KR20200087594A - Sustained-Release Preparation of Microspheres Comprising Retinoic Acid and Manufacturing Method Thereof - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 생분해성 고분자 미립구(microsphere)에 레티노익산을 함유한 서방출 제제 및 이의 제조방법에 대한 것이다. 더욱 상세하게는 상기 서방출 제제는 생분해성 고분자 미립구에 레티노익산이 일정 함량으로 담지된 약물 전달체로서, 약물의 봉입량 및 봉입 효율이 극대화되고, 초기 과다방출이 억제되며, 일정시간 동안 지속적인 약물 방출을 유도할 수 있는 서방출 제제 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a sustained-release preparation containing retinoic acid in a biodegradable polymer microsphere and a method for manufacturing the same. More specifically, the sustained-release preparation is a drug delivery system in which retinoic acid is supported in a biodegradable polymer microsphere in a certain content, maximizing the encapsulation amount and encapsulation efficiency of the drug, inhibiting initial over-release, and continuously releasing the drug for a certain period of time. It relates to a sustained release formulation capable of inducing and a method for manufacturing the same.
서방형 주사 제형이란 피하 또는 근육주사 시 체내에서 약물이 생물학적 활성을 유지하면서 지속적이고 균일하게 방출될 수 있도록 제제화된 주사 제형을 말한다. 종래에 이와 같은 서방형 주사제제들의 일반적인 제조방법은 코아세르베이션법, 용융 사출법, 분무 건조법, 용매 증발법 등이 알려져 있다. 이러한 방법 중 이중 유화 증발법(W/O/W emulsion)과 단일 유화 증발법(O/W emulsion)으로 분류되는 용매 증발법이 가장 많이 사용되고 있다. 그러나 이와 같은 다중 에멀젼법을 이용한 미립구는 초기 방출률이 높다는 단점과 함께 활성성분인 약물을 유기용매 또는 물에 용해시킬 경우 미립구를 형성하면서 약물의 물성변화, 약효 소실, 낮은 봉입 효율 등의 문제점을 내포한다.Sustained-release injection formulation refers to an injection formulation formulated so that the drug can be released continuously and uniformly while maintaining biological activity in the body during subcutaneous or intramuscular injection. Conventionally, a general manufacturing method of such sustained-release injections is a coacervation method, a melt injection method, a spray drying method, a solvent evaporation method, and the like. Among these methods, the solvent evaporation method classified into a double emulsion evaporation method (W/O/W emulsion) and a single emulsion evaporation method (O/W emulsion) is most used. However, the microspheres using the multi-emulsion method include the disadvantages of high initial release rate, and when the drug as an active ingredient is dissolved in an organic solvent or water, while forming microspheres, there are problems such as changes in the properties of the drug, loss of efficacy, and low encapsulation efficiency. do.
이러한 서방형 주사제제들의 약물 봉입률을 증가시키거나 제조공정이 쉽고 초기 과다 방출이 상대적으로 낮은 미립구를 제조하기 위한 다양한 시도가 이루어지고 있으나 아직까지 만족스럽지 못하다. 문헌 [Active self-healing encapsulation of vaccine antigens in PLGA microspheres, Journal of Controlled Release 165 (2013) 62-74]에서는 이중 유화 증발법으로 미립구를 제조한 후 미립구의 미세공을 통해서 활성성분인 백신 안티젠을 로딩한 후 생분해성 고분자의 유리전이온도(Tg)이상 가열하여 미세공을 막아서 초기방출을 억제하는 방법을 개시하고 있으나, 이러한 제조방법은 약물이 열에 의해 변성될 수 있다는 심각한 단점이 있다. 또한 단백질 트래핑 작용제를 첨가하여 약물봉입효율을 상당히 높였으나(~97%), 활성 물질의 전체적인 봉입량(1.4~1.8%)은 상당히 낮았다. 이러한 방법은 생리활성물질이 열에 의해서 변성될 수 있다는 단점이 있으며, 또한 투여 용량이 많은 약물을 고용량으로 봉입하는 데 있어서는 적용 불가능한 단점이 있다. 또한 복잡한 제조과정으로 생산화하기가 힘든 단점이 있다.Various attempts have been made to increase the drug encapsulation rate of these sustained-release injections or to manufacture microspheres that are easy to manufacture and have relatively low initial over-release, but are not yet satisfactory. In the literature [Active self-healing encapsulation of vaccine antigens in PLGA microspheres, Journal of Controlled Release 165 (2013) 62-74], microparticles were prepared by double emulsification evaporation method, and then the vaccine antigen as an active ingredient was loaded through micropores of the microspheres. Thereafter, a method of inhibiting initial release by blocking micropores by heating at a glass transition temperature (Tg) or higher of the biodegradable polymer is disclosed, but this manufacturing method has a serious disadvantage that the drug may be denatured by heat. In addition, the drug encapsulation efficiency was significantly increased by adding a protein trapping agent (~97%), but the overall encapsulation amount of the active substance (1.4-1.8%) was considerably low. This method has a drawback that the bioactive material can be denatured by heat, and also has a drawback that it is not applicable in encapsulating a drug with a large dosage. In addition, there is a disadvantage that it is difficult to produce in a complicated manufacturing process.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다. Numerous references are cited and cited throughout this specification. The disclosure content of the cited documents is incorporated by reference herein in its entirety and the level of the technical field to which the present invention pertains and the content of the present invention are more clearly described.
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 유효성분 및 레티노익산을 포함하는 고분자 미립구 함유 서방형 제제로서, 약물의 봉입량 및 봉입 효율이 극대화되며, 높은 로딩조건에서 미립구의 깨어짐이 개선되고, 미립구의 초기 방출 억제와 방출지연을 적절히 조절하는 것이 가능한 생분해성 고분자 미립구 및 이의 제조 방법을 제공하는 것이다.Therefore, the problem to be solved by the present invention is a sustained release formulation containing a polymer microsphere comprising an active ingredient and retinoic acid, the encapsulation amount and the efficiency of encapsulation of the drug are maximized, and the breaking of the microspheres is improved under high loading conditions, and the initial stage of the microspheres It is to provide a biodegradable polymer microsphere capable of appropriately controlling release inhibition and release delay, and a method for manufacturing the same.
본 발명의 하나의 관점은 유효성분 및 레티노익산을 포함하는 생분해성 고분자 미립구 함유 서방형 제제를 제공하는 것이다. One aspect of the present invention is to provide a sustained release formulation containing biodegradable polymer microspheres comprising an active ingredient and retinoic acid.
