KR20200123155A - Bcma-결합 항체 및 이의 용도 - Google Patents

Bcma-결합 항체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20200123155A
KR20200123155A KR1020207026078A KR20207026078A KR20200123155A KR 20200123155 A KR20200123155 A KR 20200123155A KR 1020207026078 A KR1020207026078 A KR 1020207026078A KR 20207026078 A KR20207026078 A KR 20207026078A KR 20200123155 A KR20200123155 A KR 20200123155A
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마한 압바시안
헨리 찬
칸다사미 하리하란
정훈 선
앤드류 부름저
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셀진 코포레이션
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Abstract

B-세포 성숙 항원(BCMA)에 결합하는 항체 종뿐 아니라, 항체 종 또는 이의 BCMA 결합 단편을 포함하는 개체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포를 고갈시키는 방법이 제공된다. 항체 종 또는 이의 BCMA 결합 단편을 포함하는 개체의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애를 치료하는 방법이 제공된다.

Description

BCMA-결합 항체 및 이의 용도
1. 서열 목록
본 출원은 ASCH 포맷으로 전자적으로 제출되고 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 서열 목록을 포함한다. 2019년 2월 13일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 명칭이 298068-00272_SL.txt이고 크기가 26,248 바이트이다.
2. 분야
본 발명은 B-세포 성숙 항원(B-Cell Maturation Antigen)(BCMA)에 결합하는 단리된 항체 또는 이의 단편, 항체 또는 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 항체 또는 단편을 생산하는 숙주 세포, 및 항체 또는 단편을 사용하는 방법 또는 이를 사용한 치료 방법에 관한 것이다.
3. 배경
BCMA(B-세포 성숙 항원; TNFRSF17 또는 CD269로도 지칭됨)는 TNF 수용체 수퍼 패밀리(super family)에 속하는 막관통 단백질이다. BCMA는 이의 리간드인 BAFF(B cell Activation Factor of TNF Family(TNF 패밀리의 B 세포 활성화 인자); TALL-1 또는 TNFSF13B로도 지칭됨) 및 APRIL(A Proliferation-Inducing Ligand(A 증식-유도 리간드))과의 상호작용으로 인한 B-세포 발달 및 항상성을 위해 필수적인 B-세포 마커이다.
BCMA 발현은 B-세포 계통에 의해 제한되는 것으로 이해되고 주로 형질 세포 및 형질모세포 상에, 및 어느 정도 기억 B-세포 상에 존재하지만, 말초 및 나이브(naive) B-세포 상에는 실제로 존재하지 않는다. 이의 패밀리 멤버인 막관통 활성제 및 사이클로필린 리간드 상호작용제(Cyclophylin ligand Interactor)(TACI) 및 TNF 패밀리 수용체의 B 세포 활성화 인자(BAFF-R)와 함께, BCMA는 체액성 면역, B-세포 발달 및 항상성의 상이한 양상을 조절한다.
BCMA는 또한 다발성 골수종(multiple myeloma)(MM) 세포 상에서 발현된다. BCMA는 다발성 골수종(MM) 세포의 성장 및 생존을 지지하는 것으로 나타난다. MM 세포주 및 갓 단리된 MM 세포는 통상적으로 이들의 세포 표면 상에 BCMA 및 TACI 단백질을 발현하고 이들의 세포 표면 상에 BAFF-R 단백질의 다양한 발현을 갖는다. 다발성 골수종은 전체 암 사망의 2%를 구성하는 2번째로 가장 일반적인 혈액학적 악성종양이다. MM은 이종 질환이며 t(11;14), t(4;14), t(8;14), del(13), 및 del(17)을 포함하는 염색체 전좌에 의해 주로 야기된다. MM-발병된 환자는 골수 침투, 골 파괴, 신부전, 면역결핍, 및 암 진단의 심리적 부담을 포함하여, 이로 인한 다양한 질환-관련된 증상을 경험할 수 있다.
다발성 골수종을 치료하기 위해 사용되는 최근 요법은 보통 치유적이지 않다. 줄기 세포 이식은 고령, 다른 심각한 병의 존재, 또는 다른 신체적 제한 때문에, 많은 환자에 대한 옵션이 될 수 없다. 화학요법만이 다발성 골수종을 부분적으로 제어하며, 이는 드물게 완전 관해를 야기한다. 이와 같이, 다발성 골수종, 및 다른 형질 세포- 또는 B 세포-관련된 질환 또는 장애를 위한 새로운 획기적인 치료가 필요하다.
4. 요약
첫번째 양태에서, 본원은 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9; 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12; 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15; 각각 서열번호 18, 서열번호 19 및 서열번호 20; 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23; 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26; 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31; 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34; 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37; 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42; 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45; 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48; 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53; 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59의 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는, B-세포 성숙 항원(BCMA)에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편을 제공한다. 구체적 실시양태에서, 항체는 각각 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 추가로 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 추가로 포함한다.
구체적 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9; 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12; 또는 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편을 제공한다.
다른 구체적 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및 각각 서열번호 18, 서열번호 19, 및 서열번호 20; 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23; 또는 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편을 제공한다.
다른 구체적 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31; 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34; 또는 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편을 제공한다.
다른 구체적 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42; 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45; 또는 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편을 제공한다.
다른 구체적 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53; 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편을 제공한다.
임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 1의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열, 또는 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열, 또는 서열번호 6, 서열번호 18, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 7-9, 10-12 또는 13-15의, 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 18-20, 21-23, 또는 24-26의, 서열번호 17과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 29-31, 32-34 또는 35-37의, 서열번호 28과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 40-42, 43-45, 또는 46-48의, 서열번호 39와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 51-53, 54-56, 또는 57-59의, 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 제공된 임의의 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 구체적 실시양태에서, 항체는 단클론 항체, 키메라 항체, 디아바디, Fab 단편, Fab' 단편, 또는 F(ab')2 단편, Fv, 이중특이적 항체, 이중특이적 Fab2, 이중특이적 (mab)2, 인간화 항체, 인공적으로 생성된 인간 항체, 이중특이적 T-세포 인게이저(engager), 이중특이적 NK 세포 인게이저, 단일쇄 항체(예를 들어, 단일쇄 Fv 단편 또는 scFv), 트리오맙, 공통 경쇄를 갖는 놉스-인투-홀스(knobs-into-holes)(kih) IgG, 크로스맙, 오쏘-Fab IgG, DVD-Ig, 투인원(2 in 1)-IgG, IgG-scFv, sdFv2-Fc, 바이-나노바디(bi-nanobody), tandAb, 이중-친화성 재표적화 항체(dual-affinity retargeting antibody)(DART), DART-Fc, scFv-HSA-scFv(여기서, HSA = 인간 혈청 알부민), 또는 독-앤드-록(dock-and-lock)(DNL)-Fab3이다. 본원에 제공된 임의의 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 구체적 실시양태에서, 상기 항체 또는 단편은 항체-약물 콘쥬게이트(conjugate)이다.
다른 양태에서, 본원은 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9; 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12; 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15; 각각 서열번호 18, 서열번호 19 및 서열번호 20; 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23; 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26; 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31; 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34; 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37; 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42; 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45; 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48; 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53; 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59의 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 본원에 제공된 임의의 폴리펩티드의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 각각 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 추가로 포함한다. 본원에 제공된 임의의 폴리펩티드의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 추가로 포함한다. 또한, 본원은 서열번호 1의 경쇄 가변 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
다른 양태에서, 본원은 본원에 제공된 임의의 항체, 이의 결합 단편, 또는 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 제공한다. 구체적 실시양태에서, 조성물은 약학 조성물이다. 다른 구체적 실시양태에서, 조성물은 정맥내, 동맥내, 근육내, 피내, 피하, 경막내, 척추강내, 또는 복강내 전달을 위해 제형화된다.
다른 양태에서, 본원은 본원에 제공된 임의의 항체, 항체 단편, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 일 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9; 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12; 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15; 각각 서열번호 18, 서열번호 19 및 서열번호 20; 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23; 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26; 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31; 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34; 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37; 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42; 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45; 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48; 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53; 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59의 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 항-BCMA 항체, BCMA-결합 항체 단편, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오티드의 더욱 구체적 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5, 서열번호 16, 서열번호 27, 서열번호 38, 서열번호 49 또는 서열번호 60의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 항-BCMA 항체, BCMA-결합 항체 단편, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 서열번호 1의 경쇄 가변 서열을 포함하는 항-BCMA 항체, BCMA-결합 항체 단편, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 서열을 포함하는 항-BCMA 항체, BCMA-결합 항체 단편, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 본원은 서열번호 1의 경쇄 가변 서열 및 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 서열을 포함하는 항-BCMA 항체, BCMA-결합 항체 단편, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
다른 양태에서, 본원은 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드 벡터를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터이다. 다른 구체적 실시양태에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다.
다른 양태에서, 본원은 본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오티드를 포함하거나, 본원에 제공된 임의의 항-BCMA 항체, 이의 BCMA-결합 단편, 또는 폴리펩티드를 포함하는 세포를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 세포는 본원에 제공된 임의의 벡터를 포함한다.
다른 양태에서, 본원은 본원에 제공된 임의의 세포가 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드를 발현하고, 이에 의해 상기 폴리펩티드를 생산하도록 야기하는 것; 및 상기 폴리펩티드를 단리시키는 것을 포함하는, 폴리펩티드를 생산하는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 본원에 제공된 임의의 세포가 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드를 발현하고, 이에 의해 상기 항체 또는 이의 단편을 생산하도록 야기하는 것; 및 상기 항체 또는 이의 단편을 단리시키는 것을 포함하는, 항-BCMA 항체, 또는 이의 BCMA 결합 단편을 생산하는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본원은 본원에 제공된 임의의 항-BCMA 항체, 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포를 고갈시키는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 본원에 제공된 임의의 항-BCMA 항체, 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포를 고갈시키는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 본원에 제공된 항-BCMA 항체, 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포, 예를 들어 BCMA-발현 형질 세포에 의해 야기된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포, 예를 들어 BCMA-발현 형질 세포에 의해 야기된 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 본원에 제공된 임의의 항-BCMA 항체, 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 구체적 실시양태에서, B 세포-관련된 장애는 다발성 골수종, 형질세포종, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma), 비-호지킨 림프종, 소포 림프종, 작은 비-분열 세포 림프종, 풍토성 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 산발성 버킷 림프종, 변연부 림프종, 절외 점막-연관된 림프 조직 림프종, 절 단구양 B 세포 림프종, 비장 림프종, 외투 세포 림프종, 대세포 림프종, 미만성 혼합 세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma)(DLBCL), 지연성 림프종, 림프형질세포 림프종, 면역모세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 원발성 B 세포 혈관중심성 림프종, 소림프구 림프종, 만성 림프구 백혈병, 불확실한 악성 가능성의 B 세포 증식, 림프종모양 육아종증, 이식후 림프증식 질환, 면역조절 장애, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 항인지질항체 증후군, 샤가스병(Chagas disease), 그레이브스병(Grave's disease), 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 심상성 천포창, 피부경화증, 다발성 경화증, 항인지질항체 증후군, ANCA 연관 혈관염, 굿파스쳐병(Goodpasture's disease), 가와사키병(Kawasaki disease), 자가면역 용혈 빈혈, 전신 홍반 루푸스, 급속 진행 사구체신염, 중쇄병, 원발성 또는 면역세포-연관된 아밀로이드증, 피부 홍반 루푸스, 의미불명 단클론 감마병증, 또는 교모세포종이다.
추가 양태에서, 본원은 본원에 제공된 임의의 중쇄 또는 경쇄 CDR 서열, 또는 본원에 제공된 임의의 중쇄 또는 경쇄 가변 서열을 포함하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor)(CAR)를 제공한다. 일 실시양태에서, CAR은 세포외 BCMA-결합 도메인 내에 상기 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및/또는 상기 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, CAR은 세포외 BCMA-결합 도메인 내에 상기 경쇄 서열 및/또는 상기 중쇄 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, CAR은 막관통 도메인, 일차 시그널링 도메인, 및/또는 공동자극 도메인 중 1 이상을 포함하거나, 추가로 포함한다. 또한, 본원은 본원에 제공된 임의의 CAR을 발현하는 세포, 예를 들어 면역 세포를 제공한다. 더욱 구체적 실시양태에서, 세포는 T 세포, 천연 킬러 세포(NK 세포), 또는 천연 킬러 T 세포(NKT 세포)이다. 또한, 본원은 본원에 제공된 항-BCMA CAR을 발현하는 세포의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포, 예를 들어 형질 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포, 예를 들어 형질 세포를 고갈시키는 방법을 제공한다. 청구항 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 세포의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애를 치료하는 방법. 본원에 제공된 임의의 항-BCMA CAR을 발현하는 세포를 포함하는 임의의 방법의 구체적 실시양태에서, B 세포-관련된 장애는 다발성 골수종, 형질세포종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 소포 림프종, 작은 비-분열 세포 림프종, 풍토성 버킷 림프종, 산발성 버킷 림프종, 변연부 림프종, 절외 점막-연관된 림프 조직 림프종, 절 단구양 B 세포 림프종, 비장 림프종, 외투 세포 림프종, 대세포 림프종, 미만성 혼합 세포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 지연성 림프종, 림프형질세포 림프종, 면역모세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 원발성 B 세포 혈관중심성 림프종, 소림프구 림프종, 만성 림프구 백혈병, 불확실한 악성 가능성의 B 세포 증식, 림프종모양 육아종증, 이식후 림프증식 질환, 면역조절 장애, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 항인지질항체 증후군, 샤가스병, 그레이브스병, 베게너 육아종증, 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군, 심상성 천포창, 피부경화증, 다발성 경화증, 항인지질항체 증후군, ANCA 연관 혈관염, 굿파스쳐병, 가와사키병, 자가면역 용혈 빈혈, 전신 홍반 루푸스, 급속 진행 사구체신염, 중쇄병, 원발성 또는 면역세포-연관된 아밀로이드증, 피부 홍반 루푸스, 의미불명 단클론 감마병증, 또는 교모세포종이다.
5. 도면
도 1은 결합활성(1a) 및 비-결합활성(1b) 결합의 도식적 표현이다.
도 2는 인간 IgG 항체, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 인간 BCMA를 발현하는 C6 세포에 결합한다는 것을 나타내는 히스토그램을 나타낸다.
도 3은 인간 IgG 항체, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 TNF 수용체 패밀리 멤버, TNFRSF12A를 발현하는 Hek293 세포에 결합하지 않았다는 것을 입증하는 히스토그램을 나타낸다.
도 4는 인간 IgG 항체, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 BCMA를 내생적으로 발현하는 NCIH929 인간 다발성 골수종 세포에 결합한다는 것을 기록한 히스토그램을 나타낸다.
도 5는 BCMA-양성 U266B1 및 KMS12BM 인간 다발성 골수종 세포에 대한 인간 IgG 항체, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199의 결합에 대한 용량-반응 곡선을 나타낸다. 도 5는 또한 상업적으로 이용가능한 항체를 이용한 OPM2 및 NUDHL1 세포 내의 TNF 수용체 패밀리 멤버, BCMA, TACI 및 BAFF의 발현 프로파일을 나타내는 막대 그래프를 나타낸다. 마지막으로, 도면은 BCMA-/TACI+/BAFFR+ NUDHL1 세포가 아닌, BCMA+/TACI-/BAFFR- OPM2에 결합하는 320111 및 320262에 대한 용량-반응 곡선을 나타낸다.
6. 상세한 설명
본원은 특정 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드, 예를 들어 BCMA-결합 폴리펩티드, 및 이러한 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 BCMA-결합 항체, 항체 단편, 및 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 치료 용도를 위해, 예를 들어 형질 세포- 또는 B 세포-관련된 질환 또는 장애를 갖는 대상체의 치료를 위해 이러한 항체, 항체 단편, 및 폴리펩티드를 사용하는 방법을 제공한다.
본원에 사용된 바와 같이, "CDR"은 항체와 항체가 향하는 항원 또는 에피토프 사이의 결합을 매개하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 특정 서열; 항원-결합 부위를 형성하는 면역글로불린의 V-영역 도메인 내에 있고(보통 극심한 서열 가변성의 3 또는 4 개 짧은 영역임) 항원 특이성의 주요 결정인자인 항체의 아미노산 잔기인 상보성 결정 영역(Complementarity Determining Region)을 의미한다. CDR의 서열은 예를 들어, 카밧(Kabat) 시스템(Kabat, et al., 1983. Sequence of Proteins of Immunological Interest. National Institutes of Health, Bethesda, Maryland. 참고); 초티아(Chothia) 시스템(Chothia &, Lesk, "Canonical Structures for the Hypervariable Regions of Immunoglobulins," J. Mol. Biol. 196, 901-917 (1987) 참고); 또는 IMGT 시스템(Lefranc et al., "IMGT Unique Numbering for Immunoglobulin and Cell Receptor Variable Domains and Ig superfamily V-like domains," Dev. Comp. Immunol. 27, 55-77 (2003) 참고)에 의해 결정되거나 넘버링될 수 있다. 또한, Abhinandan & Martin, "Analysis and Improvements to Kabat and Structurally Correct Numbering of Antibody Variable Domains," Mol. Immunol. 45:3832 (2008)를 참고한다.
