KR20200081356A - Methods and compositions for the treatment of viral infections - Google Patents

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Abstract

필로비리대 과, 플라비비리대 또는 토가비리대 과의 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염을 치료하는 방법이 제공된다. 적어도 하나의 강심 배당체를 갖는 조성물이 바이러스 감염을 치료하기 위해 사용된다. 조성물은 적어도 하나의 트리테르펜을 추가적으로 포함할 수 있다. A method of treating a viral infection caused by a virus of the Pelopiridae, Flaviviridae or Togaviridae is provided. Compositions with at least one cardiac glycoside are used to treat viral infections. The composition may further include at least one triterpene.

Description

바이러스 감염 치료를 위한 방법 및 조성물Methods and compositions for the treatment of viral infections

본 발명은 포유동물에서 플라비비리대 감염, 토가비리대 감염 또는 필로비리대 감염의 치료를 위한 항 바이러스 조성물 및 그 사용에 관한 것이다. 일부 실시 예는 출혈성 바이러스 감염의 치료에 관한 것이다.The present invention relates to an antiviral composition and its use for the treatment of flaviviridae infections, togabiridae infections or piloviridae infections in mammals. Some embodiments relate to the treatment of hemorrhagic viral infections.

네리움(Nerium) 종의 일원인 네리움 올리앤더(Nerium oleander)는 아열대 아시아, 미국 남서부 및 지중해에 널리 분포된 관상용 식물이다. 그것의 의학적 및 독성학적 특성은 오랫동안 인식되어 왔다. 예를 들어, 치질, 궤양, 나병, 뱀 물림, 암, 종양, 신경계 장애, 세포 증식성 질환의 치료에 사용하도록 제안되어 왔다.The Nerium oleander , a member of the Nerium species, is an ornamental plant widely distributed in subtropical Asia, the American Southwest, and the Mediterranean. Its medical and toxicological properties have long been recognized. For example, it has been proposed for use in the treatment of hemorrhoids, ulcers, leprosy, snake bites, cancer, tumors, nervous system disorders, and cell proliferative diseases.

네리움 종의 식물로부터 성분의 추출은 전통적으로 끓는 물, 냉수 또는 유기 용매를 사용하여 수행되어 왔다.Extraction of ingredients from plants of the Neerium species has traditionally been carried out using boiling water, cold water or organic solvents.

상업적으로 입수 가능한 ANVIRZEL™(Ozel의 미국 특허 제 5,135,745 호)은 네리움 올리앤더의 열탕(hot-water) 추출물의 농축 형태 또는 분말 형태를 함유한다. Muller et al. (Pharmazie.(1991) Sept. 46(9), 657-663)은 네리움 올리앤더의 물 추출물 분석에 관한 결과를 개시한다. 그것들은 존재하는 다당류가 주로 갈락투론산이라고 보고한다. 다른 당류들에는 람노오스, 아라비노오스 및 갈락토스가 포함된다. 네리움 올리앤더의 열탕 추출물 내의 다당류 함량 및 다당류의 개별 당 조성은 또한 Newman et al.(J. Herbal Pharmacotherapy,(2001) vol 1, pp.1-16)에 의해 보고된 바 있다. Selvaraj et al.의 미국 특허 제 5,869,060 호는 네리움 종의 추출물 및 생산 방법에 관한 것이다. 추출물을 준비하기 위해 식물 재료를 물에 넣고 끓인다. 그 다음, 조(crude) 추출물을 식물 재료로부터 분리하고, 여과에 의해 멸균시켰다. 이어서, 생성된 추출물을 동결 건조시켜 분말을 제조할 수 있다. 미국 특허 제 6,565,897 호(Selvaraj et al.의 미국 특허전 공개 제 20020114852 호 및 PCT 국제 공개 제 WO 2000/016793 호)는 실질적으로 멸균된 추출물의 제조를 위한 열탕 추출 공정을 개시한다.Commercially available ANVIRZEL™ (Ozel US Pat. No. 5,135,745) contains a concentrated or powdered form of a hot-water extract of Neerium Oliander. Muller et al. ( Pharmazie . (1991) Sept. 46(9), 657-663) discloses the results on the analysis of water extracts of Neerium oliander. They report that the polysaccharides present are primarily galacturonic acid. Other sugars include rhamnose, arabinose and galactose. The polysaccharide content and the individual sugar composition of the polysaccharide in the hot water extract of Neerium Oliander was also reported by Newman et al. ( J. Herbal Pharmacotherapy , (2001) vol 1, pp. 1-16). U.S. Patent No. 5,869,060 to Selvaraj et al. relates to extracts and methods of production of Neerium species. To prepare the extract, boil the plant material in water. The crude extract was then separated from the plant material and sterilized by filtration. Subsequently, the resulting extract may be freeze-dried to prepare a powder. U.S. Patent No. 6,565,897 (Selvaraj et al. U.S. Patent Publication No. 20020114852 and PCT International Publication No.WO 2000/016793) discloses a hot water extraction process for the preparation of substantially sterilized extracts.

Erdemoglu et al.(J. Ethnopharmacol.(2003) Nov. 89(1), 123-129)는 항-통각 및 항-염증 활성에 기초하여, 네리움 올리앤더를 포함하는 식물의 수용(aqueous) 및 에탄올 추출물의 비교 결과를 개시한다. Erdemoglu et al. ( J. Ethnopharmacol. (2003) Nov. 89(1), 123-129) based on anti-nociceptive and anti-inflammatory activity, aqueous and Comparison results of ethanol extracts are disclosed.

네리움 올리앤더의 유기 용매 추출물은 또한 Adome et al.(Afr. Health Sci.(2003) Aug. 3(2), 77-86; 에탄올 추출물), el-Shazly et al.(J. Egypt Soc. Parasitol.(1996), Aug. 26(2), 461-473; 에탄올 추출물), Begum et al.(Phytochemistry(1999) Feb. 50(3), 435-438; 메탄올 추출물), Zia et al.(J. Ethnolpharmacol.(1995) Nov. 49(1), 33-39; 메탄올 추출물) 및 Vlasenko et al.(Farmatsiia.(1972) Sept.-Oct.21(5), 46-47; 알콜성 추출물)에 의해 개시된다. The organic solvent extract of Neerium Oliander is also described in Adome et al. (Afr. Health Sci. (2003) Aug. 3(2), 77-86; ethanol extract), el-Shazly et al. (J. Egypt Soc. Parasitol. (1996), Aug. 26(2), 461-473; ethanol extract), Begum et al. (Phytochemistry (1999) Feb. 50(3), 435-438; methanol extract), Zia et al.( J. Ethnolpharmacol. (1995) Nov. 49(1), 33-39; methanol extract) and Vlasenko et al. (Farmatsiia. (1972) Sept.-Oct. 21(5), 46-47; alcoholic extract) It is initiated by.

네리움 종의 초임계 유체 추출물은 공지되어 있고(US 8394434, US 8187644, US 7402325), 신경계 장애(US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143A1) 및 세포 증식성 장애(US 8367363)를 치료하는 데 효능을 나타냈다.Supercritical fluid extracts of Neerium species are known (US 8394434, US 8187644, US 7402325), and treat neurological disorders (US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143A1) and cell proliferative disorders (US 8367363) It showed efficacy.

트리테르펜은 매우 다양한 치료 활성을 갖는 것으로 알려져있다. 공지된 트리테르펜 중 일부는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산, 바독솔론, 마슬린산 등을 포함한다. 트리테르펜의 치료 활성은 트리테르펜의 조합보다는 개별적으로 주로 평가되었다.Triterpenes are known to have a wide variety of therapeutic activities. Some of the known triterpenes include oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid, bardoxolone, maslinic acid and the like. The therapeutic activity of triterpenes was assessed primarily individually rather than in combination with triterpenes.

올레아놀산은 선천적 세포 상(cellular phase) 2 해독 경로의 강력한 활성화제인 것으로 밝혀진 바독솔론과 같은 화합물로 대표되는 트리테르페노이드 부류에 있으며, 여기서 전사 인자 Nrf2의 활성화는 항산화 전사 반응 요소(ARE)를 함유하는 다운스트림 항산화 유전자의 프로그램에서 전사적 증가를 초래한다. 바독솔론 자체는 염증 질환의 임상 시험에서 광범위하게 조사되어 왔지만, 만성 신장 질환에서의 3 상 임상 시험은 상승된 농도에서 바독솔론을 포함하는 특정 트리테르페노이드의 공지된 세포 독성과 관련될 수 있는 부작용으로 인해 종결되었다.Oleanoic acid is in the class of triterpenoids represented by compounds such as bardoxolone, which have been found to be potent activators of the innate cellular phase 2 detoxification pathway, where the activation of the transcription factor Nrf2 contains an antioxidant transcription response element (ARE) Results in a transcriptional increase in the program of downstream antioxidant genes. Bardoxolone itself has been extensively investigated in clinical trials of inflammatory diseases, but phase 3 clinical trials in chronic kidney disease may be associated with known cytotoxicity of certain triterpenoids, including bardoxolone at elevated concentrations. It was terminated due to side effects.

다른 치료 성분과 함께 트리테르펜을 함유하는 조성물은 식물 추출물로서 발견된다. Fumiko et al.(Biol. Pharm. Bull(2002), 25(11), 1485-1487)은 트리파노소마증을 치료하기 위한 Rosmarimus officinalis L.의 메탄올 추출물의 평가를 개시한다. Addington et al.(US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143 A1)은 신경 질환의 치료를 위한 올레안드린 및 트리테르펜을 함유하는 네리움 올리앤더의 초임계 유체 추출물(SCF; PBI-05204)을 개시한다. Addington et al.(US 9011937, US 20150283191 A1)은 신경 질환의 치료를 위한 올레안드린 및 트리테르펜을 함유하는 네리움 올리앤더의 SCF 추출물의 트리테르펜-함유 분획(PBI-04711)을 개시한다. Jager et al.(Molecules(2009), 14, 2016-2031)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 다양한 식물 추출물을 개시한다. Mishra et al.(PLoS One 2016 25; 11(7):e0159430. Epub 2016 Jul 25)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Betula utilis 나무 껍질의 추출물을 개시한다. Wang et al.(Molecules(2016), 21, 139)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Alstonia scholaris의 추출물을 개시한다. L. e Silva et al.(Molecules(2012), 17, 12197)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Eriope blanchetti의 추출물을 개시한다. Rui et al.(Int. J. Mol. Sci.(2012), 13, 7648-7662)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Eucaplyptus globulus의 추출물을 개시한다. Ayatollahi et al.(Iran. J. Pharm. Res.(2011), 10(2), 287-294)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Euphorbia microsciadia의 추출물을 개시한다. Wu et al.(Molecules(2011), 16, 1-15)는 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Ligustrum 종의 추출물을 개시한다. Lee et al.(Biol. Pharm. Bull(2010), 33(2), 330)은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 다른 성분들의 혼합물을 함유하는 Forsythia viridissima의 추출물을 개시한다.Compositions containing triterpene along with other therapeutic ingredients are found as plant extracts. Fumiko et al. (Biol. Pharm. Bull (2002), 25(11), 1485-1487) discloses the evaluation of methanol extracts of Rosmarimus officinalis L. for the treatment of tripanosomiasis . Addington et al. (US 8481086, US 9220778, US 9358293, US 20160243143 A1) is a supercritical fluid extract of Neerium oleander containing oleandroline and triterpene for the treatment of neurological diseases (SCF; PBI-05204) Disclosed. Addington et al. (US 9011937, US 20150283191 A1) discloses the triterpene-containing fraction (PBI-04711) of the SCF extract of nerium oliander containing oleander and triterpene for the treatment of neurological diseases. Jager et al. (Molecules (2009), 14, 2016-2031) discloses various plant extracts containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other ingredients. Mishra et al. (PLoS One 2016 25; 11(7):e0159430. Epub 2016 Jul 25) discloses an extract of Betula utilis bark containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other ingredients. Wang et al. (Molecules (2016 ), 21, 139) discloses the Alstonia scholaris extract containing a mixture of olreahnolsan, ursolic acid, betulinic acid and the other components. L. e Silva et al. (Molecules (2012), 17, 12197) discloses an extract of Eriope blanchetti containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other ingredients. Rui et al. (Int. J. Mol. Sci. (2012), 13, 7648-7662) discloses an extract of Eucaplyptus globulus containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other components. Ayatollahi et al. (Iran. J. Pharm. Res. (2011), 10(2), 287-294) discloses an extract of Euphorbia microsciadia containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other ingredients. Wu et al. (Molecules (2011), 16, 1-15) discloses extracts of the Ligustrum species containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other ingredients. Lee et al. (Biol. Pharm. Bull (2010), 33(2), 330) discloses an extract of Forsythia viridissima containing a mixture of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and other ingredients.

올레아놀산(O 또는 OA), 우르솔산(U 또는 UA) 및 베툴린산(B 또는 BA)은 PBI-05204(PBI-23; 네리움 올리앤더의 초임계 유체 추출물) 및 PBI 04711(PBI-05204의 트리테르펜-함유 분획 0-4)에서 발견되는 3 가지 주요 트리테르펜 성분이다. 본 발명자들은 이전에(Van Kanegan et al., Nature Scientific Reports(May 2016), 6:25626. doi:10.1038/srep25626), 유사한 농도에서의 뇌 슬라이스 산소 포도당 결핍(OGD) 모델 분석에서 이들의 신경 보호 활성을 비교함으로써 효능에 대한 트리테르펜의 기여에 대해 보고하였다. 본 발명자들은 PBI 05204(PBI) 및 PBI-04711(분획 0-4)이 신경 보호 활성을 제공한다는 것을 발견했다.Oleanoic acid (O or OA), ursolic acid (U or UA) and betulinic acid (B or BA) are PBI-05204 (PBI-23; supercritical fluid extract of Neerium Oliander) and tree of PBI 04711 (PBI-05204) These are the three main triterpene components found in terpene-containing fractions 0-4). We previously (Van Kanegan et al., Nature Scientific Reports (May 2016), 6:25626. doi:10.1038/srep25626), protect their neurons in brain slice oxygen glucose deficiency (OGD) model analysis at similar concentrations Triterpene's contribution to efficacy was reported by comparing activity. We have found that PBI 05204 (PBI) and PBI-04711 (fraction 0-4) provide neuroprotective activity.

네리움 종의 추출물은 많은 다른 부류의 화합물들: 강심 배당체, 당체, 스테로이드, 트리테르펜, 다당류 및 기타 화합물을 함유하는 것으로 알려져있다. 특정 화합물은 올레안드린; 네리탈로사이드; 오도로사이드; 올레아놀산; 우르솔산; 베툴린산; 올레안드리게닌; 올리아사이드 A; 베툴린(urs-12-ene-3β,28-diol); 28-norurs-12-en-3β-ol; urs-12-en-3β-ol; 3β,3β-하이드록시-12-올레아넨-28-oic acid; 3β,20α-디하이드록시우르스-21-en-38-oic acid; 3β,27-디하이드록시-12-ursen-38-oic acid; 3β,13β-디히드록시우르스-11-en-28-oic acid; 3β,12α-디하이드록시올레아난-28,13β-olide; 3β,27-디하이드록시-12-올레아난-28-oic acid; 및 다른 성분들을 포함하는 것으로 알려져있다. It is known that extracts of the Neerium species contain many different classes of compounds: cardiac glycosides, sugars, steroids, triterpenes, polysaccharides and other compounds. Specific compounds include oleandrene; Neritaloside; Odoroside; Oleanoic acid; Ursolic acid; Betulinic acid; Oleandrigenin; Oleaside A; Betulin (urs-12-ene-3β,28-diol); 28-norurs-12-en-3β-ol; urs-12-en-3β-ol; 3β,3β-hydroxy-12-oleane-28-oic acid; 3β,20α-dihydroxyurs-21-en-38-oic acid; 3β,27-dihydroxy-12-ursen-38-oic acid; 3β,13β-dihydroxyurse-11-en-28-oic acid; 3β,12α-dihydroxyoleanan-28,13β-olide; 3β,27-dihydroxy-12-oleanan-28-oic acid; And other ingredients.

바이러스성 출혈열(VHF)은 5 개의 별개의 바이러스 과: 아레나비리대, 부니아비리대, 필로비리대, 플라비비리대 및 파라믹소비리대에 의해 야기될 수 있다. 필로바이러스, 예를 들어 에볼라바이러스(EBOV)와 마르부르그바이러스(MARV)는 사람에게 알려진 가장 병원성인 바이러스이며 최대 90 %의 사망률을 가진 바이러스성 출혈열의 원인이 되는 바이러스 중 하나이다. 각각의 비리온은 단일 가닥의 네가티브-센스 RNA 분자를 포함한다. 지지적인 관리 또는 대증 요법 이외에, EBOV(에볼라바이러스) 및 MARV(마르부르그바이러스) 감염, 즉 필로바이러스 감염을 치료할 수 있는 상업적 치료 효과적인 약물과 예방 약물이 존재하지 않는다. Tai Forest(이전의 Ivory Coast), Sudan, Zaire, Reston 및 Bundibugyo의 5 종의 에볼라바이러스가 확인되었다.Viral hemorrhagic fever (VHF) can be caused by five distinct viral families: Arenaviridae, Buniaviridae, Philobiridae, Flaviviridae, and Paramyxoviridae. Philoviruses, such as Ebolavirus (EBOV) and Marburg virus (MARV), are the most pathogenic viruses known to humans and are one of the viruses responsible for viral hemorrhagic fever with a mortality rate of up to 90%. Each virion contains a single strand of negative-sense RNA molecule. In addition to supportive management or symptomatic therapy, there are no commercial therapeutically effective drugs and prophylactic drugs that can treat EBOV (Ebolavirus) and MARV (Marburg virus) infections, ie filovirus infections. Five Ebola viruses have been identified: Tai Forest (formerly Ivory Coast), Sudan, Zaire, Reston and Bundibugyo.

플라비바이러스는 포지티브의 단일 가닥의 인벨롭된(enveloped) RNA 바이러스이다. 그것들은 주로 진드기 및 모기인 절지 동물에서 발견되며, 전 세계적으로 광범위한 질병률과 사망률을 유발한다. 모기-전염 바이러스 중 일부는 황열병, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스 및 지카바이러스를 포함한다. 진드기-전염 바이러스 감염의 일부는 진드기성 뇌염, 캬사누르 삼림병, 알크후르마 질병, 옴스크 출혈열을 포함한다. 출혈성 감염은 아니지만, 포와산 바이러스는 플라비바이러스이다.Flavivirus is a positive single-stranded enveloped RNA virus. They are found mainly in arthropods that are mites and mosquitoes, and cause widespread morbidity and mortality worldwide. Some of the mosquito-infectious viruses include yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, and Zika virus. Some of the tick-borne viral infections include mite encephalitis, Cassanur forest disease, Alkhurma disease, and Omsk hemorrhagic fever. Although not a hemorrhagic infection, the Powasan virus is a flavivirus.

올레안드린은 항-HIV 활성을 나타내었지만, 많은 바이러스에 대해서는 평가되지 않았다. 트리테르펜 올레아놀산, 베툴린산 및 우르솔산은 상이한 수준의 항 바이러스 활성을 나타내는 것으로 보고되었지만, 많은 바이러스에 대해서는 평가되지 않았다. 베툴린산은 HSV-1 균주 1C, 인플루엔자 A H7N1, ECHO 6 및 HIV-1에 대해 일부 항 바이러스 활성을 나타냈다. 올레아놀산은 HIV-1, HEP C 및 HCV H 균주 NS5B에 대해 항 바이러스 활성을 나타냈다. 우르솔산은 HIV-1, HEP C, HCV H 균주 NS5B, HSV-1, HSV-2, ADV-3, ADV-8, ADV-11, HEP B, ENTV CVB1 및 ENTV EV71에 대해 항 바이러스 활성을 나타냈다. 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산의 항 바이러스 활성은 특정 바이러스에 대한 효능으로까지 예측할 수 없다. 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산 및/또는 베툴린산이 항 바이러스 활성을 거의 또는 전혀 갖지 않는 바이러스가 존재하는데, 이는 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산 및/또는 베툴린산이 특정 속의 바이러스에 대해 항 바이러스 활성을 나타낼지 여부를 선험적으로 예측할 수 없음을 의미한다. Oleandroline exhibited anti-HIV activity, but was not evaluated for many viruses. Triterpene oleanolic acid, betulinic acid and ursolic acid have been reported to exhibit different levels of antiviral activity, but have not been evaluated for many viruses. Betulinic acid showed some antiviral activity against HSV-1 strain 1C, influenza A H7N1, ECHO 6 and HIV-1. Oleanolic acid showed antiviral activity against HIV-1, HEP C and HCV H strain NS5B. Ursolic acid showed antiviral activity against HIV-1, HEP C, HCV H strains NS5B, HSV-1, HSV-2, ADV-3, ADV-8, ADV-11, HEP B, ENTV CVB1 and ENTV EV71. The antiviral activity of oleandrolin, oleanolic acid, ursolic acid, and betulinic acid is not predictable even with efficacy against specific viruses. There are viruses in which oleandroline, oleanolic acid, ursolic acid, and/or betulinic acid have little or no antiviral activity, which means that oleandrolin, oleanolic acid, ursolic acid and/or betulinic acid are antiviral against viruses of a particular genus. This means that it cannot be predicted a priori whether or not it will exhibit activity.

Barrows et al.(Cell Host Microbe(2016), 20, 259-270의 "지카바이러스 감염 억제제에 대한 FDA 승인 약물의 스크린")은 디곡신이 지카바이러스에 대한 항 바이러스 활성을 나타내지만, 투여량이 너무 높고 독성이 있을 수 있다고 보고한다. Cheung et al.(Antiviral Res.(2014) 111, 93-99의 "뎅기 바이러스 감염에 대한 라나토사이드 C의 항 바이러스 활성")은 라나토사이드 C가 뎅기 바이러스에 대한 항 바이러스 활성을 나타냄을 보고한다.Barrows et al. (Cell Host Microbe (2016), 20, 259-270, “Screen of FDA Approved Drugs for Zikavirus Infection Inhibitors”) shows that digoxin exhibits antiviral activity against Zikavirus, but the dosage is too high. Reports may be toxic. Cheung et al. (Antiviral Res. (2014) 111, 93-99, “Antiviral activity of ranatoside C against dengue virus infection”) reports that ranatoside C shows antiviral activity against dengue virus. do.

강심 배당체가 몇몇 바이러스에 대해 일부 항 바이러스 활성을 나타내는 것으로 입증되었지만, 특정 화합물은 상이한 바이러스에 대해 매우 상이한 수준의 항 바이러스 활성을 나타내며, 이는 동일한 바이러스에 대한 평가시, 일부는 매우 열악한 항 바이러스 활성을 나타내고, 일부는 더 우수한 항 바이러스 활성을 나타냄을 의미한다. Although cardiac glycosides have been demonstrated to exhibit some antiviral activity against some viruses, certain compounds exhibit very different levels of antiviral activity against different viruses, which, when evaluated for the same virus, some have very poor antiviral activity. And some show better antiviral activity.

특정 바이러스 감염에 대해 치료적으로 활성인 올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 또는 이들의 임의의 조합을 함유하는 개선된 약제학적 조성물에 대한 요구가 여전히 남아있다.There remains a need for an improved pharmaceutical composition containing oleandroline, oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid, or any combination thereof that is therapeutically active against a particular viral infection.

본 발명은 포유동물 대상체에서 바이러스 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 바이러스 감염, 예를 들어 포유동물 대상체에서 바이러스성 출혈열(VHF) 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 약제학적 조성물의 투여에 의해 포유동물에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명자들은 인간 및 동물에서 바이러스 감염을 치료하는데 사용하기에 충분한 항 바이러스 활성을 나타내는 항 바이러스 조성물을 제조하는데 성공하였다. 본 발명자들은 특정 투약 요법을 사용하는 상응하는 치료 방법을 개발하였다.The present invention provides pharmaceutical compositions and methods for treating viral infections in mammalian subjects. The present invention also provides pharmaceutical compositions and methods for treating viral infections, such as viral hemorrhagic fever (VHF) infections in mammalian subjects. The invention also provides a method of treating a viral infection in a mammal by administration of a pharmaceutical composition. We have succeeded in preparing antiviral compositions that exhibit sufficient antiviral activity for use in treating viral infections in humans and animals. We have developed a corresponding treatment method using a specific dosing regimen.

일부 실시 예에서, 바이러스 감염은 아레나비리대, 부니아비리대, 필로비리대, 플라비비리대, 파라믹소비리대, 또는 토가비리대와 같은 바이러스 과에 의해 야기된다.In some embodiments, the viral infection is caused by a viral family such as Arenaviridae, Buneaviridae, Philobiridae, Flaviviridae, Paramyxoviridae, or Togabiridae.

본 발명의 일부 실시 예는 필로바이러스 감염, 플라비바이러스 감염, 헤니파바이러스 감염, 알파바이러스 감염 또는 토가바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 치료할 수 있는 바이러스성 감염은 적어도, 에볼라바이러스, 마르부르그바이러스, 알파바이러스, 플라비바이러스, 황열병, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스, 지카바이러스, 베네수엘라 말 뇌척수염(뇌염)(VEE) 바이러스, 치쿤구야 바이러스, 웨스턴 말 뇌척수염(뇌염)(WEE) 바이러스, 이스턴 말 뇌척수염(뇌염)(EEE) 바이러스, 진드기성 뇌염, 캬사누르(Kyasanur) 삼림병, 알크후르마(Alkhurma) 질병, 옴스크 출혈열, 헨드라 바이러스, 니파 바이러스 및 이들의 종을 포함한다.Some embodiments of the invention relate to compositions and methods for treating filovirus infection, flavivirus infection, henipavirus infection, alphavirus infection or togavirus infection. Viral infections that can be treated include at least Ebola virus, Marburg virus, alpha virus, flavivirus, yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, Zika virus, Venezuelan equine encephalomyelitis (encephalitis) (VEE) virus, chikunguya Virus, Western equine encephalomyelitis (encephalitis) (WEE) virus, Eastern equine encephalomyelitis (encephalitis) (EEE) virus, tick encephalitis, Kyasanur forest disease, Alkhurma disease, Omsk hemorrhagic fever, Hendra virus , Nipa virus and their species.

본 발명의 일부 실시 예는 필로비리대 과, 플라비비리대 과, 파라믹소비리대 과 또는 토가비리대 과의 바이러스로부터의 바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.Some embodiments of the present invention relate to compositions and methods for treating viral infections from viruses of the Pelobiridae family, Flaviviridae family, Paramyxoviridae family, or Togaviridae family.

본 발명의 일부 실시 예는 헤니파바이러스 속, 에볼라바이러스 속, 플라비바이러스 속, 마르부르그바이러스 속 또는 알파바이러스 속의 바이러스로부터의 바이러스 감염을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.Some embodiments of the invention relate to compositions and methods for treating viral infections from viruses of the genus Henifavirus, Ebolavirus, Flavivirus, Marburgvirus or Alphavirus.

일부 실시 예에서, 본 발명은 (a) 특정 강심 배당체(들); b) 복수의 트리테르펜; 또는 c) 특정 강심 배당체(들)와 복수의 트리테르펜의 조합을 포함하는(필수적으로 구성되는) 항 바이러스 조성물을 제공한다. In some embodiments, the present invention is directed to (a) a specific core glycoside(s); b) a plurality of triterpenes; Or c) an antiviral composition comprising (essentially consisting of) a combination of a specific cardiac glycoside(s) and a plurality of triterpenes.

본 발명의 일 측면은 항 바이러스 조성물의 대상체에게 만성 투여함으로써 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 대상체는 조성물의 치료적 유효량(치료적으로 적절한 투여량)을 대상체에게 만성적으로 투여함으로써 바이러스 감염 또는 바이러스 감염의 개선과 관련된 증상의 완화를 제공함으로써 치료된다. 대상체에게의 조성물의 투여는 감염 직후 또는 감염 후 1 일 내지 5 일 이내에 또는 바이러스 감염의 명확한 진단 후 가장 빠른 시점에 시작될 수 있다.One aspect of the invention provides a method of treating a viral infection in a subject by chronic administration to the subject of the antiviral composition. Subjects are treated by chronically administering to the subject a therapeutically effective amount of the composition (therapeutically appropriate dosage) to provide relief of symptoms associated with viral infection or improvement of viral infection. Administration of the composition to the subject can begin immediately after infection or within 1-5 days after infection or at the earliest time point after a clear diagnosis of viral infection.

따라서, 본 발명은 포유동물에게 하나 이상의 치료적 유효량의 항 바이러스 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 1회 이상의 투여량은 매일, 매주 또는 매월 단위로 투여된다. 하루에 1회 이상의 투여량이 투여될 수 있다.Accordingly, the present invention provides a method of treating a viral infection in a mammal, comprising administering to the mammal at least one therapeutically effective amount of an antiviral composition. One or more doses are administered daily, weekly or monthly. More than one dose per day can be administered.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은:The invention also provides a method of treating a viral infection in a subject in need thereof, the method comprising:

대상체가 바이러스 감염을 갖는지 여부를 결정하는 단계;Determining whether the subject has a viral infection;

항 바이러스 조성물의 투여를 지시하는 단계;Directing the administration of the antiviral composition;

일정 기간 동안 처방된 초기 투여 요법에 따라 대상체에 초기 투여량의 항 바이러스 조성물을 투여하는 단계;Administering an initial dose of an antiviral composition to the subject according to the initial dosing regimen prescribed for a period of time;

항 바이러스 조성물에 의한 치료에 대한 대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적절성을 주기적으로 결정하는 단계; 및Periodically determining the adequacy of the subject's clinical response and/or treatment response to treatment with an antiviral composition; And

대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 적절한 경우, 원하는 임상적 종점(endpoint)에 도달할 때까지 항 바이러스 조성물로 치료를 계속하고; 또는If the subject's clinical and/or therapeutic response is appropriate, continue treatment with the antiviral composition until the desired clinical endpoint is reached; or

대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 초기 투여량 및 초기 투여 요법에서 불충분한 경우, 대상체에서 원하는 임상 반응 및/또는 치료반응이 달성될 때까지 투여량을 증량 또는 감량시키는 단계를 포함한다. And if the subject's clinical response and/or treatment response is insufficient in the initial dose and initial dosing regimen, increasing or decreasing the dose until the desired clinical response and/or treatment response in the subject is achieved.

