KR20210100841A

KR20210100841A - 유크레논 a5를 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방, 치료, 또는 개선용 조성물

Info

Publication number: KR20210100841A
Application number: KR1020200014689A
Authority: KR
Inventors: 송경식; 양은주
Original assignee: 경북대학교 산학협력단
Priority date: 2020-02-07
Filing date: 2020-02-07
Publication date: 2021-08-18
Also published as: KR20230047066A

Abstract

본 발명은 유크레논 a₅ (euchrenone a₅)를 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 euchrenone a₅는 미세아교세포에서 IFN-γ에 의해 유도된 IL-6, TNF-α, IP-10, ICAM-1 및 MCP-1 생성을 억제하고, iNOS, COX-2 단백질 발현 및 JAK2, STAT1의 인산화도 억제하는 효과를 나타낸다. 따라서, euchrenone a₅는 IFN-γ 관련 신경퇴행성 질환의 예방, 치료, 또는 개선 용도로 유용하게 이용될 것으로 기대된다.

Description

유크레논 a5를 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방, 치료, 또는 개선용 조성물 {Composition for preventing, treating, or improving neurodegenerative diseases comprising Euchrenone a5}

본 발명은 유크레논 a₅ (euchrenone a₅)를 유효성분으로 포함하는 신경퇴행성 질환의 예방, 치료, 또는 개선용 조성물에 관한 것이다.

최근 염증반응이 신경퇴행을 유발하는 주요 기전의 하나라는 사실이 밝혀지고 있다. 즉 중추신경계에 존재하는 면역세포인 미세아교세포(microglia)는 다양한 외인성, 내인성 물질로 인해 활성화될 수 있으며, 활성화된 미세아교세포는 염증성 사이토카인인 TNF-α 및 IL-1β, 일산화질소, 프로스타글란딘, 초과산화물 등의 물질을 생산, 방출한다. 이러한 물질들의 생성은 단기적으로는 면역반응을 유발하지만, 그 과도한 생산이나 지속적인 생산은 근접한 신경세포들의 사멸을 유도하여 결국 신경퇴행을 유발한다는 것이다. 또 사멸 중인 신경세포가 방출하는 물질들이 미세아교세포의 활성을 다시 유발하게 되므로, 신경퇴행은 지속적인 악순환에 빠지게 된다. 실제로 미세아교세포의 활성이 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 루게릭병, 크로이츠펠트야콥병(CreutzfeltJakob Disease, CJD), 다발성 경화증 등의 다양한 퇴행성 신경질환과 관계가 있음이 보고되었다.

인터페론 감마(Interferon-gamma, 이하 IFN-γ)는 인터페론 2형 (Type II IFN)에 속하는 것으로서 대부분 활성화된 T세포 및 자연살해세포 (natural killer cell)에 의해 생성된다. 이전의 연구에서 IFN-γ 분비는 T helper 1 (TH1) 세포 활성화 특성 중 하나이며, 이는 곧 자가면역 기전으로 이어지는 것으로 밝혀졌다. IFN-γ는 면역시스템과 관련된 여러 종류의 세포에 영향을 미치는데, 예를 들면 중추신경계 (central nervous system, CNS)에 특이적으로 존재하는 대식세포인 미세아교세포 (microglia)가 있다. 활성화된 미세아교세포는 희소돌기아교 전구세포 (oligodendrocyte progenitor cell, OPC)의 생존 (survival), 성숙 (maturation) 및 이동 (migration)을 억제하며, T 세포 유인 및 활성화, 그리고 신경세포 사멸을 유도하는 것으로 알려져 있다.

