스트림 항산화 유전자의 프로그램에서 전사적 증가를 초래한다. 바독솔론 자체는 염증 질환의 임상 시험에서 광범위하게 조사되어 왔지만, 만성 신장 질환에서의 3 상 임상 시험은 상승된 농도에서 바독솔론을 포함하는 특정 트리테르페노이드의 공지된 세포 독성과 관련될 수 있는 부작용으로 인해 종결되었다.Oleanolic acids belong to a class of triterpenoids represented by compounds such as bardoxolone that have been shown to be potent activators of the innate cellular phase 2 detoxification pathway, where activation of the transcription factor Nrf2 contains an antioxidant transcriptional response element (ARE). It results in a transcriptional increase in the program of downstream antioxidant genes. Although bardoxolone itself has been extensively investigated in clinical trials in inflammatory diseases, phase 3 clinical trials in chronic kidney disease suggest that it may be associated with the known cytotoxicity of certain triterpenoids, including bardoxolone, at elevated concentrations. It was terminated due to side effects.

다른 치료 성분과 함께 트리테르펜을 함유하는 조성물은 식물 추출물로서 발견된다. Fumiko et al.(Biol. Pharm. Bull(2002), 25(11), 1485-1487)은 트리파노소마증을 치료하기 위한 Rosmarimus officinalis L.의 메탄올 추출물의 평가를 개시한다. Addington et al.(US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143 A1)은 신경 질환의 치료를 위한 올레안드린 및 트리테르펜을 함유하는 네리움 올리앤더의 초임계 유체 추출물(SCF; PBI-05204)을 개시한다. Addington et al.(US 9011937, US 20150283191 A1)은 신경 질환의 치료를 위한 올레안드린 및 트리테르펜을 함유하는 네리움 올리앤더의 SCF 추출물의 트리테르펜-함유 분획(PBI-04711)을 개시한다. Jager et al.(Molecules(2009), 14, 2016-2031)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 다양한 식물 추출물을 개시한다. Mishra et al.(PLoS One 2016 25; 11(7):e0159430. Epub 2016 Jul 25)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Betula utilis 나무 껍질의 추출물을 개시한다. Wang et al.(Molecules(2016), 21, 139)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Alstonia scholaris의 추출물을 개시한다. L. e Silva et al.(Molecules(2012), 17, 12197)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Eriope blanchetti의 추출물을 개시한다. Rui et al.(Int. J. Mol. Sci.(2012), 13, 7648-7662)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Eucaplyptus globulus의 추출물을 개시한다. Ayatollahi et al.(Iran. J. Pharm. Res.(2011), 10(2), 287-294)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Euphorbia microsciadia의 추출물을 개시한다. Wu et al.(Molecules(2011), 16, 1-15)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Ligustrum 종의 추출물을 개시한다. Lee et al.(Biol. Pharm. Bull(2010), 33(2), 330)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Forsythia viridissima의 추출물을 개시한다.Compositions containing triterpenes along with other therapeutic ingredients are found as plant extracts. Fumiko et al. (Biol. Pharm. Bull (2002), 25(11), 1485-1487) disclose the evaluation of a methanol extract of Rosmarimus officinalis L. for the treatment of trypanosomiasis. Addington et al. (US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143 A1) described a supercritical fluid extract of Nerium oleander containing oleandrine and triterpenes (SCF; PBI-05204) for the treatment of neurological diseases. to start Addington et al. (US 9011937, US 20150283191 A1) discloses a triterpene-containing fraction (PBI-04711) of an SCF extract of Nerium oleander containing oleandrine and triterpenes for the treatment of neurological diseases. Jager et al. (Molecules (2009), 14, 2016-2031) disclose various plant extracts containing mixtures of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other components. Mishra et al. (PLoS One 2016 25; 11(7):e0159430. Epub 2016 Jul 25) discloses an extract of Betula utilis bark containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other ingredients. Wang et al. (Molecules (2016 ), 21, 139) discloses the Alstonia scholaris extract containing a mixture of olreahnolsan, ursolic acid, betulinic acid and the other components. L. e Silva et al. (Molecules (2012), 17, 12197) disclose an extract of Eriope blanchetti containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other components. Rui et al. (Int. J. Mol. Sci. (2012), 13, 7648-7662) disclose an extract of Eucaplyptus globulus containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other components. Ayatollahi et al. (Iran. J. Pharm. Res. (2011), 10(2), 287-294) disclose an extract of Euphorbia microsciadia containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other components. Wu et al. (Molecules (2011), 16, 1-15) disclose extracts of Ligustrum species containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other components. Lee et al. (Biol. Pharm. Bull (2010), 33(2), 330) disclose an extract of Forsythia viridissima containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other components.

올레아놀산(O 또는 OA), 우르솔산(U 또는 UA) 및 베툴린산(B 또는 BA)은 PBI-05204(PBI-23; 네리움 올리앤더의 초임계 유체 추출물) 및 PBI 04711(PBI-05204의 트리테르펜-함유 분획 0-4)에서 발견되는 3 가지 주요 트리테르펜 성분이다. 본 발명자들은 이전에(Van Kanegan et al., Nature Scientific Reports(May 2016), 6:25626. doi:10.1038/srep25626), 유사한 농도에서의 뇌 슬라이스 산소 포도당 결핍(OGD) 모델 분석에서 이들의 신경 보호 활성을 비교함으로써 효능에 대한 트리테르펜의 기여에 대해 보고하였다. 본 발명자들은 PBI 05204(PBI) 및 PBI-04711(분획 0-4)이 신경 보호 활성을 제공한다는 것을 발견했다.Oleanolic acid (O or OA), ursolic acid (U or UA) and betulinic acid (B or BA) are PBI-05204 (PBI-23; supercritical fluid extract of Nerium oleander) and PBI 04711 (PBI-05204 of the tree There are three major triterpene components found in terpene-containing fractions 0-4). We previously reported (Van Kanegan et al., Nature Scientific Reports (May 2016), 6:25626. doi:10.1038/srep25626), their neuroprotection in brain slice oxygenated glucose deprivation (OGD) model analysis at similar concentrations. The contribution of triterpenes to efficacy was reported by comparing the activities. We found that PBI 05204 (PBI) and PBI-04711 (fractions 0-4) confer neuroprotective activity.

네리움 종의 추출물은 많은 다른 부류의 화합물들: 강심 배당체, 당체, 스테로이드, 트리테르펜, 다당류 및 기타 화합물을 함유하는 것으로 알려져있다. 특정 화합물은 올레안드린; 네리탈로사이드; 오도로사이드; 올레아놀산; 우르솔산; 베툴린산; 올레안드리게닌; 올리아사이드 A; 베툴린(urs-12-ene-3β,28-diol); 28-norurs-12-en-3β-ol; urs-12-en-3β-ol; 3β,3β-하이드록시-12-올레아넨-28-oic acid; 3β,20α-디하이드록시우르스-21-en-38-oic acid; 3β,27-디하이드록시-12-ursen-38-oic acid; 3β,13β-디히드록시우르스-11-en-28-oic acid; 3β,12α-디하이드록시올레아난-28,13β-olide; 3β,27-디하이드록시-12-올레아난-28-oic acid; 및 다른 성분들을 포함하는 것으로 알려져있다. Extracts of Nerium species are known to contain many different classes of compounds: cardiac glycosides, glycosides, steroids, triterpenes, polysaccharides and other compounds. Certain compounds include oleandrine; neritaloside; odoroside; oleanolic acid; ursolic acid; betulinic acid; oleandrigenin; Oliaside A; betulin (urs-12-ene-3β,28-diol); 28-norurs-12-en-3β-ol; urs-12-en-3β-ol; 3β,3β-hydroxy-12-oleanene-28-oic acid; 3β,20α-dihydroxyurs-21-en-38-oic acid; 3β,27-dihydroxy-12-ursen-38-oic acid; 3β,13β-dihydroxyurs-11-en-28-oic acid; 3β,12α-dihydroxyoleanane-28,13β-olide; 3β,27-dihydroxy-12-oleanane-28-oic acid; and other ingredients.

바이러스성 출혈열(VHF)은 5 개의 별개의 바이러스 과: 아레나비리대, 부니아비리대, 필로비리대, 플라비비리대 및 파라믹소비리대에 의해 야기될 수 있다. 필로바이러스, 예를 들어 에볼라바이러스(EBOV)와 마르부르그바이러스(MARV)는 사람에게 알려진 가장 병원성인 바이러스이며 최대 90 %의 사망률을 가진 바이러스성 출혈열의 원인이 되는 바이러스 중 하나이다. 각각의 비리온은 단일 가닥의 네가티브-센스 RNA 분자를 포함한다. 지지적인 관리 또는 대증 요법 이외에, EBOV(에볼라바이러스) 및 MARV(마르부르그바이러스) 감염, 즉 필로바이러스 감염을 치료할 수 있는 상업적 치료 효과적인 약물과 예방 약물이 존재하지 않는다. Tai Forest(이전의 Ivory Coast), Sudan, Zaire, Reston 및 Bundibugyo의 5 종의 에볼라바이러스가 확인되었다.Viral hemorrhagic fever (VHF) can be caused by five distinct viral families: arenaviridae, buniaviridae, filobiridae, flaviviridae and paramyxoviridae. Filoviruses, such as Ebola virus (EBOV) and Marburg virus (MARV), are the most pathogenic viruses known to humans and are among the viruses responsible for viral hemorrhagic fever with mortality rates of up to 90%. Each virion contains a single-stranded negative-sense RNA molecule. Other than supportive management or symptomatic therapy, there are no commercially effective and prophylactic drugs that can treat EBOV (Ebolavirus) and MARV (Marburgvirus) infections, ie filovirus infections. Five Ebola viruses have been identified: Tai Forest (formerly Ivory Coast), Sudan, Zaire, Reston and Bundibugyo.

플라비바이러스는 포지티브의 단일 가닥의 인벨롭된(enveloped) RNA 바이러스이다. 그것들은 주로 진드기 및 모기인 절지 동물에서 발견되며, 전 세계적으로 광범위한 질병률과 사망률을 유발한다. 모기-전염 바이러스 중 일부는 황열병, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스 및 지카바이러스를 포함한다. 진드기-전염 바이러스 감염의 일부는 진드기성 뇌염, 캬사누르 삼림병, 알크후르마 질병, 옴스크 출혈열을 포함한다. 출혈성 감염은 아니지만, 포와산 바이러스는 플라비바이러스이다.Flaviviruses are positive single-stranded enveloped RNA viruses. They are mainly found in arthropods, ticks and mosquitoes, and cause widespread morbidity and mortality worldwide. Some of the mosquito-transmitted viruses include yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus and Zika virus. Some of the tick-borne viral infections include tick encephalitis, kasanur forest disease, alkhurma disease, and Omsk hemorrhagic fever. Although not a hemorrhagic infection, Powasan virus is a flavivirus.

올레안드린은 항-HIV 활성을 나타내었지만, 많은 바이러스에 대해서는 평가되지 않았다. 트리테르펜 올레아놀산, 베툴린산 및 우르솔산은 상이한 수준의 항 바이러스 활성을 나타내는 것으로 보고되었지만, 많은 바이러스에 대해서는 평가되지 않았다. 베툴린산은 HSV-1 균주 1C, 인플루엔자 A H7N1, ECHO 6 및 HIV-1에 대해 일부 항 바이러스 활성을 나타냈다. 올레아놀산은 HIV-1, HEP C 및 HCV H 균주 NS5B에 대해 항 바이러스 활성을 나타냈다. 우르솔산은 HIV-1, HEP C, HCV H 균주 NS5B, HSV-1, HSV-2, ADV-3, ADV-8, ADV-11, HEP B, ENTV CVB1 및 ENTV EV71에 대해 항 바이러스 활성을 나타냈다. 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산의 항 바이러스 활성은 특정 바이러스에 대한 효능으로까지 예측할 수 없다. 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산 및/또는 베툴린산이 항 바이러스 활성을 거의 또는 전혀 갖지 않는 바이러스가 존재하는데, 이는 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산 및/또는 베툴린산이 특정 속의 바이러스에 대해 항 바이러스 활성을 나타낼지 여부를 선험적으로 예측할 수 없음을 의미한다. Oleandrin exhibited anti-HIV activity, but has not been evaluated against many viruses. The triterpenes oleanolic acid, betulinic acid and ursolic acid have been reported to exhibit different levels of antiviral activity, but have not been evaluated against many viruses. Betulinic acid showed some antiviral activity against HSV-1 strain 1C, influenza A H7N1, ECHO 6 and HIV-1. Oleanolic acid showed antiviral activity against HIV-1, HEP C and HCV H strain NS5B. Ursolic acid exhibited antiviral activity against HIV-1, HEP C, HCV H strains NS5B, HSV-1, HSV-2, ADV-3, ADV-8, ADV-11, HEP B, ENTV CVB1 and ENTV EV71. The antiviral activity of oleandrine, oleanolic acid, ursolic acid and betulinic acid cannot be predicted even from their efficacy against specific viruses. There are viruses in which oleandrine, oleanolic acid, ursolic acid and/or betulinic acid have little or no antiviral activity, which means that oleandrine, oleanolic acid, ursolic acid and/or betulinic acid are antiviral against viruses of certain genera. It means that it is not possible to predict a priori whether or not it will show activity.

Barrows et al.(Cell Host Microbe(2016), 20, 259-270의 "지카바이러스 감염 억제제에 대한 FDA 승인 약물의 스크린")은 디곡신이 지카바이러스에 대한 항 바이러스 활성을 나타내지만, 투여량이 너무 높고 독성이 있을 수 있다고 보고한다. Cheung et al.(Antiviral Res.(2014) 111, 93-99의 "뎅기 바이러스 감염에 대한 라나토사이드 C의 항 바이러스 활성")은 라나토사이드 C가 뎅기 바이러스에 대한 항 바이러스 활성을 나타냄을 보고한다.Barrows et al. (“Screen of FDA Approved Drugs for Inhibitors of Zika Virus Infections” in Cell Host Microbe (2016), 20, 259-270) show that digoxin exhibits antiviral activity against Zika virus, but at too high a dose Report possible toxicity. Cheung et al. (“Antiviral activity of lanatoside C against dengue virus infection” in Antiviral Res. (2014) 111, 93-99) reported that lanatoside C exhibited antiviral activity against dengue virus. do.

강심 배당체가 몇몇 바이러스에 대해 일부 항 바이러스 활성을 나타내는 것으로 입증되었지만, 특정 화합물은 상이한 바이러스에 대해 매우 상이한 수준의 항 바이러스 활성을 나타내며, 이는 동일한 바이러스에 대한 평가시, 일부는 매우 열악한 항 바이러스 활성을 나타내고, 일부는 더 우수한 항 바이러스 활성을 나타냄을 의미한다. Although cardiac glycosides have been demonstrated to exhibit some antiviral activity against some viruses, certain compounds exhibit very different levels of antiviral activity against different viruses, which, when evaluated against the same virus, some exhibit very poor antiviral activity. and some have better antiviral activity.

특정 바이러스 감염에 대해 치료적으로 활성인 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 또는 이들의 임의의 조합을 함유하는 개선된 약제학적 조성물에 대한 요구가 여전히 남아있다.There remains a need for improved pharmaceutical compositions containing oleandrine, oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid or any combination thereof that are therapeutically active against certain viral infections.

본 발명은 포유동물 대상체에서 바이러스 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 바이러스 감염, 예를 들어 포유동물 대상체에서 바이러스성 출혈열(VHF) 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 약제학적 조성물의 투여에 의해 포유동물에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명자들은 인간 및 동물에서 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기에 충분한 항 바이러스 활성을 나타내는 항 바이러스 조성물을 제조하는데 성공하였다. 본 발명자들은 특정 투약 요법을 사용하는 상응하는 치료 방법을 개발하였다.The present invention provides pharmaceutical compositions and methods for treating a viral infection in a mammalian subject. The present invention also provides pharmaceutical compositions and methods for treating viral infections, eg, viral hemorrhagic fever (VHF) infections in a mammalian subject. The invention also provides a method of treating a viral infection in a mammal by administration of a pharmaceutical composition. The present inventors have succeeded in preparing antiviral compositions that exhibit sufficient antiviral activity for use in treating viral infections in humans and animals. The present inventors have developed corresponding treatment methods using specific dosing regimens.

일부 실시 예에서, 바이러스 감염은 아레나비리대, 부니아비리대, 필로비리대, 플라비비리대, 파라믹소비리대, 또는 토가비리대와 같은 바이러스 과에 의해 야기된다.In some embodiments, the viral infection is caused by a family of viruses such as Arenaviridae, Buniaviridae, Philoviridae, Flaviviridae, Paramyxoviridae, or Togaviridae.

본 발명의 일부 실시 예는 필로바이러스 감염, 플라비바이러스 감염, 헤니파바이러스 감염, 알파바이러스 감염 또는 토가바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 치료할 수 있는 바이러스성 감염은 적어도, 에볼라바이러스, 마르부르그바이러스, 알파바이러스, 플라비바이러스, 황열병, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스, 지카바이러스, 베네수엘라 말 뇌척수염(뇌염)(VEE) 바이러스, 치쿤구야 바이러스, 웨스턴 말 뇌척수염(뇌염)(WEE) 바이러스, 이스턴 말 뇌척수염(뇌염)(EEE) 바이러스, 진드기성 뇌염, 캬사누르(Kyasanur) 삼림병, 알크후르마(Alkhurma) 질병, 옴스크 출혈열, 헨드라 바이러스, 니파 바이러스 및 이들의 종을 포함한다.Some embodiments of the present invention relate to compositions and methods for treating filovirus infection, flavivirus infection, henipavirus infection, alphavirus infection or togavirus infection. Treatable viral infections include, at least, Ebolavirus, Marburg virus, alphavirus, flavivirus, yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, Zika virus, Venezuelan equine encephalomyelitis (VEE) virus, chikunguya. Virus, Western Equine Encephalomyelitis (Encephalitis) (WEE) Virus, Eastern Equine Encephalomyelitis (Encephalitis) (EEE) Virus, Tick Encephalitis, Kyasanur Forest Disease, Alkhurma Disease, Omsk Hemorrhagic Fever, Hendra Virus , Nipah virus and species thereof.

본 발명의 일부 실시 예는 필로비리대 과, 플라비비리대 과, 파라믹소비리대 과 또는 토가비리대 과의 바이러스로부터의 바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.Some embodiments of the present invention relate to compositions and methods for treating viral infections from viruses of the family Filobiridae, family Flaviviridae, family Paramyxoviridae or family Togaviridae.

본 발명의 일부 실시 예는 헤니파바이러스 속, 에볼라바이러스 속, 플라비바이러스 속, 마르부르그바이러스 속 또는 알파바이러스 속의 바이러스로부터의 바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.Some embodiments of the present invention relate to compositions and methods for treating viral infections from viruses of the genus Henipavirus, genus Ebolavirus, genus Flavivirus, genus Marburgvirus or genus Alphavirus.

일부 실시 예에서, 본 발명은 (a) 특정 강심 배당체(들); b) 복수의 트리테르펜; 또는 c) 특정 강심 배당체(들)와 복수의 트리테르펜의 조합을 포함하는(필수적으로 구성되는) 항 바이러스 조성물을 제공한다. In some embodiments, the present invention provides (a) specific cardiac glycoside(s); b) a plurality of triterpenes; or c) providing an antiviral composition comprising (consisting essentially of) a combination of the specific cardiac glycoside(s) and a plurality of triterpenes.

본 발명의 일 측면은 항 바이러스 조성물의 대상체에게 만성 투여함으로써 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 대상체는 조성물의 치료적 유효량(치료적으로 적절한 투여량)을 대상체에게 만성적으로 투여함으로써 바이러스 감염 또는 바이러스 감염의 개선과 관련된 증상의 완화를 제공함으로써 치료된다. 대상체에게의 조성물의 투여는 감염 직후 또는 감염 후 1 일 내지 5 일 이내에 또는 바이러스 감염의 명확한 진단 후 가장 빠른 시점에 시작될 수 있다.One aspect of the invention provides a method of treating a viral infection in a subject by chronic administration of an antiviral composition to the subject. A subject is treated by chronically administering to the subject a therapeutically effective amount (a therapeutically appropriate dosage) of the composition, thereby providing relief of symptoms associated with a viral infection or amelioration of the viral infection. Administration of the composition to a subject may begin immediately after infection or within 1 to 5 days after infection, or at the earliest point after definitive diagnosis of viral infection.

따라서, 본 발명은 포유동물에게 하나 이상의 치료적 유효량의 항 바이러스 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 1회 이상의 투여량은 매일, 매주 또는 매월 단위로 투여된다. 하루에 1회 이상의 투여량이 투여될 수 있다.Accordingly, the present invention provides a method of treating a viral infection in a mammal comprising administering to the mammal a therapeutically effective amount of one or more antiviral compositions. One or more doses are administered on a daily, weekly or monthly basis. One or more doses per day may be administered.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은:The invention also provides a method of treating a viral infection in a subject in need thereof, said method comprising:

대상체가 바이러스 감염을 갖는지 여부를 결정하는 단계;determining whether the subject has a viral infection;

항 바이러스 조성물의 투여를 지시하는 단계;directing administration of an antiviral composition;

일정 기간 동안 처방된 초기 투여 요법에 따라 대상체에 초기 투여량의 항 바이러스 조성물을 투여하는 단계;administering an initial dose of the antiviral composition to the subject according to the prescribed initial dosing regimen for a period of time;

항 바이러스 조성물에 의한 치료에 대한 대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적절성을 주기적으로 결정하는 단계; 및periodically determining the adequacy of the subject's clinical response and/or therapeutic response to treatment with the antiviral composition; and

대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 적절한 경우, 원하는 임상적 종점(endpoint)에 도달할 때까지 항 바이러스 조성물로 치료를 계속하고; 또는If the subject's clinical response and/or therapeutic response is appropriate, continue treatment with the antiviral composition until the desired clinical endpoint is reached; or

대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 초기 투여량 및 초기 투여 요법에서 불충분한 경우, 대상체에서 원하는 임상 반응 및/또는 치료반응이 달성될 때까지 투여량을 증량 또는 감량시키는 단계를 포함한다. if the subject's clinical response and/or therapeutic response is insufficient at the initial dose and initial dosing regimen, the dose is escalated or decreased until the desired clinical response and/or therapeutic response is achieved in the subject.

항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속된다. 투여량 또는 투여 요법은 예를 들어 바이러스 감염과 관련된 특정 증상의 감소 또는 완화와 같이, 환자가 원하는 임상적 종점(들)에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다. 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적절성을 결정하는 것은 바이러스 감염에 익숙한 임상의에 의해 수행될 수 있다.Treatment of the subject with the antiviral composition continues as needed. The dosage or dosing regimen may be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint(s), such as, for example, reduction or alleviation of certain symptoms associated with viral infection. Determining the adequacy of a clinical response and/or therapeutic response can be performed by a clinician familiar with viral infections.

본 발명의 방법의 개별 단계는 별도의 설비 또는 동일한 설비 내에서 수행될 수 있다.The individual steps of the method of the invention may be performed in separate facilities or in the same facility.

항 바이러스 조성물은 만성적으로, 즉 매일, 격일로, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 매주, 격주로, 2주마다, 3주마다, 매월, 격월로, 반달마다, 격월로, 2개월마다, 분기별로, 격분기마다, 3개월마다, 계절에 따라, 반년마다 및/또는 매년 투여될 수 있다. 치료 기간은 하나 이상의 주, 하나 이상의 개월, 하나 이상의 분기 및/또는 하나 이상의 년일 수 있다. 유효량의 강심 배당체는 하루에 1 회 이상 투여된다. The antiviral composition is administered chronically, i.e. daily, every other day, every 2 days, every 3 days, every 4 days, every 5 days, every 6 days, every week, every other week, every 2 weeks, every 3 weeks, every month, every other month. , semi-monthly, bi-monthly, bi-monthly, quarterly, bi-quarterly, every three months, seasonally, semi-annually, and/or annually. The duration of treatment may be one or more weeks, one or more months, one or more quarters, and/or one or more years. An effective amount of cardiac glycoside is administered at least once per day.

일부 실시 예에서, 대상체는 하루에 강심 배당체의 140 마이크로그램 내지 315 마이크로그램을 투여받는다. 일부 실시 예에서, 투여량은 20 마이크로그램 내지 750 마이크로그램, 12 마이크로그램 내지 300 마이크로그램, 또는 12 마이크로그램 내지 120 마이크로그램의 강심 배당체를 포함한다. 강심 배당체의 일일 투여량은 강심 배당체의 20 마이크로그램 내지 750 마이크로그램, 0.01 마이크로그램 내지 100 mg, 또는 0.01 마이크로그램 내지 100 마이크로그램의 범위일 수 있다. SCF 추출물에 존재하는 권장 일일 투여량의 올레안드린은 일반적으로 1 일 2 회 약 0.25 내지 약 50 마이크로그램, 또는 1 일 2 회 또는 약 12 시간마다 약 0.9 내지 5 마이크로그램이다. 투여량은 약 0.5 내지 약 100 마이크로그램/일, 약 1 내지 약 80 마이크로그램/일, 약 1.5 내지 약 60 마이크로그램/일, 약 1.8 내지 약 60 마이크로그램/일, 약 1.8 내지 약 40 마이크로그램/일일 수 있다. 최대 허용 투여량은 올레안드린을 함유하는 올리앤더 추출물의 약 100 마이크로그램/일, 약 80 마이크로그램/일, 약 60 마이크로그램/일, 약 40 마이크로그램/일, 약 38.4 마이크로그램/일 또는 약 30 마이크로그램/일일 수 있으며, 최소 유효 투여량은 약 0.5 마이크로그램/일, 약 1 마이크로그램/일, 약 1.5 마이크로그램/일, 약 1.8 마이크로그램/일, 약 2 마이크로그램/일, 또는 약 5 마이크로그램/일일 수 있다. 강심 배당체 및 트리테르펜을 포함하는 적합한 투여량은 약 0.05 0.5 mg/kg/일, 0.05-0.35 mg/kg/일, 0.05-0.22 mg/kg/일, 0.05-0.4 mg/kg/일, 0.05-0.3 mg/kg/일, 0.05-0.5 마이크로그램/kg/일, 0.05-0.35 마이크로그램/kg/일, 0.05-0.22 마이크로그램/kg/일, 0.05-0.4 마이크로그램/kg/일 또는 0.05-0.3 마이크로그램/kg/일일 수 있다.In some embodiments, the subject is administered between 140 micrograms and 315 micrograms of cardiac glycosides per day. In some embodiments, the dosage comprises from 20 micrograms to 750 micrograms, from 12 micrograms to 300 micrograms, or from 12 micrograms to 120 micrograms of cardiac glycosides. The daily dosage of cardiac glycoside may range from 20 micrograms to 750 micrograms, 0.01 micrograms to 100 mg, or 0.01 micrograms to 100 micrograms of cardiac glycosides. The recommended daily dosage of oleandrine present in the SCF extract is generally from about 0.25 to about 50 micrograms twice daily, or from about 0.9 to 5 micrograms twice daily or about every 12 hours. A dosage may be from about 0.5 to about 100 micrograms/day, from about 1 to about 80 micrograms/day, from about 1.5 to about 60 micrograms/day, from about 1.8 to about 60 micrograms/day, from about 1.8 to about 40 micrograms /may be a day. The maximum tolerated dose is about 100 micrograms/day, about 80 micrograms/day, about 60 micrograms/day, about 40 micrograms/day, about 38.4 micrograms/day, or about 30 micrograms/day, wherein the minimum effective dosage is about 0.5 micrograms/day, about 1 micrograms/day, about 1.5 micrograms/day, about 1.8 micrograms/day, about 2 micrograms/day, or about 5 micrograms/day. Suitable dosages comprising cardiac glycosides and triterpenes are about 0.05 0.5 mg/kg/day, 0.05-0.35 mg/kg/day, 0.05-0.22 mg/kg/day, 0.05-0.4 mg/kg/day, 0.05- 0.3 mg/kg/day, 0.05-0.5 microgram/kg/day, 0.05-0.35 microgram/kg/day, 0.05-0.22 microgram/kg/day, 0.05-0.4 microgram/kg/day or 0.05-0.3 micrograms/kg/day.