항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속된다. 투여량 또는 투여 요법은 예를 들어 바이러스 감염과 관련된 특정 증상의 감소 또는 완화와 같이, 환자가 원하는 임상적 종점(들)에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다. 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적절성을 결정하는 것은 바이러스 감염에 익숙한 임상의에 의해 수행될 수 있다.Treatment of subjects with antiviral compositions continues as needed. The dosage or dosing regimen can be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint(s), such as reduction or alleviation of certain symptoms associated with viral infection. Determining the adequacy of the clinical response and/or treatment response can be performed by a clinician familiar with viral infection.

본 발명의 방법의 개별 단계는 별도의 설비 또는 동일한 설비 내에서 수행될 수 있다.The individual steps of the method of the invention can be carried out in separate installations or in the same installation.

항 바이러스 조성물은 만성적으로, 즉 매일, 격일로, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 매주, 격주로, 2주마다, 3주마다, 매월, 격월로, 반달마다, 격월로, 2개월마다, 분기별로, 격분기마다, 3개월마다, 계절에 따라, 반년마다 및/또는 매년 투여될 수 있다. 치료 기간은 하나 이상의 주, 하나 이상의 개월, 하나 이상의 분기 및/또는 하나 이상의 년일 수 있다. 유효량의 강심 배당체는 하루에 1 회 이상 투여된다. The antiviral composition is chronic, i.e. every day, every other day, every 2 days, every 3 days, every 4 days, every 5 days, every 6 days, every week, every other week, every 2 weeks, every 3 weeks, every month, every other month , Can be administered every half month, every other month, every two months, quarterly, every other quarter, every three months, seasonally, every half year and/or every year. The duration of treatment can be one or more weeks, one or more months, one or more quarters, and/or one or more years. An effective amount of cardiac glycosides is administered at least once a day.

일부 실시 예에서, 대상체는 하루에 강심 배당체의 140 마이크로그램 내지 315 마이크로그램을 투여받는다. 일부 실시 예에서, 투여량은 20 마이크로그램 내지 750 마이크로그램, 12 마이크로그램 내지 300 마이크로그램, 또는 12 마이크로그램 내지 120 마이크로그램의 강심 배당체를 포함한다. 강심 배당체의 일일 투여량은 강심 배당체의 20 마이크로그램 내지 750 마이크로그램, 0.01 마이크로그램 내지 100 mg, 또는 0.01 마이크로그램 내지 100 마이크로그램의 범위일 수 있다. SCF 추출물에 존재하는 권장 일일 투여량의 올레안드린은 일반적으로 1 일 2 회 약 0.25 내지 약 50 마이크로그램, 또는 1 일 2 회 또는 약 12 시간마다 약 0.9 내지 5 마이크로그램이다. 투여량은 약 0.5 내지 약 100 마이크로그램/일, 약 1 내지 약 80 마이크로그램/일, 약 1.5 내지 약 60 마이크로그램/일, 약 1.8 내지 약 60 마이크로그램/일, 약 1.8 내지 약 40 마이크로그램/일일 수 있다. 최대 허용 투여량은 올레안드린을 함유하는 올리앤더 추출물의 약 100 마이크로그램/일, 약 80 마이크로그램/일, 약 60 마이크로그램/일, 약 40 마이크로그램/일, 약 38.4 마이크로그램/일 또는 약 30 마이크로그램/일일 수 있으며, 최소 유효 투여량은 약 0.5 마이크로그램/일, 약 1 마이크로그램/일, 약 1.5 마이크로그램/일, 약 1.8 마이크로그램/일, 약 2 마이크로그램/일, 또는 약 5 마이크로그램/일일 수 있다. 강심 배당체 및 트리테르펜을 포함하는 적합한 투여량은 약 0.05 0.5 mg/kg/일, 0.05-0.35 mg/kg/일, 0.05-0.22 mg/kg/일, 0.05-0.4 mg/kg/일, 0.05-0.3 mg/kg/일, 0.05-0.5 마이크로그램/kg/일, 0.05-0.35 마이크로그램/kg/일, 0.05-0.22 마이크로그램/kg/일, 0.05-0.4 마이크로그램/kg/일 또는 0.05-0.3 마이크로그램/kg/일일 수 있다.In some embodiments, the subject receives 140 micrograms to 315 micrograms of cardiac glycosides per day. In some embodiments, dosages include 20 micrograms to 750 micrograms, 12 micrograms to 300 micrograms, or 12 micrograms to 120 micrograms of cardiac glycosides. The daily dosage of cardiac glycosides can range from 20 micrograms to 750 micrograms, 0.01 micrograms to 100 mg, or 0.01 micrograms to 100 micrograms of cardiac glycosides. The recommended daily dose of oleandroin present in the SCF extract is generally about 0.25 to about 50 micrograms twice daily, or about 0.9 to 5 micrograms twice daily or about every 12 hours. The dosage is about 0.5 to about 100 micrograms/day, about 1 to about 80 micrograms/day, about 1.5 to about 60 micrograms/day, about 1.8 to about 60 micrograms/day, about 1.8 to about 40 micrograms /Day. The maximum allowable dosage is about 100 micrograms/day, about 80 micrograms/day, about 60 micrograms/day, about 40 micrograms/day, about 38.4 micrograms/day, or about 38.4 micrograms/day of the oleander extract containing oleander. About 30 micrograms/day, the minimum effective dosage is about 0.5 micrograms/day, about 1 microgram/day, about 1.5 micrograms/day, about 1.8 micrograms/day, about 2 micrograms/day, or About 5 micrograms/day. Suitable dosages comprising cardiac glycosides and triterpenes are about 0.05 0.5 mg/kg/day, 0.05-0.35 mg/kg/day, 0.05-0.22 mg/kg/day, 0.05-0.4 mg/kg/day, 0.05- 0.3 mg/kg/day, 0.05-0.5 microgram/kg/day, 0.05-0.35 microgram/kg/day, 0.05-0.22 microgram/kg/day, 0.05-0.4 microgram/kg/day or 0.05-0.3 Micrograms/kg/day.

항 바이러스 조성물은 전신 투여될 수 있다. 전신 투여 방식은 비경구, 구강(buccal), 장내, 근육내, 피하, 설하, 경구(peroral), 입 투여를 포함한다. 조성물은 또한 주사를 통해 또는 정맥 내로 투여될 수 있다.The antiviral composition can be administered systemically. Systemic administration methods include parenteral, buccal, intestinal, intramuscular, subcutaneous, sublingual, oral, and oral administration. The composition can also be administered via injection or intravenously.

항 바이러스 조성물에 존재하는 경우, 강심 배당체는 바람직하게는 올레안드린이지만, 오도로사이드, 네리탈로사이드 또는 올레안드리게닌을 포함할 수 있다. 일부 실시 예에서, 조성물은 a) 하나 이상의 트리테르펜; b) 하나 이상의 스테로이드; c) 하나 이상의 트리테르펜 유도체; d) 하나 이상의 스테로이드 유도체; 또는 e) 이들의 조합을 더 포함한다. 일부 실시 예에서, 조성물은 강심 배당체 및 a) 2 개 또는 3 개의 트리테르펜; b) 2 개 또는 3 개의 트리테르펜 유도체; c) 2 개 또는 3 개의 트리테르펜 염; 또는 d) 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시 예에서, 트리테르펜은 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 이의 염 또는 유도체로 이루어진 군에서 선택된다.When present in the antiviral composition, the cardiac glycosides are preferably oleandroins, but may include ododoside, neritaloside or oleandrogenin. In some embodiments, the composition comprises a) one or more triterpenes; b) one or more steroids; c) one or more triterpene derivatives; d) one or more steroid derivatives; Or e) combinations thereof. In some embodiments, the composition comprises a core glycoside and a) two or three triterpenes; b) two or three triterpene derivatives; c) two or three triterpene salts; Or d) combinations thereof. In some embodiments, the triterpenes are selected from the group consisting of oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and salts or derivatives thereof.

본 발명의 일부 실시 예는 약제학적 조성물이 적어도 하나의 약제학적 부형제 및 항 바이러스 조성물을 포함하는 것을 포함한다. 일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 a) 적어도 하나의 강심 배당체 및 적어도 하나의 트리테르펜; b) 적어도 하나의 강심 배당체 및 적어도 2 개의 트리테르펜; c) 적어도 하나의 강심 배당체 및 적어도 3 개의 트리테르펜; d) 적어도 2 개의 트리테르펜을 포함하며 강심 배당체를 배제하고; e) 적어도 3 개의 트리테르펜을 포함하며 강심 배당체를 배제하고; 또는 f) 적어도 하나의 강심 배당체, 예를 들어 올레안드린을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 트리테르펜 및 강심 배당체는 또한 달리 명시되지 않는 한, 이들의 염 및 유도체를 포함한다.Some embodiments of the invention include that the pharmaceutical composition comprises at least one pharmaceutical excipient and an antiviral composition. In some embodiments, the antiviral composition comprises: a) at least one cardiac glycoside and at least one triterpene; b) at least one cardiac glycoside and at least two triterpenes; c) at least one cardiac glycoside and at least three triterpenes; d) at least two triterpenes and excluding cardiac glycosides; e) at least three triterpenes and excluding cardiac glycosides; Or f) at least one cardiac glycoside, for example oleandrene. As used herein, the terms triterpene and cardiac glycosides also include salts and derivatives thereof, unless otherwise specified.

강심 배당체는 순수한 형태로 또는 하나 이상의 강심 배당체를 함유하는 추출물 부분으로서 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 트리테르펜(들)은 순수한 형태로 또는 트리테르펜(들)을 함유하는 추출물의 일부로서 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 일부 실시 예에서, 강심 배당체는 약제학적 조성물에서 항 바이러스 활성을 주로 담당하는 성분을 의미하는 1 차 치료 성분으로서 존재한다. 일부 실시 예에서, 트리테르펜(들)은 약제학적 조성물에서 항 바이러스 활성을 주로 담당하는 성분(들)을 의미하는 1 차 치료 성분(들)으로서 존재한다.The cardiac glycosides may be present in the pharmaceutical composition in pure form or as part of an extract containing one or more cardiac glycosides. Triterpene(s) may be present in the pharmaceutical composition in pure form or as part of an extract containing triterpene(s). In some embodiments, the cardiac glycoside is present as a primary therapeutic ingredient in the pharmaceutical composition, meaning a component primarily responsible for antiviral activity. In some embodiments, the triterpene(s) is present in the pharmaceutical composition as the primary therapeutic ingredient(s), meaning component(s) primarily responsible for antiviral activity.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물을 포함하는 추출물은 식물 재료의 추출에 의해 수득된다. 추출물은 식물 재료의 열탕 추출물, 냉수 추출물, 초임계 유체(SCF) 추출물, 유기 용매 추출물 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 일부 실시 예에서, 식물 재료는 네리움 종 또는 테베티아(Thevetia) 종 식물 질량이다. 특정 종은 네리움 올리앤더 또는 테베티아 네리폴리아(Thevetia nerifolia)를 포함한다. 일부 실시 예에서, 추출물은 추출물이 대상체에게 투여될 때, 추출 동안 강심 배당체와 함께 수득되어, 강심 배당체의 치료 효능에 기여하는 적어도 하나의 다른 약리학적 활성 제제를 포함한다. 일부 실시 예에서, 조성물은 하나 이상의 다른 비-강심 배당체 치료학적 유효 작용제, 즉 강심 배당체가 아닌 하나 이상의 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시 예에서, 조성물은 하나 이상의 항 바이러스 화합물(들)을 추가로 포함한다. 일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 약리학적 활성 다당류를 배제한다.In some embodiments, an extract comprising an antiviral composition is obtained by extraction of plant material. The extract may include a hot water extract, a cold water extract, a supercritical fluid (SCF) extract, an organic solvent extract, or a combination thereof from plant materials. In some embodiments, the plant material is a Neerium species or Thevetia species plant mass. Certain species include Neerium oleander or Thevetia nerifolia. In some embodiments, the extract comprises at least one other pharmacologically active agent that, when the extract is administered to a subject, is obtained with the cardiac glycosides during extraction, contributing to the therapeutic efficacy of the cardiac glycosides. In some embodiments, the composition further comprises one or more other non-strong glycoside therapeutically effective agents, ie one or more agents that are not cardiac glycosides. In some embodiments, the composition further comprises one or more antiviral compound(s). In some embodiments, antiviral compositions exclude pharmacologically active polysaccharides.

일부 실시 예에서, 추출물은 하나 이상의 강심 배당체 및 하나 이상의 강심 배당체 전구체(예를 들어, 카르데놀리드, 카르다디에놀리드 및 카르다트리에놀리드)와 같은 것으로서, 이들 모두는 강심 배당체의 아글리콘 성분, 예를 들어 디기톡신, 아세틸 디기톡신, 디기톡시게닌, 디곡신, 아세틸 디곡신, 디곡시게닌, 메디곡신, 스트로판틴, 사이마린, 우아바인 또는 스트로판티딘이다. 추출물은 강심 배당체 전구체로서 강심 배당체(예컨대, 글루코사이드, 프럭토사이드 및/또는 글루쿠로나이드)의 하나 이상의 글리콘(glycone) 성분을 포함할 수 있다. 따라서, 항 바이러스 조성물은 하나 이상의 아글리콘 성분 및 하나 이상의 글리콘 성분으로 이루어진 군으로부터 선택된 2 이상의 강심 배당체 전구체 및 하나 이상의 강심 배당체를 포함할 수 있다.In some embodiments, the extract is such as one or more cardiac glycosides and one or more cardiac glycoside precursors (e.g., cardenolide, cardadienolide and cardatrienolide), all of which are agglomerates of cardiac glycosides Licon components such as digitoxin, acetyl digitoxin, digitoxygenin, digoxin, acetyl digoxin, digoxigenin, medigoxin, strophantin, cymarin, ovavine or stropantidine. The extract may include one or more glycone components of the cardiac glycosides (eg, glucoside, fructoside and/or glucuronide) as the cardiac glycoside precursor. Accordingly, the antiviral composition may include two or more cardiac glycoside precursors and one or more cardiac glycosides selected from the group consisting of one or more aglycone components and one or more glycone components.

일부 실시 예에서, 올레안드린 함량에 기초한 등가 투여량이 비교될 때, 올레안드린(OL), 올레아놀산(OA), 우르솔산(UA) 및 베툴린산(BA)을 함유하는 조성물이 순수한 올레아드린보다 더 효과적이다.In some embodiments, a composition containing oleandroline (OL), oleanolic acid (OA), ursolic acid (UA), and betulinic acid (BA) is pure oleadrine when equivalent doses based on oleandrolin content are compared. It is more effective.

일부 실시 예에서, 총 트리테르펜 함량(OA + UA + BA) 대 올레안드린의 몰비는 약 15:1 내지 약 5:1, 또는 약 12:1 내지 약 8:1, 또는 약 100:1 내지 약 15:1, 또는 약 100:1 내지 약 50:1, 또는 약 100:1 내지 약 75:1, 또는 약 100:1 내지 약 80:1, 또는 약 100:1 내지 약 90:1, 또는 약 10:1의 범위이다. In some embodiments, the molar ratio of total triterpene content (OA + UA + BA) to oleandrene is about 15:1 to about 5:1, or about 12:1 to about 8:1, or about 100:1 to About 15:1, or about 100:1 to about 50:1, or about 100:1 to about 75:1, or about 100:1 to about 80:1, or about 100:1 to about 90:1, or It is in the range of about 10:1.

일부 실시 예에서, 개별 트리테르펜 대 올레안드린의 몰비는 다음과 같이 범위가 설정된다: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL); 또는 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); 또는 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); 또는 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).In some embodiments, the molar ratio of individual triterpenes to oleandrones is ranged as follows: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL) ; Or 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); Or 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); Or 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).

일부 실시 예에서, 다른 치료제는 추출물의 제조 동안 수득된 다당류가 아니며, 이는 그것이 산성 호모폴리갈락투로난 또는 아라비노갈락투로난이 아님을 의미한다. 일부 실시 예에서, 추출물은 다른 치료제를 배제하고, 및/또는 추출물의 제조 동안 수득된 산성 호모폴리갈락투로난 또는 아라비노갈락투로난을 배제한다.In some embodiments, other therapeutic agents are not polysaccharides obtained during the manufacture of the extract, meaning that it is not acidic homopolygalacturonan or arabinogalacturonan. In some embodiments, the extract excludes other therapeutic agents, and/or excludes acidic homopolygalacturonan or arabinogalacturonan obtained during manufacture of the extract.

본 발명은 또한 대상체에서의 바이러스 감염의 치료를 위한 약제의 제조에 강심 배당체를 사용하는 것을 제공한다. 일부 실시 예에서, 이러한 약제의 제조는 본 발명의 하나 이상의 항 바이러스 화합물을 제공하는 단계; 한번 투여량의 항 바이러스 화합물(들)을 약제학적 제형에 포함시키는 단계; 및 약제학적 제형을 포장하는 단계를 포함한다. 일부 실시 예에서, 제조는 PCT 국제 출원 번호 PCT/US06/29061에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 제조는 또한 포장된 제형을 벤더(소매업체, 도매업자 및/또는 유통업체)에게 전달하는 단계; 포장된 제형을 바이러스 감염을 갖는 대상체에게 판매하거나 제공하는 단계; 약제와 함께, 제형의 사용, 투여 요법, 투여, 함량 및 독성 프로파일에 관한 지침을 제공하는 라벨 및 패키지 삽입물을 포함하는 단계와 같은 하나 이상의 추가 단계들을 포함할 수 있다. 일부 실시 예에서, 바이러스 감염의 치료는 대상체가 바이러스 감염을 갖는지를 결정하는 단계; 투여 요법에 따라 대상체에게 약제학적 제형의 투여를 지시하는 단계; 대상체에게 하나 이상의 약제학적 제형을 투여하는 단계로서, 하나 이상의 약제학적 제형은 투여 요법에 따라 투여되는 단계를 포함한다. The present invention also provides the use of cardiac glycosides in the manufacture of a medicament for the treatment of a viral infection in a subject. In some embodiments, the preparation of such medicaments comprises providing one or more antiviral compounds of the present invention; Incorporating a single dose of antiviral compound(s) into the pharmaceutical formulation; And packaging the pharmaceutical formulation. In some embodiments, manufacturing may be performed as described in PCT International Application No. PCT/US06/29061. Manufacturing also includes delivering the packaged formulation to a vendor (retailer, wholesaler and/or distributor); Selling or providing the packaged formulation to a subject with a viral infection; Along with the medicament, it may include one or more additional steps, such as including a label and package insert that provides guidance regarding the use of the formulation, dosing regimen, administration, content and toxicity profile. In some embodiments, treatment of a viral infection comprises determining whether the subject has a viral infection; Instructing the subject to administer the pharmaceutical formulation according to the dosing regimen; Administering to the subject one or more pharmaceutical formulations, the one or more pharmaceutical formulations comprising administering according to the dosing regimen.

약제학적 조성물은 수용성(혼화성) 공-용매, 불수용성(불혼화성) 공-용매, 계면 활성제, 항산화제, 킬레이트제 및 흡수 증강제로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나의 물질의 조합을 추가로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition further comprises a combination of at least one substance selected from the group consisting of water-soluble (miscible) co-solvent, water-insoluble (immiscible) co-solvent, surfactant, antioxidant, chelating agent and absorption enhancer. Can.

가용화제는 적어도 단일 계면 활성제이지만, 그것은 또한 a) 계면 활성제 및 물 혼화성 용매; b) 계면 활성제 및 물 불혼화성 용매; c) 계면 활성제, 항산화제; d) 계면 활성제, 항산화제 및 물 혼화성 용매; e) 계면 활성제, 항산화제 및 물 불혼화성 용매; f) 계면 활성제, 물 혼화성 용매 및 물 불혼화성 용매; 또는 g) 계면 활성제, 항산화제, 물 혼화성 용매 및 물 불혼화성 용매의 조합과 같은 재료들의 조합일 수 있다. The solubilizer is at least a single surfactant, but it also contains a) a surfactant and a water miscible solvent; b) surfactants and water immiscible solvents; c) surfactants, antioxidants; d) surfactants, antioxidants and water miscible solvents; e) surfactants, antioxidants and water immiscible solvents; f) surfactants, water miscible solvents and water immiscible solvents; Or g) a combination of materials, such as a combination of a surfactant, antioxidant, water miscible solvent and water immiscible solvent.

약제학적 조성물은 a) 적어도 하나의 액체 담체; b) 적어도 하나의 유화제; c) 적어도 하나의 가용화제; d) 적어도 하나의 분산제; e) 적어도 하나의 다른 부형제; 또는 f) 이들의 조합을 선택적으로 더 포함한다.The pharmaceutical composition comprises a) at least one liquid carrier; b) at least one emulsifier; c) at least one solubilizer; d) at least one dispersant; e) at least one other excipient; Or f) combinations thereof.

일부 실시 예에서, 물 혼화성 용매는 저 분자량(6000 미만) PEG, 글리콜 또는 알코올이다. 일부 실시 예에서, 계면 활성제는 페길레이티드 계면 활성제이며, 이는 폴리(에틸렌 글리콜) 작용기를 포함하는 계면 활성제를 의미한다.In some embodiments, the water miscible solvent is low molecular weight (less than 6000) PEG, glycol or alcohol. In some embodiments, the surfactant is a pegylated surfactant, which means a surfactant comprising poly(ethylene glycol) functional groups.

본 발명은 본 명세서에 개시된 본 발명의 양태, 실시 예 및 하위 실시 예의 모든 조합을 포함한다.The present invention includes all combinations of aspects, embodiments and sub-embodiments of the present invention disclosed herein.

다음의 도면들은 본 명세서의 설명의 일부를 형성하고 청구된 발명의 예시적인 실시 예들을 설명한다. 당업자는 이들 도면 및 본 명세서의 설명에 비추어 과도한 실험없이 본 발명을 실시할 수 있을 것이다.
도 1 내지 도 2는 에볼라바이러스에 대한 다양한 조성물의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 3 내지 도 4는 마르부르그바이러스에 대한 다양한 조성물의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 5는 베로(Vero) E6 세포에서 지카바이러스(SIKV 균주 PRVABC59)에 대한 올레안드린의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 6은 베로 E6 세포에서 지카바이러스(SIKV 균주 PRVABC59)에 대한 디곡신의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 7은 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 8은 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.
도 9는 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 존재하에 베로 E6 세포의 시험관내 세포 생존력을 요약한 차트를 도시한다.
도 10a 및 10b는 바이러스에 노출된 직후 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 도 10a는 감염 후 2 시간; 도 10b는 감염 후 24 시간.
도 11a 및 11b는 바이러스에 노출된 직후 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 도 11a는 감염 후 2 시간; 도 11b는 감염 후 24 시간.
도 12a 및 도 12b는 올레안드린에 노출된 바이러스 감염된 베로 E6 세포에 의한 감염성 자손의 산물을 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다. 12a-에볼라바이러스; 12b-마르부르그바이러스.
도 13a 및 13b는 베로 E6 세포에서 베네수엘라 말 뇌척수염 바이러스(도 13a) 및 웨스턴 말 뇌척수염 바이러스(도 13b)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다.The following figures form part of the description herein and illustrate exemplary embodiments of the claimed invention. Those skilled in the art will be able to practice the present invention without undue experimentation in light of these drawings and the description herein.
1 to 2 show charts summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions for Ebola virus.
3 to 4 show charts summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions for marburg virus.
FIG. 5 shows a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of oleander against Zikavirus (SIKV strain PRVABC59) in Vero E6 cells.
FIG. 6 shows a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of digoxin against zicavirus (SIKV strain PRVABC59) in Vero E6 cells.
FIG. 7 shows a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandroin, digoxin and PBI-05204) for Ebolavirus in Vero E6 cells.
FIG. 8 shows a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions for marburg virus (oleandroin, digoxin and PBI-05204) in Vero E6 cells.
9 shows a chart summarizing the in vitro cell viability of Vero E6 cells in the presence of various compositions (oleandrene, digoxin and PBI-05204).
10A and 10B show charts summarizing the ability of compositions (oleandroins and PBI-05204) to inhibit Ebolavirus in Vero E6 cells immediately after exposure to virus: FIG. 10A 2 hours post infection; 10B 24 hours after infection.
11A and 11B show a chart summarizing the ability of compositions (oleandroins and PBI-05204) to inhibit Marburg virus in Vero E6 cells immediately after exposure to virus: FIG. 11A 2 hours post infection; 11B 24 hours after infection.
12A and 12B show charts summarizing the ability of compositions (oleandroins and PBI-05204) to inhibit the products of infectious progeny by virus-infected Vero E6 cells exposed to oleander. 12a-Ebola virus; 12b-Marburg virus.
13A and 13B show in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandroin, digoxin and PBI-05204) for Venezuelan Equine Encephalomyelitis Virus (FIG. 13A) and Western Equine Encephalomyelitis Virus (FIG. 13B) in Vero E6 cells Shows a chart summarizing.

본 발명은 유효량의 항 바이러스 조성물(또는 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 약제학적 부형제를 포함하는 약제학적 조성물)을 대상체에게 만성적으로 투여함으로써 대상체에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공한다. 약제학적 조성물은 대상체에 가장 적합한 투여 요법에 따라 투여되고, 투여량 및 투여 요법의 적합성은 종래의 임상 관행 및 바이러스 감염에 대한 임상 치료 종점에 따라 임상적으로 결정될 수 있다.The present invention provides a method of treating a viral infection in a subject by chronically administering to the subject an effective amount of an antiviral composition (or a pharmaceutical composition comprising an antiviral composition and one or more pharmaceutical excipients). The pharmaceutical composition is administered according to the dosing regimen most suitable for the subject, and the dosage and suitability of the dosing regimen can be clinically determined according to conventional clinical practice and clinical treatment endpoints for viral infections.

본원에 사용된 용어 "대상체"는 포유동물, 예를 들어 고양이, 개, 마우스, 기니피그, 말, 소, 양 및 인간과 같은 온혈 동물을 의미하는 것으로 이해된다.The term “subject” as used herein is understood to mean warm-blooded animals such as mammals, eg cats, dogs, mice, guinea pigs, horses, cattle, sheep, and humans.

본원에 사용된 바이러스 감염 위험이 있는 대상체는: a) 모기, 특히 에데스(Aedes) 종(Aedes egypti, Aedes albopictus) 모기가 살고있는 지리적 영역에 거주하는 대상체; b) 바이러스 감염자들 근처 또는 그들과 함께 사는 대상체; c) 바이러스 감염을 가진 사람과 성적인 관계를 가진 대상체; d) 진드기, 특히 익소디즈(Ixodes) 종(Ixodes marx, Ixodes scapularis 또는 Ixodes cooke species) 진드기가 살고있는 지리적 영역에 거주하는 대상체; e) 과일 박쥐가 사는 지리적 지역에 살고 거주하는 대상체; f) 열대 지역에 사는 대상체; g) 아프리카에 사는 대상; h) 바이러스 감염을 갖는 다른 대상체의 체액과 접촉하는 대상체; i) 아이; 또는 j) 면역 체계가 약화된 대상체이다. 일부 실시 예에서, 대상체는 암컷, 임신할 수 있는 암컷 또는 임신한 암컷이다.Subjects at risk of viral infection as used herein include: a) subjects residing in geographic areas in which mosquitoes, in particular the Aedes egypti, Aedes albopictus mosquitoes, live; b) subjects who live near or with virus infections; c) subjects who have a sexual relationship with a person with a viral infection; d) subjects living in geographic areas in which ticks, especially Ixodes marx, Ixodes scapularis or Ixodes cooke species, live; e) subjects living and residing in the geographic area in which the fruit bats live; f) subjects living in tropical regions; g) who live in Africa; h) a subject in contact with body fluids of another subject with a viral infection; i) child; Or j) the subject has a weakened immune system. In some embodiments, the subject is a female, pregnant female, or pregnant female.

본 발명에 따라 치료된 대상체는 치료 반응을 나타낼 것이다. "치료반응"은 바이러스 감염을 앓고 있는 대상체가 강심 배당체로 치료한 결과 다음과 같은 임상적 이점 중 적어도 하나를 누리게 되는 것을 의미한다: 대상체의 혈액 또는 혈장에서의 활성 바이러스 농도 감소, 대상체의 혈액 또는 혈장으로부터의 활성 바이러스의 박멸, 감염의 개선, 감염과 관련된 증상의 발생 감소, 감염의 부분적 또는 완전한 완화 또는 감염의 진행까지의 증가된 시간. 치료 반응은 전체적 또는 부분적 치료 반응일 수 있다.Subjects treated in accordance with the present invention will exhibit a therapeutic response. “Treatment response” means that a subject suffering from a viral infection has at least one of the following clinical benefits as a result of treatment with cardiac glycosides: reduction in the concentration of active virus in the subject's blood or plasma, subject's blood or Eradication of active virus from plasma, improvement of infection, reduced incidence of symptoms associated with infection, partial or complete relief of infection or increased time to progression of infection. The therapeutic response can be an overall or partial therapeutic response.

