KR20200044918A

KR20200044918A - 엑손18 및/또는 엑손21 변이형 egfr 선택적 저해제

Info

Publication number: KR20200044918A
Application number: KR1020207008984A
Authority: KR
Inventors: 나오미 아베; 신이치 하사코
Original assignee: 다이호야쿠힌고교 가부시키가이샤
Priority date: 2017-09-01
Filing date: 2018-08-31
Publication date: 2020-04-29
Also published as: CA3074418C; US20200253975A1; PH12020500419A1; CN117159551A; WO2019045036A1; CN111465397B; EP3677266A1; JP7065103B2; AU2018325819B2; CA3224526A1; MX2020002296A; CN111465397A; IL272929A; ZA202001445B; DK3677266T3; SG11202001861WA; US11701359B2; RU2020112357A; FI3677266T3; PT3677266T

Abstract

(S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 함유하는, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 항종양제. [X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

Description

엑손18 및/또는 엑손21 변이형 EGFR 선택적 저해제

본 발명은 엑손18 및/또는 엑손21 변이형 상피 성장 인자 수용체(Epidermal Growth Factor Receptor, 이하, 「EGFR」이라고도 칭한다)를 갖는 암에 대한 항종양제에 관한 것이다.

EGFR은 수용체 티로신 키나아제이며, 정상 조직에 있어서는 리간드인 상피 성장 인자(Epidermal Growth Factor, 이하 「EGF」라고도 칭한다)와 결합함으로써 생리 기능을 발휘하고, 상피 조직에 있어서 증식이나 아포토시스 저해에 기여하고 있다(비특허문헌 1). 또한, EGFR 유전자의 체세포 변이는 암의 원인 유전자로서 알려져 있고, 예를 들어 EGFR의 엑손19의 코돈 746 내지 750이 결실한 것(이하, 「엑손19 결실 변이」라고도 칭한다)이나 엑손21의 코돈 858이 코드하는 류신이 아르기닌으로 변이한 것(이하, 「L858R 변이」라고도 칭한다)은 EGF 비의존적인 키나아제 활성을 항상적으로 유도하여, 암 세포의 증식이나 생존에 기여한다(비특허문헌 2). 이들 변이는, 동아시아에 있어서는, 예를 들어 비소세포폐암의 30 내지 50％로 보이고, 또한, 구미에 있어서도 비소세포폐암의 약 10％로 보인다고 보고되어 있어, 암의 원인 인자의 하나로서 여겨지고 있다(비특허문헌 3).

그 때문에, EGFR 저해제의 항종양제로서의 연구 개발은 종래부터 활발하게 행하여지고 있어, 각종 EGFR 변이 양성 폐암의 치료에 도입되어 있다(비특허문헌 2, 4). 게피티닙, 에를로티닙, 및 아파티닙은 EGFR 변이의 90％를 차지하는 엑손19 결실 변이형 및 L858R 변이형 EGFR 양성 폐암에 대한 치료약으로서 사용되고 있다. 또한, 이들 치료 계속 중에 획득 내성이 발생하는 것이 알려져 있고, 그 원인의 50％는 엑손20의 코돈 790이 트레오닌으로부터 메티오닌으로 변이한(이하, 「T790M 변이」라고도 칭한다) 내성 변이형 EGFR이다. 이 변이를 갖는 폐암에 대해서는 오시머티닙이 치료약으로서 사용되고 있다. 따라서, 주요한 EGFR 변이를 갖는 폐암 환자에 대하여 EGFR 저해제를 사용한 치료가 확립되어 있다.

그러나 그 한편, 엑손18의 점변이 또는 결실 변이, 엑손21의 점변이 등의 몇 가지의 희소한 EGFR 변이에 대한 EGFR 저해제에 의한 치료는 확립되어 있지 않고, 이들 변이형 EGFR의 약제 감수성은 변이형에 따라 상이한 것이 보고되어 있다(비특허문헌 4). 예를 들어 엑손18의 코돈 719가 코드하는 글리신이 임의의 아미노산으로 치환된 점변이(이하, 「G719X 변이」라고도 칭한다)를 갖는 폐암이나 엑손21의 코돈 861이 코드하는 류신이 글루타민으로 치환된 점변이(이하, 「L861Q 변이」라고도 칭한다)를 갖는 폐암의, 게피티닙, 에를로티닙, 및 아파티닙에 대한 감수성은, 약제 감수성 변이인 엑손19 결실 변이 및 L858R 변이에 비하여 낮다. 또한, 아파티닙, 게피티닙 및 에를로티닙의 치료 용량에 있어서 공통적으로 발현하는 부작용으로서 피부의 이상이나 소화관 장애가 보고되어 있다. 이들 부작용은, 피부나 소화관 등 정상 조직에 발현하고 있는 야생형 EGFR의 기능이 치료약에 의해 저해되는 것에 기인한다고 널리 생각되고 있고(비특허문헌 1), 부작용 경감의 관점에서 종양 조직에 발현하는 변이형 EGFR에 비하여, 정상 조직의 야생형 EGFR에 대한 저해 활성이 낮은 특징을 갖는 저해제의 개발이 요망된다.