항 바이러스 조성물은 전신 투여될 수 있다. 전신 투여 방식은 비경구, 구강(buccal), 장내, 근육내, 피하, 설하, 경구(peroral), 입 투여를 포함한다. 조성물은 또한 주사를 통해 또는 정맥 내로 투여될 수 있다.The antiviral composition may be administered systemically. Systemic administration modes include parenteral, buccal, enteral, intramuscular, subcutaneous, sublingual, oral, and oral administration. The composition may also be administered via injection or intravenously.

항 바이러스 조성물에 존재하는 경우, 강심 배당체는 바람직하게는 올레안드린이지만, 오도로사이드, 네리탈로사이드 또는 올레안드리게닌을 포함할 수 있다. 일부 실시 예에서, 조성물은 a) 하나 이상의 트리테르펜; b) 하나 이상의 스테로이드; c) 하나 이상의 트리테르펜 유도체; d) 하나 이상의 스테로이드 유도체; 또는 e) 이들의 조합을 더 포함한다. 일부 실시 예에서, 조성물은 강심 배당체 및 a) 2 개 또는 3 개의 트리테르펜; b) 2 개 또는 3 개의 트리테르펜 유도체; c) 2 개 또는 3 개의 트리테르펜 염; 또는 d) 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 예에서, 트리테르펜은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 이의 염 또는 유도체로 이루어진 군에서 선택된다.When present in the antiviral composition, the cardiac glycoside is preferably oleandrine, but may include odoroside, neritaloside or oleandrigenin. In some embodiments, the composition comprises a) one or more triterpenes; b) one or more steroids; c) at least one triterpene derivative; d) one or more steroid derivatives; or e) a combination thereof. In some embodiments, the composition comprises a cardiac glycoside and a) two or three triterpenes; b) two or three triterpene derivatives; c) two or three triterpene salts; or d) combinations thereof. In some embodiments, the triterpene is selected from the group consisting of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and salts or derivatives thereof.

본 발명의 일부 실시 예는 약제학적 조성물이 적어도 하나의 약제학적 부형제 및 항 바이러스 조성물을 포함하는 것을 포함한다. 일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 a) 적어도 하나의 강심 배당체 및 적어도 하나의 트리테르펜; b) 적어도 하나의 강심 배당체 및 적어도 2 개의 트리테르펜; c) 적어도 하나의 강심 배당체 및 적어도 3 개의 트리테르펜; d) 적어도 2 개의 트리테르펜을 포함하며 강심 배당체를 배제하고; e) 적어도 3 개의 트리테르펜을 포함하며 강심 배당체를 배제하고; 또는 f) 적어도 하나의 강심 배당체, 예를 들어 올레안드린을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 트리테르펜 및 강심 배당체는 또한 달리 명시되지 않는 한, 이들의 염 및 유도체를 포함한다.Some embodiments of the present invention include the pharmaceutical composition comprising at least one pharmaceutical excipient and an antiviral composition. In some embodiments, the antiviral composition comprises a) at least one cardiac glycoside and at least one triterpene; b) at least one cardiac glycoside and at least two triterpenes; c) at least one cardiac glycoside and at least three triterpenes; d) comprises at least two triterpenes and excludes cardiac glycosides; e) comprises at least three triterpenes and excludes cardiac glycosides; or f) at least one cardiac glycoside, for example oleandrine. As used herein, the terms triterpenes and cardiac glycosides also include salts and derivatives thereof, unless otherwise specified.

강심 배당체는 순수한 형태로 또는 하나 이상의 강심 배당체를 함유하는 추출물 부분으로서 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 트리테르펜(들)은 순수한 형태로 또는 트리테르펜(들)을 함유하는 추출물의 일부로서 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 일부 실시 예에서, 강심 배당체는 약제학적 조성물에서 항 바이러스 활성을 주로 담당하는 성분을 의미하는 1 차 치료 성분으로서 존재한다. 일부 실시 예에서, 트리테르펜(들)은 약제학적 조성물에서 항 바이러스 활성을 주로 담당하는 성분(들)을 의미하는 1 차 치료 성분(들)으로서 존재한다.The cardiac glycosides may be present in the pharmaceutical composition in pure form or as an extract fraction containing one or more cardiac glycosides. The triterpene(s) may be present in the pharmaceutical composition in pure form or as part of an extract containing the triterpene(s). In some embodiments, the cardiac glycoside is present as a primary therapeutic component, meaning a component mainly responsible for antiviral activity in the pharmaceutical composition. In some embodiments, the triterpene(s) is present as the primary therapeutic component(s), meaning the component(s) primarily responsible for antiviral activity in the pharmaceutical composition.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물을 포함하는 추출물은 식물 재료의 추출에 의해 수득된다. 추출물은 식물 재료의 열탕 추출물, 냉수 추출물, 초임계 유체(SCF) 추출물, 유기 용매 추출물 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시 예에서, 식물 재료는 네리움 종 또는 테베티아(Thevetia) 종 식물 질량이다. 특정 종은 네리움 올리앤더 또는 테베티아 네리폴리아(Thevetia nerifolia)를 포함한다. 일부 실시 예에서, 추출물은 추출물이 대상체에게 투여될 때, 추출 동안 강심 배당체와 함께 수득되어, 강심 배당체의 치료 효능에 기여하는 적어도 하나의 다른 약리학적 활성 제제를 포함한다. 일부 실시 예에서, 조성물은 하나 이상의 다른 비-강심 배당체 치료학적 유효 작용제, 즉 강심 배당체가 아닌 하나 이상의 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시 예에서, 조성물은 하나 이상의 항 바이러스 화합물(들)을 추가로 포함한다. 일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 약리학적 활성 다당류를 배제한다.In some embodiments, the extract comprising the antiviral composition is obtained by extraction of plant material. The extract may include a hot water extract of plant material, a cold water extract, a supercritical fluid (SCF) extract, an organic solvent extract, or a combination thereof. In some embodiments, the plant material is a Nerium species or Thevetia species plant mass. Certain species include Nerium oleander or Thevetia nerifolia. In some embodiments, the extract comprises at least one other pharmacologically active agent that is obtained with the cardiac glycoside during extraction when the extract is administered to a subject, thereby contributing to the therapeutic efficacy of the cardiac glycoside. In some embodiments, the composition further comprises one or more other non-cardiac glycoside therapeutically effective agents, ie, one or more agents that are not cardiac glycosides. In some embodiments, the composition further comprises one or more antiviral compound(s). In some embodiments, the antiviral composition excludes pharmacologically active polysaccharides.

일부 실시 예에서, 추출물은 하나 이상의 강심 배당체 및 하나 이상의 강심 배당체 전구체(예를 들어, 카르데놀리드, 카르다디에놀리드 및 카르다트리에놀리드)와 같은 것으로서, 이들 모두는 강심 배당체의 아글리콘 성분, 예를 들어 디기톡신, 아세틸 디기톡신, 디기톡시게닌, 디곡신, 아세틸 디곡신, 디곡시게닌, 메디곡신, 스트로판틴, 사이마린, 우아바인 또는 스트로판티딘이다. 추출물은 강심 배당체 전구체로서 강심 배당체(예컨대, 글루코사이드, 프럭토사이드 및/또는 글루쿠로나이드)의 하나 이상의 글리콘(glycone) 성분을 포함할 수 있다. 따라서, 항 바이러스 조성물은 하나 이상의 아글리콘 성분 및 하나 이상의 글리콘 성분으로 이루어진 군으로부터 선택된 2 이상의 강심 배당체 전구체 및 하나 이상의 강심 배당체를 포함할 수 있다.In some embodiments, the extract is such as one or more cardiac glycosides and one or more cardiac glycoside precursors (eg, cardenolide, cardadienolide and cardatrienolide), all of which are agglutinins of cardiac glycosides. Licon components, for example digitoxin, acetyl digitoxin, digitoxygenin, digoxin, acetyl digoxin, digoxigenin, medigoxin, strophanthine, cymarin, huavine or strophantidine. The extract may include one or more glycol components of cardiac glycosides (eg, glucosides, fructosides and/or glucuronides) as cardiac glycoside precursors. Accordingly, the antiviral composition may comprise at least two cardiac glycoside precursors selected from the group consisting of at least one aglycone component and at least one glycoside component and at least one cardiac glycoside.

일부 실시 예에서, 올레안드린 함량에 기초한 등가 투여량이 비교될 때, 올레안드린(OL), 올레아놀산(OA), 우르솔산(UA) 및 베툴린산(BA)을 함유하는 조성물이 순수한 올레아드린보다 더 효과적이다.In some embodiments, a composition containing oleandrine (OL), oleanolic acid (OA), ursolic acid (UA), and betulinic acid (BA) is pure oleadrine when equivalent doses based on oleandrine content are compared. more effective than

일부 실시 예에서, 총 트리테르펜 함량(OA + UA + BA) 대 올레안드린의 몰비는 약 15:1 내지 약 5:1, 또는 약 12:1 내지 약 8:1, 또는 약 100:1 내지 약 15:1, 또는 약 100:1 내지 약 50:1, 또는 약 100:1 내지 약 75:1, 또는 약 100:1 내지 약 80:1, 또는 약 100:1 내지 약 90:1, 또는 약 10:1의 범위이다. In some embodiments, the molar ratio of total triterpene content (OA + UA + BA) to oleandrine is from about 15:1 to about 5:1, or from about 12:1 to about 8:1, or from about 100:1 to about 15:1, or about 100:1 to about 50:1, or about 100:1 to about 75:1, or about 100:1 to about 80:1, or about 100:1 to about 90:1, or It is in the range of about 10:1.

일부 실시 예에서, 개별 트리테르펜 대 올레안드린의 몰비는 다음과 같이 범위가 설정된다: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL); 또는 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); 또는 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); 또는 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).In some embodiments, the molar ratios of individual triterpenes to oleandrin are ranged as follows: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL) ; or 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); or 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); or 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).

일부 실시 예에서, 다른 치료제는 추출물의 제조 동안 수득된 다당류가 아니며, 이는 그것이 산성 호모폴리갈락투로난 또는 아라비노갈락투로난이 아님을 의미한다. 일부 실시 예에서, 추출물은 다른 치료제를 배제하고, 및/또는 추출물의 제조 동안 수득된 산성 호모폴리갈락투로난 또는 아라비노갈락투로난을 배제한다.In some embodiments, the other therapeutic agent is not a polysaccharide obtained during preparation of the extract, meaning that it is not an acidic homopolygalacturonan or arabinogalacturonan. In some embodiments, the extract excludes other therapeutic agents and/or excludes acidic homopolygalacturonan or arabinogalacturonan obtained during preparation of the extract.

본 발명은 또한 대상체에서의 바이러스 감염의 치료를 위한 약제의 제조에 강심 배당체를 사용하는 것을 제공한다. 일부 실시 예에서, 이러한 약제의 제조는 본 발명의 하나 이상의 항 바이러스 화합물을 제공하는 단계; 한번 투여량의 항 바이러스 화합물(들)을 약제학적 제형에 포함시키는 단계; 및 약제학적 제형을 포장하는 단계를 포함한다. 일부 실시 예에서, 제조는 PCT 국제 출원 번호 PCT/US06/29061에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 제조는 또한 포장된 제형을 벤더(소매업체, 도매업자 및/또는 유통업체)에게 전달하는 단계; 포장된 제형을 바이러스 감염을 갖는 대상체에게 판매하거나 제공하는 단계; 약제와 함께, 제형의 사용, 투여 요법, 투여, 함량 및 독성 프로파일에 관한 지침을 제공하는 라벨 및 패키지 삽입물을 포함하는 단계와 같은 하나 이상의 추가 단계들을 포함할 수 있다. 일부 실시 예에서, 바이러스 감염의 치료는 대상체가 바이러스 감염을 갖는지를 결정하는 단계; 투여 요법에 따라 대상체에게 약제학적 제형의 투여를 지시하는 단계; 대상체에게 하나 이상의 약제학적 제형을 투여하는 단계로서, 하나 이상의 약제학적 제형은 투여 요법에 따라 투여되는 단계를 포함한다. The invention also provides for the use of cardiac glycosides in the manufacture of a medicament for the treatment of a viral infection in a subject. In some embodiments, the preparation of such a medicament comprises providing one or more antiviral compounds of the present invention; incorporating a single dose of the antiviral compound(s) into the pharmaceutical formulation; and packaging the pharmaceutical formulation. In some embodiments, manufacturing may be performed as described in PCT International Application No. PCT/US06/29061. Manufacturing may also include delivering the packaged formulation to a vendor (retailer, wholesaler and/or distributor); selling or providing the packaged formulation to a subject having a viral infection; It may include one or more additional steps, such as including a label and package insert providing instructions regarding the use of the formulation, dosing regimen, administration, dosage and toxicity profile with the medicament. In some embodiments, treatment of a viral infection comprises determining whether the subject has a viral infection; instructing the subject to administer the pharmaceutical formulation according to the dosing regimen; administering to the subject one or more pharmaceutical formulations, wherein the one or more pharmaceutical formulations are administered according to a dosing regimen.

약제학적 조성물은 수용성(혼화성) 공-용매, 불수용성(불혼화성) 공-용매, 계면 활성제, 항산화제, 킬레이트제 및 흡수 증강제로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 물질의 조합을 추가로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition may further comprise a combination of at least one substance selected from the group consisting of water-soluble (miscible) co-solvents, water-insoluble (immiscible) co-solvents, surfactants, antioxidants, chelating agents and absorption enhancers. can

가용화제는 적어도 단일 계면 활성제이지만, 그것은 또한 a) 계면 활성제 및 물 혼화성 용매; b) 계면 활성제 및 물 불혼화성 용매; c) 계면 활성제, 항산화제; d) 계면 활성제, 항산화제 및 물 혼화성 용매; e) 계면 활성제, 항산화제 및 물 불혼화성 용매; f) 계면 활성제, 물 혼화성 용매 및 물 불혼화성 용매; 또는 g) 계면 활성제, 항산화제, 물 혼화성 용매 및 물 불혼화성 용매의 조합과 같은 재료들의 조합일 수 있다. The solubilizing agent is at least a single surfactant, but it also comprises a) a surfactant and a water miscible solvent; b) surfactants and water immiscible solvents; c) surfactants, antioxidants; d) surfactants, antioxidants and water miscible solvents; e) surfactants, antioxidants and water immiscible solvents; f) surfactants, water miscible solvents and water immiscible solvents; or g) a combination of materials such as a surfactant, an antioxidant, a combination of a water miscible solvent and a water immiscible solvent.

약제학적 조성물은 a) 적어도 하나의 액체 담체; b) 적어도 하나의 유화제; c) 적어도 하나의 가용화제; d) 적어도 하나의 분산제; e) 적어도 하나의 다른 부형제; 또는 f) 이들의 조합을 선택적으로 더 포함한다.The pharmaceutical composition comprises a) at least one liquid carrier; b) at least one emulsifier; c) at least one solubilizing agent; d) at least one dispersant; e) at least one other excipient; or f) optionally a combination thereof.

일부 실시 예에서, 물 혼화성 용매는 저 분자량(6000 미만) PEG, 글리콜 또는 알코올이다. 일부 실시 예에서, 계면 활성제는 페길레이티드 계면 활성제이며, 이는 폴리(에틸렌 글리콜) 작용기를 포함하는 계면 활성제를 의미한다.In some embodiments, the water miscible solvent is a low molecular weight (less than 6000) PEG, glycol or alcohol. In some embodiments, the surfactant is a pegylated surfactant, meaning a surfactant comprising a poly(ethylene glycol) functional group.

본 발명은 본 명세서에 개시된 본 발명의 양태, 실시 예 및 하위 실시 예의 모든 조합을 포함한다.The present invention includes all combinations of aspects, embodiments and sub-embodiments of the invention disclosed herein.

다음의 도면들은 본 명세서의 설명의 일부를 형성하고 청구된 발명의 예시적인 실시 예들을 설명한다. 당업자는 이들 도면 및 본 명세서의 설명에 비추어 과도한 실험없이 본 발명을 실시할 수 있을 것이다.
도 1 내지 도 2는 에볼라바이러스에 대한 다양한 조성물의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 3 내지 도 4는 마르부르그바이러스에 대한 다양한 조성물의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 5는 베로(Vero) E6 세포에서 지카바이러스(SIKV 균주 PRVABC59)에 대한 올레안드린의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 6은 베로 E6 세포에서 지카바이러스(SIKV 균주 PRVABC59)에 대한 디곡신의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 7은 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 8은 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 9는 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 존재하에 베로 E6 세포의 시험관내 세포 생존력을 요약한 차트를 도시한다.
도 10a 및 10b는 바이러스에 노출된 직후 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 도 10a는 감염 후 2 시간; 도 10b는 감염 후 24 시간.
도 11a 및 11b는 바이러스에 노출된 직후 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 도 11a는 감염 후 2 시간; 도 11b는 감염 후 24 시간.
도 12a 및 도 12b는 올레안드린에 노출된 바이러스 감염된 베로 E6 세포에 의한 감염성 자손의 산물을 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다. 12a-에볼라바이러스; 12b-마르부르그바이러스.
도 13a 및 13b는 베로 E6 세포에서 베네수엘라 말 뇌척수염 바이러스(도 13a) 및 웨스턴 말 뇌척수염 바이러스(도 13b)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The following drawings form part of the description herein and describe exemplary embodiments of the claimed invention. Those skilled in the art will be able to practice the present invention without undue experimentation in light of these drawings and the description herein.
1 to 2 depict charts summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions against Ebolavirus.
3 to 4 depict charts summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions against Marburgvirus.
5 depicts a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of oleandrine against Zika virus (SIKV strain PRVABC59) in Vero E6 cells.
6 depicts a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of digoxin against Zika virus (SIKV strain PRVABC59) in Vero E6 cells.
7 depicts a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204) against Ebolavirus in Vero E6 cells.
8 depicts a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204) against Marburgvirus in Vero E6 cells.
9 depicts a chart summarizing the in vitro cell viability of Vero E6 cells in the presence of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204).
10A and 10B depict charts summarizing the ability of compositions (oleandrine and PBI-05204) to inhibit Ebolavirus in Vero E6 cells immediately after exposure to virus: FIG. 10A 2 hours post infection; Figure 10b 24 hours post infection.
11A and 11B depict charts summarizing the ability of compositions (oleandrine and PBI-05204) to inhibit Marburgvirus in Vero E6 cells immediately after exposure to virus: FIG. 11A is 2 hours post infection; 11B 24 hours post infection.
12A and 12B depict charts summarizing the ability of compositions (oleandrine and PBI-05204) to inhibit the product of infectious progeny by virus infected Vero E6 cells exposed to oleandrine. 12a-Ebolavirus; 12b-Marburg virus.
13A and 13B show in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204) against Venezuelan equine encephalomyelitis virus ( FIG. 13A ) and Western equine encephalomyelitis virus ( FIG. 13B ) in Vero E6 cells. A chart summarizing the

본 발명은 유효량의 항 바이러스 조성물(또는 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 약제학적 부형제를 포함하는 약제학적 조성물)을 대상체에게 만성적으로 투여함으로써 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 약제학적 조성물은 대상체에 가장 적합한 투여 요법에 따라 투여되고, 투여량 및 투여 요법의 적합성은 종래의 임상 관행 및 바이러스 감염에 대한 임상 치료 종점에 따라 임상적으로 결정될 수 있다.The present invention provides a method of treating a viral infection in a subject by chronically administering to the subject an effective amount of an antiviral composition (or a pharmaceutical composition comprising an antiviral composition and one or more pharmaceutical excipients). The pharmaceutical composition is administered according to a dosing regimen most suitable for the subject, and the dosage and suitability of the dosing regimen can be clinically determined according to conventional clinical practice and clinical treatment endpoints for viral infections.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 포유동물, 예를 들어 고양이, 개, 마우스, 기니피그, 말, 소, 양 및 인간과 같은 온혈 동물을 의미하는 것으로 이해된다.As used herein, the term “subject” is understood to mean a warm-blooded animal such as a mammal, eg, a cat, a dog, a mouse, a guinea pig, a horse, a cow, a sheep and a human.

본원에 사용된 바이러스 감염 위험이 있는 대상체는: a) 모기, 특히 에데스(Aedes) 종(Aedes egypti, Aedes albopictus) 모기가 살고있는 지리적 영역에 거주하는 대상체; b) 바이러스 감염자들 근처 또는 그들과 함께 사는 대상체; c) 바이러스 감염을 가진 사람과 성적인 관계를 가진 대상체; d) 진드기, 특히 익소디즈(Ixodes) 종(Ixodes marx, Ixodes scapularis 또는 Ixodes cooke species) 진드기가 살고있는 지리적 영역에 거주하는 대상체; e) 과일 박쥐가 사는 지리적 지역에 살고 거주하는 대상체; f) 열대 지역에 사는 대상체; g) 아프리카에 사는 대상; h) 바이러스 감염을 갖는 다른 대상체의 체액과 접촉하는 대상체; i) 아이; 또는 j) 면역 체계가 약화된 대상체이다. 일부 실시 예에서, 대상체는 암컷, 임신할 수 있는 암컷 또는 임신한 암컷이다.As used herein, a subject at risk for viral infection includes: a) a subject residing in a geographic area inhabited by mosquitoes, particularly Aedes egypti (Aedes albopictus) mosquitoes; b) subjects living near or with people infected with the virus; c) a subject having sexual intercourse with a person with a viral infection; d) a subject residing in a geographic area inhabited by mites, particularly Ixodes marx, Ixodes scapularis or Ixodes cooke species mites; e) a subject living and residing in a geographic area inhabited by fruit bats; f) subjects living in tropical areas; g) persons living in Africa; h) a subject in contact with the bodily fluids of another subject having a viral infection; i) a child; or j) a subject with a weakened immune system. In some embodiments, the subject is a female, a fertile female, or a pregnant female.

본 발명에 따라 치료된 대상체는 치료 반응을 나타낼 것이다. "치료반응"은 바이러스 감염을 앓고 있는 대상체가 강심 배당체로 치료한 결과 다음과 같은 임상적 이점 중 적어도 하나를 누리게 되는 것을 의미한다: 대상체의 혈액 또는 혈장에서의 활성 바이러스 농도 감소, 대상체의 혈액 또는 혈장으로부터의 활성 바이러스의 박멸, 감염의 개선, 감염과 관련된 증상의 발생 감소, 감염의 부분적 또는 완전한 완화 또는 감염의 진행까지의 증가된 시간. 치료 반응은 전체적 또는 부분적 치료 반응일 수 있다.Subjects treated in accordance with the present invention will exhibit a therapeutic response. By "therapeutic response" is meant that a subject suffering from a viral infection enjoys at least one of the following clinical benefits as a result of treatment with cardiac glycosides: a reduction in the concentration of active virus in the subject's blood or plasma, the subject's blood or Eradication of active virus from plasma, amelioration of infection, reduction in the incidence of symptoms associated with infection, partial or complete remission of infection, or increased time to progression of infection. The therapeutic response may be a total or partial therapeutic response.

본원에 사용된 "진행까지의 시간"은 바이러스 감염이 진단(또는 치료)된 후 감염이 악화되기 시작할 때까지의 기간, 길이 또는 지속 기간이다. 더 이상의 감염 진행없이 감염 수준이 유지되는 기간이며, 감염이 다시 진행되기 시작할 때 그 기간은 종료된다. 질병의 진행은 치료 전 또는 치료 시작 시에 감염을 앓고있는 대상체를 "스테이징(staging)"함으로써 결정된다. 예를 들어, 대상체의 건강은 치료 전 또는 치료 시작 시에 결정된다. 이어서, 대상체를 강심 배당체로 치료하고, 바이러스 농도를 주기적으로 모니터링한다. 나중에 어느 시점에서, 감염 증상이 악화될 수 있으며, 따라서 감염의 진행 및 "진행까지의 시간"의 끝을 표시한다. 감염이 진행되지 않거나 또는 감염의 수준 또는 심각성이 악화되지 않은 기간이 "진행까지의 시간"이다.As used herein, “time to progression” is the period, length, or duration from when a viral infection is diagnosed (or treated) until the infection begins to worsen. The period during which the level of infection is maintained without further infection progression, and that period ends when the infection begins to progress again. The progression of the disease is determined by “staging” a subject suffering from an infection prior to or at the beginning of treatment. For example, a subject's health is determined prior to or at the start of treatment. The subject is then treated with cardiac glycosides and the virus concentration is monitored periodically. At some point later, the symptoms of infection may worsen, thus marking the progression of the infection and the end of the "time to progression". "Time to progression" is the period during which the infection has not progressed or the level or severity of the infection has not worsened.

투여 요법은 투여 스케줄에 따라 투여되는 하나 이상의 강심 배당체의 치료적으로 관련된 투여량(또는 유효 투여량)을 포함한다. 따라서, 치료적으로 관련된 투여량은 항 바이러스 조성물에 의한 치료에 대한 바이러스 감염의 치료 반응이 관찰되고 과량의 원치 않거나 유해한 부작용없이 항 바이러스 조성물을 대상체에게 투여할 수 있는 치료 투여량이다. 치료적으로 관련된 투여량은 환자에게 일부 부작용을 일으킬 수 있지만, 대상에게 치명적이지 않다. 항 바이러스 조성물이 투여되는 대상체에 대한 임상적 이점의 수준이 항 바이러스 조성물 또는 이들 성분(들)의 투여로 인해 대상체가 경험하는 유해한 부작용의 수준을 초과하는 투여량이다. 치료적으로 관련된 투여량은 다양하게 확립된 약리학적, 약역학적 및 약동학적 원리에 따라 대상체마다 상이할 것이다. 그러나, 치료적으로 관련된 투여량(예를 들어, 올레안드린에 대한 상대적 투여량)은 전형적으로 25 마이크로그램, 100 마이크로그램, 250 마이크로그램, 500 마이크로그램 또는 750 마이크로그램의 강심 배당체/일을 초과하지 않거나, 또는 투여 당 강심 배당체의 양이 25-750 마이크로그램의 범위일 수 있다. 대상체에서 표적 치료 결과를 제공하기 위해 필요한 항 바이러스 조성물의 실제 양은 약학의 기본 원리에 따라 대상체마다 다를 수 있다는 것이 당 업계에 공지되어 있다.Dosing regimens include therapeutically relevant doses (or effective doses) of one or more cardiac glycosides administered according to a dosing schedule. Thus, a therapeutically relevant dosage is a therapeutic dosage in which a therapeutic response of a viral infection to treatment with the antiviral composition is observed and the antiviral composition can be administered to a subject without undue unwanted or deleterious side effects. Therapeutically relevant dosages may cause some side effects in the patient, but are not fatal to the subject. A dosage at which the level of clinical benefit for the subject to which the antiviral composition is administered exceeds the level of adverse side effects experienced by the subject as a result of administration of the antiviral composition or these component(s). Therapeutically relevant dosages will vary from subject to subject according to various established pharmacological, pharmacodynamic and pharmacokinetic principles. However, therapeutically relevant dosages (eg, dosages relative to oleandrine) typically contain 25 micrograms, 100 micrograms, 250 micrograms, 500 micrograms or 750 micrograms of cardiac glycosides/day. not exceeded, or the amount of cardiac glycosides per administration may range from 25-750 micrograms. It is known in the art that the actual amount of antiviral composition needed to provide a targeted therapeutic result in a subject may vary from subject to subject depending upon the underlying principles of pharmacy.

치료적으로 관련된 투여량은 바이러스 감염의 치료에 전형적으로 사용되는 임의의 투여 요법에 따라 투여될 수 있다. 치료적으로 관련된 투여량은 1 일 1 회, 2 회, 3 회 이상 투여될 수 있다. 격일로, 3 일마다, 4 일마다, 5 일마다, 반주마다, 주마다, 격주로, 3 주마다, 4 주마다, 매월, 격월마다, 반달마다, 3 개월마다, 4 개월마다, 반년마다, 매년, 또는 상기의 임의의 조합에 따라 적합한 투여 스케줄에 도달한다. 예를 들어, 치료적으로 관련된 투여량은 1 주일 이상 동안 매일 1 회 이상 투여될 수 있다.Therapeutically relevant dosages may be administered according to any dosing regimen typically used for the treatment of viral infections. A therapeutically relevant dosage may be administered once, twice, three or more times daily. Every other day, every 3 days, every 4 days, every 5 days, every half week, every week, every other week, every 3 weeks, every 4 weeks, monthly, every other month, every half month, every 3 months, every 4 months, every half year , annually, or any combination of the above to arrive at a suitable dosing schedule. For example, a therapeutically relevant dosage may be administered one or more times daily for one or more weeks.