본원에 사용된 "진행까지의 시간"은 바이러스 감염이 진단(또는 치료)된 후 감염이 악화되기 시작할 때까지의 기간, 길이 또는 지속 기간이다. 더 이상의 감염 진행없이 감염 수준이 유지되는 기간이며, 감염이 다시 진행되기 시작할 때 그 기간은 종료된다. 질병의 진행은 치료 전 또는 치료 시작 시에 감염을 앓고있는 대상체를 "스테이징(staging)"함으로써 결정된다. 예를 들어, 대상체의 건강은 치료 전 또는 치료 시작 시에 결정된다. 이어서, 대상체를 강심 배당체로 치료하고, 바이러스 농도를 주기적으로 모니터링한다. 나중에 어느 시점에서, 감염 증상이 악화될 수 있으며, 따라서 감염의 진행 및 "진행까지의 시간"의 끝을 표시한다. 감염이 진행되지 않거나 또는 감염의 수준 또는 심각성이 악화되지 않은 기간이 "진행까지의 시간"이다.As used herein, “time to progress” is the period, length, or duration from when a viral infection is diagnosed (or treated) until the infection begins to worsen. This is the period during which the infection level remains without further infection progressing, and the period ends when the infection begins to progress again. Disease progression is determined by “staging” a subject suffering from an infection prior to or at the beginning of treatment. For example, a subject's health is determined prior to or at the beginning of treatment. Subsequently, subjects are treated with cardiac glycosides and virus concentrations are monitored periodically. At some point later, the symptoms of the infection may worsen, thus indicating the progress of the infection and the end of the "time to progress". The period during which the infection does not progress or the level or severity of the infection has not deteriorated is the "time to progress".

투여 요법은 투여 스케줄에 따라 투여되는 하나 이상의 강심 배당체의 치료적으로 관련된 투여량(또는 유효 투여량)을 포함한다. 따라서, 치료적으로 관련된 투여량은 항 바이러스 조성물에 의한 치료에 대한 바이러스 감염의 치료 반응이 관찰되고 과량의 원치 않거나 유해한 부작용없이 항 바이러스 조성물을 대상체에게 투여할 수 있는 치료 투여량이다. 치료적으로 관련된 투여량은 환자에게 일부 부작용을 일으킬 수 있지만, 대상에게 치명적이지 않다. 항 바이러스 조성물이 투여되는 대상체에 대한 임상적 이점의 수준이 항 바이러스 조성물 또는 이들 성분(들)의 투여로 인해 대상체가 경험하는 유해한 부작용의 수준을 초과하는 투여량이다. 치료적으로 관련된 투여량은 다양하게 확립된 약리학적, 약역학적 및 약동학적 원리에 따라 대상체마다 상이할 것이다. 그러나, 치료적으로 관련된 투여량(예를 들어, 올레안드린에 대한 상대적 투여량)은 전형적으로 25 마이크로그램, 100 마이크로그램, 250 마이크로그램, 500 마이크로그램 또는 750 마이크로그램의 강심 배당체/일을 초과하지 않거나, 또는 투여 당 강심 배당체의 양이 25-750 마이크로그램의 범위일 수 있다. 대상체에서 표적 치료 결과를 제공하기 위해 필요한 항 바이러스 조성물의 실제 양은 약학의 기본 원리에 따라 대상체마다 다를 수 있다는 것이 당 업계에 공지되어 있다.Dosage regimen includes a therapeutically relevant dose (or effective dose) of one or more cardiac glycosides administered according to the dosing schedule. Thus, a therapeutically relevant dose is a therapeutic dose at which a therapeutic response of a viral infection to treatment with an antiviral composition is observed and the antiviral composition can be administered to a subject without excessive unwanted or deleterious side effects. A therapeutically relevant dosage may cause some side effects to the patient, but is not fatal to the subject. The level of clinical benefit for the subject to which the antiviral composition is administered is a dosage that exceeds the level of adverse side effects experienced by the subject due to administration of the antiviral composition or these component(s). The therapeutically relevant dosage will vary from subject to subject according to various established pharmacological, pharmacodynamic and pharmacokinetic principles. However, therapeutically relevant doses (e.g., relative doses to oleandrones) typically include 25 micrograms, 100 micrograms, 250 micrograms, 500 micrograms or 750 micrograms of cardiac glycosides/day. Not exceeding, or the amount of cardiac glycosides per administration may range from 25-750 micrograms. It is known in the art that the actual amount of antiviral composition required to provide a targeted treatment result in a subject can vary from subject to subject depending on the basic principles of pharmacy.

치료적으로 관련된 투여량은 바이러스 감염의 치료에 전형적으로 사용되는 임의의 투여 요법에 따라 투여될 수 있다. 치료적으로 관련된 투여량은 1 일 1 회, 2 회, 3 회 이상 투여될 수 있다. 격일로, 3 일마다, 4 일마다, 5 일마다, 반주마다, 주마다, 격주로, 3 주마다, 4 주마다, 매월, 격월마다, 반달마다, 3 개월마다, 4 개월마다, 반년마다, 매년, 또는 상기의 임의의 조합에 따라 적합한 투여 스케줄에 도달한다. 예를 들어, 치료적으로 관련된 투여량은 1 주일 이상 동안 매일 1 회 이상 투여될 수 있다.The therapeutically relevant dosage can be administered according to any dosing regimen typically used in the treatment of viral infections. The therapeutically relevant dosage may be administered once, twice or three times a day. Every other day, every 3 days, every 4 days, every 5 days, every week, every week, every other week, every 3 weeks, every 4 weeks, every month, every other month, every half month, every 3 months, every 4 months, every half year Appropriate dosing schedules are reached, annually, or according to any combination of the above. For example, a therapeutically relevant dose can be administered one or more times daily for a week or longer.

실시 예 15는 이들 둘 모두가 필로바이러스인 에볼라바이러스(도 1 및 도 2) 및 마르부르그바이러스(도 3 및 도 4) 감염의 치료를 위한 올레안드린(단독 활성), 안비르젤(Anvirzel) 및 PBI 05204(네리움 올리앤더의 초임계 유체(SCF) 추출물)를 함유하는 조성물의 효능을 평가하기 위해 사용되는 시험관내 분석의 상세한 설명을 제공한다. Example 15 shows oleandrolin (single activity), anvirzel for the treatment of Ebolavirus (FIGS. 1 and 2) and Marburg virus (FIGS. 3 and 4) infections, both of which are piloviruses. And PBI 05204 (Nerium Oliander's Supercritical Fluid (SCF) extract) to provide a detailed description of the in vitro assay used to evaluate the efficacy of the composition.

상기 조성물을 40 마이크로그램/mL의 세포에 첨가한 다음, 바이러스를 첨가하고 1 시간 동안 배양하는 것으로 실험을 설정하였다. 바이러스를 세포에 첨가할 때, 조성물의 최종 농도는 20 마이크로그램/mL이다. 상이한 양의 올레안드린을 함유하는 조성물은 이들이 함유하는 올레안드린의 농도에 따라 조정될 수 있고, 이를 몰 농도로 변환시킬 수 있다. 도 1 내지 도 4는 추출물의 올레안드린 함량에 기초한 효능을 도시한다. OL 자체는 효과적이다. OL, OA, UA 및 BA를 포함하는 네리움 올리앤더의 SCF 추출물인 PBI-05204는 OL 자체보다 실질적으로 더 효과적이다. 네리움 올리앤더의 열탕 추출물인 안비르젤은 OL 자체보다 효과적이다. 두개의 추출물 모두는 나노 몰 범위에서 효능을 분명히 나타낸다. PBI-05204 추출물(1.74 %)에서의 올레안드린의 백분율은 안비르젤(0.459 %, 4.59 마이크로그램/mg)에서 보다 높다. PBI-05204의 최고 투여량에서, 그것은 EBOV 및 MARV 감염을 완전히 억제하는 반면, 안비르젤은 안비르젤과 함께 20 마이크로그램/mL 초과의 투여량에서 독성이 관찰되기 때문에, 완전한 억제를 나타내지 않았다. 데이터는 PBI-05204에 대한 에볼라바이러스 및 마르부르그바이러스에 대한 최고의 항 바이러스 활성을 입증한다. PBI-05204에서의 트리테르펜의 조합은 올레안드린의 항 바이러스 활성을 증가시켰다.The experiment was set up by adding the composition to 40 micrograms/mL of cells, then adding the virus and incubating for 1 hour. When virus is added to the cells, the final concentration of the composition is 20 micrograms/mL. Compositions containing different amounts of oleandrolin can be adjusted according to the concentration of oleandrorin they contain and converted to molar concentration. 1 to 4 show efficacy based on the oleander content of the extract. OL itself is effective. PBI-05204, a SCF extract of Neerium Oliander, which contains OL, OA, UA and BA, is substantially more effective than OL itself. Nerium Oliander's hot water extract, Anvir Gel, is more effective than OL itself. Both extracts clearly demonstrate efficacy in the nanomolar range. The percentage of oleandrolin in the PBI-05204 extract (1.74%) is higher than that in antbirzel (0.459%, 4.59 micrograms/mg). At the highest dose of PBI-05204, it completely inhibited EBOV and MARV infections, whereas antbirgel did not show complete inhibition, as toxic was observed at doses greater than 20 micrograms/mL with antbirgel. . The data demonstrates the best antiviral activity against Ebolavirus and Marburg virus against PBI-05204. The combination of triterpenes in PBI-05204 increased the antiviral activity of oleandroline.

실시 예 6은 지카바이러스(플라비바이러스) 감염의 치료를 위한 강심 배당체의 효능을 평가하기 위해 사용되는 시험관내 분석의 상세한 설명을 제공한다. 베로 E6 세포는 올레안드린(도 5) 또는 디곡신(도 6)의 존재하에서, 0.2의 MOI에서 지카바이러스(ZIKV 균주 PRVABC59)로 감염되었다. 세포를 바이러스 및 강심 배당체와 함께 1 시간 동안 배양한 후, 접종원 및 비-흡수성 강심 배당체(존재하는 경우)를 제거하였다. 세포를 신선한 배지에 담그고 48 시간 동안 배양한 후, 포르말린으로 고정하고, ZIKV 감염을 위해 염색하였다. 데이터는 강심 배당체 둘 다에 대한 지카바이러스에 대한 항 바이러스 활성을 입증하지만; 올레안드린은 디곡신보다 더 높은(거의 8 배 더 큰) 항 바이러스 활성을 나타냈다.Example 6 provides a detailed description of an in vitro assay used to evaluate the efficacy of cardiac glycosides for the treatment of Zikavirus (flavivirus) infection. Vero E6 cells were infected with Zikavirus (ZIKV strain PRVABC59) at an MOI of 0.2 in the presence of oleandrolin (FIG. 5) or digoxin (FIG. 6 ). Cells were incubated for 1 hour with virus and cardiac glycosides, and then inoculum and non-absorbable cardiac glycosides (if present) were removed. Cells were soaked in fresh medium and incubated for 48 hours before being fixed with formalin and stained for ZIKV infection. The data demonstrate antiviral activity against zicavirus against both cardiac glycosides; Oleandroline showed higher (almost 8 times larger) antiviral activity than digoxin.

실시 예 14는 지카바이러스 및 뎅기 바이러스에 대한 시험 조성물의 항 바이러스 활성을 평가하기 위해 사용된 분석의 상세한 설명을 제공한다. 데이터는 올레안드린이 지카바이러스 및 뎅기 바이러스에 대한 효능을 나타낸다는 것을 나타낸다.Example 14 provides a detailed description of the assay used to evaluate the antiviral activity of test compositions against Zikavirus and Dengue virus. The data show that oleandrolin shows efficacy against Zikavirus and Dengue virus.

도 7은 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스(EBOV)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다. 도 8은 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스(MARV)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다. 도 9는 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 존재하에 베로 E6 세포의 시험관내 세포 생존력을 요약한 차트를 도시한다. 도 7 내지 도 8의 경우, 숙주 세포는 바이러스 감염 전에 조성물에 노출되었다. 베로 E6 세포는 올레안드린 함유 식물 추출물인 올레안드린, 디곡신 또는 PBI-05204의 존재 하에서, EBOV/Kik(도 7, MOI = 1) 또는 MARV/Ci67(도 8, MOI = 1)로 감염되었다. 1 시간 후, 접종원 및 화합물을 제거하고, 신선한 배지를 세포에 첨가하였다. 48 시간 후, 세포를 고정시키고 면역 염색하여 EBOV 또는 MARV로 감염된 세포를 검출하였다. 감염된 세포를 오페레타(Operetta)를 사용하여 열거하였다.FIG. 7 shows a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandroin, digoxin and PBI-05204) for Ebolavirus (EBOV) in Vero E6 cells. 8 shows a chart summarizing the in vitro dose response antiviral activity of various compositions (oleandroin, digoxin and PBI-05204) for marburg virus (MARV) in Vero E6 cells. 9 shows a chart summarizing the in vitro cell viability of Vero E6 cells in the presence of various compositions (oleandrene, digoxin and PBI-05204). 7-8, host cells were exposed to the composition prior to viral infection. Vero E6 cells were infected with EBOV/Kik (FIG. 7, MOI = 1) or MARV/Ci67 (FIG. 8, MOI = 1) in the presence of oleandrolin, digoxin or PBI-05204, a plant extract containing oleander. . After 1 hour, the inoculum and compound were removed and fresh medium was added to the cells. After 48 hours, cells were fixed and immunostained to detect cells infected with EBOV or MARV. Infected cells were listed using Operetta.

항 바이러스 활성과 관련하여 위양성(false positive)이 관찰되지 않도록 하기 위해, 조성물의 존재하에서 세포 생존력을 시험하였다. 도 9의 데이터의 경우, 베로 E6 세포는 상기와 같이 화합물로 처리되었다. ATP 수준은 세포 생존력의 측정으로서 셀티터-글로(CellTiter-Glo)에 의해 측정되었다. 올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204는 세포 생존력을 감소시키지 않는 것으로 결정되었으며, 이는 본 명세서의 다른 도면에 상세히 기술된 항 바이러스 활성이 개별 화합물의 세포 독성에 의해 유발되는 위양성 때문이 아님을 의미한다.Cell viability was tested in the presence of the composition to ensure that no false positives were observed with respect to antiviral activity. For the data in Figure 9, Vero E6 cells were treated with compounds as above. ATP levels were measured by CellTiter-Glo as a measure of cell viability. Oleandroline, digoxin and PBI-05204 have been determined not to decrease cell viability, meaning that the antiviral activity detailed in other figures herein is not due to the false positives caused by the cytotoxicity of the individual compounds. .

따라서, 본 발명은 포유동물 또는 숙주 세포에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 바이러스 감염 걸림 이전에 포유동물 또는 숙주 세포에 항 바이러스 조성물을 투여하는 단계를 포함하여, 상기 포유동물 또는 숙주 세포의 바이러스 감염 시, 항 바이러스 조성물이 바이러스 농도를 감소시키고 바이러스 감염을 개선, 감소 또는 제거하게 한다. Accordingly, the present invention provides a method of treating a viral infection in a mammalian or host cell, the method comprising administering an antiviral composition to a mammalian or host cell prior to the viral infection arrest, the mammalian Or upon viral infection of the host cell, the antiviral composition reduces the virus concentration and allows the virus infection to be improved, reduced or eliminated.

본 발명의 항 바이러스 조성물 및 방법은 또한 항 바이러스 조성물의 투여 이전에 발생한 바이러스 감염을 치료하는데 유용하다. 베로 E6 세포를 EBOV(도 10a, 10b) 또는 MARV(도 11a, 11b)로 감염시켰다. 감염 후 2 시간(도 10a, 11a) 또는 감염 후 24 시간(도 10b, 11b)에, 올레안드린 또는 PBI-05204를 1 시간 동안 세포에 첨가한 후, 폐기하고 세포를 배양 배지로 리턴시켰다.The antiviral compositions and methods of the invention are also useful for treating viral infections that occurred prior to administration of the antiviral composition. Vero E6 cells were infected with EBOV (Figures 10A, 10B) or MARV (Figures 11A, 11B). At 2 hours post infection (FIGS. 10A, 11A) or 24 hours post infection (FIGS. 10B, 11B), oleandrone or PBI-05204 was added to the cells for 1 hour, then discarded and the cells returned to the culture medium.

도 10a 및 도 10b는 바이러스에 노출된 직후, 베로 E6 세포에서 에볼라바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 도 10a-감염 후 2 시간; 도 10b-감염 후 24 시간. 항 바이러스 조성물이 바이러스 감염 후 2 시간 내에(또는 최대 12 시간 이내에) 투여될 때, 바이러스 농도 항 바이러스 조성물은 효과적인 치료를 제공하고, EBOV 바이러스 농도를 감소시킨다. 24 시간 후에도 바이러스 조성물이 효과적이지만, 초기 바이러스 감염 후 시간이 지날수록 그 효능은 낮아진다. MARV에 대해서도 동일한 평가가 수행되었다. 도 11a 및 도 11b는 바이러스에 노출된 직후, 베로 E6 세포에서 마르부르그바이러스를 억제하는 조성물(올레안드린 및 PBI-05204)의 능력을 요약한 차트를 도시한다: 11a-감염 후 2 시간; 도 11b-감염 후 24 시간. 항 바이러스 조성물이 바이러스 감염 후 2 시간 내에(또는 최대 12 시간 이내에) 투여될 때, 바이러스 농도 항 바이러스 조성물은 효과적인 치료를 제공하고, MARV 바이러스 농도를 감소시킨다. 24 시간 후에도 바이러스 조성물이 효과적이지만, 초기 바이러스 감염 후 시간이 지날수록 그 효능은 낮아진다.10A and 10B show charts summarizing the ability of compositions (oleandroins and PBI-05204) to inhibit Ebolavirus in Vero E6 cells immediately after exposure to the virus: 2 hours after infection in FIG. 10A; 10B-24 hours post infection. When the antiviral composition is administered within 2 hours (or up to 12 hours) after viral infection, the virus concentration antiviral composition provides effective treatment and reduces EBOV virus concentration. The virus composition is effective even after 24 hours, but its efficacy decreases as time passes after the initial virus infection. The same evaluation was performed for MARV. 11A and 11B show charts summarizing the ability of compositions (oleandroins and PBI-05204) to inhibit Marburg virus in Vero E6 cells immediately after exposure to virus: 2 hours after 11a-infection; Figure 11B-24 hours after infection. When the antiviral composition is administered within 2 hours (or up to 12 hours) after viral infection, the virus concentration antiviral composition provides effective treatment and reduces the MARV virus concentration. The virus composition is effective even after 24 hours, but its efficacy decreases as time passes after the initial virus infection.

본원의 조성물의 항 바이러스 활성이 단일 세대의 바이러스 감염 세포에 대해, 예를 들어 감염 후 24 시간 이내에 감소됨을 고려하여, 항 바이러스 조성물이 바이러스성 증식을 억제할 수 있는지, 즉 감염성 자손의 생성을 억제할 수 있는지를 평가하였다. 베로 E6 세포를 올레안드린 또는 PBI-05204의 존재하에서 EBOV 또는 MARV로 감염시키고, 48 시간 동안 배양하였다. 감염된 세포 배양물로부터의 상청액을 새로운 베로 E6 세포에 통과시키고, 1 시간 동안 배양한 다음 폐기하였다. 통과한 상청액을 함유하는 세포를 48 시간 동안 배양하였다. EBOV(B) 또는 MARV(C)로 감염된 세포는 본원에 기술된 바와 같이 평가되었다. 대조군 감염률은 EBOV의 경우 66 %, MARV의 경우 67 %였다. 본 발명의 항 바이러스 조성물은 감염성 자손의 생성을 억제하였다.Considering that the antiviral activity of the compositions herein is reduced for a single generation of virus infected cells, e.g., within 24 hours after infection, whether the antiviral composition is capable of inhibiting viral proliferation, i.e. inhibiting the production of infectious progeny We evaluated whether it was possible. Vero E6 cells were infected with EBOV or MARV in the presence of oleandrolin or PBI-05204 and cultured for 48 hours. The supernatant from the infected cell culture was passed through fresh Vero E6 cells, incubated for 1 hour and then discarded. Cells containing the passed supernatant were incubated for 48 hours. Cells infected with EBOV(B) or MARV(C) were evaluated as described herein. The control infection rate was 66% for EBOV and 67% for MARV. The antiviral composition of the present invention inhibited the production of infectious progeny.

따라서, 본 발명의 항 바이러스 조성물은: a) 바이러스에 노출된 후 바이러스 감염을 억제하기 위해, 바이러스 감염 전에 예방적으로 투여될 수 있고; b) 감염성 자손의 바이러스 복제 및 생성을 억제 또는 감소시키기 위해, 바이러스 감염 후에 투여될 수 있으며; 또는 c) a)와 b)의 조합으로 투여될 수 있다.Thus, the antiviral composition of the present invention: a) can be administered prophylactically prior to viral infection to inhibit viral infection after exposure to the virus; b) can be administered after viral infection to inhibit or reduce viral replication and production of infectious progeny; Or c) a) and b).

토가비리대 알파바이러스에 대한 항 바이러스 조성물의 항 바이러스 활성은 베로 E6 세포에서 VEE 바이러스 및 WEE 바이러스를 사용하여 평가되었다. 도 13a 및 도 13b는 베로 E6 세포에서 베네수엘라 말 뇌척수염 바이러스(도 13a) 및 웨스턴 말 뇌척수염 바이러스(도 13b)에 대한 다양한 조성물(올레안드린, 디곡신 및 PBI-05204)의 시험관내 투여량 반응 항 바이러스 활성을 요약한 차트를 도시한다. 지시된 화합물의 존재 또는 부재하에서, 18 시간 동안 베로 E6 세포를 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(도 13a, MOI = 0.01) 또는 웨스턴 말 뇌염 바이러스(도 13b, MOI = 0.1)로 감염시켰다. 감염된 세포를 이전과 같이 검출하고, 오페레타에 열거하였다. 본 발명의 항 바이러스 조성물은 효과적인 것으로 밝혀졌다.The antiviral activity of the antiviral composition against Togaviridae alphavirus was evaluated using VEE virus and WEE virus in Vero E6 cells. 13A and 13B show in vitro dose response antiviral of various compositions (oleandroin, digoxin and PBI-05204) for Venezuelan Equine Encephalomyelitis Virus (FIG. 13A) and Western Equine Encephalomyelitis Virus (FIG. 13B) in Vero E6 cells. A chart summarizing the activity is shown. In the presence or absence of the indicated compound, Vero E6 cells were infected with Venezuelan equine encephalitis virus (FIG. 13A, MOI=0.01) or Western equine encephalitis virus (FIG. 13B, MOI=0.1) for 18 hours. Infected cells were detected as before and listed in the operetta. The antiviral composition of the present invention has been found to be effective.

따라서, 본 발명은 필로비리대 바이러스, 플라비비리대 바이러스 또는 토가비리대 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 항 바이러스 조성물을 투여하고, 그에 의해 항 바이러스 조성물에 바이러스를 노출시켜 상기 바이러스 감염을 치료하는 단계를 포함한다.Accordingly, the present invention provides a method of treating a viral infection caused by a piloviridae virus, a flaviviridae virus, or a togaviridae virus, the method comprising administering an effective amount of an antiviral composition, thereby preventing And treating the viral infection by exposing the virus to a viral composition.

본원의 조성물의 항 바이러스 활성을 리노바이러스(Rhinovirus) 감염에 대해 평가하였다. 리노바이러스는 피코르나비리대(Picornaviridae) 과 및 엔테로바이러스(Enterovirus) 속이다. 이것은 엔벨롭되어 있지 않고, (+) 극성의 ss-RNA 바이러스이다. 올레안드린은 본원에 사용된 농도 및 분석에서 리노바이러스에 대해 불활성인 것으로 밝혀졌다.The antiviral activity of the compositions herein was evaluated for rhinovirus infection. Rhinoviruses are of the genus Picornaviridae and Enterovirus. It is an unenveloped, (+) polar ss-RNA virus. Oleandroline was found to be inactive against rhinovirus in the concentrations and assays used herein.

PBI-05204(본 명세서 및 2012 년 5 월 29 일 발행된 Addington의 US 8187644 B2에서, 2008 년 7 월 22 일 발행된 Addington의 US 7402325 B2에서, 2013 년 5 월 12 일 발행된 Addington et al의 US 8394434 B2에 기재되며, 이들 전체 개시 내용은 본원에 참조로 포함됨)은 주요 약리학적 활성 성분으로서 강심 배당체(올레안드린, OL) 및 트리테르펜(올레아놀산(OA), 우르솔산(UA) 및 베툴린산(BA))을 포함한다. 총 트리테르펜에 대한 OL의 몰비는 약 1:(10-96)이다. OA:UA:BA의 몰비는 약 7.8:7.4:1이다. PBI-05204에서 OA, UA 및 BA의 조합은 OL 등몰 기준으로 비교할 때 올레안드린의 항 바이러스 활성을 증가시킨다. PBI-04711은 PBI-05204의 일부이지만, 강심 배당체(OL)를 함유하지 않는다. PBI-04711에서 OA:UA:BA의 몰비는 약 3:2.2:1이다. PBI-04711은 또한 항 바이러스 활성을 갖는다. 따라서, OL, OA, UA 및 BA를 포함하는 항 바이러스 조성물은 OL의 등몰 함량에 기초하여 유일한 활성 성분으로서 OL을 포함하는 조성물보다 효과적이다. 일부 실시 예에서, 개별 트리테르펜 대 올레안드린의 몰비는 하기와 같이 범위 설정된다: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL); 또는 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); 또는 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); 또는 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).PBI-05204 (in this specification and US 8187644 B2 from Addington issued May 29, 2012, US from Addington et al issued May 12, 2013 from Addington's US 7402325 B2 issued July 22, 2008) 8394434 B2, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference) is a major pharmacologically active ingredient, cardiac glycosides (oleandrones, OL) and triterpenes (oleanolic acid (OA), ursolic acid (UA) and betulinic acid) (BA)). The molar ratio of OL to total triterpene is about 1: (10-96). The molar ratio of OA:UA:BA is about 7.8:7.4:1. The combination of OA, UA and BA in PBI-05204 increases the antiviral activity of oleandrolin when compared on an OL equimolar basis. PBI-04711 is part of PBI-05204, but does not contain strong glycoside (OL). The molar ratio of OA:UA:BA in PBI-04711 is about 3:2.2:1. PBI-04711 also has antiviral activity. Thus, antiviral compositions comprising OL, OA, UA and BA are more effective than compositions comprising OL as the only active ingredient based on the equimolar content of OL. In some embodiments, the molar ratio of individual triterpenes to oleandrones is ranged as follows: 2-8(OA):2-8(UA):0.1-1(BA):0.5-1.5(OL); Or 3-6(OA):3-6(UA):0.3-8(BA):0.7-1.2(OL); Or 4-5(OA):4-5(UA):0.4-0.7(BA):0.9-1.1(OL); Or 4.6(OA):4.4(UA):0.6(BA):1(OL).

유일한 항 바이러스제로서 올레안드린을 포함하는 항 바이러스 조성물은 본 발명의 범위 내에 있다.Antiviral compositions comprising oleandrolin as the only antiviral agent are within the scope of the present invention.

항 바이러스제로서 올레안드린 및 복수의 트리테르펜을 포함하는 항 바이러스 조성물은 본 발명의 범위 내에 있다. 일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 우르솔산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 포함한다. 화합물의 몰비는 본원에 기재된 바와 같다.Antiviral compositions comprising oleandrolin and a plurality of triterpenes as antiviral agents are within the scope of the present invention. In some embodiments, the antiviral composition comprises oleandrolin, oleanolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof), ursolic acid (free acid, salt, derivative or prodrug thereof) and betulinic acid (free acid, salt, Derivatives or prodrugs). The molar ratios of the compounds are as described herein.

주요 활성 성분으로서 복수의 트리테르펜을 포함하는 항 바이러스 조성물(이는 스테로이드, 강심 배당체 및 약리학적 활성 성분을 배제하는 것을 의미함)도 본 발명의 범위 내에 있다. 상기한 바와 같이, PBI 04711은 주요 활성 성분으로서 OA, UA 및 BA를 포함하고, 항 바이러스 활성을 나타낸다. 일부 실시 예에서, 트리테르펜-기반 항 바이러스 조성물은 OA, UA 및 BA를 포함하고, 이들 각각은 유리 산 형태, 염 형태, 중수소화 형태 및 유도체 형태로부터 각각의 경우 독립적으로 선택된다.Antiviral compositions comprising a plurality of triterpenes as the main active ingredient (which means excluding steroids, cardiac glycosides and pharmacologically active ingredients) are also within the scope of the present invention. As described above, PBI 04711 contains OA, UA and BA as the main active ingredients, and exhibits antiviral activity. In some embodiments, the triterpene-based antiviral composition comprises OA, UA and BA, each of which is independently selected in each case from the free acid form, salt form, deuterated form and derivative form.