6.1 폴리펩티드
본원은 특정 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 이러한 폴리펩티드는 단독으로 또는 특정 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드와 조합되어 BCMA에 결합할 수 있다.
첫번째 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 7, 8 및 9의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 10, 11 및 12의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 13, 14 및 15의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 2의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 18, 19 및 20의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 21, 22 및 23의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 24, 25 및 26의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 29, 30 및 31의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 32, 33 및 34의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 35, 36 및 37의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 40, 41 및 42의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 43, 44 및 45의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 46, 47 및 48의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 51, 52 및 53의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 54, 55 및 56의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 57, 58 및 59의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 50의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 50의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 50의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
또한, 본원은 특정 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 이러한 항체는 단독으로 또는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열과의 조합으로 BCMA에 결합할 수 있다. 첫번째 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 3 및 4의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
본원은 특정 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 이러한 폴리펩티드는 단독으로 또는 특정 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드와 조합되어 BCMA에 결합할 수 있다.
첫번째 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 7, 8 및 9의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 10, 11 및 12의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 13, 14 및 15의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 2의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 6의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 18, 19 및 20의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 21, 22 및 23의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 24, 25 및 26의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 17의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 29, 30 및 31의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 32, 33 및 34의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 35, 36 및 37의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 28의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 40, 41 및 42의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 43, 44 및 45의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 46, 47 및 48의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 39의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
다른 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 51, 52 및 53의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 54, 55 및 56의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 또한, 본원은 각각 서열번호 57, 58 및 59의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 50의 중쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 50의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 50의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
또한, 본원은 특정 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 구체적 실시양태에서, 이러한 폴리펩티드는 단독으로 또는 특정 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드와 조합되어 BCMA에 결합할 수 있다. 첫번째 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 3 및 4의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
또한, 본원은 특정 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 첫번째 실시양태에서, 본원은 각각 서열번호 2, 3 및 4의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 임의의 이들 실시양태의 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 Fab 단편이다. 임의의 이들 실시양태의 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 서열번호 1의 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 F(ab')2 단편이다.
임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 1의 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열, 또는 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열, 또는 서열번호 6, 서열번호 18, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다.
임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하고, 서열번호 1과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 임의의 상기 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 7-9, 10-12 또는 13-15의, 서열번호 6과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 18-20, 21-23, 또는 24-26의, 서열번호 17과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 29-31, 32-34 또는 35-37의, 서열번호 28과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 40-42, 43-45, 또는 46-48의, 서열번호 39와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다; 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 서열번호 51-53, 54-56, 또는 57-59의, 서열번호 50과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다.
6.2 항체
또한, 본원은 본원에 제공된 CDR 서열 또는 중쇄 또는 경쇄 가변 서열이거나, 이를 포함하는 항체를 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 1, 2 또는 3 개 경쇄 CDR, 및 1, 2 또는 3 개 중쇄 CDR을 포함하는 항원-결합 폴리펩티드의 임의의 자연-발생 또는 인공적으로 구축된 구성을 의미하며, 여기서 폴리펩티드는 항원에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체는 Fc 부분을 갖거나 Fc 부분이 없는 항체이다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 IgG 항체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체이다. 특정 실시양태에서, 항체는 IgA 항체, IgE 항체, IgD 항체, 또는 IgM 항체이다. 특정 실시양태에서, 항체는 단클론 항체, 예를 들어 단클론 IgG 항체이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 임의의 항체는 야생형 인간 IgG Fc 영역의 Fc 변이체를 포함하고, 여기서 상기 항체는 야생형 IgG Fc 영역을 포함하는 항체와 비교하여, 인간 FcyRIIIA 및/또는 FcyRIIA 및/또는 FcyRI에 대해 친화성 감소를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 상기 항체는 인공적으로 생산된 완전-인간 항체, 예를 들어, 인간 항체를 생산하기 위해 유전적으로 변형된 마우스 또는 래트에 의해 생산된 항체, 예를 들어 OMNIRAT 또는 OMNIMOUSE(Ligand Pharmaceuticals)이다. 이러한 항체는 자연-발생하지 않지만, 인간 프레임워크 및 불변 영역을 갖는다. 인간 BCMA는 자가-항원이기 때문에, 인체는 인간 BCMA에 대한 항체를 생산하지 않을 것이다. 인간 항-BCMA 항체는 예를 들어, Kabat et al에 의해 기재된 것을 포함하여, 당업계에 알려진 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 상당히 상응하는 가변 및 불변 영역을 갖는 것일 수 있다. 본 발명의 인간 항체는 예를 들어, CDR, 특히 CDR3 내의 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내(in vitro)에서 무작위로 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내(in vivo)에서 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 본원에 제공된 인간 항-BCMA 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기로 치환된 적어도 1, 2, 3, 4, 5 이상의 위치를 가질 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 단클론 항체이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "단클론 항체"는 상당히 균질한 항체, 즉 소량으로 존재할 수 있는 가능한 돌연변이 및/또는 번역후 변형(예를 들어, 이성질화, 아미드화)을 제외하고 동일한 집단을 포함하는 개별 항체의 집단으로부터 얻은 항체를 지칭한다. 상기 용어는 이러한 균질한 항체 집단을 지칭하기 위해 사용될 수 있다. 단클론 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원성 부위에 대해 지시된다. 또한, 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 통상적으로 포함하는 다클론 항체 제조와 반대로, 각각의 단클론 항체는 항원에 대한 단일 결정인자에 대해 지시된다. 이의 특이성과 함께, 단클론 항체는 이들이 다른 면역글로불린의 의해 비오염된 하이브리도마 배양액에 의해 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 변형된 "단클론"은 상당히 균질한 항체 집단으로부터 얻어진 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 이해되지 않는다. 예를 들어, 본원에 제공된 바와 같은 단클론 항-BCMA 항체는 Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)에 의해 첫번째로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참고). "단클론 항체"는 또한 예를 들어, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항체, 예를 들어 단클론 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 한편, 나머지 쇄(들)가 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 "키메라" 항체(면역글로불린)뿐 아니라, 이러한 항체의 단편이다. 바람직하게는, 이러한 키메라 항체는 소망하는 생물학적 활성, 예를 들어 BCMA에 대한 결합을 나타낸다(미국 특허 제4,816,567호; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 키메라 항체는 비-인간 영장류(예를 들어, 시노몰구스(cynomolgus) 원숭이, 유인원 등)로부터 유래된 가변 도메인 항원-결합 서열 및 인간 불변 영역 서열을 포함하는 "영장류화된(primitized)" 항체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원의 BCMA-결합 항체는 1가이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 BCMA-결합 항체는 다가, 예를 들어 2가, 3가, 또는 4가이다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 BCMA-결합 항체는 단일특이적이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 BCMA-결합 항체는 다중특이적, 예를 들어 이중특이적, 삼중특이적 등이다. 특정 실시양태에서, 다가인 본원에 제공된 BCMA-결합 항체는 BCMA의 2 이상의 에피토프에 결합한다.
특정 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 항체, 예를 들어 단클론 항체는 당업계에 알려진 재조합 DNA 기술을 사용하여 생산될 수 있는 인간화 항체일 수 있다. 키메라 항체를 제조하기 위한 다양한 접근법이 기재되었다. 예를 들어, Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851 (1985); Takeda et al., Nature 314:452 (1985), Cabilly et al., 미국 특허 제4,816,567호; Boss et al., 미국 특허 제4,816,397호; Tanaguchi et al., EP 0171496호; EP 0173494호, GB 2177096호를 참고한다.
다른 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 이중특이적 항체이고; 즉, 이는 BCMA와 함께 제2 항원을 표적화한다. "이중특이적" 또는 "이중기능적" 항체 또는 면역글로불린은 2 개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2 개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공 하이브리도 항체 또는 면역글로불린이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990)을 참고한다. 당업자에게 알려진 많은 방법이 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 얻기 위해 이용가능하다. 예를 들어, 항체는 재조합 DNA 방법에 의해 생산될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참고). 매우 다양한 재조합 이중특이적 항체 포맷이 최근 과거에 개발되어 왔다(예를 들어, Kontermann RE, mAbs 4:2, (2012) 1-16 참고). 구체적 실시양태에서, 항체는 디아바디, 이중특이적 항체, 놉스-인투-홀스 기술을 이용한 이중특이적 항체, 크로스맙 기술을 이용한 이중특이적 항체(예를 들어, 여기서 1 이상의 Fab 단편의 VL 및 VH 또는 CH1 및 CL이 치환됨), 이중특이적 Fab2, 및/또는 이중특이적 (mab)2 등이다. 구체적 실시양태에서, 항-BCMA Fab는 크로스맙 기술을 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제2 항원은 CD19이다.
다른 구체적 실시양태에서, 항체는 이중특이적 T-세포 인게이저이다. 더욱 구체적 실시양태에서, T 세포 인게이저에 의해 표적화되는 제2 항원은 CD3이다. 다른 구체적 실시양태에서, 항체는 이중특이적 NK 세포 인게이저이다. 더욱 구체적 실시양태에서, NK 세포 인게이저에 의해 표적화되는 제2 항원은 NKG2D이다.
특정 실시양태에서, 이중특이적 항체는 2 이하의 항-BCMA 항체의 Fab 단편 및 1 이하의 제2 항체의 Fab 단편, 예를 들어 1 이하의 항-CD3 항체의 Fab 단편, ("2+1")을 포함하고, 선택적으로 1 이하의 Fc 부분을 갖는다.
다른 실시양태에서, 본원은 BCMA-결합 항체 단편, 예를 들어 단일쇄 항체, Fab 단편 또는 F'(ab)2 단편을 제공한다.
또한, 본원은 다른 구성의 BCMA-결합 항체를 제공하며, 예를 들어 상기 항체는 트리오맙, 공통 경쇄를 갖는 kih IgG, 크로스맙(예를 들어, 여기서, 1 이상의 Fab 단편의 VL 및 VH 또는 CH1 및 CL이 치환됨), 오쏘-Fab IgG, DVD-Ig, 투인원-IgG, IgG-scFv, sdFv2-Fc, 바이-나노바디, tandAb, 이중-친화성 재표적화 항체(DART)(예를 들어, Creative Biolabs에 의함), DART-Fc, scFv-HSA-scFv(여기서, HSA = 인간 혈청 알부민), 독-앤드-록(DNL)-Fab3, ImmTAC, DAF, HSA 바디(body), IgG-피노머(fynomer), 및 ART-Ig로 치환된다.
6.3 항체-약물 콘쥬게이트
다른 양태에서, 특정 실시양태에서, 각각의 또는 임의의 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 약물, 예를 들어 독소 또는 독성 모이어티, 단백질, 다당류 또는 소분자에 콘쥬게이트되어, 항체-약물 콘쥬게이트를 형성할 수 있다. 본 발명의 일 실시양태에서, 약물은 예를 들어, 1 이상의 항-세포사멸제, 유사분열 억제제, 항-종양 항생제, 면역조절제, 유전자 요법을 위한 핵산, 알킬화제, 항-혈관형성제, 항-대사산물, 붕소-함유제, 화학보호제, 호르몬제, 항-호르몬제, 코르티코스테로이드, 광활성 치료제, 올리고뉴클레오티드, 방사성핵종제, 방사선민감제, 토포이소머라아제 억제제, 및 티로신 키나아제 억제제이다. 특정 실시양태에서, 유사분열 억제제는 돌라스타틴, 아우리스타틴, 마이탄시노이드, 및 식물 알칼로이드이다. 특정 실시양태에서, 약물은 돌라스타틴, 아우리스타틴, 마이탄시노이드, 및 식물 알칼로이드이다. 아우리스타틴의 예는 모노메틸아우리스타틴 F(MMAF) 또는 모노에틸아우리스타틴 E(MMAE)이다. 마이탄시노이드의 예는, 비제한적으로, DM1, DM2, DM3, 및 DM4를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-종양 항생제는 악티노마이신, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 및 두오카르마이신으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 악티노마이신은 피롤로벤조디아제핀(PBD)이다.
약물이 마이탄시노이드인 특정 실시양태에서, 마이탄시노이드는 예를 들어, 미국 특허 제6,333,410호에 개시된 절차에 따라 생산된 티올-함유 마이탄시노이드이다. 구체적 실시양태에서, 마이탄시노이드는 DM-1(N2-데아세틸-N2-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-마이탄신)이다. DM-1은 마이탄신에 비해 3- 내지 10-배 더 세포독성이고, 이를 이황화 결합(들)을 통해 본원에 제공된 바와 같은 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편에 연결함으로써, 프로-드럭(pro-drug)으로 전환될 수 있다. 일부의 이들 콘쥬게이트(종종 "종양 활성화된 프로드럭"(TAP)으로 지칭됨)는 혈류에서 세포독성이 아니며, 이는 이들이 표적 세포와 연합시 활성화되고 내부화되어, 약물을 방출하기 때문이다. 다른 구체적 실시양태에서, 마이탄시노이드는 입체 장애 티올 결합을 함유하는 측쇄를 포함하며, 예컨대, 비제한적으로, 마이탄시노이드는 "DM3"로도 지칭되는 N2-데아세틸- N2- (4-메르캅토-1-옥소펜틸)-마이탄신, 및 "DM4"로도 지칭되는 N2-데아세틸-N2-(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-마이탄신이다. DM4는 이의 αC에 메틸기를 보유한다는 점에서 DM1 및 DM3와 상이하다. 이는 DM4가 링커, 특히, 비제한적으로, 이황화 결합을 포함하는 링커를 통해 표적화제, 예컨대 nBT062에 부착될 때 입체 장애를 야기한다. 입체 장애 티올기(1 또는 2 개 치환기, 특히 알킬 치환기, 예컨대 DM4의 메틸 치환기를 포함함)를 보유한 매우 다양한 마이탄시노이드가 본원에 그 전체가 참고로 포함되는 미국 특허 공개 제2004/0235840호에 개시되어 있다. 이펙터가 링커를 통해 표적화제에 부착될 때 입체 장애를 야기하는 위치에 치환기, 예컨대 알킬기를 포함하는 다른 이펙터 분자가 사용될 수 있다. 특정 구체적 실시양태에서, 이 장애는 화학적 변형, 예컨대 유리 약물의 알킬화를 유도하여, 이의 전체적인 안정성을 증가시키고, 이는 약물이 BCMA-발현 종양 세포에서 세포 사멸 또는 연속 세포 사이클 저지를 유도하게 할 뿐 아니라, 선택적으로 예를 들어, 일반적으로 BCMA를 발현하지 않고 약물로부터 종양을 지지하거나 보호하는 조세포, 특히 종양 스트로마 및 종양 맥관구조의 세포에 영향을 미치게 하여, 이들의 지지 또는 보호 기능을 약화시키거나 상실시킨다. DNA 알킬화제가 또한 이펙터 분자로서 사용될 수 있으며, 비제한적으로, CC-1065 유사체 또는 유도체를 포함할 수 있다. CC-1065는 스트렙토마이세스 젤렌시스(Streptomyces zelensis)의 배양액으로부터 단리된 강한 항종양-항생제이고 시험관내에서 예외적으로 세포독성인 것으로 나타났다(미국 특허 제4,169,888호).
특정 다른 구체적 실시양태에서, 약물은 탁산, 예를 들어 1 이상의 티올 또는 디설파이드기를 포함하는 탁산이다. 탁산은 튜불린의 해중합을 억제하여, 미세소관 집합체의 비율 증가 및 세포 사멸을 야기한다. 본원에 제시된 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편과의 항체-약물 콘쥬게이트에 사용될 수 있는 탁산은 예를 들어, 미국 특허 제6,436,931호; 제6,340,701호; 제6,706,708호 및 미국 특허 공개 제2004/0087649호; 제2004/0024049호 및 제2003/0004210호에 개시되어 있다. 사용될 수 있는 다른 탁산은 예를 들어, 미국 특허 제6,002,023호, 제5,998,656호, 제5,892,063호, 제5,763,477호, 제5,705,508호, 제5,703,247호, 제5,367,086호, 및 제6,596,757호에 개시되어 있다.