IFN-γ는 IFN-γ 수용체 (IFN-γ receptor, IFNGR)에 결합하며, 이는 JAK1 티로신 (tyrosine (Tyr, Y)) 인산화 (활성화)에 이은 JAK2 티로신 인산화를 유도한다. 이후 STAT1의 701번 tyrosine 잔기에서의 인산화가 일어나고, 호모다이머 (homodimer)를 이룬 STAT1은 핵으로 이동한다. STAT1 호모다이머 (감마 인터페론-활성 인자 (gamma interferon-activated factor, GAF))는 인터페론 감마 활성 사이트 요소 (IFN-γ-activation site (GAS) elements)의 프로모터에 결합하여 인터페론 조절 인자 1 (IFN regulator factor 1, IRF-1), ICAM-1 및 MCP-1과 같은 IFN-γ 조절 유전자 및 단백질 합성을 개시한다. 또한, STAT1 헤테로다이머 (heterodimer) (STAT1-STAT1-IRF-9 또는 STAT1-STAT2-IRF-9)와 IRF-1은 인터페론 자극 반응 요소 (IFN-stimulated response element, ISRE)의 프로모터에 결합하여 IP-10, iNOS 및 COX-2 발현을 유도한다.

한편, 미세아교세포는 중추신경계의 생리적/병리적 기전에 있어 중요한 역할을 담당하고 있으며, 특히 자가면역성 신경퇴행성 질환인 다발성 경화증 발병 기전에 있어 미세아교세포의 역할이 대표적 예라고 할 수 있다. 다발성 경화증은 IFN-γ를 생성하는 활성 CD4+ T세포 (T helper 1, TH1)가 혈액/뇌 장벽 (blood-brain barrier, BBB)을 통해 중추신경계 내로 침윤 (infiltration)하고, 중추신경계 내에 존재하는 여러 종류의 세포에 자가면역반응을 전달하게 되는 기전을 포함한다. IFN-γ는 미세아교세포를 염증성 M1 타입으로 변화시키며, M1 미세아교세포는 항원제시 세포 (antigen-presenting cell, APC)로서의 역할을 개시하면서 일산화질소 (nitric oxide), IL-6, TNF-α, IP-10 등을 생성한다. 이어서 케모카인 (chemokine)인 IP-10은 T세포에서 발현되는 C-X-C 모티프 케모카인 수용체 3 (C-X-C motif chemokine receptor 3, CXCR3)에 결합하여 T세포를 유인할 뿐 아니라 발병 관련 면역반응을 촉진하며, 다발성 경화증 환자의 뇌척수액 (cerebrospinal fluid, CSF) 내에서 과도한 IP-10 레벨 및 CXCR3+ T세포가 존재한다고 보고된 바 있다. MCP-1 농도구배에 의한 단핵구 이동 (monocyte migration)도 다발성 경화증 환자의 특징으로 나타나며, 백혈구 기능 관련 항원 (leukocyte function-associated antigen, LFA)의 리간드인 ICAM-1 레벨 역시 환자의 CFS 내에서 과도하게 나타나는 것으로 보고되었다. 따라서 미세아교세포에서의 IFN-γ 기전을 이해하여 세포부착 (adhesion) 및 이동 (migration)과 관련된 IP-10, MCP-1, ICAM-1과 같은 지표들의 작용을 조절하는 것이 IFN-γ 관련 신경퇴행성 질환 예방 및 치료를 위한 하나의 접근법이 될 수 있을 것으로 기대되고 있다.

이에, 본 발명자들은 IFN-γ에 의해 유도된 미세아교세포에서의 염증반응을 억제하는 물질을 발견하고, 이를 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료에 이용하고자 하였다.

한국등록특허공보 제10-1733578호

본 발명자들은 플라보노이드계 화합물인 유크레논 a₅ (euchrenone a₅)가 미세아교세포에서 IFN-γ에 의해 유도된 염증반응을 억제하는 것을 확인하였는 바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명의 목적은 유크레논 a₅ (euchrenone a₅) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 유크레논 a₅ (euchrenone a₅) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 유크레논 a₅ (euchrenone a₅) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 유크레논 a₅ (euchrenone a₅) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 euchrenone a₅ 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 euchrenone a₅ 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물의 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 euchrenone a₅ 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의, 신경퇴행성 질환의 치료에 이용되는 약제 제조를 위한 용도를 제공한다.