따라서, 엑손18 및 엑손21의 변이형 EGFR에 대하여 높은 저해 활성을 갖고, 또한 야생형 EGFR에 비해 변이형 EGFR에 높은 선택성을 갖는 약제의 개발은, 피부나 소화관에 있어서의 부작용이 발현하는 것보다도 낮은 투여량에 있어서, 변이형 EGFR을 갖는 폐암 세포의 증식을 억제가 가능하게 되는 것이 예상되어, 치료법이 확립되어 있지 않은 변이형 EGFR 양성암 환자의 연명이나 QOL 향상에 공헌할 것이 기대된다. 또한, EGFR 저해제 치료에 대한 획득 내성 변이인 T790M에 대해서도 높은 저해 활성을 갖는 약제라면, de novo 변이인 엑손18이나 엑손21의 변이형 EGFR에 대한 EGFR 저해제 치료 시에, 획득 내성의 발현 빈도를 감소시킬 가능성이 예상되어, 암 환자의 연명에 공헌할 것이 기대된다.

WO2015/175632A1호 공보 WO2015/025936A1호 공보

Nat.Rev.Cancer, vol.6, pp803-812(2006) Nature Medicine, vol.19, pp1389-1400(2013) Nat. Rev. Cancer, vol.7, pp169-181(2007) Lancet Oncol. vol.13, e23-31(2012)

본 발명의 과제는, 종래의 EGFR 저해제로는 치료 효과가 충분하지 않은, 엑손18 및/또는 엑손21 변이형 EGFR에 대한 선택성이 높은 저해제이며, 또한, 야생형 EGFR을 저해하지 않기 때문에 부작용이 저감된 항종양제를 제공하는 데 있다.

본 발명자들은, 예의 연구의 결과, 엑손18 및/또는 엑손21 변이형 EGFR이 암의 치료 표적으로서 타당한 것과 아울러, 종래 치료에 도입되어 있는 EGFR 저해제가, 엑손18 및/또는 엑손21 변이형 EGFR 간의 선택성이 모자란 것을 알아냈다. 또한, 본 발명에 관계되는 화합물이, 엑손18 및/또는 엑손21 변이형 EGFR에 대한 우수한 선택성 및 종양 증식 억제 효과를 나타내는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명은 이하의 양태를 포함한다.

항 1, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 함유하는, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 항종양제.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 2, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 1에 기재된 항종양제.

항 3, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 1 또는 2에 기재된 항종양제.

항 4, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 1 내지 3 중 어느 한 항에 기재된 항종양제.

항 5, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자에게 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 투여하는 공정을 포함하는, 악성 종양 환자의 치료 방법.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 6, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 5에 기재된 치료 방법.

항 7, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 5 또는 6에 기재된 치료 방법.

항 8, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 5 내지 7 중 어느 한 항에 기재된 치료 방법.

항 9, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 10, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 9에 기재된 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.

항 11, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 9 또는 10에 기재된 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.

항 12, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 9 내지 11 중 어느 한 항에 기재된 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.

항 13, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염의, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 사용.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 14, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 13에 기재된 사용.

항 15, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 13 또는 14에 기재된 사용.

항 16, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 13 내지 15 중 어느 한 항에 기재된 사용.

항 17, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염의, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 의약을 제조하기 위한 사용.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 18, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 17에 기재된 사용.

항 19, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 17 또는 18에 기재된 사용.

항 20, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 17 내지 19 중 어느 한 항에 기재된 사용.

항 21, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염 및 약학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하는, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한, 의약 조성물.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 22, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 21에 기재된 의약 조성물.

항 23, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 21 또는 22에 기재된 의약 조성물.

항 24, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 21 내지 23 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물.

항 25, 하기 공정 (1) 내지 (2)를 포함하는, 악성 종양 환자에 있어서의 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법의 치료 효과를 예측하는 방법:

(1) 당해 환자로부터 채취된 생체 시료에 포함되는 EGFR 유전자의 변이 유무를 검출하는 공정, 및

(2) 상기 공정 (1)에 있어서의 검출의 결과, EGFR 유전자가 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖고 있는 경우, 당해 환자에 대한 당해 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측하는 공정.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 26, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 25에 기재된 방법.

항 27, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 25 또는 26에 기재된 방법.

항 28, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 25 내지 27 중 어느 한 항에 기재된 방법.

항 29, 하기 공정 (1) 내지 (3)을 포함하는, 악성 종양 환자의 치료 방법:

(1) 당해 환자로부터 채취된 생체 시료에 포함되는 EGFR 유전자의 변이의 유무를 검출하는 공정, 및

(2) 상기 공정 (1)에 있어서의 검출의 결과, EGFR 유전자가 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖고 있는 경우, 당해 환자에 대한 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측하는 공정, 및

(3) 상기 공정 (2)에 있어서 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측된 악성 종양 환자에게, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 투여하는 공정.

[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]

항 30, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, 항 29에 기재된 방법.

항 31, 엑손21 변이가 L861Q인, 항 29 또는 30에 기재된 방법.

항 32, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항 29 내지 31 중 어느 한 항에 기재된 방법.

본 발명에 관계되는 항종양제는, 엑손18 및/또는 엑손21 변이형 EGFR에 대한 높은 선택성을 나타낸다. 따라서, 종래의 EGFR 저해제로는 치료 효과가 충분하지 않은, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자에 대한 우수한 치료 효과를 발휘하는 항종양제를 제공하는 것으로서 유용하다.

본 발명은 또한, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자의 치료 방법을 제공하는 것으로서 유용하다.