특정 실시양태에서, 약물은 포말리도마이드(4-아미노-2-[(3RS)-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온)이다. 다른 구체적 실시양태에서, 약물은 탈리도마이드((RS)-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온)이다. 다른 구체적 실시양태에서, 약물은 레날리도마이드(3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온)이다. 다른 구체적 실시양태에서, 약물은 3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이다. 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 사용되는 세레블론-결합 화합물은 3-(4-((4-((4-(2,4-디플루오로페닐)피페라진-l-일)메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온이다. 예를 들어, 이들 화합물과 관련된 개시에 대해, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 공개 제2014/0162282호를 참고한다.
본원에 제공된 방법을 위한 화합물은, 비제한적으로, 면역조절 화합물(Celgene Corporation), 특정 암을 포함한 몇몇 유형의 인간 질환을 치료하기에 유용할 수 있는 화합물의 그룹을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이 달리 나타내지 않는 경우, 용어 "면역조절 화합물"은 LPS 유도된 단핵구 TNF-.알파., IL-1B, 1L-12, IL-6, MIP-1.알파., MCP-1, GM-CSF, G-CSF, 및 COX-2 생산을 억제하는 특정 유기 소분자를 포함할 수 있다. 이들 화합물은 합성적으로 제조될 수 있거나, 상업적으로 얻어질 수 있다.
특정 실시양태에서, 약물은 미국 특허 제5,798,368호에 기재된 테트라 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린; 비제한적으로, 미국 특허 제5,635,517호, 제6,281,230호, 제6,316,471호, 제6,403,613호, 제6,476,052호 및 제6,555,554호; 공개 WO 02/059106호에 개시된 것을 포함한 1-옥소 및 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린(예를 들어, 탈리도마이드의 4-메틸 유도체), 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)프탈이미드 및 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌을 포함한다. 본원에 나타낸 각각의 특허 및 특허 출원 전부는 참고로 포함된다.
본원에 개시된 다양한 화합물은 1 이상의 키랄 중심을 함유하고, 거울상 이성질체의 라세미 혼합물 또는 부분입체 이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 따라서, 본원은 또한 이러한 화합물의 입체 이성질체로 순수한 형태의 용도뿐 아니라, 이들 형태의 혼합물의 용도를 제공한다. 예를 들어, 특정 면역조절 화합물의 거울상 이성질체의 동등하거나 비동등한 양을 포함하는 혼합물이 사용될 수 있다. 이들 이성질체는 비대칭으로 합성되거나 표준 기술, 예컨대 키랄 칼럼 또는 키랄 분해제를 사용하여 분해될 수 있다. 예를 들어, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962); 및 Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E. L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, Ind., 1972)을 참고한다.
본원에 제공된 면역조절 화합물은, 비제한적으로, 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,635,517호에 기재된 바와 같이 벤조 고리에서 아미노로 치환된 1-옥소- 및 1,3 디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린을 포함한다.
이들 화합물은 하기 구조 I을 갖는다:
Figure pct00001
상기 식에서, X 및 Y 중 하나는 C=O이고, X 및 Y 중 나머지는 C=O 또는 CH2이고, R2는 수소 또는 저급 알킬, 특히 메틸이다. 구체적인 면역조절 화합물은, 비제한적으로,
Figure pct00002
및 선택적으로 이의 순수 이성질체를 포함한다.
화합물은 표준 합성 방법(예를 들어, 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,635,517호 참고)을 통해 얻어질 수 있다. 화합물은 또한 Celgene Corporation, Warren, N.J로부터 이용가능하다.
본원에 기재된 조성물에 유용한 다른 약물은 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)프탈이미드 및 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌, 예컨대 각각 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제6,281,230호; 제6,316,471호; 제6,335,349호; 및 제6,476,052호, 및 국제 특허 출원 PCT/US97/13375호(국제 공개 WO 98/03502호)에 기재된 것의 클래스에 속한다. 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00003
상기 식에서, X 및 Y 중 하나는 C=O이고 X 및 Y 중 나머지는 C=O 또는 CH2이고; (i) 각각의 R1, R2, R3, 및 R4는 서로 독립적으로 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시이거나 (ii) R1, R2, R3, 및 R4 중 하나는 --NHR5이고 R1, R2, R3, 및 R4 중 나머지는 수소이고; R5는 수소 또는 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬이고; R6은 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 벤질, 또는 할로이고; 단, X 및 Y가 C=O이고 (i) 각각의 R1, R2, R3, 및 R4가 플루오로이거나 (ii) R1, R2, R3, 또는 R4 중 하나가 아미노인 경우, R6은 수소 이외의 것이다.
이 클래스의 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00004
상기 식에서, R1은 수소 또는 메틸이다. 별도의 실시양태에서, 본원은 이들 화합물의 거울상 이성질체로 순수한 형태(예를 들어, 선택적으로 순수한 (R) 또는 (S) 거울상 이성질체)의 용도를 제공한다.
다른 특이적 면역조절 화합물은 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,798,368호에 기재된 테트라 치환된 2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1-옥소이소인돌린이다. 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00005
상기 식에서, 각각의 R1, R2, R3, 및 R4는 서로 독립적으로 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시이다.
다른 특이적 면역조절 화합물은 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제6,403,613호에 개시된 1-옥소 및 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)이소인돌린이다. 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00006
상기 식에서,
Y는 산소 또는 H2이고,
R1 및 R2 중 첫번째는 할로, 알킬, 알콕시, 알킬아미노, 디알킬아미노, 시아노, 또는 카바모일이고, R1 및 R2 중 두번째는 첫번째와 독립적으로 수소, 할로, 알킬, 알콕시, 알킬아미노, 디알킬아미노, 시아노, 또는 카바모일이고,
R3은 수소, 알킬, 또는 벤질이다.
화합물의 구체적인 예는 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00007
상기 식에서, R1 및 R2 중 첫번째는 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시, 각각의 알킬이 1 내지 4 개 탄소 원자의 것인 디알킬아미노, 시아노, 또는 카바모일이고; R1 및 R2 중 두번째는 첫번째와 독립적으로 수소, 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시, 알킬이 1 내지 4 개 탄소 원자의 것인 알킬아미노, 각각의 알킬이 1 내지 4 개 탄소 원자의 것인 디알킬아미노, 시아노, 또는 카바모일이고; R3은 수소, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 벤질이다. 구체적인 예는, 비제한적으로, 1-옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-메틸이소인돌린을 포함한다.
다른 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00008
상기 식에서, R1 및 R2 중 첫번째는 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시, 각각의 알킬이 1 내지 4 개 탄소 원자의 것인 디알킬아미노, 시아노, 또는 카바모일이고; R1 및 R2 중 두번째는 첫번째와 독립적으로 수소, 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시, 알킬이 1 내지 4 개 탄소 원자의 것인 알킬아미노, 각각의 알킬이 1 내지 4 개 탄소 원자의 것인 디알킬아미노, 시아노, 또는 카바모일이고; R3은 수소, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 벤질이다.
본원에 제공된 다른 구체적인 화합물 및 이의 약학적 허용 염, 용매화물, 및 입체 이성질체는 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00009
상기 식에서,
R1은 수소; 할로; -(CH2)nOH; 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬; 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알콕시; 또는
-(CH2)nNHRa이고, 상기 식에서 Ra는
수소;
1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬;
-(CH2)n-(6 내지 10 원자 아릴);
-C(O)-(CH2)n-(6 내지 10 원자 아릴) 또는 -C(O)-(CH2)n-(6 내지 10 원자 헤테로아릴)(상기 식에서, 아릴 또는 헤테로아릴은 할로; -SCF3; 그 자체가 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬; 또는 그 자체가 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알콕시 중 1 이상으로 선택적으로 치환됨);
-C(O)-(C1-C8)알킬(상기 식에서, 알킬은 1 이상의 할로로 선택적으로 치환됨);
-C(O)-(CH2)n-(C3-C10-사이클로알킬);
-C(O)-(CH2)n-NRbRc(상기 식에서, Rb 및 Rc는 각각 독립적으로 수소;
1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬;
1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알콕시; 또는
할로; 그 자체가 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬; 또는 그 자체가 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알콕시 중 1 이상으로 선택적으로 치환된 6 내지 10 원자 아릴임);
-C(O)--(CH2)n-O-(C1-C6)알킬; 또는
-C(O)-(CH2)n-O-(CH2)n-(6 내지 10 원자 아릴)이고;
R2는 수소; -(CH2)nOH; 페닐; -O-(C1-C6)알킬; 또는 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬이고;
R3은 수소; 또는 1 이상의 할로로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬이고;
n은 0, 1, 또는 2이다.
구체적인 예는, 비제한적으로, 다음 구조를 갖는 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온("화합물 A") 또는 이의 거울상 이성질체 또는 거울상 이성질체의 혼합물 또는 이의 약학적 허용 염, 용매화물, 수화물, 공결정(co-crystal), 클라트레이트, 또는 다형체를 포함한다:
Figure pct00010
.
화합물 A는 본원에 제공된 실시예에 기재되거나 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제7,635,700호에 기재된 바와 같은 방법에 따라 제조될 수 있다. 화합물은 또한 본원의 교시를 기본으로 하여 당업자에게 명백한 다른 방법에 따라 합성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화합물 A는 그 전체가 본원에 참고로 포함되는, 2011년 3월 11일자로 출원된 미국 가특허 출원 제61/451,806호에 기재된 결정질 형태이다. 일부 실시양태에서, 화합물 A의 염산염이 본원에 제공된 방법에서 사용된다. 화합물 A를 사용하여 암 및 다른 질환을 치료, 예방 및/또는 관리하는 방법은 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제8,802,685호에 기재되어 있다.
본원에 제공된 다른 구체적인 화합물 또는 이의 약학적 허용 염, 용매화물 또는 입체 이성질체는 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00011
상기 식에서,
X는 C=O 또는 CH2이고;
R1은 Y-R3이고;
R2는 H 또는 (C1-C6)알킬이고;
Y는 각각 1 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환될 수 있는 6 내지 10 원자 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클; 또는 결합이고;
R3은 -(CH2)n-아릴, -O-(CH2)n-아릴 또는 -(CH2)n-O-아릴(상기 식에서, 아릴은 그 자체가 1 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬; 그 자체가 1 이상의 할로겐으로 치환된 (C1-C6)알콕시; 옥소; 아미노; 카복실; 시아노; 하이드록실; 할로겐; 중수소; 1 이상의 (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 6 내지 10 원자 아릴 또는 헤테로아릴; -CONH2; 또는 -COO-(C1-C6)알킬(상기 식에서, 알킬은 1 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환될 수 있음) 중 1 이상으로 선택적으로 치환됨);
-(CH2)n-헤테로사이클, -O-(CH2)n-헤테로사이클 또는 -(CH2)n-O-헤테로사이클(상기 식에서, 헤테로사이클은 그 자체가 1 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬; 그 자체가 1 이상의 할로겐으로 치환된 (C1-C6)알콕시; 옥소; 아미노; 카복실; 시아노; 하이드록실; 할로겐; 중수소; 1 이상의 (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 6 내지 10 원자 아릴 또는 헤테로아릴; -CONH2; 또는 -COO-(C1-C6)알킬(상기 식에서, 알킬은 1 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환될 수 있음) 중 1 이상으로 선택적으로 치환됨); 또는
-(CH2)n-헤테로아릴, -O-(CH2)n-헤테로아릴 또는 -(CH2)n-O-헤테로아릴(상기 식에서, 헤테로아릴은 그 자체가 1 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환된 (C1-C6)알킬; 그 자체가 1 이상의 할로겐으로 치환된 (C1-C6)알콕시; 옥소; 아미노; 카복실; 시아노; 하이드록실; 할로겐; 중수소; 1 이상의 (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환된 6 내지 10 원자 아릴 또는 헤테로아릴; -CONH2; 또는 -COO-(C1-C6)알킬(상기 식에서, 알킬은 1 이상의 할로겐으로 선택적으로 치환될 수 있음) 중 1 이상으로 선택적으로 치환됨)이고; n은 0, 1, 2 또는 3이다.
구체적인 예는, 비제한적으로, 3-(4-((4-(모르폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온을 포함한다. 일 실시양태에서, 화합물은 예를 들어, 본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 3-(4-((4-(모르폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온("화합물 B")의 (S) 입체 이성질체이다. 라세미 3-(4-((4-(모르폴리노메틸)벤질)옥시)-1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 및 이를 제조하는 방법은 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 공개 제2011/0196150호에서 보고되었다. 화합물 B는 다음 구조를 갖는다:
Figure pct00012
.
기재된 모든 화합물은 상업적으로 구매가능하거나 본원에 개시된 특허 또는 특허 공개에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다. 또한, 선택적으로 순수한 화합물이 알려진 분해제 또는 키랄 칼럼뿐 아니라, 다른 표준 합성 유기 화학 기술을 사용하여 인공적으로 합성되거나 분해될 수 있다. 면역조절 화합물, 이의 제조, 및 용도에 대한 추가 정보는 예를 들어, 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 공개 US20060188475호, US20060205787호, 및 US20070049618호에서 찾아볼 수 있다.
도시된 구조와 상기 구조에 주어진 명칭 사이에 차이가 있는 경우, 도시된 구조에 더욱 비중을 두어 따라야 한다. 또한, 구조 또는 구조의 일부의 입체화학이 예를 들어, 볼드체 또는 점선으로 나타나지 않는 경우, 구조 또는 구조의 일부는 이의 모든 입체 이성질체를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
6.4 키메라 항원 수용체
특정 실시양태에서, 임의의 항-BCMA 항체, 또는 이의 BCMA-결합 부분은, 예를 들어 BCMA 표적화 도메인 또는 BCMA 표적화 도메인의 일부로서 키메라 항원 수용체에 포함된다. 구체적 실시양태에서, CAR은 본원에 제공된 바와 같은 BCMA-결합 항체 단편, 예를 들어 단일쇄 Fv 단편 또는 Fab 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 키메라 항원 수용체(CAR)는 T 림프구 또는 천연 킬러(NK) 세포를 항원, 예를 들어 BCMA로 지시하고 T 림프구 또는 NK 세포를 자극하여, 항원, 예를 들어 BCMA를 나타내는 세포를 사멸시키는 인공 막-결합 단백질이다. 예를 들어, Eshhar, 미국 특허 제7,741,465호를 참고한다. 최소한으로, 본원에 제공된 CAR은 BCMA에 결합하는 세포외 도메인; 일차 활성화 신호를 면역 세포에 전송하는 막관통 도메인, 및 세포내(세포질) 시그널링 도메인을 포함한다. 모든 다른 조건이 충족되면, CAR이 예를 들어 T 림프구의 표면 상에서 발현되고 CAR의 세포외 도메인이 BCMA에 결합할 때, 세포내 시그널링 도메인은 T 림프구에 신호를 전송하여, 활성화 및/또는 증식시키고, BCMA가 세포 표면 상에 존재하는 경우, BCMA를 발현하는 세포를 사멸시킨다.
T 림프구는 완전히 활성화되기 위해, 적어도 2 개의 신호, 일차 활성화 신호 및 공동자극 신호를 필요로 하기 때문에, 통상적으로 CAR은 또한 공동자극 도메인을 포함하여, 세포 표면 상의 BCMA에 대한 세포외 도메인의 결합이 일차 활성화 신호 및 공동자극 신호 둘 다의 전송을 야기하도록 한다.