본 발명의 일 구현예로서, 상기 유크레논 a₅는 인터페론 감마(Interferon-gamma, IFN-γ)에 의해 유도된 미세아교세포 염증반응을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 신경퇴행성 질환은 다발성 경화증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 및 헌팅턴병으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 유크레논 a₅는 일산화질소, 인터루킨-6 (Interleukin-6, 이하 IL-6), 종양괴사인자-α (Tumor necrosis factor-α, 이하 TNF-α), 인터페론-감마 유도 단백-10 (IFN-γ-induced protein 10, 이하 IP-10), 세포간 부착분자-1 (intercellular adhesion molecule-1, 이하 ICAM-1), 및 단핵구 화학주성 단백-1 (monocyte chemoattractant protein-1, 이하 MCP-1)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 생성을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 유크레논 a₅는 야누스 키나아제 2 (janus kinase 2, 이하 JAK2) 또는 신호 변환기 및 전사 활성제 1 (signal transducer and activator transcription 1, 이하 STAT1)의 인산화를 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 유크레논 a₅는 유도성 산화질소 합성효소 (inducible nitric oxide synthase, 이하 iNOS), 사이클로옥시게나제-2 (cyclooxygenase-2, 이하 COX-2), 및 인터페론 조절 인자-1 (Interferon regulatory factor-1, 이하 IRF-1)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 단백질 발현을 억제할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 따른 유크레논 a₅ (euchrenone a₅)는 미세아교세포에서 IFN-γ에 의해 유도된 IL-6, TNF-α, IP-10, ICAM-1 및 MCP-1 생성을 억제하고, iNOS, COX-2 단백질 발현 및 JAK2, STAT1의 인산화도 억제하는 효과를 나타낸다. 따라서, euchrenone a₅는 다발성 경화증과 같은 IFN-γ 관련 신경퇴행성 질환의 예방, 치료, 또는 개선 용도로 유용하게 이용될 것으로 기대된다.

도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 IFN-γ 자극된 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 따른 세포생존율을 확인한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 구현예에 따른 IFN-γ 자극된 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 따른 nitric oxide, IL-6, 및 TNF-α 생성 변화를 확인한 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 구현예에 따른 IFN-γ 자극된 BV2 세포에서 euchrenone a₅처리에 따른 JAK2 및 STAT1의 인산화 변화를 확인한 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 구현예에 따른 IFN-γ 자극된 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 따른 iNOS, COX-2, 및 IRF-1 단백질 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 구현예에 따른 IFN-γ 자극된 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 따른 IP-10, ICAM-1, 및 MCP-1 생성 변화를 확인한 결과이다.

본 발명은 하기 화학식 Ⅰ로 표시되는 유크레논 a₅ (euchrenone a₅) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

[화학식 Ⅰ]

본 발명에서 용어, "약학적으로 허용 가능한 염"이란 약학적으로 허용되는 무기산, 유기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.

본 발명에서 용어, “식품학적으로 허용 가능한 염”이란 식품학적으로 허용되는 유기산, 무기산, 또는 염기로부터 유도된 염을 포함한다.

적합한 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 글루콘산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 들 수 있다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한, 동몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.