종래의 EGFR 저해제는, 야생형 EGFR에 비하여 엑손18 및 엑손21 변이형 EGFR에 대한 선택성이 낮기 때문에, 항종양 효과를 발휘하는 투여량과 야생형 EGFR 저해에 기인하는 부작용(피부의 이상이나 소화관 장애 등)이 발생하는 투여량과의 괴리가 작아, 충분한 치료 효과를 발휘하는 것이 곤란하였다. 한편, 본 발명에 관계되는 항종양제는, 엑손18 및 엑손21 변이형 EGFR에 대한 선택성이 높기 때문에, 야생형 EGFR 저해에 기인하는 부작용을 발생시키지 않고 투여량을 증가시키는 것이 가능하다고 생각되어, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자에 대하여 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있다.

추가로, 본 발명에 관계되는 항종양제는, 엑손20 영역의 획득 내성 변이인 T790M 변이 존재 하에서, 엑손18 및 엑손21 변이형 EGFR에 대하여 높은 저해 활성을 나타냈다. 따라서, 기존의 항종양제를 사용함으로써 발생하는 획득 내성 변이에 의해, 기존의 약제의 효과가 낮아진 악성 종양 환자에 대해서도 우수한 치료 효과를 발휘할 수 있다.

또한, 본 발명에 관계되는 항종양제는, 엑손20 영역의 획득 내성 변이인 T790M 변이 존재 하에서도, 엑손18 및 엑손21 변이형 EGFR에 대하여 높은 저해 활성을 갖기 때문에, de novo 변이인 엑손18이나 엑손21의 변이형 EGFR에 대한 EGFR 저해제 치료 시에, 획득 내성의 발현 빈도를 감소시킬 수 있는 점에서 유용하다.

도 1은 화합물 A의 항종양 효과를 측정하기 위한 G719A 변이형 EGFR 발현 세포주 피하 이식 모델 마우스에 있어서의 종양 체적(이하, 「TV」라고도 칭한다)을 나타낸다.
도 2는 화합물 A의 독성을 측정하기 위한 G719A 변이형 EGFR 발현 세포주 피하 이식 모델 마우스의 화합물 투여 기간 중의 체중 변화를 나타낸다.
도 3은 화합물 A의 항종양 효과를 측정하기 위한 G719A+T790M 변이형 EGFR 발현 세포주 피하 이식 모델 마우스에 있어서의 종양 체적을 나타낸다.
도 4는 화합물 A의 독성을 측정하기 위한 G719A+T790M 변이형 EGFR 발현 세포주 피하 이식 모델 마우스의 화합물 투여 기간 중의 체중 변화를 나타낸다.

명세서의 상기 또는 하기 기재에 있어서, 본 발명 범위에 포함되는 여러가지 정의의 적합예를, 하기에서 상세하게 설명한다.

본 명세서에 있어서 「EGFR」이란, 인간 상피 성장 인자 수용체(Epidermal Growth Factor Receptor) 단백질을 나타낸다. EGFR은, ErbB-1 또는 HER1이라고도 부르고 있다.

본 명세서에 있어서 「야생형 EGFR」이란, 체세포 변이를 갖고 있지 않은 EGFR을 나타내고, 구체적으로는 서열 번호 1로 나타나는 아미노산 서열을 포함하는 단백질이다(GenBank 액세션 번호: NP_005219.2).

본 명세서에 있어서 「엑손18」이란, 야생형 EGFR의 아미노산 서열(서열 번호 1)에 있어서의 688-728의 영역을 나타낸다.

본 명세서에 있어서 「엑손18 변이」란, 야생형 EGFR(서열 번호 1)의 엑손18 영역의 아미노산에 있어서의 점변이를 나타낸다. 바람직하게는, 엑손18 변이로서는, 엑손18 영역의 1개의 아미노산이 치환된 점변이 또는 결실 변이이며, 보다 바람직하게는, 엑손18의 코돈 709에 코드되는 글루탐산이 임의의 아미노산으로 치환된 점변이인 E709X, 및 엑손18의 코돈 719에 의해 코드되는 글리신이 임의의 아미노산으로 치환된 점변이인 G719X이다. 구체적으로는, E709X로서는, 엑손18 영역의 코돈 709에 코드되는 글루탐산이 리신으로 치환된 점변이인 E709K, 엑손18 영역의 코돈 709에 코드되는 글루탐산이 알라닌으로 치환된 점변이인 E709A를 들 수 있고, 이들이 바람직하다. G719X로서는, 엑손18 영역의 코돈 719에 코드되는 글리신이 알라닌으로 치환된 점변이인 G719A, 엑손18 영역의 코돈 719에 코드되는 글리신이 세린으로 치환된 점변이인 G719S, 또는 엑손18 영역의 코돈 719에 코드되는 글리신이 시스테인으로 치환된 점변이인 G719C를 들 수 있고, 이들이 바람직하고, 이 중, G719A가 특히 바람직하다.

본 발명에 있어서 「엑손21」이란, 야생형 EGFR의 아미노산 서열(서열 번호 1)에 있어서의 824-875의 영역을 나타낸다.

본 명세서에 있어서 「엑손21 변이」란, 야생형 EGFR(서열 번호 1)의 엑손21 영역의 아미노산에 있어서의 점변이를 나타낸다. 바람직하게는, 엑손21 변이로서는, 엑손21 영역의 1개의 아미노산이 치환된 점변이이며, 보다 바람직하게는, 엑손21 영역의 코돈 861에 코드되는 류신이 임의의 아미노산으로 치환된 점변이인 L861X이다. 구체적으로는, 엑손21 영역의 코돈 861에 의해 코드되는 류신이 글루타민으로 치환된 점변이인 L861Q를 들 수 있고, L861Q가 바람직하다.

