KR20210000982A - 항균성 화장료 조성물 - Google Patents

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Abstract

하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물에 관한 것이다.

Description

항균성 화장료 조성물 {Antimicrobial Cosmetic Composition}
하이드록시아세토페논(Hydroxyacetophenone) 및 카프릴하이드록사믹 산(Caprylhydroxamic acid)을 포함하는 항균용 조성물에 관한 것이다.
우리 생활주변에서 널리 이용되는 식품, 의약품, 생활용품,　화장품 등의 많은 제품에는 내부물성의 변화를 방지하고, 일정기간 동안의 보존을 위해서 인체 사용이 허가된　항균물질인 방부제가 첨가되어 있다. 특히,　화장품은 손으로 떠서 사용하거나 인체와의 접촉이 잦은 제품의 특성상 외부로부터 미생물의 유입이 가능하고 이러한 미생물에 의하여 제품의 품질이 변할 수 있다. 이에 따라, 화장품 내에서의 미생물 증식을 방지하는 물질의 사용은 제품의 품질과 소비자의 안전을 확보하기 위해 필수적이다. 이에, 다수의 항균 활성 화합물들이 화장품에 사용되고 있다(대한민국 등록특허공보 제10-1962266호).
다만, 1가지 종류의 항균 제제를 사용하는 것은 항균 제제에 대한 내성을 가지는 균이 출현되는 문제가 발생하며, 이렇게 발생한 내성균은 사멸시키기도 어렵고, 다른 다양한 제품에서 증식할 위험도 있다. 또한, 1가지 종류의 항균 제제를 고함량으로 사용하는 경우, 화장품의 안정도 등에 영향을 줄 수 있다. 따라서, 항균 제제의 양을 최소화 하면서도, 항균 활성을 나타내는 미생물의 범위를 넓히기 위한, 항균 물질의 조합에 대한 연구가 요구된다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산을 조합하는 경우 미생물에 대한 항균활성의 상승효과를 나타냄을 확인하였다.
일 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
다른 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
다른 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
다른 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
일 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.
상기 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염의 중량비는 4:1 내지 1:16, 예를 들어, 예를 들어, 4:1 내지 1:12, 예를 들어, 4:1 내지 1:8, 예를 들어, 4:1 내지 1:4, 예를 들어, 4:1 내지 1:2, 예를 들어, 4:1 내지 1:1, 예를 들어, 1:1 내지 1:16, 예를 들어, 1:2 내지 1:16, 예를 들어, 1:4 내지 1:16으로 포함하는 것일 수 있다. 일 구체예에서, 상기 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 중량비를 4:1 내지 1:16으로 포함할 경우, 단독으로 각각의 물질을 사용하는 경우에 비해, 항균 활성에 있어 상승효과를 나타냄을 확인하였다. 따라서, 상기 범위를 벗어나는 경우, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 조합에 따른 상승효과가 미미할 수 있다.
상기 조성물은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염을 0.1 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.15 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.2 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.25 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.25 중량% 내지 0.55 중량%로 포함하는 것일 수 있다. 상기 범위를 벗어나는 경우, 하이드록시아세토페논의 함량이 지나치게 적으면 항균 활성을 나타내지 않거나, 하이드록시아세토페논의 함량이 지나치게 많으면 조성물의 제형 안정성에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.
상기 조성물은 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 0.05 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.75 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.1 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.125 중량% 내지 0.6 중량%, 예를 들어, 0.125 중량% 내지 0.55 중량%로 포함하는 것일 수 있다. 상기 범위를 벗어나는 경우, 카프릴하이드록사믹 산의 함량이 지나치게 적으면 항균 활성을 나타내지 않거나, 카프릴하이드록사믹 산의 함량이 지나치게 많으면 조성물의 제형 안정성에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.
상기 화장료 조성물은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 적절히 배합하여 포함함으로써 단독 물질의 사용에 비해 항균 활성에 있어 현저한 상승효과를 나타낼 수 있고, 조성물의 제형 안정성를 유지할 수 있다.