PBI-01011은 OA, UA 및 BA를 포함하는 개량된 트리테르펜-기반 항 바이러스 조성물이며, 여기서 OA:UA:BA의 몰비는 약 9-12:최대 약 2:최대 약 2, 또는 약 10:약 1: 약 1, 또는 약 9-12:약 0.1-2:약 0.1-2, 또는 약 9-11:약 0.5-1.5:약 0.5-1.5, 또는 약 9.5-10.5:약 0.75-1.25:약 0.75-1.25, 또는 약 9.5-10.5:약 0.8-1.2:약 0.8-1.2, 또는 약 9.75-10.5:약 0.9-1.1:약 0.9-1.1이다.PBI-01011 is an improved triterpene-based antiviral composition comprising OA, UA and BA, wherein the molar ratio of OA:UA:BA is about 9-12: up to about 2: up to about 2, or about 10: about 1: about 1, or about 9-12: about 0.1-2: about 0.1-2, or about 9-11: about 0.5-1.5: about 0.5-1.5, or about 9.5-10.5: about 0.75-1.25: about 0.75 -1.25, or about 9.5-10.5: about 0.8-1.2: about 0.8-1.2, or about 9.75-10.5: about 0.9-1.1: about 0.9-1.1.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 본 명세서에 설명된 바와 같이 OA 대 UA의 몰비로 존재하는 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 우르솔산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 적어도 포함한다. OA는 UA보다 많은 몰량으로 존재한다.In some embodiments, the antiviral composition comprises oleanolic acid (a free acid, salt, derivative or prodrug thereof) and ursolic acid (a free acid, salt, derivative, or pro thereof) present in a molar ratio of OA to UA as described herein. Drag). OA is present in a higher molar amount than UA.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 본 명세서에 설명된 바와 같이 OA 대 BA의 몰비로 존재하는 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)을 적어도 포함한다. OA는 BA보다 많은 몰량으로 존재한다.In some embodiments, the antiviral composition comprises oleanolic acid (a free acid, salt, derivative or prodrug thereof) and betulinic acid (a free acid, salt, derivative or pro) present in a molar ratio of OA to BA as described herein. Drag). OA is present in a higher molar amount than BA.

일부 실시 예에서, 항 바이러스 조성물은 본 명세서에 설명된 바와 같이 OA 대 UA 대 BA의 몰비로 존재하는 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그), 우르솔산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염, 유도체 또는 프로드러그)를 적어도 포함한다. OA는 UA 및 BA 모두보다 많은 몰량으로 존재한다.In some embodiments, the antiviral composition comprises oleanolic acid (a free acid, salt, derivative or prodrug thereof), ursolic acid (a free acid, salt, derivative thereof) present in a molar ratio of OA to UA to BA as described herein. Or prodrugs) and betulinic acid (free acids, salts, derivatives or prodrugs thereof). OA is present in higher molar amounts than both UA and BA.

일부 실시 예에서, 트리테르펜-기반 항 바이러스 조성물은 강심 배당체를 배제한다.In some embodiments, the triterpene-based antiviral composition excludes cardiac glycosides.

일반적으로, 필로비리대 감염, 플라비비리대 감염 또는 토가비리대 감염이 있는 대상체는 다음과 같이 치료된다. 대상체는 상기 대상체가 상기 바이러스에 감염되었는지를 결정하기 위해 평가된다. 항 바이러스 조성물의 투여가 지시된다. 항 바이러스 조성물의 초기 투여량은 일정 기간(치료 기간) 동안 처방된 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상체의 임상 반응 및 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 한번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 결정된 투여량 증량 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속된다. 투여량 또는 투여 요법은 환자가 감염 자체의 중단, 감염 관련 증상의 감소 및/또는 감염의 진행의 감소와 같은 원하는 임상 종점(들)에 도달할 때까지 필요에 따라 조정될 수 있다.In general, subjects with piloviridae infection, flaviviridae infection, or togabilidae infection are treated as follows. Subjects are evaluated to determine if the subject is infected with the virus. Administration of antiviral compositions is indicated. The initial dose of the antiviral composition is administered to the subject according to the dosing regimen prescribed for a period of time (treatment period). The subject's clinical and therapeutic response levels are periodically determined. If the therapeutic response level is too low at one dose, the dose is increased according to a predetermined dose escalation schedule until the desired therapeutic response level is achieved in the subject. Treatment of subjects with antiviral compositions continues as needed. The dosage or dosing regimen can be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint(s), such as discontinuation of the infection itself, reduction of symptoms associated with the infection and/or reduction of the progression of the infection.

임상의가 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 다른 치료제의 조합으로 바이러스 감염된 대상체를 치료하려는 경우, 대상체가 갖는 바이러스 감염은 상기 하나 이상의 다른 치료제에 적어도 부분적으로 치료적으로 반응하는 것으로 알려져있다. 그 다음, 본 발명의 방법은 치료적 관련 투여량의 항 바이러스 조성물 및 치료적 관련 투여량의 상기 하나 이상의 다른 치료제를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 항 바이러스 조성물은 제 1 투여 요법에 따라 투여되고, 하나 이상의 다른 치료제는 제 2 투여 요법에 따라 투여된다. 일부 실시 예에서, 제 1 및 제 2 투약 요법은 동일하다. 일부 실시 예에서, 제 1 및 제 2 투약 요법은 상이하다.It is known that when a clinician wants to treat a virus infected subject with a combination of an antiviral composition and one or more other therapeutic agents, the viral infection the subject has has been at least partially therapeutically responsive to the one or more other therapeutic agents. The method of the invention then comprises administering to a subject in need thereof a therapeutically relevant dose of an antiviral composition and a therapeutically relevant dose of said one or more other therapeutic agents, wherein the antiviral composition is the first dose. Is administered according to therapy, and one or more other therapeutic agents are administered according to the second dosage regimen. In some embodiments, the first and second dosing regimens are the same. In some embodiments, the first and second dosage regimen are different.

본 발명의 항 바이러스 조성물(들)은 주요 항 바이러스 요법, 보조 항 바이러스 요법 또는 공동-항 바이러스 요법으로서 투여될 수 있다. 본 발명의 방법은 하나 이상의 다른 알려진 항 바이러스 조성물과 함께 항 바이러스 조성물을 개별적으로 또는 공동으로 투여하는 것을 포함하는데, 이는 본 발명의 항 바이러스 조성물이 공지된 항 바이러스 조성물(화합물) 또는 바이러스 감염과 관련된 증상을 치료하기 위한 조성물의 투여 전, 투여 동안 또는 투여 후에 투여될 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 염증, 구토, 구역, 두통, 열, 설사, 메스꺼움, 두드러기, 결막염, 불쾌감, 근육통, 관절통, 발작 또는 마비를 치료하는데 사용되는 약물이 본 발명의 항 바이러스 조성물과 함께 또는 별도로 투여될 수 있다. .The antiviral composition(s) of the invention can be administered as a major antiviral therapy, adjuvant antiviral therapy or co-antiviral therapy. The methods of the present invention include administering the antiviral compositions individually or jointly with one or more other known antiviral compositions, wherein the antiviral composition of the present invention is associated with a known antiviral composition (compound) or viral infection. It means that it can be administered before, during or after administration of the composition for treating symptoms. For example, drugs used to treat inflammation, vomiting, nausea, headache, fever, diarrhea, nausea, urticaria, conjunctivitis, discomfort, muscle pain, joint pain, seizures or paralysis may be administered together with or separately from the antiviral compositions of the present invention. Can. .

하나 이상의 다른 치료제는 치료학적으로 유효한 것으로 임상의가 인식하는 투여량 또는 투약 요법에 따라, 또는 서브-치료적으로 효과적인 것으로 임상의가 인식하는 투여량으로 투여될 수 있다. 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 다른 치료제의 조합의 투여에 의해 제공된 임상적 이점 및/또는 치료 효과는 부가적인 또는 상승적일 수 있으며, 이러한 수준의 이점 또는 효과는 조합물의 투여와 개별 항 바이러스 조성물 및 하나 이상의 다른 치료제의 투여의 비교에 의해 결정된다. 하나 이상의 다른 치료제는 미국 식품의약국(FDA), 세계 보건기구, 유럽 의약청(E.M.E.A.), 치료 상품 관리국(TGA, 호주), 범 미국 건강 기구(PAHO), 의약품 및 의료 기기 안전 기관(Medsafe, 뉴질랜드) 또는 전세계 다양한 보건부에 의해 제안되거나 기술된 투여량 및 투약 요법에 따라 투여될 수 있다. The one or more other therapeutic agents may be administered according to a dosage or dosage regimen recognized by the clinician as being therapeutically effective, or at a dosage recognized by the clinician as sub-therapeuticly effective. The clinical benefit and/or therapeutic effect provided by administration of a combination of an antiviral composition and one or more other therapeutic agents can be additive or synergistic, and this level of benefit or effect can be achieved by administering a combination with an individual antiviral composition and one or more. It is determined by comparison of administration of different therapeutic agents. The one or more other treatments are the U.S. Food and Drug Administration (FDA), World Health Organization, European Medicines Agency (EMEA), Therapeutic Goods Administration (TGA, Australia), Pan American Health Organization (PAHO), Drug and Medical Device Safety Agency (Medsafe, New Zealand). ) Or may be administered according to dosages and dosing regimens suggested or described by various health departments worldwide.

실시 예 5는 포유동물에서 지카바이러스 감염의 치료를 위한 예시적인 절차를 제공한다. 실시 예 12는 포유동물에서 필로바이러스 감염(에볼라바이러스, 마르부르그바이러스)의 치료를 위한 예시적인 절차를 제공한다. 실시 예 13은 포유동물에서 플라비바이러스 감염(황열, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스, 지카바이러스, 진드기성 뇌염, 캬사누르 삼림병, 알크후르마 질병, 옴스크 출혈열, 포와산 바이러스 감염)의 치료를 위한 예시적인 절차를 제공한다. Example 5 provides exemplary procedures for the treatment of zikavirus infection in mammals. Example 12 provides exemplary procedures for the treatment of pilovirus infections (Ebolavirus, Marburg virus) in mammals. Example 13 of the flavivirus infection (yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, Zika virus, mite encephalitis, Cassanur forest disease, Alkhurma disease, Omsk hemorrhagic fever, Powasan virus infection) in mammals Provides exemplary procedures for treatment.

약제학적 조성물에 존재하는 항 바이러스 화합물(트리테르펜(들), 강심 배당체(들) 등)은 변형되지 않은 형태, 염 형태, 유도체 형태 또는 이들의 조합으로 존재할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "유도체"는 a) 제 1 화학 물질과 구조적으로 관련되고 이론적으로 이로부터 유래되는 화학 물질; b) 제 1 화합물의 하나의 원자가 다른 원자 또는 원자 그룹으로 대체되는 경우, 유사한 제 1 화합물 또는 다른 제 1 화합물로부터 발생하는 것으로 상상될 수 있는 화합물로 형성된 화합물; c) 모 화합물로부터 유도되고 모 화합물의 필수 원소를 함유하는 화합물; 또는 d) 하나 이상의 단계에서 유사한 구조의 제 1 화합물로부터 생성될 수 있는 화합물을 의미한다. 예를 들어, 유도체는 중수소화 형태, 산화 형태, 탈수화, 불포화, 중합체 공액 또는 글리코실화 형태를 포함하거나 에스테르, 아미드, 락톤, 상동체, 에테르, 티오에테르, 시아노, 아미노, 알킬아미노, 설프히드릴, 헤테로시클릭, 헤테로시클릭 고리-융합, 중합, 페길화, 벤질리데닐, 트리아졸릴, 피페라지닐 또는 이의 중수소화 형태를 포함할 수 있다.Antiviral compounds (triterpen(s), cardiac glycoside(s), etc.) present in the pharmaceutical composition may be present in unmodified form, salt form, derivative form, or combinations thereof. The term “derivative” as used herein includes: a) a chemical substance structurally related to and derived from the first chemical substance; b) when one atom of the first compound is replaced by another atom or group of atoms, a compound formed of a compound that can be imagined to arise from a similar first compound or another first compound; c) compounds derived from the parent compound and containing the essential elements of the parent compound; Or d) a compound that can be produced from a first compound of similar structure in one or more steps. For example, derivatives include deuterated form, oxidized form, dehydrated, unsaturated, polymer conjugated or glycosylated form or ester, amide, lactone, homologue, ether, thioether, cyano, amino, alkylamino, sulfo Phydryl, heterocyclic, heterocyclic ring-fusion, polymerization, PEGylation, benzylideenyl, triazolyl, piperazinyl, or deuterated forms thereof.

본원에 사용된 용어 "올레안드린"은 달리 명시되지 않는 한 모든 공지된 형태의 올레안드린을 의미하는 것으로 간주된다. 올레안드린은 라세믹, 광학적으로 순수한 또는 광학적으로 풍부한 형태로 존재할 수 있다. 네리움 올리앤더 식물 재료는 예를 들어, 텍사스 아타스코사 소재의 알드리지 너서리(Aldridge Nursery)와 같은 상업적인 식물 공급 업체로부터 얻을 수 있다.As used herein, the term "oleandrene" is considered to mean all known forms of oleandrene unless otherwise specified. Oleandroline can exist in racemic, optically pure or optically rich form. Neerium oleander plant materials can be obtained from commercial plant suppliers, such as, for example, Aldridge Nursery of Atasco, Texas.

초임계 유체(SCF) 추출물은 US 7,402,325, US 8394434, US 8187644 또는 PCT 국제 공개 번호 WP 2007/016176 A2에 상세히 기술된 바와 같이 제조될 수 있으며, 이의 전체 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다. 에탄올과 같은 개질제(유기 용매)의 존재 또는 부재하에서, 초임계 이산화탄소로 추출을 수행할 수 있다.Supercritical fluid (SCF) extracts can be prepared as described in detail in US 7,402,325, US 8394434, US 8187644 or PCT International Publication No. WP 2007/016176 A2, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference. In the presence or absence of a modifier (organic solvent) such as ethanol, extraction can be carried out with supercritical carbon dioxide.

강심 배당체, 특히 올레안드린을 함유하는 다른 추출물은 다양한 상이한 공정에 의해 제조될 수 있다. 열탕 추출물의 제조 절차를 기술하고 있는 Huseyin Ziya Ozel 박사(미국 특허 번호 5,135,745)에 의해 개발된 공정에 따라 추출물을 제조할 수 있다. 수성 추출물은 2KD 내지 30KD의 분자량을 갖는 몇 가지 다당류, 올레안드린 및 올레안드리게닌, 오도로사이드 및 네리탈로사이드를 함유하는 것으로 보고되어 있다. 다당류는 산성 호모폴리갈락투로난 또는 아라비노갈락투로난을 포함하는 것으로 알려져있다. Selvaraj et al의 미국 특허 제 5,869,060 호는 네리움 종의 열탕 추출물 및 그의 제조 방법, 예를 들어 실시 예 2를 개시한다. 이어서, 생성된 추출물을 동결 건조시켜 분말을 제조할 수 있다. 미국 특허 제 6,565,897 호(Selvaraj et al.의 미국 특허 공개 제 20020114852 호 및 PCT 국제 공개 제 WO 2000/016793 호)는 실질적으로 멸균된 추출물의 제조를 위한 열탕 추출 공정을 개시하고 있다. Erdemoglu et al.(J. Ethnopharmacol.(2003) Nov. 89(1), 123-129)는 항-통각 및 항-염증 활성에 기초하여 네리움 올리앤더를 포함한 식물의 수성 및 에탄올 추출물의 비교 결과를 개시하고 있다. 네리움 올리앤더의 유기 용매 추출물은 Adome et al.(Afr. Health Sci.(2003) Aug. 3(2), 77-86; 에탄올 추출물), el-Shazly et al.(J. Egypt Soc. Parasitol.(1996), Aug. 26(2), 461-473; 에탄올 추출물), Begum et al.(Phytochemistry(1999) Feb. 50(3), 435-438; 메탄올 추출물), Zia et al.(J. Ethnolpharmacol.(1995) Nov. 49(1), 33-39; 메탄올 추출물) 및 Vlasenko et al.(Farmatsiia.(1972) Sept.-Oct. 21(5), 46-47; 알콜성 추출물)에 의해 개시된다. Singh et al.의 미국 특허 출원 공개 제 20040247660 호는 암 치료에 사용하기 위한 올레안드린의 단백질 안정화 리포좀 제형의 제조를 개시한다. Singh et al.의 미국 특허 출원 공개 제 20050026849 호는 사이클로덱스트린을 함유하는 올레안드린의 수용성 제형을 개시한다. Singh et al.의 미국 특허 출원 공개 제 20040082521 호는 열탕 추출물로부터 올레안드린의 단백질 안정화 나노 입자 제형의 제조를 개시한다.Other extracts containing strong core glycosides, especially oleandrones, can be prepared by a variety of different processes. The extract can be prepared according to a process developed by Dr. Huseyin Ziya Ozel (US Pat. No. 5,135,745), which describes the procedure for producing a hot water extract. Aqueous extracts have been reported to contain several polysaccharides with molecular weights from 2KD to 30KD, oleandroline and oleandrogenin, odroside and neritaloside. Polysaccharides are known to contain acidic homopolygalacturonane or arabinogalacturonan. U.S. Patent No. 5,869,060 to Selvaraj et al discloses a hot water extract of a Neerium species and a method for its preparation, for example Example 2. Subsequently, the resulting extract may be freeze-dried to prepare a powder. U.S. Patent No. 6,565,897 (U.S. Patent Publication No. 20020114852 by Selvaraj et al. and PCT International Publication No. WO 2000/016793) discloses a hot water extraction process for the preparation of substantially sterilized extracts. Erdemoglu et al. (J. Ethnopharmacol. (2003) Nov. 89(1), 123-129) compared the aqueous and ethanolic extracts of plants including nerium oleanander based on anti-nociceptive and anti-inflammatory activity. Is disclosed. The organic solvent extract of Neerium Oliander is Adome et al. (Afr. Health Sci. (2003) Aug. 3(2), 77-86; ethanol extract), el-Shazly et al. (J. Egypt Soc. Parasitol .(1996), Aug. 26(2), 461-473; ethanol extract), Begum et al. (Phytochemistry (1999) Feb. 50(3), 435-438; methanol extract), Zia et al. (J Ethnolpharmacol. (1995) Nov. 49(1), 33-39; methanol extract) and Vlasenko et al. (Farmatsiia. (1972) Sept.-Oct. 21(5), 46-47; alcoholic extract). It is initiated by. US Patent Application Publication No. 20040247660 by Singh et al. discloses the preparation of a protein-stabilized liposome formulation of oleandrolin for use in the treatment of cancer. US Patent Application Publication No. 20050026849 by Singh et al. discloses a water soluble formulation of oleandroline containing cyclodextrin. US Patent Application Publication No. 20040082521 by Singh et al. discloses the preparation of protein-stabilized nanoparticle formulations of oleandrones from hot water extracts.

추출물은 또한 그들의 다당류 및 탄수화물 함량에서 상이하다. 열탕 추출물은 글루코스로 제조된 표준 곡선에 비해 407.3 글루코스 당량의 탄수화물을 함유하는 한편, SCF CO2 추출물의 분석은 정량 한계 미만인 매우 낮은 수준에서 발견된 탄수화물 수준을 발견하였다. 그러나, 네리움 올리앤더의 열탕 추출물에서의 탄수화물의 양은 SCF CO2 추출물에서의 그것보다 적어도 100 배 이상 더 많았다. SCF 추출물의 다당류 함량은 0 %, <0.5 %, <0.1 %, <0.05 % 또는 <0.01 % 중량일 수 있다. 일부 실시 예에서, SCF 추출물은 식물 덩어리(mass)의 추출 동안 수득된 다당류를 배제한다.Extracts also differ in their polysaccharide and carbohydrate content. The hot water extract contained 407.3 glucose equivalents of carbohydrate compared to the standard curve made of glucose, while analysis of the SCF CO 2 extract found carbohydrate levels found at very low levels below the quantitative limit. However, the amount of carbohydrate in the hot water extract of Neerium Oliander was at least 100 times higher than that in the SCF CO 2 extract. The polysaccharide content of the SCF extract may be 0%, <0.5%, <0.1%, <0.05% or <0.01% weight. In some embodiments, the SCF extract excludes polysaccharides obtained during the extraction of plant mass.

Figure pct00001
Figure pct00001

SCF CO2 추출물 및 열탕 추출물의 부분 조성은 JEOL AccuTOF-DART 질량 분석기(JEOL USA, Peabody, MA, USA)에서 DART TOF-MS(비행시간 질량 분광계 실시간 직접 분석)에 의해 결정되었다. The partial composition of the SCF CO 2 extract and the hot water extract was determined by DART TOF-MS (real time direct mass spectrometer real time analysis) on a JEOL AccuTOF-DART mass spectrometer (JEOL USA, Peabody, MA, USA).

네리움 종 또는 테베티아(Thevetia) 종의 SCF 추출물은 약리학적 활성 화합물, 예컨대 올레안드린 및 트리테르펜의 혼합물이다. SCF 공정에 의해 수득된 추출물은 주위 온도에서 실질적으로 물-불용성인 점성 반고체(용매를 제거한 후)이다. SCF 추출물은 다양한 상이한 범위의 물 용해도를 갖는 많은 상이한 성분을 포함한다. 초임계 유체 공정으로부터의 추출물은 0.9 내지 2.5 중량 %의 올레안드린 또는 1.7 내지 2.1 중량 %의 올레안드린 또는 1.7 내지 2.0 중량 %의 올레안드린을 이론적으로 함유한다. 다양한 양의 올레안드린을 포함하는 SCF 추출물이 얻어졌다. 일 실시 예에서, SCF 추출물은 약 2 중량 %의 올레안드린을 포함한다. SCF 추출물은 열탕 추출물보다 3-10 배 더 높은 농도의 올레안드린을 함유한다. 이는 HPLC 및 LC/MS/MS(탠덤 질량 분석) 분석에 의해 확인되었다.The SCF extract of the Neerium species or Thevetia species is a mixture of pharmacologically active compounds, such as oleandrene and triterpene. The extract obtained by the SCF process is a viscous semi-solid (after removing the solvent) that is substantially water-insoluble at ambient temperature. SCF extracts contain a number of different ingredients with various different ranges of water solubility. The extract from the supercritical fluid process theoretically contains 0.9 to 2.5% by weight of oleandrone or 1.7 to 2.1% by weight of oleandrone or 1.7 to 2.0% by weight of oleandrene. SCF extracts containing varying amounts of oleander were obtained. In one embodiment, the SCF extract comprises about 2% by weight of oleander. The SCF extract contains 3-10 times higher concentrations of oleander than the hot water extract. This was confirmed by HPLC and LC/MS/MS (tandem mass spectrometry) analysis.

SCF 추출물은 올레안드린 및 트리테르펜 올레아놀산, 베툴린산 및 우르솔산 및 본원에 기재된 다른 성분을 포함한다. 올레안드린 및 트리테르펜의 함량은 배치마다 다를 수 있지만; 그 변동 정도는 과도하지 않다. 예를 들어, SCF 추출물(PBI-05204)의 배치를 이들 4 가지 성분에 대해 분석하였고, 다음과 같은 각각의 대략적인 양을 함유하는 것으로 밝혀졌다.SCF extracts include oleandroline and triterpene oleanolic acid, betulinic acid and ursolic acid and other ingredients described herein. The contents of oleander and triterpene may vary from batch to batch; The degree of fluctuation is not excessive. For example, the batch of SCF extract (PBI-05204) was analyzed for these four components and was found to contain approximate amounts of each as follows.

Figure pct00002
Figure pct00002

개별 성분의 함량은 지시된 값에 비해 ± 25 %, ± 20 %, ± 15 %, ± 10 % 또는 ± 5 %만큼 변할 수 있다. 따라서, SCF 추출물에서의 올레안드린의 함량은 SCF 추출물 mg 당 20mg ± 5mg(이는 20mg의 ± 25 %임)의 범위내에 있을 것이다.The content of the individual components can vary by ±25%, ±20%, ±15%, ±10% or ±5% compared to the indicated values. Thus, the content of oleandrolin in the SCF extract will be in the range of 20 mg ± 5 mg per mg SCF extract (which is ± 25% of 20 mg).

올레안드린, 올레아놀산, 우르솔산, 베툴린산 및 이들의 유도체는 또한 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich(www.sigmaaldrich.com; St. Louis, MO, USA))로부터 구매할 수 있다.Oleandroline, oleanolic acid, ursolic acid, betulinic acid and derivatives thereof can also be purchased from Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com; St. Louis, MO, USA).

본원에 사용된 바와 같이, 개별적으로 명명된 트리테르펜은 각각의 경우에 그들의 천연(변형되지 않은, 유리 산) 형태, 염 형태, 유도체 형태, 프로드러그 형태 또는 이들의 조합에서 독립적으로 선택될 수 있다. 중수소화 형태의 트리테르펜을 함유하는 조성물 및 방법도 또한 본 발명의 범위 내에 있다.As used herein, individually named triterpenes can be independently selected in each case in their natural (unmodified, free acid) form, salt form, derivative form, prodrug form, or combinations thereof. . Compositions and methods containing triterpenes in deuterated form are also within the scope of the present invention.

올레아놀산 유도체, 프로드러그 및 염은 2015 년 1 월 8 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20150011627 A1, 2014 년 11 월 20 일에 공개된 Rong et al.의 US 20140343108 A1, 2014 년 11 월 20 일에 공개된 Xu et al.의 US 20140343064 A1, 2014 년 6 월 26 일에 공개된 Anderson et al.의 US 20140179928 A1, 2014 년 4 월 10 일에 공개된 Bender et al.의 US20140100227 A1, 2014 년 3 월 27 일에 공개된 Jiang et al.의 US 20140088188 A1, 2014 년 3 월 27 일에 공개된 Jiang et al.의 US 20140088163 A1, 2014년 3월 6일에 공개된 Jiang et al.의 US 20140066408 A1, 2013 년 11 월 28 일에 공개된 Anderson et al.의 US 20130317007 A1, 2013 년 11 월 14 일에 공개된 Gribble et al.의 US20130303607 A1, 2012 년 9 월 27 일에 공개된 Anderson et al.의 US 20120245374, 2012년 9월 20일에 공개된 Jiang et al.의 US 20120238767 A1, 2012년 9월 20일에 공개된 Shode et al.의 US 20120237629 A1, 2012년 8월 23일에 공개된 Anderson et al.의 US 20120214814 A1, 2012 년 6 월 28 일에 공개된 Lee et al.의 US 20120165279 A1, 2011 년 12 월 1 일에 공개된 Arntzen et al.의 US 20110294752 A1, 2011 년 4 월 21 일에 공개된 Majeed et al.의 US 20110091398 A1, 2010 년 7 월 29 일에 공개된 Arntzen et al.의 US 20100189824 A1, 2010 년 2 월 25 일에 공개된 Jiang et al.의 US 20100048911 A1, 2006 년 4 월 6 일에 공개된 Arntzen et al.의 US 20060073222 A1에 개시되어 있고, 그 전체 내용은 여기에 참조로 포함된다.Oleanolic acid derivatives, prodrugs and salts are US 20150011627 A1 by Gribble et al., published on January 8, 2015, US 20140343108 A1 by Rong et al., published on November 20, 2014, November 20, 2014 Xu et al., US 20140343064 A1, published on June 26, 2014, Anderson et al., US 20140179928 A1, published on April 10, 2014, Bender et al., US20140100227 A1, 2014 3 US 20140088188 A1 by Jiang et al., published on March 27, US 20140088163 A1 by Jiang et al., published on March 27, 2014, US 20140066408 A1 by Jiang et al., published on March 6, 2014 , US 20130317007 A1 by Anderson et al., published on November 28, 2013, US20130303607 A1 by Gribble et al., published on November 14, 2013, and Anderson et al., published on September 27, 2012. US 20120245374, US 20120238767 A1 by Jiang et al., published on September 20, 2012, US 20120237629 A1 by Shode et al., published on September 20, 2012, Anderson et, published on August 23, 2012 US 20120214814 A1 by al., Lee et al., US 20120165279 A1, released on June 28, 2012, Arntzen et al., US 20110294752 A1, released on December 1, 2011, April 21, 2011 US 20110091398 A1 by Majeed et al. published, US 20100189824 A1, 201 by Arntzen et al. published on July 29, 2010 US 20100048911 A1 by Jiang et al. published on February 25, 0, and US 20060073222 A1 by Arntzen et al. published on April 6, 2006, the entire contents of which are incorporated herein by reference. .

