KR20200109308A - 세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법 - Google Patents
세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20200109308A KR20200109308A KR1020207019644A KR20207019644A KR20200109308A KR 20200109308 A KR20200109308 A KR 20200109308A KR 1020207019644 A KR1020207019644 A KR 1020207019644A KR 20207019644 A KR20207019644 A KR 20207019644A KR 20200109308 A KR20200109308 A KR 20200109308A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cells
- receptor
- ccr7
- composition
- expressing
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 368
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims abstract description 1083
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 1083
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 1081
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 547
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 528
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 140
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 46
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims abstract description 19
- -1 and methods Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims description 534
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims description 534
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 claims description 520
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 123
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 123
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 123
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 71
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 71
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 57
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 claims description 51
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 49
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 45
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 claims description 39
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 37
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 30
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 28
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 28
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 26
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 claims description 24
- 102100024423 Carbonic anhydrase 9 Human genes 0.000 claims description 24
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 claims description 24
- 102100024964 Neural cell adhesion molecule L1 Human genes 0.000 claims description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 24
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 24
- 102100031507 Fc receptor-like protein 5 Human genes 0.000 claims description 22
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 claims description 21
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 19
- 108010012255 Neural Cell Adhesion Molecule L1 Proteins 0.000 claims description 18
- 102100033579 Trophoblast glycoprotein Human genes 0.000 claims description 18
- 101000846908 Homo sapiens Fc receptor-like protein 5 Proteins 0.000 claims description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 16
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 16
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 14
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 claims description 14
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 claims description 12
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 claims description 12
- 108700012439 CA9 Proteins 0.000 claims description 12
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 claims description 12
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 claims description 12
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 12
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 12
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 claims description 12
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 claims description 12
- 101000801433 Homo sapiens Trophoblast glycoprotein Proteins 0.000 claims description 12
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 claims description 12
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 claims description 12
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims description 12
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 claims description 12
- 102000007298 Mucin-1 Human genes 0.000 claims description 12
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 claims description 12
- 101710120463 Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 claims description 12
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 claims description 12
- 102000036215 folic acid binding proteins Human genes 0.000 claims description 12
- 108091011001 folic acid binding proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 12
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 claims description 12
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 claims description 12
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 12
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 12
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 12
- 108091008927 CC chemokine receptors Proteins 0.000 claims description 11
- 102000005674 CCR Receptors Human genes 0.000 claims description 11
- 101001095088 Homo sapiens Melanoma antigen preferentially expressed in tumors Proteins 0.000 claims description 11
- 102100037020 Melanoma antigen preferentially expressed in tumors Human genes 0.000 claims description 11
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 claims description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 10
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 10
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 10
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 claims description 9
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 8
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 8
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 7
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 7
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 7
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 claims description 7
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 claims description 7
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 claims description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 6
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 claims description 6
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 6
- 108010058905 CD44v6 antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 claims description 6
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 claims description 6
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 6
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 claims description 6
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 claims description 6
- 108010060273 Cyclin A2 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100025191 Cyclin-A2 Human genes 0.000 claims description 6
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 6
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 claims description 6
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 claims description 6
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 102000050554 Eph Family Receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 108091008815 Eph receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 102100023721 Ephrin-B2 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010044090 Ephrin-B2 Proteins 0.000 claims description 6
- 101150032879 Fcrl5 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 claims description 6
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 claims description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 6
- 102000007482 Interleukin-13 Receptor alpha2 Subunit Human genes 0.000 claims description 6
- 108010085418 Interleukin-13 Receptor alpha2 Subunit Proteins 0.000 claims description 6
- 102100020793 Interleukin-13 receptor subunit alpha-2 Human genes 0.000 claims description 6
- 101710112634 Interleukin-13 receptor subunit alpha-2 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 claims description 6
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 102000016200 MART-1 Antigen Human genes 0.000 claims description 6
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 claims description 6
- 241000701029 Murid betaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 6
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100029527 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims description 6
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 claims description 6
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 claims description 6
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 101710190034 Trophoblast glycoprotein Proteins 0.000 claims description 6
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 claims description 6
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 6
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 6
- 108010027445 interleukin-22 receptor Proteins 0.000 claims description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 6
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 claims description 6
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N (4S)-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[(2S)-2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-5-amino-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(2S)-5-carbamimidamido-1-[[(1S)-4-carbamimidamido-1-carboxybutyl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1,5-dioxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CNC(=O)[C@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SSOORFWOBGFTHL-OTEJMHTDSA-N 0.000 claims description 5
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 5
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 claims description 5
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 5
- 102100039615 Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1 Human genes 0.000 claims description 5
- 102100033493 Interleukin-3 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 5
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 claims description 5
- 108010006700 Receptor Tyrosine Kinase-like Orphan Receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 5
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 5
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 claims description 5
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 102000010451 Folate receptor alpha Human genes 0.000 claims description 3
- 108050001931 Folate receptor alpha Proteins 0.000 claims description 3
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 claims description 3
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 claims description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 claims description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims 39
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims 39
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims 33
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 claims 33
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims 21
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 20
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims 19
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims 19
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims 18
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims 18
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims 18
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims 13
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 claims 12
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 claims 12
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 claims 12
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 claims 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims 12
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 11
- 102100028757 Chondroitin sulfate proteoglycan 4 Human genes 0.000 claims 8
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 claims 8
- 102000010956 Glypican Human genes 0.000 claims 8
- 108050001154 Glypican Proteins 0.000 claims 8
- 108050007237 Glypican-3 Proteins 0.000 claims 8
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 claims 8
- 108010039524 chondroitin sulfate proteoglycan 4 Proteins 0.000 claims 8
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 claims 7
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims 7
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 claims 7
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims 7
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 claims 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 6
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 claims 6
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 6
- 230000004044 response Effects 0.000 claims 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims 6
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims 5
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 claims 4
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims 4
- 101000773083 Homo sapiens 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 claims 4
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims 4
- 102100040120 Prominin-1 Human genes 0.000 claims 4
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 claims 4
- 208000026448 Wilms tumor 1 Diseases 0.000 claims 4
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 claims 4
- 108010014402 tyrosinase-related protein-1 Proteins 0.000 claims 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims 3
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 claims 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 3
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims 2
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 claims 2
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 claims 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims 2
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims 2
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims 2
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 claims 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 2
- VJNCICVKUHKIIV-UHFFFAOYSA-N dopachrome Chemical compound O=C1C(=O)C=C2NC(C(=O)O)CC2=C1 VJNCICVKUHKIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 claims 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 1
- 229940121359 adenosine receptor antagonist Drugs 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims 1
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 claims 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000296 purinergic P1 receptor antagonist Substances 0.000 claims 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 claims 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 abstract 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 18
- 101710171981 Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A Proteins 0.000 description 3
- 102100040985 Volume-regulated anion channel subunit LRRC8A Human genes 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 102100029855 Caspase-3 Human genes 0.000 description 2
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 2
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 2
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 2
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 2
- CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N beta-D-GalpNAc-(1->4)-[alpha-Neup5Ac-(2->8)-alpha-Neup5Ac-(2->3)]-beta-D-Galp-(1->4)-beta-D-Glcp-(1<->1')-Cer(d18:1/18:0) Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)C(O)=O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](CO)O1 CXQCLLQQYTUUKJ-ALWAHNIESA-N 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 2
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 2
- 101100327165 Arabidopsis thaliana CCD8 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 102000016978 Orphan receptors Human genes 0.000 description 1
- 108070000031 Orphan receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/001112—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
- A61K2039/804—Blood cells [leukemia, lymphoma]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2302—Interleukin-2 (IL-2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2307—Interleukin-7 (IL-7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/23—Interleukins [IL]
- C12N2501/2315—Interleukin-15 (IL-15)
Abstract
하나 이상의 용량의 치료 T 세포 조성물, 및 이의 용도에 사용하기 위한 방법, 조성물 및 제조 물품과 관련된, 세포 요법에 사용하기 위한 방법, 조성물 및 제조 물품이 제공된다. T 세포 조성물의 세포는 재조합 수용체 이를테면 키메라 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CARs) 또는 다른 트랜스제닉 수용체 이를테면 T 세포 수용체 (TCRs)를 발현한다. 투여된 세포의 단위 또는 세포의 용량 및/또는 투여된 세포의 표현형을 비롯한, 본원에 개시된 실시 양태의 특징들은 T 세포 조성물이 투여된 대상체에 있어서 일정한 투약 (consistent dosing), 감소된 독성 위험 및/또는 증가된 반응성과 같은 다양한 이점을 제공한다.
Description
관련 출원의 상호-참조
[1] 본 출원은 2017년 12월 8일자로 출원된 “세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법 (PHENOTYPIC MARKERS FOR CELL THERAPY AND RELATED METHODS)”이라는 명칭의 미국 가출원 제62/596,775호, 2018년 3월 14일자로 출원된 “세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법 (PHENOTYPIC MARKERS FOR CELL THERAPY AND RELATED METHODS)”이라는 명칭의 미국 가출원 제62/643,165호, 2018년 4월 13일자로 출원된 미국 가출원 제62/657,716호 및 2018년 8월 9일자로 출원된 “세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법 (PHENOTYPIC MARKERS FOR CELL THERAPY AND RELATED METHODS)”이라는 명칭의 미국 가출원 제62/716,967호의 우선권을 주장하며 상기 내용은 그 전체가 참조로서 포함된다.
서열 목록의 참조에 의한 포함
[2] 본 출원은 전자전 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2018년 12월 7일에 생성된, 35,461 바이트의 크기의 파일명 735042014540SeqList.txt로 제공된다. 상기 서열 목록의 전자적 형식의 정보는 그 전체가 참조로서 포함된다.
분야
[3] 본 발명은 하나 이상의 용량 (doses)의 치료 T 세포 조성물의 투여를 포함하는 세포 요법, 및 이에 사용하기 위한 방법, 조성물 및 제조 물품에 관한 것이다. T 세포 조성물의 세포는 재조합 수용체 예컨대 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CARs) 또는 T 세포 수용체 (TCRs)와 같은 다른 트랜스제닉 수용체를 발현한다. 본 발명의 실시 양태의 특징은, 투여된 세포 또는 세포의 단위 (units of 세포) 용량 및/또는 투여된 세포의 표현형을 포함하고, 투여된 대상체 (subjects)에 있어서 이를테면 일정한 투여 (consistent dosing), 독성의 위험을 낮추는 것 및/또는 반응성 (reosponse)을 증가시키는 것과 같은 다양한 이점을 제공한다.
[4] 질병 및 병태 (condition)를 치료하기 위해 다양한 면역 요법 및/또는 세포 요법들이 이용 가능하다. 예를 들어, 입양 세포 요법 (키메라 항원 수용체 (CARs) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 관심 질환 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포 및 다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법의 투여와 관련된 것들을 포함하는)은 암 또는 다른 질병 또는 장애의 치료에 유리할 수 있다. 개선된 접근 방식이 요구된다. 그러한 요구를 충족시키는 방법 및 제조 물품이 제공된다.
개요
[5] 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 치료용 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 적어도 약 40 %, 적어도 약 50 %, 적어도 약 60 %, 적어도 약 70 %, 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 91 %, 적어도 약 92 %, 적어도 약 93 %, 적어도 약 94 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 %, 적어도 약 99 % 또는 적어도 약 100 %, 또는 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 40 %, 약 50 %, 약 60 %, 약 70 %, 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성 (surface positive)이다. 일부 실시 양태에서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 또는 적어도 약 50 %, 또는 50 % 또는 약 50 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성 (surface positive)이다. 일부 실시 양태에서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 60 % 또는 적어도 약 60 %, 또는 60 % 또는 약 60 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성 (surface positive)이다. 일부 실시 양태에서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 70 % 는 적어도 약 70 %, 또는 70 % 또는 약 70 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성 (surface positive)이다. 일부 실시 양태에서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 80 % 또는 적어도 약 80 %, 또는 80 % 또는 약 80 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성 (surface positive)이다.
[6] 일부 실시 양태에서, 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포는 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지고; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포는 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지고; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포는 CD8+ 및 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지고; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포는 적어도 또는 적어도 약 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 %의 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지고; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포는 적어도 또는 적어도 약 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 % 의 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 및/또는 조성물 내 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포는 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 3 : 1 또는 대략 1 : 2 내지 2 : 1의 CD4+ : CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어진다.
[7] 정해진 수 (defined number)에 기초한 단위 용량 (unit dose)의 세포, 이를 테면 CD8+ T 세포의 서브 타입 또는 CD4+ T 세포의 서브 타입 또는 재조합 수용체를 발현하는 이들 세포의 서브 타입과, CD8+ 및 CD4+ T 세포의 그러한 서브타입의 비율 (ratio)과 관련되거나 이를 포함하는 방법, 조성물 및 제조 물품이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 조성물 내 T 세포의 총 수, 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 내 T 세포의 총 수는 CCR7에 대해 표면 양성이다. 일부 실시 양태에서, 조성물 내 T 세포의 총 수, 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 내 T 세포의 총 수는 CD27에 대해 표면 양성이다. 일부 실시 양태에서, 조성물 내 T 세포의 총 수, 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 내 T 세포의 총 수는 CCR7 및 CD27에 대해 표면 양성이다. 일부 실시 양태에서, 조성물은 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함한다.
[8] 일부 실시 양태에서, 세포의 서브 타입은 세포 표면 마커, 이를 테면 중심 기억 표현형 (central memory phenotype)의 마커에 대해 양성이며, 및/또는 세포 표면 마커는 CCR7 및/또는 CD27이다. 일부 실시 양태에서, 제공된 방법, 조성물 및 제조 물품은 다양한 종양을 비롯한 질환 및 병태의 치료를 위해 조작된 T 세포 요법과 같은 세포 요법과 관련하여 사용하기 위한 것이다.
[9] 본원에는 제조 물품이 제공된다. 일부 실시 양태에서, 제공되는 제조 물품은 하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기 (container)를 포함하고, 상기 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 (선택적으로 발현되도록 조작된) 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서 단위 용량의 세포는 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 (선택적으로 표면 발현하는) 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율 (defined ratio)의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율 (defined ratio)의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트 (subset)의 세포를 포함하며; 및 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서 (instructions)를 포함한다.
[10] 본원에는 제조 물품이 제공된다. 일부 실시 양태에서, 제공되는 제조 물품은 하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기 (container)를 포함하고, 상기 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 (선택적으로 발현되도록 조작된) 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서 단위 용량의 세포는 분화 클러스터 27 (CD27)을 발현하는 (선택적으로 표면 발현하는) 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트 (subset)의 세포를 포함하며; 및 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하기 위한 설명서 (instructions)를 포함한다.
[11] 치료 조성물이 또한 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 치료 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하고, 여기서 조성물 중 T 세포의 총 수 (또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수)의 적어도 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 91 %, 적어도 약 92 %, 적어도 약 93 %, 적어도 약 94 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 %, 적어도 약 99 % 또는 적어도 약 100 %, 또는 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 여기서: 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포는 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포는 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포는 CD8+ 및 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포는 적어도 (약) 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 %, 또는 (약) 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 %의 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포는 적어도 (약) 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 %, 또는 (약) 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 %의 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 조성물 중 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포는 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 3 : 1 또는 대략 1 : 2 내지 2 : 1의 CD4+ : CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어진다.
[12] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 본원에 기재된 임의의 치료 조성물을 포함한다.
[13] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함하고; 및/또는 여기서 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CD27+ 세포를 포함하고; 및/또는 여기서 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고; 및/또는 여기서 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+세포를 포함한다.
[14] 일부 실시 양태에서, 단위 용량 또는 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하고 (각각 포함), 및/또는 단위 용량 또는 조성물은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 이하, 약 5 x 106 이하, 약 1 x 106 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함한다.
[15] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이고; 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 이다.
[16] 일부 실시 양태에서, 세포 또는 조성물의 단위 용량은 정해진 비(비율)의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[17] 일부 실시 양태에서, 세포 또는 조성물의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CCR7 및/또는 CD45RA의 발현 부재 또는 발현에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 세포는 CCR7 및/또는 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 수의 세포는 추가로 CCR7+ 또는 CD45RA- 세포이다.
[18] 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CD27 및/또는 CD45RA의 발현의 부재 또는 발현에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 세포는 CD27 및/또는 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 여기서 정해진 수의 세포는 추가로 CD27+ 또는 CD45RA- 세포이다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수는 CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 정해진 수는 CD27+ 또는 CD45RA- 세포를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 또는 조성물의 단위 용량은 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 또는 조성물의 단위 용량은 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함한다.
[19] 일부 실시 양태에서, 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA-이다.
[20] 본원에서는 또한 다음을 포함하는 제조 물품이 제공된다: 하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기로서, 상기 단위 용량은 선택적으로 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서 세포의 단위 용량은 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 용기; 및 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 하나 이상의 이의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하기 위한 설명서. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함한다.
[21] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다.
[22] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+이다.
[22] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[23] 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가적으로 세포에서의 CD45RA의 발현 또는 발현의 부재에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 세포는 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 상기 정해진 수의 세포는 CD45RA- 세포이다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 추가로 포함하며, 선택적으로 정해진 수는 CD45RA- 세포를 추가로 포함한다.
[24] 일부 실시 양태에서, 선택적으로 동일한 방법에 따라 제조된, 복수의 물품 또는 단위 용량 또는 조성물 중에서, 단위 용량 중 CCR7을 발현하는 세포 (CCR7+ 세포)의 수 또는 비율은 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 다양하다.
[25] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 단위 용량 또는 수는 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 단위 용량 또는 수는 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함한다.
[26] 일부 실시 양태에서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 살아 있거나 생존 가능한 그러한 세포의 총 수이다. 일부 실시 양태에서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 네거티브 (apoptotic marker negative (-))인 그러한 세포의 총 수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)이다.
[27] 일부 실시 양태에서, 설명서는 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 것을 명시한다. 일부 실시 양태에서, 복수의 개별 조성물은 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다.
[28] 일부 실시 양태에서, 설명서는 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을, 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여하는 것을 명시한다.
[29] 일부 실시 양태에서, 설명서는 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 것을 명시한다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 것을 명시한다.
[30] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암이다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 종양 항원이다.
[31] 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD138, CD171, 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPCR5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택된다.
[32] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다.
[33] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 scFv를 포함한다.
[34] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 내 신호 전달 영역 (region)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (p또는tion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
[35] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있다.
[36] 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 자가 (autologous)이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 동종이계 (allogeneic)이다.
[37] 치료 방법이 또한 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 치료 방법은 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 본원에 기재된 임의의 치료 용량의 하나 이상의 단위 용량 또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포), 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7을 발현하는 세포 (CCR7+ 세포)의 수 또는 비율은 40 % 이하, 30 % 이하, 이하 20 %, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 다양하다.
[38] 치료 방법이 또한 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 치료 방법은 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 본원에 기재된 하나 이상의 단위 용량의 치료 조성물 또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하는 것을 포함하며, 선택적으로 여기서: 세포의 단위 용량은 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CD27 (CD27+ 세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율은 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 다양하다.
[39] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CD27+ 세포를 포함한다.
[40] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CCD8+/CCR7+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함한다 (각각 포함).
[41] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체 +/CD8+/CD27+ 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용+/CD4+/CD27+를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 약 15 % 내지 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+이고; 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+이다.
[42] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 이다.
[43] 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CD27 및/또는 CD45RA의 발현의 부재 또는 발현에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체 +/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 이다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CCR7 및/또는 CD45RA의 발현 부재 또는 발현에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-이다.
[44] 일부 실시 양태에서, 치료 방법이 또한 제공되며, 여기서 상기 방법은 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 본원에 기재된 임의의 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 것을 포함한다.
[46] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 CCR7 및 CD27 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및 상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7 (CCR7+ 세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율은 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 다양하다.
[47] 본원에는 또한 치료 방법이 제공되며, 여기서 상기 방법은 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게, 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 CCR7 및 CD27 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및 상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7 (CCR7+ 세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율은 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 다양하다.
[48] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약)5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약)1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 이다.
[49] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[50] 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CD45RA의 발현 또는 발현의 부재에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 CD45RA- 세포의 수에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 세포는 추가적으로 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 수의 세포는 추가적으로 CD45RA- 세포이다.
[51] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 단위 용량 또는 수는 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함한다.
[52] 일부 실시 양태에서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 살아 있거나 생존 가능한 그러한 세포의 총 수이다. 일부 실시 양태에서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 네거티브 (apoptotic marker negative (-))인 그러한 세포의 총수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)이다.
[53] 일부 실시 양태에서, 방법은 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함한다.
[54] 일부 실시 양태에서, 복수의 개별 조성물은 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다.
[55] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을, 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여하는 것을 포함한다.
[56] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 방법은 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
[57] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암이다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 종양 항원이다.
[58] 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택된다.
[59] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다.
[60] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 scFv를 포함한다.
[61] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 내 신호 전달 영역 (region)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (p또는tion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
[62] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있다.
[63] 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 자가 (autologous)이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 동종이계 (allogeneic)이다.
[64] 일부 실시 양태에서, 대상체를 치료하기 위하여 조작된 T 세포의 용량 단위 (dose unit)를 결정하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서 재조합 수용체 및 CCR7을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 수용체+/CCR7+ 세포의 수, 백분율 또는 비율에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[65] 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 용량 단위를 결정하는 방법이 또한 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 다음을 포함한다: (a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CD27을 발현하는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계(수용체+/CD27+); 및 (b) 수용체+/CD27+ 세포의 수, 백분율 또는 비율에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계. 여기서 단위 용량은 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[66] 또한, 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 조성물의 제조 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서 재조합 수용체 및 CCR7 및 CD27을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+/CD27+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해 조성물의 전체 또는 일부 및 선택적으로 다른 용액으로 용기를 충전하는 단계를 포함하고, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 단위 용량의 T 세포 조성물을 달성하기 위해 조성물의 전체 또는 일부 및 선택적으로 다른 용액으로 용기를 충전하는 단계를 포함하고, 여기서 단위 용량은 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[67] 또한, 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은, T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 전부 또는 일부로 용기를 충전하는 단계를 포함하며, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[68] 또한, 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 전부 또는 일부로 용기를 충전하는 단계를 포함하며, 여기서 단위 용량은 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[69] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+ 세포를 포함한다.
[70] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 약 1 x 108 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 이하, 약 5 x 106 이하, 약 1 x 106 이하, 또는 약 5 x 105 이하의 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함한다.
[71] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이고; 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 이다.
[72] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[73] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 CD27 및/또는 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 여기서 단위 용량은 CD27+ 또는 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함한다.
[74] 일부 실시 양태에서, 방법은 치료 조성물에서 CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율, 선택적으로 CD27+ 또는 CD45RA-인 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 것을 추가로 포함한다.
[75] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함한다.
[75] 일부 실시 양태에서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA-이다.
[76] 또한, 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 단위 용량을 결정하는 방법이 본원에 제공된다. 상기 방법은 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서 재조합 수용체 및 CCR7 및 CD27을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+/CD27+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 것을 포함한다.
[77] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 수용체+/CCR7+/CD27+ 세포의 수, 백분율 또는 비에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 세포의 단위 용량은 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[78] 또한, 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 조성물의 제조 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서 재조합 수용체 및 CCR7 및 CD27을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+/CD27+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해 조성물의 전체 또는 일부 및 선택적으로 다른 용액으로 용기를 충전하는 단계를 포함하고, 여기서 단위 용량은 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[79] 또한, 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은, T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 전부 또는 일부로 용기를 충전하는 단계를 포함하고, 여기서 단위 용량은 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[80] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다.
[81] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다.
[82] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+이다.
[83] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[84] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 단위 용량은 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 치료 조성물에서 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율, 선택적으로 CD45RA-인 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계를 포함한다.
[85] 또한, 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물을 생성하는 방법이 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은, 대상체의 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하는 투입 (input) 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 방법은 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에 투입 조성물에서 세포를 자극하는 단계를 포함하고, 여기서 자극은 하나 이상의 자극 제제 (stimulating agents)의 존재 하에서 세포를 배양하는 것을 포함하며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성한다.
[86] 또한, 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물을 생성하는 방법이 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 것을 포함하고, 여기서 투입 조성물은 대상체의 생물학적 샘플로부터 제공된 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하며, 및 투입 조성물은, 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅함으로써 자극되며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하고; 및 여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성한다.
[87] 또한 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물을 생성하는 방법이 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 수 (target number)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 수의 CD4+ T 세포를 단리하여, 투입 조성물을 생성하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 투입 조성물에서 세포를 자극하는 단계를 포함하며, 여기서 자극은 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅하는 것을 포함하고, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성한다.
[88] 또한 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물을 생성하는 방법이 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 것을 포함하고, 여기서 투입 조성물은, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 수 (target number)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 수의 CD4+ T 세포를 단리함으로써 생성되고, 및 투입 조성물은, 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅함으로서 자극되며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하고; 및 여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 조성물을 생성한다.
[89] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함한다.
[90] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 목표 백분율의 CD4+/CCR7+, CD4+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD45RA-, CD4+/CCR7+/CD45RA+, CD8+/CCR7+, CD8+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포를 포함한다.
[91] 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포, 대 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포; 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함한다.
[92] 일부 실시 양태에서, 방법은 또한 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 단위 용량은 다음을 포함하는 산출 조성물의 전부 또는 일부를 포함한다: C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포; 분화 클러스터 27 (CD27)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 세포의 다른 서브세트; 또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포.
[93] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포, CD4+/CCR7+ 세포, CD8+/CD27+ 세포, CD4+/CD27+ 세포, CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다.
[94] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함한다 (각각 포함).
[95] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포; 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+; 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다.
[96] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포; 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+, 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다 (각각 포함).
[97] 일부 실시 양태에서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이고; 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 이고; 및/또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 이다.
[98] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 이거나 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임); 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 이거나 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임); 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 이거나 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임)을 포함한다.
[99] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 단위 용량은 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함한다.
[100] 일부 실시 양태에서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포이다.
[101] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 제공 또는 단리 전에, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 수, 부피당 수 (number per volume), 무게당 수 (number per weight) 및/또는 백분율을 결정하는 것을 추가로 포함한다.
[102] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포를 활성화시킬 수 있고; TCR 복합체를 통해 신호를 유도할 수 있고; 및/또는 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 증식을 유도할 수 있다.
[103] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 TCR 복합체의 구성원 (member)에 결합하고, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1 차 제제 (primary agent)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 T 세포 보조 자극 분자에 특이적으로 결합하는 2 차 제제를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40 또는 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 양태에서, 1 차 및 2 차 제제는 항체를 포함하고, 선택적으로 하나 이상의 자극 제제는 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 고체 지지체, 선택적으로 비드의 표면에 존재한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 CD3-결합 분자; CD28-결합 분자; 재조합 IL-2; 재조합 IL-15; 및 재조합 IL-7, 항원 수용체에 의해 특이적으로 인식된 항원을 포함하는 백신, 및 항원 수용체에 특이적으로 결합하는 항-이디오 타입 항체 또는 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된다.
[104] 일부 실시 양태에서, 치료 조성물은 본원에 기재된 임의의 조성물이다.
[105] 일부 실시 양태에서, 방법은 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다.
[106] 일부 실시 양태에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7 (CCR7+ 세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율은 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 다양하다.
[107] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함한다
[108] 일부 실시 양태에서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 살아 있거나 생존 가능한 그러한 세포의 총 수이다. 일부 실시 양태에서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 네거티브 (apoptotic marker negative (-))인 그러한 세포의 총수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)이다.
[109] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함한다.
[110] 일부 실시 양태에서, 복수의 개별 조성물은 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다.
[111] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을, 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여하는 단계를 포함한다.
[112] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
[113] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암이다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 종양 항원이다.
[114] 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택된다.
[115] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 scFv를 포함한다.
[116] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 내 신호 전달 영역 (region)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
[117] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함한다.
[118] 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있다.
[119] 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 자가 (autologous)이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 동종이계 (allogeneic)이다.
[120] 본원에 제공된 임의의 실시 양태의 일부 측면에서, 제공된 치료 조성물 또는 단위 용량에서의 세포는, 재조합 수용체의 활성 또는 존재에 의존하는 특정 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-의존적 활성, 예를 들어 재조합 수용체에 의해 인식되는 항원의 존재하에 유도되거나 매개되는 활성을 비롯한 특정 기능적 특성과 관련된다. 일부 실시 양태에서, 기능적 속성은 더 높은 수준의 사이토카인, 예를 들어 IL-2의 생성을 포함한다. 본원에 제공된 임의의 실시 양태의 일부 측면에서, 기능적 속성은 더 낮은 수준의 사이토카인, 예를 들어 IFNγ 또는 IL-13의 생성을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 이러한 사이토카인의 더 높거나 더 낮은 수준은 특정 표현형의 비-확정된 (non-defined) 수의 세포를 함유하고/하거나 특정 표현형의 세포가 본원에 제공된 일부 실시 양태에 따른 특정 확정 비율 (particular defined ratio)이 아닌 기준 조성물 (reference composition)과 관련이 있다. 일부 실시 양태에서, 참조 조성물은 이펙터 또는 분화된 표현형을 갖는 더 많은 빈도 또는 수의 T 세포를 함유하는 것이다.
[121] 일부 측면에서, 본원에 제공된 임의의 실시 양태에 따라 대상체 그룹 중 하나에 치료 조성물 또는 단위 용량의 투여시, 대상체 그룹 중 다수의 대상체는 투여 후 효능의 증가, 지속성 및/또는 독성의 감소와 관련된 하나 이상의 특징을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 대상체 그룹 중 복수의 대상체는 약동학적 파라미터, 독성 또는 부작용의 발생 가능성 감소 및/또는 특정 반응, 효능 또는 생존 결과 (survival outcome)를 나타내거나 및/또는 이와 연관된다. 일부 실시 양태에서, 대상체는 질병 또는 병태가 있다고 의심되는 대상체이다. 일부 실시 양태에서, 특정 표현형의 비-확정된 (non-defined) 수의 세포를 함유하고/하거나 특정 표현형의 세포가 본원에 제공된 일부 실시 양태에 따른 특정 확정 비율 (defined ratio)이 아닌 기준 조성물 (reference composition)로 치료된 유사한 대상체 그룹과 비교하여 하나 이상의 특징 (features)이 개선된다.
[122] 일부 측면에서, 본원에 제공된 임의의 실시 양태에 따라 대상체 그룹 중 하나에 치료 조성물 또는 단위 용량을 투여시, 대상체 그룹 중 다수의 대상체가 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax)과 같은 특정 약동학 파라미터, 최소 혈장 농도 (즉, 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 용량 사이의 최소 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기 (T1/2) 및 곡선 아래 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도 대 시간을 플로팅함으로써 생성된 곡선 아래 면적; AUC)을 나타낼 가능성이 있거나 및/또는 이와 관련이 있다. 일부 측면에서, 치료 조성물 또는 단위 용량의 투여시, 그룹 중 다수의 대상체는 투여된 세포의 증가된 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax)를 나타낼 가능성이 있거나 및/또는 이와 관련이 있다. 일부 실시 양태에서, 치료 조성물의 세포의 장기 지속성 또는 단위 용량은 그룹 중 다수의 대상체에서 관찰된다.
[123] 일부 측면에서, 본원에 제공된 임의의 실시 양태에 따라 대상체 그룹 중 하나에 치료 조성물 또는 단위 용량 투여시, 대상체 그룹 중 다수의 대상체는 독성 또는 부작용, 예를 들어 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 중증 CRS (sCRS) 또는 신경 독성 (NT) 또는 증증 신경 독성 (sNT)의 발생 가능성의 감소를 나타낼 가능성이 있거나 및/또는 이와 관련이 있다.
[124] 일부 측면에서, 본원에 제공된 임의의 실시 양태에 따른 대상체 그룹 중 하나에 치료 조성물 또는 단위 용량 투여시, 대상체 그룹 중 다수의 대상체는 부분 반응 (partial response, PR) 또는 부분 완화 (partial remission), 완전 반응 (complete response, CR) 또는 완전 완화 (complete remission), 무진행 생존 (progression-free survival, PFS), 객관적 반응 (objective response, OR), 전체 생존 (overall survival, OS), 무사건 생존 (event-free survival,EFS), 증가된 반응 지속 시간 (increased duration of response, DOR) 또는 증가된 생존율을 나타낼 가능성이 있거나 및/또는 이와 관련이 있다. 일부 측면에서, 치료 조성물 또는 단위 용량의 투여시, 그룹 중 다수의 대상체는 증가된 무진행 생존 (progression-free survival PFS)을 나타낼 가능성이 있거나 및/또는 이와 관련이 있다.
[125] 제공된 실시 양태 중 임의의 일부 실시 양태에서, 제조 물품에 따른 세포의 단위 용량의 투여 및/또는 용도 및/또는 방법은, 예를 들어, 방법에 따라 또는 제조 물품에서 제공되는 정보에 따라 치료된 대상체 집단에서, 특정 결과를 달성하고 및/또는 독성의 위험 감소와 관련된다. 일부 측면에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35 %, 적어도 40 %, 적어도 50 % 또는 적어도 60 %는 완전 반응 (CR), 완전 완화, 완전 완화, 무진행 생존 (PFS), 객관적 반응 (OR), 전반적인 생존 (OS), 무사건 생존 (EFS) 또는 3 개월 이상, 6 개월 이상 또는 12 개월 이상 지속되는 반응을 달성한다. 제공된 방법 중 임의의 방법의 특정 실시 양태에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50 % 이상은 3 등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (cytokine release syndrome, CRS) 또는 3 등급 이상의 신경 독성을 나타내지 않는다. 일부 실시 양태에서, 이러한 대상체는 조기 발병 (early onset)의 CRS 및/또는 신경 독성을 나타내지 않는다. 예를 들어 투여 개시 후 3 일 이전에 CRS의 발병을 나타내지 않으며 및/또는 투여 개시 후 5 일 이전에 신경 독성의 발병을 나타내지 않는다. 제공된 방법 중 임의의 일부 실시 양태에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 30 %, 35 %, 40 %, 50 % 이상은 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후군 (cytokine release syndrome, CRS) 또는 신경 독성을 나타내지 않는다.
[126] 또한 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생성된 산출 조성물이 제공된다.
[127] 또한 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 결정되거나 생성된 단위 용량이 제공된다.
[128] 또한 본원에 기재된 임의의 단위 용량을 포함하는 약학적 조성물이 제공된다. 일부 실시 양태에서, 약학적 조성물은 또한 약학적 담체를 포함한다.
[129] 또한 본원에 기재된 임의의 산출 조성물, 단위 용량 또는 약학적 조성물의 전부 또는 일부를 포유동물 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다.
[130] 또한 암을 치료하기 위한 본원에 기재된 임의의 산출 조성물, 단위 용량 또는 약학적 조성물의 전부 또는 일부의 용도가 제공된다.
[131] 또한 암을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 본원에 기재된 임의의 산출 조성물, 단위 용량 또는 약학적 조성물의 전부 또는 일부의 용도가 제공된다.
[132] 또한 암 치료에 사용하기 위한 본원에 기재된 임의의 산출 조성물, 단위 용량 또는 약학적 조성물의 전부 또는 일부가 제공된다.
[133] 항원에 결합하는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 치료 세포 조성물이 본원에 제공되며, 여기서, 자극 제제로 자극 후: 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 인터루킨 2 (IL-2) 및/또는 TNF-알파로부터 선택된 사이토카인을 생성할 수 있으며; 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상은 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성 (polyfunctional)이다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 인터루킨 2 (IL-2) 및/또는 TNF-알파로부터 선택된 사이토카인을 생산할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상은 인터페론-감마 (IFN- 감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성 (polyfunctional)이다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상은 사이토카인 인터페론-감마 (IFN- 감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파를 생산하는 다작용성이다.
[134] 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제이다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 (non-specific) 또는 비-항원-의존성 (non-antigen-dependent) T 세포 자극 제제는 다클론성 (polyclonal) 자극 제제이다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 또는 비-항원-의존성 자극 제제는 PMA/이오노마이신, 항-CD3/항-CD28, 피토헤마글루티닌 (phytohemagglutinin, PHA) 또는 콘카나발린 A (concanavalin A, ConA)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제는 PMA/이오노마이신을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 재조합 수용체에 특이적으로 결합하고, 선택적으로 여기서 자극 제제는 항원-특이적 자극 제제이고/이거나 재조합 수용체에 의해 특이적으로 인식되는 항원 또는 이의 일부를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인의 생산은 세포내 사이토카인 어세이에서 측정된다.
[135] 일부 실시 양태에서, 상기 조성물은 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 % 가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA의 표면 발현에 대해 추가적으로 음성인 것을 함유한다.
[136] 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 세포이다. 일부 실시 양태에서, 대상체는 암을 가지며, 선택적으로 암은 백혈병 또는 림프종이다. 일부 실시 양태에서, 대상체는 세포를 수득할 때 높은 종양 부담 (high tumor burden)을 갖는 것으로 확인되거나 알려진 대상체이다. 일부 실시 양태에서, 대상체에서 종양의 생성물 크기의 합 (sum of product dimensions, SPD)이 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 이상이면, 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다; 및/또는 대상체로부터의 생물학적 시료, 선택적으로 혈청 시료 중 C 반응성 단백질 (C reactive protein, CRP)이 리터당 (약) 5 밀리그램, 리터당 10 밀리그램, 리터당 15 밀리그램, 20 리터당 밀리그램, 리터당 25 밀리그램, 리터당 30 밀리그램, 리터당 40 밀리그램 또는 리터당 50 밀리그램 이상이면 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 대상체에서 종양의 SPD가 (약) 50 cm2 이상인 경우 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다. 일부 실시 양태에서, CRP가 생물학적 샘플에서 리터당 (약) 20 밀리그램 이상인 경우 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다.
[137] 일부 실시 양태에서, 치료 세포 조성물에는 CD4+ T 세포로 농축되고 및/또는 조작된 (engineered) 조성물 중 총 재조합 수용체+ 세포의 적어도 (약) 60 %, 적어도 (약) 70 %, 적어도 (약) 80 %, 적어도 (약) 90 %, 적어도 (약) 95 %, 또는 적어도 (약) 97 %, 또는 조성물 중 총 세포의 약 60 % 내지 99 %, 약 75 % 내지 99 %, 약 85 % 내지 99 %, 또는 약 90 % 내지 99 % (각각 포함)는 CD4+ 이다. 일부 실시 양태에서, 치료 세포 조성물은 CD3+ T 세포가 풍부하고, CD4+ 및 CD8+ T 세포로 농축되고 및/또는 조작된 (engineered) 조성물 중 총 재조합 수용체+ 세포의 적어도 (약) 60 %, 적어도 (약) 70 %, 적어도 (약) 80 %, 적어도 (약) 90 %, 적어도 (약) 95 %, 또는 적어도 (약) 97 %, 또는 조성물 중 총 세포의 약 60 % 내지 99 %, 약 75 % 내지 99 %, 약 85 % 내지 99 %, 또는 약 90 % 내지 99 % (각각 포함)는 CD3+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 이다. 일부 실시 양태에서, 치료 세포 조성물은 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1, 선택적으로 대략 1 : 2 내지 2 : 1 인 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율로 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유한다.
[138] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 질병, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 이에 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 질병, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환, 또는 종양 또는 암이다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 종양 항원이다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 티로시나아제 관련 단백질 1 (TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 알려져 있음), 티로시나아제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라아제, 도파크롬 델타-이소머라아제 또는 DCT로도 알려져 있음), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택된다.
[139] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인 및 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 scFv를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있다.
[140] 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 자가 (autologous)이다.
[141] 본원에는, 본원에 기재된 치료 세포 조성물을 함유하는 용기를 비롯한 제조 물품 및/또는 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서가 제공된다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 복수의 개별 조성물에 포함된 복수의 단위 용량을 투여하는 것을 명시한다. 일부 실시 양태에서, 복수의 개별 조성물은 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함하며, 상기 제 2 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 세포 또는 질병 또는 병태에 의해 발현된 세포에 대해 또는 항원에 대해 특이적인 재조합 수용체를 함유하고, 선택적으로 제 2 조성물은 본원에 기재된 임의의 조성물이다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 48 시간 이내의 간격으로, 36 시간 이내의 간격으로, 24 시간 이내의 간격으로, 12 시간 이내의 간격으로, 6 시간 이내의 간격으로, 2 시간 이내의 간격으로, 1 시간 이내의 간격으로 또는 동시에 투여하는 것을 명시한다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 CD4+ 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 것을 명시한다.
[142] 본원에 기재된 치료 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시 양태에서, 치료 조성물은 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 함유하는 제 1 치료 세포 조성물이고, 하나 이상의 단위 용량은 CD8+ T 세포 및 CD4+ 세포 중 다른 하나를 함유하는 제 2 치료 세포 조성물을 추가로 함유하고, 상기 제 2 조성물은 질병 또는 병태에 의해 발현된 항원 또는 세포에 대해 특이적인 재조합 수용체 또는 재조합 수용체를 발현하는 세포를 함유하고, 선택적으로 여기서 제 2 조성물은 본원에 기재된 임의의 조성물이다.
[143] 일부 실시 양태에서, 제 2 치료 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 % 가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA의 표면 발현에 대해 추가적으로 음성인 것을 함유한다. 일부 실시 양태에서, 제 2 치료 세포 조성물은 CD8+ T 세포로 농축되고, 조작된 조성물 중 총 재조합 수용체+ 세포의 적어도 (약) 60 %, 적어도 (약) 70 %, 적어도 (약) 80 %, 적어도 (약) 90 %, 적어도 (약) 95 %, 또는 적어도 (약) 97 %, 또는 조성물 중 총 세포의 약 60 % 내지 99 %, 약 75 % 내지 99 %, 약 85 % 내지 99 %, 또는 약 90 % 내지 99 % (각각 포함)는 CD8+ 이다.
[144]
일부 실시 양태에서, 제 1 치료 조성물 및 제 2 치료 조성물은 서로 각각 (약) 48 시간 이내에, (약) 36 시간 이내에,(약) 36 시간 이내에, (약) 24 시간 이내에, (약) 12 시간 이내에, (약) 6 시간 이내에, (약) 2 시간 이내에 또는 (약) 1 시간 이내에 투여된다. 일부 실시 양태에서, CD8+ T 세포를 함유하는 제 2 치료 세포 조성물은 CD4+ T 세포를 함유하는 제 1 조성물 전에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 단위 용량의 세포는 정해진 비율의 CD4+ 대 CD8+ T 세포를 함유하며, 이 비율은 대략 1 : 3 및 대략 3 : 1, 선택적으로 대략 1 : 2 및 2 : 1, 선택적으로 (약) 1 : 1이다.
[145] 본원은 다음의 방법을 포함하는 대상체의 치료 방법을 제공한다: (A) 조성물에서 조작된 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자 (factor)에 대해 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물을 분석하는 단계, 상기 인자는 (i) CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA에 대해 표면 음성인 재조합 수용체를 발현하는 T 세포의 백분율; 및/또는 (ii) 자극 제제로 자극 후 IL-2, TNF-알파 및/또는 IFN-감마를 생성할 수 있는 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ T 세포의 백분율로부터 선택된다; 및 (B) 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 요법을 투여하는 단계, 상기 투여하는 단계는 다음에서 선택된다: (1) 조작된 T 세포 조성물의 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자가 임계 값 (threshold value) 이상인 경우, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포를 대상체에게 투여하는 단계; 또는 (2) 조작된 T 세포 조성물의 세포의 기능 또는 표현형을 나타내는 인자가 인자의 임계 값 미만인 경우, 다음에서 선택되는 요법을 투여하는 단계: (a) 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포 및 대상체에서 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제, (b) 조작된 세포 조성물의 세포의 증가된 용량 (dose), 선택적으로 동일한 질병 또는 병태를 갖지만 인자의 임계 값 또는 그 이상을 나타내는 유사한 양태에 있는 (similarly situated) 대상체에게 투여되는 하나 이상의 단위 용량과 비교하여 증가된 용량; 또는 (c) 하나 이상의 단위 용량의 조작된 세포 조성물 이외의 질병 또는 병태를 치료하기 위한 대안적 치료법, 여기서 상기 인자의 임계 값은 다음에서 선택된다: (i) 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는 (ii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는 (iii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성이다.
[146] 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 요법을 투여하는 단계를 포함하는 대상체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 상기 투여하는 단계는 다음에서 선택된다: (1) 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물의 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자가 임계 값 (threshold value) 이상인 경우, 조작된 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포를 대상체에게 투여하는 단계; 또는 (2) 조작된 T 세포 조성물의 세포의 기능 또는 표현형을 나타내는 인자가 인자의 임계 값 미만인 경우, 다음에서 선택되는 요법을 투여하는 단계: (a) 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포 및 대상체에서 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제, (b) 조작된 세포 조성물의 세포의 증가된 용량 (dose), 선택적으로 동일한 질병 또는 병태를 갖지만 인자의 임계 값 또는 그 이상을 나타내는 유사한 양태의 (similarly situated) 대상체에게 투여되는 하나 이상의 단위 용량과 비교하여 증가된 용량; 또는 (c) 조작된 세포 조성물의 용량 (dose) 이외의 질병 또는 병태를 치료하기 위한 대안적 치료법, 여기서 상기 인자의 임계 값은 다음에서 선택된다: (i) 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는 (ii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는 (iii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성이다.
[147] 일부 실시 양태에서, 세포 조성물의 세포는 대상체에 대해 자가 조직이다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 35 % 이상, 40 % 이상, 50 % 이상, 60 % 이상 또는 70 % 이상 또는 75 % 이상이 하나 이상의 단위 용량의 투여 후 3 개월 이상, 4 개월 이상, 5 개월 이상, 6 개월 이상, 9 개월 이상 또는 12 개월 이상 무 진행 생존 (progression free survival)을 달성한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법에 따라 치료되는 대상체의 35 % 이상, 40 % 이상, 50 % 이상, 60 % 이상 또는 70 % 이상 또는 75 % 이상이 하나 이상의 단위 용량의 투여 후 (약) 3 개월 이상, (약) 4 개월 이상, (약) 4 개월 이상, (약) 5 개월 이상, (약) 6 개월 이상 또는 (약) 6 개월 이상, (약) 9 개월 이상 또는 (약) 12 개월 이상 동안에 질병의 진행 (disease progression)을 달성하지 않는다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체는, 동일한 질병 또는 병태를 갖고 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유사한 용량의 자가 세포 조성물이 투여되지만 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자가 나타내는 임계 값 이하인 유사한 양태에 있는 대상체의 그룹과 비교하여, 생물학적 샘플, 선택적으로 혈액 또는 혈청 샘플에 있어서의 세포 조성물의 세포의 평균적으로 개선된 약동학적 특성 (pharmacokinetic property)을 달성한다. 일부 실시 양태에서, 약동학적 특성은 생물학적 샘플에서 시간에 따른 총 노출 (AUC) 또는 세포의 피크 수이다.
[148] 치료 T 세포 조성물에 대한 반응 가능성을 예측하는 방법이 본원에 제공되며, 이 방법은 다음을 포함한다: (a) 조성물에서 조작된 세포의 기능 또는 표현형을 나타내는 인자에 대해 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물을 분석하는 단계, 상기 인자는 (i) CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA에 대해 표면 음성인 재조합 수용체를 발현하는 T 세포의 백분율; 및/또는 (ii) 자극 제제로 자극 후 IL-2, TNF-알파 및/또는 IFN-감마를 생성할 수 있는 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ T 세포의 백분율로부터 선택된다; 및 (b) 조작된 세포의 용량을 함유하는 세포 요법의 투여 후 반응 가능성을 결정하는 단계로서,
여기서 인자가, 선택적으로 요법 투여 후 적어도 3개월 동안에, 지속성 반응 (durable response) 또는 무진행 생존 (progression free survival)을 달성할 가능성이 있는 대상체를 식별하는 임계 값 이상인 경우; 또는 인자가 요법에 대한 지속성 반응 또는 무진행 생존을 나타낼 가능성이 없는 대상체를 식별하는 임계 값 미만인 경우, 여기서 상기 인자가 임계 값이거나 그 이상인 경우, 상기 대상체를 지속 반응 (durable response) 또는 무진행 생존 (progression free survival)을 선택적으로 요법 투여 후 적어도 3개월 동안 달성할 가능성이 있는 것으로 식별하나; 상기 인자가 상기 임계 값 미만인 경우, 상기 대상체를 요법에 대한 지속성 반응 또는 무진행 생존을 나타낼 가능성이 없는 것으로 식별함;을 포함하며,
여기서 인자의 임계 값은 다음으로부터 선택된다:(i) 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는 (ii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는 (iii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성이다.
[149] 일부 실시 양태에서, 세포 조성물의 세포는 대상체에 대해 자가이다. 일부 실시 양태에서, 대상체가 요법에 대한 지속적 반응 또는 무진행 생존을 달성할 가능성이 있는 것으로 확인된 경우, 대상체에게 조작된 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포를 투여한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 T 세포 (수용체+/T 세포) 또는 총 T 세포를 포함한다 (각각 포함). 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 단위 용량은 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/T 세포 또는 총 T 세포를 함유한다.
[150] 일부 실시 양태에서, 대상체가 지속적 반응 (durable response) 또는 무진행 생존을 달성할 가능성이 없는 것으로 확인된 경우, 대상체에게 (a) 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포 및 대상체에서 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제, (b) 조작된 세포 조성물의 세포의 증가된 용량 (dose), 선택적으로 동일한 질병 또는 병태를 갖지만 인자의 임계 값 또는 그 이상을 나타내는 유사한 양태의 (similarly situated) 대상체에게 투여되는 하나 이상의 단위 용량과 비교하여 증가된 용량; 또는 (c) 조작된 세포 조성물의 용량 (dose) 이외의 질병 또는 병태를 치료하기 위한 대안적 치료법으로부터 선택된 요법을 투여한다.
[151] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 조작된 세포 조성물의 세포의 용량, 및 대상체에서 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제를 함유하는 요법의 투여를 포함하고, 상기 제제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억제제 (immune checkpoint inhibitor), 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억제제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다. 일부 실시 양태에서, 상기 제제는 치료 T 세포 조성물의 투여 전, 동시에 또는 투여 후에 투여된다.
[152] 일부 실시 양태에서, 대상체는 분석 시점 및/또는 투여 전에 높은 종양 부담 (high tumor burden)을 갖는 것으로 확인되거나 알려진 대상체이다. 일부 실시 양태에서, 대상체에서 종양의 생성물 크기의 합 (sum of product dimensions, SPD)이 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 이상이면, 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다; 및/또는 대상체로부터의 생물학적 시료, 선택적으로 혈청 시료 중 C 반응성 단백질 (C reactive protein, CRP)이 리터당 (약) 5 밀리그램, 리터당 10 밀리그램, 리터당 15 밀리그램, 20 리터당 밀리그램, 리터당 25 밀리그램, 리터당 30 밀리그램, 리터당 40 밀리그램 또는 리터당 50 밀리그램 이상이면 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 대상체에서 종양의 SPD가 (약) 50 cm2 이상인 경우 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다. 일부 실시 양태에서, CRP가 생물학적 샘플에서 리터당 (약) 20 밀리그램 이상인 경우 대상체는 높은 종양 부담을 갖는다.
[153] 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제이다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 (non-specific) 또는 비-항원-의존성 (non-antigen-dependent) T 세포 자극 제제는 다클론성 (polyclonal) 자극 제제이다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 또는 비-항원-의존성 자극 제제는 PMA/이오노마이신, 항-CD3/항-CD28, 피토헤마글루티닌 (phytohemagglutinin, PHA) 또는 콘카나발린 A (concanavalin A, ConA)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제는 PMA/이오노마이신을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 재조합 수용체에 특이적으로 결합하고, 선택적으로 여기서 자극 제제는 항원-특이적 자극 제제이고/이거나 재조합 수용체에 의해 특이적으로 인식되는 항원 또는 이의 일부를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인의 생산은 세포내 사이토카인 어세이에서 측정된다.
[154] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암이다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 종양 항원이다. 표적 항원은 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 티로시나아제 관련 단백질 1 (TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 알려져 있음), 티로시나아제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라아제, 도파크롬 델타-이소머라아제 또는 DCT로도 알려져 있음), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택된다.
[155] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인 및 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단편은 scFv를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있다.
[156] 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체에 대해 자가이다.
[157] 치료 T 세포 조성물의 제조 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 자극 조건 하에서 투입 조성물을 인큐베이팅하여 자극된 조성물을 생성하는 단계, 여기서 투입 조성물은 아포토틱 마커를 발현하지 않는 (아포토틱 마커 음성 (-)) 정해진 수의 T 세포를 함유함; 및 (b) 자극된 조성물로부터 세포로 재조합 수용체를 도입하여 조작된 세포 조성물을 생성하는 단계로서, 상기 도입은 자극된 조성물의 세포를 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제제와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 아포토틱 마커 음성 T 세포는 아포토틱 마커 음성 CD3+ 세포, 아포토틱 마커 음성 CD8+ 세포, 아포토틱 마커 음성 음성 CD4+ 세포, 또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ 세포 및 아포토틱 마커 음성 CD4+ 세포이거나 이를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 아포토틱 마커는 아넥신 V (Annexin V)이다. 일부 실시 양태에서, 아포토틱 마커는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)이다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 T 세포는 적어도 50 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 T 세포는 적어도 100 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 T 세포는 (약) 100 x 106 내지 (약) 500 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 T 세포는 적어도 (약) 300 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 함유한다.
[158] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물 중 총 T 세포의 백분율로서 아포토틱 마커 음성 T 세포의 백분율은 (약) 70 % 이상, (약) 80 % 이상, (약) 90 % 이상, 또는 (약) 95 % 이상이다. 일부 실시 양태에서, 인큐베이팅, 분리, 선별 또는 농축 (강화)하기 전에, 생물학적 샘플로부터 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 수득한다.
[159] 치료 T 세포 조성물의 제조 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 다음을 포함한다: (a) 아포토틱 마커를 발현하지 않는(아포토틱 마커 음성 (-)) T 세포 집단, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 발현하지 않는 T 세포를 단리, 선택 또는 농축하여, 투입 조성물을 얻는 단계; (b) 자극 조건 하에서 투입 조성물을 인큐베이팅하여 자극된 조성물을 생성하는 단계; 및 (c) 자극된 조성물로부터 세포로 재조합 수용체를 도입하여 조작된 세포 조성물을 생성하는 단계로서, 상기 도입은 자극된 조성물의 세포를 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제제와 접촉시키는 단계를 포함한다.
[160] 일부 실시 양태에서, 생물학적 샘플 1 차 T 세포는 대상체로부터 수득된다. 일부 실시 양태에서, 대상체는 인간 대상체이다. 일부 실시 양태에서, 생물학적 샘플은 전혈 샘플, 버피 코트 (buffy coat) 샘플, 말초혈액단 세포 (PBMC) 샘플, 분획화되지 않은 T 세포 샘플, 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 성분채집 생성물 (apheresis product) 또는 백혈구성분채집 생성물 (leukapheresis product)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 생물학적 샘플은 성분채집 생성물 또는 백혈구성분채집 생성물을 함유한다. 일부 실시 양태에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 후 36 시간 이내에 생물학적 샘플로부터 단리, 선별 또는 농축된다. 일부 실시 양태에서, 생물학적 샘플은 대상체로부터 수득된 후 36 시간 이내에 동결보호제의 존재 하에 동결 건조되고, 세포를 단리, 선별 또는 농축시키기 전에 해동되고, 선택적으로 동결 건조 샘플은 세포를 단리, 선별 또는 농축시키기 직전에 또는 6 시간 이내에, 4 시간 이내에, 2 시간 이내에 또는 1 시간 이내에 해동된다.
[161] 일부 실시 양태에서, 인큐베이션은 하나 이상의 사이토카인의 존재하에서, 선택적으로 무혈청 배지 (serum free medium)에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 IL-2, 재조합 IL-7 및/또는 재조합 IL-15로부터 선택된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 10 내지 200 IU / mL 재조합 IL-2; 100 IU / mL 내지 1,000 IU / mL 재조합 IL-7; 및/또는 10 내지 200 IU / mL 재조합 IL-15를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 자극 시약은 TCR 복합체의 구성원에 특이적으로 결합하는, 선택적으로는 CD3에 특이적으로 결합하는 1 차 제제를 함유하며, 선택적으로 여기서 1 차 제제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시 양태에서, 자극 시약은 T 세포 보조자극 (costimulatory) 분자에 특이적으로 결합하는 2 차 제제를 추가로 함유하며, 임의로 보조자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40 또는 ICOS로부터 선택되고, 선택적으로 여기서 제제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 실시 양태에서, 자극 시약은 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체, 또는 이의 항원-결합 단편과의 인큐베이션을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 1 차 제제 및/또는 2 차 제제는 고체 지지체의 표면에 존재한다. 일부 실시 양태에서, 고체 지지체는 비드이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서에서, 1 차 제제 및 2 차 제제는 복수의 스트렙타비딘 (streptavidin) 또는 스트렙타비딘 뮤테인 (streptavidin mutein) 분자를 포함하는 올리고머 입자 시약의 표면에 고정되거나 가역적으로 결합된다.
[162] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 자극 조건하에 12 시간 내지 36 시간 동안, 선택적으로 (약) 24 시간 동안 인큐베이팅된다. 일부 실시 양태에서, 접촉은 선택적으로 레트로바이러스 벡터, 선택적으로 렌티바이러스 벡터를 사용한 바이러스 형질도입에 의해 수행된다.
[163] 일부 실시 양태에서, 방법은 조작된 세포의 증식 (proliferation) 및/또는 증폭 (expansion)을 촉진하는 조건 하에서 조작된 조성물을 배양하여 조작된 T 세포를 포함하는 산출 조성물 (output composition)을 생성하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 배양은 선택적으로 무혈청 배지에서 하나 이상의 사이토카인의 존재하에 수행된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 IL-2, 재조합 IL-7 및/또는 재조합 IL-15로부터 선택된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 50 내지 400 IU / mL 재조합 IL-2; 100 IU / mL 내지 2,000 IU / mL 재조합 IL-7; 및/또는 50 내지 400 IU / mL 재조합 IL-15를 포함한다.
[164] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 2 : 1 내지 1 : 2의 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비로 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 함유하고; 또는 투입 조성물은 2 : 1 내지 1 : 2의 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비로 아포토틱 마커 음성 CD4+ T 세포 및 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 함유한다. 일부 실시 양태에서, CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포는 동일한 생물학적 샘플 또는 이로부터의 샘플로부터 개별적으로 선별, 단리 또는 농축되고 인큐베이션 전에 조합된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다.
[165] 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 다음을 함유한다: 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성이다. 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제이다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 (non-specific) 또는 비-항원-의존성 (non-antigen-dependent) T 세포 자극 제제는 다클론성 (polyclonal) 자극 제제이다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 또는 비-항원-의존성 자극 제제는 PMA/이오노마이신, 항-CD3/항-CD28, 피토헤마글루티닌 (phytohemagglutinin, PHA) 또는 콘카나발린 A (concanavalin A, ConA)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제는 PMA/이오노마이신을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 재조합 수용체에 특이적으로 결합하고, 선택적으로 여기서 자극 제제는 항원-특이적 자극 제제이고/이거나 재조합 수용체에 의해 특이적으로 인식되는 항원 또는 이의 일부를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인의 생산은 세포내 사이토카인 어세이에서 측정된다.
[166] 도 1A는 DL1 및 DL2에서의 투여를 위한 CAR T 세포 조성물에 존재하는 CD3+CAR+ T 세포의 수를 나타낸다. 도 1B는 DL1 및 DL2에서의 투여를 위한 CAR T 세포 조성물에 존재하는 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ 세포, CD4+CAR+TNF-α+ 세포 및 CD8+CAR+TNF-α+, CD4+CAR+CCR7+ 세포 및 CD8+CAR+CCR7+ 세포의 수를 나타낸다. 도 1C는 DL1 및 DL2에서의 투여를 위한 CAR T 세포 조성물에 존재하는 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ 세포, CD4+CAR+CCR7+ 세포 및 CD8+CAR+CCR7+ 세포의 수를 나타낸다.
[167] 도 2는 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 87 명의 대상체로부터의 혈액 샘플에서, 절단된 (truncated) 수용체에 특이적인 항체를 사용하여 유세포 분석에 의해 평가된 CAR-발현 CD3+ 세포/μL 혈액의 중앙값 (±사분위수) 수 (CD3, 원형; N = 87); 또는 CAR를 인코딩하는 벡터에 존재하는 우드척 간염 바이러스 (woodchuck hepatitis virus) 후-전사 조절 요소 (WPRE)에 특이적인 프라이머를 사용하여 정량적 중합 효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 평가된 통합된 (integrated) CAR 트랜스진/㎍ 게놈 DNA의 중앙값(±사분위수) 카피 (copies) 수 (qPCR, 정사각형; N = 85)를 도시한다. 유세포 분석에서 CAR+ 세포 검출에 대한 컷오프는 CAR+ 게이트에서 ≥ 25 이벤트로 설정되었고, qPCR에 대한 검출 한계는 게놈 DNA μg 당 CAR 트랜스진의 ≥ 12.5 카피(copies)이었다.
[168] 도 3A는 각각 CD4+ CAR+ 세포 및 CD8+ CAR+ 세포의 약동학적 파라미터에 대한 CCR7+ 세포 백분율 (CD4+ CAR+ 및 CD8+ CAR+ 세포 집단 중에)의 플롯을 나타낸다. CD4+ CAR+ (세포 요법이 투여된 대상체에 대해 혈액에서 CD4+ CAR+의 AUC0-28 또는 CD4+ CAR+ 세포의 AUC0-28로 표시됨). 각 도트는 개별 환자를 나타내며, 개별 도트의 음영은 환자가 용량 수준 1 (dose level 1, DL1) 또는 용량 수준 2 (dose level 2, DL2)를 받았는지 여부를 나타낸다. 도 3B는 전처리 종양 부담 (전처리(pre-treatme) 림프구고갈 (lymphodepleting) 화학요법시 평가된)이 높거나 (이 평가에서, 50 cm2 이상의 생성물 크기의 합 (sum of the products of diameters, SPD) 값으로 표시됨) 또는 낮은 것 (50 cm2 미만의 SPD 값)으로 관찰된 대상체에 대해 별도로 표시된, 유사한 플롯을 보여준다. 도 3C는 상관 계수 (correlation coefficients) 및 관련 p-값 (associated p-values)과 함께, 세포 요법을 투여받은 대상체의 혈액에서의 CD4+ CAR+ 의 AUC0-28 또는 CD8+ CAR+ 세포의 AUC0-28에 대한 CD4+CAR+CCR7+ 세포 및 CD8+CAR+CCR7+ 세포의 수의 플롯을 도시한다. 도 3D-3J는 상관 계수 (correlation coefficients) 및 관련 p-값 (associated p-values)과 함께, CD4+ CAR+ T T 세포 (도 3A, 3D-3F) 및 CD8+ CAR+ T 세포 (도 3G-3J)의 약동학 파라미터 (AUC0-28 및 Cmax)에 대한 CCR7+ 또는 CCR7+CD27+CD4+ 또는 CD8+CAR+ T 세포 백분율의 플롯을 도시한다.
[169] 도 4A-4B는 CAR (CD19)에 의해 인식된 항원으로 자극시의 CD4+ CAR+ 조성물에 의한 IFNγ (도 4A) 및 IL-2 (도 4B) 분비에 대한 CD4+ CAR+ 세포 중에 CCR7+CD27+ 세포의 백분율의 플롯을 도시한다.
[170] 도 5A-5B는 CAR (CD19)에 의해 인식된 항원으로 자극시의 CD4+ CAR+ 조성물에 의한 IL-5 (도 5A) 및 IL-13 (도 5B) 분비에 대한 CD8+ CAR+ 세포 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율의 플롯을 도시한다.
[171] 도 6A-6D는 특정 임계 값 수준 이상 또는 이하인 CD4+ CAR+ T 세포 (무진행 생존에 대한 도 6A, 반응 지속 기간에 대한 도 6C) 중 또는 CD8+ CAR+ T 세포 (무진행 생존에 대한 도 6B, 반응 지속 기간에 대한 도 6D) 중 CCR7+CD27+ CAR+ T 세포의 백분율을 함유하는 조성물이 투여된 그룹으로 분할된, CAR+ T 세포 조성물이 투여된 대상체에 대한 Kaplan-Meier 생존곡선을 보여준다.
[172] 도 7A-7B는 대상체가 사이토카인 방출 증후군 (CRS; 등급 0 대 등급 1이상)을 발생시키는지 여부의 함수로서 대상체에 대해 투여된 조성물에서 CD4+CAR+ 세포 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율 (도 7A) 또는 CD4+CAR+ 세포에 의한 IFNγ 분비 (도 7B)를 도시하는 박스 플롯을 도시한다. 도 7C-7D는 대상체가 신경독성 (NT; 등급 0-2 대 등급 3 이상)을 발생시키는지 여부의 함수로서, 대상체에 대해 투여된 조성물에서 CD4+CAR+ 세포 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율 (도 7C) 또는 CD4+CAR+ 세포에 의한 IFNγ 분비 (도 7D)를 도시하는 박스 플롯을 도시한다.
[173] 도 8A는 t-분포 확률적 임베딩 (t-distributed stochastic neighbor embedding, tSNE)에 기초한 예시적 다중 파라미터 표현형 (multiparameter phenotype) 분석을 도시한다. 도 8B는 CCR7 및 CD27 발현에 대한 분석 (도 8A에 그려진 형태의 경계 내)으로부터 확인된 세포 서브타입에 대한 전형적 유세포 분석 플롯을 도시한다.
[174] 도 9A-9C는 CAR+ T 세포 조성물의 투여 후 6 개월에 완전 반응 (CR)을 나타내는 대상체와 진행성 질환 (PD) 또는 부분 반응 (PR)을 나타내는 대상체를 구별하는 변수를 식별하기 위하여, 표현적 (phenotypic) 및 기능적 속성 (도 9A) 및 전사체적 (transcriptomic) (도 9B) 및 후성학적 분석 (도 9C)의 예시적 부분최소자승법 판별분석(PLS-DA, partial least square discriminant analysis) 평가를 도시한다.
[175] 도 10A는 조작된 세포 조성물 중 CD4+CAR+CCR7+CD27+ 세포의 빈도에 대한 전-조작 (pre-engineering) 조성물 중 CD4+CCR7+CD27+ 세포의 빈도의 플롯을 도시한다 (스피어맨의 순위-순서 상관 계수 (Spearman’s rank-order correlation coefficient): 0.591). 도 10B는 예비-조작 조성물 중 CD8+CCR7+CD27+ 세포의 빈도 및 조작된 세포 조성물 중 CD8+CAR+CCR7+CD27+ 세포의 빈도 (스피어맨의 순위-순서 상관 계수: 0.357)의 플롯을 도시한다.
[176] 도 11A-11D는 비드-기반 자극 시약 (Bead) 및 기초 배지 (Bead-Basal Media)에서의 인큐베이션 또는, 올리고머성 (oligomeric) 자극 시약 (Oligomer)에서의 배양을 포함하는 예시적 증폭 (expanded) 및 비-증폭 (non-expanded) 프로세스로부터 생성된 CAR+ T 세포 조성물로부터의 결과를 도시한다. 도 11A는 CCR7 및 CD27 둘 다에 대해 양성인 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 백분율을 도시한다. 도 11B는 CD4+CAR+ T 세포에 대한 CCR7+CD27+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 11C는 CD8+CAR+ T 세포에 대한 CCR7+CD27+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 11D는 1 일째에서의 활성화 (활성화 d1), 2 일째에서의 형질도입 (형질도입 d2), 및 배양 개시 후 다양한 시점(d4 INOC+2, d6 INOC+4, d7 INOC+5)을 비롯하여, 제조 프로세스 동안 다양한 날 (various days)에 예시적 증폭 프로세스로부터 대표적인 공여자로부터 생성된 CCR7+CD27+ 세포의 백분율을 나타낸다.
[177] 도 12는 조작 전 분리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 조성물 및 조작 후 CD4+ 및 CD8+ 치료 CAR+ T 세포 조성물의 T 세포 클론성을 나타낸다 (샤논 지수 적용).
[178] 도 13A 및 13B는 최대 선별 순위 통계 (maximally selected rank statistics)를 사용하여 측정된 치료 조성물의 CD4+/CAR+ T 세포에서, 각각 IL-2 또는 TNFα를 생성하는 세포의 "고 (high)" 또는 "저 (low)" 백분율을 갖는 환자에 대한 무진행 생존 곡선 (콕스 비례 위험 (Cox Proportional Hazard) (상단) 및 최적 분할 (optimal split) (하단))을 도시한다.
[179] 도 14는 6 개월에서, 완전 반응 (CR) (삼각형) 또는 반응 손실(loss)/반응 없음(no response)(원)을 나타내는 대상체에서 기준선 SPD (sum of the products of diameter) 및 기준선 CRP (C-반응성 단백질 (C-reactive protein))에 대한 임상 결과의 관계를 도시한다.
[180] 도 15는 6 개월에서, 완전 반응 (CR) (삼각형; 1) 또는 반응의 손실(loss)/반응 없음(no response) (원; 0)을 나타내는 고 기준선 SPD/CRP 대상체로부터 생성된 치료 T 세포 조성물 중 IL-2/CD4+/CAR+ 세포의 백분율을 나타낸다.
[181] 도 16은 투입 조성물에서 아포토틱 마커 활성화된 카스파제 3에 대해 양성인 세포에 대한 예시적 삼분위수(tertile) 컷-오프 값에 대한 무진행 생존 곡선을 도시한다.
[182] 도 17은 출발 (starting) 성분 채집 샘플, 즉 T 세포의 농축 전 성분채집 (apheresis)과 추가 프로세싱 사이의 시간의 길이가 다양한 샘플의 시기 (age)의 함수로서, 농축된 투입 T 세포 조성물에서 아포토틱 마커 활성화된 카스파제 3에 대해 양성인 세포의 백분율을 나타낸다. 왼쪽 플롯은 CD4+/활성화된 카스파제 3+ 세포의 백분율을 보여주고 오른쪽 플롯은 CD8+/활성화된 카스파제 3+ 세포의 백분율을 보여준다.
[167] 도 2는 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 87 명의 대상체로부터의 혈액 샘플에서, 절단된 (truncated) 수용체에 특이적인 항체를 사용하여 유세포 분석에 의해 평가된 CAR-발현 CD3+ 세포/μL 혈액의 중앙값 (±사분위수) 수 (CD3, 원형; N = 87); 또는 CAR를 인코딩하는 벡터에 존재하는 우드척 간염 바이러스 (woodchuck hepatitis virus) 후-전사 조절 요소 (WPRE)에 특이적인 프라이머를 사용하여 정량적 중합 효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 평가된 통합된 (integrated) CAR 트랜스진/㎍ 게놈 DNA의 중앙값(±사분위수) 카피 (copies) 수 (qPCR, 정사각형; N = 85)를 도시한다. 유세포 분석에서 CAR+ 세포 검출에 대한 컷오프는 CAR+ 게이트에서 ≥ 25 이벤트로 설정되었고, qPCR에 대한 검출 한계는 게놈 DNA μg 당 CAR 트랜스진의 ≥ 12.5 카피(copies)이었다.
[168] 도 3A는 각각 CD4+ CAR+ 세포 및 CD8+ CAR+ 세포의 약동학적 파라미터에 대한 CCR7+ 세포 백분율 (CD4+ CAR+ 및 CD8+ CAR+ 세포 집단 중에)의 플롯을 나타낸다. CD4+ CAR+ (세포 요법이 투여된 대상체에 대해 혈액에서 CD4+ CAR+의 AUC0-28 또는 CD4+ CAR+ 세포의 AUC0-28로 표시됨). 각 도트는 개별 환자를 나타내며, 개별 도트의 음영은 환자가 용량 수준 1 (dose level 1, DL1) 또는 용량 수준 2 (dose level 2, DL2)를 받았는지 여부를 나타낸다. 도 3B는 전처리 종양 부담 (전처리(pre-treatme) 림프구고갈 (lymphodepleting) 화학요법시 평가된)이 높거나 (이 평가에서, 50 cm2 이상의 생성물 크기의 합 (sum of the products of diameters, SPD) 값으로 표시됨) 또는 낮은 것 (50 cm2 미만의 SPD 값)으로 관찰된 대상체에 대해 별도로 표시된, 유사한 플롯을 보여준다. 도 3C는 상관 계수 (correlation coefficients) 및 관련 p-값 (associated p-values)과 함께, 세포 요법을 투여받은 대상체의 혈액에서의 CD4+ CAR+ 의 AUC0-28 또는 CD8+ CAR+ 세포의 AUC0-28에 대한 CD4+CAR+CCR7+ 세포 및 CD8+CAR+CCR7+ 세포의 수의 플롯을 도시한다. 도 3D-3J는 상관 계수 (correlation coefficients) 및 관련 p-값 (associated p-values)과 함께, CD4+ CAR+ T T 세포 (도 3A, 3D-3F) 및 CD8+ CAR+ T 세포 (도 3G-3J)의 약동학 파라미터 (AUC0-28 및 Cmax)에 대한 CCR7+ 또는 CCR7+CD27+CD4+ 또는 CD8+CAR+ T 세포 백분율의 플롯을 도시한다.
[169] 도 4A-4B는 CAR (CD19)에 의해 인식된 항원으로 자극시의 CD4+ CAR+ 조성물에 의한 IFNγ (도 4A) 및 IL-2 (도 4B) 분비에 대한 CD4+ CAR+ 세포 중에 CCR7+CD27+ 세포의 백분율의 플롯을 도시한다.
[170] 도 5A-5B는 CAR (CD19)에 의해 인식된 항원으로 자극시의 CD4+ CAR+ 조성물에 의한 IL-5 (도 5A) 및 IL-13 (도 5B) 분비에 대한 CD8+ CAR+ 세포 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율의 플롯을 도시한다.
[171] 도 6A-6D는 특정 임계 값 수준 이상 또는 이하인 CD4+ CAR+ T 세포 (무진행 생존에 대한 도 6A, 반응 지속 기간에 대한 도 6C) 중 또는 CD8+ CAR+ T 세포 (무진행 생존에 대한 도 6B, 반응 지속 기간에 대한 도 6D) 중 CCR7+CD27+ CAR+ T 세포의 백분율을 함유하는 조성물이 투여된 그룹으로 분할된, CAR+ T 세포 조성물이 투여된 대상체에 대한 Kaplan-Meier 생존곡선을 보여준다.
[172] 도 7A-7B는 대상체가 사이토카인 방출 증후군 (CRS; 등급 0 대 등급 1이상)을 발생시키는지 여부의 함수로서 대상체에 대해 투여된 조성물에서 CD4+CAR+ 세포 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율 (도 7A) 또는 CD4+CAR+ 세포에 의한 IFNγ 분비 (도 7B)를 도시하는 박스 플롯을 도시한다. 도 7C-7D는 대상체가 신경독성 (NT; 등급 0-2 대 등급 3 이상)을 발생시키는지 여부의 함수로서, 대상체에 대해 투여된 조성물에서 CD4+CAR+ 세포 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율 (도 7C) 또는 CD4+CAR+ 세포에 의한 IFNγ 분비 (도 7D)를 도시하는 박스 플롯을 도시한다.
[173] 도 8A는 t-분포 확률적 임베딩 (t-distributed stochastic neighbor embedding, tSNE)에 기초한 예시적 다중 파라미터 표현형 (multiparameter phenotype) 분석을 도시한다. 도 8B는 CCR7 및 CD27 발현에 대한 분석 (도 8A에 그려진 형태의 경계 내)으로부터 확인된 세포 서브타입에 대한 전형적 유세포 분석 플롯을 도시한다.
[174] 도 9A-9C는 CAR+ T 세포 조성물의 투여 후 6 개월에 완전 반응 (CR)을 나타내는 대상체와 진행성 질환 (PD) 또는 부분 반응 (PR)을 나타내는 대상체를 구별하는 변수를 식별하기 위하여, 표현적 (phenotypic) 및 기능적 속성 (도 9A) 및 전사체적 (transcriptomic) (도 9B) 및 후성학적 분석 (도 9C)의 예시적 부분최소자승법 판별분석(PLS-DA, partial least square discriminant analysis) 평가를 도시한다.
[175] 도 10A는 조작된 세포 조성물 중 CD4+CAR+CCR7+CD27+ 세포의 빈도에 대한 전-조작 (pre-engineering) 조성물 중 CD4+CCR7+CD27+ 세포의 빈도의 플롯을 도시한다 (스피어맨의 순위-순서 상관 계수 (Spearman’s rank-order correlation coefficient): 0.591). 도 10B는 예비-조작 조성물 중 CD8+CCR7+CD27+ 세포의 빈도 및 조작된 세포 조성물 중 CD8+CAR+CCR7+CD27+ 세포의 빈도 (스피어맨의 순위-순서 상관 계수: 0.357)의 플롯을 도시한다.
[176] 도 11A-11D는 비드-기반 자극 시약 (Bead) 및 기초 배지 (Bead-Basal Media)에서의 인큐베이션 또는, 올리고머성 (oligomeric) 자극 시약 (Oligomer)에서의 배양을 포함하는 예시적 증폭 (expanded) 및 비-증폭 (non-expanded) 프로세스로부터 생성된 CAR+ T 세포 조성물로부터의 결과를 도시한다. 도 11A는 CCR7 및 CD27 둘 다에 대해 양성인 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 백분율을 도시한다. 도 11B는 CD4+CAR+ T 세포에 대한 CCR7+CD27+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 11C는 CD8+CAR+ T 세포에 대한 CCR7+CD27+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 11D는 1 일째에서의 활성화 (활성화 d1), 2 일째에서의 형질도입 (형질도입 d2), 및 배양 개시 후 다양한 시점(d4 INOC+2, d6 INOC+4, d7 INOC+5)을 비롯하여, 제조 프로세스 동안 다양한 날 (various days)에 예시적 증폭 프로세스로부터 대표적인 공여자로부터 생성된 CCR7+CD27+ 세포의 백분율을 나타낸다.
[177] 도 12는 조작 전 분리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 조성물 및 조작 후 CD4+ 및 CD8+ 치료 CAR+ T 세포 조성물의 T 세포 클론성을 나타낸다 (샤논 지수 적용).
[178] 도 13A 및 13B는 최대 선별 순위 통계 (maximally selected rank statistics)를 사용하여 측정된 치료 조성물의 CD4+/CAR+ T 세포에서, 각각 IL-2 또는 TNFα를 생성하는 세포의 "고 (high)" 또는 "저 (low)" 백분율을 갖는 환자에 대한 무진행 생존 곡선 (콕스 비례 위험 (Cox Proportional Hazard) (상단) 및 최적 분할 (optimal split) (하단))을 도시한다.
[179] 도 14는 6 개월에서, 완전 반응 (CR) (삼각형) 또는 반응 손실(loss)/반응 없음(no response)(원)을 나타내는 대상체에서 기준선 SPD (sum of the products of diameter) 및 기준선 CRP (C-반응성 단백질 (C-reactive protein))에 대한 임상 결과의 관계를 도시한다.
[180] 도 15는 6 개월에서, 완전 반응 (CR) (삼각형; 1) 또는 반응의 손실(loss)/반응 없음(no response) (원; 0)을 나타내는 고 기준선 SPD/CRP 대상체로부터 생성된 치료 T 세포 조성물 중 IL-2/CD4+/CAR+ 세포의 백분율을 나타낸다.
[181] 도 16은 투입 조성물에서 아포토틱 마커 활성화된 카스파제 3에 대해 양성인 세포에 대한 예시적 삼분위수(tertile) 컷-오프 값에 대한 무진행 생존 곡선을 도시한다.
[182] 도 17은 출발 (starting) 성분 채집 샘플, 즉 T 세포의 농축 전 성분채집 (apheresis)과 추가 프로세싱 사이의 시간의 길이가 다양한 샘플의 시기 (age)의 함수로서, 농축된 투입 T 세포 조성물에서 아포토틱 마커 활성화된 카스파제 3에 대해 양성인 세포의 백분율을 나타낸다. 왼쪽 플롯은 CD4+/활성화된 카스파제 3+ 세포의 백분율을 보여주고 오른쪽 플롯은 CD8+/활성화된 카스파제 3+ 세포의 백분율을 보여준다.
상세한 설명
[183] 다양한 종양을 포함하는 질환 및 병태의 치료를 위한 조작된 T 세포 요법과 같은 세포 요법과 관련하여 사용하기 위한 방법, 조성물 및 제조 물품이 본원에 제공된다. 제공된 실시 양태는 질병 또는 병태와 관련된 분자를 인식 및/또는 특이적으로 결합하고 반응을 초래하도록 설계된 재조합 수용체를 발현하는 것과 같이 재조합 단백질을 발현하도록 조작된 것과 같은 조작된 T 세포를 포함하는 치료 T 세포 조성물에 관한 것이다. 상기 수용체는 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CARs), 및 유전자 변형 T 세포 수용체 (TCRs)를 포함하는 다른 유전자 변형 항원 수용체를 포함할 수 있다.
[184] 일부 측면에서 제공되는 구체 예는 세포 표현형, 예를 들어 치료 T 세포 조성물의 기능 또는 활성, 약동학적 파라미터, 예를들어 노출 또는 최대 세포 농도, 사이토카인 분비 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT)과 같은 독성 발생 가능성 및/또는 세포 요법의 결과, 예를들어, 세포 요법에 대한 반응과 관련된 표면 마커의 존재 및/또는 발현, 및/또는 표면 마커의 발현의 부재 또는 부족과 관련된 측면에 관한 것이며, T 세포 조성물이 투여된 대상에서 및/또는 치료 T 세포 조성물의 효능에 대한 정보를 제공할 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 구체 예는 특정 세포 표현형, 예를 들어 하나 이상의 표면 마커의 발현, 하나 이상의 사이토카인의 생성이 약동학적 파라미터, 반응 가능성 및/또는 독성 발생 가능성과 관련이 있다는 관찰에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 투여용 T 세포 조성물, 예를 들어 약물 조성물에서 C-C 케모카인 수용체 유형 7 (CCR7), CD27 및 CD45RA 또는 이들의 조합과 같은 세포 표면 마커 발현의 발현 및/또는 부재는 긍정적으로 또는 부정적으로 약동학적 파라미터 및/또는 반응 또는 독성 결과와 상관 관계가 있다. 일부 측면에서, 덜 분화된 T 세포 생성물 또는 나이브-유사 또는 중앙 기억 T 세포 서브세트가 풍부한 생성물과 관련된 표현형 및 기능적 특성은, 대상체에게 투여한 후 반응의 지속성 및/또는 무-진행 생존과 같은 개선된 약동학적 특성 또는 반응과 상관 관계가 있거나 이를 나타내는 것으로 관찰된다.
[185] 제공된 실시 양태의 측면은 또한, 치료 T 세포 조성물의 투여와 관련하여 사용하기 위한 것을 포함하여, 세포 집단을 나타내는 표현형과 같은 특정 표현형의 세포 수의 함수인 세포의 수, 비율, 백분율 및/또는 비율을 포함하는 단위 용량을 투여 또는 제공하는 것과 관련이 있다. 일부 측면에서, 제공된 실시 실시 양태는 일관된 투약 및/또는 투여를 허용한다. 일부 측면에서, 제공된 실시 양태는 특정 약동학적 파라미터의 특정 결과 및/또는 값의 가능성, 독성 및/또는 반응의 위험, 세포 요법의 효능 또는 효험을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 T 세포 조성물의 효능을 보장하면서, 치료용 T 세포 조성물의 용량을 투여받은 대상체에서 독성의 위험을 제어, 개선 또는 감소시킬 수있다. 또한, 세포를 포함하고 이러한 투여 요법에 따라 투여되도록 설계된 제조품이 제공된다.
[186] 일부 실시 양태에서, 제공된 방법, 용량, 단위 용량, 조성물 및 제조 물품은 세포 요법 및/또는 요법을 위한 세포 조성물의 방출 또는 생성의 적절한 용량을 결정할 때 특정 표현형, 예를 들어 표면 마커의 발현 및 이들의 조합을 고려하는 것이 유리할 수 있다는 관찰에 기초한다. 특정의 이용 가능한 방법에서, 용량은 조작 된 수용체에 대해 양성인 것과 같은 특정 활성을 나타내도록 조작 된 것과 같은 특정 세포 유형의 수에 기초한다. 예를 들어, 특정 이용 가능한 방법 및 복용량에서, 복용량은 생존 가능한 조작된 T 세포의 수 (또는 환자 체중 당 수) 또는 생존 가능한 세포 독성 (예를 들어, CD8+) 조작된 T 세포와 같은 그의 서브세트의 수 사이의 관찰되거나 의심되는 관계에 기초한다. 다양한 맥락에서, 이러한 수치는 신경 독성, 뇌부종 및 CRS와 같은 반응 및/또는 독성 위험과 같은 효험 및/또는 안전성 결과와 관계가있을 수있다. 그럼에도 불구하고, 일부 상황에서 이러한 측정 항목은, 특히 다른 변수를 고려하지 않고, 대상체의 약리학적 파라미터, 독성 위험, CRS 또는 NT와 지속적으로 적절하게 연관되지 않는 관찰에 기초한 구체 예가 본원에 제공된다. 따라서, 이러한 측정 항목에만 의존하여 복용량을 정의하고 방출을위한 제품을 평가하는 접근법은 전적으로 만족스럽지 않을 수 있다. 예를 들어, 이러한 접근법은 일부 상황에서 안전하고 효과적인 세포 요법을 위해 특정 치료 범위 또는 기간(window)에 도달하지 못할 수있다. 본원에는 이러한 단점을 다루는 방법 (치료, 투여, 용량 결정 및 분석 방법 포함), 치료 조성물 및 제조 물품이 제공된다.
[187] 일부 측면에서, 제공된 실시 양태는 제어되고 일정한 용량의 세포의 투여를 허용하여, 대상체에서 효험 및/또는 안전성 결과의 변동을 최소화한다. 일부 측면에서, 예를 들어, 세포 표현형에 기초하여, 세포의 특정 서브세트의 정해진 수, 비율, 백분율 및/또는 비율에 기초하여 세포의 용량을 제어하는 것은 치료 조성물에 포함된 세포의 건강, 효능 및/또는 효능에 특정 표현형을 갖는 세포 서브세트의 영향을 이해하게한다. 이러한 접근법은 세포 요법에서 세포의 일관되고 정확한 유효 용량을 결정 및/또는 계산하고 /하거나 세포 요법의 약동학적 파라미터를 제어하는데 사용될 수 있다. 특정 표면 마커를 발현하고/시키거나 특정 표현형을 갖는 세포의 수, 비율, 백분율 및/또는 비율에 기초한 투여를 위한 단위 용량을 포함하여 이러한 용량을 결정하는 방법, 이러한 투여 방법 및 지침, 및 관련된 치료 방법을 사용하여 결정된 용량을 포함하는 제조 물품 및 키트가 제공된다. 일부 측면에서, 제공된 구체 예는, 대상체에 투여하기위한 치료 조성물에서 CCR7+, CD27+ 및/또는 CD45RA- 인 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포의 수 및 선택적으로 그의 서브세트의 일관성 및 엄격한 제어에 기초한, 조작된 세포 조성물의 세포 속성의 식별, 약동학 (PK)과의 잠재적 연관 및 반응 및 독성과 같은 임상 결과를 허용한다. 투여용 세포 조성물에서 CAR + 세포의 총 수의 이러한 일관성 및 엄격한 제어는, 투여를 위해 조작 된 세포 조성물에서 세포의 다른 측면을 평가하고 제어하기위한 전략의 기초를 제공할 수 있다.
[188] 일부 측면에서, 제공된 구체 예는 낮은 변동성을 나타내고, 순수하고 정확한 용량을 포함하는 CAR+ T 세포 조성물의 투여를 허용하여, 다양한 세포 특성과 임상 결과, 예컨대 반응 및 독성 사이의 관계를 식별할 수 있게 한다. 일부 측면에서, 제공된 구체 예는 덜 분화된 표현형과 같은 특정 표현형과 관련된 마커를 발현하는 세포 집단이 특정 기능적 프로파일 (예를 들어, 사이토카인 생산)을 나타내는 관찰에 기초한다. 일부 측면에서, CCR7+ CD27+ CD4+ CAR T 세포는 감소된 IFNγ 및 증가된 IL-2를 생성하고, 일부 측면에서, CCR7+ CD27+ CD8+ CAR T 세포는 CAR의 항원-특이적 자극 시와 같이 감소된 IL-5 및 IL-13을 생성한다. 일부 실시 양태에서, 조성물 중 특정 백분율의 세포가 덜 분화된 병태를 나타내고/거나 CCR7+ CD27+ 인 CAR+ T 세포를 포함하는 투여된 세포 조성물은, 이러한 세포 집단을 더 낮은 백분율로 포함하는 조성물과 비교하여, 바람직하거나 개선된 약동학적 파라미터, 안전성 사건 및 증가된 내구성 반응과 관련이있다.
[189] 본 출원에서 언급된 특허 문서, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 출판물은 각각의 개별 출판물이 개별적으로 참조로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 전체적으로 참조로 통합된다. 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 공개에 기재된 정의와 상반되거나 달리 일치하지 않는 경우, 본원에 제시된 정의는 본원에 참조로 포함된 정의보다 우선한다 .
[190] 본 명세서에서 사용 된 섹션 제목은 단지 조직화 목적을 위한 것이며 기술된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
Ⅰ. 치료 세포 조성물의 복용량 및 용량 결정
[191] 다양한 종양을 포함하는 질환 및 병태의 치료를 위한 조작된 T 세포 요법과 같은 세포 요법과 관련하여 사용하기위한 방법, 조성물 및 제조 물품이 본원에 제공된다. 제공된 실시 양태는 대상체에게 투여하기위한 용량, 관련 치료 방법, 세포 용량을 포함하는 조성물 및 관련 제조 물품 및 키트를 결정하는 방법에 관한 것이다. 일부 측면에서 제공된 실시 양태는 예를 들어 노출 또는 최대 세포 농도와 같은 약동학적 파라미터의 값 또는 측정과 관련되거나 이와 연관된 투여용 조성물 중 세포의 세포 표현형, 예를 들어 표면 마커의 존재 및/또는 발현, 표면 마커 발현의 부재 또는 부족 및/또는 하나 이상의 사이토카인(예를들어 IL-2)을 생산하는 능력과 관련된다. 일부 측면에서, 표현형 및/또는 파라미터는 또한, 세포의 활성 및/또는 기능 및/또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT) 및/또는 T 세포 조성물을 투여한 대상체에서 세포 요법의 결과, 예를 들어 반응의 지속성 및 무진행 생존과 같은 세포 요법에 대한 반응과 같은 독성이 발생할 가능성과 관련되거나 이와 연관되어있다.
[192] 일부 측면에서, 제공된 실시 양태는 세포 조성물의 용량, 예를 들어 하나 이상의 단위 용량의 세포 조성물 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량(volume)을 결정 및/또는 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 세포의 용량은 농축되고, 예를 들어 특정 표현형을 갖는 생물학적으로 조작된 T 세포의 비율이 높거나 상대적으로 높다. 일부 측면에서, 상기 용량은 특정 표현형을 갖는 생물학적으로 활성 조작된 T 세포의 수를 기준으로한다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 세포 사멸을 겪도록 프로그램되지 않은 세포, 예를 들어, 비-아포토시스 세포 또는 세포 자멸사 경로로의 진입을 나타내지 않는 세포의 특성을 지칭한다. 일부 측면에서, 용량은 특정 표현형을 갖는 생물학적으로 활성 조작된 CD8+ T 세포의 수에 기초하고, 및/또는 특정 표현형을 갖는 생물학적으로 활성 조작된 T 세포의 총 수에 기초한다.
[193] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 단위 용량이 하나 이상의 특정 조성물에서 특정 표현형을 갖는 조작된 세포를 비교적 일정한 수, 부분, 비율 및/또는 백분율로 포함하도록 보장한다. 일부 측면에서, 일관성은 비교적 일정한 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과와 관련되거나 이와 연관된다. 일부 실시 양태에서, 일관된 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과 (예를 들어, 지속적인 반응, 지속적인 무진행 생존)가 가능한 조작된 세포의 백분율은, 조성물에서 조작된 세포 (예를 들어, T 세포)의 총수, 또는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성, CD45RA의 표면 발현에 대해 임의로 추가 음성인 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 조작된 세포(예를 들어, T 세포) 총 수의 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%, 또는 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 적어도 약 100%, 또는 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%, 또는 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100% 이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조작된 세포 (예를 들어, T 세포)는 활성화된 카스파제 3(caspase 3) 또는 아넥신 V와 같은 아폽토틱 마커에 대해 추가 음성이다. 일부 실시 양태에서, 일관된 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과 (예를 들어, 지속적인 반응, 지속적인 무진행 생존)가 가능한 조작된 세포의 백분율은, 조성물 중 총 조작된 세포 (예를 들어, T 세포)의 총 수, 또는 아포토시스의 마커 (예를 들어, 카스파제-3, 아넥신 V)에 대해 음성인, 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 조작된 세포(예를 들어, T 세포)총 수의 적어도 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 %, 또는 적어도 약 75 %, 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 % 또는 적어도 약 99 %, 또는 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % 또는 99 %, 또는 약 75 %, 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 % 또는 약 99 %이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 일관된 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과 (예를 들어, 지속적인 반응, 지속적인 무진행 생존)가 가능한 조작된 세포의 백분율은, 조성물 중 조작된 CD4+ T 세포의 총 수, 또는 인터루킨 2 (IL-2) 및/또는 TNF- 알파로부터 선택된 사이토카인을 생산할 수 있는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 CD4 + T 세포의 총 수의 적어도 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 적어도 약 70 %, 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 91 %, 적어도 약 92 %, 적어도 약 93 %, 적어도 약 94 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 %, 적어도 약 99 % 또는 적어도 약 100 %, 또는 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 70 %, 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 % 이거나 또는 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 일관된 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과 (예를 들어, 지속적인 반응, 지속적인 무진행 생존)가 가능한 조작된 세포의 백분율은, 조성물 중 조작된 CD4+ T 세포의 총 수, 또는 인터페론-감마 (IFN- 감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF- 알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인을 생산하기 위한 다작용성 재조합 수용체를 발현하는 조작된 CD4+ T 세포 총 수의 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 또는 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 또는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 또는 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60% 또는 그 이상이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 일관된 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과 (예를 들어, 지속적인 반응, 지속적인 무진행 생존)가 가능한 조성물의 조작된 세포는 본원에 기재된 하나 이상의 표현형이거나 이를 포함한다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 일관된 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과 (예를 들어, 지속적인 반응, 지속적인 무진행 생존)가 가능한 조작된 세포의 백분율은 표현형의 백분율의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 치료학적 조성물로서 사용되는 조성물은 조성물(예를 들어, 산출 조성물) 중 하나 이상의 표현형을 포함하는 세포의 백분율에 기초하여 선택된다.
[194] 일부 측면에서, 복수의 대상체, 조성물 및/또는 복용량에서, 수, 부분, 비율 및/또는 백분율은 비교적 일관성이 있고, 예를 들어, 조성물 또는 단위 용량으로 CCR7 (CCR7+)을 발현하고/하거나 하나 이상의 사이토카인을 생산하는 능력을 갖는 것과 같이 특정 표현형을 갖는 세포의 수 또는 비율은 40% 이하, 30% 이하, 20% 이하, 10% 이하 또는 5% 이하로 다르다. 일부 측면에서, 조성물 또는 단위 용량에서, 예를 들어 CCR7 (CCR7+) 발현 및/또는 하나 이상의 사이토카인 생성 능력과 같이 특정 표현형을 갖는 세포의 수 또는 비율은 상기 공정에 의해 생성된 복수의 T 세포 조성물에서 상기 수 또는 비율의 평균으로부터 20% 이하 또는 10% 이하 또는 5% 이하로 다르고/거나 결정된 복수의 T 세포 조성물 또는 복용량 중에서 하나의 표준 편차만으로 이러한 평균과 다르거나 또는 20% 이하 또는 10% 이하 또는 5% 이하로 다르다.
[195] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 하나 이상의 단위 용량의 세포, 예를 들어 CAR과 같은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 T 세포를 결정 및/또는 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 방법은 하나 이상의 단위 용량의 세포가 농축되는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 투여하는 것을 포함하고/거나 특정 표면 마커 표현형 및/또는 기능적 활성, 예컨대 하나 이상의 사이토카인을 생산하는 능력을 나타내는 것과 같이 특정 표현형을 갖는 높은 또는 비교적 높은 비율의 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 단위 용량은, 예를 들어 특정 표면 마커 표현형과 같은 특정 표현형을 갖고/갖거나 하나 이상의 사이토카인을 생산하는 능력과 같은 기능적 활성을 나타내는 세포와 같은, 조작된 T 세포의 특정 서브세트의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 비율에 기초하여 결정된다. 일부 실시 양태에서, 조작된 또는 치료 세포 조성물은 조작된 산출 조성물을 생성하기 위해 사용된 출발 물질 또는 투입 조성물과 비교하여 이러한 표현형 또는 기능적 속성을 갖는 세포를 포함하거나 농축된 산출 조성물을 생성하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 하나 이상의 단위 용량인 임의의 이러한 조성물을 포함하여, 조작된 세포를 생성하는 방법에 따라 생성된 산출 조성물과 같은 조작된 또는 치료 세포 조성물의 세포의 예시적 표현형 및 기능적 특성이 본원에 기재되어있다.
[196] 일부 측면에서, 세포 마커는 세포 건강, 생존력 및/또는 세포의 아포토시스 병태를 나타내는 마커를 포함한다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CD3, CD4, CD8, CCR7, CD27, CD45RA, 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3을 포함한다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 포함한다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CCR7 및/또는 CD27를 포함한다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CCR7이다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CD27이다.
[197] 일부 측면에서, 제공된 방법은 또한, 예를 들어 CD3, CD4, CD8, CCR7, CD27, CD45RA, 아넥신V 또는 활성화된 카스파제 3와 같은 마커의 발현과 같은 세포 표현형에 대한 치료 조성물을 평가하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 항원-특이적 기능을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 표현형은, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR과 특이적으로 결합하고/하거나 인식하는 항원으로 자극 될 때 사이토카인의 생성 또는 분비를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 사이토카인, 예를 들어 특정 세포 유형과 관련된 사이토카인, 예컨대 Th1, Th2, Th17 및/또는 Treg 아형과 관련된 사이토카인의 생산을 포함한다.
[198] 일부 측면에서, 제공된 방법은 적합한 용량, 예를 들어 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위해 조작된 T 세포를 함유하는 치료 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 방법은 또한, 조작된 T 세포의 특정 서브세트, 예를 들어 조작된 T 세포를 함유하는 치료 조성물에서 특정 표현형, 예컨대 특정 표면 마커 표현형을 갖는 세포의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 부분을 평가하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제공된 방법은 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CCR7(수용체+/CCR7+)을 발현하는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 것을 포함한다.
[199] 일부 실시 양태에서, 제공된 방법은 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 것을 포함한다. 다른 예시적인 평가를 위한 표현형 마커 및/또는 평가를 위한 방법은 아래, 예를 들어 섹션 I.A.에 기재되어 있다. 일부 측면에서, 단위 용량은 임의의 평가에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 방법은 또한 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 또는 재조합 수용체의 대용 마커를 발현하는 세포의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 부분을 평가하는 것을 포함한다. 상기 용량, 예를 들어, 하나 이상의 단위 용량은 본원에 기재된 임의의 표현형 마커의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 부분에 대한 평가에 기초하여 결정될 수 있다.
A. 세포 표현형 결정
[200] 일부 실시 양태에서, 세포 표현형, 또는 세포 조성물에서 이러한 표현형의 수준 또는 백분율은 또한, 세포의 활성 및/또는 기능 및/또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT)과 같은 독성이 발생할 가능성 및/또는 T 세포 조성물을 투여한 대상체에서 세포 요법의 반응, 예를 들어 반응의 지속성 및 무진행 생존율과 같은 세포 요법에 대한 결과와 관련되거나 이와 연관되어있다. 일부 실시 양태에서, 특정 표현형을 갖는 세포, 보다 구체적으로 이러한 특정 표현형을 갖는 세포의 백분율을 포함하는 조성물은, 지속적인 반응 및/또는 무진행 생존율과 같은 임상적 결과와 상관 관계가있다. 일부 실시 양태에서, 표현형은, T 세포 조성물 내에서 세포 또는 세포의 소집단에 의해 축적되거나 생성될 수 있는 표면 분자 및/또는 분자를 포함하는 하나 이상의 특정 분자의 존재 또는 부재를 평가함으로써 결정된다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 직접적으로 또는 역으로 T 세포 조성물 내 세포 또는 세포 집단의 생물학적 활성을 나타내거나 표시한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은, 자극에 대한 반응으로 인자(예를 들어, 사이토카인)의 생성과 같은 세포 활성을 포함할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 세포 조성물의 표현형을 식별, 검출 또는 정량하기 위해 세포 조성물의 평가가 수행된다. 특정 실시 양태에서, 세포 조성물의 측정은 특정 분자의 존재, 부재, 발현 정도 또는 수준을 확인, 검출 또는 정량화하기 위해 수행된다.