실시 예 15는 이들 둘 모두가 필로바이러스인 에볼라바이러스(도 1 및 도 2) 및 마르부르그바이러스(도 3 및 도 4) 감염의 치료를 위한 올레안드린(단독 활성), 안비르젤(Anvirzel) 및 PBI 05204(네리움 올리앤더의 초임계 유체(SCF) 추출물)를 함유하는 조성물의 효능을 평가하기 위해 사용되는 시험관내 분석의 상세한 설명을 제공한다. Example 15 is oleandrine (active alone), Anvirzel for the treatment of Ebolavirus ( FIGS. 1 and 2 ) and Marburg virus ( FIGS. 3 and 4 ) infections, both of which are filoviruses. and PBI 05204 (supercritical fluid (SCF) extract of Nerium oleander) in vitro assay used to evaluate the efficacy of the composition.

상기 조성물을 40 마이크로그램/mL의 세포에 첨가한 다음, 바이러스를 첨가하고 1 시간 동안 배양하는 것으로 실험을 설정하였다. 바이러스를 세포에 첨가할 때, 조성물의 최종 농도는 20 마이크로그램/mL이다. 상이한 양의 올레안드린을 함유하는 조성물은 이들이 함유하는 올레안드린의 농도에 따라 조정될 수 있고, 이를 몰 농도로 변환시킬 수 있다. 도 1 내지 도 4는 추출물의 올레안드린 함량에 기초한 효능을 도시한다. OL 자체는 효과적이다. OL, OA, UA 및 BA를 포함하는 네리움 올리앤더의 SCF 추출물인 PBI-05204는 OL 자체보다 실질적으로 더 효과적이다. 네리움 올리앤더의 열탕 추출물인 안비르젤은 OL 자체보다 효과적이다. 두개의 추출물 모두는 나노 몰 범위에서 효능을 분명히 나타낸다. PBI-05204 추출물(1.74 %)에서의 올레안드린의 백분율은 안비르젤(0.459 %, 4.59 마이크로그램/mg)에서 보다 높다. PBI-05204의 최고 투여량에서, 그것은 EBOV 및 MARV 감염을 완전히 억제하는 반면, 안비르젤은 안비르젤과 함께 20 마이크로그램/mL 초과의 투여량에서 독성이 관찰되기 때문에, 완전한 억제를 나타내지 않았다. 데이터는 PBI-05204에 대한 에볼라바이러스 및 마르부르그바이러스에 대한 최고의 항 바이러스 활성을 입증한다. PBI-05204에서의 트리테르펜의 조합은 올레안드린의 항 바이러스 활성을 증가시켰다.The experiment was set up by adding the composition to cells at 40 micrograms/mL, then adding the virus and incubating for 1 hour. When the virus is added to the cells, the final concentration of the composition is 20 micrograms/mL. Compositions containing different amounts of oleandrine can be adjusted according to the concentration of oleandrine they contain, which can be converted to a molar concentration. 1 to 4 show the efficacy based on the oleandrine content of the extract. OL itself is effective. PBI-05204, an SCF extract of Nerium oleander containing OL, OA, UA and BA, is substantially more effective than OL itself. Anvirgel, a boiling water extract of Nerium Oleander, is more effective than OL itself. Both extracts clearly show efficacy in the nanomolar range. The percentage of oleandrine in the PBI-05204 extract (1.74%) is higher than in Anvirgel (0.459%, 4.59 micrograms/mg). At the highest dose of PBI-05204, it completely inhibited EBOV and MARV infection, whereas Anvirgel did not show complete inhibition as toxicity was observed at doses greater than 20 micrograms/mL together with Anvirgel. . The data demonstrate the best antiviral activity against Ebolavirus and Marburg virus against PBI-05204. Combination of triterpenes in PBI-05204 increased the antiviral activity of oleandrine.

실시 예 6은 지카바이러스(플라비바이러스) 감염의 치료를 위한 강심 배당체의 효능을 평가하기 위해 사용되는 시험관내 분석의 상세한 설명을 제공한다. 베로 E6 세포는 올레안드린(도 5) 또는 디곡신(도 6)의 존재하에서, 0.2의 MOI에서 지카바이러스(ZIKV 균주 PRVABC59)로 감염되었다. 세포를 바이러스 및 강심 배당체와 함께 1 시간 동안 배양한 후, 접종원 및 비-흡수성 강심 배당체(존재하는 경우)를 제거하였다. 세포를 신선한 배지에 담그고 48 시간 동안 배양한 후, 포르말린으로 고정하고, ZIKV 감염을 위해 염색하였다. 데이터는 강심 배당체 둘 다에 대한 지카바이러스에 대한 항 바이러스 활성을 입증하지만; 올레안드린은 디곡신보다 더 높은(거의 8 배 더 큰) 항 바이러스 활성을 나타냈다.Example 6 provides a detailed description of an in vitro assay used to evaluate the efficacy of cardiac glycosides for the treatment of Zika virus (flavivirus) infection. Vero E6 cells were infected with Zika virus (ZIKV strain PRVABC59) at an MOI of 0.2 in the presence of oleandrine ( FIG. 5 ) or digoxin ( FIG. 6 ). Cells were incubated with virus and cardiac glycosides for 1 h before inoculum and non-absorbable cardiac glycosides (if present) were removed. Cells were immersed in fresh medium and cultured for 48 hours, fixed with formalin, and stained for ZIKV infection. The data demonstrate antiviral activity against Zika virus against both cardiac glycosides; Oleandrine exhibited higher (nearly 8-fold greater) antiviral activity than digoxin.

실시 예 14는 지카바이러스 및 뎅기 바이러스에 대한 시험 조성물의 항 바이러스 활성을 평가하기 위해 사용된 분석의 상세한 설명을 제공한다. 데이터는 올레안드린이 지카바이러스 및 뎅기 바이러스에 대한 효능을 나타낸다는 것을 나타낸다.Example 14 provides a detailed description of the assays used to evaluate the antiviral activity of test compositions against Zika virus and Dengue virus. The data indicate that oleandrine exhibits efficacy against Zika virus and Dengue virus.

도 7은 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스(EBOV)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다. 도 8은 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스(MARV)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다. 도 9는 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 존재하에 베로 E6 세포의 시험관내 세포 생존력을 요약한 차트를 도시한다. 도 7 내지 도 8의 경우, 숙주 세포는 바이러스 감염 전에 조성물에 노출되었다. 베로 E6 세포는 올레안드린 함유 식물 추출물인 올레안드린, 디곡신 또는 PBI-05204의 존재 하에서, EBOV/Kik(도 7, MOI = 1) 또는 MARV/Ci67(도 8, MOI = 1)로 감염되었다. 1 시간 후, 접종원 및 화합물을 제거하고, 신선한 배지를 세포에 첨가하였다. 48 시간 후, 세포를 고정시키고 면역 염색하여 EBOV 또는 MARV로 감염된 세포를 검출하였다. 감염된 세포를 오페레타(Operetta)를 사용하여 열거하였다.7 depicts a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204) against Ebolavirus (EBOV) in Vero E6 cells. 8 depicts a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204) against Marburgvirus (MARV) in Vero E6 cells. 9 depicts a chart summarizing the in vitro cell viability of Vero E6 cells in the presence of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204). 7-8 , host cells were exposed to the composition prior to viral infection. Vero E6 cells were infected with EBOV/Kik (Fig. 7, MOI = 1) or MARV/Ci67 (Fig. 8, MOI = 1) in the presence of oleandrine-containing plant extracts oleandrine, digoxin or PBI-05204. . After 1 hour, the inoculum and compounds were removed and fresh medium was added to the cells. After 48 hours, cells were fixed and immunostained to detect cells infected with EBOV or MARV. Infected cells were enumerated using Operetta.

항 바이러스 활성과 관련하여 위양성(false positive)이 관찰되지 않도록 하기 위해, 조성물의 존재하에서 세포 생존력을 시험하였다. 도 9의 데이터의 경우, 베로 E6 세포는 상기와 같이 화합물로 처리되었다. ATP 수준은 세포 생존력의 측정으로서 셀티터-글로(CellTiter-Glo)에 의해 측정되었다. 올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204는 세포 생존력을 감소시키지 않는 것으로 결정되었으며, 이는 본 명세서의 다른 도면에 상세히 기술된 항 바이러스 활성이 개별 화합물의 세포 독성에 의해 유발되는 위양성 때문이 아님을 의미한다.Cell viability was tested in the presence of the composition to ensure that no false positives were observed with respect to antiviral activity. For the data of Figure 9, Vero E6 cells were treated with the compound as above. ATP levels were measured by CellTiter-Glo as a measure of cell viability. It was determined that oleandrine, digoxin and PBI-05204 did not reduce cell viability, meaning that the antiviral activity detailed in other figures herein is not due to false positives caused by the cytotoxicity of individual compounds. .

따라서, 본 발명은 포유동물 또는 숙주 세포에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 바이러스 감염 걸림 이전에 포유동물 또는 숙주 세포에 항 바이러스 조성물을 투여하는 단계를 포함하여, 상기 포유동물 또는 숙주 세포의 바이러스 감염 시, 항 바이러스 조성물이 바이러스 농도를 감소시키고 바이러스 감염을 개선, 감소 또는 제거하게 한다. Accordingly, the present invention provides a method of treating a viral infection in a mammal or host cell, the method comprising administering an antiviral composition to the mammal or host cell prior to contracting the viral infection; or upon viral infection of the host cell, the antiviral composition reduces the viral concentration and ameliorates, reduces or eliminates the viral infection.

본 발명의 항 바이러스 조성물 및 방법은 또한 항 바이러스 조성물의 투여 이전에 발생한 바이러스 감염을 치료하는데 유용하다. 베로 E6 세포를 EBOV(도 10a, 10b) 또는 MARV(도 11a, 11b)로 감염시켰다. 감염 후 2 시간(도 10a, 11a) 또는 감염 후 24 시간(도 10b, 11b)에, 올레안드린 또는 PBI-05204를 1 시간 동안 세포에 첨가한 후, 폐기하고 세포를 배양 배지로 리턴시켰다.The antiviral compositions and methods of the present invention are also useful for treating a viral infection that occurs prior to administration of the antiviral composition. Vero E6 cells were infected with EBOV ( FIGS. 10A , 10B ) or MARV ( FIGS. 11A , 11B ). At 2 hours post infection ( FIGS. 10A, 11A ) or 24 hours post infection ( FIGS. 10B , 11B ), oleandrine or PBI-05204 was added to the cells for 1 hour, then discarded and the cells returned to the culture medium.

도 10a 및 도 10b는 바이러스에 노출된 직후, 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 도 10a-감염 후 2 시간; 도 10b-감염 후 24 시간. 항 바이러스 조성물이 바이러스 감염 후 2 시간 내에(또는 최대 12 시간 이내에) 투여될 때, 바이러스 농도 항 바이러스 조성물은 효과적인 치료를 제공하고, EBOV 바이러스 농도를 감소시킨다. 24 시간 후에도 바이러스 조성물이 효과적이지만, 초기 바이러스 감염 후 시간이 지날수록 그 효능은 낮아진다. MARV에 대해서도 동일한 평가가 수행되었다. 도 11a 및 도 11b는 바이러스에 노출된 직후, 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 11a-감염 후 2 시간; 도 11b-감염 후 24 시간. 항 바이러스 조성물이 바이러스 감염 후 2 시간 내에(또는 최대 12 시간 이내에) 투여될 때, 바이러스 농도 항 바이러스 조성물은 효과적인 치료를 제공하고, MARV 바이러스 농도를 감소시킨다. 24 시간 후에도 바이러스 조성물이 효과적이지만, 초기 바이러스 감염 후 시간이 지날수록 그 효능은 낮아진다.10A and 10B depict charts summarizing the ability of compositions (oleandrine and PBI-05204) to inhibit Ebolavirus in Vero E6 cells immediately after exposure to virus: FIG. 10A - 2 hours post infection; Figure 10b - 24 hours post infection. When the antiviral composition is administered within 2 hours (or up to 12 hours) after viral infection, the viral concentration antiviral composition provides an effective treatment and reduces the EBOV virus concentration. Although the viral composition is effective even after 24 hours, its efficacy decreases as time passes after the initial viral infection. The same evaluation was performed for MARV. 11A and 11B depict charts summarizing the ability of compositions (oleandrine and PBI-05204) to inhibit Marburgvirus in Vero E6 cells immediately after exposure to virus: 11a- 2 hours post infection; Figure 11b - 24 hours post infection. When the antiviral composition is administered within 2 hours (or up to 12 hours) after viral infection, the viral concentration antiviral composition provides an effective treatment and reduces the MARV virus concentration. Although the viral composition is effective even after 24 hours, its efficacy decreases as time passes after the initial viral infection.

본원의 조성물의 항 바이러스 활성이 단일 세대의 바이러스 감염 세포에 대해, 예를 들어 감염 후 24 시간 이내에 감소됨을 고려하여, 항 바이러스 조성물이 바이러스성 증식을 억제할 수 있는지, 즉 감염성 자손의 생성을 억제할 수 있는지를 평가하였다. 베로 E6 세포를 올레안드린 또는 PBI-05204의 존재하에서 EBOV 또는 MARV로 감염시키고, 48 시간 동안 배양하였다. 감염된 세포 배양물로부터의 상청액을 새로운 베로 E6 세포에 통과시키고, 1 시간 동안 배양한 다음 폐기하였다. 통과한 상청액을 함유하는 세포를 48 시간 동안 배양하였다. EBOV(B) 또는 MARV(C)로 감염된 세포는 본원에 기술된 바와 같이 평가되었다. 대조군 감염률은 EBOV의 경우 66 %, MARV의 경우 67 %였다. 본 발명의 항 바이러스 조성물은 감염성 자손의 생성을 억제하였다.Given that the antiviral activity of the composition herein is reduced against a single generation of virus-infected cells, for example within 24 hours after infection, whether the antiviral composition can inhibit viral proliferation, i.e., inhibit the production of infectious progeny. evaluated whether it could be done. Vero E6 cells were infected with EBOV or MARV in the presence of oleandrine or PBI-05204 and cultured for 48 hours. The supernatant from the infected cell culture was passed through fresh Vero E6 cells, incubated for 1 hour and then discarded. Cells containing the passed supernatant were incubated for 48 hours. Cells infected with EBOV (B) or MARV (C) were assessed as described herein. Control infection rates were 66% for EBOV and 67% for MARV. The antiviral composition of the present invention inhibited the production of infectious progeny.

따라서, 본 발명의 항 바이러스 조성물은: a) 바이러스에 노출된 후 바이러스 감염을 억제하기 위해, 바이러스 감염 전에 예방적으로 투여될 수 있고; b) 감염성 자손의 바이러스 복제 및 생성을 억제 또는 감소시키기 위해, 바이러스 감염 후에 투여될 수 있으며; 또는 c) a)와 b)의 조합으로 투여될 수 있다.Accordingly, the antiviral composition of the present invention may be administered prophylactically prior to viral infection, in order to inhibit viral infection after exposure to the virus: a); b) to inhibit or reduce viral replication and production of infectious progeny, after viral infection; or c) a combination of a) and b).

토가비리대 알파바이러스에 대한 항 바이러스 조성물의 항 바이러스 활성은 베로 E6 세포에서 VEE 바이러스 및 WEE 바이러스를 사용하여 평가되었다. 도 13a 및 도 13b는 베로 E6 세포에서 베네수엘라 말 뇌척수염 바이러스(도 13a) 및 웨스턴 말 뇌척수염 바이러스(도 13b)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다. 지시된 화합물의 존재 또는 부재하에서, 18 시간 동안 베로 E6 세포를 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(도 13a, MOI = 0.01) 또는 웨스턴 말 뇌염 바이러스(도 13b, MOI = 0.1)로 감염시켰다. 감염된 세포를 이전과 같이 검출하고, 오페레타에 열거하였다. 본 발명의 항 바이러스 조성물은 효과적인 것으로 밝혀졌다.The antiviral activity of the antiviral composition against Togaviridae alphavirus was evaluated using VEE virus and WEE virus in Vero E6 cells. 13A and 13B show in vitro dose response antiviral of various compositions (oleandrine, digoxin and PBI-05204) against Venezuelan equine encephalomyelitis virus (FIG. 13A) and Western equine encephalomyelitis virus (FIG. 13B) in Vero E6 cells. A chart summarizing activity is shown. Vero E6 cells were infected with Venezuelan equine encephalitis virus (Fig. 13a, MOI = 0.01) or Western equine encephalitis virus (Fig. 13b, MOI = 0.1) for 18 h in the presence or absence of the indicated compounds. Infected cells were detected as before and enumerated in operetta. The antiviral composition of the present invention has been found to be effective.

따라서, 본 발명은 필로비리대 바이러스, 플라비비리대 바이러스 또는 토가비리대 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 항 바이러스 조성물을 투여하고, 그에 의해 항 바이러스 조성물에 바이러스를 노출시켜 상기 바이러스 감염을 치료하는 단계를 포함한다.Accordingly, the present invention provides a method of treating a viral infection caused by a piloviridae virus, a flaviviridae virus or a togaviridae virus, the method comprising administering an effective amount of an antiviral composition, thereby and treating the viral infection by exposing the virus to a viral composition.

본원의 조성물의 항 바이러스 활성을 리노바이러스(Rhinovirus) 감염에 대해 평가하였다. 리노바이러스는 피코르나비리대(Picornaviridae) 과 및 엔테로바이러스(Enterovirus) 속이다. 이것은 엔벨롭되어 있지 않고, (+) 극성의 ss-RNA 바이러스이다. 올레안드린은 본원에 사용된 농도 및 분석에서 리노바이러스에 대해 불활성인 것으로 밝혀졌다.The antiviral activity of the compositions herein was evaluated against Rhinovirus infection. Rhinoviruses belong to the family Picornaviridae and the genus Enterovirus. It is an unenveloped, positively polarized ss-RNA virus. Oleandrin was found to be inactive against rhinovirus at the concentrations and assays used herein.

PBI-05204(본 명세서 및 2012 년 5 월 29 일 발행된 Addington의 US 8187644 B2에서, 2008 년 7 월 22 일 발행된 Addington의 US 7402325 B2에서, 2013 년 5 월 12 일 발행된 Addington et al의 US 8394434 B2에 기재되며, 이들 전체 개시 내용은 본원에 참조로 포함됨)은 주요 약리학적 활성 성분으로서 강심 배당체(올레안드린, OL) 및 트리테르펜(올레아놀산(OA), 우르솔산(UA) 및 베툴린산(BA))을 포함한다. 총 트리테르펜에 대한 OL의 몰비는 약 1:(10-96)이다. OA:UA:BA의 몰비는 약 7.8:7.4:1이다. PBI-05204에서 OA, UA 및 BA의 조합은 OL 등몰 기준으로 비교할 때 올레안드린의 항 바이러스 활성을 증가시킨다. PBI-04711은 PBI-05204의 일부이지만, 강심 배당체(OL)를 함유하지 않는다. PBI-04711에서 OA:UA:BA의 몰비는 약 3:2.2:1이다. PBI-04711은 또한 항 바이러스 활성을 갖는다. 따라서, OL, OA, UA 및 BA를 포함하는 항 바이러스 조성물은 OL의 등몰 함량에 기초하여 유일한 활성 성분으로서 OL을 포함하는 조성물보다 효과적이다. 일부 실시 예에서, 개별 트리테르펜 대 올레안드린의 몰비는 하기와 같이 범위 설정된다: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL); 또는 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); 또는 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); 또는 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).PBI-05204 (this specification and in US 8187644 B2 to Addington published on May 29, 2012; in US 7402325 B2 to Addington, published July 22, 2008; 8394434 B2, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference) as the major pharmacologically active ingredients cardiac glycosides (oleandrine, OL) and triterpenes (oleanolic acid (OA), ursolic acid (UA) and betulinic acid) (BA)). The molar ratio of OL to total triterpenes is about 1:(10-96). The molar ratio of OA:UA:BA is about 7.8:7.4:1. The combination of OA, UA and BA in PBI-05204 increases the antiviral activity of oleandrine when compared on an OL equimolar basis. PBI-04711 is part of PBI-05204, but does not contain cardiac glycosides (OL). The molar ratio of OA:UA:BA in PBI-04711 is about 3:2.2:1. PBI-04711 also has antiviral activity. Thus, an antiviral composition comprising OL, OA, UA and BA is more effective than a composition comprising OL as the sole active ingredient based on the equimolar content of the OL. In some embodiments, the molar ratios of individual triterpenes to oleandrin are ranged as follows: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL); or 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); or 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); or 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).

유일한 항 바이러스제로서 올레안드린을 포함하는 항 바이러스 조성물은 본 발명의 범위 내에 있다.Antiviral compositions comprising oleandrine as the only antiviral agent are within the scope of the present invention.

항 바이러스제로서 올레안드린 및 복수의 트리테르펜을 포함하는 항 바이러스 조성물은 본 발명의 범위 내에 있다. 일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 우르솔산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 포함한다. 화합물의 몰비는 본원에 기재된 바와 같다.Antiviral compositions comprising oleandrine and a plurality of triterpenes as antiviral agents are within the scope of the present invention. In some embodiments, the antiviral composition comprises oleandrine, oleanolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof), ursolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof) and betulinic acid (free acid, salt, derivatives or prodrugs). The molar ratios of the compounds are as described herein.

주요 활성 성분으로서 복수의 트리테르펜을 포함하는 항 바이러스 조성물(이는 스테로이드, 강심 배당체 및 약리학적 활성 성분을 배제하는 것을 의미함)도 본 발명의 범위 내에 있다. 상기한 바와 같이, PBI 04711은 주요 활성 성분으로서 OA, UA 및 BA를 포함하고, 항 바이러스 활성을 나타낸다. 일부 실시 예에서, 트리테르펜-기반 항 바이러스 조성물은 OA, UA 및 BA를 포함하고, 이들 각각은 유리 산 형태, 염 형태, 중수소화 형태 및 유도체 형태로부터 각각의 경우 독립적으로 선택된다.Antiviral compositions comprising a plurality of triterpenes as main active ingredients (which means excluding steroids, cardiac glycosides and pharmacologically active ingredients) are also within the scope of the present invention. As described above, PBI 04711 contains OA, UA and BA as main active ingredients, and exhibits antiviral activity. In some embodiments, the triterpene-based antiviral composition comprises OA, UA and BA, each independently selected at each occurrence from the free acid form, salt form, deuterated form and derivative form.

PBI-01011은 OA, UA 및 BA를 포함하는 개량된 트리테르펜-기반 항 바이러스 조성물이며, 여기서 OA:UA:BA의 몰비는 약 9-12:최대 약 2:최대 약 2, 또는 약 10:약 1: 약 1, 또는 약 9-12:약 0.1-2:약 0.1-2, 또는 약 9-11:약 0.5-1.5:약 0.5-1.5, 또는 약 9.5-10.5:약 0.75-1.25:약 0.75-1.25, 또는 약 9.5-10.5:약 0.8-1.2:약 0.8-1.2, 또는 약 9.75-10.5:약 0.9-1.1:약 0.9-1.1이다.PBI-01011 is an improved triterpene-based antiviral composition comprising OA, UA and BA, wherein the molar ratio of OA:UA:BA is about 9-12: up to about 2: up to about 2, or about 10: about 1: about 1, or about 9-12: about 0.1-2: about 0.1-2, or about 9-11: about 0.5-1.5: about 0.5-1.5, or about 9.5-10.5: about 0.75-1.25: about 0.75 -1.25, or about 9.5-10.5: about 0.8-1.2: about 0.8-1.2, or about 9.75-10.5: about 0.9-1.1: about 0.9-1.1.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 본 명세서에 설명된 바와 같이 OA 대 UA의 몰비로 존재하는 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 우르솔산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 적어도 포함한다. OA는 UA보다 많은 몰량으로 존재한다.In some embodiments, the antiviral composition comprises oleanolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof) and ursolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof) present in a molar ratio of OA to UA as described herein. drug) at least. OA is present in a higher molar amount than UA.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 본 명세서에 설명된 바와 같이 OA 대 BA의 몰비로 존재하는 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 적어도 포함한다. OA는 BA보다 많은 몰량으로 존재한다.In some embodiments, the antiviral composition comprises oleanolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof) and betulinic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof) present in a molar ratio of OA to BA as described herein. drug) at least. OA is present in a higher molar amount than BA.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 본 명세서에 설명된 바와 같이 OA 대 UA 대 BA의 몰비로 존재하는 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 우르솔산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)를 적어도 포함한다. OA는 UA 및 BA 모두보다 많은 몰량으로 존재한다.In some embodiments, the antiviral composition comprises oleanolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof), ursolic acid (free acid, salt, derivative thereof) present in a molar ratio of OA to UA to BA as described herein. or a prodrug) and betulinic acid (a free acid, salt, derivative or prodrug thereof). OA is present in a higher molar amount than both UA and BA.

일부 실시 예에서, 트리테르펜-기반 항 바이러스 조성물은 강심 배당체를 배제한다.In some embodiments, the triterpene-based antiviral composition excludes cardiac glycosides.

일반적으로, 필로비리대 감염, 플라비비리대 감염 또는 토가비리대 감염이 있는 대상체는 다음과 같이 치료된다. 대상체는 상기 대상체가 상기 바이러스에 감염되었는지를 결정하기 위해 평가된다. 항 바이러스 조성물의 투여가 지시된다. 항 바이러스 조성물의 초기 투여량은 일정 기간(치료 기간) 동안 처방된 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상체의 임상 반응 및 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 한번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 결정된 투여량 증량 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속된다. 투여량 또는 투여 요법은 환자가 감염 자체의 중단, 감염 관련 증상의 감소 및/또는 감염의 진행의 감소와 같은 원하는 임상 종점(들)에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다.In general, subjects with a Pilobiridae infection, a Flaviviridae infection, or a Togaviridae infection are treated as follows. A subject is evaluated to determine if the subject is infected with the virus. Administration of antiviral compositions is indicated. An initial dose of the antiviral composition is administered to a subject according to a prescribed dosing regimen for a period of time (treatment period). The subject's clinical response and therapeutic response level are determined periodically. If the level of therapeutic response at one dose is too low, the dose is increased according to a predetermined dose escalation schedule until the desired level of therapeutic response in the subject is achieved. Treatment of the subject with the antiviral composition continues as needed. The dosage or dosing regimen may be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint(s), such as cessation of infection itself, reduction of infection-related symptoms, and/or reduction of progression of infection.

임상의가 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 다른 치료제의 조합으로 바이러스 감염된 대상체를 치료하려는 경우, 대상체가 갖는 바이러스 감염은 상기 하나 이상의 다른 치료제에 적어도 부분적으로 치료적으로 반응하는 것으로 알려져있다. 그 다음, 본 발명의 방법은 치료적 관련 투여량의 항 바이러스 조성물 및 치료적 관련 투여량의 상기 하나 이상의 다른 치료제를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 항 바이러스 조성물은 제 1 투여 요법에 따라 투여되고, 하나 이상의 다른 치료제는 제 2 투여 요법에 따라 투여된다. 일부 실시 예에서, 제 1 및 제 2 투약 요법은 동일하다. 일부 실시 예에서, 제 1 및 제 2 투약 요법은 상이하다.When a clinician intends to treat a virally infected subject with a combination of an antiviral composition and one or more other therapeutic agents, it is known that the viral infection the subject has is at least partially therapeutically responsive to said one or more other therapeutic agents. The methods of the present invention then comprise administering to a subject in need thereof a therapeutically relevant dosage of an antiviral composition and a therapeutically relevant dosage of said one or more other therapeutic agents, wherein the antiviral composition is administered in a first administration. and the one or more other therapeutic agents are administered according to the second dosing regimen. In some embodiments, the first and second dosing regimens are the same. In some embodiments, the first and second dosing regimens are different.