일반적으로 PLGA 등의 생분해성 고분자에 약물의 양이 고분자 대비 1 : 4 이상으로 많아지면 약물의 방출이 초기에 급격히 증가하는 초기과다방출(initial busting) 현상이 일어나게 되며 약물의 양이 증가하면 할수록 이러한 현상은 심해지게 된다. 그리하여 고농도의 약물을 로딩해야 하는 경우 서방형 주사제로 개발하는데 결정적인 난관으로 여겨져 왔다. 즉, 초기과다방출은 약물이 급속히 방출되어 환자에게 부작용을 나타내거나 제제내의 약물이 고갈되어 원래 목적인 1주 - 4주이상의 서방화를 달성하는 것이 불가능하다. 이러한 초기방출과다 현상을 방지하고 서방화의 목적을 달성하기위해 시도되고 있는 방법 중 하나가 방출지연제를 첨가하는 것이다. 대표적인 예로서 대한민국 특허 출원10-2013-0036292 (2013.04.03.)에 제시한 바와 같이 하이드록시 나프토익산과 같은 방출지연제를 사용하여 4주 이상의 서방출 효과를 보이고 있다. In general, when the amount of a drug in a biodegradable polymer such as PLGA increases to 1: 4 or more compared to that of a polymer, an initial bursting phenomenon in which the drug release rapidly increases occurs, and as the amount of the drug increases, The phenomenon gets worse. Therefore, when it is necessary to load a high concentration of the drug, it has been considered as a crucial obstacle in developing a sustained-release injection. That is, it is impossible to achieve sustained sustained release of 1 week to more than 4 weeks, which is the original purpose, because the initial over-release causes the drug to be released rapidly, causing side effects to the patient or the drug in the formulation is depleted. One of the methods that have been attempted to prevent such an initial release excessive phenomenon and achieve the purpose of sustained release is to add a release delay agent. As a representative example, as described in Korean Patent Application 10-2013-0036292 (2013.04.03.), a release delay agent such as hydroxy naphthoic acid is used, showing a sustained release effect of 4 weeks or more.
본 발명에 있어서, 방출지연제는 미립구가 수용액에 접촉되어 팽윤이 되는 것을 막아주고 미립자가 팽윤하여 입자 붕괴가 된 이후에도 고분자와 약물에 반데르발스력과 같은 분자간력에 의한 물리적인 결합이 작용하여 약물의 방출을 지연시키는 것으로 평가된다.In the present invention, the release delay agent prevents the microspheres from swelling due to contact with the aqueous solution, and even after the particles collapse due to the swelling of the fine particles, physical bonding due to intermolecular forces such as van der Waals forces acts on the polymer and drug. It is evaluated to delay the release of the drug.
이와 같이, 본 발명은 서서히 방출하고자 하는 유효성분을 포함하는 생분해성 고분자 미립구에 레티노익산을 추가로 포함시키어, 상기 유효성분의 방출속도 및 상기 미립구의 분해속도를 조절함을 특징으로 하는, 레티노익산을 이용한 유효성분의 서방형 약물 방출 시스템을 제공한다.As described above, the present invention further comprises retinoic acid in the biodegradable polymer microspheres containing the active ingredient to be released slowly, characterized in that to control the release rate of the active ingredient and the decomposition rate of the microspheres, retinoic acid It provides a sustained-release drug release system using an active ingredient.
상기 유효성분 및 방출지연제로서 레티노익산을 포함하는 미립구의 체내 투여 후, 생분해성 고분자는 시간에 따라 체내의 전해질을 흡수하여 수화가 이루어지고 팽창되어 내부의 유효성분이 서서히 방출되게 된다.After administration in the body of the microspheres containing retinoic acid as the active ingredient and the release delay agent, the biodegradable polymer absorbs the electrolyte in the body over time and is hydrated and expanded to gradually release the active ingredient therein.
본 발명에 따른 미립구에 있어, 상기 유효성분은 에씨탈로프람 및 도네페질로부터 선택되는 1 이상일 수 있다.In the microsphere according to the present invention, the active ingredient may be at least one selected from ecitalopram and donepezil.
일 구현예에서 유효성분과 동일한 몰비로 레티노익산을 사용하는 것이 가능하며, 제조과정에서 뭉침이나 침전물이 생성되지 않도록 몰 비율을 적절히 조절하여, 예로 1 : 0.5 정도로 사용할 수도 있다.In one embodiment, it is possible to use retinoic acid in the same molar ratio as the active ingredient, and the molar ratio is appropriately adjusted so that no clumping or sediment is generated in the manufacturing process, for example, it may be used at about 1:0.5.
다른 구현예에서 유효성분 대 레티노익산의 중량비는 1 : 0.5 내지 1.2 미만일 수 있고, 생분해성 고분자 대 레티노익산의 중량비는 1 : 0.33 내지 0.8 미만일 수 있다.In another embodiment, the weight ratio of active ingredient to retinoic acid may be less than 1: 0.5 to 1.2, and the weight ratio of biodegradable polymer to retinoic acid may be less than 1: 0.33 to 0.8.
또 다른 구현예에서 유효성분 대 레티노익산의 중량비는 1 : 0.2 내지 0.8 미만일 수 있고, 생분해성 고분자 대 레티노익산의 중량비는 1 : 0.13 내지 0.53일 수 있다.In another embodiment, the weight ratio of active ingredient to retinoic acid may be 1:0.2 to less than 0.8, and the weight ratio of biodegradable polymer to retinoic acid may be 1:0.13 to 0.53.
레티노익산의 첨가로 약물의 고형화를 효율적으로 달성하고, 입자 내부의 약물을 균일하고 단단하게 유지할 수 있으며, 높은 로딩의 미립구를 얻을 수 있다. 레티노익산이 사용될 경우 적절한 강도를 가진 미립구를 제조하는데 용이할 뿐만 아니라, 바람직한 용출 패턴을 가지도록 미립구를 제조할 수 있다. With the addition of retinoic acid, solidification of the drug can be efficiently achieved, the drug inside the particle can be maintained uniformly and firmly, and high-loading microspheres can be obtained. When retinoic acid is used, it is not only easy to prepare microspheres having appropriate strength, but also microspheres can be prepared to have a desirable elution pattern.
이렇게 제조한 미립구의 입경은 1 내지 500 ㎛일 수 있고, 바람직하게는 10 내지 400 ㎛, 20 내지 300㎛ 또는 30 내지 200㎛일 수도 있다. 또한, 상기 미립구 내 상기 유효성분의 함유율 (유효성분 봉입량 / 미립구중량 × 100(%))은 10 내지 50 중량%, 또는 20 내지 50 중량%, 바람직하게는 30 내지 40 중량%일 수도 있다.The particle size of the microspheres thus prepared may be 1 to 500 μm, and preferably 10 to 400 μm, 20 to 300 μm, or 30 to 200 μm. In addition, the content of the active ingredient in the microspheres (active ingredient encapsulation / microsphere weight × 100 (%)) may be 10 to 50% by weight, or 20 to 50% by weight, preferably 30 to 40% by weight.