본 발명에 있어서, 「엑손18 및/또는 엑손21 변이」는, 「엑손18 변이」, 「엑손21 변이」, 「엑손18 및 엑손21 변이」를 포함한다.

본 발명에 있어서, 「점변이」란, 1개 또는 복수(예를 들어, 1 내지 10개 정도, 바람직하게는 1 내지 5 정도 개, 보다 바람직하게는 1, 2 또는 3개 정도)의 아미노산 잔기의 치환, 삽입 또는 결실을 초래하는 변이를 나타내고, 핵산으로서의 인 프레임 삽입 및/또는 결실 변이도 포함할 수 있다.

「엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR」는, 「엑손18 변이를 갖는 EGFR」, 「엑손21 변이를 갖는 EGFR」 및 「엑손18 및 엑손21 변이를 갖는 EGFR」을 포함한다.

본 명세서에 있어서 「엑손18 변이를 갖는 EGFR」이란, 엑손18 변이를 적어도 하나 갖는 EGFR을 나타내고, 당해 EGFR은 상이한 2개 이상의 엑손18 변이를 가져도 되고, 바람직하게는 하나의 엑손18 변이를 갖는 것이다. 또한, 당해 EGFR은 엑손18 변이 이외의 변이(예를 들어, 엑손19 결실 변이, L858R 변이, L790M 변이 등)를 갖고 있어도 된다.

본 명세서에 있어서 「엑손21 변이를 갖는 EGFR」이란, 엑손21 변이를 적어도 하나 갖는 EGFR을 나타내고, 당해 EGFR은 상이한 2개 이상의 엑손21 변이를 가져도 되고, 바람직하게는 하나의 엑손21 변이를 갖는 것이다. 또한, 당해 EGFR은 엑손21 변이 이외의 변이(예를 들어, 엑손19 결실 변이, L858R 변이, L790M 변이 등)를 갖고 있어도 된다.

또한, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR은, 또한 T790M 변이를 갖고 있어도 된다. T790M은 엑손20 영역의 획득 내성 변이이며, 기존의 EGFR 저해제를 사용함으로써 발생하는 것이 알려져 있다. T790M의 획득에 의해, 악성 종양 환자에 대하여 기존의 약제의 효과가 낮아지는 경우가 많다.

본 발명에 있어서, T790M 변이를 더 갖는 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR은, 구체적으로는, T790M 변이를 더 갖는 엑손18 영역의 E709X 및/또는 G719X 변이를 갖는 EGFR, 및 T790M 변이를 더 갖는 엑손21 영역의 L861X 변이를 갖는 EGFR의 어느 것인 것이 바람직하다. 보다 구체적으로는, T790M 변이를 더 갖는 E709K 또는 E709A 변이를 갖는 EGFR, 및 T790M 변이를 더 갖는 G719A, G719S, 또는 G719C변이를 갖는 EGFR, 그리고 T790M 변이를 더 갖는 L861Q 변이를 갖는 EGFR의 어느 것인 것이 바람직하다. 이 중, T790M 변이를 더 갖는 G719A 변이를 갖는 EGFR 및 T790M 변이를 더 갖는 L861Q 변이를 갖는 EGFR이 특히 바람직하다.

본 발명에 있어서, 악성 종양 환자가 발현하고 있는 EGFR이 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 것의 검출 방법으로서는, 상기 변이를 검출할 수 있으면 특별히 제한되지 않고, 공지된 검출 방법을 사용할 수 있다.

엑손18 및/또는 엑손21 변이의 검출에 제공하는 시료로서는, 악성 종양 환자 유래의 생체 시료, 특히 악성 종양 환자로부터 채취한 것이며 악성 종양 세포를 포함하는 시료이면 특별히 한정되지 않는다. 생체 시료로서는, 예를 들어 체액(혈액, 오줌 등), 조직, 그 추출물 및 채취한 조직의 배양물 등을 예시할 수 있다. 또한, 생체 시료의 채취 방법은, 생체 시료의 종류에 따라 적절히 선택할 수 있다.

생체 시료는, 측정 방법에 따라 적절한 처리가 됨으로써 조제된다. 또한, 검출에 사용되는 프라이머 또는 프로브를 포함하는 시약은, 이들 측정 방법에 따라, 관용되는 방법에 의해 조정할 수 있다.

본 발명의 한 양태에 있어서, 항종양제의 악성 종양 환자에의 투여 전에, 악성 종양 환자가 발현하고 있는 EGFR이 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 것의 검출하는 공정을 행할 수 있다.

또한, 악성 종양은 상이한 2종 이상의 악성 종양 세포를 포함하는 경우가 있다. 또한, 한사람의 환자에 있어서 2개 이상의 복수의 악성 종양이 발생하는 경우가 있다. 그 때문에, 한사람의 환자가, EGFR의 동일한 아미노산 위치에 상이한 변이(예를 들어, 엑손18 변이가, G719A, G719S 및 G719C의 엑손18 변이; E709K 및 E709A의 엑손18 변이)를 동시에 갖는 경우가 있다.

본 발명의 항종양제는, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드(화합물 A) 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유한다. 화합물 A는, 하기 화학식으로 표시된다.