[201] 세포 조성물의 표현형(예를 들어, 조작된 T 세포 조성물)은, 일부 경우, 세포 조성물을 생성하는데 사용되는 출발 세포 물질(예를 들어, 성분 채집 제품 또는 백혈구 성분 제품)의 표현형 및 세포 조성물의 생성을 위해 가공중인 세포 물질의 표현형을 포함하지만 이에 제한되지 않는 많은 인자에 의존할 수 있는 것으로 고려된다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 표현형은 최종 세포 조성물뿐만 아니라 출발 물질 및/또는 세포 조성물을 생성하기위한 가공중인 물질의 세포에서 평가된다.
[202] 일부 실시 양태에서, 표현형은 세포의 생존력을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 상기 표현형은 아포토시스의 부재, 아포토시스의 초기 단계의 부재 또는 아포토시스의 후기 단계의 부재를 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 상기 표현형은 아포토시스, 아포토시스 초기 단계 또는 아포토시스 후기 단계의 부재를 나타내는 인자의 부재이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은, 재조합 수용체-발현 T 세포(예를 들어, CAR+ T 세포), CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포와 같은 T 세포의 하위 집단 또는 서브세트의 표현형이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화되지 않거나 및/또는 하나 이상의 활성화 마커의 발현이 부족하거나 감소되거나 적은 세포의 표현형이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 소모되지 않거나 및/또는 하나 이상의 소모(exhaustion) 마커의 발현이 부족하거나 감소되거나 적은 세포의 표현형이다.
[203] 일부 실시 양태에서, 상기 표현형은, 예를 들어 표면 단백질과 같이 표현형을 나타내는 특정 표면 마커, 표현형을 나타내는 세포 내 마커, 또는 표현형을 나타내는 핵산 또는 표현형을 나타내는 다른 분자 또는 인자와 같이 하나 이상의 특정 분자의 세포에서 발현의 존재, 부재 또는 발현 수준으로 표시된다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 특정 분자의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일부 구체 예에서, 상기 특정 분자는, 표면 마커, 예를 들어 막 당단백질 또는 수용체; 아포토시스 또는 생존력과 관련된 마커; 또는 면역 세포의 병태를 나타내는 특정 분자, 예를 들어 활성화, 고갈 또는 성숙하거나 순수한(naive) 표현형과 관련된 마커를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 특정 분자에 기초하여 세포를 평가, 측정, 계수 및/또는 정량하기위한 임의의 공지된 방법을 사용하여 표현형의 세포 수를 결정할 수 있다.
[204] 일부 실시 양태에서, 표현형은 세포에서 하나 이상의 특정 분자의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 양성 발현은 세포에서 검출 가능한 양의 특정 분자에 의해 나타난다. 특정 실시 양태에서, 상기 검출 가능한 양은 세포에서 특정 분자의 임의의 검출된 양이다. 특정 실시 양태에서, 상기 검출 가능한 양은 세포에서 배경, 예를 들어 배경 염색, 신호 등보다 큰 양이다. 특정 실시 양태에서, 양성 발현은 역치, 예를 들어 미리 결정된 역치보다 큰 특정 분자의 양이다. 마찬가지로, 특정 실시 양태에서, 특정 분자의 음성 발현을 갖는 세포는 양성 발현을 갖는 것으로 결정되지 않은 임의의 세포일 수 있거나, 또는 특정 분자의 검출 가능한 양 또는 배경 위 특정 분자의 검출 가능한 양이 없는 세포일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포는 특정 분자의 양이 임계값 미만인 경우 특정 분자의 음성 발현을 갖는다. 당업자는 일상적인 기술의 문제로서 특정 분자에 대한 양성 및/또는 음성 발현을 정의하기 위해 임계값을 정의하는 방법을 이해하고, 임계값은 특정 매개 변수, 예를들어 검출의 분석 또는 방법, 특정 분자의 동일성, 검출에 사용된 시약 및 기기에 따라 정의될 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
[205] 특정 분자를 검출 및/또는 세포의 표현형을 분석하는데 사용될 수있는 방법의 예는 생화학적 분석; 면역화학 분석; 이미지 분석; 세포 형태학적 분석; PCR, 시퀀싱, 고-처리량 시퀀싱(high-throughput sequencing), DNA 메틸화의 결정과 같은 분자 분석; 단백질 글리코 실화 및/또는 인산화 패턴의 결정과 같은 단백질체학 분석; 유전체학 분석; 후성 유전체학 분석 (예를들어, ChIP-seq 또는 ATAC-seq); 전사체학 분석 (예를들어, RNA-seq); 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 일부 실시 양태에서, 방법은 면역 수용체 레퍼토리, 예를 들어 T 세포 수용체 (TCR)의 레퍼토리의 평가를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 임의의 표현형의 결정은 고-처리량, 자동화 및/또는 단일 세포 기반 방법으로 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 대규모 또는 게놈 전체 방법이 하나 이상의 분자 특징을 식별하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 대규모 또는 게놈 전체 방법은 치료 결과, 예를 들어 효능 및 안전성, 또는 약동학적 파라미터와 관련된 분자 특징을 식별하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 분자 특징, 예를 들어, 세포에서 특정 RNA 또는 단백질의 발현이 결정될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 표현형의 분자 특징은 PCR (표준 및 모든 PCR 변이체 포함), 마이크로 어레이 (DNA 마이크로 어레이, 마이크로 RNA 용 MM 칩, 단백질 마이크로 어레이, 세포 마이크로 어레이, 항체 마이크로 어레이 및 탄수화물 어레이를 포함 하나 이에 제한되지 않음), 시퀀싱, 바이오 마커 검출, 또는 DNA 메틸화 또는 단백질 글리코실화 패턴을 결정하는 방법에 의해 분석된다. 특정 실시 양태에서, 상기 특이 적 분자는 폴리펩티드, 즉 단백질이다. 일부 실시 양태에서, 특정 분자는 폴리뉴클레오티드이다.
[206] 일부 실시 양태에서, 특이적 분자의 양성 또는 음성 발현은 세포를 하나 이상의 항체, 또는 양성 또는 음성으로 선택된 세포에서 각각 비교적 높은 수준 (markerhigh)으로 발현 또는 발현된 (marker+) 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 다른 결합제와 배양함으로써 결정된다. 특정 실시 양태에서, 양성 또는 음성 발현은 유세포 분석법, 면역 조직 화학법, 또는 특정 마커를 검출하기위한 임의의 다른 적합한 방법에 의해 결정된다.
[207] 특정 실시 양태에서, 특이적 분자의 발현은 유세포 분석법에 의해 평가된다. 유세포 분석법은, 세포를 유체 스트림에 현탁시키고, 이를 전자 검출 장치에 의해 통과시킴으로써 세포 계수, 세포 분류, 바이오 마커 검출 및 단백질 조작에 사용되는 레이저- 또는 임피던스- 기반의 생물 물리학적 기술이다. 이는 초당 최대 수천 개의 입자에 대한 물리적 및 화학적 특성을 동시에 다중 매개 변수로 분석할 수 있다.
[208] 유량계에 의해 생성된 데이터는 히스토그램(histogram)을 생성하기 위해, 단일 차원으로, 또는 2 차원 도트 플롯으로 또는 심지어 3 차원으로 표시(plot)될 수 있다. 이러한 도표(plots)의 영역은 "게이트"라고하는 일련의 서브세트 추출을 생성함으로써 형광 강도에 기초하여 순차적으로 분리될 수 있다. 특정 게이팅 프로토콜은 특히 면역학과 관련하여 진단 및 임상 목적으로 존재한다. 플롯은 종종 대수 계산자(logarithmic scales)로 만들어진다. 상이한 형광 염료의 방출 스펙트럼이 중첩되기 때문에, 검출기에서의 신호는 계산적으로뿐만 아니라 전자적으로 보정되어야한다. 유세포 분석기를 사용하여 축적된 데이터는 소프트웨어 예를들어, JMP (통계 소프트웨어), WinMDI, Flowing Software, 및 웹-기반 Cytobank), Cellcion, FCS Express, FlowJo, FACSDiva, CytoPaint (일명 Paint-A-Gate), VenturiOne, CellQuest Pro, Infinicyt 또는 Cytospec를 사용하여 분석할 수 있다.
[209] 유세포 분석법은 당 업계의 표준 기술이며, 당업자는 하나 이상의 특이적 분자를 검출하고 데이터를 분석하여 세포 집단에서 하나 이상의 특이적 분자의 발현을 결정하기 위해 프로토콜을 설계 또는 조정하는 방법을 쉽게 이해할 것이다. 유세포 분석을 위한 표준 프로토콜 및 기술은 Loyd "미생물학의 유세포 분석; Howard M. Shapiro의 실용 유동 세포 계측법; Larry A. Sklar의 생명 공학을위한 유세포 분석, J. Paul Robinson 등의 유세포 분석법 핸드북, 세포 계측법의 현재 프로토콜, Wiley-Liss 펍, 임상 진단에서 유세포 분석, v4 (Carey, McCoy 및 Keren, eds), ASCP Press, 2007, Ormerod, M.G. (ed.) (2000) 유세포 분석-실용적인 접근. 제 3 판, 옥스포드 대학 출판부, 옥스포드, 영국, Ormerod, M.G. (1999) 유세포 분석. 제 2 판. BIOS 과학 출판사, 옥스포드, 및 유세포 분석-기본 소개. Michael G. Ormerod, 2008.에서 발견된다.
[210] 일부 실시 양태에서, 세포는 추가 분석을 위해 표현형에 따라 분류된다. 일부 실시 양태에서, 동일한 세포 조성 내에서 상이한 표현형의 세포는 형광-활성화 세포 분류 (FACS)에 의해 분류된다. FACS는 세포의 이종 혼합물을 2 개 이상의 용기로, 각각의 세포의 특정 광 산란 및 형광 특성에 기초하여, 한 번에 하나의 세포로 분류할 수 있는 특수한 유형의 유세포 분석법이다. 이는 개별 세포로부터 형광 신호를 빠르고 객관적, 정량적으로 기록할 뿐만 아니라 특히 관심있는 세포를 물리적으로 분리할 수 있기 때문에 유용한 과학적 도구이다.
[211] 일부 실시 양태에서, 표현형은 총 T 세포의 수 또는 총 CD3+ T 세포의 수를 포함한다. 특정 실시 양태에서, T 세포 조성물, 예를 들어 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 세포를 함유하는 치료 T 세포 조성물은 하나 이상의 상이한 아형의 T 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 T 세포 아형의 동일성이거나 이를 포함한다. T 세포의 상이한 집단 또는 아형은 이펙터 T 세포, 헬퍼 T 세포, 기억 T 세포, 조절 T 세포, 나이브(naive) T 세포, CD4+ 세포 및 CD8+ T 세포를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시 양태에서, T 세포 아형은 특정 분자의 존재 또는 부재를 검출함으로써 확인될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 특이적 분자는 T 세포 아형을 식별하는데 사용될 수 있는 표면 마커이다.
[212] 일부 실시 양태에서, 표현형은 표면 마커, 예를 들어 CD3, CD4, CD8, CD28, CD62L, CCR7, CD27, CD127, CD4, CD8, CD45RA 및/또는 CD45RO인 하나 이상의 특이적 분자의 양성 또는 고수준 발현이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어 CD3+, CD4+, CD8+, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및/또는 CD45RO+의 양성 표면 마커 발현에 기초한 것과 같은 T 세포 또는 T 세포 하위 집단 또는 서브세트의 표면 마커이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 표면 마커, 예를 들어 C-C 케모카인 수용체 유형 7 (CCR7), 분화 클러스터 27 (CD27), 분화 클러스터 28 (CD28), 및 분화 클러스터 45 RA (CD45RA)인 하나 이상의 특이적 분자의 양성 또는 고수준 발현이다. 특정 실시 양태에서, 표현형 마커는 CCR7, CD27, CD28, CD44, CD45RA, CD62L 및 L- 셀렉틴을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은, 표면 마커, 예를 들어 CD3, CD4, CD8, CD28, CD62L, CCR7, CD27, CD127, CD4, CD8, CD45RA 및/또는 CD45RO인 하나 이상의 특이적 분자의 음성 또는 발현의 부재이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어 CD3-, CD4-, CD8-, CD28-, CD62L-, CCR7-, CD27-, CD127-, CD4-, CD8-, CD45RA- 및/또는 CD45RO-의 표면 마커 발현 부재에 기초한 것과 같은 T 세포 또는 T 세포 하위 집단 또는 서브세트의 표면 마커이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 표면 마커, 예를 들어 C-C 케모카인 수용체 유형 7 (CCR7), 분화 클러스터 27 (CD27), 분화 클러스터 28 (CD28), 및 분화 클러스터 45 RA (CD45RA)인 하나 이상의 특이적 분자의 음성 또는 발현의 부재이다. 특정 실시 양태에서, 표현형 마커는 CCR7, CD27, CD28, CD44, CD45RA, CD62L 및 L-셀렉틴을 포함한다.
[213] 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD27, CCR7 및/또는 CD45RA의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD27+이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD27+이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD45RA-이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD45RA- 이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD27+/CD45RA- 이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD27+/CD45RA- 이다.
[214] 특정 실시 양태에서, 표면 마커는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 발현을 나타낸다. 특정 실시 양태에서, 표면 마커는, 일부 측면에서, 항-이디오타입 항체와 같은 항체를 사용하여 결정될 수 있는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 발현이다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체의 발현을 나타내는 표면 마커는 대용 마커이다. 특정 실시 양태에서, 상기 대용 마커는 활성이 거의 없거나 전혀 없도록 변형된 표면 단백질이다. 특정 실시 양태에서, 대용 마커는 재조합 수용체를 인코딩하는 동일한 폴리 뉴클레오티드에서 인코딩된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 코딩하는 핵산 서열은 내부 리보솜 출입 사이트 (IRES), 또는 T2A (예를들어, 서열번호: 6 및 17), P2A (예를들어, 서열번호: 18 및 19), E2A (예를들어, 서열번호: 20) 또는 F2A (예를들어, 서열번호: 21)와 같은 2A 서열과 같은 리보솜 건너 뛰기(skipping)를 초래하는 자가 절단 펩티드 또는 펩티드를 인코딩하는 핵산에 의해 선택적으로 분리되는 마커를 인코딩하는 핵산 서열과 작동 가능하게 연결된다. 외인성 마커 유전자는 일부 경우에 조작된 세포와 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 허용하고, 일부 경우에는 세포 자살을 촉진할 수 있다.
[215] 예시적인 대리 마커는 절단된 세포 표면 폴리펩티드, 예를 들어 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체 2 (tHER2), 절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt, 서열번호 7 또는 16에 제시된 예시적인 EGFRt 서열) 또는 전립선-특이적 막 항원(PSMA) 또는 이의 변형된 형태을 포함할 수 있다. EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체 또는 EGFRt 작제물 및 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체로 조작된 세포를 확인 또는 선택하고/하거나 수용체를 발현하는 세포를 제거 또는 분리하는데 사용될 수 있는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 포함할 수 있다. 미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu 등의 Nature Biotech.2016년 4월; 34(4): 430-434) 를 참조한다. 일부 측면에서, 마커, 예를 들어 대용 마커는 CD34, NGFR, 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어, tEGFR)의 전부 또는 일부 (예를 들어, 절단된 형태)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 마커를 인코딩하는 핵산은 링커 서열, 예를 들어 T2A와 같은 절단 가능한 링커 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커 및 임의의 링커 서열은 PCT Pub No. WO2014031687에 개시된 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 마커는 선택적으로, T2A 절단 가능한 링커 서열과 같은 링커 서열에 연결된, 절단된 EGFR (tEGFR)일 수 있다. 절단된 EGFR (예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩티드는 서열 번호 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호 7 또는 16과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열로 구성된다.
[216] 일부 실시 양태에서, 마커는 녹색 형광 단백질(GFP)과 같은 형광 단백질, 슈퍼-폴드 GFP와 같은 농축된 녹색 형광 단백질(EGFP), 적색 형광 단백질(RFP), 예컨대 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 청록색 형광 단백질(CFP), 청록색 형광 단백질(BFP), 강화 청색 형광 단백질(EBFP), 및 황색 형광 단백질(YFP) 및 형광 단백질의 종 변이체, 단량체 변이체 및 코돈-최적화 및/또는 농축된 변이체를 포함하는 이의 변이체이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 마커는 루시퍼라제, 대장균의 lacZ 유전자, 알칼리성 포스파타제, 분비된 배아 알칼리성 포스파타제(SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(CAT)와 같은 효소이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자는 루시퍼라제(luc), β- 갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), β-글루쿠로니다제(GUS) 또는 이의 변이체를 포함한다.
[217] 특정 실시 양태에서, 표현형은 예를 들어 하나 이상의 표면 마커 CD3, CD4, CD8, 및/또는 재조합 수용체 (예를 들어 CAR)의 표면 발현, 또는 재조합 수용체 (예를 들어 CAR)의 발현을 나타내거나 상관하는 그의 대용 마커의 발현을 포함한다.
[218] 특정 실시 양태에서, 표현형은 표면 마커인 하나 이상의 특정 분자의 발현에 의해 확인된다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD3, CD4, CD8 및/또는 재조합 수용체, 예를 들어, CAR의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 재조합 수용체는 CAR이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD3+/CAR+, CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+를 포함한다.
[219] 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD27, CCR7 및/또는 CD45RA 및/또는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CAR+ 이다. 일부 구체 예에서, 표현형은 CD27+/CAR+이다. 일부 구체 예에서, 표현형은 CCR7+/CD27+/CAR+이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD45RA-/CAR+ 이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD45RA-/CAR+ 이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD27+/CD45RA-/CAR+ 이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD27+/CD45RA-/CAR+ 이다.
[220] 일부 실시 양태에서, 표현형은 생존력이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 세포가 정상적인 기능성 세포 과정을 겪고/거나 괴사 또는 프로그램된 세포 사멸을 겪지 않거나 진행하지 않는 것을 나타내는 마커의 양성 발현이다. 일부 실시 양태에서, 생존력은 세포의 산화 환원 전위, 세포막의 완전성, 또는 미토콘드리아의 활성 또는 기능에 의해 평가될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 생존성은 세포 사멸과 관련된 특정 분자의 부재, 또는 분석에서 세포 사멸의 징후의 부재이다.
[221] 일부 실시 양태에서, 표현형은 생존력이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 세포의 생존력은 관련 기술 분야에서 일상적인 다수의 수단에 의해 검출, 측정 및/또는 평가될 수 있다. 이러한 생존력 분석의 비제한적인 예는 염료 흡수 분석 (예를 들어, 칼세인 AM 분석), XTT 세포 생존력 분석 및 염료 배제 분석 (예를 들어, 트립판 블루, 에오신 또는 프로피디움 염료 배제 분석)을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 생존성 분석은 세포 용량, 세포 조성물 및/또는 세포 샘플에서 생존 세포의 수 또는 백분율(예를 들어, 빈도)을 결정하는데 유용하다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 다른 특징, 예를 들어 재조합 수용체 발현과 함께 세포 생존력을 포함한다.
[222] 특정 실시 양태에서, 표현형은 세포 생존력, 생존 CD3+, 생존 CD4+, 생존 CD8+, 생존 CD3+/CAR+, 생존 CD4+/CAR+, 생존 CD8+/CAR+, 생존 CD4+/CCR7+/CAR+, 생존 CD8+/CD27+/CAR+, 생존 CD4+/CD27+/CAR+, 생존 CD8+/CCR7+/CD27+/CAR+, 생존 CD4+/CCR7+/CD27+/CAR+, 생존 CD8+/CCR7+/CD45RA-/CAR+ 또는 생존 CD4+/CCR7+/CD45RA-, 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다.
[223] 특정 실시 양태에서, 표현형은 아포토시스 및/또는 세포가 아포토시스 과정을 겪고 있다는 표시의 부재이거나 이를 포함한다. 아포토시스는 특징적인 세포 변화 및 사망을 초래하는 일련의 고정된 형태학적 및 생화학적 사건을 포함하는 프로그램된 세포 사멸의 과정이다. 이러한 변화에는 기포형성(blebbing), 세포 수축, 핵 단편화, 염색질 응축, 염색체 DNA 단편화 및 전체 mRNA 붕괴가 포함된다. 아포토시스는 잘 특성화된 과정이며, 다양한 단계와 관련된 특정 분자는 당 업계에 잘 알려져 있다.
[224] 일부 실시 양태에서, 표현형은 아포토시스의 초기 단계의 부재, 및/또는 아포토시스의 초기 단계와 관련된 지시자 및/또는 특이적 분자의 부재이다. 아포토시스의 초기 단계에서, 세포 및 미토콘드리아 막의 변화가 명백해진다. 생화학적 변화는 세포의 세포질과 핵에서도 명백하다. 예를 들어, 아포토시스의 초기 단계는 특정 카스파제, 예를 들어 2, 8, 9 및 10의 활성화에 의해 나타날 수 있다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 말기 아포토시스의 부재, 및/또는 말기 아포토시스의 말기와 관련된 지시자 및/또는 특이적 분자의 부재이다. 아포토시스의 중간 내지 말기 단계는 막 완전성, 염색질 응축 및 DNA 단편화의 추가 손실을 특징으로하며, 카스파제 3, 6 및 7의 활성화와 같은 생화학적 사건을 포함한다.
[225] 특정 실시 양태에서, 표현형은 아포토시스를 개시하는 것으로 알려진 프로-아포토시스 인자, 예를 들어 사멸 수용체 경로의 구성, 미토콘드리아 (진성) 경로의 활성화된 구성, 예를 들어, Bcl-2 계열 구성, 예를 들어 Bax, Bad 및 Bid 및 카스파제를 포함하는, 아포토시스와 관련된 하나 이상의 인자의 음성 발현이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 음성 또는 소량의 아폽토틱 마커이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 아폽토틱 마커의 음성 발현이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 지시자, 예를 들어 아넥신 V 분자의 부재이며, 이는 세포 조성물과 함께 배양되거나 세포 조성물과 접촉할 때 아포토시스를 겪는 세포에 우선적으로 결합할 것이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 세포에서 아포토시스 병태를 나타내는 하나 이상의 마커의 발현이거나 이를 포함한다.
[226] 일부 실시 양태에서, 표현형은 아포토시스의 마커인 특정 분자의 음성(또는 낮은) 발현이다. 다양한 아폽토틱 마커는 당업자에게 공지되어 있으며, 하나 이상의 카스파제의 활성 증가, 즉 활성화된 카스파제 (예를 들어, 활성 카스파제), PARP 절단의 증가, Bcl-2 패밀리 단백질의 활성화 및/또는 전좌, 세포 사멸 경로의 구성, 예를 들어, Fas 및 FADD, 핵 수축의 존재(예를 들어, 현미경으로 모니터링) 및 염색체 DNA 단편화의 존재 (예를 들어, 염색체 DNA 사다리(ladder)의 존재) 또는 TUNEL 염색 및 아넥신V 염색을 포함하는 아포토시스 분석법에 의한 것을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
[227] 카스파제는 아스파르트 산 잔기 뒤에 단백질을 절단하는 효소이며, 이 용어는 "시스테인-아스파르트 산 프로테아제"에서 유래된다. 카스파제는 아포토시스에 관여하므로, 카스파제-3과 같은 카스파제의 활성화는 아포토시스의 증가 또는 회복을 나타낸다. 특정 실시 양태에서, 카스파제 활성화는 당업자에게 공지된 방법에 의해 검출될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 활성화된 카스파제(즉, 절단된 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는)에 특이적으로 결합하는 항체는 카스파제 활성화를 검출하는데 사용될 수 있다. 다른 예에서, 카스파제 활성(FLICA)의 플루오로크롬 억제제 분석은 카스파제-3 (즉, 형광 7-아미노-4-메틸쿠마린(AMC)의 방출을 검출)에 의해 아세틸 Asp-Glu-Val-Asp 7- 아미도-4- 메틸쿠마린(Ac-DEVD-AMC)의 가수 분해를 검출함으로써 카스파제-3 활성화를 검출하는데 이용될 수 있다. FLICA 분석은 다수의 카스파제(예를 들어, FAM-VAD-FMK FLICA)에 의해 처리된 기질의 생성물을 검출함으로써 카스파제 활성화를 결정하는데 사용될 수 있다. 다른 기술은, 루미노제닉 카스파제-8 테트라펩타이드 기질 (Z-LETD-아미노루시페린), 카스파제-9 테트라펩타이드 기질(Z-LEHD- 아미노루시페린), 카스파제-3/7 기질(Z-DEVD- 아미노루시페린), 카스파제-6 기질 (Z-VEID-아미노루시페린) 또는 카스파제-2 기질(Z-VDVAD- 아미노루시페린)을 이용하는 The CASPASE-GLO® 카스파제 분석(PROMEGA)을 포함한다.
[228] 특정 실시 양태에서, 표현형은 세포에서 활성화된 카스파제-1, 활성화된 카스파제-2, 활성화된 카스파제-3, 활성화된 카스파제-7, 활성화된 카스파제-8, 활성화된 카스파제-9, 활성화된 카스파제-10 및/또는 활성화된 카스파제-13의 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3- 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 임의의 것과 같은 카스파제의 형태의 프로폼(효소원(zymogen) 절단)은 또한, 아포토시스의 존재를 나타내는 마커이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 카스파제-3의 프로폼(proform)과 같은 카스파제의 프로폼의 부재 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다.
[229] 일부 실시 양태에서, 아포토시스의 마커는 폴리 ADP-리보스 폴리머라제 1 (PARP)로 절단된다. PARP는 아포토시스의 초기 단계 동안 카스파제에 의해 절단된다. 따라서, 절단된 PARP 펩티드의 검출은 아포토시스에 대한 마커이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 절단된 PARP의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다.
[230] 일부 실시 양태에서, 아포토시스의 마커는 아포토시스와 관련된 세포의 특징을 검출하는 시약이다. 특정 실시 양태에서, 상기 시약은 아넥신V 분자이다. 아포토시스의 초기 단계 동안 지질 포스파티딜세린(PS)은 원형질막의 내부에서 외부 리플릿(leaflet)으로 이동한다. PS는 일반적으로 건강한 및/또는 비-아포토시스 세포에서 내부 막으로 제한된다. 아넥신 V는 높은 친화도로 포스파티딜세린(PS)에 우선적으로 결합하는 단백질이다. 형광 태그 또는 다른 리포터에 접합될 때, 아넥신 V를 사용하여 아포토시스의 초기 세포 표면 지표자를 신속하게 검출할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 외부 막상의 PS의 존재는 아포토시스의 후기 단계로 지속될 것이다. 따라서, 일부 구채예에서, 아넥신 V 염색은 아포토시스의 초기 및 후기 단계 모두의 지표이다. 특정 실시 양태에서, 아넥신, 예를 들어 아넥신 V는, 검출 가능한 표지로 태깅되고, 예를 들어 유세포 분석에 의해 아포토시스를 겪고있는 세포를 검출하기 위해 세포 조성물의 세포와 함께 배양, 노출 및/또는 접촉된다. 일부 실시 양태에서, 형광 태깅된 아넥신, 예를 들어 아넥신 V는 유세포 분석법 분석을 위해, 예를 들어 아 넥신-V/7-AAD 분석으로 세포를 염색하는 데 사용된다. 아넥신에 의한 아포토시스 검출에 적합한 대안적인 프로토콜은 방사성 표지된 아넥신 V를 이용하는 기술 및 분석법을 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 아넥신,예를 들어 아넥신 V-에 의한 음성 염색이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 외부 원형질막 상에 PS의 부재이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 아넥신, 예를 들어 아넥신 V에 의해 결합되지 않은 세포이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 외부 막에서 검출 가능한 PS가 결여된 세포는 아넥신 V-이다. 특정 실시 양태에서, 분석, 예를 들어 표지된 아넥신 V와의 배양 후 유세포 분석에서 아넥신 V-에 의해 결합되지 않은 세포는 아넥신 V-이다.
[231] 특정 실시 양태에서, 표현형은, 아넥신 V-, 아넥신 V-CD3+, 아넥신 V-CD4+, 아넥신 V-CD8+, 아넥신 V-CD3+/CAR+, 아넥신 V-CD4+/CAR+, 아넥신 V-CD8+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-, 활성화된 카스파제 3-/CD3+, 활성화된 카스파제 3-/CD4+, 활성화된 카스파제 3-/CD8+, 활성화된 카스파제 3-/CD3+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-/CD4+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CAR+, 아넥신 V-/CD4+/CCR7+/CAR+, 아넥신 V-/CD8+/CD27+/CAR+, 아넥신 V-/CD4+/CD27+/CAR+, 아넥신 V-/CD8+/CCR7+/CD27+/CAR+, 아넥신 V-/CD4+/CCR7+/CD27+/CAR+, 아넥신 V-/CD8+/CCR7+/CD45RA-/CAR+ 또는 아넥신 V-/CD4+/CCR7+/CD45RA-; 활성화된 카스파제 3-/CD4+/CCR7+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CD27+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-/CD4+/CD27+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CCR7+/CD27+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-/CD4+/CCR7+/CD27+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CCR7+/CD45RA-/CAR+ 또는 활성화된 카스파제 3-/CD4+/CCR7+/CD45RA- 또는 이들의 조합이다.
[232] 특정 실시 양태는 아포토시스에 대한 마커의 발현에 양성인 세포가 프로그램된 세포 사멸을 겪고 있고, 면역 기능이 감소되거나 없는 것으로 나타나고, 개시, 수행, 또는 면역 반응 또는 활동에 기여하기위해 활성화, 확장 및/또는 항원에 결합을 임의로 겪는 경우 능력이 줄어든 것으로 고려된다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제에 대한 음성 발현 및/또는 아넥신 V에 의한 음성 염색에 의해 정해진다.
[233] 특정 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-(카스파제 3-) 및/또는 아넥신 V-이거나 이를 포함한다.
[234] 표현형 중에는 T 세포의 하나 이상의 하위 유형 또는 하위 집단 또는 그의 표현형과 일반적으로 관련된 하나 이상의 마커의 발현 또는 표면 발현이 있다. T 세포 하위 유형 및 하위 집단은 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 및 나이브 T(TN) 세포, 이펙터 T 세포 (TEFF), 기억 T 세포를 포함할 수 있는 이의 서브 타입, 및 줄기 세포 기억 T (TSCM), 중앙 기억 T (TCM), 이펙터 기억 T (TEM), TEMRA 세포 또는 말단 분화 된 이펙터 기억 T 세포, 종양 침윤 림프구 (TIL), 미성숙 T 세포와 같은 이의 하위 유형 , 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막-관련 불변 T (MAIT) 세포, 자연 발생 및 적응 조절 T (Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포를 포함할 수 있다.
[235] 일부 측면에서, 표현형 중에는 발현 또는 마커 또는 기능, 예를 들어 덜 분화된 세포 서브세트 또는 더 분화된 서브세트와 관련된 사이토카인 분비와 같은 항원-특이적 기능이 포함된다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의CCR7+, CD27+ 및 인터루킨-2 (IL-2) 생산과 같은 덜 분화된 서브세트와 관련된 것들이다. 일부 측면에서, 덜 분화된 서브세트는 또한, 치료 효능, 자기-재생, 생존 기능 또는 이식편-대-숙주 질환과 관련될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 인터페론-감마 (IFN-γ) 또는 IL-13 생산과 같은 보다 분화된 서브세트와 관련된 것들이다. 일부 측면에서, 보다 분화된 서브세트는 또한, 노화(senescence) 및 효과기 기능과 관련될 수 있다.
[236] 일부 실시 양태에서, 표현형은 그들의 동족 항원에 노출된 기억 T 세포 또는 기억 T 세포 서브세트의 표현형이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 TCM 세포, TEM 세포, 또는 TEMRA 세포, TSCM 세포 또는 이들의 조합과 같은 기억 T 세포 (또는 이와 관련된 하나 이상의 마커)의 표현형이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 기억 및/또는 기억 T 세포 또는 그의 서브 타입에 대한 마커인 하나 이상의 특정 분자의 발현이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, TCM 세포와 관련된 예시적인 표현형은 하나 이상의 CD45RA-, CD62L+, CCR7+ 및 CD95+를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, TEM 세포와 관련된 예시적인 표현형은 하나 이상의 CD45RA-, CD62L-, CCR7- 및 CD95+를 포함할 수 있다.
[237] 특정 실시 양태에서, 표현형은 나이브(naive) T 세포에 대한 마커인 하나 이상의 특이적 분자의 발현이거나 이를 포함한다.
[238] 일부 실시 양태에서, 표현형은 기억 T 세포 또는 나이브(naive) T 세포이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 기억에 대한 마커인 하나 이상의 특이적 분자의 양성 또는 음성 발현이다. 일부 실시 양태에서, 기억 마커는 기억 T 세포 집단을 정의하는데 사용될 수 있는 특이적 분자이다.
[239] 일부 실시 양태에서, 표현형은 비-메모리 T 세포 또는 이의 서브 타입과 관련된 표현형 또는 하나 이상의 마커이거나 이를 포함하고; 일부 측면에서, 이는 나이브(naive) 세포와 관련된 표현형 또는 마커(들)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA+ 이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD45RA+ 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 중앙 기억 T 세포의 표현형이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA- 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA- 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 TEMRA 세포 또는 TSCM 세포이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD45RA+ 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+ 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은CD27+/CD28+, CD27-/CD28+, CD27+/CD28-, 또는 CD27-/CD28-중 하나이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD27+/CD45RA+ 이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD45RA+ 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD27+/CD45RA- 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7-/CD27+/CD45RA- 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD45RA+ 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CCR7-/CD27-/ CD45RA+ 이거나 이를 포함한다.
[240] 일부 실시 양태에서, 표현형은 상기 표현형 특성 중 어느 것이거나 이를 포함하고, CAR을 발현하는 기억 T 세포 또는 기억 아형과 관련된 표현형, 또는 CAR을 발현하는 나이브(naive) 세포와 관련된 표현형과 같은 재조합 수용체의 발현을 추가로 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 중심 기억 T 세포 또는 줄기 중심 기억 T 세포의 표현형이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 효과기 기억 세포이거나이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 TEMRA 세포이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CAR+/CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA-; CAR+/CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA-; CAR+/CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+; CAR+/CD27+/CD28+; CAR+/CD27-/CD28+; CAR+/CD27+/CD28-; 또는 CAR+/CD27-/CD28- 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CAR+/CCR7+/CD27+/CD45RA-; CAR+/CCR7-/CD27+/CD45RA-; CAR+/CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+; CAR+/CD27+; CAR+/CD27-; CAR+/CD27+/CD28-; 또는 CAR+/CD27-/CD28-이거나 이를 포함한다.
[241] 특정 실시 양태에서, 표현형은 아포토시스의 마커에 대해 음성인 T 세포의 표현형이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 아포토시스의 마커에 대해 음성인 나이브(naive) 세포이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 아포토시스의 마커는 활성화된 카스파제 3이다. 일부 실시 양태에서, 아포토시스의 마커는 아넥신V에 의한 양성 염색이다.
[242] 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 아포토시스의 마커에 대해 음성인 기억 T 세포 또는 그의 아형의 표현형이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 아포토시스의 마커에 대해 음성인 기억 T 세포 또는 특정 아형의 표현형이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 아포토시스의 마커에 대해 음성인 나이브(naive) 세포이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 아포토시스의 마커에 대해 음성인 중앙 기억 T 세포 또는 TSCM 세포 또는 나이브(naive) 세포의 표현형이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CAR을 발현하는 아포토시스의 마커에 대해 음성인 효과기 기억 세포의 표현형이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신 V-/CAR+/CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA-; 아넥신 V-/CAR+/CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA-; 아넥신 V-/CAR+/CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+; 아넥신 V-/CAR+/CD27+/CD28+; 아넥신 V-/CAR+/CD27-/CD28+; 아넥신 V-/CAR+/CD27+/CD28-; 또는 아넥신 V-/CAR+/CD27-/CD28- 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA-; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA-; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+/CD28+; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27-/CD28+; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+/CD28-; 또는 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27-/CD28- 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 아넥신 V-/CAR+/CCR7+/CD27+/CD45RA-; 아넥신 V-/CAR+/CCR7-/CD27+/CD45RA-; 아넥신 V-/CAR+/CCR7-/CD27-/CD45RA+; 아넥신 V-/CAR+/CD27+/CD28+; 아넥신 V-/CAR+/CD27-/CD28+; 아넥신 V-/CAR+/CD27+; 또는 아넥신 V-/CAR+/CD27- 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7+/CD27+/CD45RA-; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-/CD27+/CD45RA-; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-/CD27-/CD45RA+; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+/CD28+; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27-/CD28+; 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+; 또는 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27- 이거나 이를 포함한다.
[243] 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD27+/CD28+, CD27-/CD28+, CD27+/CD28-, CD27-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CAR+/CD27+/CD28+, CAR+/CD27-/CD28+, CAR+/CD27+/CD28-, CAR+/CD27-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+/CD28+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27-/CD28+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+/CD28-, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신 V-/CAR+/CD27+/CD28+, 아넥신 V-/CAR+/CD27-/CD28+, 아넥신 V-/CAR+/CD27+/CD28-, 아넥신 V-/CAR+/CD27-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD27+, CD27-, CD27+, CD27- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CAR+/CD27+, CAR+/CD27-, CAR+/CD27+, CAR+/CD27- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27-, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CD27- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신 V-/CAR+/CD27+, 아넥신 V-/CAR+/CD27-, 아넥신 V-/CAR+/CD27+, 아넥신 V-/CAR+/CD27- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다.
[244] 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+/CD28+, CCR7-/CD28+, CCR7+/CD28-, CCR7-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CAR+/CCR7+/CD28+, CAR+/CCR7-/CD28+, CAR+/CCR7+/CD28-, CAR+/CCR7-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7+/CD28+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-/CD28+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7+/CD28-, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신 V-/CAR+/CCR7+/CD28+, 아넥신 V-/CAR+/CCR7-/CD28+, 아넥신 V-/CAR+/CCR7+/CD28-, 아넥신 V-/CAR+/CCR7-/CD28- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CCR7+, CCR7-, CCR7+, CCR7- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CAR+/CCR7+, CAR+/CCR7-, CAR+/CCR7+, CAR+/CCR7- 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7+, 활성화된 카스파제 3-/CAR+/CCR7-, 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신 V-/CAR+/CCR7+, 아넥신 V-/CAR+/CCR7-, 아넥신 V-/CAR+/CCR7+, 아넥신 V-/CAR+/CCR7-, 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다.
[245] 일부 실시 양태에서, 표현형은 소진(exhaustion) 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 소진(exhaustion)과 관련된 특정 분자의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 특이적 분자는 소진 또는 소진과 관련된 질(quality), 예를 들어 열악한 효과기 기능 또는 억제 수용체 발현과 관련된 임의의 분자이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 면역 체크 포인트 억제제의 양성 또는 음성 발현이다. 특정 실시 양태에서, 소진 마커는 CTLA-4, FOXP3, PD-1, TIGIT, LAB-3, 2B4, BTLA, TIM3, VISTA, 또는 CD96 또는 이들의 조합이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CTLA-4, FOXP3, PD-1, TIGIT, LAB-3, 2B4, BTLA, TIM3, VISTA, 또는 CD96, 또는 이들의 조합의 양성 또는 음성 발현이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 PD1 및/또는 FOXP3의 양성 또는 음성 발현이다.
[246] 일부 실시 양태에서, 표현형은 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 CD3+세포에서 소진 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 CD4+ 세포에서 소진 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 소진 마커 및 CD3+의 양성 또는 음성 발현, 및 재조합 수용체 또는 CAR의 양성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 CD4+ 세포에서 소진 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 CD8+세포에서 소진 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 소진 마커는 CTLA-4, FOXP3, PD-1, TIGIT, LAB-3, 2B4, BTLA, TIM3, VISTA, 또는 CD96 중 하나 이상이다. 특정 실시 양태에서, 소진 마커는 PD1 및/또는 FOXP3이다.
[247] 특정 실시 양태에서, 표현형은 PD1-/CD3+, PD1-/CD4+, PD1-/CD8+, PD1-/CD3+/CAR+, PD1-/CD4+/CAR+, PD1-/CD8+/CAR+, PD1-/아넥신V-, PD1-/아넥신V-/CD3+, PD1-/아넥신V-/CD4+, PD1-/아넥신V-/CD8+, PD1-/아넥신V/-CD3+/CAR+, PD1-/아넥신V-/CD4+/CAR+, PD1-/아넥신V-/CD8+/CAR+, PD1-/활성화된 카스파제3-, PD1-/활성화된 카스파제3-/CD3+, PD1-/활성화된 카스파제3-/CD4+, PD1-/활성화된 카스파제3-/CD8+, PD1-/활성화된 카스파제3-/CD3+/CAR+, PD1-/활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+, PD1-/활성화된 카스파제3-/CD8+/CAR+, 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다.
[248] 특정 실시 양태에서, 표현형은 FOXP3-/CD3+, FOXP3-CD4+, FOXP3-/CD8+, FOXP3-/CD3+/CAR+, FOXP3-/CD4+/CAR+, FOXP3-/CD8+/CAR+, FOXP3-/아넥신 V-, FOXP3-/아넥신 V-/CD3+, FOXP3-/아넥신 V-/CD4+, FOXP3-/아넥신 V-/CD8+, FOXP3-/아넥신 V/-CD3+/CAR+, FOXP3-/아넥신 V-/CD4+/CAR+, FOXP3-/아넥신 V-/CD8+/CAR+, FOXP3-/활성화된 카스파제 3-, FOXP3-/활성화된 카스파제 3-/CD3+, FOXP3-/활성화된 카스파제 3-/CD4+, FOXP3-/활성화된 카스파제 3-/CD8+, FOXP3-/활성화된 카스파제 3-/CD3+/CAR+, FOXP3-/활성화된 카스파제 3-/CD4+/CAR+, FOXP3-/활성화된 카스파제 3-/CD8+/CAR+, 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다.
[249] 특정 실시 양태에서, 표현형은 T 세포 활성화와 관련된 특정 분자의 음성 발현이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화 마커인 하나 이상의 특정 분자의 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일반적으로, T 세포 활성화는 2 개의 동시 신호를 필요로한다. 첫 번째는 T 세포 수용체 복합체(TCR)가 펩티드 항원을 보유하는 주요 조직 적합성 복합체(MHC) 분자에 결합하는 것이다. 두 번째는 공동 자극 수용체 CD28과 APC 표면의 단백질, 예컨대 B7-2 또는 B7-1의 결합에 의해 제공된다. 특정 실시 양태에서, 특정 분자는 TCR 활성화와 관련되어 있고, 예를 들어 T 세포 활성화의 결과로서 활성화, 변경 또는 발현된다. 일부 특정예에서, 특정 분자는 CD28 수용체의 활성화, 예를 들어 T 세포 활성화의 결과로서 활성화, 변경 또는 발현되는 분자와 관련된다.
[250] 특정 실시 양태에서, 표현형은 활성화 마커인 하나 이상의 특정 분자의 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 활성화 마커는 CD25, CD26, CD27, CD28, CD30, CD71, CD154, CD40L, CD127, LAG3, Ki67, 또는 이들의 조합 중 하나 이상이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD25, CD26, CD27, CD28, CD30, CD71, CD154, CD40L, CD127, LAG3 또는 Ki67 중 하나 이상의 음성 또는 양성 발현이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD25, CD127, LAG3, Ki67 또는 이의 조합의 발현이거나 이를 포함한다.
[251] 일부 실시 양태에서, 표현형은 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 CD3+세포에서 활성화 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 CD4+ 세포에서 활성화 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 재조합 수용체 또는 CAR을 발현하는 CD8+ 세포에서 활성화 마커의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 활성화 마커는 CD25, CD26, CD27, CD28, CD30, CD71, CD154, CD40L, CD127, LAG3, 또는 Ki67 중 하나 이상이다. 특정 실시 양태에서, 활성화 마커는 CD25, CD127, LAG3, Ki67 또는 이들의 조합이다.
[252] 특정 실시 양태에서, 표현형은 활성화 마커 및 CD3+, CD4+, CD8+, CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+, 아넥신V-, 아넥신V-/CD3+, 아넥신V-/CD4+, 아넥신V-/CD8+, 아넥신 V/-CD3+/CAR+, 아넥신V-/CD4+/CAR+, 아넥신V-/CD8+/CAR+, 활성화된 카스파제3-, 활성화된 카스파제3-/CD3+, 활성화된 카스파제3-/CD4+, 활성화된 카스파제3-/CD8+, 활성화된 카스파제3-/CD3+/CAR+, 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+, 활성화된 카스파제3-/CD8+/CAR+, 또는 이들의 조합의 양성 또는 음성 발현이거나 이를 포함한다.
[253] 일부 실시 양태에서, 표현형은 자극, 예를 들어 면역 세포 기능을 유발, 유도, 촉진 또는 연장시키는 자극에 대한 반응에 의해 평가된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 자극 조건 또는 자극 제제의 존재하에 배양되며, 표현형은 자극에 대한 반응이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 자극에 반응에 따른 가용성 인자의 생성 또는 분비이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 자극에 반응에 따른 가용성 인자의 결핍 또는 생성 또는 분비이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 가용성 인자는 사이토카인이다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인은 IL-2이다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인은 TNFa 이다.
[254] 상기 조건은 하나 이상의 특정 매질, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 작용제, 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화 시키도록 설계된 임의의 다른 작용제을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포는 자극되고, 표현형은 가용성 인자, 예를 들어 사이토카인 또는 케모카인이 생성 또는 분비되는지에 의해 결정된다. 일부 실시 양태에서, 자극은 비특이적, 즉, 항원-특이적 자극이 아니다. 일부 실시 양태에서, 자극은 PMA 및 이오노마이신을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포는 자극 조건 또는 자극 제제의 존재 하에 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 7시간, 약 8시간, 약 9시간, 약 10 시간, 약 11 시간, 약 12 시간, 약 18 시간, 약 24 시간, 약 48 시간 또는 1 시간 내지 4 시간, 1시간 내지 12시간, 12시간 내지 24시간 또는 24시간 이상 동안 배양된다.
[255] 일부 실시 양태에서, 세포는 재조합 수용체에 특이적인 항원 또는 이의 에피토프, 또는 재조합 수용체에 결합 및/또는 인식하는 항체 또는 이의 단편, 또는 이들의 조합인 작용제로 자극된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 CAR이고, 작용제는 CAR에 특이적인 항원 또는 이의 에피토프이거나, CAR에 결합하고/하거나 이를 인식하는 항체 또는 이의 단편, 또는 이들의 조합이다. 특정 실시 양태에서, CAR에 의해 인식되는 항원의 표면 발현과 함께 표적 세포의 존재 하에 세포를 배양함으로써 세포가 자극된다. 특정 실시 양태에서, 재조합 수용체는 CAR이고, 작용제는 CAR에 결합하는 항체 또는 활성 단편, 변이체 또는 그의 일부이다. 특정 실시 양태에서, CAR에 결합하는 항체 또는 이의 활성 단편, 변이체 또는 부분은 항-이디오 타입(항-ID) 항체이다.
[256] 일부 실시 양태에서, 자극 조건 또는 작용제는 TCR 복합체의 세포 내 신호 전달 도메인을 자극하거나 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 작용제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 작용제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포 내 신호 전달 캐스케이드(cascade)를 켜거나 개시한다. 이러한 작용제는 TCR 성분 및/또는 공자극 수용체, 예를 들어, 비드와 같은 고체 지지체에 결합된 항-CD3, 항-CD28 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 특이적인 것과 같은 항체를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 작용제는 PMA 및 이오노마이신이다.
[257] 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 자극에 반응에 따른 사이토카인의 생성 또는 분비이거나 이를 포함한다. 사이토카인의 생성 및/또는 분비는 면역 반응에 기여하고, 항 바이러스 단백질의 유도 및 T 세포 증식의 유도를 포함하는 상이한 과정에 관여한다. 사이토카인은 미리 형성된 인자는 아니지만 세포 활성화에 반응하여 빠르게 생성되고 분비된다. 사이토카인의 생산 또는 분비는 당업계에 공지된 임의의 적합한 기술에 의해 측정, 검출 및/또는 정량될 수 있다.
[258] 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 사이토카인의 생성이다. 일부 실시 양태에서, 동일한 세포로부터 2 개 이상의 사이토카인의 생성은 이러한 세포의 다작용성 특징을 나타낼 수 있다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인의 생산은 세포 내 사이토카인 염색에 의해 측정, 검출 및/또는 정량화된다. 유세포 분석에 의한 세포 내 사이토카인 염색 (ICS)은 단일 세포 수준에서 사이토카인 생산을 연구하기에 적합한 기술이다. 세포 자극 후 소포체 내에서 사이토카인의 생성 및 축적을 감지하여, 특정 사이토카인의 생산 또는 임계 값에 기초하여 고생산 및 저생산 세포의 분리에 대해 양성 또는 음성인 세포 집단을 식별할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 상기와 같이, 자극은 비특이적 자극을 사용하여 수행될 수 있으며, 예를들어 항원-특이 적 자극이 아니다. 예를 들어, PMA/이오노마이신은 비특이적 세포 자극에 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 자극은 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)에 특이적인 항원 또는 이의 에피토프, 또는 재조합 수용체에 결합 및/또는 인식하는 항체 또는 이의 단편, 또는 이들의 조합인 작용제에 의해 수행될 수 있다. ICS는 또한, 매우 유연하고 다양한 방법으로, 세포 표면 마커를 사용하여 면역 표현형을 위한 다른 유세포 분석 프로토콜, 또는 세포의 특정 하위 군에서 사이토카인 생산에 접근하는 MHC 다량체의 조합과 사용할 수 있다. 사이토카인 생성을 측정 또는 검출하기위한 다른 단일 세포 기술에는 ELISPOT, 제한 희석 및 T 세포 클로닝이 포함되나 이에 제한되지는 않는다.
[259] 일부 실시 양태에서, 표현형은, 재조합 수용체에 특이적인 및/또는 인식되는 항원에 의한 재조합 수용체의 자극을 따르는 것과 같은 사이토카인의 생산이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은, 재조합 수용체에 특이적인 및/또는 인식되는 항원에 의한 재조합 수용체의 자극에 따르는 것과 같은 사이토카인의 생산의 결핍이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 사이토카인의 양성이거나 높은 수준의 생산이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 사이토카인의 음성이거나 낮은 수준의 생산이다. 사이토카인은 인터루킨-1 (IL-1), IL-1β, IL-2, sIL-2Ra, IL-3, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8 , IL-10, IL-12, IL-13, IL 27, IL-33, IL-35, TNF, 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), CXCL2, CCL2, CCL3, CCL5, CCL17, CCL24, PGD2, LTB4, 인터페론 감마 (IFN-γ), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 대식세포 염증성 단백질 (MIP)-1α, MIP-1β, Flt-3L, 프락토킨 및/또는 IL-5을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 사이토카인, 예를 들어 특정 세포 유형과 관련된 사이토카인, 예컨대 Th1, Th2, Th17 및/또는 Treg 아형과 관련된 사이토카인의 생산을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 예시적인 Th1 관련 사이토카인은 IL-2, IFN-γ 및 형질 전환 성장 인자 베타(TGF-β)를 포함하고, 일부 경우 세포 면역 반응에 관여한다. 일부 실시 양태에서, 예시적인 Th2 관련 사이토카인은 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 및 IL-13을 포함하고, 일부 경우 체액 면역 및 항-염증 특성과 관련있다. 일부 실시 양태에서, 예시적인 Th17 관련 사이토카인은 IL-17A 및 IL-17F를 포함하고, 일부 경우에는 예를 들어 염증 반응 동안 호중구 및 대식세포를 동원하는 데 관여한다.
[260] 일부 실시 양태에서, 표현형은 사이토카인의 생산이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 초과의 사이토카인(예를 들어, 다작용성)의 생산이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 사이토카인의 생산 부족이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 IL-2, IL-5, IL-13, IFN- 감마, 또는 TNF- 알파의 생성 또는 이의 부족이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 IL-2, IL-13, IFN- 감마, 또는 TNF- 알파의 생성 또는 이의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 생산의 존재 및/또는 사이토카인의 높은 수준의 생산의 존재이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 사이토카인의 생산이 적거나, 감소되거나, 또는 부재하다.
[261] 일부 실시 양태에서, 표현형은, 예를 들어, 자극 제제가 존재하거나, 분비가 억제되거나 억제될 때 자극 조건 하에서 평가되는 사이토카인의 내부 (세포 내) 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 비특이적 자극 제제, 예를 들어 항원 결합 도메인에 결합하지 않는 자극 제제, 예를 들어 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)이다. 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 비특이적 자극 제제로서 작용할 수 있는 PMA/이오노마이신이다. 일부 구체 예에서, 자극 제제는 특정 자극 제제, 예를 들어 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)에 특이적인 항원 또는 이의 에피토프이거나, 또는 재조합 수용체에 결합 및/또는 인식하는 항체 또는 이의 단편 또는 이들의 조합이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 사이토카인의 내부 생산의 부재 또는 부족이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은, 하나 이상의 사이토카인의 생산이 ICS 분석으로 평가될 때, 하나 이상의 사이토카인의 내부 양이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 ICS 분석으로 평가될 때 IL-2, IL-5, IL-13, IFN- 감마 또는 TNF-알파 중 하나 이상의 내부량이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 ICS 분석으로 평가될 때 하나 이상의 사이토카인의 낮은 내부량 또는 검출 가능한 양의 부족이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 ICS 분석으로 평가될 때 IL-2, IL-5, IL-13, IFN-감마 또는 TNF-알파의 낮은 내부량 또는 검출 가능한 양의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은, 예를들어, 다중 기능성 평가를 위한 다중화 분석 또는 검정에 의한 다중 사이토카인의 분석을 포함한다 (예를 들어, Xue et al., (2017) Journal for ImmunoTherapy of Cancer 5:85 참조). 일부 실시 양태에서, 사이토카인 발현의 결여는 세포의 활성 및/또는 기능 및/또는 반응 및 무진행 생존의 지속성과 역 상관되거나 연관되어있다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 임의의 공지된 방법에 따라 평가된, 감소된, 최소의, 또는 사이토카인 생성하지 않는 세포는, 세포 조성물 (예를 들어, 산출 조성물, 치료 세포 조성물)에서 감소된다.
[262] 특정 실시 양태는 표현형이 사이토카인의 생산 또는 사이토카인 생산의 부족 또는 적은 양을 포함할 수 있음을 고려한다. 이는 사이토카인의 동일성, 사이토카인을 검출하기 위해 수행된 분석, 및 분석과 함께 사용되는 자극 제제 또는 병태를 포함하지만 이에 제한되지 않는 몇몇 요인에 의존할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서 표현형은 ICS에 의해 지시된 바와 같이 IL-13 생산의 부족 또는 저수준이거나 또는 이를 포함하는 반면, 일부 구체 예에서, 표현형은 ICS에 의해 지시된 바와 같이 IFN- 감마의 생성이거나 이를 포함하는 것으로 고려된다.
[263] 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 사이토카인의 생산 및 CD3+, CD4+, CD8+, CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+, 아넥신V-, 아넥신V- CD3+, 아넥신V-CD4+, 아넥신V-CD8+, 아넥신V-CD3+/CAR+, 아넥신V- CD4+/CAR+, 아넥V-CD8+/CAR+, 활성화된 카스파제 3-, 활성화된 카스파제3-/CD3+, 활성화된 카스파제3-/CD4+, 활성화된 카스파제 3-/CD8+, 활성화된 카스파제3-/CD3+/CAR+, 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+, 또는 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CAR+, 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+에서 하나 이상의 사이토카인의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IL-2, IFN-감마, 및/또는 TNF-알파이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 IFN-감마의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD8+/CAR+ 세포에서 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD8+/CAR+ 세포에서 IFN-감마 및 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 IFN-감마의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD8+/CAR+ 세포에서 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD8+/CAR+ 세포에서 IFN-감마 및 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신V-/CD4+/CAR+ 세포에서 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신V-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신V-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 IFN-감마의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신V-/CD8+/CAR+ 세포에서 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신V-/CD8+/CAR+ 세포에서 IFN-감마 및 TNF-알파의 생산이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 이 단락에 기술된 표현형은 지속성있는 반응 및 무진행 생존과 양의 상관 관계가있다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 이들 표현형을 포함하는 세포는 세포 조성물(예를 들어, 산출 조성물, 치료 세포 조성물)에서 최대화되거나 증가된다. 일부 구체 예에서, 세포 조성물은, 인터루킨 2(IL-2) 및/또는 TNF-알파로부터 선택된 사이토카인을 생성할 수 있는 조성물에서, 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)를 발현하는 조작 된 CD4 T 세포와 같은 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%, 또는 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 100%, 또는 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%, 또는 약 70%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 약 100%를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 조성물은 인터페론-감마 (IFN- 감마), 인터루킨2 (IL-2) 및 TNF- 알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인을 생성하기위한 다작용성 조성물에서, 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 CD4 T세포와 같은 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 또는 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 또는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 또는 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 40% 또는 그 이상을 포함한다.
[264] 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 사이토카인 생산 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 사이토카인 생산의 부족 및 CD3+, CD4+, CD8+, CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+, 아넥신V-, 아넥신V-CD3+, 아넥신V-CD4+, 아넥신 V-CD8+, 아넥신V-CD3+/CAR+, 아넥신V-CD4+/CAR+, 아넥신V-CD8+/CAR+, 활성화된 카스파제3-, 활성화된 카스파제3-/CD3+, 활성화된 카스파제3-/CD4+, 활성화된 카스파제3-/CD8+, 활성화된 카스파제3-/CD3+/CAR+, 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+, 또는 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CAR+, 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IL-2, IFN-감마, 및/또는 TNF-알파이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2의 생산의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+ 세포에서 TNF-알파 생산의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 TNF-알파 생산의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제3-/CD4+/CAR+ 세포에서 IL-2 및 IFN-감마 생산의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CAR+ 세포에서 TNF-알파 생산의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화된 카스파제 3-/CD8+/CAR+ 세포에서 INF-감마 및 TNF-알파 생산의 부족이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 이 단락에 기술된 표현형은 지속성있는 반응 및 무진행 생존과 음의 상관 관계가 있다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 이들 표현형을 포함하는 세포는 세포 조성물(예를 들어, 산출 조성물, 치료 세포 조성물)에서 최소화되거나 감소된다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서,이 단락의 표현형을 포함하는 세포는 세포 조성물(예를 들어, 산출 조성물, 치료 세포 조성물)에서 총 세포의 2%, 5%, 10%, 15%, 20% 또는 25% 미만을 구성한다.
[265] 특정 실시 양태에서, 표현형은 ICS 분석법, 및 세포의 서브세트 또는 특정 세포 유형의 세포에 대한 하나 이상의 특이적 마커로 평가될 때, 하나 이상의 IL-2, IL-13, IFN- 감마 또는 TNF-알파의 내부 양의 존재 또는 부재이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 하나 이상의 IL-2, IL-13, IFN- 감마, 또는 TNF-알파 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+의 생성 또는 이의 부족이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 IL-2 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+의 생성이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 IL-2 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+ 의 생성 부족 또는 낮은 생성이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 IL-13 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+ 의 생성이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 IL-13 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+ 의 생성이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 IL-13 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+ 의 생성 부족 또는 낮은 생성이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 IFN-gamma 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+의 생성이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 TNF-alpha 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+의 생성이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은TNF-alpha 및 CD4+/CAR+ 및/또는 CD8+/CAR+의 생성 부족 또는 낮은 생성이거나 이를 포함한다.
[266] 임의의 하나 이상의 표현형을 단독으로 또는 조합하여 제공된 방법에 따라 평가 또는 결정할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD3+, CD3+/CAR+, CD4+/CAR+, CD8+/CAR+ 또는 이들의 조합이다.
[267] 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD3+이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD3+/CAR+이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 CD8+/CAR+이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD4+/CAR+이거나 이를 포함한다.
[268] 특정 실시 양태에서, 표현형은 아넥신-/CD3+/CAR+ 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 아넥신-/CD4+/CAR+ 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 아넥신-/CD8+/CAR 이다.
[269] 특정 실시 양태에서, 표현형은 세포 내 IL-2 및 CD4+/CAR+의 부족 또는 소량이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 세포 내 IL-13 및 CD4+/CAR+의 부족 또는 소량이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 세포 내 IL-13 및 CD8+/CAR+ 세포의 발현 부족 또는 소량이다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 세포 내 TNF-알파 CD4+/CAR+의 부족 또는 소량이다.
[270] 특정 실시 양태에서, 표현형은 CD8+/CAR+ 이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 표현형은 아넥신-/CD8+/CAR+이거나 이를 포함한다.
[271] 일부 실시 양태에서, 표현형은, 선택적으로 항원 또는 재조합 수용체에 대해 비특이적이며/이거나 폴리 클론으로 생성된 사이토카인의 하나 또는 조합의 생성의 지표를 포함하고, 여기서 하나 이상의 사이토카인은 IL-2, IL-13, IL-17, IFN- 감마 또는 TNF-알파이다. 일부 실시 양태에서, 생성 지표는, T 세포 조성물의 샘플을 폴리클로날제, 항원-특이적 제제 또는 재조합 수용체에 결합하는 제제, 선택적으로 CAR과의 배양을 포함하는 분석, 임의적으로 세포 내 사이토카인 염색 분석에서 측정된다. 일부 실시 양태에서, 작용제는 PMA 및 이오노마이신이거나 이를 포함하고 또는 T 세포 수용체 또는 T 세포 수용체 복합체 작용제이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 활성화 마커의 음성 발현을 포함하고, 여기서 활성화 마커는 CD25, CD127, LAG3, Ki67 및 이들의 조합 중에서 선택된다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 소진 마커의 음성 발현을 포함하고, 여기서 소진 마커는 PD1 또는 FOXP3 유전자 생성물 또는 이들의 조합이다. 일부 실시 양태에서, 표현형은 나이브(naive) 표현형 또는 기억 표현형을 포함하고, 선택적으로 여기서 기억 표현형은 T 효과기 기억 표현형, T 중앙 기억 표현형 또는 CD45RA를 발현하는 T 효과기 기억 표현형 (Temra)을 포함한다.
[272] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체-의존적(예를 들어, CAR) 활성은, 전염증성 사이토카인, 선택적으로, TNF-알파, IFN-감마 및 IL-2의 조합 또는 하나의 생성 또는 축적의 측정이다. 일부 실시 양태에서, 기준 척도는 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)를 포함하는 복수의, 임의로 적어도 10, 적어도 15, 적어도 20의 기준 치료용 T 세포 조성물 중 척도의 평균이며: (i) 각각의 기준 치료용 T 세포 조성물은 대상체에게 투여 후 허용 가능한 안전성 프로파일을 초래하는 것으로 관찰되거나 결정되었으며, 임의로, 상기 대상체는 항원을 발현하거나 항원과 관련된 질환 또는 병태를 가지고; 및/또는 (ii) 각각의 기준 치료용 T 세포 조성물은 대상체에게 투여 후 원하는 효능을 나타내는 것으로 관찰되거나 결정되었으며, 임의로, 상기 대상체는 항원을 발현하거나 항원과 관련된 질환 또는 병태를 갖는다.
[273] 특정 실시 양태에서, 세포 조성물의 특정 표현형의 세포의 수, 다수 또는 분획이 결정, 측정, 수득, 검출, 관찰 및/또는 확인된다. 일부 실시 양태에서, 세포 조성물은 T 세포 조성물이다. 특정 실시 양태에서, 세포 조성물은 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 세포를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 세포 조성물은, 질환 또는 병태를 치료하기 위해 대상체에게 투여될 수 있는 재조합 수용체를 발현하는 세포를 포함하는 치료 T 조성물이다. 특정 실시 양태에서, 표현형의 세포의 수는 세포 조성물의 표현형의 세포의 총량이다. 특정 실시 양태에서, 표현형의 세포 수는 세포 조성물의 용량에 존재하는 표현형의 세포의 총 수이다. 특정 실시 양태에서, 표현형의 세포 수는 세포 조성물의 샘플에 존재하는 표현형의 세포 수이다. 일부 실시 양태에서, 표현형의 세포의 수는 세포 조성물에 존재하는 표현형의 세포의 빈도, 비율 및/또는 백분율, 또는 그의 용량 또는 샘플로 표현될 수 있다.
[274] 특정 실시 양태에서, 표현형 세포의 수, 배수 또는 분획은 예를 들어, 수, 배수 또는 분획의 관련 값의 범위를 압축하기 위해 변환된다. 일부 실시 양태들에서, 변환은 결정론적 수학 함수를 데이터 세트의 각 포인트에 임의 적용하는 것, 예컨대 각 데이터 포인트 x는 변환된 값 y=f(x)으로 대체되며, 상기 f는 함수이다. 일반적으로, 변환은 데이터가 적용되는 통계적 추론 절차의 가정을 보다 가깝게 충족시키거나 그래프의 해석성 또는 외관을 향상시키도록 적용될 수 있다. 대부분의 경우 데이터 변환에 사용되는 기능은 비가역적이며 일반적으로 연속적이다. 변환은 일반적으로 비교 가능한 측정 모음에 적용된다. 적합한 변환의 예는 로그 및 제곱근 변환, 역 변환 및 전력 변환(power transformations)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시 양태에서, 표현형 세포의 수, 배수 또는 분획은 대수 변환에 의해 변환된다. 특정 실시 양태에서, 대수 변환은 공통 로그 (log10(x)), 자연 로그 (ln(x)) 또는 이진 로그 (log2(x))이다.
B. 투약 및 투여 결정
[275] 치료 조성물 또는 이의 용량은 일부 실시 양태에서 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 효과적인 양, 예를 들어 치료적 유효 또는 예방 유효량으로 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조성물은 질환 또는 병태의 부담을 감소시키기에 효과적인 양으로 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조성물은, 조성물을 투여한 대상체 그룹 중에서 보다 일관된 결과, 예를 들어 반응 및/또는 안전성 결과 및/또는 보다 일관된 약동학적 파라미터를 제공하는 양의 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조성물은 지속성있는 반응 및/또는 무진행 생존을 촉진하기에 효과적인 양으로 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 세포 표현형에 대한 T 세포를 포함하는 치료적 조성물을 평가하고, 이러한 결과에 기초하여 용량을 결정하는 것을 포함한다.
[276] 일부 실시 양태에서, 용량은 하나 이상의 특정 조성물에서 특정 표현형을 갖는 조작된 세포의 비교적 일정한 수, 부분, 비율 및/또는 백분율을 포함하는 것으로 결정된다. 일부 측면에서, 일관성은 비교적 일정한 활성, 기능, 약동학적 파라미터, 독성 결과 및/또는 반응 결과와 관련되거나 이와 연관된다. 일부 측면에서, 복수의 대상체, 조성물 및/또는 용량에서, 수, 부분, 비율 및/또는 백분율은 비교적 일관성이 있으며, 예를 들어, 특정 표현형, 예를 들어 CCR7 (CCR7+) 또는 사이토카인을 생성하는 것, 예를 들어 조성물 또는 단위 용량에서 IL-2, TNF-알파 또는 IFN-감마를 생성하는 세포의 수 또는 비율은 40% 이하, 30% 이하, 20 % 이하, 10% 이하 또는 5% 이하로 다르다. 일부 측면에서, 특정 표현형을 가진 세포의 수 또는 비율은 예를 들어, 조성물 또는 단위 용량으로 CCR7 (CCR7+)을 발현하고, 상기 공정에 의해 생성된 복수의 T 세포 조성물에서 상기 수 또는 비율의 평균으로부터 20% 이하 또는 10% 이하 또는 5% 이하만큼 변하고, 및/또는 결정된 복수의 T 세포 조성물 또는 용량 중 하나 이상의 표준 편차에 의해 이러한 평균으로부터 변하거나 20% 이하 또는 10% 이하 또는 5% 이하로 변한다. 일부 실시 양태에서, 복수의 대상체는 적어도 10개, 예컨대 적어도 15개, 적어도 20개, 적어도 25개, 적어도 30개, 적어도 40개, 50개, 적어도 60개, 적어도 70개, 적어도 80개, 적어도 90개, 적어도 100개 또는 그 이상의 대상체를 포함한다.
[277] 일부 측면에서, 용량, 예를 들어, 하나 이상의 단위 용량(들)은 조작된 T 세포의 특정 서브세트, 예를 들어 특정 표면 마커 표현형과 같은 특정 표현형을 갖는 세포의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 부분에 기초하여 결정된다. 일부 측면에서, 세포 표현형은 특정 세포 마커, 예를 들어 표면 마커의 발현 및/또는 발현 부재에 기초하여 결정된다. 일부 측면에서, 세포 마커는 세포의 생존력 및/또는 아포토시스 병태를 나타내는 마커를 포함한다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CD3, CD4, CD8, CCR7, CD27, CD45RA, 아넥신V 또는 활성화된 카스파제3을 포함한다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CCR7이다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CD27이다. 일부 양상에서, 예시적인 마커는 CCR7 및/또는 CD27을 포함한다. 일부 측면에서, 예시적인 마커는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 포함한다.
[278] 일부 실시 양태에서, 대상체에게 하나 이상의 단위 용량의 치료 T 세포 조성물, 예컨대 본원에 기재된 임의의 및/또는 본원에 제공된 방법에 의해 결정된 임의의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
[279] 일부 실시 양태에서 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체, 여기서 치료 조성물의 규정된 수의 총 재조합 수용체-발현 세포 (수용체+), 총 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포 (수용체+/ CD8+)가 투여되고 및/또는 특정 표현형, 예를들어, CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+, CCR7-/CD27-/CD8+을 갖는 세포의 정해진 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 부분을 포함하는 이러한 세포의 단위 용량이 투여되는 것을 포함하는 세포를 포함하는 단위 용량의 T세포 조성물을 질환 또는 병태를 갖는 대상체에 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
[280] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7) 발현(수용체+/CD8+/CCR7+세포)하는 재조합 수용체-발현 CD8+ T세포의 정해진 수 및/또는 CCR7(수용체+/CD4+/CCR7+세포)을 발현하는 규정된 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 정의 된 비율 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 정해진 비율 및/또는 조성물 중 세포의 다른 서브세트에 대한 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CD27 및/또는 CD45RA의 발현의 발현 또는 부재에 기초한다.
[281] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 분화 27(CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현CD8+ T세포(수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 정해진 비율 및/또는 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 정해진 비율 및/또는 조성물 중 세포의 다른 서브세트에 대한 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CCR7 및/또는 CD45RA의 발현의 발현 또는 부재에 기초한다.
[282] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 한정된 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 정해진 비율 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 정해진 비율 및/또는 조성물 중 세포의 다른 서브세트에 대한 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수 또는 비율은 추가로 세포에서의 CD45RA의 발현의 발현 또는 부재에 기초한다.
[283] 일부 실시 양태에서, 단위 용량의 세포 수는 세포의 수 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 세포의 수 또는 특정 표현형의 이러한 세포의 수, 예를들어 CD3 CD4, CD8, CCR7, CD27, CD45RA, 아넥신V 또는 활성화된 카스파제3로부터 선택된 하나 이상의 마커를 발현하거나 발현하지 않는 세포의 백분율, 비율, 빈도 및/또는 부분이고, 세포가 유래된 대상체와 같은 특정 대상체에게 용량으로 투여하는 것이 바람직하다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량의 세포 수는 세포의 수 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR- 발현 세포의 수, 또는 특정 표현형,예를 들어, CCR7+, CD27+, CD45RA+, CD45RA-, CD4+, CD8+, CD3+, 아폽토틱 마커 음성 (예를 들어, 아넥신V- 또는 카스파제 3-) 세포, 또는 전술한 것 중 어느 하나에 대해 양성 또는 음성인 세포의 이러한 세포의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 부분이다.
[284] 일부 실시 양태에서, 단위 용량의 세포 수는, 세포의 수 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 세포의 수, 또는 특정 표현형, 예를들어 CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+, CCR7-/CD27-/CD8+; 및 아폽토틱 마커 음성(예 : 아넥신V- 또는 카스파제 3-) 세포 의 이러한 세포의 수, 백분율, 비율 및/또는 부분이고, 세포가 유래된 대상체와 같은 특정 대상체에게 용량으로 투여하는 것이 바람직하다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량의 세포 수는, 세포의 수 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 세포의 수, 또는 특정 표현형, 예를들어 CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+, CCR7-/CD27-/CD8+; 및 아폽토틱 마커 음성(예: 아넥신V- 또는 카스파제 3-) 세포 및/또는 이들의 서브세트의 이러한 세포의 수, 백분율, 비율 및 또는 부분이다.
[285] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은, 세포 또는 세포유형(들)의 수 및/또는 빈도, 비율, 및/또는 세포 또는 세포 유형의 백분율, 예를들어 세포 조성물에서 개별 집단, 표현형 또는 하위 유형에 따라 결정되고, 이러한 것은 아넥신 V-/CCR7+/CAR+; 아넥신V-/CCR7+/CAR+/CD4+; 아넥신V-/CCR7+/CAR+/CD8+; 아넥신V-/CD27+/CAR+; 아넥신V-/CD27+/CAR+/CD4+; 아넥신V-/CD27+/CAR+/CD8+; 아넥신V-/CCR7+/CD27+/CAR+; 아넥신 V-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD4+; 아넥신V-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD8+; 아넥신V-/CCR7+/CD45RA-/CAR+; 아넥신 V-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD4+; 아넥신V-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD8+; 아넥신V-/CCR7-/CD45RA-/CAR+; 아넥신V-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD4+; 아넥신V-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD8+; 아넥신V-/CCR7-/CD27-/CAR+, 아넥신V-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD4+; 아넥신V-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CAR+; 활성화된 카스파제 3-/CCR7+/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제 3-/CCR7+/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CD27+/CAR+; 활성화된 카스파제 3-/CD27+/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제3-/CD27+/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제 3-/CCR7+/CD27+/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD4+;활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD45RA-/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD45RA-/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제 3-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제 3-/CCR7-/CD27-/CAR+; 활성화된 카스파제 3-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD4+; 및/또는 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD8+; 또는 이들의 조합의 표현형이다.
[286] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은, 재조합 수용체(수용체+/CD8+ 세포)를 발현하는 총 CD8+ 세포 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포, 각각 포함된 것을 약 1 x 105 내지 약 1 x 108, 약 5 x 105 내지 약 1 x 107, 약 1 x 106 내지 약 1 x 107으로 포함한다. 일부 실시예에서 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 약1 x 108이하, 약 5 x 107이하, 약 1 x 107이하, 약 5 x 106이하, 약 1 x 106이하, 또는 약 5 x 105이하로 포함한다.
[287] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 각각 5 x 105 내지 5 x 107개, 또는 1 x 106 내지 1 x 107개, 또는 5 x 106 내지 1 x 107개, 또는 약 5 x 105 내지 약 5 x 107개, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+/CCR7+세포 또는 수용체+/CD4+/CCR7+세포를 적어도 5 x 107개, 1 x 107개, 5 x 106개, 1 x 106개, 또는 적어도 약 5 x 107개, 적어도 약 1 x 107개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 1 x 106개 또는 적어도 약 5 x 105개로 포함한다.
[288] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 각각 5 x 105 내지 5 x 107개, 또는 1 x 106 내지 1 x 107개, 또는 5 x 106 내지 1 x 107개, 또는 약 5 x 105 내지 약 5 x 107개, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개 로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 적어도 5 x 107개, 1 x 107개, 5 x 106개, 1 x 106개 또는 적어도 약 5 x 107개, 적어도 약 1 x 107개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 1 x 106개 또는 적어도 약 5 x 105개 로 포함한다.
[289] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 1 x 106개, 2 x 106개, 3 x 106개, 4 x 106개, 5 x 106개, 6 x 106개, 7 x 106개, 8 x 106개, 9 x 106개, 또는 1 x 107 또는 적어도 약 1 x 106개, 적어도 약 2 x 106개, 적어도 약 3 x 106개, 적어도 약 4 x 106개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 6 x 106개, 적어도 약 7 x 106개, 적어도 약 8 x 106개, 적어도 약 9 x 106개, 또는 적어도 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 적어도 약1 x 106개, 2 x 106개, 3 x 106개, 4 x 106개, 5 x 106개, 6 x 106개, 7 x 106개, 8 x 106개, 9 x 106개, 또는 1 x 107개 또는 적어도 약 1 x 106개, 적어도 약 2 x 106개, 적어도 약 3 x 106개, 적어도 약 4 x 106개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 6 x 106개, 적어도 약 7 x 106개, 적어도 약 8 x 106개, 적어도 약 9 x 106개, 또는 적어도 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 각각을 포함한 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 3 x 106 내지 2.5 x 107개, 또는 4 x 106 내지 2 x 107개, 또는 5 x 106 내지 또는 1 x 107개 또는 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107개, 또는 약 4 x 106 내지 약 2 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 또는 1 x 107개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 및/또는 3 x 106 내지 2.5 x 107개, 4 x 106 내지 2 x 107개, 또는 5 x 106 내지 1 x 107개, 또는 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107개, 약 4 x 106 내지 약 2 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CCR7 + 세포, 각각 포함하는 것을 포함한다.
[290] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 1 x 106개, 2 x 106개, 3 x 106개, 4 x 106개, 5 x 106개, 6 x 106개, 7 x 106개, 8 x 106개, 9 x 106개, 또는 1 x 107 개, 또는 적어도 약 1 x 106개, 적어도 약 2 x 106개, 적어도 약 3 x 106개, 적어도 약 4 x 106개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 6 x 106개, 적어도 약 7 x 106개, 적어도 약 8 x 106개, 적어도 약 9 x 106개, 또는 적어도 약 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CD27+세포, 및/또는 적어도 1 x 106개, 2 x 106개, 3 x 106개, 4 x 106개, 5 x 106개, 6 x 106개, 7 x 106개, 8 x 106개, 9 x 106개, 또는 1 x 107, 또는 적어도 약 1 x 106개, 적어도 약 2 x 106개, 적어도 약 3 x 106개, 적어도 약 4 x 106개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 6 x 106개, 적어도 약 7 x 106개, 적어도 약 8 x 106개, 적어도 약 9 x 106개, 또는 적어도 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CD27+세포, 각각을 포함하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 3 x 106 내지 2.5 x 107개, 또는 4 x 106 내지 2 x 107개, 또는 5 x 106 내지 또는 1 x 107개, 또는 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107개, 또는 약 4 x 106 내지 약 2 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 및/또는 3 x 106 내지 2.5 x 107개, 4 x 106 내지 2 x 107개, 또는 5 x 106 내지 1 x 107개 또는 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107개, 약 4 x 106 내지 약 2 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포, 각각 포함하는 것을 포함한다.
[291] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 각각 5 x 105 내지 5 x 107개, 또는 1 x 106 내지 1 x 107개, 또는 5 x 106 내지 1 x 107개, 또는 약 5 x 105 내지 약 5 x 107개, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 적어도 5 x 107개, 1 x 107개, 5 x 106개, 1 x 106개 또는 적어도 약 5 x 107개, 적어도 약 1 x 107개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 1 x 106개 또는 적어도 5 x 105개 또는 적어도 약 5 x 105개로 포함한다.
[292] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 적어도 11 x 106개, 2 x 106개, 3 x 106개, 4 x 106개, 5 x 106개, 6 x 106개, 7 x 106개, 8 x 106개, 9 x 106개, 또는 1 x 107개 또는 적어도 약 11 x 106개, 적어도 약 2 x 106개, 적어도 약 3 x 106개, 적어도 약 4 x 106개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 6 x 106개, 적어도 약 7 x 106개, 적어도 약 8 x 106개, 적어도 약 9 x 106개, 또는 적어도 약 1 x 107개 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 1 x 106개, 2 x 106개, 3 x 106개, 4 x 106개, 5 x 106개, 6 x 106개, 7 x 106개, 8 x 106개, 9 x 106개, 또는 1 x 107개 또는 적어도 약 1 x 106개, 적어도 약 2 x 106개, 적어도 약 3 x 106개, 적어도 약 4 x 106개, 적어도 약 5 x 106개, 적어도 약 6 x 106개, 적어도 약 7 x 106개, 적어도 약 8 x 106개, 적어도 약 9 x 106개, 또는 적어도 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포, 각각을 포함한 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 3 x 106 내지 2.5 x 107개, 또는 4 x 106 내지 2 x 107개, 또는 5 x 106 내지 약 1 x 107개, 또는 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107개, 또는 약 4 x 106 내지 약 2 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 및/또는 3 x 106 내지 2.5 x 107개, 4 x 106 내지 2 x 107개, 또는 5 x 106 내지 1 x 107개, 또는 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107개, 약 4 x 106 내지 약 2 x 107개, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CCR7 + 세포를 각각 포함하는 것을 포함한다.
[293] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 1 : 1 또는 1 : 3 내지 3 : 1, 또는 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[294] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 1 : 1 또는 1 : 3 내지 3 : 1, 또는 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[295] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은, 재조합 수용체(수용체+/CD8+ 세포)를 발현하는 총 CD8+ 세포, 또는 재조합 수용체 (수용체+/CD4+ 세포)를 발현하는 총 CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 각각 1 x 105 내지 1 x 108개, 5 x 105 내지 1 x 107개, 또는 1 x 106 내지 1 x 107개, 또는 약 1 x 105 내지 약 1 x 108개, 약 5 x 105 내지 약 1 x 107개, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개로 포함한다. 일부 실시 양태에서 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+세포를 1 x 108개 이하, 5 x 107개 이하, 1 x 107개 이하, 5 x 106이하, 1 x 106 개 이하, 또는 5 x 105 개 이하, 또는 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107이하, 약 1 x 107개 이하, 약 5 x 106개 이하, 약 1 x 106개 이하, 또는 약 5 x 105개 이하로 포함한다.
[296] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 1 : 1 또는 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[297] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 재조합 수용체 (수용체+/CD3+ 세포)를 발현하는 또는 총 CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 1 x 105 내지 5 x 108 개, 또는 1 x 105 내지 1 x 108 개, 또는 5 x 105 내지 1 x 107 개, 또는 1 x 106 내지 1 x 107 개, 또는 약 1 x 105 내지 약 5 x 108 개, 또는 약 1 x 105 내지 약 1 x 108 개, 또는 약 5 x 105 내지 약 1 x 107 개, 또는 약1 x 106 내지 약1 x 107 개로 포함한다. 일부 실시예에서 단위 용량은 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+세포를 5 x 108 개 이하, 1 x 108 개 이하, 5 x 107 개 이하, 1 x 107 개 이하, 5 x 106 개 이하, 1 x 106 개 이하, 또는 5 x 105 개 이하, 또는 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함한다.
[298] 일부 실시 양태에서, CD3+세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포는 살아 있거나 생존 가능한 이러한 세포의 총 수이다. 일부 실시 양태에서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포는 아폽토틱 마커를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아폽토틱 마커가 음성(-)인 이러한 세포의 총 수이고, 여기서 아폽토틱 마커는 아넥신V 또는 활성화된 카스파제 3이다.
[299]
일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 임의의 조성물에서, 조성물 중 T 세포의 총 수의(또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의) 적어도 또는 약, 또는 적어도 약, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100 %는, CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이다.
[300] 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 임의의 조성물에서, 조성물 중 T 세포의 총 수의 (또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의) 적어도 또는 약, 또는 적어도 약, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 는 인터루킨2 (IL-2) 및/또는 TNF-알파로부터 선택된 사이토카인을 생성할 수 있다. 일부 실시 양태에서, IL-2 및/또는 TNF-알파를 생성할 수 있는 T 세포는 CD4+ T 세포이다.
[301] 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 임의의 조성물에서, 단위 용량에서 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27를 총 수용체+ 세포의 적어도 또는 약, 또는 적어도 약 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 또는 약 40% 내지 약 60%로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 임의의 조성물에서, 단위 용량에서 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+를 각각 총 수용체+ 세포의 적어도 또는 약, 또는 적어도 약 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 또는 약 40% 내지 약 60%로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 임의의 조성물에서, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/ CCR7+/CD45RA-를 각각 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 또는 약 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 30% 내지 약 70%, 또는 약 40% 내지 약 60%로 포함한다.
[302] 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 임의의 조성물에서, 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+, 또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27을 조성물 또는 단위 용량 또는 단위 용량에서 총 수용체+/CD8+세포의 적어도 또는 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%, 또는 조성물 또는 단위 용량에서 총 수용체+/CD8+세포의 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 각각을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 임의의 조성물에서, 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+, 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/ CCR7+/CD45RA를 조성물 또는 단위 용량 또는 단위 용량에서 총 수용체+/CD4+ 세포의 적어도 또는 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%, 또는 조성물 또는 단위 용량에서 총 수용체+/CD4+ 세포의 약 50% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%으로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조성물 중 총 수용체+/CD8+ 세포의 적어도 또는 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+이고; 또는 조성물 중 총 수용체+/CD4+ 세포의 적어도 또는 적어도 약 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+이다.
[303]
일부 실시 양태에서, 단위 용량은, 재조합 수용체 (수용체+/CD8+ 세포) 발현하는 총 CD8+ 세포 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포, 각각 포함된 것을 약 1 x 105 내지 약 1 x 108개, 약 5 x 105 내지 약 1 x 107개, 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개로 포함한다. 일부 실시예에서 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+세포를 약 1 x 108개 이하, 약 5 x 107개 이하, 약 1 x 107개 이하, 약 5 x 106개 이하, 약 1 x 106개 이하, 또는 약 5 x 105개 이하로 포함한다.
[304] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[305] 일부 실시 양태에서, 단위 용량은, 재조합 수용체(수용체+/CD8+ 세포)를 발현하는 총 CD8+ 세포, 또는 재조합 수용체 (수용체+/CD4+ 세포)를 발현하는 총 CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 각각 약 1 x 105 내지 약 1 x 108개, 약 5 x 105 내지 약 1 x 107개, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개로 포함한다. 일부 실시 양태에서 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+세포를 각각 약1 x 108개 이하, 약 5 x 107개 이하, 약 1 x 107개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106개 이하, 또는 약 5 x 105개 이하로 포함한다.
[306] 일부 실시 양태에서, 세포의 단위 용량은 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1이다.
[307] 일부 실시 양태에서, 제공된 방법은 정해진 수의 세포를 포함하는 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 정해진 세포 수와 같은, CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+, 또는 CCR7-/CD27-/CD8+인 CAR+ 세포의 정해진 수와 같은, 상기 용량은 약 5.0 x 106 내지 2.25 x 107개, 약 5.0 x 106 내지 2.0 x 107개, 약 5.0 x 106 내지 1.5 x 107개, 약 5.0 x 106 내지 1.0 x 107개, 약 5.0 x 106 내지 7.5 x 106개, 약 7.5 x 106 내지 2.25 x 107개, 약 7.5 x 106 내지 2.0 x 107개, 약 7.5 x 106 내지 1.5 x 107개, 약 7.5 x 106 내지 1.0 x 107개, 약 1.0 x 107 내지 2.25 x 107개, 약 1.0 x 107 내지 2.0 x 107개, 약 1.0 x 107 내지 1.5 x 107개, 약 1.5 x 107 내지 2.25 x 107개, 약 1.5 x 107 내지 2.0 x 107개, 약 2.0 x 107 내지 2.25 x 107개이다. 일부 실시 양태에서, 이러한 세포의 정해진 수와 같은 이러한 용량은 투여된 조성물에서 총 재조합-수용체 발현 세포를 지칭한다. 일부 측면에서, 투여되는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 세포는 아폽토틱 마커 음성 (-)이고 선택적으로 상기 아폽토틱 마커는 아넥신V 또는 활성화된 카스파제3 인 세포이다.
[308] 일부 실시 양태에서, 단위 용량의 세포 용량은 세포의 정해진 수와 같은 세포의 수, 적어도 또는 적어도 약 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 10 x 106 및 약 15 x106 사이의 재조합-수용체 발현 세포를 포함하고, 이러한 재조합-수용체 발현 세포는 CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+ 또는 CCR7-/CD27-/CD8+ 및/또는 아폽토틱 마커 음성(-) 및 CD8+이며, 여기서 아폽토틱 마커는 아넥신V 또는 활성화된 카스파제3 이다.
[309] 일부 실시 양태에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 대상체에게 세포 용량이 투여된다. 일부 실시 양태에서, 복용의 크기 또는 시기는 대상체에서 특정 질환 또는 병태의 함수로서 결정된다. 일부 경우에, 제공된 설명의 관점에서 특정 질환에 대한 복용의 크기 또는 시기는 경험적으로 결정될 수 있다.
[310] 일부 실시 양태에서, 세포의 용량은 약 4 x 105 cells/kg 내지 약 1 x 106 cells/kg, 또는 약 6 x 105cells/kg 내지 약 8 x 105 cells/kg와 같이 약 2 x 105 cells/kg 내지 약 2 x 106 cells/kg을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 조성물의 용량은 약 3 x 105 cells/kg 또는 이하, 약 4 x 105 cells/kg 또는 이하, 약 5 x 105 cells/kg 또는 이하, 약 6 x 105 cells/kg 또는 이하, 약 7 x 105 cells/kg 또는 이하, 약 8 x 105 cells/kg 또는 이하, 약9 x 105 cells/kg 또는 이하, 약 1 x 106 cells/kg 또는 이하, 또는 약 2 x 106 cells/kg 또는 이하와 같은 대상체의 킬로그램 체중 당 2 x 105 이하의 세포 (cells/kg)(예를 들어, CAR- 발현 세포와 같은 항원-발현)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 용량은 적어도 또는 적어도 약 또는 약 3 x 105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 4 x 105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 5 x 105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 6 x 105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 7 x 105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 8 x 105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 9 x 105 cells/kg, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 1 x 106 cells/kg, 또는 적어도 또는 적어도 약 또는 약 2 x 106 cells/kg 와 같은 대상체의 킬로그램 체중 당 적어도 약 또는 약 2 x 105 의 세포(예를들어, CAR발현 세포와 같은 항원-발현) (cells/kg)를 포함한다.
[311] 특정 실시예에서 상기 세포 또는 세포 아형의 개별적인 집단은 예를들어, 약 10만 내지 약 500억 개의 세포 (예를 들어, 약 500만 개 세포, 약 2500 만 개 세포, 약 5억 개 세포, 약 10억 개 세포, 약 10억 개 세포, 약 50억 개 세포, 약 200억 개 세포, 약 300 억 개 세포, 약 400억 개 세포 또는 전술 한 값 중 임의의 두 값으로 정의 된 범위), 약 100 만 내지 약 500억 개의 세포(예를 들어, 약 500 만 개 세포, 약 2500만 개 세포, 약 5억 개 세포, 약 10억 개 세포, 약 50 억 개 세포, 약 200억 개 세포, 약 300 억 개 세포 , 약 400억 개 또는 전술 한 값 중 임의의 두 값으로 정해진 범위)와 같이, 약 1 천만 내지 1 천억 개의 세포(예를 들어, 약 2 천만개 세포, 약 3 천만개 세포, 또는 약 4 천만개 세포, 또는 약 6 천만개 세포, 또는 약 7 천만개 세포, 또는 약 8 천만개 세포, 또는 약 9 천만개 세포 약 100 억 개 세포, 약 250 억 개 세포, 약 500 억 개 세포, 약 750 억 개 세포, 약 900억 개 세포 또는 전술 한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의 된 범위)와 같이, 및 일부 경우에 약 1 억개 세포 내지 약 500 억개 세포 (예를 들어, 약 1 억 2 천만 개 세포, 2 억 5 천만 개 세포, 약 3 억 5 천만 개 세포, 약 4 억 5 천만 개 세포, 약 6 억 5 천만 개 세포, 약 8 억개 세포, 약 9 억개 세포 약 30억 개의 세포, 약 300억 개의 세포, 약 450억 개의 세포) 또는 이들 범위 사이 및/또는 대상의 체중 킬로그램 당 임의의 값과 같이 약 10만 내지 약 1000억개의 세포의 범위 및/또는 대상체의 킬로그램 체중 당 세포의 양으로 대상체에 투여된다. 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 특정한 속성에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포의 용량은 세포의 용량이 대상체의 신체 표면적 또는 중량에 결속되지 않거나 이를 기초로하지 않도록 일정한 용량의 세포 또는 고정된 용량의 세포이다.
[312] 일부 실시 양태에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, 용량은 약 5 x 108 미만의 총 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를, 예를 들어 약 2 x 106 개, 약 5 x 106 개, 약 1 x 107 개, 약 5 x 107 개, 약 1 x 108 개, 약 1.5 x 108 개, 또는 약 5 x 108 개의 이러한 총 세포와 같은 약 1 x 106 내지 약 5 x 108의 범위의 이러한 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값 사이의 범위로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, 용량은 약 1 x 106개 이상의 총 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 및 약 2 x 109개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 예를들어, 약 2.5 x 107개, 5 x 107개, 1 x 108개, 1.5 x 108개의 총 이러한 세포와 같은 약 2.5 x 107개 내지 약 1.2 x 109개 범위의 이러한 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값 사이의 범위로 포함한다.
[313]
일부 실시 양태에서, 유전자 조작 세포의 용량은 약 1 x 105 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 (CAR-발현) T 세포, 약 1 x 105 내지 약 2.5 x 108개 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 105 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 105 내지 약 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 105 내지 약 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 105 내지 약 1 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 105 내지 약 5 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 105 내지 약 2.5 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 105 내지 약 1 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 5 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 106 내지 약 2.5 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 106 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 106 내지 약 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 106 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 106 내지 약 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 106 내지 약 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 106 내지 약 5 x 106개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 106 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 106 내지 약 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 106 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 106 내지 약 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 106 내지 약 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 106 내지 약 1 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약1 x 107 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 107 내지 약 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 107 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 107 내지 약 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 107 내지 약 2.5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 107 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 107 내지 약 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 107 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 107 내지 약 5 x 107개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 107 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 107 내지 약 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 5 x 107 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 108 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 1 x 108 내지 약 2.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포, 약 2.5 x 108 내지 약 5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 약 5 x 107 내지 약 1 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포와 같이 약 2.5 x 107 내지 약 1.5 x 108개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다.
[314] 일부 실시 양태에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 적어도 또는 적어도 약 1 x 105개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5 x 105개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 5 x 105개의 CAR- 발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1 x 106개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5 x 106개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 5 x 106개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1 x 107개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5 x 107개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 5 x 107개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1 x 108개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 1.5 x 108개의 CAR-발현 세포, 적어도 또는 적어도 약 2.5 x 108개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 또는 적어도 약 5 x 108개의 CAR-발현 세포를 포함한다.
[315] 일부 실시 양태에서, 세포요법은 약 1 x 105 내지 약 5 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 약 5 x 105 내지 약 1 x 107개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107 개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 각각 포함하는 것의 다수의 세포를 포함하는 용량의 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 요법은 적어도 약 1 x 105개의 총 재조합 수용체-발현 세포, 총 T 세포, 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 적어도 1 x 106개, 적어도 약 1 x 107개, 적어도 약1 x 108개의 이러한 세포를 포함하는 다수의 세포를 포함하는 용량의 세포의 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 수는 CD3+ 또는 CD8+의 총 수를 기준으로하며, 일부 경우에는 또한 재조합 수용체-발현 (예를 들어, CAR +) 세포 이다. 일부 실시 양태에서, 세포 요법은, 약 1 x 105 내지 약 5 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 또는 약 5 x 105 내지 약 1 x 107개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 각각 포함하는 것의 세포를 포함하는 용량의 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 요법은, 약 1 x 105 내지 약 5 x 108 의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+세포, 약 5 x 105 내지 약 1 x 107의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107 의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포를 포함하는 용량의 투여를 포함한다.
[316] 일부 실시 양태에서, 상기 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
[317] 일부 실시 양태에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 용량을 포함하는 용량의 CD8+ T 세포는 약 1 x 106 내지 약 5 x 108개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ 세포를 포함하고, 예를 들어, 1 x 107개, 2.5 x 107개, 5 x 107개, 7.5 x 107개, 1 x 108개, 1.5 x 108개 또는 5 x 108개의 이러한 총 세포와 같은 약 5 x 106개 내지 약 1 x 108개 범위의 이러한 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값 사이의 범위이다. 일부 실시 양태에서 환자는 다중 용량으로 투여되고, 각각의 용량 또는 총 용량은 상기 임의의 값 내에 있을 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포의 용량은 약 1 x 107 내지 약 0.75 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, 약 1 x 107 내지 약 5 x 107개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, 약 1 x 107 내지 약 0.25 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, 각각을 포함하는 것의 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 용량은 약 1 x 107개, 2.5 x 107개, 5 x 107개, 7.5 x 107개, 1 x 108개, 1.5 x 108개, 2.5 x 108개, 또는 5 x 108개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다.
[318] 일부 실시 양태에서, 세포 용량, 예를 들어 재조합 수용체-발현 T 세포는, 단일 용량으로 대상체에게 투여되거나 2 주, 1 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년 또는 그 이상 기간 내에 한 번만 투여된다.
[319] 입양 세포 요법의 맥락에서, 주어진 "용량"의 투여는 단일의 조성물 및/또는 단일의 중단없는 투여, 예를 들어 단일 주사 또는 연속 주입으로서 주어진 양 또는 수의 세포의 투여를 포함하고, 또한, 특정 기간 동안, 예를 들어 3 일 이하의 기간 동안, 다수의 개별 조성물 또는 주입으로 제공되는 주어진 양 또는 수의 세포의, 분할 용량으로서 또는 복수의 조성물로서의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 상황에서, 용량은 단일 시점에서 제공되거나 개시되는 특정 수의 세포의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나, 일부 맥락에서, 용량은 3 일 동안 또는 2 일 동안 하루에 한 번, 또는 하루 동안 다중 주입과 같은 3 일 이하의 기간 동안 다중 주사 또는 주입으로 투여된다.
[320] 따라서, 일부 측면에서, 용량의 세포는 단일 제약 조성물로 투여된다. 일부 실시 양태에서, 용량의 세포는, 용량의 세포를 총괄적으로 포함하는 복수의 조성물로 투여된다.
[321] 일부 실시 양태에서, 용어 "분할 용량"은 1 일 초과에 걸쳐 투여되도록 분할된 용량을 지칭한다. 이러한 유형의 투여는 본 방법에 포함되며 단일 용량으로 간주된다.
[322] 따라서, 세포 용량은 분할 용량, 예를 들어 시간에 따라 투여되는 분할 용량으로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태서, 용량은 2 일에 걸쳐 또는 3 일에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 분할 투여를위한 예시적인 방법은 첫날에 용량의 25 %를 투여하고 둘째 날에 용량의 나머지 75 %를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구체 예에서, 용량의 33 %는 첫날에 투여될 수 있고, 나머지 67 %는 둘째 날에 투여 될 수 있다. 일부 측면에서, 용량의 10 %는 첫날에 투여되고, 용량의 30 %는 둘째 날에 투여되고, 용량의 60 %는 세번째 날에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 분할 용량은 3 일 초과에 걸쳐 퍼지지 않는다.
[323] 일부 실시 양태에서, 용량의 세포는, 첫번째 및 두번째, 선택적으로 더 많은 것과 같은 복수의 조성물 또는 용액의 투여에 의해 투여 될 수있고, 각각은 용량의 일부 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 각각 상이한 집단 및/또는 아형의 세포를 포함하는 복수의 조성물은 임의로 특정 기간 내에 개별적으로 또는 독립적으로 투여된다. 예를 들어, 세포의 집단 또는 아형은 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포, 및/또는 각각 CD8+- 및 CD4+- 농축된 집단, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된 세포를 각각 개별적으로 포함하는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 용량의 투여는 CD8+ 세포의 용량 또는 CD4+ T 세포의 용량을 포함하는 제1 조성물의 투여 및 다른 용량의 CD4+ T 세포 및 CD8+ 세포를 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함한다.
[324] 일부 실시 양태에서, 조성물 또는 용량의 투여, 예를 들어 복수의 세포 조성물의 투여는 세포 조성물의 개별 투여를 포함한다. 일부 측면에서, 개별 투여는 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 수행된다. 일부 실시 양태에서, 용량은 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하고, 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12 시간 간격, 0 내지 6 시간 간격 또는 0 내지 2 시간 간격으로 투여된다. 일부 실시 양태에서, 제1 조성물의 투여 개시 및 제2 조성물의 투여 개시는 2 시간 이하, 1 시간 이하, 또는 30 분 이하 간격, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 수행된다. 일부 실시 양태에서, 제1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제2 조성물의 투여 완료 및/또는 개시는 2 시간 이하, 1 시간 이하, 또는 30 분 이하 간격, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 수행된다.
[325] 일부 실시 양태에서, 제1 조성물, 예를 들어 용량의 제1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 조성물, 예를 들어 용량의 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제1 조성물은 제2 조성물 전에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 제2 조성물, 예를 들어 용량의 제2 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제2 조성물, 예를 들어 용량의 제2 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다.