본 발명에 따른 미립구에 있어, 상기 생분해성 고분자로는 바람직하게, 폴리락타이드(PLA), 폴리글리코라이드(PGA), 폴리(락타이드-코-글리코라이드)(PLGA), 폴리(락타이드-코-글리코라이드)글루코즈 중에서 선택된 하나 이상이 사용될 수 있다.In the microsphere according to the present invention, the biodegradable polymer is preferably, polylactide (PLA), polyglycolide (PGA), poly(lactide-co-glycolide) (PLGA), poly(lactide- Co-glycolide)glucose may be used.
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 미립구를 포함하는 상기 제제는 주사제로서 제조될 수 있다.In a preferred embodiment, the formulation comprising microspheres according to the invention can be prepared as an injection.
본 발명은 또한 O/W 용매 내 추출 증발법(Solid-in-oil-in-water; solvent intra extraction evaporation)을 이용해 생분해성 고분자 미립구형 서방출 제제의 제조 방법을 제공한다. 상기 방법은 미립구 내 약물의 봉입량 및 봉입 효율을 극대화하고 약물을 지속적이고 균일하게 방출을 유도하는 서방출 제제를 제조할 수 있게 한다.The present invention also provides a method for preparing a biodegradable polymer microsphere spherical sustained release formulation using a solid-in-oil-in-water (solvent intra extraction evaporation) method. The method maximizes the encapsulation amount and encapsulation efficiency of the drug in the microspheres, and makes it possible to prepare a sustained-release preparation that induces continuous and uniform release of the drug.
즉, 본 발명은 생분해성 고분자, 유효성분 및 방출지연제를 포함하는 용액을 제조하는 단계, 및 상기 용액을 수용액에 첨가하면서 교반하여 O/W 유제를 형성하면서 미립구를 형성하는 단계를 포함하는, 생분해성 고분자 미립구 함유 서방형 제제의 제조 방법을 제공한다.That is, the present invention comprises the steps of preparing a solution containing a biodegradable polymer, an active ingredient and a release delay agent, and agitating while adding the solution to an aqueous solution to form an O/W emulsion and forming microspheres, Provided is a method for producing a sustained release formulation containing biodegradable polymer microspheres.
구체적으로, 본 발명은 용매와 생분해성 고분자, 유효성분, 방출지연제를 강하게 혼합 교반하여 용해시키는 단계(a), 상기 용액을 수용액(바람직하게는 폴리비닐알코올 수용액)에 적하하여 서서히 혼합 교반하여 O/W 유탁액을 제조하는 단계(b), 상기 O/W 유탁액에서 상기 공용매가 상기 수성매질로 확산 및 증발되면서 미립구가 생성되는 경화단계(c)를 포함하는 제조 방법을 제공한다. 또한, 본 발명에 따른 상기 제조방법은 상기 c) 단계에서 생성된 미립구를 건조, 바람직하게는 동결 건조하는 단계(d)를 더 포함할 수 있다. Specifically, the present invention is a step of (a) dissolving the solvent and the biodegradable polymer, an active ingredient, and a release delay agent by vigorous mixing and dissolving, and the solution is added dropwise to an aqueous solution (preferably a polyvinyl alcohol aqueous solution) and gradually mixed and stirred. It provides a manufacturing method comprising the step (b) of producing an O/W emulsion, and the curing step (c) in which the microspheres are generated as the co-solvent diffuses and evaporates from the O/W emulsion to the aqueous medium. In addition, the manufacturing method according to the present invention may further include a step (d) of drying, preferably freeze-drying the microspheres produced in step c).
예시적으로, 본 발명의 제조 방법은 다음과 같은 단계들을 통해 제조될 수 있다.Illustratively, the manufacturing method of the present invention may be manufactured through the following steps.
(a 단계) 생분해성 고분자, 유효성분, 및 (Step a) biodegradable polymer, active ingredient, and 방출지연제를Release retardant 강하게 혼합 Strongly mixed 교반하여With stirring 용해시키는Dissolving 단계 step
상기 비수성 용매는 생분해성 고분자를 용해할 수 있는 것이라면 특별히 제한되지 않는다. 본 발명의 구체적인 일 실시 양태에 따르면 상기 비수성 용매로 비등점이 낮은, 예를 들어 비등점이 25℃ 내지 85℃인, 비수성 용매를 사용할 수 있다. 비수성 용매의 비등점이 상기 범위에 포함되는 경우, 미립구의 생성 후 이의 증발 및 건조의 측면에서 유리하다. 본 발명에 있어서, 상기 비수성 용매의 비제한적인 예로, 디클로로메테인, 클로로포름, 아세토나이트릴, 디메틸설폭시드, 디메틸포름아마이드, 에틸아세테이트 등을 들 수 있으나, 특별히 이에 한정되는 것은 아니다.The non-aqueous solvent is not particularly limited as long as it can dissolve the biodegradable polymer. According to a specific embodiment of the present invention, a non-aqueous solvent having a low boiling point, for example, a boiling point of 25°C to 85°C, may be used as the non-aqueous solvent. When the boiling point of the non-aqueous solvent is included in the above range, it is advantageous in terms of evaporation and drying of the microspheres after formation. In the present invention, examples of the non-aqueous solvent include, but are not limited to, dichloromethane, chloroform, acetonitrile, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, ethyl acetate, and the like.
상기 생분해성 고분자는 약물 전달체로 사용될 수 있는 미립구 제조시 이용되는 통상의 고분자인 것으로서, 생체내에서 스스로 분해되며, 생체적합성을 갖는 것이다. 본 발명에 있어서, 폴리락타이드(PLA), 폴리글리코라이드(PGA), 폴리(락타이드-코-글리코라이드)(PLGA), 폴리(락타이드-코-글리코라이드)글루코즈 등의 생분해성 합성 고분자를 하나 이상 사용할 수 있다. The biodegradable polymer is a conventional polymer that is used in the production of microspheres that can be used as a drug delivery system, and is biodegradable by itself in vivo. In the present invention, biodegradable synthetic polymers such as polylactide (PLA), polyglycolide (PGA), poly(lactide-co-glycolide) (PLGA), poly(lactide-co-glycolide) glucose One or more can be used.
본 발명의 구체적인 일 실시양태에 있어서, 상기 생분해성 고분자는 중량 평균 분자량이 60,000 이하인 것이 사용될 수 있다. 예를 들면, 분자량 약 13,000인 폴리(락타이드-코-글리코라이드)(50:50), 분자량 약 33,000인 폴리(락타이드-코-글리코라이드)(50:50), 분자량 약 52,000인 폴리(락타이드-코-글리코라이드)(50:50), 분자량 약 20,000인 폴리(락타이드-코-글리코라이드)(75:25), 분자량 약 16,000인 폴리(락타이드)(100:0) 등을 사용할 수 있다. 이와 같은 생분해성 고분자는 예를 들면, 베링거인겔하임사의 Resomer RG502H, RG503H, RG504H, RG752H, R202H 등을 들 수 있다.In one specific embodiment of the present invention, the biodegradable polymer may have a weight average molecular weight of 60,000 or less. For example, poly(lactide-co-glycolide) having a molecular weight of about 13,000 (50:50), poly(lactide-co-glycolide) having a molecular weight of about 33,000 (50:50), poly(molecular weight of about 52,000) Lactide-co-glycolide (50:50), poly(lactide-co-glycolide) with a molecular weight of about 20,000 (75:25), poly(lactide) with a molecular weight of about 16,000 (100:0), etc. Can be used. Examples of such biodegradable polymers include Resomer RG502H, RG503H, RG504H, RG752H, and R202H from Beringer Ingelheim.