이어서, 본 발명에 관계되는 화합물의 제조법에 대하여 설명한다:

본 발명의 화합물 A는, 예를 들어, WO2015/025936A1호 공보에 기재된 제조법 또는 실시예에 나타내는 방법 등에 의해 제조할 수 있다. 단, 본 발명 화합물의 제조법은 이들 반응예에 한정되는 것은 아니다.

화합물 A가, 광학 이성체, 입체 이성체, 호변 이성체 등의 이성체를 갖는 경우에는, 특별히 명기하지 않는 한, 어느 이성체든 혼합물이든 본 발명 화합물에 포함된다. 예를 들어, 본 발명 화합물에 광학 이성체가 존재하는 경우에는, 특별히 명기하지 않는 한, 라세미체 및 라세미체로부터 분할된 광학 이성체도 본 발명 화합물에 포함된다.

화합물 A의 염이란, 약학적으로 허용되는 염을 의미하고, 염기 부가염 또는 산 부가염을 들 수 있다.

해당 염기 부가염으로서는, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염; 예를 들어 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 토류 금속염; 예를 들어 암모늄염; 예를 들어 트리메틸아민염, 트리에틸아민염, 디시클로헥실아민염, 에탄올아민염, 디에탄올아민염, 트리에탄올아민염, 프로카인염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염 등의 유기 아민염 등을 들 수 있다.

해당 산 부가염으로서는, 예를 들어 염산염, 황산염, 질산염, 인산염, 과염소산염 등의 무기산염; 예를 들어 아세트산염, 포름산염, 말레산염, 푸마르산염, 타르타르산염, 시트르산염, 아스코르브산염, 트리플루오로아세트산염 등의 유기산염; 예를 들어 메탄술폰산염, 이세티온산염, 벤젠술폰산염, p-톨루엔술폰산염 등의 술폰산염 등을 들 수 있다.

본 발명 화합물 또는 그의 염에는, 그의 프로드러그도 포함된다. 프로드러그는, 생체 내에 있어서의 생리 조건 하에서 효소나 위산 등에 의한 반응에 의해 본 발명 화합물 또는 그의 염으로 변환하는 화합물, 즉 효소적으로 산화, 환원, 가수분해 등을 일으켜서 본 발명 화합물 또는 그의 염으로 변환하는 화합물, 위산 등에 의해 가수분해 등을 일으켜서 본 발명 화합물 또는 그의 염으로 변환하는 화합물을 말한다. 또한, 히로카와 쇼텐 1990년간 「의약품의 개발」 제7권 분자 설계 163페이지 내지 198페이지에 기재되어 있는 생리적 조건으로 본 발명 화합물 또는 그의 염으로 변환하는 것이어도 된다.

[질환의 기재]

본 발명의 대상으로 되는 종양은 특별히 제한은 되지 않지만, 예를 들어, 두경부암, 소화기암(식도암, 위암, 십이지장암, 간암, 담도암(담낭·담관암 등), 췌장암, 결장직장암(결장암, 직장암 등) 등), 폐암(비소세포폐암, 소세포폐암, 중피종 등), 유방암, 생식기암(난소암, 자궁암(자궁경암, 자궁체암 등) 등), 비뇨기암(신장암, 방광암, 전립선암, 정소 종양 등), 조혈기 종양(백혈병, 악성 림프종, 다발성골수종 등), 골·연부종양, 피부암, 뇌종양 등을 들 수 있다. 바람직하게는, 폐암, 유방암, 두경부암, 뇌종양, 자궁암, 소화기암, 조혈기 종양, 또는 피부암이며, 특히 바람직하게는 폐암이다.

화합물 A 또는 그의 염은 의약으로서 사용함에 있어서는, 필요에 따라 약학적 담체를 배합하고, 예방 또는 치료 목적에 따라 각종 투여 형태를 채용 가능하다. 해당 형태로서는, 예를 들어, 경구제, 주사제, 좌제, 연고제, 첩부제 등의 어느 것이어도 되고, 바람직하게는, 경구제가 채용된다. 이들 투여 형태는, 각각 당업자에게 공지 관용의 제제 방법에 의해 제조할 수 있다.

본 발명의 항종양제는, 어떤 양태에 있어서는 화합물 A 또는 그의 염 및 약학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하는 의약 조성물로서 제공된다.

약학적으로 허용할 수 있는 담체로서는, 제제 소재로서 관용의 각종 유기 혹은 무기 담체 물질이 사용되고, 고형 제제에 있어서의 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 액상 제제에 있어서의 용제, 용해 보조제, 현탁화제, 등장화제, 완충제, 무통화제 등으로서 배합된다. 또한, 필요에 따라 방부제, 항산화제, 착색제, 감미제, 안정화제 등의 제제 첨가물을 사용할 수도 있다.

경구용 고형 제제를 제조하는 경우에는, 본 발명 화합물에 부형제, 필요에 따라 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 착색제, 교미·교취제 등을 첨가한 후, 통상의 방법에 의해 정제, 피복 정제, 과립제, 산제, 캡슐제 등을 제조할 수 있다.