[326] 일부 실시 양태에서, 세포의 용량 또는 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 정해진 또는 표적 비를 포함하며, 이 비는 임의로 대략 1 : 1이거나, 대략 1 : 1.과 같은 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 이다. 일부 측면에서, 상이한 세포 집단의 표적 또는 원하는 비율 (예를 들어, CD4+:CD8+ 비율 또는 CAR+CD4+:CAR+CD8+ 비율, 예를 들어, 1 : 1)의 조성물 또는 용량의 투여는 하나의 집단을 포함하는 세포 조성물의 투여 후, 다른 집단을 포함하는 별도의 세포 조성물의 투여를 포함하고, 여기서 투여는 대략적으로 표적 또는 원하는 비율로 수행된다. 일부 측면에서, 정해진 비율로의 세포의 용량 또는 조성물의 투여는 T 세포 요법의 확장, 지속성 및/또는 항 종양 활성을 개선시킨다.
[327] 일부 실시 양태에서, 대상체는 세포의 다중 용량, 예를 들어 2 회 이상의 용량 또는 다중 연속 용량을 수용한다. 일부 실시 양태에서, 2 가지 용량이 대상체에게 투여된다. 일부 실시 양태에서, 대상체는 연속 용량을 수용하고, 예를 들어 두번째 용량은 첫 번째 복용 후 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 연속 용량의 투여 후 추가 용량 또는 복용량이 투여되도록 첫번째 용량 후에 다중 연속 용량이 투여된다. 일부 측면에서, 추가 용량으로 대상체에게 투여되는 세포의 수는 첫번째 용량 및/또는 연속 용량과 동일하거나 유사하다. 일부 실시 양태에서, 추가 용량 또는 복용량은 이전 용량보다 더 크다.
[328] 일부 측면에서, 첫번째 및/또는 연속 용량의 크기는 이전 치료에 대한 대상체의 반응과 같은 하나 이상의 기준에 기초하여 결정되며, 예를들어 화학 요법, 대상체에서의 질병 부담, 예를 들어 종양 부하, 용량(volume), 크기, 또는 정도, 범위 또는 전이의 유형, 단계 및/또는 대상체에서의 독성 결과 발생 가능성 또는 영향, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응이다.
[329] 일부 측면에서, 제1 용량의 투여와 연속 용량의 투여 사이의 시간은 약 9 내지 약 35 일, 약 14 내지 약 28 일 또는 15 일 내지 27 일이다. 일부 실시 양태에서, 연속 용량의 투여는 제1 용량의 투여 후 약 14 일 초과 및 약 28 일 미만의 시점에 있다. 일부 측면에서, 제1 용량과 연속 용량 사이의 시간은 약 21 일이다. 일부 실시 양태에서, 추가 용량 또는 복용량 예를 들어 연속 용량은 연속 용량의 투여 후 투여된다. 일부 측면에서, 추가의 연속 용량 또는 복용량은 이전 용량의 투여 후 적어도 약 14 일 및 약 28 일 미만에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 추가 용량은 이전 용량 후 약 14 일 미만, 예를 들어 이전 용량 후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13 일에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 용량은 이전 용량 후 약 14 일 미만으로 투여되지 않거나 및/또는 용량이 이전 용량 후 약 28 일 초과로 투여되지 않는다.
[330] 일부 실시 양태에서, 세포 용량, 예를 들어 재조합 수용체-발현 세포는 제1 용량의 T 세포 및 연속 용량의 T 세포를 포함하는 2 가지 용량 (예를 들어, 이중 용량)을 포함하고, 여기서 제1 용량 및 제2 용량 중 하나 또는 모두는 분할 용량의 T 세포의 투여를 포함한다.
[331] 일부 실시 양태에서, 세포의 용량은 일반적으로 질병 부담을 감소시키는데 효과적일 정도로 충분히 크다.
[332] 일부 실시 양태에서, 세포는 원하는 투여량으로 투여되는데, 이는 일부 측면에서 원하는 용량 또는 수의 세포 또는 세포 유형(들) 및/또는 원하는 비율의 세포 유형을 포함한다. 따라서, 일부 실시 양태에서 세포의 투여량은 총 세포 수 (또는 체중 kg 당 수) 및 개별 집단 또는 아형의 원하는 비율, 예컨대 CD4+ 대 CD8+ 비율을 기초로한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 투여량은 개별 집단 또는 개별 세포 유형에서 세포의 원하는 총 수(또는 체중 kg 당 수)를 기초로한다. 일부 실시 양태에서, 투여량은 개별 집단에서 원하는 총 세포 수, 원하는 비율 및 원하는 세포의 총 수와 같은 이러한 특징의 조합에 기초한다.
[333] 일부 실시 양태에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포와 같은 세포의 집단 또는 아형은 원하는 용량의 T 세포와 같은 원하는 총 세포의 용량의 허용된 차이로 또는 그 내로 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 원하는 수의 세포 또는 세포가 투여되는 대상체, 예를 들어 세포/kg의 체중 단위당 원하는 수의 세포이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 세포의 최소 수 또는 그 이상 또는 체중 단위당 세포의 최소 수 이상이다. 일부 측면에서, 원하는 용량으로 투여된 총 세포 중에서, 개별 집단 또는 하위 유형은 원하는 산출 비율 (예를들어 CD4+ 대 CD8+ 비율) 또는 그 근처, 예를 들어, 그러한 비율의 특정 허용 오차 또는 오류 내이다.
[334] 일부 실시 양태에서, 세포는, 원하는 용량의 CD4+ 세포 및/또는 원하는 용량의 CD8+ 세포와 같은 개별 집단 또는 하위 유형의 하나 이상의 세포의 원하는 용량의 허용되는 오차로 또는 그 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 아형 또는 집단의 원하는 수의 세포, 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 수의 이러한 세포, 예를 들어 세포/ kg이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 집단 또는 아형의 최소 세포 수 또는 체중 단위 당 집단 또는 하위 유형의 최소 세포 수 이상이다.
[335] 따라서, 일부 실시 양태에서, 투여량은 총 세포의 원하는 고정 용량 및 원하는 비율을 기초로하고/거나, 하나 이상의, 예를 들어 각각의 개별 아형 또는 하위-집단의 원하는 고정 용량을 기초로한다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 투여량은 원하는 고정 또는 최소 용량의 T 세포 및 원하는 비율의 CD4+ 대 CD8+ 세포를 기초로하고/하거나 원하는 고정 또는 최소 용량의 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포를 기초로한다.
[336] 일부 실시 양태에서, 세포는 다수의 세포 집단 또는 아형, 예컨대 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 아형의 원하는 산출 비율의 허용 범위에서 또는 그 범위 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 비율은 특정 비율일 수 있거나 비율의 범위일 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 원하는 비율 (예를 들어, CD4+ 대 CD8+ 세포의 비율)은 약 1:5 내지 약 5:1 (또는 약 1:5 초과 및 약 5:1 미만), 또는 약 1:3 내지 약 3:1 (또는 약 1:3 초과 및 약 3:1 미만), 예를 들어 약 2:1 또는 약 1 : 5 (또는 약 1 : 5 초과 및 약 2 : 1 미만), 예컨대 약 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5 이다. 일부 측면에서, 허용되는 오차는 이들 범위 사이의 임의의 값을 포함하여 원하는 비율의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% 이내이다.
[337] 특정 실시 양태에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 실시 양태에서, 세포의 수 및/또는 농도는 투여되는 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 수 또는 농도를 지칭한다.
[338] 일부 측면에서, 용량의 크기는 이전 치료에 대한 대상체의 반응과 같은 하나 이상의 기준, 예를 들어 화학 요법, 대상체에서의 질병 부담, 예를 들어 종양 부하, 용량(volume), 크기 또는 정도, 범위, 전이의 유형, 단계 및/또는 독성 결과를 발생시키는 대상의 가능성 또는 발생률, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.
[339] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 또한, 하나 이상의 추가 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 세포의 투여 및/또는 림프절 마비 요법을 포함하고/하거나 상기 방법의 하나 이상의 단계가 반복된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 동일하다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 상이하고, 예를 들어, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배 또는 10 배 또는 더 높은 것과 같이 초기 용량보다 더 높거나, 예를 들어, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배 또는 10 배 또는 더 낮은 것과 같이 초기 용량보다 더 낮다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 추가 용량의 투여는 초기 치료 또는 임의의 이전 치료에 대한 대상체의 반응, 대상체의 질환 부담, 예를 들어 화학 요법, 대상체에서의 질병 부담, 예를 들어 종양 부하, 용량(volume), 크기 또는 정도, 범위, 전이의 유형, 단계 및/또는 독성 결과를 발생시키는 대상의 가능성 또는 발생률, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경 독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.
C. 치료의 방법
[340] 하나 이상의 용량, 예를 들어 단위 용량 또는 본원에 기재된 하나 이상의 단위 용량을 포함하는 임의의 조성물을 포함하는, 예를 들어 본원에 기재된 조작된 세포를 포함하는 임의의 조작된 세포 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 본원에 제공된다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 조작된 세포 또는 단위 용량을 포함하는 조작된 세포 또는 조성물 중 임의의 것을 질환 또는 장애를 갖는 대상체와 같은 대상체에게 투여하는 방법이 또한 제공된다. 일부 측면에서, 질환 또는 장애의 치료를 위한 본원에 기재된 조작된 세포를 포함하는 조작된 세포 또는 조성물의 용도가 또한 제공된다. 일부 측면에서, 질환 또는 장애의 치료를위한 의약의 제조를 위한 본원에 기재된 조작된 세포 또는 단위 용량을 포함하는 임의의 조작된 세포 또는 조성물의 용도가 또한 제공된다. 일부 측면에서, 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 또는 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 본원에 기재된 조작된 세포 또는 단위 용량을 포함하는 임의의 조작된 세포 또는 조성물이 또한 제공된다.
[341] 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체 또는 이를 포함하는 조성물을 발현하는 조작된 세포는 다양한 치료, 진단 및 예방 적응증에 유용하다. 예를 들어, 조작된 세포 또는 조작된 세포를 포함하는 조성물은 대상체에서 다양한 질환 및 장애를 치료하는데 유용하다. 이러한 방법 및 용도는 예를 들어, 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물을 질환, 병태 또는 장애, 예컨대 종양 또는 암에 걸린 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물은 질환 또는 장애의 치료에 영향을 미치는 유효량으로 투여된다. 용도는 이러한 방법 및 치료, 및 이러한 치료 방법을 수행하기위한 약제의 제조에서 조작된 세포 또는 조성물의 용도를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 방법은 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물을 질환 또는 병태를 갖거나 의심되는 대상체에게 투여함으로써 수행된다. 일부 실시 양태에서, 방법은 대상체에서 질환 또는 병태 또는 장애를 치료한다.
[342] 입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은 예를 들어 Gruenberg 등의 미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238; Rosenberg의 미국 특허 제4,690,915 호; 로젠버그 (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8 (10) : 577-85) 에 기재되어 있다. 예를 들어, Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31 (10): 928-933; 츠카하라 등 (2013) Biochem Biophys Res Commun 438 (1): 84-9; 다 빌라(Davila) 등 (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338을 참조한다.
[343] 치료되는 질환 또는 병태는 항원의 발현이 질환 병태 또는 장애의 병인과 관련되고/되거나 병인에 관여하는 임의의 것일 수 있고, 예를들어, 이러한 질병, 병태 또는 장애에 원인, 악화 또는 기타 관련이 있다. 예시적인 질환 및 병태는 세포의 악성 또는 형질 전환(예를들어, 암), 자가 면역 또는 염증성 질환 또는 예를 들어 박테리아, 바이러스 또는 기타 병원체에 의해 발생하는 감염성 질환과 관련된 질환 또는 병태를 포함할 수 있다. 치료될 수있는 다양한 질환 및 병태와 관련된 항원을 포함하는 예시적인 항원은 앞서 기재되어있다. 특정 실시 양태에서, 키메라 항원 수용체 또는 유전자 변형 TCR은 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합한다.
[344] 질병, 병태 및 장애 중에는 고형 종양, 혈액 악성 종양 및 흑색종 및 국소 및 전이성 종양을 포함하는 종양, 바이러스 또는 기타 병원체 감염과 같은 전염병, 예를들어 HIV, HCV, HBV, CMV, HPV 및 기생충 질병, 및 자가 면역 및 염증성 질환이 있다. 일부 실시 양태에서, 질환, 장애 또는 병태는 종양, 암, 악성 종양, 신생물 또는 다른 증식성 질환 또는 장애이다. 일부 실시 양태에서, 질환 또는 병태는 B 세포 악성 종양이다. 일부 실시 양태에서, B 세포 악성 종양은 백혈병 또는 림프종이다. 이러한 질병은 백혈병, 림프종, 예를 들어 급성 골수성(또는 골수성) 백혈병(AML), 만성 골수성(또는 골수성) 백혈병(CML), 급성 림프구성(또는 림프 모 구성) 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 털세포 백혈병(HCL), 소 림프구성 림프종(SLL), 외투 세포 림프종(MCL), 변연부 림프종(Marginal zone lymphoma), 버킷 림프종, 호지킨 림프종(HL), 비호지킨 림프종(NHL), 역형성성큰세포 림프종(ALCL), 소포림프종(follicular lymphoma), 불응성 여포성 림프종, 미만성거대B세포림프종(DLBCL) 및 다발성 골수종(MM)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시 양태에서, 질환 또는 병태는 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 및 미만성거대B세포림프종(DLBCL) 중에서 선택된 B 세포 악성 종양이다. 일부 실시 양태에서, 질환 또는 병태는 NHL이고 NHL은, 공격적인 NHL, 미만성거대B세포림프종(DLBCL), NOS (신생 및 무병에서 형질 전환), 원발 가슴세로칸 큰비세포림프종(PMBCL), T 세포/혈구가 풍부한 큰 B 세포 림프종(TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투 세포 림프종(MCL) 및/또는 여포성 림프종(FL), 임의로, 여포성 림프종 3B 등급(FL3B)으로 구성된 군에서 선택된다.
[345] 일부 측면에서, 질환 또는 병태는 급성 림프구성 백혈병(ALL), 성인 ALL, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 비호지킨 림프종(NHL) 또는 미만성거대B세포림프종(DLBCL)이다. 일부 경우에서, 질환 또는 병태는 NHL이고, 공격적인 NHL, 미만성거대B세포림프종(DLBCL), NOS (신생 및 무병에서 형질 전환), 원발 가슴세로칸 큰비세포림프종(PMBCL), T 세포/혈구가 풍부한 큰 B 세포 림프종(TCHRBCL), 버킷 림프종, 외투 세포 림프종(MCL) 및/또는 여포성 림프종(FL), 임의로, 여포성 림프종 3B 등급(FL3B)인 NHL과 같거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, CAR과 같은 재조합 수용체는 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하거나 B 세포 악성 종양과 관련된 병변 환경의 세포에서 발현된다. 일부 실시 양태에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커와 같은 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b 또는 CD30, 또는 이들의 조합이다.
[346] 일부 실시 양태에서, 질환 또는 병태는 다발성 골수종과 같은 골수종이다. 일부 측면에서, CAR과 같은 재조합 수용체는 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하거나 또는 다발성 골수종과 관련된 병변의 환경 세포에서 발현된다. 일부 실시 양태에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다발성 골수종과 관련된 항원을 포함한다. 일부 측면에서, 항원, 예를 들어, 질환-특이적 항원 및/또는 관련 항원과 같은 항원 또는 제 2 또는 추가 항원은 다발성 골수종, 예컨대 B 세포 성숙 항원 (BCMA), G 단백질-커플링된 수용체 클래스C 군 5 구성원 D (GPRC5D), CD38 (시클릭 ADP 리보스 가수분해 효소), CD138 (신데칸-1, 신데칸, SYN-1), CS-1 (CS1, CD2 서브세트 1, CRACC, SLAMF7, CD319 및 19A24), BAFF-R, TACI 및/또는 FcRH5에서 발현된다. 다른 예시적인 다발성 골수종 항원은 CD56, TIM-3, CD33, CD123, CD44, CD20, CD40, CD74, CD200, EGFR, β2-마이크로글로불린, HM1.24, IGF-1R, IL-6R, TRAIL-R1, 및 액티빈 수용체 유형 IIA (ActRIIA)를 포함한다. Benson 및 Byrd, J. Clin Oncol. (2012) 30 (16): 2013-15; Tao 및 Anderson, 골수 연구 (2011): 924058; Chu 등, Leukemia (2013) 28 (4): 917-27; Garfall 등., Discov Med. (2014) 17 (91) : 37-46을 참조한다. 일부 실시 양태에서, 항원은 림프종 종양, 골수종, AIDS-관련 림프종 및/또는 이식 후 림프 증식, 예컨대 CD38에 존재하는 것들을 포함한다. 이러한 항원에 대한 항체 또는 항원-결합 단편은 공지되어 있으며, 예를 들어 미국 특허 번호8,153,765; 8,603477, 8,008,450; 미국 공개 번호US20120189622 또는 US20100260748 및/또는 국제 PCT 공개 번호 WO2006099875, WO2009080829 또는 WO2012092612 또는 WO2014210064에 기재되어 있다. 일부 실시 양태에서, 이러한 항체 또는 이의 항원-결합 단편 (예를 들어, scFv)은 다중 특이적 항체, 다중 특이적 키메라 수용체, 예컨대 다중 특이적 CARs 및/또는 다중 특이적 세포에 포함된다.
[347] 일부 실시 양태에서, 질환 또는 장애는 G 단백질-커플링된 수용체 클래스 C 그룹 5 구성원 D(GPRC5D)의 발현 및/또는 B 세포 성숙 항원 (BCMA)의 발현과 관련이 있다.
[348] 일부 실시 양태에서, 질환 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 실시 양태에서, BCMA와 관련된 질환 또는 장애는 자가 면역 질환 또는 장애이다. 제공된 방법의 임의의 제공된 실시 양태에서, 자가 면역 질환 또는 장애는 전신성 홍반 루푸스(SLE), 루푸스 신장염(lupus nephritis), 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소성 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판 감소성 자반증(TTP), 자가 면역 혈소판 감소증, 샤가스 병, 그레이브스 병, 베게너 육아 종증, 결절성 다발성 동맥염, 쇼그렌 증후군, 심상성천포창, 경피증, 다발성 경화증, 건선, IgA 신증, IgM 다발성 신경병증(IgM polyneuropathies), 혈관염, 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 레이노 증후군(Reynaud's syndrome), 항-인지질 증후군, 구드패스츄어 증후군(Goodpasture 's disease), 가와사키병(Kawasaki disease), 자가 면역 용혈성 빈혈, 중증 근무력증 또는 진행성 사구체 신염이다.
[349] 일부 실시 양태에서, 질환 또는 장애는 암이다. 일부 실시 양태에서, 암은 GPRC5D-발현 암이다. 일부 실시 양태에서, 암은 혈장 세포 악성 종양이고, 혈장 세포 악성 종양은 다발성 골수종(MM) 또는 형질세포종이다. 일부 실시 양태에서, 암은 다발성 골수종 (MM)이다. 일부 실시 양태에서, 암은 재발/불응성(relapsed/refractory) 다발성 골수종이다.
[350] 일부 실시 양태에서, 질환 또는 병태는, 바이러스, 레트로 바이러스, 박테리아 및 원생성 감염, 면역 결핍, 사이토메갈로 바이러스(CMV), 엡스타인-바 바이러스 (EBV), 아데노 바이러스, BK 폴리오마 바이러스와 같지만 이에 한정되지 않는 전염성 질환 또는 병태이다. 일부 실시 양태에서, 질환 또는 병태는 관절염, 예를 들어 류마티스 관절염(RA), 제1 형 당뇨병, 전신성 홍반성 루푸스(SLE), 염증성 장 질환, 건선, 경피증, 자가 면역 갑상선 질병, 그레이브스 병, 크론 병, 다발성 경화증, 천식 및/또는 이식과 관련된 질병 또는 병태와 같은 자가면역 또는 염증성 질환 및 병태이다.
[351] 일부 실시 양태에서, 질병 또는 질환과 관련된 항원은, 또는 αvβ6 인테그린(avb6 인테그린), B 세포 성숙 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화 효소 9 (CA9, CAIX 또는 G250이라고도 함), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, NY-ESO-1 및 LAGE-2라고도 함), 암배 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸 4 (CSPG4), 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III 형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 ( EPG-2), 상피 당 단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, 5 유사 Fc 수용체 (FCRL5; Fc 수용체 상 동체 5 또는 FCRH5라고도 함), 태아 아세틸콜린 수용체(태아 AchR ), 엽산 결합 단백질(FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O- 아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당 단백질 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 결합 수용체 5D (GPR C5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이량체, 인간 고 분자량-흑색종 관련 항원 (HMW-MAA), B 형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체(kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 8 패밀리 구성원 A 를 포함하는 고 류신 리치 반복물(LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE) -A1, MAGE -A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메조텔린 (MSLN), c-Met, 뮤린 시토메갈로 바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 킬러 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART- 1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 바람직하게 발현된 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나제 유사 오판 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당 단백질 (TPBG, 5T4라고도 함), 종양 관련 당 단백질 72 (TAG72), 티로시나아제 관련 단백질 1 (TRP1, TYRP1 또는 gp75라고도 함), 티로시나 아제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라제, 도파크롬 델타-이소머라제 또는 DCT로도 알려져 있음), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름스 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 적 또는 병원체-발현 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 비오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자를 포함한다. 일부 실시 양태에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커와 같은 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b 또는 CD30 이거나 이를 포함한다.
[352] 일부 실시 양태에서, 항원은 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원은 바이러스 항원 (예컨대 HIV, HCV, HBV 등의 바이러스 항원), 박테리아 항원 및/또는 기생 항원이다.
[353] 일부 실시 양태에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 자가 전달에 의해 수행되고, 여기서 세포는 세포 요법을 받을 대상체 또는 이러한 대상체로부터 유래된 샘플로부터 단리되고/되거나 달리 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 치료를 필요로하는 대상체, 예를 들어 환자로부터 유래되고, 단리 및 처리 후 세포는 동일한 대상체에 투여된다.
[354] 일부 실시 양태에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 동종 이계 전이에 의해 수행되고, 여기서 세포 치료를 받거나 궁극적으로 받는 대상체, 예를들어 제1 대상체 이외의 대상체로부터 세포는 분리 및/또는 다르게 준비된다. 이러한 실시 양태에서, 세포는 이어서 동일한 종의 다른 대상체, 예를 들어 제2 대상체에게 투여된다. 일부 실시 양태에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 실시 양태에서, 제1 및 제2 대상체는 유 전적으로 유사하다. 일부 실시 양태에서, 제2 대상체는 제 1 대상체와 동일한 HLA 클래스 또는 수퍼 타입을 발현한다.
[355] 세포는 임의의 적합한 수단, 일시 주입(bolus infusion), 주사, 예를 들어 정맥 내 또는 피하 주사, 안구 내 주사, 안구 주위 주사, 망막 하 주사, 유리 체내 주사, 트랜스-사이막(trans-septal) 주사, 공막 내 주사, 맥락막 내 주사, 전방 내 주사, 결막 하 주사(subconjectval injection), 결막 하 주사(subconjuntival injection), 서브 테논 주사, 안구 뒤쪽의 주입, 안구 주위의 주입, 또는 후부 점액 전달(posterior juxtascleral delivery)에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 이들은 비경구, 폐내 및 비강 내, 및 국소 치료를 위해 필요한 경우 병변 내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 주어진 용량은 세포의 단일 일시 투여에 의해 투여된다. 일부 실시 양태에서, 이는 예를 들어 3 일 이하의 기간 동안 세포의 다수의 일시 투여 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 투여된다. 일부 실시 양태에서, 세포 용량 또는 임의의 추가 요법, 예를 들어 림프구 마비 요법, 중재 요법 및/또는 병용 요법의 투여는 외래 환자 전달을 통해 수행된다.
[356] 질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 과정, 세포가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 치료, 대상체의 임상 이력 및 세포에 대한 반응, 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시 양태에서 조성물 및 세포는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상에게 적합하게 투여된다.
[357] 일부 실시 양태에서, 세포는 조합 치료의 일부로서, 예를 들어 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 시약, 예컨대 세포 독성제 또는 치료제와 같은 다른 치료적 개입과 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로와 같이 조합 치료의 일부로서 투여된다. 일부 실시 양태에서 세포는 하나 이상의 추가 치료제 또는 다른 치료 개입과 관련하여 어떤 순서로든 동시에 또는 순차적으로 공동-투여된다. 일부 상황에서, 상기 세포들은, 충분히 가까운 시간에 또 다른 요법과 공동-투여되어, 세포 집단은 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시키거나 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 실시 양태에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 추가 작용제는 예를 들어 지속성을 향상시키기 위해 IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 화학 요법제의 투여를 포함한다.
[358] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 화학 요법제, 예를 들어 컨디셔닝 화학 요법제를 투여하여 예를 들어 투여 전에 종양 부담을 감소시키는 것을 포함한다.
[359] 일부 측면에서 면역 고갈 (예를 들어, 림프구 고갈) 요법을 갖는 전처리 대상은 입양 세포 요법 (ACT)의 효과를 개선할 수 있다.
[360] 따라서, 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 세포 요법을 개시하기 전에 대상에게 림프구 마비(lymphodepleting)제 또는 화학 요법제, 예컨대 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 플루다라빈(fludarabine) 또는 이들의 조합과 같은 전처리제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 대상체는 세포 요법의 개시의 적어도 2 일 전에, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 또는 7일 전에 전처리제를 투여받을 수 있다. 일부 실시 양태에서, 대상체는 세포 요법의 개시의 7 일 전, 예컨대 6, 5, 4, 3, 또는 2일 이전에 전처리제를 투여 받는다.
[361] 일부 실시 양태에서, 대상체는 약 40 mg/kg 내지 80 mg/kg 과 같은 약 20 mg/kg 내지 100 mg/kg 의 용량의 시클로 포스파미드(cyclophosphamide)로 전처리된다. 일부 측면에서, 대상체는 약 60 mg/kg의 시클로포스파미드(cyclophosphamide)로 전처리된다. 일부 실시 양태에서, 시클로포스파미드(cyclophosphamide)는 단일 용량으로 투여될 수 있거나, 또는 매일, 격일로 또는 3 일마다 주어진 것과 같은 복수의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 시클로포스파미드(cyclophosphamide)는 1 일 또는 2 일 동안 1 일 1 회 투여된다. 일부 실시 양태에서, 림프구 제거제(lymphodepleting agent)가 시클로포스파미드(cyclophosphamide)를 포함하는 경우, 대상체는 시클로포스파미드(cyclophosphamide)를 약 100 mg/m2 내지 500 mg/m2, 예컨대 약 200 mg/m2 내지400 mg/m2, 또는 250 mg/m2 내지 350 mg/m2, 각각의 용량으로 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 약 300 mg/m2의 시클로포스파미드(cyclophosphamide)를 투여받는다. 일부 실시 양태에서, 시클로포스파미드(cyclophosphamide)는 단일 용량으로 투여될 수 있거나, 또는 매일, 격일로 또는 3 일마다 주어진 것과 같은 복수의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 시클로포스파미드는 1 일 내지 5 일과 같이, 예를 들어 3 일 내지 5 일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 세포 요법의 개시 전에 3 일 동안 매일 약 300 mg/m2의 사이클로포스파미드를 투여 받는다.
[362] 일부 실시 양태에서, 림프구 제거제가 플루다라빈( fludarabine)을 포함하는 경우, 대상체는 약 1 mg/m2 내지 100 mg/m2, 예컨대 약 10 mg/m2 내지 75 mg/m2, 15 mg/m2 내지50 mg/m2, 20 mg/m2 내지 40 mg/m2, 또는 24 mg/m2 내지 35 mg/m2, 각각의 용량으로 플루다라빈을 투여받는다. 일부 경우에, 대상체는 약 30mg/m2의 플루다라빈(fludarabine)을 투여받는다. 일부 실시 양태에서, 플루다라빈(fludarabine)은 단일 용량으로 투여될 수 있거나, 또는 매일, 격일로 또는 3 일마다 주어진 것과 같은 복수의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 플루다라빈(fludarabine)은 1 일 내지 5 일과 같이, 예를 들어 3 일 내지 5 일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체는 세포 요법의 개시 전에 3일 동안 매일 약 30 mg/m2의 플루다라빈(fludarabine)을 투여 받는다.
[363] 일부 실시 양태에서, 림프구 제거제(lymphodepleting agent)는 시클로포스파미드(cyclophosphamide) 및 플루다라빈(fludarabine)의 조합과 같은 작용제의 조합을 포함한다. 따라서, 작용제의 조합은 상기와 같은 임의의 용량 또는 투여 스케줄에서 시클로포스파미드(cyclophosphamide) 및 상기와 같은 임의의 용량 또는 투여 스케줄에서 플루다라빈(fludarabine)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 대상체는 60mg/kg (~2g/m2)의 사이클로포스파미드 및 3 내지 5 용량의 25 mg/m2 플루다라빈을 첫번째 또는 후속 용량 이전에 투여받는다.
[364] 세포의 투여 후, 일부 실시 양태에서 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 예를 들어 임의의 다수의 공지된 방법에 의해 측정된다. 평가위한 파라미터는 생체 내, 예를 들어 영상화, 또는 생체 외, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의한 조작된 또는 자연 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이적 결합을 포함한다. 특정 구체 예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 Kochenderfer 등, J. Immunotherapy, 32 (7): 689-702 (2009) 및 Herman 등. J. 면역학적 방법, 285 (1): 25-40(2004)에 기재된 세포 독성 분석과 같은 임의의 적합한 공지 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 세포의 생물학적 활성은 CD107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하의 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정된다.
[365] 특정 실시 양태에서, 조작된 세포는 임의의 수의 방식으로 추가로 변형되어 그의 치료 또는 예방 효능이 증가된다. 예를 들어, 집단에 의해 발현된 조작된 CAR 또는 TCR은 링커를 통해 표적 부분에 직접 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 표적 부분에 대한 화합물, 예를 들어 CAR 또는 TCR을 접합시키는 방법은 공지되어있다. 예를 들어, Wadwa 등의, J. Drug Targeting 3 : 11 1 (1995), 및 미국 특허 5,087,616을 참조한다.
[366] 일부 실시 양태에서, 세포는 조합 치료의 일부로서, 예를 들어 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 시약, 예컨대 세포 독성제 또는 치료제와 같은 다른 치료적 개입과 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로와 같이 조합 치료의 일부로서 투여된다. 일부 실시 양태에서 세포는 하나 이상의 추가 치료제 또는 다른 치료 개입과 관련하여 어떤 순서로든 동시에 또는 순차적으로 공동-투여된다. 일부 상황에서, 상기 세포들은, 충분히 가까운 시간에 또 다른 요법과 공동-투여되어, 세포 집단은 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시키거나 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 일부 실시 양태에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 전에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 추가 작용제는 예를 들어 지속성을 향상시키기 위해 IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다.
D. 치료 T 세포 조성물로 치료 모니터링 또는 평가
1. 조작된 세포의 약동학적(PK) 평가, 예를 들어 피크 세포 수준 및 환자 요인
[367] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 T 세포, 예를 들어 T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포의 노출, 수, 농도, 지속성 및 증식의 평가를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 조작된 T 세포, 예를 들어 T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포, 또는 그의 서브세트, 예컨대 CD3+ 세포,CD3+ 세포, CD4+세포, CD8+ 세포, CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 또는 CD8+ CAR+ 세포의 노출, 수 또는 수준의 평가를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 노출, 또는 연장된 증폭(expansion) 및/또는 지속성, 및/또는 세포 표현형 또는 세포의 기능적 활성, 예를 들어 면역 요법을 위해 투여된 세포의 변화, 예를들어, 본원에 제공된 방법에서 T 세포 요법은 시험 관내 또는 생체 외에서 T 세포의 특성을 평가함으로써 측정될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 이러한 분석법은 면역 요법, 예를 들어T 세포 요법에 사용된 T 세포의 기능을 결정 또는 확인하기 위해, 본원에 제공된 세포 요법을 투여하기 전 또는 후에 사용될 수 있다.
[368] 일부 측면에서, 노출, 수, 농도, 지속성 및 증식은 약동학적 파라미터와 관련된다. 일부 경우에, 약동학은 투여 후 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈장 농도 (즉, 치료제 용량 사이의 최소 혈장 농도, 예를 들어 CAR+ T 세포; Cmin), 제거 반감기 (T1/2) 및 곡선 아래 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도 대 시간을 플롯하여 생성된 곡선 아래 면적; AUC)와 같은 파라미터를 측정함으로써 평가될 수 있다. 투여 후 혈장에서 특정 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 농도는 혈액 샘플에서 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 농도를 평가하기에 적합한 당 업계에 공지된 임의의 방법 또는 본원에 기재된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 정량적 PCR (qPCR)과 같은 핵산 기반 방법 또는 유세포 분석법 기반 방법, 또는 면역 분석법, ELISA 또는 크로마토그래피/질량 분석법 기반 분석법과 같은 다른 분석법이 사용될 수 있다.
[369] 일부 실시 양태에서, 투여된 세포, 예를 들어CAR+ T 세포 조성물의 약동학 (PK)은 투여된 세포의 이용 가능성, 예를 들어 생체 이용률을 평가하도록 결정된다. 일부 실시 양태에서, 투여된 세포의 결정된 약동학적 파라미터는 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Cmax와 같은 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax); Cmax가 달성되는 시점 (Tmax), AUC0-28와 같은 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및/또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Tmax, 및CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및 CD8+ CAR+ T 세포의 곡선 아래 면적 (AUC)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 약동학적 파라미터는 피크 CD3+ CAR+ T 세포 농도 (Cmax CD3+ CAR+ T 세포), 또는 CD8+ CAR+ T 세포 농도(Cmax CD8+ CAR+ T 세포)이다. 일부 실시 양태에서, 약동학적 파라미터는CD3+ CAR+ T 세포의 AUC0-28, (AUC0-28 CD3+ CAR+ T 세포), 또는 AUC0-28, CD8+ CAR+ T 세포(AUC0-28 CD8+ CAR+ T 세포) 이다.
[370]
일부 실시 양태에서, "노출"은 치료제를 특정 기간 동안 투여한 후 치료제, 예를 들어 혈장 (혈액 또는 혈청)에서의 CAR+ T 세포의 신체 노출을 지칭할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 노출은 용량의 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 투여 후 약동학적 분석에 의해 결정되는 치료제 농도-시간 곡선(AUC) 하의 면적으로서 제시될 수 있다. 일부 경우에, AUC는 세포 요법으로 투여된 세포를 세포*일/μL, 또는 그의 상응하는 단위로 발현된다. 일부 실시 양태에서, AUC는 환자 집단, 예를 들어 샘플 환자 집단에서의 평균 AUC로서 측정되며, 예를 들어 하나 이상의 환자(들)로부터의 평균 AUC이다. 일부 실시 양태에서, 전신 노출(systemic exposure)은, 예를 들어 0 일부터 11, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28 일 또는 그 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 주 또는 그 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 개월 또는 그 이상의 특정 시간 내에 곡선 아래 면적 (AUC)을 지칭한다. 일부 실시 양태에서, AUC는 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 투여 후 0 일부터 28 일까지의 AUC (AUC0-28)로서 측정되고, 샘플 환자 집단과 같은 환자 집단으로부터의 평균 AUC와 같은 측정된 약동학 (PK) 파라미터로부터 추정된 모든 측정 데이터 및 데이터를 포함한다. 일부 실시 양태에서, AUC0-28와 같은 특정 기간 동안의 시간, 예를 들어 AUC와 같은 시간에 따른 노출을 결정하기 위해, 치료제 농도-시간 곡선은 매개 변수, 예를 들어, 시간에 따른 세포 농도, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21 또는 28 일 또는 그 이상에서 측정한 것의 다중 측정 또는 평가를 사용하여 생성된다.
[371] 일부 실시 양태에서, T세포의 투여 후 및 치료제의 투여 후 및 투여 전, 동안 및/또는 후에 대상체에서 재조합 수용체(예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 CAR-발현 세포)를 발현하는 세포의 존재 및/또는 양은 검출된다. 일부 측면에서, 정량적 PCR (qPCR)과 같은 핵산-기반 방법은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 기관 또는 조직 샘플 (예를 들어, 질병 부위, 예를 들어, 종양 샘플)에서 재조합 수용체 (예를 들어, T 세포 기반 요법을 위해 투여된 CAR- 발현 세포)를 발현하는 세포의 양을 평가하기 위해 사용된다. 일부 측면에서, 지속성은 DNA 마이크로그램 당 수용체를 코딩하는 DNA 또는 플라스미드, 예를 들어 CAR의 카피, 또는 샘플, 예를 들어 혈액 또는 혈청의 마이크로 리터당, 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 또는 백혈구 또는 샘플의 마이크로 리터당 T 세포의 총 수당 수용체 발현, 예를 들어 CAR-발현 세포의 수의 양이다. 일부 실시 양태에서, qPCR 또는 다른 핵산-기반 방법에 사용되는 프라이머 또는 프로브는 재조합 수용체를 코딩하는 핵산의 결합, 인식 및/또는 증폭에 특이적인 것, 및/또는 조절 요소를 포함하는 플라스미드 및/또는 벡터의 다른 성분 또는 요소, 예를 들어, 프로모터, 전사 및/또는 전사 후 조절 요소 또는 반응 요소, 또는 마커, 예를 들어 대용 마커이다. 일부 실시 양태에서, 프라이머는 우드척 간염 바이러스(woodchuck hepatitis virus) 전사 후 조절 요소(WPRE)와 같은 조절 요소에 특이적일 수 있다. 일부 예에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 존재 및/또는 양은 CAR을 코딩하는 핵산 서열(예를 들어, 트랜스진 서열)의 카피 또는 DNA 질량 당 CAR-코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 핵산 서열의 카피 (예를 들어, copies/μg의 DNA); 시간에 따른 DNA의 copies/μg의 곡선의 AUC, 치료 후 DNA의 최대 또는 피크 copies/μg, 또는 치료 후 또는 개시 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21 일, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 주 또는 그 이상에 DNA의 copies/μg 으로 표현된다.
[372] 일부 실시 양태에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포의 투여 후 적어도 4, 14, 15, 27 또는 28 일에 대상체에서 검출된다. 일부 측면에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 2, 4, 또는 6 주 후에, 또는 3, 6, 또는 12, 18, 또는 24, 또는 30 또는 36 개월, 또는 1, 2, 3, 4, 5 년 또는 그 후에 검출된다.
[373] 일부 실시 양태에서, 피크 수준 및/또는 AUC가 평가되고/되거나 샘플이 유전자 조작 된 세포의 투여 개시 후 적어도 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일 또는 21일에 대상체로부터 수득된다. 일부 실시 양태에서, 피크 수준 및/또는 AUC가 평가되고/거나 샘플은 유전자 조작된 세포의 투여 개시 후 약 11 내지 22일, 12 내지 18일 또는 14 내지 16일, 각각을 포함하여, 대상체로부터 수득된다.
[374] 상기 노출, 예를 들어 세포의 수 또는 농도, 예를 들어 확장 및/또는 지속성을 나타내는 T 세포 치료를 위해 투여된 T 세포는, 대상이 노출 된 세포의 최대 수 또는 농도, 감지 가능한 세포 또는 특정 수 또는 백분율 이상의 세포 지속 기간, 시간에 따른 세포의 수 또는 농도에 대한 곡선 아래 면적 (AUC), 및/또는 이들의 조합 및 지표의 용어로 언급될 수 있다. 이러한 결과는 예를 들어 종양 샘플와 같은 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직과 같은 특정 샘플에서 핵산 또는 DNA의 총량과 비교하여 재조합 수용체를 코딩하는 핵산의 카피 수를 검출하기위한 qPCR, 및/또는 일반적으로 수용체에 특이적인 항체를 사용하여 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석과 같은 알려진 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 세포 기반 분석법은 또한, 기능성 세포의 수 또는 백분율 또는 농도, 예를 들어 질환 또는 병태의 세포에 대한 반응, 예를 들어 세포 독성 반응에 결합 및/또는 중화 및/또는 유도할 수 있는 세포, 또는 수용체에 의해 인식되는 항원의 발현을 검출하기 위해 사용될 수 있다.
[375] 일부 측면에서, 세포에 대한 대상체의 노출 증가는 세포의 증가된 확장을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 수용체 발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 대상체에서 확장된다.
[376] 일부 실시 양태에서, 수용체를 발현하는 세포는, T 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포의 투여 후 적어도 또는 적어도 약 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60 일 이상, 또는 T 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포의 투여 후 적어도 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 주 이상에 예를 들어, qPCR과 같은 특정 방법 또는 유세포 분석 기반 탐지 방법으로 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 대상체의 종양 샘플에서 검출 가능하다.
[377] 일부 측면에서, 적어도 또는 적어도 약 1 x 102, 적어도 또는 적어도 약 1 x 103, 적어도 또는 적어도 약 1 x 104, 적어도 또는 적어도 약 1 x 105, 또는 적어도 또는 적어도 약 1 x 106 또는 적어도 또는 적어도 약 5 x 106 또는 적어도 또는 적어도 약 1 x 107 또는 적어도 또는 적어도 약 5 x 107 또는 적어도 또는 적어도 약 1 x 108의 재조합 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포, 및/또는 마이크로리터당 적어도 또는 적어도 약 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400 또는 500 또는 1000 이상의 수용체 발현 세포, 예를 들어, 마이크로 리터당 10 이상은, 혈액, 예를 들어 말초 혈액 또는 이의 질병 부위, 예를 들어 종양에서와 같이 대상체 또는 체액, 혈장, 혈청, 조직 또는 그 구획에서 검출가능하거나 존재한다. 일부 실시 양태에서, 이러한 수 또는 농도의 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포의 투여 후 적어도 약 20 일, 적어도 약 40 일, 또는 적어도 약 60 일, 또는 적어도 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월, 또는 적어도 2 또는 3 년 동안 대상체에서 검출 가능하다. 이러한 세포 수는 공지된 방법을 사용한 유세포 분석 기반 또는 정량적 PCR 기반 방법, 및 총 세포 수에 대한 외삽법(extrapolation)으로 검출된 것일 수 있다. 예를 들어, Brentjens 등의 Sci Transl Med. 2013 5(177), Park 등의, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo 등의, JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila 등의.,(2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila 등의, Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen 등의, Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens 등의, Blood 2011 118(18):4817-4828를 참조한다.
[378] 일부 측면에서, 면역 조직 화학, PCR 및/또는 유세포 분석에 의해 측정되는 100개 세포 당, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 다른 구획에서 재조합 수용체를 코딩하는 핵산의 카피 수, 예를 들어 벡터 카피 수는, 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포의 투여 후 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 또는 적어도 약 6 주, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 2 또는 3 년에 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1, 또는 적어도 10이다. 일부 실시 양태에서, 수용체를 발현하는는 벡터의 카피 수, 예를 들어 게놈 DNA의 마이크로그램 당 CAR은 T 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포의 투여 후 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 또는 적어도 약 4 주 이상 또는 이러한 투여 후 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 개월 이상 또는 적어도 2 또는 3년에 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000, 또는 적어도 10,000, 또는 적어도 15,000 또는 적어도 20,000이다.
[379] 일부 측면에서, 수용체, 예를 들어 세포에 의해 발현된 CAR은 세포의 투여 후, 예를 들어 T 세포의 투여 개시 후 적어도 약 3 개월, 적어도 약 6 개월, 적어도 약 12 개월, 적어도 약 1 년, 또는 적어도 약 2 년, 적어도 약 3 년 또는 3 년 이상의 시간에 대상체, 혈장, 혈청, 혈액, 조직 및/또는 이의 질환 부위, 예를 들어 종양 부위에서 정량적 PCR (qPCR) 또는 유세포 분석에 의해 검출될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 대상체의 유체, 혈장, 혈청, 혈액, 조직, 기관 및/또는 질환 부위, 예를들어 종양 부위에서 수용체-(예를 들어, CAR-) 발현 세포의 농도에 대한 곡선 아래 면적 (AUC)은 T 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포의 투여 후 시간 경과에 따라 측정된다.
[380] 반응 가능성 또는 지속적인 반응을 평가하는 방법도 제공된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 대상체의 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 피크 수준의 검출을 포함하고, 여기서, 대상체는 이전에 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작 된 세포의 용량을 투여받았다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 피크 수준을 개별적으로 임계 값과 비교함으로써 대상체가 유전자 조작된 세포의 투여에 대한 지속성있는 반응을 달성할 가능성을 결정하는 것을 포함한다.
[381] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계 값 미만인 경우 대상체는 반응 또는 지속적인 반응을 달성할 수 있고, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계 값을 초과하는 경우 대상체는 지속적인 있는 반응을 달성하지 못할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 낮은 임계 값 사이의 치료 범위 내에있는 경우, 대상체는 지속적인 반응을 달성할 수 있고, 유전자 조작 된 세포의 피크 수준이 하한 임계 값 미만이거나 상한 임계 값을 초과하는 경우, 상한 임계 값 및 대상체는 지속적인 반응을 달성할 수 없다.
[382] 일부 경우에, 제공된 실시 양태는 속성, 인자, 환자의 특성 및/또는 질병 또는 병태, 및/또는 바이오 마커의 발현과 같은 파라미터를 평가하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 평가된 파라미터는 약동학적 파라미터, 반응, 지속적인 반응 및/또는 독성의 발달과 관련되고/되거나 이와 연관되어있다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 환자 인자 또는 환자 속성을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 평가 된 파라미터는 본원에 개시된 세포 조성물의 표현형과 상관 관계가있다. 일부 실시 양태에서, 평가된 파라미터는 산출 조성물이 무진행 생존 및/또는 지속적인 반응과 상관되는 필요한 세포 조성물(예를 들어, 세포 표현형의 백분율)을 갖는지 여부를 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 평가된 파라미터는 치료적 투여에 유용한 산출 조성물의 생성 가능성을 예측하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 질환 부담이 높은 환자, 예를 들어 SPD 값(예를 들어, 50 cm2 이상의 값) 또는 CRP 값 (예를 들어,20 mg/L 이상의 값)이 높은 환자는 치료적 투여에 유용한 산출 조성물을 생성할 가능성이 적다. 일부 실시 양태에서, 질환 부담이 낮은 환자, 예를 들어 낮은 SPD 값 (예를 들어, 50cm2 미만) 또는 CRP 값 (예를 들어, 20mg/L 미만)을 갖는 환자는 산출 조성물을 생성할 가능성이 더 높다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 질환 또는 병태의 속성, 인자, 특성을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 치료 전에, 예를 들어 세포 요법의 투여 전에 평가된다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 치료 후, 예를 들어 하나 이상의 용량의 세포 요법의 투여 후 평가된다.
[383] 일부 실시 양태에서, 파라미터는 약동학적 파라미터, 예를 들어 최대 (피크) 플라즈마 농도(Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 플라즈마 농도 (Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈장 농도 (즉, 치료제의 용량 사이의 최소 혈장 농도, 예를 들어 CAR+ T 세포; Cmin), 제거 반감기(T1/2), 곡선 아래 면적 (즉, 치료제 CAR+ T 세포의혈장 농도 대 시간을 플로팅하여 생성된 곡선 아래 면적; AUC; 예컨대 AUC0-28) 이거나 이를 포함한다.
[384] 일부 실시 양태에서, 파라미터는 환자의 질병 또는 병태 및/또는 질환의 병태를 나타내는 하나 이상의 인자이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 종양 부담을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 종양의 부담을 나타내는 상기 인자는 종양(들)의 용량(volume) 측정이다. 일부 실시 양태에서, 용량(volume) 측정은 병변(들), 예컨대 종양 크기, 종양 직경, 종양 용량(volume), 종양 질량, 종양 부하 또는 용량(volume), 종양 관련 부종, 종양 관련 괴사 및/또는 전이의 수 또는 정도의 측정이다. 일부 실시 양태에서, 종양의 용량(volume) 측정은 2 차원 측정이다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 병변(들) 면적은 모든 측정 가능한 종양의 가장 긴 직경 및 가장 긴 수직 직경의 산물로 계산된다. 일부 경우에, 종양의 용량(volume) 측정은 일차원 측정이다. 일부 경우에 측정 가능한 병변의 크기는 가장 긴 직경으로 평가된다. 일부 실시 양태에서, 직경의 생성물 (SPD), 최장 종양 직경 (LD), 최장 종양 직경의 합(SLD), 괴사, 종양 용량(volume), 괴사 용량(volume), 괴사-종양 비율 (NTR), 주변 부종 (PTE) 및 부종-종양 비율(ETR)이 측정된다.
[385] 종양 부담을 측정하고 평가하기 위한 예시적인 방법은 예를 들어,Carceller 등의, 소아 혈액 암. (2016) 63(8):1400-1406 and Eisenhauer 등의, Eur J Cancer. (2009) 45(2):228-247에 기술된 방법을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 용량(volume) 측정은 모든 측정 가능한 종양의 최대 수직 직경의 생성물의 합을 결정함으로써 측정된 직경의 생성물(SPD)의 합이다. 일부 측면에서, 종양 또는 병변은 가장 긴 직경 (LD) 및/또는 모든 측정 가능한 병변의 가장 긴 종양 직경 (SLD)의 합을 결정함으로써 일차원으로 측정된다. 일부 실시 양태에서, 종양의 용량(volume) 측정은 괴사 용량(volume) 및/또는 괴사-종양 비 (NTR)와 같은 종양 괴사의 용량(volume) 정량이며, Monsky 등의, Anticancer Res. (2012) 32(11): 4951-4961를 참조한다. 일부 측면에서, 종양의 용량(volume) 측정은 종양 관련 부종의 용량(volume) 정량, 예를 들어, 종양 주변 부종(PTE) 및/또는 부종-종양 비(ETR)이다. 일부 실시 양태에서, 대상체의 컴퓨터 단층 촬영(CT), 양전자 방출 단층 촬영(PET) 및/또는 자기 공명 영상(MRI)과 같은 영상화 기술을 사용하여 측정이 수행될 수 있다.
[386] 일부 실시 양태에서, 용량(volume) 측정은 SPD이고, 일부 경우에, 독성의 발달, 예를 들어 CRS 또는 NT는 임계 값을 초과하는 SPD 값과 상관 관계가 있다. 일부 실시 양태에서, 용량(volume) 측정은 SPD이고, 임계 값은 약 30 cm2,약 40 cm2, 약 50 cm2, 약 60 cm2 또는 약 70 cm2 이다. 일부 실시 양태에서, 용량(volume) 측정은 SPD이고, 임계 값은 약 30 cm2,약 40 cm2, 약 50 cm2, 약 60 cm2 또는 약 70 cm2 이다.
[387] 일부 실시 양태에서, 종양의 용량(volume) 측정은 대상체의 병태 또는 질환을 확인 및/또는 발견하기위한 일상적인 평가 또는 혈액 채취와 같은 스크리닝 세션에서 결정된다.
[388] 일부 측면에서, 파라미터, 예를 들어 종양 부담의 측정은 약동학적 파라미터와 연관되거나 및/또는 약동학적 파라미터와 관련된다. 일부 실시 양태에서, 약동학적 파라미터를 포함하는 파라미터는 반응 및/또는 지속적인 반응, 및/또는 독성, 예를 들어 CRS 또는 신경 독성(NT)의 발생 위험과 관련된다.
[389] 일부 실시 양태에서, 파라미터는 바이오 마커의 적어도 하나 이상 또는 패널(panel)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 바이오 마커의 발현 및/또는 존재는 약동학적 파라미터, 반응, 지속적인 반응 및/또는 독성의 발달과 관련되고/되거나 이와 연관되어있다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 특정 기준값, 예를들어 반응 및/또는 지속적인 반응, 및/또는 독성, 예를 들어 CRS 또는 신경 독성(NT)의 발생 위험과 관련된 값과 비교된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 또한, 환자 인자 및/또는 바이오마커의 평가에 기초하여 CAR+ T세포 확장, 증식 및/또는 활성을 조절할 수있는 작용제를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
[390] 일부 측면에서, 실시 양태는 파라미터를 검출하고/하거나 파라미터의 존재 및/또는 검출을 평가하기위한 생물학적 샘플을 수득하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 생물학적 샘플은 일반적으로 세포 요법의 투여 후 4 시간 내지 12 개월 내, 또는 이의 제1 투여 또는 용량, 또는 전술한 것 중 임의의 것의 개시 후, 예컨대 세포 요법의 투여 후, 또는 이의 제 1 투여 또는 용량, 또는 전술 한 것 중 임의의 것의 개시 후 일반적으로 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 또는 90일 또는 그 이상, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15주 또는 그 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 개월 또는 그 이상의 기간 이내에 수득된다. 일부 구체에서, 파라미터는 세포 요법의 투여 전 또는 세포 요법의 투여 직후, 또는 그의 제 1 투여 또는 투여량, 또는 상기의 임의의 것의 개시 후 예컨대 일반적으로 세포 요법의 투여, 또는 그의 제1 투여 또는 투여량 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 후 이후 4 시간 내지 3 일 이내, 예컨대 일반적으로 세포 요법의 투여 후, 또는 이의 제 1 투여 또는 투여량 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 후 약 1 일, 2 일 또는 3 일 내에 대상체에서 평가되거나 측정된다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 평가되거나 측정된다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 일반적으로 세포 요법의 투여 후 4 시간 내지 12 개월 내, 또는 이의 제1 투여 또는 투여량, 또는 전술한 것 중 임의의 것의 개시 후, 예컨대 세포 요법의 투여 후, 또는 이의 제 1 투여 또는 투여량, 또는 전술한 것 중 임의의 것의 개시 후 일반적으로 약1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 또는 90일 또는 그 이상, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15주 또는 그 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 개월 또는 그 이상의 기간 이내에 평가된다.
[391] 일부 실시 양태에서, 파라미터, 예를 들어 환자 인자 및/또는 바이오 마커는 약동학적 파라미터와 연관 및/또는 관련된다. 일부 실시 양태에서, 약동학적 파라미터를 포함하는 파라미터는 반응 및/또는 지속적인 반응, 및/또는 독성, 예를 들어 CRS 또는 신경 독성(NT)의 발생 위험과 관련된다.
[392] 일부 실시 양태에서, 파라미터는 바이오 마커이다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 바이오마커의 발현 및/또는 특정 바이오 마커를 발현하는 세포의 수, 농도 및/또는 백분율이다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 바이오마커 또는 복수의 바이오마커를 포함하는 패널(panel) 내의 각 바이오마커를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 바이오마커는, 본원에 기재된 바와 같은 사이토카인 및/또는 다른 혈청 또는 혈액 인자이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 패널 내의 바이오마커 또는 각 바이오 마커는 사이토카인이며, 일부 경우에는 케모카인 일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 패널의 바이오 마커 또는 각 바이오 마커는 가용성 수용체를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 패널의 바이오마커 또는 각 바이오마커는 가용성 혈청 단백질을 포함한다. 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커 패널이 본원에 기재되어있다.
[393] 일부 실시 양태에서, 파라미터는 혈액 분석 물질의 수준 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 염증 마커의 수준 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 인터루킨-7 (IL-7), IL-15, 대식세포 염증성 단백질 (MIP-1α)의 수준 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 IL-6, IL-10, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ), 종양 괴사 인자 알파(TNF-α), MIP-1α, MIP-1β, 단핵구 화학유인 단백질-1 (MCP-1) 및 C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10)의 수준 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체(섬유소 분해 생성물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β의 수준 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1, 및/또는 MIP-1β의 수준 및/또는 농도 이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 CRP, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-α, MIP-1α, MIP-1β, MCP-1, CXCL10 및 C-C 케모카인 리간드 13 (CCL13)의 수준 및/또는 농도이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 LDH, 페리틴, CRP, D- 이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γ 및/또는 MIP-1α의 수준 및/또는 농도이거나 이를 포함한다.
[394] 일부 실시 양태에서, 염증성 마커는 검출되거나 평가된 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 락테이트 탈수소효소 (LDH)의 수준 또는 존재이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 염증 마커는 면역 분석법을 사용하여 평가된다. 예를 들어, 효소-결합 면역 흡착 분석 (ELISA), 효소 면역 분석 (EIA), 방사성 면역 분석 (RIA), 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 웨스턴 블롯, 측면 흐름 분석, 면역 조직 화학, 단백질 어레이 또는 면역-PCR (iPCR)은 염증성 마커를 감지하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 제조 물품을 사용하는 것은 종양 부담을 나타내는 염증성 마커를 검출하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 염증성 마커의 분석 또는 평가는 유세포 분석을 사용한다. 일부 경우에, 시약은 염증성 마커에 결합하는 가용성 단백질이다. 일부 예에서, 시약은 C- 반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로 글로불린 (β2-M) 또는 젖산 탈수소 효소 (LDH)에 결합하는 단백질이다.
[395] 일부 실시 양태에서, 바이오 마커, 예를 들어 염증성 마커는 C-반응성 단백질(CRP)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈청, 혈장 또는 혈액과 같은 샘플로부터 인간 CRP의 정량적 측정을 수득하기 위해 시험관내 효소-연결 면역 흡착 분석을 사용하여 CRP는 평가된다. 일부 예에서, CRP는 인간 효소-연결 면역 흡착 분석(ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 실시 양태에서, 바이오 마커, 예를 들어 염증성 마커는 적혈구 침강 속도(ESR)이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, ESR은 수직 피펫 또는 튜브에서 혈장으로부터 분리된 후 적혈구가 떨어진 거리(시간당 밀리미터)를 측정함으로써 평가된다. 일부 실시 양태에서, 바이오 마커는 알부민이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 알부민은 비색 시험 또는 시험 관내 효소-결합 면역 흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 예에서, 알부민은 인간 효소-결합 면역 흡착 분석(ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 실시 양태에서, 바이오 마커, 예를 들어 염증성 마커는 페리틴 또는 β2 마이크로 글로불린이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 페리틴 또는 β2 마이크로 글로불린은 면역 검정을 사용하여 평가되거나 ELISA를 사용하여 검출된다. 일부 측면에서, 바이오 마커, 예를 들어 염증성 마커는 락테이트 데하이드로게나제(LDH)이거나 이를 포함하고, LDH는 비색 시험 또는 시험 관내 효소-결합 면역 흡착 분석법을 사용하여 평가된다.
[396] 일부 실시 양태에서, 파라미터는 LDH이고, 일부 경우에, 독성의 발달, 예를 들어 CRS 또는 NT는 임계값 초과인 LDH 값과 상관 관계가있다. 일부 실시 양태에서, 염증 마커는 LDH이고 임계 값은 리터당 약 300 유닛, 리터당 약 400 유닛, 또는 리터당 약 500 유닛 또는 리터당 약 600 유닛이다.
[397] 일부 실시 양태에서, 파라미터 또는 바이오 마커는 LDH이다. 일부 실시 양태에서, 바이오 마커는 LDH이고 임계 값은 500U/L 또는 그 이상이다. 일부 실시 양태에서, 파라미터 또는 바이오 마커는 SPD이다. 일부 실시 양태에서, 파라미터는 SPD이고, 임계 값은 약 50 cm2 또는 그 이상이다. 일부 실시 양태에서, 바이오마커 또는 파라미터는 SPD 및 LDH이고, 임계 값은 50 cm2 또는 그 이상의 SPD 및 500 U/L 또는 그 이상의 LDH이다. 일부 실시 양태에서, 바이오 마커 또는 파라미터는 CRS 또는 NT 발생 위험 증가와 관련있다. 일부 실시 양태에서, 임계 값을 초과하는 파라미터 또는 마커, 예를 들어, 50 cm2 또는 그 이상의 SPD 및 500 U/L 또는 그 이상의 LDH의 측정은 대략 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-배 또는 그 이상의 CRS 또는 NT 발생 위험 증가 예컨대 임의의 CRS 또는 NT 등급과 관련이 있다. 일부 실시 양태에서, 임계치 미만의 파라미터 또는 마커, 예를 들어, 500 cm2 미만의 SPD 및 500 U/L 미만의 LDH의 측정은 대략 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-배 또는 그 이상의 CRS 또는 NT 발생 위험 감소, 예컨대 임의의 CRS 또는 NT 등급과 관련이 있다.
2. 반응, 효능 및 생존 평가
[398] 일부 측면에서, 상기 방법은 특정 세포 표현형을 갖는 세포의 용량, 예를 들어 CCR7+ 세포 사이의 연관성 또는 관계의 결정, 및 이러한 용량의 세포를 투여한 대상체에서의 반응, 효능 및/또는 생존을 포함한다.
[399] 일부 측면에서, NHL을 갖는 대상체과 같은 대상에서의 반응률은 루가노 기준(Lugano criteria)(Cheson 등의, (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등의, (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5)에 기초한다. 일부 측면에서, 반응 평가는 임의의 임상, 혈액학적 및/또는 분자 방법을 이용한다. 일부 측면에서, 루가노 기준을 사용하여 평가된 반응은 양전자 방출 단층 촬영 (PET)-컴퓨터 단층 촬영 (CT) 및/또는 CT의 적절한 사용을 포함한다. PET-CT 평가는 FDG-avid 림프종에 대한 플루오로데옥시글루코스 (FDG)의 사용을 추가로 포함할 수 있다. 일부 측면에서, PET-CT가 FDG-avid 조직학에서 반응을 평가하기 위해 사용될 경우, 5-포인트 척도가 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 5-포인트 척도는 다음 기준으로 구성된다: 1, 배경 위의 흡수 없음; 2, 흡수≤종격(mediastinum); 3, 흡수> 종격(mediastinum) 그러나 ≤리버(liver); 4, 적당한 흡수> 리버(liver); 5, 리버(liver) 및/또는 새로운 병변보다 현저히 높은 흡수; X, 새로운 흡수 영역이 림프종과 관련이 없음.
[400] 일부 측면에서, 기술 된바와 같이 루가노 기준을 사용한 완전 반응(CR)은 완전한 대사 반응 및 다양한 측정 가능한 부위에서의 완전한 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 부위는 림프절 및 림프절 외 부위를 포함하며, 여기서 PET-CT가 사용될 때 CR은 5-포인트 척도에서 잔류 질량을 갖거나 갖지 않는 1, 2 또는 3의 점수로 기술된다. 일부 측면에서, 생리학적 흡수가 높거나 비장 또는 골수 내에서 활성화되는 (예를 들어, 화학 요법 또는 골수성 콜로니-자극 인자를 갖는) Waldeyer의 고리 또는 림프절 부위에서, 흡수는 정상적인 종격동 및/또는 리버(liver)보다 클 수 있다. 이러한 상황에서, 조직이 높은 생리학적 흡수를 갖더라도 초기 관여 부위에서의 흡수가 정상 조직을 둘러싸는 것보다 크지 않으면 완전한 대사 반응이 추론될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 CR은 질환의 림프절 외 부위가 없고, 표적 노드/결절 덩어리는 병변의 가장 긴 횡 직경 (LDi)에서 1.5cm 이하로 회귀해야한다. 추가 평가 부위에는 골수가 포함되며, 여기서 PET-CT 기반 평가는 골수에서 FDG-avid 질환의 증거가 부족하다는 것을 나타내고, CT 기반 평가는 정상적인 형태를 나타내어야하며, 결정되지 않은 경우 IHC 음성이어야 한다. 추가 부위에는 장기 확대 평가가 포함될 수 있으며 이는 정상으로 회귀해야 한다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, CR의 경우에는 없어야 한다 (Cheson 등의, (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등의, (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).
[401] 일부 측면에서, 기술 된 바와 같이 루가노 기준을 사용한 부분 반응 (PR)은 다양한 측정 가능한 부위에서의 부분 대사 및/또는 방사선 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 부위는 림프절 및 림프절 외 부위를 포함하며, 여기서 PET-CT가 사용될 때 PR은 임의의 크기의 기준선 및 잔류 질량 (들)과 비교하여 흡수가 감소된 4 또는 5의 점수로 기술된다. 중간에, 그러한 발견은 반응하는 질병을 나타낼 수 있다. 치료가 끝날때 그러한 발견은 잔류 질환을 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 PR은 최대 6 개의 대상 측정 가능 노드 및 림프종 부위의 SPD가 ≥0 %로 감소한 것으로 기술된다. CT에서 측정하기에 병변이 너무 작은 경우 5 mm x 5 mm가 기본값으로 할당되며; 병변이 더 이상 보이지 않으면 상기 값은 0 mm x 0 mm이고; 5mm x 5mm보다 크지만 정상보다 작은 노드의 경우 실제 측정 값이 계산에 사용된다. 추가적인 평가 부위는 골수를 포함하는데, 여기서 PET-CT 기반 평가는 정상 골수에서의 흡수보다 잔류 흡수가 높다는 것을 나타내야하지만, 기준선과 비교하여 감소된 잔류 흡수를 나타내어야한다(화학 요법의 허용되는 반응성 변화와 호환되는 확산 흡수). 일부 측면에서, 결절 반응(nodal response)과 관련하여 골수에서 지속적인 초점 변화가있는 경우, MRI 또는 생검 또는 간격 스캔(interval scan)에 의한 추가 평가를 고려해야한다. 일부 측면에서, 추가 부위는 장기 비대 평가를 포함할 수 있으며, 비장은 정상을 초과하여 >50% 길이로 회귀해야한다. 일부 측면에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되는데, 이는 PR의 경우 부재/정상, 퇴행하지만 증가하지 않아야한다. PET-CT 및/또는 CT 기반 평가를 사용하여 반응/안정성 질환 (SD) 또는 진행성 질환 (PD)을 측정할 수 없다 (Cheson 등의., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson 등의., (2015) 방사선과 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).
[402] 어떤 측면에서, 무진행 생존 (PFS)은 암과 같은 질환의 치료 동안 및 이후에 대상체가 질환과 함께 살지만 악화되지 않는 시간의 길이로 기술된다. 일부 측면에서, 객관적 반응(OR)은 측정 가능한 반응으로 기술된다. 일부 측면에서, 객관적 반응률 (ORR)은 CR 또는 PR을 달성한 환자의 비율로 기술된다. 일부 측면에서, 전체 생존(OS)은 진단 날짜 또는 질병, 예컨대 암의 치료 시작 날짜부터 질병으로 진단된 대상체가 여전히 살아있는 시간의 길이로 기술된다. 일부 측면에서, 무 사건 생존 (EFS)은 암 치료 후, 치료가 예방 또는 지연을 의도한 특정 합병증 또는 사건이없는 병태로 대상체가 지속되는 시간의 길이로 기술된다. 이러한 사건에는 암으로의 복귀 또는 뼈로 퍼진 암으로 인한 뼈 통증 또는 사망과 같은 특정 증상의 발병이 포함될 수 있다.
[403] 일부 실시 양태에서, 반응 지속 시간의 측정 (DOR)은 종양 반응의 기록부터 질병 진행까지의 시간을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 반응을 평가하기위한 파라미터는 지속적인 반응, 예를 들어 요법 개시로부터 일정 시간 후에 지속되는 반응을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 지속적인 반응은 요법 개시 후 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24 개월에서의 반응률에 의해 지시된다. 일부 실시 양태에서, 반응은 3 개월 초과 또는 6 개월 초과 동안 지속된다.
[404] 일부 측면에서, RECIST 기준은 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용되며; 일부 측면에서, 고형 종양에서 사용된다. (Eisenhauer 등의, 유럽 암 저널 45 (2009) 228-247.) 일부 측면에서, RECIST 기준은 표적 병변에 대한 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용된다. 어떤 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 완전한 반응은 모든 표적 병변의 소멸 및 임의의 병리적 림프절 (표적 또는 비-표적 여부)이 짧은 축에서 <10 mm로 감소되어야하는 것으로 기술된다. 다른 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 부분 반응은, 기준선 합직경을 기준으로하여, 표적 병변 직경의 합에서 적어도 30 % 이상 감소한 것으로 기술된다. 다른 측면에서, 진행성 질환 (PD)은 연구에서 가장 작은 합계 (이는 연구에서 가장 작은 경우 기준 합계를 포함 함)를 고려하여 표적 병변의 직경의 합계에서 적어도 20 % 증가한 것으로 기술된다. 20 %의 상대적 증가에 더하여, 상기 합은 또한 적어도 5mm 이상의 절대 증가를 보여 주어야한다(일부 측면에서 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행으로 간주 됨). 다른 측면에서, 안정 질환 (SD)은 연구 중에 가장 작은 합 직경을 기준으로하여, PR 자격을 갖추기에 충분한 축소 또는 PD 자격을 갖추기에 충분한 증가로 설명되지 않는다.
[405] 일부 측면에서, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 투여는 일반적으로 대상체에서 질환 또는 병태의 확장 또는 부담을 감소시키거나 방지한다. 예를 들어, 질환 또는 병태가 종양인 경우, 상기 방법은 일반적으로 골수 또는 분자적으로 검출 가능한 암에서 종양 크기, 용량(volume), 전이, 블라스트의 비율을 감소시키고/시키거나 종양 부담과 관련된 예후 또는 생존 또는 다른 증상을 개선시킨다.
[406] 질병 부담은 대상체 또는 대상체의 기관, 조직 또는 체액, 예컨대 종양의 기관 또는 조직 또는 예컨대 전이를 나타내는 다른 위치에서 질병의 세포의 총 수를 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 특정 혈액 악성 종양의 맥락에서 혈액 또는 골수에서 검출 및/또는 정량될 수 있다. 질병 부하는 일부 실시 양태에서, 종양의 질량, 전이의 수 또는 정도 및/또는 골수에 존재하는 블라스트 세포의 백분율을 포함할 수 있다.
[407] 일부 실시 양태에서, 대상체는 백혈병을 갖는다. 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수에서 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있다.
[408] 일부 측면에서, CLL을 갖는 대상체와 같은 대상체에서의 반응률은 만성 림프구성 백혈병에 관한 국제 워크숍 (IWCLL) 반응 기준에 기초한다 (Hallek, 등의., Blood 2008, Jun 15; 111 (12) : 5446- 5456). 일부 측면에서, 이러한 기준은 다음과 같이 기술된다 : 일부 측면에서, 면역 표현형에 의한 말초 혈액 클론 림프구의 부재, 임파선염의 부재, 간 비대 또는 비장 비대증의 부재, 전신 증상(constitutional symptoms)의 부재 및 만족스러운 혈구 수를 필요로하는 완전 완화(CR); 불완전한 골수 회복 (CRi)으로 완전 완화, 일부 측면에서 상기 CR로 설명되어 있지만 정상적인 혈구 수는 없음; 일부 측면에서 말초 혈액 카운트의 개선과 함께 림프구 수에서 ≥ 50 % 감소, 림프절 병증에서 ≥ 50 % 감소 또는 간 또는 비장에서의 ≥ 50 % 감소로 설명되는 부분 완화 (PR); 일부 측면에서 림프구 수의 > 5 x109/L로의 ≥ 50 % 증가, 림프절 병증의 ≥ 50 % 증가, 간 또는 비장 크기의 ≥ 50 % 증가, CLL로 인한 리히터의 변형 또는 새로운 세포질로 설명되는 진행성 질환 (PD); 및 일부 측면에서 CR, CRi, PR 또는 PD에 대한 기준을 충족시키지 않는 것으로 기술된 안정 질환.
[409] 일부 실시 양태에서, 대상체는 조성물의 세포의 하나 이상의 단위 용량 (또는 단위 용량)을 포함하는 세포 요법의 투여 후 지속 반응을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 지속적인 반응은 치료의 결과로서 대상체가 부분적 또는 완전한 반응을 나타내는 기간, 보통 수개월이다. 일부 실시 양태에서, 지속적인 반응은 전체 생존의 개선과 일치한다.
[410] 일부 실시 양태에서, 대상체는 조성물의 세포의 하나 이상의 단위 용량 (또는 단위 용량)을 포함하는 세포 요법의 투여 후 무진행 생존 (PFS)을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 무진행 생존은 치료 후 또는 치료 시작 후 (예를 들어, 조성물의 세포의 하나 이상의 단위 용량 (또는 단위 용량)을 포함하는 세포 요법의 투여 후) 질병이 악화되지 않는 시간의 길이를 측정함으로써 결정된다. 일부 실시 양태에서, 질환이 암인 경우, 무진행 생존은 악화되거나 확산되지 않는 암을 지칭한다. 일부 궤예에서, 무진행 생존은 지속적인 반응과 일치한다.
[411] 일부 실시 양태에서, 대상체는 세포 용량의 투여 1 개월 이내에 대상체의 림프절의 크기가 약 20mm 이하, 크기가 약 10mm 이하 또는 크기가 약 10 mm 이하인 경우 CR 또는 OR을 나타낸다.
[412] 일부 실시 양태에서, CLL의 인덱스 클론은 대상체의 골수에서 (또는 방법에 따라 치료 된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의 골수에서) 검출되지 않는다. 일부 실시 양태에서, CLL의 인덱스 클론은 IgH 딥 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 실시 양태에서, 인덱스 클론은 세포의 투여 후 적어도 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24 개월 또는 그 시점에 검출되지 않는다.
[413] 일부 실시 양태에서, 예를들어, 광 현미경에 의해 검출된 골수에서 10% 이상의 블라스트, 골수에서 20% 이상의 블라스트, 골수에서 30% 이상의 블라스트, 골수에서 40% 이상 또는 골수에서 50% 이상의 블라스트와 같이, 골수에서 5% 이상의 블라스트가 있는 경우 대상체가 형태학적 질환을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 골수에 5 % 미만의 블라스트가있는 경우 대상체는 완전 또는 임상 완화를 나타낸다.
[414] 일부 실시 양태에서, 대상체는 완전한 완화를 나타낼 수 있지만, (광 현미경 기술에 의해) 형태적으로 검출할 수 없는 소량의 잔류 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수에서 5 % 미만의 블라스트를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 암을 나타내는 경우, 대상체는 최소 잔류 질환(MRD)을 나타낸다고한다. 일부 실시 양태에서, 분자적으로 검출 가능한 암은 적은 수의 세포의 민감한 검출을 가능하게하는 임의의 다양한 분자 기술을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 이러한 기술은 염색체 전위에 의해 생성된 독특한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 융합 전 사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 실시 양태예에서, 백혈병-특이적 면역 표현형에 기초하여 암 세포를 확인하기 위해 유동 세포 측정법이 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 암의 분자 검출은 100,000 개의 정상 세포에서 최소 1 개의 백혈병 세포를 검출 할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 대상체는 100,000 개 세포 중 1 개 이상의 백혈병 세포가, 예를 들어 PCR 또는 유세포 분석에 의해 검출되는 경우 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 대상체의 질환 부담은 분자적으로 검출 불가능하거나 MRD-이므로, 일부 경우에, PCR 또는 유세포 분석 기술을 사용하여 대상체에서 백혈병 세포를 검출할 수 없다.
[415] 일부 측면에서, 질환 또는 병태는 제1 용량의 투여 후에 지속되고/되거나 제1 용량의 투여는 대상체에서 질환 또는 병태를 근절하기에 충분하지 않다.
[416] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 질환 또는 병태의 부담, 예를 들어, 종양 세포 수, 종양 크기, 환자 생존 기간 또는 무-생존 생존 기간을, 대상체가 하나 이상의 대안적인 치료제를 받는 것과 같은 것 및/또는 대상체가 세포 및/또는 제공된 방법에 따른 림프구 보충제 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물의 용량을 받지 않는 것과 같이 대안적인 투약 요법을 사용하는 유사한 방법으로 관찰되는 감소와 비교하여, 더 큰 정도로 및/또는 더 큰 시간 동안 감소시킨다. 일부 실시 양태에서, 대안적인 용량의 세포는 참조 조성물로 지칭된다. 일부 실시 양태에서, 참조 조성물은 특정 표현형의 비-정해진 수의 세포 및/또는 본원에 제공된 실시 양태에 따른 특정 정해진 비율이 아닌특정 표현형의 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 참조 조성물은 효과기 또는 분화된 표현형을 갖는 더 많은 빈도 또는 다수의 T 세포를 포함하는 것이다. 일부 실시 양태에서, 대상체에서의 질환 또는 병태의 부담이 검출, 평가 또는 측정된다. 질병 부담은 일부 측면에서 대상체 또는 기관 또는 조직 또는 혈액 또는 혈청과 같은 대상체의 체액에서 질병 또는 질병-관련 세포, 예를 들어 종양세포의 총 수를 검출함으로써 검출될 수 있다. 일부 측면에서, 대상의 생존, 특정 기간 내의 생존, 생존의 정도, 무-사건 또는 증상이없는 생존의 존재 또는 지속 기간, 또는 무-재발 생존이 평가된다. 일부 실시 양태에서, 질병 또는 병태의 임의의 증상이 평가된다. 일부 실시 양태에서, 질환 또는 병태 부담의 척도가 명시된다.
[417] 일부 실시 양태에서, 대상체의 무 사건 생존률 또는 전체 생존율은, 다른 방법 예를 들어, 대상이 하나 이상의 대안적인 치료제를 받는 방법 및/또는 대상체가 용량의 세포, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조품 또는 조성물에 따른 림프구 보충제를 받지 않는 것(예를 들어, 참조 조성물을 받는 것)과 비교하여 상기 방법으로 개선된다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 투여 후 6 개월에 상기 방법으로 치료된 대상체에 대한 무 사건 생존율 또는 확률은, 약 40% 초과, 약 50% 초과, 약 60% 초과, 약 70% 초과, 약 80% 초과, 약 90% 초과, 또는 약 95% 초과이다. 일부 측면에서, 전체 생존율은 약 40% 초과, 약 50% 초과, 약 60% 초과, 약 70% 초과, 약 80% 초과, 약 90% 초과, 또는 약 95% 초과이다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법으로 치료된 대상체는 무-사건 생존, 무-재발 생존 또는 적어도 6 개월 이상, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 년 이상의 생존을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 진행 시간은 예컨대 약 6 개월 이상 또는 적어도 11, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 년의 진행 시간과 같이 개선된다.
[418] 일부 실시 양태에서, 상기 방법에 의한 치료 후, 재발 가능성은 다른 방법, 예를 들어 대상체가 하나 이상의 대안적인 치료제를 투여받는 방법 및/또는 대상체가 용량의 세포 및/또는 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 림프구 보충제를 받지 않는 방법(예를 들어, 참조 조성물을 받음)과 비교하여 감소된다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 제1 용량 후 6 개월에서의 재발 확률은 약 80% 미만, 약 70% 미만, 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만 보다 적다.
[419] 일부 경우에, 투여된 세포, 예를 들어, 입양적으로 전달된 세포의 약동학은 가용성, 예를 들어 투여된 세포의 생체 이용률을 평가하기 위해 결정된다. 입양적으로 전달된 세포의 약동학을 결정하는 방법은 조작된 세포가 투여된 대상체로부터 말초 혈액을 채취하고, 말초 혈액에서 조작된 세포의 수 또는 비율을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 세포를 선택 및/또는 분리하기위한 접근법은 키메라 항원 수용체 (CAR)-특이적 항체 (예를들어, Brentjens 등의, Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38) 단백질 L(Zheng 등의, J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29), Strep-Tag 서열과 같은 에피토프 태그를 CAR의 특정 부위에 직접 도입하여 Strep-Tag에 대한 결합 시약은 CAR 폴리펩티드( 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014190273 참조)에 특이적으로 결합하는 CAR(Liu 등의. (2016) 자연 생명공학, 34:430; 국제 특허 출원 공개 번호 WO2015095895) 및 모노클로날 항체를 직접 평가하는데 사용되도록 하는 것을 포함할 수 있다. 외인성 마커 유전자는 일부 경우, 조작된 세포 요법과 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 허용하고, 일부 경우에는 세포 자살을 촉진할 수도있다. 일부 경우 절단된 표피 성장 인자 수용체(EGFRt)는 형질 도입된 세포에서 관심 형질 전환 유전자 (CAR 또는 TCR)와 공발현 될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 8,802,374 참조). EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®), 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체, 또는 EGFRt 작제물 및 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 다른 재조합 수용체로 조작된 세포를 확인 또는 선택하는 데 사용될 수 있고/거나 수용체를 발현하는 세포를 제거 또는 분리하는데 사용될 수 있는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 포함할 수 있다. 미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu 등의, Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434)를 참조한다.
[420] 일부 실시 양태에서, 환자로부터 수득된 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액에서 CAR+ T 세포의 수는 예를 들어 세포의 약동학을 결정하기 위해 세포 요법의 투여 후, 일정 기간에 결정될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 대상체의 혈액 또는 상기 방법에 의해 처리된 대부분의 대상체에서 검출 가능한 CAR+ T 세포, 선택적으로 CAR+ CD8+ T 세포 및/또는 CAR+ CD4+ T 세포의 수는, μL 당 1 세포 초과, μL 당 5 세포 초과 또는 μL 당 10 세포 초과이다.
3. 독성 평가
[421] 일부 측면에서, 상기 방법은 특정 세포 표현형, 예를 들어 CCR7+ 세포를 갖는 세포의 용량, 및 독성 결과, 예를 들어 이러한 용량의 세포가 투여 된 대상체에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 발달 또는 신경 독성(NT)사이의 연관성 또는 관계를 결정하는 것을 수반한다.
[422] 일부 측면에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 중증 CRS (sCRS)이거나 이와 관련되거나 이를 나타낸다. CRS, 예를 들어, sCRS은 일부 경우에 입양 T 세포 요법 및 다른 생물학적 생성물의 대상체에 투여 후 발생할 수 있다. See Davila 등의, Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens 등의, Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp 등의, N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); 및 Kochenderfer 등의, Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu 등의, Cancer Letters 343 (2014) 172-78를 참조한다.
[423] 전형적으로, CRS는 예를 들어 T 세포, B 세포, NK 세포, 단핵구 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과장된 전신 면역 반응에 의해 야기된다. 이러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 다량의 염증 매개체를 방출할 수 있다. 사이토카인은 급성 염증 반응을 유발하고/하거나 내피 기관 손상을 유발하여 미세 혈관 누출, 심부전 또는 사망을 초래할 수 있다. 중증의 생명을 위협하는 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전 또는 파종성 혈관 내 응고를 유발할 수 있다. 생명을 위협하는 다른 심각한 중증에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경 독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다. 일부 측면에서, 열, 특히 고열(≥38.5℃ 또는 ≥101.3°F)은 CRS와 관련이있다. 경우에 따라 CRS의 특징 또는 증상은 감염을 모방한다. 일부 실시 양태에서, CRS 증상을 나타내는 대상체에서 감염이 또한 고려되고, 배양물 별 모니터링 및 경험적 항생제 치료가 투여될 수 있다. CRS와 관련된 다른 증상으로는, 심장 기능 장애, 성인 호흡 곤란 증후군, 신부전 및/또는 간부전, 응고증, 파종 성 혈관 내 응고 및 모세관 누출 증후군이 있다.
[424] CRS는 항-IL-6 요법, 예를 들어 항-IL-6 항체, 예를 들어 토실리주맙, 또는 항생제 또는 기재된 다른 제제와 같은 항-염증 요법을 사용하여 치료될 수 있다. CRS의 결과, 징후 및 증상은 공지되어 있으며 본원에 기재된 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 특정 투여 요법 또는 투여가 주어진 CRS 관련 결과, 징후 또는 증상에 영향을 미치거나 영향을 미치지 않는 경우, 특정 결과, 징후 및 증상 및/또는 그 양 또는 정도가 특정될 수 있다.
[425] CAR-발현 세포를 투여하는 맥락에서, CRS는 일반적으로 CAR을 발현하는 세포의 주입 후 6-20일에 발생한다. Xu 등의, Cancer Letters 343 (2014) 172-78를 참조한다. 일부 경우에, CRS는 CAR T 세포 주입 후 6일 미만 또는 20일 초과 시에 발생한다. CRS의 발생 정도 및 시기는, 주입 시 기준선 사이토카인 수준 또는 종양 부담과 관련될 수 있다. 일반적으로, CRS는 상승된 혈청 수준의 인터페론(IFN)-γ, 종양 괴사 인자(TNF)-α 및/또는 인터루킨(IL) -2를 포함한다. CRS에서 빠르게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8 및 IL-10이다.
[426] CRS와 관련된 예시적인 결과는 열, 경직(rigors), 오한, 저혈압, 호흡 곤란, 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS), 뇌병증, ALT/AST 상승, 신부전, 심장 장애, 저산소증, 신경 장애 및 사망을 포함한다. 신경계 합병증은 섬망, 발작과 유사한 활동, 혼란, 단어 찾기 어려움, 실어증 및/또는 둔화가 포함한다. 다른 CRS 관련 결과에는 피로, 메스꺼움, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 장애 및 신부전이 포함된다. 일부 측면에서, CRS는 혈청-페리틴, d-이량체, 아미노 트랜스퍼라제, 락테이트 데 하이드로게나제 및 트리글리세리드와 같은 하나 이상의 인자의 증가, 또는 저섬유소혈증 또는 간비장비대와 관련이 있다.
[427] 일부 실시 양태에서, CRS와 관련된 결과에는 다음 중 하나 이상이 포함된다: 2일 이상, 예를 들어 3일 이상, 예를 들어 4일 이상 또는 적어도 연속 3일 이상 동안의 지속적인 열, 예를 들어 특정 온도, 예를 들어 약 섭씨 38도 이상의 열; 약 섭씨 38도 이상의 열; 둘 이상의 사이토카인 (예를 들어, 인터페론 감마 (IFNγ), GM -CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토카인 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)로 이루어진 군 중에서 둘 이상)의 전처리 수준과 비교하여, 이러한 사이토카인 중 하나 이상의 예를 들어 적어도 또는 약 75의 최대 접힘 변화, 또는, 예를 들어 적어도 또는 약 250의 최대 접힘 변화와 같은 사이토카인의 상승; 및/또는 저혈압과 같은 독성의 하나 이상의 임상 징후 (예를 들어, 적어도 하나의 정맥 혈압 조절기에 의해 측정된 바와 같이); 저산소증 (예를 들어, 약 90 % 이하의 혈장 산소 (PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경계 장애(정신 병태 변화, 방해 및 발작 포함). 일부 실시 양태에서, 신경 독성 (NT)은 CRS와 동시에 관찰될 수 있다.
[428] 예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인 및 CRS와 관련된 다른 인자를 포함하는 하나 이상의 인자의 증가된 또는 높은 혈청 수준을 포함한다. 예시적인 결과는 하나 이상의 이러한 인자의 합성 또는 분비의 증가를 추가로 포함한다. 이러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 T 세포와 상호 작용하는 세포, 예를 들어 선천성 면역 세포 또는 B 세포에 의한 것일 수 있다.
[429] 일부 실시 양태에서, CRS 관련 혈청 인자 또는 CRS 관련 결과는 인터페론 감마 (IFN-γ), TNF-a, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 대식세포 염증성 단백질 (MIP)-1, 종양 괴사 인자 알파 (TNFα), IL-6 및 IL-10, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프락토킨 및/또는 IL-5을 포함하는 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 인자 또는 결과는 C 반응성 단백질 (CRP)을 포함한다. CRS의 조기에 쉽게 측정할 수 있는 위험 인자일뿐 아니라 CRP는 세포 확장의 지표이기도하다. 일부 실시 양태에서, ≥15 mg/dL과 같은 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖는다. 일부 실시 양태에서, 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 갖지 않는다. 일부 실시 양태에서, CRS의 척도는 CRP의 척도 및 CRS를 나타내는 다른 인자를 포함한다.
[430] 일부 실시 양태에서, CAR 치료 전, 동안 또는 후에 하나 이상의 염증성 사이토카인 또는 케모카인이 모니터링된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 콜로니 자극인자 (GM-CSF), 또는 대식세포 염증성 단백질 (MIP)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, IFN-γ, TNF-α 및 IL-6이 모니터링된다.
[431] sCRS 발병 위험이 높은 환자를 예측하기 위해 CRS의 발병과 관련이있는 것으로 나타난 CRS 기준이 개발되었다 (Davilla 등의. 과학 중개의학. 2014;6(224):224ra25 참조). 요소에는 발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 염증 유발 사이토카인의 혈청 수준 상승, 예를 들어 치료로 유발된 상승이 전처리 종양 부담 및 sCRS 증상과 상관 관계가있는 7 가지 사이토카인 세트(IFNγ, IL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, fractalkine, 및 GM-CSF)가 포함된다. CRS의 진단 및 관리에 대한 다른 지침이 알려져있다(예를 들어, Lee 등의, Blood. 2014;124(2):188-95 참조). 일부 실시 양태에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 하기 표 1에 상세히 기재된 것들이다.
[432]
일부 측면에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 하기 표 3에 상세히 기술된 기준이다.
[433] 일부 실시 양태에서, 투여 후 대상체가 다음을 나타내는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 그의 용량의 세포의 투여에 반응하여 또는 이차적으로 "중증 CRS"( "sCRS")를 발생시키는 것으로 간주된다: (1) 적어도 3 일 동안 섭씨 38도 이상의 열; (2) 다음을 포함하는 사이토카인의 상승 (a) 투여 직후의 수준과 비교하여 다음 7 개의 사이토카인 그룹 중 2 개 이상에 대해 적어도 75 배 이상의 최대 배수 변화: 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토킨 및 IL-5 및/또는 (b) 투여 직후의 수준과 비교하여 다음 7 개의 사이토카인 그룹 중 하나 이상에 대해 적어도 250 이상의 최대 배수 변화: 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토킨 및 IL-5; 및 (c) 저혈압과 같은 독성의 적어도 하나의 임상 징후 (적어도 하나의 정맥 혈관 압박기가 필요함) 또는 저산소증 (PO2 <90 %) 또는 하나 이상의 신경계 장애(들) (정신 병태 변화, 방해 및/또는 발작 포함). 일부 실시 양태에서, 중증 CRS는 표 2 또는 표 3에 제시된 바와 같이 등급이 3 이상인 CRS를 포함한다.
[434] 일부 실시 양태에서, 4 등급 이상과 같은 중증 CRS 또는 3 등급 CRS 이상과 관련된 결과는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 2 일 이상, 예를 들어 3 일 이상, 예를 들어 4 일 이상 또는 연속 3 일 이상 동안 지속적인 열, 예를 들어 특정 온도의 열, 예를 들어 약 섭씨 38도 이상; 약 섭씨 38도 이상의 열; 2 개 이상의 사이토카인 (예를 들어, 인터페론 감마 (IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프락토카인 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)으로 이루어진 군 중 2 개 이상)의 전처리 수준과 비교하여 최대 배수 변화와 같은 사이토카인의 상승, 예를 들어, 적어도 또는 약 75, 또는 이러한 사이토카인 중 하나 이상의 최대 배수 변화 예를 들어 적어도 또는 약 250; 및/ 또는 저혈압과 같은 독성의 하나 이상의 임상 징후(예를 들어, 적어도 하나의 정맥 혈관 압박기에 의해 측정된 바와 같이); 저산소증 (예를 들어, 약 90 % 이하의 혈장 산소 (PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경계 장애(정신 병태 변화, 방해 및 발작 포함). 일부 실시 양태에서, 중증 CRS는 중환자실(ICU)에서의 관리 또는 주의를 요구하는 CRS를 포함한다.
[435] 일부 실시 양태에서, 중증 CRS와 같은 CRS는 (1) 지속적인 열 (최소 3 일 동안 섭씨 38도 이상의 열) 및 (2) 적어도 약 20 mg/dL의 CRP의 혈청 수준의 조합을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CRS는 둘 이상의 혈관 압축기의 사용을 요구하는 저혈압 또는 기계적 환기를 요구하는 호흡 부전을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 혈관 압축제의 용량은 2 차 또는 후속 투여에서 증가된다.
[436] 일부 실시 양태에서, 중증 CRS 또는 3 급 CRS는 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 증가, 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제의 증가, 오한, 열성 호중구 감소증, 두통, 좌심실 기능 장애, 뇌병증, 뇌수종 및/또는 진전을 포함한다.
[437] 다양한 결과를 측정 또는 검출하는 방법이 특정될 수 있다.
[438] 일부 측면에서, 독성 결과는 신경 독성이거나 이와 관련되어있다. 일부 실시 양태에서, 신경 독성의 임상 위험과 관련된 증상은 혼란, 섬망, 표현성 실어증, 둔화, 근육간대경련, 무기력, 변경된 정신 병태, 경련, 발작과 유사한 활동, 발작 (선택적으로 뇌파도 (EEG)에 의해 확인 됨), 베타 아밀로이드(Aβ) 수준 증가, 글루타메이트 수준 증가, 및 증가된 수준의 산소 라디칼을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 신경 독성은 중증도에 기초하여 등급화되며, 예를들어, 등급 1-5 규모 사용하고, 예를들어, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli, 자연 리뷰 신경과 6, 657-666 (12월, 2010); 국립 암 연구소―일반적인 독성 기준 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03) 참조한다.
[439] 어떤 경우에는 신경 증상이 sCRS의 가장 초기 증상일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 신경 증상은 세포 요법 주입 후 5 내지 7 일에 시작되는 것으로 보인다. 일부 실시 양태에서, 신경학적 변화 지속 기간은 3 일 내지 19 일의 범위일 수 있다. 어떤 경우에는 sCRS의 다른 증상이 해결된 후 신경학적 변화가 회복된다. 일부 실시 양태에서, 신경 학적 변화의 시간 또는 해결 정도는 항-IL-6 및/또는 스테로이드(들)로의 치료에 의해 앞당겨지지 않는다.
[440] 일부 실시 양태에서, 투여 후 대상체가 다음 중에서 자가-치료(예를 들어, 목욕, 드레싱 및 탈의, 수유, 화장실 사용, 약물 복용)를 제한하는 증상을 보이는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 그의 용량의 세포의 투여에 반응하거나 이차적으로 "중증 신경 독성"을 나타내는 것으로 간주된다: 1) 말초 운동 신경의 염증 또는 퇴행을 포함한 말초 운동 신경 병증의 증상; 2) 말초 감각 신경의 염증 또는 퇴행을 포함한 말초 감각 신경 병증의 증상, 감각 지각 왜곡과 같은 감각 이상, 비정상이고 불쾌한 감각, 신경 또는 신경 그룹을 따라 강렬한 고통스러운 감각과 같은 신경통, 및/또는 따끔 거림의 비정상적인 피부 감각을 유발하는 감각 뉴런의 기능 장애와 같은 감각 이상, 마비, 압력, 자극이 없을 때 추위 및 따뜻함. 일부 실시 양태에서, 중증 신경 독성은 표 4에 제시된 바와 같이 3 등급 이상의 신경 독성을 포함한다.
[441] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 다른 방법과 비교하여 CRS 또는 신경 독성과 관련된 증상을 감소시킨다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 다른 방법과 비교하여 중증 CRS 또는 3 등급 이상의 CRS와 관련된 증상, 결과 또는 인자를 포함하여 CRS와 관련된 증상, 결과 또는 인자를 감소시킨다. 예를 들어, 제시된 방법에 따라 치료된 대상체는 검출할 수 없고/거나 CRS, 기술된 바와 같이 예를들어 표1 또는 표 2에 제시된, 예를 들어 중증 CRS 또는 3 등급 이상의 CRS의 증상, 결과 또는 인자가 감소될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 다른 방법으로 치료받는 대상과 비교하여 사지 약화 또는 마비와 같은 신경 독성, 기억 상실, 시력 및/또는 지각, 제어 불가능한 강박 및/또는 강박 행동, 망상, 두통, 운동 제어 상실을 포함한 인지 및 행동 문제, 인지 기능 저하, 자율 신경계 기능 장애 및 성적 기능 장애를 포함한 행동 문제의 증상이 감소될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본 방법에 따라 치료된 대상체는 말초 운동 신경 병증, 말초 감각 신경 병증, 감각 이상, 신경통 또는 감각 이상과 관련된 증상이 감소될 수 있다.
[442] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 신경계의 사망과 같은 신경계 및/또는 뇌의 손상을 포함하는 신경 독성과 관련된 결과를 감소시킨다. 일부 측면에서, 상기 방법은 베타 아밀로이드 (Aβ), 글루타메이트 및 산소 라디칼과 같은 신경 독성과 관련된 인자의 수준을 감소시킨다.
[443] 일부 실시 양태에서, 유독성 결과는 용량-제한 독성 (DLT)이다. 일부 실시 양태에서, 독성 결과는 용량-제한 독성이다. 일부 실시 양태에서, 유독성 결과는 용량-제한 독성의 부재이다. 일부 실시 양태에서, 용량 제한 독성 (DLT)은 특정 독성을 평가하기 위해 알려진 또는 공개된 지침에 의해 평가된 3 등급 이상의 독성으로 정의되며, 예컨대 상기 임의의 것 및 국립 암 연구소 (NCI) 유해 사건에 대한 공통 용어 기준 (CTCAE) 버전 4.0을 포함한다.
[444] 일부 실시 양태에서, 낮은 비율, 위험 또는 독성 발생 가능성, 예를 들어 CRS 또는 신경 독성 또는 중증 CRS 또는 신경 독성, 예컨대 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 용량의 T 세포를 투여함으로써 관찰된 3 등급 이상의 CRS 또는 신경 독성은 외래 환자 기반으로 세포 요법의 투여를 허용한다. 일부 실시 양태에서, 세포 요법의 투여, 예를 들어 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 T 세포 (예를 들어 CAR+ T 세포)의 복용량은 외래 환자 기반으로 수행되거나 하룻밤 체류해야하는 병원 입원과 같이 대상체를 병원에 입원시킬 필요없다.
[445] 일부 측면에서, 세포 요법, 예를 들어 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 T 세포의 용량 (예를 들어, CAR+ T 세포)이 투여된, 외래환자 기초 치료 대상을 포함한, 대상체는, 대상이 신경 독성 또는 CRS와 같은 독성의 징후 또는 증상을 보일 때까지 또는 그렇지 않을 때 세포 용량의 투여 전 또는 투여로 독성을 치료하기위한 중재를 투여받지 않는다. 독성을 치료, 지연, 약독화 또는 완화시키기위한 예시적인 작용제가 본원에 기재되어있다.
[446] 일부 실시 양태에서, 대상체가 세포 요법을 투여한 경우, 예를 들어 외래 환자를 대상으로 치료된 대상체를 포함한 T 세포의 용량 (예 : CAR+ T 세포)은, 대상체가 열을 나타내거나 열을 줄이기 위해 치료를 받거나 투여하도록 지시받는다. 일부 실시 양태에서, 대상체의 열은 특정 임계 온도 또는 수준 이상(또는 그 이상) 인 대상체의 체온으로 특징 지워진다. 일부 측면에서, 임계 온도는 적어도 저열, 적어도 적당한 열 및/또는 적어도 고열과 관련된 온도이다. 일부 실시 양태에서, 임계 온도는 특정 온도 또는 범위이다. 예를 들어, 임계 온도는 적어도 섭씨 약 38, 39, 40, 41 또는 42도 및/또는 섭씨 약 38도 내지 섭씨 약 39도 또는 섭씨 약 39도 내지 섭씨 약 40도, 또는 섭씨 약 40도 내지 섭씨 약 41도, 또는 섭씨 약 41도 내지 섭씨 약 42도의 범위일 수 있다.
[447] 일부 실시 양태에서, 열을 감소시키도록 설계된 치료는 해열제 치료를 포함한다. 해열제는 해열 효과를 갖는 것으로 알려진 임의의 수의 작용제 중 하나와 같이 열을 감소시키는 임의의 작용제, 예를 들어 화합물, 조성물 또는 성분을 포함할 수 있으며, 예컨대 NSAIDs (예컨대 이부프로펜, 나프록센, 케토 프로펜 및 니메술라이드 등), 살리실레이트, 예컨대, 아스피린, 콜린 살리실레이트, 마그네슘 살리실레이트 및 나트륨 살리실레이트, 파라세타몰, 아세트아미노펜, 메타미졸, 나부메톤, 피낙손, 안티피린, 해열제이다. 일부 실시 양태에서, 해열제는 아세트아미노펜이다. 일부 실시 양태에서, 아세트아미노펜은 4 시간마다 최대 12.5 mg / kg의 용량으로 경구 또는 정맥 내 투여될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 이는 이부프로펜 또는 아스피린이거나 이를 포함한다.
