KR20210005007A - 항-il-27 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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스콧 샤펠
마이클 글래드스톤
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앤드류 레이크
크리스틴 밀러
케리 화이트
징 후아
파멜라 엠. 홀랜드
매튜 라우슈
데바프레가산 무들리
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서피스 온콜로지, 인크.
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Abstract

본 개시내용은 항-IL-27 항체 및 이의 항원-결합 부분에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여함으로써 암과 같은 질환의 하나 이상의 증상을 치료하거나 또는 완화하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 예를 들어 대상체 또는 샘플에서 IL-27을 검출하는 방법에 관한 것이다.

Description

항-IL-27 항체 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 3월 22일자에 출원된 미국 가출원 제62/646,496호의 이익을 주장하고, 이들은 그 전문이 참고로 포함된다.
분야
본 개시내용은 일반적으로 IL-27 신호전달을 조절하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 보다 특히, 본 개시내용은 IL-27에 결합하고, IL-27 신호전달을 조절하는 면역원성 조성물(예를 들어, 항체, 항체 단편 등)에 관한 것이다.
최근에, 증가하는 양의 증거는 면역계가 종양 형성 및 진행에 대한 상당한 장벽으로 작동한다는 것을 제안한다. 항종양 가능성 또는 활성을 갖는 자연-발생 T 세포가 암을 갖는 환자에 존재하는 원칙은 종양학에서의 면역치료학적 접근법의 개발을 합리화하였다. 면역 세포, 예컨대 T 세포, 대식세포 및 천연 살해 세포는 항종양 활성을 나타내고 악성 종양의 발생 및 성장을 효과적으로 제어할 수 있다. 종양-특이적 또는 -연관된 항원은 면역 세포가 악성상태를 인식하고 제거하도록 유도할 수 있다(Chen & Mellman, (2013) Immunity 39(1):1-10). 종양-특이적 면역 반응의 존재에도 불구하고, 악성 종양은 대개 다양한 면역조절 기전을 통해 면역 공격을 피하거나 회피하여 종양 발생 및 진행을 조절하지 못한다(Motz & Coukos, (2013) Immunity 39(1):61-730). 실제로, 최근 생긴 암 특징은 이 면역조절 기전의 이용 및 항종양 면역 반응의 장애여서 면역학적 사멸로부터의 종양 회피 및 탈출을 발생시킨다(Hanahan 및 Weinberg (2011) Cell 144(5):646-674).
IL-27은 2개의 아단위(EBI3 및 IL-27p28)로 이루어진 이종이합체성 사이토카인이다. IL-27은 IL-12 및 IL-6 사이토카인 패밀리 둘 모두와 구조적으로 관련된다. IL-27은 주로 STAT1 및 STAT3을 통해 신호전달을 매개하는 IL-27Rα(WSX1) 및 gp130 사슬로 이루어진 이종이합체 수용체에 결합하고 이를 통해 신호전달을 매개한다. 초기 보고서는, 대개 IL-12와 협력하여 작용하면서, CD4+ T 세포 증식, T 헬퍼(Th)1 세포 분화 및 IFN-γ 생산을 지지하는 면역-향상 사이토카인으로서 IL-27을 특징규명하였다. 후속하는 연구는 IL-27이 복잡한 면역조절 기능을 나타내어, 생물학적 상황 및 사용된 실험 모델에 따라 전염증성 또는 항염증성 효과를 발생시킨다는 것을 나타냈다. IL-27은 인간 암 세포에서 상이한 면역-조절 분자의 발현을 유도할 수 있고, 이는 생체내 면역 반응의 국부적인 교란을 지지할 수 있다(Fabbi 등, (2017) Mediators Inflamm 3958069. 2017년 2월 1일 온라인 공개됨. doi:10.1155/2017/3958069, 및 여기 함유된 참고문헌).
암 치료 및 관리에서 이루어진 상당한 진전에도 불구하고, 암을 치료하고 관리하기 위한 새롭고 효과적인 치료제에 대한 계속적인 필요성이 여전하다.
발명의 요약
높은 친화도 및 특이성으로 인간 IL-27 (인터류킨 27)에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본원에 개시된다. 항체 분자를 암호화하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 상기 항체 분자를 제조하는 방법이 또한 제공된다. 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물이 또한 제공된다. 본원에 개시된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 면역 장애 및 암을 포함하는 장애를 치료하고/하거나, 예방하고/하거나, 진단하기 위해 (단독으로 또는 다른 치료제 또는 절차와 병용되어) 사용될 수 있다. 따라서, 항-IL-27 항체 분자를 사용하여 암 및 면역 장애를 포함하는 다양한 장애를 치료하고/하거나 진단하기 위한 조성물 및 방법이 본원에 개시된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합하는 특성; (ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단하는 특성; (iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는 특성; (iv) 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시키는 특성; (v) 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시키는 특성; (vi) 세포로부터의 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개된 분비를 유도하거나 향상시키는 특성; 및 (vii) (i)과 (vi)의 조합의 특성 중 적어도 하나 이상을 나타낸다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합한다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 재조합 인간 IL-27 또는 쥣과 IL-27에 결합한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GFTFXXXX-C(서열번호 408)이고, 중쇄 CDR2는 N-ISSSXXYI-C(서열번호 409)이고, 중쇄 CDR3 서열은 서열번호 163이고; 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 서열번호 169, 170 및 171이거나; 또는 (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-FTFXXXXMN-C(서열번호 410)이고, 중쇄 CDR2는 N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 411)이고, 중쇄 CDR3 서열은 서열번호 166이고; 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 서열번호 172, 173 및 174인 중쇄 및 경쇄 CDR을 갖는다.
일 실시형태에서, 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 412)이고, 중쇄 CDR2는 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 413)이거나; 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 414)이고, 중쇄 CDR2는 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 415)이다.
또 다른 실시형태에서, 각각의 중쇄 및 경쇄 CDR은 하기이다: (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 161, 162 및 163이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 169, 170 및 171이거나; (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 164, 165 및 166이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 172, 173 및 174이거나; (iii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 73, 74 및 75이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 81, 82 및 83이거나; (iv) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 76, 77 및 78이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 84, 85 및 86이거나; (v) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 95, 96 및 97이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 103, 104 및 105이거나; (vi) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 98, 99 및 100이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 106, 107 및 108이거나; (vii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 117, 118 및 119이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 125, 126 및 127이거나; (viii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 120, 121 및 122이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 128, 129 및 130이거나; (ix) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 139, 140 및 141이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 147, 148 및 149이거나; (x) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 142, 143 및 144이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 150, 151 및 152이거나; (xi) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 51, 52 및 53이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 59, 60 및 61이거나; (xii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 54, 55 및 56이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 62, 63 및 64이다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GGSFSXYX-C(서열번호 416)이고, 중쇄 CDR2는 N-IDXSGXT-C(서열번호 417)이고, 중쇄 CDR3은 N-ARXXXYY[X]n =0- 1DSS[X]n =4- 6DX-C(서열번호 418)이고; 경쇄 CDR1은 N-QXXSXY-C(서열번호 419)이고, 경쇄 CDR2는 N-DXS-C(서열번호 420)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQXXDXPIT-C(서열번호 421)이거나; (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-GSFSXYXWS-C(서열번호 422)이고, 중쇄 CDR2는 N-SIDXSGXTXYNPSLKS-C(서열번호 423)이고, 중쇄 CDR3 서열은 N-ARXXXYY[X]n =0- 1DSS[X]n =4- 6DX-C(서열번호 418)이고; 경쇄 CDR1은 N-XASQXXSXYLX-C(서열번호 424)이고, 경쇄 CDR2는 N-DXSNXXT-C(서열번호 425)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQXXDXPIT-C(서열번호 421)인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
소정의 실시형태에서, (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GGSFS[R/D]Y[E/Y]-C(서열번호 426)이고, 중쇄 CDR2는 N-ID[W/Y]SG[I/S]T-C(서열번호 427)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[D/L][P/G][M/V]YY[-/Y]DSS[VSTGSV/DLGF]D[V/I]-C(서열번호 428)이고; 경쇄 CDR1은 N-Q[S/D][V/I]S[S/N]Y-C(서열번호 429)이고, 경쇄 CDR2는 N-D[S/A]S-C(서열번호 430)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQ[D/Y][S/D]D[H/L]PIT-C(서열번호 431)이거나; 또는 (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-GSFS[R/D]Y[E/Y]WS-C(서열번호 432)이고, 중쇄 CDR2는 N-SID[W/Y]SG[I/S]T[N/E]YNPSLKS-C(서열번호 433)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[D/L][P/G][M/V]YY[-/Y]DSS[VSTGSV/DLGF]D[V/I]-C(서열번호 428)이고; 경쇄 CDR1은 N-[Q/R]ASQ[S/D][V/I]S[S/N]YL[N/A]-C(서열번호 434)이고, 경쇄 CDR2는 N-D[S/A]SN[R/L][A/E]T-C(서열번호 435)이고, 경쇄 CDR3은 is N-QQ[D/Y][S/D]D[H/L]PIT-C(서열번호 431)이다.
일부 실시형태에서, (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 229, 230 및 231이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 237, 238 및 239이거나; 또는 (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 232, 233 및 234이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 240, 241 및 242이다.
소정의 실시형태에서, (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 251, 252 및 253이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 259, 260 및 261이거나; 또는 (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 254, 255 및 256이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 262, 263 및 264이다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 23, 24 및 25의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열 및 각각 서열번호 26, 27 및 28의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
본 개시내용의 추가적인 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 서열번호 339, 340 및 341의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 347, 348 및 349의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는 (ii) 각각 서열번호 342, 343 및 344의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 350, 351 및 352의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 서열번호 185, 186 및 187의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 193, 194 및 195의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는 (ii) 각각 서열번호 188, 189 및 190의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 196, 197 및 198의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
본 개시내용의 일 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 서열번호 207, 208 및 209의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 215, 216 및 217의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는 (ii) 각각 서열번호 210, 211 및 212의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 218, 219 및 220의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
본 개시내용의 추가적인 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 서열번호 273, 274 및 275의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 281, 282 및 283의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는 (ii) 각각 서열번호 276, 277 및 278의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 284, 285 및 286의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
본 개시내용의 일 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GFTFSSYG-C(서열번호 361)이고, 중쇄 CDR2는 N-IXXDGSXK-C(서열번호 436)이고, 중쇄 CDR3은 N-ARXAP[X]n =3- 8DV-C(서열번호 437)이고; 경쇄 CDR1은 N-QSXSSY-C(서열번호 438)이고, 경쇄 CDR2는 N-XXS-C(서열번호 439)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQXXXXP[X]n =0-1T-C(서열번호 440)이거나; (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-FTFSSYGMX-C(서열번호 441)이고, 중쇄 CDR2는 N-XIXXDGSXKYYXDSVKG-C(서열번호 442)이고, 중쇄 CDR3은 N-ARXAP[X]n =3- 8DV-C(서열번호 437)이고; 경쇄 CDR1은 N-RASQSXSSYLX-C(서열번호 443)이고, 경쇄 CDR2는 N-[X]n=1-2SS[X]n=3-4-C(서열번호 444)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQXXXXP[X]n =0-1T-C(서열번호 440)인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
소정의 실시형태에서, (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GFTFSSYG-C(서열번호 361)이고, 중쇄 CDR2는 N-I[K/W][Q/Y]DGS[E/N]K-C(서열번호 445)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[D/G]AP[WDIYDYYM/EYV]DV-C(서열번호 446)이고; 경쇄 CDR1은 N-QS[I/V]SSY-C(서열번호 447)이고, 경쇄 CDR2는 N-[A/D][A/S]S-C(서열번호 448)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQ[S/Y][Y/S][V/L][P/Y]P[W/-]T-C(서열번호 449)이거나; (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-FTFSSYGM[S/H]-C(서열번호 450)이고; 중쇄 CDR2는 N-[N/V]I[K/W][Q/Y]DGS[E/N]KYY[V/A]DSVKG-C(서열번호 451)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[D/G]AP[WDIYDYYM/EYV]DV-C(서열번호 446)이고; 경쇄 CDR1은 N-RASQS[I/V]SSYL[N/A]-C(서열번호 452)이고, 경쇄 CDR2는 N-[AA/D]SS[LQS/NRAT]-C(서열번호 453)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQ[S/Y][Y/S][V/L][P/Y]P[W/-]T-C(서열번호 449)이다.
일부 실시형태에서, (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 361, 362 및 363이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 369, 370 및 371이거나; 또는 (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 364, 365 및 366이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 372, 373 및 374이다.
일 실시형태에서, (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 383, 384 및 385이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 391, 392 및 393이거나; 또는 (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 386, 387 및 388이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 394, 395 및 396이다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GFTFXXXX-C(서열번호 408)이고, 중쇄 CDR2는 N-IXXXXXXX-C(서열번호 456)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[X]n =6- 15DX-C(서열번호 458)이고; 경쇄 CDR1은 N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C(서열번호 460)이고, 경쇄 CDR2는 N-XXS-C(서열번호 462)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQXXXXP[X]n =0-1T-C(서열번호 464)이거나; (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-FTFXXXXMX-C(서열번호 466)이고, 중쇄 CDR2는 N-XIXXXXXXXXYXDSVKG-C(서열번호 468)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[X]n =6- 15DX-C(서열번호 470)이고; 경쇄 CDR1은 N-RASQSXSSYLX-C(서열번호 472)이고, 경쇄 CDR2는 N-[X]n=1- 2S[X]n =4-5-C(서열번호 474)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 476)인 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
소정의 실시형태에서, (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 454)이고, 중쇄 CDR2는 N-I[S/K/W][S/Q/Y][S/D][S/G][S/A][Y/E/N][I/K]-C(서열번호 455)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[DGGRTSYTATAHNWF/DAPWDIYDYYM/GAPEYV]D[P/V]-C(서열번호 457)이고; 경쇄 CDR1은 N-QS[VLF/I/V]SS[NNKN/-]Y-C(서열번호 459)이고, 경쇄 CDR2는 N-[W/A/D][A/S]S-C(서열번호 461)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQ[H/S/Y][A/Y/S][S/V/L][A/P/Y]P[P/W/-]T-C(서열번호 463)이거나; (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]M[N/S/H]-C(서열번호 465)이고, 중쇄 CDR2는 N-[G/S/N/V]I[S/K/W][S/Q/Y][S/D][S/G][S/A][Y/E/N][I/K][L/Y]Y[V/A]DSVKG-C(서열번호 467)이고, 중쇄 CDR3은 N-AR[D/G][GGRTSYTATAHNWF/APWDIYDYYM/APEYV]D[P/V]-C(서열번호 469)이고; 경쇄 CDR1은 N-RASQS[I/V]SSYL[N/A]-C(서열번호 471)이고, 경쇄 CDR2는 N-[WA/AA/D]S[TRES/SLQS/SNRAT]-C(서열번호 473)이고, 경쇄 CDR3은 N-QQ[H/S/Y][A/Y/S][S/V/L][A/P/Y]P[P/W/-]T-C(서열번호 475)이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 상기 세포는 면역 세포이다. 일부 실시형태에서, 상기 세포는 암 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시킨다(예를 들어, 세포에서의 CD161 발현의 저해를 완화하거나 경감시킴). 일부 실시형태에서, 상기 세포는 면역 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 IL-27-매개된 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, PD-L1 발현은 저해되거나 감소한다. 일부 실시형태에서, TIM-3 발현은 저해되거나 감소한다. 일부 실시형태에서, PD-L1 발현 및 TIM-3 발현 둘 모두는 감소한다. 일부 실시형태에서, 세포는 면역 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 TNFα이다. 일부 실시형태에서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 IL-6이다. 일부 실시형태에서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 TNFα 및 IL-6이다. 일부 실시형태에서, 상기 세포는 면역 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1 IgA2, IgD 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 IgG1 항체 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 EU 넘버링에 따라 치환 S228P, L235E, L235A 중 어느 하나, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 전술된 실시형태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 실질적으로 동일한, IL-27 상의 에피토프에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 전술된 실시형태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 IL-27을 포함하는 아미노산 잔기 중 적어도 하나에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 IL-27 상의 에피토프의 돌연변이는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 전술된 실시형태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 둘 모두를 저해하거나 감소시키거나 차단한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 IL-27 상의 에피토프에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 에피토프는 표 12에 기재된 항체 분자에 의해 결합된 에피토프와 동일하거나 유사하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 51, 52 및 53에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 59, 60 및 61에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 73, 74 및 75에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 81, 82 및 83에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 95, 96 및 97에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 103, 104 및 105에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 117, 118 및 119에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 125, 126 및 127에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 139, 140 및 141에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 147, 148 및 149에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vi) 각각 서열번호 161, 162 및 163에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 169, 170 및 171에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vii) 각각 서열번호 185, 186 및 187에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 193, 194 및 195에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(viii) 각각 서열번호 207, 208 및 209에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 215, 216 및 217에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ix) 각각 서열번호 229, 230 및 231에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 237, 238 및 239에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(x) 각각 서열번호 251, 252 및 253에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 259, 260 및 261에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xi) 각각 서열번호 273, 274 및 275에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 281, 282 및 283에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xii) 각각 서열번호 295, 296 및 297에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 303, 304 및 305에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiii) 각각 서열번호 317, 318 및 319에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 325, 326 및 327에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiv) 각각 서열번호 339, 340 및 341에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 347, 348 및 349에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xv) 각각 서열번호 361, 362 및 363에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 369, 370 및 371에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(xvi) 각각 서열번호 383, 384 및 385에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 391, 392 및 393에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 상기 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 161, 162 및 163에 제시되고, 상기 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 169, 170 및 171에 제시된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 54, 55 및 56에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 62, 63 및 64에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 76, 77 및 78에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 84, 85 및 86에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 98, 99 및 100에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 106, 107 및 108에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 120, 121 및 122에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 128, 129 및 130에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 142, 143 및 144에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 150, 151 및 152에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vi) 각각 서열번호 164, 165 및 166에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 172, 173 및 174에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vii) 각각 서열번호 188, 189 및 190에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 196, 197 및 198에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(viii) 각각 서열번호 210, 211 및 212에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 218, 219 및 220에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ix) 각각 서열번호 232, 233 및 234에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 240, 241 및 242에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(x) 각각 서열번호 254, 255 및 256에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 262, 263 및 264에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xi) 각각 서열번호 276, 277 및 278에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 284, 285 및 286에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xii) 각각 서열번호 298, 299 및 300에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 306, 307 및 308에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiii) 각각 서열번호 320, 321 및 322에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 328, 329 및 330에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiv) 각각 서열번호 342, 343 및 344에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 350, 351 및 352에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xv) 각각 서열번호 364, 365 및 366에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 372, 373 및 374에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(xvi) 각각 서열번호 386, 387 및 388에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 394, 395 및 396에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 164, 165 및 166에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 172, 173 및 174에 제시된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SYSMS(서열번호 23), YISYDGGSAYYPDTVKG(서열번호 24) 및 HGDYDDDDAMDY(서열번호 25)이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 RASENIYSYLA(서열번호 26), NAETLTE(서열번호 27) 및 QHHYGTPLT(서열번호 28)이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 57, 79, 101, 123, 145, 167, 191, 213, 235, 257, 279, 301, 323, 345, 367 및 389로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 65, 87, 109, 131, 153, 175, 199, 221, 243, 265, 287, 309, 331, 353, 375 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 57 및 65;
(ii) 각각 서열번호 79 및 87;
(iii) 각각 서열번호 101 및 109;
(iv) 각각 서열번호 123 및 131;
(v) 각각 서열번호 145 및 153;
(vi) 각각 서열번호 167 및 175;
(vii) 각각 서열번호 191 및 199;
(viii) 각각 서열번호 213 및 221;
(ix) 각각 서열번호 235 및 243;
(x) 각각 서열번호 257 및 265;
(xi) 각각 서열번호 279 및 287;
(xii) 각각 서열번호 301 및 309;
(xiii) 각각 서열번호 323 및 331;
(xiv) 각각 서열번호 345 및 353;
(xv) 각각 서열번호 367 및 375; 및
(xvi) 각각 서열번호 389 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 57, 79, 101, 123, 145, 167, 191, 213, 235, 257, 279, 301, 323, 345, 367 및 389로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 65, 87, 109, 131, 153, 175, 199, 221, 243, 265, 287, 309, 331, 353, 375 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 57 및 65;
(ii) 각각 서열번호 79 및 87;
(iii) 각각 서열번호 101 및 109;
(iv) 각각 서열번호 123 및 131;
(v) 각각 서열번호 145 및 153;
(vi) 각각 서열번호 167 및 175;
(vii) 각각 서열번호 191 및 199;
(viii) 각각 서열번호 213 및 221;
(ix) 각각 서열번호 235 및 243;
(x) 각각 서열번호 257 및 265;
(xi) 각각 서열번호 279 및 287;
(xii) 각각 서열번호 301 및 309;
(xiii) 각각 서열번호 323 및 331;
(xiv) 각각 서열번호 345 및 353;
(xv) 각각 서열번호 367 및 375; 및
(xvi) 각각 서열번호 389 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 167 및 175에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 167 및 175에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 67, 89, 111, 133, 155, 177, 201, 223, 245, 267, 289, 311, 333, 355, 377 및 399로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 67, 89, 111, 133, 155, 177, 201, 223, 245, 267, 289, 311, 333, 355, 377 및 399로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 71, 93, 115, 137, 159, 181, 205, 227, 249, 271, 293, 315, 337, 359, 381 및 403으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 71, 93, 115, 137, 159, 181, 205, 227, 249, 271, 293, 315, 337, 359, 381 및 403으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 67 및 69;
(ii) 각각 서열번호 89 및 91;
(iii) 각각 서열번호 111 및 113;
(iv) 각각 서열번호 133 및 135;
(v) 각각 서열번호 155 및 157;
(vi) 각각 서열번호 177 및 179;
(vii) 각각 서열번호 201 및 203;
(viii) 각각 서열번호 223 및 225;
(ix) 각각 서열번호 245 및 247;
(x) 각각 서열번호 267 및 269;
(xi) 각각 서열번호 289 및 291;
(xii) 각각 서열번호 311 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 333 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 355 및 357;
(xv) 각각 서열번호 377 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 399 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 67 및 69;
(ii) 각각 서열번호 89 및 91;
(iii) 각각 서열번호 111 및 113;
(iv) 각각 서열번호 133 및 135;
(v) 각각 서열번호 155 및 157;
(vi) 각각 서열번호 177 및 179;
(vii) 각각 서열번호 201 및 203;
(viii) 각각 서열번호 223 및 225;
(ix) 각각 서열번호 245 및 247;
(x) 각각 서열번호 267 및 269;
(xi) 각각 서열번호 289 및 291;
(xii) 각각 서열번호 311 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 333 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 355 및 357;
(xv) 각각 서열번호 377 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 399 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 71 및 69;
(ii) 각각 서열번호 93 및 91;
(iii) 각각 서열번호 115 및 113;
(iv) 각각 서열번호 137 및 135;
(v) 각각 서열번호 159 및 157;
(vi) 각각 서열번호 181 및 179;
(vii) 각각 서열번호 205 및 203;
(viii) 각각 서열번호 227 및 225;
(ix) 각각 서열번호 249 및 247;
(x) 각각 서열번호 271 및 269;
(xi) 각각 서열번호 293 및 291;
(xii) 각각 서열번호 315 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 337 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 359 및 357;
(xv) 각각 서열번호 381 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 403 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 71 및 69;
(ii) 각각 서열번호 93 및 91;
(iii) 각각 서열번호 115 및 113;
(iv) 각각 서열번호 137 및 135;
(v) 각각 서열번호 159 및 157;
(vi) 각각 서열번호 181 및 179;
(vii) 각각 서열번호 205 및 203;
(viii) 각각 서열번호 227 및 225;
(ix) 각각 서열번호 249 및 247;
(x) 각각 서열번호 271 및 269;
(xi) 각각 서열번호 293 및 291;
(xii) 각각 서열번호 315 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 337 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 359 및 357;
(xv) 각각 서열번호 381 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 403 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 177 및 179에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 177 및 179에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 181 및 179에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 181 및 179에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포에서 CD161 발현의 IL-27 매개된 저해를 저해하거나 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현의 IL-27 매개된 발현을 저해하거나 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 분비를 유도하거나 향상시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개된 분비를 유도하거나 향상시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 개시내용에 의해 제공된 유효량의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 것으로, 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키고, 그에 의해 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 본 개시내용에 의해 제공된 유효량의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 것으로, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포에서 CD161 발현의 IL-27 매개된 억제를 저해하거나 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현의 IL-27 매개된 발현을 저해하거나 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시켜 면역 반응을 자극하거나 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 상기 암은 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암), 육종, 고환암, 난소암, 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 흑색종(예를 들어, 포도막 흑색종 등을 포함), 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 결장직장암, 방광암, 자궁내막암, 전립선암, 갑상선암, 간세포 암종, 위암, 뇌암, 림프종(예를 들어, DL-BCL), 백혈병(예를 들어, AML) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어 신장 투명 세포 암종)으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은, 하나 이상의 추가 치료제 또는 절차와 병용된, 본 개시내용에 의해 제공된 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기에서 제2 치료제 또는 절차는 화학요법, 표적화된 항암 치료(예를 들어, 티로신 키나아제 억제제(TKI)를 포함), 종양세포붕괴성 약물(oncolytic drug), 세포독성제, 면역-기반 치료, 사이토카인, 수술 절차, 방사선 절차, 동시자극 분자의 활성제, 저해 분자의 저해제, 백신 또는 세포 면역요법, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, PD-L1 저해제, TIM-3 저해제, LAG-3 저해제, TIGIT 저해제, CD112R 저해제, TAM 저해제, STING 작용제, 4-1BB 작용제, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PDR001, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 및 AMP-224로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-L1 저해제이다. 일부 실시형태에서, PD-L1 저해제는 FAZ053, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 및 BMS-936559로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 항-PD-1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는(예를 들어, 항-PD-1 항체에 노출된 세포로부터의 PD-1-매개된 사이토카인 분비를 향상; 항-PD-1 매개된 TNFα 분비를 향상; 항-PD-1 매개된 IL-6 분비를 향상) 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 항-PD-1 항체와 동시적으로 또는 이에 순차적으로 노출시켜 항-PD1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는 단계를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체, 및 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 항-IL-27 항체), 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
관련된 실시형태에서, 본 개시내용은 동시적인 또는 순차적인 투여를 위한 항-PD-1 항체 및/또는 항-PD-L1 항체, 및 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 부분(예를 들어, 항-IL-27 항체), 및 이의 사용 설명서를 포함하는 키트를 제공한다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIM-3 저해제이고, 선택적으로 TIM-3 저해제는 MGB453 또는 TSR-022이다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 LAG-3 저해제이고, 선택적으로 LAG-3 저해제는 LAG525, BMS-986016 및 TSR-033으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIGIT 저해제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD112R 저해제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TAM(Axl, Mer, Tyro) 저해제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 STING 작용제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 4-1BB 작용제이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체로부터의 샘플에서 IL-27을 검출하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) IL-27이 샘플에 존재하는 경우에 검출 항체가 검출 항체-IL-27 복합체를 형성하게 하는 조건 하에 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계이되, 검출 항체는 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 단계, 및 (b) 단계 (a)에서 생성된 복합체가 있는 경우에는 상기 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 IL-27-연관된 암을 검출하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) IL-27이 샘플에 존재하는 경우에 검출 항체가 검출 항체-IL-27 복합체를 형성하게 하는 조건 하에 IL-27-연관된 암을 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계이되, 검출 항체는 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 생성된 복합체가 존재하는 경우에 상기 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 검출 항체는 검출 가능한 라벨에 커플링된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 IL-27이 샘플에 존재하면 IL-27 및 포획 항체를 포함하는 복합체를 제조하도록 샘플을 포획 항체와 접촉시키는 단계를 추가로 포함하고, 여기서 포획 항체는 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.
일부 실시형태에서, 상기 검출 항체 또는 상기 포획 항체는 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SYSMS(서열번호 23), YISYDGGSAYYPDTVKG(서열번호 24) 및 HGDYDDDDAMDY(서열번호 25)이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 RASENIYSYLA(서열번호 26), NAETLTE(서열번호 27) 및 QHHYGTPLT(서열번호 28)이다.
일부 실시형태에서, 상기 검출 항체 또는 상기 포획 항체는 각각 서열번호 1 및 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 포획 항체는 고체 지지체 상에 부동화된다. 일부 실시형태에서, 상기 샘플은 검출 항체 전에 포획 항체와 접촉한다. 일부 실시형태에서, 상기 샘플은 체액 샘플이다. 일부 실시형태에서, 상기 체액 샘플은 혈액, 혈청, 혈장, 세포 용해물 또는 조직 용해물이다.
일부 실시형태에서, 상기 암은 신장 세포 암종(RCC: renal cell carcinoma), 간세포 암종(HCC: hepatocellular carcinoma), 폐암, 위식도암, 난소암, 자궁내막암, 흑색종, 백혈병 및 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 신장 세포 암종(RCC)이다. 다른 실시형태에서, 암은 간세포 암종(HCC)이다. 일부 실시형태에서, 암은 백혈병 및 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 급성 골수성 백혈병(AML: acute myeloid leukemia)이다.
정의
청구항 및 본 명세서에 사용된 용어는 달리 기술되지 않는 한 하기 정의되어 있다.
본 명세서 및 첨부된 청구항에 사용된 바대로, 단수 형태 "a," "an" 및 "the"는 문맥이 명확히 달리 기술하지 않는 한 복수 지시어를 포함함에 유의해야 한다.
본원에 사용된 바와 같은, "약"은 당업자에 의해 이해될 것이고, 이것이 사용되는 맥락에 따라 어느 정도로 변할 것이다. 이것이 사용된 맥락을 고려하여 당업자에게 명확하지 않은 용어가 사용되는 경우, "약"은 특정 값의 플러스 또는 마이너스 10%를 구성할 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "작용제"는 본원에 개시된 자연적 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 촉진하고/하거나, 유도하고/하거나, 증가시키고/시키거나, 활성화하는 임의의 분자를 지칭한다. 적합한 작용제 분자는 구체적으로 작용제 항체 또는 항체 단편, 자연적 폴리펩타이드, 펩타이드 또는 단백질의 단편 또는 아미노산 서열 변이체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 작용제의 존재 하의 활성화는 용량 의존적 방식으로 관찰된다. 일부 실시형태에서, 측정된 신호(예를 들어, 생물학적 활성)는 필적하는 조건 하에 음성 대조군으로 측정된 신호보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100% 더 높다. 본 개시내용의 방법에 사용하기에 적합한 작용제를 확인하는 방법이 본원에 또한 개시된다. 예를 들어, 이들 방법은 결합 검정, 예컨대 효소-결합 면역-흡착 검정(ELISA: enzyme-linked immuno-absorbent assay), Forte Bioⓒ 시스템 및 방사면역검정(RIA: radioimmunoassay)을 포함하지만, 제한되지는 않는다. 이 검정은 관심 폴리펩타이드(예를 들어, 수용체 또는 리간드)에 결합하는 작용제의 능력을 결정하고, 따라서 폴리펩타이드의 활성을 촉진하거나, 증가시키거나, 활성화하는 작용제의 능력을 나타낸다. 작용제의 효능은 폴리펩타이드의 기능을 활성화하거나 촉진하는 작용제의 능력과 같은 기능적 검정을 이용하여 또한 결정될 수 있다. 예를 들어, 기능적 검정은 폴리펩타이드를 후보 작용제 분자와 접촉시키는 단계 및 보통 폴리펩타이드와 연관된 하나 이상의 생물학적 활성의 검출 가능한 변화를 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 작용제의 효력은 보통 이의 EC50 값(작용제 반응의 50%를 활성화하는 데 필요한 농도)에 의해 정의된다. EC50 값이 더 낮을수록, 작용제의 효력이 더 크고, 최대 생물학적 반응을 활성화하는 데 필요한 농도는 더 낮다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "알라닌 스캐닝"은 주어진 단백질 또는 폴리펩타이드의 안정성 또는 기능(들)(예를 들어, 결합 친화도)에 대한 특정 야생형 잔기의 기여를 결정하도록 사용된 기법을 지칭한다. 상기 기법은 폴리펩타이드에서의 야생형 잔기에 대한 알라닌 잔기의 치환, 이어서 알라닌-치환된 유도체 또는 돌연변이체 폴리펩타이드의 안정성 또는 기능(들)(예를 들어, 결합 친화도)의 평가 및 야생형 폴리펩타이드와의 비교를 수반한다. 폴리펩타이드에서의 야생형 잔기에 대해 알라닌을 치환하기 위한 기법은 당해 분야에 공지되어 있다.
용어 "완화하는"은 암과 같은 질환 상태의 치료, 예를 들어 이의 예방, 중증도 또는 진행의 감소, 관해 또는 치유에서의 임의의 치료학적으로 유리한 결과를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "아미노산"은 자연 발생 및 합성 아미노산, 및 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전 암호에 의해 암호화된 것, 및 나중에 변형된 아미노산, 예를 들어 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 염기성 화학 구조, 즉 수소, 카복실기, 아미노기 및 R기에 결합된 탄소를 갖는 화합물, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R기｛예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩타이드 골격을 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 염기성 화학 구조를 보유한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만, 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 화학 화합물을 지칭한다.
아미노산은 본원에서 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회(Biochemical Nomenclature Commission)가 추천한 이의 흔히 공지된 3글자 기호 또는 1글자 기호에 의해 지칭될 수 있다. 뉴클레오타이드는 마찬가지로 이의 흔히 인정된 1철자 코드에 의해 지칭될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "아미노산 치환"은 제2의 상이한 "대체" 아미노산 잔기에 의한 예비결정된 아미노산 서열(출발 폴리펩타이드의 아미노산 서열)에서의 적어도 하나의 기존의 아미노산 잔기의 대체를 지칭한다. "아미노산 삽입"은 예비결정된 아미노산 서열로의 적어도 하나의 추가적인 아미노산의 혼입을 지칭한다. 삽입이 보통 1개 또는 2개의 아미노산 잔기의 삽입으로 이루어지지만, 예를 들어 약 3개 내지 약 5개 또는 심지어 약 10개, 15개 또는 20개 이하의 아미노산 잔기의 삽입과 같은 더 큰 "펩타이드 삽입"이 또한 이루어질 수 있다. 삽입된 잔기(들)는 상기 개시된 바대로 자연 발생 또는 자연 비발생일 수 있다. "아미노산 결실"은 예비결정된 아미노산 서열로부터의 적어도 하나의 아미노산 잔기의 제거를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "양" 또는 "수준"은 광의로 사용되고, 물질(예를 들어, 대사물질, 소분자, 단백질, mRNA, 마커)의 분량, 농도 또는 풍부도를 지칭한다. 대사물질 또는 소분자(예를 들어, 약물)를 지칭할 때, 용어 "양", "수준" 및 "농도"는 일반적으로 상호교환적으로 사용되고, 일반적으로 생물학적 샘플에서 검출 가능한 양을 지칭한다. "상승된 수준" 또는 "증가된 수준"은 예컨대 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 겪지 않는 개체 또는 개체들로부터의 대조군 샘플 또는 내부 대조군에 비해 샘플 내의 물질의 분량, 농도 또는 풍부도의 증가를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 샘플에서의 상승된 물질(예를 들어, 약물) 수준은 당해 분야에 공지된 기법(예를 들어, HPLC)에 의해 결정된 바대로 대조군 샘플에서의 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 증가를 지칭한다. "감소된 수준"은 예컨대 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 겪지 않는 개체 또는 개체들로부터의 대조군 또는 내부 대조군에 비해 개체에서의 물질(예를 들어, 약물)의 분량, 농도 또는 풍부도의 감소를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 감소된 수준은 검출 가능한 분량, 농도 또는 풍부도가 아주 적거나 없다. 일부 실시형태에서, 샘플에서의 감소된 물질(예를 들어, 약물) 수준은 당해 분야에 공지된 기법(예를 들어, HPLC)에 의해 결정된 바대로 대조군 샘플에서의 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 감소를 지칭한다.
본원에 기재된 것과 같은 단백질, mRNA 또는 마커를 지칭할 때, 용어 "발현의 수준" 또는 "발현 수준"은 일반적으로 상호교환적으로 사용되고, 일반적으로 생물학적 샘플에서의 단백질, mRNA 또는 마커의 검출 가능한 양을 지칭한다. 일부 양태에서, 단백질, mRNA 또는 마커의 검출 가능한 양 또는 검출 가능한 수준은 본원에 기재된 것과 같은 물질에 대한 반응의 가능성과 연관된다. "발현"은 일반적으로 유전자 내에 함유된 정보가 세포에 존재하고 작동하는 구조(예를 들어, 단백질 마커, 예컨대 PD-L1)로 전환되는 과정을 지칭한다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같은, "발현"은 폴리뉴클레오타이드로의 전사, 폴리펩타이드로의 번역, 또는 심지어 폴리뉴클레오타이드 및/또는 폴리펩타이드 변형(예를 들어, 폴리펩타이드의 번역 후 변형)을 지칭할 수 있다. 전사된 폴리뉴클레오타이드, 번역된 폴리펩타이드, 또는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 폴리펩타이드 변형(예를 들어, 폴리펩타이드의 번역 후 변형)의 단편은 또한 이것이 대안적인 스플라이싱에 의해 생성된 전사체 또는 분해된 전사체로부터 기원하든지 또는 예를 들어 단백분해에 의한 폴리펩타이드의 번역후 가공으로부터 기원하든지 발현되는 것으로 간주될 것이다. "발현된 유전자"는 mRNA로서 폴리뉴클레오타이드로 전사되고 이후 폴리펩타이드로 번역된 것, 및 또한 RNA로 전사되지만 폴리펩타이드로 번역되지 않는 것(예를 들어, 운반 및 리보솜 RNA)을 포함한다. "상승된 발현", "상승된 발현 수준" 또는 "상승된 수준"은 대조군 샘플, 예컨대 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 겪지 않는 개체 또는 개체들 또는 내부 대조군에 비해 샘플 내의 물질의 증가된 발현 또는 증가된 수준을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 샘플에서의 물질(예를 들어, 단백질 마커, 예컨대 PD-L1)의 상승된 발현은 당해 분야에 공지된 기법(예를 들어, FACS)에 의해 결정된 바대로 대조군 샘플에서의 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 증가를 지칭한다. "감소된 발현", "감소된 발현 수준" 또는 "감소된 수준"은 대조군, 예컨대 질환 또는 장애(예를 들어, 암)를 겪지 않는 개체 또는 개체들 또는 내부 대조군에 비해 개체에서의 물질(예를 들어, 단백질 마커)의 감소된 발현 또는 감소된 수준을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 감소된 발현은 적거나 없는 발현이다. 일부 실시형태에서, 샘플에서의 물질(예를 들어, 단백질 마커)의 감소된 발현은 당해 분야에 공지된 기법(예를 들어, FACS)에 의해 결정된 바대로 대조군 샘플에서의 물질의 양에 비해 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 물질의 양의 감소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "혈관신생" 또는 "신생혈관화"는 새로운 혈관이 기존의 혈관으로부터 발생하는 과정을 지칭한다(Varner 등, (1999) Angiogen. 3:53-60; Mousa 등, (2000) Angiogen. Stim. Inhib. 35:42-44; Kim 등, (2000) Amer. J. Path. 156:1345-1362; Kim 등, (2000) J. Biol. Chem. 275:33920-33928; Kumar 등 (2000) Angiogenesis: From Molecular to Integrative Pharm . 169-180). 기존의 혈관 또는 순환 내피 줄기 세포로부터의 내피 세포(Takahashi 등, (1995) Nat. Med . 5:434-438; Isner 등, (1999) J. Clin. Invest. 103:1231-1236)는 성장 인자 또는 호르몬 신호, 또는 저산소성 또는 허혈성 조건에 반응하여 이동하고 증식하고 내강을 갖는 구조로 분화하도록 활성화되어 새로운 혈관을 형성한다. 허혈이 예컨대 암에서 발생하는 동안에, 영양소의 산화 및 전달을 증가시키려는 필요성은 확실히 이환된 조직에 의한 혈관형성 인자의 분비를 유도하고; 이들 인자는 새로운 혈관 형성을 자극한다. 여러 추가 용어는 혈관신생에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "길항제"는 본원에 개시된 자연적 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 완전히 차단하거나 저해하거나 중화시키는 임의의 분자를 지칭한다. 적합한 길항제 분자는 자연적 폴리펩타이드, 펩타이드 또는 단백질의 길항제 항체 또는 항체 단편, 단편 또는 아미노산 서열 변형체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 길항제 존재하에서의 저해는 용량 의존적 방식으로 관찰된다. 일부 실시형태에서, 측정된 신호(예를 들어, 생물학적 활성)는 필적하는 조건 하에 음성 대조군에 의해 측정된 신호보다 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100% 더 작다. 본 개시내용의 방법에 사용하기에 적합한 길항제를 확인하는 방법이 본원에 또한 개시된다. 예를 들어, 이 방법은 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), Forte Bioⓒ 시스템, 방사면역검정(RIA), 중규모 디스커버리(Meso Scale Discovery) 검정(예를 들면 중규모 디스커버리-전기화학발광(MSD-ECL), 및 비드-기반의 Luminex® 검정을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 이들 검정은 관심 폴리펩타이드(예를 들면, 수용체 또는 리간드)에 결합하는 길항제의 능력을 결정하고, 따라서 폴리펩타이드의 활성을 저해, 중화 또는 차단하는 길항제의 능력을 가리킨다. 길항제의 효능은 기능적 검정, 예컨대 폴리펩타이드 또는 작용제의 기능을 저해하는 길항제의 능력을 사용하여 또한 결정될 수 있다. 예를 들어, 기능적 검정은 폴리펩타이드를 후보 길항제 분자와 접촉시키는 것 및 폴리펩타이드와 보통 연관되는 하나 이상의 생물학적 활성에서 검출 가능한 변화를 측정하는 것을 포함할 수 있다. 길항제의 효력은 이의 IC50 값(작용제 반응의 50%를 저해하는 데 필요한 농도)에 의해 일반적으로 정의된다. IC50 값이 더 낮을수록, 길항제의 효력이 더 높고, 최대 생물학적 반응을 저해하는 데 필요한 농도가 더 낮다.