부형제로서는, 유당, 백당, D-만니톨, 포도당, 전분, 탄산칼슘, 카올린, 미결정 셀룰로오스, 무수 규산 등을 들 수 있다. 결합제로서는, 물, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 단 시럽, 포도 당액, α-전분액, 젤라틴액, D-만니톨, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필 스타치, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 셀락, 인산칼슘, 폴리비닐피롤리돈 등을 들 수 있다. 붕괴제로서는, 건조 전분, 알긴산나트륨, 한천 분말, 탄산수소나트륨, 탄산칼슘, 라우릴황산나트륨, 스테아르산모노글리세라이드, 유당 등을 들 수 있다. 활택제로서는, 정제 탈크, 스테아르산염 나트륨, 스테아르산마그네슘, 붕사, 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있다. 착색제로서는, 산화티타늄, 산화철 등을 들 수 있다. 교미·교취제로서는 백당, 등피, 시트르산, 타르타르산 등을 들 수 있다.

경구용 액체 제제를 제조하는 경우에는, 본 발명 화합물에 교미제, 완충제, 안정화제, 교취제 등을 가하여 통상의 방법에 의해 내복 액제, 시럽제, 엘릭시르제 등을 제조할 수 있다.

주사제를 제조하는 경우에는, 본 발명 화합물에 pH 조절제, 완충제, 안정화제, 등장화제, 국소마취제 등을 첨가하고, 통상의 방법에 의해 피하, 근육내 및 정맥내용 주사제를 제조할 수 있다.

pH 조절제 및 완충제로서는, 시트르산나트륨, 아세트산나트륨, 인산나트륨 등을 들 수 있다. 안정화제로서는, 피로아황산나트륨, EDTA, 티오글리콜산, 티오 락트산 등을 들 수 있다. 국소마취제로서는, 염산프로카인, 염산리도카인 등을 들 수 있다. 등장화제로서는, 염화나트륨, 포도당, D-만니톨, 글리세린 등을 들 수 있다.

좌제를 제조하는 경우에는, 화합물 A에 당업계에 있어서 공지된 제제용 담체, 예를 들어, 폴리에틸렌글리콜, 라놀린, 카카오 버터, 지방산트리글리세라이드 등을, 또한 필요에 따라 Tween80(등록 상표)과 같은 계면 활성제 등을 첨가한 후, 통상의 방법에 의해 제조할 수 있다.

연고제를 제조하는 경우에는, 화합물 A에 통상 사용되는 기제, 안정제, 습윤제, 보존제 등이 필요에 따라서 배합되어, 통상의 방법에 의해 혼합, 제제화된다.

기제로서는, 유동 파라핀, 백색 바셀린, 표백 밀랍, 옥틸도데실알코올, 파라핀 등을 들 수 있다.

보존제로서는, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필 등을 들 수 있다.

첩부제를 제조하는 경우에는, 통상의 지지체에 상기 연고, 크림, 겔, 페이스트 등을 통상의 방법에 의해 도포하면 된다.

지지체로서는, 면, 스테이플 파이버, 화학 섬유를 포함하는 직포, 부직포나 연질 염화비닐, 폴리에틸렌, 폴리우레탄 등의 필름 혹은 발포체 시트가 적당하다.

상기 각 투여 단위 형태 중에 배합되어야 할 화합물 A의 양은, 이것을 적용할 환자의 증상에 따라, 혹은 그 제형 등에 따라 일정하지 않다. 일반적으로 투여 단위 형태당, 경구제로는 0.05 내지 1000mg, 주사제로는 0.01 내지 500mg, 좌제로는 1 내지 1000mg으로 하는 것이 바람직하다.

또한, 상기 투여 형태를 갖는 약제에 1일당의 투여량은, 환자의 증상, 체중, 연령, 성별 등에 따라 상이하여 일률적으로는 결정할 수 없고, 한정되지 않는다. 일반적으로, 화합물 A로서 통상 성인(체중 50kg) 1일당 0.05 내지 5000mg, 바람직하게는 0.1 내지 1000mg으로 하면 되고, 이것을 1일 1회 또는 2 내지 3회 정도로 나누어서 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명은 또한, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자에게 화합물 A 또는 그의 염을 투여하는 공정을 포함하는, 악성 종양 환자의 치료 방법을 제공한다.

본 발명은 또한, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한, 화합물 A 또는 그의 염을 제공한다.

본 발명은 또한, 화합물 A 또는 그의 염의, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 사용을 제공한다.

본 발명은 또한, 화합물 A 또는 그의 염의, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 의약을 제조하기 위한 사용을 제공한다.

본 발명은 또한, 화합물 A 또는 그의 염 및 약학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하는, 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 의약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한, 하기 공정 (1) 내지 (2)를 포함하는, 악성 종양 환자에 있어서의 화합물 A 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법의 치료 효과를 예측하는 방법을 제공한다.

(2) 상기 공정 (1)에 있어서의 검출의 결과, EGFR 유전자가 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖고 있는 경우, 당해 환자에 대한 당해 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측하는 공정.

본 발명은 또한, 하기 공정 (1) 내지 (3)을 포함하는, 악성 종양 환자의 치료 방법을 제공한다.

(2) 상기 공정 (1)에 있어서의 검출의 결과, EGFR 유전자가 엑손18 및/또는 엑손21 변이를 갖고 있는 경우, 당해 환자에 대한 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측하는 공정, 및

EGFR 유전자의 염기 서열은 공지이다. cDNA의 염기 서열의 GenBank 액세션 번호는, NM_005228.4이다.