우르솔산 유도체, 프로드러그 및 염은 2015 년 1 월 8 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20150011627 A, 2013 년 11 월 14 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20130303607 A1, 2015 년 8 월 6 일에 공개된 Yoon et al.의 US 20150218206 A1, 2004 년 11 월 30 일에 발행된 Fritsche et al.의 US 6824811, 2010 년 5 월 8 일에 발행된 Ochiai et al.의 US 7718635, 2014 년 5 월 20 일에 발행된 Lin et al.의 US 8729055, 및 2015 년 9 월 1 일에 발행된 Yoon et al.의 US 9120839에 개시되어 있고, 그 전체 내용은 여기에 참조로 포함된다.Ursolic acid derivatives, prodrugs and salts are US 20150011627 A by Gribble et al., published on January 8, 2015, US 20130303607 A by Gribble et al., published on November 14, 2013, A1, August 6, 2015 Yoon et al., US 20150218206 A1, published Nov. 30, 2004, Frische et al., US 6824811, issued on November 30, 2004, Ochiai et al., published on May 8, 2010, US 7718635, 2014 5 US 8729055 by Lin et al., issued on 20th month, and US 9120839 by Yoon et al., issued 1st September 2015, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

베툴린산 유도체, 프로드러그 및 염은 2015 년 1 월 8 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20150011627 A, 2013 년 11 월 14 일에 공개된 Gribble et al.의 US 20130303607, 2012 년 9 월 20 일에 공개된 Shode et al.의 US 20120237629 A1, 2017 년 7 월 20 일에 공개된 Regueiro-Ren et al.의 US 20170204133 A1, 2017 년 4 월 6 일에 공개된 Nitz et al.의 US 20170096446 A1, 2015 년 11 월 26 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al의 US 20150337004 A1, 2015 년 4 월 30 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al.의 US 20150119373 A1, 2014 년 10 월 2 일에 공개된 Yan et al.의 US 20140296546 A1, 2014 년 8 월 28 일에 공개된 Swidorski et al.의 US 20140243298 A1, 2014 년 8 월 7 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al.의 US 20140221328 A1. 2014 년 3 월 6 일에 공개된 Leunis et al.의 US 20140066416 A1, 2013 년 3 월 14 일에 공개된 Durst et al.의 US 20130065868 A1, 2013 년 1 월 31 일에 공개된 Regueiro-Ren et al.의 US 20130029954 A1, 2012 년 11 월 29 일에 공개된 Zhang et al.의 US 20120302530 A1, 2012 년 8 월 23 일에 공개된 Power et al.의 US 20120214775 A1, 2012 년 4 월 26 일에 공개된 Honda et al.의 US 20120101149 A1, 2011 년 9 월 15 일에 공개된 Bullock et al.의 US 20110224182 A1, 2011 년 12 월 22 일에 공개된 Hemp et al.의 US 20110313191 A1, 2011 년 9 월 15 일에 공개된 Pichette et al.의 US 20110224159 A1, 2011 년 9 월 8 일에 공개된 Parthasaradhi Reddy et al.의 US 20110218204, 2009 년 8 월 13 일에 공개된 Safe et al.의 US 20090203661 A1, 2009 년 5월 21 일에 공개된 Krasutsky et al.의 US 20090131714 A1, 2009 년 3 월 19 일에 공개된 Krasutsky et al.의 US 20090076290, 2009 년 3 월 12 일에 공개된 Leunis et al.의 US 20090068257 A1, 2008 년 11 월 27 일에 공개된 Mukherjee et al.의 US 20080293682, 2007 년 3 월 29 일에 공개된 Pezzuto et al.의 US 20070072835 A1, 2006 년 11 월 9 일에 공개된 Jansen et al.의 US 20060252733, 2006 년 11 월 9 일에 공개된 O'Neill et al.의 US 2006025274 A1에 개시되어 있고, 그 전체 내용은 여기에 참조로 포함된다.Betulinic acid derivatives, prodrugs and salts are US 20150011627 A by Gribble et al., published on January 8, 2015, US 20130303607 by Gribble et al., published on November 14, 2013, September 20, 2012 US 20120237629 A1 by Shode et al., US 20170204133 A1 by Regueiro-Ren et al., published on July 20, 2017, US 20170096446 A1 by Nitz et al., published on April 6, 2017, US 20150337004 A1 of Parthasaradhi Reddy et al published on November 26, 2015, US 20150119373 A1 of Parthasaradhi Reddy et al. released on April 30, 2015, Yan et al. on October 2, 2014. US 20140296546 A1 by Swidorski et al., published on August 28, 2014, and US 20140221328 A1 by Parthasaradhi Reddy et al., published on August 7, 2014. US 20140066416 A1 by Leunis et al., published on March 6, 2014, US 20130065868 A1 by Durst et al., published on March 14, 2013, Regueiro-Ren et al, published on January 31, 2013 US 20130029954 A1, Zhang et al., US 20120302530 A1, published on November 29, 2012, Power et al., US 20120214775 A1, published on August 23, 2012, published on April 26, 2012 Honda et al. US 20120101149 A1, Bullock et al. US 20110224182 A1 published on September 15, 2011, Hemp et al. US 20110313191 A1 published on December 22, 2011, September 2011 US 20110224159 A1 by Pichette et al., published on 15th, US 20110218204 by Parthasaradhi Reddy et al., released on 8th September 2011, US 20090203661 A1 by Safe et al., published 13 August 2009, US 20090131714 A1 of Krasutsky et al., published on May 21, 2009, US 20090076290 of Krasutsky et al., published on March 19, 2009, US of Leunis et al., published on March 12, 2009 20090068257 A1, US 20080293682 by Mukherjee et al., published on November 27, 2008, US 20070072835 A1 by Pezzuto et al., released on March 29, 2007, Jansen et al, published on November 9, 2006 . US 20060252733, US 2006025274 A1 by O'Neill et al., published on November 9, 2006 And is incorporated herein by reference in its entirety.

항 바이러스 조성물은 임의의 적합한 약제학적으로 허용가능한 제형으로 제제화될 수 있다. 비경구, 귀, 눈, 코, 흡입, 입(buccal), 설하, 장, 국소(topical), 입, 경구 및 주사 가능한 제형이 특히 유용하다. 특정 제형은 고체 또는 액체 제형을 포함한다. 예시적인 적합한 제형은 정제, 캡슐, 알약, 캐플릿, 트로키(troche), 샤시(sache), 용액, 현탁액, 분산액, 바이알, 백, 병, 주사액, i.v.(정맥 내), i.m.(근육 내) 또는 i.p.(복강 내) 투여 가능한 액체 및 제약 과학 분야의 당업자에게 공지된 다른 제형을 포함한다.The antiviral composition can be formulated into any suitable pharmaceutically acceptable formulation. Particularly useful are parenteral, ear, eye, nose, inhalation, buccal, sublingual, intestinal, topical, mouth, oral and injectable formulations. Certain formulations include solid or liquid formulations. Exemplary suitable formulations are tablets, capsules, pills, caplets, troche, saches, solutions, suspensions, dispersions, vials, bags, bottles, injections, iv (in intravenous), im (intramuscular) Or liquids that can be administered ip (intraperitoneally) and other formulations known to those skilled in the pharmaceutical sciences.

항 바이러스 조성물을 함유하는 적합한 제형은 항 바이러스 조성물을 본원에 기재된 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합함으로써 제조될 수 있으며, 약제학적으로 허용되는 부형제는 또한 Pi et al.(Cur. Drug Deliv.(Mar 2016), 13(8), 1358-1366에서의 "용출률 및 생체 이용률 향상을 위한 우르솔산 나노 결정: 상이한 입자 크기의 영향"), Yang et al.(Int. J. Nanomed.(2013), 8(1), 2917-2926에서의 "올레아놀산의 경구 생체 이용률 향상을 위한 자가 미세 유화 약물 전달 시스템: 설계 및 평가"), Li et al.(Biol. Pharm. Bull.(2014), 37(6), 926-937에서의 "실험 설계로 습식 볼 밀링에 의해 제조된 최적화된 수크로스 에스테르 안정화 올레아놀산 나노 현탁액의 개발 및 평가"), Zhang et al.(J. Pharm. Sci.(June 2014), 103(6), 1711-1719)의 "지질 나노스피어를 통한 트리테르펜의 경구 생체 이용률 향상: 제조, 특성화 및 흡수 평가"), Godugu et al.(PLoS One(Mar 2014), 9(3):e89919에서의 "새로운 항암제 베르베린 및 베툴린산의 경구 생체 이용률 및 효과 개선 방법"), Zhao et al.(Drug Deliv.(Sep 2014), 21(6), 467-479에서의 "반 용매 침전에 의한 경구 저혈당 약물에 대한 베툴린 나노 입자의 제조 및 특성"), Yang et al.(Food Chem.(May 2012), 132(1), 319-325에서의 "초임계 반-용매(SAS) 공정을 이용한 우르솔산 나노 입자의 물리 화학적 특성 및 경구 생체 이용률"), Cao et al.(Mol. Pharm.(Aug. 2012), 9(8), 2127-2135에서의 "PEPT1-매개 수송을 위한 올레아놀산의 에틸렌 글리콜-링크된 아미노산 디에스테르 프로드러그: 합성, 장 투과성 및 약동학"), Li et al.(Parm. Res.(Aug 2011), 28(8), 2020-2033)에서의 "올레아놀산의 수크로스 에스테르-안정화 나노 현탁액의 제조, 생물학적 및 약동학적 연구"), Tong et al.(Int. J. Pharm.(Feb 2011), 404(1-2), 148-158에서의 "올레아놀산, BCS 클래스 IV 화합물의 용해 및 경구 생체 이용률 향상을 위해 폴리 비닐피롤리돈 및 소듐캡레이트에 의한 스프레이 동결 건조"), Xi et al.(AAPS PharmSciTech(2009), 10(1), 172-182에서의 "올레아놀산의 자기 나노 유화 약물 전달 시스템의 제형 개발 및 생체 이용률 평가", Chen et al.(J. Pharm. Pharmacol.(Feb 2005), 57(2), 259-264에서의 "올레아놀산 나노 현탁액: 제조, 시험관내 특성화 및 개선된 간 보호 효과")에 기재되어 있고, 이의 전체 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다.Suitable formulations containing the antiviral composition can be prepared by mixing the antiviral composition with the pharmaceutically acceptable excipients described herein, and pharmaceutically acceptable excipients are also described in Pi et al. (Cur. Drug Deliv. (Mar 2016), 13(8), 1358-1366, "Ursolic acid nanocrystals to improve dissolution rate and bioavailability: the effect of different particle sizes"), Yang et al. (Int. J. Nanomed. (2013), 8 (1), “Self-emulsifying drug delivery system for improving oral bioavailability of oleanolic acid: design and evaluation”, Li et al. (Biol. Pharm. Bull. (2014), 37(6) , 926-937 "Development and Evaluation of Optimized Sucrose Ester Stabilized Oleanolic Acid Nano Suspensions Prepared by Wet Ball Milling with Experimental Design"), Zhang et al. (J. Pharm. Sci. (June 2014), 103 (6), 1711-1719), “Oral bioavailability enhancement of triterpenes through lipid nanospheres: preparation, characterization and absorption evaluation”), Godugu et al. (PLoS One (Mar 2014), 9(3):e89919 "How to improve oral bioavailability and effectiveness of new anticancer agents berberine and betulinic acid", Zhao et al. (Drug Deliv. (Sep 2014), 21(6), 467-479 Preparation and characterization of betulin nanoparticles for hypoglycemic drugs", Yang et al. (Food Chem. (May 2012), 132(1), 319-325 using the "Supercritical Semi-Solvent (SAS) process" Physicochemical properties and oral bioavailability of ursolic acid nanoparticles”, “Ethylene Oleanoic Acid for PEPT1-mediated Transport in Cao et al. (Mol. Pharm. (Aug. 2012), 9(8), 2127-2135” Glycol-linked amino acid diester prodrug: synthetic, intestinal permeable and pharmacokinetic"), Li et al .(Parm. Res. (Aug 2011), 28(8), 2020-2033), “Preparation of Sucrose Ester-Stabilized Nano Suspensions of Oleanoic Acid, Biological and Pharmacokinetic Studies”), Tong et al. (Int. J. Pharm. (Feb 2011), 404(1-2), "spray freeze drying with polyvinylpyrrolidone and sodium caprate to dissolve oleanolic acid, BCS class IV compound and improve oral bioavailability", 148-158), "Formulation development and bioavailability evaluation of oleanolic acid self nanoemulsifying drug delivery system in AAPS PharmSciTech (2009), 10(1), 172-182", Chen et al. (J. Pharm. Pharmacol. (Feb 2005), 57(2), 259-264, “Oleanolic Acid Nano Suspension: Preparation, In Vitro Characterization and Improved Liver Protection Effect”), the entire disclosure of which is incorporated herein by reference.

적합한 제형은 또한 2012 년 5 월 29 일 발행된 Addingington의 US 8187644 B2, 2008 년 7 월 22 일에 발행된 Addington의 US 7402325 B2, 2013 년 3 월 12 일 발행된 Addington et al.의 US 8394434 B2에 따라 제조될 수 있고, 이의 전체 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다. 실시 예 13-15에 기재된 바와 같이 적합한 제형이 또한 제조될 수 있다.Suitable formulations are also described in Addingington's US 8187644 B2, issued May 29, 2012, Addington's US 7402325 B2, issued July 22, 2008, and Addington et al., US 8394434 B2, issued March 12, 2013. Can be prepared accordingly, the entire disclosure of which is incorporated herein by reference. Suitable formulations can also be prepared as described in Examples 13-15.

유효량 또는 치료적으로 관련된 양의 항 바이러스 화합물(강심 배당체, 트리테르펜 또는 이들의 조합)이 구체적으로 고려된다. 용어 "유효량"은 약제학적 유효량이 고려되는 것으로 이해된다. 약제학적 유효량은 요구되거나 원하는 치료 반응에 충분한 활성 성분의 양, 즉, 환자에게 투여될 때 상당한 생물학적 반응을 이끌어 내기에 충분한 양이다. 상당한 생물학적 반응은 활성 물질의 단일 또는 다중 투여량을 투여한 결과 발생할 수 있다. 투여량은 하나 이상의 제형을 포함할 수 있다. 임의의 환자에 대한 특정 투여량 수준은 치료중인 징후, 징후의 중증도, 환자 건강, 연령, 성별, 체중, 식이, 약리학적 반응, 사용된 특정 제형, 그리고 다른 그러한 요인들을 포함하는 다양한 요인에 따라 달라짐을 이해할 것이다.Effective amounts or therapeutically relevant amounts of antiviral compounds (strong glycosides, triterpenes or combinations thereof) are specifically contemplated. It is understood that the term “effective amount” is considered a pharmaceutically effective amount. A pharmaceutically effective amount is an amount of an active ingredient sufficient for a desired or desired therapeutic response, ie, an amount sufficient to elicit a significant biological response when administered to a patient. Significant biological reactions can occur as a result of administering a single or multiple doses of the active substance. Dosages can include one or more formulations. The specific dosage level for any patient depends on a variety of factors including the signs being treated, the severity of the signs, patient health, age, gender, weight, diet, pharmacological response, the specific formulation used, and other such factors. Will understand

경구 투여를 위한 바람직한 투여량은 단일 투여량으로 1 회 내지 10 회의 제형이 투여될 수 있지만, 최대 5 개의 제형이다. 예시적인 제형은 투여 당 총 0.1 내지 500 mg(1 내지 10 투여 수준)에 대해, 제형 당 0.01 내지 100 mg 또는 0.01 내지 100 마이크로그램의 항 바이러스 조성물을 함유할 수 있다. 투여량은 대상체에서 특정 치료 반응 또는 임상적 이점을 달성하도록 미리 결정 및/또는 조정될 수 있는 투여 요법에 따라 투여될 것이다.The preferred dosage for oral administration can be administered from 1 to 10 dosages in a single dosage, but up to 5 dosages. Exemplary formulations may contain from 0.01 to 100 mg or from 0.01 to 100 micrograms of antiviral composition per formulation, for a total of 0.1 to 500 mg per administration (1 to 10 dose levels). The dosage will be administered according to a dosing regimen that can be predetermined and/or adjusted to achieve a particular therapeutic response or clinical benefit in the subject.

강심 배당체는 대상체에게 20 내지 100 마이크로그램, 12 마이크로그램 내지 300 마이크로그램, 또는 12 마이크로그램 내지 120 마이크로그램의 올레안드리인의 초기 투여량을 제공하기에 충분한 양으로 제형내에 존재할 수 있다. 제형은 올레안드린의 20 내지 100 마이크로그램, 0.01 마이크로그램 내지 100 mg 또는 0.01 마이크로그램 내지 100 마이크로그램의 올레안드린, 올레안드린 추출물 또는 올레안드린을 함유하는 네리움 올리앤더 추출물을 포함할 수 있다.The cardiac glycosides may be present in the formulation in an amount sufficient to provide the subject with an initial dose of 20 to 100 micrograms, 12 micrograms to 300 micrograms, or 12 micrograms to 120 micrograms of oleandriline. Formulations may include 20-100 micrograms, 0.01 micrograms-100 mg or 0.01 micrograms-100 micrograms of oleandrones, oleandroline extracts or nerium oleanander extracts containing oleandrones. Can.

항 바이러스제는 경구 제형으로 포함될 수 있다. 제형의 일부 실시 예는 장용(enteric) 코팅되지 않고, 0.5 내지 1 시간 이하의 기간 내에 항 바이러스 조성물의 복용량을(charge) 방출한다. 제형의 일부 실시 예는 장용 코팅되고, 예를 들어 공장(jejunum), 회장(ileum), 소장 및/또는 대장(콜론)으로부터와 같이, 위의 하류로 항 바이러스 조성물의 복용량을 방출한다. 장용 코팅된 제형은 경구 투여 후 1-10 시간 내에 항 바이러스 조성물을 전신 순환계로 방출할 것이다.Antiviral agents may be included in oral formulations. Some embodiments of the formulation are not enteric coated and release a charge of the antiviral composition within a period of 0.5 to 1 hour or less. Some embodiments of the formulation are enteric coated and release a dose of antiviral composition downstream of the stomach, such as, for example, from jejunum, ileum, small intestine, and/or large intestine (colon). Enteric coated formulations will release the antiviral composition into the systemic circulation within 1-10 hours of oral administration.

항 바이러스 조성물은 급속 방출, 즉시 방출, 제어 방출, 지속 방출, 장기적 방출, 연장 방출, 파열 방출, 연속 방출, 슬로우 방출 또는 펄스 방출 제형, 또는 이러한 방출 유형들 중 2개 이상을 나타내는 제형으로 포함될 수 있다. 제형으로부터의 항 바이러스 조성물의 방출 프로파일은 0 차, 유사-0 차, 1 차, 유사-1 차 또는 S자형(sigmoidal) 방출 프로파일일 수 있다. 항 바이러스 조성물이 투여되는 대상체에서 트리테르펜에 대한 혈장 농도 프로파일은 하나 이상의 최대 값을 나타낼 수 있다.Antiviral compositions may be included in rapid release, immediate release, controlled release, sustained release, long-term release, extended release, burst release, continuous release, slow release or pulsed release formulations, or formulations exhibiting two or more of these types of release. have. The release profile of the antiviral composition from the formulation can be a 0th, pseudo-0th, 1st, pseudo-1st, or sigmoidal release profile. The plasma concentration profile for triterpene in a subject to which the antiviral composition is administered may exhibit one or more maximum values.

인간 임상 데이터에 기초하여, 올레안드린의 투여량의 50 % 내지 75 %가 경구 생체 이용 가능할 것으로 예상되어, 제형 당 올레안드린의 10 내지 20 마이크로그램, 20 내지 40 마이크로그램, 30 내지 50 마이크로그램, 40 내지 60 마이크로그램, 50 내지 75 마이크로그램, 75 내지 100 마이크로그램을 제공할 것이다. 성인 인간에서 5 리터의 평균 혈액량을 감안할 때, 예상되는 올레안드린 혈장 농도는 0.05 내지 2 ng/ml, 0.005 내지 10 ng/mL, 0.005 내지 8 ng/mL, 0.01 내지 7 ng/mL, 0.02 내지 7 ng/mL, 0.03 내지 6 ng/mL, 0.04 내지 5 ng/mL, 또는 0.05 내지 2.5 ng/mL의 범위일 것이다. SCF 추출물에 존재하는 권장 일일 투여량의 올레안드린은 일반적으로 1 일 2 회, kg 체중 당 약 0.2 내지 약 4.5 마이크로그램이다. 올레안드린의 투여량은 약 0.2 내지 약 1 마이크로그램/kg 체중/일, 약 0.5 내지 약 1.0 마이크로그램/kg 체중/일, 약 0.75 내지 약 1.5 마이크로그램/kg 체중/일, 약 1.5 내지 약 2.52 마이크로그램/kg 체중/일, 약 2.5 내지 약 3.0 마이크로그램/kg 체중/일, 약 3.0 내지 4.0 마이크로그램/kg 체중/일 또는 약 3.5 내지 4.5 마이크로그램 올레안드린/kg 체중/일일 수 있다. 올레안드린의 최대 허용 투여량은 약 3.5 마이크로그램/kg 체중/일 내지 약 4.0 마이크로그램/kg 체중/일일 수 있다. 최소 유효 투여량은 약 0.5 마이크로그램/일, 약 1 마이크로그램/일, 약 1.5 마이크로그램/일, 약 1.8 마이크로그램/일, 약 2 마이크로그램/일, 또는 약 5 마이크로그램/일일 수 있다.Based on human clinical data, 50% to 75% of the dose of oleandroline is expected to be orally bioavailable, such that 10 to 20 micrograms, 20 to 40 micrograms, 30 to 50 microns of oleander per formulation Grams, 40 to 60 micrograms, 50 to 75 micrograms, 75 to 100 micrograms. Given the average blood volume of 5 liters in adult humans, the expected oleandroline plasma concentrations are 0.05 to 2 ng/ml, 0.005 to 10 ng/mL, 0.005 to 8 ng/mL, 0.01 to 7 ng/mL, 0.02 to 7 ng/mL, 0.03 to 6 ng/mL, 0.04 to 5 ng/mL, or 0.05 to 2.5 ng/mL. The recommended daily dose of oleandrene present in the SCF extract is generally about 0.2 to about 4.5 micrograms per kg body weight twice daily. The dosage of oleandroline is about 0.2 to about 1 microgram/kg body weight/day, about 0.5 to about 1.0 microgram/kg body weight/day, about 0.75 to about 1.5 microgram/kg body weight/day, about 1.5 to about 2.52 micrograms/kg body weight/day, about 2.5 to about 3.0 micrograms/kg body weight/day, about 3.0 to 4.0 micrograms/kg body weight/day, or about 3.5 to 4.5 micrograms oleander/kg body weight/day . The maximum allowable dose of oleandroline may be from about 3.5 micrograms/kg body weight/day to about 4.0 micrograms/kg body weight/day. The minimum effective dose can be about 0.5 micrograms/day, about 1 micrograms/day, about 1.5 micrograms/day, about 1.8 micrograms/day, about 2 micrograms/day, or about 5 micrograms/day.

항 바이러스 조성물은 존재하는 트리테르펜의 조합 및 그것들이 존재하는 몰비로 인해 저투여량 내지 고투여량으로 투여될 수 있다. 인간에 대한 치료 유효 투여량은 체중 Kg 당 약 100-1000 mg 또는 100-1000 마이크로그램의 항 바이러스 조성물이다. 이러한 투여량은 24 시간 동안 최대 10 회까지 투여할 수 있다. 다른 적절한 투여 범위가 아래에 지정되어 있다.Antiviral compositions can be administered in low to high doses due to the combination of triterpenes present and the molar ratios in which they are present. A therapeutically effective dose for humans is about 100-1000 mg or 100-1000 micrograms of antiviral composition per Kg body weight. These doses can be administered up to 10 times over a 24 hour period. Other suitable dosage ranges are specified below.

Figure pct00003
Figure pct00003

본원의 화합물은 본 발명의 조성물 또는 제형에서 하나 이상의 기능을 가질 수 있음에 유의해야 한다. 예를 들어, 화합물은 계면 활성제 및 물 혼화성 용매, 또는 계면 활성제와 물 불혼화성 용매 둘 모두로서 작용할 수 있다.It should be noted that the compounds herein may have one or more functions in the compositions or formulations of the present invention. For example, the compounds can act as surfactants and water miscible solvents, or both surfactants and water immiscible solvents.

액체 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 액체 담체를 포함할 수 있다. 액체 담체는 수성, 비-수성, 극성, 비-극성 및/또는 유기 담체일 수 있다. 액체 담체는 예를 들어 비-제한적으로 물 혼화성 용매, 물 불혼화성 용매, 물, 완충제 및 이들의 혼합물을 포함한다.The liquid composition can include one or more pharmaceutically acceptable liquid carriers. The liquid carrier can be an aqueous, non-aqueous, polar, non-polar and/or organic carrier. Liquid carriers include, but are not limited to, water miscible solvents, water immiscible solvents, water, buffers, and mixtures thereof.

본원에서 사용된 용어 "수용성 용매"또는 "물 혼화성 용매"는 상호 교환적으로 사용되며, 물과 2 상 혼합물을 형성하지 않거나, 또는 물에 충분히 용해되어 액상의 분리없이 5 % 이상의 용매를 함유하는 수성 용매 혼합물을 제공하는 유기 액체를 지칭한다. 용매는 인간 또는 동물에게 투여하기에 적합하다. 예시적인 수용성 용매는 비-제한적인 예로서, PEG(폴리(에틸렌 글리콜)), PEG 400(폴리(에틸렌 글리콜, 이는 약 400의 대략적인 분자량을 가짐), 에탄올, 아세톤, 알칸올, 알코올, 에테르, 프로필렌 글리콜, 글리세린, 트리아세틴, 폴리(프로필렌 글리콜), PVP(폴리(비닐 피롤리돈)), 디메틸술폭시드, N,N-디메틸포름아미드, 포름아미드, N,N-디메틸아세트아미드, 피리딘, 프로판올, N-메틸아세트아미드, 부탄올, 용해액( 2-피롤리돈), 파마솔브(N-메틸-2-피롤리돈)을 포함한다.As used herein, the terms "water-soluble solvent" or "water miscible solvent" are used interchangeably, and do not form a two-phase mixture with water, or are sufficiently soluble in water and contain at least 5% solvent without separation of the liquid phase. Refers to an organic liquid that provides an aqueous solvent mixture. The solvent is suitable for administration to humans or animals. Exemplary water-soluble solvents include, by way of non-limiting examples, PEG (poly(ethylene glycol)), PEG 400 (poly(ethylene glycol, which has an approximate molecular weight of about 400), ethanol, acetone, alkanol, alcohol, ether , Propylene glycol, glycerin, triacetin, poly(propylene glycol), PVP (poly(vinyl pyrrolidone)), dimethyl sulfoxide, N,N-dimethylformamide, formamide, N,N-dimethylacetamide, pyridine , Propanol, N-methylacetamide, butanol, solution (2-pyrrolidone), and Pharmasolve (N-methyl-2-pyrrolidone).

본원에서 사용된 용어 "물 불용성 용매"또는 "물 불혼화성 용매"는 상호 교환적으로 사용되며, 물과 2 상 혼합물을 형성하거나, 또는 물내의 용매의 농도가 5 %를 초과할 때 상 분리를 제공하는 유기 액체를 지칭한다. 용매는 인간 또는 동물에게 투여하기에 적합하다. 예시적인 물 불용성 용매는 비-제한적인 예로서, 중간 사슬/장쇄 트리글리세리드, 오일, 피마자유, 옥수수 유, 비타민 E, 비타민 E 유도체, 올레산, 지방산, 올리브 오일, 소프티잔(softisan) 645(디글리세릴 카프릴레이트/카프레이트/스테아레이트/히드록시 스테아레이트 아디페이트), 미글리올, 캡텍스(Captex 350: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/로레이트 트리글리세리드; Captex 355: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 트리글리세리드; Captex 355 EP/NF:글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간 사슬 트리글리세리드)를 포함한다. As used herein, the terms “water insoluble solvent” or “water immiscible solvent” are used interchangeably, to form a two-phase mixture with water, or to separate phase when the concentration of the solvent in water exceeds 5%. Refers to the organic liquid provided. The solvent is suitable for administration to humans or animals. Exemplary water insoluble solvents include, by way of non-limiting example, medium chain/long chain triglycerides, oils, castor oil, corn oil, vitamin E, vitamin E derivatives, oleic acid, fatty acids, olive oil, softisan 645 (diglycerol) Reel caprylate/caprate/stearate/hydroxy stearate adipate), migliol, captex (Captex 350: glyceryl tricaprylate/caprate/rorate triglyceride; Captex 355: glyceryl trica Prilate/Caprate Triglyceride; Captex 355 EP/NF: Glyceryl Tricaprylate/Caprate Medium Chain Triglyceride).

적합한 용매는 "산업용 Q3C 불순물에 대한 인간 사용(ICH) 약물 등록을 위한 기술 요구 사항의 조화에 관한 국제 회의 지침: 잔류 용매"(1997)에 열거되어 있으며, 이는 잔류 용매의 어느 정도의 양이 의약품에서 안전한 것으로 간주되는지를 권고한다. 예시적인 용매는 클래스 2 또는 클래스 3 용매로 열거된다. 클래스 3 용매는 예를 들어 아세트산, 아세톤, 아니솔, 1-부탄올, 2-부탄올, 부틸 아세테이트, tert-부틸메틸 에테르, 쿠멘, 에탄올, 에틸 에테르, 에틸 아세테이트, 에틸 포르 메이트, 포름산, 헵탄, 이소부틸 아세테이트, 이소프로필 아세테이트, 메틸 아세테이트, 메틸-1-부탄올, 메틸에틸 케톤, 메틸이소부틸 케톤, 2-메틸-1-프로판올, 펜탄, 1-펜탄 올, 1-프로판올, 2-프로판올 또는 프로필 아세테이트를 포함한다.Suitable solvents are listed in the "International Conference on Guidance on Harmonizing Technical Requirements for Registering Human Use (ICH) Drugs for Industrial Q3C Impurities: Residual Solvents" (1997). Recommends whether it is considered safe. Exemplary solvents are listed as Class 2 or Class 3 solvents. Class 3 solvents are, for example, acetic acid, acetone, anisole, 1-butanol, 2-butanol, butyl acetate, tert-butylmethyl ether, cumene, ethanol, ethyl ether, ethyl acetate, ethyl formate, formic acid, heptane, iso Butyl acetate, isopropyl acetate, methyl acetate, methyl-1-butanol, methylethyl ketone, methylisobutyl ketone, 2-methyl-1-propanol, pentane, 1-pentanol, 1-propanol, 2-propanol or propyl acetate It includes.