특정 실시양태에서, CAR의 세포내 도메인은 T 림프구에 의해 발현되고 상기 T 림프구의 활성화 및/또는 증식을 촉발시키는 단백질의 세포내 도메인 또는 모티프이거나 이를 포함한다. 이러한 도메인 또는 모티프는 CAR의 세포외 부분에 대한 항원의 결합에 반응한 T 림프구의 활성화를 위해 필요한 일차 항원-결합 신호를 전송할 수 있다. 통상적으로, 이 도메인 또는 모티프는 ITAM(immunoreceptor tyrosine-based activation motif(면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프))을 포함하거나, ITAM이다. CAR에 적합한 ITAM-함유 폴리펩티드는 예를 들어, 제타 CD3 쇄(CD3ζ) 또는 이의 ITAM-함유 부분을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 세포내 도메인은 CD3ζ 세포내 시그널링 도메인이다. 다른 구체적 실시양태에서, 세포내 도메인은 림프구 수용체 쇄, TCR/CD3 복합 단백질, Fc 수용체 서브유닛 또는 IL-2 수용체 서브유닛으로부터의 것이다. 특정 실시양태에서, 일차 시그널링 도메인은 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD278, FcεRI, DAP10, DAP12, 또는 CD66d로부터의 시그널링 도메인이거나, 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, CAR은 예를 들어, 폴리펩티드의 세포내 도메인의 일부로서 1 이상의 공동-자극 도메인 또는 모티프를 추가로 포함한다. 1 이상의 공동-자극 도메인 또는 모티프는 공동-자극 CD27 폴리펩티드 서열, 공동-자극 CD28 폴리펩티드 서열, 공동-자극 OX40(CD134) 폴리펩티드 서열, 공동-자극 4-1BB(CD137) 폴리펩티드 서열, 또는 공동-자극 유도성 T-세포 공동자극(ICOS) 폴리펩티드 서열, 또는 다른 공동자극 도메인 또는 모티프 중 1 이상이거나, 이를 포함할 수 있다. 특정 다른 실시양태에서, 공동자극 도메인은 MHC 클래스 I 분자, TNF 수용체 단백질, 면역글로불린-유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 시그널링 림프구 활성화(signaling lymphocytic activation) 분자(SLAM 분자), 활성화 NK 세포 수용체, BTLA, 톨(Toll) 리간드 수용체, CD2, CD7, CD27, CD30, CD40, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18), B7-H3, CDS, ICAM-1, ICOS(CD278), GITR, BAFFR, LIGHT, HVEM (LIGHTR), KIRDS2, SLAMF7, NKp80(KLRF1), NKp44, NKp30, NKp46, CD19, CD4, CD8aα, CD8β, IL2Rβ, IL2Rγ, IL7Rα, ITGA4, VLA1, CD49a, ITGA4, IA4, CD49D, ITGA6, VLA-6, CD49f, ITGAD, CD11d, ITGAE, CD103, ITGAL, CD11a, LFA-1, ITGAM, CD11b, ITGAX, CD11c, ITGB1, CD29, ITGB2, CD18, LFA-1, ITGB7, NKG2D, NKG2C, TNFR2, TRANCE/RANKL, DNAM1(CD226), SLAMF4(CD244, 2B4), CD84, CD96, CEACAM1, CRTAM, Ly9(CD229), CD160(BY55), PSGL1, CD100(SEMA4D), CD69, SLAMF6(NTB-A, Ly108), SLAM(SLAMF1, CD150, IPO-3), BLAME(SLAMF8), SELPLG(CD162), LTBR, LAT, GADS, SLP-76, 또는 PAG/Cbp 중 1 이상으로부터 유래된 기능성 시그널링 도메인이거나 이를 포함한다.
막관통 영역은 기능성 CAR 내로 포함될 수 있는 임의의 막관통 영역, 통상적으로 CD4 또는 CD8 분자로부터의 막관통 영역일 수 있다. 특정 실시양태에서, CAR의 막관통 도메인은 보통 이러한 면역계 세포에 억제 신호를 전송하는 면역계 단백질로부터의 것, 예를 들어 CTLA4(세포독성 T-림프구 항원 4 또는 세포독성 T-림프구 연관 단백질 4) 또는 PD-1(Programmed Death-1(프로그래밍된 사멸-1))으로부터의 막관통 도메인이다.
특정 실시양태에서, 다수의 세포 사멸 폴리펩티드를 포함하는 본원에 제공된 임의의 T 림프구는 CTLA4 또는 PD-1(Programmed Cell Death 1(프로그래밍된 세포 사멸-1))으로부터의 막관통 도메인을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 상기 폴리펩티드, 또는 본원에 기재된 임의의 이러한 폴리펩티드를 발현하는 T 림프구는 상기 폴리펩티드가 상기 항원에 결합할 때, 활성화되거나 자극되어, 증식한다. 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드는 T 림프구의 표면 상에서 발현될 때, T 림프구가 상기 항원을 발현하는 세포를 사멸시키도록 지시한다.
폴리펩티드의 막관통 도메인이 CTLA4로부터의 것인 본원의 임의의 폴리펩티드의 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 포유동물 CTLA4, 예를 들어 인간, 영장류, 또는 로덴트, 예를 들어 뮤린 CTLA4로부터의 것이다. 바람직하게는, 막관통 도메인은 CTLA4 또는 PD-1의 세포내 도메인, 세포외 도메인, 또는 세포내 또는 세포외 도메인으로부터의 아미노산을 포함하지 않는다. CTLA4 또는 PD-1 막관통 도메인 서열의 구체적인, 비-제한적 예가 하기에 제공된다.
구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 인간 CTLA4 유전자의 엑손 3에 의해 코딩된 폴리펩티드 서열이다. 다른 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 아미노산 서열 PEPCPDSDFLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVSLSKM(3-레터 코드(three-letter code)로, Pro-Glu-Pro-Cys-Pro-Asp-Ser-Asp-Phe-Leu-Leu-Trp-Ile-Leu-Ala-Ala-Val-Ser-Ser-Gly-Leu-Phe-Phe-Tyr-Ser-Phe-Leu-Leu-Thr-Ala-Val-Ser-Leu-Ser-Lys-Met)(서열번호 61)이거나 이를 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 젠뱅크(GenBank) 등록번호 NM_005214.4의 뉴클레오티드 610-722에 의해 코딩된 폴리펩티드 서열이거나 이를 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 아미노산 서열 PDSDFLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAVSL(3-레터 코드로, Pro-Asp-Ser-Asp-Phe-Leu-Leu-Trp-Ile-Leu-Ala-Ala-Val-Ser-Ser-Gly-Leu-Phe-Phe-Tyr-Ser-Phe-Leu-Leu-Thr-Ala-Val-Ser-Leu)(서열번호 62)이거나 이를 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 젠뱅크 등록번호 NM_005214.4의 뉴클레오티드 636-699에 의해 코딩된 폴리펩티드 서열이거나 이를 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 아미노산 서열 FLLWILAAVSSGLFFYSFLLTAV(3-레터 코드로, Phe-Leu-Leu-Trp-Ile-Leu-Ala-Ala-Val-Ser-Ser-Gly-Leu-Phe-Phe-Tyr-Ser-Phe-Leu-Leu-Thr-Ala-Val)(서열번호 63)이거나 이를 포함한다. 예를 들어, Ensembl 단백질 기준 번호 ENSP00000303939.3을 참고한다. 다른 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 폴리펩티드 서열 FLLWILAAVSSGLFFYSFLLT(3-레터 코드로, Phe-Leu-Leu-Trp-Ile-Leu-Ala-Ala-Val-Ser-Ser-Gly-Leu-Phe-Phe-Tyr-Ser-Phe-Leu-Leu-Thr)(서열번호 64)이거나 이를 포함하고, 예를 들어 UNIPROT 등록번호 P16410을 참고한다. 다른 구체적 실시양태에서, CTLA4 막관통 도메인은 폴리펩티드 서열 FLLWILVAVSLGLFFYSFLVSAVSLS(3-레터 코드로, Phe-Leu-Leu-Trp-Ile-Leu-Val-Ala-Val-Ser-Leu-Gly-Leu-Phe-Phe-Tyr-Ser-Phe-Leu-Val-Ser-Ala-Val-Ser-Leu-Ser)(서열번호 65)이거나 이를 포함한다. 예를 들어, Shin et al., Blood 119:5678-5687 (2012)을 참고한다. 다른 구체적 실시양태에서, PD-1 막관통 도메인은 아미노산 서열 TLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAA(3-레터 코드로, Thr-Leu-Val-Val-Gly-Val-Val-Gly-Gly-Leu-Leu-Gly-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Val-Trp-Val-Leu-Ala-Val-Ile-Cys-Ser-Arg-Ala-Ala)(서열번호 66)이거나 이를 포함한다. Finger et al., Gene 197(1-2):177-187 (1997)을 참고한다. 다른 구체적 실시양태에서, PD-1 막관통 도메인은 아미노산 서열 VGVVGGLLGSLVLLVWVLAVI(3-레터 코드로, Val-Gly-Val-Val-Gly-Gly-Leu-Leu-Gly-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Val-Trp-Val-Leu-Ala-Val-Ile)(서열번호 67)이거나 이를 포함한다. 예를 들어, UNIPROT 등록번호 Q15116을 참고한다. 다른 구체적 실시양태에서, PD-1 막관통 도메인은 아미노산 서열 FQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVI(3-레터 코드로, Phe-Glu-Thr-Leu-Val-Val-Gly-Val-Val-Gly-Gly-Leu-Leu-Gly-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Val-Trp-Val-Leu-Ala-Val-Ile)(서열번호 68)이거나 이를 포함한다. 예를 들어, 젠뱅크 등록번호 NM_005018.2를 참고한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 막관통 폴리펩티드 중 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 67 또는 서열번호 68에 개시된 임의의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, PD-1 막관통 도메인은 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 67 또는 서열번호 68에 개시된 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21 개 연속 아미노산이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 폴리펩티드 중 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 67 또는 서열번호 68에 개시된 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21 개 연속 아미노산을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 폴리펩티드, 예를 들어 CAR 구축에서, 특정 실시양태에서, 인간 서열은 비-인간 서열과 조합될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드, 예를 들어 인간 세포외 및 세포내 도메인 아미노산 서열을 포함하는 CAR은 비-인간 종으로부터의 막관통 도메인을 포함할 수 있고; 예를 들어, 뮤린 CTLA4 막관통 도메인 또는 뮤린 PD-1 막관통 도메인을 포함할 수 있다. 더욱 구체적 실시양태에서, 폴리펩티드, 예를 들어 CAR은 세포외 및 세포내 도메인에 대한 인간 아미노산 서열을 포함하고, 서열번호 65의 아미노산 서열을 갖거나, 이로 구성된 막관통 도메인을 포함한다.
6.5 약학 조성물
다른 양태에서, 본원은 임의의 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적 허용 비히클을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편의 제형은 본 발명의 정제된 결합제를 약학적 허용 비히클(예를 들어, 담체 또는 부형제)과 조합함으로써 저장 및 사용을 위해 제조된다. 적합한 약학적 허용 비히클은, 비제한적으로, 비독성 버퍼, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 염, 예컨대 염화나트륨; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제, 예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올, 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 사이클로헥산올, 3-펜탄올, 및 m-크레솔; 저분자량 폴리펩티드(예를 들어, 약 10 개 미만 아미노산 잔기); 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 탄수화물, 예컨대 단당류, 이당류, 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당류, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체, 예컨대 Zn-단백질 복합체; 및 비-이온 계면활성제, 예컨대 TWEEN 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. (예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22st Edition, 2012, Pharmaceutical Press, London을 참고한다.).
본원에 제공된 약학 조성물은 국소 또는 전신 치료를 위한 많은 방식으로의 투여를 위해 제형화될 수 있다. 본원에 제공된 약학 조성물은 예를 들어, 상피 또는 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 또는 겔에 의한; 또는 점액, 좌약, 스프레이, 액체 및 분말의 형태로의 국부 투여를 위해; 네뷸라이저에 의한 것을 포함한 흡입 또는 통기법에 의한 폐 투여, 또는 기관내 또는 비강내 투여; 또는 정맥내, 동맥내, 종양내, 피하, 복강내, 근육내(예를 들어, 주사 또는 주입), 또는 두개내(예를 들어, 척추강내 또는 심실내) 투여를 포함한 비경구 투여를 위해 제형화될 수 있다.
본원에 제시된 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편의 치료 제형은 단위 투여량 형태일 수 있다. 이러한 제형은 예를 들어, 단일-용량 정맥내, 또는 동맥내 투여에 적합한 정제, 알약, 캡슐, 분말, 과립, 물 또는 비-수성 매체 중 용액 또는 현탁액, 또는 좌약, 또는 플라스틱 혈액 주머니 등을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제시된 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편은 마이크로캡슐 내에 포집된다. 이러한 마이크로캡슐은 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22st Edition, 2012, Pharmaceutical Press, London에 기재된 바와 같이, 코아세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해, 예를 들어 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀션, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀션에서 각각 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐로 제조된다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 약학 조성물은 리포솜과 복합체화된 본원에 제공된 바와 같은 1 이상의 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편을 포함한다. 리포솜을 생산하기 위한 방법은 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 일부 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤, 및 PEG-유래된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 액체 조성물을 이용한 역상 증발에 의해 생성될 수 있다. 리포솜은 미세 기공 크기의 필터를 통해 압출되어, 소망하는 직경을 갖는 리포솜을 산출할 수 있다.
6.6. 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 및 항체를 생산하는 방법
다른 양태에서, 본원은 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 각각에 대한 중쇄 또는 경쇄, 및/또는 CDR 서열을 포함하여, 임의의 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본원은 BCMA에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드(또는 폴리펩티드의 단편)을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 용어 "폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드"는 폴리펩티드에 대한 코딩 서열만을 포함하는 폴리뉴클레오티드뿐 아니라, 추가 코딩 및/또는 비-코딩 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본 발명은 인간 BCMA에 대한 항체를 코딩하거나 이러한 항체의 단편(예를 들어, BCMA 결합 부위를 포함하는 단편)을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 RNA의 형태 또는 DNA의 형태일 수 있다. 구체적 실시양태에서, DNA는 예를 들어, cDNA, 게놈 DNA, 및 합성 DNA일 수 있고; 이중-가닥 또는 단일-가닥일 수 있고, 단일 가닥인 경우, 코딩 가닥 또는 비-코딩(안티-센스) 가닥일 수 있다.
구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 경쇄 가변 영역을 코딩한다.
다른 구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 16, 서열번호 27, 서열번호 38, 서열번호 49, 또는 서열번호 60의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 중쇄 가변 영역 쇄를 코딩한다.
다른 구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 서열번호 16의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 중쇄 가변 영역 쇄를 코딩한다. 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 서열번호 27의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 중쇄 가변 영역 쇄를 코딩한다. 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 서열번호 38의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 중쇄 가변 영역 쇄를 코딩한다. 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 서열번호 49의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 중쇄 가변 영역 쇄를 코딩한다. 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 서열번호 5의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 경쇄 가변 영역을 코딩하고, 서열번호 60의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 이것으로 필수적으로 구성되거나, 구성된 항체 중쇄 가변 영역 쇄를 코딩한다.
본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오티드는 폴리뉴클레오티드 벡터에 포함되고/되거나 이에 의해 발현될 수 있다. 특정 실시양태에서, 벡터는 숙주 세포 내에 포함된다. 이러한 숙주 세포는 본원에 제공된 벡터로 형질전환 또는 형질주입 후에, 본원에 제공된 BCMA 항체-코딩 폴리뉴클레오티드 서열을 발현하거나, 발현할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는 벡터 내의 1 이상의 조절 서열과 작동가능하게 연결되어, BCMA-결합 항체의 발현을 가능하게 한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 세포 내로 유전자 물질을 전달하기 위해 비히클로서 사용된 핵산 분자를 의미하고, 비제한적으로, 플라스미드, 바이러스 게놈(복제-불능 바이러스 게놈 및 다중 절편의 바이러스 게놈을 포함함), 코스미드 및 인공 염색체를 포함한다. 일반적으로, 조작된 벡터는 복제 기점, 다중 클로닝 부위 및 선택 마커를 포함한다. 벡터 자체는 일반적으로 뉴클레오티드 서열, 보통 삽입체(트랜스진, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 BCMA 항체-코딩 서열) 및 벡터의 백본으로서 제공되는 큰 서열을 포함하는 DNA 서열이다. 벡터는 트랜스진 삽입체 및 백본 외에 추가 특징인 프로모터, 유전자 마커, 항생제 내성, 리포터 유전자, 표적화 서열, 단백질 정제 태그를 포함할 수 있다. 발현 벡터로 지칭되는 벡터는 표적 세포에서 트랜스진의 발현이 가능하며, 일반적으로 트랜스진의 발현을 구동하는 프로모터 유전자와 같은 조절 서열을 갖는다. 표적 세포 내로의 벡터의 삽입은 보통 세균 세포에 대해 "형질전환", 및 진핵 세포에 대해 "형질주입"으로 지칭되고; 포유동물 세포 내로의 바이러스 벡터의 삽입은 또한 "형질도입"으로서 지칭된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 본원에 제공된 BCMA-결합 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 형질전환, 형질주입 등의 방식에 의해 도입되는 세포를 지칭한다. 상기 용어는 형질주입되거나, 형질전환되거나 형질도입된 특정 세포뿐 아니라, 이러한 세포의 자손을 지칭한다. 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 특정 변형이 다음 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 이러한 자손은 부모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용된 바와 같은 용어의 범위 내에 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "발현"은, 비제한적으로, 예를 들어 본원에 제공된 BCMA-결합 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 전사(예를 들어, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드 또는 본원에 제공된 BCMA-결합 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터), 및 특정 실시양태에서, 전사후 변형, 번역, 번역후 변형, 및 분비를 포함하여, 본 발명의 결합 분자의 생산에 포함되는 임의의 단계를 포함한다.