적합한 염기로부터 유도된 염은 나트륨, 칼륨 등의 알칼리 금속, 마그네슘 등의 알칼리 토금속, 및 암모늄 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 "신경퇴행성 질환"은 신경 세포들이 어떤 원인에 의해 소멸하게 되고, 이로 인해 뇌 기능의 이상을 일으키는 질병을 지칭하는 것으로, 다발성 경화증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 루게릭 병, 헌팅턴병, 전측두엽 치매, 피질-기저핵 퇴행증, 진행성 핵상마비, 및 근위축성 측삭 경화증으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 “예방”이란 신경퇴행성 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 신경퇴행성 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 신경퇴행성 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에 있어서, "미세아교세포(microglia)"는 중추신경계에서 일차적인 면역 기능을 수행하는 세포로서, 가늘고 긴 가지와 얇은 세포체의 모양을 유지하고 있다가 외부에서 유입되거나 내부에서 발생되는 독소들이 존재하게 되면 이들 독소로부터 신경 세포를 보호하기 위해 굵고 짧은 가지와 뚱뚱한 세포체를 가지는 활성화된 모양으로 변화하게 된다. 활성화된 미세아교세포는 정상 상태의 미세아교세포와는 달리 포식작용을 활발히 하고, 세포증식을 하며, TNFα, IL-1β 및 IL-6 등과 같은 사이토카인, 케모카인, iNOS(inducible nitric oxide synthase), COX2(cyclooxygenase-2) 등의 유전자를 발현시켜 염증 매개물질들을 생성한다. 미세아교세포의 활성화는 손상된 세포를 제거하고 외부에서 침입하는 박테리아나 바이러스로부터 신경세포를 보호하는 일면이 있으나 iNOS에 의해 생성되는 일산화질소와 COX-2에 의해 생성되는 프로스타글란딘, TNF-α 등은 신경세포에도 독성을 나타내기 때문에 결과적으로 미세아교세포의 활성화는 신경세포의 손상을 악화시키게 된다.

본 발명에 있어서, "염증반응"은 병원균, 자극물질, 또는 손상된 세포 등과 같은 조직에 위해한 자극에 대한 조직의 복합적인 생물학적 반응으로 면역세포, 혈관 및 분자 매개자를 포함하는 보호적인 반응이다. 염증 반응은 세포 손상을 일으키는 초기 원인을 제거하고, 손상된 세포 또는 조직을 제거하며 조직 복구를 개시하는 것이다. 염증 반응은 열, 통증, 발적 및 부기 등의 증상을 동반한다.

본 발명에 있어서, 상기 염증반응은 미세아교세포에서 IFN-γ의 자극에 의해 유도될 수 있으며, euchrenone a₅는 IFN-γ로 자극된 중추신경계 환경에서 미세아교세포의 염증반응을 조절할 수 있다.

본 발명의 일 실험예에서는 IFN-γ 처리된 마우스 유래 미세아교세포주 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 의해 일산화질소, IL-6, 및 TNF-α의 생성이 감소한 것을 확인하였다 (실험예 2 참조).

본 발명의 다른 실험예에서는 IFN-γ 처리된 마우스 유래 미세아교세포주 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 의해 JAK2 및 STAT1의 인산화가 감소한 것을 확인하였다 (실험예 3 참조).

본 발명의 또 다른 실험예에서는 IFN-γ 처리된 마우스 유래 미세아교세포주 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 의해 iNOS, COX-2, 및 IRF-1 단백질 발현이 감소한 것을 확인하였다 (실험예 4 참조).

본 발명의 또 다른 실험예에서는 IFN-γ 처리된 마우스 유래 미세아교세포주 BV2 세포에서 euchrenone a₅ 처리에 의해 IP-10, ICAM-1, 및 MCP-1 생성이 감소한 것을 확인하였다 (실험예 5 참조).

본 발명의 조성물 내의 상기 euchrenone a₅ 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명에 있어서, 상기 euchrenone a₅는 1.0μM 내지 12.5μM의 농도로 포함될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 1928, 2208, 2906, 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜 4000,6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 1828, 2906, 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO3) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na2S2O3), 아황산나트륨(Na2SO3), 질소가스(N2), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

또한, 본 발명은 euchrenone a₅또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의, 신경퇴행성 질환의 치료에 이용되는 약제 제조를 위한 용도를 제공한다.