상기 항균용 조성물은 화장료 조성물, 방부제 조성물, 약학적 조성물 및 의약외품 조성물에　항균을 위하여 첨가할 수 있다.　
본 명세서에서 용어, "항균"은 미생물의 생육에 저항하는 능력을 의미하여, 세균, 곰팡이, 효모 등과 같은 미생물이 생육하면서 발생할 수 있는 물리, 화학적 작용으로부터 방어하기 위해 이루어지는 모든 기작을 의미한다.
본 명세서에서 용어, "항균용 조성물"은 방부 조성물을 의미할 수 있으며, 이들이 첨가되는 조성물의 변질, 부패, 변색 및 화학변화를 방지하기 위해 사용될 수 있는 모든 첨가물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 식품의 방부제, 화장품 보존제, 의약품 보존제, 살균제, 산화방지제 등이 포함될 수 있으며, 세균, 곰팡이, 효모 등의 미생물의 증식을 억제하여 식품, 화장품, 및 의약품에서 부패 미생물의 발육저지 또는 살균 작용을 하는 등의 기능성 항생제도 포함될 수 있다.
상기 용어, "세균"은 원핵생물로서, 생명체들 중 가장 번성한 종으로, 이들 중에는 병원성을 띄는 세균들이 있다. 크기는 0.5 μm 부터 0.5 mm까지 다양하다. 상기 세균에는 예를 들어, 황색 포도상구균(Staphylococcusaureus), 대장균(Escherichia coli), 녹농균(Paeudomonas aeruginosa)가 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 상기 용어, "진균"은 곰팡이, 효모를 포함한 72,000종 이상의 균종으로 구성되는 미생물군을 총칭하며, 핵막이 있는 진핵생물에 속하고, 미토콘드리아, 소포체 등의 세포 소기관이 발달해 있으며, 키틴, 글루칸 등으로 구성된 세포벽이 있다. 대부분의 곰팡이는 세포성인 균사를 형성하여 신장, 발육하고, 번식체로 포자를 형성하지만 일부 균종은 단세포성 증식을 한다. 주로 부생균으로서 자연계의 유기분해에 관여하지만, 일부는 동식물에 기생 또는 공생한다. 상기 진균에는 예를 들어, 흑국균(Aspergillus niger), 푸른곰팡이 속(Penicillium sp.)이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.　상기 용어, "효모"는 균사가 없고, 광합성능이나 운동능도 가지지 않는 단세포 생물을 총칭하며, 가장 간단한 형태의 진핵생물로 인간의 세포 주기와 비슷한 세포주기를 가지는 것으로 알려져 있다. 상기 효모에는 예를 들어, 사카로마이세스 속(Saccharomyces sp.), 피치아 속(Pichia sp.), 칸디다 속(Candida sp.)이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 대장균(Escherichia coli), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 칸디다균(Candida albicans)) 및 흑색국균(Aspergillus niger)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 미생물에 항균 활성을 나타낼 수 있다. 일 구체예에 있어서, 상기 항균용 조성물은 대장균 및 황색포도상구균에 대하여 항균 활성의 상승효과를 나타냄을 확인하였다.
다른 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 상기 하이드록시아세토페논, 카프릴하이드록사믹 산, 항균 등에 대해서는 상기한 바와 같다.
상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연　화장수, 영양　화장수, 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물의 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 필요에 따라 분산제, 산화방지제, 방부제, pH 조절제, 보습제, 윤활제 등의 성분을 더 첨가할 수 있다. 또한, 상기 색조 화장료　조성물은 피부에 필수 영양소를 보조적으로 제공할 수 있는 물질을 추가로 포함하는데, 바람직하게는 천연향,　화장품향, 또는 식물추출물이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 보조제를 함유할 수 있다.
다른 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다. 상기 하이드록시아세토페논, 카프릴하이드록사믹 산, 항균 등에 대해서는 상기한 바와 같다.