[448] 일부 실시 양태에서, 열이 지속적인 열인 경우, 대상체에게 독성을 치료하기위한 대안적인 치료, 예를 들어 하기 섹션 II에 기재된 임의의 치료가 투여된다. 외래 환자를 대상으로 치료를 받는 대상체의 경우, 대상체가 열이 있거나 지속되는 것으로 결정된 경우 대상체는 병원으로 돌아오도록 지시 받는다. 일부 실시 양태에서, 그 또는 그녀가 해당 임계 온도 이상에서 열이 나는 경우, 대상체의 열이나 체온이 감소하지 않는 경우, 또는 예를들어 NSAID 또는 살리실레이트, 예를 들어, 이부프로펜, 아세트 아미노펜 또는 아스피린과 같은 해열제 치료와 같이 열을 줄이기 위해 설계된 치료와 같은 특정 치료 후 지정된 양 이상 또는 감소하지 않은 경우(예를 들어, 1℃ 이상, 일반적으로 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃, 또는 0.2℃만큼 변동하지 않음), 대상체는 지속 열이 갖거나, 이를 갖는 것으로 결정되거나, 갖는 것으로 간주된다. 예를 들어, 그 또는 그녀가 적어도 약 섭씨 38℃ 또는 39℃ 정도의 열이 나거나 열이있는 것으로 판단되고, 아세트 아미노펜과 같은 해열제로 치료 한 후에도 6 시간 이상, 8 시간 이상 또는 12 시간 이상 또는 24 시간 이상의 기간 동안 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃ 또는 0.2℃ 이상, 또는 약 1%, 2%, 3%, 4% 또는 5% 이상 감소되되지 않는 경우 대상체는 열이 지속되는 것으로 간주된다. 일부 실시 양태에서, 해열제의 투여량은, 박테리아 또는 바이러스 감염, 예를 들어 국소 또는 전신 감염과 관련된 열과 같은 특정 유형의 열 또는 열을 감소시키는 것과 같이 일반적으로 효과적인 투여량이다.
[449] 일부 실시 양태에서, 대상체가 관련 임계 온도 이상에서 발열을 나타내며 대상체의 열 또는 체온이 약 1℃이상 변동하지 않고, 일반적으로 약 0.5℃, 0.4 ℃, 0.3 ℃ 또는 0.2 ℃이상 변동하지 않는 경우, 지속적인 열이 있거나 이를 갖는 것으로 결정되거나 간주된다. 그러한 양의 변동이 없거나 일정량의 변동은 일반적으로 주어진 기간 동안 측정된다(예를 들어 24 시간, 12 시간, 8 시간, 6 시간, 3 시간 또는 1 시간 이상의 기간으로, 열의 첫 징후 또는 표시된 임계 값을 초과하는 첫 번째 온도에서 측정). 일부 실시 양태에서 예를 들어, 그 또는 그녀가 적어도 섭씨 38℃ 또는 39℃ 이상의 열을 보이고, 약 6 시간 이상, 8 시간 이상, 또는 12 시간 이상, 또는 24 시간 이상의 기간 동안 약 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃ 또는 0.2℃ 이상 온도 변동이 없는 경우, 대상체가 지속적인 열을 나타내는 것으로 간주되거나 결정된다.
[450] 일부 실시 양태에서, 열은 지속적인 열이고; 일부 측면에서, 대상체는 대상체가 지속 열이있는 것으로 결정된 시점, 예를들어 그러한 결정 또는 독성을 유발할 가능성이있는 초기 치료, 예를 들어 CAR+ T 세포와 같은 T 세포의 용량과 같은 세포 요법 후 첫 번째 결정의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6 시간 또는 더 적은 시간 내에 치료된다.
[451] 일부 실시 양태에서, 독성-표적화 요법과 같은 독성을 치료하기위한 하나 이상의 중재제 또는 작용제는 예를 들어, 상기 언급된 실시 양태 중 어느 하나에 따라 측정된 바와 같이, 대상체가 지속된 열을 나타내는 것으로 결정되거나 확인된(예를 들어, 첫 번째 결정되거나 확인된) 시점 또는 그 직후에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 독성-표적화 요법은 그러한 확인 또는 결정의 특정 시간 내, 예컨대 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간 또는 8시간 이내에 투여된다.
Ⅱ. 조작된 세포 조성물의 생성 방법
[452] 제공된 실시 양태 중에는 유전자 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물을 생성 또는 생산하는 방법이 있다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 CAR과 같은 재조합 수용체를 발현하는 세포를 포함하는 산출 세포 조성물을 생성하고, 이는 일부 경우에 질환 또는 병태를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 따라 사용하기 위한 것과 같은 치료 T 세포 조성물이다. 일부 실시 양태에서, 조작된 세포 조성물을 제조하기위한 하나 이상의 공정 단계의 특징은, 조작된 세포 조성물을 제조하는데 사용되는 출발 물질의 세포에서 표현형의 특징과 비교하여 농축된 것과 같은, 기술된 바와 같이 특정 특징 또는 표현형을 갖는 세포에 대해 농축된 산출 조성물을 초래할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 조작된 또는 치료 T 세포 조성물, 예를 들어 본원에 제공된 방법에 의해 생성되거나 생성된 산출 조성물은, 덜 분화된 T 세포 생성물 또는 나이브-유사 또는 중앙 기억 T 세포 서브세트가 풍부한 생성물과 관련된 표현형 및 기능적 특성 및/또는 일부 경우에, 반응의 지속성과 같은 개선된 약동학적 특성 또는 반응과 관련된, 보다 기능적으로 활성인 T 세포 생성물 및/또는 대상체에게 투여 시 무진행 생존을 나타낸다. 덜 분화된 T 세포 생성물 또는 나이브-유사 또는 중앙 기억 T 세포 서브세트 및/또는 보다 기능적으로 활성인 T 세포 생성물이 농축된 생성물과 관련된 특성을 포함하는, 조성물의 세포가 기술된 바와 같이 하나 이상의 표현형 또는 기능적 속성을 갖는 특정 백분율의 세포가 농축되거나 이를 나타내는 치료용 T 세포 조성물, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 산출 조성물이 제공된다.
[453] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 냉동 보존, 단리, 분리, 선택, 활성화 또는 자극, 형질 도입, 배양, 증폭(expansion), 세척, 현탁액, 희석, 농도 및/또는 세포의 조제를 위한 단계와 같은 하나 이상의 처리 또는 추가 처리 단계를 포함하는 공정을 통해 세포 조성물 (예를 들어, 치료 T 세포 조성물)을 생성 또는 생성하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 조성물 (예를 들어, 치료 T 세포 조성물)을 생성 또는 생산하는 방법은 대상체로부터 세포를 단리하고, 하나 이상의 자극 조건 하에서 제조, 가공, 배양하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 다음의 순서대로 수행되는 처리 단계를 포함한다: 세포, 예를 들어 1 차 세포 (예를 들어, T 세포)는 먼저 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액 샘플, 성분채집술 샘플, 백혈구 형성증 샘플)로부터 선택되거나 분리된 것과 같이 분리; 선택된 세포는 선택적으로 자극 시약의 존재 하에 단리된 세포를 자극하는 단계 후에 형질 도입을 위해 바이러스 벡터 입자와 함께 배양; 세포를 확장하는 등 형질 도입된 세포 배양; 형질 도입된 세포를 조성물로 제제화하고 제공된 용기에 조성물을 도입. 일부 실시 양태에서, 세포 조성물은 예를 들어 단위 용량으로 환자에게 투여된다. 일부 실시 양태에서, 생성된 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물은 동결 보존 전 또는 후에 동일한 대상체로 재 도입된다. 일부 실시 양태에서, 단리, 선택, 형질 도입 및/또는 배양 전 및/또는 후를 포함하는 단계의 하나 이상의 단계 동안 세포는 동결 보존되고, 이어서 해동될 수 있다.
[454] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 처리 단계는 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: (a) 세포를 포함하는 생물학적 시료(예를 들어, 전혈 샘플, 버피 코트 샘플, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 샘플, 분획화되지 않은 T 세포 샘플, 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 성분 채집 제품 또는 백혈구 생성 제품)의 세척하는 단계, (b) 예를 들어, 면역 친화성-기반 분리를위한 선택 또는 면역 친화성 시약과 함께 세포를 배양함으로써 샘플로부터 원하는 서브세트 또는 세포 집단을 단리, 예를들어, 선택하는 단계(예를 들어, CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포); (c) 선별된 세포와 같은 단리된 세포를 바이러스 벡터 입자와 배양하는 단계, (d) 기술된 바와 같은 방법을 사용하여 세포를 배양, 재배 또는 확장시키는 단계 및 (e) 형질 도입된 세포, 예를 들어 약학적으로 허용되는 완충제, 동결 보존제 또는 다른 적합한 배지를 제형 화하는 단계. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 (e) 세포를 바이러스 벡터 입자와 함께 배양하기 전, 동안 및/또는 이후에 수행될 수 있는 자극 조건에 세포를 노출시킴으로써 세포를 자극하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포의 희석, 농축 및/또는 완충제 교환과 같은 세척 또는 현탁 단계의 하나 이상의 추가 단계가 또한 상기 단계 중 임의의 단계 이전 또는 이후에 수행될 수 있다. 일부 측면에서, 생성된 조작된 세포 조성물 (예를 들어, 치료 T 세포 조성물)은 하나 이상의 용기에 도입된다. 일부 실시 양태에서, 세포 조성물은 예를 들어 단위 용량으로 환자에게 투여된다.
[455] 일부 측면에서, 상기 방법은 세포 예를 들어, 투여 용 조성물에서 세포의 표면 마커의 존재 및/또는 발현, 및/또는 표면 마커의 발현의 부재 또는 부족과 같이 세포 표현형과 같은 특정 특성, 특징 및/또는 형질을 갖는 세포 조성물을 생성하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 특정 특성, 특징 및/또는 형질, 예를 들어 세포 표현형은, 요법에서 원하는 결과, 예를 들어, 원하는 반응 또는 안전성 결과 및/또는 이러한 원하는 결과와 관련된 원하는 약동학적 파라미터를 나타내는 것과 관련된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 또한 예를 들어 대상체에게 투여하기 위해 본원에 기재된 방법을 사용하여 생성된 세포 조성물의 단위 용량과 같은 단위 용량의 결정 및/또는 생성을 포함한다. 일부 측면에서, 본원에 기재된 방법에 따라 생성된 세포 조성물 및/또는 그의 단위 용량은 예를 들어, 세포-기반 요법, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 치료 방법을 포함하여 대상체에게 투여하기 위해 치료 용도로 사용할 수 있다. 일부 측면에서, 본원에 기술된 세포 조성물 및/또는 단위 용량은 특정 원하는 치료 결과, 예를 들어, 원하는 반응 또는 안전성 결과 및/또는 이러한 원하는 결과와 관련된 원하는 약동학 파라미터를 나타내는 것을 달성하거나 연관될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포 조성물을 생성하는 방법은 세포 조성물을 생성 또는 생산하기 위해 본원에 기재된 단계에서 사용하기위한 투입 조성물을 생성 또는 생산하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 방법은 투입 조성물을 생성 또는 생산하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물을 생성하기위한 하나 이상의 방법은 하나 이상의 (a) 세포를 포함하는 생물학적 시료(예를 들어, 전혈 샘플, 버피 코트 샘플, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 샘플, 분획화되지 않은 T 세포 샘플, 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 성분 채집 제품 또는 백혈구 생성 제품)의 세척하는 단계, (b) 예를 들어, 면역 친화성-기반 분리를위한 선택 또는 면역 친화성 시약과 함께 세포를 배양함으로써 샘플로부터 원하는 서브세트 또는 세포 집단을 단리, 예를들어, 선택하는 단계(예를 들어, CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포)를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 단리, 분리, 선택 단계와 같은 하나 이상의 처리 단계를 포함하는 절차를 통해 생성된다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 세포 조성물을 생성 또는 생산하기위한 일반적인 공정의 제1 단계에서 생성된다. 일부 측면에서, 투입 조성물 내의 세포와 같이 상기 방법을 사용하여 조작하기위한 세포는, 본원, 예를 들어 II.A.에 기재된 임의의 세포이다. 일부 측면에서, 투입 조성물은 치료를 위해 대상체로부터 수득한 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포의 표적 수 또는 백분율을 기초로하여 생성되며, 이는 예를 들어 세포 표면에서 발현되는 것을 발현하거나, 또는 덜 분화된 세포 표현형과 관련된 또는이를 나타내는 마커 및/또는 메모리 세포 아형과 관련된 또는 이를 나타내는 마커를 포함하여, 특정 세포 표현형과 관련된 하나 이상의 마커를 발현하지 않을 수 있다. 일부 측면에서, 투입 조성물은 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 T 세포의 표적 백분율 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 아포토시스의 마커(예를들어, 활성화된 카스파제-3, 아넥신V).를 발현하지 않는 T 세포(예를 들어, CD4+ 및 CD8+ T 세포)의 표적 수 또는 백분율(예를 들어, 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상)을 포함한다.
[456] 일부 측면에서, 투입 조성물은, 예를 들어 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체; CAR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 작용제의 도입에 의한 유전자 조작의 대상 또는 그 일부 및/또는 다른 분자, 예컨대 임의의 폴리뉴클레오티드 또는 핵산, 또는 예를 들어 섹션 II.C.3에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 작용제이다. 일부 측면에서, 투입 조성물 중의 세포는 하나 이상의 작용제 및/또는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 섹션 II.C.3 에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 도입함으로써 조작된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에 세포를 배양함으로써 상기 도입 전, 동안 및/또는 도입 후에 투입 조성물이 자극되고, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래한다. 일부 실시 양태에서, 상기 자극은 본원, 예를 들어 섹션II.B에 기재된 임의의 자극 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 세포 조성물을 생성 또는 생산하기위한 임의의 처리 또는 추가 처리 단계에서 사용된다.
[457] 일부 측면에서, 상기 방법은 유전자 조작된 세포, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 조작된 T 세포를 포함하는 산출 조성물을 생성한다. 일부 측면에서, 산출 조성물은 덜 분화된 세포 표현형과 관련되거나 이를 나타내는 마커 및/또는 기억 세포 아형과 관련되거나 이를 나타내는 마커를 포함하여, 예를 들어 세포 표면에서 발현되는 것을 발현하거나, 특정 세포 표현형과 관련된 하나 이상의 마커를 발현하지 않는 조작된 세포의 정해진 비율, 빈도 및/또는 수를 포함한다. 일부 측면에서, 산출 조성물은 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포에 대한 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현(수용체+) CD8+ T세포의 정해진 비율, 및/또는 조성물 내 세포의 다른 서브세트에 대한 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+ CD8+ T세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포의 정해진 비율을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 아포토시스의 마커를 발현하지 않는 T 세포 (예를 들어, 카스파제-3, 아넥신 V)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 아포토시스의 마커(예를들어, 카스파제-3, 아넥신 V)를 발현하지 않는 T 세포의 표적 수 또는 백분율(예를들어, 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 자극 후 사이토카인을 생성하는 표적 수 또는 백분율의 T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 자극은 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 항원 특이적이다. 일부 실시 양태에서, 자극, 예를 들어 PMA/이오노마이신을 포함하는 자극은 재조합 수용체 (예를 들어, CAR) 항원 특이적이지 않다. 일부 실시 양태에서, 생산된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및/또는 IFNg이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 생산된 사이토카인은 IL-2 및/또는 TNFα이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 예를 들어 특정 특징 및/또는 표현형에 기초하여 정해진 비율의 세포를 포함하는 원하는 산출 조성물은 본원에 기재된 방법에 의해 생성될 수 있다.
[458] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 또한, 투입 조성물을 생성하기 전에, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포 및 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 수, 용량(volume)당 수, 중량 당 수 및/또는 백분율을 제공 또는 격리, 결정하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 아포토시스의 마커 (예를 들어, 카스파제-3, 아넥신 V)를 발현하지 않는 T 세포(예를들어, CD4+, CD8+ T 세포)의 수, 용량(volume)당 수, 중량 당 수 및/또는 백분율을 결정하는 것을 포함한다.
[459] 특정 실시 양태에서, 유전자 조작은 핵산, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 작용제를 도입하기 위한 투입 조성물로부터의 세포 형질 감염 또는 형질 도입이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 세포 조성물을 생성하는 단계는 투입 조성물의 세포를 활성화 또는 자극하는 하나 이상의 단계를 포함한다: 투입 조성물로부터 세포를 유전자 조작, 형질 도입 또는 형질 감염시키는 단계; 및/또는 형질 감염된 세포를 확장시키는 단계; 이에 의해 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포에 대한 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포의 정해진 비율, 및/또는 조성물 내 세포의 다른 서브세트에 대한 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포의 정해진 비율을 갖는 산출 세포 조성물이 야기된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 단계는 자극 후 사이토카인을 생성하는 표적 수 또는 백분율의 T 세포를 포함하는 산출 세포 조성물을 초래한다. 일부 실시 양태에서, 생산된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및/또는 IFNg이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 생산된 사이토카인은 IL-2 및/또는 TNFα이거나 이를 포함한다.
[460] 일부 실시 양태에서, 제공된 방법은 임상용 세포의 제조에서 하나 이상의 단계 또는 모든 단계가 수행되도록 수행되며, 예를 들어, 입양 세포 요법에서, 세포를 비 멸균 조건에 노출시키지 않고 무균실 또는 캐비닛을 사용할 필요없이 수행된다. 이러한 공정의 실시 양태에서, 세포는 모두 폐쇄 시스템 내에서 단리, 분리 또는 선택, 형질 도입, 세척, 임의로 활성화 또는 자극 및 제제화된다. 이러한 공정의 일부 측면에서, 세포는 폐쇄 시스템으로부터 발현되어 하나 이상의 생체 물질 용기에 도입된다. 일부 실시 양태에서, 방법은 자동화된 방식으로 수행된다. 일부 실시 양태에서, 상기 단계들 중 하나 이상은 폐쇄 시스템 또는 장치와 별도로 수행된다.
[461] 일부 실시 양태에서, 세포 요법을 제조, 생성 또는 생산하기위한 방법의 하나 이상의 다른 처리 단계를 수행하기 위해 폐쇄 시스템이 사용된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 프로세싱 단계, 예를 들어, 단리, 선택 및/또는 농축, 프로세싱, 형질 도입 및 조작과 관련된 배양, 및 제형화 단계는, 통합 또는 자급식 시스템에서 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로 시스템, 장치 또는 기구를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함하며, 이는 사용자가 처리, 단리, 조작 및 제제화 단계의 다양한 측면을 프로그래밍, 제어, 결과 평가 및/또는 조정할 수 있게한다. 일례에서, 시스템은 국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/072003, 또는 US 20110003380 A1에 기술된 시스템이다. 일례에서, 시스템은 국제 공개 번호 WO2016/073602에 기술된 시스템이다.
a. 시료에서 세포의 단리 또는 선택
[462] 일부 실시 양태에서, 처리 단계는 생물학적 샘플, 예컨대 대상체로부터 수득된 또는 대상체로부터 유래된 것으로부터 세포 또는 이의 조성물의 단리, 예컨대 특정 질환 또는 병태를 갖거나 세포 요법이 필요한 또는 어느 세포 요법이 투여될 것인지를 포함한다. 일부 측면에서, 대상체는 세포가 단리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법과 같은 특정 치료적 개입이 필요한 환자인 대상체과 같은 인간이다. 따라서, 일부 실시 양태에서 세포는 1차 세포, 예를 들어 1차 인간 세포이다. 일부 실시 양태에서, 세포는 CD4+ 및CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 포함한다. 시료에는 조직, 체액 및 대상체로부터 직접 채취한 기타 시료가 포함된다. 상기 시료에는 조직, 체액 및 대상체로부터 직접 채취한 기타 시료뿐만 아니라, 분리, 원심 분리, 유전자 조작(예를 들어, 바이러스 벡터를 이용한 형질 도입) 세척 및/또는 배양과 같은 하나 이상의 처리 단계에서 생성된 시료가 포함된다. 상기 생물학적 샘플은 생물학적 공급원으로부터 직접 수득된 샘플 또는 가공된 샘플 일 수 있다. 생물학적 샘플에는 체액, 예컨대 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 기관 샘플, 이로부터 유래된 가공된 샘플이 포함 되나, 이에 제한되지는 않는다.
[463] 일부 측면에서, 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 본원에서 성분채집술(apheresis) 또는 백혈구성분채집술 샘플(leukapheresis sample)로도 지칭되는 성분 채집 또는 백혈구성분채집술 생성물이거나 이로부터 유래된다. 예시적인 샘플에는 전혈, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위, 장, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 기타 기관 및/또는 그로부터 유래된 세포가 포함된다. 샘플은 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법과 관련하여 자가 및 동종 이계 공급원으로부터의 샘플을 포함한다.
[464] 일부 실시 양태에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서 세포는 이종성 공급원, 예를 들어 마우스, 랫트, 비인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.
[465] 일부 예에서, 대상체의 순환 혈액으로부터의 세포는 예를 들어, 성분채집술 또는 백혈구성분채집술에 의해 수득된다. 일부 측면에서, 상기 샘플은 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 핵 형성 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함하는 림프구를 함유하고, 일부 측면에서 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
[466] 일부 실시 양태에서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 처리 단계를 위해 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 위치시키기 위해 세척된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 인산염 완충 식염수 (PBS)로 세척된다. 일부 실시 양태에서, 세척 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 부족하다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조자의 지시에 따라 반자동 "흐름 통과" 원심 분리기 (예를 들어, Cobe 2991 세포 처리기, Baxter)로 완수된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조자의 지시에 따라 접선 유동 여과 (TFF)에 의해 완수된다. 일부 실시 양태에서, 상기 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충제, 예를 들어 Ca++/Mg++ 비함유 PBS에 재현탁된다. 특정 실시 양태에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고 세포는 배양 배지에 직접 재현탁된다.
[467] 세포는 일반적으로 포유 동물 세포와 같은 진핵 세포이고, 전형적으로 인간 세포이다. 일부 실시 양태에서, 혈액, 골수, 림프 또는 림프 기관으로부터 유래된 세포는, 면역계의 세포, 예를 들어 선천성 또는 적응성 면역 세포, 예를 들어 림프구를 포함하는 골수 또는 림프구 세포, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포이다. 다른 예시적인 세포는 유도된 다능성 줄기 세포 (iPSC)를 포함하는 다능성(multipotent) 및 분화다능(pluripotent) 줄기 세포와 같은 줄기 세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 1 차 세포, 예컨대 대상체로부터 직접 단리되고/되거나 대상체로부터 단리되고 동결된 것들이다. 일부 실시 양태에서, 상기 세포는 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포와 같은 T 세포 또는 다른 세포 유형의 하나 이상의 서브세트, 기능, 활성화 병태, 성숙도, 분화 가능성, 확장, 재순환, 국소화 및/또는 지속성 능력, 항원 특이성, 항원 수용체 유형, 특정 기관 또는 구획의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로파일 및/또는 분화 정도에 의해 정해진 것과 같은 이들의 소집단을 포함한다. 치료될 대상과 관련하여, 세포는 동종 이계 및/또는 자가 조직일 수 있다. 상기 방법들 중에는 상용 방법들이 포함된다. 상용 기술과 같은 일부 측면에서, 세포는 다능성 및/또는 다분화능, 예컨대 줄기 세포, 예컨대 유도된 다능성 줄기 세포 (iPSC)이다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 대상체로부터 세포를 단리하고, 이를 제조, 가공, 배양 및/또는 조작하고, 동결 보존 전 또는 후에 동일한 대상체로 세포를 재도입하는 것을 포함한다.
[468] T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 하위 유형 및 하위 집단은 나이브 T (TN) 세포, 이펙터 T 세포 (TEFF), 기억 T 세포 및 줄기 세포 기억 T (TSCM), 중앙 기억 T (TCM), 이펙터 기억 T (TEM) 또는 말기 분화된 이펙터 기억 T 세포, 종양 침윤 림프구 (TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막 관련 불변 T (MAIT) 세포, 자연 발생 및 적응 조절 T (Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포와 같은 이들의 하위 집단이다.
[469] 일부 실시 양태에서, 세포는 자연 살해 (NK) 세포이다. 일부 실시 양태에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염구이다.
[470] 일부 실시 양태에서, 단리 방법은 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한, 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 이러한 마커에 기초한 임의의 공지된 분리 방법이 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 분리는 친화성 또는 면역친화성-기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서 단리는, 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포의 발현 또는 발현 수준에 기초한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함하고, 예를들어, 이러한 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 배양 이후 일반적으로 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너에 결합된 세포의 세척 단계 및 분리가 후속되는 것에 의한다.
[471] 일부 실시 양태에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비친화성 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 예에서, 예를 들어, 원치 않는 성분을 제거하고, 원하는 성분을 풍부하게하고, 특정 시약에 민감한 세포를 용해 또는 제거하기 위해, 하나 이상의 시약의 존재 하에서 세포를 세척, 원심 분리 및/또는 배양한다. 일부 예에서, 세포는 밀도, 부착 특성, 크기, 감도 및/또는 특정 성분에 대한 내성과 같은 하나 이상의 특성에 기초하여 분리된다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 밀도 기반 세포 분리 방법, 예컨대 적혈구를 용해시켜 말초 혈로부터 백혈구를 제조하고 퍼콜(Percoll) 또는 피콜(Ficoll) 구배를 통한 원심 분리하는 것을 포함한다.
[472] 일부 실시 양태에서, 선별 단계의 적어도 일부는 선별 시약과 함께 세포의 배양을 포함한다. 예를 들어 하나 이상의 상이한 세포 유형의 선택을 위해 하나 이상의 선별 시약을 사용하여 수행될 수있는 선별 방법의 일부로서 선별 시약 또는 시약과의 배양은, 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포 내 또는 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한다. 일부 실시 양태에서, 선별 마커 또는 이러한 마커에 기초한 분리 시약을 사용하는 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 선별 시약 또는 시약들은 친화성 또는 면역 친화성-기반 분리인 분리를 초래한다. 예를 들어, 일부 측면에서 상기 선별는, 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포의 발현 또는 발현 수준에 기초하여 세포 및 세포 집단의 분리를위한 시약 또는 시약과의 배양, 예를들어 이러한 마커에 특이 적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 배양 이후 일반적으로 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너에 결합된 세포의 세척 및 분리에 의한 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 공정의 선택 및/또는 다른 측면은 국제 특허 출원 공개 번호 WO/2015/164675에 기재된 바와 같다.
[473] 이러한 공정의 일부 측면에서, 용량(volume)의 세포를 원하는 양의 친화성-기반 선택 시약과 혼합한다. 면역 친화성-기반 선택은 분리되는 세포와 세포상의 마커에 특이적으로 결합하는 분자, 예를 들어 고체 표면상의 항체 또는 다른 결합 파트너, 예를 들어 입자 사이에 유리한 에너지 상호 작용을 야기하는 임의의 시스템 또는 방법을 사용하여 수행 될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 방법은 비드, 예컨대 세포의 마커에 특이적인 선택제(예를 들어, 항체)로 코팅된 자기 비드와 같은 입자를 사용하여 수행된다. 상기 입자 (예를들어, 비드)는 에너지적으로 유리한 상호 작용을 촉진하는 것을 돕기위해 일정한 세포 밀도 대 입자 (예를 들어, 비드) 비로 진탕 또는 혼합하는동안 튜브 또는 백과 같은 용기에서 배양되거나 세포와 혼합될 수 있다. 다른 경우에, 상기 방법은 선택의 전부 또는 일부가 원심 챔버의 내부 공동에서, 예를 들어 원심 회전 하에 수행되는 세포의 선택을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 배양은 면역 친화성-기반 선별 시약과 같은 선별 시약과 함께 원심 챔버에서 수행된다. 특정 실시 양태에서, 단리 또는 분리는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/072003 또는 US 20110003380 A1에 기재된 시스템, 장치 또는 기구를 사용하여 수행된다. 일례에서, 시스템은 국제 공개 번호 WO2016/073602에 기술된 시스템이다.
[474] 일부 실시 양태에서, 원심 분리 챔버의 공동에서 이러한 선별 단계 또는 그의 일부 (예를 들어, 항체-코팅된 입자, 예를 들어, 자기 비드와의 배양)를 수행함으로써, 사용자는 다른 이용 가능한 방법에 비해 이점을 제공할 수 있는, 다양한 용액의 용량(volume), 가공 중 용액 첨가,그 타이밍과 같은 특정 파라미터를 제어할 수 있다. 예를 들어, 배양 중 공동의 액체 용량(volume)을 감소시키는 능력은, 공동 내의 총 세포 수에 영향을주지 않으면서, 선택에 사용된 입자(예를 들어 비드 시약)의 농도, 및 이에 따른 용액의 화학적 전위를 증가시킬 수 있다. 이는 처리되는 세포와 선택에 사용되는 입자 사이의 짝 상호 작용(pairwise interactions)을 향상시킬 수 있다. 일부 실시 양태에서, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 시스템, 회로 및 제어와 관련될 때 챔버에서 배양 단계를 수행하는 것은 사용자가 배양 동안 원하는 시간(들)에서 용액의 교반을 수행할 수 있게하며, 이는 또한 상호 작용을 향상시킬 수 있다.
[475] 일부 실시 양태에서, 선별 단계의 적어도 일부는 원심 분리 챔버에서 수행되며, 이는 선별 시약과 함께 세포의 배양을 포함한다. 이러한 공정의 일부 측면에서, 제조자의 지침에 따라, 세포 용량(volume)은 동일한 수의 세포 및/또는 세포 용량(volume)을 선택하기 위해 튜브 또는 용기에서 유사한 선택을 수행할 때 일반적으로 사용되는 것보다 훨씬 적은 양의 원하는 친화도-기반 선별 시약과 혼합된다. 일부 실시 양태에서, 동일 선별 시약(들) 양의 5 % 이하, 10 % 이하, 15 % 이하, 20 % 이하, 25 % 이하, 50 % 이하, 60 % 이하, 70 % 이하 또는 80 % 이하인 선별 시약 또는 시약의 양은 제조업자의 지시에 따라 동일한 수의 세포 및/또는 동일한 용량(volume)의 세포에 대한 튜브 또는 용기 기반 배양에서 세포의 선별에 사용된다.
[476] 일부 실시 양태에서, 선별, 예를 들어 세포의 면역 친화성-기반 선별을 위해, 세포는 선별 시약, 예를 들어 농축 및/또는 고갈시키기를 원하는 세포상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 분자와 함께 선별 완충제, 그러나 조성물의 다른 세포에는 없는, 선택적으로 중합체 또는 표면과 같은 스캐폴드, 예를 들어, 비드, 예를 들어, 자기 비드에 결합된 항체, 예컨대 CD4 및 CD8에 특이적인 모노클로날 항체에 결합된 자기 비드를 함유하는 조성물에서 챔버의 공동에서 배양된다. 일부 실시 양태에서, 기술된 바와 같이, 선별 시약은 교반 또는 회전 시 튜브에서 선별을 수행할 때 동일한 수의 세포 또는 동일한 용량(volume)의 세포 선별의 동일하거나 유사한 선별 효율을 달성하기 위해 전형적으로 사용되거나 필요한 선별 시약의 양과 비교하여 실질적으로 적은 양 (예를 들어, 양의 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % 또는 80 % 이하)으로 챔버의 공동의 세포에 첨가된다. 일부 실시 양태에서, 배양은 예를 들어, 10 mL 내지 200 mL, 예를 들어, 적어도 또는 약 적어도 또는 약 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 150 mL 또는 200 mL의 시약의 배양으로 표적 용량(volume)을 달성하기 위해 세포 및 선별 시약에 선별 완충제를 첨가하여 수행된다. 일부 실시 양태에서, 선별 완충제 및 선별 시약은 세포에 첨가하기 전에 예비 혼합된다. 일부 실시 양태에서, 선별 완충제 및 선별 시약은 개별적으로 세포에 첨가된다. 일부 실시 양태에서, 선별 배양은 주기적으로 온화한 혼합 조건으로 수행되며, 이는 에너지적으로 선호되는 상호 작용을 촉진시키고, 이에 의해 높은 선별 효율을 달성하면서도 전체 선별 시약의 적은 사용을 허용할 수 있다.
[477] 일부 실시 양태에서, 선별 시약과의 배양의 총 지속 시간은, 5 분 내지 6 시간 또는 약 5 분 내지 약 6 시간, 예컨대 30 분 내지 3 시간, 예를 들어, 적어도 또는 적어도 약 30 분, 60 분, 120 분 또는 180 분이다.
[478] 일부 실시 양태에서, 인큐베이션은 혼합 조건 하에서 예컨대 600 rpm 내지 1700 rpm 또는 약 600 rpm 내지 약 1700 rpm (예를 들어 약 또는 적어도 600 rpm, 1000 rpm 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm)과 같이, 세포를 펠릿화하기 위해 사용된 것보다 낮은 속도와 같은, 상대적으로 낮은 힘 또는 속도에서 회전의 존재에서, 예컨대, 80g 내지 100g 또는 약 80g 내지 약 100g(예를 들어 약 또는 적어도 80g, 85g, 90g, 95g 또는 100g)의 챔버 또는 다른 용기의 샘플 또는 벽에서의 RCF에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 스핀은 이러한 저속에서 스핀의 반복된 간격에 이어서 휴식 기간, 예를들어, 약 1 또는 2 초 회전 후 약 5, 6, 7 또는 8 초 동안의 휴식과 같이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 초 동안의 회전 및/또는 휴식을 사용하여 수행된다.
[479] 일부 실시 양태에서, 이러한 공정은 챔버가 일체형인 완전 폐쇄 시스템 내에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 자동화된 프로그램을 사용하여 단일 폐쇄 시스템에서 세척 및 바인딩 단계를 완료하기 위해 이러한 공정(및 일부 측면에서, 하나 이상의 추가 단계, 예를 들어, 성분 채집 샘플과 같은 세포를 함유하는 샘플을 세척하는 이전 세척 단계)은 세포, 시약 및 기타 구성 요소가 적절한 시간에 챔버로 유입 및 배출되고 원심분리되는 것과 같이 자동화된 방식으로 수행된다.
[480] 일부 실시 양태에서, 세포 및 선별 시약 및/또는 시약의 배양 및/또는 혼합 후, 배양된 세포는 특정 시약 또는 시약의 존재 또는 부재에 기초하여 세포를 선택하기 위해 분리된다. 일부 실시 양태에서, 분리는 선별 시약과 함께 세포의 배양이 수행된 동일한 폐쇄 시스템에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 선별 시약과의 배양 후, 선별 시약이 결합된 세포를 포함하는 배양된 세포는 세포의 면역 친 화성-기반 분리를 위한 시스템으로 이동된다. 일부 실시 양태에서, 면역 친화성-기반 분리 시스템은 자기 분리 컬럼이거나 이를 포함한다.
[481] 이러한 분리 단계는, 세포가 시약, 예를 들어 항체 또는 결합 파트너에 결합하는 양성 선별이 추가 사용을 위해 유지되고/되거나 세포가 시약, 예를 들어 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않는, 음성 선별이 유지되는 것을 기반으로 할 수 있다. 일부 예에서, 두 분획은 추가 사용을 위해 유지된다. 일부 측면에서, 음성 선별은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어서, 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현된 마커에 기초하여 분리가 가장 잘 수행된다.
[482] 일부 실시 양태에서, 공정 단계는 친화성-기반 선별을 수행할 수 있는 시스템 또는 장치를 사용하는 것과 같이 배양 된 것 및 세포의 음성 및/또는 양성 선별을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 단리는 양성 선별에 의한 특정 세포 집단의 농축 또는 음성 선별에 의한 특정 세포 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 실시 양태에서, 양성 또는 음성 선별은, 양성 또는 음성 선별된 세포에서 상대적으로 더 높은 수준 (마커high)으로 발현 또는 발현 된 (마커+) 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제와 함께 세포를 배양함으로써 달성된다. 동일한 선택 단계, 예를 들어 양성 또는 음성 선별 단계의 여러 라운드가 수행될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 양성 또는 음성 선별 단계는 예를 들어 양성 또는 음성 선별 단계를 반복함으로써 선별 공정을 거친다. 일부 실시 양태에서, 선별은 2 회, 3 회, 4 회, 5 회, 6 회, 7 회, 8 회, 9 회 또는 9 회 이상 반복된다. 특정 실시 양태에서, 동일한 선별이 최대 5 회 수행된다. 특정 실시 양태에서, 동일한 선별 단계가 3 회 수행된다.
[483] 상기 분리로 인해 특정 세포 집단 또는 특정 마커를 발현하는 세포가 100 % 농축 또는 제거될 필요는 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은 그러한 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭하지만, 마커를 발현하지 않는 세포가 완전히 부재할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 그러한 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 지칭하지만, 그러한 모든 세포를 완전히 제거할 필요는 없다.
[484] 일부 예에서, 하나의 단계로부터 양성 또는 음성으로 선별된 분획에 후속 양성 또는 음성 선별과 같은 다른 분리 단계가 수행되는 다중 라운드의 분리 단계가 수행된다. 일부 예에서, 단일 분리 단계는, 예를들어, 각각 음성 선별을 표적으로하는 마커에 특이적인 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 배양함으로써, 다수의 마커를 동시에 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다수의 세포 유형은 세포를 다양한 세포 유형에서 발현된 복수의 항체 또는 결합 파트너와 배양함으로써 동시에 양 성적으로 선별될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 분리 단계가 반복되고/되거나 1 회 이상 수행된다. 일부 실시 양태에서, 분리 단계로부터 유래된, 양성 또는 음성으로 선별된 분획은 예를 들어 양성 또는 음성 선별 단계를 반복함으로써 동일한 분리 단계를 거친다. 일부 실시 양태에서, 단일 분리 단계는, 예를 들어 양성으로 선별된 세포의 수율을 증가시키고, 음성으로 선별된 세포의 순도를 증가시키고/시키거나 음성으로 선별된 분획으로부터 양성으로 선택된 세포를 추가로 제거하기 위해 1 회 이상 반복 및/또는 수행된다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 분리 단계가 2 회, 3 회, 4 회, 5 회, 6 회, 7 회, 8 회, 9 회, 10 회 또는 10 회 이상 수행 및/또는 반복된다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 선별 단계는 1 회 내지 10 회, 1 회 내지 5 회, 또는 3 회 내지 5 회 수행 및/또는 반복된다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 선별 단계가 3 회 반복된다.
[485] 예를 들어, 일부 측면에서, 예를 들어 CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및/또는 CD45RO+ T세포와 같이, 높은 수준의 하나 이상의 표면 마커를 양성 또는 발현하는 세포와 같은 T세포의 특이적 하위 집단은 양성 또는 음성 선별 기술에 의해 단리된다. 일부 실시 양태에서, 이러한 세포는 이러한 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 결합 파트너와의 배양에 의해 선별된다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 결합 파트너는, 자기 비드 또는 상자성 비드와 같이 선별을 수행하기 위해 고체 지지체 또는 매트릭스에 직접적으로 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는 항-CD3/항-CD28 접합된 자기 비드 (예를 들어, DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T 세포 확장기 및/또는 ExpACT® 비드)를 사용하여 양성으로 선별될 수 있다.
[486] 일부 실시 양태에서, T 세포는, B 세포, 단핵구 또는 CD14와 같은 다른 백혈구와 같은 비-T 세포에서 발현된 마커의 음성 선별에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 선별 단계는 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포 독성 T 세포를 분리하기 위해 사용된다. 이러한 CD4+ 및 CD8+ 집단은 하나 이상의 나이브, 기억, 및/또는 이펙터 T 세포 하위 집단에서 상대적으로 더 높은 정도로 발현되거나 발현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선별에 의해 하위 집단으로 추가로 분류될 수 있다.
[487] 일부 실시 양태에서, CD8+ T 세포는, 예를 들어 각각의 하위집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선별에 의해, 나이브(naive), 중앙 기억, 효과기 기억 및/또는 중심 기억 줄기 세포에 대해 추가로 농축되거나 고갈된다. 일부 실시 양태에서, 중앙 기억 T (TCM) 세포의 농축은 투여 후 장기 생존, 증폭(expansion) 및/또는 생착을 향상시키는 것과 같은 효능을 증가시키기 위해 수행되며, 이는 일부 측면에서 이러한 하위 집단에서 특히 강력하다. Terakura 등의, (2012) Blood.1:72-82; Wang 등의, (2012) J Immunother. 35(9):689-701를 참조한다. 일부 실시 양태에서, TCM-농축된 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포의 결합은 효능을 추가로 향상시킨다.
[488] 실시 양태에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 모두에 존재한다. PBMC는, 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하는 것과 같이, CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획을 풍부하게하거나 고갈시킬 수 있다.
[489] 일부 실시 양태에서, 중앙 기억 T (TCM) 세포에 대한 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 높은 표면 발현에 기초하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현 또는 고발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 측면에서, TCM 세포에 대해 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 한 측면에서, 중앙 기억 T (TCM) 세포에 대한 농축은 CD4 발현에 기초하여 선별된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선별 및 CD62L에 기초한 양성 선별에 적용된다.
[490] 일부 측면에서 이러한 선별들은 동시에 수행되고 다른 측면에서는 어느 쪽이든 순서대로 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ T 세포 집단 또는 하위 집단을 제조하는데 사용된 동일한 CD4 발현-기반 선별 단계는 또한, CD4+ T 세포 집단 또는 하위 집단을 생성하는 데 사용되며, 따라서, CD4- 기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획은 유지되고 상기 방법의 후속 단계에서 사용되며, 임의로 하나 이상의 추가의 양성 또는 음성 선별 단계를 따른다. 일부 실시 양태에서, CD4+ T 세포 집단에 대한 선별 및 CD8+ T 세포 집단에 대한 선별은 동시에 수행된다. 일부 실시 양태에서, CD4+ T 세포 집단 및 CD8+ T 세포 집단에 대한 선별은 임의의 순서로 순차적으로 수행된다. 일부 실시 양태에서, 세포를 선별하기위한 방법은 미국 출원 공개 번호 US20170037369에 기재된 것을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 선별된 CD4+ T 세포 집단 및 선별된 CD8+ T 세포 집단은 선별 후에 결합될 수 있다. 일부 측면에서, 선별된 CD4+ T 세포 집단 및 선별된 CD8+ T 세포 집단은 용기 또는 생물 반응기 백과 같은 백에서 결합될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 선별된 CD4+ T 세포 집단 및 선별된 CD8+ T 세포 집단은 개별적으로 가공되어, 선별된 CD4+ T 세포 집단은 CD4+ T 세포가 농축되고, 자극 시약 (예를 들어, 항-CD3/항-CD28 자기 비드)과 함께 배양, 재조합 단백질 (예를 들어 CAR)을 인코딩하는 바이러스 벡터로 형질 도입되고, T 세포를 확장시키기위한 조건 하에서 배양되고, 선별된 CD8+ T 세포 집단은 CD8+ T 세포가 농축되고 자극 시약 (예를 들어, 항-CD3/항-CD28 자기 비드)과 함께 배양, 동일한 공여자로부터의 CD4+ T 세포의 조작과 동일한 재조합 단백질인 재조합 단백질 (예를 들어, CAR)을 코딩하는 바이러스 벡터로 형질 도입되고, 제공된 방법에 따라 T 세포를 확장시키기 위한 조건 하에서 배양된다.
[491] 특정 실시 양태에서, 생물학적 샘플, 예를 들어 PBMCs 또는 다른 백혈구 샘플은 CD4+ T 세포의 선별에 적용되며, 여기서 음성 및 양성 분획이 유지된다. 특정 실시 양태에서, CD8+ T 세포는 음성 분획으로부터 선별된다. 일부 실시 양태에서, 생물학적 샘플은 CD8+ T 세포의 선별에 적용되며, 여기서 음성 및 양성 분획 모두가 유지된다. 특정 실시 양태에서, CD4+ T 세포는 음성 분획으로부터 선별된다.
[492] 특정 예에서, PBMCs 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은 CD4+ T 세포의 선별에 적용되며, 여기서 음성 및 양성 분획 모두가 유지된다. 그런 다음, 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초하여 음성 선별에 적용되고, 양성 선택은 CD62L 또는 CCR7과 같은 중앙 기억 T 세포의 마커 특성에 기초하며, 여기서 양성 및 음성 선별은 임의의 순서로 수행된다.
[493] CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 식별함으로써 나이브(naive), 중앙 기억 및 이펙터 세포로 분류될 수 있다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 얻을 수 있다. 일부 실시 양태에서, 나이브(naive) CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ 또는 CD4+ T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 중앙 메모리 CD4+ T 세포는CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 실시 양태에서, 이펙터 CD4+ T 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
[494] 일 예에서, 음성 선별에 의해 CD4+ T 세포를 풍부하게하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 결합 파트너는 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합되어 양성 및/또는 음성 선별을위한 세포의 분리를 허용한다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 세포 및 세포 집단은 면역 자성 (또는 자성친화) 분리 기술을 사용하여 분리 또는 단리된다(분자 의학의 방법, vol. 58 : 전이 연구 프로토콜, Vol. 2 세포 행동 시험관 및 생체 내, p 17-25 편집: S. A. Brooks 및 U. Schumacher ®Humana Press Inc., Totowa, NJ 에서 검토된다.).
[495] 일부 측면에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은, 자성 반응 입자 또는 상자성 비드 (예 : Dynalbeads 또는 MACS® 비드와 같은 미세 입자)와 같은 미립자와 같이 작은, 자화성인 또는 자기 응답성인 물질을 포함하는 선별 시약과 함께 배양된다. 자기 반응성 물질, 예를 들어 입자는 일반적으로 결합 파트너, 예를 들어 항체에 직접 또는 간접적으로 부착되어 있으며, 이는 표면 마커, 세포 상에 존재하는 것, 세포들, 또는 세포의 집단과 같은 분자에 특이적으로 결합하며, 이는 선별되는 것이 바람직하고, 예를 들어, 음성 또는 양성으로 선별되는 것이 바람직하다.
[496] 일부 실시 양태에서, 자성 입자 또는 비드는, 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특정 결합 부재에 결합된 자기 반응성 물질을 포함한다. 자기 분리 방법에 사용하기위한 잘 알려진 자기 응답성 물질이 많이 있다. 적합한 자성 입자는 Molday, 미국 특허 제 4,452,773호 및 유럽 특허 명세서 EP452342 B에 기재되어 있는 것을 포함하며, 이는 본원에 참조로 포함된다. Owen 미국 특허 번호. 4,795,698, 및 Liberti 등의, 미국 특허 번호 5,200,084에 기술된 것과 같은 콜로이드 크기의 입자는 다른 예이며, 또한 사용될 수 있다.
[497] 상기 배양은 일반적으로 샘플 내 세포에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는, 자성 입자 또는 비드에 부착된, 항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 예를 들어 2 차 항체 또는, 이러한 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 다른 시약 조건에서 수행된다.
[498] 특정 실시 양태에서, 자기 반응성 입자는 1 차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2 차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비 딘으로 코팅된다. 특정 실시 양태에서, 상기 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1 차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 실시 양태에서, 비드보다는 세포가 1 차 항체 또는 결합 파트너로 표지된 후, 세포-유형 특이적 2차 항체-또는 다른 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 실시 양태에서, 스트렙타비딘-코팅된 자성 입자는 비오티닐화된 1 차 또는 2 차 항체와 함께 접합에 사용된다.
[499] 일부 측면에서, 샘플이 자기장에 배치되는 절차에서 분리가 달성되며, 자기응답성 또는 자화성 입자가 부착된 셀은 자석에 부착되어 라벨링되지 않은 셀로부터 분리될 것이다. 양성 선별을 위해, 자석에 부착되는 세포는 유지된다; 음성 선별을 위해, 부착되지 않은 세포 (표지되지 않은 세포)는 유지된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선별의 조합은 동일한 선별 단계 동안 수행되며, 여기서 양성 및 음성 분획은 유지되고 추가로 처리되거나 추가 분리 단계를 거친다.
[500] 일부 실시 양태에서, 친화도-기반 선별은 자기-활성화 세포 분류(MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통한 것이다. MACS (Magnetic Activated Cell Sorting), 예를 들어 CliniMACS 시스템은 자화된 입자가 부착된 셀을 고순도로 선별할 수 있다. 특정 실시 양태에서, MACS는 비-표적 및 표적 종이 외부 자기장의 적용 후에 순차적으로 용리되는 모드에서 작동한다. 즉, 자화 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 종이 용리되는 동안 제자리에 고정된다. 이어서, 이러한 제 1 용리 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되고 용리되는 것이 방지된 종은, 이들이 용리 및 회수될 수 있도록 어떤 방식으로도 자유롭게된다. 특정 실시 양태에서, 비-표적 세포는 이종 세포 집단으로부터 표지되고 고갈된다.
[501] 일부 실시 양태에서, 자기적으로 반응하는 입자는 후속 배양, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착된 채로 남고; 일부 측면에서, 상기 입자는 환자에게 투여하기 위해 세포에 부착된 채로 남는다. 일부 실시 양태에서, 자화성 또는 자기 응답성 입자는 상기 세포로부터 제거된다. 세포로부터 자화성 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체, 자화성 입자 또는 절단 가능한 링커에 접합된 항체 등의 사용을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 자화성 입자는 생분해성이다.
[502] 특정 실시 양태에서, 단리 또는 분리는 방법의 단리, 세포 제조, 분리, 가공, 배양(incubation), 배양(culture) 및/또는 제제화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 장치 또는 기구를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 상기 시스템은 예를 들어 오류, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 폐쇄 또는 멸균 환경에서 이들 각각의 단계를 수행하는데 사용된다. 일례에서, 상기 시스템은 국제 특허 출원 공개 번호WO2009/072003, 또는 US 20110003380 A1에 기술된 시스템이다.
[503] 일부 실시 양태에서, 상기 시스템 또는 장치는 통합 또는 자급식 시스템에서 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로, 하나 이상의, 예를 들어, 모든 단리, 처리, 조작 및 제제화 단계를 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함하며, 이는 사용자가 처리, 단리, 조작 및 제제화 단계의 다양한 측면을 프로그래밍, 제어, 결과 평가 및/또는 조정할 수 있게한다.
[504] 일부 측면에서, 선별 및/또는 다른 단계는, 예를 들어 폐쇄 및 멸균 시스템에서 임상-규모 수준으로 세포의 자동 분리를 위해, CliniMACS 시스템 (Miltenyi Biotic)을 사용하여 수행된다. 구성 요소에는 통합 마이크로 컴퓨터, 자기 분리 장치, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 측면에서 통합 컴퓨터는 기구의 모든 구성 요소를 제어하고, 시스템이 표준화된 순서로 반복되는 절차를 수행하도록 지시한다. 일부 측면에서 자기 선별 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선별 칼럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 튜빙 세트 전체의 유량을 제어하고, 핀치 밸브와 함께, 시스템을 통한 완충액의 제어된 흐름 및 세포의 지속적인 현탁액을 확보한다.
[505] 일부 측면에서 CliniMACS 시스템은 멸균, 비발열성 용액으로 공급되는 항체-결합 자화성 입자를 사용한다. 일부 실시 양태에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 준비 백을 튜브 세트에 연결하고, 차례로 완충액을 함유하는 백 및 세포 수집 백에 연결한다. 튜빙 세트는 사전-컬럼 및 분리 컬럼을 포함하여 사전-조립된 멸균 튜브로 구성되며 일회용이다. 선별 프로그램이 시작된 후, 시스템은 세포 샘플을 선별 컬럼에 자동으로 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 유지되고, 표지되지 않은 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기위한 세포 집단은 표지가 없으며 칼럼에 유지되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기위한 세포 집단은 표지되어 칼럼에 유지된다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 방법에 사용하기위한 세포 집단은 자기장을 제거한 후 칼럼으로부터 용리되고, 세포 수집 백 내에서 수집된다.
[506] 특정 실시 양태에서, 선별 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템 (Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 측면에서 CliniMACS Prodigy 시스템은 원심 분리에 의해 세포의 자동 세척 및 분별을 가능하게하는 세포 통합 처리를 갖추고있다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템은 원천 세포 제품의 거시적 층을 식별하여 최적의 셀 분별 끝점을 결정하는 온보드 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어도 포함할 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 세포 분화 및 확장, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합 세포 배양 챔버를 포함할 수 있다. 입력 포트는 배지의 멸균 제거 및 보충을 가능하게하며 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터링할 수 있다. 예를들어, Klebanoff 등의, (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura 등의, (2012) Blood.1:72-82, 및 Wang 등의, (2012) J Immunother. 35(9):689-701를 참조한다.
[507] 일부 실시 양태에서, 본원에 기술된 세포 집단은 유동 세포 측정법을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되는데, 여기서 다중 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 세포 집단은 예비 규모 (FACS)-분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 실시 양태에서, 본원에 기재된 세포 집단은 FACS-기반 검출 시스템과 조합된 미세 전자 기계 시스템(MEMS) 칩을 사용하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다 (예를들어, WO 2010/033140, Cho 등의, (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin 등의, (2008) J Biophoton. 1(5):355-376 참조). 두 경우 모두, 세포는 다수의 마커로 표지될 수 있어서, 고순도로 잘 정해진 T 세포 서브세트를 단리할 수 있다.
[508] 일부 실시 양태에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선택을 위한 선별를 용이하게한다. 예를 들어, 선별은 형광 표지된 항체에 대한 결합에 기초할 수 있다. 일부 예에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포 선별은, 예를 들어, 유세포 분석 검출 시스템과 조합하여 예비 스케일(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩을 포함하는 형광-활성화 세포 분류 (FACS)에 의한 것과 같이, 유체 스트림으로 운반된다. 이러한 방법은 동시에 다수의 마커를 기반으로 양성 및 음성 선택을 가능하게한다.
[509] 일부 실시 양태에서, 준비 방법은 냉동 단계, 예를들어 선택, 단리, 배양 및/또는 조작 전 또는 후에 세포를 냉동 보존하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 냉동 단계, 예를들어 선택 단리 또는 농축 전 또는 후에 세포를 동결 보존하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도의 단핵구를 제거한다. 일부 실시 양태에서, 상기 세포는 예를 들어 세척 단계 후에 동결 용액에 현탁되어 혈장 및 혈소판을 제거한다. 일부 측면에서 공지된 다양한 동결 용액 및 파라미터 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 일 예는, 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민 (HSA) 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 함유하는 PBS를 사용하는 것을 포함한다. 이어서, 이를 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 되도록 배지로 1 : 1로 희석시킨다. 이어서, 세포를 일반적으로 -80℃로 동결시킨다. 분당 1°의 속도로 액체 질소 저장 탱크의 기체 상에 저장된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 동결 보존에 적합한 백 (예를 들어, CryoMacs® 냉동 백, Miltenyi Biotec)에 봉입된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 냉동 보존에 적합한 바이알(예를 들어, CellSeal® 바이알, Cook Regentec)에 봉입된다. 일부 실시 양태에서, 동결 단계 및/또는 시약은 본원에 기재된 동결 단계 및/또는 시약 중 임의의 것을 포함한다.
[510] 본원에 기재된 방법의 일부 실시 양태에서, 세포 사멸을 감소, 최소화 또는 예방하기 위해 선택, 단리, 배양 및/또는 조작 전에 샘플(예를 들어, 성분 채집 또는 백혈구성분채집 제품)을 동결 보존하는 것이 유리하다. 세포 사멸을 감소, 최소화 또는 예방하고, 세포 생존력을 보존하기위한 비제한적 항냉동의 방법(cyroprotection method)은 아래에 기재되어있다. 일부 실시 양태에서, 세포를 함유하는 샘플(예를 들어, 전혈 샘플, 버피 코트 샘플, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 샘플, 비 분획 T 세포 샘플, 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 성분 채집 생성물 또는 백혈구성분채집 생성물)은 동결 보존 및/또는 동결 보호 (예를 들어, 냉동)된 후, 단리, 선택, 활성화, 자극, 조작, 형질 전환, 형질 감염, 배양(incubating), 배양(culturing), 수확, 세포 집단을 제제화 및/또는 제제화된 세포 집단의 대상체에 대한 투여를 위한 임의의 단계 전에 해동된다. 특정 실시 양태에서, 성분 채집 생성물 또는 백혈구성분채집 생성물은 동결 보존 및/또는 동결보호된 (예를 들어, 냉동된) 다음에 상기와 같이 세포 선택 또는 단리 단계 (예를 들어, T 세포 선택 또는 단리 단계)를 거치기 전에 해동된다. 일부 실시 양태에서, 동결 보존 및/또는 동결 보호된 성분 채집 생성물 또는 백혈구 성분 채집 생성물은 세포(예를들어 T 세포) 선택 또는 단리 단계를 거친 후, 추가의 동결 보존 및/또는 동결 보호 단계는, 후속 단계 중 임의의 단계, 예를들어, 활성화, 자극, 공학, 형질 전환, 형질 감염, 배양, 배양, 수확, 세포 집단 형성 및/또는 제제화된 세포 집단을 대상체에게 투여하는 단계 동안, 또는 단계 사이에서 수행되지 않는다. 예를 들어, 해동된, 동결보존 및/또는 동결보호된 성분 채집 생성물 또는 백혈구 성분채집 생성물로부터 선택된 T 세포는, T 세포 활성화/자극 또는 형질 도입과 같은 다운 스트림 공정을 위해 해동되기 전에 다시 동결보존 및/또는 동결보호되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 동결 보존 및/또는 동결 보호된 성분 채집 생성물 또는 백혈구 성분 채집 생성물은 세포(예를들어 T 세포) 선택 또는 단리 단계를 거친 후, 추가의 동결 보존 및/또는 동결 보호 단계는, 후속 단계 중 임의의 단계, 예를들어, 활성화, 자극, 공학, 형질 전환, 형질 감염, 배양, 배양, 수확, 세포 집단 형성 및/또는 제제화된 세포 집단을 대상체에게 투여하는 단계 동안, 또는 단계 사이에서 수행된다. 예를 들어, 해동된, 동결보존 및/또는 동결보호된 성분 채집 생성물 또는 백혈구 성분채집 생성물로부터 선택된 T 세포는, T 세포 활성화/자극 또는 형질 도입과 같은 다운 스트림 공정을 위해 해동되기 전에 다시 동결보존 및/또는 동결보호된다.
[511] 특정 실시 양태에서, 동결보존 및/또는 동결보호 성분 채집 생성물 또는 백혈구 성분채집 생성물은 (예를 들어, 샘플을 동결시키기 전에 T 세포 선택없이) 뱅킹되며, 이는 일부 측면에서 후속 처리 단계에 대해 더 많은 유연성을 허용할 수 있다. 일 측면에서, 선택 전의 뱅킹 세포는 다운 스트림 공정에 대한 세포 수율을 증가시키고, 뱅킹 세포가 이전에 더 건강하고 제조 성공 기준을 충족시키는 것이 더 쉽다는 것을 의미할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 뱅킹된 세포(the banked cells)는 뱅킹되지 않은 세포와 비교하여 세포 조성물을 생성 또는 생산하기위한 단계 또는 추가 단계에서와 같이 추가의 처리 단계에서 더욱 견고하다. 다른 측면에서, 일단 해동되면, 동결보존 및/또는 동결보호 성분 채집 생성물 또는 백혈구 성분채집 생성물에는 하나 이상의 상이한 선택 방법이 적용될 수 있다. 이 접근법의 장점은, 무엇보다도 샘플의 기증자 및/또는 다른 수신자와 같은 대상체의 질병 또는 병태의 치료를위한 세포 요법의 세포의 이용 가능성, 효능 및/또는 다른 측면을 향상시키는 것이다.
[512] 일부 실시 양태에서, 혈액 샘플, 성분 채집술 샘플 또는 백혈구 성분채집술 샘플의 동결 보존은 대상체로부터 샘플을 수득한 후 1,2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 24, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50 시간 이내에 일어난다. 실시 실시 양태에서, 혈액 샘플, 성분 채집 샘플 또는 백혈구 성분채집술 샘플의 동결 보존은 대상체로부터 샘플이 수득된 후 1일, 2일 또는 3일 이내에 일어난다.
[513] 일부 실시 양태에서, 세포를 함유하는 샘플 (예를 들어, 혈액 샘플, 성분 채집술 생성물 또는 백혈구 성분채집술 생성물)은 성분 채집술 또는 백혈구 성분채집술 중에 첨가된 헤파린과 같은 하나 이상의 항응고제(anti-coagulants)를 제거하기 위해 세척된다. 일부 실시 양태에서, 샘플 (예를 들어, 혈액 샘플, 성분 채집술 샘플, 백혈구 성분채집술 샘플)은 선별, 단리 및/또는 농축를 겪고, 선택된, 단리 및/또는 농축된 세포는 동결 보존된다. 일부 실시 양태에서, 단리, 선택 및/또는 농축된 세포는 T 세포, 예컨대 본원에 기재된 임의의 T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 농축된 T 세포 조성물은 단리, 선별 및/또는 농축 후 동결, 예를 들어 동결보존 및/또는 냉동(cryofrozen)된다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ T 세포의 조성물은 단리, 선택 및/또는 농축 후에 동결, 예를 들어 동결보존 및/또는 냉동(cryofrozen)된다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD8+ T 세포의 조성물은 단리, 선택 및/또는 농축 후 동결, 예를 들어 동결보존 및/또는 냉동(cryofrozen)된다. 일부 실시 양태에서, 농축된 T 세포는 세포 조성물의 배양(incubating), 활성화, 자극, 조작, 형질 전환, 형질 감염, 배양(cultivating,), 확장, 수확 및/또는 제제화하는 임의의 단계 이전에 동결, 예를 들어 동결보존 및/또는 냉동(cryofrozen)된다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ T 세포의 조성물은 세포 조성물을 배양(incubating), 활성화, 자극, 조작, 형질 전환, 형질 감염, 배양(cultivating,), 확장, 수확 및/또는 제제화하는 임의의 단계 이전에, 예를 들어 동결보존 및/또는 냉동(cryofrozen)된다. 일부 실시 양태에서, 농축된 CD8+ T 세포의 조성물은 세포 조성물을 배양(incubating), 활성화, 자극, 조작, 형질 전환, 형질 감염, 배양(cultivating,), 확장, 수확 및/또는 제제화하는 임의의 단계 이전에, 예를 들어 동결보존 및/또는 냉동(cryofrozen)된다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 냉동된(cryofrozen) 투입 조성물은 예를 들어 약 -80 ℃에서, 12시간 내지 7일, 24시간 내지 120시간, 또는 2일 내지 5일 동안 저장된다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 냉동된(cryofrozen) 투입 조성물은 약 -80 ℃에서, 10일, 9일, 8일, 7일, 6일 또는 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일 미만의 시간 동안 저장된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 냉동된(cryofrozen) 투입 조성물은 약 -80 ℃에서, 약 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일 또는 6 일 동안 저장된다.
[514] 일부 실시 양태에서, 공여체가 질병 또는 병태로 진단된 후의 시점에서, 샘플 (예를 들어, 성분 채집술 또는 백혈구 성분 채집술 샘플)은 사전 세포 선별 없이 또는 그 전에(예를 들어 크로마토그래피에 의한 선별과 같은 사전 T 세포 선별이 없는 경우) 동결보존 및/또는 동결보호된다. 일부 측면에서, 냉동 보존 시간은 또한 공여자가 다음 중 하나 이상을 받기 전이다: 질병 또는 병태에 대한 임의의 초기 치료, 질병 또는 병태에 대한 치료를 위해 표지된 임의의 표적 치료 또는 임의의 치료, 또는 방사선 및/또는 화학 요법 이외의 임의의 치료. 일부 실시 양태에서, 상기 샘플은 질병의 초기 치료 후 질환의 첫 번째 재발 후, 및 공여자 또는 대상체가 질병에 대한 후속 치료를 받기 전에 수집된다. 초기 및/또는 후속 치료는 세포 요법 이외의 요법일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 수집된 세포는 초기 및/또는 후속 치료 후 세포 요법에 사용될 수 있다. 한 측면에서, 사전 세포 선별이 없는 동결보존 및/또는 동결보호 샘플은 선불 비용, 예를 들어, 무작위 임상 시험에서, 이후에 크로스오버하여 치료를 요구할 수 있는 비-치료 환자와 관련된 비용을 줄이는 데 도움이 될 수 있다.
[515] 일부 실시 양태에서, 상기 샘플(예를들어, 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술 샘플)은, 질병에 대한 제 2 치료 라인 후 질병의 2 차 재발 후, 및 공여자 또는 대상체가 후속적인 질병 치료를 받기 전에, 세포를 선별 없이(예를 들어, 크로마토그래피에 의한 선별과 같은, 사전 T 세포 선별이 없는 경우) 또는 그 전에 세포를 수집 및 동결보존 및/또는 동결보호한다. 일부 실시 양태에서, 환자는, 예를 들어 특정 위험 인자를 평가함으로써, 2차 치료 후에 재발 가능성이있는 것으로 확인된다. 일부 실시 양태에서, 상기 위험 인자는 질환 유형 및/또는 유전학적, 예컨대 이중-히트 림프종, 1차 난치 암 또는 활성화 된 B-세포 림프종을 기초로한다. 일부 실시 양태에서, 상기 위험 인자는 1차 치료 후 조기 재발 또는 치료 후 다른 불량한 예후 지표 (예를들어, IPI (국제예후지수(International Prognostic Index))> 2)와 같은 임상적 제시에 기초한다.
[516] 일부 실시 양태에서, 공여자 또는 대상체가 질병으로 진단되기 전의 시점에서, 상기 샘플(예를들어, 성분 채집 또는 백혈구성분채집술 샘플)을, 사전 세포 선별 없이 또는 그 전(예를들어, 크로마토그래피에 의한 선별과 같은 사전 T 세포 선별이 없는 경우)에 수집 및 동결보존 및/또는 동결보호된다. 일부 측면에서, 공여자 또는 대상체는 질병이 발생할 위험이있는 것으로 결정될 수 있다. 일부 측면에서, 공여자 또는 대상체는 건강한 대상체일 수 있다. 특정 경우에, 공여자 또는 대상체는 세포 치료가 인생의 후반에 요구되는 경우에 질병을 일으킬 위험이 있거나 질병으로 진단받지 않고 세포를 뱅킹(bank) 또는 저장하도록 선택할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 공여자 또는 대상체는 질병 발생 위험을 증가시킬 수 있는, 유전적 돌연변이, 유전적 기형, 유전적 장애, 가족력, 단백질 기형(단백질 생산 및/또는 가공 결함) 및 생활 양식 선택과 같은 요인에 기초하여 질병을 일으킬 위험이 있는 것으로 간주될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포는 예방을 위한 것으로서 수집된다.
[517] 공여자 및 이에 따른 세포가 질병에 대한 광범위한 치료를받지 않았거나 및/또는 질병 또는 병태 또는 이의 진단 전에 단계에서 공여자가 세포를 저장하도록 허용함으로써, 한 번 또는 여러 번의 치료 후 수확된 세포와 비교하여 이러한 세포는 세포 요법에 사용하기위한 특정 이점을 가질 수 있다. 예를 들어, 1 회 이상의 치료 전에 수확된 세포는 더 건강할 수 있고, 더 높은 수준의 특정 세포 활성을 나타낼 수 있고, 더 빠르게 성장할 수 있고/거나 여러 라운드의 치료를받은 세포보다 유전자 조작에 대해 더 수용적일 수 있다. 예를 들어, 세포 요법에 필요하기 전에 공여자의 세포를 수집, 선택적으로 처리 및 저장함으로써, 수혜자가 나중에 필요할 때 세포를 쉽게 이용할 수 있을 것이다. 이로 인해 성분 채집 실험실 용량이 증가하여, 기술자에게 성분 채집 수집 절차를 일정 관리할 수있는 유연성을 제공한다.
[518] 일부 실시 양태에서, 동결 보존된 세포(예를들어, 샘플의 선별된 세포 또는 세포 (예를들어, 혈액 샘플, 성분채집술 샘플, 백혈구성분채집술 샘플)는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 일 미만의 시간 동안, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 주 미만의 시간, 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 주 또는 8주 이상의 시간 동안 저장될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 동결 보존된 세포(예를들어, 샘플의 선별된 세포 또는 세포 (예를들어, 혈액 샘플, 성분채집술 샘플, 백혈구성분채집술 샘플)는 약 1 개월, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 12 개월 또는 그 이상의 시간 동안 저장될 수 있다. 저장 후, 상기 세포 (예를들어, 샘플의 선별된 세포 또는 세포 (예를들어, 혈액 샘플, 성분채집술 샘플, 백혈구성분채집술 샘플)가 해동될 수 있고 공정의 동일한 지점으로부터 처리가 재개될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포는 추가 처리, 예를 들어 자극 조건 하에서 배양하기 전에 동결보호되고 저장된다. 특정 실시 양태에서, 배양 및/또는 제제화된 집단 세포는 대상체, 예를들어 자가 세포 요법으로서 투여되기 전에 동결보호되고 저장된다.
[519] 특정 실시 양태에서, 세포는 예를 들어 세척 단계 후에, 예를 들어 혈장 및 혈소판을 제거하기 위해 동결된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR 를 발현하는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 제조 및/또는 생성과 관련된 단계 중 어느 단계 이전, 이후 및/또는 동안 동결된다. 특정 실시 양태에서, 이러한 단계는 조작된 세포의 생성과 관련된 임의의 단계를 포함할 수 있으며, 세포의 서브세트, 예를 들어 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 선별 및/또는 단리, 세포, 예를 들어 T 세포 또는 이의 서브세트의 자극 및/또는 확장, 또는 세포의 형질 감염 또는 형질 도입을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 세포는, 세포의 선별 및/또는 단리, 세포의 자극 및/또는 확장, 또는 세포의 형질감염 또는 형질도입 전에 대상체로부터 수집된 성분 채집 샘플의 세포이다. 특정 실시 양태에서, 조작 공정의 완료 후, 예를 들어 단리, 선택, 자극, 활성화, 형질 도입, 형질 감염 및/또는 확장의 하나 이상의 단계를 포함하는 공정 후에 세포를 동결시킨다.
[520] 일부 실시 양태에서, 세포는 동결 용액, 예를 들어 동결방호제 및/또는 동결보호제를 함유하는 용액에 현탁된다. 일부 측면에서, 동결 보존 또는 유리화 매체를 함유하는 동결 용액 또는 동결보호제를 함유하는 용액을 포함하여, 임의의 다양한 공지된 동결 용액 및 파라미터가 사용될 수 있다. 적합한 동결 보호제는, 디메틸설폭사이드 (DMSO), 글리세롤, 글리콜, 프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜, 프로판 디올, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 1, 2-프로판디올 (PROH) 또는 이들의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 예에서, 동결 보존 용액은 폴리비닐 피롤리디온, 히드록시에틸 스타치, 다당류, 단당류, 알기네이트(alginate), 트레할로스(trehalose), 라프모스, 덱스트란, 인간 혈청 알부민, 피콜, 지질단백질, 폴리비닐 피롤리돈, 하이드록시에틸 스타치, 자가 혈장 또는 이들의 혼합물을 포함 하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 비-세포 투과성 동결보존제를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포는 각각 약 1 % 내지 약 20 %, 약 3 % 내지 약 9 %, 또는 약 6 % 내지 약 9 % 용량(volume), 각각을 포함한, 동결 보호제의 최종 농도로 동결 용액에 현탁된다. 특정 실시 양태에서, 동결 용액 중 동결 보호제의 최종 농도는 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 5.5%, 약 6%, 약 6.5%, 약 7%, 약 7.5%, 약 8%, 약 8.5%, 약 9%, 약 9.5% 또는 약 10% 용량(volume)이다.
[521] 일부 실시 양태에서, 세포는 예를들어, 특정 세포 밀도, 예를 들어 공지 또는 제어된 세포 밀도에서 동결된다. 특정 실시 양태에서, 동결 과정 동안 세포 밀도는 동결 과정 동안 및/또는 그로 인해 발생하는 세포 사멸 및/또는 세포 손상에 영향을 미칠 수있다. 예를 들어, 특정 실시 양태에서, 세포 밀도는 동결 과정 동안 주변과의 평형, 예를 들어 삼투 평형에 영향을 미친다. 일부 실시 양태에서, 이 평형은 탈수를 포함 및/또는 초래한다. 특정 실시 양태에서, 상기 탈수는 동결 용액, 예를 들어 DMSO 및/또는 DMSO 함유 용액과의 접촉, 조합 및/또는 배양으로 발생하는 세포 탈수이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 탈수는 예를 들어 세포에 노출된 유효 액체수 농도를 감소시킴으로써 세포 외 공간에서 얼음 결정의 결정핵 생성 및 확대로 인한 탈수이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포는 다른, 예를 들어, 더 높거나 더 낮은 세포 밀도로 동결된 세포보다 탈수를 느리게하거나 덜 빠르게하는 세포 밀도에서 냉동된다. 일부 실시 양태에서, 세포는, 동일 또는 유사한 조건 하에서 상이한, 예를들어, 더 높거나 더 낮은 밀도에서의 세포 동결의 약, 적어도 또는 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 50배, 또는 100배 느린 탈수를 초래하는 세포 밀도에서 동결된다.
[522] 일부 실시 양태에서, 동결 보호제는 DMSO이다. 특정 실시 양태에서, 세포는 각각 약 1 % 내지 약 20 %, 약 3 % 내지 약 9 %, 또는 약 6 % 내지 약 9 % 용량(volume), 각각을 포함한, DMSO의 최종 농도로 동결 용액에 현탁된다. 특정 실시 양태에서, 동결 용액 중 DMSO의 최종 농도는 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 5.5%, 약 6%, 약 6.5%, 약 7%, 약 7.5%, 약 8%, 약 8.5%, 약 9%, 약 9.5% 또는 약 10% 용량(volume)이다.
[523] 특정 구체 예에서, 세포는 동결 용액에 약 0.1x106 cells/ mL 내지 약 5,000x106 cells/ mL, 약 1x106 cells/ mL 내지 약 500x106 cells/ mL, 약 5x106 cells/ mL 내지 약 150x106 cells/ mL, 약 10x106 cells/ mL 내지 약 70x106 cells/ mL, 또는 약 15x106 cells/ mL 내지 약 60x106 cells/ mL, 각각을 포함하는 밀도로 현탁된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 생존 가능한 세포이다.
[524] 특정 구체 예에서, 세포는 약 1x106 cells/ mL 내지 약 1x108 cells/ mL, 약 1x106 cells/ mL 내지 약 2x107 cells/ mL, 약 1x107 cells/ mL 내지 약 5 x107 cells/ mL, 또는 약 1x107 cells/ mL 내지 5x107 cells/ mL, 각각을 포함하는 밀도로 동결 용액에 현탁된다. 특정 구체 예에서, 세포는 약 1x106 cells/ mL, 약 2x106 cells/ mL, 약 5x106 cells/ mL, 약 1x107 cells/ mL, 약 1.5x107 cells/ mL, 약 2x107 cells/ mL, 약 2.5x107 cells/ mL, 약 2.5x107 cells/ mL, 약 2.5x107 cells/ mL, 약 3x107 cells/ mL, 약 3.5x107 세포/ mL, 약 4x107 cells/ mL, 약 4.5x107 cells/ mL, 또는 약 5x107 cells/ mL, 각각 포함하는 밀도로 동결 용액에 현탁된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 약 11.5x107 cells/ mL 내지 약 6x107 cells/ mL의 밀도로 동결 용액 중에 현탁된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 적어도 약 1x107 cells/ mL의 밀도로 동결 용액에 현탁된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 적어도 약 1.5 x 107 cells/ mL의 밀도로 동결 용액에 현탁된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 생존 가능한 세포이다.
[525] 일부 실시 양태에서, 세포는 용기에서 동결된다. 특정 실시 양태에서, 용기는 동결 용기 및/또는 동결 보호 용기이다. 동결(cryofreezing)에 적합한 용기에는 바이알, 백, 예를 들어 비닐 봉지 및 캔이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 특정 실시 양태에서, 세포, 예를 들어, CAR 발현 세포를 함유하는 세포 조성물과 같은 동일한 세포 조성물의 세포는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10, 또는 10 개 이상의 개별 용기에서 동결된다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 세포 및/또는 세포의 조성물은 예를 들어 용액, 동결 용액 및/또는 동결보호제와 같은 용량(volume)에 현탁되고, 이는 용기에 적합한 용량(volume)보다 크므로, 용량(volume)은 둘 이상의 용기에 배치된다. 일부 실시 양태에서, 용량(volume)은 약 100mL, 50mL, 25mL, 20mL, 15mL, 10mL, 5mL 또는 5mL 미만이며, 세포는 2개, 3개, 4개, 5개 6개, 7개, 8개, 9개, 10개 또는 10개 이상의 개별 바이알에서 동결된다. 특정 실시 양태에서, 동일한 용량(volume)의 세포가 각각의 바이알에 배치된다. 일부 실시 양태에서, 바이알은 동일한 바이알, 예를 들어 동일한 메이크(make), 모델 및/또는 제조 로트(manufacturing lot)의 바이알이다. 특정 실시 양태에서, 상기 용량(volume)은 약 10 mL, 15 mL, 20 mL, 25 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 120 mL, 150 mL, 200 mL, 또는 200 mL 이상이고, 세포는 2 개, 3 개, 4 개, 5 개 6 개, 7 개, 8 개, 9 개, 10 개 또는 10 개 이상의 별도의 백에서 동결된다. 특정 실시 양태에서, 동일한 용량(volume)의 세포가 각각의 백에 배치된다. 일부 실시 양태에서, 백은 동일한 백, 예를 들어 동일한 메이크, 모델 및/또는 제조 로트(manufacturing lot)의 백이다.
[526] 일부 실시 양태에서, 용기는 바이알이다. 특정 실시 양태에서 , 용기는 약 또는 적어도 0.5 mL, 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL, 6 mL, 7 mL, 8 mL, 9 mL, 10 mL, 11 mL, 12 mL, 13 mL, 14 mL, 15 mL, 16 mL, 17 mL, 18 mL, 19 mL, 20 mL, 25 mL, 30 mL, 35 mL, 40 mL, 45 mL, 또는 50 mL의 충전 용량(volume)을 갖는 바이알이다. 일부 실시 양태에서, 바이알은 각각 1mL 내지 120mL, 1mL 내지 20mL, 1mL 내지 5mL, 1mL 내지 10mL, 1mL 내지 40mL, 또는 20mL 내지 40mL, 각각 포함하는 충전 용량(volume)을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 바이알은 동결 바이알, 동결보호 바이알 및/또는 저온바이알(cryovial)이다. 적합한 바이알은 공지되어 있으며, CellSeal® 바이알 (Cook Regentec) 및 미국 특허 번호 US 8,936,905, US 9,565,854 및 US 8,709,797에 기술된 바이알을 포함하지만 이에 제한되지는 않으며, 본 명세서에 전체적으로 참조로 포함된다.
[527] 특정 실시 양태에서, 용기는 백이다. 특정 실시 양태에서 , 용기는 약 또는 적어도 0.5 mL, 1 mL, 2 mL, 3 mL, 4 mL, 5 mL, 6 mL, 7 mL, 8 mL, 9 mL, 10 mL, 11 mL, 12 mL, 13 mL, 14 mL, 15 mL, 16 mL, 17 mL, 18 mL, 19 mL, 20 mL, 25 mL, 30 mL, 35 mL, 40 mL, 45 mL, 또는 50 mL의 충전 용량(volume)을 갖는 백이다. 일부 실시 양태에서, 백은 각각 1mL 내지 120mL, 1mL 내지 20mL, 1mL 내지 5mL, 1mL 내지 40mL, 또는 20mL 내지 40mL, 1 mL 내지 70 mL, 또는 50 mL 내지 70 mL, 각각 포함하는 충전 용량(volume)을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 백은 약 100mL, 75mL, 70mL, 50mL, 25mL, 20mL 또는 10mL의 용량(volume)로 채워진다. 적합한 백은 공지되어 있으며, CryoMacs® 냉동 백(Miltenyi Biotec)을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 특정 실시 양태에서, 용량(volume)은 실온에서의 용량(volume)이다. 일부 실시 양태에서, 상기 용량(volume)은 37℃ 내지 4℃, 16℃ 내지 27℃ 포함, 또는 약 또는 적어도 16℃, 17℃, 18℃, 19℃, 20℃, 21℃, 22℃, 23℃, 24℃, 25℃, 26℃, 27℃, 28℃, 29℃, 30℃, 31℃, 32℃, 33℃, 34℃, 35℃, 36℃, 또는 37℃의 용량(volume)이다. 일부 실시 양태에서, 용량(volume)은 25℃에서의 용량(volume)이다.
[528] 일부 실시 양태에서, 배지 또는 용액, 예를 들어, 1 mL 내지 20 mL의 동결 용액의 용량(volume)에서의 세포는 하나 이상의 바이알에서 동결된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 바이알은 1 mL 내지 5 mL의 충전 용량(volume)을 갖는다. 특정 실시 양태에서, 20mL 내지 120mL의 용량(volume)의 배지 또는 용액, 예를 들어 동결 용액의 세포는 하나 이상의 백에서 동결된다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 백은 20 mL 내지 40 mL의 충전 용량(volume)을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 120 mL 이상의 용량(volume)의 배지 또는 용액, 예를 들어 동결 용액의 세포는 하나 이상의 백에서 동결된다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 백은 50 mL 내지 70 mL의 충전 용량(volume)을 갖는다.
[529] 특정 실시 양태에서, 세포는 용액, 예를 들어 동결 용액에서 동결되고, 이는 용기, 예를 들어 백 또는 바이알에 표면적 대 용량(volume) 비로 배치된다. 특정 실시 양태에서, 표면적 대 용량(volume)비는 약 0.1 cm-1 내지 100 cm-1; 1 cm-1 내지 50 cm-1, 1 cm-1 내지 20 cm-1, 1 cm-1내지 10 cm-1, 2 cm-1 내지 10 cm-1, 3 cm-1 내지 7 cm-1, 또는 3 cm-1 내지 6 cm-1, 각각 포함이다. 특정 실시 양태에서, 표면적 대 용량(volume) 비는 약 3 cm-1 내지 6 cm-1.이다. 일부 실시 양태에서, 표면적 대 용량(volume) 비는 약 또는 적어도 3 cm-1, 4 cm-1, 5 cm-1, 6 cm-1, 또는 7 cm-1 이다.
[530] 일부 실시 양태에서, 동결 보존 배지로의 전달은 샘플, 예를 들어 조작된 세포 조성물의 세척, 예를 들어 배지를 제거하고/하거나 후속 동결을 위한 적합한 동결보존 완충액 또는 배지에서 세포를 교체하는 것과 같은 하나 이상의 처리 단계와 관련된다. 특정 실시 양태에서, 동결보존 배지로의 전달은 폐쇄 및 멸균 시스템에서, 임상 규모 수준으로 완전히 자동화된다. 특정 실시 양태에서, CliniMACS 시스템 (Miltenyi Biotec)을 사용하여 동결보존 배지로의 이동이 수행된다.
[531] 일부 실시 양태에서, 세포는 해동된다. 특정 실시 양태에서, 세포는, 세포를 과열시키거나 세포를 37 ℃초과와 같은 고온에 노출시키지 않고, 예를 들어 가능한 빨리 급속하게 해동된다. 일부 실시 양태에서, 급속 해동은 세포가 고농도의 동결보호제 및/또는 DMSO에 노출되는 것을 감소 및/또는 방지한다. 특정 실시 양태에서, 해동이 발생하는 속도는 세포가 동결 및 해동되는 용기, 예를 들어 바이알 및/또는 백의 특성에 의해 영향을 받을 수 있다. 특정 실시 양태에서, 세포는 약 37℃, 35℃, 32℃, 30℃, 29℃, 28℃, 27℃, 26℃, 25℃, 24℃, 23℃, 22℃, 21℃, 20℃, 또는 15℃, 또는 15℃ 내지 30℃, 23℃ 내지 28℃, 또는 24℃ 내지 26℃, 또는 이보다 적은 온도에서 해동된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 열 블록(heat block) 또는 수조에서 해동된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 열 블록(heat block) 또는 수조에서 해동되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 세포는 실온에서 해동된다. 일부 실시 양태에서, 용기 벽의 두께는, 예를 들어 두꺼운 벽을 갖는 용기의 세포가 보다 얇은 벽을 갖는 용기에서보다 느린 속도로 해동하는 것과같은 세포 해동 속도에 영향을 미친다. 일부 실시 양태에서, 낮은 표면적 대 용량(volume)의 비를 갖는 용기는 느리고 불균일한 해동 속도를 갖는다. 일부 실시 양태에서, 동결보존된 세포는 표면적 대 용량(volume) 비가 약 또는 적어도 1 cm-1, 2 cm-1, 3 cm-1, 4 cm-1, 5 cm-1, 6 cm-1, 또는 7 cm-1, 8 cm-1, 9 cm-1, 또는 10 cm-1인 함유물에서 신속하게 해동된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 약 120 분, 90 분, 60 분, 45분, 30분, 25분, 20분, 15분 또는 10분 또는 이내에 해동된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 각각 10분 내지 60분, 15분 내지 45분, 또는 15분 내지 25분 동안 해동된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 약 또는 20분 이내에 해동된다.
[532] 특정 실시 양태에서, 해동된 세포는 투여 전 또는 임의의 후속 조작 및/또는 가공 단계 전에, 휴식, 예를 들어 배양(incubated) 또는 배양(cultured)된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 낮은 및/또는 검출할 수 없는 양의 동결보호제, 또는 동결보호제, 예를 들어 DMSO의 부재 하에 휴식된다. 특정 실시 양태에서, 해동된 세포는 세척 단계 후 또는 직후에 예를 들어 동결보호제 및/또는 DMSO를 제거하기 위해 휴식된다. 일부 실시 양태에서, 휴식은 약 37℃에서 배양(culture) 및/또는 배양(incubation)하는 것이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 휴식은 임의의 처리 또는 조작 단계와 함께 사용 및/또는 관련된 임의의 시약, 예를 들어, 자극성 시약, 비드 시약 또는 재조합 사이토카인의 부재에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 약 또는 적어도 5분, 10분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 8시간 동안, 12시간, 18시간 또는 24시간 동안 휴식된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 약 또는 적어도 2 시간 동안 휴식된다.
[533] 일부 실시 양태에서, 세포는, 세포를 처리 및/또는 조작하기위한 상기 방법 전, 동안 또는 후에 동결, 예를들어, 동결 보존된다. 일부 실시 양태에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 이어서, 세포를 일반적으로 분당 1°의 속도로 -80 ℃로 동결시키고 액체 질소 저장 탱크의 기체 병태로 저장한다. 일부 실시 양태에서, 세포는 제어 속도 냉동기를 사용하여 분당 약 1°의 속도로 능동적 및/또는 효과적으로 냉각된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 제어 속도 냉동기로 동결될 수 있다. 일부 측면에서, 제어 속도 냉동기는 프로그래밍된 냉각 프로파일, 예를들어 여러 냉각 및/또는 가열 속도의 프로파일로 세포를 동결하는 데 사용된다. 이러한 동결 프로파일은 핵 생성, 예를 들어 얼음 형성을 조절하기위해, 예를 들어 세포 내 얼음 형성을 감소시키기 위해 프로그래밍될 수 있다.
[534] 일부 구체 예에서, 특정 농도 또는 세포 밀도의 세포 조성물과 같은 설명된 임의의 세포 및 조성물을 포함하는 동결 세포의 특징은 동결보호제의 존재 하에서 동결되고/거나 특정 용량(volume) 또는 표면 대 용량(volume) 비율로 용기에 채워지고, 개선, 증가 및/또는 빠른 확장 포함한다; 세포 생존의 개선된 증가 및/또는 농축, 및 세포 사멸, 예를 들어, 괴사, 프로그램된 세포 사멸 및/또는 아포토시스의 감소된 사례; 개선, 농축 및/또는 증가된 활성, 예를 들어 세포 분해 활성; 및/또는 대안적인 수단에 의해 동결된 세포보다 해동 후 노화 또는 정지의 감소된 사례.
[535] 특정 실시 양태에서, 세포는 본원에 제공된 세포 밀도 및/또는 표면적 대 용량(volume)비로 동결되고, 다른 세포 밀도 및/또는 동일하거나 유사한 조건에서 다른 표면적 대 용량(volume) 비율로 동결된 세포와 비교하여, 동결(freezing), 냉동(cryofreezing) 및/또는 동결보존 동안 및/또는 그로 인한 세포 사멸, 예를 들어, 괴사 및/또는 아포토시스를 감소된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 본원에 제공된 세포 밀도 및/또는 표면적 대 용량(volume) 비로 동결되고, 동결(freezing), 냉동(cryofreezing) 및/또는 동결보존 후, 예를 들어 냉동 세포의 해동 후 48 시간 이내에 지연된 세포 사멸, 예를 들어, 괴사, 프로그램된 세포 사멸 또는 아포토시스를 통해 죽는 세포의 양의 감소를 갖는다. 특정 실시 양태에서, 동일하거나 유사한 조건 하에서 상이한 세포 밀도 및/또는 상이한 표면적 대 용량(volume)비로 동결된 세포와 비교할 때, 동결 및/또는 동결보존 동안 및/또는 이로 인한 세포 사멸이 적어도 또는 약 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 99% 더 적다. 특정 실시 양태에서, 제공된 세포 밀도 및/또는 표면적 대 용량(volume) 비에서 동결된 세포의 40 %, 30 %, 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, 5 %, 1 %, 0.1 % 또는 0.01 % 미만은 동결(freezing), 냉동(cryofreezing) 및/또는 동결보존 동안 또는 그 결과로 죽는다.
[536] 일부 실시 양태에서, 세포는 본원에 제공된 세포 밀도 및/또는 표면적 대 용량(volume)비로 동결되고, 동일하거나 유사한 조건 하에서 상이한 세포 밀도 및/또는 상이한 표면적 대 용량(volume)비로 동결된 세포와 비교하여, 동결(freezing), 냉동(cryofreezing) 및/또는 동결 보존 때문에 및/또는 그로 인한 노화 또는 정지의 사례가 감소된다. 특정 실시 양태에서, 동일하거나 유사한 조건 하에서 상이한 세포 밀도 및/또는 상이한 표면적 대 용량(volume)비로 동결된 세포와 비교할 때, 적어도 또는 약 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 99% 더 적은 세포가 노화 및/또는 정지 세포이다. 특정 실시 양태에서, 세포는 제공된 세포 밀도 및/또는 표면적 대 용량(volume)비에서 동결되고, 세포의 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, 0.1%, 또는 0.01% 미만이 동결, 냉동, 및/또는 동결보존으로 인해 노화 및/또는 정지된다.
[537] 특정 실시 양태에서, 세포는 본원에 제공된 세포 밀도 및/또는 표면적 대 용량(volume) 비로 동결, 예를 들어 동결 보존되고, 예를 들어 자극 조건 하에서, 예를 들어 동일하거나 유사한 조건 하에서 상이한 세포 밀도 및/또는 표면적 대 용량(volume)비로 동결 된 세포와 비교하여 세포가 해동 된 후 본원에 기재된 자극 시약과의 배양에 의해 개선되고, 더 빠르고, 및/또는 더 빠른 증폭(expansion)을 갖는다. 특정 실시 양태에서, 동일하거나 유사한 조건 하에서 상이한 세포 밀도 및/또는 상이한 표면적 대 용량(volume)비로 동결된 세포와 비교할 때 세포는 약 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200%, 1 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배 또는 10 배만큼 더 빠르거나 및/또는 더 빠른 속도로 증폭(expansion)한다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 해동된 세포는, 동일하거나 유사한 조건 하에서 상이한 세포 밀도 및/또는 상이한 표면적 대 용량(volume)비로 동결 된 해동된 세포보다 약 또는 적어도 5 %, 10 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 % 또는 99 % 더 적은 시간에 예를 들어, 2배 증폭(expansion)과 같이 미리 결정된 세포 수, 밀도 또는 인자와 같은 임계치 증폭(expansion)에 도달한다.
[538] 일부 실시 양태에서, 세포는 상기 세포 밀도에서 동결, 예를 들어 동결 보존되고, 동일하거나 유사한 조건 하에서 상이한 세포 밀도, 예를 들어, 더 높거나 더 낮은 밀도로 동결된 세포와 비교하여, 예를 들어, 세포가 해동된 후 본원에 기재된 세포 용해 활성을 측정하기위한 임의의 분석에 의해 측정된 것과 같이, 세포의 활성을 개선, 증가 및/또는 증가시킨다. 특정 실시 양태에서, 세포 용해 활성은 동일하거나 유사한 조건에서 다른 밀도로 냉동된 세포와 비교할 때, 약 또는 적어도 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200%, 1배, 1.5 배, 2배, 3배, 4배, 5배, 또는 10배 증가한다. 성분 채집술 샘플과 같은 샘플로부터의 세포의 극저온 저장 및 처리를위한 예시적인 방법 및 시스템은 국제 공개 출원 번호 WO2018170188에 기술된 것들을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법 및 시스템은 환자가 세포 요법을 필요로하기 전에 성분채집술을 수집한 후, 세포, 예를 들어 재조합 수용체 (예 : CAR)를 갖는 T 세포를 조작하는 공정에서 나중에 사용하기 위해 성분채집술 샘플을 동결보존시키는 단계를 포함한다. 일부 경우에, 이러한 공정은 본원에 기술된 공정을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 성분 채집 샘플은 대상체로부터 수집되고, 후속 T 세포 선택, 활성화, 자극, 조작, 형질 도입, 형질 감염, 배양, 배양, 수확, 세포 집단의 제제화 및/또는 제제화 된 세포 집단을 대상체에게 투여하기 전에 동결 보존되기 전에 동결보존 된다. 이러한 예에서, 동결 보존된 성분 채집 샘플은, 샘플을 본원에 기술된 바와 같은 임의의 하나 이상의 선택 단계에 적용하기 전에 해동된다.
[539] 일부 실시 양태에서, 동결 보존된 및/또는 동결 보호된 세포 샘플(예를 들어, 성분 채집술 또는 백혈구 성분채집술 샘플), 예를 들어, 이전 세포 선택을 받지 않은 세포 샘플(예를 들어, 크로마토그래피에 의한 선택과 같은 사전 T 세포 선택이 없는 경우)은, 세포 요법을 위한 세포 집단, 예를 들어, CAR+ T 세포를 함유하는 T 세포 집단의 제조를 위한 다운 스트림 공정에 사용하기 전에 해동된다. 일부 실시 양태에서, 이러한 동결보존 및/또는 동결보호된 세포 샘플(예를 들어, 성분 채집술 또는 백혈구 성분채집술 샘플)은 CAR+ T 세포 요법과 같은 조작된 T 세포 요법을 위해 본원에 제공된 방법과 관련하여 사용된다. 특정 예에서, 추가의 동결 보존 단계는 수확/제조 단계 이전 또는 동안에 수행되지 않는다.
ⅰ. 투입 조성물의 특징
[540] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 생물학적 샘플, 예를 들어, 성분 채집술 샘플, 백혈구성분채집술 샘플로부터 단리되거나 선택된 T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 본원에 기재된 임의의 방법에 따라 동결 보존될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 농축된 CD3+ T 세포, 예를 들어 생존 가능한 CD3+ T 세포의 집단을 포함한다. 일부 구체 예에서, 투입 조성물의 세포의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100% 는 CD3+ T 세포, 예를 들어 생존 가능한 CD3+ T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 CD3+ T 세포, 예를 들어 생존 가능한 CD3+ T 세포로 본질적으로 구성된다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 CD4+ 세포가 농축되고/되거나 CD8+ 세포가 농축된다.
[541] 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 농축된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포, 예를 들어, CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 위해 농축된 세포의 집단이다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 CD4+ 또는 CD8+ T 세포인 적어도 60 %, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100% 의 세포이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 본질적으로 CD4+ 및 CD8+ T 세포로 구성된다.
[542] 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 농축된 CD4+ T 세포의 집단이다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물의 세포의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100%은 CD4+ T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 본질적으로 CD4+ T 세포로 구성된다.
[543] 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 농축된 CD8+ T 세포의 집단이다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물의 세포의 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 약 100%은 CD8+ T 세포이다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 본질적으로 CD8+ T 세포로 구성된다.
[544] 일부 실시 양태에서, 농축된 CD4+ T 세포 집단으로부터의 세포 및 농축된 CD8+ T 세포 집단으로부터의 세포는 혼합, 조합 및/또는 풀링되어 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 함유하는 투입 조성물을 생성한다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 집단은 자극 세포, 예를 들어 II-B 섹션에 기재된 자극 조건 하에서 세포를 배양하기 전에 풀링(pooled), 혼합 및/또는 조합된다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 집단은 생물학적 샘플로부터 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 단리, 농축 및/또는 선택한 후에 풀링(pooled), 혼합 및/또는 조합된다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 집단은 동결, 예를 들어 동결 보존 및 농축된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 집단의 해동 후에 풀링(pooled), 혼합 및/또는 조합된다.
[545] 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ 세포 집단으로부터의 세포를 농축된 CD8+ 세포 집단으로부터의 세포와 혼합, 풀링 및/또는 조합하여 투입 조성물을 생성, 생산 또는 제조한다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ T 세포의 집단은 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 99.9% 의 CD4+ T 세포를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD4+ T 세포의 집단은 100% CD4+ T 세포를 함유하거나 약 100% CD4+ T 세포를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 농축된 T 세포의 집단은 20% 미만, 10% 미만, 5 % 미만, 1% 미만, 0.1% 미만, 또는 0.01% 미만의 CD8+ T 세포를 포함 또는 함유하고/거나 CD8+ T 세포를 포함하지 않으며/거나 CD8+ T 세포가 없거나 실질적으로 없다. 일부 실시 양태에서, 세포 집단은 본질적으로 CD4+ T 세포로 구성된다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD8+ T 세포의 집단은 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 또는 99.9% CD8+ T 세포를 함유하거나, 또는 약 100% CD8+ T 세포를 함유한다. 특정 실시 양태에서, 농축된 CD8+ T 세포의 집단은 20% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만 또는 0.01% 미만의 CD4+ T 세포를 포함하거나 함유하고/거나 또는 CD4+ T 세포를 함유하지 않고/거나 CD4+ T 세포가 없거나 또는 실질적으로 없다. 일부 실시 양태에서, 세포 집단은 본질적으로 CD8+ T 세포로 구성된다.
[546] 특정 실시 양태에서, CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포는 1:10 내지 10 : 1, 1:5 내지 5:1, 4:1 내지 1:4, 1:3 내지 3:1, 2:1 내지 1:2, 1.5:1 내지 1:1.5, 1.25:1 내지 1:1.25, 1.2:1 내지 1:1.2, 1.1:1 내지1:1.1, 또는 약 1:1 또는 1:1의 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포의 비로 풀링, 혼합 및/또는 조합된다. 특정 실시 양태에서, 생존가능한 CD4+ T 세포 및 생존가능한 CD8+ T 세포는 1:10 내지 10 : 1, 1:5 내지 5:1, 4:1 내지 1:4, 1:3 내지 3:1, 2:1 내지 1:2, 1.5:1 내지 1:1.5, 1.25:1 내지 1:1.25, 1.2:1 내지 1:1.2, 1.1:1 내지1:1.1, 또는 약 1:1 또는 1:1의 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포의 비로 풀링, 혼합 및/또는 조합된다.
[547] 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 아폽토틱 마커에 대해 양성이 아닌 세포 (예를 들어, T 세포)를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 아폽토틱 마커는 아넥신V 및/또는 활성화된 카스파제3 이다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물에 함유된 세포는, 아넥신V-, 아넥신 V-/CD3+, 아넥신V-/CD4+, 아넥신 V-/CD8+, 아넥신V-/CD3+, 활성화된 카스파제3-, 활성화된 카스파제3-/ CD3+, 활성화된 카스파제3-/CD4+, 활성화된 카스파제3-/CD8+ 또는 이들의 조합이거나 이를 포함한다.
[548] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 아폽토틱 마커(예를들어, 카스파제-3 또는 아넥신V)를 발현하지 않는 T세포의 표적 수 또는 백분율(예를들어, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 이하)을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 자극 후 사이토카인을 생성하는 표적 수 또는 백분율의 T 세포를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 자극은 재조합 수용체(예를 들어, CAR)항원 특이적이지 않으며, 예를 들어 PMA/이오노마 이신을 포함하는 자극이 아니다. 일부 실시 양태에서, 생산된 사이토카인은 IL-2, TNFα 및/또는 IFNg이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 생산된 사이토카인은 IL-2 및/또는 TNFα이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 투입 조성물을 제공, 생산 또는 생성하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 CD8+ T 세포의 표적 백분율, 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 아 폽토시스의 마커(예를 들어, 카스파제-3, 아넥신 V)를 발현하지 않는 T 세포를 함유한다.
[549] 일부 측면에서, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포의 표적 백분율을 함유하는 세포 조성물을 대상체로부터의 생물학적 샘플로부터 제공함으로써 투입 조성물을 생성할 수 있다. 일부 측면에서, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA 를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율을 함유하는 세포 조성물을 대상체로부터의 생물학적 샘플로부터 제공함으로써 투입 조성물을 생성할 수 있다. 일부 측면에서, 투입 조성물은 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포 및/ 또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 수, 용량(volume)당 수, 중량 당 수 및/또는 백분율의 결정 및 추가 성분과 혼합 시, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 CD8+ T 세포의 표적 백분율 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA을 발현 또는 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율을 함유하는 세포의 특정 수, 용량(volume) 또는 무게를 선택 후 생성될 수 있다. 일부 측면에서, 투입 조성물은 CD4+ T 세포를 함유하는 세포 조성물 및 CD8+ T 세포를 함유하는 세포 조성물을 혼합함으로써 생성될 수 있다. 일부 구체 예에서, CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커(예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커(예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 개수, 용량(volume)당 개수, 중량 당 개수 및/또는 백분율 결정 및 추가 성분과 혼합 시, CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커(예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T세포 및/또는 CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커(예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 특정 개수, 용량(volume) 또는 무게를 선택 후에 투입 조성물은 생성될 수 있다.