본 발명에서 “개체”란 신경퇴행성 질환의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서, 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.

본 발명의 euchrenone a₅ 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 euchrenone a₅ 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 euchrenone a₅ 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 ]

실시예 1. 세포배양 및 IFN -γ 처리

마우스 유래 미세아교세포주 BV2 세포는 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM; Welgene, Gyeongsan, Korea)에 10% 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS) (HyClone, Logan, UT)과 100 units/mL 페니실린 및 100 μg/mL 스트렙토마이신 (Welgene)이 포함된 배지에서 배양하였으며, 37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기 내에서 배양하였다.

그런 다음, 48-웰 플레이트에 1.5 × 10⁵세포/웰의 밀도로 세포를 계대한 후 24시간 동안 배양하고, 배지 제거 후 혈청과 페놀레드 (phenol red)가 없는 DMEM (Welgene)으로 교체해 주었다. 이후 곧 바로 유크레논 a₅ (euchrenone a₅)를 1.0 내지 25μM의 농도로 전처리하고 2시간 동안 배양하였으며, 재조합 마우스 IFN-γ (recombinant mouse IFN-γ; BioLegend, San Diego, CA)를 10 ng/mL의 농도로 24시간동안 처리하였다. 배지는 ELISA를 위해 회수하고, 곧 바로 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT; Biosesang, 성남, 한국)를 0.5 mg/mL의 농도로 혈청 및 페놀레드가 없는 DMEM에 용해시켜 세포에 처리하였다. 1시간 후, MTT 용액을 제거하고 살아있는 세포에 의해 생성된 불용성의 포르마잔 (formazan)을 DMSO를 사용하여 녹이고, 마이크로 플레이트 리더 (Microplate reader)를 이용하여 575 nm에서 흡광도 (optical density, OD)를 측정하였다.

세포생존율은 대조군 (control)인 vehicle 처리 그룹 (100%)에 대한 상대적인 값을 백분율 (%)로 나타내었으며, 양성대조군 (positive control)으로서 10μM의 1400W (iNOS 저해제; Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO)를 사용하였다.

실시예 2. 일산화질소 (nitric oxide, NO) 정량

IFN-γ 처리된 BV2에 의해 생성된 일산화질소를 정량하기 위해 상업적으로 판매하는 일산화탄소 검출 키트 (Nitric oxide detection kit, iNtRON Biotechnology)를 사용하였다. 실험은 제조회사에서 권장하는 방법에 따라 수행하였다. 즉, 상기 실시예 1에서 수거한 BV2 배지 100μL에 N1 버퍼 (기질용액) 50 μL를 첨가, 실온의 어두운 곳에서 10분 동안 배양하였다. N2 버퍼 (발색용액) 50 μL를 첨가한 뒤, 마이크로 플레이트 리더를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 일산화질소 정량은, 키트에 포함되어 있는 아질산염 표준용액 (nitrite standard)을 사용하여 작성된 표준곡선 (standard curve)에 의해 이뤄졌다.

실시예 3. ELISA 분석

배지 내로 분비된 전염증성 사이토카인 IL-6 및 TNF-α 정량을 위해 ELISA를 실시하였으며, 그 방법은 이전에 보고된 것과 동일한 방법으로 진행하였다.