본 발명의 항 바이러스 조성물(들)은 주요 항 바이러스 요법, 보조 항 바이러스 요법 또는 공동-항 바이러스 요법으로서 투여될 수 있다. 본 발명의 방법은 하나 이상의 다른 알려진 항 바이러스 조성물과 함께 항 바이러스 조성물을 개별적으로 또는 공동으로 투여하는 것을 포함하는데, 이는 본 발명의 항 바이러스 조성물이 공지된 항 바이러스 조성물(화합물) 또는 바이러스 감염과 관련된 증상을 치료하기 위한 조성물의 투여 전, 투여 동안 또는 투여 후에 투여될 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 염증, 구토, 구역, 두통, 열, 설사, 메스꺼움, 두드러기, 결막염, 불쾌감, 근육통, 관절통, 발작 또는 마비를 치료하는데 사용되는 약물이 본 발명의 항 바이러스 조성물과 함께 또는 별도로 투여될 수 있다. .The antiviral composition(s) of the present invention may be administered as primary antiviral therapy, adjuvant antiviral therapy or co-antiviral therapy. The methods of the present invention comprise individually or concurrently administering an antiviral composition with one or more other known antiviral compositions, wherein the antiviral composition of the present invention is associated with a known antiviral composition (compound) or viral infection. It means that the composition may be administered before, during or after administration of the composition for treating a condition. For example, a drug used to treat inflammation, vomiting, nausea, headache, fever, diarrhea, nausea, urticaria, conjunctivitis, malaise, myalgia, arthralgia, seizures or paralysis may be administered with or separately from the antiviral composition of the present invention. can .

하나 이상의 다른 치료제는 치료학적으로 유효한 것으로 임상의가 인식하는 투여량 또는 투약 요법에 따라, 또는 서브-치료적으로 효과적인 것으로 임상의가 인식하는 투여량으로 투여될 수 있다. 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 다른 치료제의 조합의 투여에 의해 제공된 임상적 이점 및/또는 치료 효과는 부가적인 또는 상승적일 수 있으며, 이러한 수준의 이점 또는 효과는 조합물의 투여와 개별 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 다른 치료제의 투여의 비교에 의해 결정된다. 하나 이상의 다른 치료제는 미국 식품의약국(FDA), 세계 보건기구, 유럽 의약청(E.M.E.A.), 치료 상품 관리국(TGA, 호주), 범 미국 건강 기구(PAHO), 의약품 및 의료 기기 안전 기관(Medsafe, 뉴질랜드) 또는 전세계 다양한 보건부에 의해 제안되거나 기술된 투여량 및 투약 요법에 따라 투여될 수 있다. The one or more other therapeutic agents may be administered according to a dosage or dosing regimen recognized by the clinician to be therapeutically effective, or at a dosage recognized by the clinician to be sub-therapeutically effective. The clinical benefit and/or therapeutic effect provided by the administration of the combination of the antiviral composition and one or more other therapeutic agents may be additive or synergistic, and this level of benefit or effect may differ from the administration of the combination and the individual antiviral compositions and the one or more other therapeutic agents. It is determined by comparison of administration of different therapeutic agents. One or more other therapeutic agents are the United States Food and Drug Administration (FDA), World Health Organization, European Medicines Agency (EMEA), Therapeutic Goods Administration (TGA, Australia), Pan American Health Organization (PAHO), Drug and Medical Device Safety Agency (Medsafe, New Zealand). ) or according to dosages and dosing regimens suggested or described by various health departments worldwide.

실시 예 5는 포유동물에서 지카바이러스 감염의 치료를 위한 예시적인 절차를 제공한다. 실시 예 12는 포유동물에서 필로바이러스 감염(에볼라바이러스, 마르부르그바이러스)의 치료를 위한 예시적인 절차를 제공한다. 실시 예 13은 포유동물에서 플라비바이러스 감염(황열, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스, 지카바이러스, 진드기성 뇌염, 캬사누르 삼림병, 알크후르마 질병, 옴스크 출혈열, 포와산 바이러스 감염)의 치료를 위한 예시적인 절차를 제공한다. Example 5 provides an exemplary procedure for the treatment of a Zika virus infection in a mammal. Example 12 provides exemplary procedures for the treatment of filovirus infections (Ebolavirus, Marburgvirus) in a mammal. Example 13 is a flavivirus infection (yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, Zika virus, tick encephalitis, Kasanur forest disease, alkhurma disease, Omsk hemorrhagic fever, Powasan virus infection) in mammals. Exemplary procedures for treatment are provided.

약제학적 조성물에 존재하는 항 바이러스 화합물(트리테르펜(들), 강심 배당체(들) 등)은 변형되지 않은 형태, 염 형태, 유도체 형태 또는 이들의 조합으로 존재할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "유도체"는 a) 제 1 화학 물질과 구조적으로 관련되고 이론적으로 이로부터 유래되는 화학 물질; b) 제 1 화합물의 하나의 원자가 다른 원자 또는 원자 그룹으로 대체되는 경우, 유사한 제 1 화합물 또는 다른 제 1 화합물로부터 발생하는 것으로 상상될 수 있는 화합물로 형성된 화합물; c) 모 화합물로부터 유도되고 모 화합물의 필수 원소를 함유하는 화합물; 또는 d) 하나 이상의 단계에서 유사한 구조의 제 1 화합물로부터 생성될 수 있는 화합물을 의미한다. 예를 들어, 유도체는 중수소화 형태, 산화 형태, 탈수화, 불포화, 중합체 공액 또는 글리코실화 형태를 포함하거나 에스테르, 아미드, 락톤, 상동체, 에테르, 티오에테르, 시아노, 아미노, 알킬아미노, 설프히드릴, 헤테로시클릭, 헤테로시클릭 고리-융합, 중합, 페길화, 벤질리데닐, 트리아졸릴, 피페라지닐 또는 이의 중수소화 형태를 포함할 수 있다.The antiviral compound (triterpene(s), cardiac glycoside(s), etc.) present in the pharmaceutical composition may be present in unmodified form, salt form, derivative form, or a combination thereof. As used herein, the term “derivative” refers to: a) a chemical substance structurally related to and theoretically derived from a first chemical substance; b) a compound formed from a compound that is imaginable to arise from a similar first compound or another first compound when one atom of the first compound is replaced by another atom or group of atoms; c) compounds derived from the parent compound and containing the essential elements of the parent compound; or d) can be prepared from a first compound of similar structure in one or more steps. For example, derivatives include deuterated forms, oxidized forms, dehydrated, unsaturated, polymer conjugated or glycosylated forms, or include esters, amides, lactones, homologues, ethers, thioethers, cyano, amino, alkylamino, sulfonyl phydryl, heterocyclic, heterocyclic ring-fused, polymerized, pegylated, benzylidenyl, triazolyl, piperazinyl or deuterated forms thereof.

본원에 사용된 용어 "올레안드린"은 달리 명시되지 않는 한 모든 공지된 형태의 올레안드린을 의미하는 것으로 간주된다. 올레안드린은 라세믹, 광학적으로 순수한 또는 광학적으로 풍부한 형태로 존재할 수 있다. 네리움 올리앤더 식물 재료는 예를 들어, 텍사스 아타스코사 소재의 알드리지 너서리(Aldridge Nursery)와 같은 상업적인 식물 공급 업체로부터 얻을 수 있다.As used herein, the term “oleandrine” is intended to mean all known forms of oleandrine, unless otherwise specified. Oleandrin may exist in racemic, optically pure or optically enriched form. Nerium oleander plant material can be obtained from commercial plant suppliers such as, for example, Aldridge Nursery of Atasco, Texas.

초임계 유체(SCF) 추출물은 US 7,402,325, US 8394434, US 8187644 또는 PCT 국제 공개 번호 WP 2007/016176 A2에 상세히 기술된 바와 같이 제조될 수 있으며, 이의 전체 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다. 에탄올과 같은 개질제(유기 용매)의 존재 또는 부재하에서, 초임계 이산화탄소로 추출을 수행할 수 있다.Supercritical fluid (SCF) extracts may be prepared as detailed in US 7,402,325, US 8394434, US 8187644 or PCT International Publication No. WP 2007/016176 A2, the entire disclosures of which are incorporated herein by reference. Extraction can be performed with supercritical carbon dioxide in the presence or absence of a modifier (organic solvent) such as ethanol.

강심 배당체, 특히 올레안드린을 함유하는 다른 추출물은 다양한 상이한 공정에 의해 제조될 수 있다. 열탕 추출물의 제조 절차를 기술하고 있는 Huseyin Ziya Ozel 박사(미국 특허 번호 5,135,745)에 의해 개발된 공정에 따라 추출물을 제조할 수 있다. 수성 추출물은 2KD 내지 30KD의 분자량을 갖는 몇 가지 다당류, 올레안드린 및 올레안드리게닌, 오도로사이드 및 네리탈로사이드를 함유하는 것으로 보고되어 있다. 다당류는 산성 호모폴리갈락투로난 또는 아라비노갈락투로난을 포함하는 것으로 알려져있다. Selvaraj et al의 미국 특허 제 5,869,060 호는 네리움 종의 열탕 추출물 및 그의 제조 방법, 예를 들어 실시 예 2를 개시한다. 이어서, 생성된 추출물을 동결 건조시켜 분말을 제조할 수 있다. 미국 특허 제 6,565,897 호(Selvaraj et al.의 미국 특허 공개 제 20020114852 호 및 PCT 국제 공개 제 WO 2000/016793 호)는 실질적으로 멸균된 추출물의 제조를 위한 열탕 추출 공정을 개시하고 있다. Erdemoglu et al.(J. Ethnopharmacol.(2003) Nov. 89(1), 123-129)는 항-통각 및 항-염증 활성에 기초하여 네리움 올리앤더를 포함한 식물의 수성 및 에탄올 추출물의 비교 결과를 개시하고 있다. 네리움 올리앤더의 유기 용매 추출물은 Adome et al.(Afr. Health Sci.(2003) Aug. 3(2), 77-86; 에탄올 추출물), el-Shazly et al.(J. Egypt Soc. Parasitol.(1996), Aug. 26(2), 461-473; 에탄올 추출물), Begum et al.(Phytochemistry(1999) Feb. 50(3), 435-438; 메탄올 추출물), Zia et al.(J. Ethnolpharmacol.(1995) Nov. 49(1), 33-39; 메탄올 추출물) 및 Vlasenko et al.(Farmatsiia.(1972) Sept.-Oct. 21(5), 46-47; 알콜성 추출물)에 의해 개시된다. Singh et al.의 미국 특허 출원 공개 제 20040247660 호는 암 치료에 사용하기 위한 올레안드린의 단백질 안정화 리포좀 제형의 제조를 개시한다. Singh et al.의 미국 특허 출원 공개 제 20050026849 호는 사이클로덱스트린을 함유하는 올레안드린의 수용성 제형을 개시한다. Singh et al.의 미국 특허 출원 공개 제 20040082521 호는 열탕 추출물로부터 올레안드린의 단백질 안정화 나노 입자 제형의 제조를 개시한다.Other extracts containing cardiac glycosides, particularly oleandrine, can be prepared by a variety of different processes. The extract can be prepared according to a process developed by Dr. Huseyin Ziya Ozel (US Pat. No. 5,135,745) which describes a procedure for preparing a boiling water extract. It is reported that the aqueous extract contains several polysaccharides with molecular weights of 2KD to 30KD, oleandrine and oleandrigenin, orodoside and neritaloside. Polysaccharides are known to include acidic homopolygalacturonan or arabinogalacturonan. U.S. Patent No. 5,869,060 to Selvaraj et al discloses a boiling water extract of Nerium species and a method for preparing the same, for example Example 2. Then, the resulting extract may be freeze-dried to prepare a powder. U.S. Patent No. 6,565,897 (U.S. Patent Publication No. 20020114852 to Selvaraj et al. and PCT International Publication No. WO 2000/016793) discloses a hot water extraction process for the preparation of substantially sterile extracts. Erdemoglu et al. (J. Ethnopharmacol. (2003) Nov. 89(1), 123-129) compared aqueous and ethanolic extracts of plants including Nerium oleander based on anti-nociceptive and anti-inflammatory activity. is starting. The organic solvent extract of Nerium oleander was prepared by Adome et al. (Afr. Health Sci. (2003) Aug. 3(2), 77-86; ethanol extract), el-Shazly et al. (J. Egypt Soc. Parasitol). (1996), Aug. 26(2), 461-473; ethanol extract), Begum et al. (Phytochemistry (1999) Feb. 50(3), 435-438; methanol extract), Zia et al. (J) Ethnolpharmacol. (1995) Nov. 49(1), 33-39; methanol extract) and Vlasenko et al. (Farmatsiia. (1972) Sept.-Oct. 21(5), 46-47; alcoholic extract). is initiated by US Patent Application Publication No. 20040247660 to Singh et al. discloses the preparation of protein stabilized liposomal formulations of oleandrine for use in the treatment of cancer. US Patent Application Publication No. 20050026849 to Singh et al. discloses water-soluble formulations of oleandrin containing cyclodextrins. US Patent Application Publication No. 20040082521 to Singh et al. discloses the preparation of protein-stabilized nanoparticle formulations of oleandrin from boiling water extracts.

추출물은 또한 그들의 다당류 및 탄수화물 함량에서 상이하다. 열탕 추출물은 글루코스로 제조된 표준 곡선에 비해 407.3 글루코스 당량의 탄수화물을 함유하는 한편, SCF CO2 추출물의 분석은 정량 한계 미만인 매우 낮은 수준에서 발견된 탄수화물 수준을 발견하였다. 그러나, 네리움 올리앤더의 열탕 추출물에서의 탄수화물의 양은 SCF CO2 추출물에서의 그것보다 적어도 100 배 이상 더 많았다. SCF 추출물의 다당류 함량은 0 %, <0.5 %, <0.1 %, <0.05 % 또는 <0.01 % 중량일 수 있다. 일부 실시 예에서, SCF 추출물은 식물 덩어리(mass)의 추출 동안 수득된 다당류를 배제한다.The extracts also differ in their polysaccharide and carbohydrate content. The boiling water extract contained 407.3 glucose equivalents of carbohydrate compared to the standard curve prepared with glucose, while analysis of the SCF CO 2 extract found carbohydrate levels found at very low levels below the limit of quantitation. However, the amount of carbohydrates in the boiling water extract of Nerium oleander was at least 100 times greater than that in the SCF CO 2 extract. The polysaccharide content of the SCF extract may be 0%, <0.5%, <0.1%, <0.05% or <0.01% by weight. In some embodiments, the SCF extract excludes polysaccharides obtained during extraction of the plant mass.

Figure pat00001
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SCF CO2 추출물 및 열탕 추출물의 부분 조성은 JEOL AccuTOF-DART 질량 분석기(JEOL USA, Peabody, MA, USA)에서 DART TOF-MS(비행시간 질량 분광계 실시간 직접 분석)에 의해 결정되었다. The partial composition of the SCF CO 2 extract and the boiling water extract was determined by DART TOF-MS (time-of-flight mass spectrometer real-time direct analysis) on a JEOL AccuTOF-DART mass spectrometer (JEOL USA, Peabody, MA, USA).

네리움 종 또는 테베티아(Thevetia) 종의 SCF 추출물은 약리학적 활성 화합물, 예컨대 올레안드린 및 트리테르펜의 혼합물이다. SCF 공정에 의해 수득된 추출물은 주위 온도에서 실질적으로 물-불용성인 점성 반고체(용매를 제거한 후)이다. SCF 추출물은 다양한 상이한 범위의 물 용해도를 갖는 많은 상이한 성분을 포함한다. 초임계 유체 공정으로부터의 추출물은 0.9 내지 2.5 중량 %의 올레안드린 또는 1.7 내지 2.1 중량 %의 올레안드린 또는 1.7 내지 2.0 중량 %의 올레안드린을 이론적으로 함유한다. 다양한 양의 올레안드린을 포함하는 SCF 추출물이 얻어졌다. 일 실시 예에서, SCF 추출물은 약 2 중량 %의 올레안드린을 포함한다. SCF 추출물은 열탕 추출물보다 3-10 배 더 높은 농도의 올레안드린을 함유한다. 이는 HPLC 및 LC/MS/MS(탠덤 질량 분석) 분석에 의해 확인되었다.SCF extracts of Nerium species or Thevetia species are mixtures of pharmacologically active compounds such as oleandrin and triterpenes. The extract obtained by the SCF process is a viscous semi-solid (after solvent removal) that is substantially water-insoluble at ambient temperature. The SCF extract contains many different components with various different ranges of water solubility. Extracts from the supercritical fluid process theoretically contain 0.9 to 2.5 wt % oleandrine or 1.7 to 2.1 wt % oleandrine or 1.7 to 2.0 wt % oleandrine. SCF extracts containing varying amounts of oleandrine were obtained. In one embodiment, the SCF extract comprises about 2% oleandrine by weight. SCF extract contains 3-10 times higher concentration of oleandrin than boiling water extract. This was confirmed by HPLC and LC/MS/MS (tandem mass spectrometry) analysis.

SCF 추출물은 올레안드린 및 트리테르펜 올레아놀산, 베툴린산 및 우르솔산 및 본원에 기재된 다른 성분을 포함한다. 올레안드린 및 트리테르펜의 함량은 배치마다 다를 수 있지만; 그 변동 정도는 과도하지 않다. 예를 들어, SCF 추출물(PBI-05204)의 배치를 이들 4 가지 성분에 대해 분석하였고, 다음과 같은 각각의 대략적인 양을 함유하는 것으로 밝혀졌다.The SCF extract contains oleandrine and triterpene oleanolic acid, betulinic acid and ursolic acid and other ingredients described herein. The content of oleandrine and triterpene may vary from batch to batch; The degree of variation is not excessive. For example, a batch of SCF extract (PBI-05204) was analyzed for these four components and found to contain the following approximate amounts of each.

Figure pat00002
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개별 성분의 함량은 지시된 값에 비해 ± 25 %, ± 20 %, ± 15 %, ± 10 % 또는 ± 5 %만큼 변할 수 있다. 따라서, SCF 추출물에서의 올레안드린의 함량은 SCF 추출물 mg 당 20mg ± 5mg(이는 20mg의 ± 25 %임)의 범위내에 있을 것이다.The content of the individual components may vary by ± 25 %, ± 20 %, ± 15 %, ± 10 % or ± 5 % relative to the indicated values. Thus, the content of oleandrine in the SCF extract will be in the range of 20 mg ± 5 mg per mg of SCF extract (which is ± 25% of 20 mg).

올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 이들의 유도체는 또한 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich(www.sigmaaldrich.com; St. Louis, MO, USA))로부터 구매할 수 있다.Oleandrine, oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and their derivatives can also be purchased from Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com; St. Louis, MO, USA).

본원에 사용된 바와 같이, 개별적으로 명명된 트리테르펜은 각각의 경우에 그들의 천연(변형되지 않은, 유리 산) 형태, 염 형태, 유도체 형태, 프로드러그 형태 또는 이들의 조합에서 독립적으로 선택될 수 있다. 중수소화 형태의 트리테르펜을 함유하는 조성물 및 방법도 또한 본 발명의 범위 내에 있다.As used herein, the individually named triterpenes may in each case be independently selected from their native (unmodified, free acid) form, salt form, derivative form, prodrug form, or combinations thereof. . Compositions and methods containing triterpenes in deuterated form are also within the scope of the present invention.

올레아놀산 유도체, 프로드러그 및 염은 2015 년 1 월 8 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20150011627 A1, 2014 년 11 월 20 일에 공개된 Rong et al.의 US 20140343108 A1, 2014 년 11 월 20 일에 공개된 Xu et al.의 US 20140343064 A1, 2014 년 6 월 26 일에 공개된 Anderson et al.의 US 20140179928 A1, 2014 년 4 월 10 일에 공개된 Bender et al.의 US20140100227 A1, 2014 년 3 월 27 일에 공개된 Jiang et al.의 US 20140088188 A1, 2014 년 3 월 27 일에 공개된 Jiang et al.의 US 20140088163 A1, 2014년 3월 6일에 공개된 Jiang et al.의 US 20140066408 A1, 2013 년 11 월 28 일에 공개된 Anderson et al.의 US 20130317007 A1, 2013 년 11 월 14 일에 공개된 Gribble et al.의 US20130303607 A1, 2012 년 9 월 27 일에 공개된 Anderson et al.의 US 20120245374, 2012년 9월 20일에 공개된 Jiang et al.의 US 20120238767 A1, 2012년 9월 20일에 공개된 Shode et al.의 US 20120237629 A1, 2012년 8월 23일에 공개된 Anderson et al.의 US 20120214814 A1, 2012 년 6 월 28 일에 공개된 Lee et al.의 US 20120165279 A1, 2011 년 12 월 1 일에 공개된 Arntzen et al.의 US 20110294752 A1, 2011 년 4 월 21 일에 공개된 Majeed et al.의 US 20110091398 A1, 2010 년 7 월 29 일에 공개된 Arntzen et al.의 US 20100189824 A1, 2010 년 2 월 25 일에 공개된 Jiang et al.의 US 20100048911 A1, 2006 년 4 월 6 일에 공개된 Arntzen et al.의 US 20060073222 A1에 개시되어 있고, 그 전체 내용은 여기에 참조로 포함된다.Oleanolic acid derivatives, prodrugs and salts are disclosed in US 20150011627 A1 by Gribble et al., published Jan. 8, 2015, US 20140343108 A1 by Rong et al., published Nov. 20, 2014, in US 20140343108 A1 in Nov. 20, 2014. US 20140343064 A1 by Xu et al., published on Jun. 26, 2014, US 20140179928 A1 by Anderson et al., published on Jun. 26, 2014, US20140100227 A1 by Bender et al., published Apr. 10, 2014, 3, 2014 US 20140088188 A1 by Jiang et al. published March 27, 2014 US 20140088163 A1 by Jiang et al. published March 27, 2014, US 20140066408 A1 by Jiang et al. published March 6, 2014 , US 20130317007 A1 by Anderson et al., published Nov. 28, 2013, US201303303607 A1 by Gribble et al., published Nov. 14, 2013, and US201303303607 A1 by Anderson et al., published Sep. 27, 2012 US 20120245374, US 20120238767 A1 by Jiang et al. published September 20, 2012, US 20120237629 A1 by Shode et al. published September 20, 2012, Anderson et al. US 20120214814 A1 to al., US 20120165279 A1 to Lee et al. published Jun. 28, 2012, US 20110294752 A1 to Arntzen et al. published Dec. 1, 2011, US 20110294752 A1 to Apr. 21, 2011 by Lee et al. US 20110091398 A1 by Majeed et al., published 29 July 2010, US 201000189824 A1, 201 by Arntzen et al. published on July 29, 2010 US 20100048911 A1 to Jiang et al., published Feb. 25, 0, and US 20060073222 A1 to Arntzen et al., published Apr. 6, 2006, the entire contents of which are incorporated herein by reference. .

우르솔산 유도체, 프로드러그 및 염은 2015 년 1 월 8 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20150011627 A, 2013 년 11 월 14 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20130303607 A1, 2015 년 8 월 6 일에 공개된 Yoon et al.의 US 20150218206 A1, 2004 년 11 월 30 일에 발행된 Fritsche et al.의 US 6824811, 2010 년 5 월 8 일에 발행된 Ochiai et al.의 US 7718635, 2014 년 5 월 20 일에 발행된 Lin et al.의 US 8729055, 및 2015 년 9 월 1 일에 발행된 Yoon et al.의 US 9120839에 개시되어 있고, 그 전체 내용은 여기에 참조로 포함된다.Ursolic acid derivatives, prodrugs and salts are disclosed in US 20150011627 A by Gribble et al., published Jan. 8, 2015, US 20130303607 A1 by Gribble et al., published Nov. 14, 2013, Aug. 6, 2015 US 20150218206 A1 by Yoon et al. published on Nov. 30, 2004, US 6824811 by Fritsche et al., published on 30 November 2004, US 7718635 by Ochiai et al. published on 8 May 2010, 5, 2014 US 8729055 to Lin et al., issued Sept. 20, and US 9120839, Yoon et al., Sep. 1, 2015, issued Sept. 1, 2015, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

베툴린산 유도체, 프로드러그 및 염은 2015 년 1 월 8 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20150011627 A, 2013 년 11 월 14 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20130303607, 2012 년 9 월 20 일에 공개된 Shode et al.의 US 20120237629 A1, 2017 년 7 월 20 일에 공개된 Regueiro-Ren et al.의 US 20170204133 A1, 2017 년 4 월 6 일에 공개된 Nitz et al.의 US 20170096446 A1, 2015 년 11 월 26 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al의 US 20150337004 A1, 2015 년 4 월 30 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al.의 US 20150119373 A1, 2014 년 10 월 2 일에 공개된 Yan et al.의 US 20140296546 A1, 2014 년 8 월 28 일에 공개된 Swidorski et al.의 US 20140243298 A1, 2014 년 8 월 7 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al.의 US 20140221328 A1. 2014 년 3 월 6 일에 공개된 Leunis et al.의 US 20140066416 A1, 2013 년 3 월 14 일에 공개된 Durst et al.의 US 20130065868 A1, 2013 년 1 월 31 일에 공개된 Regueiro-Ren et al.의 US 20130029954 A1, 2012 년 11 월 29 일에 공개된 Zhang et al.의 US 20120302530 A1, 2012 년 8 월 23 일에 공개된 Power et al.의 US 20120214775 A1, 2012 년 4 월 26 일에 공개된 Honda et al.의 US 20120101149 A1, 2011 년 9 월 15 일에 공개된 Bullock et al.의 US 20110224182 A1, 2011 년 12 월 22 일에 공개된 Hemp et al.의 US 20110313191 A1, 2011 년 9 월 15 일에 공개된 Pichette et al.의 US 20110224159 A1, 2011 년 9 월 8 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al.의 US 20110218204, 2009 년 8 월 13 일에 공개된 Safe et al.의 US 20090203661 A1, 2009 년 5월 21 일에 공개된 Krasutsky et al.의 US 20090131714 A1, 2009 년 3 월 19 일에 공개된 Krasutsky et al.의 US 20090076290, 2009 년 3 월 12 일에 공개된 Leunis et al.의 US 20090068257 A1, 2008 년 11 월 27 일에 공개된 Mukherjee et al.의 US 20080293682, 2007 년 3 월 29 일에 공개된 Pezzuto et al.의 US 20070072835 A1, 2006 년 11 월 9 일에 공개된 Jansen et al.의 US 20060252733, 2006 년 11 월 9 일에 공개된 O'Neill et al.의 US 2006025274 A1에 개시되어 있고, 그 전체 내용은 여기에 참조로 포함된다.Betulinic acid derivatives, prodrugs and salts are disclosed in US 20150011627 A by Gribble et al., published Jan. 8, 2015, US 20130303607 by Gribble et al., published Nov. 14, 2013, in US 20130303607, Sep. 20, 2012 Shode et al. published US 20120237629 A1, Regueiro-Ren et al. US 20170204133 A1 published July 20, 2017, US 20170096446 A1 published April 6, 2017 by Nitz et al. US 20150337004 A1 by Parthasaradhi Reddy et al, published on Nov. 26, 2015, US 20150119373 A1 by Parthasaradhi Reddy et al., published on Apr. 30, 2015, Yan et al., published on Oct. 2, 2014. US 20140296546 A1 by Swidorski et al. published Aug. 28, 2014, US 20140243298 A1 by Swidorski et al. published Aug. 7, 2014, US 20140221328 A1 by Parthasaradhi Reddy et al., published Aug. 7, 2014. US 20140066416 A1 by Leunis et al., published Mar. 6, 2014, US 20130065868 A1, by Durst et al., published Mar. 14, 2013, Regueiro-Ren et al, Jan. 31, 2013 US 20130029954 A1 by ., US 20120302530 A1 by Zhang et al. published on Nov. 29, 2012, US 20120214775 A1 by Power et al. published on Aug. 23, 2012, published on Apr. 26, 2012 US 20120101149 A1 by Honda et al. published September 15, 2011, US 20110224182 A1 by Bullock et al. published September 15, 2011, US 20110313191 A1 by Hemp et al. published December 22, 2011, September 2011 US 20110224159 A1 by Pichette et al. published on 15th September, US 20110218204 by Parthasaradhi Reddy et al. published on 8 September 2011, US 20090203661 A1 by Safe et al. published on 13 August 2009, US 20090131714 A1 by Krasutsky et al. published May 21, 2009, US 20090076290 by Krasutsky et al. published March 19, 2009, US 20090076290 by Leunis et al., published March 12, 2009 20090068257 A1, US 20080293682 by Mukherjee et al. published on November 27, 2008, US 20070072835 A1 by Pezzuto et al. published on March 29, 2007, Jansen et al published on November 9, 2006 US 20060252733 to ., US 2006025274 A1 to O'Neill et al. published on Nov. 9, 2006 , the entire contents of which are incorporated herein by reference.