본 명세서에서　용어, "피부　외용제"는 일반적으로 외용에 사용하는 조성물 전반을 포괄하는 개념으로, 기초 화장료, 메이크업 화장료, 모발용 화장료, 면도용 화장료 등 각종 화장료를 포함하는 화장료 조성물이나 연고제 등의 다양한 의약품 내지 의약외품 등으로 폭넓게 적용 가능한 것을 의미할 수 있다. 예를 들어, 상기 의약외품은 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제, 코팅제 또는 필터충진제일 수 있다.
상기 피부　외용제 조성물은 유효성분 외에 사용용도 및　외용제　조성물의 성질에 따라 통상　외용제에 배합되고 있는 성분, 구체적으로 보습제, 자외선 흡수제, 비타민류, 동식 물 추출성분, 소화제, 미백제, 혈관확장제, 수렴제, 청량제, 호르몬제 등을 추가로 배합한 것일 수 있다.
상기 피부　외용제 조성물의 제형은 사용용도 및　외용제　조성물의 성질에 따라 적절한 형태를 취할 수 있으며, 구체적으로 수용액계, 가용화계, 유화계, 유액계, 겔계, 페이스트계, 연고계, 에어졸계, 물-기름 2층계, 물-기름-분말 3층계일 수 있으며, 상기 제형에 의해 본 발명의　외용제의 제형 및 형태가 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기　피부　외용제는 유효성분을　피부 조직으로 침투 또는 이행시키기 위해서 필요한 기제를 추가로 포함할 수 있다.
다른 양상은 하이드록시아세토페논 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 상기 하이드록시아세토페논, 카프릴하이드록사믹 산, 항균 등에 대해서는 상기한 바와 같다.
상기　항균용 조성물을　항균　활성을 갖는　약학 조성물의 유효성분으로 포함하거나, 의약 용도를 갖는 유효 성분의 보조제로서 사용할 수 있다. 상기　약학 조성물은 기술분야의 당업자라면 잘 알고 있는 방법에 따라 제조될 수 있다.　
상기　약학 조성물은 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 상세하게는 제형화할 경우, 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 고형제제는 상기 에틸헥실갈레이트를 포함하는 조성물 외에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다.　또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함할 수 있다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
다른 양상은 상기 항균용 조성물을 균에 처리하는 단계를 포함하는　항균　방법을 제공한다.
상기 하이드록시아세토페논, 카프릴하이드록사믹 산, 항균 등에 대해서는 상기한 바와 같다.
상기　항균용 조성물을 균에 처리하는 방법은　항균이 필요한 다양한 분야에서 당업자에게 잘 알려진 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.　항균용 조성물의 처리량은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.　
일 양상에 따른 항균용 조성물은 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산을 적합한 비율로 조합함으로써, 항균 활성에 있어 상승효과를 나타낼 수 있다. 따라서, 이들이 화장료 조성물에 포함되는 경우, 항균 제제의 양을 최소화하여 제형의 안정도 및 안전성을 확보할 수 있다.
도 1은 하이드록시아세토페논과 카프릴하이드록사믹 산 조합 비율에 따른 대장균(Escherichia coli ATCC 8739) 및 황색포도상구균(Staphylococcus aureus ATCC 6538)에 대한 항균 상승효과를 확인한 방법을 나타낸 도면이다.
도 2는 하이드록시아세토페논 0.6 중량%로 포함한 화장료 조성물(샴푸)의 변색 정도를 나타낸 도면이다.
도 3은 하이드록시아세토페논 0.6 중량%로 포함한 화장료 조성물(에센스)의 변색 정도를 나타낸 도면이다.
도 4는 하이드록시아세토페논 0.6 중량%로 포함한 화장료 조성물(폼 클렌저)의 변색 정도를 나타낸 도면이다.
도 5는 하이드록시아세토페논 0.6 중량%로 포함한 화장료 조성물(로션)의 변색 정도를 나타낸 도면이다.