즉, 1차 항체를 0.1 M NaHCO₃ 코팅 버퍼 (pH 9.6)에 희석시키고, ELISA용 96 웰 플레이트에 첨가하여 4℃에서 밤새 코팅시킨 후 0.05% Tween20이 포함된 인산완충식염수 (phosphate-buffered saline, PBS; pH 7.4)와 증류수로 각각 3회 반복 세척하였다. 3% 소혈청알부민 (bovine serum albumin, BSA)이 포함된 PBS 용액(3% BSA-PBS)을 처리하여 실온에서 1시간 동안 블로킹 (blocking) 하였다. 플레이트 세척 후, 3% BSA-PBS에 희석된 사이토카인 표준물질 (cytokine standard) 및 BV2 배지를 실온에서 1시간 동안 처리하였다. 플레이트 세척 후, 비오틴 (biotin)이 결합된 사이토카인 항체를 3% BSA-PBS에 희석하여 실온에서 1 시간 동안 각각 처리하였다. 다시 플레이트를 세척한 다음, 서양고추냉이 과산화효소 (horseradish peroxidase, HRP)가 결합된 아비딘 (avidin) (HRP-avidin)을 3% BSA-PBS에 희석하여 실온의 어두운 곳에서 1시간 동안 반응시켰다. 플레이트 세척 후, TMB 기질 세트를 사용하여 발색하였다. 실온의 어두운 곳에서 약 15분간 배양한 뒤, 2 노르말 황산 (sulfuric acid, H₂SO₄) 용액을 사용하여 반응종료 하였다. 그 후, 즉시 마이크로 플레이트 리더를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료 희석배수를 감안하여 사이토카인 농도를 계산하였다. 실험에 사용된 항체 및 표준물질은 하기 표1에 나타내었다.

Name	Catalog #
Purified anti-mouse IL-6	BioLegend #504501
Recombinant mouse IL-6 (ELISA std.)	BioLegend #575709
Biotin anti-mouse IL-6	BioLegend #504601
Purified anti-mouse/rat TNF-α	BioLegend #506101
Recombinant mouse TNF-α (ELISA std.)	BioLegend #575209
Biotin anti-mouse/rat TNF-α	BioLegend #516003

IP-10 (마우스 IP-10 ELISA kit; Koma Biotech, 서울, 한국) 및 ICAM-1 (마우스 ICAM-1/CD54 면역검정법 (immunoassay); R&D Systems, Minneapolis, MN)은 상업적으로 판매되는 키트를 구매하여 정량하였으며, MCP-1 정량은 IL-6 및 TNF-α ELISA와 동일한 방법으로 수행하되, 항체 및 표준물질은 다음의 것을 사용하였다; 정제된 항-마우스 MCP-1 항체 (clone 4E2/MCP; BioLegend), 비오틴 (biotin) 항-마우스 MCP-1 항체 (clone 4E2/MCP; BioLegend), 재조합 마우스 MCP-1 ELISA standard (BioLegend).

실시예 4. 웨스턴 블랏

웨스턴 블랏을 통해 IFN-γ 및 euchrenone a₅ 처리에 의한 단백질 발현 변화를 관찰하였다.

구체적으로, 각 총 단백질 15μg씩을 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아마이드 겔 (sodium dodecyl sulfate (SDS)-polyacrylamide gel)에 주입하였으며, 타겟 단백질은 다음과 같은 항체를 사용하여 검출하였다; 항-JAK2 (phospho Y1007+Y1008) 항체 (abcam, Cambridge, MA), phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) rabbit mAb (Cell Signaling Technology, Danvers, MA), 항-iNOS 항체 (abcam), 항-COX-2 항체 (abcam), IRF-1 (D5E4) XP rabbit mAb (Cell Signaling Technology), 및 β-Actin (8H10D10) mouse mAb (Cell Signaling Technology). β-Actin은 로딩 대조군 (loading control)으로서 검출하였다.

실시예 5. 통계학적 분석

독립적인 3회 반복 실험에 의해 얻어진 데이터는 평균±표준편차 (mean±standard deviation (SD)) 값으로 표현하였다. 통계학적인 유의성 (p<0.05)은 One-way ANOVA with Dunnett’s multiple comparison test (GraphPad Prism 8, La Jolla, CA)에 의해 판단되었다.