[550] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은, 대상체로부터 얻은 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포의 표적 수 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 수를 분리, 정제, 분리 또는 선택함으로써 생성될 수 있으며, 이에 의해 투입 조성물을 생성한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은, 대상체로부터 얻은 생물학적 샘플로부터 CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커 (예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현하거나 발현하지 않는 표적 수의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커 (예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현하거나 발현하지 않는 표적 수의 CD4+ T 세포를 분리, 정제, 분리 또는 선택함으로써 생성될 수 있으며, 이에 의해 투입 조성물을 생성한다. 일부 측면에서, 이러한 표적 수(들)의 세포는, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 CD8+ T 세포의 표적 백분율 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현 또는 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율을 포함하는 투입 조성물의 생성을 위해 조합 또는 혼합될 수 있다. 일부 측면에서, 표적 수(들)의 세포는, CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커 (예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현 또는 발현하지 않는 CD8+ T 세포의 표적 백분율 및/또는 CCR7, CD27, CD45RA 및/또는 아폽토틱 마커 (예를 들어, 카스파제3, 아넥신V)를 발현 또는 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율을 포함하는 입력조성물을 생성하기위해 조합 또는 혼합될 수 있다.
[551] 일부 측면에서, 투입 조성물은 CD4+/CCR7+, CD4+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD45RA-, CD4+/CCR7+/CD45RA+, CD8+/CCR7+, CD8+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포의 표적 백분율을 포함한다. 일부 측면에서, 투입 조성물은 CD4+/CCR7+, CD4+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD45RA-, CD4+/CCR7+/CD45RA+, CD8+/CCR7+, CD8+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 CD8+/CCR7+/CD45RA+ 및 아폽토틱 마커 음성(예를들어, 아넥신V- 또는 카스파제3-) 세포의 표적 백분율을 포함한다.
[552] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 함유한다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 하나 이상의 아형 또는 집단이다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 아형 또는 집단은, 덜 분화된 세포 표현형과 관련되거나 이를 나타내는 마커 및/또는 메모리 세포 아형과 관련되거나 이를 나타내는 마커를 포함하는, 특정 세포 표현형과 관련된 하나 이상의 마커를 발현, 예를 들어, 세포 표면에서 발현하거나, 또는 발현하지 않는 세포를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 CD4+ T 세포를 함유하고, CD4+ T 세포의 적어도 일부는 덜 분화된 표현형, 예컨대 CCR7 및/또는 CD27과 관련된 마커를 발현한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물은 CD8+ T 세포를 함유하고, CD8+ T 세포의 적어도 일부는 덜 분화된 표현형, 예컨대 CCR7 및/또는 CD27과 관련된 마커를 발현한다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물은 특정 표현형을 나타내는 세포의 백분율 또는 비율, 예를들어 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포의 표적 백분율 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율을 포함하고/거나 고정(fixed), 선호, 표적, 정의 및/또는 제어된다.
[553] 특정 실시 양태에서, 방법은 투입 조성물을 생성 또는 생산하기 위해 세포 또는 세포의 조성물을 혼합 또는 조합하는 하나 이상의 단계를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 세포 또는 세포 조성물은 샘플로부터 선택 및/또는 단리되었다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물의 세포는 샘플로부터 선택 및/또는 단리되었다. 일부 실시 양태에서, CD4+ T 세포 및/또는 CD4 + T 세포의 조성물은 샘플로부터 선택되거나 단리된다. 일부 실시 양태에서, CD8+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 조성물은 샘플로부터 선택되거나 단리된다. 일부 실시 양태에서, 샘플은 혈액 샘플, 성분 채집술 샘플 및/또는 백혈구 성분채집술 샘플과 같은 생물학적 샘플이다. 특정 실시 양태에서, 샘플은 대상체, 예를 들어 인간의 대상체로부터 온 것이다. 특정 실시 양태에서, CD4+ T 세포의 조성물 및 CD8+ T 세포의 조성물은 동일한 샘플로부터 단리 및/또는 선택된다. 특정 실시 양태에서, CD4+ T 세포의 조성물 및 CD8+ T 세포의 조성물은 동일한 대상체로부터 취하거나 얻은 샘플로부터 단리 및/또는 선택된다.
[554] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물의 생성 또는 생산은 세포를 평가, 특성화 및/또는 식별하는 하나 이상의 단계를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 세포는 CD4+ T 세포의 조성물에서 평가, 특성화 및/또는 확인된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 CD8+ T 세포의 조성물에서 평가, 특성화 및/또는 확인된다. 일부 실시 양태에서, 세포는, 덜 분화된 세포 표현형 또는 병태를 나타내는 및/또는 이와 관련된 마커 및/또는 기억 세포 아형과 관련된 또는 이를 나타내는 마커에 대해 양성이다. 특정 실시 양태에서, 세포는 T 세포에서보다 더 분화된 병태를 나타내거나 및/또는 이와 관련된 마커에 대해 음성이다. 특정 실시 양태에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포 조성물로부터의 세포는, 덜 분화된 세포 표현형 또는 병태 및/또는 메모리 세포 아형과 관련되거나 이를 나타내는 마커와 관련된 하나 이상의 마커에 양성 또는 보다 분화된 병태와 관련된 하나 이상의 마커에 대해 음성인 세포의 양, 수준, 부분 및/또는 백분율을 결정하기 위해 평가, 특성화 및/또는 식별된다. 특정 실시 양태에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포 조성물로부터의 세포는, 예를 들어 덜 분화된 세포 표현형과 관련된 마커 또는 병태 및/또는 메모리 세포 아형과 관련되거나 이를 나타내는 마커의 발현 또는 발현 부족과 같은 특정 표현형을 나타내는 세포의 양, 수준, 부분 및/또는 백분율을 결정하기 위해 평가, 특성화 및/또는 식별된다.
[555] 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 CD4+ T 세포를 함유하는 세포 조성물을 CD8+ T 세포를 함유하는 세포 조성물과 혼합 또는 조합하여 세포 조성물, 예를들어 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 T 세포의 표적 백분율 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 표적 백분율과 입력조성물을 생성 또는 생산하는 하나 이상의 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 투입 조성물의 생성 또는 생산은 하나 이상의 단계를 포함한다: (i) 샘플, 예를 들어 생물학적 샘플로부터 CD4+ T 세포의 조성물 및/또는 CD8+ T 세포의 조성물을 단리하거나 선택하는 단계; (ii) 예를 들어, CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 조성물에서 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA와 같이, 덜 분화된 세포 표현형 또는 병태와 관련된 하나 이상의 마커 및/또는 메모리 세포 아형 또는 보다 분화된 아형과 관련된 또는 이를 나타내는 마커에 대해 양성 또는 음성인 세포의 양, 수준, 부분 및/또는 백분율을 평가, 특성화 및/또는 식별하는 단계; 및/또는 (iii) 표적, 정해진, 고정된, 및/또는 선호되는, 샘플에 존재하는 비율과는 다른 투입 조성물에서의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 T 세포의 백분율 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 백분율에서 CD4+ T 세포의 조성물의 세포를 CD8+ T 세포의 조성물의 세포와 혼합 또는 조합하는 단계.
[556] 일부 측면에서, 투입 조성물에서 CD4+/CCR7+, CD4+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD45RA-, CD4+/CCR7+/CD45RA+, CD8+/CCR7+, CD8+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포의 표적 백분율은, 입력조성물에서 총 세포의 적어도 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%를 포함하거나, 투입 조성물에서 총 세포의 각각 약 15% 내지 90%, 약 20% 내지 80%, 약 30% 내지 70%, 또는 약 40% 내지 60%는, CD4+/CCR7+, CD4+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD45RA-, CD4+/CCR7+/CD45RA+, CD8+/CCR7+, CD8+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 CD8+/CCR7+/CD45RA+이다.
[557] 일부 실시 양태에서, 투입 조성물 중 CCR7+, CD27+ 및/또는 CCR7+/CD27+ 세포의 표적 백분율은, 투입 조성물 중 CCR7+, CD27+ 및/또는 CCR7+/CD27+ 세포에서 총 세포의 적어도 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%, 또는 투입 조성물 중 총 세포의 약15% 내지 90%, 약 20% 내지 80%, 약 30% 내지 70%, 또는 약 40% 내지 60%이다.
[558] 일부 실시 양태에서, 방법은 투입 조성물의 세포를 유전자 조작하는 하나 이상의 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 유전자 조작은, 세포를 활성화 및/또는 촉진하는 조건 하에서 투입 조성물의 세포를 배양하는 단계, 핵산 분자, 예를 들어 재조합 및/또는 이종 핵산 분자를 포함하는 하나 이상의 작용제를 세포에 전달하는 단계, 활성화 또는 자극 조건 하에서 세포를 배양함으로써 세포를 확장시키는 단계, 세포를 수확하는 단꼐 및/또는 동결 보존과 같은 동결에 의해 세포를 저장하는 단계의 하나 이상의 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 유전자 조작 단계는 조작된 세포를 함유하는 산출 세포 조성물을 생성한다. 특정 실시 양태에서, 산출 조성물의 조작된 세포는, 고정된, 정해진 및/또는 목표 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 및/또는 조성물의 컴포지션의 다른 세포 서브세트에 대해 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T세포를 갖는다.
b. 세포의 활성화 및 자극
[559] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 처리 단계는 선택된 세포 집단과 같은 단리된 세포를 자극하는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포는 유전자 조작 이전 또는 유전자 조작과 관련하여 배양(incubated) 및/또는 배양(cultured)된다. 배양은 상기 형질 도입 방법의 구체 예로부터 생성된 유전자 조작과 같은 유전자 조작 이전이거나 이와 관련될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 자극은 예를 들어 형질 도입 전에 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래한다. 배양(incubation) 단계는 배양(culture), 배양(cultivation), 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함할 수 있다. 배양 및/또는 조작은 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜빙 세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 백 또는 배양 또는 배양 세포를위한 다른 용기에서 수행될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극 제제의 존재 하에서 배양된다. 이러한 조건은 집단에서 세포의 증식, 확장, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 조건, 예를 들어 재조합 항원 수용체의 도입을 포함한다.
[560] 일부 실시 양태에서, 처리 단계는 선택된 세포와 같은 세포의 배양을 포함하며, 여기서 배양(incubation) 단계는 세포의 배양(culture), 배양(cultivation), 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극 제제의 존재 하에서 배양된다. 이러한 조건은 집단에서 세포의 증식, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 조건, 예를 들어 재조합 항원 수용체의 도입을 포함한다.
[561]
일부 실시 양태에서, 자극 및/또는 활성화 조건은 하나 이상의 특정 매질, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 작용제, 예를 들어, 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예를 들어 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체, 및 세포를 활성화시키도록 설계된 임의의 다른 작용제를 포함할 수 있다.
[562] 일부 실시 양태에서, 자극 조건 또는 작용제는 TCR 복합체의 세포 내 신호 전달 도메인을 자극하거나 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 작용제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 작용제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포 내 신호 전달 캐스케이드를 켜거나 개시한다. 이러한 작용제는 1차 신호를 전달하기위해, 예를들어, ITAM-유도된 신호의 활성화를 개시하기위해, 항-CD3과 같이, TCR에 특이적인 항체와 같은, 적합한 작용제를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 자극 조건은 하나 이상의 작용제, 예를 들어 공 자극 수용체, 예를 들어 항-CD28 또는 항-4-1BB를 자극할 수 있는 리간드를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 이러한 작용제 및/또는 리간드는 비드와 같은 고체 지지체 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합될 수 있다. 자극 제제 중에는 항-CD3/항-CD28 비드 (예를들어 DYNABEADS® M-450 CD3/CD28 T 세포 확장기, 및/또는 ExpACT® 비드)가 있다. 임의로, 확장 방법은 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 첨가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다 (예를 들어, 약 0.5 ng/ml 이상의 농도에서). 일부 실시 양태에서, 자극 제제는 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15, 예를 들어, 적어도 약10 units/mL, 적어도 약 50 units/mL, 적어도 약100 units/mL 또는 적어도 약200 units/mL 농도의 IL-2 를 포함한다.
[563] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포를 활성화시킬 수 있고; TCR 복합체를 통해 신호를 유도할 수 있고; 및/또는 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 증식을 유도할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 TCR 복합체의 구성원에 결합하고, 임의로 CD3에 특이적으로 결합하는 1 차 작용제를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 T 세포 공동 자극 분자에 특이적으로 결합하는 2 차 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 공동 자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40 또는 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 양태에서, 1차 및 2차 작용제는 항체를 포함하고, 임의로 여기서, 하나 이상의 자극 제제는 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와의 배양을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 고체 지지체, 임의적으로 비드의 표면에 존재한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 제제는 CD3- 결합 분자; CD28- 결합 분자; 재조합 IL-2; 재조합 IL-15; 및 재조합 IL-7, 항원 수용체에 의해 특이적으로 인식되는 항원을 포함하는 백신 및 항원 수용체에 특이 적으로 결합하는 항-이디오타입 항체 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
[564] 상기 조건은 하나 이상의 특정 매질, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 작용제, 예를 들어, 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예를 들어 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체, 및 세포를 활성화 시키도록 설계된 임의의 다른 작용제를 포함한다.
[565] 실시 양태에서, 항원-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포와 같은 항원-특이적 T 세포는 나이브(naive) 또는 항원 특이적 T 림프구를 항원으로 자극함으로써 수득된다. 예를 들어, 항원-특이적 T 세포주 또는 클론은, 감염된 대상체로부터 T 세포를 단리하고, 동일한 항원으로 시험 관내 세포를 자극함으로써 사이토메갈로 바이러스 항원에 생성될 수 있다.
[566] 일부 측면에서, 배양은, 미국 특허 번호 6,040,177, Riddell 등의, Klebanoff 등의, (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura 등의, (2012) Blood.1:72-82, 및/또는 Wang 등의, (2012) J Immunother 35(9):689-701 에 기재된 것과 같은 기술에 따라 수행된다.
[567] 일부 실시 양태에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어 적어도 약 25℃ 일반적으로 적어도 약 30℃및 일반적으로 약 37 ℃을 포함한다. 임의로, 배양은 비-분할 EBV- 변형 림프모(lymphoblastoid)세포 (LCL)를 피더(feeder) 세포로서 첨가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rad 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서 LCL 피더 세포는 적어도 약 10 : 1의 초기 T 림프구에 대한 LCL 피더 세포의 비와 같은 임의의 적합한 양으로 제공된다.
[568] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 자극 조건 또는 자극 제제의 존재 하에서 배양의 적어도 일부는, 예를 들어, 국제 공개 번호 WO2016/073602에 기재된 바와 같은 원심 회전 하의 원심 챔버의 내부 공동에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 원심 챔버에서 수행되는 배양의 적어도 일부는 자극 및/또는 활성화를 유도하기 위해 시약 또는 시약과 혼합하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 선택된 세포와 같은 세포는 원심 챔버에서 자극 조건 또는 자극 제제와 혼합된다. 이러한 과정의 일부 측면에서, 세포의 용량(volume)은 세포 배양 플레이트 또는 다른 시스템에서 유사한 자극을 수행할 때 일반적으로 사용되는 것보다 훨씬 적은 양의 하나 이상의 자극 조건 또는 작용제와 혼합된다.
[569] 일부 실시 양태에서, 주기적으로 흔들거나 회전하는 원심 챔버, 예를 들어 튜브 또는 백에서 혼합하지 않고 선택하는 경우, 자극 제제는, 동일한 수의 세포 또는 동일한 용량(volume)의 세포의 선택의 대략 동일하거나 유사한 효율을 달성하기 위해 전형적으로 사용되거나 필요한 자극 제제의 양과 비교하여 실질적으로 보다 적은 양(예를들어, 상기 양의 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 이하) 으로 챔버의 공동에있는 세포에 첨가된다. 일부 실시 양태에서, 배양은, 예를 들어, 약 10 mL 내지 약 200 mL 또는 약20 mL 내지 약125 mL, 예컨대, 적어도 또는 적어도 약 또는 약 10 mL, 20 mL, 30 mL, 40 mL, 50 mL, 60 mL, 70 mL, 80 mL, 90 mL, 100 mL, 105 mL, 110 mL, 115 mL, 120 mL, 125 mL, 130 mL, 135 mL, 140 mL, 145 mL, 150 mL, 160 mL, 170 mL, 180 mL, 190 mL, 또는 200 mL의 시약을 배양하여 표적 용량(volume)을 달성하기 위해, 세포 및 자극 제제에 배양 완충제를 첨가하여 수행된다. 일부 실시 양태에서, 배양 완충제 및 자극 제제는 세포에 첨가하기 전에 예비 혼합된다. 일부 실시 양태에서, 배양 완충제 및 자극 제제는 세포에 별도로 첨가된다. 일부 실시 양태에서, 자극 배양은 주기적으로 온화한 혼합 조건으로 수행되며, 이는 에너지적으로 선호되는 상호 작용을 촉진시켜 세포의 자극 및 활성화를 달성하면서 덜 전반적인 자극 제제의 사용을 허용할 수 있다.
[570] 일부 실시 양태에서, 일반적으로 배양은, 챔버의 샘플 또는 벽 또는 80g 내지 100g 또는 약 80g 내지 약 100g (예를 들어 약 또는 적어도 80 g, 85 g, 90 g, 95 g, 또는100 g)의 다른 용기의 RCF에서와 같이, 일반적으로 600rpm 내지 1700rpm 또는 약 600rpm 내지 약 1700rpm(예를 들어, 약 또는 적어도 600rpm, 1000rpm 또는 1500rpm 또는 1700rpm)과 같은 세포 펠렛팅(pellet)에 사용된 것과 비교하여 낮은 속도와 같이 낮은 힘 또는 속도와 관련된 스핀의 존재와 같은 혼합 조건 하에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 스핀은, 약 1 또는 2 초에서 스핀 후 약 5, 6, 7, 또는 8 초 동안의 휴식과 같이, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 초 동안 회전 및/또는 휴식과 같이 이러한 저속에서 반복된 스핀 간격 후 휴식 기간을 사용함으로써 수행된다.
[571] 일부 실시 양태에서, 예를 들어, 자극 제제와 함께 배양의 총 지속 시간은 각각 약 1시간 내지 96시간, 1시간 내지 72시간, 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간, 18시간 및 30시간, 또는 12시간 내지 24시간, 예컨대 약 또는 적어도 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 36시간 또는 72시간이다. 일부 실시 양태에서, 추가 배양은 각각 약 1시간 내지 48시간, 4시간 내지 36시간, 8시간 내지 30시간 또는 12시간 내지 24시간 동안이다.
c. 유전자 조작
[572] 일부 실시 양태에서, 처리 단계는 재조합 단백질을 인코딩하는 핵산 분자의 도입을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된다. 이러한 재조합 단백질 중에는 섹션 III에 기재된 것과 같은 재조합 수용체가 있다. 일부 실시 양태에서, 조작은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 도입함으로써 수행된다. 재조합 수용체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 이러한 핵산 및/또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터 또는 작제물이 또한 제공된다. 세포에서 재조합 단백질, 예컨대 재조합 수용체를 코딩하는 핵산 분자의 도입은 다수의 공지된 벡터 중 임의의 것을 사용하여 수행될 수있다. 이러한 벡터는 렌티 바이러스 및 감마레트로 바이러스 시스템을 포함하는 바이러스 및 비-바이러스 시스템뿐만 아니라 피기백(PiggyBac) 또는 슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty) 기반 유전자 전달 시스템과 같은 트랜스포손 기반 시스템을 포함한다. 예시적인 방법은 바이러스, 예를 들어 레트로 바이러스 또는 렌티 바이러스를 통한, 수용체를 코딩하는 핵산의 전달, 형질 도입, 트랜스포손 및 전기천공법을 포함한다.
[573] 일부 실시 양태에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. CAR과 같은 트랜스제닉 수용체를 코딩하는 핵산의 도입을 위한 세포는 생물학적 샘플과 같은 샘플, 예를 들어 대상체로부터 얻거나 유래된 샘플로부터 단리될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포가 단리되는 대상체는 질환 또는 병태를 갖거나 또는 세포 요법이 필요한, 또는 세포 요법이 투여될 대상이다. 일부 실시 양태에서 대상체는 세포가 단리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법과 같은 특정한 치료적 개입이 필요한 인간이다.
[574] 특정 실시 양태에서, 세포의 조성물은 예를 들어 증식 및/또는 증폭(expansion)을 촉진하는 조건 하에서 세포를 배양하기 전에 조작, 예를 들어 형질 도입 또는 형질 감염된다. 특정 실시 양태에서, 세포의 조성물은 조성물이 자극 조건 하에서 자극, 활성화 및/또는 배양된 후에 조작된다. 특정 실시 양태에서, 조성물은 자극된 조성물이다. 특정 실시 양태에서, 자극된 조성물은 이전에 동결 보존 및 저장되었고, 조작 전에 해동된다.
[575] 일부 실시 양태에서, 유전자 전이는 세포를 먼저 자극함으로써, 예를 들어 세포를 증식, 생존 및/또는 예를 들어, 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정된 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 조합, 이어서 활성화된 세포의 형질 도입, 및 임상 적용에 충분한 수의 배양으로의 확장함으로써 달성된다.
[576] 일부 실시 양태에서, 재조합 핵산은, 예를 들어, 시미안 바이러스 40 (SV40), 아데노 바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV) 및 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)로부터 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여 세포 내로 전달된다.
[577] 일부 실시 양태에서, 재조합 핵산은 전기 청공을 통해 T세포내로 전달된다 (예를 들어, Chicaybam 등의, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo 등의, (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437를 참조). 일부 실시 양태에서, 재조합 핵산은 트랜스 포존을 트랜스 포존을 통해 T세포 내로 전달된다 (예를들어, Manuri 등의, (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma 등의, (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang 등의, (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현시키는 다른 방법은 인산 칼슘 형질 감염(예를 들어, 뉴욕, John Wiley & Sons의, 분자 생물학의 현재 프로토콜에 설명된 바와 같이),원형질체 융합, 양이온성 리포좀-매개 형질 감염; 텅스텐 입자-촉진 미세 입자 충격(Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 스트론튬 포스페이트 DNA 공동 침전(Brash 등의., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))을 포함한다.
[578] 재조합 산물을 코딩하는 핵산의 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터는, 예를 들어 국제 특허 출원, 공개 번호 : WO2014055668 및 미국 특허 번호 7,446,190에 기재된 것들이다.
[579] 일부 실시 양태에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 예를 들어 증폭(expansion) 동안 또는 후에, T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)와 함께 증폭(expansion) 감염될 수 있다. 원하는 수용체의 유전자 도입을 위한 이러한 형질 감염은 예를 들어 임의의 적합한 레트로 바이러스 벡터를 사용하여 수행될 수 있다. 이어서 유전자 변형된 세포 집단은 초기 자극 (예를 들어, CD3/CD28 자극)으로부터 유리될 수 있고, 이어서 제 2 유형의 자극, 예를 들어 데 노보(de novo) 도입 수용체를 통해 자극될 수 있다. 이러한 제 2 유형의 자극은 펩티드/MHC 분자, 유전자 도입 수용체의 동족 (가교) 리간드 (예를 들어, CAR의 자연 리간드) 또는 새로운 수용체의 골격 내에서 직접 결합(예를 들어, 수용체 내의 불변 영역을 인식함으로써)하는 임의의 리간드(예를들어 항체)의 형태의 항원성 자극을 포함할 수 있다. 예를 들어, Cheadle 등의 "T- 세포 기반 요법을위한 키메라 항원 수용체" 방법 Mol Biol. 2012; 907 : 645-66 또는 Barrett 등의, 약의 암 연례 검토를 위한 키메라 항원 수용체 요법 Vol. 65 : 333-347 (2014)를 참조한다.
[580] 일부 경우에, 세포, 예를 들어 T 세포가 활성화될 필요없는 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 일부 경우에, 세포는 활성화 전에 선택 및/또는 형질 도입될 수 있다. 따라서, 세포는 세포의 배양 이전에 또는 후에 조작될 수 있으며, 경우에 따라 배양의 적어도 일부와 동시에 또는 일부 동안 조작될 수 있다.
[581] 일부 측면에서, 세포는 추가로 사이토카인 또는 다른 인자의 발현을 촉진하도록 조작된다. 추가의 핵산 중에, 예를 들어 도입 유전자는 전달된 세포의 생존력 및/또는 기능을 촉진하는 것과 같은 요법의 효능을 개선하기 위한 것; 생체 내 생존 또는 국소화를 평가하기 위해, 세포의 선택 및/또는 평가를위한 유전자 마커를 제공하는 유전자; 예를 들어, 세포가 Lupton S. D. 등의, Mol. 및 Cell Biol., 11:6 (1991); 및 Riddell 등의, 인간 유전자 요법 3:319-338 (1992)에 의해 기술된 바와 같이 생체 내 음성 선택에 세포를 민감하게함으로써 안전성을 향상시키는 유전자;이며, 지배적 양성 선별성 마커를 음성 선별성 마커와 융합시켜 유도된 이작용성 선별성 융합 유전자의 사용을 설명하는 Lupton 등의 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601의 간행물을 또한 참조한다. 예를 들어 Riddell 등의, 미국 특허 번호 6,040,177, 14-17 열을 참조한다.
[582] 일부 실시 양태에서, 도입은 조성물의 하나 이상의 세포를 재조합 단백질을 코딩하는 핵산 분자, 예를 들어 재조합 수용체에 접촉함으로써 수행된다. 일부 실시 양태에서, 접촉은, 회전식 접종(spinoculation)과 같은 원심 분리 (예를 들어, 원심 접종)으로 수행될 수 있다. 이러한 방법은 국제 공개 번호 WO2016/073602에 기재된 바와 같은 방법을 포함한다. 예시적인 원심 챔버는 A-200/F 및 A-200 원심 챔버 및 그러한 시스템과 함께 사용하기위한 다양한 키트를 포함하여, Sepax® 및 Sepax® 2 시스템과 함께 사용하기위한 것을 포함하여, Biosafe SA에 의해 생산되고 판매되는 것들을 포함한다. 예시적인 챔버, 시스템 및 처리기구 및 캐비닛은 예를 들어 미국 특허 번호 6,123,655, 미국 특허 번호 6,733,433 및 공개된 미국 특허 출원, 공개 번호 US 2008/0171951 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO 00/38762에 기재되어 있으며, 이들 각각의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 그러한 시스템과 함께 사용하기위한 예시적인 키트는 BioSafe SA에 의해 제품명 CS-430.1, CS-490.1, CS-600.1 또는 CS-900.2.로 판매되는 일회용 키트를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
[583] 일부 실시 양태에서, 시스템은, 형질 도입 단계 및 시스템에서 수행되는 하나 이상의 다양한 다른 처리 단계, 예를 들어, 본원 또는 국제 공개 번호 WO2016/073602에 기재된 원심 챔버 시스템과 함께 또는 이와 관련하여 수행될 수있는 하나 이상의 처리 단계를 작동, 자동화, 제어 및/또는 모니터링하기위한 기기를 포함하는 다른기구에 포함되고/되거나 다른기구와 관련되어 배치된다. 일부 실시 양태에서 상기 기구는 캐비닛 내에 포함된다. 일부 실시 양태에서, 기구는 제어 회로, 원심 분리기, 커버, 모터, 펌프, 센서, 디스플레이 및 사용자 인터페이스를 포함하는 하우징을 포함하는 캐비닛을 포함한다. 예시적인 장치는 미국 특허 번호 6,123,655, 미국 특허 번호 6,733,433 및 US 2008/0171951에 기재되어있다.
[584] 일부 실시 양태에서, 시스템은 일련의 용기, 예를 들어 백(bags), 튜빙(tubing), 스톱 콕(stopcocks), 클램프(clamps), 커넥터(connectors) 및 원심분리 챔버(centrifuge chamber)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 백과 같은 용기는 동일한 백 또는 별도의 백과 같은 동일한 용기 또는 별도의 용기에 형질 도입될 세포 및 바이러스 벡터 입자를 포함하는 백과 같은 하나 이상의 용기를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 시스템은 희석제 및/또는 세척 용액과 같은 매체를 함유하는 백과 같은 하나 이상의 용기를 추가로 포함하며, 이는 챔버 및/또는 다른 성분으로 당겨져 상기 방법 동안 성분 및/또는 조성물을 희석, 재현탁 및/또는 세척한다. 상기 용기는 투입 라인, 희석 라인, 세척 라인, 폐기물 라인 및/또는 산출 라인에 대응하는 위치에서와 같이 시스템에서 하나 이상의 위치에 연결될 수 있다.
[585] 일부 실시 양태에서, 챔버는 원심 분리기와 관련되어 있으며, 이는 회전축과 같은 챔버의 회전에 영향을 줄 수 있다. 세포의 형질 도입과 관련하여 및/또는 하나 이상의 다른 처리 단계에서 배양 전, 동안 및/또는 후에 회전이 일어날 수 있다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 다양한 처리 단계 중 하나 이상이 회전 하에, 예를 들어 특정 힘에서 수행된다. 상기 챔버는 전형적으로 수직 또는 일반적으로 수직 회전할 수 있어서, 원심 분리 동안 챔버가 수직으로 앉아 있고 측벽 및 축은 수직 또는 일반적으로 수직이고, 단부 벽(들)은 수평 또는 일반적으로 수평이다.
[586] 일부 실시 양태에서, 세포, 바이러스 입자 및 시약을 함유하는 조성물은, 일반적으로 600 rpm 내지 1700 rpm, 또는 약 600 rpm 내지 약 1700 rpm (예를들어, 약 또는 적어도 600 rpm, 1000 rpm, 또는 1500 rpm 또는 1700 rpm)과 같이 세포를 펠렛화(pellet)하기 위해 사용된 것보다 낮은 속도와 같은 비교적 낮은 힘 또는 속도로 회전될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 회전은, 예를 들어 챔버 또는 공동의 내부 또는 외부 벽에서 측정될 때 100g 내지 3200g 또는 약 100g 내지 약 3200g (예를 들어, 적어도 또는 약 100g, 200g, 300g, 400g, 500g, 1000g, 1500g, 2000g, 2500g, 3000g 또는 3200g)의 힘, 예를 들어 상대 원심력에서 수행된다. "상대 원심력"또는 RCF라는 용어는 일반적으로, 지구의 중력과 연관되어, 회전축과 비교하여 공간의 특정 지점에서 물체 또는 물질(예를들어 세포, 샘플 또는 펠렛 및/또는 챔버 또는 회전중인 다른 용기의 지점)에 부여되는 유효력으로 이해된다. 상기 값은 중력, 회전 속도 및 회전 반경(회전축과 RCF가 측정되는 물체, 물질 또는 입자로부터의 거리)을 고려하여 공지된 공식을 사용하여 결정될 수 있다.
[587] 일부 실시 양태에서, 유전자 조작의 적어도 일부 동안, 예를 들어 형질 도입 및/또는 유전자 조작 후 세포는, 전술한 바와 같이, 유전자 조작된 세포의 배양, 예를 들어 세포의 배양 또는 확장을 위해, 백과 같은 용기, 예를 들어 생물 반응기 백 조립체로 옮겨진다. 일부 실시 양태에서, 세포의 배양 또는 증폭(expansion)용 용기는 관류 백과 같은 생물 반응기 백이다.
1. 벡터 및 방법
[588] 일부 실시 양태에서, 처리 단계는 재조합 단백질을 코딩하는 핵산 분자를 세포 내로 도입하는 것을 포함하고, 다수의 공지된 벡터 중 임의의 것을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 벡터는 재조합 수용체를 코딩하는 핵산을 포함한다. 특정 실시 양태에서, 벡터는 바이러스 벡터 비-바이러스 벡터이다. 일부 경우에, 벡터는 레트로 바이러스 벡터, 예를 들어 렌티 바이러스 벡터 또는 감마 레트로 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터이다.
[589] 일부 경우에, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 인코딩하는 핵산 서열은, 신호 펩티드를 인코딩하는 신호 서열을 포함한다. 신호 펩티드의 비 제한적인 예시적인 예는, 예를 들어 GMCSFR 알파 쇄 신호 펩티드, CD8 알파 신호 펩티드 또는 CD33 신호 펩티드를 포함한다.
[590]
일부 실시 양태에서, 벡터는, 바이러스 벡터, 예를 들어 레트로 바이러스 또는 렌티 바이러스, 비 바이러스 벡터 또는 트랜스 포손, 예를 들어 Sleeping Beauty 트랜스포손 시스템, 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV)로부터 유래된 벡터, 렌티 바이러스 벡터 또는 레트로 바이러스 벡터, 예를 들어 감마-레트로 바이러스 벡터, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수증식 육종 바이러스 (MPSV), 쥐 배아 줄기 세포 바이러스 (MESV), 쥐 줄기 세포 바이러스 (MSCV), 비장 초점 형성 바이러스(SFFV) 또는 아데노-관련 바이러스(AAV)에서 유래된 레트로 바이러스 벡터를 포함한다.
[591] 일부 실시 양태에서, 바이러스 벡터 또는 비-바이러스 DNA는 이종 재조합 단백질을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 이종 재조합 분자는, 재조합 수용체, 예를 들어 항원 수용체, SB-트랜스포존, 예를 들어 유전자 침묵, 캡시드-봉입된 트랜스포존, 상 동성 이중 가닥 핵산, 예를 들어 게놈 재조합 또는 리포터 유전자를 위한 것이거나 이를 포함한다(예를 들어, GFP와 같은 형광 단백질 또는 루시퍼라제).
ⅰ. 형질도입을 위한 바이러스벡터 입자의 제조
[592] 일부 실시 양태에서, 재조합 핵산은, 재조합 감염성 바이러스 입자, 예를 들어 시미안 바이러스 40 (SV40), 아데노 바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV)로부터 유래된 벡터를 사용하여 세포 내로 전달된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티 바이러스 벡터 또는 레트로 바이러스 벡터, 예컨대 감마-레트로 바이러스 벡터를 사용하여 T 세포 내로 전달된다 (예를들어, Koste 등의, (2014) 유전자 치료 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens 등의, (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino 등의, (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park 등의, Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557.참조).
[593] 일부 실시 양태에서, 레트로 바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열 (LTR)를 갖으며, 예를 들어, 몰로니(Moloney) 쥐 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수 증식 육종 바이러스(MPSV), 쥐 배아 줄기 세포 바이러스(MESV), 쥐 줄기 세포 바이러스(MSCV) 또는 비장 초점 형성 바이러스(SFFV)에서 유래한 레트로 바이러스 벡터이다. 일부 실시 양태에서, 레트로 바이러스는 임의의 조류 또는 포유 동물 세포 공급원으로부터 유래된 것들을 포함한다. 레트로 바이러스는 전형적으로 양쪽성(amphotropic)이며, 이는 인간을 포함하여 여러 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미한다. 한 실시 양태에서, 발현될 유전자는 레트로 바이러스 개그(gag), 폴(pol) 및/또는 env 서열을 대체한다. 다수의 예시적인 레트로 바이러스 시스템은 예를들어, 미국 특허 번호 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller 및 Rosman (1989) 바이오 테크닉 7:980-990; Miller, A. D. (1990) 인간 유전자 치료 1:5-14; Scarpa 등의, (1991) 바이러스학 180:849-852; Burns 등의, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie 및 Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109에 기재되어 있다.
[594] 렌티 바이러스 형질 도입 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법은, 예를들어 Wang 등의, (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper 등의, (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen 등의, (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; 및 Cavalieri 등의, (2003) Blood. 102(2): 497-505에 기재되어 있다.
[595] 일부 실시 양태에서, 바이러스 벡터 입자는 렌티 바이러스 게놈 기반 벡터로부터 유래된 것과 같은 레트로 바이러스 게놈 기반 벡터로부터 유래된 게놈을 포함한다. 제공된 바이러스 벡터의 일부 측면에서, CAR과 같은 재조합 수용체를 코딩하는 이종성 핵산은, 벡터 게놈의 5'LTR 및 3'LTR 서열 사이에 포함 및/또는 위치된다.
[596] 일부 실시 양태에서, 바이러스 벡터 게놈은 렌티 바이러스 게놈, 예컨대 HIV-1 게놈 또는 SIV 게놈이다. 예를 들어, 렌티 바이러스 벡터는 병독성 유전자를 곱하여 약독화함으로써 생성되었으며, 예를 들어 유전자 env, vif, vpu 및 nef는 결실되어, 벡터를 치료 목적으로 더 안전하게 만든다. 렌티 바이러스 벡터는 알려져있다. Naldini 등의, (1996 및 1998); Zufferey 등의, (1997); Dull 등의, 1998, 미국 특허 번호 6,013,516; 및 5,994,136을 참조한다. 일부 실시 양태에서, 이들 바이러스 벡터는 플라스미드-기반 또는 바이러스-기반이며, 외래 핵산을 통합하고, 선택하고, 핵산을 숙주 세포 내로 전달하기 위해 필수 서열을 보유하도록 구성된다. 알려진 렌티 바이러스는 미국식 문화 컬렉션(American Type Culture Collection)과 같은 보관소 또는 수집물로부터 쉽게 구할 수 있거나 일반적으로 사용 가능한 기술을 사용하여 알려진 출처에서 단리할 수 있다.
[597] 렌티 바이러스 벡터의 비 제한적인 예는 렌티 바이러스, 예를 들어, 인간 면역 결핍 바이러스 1 (HIV-1), HIV-2, 시미안(Simian) 면역 결핍 바이러스(SIV), 인간 T세포림프친화바이러스 1 (HTLV-1), HTLV-2 또는 말 감염 빈혈 바이러스(E1AV)에서 유래된 것을 포함한다. 예를 들어, 렌티 바이러스 벡터는 HIV 독성 유전자를 곱하여 약독화함으로써 생성되고, 예를 들어 유전자 env, vif, vpr, vpu 및 nef는 결실되어 치료 목적으로 벡터를 더 안전하게 만든다. 렌티 바이러스 벡터는 당 업계에 공지되어 있으며, Naldini 등의. (1996 및 1998); Zufferey 등의, (1997); Dull 등의, 1998, 미국 특허 번호 6,013,516; 및 5,994,136를 참조한다. 일부 실시 양태에서, 이들 바이러스 벡터는 플라스미드-기반 또는 바이러스-기반이며, 외래 핵산을 통합하고, 선택하고, 핵산을 숙주 세포 내로 전달하기 위해 필수 서열을 보유하도록 구성된다. 알려진 렌티 바이러스는 미국식 문화 컬렉션("ATCC"; 10801 University Blvd., Manassas, Va. 20110-2209)과 같은 보관소 또는 수집물로부터 쉽게 구할 수 있거나 일반적으로 사용 가능한 기술을 사용하여 알려진 출처에서 단리할 수 있다.
[598] 바이러스 벡터 게놈은 전형적으로 패키징 또는 생산자 세포주로 형질 감염될 수있는 플라스미드 형태로 구축된다. 임의의 이러한 예에서, 재조합 수용체와 같은 재조합 단백질을 코딩하는 핵산은 바이러스 벡터의 영역, 예컨대 바이러스 게놈의 비-필수 영역에 삽입되거나 위치된다. 일부 실시 양태에서, 핵산은 특정 바이러스 서열 대신 바이러스 게놈 내로 삽입되어 복제 결함인 바이러스를 생성한다.
[599] 게놈이 바이러스 벡터 게놈의 RNA 카피를 함유하는 레트로 바이러스 입자를 생성하기 위해 임의의 공지된 다양한 방법을 사용할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 바이러스 기반 유전자 전달 시스템의 제조에 적어도 2개의 성분이 관여한다: 첫째, 바이러스 벡터 입자를 생성하는 데 필요한 효소뿐만 아니라 구조 단백질을 포함하는 패키징 플라스미드, 및 두번째, 바이러스 벡터 자체, 즉 전달될 유전 물질. 이러한 구성 요소 중 하나 또는 둘 다를 설계할 때 생물 안전 보호 장치를 도입할 수 있다.
[600] 일부 실시 양태에서, 패키징 플라스미드는 외피 단백질(Naldini 등의, 1998) 이외의 단백질인 HIV-1과 같은 모든 레트로 바이러스를 함유할 수 있다. 다른 실시 양태에서, 바이러스 벡터는 독성과 관련된 것, 예를 들어 HIV의 주요 트랜스활성제인 vpr, vif, vpu 및 nef 및/또는 Tat 바이러스와 같은 추가적인 바이러스 유전자가 결여될 수 있다. 일부 실시 양태에서, HIV- 기반 렌티 바이러스 벡터와 같은 렌티 바이러스 벡터는 모 바이러스의 3 가지 유전자: gag, pol 및 rev를 포함하며, 이는 재조합을 통한 야생형 바이러스의 재구성 가능성을 감소 시키거나 제거한다.
[601] 일부 실시 양태에서, 바이러스 벡터 게놈은 바이러스 벡터 게놈으로부터 전사된 바이러스 게놈 RNA를 바이러스 입자로 패키징하는데 필요한 모든 성분을 함유하는 패키징 세포주에 도입된다. 대안적으로, 바이러스 벡터 게놈은 관심있는 하나 이상의 서열, 예를 들어 재조합 핵산 이외에 바이러스 성분을 코딩하는 하나 이상의 유전자를 포함할 수 있다. 그러나 일부 측면에서, 표적 세포에서 게놈의 복제를 방지하기 위해, 복제에 필요한 내인성 바이러스 유전자가 제거되어 패키징 세포주에서 별도로 제공된다.
[602] 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는 입자를 생성하는데 필요한 성분을 포함하는 하나 이상의 플라스미드 벡터로 형질 감염된다. 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는 LTRs, 시스-작용 패키징 서열 및 관심있는 서열, 즉 CAR과 같은 항원 수용체를 코딩하는 핵산을 포함하여, 바이러스 벡터 게놈을 함유하는 플라스미드; 및 바이러스 효소 및/또는 구조적 성분, 예컨대 Gag, pol 및/또는 rev를 코딩하는 하나 이상의 헬퍼 플라스미드로 형질 감염된다. 일부 실시 양태에서, 레트로 바이러스 벡터 입자를 생성하는 다양한 유전자 성분을 분리하기 위해 다수의 벡터가 이용된다. 이러한 일부 실시 양태에서, 패키징 세포에 별도의 벡터를 제공하는 것은 달리 복제적격 바이러스를 생성할 수 있는 재조합 사건의 가능성을 감소시킨다. 일부 실시 양태에서, 모든 레트로 바이러스의 성분을 갖는 단일 플라스미드 벡터가 사용될 수 있다.
[603] 일부 실시 양태에서, 렌티 바이러스 벡터 입자와 같은 레트로 바이러스 벡터 입자는 슈도타이프(pseudotyped)되어 숙주 세포의 형질 도입 효율을 증가시킨다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 렌티 바이러스 벡터 입자와 같은 레트로 바이러스 벡터 입자는, VSV-G 당 단백질로 슈도타이프(pseudotyped)되며, 이는 형질 도입될 수 있는 세포 유형을 확장시키는 넓은 세포 숙주 범위를 제공한다. 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는 비이방성(non-native) 외피 당 단백질을 코딩하는 플라스미드 또는 폴리 뉴클레오티드, 예를 들어 신드바이스(Sindbis) 바이러스 외피, GALV 또는 VSV-G와 같은 이종 이방성, 다방성 또는 양쪽성 외피를 포함하도록 형질 감염된다.
[604] 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는, 바이러스 게놈 RNA를 렌티 바이러스 벡터 입자로 패키징하는데 필요한 바이러스 조절 및 구조 단백질을 포함하는 성분을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는 렌티 바이러스 단백질을 발현하고 기능성 렌티 바이러스 벡터 입자를 생성 할 수 있는 임의의 세포주일 수 있다. 일부 측면에서, 적합한 패키징 세포주는293 (ATCC CCL X), 293T, HeLA (ATCC CCL 2), D17 (ATCC CCL 183), MDCK (ATCC CCL 34), BHK (ATCC CCL-10) 및 Cf2Th (ATCC CRL 1430) 세포를 포함한다.
[605] 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는 바이러스 단백질(들)을 안정적으로 발현한다. 예를 들어, 일부 측면에서, gag, pol, rev 및/또는 다른 구조적 유전자를 포함하지만 LTR이없고 패키징 성분이없는 패키징 세포주가 구축될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는, 이종 단백질을 코딩하는 핵산 분자 및/또는 외피 당 단백질을 코딩하는 핵산을 포함하는 바이러스 벡터 게놈과 함께 하나 이상의 바이러스 단백질을 코딩하는 핵산 분자로 일시적으로 형질 감염될 수 있다.
[606] 일부 실시 양태에서, 바이러스 벡터 및 패키징 및/또는 헬퍼 플라스미드는 형질 감염 또는 감염을 통해 패키징 세포주 내로 도입된다. 패키징 세포주는 바이러스 벡터 게놈을 함유하는 바이러스 벡터 입자를 생성한다. 형질 감염 또는 감염 방법은 잘 알려져있다. 비-제한적인 예에는 인산 칼슘, DEAE- 덱스트란 및 리포펙션 방법, 전기천공법 및 미세주입법이 포함된다.
[607] 재조합 플라스미드 및 레트로바이러스 LTR 및 패키징 서열이 특별한 세포주에 도입될 때(예를 들어, 인산 칼슘 침전에 의해), 패키징 서열은 재조합 플라스미드의 RNA 전사체가 바이러스 입자로 패키징될 수 있게하며, 이는 배양 배지로 분비될 수 있다. 이어서 일부 실시 양태에서 재조합 레트로 바이러스를 함유하는 배지를 수집하고, 임의로 농축시키고, 유전자 전이에 사용한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 패키징 플라스미드 및 전달 벡터를 포장 세포주로 공동 형질 감염시킨 후, 바이러스 벡터 입자는 배양 배지로부터 회수되고 당업자에 의해 사용되는 표준 방법에 의해 적정된다.
[608] 일부 실시 양태에서, 렌티 바이러스 벡터와 같은 레트로 바이러스 벡터는 렌티 바이러스 입자의 생성을 허용하는 플라스미드의 도입에 의해 예시적인 HEK 293T 세포주와 같은 패키징 세포주에서 생성될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 패키징 세포는 형질 감염되고/되거나 gag 및 pol을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 재조합 수용체, 예컨대 항원 수용체, 예를 들어 CAR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는 선택적으로 및/또는 추가로 rev 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드로 형질 감염되고/되거나 이를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 패키징 세포주는 선택적으로 및/또는 추가로 VSV-G와 같은 비천연(non-native) 외피 당단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 형질 감염되고/되거나 이를 함유한다. 이러한 일부 실시 양태에서, 세포의 형질 감염 후 대략 2 일, 예를 들어 HEK 293T 세포에서, 세포 상청액은 재조합 렌티 바이러스 벡터를 함유하며, 이는 회복되고 역가될 수 있다.
[609] 회복 및/또는 생성된 레트로 바이러스 벡터 입자는 기재된 방법을 사용하여 표적 세포를 형질 도입하는데 사용될 수 있다. 일단 표적 세포에서, 바이러스 RNA는 역전사되고, 핵으로 수입(imported)되고, 숙주 게놈으로 안정적으로 통합된다. 바이러스 RNA의 통합 후 1일 또는 2일, 재조합 단백질의 발현, 예를 들어 CAR과 같은 항원 수용체가 검출될 수 있다.
ⅱ. 핵산
[610] 일부 실시 양태에서, 핵산은 이종성, 즉, 세포로부터 얻은 세포 또는 샘플, 예컨대 다른 유기체 또는 세포로부터 얻은 것과 같이 일반적으로 존재하지 않으며, 이는 예를 들어, 조작되고있는 세포 및/또는 그러한 세포가 유래된 유기체에서 통상적으로 발견되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 핵산은 자연적으로 발견되지 않는 핵산과 같이 자연적으로 발생하지 않으며, 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 코딩하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 핵산을 포함한다.
[611] 일부 실시 양태에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함함으로써, 이러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현시킨다.
[612] 일부 경우에, 재조합 수용체를 코딩하는 핵산 서열은 신호 펩티드를 인코딩하는 신호 서열을 함유한다. 일부 양상에서, 신호 서열은 천연 폴리펩티드로부터 유래된 신호 펩티드를 인코딩할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 이종 또는 비천연 신호 펩티드, 예를 들어 서열 번호 25에 제시된 GMCSFR 알파 사슬 세트의 예시적 신호 펩티드를 인코딩할 수 있고, 및 서열 번호 24에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩될 수 있다. 일부 경우에, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 인코딩하는 핵산 서열은, 신호 펩티드를 코딩하는 신호 서열을 포함한다. 신호 펩티드의 비제한적 예시적인 예는, 예를 들어 서열 번호 25에 제시된 GMCSFR 알파 사슬 신호 펩티드를 포함하고, 서열 번호 24에 제시된 뉴클레오티드 서열 또는 서열 번호 26에 제시된 CD8 알파 신호 펩티드에 의해 인코딩된다.
[613] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 코딩하는 폴리 뉴클레오티드는 재조합 수용체의 발현을 제어하기 위해 작동 가능하게 연결된 하나 이상의 프로모터를 함유한다. 일부 예에서, 폴리 뉴클레오티드는 재조합 수용체의 발현을 제어하기 위해 작동 가능하게 연결된 2개, 3개 또는 이상의 프로모터를 함유한다.
[614] 핵산 분자가 2 개 이상의 상이한 폴리펩티드 사슬, 예를 들어 재조합 수용체 및 마커를 인코딩하는 특정 경우에, 각 폴리펩티드 사슬은 별개의 핵산 분자에 의해 인코딩될 수 있다. 예를 들어, 2 개의 별개의 핵산이 제공되며, 각각은 세포에서의 발현을 위해 개별적으로 세포 내로 전달되거나 도입될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 및 마커를 인코딩하는 핵산은, 동일한 프로모터에 작동 가능하게 연결되고 임의로 내부 리보솜 진입 부위 (IRES), 또는자가-절단 펩티드를 인코딩하는 핵산에 의해 분리되거나 또는 리보솜 건너 뛰기를 유발하는 펩타이드, 이는 임의로 T2A, P2A, E2A 또는 F2A이다. 일부 실시 양태에서, 마커를 인코딩하는 핵산 및 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산은 2 개의 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시 양태에서, 마커를 코딩하는 핵산 및 재조합 수용체를 코딩하는 핵산은 세포의 게놈 내의 상이한 위치에 존재하거나 삽입된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드는 배양된 세포를 함유하는 조성물, 예컨대 레트로 바이러스 형질 도입, 형질 감염 또는 형질 전환에 의해 도입된다.
[615] 폴리 뉴클레오티드가 제1 및 제2 핵산 서열을 포함하는 것과 같은 일부 실시 양태에서, 상이한 폴리펩티드 사슬 각각을 인코딩하는 코딩 서열은, 동일하거나 상이할 수 있는 프로모터에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 핵산 분자는 2 개 이상의 상이한 폴리펩티드 사슬의 발현을 유도하는 프로모터를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 이러한 핵산 분자는 멀티시스트로닉 (바이시스트로닉(bicistronic) 또는 트리시스트로닉(tricistronic), 예를 들어 미국 특허 번호 6,060,273 참조)일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 전사 단위는 단일 프로모터로부터의 메시지에 의해 유전자 산물(예를들어 마커를 인코딩 및 재조합 수용체를 인코딩하는)의 공동 발현을 허용하는 IRES (내부 리보솜 진입 부위)를 포함하는 바이시스트로닉 단위로서 조작될 수 있다.
[616] 대안적으로, 일부 경우에, 단일 프로모터는 단일 오픈 리딩 프레임(ORF)에서 자가-절단 펩티드(예를들어, 2A 서열) 또는 단백질 분해 효소 인식 부위(예를들어, 퓨린)를 인코딩하는 서열에 의해 서로 분리된 2 개 또는 3 개의 유전자(예를들어, 마커를 인코딩 및 재조합 수용체를 인코딩하는)를 포함하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서 ORF는 단일 폴리펩티드를 인코딩하는데, 이는 번역(translation) 중 (2A의 경우) 또는 번역 이후 개별 단백질로 처리된다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩티드는, 리보솜이 2A 요소의 C- 말단에서 펩티드 결합의 합성을 건너뛰게하여(리보솜 건너 뛰기), 2A 서열의 말단과 다음 펩티드 하류 사이의 분리를 초래할 수 있다 (예를들어, de Felipe, Genetic Vaccines 및 Ther. 2:13 (2004) 및 de Felipe 등의, Traffic 5:616-626 (2004)참조). 다양한 2A 요소가 알려져있다. 본원에 개시된 방법 및 시스템에 사용될 수 있는 2A 서열의 예는, 미국 특허 공개 번호 20070116690에 기술된 바와 같이 구제역 바이러스 (F2A, 예를 들어, 서열 번호 21), 말 비염 A 바이러스 (E2A, 예를 들어, 서열 번호 20), 사타구아(Thosea asigna) 바이러스 (T2A, 예를 들어, 서열 번호 6 또는 17) 및 돼지 테스코 바이러스-1 (P2A, 예를 들어 서열 번호 18 또는 19)로부터의 2A 서열을 제한없이 포함할 수 있다.
[617] 본원에 기재된 임의의 재조합 수용체는, 임의의 조합 또는 배열로 재조합 수용체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 함유하는 폴리 뉴클레오티드에 의해 인코딩될 수 있다. 예를 들어, 1, 2, 3 개 이상의 폴리 뉴클레오티드는 1, 2, 3 개 이상의 상이한 폴리펩티드, 예를 들어 재조합 수용체를 인코딩할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 하나의 벡터 또는 작제물은 핵산 서열 인코딩 마커를 함유하고, 별도의 벡터 또는 작제물은 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 핵산 서열을 함유한다. 일부 실시 양태에서, 마커를 인코딩하는 핵산 및 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산은 2 개의 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 코딩하는 핵산은 마커를 코딩하는 핵산의 하류에 존재한다.
[618]
일부 실시 양태에서, 벡터 골격은 하나 이상의 마커(들)를 인코딩하는 핵산 서열을 함유한다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 마커(들)는 형질 도입 마커, 대리 마커 및/또는 선택 마커이다.
[619]
일부 실시 양태에서, 마커는 형질 도입 마커 또는 대용 마커이다. 형질 도입 마커 또는 대용 마커는 폴리 뉴클레오티드와 함께 도입된 세포, 예를 들어 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드를 검출하는데 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 형질 도입 마커는 세포의 변형을 나타내거나 확인할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 대용 마커는 재조합 수용체, 예를 들어 재조합 수용체, 예를들어 CAR와 함께 세포 표면에서 공동 발현되도록 만들어진 단백질이다. 특정 실시 양태에서, 이러한 대용 마커는 활성이 거의 없거나 전혀 없도록 변형된 표면 단백질이다. 특정 실시 양태에서, 대용 마커는 재조합 수용체를 인코딩하는 동일한 폴리 뉴클레오티드에서 인코딩된다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 서열은, 임의로 내부 리보솜 도입 부위 (IRES)에 의해 분리 된 마커를 인코딩하는 핵산 서열, 또는자가-절단 펩티드 또는 T2A, P2A, E2A 또는 F2A와 같은 2A 서열과 같은 리보솜 건너 뛰기를 유발하는 펩티드를 인코딩하는 핵산에 작동 가능하게 연결된다. 외인성 마커 유전자는 경우에 따라 조작된 세포와 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 허용하고, 일부 경우에는 세포 자살을 촉진한다.
[620] 예시적인 대용 마커는 절단된 세포 표피 폴리펩티드, 예컨대 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체 2 (tHER2), 절단된 표피 성장 인자 수용체(EGFRt, 서열 번호 7 또는 16에 제시된 예시적인 EGFRt 서열) 또는 전립선-특이적 막 항원(PSMA) 또는 그의 변형된 형태를 포함할 수 있다. EGFRt는 항체 세툭시맙 (Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 함유할 수 있으며, 이는 EGFRt 작제물 및 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)와 조작되는 세포를 확인 또는 선택하기위해, 및/또는 수용체를 발현하는 세포를 제거 또는 분리하기 위해 사용될 수 있다. 미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu 등의 , Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434)를 참조한다. 일부 측면에서, 마커, 예를 들어 대용 마커는 CD34, NGFR, CD19 또는 절단된 CD19, 예를 들어 절단된 비인간 CD19 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어, tEGFR)의 전부 또는 일부 (예를 들어, 절단 된 형태)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 마커를 인코딩하는 핵산은 링커 서열, 예를 들어 T2A와 같은 링커 서열을 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된다. 예를들어, 마커 및 선택적으로 링커 서열은 PCT 공개 번호 WO2014031687에 기재된 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 마커는 선택적으로 T2A 절단 가능한 링커 서열과 같은 링커 서열에 연결된 절단된 EGFR (tEGFR) 일 수 있다. 절단된 EGFR (예를 들어, tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩티드는, 서열 번호 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호 7 또는 16에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
[621] 일부 실시 양태에서, 마커는 형광 단백질, 예컨대 녹색 형광 단백질(GFP), 수퍼-폴드 GFP와 같은 강화 녹색 형광 단백질(EGFP), td토마토, m체리, m딸기, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2와 같은 적색 형광 단백질(RFP), 청록색 형광 단백질(CFP), 청색 녹색 형광 단백질(BFP), 강화 청색 형광 단백질(EBFP) 및 황색 형광 단백질(YFP), 및 종 변이체, 단량체 변이체, 및 형광 단백질의 코돈-최적화 및/또는 개선된 변이체를 포함하는 이의 변이체이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 마커는 루시페라제, 이. 콜라이의 lacZ 유전자, 알칼리성 포스파타제, 분비된 배아 알칼리성 포스파타제(SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(CAT)와 같은 효소이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자는, 루시퍼라제(luc), β-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제 (CAT), β-글루쿠로니다제(GUS) 또는 이의 변이체를 포함한다.
[622] 일부 실시 양태에서, 마커는 선택 마커이다. 일부 실시 양태에서, 선택 마커는 외인성 작용제 또는 약물에 대한 내성을 부여하는 폴리펩티드이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자이다. 일부 실시 양태에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자이며 포유 동물 세포에 항생제 내성을 부여한다. 일부 실시 양태에서, 선택 마커는 퓨로마이신 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 블라스티신 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 유전자 내성 유전자 또는 제오신(Zeocin) 내성 유전자 또는 그의 변형된 형태이거나 이를 포함한다.
d. 세포 배양 및/또는 증폭 (expansion)
[623] 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 방법을 사용하여 조작된 세포는 하나 이상의 배양 단계, 예를 들어 증식 및/또는 증폭(expansion)을 촉진하는 조건 하에서 세포를 배양할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 조작된 세포는 유전자 조작 단계, 예를 들어 형질 도입 또는 형질 감염에 의해 재조합 폴리펩티드를 세포에 도입하는 단계 후에 증식 및/또는 확장을 촉진하는 조건 하에서 배양된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 자극 조건 하에서 세포가 배양(incubated)되고, 재조합 폴리 뉴클레오티드, 예를 들어 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드로 형질 도입되거나 형질 감염된 후 배양(cultivated)된다. 일부 실시 양태에서, 배양은 농축된 T 세포의 하나 이상의 배양 조성물을 생성한다. 일부 실시 양태에서, 이러한 조건은 집단에서 세포의 증식, 확장, 활성화 및/또는 생존을 유도하도록 설계될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 자극 조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 작용제, 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포의 성장, 분열 및/또는 증폭(expansion)을 촉진하도록 설계된 임의의 다른 작용제의 하나 이상을 포함할 수 있다.
[624]
일부 실시 양태에서, 조작된 세포는, 예를 들어 첨가된 세포의 배양을 위한 세포 배지 및/또는 세포와 함께 공급 포트를 통해, 충전될 수 있는 용기에서 배양된다. 세포는 예를 들어 세포의 증폭(expansion) 및/또는 증식을 위해 세포의 배양이 요구되는 임의의 세포 공급원으로부터 유래될 수 있다.
[625] 일부 측면에서, 배양 배지는 T 세포와 같은 세포의 성장, 배양, 증폭(expansion) 또는 증식을 지원하는 적응된 배양 배지이다. 일부 측면에서, 배지는 염, 아미노산, 비타민, 당 또는 이들의 임의의 조합의 혼합물을 포함하는 액체일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 배양 배지는 배양 동안 세포의 배양, 증폭(expansion) 또는 증식을 자극하기위한 하나 이상의 자극 조건 또는 작용제를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 자극 조건은 IL-2, IL-7 또는 IL-15로부터 선택된 하나 이상의 사이토카인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인은 재조합 사이토카인이다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 인간 재조합 사이토카인이다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 T 세포에 의해 발현되고/되거나 내인성인 수용체에 결합하고 /하거나 수용체에 결합할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 사이토카인의 4- 알파-헬릭스 다발 패밀리의 구성원이거나이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 사이토카인의 4- 알파-헬릭스 다발 패밀리의 구성원은 인터루킨-2 (IL-2), 인터루킨-4 (IL-4), 인터루킨-7 (IL-7), 인터루킨-9 (IL-9), 인터루킨-12 (IL-12), 인터루킨-15 (IL-15), 과립구 콜로니-자극 인자(G-CSF) 및 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IL-15 이거나이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IL-7이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인은 재조합 IL-2이거나 이를 포함한다.
[626]
일부 실시 양태에서, 배양(culturing) 또는 배양(incubation) 동안 배양 배지에서 하나 이상의 사이토카인의 농도는 독립적으로 약 1 IU/mL 내지 1500 IU/mL, 예컨대 약 1 IU/mL 내지 100 IU/mL, 2 IU/mL 내지 50 IU/mL, 5 IU/mL 내지 10 IU/mL, 10 IU/mL 내지 500 IU/mL, 50 IU/mL 내지 250 IU/mL 또는 100 IU/mL 내지 200 IU/mL, 50 IU/mL 내지 1500 IU/mL, 100 IU/mL 내지 1000 IU/mL 또는 200 IU/mL 내지 600 IU/mL로부터 유래된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 사이토카인의 농도는 독립적으로 적어도 또는 적어도 약 1 IU/mL, 5 IU/mL, 10 IU/mL, 50 IU/mL, 100 IU/mL, 200 IU/mL, 500 IU/mL, 1000 IU/mL 또는 1500 IU/mL이다.
[627] 일부 측면에서, 세포는 조작된 세포 및 배양 배지의 전달 후 적어도 일부 시간 동안 배양된다. 일부 실시 양태에서, 자극 조건은 일반적으로 인간 T 림프구와 같은 1 차 면역 세포의 성장에 적합한 온도, 예를 들어 약 25℃ 이상, 일반적으로 약 30도 이상, 및 일반적으로 약 37℃의 온도를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 농축된 T 세포의 조성물은 25 내지 38℃ 예컨대 30 내지 37℃ 예를 들어 약 37℃± 2 ℃ 에서 배양된다. 일부 실시 양태에서, 배양(incubation)은 배양(culture)까지의 시간 동안 수행되고, 예컨대, 배양(cultivation) 또는 증폭(expansion)은 원하는 또는 임계 밀도, 농도, 수 또는 용량의 세포를 초래한다. 일부 실시 양태에서, 배양(incubation)은 예를 들어 배양(culture)까지의 시간 동안 수행되고, 예컨대 배양(cultivation) 또는 증폭(expansion)은 원하는 또는 임계 밀도, 농도, 수 또는 용량의 생존가능한 세포를 초래한다. 일부 실시 양태에서, 배양은 약 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일 또는 그 이상 동안이다.
[628] 일부 실시 양태에서, 세포는 세포 배양물에서 목표량의 이산화탄소를 유지하기위한 조건 하에서 배양된다. 일부 측면에서, 이는 성장 동안 세포의 최적의 배양, 증폭(expansion) 및 증식을 보장한다. 일부 층면에서, 이산화탄소의 양(CO2)은 상기 가스의 10% 내지 0% (v/v), 예컨대, 상기 가스의 8% 내지 2% (v/v), 예컨대 양의 5% (v/v) CO2 이다.
[629] 특정 실시 양태에서, 배양은 폐쇄 시스템에서 수행된다. 특정 실시 양태에서, 배양은 멸균 조건 하에 폐쇄 시스템에서 수행된다. 특정 실시 양태에서, 배양은 제공된 시스템의 하나 이상의 단계와 동일한 폐쇄 시스템에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 농축된 T 세포의 조성물은 폐쇄 시스템으로부터 제거되고 배양을 위한 생물 반응기에 배치 및/또는 연결된다. 배양에 적합한 생물 반응기의 예는 GE Xuri W25, GE Xuri W5, Sartorius BioSTAT RM 20 | 50, Finesse SmartRocker 생물 반응기 시스템, 및 Pall XRS 생물 반응기 시스템을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 생물 반응기는 배양 단계의 적어도 일부 동안 세포를 관류(perfuse) 및/또는 혼합하는데 사용된다.
[630] 일부 실시 양태에서, 생물 반응기의 밀폐, 연결 및/또는 제어 하에 배양된 세포는 생물 반응기없이 배양된 세포, 예를 들어, 정적 조건, 예를 들어 혼합, 요동, 운동 및/또는 관류없이 배양된 세포보다 배양 동안보다 빠르게 증폭(expansion)을 겪는다. 일부 실시 양태에서, 생물 반응기의 밀폐, 연결 및/또는 제어 하에 배양된 세포는 14일, 10일, 9일, 8일, 7일, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일, 60시간, 48시간, 36시간, 24시간 또는 12시간 이내에 임계치 확장, 세포 수 및/또는 밀도에 도달하거나 이를 달성한다. 일부 실시 양태에서, 생물 반응기의 밀폐, 연결 및/또는 제어 하에 배양된 세포는, 예시적 및/또는 대안적인 공정에서 배양된 세포, 생물 반응기의 밀폐, 연결 및/또는 제어 하에 배양되지 않는 세포보다 임계치 증폭(expansion), 세포 수 및/또는 밀도가 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 적어도 1 배, 적어도 2 배, 적어도 3 배, 적어도 4 배, 적어도 5 배에 도달하거나 이를 달성한다.
[631] 일부 실시 양태에서, 혼합은 요동 및/또는 운동이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포는 생물 반응기와 관련하여 사용되는 용기, 예를 들어 백을 사용하여 배양된다. 일부 경우에, 생물 반응기는 움직임 또는 요동의 영향을받을 수 있으며, 이는 일부 측면에서 산소 전달을 증가시킬 수 있다. 생물 반응기의 운동은 수평축을 따라 회전하는 것, 수직축을 따라 회전하는 것, 생물 반응기의 기울어지거나 기울어진 수평 축을 따른 요동 운동 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시 양태에서, 배양의 적어도 일부는 요동(rocking)으로 수행된다. 요동 속도 및 요동 각도는 원하는 교반을 달성하도록 조정될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 요동 각도는 약 20°, 19°, 18°, 17°, 16°, 15°, 14°, 13°, 12°, 11°, 10°, 9°, 8°, 7°, 6°, 5°, 4°, 3°, 2°또는 1°이다. 특정 실시 양태에서, 요동 각도는 6 -16°이다. 다른 실시 양태에서, 요동 각도는 7-16°이다. 다른 실시 양태에서, 요동 각도는 8-12°이다. 일부 실시 양태에서, 요동 속도는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 1 12, 13, 14 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 rpm이다. 일부 실시 양태에서, 요동 속도는 4 내지 12 rpm, 예컨대 4 내지 6 rpm이다. 세포 배양 증폭(expansion)의 적어도 일부는 5 내지 15 RPM, 예컨대 6 RMP 또는 10 RPM의 속도와 같은 일정한 요동 속도에서 5°내지 10°예컨대 6°의 각도에서 요동 운동으로 수행된다.
[632] 일부 실시 양태에서, 조작된 T 세포와 같은 세포를 포함하는 조성물, 예를 들어 조작된 CD4+ T 세포 또는 조작된 CD8+ T 세포, 또는 본원에 기재된 임의의 표현형의 조작된 세포는 계면 활성제의 존재 하에 배양된다. 특정 실시 양태에서, 조성물의 세포를 배양하면, 예를 들어 혼합, 요동, 운동 및/또는 관류로 인해, 배양 동안 발생할 수있는 전단 응력(shear stress)의 양이 감소된다. 특정 실시 양태에서, 조작된 T 세포, 예를 들어 조작된 CD4+ T 세포 또는 조작된 CD8+ T 세포와 같은 세포의 조성물은, 계면 활성제와 배양되고, 적어도 50 % , 적어도 60 %, 적어도 70 %, 적어도 75 % , 적어도 80 %, 적어도 85 %, 적어도 90 %, 적어도 95 %, 적어도 99 % 또는 적어도 99.9 %의 T세포 생존, 예를 들어, 배양이 완료된 후 적어도 또는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일 또는 7일 이상 동안 생존 가능하고/하거나 괴사, 프로그램된 세포 사멸 또는 아포토시스를 겪지 않는다. 특정 실시 양태에서, 조작된 T 세포와 같은 세포의 조성물, 예를 들어 조작된 CD4+ T 세포 또는 조작된 CD8+ T 세포는 계면 활성제의 존재 하에서 배양되고, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만, 0.1% 미만 또는 0.01% 미만의 세포는, 예를 들어, 전단 또는 전단-유도 응력(shearing-induced stress)으로 인해 세포 사멸, 예를 들어 프로그램된 세포 사멸, 아포토시스 및/또는 괴사를 겪는다.
[633] 특정 실시 양태에서, 조작된 T 세포와 같은 세포의 조성물, 예를 들어 조작된 CD4+ T 세포 또는 조작된 CD8+ T 세포는, 0.1μl/ml 내지 10.0μl/ml, 0.2μl/ml 내지 2.5μl/ml, 0.5μl/ml 내지 5μl/ml, 1μl/ml 내지 3μl/ml, 또는 2μl/ml 내지 4μl/ml 의 계면활성제의 존재 하에 배양된다. 일부 실시 양태에서, 조작된 T세포와 같은 세포의 조성물, 예를 들어 조작된 CD4+ T 세포 또는 조작된 CD8+ T세포는 약 또는 적어도 0.1μl/ml, 0.2μl/ml, 0.4μl/ml, 0.6μl/ml, 0.8μl/ml, 1μl/ml, 1.5μl/ml, 2.0μl/ml, 2.5μl/ml, 5.0μl/ml, 10μl/ml, 25μl/ml, 또는 50μl/ml의 계면 활성제의 존재 하에서 배양된다. 특정 실시 양태에서, 세포의 조성물은 약 2μl/ml의 계면 활성제의 존재 또는 그 존재 하에서 배양된다.
[634] 일부 실시 양태에서, 계면 활성제는 액체 및/또는 고체의 표면 장력을 감소시키는 작용제이거나 이를 포함한다. 예를 들어, 계면 활성제는 지방 알코올 (예를 들어, 스테아릴 알코올), 폴리옥시에틸렌 글리콜 옥틸페놀 에테르 (예를 들어, Triton X-100) 또는 폴리옥시에틸렌 글리콜 소르비탄 알킬 에스테르(예를 들어, 폴리소르베이트 20, 40, 60)를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 계면 활성제는 폴리소르베이트 80 (PS80), 폴리소르베이트 20 (PS20), 폴록사머 188 (P188)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예시적인 실시 양태에서, 화학적으로 정해진 공급 매질에서 계면 활성제의 농도는 PS80의 약 0.0025% 내지 약 0.25% (v/v) 이고; PS20의 약 0.0025% 내지 약 0.25% (v/v); 또는 P188의 약 0.1% 내지 약 5.0% (w/v)이다.
[635] 일부 실시 양태에서, 계면 활성제는 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양쪽이온성(zwitterionic) 계면 활성제 또는 이에 첨가된 비이온성 계면 활성제이거나 이를 포함한다. 적합한 음이온성 계면 활성제는 알킬 설포네이트, 알킬 포스페이트, 알킬 포스포네이트, 칼륨 라우레이트, 트리에탄올아민 스테아레이트, 소듐 라우릴 설페이트, 소듐 도데실설페이트, 알킬 폴리옥시 에틸렌 설페이트, 소듐 알기네이트, 디옥틸 소듐 설포석시네이트, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜 이노신, 포스파티딜 이노시톨, 디포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜세린, 포스파티드산 및 이들의 염, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 콜산 및 기타 담즙산 (예를 들어, 콜산, 데옥시콜산, 글리코콜산, 타우로콜산, 글리코데옥시콜산) 및 이들의 염 (예를들어 소듄 데옥시 콜레이트);를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
[636] 일부 구체 예에서, 적합한 비이온성 계면 활성제는 다음을 포함한다: 글리세릴 에스테르, 폴리옥시에틸렌 지방 알코올 에테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르(폴리소르베이트), 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르, 소르비탄 에스테르, 글리세롤 모노스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 세틸 알코올, 세토 스테아릴 알코올, 스테아릴 알코올, 아릴 알킬 폴리에테르 알코올, 폴리옥시 에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중 합체 (폴록사머), 폴록사민, 메틸셀룰로스, 하이드록시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시 프로필메틸 셀룰로스, 비결정질 셀룰로스, 전분 및 전분 유도체를 포함하는 다당류, 예컨대 하이드록시에틸 스타치 (HES), 폴리비닐 알코올 및 폴리비닐피롤리돈. 특정 실시 양태에서, 비이온성 계면 활성제는 폴리옥시에틸렌 및 폴리옥시프로필렌 공중합체, 바람직하게는 프로필렌 글리콜 및 에틸렌 글리콜의 블록 공중합체이다. 이러한 중합체는 때때로 PLURONIC® F68 또는 Kolliphor® P188이라고도하는 상표명 POLOXAMER로 판매된다. 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르 중에는 알킬 사슬이 짧은 것이 포함된다. 이러한 계면 활성제의 일례는 SOLUTOL®HS 15, 폴리에틸렌-660-하이드록시스테아 레이트이다.
[637] 일부 실시 양태에서, 적합한 양이온성 계면 활성제는 천연 인지질, 합성 인지질, 4 차 암모늄 화합물, 벤즈알코늄 클로라이드, 세틸트리메틸 암모늄 브로마이드, 키토산, 라우릴 디메틸 벤질 암모늄 클로라이드, 아실 카르니틴 히드로클로라이드, 디메틸 디옥타데실 암모늄 브로마이드(DDAB), 디올레트리트리메틸 암모늄 프로판 (DOTAP), 디미리스토일 트리메틸 암모늄 프로판(DMTAP), 디메틸 아미노 에탄 카르바모일 콜레스테롤(DC-Chol), 1,2-디아실글리세로-3-(O-알킬) 포스포 콜린, O-알킬포스파티딜콜린, 알킬 피리디늄 할라이드 또는 장쇄 알킬 아민, 예를 들어, n- 옥틸아민 및 올레일 아민을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
[638] 양쪽이온성 계면 활성제는 전기적으로 중성이지만 동일한 분자 내에 국소 양전하 및 음전하를 갖는다. 적합한 양쪽이온성 계면 활성제에는 양쪽이온성 인지질이 포함되나 이에 제한되지는 않는다. 적합한 인지질은 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 디아실-글리세로-포스포에탄올아민 (예를 들어, 디 미리스토일-글리세로-포스포에탄올아민(DMPE), 디팔미토일-글리세로-포스포에탄올 아민(DPPE), 디스테아로 일-글리세로-포스포에탄올아민(DSPE) 및 디올로일릴-글리세로-포스포에탄올아민 (DOPE))을 포함한다. 음이온성 및 양쪽 이온성 인지질을 포함하는 인지질의 혼합물이 본 발명에 사용될 수 있다. 이러한 혼합물은 리소 인지질, 난(egg) 또는 대두 인지질 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 음이온성, 양쪽이온성 또는 인지질의 혼합물이든 인지질은, 염분 또는 탈염, 수소화 또는 부분 수소화 또는 천연 반합성 또는 합성일 수 있다.
[639] 특정 실시 양태에서, 계면 활성제는 폴록사머, 예를 들어 폴록사머188이다. 일부 실시 양태에서, 세포의 조성물은 0.1μl/ml 내지 10.0μl/ml, 0.2μl/ml 내지 2.5μl/ml, 0.5μl/ml 내지 5μl/ml, 1μl/ml 내지 3 μl/ml, 또는 2 μl/ml 내지 4 μl/ml의 폴록 사머의 존재 하에서 배양된다. 일부 구체 예에서, 세포의 조성물은 약 또는 적어도 0.1μl/ml, 0.2μl/ml, 0.4μl/ml, 0.6μl/ml, 0.8μl/ml, 1μl/ml, 1.5μl/ml, 2.0μl/ml, 2.5μl/ml, 5.0μl/ml, 10μl/ml, 25μl/ml, 또는 50μl/ml의 계면 활성제의 존재 하에서 배양된다. 특정 실시 양태에서, 세포의 조성물은 약 2μl/mll의 폴록 사머의 존재 하에서 배양된다.
[640] 일부 측면에서, CD4+ 및 CD8+ 세포는 증폭(expansion)되고, 일부 경우에 각각 개별적으로 증폭(expansion)되거나 함께 증폭(expansion)되어 이들이 각각 임계 양 또는 세포 밀도에 도달할 때까지 증폭(expansion)된다. 특정 실시 양태에서, 세포가 임계량, 농도 및/또는 증폭(expansion)을 달성할 때, 예를 들어 세포를 수확함으로써 배양이 종료된다. 특정 실시 양태에서, 배양은, 세포가 예를 들어 배양의 개시 또는 시작 시 세포의 밀도의 양과 관련하여 및/또는 대응하여 약 또는 적어도 1.5배 증폭(expansion), 2배 증폭(expansion), 2.5배 증폭(expansion), 3배 증폭(expansion), 3.5배 증폭(expansion), 4배 증폭(expansion), 4.5배 증폭(expansion), 5배 증폭(expansion), 6배 증폭(expansion), 7배 증폭(expansion), 8배 증폭(expansion), 9배 증폭(expansion), 10배 증폭(expansion), 또는 10배 증폭(expansion) 이상을 달성하거나 도달할 때 종료된다. 일부 실시 양태에서, 임계 증폭(expansion)은 예를 들어 배양의 개시 또는 시작 시 세포의 밀도의 양과 관련 및/또는 대응하여 4배 증폭(expansion)이다. 일부 실시 양태에서, 세포가 임계 총 세포 량, 예를 들어 임계 세포 수를 달성할 때, 배양은 예를 들어 세포를 수확함으로써 종결된다. 일부 실시 양태에서, 배양은 세포가 임계 총 핵형성 세포 (TNC) 수를 달성할 때 종료된다. 일부 실시 양태에서, 배양은 세포가 임계 생존 가능한 양의 세포, 예를 들어 임계 생존 가능한 세포 수를 달성할 때 종료된다. 일부 실시 양태에서, 임계 세포 수는 약 또는 적어도 50 x106 세포, 100 x106 세포, 200 x106 세포, 300 x106 세포, 400 x106 세포, 600 x106 세포, 800 x106 세포, 1000 x106 세포, 1200 x106 세포, 1400 x106 세포, 1600 x106 세포, 1800 x106 세포, 2000 x106 세포, 2500 x106 세포, 3000 x106 세포, 4000 x106 세포, 5000 x106 세포, 10,000 x106 세포, 12,000 x106 세포, 15,000 x106 세포 또는 20,000 x106 세포이거나, 또는 또는 생존 세포의 상기 임계 값 중 임의의 것이다.
[641] 특정 실시 양태에서, 배양은 세포가 역치 세포 수를 달성할 때 종료된다. 일부 실시 양태에서, 배양은 임계 세포 수에 달성된 후 약 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 또는 그 이상 이내에 종료된다. 특정 실시 양태에서, 배양은 임계 세포 수에 달성된 후 약 1 일에 종료된다. 특정 실시 양태에서, 임계 밀도는 약 또는 적어도 0.1 x106 cells/ mL, 0.5 x106 cells/ mL, 1 x106 cells/ mL, 1.2 x106 cells/ mL, 1.5 x106 cells/ mL, 1.6 x106 cells/ mL, 1.8 x106 cells/ mL, 2.0 x106 cells/ mL, 2.5 x106 cells/ mL, 3.0 x106 cells/ mL, 3.5 x106 cells/ mL, 4.0 x106 cells/ mL, 4.5 x106 cells/ mL, 5.0 x106 cells/ mL, 6 x106 cells/ mL, 8 x106 cells/ mL, 또는 10 x106 cells/ mL, 또는 전술한 생존 세포 임계 값 중 임의의 것이다. 특정 실시 양태에서, 배양은 세포가 임계 밀도를 달성할 때 종료된다. 일부 실시 양태에서, 배양은 임계 밀도에 달성된 후 약 6시간, 12시간, 24시간, 36시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일 또는 그 이상, 또는 그 시점 또는 그 이내에 종료된다. 특정 실시 양태에서, 배양은 역치 밀도가 달성된 후 또는 약 1 일 후에 종료된다.
[642] 일부 구조물에서, 배양의 적어도 일부는 정적 조건 하에서 수행된다. 일부 실시 양태에서, 배양 중 적어도 일부는 관류(perfusion)와 함께 수행되는데, 예를 들어, 배양동안 사용된 배지를 관용하고(perfuse out), 신선한 배지를 관류(perfuse in)한다. 일부 실시 양태에서, 방법은 공급 포트를 통한 것과 같이 신선한 배양 배지를 세포 배양액에 관류시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 관류 동안 첨가된 배양 배지는 하나 이상의 자극 제제, 예를 들어 하나 이상의 재조합 사이토카인, 예컨대 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 관류 동안 첨가된 배양 배지는 정적 배양 동안 사용된 동일한 배양 배지이다.
[643] 일부 실시 양태에서, 배양 후, 용기, 예를 들어 백은, 세포 요법을 제조, 생성 또는 생산하기위한 하나 이상의 다른 처리 단계를 수행하기위한 시스템에 재연결되며, 예를 들어, 원심 챔버를 포함하는 시스템에 재연결된다. 일부 측면에서, 배양된 세포는 배양된 세포의 제형화를 위해 백에서 챔버의 내부 공동으로 전달된다.
[644] 일부 실시 양태에서, T-세포는, 배양-개시 조성물 공급 세포, 예컨대 비분할 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), (예를 들어, 증폭(expansion)될 초기 집단에서, 결과 세포 집단이 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40개 또는 그 이상의 PBMC 피더 세포를 함유하도록)에 첨가됨으로써 증폭(expansion)되고; 배양물을 배양한다 (예를 들어, T 세포의 수를 증폭(expansion)시키기에 충분한 시간 동안). 일부 측면에서, 비분할 공급 세포는 감마-조사된 PBMC 공급 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, PBMC에는 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600 rad 범위의 감마선이 조사된다. 일부 측면에서, 공급 세포는 T 세포 집단의 첨가 전에 배양 배지에 첨가된다.
e.
조성물 및 제제
[645] 본원에 제공된 방법은 특이적 표현형 및 기능적 특성을 갖는 조작된 세포 (예를 들어, T 세포)의 산출 조성물을 생성할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 예를 들어 치료 또는 제약 조성물 또는 제제가되도록 제제화될 수 있다. 따라서, 임의의 세포 및/또는 용량의 세포, 예를 들어 약학 조성물 및 제제를 포함하는 소정의 용량 또는 이의 분획으로 투여하기위한 세포 수를 포함하는 단위 투여 형태 조성물을 포함하는 조성물 (예를 들어, 산출 조성물)이 제공된다. 제약 조성물 및 제제는 일반적으로 하나 이상의 선택적인 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 항원 수용체,예를 들어 CAR 또는 TCR로 조작된 세포의 용량은 약제학적 조성물 또는 제제와 같은 조성물 또는 제제로서 제공된다. 이러한 조성물은 제공된 방법, 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물, 예를 들어 질병, 병태 및 장애의 예방 또는 치료, 또는 검출, 진단 및 예후 방법에 따라 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 임의의 단위 용량 및/또는 본원에 기재된 임의의 단위 용량의 세포를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 일부 실시 양태에서, 조성물은 산출 조성물이다.
[646] 일부 실시 양태에서, 재조합 항원 수용체, 예를 들어 CAR 또는 TCR로 조작된 세포는 약제학적 조성물 또는 제제와 같은 조성물 또는 제제로서 제공된다. 이러한 조성물은 질병, 병태 및 장애의 예방 또는 치료 방법, 또는 검출, 진단 및 예후 방법을 포함하는 입양 세포 요법 방법에 따라 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 이러한 조성물 또는 제제는 제공된 생의학 재료 용기에 및/또는 제공된 제조 물품의 성분으로서 저장, 포함 또는 전달될 수 있다.
[647] 일부 경우에, 세포는 세포 요법의 제조, 생성 또는 생산을위한 하나 이상의 단계(예를들어 원심 챔버 및/또는 폐쇄 시스템에서 수행)로 처리되고/되거나 조작된 세포는 배양 및 증폭(expansion), 및/또는 기술된 바와 같은 하나 이상의 다른 처리 단계 전 또는 후에 제공된 형질 도입 처리 단계로부터 생성된 유전자 조작된 세포의 제형과 같은 세포의 제형을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 세포는 단일 용량 투여 또는 다중 용량 투여와 같은 투여량으로 제형화될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포의 제제화와 관련된 제공된 방법은, 형질 전환된 세포, 예컨대 상기 기재된 처리 단계를 사용하여 형질 도입 및/또는 증폭(expansion)된 세포를 폐쇄 시스템에서 처리하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제제화된 세포는 생체 의학 재료 용기, 예를 들어 본원에 제공된 바이알로 전달되거나 도입 될 수 있다.
[648] 특정 실시 양태에서, 조작 및 배양된 T 세포와 같은 하나 이상의 세포 조성물 (예를 들어, 투입 조성물)이 제제화된다. 특정 실시 양태에서, 조작 및 배양된 T 세포와 같은 하나 이상의 세포 조성물은 하나 이상의 조성물이 조작 및/또는 배양된 후에 제제화된다.
[649] 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 처리 단계에 의해 생성된 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포와 같은 T 세포가 제제화된다. 일부 측면에서, 복수의 조성물은 개별적으로 제조, 생산 또는 생성되며, 각각은 예컨대, 임의로 특정 시간 내에 개별적으로 또는 독립적으로 투여하기 위해 대상체로부터 상이한 집단 및/또는 아형의 세포를 함유한다. 예를 들어, 상이한 집단 또는 아형의 세포를 함유하는 조작된 세포의 개별 제제는 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포, 및/또는 각각 CD8+ 및 CD4+ 농축된 집단, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작 된 세포를 개별적으로 포함하는 CD4+ 및/또는 CD8+ T세포를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 조성물은 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된 CD4+ T세포와 함께 제제화된다. 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 조성물은 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된 CD8+ T 세포와 함께 제제화된다. 일부 실시 양태에서, 용량의 투여는 CD8+ 세포의 용량 또는 CD4+ T 세포의 용량을 포함하는 제1 조성물의 투여 및 다른 용량의 CD4+ T세포 및 CD8+ 세포를 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 용량의 CD8+ T세포 또는 용량의 CD4+ T세포를 포함하는 제 1 조성물은 다른 용량의 CD4+ T세포 및 CD8+ T 세포를 포함하는 제 2 조성물 전에 투여된다. 일부 실시 양태에서, 용량의 투여는 용량의 CD8+ T세포 및 용량의 CD4+ T세포를 모두를 포함하는 조성물의 투여를 포함한다.
[650] 일부 실시 양태에서, 세포(예를 들어, 조작된 세포)는 예를 들어 CCR7 또는 CD27 발현과 같은 원하는 표현형의 하나 이상의 마커의 표면 발현에 기초하여 제제화 이전에 생산 공정의 끝에서 또는 근처에서 농축되거나 분류되며, 예를 들어, 투여된 치료 조성물 중 적어도 특정 백분율(예컨대, 적어도 또는 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%) 또는 수의 세포(또는 이의 서브세트)는 이러한 마커에 대해 양성이다.
[651] 특정 실시 양태에서, 조작된 및 배양된 T 세포와 같은 하나 이상의 세포 조성물 (예를 들어, 산출 조성물)은 2개의 별도의 조성물, 예를 들어 별도의 조작된 및/또는 배양된 세포의 조성물이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 2개의 별개의 세포 조성물, 예를 들어 동일한 생물학적 샘플로부터 선택, 단리 및/또는 농축되고 별도로 조작되고 별도로 배양된 2개의 별개의 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 조성물이 별도로 제형 화된다. 특정 실시 양태에서, 2개의 별개의 조성물은 조작된 및/또는 배양된 CD4+ T 세포의 조성물과 같은 CD4+ T 세포의 조성물을 포함한다. 특정 실시 양태에서, 2 개의 별개의 조성물은 조작된 및/또는 배양된 CD8+ T 세포의 조성물과 같은 CD8+ T 세포의 조성물을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조작된 및 배양된 CD4+ T 세포 및 조작된 및 배양된 CD8+ T 세포의 개별 조성물과 같은 2 개의 개별 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 조성물이 별도로 제제화된다. 일부 실시 양태에서, 단일 세포 조성물이 제형화된다. 특정 실시 양태에서, 단일 조성물은 조작된 및/또는 배양된 CD4+ T 세포의 조성물과 같은 CD4+ T 세포의 조성물이다. 일부 실시 양태에서, 단일 조성물은 제제화 전에 별도의 조성물로부터 조합된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 조성물이다.
[652] 일부 실시 양태에서, 조작 및 배양된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 개별 조성물 (예를 들어, 산출 조성물)과 같은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 개별 조성물은 단일 조성물로 조합되어 제형화된다. 특정 실시 양태에서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 별도의 제제화된 조성물은 제제화가 수행되고/되거나 완료된 후에 단일 조성물로 조합된다. 특정 실시 양태에서, 조작되고 배양된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 개별 조성물과 같은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 개별 조성물은 개별 조성물로서 개별적으로 제형화된다.
[653] 일부 실시 양태에서, 세포는 본원에 제공된 생물 의학 재료 용기 내의 임의의 바이알과 같은, 바이알과 같은 용기로 제형화될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포는 배양 중에 달성된 임계 세포 수, 밀도 및/또는 증폭(expansion) 이후 0일 내지 10일, 0일 내지 5일, 2일 내지 7일, 0.5일 내지 4일, 또는 1일 내지 3일에 제형화된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 배양 동안, 임계 세포 수, 밀도 및/또는 증폭(expansion)이 달성된 후 약 12시간, 18시간, 24시간, 1일, 2일, 또는 3일에 또는 그 이내에 제형화된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 배양 동안, 임계 세포 수, 밀도 및/또는 증폭(expansion)이 달성된 후 약 1 일에 또는 그 이내에 제제화된다.
[654] 일부 실시 양태에서, 세포는 제약상 허용되는 완충액으로 제제화되는데, 이는 일부 측면에서 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 상기 공정은 대상체에게 투여하기 위해 배지를 제약상 허용되거나 바람직한 배지 또는 제제 완충제로 배지를 교환하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 공정 단계는 하나 이상의 임의의 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함할 수있는 제약상 허용되는 완충액에서 세포를 대체하기 위해 형질도입 및/또는 증폭(expansion) 된 세포를 세척하는 것을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 이러한 약제학적 형태의 예는 세포 및 조성물을 대상체에게 투여하기에 적합한 형태와 관련하여 하기에 기술될 수 있다. 일부 실시 양태에서 약학 조성물은 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 효과적인 양, 예를 들어 치료적 유효 또는 예방적 유효량으로 세포를 함유한다.
[655] 용어 "약제학적 제제"는 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록하는 형태이고, 제제가 투여 될 수있는 대상체에 허용 할 수없는 독성을 갖는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
[656] "약제학적으로 허용되는 담체"는 활성 성분 이외의 약제학적 제형의 성분을 나타내며, 이는 대상체에게 무독성이다. 약제학적으로 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 보존제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
[657] 일부 측면에서, 담체의 선택은 특정 세포 및/또는 투여 방법에 의해 부분적으로 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 존재한다. 예를 들어, 약학 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 보존제는 예를 들어 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산 나트륨 및 염화 벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 둘 이상의 방부제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 이들의 혼합물은 전형적으로 총 조성물의 중량을 기준으로 약 0.0001% 내지 약 2%의 양으로 존재한다. 담체는 예를 들어 Remington 의 제약 과학 16판, Osol, A. Ed. (1980)에 기재된다. 제약상 허용되는 담체는 일반적으로 사용된 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산과 같은 완충제; 아스코르브 산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대, 옥타데실 디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3- 펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린과 같은 단백질; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리 돈; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 슈크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염 형성 반대 이온; 금속 착물 (예를 들어 Zn-단백질 착물); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)과 같은 비이온성 계면 활성제.
[658] 일부 측면에서 완충제가 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는 예를 들어 시트르산, 시트르산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2 종 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 총 조성물의 약 0.001 중량 % 내지 약 4 중량 %의 양으로 존재한다. 투여 가능한 제약 조성물의 제조 방법이 공지되어있다. 예시적인 방법은 예를 들어 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21판. (May 1, 2005).에 더욱 구체적으로 기재되어있다.
[659] 제제는 수용액을 포함할 수 있다. 제제 또는 조성물은 또한 세포로 치료되는 특정 적응증, 질병 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분, 바람직하게는 세포에 상보적인 활성을 갖는 활성 성분을 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성은 서로 악영향을 미치지 않는다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합하여 적합하게 존재한다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 약학적 조성물은 다른 약학적 활성제 또는 약물, 예컨대 화학 요법제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드 록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴 및/또는 빈크리스틴을 더 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 작용제 또는 세포는 염, 예를 들어 제약상 허용되는 염의 형태로 투여된다. 적합한 약제학적으로 허용되는 산 부가 염은 무기산(mineral acids)으로 부터 유래된 것, 예를들어, 염산(hydrochloric), 브롬화수소산(hydrobromic), 인산(phosphoric), 메타인산(metaphosphoric), 질산(nitric) 및 황산, 및 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜산, 글루콘산, 숙신산 및 아릴 술폰산과 같은 유기산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산을 포함한다.
[660] 일부 실시 양태에서 조성물은 멸균 액체 제제, 예를 들어 등장성 수용액, 현탁액, 유제, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 조성물은, 예를 들어 물, 식염수, 포스페이트 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다. 멸균 주사용 용액은 적절한 담체, 희석제 또는 부형제, 예컨대 멸균수, 생리 식염수, 글루코오스, 덱스트로스 등과의 혼합물과 같은 용매에 세포를 혼입시킴으로써 제조될 수 있다. 조성물은 투여 경로 및 원하는 제제에 따라 습윤제, 분산제 또는 에멀션화제(예를 들어 메틸셀룰로오스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 향상 첨가제, 보존제, 향미제 및/또는 색소와 같은 보조 물질을 함유할 수 있다. 적절한 준비를 준비하기 위해 일부 측면에서 표준 텍스트를 참조할 수 있다.
[661] 항균 보존제, 항산화제, 킬레이트제 및 완충제를 포함하여 조성물의 안정성 및 무균성을 향상시키는 다양한 첨가제가 첨가될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 및 소르브산에 의해 보장될 수 있다. 주사용 약학 형태의 흡수를 연장시키는 것은 흡수 지연제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 사용함으로써 야기될 수 있다.
[662] 일부 실시 양태에서, 제제 완충제는 동결 보존제를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 세포는 1.0 % 내지 30 % DMSO 용액, 예컨대 5 % 내지 20 % DMSO 용액 또는 5 % 내지 10 % DMSO 용액을 함유하는 동결 보존제 용액으로 제제화된다. 일부 실시 양태에서, 동결 보존 용액은 예를 들어 20 % DMSO 및 8 % 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS, 또는 다른 적합한 세포 동결 배지이거나 이를 함유한다. 일부 실시 양태에서, 동결 보존 용액은 예를 들어 적어도 또는 약 7.5 % DMSO이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 상기 공정 단계는 형질 보존된 용액에서 세포를 대체하기 위해 형질 도입 및/또는 증폭(expansion)된 세포를 세척하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포는 최종 농도가 약 12.5%, 12.0%, 11.5%, 11.0%, 10.5%, 10.0%, 9.5%, 9. 0%, 8.5%, 8.0%, 7.5%, 7.0%, 6.5%, 6.0%, 5.5%, 또는 5.0% DMSO, 또는 1% 내지 15%, 6% 내지 12%, 5% 내지 10%, 또는 6% 내지 8% 인 DMSO 배지 및/또는 용액에서 동결, 예를 들어 동결 보존 또는 동결 보호된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 최종 농도가 약 5.0%, 4.5%, 4.0%, 3.5%, 3.0%, 2.5%, 2.0%, 1.5%, 1.25%, 1.0%, 0.75%, 0.5%, 또는 0.25% HSA, 또는 0.1% 내지 5%, 0.25% 내지 4%, 0.5% 내지 2%, 또는 1% 내지 2% HSA인 배지 및/또는 용액에서 동결, 예를 들어 동결 보존 또는 동결 보호된다.
[663] 특정 실시 양태에서, 자극된, 조작된 및/또는 배양된, 농축된 T 세포, 예를 들어 T 세포의 조성물은 제제화, 동결 보존된 후, 예를 들어 제공된 생체 의학 재료 용기에 일정 시간 동안 저장된다. 특정 실시 양태에서, 제형화된 동결 보존된 세포는 세포가 주입을 위해 방출될 때까지 저장된다. 특정 실시 양태에서, 제형화된, 동결 보존된 세포는 1 일 내지 6 개월, 1개월 내지 3 개월, 1 일 내지14 일, 1 일 내지 7 일, 3 일 내지 6 일, 6 개월 내지 12 개월 또는 12 개월 이상 동안 저장된다. 일부 실시 양태에서, 세포는 동결 보존되고, 약 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일 또는 7 일 또는 그 미만 동안 냉동 보존되고 저장된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 저장 후 해동 및 대상체에게 투여된다. 특정 실시 양태에서, 세포는 약 5 일 동안 저장된다.
[664] 일부 실시 양태에서, 제제는 배양된 또는 증폭(expansion)된 세포와 같은 세포의 세척, 희석 또는 농축을 포함하는 하나 이상의 처리 단계를 사용하여 수행된다. 일부 실시 양태에서, 가공은 소정의 용량 또는 이의 분획으로 투여하기위한 세포 수를 포함하는 단위 용량 형태 조성물과 같은 원하는 농도 또는 수로 세포의 희석 또는 농도를 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 처리 단계는 용량(volume) 감소를 포함하여 원하는대로 세포의 농도를 증가시킬 수 있다. 일부 실시 양태에서, 처리 단계는 용량(volume)-부가를 포함하여 원하는대로 세포의 농도를 감소시킬 수 있다. 일부 실시 양태에서, 처리는 형질 도입 및/또는 증폭(expansion)된 세포에 용량(volume)의 제형 완충제를 첨가하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제형 완충제의 용량(volume)은 10mL 내지 1000mL 또는 약10mL 내지 약1000mL, 예컨대 적어도 또는 약 50mL, 100mL, 200mL, 300mL, 400mL, 500 mL, 600 mL, 700 mL, 800 mL, 900 mL 또는 1000 mL이다.
[665] 일부 실시 양태에서, 세포는 용기, 예를 들어 백 또는 원심 챔버에서 자극된 조작된 및/또는 배양되는 것과 같이 배양된다. 일부 측면에서, 용기는 제1 용기이고, 배양된 세포는 제1 용기,예를 들어, 제1 용기에 작동 가능하게 연결된 생의학 재료 용기와 같은 제2 용기에 대한 백 또는 원심 챔버로부터 발현 또는 전달된다. 일부 실시 양태에서, 생의학 재료 용기는, 통합 및 작동 가능한 연결을 위해 구성되고/거나 제1 용기, 예를 들어 이전 처리 단계 중 하나 이상에 사용되는 백 또는 원심 챔버에 통합되거나 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시 양태에서, 생의학 재료 용기는 산출 라인 또는 산출 위치에서 제1 용기,예를들어,백 또는 원심 챔버에 연결된다. 경우에 따라 제1 용기, 예를들어 백 또는 원심 챔버는, 입구 튜브에서 생체 의학 용기의 바이알에 연결된다.