도 6은 하이드록시아세토페논 0.6 중량%로 포함한 화장료 조성물(스킨)의 변색 정도를 나타낸 도면이다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 항균 활성을 나타내는 최소 농도 확인
고함량의 항균 제제를 사용하는 것은 화장료 조성물의 안정성 및 안전성에 있어 부정적인 영향을 미칠 수 있으므로, 하이드록시아세토페논(HAP: hydroxyacetophenone) 및 카프릴하이드록사믹 산(CHA: caprylhydroxamic acid)의 항균 활성을 나타내는 최소 농도를 확인하고자 하였다.
구체적으로, 대장균(E.coli) 및 황색포도상구균(S.aureus)을 트립틱 소이 배지(TSA: Tryptic Soy agar)에 도말하여, 32 ℃에서 24시간 배양하여 오염되지 않은 순수한 집락을 얻었다. 순수 분리된 각 균의 집락을 TSA에 접종하여 32 ℃에서 24시간 배양하고, 증식기(exponential phase)에 도달한 균액을 준비하였다. 준비된 균액은 0.85% NaCl 용액을 사용하여 단계 희석하고, TSA에 도말하였다. 균을 도말한 플레이트는 32 ℃에서 24시간 배양한 뒤, 집락의 개수에 희석 배수를 곱하여 균액의 최종 균수를 확인한다. 균수를 확인한 균액에 TSA를 첨가하여 최종 균수가 106 CFU/ml이 넘지 않도록 희석하였다. 이때, 물에 대한 용해도가 높은 원료 및 추출물은 TSA로 희석하고, 물에 대한 용해도가 낮은 원료의 경우에는 TSA에 레시틴 0.01%를 추가한 후, 중탕으로 가온하면서 원료를 희석하였다. 균수를 맞춘 균액은 96-웰 플레이트 각 줄의 3개 칸에 100㎕씩 넣어주었다. 100㎕의 균액이 담겨있는 플레이트 첫번째 행의 3개 칸에 준비한 원료를 100㎕씩 넣고, 균액과 원료를 잘 혼합한 뒤, 100㎕을 다음 행의 3개의 칸에 첨가하여, 원료를 1번 행 농도의 1/2로 희석하였다. 이러한 방식으로 원료를 1/2씩 단계적으로 희석하였다.
균주 및 희석된 시료를 분주한 96-웰 플레이트는 32 ℃ 인큐베이터에서 24시간 배양한 후, 배지의 현탁도를 확인하여 육안으로 균의 증식 여부를 판단하였다. 플레이트 각 행의 3개 칸에는 동일한 균주가 포함되어 있으므로, 3개 칸의 현탁도를 함께 관찰하였다. 현탁도를 관찰한 결과, 균이 자라지 않은 농도 중 가장 낮은 농도를 해당 원료의 최소 저해 농도 (MIC: Minimal Inhibitory Concentration) 값으로 정하였다.
균주 하이드록시아세토페논 카프릴하이드록사믹 산
E. coli 0.25 중량% 0.125 중량%
S.aureus 0.25 중량% 0.125 중량%
그 결과, 상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 하이드록시아세토페논의 경우, 대장균 및 황색포도상구균에 대하여 항균 활성을 나타내는 최소 농도는 0.25 중량%이고, 카프릴하이드록사믹 산의 경우, 상기 2종의 균에 대하여 항균 활성을 나타내는 최소 농도는 0.125 중량%임을 확인하였다.
실시예 2. 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 조합에 따른 항균 상승효과 확인
하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 조합의 중량비에 따른 항균 상승효과를 확인하고자 하였다.
구체적으로, 대장균(E. coli) 및 황색포도상구균(S. aureus)을 트립틱 소이 배지(TSB: Tryptic Soy broth)에 도말하여, 32 ℃에서 24시간 배양하여 오염되지 않은 순수한 집락을 얻었다. 순수 분리된 각 균의 집락을 TSB에 접종하여 32 ℃에서 24시간 배양하고, 증식기(exponential phase)에 도달한 균액을 준비하였다. 준비한 균액은 TSB를 사용하여 최종 균수가 106 CFU/ml이 넘지 않도록 희석한 후, 96-웰 플레이트의 각 웰에 50㎕씩 분주하였다. 이때, 원료 및 추출물은 물에 대한 용해도가 높은 경우 TSB로 희석한다. 물에 대한 용해도가 낮은 원료는 TSB에 레시틴 0.01%를 추가한 후, 중탕으로 가온하면서 희석하였다.