본원에 사용된 바와 같이, 문구 "인간 IL-27을 길항시키는 항체 또는 이의 항원 결합 부분"은, 예를 들어 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상인 인간 IL-27 활성의 감소(또는 저해)와 관련하여, 인간 IL-27의 적어도 하나의 분야 인정된 활성(예를 들어, IL-27 생물학적 활성 및/또는 IL-27 신호전달에 의해 매개된 하류 경로(들) 또는 다른 IL-27-매개된 기능)을 길항시키는 항체를 지칭한다. IL-27 생물학적 활성 및/또는 IL-27 신호전달에 의해 매개된 하류 경로(들) 또는 다른 IL-27-매개된 기능의 추가적인 예는 하기에 및 본원에서 그 외에 더 자세히 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항-IL-27 길항제 항체"(상호교환적으로 "항-IL-27 항체"라 칭함)는 IL-27에 특이적으로 결합하고 IL-27 생물학적 활성 및/또는 IL-27 신호전달에 의해 매개된 하류 경로(들) 또는 다른 IL-27-매개된 기능을 저해하는 항체를 지칭한다. 항-IL-27 길항제 항체는, IL-27 신호전달 또는 기능, 예컨대 수용체 결합 및/또는 IL-27 또는 이의 대사물질에 대한 세포 반응의 유발에 의해 매개된 하류 경로를 포함하는, IL-27 생물학적 활성(예를 들어, 리간드 결합, 효소 활성)을 차단하거나 길항시키거나 억제하거나 저해하거나 또는 감소시키는 항체를 포괄한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항-IL-27 길항제 항체는 인간 IL-27에 결합하고, 이의 동족 또는 일반 수용체(예를 들어, IL-27 수용체), 또는 하나 이상의 수용체 아단위(예를 들어, gp130 및/또는 IL-27Rα(WSX1/TCCR로도 공지됨))에 대한 인간 IL-27의 결합을 방지하거나 차단하거나 저해한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 gp130에 대한 인간 IL-27의 결합을 방지하거나 차단하거나 저해한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 IL-27Rα에 대한 인간 IL-27의 결합을 방지하거나 차단하거나 저해한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 IL-27 단량체의 이합체화를 방지하거나 차단하거나 저해한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 EBI3 단량체에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 IL-27p28 단량체에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 IL-27 단량체 둘 모두에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 EBI3 및 P28 둘 모두를 포함하는 비인접 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시킨다(예를 들어, 세포에서 CD161 발현의 IL-27 매개된 저해를 완화하거나 경감시킨다). 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27은 세포로부터의 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 인간 IL-27에 결합하고, 항종양 반응을 자극하거나 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 15 nM 이하의 친화도로 인간 IL-27에 결합한다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 길항제 항체는 인간 IL-27에 결합하고, 야생형 또는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 야생형 또는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 항-IL-27 길항제 항체의 예는 본원에 제공된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체"는 2개의 경쇄 폴리펩타이드 및 2개의 중쇄 폴리펩타이드를 포함하는 전체 항체를 지칭한다. 전체 항체는 IgM, IgG, IgA, IgD 및 IgE 항체를 포함하는 상이한 항체 아이소타입을 포함한다. 용어 "항체"는 다중클론 항체, 단일클론 항체, 키메라화 또는 키메라 항체, 인간화 항체, 영장류화 항체, 탈면역화된 항체 및 완전 인간 항체를 포함한다. 항체는 임의의 다양한 종, 예를 들어 포유류, 예컨대 인간, 비인간 영장류(예를 들어, 오랑우탄, 개코원숭이 또는 침팬지), 말, 소, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼, 기니아 피그, 게르빌루스쥐, 햄스터, 래트 및 마우스에서 생산되거나 이들로부터 유래될 수 있다. 항체는 정제된 또는 재조합의 항체일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체 단편", "항원-결합 단편" 또는 유사한 용어는 표적 항원(예를 들어, IL-27)에 결합하고 표적 항원의 활성을 저해하는 능력을 보유하는 항체의 단편을 지칭한다. 이러한 단편은 예를 들어 단일 사슬 항체, 단일 사슬 Fv 단편(scFv), Fd 단편, Fab 단편, Fab' 단편 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. scFv 단편은 scFv가 유래된 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 둘 모두를 포함하는 단일 폴리펩타이드 사슬이다. 또한, 이트라바디, 미니바디, 트리아바디 및 디아바디는 또한 항체의 정의에 포함되고, 본원에 기재된 방법에 사용하기에 적합하다. 예를 들어, Todorovska 등, (2001) J. Immunol. Methods 248(1):47-66; Hudson 및 Kortt, (1999) J. Immunol. Methods 231(1):177-189; Poljak, (1994) Structure 2(12):1121-1123; Rondon 및 Marasco, (1997) Annu. Rev. Microbiol. 51:257-283을 참조하고, 이들의 각각의 개시내용은 본원에 그 전문이 참고로 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "항체 단편"은 또한 예를 들어 단일 도메인 항체, 예컨대 낙타화 단일 도메인 항체를 포함한다. 예를 들어, Muyldermans 등, (2001) Trends Biochem. Sci. 26:230-235; Nuttall 등, (2000) Curr. Pharm. Biotech. 1:253-263; Reichmann 등, (1999) J. Immunol. Meth. 231:25-38; PCT 출원 공보 WO 94/04678호 및 WO 94/25591호; 및 미국 특허 제6,005,079호를 참조하고, 이들 모두는 본원에 그 전문이 참고로 포함된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 단일 도메인 항체가 형성되도록 변형을 갖는 2개의 VH 도메인을 포함하는 단일 도메인 항체를 제공한다.
일부 실시형태에서, 항원-결합 단편은 중쇄 폴리펩타이드의 가변 영역 및 경쇄 폴리펩타이드의 가변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항원-결합 단편은 항체의 경쇄 폴리펩타이드 및 중쇄 폴리펩타이드의 CDR을 포함한다.
용어 "항원 제시 세포" 또는 "APC"는 표면 상의 MHC와 복합체화된 외래 항원을 디스플레이하는 세포이다. T 세포는 T 세포 수용체(TCR)를 사용하여 이 복합체를 인식한다. APC의 예는 B 세포, 수지상 세포(DC), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC: peripheral blood mononuclear cell), 단핵구(예컨대, THP-1), B 림프아구성 세포(예컨대, C1R.A2, 1518 B-LCL) 및 단핵구 유래 수지상 세포(DC)를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 일부 APC는 식세포작용 또는 수용체-매개된 세포이물흡수에 의해 항원을 내재화한다.
용어 "항원 제시"는 APC가 항원을 포획하고, 예를 들어 MHC-I 및/또는 MHC-II 접합체의 성분으로서 T 세포에 의한 이의 인식이 가능하게 하는 과정을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "아폽토시스"는 다세포 유기체(예를 들어, 인간)에서 발생하는 예정 세포사의 과정을 지칭한다. 아폽토시스를 야기하는 고도로-조절된 생화학 사건 및 분자 사건은 막 블레빙(blebbing), 세포 용적 수축, 염색체 DNA 응축 및 단편화, 및 mRNA 붕괴를 포함하는 세포에 관찰 가능하고 특징적인 형태학적 변화를 야기할 수 있다. 아폽토시스를 겪는 T 세포를 포함하는 세포를 확인하기 위한 흔한 방법은 세포를 형광단-접합된 단백질(아넥신 V)에 노출시키는 것이다. 아넥신 V는 세포가 아폽토시스의 과정을 겪는 초기 표시자인 혈장 막의 외부 리플릿에서의 포스파티딜세린에 결합하는 이의 능력에 의해 아폽토시스 세포를 검출하도록 흔히 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "B 세포"(대안적으로 "B 림프구")는 림프구 아형의 백혈구의 유형을 지칭한다. B 세포는 항체를 분비함으로써 적응 면역계의 체액 면역력 성분에서 작용한다. B 세포는 또한 항원을 제시하고 사이토카인을 분비한다. B 세포는 다른 2개의 종류의 림프구인 T 세포 및 자연 살해 세포와 달리 이의 세포막에서 B 세포 수용체(BCR)를 발현한다. BCR은 항체 반응을 개시시키는 특이적 항원에 B 세포가 결합하게 한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "부동화된 IL-27에 결합한다"는 예를 들어 세포의 표면 상에 발현되거나 고체 지지체에 부착된 IL-27에 결합하는 본 개시내용의 항체의 능력을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "이중특이적" 또는 "이작용성 항체"는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리드 항체를 지칭한다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, Songsivilai & Lachmann, (1990) Clin. Exp. Immunol. 79:315-321; Kostelny 등, (1992) J. Immunol. 148:1547-1553을 참조한다.
전통적으로, 이중특이적 항체의 재조합 생산은 2개의 중쇄/경쇄 쌍이 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄/경쇄 쌍의 동시발현에 기초한다(Milstein 및 Cuello, (1983) Nature 305:537-539). 원하는 결합 특이성을 갖는 항체 가변 도메인(항체-항원 조합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합될 수 있다. 중쇄 가변 영역의 융합은 바람직하게는 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인에 의한다. 이중특이적 항체를 생성하기 위한 예시적인 현재 공지된 방법의 추가의 상세내용을 위해, 예를 들어 Suresh 등, (1986) Methods Enzymol. 121:210; PCT 공보 WO 96/27011호; Brennan 등, (1985) Science 229:81; Shalaby 등, J. Exp. Med. (1992) 175:217-225; Kostelny 등, (1992) J. Immunol. 148(5):1547-1553; Hollinger 등, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Gruber 등, (1994) J. Immunol. 152:5368; 및 Tutt 등, (1991) J. Immunol. 147:60을 참조한다. 이중특이적 항체는 또한 가교결합된 항체 또는 이종접합체 항체를 포함한다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교결합 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 적합한 가교결합제는 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 다수의 가교결합 기법과 함께 미국 특허 제4,676,980호에 개시되어 있다.
재조합 세포 배양물로부터 직접 이중특이적 항체 단편을 제조하고 단리하기 위한 다양한 기법이 또한 기재되어 있다. 예를 들어, 이중특이적 항체는 류신 지퍼를 사용하여 생산되었다. 예를 들어, Kostelny 등 (1992) J Immunol 148(5):1547-1553을 참조한다. Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결될 수 있다. 항체 동종이합체는 힌지 영역에서 환원되어 단량체를 형성할 수 있고, 이후 재산화되어 항체 이종이합체를 형성할 수 있다. 상기 방법은 항체 동종이합체의 생산에 또한 사용될 수 있다. Hollinger 등 (1993) Proc Natl Acad Sci USA 90:6444-6448에 의해 기재된 "디아바디" 기법은 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 대안적인 기전을 제공하였다. 단편은 동일한 사슬에서 2개의 도메인 사이에 쌍 짓기를 허용하기에 너무 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보성 VL 및 VH 도메인과 쌍을 짓도록 강제되어서, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-사슬 Fv(scFv) 이합체의 사용에 의해 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 다른 전략이 또한 보고되었다. 예를 들어, Gruber 등 (1994) J Immunol 152:5368을 참조한다. 대안적으로, 항체는 예를 들어 Zapata 등 (1995) Protein Eng. 8(10):1057-1062에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 간단히 말하면, 이 항체는 항원 결합 영역의 쌍을 형성하는 탠덤 Fd 분절의 쌍(VH-CH1-VH-CH1)을 포함한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
2개 초과의 원자가를 갖는 항체(예를 들어, 삼중특이적 항체)가 고려되고, 예를 들어 Tutt 등 (1991) J Immunol 147:60에 기재되어 있다.
본 개시내용은 또한 Wu 등 (2007) Nat Biotechnol 25(11): 1290-1297에 기재된 이중 가변 도메인 면역글로불린(DVD-Ig) 분자와 같은 다중특이적 항체의 변이체 형태를 포괄한다. 2개의 상이한 모 항체로부터의 2개의 상이한 경쇄 가변 도메인(VL)이 탠덤으로 직접 연결되거나 재조합 DNA 기법에 의한 짧은 링커를 통해, 이어서 경쇄 불변 도메인을 통해 연결되도록 DVD-Ig 분자가 설계된다. 유사하게, 중쇄는 탠덤으로 연결된 2개의 상이한 중쇄 가변 도메인(VH), 이어서 불변 도메인 CH1 및 Fc 영역을 포함한다. 2개의 모 항체로부터 DVD-Ig 분자를 제조하는 방법은 예를 들어 PCT 공보 WO 08/024188호 및 WO 07/024715호에 추가로 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, 이중특이적 항체는 탠덤식 Fab(Fab-in-Tandem) 면역글로불린이고, 여기서 제2 특이성을 갖는 경쇄 가변 영역은 전체 항체의 중쇄 가변 영역에 융합된다. 이러한 항체는 예를 들어 국제 특허 출원 공보 WO 2015/103072호에 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "암 항원" 또는 "종양 항원"은 (i) 종양-특이적 항원, (ii) 종양-연관된 항원, (iii) 종양-특이적 항원을 발현하는 세포, (iv) 종양-연관된 항원을 발현하는 세포, (v) 종양 상의 배아 항원, (vi) 자가유래 종양 세포, (vii) 종양-특이적 막 항원, (viii) 종양-연관된 막 항원, (ix) 성장 인자 수용체, (x) 성장 인자 리간드 및 (xi) 임의의 다른 유형의 항원 또는 항원 제시 세포 또는 암과 연관된 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "암-특이적 면역 반응"은 종양, 암 세포 또는 암 항원의 존재에 의해 유도된 면역 반응을 지칭한다. 소정의 실시형태에서, 그 반응은 암 항원 특이적 림프구의 증식을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 그 반응은 항체 및 T-세포 수용체의 발현 및 상향조절 및 림포카인, 케모카인 및 사이토카인의 형성 및 방출을 포함한다. 선천성 면역계 및 후천성 면역계 둘 모두는 종양, 암 세포 또는 암 항원에 대한 항원 반응을 개시하도록 상호작용한다. 소정의 실시형태에서, 암-특이적 면역 반응은 T 세포 반응이다.
용어 "암종"은 당업계에 인식되어 있고, 호흡기관 암종, 위장계 암종, 비뇨생식계 암종, 고환 암종, 유방 암종, 전립선 암종, 내분비계 암종 및 흑색종을 포함하는 상피 조직 또는 내분비 조직의 악성상태를 지칭한다. 본원에 기재된 항-IL-27 항체는 신장 암종 또는 흑색종, 또는 임의의 바이러스 질환을 포함하는 임의의 유형의 암을 갖거나 갖는 것으로 의심되거나 이를 발생시킬 고위험에 있을 수 있는 환자를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 암종은 자궁경부, 폐, 전립선, 유방, 두경부, 결장 및 난소의 조직으로부터 형성하는 것을 포함한다. 상기 용어는 또한 암성 조직 및 육종성 조직으로 이루어진 악성 종양을 포함하는 암육종을 포함한다. "선암"은 선 조직으로부터 유래되거나 종양 세포가 인식 가능한 선 구조를 형성하는 암종을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CD112R"은 폴리오바이러스 수용체-유사 단백질의 구성원을 지칭하고, 인간 T 세포에 대한 동시저해 수용체이다. CD112R은 T 세포 상에 우선적으로 발현되고, T 세포 수용체-매개된 신호를 저해한다. 항원-제시 세포 및 종양 세포 상에 광범위하게 발현된 CD112는 CD112R에 대한 리간드이다. CD112R은 CD112에 결합하는 것에 CD226과 경쟁한다. CD112R-CD112 상호작용의 방해는 인간 T 세포 반응을 향상시킨다. CD112와의 상호작용을 통한 인간 T 세포에 대한 신규의 관문으로서의 CD112R. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "CD112R 저해제"는 CD112R의 생물학적 기능 또는 활성을 파괴하거나 차단하거나 저해하는 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CD137"(대안적으로 "4-1BB")은 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 슈퍼패밀리의 구성원을 지칭한다. 4-1BB는 주로 활성화된 T 세포에 대한 동시자극 면역 관문 분자이다. CD137의 가교결합은 T 세포 증식, IL-2 분비, 생존 및 세포용해 활성을 향상시킨다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "4-1BB 작용제"는 4-1BB의 하나 이상의 기능을 자극하거나 유도하거나 증가시키는 물질을 지칭한다. 예시적인 4-1BB 작용제는 T 세포를 자극하도록 이 4-1BB를 표적화하는 완전 인간 IgG2 단일클론 항체인 우토밀루맙(Utomilumab)(PF-05082566)이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "CD161"(대안적으로 살해 세포 렉틴-유사 수용체 하위패밀리 B, 구성원 1(KLRB1); NK1.1 또는 NKR-P1A로 공지됨)은 C-유형 렉틴 슈퍼패밀리의 구성원을 지칭한다. CD161은 T 세포의 마커이고, CD161 발현은 다수의 상이한 암 유형에 대해 종양 미세환경으로의 T 세포 침윤과 연관된다. CD161은 본원에 그 전문이 참고로 포함된 Fergusson 등, (2014) Cell Reports 9(3):1075-1088에 추가로 기재되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "IL-27" 또는 "인터류킨 27"은 IL-27 사이토카인을 지칭한다. IL-27은 IL-6/IL-12 사이토카인 패밀리와 관련되고, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스 유도 유전자 3으로 공지된 제1 아단위(EBI3; IL-27 아단위 β 및 IL-27B로도 공지됨) 및 IL-27p28로 공지된 제2 아단위(IL30, IL-27 아단위 α 및 IL-27A로도 공지됨)를 포함하는 이종이합체성 사이토카인이다. IL-27은 단핵구, 내피 세포 및 수지상 세포를 포함하는 활성화된 항원 제시 세포에 의해 주로 합성된다(Jankowski 등 (2010) Arch Immunol. Ther. Exp. 58:417-425, Diakowski 등 (2013) Adv. Clin. Exp. Med. (2013) 22(5): 683-691). IL-27이 전염증성 효과를 가질 수 있지만, 많은 연구는 면역억제 물질로서의 IL-27의 중요한 역할을 제안한다(Shimizu 등 (2006) J. Immunol. 176:7317-7324, Hisada 등 (2004) Cancer Res. 64:1152-1156, 상기 Diakowski (2013) 문헌). 이것은 Th1 반응의 개시를 촉진하는 인자로 초기에 기재되었지만, IL-27은 Th1 반응을 제한하고, Th2 및 Th17 세포 분화를 저해하고, Tr1 및 다른 T 조절 세포 집단의 발생을 조절함으로써 주요 T-세포 억제 기능을 하는 것으로 후에 발견되었다(Dietrich 등 (2014) J. Immunol. 192:5382-5389). 면역조절제로서의 이의 역할 이외에, IL-27은 또한 혈관신생, 조혈작용 및 파골세포형성을 조절한다(상동 참조).
IL-27은 WSX1로 공지된 제1 아단위(IL-27 수용체 아단위 α, IL-27RA, T-세포 사이토카인 수용체 유형 1(TCCR) 및 사이토카인 수용체-유사 1(CRL1)로도 공지됨) 및 gp130으로 공지된 제2 아단위(인터류킨-6 신호 유도제(IL6ST), 인터류킨-6 수용체 아단위 β(IL-6RB) 및 온코스타틴 M 수용체로도 공지됨)를 포함하는 이종이합체성 I형 사이토카인 수용체(IL-27 수용체 또는 IL-27R)를 통해 신호전달한다. gp130은 또한 IL-6 패밀리 사이토카인에 대한 수용체 아단위이다(Liu 등 (2008) Scan. J. Immunol. 68:22-299, 상기 Diakowski (2013) 문헌). IL-27R을 통한 IL-27 신호전달은 JAK-STAT 및 p38 MAPK 경로를 포함하는 다수의 신호전달 캐스케이드를 활성화한다.
EBI3은 또한 p28 또는 IL-27 이종이합체와 독립적인 생물학적 기능을 갖는 것으로 생각된다. 예를 들어, EBI3은 또한 p35와 상호작용하여 이종이합체성 사이토카인 IL-35를 형성하고(Yoshida 등 (2015) Annu. Rev Immunol. 33:417-43), 상응하는 p28 또는 IL-27 증가 없이 소정의 세포 유형에서 선택적으로 과발현되는 것으로 나타났다(Larousserie 등 (2005) Am. J. Pathol. 166(4):1217-28).
예시적인 인간 EBI3 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 698(NCBI 기준 서열: NP_005746.2; N-MTPQLLLALVLWASCPPCSGRKGPPAALTLPRVQCRASRYPIAVDCSWTLPPAPNSTSPVSFIATYRLGMAARGHSWPCLQQTPTSTSCTITDVQLFSMAPYVLNVTAVHPWGSSSSFVPFITEHIIKPDPPEGVRLSPLAERQLQVQWEPPGSWPFPEIFSLKYWIRYKRQGAARFHRVGPIEATSFILRAVRPRARYYVQVAAQDLTDYGELSDWSLPATATMSLGK-C)에서 제공된다. 예시적인 인간 p28 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 699(NCBI 기준 서열: NP_663634.2; N-MGQTAGDLGWRLSLLLLPLLLVQAGVWGFPRPPGRPQLSLQELRREFTVSLHLARKLLSEVRGQAHRFAESHLPGVNLYLLPLGEQLPDVSLTFQAWRRLSDPERLCFISTTLQPFHALLGGLGTQGRWTNMERMQLWAMRLDLRDLQRHLRFQVLAAGFNLPEEEEEEEEEEEEERKGLLPGALGSALQGPAQVSWPQLLSTYRLLHSLELVLSRAVRELLLLSKAGHSVWPLGFPTLSPQP-C)에서 제공된다. 예시적인 인간 WSX1 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 700(NCBI 기준 서열: NP_004834.1; N-MRGGRGAPFWLWPLPKLALLPLLWVLFQRTRPQGSAGPLQCYGVGPLGDLNCSWEPLGDLGAPSELHLQSQKYRSNKTQTVAVAAGRSWVAIPREQLTMSDKLLVWGTKAGQPLWPPVFVNLETQMKPNAPRLGPDVDFSEDDPLEATVHWAPPTWPSHKVLICQFHYRRCQEAAWTLLEPELKTIPLTPVEIQDLELATGYKVYGRCRMEKEEDLWGEWSPILSFQTPPSAPKDVWVSGNLCGTPGGEEPLLLWKAPGPCVQVSYKVWFWVGGRELSPEGITCCCSLIPSGAEWARVSAVNATSWEPLTNLSLVCLDSASAPRSVAVSSIAGSTELLVTWQPGPGEPLEHVVDWARDGDPLEKLNWVRLPPGNLSALLPGNFTVGVPYRITVTAVSASGLASASSVWGFREELAPLVGPTLWRLQDAPPGTPAIAWGEVPRHQLRGHLTHYTLCAQSGTSPSVCMNVSGNTQSVTLPDLPWGPCELWVTASTIAGQGPPGPILRLHLPDNTLRWKVLPGILFLWGLFLLGCGLSLATSGRCYHLRHKVLPRWVWEKVPDPANSSSGQPHMEQVPEAQPLGDLPILEVEEMEPPPVMESSQPAQATAPLDSGYEKHFLPTPEELGLLGPPRPQVLA-C)에서 제공된다. 예시적인 인간 gp130 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 701(NCBI 기준 서열: NP_002175.2; N-MLTLQTWLVQALFIFLTTESTGELLDPCGYISPESPVVQLHSNFTAVCVLKEKCMDYFHVNANYIVWKTNHFTIPKEQYTIINRTASSVTFTDIASLNIQLTCNILTFGQLEQNVYGITIISGLPPEKPKNLSCIVNEGKKMRCEWDGGRETHLETNFTLKSEWATHKFADCKAKRDTPTSCTVDYSTVYFVNIEVWVEAENALGKVTSDHINFDPVYKVKPNPPHNLSVINSEELSSILKLTWTNPSIKSVIILKYNIQYRTKDASTWSQIPPEDTASTRSSFTVQDLKPFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSDWSEEASGITYEDRPSKAPSFWYKIDPSHTQGYRTVQLVWKTLPPFEANGKILDYEVTLTRWKSHLQNYTVNATKLTVNLTNDRYLATLTVRNLVGKSDAAVLTIPACDFQATHPVMDLKAFPKDNMLWVEWTTPRESVKKYILEWCVLSDKAPCITDWQQEDGTVHRTYLRGNLAESKCYLITVTPVYADGPGSPESIKAYLKQAPPSKGPTVRTKKVGKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIRNYTIFYRTIIGNETAVNVDSSHTEYTLSSLTSDTLYMVRMAAYTDEGGKDGPEFTFTTPKFAQGEIEAIVVPVCLAFLLTTLLGVLFCFNKRDLIKKHIWPNVPDPSKSHIAQWSPHTPPRHNFNSKDQMYSDGNFTDVSVVEIEANDKKPFPEDLKSLDLFKKEKINTEGHSSGIGGSSCMSSSRPSISSSDENESSQNTSSTVQYSTVVHSGYRHQVPSVQVFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQYFKQNCSQHESSPDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISDHISQSCGSGQMKMFQEVSAADAFGPGTEGQVERFETVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGGYMPQ-C)에서 제공된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "경쟁하다"는, 동일한 에피토프에 대한 결합에 경쟁하는 항원-결합 단백질(예를 들어, 면역글로불린, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 맥락에서 사용될 때, 검정(예를 들어, 경쟁적 결합 검정; 교차차단 검정)에 의해 결정된 바대로 항원-결합 단백질 사이의 상호작용을 지칭하고, 여기서 시험 항원-결합 단백질(예를 들어, 시험 항체)은 공통 항원(예를 들어, IL-27 또는 이의 단편)에 대한 기준 항원-결합 단백질(예를 들어, 기준 항체)의 특이적 결합을 저해한다(예를 들어, 감소시키거나 차단함).
지정된 폴리펩타이드 또는 단백질로부터 "유래된" 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열은 폴리펩타이드의 기원을 지칭한다. 바람직하게는, 특정 서열로부터 유래된 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열은 그 서열과 본질적으로 동일하거나, 그렇지 않으면 서열에서 이의 기원을 갖는 것으로 당업자에게 확인 가능한 아미노산 서열 또는 이의 부분을 갖는데, 그 부분은 적어도 10개 내지 20개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 20개 내지 30개의 아미노산, 더 바람직하게는 적어도 30개 내지 50개의 아미노산으로 이루어진다. 다른 펩타이드로부터 유래된 폴리펩타이드는 출발 폴리펩타이드, 예를 들어 다른 아미노산 잔기로 치환되거나 하나 이상의 아미노산 잔기 삽입 또는 결실을 갖는 하나 이상의 아미노산 잔기에 비해 하나 이상의 돌연변이를 가질 수 있다.
폴리펩타이드는 자연 발생이 아닌 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이러한 변이체는 반드시 출발 분자와 100% 미만의 서열 동일성 또는 유사성을 갖는다. 소정의 실시형태에서, 변이체는, 예를 들어 변이체 분자의 길이에 걸쳐, 출발 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 약 75% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 80% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 85% 내지 100% 미만, 더 바람직하게는 약 90% 내지 100% 미만(예를 들어, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%) 및 가장 바람직하게는 약 95% 내지 100% 미만의 아미노산 서열 동일성 또는 유사성의 아미노산 서열을 가질 것이다.
소정의 실시형태에서, 출발 폴리펩타이드 서열과 이로부터 유래된 서열 사이에 1개의 아미노산 차이가 있다. 이 서열과 관련하여 동일성 또는 유사성은 본원에서 최대 서열 동일성 퍼센트를 달성하도록 서열을 정렬하고 필요한 경우 갭을 도입한 후에 출발 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기(즉, 동일한 잔기)의 백분율로 정의된다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어지거나 본질적으로 이들로 이루어지거나 이들을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 인접 아미노산 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 인접 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 폴리펩타이드는 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 10개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 50개, 55개, 60개, 65개, 70개, 75개, 80개, 85개, 90개, 95개, 100개, 200개, 300개, 400개 또는 500개(또는 이들 숫자 내의 임의의 정수)의 인접 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용의 항체는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 본 발명의 뉴클레오타이드 서열은 클로닝, 유전자 치료, 단백질 발현 및 정제, 돌연변이 도입, 백신접종을 필요로 하는 숙주에서의 DNA 백신접종, 예를 들어 수동 면역화를 위한 항체 생성, PCR, 프라이머 및 프로브 생성 등을 포함하는 다수의 분야에 유용할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 발명의 뉴클레오타이드 서열은 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 이들로 이루어지거나 본질적으로 이들로 이루어진다. 소정의 실시형태에서, 뉴클레오타이드 서열은 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 뉴클레오타이드 서열은 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 인접 뉴클레오타이드 서열과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 인접 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 뉴클레오타이드 서열은 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열의 적어도 10개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개, 45개, 50개, 55개, 60개, 65개, 70개, 75개, 80개, 85개, 90개, 95개, 100개, 200개, 300개, 400개 또는 500개(또는 이들 숫자 내의 임의의 정수)의 인접 뉴클레오타이드를 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
본원에 개시된 방법에 사용하기에 적합한 항체가 자연적 서열의 원하는 활성을 보유하면서 이것이 유래된 자연 발생 또는 자연적 서열로부터 서열이 변하도록 변형될 수 있다고 당업자에 의해 또한 이해될 것이다. 예를 들어, "비필수" 아미노산 잔기에서 보존적 치환 또는 변화를 발생시키는 뉴클레오타이드 또는 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 돌연변이는 표준 기법, 예컨대 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개된 돌연변이유발에 의해 유도될 수 있다.
본원에 개시된 방법에 사용하기에 적합한 항체는 하나 이상의 아미노산 잔기, 예를 들어 필수 또는 비필수 아미노산 잔기에서 보존적 아미노산 치환을 포함할 수 있다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함하여 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당해 분야에서 정의되어 있다. 따라서, 결합 폴리펩타이드에서의 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게는 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기로 대체된다. 소정의 실시형태에서, 아미노산의 스트링은 측쇄 패밀리 구성원의 순서 및/또는 조성이 상이한 구조적으로 유사한 스트링에 의해 대체될 수 있다. 대안적으로, 소정의 실시형태에서, 돌연변이는 암호화 서열의 전부 또는 일부를 따라, 예컨대 포화 돌연변이유발에 의해 무작위로 도입될 수 있고, 생성된 돌연변이체는 본 발명의 결합 폴리펩타이드로 혼입되고, 원하는 표적에 결합하는 이의 능력에 대해 스크리닝될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 항원 "교차-제시"는 APC 상의 MHC 클래스 I 및 클래스 II 분자를 통한 T 세포에 대한 외인성 단백질 항원의 제시를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "교차-반응한다"는 상이한 종으로부터의 IL-27에 결합하는 본 개시내용의 항체의 능력을 지칭한다. 예를 들어, 인간 IL-27에 결합하는 본 개시내용의 항체는 또한 IL-27의 다른 종에 결합할 수 있다. 본원에 사용된 바대로, 교차-반응성은 결합 검정(예를 들어, SPR, ELISA)에서의 정제된 항원와의 비반응성 또는 IL-27를 생리학적으로 발현하는 세포에 대한 결합 또는 그렇지 않으면 이것과의 기능적 상호작용을 검출함으로써 측정된다. 교차-반응성을 결정하는 방법은 예를 들어 Biacore™ 2000 SPR 장치(Biacore AB, 스웨덴 웁살라)를 사용한 Biacore™ 표면 플라스몬 공명(SPR) 분석 또는 유세포 기법에 의한 본원에 기재된 바와 같은 표준 결합 검정을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "세포독성 T 림프구(CTL) 반응"은 세포독성 T 세포에 의해 유도된 면역 반응을 지칭한다. CTL 반응은 CD8+ T 세포에 의해 주로 매개된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "수지상 세포" 또는 "DC"는 골수(BM)-유래 백혈구이고 항원-제시 세포의 가장 강력한 유형인 항원 제시 세포의 유형을 지칭한다. DC는 포획 및 프로세스 항원인데, 이는 단백질을 T 세포에 의해 인식된 주요 조직적합성 복합체(MHC: major histocompatibility complex) 분자 상에 제시된 펩타이드로 전환시킨다. DC는 이종성, 예를 들어 골수성 및 형질세포양 DC이지만, 모든 DC는 미경험 T 세포에 항원 흡수, 프로세싱 및 제시를 할 수 있고, DC 아형은 구별되는 마커를 갖고, 위치, 이동 경로, 상세한 면역학적 기능 및 이의 생성을 위한 감염 또는 염증성 자극에 대한 의존성이 상이하다. 적응 면역 반응의 발생 동안에, DC의 표현형 및 기능은 관용성, 기억 및 극성화 T-헬퍼 1(Th1), Th2 및 Th17 분화를 개시시키는 데 역할을 한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "수지상 세포 활성화"는 미성숙 수지상 세포로부터 성숙 수지상 세포로의 이행을 지칭하고, 활성화된 수지상 세포는 성숙 수지상 세포 및 이행의 과정에 있는 수지상 세포를 포괄하고, 여기서 동시자극 신호를 유도하는 CD80 및 CD86의 발현은 자극을 활성화함으로써 상승된다. 성숙 인간 수지상 세포는 CD40, CD80, CD86 및 HLA-클래스 II(예를 들어, HLA-DR)의 발현에 양성인 세포이다. 미성숙 수지상 세포는 예를 들어 CD80 및 CD86으로 이루어진 군으로부터 선택된 마커에 기초하여 성숙 수지상 세포와 구별될 수 있다. 미성숙 수지상 세포는 이 마커에 대해 약하게 양성이고 바람직하게는 음성인 한편, 성숙 수지상 세포는 양성이다. 성숙 수지상 세포의 구별은 일상적으로 당업자에 의해 수행되고, 상기 기재된 각각의 마커 및 이의 발현을 측정하는 방법은 당업자에게 또한 널리 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "EC50"은 최대 반응의 50%, 즉 최대 반응과 기준치 사이의 중간인, 시험관내 또는 생체내 검정에서 반응을 유도하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 농도를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "유효 용량" 또는 "효과적인 투약량"은 원하는 효과를 달성하거나 적어도 부분적으로 달성하기에 충분한 양으로 정의된다. 용어 "치료학적 유효 용량"은 질환을 이미 겪는 환자에서 질환 및 이의 합병증을 치유하거나 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분한 양으로 정의된다. 이러한 사용에 효과적인 양은 치료되는 장애의 중증도 및 환자 자체의 면역계의 일반 상태에 따라 달라질 것이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "에피토프" 또는 "항원성 결정부위"는 면역글로불린 또는 항체가 특이적으로 결합하는 항원에서의 부위를 지칭한다. 용어 "에피토프 맵핑"은 표적 단백질 항원에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 부위, 또는 에피토프를 확인하는 공정 또는 방법을 지칭한다. 에피토프 맵핑 방법 및 기법은 본원에 제공된다. 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산 둘 모두로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출에서 보유되는 한편, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 의한 처리에서 소실된다. 에피토프는 전형적으로 고유한 공간 구성에서 적어도 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개 또는 15개의 아미노산을 포함한다. 주어진 항체에 의해 어떤 에피토프가 결합되었는지를 결정하는 방법(즉, 에피토프 맵핑)은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 면역블로팅 및 면역침전 검정을 포함하고, 여기서 IL-27로부터의 중첩 펩타이드 또는 인접 펩타이드는 주어진 항-IL-27 항체와의 반응성에 대해 시험된다. 에피토프의 공간 구성을 결정하는 방법은 당해 분야에서의 기법 및 본원에 기재된 것, 예를 들어 X선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다(예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)을 참조한다).
본원에 기재된 특정 항체에 의해 인식된 에피토프(예를 들어, 동일한 영역 또는 중첩 영역 또는 그 영역 사이의 또는 그 영역에 걸친 영역)의 전부 또는 일부를 포함하는 IL-27 상의 에피토프에 결합하는 항체는 본 개시내용에 의해 또한 포함된다.
동일한 에피토프에 결합하는 항체 및/또는 본원에 기재된 항체와 인간 IL-27에 대한 결합에 대해 경쟁하는 항체는 본 개시내용에 의해 또한 포함된다. 동일한 에피토프를 인식하거나 결합에 대해 경쟁하는 항체는 일상적 기법을 이용하여 확인될 수 있다. 이러한 기법은 예를 들어 표적 항원에 대한 다른 항체의 결합을 차단하는 하나의 항체의 능력을 보여주는 면역검정, 즉 경쟁적 결합 검정을 포함한다. 경쟁적 결합은 시험 중인 면역글로불린이 IL-27와 같은 공통 항원에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 저해하는 검정에서 결정된다. 많은 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어 고상 직접 또는 간접 방사면역검정(RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역검정(EIA), 샌드위치 경쟁 검정(Stahli 등, Methods in Enzymology 9:242 (1983) 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(Kirkland 등, J. Immunol. 137:3614 (1986) 참조); 고상 직접 표지화 검정, 고상 직접 표지화 샌드위치 검정(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988) 참조); I-125 라벨을 사용한 고상 직접 라벨 RIA(Morel 등, Mol. Immunol. 25(1):7 (1988) 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(Cheung 등, Virology 176:546 (1990)); 및 직접 표지화 RIA(Moldenhauer 등, Scand. J. Immunol. 32:77 (1990))는 공지되어 있다. 전형적으로, 이러한 검정은 고체 표면 또는 비표지된 시험 면역글로불린 및 표지된 기준 면역글로불린인 이들 중 어느 하나를 보유하는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 포함한다. 경쟁적 저해는 시험 면역글로불린의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 라벨의 양을 결정함으로써 측정된다. 보통 시험 면역글로불린은 과량으로 존재한다. 보통, 경쟁 항체가 과량으로 존재할 때, 이것은 적어도 50% 내지 55%, 55% 내지 60%, 60% 내지 65%, 65% 내지 70%, 70% 내지 75% 또는 초과만큼 공통 항원에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 저해할 것이다.
다른 기법은 예를 들어 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분할을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 X선 분석 및 항원:항체 상호작용의 구성 및 동역학을 연구하는 수소/중수소(H/D) 교환과 조합된 질량 분광법을 포함한다. 다른 방법은 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 버전에 대한 항체의 결합을 모니터링하는데, 여기서 항원 서열 내의 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 소실이 대개 에피토프 성분의 표시로 생각된다. 또한, 에피토프 맵핑에 대한 컴퓨팅 조합 방법이 또한 사용될 수 있다. 이 방법은 조합 파지 디스플레이 펩타이드 라이브러리로부터의 특이적 짧은 펩타이드를 친화도 단리시키는 관심 항체의 능력에 의존한다. 이후, 펩타이드는 펩타이드 라이브러리를 스크리닝하기 위해 사용된 항체에 상응하는 에피토프의 정의에 대한 본보기로 간주된다. 에피토프 맵핑에 대해, 구성적 불연속 에피토프를 맵핑하는 것으로 나타난 컴퓨팅 알고리즘이 또한 개발되었다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "Fc-매개된 효과기 기능" 또는 "Fc 효과기 기능"은 항체의 1차 기능 및 목적 이외의 항체의 생물학적 활성을 지칭한다. 예를 들어, 치료학적 아그노스틱 항체의 효과기 기능은 표적 단백질 또는 경로의 활성화 이외의 생물학적 활성이다. 항체 효과기 기능의 예는 C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC: antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity); 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향조절; Fc 수용체를 발현하는 혈소판의 활성화의 결여; 및 B 세포 활성화를 포함한다. 많은 효과기 기능은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합으로 시작한다. 일부 실시형태에서, 종양 항원-표적화 항체는 효과기 기능, 예를 들어 ADCC 활성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 종양 항원-표적화 항체는 불변 영역의 비변형된 형태에 비해 증가된 효과기 기능(예를 들어, ADCC를 매개하는 증가된 능력)을 갖는 변이체 불변 영역을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "Fc 수용체"는 항체의 Fc 영역에 의해 결합된 면역 효과기 세포의 표면에서 발견된 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 실시형태에서, Fc 수용체는 Fcγ 수용체이다. FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FγcRIII(CD16)인 Fcγ 수용체의 3개의 하위종류가 있다. 모든 4개의 IgG 아이소타입(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)은 Fc 수용체 FcγRI, FcγRIIA 및 FcγRIIIA에 결합하고 이를 활성화한다. FcγRIIB는 저해 수용체이고, 따라서 이 수용체에 결합하는 항체는 보체 및 세포 반응을 활성화하지 않는다. FcγRI는 단량체 형태의 IgG에 결합하는 고친화도 수용체인 한편, FcγRIIA 및 FcγRIIA는 오직 다량체 형태의 IgG에 결합하는 저친화도 수용체이고, 약간 더 낮은 친화도를 갖는다. Fc 수용체 및/또는 C1q에 대한 항체의 결합은 Fc 영역 내의 특이적 잔기 또는 도메인에 의해 좌우된다. 결합은 또한 힌지 영역 내에 및 항체의 CH2 부분 내에 위치한 잔기에 따라 달라진다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항체의 작용성 활성 및/또는 치료학적 활성은 Fc 수용체(예를 들어, FcγR)에 대한 Fc 영역의 결합에 따라 달라진다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항체의 작용성 활성 및/또는 치료학적 활성은 Fc 수용체(예를 들어, FcγR)에 대한 Fc 영역의 결합에 의해 향상된다.
본 개시내용에 사용된 소정의 Fc 수용체 서열의 목록은 하기 표 13에 제시된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "글리코실화 패턴"은 단백질, 보다 구체적으로는 면역글로불린 단백질에 공유 부착된 탄수화물 단위의 패턴으로 정의된다. 이종성 항체의 글리코실화 패턴은, 당해 분야의 당업자가 전이유전자의 CH 유전자가 유래된 종보다 비인간 형질전환 동물의 종에서 글리코실화의 상기 패턴과 더 유사한 것으로서 이종성 항체의 글리코실화 패턴을 인식할 때, 비인간 형질전환 동물의 종에 의해 생산된 항체에서 자연 발생하는 글리코실화 패턴과 실질적으로 유사한 것으로 특징규명될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "인간 항체"는 인간 생식선 면역글로불린 서열의 (존재하는 경우) 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 본 개시내용의 인간 항체는 인간 생식선 면역글로불린 서열(예를 들어, 시험관내 랜덤 또는 부위-특이적 돌연변이유발 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(예를 들어, Lonberg 등, (1994) Nature 368(6474): 856-859); Lonberg, (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg & Huszar, (1995) Intern. Rev. Immunol. 13:65-93 및 Harding & Lonberg, (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci. 764:536-546 참조). 그러나, 용어 "인간 항체"는 다른 포유류 종, 예컨대 마우스의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 그래프팅된 항체(즉, 인간화 항체)를 포함하지 않는다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "이종성 항체"는 이러한 항체를 생산하는 형질전환 비인간 유기체와 관련하여 정의된다. 이 용어는 형질전환 비인간 동물로 이루어지지 않는 유기체에서 발견되는 것에 상응하고 일반적으로 형질전환 비인간 동물의 것이 아닌 종으로부터의 아미노산 서열 또는 암호화 핵산 서열을 갖는 항체를 지칭한다.
용어 "면역 반응의 유도" 및 "면역 반응의 향상"은 상호교환적으로 사용되고, 특정 항원에 대한 면역 반응(즉, 수동 또는 적응)의 자극을 지칭한다. CDC 또는 ADCC를 유도하는 것과 관련하여 사용되는 용어 "유도한다"는 특정한 직접적인 세포 사멸 기전의 자극을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "면역원성 세포사"(대안적으로 "면역원성 아폽토시스"로 알려짐)는 종양 세포의 면역원성의 증가 및 면역원성 방식의(예를 들어, 식세포작용에 의한) 종양 세포의 사멸을 발생시키는, 종양 세포로부터의 손상-연관 분자 패턴(DAMP) 분자(예를 들어, 아데노신 삼인산, ATP)의 사전부검 발현 및 방출을 유도하는 하나 이상의 신호전달 경로의 활성화와 연관되는 세포사 양상을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "면역원성 세포사 유도제"는 면역원성 세포사 과정, 경로 또는 양상을 유도하는 화학적, 생물학적 또는 약리학적 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, (예를 들어, 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3의 인간 IL-27-매개된 인산화의 저해 또는 감소를 지칭하는) 용어 "저해한다", "감소시킨다" 또는 "차단한다"는 상호교환적으로 사용되고, 부분 및 완전 저해/차단 둘 모두를 포괄한다. IL-27의 저해/차단은 저해 또는 차단 없이 생기는 활성의 유형 또는 정상 수준을 감소시키거나 변경한다. 저해 및 차단은 항-IL-27 항체와 접촉하지 않은 IL-27과 비교하여 항-IL-27 항체와 접촉하여 예를 들어 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%만큼 IL-27의 결합을 저해하는 IL-27의 결합 친화도의 임의의 측정 가능한 감소를 포함하도록 또한 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "혈관신생을 저해한다", "혈관신생을 줄인다" 및 "혈관신생을 감소시킨다"는 상응하는 대조군 조직에서의 분량의 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이하인, 가장 바람직하게는 대조군 조직에서 관찰된 동일한 수준에 있는 분량으로 혈관신생의 수준을 감소시키는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, (예를 들어, 세포를 지칭하는) 용어 "성장을 저해한다"는 세포의 성장의 임의의 측정 가능한 감소, 예를 들어 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% 또는 100%만큼의 세포의 성장의 저해를 포함하도록 의도된다.
본원에 사용된 바와 같은, "예방을 필요로 하는", "치료를 필요로 하는" 또는 "이를 필요로 하는" 대상체는 적절한 의학 실행자(예를 들어, 인간의 경우에 의사, 간호사 또는 실습 간호사; 비인간 포유류의 경우에 수의사)의 판단에 의해 주어진 치료(예컨대, 항-IL-27 항체를 포함하는 조성물에 의한 치료)로부터 합당하게 이익인 대상체를 지칭한다.
용어 "생체내"는 살아 있는 유기체에서 생기는 과정을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭하도록 의도된다(예를 들어, 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 IL-27 이외의 항원에 결합하는 항체가 실질적으로 없음). 그러나, 에피토프에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 상이한 종으로부터의 다른 IL-27 단백질과 교차-반응성을 가질 수 있다. 그러나, 항체는 본원에 기재된 바와 같은 특이적 결합에서 인간 IL-27에 대한 특이적 결합을 계속해서 나타낸다. 또한, 단리된 항체는 전형적으로 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없다. 일부 실시형태에서, 상이한 IL-27 특이성을 갖는 "단리된" 항체의 조합은 잘-한정된 조성물에서 조합된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "단리된 핵산 분자"는 IL-27에 결합하는 항체 또는 항체 부분(예를 들어, VH, VL, CDR3)을 암호화하는 핵산을 언급하고, 항체 또는 항체 부분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 IL-27 이외의 항원에 결합하는 항체 또는 항체 부분을 암호화하는 다른 뉴클레오타이드 서열이 없고, 다른 서열이 인간 게놈 DNA에서 핵산을 자연적으로 플랭킹할 수 있는 핵산 분자를 지칭하도록 의도된다. 예를 들어, 표 12에 기재된 서열로부터 선택된 서열은 본원에 기재된 항-IL-27 항체 단일클론 항체의 중쇄(VH) 가변 영역 및 경쇄(VL) 가변 영역을 포함하는 뉴클레오타이드 서열에 상응한다.