용어 "조절 서열"은 특정 숙주 유기체에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현을 위해 필요한 핵산 서열을 지칭한다. 원핵생물에 적합한 조절 서열은 예를 들어, 프로모터, 선택적으로 작동자 서열, 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포가 이용되는 것으로 알려져 있으며, 벡터는 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 핵산 또는 폴리뉴클레오티드는 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓여 있을 때, "작동가능하게 연결되어" 있다. 예를 들어, 프로모터 핵산 서열은 프로모터가 BCMA-결합 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편의 발현을 구동하는 경우, BCMA-결합 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편을 코딩하는 핵산 서열에 작동 가능하게 연결되어 있거나; 다른 예로서, 전서열(presequence) 또는 분비성 리더에 대한 핵산 서열은 폴리펩티드의 분비에 참여하는 단백원으로서 발현되는 경우, 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결되어 있거나; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 주는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결되어 있거나; 리보솜 결합 부위는 번역을 가능하게 하도록 위치해 있는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결되어 있다. 일반적으로, "작동가능하게 연결되다"는 연결된 핵산 서열이 인접하고, 분비성 리더의 경우, 인접하고 동일한 판독 프레임 내에 있음을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접해야만 하는 것은 아니다. 연결은 예를 들어, 가까운 제한 부위의 결찰에 의해 달성될 수 있다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 관례에 따라 사용된다.
용어 "숙주 세포," "표적 세포" 또는 "수용체 세포"는 벡터에 대한 수용체일 수 있거나 수용체이었거나 외인성 핵산 분자, 폴리뉴클레오티드 및/또는 단백질을 포함할 수 있거나 포함하였던 임의의 개별 세포 또는 세포 배양액을 포함한다. 또한, 단일 세포의 자손을 포함하는 것으로 의도되며, 자손은 자연적, 돌발적, 또는 의도적 돌연변이로 인해 원래의 부모 세포와 (형태학 또는 게놈 또는 총 DNA 보체에서) 반드시 완전히 동일하지 않을 수 있다. 세포는 원핵생물 또는 진핵생물일 수 있고, 비제한적으로, 세균 세포, 효모 세포, 동물 세포, 및 포유동물 세포, 예를 들어 뮤린, 래트, 마카크 또는 인간을 포함할 수 있다. 적합한 숙주 세포는 원핵생물 및 효모, 진균, 곤충 세포 및 포유동물 세포를 포함한 진핵 숙주 세포를 포함한다.
항체 또는 이의 단편은 세균에서 생산될 수 있다. 발현 후, 본 발명의 결합 분자, 바람직하게는 결합 분자는 가용성 분획에서 대장균(E. coli) 세포 페이스트로부터 단리되고, 예를 들어 친화성 크로마토그래피 및/또는 크기 배제를 통해 정제될 수 있다. 최종 정제는 예를 들어, CHO 세포에서 발현된 항체를 정제하기 위한 절차와 유사하게 수행될 수 있다.
원핵생물과 함께, 진핵 미생물, 예컨대 사상성 진균 또는 효모가 본 발명의 결합 분자에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae), 또는 일반적인 빵 효모(baker's yeast)는 저급 진핵 숙주 미생물 중에 가장 일반적으로 사용된다. 그러나, 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 숙주, 예컨대 클루이베로마이세스 락티스(K. lactis), 클루이베로마이세스 프라질리스(K. fragilis)(ATCC 12424), 클루이베로마이세스 불가리쿠스(K. bulgaricus)(ATCC 16045), 클루이베로마이세스 위케라미(K. wickeramii)(ATCC 24178), 클루이베로마이세스 왈티(K. waltii)(ATCC 56500), 클루이베로마이세스 드로소필라룸(K. drosophilarum)(ATCC 36906), 클루이베로마이세스 쎄르모톨러란스(K. thermotolerans), 및 클루이베로마이세스 마르시아누스(K. marxianus); 야로위아(Yarrowia)(EP 402 226); 피히아 파스토리스(Pichia pastoris)(EP 183 070); 칸디다(Candida); 트리코데르마 리시아(Trichoderma reesia)(EP 244 234); 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa); 쉬반니오마이세스(Schwanniomyces), 예컨대 쉬반니오마이세스 옥시덴탈리스(Schwanniomyces occidentalis); 및 사상성 진균, 예컨대 뉴로스포라(Neurospora), 페니실리움(Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium), 및 아스페르길루스(Aspergillus) 숙주, 예컨대 아스페르길루스 니둘란스(A. nidulans) 및 아스페르길루스 니게르(A. niger)와 같은 많은 다른 속, 종, 및 균주가 본원에서 일반적으로 이용가능하고 유용하다.
본 발명의 글리코실화된 결합 분자, 바람직하게는 항체 유래된 결합 분자의 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda)(애벌레), 아에데스 아에기프티(Aedes aegypti)(모기), 아에데스 알보픽투스(Aedes albopictus)(모기), 드로소필라 멜라노가스터(Drosophila melanogaster)(초파리), 및 봄빅스 모리(Bombyx mori)와 같은, 숙주로부터의 많은 바큘로바이러스 균주 및 변이체 및 상응하는 허용되는 곤충 숙주 세포가 확인되었다. 형질주입을 위해 다양한 바이러스 균주, 예를 들어 아우토그라파 칼리포니카(Autographa californica) NPV의 L-1 변이체 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 균주가 공개적으로 이용가능하고, 이러한 바이러스는 본 발명에 따른 본원의 바이러스로서, 특히 스포도프테라 프루기페르다의 형질주입을 위해 사용될 수 있다.
목화, 옥수수, 감자, 콩, 페튜니아, 토마토, 아라비돕시스(Arabidopsis) 또는 담배의 식물 세포 배양액이 또한 숙주로서 이용될 수 있다. 식물 세포 배양액에서 단백질의 생산에 유용한 클로닝 및 발현 벡터는 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, Hiatt et al., Nature (1989) 342: 76-78, Owen et al. (1992) Bio/Technology 10: 790-794, Artsaenko et al. (1995) The Plant J. 8: 745-750, 및 Fecker et al. (1996) Plant Mol. Biol. 32: 979-986을 참고한다.
배양액(조직 배양액)에서 척추동물 세포의 번식(propagation), 및 이로부터의 단백질의 발현은 일상 절차가 되었다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 계통(부유 배양에서의 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); 아기 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10); 중국 햄서터 난소 세포/-DHFR (CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216 (1980)); 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)); 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70); 아프리칸 그린 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL1587); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2,1413 8065); 마우스 유방 종양(MMT 060562, ATCC CCL5 1); TRI 세포(Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간암 계통(Hep G2)이다.
재조합 기술을 사용할 때, 본원에 제공된 BCMA-결합 항체 또는 이의 단편은 주변세포질 공간에서 세포내 생산되거나, 배지 내로 직접 분비될 수 있다. 결합 분자가 세포내 생산되는 경우, 첫번째 단계로서, 미립자 잔해물인 숙주 세포 또는 용해된 단편이 예를 들어, 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거된다. Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)은 대장균의 주변세포질 공간에 분비된 항체를 단리시키기 위한 절차를 기재하고 있다. 간략하게는, 세포 페이스트는 소듐 아세테이트(pH 3.5), EDTA, 및 페닐메틸설포닐플루오라이드(PMSF)의 존재 하에서 약 30 분에 걸쳐 해동된다. 세포 잔해물은 원심분리에 의해 제거될 수 있다. 항체가 배지 내로 분비될 때, 이러한 발현 시스템으로부터의 상청액은 일반적으로 우선 상업적으로 이용가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어 Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외여과 유닛을 사용하여 농축된다. 프로테아제 억제제, 예컨대 PMSF가 상기 단계 중 임의의 것에 포함되어 단백질분해를 억제할 수 있고, 항생제가 포함되어 외래의 오염물의 성장을 예방할 수 있다.
숙주 세포로부터 제조된 BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 예를 들어, 수산화인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있으며, 친화성 크로마토그래피가 우선적인 정제 기술이다. 친화성 리간드가 부착되는 매트릭스는 가장 보통은 아가로오스이지만, 다른 매트릭스가 이용가능하다. 기계적으로 안정된 매트릭스, 예컨대 조절 공극 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠은 아가로오스로 달성될 수 있는 것에 비해 빠른 유속 및 짧은 처리 시간을 허용한다. 본 발명의 결합 분자가 CH3 도메인을 포함하는 경우, Bakerbond ABXMresin(J. T. Baker, Phillipsburg, N.J.)이 정제를 위해 사용될 수 있다. 단백질 정제를 위한 다른 기술, 예컨대 표준 절차에 따른 이온-교환 칼럼 상의 분별, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 상의 크로마토그래피, 헤파린 SEPHAROSE.TM. 상의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지(예컨대, 폴리아스파르트산 칼럼) 상의 크로마토그래피, 크로마토-포커싱, SDS-PAGE, 및 암모늄 설페이트 침전이 회수될 항체에 따라 사용될 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명의 결합 분자를 생산하기 위한 과정이 제공되며, 상기 과정은 결합 분자를 발현시키는 조건 하에서 본원에 정의된 숙주 세포를 배양하는 것 및 배양액으로부터 생산된 결합 분자를 회수하는 것을 포함한다.
용어 "배양하는 것"은 배지에서 적합한 조건 하에 세포의 시험관내 유지, 분화, 성장, 증식 및/또는 번식을 지칭한다.
6.7 사용 방법
다른 양태에서, 본원은 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편의 사용 방법, 예를 들어 이러한 항체 또는 항체 단편을 사용하는 치료 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본원은 1 이상의 항-BCMA 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-관련된 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 1 이상의 항-BCMA 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 형질 세포-관련된 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 1 이상의 항-BCMA 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, B-세포-관련된 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 구체적 실시양태에서, BCMA-관련된 장애는 다발성 골수종, 형질세포종, 형질 세포 백혈병, 마크로글로불린혈증, 아밀로이드증, 발덴스트룀 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia), 고립골 형질세포종, 골수외 형질세포종, 골경화 골수종, 중쇄병, 의미불명 단클론 감마병증, 및 무증상 다발성 골수종이다.
또한, 본원은 다발성 골수종 세포를 본원에 제공된 1 이상의 항-BCMA 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 다발성 골수종 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 다발성 골수종 세포를 본원에 제공된 1 이상의 항-BCMA 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 다발성 골수종 세포의 성장률을 감소시키는 방법을 제공한다.
본원에 제공된 임의의 방법, 예를 들어 치료 방법에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 네이키드(naked) 항체 또는 단편이며, 즉 항체 또는 단편은 독성 모이어티를 포함하도록 변형되지 않았다. 본원에 제공된 임의의 방법, 예를 들어 치료 방법에서, 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 항체-약물-콘쥬게이트(ADC), 예를 들어 상기 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 ADC의 일부이다.
본원에 제공된 임의의 치료 방법에서, 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA 결합 단편은 치료적 유효량으로 제공되거나 투여된다. 다양한 실시양태에서, 치료적 유효량은 1 x 105 내지 5 x 105, 5 x 105 내지 1 x 106, 1 x 106 내지 5 x 106, 5 x 106 내지 1 x 107, 1 x 107 내지 5 x 107, 5 x 107 내지 1 x 108, 1 x 108 내지 5 x 108, 5 x 108 내지 1 x 109 나노몰의 상기 항체 또는 단편이다. 다양한 다른 실시양태에서, 치료적 유효량은 1 x 105 내지 5 x 105, 5 x 105 내지 1 x 106, 1 x 106 내지 5 x 106, 5 x 106 내지 1 x 107, 1 x 107 내지 5 x 107, 5 x 107 내지 1 x 108, 1 x 108 내지 5 x 108, 5 x 108 내지 1 x 109 나노몰의 상기 항체 또는 단편이다.
항-BCMA 항체 또는 BCMA-결합 단편은 주치의 또는 임상의에 의해 적합한 것으로 여겨지는 임의의 투여 스케줄, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7 일 마다 1 회, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 주 마다 1 회로 항-BCMA 항체 또는 BCMA-결합 단편을 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 항-BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편은 기간, 예를 들어 1, 2, 3, 또는 4 주 동안 투여된 후, 항체 또는 항체 단편 투여 없이 휴지될 수 있다. 이러한 투여-휴지 사이클은 2, 3, 4 또는 5 회 반복될 수 있다.
특정 실시양태에서, BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편이 투여되는 환자는 이전에 1, 2, 3 회 이상 라인(line)의 요법을 투여받았으며, 이전 라인의 요법은 레날리도마이드(REVLIMID), 포말리도마이드(POMALYST), 탈리도마이드(THALOMID), 보르테조밉(VELCADE), 덱사메타손, 사이클로포스파미드, 독소루비신(ADRIAMYCIN, RUBEX), 카필조밉(KRYPOLIS), 이악시조밉(NINLARO), 시스플라틴(PLATINOL), 독소루비신(ADRIAMYCIN), 에토포시드(ETOPOPHOS), 항-CD38 항체, 예컨대 다라투무맙(DARZALEX); 파노비노스타트; 또는 엘로투주맙(EMPLICITI) 중 1 이상의 투여를 포함할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 이러한 환자는 보르테조밉, 레날리도마이드 및 덱사메타손(RVD); 보르테조밉, 사이클로포스파미드 및 덱사메타손(BCD); 보르테조밉, 독소루비신 및 덱사메타손; 카필조밉, 레날리도마이드 및 덱사메타손(CRD); 익사조밉, 레날리도마이드 및 덱사메타손; 보르테조밉 및 덱사메타손; 보르테조밉, 탈리도마이드 및 덱사메타손; 레날리도마이드 및 덱사메타손; 덱사메타손, 탈리도마이드, 시스플라틴, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 에토포시드 및 보르테조밉(VTD-PACE); 레날리도마이드 및 저용량 덱사메타손; 보르테조밉, 사이클로포스파미드 및 덱사메타손; 카필조밉 및 덱사메타손; 레날리도마이드 단독; 보르테조밉 단독; 다라투무맙 단독; 보르테조밉, 레날리도마이드 및 덱사메타손; 다라투무맙, 보르테조밉 및 덱사메타손; 다라투무맙, 레날리도마이드 및 덱사메타손; 엘로투주맙, 레날리도마이드, 및 덱사메타손; 엘로투주맙, 레날리도마이드 및 덱사메타손; 벤다무스틴, 보르테조밉 및 덱사메타손; 벤다무스틴, 레날리도마이드, 및 덱사메타손; 포말리도마이드 및 덱사메타손; 포말리도마이드, 보르테조밉 및 덱사메타손; 포말리도마이드, 카필조밉 및 덱사메타손; 보르테조밉 및 리포솜 독소루비신; 사이클로포스파미드, 레날리도마이드, 및 덱사메타손; 엘로투주맙, 보르테조밉 및 덱사메타손; 익사조밉 및 덱사메타손; 파노비노스타트, 보르테조밉 및 덱사메타손; 파노비노스타트 및 카필조밉; 또는 포말리도마이드, 사이클로포스파미드 및 덱사메타손을 이용한 요법을 받았다.
BCMA 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것은 1 이상의 추가 요법의 투여에 의해 달성될 수 있다. 특정 암, 예를 들어 다발성 골수종에 대해, 1 이상의 추가 요법은 레날리도마이드, 포말리도마이드, 탈리도마이드, 보르테조밉, 덱사메타손, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 카필조밉, 이악시조밉, 시스플라틴, 독소루비신, 에토포시드, 항-CD38 항체, 예컨대 다라투무맙; 파노비노스타트; 및/또는 엘로투주맙, 단독, 상기 열거된 조합 중 하나, 또는 임의의 다른 조합 중 1 이상일 수 있다.
특정 실시양태에서, 이를 필요로 하는 환자는 상기 섹션 5.3에 개시된 1 이상의 화합물과 조합된, 예를 들어 레날리도마이드 또는 포말리도마이드와 조합된 본원에 제공된 1 이상의 항-BCMA 항체를 투여받는다.
특정 실시양태에서, 이를 필요로 하는 환자는 다음 화합물 중 1 이상과 조합된 본원에 제공된 1 이상의 항-BCMA 항체를 투여받는다.