또한, 「치료 효과」는, 종양 축소 효과, 재발 억제 효과, 연명 효과 등에 의해 평가할 수 있고, 재발 억제 효과는 무재발 생존 기간의 연장이나 재발률의 개선의 정도, 연명 효과는 전생존 기간이나 무증악 생존 기간의 중앙값의 연장의 정도 등에 의해 나타낼 수 있다. 화합물 A 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 항종양제를 사용한 화학 요법이 「충분한 치료 효과를 나타낸다」란, 화합물 A 또는 그의 염을 유효 성분으로서 함유하는 항종양제를 투여함으로써, 비투여의 경우와 비교하여, 생존 기간을 연장시키거나, 재발을 억제시키거나 하는 우수한 치료 효과를 말한다.

실시예

이하에 시험예를 나타내어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예(시험예)에 제한되는 것이 아니다.

시험예 1 In vitro(시험관 내) 약효 시험

HEK293 세포를 사용한 변이형 EGFR 강제 발현계에 있어서의 세포내 인산화 평가 결과(저해 활성)

화합물의 세포내 표적 저해 활성은, Jump-In(상표) Grip(상표) HEK293 세포(Thermo Fisher Scientific Inc.)(이하, 「HEK293 세포」라고도 칭한다)를 사용한 변이형 EGFR 강제 발현계에 있어서의 세포내 EGFR 인산화를 지표로 평가하였다. HEK293 세포는, 10％ 투석 소태아혈청(dialyzed(투석) FBS) 및 100U/mL 페니실린/100μg/mL 스트렙토마이신(Thermo Fisher Scientific Inc.)을 포함하는 D-MEM with GlutaMAX(상표)-I(High glucose(고 글루코오스))(Thermo Fisher Scientific Inc.)로 유지하고, 인간 EGFR 유전자(G719A, G719S, G719C, E709K, E709A, L861Q, G719A+T790M(+은 양쪽의 변이를 갖는 것을 나타낸다.), L861Q+T790M)를 코드한 pJTI™R4 DEST CMV pA 벡터를 Opti-MEM(상표) I(Thermo Fisher Scientific Inc.)와 함께 ViaFect(상표) Transfection Reagent(프로메가 가부시키가이샤)를 사용하여 도입하였다. 변이형 인간 EGFR을 발현한 HEK293 세포를, 384웰 평평한 밑바닥 마이크로플레이트의 각 웰에 1웰당의 세포수가 10,000개가 되도록 파종하고, 5％ 탄산 가스 함유의 배양기 중 37℃에서 1일 배양하였다. 화합물 A, 에를로티닙, 아파티닙 및 오시머티닙(이하, 「비교 화합물」이라고도 칭한다)을 DMSO에 용해하고, DMSO 혹은 각 세포의 현탁에 사용한 배지를 사용하여 희석하고, 이것을 세포의 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 5％ 탄산 가스 함유의 배양기 중 37℃에서 6시간 배양하였다. 배양 후, 20％ 중성 완충 포르말린액(와코 쥰야꾸 고교 가부시키가이샤)을 사용하여 세포를 고정하고, ODYSSEY(상표) Blocking Buffer(PBS)(M&S TechnoSystems Inc.)에 의해 세포를 블로킹한 후, ODYSSEY(상표) Blocking Buffer(PBS)를 사용하여 200분의 1로 희석한 1차 항체(EGFR Monoclonal Antibody(R19/48MIX)#AHR5062(Thermo Fisher Scientific Inc.) 및 Phospho-EGFR Receptor(Tyr1068)Antibody#2234L(CST))에 반응시켜 4℃에서 밤새 침투하였다. 다음날, ODYSSEY(상표) Blocking Buffer(PBS)를 사용하여 800분의 1로 희석한 2차 항체(IRDye 800CW Goat aRabbit#926-32211 및 IRDye 680RD Goat aMouse#926-68070(M&S TechnoSystems Inc.))에 반응시켜 실온에서 1시간 침투하였다. 형광 강도(Fluorescence intensity: 이하 「FI」라고도 칭한다)의 검출은, Odyssay Infrared Imaging System(LI-COR Bioscience)를 사용하여, 형광 파장 800㎚ 및 700㎚로 측정하였다.

형광 파장 800㎚ 및 700㎚로 검출한 FI값으로부터 세포를 포함하지 않는 웰의 FI값을 차감한 수치를 각각, FI(800, EGFR)-Blank, FI(700, p-EGFR)-Blank로 한다. 각 웰의 FI(700, p-EGFR)-Blank로부터 FI(800, EGFR)-Blank를 제산한 값을 FI(p-EGFR/EGFR) 값으로 한다. 이하의 식으로부터 인산화 EGFR 저해율을 산출하고, 인산화 EGFR을 50％ 저해할 수 있는 피검 화합물의 농도(IC₅₀(μM))를 구하였다. 결과를 표 1에 나타내었다.

인산화 EGFR 비율(％)=T/C×100

T: 피검 화합물을 첨가한 웰의 FI(p-EGFR/EGFR)

C: 피검 화합물을 첨가하지 않은 웰의 FI(p-EGFR/EGFR).

표 1로부터 명백해진 바와 같이, 화합물 A는 엑손18 또는 엑손21 변이형 EGFR에 대하여 높은 세포내 인산화 저해 활성을 나타내고, 그 활성은 에를로티닙, 오시머티닙에 비하여 높고, 아파티닙과 동등하였다. 획득 내성 변이인 T790M 변이 존재 하에서는, 화합물 A의 엑손18 또는 엑손21 변이형 EGFR에 대한 저해 활성은 아파티닙에 비하여 높았다.