본원에 사용된 바와 같은, "아이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화된 항체 클래스(예를 들어, IgM 또는 IgG1)를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG1 아이소타입이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG2 아이소타입이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG3 아이소타입이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 인간 단일클론 항체는 IgG4 아이소타입이다. 당업자에게 명확한 것처럼, 항체 아이소타입(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1 IgA2, IgD 및 IgE)의 확인은 당해 분야에서 일상적이고, 공지된 항체, 공개된 Fc 변이체 서열 및 보존된 서열과의 서열 정렬의 조합을 흔히 수반한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "아이소타입 스위칭"은 항체의 종류 또는 아이소타입이 하나의 Ig 종류로부터 다른 Ig 종류 중 하나로 변하는 현상을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "KD" 또는 "KD"는 항체와 항원 사이의 결합 반응의 평형 해리 상수를 지칭한다. KD의 값은 항체 해리 상수(kd) 대 항체 결합 상수(ka)의 비율의 숫자 표시이다. KD의 값은 항원에 대한 항체의 결합 친화도와 반비례한다. KD 값이 더 작을수록, 항원에 대한 항체의 친화도가 더 크다. 친화도는 리간드에 대한 단일 분자의 결합 강도이고, 전형적으로 평형 해리 상수(KD)에 의해 측정되고 기록되는데, 이는 이분자 상호작용의 강도를 평가하고 순위화하도록 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "kd" 또는 "kd"(대안적으로 "koff" 또는 "koff")는 항체/항원 복합체로부터의 항체의 해리에 대한 해리 상수를 지칭하도록 의도된다. kd의 값은 초당 붕괴하거나 해리하는 복합체의 부분의 숫자 표시이고, 초-1 단위로 표현된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "ka" 또는 "ka"(대안적으로 "kon" 또는 "kon")는 항체와 항원의 회합에 대한 결합 상수를 지칭하도록 의된다. ka의 값은 항체 및 항원의 1 몰(1M) 용액 중에 초당 형성된 항체/항원 복합체의 수의 숫자 표시이고, M-1초-1 단위로 표현된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "백혈구"는 감염성 유기체 및 외래 물질에 대해 신체를 방어하는 데 관여된 백혈구의 유형을 지칭한다. 백혈구는 골수에서 생성된다. 2개의 주요 그룹 사이에 5가지 주요 유형의 백혈구가 있다: 다형핵성 백혈구(호중구, 호산구, 호염기구) 및 단핵 백혈구(단핵구 및 림프구).
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "림프구"는 신체의 면역 방어에 관여된 백혈구(leukocyte) 또는 백혈구(white blood cell)의 유형을 지칭한다. 2개의 주요 유형의 림프구가 있다: B-세포 및 T-세포.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "연결된", "융합된" 또는 "융합"은 상호교환적으로 사용된다. 이들 용어는 화학 접합 또는 재조합 수단을 포함하는 어떤 수단에 의하든 함께 2개 이상의 요소 또는 성분 또는 도메인의 연결을 지칭한다. 화학 접합의 방법(예를 들어, 이종이작용성 가교결합제를 사용)은 당해 분야에 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "국소 투여" 또는 "국소 전달"은 혈관계를 통한 의도된 표적 조직 또는 부위에 대한 조성물 또는 물질의 수송에 의존하지 않는 전달을 지칭한다. 예를 들어, 상기 조성물은 조성물 또는 물질의 주사 또는 이식에 의해 또는 주사에 의해 또는 조성물 또는 물질을 함유하는 장치의 이식에 의해 전달될 수 있다. 표적 조직 또는 부위에 인접한 국소 투여 후에, 상기 조성물 또는 물질, 또는 이의 하나 이상의 성분은 의도된 표적 조직 또는 부위로 확산할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "MHC 분자"는 MHC 클래스 I 및 MHC 클래스 II인 2개의 유형의 분자를 지칭한다. MHC 클래스 I 분자는 특이적 CD8+ T 세포에 항원을 제시하고, MHC 클래스 II 분자는 특이적 CD4+ T 세포에 항원을 제시한다. APC에 외인성으로 전달된 항원은 주로 MHC 클래스 II와의 회합을 위해 처리된다. 이에 반해서, APC에 내인성으로 전달된 항원은 주로 MHC 클래스 I과의 회합을 위해 처리된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "단일클론 항체"는 특정 에피토프에 대한 단일 결합 특이성 및 친화도를 나타내는 항체를 지칭한다. 따라서, 용어 "인간 단일클론 항체"는 단일 결합 특이성을 나타내고 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역 및 선택적인 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 인간 단일클론 항체는 불활화된 세포에 융합된 인간 중쇄 전이유전자 및 경쇄 전이유전자를 포함하는 게놈을 갖는 형질전환 비인간 동물, 예를 들어 형질전환 마우스로부터 얻은 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "단핵구"는 백혈구의 유형을 지칭하고, 면역 반응을 가져오도록 대식세포 및 수지상 세포로 구별될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "자연 살해(NK) 세포"는 세포독성 림프구의 유형을 지칭한다. 소정의 종양 세포를 사멸하고 바이러스 및 다른 세포내 병원균에 대한 선천성 면역력, 및 항체 의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC)에서 중요한 역?l을 하는 큰, 보통 과립상의, 비-T, 비-B 림프구가 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "자연-발생"은 물체에 적용되면서 물체가 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 지칭한다. 예를 들어, 자연에서의 소스로부터 단리될 수 있고, 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않은, 유기체(바이러스를 포함)에 존재하는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열은 자연-발생이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "비스위칭된 아이소타입"은 아이소타입 스위칭이 일어나지 않을 때 생성된 중쇄의 아이소타입 종류를 지칭하고, 비스위칭된 아이소타입을 암호화하는 CH 유전자는 전형적으로 기능적으로 재배열된 VDJ 유전자로부터 바로 하류에 있는 제1 CH 유전자이다. 아이소타입 스위칭은 전통적인 또는 비전통적인 아이소타입 스위칭으로 분류된다. 전통적인 아이소타입 스위칭은 전이유전자에서의 적어도 하나의 스위치 서열 영역을 포함하는 재조합 사건에 의해 발생한다. 비전통적인 아이소타입 스위칭은 예를 들어 인간 σμ와 인간 Σμ(δ-연관된 결실) 사이의 상동성 재조합에 의해 생길 수 있다. 다른 것들 중에서 전이유전자간 및/또는 염색체간 재조합과 같은 대안적인 비전통적인 스위칭 기전은 발생하거나 아이소타입 스위칭을 유발할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "핵산"은 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드 및 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 이의 중합체를 지칭한다. 구체적으로 한정되지 않는 한, 상기 용어는 기준 핵산과 유사한 결합 특성을 갖고 자연 발생 뉴클레오타이드와 유사한 방식으로 대사되는 천연 뉴클레오타이드의 공지된 유사체를 함유하는 핵산을 포괄한다. 달리 표시되지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체(예를 들어, 축퇴성 코돈 치환) 및 상보성 서열 및 명확히 표시된 서열을 암시적으로 포괄한다. 구체적으로, 축퇴성 코돈 치환은 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 제3 위치가 혼합 염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환된 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다(Batzer 등, Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka 등, Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985; 및 Cassol 등, 1992; Rossolini 등, Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994). 아르기닌 및 류신에 대해, 제2 염기에서의 변형은 또한 보존적일 수 있다. 용어 핵산은 유전자, 유전자에 의해 암호화된 cDNA 및 mRNA와 상호교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 폴리뉴클레오타이드는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있는 임의의 폴리리보뉴클레오타이드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오타이드로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드는 단일 가닥 및 이중 가닥 DNA, 단일 가닥 영역과 이중 가닥 영역의 혼합인 DNA, 단일 가닥 및 이중 가닥 RNA, 및 단일 가닥 영역과 이중 가닥 영역의 혼합인 RNA, 단일 가닥 또는 보다 전형적으로 이중 가닥 또는 단일 가닥 영역과 이중 가닥 영역의 혼합일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하는 하이브리드 분자로 이루어질 수 있다. 또한, 폴리뉴클레오타이드는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중 가닥 영역으로 이루어질 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 또한 안정성을 위해 또는 다른 이유로 변형된 하나 이상의 변형된 염기 또는 DNA 또는 RNA 골격을 함유할 수 있다. "변형된" 염기는 예를 들어 트리틸화 염기 및 드문 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. 다양한 변형이 DNA 및 RNA에 이루어질 수 있고, 이에 따라 "폴리뉴클레오타이드"는 화학적으로, 효소로 또는 대사상 변형된 형태를 포괄한다.
핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓일 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된다. 전사 조절 서열과 관련하여, 작동 가능하게 연결됨은 연결된 DNA 서열이 인접하고, 2개의 단백질 암호화 영역을 연결할 필요가 있을 때, 인접하고 리딩 프레임에 있다는 것을 의미한다. 스위치 서열에 대해, 작동 가능하게 연결됨은 서열이 스위치 재조합을 가져올 수 있다는 것을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은, "비경구 투여", "비경구로 투여된다" 및 다른 문법상 균등한 구절은 장용 및 국소 투여가 아닌 투여 방식, 보통 주사에 의한 것을 지칭하고, 제한 없이, 정맥내, 비강내, 눈내, 근육내, 동맥내, 초내, 낭내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관경유, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내, 경막외, 대뇌내, 두개내, 경동맥내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "환자"는 예방적 치료 또는 치료학적 치료를 받는 인간 및 다른 포유류 대상체를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "PD-1 길항제"는 PD-1 신호전달 경로를 저해하거나 그렇지 않으면 세포(예를 들어, 면역 세포)에서 PD-1 기능을 저해하는 임의의 화학 화합물 또는 생물학적 분자를 지칭한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 차단하고/하거나, PD-1에 대한 PD-L2의 결합을 차단한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 특이적으로 결합한다.
용어 "동일성 퍼센트"는 2개 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열의 맥락에서 하기에 기재된 서열 비교 알고리즘(예를 들어, BLASTP 및 BLASTN 또는 당업자에게 이용 가능한 다른 알고리즘) 중 하나를 사용하여 또는 육안 검사에 의해 측정될 때 최대 관련도에 대해 비교되고 정렬될 때 동일한 규정된 백분율의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기를 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 적용에 따라, "동일성 퍼센트"는 예를 들어 기능적 도메인에 걸쳐 비교되는 서열의 영역에 걸쳐 존재하거나, 대안적으로 비교되는 2개의 서열의 전장에 걸쳐 존재할 수 있다. 서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 시험 서열이 비교되는 기준 서열로 작용한다. 서열 비교 알고리즘을 사용할 때, 시험 서열 및 기준 서열은 컴퓨터로 입력되고, 필요한 경우 하위서열 좌표가 지정되고, 서열 알고리즘 프로그램 매개변수가 지정된다. 이후, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 매개변수에 기초하여 기준 서열에 대하여 시험 서열(들)에 대한 서열 동일성 퍼센트를 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은 예를 들어 Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)의 국소 상동성 알고리즘에 의해, Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)의 유사성 조사 방법에 의해, 이들 알고리즘(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group(위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575)에서의 GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFASTA)의 컴퓨터 실행에 의해, 또는 육안 검사에 의해(일반적으로 하기 Ausubel 등의 문헌 참조) 수행될 수 있다.
서열 동일성 및 서열 유사성 퍼센트를 결정하기에 적합한 알고리즘의 하나의 예는 Altschul 등, J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990)에 기재된 BLAST 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 미국 국립 생물공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information) 웹사이트를 통해 공중에게 이용 가능하다.
일반적으로 본원에 사용된 바와 같은, "약학적으로 허용 가능한"은 충분한 의학적 판단의 범위 내에 인간 및 동물의 조직, 장기 및/또는 체액과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 합당한 이익/위험 비에 맞는 화합물, 재료, 조성물 및/또는 투여형을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, "약학적으로 허용 가능한 담체"는 생리학적으로 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 지칭하고 이를 포함한다. 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 염, 예를 들어 산 부가 염 또는 염기 부가 염을 포함할 수 있다(예를 들어, Berge 등 (1977) J Pharm Sci 66:1-19 참조).
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하도록 상호교환적으로 사용된다. 상기 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공 화학 모방체인 아미노산 중합체, 및 자연 발생 아미노산 중합체 및 비자연 발생 아미노산 중합체에 적용된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "예방하는"은 병태와 관련하여 사용될 때 상기 조성물을 받지 않는 대상체에 비해 대상체에서의 의학 병태의 증상의 빈도를 감소시키거나 이의 발생을 지연시키는 조성물의 투여를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "정제된" 또는 "단리된"은 본원에 기재된 임의의 단백질(항체 또는 단편)에 적용되면서 천연에서 폴리펩타이드를 수반하는 성분(예를 들어, 단백질 또는 다른 자연-발생 생물학적 분자 또는 유기 분자)으로부터 분리되거나 정제된 폴리펩타이드, 예를 들어 단백질을 발현하는 원핵생물에서의 다른 단백질, 지질 및 핵산을 지칭한다. 전형적으로, 폴리펩타이드는 샘플에서 총 단백질의 적어도 60 (예를 들어, 적어도 65, 70, 75, 80, 85, 90, 92, 95, 97 또는 99) 중량%를 구성할 때 정제된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "예정 세포사 단백질 1" 또는 "PD-1"은 CD28 패밀리에 속하는 면역-저해 수용체인 예정 세포사 단백질 1 폴리펩타이드를 지칭하고, 인간에서 PDCD1 유전자에 의해 암호화된다. PD-1에 대한 대안적인 명칭 또는 동의어는 PDCD1, PD1, CD279 및 SLEB2를 포함한다. PD-1은 생체내 이전에 활성화된 T 세포, B 세포 및 골수성 세포에서 주로 발현되고, PD-L1 및 PD-L2인 2개의 리간드에 결합한다. 용어 "PD-1"은 본원에 사용된 바대로 인간 PD-1(hPD-1), hPD-1의 변이체, 아이소폼 및 종 동족체, 및 hPD-1과 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다. 완전한 hPD-1 서열은 GenBank 수탁 번호 AAC51773 하에 발견될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "예정 사멸 리간드-1" 또는 "PD-L1"은 PD-1에 대한 결합 시 T 세포 활성화 및 사이토카인 분비를 하향조절하는 PD-1에 대한 2개의 세포 표면 당단백질 리간드 중 하나이다(다른 것은 PD-L2임). PD-L1에 대한 대안적인 명칭 또는 동의어는 PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 및 B7-H를 포함한다. 용어 "PD-L1"은 본원에 사용된 바대로 인간 PD-L1(hPD-L1), hPD-L1의 변이체, 아이소폼 및 종 동족체, 및 hPD-L1과 적어도 하나의 공통 에피토프를 갖는 유사체를 포함한다. 완전한 hPD-L1 서열은 GenBank 수탁 번호 Q9NZQ7 하에 발견될 수 있다.
PD-1은 TCR 신호를 음성으로 조절하는 면역-저해 단백질로 공지되어 있다(Ishida, Y. 등 (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C. 등 (Epub 2006 Dec. 29) Immunol. Immunother. 56(5):739-745). PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용은 T-세포 수용체 매개된 증식을 감소시킬 수 있는 면역 관문으로 작용할 수 있다(Dong 등 (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank 등 (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi 등 (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). 면역 억제는 PD-1과 PD-L1 또는 PD-L2와의 국소 상호작용을 저해함으로써 역전될 수 있고, 그 효과는 PD-1과 PD-L2와의 상호작용이 또한 차단될 때 상가적이다(Iwai 등 (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown 등 (2003) J. Immunol. 170:1257-66).
여러 암에 대해, 종양 생존 및 증식은 종양-매개된 면역 관문 조절에 의해 지속된다. 이 조절은 항암 면역계 기능을 파괴할 수 있다. 예를 들어, 최근의 연구는 종양 세포에 의한 면역 관문 수용체 리간드, 예컨대 PD-L1 또는 PD-L2의 발현이 종양 미세환경에서 면역계 활성을 하향조절하고 암 면역 회피를 촉진할 수 있다는 것을 나타냈다. 특히 T 세포를 억제함으로써. PD-L1은 다양한 인간 암에 의해 풍부하게 발현된다(Dong 등, (2002) Nat Med 8:787-789). PD-1인 PD-L1에 대한 수용체는 림프구(예를 들어, 활성화된 T 세포) 상에 발현되고, 특히 T 세포를 억제함으로써 면역계의 하향조절 및 자가-관용성의 촉진에 보통 관여된다. 그러나, T 세포 상에서 발현된 PD-1 수용체가 종양 세포 상의 동족 PD-L1 리간드에 결합할 때, 생성된 T 세포 억제는 종양에 대한 손상된 면역 반응(예를 들어, 종양 침윤 림프구의 감소 또는 암 세포에 의한 면역 회피의 확립)에 기여한다.
예를 들어, 난소암, 신장암, 결장직장암, 췌장암, 간암 및 흑색종의 큰 샘플 세트에서, PD-L1 발현이 후속하는 치료와 무관하게 불량한 예후 및 전체 생존율 감소와 상관되는 것으로 나타났다(예를 들어, Dong 등, (2002) Nat Med 8(8):793-800; Yang 등, (2008) Invest Ophthalmol Vis Sci 49(6):2518-2525; Ghebeh 등, (2006) Neoplasia 8:190-198; Hamanishi 등, (2007) Proc Nat Acad Sci USA 104:3360-3365; Thompson 등, (2006) Clin Genitourin Cancer 5:206-211; Nomi 등, (2005) Clin Cancer Res 11:2947-2953; Inman 등, (2007) Cancer 109:1499-1505; Shimauchi 등, (2007) Int J Cancer 121:2585-2590; Gao 등, (2009) Clin Cancer Res 15:971-979; Nakanishi 등, (2007) Cancer Immunol Immunother 56:1173-1182; Hino 등, (2010) Cancer 116(7):1757-1766 참조). 유사하게, 종양 림프구 상의 PD-1 발현은 유방암(Kitano 등, (2017) ESMO Open 2(2):e000150) 및 흑색종(Kleffel 등, (2015) Cell 162(6):1242-1256)에서 기능이상적 T 세포를 마킹하는 것으로 발견되었다. PD-1 길항제, 예컨대 PD-1/PD-L1/PD-L2 신호전달 축의 기능에 영향을 미치고/미치거나, PD-1과 PD-L1 및/또는 PD-L2 사이의 상호작용을 파괴하는 것이 예를 들어 개발되었고, 면역 세포-종양 세포 상호작용의 조절을 통해 작용하는 신규의 항종양 저해제 종류를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "재배열된"은 V 분절이 각각 본질적으로 완전한 VH 또는 VL 도메인을 암호화하는 구성에서 D-J 또는 J 분절에 바로 인접하여 위치한 중쇄 면역글로불린 또는 경쇄 면역글로불린 좌위의 구성을 지칭한다. 재배열된 면역글로불린 유전자 좌위는 생식선 DNA와 비교하여 확인될 수 있고, 재배열된 좌위는 적어도 하나의 재조합된 헵타머/노나머 상동성 요소를 가질 것이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "재조합 숙주 세포"(또는 단순히 "숙주 세포")는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 지칭하도록 의도된다. 이러한 용어가 특정 대상체 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손을 지칭하도록 의도되는 것으로 이해되어야 한다. 소정의 변형이 돌연변이 또는 환경 영향으로 인해 계속하여 생성하여 일어날 수 있으므로, 이러한 자손은 사실 모 세포와 동일하지 않을 수 있고, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 여전히 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "재조합 인간 항체"는 (a) 인간 면역글로불린 유전자에 대한 형질전환 또는 염색체이식인 동물(예를 들어, 마우스)로부터 단리된 항체 또는 이로부터 제조된 하이브리도마, (b) 예를 들어 트랜스펙토마로부터 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터 단리된 항체, (c) 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (d) 다른 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나 발현되거나 생성되거나 단리된 항체와 같은 재조합 수단에 의해 제조되거나 발현되거나 생성되거나 단리된 모든 인간 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 생식선 유전자에 의해 암호화된 특정한 인간 생식선 면역글로불린 서열을 사용하지만, 예를 들어 항체 성숙 동안 생기는 후속하는 재배열 및 돌연변이를 포함하는 가변 영역 및 불변 영역을 포함한다. 당해 분야에 공지된 것처럼(예를 들어, Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9):1117-1125 참조), 가변 영역은 외래 항원에 특이적인 항체를 형성하기 위해 재배열하는 다양한 유전자에 의해 암호화된 항원 결합 도메인을 함유한다. 가변 영역은 재배열 이외에 외래 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시키도록 다수의 단일 아미노산 변화(체세포 돌연변이 또는 과돌연변이라고도 칭함)에 의해 추가로 변형될 수 있다. 불변 영역은 항원에 대한 추가의 반응(즉, 아이소타입 스위치)을 변화시킬 것이다. 따라서, 항원에 대한 반응에서 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩타이드를 암호화하는 재배열되고 체세포 돌연변이된 핵산 분자는 원래의 핵산 분자와 서열 동일성을 갖지 않을 수 있고, 대신에 실질적으로 동일하거나 유사할 것이다(즉, 적어도 80%의 동일성을 가짐).
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "기준 항체"("기준 mAb"와 상호교환적으로 사용됨) 또는 "기준 항원-결합 단백질"은 IL-27에서 특이적 에피토프에 결합하고 그 자체와 하나 이상의 별개의 항체 사이의 관계를 확립하도록 사용되는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하고, 여기서 관계는 IL-27에서 동일한 에피토프에 대한 기준 항체 및 하나 이상의 별개의 항체의 결합이다. 본원에 사용된 바와 같은, 상기 용어는 경쟁자로서 시험 또는 검정, 예컨대 본원에 기재된 것(예를 들어, 경쟁적 결합 검정)에서 유용한 항-IL-27 항체를 함축하고, 여기서 검정은 동일한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 별개의 항체의 발견, 확인 또는 발생에 유용하다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "특이적 결합", "선택적 결합", "선택적으로 결합한다" 및 "특이적으로 결합한다"는 미리 결정된 항원 상의 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다. 전형적으로, 항체는 분석물질로서의 재조합 인간 IL-27 및 리간드로서의 항체를 사용하여 BIACORE 2000 장치에서 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정될 때 대략 10-6 M 미만, 예컨대 대략 10-7, 10-8 M, 10-9 M 또는 10-10 M 미만 또는 심지어 이것 이하의 평형 해리 상수(KD)로 결합하고, 미리 결정된 항원 또는 밀접히 관련된 항원 이외의 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카세인)에 대한 결합에 대해 이의 친화도보다 적어도 2배 더 높은 친화도로 미리 결정된 항원에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 분석물질로서 재조합 인간 IL-27 및 리간드로서 항체를 사용하여 Biacore 2000 기기에서 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정될 때 대략 100 nM(10-7 M) 미만, 선택적으로 대략 50 nM(5 x 10-8 M) 미만, 선택적으로 대략 15 nM(1.5 x 10-8 M) 미만, 선택적으로 대략 10 nM(10-8 M) 미만, 선택적으로 대략 5 nM(5 x 10-9 M) 미만, 선택적으로 대략 1 nM(10-9 M) 미만, 선택적으로 대략 0.1 nM(10-10 M) 미만, 선택적으로 대략 0.01 nM(10-11 M) 미만, 또는 심지어 더 적은 평형 해리 상수(KD)로 IL-27에 특이적으로 결합하는 항체, 여기서 미리결정된 항원에 대한 결합은 미리결정된 항원 또는 밀접히 관련된 항원 이외의 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카세인)에 대한 결합에 대해 항체의 친화도의 적어도 2배 초과인 친화도로 발생한다. 문구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 본원에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 상호교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "STAT1 인산화"는 인간에서 STAT1 유전자에 의해 암호화된 전사 인자인 신호 유도자 및 전사 활성제 1(STAT1) 폴리펩타이드의 인산화를 지칭한다. STAT 분자는 전사 인자로서 작용하도록 핵으로 전좌하는 동종이합체 또는 이종이합체를 형성함으로써 활성화 및 이합체화를 야기하는 수용체 연관된 키나제에 의해 인산화된다. STAT1은 IL-27을 포함하는 여러 리간드를 통해 신호전달에 반응하여 활성화(즉, 인산화)될 수 있다. IL-27R을 통한 IL-27 신호전달은 STAT1을 인산화(pSTAT1)시킨다. STAT1은 세포의 생존, 생존능력 또는 병원균 반응에 관여된 유전자 발현에서 중요한 역할을 갖는다. IL-27 신호전달의 결과로서 STAT1 인산화를 결정하는 방법은 인산화된 STAT1을 특이적으로 인식하는 항체로 표지된 세포의 유세포분석법 분석을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다(예를 들어, Tochizawa 등, (2006) J Immunol Methods 313(1-2):29-37 참조).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "STAT3 인산화"는 인간에서 STAT3 유전자에 의해 암호화된 전사 인자인 신호 유도자 및 전사 활성제 3(STAT3) 폴리펩타이드의 인산화를 지칭한다. STAT3은 세포 자극에 반응하여 다양한 유전자의 발현을 매개하고, 이에 따라 세포 성장 및 아폽토시스와 같은 많은 세포 과정에서 중요한 역할을 한다. IL-27 신호전달의 결과로서 STAT3 인산화를 결정하는 방법은 인산화된 STAT3을 특이적으로 인식하는 항체로 표지된 세포 또는 세포 추출물의 분석을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다(예를 들어, Fursov 등, (2011) Assay Drug Dev Technol 9(4):420-429 참조).
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "스위치 서열"은 스위치 재조합을 담당하는 DNA 서열을 지칭한다. "스위치 공여자" 서열, 전형적으로 μ 스위치 영역은 스위치 재조합 동안 결실되는 작제물 영역의 5'(즉, 상류)일 것이다. "스위치 억셉터" 영역은 결실되는 작제물 영역과 대체 불변 영역(예를 들어, γ, ε 등) 사이일 것이다. 재조합이 항상 발생하는 특이적 부위가 없으므로, 최종 유전자 서열은 전형적으로 작제물로부터 예측 가능하지 않을 것이다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 방법 및 조성물은 면역 장애를 갖는 대상체를 치료하도록 사용될 수 있다. 용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비포유류, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
핵산에 대해, 용어 "실질적인 상동성"은 2개의 핵산 또는 이의 지정된 서열이 최적으로 정렬되고 비교될 때 뉴클레오타이드의 적어도 약 80%, 보통 뉴클레오타이드의 적어도 약 90% 내지 95%, 및 더 바람직하게는 적어도 약 98% 내지 99.5%에서 적절한 뉴클레오타이드 삽입 또는 결실과 동일하다는 것을 나타낸다. 대안적으로, 분절이 선택적 혼성화 조건 하에 가닥의 보체에 혼성화할 때 실질적인 상동성이 존재한다.
2개 서열 사이의 동일성 퍼센트는 2개의 서열의 최적 정렬에 대해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각각의 갭의 길이를 고려하여 서열이 공유하는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 상동성 % = 동일한 위치의 수 / 위치의 총 수 x 100). 2개의 서열 사이의 서열의 비교 및 동일성 퍼센트의 결정은 하기 비제한적인 예에 기재된 것처럼 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다.
2개 뉴클레오타이드 서열 사이의 동일성 퍼센트는 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 이용 가능)에서 GAP 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다. 2개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이의 동일성 퍼센트는 또한 PAM120 가중 잔기 표, 12의 갭 길이 패널티 및 4의 갭 패널티를 사용하여 ALIGN 프로그램(버전 2.0)으로 포함된 E. Meyers 및 W. Miller (CABIOS, 4:11-17 (1989))의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 2개의 아미노산 서열 사이의 동일성 퍼센트는 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지(http://www.gcg.com에서 이용 가능)에서 GAP 프로그램으로 포함된 Needleman 및 Wunsch (J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)) 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
본 개시내용의 핵산 및 단백질 서열은 예를 들어 관련된 서열을 확인하기 위해 공공 데이터베이스에 대한 조사를 수행하도록 "쿼리 서열"로서 추가로 사용될 수 있다. 이러한 조사는 Altschul, 등 (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 뉴클레오타이드 조사는 본 발명의 핵산 분자에 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램, 점수 = 100, 워드길이 = 12로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 조사는 본 발명의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, 점수 = 50, 워드길이 = 3으로 수행될 수 있다. 비교 목적을 위한 갭이 있는 정렬을 얻기 위해, Gapped BLAST는 Altschul 등, (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402에 기재된 바대로 사용될 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 사용할 때, 각각의 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수를 사용할 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov.를 참조한다.
핵산은 전체 세포, 세포 용해물 또는 부분적으로 정제되거나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 알칼리/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 당해 분야에 널리 공지된 다른 것들을 포함하는 표준 기법에 의해 다른 세포 성분 또는 다른 오염물질, 예를 들어 다른 세포 핵산 또는 단백질로부터 정제될 때 "단리"되거나 "실질적으로 순수하게" 된다. F. Ausubel, 등, ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)을 참조한다.
본 개시내용의 핵산 조성물은 cDNA, 게놈 또는 이의 혼합물로부터 대개 자연적 서열(변형된 제한 부위 등을 제외)에 있으면서 유전자 서열을 제공하기 위한 표준 기법에 따라 돌연변이될 수 있다. 암호화 서열에 대해, 이 돌연변이는 원하는 경우 아미노산 서열에 영향을 미칠 수 있다. 특히, 자연적 V, D, J, 불변, 스위치에 실질적으로 상동성이거나 이로부터 유래된 DNA 서열 및 본원에 기재된 것과 같은 다른 서열이 고려된다(여기서, "유래된"은 서열이 다른 서열로부터 동일하거나 변형된다는 것을 나타냄).
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "STING"(대안적으로 TMEM173)은 직접적인 세포기질 DNA 센서 및 어댑터 단백질 둘 모두로서 작용하는 단백질인 인터페론 유전자의 자극제를 지칭한다. 인간에서, STING은 TMEM173 유전자에 의해 암호화된다. STING은 선천성 면역력에서 중요한 역할을 한다. STING은 세포가 세포내 병원균, 예컨대 바이러스, 마이코박테리아 및 세포내 기생충으로 감염될 때 I형 인터페론 생성을 유도한다. STING에 의해 매개된 I형 인터페론은 이것 및 근처의 세포를 분비하는 동일한 세포에 결합함으로써 국소 감염으로부터 감염된 세포 및 근처의 세포를 보호한다. STING에 예시적인 아미노산 서열은 수탁 번호 NP_001288667 하에 NCBI Genbank 데이터염기에 의해 제공된다.
용어 "T 세포"는 세포 표면 상의 T 세포 수용체의 존재에 의해 다른 백혈구와 구별될 수 있는 백혈구의 유형을 지칭한다. 비제한적인 예로서 TH1, TH2, TH3, TH17, TH9 및 TFH 세포를 포함하는 T 헬퍼 세포(TH 세포 또는 CD4+ T 세포로 알려짐) 및 아형, 세포독성 T 세포(TC 세포, CD8+ T 세포, 세포독성 T 림프구, T-살해 세포, 살해 T 세포로 알려짐), 중앙 기억 T 세포(TCM 세포), 효과기 기억 T 세포(TEM 및 TEMRA 세포) 및 상주 기억 T 세포(TRM 세포)를 포함하는 기억 T 세포 및 아형, CD4+ FOXP3+ Treg 세포, CD4+FOXP3- Treg 세포, Tr1 세포, Th3 세포 및 Treg17 세포를 포함하는 조절 T 세포(Treg 세포 또는 억제자 T 세포로 알려짐) 및 아형, 자연 살해 T 세포(NKT 세포로 알려짐), 점막 불변 T 세포(MAIT), 및 Vγ9/Vδ2 T 세포를 포함하는 감마 델타 T 세포(γδ T 세포)를 포함하는 여러 T 세포 하위집단이 존재한다. 임의의 하나 이상의 전술된 또는 언급되지 않은 T 세포는 본 발명의 사용 방법을 위한 표적 세포 유형일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "T 세포-매개된 반응"은 비제한적인 예로서 효과기 T 세포(예를 들어, CD8+ 세포) 및 헬퍼 T 세포(예를 들어, CD4+ 세포)를 포함하는 T 세포에 의해 매개된 임의의 반응을 지칭한다. T 세포 매개된 반응은 예를 들어 T 세포 세포독성 및 증식을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "치료학적 유효량" 또는 "치료학적 유효 용량" 또는 본원에 사용된 유사한 용어는 원하는 생물학적 반응 또는 의학적 반응(예를 들어, 암의 하나 이상의 증상의 개선)을 유도하는 물질(예를 들어, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 양을 의미하도록 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "TAM 수용체"는 TAM 수용체 단백질 티로신 키나제(TYRO3, AXL 및 MER)를 지칭한다. TAM 수용체는 면역계 항상성의 조절에 관여된다. 암 환경에서, TAM 수용체는 이중 조절 역할을 가져 종양 발생의 개시 및 진행 및 동시에 다양한 면역 세포의 연관된 항종양 반응을 제어한다. TAM 수용체의 추가의 설명은 Paolino 및 Penninger (2016) Cancers 8(97): doi:10.3390/cancers8100097에서 발견된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "TAM 수용체 저해제" 또는 "TAM 저해제"는 TAM 수용체의 기능 또는 활성을 저해하거나 차단하거나 감소시키는 물질을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "TIGIT" 또는 "Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T-세포 면역수용체"는, 달리 표시되지 않는 한, 포유류, 예컨대 영장류(예를 들어, 인간) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함하는 임의의 척추동물 원천으로부터의 임의의 자연적 TIGIT를 지칭한다. TIGIT는 DKFZp667A205, FLJ39873, V-set 및 면역글로불린 도메인-함유 단백질 9, V-set 및 막관통 도메인-함유 단백질 3, VSIG9, VSTM3 및 WUCAM으로 당해 분야에 또한 공지되어 있다. 상기 용어는 또한 TIGIT의 자연 발생 변이체, 예를 들어 스플라이스 변이체 또는 대립형질 변이체를 포괄한다. 예시적인 인간 TIGIT의 아미노산 서열은 UniProt 수탁 번호 Q495A1 하에 발견될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료한다", "치료하는" 및 "치료"는 본원에 기재된 바대로 치료학적 조치 또는 예방적 조치를 지칭한다. "치료"의 방법은 장애 또는 재발하는 장애를 예방하거나 치유하거나 지연시키거나 이의 중증도를 감소시키거나 이의 하나 이상의 증상을 완화하기 위해, 또는 이러한 치료의 부재 하에 예상되는 것을 넘어 대상체의 생존을 연장하도록 이러한 치료를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 특정 항원에 대한 향상된 면역 반응을 필요로 하는 대상체 또는 이러한 장애를 최종적으로 획득할 수 있는 대상체에 대한 본 개시내용의 인간 항체의 투여를 사용한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "종양 미세환경"(대안적으로 "암 미세환경"; TME로 축약)은 둘러싼 혈관, 및 비제한적인 예로서 면역 세포, 섬유아세포, 골수-유래 염증성 세포 및 림프구를 포함하는 비암성 세포를 비롯하여 종양 또는 신생물이 존재하는 세포 환경 또는 환경들을 지칭한다. 신호전달 분자 및 세포외 기질은 또한 TME를 포함한다. 종양 및 둘러싼 미세환경은 밀접히 관련되고, 끊임없이 상호작용한다. 종양은 세포외 신호를 방출하고, 종양 혈관신생을 촉진하고, 말초 면역 관용성을 유도함으로써 미세환경에 영향을 미칠 수 있는 한편, 미세환경에서의 면역 세포는 종양 세포의 성장 및 진화에 영향을 미칠 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "비재배열된" 또는 "생식선 구성"은 V 분절을 지칭하고, V 분절이 D 또는 J 분절에 바로 인접하도록 조합되지 않는 구성을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은, 용어 "벡터"는 핵산 분자가 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 그 핵산 분자를 지칭하도록 의도된다. 하나의 유형의 벡터는 추가 DNA 분절이 결찰될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 지칭하는 "플라스미드"이다. 다른 유형의 벡터는 추가 DNA 분절이 바이러스 게놈에 결찰될 수 있는 바이러스 벡터이다. 소정의 벡터는 이것이 도입된 숙주 세포(예를 들어, 박테리아 복제 기원을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터)에서 자율 복제할 수 있다. 다른 벡터(예를 들어, 비에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포로의 도입 시 숙주 세포의 게놈으로 통합될 수 있어서, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 소정의 벡터는 이것이 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터"(또는 단순히 "발현 벡터")라 칭해진다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에서 유용한 발현 벡터는 대개 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, 플라스미드가 가장 흔히 사용된 벡터 형태이므로, "플라스미드" 및 "벡터"는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 동등한 기능을 제공하는 바이러스 벡터(예를 들어, 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스)와 같은 발현 벡터의 다른 형태를 포함하도록 의도된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 분야의 당업자가 보통 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 바람직한 방법 및 재료는 하기에 기재되어 있지만, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 재료는 또한 현재 개시된 방법 및 조성물의 실행 또는 시험에서 사용될 수 있다. 본원에 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참고로 포함된다.
도 1은 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 대한 친화도 데이터를 제공하는 표이다. 친화도 측정은 ForteBio 및 Meso Scale Discovery 방법을 사용하여 수행되었다.
도 2는 ELISA에 의해 측정된 바와 같은 플레이트 결합된 재조합 IL-27에 대한 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체의 결합을 도시하는 그래프이다.
도 3a 내지 도 3e는 각각 막대 차트, 2개의 그래프, 막대 차트 및 그래프이다. 도 3a는 유세포분석법에 의해 측정된 바와 같은 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 의한 인간 전혈에서의 STAT1의 IL-27-매개된 인산화의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 3b는 유세포분석법에 의해 측정된 바와 같은 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 의한 인간 PBMC에서의 STAT1의 IL-27-매개된 인산화의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 3c는 유세포분석법에 의해 측정된 바와 같은 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 의한 U937 세포에서의 STAT1의 IL-27-매개된 인산화의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 3d는 유세포분석법에 의해 측정된 바와 같은 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체에 의한 HUT-78 세포에서의 STAT1의 IL-27-매개된 인산화의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 3e는 SRF388이 인간 전혈 T 세포에서 IL-27-매개된 pSTAT1을 저해하는 그래프이다.
도 4는 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체의 농도의 범위에 의한 T 세포에서의 CD161 발현의 IL-27-매개된 저해의 역전을 도시하는 그래프이다. CD161 발현은 유세포분석법을 사용하여 결정되었다.
도 5a는 ELISA에 의해 측정된 바와 같은 인간 PBMC에서 TNFα의 PD-1-매개된 분비를 향상시키는 항-IL-27 항체의 정도를 도시하는 그래프이다. 도 5b는 ELISA에 의해 측정된 바와 같은 인간 PBMC에서 IL-6의 PD-1-매개된 분비를 향상시키는 항-IL-27 항체의 정도를 도시하는 그래프이다. 도 5c는 PD-1 봉쇄와 조합된 SRF388이 건강한 공여자 및 RCC를 갖는 환자로부터의 PBMC에서 사이토카인 생성을 증가시킨다는 것을 보여주는 점도표이다(약어: CBA = Cytometric Bead Array, IFNγ = 인터페론 감마, MSD = Meso Scale Discovery, PBMC = 말초 혈액 단핵 세포, PD-1 = 예정 사멸 수용체-1, RCC = 신장 세포 암종, TNFα = 종양 괴사 인자 알파). 도 5d는 IL-27이 PD-1 봉쇄 후 사이토카인 생성을 저해하고, SRF388과 조합되어 회복된다는 것을 보여준다(약어: Ctrl = 대조군, ns = 무의미, PBMC = 말초 혈액 단핵 세포, rhIL-27 = 재조합 인간 IL-27). 도 5e는 이러한 세포가 SRF388 항체, αPD-1 항체, 또는 SRF388 및 αPD-1 항체의 조합과 접촉될 때 다양한 표시된 유형의 세포에 대해 PBMC 배양에서 관찰된 사이토카인 유도(구체적으로, TNFα, IFNγ, IL-6 및 IL-17A)를 요약한다. 도 5f는 다양한 농도의 표시된 개별 항체(SRF405, SRF410, SRF411, SRF414, SRF416, SRF536, SRF543, SRF529, SRF381, SRF388 및 Ab7)의 U937(림프종) 세포에서의 pSTAT1 신호에 대한 영향을 보여준다. 도 5g는 다양한 농도의 이 개별 항체의 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)에서의 pSTAT1 신호에 대한 영향을 보여준다. 도 5h는 다양한 농도의 이 개별 항체의 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)에서의 CD161 신호에 대한 영향을 보여준다. 도 5i는 다양한 농도의 이 개별 항체(SRF414 배제)의 CD4 T 림프구(CD4 세포)에서의 PD-L1 신호에 대한 영향을 보여준다. 도 5j는 다양한 농도의 이 개별 항체(SRF529 배제)의 단핵구에서의 PD-L1 신호에 대한 영향을 보여준다. 도 5k는 다양한 농도의 이 개별 항체(SRF529 배제)의 단핵구에서의 TIM-3 신호에 대한 영향을 보여준다.
도 6a는 유세포분석법에 의해 결정된 바대로 항-IL-27 항체에 의한 인간 단핵구의 치료에 의한 PD-L1의 IL-27-매개된 발현의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 6b는 유세포분석법에 의해 결정된 바대로 EBI3 단량체에 특이적으로 결합하는 항-IL-27 항체의 농도의 범위에 의한 인간 단핵구의 치료에 의한 PD-L1의 IL-27-매개된 발현의 용량 의존적 저해를 도시하는 그래프이다. 도 6c는 유세포분석법에 의해 결정된 바대로 항-IL-27 항체에 의한 인간 단핵구의 치료에 의한 TIM3의 IL-27-매개된 발현의 저해를 도시하는 그래프이다. 도 6d는 유세포분석법에 의해 결정된 바대로 항-IL-27 항체에 의한 휴지 인간 T 세포의 치료에 의한 PD-L1의 IL-27-매개된 발현의 저해를 도시하는 그래프이다.
도 7a는 마우스로부터의 단리된 폐로부터의 결절의 시각 계수에 의해 결정된 바대로 표시된 바와 같은 항-IL27 항체(SRF388), 아이소타입 대조군 항체, αWSX-1 항체 또는 조합된 αPD-1 및 αCTLA-4 항체로 치료된 B16F10 종양-보유 마우스로부터의 표면 폐 B16F10 전이성 결절(폐 결절)의 수를 도시하는 점도표이다. 도 7b는 생물발광 영상화 분석에 의해 결정된 바대로 항-IL-27 항체(SRF388) 또는 아이소타입 대조군 항체로 치료된 마우스에서 생물발광 B16-Luc 종양의 성장 동력학을 도시하는 그래프를 제공한다. 도 7c는 표시된 바와 같은 항-IL27 항체(SRF388), 아이소타입 대조군 항체, αWSX-1 항체 또는 조합된 αPD-1 및 αCTLA-4 항체로 치료된 B16F10 종양-보유 마우스로부터 단리된 헤마톡실린 및 에오신으로 염색된 고정된 절편화된 폐 조직의 일련의 영상을 보여준다. 도 7d는 영상 분석 소프트웨어에 의해 결정된 바대로 표시된 바와 같은 항-IL27 항체(SRF388), 아이소타입 대조군 항체, αWSX-1 항체 또는 조합된 αPD-1 및 αCTLA-4 항체로 치료된 B16F10 종양-보유 마우스로부터 단리된 헤마톡실린 및 에오신으로 염색된 고정된 절편화된 폐 조직 B16F10 종양 조직의 총 조직 면적의 백분율로서 총 종양 면적을 도시하는 점도표이다. 표면 폐 전이 수 및 총 종양 면적의 유사한 감소가 IL-27RA(WSX-1) 매개된 항체 봉쇄 및 항-PD-1 + 항-CTLA-4 병용 치료로 관찰되었다.