항 바이러스 조성물은 임의의 적합한 약제학적으로 허용가능한 제형으로 제제화될 수 있다. 비경구, 귀, 눈, 코, 흡입, 입(buccal), 설하, 장, 국소(topical), 입, 경구 및 주사 가능한 제형이 특히 유용하다. 특정 제형은 고체 또는 액체 제형을 포함한다. 예시적인 적합한 제형은 정제, 캡슐, 알약, 캐플릿, 트로키(troche), 샤시(sache), 용액, 현탁액, 분산액, 바이알, 백, 병, 주사액, i.v.(정맥 내), i.m.(근육 내) 또는 i.p.(복강 내) 투여 가능한 액체 및 제약 과학 분야의 당업자에게 공지된 다른 제형을 포함한다.The antiviral composition may be formulated in any suitable pharmaceutically acceptable formulation. Parenteral, otic, ocular, nasal, inhaled, buccal, sublingual, enteral, topical, buccal, oral and injectable formulations are particularly useful. Certain formulations include solid or liquid formulations. Exemplary suitable dosage forms are tablets, capsules, pills, caplets, troches, sachets, solutions, suspensions, dispersions, vials, bags, bottles, injections, iv (intravenous), im (intramuscular). or ip (intraperitoneal) administrable liquids and other formulations known to those skilled in the art of pharmaceutical science.

항 바이러스 조성물을 함유하는 적합한 제형은 항 바이러스 조성물을 본원에 기재된 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있으며, 약제학적으로 허용되는 부형제는 또한 Pi et al.(Cur. Drug Deliv.(Mar 2016), 13(8), 1358-1366에서의 "용출률 및 생체 이용률 향상을 위한 우르솔산 나노 결정: 상이한 입자 크기의 영향"), Yang et al.(Int. J. Nanomed.(2013), 8(1), 2917-2926에서의 "올레아놀산의 경구 생체 이용률 향상을 위한 자가 미세 유화 약물 전달 시스템: 설계 및 평가"), Li et al.(Biol. Pharm. Bull.(2014), 37(6), 926-937에서의 "실험 설계로 습식 볼 밀링에 의해 제조된 최적화된 수크로스 에스테르 안정화 올레아놀산 나노 현탁액의 개발 및 평가"), Zhang et al.(J. Pharm. Sci.(June 2014), 103(6), 1711-1719)의 "지질 나노스피어를 통한 트리테르펜의 경구 생체 이용률 향상: 제조, 특성화 및 흡수 평가"), Godugu et al.(PLoS One(Mar 2014), 9(3):e89919에서의 "새로운 항암제 베르베린 및 베툴린산의 경구 생체 이용률 및 효과 개선 방법"), Zhao et al.(Drug Deliv.(Sep 2014), 21(6), 467-479에서의 "반 용매 침전에 의한 경구 저혈당 약물에 대한 베툴린 나노 입자의 제조 및 특성"), Yang et al.(Food Chem.(May 2012), 132(1), 319-325에서의 "초임계 반-용매(SAS) 공정을 이용한 우르솔산 나노 입자의 물리 화학적 특성 및 경구 생체 이용률"), Cao et al.(Mol. Pharm.(Aug. 2012), 9(8), 2127-2135에서의 "PEPT1-매개 수송을 위한 올레아놀산의 에틸렌 글리콜-링크된 아미노산 디에스테르 프로드러그: 합성, 장 투과성 및 약동학"), Li et al.(Parm. Res.(Aug 2011), 28(8), 2020-2033)에서의 "올레아놀산의 수크로스 에스테르-안정화 나노 현탁액의 제조, 생물학적 및 약동학적 연구"), Tong et al.(Int. J. Pharm.(Feb 2011), 404(1-2), 148-158에서의 "올레아놀산, BCS 클래스 IV 화합물의 용해 및 경구 생체 이용률 향상을 위해 폴리 비닐피롤리돈 및 소듐캡레이트에 의한 스프레이 동결 건조"), Xi et al.(AAPS PharmSciTech(2009), 10(1), 172-182에서의 "올레아놀산의 자기 나노 유화 약물 전달 시스템의 제형 개발 및 생체 이용률 평가", Chen et al.(J. Pharm. Pharmacol.(Feb 2005), 57(2), 259-264에서의 "올레아놀산 나노 현탁액: 제조, 시험관내 특성화 및 개선된 간 보호 효과")에 기재되어 있고, 이의 전체 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.Suitable formulations containing an antiviral composition can be prepared by mixing the antiviral composition with a pharmaceutically acceptable excipient described herein, which is also described in Pi et al. (Cur. Drug Deliv. (Mar. 2016), 13(8), "Ursolic acid nanocrystals for improving dissolution and bioavailability: the effect of different particle sizes" in 13(8), 1358-1366), Yang et al. (Int. J. Nanomed. (2013), 8) (1), "Self-microemulsifying drug delivery system for improving oral bioavailability of oleanolic acid: design and evaluation" in 2917-2926), Li et al. (Biol. Pharm. Bull. (2014), 37(6)) , "Development and evaluation of optimized sucrose ester stabilized oleanolic acid nanosuspensions prepared by wet ball milling with experimental design" in 926-937), Zhang et al. (J. Pharm. Sci. (June 2014), 103) (6), 1711-1719), “Enhancing the oral bioavailability of triterpenes via lipid nanospheres: preparation, characterization and absorption evaluation”), Godugu et al. (PLoS One (Mar 2014), 9(3):e89919). “Method for improving oral bioavailability and effectiveness of novel anticancer drugs berberine and betulinic acid” in “Oral bioavailability and effectiveness” in Zhao et al. Preparation and Characterization of Betulin Nanoparticles for Hypoglycemic Drugs"), Yang et al. (Food Chem. (May 2012), 132(1), 319-325 using a supercritical anti-solvent (SAS) process) Physicochemical properties and oral bioavailability of ursolic acid nanoparticles), Cao et al. (Mol. Pharm. (Aug. 2012), 9(8), 2127-2135), “Ethylene of oleanolic acid for PEPT1-mediated transport. Glycol-Linked Amino Acid Diester Prodrugs: Synthesis, Intestinal Permeability and Pharmacokinetics"), Li et al .(Parm. Res. (Aug 2011), 28(8), 2020-2033), "Preparation, biological and pharmacokinetic studies of sucrose ester-stabilized nanosuspensions of oleanolic acid"), Tong et al. (Int. J. Pharm. (Feb 2011), 404(1-2), "Spray Freeze Drying with Polyvinylpyrrolidone and Sodium Caprate to Improve Dissolution and Oral Bioavailability of Oleanolic Acid, BCS Class IV Compounds" in 404(1-2), 148-158); Xi et al. (“Formulation Development and Bioavailability Evaluation of Self-Nanoemulsifying Drug Delivery Systems of Oleanolic Acid” in AAPS PharmSciTech (2009), 10(1), 172-182), Chen et al. (J. Pharm. Pharmacol. (Feb 2005), 57(2), 259-264, "Oleanolic Acid Nano Suspension: Preparation, In Vitro Characterization and Improved Hepatoprotective Effect"), the entire disclosure of which is incorporated herein by reference.

적합한 제형은 또한 2012 년 5 월 29 일 발행된 Addingington의 US 8187644 B2, 2008 년 7 월 22 일에 발행된 Addington의 US 7402325 B2, 2013 년 3 월 12 일 발행된 Addington et al.의 US 8394434 B2에 따라 제조될 수 있고, 이의 전체 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다. 실시 예 13-15에 기재된 바와 같이 적합한 제형이 또한 제조될 수 있다.Suitable formulations are also disclosed in US 8187644 B2 to Addingington, issued 29 May 2012, US 7402325 B2 to Addington, 22 July 2008, and US 8394434 B2 to Addington et al. may be prepared according to the present invention, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference. Suitable formulations can also be prepared as described in Examples 13-15.

유효량 또는 치료적으로 관련된 양의 항 바이러스 화합물(강심 배당체, 트리테르펜 또는 이들의 조합)이 구체적으로 고려된다. 용어 "유효량"은 약제학적 유효량이 고려되는 것으로 이해된다. 약제학적 유효량은 요구되거나 원하는 치료 반응에 충분한 활성 성분의 양, 즉, 환자에게 투여될 때 상당한 생물학적 반응을 이끌어 내기에 충분한 양이다. 상당한 생물학적 반응은 활성 물질의 단일 또는 다중 투여량을 투여한 결과 발생할 수 있다. 투여량은 하나 이상의 제형을 포함할 수 있다. 임의의 환자에 대한 특정 투여량 수준은 치료중인 징후, 징후의 중증도, 환자 건강, 연령, 성별, 체중, 식이, 약리학적 반응, 사용된 특정 제형, 그리고 다른 그러한 요인들을 포함하는 다양한 요인에 따라 달라짐을 이해할 것이다.An effective or therapeutically relevant amount of an antiviral compound (cardiac glycoside, triterpene, or a combination thereof) is specifically contemplated. It is understood that the term “effective amount” contemplates a pharmaceutically effective amount. A pharmaceutically effective amount is an amount of active ingredient sufficient for the desired or desired therapeutic response, ie, an amount sufficient to elicit a significant biological response when administered to a patient. A significant biological response may occur as a result of administration of single or multiple doses of the active agent. A dosage may include one or more formulations. The specific dosage level for any patient will depend on a variety of factors including the indication being treated, the severity of the indication, the patient's health, age, sex, weight, diet, pharmacological response, the particular formulation used, and other such factors. will understand

경구 투여를 위한 바람직한 투여량은 단일 투여량으로 1 회 내지 10 회의 제형이 투여될 수 있지만, 최대 5 개의 제형이다. 예시적인 제형은 투여 당 총 0.1 내지 500 mg(1 내지 10 투여 수준)에 대해, 제형 당 0.01 내지 100 mg 또는 0.01 내지 100 마이크로그램의 항 바이러스 조성물을 함유할 수 있다. 투여량은 대상체에서 특정 치료 반응 또는 임상적 이점을 달성하도록 미리 결정 및/또는 조정될 수 있는 투여 요법에 따라 투여될 것이다.A preferred dosage for oral administration is a maximum of 5 formulations, although 1 to 10 formulations may be administered in a single dose. Exemplary formulations may contain 0.01 to 100 mg or 0.01 to 100 micrograms of antiviral composition per formulation, for a total of 0.1 to 500 mg per dose (1 to 10 dose levels). Dosages will be administered according to a dosing regimen that may be predetermined and/or adjusted to achieve a particular therapeutic response or clinical benefit in the subject.

강심 배당체는 대상체에게 20 내지 100 마이크로그램, 12 마이크로그램 내지 300 마이크로그램, 또는 12 마이크로그램 내지 120 마이크로그램의 올레안드리인의 초기 투여량을 제공하기에 충분한 양으로 제형내에 존재할 수 있다. 제형은 올레안드린의 20 내지 100 마이크로그램, 0.01 마이크로그램 내지 100 mg 또는 0.01 마이크로그램 내지 100 마이크로그램의 올레안드린, 올레안드린 추출물 또는 올레안드린을 함유하는 네리움 올리앤더 추출물을 포함할 수 있다.The cardiac glycoside may be present in the formulation in an amount sufficient to provide the subject with an initial dose of oleandrine from 20 to 100 micrograms, from 12 micrograms to 300 micrograms, or from 12 micrograms to 120 micrograms. The formulation may comprise 20 to 100 micrograms, 0.01 micrograms to 100 mg or 0.01 micrograms to 100 micrograms of oleandrine, oleandrine extract or Nerium oleander extract containing oleandrine. can

항 바이러스제는 경구 제형으로 포함될 수 있다. 제형의 일부 실시 예는 장용(enteric) 코팅되지 않고, 0.5 내지 1 시간 이하의 기간 내에 항 바이러스 조성물의 복용량을(charge) 방출한다. 제형의 일부 실시 예는 장용 코팅되고, 예를 들어 공장(jejunum), 회장(ileum), 소장 및/또는 대장(콜론)으로부터와 같이, 위의 하류로 항 바이러스 조성물의 복용량을 방출한다. 장용 코팅된 제형은 경구 투여 후 1-10 시간 내에 항 바이러스 조성물을 전신 순환계로 방출할 것이다.The antiviral agent may be included in an oral formulation. Some embodiments of the formulation are not enteric coated and release a charge of the antiviral composition within a period of 0.5 to 1 hour or less. Some embodiments of the dosage form are enteric coated and release a dose of the antiviral composition downstream of the stomach, eg, from the jejunum, ileum, small intestine and/or large intestine (colon). The enteric coated formulation will release the antiviral composition into the systemic circulation within 1-10 hours after oral administration.

항 바이러스 조성물은 급속 방출, 즉시 방출, 제어 방출, 지속 방출, 장기적 방출, 연장 방출, 파열 방출, 연속 방출, 슬로우 방출 또는 펄스 방출 제형, 또는 이러한 방출 유형들 중 2개 이상을 나타내는 제형으로 포함될 수 있다. 제형으로부터의 항 바이러스 조성물의 방출 프로파일은 0 차, 유사-0 차, 1 차, 유사-1 차 또는 S자형(sigmoidal) 방출 프로파일일 수 있다. 항 바이러스 조성물이 투여되는 대상체에서 트리테르펜에 대한 혈장 농도 프로파일은 하나 이상의 최대 값을 나타낼 수 있다.The antiviral composition may be included in a rapid release, immediate release, controlled release, sustained release, prolonged release, extended release, burst release, continuous release, slow release or pulsed release dosage form, or a dosage form exhibiting two or more of these release types. have. The release profile of the antiviral composition from the formulation may be a zero order, pseudo-0 order, first order, pseudo-first order or sigmoidal release profile. The plasma concentration profile for triterpene in a subject administered the antiviral composition may exhibit one or more maxima.

인간 임상 데이터에 기초하여, 올레안드린의 투여량의 50 % 내지 75 %가 경구 생체 이용 가능할 것으로 예상되어, 제형 당 올레안드린의 10 내지 20 마이크로그램, 20 내지 40 마이크로그램, 30 내지 50 마이크로그램, 40 내지 60 마이크로그램, 50 내지 75 마이크로그램, 75 내지 100 마이크로그램을 제공할 것이다. 성인 인간에서 5 리터의 평균 혈액량을 감안할 때, 예상되는 올레안드린 혈장 농도는 0.05 내지 2 ng/ml, 0.005 내지 10 ng/mL, 0.005 내지 8 ng/mL, 0.01 내지 7 ng/mL, 0.02 내지 7 ng/mL, 0.03 내지 6 ng/mL, 0.04 내지 5 ng/mL, 또는 0.05 내지 2.5 ng/mL의 범위일 것이다. SCF 추출물에 존재하는 권장 일일 투여량의 올레안드린은 일반적으로 1 일 2 회, kg 체중 당 약 0.2 내지 약 4.5 마이크로그램이다. 올레안드린의 투여량은 약 0.2 내지 약 1 마이크로그램/kg 체중/일, 약 0.5 내지 약 1.0 마이크로그램/kg 체중/일, 약 0.75 내지 약 1.5 마이크로그램/kg 체중/일, 약 1.5 내지 약 2.52 마이크로그램/kg 체중/일, 약 2.5 내지 약 3.0 마이크로그램/kg 체중/일, 약 3.0 내지 4.0 마이크로그램/kg 체중/일 또는 약 3.5 내지 4.5 마이크로그램 올레안드린/kg 체중/일일 수 있다. 올레안드린의 최대 허용 투여량은 약 3.5 마이크로그램/kg 체중/일 내지 약 4.0 마이크로그램/kg 체중/일일 수 있다. 최소 유효 투여량은 약 0.5 마이크로그램/일, 약 1 마이크로그램/일, 약 1.5 마이크로그램/일, 약 1.8 마이크로그램/일, 약 2 마이크로그램/일, 또는 약 5 마이크로그램/일일 수 있다.Based on human clinical data, it is expected that 50% to 75% of the dose of oleandrine will be orally bioavailable, with 10-20 micrograms, 20-40 micrograms, 30-50 micrograms of oleandrine per dosage form. grams, 40 to 60 micrograms, 50 to 75 micrograms, 75 to 100 micrograms. Given an average blood volume of 5 liters in an adult human, expected oleandrine plasma concentrations are 0.05 to 2 ng/ml, 0.005 to 10 ng/mL, 0.005 to 8 ng/mL, 0.01 to 7 ng/mL, 0.02 to 7 ng/mL, 0.03 to 6 ng/mL, 0.04 to 5 ng/mL, or 0.05 to 2.5 ng/mL. The recommended daily dosage of oleandrine present in SCF extracts is generally from about 0.2 to about 4.5 micrograms per kg body weight, twice daily. The dosage of oleandrine is from about 0.2 to about 1 micrograms/kg body weight/day, from about 0.5 to about 1.0 micrograms/kg body weight/day, from about 0.75 to about 1.5 micrograms/kg body weight/day, from about 1.5 to about 2.52 micrograms/kg body weight/day, about 2.5 to about 3.0 micrograms/kg body weight/day, about 3.0 to 4.0 micrograms/kg body weight/day, or about 3.5 to 4.5 micrograms oleandrine/kg body weight/day . The maximum tolerated dose of oleandrine may be from about 3.5 micrograms/kg body weight/day to about 4.0 micrograms/kg body weight/day. The minimum effective dosage may be about 0.5 micrograms/day, about 1 micrograms/day, about 1.5 micrograms/day, about 1.8 micrograms/day, about 2 micrograms/day, or about 5 micrograms/day.

항 바이러스 조성물은 존재하는 트리테르펜의 조합 및 그것들이 존재하는 몰비로 인해 저투여량 내지 고투여량으로 투여될 수 있다. 인간에 대한 치료 유효 투여량은 체중 Kg 당 약 100-1000 mg 또는 100-1000 마이크로그램의 항 바이러스 조성물이다. 이러한 투여량은 24 시간 동안 최대 10 회까지 투여할 수 있다. 다른 적절한 투여 범위가 아래에 지정되어 있다.Antiviral compositions can be administered in low to high doses due to the combination of triterpenes present and the molar ratios in which they are present. A therapeutically effective dosage for humans is about 100-1000 mg or 100-1000 micrograms of antiviral composition per kg body weight. These doses may be administered up to 10 times in 24 hours. Other suitable dosage ranges are specified below.

Figure pat00003
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본원의 화합물은 본 발명의 조성물 또는 제형에서 하나 이상의 기능을 가질 수 있음에 유의해야 한다. 예를 들어, 화합물은 계면 활성제 및 물 혼화성 용매, 또는 계면 활성제와 물 불혼화성 용매 둘 모두로서 작용할 수 있다.It should be noted that a compound herein may have more than one function in a composition or formulation of the present invention. For example, the compound may act as both a surfactant and a water miscible solvent, or a surfactant and a water immiscible solvent.

액체 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 액체 담체를 포함할 수 있다. 액체 담체는 수성, 비-수성, 극성, 비-극성 및/또는 유기 담체일 수 있다. 액체 담체는 예를 들어 비-제한적으로 물 혼화성 용매, 물 불혼화성 용매, 물, 완충제 및 이들의 혼합물을 포함한다.Liquid compositions may include one or more pharmaceutically acceptable liquid carriers. Liquid carriers may be aqueous, non-aqueous, polar, non-polar and/or organic carriers. Liquid carriers include, for example, but are not limited to, water miscible solvents, water immiscible solvents, water, buffers, and mixtures thereof.

본원에서 사용된 용어 "수용성 용매"또는 "물 혼화성 용매"는 상호 교환적으로 사용되며, 물과 2 상 혼합물을 형성하지 않거나, 또는 물에 충분히 용해되어 액상의 분리없이 5 % 이상의 용매를 함유하는 수성 용매 혼합물을 제공하는 유기 액체를 지칭한다. 용매는 인간 또는 동물에게 투여하기에 적합하다. 예시적인 수용성 용매는 비-제한적인 예로서, PEG(폴리(에틸렌 글리콜)), PEG 400(폴리(에틸렌 글리콜, 이는 약 400의 대략적인 분자량을 가짐), 에탄올, 아세톤, 알칸올, 알코올, 에테르, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 트리아세틴, 폴리(프로필렌 글리콜), PVP(폴리(비닐 피롤리돈)), 디메틸술폭시드, N,N-디메틸포름아미드, 포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 피리딘, 프로판올, N-메틸아세트아미드, 부탄올, 용해액( 2-피롤리돈), 파마솔브(N-메틸-2-피롤리돈)을 포함한다.As used herein, the terms "aqueous solvent" or "water miscible solvent" are used interchangeably and contain at least 5% solvent that does not form a two-phase mixture with water or is sufficiently soluble in water without separation of the liquid phase. refers to an organic liquid that provides an aqueous solvent mixture that The solvent is suitable for administration to humans or animals. Exemplary water-soluble solvents include, but are not limited to, PEG (poly(ethylene glycol)), PEG 400 (poly(ethylene glycol, which has an approximate molecular weight of about 400), ethanol, acetone, alkanols, alcohols, ethers , propylene glycol, glycerin, triacetin, poly(propylene glycol), PVP (poly(vinyl pyrrolidone)), dimethylsulfoxide, N,N-dimethylformamide, formamide, N,N-dimethylacetamide, pyridine , propanol, N-methylacetamide, butanol, solution (2-pyrrolidone), and Pharmasolve (N-methyl-2-pyrrolidone).

본원에서 사용된 용어 "물 불용성 용매"또는 "물 불혼화성 용매"는 상호 교환적으로 사용되며, 물과 2 상 혼합물을 형성하거나, 또는 물내의 용매의 농도가 5 %를 초과할 때 상 분리를 제공하는 유기 액체를 지칭한다. 용매는 인간 또는 동물에게 투여하기에 적합하다. 예시적인 물 불용성 용매는 비-제한적인 예로서, 중간 사슬/장쇄 트리글리세리드, 오일, 피마자유, 옥수수 유, 비타민 E, 비타민 E 유도체, 올레산, 지방산, 올리브 오일, 소프티잔(softisan) 645(디글리세릴 카프릴레이트/카프레이트/스테아레이트/히드록시 스테아레이트 아디페이트), 미글리올, 캡텍스(Captex 350: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/로레이트 트리글리세리드; Captex 355: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 트리글리세리드; Captex 355 EP/NF:글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간 사슬 트리글리세리드)를 포함한다. As used herein, the terms "water insoluble solvent" or "water immiscible solvent" are used interchangeably and form a two-phase mixture with water, or cause phase separation when the concentration of solvent in water exceeds 5%. It refers to an organic liquid that provides. The solvent is suitable for administration to humans or animals. Exemplary water insoluble solvents include, but are not limited to, medium chain/long chain triglycerides, oil, castor oil, corn oil, vitamin E, vitamin E derivatives, oleic acid, fatty acids, olive oil, softisan 645 (diglycerides) Lyl Caprylate/Caprate/Stearate/Hydroxy Stearate Adipate), Miglyol, Captex (Captex 350: Glyceryl Tricaprylate/Caprate/Lorate Triglyceride; Captex 355: Glyceryl Trika) Prylate/Caprate Triglycerides; Captex 355 EP/NF: Glyceryl Tricaprylate/Caprate Medium Chain Triglycerides).

적합한 용매는 "산업용 Q3C 불순물에 대한 인간 사용(ICH) 약물 등록을 위한 기술 요구 사항의 조화에 관한 국제 회의 지침: 잔류 용매"(1997)에 열거되어 있으며, 이는 잔류 용매의 어느 정도의 양이 의약품에서 안전한 것으로 간주되는지를 권고한다. 예시적인 용매는 클래스 2 또는 클래스 3 용매로 열거된다. 클래스 3 용매는 예를 들어 아세트산, 아세톤, 아니솔, 1-부탄올, 2-부탄올, 부틸 아세테이트, tert-부틸메틸 에테르, 쿠멘, 에탄올, 에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 에틸 포르 메이트, 포름산, 헵탄, 이소부틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 메틸 아세테이트, 메틸-1-부탄올, 메틸에틸 케톤, 메틸이소부틸 케톤, 2-메틸-1-프로판올, 펜탄, 1-펜탄 올, 1-프로판올, 2-프로판올 또는 프로필 아세테이트를 포함한다.Suitable solvents are listed in "Guidelines of the International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Drugs for Human Use (ICH) for Industrial Q3C Impurities: Residual Solvents" (1997), which states that what amounts of residual solvents is considered safe in Exemplary solvents are listed as class 2 or class 3 solvents. Class 3 solvents include, for example, acetic acid, acetone, anisole, 1-butanol, 2-butanol, butyl acetate, tert-butylmethyl ether, cumene, ethanol, ethyl ether, ethyl acetate, ethyl formate, formic acid, heptane, iso Butyl acetate, isopropyl acetate, methyl acetate, methyl-1-butanol, methylethyl ketone, methylisobutyl ketone, 2-methyl-1-propanol, pentane, 1-pentanol, 1-propanol, 2-propanol or propyl acetate includes

본 발명에서 물 불혼화성 용매로서 사용될 수 있는 다른 물질은 다음의 물질들, 즉 캡텍스 100: 프로필렌 글리콜 디카프레이트; 캡텍스 200: 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트; 캡텍스 200 P: 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 캡텍스 300: 글리세릴 트리 카프릴레이트/카프레이트; 캡텍스 300 EP/NF: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간 사슬 트리글리세리드; 캡텍스 350: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/로레이터(Laurate); 캡텍스 355: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트; 캡텍스 355 EP/NF: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간 사슬 트리글리세리드; 캡텍스 500: 트리아세틴; 캡텍스 500 P: 트리아세틴(Pharmaceutical Grade); 캡텍스 800: 프로필렌 글리콜 디(2-에티텍사노에이트); 캡텍스 810 D: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/리놀레에이트; 캡텍스 1000: 글리세릴 트리카프레이트; 캡텍스 CA: 중간 사슬 트리글리세리드; 캡텍스 MCT-170: 중간 사슬 트리글리세리드; 캡물(Capmul) GMO: 글리세릴 모노올레에이트; 캡물 GMO-50 EP/NF: 글리세릴 모노올레 에이트; 캡물 MCM: 중간 사슬 모노- 및 디글리세리드; 캡물 MCM C8: 글리세릴 모노 카프릴레이트; 캡물 MCM C10: 글리세릴 모노카프레이트; 캡물 PG-8: 프로필렌 글리콜 모노카프릴레이트; 캡물 PG-12: 프로필렌 글리콜 모노라우레이트; 카프롤(Caprol) 10G10O: 데카글리세롤 데카올레에이트; 카프롤 3GO: 트리글리세롤 모노 올레에이트; 카프롤 ET: 혼합 지방산의 폴리글리세롤 에스테르; 카프롤 MPGO: 헥사 글리세롤 디올레에이트; 카프롤 PGE 860: 데카글리세롤 모노-, 디올레에이트를 포함한다. Other materials that can be used as the water-immiscible solvent in the present invention include the following materials: Captex 100: propylene glycol dicaprate; Captex 200: propylene glycol dicaprylate/dicaprate; Captex 200 P: propylene glycol dicaprylate/dicaprate; propylene glycol dicaprylocaprate; Captex 300: glyceryl tricaprylate/caprate; Captex 300 EP/NF: glyceryl tricaprylate/caprate medium chain triglycerides; Captex 350: Glyceryl Tricaprylate/Caprate/Laurate; Captex 355: glyceryl tricaprylate/caprate; Captex 355 EP/NF: glyceryl tricaprylate/caprate medium chain triglycerides; Captex 500: triacetin; Captex 500 P: Triacetin (Pharmaceutical Grade); Captex 800: propylene glycol di(2-ethitexanoate); Captex 810 D: glyceryl tricaprylate/caprate/linoleate; Captex 1000: glyceryl tricaprate; Captex CA: medium chain triglycerides; Captex MCT-170: medium chain triglycerides; Capmul GMO: glyceryl monooleate; Capmul GMO-50 EP/NF: glyceryl monooleate; Capmul MCM: medium chain mono- and diglycerides; Capmul MCM C8: glyceryl monocaprylate; Capmul MCM C10: glyceryl monocaprate; Capmul PG-8: propylene glycol monocaprylate; Capmul PG-12: propylene glycol monolaurate; Caprol 10G10O: decaglycerol decaoleate; Caprol 3GO: triglycerol mono oleate; Caprol ET: polyglycerol esters of mixed fatty acids; Caprol MPGO: hexaglycerol dioleate; Caprol PGE 860: contains decaglycerol mono-, dioleate.