[666] 일부 실시 양태에서, 세포 조성물을 제형화하기위한 이러한 처리 단계는 폐쇄 시스템에서 수행된다. 이러한 처리 단계의 예시는 Sepax 또는 Sepax 2 세포 처리 시스템과 함께 사용하는 것을 포함하여 Biosafe SA에서 생산 및 판매하는 원심 챔버와 같은 세포 처리 시스템과 관련된 하나 이상의 시스템 또는 키트와 함께 원심 챔버를 사용하여 수행될 수 있다. 예시적인 시스템 및 공정는 국제 공개 번호 WO2016/073602에 기재되어있다. 일부 실시 양태에서, 상기 방법은 제제화된 조성물을 원심 챔버의 내부 공동으로부터 발현 또는 전달시키는 것을 포함하고, 이는 전술한 임의의 상기 실시 양태에서 제형 완충제, 예컨대 제약상 허용되는 완충제에서 제제화된 세포의 생성된 조성물이다. 일부 실시 양태에서, 제제화된 조성물의 발현 또는 전달은, 원심 챔버와 폐쇄 시스템의 일부로서 작동 가능하게 연결된 본원에 기술된 생체 의학 용기의 바이알과 같은 용기에 대한 것이다. 일부 실시 양태에서, 생체 의학 재료 용기는 하나 이상의 처리 단계를 수행하는 폐쇄 시스템 또는 장치에 통합 및/또는 작동 가능한 연결을 위해 구성되거나 및/또는 통합되거나 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시 양태에서, 생체 의학 재료 용기는 출력 라인 또는 출력 위치에서 시스템에 연결된다. 일부 경우에, 폐쇄 시스템은 유입 튜브에서 생체 의학 용기의 바이알에 연결된다. 본원에 기재된 생체 의학 재료 용기와 함께 사용하기위한 예시적인 폐쇄 시스템은 Sepax® 및 Sepax® 2 시스템을 포함한다.
[667] 일부 실시 양태에서, 상기 조성물은 제1 용기, 예를들어 원심 챔버 또는 세포 처리 시스템로부터, 제형화된 조성물의 발현을 위해 연결될 수 있는 하나 또는 복수의 용기가 있는 포트, 예를 들어 생의학 재료 용기와 함께 튜빙 라인의 각 끝에 연결된 멀티-웨이 튜빙 매니폴드가 포함된 멀티-포트 출력 키트를 통해, 생체 의학 용기로 전달될 수 있다. 일부 측면에서, 원하는 개수 또는 복수의 그러한 바이알들은 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8 개 이상과 같이 하나 이상, 일반적으로 둘 이상의 멀티-포트 출력의 포트들에 살균적으로 연결될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 용기, 예를 들어 생의학 재료 용기는 포트 또는 모든 포트보다 적은 포트에 부착 될 수있다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 시스템은 산출 조성물의 생체 의학 용기의 복수의 바이알로의 발현에 영향을 줄 수 있다.
[668] 일부 측면에서, 세포는 단일 단위 투여 용량 또는 다중 투여 용량과 같은 투여 용량으로 하나 이상의 복수의 산출 용기, 예를 들어 생체 의학 용기의 바이알에 발현되거나 전달될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 생체 의학 용기의 바이알은 각각 주어진 용량 또는 이의 분획으로 투여하기위한 다수의 세포를 함유할 수 있다. 따라서, 일부 측면에서, 각각의 바이알은 투여를위한 단일 단위 용량을 함유할 수 있거나 또는 복수의 바이알 중 하나 이상, 예컨대 바이알 중 2 개 또는 바이알 중 3 개가 함께 투여 용량을 구성하도록 원하는 용량의 분획을 함유할 수 있다.
[669] 따라서, 본원에 기술된 생의학 재료 용기 내의 바이알은 일반적으로 투여될 세포, 예를 들어 하나 이상의 단위 용량을 함유한다. 단위 용량은 대상체에게 투여될 세포의 양 또는 수 또는 투여될 세포의 수(또는 그 이상)의 2 배일 수 있다. 이는 대상에게 투여될 세포의 최저 용량 또는 최저 가능 용량일 수 있다.
[670] 일부 실시 양태에서, 각각의 바이알은 개별적으로 단위 용량의 세포를 포함한다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 용기 각각은 동일하거나 대략 또는 실질적으로 동일한 수의 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 각각의 단위 용량은 조작된 세포, 총 세포,T 세포 또는 PBMC를 적어도 또는 약 1 x 106, 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 2.5 x 108, or 5 x 108 개로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 각각의 단위 용량은 조작된 세포,총 세포,T 세포 또는 PBMCs를 적어도 또는 약 2.5 x 107, 약 5.0 x 107, 약 1.5 x 108, 약 3.0 x 108, 약 4.5 x 108,약 8.0 x 108 또는 약 1.2 x 109 개로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 각각의 단위 용량은 조작된 세포,총 세포,T 세포 또는 PBMCs를 약 2.5 x 107, 약 5.0 x 107, 약 1.5 x 108, 약 3.0 x 108, 약 4.5 x 108,약 8.0 x 108 또는 약 1.2 x 109 개 또는 그 이하로 포함한다. 일부 측면에서, 바이알에 함유될 수있는 예시적인 용량의 세포는 본원, 예를 들어 섹션 IV에 기술된 임의의 용량을 포함한다. 일부 측면에서, 대상체에게 투여될 수있는 예시적인 용량의 세포는 본원,예를 들어 섹션 IV에 기재된 임의의 용량을 포함한다.
[671] 일부 실시 양태에서, 각각의 용기에서 제제화된 세포 조성물의 용량(volume)은 10mL 내지 100mL, 예컨대 적어도 또는 약 20mL, 30mL, 40mL, 50mL, 60mL, 70mL, 80mL, 90 mL 또는 100 mL이다. 일부 실시 양태에서, 바이알의 세포는 동결 보존될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 바이알은 추가 사용까지 액체 질소에 저장될 수 있다.
[672] 일부 실시 양태에서, 상기 방법에 의해 생성된 이러한 세포 또는 이러한 세포를 포함하는 조성물은 질환 또는 병태를 치료하기 위해 대상체에게 투여된다. 일부 실시 양태에서 약학 조성물은 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하는데 효과적인 양, 예를 들어 치료적 유효 또는 예방적 유효량으로 작용제 또는 세포를 함유한다. 일부 실시 양태에서 치료 또는 예방 효능은 치료 대상의 주기적 평가에 의해 모니터링된다. 수일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 병태에 따라, 원하는 질환 증상의 억제가 발생할 때까지 치료가 반복된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 바람직한 투여량은 조성물의 단일 일시 투여, 조성물의 다중 일시 투여 또는 조성물의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
[673] 상기 작용제 또는 세포는 임의의 적합한 수단, 일시 주입(bolus infusion), 주사, 예를 들어 정맥 내 또는 피하 주사, 안구 내 주사, 안구 주위 주사, 망막 하 주사, 유리 체내 주사, 트랜스-사이막(trans-septal) 주사, 공막 내 주사, 맥락막 내 주사, 전방 내 주사, 결막 하 주사(subconjectval injection), 결막 하 주사(subconjuntival injection), 서브 테논 주사, 안구 뒤쪽의 주입, 안구 주위의 주입, 또는 후부 점액 전달(posterior juxtascleral delivery)에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 이들은 비경구, 폐내 및 비강 내, 및 국소 치료를 위해 필요한 경우 병변 내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 주어진 용량은 세포 또는 조성물의 단일 일시 투여에 의해 투여된다. 일부 실시 양태에서, 이는 예를 들어 3 일 이하의 기간 동안 세포 또는 작용제의 다수의 일시 투여 또는 세포 또는 작용제의 연속 주입 투여에 의해 투여된다.
[674] 질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 작용제의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 과정, 세포가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 치료, 대상체의 임상 이력 및 세포에 대한 반응, 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 일부 실시 양태에서 조성물은 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 대상에게 적합하게 투여된다.
[675] 세포 또는 작용제는 표준 투여 기술, 제제 및/또는 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 저장 및 투여를위한 주사기 및 바이알과 같은 제형 및 장치가 제공된다. 세포와 관련하여, 투여는 자가 또는 이종일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응성 세포 또는 전구체는 하나의 대상체로부터 수득될 수 있고, 동일한 대상체 또는 상이한 양립 가능한 대상체에게 투여될 수 있다. 말초 혈액 유래 면역 반응성 세포 또는 그의 자손 (예를 들어, 생체 내, 생체 외 또는 시험 관내 유래된)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사 또는 비경구 투여를 비롯한 국소 주사를 통해 투여 될 수 있다. 치료학적 조성물 (예를 들어, 유전자 변형 면역 반응성 세포 또는 신경 독성 증상을 치료 또는 개선하는 작용제를 함유하는 약제학적 조성물)을 투여할 때, 이는 일반적으로 단위 투여량 주사 가능한 형태(용액, 현탁액, 유제)로 제형화 될 것이다.
[676] 제형은 경구, 정맥 내, 복강 내, 피하, 폐, 경피, 근육 내, 비강 내, 협측, 설하 또는 좌약 투여용 제형을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 작용제 또는 세포 집단은 비경구 투여된다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 정맥 내, 근육 내, 피하, 직장, 질 및 복강 내 투여를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 작용제 또는 세포 집단은 정맥 내, 복강 내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 사용하여 대상체에게 투여된다.
[677] 일부 실시 양태에서 조성물은 멸균 액체 제제, 예를 들어 등장성 수용액, 현탁액, 유제, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 제제는 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조하기가 더 쉽다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하는 것이 다소 더 편리하다. 한편, 점성 조성물은 특정 조직과 더 긴 접촉 기간을 제공하기 위해 적절한 점도 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어 물, 식염수, 포스페이트 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
[678] 멸균 주사용 용액은 적절한 담체, 희석제 또는 부형제, 예컨대 멸균수, 생리 식염수, 글루코오스, 덱스트로스 등과의 혼합물과 같은 용매에 작용제 또는 세포를 혼입시킴으로써 제조될 수 있다.
[679] 생체 내 투여에 사용되는 제제는 일반적으로 멸균성이다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
1. 산출 조성물의 특징
[680] 제공된 실시 양태 중에는 유전자 조작 세포를 함유하는 세포 조성물, 예컨대 산출 조성물의 제조 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 산출 조성물은 본원에 기재된 임의의 것과 같은 투입 조성물의 유전자 조작에 따라 생성될 수 있다. 특정 실시 양태에서, 본원에 제공된 방법은 특정 표현, 특징 및/또는 특성, 예를 들어 세포 표현형, 예를 들어, 표면 마커의 존재 및/또는 발현 및/또는 투여용 조성물에서 세포의 표면 마커의 발현의 부재 또는 부재를 갖는 조작된 세포를 함유하는 산출 세포 조성물을 생성하기 위해 투입 조성물로부터 세포를 유전자 조작하는 하나 이상의 단계를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 덜 분화된 세포 표현형과 관련되거나 이를 나타내는 마커 및/또는 메모리 세포 아형과 관련되거나 이를 나타내는 마커를 포함하는, 특정 세포 표현형과 관련된 하나 이상의 마커를 발현, 예를 들어, 세포 표면에서 발현하거나, 또는 발현하지 않는 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 산출 조성물의 세포는, 예를 들어, 본원에 기재된 자극에 대한 반응으로, 덜 분화 된 세포 표현형과 관련되거나 이를 나타내는 사이토카인 및/또는 기억 세포 아형과 관련되거나 또는 이를 나타내는 사이토카인을 포함하는 하나 이상의 사이토카인을 생성하는 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 본원에 제공된 방법은 질환의 치료에 유용한 산출 조성물을 생성한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물, 또는 제제, 치료 조성물 또는 이로부터 제제화된 제약 조성물은 무진행 생존 및/또는 지속적인 반응과 상관 관계가있다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물, 또는 제제, 치료 조성물, 또는 이로부터 제제화된 제약 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 질환 부담이 높고/거나 낮은 환자에서 무진행 생존 및/또는 지속적인 반응과 상관 관계가있다.
[681] 특정 실시 양태에서, 본원에 제공된 방법은 출발 및/또는 투입 조성물로부터 세포를 유전자 조작하여 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포의 정해진 비율 및/또는 조성물의 세포의 다른 서브세트에 대한 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포의 정해진 비율을 갖는 결과 및/또는 산출 세포 조성물을 생성하는 하나 이상의 단계를 포함한다.
[682] 특정 실시 양태에서, 본원에 제공된 방법은 출발 및/또는 투입 조성물로부터 세포를 유전자 조작하여 세포, 예를 들어 IL-2, TNF-알파 또는 IFN-감마를 생산하는 CD4+ 세포의 백분율을 갖는 결과/또는 산출 세포 조성물을 생성하기위한 하나 이상의 단계를 포함한다.
[683] 특정 실시 양태에서, 투입 조성물의 함량, 기질(make-up) 및/또는 구성은 산출 세포 조성물의 함량, 기질 및/또는 구성과 관련, 제어, 대응 및/또는 관련된다. 특정 실시 양태에서, 투입 조성물에서, 덜 분화된 세포 표현형과 관련된 또는 이를 나타내는 마커 및/또는 메모리 세포 아형과 관련된 또는 이를 나타내는 마커를 포함하여, 특정 세포 표현형과 관련된 하나 이상의 마커를 발현하는 세포의 양, 부분, 백분율, 수, 용량(volume) 당 수, 중량 당 수 및/또는 비율은, 산출 세포 조성물의 내용, 구성 및/또는 기질과 관련, 제어, 대응 및/또는 관련한다. 특정 실시 양태에서, 특정 세포 표현형과 관련된 하나 이상의 마커를 발현하는 CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 양, 부분, 수, 용량(volume) 당 수, 및/또는 비율, 투입 조성물에서 기억 세포 아형과 관련되거나 이를 나타내는 덜 분화된 세포 표현형 및/또는 마커는, 산출 세포 조성물의 의 내용, 기질 및/또는 구성과 관련, 제어, 대응 및/또는 관련한다. 일부 측면에서, 투입 조성물 중 세포의 하나 이상의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA의 발현의 발현 또는 부재는, 예를 들어, 유전자 조작 후, 재조합 수용체를 발현하기 위해, 산출 조성물에서 세포의 하나 이상의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA의 발현의 발현 또는 부재와 상관 관계가있다. 따라서, 일부 측면에서, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA 중 하나 이상을 발현하거나 발현하지 않는 투입 조성물 중 세포의 수, 빈도 및/또는 백분율은, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA 중 하나 이상을 발현하거나 발현하지 않는 산출 조성물에서 재조합 수용체-발현 조작된 세포의 수, 빈도 및/또는 백분율과 관련되고/있거나 이를 나타내는 것이다. 일부 측면에서, 투입 조성물의 세포에서 아폽토틱 마커 (예를 들어, 활성화된 카스파제3 또는 아넥신V)의 발현 부재는, 산출 조성물 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 단위 용량으로 투여되는 제제, 치료 조성물, 제약 조성물)의 투여 후 무진행 생존 및/또는 지속적인 반응과 상관 관계가 있다. 따라서, 일부 측면에서, 아폽토틱 마커(예를 들어, 활성화된 카스파제3, 아넥신 V)를 발현하지 않는 투입 조성물 중 세포의 수, 빈도 및/또는 백분율은 질병을 치료하는 유용한 산출 조성물과 관련되어 있다.
[684] 일부 측면에서, 산출조성물은 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포에 대한 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포의 정해진 비율, 및/또는 조성물의 다른 세포 서브세트에 대한 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포의 정해진 비율을 포함한다.
[685] 일부 실시 양태에서, 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포에 대한 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+,수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포의 정해진 비율; 또는 조성물의 다른 세포 서브세트에 대한 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포의 정해진 비율을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 아폽토틱 마커 (예를 들어, 카스파제 3, 아넥신 V)를 발현하지 않는 세포를 포함한다.
[686] 일부 실시 양태에서, 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포에 대한 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포의 정해진 비율은 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 3:1 또는 대략1:2 내지 2:1로, 수용체+/CD8+/CCR7+: 수용체+/CD4+/CCR7+; 수용체+/CD8+/CD27+: 수용체+/CD4+/CD27+; 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+: 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+; 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-: 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+: 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포의 정의 비는 아폽토 시스의 마커 (예를 들어, 카스파제 3, 아넥신 V)를 발현하는 세포를 포함하지 않는다.
[687] 일부 실시 양태에서, 다른 세포조성물의 서브세트에 대한 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포의 정해진 비율은, 투입 조성물의 전체 세포의 적어도 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% ,또는 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- and/or 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+인 산출 조성물에서 전체 수용체-발현 세포(수용체+ 세포)의 약 15% 내지 90%, 약 20% 내지 80%, 약 30% 내지 70%, 또는 약 40% 내지 60%이다. 일부 실시 양태에서, 다른 조성물 세포의 서브세트에 대한 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+ 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+의 정해진 비율은, 산출 조성물의 전체 세포 중 적어도 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%를 포함하고, 또는 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+ 및/또는수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+인 산출조성물에서 재조합-발현 세포의 약15% 내지 90%, 약 20% 내지 80%, 약 30% 내지 70%, 또는 약 40% 내지 60%이다.
[688] 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 산출 조성물은 조작된 세포(예를 들어, 조성물 중 T 세포)의 총 수, 또는 아폽토틱 마커에 대해 음성 (예 : 카스파제-3, 아넥신V)인 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 조작된 세포 (예를 들어, T 세포)의 총 수의 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 아포토시스의 마커는 활성화된 카스파제3이다. 일부 실시 양태에서, 아포토시스의 마커는 아넥신V이다.
[689] 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 IL-2, IFN-감마 및/또는 TNF-알파인 하나 이상의 사이토카인을 생성할 수 있는 조작된 T 세포와 같은 세포, 예를 들어 T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 IL-2를 생성할 수있는 CD4+/CAR+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 TNF-알파를 생성할 수 있는 CD4+/CAR+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 IL-2, TNF-알파 및 IFN-감마를 생성할 수있는 CD4+/CAR+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 IL-2 및 TNF- 알파를 생성 할 수있는 CD4+/CAR+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 IL-2 및 IFN-감마를 생성 할 수있는 CD4+/CAR+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 TNF-알파를 생성할 수 있는 CD8+/CAR+ 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 TNF-알파 및 IFN-감마를 생성할 수 있는 CD8+/CAR+ 세포를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 산출 조성물은 인터루킨 2 (IL-2) 및/또는 TNF- 알파로부터 선택된 사이토카인을 생산할 수 있는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 CD4 T 세포와 같은 CD4+ T 세포 총 수의 적어도 또는 약 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 CD4 T 세포와 같은 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% 또는 그 이상을 포함하고, 이는 인터페론-감마 (IFN- 감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인을 생산하기위한 다작 용성이다.
[690] 특정 실시 양태에서, 본원에 제공된 방법은 유전자 조작된 세포, 예를 들어 산출 세포 조성물을 함유하는 세포의 조성물을 생성 또는 생산한다. 특정 실시 양태에서, 산출 세포 조성물은 유전자 조작 세포의 일부 또는 모든 단계로부터 생성된 세포 조성물이다. 특정 실시 양태에서, 산출 세포 조성물은 입력 세포 조성물의 유전자 조작 세포의 과정으로부터 생성된다. 특정 실시 양태에서, 공정은 세포, 예컨대 입력 세포 조성물로부터 수득된 세포를 활성화, 형질 전환 또는 형질 감염, 증폭(expansion) 및/또는 수확하기위한 하나 이상의 단계를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 산출 세포 조성물은 유전자 조작된 세포를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 산출 세포 조성물의 세포는 유전자 조작의 공정을위한 모든 단계를 거쳤다.
[691] 일부 실시 양태에서, 산출 세포 조성물은 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하는 세포를 함유하고, 이에 의해 이러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현시킨다. 일부 실시 양태에서, 핵산은 이종성, 즉, 세포로부터 얻은 세포 또는 샘플, 예컨대 다른 유기체 또는 세포로부터 얻은 것과 같이 일반적으로 존재하지 않으며, 이는 예를 들어, 조작되고있는 세포 및/또는 그러한 세포가 유래된 유기체에서 통상적으로 발견되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 핵산은 자연적으로 발견되지 않는 핵산과 같이 자연적으로 발생하지 않으며, 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 코딩하는 핵산의 키메라 조합을 포함하는 핵산을 포함한다.
[692] 일부 실시 양태에서, 산출 세포 조성물은 유전자 조작된 세포를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 산출 세포 조성물은 조작된 T 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 조작된 T 세포는 조작된 CD4+ T 세포 및 조작된 CD8+ T 세포를 포함한다. 특정 실시 양태에서 산출 세포 조성물은 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% , 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 100% 또는 약 100% 의 조작된 T 세포를 함유하거나 포함한다. 특정 실시 양태에서, 조작된 세포는 재조합 수용체를 발현한다. 특정 실시 양태에서 산출 세포 조성물은 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% , 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 적어도 99.5%, 적어도 99.9%, 또는 100% 또는 약 100% 의 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하거나 포함한다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 TCR 또는 CAR이다. 특정 실시 양태에서, 재조합 수용체는 CAR이다.
[693] 일부 측면에서, 상기 방법은 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기위한 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 단위 용량은 산출 조성물의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 측면에서, 산출 조성물의 전부 또는 일부는 대상체에게 투여하기위한 단위 용량으로서 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 방법은 또한 산출 조성물의 전부 또는 일부를 선택하고, 임의로 투여를위한 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해 다른 용액과 조합하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 제공된 실시 양태는, 하나 이상의 단위 용량의 세포 조성물 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량(volume)을 결정하는 것을 포함하고, 단위 용량은 본원에 기술된 제조 물품에 함유되고/되거나, 예를 들어 치료 목적을 위해 대상체에게 투여될 수 있도록 한다. 일부 측면에서, 단위 용량은 특정 표현형을 갖는 생물학적 활성 조작된 T 세포의 수에 기초하고, 및/또는 특정 표현형을 갖는 생물학적 활성 조작 된 T 세포의 총 수에 기초한다. 일부 측면에서, 단위 용량은 본원,예를 들어 섹션 I에 기재된 임의의 단위 용량일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 다음을 포함하는 산출 조성물의 전부 또는 일부를 포함한다: C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7 을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포(수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 정해진 비율 및/또는 조성물 중 세포의 다른 서브세트에 대한 수용체+/CD8+/CCR7+세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 정해진 비율; 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+세포의 정해진 비율 및/또는 조성물 중 세포의 다른 서브세트에 대한 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 정해진 비율; 또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+세포) 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 정해진 비율 및/또는 조성물 중 세포의 다른 서브세트에 대한 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 정해진 비율.
[694] 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 산출 조성물에 포함된 세포의 표현형(들) (예를들어, 표면 마커, 아폽토틱 마커, 사이토카인 생성)및 산출 조성물에서 이러한 표현형의 백분율을 결정하기 위해 평가된다. 일부 실시 양태에서, 치료용 산출 조성물은 관심있는 특정 표현형을 갖는 세포의 하나 이상의 백분율을 기초로하여 선택된다. 일부 실시 양태에서, 치료제로서 사용하기 위해 선택된 산출 조성물은 본원에 기재된 하나 이상의 백분율 및 표현형에 따른 특정 표현형 (예를 들어, 표면 마커, 아폽토 시스 마커, 사이토카인 생산)을 갖는 하나 이상의 백분율의 세포를 갖거나 포함한다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물이 하나 이상의 표현형의 하나 이상의 표적 백분율, 예를 들어 본원에 기재된 특정 표현형의 백분율을 포함하지 않는 경우, 산출 조성물은 표현형의 표적 백분율이 달성되도록 산출 조성물을 선택, 단리 또는 농축시키기위한 선택 과정을 겪을 수 있다. 일부 실시 양태에서, 산출 조성물이 본원에 기재된 하나 이상의 표현형의 표적 백분율을 달성하기 위해 추가 처리를 수행할 수 없는 경우, 산출 조성물은 치료 조성물로서 사용되지 않는다.
[695] 일부 실시 양태에서, 산출 조성물은 본원에 공지되거나 기재된 동결 보존 방법 중 임의의 것에 따라 동결 보존된다.
Ⅲ. 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포
[696] 일부 실시 양태에서, 제공된 방법 및 제조 물품은, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포와 같은 면역 세포와 같은 조작 된 세포와 관련된다. 일부 측면에서, 제공된 방법은 조작된 T 세포, 예컨대 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 투여를 포함하고, 이는 특정 표현형의 특정 또는 정해진 백분율 또는 수의 세포가 본원에 기재된 바와 같이 투여되는 세포의 조성물을 투여하는 것을 포함하여 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 유전자 조작된 것(예를 들어, CCR7+ 또는 CD27)이다. 일부 측면에서, 조작된 세포의 재조합 수용체는 질환 또는 병태와 관련된 항원에 결합 및/또는 표적화될 수 있다.
A. 재조합 수용체
[697] 수용체 중에는 항원 수용체 및 이의 하나 이상의 성분을 함유하는 수용체가 있다. 재조합 수용체는 키메라 수용체, 예컨대 리간드-결합 도메인 또는 이의 결합 단편 및 세포 내 신호 전달 도메인 또는 영역, 기능성 비-TCR 항원 수용체, 키메라 항원 수용체 (CAR) 및 T 세포 수용체 (TCRs), 예컨대 재조합 또는 트랜스제닉 TCRs , 키메라 자가항체 수용체(CAAR) 및 상기의 임의의 성분를 포함할 수 있다. CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로 일부 측면에서 링커 및/또는 트랜스멤브레인 도메인(들)을 통해 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분에 연결된 세포 외 항원 (또는 리간드) 결합 도메인을 포함한다.
1. 키메라 항원 수용체(CARs)
[698] 일부 실시 양태에서, 특정 세포 유형의 표면에 발현된 항원과 같은 특정 항원(또는 마커 또는 리간드)에 대해 특이성을 갖는 CAR을 발현하는 T 세포와 같은 조작된 세포가 제공된다. 일부 실시 양태에서, 항원은 폴리펩티드이다. 일부 실시 양태에서, 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 RNCPDp에서, 항원은 정상 또는 비표적화 세포 또는 조직과 비교하여 질환 또는 병태의 세포, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 실시 양태에서, 항원은 정상 세포에서 발현되고/되거나 조작된 세포에서 발현된다.
[699] 특정 실시 양태에서, 키메라 수용체와 같은 재조합 수용체는 세포질 신호 전달 도메인 또는 영역을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역 (세포 내 신호 전달 도메인 또는 영역으로도 상호 교환 가능하게 지칭 됨), 예컨대 T 세포에서 일차 활성화 신호를 유도할 수 있는 세포질 (세포 내) 영역,예컨대, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 세포질 신호 전달 도메인 또는 영역 (예를 들어, CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 또는 영역 또는 그의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분) 및/또는 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함한다.
[700] 일부 실시 양태에서, 키메라 수용체는 리간드(예를 들어, 항원) 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 리간드-결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 수용체는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 인식 도메인을 함유하는 CAR이다. 일부 실시 양태에서, 항원과 같은 리간드는 세포 표면에서 발현된 단백질이다. 일부 실시 양태에서, CAR은 TCR-유사 CAR이고, 항원은 예를 들어 TCR과 같은 세포 내 단백질의 펩티드 항원같은 가공된 펩티드 항원이고, 주요 조직 적합성 복합체 (MHC) 분자와 관련하여 세포 표면에서 인식된다.
[701] CARs를 포함하는 예시적인 항원 수용체, 및 이러한 수용체를 조작하고 세포 내로 도입하는 방법은, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 번호 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061,미국 특허 공개 번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허 번호 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353, 및 8,479,118, 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416, 및/또는 those described by Sadelain 등의 Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila 등의, (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle 등의, Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu 등의, Cancer, 2012 March 18(2): 160-75에 기재된 것을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 미국 특허 번호 7,446,190에 기재된 바와 같은 CAR 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO/2014055668 A1에 기재된 것들을 포함한다. CAR의 예는 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 번호 7,446,190, 미국 특허 번호 8,389,282, Kochenderfer 등의, 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang 등의, (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; 및 Brentjens 등의, Sci Transl Med. 2013 5(177)와 같은 상기 공보 중 어느 하나에 개시된 바와 같은 CARs를 포함한다. WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 번호 7,446,190, 및 미국 특허 번호 8,389,282를 또한 참조한다.
[702]
일부 실시 양태에서, CAR은 예를 들어, 암 마커, 및/또는 정상 또는 비-질병 세포 유형에서 발현된 항원과 같은 감쇄 반응을 유도하기위한 항원과 같은 입양 요법에 의해 표적화될 특정 세포 유형에서 발현된 항원과 같은 특정 항원(또는 마커 또는 리간드)에 대해 특이적으로 구축된다. 따라서, CAR은 전형적으로, 세포 외 부분에 하나 이상의 항원 결합 분자, 예컨대 하나 이상의 항원-결합 단편, 도메인 또는 부분, 또는 하나 이상의 항체 가변 도메인, 및/또는 항체 분자를 포함한다. 일부 실시 양태에서, CAR은, 단일 클론 항체(mAb)의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)로부터 유래된 단일 쇄 항체 단편 (scFv)과 같은 항원 분자 부분 또는 항체 분자의 일부를 포함한다.
[703] 일부 실시 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 항원 수용체와 같은 재조합 수용체의 일부로서 세포에서 발현된다. 항원 수용체 중에는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 기능성 비-TCR 항원 수용체가 있다. 일반적으로, 펩티드-MHC 복합체에 대한 TCR- 유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 CAR은 또한 TCR-유사 CAR로 지칭될 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR-유사 CAR의 MHC-펩티드 복합체에 특이적인 세포 외 항원 결합 도메인은, 일부 측면에서 링커 및/또는 막 횡단 도메인(들)을 통해 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분에 연결된다. 일부 실시 양태에서, 이러한 분자는 전형적으로 TCR과 같은 천연 항원 수용체를 통한 신호, 선택적으로 공동 자극 수용체와 조합된 이러한 수용체를 통한 신호를 모방하거나 근사할 수 있다.
[704] 일부 실시 양태에서, 키메라 수용체(예를 들어, CAR)와 같은 재조합 수용체는 항원 (또는 리간드)에 특이적으로 결합하는 것과 같은 리간드-결합 도메인을 포함한다. 키메라 수용체에 의해 표적화된 항원 중에는 입양 세포 요법을 통해 표적화될 질환, 병태 또는 세포 유형의 맥락에서 발현되는 것들이 있다. 질병과 병태 중에는 증식성, 신생물성 및 악성 질환 및 장애, 혈액 암, 면역계의 암을 포함한 암 및 종양, 예컨대 림프종, 백혈병 및/또는 골수종, 예컨대 B, T 및 골수성 백혈병, 림프종 및 다발성 골수종이 있다.
[705] 일부 실시 양태에서, 항원 (또는 리간드)은 폴리펩티드이다. 일부 실시 양태에서, 이것은 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 실시 양태에서, 항원 (또는 리간드)은 정상 또는 비표적화 세포 또는 조직과 비교하여 질환 또는 병태의 세포, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 실시 양태에서, 항원은 정상 세포에서 발현되고/되거나 조작된 세포에서 발현된다.
[706] 일부 실시 양태에서, CAR은 세포 표면에서 발현된 온전한 항원과 같은 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어, scFv)을 포함한다.
[707] 일부 실시 양태에서, 항원(또는 리간드)은 종양 항원 또는 암 마커이다. 일부 실시 양태에서, 항원(또는 리간드)은 αvβ6 인테그린(avb6 인테그린), B 세포 성숙 항원(BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 탈수효소 9 (CA9, CAIX 또는 G250이라고도 함), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, NY-ESO-1 및 LAGE-2라고도 함), 카르시노 배아 항원(CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1(CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4 (CSPG4), 표피 성장 인자 단백질(EGFR), III 형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이(EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, 5와 같은 Fc 수용체(FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5라고도 함), 태아 아세틸콜린 수용체(태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), 글리피칸 -3 (GPC3), G 단백질 결합 수용체 5D(GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이량체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), 간염 B 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 8 패밀리 구성원 A를 포함한 류신 리치 반복물(LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1 , MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메조텔린(MSLN), c-Met, 쥐과 거대세포 바이러스(CMV), 뮤신 1(MUC1), MUC16, 천연 킬러 그룹 2 구성원 D(NKG2D) 리간드, 멜라 A( MART-1), 신경 세포 부착 분자(NCAM), 온코페탈 항원, 우선적으로 발현된 흑색종 항원(PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원(PSCA), 전립선 특이 막 항원(PSMA), 수용체 티로신키나제 유사 오판 수용체 1 (ROR1), 서바이빈(Survivin), 영양막 당단백질 (TPBG, 5T4라고도 함), 종양 관련 당단백질72 (TAG72), 티로시나제 관련 단백질 1(TRP1, TYRP1 또는 gp75라고도 함), 티로시나제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라제, 도파크롬 델타-이성질화효소 또는 DCT), 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체- 발현된 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 비오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커와 같은 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이를 포함한다.
[708] 일부 실시 양태에서, 항원은 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항원은 바이러스 항원 (예컨대 HIV, HCV, HBV 등의 바이러스 항원), 박테리아 항원 및/또는 기생 항원이다.
[709] 본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며 온전한 항체 및 기능적(항원 결합) 항체 단편을 포함하는 폴리클로날 및 모노클로날 항체, 단편 항원 결합 (Fab) 단편,F(ab')2단편, Fab'단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 항원에 특이 적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변 (VH) 영역, 단일 사슬 항체 단편을 포함, 단일 사슬 가변 단편(scFv) 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노 바디)단편을 포함한다. 상기 용어는 달리 명시되지 않는 한, 유전자 조작된 및/또는 달리 변형된 형태의 면역 글로불린, 예컨대 인트라 바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체 및 이종 접합체 항체, 다중특이적, 예를 들어, 이중 특이적 또는 삼중 특이적, 항체, 디아바디, 트라이아바디 및 테트라바디, 직렬 di-scFv, 직렬 tri-scFv를 포함하고, 용어 "항체"는 본원에서 "항원 결합 단편"으로도 지칭되는 이의 기능성 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야하며, 상기 용어는 또한 IgG 및 그의 서브 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 서브 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포함한다.
[710] "초 가변 영역" 또는 "HVR"과 동의어인 "상보성 결정 영역"및 "CDR"이라는 용어는, 일부 경우에 항원 특이성 및/또는 결합 친화성을 부여하는 항체 가변 영역 내의 아미노산의 비 연속적 서열을 지칭하는 것으로 알려져있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역 (CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)에는 3 개의 CDRs가 있고 각각의 경쇄 가변 영역 (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)에는 3 개의 CDRs이있다. "프레임 워크 영역" 및 "FR"은 경우에 따라, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 공지되어있다. 일반적으로, 각 전장 중쇄 가변 영역 (FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)에는 4 개의 FRs가 있고, 각 전장 경쇄 가변 영역 (FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4)에는 4 개의 Frs가 있다.
[711] 주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는, Kabat 등의. (1991), "면역학적 관심의 단백질의 서열," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("Kabat" numbering scheme); Al-Lazikani 등의, (1997) JMB 273,927-948 ("코티아"번호 체계); MacCallum 등의., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "항체-항원 상호 작용: 접촉 분석 및 결합 부위 지형," J. Mol. Biol. 262, 732-745." ("접촉" 번호 매기기 체계); Lefranc MP 등의, "면역 글로불린 및 T 세포 수용체 가변 도메인 및 Ig 수퍼 패밀리 V-유사 도메인에 대한 IMGT 고유 넘버링," Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 ("IMGT"번호 체계); Honegger A 및 Pluckthun A, "면역 글로불린 가변 도메인에 대한 또 다른 번호 체계: 자동 모델링 및 분석 도구," J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, ("Aho" 번호 체계); 및 Martin 등의, "항체 초 가변 루프 모델링: 결합 알고리즘" PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, ("AbM" 번호 체계)에 기재된 것을 포함하는 다수의 잘 알려진 방법 중 하나를 사용하여 쉽게 결정될 수 있다.
[712] 주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 계획에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어 Kabat 체계는 구조적 정렬을 기반으로하는 반면 Chothia 체계는 구조 정보를 기반으로 한다. 카바트(Kabat) 및 코티아(Chothia) 체계 모두에 대한 넘버링은 삽입 문자, 예를 들어 "30a"에 의해 삽입되고 일부 항체에서 나타나는 결실이있는 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이에 기초한다. 상기 두 가지 체계는 다른 위치에 특정 삽입 및 삭제("인델")를 배치하여 다른 넘버링을 초래한다. 접촉 방식은 복잡한 결정 구조의 분석을 기반으로하며, 여러 측면에서 코티아(Chothia) 넘버링 체계와 유사하다. AbM 체계는 옥스포드 분자의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된 것에 기초한 Kabat와 Chothia 정의 사이의 절충안이다.
[713] 하기 표 1은 각각 Kabat, Chothia, AbM 및 Contact 체계에 의해 식별된 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 위치 경계를 열거한다. CDR-H1의 경우, Kabat 및 Chothia 넘버링 체계를 모두 사용하여 잔기 넘버링이 나열된다. FR은, 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치한 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치한 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한 FR-L3 등으로, CDRs 사이에 위치한다. 도시된 Kabat 넘버링 체계는 H35A 및 H35B에 삽입하기 때문에, 도시된 Kabat 넘버링 규칙을 사용하여 넘버링될 때 코티아(Chothia) CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.
표 1 다양한 번호 체계에 따른 CDR의 경계
1- Kabat 등의, (1991), "면역학적 관심의 단백질의 서열," 5th Ed. 국립 보건원 공중 보건 서비스, Bethesda, MD
2 - Al-Lazikani 등의, (1997) JMB 273,927-948
[714] 따라서, 달리 명시되지않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역의 "CDR" 또는 "상보적 결정 영역"또는 개별 특정 CDR (예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3), 예컨대 그의 가변 영역은, 전술한 방식 중 임의의 것에 의해 정의 된 바와 같은 (또는 특정) 상보적 결정 영역 또는 다른 공지된 방식을 포함하는 것으로 이해되어야한다. 예를 들어, 특정 CDR (예를 들어, CDR-H3)이 주어진 VH o또는 VL 영역 아미노산 서열에서 상응하는 CDR의 아미노산 서열을 포함하는 것으로 언급된 경우, 이러한 CDR은 임의의 상기 언급 된 방식, 또는 다른 공지된 방식에 의해 정해진 바와 같이 가변 영역 내에서 상응하는 CDR (예를 들어, CDR-H3)의 서열을 갖는 것으로 이해된다. 일부 실시 양태에서, 특정 CDR 서열이 특정된다. 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 규칙을 사용하여 기술되지만, 항체는 임의의 다른 상기 언급된 넘버링 규칙 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 규칙에 따라 기재된 CDRs를 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
[715]
마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 그의 가변 영역의 FR 또는 개별 지정 FR(들) (예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은, 임의의 알려진 방식에 의해 정해진 바와 같은 (또는 특정) 프레임 워크 영역을 포함하는 것으로 이해되어야한다. 일부 예에서, Kabat, Chothia, AbM 또는 접촉 방법에 의해 정해진 CDR, 또는 다른 알려진 방식과 같은 특정 CDR, FR, 또는 FRs 또는 CDR의 식별을 위한 방법이 특정된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 제공된다.
[716]
용어 "가변 영역"또는 "가변 도메인"은 항체를 항원에 결합 시키는데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 (각각 VH 및 VL)은 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 골격 영역(FRs) 및 3 개의 CDRs를 포함한다. 예를들어, Kindt 등의, Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman 및 Co., page 91 (2007)를 참조한다. 항원 결합 특이성을 부여하기 위해 단일 VH 또는VL 도메인이 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, Portolano 등의, J. Immunol. 150 : 880-887 (1993); Clarkson 등, Nature352 : 624-628 (1991)을 참조한다.
[717] CAR에 포함된 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편"또는 "항원 결합 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab ', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 중쇄 가변 (VH) 영역, 단일-쇄 항체 분자, 예컨대 scFv 및 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이적 항체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시 양태에서, CARs의 항원-결합 도메인은 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL) 영역을 포함하는 항체 단편이거나 이를 포함한다. 특정 실시 양태에서, 항체는 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변 (VL) 영역, 예컨대 scFv를 포함하는 단일 쇄 항체 단편이다.
[718] 일부 실시 양태에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 CD19이다. 일부 실시 양태에서, scFv는 CD19에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD19에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 FMC63 및 SJ25C1과 같은 마우스 유래 항체이다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 항체 단편은 예를 들어 미국 특허 공개 번호 US 2016/0152723에 기재된 바와 같은 인간 항체이다.
[719] 일부 실시 양태에서, scFv는 FMC63으로부터 유래된다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대해 생성된 마우스 단일 클론 IgG1 항체를 지칭한다 (Ling, N. R. 등의, (1987). Leucocyte typeing III. 302). 일부 실시 양태에서, FMC63 항체는 각각 서열 번호 38 및 39에 제시된 CDR-H1 및 CDR-H2, 서열 번호 40 또는 54에 제시된 CDR-H3; 및 서열 번호 35에 제시된 CDR-L1 및 서열 번호 36 또는 55에 제시된 CDR-L2 및 서열 번호 37 또는 34에 제시된 CDR-L3를 포함한다. 일부 실시 양태에서, FMC63 항체는, 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
[720] 일부 실시 양태에서, scFv는 서열 번호 35의 CDR-L1 서열, 서열 번호 36의 CDR-L2 서열 및 서열 번호 37의 CDR-L3 서열을 포함하는 가변 경쇄 및/또는 서열 번호 38의 CDR-H1 서열, 서열 번호 39의 CDR-H2 서열 및 서열 번호 40의 CDR-H3 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 실시 양태에서, scFv는 서열 41에 제시된 가변 중쇄 영역 및 서열 42에 제시된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 실시 양태에서, 링커는 서열 번호 56에 기재되어있다. 일부 실시 양태에서, scFv는 VH, 링커 및 VL을 순서대로 포함한다. 일부 실시 양태에서, scFv는 VL, 링커 및 VH를 순서대로 포함한다. 일부 실시 양태에서, scFv는 서열 번호 57에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호 57에 대한 서열 동일성을 적어도85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 나타내는 서열에 의해 인코딩된다. 일부 실시 양태에서, scFv는 서열 43에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호 43에 대한 서열 동일성을 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 나타내는 서열을 포함한다.
[721] 일부 실시 양태에서, scFv는 SJ25C1로부터 유래된다. SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대해 생성 된 마우스 단일 클론 IgG1 항체이다 (Ling, N. R., 등의. (1987). Leucocyte typeing III. 302). 일부 실시 양태에서, SJ25C1 항체는, 서열 번호 47-49에 각각 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3, 서열 번호 44-46에 각각 제시된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, SJ25C1 항체는, 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
[722] 일부 실시 양태에서, scFv는, 서열 번호 44의 CDR-L1 서열, 서열 번호 45의 CDR-L2 서열을 포함하는 가변 경쇄 및 서열 번호 46의 CDR-L3 서열 및/또는 서열 번호 47의 CDR-H1 서열을 포함하는 가변 중쇄, 서열 번호 48의 CDR-H2 서열, 및 서열 번호 49의 CDR-H3 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, scFv는 서열 번호 50에 제시된 가변 중쇄 영역 및 서열 번호 51에 제시된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 실시 양태에서, 링커는 서열 번호 52에 기재되어있다. 일부 실시 양태에서, 상기 scFv는 VH, 링커 및 VL을 순서대로 포함한다. 일부 실시 양태에서, scFv는 VL, 링커 및 VH를 순서대로 포함한다. 일부 실시 양태에서, scFv는 서열번호 53에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 53과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
[723] 일부 실시 양태에서, 항원은 CD20이다. 일부 실시 양태에서, scFv는 CD20에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD20에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 리툭시맙 scFv와 같은 리툭시맙이거나 이로부터 유래된 항체이다.
[724] 일부 실시 양태에서, 항원은 CD22이다. 일부 실시 양태에서, scFv는 CD22에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CD22에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 m971 scFv와 같은 m971이거나 그로부터 유래된 항체이다.
[725] 일부 실시 양태에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 BCMA이다. 일부 실시 양태에서, scFv는 BCMA에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 실시 양태에서, BCMA에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 국제 특허 출원, 공개 번호 WO 2016/090327 및 WO 2016/090320에 제시된 항체 또는 항체 단편으로부터의 VH 및 VL이거나 이를 포함한다.
[726] 일부 실시 양태에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 GPRC5D이다. 일부 실시 양태에서, scFv는, GPRC5D에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유래된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 실시 양태에서, GPRC5D 에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 국제 특허 출원, 공개 번호 WO 2016/090329 및 WO 2016/090312에 제시된 항체 또는 항체 단편으로부터의 VH 및 VL이거나 이를 포함한다.
[727] 일부 실시 양태에서, CAR은 TCR-유사 항체, 예컨대 항체 또는 항원-결합 단편 (예를 들어, scFv)을 MHC-펩타이드 복합체로서 세포 표면에 제시된 세포 내 항원, 예컨대 종양 관련 항원을 특이적으로 인식하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, MHC-펩티드 복합체를 인식하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 항원 수용체와 같은 재조합 수용체의 일부로서 세포상에서 발현될 수 있다. 상기 수용체는 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CARs), 및 유전자 변형 T 세포 수용체(TCRs)를 포함하는 다른 유전자 변형 항원 수용체를 포함할 수 있다. 일반적으로, 펩티드-MHC 복합체에 대한 TCR-유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 CAR은 또한 TCR-유사 CAR로 지칭될 수 있다.
[728] "주요 조직 적합성 복합체"(MHC)는 일부 경우 세포 기계에 의해 처리된 펩티드 항원을 포함하여, 폴리펩티드의 펩티드 항원과 복합체를 형성 할 수있는 다형성 펩티드 결합 부위 또는 결합 그루브를 포함하는 단백질, 일반적으로 당 단백질을 지칭한다. 경우에 따라 MHC 분자가 세포 표면에 표시되거나 발현될 수 있으며, TCR 또는 TCR- 유사 항체와 같은 T 세포 상의 항원 수용체에 의해 인식될 수 있는 형태로 항원을 제시하기 위해 펩티드와의 복합체, 즉 MHC-펩티드 복합체를 포함한다. 일반적으로, MHC 클래스 I 분자는 α 사슬, 경우에 따라 3 개의 α 도메인에 걸쳐있는 막, 및 비공유적으로 연관된 β2 마이크로 글로불린을 갖는 이종이량체이다. 일반적으로, MHC 클래스 II 분자는 2 개의 막 통과 당 단백질, α 및 β로 구성되며, 이들 둘 다는 전형적으로 막에 걸쳐있다. MHC 분자는 항원 결합 부위 또는 펩티드에 결합하기위한 부위 및 적절한 항원 수용체에 의한 인식에 필요한 서열을 포함하는 MHC의 유효 부분을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, MHC 클래스 I 분자는 시토졸에서 유래하는 펩티드를 세포 표면으로 전달하고, 여기서 MHC- 펩티드 복합체는 일반적으로 CD8+ T 세포와 같은 T 세포에 의해 인식되지만 일부 경우에는 CD4+ T 세포에 의해 인식된다. 일부 실시 양태에서, MHC 클래스 II 분자는 수포 시스템(vesicular system)에서 유래된 펩티드를 세포 표면으로 전달하며, 여기서 이들은 CD4 + T 세포에 의해 전형적으로 인식된다. 일반적으로, MHC 분자는,마우스에서 H-2 및 인간에서 백혈구 항원 (HLA)으로 통칭되는, 연결된 유전자좌(linked loci) 그룹에 의해 인코딩된다. 따라서, 전형적으로 인간 MHC는 또한 인간 백혈구 항원 (HLA)으로 지칭될 수 있다.
[729] 용어 "MHC- 펩티드 복합체"또는 "펩티드-MHC 복합체" 또는 그의 변이체는, MHC 분자의 결합 홈 또는 갈라진 틈에서 펩티드의 비공유적 상호 작용에 의한 것과 같은 펩티드 항원 및 MHC 분자의 복합체 또는 회합을 지칭한다. 일부 실시 양태에서, MHC-펩티드 복합체는 세포의 표면에 존재하거나 표시된다. 일부 실시 양태에서, MHC- 펩티드 복합체는 항원 수용체, 예컨대 TCR, TCR-유사 CAR 또는 그의 항원-결합 부분에 의해 특이적으로 인식될 수 있다.
[730] 일부 실시 양태에서, 폴리펩티드의 펩티드, 예컨대 펩티드 항원 또는 에피토프는 항원 수용체에 의한 인식과 같은 MHC 분자와 회합될 수 있다. 일반적으로, 펩티드는 폴리펩티드 또는 단백질과 같은 보다 긴 생물학적 분자의 단편으로부터 유래되거나 이를 기초로 한다. 일부 실시 양태에서, 펩티드는 전형적으로 약 8 내지 약 24 개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 양태에서, 펩티드는 MHC 클래스 II 복합체에서 인식하기 위해 약 9 내지 22 개 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 실시 양태에서, 펩티드는 MHC 클래스 I 복합체에서 인식하기 위해 약 8 내지 13 개 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 실시 양태에서, MHC- 펩티드 복합체와 같은 MHC 분자와 관련하여 펩티드의 인식시, 항원 수용체, 예컨대 TCR 또는 TCR-유사 CAR은, T 세포 증식, 사이토카인 생성, 세포 독성 T 세포 반응 또는 다른 반응과 같은 T 세포 반응을 유도하는 T 세포에 대한 활성화 신호를 생성하거나 유발한다.
[731] 일부 실시 양태에서, TCR- 유사 항체 또는 항원-결합 부분은 공지되어 있거나 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다 (예를들어, 미국 공개 출원 번호 US 2002/0150914; US 2003/0223994; US 2004/0191260; US 2006/0034850; US 2007/00992530; US20090226474; US20090304679; 및 국제 PCT 공개 번호 WO 03/068201 참조).
[732] 일부 실시 양태에서, MHC- 펩티드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 특정 MHC- 펩티드 복합체를 포함하는 유효량의 면역원으로 숙주를 면역시킴으로써 생성될 수 있다. 일부 경우에, MHC-펩티드 복합체의 펩티드는 MHC에 결합할 수있는 항원의 에피토프, 예를 들어 종양 항원, 예를 들어 범용 종양 항원, 골수종 항원 또는 하기 기재된 바와 같은 다른 항원이다. 일부 실시 양태에서, 유효량의 면역원이 면역 반응을 유발하기 위해 숙주에 투여되고, 여기서 면역원은 MHC 분자의 결합 그루브에서 펩티드의 3 차원 제시에 대항하여 면역 반응을 유도하기에 충분한 시간 동안 이의 3 차원 형태를 보유한다. 이어서, 숙주로부터 수집된 혈청을 분석하여, MHC 분자의 결합 그루브에서 펩티드의 3 차원 제시를 인식하는 원하는 항체가 생성되는지를 결정한다. 일부 실시 양태에서, 생성된 항체는 항체가 MHC-펩티드 복합체를 MHC 분자 단독, 관심있는 펩티드 단독, 및 MHC 및 관련없는 펩티드의 복합체와 구별할 수 있음을 확인하기 위해 평가될 수 있다. 이어서 원하는 항체를 단리할 수 있다.
[733] 일부 실시 양태에서, MHC-펩티드 복합체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 파지 항체 라이브러리와 같은 항체 라이브러리 디스플레이 방법을 사용함으로써 생성될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 예를 들어, 라이브러리의 구성원이 CDR 또는 CDRs의 하나 이상의 잔기에서 돌연변이되는 경우, 돌연변이체 Fab, scFv 또는 다른 항체 형태의 파지 디스플레이 라이브러리가 생성될 수 있다. 예를들어, 미국 출원 공개 번호 US20020150914, US2014/0294841; 및 Cohen CJ. 등의. (2003) J Mol. Recogn. 16:324-332.을 참조한다.
[734] 본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 단일 사슬 가변 단편 (scFv) 및 단일 도메인 항체 (예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편을 포함하는, 단편 항원 결합 (Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab'단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 항원에 특이 적으로 결합 할 수있는 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일 사슬 항체 단편을 포함하는, 온전한 항체 및 기능적 (항원-결합) 항체 단편을 포함한다. 상기 용어는 유전자 조작된 및/또는 달리 변형 된 형태의 면역 글로불린, 예컨대 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체 및 이종접합체 항체, 다중특이적, 예를 들어 이중특이적, 항체, 디아바디, 트라이아바디 및 테트라바디, 탠덤 di-scFv, 탠덤 tri-scFv을 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 "항체"는 이의 기능성 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 그의 서브 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 서브 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포함한다.
[735] 일부 실시 양태에서, 항원-결합 단백질, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 전장 항체의 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 실시 양태에서, 항체의 중쇄 및 경쇄는 전장 일 수 있거나 항원-결합 부분 (a Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)) 일 수있다. 다른 실시 양태에서, 항체 중쇄 불변 영역은 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE로부터 선택되고, 특히 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 선택되고, 보다 특히, IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1)이다. 다른 실시 양태에서, 항체 경쇄 불변 영역은 예를 들어 카파 또는 람다, 특히 카파로부터 선택된다.
[736] 제공된 항체 중에는 항체 단편이있다. "항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 한체 단편의 예에는, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 ;디아바디; 선형 항체; 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일 쇄 항체 분자, 예컨대 scFv 및 단일 도메인 VH 단일 항체; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 특정 실시 양태에서, 항체는 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역, 예컨대 scFv를 포함하는 단일 쇄 항체 단편이다.
[737] 용어 "가변 영역"또는 "가변 도메인"은 항체를 항원에 결합 시키는데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 (각각 VH 및 VL)은 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 골격 영역(FRs) 및 3 개의 CDRs를 포함한다. 예를들어, Kindt 등의, Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman 및 Co., page 91 (2007)를 참조한다. 항원 결합 특이성을 부여하기 위해 단일 VH 또는VL 도메인이 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, Portolano 등의, 150 : 880-887 (1993); Clarkson 등의, Nature352 : 624-628 (1991)을 참조한다.
[738] 단일 도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시 양태에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다. 일부 실시 양태에서, CAR은,본원에 기술되거나 공지 된 임의의 표적 항원과 같은, 종양 세포 또는 암 세포와 같은 표적화될 세포 또는 질환의 암 마커 또는 세포 표면 항원과 같은, 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인을 포함한다.
[739] 항체 단편은 온전한 항체의 단백질 분해 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 항체는 예를 들어 합성 링커, 예를 들어 펩티드 링커에 의해 연결된 둘 이상의 항체 영역 또는 쇄를 갖는 것들과 같이 자연적으로 발생하지 않는 배열을 포함하는 단편과 같은 재조합적으로 생성된 단편이고, 및/또는 자연 발생 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성되지 않을 수 있다. 일부 실시 양태에서, 항체 단편은 scFv이다.
[740] "인간화된" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비인간 CDR로부터 유래되고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FRs로부터 유래된 항체이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함 할 수 있다. 비인간 항체의 "인간화된 형태"는 모체 비인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 인간화, 전형적으로 인간에 대한 면역 원성을 감소시키는 비인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 실시 양태에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선하기 위해 비인간 항체 (예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
[741] 따라서, 일부 실시 양태에서, TCR-유사 CARs를 포함하는 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 단편은 scFv를 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편을 포함하는 세포 외 부분 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인 및/또는 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프를 포함하는 신호 전달 도메인(ITAM)이거나 또는 이를 포함한다.
[742] 일부 실시 양태에서, CAR과 같은 재조합 수용체, 예를 들어 항체 부분은 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 힌지 영역, 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역과 같은 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체 또는 변형된 버전의 적어도 일부이거나 이를 포함할 수 있는 스페이서를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 스페이서 및/또는 힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 불변 영역 또는 부분은 인간 IgG, 예컨대 IgG4 또는 IgG1의 것이다. 일부 측면에서, 불변 영역의 일부는 항원-인식 성분, 예를 들어 scFv 및 막 통과 도메인 사이의 스페이서 영역으로서 기능한다. 스페이서는 스페이서가 없을 때와 비교하여 항원 결합 후 세포의 반응성을 증가시키는 길이를 가질 수 있다. 일부 예에서, 스페이서는 약 12 개 아미노산 길이이거나 또는 12 개 이하의 아미노산 길이이다. 예시적인 스페이서는 약 10 내지 229 아미노산, 약 10 내지 200 아미노산, 약 10 내지 175 아미노산, 약 10 내지 150 아미노산, 약 10 내지 125 아미노산, 약 10 내지 100 아미노산, 약 10 내지 75 아미노산, 약 10 내지 50 아미노산, 약 10 내지 40 아미노산, 약 10 내지 30 아미노산, 약 10 내지 20 아미노산, 또는 약 10 내지 15 아미노산의 아미노산을 갖고, 열거된 범위 중 임의의 범위의 종말점 사이의 임의의 정수를 포함하는 것을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 스페이서 영역은 약 12개 이하의 아미노산, 약 119개 이하의 아미노산, 또는 약 229개 이하의 아미노산을 갖는다. 예시적인 스페이서는 IgG4 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지, 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지를 포함한다. 예시적인 스페이서는 Hudecek 등의. (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, Hudecek 등의. (2015) Cancer Immunol Res. 3(2): 125-135 또는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014031687에 기재된 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시 양태에서, 스페이서는 서열 번호 1에 제시된 서열을 가지며, 서열 번호 2에 제시된 서열에 의해 인코딩된다. 일부 실시 양태에서, 스페이서는 서열 번호 3에 제시된 서열을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 스페이서는 서열 번호 4에 제시된 서열을 갖는다.
[743] 일부 측면에서, 스페이서는 (a) 면역 글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 구성하거나 약 15 개 이하의 아미노산을 포함하고, CD28 세포 외 영역 또는 CD8 세포 외 영역을 포함하지 않는, (b) 면역 글로불린 힌지, 임의로 IgG4 힌지, 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나, 약 15 개 이하의 아미노산을 포함하고, CD28 세포 외 영역 또는 CD8 세포 외 영역을 포함하지 않고, 또는 (c) 약 12 개 아미노산 길이이거나 및/또는 면역 글로불린 힌지, 임의로 IgG4 또는 그의 변형 된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되거나; 또는 (d) 서열 번호 1, 3-5, 27-34 또는 58에 제시된 아미노산 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 임의의 변이체를 포함하거나 구성되거나; (e) 화학식 X1PPX2P를 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌인, 폴리펩티드 스페이서이다.
[744] 일부 구체 예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgD이다. 일부 실시 양태에서, 스페이서는 서열 번호 5에 제시된 서열을 갖는다. 일부 실시 양태에서, 상기 스페이서는 서열번호 1,2,3 및 5 중 임의의 것과 적어도 또는 적어도 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다.
[745] 항원 인식 도메인은 일반적으로 CAR의 경우에 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통한 활성화를 모방하고/거나 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 보내는 신호 전달 성분과 같은 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분에 연결된다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 항원 결합 성분 (예를 들어, 항체)은 하나 이상의 막 횡단 및 세포 내 신호 전달 영역에 연결된다. 일부 실시 양태에서, 막 횡단 도메인은 세포 외 도메인에 융합된다. 한 실시 양태에서, 수용체 내의 도메인 중 하나, 예를 들어 CAR과 자연적으로 연관된 막 통과 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막 횡단 도메인은, 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호 작용을 최소화하기 위해 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막 횡단 도메인에 이러한 도메인의 결합을 피하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형된다.
[746] 일부 실시 양태에서 막 관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래된다. 공급원이 천연인 경우, 일부 측면에서 도메인은 임의의 막-결합 또는 막 횡단 단백질로부터 유래된다. 막 관통 지역(Transmembrane regions)은 T- 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154로부터 유래 된 것(즉, 적어도 막 관통 영역(들)을 포함)을 포함한다. 대안적으로 일부 구체 예에서 막 횡단 도메인(transmembrane domain)은 합성이다. 일부 측면에서, 합성 막 횡단 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플렛(triplet)은 합성 막 횡단 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 실시 양태에서, 연결은 링커, 스페이서 및/또는 막 횡단 도메인(들)에 의한 것이다.
[747] 세포 내 신호 전달 영역 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 보조 자극 수용체와 조합된 이러한 수용체를 통한 신호, 및/또는 동시 자극 수용체만을 통한 신호를 모방하거나 근접한 것이 있다. 일부 실시 양태에서, 짧은 올리고-또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 글리신 및 세린을 포함하는 것과 같은 2 내지 10 개 아미노산 길이의 링커, 예를 들어 글리신-세린 이중선은, 막 횡단 도메인과 CAR의 세포질 신호 전달 도메인 사이의 연결을 나타내고, 형성한다.
[748] 수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분 또는 성분들을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 수용체는 T-세포 활성화 및 세포 독성, 예를 들어 CD3 제타 쇄를 매개하는 TCR CD3 쇄와 같은 TCR 복합체의 세포 내 성분을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, ROR1-결합 항체는 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 실시 양태에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막 횡단 도메인, CD3 세포 내 신호 전달 도메인, 및/또는 다른 CD 막 횡단 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부를 추가로 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR은 CD3-제타(CD3-ζ) 또는 Fc 수용체γ와 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이의 키메라 분자를 포함한다.
[749] 일부 실시 양태에서, CAR의 결찰시, CAR의 세포질 도메인 또는 세포 내 신호 전달 영역은 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 정상 이펙터 기능 또는 반응 중 하나 이상을 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 상황에서, CAR은 세포 분해 활성 또는 T-헬퍼 활성과 같은 T 세포의 기능, 예컨대 사이토카인의 분비 또는 다른 인자를 유도한다. 일부 실시 양태에서, 항원 수용체 성분 또는 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 영역의 절단된 부분은, 예를 들어 그것이 효과기 기능 신호를 형질 도입하는 경우 온전한 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 실시 양태에서, 예를 들어 세포 내 도메인 또는 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역은 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열, 및 일부 측면에서, 자연 맥락에서 항원 수용체 결합 후 신호 전달을 개시하기 위해 이러한 수용체와 협력하여 작용하는 공-수용체의 서열, 및/또는 이러한 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다.
[750] 자연적인 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 보조 자극 신호를 필요로한다. 따라서, 일부 실시 양태에서, 완전 활성화를 촉진하기 위해, 2 차 또는 공동-자극 신호를 생성하기위한 성분이 CAR에 또한 포함된다. 다른 실시 양태에서, CAR은 공-자극 신호를 생성하기위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가의 CAR은 동일한 세포에서 발현되고 2 차 또는 보조 자극 신호를 생성하기위한 성분을 제공한다.
[751] T 세포 활성화는 일부 측면에서 2 가지 부류의 세포질 신호 전달 서열에 의해 매개되는 것으로 기술되어있다: TCR (1 차 세포질 신호 전달 서열)을 통해 항원-의존적 1 차 활성화를 개시하는 것, 및 2 차 또는 공동-자극 신호 (2 차 세포질 신호 전달 서열)를 제공하기 위해 항원 독립적 방식으로 작용하는 것들. 일부 측면에서, CAR은 이러한 시그널링 구성 요소 중 하나 또는 둘 모두를 포함한다.
[752] 일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1 차 활성화를 조절하는 1 차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1 차 세포질 신호 전달 서열은, 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호 전달 모티프를 포함할 수 있다. 1 차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는, TCR 또는 CD3 제타, FcR 감마 또는 FcR 베타로부터 유래 된 것들을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CAR 내의 세포질 신호 전달 분자(들)는 세포질 신호 전달 도메인, 이의 부분 또는 CD3 제타로부터 유래된 서열을 포함한다.
[753] 일부 실시 양태에서, CAR은 보조 자극 수용체의 신호 전달 영역 및/또는 막 횡단 부분, 예컨대 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS를 포함한다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 신호 전달 영역 및 보조 자극 성분 둘 다를 포함한다.
[754] 일부 실시 양태에서, 신호 전달 영역은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 보조 자극 성분은 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 실시 양태에서, CARs는 활성화 또는 자극성 CARs, 및 보조 자극 CARs를 포함하며, 둘 다 동일한 세포에서 발현된다 (WO2014/055668 참조).
[755] 특정 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 CD28 막 횡단 및 CD3 (예를 들어, CD3- 제타) 세포 내 도메인에 연결된 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 CD3 제타 세포 내 도메인에 연결된 키메라 CD28 및 CD137 (4-1BB, TNFRSF9) 보조 자극 도메인을 포함한다.
[756] 일부 실시 양태에서, CAR은 세포질 부분에서 하나 이상의, 예를 들어 2개 이상의 보조 자극 도메인 및 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CARs은 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포 내 성분을 포함한다.
[757] 일부 경우에, CARs은 1세대, 2세대 및/또는 3세대 CARs로 지칭된다. 일부 측면에서, 1 세대 CAR은 항원 결합시 CD3-쇄 유도된 신호만을 제공하는 것이다; 일부 측면에서, 2 세대 CAR은 CD28 또는 CD137과 같은 보조 자극 수용체로부터의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것과 같은 신호 및 보조 자극 신호를 제공하는 것이다; 일부 측면에서, 일부 측면에서 3 세대 CAR은 상이한 보조 자극 수용체의 다중 보조 자극 도메인을 포함하는 것이다.
[758] 일부 실시 양태에서, 키메라 항원 수용체는 본원에 기재된 항체 또는 단편을 포함하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 본원에 기재된 항체 또는 단편을 포함하는 세포 외 부분 및 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 단편은 scFv 또는 단일 도메인 VH 항체를 포함하고 세포 내 도메인은 ITAM을 포함한다. 일부 측면에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 쇄의 제타 쇄의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 키메라 항원 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 횡단 도메인을 포함한다.
[759] 일부 측면에서, 막 횡단 도메인은 CD28의 막 횡단 부분을 포함한다. 세포 외 도메인 및 막 횡단은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포 외 도메인 및 막 횡단은 본원에 기재된 바와 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 실시 양태에서, 키메라 항원 수용체는 막 횡단 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이와 같은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, T 세포 보조 자극 분자는 CD28 또는 4-1BB이다.
[760] 일부 실시 양태에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막 횡단 부분이거나 이를 포함하는 막 횡단 도메인, 및 CD28의 신호 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타 또는 이의 기능적 변이체의 신호 전달 부분을 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막 횡단 부분이거나 이를 포함하는 막 횡단 도메인, 및 4-1BB의 신호 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타 또는 이의 기능적 변이체의 신호 전달 부분을 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 이러한 일부 실시 양태에서, 수용체는 Ig 힌지, 예를 들어 힌지 전용 스페이서와 같은 IgG4 힌지와 같은 인간 Ig 분자와 같은 Ig분자의 일부를 포함하는 스페이서를 추가로 포함한다.
[761] 일부 실시 양태에서, 수용체의 막 횡단 도메인, 예를 들어 CAR은, 인간 CD28의 막 횡단 도메인 또는 그의 변이체, 예를 들어 인간 CD28의 27- 아미노산 막 횡단 도메인 (수탁 번호: P10747.1)이고, 또는 서열 번호 8에 제시된 아미노산의 서열 또는 서열번호 8의 적어도 또는 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막 횡단 도메인이고, 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체의 부분을 포함하는 막 횡단 도메인은, 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 또는 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[762] 일부 구체 예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, T 세포 보조 자극 분자는 CD28 또는 4-1BB이다.
[763] 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포 내 보조 자극 신호 전달 도메인 또는 그의 기능적 변이체 또는 그의 일부, 예컨대 그의 41 개 아미노산 도메인 및/또는 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL에서 GG로 치환된 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은, 서열 번호 10 또는 11에 제시된 아미노산 서열과 적어도 또는 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 세포내 영역은 인간 4-1BB(수탁 번호 Q07011.1)의 42-아미노산 세포질 도메인과 같은 4-1BB의 세포 내 보조 자극 신호 전달 도메인 또는 그의 기능적 변이체 또는 그의 일부 또는 기능적 변이체 또는 이의 일부, 예컨대 서열 번호 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호 12와 적어도 또는 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의, 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
[764] 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은, 인간 CD3 쇄, 임의로 CD3 제타 자극 신호 전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체, 예컨대 인간 CD3ζ의 이소형 3의 112 AA 세포질 도메인(수탁 번호: P20963.2) 또는 미국특허 번호 7,446,190 또는 미국 특허 번호 8,911,993에 기재된 것과 같은 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포 내 신호 전달 영역은, 서열 번호 13, 14 또는 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호 13, 14 또는 15에 대한 적어도 또는 약 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
[765] 일부 측면에서, 스페이서는 IgG의 힌지 영역만을 포함하며, 예컨대 IgG4 또는 IgG1의 힌지만, 예컨대 서열 번호 1에 제시된 힌지 전용 스페이서와 같은 것을 포함한다. 다른 실시 양태에서, 스페이서는 CH2 및/또는 CH3 도메인에 연결된 Ig 힌지, 예를 들어 및 IgG4 힌지이다. 일부 실시 양태에서, 스페이서는 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지이며, 이는 서열 번호 3에 제시된 바와 같이 CH2 및 CH3 도메인에 연결된다. 일부 실시 양태에서, 스페이서는 서열 번호 4에 제시된 바와 같이 CH3 도메인에만 연결된 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지이다. 일부 실시 양태에서, 스페이서는 글리신-세린 풍부 (rich) 서열 또는 공지된 가요성(flexible) 링커와 같은, 다른 가요성(flexible) 링커이거나 이를 포함한다.
2. T 세포 수용체 (TCR)
[766] 일부 실시 양태에서, 종양, 바이러스 또는 자가 면역 단백질의 항원과 같은, 표적 폴리펩티드의 펩티드 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 인식하는 T 세포 수용체 (TCR) 또는 그의 항원-결합 부분을 발현하는 T 세포와 같은 조작된 세포가 제공된다.
[767] 일부 실시 양태에서, "T 세포 수용체"또는 "TCR"은 가변 α 및 β 사슬 (각각 TCRα 및 TCRβ라고도 함) 또는 가변 γ 및 δ 사슬 (각각 TCRγ 및 TCRδ라고도 함) 또는 그의 항원-결합 부분을 함유하는 분자이고, MHC 분자에 결합된 펩티드에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 αβ 형태이다. 일반적으로, αβ 및 γδ 형태로 존재하는 TCR은 일반적으로 구조적으로 유사하지만,이를 발현하는 T 세포는 별개의 해부학적 위치 또는 기능을 가질 수 있다. TCR은 세포 표면 또는 가용성 형태로 발견될 수 있다. 일반적으로, TCR은 T 세포 (또는 T 림프구)의 표면에서 발견되며, 여기서 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자에 결합 된 항원을 인식하는 것이 일반적이다.
[768] 달리 언급되지 않는 한, 용어 "TCR"은 완전한 TCR 뿐만 아니라 그의 항원-결합 부분 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 실시 양태에서, TCR은 αβ 형태 또는 γδ 형태의 TCR을 포함하여 온전한 또는 전장(full-length) TCR이다. 일부 실시 양태에서, TCR은 예컨대, MHC-펩티드 복합체에 결합하는, MHC 분자에 결합하는 특이적 펩타이드에 결합하는 전장 TCR 미만의 항원-결합 부분이다. 일부 양태에서, TCR의 항원-결합 부분 또는 단편은, 전체 TCR이 결합하는 MHC-펩티드 복합체와 같은 펩티드 에피토프에 결합할 수 있는, 전장 또는 온전한 TCR의 구조적 도메인의 일부만을 함유할 수 있다. 일부 양태에서, 항원 결합 부분은 MHC-펩티드 복합체에 특이적으로 결합하는 결합 부위를 형성하기에 충분한 TCR의 가변 도메인, 예컨대 TCR의 가변 α 사슬 및 가변 β 사슬을 포함한다. 일반적으로, TCR의 가변 사슬은 펩티드, MHC 및/또는 MHC-펩티드 복합체의 인식에 관여하는 상보성 결정 영역을 함유한다.
[769] 일부 실시 양태에서, TCR의 가변 도메인은 초 가변 루프 또는 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유하며, 이는 일반적으로 항원 인식 및 결합 능력 및 특이성에 주요 기여자이다. 일부 실시 양태에서, TCR의 CDR 또는 이의 조합은 주어진 TCR 분자의 모든 또는 실질적으로 모든 항원-결합 부위를 형성한다. TCR 사슬의 가변 영역 내의 다양한 CDR은 일반적으로 프레임 워크 영역 (FR)에 의해 분리되며, 이는 일반적으로 CDR과 비교하여 TCR 분자 사이에서 낮은 가변성(variability)을 나타낸다(예컨대, lores et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988; see also Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003 참조). 일부 실시 양태에서, CDR3은 항원 결합 또는 특이성을 담당하는 주요 CDR이거나, 항원 인식 및/또는 펩티드-MHC 복합체의 가공된 펩티드 부분과의 상호 작용을 위해 주어진 TCR 가변 영역상의 3 개의 CDR 중에서 가장 중요하다. 일부 양태에서, 알파 사슬의 CDR1은 특정 항원성 펩타이드의 N-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 양태에서, 베타 사슬의 CDR1은 펩티드의 C-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 양태에서, CDR2는 MHC-펩티드 복합체의 MHC 부분과의 상호 작용 또는 인식을 담당하는 1 차 CDR에 가장 크게 기여하거나 또는 주요 CDR이다. 일부 실시 양태에서, β-사슬의 가변 영역은 추가적으로 초 가변 영역 (CDR4 또는 HVR4)을 포함할 수 있으며, 이는 일반적으로 항원 인식이 아닌 초 항원 결합에 관여한다 (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8 : 411-426 참조).
[770] 일부 실시 양태에서, TCR은 또한 불변 도메인, 막 관통 도메인 및/또는 짧은 세포질 꼬리를 함유할 수 있다 (예를 들어, Janeway et al., Immunobiology : The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997 참조). 일부 측면에서, TCR의 각 사슬은 하나의 N-말단 면역 글로불린 가변 도메인, 하나의 면역 글로불린 불변 도메인, 막 관통 영역 및 C-말단 말단에서 짧은 세포질 꼬리를 가질 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 신호 전달의 매개에 관여하는 CD3 복합체의 불변 단백질과 관련된다.
[771] 일부 실시 양태에서, TCR 사슬은 하나 이상의 불변 도메인을 함유한다. 예를 들어, 주어진 TCR 사슬(예를 들어, α- 사슬 또는 β- 사슬)의 세포 외 부분은 가변 도메인(예를 들어, Vα 또는 Vβ; 전형적으로 Kabat et al.,“Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.에서 Kabat이 넘버링한 아미노산 1 내지 116) 및 세포막에 인접한 불변 도메인(예를 들어, α-사슬 불변 도메인 또는 Cα, 전형적으로 Kabat 넘버링에 기초한 사슬의 117 내지 259 위치, 또는 β 사슬 불변 도메인 또는 Cβ, 전형적으로 Kabat 넘버링에 기초한 사슬의 위치 117 내지 295 위치)과 같은 2 개의 면역 글로불린 유사 도메인을 함유할 수 있다. 예를 들어, 어떤 경우에는 2 개의 사슬에 의해 형성된 TCR의 세포외 부분은 2 개의 막-근위 불변 도메인 및 2 개의 막-말단 가변 도메인을 함유하며, 가변 도메인은 각각 CDR을 함유한다. TCR의 불변 도메인은 시스테인 잔기가 이황화 결합을 형성하여 TCR의 두 사슬을 연결하는 짧은 연결 서열을 함유할 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 α 및 β 사슬 각각에 추가 시스테인 잔기를 가질 수 있어서, TCR은 불변 도메인에서 2 개의 이황화 결합을 함유한다.
[772] 일부 실시 양태에서, TCR 사슬는 막 관통 도메인을 함유한다. 일부 실시 양태에서, 막 횡단 도메인은 양으로 하전된다. 일부 양태에서, TCR 사슬는 세포질 꼬리(cytoplasmic tail)를 함유한다. 일부 양태에서, 구조는 TCR이 CD3 및 그의 서브 유닛과 같은 다른 분자와 회합되도록 한다. 예를 들어, 막 횡단 영역을 갖는 불변 도메인을 함유하는 TCR은 세포막에 단백질을 고정시키고 CD3 신호 전달 장치 또는 복합체의 불변 서브 유닛과 회합(associate)할 수 있다. CD3 신호 전달 서브 유닛 (예를 들어, CD3γ, CD3δ, CD3ε 및 CD3ζ 사슬)의 세포 내 꼬리는 TCR 복합체의 신호 전달 용량에 관여하는 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM을 하나 이상을 함유한다
[773] 일부 실시 양태에서, TCR은 2 개의 사슬 α 및 β (또는 임의로 γ 및 δ)의 이종이량체일 수 있거나, 단일 사슬 TCR 구축물일 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 예를 들어 이황화 결합 또는 이황화 결합들에 의해 연결된 2 개의 별개의 사슬 (α 및 β 사슬 또는 γ 및 δ 사슬)을 함유하는 이종이량체이다.
[774] 일부 실시 양태에서, TCR은, 실질적으로 전장 코딩 서열이 용이하게 이용될 수 있는 공지된 TCR 서열, 예컨대 Vα, β 사슬의 서열로부터 생성될 수 있다. 세포 공급원으로부터 V 사슬 서열을 포함하는 전장 TCR 서열을 얻는 방법은 잘 알려져 있다. 일부 실시 양태에서, TCR을 코딩하는 핵산은 다양한 공급원, 예를 들어 주어진 세포 또는 세포들 내에서 또는 이들로 부터 분리된 TCR-코딩 핵산의 중합 효소 연사슬 반응 (PCR) 증폭, 또는 공개적으로 이용 가능한 TCR DNA 서열의 합성에 의해 수득될 수 있다.
[775] 일부 실시 양태에서, TCR은 생물학적 공급원, 예컨대 T 세포 (예를 들어, 세포독성 T 세포), T-세포 하이브리도마 또는 다른 공개적으로 이용 가능한 공급원으로부터 수득된다. 일부 실시 양태에서, T-세포는 생체 내 단리된 세포로부터 수득될 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 전형적으로 선별된 TCR이다. 일부 실시 양태에서, TCR은 네오에피토프(neoepitope)-제한된 TCR이다. 일부 실시 양태에서, T-세포는 배양된 T-세포 하이브리도마 또는 클론일 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR 또는 이의 항원-결합 부분 또는 이의 항원-결합 단편은 TCR의 서열에 대한 지식으로부터 합성적으로 생성될 수 있다.
[776] 일부 실시 양태에서, TCR은 표적 폴리펩티드 항원 또는 그의 표적 T 세포 에피토프에 대한 후보 TCR의 라이브러리를 스크리닝함으로써 확인되거나 선택된 TCR로부터 생성된다. TCR 라이브러리는 PBMC, 비장 또는 다른 림프 기관에 존재하는 세포를 포함하여 대상체로부터 단리된 T 세포로부터 Vα 및 Vβ의 레퍼토리의 증폭에 의해 생성될 수 있다. 일부 양태에서, T 세포는 종양 침윤 림프구(TIL)로부터 증폭될 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR 라이브러리는 CD4+ 또는 CD8+ 세포로부터 생성될 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 정상 건강한 대상체, 즉 정상 TCR 라이브러리의 T 세포 공급원으로부터 증폭될 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 병에 걸린 대상체, 즉 병에 걸린 TCR 라이브러리의 T 세포 공급원으로부터 증폭될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 축퇴(degenerate) 프라이머는 인간으로부터 얻은 샘플, 예컨대 T 세포에서 RT-PCR에 의해 Vα 및 Vβ의 유전자 레퍼토리를 증폭시키기 위해 사용된다. 일부 실시 양태에서, scTv 라이브러리는 증폭된 생성물이 링커에 의해 분리되도록 클로닝되거나 조립되는 순수한 Vα 및 Vβ 라이브러리로부터 조립될 수 있다. 대상체 및 세포의 공급원에 따라, 라이브러리는 HLA 대립 유전자-특이적일 수 있다. 대안적으로, 일부 실시 양태에서, TCR 라이브러리는 모체 또는 스캐폴드 TCR 분자의 돌연변이 유발 또는 다양화에 의해 생성될 수 있다. 일부 측면에서 TCR은 예를 들어 α 또는 β 사슬의 돌연변이 유발에 의해 유도된 진화에 적용된다. 일부 측면에서, TCR의 CDR 내의 특정 잔기가 변경된다. 일부 실시 양태에서, 선택된 TCR은 친화도 성숙에 의해 변형될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 항원-특이적 T 세포는 예를 들어 펩티드에 대한 CTL 활성을 평가하기 위해 스크리닝함으로써 선택될 수 있다. 일부 측면에서, 예를 들어 항원-특이적 T 세포 상에 존재하는 TCR은 예를 들어 항원에 대한 특정 친화성 또는 결합력과 같은 결합 활성에 의해 선택될 수 있다.
[777] 일부 실시 양태에서, 유전자 조작된 항원 수용체는 재조합 T 세포 수용체(TCR) 및/또는 자연 발생 T 세포로부터 클로닝된 TCR을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원 (예를 들어, 암 항원)에 대한 고친화성 T 세포 클론이 환자로부터 확인되고, 단리되고, 세포 내로 도입된다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원에 대한 TCR 클론은 인간 면역계 유전자 (예를 들어, 인간 백혈구 항원 시스템 또는 HLA)로 조작된 형질전환 마우스에서 생성되었다. 예를 들어, Parkhurst 등 (2009) Clin Cancer Res. 15 : 169-180 및 Cohen 등 (2005) J Immunol. 175 : 5799-5808 참조. 일부 실시 양태에서, 파지 디스플레이가 표적 항원에 대해 TCR을 분리하는데 사용된다(예를 들어, Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14 : 1390-1395 및 Li (2005) Nat Biotechnol. 23 : 349-354 참조).
[778] 일부 실시 양태에서, TCR 또는 이의 항원 결합 부분은 변형 또는 조작된 것이다. 일부 실시 양태에서, 유도된 진화 방법은 특정 MHC-펩티드 복합체에 대한 더 높은 친화력과 같은 변경된 특성을 갖는 TCR을 생성하는데 사용된다. 일부 실시 양태에서, 유도된 진화는 제한되지는 않지만, 이스트 디스플레이(Holler et al. (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al. (2000) Proc Natl Acad Sci USA, 97, 5387-92), 파지 디스플레이 (Li et al. (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54) 또는 T cell 디스플레이 (Chervin et al. (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84)를 포함하는 디스플레이 방법에 의해 달성될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 디스플레이 접근은 공지의, 페어런트(parent) 또는 참조 TCR의 엔지니어링 또는 변형을 포함한다. 예컨대, 일부 양태에서, 야생형 TCR은 CDRD의 하나 이상의 잔기가 돌연변이된 돌연변이 TCR을 생성하기 위한 템플릿으로서 사용될 수 있고, 예컨대, 원하는 목적 항원에 대한 고 친화성과 같은 원하는 변경된 특성을 갖는 돌연변이체를 선택할 수 있다.
[779] 일부 실시 양태에서, 관심있는 TCR을 생산 또는 생성하는데 사용하기위해 사용되는 표적 폴리펩티드의 펩티드는 공지되어 있거나 당업자에 의해 용이하게 식별될 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR 또는 항원-결합 부분을 생성하는데 사용하기에 적합한 펩티드는 하기 기재된 표적 폴리펩티드와 같은 관심 표적 폴리펩티드에서 HLA-제한 모티프의 존재에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 펩티드는 이용 가능한 컴퓨터 예측 모델을 사용하여 식별된다. 일부 실시 양태에서, MHC 클래스 I 결합 부위를 예측하기 위한 이러한 모델에는 제한되지는 않지만, ProPredl (Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17 (12) : 1236-1237), SYFPEITHI (Schuler et al. (2007), Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007)이 포함된다. 일부 실시 양태에서, MHC-제한된 에피토프는 HLA-A0201이며, 이는 모든 백인의 대략 39-46%에서 발현되므로, TCR 또는 다른 MHC-펩티드 결합 분자를 제조하는데 사용하기에 적합한 MHC 항원의 선택을 나타낸다.
[780] 컴퓨터 예측 모델을 사용하는 프로테아좀 및 면역-프로테아좀에 대한 HLA-A0201-결합 모티프 및 절단 부위가 공지되어 있다. MHC 클래스 I 결합 부위를 예측하기 위해, 이러한 모델에는 제한되지는 않지만, ProPredl (Sing and Raghava에 더 상세히 기재됨, ProPred : HLA-DR 결합 부위의 예측, BIO INFORMATICS 17(12): 1236-1237 2001), 및 SYFPEITHI (Schuler et al. SYFPEITHI, Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007에서 T-세포 에피토프 예측 및 서치를 위한 데이터베이스)를 포함한다.
[781] 일부 실시 양태에서, TCR 또는 이의 항원 결합 부분은 결합 특성과 같은 하나 이상의 특성이 변경된 재조합으로 생성된 천연 단백질 또는 이의 돌연변이 된 형태일 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 다양한 동물 종, 예컨대 인간, 마우스, 래트 또는 다른 포유 동물 중 하나로부터 유래될 수 있다. TCR은 세포-결합 또는 가용성 형태일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 본 발명에서 제공된 방법의 목적 상, TCR은 세포의 표면 상에 발현된 세포 결합 형태이다.
[782] 일부 실시 양태에서, TCR은 전장 TCR이다. 일부 실시 양태에서, TCR은 항원-결합 부분이다. 일부 실시 양태에서, TCR은 이량체 TCR (dTCR)이다. 일부 실시 양태에서, TCR은 단일사슬 TCR (sc-TCR)이다. 일부 실시 양태에서, dTCR 또는 scTCR은 WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186에서 기재된 구조를 갖는다.
[783] 일부 실시 양태에서, TCR은 막 관통 서열을 갖는다. 일부 실시 양태에서, TCR은 세포질 서열에 해당하는 서열을 함유한다. 일부 실시 양태에서, TCR은 CD3과 TCR 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 양태에서, dTCR 또는 scTCR을 포함하는 임의의 TCR은 T 세포의 표면에서 활성 TCR을 생성하는 신호 전달 도메인에 연결될 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 세포의 표면에서 발현된다.
[784] 일부 실시 양태에서, dTCR은 TCR α 사슬 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR α 사슬 불변 영역 세포외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제1 폴리펩티드, 및 TCR β 사슬 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR β 사슬 불변 영역 세포외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제2 폴리렙티드를 갖고, 제1 및 제2 폴리펩티드는 이황화 결합에 의해 연결된다. 일부 실시 양태에서, 상기 결합은 자연 이량체 αβ TCR에 존재하는 자연 사슬간 이황화 결합에 해당할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 사슬간 이황화 결합은 천연 TCR에 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 실시 예에서, 하나 이상의 시스테인이 dTCR 폴리펩티드 쌍의 불변 영역 세포외 서열에 통합될 수 있다. 일부 양태에서, 천연 및 비천연 이황화 결합이 바람직할 수 있다. 일부 실시 양태에서, TCR은 막에 고정하기 위한 막 횡단 서열을 함유한다.
[785] 일부 실시 양태에서, dTCR은 가변 α 도메인, 불변 α 도메인 및 불변 α 도메인의 C-말단에 부착된 제1 이량체화 모티프를 포함하는 TCR α 사슬, 및 가변 β 도메인, 불변 β 도메인 및 불변 β 도메인의 C-말단에 부착된 제1 이량체화 모티프를 포함하는 TCR β 사슬을 함유하고, 여기서 제1 및 제2 이량체화 모티프는 쉽게 상호 작용하여 TCR α 사슬 및 TCR β 사슬을 함께 연결하는 제1 이량체화 모티프의 아미노산과 제 2 이량체화 모티프의 아미노산 사이의 공유 결합을 형성 한다.
[785] 일부 실시 양태에서, TCR은 scTCR이다. 전형적으로, scTCR은 공지된 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 예컨대, Soo Hoo, W. F. et al. PNAS (USA) 89, 4759 (1992); Wiilfing, C. and Pliickthun, A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. et al. PNAS (USA) 90 3830 (1993); International published PCT Nos. WO 96/13593, WO 96/18105, W099/60120, W099/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; 및 Schlueter, C. J. et al. J. Mol. Biol. 256, 859 (1996)를 참조할 수 있다. 일부 실시 양태에서, scTCR은 TCR 사슬의 회합을 촉진시키기 위해 도입된 비천연 이황화 사슬간 결합을 함유한다 (예를 들어, 국제 공개 PCT 번호 WO 03/020763 참조). 일부 실시 양태에서, scTCR은 이의 C-말단에 융합된 이종 류신 지퍼가 사슬 회합을 촉진하는 비-이황화 연결된 절단된 TCR이다 (예를 들어, 국제 공개 PCT 번호 W099/60120 참조). 일부 실시 양태에서, scTCR은 펩티드 링커를 통해 TCRβ 가변 도메인에 공유적으로 연결된 TCRα 가변 도메인을 함유한다 (예를 들어, 국제 공개 PCT 번호 W099/18129 참조).
[787] 일부 실시 양태에서, scTCR은 TCR α 사슬 가변 영역에 상응하는 아미노산 서열로 구성되는 제 1 세그먼트, TCR β 사슬 불변 도메인 세포외 서열에 상응하는 아미노산 서열의 N 말단에 융합된 TCR β 사슬 가변 영역 서열에 상응하는 아미노산 서열에 의해 구성되는 제 2 세그먼트, 및 제 1 세그먼트의 C 말단을 제 2 세그먼트의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 포함한다.
[788] 일부 실시 양태에서, scTCR은 α 사슬 세포외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 1 세그먼트, β 사슬 세포외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 β 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 2 세그먼트, 막 관통 서열, 및 선택적으로, 제 1 세그먼트의 C 말단을 제 2 세그먼트의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 포함한다.
[789] 일부 실시 양태에서, scTCR은 β 사슬 세포외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 TCR β 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 1 세그먼트, α 사슬 세포외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열로 구성된 제 2 세그먼트, 막 관통 서열, 및 선택적으로, 제 1 세그먼트의 C 말단을 제 2 세그먼트의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 포함한다.
[790] 일부 실시 양태에서, 제 1 및 제 2 TCR 세그먼트를 연결하는 scTCR의 링커는 TCR 결합 특이성을 유지하면서 단일 폴리펩티드 가닥을 형성할 수 있는 임의의 링커일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 링커 서열은 예를 들어 화학식 -P-AA-P-를 가질 수 있고, 여기서 P는 프롤린이고 AA는 아미노산이 글리신 및 세린인 아미노산 서열을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 제 1 및 제 2 세그먼트는 이의 가변 영역 서열이 그러한 결합을 위해 배향되도록 쌍을 이룬다. 따라서, 일부 양태에서, 링커는 제 1 세그먼트의 C 말단과 제 2 세그먼트의 N 말단, 또는 그 반대의 경우의 사이의 거리에 걸쳐 있도록 충분한 길이를 가지지만, scTCR의 표적 리간드에의 결합을 차단하거나 감소시키기 않는 거리를 갖는다. 일부 실시 양태에서, 링커는 약 10 내지 45 개의 아미노산, 예컨대 10 내지 30 개의 아미노산 또는 26 내지 41 개의 아미노산 잔기, 예를 들어 29, 30, 31 또는 32 개의 아미노산을 함유할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 링커는 화학식 -PGGG-(SGGGG)5P-를 가지며, 여기서 P는 프롤린이고, G는 글리신이고, S는 세린이다(서열 번호: 22). 일부 실시 양태에서, 링커는 GSADDAKKDAAKKDGKS (서열 번호: 23) 서열을 갖는다
[791] 일부 실시 양태에서, scTCR은 α 사슬의 불변 도메인의 면역 글로불린 영역의 잔기를 β 사슬의 불변 도메인의 면역 글로불린 영역의 잔기에 연결하는 공유 이황화 결합을 함유한다. 일부 실시 양태에서, 천연 TCR에 사슬간 이황화 결합이 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 하나 이상의 시스테인은 scTCR 폴리펩타이드의 제 1 및 제 2 세그먼트의 불변 영역 세포외 서열에 통합될 수 있다. 일부 양태에서, 천연 및 비천연 이황화 결합 둘 모두가 바람직할 수 있다.
[792] 도입된 사슬간 이황화 결합을 함유하는 dTCR 또는 scTCR의 일부 실시 양태에서, 천연 이황화 결합은 존재하지 않는다. 일부 실시 양태에서, 천연 사슬 간 이황화 결합을 형성하는 하나 이상의 천연 시스테인은 다른 잔기, 예컨대 세린 또는 알라닌으로 치환된다. 일부 실시 양태에서, 도입된 이황화 결합은 제 1 및 제 2 세그먼트상의 비-시스테인 잔기를 시스테인으로 돌연변이시킴으로써 형성될 수 있다. TCR의 예시적인 비천연 이황화 결합은 국제 PCT 번호 WO2006/000830에 공개되어있다.
[793] 일부 실시 양태에서, TCR 또는 그의 항원-결합 단편은 약 10-5 내지 10-12 M의 또는 그의 개별적인 값 및 범위의 표적 항원에 대한 평형 결합 상수와의 친화성을 나타낸다. 일부 실시 양태에서, 표적 항원은 MHC-펩티드 복합체 또는 리간드이다.
[794] 일부 실시 양태에서, α 및 β 사슬와 같은 TCR을 코딩하는 핵산 또는 핵산들은 PCR, 클로닝 또는 다른 적합한 수단에 의해 증폭될 수 있고, 적합한 발현 벡터 또는 벡터로 클로닝될 수 있다. 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터 일 수 있으며, 임의의 적합한 숙주를 형질전환 또는 형질감염시키는 데 사용될 수 있다. 적합한 벡터는 플라스미드 및 바이러스와 같이, 증식 및 확장 또는 둘 다를 위해 설계된 것을 포함한다.
[795] 일부 실시 양태에서, 벡터는 pUC 시리즈 (Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈 (Stratagene, LaJolla, Calif.), pET 시리즈 (Novagen, Madison, Wis.), pGEX 시리즈 (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) 또는 pEX 시리즈 (Clontech, Palo Alto, Calif.). 일부 양태에서, 1q10, 1011, 1ZhrII (Stratagene), EMBL4 및 1NMI 149와 같은 박테리오파지 벡터가 또한 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 식물 발현 벡터가 사용될 수 있고, pBIO1, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 및 pBIN19 (Clontech)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 동물 발현 벡터는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo (Clontech)를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 레트로바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 사용된다.
[796] 일부 실시 양태에서, 재조합 발현 벡터는 표준 재조합 DNA 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 벡터는, 벡터가 도입될 숙주의 유형(예를 들어, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물)에 특이적인 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈과 같은 조절 서열을 함유할 수 있고, 벡터가 DNA 기반인지 또는 RNA 기반인지를 적절하게 고려할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 벡터는 TCR 또는 항원-결합 부분 (또는 다른 MHC-펩티드 결합 분자)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 작동 가능하게 연결된 비천연 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 프로모터는 비 바이러스 성 프로모터 또는 바이러스 성 프로모터, 예컨대 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터일 수 있고, 뮤린 줄기세포 바이러스의 장기 반복에서 발견되는 프로모터일 수 있다. 다른 공지된 프로모터도 고려될 수 있다.
[797] 일부 실시 양태에서, T-세포 클론이 수득 된 후, TCR α 및 β 사슬이 단리되고 유전자 발현 벡터로 클로닝된다. 일부 실시 양태에서, TCR 알파 및 베타 유전자는 피코르나 바이러스 2A 리보솜 스킵 펩티드를 통해 연결되어 두 사슬이 공발현된다. 일부 실시 양태에서, TCR의 유전자 전달은 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 또는 트랜스포손을 통해 달성된다 (예를 들어, Baum et al. (2006) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13:1050-1063; Frecha et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:1748-1757; and Hackett et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:674-683 참조).
[798] 일부 실시 양태에서, TCR을 코딩하는 벡터를 생성하기 위해, α 및 β 사슬는 관심있는 TCR을 발현하는 T 세포 클론으로부터 단리되고, 발현 벡터로 클로닝된 총 cDNA로부터 PCR 증폭된다. 일부 실시 양태에서, α 및 β 사슬은 동일한 벡터로 클로닝된다. 일부 실시 양태에서, α 및 β 사슬은 상이한 벡터로 클로닝된다. 일부 실시 양태에서, 생성된 α 및 β 사슬은 예컨대, 렌티바이러스 벡터와 같은 레트로바이러스 벡터 내로 통합된다.
3. 키메라 자가(Auto)-항체 수용체 (CAAR)
[799] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 키메라 자가항체 수용체 (CAAR)이다. 일부 실시 양태에서, CAAR은 자가항체에 특이적이다. 일부 실시 양태에서, CAAR을 발현하도록 조작된 T 세포와 같은 CAAR을 발현하는 세포는 자가항체-발현 세포에 특이적으로 결합하고 사멸하는데 사용될 수 있지만, 정상적인 항체 발현 세포에서는 아니다. 일부 실시 양태에서, CAAR-발현 세포는 자가 면역 질환과 같은 자가-항원의 발현과 관련된 자가 면역 질환을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, CAAR-발현 세포는 궁극적으로 자가항체를 생성하고 이들의 세포 표면에 자가항체를 디스플레이하는 B 세포를 표적화할 수 있고, 이들 B 세포를 치료적 개입을 위한 질환-특이적 표적으로 표시한다. 일부 실시 양태에서, CAAR-발현 세포는 항원-특이적 키메라 자가항체 수용체를 사용하여 질병-유발 B 세포를 표적화함으로써 자가 면역 질환에서 병원성 B 세포를 효율적으로 표적화하고 사멸시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체는 미국 특허 출원 공개 번호 2017/0051035에 기재된 것과 같은 CAAR이다.
[800] 일부 실시 양태에서, CAAR은 자가항체 결합 도메인, 막 통과 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포내 신호 전달 도메인은 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있은 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인 및/또는 면역 수용체 티로신계 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포내 신호 전달 영역은 2 차 또는 보조 자극 신호 전달 영역(2차 세포내 신호 전달 영역)을 포함한다.
[801] 일부 실시 양태에서, 자가항체 결합 도메인은 자가 항원 또는 이의 단편을 포함한다. 자가 항원의 선택은 표적화되는 자가항체의 유형에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 자가 항원은 특정 질환 상태, 예를 들어, 자가 면역 질환, 예컨대, 자가항체-매개 자가 면역 질환과 관련된 B 세포와 같은 표적 세포상의 자가항체를 인식하기 때문에 선택될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 자가 면역 질환은 펩피거스 불가리스(pemphigus vugaris: PV)를 포함한다. 예시적인 자가 항원은 데스모글린 1 (desmoglein 1: Dsgl) 및 Dsg3을 포함한다.
4. 다중 타겟팅
[802] 일부 실시 양태에서, 세포 및 방법은 세포상의 둘 이상의 유전적으로 조작된 수용체의 발현과 같은 다중-표적화 전략을 포함하며, 각각은 상이한 항원의 동일성을 인식하고, 전형적으로 상이한 세포내 신호 전달 성분을 포함한다. 이러한 다중-표적화 전략은, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2014055668 A1 (예를 들어, 활성화 및 보조 자극 CAR의 조합을 설명하는 것, 예를 들어, 표적외, 예를 들어 정상 세포 상이 아닌 치료될 질환 또는 상태의 세포에서만 함께 존재하여, 개별적으로 존재하는 2 개의 상이한 항원을 표적으로 하는 것을 기술함)에 기술되어있고, Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (2013 년 12 월) (활성화 및 억제 CAR을 발현하는 세포를 기술함, 치료될 질환 또는 상태의 세포 및 정상 또는 비-질환 세포 모두에 발현하는 항원에 결합하는 활성화 CAR 및 치료를 희망하지 않는 세포 또는 정상 세포에서만 오직 발현하는 다른 항원에 결합하는 억제 CAR을 기술함)
[803] 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 세포는, 일반적으로 제 1 수용체, 예를 들어 제 1 항원에 의해 인식된 항원에 특이적으로 결합할 때, 세포에 대한 활성화 또는 자극 신호를 유도할 수 있는 제 1 유전적으로 조작된 항원 수용체 (예를 들어, CAR 또는 TCR)를 발현하는 수용체를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 세포는, 일반적으로 제 2 수용체에 의해 인식된 제 2 항원에 특이적으로 결합 할 때, 면역 세포에 보조 자극 신호를 유도할 수 있는 키메라 보조 자극 수용체와 같은 제 2 유전적으로 조작된 항원 수용체 (예를 들어, CAR 또는 TCR)을 또한 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 항원 및 제 2 항원은 동일하다. 일부 실시 양태에서, 제 1 항원 및 제 2 항원은 상이하다.
[804] 일부 실시 양태에서, 제 1 및/또는 제 2 유전적으로 조작된 항원 수용체 (예를 들어 CAR 또는 TCR)는 세포에 활성화 또는 자극 신호를 유도할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 함유하는 세포내 신호 전달 성분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 수용체에 의해 유도 된 활성화는 세포에서 신호 전달 또는 단백질 발현의 변화를 포함하여, 면역 반응을 개시하고, 예컨대 ITAM 인산화 및/또는 ITAM-매개 신호 전달 캐스케이드의 개시, 결합 수용체 (예를 들어, CD4 또는 CD8 등) 근처의 분자의 면역학적 시냅스 및/또는 클러스터링, 하나 이상의 전사 인자, 예컨대 NF-KB 및/또는 AP-1의 활성화, 및/또는 사이토카인과 같은 인자의 유전자 발현의 유도, 증식 및/또는 생존을 개시한다.
[805] 일부 실시 양태에서, 제 1 및/또는 제 2 수용체는 CD28, CD137 (4-1BB), 0X40 및/또는 ICOS와 같은 보조 자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제 1 및 제 2 수용체는 상이한 보조 자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일 구현 예에서, 제 1 수용체는 CD28 보조 자극 신호 전달 영역을 함유하고 제 2 수용체는 4-IBB 보조 자극 신호 전달 영역을 포함하거나, 서로 반대의 영역을 함유한다.