도 8a는 IL-27 미니서클에 의한 치료 후에 IL-27을 과발현하는 마우스로부터 단리된 비장세포에서 1.0 log2 초과의 배수 변화의 발현 변화(검정 점)로 유전자의 마이크로어레이 데이터를 도시하는 산점도를 제공한다. 도 8b는 도 8a에서처럼 비장세포에서 표시된 바와 같은 선택 면역조절 유전자의 발현 수준을 도시하는 그래프를 제공한다. 도 8c는 인간 IL-27의 이소성 발현이 생체내 쥣과 T 세포에서 저해성 수용체 발현을 유도하고, SRF388이 IL-27 미니서클 치료 후 생체내 T 세포에서 저해성 수용체 발현을 감소시킨다는 것을 보여준다. 6주령 암컷 Balb/c 마우스는 빈 벡터(대조군) 또는 hIL-27 미니서클이 주사되었다. (상부 왼쪽 및 오른쪽 패널) PBMC 및 (하부 왼쪽 및 오른쪽 패널) 총 비장세포를 형질주입 후 5일에 수집하고, 세포를 염색하고, 유세포분석법에 의해 분석하였다. 표시된 마커의 발현은 CD4+ T 세포(상부 왼쪽 및 하부 왼쪽 패널) 및 CD8+ T 세포(상부 오른쪽 및 하부 오른쪽 패널)에서 분석되었다. FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석을 수행하였다. 도 8d는 SRF388이 쥣과 혈장에서 미니서클-유래 인간 IL-27의 검출을 저해한다는 것을 보여준다.
도 9는 선택 단일클론 항체 특성의 표로 된 요약을 제시한다.
도 10a는 서열 분배가 NT 넘버링을 반영하는 항체 서열의 차트를 제시한다. 도 10b는 서열 분배가 ImMunoGeneTics(IMGT) 넘버링을 반영하는 (도 10a의 서열 차트에 상응하는) 항체 서열의 차트를 제시한다. 도 10a 및 도 10b 둘 모두에서, CDR 서열에서의 강조된 아미노산은 생식선-암호화된 서열로부터의 돌연변이를 보여준다. 당업자에게 명확한 것처럼, CDR 서열, 프레임워크 서열 등의 결정을 포함하는 항체 넘버링은 도 10a 및 도 10b에 제시되고 본원에서 그 외에 사용된 NT 및 IMGT 넘버링 시스템을 통한 것을 포함하여 다수의 분야 인정된 방식으로 수행될 수 있다.
본 개시내용은 적어도 부분적으로 고친화도 및 특이성으로 인간 IL-27에 결합하는 항체 분자를 제공한다. 일 실시형태에서, IL-27에 결합하는 인간 항체가 본원에 개시된다. 용어 "IL-27" 및 "IL27"은 본원에 사용된 바와 같이 상호교환적으로 2개의 상이한 유전자에 의해 암호화된 2개의 구별되는 아단위로 이루어진 IL-27인 이종이합체성 사이토카인을 지칭한다: 엡스타인-바 바이러스-유도된 유전자 3(EBI3) 및 IL-27p28. IL-27은 조혈 세포 및 비조혈 세포에 대한 다양한 효과를 갖는 전염증성 특성 및 항염증성 특성 둘 모두를 갖는다.
따라서, 일 양태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하기 중 적어도 하나 이상을 나타낸다:
(i) 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합하는 특성;
(ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단하는 특성;
(iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는 특성;
(iv) 세포에서 CD161 발현의 IL-27 매개된 저해를 저해하거나 감소시키는 특성;
(v) 세포에서 IL-27 매개된 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시키는 특성;
(vi) 세포로부터의 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개된 분비를 유도하거나 향상시키는 특성; 및
(vii) (i) 내지 (vi)의 조합.
다른 양태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 IL-27 생물학적 활성 또는 IL-27 신호전달을 저해하거나 감소시키는 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
본 발명의 추가적인 양태는 항체 분자를 암호화하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 항체 분자를 제조하는 방법을 포함한다. 면역접합체, 다중특이적 또는 이중특이적 분자 및 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물이 또한 제공된다. 본원에 개시된 항-IL-27 항체 분자는 암성 또는 악성 장애, 예를 들어 고형 종양 및 액체 종양(예를 들어, 백혈병, 예를 들어 림프종, 예를 들어 AML), 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암), 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 흑색종, 고환암, 육종, 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 간암(예를 들어, 간세포 암종(HCC)), 결장직장암, 난소암, 뇌암(예를 들어, 다형성 교모세포종) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어 신장 투명 세포 암종)을 치료하고/하거나, 예방하고/하거나, 진단하도록 사용될 수 있다.
항-IL-27 항체 및 이의 항원-결합 단편
본 개시내용은 IL-27, 특히 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 항체 및 이의 항원 결합 부분을 제공한다. 표 12에 제시된 중쇄 및 경쇄 CDR 및 가변 서열을 포함하는 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본원에 제공된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 (i) 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합하는 특성; (ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단하는 특성; (iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는 특성; (iv) 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시키는 특성; (v) 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시키는 특성; (vi) 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개된 분비를 유도하거나 향상시키는 특성; 및 (vii) (i)과 (vi)의 조합 중 적어도 하나 이상을 나타낸다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합한다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 재조합 인간 IL-27 또는 쥣과 IL-27에 결합한다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포는 암 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시킨다(예를 들어, 세포에서의 CD161 발현의 저해를 완화하거나 경감시킴). 일부 실시형태에서, 세포는 면역 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시킨다. 일부 실시형태에서, PD-L1 발현은 저해되거나 감소한다. 일부 실시형태에서, TIM-3 발현은 저해되거나 감소한다. 일부 실시형태에서, PD-L1 발현 및 TIM-3 발현 둘 모두는 감소한다. 일부 실시형태에서, 세포는 면역 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시킨다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 TNFα이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IL-6이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 TNFα 및 IL-6이다. 일부 실시형태에서, 세포는 면역 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1 IgA2, IgD 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항체는 IgG1 항체 또는 IgG4 항체이다. 일부 실시형태에서, 항체는 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 EU 넘버링에 따라 치환 S228P, L235E, L235A 중 어느 하나, 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 전술된 실시형태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 IL-27 상의 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 전술된 실시형태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 IL-27을 포함하는 적어도 하나의 아미노산 잔기에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 IL-27 상의 에피토프의 돌연변이는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 전술된 실시형태 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 둘 모두에 대한 결합을 저해하거나 감소시키거나 차단한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 IL-27 상의 에피토프에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 에피토프는 표 12에 기재된 항체 분자에 의해 결합된 에피토프와 동일하거나 유사하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 51, 52 및 53에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 59, 60 및 61에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 73, 74 및 75에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 81, 82 및 83에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 95, 96 및 97에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 103, 104 및 105에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 117, 118 및 119에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 125, 126 및 127에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 139, 140 및 141에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 147, 148 및 149에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vi) 각각 서열번호 161, 162 및 163에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 169, 170 및 171에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vii) 각각 서열번호 185, 186 및 187에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 193, 194 및 195에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(viii) 각각 서열번호 207, 208 및 209에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 215, 216 및 217에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ix) 각각 서열번호 229, 230 및 231에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 237, 238 및 239에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(x) 각각 서열번호 251, 252 및 253에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 259, 260 및 261에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xi) 각각 서열번호 273, 274 및 275에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 281, 282 및 283에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xii) 각각 서열번호 295, 296 및 297에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 303, 304 및 305에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiii) 각각 서열번호 317, 318 및 319에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 325, 326 및 327에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiv) 각각 서열번호 339, 340 및 341에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 347, 348 및 349에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xv) 각각 서열번호 361, 362 및 363에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 369, 370 및 371에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(xvi) 각각 서열번호 383, 384 및 385에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 391, 392 및 393에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 161, 162 및 163에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 169, 170 및 171에 제시된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 54, 55 및 56에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 62, 63 및 64에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ii) 각각 서열번호 76, 77 및 78에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 84, 85 및 86에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iii) 각각 서열번호 98, 99 및 100에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 106, 107 및 108에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(iv) 각각 서열번호 120, 121 및 122에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 128, 129 및 130에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(v) 각각 서열번호 142, 143 및 144에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 150, 151 및 152에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vi) 각각 서열번호 164, 165 및 166에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 172, 173 및 174에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(vii) 각각 서열번호 188, 189 및 190에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 196, 197 및 198에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(viii) 각각 서열번호 210, 211 및 212에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 218, 219 및 220에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(ix) 각각 서열번호 232, 233 및 234에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 240, 241 및 242에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(x) 각각 서열번호 254, 255 및 256에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 262, 263 및 264에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xi) 각각 서열번호 276, 277 및 278에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 284, 285 및 286에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xii) 각각 서열번호 298, 299 및 300에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 306, 307 및 308에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiii) 각각 서열번호 320, 321 및 322에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 328, 329 및 330에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xiv) 각각 서열번호 342, 343 및 344에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 350, 351 및 352에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
(xv) 각각 서열번호 364, 365 및 366에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 372, 373 및 374에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
(xvi) 각각 서열번호 386, 387 및 388에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 394, 395 및 396에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 164, 165 및 166에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 172, 173 및 174에 제시된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SYSMS(서열번호 23), YISYDGGSAYYPDTVKG(서열번호 24) 및 HGDYDDDDAMDY(서열번호 25)이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 RASENIYSYLA(서열번호 26), NAETLTE(서열번호 27) 및 QHHYGTPLT(서열번호 28)이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 57, 79, 101, 123, 145, 167, 191, 213, 235, 257, 279, 301, 323, 345, 367 및 389로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 65, 87, 109, 131, 153, 175, 199, 221, 243, 265, 287, 309, 331, 353, 375 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 57 및 65;
(ii) 각각 서열번호 79 및 87;
(iii) 각각 서열번호 101 및 109;
(iv) 각각 서열번호 123 및 131;
(v) 각각 서열번호 145 및 153;
(vi) 각각 서열번호 167 및 175;
(vii) 각각 서열번호 191 및 199;
(viii) 각각 서열번호 213 및 221;
(ix) 각각 서열번호 235 및 243;
(x) 각각 서열번호 257 및 265;
(xi) 각각 서열번호 279 및 287;
(xii) 각각 서열번호 301 및 309;
(xiii) 각각 서열번호 323 및 331;
(xiv) 각각 서열번호 345 및 353;
(xv) 각각 서열번호 367 및 375; 및
(xvi) 각각 서열번호 389 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 중쇄 가변 영역은 서열번호 57, 79, 101, 123, 145, 167, 191, 213, 235, 257, 279, 301, 323, 345, 367 및 389로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄 가변 영역은 서열번호 65, 87, 109, 131, 153, 175, 199, 221, 243, 265, 287, 309, 331, 353, 375 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 57 및 65;
(ii) 각각 서열번호 79 및 87;
(iii) 각각 서열번호 101 및 109;
(iv) 각각 서열번호 123 및 131;
(v) 각각 서열번호 145 및 153;
(vi) 각각 서열번호 167 및 175;
(vii) 각각 서열번호 191 및 199;
(viii) 각각 서열번호 213 및 221;
(ix) 각각 서열번호 235 및 243;
(x) 각각 서열번호 257 및 265;
(xi) 각각 서열번호 279 및 287;
(xii) 각각 서열번호 301 및 309;
(xiii) 각각 서열번호 323 및 331;
(xiv) 각각 서열번호 345 및 353;
(xv) 각각 서열번호 367 및 375; 및
(xvi) 각각 서열번호 389 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 167 및 175에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 167 및 175에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 67, 89, 111, 133, 155, 177, 201, 223, 245, 267, 289, 311, 333, 355, 377 및 399로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 67, 89, 111, 133, 155, 177, 201, 223, 245, 267, 289, 311, 333, 355, 377 및 399로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 71, 93, 115, 137, 159, 181, 205, 227, 249, 271, 293, 315, 337, 359, 381 및 403으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄는 서열번호 71, 93, 115, 137, 159, 181, 205, 227, 249, 271, 293, 315, 337, 359, 381 및 403으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 67 및 69;
(ii) 각각 서열번호 89 및 91;
(iii) 각각 서열번호 111 및 113;
(iv) 각각 서열번호 133 및 135;
(v) 각각 서열번호 155 및 157;
(vi) 각각 서열번호 177 및 179;
(vii) 각각 서열번호 201 및 203;
(viii) 각각 서열번호 223 및 225;
(ix) 각각 서열번호 245 및 247;
(x) 각각 서열번호 267 및 269;
(xi) 각각 서열번호 289 및 291;
(xii) 각각 서열번호 311 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 333 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 355 및 357;
(xv) 각각 서열번호 377 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 399 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 67 및 69;
(ii) 각각 서열번호 89 및 91;
(iii) 각각 서열번호 111 및 113;
(iv) 각각 서열번호 133 및 135;
(v) 각각 서열번호 155 및 157;
(vi) 각각 서열번호 177 및 179;
(vii) 각각 서열번호 201 및 203;
(viii) 각각 서열번호 223 및 225;
(ix) 각각 서열번호 245 및 247;
(x) 각각 서열번호 267 및 269;
(xi) 각각 서열번호 289 및 291;
(xii) 각각 서열번호 311 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 333 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 355 및 357;
(xv) 각각 서열번호 377 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 399 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 71 및 69;
(ii) 각각 서열번호 93 및 91;
(iii) 각각 서열번호 115 및 113;
(iv) 각각 서열번호 137 및 135;
(v) 각각 서열번호 159 및 157;
(vi) 각각 서열번호 181 및 179;
(vii) 각각 서열번호 205 및 203;
(viii) 각각 서열번호 227 및 225;
(ix) 각각 서열번호 249 및 247;
(x) 각각 서열번호 271 및 269;
(xi) 각각 서열번호 293 및 291;
(xii) 각각 서열번호 315 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 337 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 359 및 357;
(xv) 각각 서열번호 381 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 403 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
(i) 각각 서열번호 71 및 69;
(ii) 각각 서열번호 93 및 91;
(iii) 각각 서열번호 115 및 113;
(iv) 각각 서열번호 137 및 135;
(v) 각각 서열번호 159 및 157;
(vi) 각각 서열번호 181 및 179;
(vii) 각각 서열번호 205 및 203;
(viii) 각각 서열번호 227 및 225;
(ix) 각각 서열번호 249 및 247;
(x) 각각 서열번호 271 및 269;
(xi) 각각 서열번호 293 및 291;
(xii) 각각 서열번호 315 및 313;
(xiii) 각각 서열번호 337 및 335;
(xiv) 각각 서열번호 359 및 357;
(xv) 각각 서열번호 381 및 379; 및
(xvi) 각각 서열번호 403 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 177 및 179에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 177 및 179에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 181 및 179에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 181 및 179에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함한다.
항-IL-27 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제조하는 방법
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 임의의 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제조하는 방법을 특징으로 한다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항체를 제조하는 방법은 대상체(예를 들어, 비인간 포유류)를 적절한 면역원으로 면역화하는 단계를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 임의의 항체를 생성하기에 적합한 면역원은 본원에 기재되어 있다. 예를 들어, IL-27에 결합하는 항체를 생성하기 위해, 당업자는 적합한 대상체(예를 들어, 비인간 포유류, 예컨대 래트, 마우스, 게르빌루스쥐, 햄스터, 개, 고양이, 돼지, 염소, 말 또는 비인간 영장류)를 IL-27로 면역화할 수 있다. 일부 실시형태에서, 서열번호 97에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 전장 인간 IL-27 EBI3 단량체 폴리펩타이드는 면역원으로서 사용된다. 일부 실시형태에서, 서열번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 전장 인간 IL-27p28 단량체 폴리펩타이드는 면역원으로서 사용된다.
적합한 대상체(예를 들어, 비인간 포유류)는 포유류에 의한 항체의 생성을 유도하기에 충분한 여러 횟수의 후속하는 부스터 면역화와 함께 적절한 항원으로 면역화될 수 있다. 면역원은 아쥬반트와 대상체(예를 들어, 비인간 포유류)에게 투여될 수 있다. 대상체에서 항체를 생산하는 데 유용한 아쥬반트는 단백질 아쥬반트; 박테리아 아쥬반트, 예를 들어 전체 박테리아(BCG, 코리네박테리아 파르붐 또는 살모넬라 민네소타) 및 박테리아 성분, 예를 들어 세포벽 골격, 트레할로스 디마이콜레이트, 모노포스포릴 지질 A, 튜버클 바실러스의 메탄올 추출성 잔기(MER: methanol extractable residue), 완전 또는 불완전 프로인드(Freund) 아쥬반트; 바이러스 아쥬반트; 화학 아쥬반트, 예를 들어 수산화알루미늄 및 요오도아세테이트 및 콜레스테릴 헤미숙시네이트를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 면역 반응을 유도하는 방법에 사용될 수 있는 다른 아쥬반트는 예를 들어 콜레라 독소 및 파라폭스바이러스 단백질을 포함한다. 또한, Bieg 등 (1999) Autoimmunity 31(1):15-24를 참조한다. 또한, 예를 들어 Lodmell 등 (2000) Vaccine 18:1059-1066; Johnson 등 (1999) J Med Chem 42:4640-4649; Baldridge 등 (1999) Methods 19:103-107; 및 Gupta 등 (1995) Vaccine 13(14): 1263-1276을 참조한다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 면역원에 결합하는 단일클론 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주를 생산하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 실험실 마우스와 같은 적합한 포유류는 상기에 기재된 바대로 IL-27 폴리펩타이드로 면역화된다. 면역화된 포유류의 항체-생산 세포(예를 들어, 비장의 B 세포)는 면역원의 적어도 하나의 부스터 면역화 후 2일 내지 4일에 단리되고 이후 적합한 골수종 세포주의 세포와의 융합 전에 배양물에서 짧게 성장할 수 있다. 세포는 예를 들어 백시니아 바이러스 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 융합 프로모터의 존재 하에 융합될 수 있다. 융합에서 얻은 하이브리드 세포는 클로닝되고, 원하는 항체를 분비하는 세포 클론이 선택된다. 예를 들어, 적합한 면역원으로 면역화된 Balb/c 마우스의 비장 세포는 골수종 세포주 PAI 또는 골수종 세포주 Sp2/0-Ag 14의 세포와 융합될 수 있다. 융합 후에, 세포는 정상 골수종 세포가 원하는 하이브리도마 세포를 과성장시키는 것을 막도록 규칙적인 간격으로 선택 배지, 예를 들어 HAT 배지가 보충된 적합한 배양 배지에서 팽창한다. 이후, 얻은 하이브리드 세포는 원하는 항체, 예를 들어 인간 IL-27에 결합하는 항체의 분비를 위해 스크리닝되고, 일부 실시형태에서, 당업자는 예를 들어 미국 특허 제6,300,064호(Knappik 등; Morphosys AG) 및 Schoonbroodt 등 (2005) Nucleic Acids Res 33(9):e81에 기재된 바대로 면역 비편향된 라이브러리로부터 항-IL-27 항체를 확인할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 방법은 예를 들어 파지 디스플레이 기술, 박테리아 디스플레이, 효모 표면 디스플레이, 진핵생물 바이러스 디스플레이, 포유류 세포 디스플레이 및 무세포(예를 들어, 리보솜 디스플레이) 항체 스크리닝 기법을 수반하거나 이와 함께 사용될 수 있다(예를 들어, Etz 등 (2001) J Bacteriol 183:6924-6935; Cornelis (2000) Curr Opin Biotechnol 11:450-454; Klemm 등 (2000) Microbiology 146:3025-3032; Kieke 등 (1997) Protein Eng 10:1303-1310; Yeung 등 (2002) Biotechnol Prog 18:212-220; Boder 등 (2000) Methods Enzymology 328:430-444; Grabherr 등 (2001) Comb Chem High Throughput Screen 4:185-192; Michael 등 (1995) Gene Ther 2:660-668; Pereboev 등 (2001) J Virol 75:7107-7113; Schaffitzel 등 (1999) J Immunol Methods 231:119-135; 및 Hanes 등 (2000) Nat Biotechnol 18:1287-1292 참조).
다양한 파지 디스플레이 방법을 사용하여 항체를 확인하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능적 항체 도메인은 이를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 보유하는 파지 입자의 표면에 디스플레이된다. 이러한 파지는 레퍼토리 또는 조합 항체 라이브러리(예를 들어, 인간 또는 쥣과)로부터 발현된 Fab, Fv 또는 디설파이드-결합 안정화 Fv 항체 단편과 같은 항체의 항원-결합 도메인을 디스플레이하도록 사용될 수 있다. 이 방법에 사용된 파지는 전형적으로 fd 및 M13가 같은 사상성 파지이다. 항원 결합 도메인은 임의의 파지 코트 단백질 pIII, pVIII 또는 pIX에 재조합으로 융합된 단백질로서 발현된다. 예를 들어, Shi 등 (2010) JMB 397:385-396을 참조한다. 본원에 기재된 면역글로불린 또는 이의 단편을 제조하기 위해 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는 Brinkman 등 (1995) J Immunol Methods 182:41-50; Ames 등 (1995) J Immunol Methods 184:177-186; Kettleborough 등 (1994) Eur J Immunol 24:952-958; Persic 등 (1997) Gene 187:9-18; Burton 등 (1994) Advances in Immunology 57:191-280; 및 PCT 공보 WO 90/02809호, WO 91/10737호, WO 92/01047호, WO 92/18619호, WO 93/11236호, WO 95/15982호 및 WO 95/20401호에 개시된 것을 포함한다. 적합한 방법은 또한 예를 들어 미국 특허 제5,698,426호; 제5,223,409호; 제5,403,484호; 제5,580,717호; 제5,427,908호; 제5,750,753호; 제5,821,047호; 제5,571,698호; 제5,427,908호; 제5,516,637호; 제5,780,225호; 제5,658,727호; 제5,733,743호 및 제5,969,108호에 기재되어 있다.
일부 실시형태에서, 파지 디스플레이 항체 라이브러리는 면역화된 포유류로부터의 B 세포로부터 수집된 mRNA를 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, B 세포를 포함하는 비장 세포 샘플은 상기에 기재된 바대로 IL-27 폴리펩타이드로 면역화된 마우스로부터 단리될 수 있다. mRNA는 세포로부터 단리되고 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 cDNA로 전환될 수 있다. 예를 들어, Sambrook 등 (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition," Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; 상기 Harlow 및 Lane (1988) 문헌; 상기 Benny K. C. Lo (2004) 문헌; 및 상기 Borrebaek (1995) 문헌을 참조한다. 면역글로불린의 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드의 가변 영역을 암호화하는 cDNA는 파지 디스플레이 라이브러리를 작제하도록 사용된다. 이러한 라이브러리를 생성하는 방법은 예를 들어 Merz 등 (1995) J Neurosci Methods 62(1-2):213-9; Di Niro 등 (2005) Biochem J 388(Pt 3):889-894; 및 Engberg 등 (1995) Methods Mol Biol 51:355-376에 기재되어 있다.
일부 실시형태에서, 선택 및 스크리닝의 조합은 예를 들어 하이브리도마 유래 항체의 집단 또는 파지 디스플레이 항체 라이브러리로부터 관심 항체를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 적합한 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 Hoogenboom (1997) Trends in Biotechnology 15:62-70; 상기 Brinkman 등 (1995) 문헌; 상기 Ames 등 (1995) 문헌; 상기 Kettleborough 등 (1994) 문헌; 상기 Persic 등 (1997) 문헌; 및 상기 Burton 등 (1994) 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 박테리오파지 코트 단백질의 융합 단백질(예를 들어, M13 파지의 pIII, pVIII 또는 pIX) 및 상이한 항원-조합 영역을 각각 암호화하는 복수의 파지미드 벡터는 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 제조되고, 이후 박테리아(예를 들어, E. 콜라이)의 집단으로 도입된다. 박테리아에서의 박테리오파지의 발현은 일부 실시형태에서 헬퍼 파지의 사용을 필요로 할 수 있다. 일부 실시형태에서, 헬퍼 파지가 필요하지 않다(예를 들어, Chasteen 등, (2006) Nucleic Acids Res 34(21):e145 참조). 박테리아로부터 생성된 파지는 회수되고, 이후 예를 들어 고체 지지체에 결합된(부동화된) 표적 항원에 접촉된다. 파지는 또한 용액 중의 항원에 접촉될 수 있고, 복합체는 후속하여 고체 지지체에 결합된다.
상기 방법을 사용하여 스크리닝된 항체의 하위집단은 당해 분야에 공지된 임의의 면역학적 기반 방법 또는 생화학적 기반 방법을 사용하여 특정 항원(예를 들어, 인간 IL-27)에 대한 이의 특이성 및 결합 친화도에 대해 특징규명될 수 있다. 예를 들어, IL-27에 대한 항체의 특이적 결합은 비제한적인 예로서 상기에 기재된 바대로 ELISA 검정, SPR 검정, 면역침전 검정, 친화도 크로마토그래피 및 평형 투석과 같은 면역학적 기반 방법 또는 생화학적 기반 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 항체의 면역특이적 결합 및 교차-반응성을 분석하기 위해 사용될 수 있는 면역검정은 웨스턴 블롯, RIA, ELISA(효소 결합 면역흡착 검정), "샌드위치" 면역검정, 면역침전 검정, 면역확산 검정, 응집 검정, 보체-고정 검정, 면역방사계측 검정, 형광 면역검정 및 단백질 A 면역검정과 같은 기법을 사용한 경쟁적 검정 시스템 및 비경쟁적 검정 시스템을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 이러한 검정은 일상적이고 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
예를 들어, 항-IL-27 항체가 전장, 인간 IL-27 및/또는 IL-27 단백질에 결합하지 않는지를 결정하기 위해 상기 방법이 또한 사용될 수 있다고 이해된다.
선택된 CDR 아미노산 서열이 짧은 서열(예를 들어, 10개 내지 15개 미만의 아미노산 길이)인 실시형태에서, CDR을 암호화하는 핵산은 예를 들어 Shiraishi 등 (2007) Nucleic Acids Symposium Series 51(1):129-130 및 미국 특허 제6,995,259호에 기재된 바대로 화학적으로 합성될 수 있다. 억셉터 항체를 암호화하는 주어진 핵산 서열에 대해, CDR을 암호화하는 핵산 서열의 영역은 표준 분자 생물학 기법을 사용하여 화학적으로 합성된 핵산으로 대체될 수 있다. 화학적으로 합성된 핵산의 5' 및 3' 말단은 공여자 항체의 가변 영역을 암호화하는 핵산으로 핵산을 클로닝하는 데 사용하기 위한 점착성 말단 제한 효소 부위를 포함하도록 합성될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항-IL-27 항체는 상응하는 비변경된 불변 영역에 비해 감소된(또는 무의) 효과기 기능을 갖는 변경된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 항-IL-27 항체의 불변 영역을 포함하는 효과기 기능은 불변 영역 또는 Fc 영역의 특성을 변경함으로써 조절될 수 있다. 변경된 효과기 기능은 예를 들어 하기 활성 중 하나 이상의 조절을 포함한다: 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC), 보체 의존적 세포독성(CDC: complement-dependent cytotoxicity), 아폽토시스, 하나 이상의 Fc-수용체에 대한 결합 및 전염증성 반응. 조절은 불변 영역의 비변경된 형태의 활성과 비교하여 변경된 불변 영역을 함유하는 해당 항체에 의해 나타난 효과기 기능 활성의 증가, 감소 또는 제거를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 조절은 활성이 폐지되거나 완전히 부재한 상황을 포함한다.
일 실시형태에서, 본원에 기재된 항-IL-27 항체는 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, IgG4 중쇄 불변 영역은 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역이다. 또 다른 실시형태에서, IgG4 불변 영역은 예를 들어 EU 넘버링(상기 Kabat, E.A. 등)에 따라 S228P 및 L235E 또는 L235A의 하나 또는 둘 모두와 같은 돌연변이를 포함한다. 야생형 및 돌연변이체 IgG4 불변 영역의 본 개시내용의 항체에 사용하기 위한 대표적인 서열은 표 12에 기재되어 있다. 일 실시형태에서, 본원에 기재된 항-IL-27 항체는 IgG1 불변 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, IgG1 중쇄 불변 영역은 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역이다. 또 다른 실시형태에서, IgG1 중쇄 불변 영역은 돌연변이를 포함한다. 야생형 및 돌연변이체 IgG4 불변 영역의 본 개시내용의 항체에 사용하기 위한 대표적인 서열은 표 12에 기재되어 있다.
변경된 FcR 결합 친화도 및/또는 ADCC 활성 및/또는 변경된 CDC 활성을 갖는 변경된 불변 영역은 불변 영역의 비변경된 형태와 비교하여 향상되거나 감소된 FcR 결합 활성 및/또는 ADCC 활성 및/또는 CDC 활성을 갖는 폴리펩타이드이다. FcR에 대한 결합 증가를 나타내는 변경된 불변 영역은 비변경된 폴리펩타이드보다 더 높은 친화도로 적어도 하나의 FcR에 결합한다. FcR에 대한 결합 감소를 나타내는 변경된 불변 영역은 불변 영역의 비변경된 형태보다 더 낮은 친화도로 적어도 하나의 FcR에 결합한다. FcR에 대한 결합 감소를 나타내는 이러한 변이체는 FcR에 대한 적거나 미미한 결합, 예를 들어 FcR에 대한 자연적 서열 면역글로불린 불변 영역 또는 Fc 영역의 결합 수준과 비교하여 FcR에 대한 결합의 0 내지 50%(예를 들어, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 미만)를 보유할 수 있다. 유사하게, 조절된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 나타내는 변경된 불변 영역은 비변경된 불변 영역과 비교하여 증가되거나 감소된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서, 변경된 불변 영역을 포함하는 항-IL-27 항체는 불변 영역의 비변경된 형태의 ADCC 및/또는 CDC 활성의 대략 0 내지 50%(예를 들어, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 미만)를 나타낼 수 있다. 감소된 ADCC 및/또는 CDC를 나타내는 변경된 불변 영역을 포함하는 본원에 기재된 항-IL-27 항체는 감소된 ADCC 및/또는 CDC 활성을 나타내거나 나타내지 않을 수 있다.
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항-IL-27 항체는 감소된 효과기 기능을 나타내거나 나타내지 않는다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 G2/G4 하이브리드 불변 영역과 같은 하이브리드 불변 영역 또는 이의 일부를 포함한다(예를 들어, Burton 등 (1992) Adv Immun 51:1-18; Canfield 등 (1991) J Exp Med 173:1483-1491; 및 Mueller 등 (1997) Mol Immunol 34(6):441-452 참조). 상기를 참조한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 향상되거나 감소된 보체 의존적 세포독성(CDC)을 나타내는 변경된 불변 영역을 함유할 수 있다. 조절된 CDC 활성은 항체의 Fc 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 또는 결실을 도입함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제6,194,551호를 참조한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 시스테인 잔기(들)는 Fc 영역에 도입될 수 있어 이 영역에서 사슬간 디설파이드 결합이 형성하게 한다. 이렇게 생성된 동종이합체 항체는 개선되거나 감소된 내재화 능력 및/또는 증가되거나 감소된 보체-매개된 세포사를 가질 수 있다. 예를 들어, Caron 등 (1992) J Exp Med 176:1191-1195 및 Shopes (1992) Immunol 148:2918-2922; PCT 공보 WO 99/51642호 및 WO 94/29351호; Duncan 및 Winter (1988) Nature 322:738-40; 및 미국 특허 제5,648,260호 및 제5,624,821호를 참조한다.
재조합 항체 발현 및 정제
본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 분자 생물학 및 단백질 화학의 분야에 공지된 다양한 기법을 사용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체의 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드의 하나 또는 둘 모두를 암호화하는 핵산은 전사 및 번역 조절 서열을 함유하는 발현 벡터로 삽입될 수 있고, 이 서열은 예를 들어 프로모터 서열, 리보솜 결합 부위, 전사 시작 및 중단 서열, 번역 시작 및 중단 서열, 전사 종결자 신호, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서 또는 활성제 서열을 포함한다. 조절 서열은 프로모터 및 전사 시작 및 중단 서열을 포함한다. 또한, 발현 벡터는 2개의 상이한 유기체에서, 예를 들어 발현을 위해 포유류 또는 곤충 세포에서 유지되고 클로닝 및 증폭을 위해 원핵생물 숙주에서 유지될 수 있도록 하나 초과의 복제 시스템을 포함할 수 있다.
몇몇 가능한 벡터 시스템은 포유류 세포에서 핵산으로부터 클로닝된 중쇄 폴리펩타이드 및 경쇄 폴리펩타이드의 발현에 이용 가능하다. 하나의 종류의 벡터는 숙주 세포 게놈으로의 원하는 유전자 서열의 통합에 의존한다. 안정하게 통합된 DNA를 갖는 세포는 E. 콜라이 gpt(Mulligan 및 Berg (1981) Proc Natl Acad Sci USA 78:2072) 또는 Tn5 neo(Southern 및 Berg (1982) Mol Appl Genet 1:327)와 같은 약물 내성 유전자를 동시에 도입함으로써 선택될 수 있다. 선택 가능한 마커 유전자는 발현되거나 동시형질주입에 의해 동일한 세포로 도입되는 DNA 유전자 서열에 연결될 수 있다(Wigler 등 (1979) Cell 16:77). 제2 종류의 벡터는 염색체외 플라스미드에 자율 복제 능력을 부여하는 DNA 요소를 사용한다. 이 벡터는 소 파필로마바이러스(Sarver 등 (1982) Proc Natl Acad Sci USA, 79:7147), 사이토메갈로바이러스, 폴리오마 바이러스(Deans 등 (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81:1292) 또는 SV40 바이러스(Lusky 및 Botchan (1981) Nature 293:79)와 같은 동물 바이러스로부터 유래될 수 있다.
발현 벡터는 후속하는 핵산 발현에 적합한 방식으로 세포로 도입될 수 있다. 도입 방법은 주로 하기 기재된 표적화된 세포 유형에 의해 기술된다. 예시적인 방법은 CaPO4 침전, 리포솜 융합, 양이온성 리포솜, 전기천공, 바이러스 감염, 덱스트란-매개된 형질주입, 폴리브렌-매개된 형질주입, 원형질체 융합 및 직접 미량주사를 포함한다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편의 발현에 적절한 숙주 세포는 효모, 박테리아, 곤충, 식물 및 포유류 세포를 포함한다. 박테리아, 예컨대 E. 콜라이, 진균, 예컨대 사카로마이세스 세레비시아에 및 피치아 파스토리스, 곤충 세포, 예컨대 SF9, 포유류 세포주(예를 들어, 인간 세포주), 및 1차 세포주가 특히 관심 있다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 형질전환 동물(예를 들어, 형질전환 포유류)에서 발현되고 이로부터 정제될 수 있다. 예를 들어, 항체는 형질전환 비인간 포유류(예를 들어, 설치류)에서 생산되고, 예를 들어 Houdebine (2002) Curr Opin Biotechnol 13(6):625-629; van Kuik-Romeijn 등 (2000) Transgenic Res 9(2):155-159; 및 Pollock 등 (1999) J Immunol Methods 231(1-2):147-157에 기재된 바대로 젖으로부터 단리될 수 있다.
항체 및 이의 단편은 단백질의 발현을 허용하기에 충분한 조건 하에 이에 충분한 시간 동안 항체 또는 단편을 암호화하는 핵산을 함유하는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 배양함으로써 세포로부터 생산될 수 있다. 단백질 발현을 위한 이러한 조건은 발현 벡터 및 숙주 세포의 선택에 따라 달라질 것이고, 일상적 실험을 통해 당업자에 의해 용이하게 확인될 것이다. 예를 들어, E. 콜라이에서 발현된 항체는 봉입체로부터 재폴딩될 수 있다(예를 들어, Hou 등 (1998) Cytokine 10:319-30 참조). 박테리아 발현 시스템 및 이의 사용 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다(Current Protocols in Molecular Biology, Wiley & Sons, 및 Molecular Cloning--A Laboratory Manual--3rd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001) 참조). 코돈, 적합한 발현 벡터 및 적합한 숙주 세포의 선택은 다수의 인자에 따라 변할 것이고, 필요한 바대로 용이하게 최적화될 수 있다. 본원에 기재된 항체(또는 이의 단편)는 포유류 세포 또는 비제한적인 예로서 효모, 바쿨로바이러스 및 시험관내 발현 시스템을 포함하는 다른 발현 시스템에서 발현될 수 있다(예를 들어, Kaszubska 등 (2000) Protein Expression and Purification 18:213-220 참조).
항체 및 이의 단편은 발현 후에 단리될 수 있다. 항체 또는 이의 단편은 샘플에 어떤 다른 성분이 존재하는지에 따라 당업자에게 공지된 다양한 방식으로 단리되거나 정제될 수 있다. 표준 정제 방법은 전기영동 기법, 분자 기법, 면역학적 기법 및 크로마토그래픽 기법, 예를 들어 이온 교환, 소수성, 친화도 및 역상 HPLC 크로마토그래피를 포함한다. 예를 들어, 항체는 표준 항-항체 칼럼(예를 들어, 단백질-A 또는 단백질-G 칼럼)을 사용하여 정제될 수 있다. 한외여과 및 정용여과 기법은 단백질 농도와 관련하여 또한 유용하다. 예를 들어, Scopes (1994) "Protein Purification, 3rd edition," Springer-Verlag, New York City, New York을 참조한다. 필요한 정제 정도는 원하는 용도에 따라 변할 것이다. 일부 경우에, 발현된 항체 또는 이의 단편의 정제가 필요하지 않을 것이다.
정제된 항체 또는 이의 단편의 수율 또는 순도를 결정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 브래드포드(Bradford) 검정, UV 분광학, 비우렛(Biuret) 단백질 검정, 로리(Lowry) 단백질 검정, 아미도 블랙 단백질 검정, 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 질량 분광법(MS) 및 겔 전기영동 방법(예를 들어, 단백질 염색, 예컨대 쿠마시 블루 또는 콜로이드성 은 염색을 사용)을 포함한다.
항체 또는 이의 항원-결합 단편의 변형
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이의 발현 및 정제 후에 변형될 수 있다. 변형은 공유 변형 또는 비공유 변형일 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어 폴리펩타이드의 표적화된 아미노산 잔기를 선택된 측쇄 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시킴으로써 항체 또는 단편으로 도입될 수 있다. 변형에 적합한 부위는 예를 들어 항체 또는 단편의 구조 분석 또는 아미노산 서열 분석을 포함하는 임의의 다양한 기준을 사용하여 선택될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이종성 모이어티에 접합될 수 있다. 이종성 모이어티는 예를 들어 이종성 폴리펩타이드, 치료제(예를 들어, 독소 또는 약물), 또는 검출 가능한 라벨, 예컨대 비제한적인 예로서 방사성 라벨, 효소 라벨, 형광 라벨, 중금속 라벨, 발광 라벨 또는 친화도 태그, 예컨대 비오틴 또는 스트렙타비딘일 수 있다. 적합한 이종성 폴리펩타이드는 항체 또는 단편을 정제하는 데 사용하기 위한 예를 들어 항원성 태그(FLAG(DYKDDDDK(서열번호 405)), 폴리히스티딘(6-His; HHHHHH(서열번호 406), 혈구응집소(HA; YPYDVPDYA(서열번호 407)), 글루타티온-S-전환효소(GST) 또는 말토스 결합 단백질(MBP))을 포함한다. 이종성 폴리펩타이드는 또한 진단학적 마커 또는 검출 가능한 마커로서 유용한 폴리펩타이드(예를 들어, 효소), 예를 들어 루시퍼라제, 형광 단백질(예를 들어, 녹색 형광 단백질(GFP: green fluorescent protein)) 또는 클로르암페니콜 아세틸 전환효소(CAT: chloramphenicol acetyl transferase)를 포함한다. 적합한 방사성 라벨은 예를 들어 32P, 33P, 14C, 125I, 131I, 35S 및 3H를 포함한다. 적합한 형광 라벨은 제한 없이 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 녹색 형광 단백질(GFP), DyLight™ 488, 피코에리트린(PE), 프로피듐 요오다이드(PI), PerCP, PE-Alexa Fluor® 700, Cy5, 알로피코시아닌 및 Cy7을 포함한다. 발광 라벨은 예를 들어 임의의 다양한 발광 란탄족(예를 들어, 유로퓸 또는 터븀) 킬레이트를 포함한다. 예를 들어, 적합한 유로퓸 킬레이트는 디에틸렌 트리아민 펜타아세트산(DTPA) 또는 테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산(DOTA)의 유로퓸 킬레이트를 포함한다. 효소 라벨은 예를 들어 알칼리 포스파타아제, CAT, 루시퍼라제 및 겨자무 과산화효소를 포함한다.
2개의 단백질(예를 들어, 항체 및 이종성 모이어티)은 임의의 다수의 공지된 화학 가교결합제를 사용하여 가교결합될 수 있다. 이러한 가교결합제의 예는 "장애" 디설파이드 결합을 포함하는 연결을 통해 2개의 아미노산 잔기를 연결하는 것이다. 이 연결에서, 가교결합 단위 내의 디설파이드 결합은, 예를 들어 환원된 글루타티온 또는 효소 디설파이드 환원효소의 작용에 의한 환원으로부터 (디설파이드 결합의 어느 한 측에서의 장애 기에 의해) 보호된다. 하나의 적합한 시약인 4-숙신이미딜옥시카보닐-α-메틸-α(2-피리딜디티오) 톨루엔(SMPT)은 단백질의 하나에서 말단 리신 및 다른 하나에서 말단 시스테인을 사용하여 2개의 단백질 사이에 연결을 형성한다. 각각의 단백질에서 상이한 커플링 모이어티에 의해 가교결합하는 이종이작용성 시약을 또한 사용할 수 있다. 다른 유용한 가교결합제는 제한 없이 2개의 아미노기(예를 들어, N-5-아지도-2-니트로벤조일옥시숙신이미드), 2개의 설프하이드릴기(예를 들어, 1,4-비스-말레이미도부탄), 아미노기 및 설프하이드릴기(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스테르), 아미노기 및 카복실기(예를 들어, 4-[p-아지도살리사이클라미도]부틸아민), 및 아르기닌의 측쇄에 존재하는 아미노기 및 구아니디늄기(예를 들어, p-아지도페닐 글리옥살 일수화물)를 연결하는 시약을 포함한다.
일부 실시형태에서, 방사성 라벨은 항체의 아미노산 골격에 직접 접합될 수 있다. 대안적으로, 방사성 라벨은 관련 단백질의 메타-요오도페닐(mIP) 유도체 또는 단백질 골격에 결국 결합되는 칼레이트(예를 들어, DOTA 또는 DTPA)를 형성하도록(예를 들어, Rogers 등 (1997) J Nucl Med 38:1221-1229 참조) 유리 아미노기에 결합하는 더 큰 분자의 일부(예를 들어, 메타-[125I]요오도페닐-N-하이드록시숙신이미드([125I]mIPNHS에서의 125I)로 포함될 수 있다. 방사성 라벨 또는 이를 함유하는 더 큰 분자/킬레이트를 본원에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편에 접합하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 이러한 방법은 단백질에 대한 방사성 라벨 또는 칼레이트의 결합을 용이하게 하는 조건(예를 들어, pH, 염 농도 및/또는 온도) 하에 단백질을 방사성 라벨과 항온처리하는 단계를 수반한다(예를 들어, 미국 특허 제6,001,329호 참조).
형광 라벨(때때로 "형광단"이라 칭함)을 단백질(예를 들어, 항체)에 접합하는 방법은 단백질 화학의 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 형광단은 형광단에 고정된 숙신이미딜(NHS) 에스테르 또는 테트라플루오로페닐(TFP) 에스테르 모이어티를 사용하여 단백질의 (예를 들어, 리신의) 유리 아미노기 또는 설프하이드릴기(예를 들어, 시스테인)에 접합될 수 있다. 일부 실시형태에서, 형광단은 이종이작용성 가교결합제 모이어티, 예컨대 술포-SMCC에 접합될 수 있다. 적합한 접합 방법은 단백질에 대한 형광단의 결합을 용이하게 하는 조건 하에 항체 단백질 또는 이의 단편을 형광단과 항온처리하는 단계를 수반한다. 예를 들어, Welch 및 Redvanly (2003) "Handbook of Radiopharmaceuticals: Radiochemistry and Applications," John Wiley and Sons (ISBN 0471495603)을 참조한다.
일부 실시형태에서, 항체 또는 단편은 순환에서, 예를 들어 혈액, 혈청 또는 다른 조직에서, 예를 들어 항체의 안정화 및/또는 보유를 개선하는 모이어티로 변형될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 단편은 예를 들어 Lee 등 (1999) Bioconjug Chem 10(6): 973-8; Kinstler 등 (2002) Advanced Drug Deliveries Reviews 54:477-485; 및 Roberts 등 (2002) Advanced Drug Delivery Reviews 54:459-476에 기재된 바대로 PEG화되거나 HES화될 수 있다(Fresenius Kabi, 독일; 예를 들어,
Figure pct00001
등 (2010) Int J Pharm 387(1-2):110-119 참조). 안정화 모이어티는 적어도 1.5 (예를 들어, 적어도 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40 또는 50 이상) 배만큼 항체(또는 단편)의 안정성 또는 보유를 개선할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 글리코실화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이 항체 또는 단편이 감소된 또는 부재한 글리코실화를 갖도록 효소 처리 또는 화학 처리로 처리되거나 세포로부터 생산될 수 있다. 감소된 글리코실화를 갖는 항체를 생산하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어 미국 특허 제6,933,368호; Wright 등 (1991) EMBO J 10(10):2717-2723; 및 Co 등 (1993) Mol Immunol 30:1361에 기재되어 있다.