본 발명의 구체적인 일 실시양태에 있어서, 상기 생분해성 고분자는 0.16 내지 0.6 dL/g의 고유점도를 가질 수 있다. 본 발명에 있어서, 상기 생분해성 고분자의 점도가 0.1 dL/g 미만이면 약물 분말 입자를 봉입하는 미립구가 제대로 형성되지 않거나 약물 봉입률이 현저히 감소하게 되며, 0.6 dL/g 를 초과하는 경우에는 미립구의 크기가 과도하게 크게 형성될 수 있고, 약물방출량이 적어 소망하는 수준의 약효가 나타나지 않을 수 있다.In one specific embodiment of the present invention, the biodegradable polymer may have an intrinsic viscosity of 0.16 to 0.6 dL/g. In the present invention, if the viscosity of the biodegradable polymer is less than 0.1 dL/g, the microspheres encapsulating the drug powder particles are not properly formed or the drug encapsulation rate is significantly reduced, and when it exceeds 0.6 dL/g, The size may be excessively large, and the desired drug efficacy may not appear due to the small amount of drug release.
본 발명의 구체적인 일 실시양태에 따르면, 상기 단계에서 생분해성 고분자는 제1 혼합액 1ml 당 10mg 내지 150 mg의 농도, 바람직하게는 25mg 내지 125 mg의 농도, 더욱 바람직하게는 50mg내지 125mg의 농도로 용해된다. 생분해성 고분자의 농도가 적은 경우 고분자 용액의 점도가 낮아져서 균질기로 분산시 입자의 크기가 작아지는 경향이 있으나, 미립구 형성 전 미세 방울 내 고분자의 비율이 작아 입자형성 시 성긴 구조를 나타낼 수 있으며, 그에 따라 약물의 봉입량 및 봉입효율도 낮아지는 것으로 보인다. 반면 상기 농도가 150mg/ml를 초과하는 경우에는 고분자 용액의 점도가 높아짐에 따라서 미립구의 크기가 커지는 경향이 있다.According to a specific embodiment of the present invention, in the step, the biodegradable polymer is dissolved at a concentration of 10 mg to 150 mg per 1 ml of the first mixed solution, preferably at a concentration of 25 mg to 125 mg, more preferably at a concentration of 50 mg to 125 mg do. When the concentration of the biodegradable polymer is low, the viscosity of the polymer solution is lowered, so the particle size tends to be smaller when dispersed in a homogenizer, but the ratio of the polymer in the fine droplets before the formation of the microspheres is small, which may indicate a coarse structure during particle formation. Accordingly, it seems that the amount of encapsulation and the efficiency of encapsulation of drugs are also lowered. On the other hand, when the concentration exceeds 150 mg/ml, the size of the microspheres tends to increase as the viscosity of the polymer solution increases.
고형화제로는 앞서 언급된 물질들이 사용될 수 있다. As the solidifying agent, the aforementioned substances can be used.
(b 단계) 상기 용액을 수용액에 적하하여 서서히 혼합 (Step b) The solution is added dropwise to an aqueous solution and mixed gradually. 교반하여With stirring O/W 유탁액을 제조하는 단계 Step of preparing O/W emulsion
본 발명의 상기 수성 매질은 유화제를 포함할 수 있다. 상기 유화제의 함량은 수성 용매 1L 당 0.1g 내지 10g, 또는 3g 내지 7g의 범위, 즉, 0.1(w/v)% 내지 10(w/v)% 또는 3(w/v)% 내지 7(w/v)%인 것이 바람직하다. 상기 유화제로는 폴리소르베이트, 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐알콜, 폴록사머, 스판80 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게, 본 발명에 있어 상기 유화제는 폴리비닐알콜이다.The aqueous medium of the present invention may include an emulsifier. The content of the emulsifier is in the range of 0.1 g to 10 g, or 3 g to 7 g per 1 L of aqueous solvent, that is, 0.1 (w/v)% to 10 (w/v)% or 3 (w/v)% to 7 (w) It is preferable that it is /v)%. Examples of the emulsifier include polysorbate, polyethylene glycol, polyvinyl alcohol, poloxamer, and span 80, but are not limited thereto. Preferably, in the present invention, the emulsifier is polyvinyl alcohol.
본 발명의 구체적인 일 실시양태에 있어서, 상기 b) 단계에서 유탁액은 현탁액과 상기 수성 매질이 부피비를 기준으로 1:5 내지 1:50의 비율로 혼합되어 제조된다. 상기 혼합 비율은 바람직하게는 1:10 내지 1:20이다. 상기 현탁액과 상기 수성매질의 부피비가 1:5 미만일 경우에는 O/W 유탁액을 균질기로 균질화한 후 O/W 유탁액 중 미세 방울 간의 간격이 좁아 충돌할 가능성이 커져 공용매 및 비수성용매의 확산 및 증발 전에 미세 방울들이 뭉쳐져 크기가 균일한 미립구 형성이 어려워질 수 있다. 또한, 상기 비율이 1:50을 초과할 경우에는 첨가되는 유화제의 양이 많아져서 비용적 측면에서 불리하다.In one specific embodiment of the present invention, the emulsion in step b) is prepared by mixing the suspension and the aqueous medium in a ratio of 1:5 to 1:50 based on the volume ratio. The mixing ratio is preferably 1:10 to 1:20. When the volume ratio of the suspension and the aqueous medium is less than 1:5, after the homogenization of the O/W emulsion with a homogenizer, the gap between the fine droplets in the O/W emulsion becomes narrow, and the possibility of collision increases, so that the co-solvent and non-aqueous solvent The fine droplets may agglomerate before diffusion and evaporation, making it difficult to form a uniform particle size. In addition, when the ratio exceeds 1:50, the amount of the emulsifier added increases, which is disadvantageous in terms of cost.