하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 항균 상승효과를 확인하는 실험 방법은 도 1에 나타내었다. 구체적으로, 항균 상승효과를 확인하고자 하는 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산은 각각 실시예 1에서 확인한 최소 저해 농도(MIC)의 8배가 되도록 희석하였다. TSB를 사용하여 준비한 원료를 1/2씩 단계 희석함으로써, 최소 저해 농도의 8배에서 1/16배까지 희석된 원료를 준비하였다. 96-웰 플레이트 각 행 및 열에는 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산 각각을 낮은 농도 (최소 저해 농도의 1/16배)에서 높은 농도 (최소 저해 농도의 8배) 순으로 각 웰에 25㎕씩 분주하였다. 음성 대조군 웰에는 균을 첨가하지 않고, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산을 100㎕씩 분주하고, 양성 대조군 웰에는 균주만 100㎕ 분주하였다.
균주 및 희석된 시료를 분주한 96-웰 플레이트는 32 ℃ 인큐베이터에서 24시간 배양한 후, 균의 증식이 육안으로 관찰되지 않는 최소 농도의 배합 비율을 확인하였다. 가장 효율적으로 나타난 배합 농도 결과를 하기 식에 대입하여 부분 억제 농도 (FIC: fractional inhibiting concentration) 및 FIC 지수(FIC index)를 계산하였다.
- HAP 또는 CHA의 FIC = (배합물에서의 HAP 또는 CHA의 MIC) / (HAP 또는 CHA를 단독으로 사용하였을 때의 MIC)
- FIC 지수 = HAP의 FIC + CHA의 FIC
이때, 계산된 FIC 지수≤0.5이면, 상승효과(synergistic effect); 0.5＜FIC 지수≤1이면, 부분적인 상승효과(Partial synergistic effect); 1＜FIC 지수≤4이면, 무관함 (indifferenct); FIC 지수＞4이면, 상쇄효과(antagonistic effect)가 있는 것으로 판단한다.
균주 결과 HAP : CHA FIC 지수
대장균(E. coli) 부분적인 상승효과 1 : 16 0.5156
1 : 8 0.5312
1 : 4 0.5625
1 : 2 0.625
1 : 1 0.75
무관함 1 : 32 1.0156
황색포도상구균(S.aureus) 부분적인
상승효과		 4 : 1 0.75
1 : 1 0.75
무관함 8 : 1 1.25
그 결과, 상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 중량비가 1:1 내지 1:16으로 포함할 경우, 대장균에 대한 항균 활성에 있어 부분적인 상승 효과를 나타냄을 확인하였다. 반면에, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 중량비가 1:32로 포함할 경우, 대장균에 대한 항균 활성에 있어 상승 효과를 나타내지 않음을 확인하였다.
또한, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 중량비가 4:1 내지 1:1로 포함할 경우, 황색포도상구균에 대한 항균 활성에 있어 부분적인 상승 효과를 나타냄을 확인하였다. 반면에, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 중량비가 8:1로 포함할 경우, 황색포도상구균에 대한 항균 활성에 있어 상승 효과를 나타내지 않음을 확인하였다.
종합하면, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 중량비를 4:1 내지 1:16으로 포함할 경우, 각각의 물질을 단독으로 사용한 경우와 비교하여 현저하게 상승된 항균 활성을 나타냄을 확인하였다.
실시예 3. 화장료 조성물의 제형 안정성에 영향을 미치지 않는 최대 농도 확인
고함량의 항균 제제를 포함하는 경우 화장료 조성물의 제형 안정성에 부정적인 영향을 미칠 수 있으므로, 제형의 안정성에 영향을 미치지 않는 최대 농도를 확인하고자 하였다.