본 발명에서 물 불혼화성 용매로서 사용될 수 있는 다른 물질은 다음의 물질들, 즉 캡텍스 100: 프로필렌 글리콜 디카프레이트; 캡텍스 200: 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트; 캡텍스 200 P: 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트; 캡텍스 300: 글리세릴 트리 카프릴레이트/카프레이트; 캡텍스 300 EP/NF: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간 사슬 트리글리세리드; 캡텍스 350: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/로레이터(Laurate); 캡텍스 355: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트; 캡텍스 355 EP/NF: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트 중간 사슬 트리글리세리드; 캡텍스 500: 트리아세틴; 캡텍스 500 P: 트리아세틴(Pharmaceutical Grade); 캡텍스 800: 프로필렌 글리콜 디(2-에티텍사노에이트); 캡텍스 810 D: 글리세릴 트리카프릴레이트/카프레이트/리놀레에이트; 캡텍스 1000: 글리세릴 트리카프레이트; 캡텍스 CA: 중간 사슬 트리글리세리드; 캡텍스 MCT-170: 중간 사슬 트리글리세리드; 캡물(Capmul) GMO: 글리세릴 모노올레에이트; 캡물 GMO-50 EP/NF: 글리세릴 모노올레 에이트; 캡물 MCM: 중간 사슬 모노- 및 디글리세리드; 캡물 MCM C8: 글리세릴 모노 카프릴레이트; 캡물 MCM C10: 글리세릴 모노카프레이트; 캡물 PG-8: 프로필렌 글리콜 모노카프릴레이트; 캡물 PG-12: 프로필렌 글리콜 모노라우레이트; 카프롤(Caprol) 10G10O: 데카글리세롤 데카올레에이트; 카프롤 3GO: 트리글리세롤 모노 올레에이트; 카프롤 ET: 혼합 지방산의 폴리글리세롤 에스테르; 카프롤 MPGO: 헥사 글리세롤 디올레에이트; 카프롤 PGE 860: 데카글리세롤 모노-, 디올레에이트를 포함한다. Other materials that can be used as the water immiscible solvent in the present invention include the following materials, namely Captex 100: propylene glycol dicaprate; Captex 200: propylene glycol dicaprylate/dicaprate; Captex 200 P: Propylene glycol dicaprylate/dicaprate; Propylene glycol dicaprylocaprate; Captex 300: glyceryl tri-caprylate/caprate; Captex 300 EP/NF: glyceryl tricaprylate/caprate medium chain triglyceride; Captex 350: glyceryl tricaprylate/caprate/Laurate; Captex 355: glyceryl tricaprylate/caprate; Captex 355 EP/NF: glyceryl tricaprylate/caprate medium chain triglyceride; Captex 500: triacetin; Captex 500 P: Triacetin (Pharmaceutical Grade); Captex 800: Propylene glycol di(2-ethexanosate); Captex 810 D: glyceryl tricaprylate/caprate/linoleate; Captex 1000: glyceryl tricaprate; Captex CA: medium chain triglycerides; Captex MCT-170: medium chain triglyceride; Capmul GMO: glyceryl monooleate; Cap water GMO-50 EP/NF: glyceryl monooleate; Cap water MCM: medium chain mono- and diglycerides; Cap water MCM C8: glyceryl mono caprylate; Cap water MCM C10: glyceryl monocaprate; Cap water PG-8: propylene glycol monocaprylate; Cap water PG-12: propylene glycol monolaurate; Caprol 10G10O: decaglycerol decaoate; Caprol 3GO: triglycerol mono oleate; Caprol ET: polyglycerol ester of mixed fatty acids; Caprol MPGO: hexa glycerol dioleate; Caprol PGE 860: decaglycerol mono-, dioleate.

본원에 사용된 "계면 활성제"는 극성 또는 하전 친수성 부분뿐만 아니라 비극성 소수성(친유성) 부분을 포함하는 화합물을 지칭한다; 즉, 계면 활성제는 양쪽 친매성이다. 계면 활성제라는 용어는 하나 이상의 화합물의 혼합물을 지칭할 수 있다. 계면 활성제는 가용화제, 유화제 또는 분산제일 수 있다. 계면 활성제는 친수성 또는 소수성일 수 있다.“Surfactant” as used herein refers to a compound comprising a polar or charged hydrophilic portion as well as a non-polar hydrophobic (lipophilic) portion; That is, surfactants are both amphiphilic. The term surfactant can refer to a mixture of one or more compounds. The surfactant can be a solubilizer, emulsifier or dispersant. The surfactant can be hydrophilic or hydrophobic.

친수성 계면 활성제는 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 친수성 계면 활성제일 수 있다. 이러한 계면 활성제는 음이온성, 양이온성, 양쪽 이온성 또는 비-이온성일 수 있지만, 비-이온성 친수성 계면 활성제가 현재 바람직하다. 상기 논의된 바와 같이, 이들 비-이온성 친수성 계면 활성제는 일반적으로 약 10보다 큰 HLB 값을 가질 것이다. 친수성 계면 활성제의 혼합물 또한 본 발명의 범위 내에 있다.The hydrophilic surfactant can be any hydrophilic surfactant suitable for use in pharmaceutical compositions. Such surfactants can be anionic, cationic, zwitterionic or non-ionic, but non-ionic hydrophilic surfactants are currently preferred. As discussed above, these non-ionic hydrophilic surfactants will generally have an HLB value greater than about 10. Mixtures of hydrophilic surfactants are also within the scope of the present invention.

유사하게, 소수성 계면 활성제는 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 소수성 계면 활성제일 수 있다. 일반적으로, 적합한 소수성 계면 활성제는 약 10 미만의 HLB 값을 가질 것이다. 소수성 계면 활성제의 혼합물은 또한 본 발명의 범위 내에 있다.Similarly, the hydrophobic surfactant can be any hydrophobic surfactant suitable for use in pharmaceutical compositions. Generally, suitable hydrophobic surfactants will have an HLB value less than about 10. Mixtures of hydrophobic surfactants are also within the scope of the present invention.

추가의 적합한 가용화제의 예는 알코올 및 폴리올, 예컨대 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 벤질 알코올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 부탄디올 및 이의 이성질체, 글리세롤, 펜타에리트리톨, 소르비톨, 만니톨, 트랜스큐톨, 디메틸 이소 소르비드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리비닐알코올, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 다른 셀룰로오스 유도체, 시클로덱스트린 및 시클로덱스트린 유도체; 평균 분자량이 약 200 내지 약 6000인 폴리에틸렌 글리콜의 에테르, 예컨대 테트라하이드로푸르푸릴 알코올 PEG 에테르(글리코푸롤, 이는 BASF로부터 상표명 Tetraglycol로 시판됨) 또는 메톡시 PEG(Union Carbide); 아미드, 예컨대 2-피롤리돈, 2-피페리돈, 카프로락탐, N-알킬피롤리돈, N-하이드록시알킬피롤리돈, N-알킬피페리돈, N-알킬카프로락탐, 디메틸아세트아미드 및 폴리비닐피롤리돈; 에스테르, 예컨대 에틸 프로피오네이트, 트리부틸시트레이트, 아세틸 트리에틸시트 레이트, 아세틸 트리부틸 시트레이트, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 에틸 부티레이트, 트리아세틴, 프로필렌 글리콜 모노아세테이트, 프로필렌 글리콜 디아세테이트, 카프로락톤 및 이의 이성질체, 발레로락톤 및 이의 이성질체, 부티로락톤 및 이의 이성질체; 및 당 업계에 공지된 다른 가용화제, 예컨대 디메틸 아세트아미드, 디메틸 이소소르비드(Arlasolve DMI(ICI)), N-메틸 피롤리돈(Pharmasolve(ISP)), 모노옥타노인, 디에틸렌 글리콜 노노에틸 에테르(이는 상품명 Transcutol로 Gattefosse로부터 입구 가능함), 및 물을 포함한다. 가용화제의 혼합물 또한 본 발명의 범위 내에 있다.Examples of further suitable solubilizers are alcohols and polyols, such as ethanol, isopropanol, butanol, benzyl alcohol, ethylene glycol, propylene glycol, butanediol and isomers thereof, glycerol, pentaerythritol, sorbitol, mannitol, transcutol, dimethyl isosorbide , Polyethylene glycol, polypropylene glycol, polyvinyl alcohol, hydroxypropyl methylcellulose and other cellulose derivatives, cyclodextrins and cyclodextrin derivatives; Ethers of polyethylene glycol having an average molecular weight of about 200 to about 6000, such as tetrahydrofurfuryl alcohol PEG ether (glycolurol, which is commercially available from BASF under the trade name Tetraglycol) or methoxy Union Carbide (PEG); Amides such as 2-pyrrolidone, 2-piperidone, caprolactam, N-alkylpyrrolidone, N-hydroxyalkylpyrrolidone, N-alkylpiperidone, N-alkylcaprolactam, dimethylacetamide and poly Vinylpyrrolidone; Esters such as ethyl propionate, tributyl citrate, acetyl triethyl citrate, acetyl tributyl citrate, triethyl citrate, ethyl oleate, ethyl caprylate, ethyl butyrate, triacetin, propylene glycol monoacetate, Propylene glycol diacetate, caprolactone and isomers thereof, valerolactone and isomers thereof, butyrolactone and isomers thereof; And other solubilizers known in the art, such as dimethyl acetamide, dimethyl isosorbide (Arlasolve DMI (ICI)), N-methyl pyrrolidone (Pharmasolve (ISP)), monooctanoin, diethylene glycol nonoethyl ether (Which is available from Gattefosse under the trade name Transcutol), and water. Mixtures of solubilizers are also within the scope of the present invention.

지시된 것을 제외하고는, 본원에 언급된 화합물은 표준 상업적 공급원으로부터 쉽게 입수할 수 있다.Except as indicated, the compounds mentioned herein are readily available from standard commercial sources.

반드시 필요하지는 않지만, 조성물 또는 제형은 하나 이상의 킬레이트화제, 하나 이상의 보존제, 하나 이상의 항산화제, 하나 이상의 흡착제, 하나 이상의 산성화제, 하나 이상의 알칼리화제, 하나 이상의 소포제, 하나 이상의 완충제, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 전해질, 하나 이상의 염, 하나 이상의 안정화제, 하나 이상의 장성(tonicity) 개질제, 하나 이상의 희석제 또는 이들의 조합을 추가로 포함할 수 있다.Although not required, the composition or formulation may contain one or more chelating agents, one or more preservatives, one or more antioxidants, one or more adsorbents, one or more acidifying agents, one or more alkalizing agents, one or more anti-foaming agents, one or more buffering agents, one or more coloring agents, one Or more electrolyte, one or more salts, one or more stabilizers, one or more tonicity modifiers, one or more diluents, or combinations thereof.

본 발명의 조성물은 또한 고정 유, 땅콩 유, 참기름, 면실유, 옥수수 유 및 올리브유와 같은 오일; 올레산, 스테아르산 및 이소스테아르 산과 같은 지방산; 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 지방산 글리세리드 및 아세틸화된 지방산 글리세리드와 같은 지방산 에스테르를 포함한다. 조성물은 또한 에탄올, 이소프로판올, 헥사데실 알코올, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜과 같은 알코올; 2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-메탄올과 같은 글리세롤 케탈; 폴리(에틸렌 글리콜) 450과 같은 에테르; 미네랄 오일 및 바셀린과 같은 석유 탄화수소; 물; 약제학적으로 적합한 계면 활성제, 현탁제 또는 유화제; 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.The composition of the present invention also includes oils such as fixed oil, peanut oil, sesame oil, cottonseed oil, corn oil and olive oil; Fatty acids such as oleic acid, stearic acid and isostearic acid; Fatty acid esters such as ethyl oleate, isopropyl myristate, fatty acid glycerides and acetylated fatty acid glycerides. The composition may also include alcohols such as ethanol, isopropanol, hexadecyl alcohol, glycerol and propylene glycol; Glycerol ketals such as 2,2-dimethyl-1,3-dioxolane-4-methanol; Ethers such as poly(ethylene glycol) 450; Petroleum hydrocarbons such as mineral oil and petrolatum; water; Pharmaceutically suitable surfactants, suspensions or emulsifiers; Or mixtures thereof.

제약 제형 분야에서 사용되는 화합물은 일반적으로 다양한 기능 또는 목적을 제공한다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 본 명세서에서 명명된 화합물이 한 번만 언급되거나 본 명세서에서 하나 이상의 용어를 정의하는 데 사용되는 경우, 그 목적 또는 기능은 단지 명명된 목적 또는 기능(들)으로 제한되는 것으로 해석되어서는 안된다.It should be understood that compounds used in the field of pharmaceutical formulations generally serve a variety of functions or purposes. Thus, when a compound named herein is mentioned only once or is used to define one or more terms herein, the purpose or function should not be construed as being limited to the named purpose or function(s) only.

제형의 하나 이상의 성분은 그의 유리 염기, 유리 산 또는 약제학적으로 또는 분석학적으로 허용되는 염 형태로 존재할 수 있다. 본원에 사용된 "약제학적으로 또는 분석학적으로 허용되는 허용되는 염"은 이온 결합된 쌍을 형성하기 위해 필요에 따라 이를 산과 반응시켜 개질된 화합물을 지칭한다. 허용되는 염의 예는 예를 들어 비-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 종래의 비-독성 염을 포함한다. 적합한 비-독성 염은 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 설폰산, 설 팜산, 인산, 질산 및 기타 당업자에게 공지된 것들을 포함한다. 염은 유기산, 예컨대 아미노산, 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 히드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 에탄 디술폰산, 옥살산, 이세티온산 및 기타 당업자에게 공지된 것들로부터 제조된다. 한편, 약리학적 활성 성분이 산 작용기를 갖는 경우, 약제학적으로 허용되는 염기가 첨가되어 약제학적으로 허용되는 염을 형성한다. 다른 적합한 염의 목록은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th(ed., Mack Publishing Company, PA, Easton, 1985, p. 1418)에서 찾을 수 있는데, 그 관련 개시 내용은 본원에 참고로 포함된다. One or more components of the formulation may be in its free base, free acid or pharmaceutically or analytical acceptable salt form. “Pharmaceutically or analytical acceptable acceptable salt” as used herein refers to a compound that has been modified by reacting it with an acid as necessary to form an ion-bonded pair. Examples of acceptable salts include, for example, conventional non-toxic salts formed from non-toxic inorganic or organic acids. Suitable non-toxic salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, sulfonic acid, sulfamic acid, phosphoric acid, nitric acid and others known to those skilled in the art. Salts are organic acids such as amino acids, acetic acid, propionic acid, succinic acid, glycolic acid, stearic acid, lactic acid, malic acid, tartaric acid, citric acid, ascorbic acid, pamoic acid, maleic acid, hydroxymaleic acid, phenylacetic acid, glutamic acid, benzoic acid, salicylic acid, Sulfanilic acid, 2-acetoxybenzoic acid, fumaric acid, toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid, ethane disulfonic acid, oxalic acid, isethionic acid and others known to those skilled in the art. On the other hand, when the pharmacologically active ingredient has an acid functional group, a pharmaceutically acceptable base is added to form a pharmaceutically acceptable salt. A list of other suitable salts can be found in Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th (ed., Mack Publishing Company, PA, Easton, 1985, p. 1418), the relevant disclosures of which are incorporated herein by reference.

"약제학적으로 허용되는"이라는 문구는 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제나 합병증없이 합리적인 이익/위험율에 비례하여, 인간 및 동물의 조직과의 접촉에 사용하기에 적합한 화합물, 재료, 조성물 및/또는 제형을 지칭하기 위해 사용된다. The phrase "pharmaceutically acceptable" is used for contact with human and animal tissues, within the scope of sound medical judgment, in proportion to a reasonable benefit/risk without excessive toxicity, irritation, allergic reactions, or other problems or complications. Used to refer to compounds, materials, compositions and/or formulations suitable for the following.

제형은 제약 산업에 공지된 임의의 종래의 수단에 의해 제조될 수 있다. 액체 제형은 용기에 하나 이상의 액체 담체 및 항 바이러스 조성물을 제공함으로써 제조될 수 있다. 하나 이상의 다른 부형제가 액체 제형에 포함될 수 있다. 고체 제형은 하나 이상의 고체 담체 및 항 바이러스 조성물을 제공함으로써 제조될 수 있다. 하나 이상의 다른 부형제가 고형 제형에 포함될 수 있다.The formulation can be prepared by any conventional means known in the pharmaceutical industry. Liquid formulations can be prepared by providing one or more liquid carriers and an antiviral composition in a container. One or more other excipients may be included in the liquid formulation. Solid formulations can be prepared by providing one or more solid carrier and antiviral compositions. One or more other excipients may be included in the solid dosage form.

제형은 종래의 포장 장비 및 재료를 사용하여 포장될 수 있다. 제형은 팩, 병, 비아, 백, 주사기, 엔벨로프, 패킷, 블리스터 팩, 박스, 앰플 또는 다른 용기에 포함될 수 있다.The formulation can be packaged using conventional packaging equipment and materials. Formulations can be included in packs, bottles, vias, bags, syringes, envelopes, packets, blister packs, boxes, ampoules or other containers.

본 발명의 조성물은 임의의 제형에 포함될 수 있다. 특정 제형은 고체 또는 액체 제형을 포함한다. 예시적인 적합한 제형은 정제, 캡슐, 알약, 캐플릿, 트로 키, 샤시 및 제약 과학 분야의 당업자에게 공지된 다른 제형을 포함한다.The composition of the present invention can be included in any formulation. Certain formulations include solid or liquid formulations. Exemplary suitable formulations include tablets, capsules, pills, caplets, troches, chassis and other formulations known to those skilled in the pharmaceutical sciences.

상기 설명 및 하기 실시 예에 비추어 볼 때, 당업자는 과도한 실험없이 청구된 바와 같은 본 발명을 실시할 수 있을 것이다. 전술한 내용은 본 발명의 실시 예의 실시를 위한 특정 절차를 상세히 설명하는 하기 실시 예를 참조하여 보다 잘 이해될 것이다. 이들 예에 대한 모든 언급은 예시의 목적을 위한 것이다. 하기 실시 예는 배타적인 것으로 간주되어서는 안되며, 본 발명에 의해 고려되는 많은 실시 예들 중 일부만을 예시할 뿐이다.In light of the above description and the following examples, those skilled in the art will be able to practice the invention as claimed without undue experimentation. The foregoing will be better understood with reference to the following examples detailing specific procedures for practicing the embodiments of the invention. All references to these examples are for purposes of illustration. The following examples should not be regarded as exclusive, but merely illustrate some of the many embodiments contemplated by the present invention.

실시 예 1Example 1

분말 올리앤더(oleander, 협죽도) 잎의 초임계 유체 추출Supercritical fluid extraction of powder oleander leaves

방법 A. 이산화탄소와 함께Method A. with carbon dioxide

분말 올리앤더 잎은 올리앤더 잎 재료를 수확, 세척 및 건조시킨 후, 올리앤더 잎 재료를 예컨대 미국 특허 제 5,236,132 호, 제 5,598,979 호, 제 6,517,015 호 및 제 6,715,705 호에 기술된 것과 같은 분쇄 및 탈수 장치를 통해 통과시킴으로써 준비하였다. 사용된 출발 물질의 중량은 3.94 kg이었다.The powder oleander leaves are harvested, washed and dried after oleander leaf materials are crushed and dewatered as described in U.S. Pat.Nos. 5,236,132, 5,598,979, 6,517,015 and 6,715,705. It was prepared by passing through. The starting material used weighed 3.94 kg.

출발 물질을 추출기 장치에서 300 bar(30 MPa, 4351 psi)의 압력 및 50 ℃(122ºF)의 온도에서 순수한 CO2와 혼합하였다. 총 197 kg의 CO2를 사용하여 용매 대 원료의 비가 50:1이 되도록 하였다. 이어서, CO2와 원료의 혼합물을 분리기 장치에 통과시켜, 혼합물의 압력과 온도를 변경하고, 추출물을 이산화탄소로부터 분리하였다.The starting material was mixed with pure CO 2 at a pressure of 300 bar (30 MPa, 4351 psi) and a temperature of 50° C. (122 ºF) in an extractor apparatus. A total of 197 kg of CO 2 was used to achieve a solvent to raw material ratio of 50:1. Subsequently, a mixture of CO 2 and raw materials was passed through a separator device to change the pressure and temperature of the mixture, and the extract was separated from carbon dioxide.

추출물(65 g)은 향이 좋은 갈색의 끈적 끈적한 점성 물질로서 수득되었다. 엽록소 및 기타 잔류 발색 화합물로 인해 컬러가 야기되었을 수 있다. 정확한 수율 측정을 위해, 튜브 및 분리기를 아세톤으로 헹구고, 아세톤을 증발시켜 추출물의 추가 9 g을 수득하였다. 총 추출량은 74g이었다. 출발 물질의 중량을 기준으로, 추출물의 수율은 1.88 %였다. 추출물 중의 올레안드린의 함량은 고압 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법을 사용하여, 560.1 mg, 또는 0.76 %의 수율로 계산되었다.The extract (65 g) was obtained as a brown, viscous viscous substance with a pleasant scent. Color may have been caused by chlorophyll and other residual coloring compounds. For accurate yield measurement, the tube and separator were rinsed with acetone, and acetone was evaporated to yield an additional 9 g of extract. The total extraction amount was 74 g. Based on the weight of the starting material, the yield of the extract was 1.88%. The content of oleander in the extract was calculated using a high pressure liquid chromatography and mass spectrometry method to yield 560.1 mg, or 0.76%.

방법 B. 이산화탄소와 에탄올의 혼합물과 함께Method B. With a mixture of carbon dioxide and ethanol

분말 올리앤더 잎은 올리앤더 잎 재료를 수확, 세척 및 건조시킨 후, 올리앤더 잎 재료를 예컨대 미국 특허 제 5,236,132 호, 제 5,598,979 호, 제 6,517,015 호 및 제 6,715,705 호에 기술된 것과 같은 분쇄 및 탈수 장치를 통해 통과시킴으로써 준비하였다. 사용된 출발 물질의 중량은 3.85 kg이었다.The powder oleander leaves are harvested, washed and dried after oleander leaf materials are crushed and dewatered as described in U.S. Pat.Nos. 5,236,132, 5,598,979, 6,517,015 and 6,715,705. It was prepared by passing through. The starting material used weighed 3.85 kg.

출발 물질을 추출기 장치에서 280 bar(28 MPa, 4061 psi)의 압력 및 50 ℃(122ºF)의 온도에서 개질제로서 순수한 CO2 및 5 % 에탄올과 혼합하였다. 총 160kg의 CO2와 8kg의 에탄올을 사용하여 용매 대 원료의 비가 43.6 대 1이 되도록 하였다. 이어서, CO2, 에탄올 및 원료의 혼합물을 분리기 장치를 통해 통과시켜, 혼합물의 압력과 온도를 변경하고, 추출물을 이산화탄소로부터 분리하였다.The starting material was mixed with pure CO 2 and 5% ethanol as modifiers at a pressure of 280 bar (28 MPa, 4061 psi) and a temperature of 50° C. (122° F.) in an extractor apparatus. A total of 160 kg of CO 2 and 8 kg of ethanol were used to achieve a solvent to raw material ratio of 43.6 to 1. Subsequently, a mixture of CO 2 , ethanol and raw materials was passed through a separator device to change the pressure and temperature of the mixture, and the extract was separated from carbon dioxide.

추출물(207 g)은 에탄올을 제거한 후, 명백하게 약간의 엽록소를 함유하는 짙은 녹색의 끈적 끈적한 점성 덩어리로서 수득되었다. 출발 물질의 중량을 기준으로, 추출물의 수율은 5.38 %였다. 추출물 중의 올레안드린의 함량은 고압 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법을 사용하여, 1.89 g, 또는 0.91 %의 수율로 계산되었다.The extract (207 g) was obtained after removal of ethanol, apparently as a dark green, sticky viscous mass containing some chlorophyll. Based on the weight of the starting material, the yield of the extract was 5.38%. The content of oleander in the extract was calculated using a high pressure liquid chromatography and mass spectrometry with a yield of 1.89 g, or 0.91%.

실시 예 2Example 2

분말 올리앤더 잎의 열탕(hot-water) 추출.Hot-water extraction of powder oliander leaves.

(비교 예)(Comparative example)

열탕 추출은 전형적으로 올리앤더 잎으로부터 올레안드린 및 다른 활성 성분을 추출하기 위해 사용된다. 열탕 추출 공정의 예는 미국 특허 제 5,135,745 호 및 제 5,869,060 호에서 찾을 수 있다.Hot water extraction is typically used to extract oleander and other active ingredients from oleander leaves. Examples of hot water extraction processes can be found in U.S. Patent Nos. 5,135,745 and 5,869,060.

5 g의 분말 올리앤더 잎을 사용하여 열탕 추출을 수행하였다. 분말화된 올리앤더 잎에(올리앤더 출발 물질의 중량 기준) 10 부피의 끓는 물을 첨가하고, 혼합물을 6 시간 동안 일정하게 교반하였다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 잎 잔류 물을 수집하고, 동일한 조건 하에서 다시 추출하였다. 여과액을 합하고 동결 건조시켰다. 추출물의 외관은 갈색이었다. 건조된 추출물 물질의 무게는 약 1.44g이었다. 추출 물질 34.21 mg을 물에 용해시키고, 고압 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법을 사용하여 올레안드린 함량 분석을 수행하였다. 올레안드린의 양은 3.68 mg으로 측정되었다. 추출물의 양을 기준으로 한 올레안드린 수율은 0.26 % 인 것으로 계산되었다.Hot water extraction was performed using 5 g of powder oliander leaves. 10 volumes of boiling water was added to the powdered oleander leaves (by weight of the oleander starting material) and the mixture was stirred constantly for 6 hours. The mixture was then filtered, the leaf residue was collected and extracted again under the same conditions. The filtrates were combined and lyophilized. The appearance of the extract was brown. The dried extract material weighed about 1.44 g. 34.21 mg of the extract was dissolved in water and oleander content analysis was performed using high pressure liquid chromatography and mass spectrometry. The amount of oleander was measured at 3.68 mg. The yield of oleander based on the amount of extract was calculated to be 0.26%.

실시 예 3Example 3

약제학적 조성물의 제조.Preparation of pharmaceutical compositions.

방법 A. 크레모포르(Cremophor)-기반 약물 전달 시스템Method A. Cremophor-based drug delivery system

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the indicated amounts.

Figure pct00004
Figure pct00004

부형제를 병에 분배하고, 뉴 브런즈윅 사이언티픽 C24KC 냉장 인큐베이터 셰이커내에서 60 ℃에서 24 시간 동안 흔들어서 균질성을 확보하였다. 이어서, 샘플을 따라서 용해화를 육안으로 검사하였다. 부형제 및 항 바이러스 조성물 둘 모두는 24 시간 후에 모든 제형에 대해 완전히 용해되었다.The excipients were dispensed into bottles and shaken for 24 hours at 60° C. in a New Brunswick Scientific C24KC refrigerated incubator shaker to ensure homogeneity. The solubility was then visually inspected along the sample. Both excipients and antiviral compositions were completely dissolved for all formulations after 24 hours.

방법 B. GMO/크레모포르-기반 약물 전달 시스템Method B. GMO/cremophor-based drug delivery system

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the indicated amounts.

Figure pct00005
Figure pct00005

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 C. 라브라솔(Labrasol)-기반 약물 전달 시스템Method C. Labrasol-based drug delivery system

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the indicated amounts.

Figure pct00006
Figure pct00006

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 D. 비타민 E-TPGS 기반 미셀 형성 시스템Method D. Vitamin E-TPGS based micelle formation system

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the indicated amounts.

Figure pct00007
Figure pct00007

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 E. 다-성분 약물 전달 시스템Method E. Multi-component drug delivery system

하기 성분들이 지시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in the indicated amounts.

Figure pct00008
Figure pct00008

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

방법 F. 다-성분 약물 전달 시스템Method F. Multi-component drug delivery system

하기 성분들이 캡슐에 포함된 것으로 표시된 양으로 제공되었다.The following ingredients were provided in amounts indicated as being included in the capsule.

Figure pct00009
Figure pct00009

방법 A의 절차를 따랐다.The procedure of Method A was followed.

실시 예 4Example 4

장용 코팅된(enteric coated) 캡슐의 제조Preparation of enteric coated capsules

단계 I:액체-충전 캡슐의 제조Step I: Preparation of liquid-filled capsules

경질 젤라틴 캡슐(50 카운트, 00 크기)을 실시 예 3의 액체 조성물로 충전하였다. 이들 캡슐을 800mg의 제형으로 수동으로 충전한 다음, 50 % 에탄올/50 % 수용액과 함께 손으로 밀봉하였다. 이어서, 캡슐을 하기 지시된 양으로 하기 성분을 함유하는 22 % 젤라틴 용액과 함께 손으로 밴딩하였다(banded).Hard gelatin capsules (50 counts, 00 size) were filled with the liquid composition of Example 3. These capsules were manually filled with 800 mg formulation and then hand sealed with 50% ethanol/50% aqueous solution. The capsules were then banded by hand with a 22% gelatin solution containing the following ingredients in the amounts indicated below.

Figure pct00010
Figure pct00010

젤라틴 용액을 완전히 혼합하고 1-2 시간 동안 팽윤시켰다. 팽창 기간 후, 용액을 단단히 덮고 55 ℃ 오븐에 넣고 액화시켰다. 전체 젤라틴 용액이 액체가 되면 밴딩(banding)을 수행하였다The gelatin solution was mixed thoroughly and swollen for 1-2 hours. After the expansion period, the solution was tightly covered and placed in a 55° C. oven to liquefy. When the whole gelatin solution became liquid, banding was performed.