[ 실험예 ]

실험예 1. Euchrenone a ₅ 처리에 따른 세포생존율 확인

상기 실시예 1의 방법으로 마우스 유래 미세아교세포주 BV2 세포에 euchrenone a₅를 처리하고 세포생존율을 확인한 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 euchrenone a₅의 농도구간 1.0 ~ 12.5 μM에서 BV2 세포에 대한 독성이 관찰되지 않았다.

실험예 2. Euchrenone a ₅ 처리에 따른 nitric oxide, IL-6, 및 TNF -α 생성 변화 확인

IFN-γ 처리된 BV2에 의해 생성된 일산화질소 (nitric oxide)를 상기 실시예 2의 방법으로 정량한 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 nitric oxide는 대조군에서 0.09 ± 0.59 μM로 나타난 반면, IFN-γ 처리에 의해 32.38 ± 2.87 μM로 증가하였고 이는 12.5 μM의 euchrenone a₅ 처리에 의해 25.32 ± 5.10 μM 까지 감소한 것을 확인하였다.

또한, 상기 실시예 3의 방법으로 IL-6 및 TNF-α 생성량을 정량한 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, IL-6 생성은 대조군에서 143.60 ± 25.44 pg/mL로 나타난 반면, IFN-γ 단독처리군에서 709.87 ± 191.96 pg/mL로 증가하였고, 이는 12.5 μM euchrenone a₅ 처리에 의해 334.94 ± 93.79 pg/mL로 감소하였다.

TNF-α 생성은 대조군에서 18.45 ± 4.40 pg/mL로 나타난 반면, IFN-γ 단독처리군에서 55.87 ± 6.45 pg/mL로 증가하였고, 이는 12.5 μM euchrenone a₅ 처리에 의해 37.70 ± 5.17 pg/mL까지 유의적으로 감소하였다.

상기와 같은 결과를 바탕으로, 하기 실험예 3 및 4의 웨스턴 블랏 실험 결과는 euchrenone a₅의 활성을 고려하여 12.5 μM 수준에서 확인하였다.

실험예 3. Euchrenone a ₅ 처리에 따른 JAK2 및 STAT1의 인산화 변화 확인

BV2 세포에 IFN-γ를 1, 3 및 24시간 동안 처리하고, 상기 실시예 4의 방법으로 웨스턴 블랏을 통해 JAK2 및 STAT1의 인산화를 확인한 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 IFN-γ 처리에 의해 티로신-인산화 JAK2 (tyrosine-phosphorylated JAK2, pTyr-JAK2) 및 티로신-인산화 STAT1 (tyrosine-phosphorylated STAT1, pTyr-STAT1)이 대조군에 비해 유의적으로 증가하였다 (단, IFN-γ 처리 3시간째 pTyr-JAK2 레벨은 제외).

반면, euchrenone a₅ 처리군에서는 pTyr-JAK2 레벨이 IFN-γ 처리 1시간 및 3시간째에는 증가하였으나, 24시간째에는 IFN-γ 단독처리군에 비해 0.29 ± 0.12배까지 유의적으로 감소한 것을 확인하였다 (IFN-γ 단독처리군, 0.99 ± 0.07배; 대조군, 검출되지 않음). 또한, euchrenone a₅ 처리에 의해 pTyr-STAT1 레벨은 시간 의존적으로 감소하였으며, 특히 24시간째에는 pTyr-STAT1 레벨이 0.35 ± 0.07배까지 감소한 것을 확인하였다 (IFN-γ 단독처리군, 1.00 ± 0.07배; 대조군, 검출되지 않음).