약학적 조성물 및 제제
소정의 실시형태에서, 본 발명은 항-IL-27 항체와 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아쥬반트를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
소정의 실시형태에서, 허용 가능한 제제 재료는 바람직하게는 사용된 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이다. 소정의 실시형태에서, 제제 재료(들)는 피하 및/또는 정맥 투여를 위한 것이다. 소정의 실시형태에서, 약학적 조성물은 예를 들어 pH, 삼투질농도, 점도, 투명성, 색상, 등장성, 냄새, 무균성, 안정성, 분해 또는 방출 속도, 조성물의 흡착 또는 투과를 변형시키거나 유지하거나 보존하기 위한 제제 재료를 함유할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 적합한 제제 재료는 아미노산(예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신); 항균제; 항산화제(예컨대, 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충액(예컨대, 붕산염, 중탄산염, Tris-HCl, 시트르산염, 인산염 또는 다른 유기 산); 벌크화제(예컨대, 만니톨 또는 글리신); 킬레이트화제(예컨대, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA)); 착화제(예컨대, 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 다른 탄수화물(예컨대, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질(예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 착향료 및 희석제; 유화제; 소수성 중합체(예컨대, 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩타이드; 염 형성 반대이온(예컨대, 나트륨); 보존제(예컨대, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 펜에틸 알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용매(예컨대, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알콜(예컨대, 만니톨 또는 소르비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대, 플루오닉스(pluronics), PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 타일록사팔); 안정성 증대제(예컨대, 수크로스 또는 소르비톨); 긴장성 증대제(예컨대, 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약학적 아쥬반트를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1995). 소정의 실시형태에서, 제제는 PBS; 20 mM NaOAC, pH 5.2, 50 mM NaCl; 및/또는 10 mM NAOAC, pH 5.2, 9% 수크로스를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 최적 약학적 조성물은 예를 들어 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 투약량에 따라 당업자에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, 상기 Remington's Pharmaceutical Sciences 문헌을 참조한다. 소정의 실시형태에서, 이러한 조성물은 항-IL-27 항체의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및/또는 생체내 청소 속도에 영향을 미칠 수 있다.
소정의 실시형태에서, 약학적 조성물에서의 1차 비히클 또는 담체는 사실상 수성 또는 비수성일 수 있다. 예를 들어, 소정의 실시형태에서, 적합한 비히클 또는 담체는 가능하게는 비경구 투여를 위한 조성물에서 흔한 다른 재료가 보충된 주사용수, 생리학적 식염수 용액 또는 인공 뇌척수액일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 식염수는 등장성 인산염-완충 식염수를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수는 추가의 예시적인 비히클이다. 소정의 실시형태에서, 약학적 조성물은 약 pH 7.0 내지 8.5의 Tris 완충액 또는 약 pH 4.0 내지 5.5의 아세트산염 완충액을 포함하는데, 이는 따라서 소르비톨 또는 적합한 대체물을 추가로 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 항-IL-27 항체를 포함하는 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 선택된 조성물을 동결건조된 케이크 또는 수성 용액의 형태로 선택적인 제제 물질과 혼합함으로써 저장에 준비될 수 있다(상기 Remington's Pharmaceutical Sciences 문헌). 추가로, 소정의 실시형태에서, 항-IL-27 항체를 포함하는 조성물은 적절한 부형제, 예컨대 수크로스를 사용하여 동결건조물로서 제제화될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 약학적 조성물은 비경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 상기 조성물은 흡입에 또는 소화관을 통한 전달에, 예컨대 경구로 선택될 수 있다. 이러한 약학적으로 허용 가능한 조성물의 제제는 당업자의 능력 내에 있다.
소정의 실시형태에서, 제제 성분은 투여 부위에 허용 가능한 농도로 존재한다. 소정의 실시형태에서, 완충액은 생리학적 pH에서 또는 약간 더 낮은 pH에서, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 범위 내에 조성물을 유지시키도록 사용된다.
소정의 실시형태에서, 비경구 투여가 고려될 때, 치료학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 비히클에서 항-IL-27 항체를 포함하는 발열원 비함유의 비경구로 허용 가능한 수성 용액의 형태일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 비경구 주사를 위한 비히클은 항-IL-27 항체가 무균 등장성 용액으로 제제화되고 적절히 보존되는 무균 증류수이다. 소정의 실시형태에서, 제조는 생성물의 제어형 방출 또는 서방형을 제공할 수 있는 주사용 마이크로구, 생체-침식성 입자, 중합체 화합물(예컨대, 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포솜과 같은 물질에 의한 원하는 분자의 제제화를 수반할 수 있고, 이 생성물은 이후 데포 주사를 통해 전달될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 히알우론산이 또한 사용될 수 있고, 순환에서 지속된 기간을 촉진하는 효과를 가질 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이식형 약물 전달 장치는 원하는 분자를 도입하도록 사용될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 약학적 조성물은 흡입을 위해 제제화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 흡입을 위한 건조 분말로서 제제화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 항-IL-27 항체를 포함하는 흡입 용액은 에어로졸 전달을 위한 추진제에 의해 제제화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 용액은 분무될 수 있다. 폐 투여는 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 기재한 PCT 출원 PCT/US94/001875호에 추가로 기재되어 있다.
소정의 실시형태에서, 제제가 경구로 투여될 수 있다고 고려된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 방식으로 투여되는 항-IL-27 항체는 정제 및 캡슐과 같은 고체 투여형의 배합에 습관적으로 사용되는 담체에 의해 또는 이것 없지 제제화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 캡슐은 생체이용률이 최대화되고 전신순환전 분해가 최소화될 때 위장관에서의 지점에서 제제의 활성 부분을 방출시키도록 설계될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 물질은 항-IL-27 항체의 흡수를 용이하게 하도록 포함될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 희석제, 향료, 저융점 왁스, 식물성 오일, 활택제, 현탁제, 정제 붕괴제 및 결합제가 또한 사용될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 약학적 조성물은 정제의 제조에 적합한 비독성 부형제와의 혼합물에서 효과적인 분량의 항-IL-27 항체를 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 정제를 무균수 또는 다른 적절한 비히클에 용해함으로써, 용액은 단위-용량 형태로 제조될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 적합한 부형제는 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨 또는 중탄산나트륨, 락토스 또는 인산칼슘; 또는 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 또는 활택제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 탈크를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
추가적인 약학적 조성물은 지효성 또는 제어형 전달 제제에서 항-IL-27 항체를 포함하는 제제를 포함하여 당업자에게 명백할 것이다. 소정의 실시형태에서, 다양한 다른 지속성 또는 제어형 전달 수단, 예컨대 리포솜 담체, 생체-침식성 마이크로입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사를 제제화하기 위한 기법은 당업자에게 또한 공지되어 있다. 예를 들어, 약학적 조성물의 전달을 위한 다공성 중합체 마이크로입자의 제어형 방출을 기재한 PCT 출원 PCT/US93/00829호를 참조한다. 소정의 실시형태에서, 서방형 제제는 성형 물품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함할 수 있다. 서방형 매트릭스는 폴리에스테르, 하이드로겔, 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호 및 EP 058,481호), L-글루탐산 및 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체(Sidman 등, Biopolymers, 22:547-556 (1983)), 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트)(Langer 등, J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 (1981) 및 Langer, Chem. Tech., 12:98-105 (1982)), 에틸렌 비닐 아세테이트(상기 Langer 등의 문헌) 또는 폴리-D(-)-3-하이드록시부티르산(EP 133,988호)을 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 서방형 조성물은 또한 리포솜을 포함할 수 있으며, 이들은 당해 분야에 공지된 임의의 몇몇 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, Eppstein 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688-3692 (1985); EP 036,676호; EP 088,046호 및 EP 143,949호를 참조한다.
생체내 투여를 위해 사용될 약학적 조성물은 전형적으로 무균이다. 소정의 실시형태에서, 이것은 무균 여과 막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 상기 조성물이 동결건조되는 경우, 상기 방법을 사용한 무균화는 동결건조 및 재구성 전에 또는 후에 수행될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 비경구 투여를 위한 조성물은 동결건조된 형태로 또는 용액 중에 저장될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 비경구 조성물은 일반적으로 무균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어 피하 주사 침이 관통 가능한 스톱퍼를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알에 배치된다.
소정의 실시형태에서, 약학적 조성물이 제제화되면, 이것은 용액, 현탁액, 겔, 에멀션, 고체로서 또는 탈수된 또는 동결건조된 분말로서 무균 바이알에 저장될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 제제는 사용 준비 형태로 또는 투여 전에 재구성되는 형태로(예를 들어, 동결건조된 형태로) 저장될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 단일-용량 투여 단위를 제조하기 위한 키트가 제공된다. 소정의 실시형태에서, 키트는 건조된 단백질을 갖는 제1 용기 및 수성 제제를 갖는 제2 용기 둘 모두를 함유할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 단일 및 다중 챔버 프리필드 주사기(예를 들어, 액체 주사기 및 동결주사기)를 함유하는 키트가 포함된다.
소정의 실시형태에서, 치료학적으로 사용되는 항-IL-27 항체를 포함하는 약학적 조성물의 유효량은 예를 들어 치료학적 맥락 및 목적에 따라 달라질 것이다. 당업자는 소정의 실시형태에 따라 치료에 적절한 투약량 수준이 부분적으로 전달된 분자, 항-IL-27 항체가 사용되는 적응증, 투여 경로 및 환자의 몸집(체중, 체표면 또는 장기 크기) 및/또는 상태(연령 및 일반 건강)에 따라 변할 것이라는 것을 이해할 것이다. 소정의 실시형태에서, 임상의는 최적 치료 효과를 얻기 위해 투약량을 적정하고 투여 경로를 변형시킬 수 있다.
소정의 실시형태에서, 투약 빈도는 사용된 제제에서 항-IL-27 항체의 약동학 매개변수를 고려할 것이다. 소정의 실시형태에서, 임상의는 원하는 효과를 달성하는 투약량이 도달될 때까지 조성물을 투여할 것이다. 소정의 실시형태에서, 상기 조성물은 따라서 단일 용량으로서 또는 경시적으로 2 이상의 용량(동일한 양의 원하는 분자를 함유하거나 함유하지 않을 수 있음)으로 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 투약량의 추가 개선은 일상적으로 당업자에 의해 이루어지고, 이들이 일상적으로 수행하는 업무의 영역 내에 있다. 소정의 실시형태에서, 적절한 투약량은 적절한 용량-반응 데이터의 사용을 통해 확인될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 약학적 조성물의 투여 경로는 공지된 방법에 따르고, 예를 들어 경구로, 정맥내, 복강내, 대뇌내(조직질실내), 뇌실내, 근육내, 피하로, 눈내, 동맥내, 문맥내 또는 병변내 경로에 의한 주사를 통해; 서방형 시스템에 의해 또는 이식 장치에 의한다. 소정의 실시형태에서, 상기 조성물은 볼루스 주사에 의해 또는 연속적으로 주입에 의해, 또는 이식 장치에 의해 투여될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 병용 치료의 개별 요소는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 상기 조성물은 원하는 분자가 흡수되거나 캡슐화된 막, 스폰지 또는 다른 적절한 물질의 이식을 통해 국소로 투여될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이식 장치가 사용되는 경우, 그 장치는 임의의 적합한 조직 또는 장기로 이식될 수 있고, 원하는 분자의 전달은 확산, 정기 방출 볼루스 또는 연속 투여를 통해서일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 생체외 방식으로 항-IL-27 항체를 포함하는 약학적 조성물을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 경우에, 환자로부터 제거된 세포, 조직 및/또는 장기는 항-IL-27 항체를 포함하는 약학적 조성물에 노출되고, 이후에 세포, 조직 및/또는 장기가 환자에게 후속하여 다시 이식된다.
소정의 실시형태에서, 항-IL-27 항체는 폴리펩타이드를 발현하고 분비하도록 본원에 기재된 것과 같은 방법을 사용하여 유전자 조작된 소정의 세포를 이식함으로써 전달될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 이러한 세포는 동물 또는 인간 세포일 수 있고, 자가유래, 이종성 또는 이종발생성일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 세포는 불활화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 면역학적 반응의 기회를 감소시키기 위해, 세포는 둘러싼 조직의 침윤을 피하도록 캡슐화될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 캡슐화 재료는 전형적으로 단백질 산물(들)의 방출을 허용하지만 환자의 면역계 또는 다른 해로운 인자에 의해 둘러싼 조직으로부터의 세포의 파괴를 막는 생체적합성, 반투과성 중합체성 인클로저 또는 막이다.
적용분야
본원에 기재된 조성물은 다수의 진단학적 분야 및 치료학적 분야에 사용될 수 있다. 예를 들어, 검출 가능하게-표지된 항원-결합 분자는 샘플(예를 들어, 생물학적 샘플)에서 표적 항원의 존재 또는 양을 검출하도록 검정에서 사용될 수 있다. 상기 조성물은 표적 항원 기능의 저해를 연구하기 위한 시험관내 검정에 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물이 보체 단백질에 결합하고 이를 저해하는 일부 실시형태에서, 상기 조성물은 보체 활성을 저해하거나 그렇지 않으면 보체-연관된 장애를 치료하는 데 유용한 추가적인 신규의 화합물을 확인하도록 설계된 검정에서 양성 대조군으로 사용될 수 있다. 예를 들어, IL-27 저해 조성물은 IL-27 생산을 감소시키거나 무효화하는 추가 화합물(예를 들어, 소분자, 압타머 또는 항체)을 확인하도록 검정에서 양성 대조군으로 사용될 수 있다. 상기 조성물은 또한 하기에 자세히 설명된 바와 같이 치료학적 방법에 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 (i) 항체 분자 및 IL-27의 상호작용이 발생하게 하는 조건 하에 샘플 또는 대상체(및 선택적으로 기준 샘플 또는 대상체)를 본원에 기재된 임의의 항체와 접촉시키는 단계 및 (ii) 항체 분자와 샘플 또는 대상체(및 선택적으로 기준 샘플 또는 대상체) 사이의 복합체의 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 생물학적 샘플 또는 대상체에서 IL-27를 검출하는 방법을 제공한다.
키트
키트는 본원에 개시된 바와 같은 항-IL-27 항체 및 사용 설명서를 포함할 수 있다. 키트는 적합한 용기에서 항-IL-27 항체, 하나 이상의 컨트롤 및 다양한 완충액, 시약, 효소 및 당해 분야에 널리 공지된 다른 표준 성분을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 바와 같은 항-IL-27 항체 또는 항원-결합 부분 및 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 대상체에서 암을 치료하는 데 있어서의 사용 설명서를 선택적으로 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 추가 치료제 또는 절차와의 병용에서의 사용 설명서와 함께 포함하는 키트를 제공한다.
용기는 적어도 하나의 바이알, 웰, 시험 관, 플라스크, 병, 주사기 또는 항-IL-27 항체가 배치될 수 있고, 일부 경우에 적합하게 분취될 수 있는 다른 용기 수단을 포함할 수 있다. 추가 성분이 제공되는 경우, 키트는 이 성분이 배치될 수 있는 추가 용기를 함유할 수 있다. 키트는 또한 항-IL-27 항체를 함유하기 위한 수단 및 상업용 규모로 근접하게 구속된 임의의 다른 시약 용기를 포함할 수 있다. 이러한 용기는 주사 또는 원하는 바이알이 보유되는 취입-성형된 플라스틱 용기를 포함할 수 있다. 용기 및/또는 키트는 사용 설명서 및/또는 경고를 갖는 라벨링을 포함할 수 있다.
사용 방법
본 발명의 조성물은 IL-27의 검출 및/또는 정량화 및/또는 IL-27 기능의 길항작용을 포함하는 많은 시험관내 및 생체내 유용성을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해를 저해하거나 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 분비를 유도하거나 향상시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터의 하나 이상의 사이토카인의 분비를 유도하거나 향상시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시켜 면역 반응을 자극하거나 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포로부터의 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시켜 면역 반응을 자극하거나 암을 치료한다.
일부 실시형태에서, 암은 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암), 육종, 고환암, 난소암, 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 흑색종, 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 결장직장암, 방광암, 자궁내막암, 전립선암, 갑상선암, 간세포 암종, 위암, 뇌암, 림프종(예를 들어, DL-BCL), 백혈병(예를 들어, AML) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어 신장 투명 세포 암종)으로부터 선택된다.
상기 기재된 조성물은 특히 대상체에서 다양한 암을 치료하거나 예방하는 방법에 유용하다. 상기 조성물은, 부분적으로 투여 경로에 따라 달라지는, 다양한 방법을 사용하여 대상체, 예를 들어 인간 대상체에게 투여될 수 있다. 경로는 예를 들어 정맥내 주사 또는 주입(IV), 피하 주사(SC), 복강내(IP) 주사, 근육내 주사(IM) 또는 초내 주사(IT)일 수 있다. 주사는 볼루스 또는 연속 주입에 있을 수 있다.
투여는 예를 들어 국소 주입, 주사에 의해 또는 임플란트에 의해 달성될 수 있다. 임플란트는 다공성, 비다공성 또는 젤라틴성 재료, 예를 들어 막, 예컨대 실라스틱 막 또는 섬유일 수 있다. 임플란트는 대상체에 대한 조성물의 서방형 또는 주기적 방출을 위해 구성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공보 제20080241223호; 미국 특허 제5,501,856호; 제4,863,457호; 및 제3,710,795호; EP488401호; 및 EP 430539호를 참조하고, 이들의 각각의 개시내용은 본원에 그 전문이 참고로 포함된다. 상기 조성물은 예를 들어 확산 시스템, 침식 시스템 또는 대류 시스템, 예를 들어 삼투성 펌프, 생체분해성 임플란트, 전기확산 시스템, 전기삼투 시스템, 증기 압력 펌프, 전해 펌프, 비등성 펌프, 압전 펌프, 침식-기반 시스템 또는 전기기계 시스템에 기초한 이식형 장치에 의해 대상체에게 전달될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 국소 투여에 의해 대상체에게 치료학적으로 전달된다.
용량이 대상체에서 암을 치료하거나 예방할 수 있는 본원에 기재된 항체 또는 이의 단편의 적합한 용량은 예를 들어 치료되는 대상체의 연령, 성별 및 체량 및 사용된 특정 저해제 화합물을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 암을 갖는 대상체를 치료하는 데 있어서 동일한 대상체를 치료하는 데 필요한 IL-27-결합 Fab' 항체 단편의 용량과 비교하여 상이한 용량의 전체 항-IL-27 항체가 필요할 수 있다. 대상체에게 투여되는 용량에 영향을 미치는 다른 인자는 예를 들어 암의 유형 또는 중증도를 포함한다. 예를 들어, 전이성 흑색종을 갖는 대상체는 교모세포종을 갖는 대상체보다 항-IL-27 항체의 상이한 투약량의 투여를 필요로 할 수 있다. 다른 인자는 예를 들어 대상체에 동시적으로 영향을 미치거나 과거에 영향을 미친 다른 의학 장애, 대상체의 일반 건강, 대상체의 유전 성향, 식이, 투여 시간, 배설률, 약물 병용, 및 대상체에게 투여되는 임의의 다른 추가 치료제를 포함할 수 있다. 임의의 특정 대상체에 대한 특정 투약량 및 치료 요법이 치료 의학 전문가(예를 들어, 의사 또는 간호사)의 판단에 따라 또한 달라질 것이라는 것이 또한 이해되어야 한다. 적합한 투약량은 본원에 기재된다.
약학적 조성물은 치료학적 유효량의 본원에 기재된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 이러한 유효량은, 부분적으로 투여된 항체의 효과 또는 하나 초과의 물질이 사용되면 항체와 하나 이상의 추가 활성제의 조합 효과에 기초하여, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 치료학적 유효량의 본원에 기재된 항체 또는 이의 단편은 또한 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응, 예를 들어 종양 성장 감소를 유발하는 항체(및 하나 이상의 추가 활성제)의 능력과 같은 인자에 따라 변할 수 있다. 예를 들어, 치료학적 유효량의 항-IL-27 항체는 당해 분야에 공지되거나 본원에 기재된 특정 장애 및/또는 특정 장애의 증상 중 어느 하나를 저해(이의 중증도를 줄이거나 이의 발생을 제거)하고/하거나 예방할 수 있다. 치료학적 유효량은 또한 치료학적으로 유리한 효과가 상기 조성물의 임의의 독성 또는 해로운 효과를 능가하는 것이다.
본원에 기재된 임의의 항체 또는 이의 단편의 적합한 인간 용량은 예를 들어 I상 용량 증가 연구에서 추가로 평가될 수 있다. 예를 들어, van Gurp 등 (2008) Am J Transplantation 8(8):1711-1718; Hanouska 등 (2007) Clin Cancer Res 13(2, part 1):523-531; 및 Hetherington 등 (2006) Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10): 3499-3500을 참조한다.
일부 실시형태에서, 전체로서의 조성물이 치료학적으로 효과적이도록 상기 조성물은 본원에 기재된 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 1종 이상(예를 들어, 2종, 3종, 4종, 5종, 6종, 7종, 8종, 9종, 10종 또는 11종 이상)의 추가 치료제를 함유한다. 예를 들어, 조성물은 본원에 기재된 항-IL-27 항체 및 알킬화제를 함유할 수 있고, 여기서 항체 및 알킬화제는 각각 조합될 때 대상체에서 암(예를 들어, 흑색종)을 치료하거나 예방하기에 치료학적으로 효과적인 농도에 있다.
이러한 조성물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 암의 동물 모델)에서 공지된 약학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 이 절차는 예를 들어 LD50(집단의 50%에 치사인 용량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료학적으로 효과적인 용량)을 결정하기 위해 사용될 수 있다. 독성과 치료 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이고, 이것은 LD50/ED50의 비로 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 조성물이 사용될 수 있지만, 이러한 화합물을 이환된 조직 부위로 표적화하는 전달 시스템을 설계하고, 정상 세포에 대한 가능한 손상을 최소화하여 부작용을 줄이도록 주의를 해야 한다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 얻은 데이터는 인간에서 사용하기 위한 일련의 투약량을 제제화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투약량은 일반적으로 적은 독성으로 또는 독성 없이 ED50을 포함하는 항체 또는 단편의 순환 농도의 범위 내에 있다. 투약량은 사용된 투여형 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에 변할 수 있다. 본원에 기재된 항-IL-27 항체에 대해, 치료학적 유효 용량은 초기에 세포 배양 검정으로부터 추산될 수 있다. 용량은 세포 배양에 결정된 바대로 IC50(즉, 증상의 반-최대 저해를 달성하는 항체의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 동물 모델에서 제제화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서 유용한 용량을 보다 정확하게 결정하도록 사용될 수 있다. 혈장에서의 수준은 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 예를 들어 (예를 들어, 눈 또는 관절에) 국소 투여가 원해지는 경우, 세포 배양 또는 동물 모델링은 국소 부위 내에 치료학적 유효 농도를 달성하는 데 필요한 용량을 결정하도록 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 상기 방법은 암을 위한 다른 치료제와 함께 수행될 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 방사선, 수술, 표적화된 또는 세포독성 화학요법, 화학방사선요법, 호르몬 치료, 면역요법, 유전자 치료, 세포 이식 치료, 정밀 의료, 게놈 편집 치료, 또는 다른 약물치료와 동시에, 전에 또는 후에 대상체에게 투여될 수 있다.
상기에 기재된 바대로, 본원에 기재된 조성물(예를 들어, 항-IL-27 조성물)은 비제한적인 예로서 카포시 육종, 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 골수아구 전골수구 골수단핵구 단구성 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수구성(과립구성) 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 외투 세포 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 버킷 림프종 및 변연대 B 세포 림프종, 진성 다혈구증 림프종, 호지킨 질환, 비호지킨 질환, 다발성 골수종, 발데스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄병, 고형 종양, 육종 및 암종, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 골육종, 척삭종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 윤활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 육종, 결장직장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암, 땀샘 암종, 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암, 낭선암종, 수질 암종, 기관지원성 암종, 신장 세포 암종, 간세포 암종(HCC), 간세포암, 담관 암종, 융모막암종, 정상피종, 배아성 암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환 종양, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 비소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 속귀신경집종, 핍지교종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 비인두 암종, 식도 암종, 기저 세포 암종, 담도암, 방광암, 골암, 뇌 및 중추 신경계(CNS) 암, 자궁경부암, 융모막암종, 결장직장암, 결합 조직 암, 소화계의 암, 자궁내막암, 식도암, 눈암, 두경부암, 위암, 상피내 신생물, 신장암, 후두암, 간암, 폐암(소세포, 대세포), 흑색종, 신경모세포종; 구강암(예를 들어, 입술, 혀, 입 및 인두), 난소암, 췌장암, 망막모세포종, 횡문근육종, 직장암; 호흡기관의 암, 육종, 피부암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 및 비뇨기계의 암과 같은 다양한 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
병용 요법
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가 치료제 또는 치료, 예를 들어 암을 위한 다른 치료제 또는 치료와 병용될 수 있다. 예를 들어, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가 치료제와 병용되어 대상체(예를 들어, 인간 환자)에게 투여될 수 있고, 이 병용은 암을 갖거나 이의 위험에 있는 대상체에게 치료 이익을 제공한다.
일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 하나 이상의 추가 치료제는 동일한 시간에(예를 들어, 동시에) 투여된다. 다른 실시형태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 시간상 첫 번째로 투여되고, 하나 이상의 추가 치료제는 시간상 두 번째로(예를 들어, 순차적으로) 투여된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가 치료제는 시간상 첫 번째로 투여되고, 항-IL-27 항체는 시간상 두 번째로 투여된다.
본원에 기재된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 과거에 투여되었거나 현재 투여되는 치료를 대체하거나 증대시킬 수 있다. 예를 들어, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로 치료 시, 하나 이상의 추가 치료제의 투여는 중단하거나 줄어들고, 예를 들어 더 낮은 수준에서 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 과거의 치료의 투여는 유지될 수 있다. 일부 실시형태에서, 과거의 치료는 항-IL-27 항체의 수준이 치료 효과를 제공하기에 충분한 수준에 도달할 때까지 유지될 것이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 하나 이상의 추가 치료제 또는 절차와 병용하여 유효량의 본 개시내용에 의해 제공된 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 제2 치료제 또는 절차는 화학요법, 표적화된 항암 치료, 종양세포붕괴성 약물, 세포독성제, 면역-기반 치료, 사이토카인, 수술 절차, 방사선 절차, 동시자극 분자의 활성제, 저해 분자의 저해제, 백신 또는 세포 면역요법, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, TIM-3 저해제, LAG-3 저해제, TIGIT 저해제, CD112R 저해제, TAM 저해제, STING 작용제, 4-1BB 작용제, 또는 이들의 조합이다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PDR001, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 및 AMP-224로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-L1 저해제이다. 일부 실시형태에서, PD-L1 저해제는 FAZ053, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 및 BMS-936559로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 항-PD-1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는(예를 들어, 항-PD-1 항체에 노출된 세포로부터의 PD-1-매개된 사이토카인 분비를 향상; 항-PD-1 매개된 TNFα 분비를 향상; 항-PD-1 매개된 IL-6 분비를 향상) 방법을 제공하고, 상기 방법은 세포를 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 항-PD-1 항체와 동시적으로 또는 이에 순차적으로 노출시켜 항-PD1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 수니티닙(Sutent®), 카보잔티닙(Cabozantinib)(Cabometyx®), 악시티닙(Axitinib)(Inlyta®), 렌바티닙(Lenvatinib)(Lenvima®), 에버롤리무스(Everolimus)(Afinitor®), 베바시주맙(Bevacizumab)(Avastin®), 에파카도스타트, NKTR-214(CD-122-바이어싱 작용제), 티보자닙(Fotivda®), 아벡시노스타트, 이필리무맙(Ipilimumab)(Yervoy®), 트레멜리무맙, 파조파닙(Pazopanib)(Votrient®), 소라페닙(Sorafenib)(Nexavar®), 템시롤리무스(Temsirolimus)(Torisel®), 라무시루맙(Ramucirumab)(Cyramza®), 니라파립, 사볼리티닙, 보롤라닙(X-82), 레고라페닙(Regorafenib)(Stivargo®), 도나페닙(Donafenib)(다중키나제 저해제), 캄렐리주맙(Camrelizumab)(SHR-1210), 페삭스티모겐 데바시렙벡(JX-594), 라무시루맙(Cyramza®), 아파티닙(YN968D1), 캡슐화 독소루비신(Thermodox®), 티반티닙(Tivantinib)(ARQ197), ADI-PEG 20, 비니메티닙, 아파티닙 메실레이트, 닌테다닙, 리릴루맙, 니볼루맙(Nivolumab)(Opdivo®), 펨브롤리주맙(Pembrolizumab)(Keytruda®), 아테졸리주맙(Atezolizumab)(Tecentriq®), 아벨루맙(Avelumab)(Bavencio®), 더발루맙(Durvalumab)(Imfimzi®), 세미플리맙-rwlc(Libtayo®), 티슬렐리주맙 및/또는 스파르탈리주맙이다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIM-3 저해제이고, 선택적으로 TIM-3 저해제는 MGB453 또는 TSR-022이다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 LAG-3 저해제이고, 선택적으로 LAG-3 저해제는 LAG525, BMS-986016 및 TSR-033으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIGIT 저해제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD112R 저해제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 TAM(Axl, Mer, Tyro) 저해제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 STING 작용제이다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 추가적인 치료제는 4-1BB 작용제이다.
화학치료제와의 병용
본 발명의 조성물과의 병용 및/또는 동시투여에 적합한 화학치료제는 예를 들어 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시안트란신디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤 및 퓨로마이신 및 이들의 유사체 또는 동족체를 포함한다. 추가의 물질은 예를 들어 항대사물질(예를 들어, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 사이타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예를 들어, 메클로르에타민, 티오TEPA, 클로르암부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU), 로무스틴(CCNU), 사이클로포스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조신, 미토마이신 C, 시스-디클로르디아민 백금(II)(DDP), 프로카바진, 알트레타민, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 사트라플라틴 또는 트리플라틴 테트라니트레이트), 안트라사이클린(예를 들어, 다우노루비신(이전에 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예를 들어, 닥티노마이신(이전에 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 및 안트라마이신(AMC)) 및 항유사분열제(예를 들어, 빈크리스틴 및 빈블라스틴) 및 테모졸로마이드를 포함한다.
PD-1/PD-L1 길항제와의 병용
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하고, PD-1/PD-L1 생물학적 활성 및/또는 인간 PD-1/PD-L1 신호전달에 의해 매개된 하류 경로(들) 및/또는 세포 과정 또는 다른 인간 PD-1/PD-L1-매개된 기능을 저해하는 하나 이상의 PD-1 길항제와 병용된다(예를 들어, 조합되어 투여된다).
따라서, PD-1/PD-L1 신호전달에 의해 매개된 하류 경로 및/또는 세포 과정, 예컨대 수용체 결합 및/또는 PD-1/PD-L1에 대한 세포 반응의 도출을 포함하는 PD-1/PD-L1 생물학적 활성을 직접적으로 또는 알로스테릭으로 차단하거나 길항시키거나 억제하거나 저해하거나 감소시키는 PD-1 길항제가 본원에 제공된다. 세포 또는 대상체에 의해 생성된 인간 PD-1 또는 PD-L1의 분량 또는 양을 감소시키는 PD-1 길항제가 본원에 또한 제공된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 PD-1에 결합하고 PD-1에 대한 PD-L1 결합을 방지하거나 저해하거나 감소시키는 PD-1 길항제를 제공한다. 일부 양태에서, PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1을 암호화하는 mRNA에 결합하고, 번역을 방지한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1을 암호화하는 mRNA에 결합하고, 분해 및/또는 턴오버를 초래한다.
일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-1 신호전달 또는 기능을 저해한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L1, PD-L2, 또는 PD-L1 및 PD-L2 둘 모두에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L1 및 PD-L2에 대한 PD-1의 결합을 차단한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 특이적으로 결합한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L2에 특이적으로 결합한다.
일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 동족 리간드에 대한 PD-1의 결합을 저해한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-L1에 대한 PD-1의 결합, PD-L2에 대한 PD-1의 결합, 또는 PD-L1 및 PD-L2 둘 모두에 대한 PD-1의 결합을 저해한다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 동족 리간드에 대한 PD-1의 결합을 저해하지 않는다.
일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체(mAb) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-L1에 결합하고 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 저해하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 결합하고 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 저해하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
PD-1과 이의 리간드 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 둘 모두 사이의 상호작용을 저해하거나 파괴하는 몇몇 면역 관문 길항제는 임상 개발 중이거나, 암을 치료하는 임상의에게 현재 이용 가능하다.
본 개시내용에 의해 제공된 임의의 조성물, 방법 및 용도에서 PD-1 길항제를 포함할 수 있는 항-인간 PD-1 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 예는 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙, MK-3475, h409A11; 모두 본원에 그 전문이 참고로 포함된 US8952136호, US8354509호, US8900587호 및 EP2170959호 참조; Merck), OPDIVO®(니볼루맙, BMS-936558, MDX-1106, ONO-4538; 모두 본원에 그 전문이 참고로 포함된 US7595048호, US8728474호, US9073994호, US9067999호, EP1537878호, US8008449호, US8779105호 및 EP2161336호 참조; Bristol Myers Squibb), MEDI0680(AMP-514), BGB-A317 및 BGB-108(BeiGene), 244C8 및 388D4(본원에 그 전문이 참고로 포함된 WO2016106159호 참조; Enumeral Biomedical), PDR001(Novartis) 및 REGN2810(Regeneron)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 따라서, 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 펨브롤리주맙이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 니볼루맙이다.
본 개시내용에 의해 제공된 임의의 조성물, 방법 및 용도에서 PD-1 길항제를 포함할 수 있는 항-인간 PD-L1 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 예는 BAVENCIO®(아벨루맙, MSB0010718C, 본원에 그 전문이 참고로 포함된 WO2013/79174호 참조; Merck/Pfizer), IMFINZI®(더발루맙, MEDI4736), TECENTRIQ®(아테졸리주맙, MPDL3280A, RG7446; 본원에 그 전문이 참고로 포함된 WO2010/077634호 참조; Roche), MDX-1105(BMS-936559, 12A4; 둘 모두 본원에 그 전문이 참고로 포함된 US7943743호 및 WO2013/173223호; Medarex/BMS) 및 FAZ053(Novartis)을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 따라서, 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 아벨루맙이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 더발루맙이다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 아테졸리주맙이다.
일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 결합하는 면역접합체, 예를 들어 면역글로불린 분자의 Fc 영역과 같은 불변 영역에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 PD-1 결합 부분 또는 세포외 부분을 함유하는 융합 단백질이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 면역부착 분자의 예는 WO2010/027827호 및 WO2011/066342호에 기재되어 있고, 이들 둘 모두는 본원에 그 전문이 참고로 포함된다. 일부 실시형태에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 PD-L2-FC 융합 단백질인 AMP-224(B7-DCIg로도 알려짐)이다.
당업자에 의해 PD-1 또는 PD-L1에 결합하고 PD-1/PD-L1 신호전달 경로를 파괴하는 임의의 PD-1 길항제가 본원에 개시된 조성물, 방법 및 용도에 적합하다고 이해될 것이다.
일부 실시형태에서, PD-1/PD-L1 길항제는 소분자, 핵산, 펩타이드, 펩타이드 모방체, 단백질, 탄수화물, 탄수화물 유도체 또는 글리코중합체이다. 예시적인 소분자 PD-1 저해제는 Zhan 등, (2016) Drug Discov Today 21(6):1027-1036에 기재되어 있다.
TIM-3 저해제와의 병용
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIM-3 저해제와 병용된다(예를 들어, 조합되어 투여된다). TIM-3 저해제는 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질 또는 올리고펩타이드일 수 있다. 일부 실시형태에서, TIM-3 저해제는 MGB453(Novartis), TSR-022(Tesaro) 또는 LY3321367(Eli Lilly)로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 MGB453과 조합되어 투여된다. 일부 실시형태에서, 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TSR-022와 조합되어 투여된다.
LAG-3 저해제와의 병용
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 LAG-3 저해제와 병용된다(예를 들어, 조합되어 투여된다). LAG-3 저해제는 항체, 이의 항원 결합 단편, 면역접합체, 융합 단백질 또는 올리고펩타이드일 수 있다. 일부 실시형태에서, LAG-3 저해제는 LAG525(Novartis), BMS-986016(Bristol-Myers Squibb), TSR-033(Tesaro), MK-4280(Merck & Co) 또는 REGN3767(Regeneron)로부터 선택된다.
기타 병용
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TIGIT 저해제, 키나제 저해제(예를 들어, 티로신 키나제 저해제(TKI)), CD112R 저해제, TAM 수용체 저해제, STING 작용제 및/또는 4-1BB 작용제, 또는 이들의 조합과 병용된다(예를 들어, 조합되어 투여된다).
검출 방법
일부 실시형태에서, 본원에 기재된 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 생물학적 샘플에서 인간 IL-27의 검출 및/또는 정량화의 방법에서 사용될 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 바와 같은 항-IL-27 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 환자에서 질환(예를 들어, 암)의 진행을 진단하고/하거나, 예측하고/하거나, 결정하는 데 유용하다.
본원에 정의된 바와 같이 암에서의 개선을 위한 대상체(예를 들어, 인간 환자)의 모니터링은 질환 매개변수의 변화, 예를 들어 종양 성장의 감소에 대해 대상체를 평가하는 것을 의미한다. 일부 실시형태에서, 그 평가는 투여 후 적어도 한(1)시간, 예를 들어 적어도 2, 4, 6, 8, 12, 24 또는 48시간, 또는 적어도 1일, 2일, 4일, 10일, 13일, 20일 이상, 또는 적어도 1주, 2주, 4주, 10주, 13주, 20주 이상 수행된다. 대상체는 하기 기간 중 하나 이상에서 평가될 수 있다: 치료 시작 전에; 치료 기간; 또는 치료의 하나 이상의 요소가 투여한 후. 평가는 추가의 치료에 대한 필요성을 평가하는 것, 예를 들어 투약량, 투여 빈도 또는 치료 기간이 변경되어야 하는지를 평가하는 것을 포함할 수 있다. 이것은 선택된 치료학적 양상을 추가하거나 뺄 필요성을 평가하는 것, 예를 들어 본원에 기재된 암에 대한 임의의 치료를 추가하거나 빼는 것을 또한 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체로부터의 샘플에서 IL-27을 검출하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) IL-27이 샘플에 존재하는 경우에는 검출 항체가 검출 항체-IL-27 복합체를 형성하게 하는 조건 하에 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계이되, 검출 항체는 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 생성된된 복합체가 있는 경우에는 상기 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 IL-27-연관된 암을 검출하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) IL-27이 샘플에 존재하는 경우에는 검출 항체가 검출 항체-IL-27 복합체를 형성하게 하는 조건 하에 IL-27-연관된 암을 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계이되, 검출 항체는 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 생성된 복합체가 있는 경우에는 상기 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 검출 항체는 검출 가능한 라벨에 커플링된다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 IL-27이 샘플에 존재하면 IL-27 및 포획 항체를 포함하는 복합체를 제조하도록 샘플을 포획 항체와 접촉시키는 단계를 추가로 포함하고, 포획 항체는 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.
일부 실시형태에서, 포획 항체는 고체 지지체 상에 부동화된다. 일부 실시형태에서, 샘플은 검출 항체 전에 포획 항체와 접촉한다. 일부 실시형태에서, 샘플은 체액 샘플이다. 일부 실시형태에서, 체액 샘플은 혈액, 혈청, 혈장, 세포 용해물 또는 조직 용해물이다.
일부 실시형태에서, 암은 신장 세포 암종(RCC), 간세포 암종, 폐암, 위식도암, 난소암, 자궁내막암, 흑색종, 백혈병 및 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 신장 세포 암종(RCC)이다. 다른 실시형태에서, 암은 간세포 암종(HCC)이다. 일부 실시형태에서, 암은 백혈병 및 림프종으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 암은 급성 골수성 백혈병(AML)이다.
실시예
본 개시내용이 이의 구체적인 실시형태를 참조하여 기재되어 있지만, 다양한 변화가 이루어질 수 있고, 본 개시내용의 정신 및 범위로부터 벗어나지 않으면서 균등물이 치환된다는 것이 당업자에 의해 이해되어야 한다. 또한, 본 개시내용의 목적, 정신 및 범위에 특정 상황, 재료, 물질의 조성, 공정, 공정 단계 또는 단계들을 조정하도록 많은 변형이 이루어질 수 있다. 모든 이러한 변형은 본 개시내용의 범위 내에 있도록 의도된다.
실시예 1: IL-27 EBI3 단량체에 특이적으로 결합하는 항-IL-27 항체의 생성 및 특징규명
이 실시예는 인간 IL-27의 EBI3 아단위에 특이적으로 결합하는 항-IL-27 항체의 제조를 기재한다. 간단히 말하면, BALB/c 마우스는 인간 EBI3 면역화 벡터(Aldevron)로 면역화되고, 항-EBI3 단일클론 항체를 발현하는 하이브리도마의 생성 및 단리에서 사용되었다. 단리된 하이브리도마는 본원에서 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7 및 Ab8이라 칭하는 항-IL-27 항체 분자를 발현하는 하이브리도마를 포함하였다. 하이브리도마 상청액은 표면-표적화된 인간 EBI3을 발현하는 포유류 세포에서 유세포분석법에 의해 분석되었다. 시험된 모든 하이브리도마 클론 상청액은 EBI3 발현 세포에 결합하였다(데이터 비기재).
예시적인 단리된 항-EBI3 항체 Ab7(이하 "Ab7-VH0"라 칭하는 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및 이하 "Ab7-VL0"라 칭하는 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하는 이하 "Ab7"이라 칭함)은 서열분석되고, 하기에 추가로 특징규명되었다(아미노 말단 신호 펩타이드 서열은 기재되지 않음).
단리된 Ab7 항체의 중쇄 가변 영역(Ab7-VH0)은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00002
중쇄 가변 영역 Ab7-VH0를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00003
단리된 Ab7 항체의 경쇄 가변 영역(Ab7-VL0)은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00004
단리된 Ab7 항체의 중쇄(Ab7-VH0-mIgG2a)는 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00005
경쇄 가변 영역 Ab7-VL0를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00006
단리된 Ab7 항체의 경쇄(Ab7-VL0-m카파)는 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00007
인간화된 Ab7 항체는 당해 분야에 공지된 방법을 사용하여 설계되었다. 간단히 말하면, 마우스 단일클론 Ab7 항체를 암호화하는 V 영역 유전자 서열은 일련의 전체 인간화된 항체를 작제하기 위해 사용되었다. 가변 영역 유전자는 인간 IgG1 중쇄 불변 도메인 및 인간 카파 경쇄 불변 도메인을 암호화하는 벡터로 클로닝되었다. 키메라 항체 및 인간화된 항체는 포유류 세포에서 일시적으로 발현되었다. 단리된 Ab7 중쇄 가변 영역의 인간화는 5개의 인간화된 중쇄 가변 영역 변이체(이하 "Ab7-VH1", "Ab7-VH2", "Ab7-VH3", "Ab7-VH4" 및 "Ab7-VH5"라 칭함)를 생성시켰다. 단리된 Ab7 경쇄 가변 영역의 인간화는 4개의 인간화된 경쇄 가변 영역 변이체(이하 "Ab7-VL1", "Ab7-VL2", "Ab7-VL3" 및 "Ab7-VL4"라 칭함)를 생성시켰다.
인간화된 Ab7 변이체 가변 영역을 한정하는 단백질 서열, 및 인간화된 Ab7 변이체 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 하기 요약되어 있다(아미노 말단 신호 펩타이드 서열은 기재되지 않음).