(c 단계) 상기 O/W 유탁액에서 상기 (step c) in the O/W emulsion 공용매가A public sale price 상기 remind 수성매질로With aqueous medium 확산 및 증발되면서 As it spreads and evaporates 미립구가Fine grain 생성되는 경화단계 The resulting curing step
상기 b) 단계에서 공용매가 수성 매질로 확산 및 증발되면서 1차적인 고분자 경화가 유도되며 그에 따라서 약물 입자들이 미립구 내에 봉입된다. 즉, 상기 O/W 유탁액 중 분산된 미세 방울 내의 공용매가 수성용매 상으로 급격히 확산 및 추출되면서 생분해성 고분자가 빠르게 고형화되어 미립구를 형성한다. 본 발명의 구체적인 일 실시양태에 따르면 이 과정에서 미세방울들이 서로 뭉치지 않도록 자력식 교반기로 강하게 교반하는 것이 바람직하다. 미립구의 형성시간은 1 내지 10분으로 할 수 있다. 상기 미립구 형성시간이 1 분 미만일 경우에는 미립구의 생분해성 고분자가 덜 경화되어 입자간에 뭉침 현상이 나타날 수 있다. 반면, 10분을 초과하는 경우에는 약물의 봉입 효율이 낮아질 수 있다. In step b), the primary polymer curing is induced as the co-solvent diffuses and evaporates to the aqueous medium, and thus the drug particles are encapsulated in the microspheres. That is, as the co-solvent in the fine droplets dispersed in the O/W emulsion is rapidly diffused and extracted into the aqueous solvent phase, the biodegradable polymer rapidly solidifies to form microspheres. According to one specific embodiment of the present invention, it is preferable to stir strongly with a magnetic stirrer so that the microdroplets do not clump together in this process. The formation time of the microspheres can be 1 to 10 minutes. When the formation time of the microspheres is less than 1 minute, the biodegradable polymer of the microspheres is less cured, and aggregation may occur between particles. On the other hand, if it exceeds 10 minutes, the encapsulation efficiency of the drug may be lowered.
미립구 생성 후 상기 O/W 유탁액에서 수성 매질 및 용매를 제거하고 미립구를 수득한다.After formation of the microspheres, the aqueous medium and solvent are removed from the O/W emulsion and microspheres are obtained.
(d 단계) c) 단계에서 생성된 (Step d) created in step c) 미립구를Microspheres (동결) 건조하는 단계 (Freezing) Step of drying
상기 (동결) 건조 과정을 통해 미립구의 구조가 견고해지며 약물이 생분해성 고분자에 완전히 봉입될 수 있다. 본 발명의 구체적인 일 실시양태에 따르면, 상기 건조는 미립구 내에 잔류하는 용매를 완전히 제거하기 위하여 동결 건조 단계가 더 포함될 수 있다. 상기 동결 단계는 -30℃ 내지 -40℃의 온도조건에서 수행될 수 있으며, 건조 시간은 12 내지 24 시간일 수 있다. 본 발명의 구체적인 일 실시양태에 따르면 상기 동결 건조 단계는 진공 조건에 하에서 수행될 수 있다. 상기 건조 시간이 12시간 미만의 온도 조건에서 수행되는 경우 잔류 용매가 완전히 제거되지 않을 수 있으며, 반면, 건조 시간이 24시간을 초과하게 되면, 생산성이 낮아질 수 있다. Through the (freezing) drying process, the structure of the microspheres becomes solid and the drug can be completely encapsulated in the biodegradable polymer. According to one specific embodiment of the present invention, the drying may further include a freeze drying step to completely remove the solvent remaining in the microspheres. The freezing step may be performed at a temperature condition of -30°C to -40°C, and the drying time may be 12 to 24 hours. According to one specific embodiment of the present invention, the freeze drying step may be performed under vacuum conditions. When the drying time is performed at a temperature condition of less than 12 hours, residual solvent may not be completely removed, whereas when the drying time exceeds 24 hours, productivity may be lowered.
전술한 바와 같이 본 발명에 따른 O/W 용매 내 추출 증발법(Solid-in-oil-in-water; solvent intra extraction evaporation)을 이용해 서방출 제제인 생분해성 고분자 미립구를 제조할 수 있다. 상기 방법에 따라 수득된 미립구는 약물 봉입량 및 봉입 효율이 높고 서방출 효과가 우수하다. As described above, a biodegradable polymer microsphere that is a sustained release preparation may be prepared using a solid-in-oil-in-water (solvent intra extraction evaporation) method according to the present invention. The microsphere obtained according to the above method has a high drug encapsulation amount and encapsulation efficiency and excellent sustained release effect.
본 발명에 있어서, 상기 미립구는 생분해성 고분자가 미립구 100중량% 대비 30 내지 95 중량%, 바람직하게는 45 내지 75 중량%가 포함될 수 있다. 만일 생분해성 고분자가 40 중량% 미만으로 포함되는 경우에는 미립구의 표면 및 내부에 다공상의 특성을 나타나는 경향이 있어 약물이 초기에 과다 방출되거나 짧은 방출 시간을 나타내는 문제점이 있다. 반면, 95 중량%를 초과하는 경우에는 환자 또는 동물체에 투여되는 미립구의 양이 지나치게 많아져 투여가 힘들거나, 투여 자체가 불가능해질 수 있다.In the present invention, the microspheres may contain 30 to 95% by weight, preferably 45 to 75% by weight of the biodegradable polymer compared to 100% by weight of the microspheres. If the biodegradable polymer is contained in an amount of less than 40% by weight, there is a tendency to exhibit porous properties on the surface and inside of the microspheres, and thus there is a problem in that the drug is initially over-released or exhibits a short release time. On the other hand, if it exceeds 95% by weight, the amount of microspheres administered to the patient or animal is too large, which may make administration difficult or impossible.
본 발명은 유효성분을 담지한 생분해성 고분자 입자를 제조함에 있어서 O/W 용매 내 추출 증발법을 이용하여 최소한의 공정과 에너지를 사용해 높은 약물 봉입량 및 봉입효율, 장기간 동안 지속적인 약물 방출 거동을 나타낼 수 있는 고분자 미립구 서방형 제제 및 이의 제조방법을 제공한다. 특히, 미립구 내에 유효성분을 서방화를 시킬 수 있는 방출지연제를 포함시킴으로써 미립구의 봉입율과 로딩율을 증가시키고 미립구의 내부구조를 균일하게 하여 약물 방출을 효율적으로 제어할 수 있다. The present invention exhibits high drug encapsulation and encapsulation efficiency and sustained drug release behavior over a long period of time by using a minimal process and energy using an extraction evaporation method in an O/W solvent in preparing biodegradable polymer particles carrying an active ingredient. Provides a sustained release formulation of a polymer microspheres and a method for manufacturing the same. In particular, by incorporating a release retardant capable of slowing the release of the active ingredient in the microspheres, the encapsulation rate and loading rate of the microspheres can be increased, and the internal structure of the microspheres can be uniformly controlled to effectively control drug release.
도 1에서 A는 비교예 1, B는 실시예 1-3의 에씨탈로프람 함유 미립구 사진이고, C는 비교예 2 및 D는 실시예 2-3 는 도네페질 함유 미립구의 전자현미경 사진이다. 좌측 사진은 고분자와 약물만으로 제조된 사진이고 우측 사진은 고분자, 약물과 레티노익산이 첨가된 미립구의 사진이다. 실시예 1-3과 실시예 2-3에서 제조된 미립구는 외부가 매끈한 형태를 보이고 건조 후 입자가 깨어지거나 변형된 형태가 관찰되지 않았다.