실험예 4. Euchrenone a ₅ 처리에 따른 iNOS , COX-2, 및 IRF -1 단백질 발현 확인

IFN-γ를 24시간 동안 처리한 BV2 세포에서 상기 실시예 4의 방법으로 iNOS, COX-2, 및 IRF-1 단백질 발현량을 확인한 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 iNOS 단백질 발현은 IFN-γ 처리에 의해 현저히 증가하였으나 (IFN-γ 단독처리구, 1.00 ± 0.15배; 대조군, 0.02 ± 0.03배), euchrenone a₅ 전처리에 의해 0.26 ± 0.07배까지 유의적으로 감소하였다. 또한, IFN-γ에 의해 증가한 COX-2 단백질 발현 (IFN-γ 단독처리구, 1.00 ± 0.07배; 대조군, 0.56 ± 0.03배) 역시 euchrenone a₅에 의해 0.85 ± 0.07배까지 감소한 것을 확인하였다. 한편, IRF-1 단백질 발현의 경우 IFN-γ에 의해 유의적으로 증가하였으나 (IFN-γ 단독처리군, 1.00 ± 0.08 배; 대조군, 검출되지 않음), euchrenone a₅에 의해 약간의 감소 경향만 보였을 뿐 통계학적 유의성은 관찰되지 않았다 (0.85 ± 0.13배).

실험예 5. Euchrenone a ₅ 처리에 따른 IP-10, ICAM -1, 및 MCP -1 생성 변화 확인

상기 실시예 3의 방법으로 IFN-γ 처리된 BV2에 의해 생성되는 세포부착 (adhesion) 및 이동 (migration) 관련 지표인 IP-10, MCP-1, 및 ICAM-1의 생성량을 정량화 하여 도 5에 나타내었다.

IFN-γ로 유도된 IP-10 생성의 경우, 3.34 ± 1.00 ng/mL까지 증가하였던 IP-10 생성이 euchrenone a₅의 농도에 의존하여 감소하였으며 (대조군, 0.05 ± 0.05 ng/mL), 특히 12.5 μM euchrenone a₅ 처리군에서 1.79 ± 0.60 ng/mL까지 유의적으로 IP-10 생성이 감소하는 것을 확인하였다.

뿐만 아니라, IFN-γ에 의해 8.03 ± 0.43 및 47.33 ± 3.71 ng/mL까지 증가하였던 ICAM-1과 MCP-1 생성은 12.5 μM euchrenone a₅에 의해 각각 5.80 ± 0.28 및 33.69 ± 6.35 ng/mL까지 감소하는 것을 확인하였다 (ICAM-1 대조군, 1.68 ± 0.18 ng/mL; MCP-1 대조군, 23.84 ± 3.67 ng/mL).

상기 결과를 통해 euchrenone a₅가 IFN-γ에 의해 유도된 nitric oxide, IL-6 및 TNF-α 생성을 감소시키고, IFN-γ에 의해 증가된 JAK2 및 STAT1 인산화를 감소시킬 뿐만 아니라, iNOS 및 COX-2 단백질 발현 역시 유의적으로 억제하였으며, IP-10, ICAM-1 및 MCP-1 생성도 감소시키는 것을 확인하였고, 이러한 결과는 euchrenone a₅를 IFN-γ 관련 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 조성물로 이용할 수 있음을 보여주는 것이다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.

Claims

유크레논 a₅ (euchrenone a₅) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유크레논 a₅는 인터페론 감마(Interferon-gamma)에 의해 유도된 미세아교세포 염증반응을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 신경퇴행성 질환은 다발성 경화증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 및 헌팅턴병으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유크레논 a₅는 일산화질소, IL-6, TNF-α, IP-10, ICAM-1, 및 MCP-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유크레논 a₅는 JAK2 또는 STAT1의 인산화를 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유크레논 a₅는 iNOS, COX-2, 및 IRF-1로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 단백질 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
유크레논 a₅ (euchrenone a₅) 또는 이의 식품학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 신경퇴행성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제7항에 있어서,
상기 유크레논 a₅는 인터페론 감마(Interferon-gamma; IFN-γ)에 의해 유도된 미세아교세포 염증반응을 억제하는 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.
제7항에 있어서,
상기 신경퇴행성 질환은 다발성 경화증, 파킨슨병, 알츠하이머병, 및 헌팅턴병으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 식품 조성물.