[806] 일부 실시 양태에서, 제 1 및/또는 제 2 수용체는 ITAM 또는 ITAM- 유사 모티프를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인 및 보조 자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인을 모두 포함한다.
[807] 일부 실시 양태에서, 제 1 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 함유하는 세포내 신호 전달 도메인을 함유하고, 제 2 수용체는 보조 자극 수용체의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 동일한 세포에서 유도된, 활성화 또는 자극 신호와 조합된 보조 자극 신호는 유전자 발현 증가, 사이토 카인 및 기타 인자의 분비 증가 및 세포 사멸과 같은 T 세포 매개된 이펙터 기능의 증가와 같은 면역 반응을 일으키고 지속시키는 것과 같은 면역 반응을 초래하는 신호이다.
[808] 일부 실시 양태에서, 제 1 수용체 단독의 결찰(ligation) 또는 제 2 수용체 단독의 결찰은 강력한 면역 반응을 유도하지 않는다. 일부 측면에서, 단지 하나의 수용체가 결찰되면, 세포는 항원에 대해 내성 또는 비반응성이 되거나, 억제되고/되거나 인자를 증식 또는 분비하거나 이펙터 기능을 수행하도록 유도되지 않는다. 그러나, 일부 실시 양태에서, 제 1 및 제 2 항원을 발현하는 세포의 만남과 같이 복수의 수용체가 결찰될 때, 예를 들어 하나 이상의 사이토카인의 분비, 증식, 지속 및/또는 표적 세포의 세포 독성 사멸과 같은 면역 이펙터 기능 수행에 의해 유도된 완전한 면역 활성화 또는 자극과 같은 원하는 반응이 달성된다.
[809] 일부 실시 양태에서, 2 개의 수용체는 각각 세포에 대한 활성화 및 억제 신호를 유도하여, 수용체 중 하나에 의한 항원에 대한 결합이 세포를 활성화 시키거나 반응을 유도하지만, 제 2 억제 수용체에 의한 항원으로의 결합은 그 반응을 억제하거나 약화시키는 신호를 유도한다. 예들은 활성화 CAR 및 억제 CAR 또는 iCAR의 조합이다. 이러한 전략은, 예를 들어 활성화 CAR이 질환 또는 상태에서 발현되지만 정상 세포에서도 발현되는 항원에 결합하고, 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되지만 질병이나 상태의 세포에서는 발현되지 않는 별도의 항원에 결합할 때 사용될 수 있다.
[810] 일부 실시 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포는, 질환 또는 상태와 관련되고/되거나 특이적인 항원 이외의 항원을 인식하는 CAR와 같은, 억제성 CAR (iCAR, Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (2013) 참조)를 추가적으로 포함하고, 예컨대, 표적외 효과를 감소시키기 위해, 그의 리간드에 억제성 CAR를 결합함으로써 질환-표적화 CAR가 약화되거나 억제됨을 통해 활성화 신호가 운반된다.
[811] 일부 실시 양태에서, 2 개의 수용체는 각각 세포에 대한 활성화 및 억제 신호를 유도하여, 수용체 중 하나의 항원에 대한 결찰이 세포를 활성화 시키거나 반응을 유도하지만, 제 2 억제 수용체의 항원에 대한 결찰은 그 반응을 억제하거나 약화시키는 신호를 유도한다. 예들은 활성화 CAR 및 억제 CAR (iCAR)의 조합이다. 이러한 전략은, 예를 들어 활성화 CAR이 질환 또는 상태에서 발현되지만 정상 세포에서도 발현되는 항원에 결합하고, 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되지만 질병이나 상태의 세포에서는 발현되지 않는 별도의 항원에 결합할 때와 같이, 표적외 효과의 유발을 감소시킬 수 있도록 사용될 수 있다.
[812] 일부 측면에서, 키메라 수용체는 억제 CAR (예를 들어, iCAR)이거나 이를 포함하고, 세포에서 ITAM- 및/또는 보조 자극-촉진된 반응과 같은 면역 반응을 약화시키거나 억제하는 세포내 성분을 포함한다. 이러한 세포내 신호 전달 성분의 예로는 PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 수용체, A2AR을 포함하는 EP2/4 아데노신 수용체를 비롯한 면역 체크 포인트 분자에서 발견되는 것들이 있다. 일부 측면에서, 조작된 세포는 이러한 억제 분자의 신호 전달 도메인을 포함하거나 그로부터 유도된 억제성 CAR을 포함하여, 예를 들어 활성화 및/또는 보조 자극성 CAR에 의해 유도된 세포의 반응을 약화시키는 역할을 한다.
[813] 일부 실시 양태에서, 다중-표적화 전략은 특정 질환 또는 상태와 관련된 항원이 비-질병화 세포에서 발현되고/되거나 조작된 세포 자체에서 일시적으로 (예를 들어, 유전적 조작과 관련된 자극시) 또는 영구적으로 발현되는 경우에 사용된다. 이러한 경우, 2 개의 개별적이고 각각 특이적인 항원 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성, 선택성 및/또는 효능이 개선될 수 있다.
[814] 일부 실시 양태에서, 복수의 항원, 예를 들어 제 1 및 제 2 항원은 암세포와 같은 표적화되는 세포, 조직 또는 질환 또는 병태에서 발현된다. 일부 측면에서, 세포, 조직, 질환 또는 병태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다. 일부 실시 양태에서, 다수의 항원 중 하나 이상은 일반적으로 세포 요법으로 표적화하기를 원하지 않는 세포, 예를 들어, 정상 또는 비-질병 (non-diseased) 세포 또는 조직, 및/또는 조작된 세포 자체 상에서도 발현된다. 이러한 실시 양태에서, 세포의 반응을 달성하기 위해 다중 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.
IV. 제조 물품 및 키트
[815] 제공된 입양 세포 치료법에 따라 대상체에게 세포를 투여하기 위한 제조 물품 및 세포 및 조성물의 저장 및 투여를 위한 제조 물품, 예컨대 키트 및 장치가 또한 제공된다.
[816] 제조 물품은, 일반적으로 대상체에게 세포를 투여하기 위한 설명서를 비롯하여, 하나 이상의 용기, 전형적으로는 복수의 용기, 포장 재료, 및 용기 또는 용기들 및/또는 포장 상에 또는 이들과 결합된 라벨 또는 포장 삽입물 (package insert)을 포함한다.
[817] 일부 실시 양태에서, 본원에 기재된 치료적 유효량의 임의의 조작된 세포를 포함하는 조성물, 및 질환 또는 병태를 치료하기 위해 대상체에게 투여하기 위한 설명서를 포함하는 제조 물품 및/또는 키트가 제공된다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 본원에 제공된 방법의 일부 또는 전부를 명시할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 세포 요법용 세포의 투여에 대한 특정 설명서, 예를 들어 투여를 위한 대상체의 용량,시기, 선택 및/또는 식별 및 투여 조건을 명시한다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 투여용 조성물과 함께 라벨 또는 패키지 삽입물로서 포함될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 투여될 조성물의 용량, 예를 들어 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 결정하는 것을 명시한다.
[818] 용기는 일반적으로 투여될 세포, 예를 들어 그들의 하나 이상의 단위 용량을 함유한다. 제조 물품은 전형적으로 세포의 단일 단위 용량을 각각 함유하는 다수의 용기를 포함한다. 단위 용량은 제1 용량으로 대상체에게 투여될 세포의 양 또는 수 또는 제 1 또는 임의의 하나 이상의 연속 용량(들)로 투여될 세포의 수 (또는 그 이상) 일 수 있다. 투여 방법과 관련하여 단위 용량은 대상체에게 투여될 세포의 최저 용량 또는 가능한 최소 용량일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량은 본원의 방법에 따라, 특정 질환 또는 병태를 갖는 임의의 대상체 또는 임의의 대상체에게 단일 투여량으로 투여될 수 있는 목표 범위 내의 최소 세포 수 또는 세포 수 또는 최소 기준 단위 (reference units) 또는 목표 기준 단위 또는 기준 단위이다.
[819] 일부 실시 양태에서, 단위 용량에서의 세포 수는 세포의 수 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 세포의 수, 또는 특정 표현형의 그러한 세포, 예를 들어 CD4, CD8, CCR7, CD27, CD45RA, 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3으로부터 선택되는 하나 이상의 마커를 발현하거나 발현하지 않는 세포의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 비이고, 특정 대상체, 이를테면 그 세포가 유래된 대상체에게 일회 용량 (a dose)으로 투여하는 것이 바람직하다. 일부 실시 양태에서, 단위 용량에서의 세포의 수는 세포의 수 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR- 발현 세포의 수, 또는 특정 표현형의 이러한 세포, 예를 들어, CCR7+, CD27+, CD45RA+, CD45RA-, CD4+, CD8+, 아포토시스 마커 음성 (예, 아넥신 V- 또는 카스파제 3-) 세포, 전술한 것 중 임의의 하나 이상에 대해 양성 또는 음성인 세포의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 비이고, 특정 대상체, 이를테면 그 세포가 유래된 대상체에게 일회 용량 (a dose)으로 투여하는 것이 바람직하다.
[820] 일부 실시 양태에서, 단위 용량에서의 세포 수는 세포의 수 또는 재조합 수용체 발현 또는 CAR-발현 세포의 수, 또는 특정 표현형의 이러한 세포, 예를 들어 CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+, CCR7-/CD27-/CD8+; 및 아포토시스 마커 음성 (예, 아넥신 V- 또는 카스파제 3-) 세포의 수, 백분율, 비율, 빈도 및/또는 비이고, 특정 대상체, 이를테면 그 세포가 유래된 대상체에게 일회 용량 (a dose)으로 투여하는 것이 바람직하다. 일부 실시 양태에서, 정해진 수의 세포는 세포의 수 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 세포의 수, 또는 특정 표현형의 이러한 세포, 예를 들어, CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+, CCR7-/CD27-/CD8+; 및 아포토시스 마커 음성 (예, 아넥신 V- 또는 카스파제 3-) 세포, 및/또는 이의 임의의 서브세트의 수, 백분율, 비율 및/또는 비를 포함하고, 특정 대상체, 이를테면 그 세포가 유래된 대상체에게 일회 용량 (a dose)으로 투여하는 것이 바람직하다. 일부 실시 양태에서, 세포는 본원에 따른 방법에 의해 치료될 대상체 또는 이를 필요로 하는 대상체로부터 유래된 것이다.
[821] 일부 실시 양태에서, 설명서는 세포 또는 세포 타입(들)의 용량 또는 수 및/또는 세포 조성물 중 세포 또는 세포 타입, 예를 들어 개별 개체군 (individual populations), 표현형 또는 서브타입, 예를 들어 아넥신 V-/CCR7+/CAR+; 아넥신 V-/CCR7+/CAR+/CD4+; 아넥신 V-/CCR7+/CAR+/CD8+; 아넥신 V-/CD27+/CAR+; 아넥신 V-/CD27+/CAR+/CD4+; 아넥신 V-/CD27+/CAR+/CD8+; 아넥신 V-/CCR7+/CD27+/CAR+; 아넥신 V-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD4+; 아넥신 V-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD8+; 아넥신 V-/CCR7+/CD45RA-/CAR+; 아넥신 V-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD4+; 아넥신 V-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD8+; 아넥신 V-/CCR7-/CD45RA-/CAR+; 아넥신 V-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD4+; 아넥신 V-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD8+; 아넥신 V-/CCR7-/CD27-/CAR+, 아넥신 V-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD4+; 아넥신 V-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CD27+/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CD27+/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제3-/CD27+/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD27+/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD27+/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD45RA-/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제3-/CCR7+/CD45RA-/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD45RA-/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD4+; 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD45RA-/CAR+/CD8+; 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD27-/CAR+; 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD4+; and/or 활성화된 카스파제3-/CCR7-/CD27-/CAR+/CD8+; 또는 이들의 조합의 표현형을 갖는 것들의 빈도, 비율 및/또는 백분율을 명시한다.
[822] 일부 실시 양태에서, 제조 물품은 정해진 수, 비율, 백분율의 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 조작된 CD8+ T 세포 및/또는 정해진 수의 CCR7을 발현하는 조작된 CD4+ T 세포; 및/또는 정해진 비율의 CCR7을 발현하는 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7을 발현하는 CD4+ T 세포를 포함하는 단위 용량의 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제조 물품은 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서, 및/또는 본원에 기재된 임의의 표현형을 평가하기 위한 설명서 및/또는 투여 용량 또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 결정하기 위한 설명서를 포함한다. 특정 표현형을 갖는 CAR+ 발현 세포의 정해진 수, 비율 또는 백분율의 예시적 단위 용량은 본 개시 내용에 걸쳐 기재된 임의의 것을 포함한다.
[823] 일부 실시 양태에서, 각각의 용기는, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 수의 세포, 또는 재조합 수용체-발현 또는 CAR-발현 세포, 또는 특정 표현형의 이러한 세포, 예를 들어 CCR7+/CD4+, CCR7+/CD8+, CD27+/CD4+, CD27+/CD8+, CD45RA+/CD4+, CD45RA+/CD8+, CCR7-/CD4+, CCR7-/CD8+, CD27-/CD4+, CD27-/CD8+, CD45RA-/CD4+, CD45RA-/CD8+, CCR7+/CD27+/CD4+, CCR7+/CD27+/CD8+, CCR7+/CD45RA-/CD4+, CCR7+/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD45RA-/CD4+, CCR7-/CD45RA-/CD8+, CCR7-/CD27-/CD4+, CCR7-/CD27-/CD8+; 및 아포토시스 마커 음성 (예, 아넥신 V- 또는 카스파제 3-) 세포를 개별적으로 포함하는 단위 용량의 세포를 포함한다. 일부 실시 양태에서, 각각의 용기는, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 수의 목표 범위 내의 기준 단위 또는 목표 범위 내의 다수의 기준 단위를 포함하는 단위 용량의 세포를 개별적으로 포함한다.
[824] 일부 실시 양태에서, 제조 물품 또는 키트는 재조합 수용체를 발현하는 복수의 CD4+ T 세포를 포함하는 용기, 선택적으로 바이알, 및 재조합 수용체를 발현하는 복수의 CD8+ T 세포를 포함하는 용기, 선택적으로 바이알을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제조 물품 또는 키트는 재조합 수용체를 발현하는 복수의 CD4+ T 세포를 포함하는 용기, 선택적으로 바이알을 포함하고, 동일한 용기에, 재조합 수용체를 발현하는 복수의 CD8+ T 세포를 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 동결 보호제는 세포와 함께 포함된다. 일부 측면에서, 용기는 백 (bag)이다.
[825] 적합한 용기는 예를 들어, 병, 바이알, 주사기 및 주입 백과 같은 가요성 백 (flexible bags)을 포함한다. 특정 실시 양태에서, 용기는 백(bag), 예를 들어, 대상체에게 세포를 주입하기에 적합한 가요성 백, 예를 들어 가요성 플라스틱 또는 PVC 백 및/또는 IV 용액 백이다. 일부 실시 양태에서의 백은, 멸균 용액의 제공 및 세포 및 조성물의 전달을 위해, 밀봉가능하고 및/또는 멸균될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 용기, 예를 들어, 백은 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500 또는 1000 mL 용량, 예를 들어 약 10 내지 약 100 또는 약 10 내지 약 500 mL 용량 일 수 있다. 일부 실시 양태에서, 용기 (예를 들어, 백)은 안정하고 및/또는 하나 이상의 다양한 온도, 이를테면 저온과 같은, 예를 들어 (약) -20 ℃, -80 ℃, -120 ℃, 135 ℃ 또는 그 이하 및/또는 동결 보존 (cryopreservation)에 적합한 온도, 및/또는 다른 온도, 이를테면 세포를 해동하기에 적합한 온도 및 (약) 37 ℃ 와 같은 체온, 예를 들어 치료 직전의 대상체의 위치 또는 치료 위치 (예를 들어, 병상)에서 해동을 가능하게 하는 온도에서 세포의 안정한 저장 및/또는 유지를 제공하는 물질이거나 및/또는 이러한 물질로부터 만들어진다.
[826] 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 용기는 하나 이상의 포트, 예를 들어 멸균 접근 포트, 예를 들어 하나 이상의 튜브에 튜빙 또는 캐뉼러를 연결하기 위한 포트, 예를 들어 정맥내 또는 다른 주입을 위한 및/또는 다른 용기로부터 및 다른 용기, 예를 들어 세포 배양 및/또는 저장 백 또는 다른 용기로의 이동을 목적으로 하는 연결을 위한 포트를 갖는다. 예시적 용기는 주입 백, 정맥내 용액 백, 주사 바늘로 천공 가능한 마개가 있는 마개가 있는 바이알을 포함한다.
[827] 제조 물품은 하나 이상의 식별 정보 및/또는 사용 설명서와 함께 패키지 삽입물 또는 라벨을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 정보 또는 설명서는 내용물이 특정 병태 또는 질환을 치료하기 위하여 사용될 수 있거나 사용되어야 한다는 것을 나타내고 및/또는 이에 대한 지침을 제공한다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 제조 물품의 내용물이 질병 또는 병태를 치료하는데 사용될 것임을 나타낼 수 있다. 일부 실시 양태에서, 라벨 또는 패키지 삽입물은 예를 들어, 제공된 방법의 임의의 실시 양태에 따라, 대상체, 예를 들어 세포의 1 차 및 1 회 이상의 연속 용량의 투여를 포함하는 방법을 통해, 예를 들어 세포가 유래된 대상체를 치료하기 위한 지침을 제공한다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 제 1 투여 (first dose)에서의 하나의 단위 용량, 예를 들어, 제조 물품 내의 단일 개별 용기의 내용물의 투여에 이어서 특정 시점 또는 특정 시간대 내에서 및/또는 대상체에서 하나 이상의 인자 또는 결과의 존재 또는 부재 또는 양 또는 정도의 검출 후에 하나 이상의 연속 용량을 투여하는 것을 명시한다.
[828] 일부 실시 양태에서, 설명서는 하나 이상의 단위 용량을 대상체에게 투여하는 것을 명시한다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 본원에 제공된 방법을 사용하여 결정된 용량의 투여를 명시한다. 일부 실시 양태에서, 설명서는 세포 표면 마커의 발현의 평가에 기초하여 적절한 용량을 결정 및/또는 계산하는 방법을 명시한다.
[829] 일부 실시 양태에서, 라벨 또는 패키지 삽입물 또는 패키징은 세포가 유래된 및/또는 투여될 대상의 특정 동일성을 나타내기 위한 식별자를 포함한다. 자가 전달 (autologous transfer)의 경우, 세포가 유래된 대상체의 아이덴티티 (identity)는 세포가 투여될 대상체의 아이덴티티 (identity)와 동일하다. 따라서, 식별 정보는 세포가 특정 환자, 예를 들어 세포가 원래 유래된 특정 환자에게 투여되도록 명시할 수 있다. 이러한 정보는 패키징 재료 및/또는 라벨에 바코드 또는 다른 코딩된 식별자의 형태로 존재할 수 있거나, 또는 대상체의 이름 및/또는 다른 식별 특성을 나타낼 수 있다.
[830] 일부 실시 양태에서의 제조 물품은 하나 이상의, 전형적으로는 복수의, 세포를 포함하는 조성물, 예를 들어, 이의 개별 단위 투여 형태 (individual unit dose forms)를 함유하는 용기를 포함하고 추가 제제, 예를 들어 세포와 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로 조합되어 투여될 추가의 제제, 예를 들어 세포 독성제 또는 다른 치료제를 포함하는 조성물이 포함된 하나 이상의 추가 용기를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 제조 물품은 약학적으로 허용가능한 완충제를 포함하는 다른 용기 또는 동일한 용기를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 튜브, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
[831] 용어 "패키지 삽입물"은 치료 제품의 상업용 패키지에 통상적으로 포함된 지침을 나타내는데 사용되고, 이는 그러한 치료 제품의 적응증 (indications), 사용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 금기 및/또는 경고에 관한 정보를 포함한다.
[832] 일부 실시 양태에서, 제조 물품 및/또는 키트는 생물학적 샘플, 예를 들어 투여 후보이거나 요법이 투여된 대상체로부터의 생물학적 샘플을 분석하기 위한 하나 이상의 시약 및 선택적으로 시약 또는 분석법의 사용 지침을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 제조 물품 및/또는 키트는 특정 표현형 마커의 수준, 예를 들어, CD4, CD8, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA, 및 아포토시스를 나타내는 특정 마커, 예컨대 아넥신 V 및/또는 카스파제 3 절단 (cleavage)의 수준을 측정하기 위한 시약 및 측정 지침을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈장 또는 혈청 샘플이거나 이로부터 수득된다. 일부 실시 양태에서, 시약은 세포 요법의 투여 전 또는 세포 요법의 투여 후, 진단 목적으로 대상체를 확인하고/하거나 치료 결과 및/또는 독성을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시 양태에서, 제조 물품 및/또는 키트는 독성과 관련된 특정 세포 표면 마커 또는 다른 마커의 수준을 측정하기 위한 시약 및 측정 지침을 추가로 포함한다. 일부 실시 양태에서, 시약은 세포 표면 마커 또는 다른 마커, 예컨대 면역 분석, 앱 타머-기반 분석, 조직학적 또는 세포학적 분석, 또는 mRNA 발현 수준 분석을 측정하기 위해 시험관내 (in vitro) 분석을 수행하기 위한 성분을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 시험관내 분석은 효소결합면역흡착분석 (ELISA), 면역블롯팅, 면역침강, 방사선 면역 검정 (RIA), 면역 염색, 유세포 분석, 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 화학 발광 분석, 측면 유동 면역 분석, 억제 분석 및 결합활성 분석 (avidity assay) 중에서 선택된다. 일부 측면에서, 시약은 세포 표면 마커 또는 다른 마커에 특이적으로 결합하는 결합 시약이다. 일부 경우에, 결합 시약은 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 앱타머 또는 핵산 프로브이다. 일부 실시 양태에서, 시약은 마커, 예컨대 CD4, CD8, CCR7, CD27, CD45RA, 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3의 발현 및/또는 존재를 검출하기 위한 시약을 포함한다.
V. 정의
[833] 달리 정의되지 않는 한, 여기에 사용된 모든 기술 용어, 표기 및 다른 기술적 및 과학적 용어 또는 용어들은 청구된 주제가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 본 발명에서 정의되며, 본 발명의 정의를 포함하는 것은 당해 기술 분야에서 일반적으로 이해되는 것 이상의 실질적인 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 아니된다.
[834] 본원에서 사용되는, 단수 형태 "a", "an"및 "the"는 문맥상 명백하게 달리 명시하지 않는 한 복수 대상을 포함한다. 예를 들어, "a"또는 "an"은 "적어도 하나"또는 "하나 이상"을 의미한다. 본원에 기술된 측면 및 변형은 측면 및 변형으로 "이루어지는 (consisting)" 및/또는 "필수적으로 이루어지는 (consisting essentially of)"를 포함하는 것으로 이해된다.
[835] 본 개시 내용 전반에 걸쳐, 청구된 주제의 다양한 관점이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식에서의 설명은 편의상 및 간략화를 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 아니됨을 이해해야 한다. 따라서, 범위에 대한 기술은 가능한 모든 하위 범위 및 그 범위 내의 개별적인 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한과 하한 사이 및 언급된 범위 내의 임의의 다른 명시된 또는 개재된 값은 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있으며, 기술된 범위 내에서 특별히 배제된 제한에 따라 청구범위 내에 또한 포함된다. 언급된 범위가 제한 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 포함된 제한 각각 또는 모두를 제외한 범위가 청구 대상에 또한 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
[836] 본원에서 사용된 용어 "약 (about)"은 이 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본원에서 "약"의 값 또는 파라미터에 대한 언급 (reference)은 그 값 또는 파라미터 그 자체를 대상으로 하는 실시 양태를 포함한다 (그리고 설명한다). 예를 들어, "약 X"를 언급하는 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다.
[837] 본원에 사용된 바와 같이, 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치가 개시된 서열, 예를 들어 서열 목록에 기재된 서열에서 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치에 "상응"한다는 것은, 표준 정렬 알고리즘, 예컨대 GAP 알고리즘을 사용하여 상기 기재된 서열과 상동성을 최대화하는 정렬시 확인된 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치를 말한다. 서열을 정렬시킴으로써, 예컨대, 보존된 아미노산 잔기 및 동일한 아미노산 잔기를 가이드로서 사용하여 상응하는 잔기를 확인할 수 있다. 일반적으로, 상응하는 위치를 확인하기 위해, 가장 높은 정도의 매치가 얻어지도록 아미노산 서열이 정렬된다 (예를 들어, Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New.Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; 및 Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073 참조).
[838] 본 발명에 사용되는바, 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터뿐만 아니라 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 그들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본 발명에서는 "발현 벡터"라 지칭한다. 벡터 중에는 레트로바이러스, 예컨대 감마레트로바이러스 및 렌티 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 있다.
[839] 용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양체 9host cell culture)"는 상호교환적으로 사용되며, 이러한 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하는데, 여기에는 최초의 형질전환된 세포 및 계대의 수에 관계없이 그로부터 유래된 자손이 포함된다. 자손은 핵산 함량이 부모 세포와 완전히 동일하지는 않을 수 있고, 돌연변이를 포함할 수 있다. 본래의 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본원에 포함된다.
[840] 본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상의 또는 세포 내의 검출 가능한 존재를 지칭한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예컨대 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 존재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소타입-매치된 (isotype-matched) 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출 가능하다.
[841] 본 발명에서 사용되는 바, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "음성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상에 또는 세포내의 실질적인 검출 가능한 존재의 부재를 말한다. 표면 마커를 언급할때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예컨대 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 부재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소형-매치된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출되지 않고, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 낮은 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출된다.
[842] 본원에 사용된 바와 같이, 아미노산 서열 (레퍼런스 폴리펩티드 서열)에 대해 사용되는 경우, "백분율 (%) 아미노산 서열 상동성" 및 "백분율 상동성"은, 서열들과, 최대치의 백분율 서열 상동성을 얻기 위하여 필요하다면 도입되는 갭을 정렬한 후, 상기 기준 폴리펩타이드 서열 내 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 (예컨대, 대상 항체 또는 단편) 내 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되며, 상기 서열 상동성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않는다. 백분율 아미노산 서열 상동성을 결정하는 목적을 위한 서열정렬은 다양한 방식, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈리안 (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공중이 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여 달성될 수 있다. 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 적절히 결정할 수 있다.
[843] 아미노산 치환은 폴리펩타이드의 하나의 아미노산이 다른 아미노산에 의해 대체되는 것을 포함할 수 있다. 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비-보존적 아미노산 치환일 수 있다. 아미노산 치환은 예컨대 목적하는 항체와 같은 결합 분자 및 목적하는 활성, 예컨대 유지 및/또는 개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝된 생성물 내로 도입될 수 있다.
[844] 아미노산은 일반적으로 다음의 공통 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다 :
(1) 소수성 : 노르류신 (Norleucine), Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성 : Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성 : Asp, Glu;
(4) 염기성 : His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기 : Gly, Pro;
(6) 방향족 : Trp, Tyr, Phe.
[845] 일부 실시 양태에서, 보존적 치환은 이들 클래스 중 하나의 구성원을 동일한 클래스의 다른 구성원으로 교환하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시 양태에서, 비-보존적 아미노산 치환은 이들 클래스 중 하나의 구성원을 다른 클래스로 교환하는 것을 포함할 수 있다.
[846] 본원에 사용된 바와 같이, 조성물은 세포를 포함하여 둘 이상의 생성물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비-수성 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다.
[847] 본원에 사용 된 "대상체 (subject)"는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유 동물이며, 통상적으로 인간이다.
VI. 예시적인 실시 양태
[848] 다음의 실시 양태들이 제공된다:
1. 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 치료 조성물 (therapeutic composition)로서, 여기서 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 적어도 약 40 %, 적어도 약 50 %, 적어도 약 60 %, 적어도 약 70 %, 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 91 %, 적어도 약 92 %, 적어도 약 93 %, 적어도 약 94 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 %, 적어도 약 99 % 또는 적어도 약 100 %, 또는 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 40 %, 약 50 %, 약 60 %, 약 70 %, 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
2. 실시 양태 1에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 50 % 또는 적어도 약 50 %, 또는 50 % 또는 약 50 % 가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
3. 실시 양태 1에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 60 % 또는 적어도 약 60 %, 또는 60 % 또는 약 60 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
4. 실시 양태 1에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 70 % 또는 적어도 약 70 %, 또는 70 % 또는 약 70 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
5. 실시 양태 1에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 80 % 또는 적어도 약 80 %, 또는 80 % 또는 약 80 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
6. 실시 양태 1-5 중 어느 하나에 있어서, 여기서:
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ 및 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 적어도 또는 적어도 약 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 % CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 적어도 또는 적어도 약 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 % CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 및/또는
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 3 : 1 또는 대략 1 : 2 내지 2 : 1, CD4+ : CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지는 것인 치료 조성물.
7. 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 치료 조성물로서, 여기서 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 91 %, 적어도 약 92 %, 적어도 약 93 %, 적어도 약 94 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 %, 적어도 약 99 % 또는 적어도 약 100 %, 또는 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 여기서:
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ 및 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포가 적어도 약 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 % CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 적어도 또는 적어도 약 30 %, 50 % 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 % CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 및/또는
조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 3 : 1 또는 대략 1 : 2 내지 2 : 1, CD4+ : CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지는 것인 치료 조성물.
8. 실시 양태 1-7 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중의 T 세포의 총 수, 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포의 총 수가 CCR7에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
9. 실시 양태 1-7 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중의 T 세포의 총 수, 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포의 총 수가 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
10. 실시 양태 1-7 중 어느 하나에 있어서, 조성물 중의 T 세포의 총 수, 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포의 총 수는 CCR7 및 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
11. 실시 양태 1-10 중 어느 하나에 있어서, 조성물은 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 것인 조성물.
12. 실시 양태 1-11 중 어느 하나에 있어서,
단위 용량 또는 조성물이 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108 개, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107 개, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하고 (각각 포함); 및/또는
단위 용량 또는 조성물이 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 약 1 x 108개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함하는 것인 조성물.
13. 실시 양태 1-12 중 어느 하나에 있어서, 조성물 또는 단위 용량이 적어도 약 33 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함하는 것인 조성물.
14. 실시 양태 1-13 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 또는 조성물이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107,(약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107,(약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함 (각각 포함)하는 것인 조성물.
15. 실시 양태 1-14 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+이고; 또는 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+인 조성물.
16. 실시 양태 1-15 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 또는 조성물이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 조성물.
17. 실시 양태 16에 있어서, 정해진 수 또는 비율의 세포가 세포 상에서 CD27 및/또는 CD45RA의 발현의 부재 또는 발현에 추가로 기초하는 것인 조성물.
18. 실시 양태 16 또는 실시 양태 17에 있어서, 정해진 수의 세포가 D27 및/또는 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 수의 세포가 추가로 CD27+또는 CD45RA- 세포인 조성물.
19. 실시 양태 1-15 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량 또는 조성물이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율이 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 조성물.
20. 실시 양태 19에 있어서, 정해진 세포 수 또는 비율이 세포 상에 CCR7 또는 CD45RA 세포의 발현 또는 발현의 부재에 기초하는 것인 조성물.
21. 실시 양태 19 또는 실시 양태 20에 있어서, 정해진 수의 세포는 CCR7 및/또는 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 수의 세포는 CCR7+ 또는 CD45RA- 세포인 조성물.
22. 실시 양태 1-21 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량 또는 조성물이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 조성물.
23. 실시 양태 1-21 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량 또는 조성물이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 조성물.
24. 실시 양태 1-23 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA-인 조성물.
25. 실시 양태 1-24 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 수 또는 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108,(약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108,(약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 조성물.
26. 실시 양태 1-24 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 수 또는 단위 용량은 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 조성물.
27. 실시 양태 1-26 중 어느 하나에 있어서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 살아 있거나 생존 가능한 그러한 세포의 총 수인 것인 조성물.
28. 실시 양태 1-27 중 어느 하나에 있어서, CD3+세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 음성 (apoptotic marker negative (-))인 이러한 세포의 총 수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)인 조성물.
29. 실시 양태 1-28 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함하는 것인 조성물.
30. 실시 양태 1-29 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 조성물.
31. 실시 양태 30에 있어서, 질환, 장애 또는 병태가 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환. 또는 종양 또는 암인 조성물.
32. 실시 양태 30 또는 실시 양태 31에 있어서, 표적 항원이 종양 항원인 조성물.
33. 실시 양태 30-32 중 어느 하나에 있어서, 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸 콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 치료 조성물.
34. 실시 양태 1-33 중 어느 하나에 있어서, 상기 재조합 수용체는 기능성 비-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원 결합 단편이거나 이를 포함하는 것인 조성물.
35. 실시 양태 1-34 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인 조성물.
36. 실시 양태 1-35 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함하는 것인 조성물.
37. 실시 양태 36에 있어서, 항원-결합 도메인이 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함하는 것인 조성물.
38. 실시 양태 37에 있어서, 단편이 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 조성물.
39. 실시 양태 37 또는 실시 양태 38에 있어서, 단편이 scFv를 포함하는 것인 조성물.
40. 실시 양태 1-39 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것인 조성물.
41. 실시 양태 40에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 조성물.
42. 실시 양태 41에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 조성물.
43. 실시 양태 42에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 조성물.
44. 실시 양태 40-43 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 조성물.
45. 실시 양태 40-44 중 어느 하나에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 조성물.
46. 실시 양태 45에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인이 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 조성물.
47. 실시 양태 45 또는 실시 양태 46에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 조성물.
48. 실시 양태 45-47 중 어느 하나에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인이 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 조성물.
49. 실시 양태 1-48 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 조성물.
50. 실시 양태 1-49 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체에 대해 자가 (autologous)인 조성물.
51. 실시 양태 1-50 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체에 대해 동종 이계 (allogeneic)인 조성물.
52. 실시 양태 1-51 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 용기, 및 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서를 포함하는 것인 제조 물품.
53. 다음을 포함하는 제조 물품:
하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기 (container)로서, 상기 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 (선택적으로 발현되도록 조작된) 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서 단위 용량의 세포는 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 (선택적으로 표면 발현하는) 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율 (defined ratio)의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율 (defined ratio)의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트 (subset)의 세포를 포함하는 것인 용기; 및
질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서 (instructions).
54. 다음을 포함하는 제조 물품:
하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기 (container)로서, 상기 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 (선택적으로 발현되도록 조작된) 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서 단위 용량의 세포는 분화 클러스터 27 (CD27)을 발현하는 (선택적으로 표면 발현하는) 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트 (subset)의 세포를 포함하는 것인 용기; 및
질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하기 위한 설명서.
55. 실시 양태 53 또는 실시 양태 54에 있어서, 단위 용량의 세포가 실시 양태 1-51 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 것인 제조 물품.
56. 실시 양태 53-55 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량의 세포가 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함하고; 및/또는 단위 용량의 세포가 정해진 수의 CD4+/CCR7+ 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
57. 실시 양태 53-55 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량의 세포가 정해진 수의 CD8+/CD27+ 세포를 포함하고; 및/또는 단위 용량의 세포는가 정의 된 수의 CD4+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
58. 실시 양태 52-57 중 어느 하나에 있어서,
단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108,(약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+세포 (수용체+/CD4+세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하고 (각각 포함); 및/또는
단위 용량이 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
59. 실시 양태 52-58 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함하는 것인 제조 물품.
60. 실시 양태 52-59 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 를 포함 (각각 포함)하는 것인 제조 물품.
61. 실시 양태 52-60 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이고; 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 인 제조 물품.
62. 실시 양태 51-56 및 58-61 중 어느 하나에 있어서, 세포 또는 조성물의 단위 용량 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 제조 물품.
63. 실시 양태 62에 있어서, 정해진 세포 수 또는 비율이 세포 상에 CD27 또는 CD45RA 세포의 발현 또는 발현의 부재에 기초하는 것인 제조 물품.
64. 실시 양태 62 또는 실시 양태 63에 있어서, 정해진 수의 세포가 CD27 및/또는 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 수의 세포는 CD27+ 또는 CD45RA- 세포인 제조 물품.
65. 실시 양태 51-55 및 57-61 중 어느 하나에 있어서, 세포 또는 조성물의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 제조 물품.
66. 실시 양태 65에 있어서, 정해진 수 또는 비율이 세포 상에서 CCR7 및/또는 CD45RA의 발현의 부재 또는 발현에 추가로 기초하는 것인 제조 물품.
67. 실시 양태 65 또는 실시 양태 66에 있어서, 정해진 수의 세포가 CCR7 및/또는 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 수의 세포는 CCR7+ 또는 CD45RA- 세포인 제조 물품.
68. 실시 양태 51-67 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량의 세포가 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
69. 실시 양태 51-67 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량의 세포가 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
70. 실시 양태 51-69 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포인 제조 물품.
71. 다음을 포함하는 제조 물품:
하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기 (container)로서, 상기 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는, 선택적으로 발현되도록 조작된, 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서 단위 용량의 세포는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트 (subset)의 세포를 포함하는 것인 용기; 및
질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하기 위한 설명서.
72. 실시 양태 63, 64 및 66-71 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량의 세포가 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
73. 실시 양태 63, 64 및 66-71 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량의 세포는 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 제조 물품.
74. 실시 양태 63, 64 및 66-73 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약)5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약)1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 제조 물품.
75. 실시 양태 63, 64 및 66-74 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
76. 실시 양태 63, 64 및 66-75 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
77. 실시 양태 63, 64 및 66-76 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 제조 물품.
78. 실시 양태 63, 64 및 66-77 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 인 제조 물품.
79. 실시 양태 63, 64 및 66-78 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
80. 실시 양태 79에 있어서, 정해진 수 또는 비율이 세포 상에서 CD45RA의 발현 또는 발현의 부재에 추가로 기초하는 것인 제조 물품.
81. 실시 양태 79 또는 실시 양태 80에 있어서, 정해진 수의 세포가 CD45RA를 추가로 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 세포가 CD45RA- 세포 인 제조 물품.
82. 실시 양태 52, 53, 55, 56, 58-64 및 66-81 중 어느 하나에 있어서, 선택적으로 동일한 방법에 따라 생성된 복수의 물품 또는 단위 용량 중에서, CCR7을 발현하는 세포 (CCR7+ 세포)의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 이하 20 %, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 제조 물품.
83. 실시 양태 52-82 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 수 또는 단위 용량이 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함 (각각 포함)하는 것인 제조 물품.
84. 실시 양태 52-83 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 수 또는 단위 용량이 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
85. 실시 양태 52-84 중 어느 하나에 있어서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수가 살아 있거나 생존 가능한 세포의 총 수인 제조 물품.
86. 실시 양태 52-85 중 어느 하나에 있어서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수가 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 음성 (apoptotic marker negative (-))인 세포의 총 수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)인 제조 물품.
87. 실시 양태 52-86 중 어느 하나에 있어서, 설명서가 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량의 투여를 명시하는 것인 제조 물품.
88. 실시 양태 87에 있어서, 복수의 개별 조성물이 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 것인 제조 물품.
89. 실시 양태 88에 있어서, 제 1 조성물이 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
90. 실시 양태 88에 있어서, 제 1 조성물이 CD4+ T 세포를 포함하는 것인 제조 물품.
91. 실시 양태 88-90 중 어느 하나에 있어서, 설명서가 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여하는 것을 명시하는 것인 제조 물품.
92. 실시 양태 88-91 중 어느 하나에 있어서, 설명서가 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 것을 명시하는 것인 제조 물품.
93. 실시 양태 88-92 중 어느 하나에 있어서, 설명서가 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 것을 명시하는 것인 제조 물품.
94. 실시 양태 52-93 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함하는 제조 물품.
95. 실시 양태 1-94 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 제조 물품 또는 조성물.
96. 실시 양태 95에 있어서, 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암인 제조 물품 또는 조성물.
97. 실시 양태 96에 있어서, 표적 항원이 종양 항원인 제조 물품 또는 조성물.
98. 실시 양태 95-97 중 어느 하나에 있어서, 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸 콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 제조 물품 또는 조성물.
99. 실시 양태 1-98 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
100. 실시 양태 1-99 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인 제조 물품 또는 조성물.
101. 실시 양태 1-100 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
102. 실시 양태 101에 있어서, 항원-결합 도메인이 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
103. 실시 양태 102에 있어서, 단편이 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
104. 실시 양태 102 또는 실시 양태 103에 있어서, 단편이 scFv를 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
105. 실시 양태 1-104 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
106. 실시 양태 105에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
107. 실시 양태 106에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
108. 실시 양태 107에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
109. 실시 양태 1-108 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
110. 실시 양태 1-109 중 어느 하나에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
111. 실시 양태 110에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
112. 실시 양태 110 또는 실시 양태 111에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 제조 물품 또는 조성물.
113. 실시 양태 110-112 중 어느 하나에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인이 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 제조 물품 또는 조성물.
114. 실시 양태 110-113 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 제조 물품 또는 조성물.
115. 실시 양태 110-114 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체에 대해 자가인 제조 물품 또는 조성물.
116. 실시 양태 110-114 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체에 대해 동종 이계인 제조 물품 또는 조성물.
117. 치료 방법으로서, 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 실시 양태 1 또는 실시 양태 7의 치료 조성물 또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+및/또는 CD4+T세포를 포함하는 치료 조성물의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 선택적으로 여기서;
세포의 단위 용량이 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및/또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7을 발현하는 세포 (CCR7+세포)의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 이하 20 %, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 치료 방법.
118. 실시 양태 117에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함하는 것인 방법.
119. 실시 양태 117에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CCR7+ 세포를 포함하는 것인 방법.
120. 치료 방법으로서, 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 실시 양태 1 또는 실시 양태 7의 치료 조성물 또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T세포를 포함하는 치료 조성물의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 선택적으로 여기서;
세포의 단위 용량이 분화 클러스터 27 (CD27)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및/또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CD27을 발현하는 세포 (CD27+ 세포)의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 이하 20 %, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 치료 방법.
121. 실시 양태 120에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
122. 실시 양태 120에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CD27+세포를 포함하는 것인 방법.
123. 실시 양태 117-122 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108,(약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
124. 실시 양태 117-123 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 약 1 x 108개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107개 이하, 약 5 x 106개 이하, 약 1 x 106개 이하, 또는 약 5 x 105개 이하의 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
125. 실시 양태 117-124 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함하는 것인 방법.
126. 실시 양태 117-125 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107,(약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107,또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
127. 실시 양태 117-126 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+이고; 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+인 방법.
128. 실시 양태 117-119 및 123-127 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
129. 실시 양태 117-119 및 123-128 중 어느 하나에 있어서, 정해진 수 또는 비율이 세포 상에서 CD27 및/또는 CD45RA의 발현 부재 또는 발현에 추가로 기초하는 것인 방법.
130. 실시 양태 120-127 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
131. 실시 양태 120-127 및 130 중 어느 하나에 있어서, 정해진 수 또는 비율이 세포 상에서 CCR7 및/또는 CD45RA의 발현 부재 또는 발현에 추가로 기초하는 것인 방법.
132. 실시 양태 131에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-세포를 포함하는 것인 방법.
133. 실시 양태 129, 131 또는 132에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 인 방법.
134. 실시 양태 131에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 방법.
135. 실시 양태 129, 131 또는 132 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA-인 방법.
136. 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 실시 양태 1 또는 실시 양태 7의 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
137. 실시 양태 136에 있어서, 여기서:
세포의 단위 용량이 CCR7 및 CD27 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7 (CCR7+세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 방법.
138. 치료 방법으로서, 상기 방법은 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게, 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서:
세포의 단위 용량이 CCR7 및 CD27 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+T세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고; 및
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7 (CCR7+ 세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 방법.
139. 실시 양태 129 및 131-138 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
140. 실시 양태 129 및 131-138 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
141. 실시 양태 129 및 131-140 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약)1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
142. 실시 양태 129 및 131-141 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD8+세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
143. 실시 양태 129 및 131-142 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
144. 실시 양태 129 및 131-143 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107,(약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107,(약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
145. 실시 양태 129 및 131-144 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+인 방법.
146. 실시 양태 129 및 131-145 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
147. 실시 양태 129 및 131-146 중 어느 하나에 있어서, 정해진 수 또는 비율이 세포 상에서 CD45RA의 발현 부재 또는 발현에 추가로 기초하는 것인 방법.
148. 실시 양태 129 및 131-147 중 어느 하나에 있어서, 정해진 수의 세포는 추가적으로 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않으며, 선택적으로 정해진 수의 세포는 추가적으로 CD45RA- 세포인 방법.
149. 실시 양태 117-148 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108,(약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108,(약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+세포) 또는 총 CD3+세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
150. 실시 양태 117-149 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 방법.
151. 실시 양태 117-150 중 어느 하나에 있어서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수가 살아 있거나 생존 가능한 세포의 총 수인 방법.
152. 실시 양태 117-151 중 어느 하나에 있어서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수가 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 음성 (apoptotic marker negative (-))인 세포의 총 수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)인 방법.
153. 실시 양태 117-152 중 어느 하나에 있어서, 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
154. 실시 양태 117-153 중 어느 하나에 있어서, 복수의 개별 조성물이 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 것인 방법.
155. 실시 양태 154에 있어서, 제 1 조성물이 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
156. 실시 양태 154에 있어서, 제 1 조성물이 CD4+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
157. 실시 양태 154-156 중 어느 하나에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
158. 실시 양태 154-157 중 어느 하나에 있어서, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
159. 실시 양태 154-158 중 어느 하나에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
160. 실시 양태 117-159 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체인 방법.
161. 실시 양태 117-160 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 방법.
162. 실시 양태 161에 있어서, 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암인 방법.
163. 실시 양태 161 또는 162에 있어서, 표적 항원이 종양 항원인 방법.
164. 실시 양태 161-163 중 어느 하나에 있어서, 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸 콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 방법.
165. 실시 양태 117-164 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함하는 것인 방법.
166. 실시 양태 117-165 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인 방법.
167. 실시 양태 117-166 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함하는 것인 방법.
168. 실시 양태 167에 있어서, 항원-결합 도메인이 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함하는 것인 방법.
169. 실시 양태 168에 있어서, 단편이 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
170. 실시 양태 168 또는 실시 양태 169에 있어서, 단편이 scFv를 포함하는 것인 방법.
171. 실시 양태 117-161 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것인 방법.
172. 실시 양태 171에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
173. 실시 양태 172에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 방법.
174. 실시 양태 173에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 방법.
175. 실시 양태 117-174 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
176. 실시 양태 117-175 중 어느 하나에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
177. 실시 양태 176에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
178. 실시 양태 176 또는 실시 양태 177에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
179. 실시 양태 176-178 중 어느 하나에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인이 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 방법.
180. 실시 양태 117-179 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 방법.
181. 실시 양태 117-179 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체에 대해 자가인 방법.
182. 실시 양태 117-179 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체에 대해 동종 이계인 방법.
183. 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 단위 용량을 결정하는 방법으로서, 상기 방법은 다음을 포함하는 것인 방법:
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CCR7을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계;
(b) 수용체+/CCR7+ 세포의 수, 백분율 또는 비율에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계로서, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 단계.
184. 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 단위 용량을 결정하는 방법으로서, 상기 방법은 다음을 포함한는 것인 방법:
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CD27을 발현하는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계(수용체+/CD27+); 및
(b) 수용체+/CD27+ 세포의 수, 백분율 또는 비율에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계로서, 여기서 단위 용량이 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 단계.
185. 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은 다음을 포함하는 것인 방법:
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CCR7 및/또는 CD27을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+ 및/또는 수용체+/CD27+ )의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계; 및
(b) T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해 조성물의 전체 또는 일부 및 선택적으로 다른 용액으로 용기를 채우는 단계로서, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하거나, 또는 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 단계.
186. 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은 T 세포 조성물의 전체 또는 일부로 용기를 채우는 단계를 포함하고, T 세포 조성물은 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하며, T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
187. 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은 T 세포 조성물의 전체 또는 일부로 용기를 채우는 단계를 포함하고, T 세포 조성물은 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하며, T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 여기서 단위 용량은 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
188. 실시 양태 184-187 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함하는 것인 방법.
189. 실시 양태 184-187 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 CD4+/CCR7+ 세포를 포함하는 것인 방법.
190. 실시 양태 184-189 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
191. 실시 양태 184-180 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 이하, 약 5 x 106 이하, 약 1 x 106 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함하는 것인 방법.
192. 실시 양태 184-191 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함하는 것인 방법.
193. 실시 양태 184-192 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
194. 실시 양태 184-193 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이고; 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 인 방법.
195. 실시 양태 184-194 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
196. 실시 양태 184-195 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 CD27 및/또는 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 여기서 단위 용량은 CD27+또는 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하는 것인 방법.
197. 실시 양태 184-196 중 어느 하나에 있어서, 치료 조성물에서 CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율, 선택적으로 CD27+또는 CD45RA-인 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
198. 실시 양태 196 또는 실시 양태 197에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 거인 방법.
199. 실시 양태 196 또는 실시 양태 197에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 방법.
200. 실시 양태 196-199 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)가 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA인 방법.
201. 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 단위 용량을 결정하는 방법으로서, 상기 방법은 다음을 포함하는 것인 방법:
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서 재조합 수용체 및 CCR7 및 CD27을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+/CD27+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계;
(b) 수용체+/CCR7+/CD27+ 세포의 수, 백분율 또는 비에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계로서, 여기서 세포의 단위 용량이 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
202. 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은 다음을 포함하는 것인 방법:
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CCR7 및 CD27을 발현하는 T 세포 (수용체+/CCR7+/CD27+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계; 및
(b) T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해 조성물의 전체 또는 일부 및 선택적으로 다른 용액으로 용기를 채우는 단계로서, 여기서 단위 용량이 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
203. 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하는 T 세포 조성물의 전부 또는 일부로 용기를 채우는 단계로서, 여기서 단위 용량이 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
204. 실시 양태 201-203 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
205. 실시 양태 201-203 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
206. 실시 양태 201-205 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
207. 실시 양태 201-206 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
208. 실시 양태 201-207 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
209. 실시 양태 201-208 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함(각각 포함)하는 것인 방법.
210. 실시 양태 201-209 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 인 방법.
211. 실시 양태 201-210 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율이 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1이거나 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
212. 실시 양태 201-211 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 단위 용량이 CD45RA-세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하는 것인 방법.
213. 실시 양태 201-212 중 어느 하나에 있어서, 치료 조성물에서 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율, 선택적으로 CD45RA-인 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
214. 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서, 상기 방법은 다음을 포함한다:
i) 대상체의 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하는 투입 (input) 조성물을 제공하는 단계;
ii) 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 단계; 및
iii) 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에 투입 조성물 내의 세포를 자극하는 단계로서, 여기서 자극하는 단계는 하나 이상의 자극 제제 (stimulating agents)의 존재 하에서 세포를 배양하는 것을 포함하며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하는 것인 단계;
여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성하는 것인 방법.
215. 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서, 상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 단계를 포함하고, 여기서 투입 조성물은 대상체의 생물학적 샘플로부터 제공된 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하며, 및 투입 조성물은, 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅함으로써 자극되며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하고; 및 여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성하는 것인 방법.
216. 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서, 상기 방법은 다음을 포함하는 것인 방법:
i) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 수 (target number)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 수의 CD4+ T 세포를 단리하여, 투입 조성물을 생성하는 단계;
ii) 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 단계; 및
iii) 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 투입 조성물 내의 세포를 자극하는 단계로서, 여기서 자극은 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅하는 것을 포함하고, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하는 것인 단계;
여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성하는 것인 방법.
217. 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서, 상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 것을 포함하고, 여기서 투입 조성물이, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 수 (target number)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 수의 CD4+ T 세포를 단리함으로써 생성되고, 및 투입 조성물은, 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅함으로써 자극되며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하고; 및 여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 조성물을 생성하는 것인 방법.
218. 실시 양태 212에 있어서, 투입 조성물이 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
219. 실시 양태 214-217 중 어느 하나에 있어서, 투입 조성물이 목표 백분율의 CD4+/CCR7+, CD4+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD45RA-, CD4+/CCR7+/CD45RA+, CD8+/CCR7+, CD8+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포를 포함하는 것인 방법.
220. 실시 양태 214-219 중 어느 하나에 있어서, 산출 조성물이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포, 대 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포; 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
221. 실시 양태 214-219 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 단위 용량은 다음을 포함하는 산출 조성물의 전부 또는 일부를 포함하는 것인 방법:
C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포;
분화 클러스터 27 (CD27)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포; 또는
CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포.
222. 실시 양태 221에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포, CD4+/CCR7+ 세포, CD8+/CD27+ 세포, CD4+/CD27+ 세포, CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
223. 실시 양태 221 또는 실시 양태 222에 있어서, 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 각각 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하는 것인 방법.
224. 실시 양태 221-223 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포; 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+; 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
225. 실시 양태 221-224 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포를 포함하고; 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+, 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
226. 실시 양태 221-225 중 어느 하나에 있어서,
단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이고;
및/또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 이고; 및/또는
단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 인 방법.
227. 실시 양태 221-226 중 어느 하나에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임); 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임); 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임)를 포함하는 것인 방법.
228. 실시 양태 221-227 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 여기서 단위 용량이 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하는 것인 방법.
229. 실시 양태 228에 있어서, 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA-세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-세포를 포함하는 것인 방법.
230. 실시 양태 221-229 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포인 방법.
231. 실시 양태 214-230 중 어느 하나에 있어서, 제공 또는 단리 전에, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+T세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+T세포의 수, 부피당 수 (number per volume), 무게당 수 (number per weight) 및/또는 백분율을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
232. 실시 양태 214-231 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 자극 제제가 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포를 활성화시킬 수 있고; TCR 복합체를 통해 신호를 유도할 수 있고; 및/또는 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 증식을 유도할 수 있는 것인 방법.
233. 실시 양태 214-232 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 자극 제제가 TCR 복합체의 구성원 (member)에 결합하고, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1 차 제제 (primary agent)를 포함하는 것인 방법.
234. 실시 양태 233에 있어서, 하나 이상의 자극 제제가 T 세포 보조 자극 분자에 특이적으로 결합하는 2 차 제제를 추가로 포함하는 것인 방법.
235. 실시 양태 234에 있어서, 보조 자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40 또는 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
236. 실시 양태 234 또는 실시 양태 235에 있어서, 1 차 및 2 차 제제가 항체를 포함하고, 선택적으로 하나 이상의 자극 제제가 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와의 인큐베이션을 포함하는 것인 방법.
237. 실시 양태 214-236 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 자극 제제가 고체 지지체, 선택적으로 비드의 표면 상에 존재하는 것인 방법.
238. 실시 양태 214-237 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 자극 제제가 CD3-결합 분자; CD28-결합 분자; 재조합 IL-2; 재조합 IL-15; 및 재조합 IL-7, 항원 수용체에 의해 특이적으로 인식된 항원을 포함하는 백신, 및 항원 수용체에 특이적으로 결합하는 항-이디오 타입 항체 또는 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
239. 실시 양태 183-238 중 어느 하나에 있어서, 치료 조성물은 실시 양태 1 에 따른 조성물인 방법.
240. 실시 양태 183-239 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
241. 실시 양태 183-240 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 단위 용량 중에서 CCR7 (CCR7+ 세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 방법.
242. 실시 양태 183-241 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
243. 실시 양태 183-242 중 어느 하나에 있어서, 단위 용량이 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 방법.
244. 실시 양태 183-243 중 어느 하나에 있어서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 살아 있거나 생존 가능한 그러한 세포의 총 수인 방법.
245. 실시 양태 183-244 중 어느 하나에 있어서, CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 음성 (apoptotic marker negative (-))인 이러한 세포의 총 수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)인 방법.
246. 실시 양태 240-245 중 어느 하나에 있어서, 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
247. 실시 양태 246에 있어서, 복수의 개별 조성물은 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 것인 방법.
248. 실시 양태 247에 있어서, 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
249. 실시 양태 247에 있어서, 제 1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
250. 실시 양태 247-249 중 어느 하나에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
251. 실시 양태 247-250 중 어느 하나에 있어서, CD4+ 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
252. 실시 양태 247-250 중 어느 하나에 있어서, CD8+ 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
253. 실시 양태 183-252 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함하는 것인 방법.
254. 실시 양태 183-253 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 방법.
255. 실시 양태 254에 있어서, 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암인 방법.
256. 실시 양태 254 또는 실시 양태 255에 있어서, 표적 항원이 종양 항원인 방법.
257. 실시 양태 254-256 중 어느 하나에 있어서, 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸 콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백질 100 (gp100), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 방법.
258. 실시 양태 183-257 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함하는 것인 방법.
259. 실시 양태 183-258 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인 방법.
260. 실시 양태 183-259 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함하는 것인 방법.
261. 실시 양태 260에 있어서, 항원-결합 도메인이 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함하는 것인 방법.
262. 실시 양태 261에 있어서, 단편은 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
263. 실시 양태 261 또는 실시 양태 262에 있어서, 단편은 scFv를 포함하는 것인 방법.
264. 실시 양태 183-263 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것인 방법.
265. 실시 양태 264에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
266. 실시 양태 265에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 방법.
267. 실시 양태 266에 있어서, 세포 내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포 내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 방법.
268. 실시 양태 183-267 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체가 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
269. 실시 양태 183-268 중 어느 하나에 있어서, 세포 내 신호 전달 영역이 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
270. 실시 양태 269에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인이 T 세포 보조 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
271. 실시 양태 259-270 중 어느 하나에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인이 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
272. 실시 양태 269-271 중 어느 하나에 있어서, 보조 자극 신호 전달 도메인이 막 관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 방법.
273. 실시 양태 183-272 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 방법.
274. 실시 양태 183-273 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체에 대해 자가인 방법.
275. 실시 양태 183-274 중 어느 하나에 있어서, T 세포가 대상체에게 동종 이계인 방법.
276. 실시 양태 183-275 중 어느 하나의 방법에 의해 생성된 산출 조성물.
277. 실시 양태 201-213 및 221-276 중 어느 하나의 방법에 의해 결정되거나 생산된 단위 용량.
278. 실시 양태 277의 단위 용량을 포함하는 약학 조성물.
279. 실시 양태 278에 있어서, 약학적 담체를 추가로 포함하는 것인 약학적 조성물.
280. 실시 양태 276의 산출 조성물의 전부 또는 일부, 실시 양태 277의 단위 용량 또는 실시 양태 278 또는 실시 양태 279의 약학적 조성물을 포유 동물 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
281. 암을 치료하기 위한 실시 양태 276의 산출 조성물, 실시 양태 277의 단위 용량 또는 실시 양태 278 또는 실시 양태 279의 약학적 조성물의 전부 또는 일부의 용도.
282. 암을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 실시 양태 276의 산출 조성물, 실시 양태 277의 단위 용량 또는 실시 양태 278 또는 실시 양태 279의 약학적 조성물의 전부 또는 일부의 용도.
283. 암 치료에 사용하기 위한 실시 양태 276의 산출 조성물, 실시 양태 277의 단위 용량 또는 실시 양태 278 또는 실시 양태 279의 약학적 조성물.
VII. 실시예
하기 실시예는 단지 예시의 목적으로 포함되며 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다.
실시예 1 항-CD19 CAR-발현 T 세포의 표현형 및 세포 속성 및 약동학 (PK) 파라미터, 반응성 및 독성의 평가
[850] 대상체에게 투여시 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 조작된 T 세포의 세포 표현형과 약동학 (PK) 파라미터, 반응성 및 독성 결과 사이의 관계를 평가하였다.
A. 치료적 T 세포 조성의 속성
[851] CD19에 특이적인 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 함유하는 예시적인 치료 T 세포 조성물을 생성하여 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현시켰다. 항-CD19 CAR은 뮤린 항체 (FMC63에서 유래한 가변 영역, VL-링커-VH 배향), 면역 글로불린-유래 스페이서, CD28에서 유래된 막 관통 도메인, 4-1BB로부터 유래 된 보조자극 영역, 및 CD3-제타 세포 내 신호 전달 도메인으로부터 유래된 항-CD19 scFv를 함유하였다. 바이러스 벡터는 절단된 수용체를 암호화하는 서열을 추가로 함유하였으며, 이는 CAR 발현에 대한 대리 마커로서 기능하고; T2A 리보솜 스킵 서열에 의해 CAR 서열로부터 분리된다. 하기 기술된 재발성 및 불응성 (Relapsed and Refractory) 비-호지킨 림프종 (Non-Hodgkin’s LymphomaNHL)을 갖는 대상체에서 투여에 사용되는, 생성된 치료 T 세포 조성물을 유세포 분석법 및 시험관내 검정을 사용하여 100 개 이상의 표현형, 기능적 및 세포 건강 관련 속성에 대해 평가하였다. 조작 (engineering) 전후에 다양한 특성에 대해 세포를 평가하였다.
[852] 평가된 예시적인 속성이 표 E1에 제시되어 있다. 일반적으로 기억 표현형 (memory phenotypic) 조성물 및 세포 건강 표현형 (cell health phenotypes) 과 관련된 표현형 특성을 유세포 분석법을 사용하여 조사하였다. T 세포 기능성은 시험관내 항원-특이적 생물 검정을 사용하여 평가되었다. 대표적인 수의 동결-해동 사이클을 거친 치료 T 세포 조성물에 대해 특성화 및 방출 시험을 수행 하였다.
[853] 투여용 세포 조성물의 생성을 위해, 자가 세포를 백혈구성분채집술 (leukapheresis)을 통해 대상체로부터 단리하였다. 백혈구성분채집 샘플을 CAR-발현 세포의 생성 공정에 적용하였다. 이 프로세스는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 정제를 위해 자동화된 세척 및 면역친화성 기반 선별 (immunoaffinity based selection)을 사용하여 세포를 세척하는 것으로, 그 결과 각각 CD8 + (세포의 중앙값 99 %, 사분위간 범위 (IQR) 98-100 %가 CD8 + 임)및 CD4 + (세포의 중앙값 99 %, IQR 99-100 %가 CD4 + 임)가 농축된 (enriched) 2 가지 조성물이 생성되었다.
[854] 농축된 CD4 + 및 CD8 + 조성물의 세포는 4-1BB 보조자극 도메인을 갖는 항-CD19 CAR을 인코딩하는 벡터를 사용하여 렌티바이러스 형질 도입에 개별적으로 적용되었다. 이어서, 형질 도입된 집단을 세포 증폭 (expansion)을 위한 자극 시약의 존재하에 별도로 인큐베이션하였다. 증폭된 CD8 + 및 CD4 + 세포는 별도로 제제화 및 동결 보존되고 투여 전에 저장되었다. 세포 건강을 나타내는 파라미터에서, 상이한 환자로부터 유래된 로트 (lots) 및/또는 세포 조성물 사이의 변동을 최소화하기 위해, 세포를 로트에 걸쳐 (across) 일정한 부피로 유지시켰다. 세포 생성물은 좁은 범위의 생존 세포 농도를 나타내었다 (하나 그룹의 대상체에 대한 세포 조성의 평가에 기초하여, CD8+: 중앙값 31 x 106 세포/mL, IQR 28-40 x 106 세포/mL, N=38; CD4+: 중앙값 35 x 106 세포/mL, IQR 31-40 x 106, N=36).
[855] 투여 부위에서, 적절한 용량의 CD8+CAR+ 및 CD4+CAR+ 세포의 수에 상응하는 각각의 조성물의 목표 용량 (target volume)에 따라, 세포 조성물을 해동시키고 개별적으로 투여하였다 (예를 들어, DL1에 대해, 5 x 107 총 CAR-발현 T 세포(각각 2.5 x 107 의 CAR-발현 CD4+ 및 CAR-발현 CD8+ 세포), 또는 DL2에 대해, containing 1 x 108 총 CAR-발현 T 세포 (각각 5 x 107 의 CAR-발현 CD4+ 및 CAR-발현 CD8+ 세포)).
[856] 투여용 조성물에서 CAR-발현 T 세포의 건강을 나타내는 파라미터, 예를 들어 해동 후, 생존력, 세포 표면 아넥신 V 발현 및 활성 세포 내 카스파제 3의 수준을 측정함으로써 평가하였다. 아넥신 V-발현 세포의 중앙값 백분율은 CD8+CAR+ T 세포의 11 % (IQR 9-18 %; N = 33) 및 CD4+CAR+ T 세포의 10 % (IQR 8-17 %; N = 31)였다. 카스파제 3 발현은 아넥신 V 발현과 유사한 것으로 관찰되었다.
[857] 투여용 조성물에서 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ T 세포의 양을 정확하게 제어 하였다. 예시적 일련의 대상체에 실제로 투여된 세포의 수는 주어진 용량에 대한 목표 세포 수의 8 % 이하인 것으로 관찰되었다 :
● DL1에서 세포가 투여된 대상체에 대하여 2.4-2.7 x 107 (목표 ±8 %) CD4+CAR+ T 세포 (n = 48)
● DL2에서 세포가 투여된 대상체에 대하여 4.6-5.1 x 107 (목표 ± 8%) CD4+CAR+ T 세포 또는 4.6-5.1 x 107 (목표 ±8 %) CD8+CAR+ T 세포 (n = 20).
[858] 투여된 용량의 범위는 상이한 예시적 일련의 대상체에서 변동성이 낮은 것으로 밝혀졌다.
● DL1에서 48-52 Х106 CD3+CAR+T 세포 (n =34)
● DL2에서 96-101Х106 CD3+CAR+T 세포 (n = 29)
● DL1에서 24-27 x 106 CD4+CAR+ 또는 CD8+CAR+ T 세포 (n = 34)
● DL2에서 46-51 x 106 CD4+CAR+ 또는 CD8+CAR+ T 세포 (n = 29).
[859] 도 1A에 도시된 바와 같이, 대상체에게 투여된 CAR-발현 T 세포 조성물은 높은 T 세포 순도 및 로트 사이의 낮은 분산을 나타내는 것으로 관찰되었다. 예를 들어, 공정 및 생성물 제어의 관점에서, CAR T 세포를 함유하는 치료 세포 조성물은 세포-특이적 T 세포 기능에서 로트-투-로트 (lot-to-lot) 변동성이 낮은 것으로 관찰되었다.
[860] 시험관내 항원-특이적 사이토카인 축적 및 세포 내 사이토카인 염색 (intracellular cytokine staining, ICS)은 다수의 사이토카인 (IL-2, TNF-α 및 IFN-γ)에 대한 사이토카인 생산을 위한 로트 간에 유사한 낮은 분산을 나타내었다. 예시적 ICS 실험에서, 조성물로부터의 세포를 CD19로 자극하고, TNF-α를 포함하는 사이토카인에 대해 염색하고, 메모리 표현형 마커로서 C-C 케모카인 수용체 유형 7 (CCR7)을 포함하는 표면 단백질을 유세포 분석에 의해 분석하였다. 사이토카인 또는 표면 단백질에 대해 양성인 투여용 조성물 중 세포의 수를 측정하였다. 도 1B는 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ 및, CD4+CAR+TNF-α+ 및 CD8+CAR+TNF-α+ 및, CD4+CAR+CCR7+ 및 CD8+CAR+CCR7+ 의 수를 나타내며, DL1 및 DL2에서의 투여를 위해 CAR T 세포 조성물에 존재한다. 도 1C는 제어된 용량 조성물 중 CD4+ CAR+ 세포, CD8+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ CCR7+ 세포 및 CD8+ CAR+ CCR7+ 세포의 수를, 다른 스케일로 나타내는 또 다른 도면을 보여준다. 이러한 결과는 표 E2에 요약되어 있다. 그 결과는 CD4+CAR+ and CD8+CAR+ 세포, CD4+CAR+TNF-α+ 및 CD8+CAR+TNF-α+ 세포, CD4+CAR+CCR7+ 및 CD8+CAR+CCR7+ 세포의 수의 변동성 (variability)이 낮다는 것을 보여준다. 예를 들어, TNF-α 생성에 대해 양성인 세포의 수에 대하여 타이트한 범위 (tight range)가 관찰되었다 (n = 61).
[861] CD19로 자극한 후 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)의 CAR+ 세포에 의한 생산을 나타내는 파라미터는 CD4+CAR+ T 세포에 대해 37 % (N = 59) 및 CD8+CAR+ T 세포에 대해 51 % (N = 61)의 상대 표준 편차 (RSD)를 갖는, 상이한 로트 간에 좁은 범위 (narrow range)를 보여주었다.
[862] 결과는 세포 조성물의 제조 및 제어 과정의 적어도 3 가지 측면이 조성물 간의 낮은 변동성 및 일정한 세포 건강에 기여한다는 관찰과 일치하였다: 정확하고 일관된 일정한 (consistent flat) 용량의 투여된 CD4+ 및 CD8+ 세포; 조성물 간 표현형 (예를 들어, CCR7) 또는 시험관내 기능 (예를 들어, 항원 자극 후 IL-2, TNF-α 및 IFN-γ 생산)의 낮은 로트 변동성을 야기하는 CD4+ 및 CD8+ 세포 배양 조건의 제어 및 최적화; 및 조성물의 일정한 제형 및 용량. 결과는 또한 대상체에게 투여하기 위한 치료 조성물 중 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포의 수의 타이트한 제어가 조작된 세포 조성물 중 세포의 속성 (도 1C 참조) 및 약동학 (PK) 및 임상적 결과, 예를 들어 반응 및 독성과의 잠재적 관련성의 확인을 가능하게 한다는 것을 보여주었다.
B. 항-CD19 CAR
+
T 세포 조성물의 투여
[863] 상기 기술된 치료적 CAR+ T 세포 조성물은 임상 연구에서 재발 또는 불응성 (relapsed or refractory, R/R) 공격성 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가진 대상체에게 투여되었다. 구체적으로, 확산성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL) 데 노보 (de novo) 또는 지연성 림프종 (NOS), 고-등급 (high-grade) B 세포 림프종 (더블/트리플 히트(hit) 포함)로부터 형질 전환된 DLBCL, 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 또는 한계 영역 림프종 (MZL)으로부터 형질 전환된 DLBCL, 원발 종격동 거대 b-세포 림프종 (primary mediastinal large b-cell lymphoma, PMBCL), 및 여포성 림프종 3b 등급 (FLG3B)을 비롯하여, R/R NHL을 갖는 성인 인간 대상체의 코호트는 항-CD19 CAR-발현 T 세포 조성물로 투여되었다. 전체 코호트 내 대상체의 코어 서브세트에 대하여 결과를 개별적으로 평가하였다 (불량한 전신 활동도 (ECOG 2)를 갖는 대상체들을 제외한, 한계 영역 림프종 (MZL) 및/또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL, Richter's)으로부터 형질 전환된 DLBCL, 및 원발성 종격동 거대 b-세포 림프종 (PMBCL)이 있는 대상체들을 제외한 외), 여포성 림프종 등급 3b (FLG3B) (코어 코호트)). 코어 코호트에는 DLBCL, NOS 및 형질 전환된 여포성 림프종 (tFL) 또는 고등급 B-세포 림프종 (더블/트리플 히트) 또는 고-등급 B-세포 림프종이 있는 대상체, MYB 및 BCL2 및/또는 DLBCL 조직학을 사용한 BCL6 재배열 (더블/트리플 히트)이 있는 대상체 및 ECOG PS (Eastern Cooperative Oncology Group performance status)가 0 또는 1인 대상체가 포함되었다. 이 실시예에서 제시된 시점에서의 분석은 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 전체 코호트 (88 명(코어 코호트로부터의 65 명)은 반응을 평가했으며 91 명 (코어 코호트로부터의 67 명)은 안전성을 평가하였음)에서 총 91 명의 대상체에 대한 평가를 기반으로 한다.
[864] 항-CD19 CAR는 뮤린 항체 유래의 항-CD19 scFv (FMC63 유래의 가변 영역, VL-링커-VH 배향), 면역 글로불린-유래 스페이서, CD28 유래의 막 관통 도메인, 4-1BB 유래의 보조자극 영역, 및 CD3-제타 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하였다. 바이러스 벡터는 절단된 수용체를 암호화하는 서열을 추가로 함유하였으며, 이는 CAR 발현에 대한 대리 마커로서 기능하고; T2A 리보솜 스킵 서열에 의해 CAR 서열로부터 분리된다.
[865] 항-CD19 CAR-발현 세포를 함유하는 동결 보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여 전에 해동시켰다. 치료적 T 세포 용량은 대략 1 : 1의 목표 비율로 별도로 투여된 제제화된 CD8+ CAR+ 집단 및 제제화된 CD4+ CAR+ 세포 집단을 투여하는 것에 의해 정해진 세포 조성물로서 투여되었다. 대상체에게 다음과 같이 단일 또는 이중 용량의 CAR-발현 T 세포 (각 단일 용량은 각각 CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 개별 주입을 통해)가 투여되었다: 5 x 107 개의 총 CAR-발현 T 세포를 함유하는 단일 용량의 용량 수준 1 (DL1), 또는 1 x 108 개의 총 CAR-발현 T 세포를 함유하는 단일 용량의 용량 수준 2 (DL2). 일부 경우에, 투약 오류 (dosing error)로 인하여, 대상체에게 2 회 용량 스케줄을 통해 2 회 DL2 용량을 부주의하게 받은 1 명의 대상체를 포함하여, 각 용량이 대략 14 일 간격으로 1 일 및 14 일에 투여되는 DL1의 이중 용량이 대상체에게 투여되었다. DL1 및 DL2에서 투여된 조성물에 대한 T 세포 서브세트의 용량 수준 및 목표 수(target numbers)는 표 E3에 제시되어 있다. 코어 코호트에서, 34 명의 대상체에게 DL1이 투여되었고, 27 명의 대상체에게 DL2로 투여되었다.
C. 치료 후 안전성 및 반응 결과
[866] 표 E4는 두 용량 수준에서 전체 코호트 및 코어 코호트에 대한 전체 반응 및 안전성 결과를 보여준다. 완전 반응 (CR)을 보이는 52 %의 대상을 포함하여 객관적 반응률 (ORR)은 74 %였다. 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 발생률은 35 %였으며 1 %는 중증 CRS였고; 및 임의의 등급의 신경 독성 (NT)의 발병률은 19 %였으며, 1 %는 중증 NT였다.
a 유사한 결과를 갖는 DL1D (용량 수준 1, 2회 용량 스케줄)로 치료받은 4 명의 환자.
b PD, 사망 또는 28-일 재병기설정 스캔 (restaging scans)의 이벤트를 갖는 환자를 포함한다. 한 환자는 이용 가능한 재병기설정 스캔이 없었다.
c 데이터 스냅 샷 날짜 28 일 이전에 적어도 1 회 용량의 순응 (conforming) CAR-발현 세포 생성물을 받았거나 사망한 모든 대상체를 포함한다.
D. 약동학적 평가
[867] 대리 마커로서 사용된 절단된 수용체에 특이적인 항체를 사용하는 유세포 분석법, 및 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 벡터에 존재하는 우드척 간염 바이러스 전사 후 조절 요소 (WPRE)에 특이적인 프라이머를 사용한 정량적 중합효소연쇄반응 (qPCR)에 의해 평가 가능한 PK를 갖는 DLBCL 코호트에서의 86 명의 대상체에서 투여 (pre-treatment or pre-lymphodepleting chemotherapy (LDC)) 전 시점 및 치료 후 다양한 시점 ((with day of administration as day 1)에 말초 혈액 및 골수에서 CAR+ T의 수를 검출하였다. 0 일과 28 일 사이에 표시된 CAR+ 세포 집단에 대한 마이크로 리터당 숫자를 나타내는 곡선 아래 영역 (AUC0-28; CAR+ 세포*일/μL 혈액), CAR+ 세포의 최대 또는 피크 혈중 농도 (Cmax; CAR+ 세포/μL 혈액) 및 Cmax까지의 시간 (Tmax; 일)을 평가하였다.
[868] qPCR 또는 유세포 분석법에 의해 평가된 바와 같이, 다양한 지시된 시점에서 혈액 1 마이크로 리터당 CAR T 세포의 검출된 수를 나타내는 예시적 그래프가 도 2에 도시되어 있다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 대상체로부터의 샘플에서 CAR- 발현 세포의 수준은 유세포 분석 기반 분석법 및 qPCR 기반 분석법에 의해 모두 관찰되었다.
실시예 2 항-CD19 CAR-발현 T 세포의 세포 속성과 약동학 (PK) 파라미터, 반응성 및 독성 간의 연관성
[869] 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 조작된 T 세포의 평가된 세포 속성과 대상체에게 투여 시 세포의 약동학 (PK) 파라미터, 반응성 및 독성 결과 간의 관계가, 실시예 1에서 결정된 바와 같이, 평가되었다.
A. 투여된 치료 세포 조성물의 세포 표현형 속성과 약동학/CAR + T 세포 노출 (Exposure) 간의 관계
[870] 투여된 치료 조성물에서 CAR+ T 세포의 특정 표현형 속성, 및 약동학 (PK) 또는 CAR+ T 세포 노출 및 사이토카인 생성과 관련된 파라미터 사이의 관계를 평가하였다.
[871] 특히, 상이한 대상체로부터 유래되고 투여를 위해 제제화된 세포로부터 조작된 치료 세포 조성물 간의 낮은 변동성 때문에, 약동학적 파라미터 (예를 들어, AUC), 임상 반응 결과 및 독성 결과 (예를 들어, CRS 또는 NT)와 관련된 표현형 (예를 들어, CCR7+ 발현 및 사이토카인 생성)을 검출할 수 있었다.
[872] C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7), CD27 및 CD45RA를 비롯하여, 기억 세포 서브타입과 같은 특정 T 세포 서브타입을 나타낼 수 있는 세포 표면 마커의 발현 수준 또는 세포 표면 마커의 부재가 유세포 분석법에 의해 평가되었다. CD3, CD4, CD8, CD28의 표면 발현 수준 및/또는 대리 마커로서 사용된 절단된 수용체의 표면 발현 수준이 또한 평가되었고; 활성화된 카스파제 3의 존재가 아포토틱 세포의 척도로 평가되었다. CD19 (발현된 CAR에 특이적인 항원)로 자극한 후 CD8 세포에서 사이토카인 생산 (pg/mL)을 평가하였다. 마커의 발현 및 사이토카인 생성은, 투여 후 0 일 내지 28 일 (AUC0-28; 투여일로서 0 일) 및 투여 후 CAR+ 세포의 최대 또는 피크 혈중 농도 (Cmax)에서, 대상체의 혈액에서 검출된 CAR+ T 세포 (또는 이의 서브세트)의 수를 나타내는 곡선 아래 면적과 상관 관계가 있었다. 일변량, 다변량 및 기계 학습 기반 분석 (machine learning based analyses)을 사용하여 상관 관계를 평가하였다.
[873] 투여되는 치료 세포 조성물에서 활성 카스파제 3-음성 (비-아포토틱) 세포 중에서, 투여되는 치료 세포 조성물 중, CD4 또는 CD8 CAR+ T 세포 중에서, CCR7+ 세포, CD27+ 세포, CCR7+CD27+ 세포, 또는 CD45RA-CCR7+ 세포의 총 백분율 또는 수는 CD4 또는 CD8 Cmax 및 AUC0-28과 양의 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었다. CD45RA-CCR7- 세포의 총 백분율 또는 수는 CD4 또는 CD8 Cmax 및 AUC0-28과 음의 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었다. CCR7-CD27- 세포의 총 백분율 또는 수는 CD4 Cmax 및 AUC0-28과 음의 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었다. CD19로 자극 시 시험관내 IL-2 생성 수준은 CD8 Cmax 및 AUC0-28과 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었다.
[874] 도 3A는 CCR7+ 세포 (CD4+ CAR+ 및 CD8+ CAR+ 세포 집단 중에서)의 백분율과 CD4+ CAR+ 및 CD8+ CAR+ 세포 각각의 약동학의 관계를 평가한 연구 결과를 보여준다 (세포 요법이 투여 대상체에 대한 혈액 내 CD8+ CAR+ 세포의 AUC0-28에 또는 CD4+ CAR+의 AUC0-28 의해 나타내어지는 바와 같이). 각 도트는 개별 환자를 나타내며, 개별 도트의 음영은 환자가 용량 수준 1 (DL1) 또는 용량 수준 2 (DL2)를 받았는지 여부를 나타낸다. 도 3B에서, 이러한 분석은 높은 (이 평가에서, 50 cm2 이상의 생성물 크기의 합 (sum of the products of diameters, SPD)의 값으로 표시됨) 또는 낮은 (50 cm2 미만의 SPD 값) 전처리 (pre-treatment) 종양 부담 (전처리 림프구제거 화학요법 (lymphodepleting chemotherapy) 시 평가된)을 나타내는 것으로 관찰되는 대상체에 대해 개별적으로 나타내는 결과와 함께 제시된다. 투여된 용량에서 CD4+ CAR+ 세포 중 CCR7+ 세포의 백분율은 CD4+ AUC0-28과 양의 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었고, 투여된 용량에서 CD8+ CAR+ 세포 중 CCR7+ 세포의 백분율은 CD8+ AUC0-28과 양의 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었다. 추가로, "고 (high)" 전처리 질환 부담 그룹의 대상체로부터 유래된 세포로부터 생성된 조작된 치료 세포 조성물은 일반적으로, CD8+ 및 CD4+ 조성물 중에서, 더 높은 백분율의 CCR7+ 세포를 나타내는 것으로 관찰되었다. 도 3C는 세포 요법이 투여된 대상체에 대해 혈액에서 CCR7+ CD4+ CAR+ 및 CCR7+ CD8+ CAR+ 세포의 총 수와 CD4+ CAR+ 세포의 AUC0-28 및 CD8+ CAR+ 세포의 AUC0-28 사이의 관계를 각각 평가한 결과를 나타낸다.
[875] CD4+ CAR+ T 세포의 속성 및 CD4+ 또는 CD8+ CAR+ T 세포의 AUC0-28 및 Cmax 사이의 관계의 추가 평가에서, CCR7+ 또는 CCR7+ CD27+ 인 CD4+ CAR+ T 세포의 백분율은 CD4+ CAR+ T 세포 (도 3A, 3D-3F) 및 CD8+ CAR+ T 세포 (도 3G-3J)의 PK 파라미터 (AUC0-28 및 Cmax)와 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었다. 결과는 CD4+ CAR+ T 세포가 CD8+ CAR+ T 세포의 증폭 (expansion)을 지원할 수 있다는 관찰과 일치한다.
[876] 결과는 특정 표현형 마커, 예를 들어 T 세포 서브타입을 나타내는 것들, 예컨대 기억 구획 서브타입 (예를 들어, CCR7 및/또는 CD27)을 발현하는 세포의 치료 세포 조성물에서의 표현 (representation)이, 예를 들어 확정된 (defined) 세포 조성물이 투여된 대상체에서 CAR+ T 세포에 대한 노출 정도를 나타내는 약동학적 파라미터, 예를 들어 AUC0-28 및 Cmax 와 양의 상관 관계에 있다는 관찰과 일치하였다. 일부 측면에서, CAR+ T 세포 조성물 중 CD45RA- CCR7- 또는 CCR7- CD27- 세포는 약동학적 파라미터와 음의 상관 관계가 있었다.
B. 투여된 치료 세포 조성물의 세포 표현형 속성과 약동학/CAR
+
T 세포 노출, 임상 반응, 독성 간의 관계
[877] 치료 조성물에서 CAR+ T 세포의 특정 표현적 속성과 약동학 (PK) 또는 CAR+ T 세포 노출, 사이토카인 생성, 임상 반응 결과 및 독성 결과와 관련된 파라미터와의 관계를 평가하였다. 예시적 대상체 그룹으로부터 생성되고 예시적 대상체 그룹에게 투여된 치료 조성물의 분석에서, 기억 T 세포 서브타입을 나타내는 마커를 발현하는 높은 빈도의 세포를 갖는 조성물은 시험관내 CD19 자극 후의 사이토카인 생성과 강한 상관 관계를 나타냈다.
[878] 다양한 마커의 세포 표면 발현 수준, 활성화된 카스파제의 존재, CD19로 자극 후의 CD4+ 및 CD8+ 세포에서의 사이토카인 생성, 투여 후 약동학적 (PK) 파라미터 (AUC0-28 및 Cmax)는 상기 기재된 바와 같이 측정되었다. 마커의 발현 및 사이토카인 생성은, 특정 CAR+ T 세포 조성물이 투여된 상기 기재된 코어 코호트 내의 평가가능한 대상체로부터 측정된, AUC0-28, Cmax 및 임상 반응 결과 (무진행 생존 및 지속 반응을 비롯한) 및 독성 결과 (사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경 독성 (NT))와 상관 관계가 있었다. 일변량, 다변량 및 기계 학습 기반 분석을 사용하여 상관 관계를 평가하였다. 세포의 다양한 속성에 대한 공칭 (nominal) p-값 및 독성, 반응 또는 약동학적 (PK) 파라미터와의 연관성을 나타내는 히트맵 (heatmap)이 생성되었다.
[879] 결과는 특정 기능적 프로파일, 안전성 이벤트 및 지속 반응 및 덜 분화된 T 세포 상태를 나타내는 마커, 예를 들어 CCR7+CD27+ 를 발현하는 세포의 빈도 사이의 연관성을 보여주었다. 구체적으로, 중심 기억 T 세포 서브타입을 나타내는 마커인, 높은 빈도의 CCR7+ 세포를 포함하는 조성물은 증가된 IL-2 생성을 나타냈다 (스피어맨 ρ = 0.55, P <0.0001). 도 4A-4B에 도시된 바와 같이, 증가된 빈도의 덜 분화된 CCR7+CD27+ CAR+ T 세포를 함유하는 CD4+ CAR-발현 T 세포 조성물은 감소된 IFNγ (도 4A) 및 증가된 IL-2 (도 4B)를 분비한다. 대조적으로, 이펙터 분화된 (effector differentiated) T 세포 서브타입과 관련된 마커를 발현하는 높은 빈도의 세포를 포함하는 조성물은 증가된 IFNγ 생산 (ρ= 0.51, P <0.0001) 및 IL-13 생산 (ρ= 0.45, P <0.0001)을 나타냈다. 도 5A-5B에 도시된 바와 같이, 덜 분화된 CCR7+CD27+ CAR+ T 세포의 증가된 빈도를 함유하는 CD8+ CAR-발현 T 세포 조성물은 IL-5 (도 5A) 및 IL-13 (도 5B)과 같은 Th2와 관련된 낮은 수준의 일부 사이토카인을 생성한다.
[880] 조성물에서의 기억 표현형과 기능 사이의 상관 관계는 중앙 기억 서브세트와 CAR+ 세포의 피크 생체 내 (in vivo) 증폭 (ρ=0.42, P=0.002), 및 관찰된 무진행 생존 (PFS) (카플란-마이어 생존 추정치, P=0.0164) 간의 양의 상관 관계로 해석되었다. 도 6A-6D는 특정 임계 값 이상 또는 이하인 CD8+ CAR+ 세포 중에서 (무진행 생존에 대한 도 6A, 반응 지속 기간에 대한 도 6C) 또는 CD4+ CAR+ T 세포 중에서(무진행 생존에 대한 도 6B, 반응 지속 기간에 대한 도 6D) CCR7+CD27+ CAR+ T 세포의 빈도를 함유하는 조성물이 투여된 그룹으로 나눈, CAR+ T 세포 조성물이 투여된 대상체에 대한 카플란-마이어 생존 곡선을 보여준다. 조성물 중 더 높은 CCR7+CD27+ 기억 세포는 더 긴 무진행 생존과 상관 관계가 있는 것으로 관찰되었다.
[881] 또한, 증가된 빈도의 중앙 기억 하위모집단 (central memory subpopulation)을 함유하는 CD4+ CAR+ T 세포 조성물은 대상체가, 사이토카인 방출 증후군 (CRS, 등급 1 이상, P=0.0069; 도 7A) 또는 중증 신경 독성 (NT, 3 등급 이상, P = 0.0014, 도 7C) 둘 중 하나에 대한, 치료 조성물의 투여 후 독성이 진행되는지 여부와의 관계를 입증하였다. IFNγ 생성이 감소된 CD4+ CAR+ T 세포 조성물은 CRS (등급 1 이상, P = 0.0186; 도 7B) 또는 중증 NT (등급 3 이상, P = 0.0055, 도 7D)와 관련되었다.
[882] 결과는 조작된 세포 조성 속성과 PK, 투여된 세포의 안전성 및 반응성 결과 사이의 관계를 보여주었다. 고 빈도의 CCR7+ 세포를 갖는 조성물은 투여 후 피크 CAR+ 세포 증폭 및 지속성을 증가시키는 것으로 관찰되었고, 이는 덜 분화된 CAR+ T 세포가 약동학적 파라미터 및 무진행 생존에 기여한다는 관찰과 일치한다. 결과는 덜 분화된 T 세포와 관련된 표현형 및 기능적 속성 및 프로파일이 NT 또는 CRS의 가능성 증가 및 반응의 지속성 반응의 개선과의 관계를 나타내었다는 관찰과 일치한다.
C. 다중 파라미터 표현형 분석
[883] 유세포 분석법을 사용하여 상이한 세포 서브타입 집단을 확인하기 위해, t-분포 확률적 이웃 임베딩 (t-distributed stochastic neighbor embedding, tSNE)에 기초하여 예시적 다중 파라미터 표현형 분석을 수행하였다. tSNE 분석은, 다중 세포 속성을 2 차원 플롯으로 축소하는 것 (collapsing) 및 2 차원 플롯에서 6 개의 상이한 세포 서브타입을 식별하는 것을 비롯하여, 2 차원 공간에서의 결과를 나타내기 위하여 비선형 차원 축소를 수반하였다 (도 8A 참조). 플롯에 주로 존재하는 두 가지 속성이 식별되었다. 도시된 바와 같이, CCR7 및 CD27을 모두 발현하는 기억 T 세포 서브세트 (도 8A에 도시된 형태의 경계 내에서, 도 8B에 도시된 CCR7 및 CD27 발현에 대한 유세포 분석 플롯)가 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포 중에서 식별되었다. 도 4A-4B 및 5A-5B에서 도시된 바와 같이, 식별된 세포는 별개의 기능적 프로파일을 나타냈다.
D. 결론
[884] 대상체에게 투여된 CAR+ T 세포 조성물은 낮은 변동성을 나타내고, 순수 (pure)하고 정확한 용량을 함유하여, 다양한 세포 속성과 임상 결과, 예컨대 반응성 및 독성 사이의 관계를 식별할 수 있게 하였다. 기억 표현형과 관련된 마커를 발현하는 세포 집단은 감소된 IFNγ 및 증가된 IL-2를 생성하는 CCR7+CD27+CD4+ CAR T 세포, 및 감소된 IL-5 및 IL-13을 생성하는 CCR7+CD27+CD8+ CAR T 세포와 함께, 특정 기능적 프로파일 (예를 들어, 사이토 카인 생산)을 나타내었다. CCR7+CD27+ 과 같은 표현형 발현 및 사이토카인 생산과 같은 기능적 프로파일에 기초하여, 덜 분화된 상태에서 CAR+ T 세포를 함유하는 투여된 세포 조성물은 약동학적 파라미터, 안전성 이벤트 및 증가된 지속 반응과 관련이 있는 것으로 관찰되었다.
[885] 또한, 본원에 제공된 실시양태 중에는 항-CD19 CAR+ 세포를 함유하는 것과 같은 많은 치료 세포 조성물 (예를 들어, 다양한 환자의 출발 모집단으로부터 생성된 것) 간에 낮은 변동성을 제공하는 방법 및 조성물과 관련된 것들이다. 제공된 실시 양태 중에는, 질병 부담에 따라 환자를 계층화하고 및/또는 투여 후 하나 이상의 결과, 예컨대, 항-CD19 CAR+ 세포의 약동학적 파라미터, 예를 들어, 최대 노출 수준 또는 AUC에 의해 측정된 바와 같은 시간에 따른 노출을 비롯하여, 치료 투여 후 CAR-T 세포에 환자의 노출을 나타내는 인자와 관련될 수 있는 특정 T 세포 표현형 또는 표현형 속성을 확인하기 위해, 예를 들어, 그러한 낮은 정도의 변동성에 기인할 수 있는 능력에 기초한 것들이 있다.
[886] 일부 실시 양태에서, 이러한 파라미터는 하나 이상의 T 세포 구획의 파라미터를 나타내는 하나 이상의 마커, 예컨대 예를 들어, CCR7+ 또는 CD27+ 발현 또는 백분율 및/또는 CCR7+ 및/또는 CD27+ 세포의 중심 기억 T 세포 표현형을 포함한 기억 서브타입을 나타내는 마커와 관련된 속성을 포함한다. 일부 측면에서, 이러한 결과는, 재조합 수용체 (예를 들어 CAR)를 발현하는 세포 조성물을 포함하는 세포 조성물로서 적어도 특정 비율의 세포가 하나 이상의 이러한 마커, 예를 들어 CCR7 및/또는 CD27에 대해 양성인 세포 조성물을 투여함으로써, 및/또는 이러한 마커를 발현하는 특정 수 또는 백분율의 세포, 예를 들어 CCR7 및/또는 CD27이, 예를 들어 다수의 대상체 또는 적응증에 걸쳐 투여용으로 표시된 용량을 투여함으로써, 하나 이상의 이러한 마커 및/또는 속성의 발현에 기초한 투약 (dosing)을 서포트한다. 이러한 실시 양태 중에는 CCR7+인 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포의 정해진 수 또는 고정 용량에 기초하여 투여하는 것들이 있다. 일부 측면에서, 이러한 접근법은 치료 조성물을 투여한 대상체 사이의 용량 대 용량 (dose-to-dose) 변동성을 제한하거나 감소시킬 수 있다. 일부 측면에서, 이러한 접근법은, 예를 들어 시간의 경과에 따라 또는 피크에서, 환자에서의 CAR+ T 세포 수준 또는 노출 정도와 같은, 특정 약동학적 특성의 표적화 및/또는 제어를 허용한다. 일부 측면에서, 이러한 파라미터는, 투여된 치료 T 세포 조성물에 대해, 예를 들어, 특정 반응 또는 효능 결과의 적어도 원하는 확률과 관련되고 하나 이상의 부작용 또는 독성 결과의 특정 확률 또는 위험보다 낮은 것으로 관찰되는 것과 같은 것과 같이, 허용 가능한 치료역(therapeutic window) 또는 범위 (range) 내에 있도록 타겟화된다.
실시예 3 지속 반응 (Durable Response)과 관련된 CAR
+
T 세포 조성물의 분자 시그니처의 확인
[887] 임상 반응, 예를 들어 CAR+ T 세포 투여시의 지속적 임상 반응과 관련된 CAR+ T 세포 조성물에서 분자 시그니처를 확인하기 위해 다양한 기능적 특성의 평가와 함께, 전사체 및 후성 유전학적 분석과 같은 게놈 특성화 연구가 수행되었다. 상기 실시예 1에서 기재된 바와 같이 생성된 CAR+ T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물에 대해 대략 100 개의 표현형 및 기능적 특성의 분석, 고-처리량 RNA 서열 분석 (RNA-seq)에 의한 대략 20,000 개의 전사체의 발현의 평가 및 시퀀싱 (ATAC-seq)을 사용한 트랜스포사제-접근 가능한 염색질에 대한 분석에 의한 대략 100,000 개의 조절 영역에서 염색질 접근성 평가를 수행하였다. CAR + T 세포 조성물의 투여 후 6 개월에, 완전 반응 (CR)을 보이는 대상체와 진행성 질환 (PD) 또는 부분 반응 (PR)을 보이는 대상체를 구별하는 변수를 확인하기 위해 부분 최소 제곱 판별 분석 (partial least squares-discriminant analysis, PLS-DA)에 의해 속성을 분석하였다. 도 9A-9C에 도시된 바와 같이, 표현형 및 기능적 특성의 평가 및 전사체 및 후성학적 분석은 조작된 세포 조성물이 투여된 대상체에서 지속 임상 반응 (예를 들어, 6 개월에서의 CR)과 관련된 조작된 CAR+ T 세포 조성물의 분자 시그니처를 확인하는데 사용될 수 있다. 결과는 효능 및 안전성과 상관되는 분자 시그너처가 조작된 세포 조성물의 게놈 특성에 기초하여 식별될 수 있다는 관찰과 일치한다.
실시예 4: 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현시키기 위한 조작 전과 후의 T 세포 조성물에서의 기억 세포 서브타입 속성의 연관성
[889] CCR7, CD27 및/또는 CD45RA와 같은 기억 서브타입을 나타내는 마커의 발현을 비롯하여, 다양한 세포 속성이 조작 전에 대상체로부터의 T 세포 조성물 및 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 조작된 치료 세포 조성물에서 평가되었다. 두 모집단에서의 속성 간의 연관성이 평가되었다.
[890] CD4+ 및 CD8+ T 세포는 다수의 대상체로부터 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 백혈구성분채집술로부터의 면역친화성-기반 강화 (immunoaffinity-based enrichment)에 의해 선택되었다. 이러한 선택된 T 세포의 조성물 (유전적 조작 전에, "전-조작 조성물"로 지정됨)은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7), CD27 및 CD45RA를 비롯한 기억 세포 서브타입과 같은 특정 T 세포 서브타입을 나타내는 세포 표면 마커의 발현을 비롯하여 다양한 속성에 대하여 평가되었고, 대리 마커로서 사용된 CD3, CD4, CD8, CD28 및/또는 절단된 수용체의 표면 발현, 및 활성화된 카스파제 3의 존재가 아포토틱 세포의 척도로서 평가되었다. 선택된 T 세포는, 사이토카인의 존재 하에 항-CD3 및 항-CD28 항체-코팅된 비드와 함께 인큐베이션함으로써 활성화시킨 후, 항-CD19 CAR를 발현하도록 유전자 조작되었고, 이후 상기 실시예 1에 기재된, 항-CD19 CAR를 인코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입 되었다. 생성된 세포 조성물은 증폭 및 동결 보존되고 (유전적 조작 후, "조작된 세포 조성물"로 지정됨), 상기 기재된 바와 같이 세포 속성에 대해 평가되었다. 전-조작 조성물의 세포 속성과 조작된 세포 조성물 간의 페어와이즈 상관 (pairwise correlations)에 대한 스피어맨의 순위 상관 계수가 결정되었다.
[891] 도 10A-10B는 전-조작 조성물 중 CD4+CCR7+CD27+ 세포의 빈도와 조작된 세포 조성물 중 CD4+CAR+CCR7+CD27+ 세포의 빈도 사이 (도 10A; 스피어맨의 순위 상관 계수: 0.591), 및 전-조작 조성물 중 CD8+CCR7+CD27+ 세포의 빈도 및 조작된 세포 조성물 중 CD8+CAR+CCR7+CD27+ 세포의 빈도 사이 (도 10B; 스피어맨의 순위 상관 계수: 0.357)의 상관 관계의 예시적 결과를 도시한다. 결과는 일부 경우에 투여를 위해 조작된 세포 조성물에서 기억 세포 서브타입, 예를 들어 CCR7 및/또는 CD27을 나타내는 하나 이상의 마커의 발현이 전-조작 세포 조성물에서의 마커의 발현과 관련이 있음을 보여주었다. 결과는 기억 세포 서브타입, 예를 들어 CCR7 및/또는 CD27을 나타내는 마커(들)를 발현하는 특정 수 또는 백분율의 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물이 전-조작 조성물 중 마커(들)를 발현하는 세포의 수 또는 백분율에 기초하여 생성될 수 있다는 결과와 일치하였다.
실시예 5: CAR+ T 세포를 함유하는 조작된 T 세포 조성물에서 나이브-유사 마커의 평가
[892] 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하는 1 차 T 세포의 조작된 조성물은 바이러스 벡터로 형질 도입하기 전에 T 세포를 활성화시키기 위해 부착된 항-CD3 및 항-CD28 항체를 갖는 상자성 폴리스티렌-코팅된 비드로 구성된 자극 제제를 사용하는 2 개의 병렬 프로세스에 의해 생성되었다. 두 프로세스 모두에서, 동일한 항-BCMA CAR을 발현시키기 위해 렌티바이러스 형질 도입에 의해 세포가 조작되었다. CAR는 BCMA에 특이적인 scFv 항원-결합 도메인, CD28 막 관통 영역, 4-1BB 보조자극 신호 전달 영역 및 CD3-제타 유래 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하였다. 프로세스는 세포의 증폭에 대한 조건 및 기간에서 차이가 있었다. 생성된 T 세포 조성물은 세포 표면 마커에 대해 평가되었다.
[893] 두 프로세스에서, 인간 공여자로부터의 백혈구분리채집 샘플로부터 단리된 PBMC로부터 CD4+ 및 CD8+ 세포의 개별 조성물이 선택되고, 선택된 세포 조성물이 동결 보존되었다. 이어서, CD4+ 및 CD8+ T 세포의 개별 조성물이 해동되었고 생존 CD4+ T 세포 대 생존 CD8+ T 세포가 1 : 1의 비로 혼합되었다. 혼합된 투입 세포 조성물의 대략 300 x 106 T 세포 (150 x 106 CD4+ 및 150 x 106 CD8+ T 세포)는 무혈청 배지에서 1 : 1 비드 대 세포 비율로 항-CD3/항-CD28 항체 접합 비드의 존재 하에서 세포를 18-30 시간 동안 인큐베이팅함으로써 자극되었다. 배지는 또한 재조합 IL-2, IL-7 및 IL-15를 함유하였다. 자극 후, 세포는 세척되고 재조합 IL-2, IL-7 및 IL-15와 첨가제를 함유한 무 혈청배지에 재현탁되었다.