도 2는 도네페질과 고분자로 구성된 미립구인 비교예 1과 방출지연제인 레티노익산의 함량을 증가하여 제조한 미립구인 실시예 1-1, 실시예 1-2, 실시예 1-3, 실시예 1-4에 대한 PBS용액 속에서 시간에 따라 입자의 팽창과 뭉침 현상을 관찰한 광학 현미경 사진이다. 시간이 지날수록 모든 미립구가 팽윤되고 미립구의 형체가 붕괴되는 것을 알 수 있으며 특히 레티노익산의 함량이 증가할수록 미립구의 뭉침과 붕괴가 10일 정도 까지 지연됨을 알 수 있었다. 이 결과는 미립구에서 에씨탈로프람의 방출이 지연될 수 있다는 것을 의미한다.
도 3은 도네페질과 고분자로 구성된 미립구인 비교예 2와 방출지연제인 레티노익산의 함량을 증가하여 제조한 미립구인 실시예 2-1, 실시예 2-2, 실시예 2-3, 실시예 2-4에 대한 PBS용액 속에서 시간에 따라 입자의 팽창과 뭉침 현상을 관찰한 광학 현미경 사진이다. 시간이 지날수록 모든 미립구가 팽윤되고 미립구의 형체가 붕괴되는 것을 알수 있으며 특히 레티노익산의 함량이 증가할수록 미립구의 붕괴가 25일 까지 지연됨을 알 수 있었다. 이 결과는 미립구에서 도네페질의 방출이 지연될 수 있다는 것을 의미한다.
도 4는 에씨탈로프람과 고분자로 구성된 미립구인 비교예 1과 방출지연제인 레티노익산의 함량을 증가하여 제조한 미립구인 실시예 1-1, 실시예 1-2 및 실시예 1-3에 대한 PBS용액 속에서 시간에 따라 미립구에서 에씨탈로프람의 서방출 특성을 관찰한 그래프이다.
도 5는 도네페질과 고분자로 구성된 미립구인 비교예 2와 방출지연제인 레티노익산의 함량을 증가하여 제조한 미립구인 실시예 2-1, 실시예 2-2 및 실시예 2-3에 대한 PBS 용액 속에서 시간에 따라 미립구에서 도네페질의 서방출 특성을 관찰한 그래프이다. In FIG. 1, A is Comparative Example 1, B is a photograph of the esipalopram-containing microspheres of Examples 1-3, C is Comparative Examples 2 and D, and Example 2-3 is an electron microscope photograph of the donepezil-containing microspheres. . The photo on the left is a photo made of only polymers and drugs, and the photo on the right is a photo of microspheres containing polymers, drugs and retinoic acid. The microspheres prepared in Examples 1-3 and 2-3 showed a smooth shape on the outside, and no particles were broken or deformed after drying.
Figure 2 is a fine sphere consisting of donepezil and polymer Comparative Example 1 and the release delay agent retinoic acid content prepared by increasing the content of the particulate Example 1-1, Example 1-2, Example 1-3, Example 1 It is an optical micrograph which observed the expansion and aggregation of particles over time in PBS solution for -4. As time passed, it was found that all the microspheres swelled and the shape of the microspheres collapsed. In particular, as the content of retinoic acid increased, it was found that the aggregation and collapse of the microspheres was delayed up to 10 days. This result means that the release of escitalopram from the microsphere may be delayed.
Figure 3 is a microspheres prepared by increasing the content of retinoic acid as a release delay agent Comparative Example 2 and microspheres consisting of donepezil and polymer Example 2-1, Example 2-2, Example 2-3, Example 2 It is an optical micrograph which observed the expansion and aggregation of particles over time in PBS solution for -4. As time passed, it was found that all the microspheres swelled and the shape of the microspheres collapsed. Especially, as the content of retinoic acid increased, the collapse of the microspheres was delayed until 25 days. This result means that the release of donepezil from the microspheres may be delayed.
Figure 4 is a particulate sphere prepared in Comparative Example 1 consisting of estalopram and a polymer and a particulate sphere prepared by increasing the content of the retarding agent retinoic acid Example 1-1, Example 1-2 and Example 1-3 It is a graph observing the sustained-release characteristics of estalopram in microspheres over time in PBS solution.
Figure 5 is a PBS solution for Example 2-1, Example 2-2 and Example 2-3, which are microspheres prepared by increasing the content of Comparative Example 2, which is a microsphere composed of donepezil and a polymer, and retinoic acid, which is a release delay agent. It is a graph observing the sustained release properties of donepezil in microspheres over time.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only intended to illustrate the present invention in more detail, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples.
실시예Example
실시예 1: 생분해성 고분자인 PLGA, 에씨탈로프람 및 레티노익산을 사용한 O/W 형 미립구 제조 Example 1: Preparation of O/W type microspheres using biodegradable polymers PLGA, Escalopram and Retinoic Acid
생분해성 고분자 PLGA 1.5 g(제조원: EVONIK, 제품명: RESOMER RG753H) 및 에씨탈로프람 1g과 레티노익산(retinoic acid) 각각 0.5 g, 0.8 g, 1 g 및 1.2g을 디클로로메테인 20 ml에 첨가하고 강하게 교반하여 1시간 용해시켰다. 균일하게 용해된 용액을 5(w/v)% 폴리비닐알코올(제조원: 시그마알드리치, 87~90% hydrolyzed MW: 30,000~70,000) 200 ml 수용액상에 넣어 주면서 균질기(IKA, ULTRA-TURRAX T8)를 이용하여 1,000~2,000 rpm으로 분산시켜 2분에 걸쳐 O/W 유탁액을 얻었다. 그 후 상기 유탁액을 상온, 상압 하에 5시간 자력교반기(900 rpm)로 강하게 저어주면서 미립구를 형성시킨 후, 거름종이(Whatman)를 이용해 미립구를 채취하고 증류수로 2~3회 세척하였다. 세척한 미립구를 상온, 상압 하에 3시간 동안 1차 건조시킨 후, 12시간 동안 -35℃에서 동결 건조하여 미립구 내 용매를 완전히 제거하였다.1.5 g of biodegradable polymer PLGA (manufacturer: EVONIK, product name: RESOMER RG753H) and 1 g of ecitalopram and 0.5 g, 0.8 g, 1 g and 1.2 g of retinoic acid, respectively, are added to 20 ml of dichloromethane And stirred vigorously to dissolve for 1 hour. Homogenizer (IKA, ULTRA-TURRAX T8) with uniformly dissolved solution in 200 ml aqueous solution of 5(w/v)% polyvinyl alcohol (manufacturer: Sigma Aldrich, 87~90% hydrolyzed MW: 30,000~70,000) Dispersed at 1,000 ~ 2,000 rpm using to obtain an O/W emulsion over 2 minutes. Thereafter, the emulsion was stirred with a magnetic stirrer (900 rpm) for 5 hours at room temperature and normal pressure to form a microsphere, and then the microsphere was collected with filter paper (Whatman) and washed 2-3 times with distilled water. The washed microspheres were first dried under normal temperature and normal pressure for 3 hours, and then freeze-dried at -35°C for 12 hours to completely remove the solvent in the microspheres.