구체적으로, 하이드록시아세토페논을 포함하지 않은 샴푸, 에센스, 폼 클렌저, 로션, 스킨을 준비하였다. 각각의 제형에서 하이드록시아세토페논으로 인한 변색 정도를 비교하기 위해 5가지 제형을 선정하였다. 희석되는 원료의 용해도를 높이고, 제형에 균일하게 혼합될 수 있도록 프로판디올을 사용하여, 하이드록시아세토페논을 60% 희석하였다. 희석된 하이드록시아세토페논을 제형 질량의 1/100로 첨가하여, 최종적으로 각 제형에 하이드록시아세토페논이 0.6 중량%로 포함되게 하였다. 하이드록시아세토페논을 포함하지 않는 시료, 및 하이드록시아세토페논 0.6 중량%로 포함한 시료 1개씩을 각각 빛이 차단되는 항온조기와 빛에 노출될 수 있는 창가에 보관하였다. 보관 1개월 후, 시료의 변색 여부를 비교하였다.
제형 하이드록시아세토페논 미포함 하이드록시아세토페논 0.6 중량% 포함
항온조기 창가 항온조기 창가
샴푸 변색되지 않음 변색되지 않음 변색되지 않음 변색됨
에센스 변색되지 않음 변색되지 않음 변색되지 않음 변색 및 시료가 탁해짐
폼 클렌저 변색되지 않음 변색되지 않음 변색되지 않음 변색됨
로션 변색되지 않음 변색되지 않음 변색되지 않음 변색됨
스킨 변색되지 않음 변색되지 않음 변색되지 않음 변색 및 시료가 탁해짐
그 결과, 상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 빛이 차단된 상태에서 보관된 경우, 하이드록시아세토페논 포함 여부와 관계 없이, 화장료 조성물의 모든 제형에서 변색이 일어나지 않았다. 이와 달리, 빛이 차단되지 않은 상태에서 보관된 경우, 하이드록시아세토페논을 포함하지 않은 화장료 조성물과 비교하여, 하이드록시아세토페논을 0.6 중량%로 포함하는 화장료 조성물에서 변색이 일어남을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 하이드록시아세토페논을 0.6 중량% 이상으로 포함할 경우, 화장료 조성물의 변색을 일으켜, 제형의 안정성에 부정적인 영향을 미칠 수 있음을 확인하였다.
이상의 결과로부터, 상기 항균용 조성물은 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산을 적절히 배합하여 포함함으로써, 항균 활성에 있어 상승효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
또한, 하이드록시아세토페논 및 카프릴하이드록사믹 산의 항균 활성을 나타내는 최소 농도는 각각 0.25 중량% 및 0.125 중량%이고; 화장료 조성물 제형의 안정성에 부정적인 영향을 미치지 않는 범위는 0.6 중량% 이하임을 확인하였다.

Claims (8)

  1. 하이드록시아세토페논(Hydroxyacetophenone) 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산(Caprylhydroxamic acid) 또는 이의 염을 포함하는 항균용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 하이드록시아세토페논(Hydroxyacetophenone) 또는 이의 염; 및 카프릴하이드록사믹 산(Caprylhydroxamic acid) 또는 이의 염의 중량비는 4:1 내지 1:16인 것인, 항균용 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 하이드록시아세토페논 또는 이의 염을 0.2 중량% 내지 0.6 중량%로 포함하고; 상기 카프릴하이드록사믹 산 또는 이의 염을 0.1 중량% 내지 0.6 중량%로 포함하는 것인 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 대장균(Escherichia coli), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 칸디다균(Candida albicans), 및 흑색국균(Aspergillus niger)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 미생물에 항균 활성을 나타내는 것인 조성물.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림,　로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 및 스프레이를 포함하는 군으로부터 선택된 하나 이상의 제형인 것인 화장료 조성물.
  7. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항의 항균용 조성물을 포함하는 피부 외용제 조성물.
  8. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항의 항균용 조성물을 포함하는 항균용 약학 조성물.
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