본원에 사용된 "계면 활성제"는 극성 또는 하전 친수성 부분뿐만 아니라 비극성 소수성(친유성) 부분을 포함하는 화합물을 지칭한다; 즉, 계면 활성제는 양쪽 친매성이다. 계면 활성제라는 용어는 하나 이상의 화합물의 혼합물을 지칭할 수 있다. 계면 활성제는 가용화제, 유화제 또는 분산제일 수 있다. 계면 활성제는 친수성 또는 소수성일 수 있다.As used herein, "surfactant" refers to a compound comprising a polar or charged hydrophilic moiety as well as a non-polar hydrophobic (lipophilic) moiety; That is, surfactants are amphiphilic. The term surfactant may refer to a mixture of one or more compounds. Surfactants may be solubilizers, emulsifiers or dispersants. Surfactants may be hydrophilic or hydrophobic.

친수성 계면 활성제는 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 친수성 계면 활성제일 수 있다. 이러한 계면 활성제는 음이온성, 양이온성, 양쪽 이온성 또는 비-이온성일 수 있지만, 비-이온성 친수성 계면 활성제가 현재 바람직하다. 상기 논의된 바와 같이, 이들 비-이온성 친수성 계면 활성제는 일반적으로 약 10보다 큰 HLB 값을 가질 것이다. 친수성 계면 활성제의 혼합물 또한 본 발명의 범위 내에 있다.The hydrophilic surfactant may be any hydrophilic surfactant suitable for use in pharmaceutical compositions. Such surfactants may be anionic, cationic, zwitterionic or non-ionic, although non-ionic hydrophilic surfactants are presently preferred. As discussed above, these non-ionic hydrophilic surfactants will generally have HLB values greater than about 10. Mixtures of hydrophilic surfactants are also within the scope of the present invention.

유사하게, 소수성 계면 활성제는 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 소수성 계면 활성제일 수 있다. 일반적으로, 적합한 소수성 계면 활성제는 약 10 미만의 HLB 값을 가질 것이다. 소수성 계면 활성제의 혼합물은 또한 본 발명의 범위 내에 있다.Similarly, the hydrophobic surfactant may be any hydrophobic surfactant suitable for use in pharmaceutical compositions. Generally, suitable hydrophobic surfactants will have an HLB value of less than about 10. Mixtures of hydrophobic surfactants are also within the scope of the present invention.

추가의 적합한 가용화제의 예는 알코올 및 폴리올, 예컨대 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 벤질 알코올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄디올 및 이의 이성질체, 글리세롤, 펜타에리트리톨, 소르비톨, 만니톨, 트랜스큐톨, 디메틸 이소 소르비드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리비닐알코올, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 다른 셀룰로오스 유도체, 시클로덱스트린 및 시클로덱스트린 유도체; 평균 분자량이 약 200 내지 약 6000인 폴리에틸렌 글리콜의 에테르, 예컨대 테트라하이드로푸르푸릴 알코올 PEG 에테르(글리코푸롤, 이는 BASF로부터 상표명 Tetraglycol로 시판됨) 또는 메톡시 PEG(Union Carbide); 아미드, 예컨대 2-피롤리돈, 2-피페리돈, 카프로락탐, N-알킬피롤리돈, N-하이드록시알킬피롤리돈, N-알킬피페리돈, N-알킬카프로락탐, 디메틸아세트아미드 및 폴리비닐피롤리돈; 에스테르, 예컨대 에틸 프로피오네이트, 트리부틸시트레이트, 아세틸 트리에틸시트 레이트, 아세틸 트리부틸 시트레이트, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 에틸 부티레이트, 트리아세틴, 프로필렌 글리콜 모노아세테이트, 프로필렌 글리콜 디아세테이트, 카프로락톤 및 이의 이성질체, 발레로락톤 및 이의 이성질체, 부티로락톤 및 이의 이성질체; 및 당 업계에 공지된 다른 가용화제, 예컨대 디메틸 아세트아미드, 디메틸 이소소르비드(Arlasolve DMI(ICI)), N-메틸 피롤리돈(Pharmasolve(ISP)), 모노옥타노인, 디에틸렌 글리콜 노노에틸 에테르(이는 상품명 Transcutol로 Gattefosse로부터 입구 가능함), 및 물을 포함한다. 가용화제의 혼합물 또한 본 발명의 범위 내에 있다.Examples of further suitable solubilizers include alcohols and polyols such as ethanol, isopropanol, butanol, benzyl alcohol, ethylene glycol, propylene glycol, butanediol and isomers thereof, glycerol, pentaerythritol, sorbitol, mannitol, transcutol, dimethyl isosorbide , polyethylene glycol, polypropylene glycol, polyvinyl alcohol, hydroxypropyl methylcellulose and other cellulose derivatives, cyclodextrin and cyclodextrin derivatives; ethers of polyethylene glycols having an average molecular weight of from about 200 to about 6000, such as tetrahydrofurfuryl alcohol PEG ether (glycofurol, sold under the trade name Tetraglycol from BASF) or methoxy PEG (Union Carbide); Amides such as 2-pyrrolidone, 2-piperidone, caprolactam, N-alkylpyrrolidone, N-hydroxyalkylpyrrolidone, N-alkylpiperidone, N-alkylcaprolactam, dimethylacetamide and poly vinylpyrrolidone; esters such as ethyl propionate, tributylcitrate, acetyl triethylcitrate, acetyl tributyl citrate, triethylcitrate, ethyl oleate, ethyl caprylate, ethyl butyrate, triacetin, propylene glycol monoacetate, propylene glycol diacetate, caprolactone and isomers thereof, valerolactone and isomers thereof, butyrolactone and isomers thereof; and other solubilizing agents known in the art, such as dimethyl acetamide, dimethyl isosorbide (Arlasolve DMI (ICI)), N-methyl pyrrolidone (Pharmasolve (ISP)), monooctanoin, diethylene glycol nonoethyl ether (which is available from Gattefosse under the trade name Transcutol), and water. Mixtures of solubilizers are also within the scope of the present invention.

지시된 것을 제외하고는, 본원에 언급된 화합물은 표준 상업적 공급원으로부터 쉽게 입수할 수 있다.Except where indicated, the compounds referred to herein are readily available from standard commercial sources.

반드시 필요하지는 않지만, 조성물 또는 제형은 하나 이상의 킬레이트화제, 하나 이상의 보존제, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 흡착제, 하나 이상의 산성화제, 하나 이상의 알칼리화제, 하나 이상의 소포제, 하나 이상의 완충제, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 전해질, 하나 이상의 염, 하나 이상의 안정화제, 하나 이상의 장성(tonicity) 개질제, 하나 이상의 희석제 또는 이들의 조합을 추가로 포함할 수 있다.Although not required, the composition or formulation may comprise one or more chelating agents, one or more preservatives, one or more antioxidants, one or more adsorbents, one or more acidifying agents, one or more alkalizing agents, one or more antifoaming agents, one or more buffering agents, one or more colorants, one or more It may further comprise one or more electrolytes, one or more salts, one or more stabilizers, one or more tonicity modifiers, one or more diluents, or combinations thereof.

본 발명의 조성물은 또한 고정 유, 땅콩 유, 참기름, 면실유, 옥수수 유 및 올리브유와 같은 오일; 올레산, 스테아르산 및 이소스테아르 산과 같은 지방산; 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 지방산 글리세리드 및 아세틸화된 지방산 글리세리드와 같은 지방산 에스테르를 포함한다. 조성물은 또한 에탄올, 이소프로판올, 헥사데실 알코올, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜과 같은 알코올; 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-메탄올과 같은 글리세롤 케탈; 폴리(에틸렌 글리콜) 450과 같은 에테르; 미네랄 오일 및 바셀린과 같은 석유 탄화수소; 물; 약제학적으로 적합한 계면 활성제, 현탁제 또는 유화제; 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.The composition of the present invention may also contain oils such as fixed oil, peanut oil, sesame oil, cottonseed oil, corn oil and olive oil; fatty acids such as oleic acid, stearic acid and isostearic acid; fatty acid esters such as ethyl oleate, isopropyl myristate, fatty acid glycerides and acetylated fatty acid glycerides. The composition may also contain alcohols such as ethanol, isopropanol, hexadecyl alcohol, glycerol and propylene glycol; glycerol ketals such as 2,2-dimethyl-1,3-dioxolane-4-methanol; ethers such as poly(ethylene glycol) 450; petroleum hydrocarbons such as mineral oil and petrolatum; water; pharmaceutically suitable surfactants, suspending or emulsifying agents; or mixtures thereof.

제약 제형 분야에서 사용되는 화합물은 일반적으로 다양한 기능 또는 목적을 제공한다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 본 명세서에서 명명된 화합물이 한 번만 언급되거나 본 명세서에서 하나 이상의 용어를 정의하는 데 사용되는 경우, 그 목적 또는 기능은 단지 명명된 목적 또는 기능(들)으로 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다.It should be understood that compounds used in the field of pharmaceutical formulation generally serve a variety of functions or purposes. Thus, when a named compound is mentioned only once or used to define one or more terms herein, that purpose or function should not be construed as limited to the only named purpose or function(s).

제형의 하나 이상의 성분은 그의 유리 염기, 유리 산 또는 약제학적으로 또는 분석학적으로 허용되는 염 형태로 존재할 수 있다. 본원에 사용된 "약제학적으로 또는 분석학적으로 허용되는 허용되는 염"은 이온 결합된 쌍을 형성하기 위해 필요에 따라 이를 산과 반응시켜 개질된 화합물을 지칭한다. 허용되는 염의 예는 예를 들어 비-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 종래의 비-독성 염을 포함한다. 적합한 비-독성 염은 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 설폰산, 설 팜산, 인산, 질산 및 기타 당업자에게 공지된 것들을 포함한다. 염은 유기산, 예컨대 아미노산, 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 히드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 에탄 디술폰산, 옥살산, 이세티온산 및 기타 당업자에게 공지된 것들로부터 제조된다. 한편, 약리학적 활성 성분이 산 작용기를 갖는 경우, 약제학적으로 허용되는 염기가 첨가되어 약제학적으로 허용되는 염을 형성한다. 다른 적합한 염의 목록은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th(ed., Mack Publishing Company, PA, Easton, 1985, p. 1418)에서 찾을 수 있는데, 그 관련 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다. One or more components of the formulation may be present in the form of their free base, free acid, or pharmaceutically or analytically acceptable salt thereof. "Pharmaceutically or analytically acceptable salt," as used herein, refers to a compound that has been modified by reacting it with an acid as necessary to form an ionically bound pair. Examples of acceptable salts include conventional non-toxic salts formed, for example, from non-toxic inorganic or organic acids. Suitable non-toxic salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, sulfonic acid, sulfamic acid, phosphoric acid, nitric acid and others known to those skilled in the art. Salts include organic acids such as amino acids, acetic acid, propionic acid, succinic acid, glycolic acid, stearic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, ascorbic acid, pamoic acid, maleic acid, hydroxymaleic acid, phenylacetic acid, glutamic acid, benzoic acid, salicylic acid, prepared from sulfanilic acid, 2-acetoxybenzoic acid, fumaric acid, toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid, ethane disulfonic acid, oxalic acid, isethionic acid and others known to those skilled in the art. On the other hand, when the pharmacologically active ingredient has an acid functional group, a pharmaceutically acceptable base is added to form a pharmaceutically acceptable salt. A list of other suitable salts can be found in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th (ed., Mack Publishing Company, PA, Easton, 1985, p. 1418), the disclosure of which is incorporated herein by reference.

"약제학적으로 허용되는"이라는 문구는 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제나 합병증없이 합리적인 이익/위험율에 비례하여, 인간 및 동물의 조직과의 접촉에 사용하기에 적합한 화합물, 재료, 조성물 및/또는 제형을 지칭하기 위해 사용된다. The phrase "pharmaceutically acceptable" is used for contact with tissues of humans and animals, within the scope of sound medical judgment, and proportionate to a reasonable benefit/risk rate without undue toxicity, irritation, allergic reaction, or other problems or complications. Used to refer to compounds, materials, compositions and/or formulations suitable for the following.

제형은 제약 산업에 공지된 임의의 종래의 수단에 의해 제조될 수 있다. 액체 제형은 용기에 하나 이상의 액체 담체 및 항 바이러스 조성물을 제공함으로써 제조될 수 있다. 하나 이상의 다른 부형제가 액체 제형에 포함될 수 있다. 고체 제형은 하나 이상의 고체 담체 및 항 바이러스 조성물을 제공함으로써 제조될 수 있다. 하나 이상의 다른 부형제가 고형 제형에 포함될 수 있다.The formulations may be prepared by any conventional means known in the pharmaceutical industry. Liquid formulations can be prepared by providing in a container one or more liquid carriers and an antiviral composition. One or more other excipients may be included in the liquid formulation. Solid dosage forms can be prepared by providing one or more solid carriers and an antiviral composition. One or more other excipients may be included in the solid dosage form.

제형은 종래의 포장 장비 및 재료를 사용하여 포장될 수 있다. 제형은 팩, 병, 비아, 백, 주사기, 엔벨로프, 패킷, 블리스터 팩, 박스, 앰플 또는 다른 용기에 포함될 수 있다.The formulation may be packaged using conventional packaging equipment and materials. Formulations may be contained in packs, bottles, vias, bags, syringes, envelopes, packets, blister packs, boxes, ampoules or other containers.

본 발명의 조성물은 임의의 제형에 포함될 수 있다. 특정 제형은 고체 또는 액체 제형을 포함한다. 예시적인 적합한 제형은 정제, 캡슐, 알약, 캐플릿, 트로 키, 샤시 및 제약 과학 분야의 당업자에게 공지된 다른 제형을 포함한다.The composition of the present invention may be included in any formulation. Certain formulations include solid or liquid formulations. Exemplary suitable dosage forms include tablets, capsules, pills, caplets, troches, chassis and other dosage forms known to those skilled in the art of pharmaceutical science.

상기 설명 및 하기 실시 예에 비추어 볼 때, 당업자는 과도한 실험없이 청구된 바와 같은 본 발명을 실시할 수 있을 것이다. 전술한 내용은 본 발명의 실시 예의 실시를 위한 특정 절차를 상세히 설명하는 하기 실시 예를 참조하여 보다 잘 이해될 것이다. 이들 예에 대한 모든 언급은 예시의 목적을 위한 것이다. 하기 실시 예는 배타적인 것으로 간주되어서는 안되며, 본 발명에 의해 고려되는 많은 실시 예들 중 일부만을 예시할 뿐이다.In light of the above description and the following examples, those skilled in the art will be able to practice the invention as claimed without undue experimentation. The foregoing will be better understood with reference to the following examples which describe in detail specific procedures for practicing the embodiments of the present invention. All references to these examples are for the purpose of illustration. The following examples are not to be considered exhaustive, but merely exemplify some of the many examples contemplated by the present invention.

실시 예 1Example 1

분말 올리앤더(oleander, 협죽도) 잎의 초임계 유체 추출Supercritical fluid extraction of powdered oleander leaves

방법 A. 이산화탄소와 함께Method A. With carbon dioxide

*분말 올리앤더 잎은 올리앤더 잎 재료를 수확, 세척 및 건조시킨 후, 올리앤더 잎 재료를 예컨대 미국 특허 제 5,236,132 호, 제 5,598,979 호, 제 6,517,015 호 및 제 6,715,705 호에 기술된 것과 같은 분쇄 및 탈수 장치를 통해 통과시킴으로써 준비하였다. 사용된 출발 물질의 중량은 3.94 kg이었다.*Powdered oleander leaves are prepared by harvesting, washing, and drying the oliander leaf material, then milling and dewatering the oliander leaf material as described in, for example, U.S. Patent Nos. 5,236,132, 5,598,979, 6,517,015 and 6,715,705. It was prepared by passing it through the device. The weight of the starting material used was 3.94 kg.

출발 물질을 추출기 장치에서 300 bar(30 MPa, 4351 psi)의 압력 및 50 ℃(122ºF)의 온도에서 순수한 CO2와 혼합하였다. 총 197 kg의 CO2를 사용하여 용매 대 원료의 비가 50:1이 되도록 하였다. 이어서, CO2와 원료의 혼합물을 분리기 장치에 통과시켜, 혼합물의 압력과 온도를 변경하고, 추출물을 이산화탄소로부터 분리하였다.The starting material was mixed with pure CO 2 in an extractor apparatus at a pressure of 300 bar (30 MPa, 4351 psi) and a temperature of 50 °C (122ºF). A total of 197 kg of CO 2 was used so that the ratio of solvent to raw material was 50:1. Then, the mixture of CO 2 and the raw material was passed through a separator device to change the pressure and temperature of the mixture, and the extract was separated from carbon dioxide.

추출물(65 g)은 향이 좋은 갈색의 끈적 끈적한 점성 물질로서 수득되었다. 엽록소 및 기타 잔류 발색 화합물로 인해 컬러가 야기되었을 수 있다. 정확한 수율 측정을 위해, 튜브 및 분리기를 아세톤으로 헹구고, 아세톤을 증발시켜 추출물의 추가 9 g을 수득하였다. 총 추출량은 74g이었다. 출발 물질의 중량을 기준으로, 추출물의 수율은 1.88 %였다. 추출물 중의 올레안드린의 함량은 고압 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법을 사용하여, 560.1 mg, 또는 0.76 %의 수율로 계산되었다.The extract (65 g) was obtained as a fragrant brown sticky viscous substance. Chlorophyll and other residual chromogenic compounds may have caused the color. For accurate yield determination, the tube and separator were rinsed with acetone and the acetone evaporated to give an additional 9 g of extract. The total extraction amount was 74 g. Based on the weight of the starting material, the yield of the extract was 1.88%. The content of oleandrin in the extract was calculated using high pressure liquid chromatography and mass spectrometry to yield 560.1 mg, or 0.76%.

방법 B. 이산화탄소와 에탄올의 혼합물과 함께Method B. With a mixture of carbon dioxide and ethanol

분말 올리앤더 잎은 올리앤더 잎 재료를 수확, 세척 및 건조시킨 후, 올리앤더 잎 재료를 예컨대 미국 특허 제 5,236,132 호, 제 5,598,979 호, 제 6,517,015 호 및 제 6,715,705 호에 기술된 것과 같은 분쇄 및 탈수 장치를 통해 통과시킴으로써 준비하였다. 사용된 출발 물질의 중량은 3.85 kg이었다.Powdered oleander leaves are prepared by harvesting, washing and drying the oliander leaf material, then milling and dewatering the oliander leaf material in a grinding and dewatering apparatus such as those described in US Pat. Nos. 5,236,132, 5,598,979, 6,517,015, and 6,715,705. It was prepared by passing it through. The weight of the starting material used was 3.85 kg.

출발 물질을 추출기 장치에서 280 bar(28 MPa, 4061 psi)의 압력 및 50 ℃(122ºF)의 온도에서 개질제로서 순수한 CO2 및 5 % 에탄올과 혼합하였다. 총 160kg의 CO2와 8kg의 에탄올을 사용하여 용매 대 원료의 비가 43.6 대 1이 되도록 하였다. 이어서, CO2, 에탄올 및 원료의 혼합물을 분리기 장치를 통해 통과시켜, 혼합물의 압력과 온도를 변경하고, 추출물을 이산화탄소로부터 분리하였다. The starting material was mixed with pure CO 2 and 5% ethanol as modifier at a pressure of 280 bar (28 MPa, 4061 psi) and a temperature of 50° C. (122° F) in an extractor apparatus. A total of 160 kg of CO 2 and 8 kg of ethanol were used so that the ratio of solvent to raw material was 43.6 to 1. Then, a mixture of CO 2 , ethanol and raw material was passed through a separator device to change the pressure and temperature of the mixture, and the extract was separated from carbon dioxide.

추출물(207 g)은 에탄올을 제거한 후, 명백하게 약간의 엽록소를 함유하는 짙은 녹색의 끈적 끈적한 점성 덩어리로서 수득되었다. 출발 물질의 중량을 기준으로, 추출물의 수율은 5.38 %였다. 추출물 중의 올레안드린의 함량은 고압 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법을 사용하여, 1.89 g, 또는 0.91 %의 수율로 계산되었다.The extract (207 g) was obtained as a dark green sticky viscous mass, apparently containing some chlorophyll, after removal of the ethanol. Based on the weight of the starting material, the yield of the extract was 5.38%. The content of oleandrine in the extract was calculated using high pressure liquid chromatography and mass spectrometry in a yield of 1.89 g, or 0.91 %.

실시 예 2Example 2

분말 올리앤더 잎의 열탕(hot-water) 추출.Hot-water extraction of powdered oleander leaves.

(비교 예)(comparative example)

열탕 추출은 전형적으로 올리앤더 잎으로부터 올레안드린 및 다른 활성 성분을 추출하기 위해 사용된다. 열탕 추출 공정의 예는 미국 특허 제 5,135,745 호 및 제 5,869,060 호에서 찾을 수 있다.Hot water extraction is typically used to extract oleandrin and other active ingredients from oleander leaves. Examples of hot water extraction processes can be found in US Pat. Nos. 5,135,745 and 5,869,060.

5 g의 분말 올리앤더 잎을 사용하여 열탕 추출을 수행하였다. 분말화된 올리앤더 잎에(올리앤더 출발 물질의 중량 기준) 10 부피의 끓는 물을 첨가하고, 혼합물을 6 시간 동안 일정하게 교반하였다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 잎 잔류 물을 수집하고, 동일한 조건 하에서 다시 추출하였다. 여과액을 합하고 동결 건조시켰다. 추출물의 외관은 갈색이었다. 건조된 추출물 물질의 무게는 약 1.44g이었다. 추출 물질 34.21 mg을 물에 용해시키고, 고압 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법을 사용하여 올레안드린 함량 분석을 수행하였다. 올레안드린의 양은 3.68 mg으로 측정되었다. 추출물의 양을 기준으로 한 올레안드린 수율은 0.26 % 인 것으로 계산되었다.Hot water extraction was performed using 5 g of powdered oleander leaves. To the powdered oliander leaves (based on the weight of the oliander starting material) 10 volumes of boiling water were added and the mixture was stirred constantly for 6 hours. The mixture was then filtered, the leaf residue was collected and extracted again under the same conditions. The filtrates were combined and lyophilized. The appearance of the extract was brown. The weight of the dried extract material was about 1.44 g. 34.21 mg of the extract was dissolved in water, and analysis of the oleandrine content was performed using high pressure liquid chromatography and mass spectrometry. The amount of oleandrine was measured to be 3.68 mg. The yield of oleandrine based on the amount of extract was calculated to be 0.26%.

실시 예 3Example 3

약제학적 조성물의 제조.Preparation of a pharmaceutical composition.

방법 A. 크레모포르(Cremophor)-기반 약물 전달 시스템Method A. Cremophor-Based Drug Delivery System

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the amounts indicated.

Figure pat00004
Figure pat00004

부형제를 병에 분배하고, 뉴 브런즈윅 사이언티픽 C24KC 냉장 인큐베이터 셰이커내에서 60 ℃에서 24 시간 동안 흔들어서 균질성을 확보하였다. 이어서, 샘플을 따라서 용해화를 육안으로 검사하였다. 부형제 및 항 바이러스 조성물 둘 모두는 24 시간 후에 모든 제형에 대해 완전히 용해되었다.The excipients were dispensed into bottles and shaken in a New Brunswick Scientific C24KC refrigerated incubator shaker at 60° C. for 24 hours to ensure homogeneity. The samples were then followed and visually inspected for dissolution. Both excipients and antiviral composition were completely dissolved for all formulations after 24 hours.

방법 B. GMO/크레모포르-기반 약물 전달 시스템Method B. GMO/Cremophor-Based Drug Delivery System

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the amounts indicated.

Figure pat00005
Figure pat00005

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 C. 라브라솔(Labrasol)-기반 약물 전달 시스템Method C. Labrasol-Based Drug Delivery System

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the amounts indicated.

Figure pat00006
Figure pat00006

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 D. 비타민 E-TPGS 기반 미셀 형성 시스템Method D. Vitamin E-TPGS-based micellar formation system

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the amounts indicated.

Figure pat00007
Figure pat00007

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 E. 다-성분 약물 전달 시스템Method E. Multi-Component Drug Delivery System

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the amounts indicated.

Figure pat00008
Figure pat00008

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 F. 다-성분 약물 전달 시스템Method F. Multi-Component Drug Delivery System

하기 성분들이 캡슐에 포함된 것으로 표시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the amounts indicated as included in the capsules.

Figure pat00009
Figure pat00009

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

실시 예 4Example 4

장용 코팅된(enteric coated) 캡슐의 제조Preparation of enteric coated capsules

단계 I:액체-충전 캡슐의 제조Step I: Preparation of Liquid-Filled Capsules

경질 젤라틴 캡슐(50 카운트, 00 크기)을 실시 예 3의 액체 조성물로 충전하였다. 이들 캡슐을 800mg의 제형으로 수동으로 충전한 다음, 50 % 에탄올/50 % 수용액과 함께 손으로 밀봉하였다. 이어서, 캡슐을 하기 지시된 양으로 하기 성분을 함유하는 22 % 젤라틴 용액과 함께 손으로 밴딩하였다(banded).Hard gelatin capsules (50 counts, size 00) were filled with the liquid composition of Example 3. These capsules were manually filled with 800 mg of formulation and then sealed by hand with 50% ethanol/50% aqueous solution. The capsules were then hand banded with a 22% gelatin solution containing the following ingredients in the amounts indicated below.

Figure pat00010
Figure pat00010

젤라틴 용액을 완전히 혼합하고 1-2 시간 동안 팽윤시켰다. 팽창 기간 후, 용액을 단단히 덮고 55 ℃ 오븐에 넣고 액화시켰다. 전체 젤라틴 용액이 액체가 되면 밴딩(banding)을 수행하였다The gelatin solution was thoroughly mixed and allowed to swell for 1-2 hours. After the expansion period, the solution was tightly covered and placed in a 55 °C oven to liquefy. Banding was performed when the entire gelatin solution became liquid.

뾰족한 둥근 3/0 아티스트 브러쉬를 사용하여, 젤라틴 용액을 캡슐에 페인트하였다. 시오노기(Shionogi)에 의해 제공되는 밴딩 키트를 사용했다. 밴딩 후, 밴드를 경화시키기 위해 캡슐을 주위 조건에서 12 시간 동안 유지시켰다.Using a pointed, round 3/0 artist brush, the gelatin solution was painted onto the capsules. A banding kit provided by Shionogi was used. After banding, the capsules were held at ambient conditions for 12 hours to cure the bands.

단계 II:액체-충전 캡슐의 코팅Step II: Coating of Liquid-Filled Capsules

하기 표에 열거된 성분으로부터 코팅 분산액을 제조하였다.Coating dispersions were prepared from the ingredients listed in the table below.

Figure pat00011
Figure pat00011

단계 I에 따른 밴딩 캡슐을 사용하는 경우, 분산액을 20.0 mg/cm2 코팅 수준으로 캡슐에 도포하였다. 캡슐을 코팅하기 위해 하기 조건을 사용하였다.When using banding capsules according to step I, the dispersion was applied to the capsules at a coating level of 20.0 mg/cm 2 . The following conditions were used to coat the capsules.

Figure pat00012
Figure pat00012

* 스프레이 노즐은 노즐과 스프레이 경로가 유입 공기의 흐름 경로하에 있도록 설정되었다.* The spray nozzle is set so that the nozzle and spray path are under the inlet air flow path.