예시적 화합물은, 비제한적으로, N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일]메틸}사이클로프로필카복사미드; 3-[2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-이소인돌-4-일메틸]-1,1-디메틸-우레아; (-)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-3-(1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-프로피온아미드; (+)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-3-(1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-프로피온아미드; (-)-{2-[1-(3-에톡시-4-메톡시페닐)-2-메틸설포닐에틸]-4-아세틸아미노이소인돌린-1,3-디온}; (+)-{2-[1-(3-에톡시-4-메톡시페닐)-2-메틸설포닐에틸]-4-아세틸아미노이소인돌린-1,3-디온}; 디플루오로메톡시 SelCIDs; 1-프탈이미도-1-(3,4-디에톡시페닐)에탄; 3-(3,4-디메톡시페닐)-3-(3,5-디메톡시페닐)아크릴로 니트릴; 1-옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-아미노이소인돌린; 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-아미노이소인돌린; 4-아미노-2-(3-메틸-2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-이소인돌-1,3-디온; 3-(3-아세토아미도프탈이미도)-3-(3-에톡시-4-메톡시페닐)-N-하이드록시프로피온아미드; 1-옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-4-메틸이소인돌린; 사이클로프로필-N-{2-[(1S)-1-(3-에톡시-4-메톡시페닐)-2-(메틸설포닐)에틸]-3-옥소이소인돌린-4-일}카복사미드; 치환된 2-(3-하이드록시-2,6-디옥소피페리딘-5-일)이소인돌린; N-[2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-이소인돌-5-일메틸]-4-트리플루오로메톡시벤즈아미드; (S)-4-클로로-N-((2-(3-메틸-2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)메틸)벤즈아미드; 피리딘-2-카복실산 [2-[(3S)-3-메틸-2,6-디옥소-피페리딘-3-일]-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-이소인돌-5-일메틸]-아미드; (S)-N-((2-(3-메틸-2,6-디옥소피페리딘-3-일)-1,3-디옥소이소인돌린-5-일)메틸)-4-(트리플루오로메틸)벤즈아미드; 3-(2,5-디메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온 등을 포함한다.
특정 실시양태에서, 이를 필요로 하는 환자는 미국 특허 제5,929,117호에 개시된 것과 같은 치환된 스티렌의 1 이상의 시아노 및 카복시 유도체; 미국 특허 제5,874,448호 및 제5,955,476호에 기재된 것과 같은 1-옥소-2-(2,6-디옥소-3-플루오로피페리딘-3일) 이소인돌린 및 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소-3-플루오로피페리딘-3-일)이소인돌린; 미국 특허 제6,380,239호에 기재된 인돌린 고리의 4- 또는 5-위치에서 치환된 1-옥소 및 1,3-디옥소이소인돌린(예를 들어, 4-(4-아미노-1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-4-카바모일부탄산); 미국 특허 제6,458,810호에 기재된 2-위치에서 2,6-디옥소-3-하이드록시피페리딘-5-일로 치환된 이소인돌린-1-온 및 이소인돌린-1,3-디온(예를 들어, 2-(2,6-디옥소-3-하이드록시-5-플루오로피페리딘-5-일)-4-아미노이소인돌린-1-온); 미국 특허 제5,698,579호 및 제5,877,200호에 개시된 비-폴리펩티드 사이클릭 아미드의 클래스; 및 미국 특허 공개 제2003/0045552호, 미국 특허 공개 제2003/0096841호, 및 국제 특허 출원 PCT/US01/50401호(국제 공개 WO 02/059106호)에 기재된 것과 같은 이소인돌이미드 화합물과 조합된 본원에 제공된 1 이상의 항-BCMA 항체를 투여받는다. 미국 특허 공개 제2006/0205787호는 4-아미노-2-(3-메틸-2,6-디옥소피페리딘-3-일)-이소인돌-1,3-디온 조성물을 기재하고 있다. 미국 특허 공개 제2007/0049618호는 이소인돌이미드 화합물을 기재하고 있다.
특정 실시양태에서, 이를 필요로 하는 환자는 각각 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제7,091,353호, 미국 특허 공개 제2003/0045552호, 및 국제 특허 출원 PCT/US01/50401호(국제 공개 WO 02/059106호)에 개시된 이소인돌이미드 클래스의 1 이상의 멤버와 조합된 본원에 제공된 1 이상의 항-BCMA 항체를 투여받는다. 대표적인 화합물 및 이의 약학적 허용 염, 수화물, 용매화물, 클라트레이트, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미 화합물, 및 입체 이성질체의 혼합물은 하기 화학식 II의 것이다:
Figure pct00013
상기 식에서,
X 및 Y 중 하나는 C=O이고 나머지는 CH2 또는 C=O이고; R1은 H, (C1-C8)알킬, (C3-C7)사이클로알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 벤질, 아릴, (C0-C4)알킬-(C1-C6)헤테로사이클로알킬, (C0-C4)알킬-(C2-C5)헤테로아릴, C(O)R3, C(S)R3, C(O)OR4, (C1-C8)알킬-N(R6)2, (C1-C8)알킬-OR5, (C1-C8)알킬-C(O)ORS, C(O)NHR3, C(S)NHR3, C(O)NR3R3', C(S)NR3R3' 또는 (C1-C8)알킬-O(CO)R5이고; R2는 H, F, 벤질, (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, 또는 (C2-C8)알키닐이고; R3 및 R3'는 독립적으로 (C1-C8)알킬, (C3-C7)사이클로알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-Cs)알키닐, 벤질, 아릴, (C0-C4)알킬-(C1-C6)헤테로사이클로알킬, (C0-C4)알킬-(C2-C5)헤테로아릴, (C0-C8)알킬-N(R6)2, (C1-C8)알킬-OR5, (C1-C8)알킬-C(O)OR5, (C1-C8)알킬-O(CO)R5, 또는 C(O)OR5이고; R4는 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, (C1-C4)알킬-OR5, 벤질, 아릴, (C0-C4)알킬-(C1-C6)헤테로사이클로알킬, 또는 (C0-C4)알킬-(C2-C5)헤테로아릴이고; R5는 (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 벤질, 아릴, 또는 (C2-C5)헤테로아릴이고; R6의 각각의 발생은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 벤질, 아릴, (C2-C5)헤테로아릴, 또는 (C0-C8)알킬-C(O)O--R5이거나 R6 기는 결합하여, 헤테로사이클로알킬기를 형성할 수 있고; n은 0 또는 1이고; *은 키랄-탄소 중심을 나타낸다.
화학식 II의 구체적 실시양태에서, n이 0이면, R1은 (C3-C7)사이클로알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 벤질, 아릴, (C0-C4)알킬-(C1-C6)헤테로사이클로알킬, (C0-C4)알킬-(C2-C5)헤테로아릴, C(O)R3, C(O)OR4, (C1-C8)알킬-N(R6)2, (C1-C8)알킬-OR5, (C1-C8)알킬-C(O)OR5, C(S)NHR3, 또는 (C1-C8)알킬-O(CO)R5이고;
R2는 H 또는 (C1-C8)알킬이고; R3은 (C1-C8)알킬, (C3-C7)사이클로알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 벤질, 아릴, (C0-C4)알킬-(C1-C6)헤테로사이클로알킬, (C0-C4)알킬-(C2-C5)헤테로아릴, (C5-C8)알킬-N(R6)2; (C0-C8)알킬-NH--C(O)O--R5; (C1-C8)알킬-OR5, (C1-C8)알킬-C(O)OR5, (C1-C8)알킬-O(CO)R5, 또는 C(O)OR5이고; 나머지 변수는 동일한 정의를 갖는다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, R2는 H 또는 (C1-C4)알킬이다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, R1은 (C1-C8)알킬 또는 벤질이다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, R1은 H, (C1-C8)알킬, 벤질, CH2OCH3, CH2CH2OCH3, 또는
Figure pct00014
이다.
화학식 II의 화합물의 다른 실시양태에서, R1은
Figure pct00015
이고,
상기 식에서,
Q는 O 또는 S이고, 각각의 경우의 R7은 독립적으로 H, (C1-C8)알킬, (C3-C7)사이클로알킬, (C2-C8)알케닐, (C2-C8)알키닐, 벤질, 아릴, 할로겐, (C0-C4)알킬-(C1-C6)헤테로사이클로알킬, (C0-C4)알킬-(C2-C5)헤테로아릴, (C0-C8)알킬-N(R6)2, (C1-C8)알킬-OR5, (C1-C8)알킬-C(O)OR5, (C1-C8)알킬-O(CO)R5, 또는 C(O)OR5이거나, 인접한 경우의 R7은 함께 바이사이클릭 알킬 또는 아릴 고리를 형성할 수 있다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, R1은 C(O)R3이다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, R3은 (C0-C4)알킬-(C2-C5)헤테로아릴, (C1-C8)알킬, 아릴, 또는 (C0-C4)알킬-OR5이다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, 헤테로아릴은 피리딜, 푸릴, 또는 티에닐이다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, R1은 C(O)OR4이다.
화학식 II의 다른 구체적 화합물에서, C(O)NHC(O)의 H는 (C1-C4)알킬, 아릴, 또는 벤질로 치환될 수 있다.
이 클래스의 화합물의 추가 예는, 비제한적으로, [2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-이소인돌-4-일메트- 일]-아미드; (2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-이소인돌-- 4-일메틸)-카르밤산 tert-부틸 에스터; 4-(아미노메틸)-2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-이소인돌린-1,3-디온; N-(2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디하이드로-1H-이소인돌-4-일메틸)-아세트아미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}사이클로프로필-카복사미드; 2-클로로-N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}아세트아미드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3-피리딜카복사미드; 3-{1-옥소-4-(벤질아미노)이소인돌린-2-일}피페리딘-2,6-디온; 2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-4-(벤질아미노)이소인돌린-1,3-디온; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}프로판아미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}-3-피리딜카복사미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸} 헵탄아미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}-2-푸릴카복사미드; {N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)카바모일}메틸 아세테이트; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2-티에닐카복사미드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일]메틸}(부틸- 아미노)카복사미드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일]메틸}(옥틸아미노)카복사미드; 및 N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일]메틸}(벤질아미노)카복사미드를 포함한다.
특정 다른 실시양태에서, 이를 필요로 하는 환자는 각각 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 공개 US 2002/0045643호, 국제 공개 WO 98/54170호, 및 미국 특허 제6,395,754호에 개시된 이소인돌-이미드 클래스의 1 이상의 멤버와 조합된 본원에 제공된 1 이상의 항-BCMA 항체를 투여받는다. 대표적인 화합물 및 이의 약학적 허용 염, 수화물, 용매화물, 클라트레이트, 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미 화합물, 및 입체 이성질체의 혼합물은 하기 화학식 III의 것이다:
Figure pct00016
상기 식에서,
X 및 Y 중 하나는 C=O이고 나머지는 CH2 또는 C=O이고;
R은 H 또는 CH2OCOR'이고;
(i) R1, R2, R3, 또는 R4 각각은 서로 독립적으로 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시이거나 (ii) R1, R2, R3, 또는 R4 중 하나는 니트로 또는 -NHR5이고 R1, R2, R3, 또는 R4 중 나머지는 수소이고; R5는 수소 또는 1 내지 8 개 탄소의 알킬이고, R6은 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 벤조, 클로로, 또는 플루오로이고;
R'은 R7-CHR10-N(R8R9)이고;
R7은 m-페닐렌 또는 p-페닐렌 또는 -(CnH2n)-(상기 식에서, n은 0 내지 4의 값을 가짐)이고; R8 및 R9 각각은 서로 독립적으로 수소 또는 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬이거나, R8 및 R9는 함께 테트라메틸렌, 펜타메틸렌, 헥사메틸렌, 또는 -CH2CH2X1CH2CH2-(상기 식에서, X1은 -O-, -S-, 또는 -NH-임)이고; R10은 수소, 8 개까지의 탄소 원자의 알킬, 또는 페닐이고;
*은 키랄-탄소 중심을 나타낸다.
다른 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00017
상기 식에서,
X 및 Y 중 하나는 C=O이고, X 및 Y 중 나머지는 C=O 또는 CH2이고;
(i) R1, R2, R3, 또는 R4 각각은 서로 독립적으로 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시이거나 (ii) R1, R2, R3, 및 R4 중 하나는 -NHR5이고 R1, R2, R3, 및 R4 중 나머지는 수소이고;
R5는 수소 또는 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬이고;
R6은 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 벤조, 클로로, 또는 플루오로이고;
R7은 m-페닐렌 또는 p-페닐렌 또는 -(CnH2n)-(상기 식에서, n은 0 내지 4의 값을 가짐)이고;
R8 및 R9 각각은 서로 독립적으로 수소 또는 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬이거나, R8 및 R9는 함께 테트라메틸렌, 펜타메틸렌, 헥사메틸렌, 또는 -CH2CH2X1CH2CH2-(상기 식에서, X1은 -O-, -S-, 또는 -NH-임)이고;
R10은 수소, 8 개까지의 탄소 원자의 알킬, 또는 페닐이다.
다른 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00018
상기 식에서,
X 및 Y 중 하나는 C=O이고, X 및 Y 중 나머지는 C=O 또는 CH2이고;
R1, R2, R3, 및 R4 각각은 서로 독립적으로 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시이거나 (ii) R1, R2, R3, 및 R4 중 하나는 니트로 또는 보호된 아미노이고 R1, R2, R3, 및 R4 중 나머지는 수소이고;
R6은 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 벤조, 클로로, 또는 플루오로이다.
다른 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00019
상기 식에서,
X 및 Y 중 하나는 C=O이고, X 및 Y 중 나머지는 C=O 또는 CH2이고;
(i) R1, R2, R3, 및 R4 각각은 서로 독립적으로 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시이거나 (ii) R1, R2, R3, 및 R4 중 하나는 -NHR5이고 R1, R2, R3, 및 R4 중 나머지는 수소이고;
R5는 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 또는 CO-R7-CH(R10)NR8R9(상기 식에서, R7, R8, R9, 및 R10 각각은 본원에 정의된 바와 같음)이고;
R6은 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 벤조, 클로로, 또는 플루오로이다.
화합물의 구체적인 예는 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00020
X 및 Y 중 하나는 C=O이고, X 및 Y 중 나머지는 C=O 또는 CH2이고;
R6은 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 벤질, 클로로, 또는 플루오로이고;
R7은 m-페닐렌 또는 p-페닐렌 또는 -(CnH2n)-(상기 식에서, n은 0 내지 4의 값을 가짐)이고;
R8 및 R9 각각은 서로 독립적으로 수소 또는 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬이거나, R8 및 R9는 함께 테트라메틸렌, 펜타메틸렌, 헥사메틸렌, 또는 -CH2CH2X1CH2CH2-(상기 식에서, X1은 -O-, -S-, 또는 -NH-임)이고;
R10은 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 또는 페닐이다.
다른 구체적인 면역조절 화합물은 각각 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,874,448호 및 제5,955,476호에 기재된 것과 같은 1-옥소-2-(2,6-디옥소-3-플루오로피페리딘-3일) 이소인돌린 및 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소-3-플루오로피페리딘-3-일)이소인돌린이다. 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00021
상기 식에서,
Y는 산소 또는 H2이고 R1, R2, R3, 및 R4 각각은 서로 독립적으로 수소, 할로, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 4 개 탄소 원자의 알콕시, 또는 아미노이다.
본원에 개시된 다른 구체적인 면역조절 화합물은 둘 다 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제6,380,239호 및 미국 특허 제7,244,759호에 기재된 인돌린 고리의 4- 또는 5-위치에서 치환된 1-옥소 및 1,3-디옥소이소인돌린이다. 대표적인 화합물 및 이의 염은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00022
상기 식에서,
C*로 표시된 탄소 원자는 키랄 중심을 구성하고(n이 0이 아니고, R1이 R2와 동일하지 않을 때); X1 및 X2 중 하나는 아미노, 니트로, 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 또는 NH-Z이고, X1 또는 X2 중 나머지는 수소이고; R1 및 R2 각각은 서로 독립적으로 하이드록시 또는 NH-Z이고; R3은 수소, 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 할로, 또는 할로알킬이고; Z는 수소, 아릴, 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 포르밀, 또는 1 내지 6 개 탄소의 아실이고; n은 0, 1, 또는 2의 값을 갖고; 단, X1이 아미노이고, n이 1 또는 2이면, R1 및 R2는 둘 다 하이드록시가 아니다.
또한, 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00023
상기 식에서,
n이 0이 아니고, R1이 R2가 아닐 때, C*로 표시된 탄소 원자는 키랄 중심을 구성하고; X1 및 X2 중 하나는 아미노, 니트로, 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 또는 NH-Z이고, X1 또는 X2 중 나머지는 수소이고; R1 및 R2 각각은 서로 독립적으로 하이드록시 또는 NH-Z이고; R3은 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 할로, 또는 수소이고; Z는 수소, 아릴 또는 1 내지 6 개 탄소의 알킬 또는 아실이고; n은 0, 1, 또는 2의 값을 갖는다.
구체적인 예는, 비제한적으로, 각각 다음 구조를 갖는 2-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-4-카바모일-부티르산 및 4-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일)-4-카바모일-부티르산, 및 이의 약학적 허용 염, 용매화물, 프로드럭, 및 입체 이성질체를 포함한다:
Figure pct00024
다른 대표적인 화합물, 및 이의 염은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00025
상기 식에서,
n이 0이 아니고, R1이 R2가 아닐 때, C*로 표시된 탄소 원자는 키랄 중심을 구성하고; X1 및 X2 중 하나는 아미노, 니트로, 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 또는 NH-Z이고, X1 또는 X2 중 나머지는 수소이고; R1 및 R2 각각은 서로 독립적으로 하이드록시 또는 NH-Z이고; R3은 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 할로, 또는 수소이고; Z는 수소, 아릴, 또는, 1 내지 6 개 탄소의 알킬 또는 아실이고; n은 0, 1, 또는 2의 값을 갖는다.