중쇄 가변 영역 Ab7-VH1은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00008
중쇄 가변 영역 Ab7-VH1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00009
중쇄 가변 영역 Ab7-VH2는 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00010
중쇄 가변 영역 Ab7-VH2를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00011
중쇄 가변 영역 Ab7-VH3은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00012
중쇄 가변 영역 Ab7-VH3을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00013
중쇄 가변 영역 Ab7-VH4는 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00014
중쇄 가변 영역 Ab7-VH4를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00015
중쇄 가변 영역 Ab7-VH5는 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00016
중쇄 가변 영역 Ab7-VH5를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00017
경쇄 가변 영역 Ab7-VL1은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00018
경쇄 가변 영역 Ab7-VL1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00019
경쇄 가변 영역 Ab7-VL2는 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00020
경쇄 가변 영역 Ab7-VL2를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00021
경쇄 가변 영역 Ab7-VL3은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00022
경쇄 가변 영역 Ab7-VL3을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00023
경쇄 가변 영역 Ab7-VL4는 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00024
경쇄 가변 영역 Ab7-VL4를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다(FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4):
Figure pct00025
단리된 모 Ab7 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열(Kabat 정의)은 표 1에 기재되어 있다.
Figure pct00026
완전한 키메라 및 인간화된 중쇄 또는 경쇄 항체 서열을 생성하기 위해, 상기 기재된 각각의 중쇄 가변 영역은 인간 IgG1 불변 영역과 조합되고, 상기 기재된 각각의 경쇄 가변 영역은 인간 카파 불변 영역과 조합된다.
키메라 및 인간화된 Ab7 변이체의 완전한 중쇄 및 경쇄를 한정하는 단백질 서열은 하기 요약되어 있다(아미노 말단 신호 펩타이드 서열이 기재되지 않음).
중쇄 Ab7-VH0-IgG1은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00027
중쇄 Ab7-VH0-IgG1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00028
중쇄 Ab7-VH1-IgG1은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00029
중쇄 Ab7-VH1-IgG1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00030
중쇄 Ab7-VH2-IgG1은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00031
중쇄 Ab7-VH2-IgG1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00032
중쇄 Ab7-VH3-IgG1은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00033
중쇄 Ab7-VH3-IgG1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00034
중쇄 Ab7-VH4-IgG1은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00035
중쇄 Ab7-VH4-IgG1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00036
중쇄 Ab7-VH5-IgG1은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00037
중쇄 Ab7-VH5-IgG1을 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00038
경쇄 Ab7-VL0-카파는 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00039
경쇄 Ab7-VL0-카파를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00040
경쇄 Ab7-VL1-카파는 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00041
경쇄 Ab7-VL1-카파를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00042
경쇄 Ab7-VL2-카파는 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00043
경쇄 Ab7-VL2-카파를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00044
경쇄 Ab7-VL3-카파는 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00045
경쇄 Ab7-VL3-카파를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00046
경쇄 Ab7-VL4-카파는 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00047
경쇄 Ab7-VL4-카파를 암호화하는 핵산 서열은 하기 서열을 갖는다 (FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4-불변 영역):
Figure pct00048
가변 영역 서열이 전장 면역글로불린 중쇄 및 경쇄를 제조하기 위해 다른 항체 불변 영역 서열에 융합될 수 있다고 또한 고려된다. 예를 들어, Ab7-VH0, Ab7-VH1, Ab7-VH2, Ab7-VH3, Ab7-VH4 또는 Ab7-VH5 중쇄 가변 영역은 인간 IgG2, IgG3, IgG4 또는 불변 영역에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 IgG4(예를 들어, IgG4mt 또는 IgG4mt2)와 조합될 수 있다. 유사하게, Ab7-VL0, Ab7-VL1, Ab7-VL2, Ab7-VL3 또는 Ab7-VL4 경쇄 가변 영역은 인간 람다 불변 영역과 조합될 수 있다.
상기 기재된 Ab7 및 인간화된 Ab7 변이체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 DNA 단편은 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄에 대해 pANT 발현 벡터(Antitope) 시스템으로 클로닝하기 위해 플랭킹 제한 효소 부위에 의해 합성되었다. 모든 작제물은 시퀀싱에 의해 확인되었다. 표 2에 기재된 중쇄 및 경쇄 조합은 PEI 형질주입 방법을 사용하여 HEK293 EBNA 부착성 세포(LGC Standards, 영국 테딩턴)로 일시적으로 형질주입되고, 형질주입 후 7일 동안 항온처리되었다.
Figure pct00049
항체를 단백질 A-접합된 세파로스 칼럼(GE Healthcare, Little Chalfont, UK)에서 세포 배양 상청액으로부터 정제하고, 1x DPBS pH 7.2로 완충액 교환하고, 예측된 아미노산 서열에 기초하여 흡광 계수(Ec(0.1%))를 사용하여 OD280nm에 의해 정량화되었다. 1 μg의 각각의 항체는 SDS-PAGE에 의해 분석되고, 전형적인 항체의 프로파일에 상응하는 밴드가 관찰되었다(데이터 비기재).
항-EBI3 항체의 시험관내 특징규명
표 2에 기재된 바대로 제조된 Ab7 항체 및 Ab7 항체 변이체는 이의 생물학적 특징 및 활성을 확인하기 위해 일련의 시험관내 검정에서 시험되었다.
키메라 Ab7.1 항체에 대한 인간화된 Ab7 항체 변이체의 결합을 평가하기 위해, 결합 경쟁 ELISA가 확립되었다. 검정 플레이트를 1x DPBS pH 7.2 중에 희석된 1 μg/mL의 인간 IL-27(hIL-27)(R&D Systems, Abingdon, UK)로 코팅하고, 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 모든 항체를 25 μg/mL로 2% BSA/DPBS에 희석하고, 플레이트에 3배 아래로 연속 희석하여 8개의 점 결합 곡선을 생성하였다. 항체 희석을 0.08 μg/mL의 일정한 최종 농도에서 비오틴화된 Ab7.1 항체와 예비 혼합하였다. 이후, 항체 혼합물을 코팅된 검정 플레이트로 옮기고, 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 비오틴화된 Ab7.1 항체의 결합은 스트렙타비딘-퍼옥시다제 접합체(Sigma-Aldrich, Gillingham, UK) 및 TMB 기질(ThermoFisher, Loughborough, UK)로 검출되었다. 반응을 1M HCl로 중단시키고, Dynex Technologies MRX TC II 플레이트 판독기에서 450 nm에서 흡광도 판독하였다.
시험된 항체의 절대 IC50 값은 4개-매개변수 로지스틱 곡선을 사용하여 결정되었다. 각각의 플레이트에서 키메라 항체의 IC50에 대비된 정규화된 IC50은 표 3에 요약되어 있다. 결과는 Ab7-VL4 경쇄를 함유하는 변이체를 제외하고 생성된 모든 인간화된 Ab7 변이체가 키메라 Ab7.1 항체와 유사한 결합 프로파일을 갖는다는 것을 보여주고, 대부분의 변이체는 2배의 키메라 Ab7.1 항체 내에 경쟁한다.
Figure pct00050
항체는 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 추가로 특징규명되었다. 동역학 실험은 Biacore T200(GE Healthcare, Uppsala, Sweden)에서 수행되었다. 모든 실험은 hIL-27(R&D Systems, Abingdon, UK)을 사용하여 HBS-P+ 전개 완충액(pH 7.4)(GE Healthcare, Little Chalfont, UK)으로 25℃에서 실행되었다. 인간 IL-27(hIL-27) 항원은 약 16 RU로 CM5 칩에 포획되었다. 10 mM 아세테이트 완충액 pH 5.0 중의 1 μg/mL의 단백질 농도에서 부동화를 수행하였다. 각각의 농도 사이의 재생성 없이 HBS-P+ 완충액에 희석된 3.3 nM 내지 30 nM의 항체의 3점, 3배 희석 범위가 사용되었다. 증가하는 농도의 항체의 3개 주사에 대한 결합 단계는 매회 75초 동안 모니터링되고, 단일 분해 단계는 마지막 항체 주사 후 250초 동안 측정되었다. hIL-27 표면의 재생성은 120초 동안 2M MgCl2의 단일 주사를 사용하여 수행되었다. 동역학 사이클에 걸쳐 표면 및 분석물질의 안정성을 확인하기 위해 검정에 걸쳐 키메라 항체의 다수의 반복(n = 4)이 수행되었다.
1:1 결합 및 2가 분석물질 모델 둘 모두는 항체의 2가 성질로 인해 데이터를 분석하도록 사용되었다. 1:1 결합 모델 분석으로부터의 결과는 표 4에 요약되어 있고, 2가 분석물질 모델로부터의 결과는 표 5에 요약되어 있다.
Figure pct00051
Figure pct00052
1:1 모델을 사용한 단일 사이클 동역학(표 4)은 2가 분석물질 모델(표 5) 및 경쟁 ELISA로부터의 결과와 일치하게 Ab7-VL4 인간화된 변이체가 hIL-27에 결합하지 않고, 남은 변이체가 2배의 키메라 항체 내에 결합한다는 것을 입증한다.
요약하면, 단일 사이클 동역학에 의해 결정된 바대로 1:1 결합 모델을 사용하여 Ab7.1 키메라 항체의 결합 친화도는 1 nM이었다. 모든 인간화된 변이체는 결합이 폐지된 Ab7-VL4 함유 변이체를 제외하고 1.5 nM 이하의 KD를 갖는다. 이 결과는 Ab7 항체 및 Ab7 항체 변이체가 IL-27의 EBI3 아단위에 높은 친화도로 결합한다는 것을 입증한다.
실시예 2: 인간 IL-27의 EBI3 및/또는 P28 아단위에 특이적으로 결합하는 효모에서의 항-IL-27 항체의 생성
다수의 에피토프 빈을 나타내는 추가적인 항-IL-27 단일클론 항체는 하기 기재된 방법을 사용하여 8개의 미경험 인간 합성 효모 라이브러리로부터 선택되었다.
재료 및 방법
약 109 다양성의 각각의 8개의 미경험 인간 합성 효모 라이브러리는 이전에 기재된 바대로 증식되었다(예를 들어, 모두 본원에 그 전문이 참고로 포함된 Xu 등, (2013) Protein Eng Des Sel 26(10):663-670; WO2009036379호; WO2010105256호; 및 WO2012009568호 참조). 처음의 2회차의 선택을 위해, Miltenyi MACS 시스템을 사용한 자기 비드 분류 기법은 이전에 기재된 바대로 수행되었다(예를 들어, 본원에 그 전문이 참고로 포함된 Siegel 등 (2004) J Immunol Methods 286(1-2):141-153 참조).
간단히 말하면, 효모 세포(약 1010개의 세포/라이브러리)를 세척 완충액(인산염-완충 식염수(PBS)/0.1% 소 혈청 알부민(BSA)) 중에 30℃에서 30분 동안 3 mL의 100 nM 비오틴화된 항원(재조합 인간 IL-27; R&D Systems)과 항온처리하였다. 세포 펠릿을 40 mL의 아주 차가운 세척 완충액으로 1회 세척한 후 20 mL의 세척 완충액에 재현탁하고, Streptavidin MicroBeads(500 μl)를 효모에 첨가하고, 4℃에서 15분 동안 항온처리하였다. 다음에, 효모 세포를 펠릿화하고, 20 mL의 세척 완충액에 재현탁하고, Miltenyi LS 칼럼에 로딩하였다. 20 mL를 로딩한 후, 칼럼을 3 mL의 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 이후, 칼럼을 자기장으로부터 제거하고, 효모 세포를 5 mL의 성장 배지로 용리시키고, 이후 밤새 성장시켰다. 유세포분석법을 사용하여 차후의 회차의 선택을 수행하였다. 대략 2×107개의 효모 세포를 펠릿화하고, 세척 완충액으로 3회 세척하고, 평형 조건 하에 감소하는 농도의 비오틴화된 항원(100 내지 1 nM), 종 교차-반응성을 얻기 위한 30 nM의 상이한 종의 비오틴화된 항원 또는 선택으로부터 비특이적 항체를 제거하기 위한 다중-특이성 고갈 시약(PSR: poly-specificity depletion reagent)과 30℃에서 항온처리하였다. PSR 고갈을 위해, 라이브러리를 비오틴화된 PSR 시약의 1:10 희석과 항온처리하였다.
이후, 효모 세포를 세척 완충액으로 2회 세척하고, 4℃에서 15분 동안 LC-FITC(1:100 희석) 및 SA-633(1:500 희석) 또는 EAPE(1:50 희석) 2차 시약 중 어느 하나로 염색하였다. 세포 펠릿을 세척 완충액으로 2회 세척한 후에 0.3 mL의 세척 완충액에 재현탁하고, 스트레이너-캡핑된 분류 관으로 옮겼다. FACS ARIA 분류기(BD Biosciences)를 사용하여 분류를 수행하고, 원하는 특징을 갖는 항체를 선택하기 위해 분류 게이트를 결정하였다. 모든 원하는 특징을 갖는 집단이 얻어질 때까지 선택 회차를 반복하였다. 최종 회차의 분류 후, 효모 세포를 플레이팅하고, 개별 콜로니를 규명을 위해 선별하였다.
경쇄 다양화
항체의 추가의 발견 및 개선을 위해 1차 발견 단계 동안 경쇄 다양성 프로토콜을 사용하였다.
경쇄 배치 다양화 프로토콜: 미경험 선택 산출물로부터의 중쇄 플라스미드를 부수고 붙잡기를 통해 효모로부터 추출하고, 증폭시키고 후속하여 E. 콜라이로부터 정제하고, 5 × 106의 다양성을 갖는 경쇄 라이브러리로 형질전환하였다. 미경험 발견과 동일한 조건을 이용하여 1회차의 MACS 및 4회차의 FACS로 선택을 수행하였다. 상이한 FACS 회차에, 항원 적정에 의해 PSR 결합, 종 교차-반응성 및 친화도 압박에 대해 라이브러리를 살펴보았다. 원하는 특징을 갖는 집단을 얻기 위해 분류를 수행하였다.
항체 최적화
하기 기재된 바대로 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로 다양성을 도입하여 항체의 최적화를 수행하였다.
CDRH1 및 CDRH2 선택: 단일 항체의 CDRH3을 1 × 108의 다양성의 CDRH1 및 CDRH2 변이체를 갖는 예비제조 라이브러리로 재조합하고, 미경험 발견에 기재된 바대로 1회차의 MACS 및 4회차의 FACS로 선택을 수행하였다. 상이한 FACS 회차에, 적정 또는 부모 Fab 사전-복합화에 의해 PSR 결합, 종 교차-반응성 및 친화도 압박에 대해 라이브러리를 살펴보고, 원하는 특징을 갖는 집단을 얻기 위해 분류를 수행하였다.
항체 생산 및 정제
효모 클론은 포화로 성장하고, 이후 진탕시키면서 30℃에서 48시간 동안 유도되었다. 유도 후, 효모 세포를 펠릿화하고, 상청액을 정제를 위해 수확하였다. IgG를 단백질 A 칼럼을 사용하여 정제하고, 아세트산, pH 2.0으로 용리하였다. Fab 단편을 파파인 분해에 의해 생성하고, KappaSelect(GE Healthcare LifeSciences) 위에서 정제하였다.
ForteBio K D 측정
ForteBio 친화도 측정을 일반적으로 이전에 기재된 바대로 Octet RED384에서 수행하였다(예를 들어, 본원에 전체적으로 참조로 포함된 Estep 등, High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity and epitope binning. Mabs 5(2), 270-278 (2013) 참조). 간단히 말하면, IgG를 AHO 센서에 온라인으로 로딩하여 ForteBio 친화도 측정을 수행하였다. 센서를 30분 동안 검정 완충액에서 오프라인으로 평형화하고, 이후 기준치 확립을 위해 60초 동안 온라인으로 모니터링하였다. IgG가 로딩된 센서를 3분 동안 100 nM 항원에 노출시키고, 이후 분해-속도 측정을 위해 3분 동안 검정 완충액으로 옮겼다. 1:1 결합 모델을 사용하여 모든 동역학을 분석하였다. 재조합 인간 IL-27 단백질(R&D Systems 카탈로그: 2526-IL)은 항원으로 사용되었다. 항-IL-27 항체에 대한 친화도 측정은 도 1에 도시되어 있다.
ForteBio 에피토프 비닝/리간드 차단
표준 샌드위치 형식 교차차단 검정을 사용하여 에피토프 비닝/리간드 차단을 수행하였다. 대조군 항-표적 IgG를 AHQ 센서에 로딩하고, 센서 상의 비점유된 Fc-결합 부위를 관련없는 인간 IgG1 항체로 차단하였다. 이후, 센서를 100 nM 표적 항원, 이어서 제2 항-표적 항체 또는 리간드에 노출시켰다. 항원 회합 후 제2 항체 또는 리간드에 의한 추가 결합은 비점유된 에피토프(비경쟁자)를 나타내는 반면, 무결합은 에피토프 차단(경쟁자 또는 리간드 차단)을 나타낸다.
MSD-SET 동역학 검정
평형 친화도 측정을 이전에 기재된 바대로 수행하였다(Estep　등, 2013). 용액 평형 적정(SET: solution equilibrium titration)은 10 내지 100 pM에서 일정하게 유지된 항원과 PBS + 0.1% IgG-무 BSA(PBSF)에서 수행하고, 5 내지 100 nM에서 시작하여 항체의 3배 내지 5배 연속 희석액과 항온처리하였다(실험 조건은 샘플 독립적임). 항체(PBS 중의 20 nM)를 4℃에서 밤새 또는 실온에서 30분 동안 표준 결합 MSD-ECL 플레이트에 코팅하였다. 이후, 플레이트를 700 rpm에서 진탕시키면서 30분 동안 차단한 후에, 세척 완충액(PBSF + 0.05% Tween 20)으로 3회 세척하였다. SET 샘플을 적용하고, 700 rpm에서 진탕시키면서 150초 동안 플레이트에서 항온처리한 후에, 1회 세척하였다. 플레이트에 포획된 항원을 3분 동안 플레이트에서의 항온처리에 의해 PBSF 중의 250 ng/mL의 술포태그-표지된 스트렙타비딘으로 검출하였다. 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척하고, 이후 1x Read Buffer T와 계면활성제를 사용하여 MSD Sector Imager 2400 장치에서 판독하였다. 유리 항원 퍼센트는 Prism에서 적정된 항체의 함수로서 작도되고, 이차방정식에 적합화하여 KD를 구했다. 처리율을 개선하기 위해, SET 샘플 제조를 포함하는 MSD-SET 실험에 걸쳐 액체 취급 로봇을 사용하였다.
실시예 3: 재조합 인간 IL-27에 대한 항-IL-27 항체의 결합
재조합 인간 IL-27에 결합하는 실시예 2에 기재된 항-IL-27 항체의 능력은 ELISA에 의해 평가되었다. 간단히 말하면, Nunc Maxisorp ELISA 플레이트(Affymetrix #44-2404-21)를 100 μL/웰의 재조합 인간 IL-27(R&D Systems #2526-IL/CF)(PBS에 0.5 μg/mL 희석됨)로 코팅하고, 밀봉하고 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 플레이트를 100 μL/웰의 세척 완충액(PBS + 0.01% Tween)으로 3회 세척하였다. 이후, 플레이트를 진탕시키면서 실온(RT)에서 1시간 동안 200 μL/웰의 차단 완충액(PBS + 0.1% BSA + 0.01% Tween)으로 차단하였다. 차단 완충액을 경사여과시키고, 희석된 대조군 및 항-IL-27 항체의 웰당 100 μL를 표시된 바대로 첨가하였다. 1μg/mL의 상부 농도로부터 시작하여 항체를 1:10 희석하여 각각의 항체에 대해 10점 연속 희석을 생성하였다. 플레이트를 진탕시키면서 RT에서 1시간 내지 2시간 동안 항온처리하였다. 플레이트를 100 μL/웰의 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 100 μL/웰의 항-인간 IgG 2차 항체(SouthernBiotech; 카탈로그 # 2014-05)를 첨가하였다(차단 완충액에 1:5000 희석됨). 이후, 플레이트를 진탕시키면서 RT에서 1시간 동안 항온처리하였다. 1시간 항온처리 후에, 플레이트를 100 μL/웰의 세척 완충액으로 3회 세척하였다. 플레이트를 전개시키기 위해, 100 μL/웰의 TMB 완충액(Life Technologies #00-2023)을 첨가하였다. 표준 곡선의 웰에서의 청색 색상의 전개가 관찰되었고, 가장 높은 농도의 희석된 대조군 항체가 진청색에 도달하자마자(5분 내지 10분), 50 μL/웰의 STOP 용액(Thermo Fisher #SS04)을 첨가하였다(색상이 황색으로 변할 것임). 전개된 플레이트를 반응의 중단 30분 내에 450 nm(파장 보정을 위해 마이너스 570 nm)에서 판독하였다.
도 2에 도시된 것처럼, 항-IL-27 항체는 재조합 인간 IL-27에 결합한다. IgG 아이소타입 대조군 항체(IgG 대조군)는 비교자로서 사용되었다.
예를 들어, 생화학 친화도 및 특이성 연구는 항-IL-27 항체 SRF388이 이종이합체성 사이토카인 IL-27의 p28 아단위에 결합한다(그러나 EBI3 아단위에는 결합하지 않음)는 것을 보여주었다. SRF388은 인간, 비인간 영장류 및 설치류 재조합 IL-27에 결합하고, 결합 정도는 종들 사이에 상이하였다. IL-27에 대한 SRF388의 결합 특이성은 약 4500개 세포 표면의 패널 및 가용성 분자에 대한 시험에 의해 확인되었고, 오프-타깃 결합이 관찰되지 않았다. 수용체 IL-27RA(WSX-1)에 대한 IL-27의 결합 특이성이 또한 확인되었고; 다른 세포 표면 수용체는 인간 IL-27에 결합하지 않았다. 인간 IL-27과 IL-27RA(WSX-1) 사이의 상호작용을 차단하는 SRF388의 능력은 표면 플라스몬 공명에 의해 확인되었다.
본원에 개시된 항체의 결합은 여러 모델 시스템에서 평가되었다. 인간 IL-27이 마우스 세포에 생물학적 활성이므로, DNA 미니서클 전달을 사용한 마우스에서의 인간 IL-27의 전신 과발현은 전장-게놈 마이크로어레이 분석, 유세포분석법 및 혈청 사이토카인 분석에 의해 생체내 IL-27-매개된 효과를 분석하도록 사용되었다. 생체내 IL-27에 의해 조절된 많은 마커는 인간 세포-기반 검정에서의 발견과 일치하였다. SRF381은 또한 파종성 B16 종양 모델에서 평가되었다. 그 환경에서, SRF381에 의한 치료는 IL-27 리간드(IL-27 p28, EBI3) 또는 수용체(IL-27RA)의 다양한 성분에 대해 결핍인 마우스에서 관찰된 표현형과 일치한 결과를 보여주었다.
종합하면, 이 연구는 SRF388(및 이의 형제 SRF381)이 마우스에서 IL 27 결핍증을 표현형카피할 수 있고, IL-27에 특이적으로 고친화도로 결합하고, 단독으로 또는 PD-L1 차단제와 조합되어 이의 면역억제 효과를 저해할 수 있다는 것을 입증한다.
실시예 4: 항-IL27 항체는 시험관내 STAT1의 인산화를 저해한다
IL-27 수용체(IL-27R)를 통한 IL-27 신호전달은 신호 유도자 및 전사 활성제 1(STAT1) 폴리펩타이드를 인산화(pSTAT1)한다. 실시예 2에 기재된 항-IL-27 항체는 유세포분석법에 의해 인간 전혈, 인간 PBMC, U937 골수성 세포(조직구성 림프종 세포주) 및 HUT-78 T 세포 림프종 세포에서 STAT1의 IL-27-매개된 인산화를 저해하는 이의 능력에 대해 시험되었다.
항-IL-27 항체는 인간 전혈에서의 STAT1의 IL-27-매개된 인산화를 저해하는 이의 능력에 대해 시험되었다. 간단히 말하면, 이 검정에서 실온에서 저장된 EDTA 항응고된 전체 인간 혈액을 사용하였다. 45 μL의 혈액을 딥 웰, 환저 플레이트(Phenix #850356)의 각각의 웰에 분배하고, 플레이트 가온기(EchoTherm IC20)에서 37℃에서 또는 37℃ 항온처리기에서 30분 동안 가온시켰다. 항-IL-27 항체를 폴리프로필렌 V-바닥 플레이트(Corning #3363)에서 내독소-비함유 PBS(Teknova #P0300)에 10x 상부 농도로 희석하였다. 항-IL-27 항체를 내독소-비함유 PBS에 원하는 바대로 연속 희석하였다. PBS 단독을 비자극된 대조군 및 자극된 대조군에 대해 웰에 첨가하였다. 5 μL의 각각의 희석을 45 μL의 혈액의 웰에 첨가하고, 플레이트 진탕기에서 15초 1000 RPM(Eppendorf Mix Mate)에서 진탕시켜 혼합하였다. 플레이트를 플레이트 가온기에서 37℃에서 또는 37℃ 항온처리기에서 60분 동안 항온처리하였다.
10 μg의 재조합 인간 IL-27 바이알(R&D Systems # 2526-IL)을 100 μL의 PBS + 0.1% BSA(10% BSA Sigma #A1595로부터 제조됨)를 첨가하여 100 μg/mL로 재구성하였다. 재조합 hIL-27(rhIL-27)의 워킹 스톡을 내독소-비함유 PBS에 200 ng/mL로 희석하여 제조하였다. 60분 항온처리 후에, 5 μL의 200 ng/mL rhIL-27을 자극된 혈액의 각각의 웰에 첨가하였다. 5 μL의 PBS를 비자극된 대조군 웰에 첨가하였다. 플레이트를 플레이트 진탕기에서 1000 RPM에서 15초 동안 진탕시켰다. 플레이트를 37℃에서 30분 동안 항온처리하였다.
30분 항온처리 후에, 세포를 고정하였다. Lyse/Fix 시약(BD #558049)을 무균수(Hyclone #SH3052902)에 1:5 희석하고, 수욕에서 37℃로 가온시켰다. 500 μL의 Lyse/Fix 시약을 딥 웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 플레이트 진탕기에서 1000 RPM에서 15초 동안 혼합하였다. 플레이트를 37℃에서 15분 동안 항온처리하였다.
15분 항온처리 후에, 플레이트를 실온에서 1500 RPM에서 5분 동안 원심분리하고(Eppendorf 원심분리기 5810R), 상청액을 플리킹(flicking)하여 버렸다. 1 mL의 내독소-비함유 PBS를 웰마다 첨가하고, 플레이트를 플레이트 진탕기에서 1000 RPM에서 15초 동안 진탕시켰다. 플레이트를 실온에서 1500 RPM에서 5분 동안 원심분리하고(Eppendorf 원심분리기 5810R), 상청액을 플리킹하여 버렸다. 세포 펠릿이 플레이트에 남았다.
세포 펠릿을 FACS 완충액(PBS, Gibco #14190-144 /2% FBS, Sigma #F8317/1 mM EDTA, Fisher #BP2482) 중에 50 μL의 1:200 CD14-Pacific Blue(Biolegend #325616)에 재현탁하고, U-바닥 96웰 플레이트(Costar #3799)로 옮겼다. 플레이트를 플레이트 밀봉기(VWR #89134-432)로 밀봉하고, 암소에서 실온에서 30분 동안 항온처리하였다.
30분 항온처리 후에, 150 μL의 FACS 완충액을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1500 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 이후, 세포 펠릿을 피펫팅으로 (-20℃에서 저장된) 100 μL의 Perm III(BD #558050)에 재현탁하고, 플레이트를 플레이트 밀봉기 및 뚜껑으로 밀봉하였다. 플레이트를 -20℃에서 밤새 또는 4℃에서 15분 항온처리하였다. 항온처리 후에, 150 μL의 PBS를 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1500 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 플리킹하여 플레이트로부터 버리고, 플레이트를 하기 표 6에 기재된 바대로 제조된 50 μL의 염색 칵테일에 재현탁하였다:
Figure pct00053
플레이트를 암소에서 실온에서 1시간 동안 항온처리하였다. 1시간 항온처리 후에, 100 μL의 FACS 완충액을 첨가하고, 플레이트를 실온에서 1500 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 플리킹하여 플레이트로부터 버리고, 플레이트를 유세포분석법에 의한 분석을 위해 100 μL의 FACS 완충액 중에 재현탁하였다.
도 3a에 도시된 것처럼, 항-IL-27 항체는 인간 전혈에서의 STAT1의 인산화를 저해한다. 항-IL-27 항체 Ab14는 인간 전혈에서 24.7 ng/mL의 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다.
실시예 2에 기재된 항-IL-27 항체는 유세포분석법에 의해 혼주된 인간 PBMC에서 STAT1의 IL-27-매개된 인산화를 저해하는 이의 능력에 대해 추가로 시험되었다. 간단히 말하면, 버피 코트로부터 얻은 인간 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)의 동결된 저온바이알은 액체 질소 저장으로부터 제거되고, 37℃ 수욕에서 빨리 해동되었다. 각각의 저온바이알의 내용물을 P1000 피펫으로 제거하고, 15 mL의 원추형 팔콘 관으로 옮겼다. 2 내지 3 mL의 완전 RPMI-1640(Gibco, 61870-036)을 해동된 세포에 천천히 첨가하고, 세포를 온화하게 와류시키거나 플리킹하여 현탁하였다. 원추형 관을 완전 RPMI-1640으로 10 mL로 토핑 오프하고, 관을 뒤집어 혼합하였다. 원추형 관은 실온에서 1400 RPM에서 8분 동안 원심분리된 관이다.
PBMC 세포를 따뜻한 혈청-비함유 RPMI-1640에서 mL당 400만개의 세포의 밀도로 재현탁하고, 환저 96웰 플레이트(Costar, 3799)에서 웰(50 μ)당 200,000개의 세포의 밀도로 플레이팅하였다. 항-IL-27 항체를 96웰 폴리프로필렌 플레이트의 제1 열에서 혈청-비함유 RPMI-1640에 40 μg/mL의 상부 농도로 희석하였다(10 μg/mL 최종일 것임). 플레이트의 처음의 10열의 나머지에서 원하는 바대로 연속 희석(1:2, 1:3 등 …)을 만들었다. 50 마이크로리터(μL)의 항체 스톡(4x)을 환저 플레이트에서 PBMC 세포의 플레이트의 처음의 10열에 첨가하였다. 11열 및 12열에서, 50 μL의 혈청-비함유 RPMI-1640 세포 배지를 첨가하였다. 이후, 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 항온처리하였다.
2시간 항온처리 후에, 혈청-비함유 RPMI-1640 세포 배지에 희석된 100 μ의 50 ng/mL 재조합 인간 IL-27(R&D Systems, 2526-IL)을 25 ng/mL의 최종 농도에 대해 (무혈청 배지 단독 또는 항체 단독을 포함한 대조군 웰을 제외한) 각각의 웰에 첨가하였다. 100 μL의 무혈청 RPMI-1640 세포 배지를 대조군 웰 또는 항체 단독을 갖는 웰에 첨가하였다. 플레이트를 37℃에서 20분 동안 항온처리하였다.
20분 항온처리 후에, DI 물 중의 50 μL의 4% PFA(Pierce, 28906)를 각각의 웰에 직접 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 5분 동안 항온처리하여 세포를 고정하였다. 플레이트를 2000 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 배지를 플리킹하여 버리고, 플레이트를 150 μL의 DPBS로 세척하였다. 세척 단계를 2회 더 반복하였다. H2O에 희석된 50 μ의 아주 차가운 90% 메탄올(MeOH)(Sigma, 439193)을 12-채널 피펫을 사용하여 각각의 웰에 빨리 첨가하였다. 첨가할 때 MeOH 특수 관리를 기울여 각각의 웰을 혼합하였다. 플레이트를 20℃에서 적어도 15분 동안 항온처리하였다. 100 μL의 DPBS를 90% 메탄올의 상부에서 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 2000 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 플레이트 내용물을 플리킹하여 버리고, 플레이트를 이전에 기재된 바대로 3회 세척하였다. 마지막 세척 후에, 세포 펠릿은 플레이트의 웰에 남았다.
펠릿화된 PBMC를 암소에서 실온에서 45분 동안 FACS 완충액(2% FBS, DPBS 중 2 mM EDTA) 중의 pSTAT1 PE(BD Phosflow, 526069) 1:100으로 염색하였다. 관리를 기울여 염색을 첨가할 때 12-채널 피펫으로 각각의 웰을 혼합하였다. 45분 항온처리 후에, 100 μL의 FACS 완충액을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 2000 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액을 플리킹하여 버리고, 플레이트를 이전에 기재된 바대로 2회 세척하였다. 세포를 100 μL의 FACS 완충액에 재현탁하고, 유세포분석법에 의해 분석하였다.
도 3b에 도시된 바대로, 항-IL-27 항체는 인간 혼주된 PBMC에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항-IL-27 항체 SRF381은 혼주된 인간 PBMC에서 140.5 ng/mL(n = 2)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항-IL-27 항체 SRF388은 혼주된 인간 PBMC에서 58.3 ng/mL(n = 3)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다.
항-IL-27 항체는 본질적으로 도 3b에 기재된 바대로 유세포분석법에 의해 Fc 수용체를 발현하는 것으로 공지된 세포주인 U937 세포에서 STAT1의 IL-27-매개된 인산화를 저해하는 이의 능력에 대해 추가로 시험되었다. 도 3c에 도시된 것처럼, 항-IL-27 항체는 표시된 바와 같은 U-937 세포에서 STAT1의 인산화를 저해한다. 항체 SRF381은 U937 세포에서 81 ng/mL(n = 2)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항체 SRF388은 U937 세포에서 96 ng/mL(n = 2)의 평균 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다.
항-IL-27 항체는 본질적으로 도 3b에 도시된 것처럼 유세포분석법에 의해 세포 표면 Fc 수용체를 발현하지 않는 피부 T-세포 림프종 라인 HUT-78에서 STAT1의 IL-27-매개된 인산화를 저해하는 이의 능력에 대해 시험되었다. 도 3d에 도시된 것처럼, 항-IL-27 항체는 HUT-78 세포에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항체 SRF381은 HUT-78 세포에서 80 ng/mL(n=1)의 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다. 항체 SRF388은 HUT-78 세포에서 95 ng/mL(n = 1)의 IC50에서 STAT1의 인산화를 저해하였다.
본 개시내용은 또한 전혈 검정에서 종에 걸친 SRF388에 의한 IL-27 저해를 평가하였다. 종에 걸친 SRF388 활성을 특징규명하기 위해, 인간, 시아노몰거스 원숭이, 래트 및 마우스로부터의 재조합 IL-27은 이들 종으로부터 얻은 전혈 샘플로부터 T 림프구에서 pSTAT1 신호전달을 자극하도록 시험되었다(데이터 비기재).
간단히 말하면, 전혈을 37℃로 가온시킨 후, SRF388과 60분 예비항온처리하고, 20 ng/mL의 인간 IL-27을 첨가하였다. 샘플을 추가 30분 동안 항온처리하였다. 백혈구를 고정하고, 적혈구를 용해시켰다. 세척 후에, 고정된 세포를 투과시키고, 항-CD3 및 항-포스포-STAT1(Y701)로 염색하였다. 1시간 항온처리 후에, 샘플을 세척하고, 유세포분석법을 위해 재현탁하였다. 자극된 및 비자극된 대조군 웰을 사용하여 퍼센트 저해를 계산하고, GraphPad Prism을 사용하여 IC50 값을 계산하였다.
인간 T 세포에서의 SRF388 신호전달 저해에 대표적인 데이터는 도 3e에 도시되어 있다. 상이한 종에 대한 SRF388의 친화도에 이루어진 관찰과 일치하게, SRF388에 의한 IL-27 신호전달 저해의 효력은 인간에서 가장 강하고, 이어서 시아노몰거스 원숭이, 래트 및 마우스였다(예를 들어, 표 7 참조).
Figure pct00054
실시예 5: 항-IL-27 항체에 의한 CD161의 IL-27- 매개된 저해의 감소
C형 렉틴 CD161은 발현이 IL-27에 의해 억제되는 T 세포의 마커이다. 실시예 2에 기재된 항-IL-27 항체는 유세포분석법에 의해 혼주된 인간 PBMC 세포에서의 CD161의 IL-27-매개된 저해를 역전시키는 이의 능력에 대해 시험되었다. 간단히 말하면, 버피 코트로부터 얻은 혼주된 인간 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)의 동결된 저온바이알을 액체 질소 저장으로부터 제거하고, 37℃ 수욕에서 빨리 해동하였다. 각각의 저온바이알의 내용물을 P1000 피펫으로 제거하고, 15 mL의 원추형 팔콘 관으로 옮겼다. 2 내지 3 mL의 완전 RPMI-1640(Gibco, 61870-036)을 해동된 세포에 천천히 첨가하고, 세포를 온화하게 와류시키거나 플리킹하여 현탁하였다. 원추형 관을 완전 RPMI-1640으로 10 mL로 토핑 오프하고, 관을 뒤집어 혼합하였다. 원추형 관은 실온에서 1400 RPM에서 8분 동안 원심분리된 관이다.
외부 벽의 사용은 5일 검정 동안 증발의 효과를 최소화하도록 회피되었다. 외부 웰은 DPBS(Gibco, 14190-144)의 웰당 200 μL로 충전되어야 한다. PBMC 세포를 따뜻한 완전 RPMI-1640에 mL당 200만개의 세포의 밀도로 재현탁하였다. 정제된 인간 항-CD3 항체(Biolegend, UCTH1, #300402)를 0.5 μg/mL의 농도로 첨가하였다(이것은 최종 농도의 2배임). 환저 96웰 플레이트(Costar, 3799)에서 이 세포 혼합물의 웰당 100 μL(웰당 200,000개의 세포)를 플레이팅하였다.
항-IL-27 항체를 40 μg/mL의 상부 농도(10 μg/mL 최종일 것임)로 96웰 폴리프로필렌 플레이트의 제1 열에서 완전 RPMI-1640에 희석하였다. 플레이트의 처음의 10열의 나머지에서 원하는 바대로 연속 희석(1:2, 1:3 등 …)을 만들었다. 50 μL의 항체 스톡(4x)을 환저 플레이트에서 PBMC 세포의 플레이트의 처음의 10열에 첨가하였다. 11열 및 12열에서, 50 μL의 완전 RPMI-1640을 첨가하였다.
항-IL-27 항체의 첨가 후에, 완전 RPMI-1640에 희석된 50 μL의 100 ng/mL 재조합 인간 IL-27(R&D Systems, #2526-IL)을 25 ng/mL의 최종 농도를 위해 (무혈청 배지 또는 항체 단독을 포함하는 대조군 웰을 제외한) 각각의 웰에 첨가하였다. 50 μL의 완전 RPMI-1640을 대조군 웰에 첨가하였다. 플레이트를 최소 간섭으로 조직 배양 항온처리기에서 37℃에서 5일 동안 항온처리하였다.
5일 항온처리 후에, 플레이트를 항온처리기로부터 제거하고, 플레이트 진탕기에서 600 RPM에서 30초 동안 교반하였다. 플레이트를 1800 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 배지를 제거하고, 추가적인 검정을 위해 떼어 놓고, 플레이트를 150 μL의 DPBS(Gibco, #14190-144)로 세척하였다. 세척 단계를 2회 더 반복하였다. 세포 펠릿을 하기 표 8에 기재된 바대로 염색 칵테일의 웰당 50 μL로 염색하였다:
Figure pct00055
플레이트를 플레이트 진탕기에서 600 RPM에서 30초 동안 교반하고, 플레이트를 실온에서 암소에서 30분 동안 항온처리하였다.
30분 항온처리 후에, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 플리킹하여 버렸다. 플레이트를 이전에 기재된 바대로 2회 세척하였다. 마지막 세척 후에, 세포 펠릿을 실온에서 10분 동안 DI 물 중의 50 μL의 4% PFA(Pierce, 28906)를 첨가하여 고정하였다. 100 μL의 FASC 완충액을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1800 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포를 100 μL의 FACS 완충액에 재현탁하고, 유세포분석법에 의해 판독하였다.
도 4에 도시된 것처럼, 표시된 바와 같은 항-IL-27 항체는 CD161의 IL-27 매개된 저해를 감소시킨다.
실시예 6: 항-IL-27 항체의 추가적인 시험관내 특징규명을 포함하는 항-IL-27 항체에 의한 TNFα, IL-6 및 다른 사이토카인의 PD-1-매개된 분비의 향상
항-IL-27 항체는 암 환자로부터의 인간 PBMC 세포에서 TNFα 및 IL-6의 PD-1-매개된 분비를 향상시키는 이의 능력에 대해 시험되었다. 암 환자로부터의 인간 PBMC 세포는 1 μg/mL에서의 표시된 바와 같은 항-PD-1 항체를 또한 받는 웰의 첨가로 본질적으로 실시예 5에 기재된 바와 같이 배양되었다. 검정으로부터의 상청액은 인간 CBA Th1/Th2/Th17 키트(BD, 560484)를 사용하여 TNFα 및 IL-6에 대해 분석되었다. 도 5a 및 도 5b에 도시된 바와 같이, 항-IL-27 항체는 혼주된 인간 PBMC 세포에서 TNFα 및 IL-6의 PD-1-매개된 분비를 향상시킨다.
본원에서의 기법은 또한 인간 PBMC에서 단일요법의 그리고 항-PD-1과 조합된 SRF388의 사이토카인-유도 활성을 보여준다. IL-27은 여러 염증성 사이토카인의 발현을 부정적으로 조절한다고 공지되어 있다. 사이토카인 생성에 대한 IL-27 봉쇄의 효과를 결정하기 위해, 건강한 공여자, RCC를 갖는 환자 및 난소암을 갖는 환자로부터의 인간 PBMC는 몇일 동안 SRF388의 존재 또는 부재 하에 항-CD3으로 활성화되고, IL-17, IFNγ, TNFα 및 IL-6을 포함하는 분비된 사이토카인의 수준에 대해 시험되었다. 간단히 말하면, 4명의 건강한 공여자, 5명의 RCC를 갖는 환자 및 2명의 난소암을 갖는 환자로부터의 새로운 전혈로부터 단리된 PBMC는 SRF388(1 μg/mL), 항-PD 1(펨브롤리주맙, 1 μg/mL) 또는 항체 둘 모두의 존재 또는 부재 하에 0.25 μg/mL의 항-CD3 항체로 활성화되었다. 5일 후, 상청액은 수집되고, MSD 또는 CBA에 의해 TNFα(A) 또는 IFNγ(B)의 수준에 대해 시험하였다. 기재된 데이터는 항-CD3 자극 단독과 비교하여 사이토카인 생성의 배수-변화를 나타낸다. 통계학은 쌍별 t-시험(*p < 0.005)에 의해 계산되었다.
항-PD-1 항체는 이 검정에서 대조군으로서 사용되고, PD-1 및 IL-27 봉쇄의 조합은 또한 도 5c에 도시된 바대로 탐구되었다. SRF388 치료는 (2배 초과 증가로 결정된 바대로) 4명 중 2명의 건강한 공여자, 5명 중 3명의 RCC를 갖는 환자 및 2명 중 1명의 난소암을 갖는 환자를 포함하여 시험된 11개 중 6개의 PBMC 샘플에서 TNFα 생성을 증가시켰다. 공여자의 하위집단에서 시험될 때 이 활성은 SRF388 용량 의존적이었다(데이터 비기재). 항-PD-1(펨브롤리주맙) 치료는 시험된 11명 중 2명의 공여자(5명 중 1명의 RCC 및 2명 중 1명의 난소암)에서 TNFα 증가를 보여주는 반면에, SRF388 및 항-PD-1의 조합은 11명 중 10명의 공여자에서 증가시켰다. 병용 치료 조건에서 보인 TNFα의 증가는 10명 중 8명의 반응자에 상가적인 것으로 나타났다. IFNγ 생성에 대한 상가 효과는 SRF388 및 항-PD-1 치료(11명 중 10명의 공여자) 후 이 배양에서 관찰되었지만, 항-PD-1 치료 단독에 대한 반응은 SRF388(11명 중 2명의 공여자)과 비교하여 더 흔히 보였다(11명 중 10명의 공여자). 종합하면, 이 데이터는 SRF388이 건강한 공여자 및 암을 갖는 환자로부터의 활성화된 PBMC 배양에서 TNFα 수준을 증가시키고, SRF388 및 항-PD-1 치료의 조합이 치료 단독과 비교하여 TNFα 및 IFNγ의 더 높은 수준을 발생시킨다는 것을 제안한다.