실시 예 5Example 5

대상체에서 지카바이러스 감염의 치료Treatment of a Zika Virus Infection in a Subject

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral Composition Therapy

지카바이러스 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련 투여량은 일정 기간 동안의 소정의 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상체의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 지카바이러스 적정 농도(titre)를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서의 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물을 이용한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.A subject exhibiting a Zika virus infection is prescribed an antiviral composition, and a therapeutically relevant dose is administered to the subject according to a prescribed dosing regimen over a period of time. The subject's level of response to treatment is determined periodically. A therapeutic response level can be determined by determining a subject's Zika virus titre in blood or plasma. If the level of therapeutic response in one dose is too low, the dose is increased according to a predetermined schedule of dose escalation until the desired level of therapeutic response in the subject is achieved. Treatment of the subject with the antiviral composition may continue as needed, and the dosage or dosing regimen may be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제를 갖는 항 바이러스 조성물Method B. Combination Therapy: Antiviral Composition with Other Agents

지카바이러스 감염 또는 그 증상의 치료를 위해 대상체에게 하나 이상의 다른 치료제를 처방하고 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.Method A above is followed except that one or more other therapeutic agents have been prescribed and administered to the subject for treatment of a Zika virus infection or symptoms thereof. One or more other therapeutic agents may then be administered with, or before or after administration of the antiviral composition. Dosage escalation (or reduction) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

실시 예 6Example 6

지카바이러스 감염에 대한 항 바이러스 활성의 시험관 내 평가In vitro evaluation of antiviral activity against Zika virus infection

방법 A. 순수한 화합물Method A. Pure Compounds

베로 E6 세포(Vero C1008 세포로도 알려짐, ATTC No. CRL-1586; https://www.atcc.org/Products/All/CRL-1586.aspx)는 강심 배당체의 존재 하에서 0.2의 MOI(다중 감염)로 ZIKV(지카바이러스 균주 PRVABC59, ATCC VR-1843; https://www.atcc.org/Products/All/VR-1843.aspx)에 감염되었다. 세포를 바이러스 및 화합물과 함께 1 시간 동안 배양한 후, 접종원 및 화합물을 폐기하였다. 세포에 새로운 배지를 제공하고 48 시간 동안 배양한 후, 포르말린으로 고정하고 ZIKV 감염을 위해 착색되었다. 신티그라피(scintigraphy)에 의해 결정된 올레안드린(도 1a) 및 디곡신(도 1b)의 대표적인 감염률이 도시되어 있다. 다른 화합물은 동일한 조건에서 평가되며, 지카바이러스에 대해 매우 다양한 수준의 항 바이러스 활성을 나타낸다. Vero E6 cells (also known as Vero C1008 cells, ATTC No. CRL-1586; https://www.atcc.org/Products/All/CRL-1586.aspx) were subjected to multiple infection with an MOI of 0.2 in the presence of cardiac glycosides. ) was infected with ZIKV (Zika virus strain PRVABC59, ATCC VR-1843; https://www.atcc.org/Products/All/VR-1843.aspx). After cells were incubated with virus and compound for 1 hour, the inoculum and compound were discarded. Cells were provided with fresh medium and incubated for 48 hours, then fixed with formalin and stained for ZIKV infection. Representative infection rates of oleandrine ( FIG. 1A ) and digoxin ( FIG. 1B ) as determined by scintigraphy are shown. Other compounds were evaluated under the same conditions and exhibited very variable levels of antiviral activity against Zika virus.

방법 B. 추출물 형태의 화합물Method B. Compound in extract form

시험되는 표적 화합물을 함유하는 추출물은 추출물의 양이 추출물 중의 표적 화합물의 양으로 정규화되는 것을 제외하고는 방법 A에 상세히 기술된 바와 같이 평가된다. 예를 들어, 2 중량 %의 올레안드린을 함유하는 추출물은 1 mg의 추출물 당 20 마이크로그램의 올레안드린을 함유한다. 따라서, 평가를 위한 의도된 양의 올레안드린이 20 마이크로그램이면, 1 mg의 추출물이 분석에 사용될 것이다.Extracts containing the target compound being tested are evaluated as detailed in Method A except that the amount of extract is normalized to the amount of target compound in the extract. For example, an extract containing 2% by weight of oleandrine contains 20 micrograms of oleandrine per mg of extract. Thus, if the intended amount of oleandrine for evaluation is 20 micrograms, then 1 mg of extract will be used in the analysis.

실시 예 7Example 7

항 바이러스 조성물을 포함하는 정제의 제조Preparation of Tablets Containing Antiviral Compositions

3 % 실로이드(Syloid) 244FP 및 97 % 미정질 셀룰로오스(MCC)의 초기 정제 혼합물을 혼합하였다. 이어서, 실시 예 3에 따라 제조된 기존의 배치 조성물을 습식 제립법(wet granulation)을 통해 실로이드/MCC 혼합물에 혼입시켰다. 이 혼합물은 아래 표에서 "초기 정제(tabletting) 혼합물"로 표시되어 있다. 추가적인 MMC가 압축률을 높이기 위해 추가-과립으로 첨가되었다. 초기 정제 혼합물에 대한 이러한 첨가는 "추가-과립(extragranular) 첨가"로 표시되어 있다. 추가-과립 첨가로부터의 결과적인 혼합물은 "최종 정제 혼합물"과 동일한 조성이었다.An initial purification mixture of 3% Syloid 244FP and 97% microcrystalline cellulose (MCC) was mixed. Then, the conventional batch composition prepared according to Example 3 was incorporated into the Syloid/MCC mixture through wet granulation. This mixture is labeled "initial tabletting mixture" in the table below. Additional MMC was added as extra-granules to increase the compressibility. This addition to the initial purification mixture is marked as "extragranular addition". The resulting mixture from the add-granule addition was of the same composition as the "final purification mixture".

Figure pat00013
Figure pat00013

Figure pat00014
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Figure pat00015
Figure pat00015

실로이드 244FP는 그레이스 데이비슨(Grace Davison)에 의해 제조된 콜로이드 이산화 규소이다. 콜로이드 이산화 규소는 일반적으로 흡착제, 활택제(glidant) 및 정제 붕해제와 같은 여러 기능을 제공하는 데 사용된다. 실로이드 244FP는 오일에서 그 중량의 3 배를 흡착하는 능력 및 5.5 미크론 입자 크기 때문에 선택되었다. Syloid 244FP is colloidal silicon dioxide manufactured by Grace Davison. Colloidal silicon dioxide is commonly used to serve several functions such as adsorbent, glidant and tablet disintegrant. Syloid 244FP was chosen because of its ability to adsorb three times its weight in oil and its 5.5 micron particle size.

실시 예 8Example 8

올레안드린을 함유하는 용액의 HPLC 분석HPLC analysis of solutions containing oleandrine

다음 조건(대칭 C18 컬럼(5.0 ㎛, 150 x 4.6 mm I.D.; 물); MeOH:물의 이동 상 = 54:46(v/v) 및 1.0 ml/분에서의 유속)을 사용하여, 샘플(올레안드린 표준 물질, SCF 추출물 및 열탕 추출물)을 HPLC(물)상에서 분석하였다. Using the following conditions (symmetric C18 column (5.0 μm, 150 x 4.6 mm ID; water); mobile phase of MeOH:water = 54:46 (v/v) and flow rate at 1.0 ml/min), the sample (olean Drin standards, SCF extract and hot water extract) were analyzed on HPLC (water).

검출 파장은 217 nm로 설정되었다. 샘플은 대략적인 목표 농도의 올레안드린을 달성하기 위하여, 화합물 또는 추출물을 고정된 양의 HPLC 용매에 용해시킴으로써 제조되었다. 올레안드린의 머무른 시간은 내부 표준을 사용하여 결정할 수 있다. 올레안드린의 농도는 내부 표준을 사용하는 신호 반응 곡선을 개발/전개함으로써(developing), 결정/보정될 수 있다.The detection wavelength was set to 217 nm. Samples were prepared by dissolving the compound or extract in a fixed amount of HPLC solvent to achieve an approximate target concentration of oleandrine. The retention time of oleandrine can be determined using an internal standard. The concentration of oleandrine can be determined/calibrated by developing/developing a signal response curve using an internal standard.

실시 예 9Example 9

약제학적 조성물의 제조Preparation of pharmaceutical compositions

본 발명의 약제학적 조성물은 하기 방법 중 임의의 방법으로 제조될 수 있다. 습식 또는 건식 조건하에서 혼합을 수행할 수 있다. 약제학적 조성물은 제조 동안 압축, 건조 또는 둘다 될 수 있다. 약제학적 조성물은 제형으로 나누어질 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by any of the following methods. Mixing can be carried out under wet or dry conditions. The pharmaceutical composition may be compressed, dried, or both during manufacture. The pharmaceutical composition may be divided into dosage forms.

방법 A.Method A.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 하나의 항 바이러스 화합물과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is admixed with at least one antiviral compound disclosed herein.

방법 B.Method B.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 두 개의 항 바이러스 화합물과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is admixed with at least two antiviral compounds disclosed herein.

방법 C.Method C.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 하나의 강심 배당체와 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is admixed with at least one cardiac glycoside disclosed herein.

방법 D.Method D.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 두 개의 트리테르펜과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is admixed with at least two triterpenes disclosed herein.

방법 E.Method E.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 하나의 강심 배당체 및 본원에 개시된 적어도 두개의 트리테르펜과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is admixed with at least one cardiac glycoside disclosed herein and at least two triterpenes disclosed herein.

방법 D.Method D.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 세 개의 트리테르펜과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is admixed with at least three triterpenes disclosed herein.

실시 예 10Example 10

트리테르펜 혼합물의 제조Preparation of triterpene mixtures

명시된 트리테르펜을 지시된 대략적인 몰비로 혼합하여, 하기 조성물을 제조하였다.The following compositions were prepared by mixing the indicated triterpenes in the approximate molar ratios indicated.

Figure pat00016
Figure pat00016

각각의 조성물에 대해, 3 개의 상이한 각각의 용액을 제조하였고, 이에 따라 각각의 용액 중 트리테르펜의 총 농도는 대략 9 μM, 18 μM 또는 36 μM이었다.For each composition, three different respective solutions were prepared, so the total concentration of triterpenes in each solution was approximately 9 μM, 18 μM or 36 μM.

Figure pat00017
Figure pat00017

실시 예 11Example 11

항 바이러스 조성물의 제조Preparation of antiviral compositions

항 바이러스 조성물은 개별 트리테르펜 성분을 혼합하여 혼합물을 형성함으로써 제조될 수 있다. 허용 가능한 항 바이러스 활성을 제공한 상기 제조된 트리테르펜 혼합물을 항 바이러스 조성물로 제형화하였다(formulated).Antiviral compositions can be prepared by mixing the individual triterpene components to form a mixture. The triterpene mixture prepared above, which provided acceptable antiviral activity, was formulated into an antiviral composition.

올레아놀산 및 우르솔산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleanolic acid and ursolic acid

공지된 양의 올레아놀산 및 우르솔산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다.Known amounts of oleanolic acid and ursolic acid are mixed according to a predetermined molar ratio of the components as defined herein. The ingredients can be mixed in solid form or mixed with a solvent such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained the components in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, at least one pharmaceutically acceptable excipient is admixed with the pharmacologically active agent. The antiviral composition is formulated for administration to a mammal.

올레아놀산 및 베툴린산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleanolic acid and betulinic acid

공지된 양의 올레아놀산 및 베툴린산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다.A known amount of oleanolic acid and betulinic acid was mixed according to a predetermined molar ratio of the components as defined herein. The ingredients can be mixed in solid form or mixed with a solvent such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained the components in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, at least one pharmaceutically acceptable excipient is admixed with the pharmacologically active agent. The antiviral composition is formulated for administration to a mammal.

올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleanolic acid, ursolic acid and betulinic acid

공지된 양의 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 용매에서 혼합되었다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다. Known amounts of oleanolic acid, ursolic acid and betulinic acid are mixed according to a predetermined molar ratio of the components as defined herein. The components are mixed in solid form or mixed in a solvent, for example a solvent. The ingredients can be mixed in solid form or mixed with a solvent such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained the components in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, one or more pharmaceutically acceptable excipients are admixed with the pharmacologically active agent. The antiviral composition is formulated for administration to a mammal.

올레아드린, 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleadrine, oleanolic acid, ursolic acid and betulinic acid

공지된 양의 올레아드린, 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다.Known amounts of oleadrine, oleanolic acid, ursolic acid and betulinic acid are mixed according to a predetermined molar ratio of the components as defined herein. The ingredients can be mixed in solid form or mixed with a solvent such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained the components in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, one or more pharmaceutically acceptable excipients are admixed with the pharmacologically active agent. The antiviral composition is formulated for administration to a mammal.

실시 예 12Example 12

대상체에서 필로바이러스 감염의 치료treatment of filovirus infection in a subject

예시적인 필로바이러스 감염은 에볼라바이러스 및 마르부르그바이러스를 포함한다.Exemplary filovirus infections include Ebolavirus and Marburg virus.

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral Composition Therapy

필로바이러스 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련된 투여량은 일정 기간 동안 처방된 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상체의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 필로바이러스 적정 농도를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.A subject exhibiting a filovirus infection is prescribed an antiviral composition, and a therapeutically relevant dose is administered to the subject according to the prescribed dosing regimen for a period of time. The subject's level of response to treatment is determined periodically. A therapeutic response level can be determined by determining a subject's filovirus titer in blood or plasma. If the level of therapeutic response in one dose is too low, the dose is increased according to a pre-determined schedule of dose escalation until the desired level of therapeutic response in the subject is achieved. Treatment of the subject with the antiviral composition may continue as needed, and the dosage or dosing regimen may be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제를 갖는 항 바이러스 조성물Method B. Combination Therapy: Antiviral Composition with Other Agents

대상체가 필로바이러스 감염 또는 그 증상의 치료를 위해 하나 이상의 다른 치료제를 처방 및 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.Method A is followed except that the subject has prescribed and administered one or more other therapeutic agents for the treatment of filovirus infection or symptoms thereof. One or more other therapeutic agents may then be administered with, or before or after administration of the antiviral composition. Dosage escalation (or reduction) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

실시 예 13Example 13

대상체에서 플라비바이러스 감염의 치료Treatment of Flavivirus Infection in a Subject

예시적인 플라비바이러스 감염은 황열병, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스, 지카바이러스, 진드기성 뇌염, 캬사누르 삼림병, 알크후르마(Alkhurma) 질병, 치쿤군야 바이러스, 옴스크 출혈열, 포와산(Powassan) 바이러스 감염을 포함한다.Exemplary flavivirus infections include yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, Zika virus, tick encephalitis, kasanur forest disease, Alkhurma disease, chikungunya virus, Omsk hemorrhagic fever, Powassan ), including viral infections.

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral Composition Therapy

플라비바이러스 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련된 투여량은 일정 기간 동안 처방된 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 플라비바이러스 적정 농도를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.A subject exhibiting a flavivirus infection is prescribed an antiviral composition, and a therapeutically relevant dose is administered to the subject according to the prescribed dosing regimen for a period of time. The subject's level of response to treatment is determined periodically. A therapeutic response level can be determined by determining a subject's flavivirus titer in blood or plasma. If the level of therapeutic response in one dose is too low, the dose is increased according to a pre-determined schedule of dose escalation until the desired level of therapeutic response in the subject is achieved. Treatment of the subject with the antiviral composition may continue as needed, and the dosage or dosing regimen may be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제를 갖는 항 바이러스 조성물Method B. Combination Therapy: Antiviral Composition with Other Agents

플라비바이러스 감염 또는 그 증상의 치료를 위해 대상체에 하나 이상의 다른 치료제로 처방하고 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.Method A above is followed except that one or more other therapeutic agents are prescribed and administered to the subject for treatment of a flavivirus infection or symptoms thereof. One or more other therapeutic agents may then be administered with, or before or after administration of the antiviral composition. Dosage escalation (or reduction) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

실시 예 14Example 14

지카바이러스 및 뎅기 바이러스에 대한 항 바이러스 활성 평가 Evaluation of antiviral activity against Zika virus and dengue virus

CPE-기반 항 바이러스 분석은 일정 농도 범위에서 시험 조성물의 존재 또는 부재하에서 표적 세포를 감염시킴으로써 수행되었다. 표적 세포의 감염은 세포 병변 효과 및 세포 사멸을 초래한다. 이러한 유형의 분석에서, 시험 조성물의 존재하에서 CPE의 감소 및 이에 상응하는 세포 생존력의 증가는 항 바이러스 활성의 지표로서 사용된다. CPE-기반 분석의 경우, 중립적 적색 판독(red readout)으로 세포 생존력을 결정하였다. 생존 세포는 그 리소좀내에 중성 적색을 포함한다. 중성 적색의 흡수는 살아있는 세포가 세포질에서 보다 리소좀 내에서 더 낮은 pH를 유지하는 능력에 의존하며, 이 활성 과정은 ATP를 필요로 한다. 리소좀 내부에 들어가면, 중성 적색 염료가 충전되어 세포 내에 유지된다. 중성 적색(0.033 %)과의 3 시간 배양 후, 세포 외 염료를 제거하고, 세포를 PBS로 세척하고, 세포 내 중성 적색을 50 % 에탄올 + 1 % 아세트산 용액으로 용해시켰다. 490 nm에서 각각의 웰(well)의 흡광도(광학 밀도)를 판독하여, 용액내 중성 적색의 양을 정량화하였다.CPE-based antiviral assays were performed by infecting target cells in the presence or absence of test compositions at a range of concentrations. Infection of target cells results in cellular lesion effects and cell death. In this type of assay, a decrease in CPE and a corresponding increase in cell viability in the presence of the test composition is used as an indicator of antiviral activity. For CPE-based assays, cell viability was determined with a neutral red readout. Viable cells contain a neutral red color within their lysosomes. Absorption of neutral red depends on the ability of living cells to maintain a lower pH in the lysosome than in the cytoplasm, and this activation process requires ATP. Once inside the lysosome, a neutral red dye is charged and retained within the cell. After 3 h incubation with neutral red (0.033%), the extracellular dye was removed, the cells were washed with PBS, and the intracellular neutral red was lysed with 50% ethanol + 1% acetic acid solution. The amount of neutral red in solution was quantified by reading the absorbance (optical density) of each well at 490 nm.

부착성(adherent) 세포주는 바이러스 패널에 대한 조성물의 항 바이러스 활성을 평가하기 위해 사용되었다. 바이러스를 세포에 첨가하기 전에, 조성물을 표적 세포와 함께 30 분 동안 사전 배양하였다. 조성물은 감염 배양 기간 동안, 세포 배양 배지에 존재하였다. 각각의 감염 분석에 대해, 바이러스가 없는 상태에서 조성물의 세포 독성 효과를 결정하기 위해 동일한 농도의 조성물(복제물)을 사용하여 생존력 분석을 병렬적으로 수립하였다.Adherent cell lines were used to evaluate the antiviral activity of the compositions against a panel of viruses. Prior to adding the virus to the cells, the composition was pre-incubated with the target cells for 30 minutes. The composition was present in the cell culture medium during the infection culture period. For each infection assay, viability assays were established in parallel using the same concentration of the composition (replicas) to determine the cytotoxic effect of the composition in the absence of virus.

시험 조성물의 항 바이러스 활성은 시험 조건 하의 세포의 감염 수준(면역 염색-기반 분석) 또는 생존력(CPE-기반 분석)을, 감염되지 않은 세포의 감염 수준 또는 생존력과 비교함으로써 결정되었다. 억제제의 존재 하의 생존력을 모의-처리된 세포의 생존력과 비교함으로써, 감염되지 않은 세포에서 세포 독성 효과를 평가하였다. 세포 독성은 XTT 생존력 분석에 의해 결정되었으며, 이는 상응하는 감염 분석을 위한 판독과 동일한 시점에서 수행되었다.The antiviral activity of the test composition was determined by comparing the level of infection (immunostaining-based assay) or viability (CPE-based assay) of cells under the test conditions with the level of infection or viability of uninfected cells. Cytotoxic effects were assessed in uninfected cells by comparing viability in the presence of inhibitor to viability of mock-treated cells. Cytotoxicity was determined by the XTT viability assay, which was performed at the same time points as reads for the corresponding infection assay.

시험 조성물을 100 % 메탄올에 용해시켰다. 시험된 최고 농도로서 50 μM로 시작하여, 8-배 희석을 수행함으로써, 8 가지 농도의 조성물이(중복으로) 생성되었다. 조성물의 가장 높은 시험 농도(50 μM)는 배양 배지에서 0.25 % 최종 농도의 메탄올(v/v %)을 초래하였다. 8-배 희석 시리즈의 메탄올 비히클은 각 조성물 시험 조건에서 메탄올의 최종 농도를 반영하는 농도를 가지면서, 각각의 분석 플레이트에 포함되었다. 가능한 경우, 조성물의 EC50 및 CC50는 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어를 사용하여 각각의 분석에 대해 결정되었다.The test composition was dissolved in 100% methanol. By performing an 8-fold dilution, starting with 50 μM as the highest concentration tested, 8 concentrations of the composition were generated (in duplicate). The highest tested concentration of the composition (50 μM) resulted in a 0.25% final concentration of methanol (v/v %) in the culture medium. An 8-fold dilution series of methanol vehicle was included in each assay plate, with concentrations reflecting the final concentration of methanol in each composition test condition. Where possible, the EC50 and CC50 of the composition were determined for each assay using GraphPad Prism software.

항 바이러스 활성은 바이러스-유도된 세포 병변 효과(CPE)에 대한 보호 정도에 의해 평가되었다. 상이한 농도의 대조군 또는 조성물의 존재 하에서 세포는 바이러스로 공격 받았다. CPE에 대한 보호 정도는 감염 후 6 일(ZIKV, 지카바이러스) 또는 감염 후 7 일(DENV, 뎅기바이러스) 후에, 다른 시험 조건에서 세포 생존력을 정량화하고, 비처리된 세포와 비히클 단독으로 처리된 세포(감염 배지)의 값을 비교함으로써 모니터링하였다.Antiviral activity was assessed by the degree of protection against virus-induced cellular lesion effects (CPE). Cells were challenged with virus in the presence of different concentrations of control or composition. The degree of protection against CPE was quantified by quantifying cell viability in different test conditions after 6 days post-infection (ZIKV, Zika virus) or 7 days post-infection (DENV, dengue virus), untreated cells and cells treated with vehicle alone. (infection medium) was monitored by comparing the values.

중립 분석을 위한 품질 관리가 모든 플레이트에서 수행되어: i) 신호 대 배경(S/B) 값; ii) 공지된 억제제에 의한 억제, 및 iii) 모든 데이터 포인트의 변동 계수(C.V.)에 의해 측정된 분석의 변동을 결정한다. 감염 분석의 전체 변동은 3.4 % 내지 9.5 %의 범위였으며, 생존력 분석의 전체 변동은 1.4 % 내지 3.2 %의 범위였으며, 이는 모든 C.V.값들의 평균으로 계산되었다. 감염 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)의 범위는 2.9에서 11.0이며, 생존력 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)의 범위는 6.5에서 29.9였다. Quality control for neutral analysis was performed on all plates: i) signal versus background (S/B) values; ii) inhibition by known inhibitors, and iii) the variance of the assay as measured by the coefficient of variation (C.V.) of all data points. The overall variation in the infection assay ranged from 3.4% to 9.5%, and the overall variation in the viability assay ranged from 1.4% to 3.2%, calculated as the average of all C.V. values. The signal versus background (S/B) range for the infection assay ranged from 2.9 to 11.0, and the signal versus background (S/B) range for the viability assay ranged from 6.5 to 29.9.

뉴트럴 레드 판독으로 DENV2-유도된 세포 병변 효과(CPE)의 보호: DENV2 항 바이러스 분석을 위해, 08-10381 몬세라트 균주를 사용하였다. 바이러스 스톡은 C6/36 곤충 세포에서 생성되었다. 베로 세포(Cercopithecus aethiops에서 유래한 상피 신장 세포)를 5 % FBS(MEM5)와 함께 MEM에서 유지시켰다. 감염 및 생존력 분석 모두를 위해, 세포를 96-웰 투명 평평한 바닥 플레이트에 웰당 10,000 세포로 시딩하고(seeded), MEM5에서 37 ℃에서 24 시간 동안 유지시켰다. 감염 당일, 샘플을 1 % 소 혈청 알부민(BSA)과 함께 MEM을 사용하여 U-바닥 플레이트에서 8-배 희석하였다. 시험 물질 희석 물을 최종 농도 1.25X로 제조하고, 40μl을 표적 세포와 함께 37 ℃에서 30 분 동안 배양하였다. 시험 물질 사전-배양 후, 1 % BSA와 함께 MEM에서 제조된 10μl의 바이러스 희석액을 각 웰에 첨가하고(웰당 50μl 최종 부피), 플레이트를 5 % CO2를 갖는 가습 인큐베이터에서 3 시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분석에 사용된 바이러스의 부피는 리바비린 및 DENV2의 공지된 억제제인 화합물 A3에 의해 억제된, 선형 범위의 신호를 생성하도록 미리 결정되었다. 감염 배양 후, 세포를 PBS로 세척한 다음, 2 % FBS(MEM2)를 함유하는 MEM으로 세척하여, 비결합(unbound) 바이러스를 제거하였다. 이어서, MEM2에서 1X 농도로 제조된 억제제 희석액을 함유하는 50μl의 배지를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 인큐베이터(5 % CO2)에서 7 일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 바이러스가 없는 대조군( "모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 비히클(메탄올) 단독으로 배양된 감염된 세포, 및 세포가 없는 웰(배경을 결정하기 위해)을 분석 플레이트에 포함시켰다. 50μM 리바비린 및 0.5μM 화합물 A3을 함유하는 대조 웰을 또한 분석 플레이트 상에 포함시켰다. 감염 7 일 후, 세포 생존률을 모니터링하기 위해 세포를 중성 적색으로 염색하였다. 감염 배지에서 일련의 8-배 희석액을 사용하여 시험 물질을 중복으로 반복해서 평가하였다. 대조군은 바이러스 없이 배양된 세포("모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 또는 리바비린(0.5μM) 또는 A3(0.5μM)의 존재하에 감염된 세포를 포함하였다. 메탄올 비히클만을 사용한 완전 복제 억제 곡선이 동일한 분석 플레이트 상에 포함되었다.Protection of DENV2-induced cytopathic effect (CPE) with neutral red readout: For the DENV2 antiviral assay, the 08-10381 Montserrat strain was used. Virus stocks were generated in C6/36 insect cells. Vero cells ( epithelial kidney cells derived from Cercopithecus aethiops ) were maintained in MEM with 5% FBS (MEM5). For both infection and viability assays, cells were seeded at 10,000 cells per well in 96-well clear flat bottom plates and maintained in MEM5 at 37° C. for 24 h. On the day of infection, samples were diluted 8-fold in U-bottom plates using MEM with 1% bovine serum albumin (BSA). Test substance dilutions were prepared to a final concentration of 1.25X, and 40 μl were incubated with target cells at 37° C. for 30 minutes. After test substance pre-incubation, 10 μl of virus dilution prepared in MEM with 1% BSA is added to each well (50 μl final volume per well), and the plate is incubated in a humidified incubator with 5% CO 2 at 37° C. for 3 hours. cultured. The volume of virus used in the assay was predetermined to produce a signal in a linear range, inhibited by ribavirin and compound A3, a known inhibitor of DENV2. After infection culture, cells were washed with PBS and then washed with MEM containing 2% FBS (MEM2) to remove unbound virus. Then, 50 μl of medium containing inhibitor dilution prepared at 1× concentration in MEM2 was added to each well. Plates were incubated in an incubator (5% CO 2 ) at 37° C. for 7 days. Virus-free controls (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, infected cells cultured with vehicle (methanol) alone, and wells without cells (to determine background) were included in the assay plate. Control wells containing 50 μM Ribavirin and 0.5 μM Compound A3 were also included on the assay plate. Seven days after infection, cells were stained neutral red to monitor cell viability. Test substances were evaluated in duplicate using serial 8-fold dilutions in infection medium. Controls included cells cultured without virus (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, or cells infected in the presence of ribavirin (0.5 μM) or A3 (0.5 μM). Full replication inhibition curves using methanol vehicle only were included on the same assay plate.