레티노익산의 사용량을 변경해 가며 동일한 방법으로 실시예 1-1 내지 1-4를 제조하였다. 실시예 1의 대표적인 예는 실시예 1-2이다.Examples 1-1 to 1-4 were prepared in the same manner while changing the amount of retinoic acid used. A representative example of Example 1 is Example 1-2.
실시예 2: 생분해성 고분자 PLGA, 도네페질 및 레티노익산을 사용한 O/W 형 미립구 제조 Example 2: Preparation of O/W type microspheres using biodegradable polymer PLGA, donepezil and retinoic acid
생분해성 고분자 PLGA 1.5 g(제조원: EVONIK, 제품명: RESOMER RG753H) 및 도네페질 1g과 레티노익산 각각 0.2 g, 0.4 g, 0.6 g 및 0.8g을 디클로로메테인 20 ml에 첨가하고 강하게 교반하여 1시간 용해시켰다. 그 후, 실시예 1과 동일하게 진행하여 미립구를 제조하였다.1.5 g of biodegradable polymer PLGA (manufacturer: EVONIK, product name: RESOMER RG753H) and 1 g of donepezil and 0.2 g, 0.4 g, 0.6 g, and 0.8 g of retinoic acid, respectively, were added to 20 ml of dichloromethane, and stirred with vigorous strength to dissolve for 1 hour. Ordered. Thereafter, the same procedure as in Example 1 was carried out to produce microspheres.
레티노익산의 사용량을 변경해 가며 동일한 방법으로 실시예 2-1 내지 2-4를 제조하였다. 실시예 2의 대표적인 예는 실시예 2-3이다.Examples 2-1 to 2-4 were prepared in the same manner while changing the amount of retinoic acid used. A representative example of Example 2 is Example 2-3.
비교예 1: 생분해성 고분자 PLGA와 에씨탈로프람을 사용한 미립구 제조 Comparative Example 1: Preparation of microspheres using biodegradable polymer PLGA and Escalopram
생분해성 고분자 PLGA 1.5 g(제조원: EVONIK, 제품명: RESOMER RG753H) 및 에씨탈로프람 1g을 디클로로메테인 20ml 에 첨가하고 강하게 교반하여 1시간 용해시켰다. 그 후, 실시예 1과 동일하게 진행하여 미립구를 제조하였다.1.5 g of biodegradable polymer PLGA (manufacturer: EVONIK, product name: RESOMER RG753H) and 1 g of estalopram were added to 20 ml of dichloromethane and stirred with vigorous strength to dissolve for 1 hour. Thereafter, the same procedure as in Example 1 was carried out to produce microspheres.
비교예 2: 생분해성 고분자 PLGA와 도네페질을 사용한 미립구 제조 Comparative Example 2: Preparation of microspheres using biodegradable polymer PLGA and donepezil
생분해성 고분자 PLGA 1.5 g(제조원: EVONIK, 제품명: RESOMER RG753H) 및 도네페질 1g을 디클로로메테인 20ml 에 첨가하고 강하게 교반하여 1시간 용해시켰다. 그 후, 실시예 1과 동일하게 진행하여 미립구를 제조하였다.1.5 g of biodegradable polymer PLGA (manufacturer: EVONIK, product name: RESOMER RG753H) and 1 g of donepezil were added to 20 ml of dichloromethane and stirred vigorously to dissolve for 1 hour. Thereafter, the same procedure as in Example 1 was carried out to produce microspheres.
실험예 1: 미립구의 형태 측정 Experimental Example 1: Measurement of the shape of the microspheres
상기 실시예 및 비교예에서 얻어진 미립구 형태를 광학현미경을 사용하여 확인하였다. The microsphere shape obtained in the above Examples and Comparative Examples was confirmed using an optical microscope.
측정결과를 도 1 내지 3에 나타내었다. 상기 결과에 따르면 각 실시예 및 비교예에서 약 50~160 μm 크기의 미립구가 확인되었다.The measurement results are shown in FIGS. 1 to 3. According to the above results, microspheres having a size of about 50 to 160 μm were confirmed in each of Examples and Comparative Examples.
도 1에서 A는 비교예 1, B는 실시예 1-3의 에씨탈로프람 함유 미립구 사진이고, C는 비교예 2 및 D는 실시예 2-3 는 도네페질 함유 미립구의 전자현미경 사진이다. 실시예 1-3과 실시예 2-3에서 제조된 미립구는 외부가 매끈한 형태를 보이고 건조 후 입자가 깨어지거나 변형된 형태가 관찰되지 않았다. 반면에, 비교예 1은 액체 상태의 에씨탈로프람과 PLGA 고분자간의 상분리로 입자 내부에 스폰지 형태의 동공이 생긴 것을 관찰할 수 있었고 그로 인하여 입자의 강도가 현저히 낮아져 부서져 있는 입자가 많이 관찰되었다. In FIG. 1, A is Comparative Example 1, B is a photograph of the esipalopram-containing microspheres of Examples 1-3, C is Comparative Examples 2 and D, and Example 2-3 is an electron microscope photograph of the donepezil-containing microspheres. . The microspheres prepared in Examples 1-3 and 2-3 showed a smooth shape on the outside, and no particles were broken or deformed after drying. On the other hand, in Comparative Example 1, it was possible to observe that the pores in the form of a sponge were formed inside the particles due to the phase separation between the liquid escitalopram and the PLGA polymer, whereby the strength of the particles was significantly lowered and many broken particles were observed. .
실험예 2: 미립구의 에씨탈로프람 및 도네페질 봉입량 및 봉입률 측정 Experimental Example 2: Estalopram and donepezil encapsulation amount and encapsulation rate measurement of microspheres
상기 실시예 및 비교예에서 제조된 미립구 약 30 mg을 각각 클로로포름(시그마알드리치) 3 ml에 넣어 완전히 용해시킨 후, 400배 희석하여 검액으로 사용하였다. HPLC 측정기를 이용해 흡광도를 측정하여 미립구 내에 봉입되어 있는 에씨탈로프람과 도네페질의 함량을 측정하였다. 봉입률은 약물의 투입량 대비 봉입량으로 계산하였다.About 30 mg of the microspheres prepared in the above Examples and Comparative Examples were completely dissolved in 3 ml of chloroform (Sigma Aldrich), respectively, and diluted 400-fold to be used as a test solution. The absorbance was measured using an HPLC meter to measure the contents of escitalopram and donepezil enclosed in the microspheres. The encapsulation rate was calculated as the amount of encapsulation compared to the dose of the drug.