뾰족한 둥근 3/0 아티스트 브러쉬를 사용하여, 젤라틴 용액을 캡슐에 페인트하였다. 시오노기(Shionogi)에 의해 제공되는 밴딩 키트를 사용했다. 밴딩 후, 밴드를 경화시키기 위해 캡슐을 주위 조건에서 12 시간 동안 유지시켰다.Using a pointed round 3/0 artist brush, the gelatin solution was painted in capsules. The banding kit provided by Shionogi was used. After banding, the capsules were kept at ambient conditions for 12 hours to cure the band.

단계 II:액체-충전 캡슐의 코팅Step II: Coating of the liquid-filled capsule

하기 표에 열거된 성분으로부터 코팅 분산액을 제조하였다.Coating dispersions were prepared from the ingredients listed in the table below.

Figure pct00011
Figure pct00011

단계 I에 따른 밴딩 캡슐을 사용하는 경우, 분산액을 20.0 mg/cm2 코팅 수준으로 캡슐에 도포하였다. 캡슐을 코팅하기 위해 하기 조건을 사용하였다.When using the banding capsule according to step I, the dispersion was applied to the capsule at a coating level of 20.0 mg/cm2. The following conditions were used to coat the capsules.

Figure pct00012
Figure pct00012

* 스프레이 노즐은 노즐과 스프레이 경로가 유입 공기의 흐름 경로하에 있도록 설정되었다.* The spray nozzle is set so that the nozzle and spray path are under the flow path of the incoming air.

실시 예 5Example 5

대상체에서 지카바이러스 감염의 치료Treatment of Zikavirus infection in subjects

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral composition therapy

지카바이러스 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련 투여량은 일정 기간 동안의 소정의 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상체의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 지카바이러스 적정 농도(titre)를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서의 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물을 이용한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.Subjects exhibiting Zicavirus infection are prescribed anti-viral compositions, and therapeutically relevant dosages are administered to subjects according to a given dosing regimen for a period of time. The subject's therapeutic response level is periodically determined. The level of therapeutic response can be determined by determining a subject's zicavirus titre in blood or plasma. If the treatment response level is too low at one dose, the dose is increased according to a predetermined dose increase schedule until the desired treatment response level in the subject is achieved. Treatment of subjects with antiviral compositions continues as needed, and the dosage or dosing regimen can be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제를 갖는 항 바이러스 조성물Method B. Combination therapy: antiviral composition with other agents

지카바이러스 감염 또는 그 증상의 치료를 위해 대상체에게 하나 이상의 다른 치료제를 처방하고 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.Method A is followed except that one or more other therapeutic agents have been prescribed and administered to the subject for treatment of a Zikavirus infection or its symptoms. Subsequently, one or more other therapeutic agents may be administered in combination with, or before or after the antiviral composition. Dose escalation (or loss) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

실시 예 6Example 6

지카바이러스 감염에 대한 항 바이러스 활성의 시험관 내 평가In vitro evaluation of antiviral activity against zikavirus infection

방법 A. 순수한 화합물Method A. pure compound

베로 E6 세포(Vero C1008 세포로도 알려짐, ATTC No. CRL-1586; https://www.atcc.org/Products/All/CRL-1586.aspx)는 강심 배당체의 존재 하에서 0.2의 MOI(다중 감염)로 ZIKV(지카바이러스 균주 PRVABC59, ATCC VR-1843; https://www.atcc.org/Products/All/VR-1843.aspx)에 감염되었다. 세포를 바이러스 및 화합물과 함께 1 시간 동안 배양한 후, 접종원 및 화합물을 폐기하였다. 세포에 새로운 배지를 제공하고 48 시간 동안 배양한 후, 포르말린으로 고정하고 ZIKV 감염을 위해 착색되었다. 신티그라피(scintigraphy)에 의해 결정된 올레안드린(도 1a) 및 디곡신(도 1b)의 대표적인 감염률이 도시되어 있다. 다른 화합물은 동일한 조건에서 평가되며, 지카바이러스에 대해 매우 다양한 수준의 항 바이러스 활성을 나타낸다. Vero E6 cells (also known as Vero C1008 cells, ATTC No. CRL-1586; https://www.atcc.org/Products/All/CRL-1586.aspx) have 0.2 MOIs (multiple infections) in the presence of cardiac glycosides ) ZIKV (Zikavirus strain PRVABC59, ATCC VR-1843; https://www.atcc.org/Products/All/VR-1843.aspx). Cells were incubated for 1 hour with virus and compound, and then inoculum and compound were discarded. Cells were supplied with fresh medium and incubated for 48 hours before being fixed with formalin and stained for ZIKV infection. Representative infection rates of oleandroins (FIG. 1A) and digoxin (FIG. 1B) determined by scintigraphy are shown. Other compounds are evaluated under the same conditions, and exhibit very different levels of antiviral activity against Zikavirus.

방법 B. 추출물 형태의 화합물Method B. Compound in extract form

시험되는 표적 화합물을 함유하는 추출물은 추출물의 양이 추출물 중의 표적 화합물의 양으로 정규화되는 것을 제외하고는 방법 A에 상세히 기술된 바와 같이 평가된다. 예를 들어, 2 중량 %의 올레안드린을 함유하는 추출물은 1 mg의 추출물 당 20 마이크로그램의 올레안드린을 함유한다. 따라서, 평가를 위한 의도된 양의 올레안드린이 20 마이크로그램이면, 1 mg의 추출물이 분석에 사용될 것이다.The extract containing the target compound tested is evaluated as detailed in Method A, except that the amount of extract is normalized to the amount of target compound in the extract. For example, an extract containing 2% by weight of oleandroline contains 20 micrograms of oleandroline per 1 mg of extract. Thus, if the intended amount of oleandroline for evaluation is 20 micrograms, 1 mg of extract will be used for analysis.

실시 예 7Example 7

항 바이러스 조성물을 포함하는 정제의 제조Preparation of tablets comprising antiviral composition

3 % 실로이드(Syloid) 244FP 및 97 % 미정질 셀룰로오스(MCC)의 초기 정제 혼합물을 혼합하였다. 이어서, 실시 예 3에 따라 제조된 기존의 배치 조성물을 습식 제립법(wet granulation)을 통해 실로이드/MCC 혼합물에 혼입시켰다. 이 혼합물은 아래 표에서 "초기 정제(tabletting) 혼합물"로 표시되어 있다. 추가적인 MMC가 압축률을 높이기 위해 추가-과립으로 첨가되었다. 초기 정제 혼합물에 대한 이러한 첨가는 "추가-과립(extragranular) 첨가"로 표시되어 있다. 추가-과립 첨가로부터의 결과적인 혼합물은 "최종 정제 혼합물"과 동일한 조성이었다.The initial purification mixture of 3% Syloid 244FP and 97% microcrystalline cellulose (MCC) was mixed. Subsequently, the existing batch composition prepared according to Example 3 was incorporated into the syloid/MCC mixture through wet granulation. This mixture is designated as the "tablet mixture" in the table below. Additional MMC was added as an extra-granule to increase compression. This addition to the initial tablet mixture is marked as "extragranular addition". The resulting mixture from the addition of granules was of the same composition as the “final tablet mixture”.

Figure pct00013
Figure pct00013

Figure pct00014
Figure pct00014

Figure pct00015
Figure pct00015

실로이드 244FP는 그레이스 데이비슨(Grace Davison)에 의해 제조된 콜로이드 이산화 규소이다. 콜로이드 이산화 규소는 일반적으로 흡착제, 활택제(glidant) 및 정제 붕해제와 같은 여러 기능을 제공하는 데 사용된다. 실로이드 244FP는 오일에서 그 중량의 3 배를 흡착하는 능력 및 5.5 미크론 입자 크기 때문에 선택되었다. Syloid 244FP is a colloidal silicon dioxide manufactured by Grace Davison. Colloidal silicon dioxide is commonly used to provide several functions, such as adsorbents, glidants and tablet disintegrants. Syloid 244FP was chosen because of its ability to adsorb three times its weight in oil and the 5.5 micron particle size.

실시 예 8Example 8

올레안드린을 함유하는 용액의 HPLC 분석HPLC analysis of a solution containing oleander

다음 조건(대칭 C18 컬럼(5.0 ㎛, 150 x 4.6 mm I.D.; 물); MeOH:물의 이동 상 = 54:46(v/v) 및 1.0 ml/분에서의 유속)을 사용하여, 샘플(올레안드린 표준 물질, SCF 추출물 및 열탕 추출물)을 HPLC(물)상에서 분석하였다. Samples (oleans) using the following conditions (symmetric C18 column (5.0 μm, 150×4.6 mm ID; water); MeOH:water mobile phase=54:46 (v/v) and flow rate at 1.0 ml/min) Standards given, SCF extract and hot water extract) were analyzed on HPLC (water).

검출 파장은 217 nm로 설정되었다. 샘플은 대략적인 목표 농도의 올레안드린을 달성하기 위하여, 화합물 또는 추출물을 고정된 양의 HPLC 용매에 용해시킴으로써 제조되었다. 올레안드린의 머무른 시간은 내부 표준을 사용하여 결정할 수 있다. 올레안드린의 농도는 내부 표준을 사용하는 신호 반응 곡선을 개발/전개함으로써(developing), 결정/보정될 수 있다.The detection wavelength was set to 217 nm. Samples were prepared by dissolving the compound or extract in a fixed amount of HPLC solvent to achieve an approximate target concentration of oleandrolin. The length of stay in Oleanrin can be determined using internal standards. The concentration of oleander can be determined/corrected by developing/developing a signal response curve using internal standards.

실시 예 9Example 9

약제학적 조성물의 제조Preparation of pharmaceutical compositions

본 발명의 약제학적 조성물은 하기 방법 중 임의의 방법으로 제조될 수 있다. 습식 또는 건식 조건하에서 혼합을 수행할 수 있다. 약제학적 조성물은 제조 동안 압축, 건조 또는 둘다 될 수 있다. 약제학적 조성물은 제형으로 나누어질 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be prepared by any of the following methods. Mixing can be carried out under wet or dry conditions. The pharmaceutical composition can be compressed, dried or both during manufacture. The pharmaceutical composition can be divided into dosage forms.

방법 A.Method A.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 하나의 항 바이러스 화합물과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is mixed with at least one antiviral compound disclosed herein.

방법 B.Method B.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 두 개의 항 바이러스 화합물과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is mixed with at least two antiviral compounds disclosed herein.

방법 C.Method C.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 하나의 강심 배당체와 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is mixed with at least one cardiac glycoside disclosed herein.

방법 D.Method D.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 두 개의 트리테르펜과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is mixed with at least two triterpenes disclosed herein.

방법 E.Method E.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 하나의 강심 배당체 및 본원에 개시된 적어도 두개의 트리테르펜과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is mixed with at least one cardiac glycoside disclosed herein and at least two triterpenes disclosed herein.

방법 D.Method D.

적어도 하나의 약제학적 부형제가 본원에 개시된 적어도 세 개의 트리테르펜과 혼합된다.At least one pharmaceutical excipient is mixed with at least three triterpenes disclosed herein.

실시 예 10Example 10

트리테르펜 혼합물의 제조Preparation of the triterpene mixture

명시된 트리테르펜을 지시된 대략적인 몰비로 혼합하여, 하기 조성물을 제조하였다.The following compositions were prepared by mixing the indicated triterpenes in the approximate molar ratios indicated.

Figure pct00016
Figure pct00016

각각의 조성물에 대해, 3 개의 상이한 각각의 용액을 제조하였고, 이에 따라 각각의 용액 중 트리테르펜의 총 농도는 대략 9 μM, 18 μM 또는 36 μM이었다.For each composition, three different individual solutions were prepared, so the total concentration of triterpene in each solution was approximately 9 μM, 18 μM or 36 μM.

Figure pct00017
Figure pct00017

실시 예 11Example 11

항 바이러스 조성물의 제조Preparation of antiviral compositions

항 바이러스 조성물은 개별 트리테르펜 성분을 혼합하여 혼합물을 형성함으로써 제조될 수 있다. 허용 가능한 항 바이러스 활성을 제공한 상기 제조된 트리테르펜 혼합물을 항 바이러스 조성물로 제형화하였다(formulated).Antiviral compositions can be prepared by mixing individual triterpene components to form a mixture. The prepared triterpene mixture that provided acceptable antiviral activity was formulated into an antiviral composition.

올레아놀산 및 우르솔산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleanolic acid and ursolic acid

공지된 양의 올레아놀산 및 우르솔산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다.Known amounts of oleanolic acid and ursolic acid were mixed according to a predetermined molar ratio of ingredients as defined herein. The components may be mixed in solid form or solvents such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained ingredients in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, at least one pharmaceutically acceptable excipient is mixed with the pharmacologically active agent. Antiviral compositions are formulated for administration to mammals.

올레아놀산 및 베툴린산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleanolic acid and betulinic acid

공지된 양의 올레아놀산 및 베툴린산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다.Known amounts of oleanolic acid and betulinic acid were mixed according to a predetermined molar ratio of ingredients as defined herein. The components may be mixed in solid form or solvents such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained ingredients in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, at least one pharmaceutically acceptable excipient is mixed with the pharmacologically active agent. Antiviral compositions are formulated for administration to mammals.

올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleanoic acid, ursolic acid and betulinic acid

공지된 양의 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 용매에서 혼합되었다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다. Known amounts of oleanolic acid, ursolic acid and betulinic acid were mixed according to a predetermined molar ratio of ingredients as defined herein. The components are mixed in solid form or mixed in a solvent, for example a solvent. The components may be mixed in solid form or solvents such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained ingredients in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, one or more pharmaceutically acceptable excipients are mixed with the pharmacologically active agent. Antiviral compositions are formulated for administration to mammals.

올레아드린, 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 갖는 항 바이러스 조성물Antiviral composition with oleadrine, oleanolic acid, ursolic acid and betulinic acid

공지된 양의 올레아드린, 올레아놀산, 우르솔산 및 베툴린산을 본원에 정의된 바와 같은 성분의 미리 정해진 몰비에 따라 혼합하였다. 성분은 고체 형태로 혼합되거나 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 아세톤, 프로판올, 디메틸 설폭사이드(DMSO), 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸아세트아미드(DMAC), N-메틸피롤리돈(NMP), 물 또는 이들의 혼합물내에서 혼합되었다. 생성된 혼합물은 본원에 기재된 바와 같이 상대 몰비로 성분을 함유하였다.Known amounts of oleadrine, oleanolic acid, ursolic acid, and betulinic acid were mixed according to a predetermined molar ratio of ingredients as defined herein. The components may be mixed in solid form or solvents such as methanol, ethanol, chloroform, acetone, propanol, dimethyl sulfoxide (DMSO), dimethylformamide (DMF), dimethylacetamide (DMAC), N-methylpyrrolidone ( NMP), water or mixtures thereof. The resulting mixture contained ingredients in relative molar ratios as described herein.

약제학적으로 허용되는 항 바이러스 조성물의 경우, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제가 약리학적 활성 제제와 혼합되었다. 항 바이러스 조성물은 포유동물에게 투여하기 위해 제형화된다.For pharmaceutically acceptable antiviral compositions, one or more pharmaceutically acceptable excipients are mixed with the pharmacologically active agent. Antiviral compositions are formulated for administration to mammals.

실시 예 12Example 12

대상체에서 필로바이러스 감염의 치료Treatment of pilovirus infection in a subject

예시적인 필로바이러스 감염은 에볼라바이러스 및 마르부르그바이러스를 포함한다.Exemplary filovirus infections include Ebola virus and Marburg virus.

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral composition therapy

필로바이러스 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련된 투여량은 일정 기간 동안 처방된 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상체의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 필로바이러스 적정 농도를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.Subjects exhibiting filovirus infection are prescribed anti-viral compositions, and therapeutically relevant doses are administered to subjects according to a prescribed dosing regimen for a period of time. The subject's therapeutic response level is periodically determined. The level of therapeutic response can be determined by determining the appropriate concentration of the subject's filovirus in the blood or plasma. If the treatment response level is too low at one dose, the dose is increased according to a predetermined dose increase schedule until the desired treatment response level is achieved in the subject. Treatment of the subject with the antiviral composition continues as needed, and the dosage or dosing regimen can be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제를 갖는 항 바이러스 조성물Method B. Combination therapy: antiviral composition with other agents

대상체가 필로바이러스 감염 또는 그 증상의 치료를 위해 하나 이상의 다른 치료제를 처방 및 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.Method A is followed except that the subject has prescribed and administered one or more other therapeutic agents for the treatment of a filovirus infection or its symptoms. Subsequently, one or more other therapeutic agents may be administered in combination with, or before or after the antiviral composition. Dose escalation (or loss) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

실시 예 13Example 13

대상체에서 플라비바이러스 감염의 치료Treatment of flavivirus infections in subjects

예시적인 플라비바이러스 감염은 황열병, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스, 지카바이러스, 진드기성 뇌염, 캬사누르 삼림병, 알크후르마(Alkhurma) 질병, 치쿤군야 바이러스, 옴스크 출혈열, 포와산(Powassan) 바이러스 감염을 포함한다.Exemplary flavivirus infections include yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, Zika virus, tick encephalitis, Cassanur forest disease, Alkhurma disease, Chikungunya virus, Omsk hemorrhagic fever, Powassan ) Contains viral infections.

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral composition therapy

플라비바이러스 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련된 투여량은 일정 기간 동안 처방된 투여 요법에 따라 대상체에게 투여된다. 대상의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 플라비바이러스 적정 농도를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.Subjects exhibiting flavivirus infection are prescribed anti-viral compositions, and therapeutically relevant doses are administered to subjects according to a prescribed dosing regimen for a period of time. The subject's therapeutic response level is periodically determined. The level of treatment response can be determined by determining the appropriate concentration of a flavivirus in a subject in blood or plasma. If the treatment response level is too low at one dose, the dose is increased according to a predetermined dose increase schedule until the desired treatment response level is achieved in the subject. Treatment of the subject with the antiviral composition continues as needed, and the dosage or dosing regimen can be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제를 갖는 항 바이러스 조성물Method B. Combination therapy: antiviral composition with other agents

플라비바이러스 감염 또는 그 증상의 치료를 위해 대상체에 하나 이상의 다른 치료제로 처방하고 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.Method A is followed except that the subject is prescribed and administered with one or more other therapeutic agents to treat the flavivirus infection or its symptoms. Subsequently, one or more other therapeutic agents may be administered in combination with, or before or after the antiviral composition. Dose escalation (or loss) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

실시 예 14Example 14

지카바이러스 및 뎅기 바이러스에 대한 항 바이러스 활성 평가 Evaluation of antiviral activity against zikavirus and dengue virus

CPE-기반 항 바이러스 분석은 일정 농도 범위에서 시험 조성물의 존재 또는 부재하에서 표적 세포를 감염시킴으로써 수행되었다. 표적 세포의 감염은 세포 병변 효과 및 세포 사멸을 초래한다. 이러한 유형의 분석에서, 시험 조성물의 존재하에서 CPE의 감소 및 이에 상응하는 세포 생존력의 증가는 항 바이러스 활성의 지표로서 사용된다. CPE-기반 분석의 경우, 중립적 적색 판독(red readout)으로 세포 생존력을 결정하였다. 생존 세포는 그 리소좀내에 중성 적색을 포함한다. 중성 적색의 흡수는 살아있는 세포가 세포질에서 보다 리소좀 내에서 더 낮은 pH를 유지하는 능력에 의존하며, 이 활성 과정은 ATP를 필요로 한다. 리소좀 내부에 들어가면, 중성 적색 염료가 충전되어 세포 내에 유지된다. 중성 적색(0.033 %)과의 3 시간 배양 후, 세포 외 염료를 제거하고, 세포를 PBS로 세척하고, 세포 내 중성 적색을 50 % 에탄올 + 1 % 아세트산 용액으로 용해시켰다. 490 nm에서 각각의 웰(well)의 흡광도(광학 밀도)를 판독하여, 용액내 중성 적색의 양을 정량화하였다.CPE-based antiviral analysis was performed by infecting target cells with or without test compositions over a range of concentrations. Infection of target cells results in cell lesion effects and cell death. In this type of assay, a decrease in CPE in the presence of a test composition and corresponding increase in cell viability is used as an indicator of antiviral activity. For CPE-based assays, cell viability was determined by neutral red readout. Viable cells contain a neutral red color in the lysosome. Absorption of neutral red depends on the ability of living cells to maintain a lower pH in the lysosome than in the cytoplasm, and this active process requires ATP. Once inside the lysosome, neutral red dye is charged and held in the cell. After 3 hours incubation with neutral red (0.033%), extracellular dye was removed, cells were washed with PBS and intracellular neutral red was dissolved with 50% ethanol + 1% acetic acid solution. The absorbance (optical density) of each well was read at 490 nm to quantify the amount of neutral red in solution.

부착성(adherent) 세포주는 바이러스 패널에 대한 조성물의 항 바이러스 활성을 평가하기 위해 사용되었다. 바이러스를 세포에 첨가하기 전에, 조성물을 표적 세포와 함께 30 분 동안 사전 배양하였다. 조성물은 감염 배양 기간 동안, 세포 배양 배지에 존재하였다. 각각의 감염 분석에 대해, 바이러스가 없는 상태에서 조성물의 세포 독성 효과를 결정하기 위해 동일한 농도의 조성물(복제물)을 사용하여 생존력 분석을 병렬적으로 수립하였다.Adherent cell lines were used to evaluate the antiviral activity of the composition against the viral panel. Before adding the virus to the cells, the composition was pre-incubated with the target cells for 30 minutes. The composition was present in the cell culture medium during the period of infection culture. For each infection assay, viability assays were established in parallel using the same concentration of composition (replica) to determine the cytotoxic effect of the composition in the absence of virus.

시험 조성물의 항 바이러스 활성은 시험 조건 하의 세포의 감염 수준(면역 염색-기반 분석) 또는 생존력(CPE-기반 분석)을, 감염되지 않은 세포의 감염 수준 또는 생존력과 비교함으로써 결정되었다. 억제제의 존재 하의 생존력을 모의-처리된 세포의 생존력과 비교함으로써, 감염되지 않은 세포에서 세포 독성 효과를 평가하였다. 세포 독성은 XTT 생존력 분석에 의해 결정되었으며, 이는 상응하는 감염 분석을 위한 판독과 동일한 시점에서 수행되었다.The antiviral activity of the test composition was determined by comparing the level of infection (immune staining-based assay) or viability (CPE-based assay) of cells under test conditions to the level of infection or viability of uninfected cells. By comparing the viability in the presence of the inhibitor with that of mock-treated cells, the cytotoxic effect in uninfected cells was evaluated. Cytotoxicity was determined by XTT viability analysis, which was performed at the same time point as the reading for the corresponding infection analysis.

시험 조성물을 100 % 메탄올에 용해시켰다. 시험된 최고 농도로서 50 μM로 시작하여, 8-배 희석을 수행함으로써, 8 가지 농도의 조성물이(중복으로) 생성되었다. 조성물의 가장 높은 시험 농도(50 μM)는 배양 배지에서 0.25 % 최종 농도의 메탄올(v/v %)을 초래하였다. 8-배 희석 시리즈의 메탄올 비히클은 각 조성물 시험 조건에서 메탄올의 최종 농도를 반영하는 농도를 가지면서, 각각의 분석 플레이트에 포함되었다. 가능한 경우, 조성물의 EC50 및 CC50는 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어를 사용하여 각각의 분석에 대해 결정되었다.The test composition was dissolved in 100% methanol. Starting with 50 μM as the highest concentration tested, an 8-fold dilution was performed, resulting in 8 concentrations (duplicate). The highest test concentration of the composition (50 μM) resulted in 0.25% final concentration of methanol (v/v%) in the culture medium. Methanol vehicles of the 8-fold dilution series were included in each assay plate, with concentrations reflecting the final concentration of methanol in each composition test condition. Where possible, EC50 and CC50 of the composition were determined for each analysis using GraphPad Prism software.

항 바이러스 활성은 바이러스-유도된 세포 병변 효과(CPE)에 대한 보호 정도에 의해 평가되었다. 상이한 농도의 대조군 또는 조성물의 존재 하에서 세포는 바이러스로 공격 받았다. CPE에 대한 보호 정도는 감염 후 6 일(ZIKV, 지카바이러스) 또는 감염 후 7 일(DENV, 뎅기바이러스) 후에, 다른 시험 조건에서 세포 생존력을 정량화하고, 비처리된 세포와 비히클 단독으로 처리된 세포(감염 배지)의 값을 비교함으로써 모니터링하였다.Antiviral activity was assessed by the degree of protection against virus-induced cell lesion effect (CPE). Cells were attacked with viruses in the presence of different concentrations of controls or compositions. The degree of protection against CPE was quantified for cell viability at different test conditions 6 days after infection (ZIKV, Zikavirus) or 7 days after infection (DENV, dengue virus), untreated cells and cells treated with vehicle alone. (Infection medium) was monitored by comparing the values.

중립 분석을 위한 품질 관리가 모든 플레이트에서 수행되어: i) 신호 대 배경(S/B) 값; ii) 공지된 억제제에 의한 억제, 및 iii) 모든 데이터 포인트의 변동 계수(C.V.)에 의해 측정된 분석의 변동을 결정한다. 감염 분석의 전체 변동은 3.4 % 내지 9.5 %의 범위였으며, 생존력 분석의 전체 변동은 1.4 % 내지 3.2 %의 범위였으며, 이는 모든 C.V.값들의 평균으로 계산되었다. 감염 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)의 범위는 2.9에서 11.0이며, 생존력 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)의 범위는 6.5에서 29.9였다. Quality control for neutral analysis was performed on all plates: i) signal to background (S/B) values; Determine the variance of the assay as determined by ii) inhibition by known inhibitors, and iii) coefficient of variation (C.V.) of all data points. The overall variation of the infection assay ranged from 3.4% to 9.5%, and the overall variation of the viability assay ranged from 1.4% to 3.2%, which was calculated as the average of all C.V. values. The signal to background (S/B) range for infection analysis ranged from 2.9 to 11.0, and the signal to background (S/B) range for viability analysis ranged from 6.5 to 29.9.

뉴트럴 레드 판독으로 DENV2-유도된 세포 병변 효과(CPE)의 보호: DENV2 항 바이러스 분석을 위해, 08-10381 몬세라트 균주를 사용하였다. 바이러스 스톡은 C6/36 곤충 세포에서 생성되었다. 베로 세포(Cercopithecus aethiops에서 유래한 상피 신장 세포)를 5 % FBS(MEM5)와 함께 MEM에서 유지시켰다. 감염 및 생존력 분석 모두를 위해, 세포를 96-웰 투명 평평한 바닥 플레이트에 웰당 10,000 세포로 시딩하고(seeded), MEM5에서 37 ℃에서 24 시간 동안 유지시켰다. 감염 당일, 샘플을 1 % 소 혈청 알부민(BSA)과 함께 MEM을 사용하여 U-바닥 플레이트에서 8-배 희석하였다. 시험 물질 희석 물을 최종 농도 1.25X로 제조하고, 40μl을 표적 세포와 함께 37 ℃에서 30 분 동안 배양하였다. 시험 물질 사전-배양 후, 1 % BSA와 함께 MEM에서 제조된 10μl의 바이러스 희석액을 각 웰에 첨가하고(웰당 50μl 최종 부피), 플레이트를 5 % CO2를 갖는 가습 인큐베이터에서 3 시간 동안 37℃에서 배양하였다. 분석에 사용된 바이러스의 부피는 리바비린 및 DENV2의 공지된 억제제인 화합물 A3에 의해 억제된, 선형 범위의 신호를 생성하도록 미리 결정되었다. 감염 배양 후, 세포를 PBS로 세척한 다음, 2 % FBS(MEM2)를 함유하는 MEM으로 세척하여, 비결합(unbound) 바이러스를 제거하였다. 이어서, MEM2에서 1X 농도로 제조된 억제제 희석액을 함유하는 50μl의 배지를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 인큐베이터(5 % CO2)에서 7 일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 바이러스가 없는 대조군( "모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 비히클(메탄올) 단독으로 배양된 감염된 세포, 및 세포가 없는 웰(배경을 결정하기 위해)을 분석 플레이트에 포함시켰다. 50μM 리바비린 및 0.5μM 화합물 A3을 함유하는 대조 웰을 또한 분석 플레이트 상에 포함시켰다. 감염 7 일 후, 세포 생존률을 모니터링하기 위해 세포를 중성 적색으로 염색하였다. 감염 배지에서 일련의 8-배 희석액을 사용하여 시험 물질을 중복으로 반복해서 평가하였다. 대조군은 바이러스 없이 배양된 세포("모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 또는 리바비린(0.5μM) 또는 A3(0.5μM)의 존재하에 감염된 세포를 포함하였다. 메탄올 비히클만을 사용한 완전 복제 억제 곡선이 동일한 분석 플레이트 상에 포함되었다.Protection of DENV2-induced cell lesion effect (CPE) with neutral red reading: For DENV2 antiviral analysis, the 08-10381 Montserrat strain was used. Virus stocks were generated in C6/36 insect cells. Vero cells (epithelial cells derived from Cercopithecus aethiops ) were maintained in MEM with 5% FBS (MEM5). For both infection and viability assays, cells were seeded at 10,000 cells per well in a 96-well clear flat bottom plate and maintained for 24 hours at 37° C. in MEM5. On the day of infection, samples were diluted 8-fold in U-bottom plates using MEM with 1% bovine serum albumin (BSA). Test substance dilutions were prepared to a final concentration of 1.25X, and 40 μl were incubated with target cells at 37° C. for 30 minutes. After pre-incubation of the test substance, 10 μl of virus dilution prepared in MEM with 1% BSA was added to each well (50 μl final volume per well) and the plate was placed in a humidified incubator with 5% CO 2 at 37° C. for 3 hours. Cultured. The volume of virus used in the assay was predetermined to produce a linear range of signals inhibited by compound A3, a known inhibitor of ribavirin and DENV2. After culture of infection, cells were washed with PBS, followed by washing with MEM containing 2% FBS (MEM2) to remove unbound virus. Subsequently, 50 μl of medium containing an inhibitor dilution prepared at 1× concentration in MEM2 was added to each well. Plates were incubated at 37° C. for 7 days in an incubator (5% CO 2 ). Virus free controls (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, infected cells cultured with vehicle (methanol) alone, and cellless wells (to determine background) were included in the assay plate. Control wells containing 50 μM ribavirin and 0.5 μM compound A3 were also included on the assay plate. Seven days after infection, cells were stained in neutral red to monitor cell viability. Test substances were evaluated in duplicates using a series of 8-fold dilutions in the infection medium. Controls included cells cultured without virus (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, or cells in the presence of ribavirin (0.5 μM) or A3 (0.5 μM). A complete replication inhibition curve using only methanol vehicle was included on the same assay plate.