뉴트럴 레드 판독으로 ZIKV-유도된 세포 병변 효과(CPE)의 보호: ZIKV 항 바이러스 분석을 위해, PLCal_ZV 균주가 사용되었다. 베로 세포(Cercopithecus aethiops에서 유래한 상피 신장 세포)를 5 % FBS(MEM5)와 함께 MEM에서 유지시켰다. 감염 및 생존률 분석 모두를 위해, 세포를 96-웰 투명 평평한 바닥 플레이트에 웰당 10,000 세포로 시딩하고, MEM5에서 24 시간 동안 37 ℃로 유지시켰다. 감염 당일, 샘플을 1 % 소 혈청 알부민(BSA)과 함께 MEM을 사용하여 U-바닥 플레이트에서 8-배 희석하였다. 시험 물질 희석 물을 최종 농도 1.25X로 제조하고, 40μl를 표적 세포와 함께 37 ℃에서 30 분 동안 배양하였다. 시험 물질 사전-배양 후, 1 % BSA와 함께 MEM에서 제조된 10μl의 바이러스 희석액을 각 웰에 첨가하고(웰당 50μl 최종 부피), 플레이트를 5 % CO2의 가습 인큐베이터에서 3 시간 동안 37 ℃에서 배양하였다. 감염 배양 후, 세포를 PBS로 세척한 다음, 2 % FBS(MEM2)를 함유하는 MEM으로 세척하여, 비결합 바이러스를 제거하였다. 이어서, MEM2에서 1X 농도로 제조된 억제제 희석액을 함유하는 50μl의 배지를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 인큐베이터(5 % CO2)에서 6 일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 바이러스가 없는 대조군( "모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 비히클(메탄올) 단독으로 배양된 감염된 세포, 및 세포가 없는 웰(배경을 결정하기 위해)을 분석 플레이트에 포함시켰다. 감염 6 일 후, 세포 생존률을 모니터링하기 위해 세포를 중성 적색으로 염색하였다. 감염 배지에서 일련의 8 배 희석액을 사용하여, 시험 물질을 2 회 반복하여 평가하였다. 대조군은 바이러스 없이 배양된 세포("모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 또는 A3(0.5μM)의 존재하에 감염된 세포를 포함하였다. 메탄올 비히클만을 사용한 완전 복제 억제 곡선은 동일한 분석 플레이트 상에 포함되었다.Protection of ZIKV-Induced Cell Lesion Effect (CPE) with Neutral Red Readout: For ZIKV antiviral assay, PLCal_ZV strain was used. Vero cells ( epithelial kidney cells derived from Cercopithecus aethiops ) were maintained in MEM with 5% FBS (MEM5). For both infection and viability assays, cells were seeded at 10,000 cells per well in 96-well clear flat bottom plates and maintained at 37 °C for 24 h in MEM5. On the day of infection, samples were diluted 8-fold in U-bottom plates using MEM with 1% bovine serum albumin (BSA). Test substance dilutions were prepared to a final concentration of 1.25X, and 40 μl were incubated with target cells at 37° C. for 30 minutes. After test substance pre-incubation, 10 μl of virus dilution prepared in MEM with 1% BSA was added to each well (50 μl final volume per well), and the plate was incubated at 37° C. for 3 hours in a humidified incubator with 5% CO 2 . did. After incubation of infection, cells were washed with PBS and then washed with MEM containing 2% FBS (MEM2) to remove unbound virus. Then, 50 μl of medium containing inhibitor dilution prepared at 1× concentration in MEM2 was added to each well. Plates were incubated at 37° C. in an incubator (5% CO 2 ) for 6 days. Virus-free controls (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, infected cells cultured with vehicle (methanol) alone, and wells without cells (to determine background) were included in the assay plate. After 6 days of infection, cells were stained neutral red to monitor cell viability. Test substances were evaluated in duplicate using serial 8-fold dilutions in infection medium. Controls included cells cultured without virus (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, or cells infected in the presence of A3 (0.5 μM). Full replication inhibition curves using methanol vehicle only were included on the same assay plate.

CPE-기반 생존력 데이터의 분석: 중성 적색 분석의 경우, 490 nm에서의 흡광도를 모니터링함으로써 세포 생존력을 결정하였다. 세포가 없는 웰에서 얻은 평균 신호를 모든 샘플로부터 제하였다. 이어서, 모든 데이터 포인트는 동일한 분석 플레이트상에서 모의(감염되지 않은) 세포의 8 개 웰에서 관찰된 평균 신호의 백분율로서 계산되었다. 배지 단독으로 처리된 감염된 세포는 감염되지 않은 세포에서 관찰된 것의 평균 4.2 %(HRV의 경우), 26.9 %(DENV의 경우) 및 5.1 %(ZIKV의 경우)로 신호를 감소시켰다. 이 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)은 2.9(DENV의 경우) 및 7.2(ZIKV의 경우)였는데, 이는 비히클만으로 처리된 감염된 세포의 생존력과 비교되는, "모의-감염된" 세포에서의 생존력 백분율로 결정되었다. Analysis of CPE-Based Viability Data: For the neutral red assay, cell viability was determined by monitoring absorbance at 490 nm. The average signal obtained in cell-free wells was subtracted from all samples. All data points were then calculated as a percentage of the mean signal observed in 8 wells of mock (uninfected) cells on the same assay plate. Infected cells treated with medium alone reduced the signal by an average of 4.2% (for HRV), 26.9% (for DENV) and 5.1% (for ZIKV) of that observed in uninfected cells. The signal versus background (S/B) for this assay was 2.9 (for DENV) and 7.2 (for ZIKV), which are viability in “mock-infected” cells compared to the viability of infected cells treated with vehicle alone. determined as a percentage.

화합물-유도된 세포 독성을 평가하기 위한 생존력 분석(XTT): 모의-감염된 세포를 상응하는 감염 분석에 사용된 것과 동일한 실험 설정 및 억제제 농도를 사용하여, 억제제 희석액과 함께(또는 배지 단독으로) 배양하였다. 배양 온도 및 배양 기간은 상응하는 감염 분석의 조건을 반영하였다. 세포 생존력은 XTT 방법으로 평가되었다. XTT 분석은 미토콘드리아 활성을 측정하고, 오렌지 포마잔 염료를 형성하는 황색 테트라졸륨 염(XTT)의 분할(cleavage)에 기초한다. 반응은 활성 미토콘드리아가 있는 생존 세포에서만 일어난다. 포마잔 염료는 스캐닝 다중-웰 분광 광도계를 사용하여 직접 정량화된다. 세포가 없는 웰로부터 얻은 배경 수준을 모든 데이터 포인트로부터 제하였다.(각각의 올레아드린 시험 웰의 최종 퍼센트 메탄올을 반영하는 7개의 농도로) 메탄올 비히클만을 갖는 대조군을 생존력 분석 플레이트에 포함시켰다. 490 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 생존력 정도를 모니터링하였다.Viability Assay (XTT) to Assess Compound-Induced Cytotoxicity: Incubate mock-infected cells with inhibitor dilutions (or media alone), using the same experimental setup and inhibitor concentrations used for the corresponding infection assays. did. The incubation temperature and incubation period reflected the conditions of the corresponding infection assay. Cell viability was assessed by the XTT method. The XTT assay measures mitochondrial activity and is based on the cleavage of a yellow tetrazolium salt (XTT) to form an orange formazan dye. The response occurs only in viable cells with active mitochondria. Formazan dye is directly quantified using a scanning multi-well spectrophotometer. Background levels from wells without cells were subtracted from all data points. Controls with methanol vehicle only (at 7 concentrations reflecting the final percent methanol of each oleadrine test well) were included in viability assay plates. The degree of viability was monitored by measuring the absorbance at 490 nm.

세포 독성 데이터의 분석: XTT 분석의 경우, 490 nm에서의 흡광도를 모니터링함으로써 세포 생존력을 결정하였다. 세포가 없는 웰에서 얻은 평균 신호를 모든 샘플로부터 제하였다. 이어서, 모든 데이터 포인트를 동일한 분석 플레이트상에서 모의(감염되지 않은) 세포의 8 개 웰에서 관찰된 평균 신호의 백분율로 계산하였다. 이 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)은 29.9(IVA의 경우), 8.7(HRV의 경우), 6.5(DENV의 경우) 및 6.7(ZIKV의 경우)이였는데, 이는 세포 없는 웰에 대해 관찰된 신호와 비교되는, "모의-감염된" 세포의 생존력 백분율로 결정되었다.Analysis of cytotoxicity data: For the XTT assay, cell viability was determined by monitoring absorbance at 490 nm. The average signal obtained in cell-free wells was subtracted from all samples. All data points were then calculated as a percentage of the mean signal observed in 8 wells of mock (uninfected) cells on the same assay plate. Signal versus background (S/B) for this assay were 29.9 (for IVA), 8.7 (for HRV), 6.5 (for DENV) and 6.7 (for ZIKV), which were observed for cell-free wells. It was determined as the percentage of viability of "mock-infected" cells compared to the signal.

실시 예 15Example 15

필로바이러스(에볼라바이러스 및 마르부르그바이러스)에 대한 항 바이러스 활성 평가 Evaluation of antiviral activity against filoviruses (Ebolavirus and Marburg virus)

방법 A.Method A.

베로 E6 세포는 올레안드린 함유 식물 추출물인 올레안드린, 디곡신 또는 PBI-05204의 존재하에 EBOV/Kik(A, MOI = 1) 또는 MARV/Ci67(B, MOI = 1)로 감염되었다. 1 시간 후, 접종원 및 화합물을 제거하고, 신선한 배지를 세포에 첨가하였다. 48 시간 후, 세포를 고정시키고, 면역 염색하여 EBOV 또는 MARV로 감염된 세포를 검출하였다. 감염된 세포를 오페레타(Operetta)를 사용하여 열거하였다. C) 베로 E6를 상기와 같이 화합물로 처리하였다. ATP 수준은 세포 생존력의 측정으로서 CellTiter-Glo에 의해 측정되었다.Vero E6 cells were infected with EBOV/Kik (A, MOI = 1) or MARV/Ci67 (B, MOI = 1) in the presence of oleandrine containing plant extracts oleandrine, digoxin or PBI-05204. After 1 hour, the inoculum and compounds were removed and fresh medium was added to the cells. After 48 hours, cells were fixed and immunostained to detect cells infected with EBOV or MARV. Infected cells were enumerated using Operetta. C) Vero E6 was treated with compound as above. ATP levels were measured by CellTiter-Glo as a measure of cell viability.

방법 B.Method B.

베로 E6 세포를 EBOV(A, B) 또는 MARV(C, D)로 감염시켰다. 감염 후 2 시간(A, C) 또는 감염 후 24 시간(B, D)에, 올레안드린 또는 PBI-05204를 1 시간 동안 세포에 첨가한 후, 폐기하고, 세포를 배양 배지로 리턴시켰다. 감염 48 시간 후, 감염된 세포를 도 1에서와 같이 분석하였다.Vero E6 cells were infected with EBOV (A, B) or MARV (C, D). At 2 h post-infection (A, C) or 24 h post-infection (B, D), oleandrine or PBI-05204 was added to cells for 1 h, then discarded and cells returned to culture medium. 48 hours after infection, infected cells were analyzed as in FIG. 1 .

방법 C.Method C.

베로 E6 세포를 올레안드린 또는 PBI-05204의 존재하에서 EBOV 또는 MARV로 감염시키고, 48 시간 동안 배양하였다. 감염된 세포 배양물로부터의 상층액(supernatant)을 새로운 베로 E6 세포에 통과시키고, 1 시간 동안 배양한 다음, 폐기하였다(A에 도시된 바와 같이). 통과된 상층액을 함유하는 세포를 48 시간 동안 배양하였다. EBOV(B) 또는 MARV(C)로 감염된 세포는 전술한 바와 같이 검출되었다. 대조군 감염률은 EBOV의 경우 66 %, MARV의 경우 67 %였다.Vero E6 cells were infected with EBOV or MARV in the presence of oleandrine or PBI-05204 and cultured for 48 hours. Supernatants from infected cell cultures were passed through fresh Vero E6 cells, incubated for 1 hour, and then discarded (as shown in A). Cells containing the passed supernatant were incubated for 48 hours. Cells infected with EBOV (B) or MARV (C) were detected as described above. Control infection rates were 66% for EBOV and 67% for MARV.

실시 예 16Example 16

토가비리대(토가비리대) 바이러스에 대한 항 바이러스 활성 평가Evaluation of antiviral activity against Togaviridae (Togaviridae) virus

(알파바이러스: VEEV 및 WEEV)(Alphaviruses: VEEV and WEEV)

베로 E6 세포를 지시된 화합물의 존재 또는 부재하에서, 18 시간 동안 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(A, MOI = 0.01) 또는 웨스턴 말 뇌염 바이러스(B, MOI = 0.1)로 감염시켰다. 감염된 세포를 본원에 기재된 바와 같이 검출하고 오페레타에 열거하였다.Vero E6 cells were infected with Venezuelan Equine Encephalitis Virus (A, MOI = 0.01) or Western Equine Encephalitis Virus (B, MOI = 0.1) for 18 h in the presence or absence of the indicated compounds. Infected cells were detected as described herein and enumerated in operetta.

실시 예 17Example 17

대상체에서의 파라믹소비리대 감염의 치료Treatment of Paramyxoviridae Infection in a Subject

예시적인 파라믹소비리대(파라믹소비리대) 과 바이러스 감염은 헤니파바이러스 속 감염, 니파 바이러스 감염, 또는 헨드라 바이러스 감염을 포함한다.Exemplary Paramyxoviridae (Paramyxoviridae) and viral infections include Henipavirus genus infection, Nipahvirus infection, or Hendra virus infection.

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral Composition Therapy

파라믹소비리대 과 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련된 투여량은 소정의 투여 요법에 따라 일정 기간 동안 대상체에게 투여된다. 대상체의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 바이러스 적정 농도를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.A subject exhibiting a Paramyxoviridae infection is prescribed an antiviral composition, and a therapeutically relevant dose is administered to the subject over a period of time according to a prescribed dosing regimen. The subject's level of response to treatment is determined periodically. A therapeutic response level can be determined by determining a subject's viral titer in blood or plasma. If the level of therapeutic response in one dose is too low, the dose is increased according to a pre-determined schedule of dose escalation until the desired level of therapeutic response in the subject is achieved. Treatment of the subject with the antiviral composition may continue as needed, and the dosage or dosing regimen may be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제와의 항 바이러스 조성물Method B. Combination Therapy: Antiviral Composition with Other Agents

파라믹소비리대 과 감염 또는 그 증상의 치료를 위해, 대상체에 하나 이상의 다른 치료제로 처방하고 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.For the treatment of a Paramyxoviridae infection or its symptoms, Method A above is followed except that one or more other therapeutic agents are prescribed and administered to the subject. One or more other therapeutic agents may then be administered with, or before or after administration of the antiviral composition. Dosage escalation (or reduction) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

본원에 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은 특정 값의 ±10 %, ±5 %, ±2.5 % 또는 ±1 %를 의미하는 것으로 간주된다. 본원에서 사용되는 용어 "실질적으로"는 "대부분" 또는 "적어도 대다수" 또는 "50 % 초과"를 의미하는 것으로 간주된다As used herein, the term “about” or “approximately” is intended to mean ±10%, ±5%, ±2.5%, or ±1% of the specified value. As used herein, the term “substantially” is intended to mean “a majority” or “at least a majority” or “greater than 50%”.

상기 기재 내용이 본 발명의 특정 실시 예에 대한 상세한 설명이다. 본 발명의 특정 실시 예가 예시의 목적으로 여기에 설명되었지만, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서, 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구 범위에 의한 것을 제외하고는 제한되지 않는다. 본 명세서에 개시되고 청구된 모든 실시 예는 본 개시내용에 비추어 볼 때, 과도한 실험없이 제조 및 실행될 수 있다.The above description is a detailed description of a specific embodiment of the present invention. Although specific embodiments of the invention have been described herein for purposes of illustration, it will be understood that various changes may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention. Accordingly, the invention is not limited except by the appended claims. All embodiments disclosed and claimed herein can be made and practiced without undue experimentation in light of this disclosure.

Claims (17)

필요로 하는 말에서, 웨스턴 말 뇌염 바이러스(WEEV), 이스턴 말 뇌염 바이러스(EEEV) 또는 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(VEEV)에 의해 유발되는 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기 위한 항 바이러스 조성물에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염), 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2 개의 트리테르펜과 올레안드린의 조합을 포함하는 항 바이러스 조성물.An antiviral composition for use in treating a viral infection caused by Western Equine Encephalitis Virus (WEEV), Eastern Equine Encephalitis Virus (EEEV) or Venezuelan Equine Encephalitis Virus (VEEV) in an equine in need thereof, said antiviral The composition comprises a combination of oleandrine and at least two triterpenes selected from the group consisting of oleanolic acid (free acid, or salt thereof), ursolic acid (free acid, or salt thereof) and betulinic acid (free acid, or salt thereof) An antiviral composition comprising. 말이 바이러스 감염에 걸리기 전에, 연장된 치료 기간에 걸쳐 반복적으로 항 바이러스 조성물의 1회 이상의 투여량으로 말에 만성적으로 투여되어, 상기 말이 바이러스 감염에 걸리는 것을 방지하기 위하여, 웨스턴 말 뇌염 바이러스(WEEV), 이스턴 말 뇌염 바이러스(EEEV) 또는 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(VEEV)에 의해 유발되는 바이러스 감염에 걸릴 위험이 있는 말을 예방적으로 치료하는데 사용하기 위한 항 바이러스 조성물에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염), 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2 개의 트리테르펜과 올레안드린의 조합을 포함하는 항 바이러스 조성물.Western Equine Encephalitis Virus (WEEV) is administered to horses chronically in one or more doses of an antiviral composition repeatedly over an extended treatment period before the horse becomes afflicted with a viral infection to prevent the horse from contracting a viral infection. , An antiviral composition for use in the prophylactic treatment of horses at risk of contracting a viral infection caused by Eastern Equine Encephalitis Virus (EEEV) or Venezuelan Equine Encephalitis Virus (VEEV), wherein the antiviral composition comprises oleanolic acid ( an antiviral comprising a combination of oleandrine and at least two triterpenes selected from the group consisting of ursolic acid (free acid, or salt thereof), and betulinic acid (free acid, or salt thereof) composition. 필요로 하는 말에서, 웨스턴 말 뇌염 바이러스(WEEV), 이스턴 말 뇌염 바이러스(EEEV) 또는 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(VEEV)에 의해 유발되는 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기 위한 항 바이러스 조성물에 있어서,
상기 항 바이러스 조성물은 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염), 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2 개의 트리테르펜과 올레안드린의 조합, 또는 올레안드린을 포함하고,
이는 말이 상기 항 바이러스 조성물의 투여를 지시하는 상기 바이러스 감염을 가지는지 여부를 결정하고; 일정 기간 동안 처방된 초기 투여 요법에 따라 초기 투여량의 항 바이러스 조성물을 말에게 투여하고; 항 바이러스 조성물에 의한 치료에 대한 말의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적절성을 주기적으로 결정하고; 및 필요에 따라 항 바이러스 조성물로 치료를 계속하거나; 또는 투여량을 증량 또는 감량하는 것을 포함하는 방법에 사용되는 항 바이러스 조성물. An antiviral composition for use in treating a viral infection caused by Western Equine Encephalitis Virus (WEEV), Eastern Equine Encephalitis Virus (EEEV) or Venezuelan Equine Encephalitis Virus (VEEV) in an equine in need thereof, comprising:
The antiviral composition comprises oleandrine and at least two triterpenes selected from the group consisting of oleanolic acid (free acid, or salt thereof), ursolic acid (free acid, or salt thereof) and betulinic acid (free acid, or salt thereof) a combination of, or including oleandrine,
This determines whether the horse has the viral infection indicative of administration of the antiviral composition; administering to the horse an initial dose of the antiviral composition according to the prescribed initial dosing regimen for a period of time; periodically determining the adequacy of the horse's clinical response and/or therapeutic response to treatment with an antiviral composition; and continuing treatment with the antiviral composition as needed; or an antiviral composition for use in a method comprising increasing or decreasing the dose. 제1항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 a) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염) 및 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염); b) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염); 또는 c) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염), 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염)을 포함하는 항 바이러스 조성물.The composition of claim 1 , wherein the antiviral composition comprises: a) oleandrine, oleanolic acid (free acid, or salt thereof) and ursolic acid (free acid, or salt thereof); b) oleandrine, oleanolic acid (the free acid, or salt thereof) and betulinic acid (the free acid, or salt thereof); or c) an antiviral composition comprising oleandrine, oleanolic acid (free acid, or salt thereof), ursolic acid (free acid, or salt thereof) and betulinic acid (free acid, or salt thereof). 제1항에 있어서, 1회 이상의 투여량이 매일, 매주 또는 매월 투여되는 항 바이러스 조성물.The antiviral composition of claim 1 , wherein one or more doses are administered daily, weekly or monthly. 제1항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 비경구, 구강, 장내, 근육내, 피하, 설하, 경구(peroral), 입 투여 또는 이들의 조합에 의해 투여되는 항 바이러스 조성물.The antiviral composition according to claim 1, wherein the antiviral composition is administered by parenteral, oral, enteral, intramuscular, subcutaneous, sublingual, oral, oral administration, or a combination thereof. 제1항에 있어서, 올레안드린이 순수한 형태 또는 추출물 부분으로 존재하는 항 바이러스 조성물. The antiviral composition according to claim 1, wherein the oleandrine is present in pure form or as an extract fraction. 필요로 하는 말에서, 웨스턴 말 뇌염 바이러스(WEEV), 이스턴 말 뇌염 바이러스(EEEV) 또는 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(VEEV) 감염을 치료하는데 사용하기 위한 항 바이러스 조성물에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레안드린을 포함하는 항 바이러스 조성물.An antiviral composition for use in treating a Western Equine Encephalitis Virus (WEEV), Eastern Equine Encephalitis Virus (EEEV) or Venezuelan Equine Encephalitis Virus (VEEV) infection in an equine in need, said antiviral composition comprising oleandrine An antiviral composition comprising a. 연장된 치료 기간에 걸쳐 반복적으로 항 바이러스 조성물의 1회 이상의 투여량으로 말에 만성적으로 투여되어, 상기 말이 바이러스 감염에 걸리는 것을 방지하기 위하여, 바이러스 감염에 걸릴 위험이 있는 말에서, 웨스턴 말 뇌염 바이러스(WEEV), 이스턴 말 뇌염 바이러스(EEEV) 또는 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(VEEV) 감염을 예방하는데 사용하기 위한 항 바이러스 조성물에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레안드린을 포함하는 항 바이러스 조성물. Western equine encephalitis virus, in horses at risk of contracting a viral infection by chronic administration to horses in one or more doses of an antiviral composition repeatedly over an extended treatment period to prevent the horse from contracting a viral infection. An antiviral composition for use in preventing infection with (WEEV), Eastern Equine Encephalitis Virus (EEEV) or Venezuelan Equine Encephalitis Virus (VEEV), wherein the antiviral composition comprises oleandrine. 제2항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 a) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염) 및 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염); b) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염); 또는 c) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염), 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염)을 포함하는 항 바이러스 조성물.3. The method of claim 2, wherein the antiviral composition comprises: a) oleandrine, oleanolic acid (free acid, or salt thereof) and ursolic acid (free acid, or salt thereof); b) oleandrine, oleanolic acid (the free acid, or salt thereof) and betulinic acid (the free acid, or salt thereof); or c) an antiviral composition comprising oleandrine, oleanolic acid (free acid, or salt thereof), ursolic acid (free acid, or salt thereof) and betulinic acid (free acid, or salt thereof). 제3항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 a) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염) 및 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염); b) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염); 또는 c) 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 또는 염), 우르솔산(이의 유리 산, 또는 염) 및 베툴린산(이의 유리 산, 또는 염)을 포함하는 항 바이러스 조성물.4. The method of claim 3, wherein the antiviral composition comprises: a) oleandrine, oleanolic acid (free acid, or salt thereof) and ursolic acid (free acid, or salt thereof); b) oleandrine, oleanolic acid (the free acid, or salt thereof) and betulinic acid (the free acid, or salt thereof); or c) an antiviral composition comprising oleandrine, oleanolic acid (free acid, or salt thereof), ursolic acid (free acid, or salt thereof) and betulinic acid (free acid, or salt thereof). 제1항에 있어서, 총 트리테르펜 함량(올레아놀산 + 우르솔산 + 베툴린산) 대 올레안드린의 몰비는 15:1 내지 5:1, 또는 12:1 내지 8:1, 또는 100:1 내지 15:1, 또는 100:1 내지 50:1, 또는 100:1 내지 75:1, 또는 100:1 내지 80:1, 또는 100:1 내지 90:1, 또는 10:1의 범위인 항 바이러스 조성물.2. The method of claim 1, wherein the molar ratio of total triterpene content (oleanolic acid + ursolic acid + betulinic acid) to oleandrine is from 15:1 to 5:1, alternatively from 12:1 to 8:1, alternatively from 100:1 to 15: 1, or 100:1 to 50:1, or 100:1 to 75:1, or 100:1 to 80:1, or 100:1 to 90:1, or 10:1. 제1항에 있어서, 개별 트리테르펜(올레아놀산(OA):우르솔산(UA):베툴린산 (BA)) 대 올레안드린(OL)의 몰비는 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL); 또는 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); 또는 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL); 9-12(OA):최대 2(UA):최대 2 또는 10(OA):1(UA):1 또는 9-12(OA):0.1-2(UA):0.1-2(BA) 또는 9-11(OA):0.5-1.5(UA):0.5-1.5(BA) 또는 9.5-10.5(OA):0.75-1.25(UA):0.75-1.25(BA) 또는 9.5-10.5(OA):0.8-1.2(UA):0.8-1.2(BA) 또는 9.75-10.5(OA):0.9-1.1(UA):0.9-1.1(BA)의 범위인 항 바이러스 조성물.The molar ratio of claim 1 , wherein the molar ratio of the individual triterpenes (oleanolic acid (OA):ursolic acid (UA):betulinic acid (BA)) to oleandrine (OL) is 2-8 (OA):2-8 (UA) :0.1-1 (BA):0.5-1.5 (OL); or 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); or 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL); 9-12(OA):max 2(UA):max 2 or 10(OA):1(UA):1 or 9-12(OA):0.1-2(UA):0.1-2(BA) or 9 -11(OA):0.5-1.5(UA):0.5-1.5(BA) or 9.5-10.5(OA):0.75-1.25(UA):0.75-1.25(BA) or 9.5-10.5(OA):0.8- An antiviral composition in the range of 1.2(UA):0.8-1.2(BA) or 9.75-10.5(OA):0.9-1.1(UA):0.9-1.1(BA). 제1항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 네리움 종 또는 테베티아 종으로부터의 식물 물질의 추출물을 포함하는 항 바이러스 조성물.The antiviral composition of claim 1 , wherein the antiviral composition comprises an extract of plant material from Nerium spp. or Thevetia spp. 제14항에 있어서, 상기 추출물은 올레안드린, 오도로사이드 또는 네리탈로사이드의 하나 이상의 아글리콘 성분, 올레안드린, 오도로사이드 또는 네리탈로사이드의 하나 이상의 글리콘 성분, 또는 이들의 조합을 추가로 포함하는 항 바이러스 조성물.15. The method of claim 14, wherein the extract comprises one or more aglycone components of oleandrine, orodoside or neritaloside, one or more glycol components of oleandrine, orodoside or neritaloside, or a combination thereof. Further comprising an antiviral composition. 제1항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 1 차 항 바이러스 요법, 보조 항 바이러스 요법 또는 공동-항 바이러스 요법으로 투여되는 항 바이러스 조성물.The antiviral composition according to claim 1, wherein the antiviral composition is administered as a primary antiviral therapy, an adjuvant antiviral therapy or a co-antiviral therapy. 제16항에 있어서, 상기 투여는 적어도 하나의 다른 항 바이러스 조성물 또는 상기 바이러스 감염과 관련된 증상을 치료하기 위한 적어도 하나의 다른 조성물과 함께 상기 항 바이러스 조성물의 개별 투여 또는 공동 투여를 포함하는 항 바이러스 조성물.The antiviral composition of claim 16 , wherein said administering comprises separate administration or co-administration of said antiviral composition with at least one other antiviral composition or at least one other composition for treating a condition associated with said viral infection. .
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