IL-27 및 PD-1 봉쇄의 역할을 추가로 탐구하기 위해, 동일한 활성화된 PBMC 배양 시스템은 IL-27이 PD-1 봉쇄에 의해 생긴 사이토카인 생성의 증가의 효과에 직접적으로 대응할 수 있는지를 결정하기 위해 사용되었다. 간단히 말하면, 인간 전혈로부터의 새로 단리된 PBMC는 0.25 μg/mL의 항-CD3 항체에 의해 활성화되었다. 세포는 37℃에서 5일 동안 대조군 IgG1(1 μg/mL), αPD-1 항체(펨브롤리주맙, 1 μg/mL) 단독, rhIL-27(25 ng/mL)과 αPD-1 또는 rhIL-27과 αPD-1과 함께 SRF388(1 μg/mL)로 치료되었다. 상청액은 CBA 검출을 위해 수집되었다. 4명의 건강한 공여자로부터의 예의 사이토카인(IL-17A 및 IFNγ)은 대조군에 대한 배수 변화로 나타났다. 평균 및 표준 편차가 도시되어 있다. 통계학은 쌍별 t-시험(* p<0.05, ** p<0.01)에 의해 계산되었다. 유사한 결과는 또한 RCC를 갖는 환자로부터의 PBMC에서 나타났다. PD-1 봉쇄는 이 배양물에서 IL-17 및 IFNγ 둘 모두를 증가시키고, IL-27은 도 5d에 도시된 바와 같이 SRF388의 존재 하에 역전된 반응인 이 활성을 완전히 저해할 수 있었다. 이 데이터는 IL-27이 사이토카인 생성에 대한 항-PD-1 치료의 효과를 약화시킨다는 것을 보여준다.
따라서, IL-27은 SRF388에 의해 차단된 특성인 활성화된 인간 PBMC에서의 항-PD-1 매개된 전염증성 사이토카인 생성을 저해하는 것으로 나타났다. 더욱이, PD-1 봉쇄와 조합된 SRF388은 건강한 공여자 및 RCC를 갖는 환자로부터의 활성화된 PBMC에서 사이토카인 생성을 증가시켰다. 따라서, IL-27을 차단함으로써, SRF388은 면역조절 수용체 발현을 변경하고 염증성 사이토카인 생성을 증가시킴으로써 면역 세포 활성화를 향상시킨다.
항-IL-27 항체(여기서, SRF388), αPD-1 항체, 또는 조합된 항-IL-27 및 αPD-1 항체의 존재 하의 개별 항-IL-27 항체의 추가적인 특징규명에서, 사이토카인 유도/분비의 추가의 특징규명을 수행하였다(구체적으로 TNFα, IFNγ, IL-6 및 IL-17A에 대해 도 5e). SRF405, SRF410, SRF411, SRF414, SRF416, SRF536, SRF543, SRF529, SRF381, SRF388 및 Ab7 항체에 대한 다수의 IL-27-매개된 신호전달 효과에 걸쳐 시험관내 용량-반응 곡선을 또한 얻었다(도 5f 내지 도 5k, 여기서: 도 5f는 증가하는 농도의 항-IL-27 항체에 걸쳐 U937(림프종) 세포에서의 pSTAT1 신호의 저해를 보여주고; 도 5g는 증가하는 농도의 항-IL-27 항체에 걸쳐 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)에서의 pSTAT1 신호의 저해를 보여주고; 도 5h는 증가하는 농도의 항-IL-27 항체에 걸쳐 PBMC(말초 혈액 단핵 세포)에서의 CD161 신호에 대한 변하는 효과를 보여주고; 도 5i는 증가하는 농도의 항-IL-27 항체에 걸쳐 CD4 T 림프구(CD4 세포)에서의 PD-L1 신호에 대한 변하는 효과를 보여주고; 도 5j는 증가하는 농도의 항-IL-27 항체에 걸쳐 단핵구에서의 PD-L1 신호에 대한 변하는 효과를 보여주고; 도 5k는 증가하는 농도의 항-IL-27 항체에 걸쳐 단핵구에서의 TIM-3 신호에 대한 변하는 정도의 저해 효과를 보여준다).
실시예 7: 항-IL-27 항체에 의한 PD-L1 및 TIM3의 IL-27- 매개된 발현의 저해
실시예 1 및 실시예 2에 기재된 항-IL-27 항체는 유세포분석법에 의해 혼주된 인간 단핵구에서 IL-27-매개된 발현 PD-L1 및 TIM-3을 저해하는 이의 능력에 대해 시험되었다.
새로운 단핵구는 RosetteSep™ Human Monocyte Enrichment Cocktail(Stemcell #15068)을 사용하여 인간 버피 코트로부터 단리되었다.
외부 벽의 사용은 5일 검정 동안 증발의 효과를 최소화하도록 회피되었다. 외부 웰은 DPBS(Gibco, 14190-144)의 웰당 200 μL로 충전되어야 한다. 단핵구는 따뜻한 완전 RPMI-1640에서 mL당 200만개의 세포의 밀도로 재충전되었다. 이 세포 혼합물의 웰당 100 μL를 환저 96웰 플레이트(Costar, 3799)에서 플레이팅하였다(웰당 200,000개의 세포).
항-IL-27 항체를 40 μg/mL의 상부 농도(10 μg/mL 최종 농도)로 96웰 폴리프로필렌 플레이트의 처음의 열에서 완전 RPMI-1640에 희석하였다. 플레이트의 처음의 10열의 나머지에서 원하는 바대로 연속 희석(1:2, 1:3 등 …)을 만들었다. 환저 플레이트에서 PBMC 세포의 플레이트의 처음의 10열에 50 μL의 항체 스톡(4x)을 첨가하였다. 11열 및 12열에서, 1250 μL의 완전 RPMI-1640을 첨가하였다.
항-IL-27 항체의 첨가 후에, 완전 RPMI-1640에 희석된 50 μL의 80 ng/mL 재조합 인간 IL-27(R&D Systems, 2526-IL)을 20 ng/mL의 최종 농도에 대해 (무혈청 배지 또는 항체 단독을 포함한 대조군 웰을 제외한) 각각의 웰에 첨가하였다. 100 μL의 무혈청 RPMI-1640을 대조군 웰에 첨가하였다. 플레이트를 최소 간섭으로 37℃에서 3일 동안 항온처리하였다.
3일 항온처리 후에, 플레이트를 항온처리기로부터 제거하고, 플레이트 진탕기에서 600 RPM에서 30초 동안 교반하였다. 플레이트를 1800 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 배지를 플리킹하여 버리고, 플레이트를 150 μL의 DPBS(Gibco, 14190-144)로 세척하였다. 세척 단계를 2회 반복하였다. 세포 펠릿을 하기 표 9에 기재된 바대로 염색 칵테일의 웰당 50 μL로 염색하였다:
Figure pct00056
플레이트를 플레이트 진탕기에서 600 RPM에서 30초 동안 교반하고, 플레이트를 암소에서 4℃에서 30분 동안 항온처리하였다.
30분 항온처리 후에, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 플리킹하여 버렸다. 플레이트를 이전에 기재된 바대로 2회 세척하였다. 마지막 세척 후에, 세포 펠릿을 실온에서 10분 동안 탈이온화(DI) 물 중의 50 μL의 4% PFA(Pierce, 28906)를 첨가하여 고정하였다. 100 μL의 FASC 완충액을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1800 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포를 100 μL의 FACS 완충액에 재현탁하고, 유세포분석법에 의해 분석하였다.
도 6a, 도 6b 및 도 6c에 도시된 것처럼, 항-IL-27 항체는 혼주된 인간 단핵구에서 PD-L1 및 TIM3의 IL-27 매개된 발현을 강력히 저해하였다.
항-IL-27 항체는 본질적으로 도 6a, 도 6b 및 도 6c에 기재된 것처럼 (비활성화된) 휴지 T 세포에서 PD-L1의 IL-27-매개된 발현을 저해하는 이의 능력에 대해 추가로 시험되었다. 휴지 T-세포는 RosetteSep™ Human T cell Enrichment Cocktail(Stemcell #15061)을 사용하여 인간 버피 코트로부터 단리되었다.
검정의 결말 시, 세포 펠릿을 하기 표 10에 기재된 바대로 염색 칵테일의 웰당 50 μL로 염색하였다:
Figure pct00057
플레이트를 플레이트 진탕기에서 600 RPM에서 30초 동안 교반하고, 플레이트를 암소에서 4℃에서 30분 동안 항온처리하였다.
30분 항온처리 후에, 플레이트를 원심분리하고, 상청액을 플리킹하여 버렸다. 플레이트를 이전에 기재된 바대로 2회 세척하였다. 마지막 세척 후에, 세포 펠릿을 실온에서 10분 동안 DI 물 중의 50 μL의 4% PFA(Pierce, 28906)를 첨가하여 고정하였다. 100 μL의 FASC 완충액을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 1800 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포를 100 μL의 FACS 완충액에 재현탁하고, 유세포분석법에 의해 판독하였다. 도 6d에 도시된 것처럼, 항-IL-27 항체는 혼주된 인간 휴지 T 세포에서 PD-L1의 IL-27-매개된 발현을 강력히 저해하였다.
실시예 8: 흑색종의 파종성 B16F10 모델에서의 항-IL-27 항체의 생체내 효능
임상 후보 SRF388을 사용하여 IL-27 봉쇄의 항종양 활성을 평가하기 위해 흑색종 폐 전이의 모델을 사용하였다. 파종성 B16F10 폐 전이의 성장은 EBI3 및 Il27ra(Wsx-1)-결핍 마우스에서 유의미하게 감소하는 것으로 공지되어 있다(Sauer 등, J. Immunology 181: 6148-6157). 폐 결절 크기 및 성장 동역학이 이동된 B16F10 세포의 수에 따라 달라지고 가변적으로 신속히 진행할 수 있으므로, 항-PD-1 및 항-CTLA-4의 조합은 치료학적 활성에 대한 벤치마크로서 연구되었다. SRF388 전치료는 전체 종양 부담을 유의미하게 감소시켰다. 생체내 항-IL-27 항체의 항종양 효능을 평가하기 위해, B16F10 흑색종 종양 모델에서의 종양 성장에 대한 Ab14의 효과를 평가하였다.
간단히 말하면, 6주령 내지 8주령 암컷 C57BL/6 마우스(n = 10/그룹)에 200 μL의 인산염-완충 식염수(PBS)에서 꼬리 정맥을 통해 2.5 x 105개의 B16F10 세포 또는 1 x 105개의 B16-Luc 세포를 정맥내로(i.v.) 접종하였다. 동물에 SRF388(1 ㎎ 용량)(Wuxi; 로트 2108SD170316K01X01I01) 또는 다중클론 인간 IgG 아이소타입 대조군(1 ㎎ 용량)(Bioxcell; BE0092; 로트 658417D1)을 복강내로(i.p.) 주사하였다. 항체는 총 4가지의 용량(-7일, 0일, 7일 및 14일)에 대해 종양 주사 전에 7일에 시작하여 주마다 1회 투약되었다. 폐 전이의 시각 열거를 위해, B16F10 종양 보유 마우스는 종양 세포 주사 후 18일에 CO2 질식으로 안락사되고, 폐는 심장 천자를 통해 PBS로 관류되고, 제거되고 24시간 동안 10% 중성 완충 포르말린에서 고정되었다. 이후, 고정된 폐를 70% 에탄올로 옮기고, 표면 폐 전이는 시각적으로 계수되었다. 면역조직화학 분석을 위해, 포르말린 고정된 폐(n = 5/그룹)는 파라핀 포매되고, 절편화되고, 각각의 절편에서 총 조직 면적의 백분율로서 총 종양 면적의 정량화를 위해 헤마톡실린 및 에오신으로 염색되었다. 폐 전이의 생체내 종양 영상화를 위해, B16-Luc 종양-보유 동물은 매주 2회 200 μL의 PBS(Promega) 중의 3 ㎎의 VivoGlo D-루시페린으로 꼬리 정맥을 통해 i.v. 주사되었다. 루시페린 주사 후 5분에 동물은 안락사되고, 생물발광 영상화는 IVIS Lumina LT Series III 영상장치를 사용하여 수행되었다. Living Image(버전 4.5.5) 소프트웨어를 사용하여 영상은 분석되고, 광자/초의 총 플럭스 측정으로 표시된다.
도 7a 내지 도 7d에 도시된 것처럼, 항-IL-27 항체 SRF388에 의한 B16F10 종양-보유 마우스의 치료는 표면 폐 전이의 총 계수치(폐 결절 수, 도 7a) 및 면역조직화학(IHC) 분석에 의해 폐 조직 절편에서의 종양 면적의 감소(도 7c 및 도 7d) 둘 모두에 의해 측정된 것처럼 전체 종양 부담을 유의미하게 감소시켰다. SRF388에 의한 p28의 봉쇄는 아이소타입 대조군 치료와 비교하여 폐 B16 결절의 수를 42% 감소시켰다. SRF388 치료는 아이소타입 대조군과 비교하여 B16F10 폐 전이의 성장을 유의미하게 저해하였다(각각 21.6±8.4 대 37.6±10.9 폐 결절)(p=0.0079). SRF388 치료는 IHC에 의해 측정된 바와 같이 전체 폐 종양 전이 면적을 83% 감소시켰다(아이소타입 대조군 그룹에서의 16.43±1.39% 대 SRF388 치료 그룹에서의 2.83±1.45%). 유사하게, 생물발광 영상화는 SRF388 치료가 B16-Luc 폐 전이의 성장을 유의미하게(p=0.0062) 지연시킨다는 것을 밝혀냈다(도 7b). 표면 폐 전이 수 및 총 종양 면적의 유사한 감소는 도 7d에 도시된 바와 같이 IL-27RA(WSX-1) 매개된 항체 봉쇄 및 항-PD-1 + 항-CTLA-4 병용 치료로 관찰되었다. 이 데이터는 항-PD-1 및 항-CTLA-4 벤치마크 조합이 항종양 활성을 입증한 2개의 독립 실험으로부터 얻었다. B16F10 세포(2.5 x 105)는 C57BL/6 마우스(n = 10/그룹)에서 정맥내로 주사되었다. 마우스는 1 ㎎의 SRF388, 항-IL-27RA(WSX-1) 또는 인간 IgG 아이소타입 대조군 항체로 IP 치료되었다(-7일, 0일, 7일, 14일). 여러 동물은 항-PD-1 및 항-CTLA-4로 IP 치료되었다(0일, 4일, 7일 및 11일). 상기에 기재된 바대로 치료된 B16F10 폐 전이를 보유하는 동물(n = 5/그룹)로부터 수집된 폐는 절편화되고 H&E로 염색되었다. B16F10 종양 조직은 치료된 동물로부터의 H&E 염색된 폐 절편에서 정상 폐 조직으로부터 기술되었다(도 7a). 종양 면적은 총 폐 면적의 백분율로서 계산되었다(도 7d). 통계학은 t-시험에 의해 계산되었다. 종합하면, 이 데이터는 SRF388이 종양 모델에서 Il27ra(WSX-1) 및 EBI3 결핍증을 표현형카피할 수 있다는 것을 나타내고, PD-1 및 CTLA-4의 조합된 봉쇄와 유사한 활성을 보여준다.
이 데이터는 항-IL-27 항체(SRF388)에 의한 치료가 항종양 효과를 생성하여 IL-27에 결합하지 않는 아이소타입 대조군 항체에 의한 치료보다 더 큰 정도로 종양 성장 및 전이 둘 모두를 감소시킨다는 것을 입증한다.
실시예 9: 인간 IL-27 미니서클로 유체역학적으로 형질주입된 마우스로부터의 쥣과 비장세포의 유전자 발현 프로파일링
생체내 T 세포 표현형에 대한 IL-27의 효과를 조사하기 위해, IL-27을 암호화하는 DNA 미니서클은 마우스에서 IL-27을 과발현하도록 사용되었고, T 세포 반응은 RNA-Seq 및 유세포분석법에 의해 평가되었다. 인간 IL-27은 종 교차-반응성인 것으로 공지되어 있고, 시험관내 쥣과 비장세포에서 pSTAT1 신호전달 및 PD L1을 유도할 수 있다. 이 종 교차-반응성은 마우스에서의 인간 IL-27 과발현 및 SRF388에 의한 이의 저해의 효과를 연구하도록 사용되었다. 이를 위해, 인간 IL-27을 암호화하는 DNA 플라스미드 미니서클(글리신 세린 링커에 의해 EBI3에 테터링된 p28)은 하기 기재된 바와 같이 유체역학 형질주입에 의해 마우스에 투여되고, 이는 IL-27의 높은 전신 수준을 발생시켰다.
인간 IL-27 미니서클의 유체역학 형질주입
6주령 암컷 BALB/c 마우스는 5초의 기간에 걸쳐 꼬리 정맥을 통해 2 mL의 0.9% 노르말 식염수 중의 20 μg의 빈 벡터 또는 연결된 인간 IL-27 미니서클 DNA(System Biosciences, Palo Alto, CA)가 주사되었다. 주사된 동물을 5분 동안 회복되도록 가열 패드로 빈 우리로 옮겼다. 전혈은 미니서클 주사 후 24시간에 혈장 분리를 위해 K2-EDTA 관으로 수집되고, 혈장 IL-27 수준은 ELISA에 의해 확인되었다. PBMC 및 총 비장세포는 형질주입 후 5일에 수집되었고, 세포는 염색되고 유세포분석법에 의해 분석되었다. 표시된 마커의 발현은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포에서 분석되었다. 분석은 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 수행되었다.
유전자 발현 프로파일링
마우스 비장세포는 전체 비장의 기계적 해리, 이어서 적혈구의 ACK 용리에 의해 제조되었다. 총 RNA는 RNeasy® Mini Kit(Qiagen, 카탈로그 74104호)로 비장세포로부터 추출되고, 뉴클레아제 유리수(Qiagen, 카탈로그 19101호) 중에 20 ng/μL로 조정되었다. 유전자 발현 프로파일링은 Affymetrix GeneChip™ Mouse Gene 2.0 ST Arrays(Applied Biosystems, 카탈로그 902118호)에서 수행되었다. RNA 샘플의 처리, 혼성화 및 어레이 스캐닝은 Boston University Microarray and Sequencing Resource(BUMSR)에서 표준 Affymetrix GeneChip™ 프로토콜을 사용하여 수행되었다. 모든 CEL 파일은 Robust Multi-array Average(RMA)(Irizarry 등, 2003)에 의해 정규화되고, 유전자 발현 데이터는 비발현된 프로브를 제거하고 높은 반복간 분산 계수로 전사체를 버림으로써 예비처리되었다. 후속하는 분석(평균 발현, 배수 변화, t 시험)은 R에서 수행되었다.
유세포분석법 분석
전혈 및 비장은 미니서클 주사 후 5일에 마우스로부터 수집되었다. 비장세포는 형질주입 후 5일에 IL 27-발현 마우스로부터 수집되고, Affymetrix GeneChip Mouse Gene 2.0 ST Array에 의해 분석되었다. 단일 세포 비장세포 현탁액은 40 ㎛ 나일론 세포 스트라이너를 통한 기계적 해리, 이어서 ACK 완충액 중의 적혈구 용리에 의해 제조되었다. 전혈 세포는 직접적으로 염색된 후에, 적혈구 용리되고, 제조사(BD Biosciences, San Jose, CA)의 지시에 따라 BD Phosflow Lyse/Fix Buffer에 고정되었다. FcγRIII/II는 2% FBS 및 2 mM EDTA로 PBS 중에 세포를 래트 항-마우스 CD16/CD32 mAb(100만개의 세포당 1 μg; Biolegend, San Jose, CA)와 예비항온처리함으로써 차단되었다. 세포는 쥣과 CD4(클론 GK1.5), CD8(53-6.7), PD-L1(10F.9G2), TIM3(RMT3-23), LAG3(C9B7W) 및 TIGIT(1G9)(Biolegend)에 대해 APC-, PE-, Brilliant Violet 510- 및 Brilliant Violet 711-접합된 mAb로 염색되었다. 세포-연관된 형광은 LSRFortessa X-20 유세포분석기(BD Biosciences)를 사용하여 측정되고, 분석은 FlowJo 소프트웨어(Tree Star, Ashland, OR)를 사용하여 수행되었다.
통계 분석
통계 유의도는 표시된 바와 같이 쌍별, 독립 또는 비율 Student t 시험을 사용하여 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 결정되었다. 비율 t 시험이 사용될 때, 0.1은 0 값을 비-0 값으로 만들기 위해 0 값에 추가되었다. 0.05 미만의 P 값은 유의미하다고 생각되었다.
IL-27은 생체내 T 세포에 의한 저해 수용체의 발현을 촉진한다
400개 초과의 유전자는 도 8a에 도시된 바와 같이 IL-27의 투여에 반응하여 1.0배 이상으로 변했다. 이 유전자의 하위집단은 표 11에 기재되어 있다. 면역 반응에서 중요한 역할을 하는 면역 저해 수용체를 암호화하는 것이 이 유전자 중에 있었다. 도 8b에 도시된 바와 같이, Ly6a(Sca-1을 암호화함), Lag3, Tigit 및 Il10은 IL-27에 반응하여 비장세포에서 상향조절되었다. 1배 미만 유도(데이터 비기재)인 Ctla4 및 Cd274(PD-L1을 암호화함)의 IL-27-매개된 상향조절에 대한 경향이 또한 있었다. 발현 데이터를 검증하기 위해, 유세포분석법은 이들 마우스로부터의 T 세포에 대해 PD-L1, LAG-3, TIGIT 및 TIM-3의 단백질 발현을 평가하도록 사용되었다. IL-27 미니서클의 투여는 비장(Spleen) 및 말초 혈액(PBMC) CD4+ T 세포에서 PD-L1, LAG-3 및 TIGIT를 상향조절하였다. CD8+ T 세포에서, IL-27 미니서클은 PD-L1, LAG-3, TIGIT 및 TIM-3을 상향조절하였다. 도 8c에 도시된 바와 같이, IL-27 미니서클의 투여는 비장 및 말초 혈액 CD4+ T 세포에서 PD-L1, Lag-3 및 Tigit를 상향조절하였다. CD8+ T 세포에서, IL-27 미니서클은 PD-L1, Lag-3, Tigit 및 Tim-3을 상향조절하였다. 이 데이터는 IL-27이 생체내 면역조절 수용체 발현을 유도하는 데 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 제안한다.
생체내 미니서클-유래 인간 IL-27을 차단하는 SRF388의 능력을 조사하기 위해, 비장세포에서의 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의한 표적 관여 및 면역조절 수용체 발현 둘 모두가 연구되었다. IL-27 형질주입 및 SRF388(50 ㎎/㎏)에 의한 치료 후 5일에, 혈장은 Meso Scale Discovery(MSD)에 의해 IL-27 이종이합체 및 EBI3 수준을 분석하기 위해 마우스로부터 수집되었다. IL-27 이종이합체 검정은 SRF388 및 인간 특이적 EBI3 검출 항체를 교차 차단하는 p28 포획 항체를 사용하고, 따라서 SRF388이 IL-27에 결합하면 이의 검출이 마스킹될 것이다. EBI3 검정은 인간 EBI3의 2개의 구별되는 에피토프에 특이적인 포획 항체 및 검출 항체 둘 모두를 사용하고, 미니서클 유래 IL-27이 테터링된 이종이합체이므로 이 검정은 SRF388 결합과 무관하게 총 IL 27의 검출을 허용한다.
간단히 말하면, 6주령 암컷 Balb/c 마우스에 빈 벡터(대조군) 또는 인간 IL-27을 주사하였다. 마우스를 미니서클 형질주입의 전 7일에 및 그 날에(-7일 및 0일) 1 ㎎의 SRF388 또는 항-DNP IgG1 아이소타입 대조군 항체로 치료하였다. 전혈을 수집하고, 혈장을 Meso Scale Discovery에 의해 IL-27에 대해 분석하였다(도 8d). 도 8d는 SRF388 치료가 MSD에 의해 혈장에서 IL-27 검출을 완전히 저해한다는 것을 보여준다. 25 ㎎/㎏의 용량의 SRF388이 시험될 때 유사한 데이터가 보였다. 이 데이터는 25 ㎎/㎏ 이상의 용량에서의 SRF388이 생체내 미니서클 유래 IL-27을 완전히 포화시킬 수 있다는 것을 제안한다. 이 완전한 표적 관여는 또한 pSTAT1 기능적 검정에서 확인되었다.
생체내 IL-27의 활성을 차단하는 SRF388의 능력을 평가하기 위해, PD L1, Tim-3, Lag-3 및 Tigit의 발현은 유세포분석법에 의해 쥣과 PBMC 및 비장세포에서 분석되었다. SRF388은 CD4+ PBMC에서 IL 27-유도된 PD-L1 및 Lag 3 발현 및 CD8+ PBMC에서 PD-L1, Tim-3, Lag-3 및 Tigit 발현을 유의미하게 차단하였다. SRF388 치료는 또한 CD4+ 비장세포에서 IL 27 유도된 PD-L1, Lag-3 및 Tigit 발현 및 CD8+ 비장세포에서 PD-L1 및 Lag 3 발현을 차단하였다. 이 데이터는 SRF388이 생체내 인간 IL-27의 활성을 관여시키면서 차단할 수 있다는 것을 제안한다.
이 결과는 생체내 IL-27의 이소성 발현이 비장세포에서 T 세포, 및 면역조절 활성을 갖는 여러 다른 분자에 의한 다수의 저해 수용체의 상향조절을 생성시킨다는 것을 입증한다. 이 데이터는 (예를 들어, 항-IL-27 항체에 의한 치료에 의한) IL-27 길항작용이 T 세포 상의 저해제 수용체의 발현을 감소시켜 면역 반응을 증가시킨다는 것을 제안한다.
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실시예 10: SRF388 결합 특성 및 IL-27 수용체 봉쇄
1 μg/mL의 SRF388 농도로 0 내지 5.0 μg/mL의 범위의 농도에서의 재조합 인간 IL-27의 결합 및 해리가 결정되었다. 최종 결합 동역학 매개변수는 데이터에 모델 적합화도를 나타낸 결합 모델 적합화 매개변수(R2 및 χ2)와 함께 표 14에 기재되어 있다.
인간 IL-27은 이 연구에서 시험된 모든 종의 SRF388에 대한 가장 강한 결합 친화도를 나타냈다(3.86 pM). 재조합 래트 및 시아노몰거스 원숭이 IL-27은 또한 각각 80.9 및 37.4 pM의 값으로 SRF388에 대한 강한 친화도를 보여주었지만, 인간 단백질보다 다소 더 약했다. 재조합 마우스 IL-27은 이의 더 느린 결합 및 더 빠른 해리 상수로 표시된 것과 같은 nM 범위(4.43 nM)에서의 값으로 인간 단백질과의 비교에 의해 가장 약한 친화도를 가졌다.
Figure pct00112
실시예 11: CDR 서열 정렬
본 개시내용의 항-IL-27 항체의 다수의 하위선택은 이의 CDR 영역에 걸쳐 서열 상동성을 공유하여 기능성을 보유하는 것으로 검증된 변이체 CDR 서열의 다양성을 제공한다. 하기 공통 CDR 서열이 본 개시내용에 의해 완전히 지지되고, 따라서 본 개시내용의 범위 내에 있다고 명확히 고려된다.
SRF388, SRF381, SRF382, SRF384, SRF386 및 SRF529 항체에 대해, 각각의 이들 항-IL-27 항체의 CDR 서열의 정렬은 가변 잔기에 의해 끼워진 광범위한 상동성을 밝혀냈다. 특히, 중쇄 CDR1 정렬은 하기 가변 잔기를 밝혀냈다:
Figure pct00113
이 동족 항체에 대한 공통 중쇄 CDR1(IMGT) 서열은 따라서 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 412)이고, 따라서 N-GFTFXXXX-C(서열번호 408)(여기서, X는 임의의 아미노산 잔기임)가 공통 중쇄 CDR1(IMGT) 서열로서 본원에서 보다 일반적으로 고려된다.
SRF388, SRF381, SRF382, SRF384, SRF386 및 SRF529 항체 중쇄 CDR2(IMGT) 서열의 정렬은 하기를 밝혀냈다:
Figure pct00114
이 동족 항체에 대한 공통 중쇄 CDR2(IMGT) 서열은 따라서 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 413)이고, 따라서 N-ISSSXXYI-C(서열번호 409)(여기서, X는 임의의 아미노산 잔기임)가 공통 중쇄 CDR2(IMGT) 서열로서 본원에서 보다 일반적으로 고려된다.
인간 CDR1(NT) 및 인간 CDR2(NT) 서열의 정렬은 또한 하기를 밝혀냈다:
Figure pct00115
Figure pct00116
이 동족 항체에 대한 공통 중쇄 CDR1(NT) 및 CDR2(NT) 서열은 따라서 각각 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 414) 및 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 415)이다. 이 공통 서열의 견지에서, 각각 공통 중쇄 CDR1(NT) 및 CDR2(NT) 서열 N-FTFXXXXMN-C(서열번호 410) 및 N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 411)(여기서, X는 임의의 아미노산 잔기임)가 본원에서 보다 일반적으로 고려된다.
중쇄 CDR3(IMGT 또는 NT) 및 경쇄 CDR CDR1(IMGT 또는 NT), CDR2(IMGT 또는 NT) 및 CDR3(IMGT 또는 NT)은 SRF388, SRF381, SRF382, SRF384, SRF386 및 SRF529 사이에 완전히 보존되었다.
SRF535 및 SRF538 단일클론 항체에서 수행된 유사한 CDR 서열 정렬은 이들 2개의 관련된 항체에 대한 하기 공통 CDR 서열을 밝혀냈다:
관찰된 변이(IMGT):
HCDR1 (IMGT) - N-GFTFSSYG-C (서열번호 361)
HCDR2 (IMGT) - N-I[K/W][Q/Y]DGS[E/N]K-C (서열번호 445)
HCDR3 (IMGT) - N-AR[D/G]AP[WDIYDYYM/EYV]DV-C (서열번호 446)
LCDR1 (IMGT) - N-QS[I/V]SSY-C (서열번호 447)
LCDR2 (IMGT) - N-[A/D][A/S]S-C (서열번호 448)
LCDR3 (IMGT) - N-QQ[S/Y][Y/S][V/L][P/Y]P[W/-]T-C (서열번호 449)
공통 (IMGT):
HCDR1 (IMGT) - N-GFTFSSYG-C (서열번호 361)
HCDR2 (IMGT) - N-IXXDGSXK-C (서열번호 436)
HCDR3 (IMGT) - N-ARXAP[X]n=3-8DV-C (서열번호 437)
LCDR1 (IMGT) - N-QSXSSY-C (서열번호 438)
LCDR2 (IMGT) - N-XXS-C (서열번호 439)
LCDR3 (IMGT) - N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C (서열번호 440)
관찰된 변이(NT):
HCDR1 (NT) - N-FTFSSYGM[S/H]-C (서열번호 450)
HCDR2 (NT) - N-[N/V]I[K/W][Q/Y]DGS[E/N]KYY[V/A]DSVKG-C (서열번호 451)
HCDR3 (NT) - N-AR[D/G]AP[WDIYDYYM/EYV]DV-C (서열번호 446)
LCDR1 (NT) - N-RASQS[I/V]SSYL[N/A]-C (서열번호 452)
LCDR2 (NT) - N-[AA/D]SS[LQS/NRAT]-C (서열번호 453)
LCDR3 (NT) - N-QQ[S/Y][Y/S][V/L][P/Y]P[W/-]T-C (서열번호 449)
공통 (NT):
HCDR1 (NT) - N-FTFSSYGMX-C (서열번호 441)
HCDR2 (NT) - N-XIXXDGSXKYYXDSVKG-C (서열번호 442)
HCDR3 (NT) - N-ARXAP[X]n =3- 8DV-C (서열번호 437)
LCDR1 (NT) - N-RASQSXSSYLX-C (서열번호 443)
LCDR2 (NT) - N-[X]n=1-2SS[X]n=3-4-C (서열번호 444)
LCDR3 (NT) - N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C (서열번호 440)
CDR 서열의 정렬은 하기 관찰된 변이 및 공통 서열을 생성시키는 SRF388, SRF381, SRF382, SRF384, SRF386, SRF529, SRF535 및 SRF538 항체의 전부 사이에 또한 수행되었다:
관찰된 변이(IMGT):
HCDR1 (IMGT) - N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C (서열번호 454)
HCDR2 (IMGT) - N-I[S/K/W][S/Q/Y][S/D][S/G][S/A][Y/E/N][I/K]-C (서열번호 455)
HCDR3 (IMGT) - N-AR[DGGRTSYTATAHNWF/DAPWDIYDYYM/GAPEYV]D[P/V]-C (서열번호 457)
LCDR1 (IMGT) - N-QS[VLF/I/V]SS[NNKN/-]Y-C (서열번호 459)
LCDR2 (IMGT) - N-[W/A/D][A/S]S-C (서열번호 461)
LCDR3 (IMGT) - N-QQ[H/S/Y][A/Y/S][S/V/L][A/P/Y]P[P/W/-]T-C (서열번호 463)
공통 (IMGT):
HCDR1 (IMGT) - N-GFTFXXXX-C (서열번호 408)
HCDR2 (IMGT) - N-IXXXXXXX-C (서열번호 456)
HCDR3 (IMGT) - N-AR[X]n=6-15DX-C (서열번호 458)
LCDR1 (IMGT) - N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C (서열번호 460)
LCDR2 (IMGT) - N-XXS-C (서열번호 462)
LCDR3 (IMGT) - N-QQXXXXP[X]n =0-1T-C (서열번호 464)
관찰된 변이(NT):
HCDR1 (NT) - N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]M[N/S/H]-C (서열번호 465)
HCDR2 (NT) - N-[G/S/N/V]I[S/K/W][S/Q/Y][S/D][S/G][S/A][Y/E/N][I/K][L/Y]Y[V/A]DSVKG-C (서열번호 467)
HCDR3 (NT) - N-AR[D/G][GGRTSYTATAHNWF/APWDIYDYYM/APEYV]D[P/V]-C (서열번호 469)
LCDR1 (NT) - N-RASQS[I/V]SSYL[N/A]-C (서열번호 471)
LCDR2 (NT) - N-[WA/AA/D]S[TRES/SLQS/SNRAT]-C (서열번호 473)
LCDR3 (NT) - N-QQ[H/S/Y][A/Y/S][S/V/L][A/P/Y]P[P/W/-]T-C (서열번호 475)
공통 (NT):
HCDR1 (NT) - N-FTFXXXXMX-C (서열번호 466)
HCDR2 (NT) - N-XIXXXXXXXXYXDSVKG-C (서열번호 468)
HCDR3 (NT) - N-AR[X]n=6-15DX-C (서열번호 470)
LCDR1 (NT) - N-RASQSXSSYLX-C (서열번호 472)
LCDR2 (NT) - N-[X]n=1-2S[X]n=4-5-C (서열번호 474)
LCDR3 (NT) - N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C (서열번호 476)
SRF543 및 SRF414의 정렬이 또한 수행되었고, 하기 관찰된 변이 및 공통 서열을 생성시켰다:
관찰된 변이(IMGT):
HCDR1 (IMGT) - N-GGSFS[R/D]Y[E/Y]-C (서열번호 426)
HCDR2 (IMGT) - N-ID[W/Y]SG[I/S]T-C (서열번호 427)
HCDR3 (IMGT) - N-AR[D/L][P/G][M/V]YY[-/Y]DSS[VSTGSV/DLGF]D[V/I]-C (서열번호 428)
LCDR1 (IMGT) - N-Q[S/D][V/I]S[S/N]Y-C (서열번호 429)
LCDR2 (IMGT) - N-D[S/A]S-C (서열번호 430)
LCDR3 (IMGT) - N-QQ[D/Y][S/D]D[H/L]PIT-C (서열번호 431)
공통 (IMGT):
HCDR1 (IMGT) - N-GGSFSXYX-C (서열번호 416)
HCDR2 (IMGT) - N-IDXSGXT-C (서열번호 417)
HCDR3 (IMGT) - N-ARXXXYY[X]n=0-1DSS[X]n=4-6DX-C (서열번호 418)
LCDR1 (IMGT) - N-QXXSXY-C (서열번호 419)
LCDR2 (IMGT) - N-DXS-C (서열번호 420)
LCDR3 (IMGT) - N-QQXXDXPIT-C (서열번호 421)
관찰된 변이(NT):
HCDR1 (NT) - N-GSFS[R/D]Y[E/Y]WS-C (서열번호 432)
HCDR2 (NT) - N-SID[W/Y]SG[I/S]T[N/E]YNPSLKS-C (서열번호 433)
HCDR3 (NT) - N-AR[D/L][P/G][M/V]YY[-/Y]DSS[VSTGSV/DLGF]D[V/I]-C (서열번호 428)
LCDR1 (NT) - N-[Q/R]ASQ[S/D][V/I]S[S/N]YL[N/A]-C (서열번호 434)
LCDR2 (NT) - N-D[S/A]SN[R/L][A/E]T-C (서열번호 435)
LCDR3 (NT) - N-QQ[D/Y][S/D]D[H/L]PIT-C (서열번호 431)
공통 (NT):
HCDR1 (NT) - N-GSFSXYXWS-C (서열번호 422)
HCDR2 (NT) - N-SIDXSGXTXYNPSLKS-C (서열번호 423)
HCDR3 (NT) - N-ARXXXYY[X]n=0-1DSS[X]n=4-6DX-C (서열번호 418)
LCDR1 (NT) - N-XASQXXSXYLX-C (서열번호 424)
LCDR2 (NT) - N-DXSNXXT-C (서열번호 425)
LCDR3 (NT) - N-QQXXDXPIT-C (서열번호 421)
실시예 12: 선택된 단일클론 항체의 특성
본 개시내용의 선택된 단일클론 항체는 다양한 기능 특성에 평가되었다. 소정의 이러한 평가의 결과는 도 9에 표로 되어있다. 주목할만하게, Ab7, SRF557, SRF536, SRF416, SRF543, SRF414, SRF529, SRF381, SRF388, SRF382, SRF384, SRF386, SRF410, SRF411, SRF405, SRF535 및 SRF538을 포함하여, (상기에 기재된 바대로 Biacore 2000 기기에서 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 결정된 바대로) 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 대한 결합("특성 (i)")을 나타내는 넓은 범위의 단일클론 항체가 확인되었다.
예상치 못하게, 단일클론 항체의 선택은 Ab7, SRF536, SRF416, SRF543, SRF414, SRF529, SRF381, SRF388, SRF382, SRF384, SRF386, SRF535 및 SRF538을 포함하여 WSX-1 경쟁적인("특성 (ii)") 것으로 확인되었다.
놀랍게도, Ab7, SRF536, SRF416, SRF543, SRF414, SRF529, SRF381, SRF388, SRF382, SRF384, SRF386, SRF410, SRF411, SRF405, SRF535 및 SRF538을 포함하여 pSTAT1 U937을 저해하는("특성 (iii)") 단일클론 항체의 선택이 확인되었다.
주목할만하게, Ab7, SRF536, SRF416, SRF543, SRF529, SRF381, SRF388, SRF382, SRF384 및 SRF386을 포함하여 CD161 발현을 저해하는("특성 (iv)") 단일클론 항체의 선택이 또한 확인되었다.
Ab7, SRF536, SRF416, SRF543, SRF414, SRF529, SRF381, SRF388, SRF382, SRF384, SRF386 및 SRF535를 포함하여 주목할만하게 CD4+ T 세포에서 PD-L1 발현을 저해하는("특성 (v)") 단일클론 항체의 선택이 또한 확인되었다.
제한된 수의 단일클론 항체가 오직 시험되었지만, PD-1-매개된 사이토카인 분비를 향상시키는("특성 (vi)") 시험된 이 항체의 능력의 변동성이 또한 관찰되었다. 구체적으로, SRF381 및 SRF388 항체는 주목할만하게 PD-1-매개된 사이토카인 분비를 향상시키는 것으로 확인되는 반면에, SRF536은 그렇지 않았다.
상기 언급된 바와 같은 각각의 특성 (i) 내지 (vi)를 보유하는 단일클론 항체가 따라서 본원에서 확인되었다. 조사된 모든 항체는 각각의 특성 (i) 내지 (vi)를 보유하는 것으로 확인되지 않았고, 이들 특성의 하위선택을 보유하는 항체의 선택이 조립될 수 있다는 것이 따라서 명확히 고려된다. 예를 들어, 항체 Ab7, SRF536, SRF416, SRF543, SRF529, SRF381, SRF388, SRF382, SRF384 및 SRF386은 각각의 특성 (i) 내지 (v)를 보유하는 것으로 확인되었다. 한편, 항체 Ab7, SRF536, SRF416, SRF543, SRF529, SRF381, SRF388, SRF382, SRF384 및 SRF386은 각각의 특성 (iii) 및 (iv)를 보유하는 것으로 확인되었다. 당업자에게 명확한 것처럼, 항체의 유사한 하위선택 및 연관된 특성은 도 9에 제시된 정보로부터 용이하게 조립된다.