HPLC 분석 조건은 다음과 같았다. HPLC analysis conditions were as follows.
- 이동상은 Acetonitrile 4 : Methanol 5 : Buffer 11 비율로 제조하였고, 검지기는 UV 240 nm, 분리용 컬럼은 4.6-mm Х 25-cm; 5-um packing L1이었으며, 유속은 1.5 mL/min, Injection size는 20 uL, 분석시간은 15 min, 분석 범위는 1000 ug/ml ~ 7.8125 ug/ml의 농도 범위에서 측정하였다.-The mobile phase was prepared in the ratio of Acetonitrile 4: Methanol 5: Buffer 11, the detector was 240 nm UV, and the separation column was 4.6-mm Х 25-cm; It was 5-um packing L1, the flow rate was 1.5 mL/min, the injection size was 20 uL, the analysis time was 15 min, and the analysis range was measured in a concentration range of 1000 ug/ml to 7.8125 ug/ml.
측정결과를 하기 표 3과 표 4에 나타내었다.The measurement results are shown in Tables 3 and 4 below.
(약물봉입량/미립구중량) Х 100(%)Estalopram content (%)
(Drug loading/particulate weight) Х 100 (%)
(약물봉입량/약물투입량)Х100%Estalopram encapsulation efficiency (%)
(Drug loading/drug injection) Х100%
(약물봉입량/미립구중량) Х 100(%)Donepezil content (%)
(Drug loading/particulate weight) Х 100 (%)
(약물봉입량/약물투입량)Х100%Donepezil encapsulation efficiency (%)
(Drug loading/drug injection) Х100%
실시예 1-1, 1-2, 1-3와 실시예 2-1, 2-2, 2-3에서의 에씨탈로프람과 도네페질의 봉입효율은 75-80% 수준으로 높게 나왔다. 실시예 1-4와 실시예 2-4는 레티노익산이 너무 많아 미립구 형성이 잘되지 않아 봉입효율이 40-50% 수준으로 낮았다. 그리고, 레티노익산이 없는 비교예 1는 약물이 액상으로 제조과정에서 손실율이 커져서 봉입율이 상대적으로 낮았다. 비교예 2는 로딩과 봉입율이 양호하게 나왔다. The encapsulation efficiency of ecitalopram and donepezil in Examples 1-1, 1-2, 1-3 and Examples 2-1, 2-2, 2-3 was high at 75-80%. In Example 1-4 and Example 2-4, there were too many retinoic acids, so the formation of microspheres was not good, so the encapsulation efficiency was low to 40-50%. In addition, in Comparative Example 1 without retinoic acid, the drug was in a liquid state, and the loss rate in the manufacturing process was large, so that the encapsulation rate was relatively low. Comparative Example 2 showed good loading and encapsulation rates.
실험예 3: 미립구의 In vitro 약물 방출 거동 측정 Experimental Example 3: In vitro drug release behavior measurement of microspheres
약물의 방출거동을 측정하기 위하여 상기 실시예 1과 실시예 2 및 상기 비교예 1과 비교예 2에서 제조된 각 미립구를 입자 내 약물의 양이 4.0 mg이 되도록 무게를 측정한 후 각각 100 ml의 PBS(phosphate buffer saline, pH 7.4)에 넣고 37℃ 등온기에 보관하였으며, 시간대별로 1 ml을 추출한 PBS를 40배 희석하여 HPLC 측정기를 사용하여 방출량을 측정하였다. 흡광도 값을 환산하여 방출된 약물의 농도를 구하였으며, 각 입자 샘플의 전체 약물 (4 mg) 대비 각 시간대별로 방출된 약물의 양을 누적 백분율로 계산하여 나타내었다. 에씨탈로프람과 도네페질 용액은 본 실험의 대조군으로 사용하였다. 상기 측정 결과를 도 4 및 5에 나타내었다.In order to measure the release behavior of the drug, each microsphere prepared in Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 and 2 was weighed so that the amount of drug in the particles was 4.0 mg, and then 100 ml of each. It was put in PBS (phosphate buffer saline, pH 7.4) and stored in an isotherm at 37° C., and the amount of release was measured by diluting the PBS extracted 1 ml for each time 40 times using an HPLC meter. The concentration of the drug released was calculated by converting the absorbance value, and the amount of drug released for each time period compared to the total drug (4 mg) in each particle sample was calculated and expressed as a cumulative percentage. Ecitalopram and donepezil solutions were used as controls in this experiment. The measurement results are shown in FIGS. 4 and 5.
도 4는 본 발명에 따른 에씨탈로프람 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 미립구를 실험예 1에 따라 실험한 in vitro 약물 방출 거동 측정 결과를 보여주는 그래프이다. 비교예 1과 비교하여 레티노익산을 함유한 경우 레티노익산의 함량이 증가할수록 초기방출 억제와 방출지연 효과가 양호하게 나타났다.Figure 4 is a graph showing the in vitro drug release behavior measurement results of the microspheres prepared in Example 1 and Comparative Example 1 according to the present invention according to Experimental Example 1. Compared with Comparative Example 1, when the content of retinoic acid was increased, the initial release suppression and the delayed release effect were better as the content of retinoic acid increased.
도 5는 본 발명에 따른 도네페질 실시예 2 및 비교예 2에서 제조된 미립구를 실험예 1에 따라 실험한 in vitro 약물 방출 거동 측정 결과를 보여주는 그래프이다. 비교예 2과 비교하여 레티노익산을 함유한 경우 레티노익산의 함량이 증가할수록 초기방출 억제와 방출지연 효과가 양호하게 나타났다.5 is a graph showing the results of in vitro drug release behavior measurement of the microspheres prepared in Example 2 and Comparative Example 2 of donepezil according to the present invention. Compared to Comparative Example 2, when the content of retinoic acid was increased, the initial release suppression and the delayed release effect were better as the content of retinoic acid increased.
이는 방출지연제의 첨가로 미립구 내부 구조가 고분자와 약물의 결합을 강하게 하는 반데르발스력이 작용하여 외부의 수용액의 흡수를 방해하고 분자간의 해리를 막아주는 역할을 하는 것에 의하여 방출을 지연시킨 결과로 평가된다.This is a result of delaying the release by acting to prevent the absorption of the external aqueous solution and to prevent the dissociation between molecules by the action of van der Waals, which strengthens the bond between the polymer and the drug with the internal structure of the microspheres by the addition of a release retardant. It is evaluated as.
Claims (11)
상기 용액을 수용액에 첨가하면서 교반하여 O/W 유제를 형성하면서 미립구를 형성하는 단계
를 포함하는 제1항에 따른 서방형 제제의 제조방법.Preparing a solution containing a biodegradable polymer, an active ingredient, and retinoic acid; And
Forming a microsphere while forming an O/W emulsion by stirring while adding the solution to an aqueous solution
Method for producing a sustained-release preparation according to claim 1 comprising a.
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