[894] 하나의 프로세스 (예시적 비-증폭 프로세스)에서, 자극된 세포 조성물로부터의 세포는 스피노큘레이션 (spinoculation)에 의해 항-BCMA CAR을 인코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질 도입되었다. 스피노큘레이션 후, 세포는 세척되고 재조합 IL-2, IL-7 및 IL-15를 함유하는 무혈청 배지에서 재현탁되었다. 재현탁된 조성물의 세포는 인큐베이터에서 약 37.0 ℃에서 인큐베이션되었다. 자극 개시 후 약 96 시간에, 세포는 상자성 비드가 접합된 항 CD3/항-CD28 항체를 제거하기 위여 자기장의 존재 하에 2 회 세정되었고, 10 % DMSO를 함유하는 용액으로 제제화되었다. 제제화된 세포 조성물을 백 또는 바이알로 옮기고 대략 -80 ℃에서 보관하였다.
[895] 인큐베이션 후, 다른 프로세스 (예시적 증폭 프로세스)에서, 자극된 세포 조성물로부터의 대략 100 x 106 개의 생존 세포는 재조합 IL-2, IL-7 및 IL-15를 함유하는 무혈청 배지에서 농축되었다. 세포는 대략 1600 g에서 60 분 동안 스피노큘레이션에 의해 상기 기재된 것과 동일한 항-BCMA CAR을 인코딩하는 렌티바이러스 벡터로 형질 도입되었다. 스피노큘레이션 후, 세포는 재조합 IL-2, IL-7 및 IL-15를 함유하는 무혈청 배지에서 재현탁되었고 약 37 ℃에서 약 18 내지 30 시간 동안 인큐베이션되었다. 이어서, 세포를 생물 반응기 (예를 들어, 요동 운동 생물 반응기)로 이동시켜 증폭을 위해 인큐베이션 및 형질 도입 단계 동안 사용된 바와 같이 2 배의 농도의 IL-2, IL-7 및 IL-15를 함유하는 약 500mL의 예시적 무혈청 배지에서 배양시켰다. 설정된 생존 세포 밀도가 달성되었을 때, 관류가 개시되었고, 여기서 배지는 연속적 혼합과 함께 반-연속 관류로 대체되었다. 세포는 약 3 x 106 세포/ml의 임계 세포 밀도가 달성될 때까지 생물 반응기에서 다음날 배양되었으며, 이는 통상 6-7 일의 증폭을 수반하는 프로세스에서 발생한다. 항-CD3 및 항-CD28 항체 접합 상자성 비드는 자기장에의 노출에 의해 세포 조성물로부터 제거되었다. 이어서, 세포를 수집하고 상기 기재된 바와 같이 제제화 및 동결 보호하였다.
[896] 예시적 증폭 및 비-증폭 프로세스를 사용하여 생성된 T 세포 조성물은 CD4, CD8, CCR7 및 CD27을 비롯한 표면 마커를 인식하는 시약으로 염색되었고 유세포 분석에 의해 평가되었다. CCR7 및 CD27 염색 둘 다에 대해 표면 양성인 CD4+CAR+ 및 CD8+CAR+ T 세포의 백분율이 도 11A에 도시되어 있다. 도 11B 및 도 11C는 항-CD3/항-CD28 항체 접합된 비드 자극 제제와의 인큐베이션 이전에 투입 조성물 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율과 비교하여, 생성된 T 세포 조성물에서, CD4+CAR+ T 세포 및 CD8+CAR+ 중 CCR7+CD27+ 세포의 백분율을 각각 나타낸다. 도시된 바와 같이, 예시적 증폭 프로세스와 비교하여, 예시적 비-증폭 프로세스로부터 생성된 T 세포 조성물에서 더 높은 백분율의 CCR7+CD27+ 가 관찰되었다. 이러한 결과는 예시적 증폭 프로세스에 의해 생성된 세포 조성물보다 더 많은 포션 (portion)의 나이브형 (na
ve-like), 덜 분화된 표현형을 갖는 세포를 갖는 예시적 비-증폭 프로세스로부터 조작된 세포 조성물과 일치한다.
[897] 활성화, 형질 도입 시 또는 배양 개시 후 다양한 시간 (inoc +2, inoc +4 또는 inoc + 포함)을 비롯하여, 제조 프로세스 동안 다양한 날에 대표적인 공여자로부터 예시적 증폭 프로세스에 의해 생성된 세포의 추가 분석은 CCR7+ CD27+ 세포의 감소된 백분율에 결정된 것과 같이 세포의 증폭이 더 분화된 표현형과 관련되어 있음을 입증한다 (도 11D).
실시예 6: 시퀀싱 및 분석 방법을 사용한 T 세포 클론성 평가
[898] T 세포의 조성물은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현시키기 위해 유전적 조작 전후에, T 세포 수용체 (TCR) 쌍의 단일 세포 시퀀싱을 사용하여, T 세포 클론 풍부도 (clonal abundance)에 대해 평가되었다.
[899] CD4+ 및 CD8+ T 세포의 정제를 위한 면역 친화성 기반 선택에 의해 백혈구 성분채집술을 통해 대상체로부터 자가 T 세포를 단리하여, 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포에 대해 농축된 2 가지 조성물을 수득하였다. 농축된 CD4+ 및 CD8+ 조성물의 세포를 항-CD3/항-CD28 상자성 비드로 활성화시킨 후, 항-CD19 CAR를 인코딩하는 벡터를 사용하여 렌티바이러스 형질 도입을 개별적으로 수행하였다. 항-CD19 CAR는 뮤린 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv (FMC63 유래의 가변 영역), 면역 글로불린 유래 스페이서, CD28 유래의 막 관통 도메인, 4-1BB 유래의 보조자극 영역 및 CD3-제타 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하였다. 이어서, 세포 증폭을 위한 자극 시약의 존재 하에 형질 도입된 모집단이 별도로 인큐베이션되었다. CAR-발현 T 세포를 함유하는 증폭된 CD8+ 및 CD4+ 조성물은 제제화되고 개별적으로 동결 보존되고 저장되었다.
[900] 조작 전 단리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포 조성물 (CMAT)의 T 세포 클론성 및 상기 기술된 방법에 의한 조작 후 CD4+ 및 CD8+ 치료 용 CAR+ T 세포 조성물의 T 세포 클론성이 평가되었다. T 세포 클론성을 평가하기 위해, 세포는 일반적으로 WO2016044227, WO2016176322 및 WO2012048340에 기술된 바와 같이 단일-세포 αβ-쌍 TCR 시퀀싱에 적용되었다. TCR 유전자의 바코딩된 (barcoded) 단일-세포 시퀀싱에 기초하여, 세포 모집단에서 T 세포 클론성 및 식별된 클론의 다양성이 결정되었다. 일부 경우에, 샤논(Shannon) 인덱스는 클론을 필터링하기 위한 임계 값 ("샤논- 조정된 클론성")으로 사용되었고, 샘플 노이즈를 제거하면서 샘플 간 관계를 유지하였다. Chaara et al. (2018) Front Immunol 9: 1038 을 참조한다.
[901] 도 12는 샤논 지수를 적용한 후의 각 샘플의 클론성을 나타낸다. 도 12에 도시된 바와 같이, CD4 및 CD8 세포의 클론성은 유전적 조작 전 및 후의 T 세포 조성물 간에 상이하였고, 조작된 CAR+ T 세포 조성물은 세포 조작 프로세스의 개시 전 조성물에서의 T 세포와 비교하여 감소된 클론성을 나타냈다.
[902] 유전적 조작 후 CD4+ 및 CD8+ 치료적 CAR+ T 세포 조성물은 아포토시스를 나타내는 인자, 예를 들어 아넥신 V (아넥신 V-) 또는 카스파제 3 절단 (비-아포토틱 세포를 나타냄)의 발현 및 CD45RA, CCR7, CD27, CD4 및 CD8을 비롯한 다양한 표면 마커의 발현이 유세포 분석법으로 분류되었다. 세포의 표현형은 세포의 클론성 정도와 상관 관계가 있었다. CD4+ 및 CD8+ 치료적 CAR+ T 세포 조성물 둘 다에서, CCR7-/CD27- 인 아포토틱 마커-음성 세포의 존재는 조성물에서 세포의 클론성과 양의 상관 관계가 높은 것으로 관찰되었다. 마찬가지로, CCR7+ 또는 CCR7+/CD27+ 인 아포토틱 마커-음성 세포의 존재는 각각의 CD4+ 및 CD8+ 치료적 CAR+ T 세포 조성물에서 세포의 클론 성과 음의 상관 관계가 있었다. 이들 결과는 세포의 클론성이 CCR7 및/또는 CD27 양성에 의해 측정되는 것과 같이 덜 분화된, 나이브-유사 세포와 역 (inversely) 상관될 수 있다는 관찰과 일치한다.
실시예 7 세포 표현적 및 기능적 속성과 반응성 사이의 관계의 평가
[903] CD19에 대해 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 함유하는 예시적 치료 T 세포 조성물을 실시예 1에 기재된 바와 같이 생성하고 환자에게 투여하였다. 출발 샘플, 농축된 CD4+ 또는 CD8+ 투입 T 세포 조성물 및 생성된 항-CD19 CAR를 발현하는 T 세포 조성물이 다양한 표현형, 기능 및 세포 건강 관련 속성을 비롯한 다양한 속성에 대해 유세포 분석법으로 평가되었다.
[904] CAR+ T 세포 조성물의 속성은 치료 T 세포 조성물이 투여된 대상체의 무진행 생존 (PFS)을 비교함으로써 평가된 바와 같이 반응성 결과와의 관계에 대한 일변량 분석을 통해 분석되었다. 확인된 상위 가변 속성 중에는, 골지 억제제 (Golgi inhibitor)의 존재 하에 PMA/이오노마이신에 반응하여, 비-CAR 항원-특이적 방식으로, 예를 들어 유동-기반 방법 세포 내 사이토카인 염색 (ICS) 분석에서 IL-2 및 TNF-알파 사이토카인을 생산하는 CD4+ CAR+ T 세포의 능력이 있다. 특히, 도 13A 및 13B는 최대 선택 순위 통계 (maximally selected rank statistics)을 사용하여 결정된 것과 같이, 치료 조성물의 CD4+/CAR+ T 세포에서, 각각 IL-2 및 TNFα 생성 세포의 "높은" 또는 "낮은" 백분율을 갖는 환자에 대한 PFS 곡선 (콕스 비례 위험 (위) 및 최적 분할 (아래))을 도시한다. 도 13A 및 13B에 도시된 바와 같이, 더 높은 수준의 CD4+/CAR+ IL-2 또는 TNFα 생산을 함유하는 치료 T 세포 조성물이 투여된 그룹은 이러한 세포의 더 낮은 백분율을 함유하는 치료 T 세포 조성물이 투여된 대상체와 비교하여 개선된 생존을 나타냈다.
[905] CAR+ 치료 T 세포 조성물의 투여 전에, 실시예 2에 기재된 바와 같이 생성물 크기의 합 (SPD)의 기준 혈청 수준을 모니터링함으로써, 대상체는 종양 부담에 대해 평가되었다. CRP (C 반응성 단백질)의 기준 혈청 수준이 또한 결정되었다. CAR-발현 T 세포 조성물을 실시예 1에 실질적으로 기재된 대상체에게 투여한 후, 투여 후 6 개월에 각 대상체에 대해 임상 결과를 결정하였고 질병 부담과 관련시켰다. 도 14는 6 개월에서 완전 반응 (CR) (삼각형) 또는 반응 손실/응답 없음 (원)을 나타내는 대상체에서 SPD 또는 CRP 수준과 상관된 임상 결과를 도시한다. 도 14에 도시된 바와 같이, 낮은 기준선 SDP (50 cm2 미만) 및 낮은 CRP 값 (기준선 샘플에서 20 mg/L 미만)으로 나타낸 바와 같이, 질병 부담이 더 낮은 환자는, 더 높은 기준선 SPD 및 CRP 값으로 나타내는 바와 같이, 질병 부담이 높은 환자에 비해 6 개월에서 반응 손실 위험이 더 낮았다. 질병 부담이 높은 환자의 경우, IL-2 발현을 생성하는 CD4+CAR+ T 세포의 증가된 빈도를 갖는 치료 T 세포 조성물은 6 개월에서 유지된 반응과 상관 관계가 있었다 (도 15). TNF-알파에 대해서도 유사한 결과가 관찰되었다. 이러한 데이터는 CD4+CAR-발현 T 세포의 특정 기능적 특성, 예를 들어 IL-2 및 TNFα를 생성하는 능력은, 특히 높은 질병 부담 또는 임계 값에 대한 SPD 또는 CRP의 기준선 수준을 갖는 대상체에서, 유지된 임상 반응과 양의 상관 관계가 있다는 관찰 결과와 일치한다.
[906] CD4+ 또는 CD8+ (항-CD19 CAR로 조작 전에)에 대해 선택되고 농축된 투입 조성물의 세포 건강이 아포토시스의 마커 (예를 들어, 활성화된 카스파제 3)에 대한 유세포 분석법에 의해 평가되었다. 세포 건강과 반응성의 관계를 평가하였다. 도 16에 도시된 바와 같이, 복수의 농축된 T 세포 투입 조성물 중에서, 투입 조성물 중 아포토시스 마커 (예를 들어, 활성화된 카스파제 3)에 대해 양성인 세포에 대한 예시적 삼분위 (tertile) 컷-오프 값은 치료 T 세포 조성물을 생성하는데 사용된 출발 T 세포 물질에서의 아포토틱 세포 퍼센트와 PFS의 확률 사이의 관계를 입증하였다. 결과는 출발 물질에서의 아포토틱 마커+ 세포 퍼센트와 개선된 무진행 생존 (PFS) 사이의 역 (inverse) 상관 관계와 일치한다.
[907] 도 17은 출발 성분 채집 (starting apheresis) 샘플, 즉, 성분채집 및 T 세포 강화 전의 추가 프로세스 사이의 시간 (time)의 길이 (예를 들어, 시간 (in hours))가 변하는 샘플의 시기 (age)의 함수로서, 실시예 1에 실질적으로 기술된 방법을 사용하여 농축된 투입 T 세포 조성물에서 아포토틱 마커 (예를 들어, 활성화된 카스파제 3)에 대해 양성인 세포의 퍼센트를 보여준다. 이러한 데이터는 성분 채집 연령과 아포토틱 마커에 양성인 세포의 존재 사이의 양의 상관 관계를 지지한다.
[908] 농축된 CD8+ 또는 CD4+ T 세포 출발 물질에서 아포토틱 마커 (예를 들어, 활성화된 카스파제 3)에 대해 양성인 세포의 존재와 형질 도입된 물질의 또는 프로세스 또는 생성물 특징의 다양한 다른 파라미터 또는 속성 사이의 상관 관계가 표 E5에 요약되어 있다. 이들 데이터는 출발 T 세포 물질 아포토틱 프로파일이 치료 조성물 품질과 상관 관계가 있다는 결과를 추가로 지지한다.
[909] 상기 결과는, 생성된 CAR+ 치료 T 세포 조성물 및/또는 프로세스의 특징과 관련된 특정 상관 변수가, 대상체가 지속적인 PFS를 나타낼 가능성을 예측하거나 나타낼 수 있는 모델을 지지한다. 다중화 조정 p-값 (Bonferroni correction)을 추론하기 위해 순열을 사용하여 결정된 것과 같이, 추가 분할 (splits)이 유의하지 않을 때까지 분할 (partitions) 이 재귀적으로 수행되는 재귀적 분할 생존 곡선에 대한 조건부 추론 트리를 사용하여, PFS의 지속성과 관련된 변수의 결정 트리 (decision tree)가 개발되었다. 모델은, 변수가 출발 T 세포 물질 (예를 들어, 농축된 CD8+ T 세포)에서 낮은 수준의 아포토틱 마커+/CD3+/CAR+ 세포, 치료 T 세포 조성물의 생산을 위한 프로세스 동안 세포의 상대적으로 적은 수의 더블링 (배가), 및 항원-비의존적 자극 후 (예를 들어, 세포 내 사이토카인 분석에서 PMA/이오노마 이신에 반응하는) 사이토카인 (예를 들어, IL-2 또는 TNF)에 대해 음성인 치료 적 T 세포 조성물의 세포 중에서 CAR+CD4+ 세포의 상대적으로 낮은 백분율을 수반하는 반응의 지속성의 개선된 가능성을 추론하였다.
[910] 본 발명은 예를 들어 본 발명의 다양한 측면을 예시하기 위해 제공되는, 개시된 특정 실시 양태로 범위가 제한되도록 의도되지 않는다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본원의 설명 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본 개시의 진정한 범위 및 사상을 벗어나지 않고 실시될 수 있으며 본 개시의 범위 내에 속하도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING
<110> Juno Therapeutis, Inc.
Larson, Ryan P.
<120> PHENOTYPIC MARKERS FOR CELL THERAPY AND
RELATED METHODS
<130> 73504-20145.40
<140> Not Yet Assisgned
<141> Concurrently Herewith
<150> US 62/596,775
<151> 2017-12-08
<150> US 62/643,165
<151> 2018-03-14
<150> US 62/657,716
<151> 2018-04-13
<150> US 62/716,967
<151> 2018-08-09
<160> 59
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Spacer (IgG4hinge) (aa)
<400> 1
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Spacer (IgG4hinge) (nt)
<400> 2
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 3
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge-CH3 spacer
<400> 3
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 4
<211> 229
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge-CH2-CH3 spacer
<400> 4
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 5
<211> 282
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IgD-hinge-Fc
<400> 5
Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala
1 5 10 15
Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala
20 25 30
Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys
35 40 45
Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro
50 55 60
Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln
65 70 75 80
Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly
85 90 95
Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val
100 105 110
Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly
115 120 125
Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn
130 135 140
Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro
145 150 155 160
Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys
165 170 175
Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser
180 185 190
Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu
195 200 205
Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro
210 215 220
Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser
225 230 235 240
Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr
245 250 255
Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg
260 265 270
Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His
275 280
<210> 6
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A
<400> 6
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 7
<211> 357
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> tEGFR
<400> 7
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> CD28 (amino acids 153-179 of Accession No. P10747)
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> CD28 (amino acids 114-179 of Accession No. P10747)
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> CD28 (amino acids 180-220 of P10747)
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD28 (LL to GG)
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> 4-1BB (amino acids 214-255 of Q07011.1)
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD3 zeta
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD3 zeta
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD3 zeta
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 335
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> tEGFR
<400> 16
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A
<400> 17
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 18
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P2A
<400> 18
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P2A
<400> 19
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 20
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> E2A
<400> 20
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 21
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> F2A
<400> 21
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<220>
<221> REPEAT
<222> (5)...(9)
<223> SGGGG is repeated 5 times
<400> 22
Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Pro
1 5 10
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 23
Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 24
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GMCSFR alpha chain signal sequence
<400> 24
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atccca 66
<210> 25
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GMCSFR alpha chain signal sequence
<400> 25
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 26
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD8 alpha signal peptide
<400> 26
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 27
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 28
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 29
<211> 61
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 29
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 30
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 31
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 32
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 33
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<400> 34
Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR L1
<400> 35
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR L2
<400> 36
Ser Arg Leu His Ser Gly Val
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR L3
<400> 37
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly
1 5
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR H1
<400> 38
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR H2
<400> 39
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR H3
<400> 40
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH
<400> 41
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 43
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> scFv
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR L1
<400> 44
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR L2
<400> 45
Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR L3
<400> 46
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR H1
<400> 47
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR H2
<400> 48
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR H3
<400> 49
Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH
<400> 50
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL
<400> 51
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> scFv
<400> 53
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
<210> 54
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HC-CDR3
<400> 54
His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LC-CDR2
<400> 55
His Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LC-CDR3
<400> 56
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 57
<211> 735
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Sequence encoding scFv
<400> 57
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480
tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtga gcagc 735
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hinge
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(1)
<223> Xaa is glycine, cysteine or arginine
<220>
<221> VARIANT
<222> (4)...(4)
<223> Xaa is cysteine or threonine
<400> 58
Xaa Pro Pro Xaa Pro
1 5
<210> 59
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 59
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
Claims (316)
- 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 치료 조성물로서,
조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 적어도 약 40 %, 적어도 약 50 %, 적어도 약 60 %, 적어도 약 70 %, 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 91 %, 적어도 약 92 %, 적어도 약 93 %, 적어도 약 94 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 %, 적어도 약 99 % 또는 적어도 약 100 %, 또는 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 40 %, 약 50 %, 약 60 %, 약 70 %, 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 50 %, 적어도 약 50 %, 50%, 또는 약 50 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 60 %, 적어도 약 60 %, 60%, 또는 약 60 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 70 %, 적어도 약 70 %, 70%, 또는 약 70 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항에 있어서, 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 80 %, 적어도 약 80 %, 80%, 또는 약 80 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ 및 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 적어도 30 %, 50 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 30 %, 약 50 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %의 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 적어도 30 %, 50 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 30 %, 약 50 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %의 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며; 및/또는
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 대략 1 : 1, 대략 1 : 3 내지 3 : 1, 또는 대략 1 : 2 내지 2 : 1의 CD4+ : CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지는 것인 치료 조성물.
- 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 치료 조성물로서,
조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 적어도 약 80 %, 적어도 약 85 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 91 %, 적어도 약 92 %, 적어도 약 93 %, 적어도 약 94 %, 적어도 약 95 %, 적어도 약 96 %, 적어도 약 97 %, 적어도 약 98 %, 적어도 약 99 % 또는 적어도 약 100 %, 또는 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 80 %, 약 85 %, 약 90 %, 약 91 %, 약 92 %, 약 93 %, 약 94 %, 약 95 %, 약 96 %, 약 97 %, 약 98 %, 약 99 % 또는 약 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로:
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체 발현하는 조성물 중의 T 세포가 CD8+ 및 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물에서 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포가 적어도 30 %, 50 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 30 %, 50 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 %의 CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지며;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 적어도 30 %, 50 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %, 또는 약 30 %, 50 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 또는 99 % 또는 100 %의 CD4+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지고/이루어지거나;
상기 조성물 중의 T 세포 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포가 대략 1 : 1, 대략 1 : 3 내지 3 : 1, 또는 대략 1 : 2 내지 2 : 1의 CD4+ : CD8+ T 세포를 포함하거나 이로 이루어지는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 중의 T 세포의 총 수, 또는 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포의 총 수는 CCR7에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 중의 T 세포의 총 수, 또는 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포의 총 수는 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 중의 T 세포의 총 수, 또는 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중의 T 세포의 총 수는 CCR7 및 CD27에 대해 표면 양성인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량 또는 조성물이 상기 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 상기 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 각각 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108 개, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107 개, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하고/포함하거나;
상기 단위 용량 또는 조성물이 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 또는 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 또는 조성물이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 를 각각 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %는 각각 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이거나; 상기 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %(각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 또는 조성물이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1,또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 치료 조성물.
- 제16항에 있어서, 상기 정해진 수 또는 비율의 세포가 추가로 CD27+ 또는 CD45RA- 세포인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 또는 조성물이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1, 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 치료 조성물.
- 제18항에 있어서, 상기 정해진 세포 수 또는 비율의 세포가 추가로 CCR7+ 또는 CD45RA- 세포인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 또는 조성물이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하고; 및/또는 상기 단위 용량 또는 조성물이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 또는 조성물 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %(각각 포함)가 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA-인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체를 발현하는 세포의 수 또는 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 각각 포함하고/포함하거나, 상기 재조합 수용체를 발현하는 세포의 수 또는 단위 용량은 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 살아 있거나 생존 가능한 세포의 총 수인 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 아포토틱 마커(apoptotic marker)를 발현하지 않는 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 음성(apoptotic marker negative)인 세포의 총 수이며, 여기서 상기 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3(Caspase 3)인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 치료 조성물.
- 제25항에 있어서, 상기 질환, 장애 또는 병태가 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환. 또는 종양 또는 암인 치료 조성물.
- 제25항 또는 제26항에 있어서, 상기 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 γδ2, O-아세틸화 γδ2 (Oγδ2), 강글리오사이드 γδ3, 당단백질 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경사슬, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3,MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 티로시나아제 관련 단백질 1 (TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 알려져 있음), 티로시나아제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라아제, 도파크롬 델타-이소머라아제 또는 DCT로도 알려져 있음), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR) 인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인 및 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고, 상기 세포외 도메인과 상기 세포내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제28항에 있어서, 상기 항원-결합 도메인이 항체 또는 이의 항체 단편(선택적으로 이는 단일 사슬 단편)이거나 이를 포함하는 치료 조성물.
- 제30항에 있어서, 상기 단편이 scFv를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역이 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제33항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인이 T 세포 보조 자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제33항 또는 제34항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인이 상기 막 관통 도메인과 상기 세포내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 상기 대상체에 대해 자가(autologous)인 치료 조성물.
- 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 상기 대상체에 대해 동종 이계(allogeneic)인 치료 조성물.
- 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 암을 가지며, 선택적으로 상기 암이 백혈병 또는 림프종인 치료 조성물.
- 제40항에 있어서, 상기 대상체는, 상기 세포를 수득할 때, 종양 부담이 높은 것으로 확인되거나 알져진 대상체인 치료 조성물.
- 제41항에 있어서, 상기 대상체에서 종양의 생성물 크기의 합 (sum of product dimensions, SPD)이 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 이상이면, 상기 대상체는 높은 종양 부담을 갖고/갖고나;
상기 대상체로부터의 생물학적 시료, 선택적으로 혈청 시료 중 C 반응성 단백질 (C reactive protein: CRP)이 리터당 (약) 5 밀리그램, 리터당 10 밀리그램, 리터당 15 밀리그램, 20 리터당 밀리그램, 리터당 25 밀리그램, 리터당 30 밀리그램, 리터당 40 밀리그램 또는 리터당 50 밀리그램 이상이면 상기 대상체는 높은 종양 부담을 갖는 것인, 치료 조성물.
- 제42항에 있어서, 상기 대상체에서 상기 종양의 SPD가 (약) 50 cm2 이상인 경우 상기 대상체는 높은 종양 부담을 갖는 것인, 치료 조성물.
- 제42항 또는 제43항에 있어서, 상기 CRP가 상기 생물학적 샘플에서 리터당 (약) 20 밀리그램 이상인 경우 상기 대상체는 높은 종양 부담을 갖는 것인, 치료 조성물.
- 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 용기, 및 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 상기 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서를 포함하는 것인 제조 물품.
- 제조 물품으로서,
하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기(container)로서, 상기 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 (선택적으로 발현되도록 조작된) 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서, 단위 용량의 세포는 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 (선택적으로 표면 발현하는) 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트(subset)의 세포를 포함하는 용기; 및
질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서(instructions)를 포함하는 제조 물품.
- 제조 물품으로서
하나 이상의 치료 조성물에 존재하는 하나 이상의 단위 용량의 세포를 포함하는 용기로서, 상기 단위 용량은 재조합 수용체를 발현하는 (선택적으로 발현되도록 조작된) 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하고, 여기서 단위 용량의 세포는 분화 클러스터 27(CD27)을 발현하는 (선택적으로 표면 발현하는) 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포(수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브 세트 (subset)의 세포를 포함하는 용기; 및
질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 상기 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하기 위한 설명서;를 포함하는 제조 물품.
- 제46항 또는 제47항에 있어서, 상기 단위 용량의 세포가 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 것인 제조 물품.
- 치료 방법으로서,
질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 제1항 또는 제7항의 치료 조성물 또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 선택적으로;
상기 세포의 단위 용량이 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고/포함하거나;
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 상기 단위 용량 중에서 CCR7을 발현하는 세포 (CCR7+ 세포)의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 치료 방법.
- 제49항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함하고/포함하거나 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CCR7+세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 치료 방법으로서,
질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 제1항 또는 제7항의 치료 조성물 또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 포함하고, 선택적으로
상기 세포의 단위 용량이 분화 클러스터 27 (CD27)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고/포함하거나;
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 상기 단위 용량 중에서 CD27을 발현하는 세포 (CD27+ 세포)의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 치료 방법.
- 제51항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CD27+ 세포를 포함하고/포함하거나; 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CD27+세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량이 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 각각 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하고/포함하거나;
상기 단위 용량이 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 (약) 1 x 108 개 이하, (약) 5 x 107 개 이하, (약) 1 x 107 개 이하, (약) 5 x 106 개 이하, (약) 1 x 106 개 이하, 또는 (약) 5 x 105 개 이하로 포함하고/포함하거나;
상기 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제49항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 를 각각 포함하는 것인 치료 방법.
- 제49항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 중에서 상기 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 상기 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %가 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이거나; 상기 단위 용량에서 상기 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량에서 상기 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %가 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 인 치료 방법.
- 제49항, 제50항 및 제53항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1, 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 치료 방법.
- 제51항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및 수용체+/CD4+/CD27+ 세포, 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 포함하며, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1, 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 치료 방법.
- 제56항 또는 제57항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하고/포함하거나; 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제58항에 있어서, 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %가 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 이고/이거나; 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %가 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA-인 치료 방법.
- 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 제1항 또는 제7항의 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
- 제60항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고;
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 상기 단위 용량 중에서 CCR7 을 발현하는 세포(CCR7+ 세포)의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 치료 방법.
- 치료 방법으로서,
질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물 및/또는 이러한 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 포함하며,
상기 세포의 단위 용량이 CCR7 및 CD27를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하고;
상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 상기 단위 용량 중에서 CCR7을 발현하는 세포(CCR7+ 세포)의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 치료 방법.
- 제58항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고/포함하거나; 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제58항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량이 상기 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약)5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약)1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하고/포함하거나;
상기 단위 용량이 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함하고/포함하거나;
상기 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제58항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107, 약 4 x 106 내지 약 2 x 107, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포; 및/또는 약 3 x 106 내지 약 2.5 x 107, 약 4 x 106 내지 약 2 x 107, 또는 약 5 x 106 내지 약 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제58항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 인 치료 방법.
- 제58항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1, 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 치료 방법.
- 제49항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정해진 수의 세포는 추가적으로 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않으며, 상기 선택적으로 정해진 수의 세포는 추가적으로 CD45RA- 세포인 치료 방법.
- 제49항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 1 x 105 내지 약 5 x 108, 약 1 x 105 내지 약 1 x 108, 약 5 x 105 내지 약 1 x 107, 또는 약 1 x 106 내지 약 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제49항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제70항에 있어서, 상기 CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수가 살아 있거나 생존 가능한 그러한 세포의 총 수인 치료 방법.
- 제49항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수가 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 이러한 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 음성 (apoptotic marker negative)인 이러한 세포의 총수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)인 치료 방법.
- 제49항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제73항에 있어서, 상기 복수의 개별 조성물이 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 것인 치료 방법.
- 제74항에 있어서, 상기 제 1 조성물이 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제74항에 있어서, 상기 제 1 조성물이 CD4+ T 세포를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제49항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 48 시간 이하의 간격으로 투여하는 단계를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제77항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물이 36 시간 이하, 24 시간 이하, 12 시간 이하, 6 시간 이하, 4 시간 이하, 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하 간격으로 투여되는 것인 치료 방법.
- 제77항 또는 제78항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물이 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여되는 것인 치료 방법.
- 제73항 또는 제79항에 있어서, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 치료 방법.
- 제73항 또는 제79항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 치료 방법.
- 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 단위 용량을 결정하는 방법으로서,
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 상기 재조합 수용체 및 CCR7 을 발현하는 T 세포(수용체+/CCR7+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계;
(b) 수용체+/CCR7+ 세포의 수, 백분율 또는 비율에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계로서, 여기서 상기 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 단계;
를 포함하는 방법.
- 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 단위 용량을 결정하는 방법으로서,
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 상기 재조합 수용체 및 CD27을 발현하는 T 세포(수용체+/CD27+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계; 및
(b) 수용체+/CD27+ 세포의 수, 백분율 또는 비율에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계로서, 여기서 단위 용량이 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 단계;
를 포함하는 방법.
- 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 조성물의 제조 방법으로서,
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CCR7 및/또는 CD27 을 발현하는 T 세포(수용체+/CCR7+ 및/또는 수용체+/CD27+)의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계; 및
(b) 상기 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해 상기 조성물의 전체 또는 일부 및 선택적으로 다른 용액으로 용기를 채우는 단계로서, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 세포의 다른 서브 세트를 포함하거나, 또는 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포 를 포함하는 것인 단계;
를 포함하는 방법.
- 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법으로서,
상기 방법은 T 세포 조성물의 전체 또는 일부로 용기를 채우는 단계를 포함하고, 상기 T 세포 조성물은 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하며, 상기 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 여기서 단위 용량은 C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
- 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법으로서,
상기 방법은 T 세포 조성물의 전체 또는 일부로 용기를 채우는 단계를 포함하고, 상기 T 세포 조성물은 질환 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하며, 상기 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 여기서 상기 단위 용량은 분화 27 (CD27)의 클러스터를 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 대 조성물 중 다른 서브 세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제83항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포를 포함하고 및/또는 세포의 단위 용량이 정해진 CD4+/CCR7+ 세포를 포함하는 것인 방법
- 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량이 상기 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 각각 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하고/포함하거나,
상기 단위 용량이 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 이하, 약 5 x 106 이하, 약 1 x 106 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함하고/포함하거나,
상기 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+를 포함하는 것인 방법.
- 제82항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+ 를 포함하는 것인 방법.
- 제82항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이거나, 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 인 방법.
- 제82항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1, 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
- 제82항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 CD27 및/또는 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 여기서 상기 단위 용량은 CD27+ 또는 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제82항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 조성물에서 CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율, 선택적으로 CD27+ 또는 CD45RA-인 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제92항 또는 제93항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하고 및/또는 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제92항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 중에서 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %가 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA-, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA인 방법.
- 대상체를 치료하기 위해 조작된 T 세포의 단위 용량을 결정하는 방법으로서,
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서 재조합 수용체 및 CCR7 및 CD27 (수용체+/CCR7+/CD27+)을 발현하는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계;
(b) 수용체+/CCR7+/CD27+ 세포의 수, 백분율 또는 비에 기초하여, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 세포의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계로서, 여기서 상기 세포의 단위 용량이 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브 세트의 세포를 포함하는 것인 단계;
를 포함하는 방법.
- 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 조성물의 제조 방법으로서,
(a) 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 CD8+ 및/또는 CD4+ T 세포를 포함하는 치료 조성물에서, 재조합 수용체 및 CCR7 및 CD27 (수용체+/CCR7+/CD27+)을 발현하는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계; 및
(b) 상기 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해 조성물의 전체 또는 일부 및 선택적으로 다른 용액으로 용기를 채우는 단계로서, 여기서 상기 단위 용량이 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 단계;
를 포함하는 방법.
- 단위 용량의 T 세포 조성물을 포함하는 치료 조성물의 제조 방법으로서,
상기 방법은 상기 T 세포 조성물의 단위 용량을 달성하기 위해, 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 재조합 수용체를 포함하는 T 세포를 포함하는 상기 T 세포 조성물의 전부 또는 일부로 용기를 채우는 단계로서, 여기서 상기 단위 용량이 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 단계를 포함하는 방법.
- 제96항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+/CD27+세포를 포함하고 및/또 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제96항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 재조합 수용체를 발현하는 총 CD8+ 세포 (수용체+/CD8+ 세포) 또는 재조합 수용체를 발현하는 총 CD4+ 세포 (수용체+/CD4+ 세포), 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 각각 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하고; 상기 단위 용량이 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하로 포함하며; 및/또는 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제96항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 %(각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 인 방법.
- 제96항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고, 이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1, 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1인 방법.
- 제96항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 단위 용량이 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제96항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 조성물에서 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 T 세포의 수, 백분율 또는 비율, 선택적으로 CD45RA-인 T 세포의 수, 백분율 또는 비율을 평가하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서,
i) 대상체의 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율(target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하는 투입(input) 조성물을 제공하는 단계;
ii) 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리 뉴클레오티드를 상기 투입 조성물에 도입하는 단계; 및
iii) 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에 상기 투입 조성물 내의 상기 세포를 자극하는 단계로서, 여기서 자극하는 단계는 하나 이상의 자극 제제 (stimulating agents)의 존재 하에서 세포를 배양하는 것을 포함하며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하는 것인 단계;
를 포함하고,
여기서, 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출(output) 조성물을 생성하는 것인 방법.
- 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서,
상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 투입 조성물은 대상체의 생물학적 샘플로부터 제공된 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하고, 상기 투입 조성물은, 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅함으로써 자극되며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하고;
여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성하는 것인 방법.
- 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서,
i) 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 수 (target number)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 수의 CD4+ T 세포를 단리하여, 투입 조성물을 생성하는 단계;
ii) 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 상기 투입 조성물에 도입하는 단계; 및
iii) 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 상기 투입 조성물 내의 세포를 자극하는 단계로서, 여기서 자극은 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅하는 것을 포함하고, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하는 것인 단계;
를 포함하고,
여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 산출 (output) 조성물을 생성하는 것인 방법.
- 유전적으로 조작된 세포를 포함하는 세포 조성물의 생성 방법으로서,
상기 방법은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투입 조성물에 도입하는 것을 포함하고, 여기서 투입 조성물이, 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플로부터, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 수 (target number)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 수의 CD4+ T 세포를 단리함으로써 생성되고, 상기 투입 조성물은, 상기 도입 전, 도입 동안에 및/또는 도입 이후에, 하나 이상의 자극 제제의 존재 하에서 세포를 인큐베이팅함으로써 자극되며, 상기 자극은 세포의 활성화 및/또는 증식을 초래하고;
여기서 상기 방법은 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 재조합 수용체-발현 (수용체+) CD8+ T 세포 대 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포, 및/또는 정해진 비율의 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 수용체+/CD4+ T 세포 대 조성물 중 다른 서브 세트의 세포를 포함하는 산출 조성물을 생성하는 것인 방법.
- 제106항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투입 조성물이 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 또는 발현하지 않는 목표 백분율 (target percentage)의 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 목표 백분율의 CD4+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제106항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투입 조성물이 목표 백분율의 CD4+/CCR7+, CD4+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD27+, CD4+/CCR7+/CD45RA-, CD4+/CCR7+/CD45RA+, CD8+/CCR7+, CD8+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD27+, CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제106항 내지 제111 중 어느 한 항에 있어서, 상기 산출 조성물이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포, 대 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포; 또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+, 수용체+/CD8+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+, 수용체+/CD4+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제106항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하기 위한 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 결정하는 단계를 더 포함하며,
여기서 상기 단위 용량은:
C-C 케모카인 수용체 타입 7 (CCR7)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+ 세포) 및/또는 CCR7을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포;
분화 클러스터 27 (CD27)을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CD27+ 세포) 및/또는 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 대 조성물 중 세포의 다른 서브세트; 또는
CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포 (수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 CCR7 및 CD27을 발현하는 정해진 수의 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포 (수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포) 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 대 조성물 중 다른 서브세트의 세포;
를 포함하는 산출 조성물의 전부 또는 일부를 포함하는 방법.
- 제113항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 CD8+/CCR7+ 세포, CD4+/CCR7+ 세포, CD8+/CD27+ 세포, CD4+/CD27+ 세포, CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제113항 또는 제114항에 있어서, 상기 단위 용량은 총 수용체+/CD8+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포, 총 수용체+/CD4+/CD27+ 세포, 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포, 또는 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 각각 (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개로 포함하는 것인 방법.
- 제113항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량이 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포; 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+; 및/또는 적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는적어도 약 3 x 106, 4 x 106, 5 x 106, 6 x 106, 7 x 106, 8 x 106, 9 x 106, 또는 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함하고/포함하거나;
상기 단위 용량이 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD8+/CD27+ 세포를 포함하고; 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 또는 총 수용체+/CD4+/CD27+, 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 및/또는 (약) 3 x 106 내지 (약) 2.5 x 107, (약) 4 x 106 내지 (약) 2 x 107, 또는 (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 총 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포를 포함 (각각 포함)하는 것인 방법.
- 제113항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+ 또는 수용체+/CD8+/CD27+ 이고;
상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+ 또는 수용체+/CD4+/CD27+ 이고; 및/또는
상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 인 방법.
- 제113항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1 , 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임); 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CD27+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1, 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임); 및/또는 정해진 비율의 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포 대 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포 (이 비율은 선택적으로 1 : 1 , 대략 1 : 1 또는 대략 1 : 3 내지 대략 3 : 1 임)를 포함하는 것인 방법.
- 제113항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 CD45를 발현하거나 발현하지 않는 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하고, 선택적으로 여기서 상기 단위 용량이 CD45RA- 세포를 포함하는 정해진 수의 세포를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제110항에 있어서, 상기 세포의 단위 용량이 정해진 수의 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제113항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 적어도 15 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % 또는 90 %, 또는 상기 단위 용량 중에서 총 수용체+ 세포의 약 15 % 내지 90 %, 약 20 % 내지 80 %, 약 30 % 내지 70 %, 또는 약 40 % 내지 60 % (각각 포함)는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포인 방법.
- 제106항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제공 또는 단리 전에, CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD8+ T 세포 및/또는 CCR7, CD27 및/또는 CD45RA를 발현하거나 발현하지 않는 CD4+ T 세포의 수, 부피당 수 (number per volume), 무게당 수 (number per weight) 및/또는 백분율을 결정하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제106항 내지 제122항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 자극 제제가 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포를 활성화시킬 수 있고; TCR 복합체를 통해 신호를 유도할 수 있고; 및/또는 T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포의 증식을 유도할 수 있는 것인 방법.
- 제106항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 자극 제제가 TCR 복합체의 구성원(member)에 결합하고, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1 차 제제(primary agent)를 포함하는 것인 방법.
- 제124항에 있어서, 상기 하나 이상의 자극 제제가 T 세포 보조 자극 분자에 특이적으로 결합하는 2 차 제제를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제125항에 있어서, 상기 보조 자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40 또는 ICOS로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제125항 또는 제126항에 있어서, 상기 1 차 및 2 차 제제가 항체를 포함하고, 선택적으로 하나 이상의 자극 제제가 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체와의 인큐베이션을 포함하는 것인 방법.
- 제106항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 자극 제제가 고체 지지체, 선택적으로 비드의 표면 상에 존재하는 것인 방법.
- 제106항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 자극 제제가 CD3-결합 분자; CD28-결합 분자; 재조합 IL-2; 재조합 IL-15; 및 재조합 IL-7, 항원 수용체에 의해 특이적으로 인식된 항원을 포함하는 백신, 및 항원 수용체에 특이적으로 결합하는 항-이디오 타입 항체 또는 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
- 제82항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 조성물이 제1항 또는 제7항에 따른 조성물인 방법.
- 제82항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게, 상기 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제82항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체 그룹 중, 상기 단위 용량 중에서 CCR7 (CCR7+ 세포)을 발현하는 세포의 수 또는 비율이 40 % 이하, 30 % 이하, 20 % 이하, 10 % 이하 또는 5 % 이하로 변화되는 것인 방법.
- 제82항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단위 용량이 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 상기 재조합 수용체를 발현하는 총 CD3+ 세포 (수용체+/CD3+ 세포) 또는 총 CD3+ 세포를 각각 포함하고; 및/또는 상기 단위 용량이 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/CD3+ 세포 또는 총 CD3+ 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제82항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 살아 있거나 생존 가능한 그러한 세포의 총 수인 방법.
- 제82항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD3+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CCR7+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD4+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체/CD4+/CCR7+/CD27+ 세포의 총 수, 수용체+/CD8+/CCR7+/CD45RA- 세포 및/또는 수용체+/CD4+/CCR7+/CD45RA- 세포의 총 수는 아포토틱 마커 (apoptotic marker)를 발현하지 않는 세포의 총 수이고/이거나 아포토틱 마커 음성 (apoptotic marker negative)인 세포의 총 수이며, 여기서 아포토틱 마커는 아넥신 V 또는 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)인 방법.
- 제131항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제136항에 있어서, 상기 복수의 개별 조성물은 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 것인 방법.
- 제137항에 있어서, 상기 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제137항에 있어서, 상기 제 1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제131항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 상기 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 48 시간 이하의 간격으로 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제140항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 상기 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물이 36 시간 이하의 간격으로, 24 시간 이하의 간격으로, 12 시간 이하의 간격으로, 6 시간 이하의 간격으로, 2 시간 이하의 간격으로, 1 시간 이하의 간격으로 또는 30 분 이하의 간격으로 투여되는 것인 방법.
- 제140항 또는 제141항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물이 2 시간 이하, 1 시간 이하, 30 분 이하, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 또는 동시에 투여되는 것인 방법.
- 제136항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제136항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하기 전에, CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제49항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 방법.
- 제145항에 있어서, 상기 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암인 방법.
- 제145항 또는 제146항에 있어서, 상기 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 γδ2, O-아세틸화 γδ2 (Oγδ2), 강글리오사이드 γδ3, 당단백질 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경사슬, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3,MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 티로시나아제 관련 단백질 1 (TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 알려져 있음), 티로시나아제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라아제, 도파크롬 델타-이소머라아제 또는 DCT로도 알려져 있음), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 방법.
- 제49항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)인 방법.
- 제48항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인 및 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고, 상기 세포외 도메인과 상기 세포내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제149항에 있어서, 상기 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제150항에 있어서, 상기 단편이 scFv를 포함하는 것인 방법.
- 제149항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제149항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역이 보조 자극 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제153항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
- 제153항 또는 제154항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
- 제153항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인이 상기 막 관통 도메인과 상기 세포내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 방법.
- 제49항 내지 제156항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 방법.
- 제49항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 대상체에 대해 자가 (autologous)인 방법.
- 제49항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 대상체에 대해 동종이계 (allogeneic)인 방법.
- 제157항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 암을 가지며, 선택적으로 상기 암이 백혈병 또는 림프종인 방법.
- 제160항에 있어서, 대상체가, 세포를 수득할 때에, 높은 종양 부담을 갖는 것으로 확인되거나 알려진 대상체인 방법.
- 제161항에 있어서, 상기 대상체에서 종양의 생성물 크기의 합 (sum of product dimensions, SPD)이 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 이상이면, 대상체는 높은 종양 부담을 가지며; 및/또는 대상체로부터의 생물학적 시료, 선택적으로 혈청 시료 중 C 반응성 단백질 (C reactive protein, CRP)이 리터당 (약) 5 밀리그램, 리터당 10 밀리그램, 리터당 15 밀리그램, 20 리터당 밀리그램, 리터당 25 밀리그램, 리터당 30 밀리그램, 리터당 40 밀리그램 또는 리터당 50 밀리그램 이상이면 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 방법.
- 제162항에 있어서, 상기 대상체에서 종양의 SPD가 (약) 50 cm2 이상인 경우 상기 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 방법.
- 제162항 또는 제163항에 있어서, 상기 CRP가 상기 생물학적 샘플에서 리터당 (약) 20 밀리그램 이상인 경우 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 방법.
- 제106항 내지 제164항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생성된 산출 조성물.
- 제82항 내지 제164항 중 어느 한 항의 방법에 의해 결정되거나 생성된 단위 용량.
- 제166항의 단위 용량을 포함하는 약학적 조성물.
- 제167항에 있어서, 약학적 담체를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
- 제165항의 산출 조성물의 전부 또는 일부, 제166항의 단위 용량 또는 제167항 또는 제168항의 약학적 조성물을 포유동물 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.
- 암을 치료하기 위한, 제165항의 산출 조성물의 전부 또는 일부, 제166항의 단위 용량 또는 제167항 또는 제168항의 약학적 조성물의 용도.
- 암 치료용 의약의 제조에 있어서의, 제165항의 산출 조성물의 전부 또는 일부, 제166항의 단위 용량 또는 제167항 또는 제168항의 약학적 조성물의 용도.
- 암 치료에 사용하기 위한, 제165항의 산출 조성물, 제166항의 단위 용량 또는 제167항 또는 제168항의 약학적 조성물.
- 항원에 결합하는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 치료 세포 조성물 (therapeutic cell composition)로서,
자극 제제로 자극 후:
상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 인터루킨 2 (IL-2) 및/또는 TNF-알파로부터 선택된 사이토카인을 생성할 수 있으며; 및/또는
상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성 (polyfunctional)인 치료 세포 조성물.
- 제173항에 있어서, 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 인터루킨 2 (IL-2) 및/또는 TNF-알파로부터 선택된 사이토카인을 생성할 수 있는 것인 치료 세포 조성물.
- 제173항 또는 제174항에 있어서, 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 사이토카인 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파의 생산을 위해 다작용성인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제176항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자극 제제가 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제인 치료 세포 조성물.
- 제177항에 있어서, 상기 비-특이적 (non-specific) 또는 비-항원-의존성 (non-antigen-dependent) T 세포 자극 제제가 다클론성 (polyclonal) 자극 제제인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제178항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제가 PMA/이오노마이신, 항-CD3/항-CD28, 피토헤마글루티닌 (phytohemagglutinin, PHA) 또는 콘카나발린 A (concanavalin A, ConA)를 포함하는 것인 치료 세포 조성물.
- 제177항 내지 제179항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제가 PMA/이오노마이신을 포함하는 것인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제176항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자극 제제가 재조합 수용체에 특이적으로 결합하고, 선택적으로 여기서 상기 자극 제제가 항원-특이적 자극 제제이고/이거나 재조합 수용체에 의해 특이적으로 인식되는 항원 또는 이의 일부를 포함하는 것인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제181항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인의 생산은 세포 내 사이토카인 어세이에서 측정되는 것인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제182항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 % 가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA의 표면 발현에 대해 추가로 음성인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제183항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 세포인 치료 세포 조성물.
- 제184항에 있어서, 상기 대상체가 암을 갖고, 선택적으로 상기 암이 백혈병 또는 림프종인 치료 세포 조성물.
- 제185항에 있어서, 상기 대상체가, 세포를 수득할 때, 높은 종양 부담을 갖는 것으로 확인되거나 알려진 대상체인 치료 세포 조성물.
- 제186항에 있어서,
상기 대상체에서 종양의 생성물 크기의 합 (sum of product dimensions, SPD)이 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 이상이면, 대상체가 높은 종양 부담을 가지며; 및/또는
상기 대상체로부터의 생물학적 시료, 선택적으로 혈청 시료 중 C 반응성 단백질 (C reactive protein, CRP)이 리터당 (약) 5 밀리그램, 리터당 10 밀리그램, 리터당 15 밀리그램, 20 리터당 밀리그램, 리터당 25 밀리그램, 리터당 30 밀리그램, 리터당 40 밀리그램 또는 리터당 50 밀리그램 이상이면 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 치료 세포 조성물.
- 제187항에서, 상기 대상체에서 종양의 SPD가 (약) 50 cm2 이상인 경우 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 치료 세포 조성물.
- 제187항 또는 제188항에서,
상기 CRP가 생물학적 샘플에서 리터당 약 20 밀리그램 이상인 경우 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제189항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 세포 조성물이 CD4+ T 세포로 농축되고 및/또는 조작된 조성물 중 총 재조합 수용체+ 세포의 적어도 (약) 60 %, 적어도 약 70 %, 적어도 약 80 %, 적어도 약 90 %, 적어도 약 95 %, 적어도 (약) 97 %, 또는 상기 조성물 중 총 세포의 약 60 % 내지 99 %, 약 75 % 내지 99 %, 약 85 % 내지 99 %, 또는 약 90 % 내지 99 % (각각 포함)가 CD4+ 인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제189항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 치료 세포 조성물이 CD3+ T 세포로 농축되고, CD4+ 및 CD8+ T 세포로 농축되고 및/또는 조작된 조성물 중 재조합 수용체+ 세포의 적어도 (약) 60 %, 적어도 (약) 70 %, 적어도 (약) 80 %, 적어도 (약) 90 %, 적어도 (약) 95 %, 적어도 (약) 97 %, 또는 조성물 중 총 세포의 약 60 % 내지 99 %, 약 75 % 내지 99 %, 약 85 % 내지 99 %, 또는 약 90 % 내지 99 % 가 CD3+ 또는 CD4+ 및 CD8+ 인 치료 세포 조성물.
- 제191항에 있어서, 상기 치료 세포 조성물이 대략 1 : 3 내지 3 : 1, 선택적으로 대략 1 : 2 내지 2 : 1인 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비로 CD4 + 및 CD8 + T 세포를 포함하는 것인 치료 세포 조성물.
- 제173항 내지 제192항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제173항 내지 제193항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합하는 것인 치료 조성물.
- 제194항에 있어서, 상기 질환, 장애 또는 병태는 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암인 치료 조성물.
- 제194항 또는 제195항에 있어서, 상기 표적 항원이 종양 항원인 치료 조성물.
- 제194항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 γδ2, O-아세틸화 γδ2 (Oγδ2), 강글리오사이드 γδ3, 당단백질 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경사슬, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3,MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 티로시나아제 관련 단백질 1 (TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 알려져 있음), 티로시나아제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라아제, 도파크롬 델타-이소머라아제 또는 DCT로도 알려져 있음), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 치료 조성물.
- 제173항 내지 제197항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제173항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인 치료 조성물.
- 제173항 내지 제199항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인 및 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제200항에 있어서, 상기 항원-결합 도메인이 선택적으로 단일 사슬 단편인 항체 또는 이의 항체 단편이거나 이를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제201항에 있어서, 상기 단편이 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제201항 또는 제202항에 있어서, 상기 단편이 scFv를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제200항 내지 제203항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인이 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제200항 내지 제204항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분(portion)의 세포내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제200항 내지 제205항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 세포외 도메인과 세포내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제200항 내지 제206항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역이 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제207항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인은 T 세포 보조 자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제207항 또는 제208항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 치료 조성물.
- 제207항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인이 상기 막 관통 도메인과 상기 세포내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 치료 조성물.
- 제173항 내지 제210항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 치료 조성물.
- 제173항 내지 제211항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포는 대상체에 대해 자가인 (autologous) 치료 조성물.
- 제173항 내지 제212항 중 어느 한 항의 치료 세포 조성물을 포함하는 용기, 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 상기 치료 조성물, 선택적으로 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 (volume)을 투여하기 위한 설명서를 포함하는 제조 물품.
- 제213항에 있어서, 설명서가 복수의 개별 조성물에 함유된 복수의 단위 용량을 투여하는 것을 명시하는 것인 제조 물품.
- 제214항에 있어서, 상기 복수의 개별 조성물이 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 다른 하나를 포함하는 제 2 조성물을 포함하고 상기 제 2 조성물이 재조합 수용체를 발현하는 세포 또는 질병 또는 병태에 의해 발현된 세포에 대해 또는 항원에 대해 특이적인 재조합 수용체를 포함하며 선택적으로 제 2 조성물이 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 조성물인 제조 물품.
- 제215항에 있어서, 상기 설명서가 CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량 및 CD4+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 조성물을 48 시간 이내의 간격으로, 36 시간 이내의 간격으로, 24 시간 이내의 간격으로, 12 시간 이내의 간격으로, 6 시간 이내의 간격으로, 2 시간 이내의 간격으로, 1 시간 이내의 간격으로 또는 동시에 투여하는 것을 명시하는 것인 제조 물품.
- 제215항 또는 제216항에 있어서, 상기 설명서가 CD4+ 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 함유하는 상기 조성물을 투여하기 전에, CD8+ T 세포 또는 이의 하나 이상의 단위 용량을 함유하는 상기 조성물 및/또는 이러한 하나 이상의 단위 용량에 상응하는 용량을 투여하는 것을 명시하는 것인 제조 물품.
- 제173항 내지 제212항 중 어느 한 항의 치료 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량을 질환 또는 병태를 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법.
- 제218항에 있어서, 상기 치료 조성물이 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포 중 하나를 함유하는 제 1 치료 세포 조성물이고, 하나 이상의 단위 용량이 CD8+ T 세포 및 CD4+ 세포 중 다른 하나를 함유하는 제 2 치료 세포 조성물을 추가로 함유하고, 상기 제 2 조성물이 질병 또는 병태에 의해 발현된 세포에 대해 또는 항원에 대해 특이적인 재조합 수용체 또는 재조합 수용체를 발현하는 세포를 포함하고, 선택적으로 여기서 상기 제 2 조성물이 제173항 내지 제212항 중 어느 한 항의 조성물인 방법.
- 제47항에 있어서, 상기 제 2 치료 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 상기 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 (약) 또는 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94%, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 % 가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA의 표면 발현에 대해 추가적으로 음성인 방법.
- 제219항 또는 제220항에 있어서, 상기 제 2 치료 세포 조성물이 CD8+ T 세포로 농축되고, 상기 조작된 조성물 중 총 재조합 수용체+ 세포의 적어도 (약) 60 %, 적어도 (약) 70 %, 적어도 (약) 80 %, 적어도 (약) 90 %, 적어도 (약) 95 %, 또는 적어도 (약) 97 %, 또는 상기 조성물 중 총 세포의 약 60 % 내지 99 %, 약 75 % 내지 99 %, 약 85 % 내지 99 %, 또는 약 90 % 내지 99 % (각각 포함)가 CD8+ 인 방법.
- 제221항에 있어서, 상기 제 1 치료 조성물 및 제 2 치료 조성물이 서로 각각 (약) 48 시간 이내에, (약) 36 시간 이내에,(약) 36 시간 이내에, (약) 24 시간 이내에, (약) 12 시간 이내에, (약) 6 시간 이내에, (약) 2 시간 이내에 또는 (약) 1 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
- 제221항 또는 제222항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포를 함유하는 상기 제 2 치료 세포 조성물이 상기 CD4+ T 세포를 함유하는 상기 제 1 조성물 전에 투여되는 것인 방법.
- 제218항 내지 제223항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 단위 용량의 세포는 정해진 비율의 CD4+ 대 CD8+ T 세포를 함유하며, 이 비율은 1 : 3 및 3 : 1 , 대략 1 : 3 및 3 : 1, 선택적으로 1 : 2 및 2 : 1 , 대략 1 : 2 및 2 : 1, 선택적으로 1 : 1 또는 약 1 : 1인 방법.
- 대상체의 치료 방법으로서,
(A) 조성물 중 조작된 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자 (factor)에 대해 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 조작된 세포 조성물을 분석하는 단계로서, 상기 인자는 (i) CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA에 대해 표면 음성인 재조합 수용체를 발현하는 T 세포의 백분율; 및/또는 (ii) 자극 제제로 자극 후 IL-2, TNF-알파 및/또는 IFN-감마를 생성할 수 있는 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ T 세포의 백분율로부터 선택되는 것인 단계; 및
(B) 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 치료요법(therapy)을 투여하는 단계로서, 상기 투여하는 단계는 다음에서 선택되는 단계:
(1) 상기 조작된 T 세포 조성물의 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자가 임계 값 (threshold value) 이거나 그 이상인 경우, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포를 상기 대상체에게 투여함; 또는
(2) 상기 조작된 T 세포 조성물의 세포의 기능 또는 표현형을 나타내는 상기 인자가 상기 인자의 임계 값 미만인 경우, (a) 상기 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포 및 상기 대상체에서 상기 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제, (b) 상기 조작된 세포 조성물의 세포의 증가된 용량 (dose), 선택적으로 동일한 질병 또는 병태를 갖지만 상기 인자의 임계 값 또는 그 이상을 나타내는 유사한 양태에 있는 (similarly situated) 대상체에게 투여되는 하나 이상의 단위 용량과 비교하여 증가된 용량; 또는 (c) 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량 외 질병 또는 병태를 치료하기 위한 대안적 치료법;에서 선택되는 요법을 투여함;
을 포함하며,
여기서 상기 인자의 임계 값은
(i) 상기 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 상기 재조합 수용체를 발현하는 상기 조성물 중 T 세포의 총 수의 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는
(ii) 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는
(iii) 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 약 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성임;
에서 선택되는 치료 방법.
- 대상체의 치료 방법으로서,
상기 방법은 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 요법을 투여하는 단계를 포함하고 투여하는 단계는 다음에서 선택되며,
(1) 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물의 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자가 임계 값 (threshold value) 이상인 경우, 상기 조작된 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포를 대상체에게 투여함; 또는
(2) 상기 조작된 T 세포 조성물의 세포의 기능 또는 표현형을 나타내는 인자가 인자의 임계 값 미만인 경우, (a) 상기 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포 및 대상체에서 상기 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제, (b) 상기 조작된 세포 조성물의 세포의 증가된 용량 (dose), 선택적으로 동일한 질병 또는 병태를 갖지만 인자의 임계 값 또는 그 이상을 나타내는 유사한 양태의 (similarly situated) 대상체에게 투여되는 하나 이상의 단위 용량과 비교하여 증가된 용량; 또는 (c) 조작된 세포 조성물의 용량 (dose) 이외의 질병 또는 병태를 치료하기 위한 대안적 치료법;에서 선택되는 요법을 투여함;;
여기서 상기 인자의 임계 값은
(i) 상기 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 약 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는
(ii) 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 약 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는
(iii) 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중에서 CD4+ T 세포의 총 수의 약 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성임;
에서 선택되는 치료 방법.
- 제218항 내지 제226항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물의 세포는 상기 대상체에 대해 자가 (autologous)인 방법.
- 제218항 내지 제227항 중 어느 한 항에 있어서, 치료된 대상체의 35 % 이상, 40 % 이상, 50 % 이상, 60 % 이상 또는 70 % 이상 또는 75 % 이상이 하나 이상의 단위 용량의 투여 후 3 개월 이상, 4 개월 이상, 5 개월 이상, 6 개월 이상, 9 개월 이상 또는 12 개월 이상 무진행 생존 (progression free survival)을 달성하는 것인 방법.
- 제218항 내지 제228항 중 어느 한 항에 있어서, 치료된 대상체의 35 % 이상, 40 % 이상, 50 % 이상, 60 % 이상 또는 70 % 이상 또는 75 % 이상이 하나 이상의 단위 용량의 투여 후 약 3 개월 이상, 약 4 개월 이상, 약 4 개월 이상, 약 5 개월 이상, 약 6 개월 이상 또는 약 6 개월 이상, 약 9 개월 이상 또는 약 12 개월 이상 동안에 질병의 진행 (disease progression)을 달성하지 않는 것인 방법.
- 제218항 내지 제229항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체는, 동일한 질환 또는 병태를 갖고 유사한 용량의 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 자가 세포 조성물이 투여되지만 세포의 표현형 또는 기능을 나타내는 인자가 임계 값 이하인 대상체 그룹과 비교하여, 평균적으로 개선된, 생물학적 샘플, 선택적으로 혈액, 혈청 샘플에서의 세포 조성물의 세포의 약동학적 특성을 달성하는 것인 방법.
- 제230항에 있어서, 상기 약동학적 특성이 생물학적 샘플에서의 시간에 따른 총 노출 (AUC) 또는 세포의 피크 수인 방법.
- 치료 T 세포 조성물에 대한 반응 가능성을 예측하는 방법으로서,
(a) 조성물에서 조작된 세포의 기능 또는 표현형을 나타내는 인자에 대해 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 함유하는 조작된 세포 조성물을 분석하는 단계로서, 상기 인자는 (i) CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고, 선택적으로 CD45RA에 대해 표면 음성인 재조합 수용체를 발현하는 T 세포의 백분율; 및/또는 (ii) 자극 제제로 자극 후 IL-2, TNF-알파 및/또는 IFN-감마를 생성할 수 있는 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ T 세포의 백분율로부터 선택되는 것인 단계; 및
(b) 상기 조작된 세포의 용량을 함유하는 세포 요법의 투여 후 반응 가능성을 결정하는 단계로서, 여기서 상기 인자가 임계 값이거나 그 이상인 경우, 상기 대상체를 지속 반응 (durable response) 또는 무진행 생존 (progression free survival)을 선택적으로 요법 투여 후 적어도 3개월 동안 달성할 가능성이 있는 것으로 식별하나; 상기 인자가 상기 임계 값 미만인 경우, 상기 대상체를 요법에 대한 지속성 반응 또는 무진행 생존을 나타낼 가능성이 없는 것으로 식별함;
플 포함하며,
여기서 상기 인자의 임계 값은
(i) 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %는 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는
(ii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는
(iii) 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성임;
에서 선택되는 방법.
- 제232항에 있어서, 상기 세포 조성물의 세포가 상기 대상체에 대해 자가인 방법.
- 제232항 또는 제233항에 있어서, 상기 대상체가 요법에 대한 지속 반응 또는 무진행 생존을 달성할 가능성이 있는 것으로 확인된 경우, 상기 대상체에게 상기 조작된 T 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포를 투여하는 것인 방법.
- 제218항 내지 제231항, 제233항 및 제234항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 단위 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 재조합 수용체를 발현하는 총 T 세포 (수용체+/T 세포) 또는 총 T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제218항 내지 제231항 및 제233항 내지 제235항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 이상의 단위 용량은 약 5 x 108 개 이하, 약 1 x 108 개 이하, 약 5 x 107 개 이하, 약 1 x 107 개 이하, 약 5 x 106 개 이하, 약 1 x 106 개 이하, 또는 약 5 x 105 개 이하의 총 수용체+/T 세포 또는 총 T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제225항 내지 제236항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자의 임계 값이, 상기 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성인 방법.
- 제225항 내지 제237항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자의 임계 값이, 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있는 것인 방법.
- 제225항 내지 제238항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자의 임계 값이, 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성인 방법.
- 제225항 내지 제239항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자의 임계 값이, 상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 (약) 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 사이토카인 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파의 생산을 위해 다작용성인 방법.
- 제232항 내지 제240항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 지속 반응 (durable response) 또는 무진행 생존을 달성할 가능성이 없는 것으로 확인된 경우, 상기 대상체에게 (a) 상기 조작된 세포 조성물의 하나 이상의 단위 용량의 세포 및 대상체에서 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제, (b) 상기 조작된 세포 조성물의 세포의 증가된 용량 (dose), 선택적으로 동일한 질병 또는 병태를 갖지만 인자의 임계 값 또는 그 이상을 나타내는 유사한 양태의 (similarly situated) 대상체에게 투여되는 하나 이상의 단위 용량과 비교하여 증가된 용량; 또는 (c) 상기 조작된 세포 조성물의 용량 (dose) 이외의 질병 또는 병태를 치료하기 위한 대안적 치료법으로부터 선택된 요법을 투여하는 것인 방법.
- 제225항 내지 제231항 및 제241항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포 조성물의 세포의 용량, 및 대상체에서 상기 조작된 세포 조성물의 T 세포의 증폭 (expansion), 증식 (proliferation) 또는 효능을 증가시킬 수 있는 제제를 함유하는 요법의 투여를 포함하고, 상기 제제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 면역 체크포인트 억제제 (immune checkpoint inhibitor), 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나아제 억제제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인인 방법.
- 제242항에 있어서, 상기 제제가 치료적 T 세포 조성물의 투여 전, 동시에 또는 투여 후에 투여되는 것인 방법.
- 제218항 내지 제242항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 분석 시점 및/또는 투여 전에 높은 종양 부담 (high tumor burden)을 갖는 것으로 확인되거나 알려진 대상체인 방법.
- 제244항에 있어서, 상기 대상체에서 종양의 생성물 크기의 합 (sum of product dimensions, SPD)이 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2 또는 70 cm2 이상이면, 상기 대상체가 높은 종양 부담을 갖고/갖거나
상기 대상체로부터의 생물학적 시료, 선택적으로 혈청 시료 중 C 반응성 단백질 (C reactive protein, CRP)이 리터당 (약) 5 밀리그램, 리터당 10 밀리그램, 리터당 15 밀리그램, 20 리터당 밀리그램, 리터당 25 밀리그램, 리터당 30 밀리그램, 리터당 40 밀리그램 또는 리터당 50 밀리그램 이상이면 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 방법.
- 제245항에서, 상기 대상체에서 종양의 SPD가 약 50 cm2 이상인 경우 상기 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 방법.
- 제245항 또는 제246항에 있어서, 상기 CRP가 생물학적 샘플에서 리터당 약 20 밀리그램 이상인 경우 상기 대상체가 높은 종양 부담을 갖는 것인 방법.
- 제225항 내지 제247항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자극 제제가 비-특이적 (non-specific) 또는 비-항원-의존성 (non-antigen-dependent) T 세포 자극 제제인 방법.
- 제248항에 있어서, 상기 비-특이적 (non-specific) 또는 비-항원-의존성 (non-antigen-dependent) T 세포 자극 제제가 다클론성 (polyclonal) 자극 제제인 방법.
- 제248항 또는 제249항에 있어서, 상기 비-특이적 또는 비-항원-의존성 자극 제제가 PMA/이오노마이신, 항-CD3/항-CD28, 피토헤마글루티닌 (phytohemagglutinin, PHA) 또는 콘카나발린 A (concanavalin A, ConA)를 포함하는 것인 방법.
- 제248항 내지 제250항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제가 PMA/이오노마이신을 포함하는 것인 방법.
- 제225항 내지 제247항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자극 제제가 재조합 수용체에 특이적으로 결합하고, 선택적으로 여기서 상기 자극 제제는 항원-특이적 자극 제제이고/이거나 재조합 수용체에 의해 특이적으로 인식되는 항원 또는 이의 일부를 포함하는 것인 방법.
- 제225항 내지 제252항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인의 생산이 세포내 사이토카인 어세이에서 측정되는 것인 방법.
- 제218항 내지 제253항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제218항 내지 제254항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 질환, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련되거나, 특이적이거나 및/또는 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 방법.
- 제255항에 있어서, 상기 질환, 장애 또는 병태가 감염성 질환 또는 장애, 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 종양 또는 암인 방법.
- 제255항 또는 제256항에 있어서, 상기 표적 항원은 종양 항원인 방법.
- 제255항 내지 제257항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 항원이 αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산탈수효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암 고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2로도 알려짐), 암태아성 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케포카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4(CSPG4), 상피성장인자 단백질 (EGFR), 타입 III 상피성장인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백질 2 (EPG-2), 상피 당단백질 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 γδ2, O-아세틸화 γδ2 (Oγδ2), 강글리오사이드 γδ3, 당단백질 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 커플링된 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 다이머, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경사슬, L1 세포 부착 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 리치 리피트 함유 8 패밀리 멤버 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3,MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐의 사이토메갈로바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 내추럴 킬러 그룹 2 멤버 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 부착 분자 (NCAM), 종양태아성 항원, 흑색종의 우선 발현된 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백질 (5T4로도 알려진 TPBG), 종양-관련 당단백질 72 (TAG72), 티로시나아제 관련 단백질 1 (TRP1, TYRP1 또는 gp75로도 알려져 있음), 티로시나아제 관련 단백질 2 (TRP2, 도파크롬 토토머라아제, 도파크롬 델타-이소머라아제 또는 DCT로도 알려져 있음), 혈관 상피성장인자 수용체 (VEGFR), 혈관 상피성장인자 수용체 2 (VEGFR2), 윌름 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원, 또는 범용 태그와 관련된 항원, 및/또는 바이오티닐화 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현된 분자들 중에서 선택되는 것인 방법.
- 제218항 또는 제258항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 기능성 비(non)-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제218항 내지 제259항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR) 인 방법.
- 제218항 또는 제260항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 항원-결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인 및 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제261항에 있어서, 상기 항원-결합 도메인이 항체 또는 이의 항체 단편(이는 선택적으로 단일 사슬 단편임)이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제262항에 있어서, 상기 단편은 가요성 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
- 제262항 또는 제263항에 있어서, 상기 단편은 scFv를 포함하는 것인 방법.
- 제261항 내지 제264항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인이 1 차 신호 전달 도메인, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호 전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 신호 전달 도메인, 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유하는 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제265항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인이 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬 또는 이의 신호 전달 부분 (portion)의 세포내 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제261항 내지 제266항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 상기 세포외 도메인과 상기 세포내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막 관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제261항 내지 제267항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역이 보조 자극 (costimulatory) 신호 전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제268항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인이 세포 보조 자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
- 제268항 또는 제269항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인이 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것인 방법.
- 제269항 또는 제270항에 있어서, 상기 보조 자극 신호 전달 도메인이 막 관통 도메인과 세포내 신호 전달 도메인 사이에 있는 것인 방법.
- 제218항 내지 제271항 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 대상체로부터 수득된 1 차 T 세포인 방법.
- 제218항 내지 제272항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 대상체에 대해 자가인 방법.
- 치료 T 세포 조성물의 제조 방법으로서,
(a) 자극 조건 하에서 투입 조성물을 인큐베이팅하여, 자극된 조성물을 생성하는 단계로서, 여기서 상기 투입 조성물이 아포토틱 마커를 발현하지 않는 (아포토틱 마커 음성 (-)) 정해진 수의 T 세포를 포함하는 것인 단계; 및
(b) 상기 자극된 조성물로부터 세포로 재조합 수용체를 도입하여 조작된 세포 조성물을 생성하는 단계로서, 상기 도입은 상기 자극된 조성물의 세포를 상기 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제제와 접촉시키는 것을 포함하는 것인 단계;
를 포함하는 치료 T 세포 조성물의 제조 방법.
- 제274항에 있어서, 상기 아포토틱 마커 음성 T 세포가 아포토틱 마커 음성 CD3+ 세포, 아포토틱 마커 음성 CD8+ 세포, 아포토틱 마커 음성 음성 CD4+ 세포, 또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ 세포 및 아포토틱 마커 음성 CD4+ 세포이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제274항 또는 제275항에 있어서, 상기 아포토틱 마커가 아넥신 V (Annexin V)인 방법.
- 제274항 또는 제275항에 있어서, 상기 아포토틱 마커가 활성화된 카스파제 3 (Caspase 3)인 방법.
- 제274항 내지 제276항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정해진 수의 T 세포가 적어도 50 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제274항 내지 제278항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정해진 수의 T 세포가 적어도 100 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제274항 내지 제279항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정해진 수의 T 세포가 약 100 x 106 내지 약 500 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제274항 내지 제280항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 정해진 수의 T 세포는 적어도 약 300 x 106 개의 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제274항 내지 제281항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투입 조성물 중 총 T 세포의 백분율로서 아포토틱 마커 음성 T 세포의 백분율이 약 70 % 이상, 약 80 % 이상, 약 90 % 이상, 또는 약 95 % 이상인 방법.
- 제274항 내지 제282항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인큐베이팅 전에, 상기 정해진 수의 아포토틱 마커 음성 T 세포를 포함하는 투입 조성물을 수득하는 것인 방법.
- 제274항 내지 제283항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인큐베이팅, 분리, 선별 또는 농축 전에, 생물학적 샘플로부터 아포토틱 마커 음성 T 세포, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 수득하는 것인 방법.
- 치료 T 세포 조성물의 제조 방법으로서,
(a) 생물학적 샘플로부터 아포토틱 마커를 발현하지 않는(아포토틱 마커 음성 (-)) T 세포 집단, 선택적으로 아포토틱 마커 음성 CD4+ 및/또는 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포을 단리, 선택 또는 농축하여, 투입 조성물을 얻는 단계;
(b) 자극 조건 하에서 상기 투입 조성물을 인큐베이팅하여 자극된 조성물을 생성하는 단계; 및
(c) 상기 자극된 조성물로부터 세포로 재조합 수용체를 도입하여 조작된 세포 조성물을 생성하는 단계로서, 상기 도입은 상기 자극된 조성물의 세포를 상기 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제제와 접촉시키는 단계를 포함하는 것인 단계;
를 포함하는 치료 T 세포 조성물의 제조 방법.
- 제284항 또는 제285항에 있어서, 상기 생물학적 샘플 1 차 T 세포가 대상체로부터 수득되는 것인 방법.
- 제286항에 있어서, 상기 대상체 (subject)가 인간 대상체 (human subject)인 방법.
- 제284항 내지 제287항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 전혈 샘플, 버피 코트 (buffy coat) 샘플, 말초혈액단 세포 (PBMC) 샘플, 분획화되지 않은 T 세포 샘플, 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 성분채집 생성물 (apheresis product) 또는 백혈구성분채집 생성물 (leukapheresis product)이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제284항 내지 제288항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 성분채집 생성물 또는 백혈구성분채집 생성물을 포함하는 것인 방법.
- 제284항 내지 제289항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포가 대상체로부터 수득된 후 36 시간 이내에 생물학적 샘플로부터 단리, 선별 또는 농축되는 것인 방법.
- 제284항 내지 제289항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플이 대상체로부터 수득된 후 36 시간 이내에 동결보호제의 존재 하에 동결 건조되고, 세포를 단리, 선별 또는 농축시키기 전에 해동되고, 선택적으로 동결 건조 샘플이 세포의 단리, 선별 또는 농축 직전에 또는 6 시간 이내에, 4 시간 이내에, 2 시간 이내에 또는 1 시간 이내에 해동되는 것인 방법.
- 제274항 내지 제291항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인큐베이션은 하나 이상의 사이토카인의 존재하에, 선택적으로 무혈청 배지 (serum free medium)에서 수행되는 것인 방법.
- 제292항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인이 재조합 IL-2, 재조합 IL-7 및/또는 재조합 IL-15로부터 선택되는 것인 방법.
- 제293항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인이 10 내지 200 IU / mL 재조합 IL-2; 100 IU / mL 내지 1,000 IU / mL 재조합 IL-7; 및/또는 10 내지 200 IU / mL 재조합 IL-15를 포함하는 것인 방법.
- 제274항 내지 제294항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자극 시약이 TCR 복합체의 구성원에 특이적으로 결합하는, 선택적으로는 CD3에 특이적으로 결합하는 1 차 제제를 포함하며, 선택적으로 여기서 상기 1 차 제제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 방법.
- 제295항에 있어서, 상기 자극 시약이 T 세포 보조 자극 (costimulatory) 분자에 특이적으로 결합하는 2 차 제제를 추가로 포함하며, 선택적으로 상기 보조자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40 또는 ICOS로부터 선택되고, 선택적으로 여기서 제제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 방법.
- 제274항 내지 제296항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 자극 시약이 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체, 또는 이의 항원-결합 단편과의 인큐베이션을 포함하는 것인 방법.
- 제295항 내지 제297항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1 차 제제 및/또는 2 차 제제가 고체 지지체의 표면에 존재하는 것인 방법.
- 제298항에 있어서, 상기 고체 지지체는 비드이거나 이를 포함하는 것인 방법.
- 제295항 내지 제299항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1 차 제제 및 2 차 제제가 복수의 스트렙타비딘 (streptavidin) 또는 스트렙타비딘 뮤테인 (streptavidin mutein) 분자를 포함하는 올리고머 입자 시약의 표면에 고정되거나 가역적으로 결합되는 것인 방법.
- 제274항 내지 제300항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투입 조성물이 자극 조건하에 12 시간 내지 36 시간 동안, 선택적으로 약 24 시간 동안 인큐베이팅되는 것인 방법.
- 제274항 내지 제301항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접촉이 선택적으로 레트로바이러스 벡터, 선택적으로 렌티바이러스 벡터를 사용한 바이러스 형질도입에 의해 수행되는 것인 방법.
- 제274항 내지 제302항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 세포의 증식 (proliferation) 및/또는 증폭 (expansion)을 촉진하는 조건 하에서 조작된 조성물을 배양하여 조작된 T 세포를 포함하는 산출 조성물 (output composition)을 생성하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제303항에 있어서, 상기 배양이 선택적으로 무혈청 배지에서 하나 이상의 사이토카인의 존재하에 수행되는 것인 방법.
- 제304항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인이 재조합 IL-2, 재조합 IL-7 및/또는 재조합 IL-15로부터 선택되는 것인 방법.
- 제304항 또는 제305항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인이 50 내지 400 IU / mL 재조합 IL-2; 100 IU / mL 내지 2,000 IU / mL 재조합 IL-7; 및/또는 50 내지 400 IU / mL 재조합 IL-15를 포함하는 것인 방법.
- 제274항 내지 제306항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투입 조성물이 2 : 1 내지 1 : 2의 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비로 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포를 함유하거나; 투입 조성물이 2 : 1 내지 1 : 2의 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비로 아포토틱 마커 음성 CD4+ T 세포 및 아포토틱 마커 음성 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 방법.
- 제307항에 있어서, 상기 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포가 동일한 생물학적 샘플 또는 이로부터의 샘플로부터 개별적으로 선별, 단리 또는 농축되고 인큐베이션 전에 조합되는 것인 방법.
- 제274항 내지 제308항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 수용체가 키메라 항원 수용체 (CAR)인 방법.
- 제303항 내지 제309항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 산출 조성물이
상기 조성물 중 T 세포의 총 수 또는 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 T 세포의 총 수의 적어도 (약) 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 CCR7 및/또는 CD27에 대해 표면 양성이고; 및/또는
상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물 중 CD4+ T 세포의 총 수의 적어도 약 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 또는 100 %가 자극 제제로 자극 후 인터루킨 2 (IL-2) 또는 TNF-알파를 생성할 수 있으며; 및/또는
상기 재조합 수용체를 발현하는 조성물에서 CD4+ T 세포의 총 수의 약 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 % 또는 그 이상이 자극 제제로 자극 후 인터페론-감마 (IFN-감마), 인터루킨 2 (IL-2) 및 TNF-알파 중에서 선택된 둘 이상의 사이토카인의 생산을 위해 다작용성임;
을 포함하는 방법.
- 제310항에 있어서, 상기 자극 제제가 비-특이적 (non-specific) 또는 비-항원-의존성 (non-antigen-dependent) T 세포 자극 제제인 방법.
- 제311항에 있어서, 상기 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제가 다클론성 (polyclonal) 자극 제제인 방법.
- 제311항 또는 제312항에 있어서, 상기 비-특이적 또는 비-항원-의존성 자극 제제가 PMA/이오노마이신, 항-CD3/항-CD28, 피토헤마글루티닌 (phytohemagglutinin, PHA) 또는 콘카나발린 A (concanavalin A, ConA)를 포함하는 것인 방법.
- 제311항 내지 제313항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비-특이적 또는 비-항원-의존성 T 세포 자극 제제가 PMA/이오노마이신을 포함하는 것인 방법.
- 제310항에 있어서, 상기 자극 제제가 재조합 수용체에 특이적으로 결합하고, 선택적으로 여기서 상기 자극 제제는 항원-특이적 자극 제제이고/이거나 재조합 수용체에 의해 특이적으로 인식되는 항원 또는 이의 일부를 포함하는 것인 방법.
- 제310항 내지 제315항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인의 생산이 세포내 사이토카인 어세이에서 측정되는 것인 방법.
Applications Claiming Priority (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762596775P | 2017-12-08 | 2017-12-08 | |
| US62/596,775 | 2017-12-08 | ||
| US201862643165P | 2018-03-14 | 2018-03-14 | |
| US62/643,165 | 2018-03-14 | ||
| US201862657716P | 2018-04-13 | 2018-04-13 | |
| US62/657,716 | 2018-04-13 | ||
| US201862716967P | 2018-08-09 | 2018-08-09 | |
| US62/716,967 | 2018-08-09 | ||
| PCT/US2018/064630 WO2019113559A2 (en) | 2017-12-08 | 2018-12-07 | Phenotypic markers for cell therapy and related methods |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20200109308A true KR20200109308A (ko) | 2020-09-22 |
Family
ID=65441035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020207019644A KR20200109308A (ko) | 2017-12-08 | 2018-12-07 | 세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210128616A1 (ko) |
| EP (1) | EP3720480A2 (ko) |
| JP (2) | JP2021505615A (ko) |
| KR (1) | KR20200109308A (ko) |
| CN (1) | CN112203680A (ko) |
| AU (1) | AU2018379094A1 (ko) |
| BR (1) | BR112020011223A2 (ko) |
| CA (1) | CA3084446A1 (ko) |
| IL (1) | IL275075A (ko) |
| MX (1) | MX2020005906A (ko) |
| SG (1) | SG11202005217VA (ko) |
| WO (1) | WO2019113559A2 (ko) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2018264636B2 (en) * | 2017-05-08 | 2022-03-17 | Toolgen Incorporated | Artificially manipulated immune cell |
| AU2018275894A1 (en) | 2017-06-02 | 2019-12-12 | Juno Therapeutics, Inc. | Articles of manufacture and methods for treatment using adoptive cell therapy |
| KR20200054178A (ko) | 2017-08-09 | 2020-05-19 | 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 | 유전자 조작된 세포 조성물 및 관련 조성물의 제조 방법 |
| WO2021041617A1 (en) * | 2019-08-27 | 2021-03-04 | H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. | Methods of enhancing car t cell therapy |
| JP2022554348A (ja) | 2019-11-05 | 2022-12-28 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 治療用ｔ細胞組成物の属性を決定する方法 |
| WO2021231657A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-18 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof |
| WO2021231661A2 (en) * | 2020-05-13 | 2021-11-18 | Juno Therapeutics, Inc. | Process for producing donor-batched cells expressing a recombinant receptor |
| JP2023064787A (ja) * | 2021-10-27 | 2023-05-12 | 国立大学法人京都大学 | Ｔ細胞の品質評価方法、および当該方法に用いる試薬 |
| WO2023230548A1 (en) | 2022-05-25 | 2023-11-30 | Celgene Corporation | Method for predicting response to a t cell therapy |
Family Cites Families (84)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4452773A (en) | 1982-04-05 | 1984-06-05 | Canadian Patents And Development Limited | Magnetic iron-dextran microspheres |
| US4690915A (en) | 1985-08-08 | 1987-09-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans |
| US4795698A (en) | 1985-10-04 | 1989-01-03 | Immunicon Corporation | Magnetic-polymer particles |
| IN165717B (ko) | 1986-08-07 | 1989-12-23 | Battelle Memorial Institute | |
| US5219740A (en) | 1987-02-13 | 1993-06-15 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy |
| DE68919715T2 (de) | 1988-12-28 | 1995-04-06 | Stefan Miltenyi | Verfahren sowie materialien zur hochgraduierten magnetischen abspaltung biologischer materialien. |
| US5200084A (en) | 1990-09-26 | 1993-04-06 | Immunicon Corporation | Apparatus and methods for magnetic separation |
| DE4228458A1 (de) | 1992-08-27 | 1994-06-01 | Beiersdorf Ag | Multicistronische Expressionseinheiten und deren Verwendung |
| US5827642A (en) | 1994-08-31 | 1998-10-27 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes |
| WO1996013593A2 (en) | 1994-10-26 | 1996-05-09 | Procept, Inc. | Soluble single chain t cell receptors |
| WO1996018105A1 (en) | 1994-12-06 | 1996-06-13 | The President And Fellows Of Harvard College | Single chain t-cell receptor |
| US20020150914A1 (en) | 1995-06-30 | 2002-10-17 | Kobenhavns Universitet | Recombinant antibodies from a phage display library, directed against a peptide-MHC complex |
| US6013516A (en) | 1995-10-06 | 2000-01-11 | The Salk Institute For Biological Studies | Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells |
| DE19608753C1 (de) | 1996-03-06 | 1997-06-26 | Medigene Gmbh | Transduktionssystem und seine Verwendung |
| US6451995B1 (en) | 1996-03-20 | 2002-09-17 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Single chain FV polynucleotide or peptide constructs of anti-ganglioside GD2 antibodies, cells expressing same and related methods |
| WO1997015399A1 (en) | 1996-04-24 | 1997-05-01 | Claude Fell | Cell separation system for biological fluids like blood |
| KR100712256B1 (ko) | 1997-10-02 | 2007-04-27 | 알토 바이오사이언스 코포레이션 | 가용성 단일쇄 ｔ-세포 수용체 단백질 |
| US5994136A (en) | 1997-12-12 | 1999-11-30 | Cell Genesys, Inc. | Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors |
| DK1066380T3 (da) | 1998-05-19 | 2002-01-28 | Avidex Ltd | Opløselig T-cellereceptor |
| WO2000014257A1 (en) | 1998-09-04 | 2000-03-16 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Fusion receptors specific for prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
| AU2472400A (en) | 1998-10-20 | 2000-05-08 | City Of Hope | CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies |
| ES2224726T3 (es) | 1998-12-24 | 2005-03-01 | Biosafe S.A. | Sistema de separacion sanguinea indicado en particular para la concentracion de celulas madre hematopoyeticas. |
| US20040191260A1 (en) | 2003-03-26 | 2004-09-30 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Compositions capable of specifically binding particular human antigen presenting molecule/pathogen-derived antigen complexes and uses thereof |
| WO2001094944A2 (en) | 2000-06-02 | 2001-12-13 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Artificial antigen presenting cells and methods of use thereof |
| WO2002077029A2 (en) | 2000-11-07 | 2002-10-03 | City Of Hope | Cd19-specific redirected immune cells |
| US7070995B2 (en) | 2001-04-11 | 2006-07-04 | City Of Hope | CE7-specific redirected immune cells |
| US20090257994A1 (en) | 2001-04-30 | 2009-10-15 | City Of Hope | Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers |
| PT1421115E (pt) | 2001-08-31 | 2005-07-29 | Avidex Ltd | Receptor de celulas t soluvel |
| US7939059B2 (en) | 2001-12-10 | 2011-05-10 | California Institute Of Technology | Method for the generation of antigen-specific lymphocytes |
| US6992176B2 (en) | 2002-02-13 | 2006-01-31 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antibody having a T-cell receptor-like specificity, yet higher affinity, and the use of same in the detection and treatment of cancer, viral infection and autoimmune disease |
| JP2005533486A (ja) | 2002-02-20 | 2005-11-10 | ダイアックス、コープ | Ｍｈｃ−ペプチド複合体結合リガンド |
| US20030170238A1 (en) | 2002-03-07 | 2003-09-11 | Gruenberg Micheal L. | Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy |
| US7446190B2 (en) | 2002-05-28 | 2008-11-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors |
| US7569664B2 (en) | 2002-10-09 | 2009-08-04 | Immunocore Limited | Single chain recombinant T cell receptors |
| US20050129671A1 (en) | 2003-03-11 | 2005-06-16 | City Of Hope | Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells |
| US20050025763A1 (en) | 2003-05-08 | 2005-02-03 | Protein Design Laboratories, Inc. | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
| AU2005235811B2 (en) | 2004-02-06 | 2011-11-03 | Morphosys Ag | Anti-CD38 human antibodies and uses therefor |
| AU2005247950B2 (en) | 2004-05-27 | 2012-02-02 | Receptor Logic, Inc. | Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof |
| US20090304679A1 (en) | 2004-05-27 | 2009-12-10 | Weidanz Jon A | Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof |
| US20090226474A1 (en) | 2004-05-27 | 2009-09-10 | Weidanz Jon A | Antibodies as T cell receptor mimics, methods of production and uses thereof |
| JP5563194B2 (ja) | 2004-06-29 | 2014-07-30 | イムノコア リミテッド | 改変ｔ細胞レセプターを発現する細胞 |
| DK1893253T3 (da) | 2005-03-23 | 2010-08-16 | Biosafe Sa | Integreret system til opsamling, forarbejdning og transplantation af celledelmængder, omfattende voksenstamceller til regenerativ medicin |
| SG10201912554TA (en) | 2005-03-23 | 2020-02-27 | Genmab As | Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma |
| US8222027B2 (en) | 2006-06-20 | 2012-07-17 | Cook General Biotechnolgy, LLC | Systems and methods for cryopreservation of cells |
| US8709797B2 (en) | 2006-06-20 | 2014-04-29 | Cook General Biotechnology Llc | Systems and methods for cryopreservation of cells |
| EP1914242A1 (en) | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer |
| ES2529166T3 (es) | 2007-03-30 | 2015-02-17 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Expresión constitutiva de ligandos coestimuladores en linfocitos T transferidos de forma adoptiva |
| ES2374863T3 (es) | 2007-12-07 | 2012-02-22 | Miltenyi Biotec Gmbh | Centrífuga para separar una muestra en por lo menos dos componentes. |
| US8479118B2 (en) | 2007-12-10 | 2013-07-02 | Microsoft Corporation | Switching search providers within a browser search box |
| CN101952315B (zh) | 2007-12-26 | 2015-04-01 | 生物测试股份公司 | 靶向cd138的试剂及其应用 |
| US20120164718A1 (en) | 2008-05-06 | 2012-06-28 | Innovative Micro Technology | Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device |
| JP5173594B2 (ja) | 2008-05-27 | 2013-04-03 | キヤノン株式会社 | 管理装置、画像形成装置及びそれらの処理方法 |
| KR20110096536A (ko) | 2008-10-31 | 2011-08-30 | 애보트 바이오테라퓨틱스 코포레이션 | 희귀 림프종의 치료를 위한 항ｃｓ1 항체의 용도 |
| CN102471380B (zh) | 2009-04-01 | 2015-01-14 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗FcRH5抗体和免疫偶联物及使用方法 |
| CA2777053A1 (en) | 2009-10-06 | 2011-04-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Human single-chain t cell receptors |
| PL2496698T3 (pl) | 2009-11-03 | 2019-07-31 | City Of Hope | Skrócony receptor naskórkowego czynnika wzrostu (EGFRt) do selekcji transdukowanych komórek T |
| CN106220739A (zh) | 2010-12-09 | 2016-12-14 | 宾夕法尼亚大学董事会 | 嵌合抗原受体‑修饰的t细胞治疗癌症的用途 |
| JOP20210044A1 (ar) | 2010-12-30 | 2017-06-16 | Takeda Pharmaceuticals Co | الأجسام المضادة لـ cd38 |
| KR101976882B1 (ko) | 2011-03-23 | 2019-05-09 | 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 | 세포 면역요법용 방법 및 조성물 |
| WO2012135854A2 (en) | 2011-04-01 | 2012-10-04 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Antibodies to cytosolic peptides |
| US8398282B2 (en) | 2011-05-12 | 2013-03-19 | Delphi Technologies, Inc. | Vehicle front lighting assembly and systems having a variable tint electrowetting element |
| CN107880101B (zh) | 2011-11-11 | 2021-12-21 | 弗雷德哈钦森癌症研究中心 | 针对癌症的靶向细胞周期蛋白a1的t细胞免疫疗法 |
| AU2013221672B2 (en) | 2012-02-13 | 2017-11-09 | Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute | Bispecific chimeric antigen receptors and therapeutic uses thereof |
| WO2013126726A1 (en) | 2012-02-22 | 2013-08-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use |
| NZ702108A (en) | 2012-05-03 | 2016-09-30 | Hutchinson Fred Cancer Res | Enhanced affinity t cell receptors and methods for making the same |
| IL293944A (en) | 2012-08-20 | 2022-08-01 | Hutchinson Fred Cancer Res | Method and preparations for cellular immunotherapy |
| KR102198058B1 (ko) | 2012-10-02 | 2021-01-06 | 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 | 면역치료용 조성물 및 방법 |
| US9405601B2 (en) | 2012-12-20 | 2016-08-02 | Mitsubishi Electric Corporation | In-vehicle apparatus and program |
| EP3004168A4 (en) | 2013-05-24 | 2017-03-01 | Board of Regents, The University of Texas System | Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies |
| AR096687A1 (es) | 2013-06-24 | 2016-01-27 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-fcrh5 |
| US9108442B2 (en) | 2013-08-20 | 2015-08-18 | Ricoh Company, Ltd. | Image forming apparatus |
| EP3083671B1 (en) | 2013-12-20 | 2020-09-30 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Tagged chimeric effector molecules and receptors thereof |
| IL292038A (en) | 2014-04-23 | 2022-06-01 | Juno Therapeutics Inc | Methods for enriching and producing immune cell populations for stress treatment |
| US10301370B2 (en) | 2014-05-02 | 2019-05-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods of chimeric autoantibody receptor T cells |
| TWI751102B (zh) | 2014-08-28 | 2022-01-01 | 美商奇諾治療有限公司 | 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體 |
| TWI787903B (zh) | 2014-11-05 | 2022-12-21 | 美商奇諾治療有限公司 | 用於轉導作用及細胞處理之方法 |
| AU2015357518B2 (en) | 2014-12-05 | 2021-10-07 | Eureka Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptors targeting G-protein coupled receptor and uses thereof |
| RU2725819C2 (ru) | 2014-12-05 | 2020-07-06 | Мемориал Слоан-Кеттеринг Кэнсер Сентер | Антитела, нацеленные на рецептор, связанный с g-белками, и способы их применения |
| EP3872094A3 (en) | 2014-12-05 | 2021-12-08 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Antibodies targeting b-cell maturation antigen and methods of use |
| KR20170109538A (ko) | 2014-12-05 | 2017-09-29 | 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 | B-세포 성숙화 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체 및 그의 용도 |
| AU2016343682A1 (en) * | 2015-10-30 | 2018-06-14 | The Regents Of The University Of California | Methods of generating T-cells from stem cells and immunotherapeutic methods using the T-cells |
| EP4353818A2 (en) * | 2017-02-27 | 2024-04-17 | Juno Therapeutics, Inc. | Compositions, articles of manufacture and methods related to dosing in cell therapy |
| EP3595440A2 (en) | 2017-03-14 | 2020-01-22 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for cryogenic storage |
| KR20200054178A (ko) * | 2017-08-09 | 2020-05-19 | 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 | 유전자 조작된 세포 조성물 및 관련 조성물의 제조 방법 |
-
2018
- 2018-12-07 US US16/770,510 patent/US20210128616A1/en active Pending
- 2018-12-07 JP JP2020531126A patent/JP2021505615A/ja active Pending
- 2018-12-07 CA CA3084446A patent/CA3084446A1/en active Pending
- 2018-12-07 KR KR1020207019644A patent/KR20200109308A/ko unknown
- 2018-12-07 AU AU2018379094A patent/AU2018379094A1/en active Pending
- 2018-12-07 BR BR112020011223-2A patent/BR112020011223A2/pt unknown
- 2018-12-07 MX MX2020005906A patent/MX2020005906A/es unknown
- 2018-12-07 CN CN201880088447.5A patent/CN112203680A/zh active Pending
- 2018-12-07 SG SG11202005217VA patent/SG11202005217VA/en unknown
- 2018-12-07 EP EP18847259.1A patent/EP3720480A2/en active Pending
- 2018-12-07 WO PCT/US2018/064630 patent/WO2019113559A2/en unknown
-
2020
- 2020-06-02 IL IL275075A patent/IL275075A/en unknown
-
2023
- 2023-04-14 JP JP2023066140A patent/JP2023100673A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SG11202005217VA (en) | 2020-07-29 |
| CN112203680A (zh) | 2021-01-08 |
| BR112020011223A2 (pt) | 2020-11-17 |
| EP3720480A2 (en) | 2020-10-14 |
| US20210128616A1 (en) | 2021-05-06 |
| MX2020005906A (es) | 2020-10-22 |
| WO2019113559A9 (en) | 2020-06-25 |
| IL275075A (en) | 2020-07-30 |
| WO2019113559A2 (en) | 2019-06-13 |
| JP2023100673A (ja) | 2023-07-19 |
| JP2021505615A (ja) | 2021-02-18 |
| CA3084446A1 (en) | 2019-06-13 |
| WO2019113559A3 (en) | 2019-07-18 |
| AU2018379094A1 (en) | 2020-06-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102540751B1 (ko) | 입양 세포 치료법을 이용한 b 세포 악성종양의 치료 방법 | |
| KR20200109308A (ko) | 세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법 | |
| KR20220105664A (ko) | Bcma 및 cd19에 결합하는 키메라 항원 수용체 및 이의 용도 | |
| BR112021003305A2 (pt) | métodos para produzir células que expressam receptor de antígeno quimérico | |
| CN110582287A (zh) | 与在细胞疗法中给药有关的组合物、制品和方法 | |
| KR20200069358A (ko) | 키메라 항원 수용체 발현 세포의 제조 방법 | |
| US20190298772A1 (en) | Combination therapy of a t cell-based therapy and a btk inhibitor | |
| JP2018501463A (ja) | キメラ抗原受容体療法に対する治療応答性を予測するバイオマーカーおよびその使用 | |
| JP2022084710A (ja) | Ｃａｒ－ｔ細胞の投薬を決定するための方法 | |
| KR20200116081A (ko) | 유전자 조작된 세포의 투약 및 조절 방법 | |
| KR20220034782A (ko) | 세포 매개 세포 독성 요법 및 친생존 ｂｃｌ2 패밀리 단백질 억제제의 병용 요법 | |
| KR20220146530A (ko) | 키메라 항원 수용체-발현 세포의 제조 방법 | |
| KR20200046045A (ko) | 유전자 조작된 세포를 제조하기 위한 방법 및 조성물 | |
| US20210230671A1 (en) | Methods for assessing integrated nucleic acids | |
| US20230087953A1 (en) | Bcma-directed chimeric antigen receptor t cell compositions and methods and uses thereof | |
| KR20230015921A (ko) | Ｂｃｍａ-지시된 ｔ 세포 요법 및 면역 조절 화합물의 조합 | |
| RU2776823C2 (ru) | Композиции, изделия и способы, связанные с дозированием в клеточной терапии |