구체적인 예는, 비제한적으로, 각각 다음 구조를 갖는 4-카바모일-4-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-부티르산, 4-카바모일-2-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-부티르산, 2-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-4-페닐카바모일-부티르산, 및 2-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디하이드로-이소인돌-2-일}-펜탄디옥산, 및 이의 약학적 허용 염, 용매화물, 프로드럭, 및 입체 이성질체를 포함한다:
Figure pct00026
.
화합물의 다른 구체적인 예는 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00027
상기 식에서,
X1 및 X2 중 하나는 니트로, 또는 NH-Z이고, X1 또는 X2 중 나머지는 수소이고;
R1 및 R2 각각은 서로 독립적으로 하이드록시 또는 NH-Z이고;
R3은 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 할로, 또는 수소이고;
Z는 수소, 페닐, 1 내지 6 개 탄소의 아실, 또는 1 내지 6 개 탄소의 알킬이고;
n은 0, 1, 또는 2의 값을 갖고;
-COR2 및 - (CH2)nCOR1이 상이한 경우, C*로 표시된 탄소 원자는 키랄 중심을 구성한다.
다른 대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00028
상기 식에서,
X1 및 X2 중 하나는 1 내지 6 개 탄소의 알킬이고;
R1 및 R2 각각은 서로 독립적으로 하이드록시 또는 NH-Z이고;
R3은 1 내지 6 개 탄소의 알킬, 할로, 또는 수소이고;
Z는 수소, 페닐, 1 내지 6 개 탄소의 아실, 또는 1 내지 6 개 탄소의 알킬이고;
n은 0, 1, 또는 2의 값을 갖고;
-COR2 및 - (CH2)nCOR1이 상이한 경우, C*로 표시된 탄소 원자는 키랄 중심을 구성한다.
또 다른 구체적 면역조절 화합물은 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제6,458,810호에 기재된 2-위치에서 2,6-디옥소-3-하이드록시피페리딘-5-일로 치환된 이소인돌린-1-온 및 이소인돌린-1,3-디온이다.
대표적인 화합물은 하기 화학식의 것이다:
Figure pct00029
상기 식에서,
*로 표시된 탄소 원자는 키랄 중심을 구성하고;
X는 -C(O)- 또는 -CH2-이고;
R1은 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬 또는 -NHR3이고;
R2는 수소, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 또는 할로겐이고;
R3은 수소,
비치환되거나 1 내지 8 개 탄소 원자의 알콕시, 할로, 아미노, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬아미노로 치환된 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬,
3 내지 18 개 탄소 원자의 사이클로알킬,
비치환되거나 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알콕시, 할로, 아미노, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬아미노로 치환된 페닐,
비치환되거나 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알콕시, 할로, 아미노, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬아미노, 또는 -COR4로 치환된 벤질이고, 상기 식에서,
R4는 수소,
비치환되거나 1 내지 8 개 탄소 원자의 알콕시, 할로, 아미노, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬아미노로 치환된 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬,
3 내지 18 개 탄소 원자의 사이클로알킬,
비치환되거나 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알콕시, 할로, 아미노, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬아미노로 치환된 페닐, 또는
비치환되거나 1 내지 8 개 탄소 원자의 알킬, 1 내지 8 개 탄소 원자의 알콕시, 할로, 아미노, 또는 1 내지 4 개 탄소 원자의 알킬아미노로 치환된 벤질이다.
7. 실시예
다음 재료 및 방법을 실시예 1-3에 기재된 실험에서 이용하였다.
세포 배양: Hek293 세포를 10% 소태아혈청(FBS)이 보충된 DMEM(ThermoFisher)에서 성장시켰다. C6 세포를 10% FBS가 보충된 Ham's F12 영양소 혼합물(ThermoFisher)에서 유지하였다. NCIH929, U266B1, KMS12BM, OPM2 및 NUDHL1 세포를 10% FBS가 보충된 RPMI-1640 배지에서 배양하였다.
플라스미드: 전장 인간 BCMA(UniProtKB-Q02223; TNFRSF17)를 코딩하는 cDNA를 발현 벡터 SF#10008 내로 클로닝시키고 C6 세포 내로 형질주입하였다. 인간 TNFRSF12A(TWEAKR; NP_057723.1)를 코딩하는 전장 cDNA를 pCDNA3.1(+) 발현 벡터 내로 서브클로닝시켰으며, 이어서 Hek293 세포 내로 형질주입하였다. 형질주입체를 푸로마이신 또는 네오마이신을 사용하여 선택하고 클론 집단을 생성하고 유세포분석에 의해 스크리닝하였다.
FACS 분석: 이 연구에서 사용된 FACs 항체는 다음을 포함한다: 1) 인간 TNFRSF12A-R-피코에리트린(PE)에 대한 LS-C106982-100 마우스 단클론(LifeSpan BioSciences, Inc.); 2) EM901은 이전에 BCMA-결합 항체로서 특징지어짐(Mab42; 국제 출원 번호 WO2017/021450호); 3) PE로 표지된 Ebiosciences 항-인간 IgG Fcγ-특이성; 4) 인간 IgG 아이소타입 대조군; 5) 항-TACI 항체[1A1](Abcam); 6) BAFF 수용체 항체 8A7(ThermoFisher); 7) BCMA 항체 19F2(BioLegend). 각각의 모든 세포 유형(75,000 세포/웰)을 96 웰 플레이트에서 25 분 동안 FACs 버퍼(0.2% BSA를 함유한 PBS) 중 일차 항체와 함께 항온처리하였다. 세포를 FACs 버퍼로 1 회 세척하고 25 분 동안 1:100 희석 이차 항체와 함께 항온처리하였다. 1 회 세척 후, 세포를 1% 파라포름알데하이드로 10 분 동안 고정하고, FACs 버퍼로 세척하고 100 μL FACs 버퍼 중에 재현탁하였다. 제조사의 설명서에 따라, 표지된 세포를 Attune NxT 유세포분석기를 사용하여 분석하고 데이터를 FlowJo 10.0.8r1(FLOWJO LLC)을 사용하여 처리하였다.
7.1. 실시예 1
종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 멤버 17(tumor necrosis factor receptor superfamily member 17)(TNFRSF17)로도 알려진 B-세포 성숙 항원(B-cell maturation antigen)(BCMA)은 많은 상이한 유형의 암에서 나타나는 단백질이다.
항-BCMA 항체 생성: 인간 BCMA에 대한 항체는 AcroBiosystem(Newark, DE 19711)으로부터 구매한 BCMA-(a.a.1-54) 및 재조합 인간 BCMA 세포외 도메인 단백질(aa. 1-54)을 포함하는 DNA 벡터의 다중 적용으로 Aldevron Freiburg(Freiburg, Germany)에서 수행된 OmniFlic(Ligand Pharmaceuticals) x RAT5Lew 동물에서의 면역법으로부터 유래되었다. 면역반응성 동물로부터의 림프절을 수집하고 총 RNA를 Teneobio, Inc.(Palo Alto, California)의 일차 림프구로부터 추출하였다. 페어드-엔드(paired-end) 차세대 시퀀싱을 수행하기 전에 IgG 가변 영역을 각각의 샘플에서 증폭시킨 후, 랭크 분석하여, 각각의 고유 인간 IgG 가변 영역에 대한 발현 수준을 정량화하였다. 고도로 발현된 IgG 서열 계통을 단백질 발현을 위한 pTT5 발현 벡터(NRC Toronto, Ontario, Canada) 내로의 클로닝을 위해 선택하였다.
항-BCMA 항체의 발현: 추정상 BCMA 반응성 V H 의 패널과 함께, 앞서 기재된 5 개의 V H 영역을 각각 표준 IgG1/카파(Kappa) 항체 포맷의 단일 공통 V L 로 공동형질주입하였다. 모든 항체 서열을 pTT5 포유동물 단백질 발현 벡터(NRC-CNRC, Ottawa, Ontario, Canada) 내로 서브클로닝시켰다. 항체를 제조사의 프로토콜에 따라 24 딥 웰 플레이트(Cat.# P-DW-10ML-24-C-S, Axygen, Tewksbury, MA)에서 Expi293 또는 ExpiCHO-S 세포(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) 내로 일시적으로 형질주입하였다. 각각의 항체에 대해, 0.5 ㎍/mL DNA/mL 발현 배지에서의 발현을 위해 1:1 LC:HC의 DNA 비를 사용하였으며, 배양액을 5% CO2 대기로 37℃에서 3mM 궤도 진탕 플랫폼(orbit shaking platform)을 사용하여 500 RPM으로 진탕하였다. 형질주입 6 내지 7 일 후, 플레이트를 원심분리(3724 RCF, 4℃, 30 분)에 의해 투명화시키고 상청액을 새로운 다중-웰 플레이트로 이동시키고, Octet Red 384(Pall ForteBio, Freemont, CA) 상의 단백질 A 바이오센서를 사용하여 역가에 대해 평가하고 활성에 대해 스크리닝하였다.
히트(hit)의 확인시, 항-BCMA 리드 분자를 제조사 설명서에 따라 Erlenmeyer 250mL 플라스크(Cat#:431144, Corning, Tewksbury, MA)에서 60mL 스케일로 ExpiCHO-S 세포에 일시적으로 형질주입하고, 25mM 궤도를 갖는 진탕 플랫폼 상에서 120 RPM으로 37℃에서 휘저었다. 배양 1 주 후, 상청액을 원심분리(3724 RCF, 4℃, 30 분) 후, 여과(Cat.# 89220-720, VWR, Radnor, PA)에 의해 수집하고, 이어서 정제하였다.
항-BCMA 항체의 정제: 여과된 상청액을 AKTA Pure 크로마토그래피 시스템(Cat # 29046694, GE Healthcare) 상에서 5 mL Mab Select Sure Lx 수지(Cat # 29157185, GE healthcare)를 사용하여 정제하였다. 이들 샘플을 소듐 시트레이트, pH 3.0를 사용하여 칼럼에서 용출시키고 3M Tris-HCl을 이용해 pH 5.5로 중화시켰다. 최종 샘플을 당사의 범용 버퍼(10 mM 소듐 아세테이트 pH 5.2 및 9% (w/v) 수크로오스) 내로 투석하였다. 농도 및 순도(응집의 평가)를 SEC 칼럼(Cat# PL 1580-3301, Agilent USA)을 이용함으로써 측정하였다.
항-BCMA 항체에 대한 표면 플라스몬 공명 결합 분석: 이 분석에서 사용된 진행 버퍼는 HBS-EP(150mM NaCl, 10mM Hepes pH7.4, 3mM EDTA 및 0.005% 계면활성제 P20)였다. 비-결합활성 측정을 위해, 항체 320199 및 319883을 2㎍/mL의 농도에서 단백질 A 칩(GE Healthcare) 상에 포획하는 한편, Acro Biosystems로부터의 재조합 Hu-BCMA(BCA-H522y)뿐 아니라, Fc-절단된 Cyno-BCMA를 50 nM의 최고 농도에서 출발한 후, 이어서 0.6 nM까지 3 배 희석하여(50nM, 16.66nM, 5.55nM, 1.85nM, 0.6nM 및 0nM) 유동시켰다. 분석을 10 μL의 유속으로 25℃ 및 37℃에서 수행하였다.
Teniobio로부터의 6 개 BCMA 클론(320199, 319883, 319952, 320262, 319966, 320111)을 Biacore-8K 기구(GE Healthcare)를 사용하여 뮤린 Fc 태그로 293 세포에서 발현된 인간 BCMA, 시아노-BCMA 및 시아노-TACI(Transmembrane Activator and CAML Interactor)에 대한 결합에 대해 시험하였다. 결합활성(도 1a) 및 비-결합활성(도 1b) 측정을 시험하였다.
결합활성 측정을 위해, 항원을 2 ㎍/mL의 농도에서 항-마우스 표면 상에 포획하는 한편, 항체를 50 nM의 최고 농도에서 출발한 후, 이어서 0.6 nM까지 3 배 희석하여(50nM, 16.66nM, 5.55nM, 1.85nM, 0.6nM 및 0nM) 유동시켰다. 분석을 포획 동안 10 μL/분, 3 분의 결합 및 5 분의 해리 동안 30 μL/분의 유속으로 25℃에서 수행하였다. 표면은 포획을 위해 매분 후에 재생성하였고, 3 분의 결합 및 5 분의 해리 동안 30 μL/분의 유속이 이어졌다. 표면은 1 분 동안 10 mM 글리신 pH 1.5를 이용한 각각의 사이클 후 재생성하였다. 이 분석에서 사용된 진행 버퍼는 HBS-EP(150mM NaCl, 10mM Hepes pH7.4, 3mM EDTA 및 0.005% 계면활성제 P20)였다.
데이터 분석은 맞춤을 위해 이중 참조된 데이터를 보고 1:1 랭뮤어(Langmuir) 모델을 사용함으로써 Biacore 8K 분석 소프트웨어(GE Healthcare)를 이용하여 수행하였다. EngMab으로부터의 항-BCMA 항체를 양성 대조군으로서 사용한 한편, 항-RSV1-IgG1을 음성 대조군으로서 사용하였다.
면역조직화학: 아이소타입 대조군으로서 정상 인간 및 토끼(Abcam, ab172730) IgG를 갖는 인간 또는 토끼 IgG 백본에서 결합제의 DAB 단색 면역조직화학(IHC) 염색을 결합 중합체 정제 검출 키트(Leica, DS9800)를 구비한 Bond-III 자동염색기(Leica Microsystems) 상에서 수행하였다. 세포 펠릿의 포르말린-고정, 파라핀 임베디드(Formalin-fixed, paraffin-embedded)(FFPE) 박편(4 μm)을 100℃에서 20 분 동안 에피토프 검색 용액 1(Leica, AR9961)로 항원-언마스킹하고(unmasked), 5 분 동안 과산화물 차단제로 차단하였다. 박편을 15 분 동안 적절한 희석에서 결합제와 함께 항온처리하였다. 인간 IgG 백본에서의 결합제에 대해, 이차 토끼 항 인간 IgG 항체(Abcam, ab2410, 1:100)를 8 분 동안 적용하였다. 이 단계는 토끼 IgG 백본에서의 결합제에 대해서는 필요하지 않았다. 그 다음에, 박편을 8 분 동안 중합체에서 항온처리하고, 10 분 동안 DAB에서 발달시키고, 5 분 동안 헤마톡실린으로 대비염색하고, Sakura Finetek으로 커버슬립하였다.
7.2. BCMA 항체 결합 연구. 실시예 2
이 실시예는 인간 IgGs, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 인간 BCMA 단백질을 발현하는 C6 세포를 인식한다는 것을 입증한다. 인간 BCMA로 안정적으로 형질주입된 C6 세포 또는 목(mock)-형질주입된 C6 세포를 0.4 ㎍/mL의 EM901, 320262, 319966, 320111, 319883 또는 320199와 함께 항온처리하였다. 각각의 항체의 반응성을 FACs에 의해 모니터링하였다. 이전에 BCMA를 검출하는 것으로 입증되었던 항체인 EM901(특허 번호 WO2017021450호)을 C6-BCMA 형질주입체에 강하게 결합시키고, 이들 세포에 의한 BCMA 발현을 확인하였다. 비-형질주입된 C6 세포(각각의 프레임에서 좌측 히스토그램(청색) 곡선)에 비해, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199에 상응하는 히스토그램(각각의 프레임에서 우측 히스토그램(적색) 곡선)은 상당한 우측 이동을 나타내었다(도 2). 이들 결과는 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 세포 표면-발현된 인간 BCMA와 반응한다는 것을 나타낸다. 이들 결합 상호작용을 정량화하는 기하평균값을 포함시켰다(도 2).
7.3. BCMA 항체 결합 연구. 실시예 3
이 실시예는 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 BCMA와 관련된 TNF 수용체 패밀리의 멤버인 전장 인간 TNFRSF12A/TWEAKR을 발현하는 Hek293 세포에 결합하지 않는다는 것을 나타낸다. 인간 TNFRSF12A로 안정적으로 형질주입된 Hek293 세포를 0.4 ug/mL의 인간 IgG 아이소타입 대조군, 320262, 319966, 320111, 319883 또는 320199와 함께 항온처리하였다. 각각의 항체의 반응성을 FACs에 의해 모니터링하였다. 항-TNFRSF12A 항체는 Hek293-TNFRSF12A 세포를 염색하여, TNFRSF12A 발현을 나타내었다. 아이소타입 대조군(청색 히스토그램)에 비해, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199에 상응하는 히스토그램(적색으로 나타냄)의 우측 이동은 검출할 수 없었다(도 3). 이들 결과는 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 인간 TNFRSF12A를 향한 상당한 결합 활성을 나타내지 않았다는 것을 나타낸다. 이들 결합 상호작용을 정량화하는 기하평균을 나타내었다(도 3).