뉴트럴 레드 판독으로 ZIKV-유도된 세포 병변 효과(CPE)의 보호: ZIKV 항 바이러스 분석을 위해, PLCal_ZV 균주가 사용되었다. 베로 세포(Cercopithecus aethiops에서 유래한 상피 신장 세포)를 5 % FBS(MEM5)와 함께 MEM에서 유지시켰다. 감염 및 생존률 분석 모두를 위해, 세포를 96-웰 투명 평평한 바닥 플레이트에 웰당 10,000 세포로 시딩하고, MEM5에서 24 시간 동안 37 ℃로 유지시켰다. 감염 당일, 샘플을 1 % 소 혈청 알부민(BSA)과 함께 MEM을 사용하여 U-바닥 플레이트에서 8-배 희석하였다. 시험 물질 희석 물을 최종 농도 1.25X로 제조하고, 40μl를 표적 세포와 함께 37 ℃에서 30 분 동안 배양하였다. 시험 물질 사전-배양 후, 1 % BSA와 함께 MEM에서 제조된 10μl의 바이러스 희석액을 각 웰에 첨가하고(웰당 50μl 최종 부피), 플레이트를 5 % CO2의 가습 인큐베이터에서 3 시간 동안 37 ℃에서 배양하였다. 감염 배양 후, 세포를 PBS로 세척한 다음, 2 % FBS(MEM2)를 함유하는 MEM으로 세척하여, 비결합 바이러스를 제거하였다. 이어서, MEM2에서 1X 농도로 제조된 억제제 희석액을 함유하는 50μl의 배지를 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 인큐베이터(5 % CO2)에서 6 일 동안 37 ℃에서 배양하였다. 바이러스가 없는 대조군( "모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 비히클(메탄올) 단독으로 배양된 감염된 세포, 및 세포가 없는 웰(배경을 결정하기 위해)을 분석 플레이트에 포함시켰다. 감염 6 일 후, 세포 생존률을 모니터링하기 위해 세포를 중성 적색으로 염색하였다. 감염 배지에서 일련의 8 배 희석액을 사용하여, 시험 물질을 2 회 반복하여 평가하였다. 대조군은 바이러스 없이 배양된 세포("모의-감염된"), 배지 단독으로 배양된 감염된 세포, 또는 A3(0.5μM)의 존재하에 감염된 세포를 포함하였다. 메탄올 비히클만을 사용한 완전 복제 억제 곡선은 동일한 분석 플레이트 상에 포함되었다.Protection of ZIKV-induced cell lesion effect (CPE) with neutral red reading: For ZIKV antiviral analysis, the PLCal_ZV strain was used. Vero cells (epithelial cells derived from Cercopithecus aethiops ) were maintained in MEM with 5% FBS (MEM5). For both infection and viability assays, cells were seeded at 10,000 cells per well in a 96-well clear flat bottom plate and maintained at 37° C. for 24 hours in MEM5. On the day of infection, samples were diluted 8-fold in U-bottom plates using MEM with 1% bovine serum albumin (BSA). Test substance dilutions were made to a final concentration of 1.25X and 40 μl were incubated with target cells for 30 minutes at 37°C. After pre-incubation of the test substance, 10 μl of virus dilution prepared in MEM with 1% BSA was added to each well (50 μl final volume per well) and the plates were incubated at 37° C. for 3 hours in a humidified incubator with 5% CO 2 Did. After the culture of infection, cells were washed with PBS, followed by washing with MEM containing 2% FBS (MEM2) to remove unbound virus. Subsequently, 50 μl of medium containing an inhibitor dilution prepared at 1× concentration in MEM2 was added to each well. Plates were incubated at 37° C. for 6 days in an incubator (5% CO 2 ). Virus free controls (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, infected cells cultured with vehicle (methanol) alone, and cellless wells (to determine background) were included in the assay plate. Six days after infection, cells were stained in neutral red to monitor cell viability. The test material was evaluated in duplicate, using a series of 8-fold dilutions in the infection medium. Controls included cells cultured without virus (“mock-infected”), infected cells cultured with medium alone, or cells in the presence of A3 (0.5 μM). The complete replication inhibition curve using only methanol vehicle was included on the same assay plate.

CPE-기반 생존력 데이터의 분석: 중성 적색 분석의 경우, 490 nm에서의 흡광도를 모니터링함으로써 세포 생존력을 결정하였다. 세포가 없는 웰에서 얻은 평균 신호를 모든 샘플로부터 제하였다. 이어서, 모든 데이터 포인트는 동일한 분석 플레이트상에서 모의(감염되지 않은) 세포의 8 개 웰에서 관찰된 평균 신호의 백분율로서 계산되었다. 배지 단독으로 처리된 감염된 세포는 감염되지 않은 세포에서 관찰된 것의 평균 4.2 %(HRV의 경우), 26.9 %(DENV의 경우) 및 5.1 %(ZIKV의 경우)로 신호를 감소시켰다. 이 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)은 2.9(DENV의 경우) 및 7.2(ZIKV의 경우)였는데, 이는 비히클만으로 처리된 감염된 세포의 생존력과 비교되는, "모의-감염된" 세포에서의 생존력 백분율로 결정되었다. Analysis of CPE-based viability data: For neutral red analysis, cell viability was determined by monitoring absorbance at 490 nm. The average signal from cells-free wells was subtracted from all samples. All data points were then calculated as a percentage of the average signal observed in 8 wells of mock (uninfected) cells on the same assay plate. Infected cells treated with medium alone reduced the signal to an average of 4.2% (for HRV), 26.9% (for DENV) and 5.1% (for ZIKV) of those observed in uninfected cells. The signal-to-background (S/B) for this assay was 2.9 (for DENV) and 7.2 (for ZIKV), viability in “mock-infected” cells, compared to the viability of infected cells treated with vehicle only. It was determined as a percentage.

화합물-유도된 세포 독성을 평가하기 위한 생존력 분석(XTT): 모의-감염된 세포를 상응하는 감염 분석에 사용된 것과 동일한 실험 설정 및 억제제 농도를 사용하여, 억제제 희석액과 함께(또는 배지 단독으로) 배양하였다. 배양 온도 및 배양 기간은 상응하는 감염 분석의 조건을 반영하였다. 세포 생존력은 XTT 방법으로 평가되었다. XTT 분석은 미토콘드리아 활성을 측정하고, 오렌지 포마잔 염료를 형성하는 황색 테트라졸륨 염(XTT)의 분할(cleavage)에 기초한다. 반응은 활성 미토콘드리아가 있는 생존 세포에서만 일어난다. 포마잔 염료는 스캐닝 다중-웰 분광 광도계를 사용하여 직접 정량화된다. 세포가 없는 웰로부터 얻은 배경 수준을 모든 데이터 포인트로부터 제하였다.(각각의 올레아드린 시험 웰의 최종 퍼센트 메탄올을 반영하는 7개의 농도로) 메탄올 비히클만을 갖는 대조군을 생존력 분석 플레이트에 포함시켰다. 490 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 생존력 정도를 모니터링하였다.Viability Assay (XTT) to assess compound-induced cytotoxicity: Mock-infected cells are cultured with inhibitor dilutions (or medium alone) using the same experimental setup and inhibitor concentrations used for the corresponding infection assay. Did. Incubation temperature and incubation period reflected the conditions of the corresponding infection assay. Cell viability was assessed by XTT method. XTT analysis measures mitochondrial activity and is based on cleavage of yellow tetrazolium salt (XTT) to form orange formazan dye. The reaction only occurs in viable cells with active mitochondria. Formazan dye is quantified directly using a scanning multi-well spectrophotometer. Background levels obtained from cell-free wells were subtracted from all data points. Controls with only methanol vehicle were included in the viability assay plate (at 7 concentrations reflecting the final percent methanol of each oleadrin test well). The viability was monitored by measuring the absorbance at 490 nm.

세포 독성 데이터의 분석: XTT 분석의 경우, 490 nm에서의 흡광도를 모니터링함으로써 세포 생존력을 결정하였다. 세포가 없는 웰에서 얻은 평균 신호를 모든 샘플로부터 제하였다. 이어서, 모든 데이터 포인트를 동일한 분석 플레이트상에서 모의(감염되지 않은) 세포의 8 개 웰에서 관찰된 평균 신호의 백분율로 계산하였다. 이 분석에 대한 신호 대 배경(S/B)은 29.9(IVA의 경우), 8.7(HRV의 경우), 6.5(DENV의 경우) 및 6.7(ZIKV의 경우)이였는데, 이는 세포 없는 웰에 대해 관찰된 신호와 비교되는, "모의-감염된" 세포의 생존력 백분율로 결정되었다.Analysis of cytotoxicity data: For XTT analysis, cell viability was determined by monitoring absorbance at 490 nm. The average signal from cells-free wells was subtracted from all samples. All data points were then calculated as a percentage of the average signal observed in 8 wells of mock (uninfected) cells on the same assay plate. The signal-to-background (S/B) for this analysis were 29.9 (for IVA), 8.7 (for HRV), 6.5 (for DENV) and 6.7 (for ZIKV), observed for cell-free wells. It was determined as the percentage of viability of "mock-infected" cells, compared to the signal.

실시 예 15Example 15

필로바이러스(에볼라바이러스 및 마르부르그바이러스)에 대한 항 바이러스 활성 평가 Evaluation of antiviral activity against pilovirus (Ebola virus and Marburg virus)

방법 A.Method A.

베로 E6 세포는 올레안드린 함유 식물 추출물인 올레안드린, 디곡신 또는 PBI-05204의 존재하에 EBOV/Kik(A, MOI = 1) 또는 MARV/Ci67(B, MOI = 1)로 감염되었다. 1 시간 후, 접종원 및 화합물을 제거하고, 신선한 배지를 세포에 첨가하였다. 48 시간 후, 세포를 고정시키고, 면역 염색하여 EBOV 또는 MARV로 감염된 세포를 검출하였다. 감염된 세포를 오페레타(Operetta)를 사용하여 열거하였다. C) 베로 E6를 상기와 같이 화합물로 처리하였다. ATP 수준은 세포 생존력의 측정으로서 CellTiter-Glo에 의해 측정되었다.Vero E6 cells were infected with EBOV/Kik (A, MOI = 1) or MARV/Ci67 (B, MOI = 1) in the presence of oleandrolin, digoxin or PBI-05204, a plant extract containing oleander. After 1 hour, the inoculum and compound were removed and fresh medium was added to the cells. After 48 hours, cells were fixed and immunostained to detect cells infected with EBOV or MARV. Infected cells were listed using Operetta. C) Vero E6 was treated with the compound as above. ATP levels were measured by CellTiter-Glo as a measure of cell viability.

방법 B.Method B.

베로 E6 세포를 EBOV(A, B) 또는 MARV(C, D)로 감염시켰다. 감염 후 2 시간(A, C) 또는 감염 후 24 시간(B, D)에, 올레안드린 또는 PBI-05204를 1 시간 동안 세포에 첨가한 후, 폐기하고, 세포를 배양 배지로 리턴시켰다. 감염 48 시간 후, 감염된 세포를 도 1에서와 같이 분석하였다.Vero E6 cells were infected with EBOV (A, B) or MARV (C, D). At 2 hours post infection (A, C) or 24 hours post infection (B, D), oleandroline or PBI-05204 was added to the cells for 1 hour, then discarded and the cells returned to the culture medium. 48 hours after infection, the infected cells were analyzed as in FIG. 1.

방법 C.Method C.

베로 E6 세포를 올레안드린 또는 PBI-05204의 존재하에서 EBOV 또는 MARV로 감염시키고, 48 시간 동안 배양하였다. 감염된 세포 배양물로부터의 상층액(supernatant)을 새로운 베로 E6 세포에 통과시키고, 1 시간 동안 배양한 다음, 폐기하였다(A에 도시된 바와 같이). 통과된 상층액을 함유하는 세포를 48 시간 동안 배양하였다. EBOV(B) 또는 MARV(C)로 감염된 세포는 전술한 바와 같이 검출되었다. 대조군 감염률은 EBOV의 경우 66 %, MARV의 경우 67 %였다.Vero E6 cells were infected with EBOV or MARV in the presence of oleandrolin or PBI-05204 and cultured for 48 hours. The supernatant from the infected cell culture was passed through fresh Vero E6 cells, incubated for 1 hour, and then discarded (as shown in A). Cells containing the passed supernatant were incubated for 48 hours. Cells infected with EBOV(B) or MARV(C) were detected as described above. The control infection rate was 66% for EBOV and 67% for MARV.

실시 예 16Example 16

토가비리대(토가비리대) 바이러스에 대한 항 바이러스 활성 평가Evaluation of antiviral activity against Togaviridae virus

(알파바이러스: VEEV 및 WEEV)(Alphavirus: VEEV and WEEV)

베로 E6 세포를 지시된 화합물의 존재 또는 부재하에서, 18 시간 동안 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(A, MOI = 0.01) 또는 웨스턴 말 뇌염 바이러스(B, MOI = 0.1)로 감염시켰다. 감염된 세포를 본원에 기재된 바와 같이 검출하고 오페레타에 열거하였다.Vero E6 cells were infected with Venezuelan equine encephalitis virus (A, MOI = 0.01) or Western equine encephalitis virus (B, MOI = 0.1) for 18 hours with or without the indicated compounds. Infected cells were detected as described herein and listed in the operetta.

실시 예 17Example 17

대상체에서의 파라믹소비리대 감염의 치료Treatment of paramyxoviral infection in subjects

예시적인 파라믹소비리대(파라믹소비리대) 과 바이러스 감염은 헤니파바이러스 속 감염, 니파 바이러스 감염, 또는 헨드라 바이러스 감염을 포함한다.Exemplary Paramyxoviridae (Paramyxoviridae) and viral infections include infections of the genus Henifavirus, infections with the Nipavirus, or Hendra virus infections.

방법 A. 항 바이러스 조성물 요법Method A. Antiviral composition therapy

파라믹소비리대 과 감염을 나타내는 대상체는 항 바이러스 조성물로 처방되고, 치료적으로 관련된 투여량은 소정의 투여 요법에 따라 일정 기간 동안 대상체에게 투여된다. 대상체의 치료 반응 수준은 주기적으로 결정된다. 치료 반응 수준은 혈액 또는 혈장에서 대상체의 바이러스 적정 농도를 결정함으로써 결정될 수 있다. 한 번의 투여량에서 치료 반응 수준이 너무 낮으면, 대상체에서 원하는 치료 반응 수준이 달성될 때까지 미리 정해진 투여량 증가 스케쥴에 따라 투여량이 증가된다. 항 바이러스 조성물에 의한 대상체의 치료는 필요에 따라 계속되고, 환자가 원하는 임상 종점에 도달할 때까지 투여량 또는 투여 요법을 필요에 따라 조절할 수 있다.Subjects exhibiting paramyxoviridae infection are prescribed with antiviral compositions, and therapeutically relevant doses are administered to the subject for a period of time in accordance with a given dosing regimen. The subject's therapeutic response level is periodically determined. The level of treatment response can be determined by determining the viral concentration of the subject in blood or plasma. If the treatment response level is too low at one dose, the dose is increased according to a predetermined dose increase schedule until the desired treatment response level is achieved in the subject. Treatment of the subject with the antiviral composition continues as needed, and the dosage or dosing regimen can be adjusted as needed until the patient reaches the desired clinical endpoint.

방법 B. 병용 요법:다른 약제와의 항 바이러스 조성물Method B. Combination therapy: antiviral composition with other agents

파라믹소비리대 과 감염 또는 그 증상의 치료를 위해, 대상체에 하나 이상의 다른 치료제로 처방하고 투여한 것을 제외하고는 상기 방법 A를 따른다. 이어서, 하나 이상의 다른 치료제가 항 바이러스 조성물과 함께, 또는 그 투여 이전 또는 이후에 투여될 수 있다. 하나 이상의 다른 치료제의 투여량 증량(또는 감량)이 또한 수행될 수 있다.For treatment of Paramyxoviridae infection or its symptoms, Method A is followed except that the subject is prescribed and administered with one or more other therapeutic agents. Subsequently, one or more other therapeutic agents may be administered in combination with, or before or after the antiviral composition. Dose escalation (or loss) of one or more other therapeutic agents may also be performed.

본원에 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은 특정 값의 ±10 %, ±5 %, ±2.5 % 또는 ±1 %를 의미하는 것으로 간주된다. 본원에서 사용되는 용어 "실질적으로"는 "대부분" 또는 "적어도 대다수" 또는 "50 % 초과"를 의미하는 것으로 간주된다As used herein, the term “about” or “approximately” is considered to mean ±10%, ±5%, ±2.5% or ±1% of a particular value. The term "substantially" as used herein is considered to mean "most" or "at least the majority" or "greater than 50%".

상기 기재 내용이 본 발명의 특정 실시 예에 대한 상세한 설명이다. 본 발명의 특정 실시 예가 예시의 목적으로 여기에 설명되었지만, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서, 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명은 첨부된 청구 범위에 의한 것을 제외하고는 제한되지 않는다. 본 명세서에 개시되고 청구된 모든 실시 예는 본 개시내용에 비추어 볼 때, 과도한 실험없이 제조 및 실행될 수 있다.The above description is a detailed description of specific embodiments of the present invention. Although specific embodiments of the invention have been described herein for purposes of illustration, it will be understood that various modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention. Accordingly, the invention is not limited except as by the appended claims. All embodiments disclosed and claimed herein can be manufactured and implemented without undue experimentation in light of the present disclosure.

Claims (23)

필로비리대 과, 파라믹소비리대 과, 토가비리대 과 또는 플라비바이러스 속의 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염을 이를 필요로 하는 대상체에서 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 a) 올레안드린 또는 디곡신으로부터 선택된 강심 배당체; b) 복수의 트리테르펜; 또는 c) 강심 배당체와 복수의 트리테르펜의 조합을 포함하는 항 바이러스 조성물을 1회 이상의 투여량으로 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법. A method for treating a virus infection caused by a virus of the genus Piloviridae, Paramyxoviridae, Togaviridae or Flavivirus in a subject in need thereof, the method comprising: a) oleandrene or digoxin Cardiac glycosides selected from; b) a plurality of triterpenes; Or c) administering an antiviral composition comprising a combination of cardiac glycosides and a plurality of triterpenes to said subject in one or more doses. 필로비리대 과, 파라믹소비리대 과, 토가비리대 과 또는 플라비바이러스 속의 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염에 걸릴 위험이 있는 대상체를 치료하는 예방 방법으로서, 상기 방법은 상기 대상체가 바이러스 감염에 걸리기 전에, 연장된 치료 기간에 걸쳐 반복적으로 항 바이러스 조성물을 1회 이상의 투여량으로 상기 대상체에게 만성적으로 투여하여, 상기 대상체가 바이러스 감염에 걸리는 것을 방지하는 단계를 포함하고; 상기 항 바이러스 조성물은 a) 올레안드린 또는 디곡신으로부터 선택된 강심 배당체; b) 복수의 트리테르펜; 또는 c) 강심 배당체와 복수의 트리테르펜의 조합을 포함하는 예방 방법.A method for the prevention of a subject at risk of a viral infection caused by a virus of the genus Piloviridae, Paramyxoviridae, Togaviridae or Flavivirus, the method comprising: Before taking, chronically administering to said subject in one or more doses of an antiviral composition repeatedly over an extended treatment period, thereby preventing the subject from having a viral infection; The anti-viral composition comprises: a) a cardiac glycoside selected from oleandrene or digoxin; b) a plurality of triterpenes; Or c) a prophylactic method comprising a combination of a strong glycoside and a plurality of triterpenes. 필로비리대 과, 파라믹소비리대 과, 토가비리대 과 또는 플라비바이러스 속의 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염을 이를 필요로 하는 대상체에서 치료하는 방법으로서, 상기 방법은,
대상체가 필로비리대 과, 파라믹소비리대 과, 토가비리대 과 또는 플라비바이러스 속의 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 감염을 가지는지 여부를 결정하는 단계;
a) 올레안드린 또는 디곡신으로부터 선택된 강심 배당체; b) 복수의 트리테르펜; 또는 c) 강심 배당체와 복수의 트리테르펜의 조합을 포함하는 항 바이러스 조성물의 투여를 지시하는 단계;
일정 기간 동안 처방된 초기 투여 요법에 따라 초기 투여량의 항 바이러스 조성물을 대상체에게 투여하는 단계;
항 바이러스 조성물에 의한 치료에 대한 대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응의 적절성을 주기적으로 결정하는 단계; 및
대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 적절한 경우, 원하는 임상적 종점이 달성될 때까지 필요한 항 바이러스 조성물로 치료를 계속하고; 또는
대상체의 임상 반응 및/또는 치료 반응이 초기 투여량 및 초기 투여 요법에서 부적절한 경우, 대상체에서 원하는 임상 반응 및/또는 치료 반응이 달성될 때까지 투여량을 증량 또는 감량시키는 단계:
를 포함하는 방법. A method of treating a virus infection caused by a virus in the family Piloviridae, Paramyxoviridae, Togaviridae or Flavivirus in a subject in need thereof, the method comprising:
Determining whether the subject has a viral infection caused by a virus of the genus Piloviridae, Paramyxoviridae, Togaviridae or Flavivirus;
a) a cardiac glycoside selected from oleandrene or digoxin; b) a plurality of triterpenes; Or c) directing the administration of an antiviral composition comprising a combination of cardiac glycosides and a plurality of triterpenes;
Administering an initial dose of the antiviral composition to the subject according to the initial dosing regimen prescribed for a period of time;
Periodically determining the adequacy of the subject's clinical response and/or treatment response to treatment with an antiviral composition; And
If the subject's clinical response and/or therapeutic response is appropriate, continue treatment with the required antiviral composition until the desired clinical endpoint is achieved; or
If the subject's clinical response and/or treatment response is inappropriate in the initial dose and initial dosing regimen, increasing or decreasing the dose until the desired clinical response and/or treatment response in the subject is achieved:
How to include. 제 1 항에 있어서, 상기 강심 배당체는 올레안드린인 방법. The method of claim 1, wherein the cardiac glycoside is oleandroline. 제 1 항에 있어서, 상기 복수의 트리테르펜은 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 프로드러그 또는 유도체), 우르솔산(이의 유리 산, 염, 프로드러그 또는 유도체), 베툴린산(이의 유리 산, 염, 프로드러그 또는 유도체)으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 2개의 트리테르펜인 방법. The method of claim 1, wherein the plurality of triterpenes are oleanoic acid (free acid, salt, prodrug or derivative thereof), ursolic acid (free acid, salt, prodrug or derivative thereof), betulinic acid (free acid, salt thereof). A method comprising at least two triterpenes selected from the group consisting of prodrugs or derivatives. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 프로드러그 또는 유도체) 및 우르솔산(이의 유리 산, 염, 프로드러그 또는 유도체)을 포함하는 방법.The antiviral composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the antiviral composition comprises oleandroline, oleanolic acid (free acid, salt, prodrug or derivative thereof) and ursolic acid (free acid, salt, prodrug or derivative thereof). How to include). 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 염, 프로드러그 또는 유도체) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염, 프로드러그 또는 유도체)을 포함하는 방법.The antiviral composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the antiviral composition comprises oleandroline, oleanolic acid (free acid, salt, prodrug or derivative thereof) and betulinic acid (free acid, salt, prodrug or derivative thereof). How to include). 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레안드린, 올레아놀산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체), 우르솔산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체)을 포함하는 방법. The antiviral composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the antiviral composition comprises oleandroline, oleanolic acid (free acid, salt prodrug or derivative thereof), ursolic acid (free acid, salt prodrug or derivative thereof) and A method comprising betulinic acid (a free acid, salt prodrug or derivative thereof). 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레아놀산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체), 우르솔산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체)을 포함하는 방법. The antiviral composition according to any one of claims 1 to 3, wherein the antiviral composition comprises oleanolic acid (a free acid, salt prodrug or derivative thereof), ursolic acid (a free acid, salt prodrug or derivative thereof) and betulin acid (its A method comprising a free acid, salt prodrug or derivative). 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레아놀산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체) 및 우르솔산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체)을 포함하는 방법. The method according to any one of claims 1 to 3, wherein the antiviral composition comprises oleanolic acid (free acid, salt prodrug or derivative thereof) and ursolic acid (free acid, salt prodrug or derivative thereof). 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 올레아놀산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체) 및 베툴린산(이의 유리 산, 염 프로드러그 또는 유도체)을 포함하는 방법. The method according to any one of claims 1 to 3, wherein the antiviral composition comprises oleanolic acid (a free acid, salt prodrug or derivative thereof) and betulinic acid (a free acid, salt prodrug or derivative thereof). 전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 필로 바이러스 감염, 에볼라 바이러스 감염 및 마르부르그 바이러스 감염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.The method of any one of the preceding clauses, wherein the viral infection is selected from the group consisting of Philovirus infection, Ebola virus infection and Marburg virus infection. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 플라비바이러스 감염, 황열병, 뎅기열, 일본 뇌염, 웨스트 나일 바이러스, 지카바이러스, 진드기성 뇌염, 캬사누르 삼림병, 알크후르마 질병, 옴스크 출혈열, 포와산 바이러스 감염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법. The virus infection according to any one of claims 1 to 11, wherein the viral infection is flavivirus infection, yellow fever, dengue fever, Japanese encephalitis, West Nile virus, zikavirus, tick encephalitis, Cassanur forest disease, Alkhurma disease. , Omsk hemorrhagic fever, method selected from the group consisting of Powassan virus infection. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 알파하바이러스 감염, 베네수엘라 말 뇌염 바이러스 감염, 웨스턴 말 뇌염 바이러스 감염, 치쿤군야 바이러스 감염, 및 이스턴 말 뇌염 바이러스 감염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법. 12. The method of any one of claims 1 to 11, wherein the viral infection is from a group consisting of alpha subviral infection, Venezuelan equine encephalitis virus infection, Western equine encephalitis virus infection, Chikungunya virus infection, and Eastern equine encephalitis virus infection. How to be chosen. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 감염은 헤니파 바이러스 감염, 헨드라 바이러스 감염 및 니파 바이러스 감염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.12. The method according to any one of claims 1 to 11, wherein the viral infection is selected from the group consisting of Henifa virus infection, Hendra virus infection and Nipa virus infection. 전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체의 혈액 또는 혈장에서의 바이러스 농도가 치료 결과 감소되거나 증가하지 않는 방법.The method of any one of the preceding clauses, wherein the viral concentration in the blood or plasma of the subject does not decrease or increase as a result of treatment. 전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1회 이상의 투여량은 매일, 매주 또는 매월 단위로 투여되는 방법.The method of any one of the preceding clauses, wherein the one or more doses are administered on a daily, weekly or monthly basis. 전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 비경구, 구강, 장내, 근육내, 피하, 설하, 경구(peroral), 입 투여 또는 이들의 조합 인 방법.The method of any one of the preceding clauses, wherein the administration is parenteral, oral, intestinal, intramuscular, subcutaneous, sublingual, peroral, oral administration, or a combination thereof. 전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 강심 배당체는 순수한 형태 또는 강심 배당체를 함유하는 추출물 부분으로 존재하는 방법.The method of any one of the preceding claims, wherein the at least one cardiac glycoside is present in pure form or as an extract portion containing the cardiac glycoside. 전술한 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항 바이러스 조성물은 수용성(또는 물 혼화성) 공-용매, 불수용성(물 불혼화성) 공-용매, 항산화제 및 계면 활성제로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 약제학적 부형제를 더 포함하는 방법.The antiviral composition according to any one of the preceding claims, wherein the antiviral composition is at least one selected from the group consisting of water-soluble (or water miscible) co-solvents, water-insoluble (water immiscible) co-solvents, antioxidants and surfactants. The method further comprises a pharmaceutical excipient. 제 20 항에 있어서, 적어도 하나의 물 혼화성 용매, 적어도 하나의 항산화제 및 적어도 하나의 가용화제가 존재하는 방법.21. The method of claim 20, wherein at least one water miscible solvent, at least one antioxidant and at least one solubilizer are present. 대상체에서의 필로바이러스 감염 또는 플라비바이러스 감염 치료를 위한 약물 제조에 있어서 여기에 기재된 하나 이상의 항 바이러스 조성물을 사용하는 방법. A method of using one or more antiviral compositions described herein in the manufacture of a drug for the treatment of a filovirus infection or a flavivirus infection in a subject. 바이러스 감염 치료에 있어서 여기에 기재된 하나 이상의 항 바이러스 조성물을 사용하는 방법.
A method of using one or more antiviral compositions described herein in the treatment of a viral infection.
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