SEQUENCE LISTING <110> Surface Oncology, Inc. <120> ANTI-IL-27 ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> 54083-501WO01 <140> PCT/US19/23625 <141> 2019-03-22 <150> 62/646,496 <151> 2018-03-22 <160> 705 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 1 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Phe Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asp Tyr Asp Asp Asp Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 2 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 2 gaggtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgaaactc 60 ttctgtgcag cctctggatt cacctttacc agctattcca tgagctgggt ccgccagact 120 ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagttatg atggtggtag cgcctactac 180 cctgacactg tgaagggccg gttctccatc tccagagaca atgccaagaa aaccctgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgaa gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacatgga 300 gactatgacg acgacgacgc gatggactac tggggccaag gaacctcagt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 3 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 3 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Asn Ala Glu Thr Leu Thr Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Asp Leu Lys 100 105 <210> 4 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 4 gacatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga aactgtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtga gaacatttac agctatttag catggtatca gcagaaacag 120 gggaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcagaaacct tgacagaagg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacacaa ttctctctca agatcaacag tctgcaacct 240 gaagattttg ggaattacta ctgtcaacat cattacggta ccccgctcac attcggcgct 300 gggaccaagc tggatctgaa a 321 <210> 5 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 5 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Lys Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asp Tyr Asp Asp Asp Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 6 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 6 gaggtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc agctattcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatac attagttatg atggtggtag cgcctactac 180 cctgacactg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa aaccctgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgaa gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacatgga 300 gactatgacg acgacgacgc gatggactac tggggccaag gaacctcagt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 7 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 7 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asp Tyr Asp Asp Asp Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 8 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc agctattcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatac attagttatg atggtggtag cgcctactac 180 cctgacactg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240 ctgcaaatga gcagcctgaa gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacatgga 300 gactatgacg acgacgacgc gatggactac tggggccaag gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 9 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 9 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Lys Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asp Tyr Asp Asp Asp Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 10 gaggtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc agctattcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatac attagttatg atggtggtag cgcctactat 180 cctgacactg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa aaccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc aagacatgga 300 gactatgacg acgacgacgc gatggactac tggggccaag gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 11 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 11 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asp Tyr Asp Asp Asp Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 12 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 12 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc agctattcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatac attagttatg atggtggtag cgcctactat 180 cctgacactg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa caccctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc aagacatgga 300 gactatgacg acgacgacgc gatggactac tggggccaag gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 13 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial <220> 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ccacctaccg ggtggtgtcc gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg 960 aacggcaaag agtacaagtg caaagtgtcc aacaagggcc tgccctccag catcgaaaag 1020 accatctcca aggccaaggg ccagccccgc gagccccaag tgtacaccct gcctcccagc 1080 caggaagaga tgaccaagaa tcaagtgtcc ctgacttgtc tggtcaaggg cttctacccc 1140 tccgatatcg ccgtggagtg ggagtccaac ggccagcccg agaacaacta caagaccacc 1200 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctgtact ctcggctgac cgtggacaag 1260 tcccggtggc aggaaggcaa cgtcttctcc tgctccgtga tgcacgaggc cctgcacaac 1320 cactacaccc agaagtccct gtccctgtct ctgggc 1356 <210> 73 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 73 Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly 1 5 <210> 74 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 74 Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile 1 5 <210> 75 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 75 Ala Arg Asp Gly Gly Arg Thr Ser Tyr Thr Ala Thr Ala His Asn Trp 1 5 10 15 Phe Asp Pro <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 76 Phe Thr Phe 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caacaccaaa gtggataaaa aagtggaacc gaaaagctgc 660 gataaaaccc atacctgccc gccgtgcccg gcgccggaac tgctgggcgg cccgagcgtg 720 tttctgtttc cgccgaaacc gaaagatacc ctgatgatta gccgcacccc ggaagtgacc 780 tgcgtggtgg tggatgtgag ccatgaagat ccggaagtga aatttaactg gtatgtggat 840 ggcgtggaag tgcataacgc gaaaaccaaa ccgcgcgaag aacagtataa cagcacctat 900 cgcgtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat caggattggc tgaacggcaa agaatataaa 960 tgcaaagtga gcaacaaagc gctgccggcg ccgattgaaa aaaccattag caaagcgaaa 1020 ggccagccgc gcgaaccgca ggtgtatacc ctgccgccga gccgcgatga actgaccaaa 1080 aaccaggtga gcctgacctg cctggtgaaa ggcttttatc cgagcgatat tgcggtggaa 1140 tgggaaagca acggccagcc ggaaaacaac tataaaacca ccccgccggt gctggatagc 1200 gatggcagct tttttctgta tagcaaactg accgtggata aaagccgctg gcagcagggc 1260 aacgtgttta gctgcagcgt gatgcatgaa gcgctgcata accattatac ccagaaaagc 1320 ctgagcctga gcccgggcaa a 1341 <210> 401 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 401 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 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misc_feature <222> (17)..(17) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 418 Ala Arg Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Asp Ser Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Asp 1 5 10 15 Xaa <210> 419 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 419 Gln Xaa Xaa Ser Xaa Tyr 1 5 <210> 420 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 420 Asp Xaa Ser 1 <210> 421 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <220> <221> misc_feature <222> (3)..(4) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 421 Gln Gln Xaa Xaa Asp Xaa Pro Ile Thr 1 5 <210> 422 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> 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Asp Ile Ala 20 25 30 Thr Tyr Tyr Cys 35 <210> 683 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 683 Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala 20 25 30 Thr Tyr Tyr Cys 35 <210> 684 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 684 Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala 20 25 30 Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 685 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 685 Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala 20 25 30 Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 686 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 686 Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 1 5 10 15 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala 20 25 30 Thr 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Thr Ala Val His Pro Trp 100 105 110 Gly Ser Ser Ser Ser Phe Val Pro Phe Ile Thr Glu His Ile Ile Lys 115 120 125 Pro Asp Pro Pro Glu Gly Val Arg Leu Ser Pro Leu Ala Glu Arg Gln 130 135 140 Leu Gln Val Gln Trp Glu Pro Pro Gly Ser Trp Pro Phe Pro Glu Ile 145 150 155 160 Phe Ser Leu Lys Tyr Trp Ile Arg Tyr Lys Arg Gln Gly Ala Ala Arg 165 170 175 Phe His Arg Val Gly Pro Ile Glu Ala Thr Ser Phe Ile Leu Arg Ala 180 185 190 Val Arg Pro Arg Ala Arg Tyr Tyr Val Gln Val Ala Ala Gln Asp Leu 195 200 205 Thr Asp Tyr Gly Glu Leu Ser Asp Trp Ser Leu Pro Ala Thr Ala Thr 210 215 220 Met Ser Leu Gly Lys 225 <210> 699 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 699 Met Gly Gln Thr Ala Gly Asp Leu Gly Trp Arg Leu Ser Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Pro Leu Leu Leu Val Gln Ala Gly Val Trp Gly Phe Pro Arg Pro 20 25 30 Pro Gly Arg Pro Gln Leu Ser Leu Gln Glu Leu Arg Arg Glu Phe Thr 35 40 45 Val Ser Leu His Leu Ala Arg Lys Leu Leu Ser Glu Val Arg Gly Gln 50 55 60 Ala His Arg Phe Ala Glu Ser His Leu Pro Gly Val Asn Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Leu Pro Leu Gly Glu Gln Leu Pro Asp Val Ser Leu Thr Phe Gln Ala 85 90 95 Trp Arg Arg Leu Ser Asp Pro Glu Arg Leu Cys Phe Ile Ser Thr Thr 100 105 110 Leu Gln Pro Phe His Ala Leu Leu Gly Gly Leu Gly Thr Gln Gly Arg 115 120 125 Trp Thr Asn Met Glu Arg Met Gln Leu Trp Ala Met Arg Leu Asp Leu 130 135 140 Arg Asp Leu Gln Arg His Leu Arg Phe Gln Val Leu Ala Ala Gly Phe 145 150 155 160 Asn Leu Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu 165 170 175 Arg Lys Gly Leu Leu Pro Gly Ala Leu Gly Ser Ala Leu Gln Gly Pro 180 185 190 Ala Gln Val Ser Trp Pro Gln Leu Leu Ser Thr Tyr Arg Leu Leu His 195 200 205 Ser Leu Glu Leu Val Leu Ser Arg Ala Val Arg Glu Leu Leu Leu Leu 210 215 220 Ser Lys Ala Gly His Ser Val Trp Pro Leu Gly Phe Pro Thr Leu Ser 225 230 235 240 Pro Gln Pro <210> 700 <211> 636 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 700 Met Arg Gly Gly Arg Gly Ala Pro Phe Trp Leu Trp Pro Leu Pro Lys 1 5 10 15 Leu Ala Leu Leu Pro Leu Leu Trp Val Leu Phe Gln Arg Thr Arg Pro 20 25 30 Gln Gly Ser Ala Gly Pro Leu Gln Cys Tyr Gly Val Gly Pro Leu Gly 35 40 45 Asp Leu Asn Cys Ser Trp Glu Pro Leu Gly Asp Leu Gly Ala Pro Ser 50 55 60 Glu Leu His Leu Gln Ser Gln Lys Tyr Arg Ser Asn Lys Thr Gln Thr 65 70 75 80 Val Ala Val Ala Ala Gly Arg Ser Trp Val Ala Ile Pro Arg Glu Gln 85 90 95 Leu Thr Met Ser Asp Lys Leu Leu Val Trp Gly Thr Lys Ala Gly Gln 100 105 110 Pro Leu Trp Pro Pro Val Phe Val Asn Leu Glu Thr Gln Met Lys Pro 115 120 125 Asn Ala Pro Arg Leu Gly Pro Asp Val Asp Phe Ser Glu Asp Asp Pro 130 135 140 Leu Glu Ala Thr Val His Trp Ala Pro Pro Thr Trp Pro Ser His Lys 145 150 155 160 Val Leu Ile Cys Gln Phe His Tyr Arg Arg Cys Gln Glu Ala Ala Trp 165 170 175 Thr Leu Leu Glu Pro Glu Leu Lys Thr Ile Pro Leu Thr Pro Val Glu 180 185 190 Ile Gln Asp Leu Glu Leu Ala Thr Gly Tyr Lys Val Tyr Gly Arg Cys 195 200 205 Arg Met Glu Lys Glu Glu Asp Leu Trp Gly Glu Trp Ser Pro Ile Leu 210 215 220 Ser Phe Gln Thr Pro Pro Ser Ala Pro Lys Asp Val Trp Val Ser Gly 225 230 235 240 Asn Leu Cys Gly Thr Pro Gly Gly Glu Glu Pro Leu Leu Leu Trp Lys 245 250 255 Ala Pro Gly Pro Cys Val Gln Val Ser Tyr Lys Val Trp Phe Trp Val 260 265 270 Gly Gly Arg Glu Leu Ser Pro Glu Gly Ile Thr Cys Cys Cys Ser Leu 275 280 285 Ile Pro Ser Gly Ala Glu Trp Ala Arg Val Ser Ala Val Asn Ala Thr 290 295 300 Ser Trp Glu Pro Leu Thr Asn Leu Ser Leu Val Cys Leu Asp Ser Ala 305 310 315 320 Ser Ala Pro Arg Ser Val Ala Val Ser Ser Ile Ala Gly Ser Thr Glu 325 330 335 Leu Leu Val Thr Trp Gln Pro Gly Pro Gly Glu Pro Leu Glu His Val 340 345 350 Val Asp Trp Ala Arg Asp Gly Asp Pro Leu Glu Lys Leu Asn Trp Val 355 360 365 Arg Leu Pro Pro Gly Asn Leu Ser Ala Leu Leu Pro Gly Asn Phe Thr 370 375 380 Val Gly Val Pro Tyr Arg Ile Thr Val Thr Ala Val Ser Ala Ser Gly 385 390 395 400 Leu Ala Ser Ala Ser Ser Val Trp Gly Phe Arg Glu Glu Leu Ala Pro 405 410 415 Leu Val Gly Pro Thr Leu Trp Arg Leu Gln Asp Ala Pro Pro Gly Thr 420 425 430 Pro Ala Ile Ala Trp Gly Glu Val Pro Arg His Gln Leu Arg Gly His 435 440 445 Leu Thr His Tyr Thr Leu Cys Ala Gln Ser Gly Thr Ser Pro Ser Val 450 455 460 Cys Met Asn Val Ser Gly Asn Thr Gln Ser Val Thr Leu Pro Asp Leu 465 470 475 480 Pro Trp Gly Pro Cys Glu Leu Trp Val Thr Ala Ser Thr Ile Ala Gly 485 490 495 Gln Gly Pro Pro Gly Pro Ile Leu Arg Leu His Leu Pro Asp Asn Thr 500 505 510 Leu Arg Trp Lys Val Leu Pro Gly Ile Leu Phe Leu Trp Gly Leu Phe 515 520 525 Leu Leu Gly Cys Gly Leu Ser Leu Ala Thr Ser Gly Arg Cys Tyr His 530 535 540 Leu Arg His Lys Val Leu Pro Arg Trp Val Trp Glu Lys Val Pro Asp 545 550 555 560 Pro Ala Asn Ser Ser Ser Gly Gln Pro His Met Glu Gln Val Pro Glu 565 570 575 Ala Gln Pro Leu Gly Asp Leu Pro Ile Leu Glu Val Glu Glu Met Glu 580 585 590 Pro Pro Pro Val Met Glu Ser Ser Gln Pro Ala Gln Ala Thr Ala Pro 595 600 605 Leu Asp Ser Gly Tyr Glu Lys His Phe Leu Pro Thr Pro Glu Glu Leu 610 615 620 Gly Leu Leu Gly Pro Pro Arg Pro Gln Val Leu Ala 625 630 635 <210> 701 <211> 918 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 701 Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Leu Val Gln Ala Leu Phe Ile Phe Leu 1 5 10 15 Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr Ile Ser 20 25 30 Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys 35 40 45 Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr 50 55 60 Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile Pro Lys Glu Gln Tyr Thr 65 70 75 80 Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Ile Ala Ser 85 90 95 Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu 100 105 110 Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys 115 120 125 Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys 130 135 140 Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu 145 150 155 160 Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg 165 170 175 Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val 180 185 190 Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr 195 200 205 Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro 210 215 220 Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu 225 230 235 240 Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys 245 250 255 Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile 260 265 270 Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp 275 280 285 Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu 290 295 300 Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile 305 310 315 320 Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Ile 325 330 335 Asp Pro Ser His Thr Gln Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val 355 360 365 Thr Leu Thr Arg Trp Lys Ser His Leu Gln Asn Tyr Thr Val Asn Ala 370 375 380 Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu 385 390 395 400 Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr Ile 405 410 415 Pro Ala Cys Asp Phe Gln Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala 420 425 430 Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu 435 440 445 Ser Val Lys Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala 450 455 460 Pro Cys Ile Thr Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr 465 470 475 480 Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu Ile Thr Val 485 490 495 Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser Ile Lys Ala 500 505 510 Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys 515 520 525 Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val 530 535 540 Asp Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Arg Thr 545 550 555 560 Ile Ile Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu 565 570 575 Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met 580 585 590 Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe 595 600 605 Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro 610 615 620 Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys 625 630 635 640 Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro 645 650 655 Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro 660 665 670 Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe 675 680 685 Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe 690 695 700 Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Ile Asn 705 710 715 720 Thr Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser 725 730 735 Ser Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gln Asn 740 745 750 Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg 755 760 765 His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln 770 775 780 Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp 785 790 795 800 His Val Asp Gly Gly Asp Gly Ile Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys 805 810 815 Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro Asp Ile Ser His Phe Glu 820 825 830 Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu 835 840 845 Lys Gln Gln Ile Ser Asp His Ile Ser Gln Ser Cys Gly Ser Gly Gln 850 855 860 Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly 865 870 875 880 Thr Glu Gly Gln Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala 885 890 895 Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln 900 905 910 Gly Gly Tyr Met Pro Gln 915 <210> 702 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 702 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 703 <211> 229 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 703 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 704 <211> 229 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 704 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 705 <211> 229 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 705 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225

Claims (118)

  1. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합하는 특성;
    (ii) IL-27 수용체에 대한 IL-27의 결합을 차단하는 특성;
    (iii) 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는 특성;
    (iv) 세포에서 CD161 발현의 IL-27-매개된 저해를 저해하거나 감소시키는 특성;
    (v) 세포에서 IL-27-매개된 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시키는 특성; 및
    (vi) 세포로부터의 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시키는 특성 중 적어도 하나 이상을 나타내는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 15 nM 이하의 평형 해리 상수(KD)로 인간 IL-27에 결합하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 쥣과 IL-27에 결합하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  4. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 N-GFTFXXXX-C(서열번호 408)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-ISSSXXYI-C(서열번호 409)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 서열번호 163에 제시된 중쇄 CDR3 서열; 및 서열번호 169, 170 및 171에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 N-FTFXXXXMN-C(서열번호 410)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-XISSSXXYIXYADSVKG-C(서열번호 411)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 서열번호 166에 제시된 중쇄 CDR3 서열; 및 서열번호 172, 173 및 174에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  5. 제4항에 있어서, 상기 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 412)로 이루어지고 상기 중쇄 CDR2는 N-ISSS[S/G][S/A]YI-C(서열번호 413)로 이루어지거나; 또는 상기 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]MN-C(서열번호 414)로 이루어지고 상기 중쇄 CDR2는 N-[G/S]ISSS[S/G][S/A]YI[L/Y]YADSVKG-C(서열번호 415)로 이루어진, 단리된 단일클론 항체.
  6. 제4항에 있어서,
    (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 161, 162 및 163에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 169, 170 및 171에 제시되거나;
    (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 164, 165 및 166에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 172, 173 및 174에 제시되거나;
    (iii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 73, 74 및 75에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 81, 82 및 83에 제시되거나;
    (iv) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 76, 77 및 78에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 84, 85 및 86에 제시되거나;
    (v) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 95, 96 및 97에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 103, 104 및 105에 제시되거나;
    (vi) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 98, 99 및 100에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 106, 107 및 108에 제시되거나;
    (vii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 117, 118 및 119에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 125, 126 및 127에 제시되거나;
    (viii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 120, 121 및 122에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 128, 129 및 130에 제시되거나;
    (ix) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 139, 140 및 141에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 147, 148 및 149에 제시되거나;
    (x) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 142, 143 및 144에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 150, 151 및 152에 제시되거나;
    (xi) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 51, 52 및 53에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 59, 60 및 61에 제시되거나; 또는
    (xii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 54, 55 및 56에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 62, 63 및 64에 제시된, 단리된 단일클론 항체.
  7. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 N-GGSFSXYX-C(서열번호 416)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-IDXSGXT-C(서열번호 417)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 N-ARXXXYY[X]n =0- 1DSS[X]n =4- 6DX-C(서열번호 418)로 이루어진 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QXXSXY-C(서열번호 419)로 이루어진 경쇄 CDR1, N-DXS-C(서열번호 420)로 이루어진 경쇄 CDR2 및 N-QQXXDXPIT-C(서열번호 421)로 이루어진 경쇄 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 N-GSFSXYXWS-C(서열번호 422)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-SIDXSGXTXYNPSLKS-C(서열번호 423)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 N-ARXXXYY[X]n =0-1DSS[X]n=4-6DX-C(서열번호 418)로 이루어진 중쇄 CDR3 서열; 및 N-XASQXXSXYLX-C(서열번호 424)로 이루어진 경쇄 CDR1, N-DXSNXXT-C(서열번호 425)로 이루어진 경쇄 CDR2 및 N-QQXXDXPIT-C(서열번호 421)로 이루어진 경쇄 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  8. 제7항에 있어서,
    (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GGSFS[R/D]Y[E/Y]-C(서열번호 426)로 이루어지고, 중쇄 CDR2는 N-ID[W/Y]SG[I/S]T-C(서열번호 427)로 이루어지고, 중쇄 CDR3 서열은 N-AR[D/L][P/G][M/V]YY[-/Y]DSS[VSTGSV/DLGF]D[V/I]-C(서열번호 428)로 이루어지고; 경쇄 CDR1은 N-Q[S/D][V/I]S[S/N]Y-C(서열번호 429)로 이루어지고, 경쇄 CDR2는 N-D[S/A]S-C(서열번호 430)로 이루어지고, 경쇄 CDR3 서열은 N-QQ[D/Y][S/D]D[H/L]PIT-C(서열번호 431)로 이루어지거나; 또는
    (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-GSFS[R/D]Y[E/Y]WS-C(서열번호 432)로 이루어지고, 중쇄 CDR2는 N-SID[W/Y]SG[I/S]T[N/E]YNPSLKS-C(서열번호 433)로 이루어지고, 중쇄 CDR3 서열은 N-AR[D/L][P/G][M/V]YY[-/Y]DSS[VSTGSV/DLGF]D[V/I]-C(서열번호 428)로 이루어지고; 경쇄 CDR1은 N-[Q/R]ASQ[S/D][V/I]S[S/N]YL[N/A]-C(서열번호 434)로 이루어지고, 경쇄 CDR2는 N-D[S/A]SN[R/L][A/E]T-C(서열번호 435)로 이루어지고, 경쇄 CDR3 서열은 N-QQ[D/Y][S/D]D[H/L]PIT-C(서열번호 431)로 이루어진, 단리된 단일클론 항체.
  9. 제7항에 있어서,
    (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 229, 230 및 231에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 237, 238 및 239에 제시되거나; 또는
    (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 232, 233 및 234에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 240, 241 및 242에 제시된, 단리된 단일클론 항체.
  10. 제7항에 있어서,
    (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 251, 252 및 253에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 259, 260 및 261에 제시되거나; 또는
    (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 254, 255 및 256에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 262, 263 및 264에 제시된, 단리된 단일클론 항체.
  11. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 23, 24 및 25에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 26, 27 및 28에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  12. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 339, 340 및 341에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 347, 348 및 349에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 서열번호 342, 343 및 344에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 350, 351 및 352에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  13. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 185, 186 및 187에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 193, 194 및 195에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 서열번호 188, 189 및 190에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 196, 197 및 198에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  14. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 207, 208 및 209에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 215, 216 및 217에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 서열번호 210, 211 및 212에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 218, 219 및 220에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  15. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 273, 274 및 275에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 281, 282 및 283에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 서열번호 276, 277 및 278에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 284, 285 및 286에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  16. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 N-GFTFSSYG-C(서열번호 361)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-IXXDGSXK-C(서열번호 436)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 N-ARXAP[X]n =3- 8DV-C(서열번호 437)로 이루어진 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QSXSSY-C(서열번호 438)로 이루어진 경쇄 CDR1, N-XXS-C(서열번호 439)로 이루어진 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n =0-1T-C(서열번호 440)로 이루어진 경쇄 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 N-FTFSSYGMX-C(서열번호 441)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-XIXXDGSXKYYXDSVKG-C(서열번호 442)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 N-ARXAP[X]n =3- 8DV-C(서열번호 437)로 이루어진 중쇄 CDR3 서열; 및 N-RASQSXSSYLX-C(서열번호 443)로 이루어진 경쇄 CDR1, N-[X]n=1- 2SS[X]n =3-4-C(서열번호 444)로 이루어진 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 440)로 이루어진 경쇄 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  17. 제16항에 있어서,
    (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GFTFSSYG-C(서열번호 361)로 이루어지고, 중쇄 CDR2는 N-I[K/W][Q/Y]DGS[E/N]K-C(서열번호 445)로 이루어지고, 중쇄 CDR3 서열은 N-AR[D/G]AP[WDIYDYYM/EYV]DV-C(서열번호 446)로 이루어지고; 경쇄 CDR1은 N-QS[I/V]SSY-C(서열번호 447)로 이루어지고, 경쇄 CDR2는 N-[A/D][A/S]S-C(서열번호 448)로 이루어지고, 경쇄 CDR3 서열은 N-QQ[S/Y][Y/S][V/L][P/Y]P[W/-]T-C(서열번호 449)로 이루어지거나; 또는 (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-FTFSSYGM[S/H]-C(서열번호 450)로 이루어지고, 중쇄 CDR2는 N-[N/V]I[K/W][Q/Y]DGS[E/N]KYY[V/A]DSVKG-C(서열번호 451)로 이루어지고, 중쇄 CDR3 서열은 N-AR[D/G]AP[WDIYDYYM/EYV]DV-C(서열번호 446)로 이루어지고; 경쇄 CDR1은 N-RASQS[I/V]SSYL[N/A]-C(서열번호 452)로 이루어지고, 경쇄 CDR2는 N-[AA/D]SS[LQS/NRAT]-C(서열번호 453)로 이루어지고, 경쇄 CDR3 서열은 N-QQ[S/Y][Y/S][V/L][P/Y]P[W/-]T-C(서열번호 449)로 이루어지는, 단리된 단일클론 항체.
  18. 제16항에 있어서,
    (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 361, 362 및 363이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 369, 370 및 371이거나; 또는
    (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 364, 365 및 366이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 372, 373 및 374인, 단리된 단일클론 항체.
  19. 제16항에 있어서,
    (i) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 383, 384 및 385이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 391, 392 및 393이거나; 또는
    (ii) 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 386, 387 및 388이고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 394, 395 및 396인, 단리된 단일클론 항체.
  20. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 N-GFTFXXXX-C(서열번호 408)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-IXXXXXXX-C(서열번호 456)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 N-AR[X]n=6-15DX-C(서열번호 458)로 이루어진 중쇄 CDR3 서열; 및 N-QS[X]n=1-3SS[X]n=0-4Y-C(서열번호 460)로 이루어진 경쇄 CDR1, N-XXS-C(서열번호 462)로 이루어진 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 464)로 이루어진 경쇄 CDR3 서열; 또는
    (ii) 각각 N-FTFXXXXMX-C(서열번호 466)로 이루어진 중쇄 CDR1, N-XIXXXXXXXXYXDSVKG-C(서열번호 468)로 이루어진 중쇄 CDR2 및 N-AR[X]n=6-15DX-C(서열번호 470)로 이루어진 중쇄 CDR3 서열; 및 N-RASQSXSSYLX-C(서열번호 472)로 이루어진 경쇄 CDR1, N-[X]n=1-2S[X]n=4-5-C(서열번호 474)로 이루어진 경쇄 CDR2 및 N-QQXXXXP[X]n=0-1T-C(서열번호 476)로 이루어진 경쇄 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  21. 제20항에 있어서,
    (i) 각각 중쇄 CDR1은 N-GFTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]-C(서열번호 454)로 이루어지고, 중쇄 CDR2는 N-I[S/K/W][S/Q/Y][S/D][S/G][S/A][Y/E/N][I/K]-C(서열번호 455)로 이루어지고, 중쇄 CDR3 서열은 N-AR[DGGRTSYTATAHNWF/DAPWDIYDYYM/GAPEYV]D[P/V]-C(서열번호 457)로 이루어지고; 경쇄 CDR1은 N-QS[VLF/I/V]SS[NNKN/-]Y-C(서열번호 459)로 이루어지고, 경쇄 CDR2는 N-[W/A/D][A/S]S-C(서열번호 461)로 이루어지고, 경쇄 CDR3 서열은 N-QQ[H/S/Y][A/Y/S][S/V/L][A/P/Y]P[P/W/-]T-C(서열번호 463)로 이루어지거나; 또는
    (ii) 각각 중쇄 CDR1은 N-FTF[S/A/R][S/R][T/Y][G/S]M[N/S/H]-C(서열번호 465)로 이루어지고, 중쇄 CDR2는 N-[G/S/N/V]I[S/K/W][S/Q/Y][S/D][S/G][S/A][Y/E/N][I/K][L/Y]Y[V/A]DSVKG-C(서열번호 467)로 이루어지고, 중쇄 CDR3 서열은 N-AR[D/G][GGRTSYTATAHNWF/APWDIYDYYM/APEYV]D[P/V]-C(서열번호 469)로 이루어지고; 경쇄 CDR1은 N-RASQS[I/V]SSYL[N/A]-C(서열번호 471)로 이루어지고, 경쇄 CDR2는 N-[WA/AA/D]S[TRES/SLQS/SNRAT]-C(서열번호 473)로 이루어지고, 경쇄 CDR3 서열은 N-QQ[H/S/Y][A/Y/S][S/V/L][A/P/Y]P[P/W/-]T-C(서열번호 475)로 이루어진, 단리된 단일클론 항체.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 IL-27을 길항시키는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  24. 제23항에 있어서, 상기 세포는 면역 세포인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  25. 제23항에 있어서, 상기 세포는 암 세포인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시키는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  27. 제26항에 있어서, 상기 세포는 면역 세포인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서의 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시키는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  29. 제28항에 있어서, 상기 세포는 면역 세포인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  30. 제29항에 있어서, 상기 세포는 암 세포인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  31. 제29항에 있어서, 상기 세포는 암 세포이고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 암 세포에서의 PD-L1 발현을 저해하거나 감소시키는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터의 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시키는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  33. 제32항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 IFNg, TNFα 또는 IL-6인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  34. 제33항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 IFNg, IL-17, TNFα 또는 IL-6인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  35. 제33항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 TNFα인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  36. 제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 면역 세포인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1 IgA2, IgD 및 IgE 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  38. 제37항에 있어서, 상기 항체는 IgG1 항체 또는 IgG4 항체인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  39. 제38항에 있어서, 상기 항체는 야생형 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  40. 제38항에 있어서, 상기 항체는 야생형 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  42. 제41항에 있어서, 상기 항체는 돌연변이체 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  43. 제41항에 있어서, 상기 항체는 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  44. 제43항에 있어서, 상기 돌연변이체 IgG4 중쇄 불변 영역은 EU 넘버링에 따라 치환 S228P, L235E, L235A 중 어느 하나, 또는 이들의 조합을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  45. 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  46. 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 아미노산 잔기 중 적어도 하나에 결합하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  47. 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 의해 결합된 에피토프의 돌연변이는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분 그리고 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 둘 모두에 대한 결합을 저해하거나 감소시키거나 차단하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  48. 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, IL-27 상의 에피토프에 결합하고, 상기 에피토프는 표 12에 기재된 항체 분자에 의해 결합된 에피토프와 동일하거나 유사한, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  49. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 51, 52 및 53에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 59, 60 및 61에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (ii) 각각 서열번호 73, 74 및 75에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 81, 82 및 83에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iii) 각각 서열번호 95, 96 및 97에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 103, 104 및 105에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iv) 각각 서열번호 117, 118 및 119에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 125, 126 및 127에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (v) 각각 서열번호 139, 140 및 141에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 147, 148 및 149에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (vi) 각각 서열번호 161, 162 및 163에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 169, 170 및 171에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (vii) 각각 서열번호 185, 186 및 187에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 193, 194 및 195에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (viii) 각각 서열번호 207, 208 및 209에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 215, 216 및 217에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (ix) 각각 서열번호 229, 230 및 231에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 237, 238 및 239에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (x) 각각 서열번호 251, 252 및 253에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 259, 260 및 261에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xi) 각각 서열번호 273, 274 및 275에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 281, 282 및 283에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xii) 각각 서열번호 295, 296 및 297에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 303, 304 및 305에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xiii) 각각 서열번호 317, 318 및 319에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 325, 326 및 327에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xiv) 각각 서열번호 339, 340 및 341에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 347, 348 및 349에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xv) 각각 서열번호 361, 362 및 363에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 369, 370 및 371에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
    (xvi) 각각 서열번호 383, 384 및 385에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 391, 392 및 393에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  50. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 54, 55 및 56에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 62, 63 및 64에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (ii) 각각 서열번호 76, 77 및 78에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 84, 85 및 86에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iii) 각각 서열번호 98, 99 및 100에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 106, 107 및 108에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (iv) 각각 서열번호 120, 121 및 122에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 128, 129 및 130에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (v) 각각 서열번호 142, 143 및 144에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 150, 151 및 152에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (vi) 각각 서열번호 164, 165 및 166에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 172, 173 및 174에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (vii) 각각 서열번호 188, 189 및 190에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 196, 197 및 198에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (viii) 각각 서열번호 210, 211 및 212에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 218, 219 및 220에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (ix) 각각 서열번호 232, 233 및 234에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 240, 241 및 242에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (x) 각각 서열번호 254, 255 및 256에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 262, 263 및 264에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xi) 각각 서열번호 276, 277 및 278에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 284, 285 및 286에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xii) 각각 서열번호 298, 299 및 300에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 306, 307 및 308에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xiii) 각각 서열번호 320, 321 및 322에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 328, 329 및 330에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xiv) 각각 서열번호 342, 343 및 344에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 350, 351 및 352에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열;
    (xv) 각각 서열번호 364, 365 및 366에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 372, 373 및 374에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열; 및
    (xvi) 각각 서열번호 386, 387 및 388에 제시된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및 각각 서열번호 394, 395 및 396에 제시된 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  51. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄 CDR을 포함하고, 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 164, 165 및 166에 제시되고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열은 각각 서열번호 172, 173 및 174에 제시된, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  52. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 57, 79, 101, 123, 145, 167, 191, 213, 235, 257, 279, 301, 323, 345, 367 및 389로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 65, 87, 109, 131, 153, 175, 199, 221, 243, 265, 287, 309, 331, 353, 375 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  53. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 57 및 65;
    (ii) 각각 서열번호 79 및 87;
    (iii) 각각 서열번호 101 및 109;
    (iv) 각각 서열번호 123 및 131;
    (v) 각각 서열번호 145 및 153;
    (vi) 각각 서열번호 167 및 175;
    (vii) 각각 서열번호 191 및 199;
    (viii) 각각 서열번호 213 및 221;
    (ix) 각각 서열번호 235 및 243;
    (x) 각각 서열번호 257 및 265;
    (xi) 각각 서열번호 279 및 287;
    (xii) 각각 서열번호 301 및 309;
    (xiii) 각각 서열번호 323 및 331;
    (xiv) 각각 서열번호 345 및 353;
    (xv) 각각 서열번호 367 및 375; 및
    (xvi) 각각 서열번호 389 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  54. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호 57, 79, 101, 123, 145, 167, 191, 213, 235, 257, 279, 301, 323, 345, 367 및 389로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호 65, 87, 109, 131, 153, 175, 199, 221, 243, 265, 287, 309, 331, 353, 375 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  55. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 57 및 65;
    (ii) 각각 서열번호 79 및 87;
    (iii) 각각 서열번호 101 및 109;
    (iv) 각각 서열번호 123 및 131;
    (v) 각각 서열번호 145 및 153;
    (vi) 각각 서열번호 167 및 175;
    (vii) 각각 서열번호 191 및 199;
    (viii) 각각 서열번호 213 및 221;
    (ix) 각각 서열번호 235 및 243;
    (x) 각각 서열번호 257 및 265;
    (xi) 각각 서열번호 279 및 287;
    (xii) 각각 서열번호 301 및 309;
    (xiii) 각각 서열번호 323 및 331;
    (xiv) 각각 서열번호 345 및 353;
    (xv) 각각 서열번호 367 및 375; 및
    (xvi) 각각 서열번호 389 및 397로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  56. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 167 및 175에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  57. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 167 및 175에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  58. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열번호 67, 89, 111, 133, 155, 177, 201, 243, 245, 267, 289, 311, 333, 355, 377 및 399로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  59. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열번호 67, 89, 111, 133, 155, 177, 201, 243, 245, 267, 289, 311, 333, 355, 377 및 399로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  60. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열번호 71, 93, 115, 137, 159, 181, 205, 227, 249, 271, 293, 315, 337, 359, 381 및 403으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  61. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 상기 중쇄는 서열번호 71, 93, 115, 137, 159, 181, 205, 227, 249, 271, 293, 315, 337, 359, 381 및 403으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 상기 경쇄는 서열번호 69, 91, 113, 135, 157, 179, 203, 225, 247, 269, 291, 313, 335, 357, 379 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  62. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 67 및 69;
    (ii) 각각 서열번호 89 및 91;
    (iii) 각각 서열번호 111 및 113;
    (iv) 각각 서열번호 133 및 135;
    (v) 각각 서열번호 155 및 157;
    (vi) 각각 서열번호 177 및 179;
    (vii) 각각 서열번호 201 및 203;
    (viii) 각각 서열번호 243 및 225;
    (ix) 각각 서열번호 245 및 247;
    (x) 각각 서열번호 267 및 269;
    (xi) 각각 서열번호 289 및 291;
    (xii) 각각 서열번호 311 및 313;
    (xiii) 각각 서열번호 333 및 335;
    (xiv) 각각 서열번호 355 및 357;
    (xv) 각각 서열번호 377 및 379; 및
    (xvi) 각각 서열번호 399 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  63. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 67 및 69;
    (ii) 각각 서열번호 89 및 91;
    (iii) 각각 서열번호 111 및 113;
    (iv) 각각 서열번호 133 및 135;
    (v) 각각 서열번호 155 및 157;
    (vi) 각각 서열번호 177 및 179;
    (vii) 각각 서열번호 201 및 203;
    (viii) 각각 서열번호 243 및 225;
    (ix) 각각 서열번호 245 및 247;
    (x) 각각 서열번호 267 및 269;
    (xi) 각각 서열번호 289 및 291;
    (xii) 각각 서열번호 311 및 313;
    (xiii) 각각 서열번호 333 및 335;
    (xiv) 각각 서열번호 355 및 357;
    (xv) 각각 서열번호 377 및 379; 및
    (xvi) 각각 서열번호 399 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  64. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 71 및 69;
    (ii) 각각 서열번호 93 및 91;
    (iii) 각각 서열번호 115 및 113;
    (iv) 각각 서열번호 137 및 135;
    (v) 각각 서열번호 159 및 157;
    (vi) 각각 서열번호 181 및 179;
    (vii) 각각 서열번호 205 및 203;
    (viii) 각각 서열번호 227 및 225;
    (ix) 각각 서열번호 249 및 247;
    (x) 각각 서열번호 271 및 269;
    (xi) 각각 서열번호 293 및 291;
    (xii) 각각 서열번호 315 및 313;
    (xiii) 각각 서열번호 337 및 335;
    (xiv) 각각 서열번호 359 및 357;
    (xv) 각각 서열번호 381 및 379; 및
    (xvi) 각각 서열번호 403 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  65. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    (i) 각각 서열번호 71 및 69;
    (ii) 각각 서열번호 93 및 91;
    (iii) 각각 서열번호 115 및 113;
    (iv) 각각 서열번호 137 및 135;
    (v) 각각 서열번호 159 및 157;
    (vi) 각각 서열번호 181 및 179;
    (vii) 각각 서열번호 205 및 203;
    (viii) 각각 서열번호 227 및 225;
    (ix) 각각 서열번호 249 및 247;
    (x) 각각 서열번호 271 및 269;
    (xi) 각각 서열번호 293 및 291;
    (xii) 각각 서열번호 315 및 313;
    (xiii) 각각 서열번호 337 및 335;
    (xiv) 각각 서열번호 359 및 357;
    (xv) 각각 서열번호 381 및 379; 및
    (xvi) 각각 서열번호 403 및 401로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  66. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 177 및 179에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  67. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 177 및 179에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  68. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 181 및 179에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  69. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하고 이를 길항시키는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 각각 서열번호 181 및 179에 제시된 아미노산 서열에 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  70. 약학적 조성물로서, 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약학적 조성물.
  71. 핵산으로서, 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄 및 중쇄 둘 모두를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산.
  72. 발현 벡터로서, 제71항의 핵산을 포함하는 발현 벡터.
  73. 세포로서, 제72항의 발현 벡터로 형질전환된 세포.
  74. 인간 IL-27에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은 상기 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 발현을 허용하는 조건 하에 제73항에 따른 세포를 유지시키는 단계를 포함하는, 방법.
  75. 제74항에 있어서, 상기 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 얻는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  76. 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시키는, 방법.
  77. 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시키는, 방법.
  78. 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포에서 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하는, 방법.
  79. 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 분비를 유도하거나 향상시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포를 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1 매개된 분비를 유도하거나 향상시키는, 방법.
  80. 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제70항의 약학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  81. 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제70항의 약학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  82. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제70항의 약학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포에서 STAT1 및/또는 STAT3 인산화를 저해하거나 감소시켜 상기 면역 반응을 자극하거나 또는 상기 암을 치료하는, 방법.
  83. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제70항의 약학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포에서 CD161 발현의 저해를 저해하거나 감소시켜 상기 면역 반응을 자극하거나 또는 상기 암을 치료하는, 방법.
  84. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제70항의 약학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포 상의 PD-L1 및/또는 TIM-3 발현을 저해하거나 감소시켜 상기 면역 반응을 자극하거나 또는 상기 암을 치료하는, 방법.
  85. 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제70항의 약학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 약학적 조성물은 세포로부터 하나 이상의 사이토카인의 PD-1-매개된 분비를 유도하거나 향상시켜 상기 면역 반응을 자극하거나 상기 암을 치료하는, 방법.
  86. 제81항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암), 육종, 고환암, 난소암, 췌장암, 유방암(예를 들어, 삼중 음성 유방암), 흑색종, 두경부암(예를 들어, 편평 두경부암), 결장직장암, 방광암, 자궁내막암, 전립선암, 갑상선암, 간세포 암종, 위암, 뇌암, 림프종(예를 들어, DL-BCL), 백혈병(예를 들어, AML) 또는 신장암(예를 들어, 신장 세포 암종, 예를 들어 신장 투명 세포 암종)으로부터 선택되는, 방법.
  87. 항-PD-1 항체의 하나 이상의 활성을 향상(예를 들어, 항-PD-1 항체에 노출된 세포로부터 PD-1-매개된 사이토카인 분비를 향상; 항-PD-1 매개된 TNFα 분비를 향상; 항-PD-1 매개된 IL-6 분비를 향상)시키는 방법으로서, 상기 방법은 세포를 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 항-PD-1 항체와 동시적으로 또는 이에 순차적으로 노출시켜 항-PD1 항체의 하나 이상의 활성을 향상시키는, 방법.
  88. 약학적 조성물로서, 항-PD-1 항체 및 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약학적 조성물.
  89. 키트로서, 동시적인 또는 순차적인 투여를 위한 항-PD-1 항체 및 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 및 이의 사용 설명서를 포함하는, 키트.
  90. 제80항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합되어 투여되고, 제2 치료제 또는 절차는 화학요법, 표적화된 항암 치료, 종양세포붕괴성 약물(oncolytic drug), 세포독성제, 면역-기반 치료, 사이토카인, 수술 절차, 방사선 절차, 동시자극 분자의 활성제, 저해 분자의 저해제, 백신, 또는 세포 면역요법, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  91. 제90항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제, PD-L1 저해제, TIM-3 저해제, LAG-3 저해제, TIGIT 저해제, CD112R 저해제, TAM 저해제, STING 작용제, 4-1BB 작용제, 또는 이들의 조합인, 방법.
  92. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 PD-1 길항제인, 방법.
  93. 제92항에 있어서, 상기 PD-1 길항제는 PDR001, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, MEDI0680, REGN2810, TSR-042, PF-06801591 및 AMP-224로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  94. 제91항에 있어서, 상기 PD-L1 저해제는 FAZ053, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 및 BMS-936559로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  95. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 수니티닙(Sutent®), 카보잔티닙(Cabometyx®), 악시티닙(Inlyta®), 렌바티닙(Lenvima®), 에버롤리무스(Afinitor®), 베바시주맙(Avastin®), 에파카도스타트, NKTR-214(CD-122-바이어싱 작용제), 티보자닙(Fotivda®), 아벡시노스타트, 이필리무맙(Yervoy®), 트레멜리무맙, 파조파닙(Votrient®), 소라페닙(Nexavar®), 템시롤리무스(Torisel®), 라무시루맙(Cyramza®), 니라파립, 사볼리티닙, 보롤라닙(X-82), 레고라페닙(Stivargo®), 도나페닙(다중키나제 저해제), 캄렐리주맙(SHR-1210), 페삭스티모겐 데바시렙벡(JX-594), 라무시루맙(Cyramza®), 아파티닙(YN968D1), 캡슐화 독소루비신(Thermodox®), 티반티닙(ARQ197), ADI-PEG 20, 비니메티닙, 아파티닙 메실레이트, 닌테다닙, 리릴루맙, 니볼루맙(Opdivo®), 펨브롤리주맙(Keytruda®), 아테졸리주맙(Tecentriq®), 아벨루맙(Bavencio®), 더발루맙(Imfimzi®), 세미플리맙-rwlc(Libtayo®), 티슬렐리주맙 및 스파르탈리주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  96. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIM-3 저해제이고, 선택적으로 상기 TIM-3 저해제는 MGB453 또는 TSR-022인, 방법.
  97. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 LAG-3 저해제이고, 선택적으로 상기 LAG-3 저해제는 LAG525, BMS-986016 및 TSR-033으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  98. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 TIGIT 저해제인, 방법.
  99. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 CD112R 저해제인, 방법.
  100. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 TAM(Axl, Mer, Tyro) 저해제인, 방법.
  101. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 4-1BB 작용제인, 방법.
  102. 제91항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가적인 치료제는 티로신 키나제 저해제(TKI: Tyrosine Kinase Inhibitor)인, 방법.
  103. 대상체로부터의 샘플에서 IL-27 또는 EBI3을 검출하는 방법으로서, 상기 방법은 (a) IL-27 또는 EBI3이 상기 샘플에 존재하는 경우에는 검출 항체가 검출 항체-EBI3 복합체를 형성하게 하는 조건 하에 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계이되, 상기 검출 항체는 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 생성된 복합체가 있는 경우에는 상기 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  104. 대상체에서 IL-27-연관된 암을 검출하는 방법으로서, 상기 방법은 (a) IL-27 또는 EBI3이 샘플에 존재하는 경우에는 검출 항체가 검출 항체-EBI3 복합체를 형성하게 하는 조건 하에 IL-27-연관된 암을 갖는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플을 검출 항체와 접촉시키는 단계이되, 상기 검출 항체는 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 단계; 및 (b) 단계 (a)에서 생성된 복합체가 있는 경우에는 상기 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  105. 제103항 또는 제104항에 있어서, 상기 검출 항체는 검출 가능한 라벨에 커플링된, 방법.
  106. 제103항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 IL-27 또는 EBI3이 샘플에 존재하는 경우에는 IL-27 또는 EBI3 및 포획 항체를 포함하는 복합체를 생성하도록 상기 샘플을 포획 항체와 접촉시키는 단계를 추가로 포함하고, 상기 포획 항체는 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, 방법.
  107. 제106항에 있어서, 상기 포획 항체는 고체 지지체 상에 부동화된, 방법.
  108. 제103항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 샘플은 상기 검출 항체 전에 상기 포획 항체와 접촉하는, 방법.
  109. 제103항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 샘플은 체액 샘플인, 방법.
  110. 제109항에 있어서, 상기 체액 샘플은 혈액, 혈청, 혈장, 세포 용해물 또는 조직 용해물인, 방법.
  111. 제104항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 신장 세포 암종(RCC: renal cell carcinoma), 간세포 암종(HCC: hepatocellular carcinoma), 폐암, 위식도암, 난소암, 자궁내막암, 흑색종, 백혈병 및 림프종으로부터 선택되는, 방법.
  112. 제111항에 있어서, 상기 암은 신장 세포 암종(RCC)인, 방법.
  113. 제111항에 있어서, 상기 암은 간세포 암종(HCC)인, 방법.
  114. 제111항에 있어서, 상기 암은 백혈병 및 림프종으로부터 선택되는, 방법.
  115. 제111항에 있어서, 상기 암은 난소암인, 방법.
  116. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 제70항의 약학적 조성물의 용도로서, 대상체에서 면역 반응을 자극하기 위한 또는 대상체에서 암을 치료하기 위한, 선택적으로는 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와 조합하여 사용하기 위한, 용도.
  117. 키트로서, 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 또는 제70항의 약학적 조성물 및 대상체에서 면역 반응을 자극하거나 또는 대상체에서 암을 치료하는 데 있어서의 사용 설명서를, 선택적으로는 하나 이상의 추가적인 치료제 또는 절차와의 병용에서의 사용 설명서와 함께 포함하는, 키트.
  118. 키트로서, 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 대상체로부터의 샘플에서 IL-27을 검출하는 데 있어서의 사용 설명서를, 선택적으로는 대상체에서 IL-27-연관된 암을 검출하는 데 있어서의 사용 설명서와 함께 포함하는, 키트.
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