7.4. BCMA 항체 결합 연구. 실시예 4
이 실시예는 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 인간 BCMA를 내생적으로 발현하는 NCIH929 다발성 골수종 세포를 인식한다는 것을 입증한다. NCIH929 세포를 1.0 ug/mL의 인간 IgG 아이소타입 대조군, EM901, 320262, 319966, 320111, 319883 또는 320199와 함께 항온처리하였다. 각각의 mAb의 반응성을 FACs에 의해 모니터링하였다. BCMA를 인식하는 EM901 항체는 NCIH929 세포에 강하게 결합하였다. 아이소타입 대조군(각각의 프레임에서 좌측 히스토그램(청색) 곡선)에 비해, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199에 상응하는 히스토그램(각각의 프레임에서 우측 히스토그램(적색) 곡선)은 상당한 우측 이동을 나타내었다(도 4). 이들 결과는 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 NCIH929 세포와 반응하였다는 것을 나타낸다. 이들 결합 상호작용을 정량화하는 기하평균을 나타내었다(도 4).
7.5. BCMA 항체 결합 연구. 실시예 5
이 실시예는 도 5에 나타낸 바와 같이, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 0.016-10 ug/mL의 인간 IgG 아이소타입 대조군, EM901, 320262, 319966, 320111, 319883 또는 320199와 함께 항온처리된 BCMA+ 다발성 골수종 세포, U266B1 및 KMS12BM을 인식한다는 것을 입증한다. 각각의 mAb의 반응성을 FACs에 의해 모니터링하였다. EM901, 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199는 용량-반응 방식으로 아이소타입 대조군에 비해 U266B1 및 KMS12BM에 결합하였다(도 5). 또한, 320262 및 320111은 TACI 또는 BAFF 수용체, BCMA와 관련된 다른 TNF 수용체 패밀리 멤버가 아닌, BCMA를 발현하는 OPM2 다발성 골수종 세포를 인식하였다(용량-반응 곡선 및 막대 그래프, 도 5). 반대로, 320262 및 320111은 BCMA-/TACI+/BAFFR+인 NUDHL1 세포에는 결합하지 않았다(용량-반응 곡선 및 막대 그래프, 도 5). 이들 결과는 320262, 319966, 320111, 319883 및 320199가 BCMA-의존성, 용량-반응성 세포-결합을 나타낸다는 것을 나타낸다. 이들 결합 상호작용을 정량화하는 기하평균을 나타내었다(도 5).
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
SEQUENCE LISTING <110> CELGENE CORPORATION <120> BCMA-BINDING ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> 298068-00272 <140> <141> <150> 62/633,152 <151> 2018-02-21 <160> 68 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Arg Ala Ser 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180 tacaccccgt ccctcaagag tcgcgtcacc atatccgaag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagg tgaggtctgt gaccgtcgca gacacgggtg tgtattactg tgcgagaccg 300 gattactatg gttcggggac tatcgcgtgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360 <210> 39 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 39 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Ser Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Arg Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe 65 70 75 80 Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Ser Pro Tyr Lys Trp Asn Asp Gly Asn Phe Phe Gly Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 40 Ser Ser Asn Ser Tyr Trp Gly 1 5 <210> 41 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 41 Arg Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 42 Pro Tyr Lys Trp Asn Asp Gly Asn Phe Phe Gly 1 5 10 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 43 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asn Ser Tyr 1 5 10 <210> 44 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 44 Tyr Tyr Ser Gly Ile 1 5 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 45 Pro Tyr Lys Trp Asn Asp Gly Asn Phe Phe Gly 1 5 10 <210> 46 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 46 Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Asn Ser Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 47 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 47 Arg Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr His Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 48 Pro Tyr Lys Trp Asn Asp Gly Asn Phe Phe Gly 1 5 10 <210> 49 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 49 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggacac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtaatt cctactgggg ctggatccgc 120 cagtccccag ggagggggct ggagtggatt gggaggatct attatagtgg gatcacccac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggctg tgtattactg tgcgagtccg 300 tataagtgga acgacgggaa tttttttggt tggggccagg gcaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 50 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 50 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ser Ser Ile Ser Arg Ser 20 25 30 Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Ile Gly Thr Phe Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Glu Asp Thr Ser Lys Lys Gln Leu 65 70 75 80 Ser Leu Asn Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Pro Ser Gly Tyr Thr Thr Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 51 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 51 Arg Ser Asn Tyr Tyr Trp Gly 1 5 <210> 52 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 52 Thr Phe Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 53 Pro Ser Gly Tyr Thr Thr Ser 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 54 Gly Ser Ser Ile Ser Arg Ser Asn Tyr 1 5 <210> 55 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 55 Tyr Tyr Ser Gly Thr 1 5 <210> 56 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 56 Pro Ser Gly Tyr Thr Thr Ser 1 5 <210> 57 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 57 Gly Ser Ser Ile Ser Arg Ser Asn Tyr Tyr Trp Gly 1 5 10 <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 58 Thr Phe Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 59 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 59 Pro Ser Gly Tyr Thr Thr Ser 1 5 <210> 60 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 60 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggaag ctccatcagc aggagtaatt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaagggtct ggagtggatt gggactttct attatagtgg gaccacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgaag acacgtccaa gaaacagtta 240 tccctgaacc tgaggtctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagacct 300 tccggatata ccaccagctg gggccagggc accctggtca ccgtctcctc a 351 <210> 61 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala 1 5 10 15 Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser 20 25 30 Leu Ser Lys Met 35 <210> 62 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Pro Asp Ser Asp Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly 1 5 10 15 Leu Phe Phe Tyr Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser Leu 20 25 <210> 63 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr 1 5 10 15 Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val 20 <210> 64 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe Tyr 1 5 10 15 Ser Phe Leu Leu Thr 20 <210> 65 <211> 26 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 65 Phe Leu Leu Trp Ile Leu Val Ala Val Ser Leu Gly Leu Phe Phe Tyr 1 5 10 15 Ser Phe Leu Val Ser Ala Val Ser Leu Ser 20 25 <210> 66 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu 1 5 10 15 Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala 20 25 <210> 67 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp 1 5 10 15 Val Leu Ala Val Ile 20 <210> 68 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser Leu 1 5 10 15 Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile 20 25

Claims (57)

  1. a. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9;
    b. 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12;
    c. 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15;
    d. 각각 서열번호 18, 서열번호 19 및 서열번호 20;
    e. 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23;
    f. 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26;
    g. 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31;
    h. 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34;
    i. 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37;
    j. 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42;
    k. 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45;
    l. 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48;
    m. 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53;
    n. 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는
    o. 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59
    의 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는, B-세포 성숙 항원(B-Cell Maturation Antigen)(BCMA)에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항체가 각각 서열번호 2, 서열번호 3 또는 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 추가로 포함하는 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 항체가 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 추가로 포함하는 항체 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  4. 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및
    a. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9;
    b. 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12; 또는
    c. 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15
    의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열
    을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  5. 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및
    a. 각각 서열번호 18, 서열번호 19, 및 서열번호 20;
    b. 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23; 또는
    c. 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26
    의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열
    을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  6. 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및
    a. 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31;
    b. 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34; 또는
    c. 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37
    의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열
    을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  7. 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및
    a. 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42;
    b. 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45; 또는
    c. 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48
    의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열
    을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  8. 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄, 및
    a. 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53;
    b. 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는
    c. 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59
    의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열
    을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA-결합 단편.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    서열번호 1의 경쇄 가변 서열을 포함하는 항체 또는 이의 결합 단편.
  10. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 서열을 포함하는 항체 또는 이의 결합 단편.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체가 단클론 항체, 키메라 항체, 디아바디, 이중특이적 항체, 이중특이적 Fab2, 이중특이적 (mab)2, 인간화 항체, 인공적으로 생성된 인간 항체, 이중특이적 T-세포 인게이저(engager), 이중특이적 NK 세포 인게이저, 또는 단일쇄 항체인 항체.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체가 트리오맙, 공통 경쇄를 갖는 놉-인-홀(knob-in-hole)(kih) IgG, 크로스맙, 오쏘-Fab IgG, DVD-Ig, 투인원(2 in 1)-IgG, IgG-scFv, sdFv2-Fc, 바이-나노바디(bi-nanobody), tandAb, DART, DART-Fc, scFv-HAS-scFv, 또는 DNL-Fab3인 항체.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체가 항체-약물 콘쥬게이트(conjugate)인 항체.
  14. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    단일쇄 가변 단편(scFv), Fab 단편, 또는 F(ab')2 단편인 결합 단편.
  15. a. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9;
    b. 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12;
    c. 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15;
    d. 각각 서열번호 18, 서열번호 19 및 서열번호 20;
    e. 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23;
    f. 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26;
    g. 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31;
    h. 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34;
    i. 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37;
    j. 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42;
    k. 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45;
    l. 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48;
    m. 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53;
    n. 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는
    o. 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59
    의 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 폴리펩티드가 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 추가로 포함하는 폴리펩티드.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 폴리펩티드가 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 추가로 포함하는 폴리펩티드.
  18. 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  19. 서열번호 1의 경쇄 가변 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  20. 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체, 이의 결합 단편, 또는 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 조성물이 약학 조성물인 조성물.
  23. 제22항에 있어서,
    상기 조성물이 정맥내, 동맥내, 근육내, 피하, 경막내, 척추강내, 또는 복강내 전달을 위해 제형화되는 조성물.
  24. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체, 항체 단편, 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  25. a. 각각 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9;
    b. 각각 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12;
    c. 각각 서열번호 13, 서열번호 14 및 서열번호 15;
    d. 각각 서열번호 18, 서열번호 19 및 서열번호 20;
    e. 각각 서열번호 21, 서열번호 22 및 서열번호 23;
    f. 각각 서열번호 24, 서열번호 25 및 서열번호 26;
    g. 각각 서열번호 29, 서열번호 30 및 서열번호 31;
    h. 각각 서열번호 32, 서열번호 33 및 서열번호 34;
    i. 각각 서열번호 35, 서열번호 36 및 서열번호 37;
    j. 각각 서열번호 40, 서열번호 41 및 서열번호 42;
    k. 각각 서열번호 43, 서열번호 44 및 서열번호 45;
    l. 각각 서열번호 46, 서열번호 47 및 서열번호 48;
    m. 각각 서열번호 51, 서열번호 52 및 서열번호 53;
    n. 각각 서열번호 54, 서열번호 55 및 서열번호 56; 또는
    o. 각각 서열번호 57, 서열번호 58 및 서열번호 59
    의 중쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  26. 각각 서열번호 2, 서열번호 3 및 서열번호 4의 경쇄 CDR1, CDR2 또는 CDR3을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  27. 제25항에 있어서,
    상기 폴리뉴클레오티드가 서열번호 5, 서열번호 16, 서열번호 27, 서열번호 38, 서열번호 49 또는 서열번호 60의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  28. 서열번호 1의 경쇄 가변 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  29. 서열번호 6, 서열번호 17, 서열번호 28, 서열번호 39, 또는 서열번호 50의 중쇄 가변 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  30. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드 벡터.
  31. 제30항에 있어서,
    상기 벡터가 발현 벡터인 벡터.
  32. 제30항에 있어서,
    상기 벡터가 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터인 벡터.
  33. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포.
  34. 제31항 또는 제32항의 벡터를 포함하는 세포.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서,
    상기 세포가 상기 항체, 이의 결합 단편, 또는 폴리펩티드를 발현하는 세포.
  36. 제35항의 세포가 상기 폴리뉴클레오티드를 발현하고, 이에 의해 상기 폴리펩티드를 생산하도록 야기하는 것; 및 상기 폴리펩티드를 단리시키는 것을 포함하는, 폴리펩티드를 생산하는 방법.
  37. 제35항의 세포가 상기 폴리뉴클레오티드를 발현하고, 이에 의해 상기 항체를 생산하도록 야기하는 것; 및 상기 항체를 단리시키는 것을 포함하는, BCMA에 결합하는 항체, 또는 이의 BCMA 결합 단편을 생산하는 방법.
  38. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포를 고갈시키는 방법.
  39. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 형질 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 형질 세포를 고갈시키는 방법.
  40. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포에 의해 야기된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포에 의해 야기된 장애를 치료하는 방법.
  41. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 형질 세포에 의해 야기된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 형질 세포에 의해 야기된 장애를 치료하는 방법.
  42. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 항체, 또는 이의 BCMA 결합 단편, 또는 폴리펩티드의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애를 치료하는 방법.
  43. 제38항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 세포-관련된 장애가 형질세포종, 호지킨 림프종(Hodgkins lymphoma), 소포 림프종, 작은 비-분열 세포 림프종, 풍토성 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 산발성 버킷 림프종, 변연부 림프종, 절외 점막-연관된 림프 조직 림프종, 절 단구양 B 세포 림프종, 비장 림프종, 외투 세포 림프종, 대세포 림프종, 미만성 혼합 세포 림프종, 면역모세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 원발성 B 세포 혈관중심성 림프종, 소림프구 림프종, 불확실한 악성 가능성의 B 세포 증식, 림프종모양 육아종증, 이식후 림프증식 질환, 면역조절 장애, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 항인지질항체 증후군, 샤가스병(Chagas' disease), 그레이브스병(Grave's disease), 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 심상성 천포창, 피부경화증, 다발성 경화증, 항인지질항체 증후군, ANCA 연관 혈관염, 굿파스쳐병(Goodpasture's disease), 가와사키병(Kawasaki disease), 자가면역 용혈 빈혈, 및 급속 진행 사구체신염, 중쇄병, 원발성 또는 면역세포-연관된 아밀로이드증, 또는 의미불명 단클론 감마병증인 방법.
  44. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 폴리펩티드가 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor)(CAR)인 폴리펩티드.
  45. 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CAR이 세포외 BCMA-결합 도메인 내에 상기 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열, 및/또는 상기 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  46. 제19항 또는 제20항에 있어서,
    상기 CAR이 세포외 BCMA-결합 도메인 내에 상기 경쇄 서열 및/또는 상기 중쇄 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  47. 제44항에 있어서,
    상기 CAR이 막관통 도메인, 일차 시그널링 도메인, 또는 공동자극 도메인 중 하나 이상을 포함하는 폴리펩티드.
  48. 제44항에 있어서,
    상기 CAR이 막관통 도메인, 일차 시그널링 도메인, 또는 공동자극 도메인을 포함하는 폴리펩티드.
  49. 제44항 내지 제48항 중 어느 한 항의 폴리펩티드를 발현하는 세포.
  50. 제49항에 있어서,
    상기 세포가 면역 세포인 세포.
  51. 제50항에 있어서,
    상기 면역 세포가 T 세포, 천연 킬러 세포(NK 세포), 또는 천연 킬러 T 세포(NK T 세포)인 세포.
  52. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 세포의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포를 고갈시키는 방법.
  53. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 세포의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 형질 세포 고갈을 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 형질 세포를 고갈시키는 방법.
  54. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 세포의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 세포에 의해 야기된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 세포에 의해 야기된 장애를 치료하는 방법.
  55. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 세포의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA-발현 형질 세포에 의해 야기된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA-발현 형질 세포에 의해 야기된 장애를 치료하는 방법.
  56. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 세포의 치료적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애 치료를 필요로 하는 환자에서 BCMA 발현과 연관된 B 세포-관련된 장애를 치료하는 방법.
  57. 제52항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 세포-관련된 장애가 형질세포종, 호지킨 림프종, 소포 림프종, 작은 비-분열 세포 림프종, 풍토성 버킷 림프종, 산발성 버킷 림프종, 변연부 림프종, 절외 점막-연관된 림프 조직 림프종, 절 단구양 B 세포 림프종, 비장 림프종, 외투 세포 림프종, 대세포 림프종, 미만성 혼합 세포 림프종, 면역모세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 원발성 B 세포 혈관중심성 림프종, 소림프구 림프종, 불확실한 악성 가능성의 B 세포 증식, 림프종모양 육아종증, 이식후 림프증식 질환, 면역조절 장애, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판 감소성 자반증, 항인지질항체 증후군, 샤가스병, 그레이브스병, 베게너 육아종증, 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군, 심상성 천포창, 피부경화증, 다발성 경화증, 항인지질항체 증후군, ANCA 연관 혈관염, 굿파스쳐병, 가와사키병, 자가면역 용혈 빈혈, 및 급속 진행 사구체신염, 중쇄병, 원발성 또는 면역세포-연관된 아밀로이드증, 또는 의미불명 단클론 감마병증인 방법.
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