시험예 2

야생형 및 변이형 EGFR 발현 세포주에 대한 세포 증식 억제 효과의 평가(in vitro)

화합물의 야생형 EGFR 및 변이형 EGFR에 대한 저해 활성은, 인간 EGFR 유전자를 도입한 마우스 B 림프구 전구 세포주인 Ba/F3 세포를 사용하여 행하였다. Ba/F3 세포는 10％ 소태아혈청(FBS), 100U/mL 페니실린/100μg/mL 스트렙토마이신(Thermo Fisher Scientific Inc.) 및 1ng/mL 마우스 인터류킨-3(mIL-3)(CST)을 포함하는 RPMI-1640 배지(Thermo Fisher Scientific Inc.)에서 유지하고, 인간 EGFR 유전자(야생형(WT), G719A, L861Q)를 코드한 PB-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro 벡터 혹은 PB-CMV-MCS-EF1-RFP+Puro 벡터를 Super PiggyBacTransposase 발현 벡터와 함께 Amaxa(상표) Cell Line Nucleofector(상표) Kit V에 의한 전기 천공법에 의해 도입한 후 퓨로마이신(SIGMA)으로 선택하였다. 야생형 EGFR을 발현한 Ba/F3 세포(이하, 「Ba/F3-EGFR_WT」라고도 칭한다)는 50ng/mL EGF(R&D시스템즈) 존재 하에서 mIL-3 비의존적인 증식을 나타내고, 또한 엑손18 및 엑손21 활성 변이형 EGFR을 발현한 Ba/F3 세포(이하, 「Ba/F3-EGFR G719A」, 「Ba/F3-EGFR L861Q」)는 EGF 비존재 하에서 mIL-3 비의존적인 증식을 나타냈다.

세포 증식 억제 효과의 평가 시에, Ba/F3-EGFR_WT 세포를 10％ FBS, 100U/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신 및 50ng/mL EGF를 포함하는 RPMI-1640 배지에서 현탁하고, 세포 현탁액을 96웰 평평한 밑바닥 마이크로플레이트의 각 웰에 1웰당의 세포수가 30,000개로 되도록 파종하였다. 한편, Ba/F3-EGFR G719A 세포 및 Ba/F3-EGFR L861Q 세포는 10％ FBS, 100U/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신을 포함하는 RPMI-1640 배지에서 현탁하고, 세포 현탁액을 96웰 평평한 밑바닥 마이크로플레이트의 각 웰에 1웰당의 세포수가 15,000개로 되도록 파종하였다. 다음으로 화합물 A, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙 및 오시머티닙(이하, 「비교 화합물」이라고도 칭한다)을 DMSO에 용해하고, DMSO 혹은 각 세포의 현탁에 사용한 배지를 사용하여 희석하고, 이것을 세포의 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 5％ 탄산 가스 함유의 배양기 중 37℃에서 3일 배양하였다. 배양 후의 세포수의 계측은 Cell Titer-Glo(상표) Luminescent Cell Viability Assay(프로메가)를 사용하여, 메이커가 권장하는 프로토콜에 기초하여 행하였다. 이하의 식으로부터 증식율을 산출하고, 50％ 저해하는 피검 화합물의 농도(IC₅₀(μM))를 구하였다.

증식율(％)=T/C×100

T: 피검 화합물을 첨가한 웰의 발광 강도

C: 피검 화합물을 첨가하지 않은 웰의 발광 강도.

또한, 이하의 식으로부터 야생형 EGFR와 G719A 변이형 EGFR 또는 L861Q 변이형 EGFR의 IC₅₀값의 비를 산출하였다. 결과를 표 2에 나타내었다.

IC₅₀ ratio(비)=IC₅₀(WT)/IC₅₀(G719A 또는 L861Q).

표 2로부터 명백해진 바와 같이, 화합물 A는, G719A 또는 L861Q 변이에 대한 선택적 저해 활성을 나타냈다.

시험예 3 In vivo(생체 내) 약효 시험

G719A 변이형 EGFR 발현 세포주 마우스 피하 이식 모델을 사용한 항종양 효과의 평가 G719A 변이형 EGFR 발현 세포주의 마우스 피하 이식 모델을 사용한 평가에서는, 인간 EGFR 유전자를 도입한 마우스 섬유아세포주인 NIH-3T3 세포를 사용하여 행하였다. NIH-3T3 세포는 10％ 소신생아혈청(NBCS), 1,500mg/L 탄산수소나트륨, 100U/mL 페니실린/100μg/mL 스트렙토마이신(Thermo Fisher Scientific Inc.)을 포함하는 D-MEM(고 글루코오스) 배지(와코준야쿠)에서 유지하고, 인간 EGFR 유전자(G719A)를 코드한 PB-CMV-MCS-EF1-RFP+Puro 벡터를 Super PiggyBacTransposase 발현 벡터와 함께 Amaxa(상표) Cell Line Nucleofector(상표) Kit R에 의한 전기 천공법에 의해 도입한 후 퓨로마이신(SIGMA)으로 선택하였다. 엑손18 변이형 EGFR을 발현한 NIH-3T3 세포(이하, 「NIH3T3-EGFR G719A」라고도 칭한다)는 1％ NBCS 조건 하 또한 EGF 비존재 하에서 증식을 나타냈다.

G719A 변이형 EGFR 발현 세포주의 마우스 피하 이식 모델을 사용한 평가 시에, 인간 변이형 EGFR을 도입한 NIH3T3-EGFR G719A 세포를 누드마우스의 피하에 이식하고, 종양이 생착된 누드마우스의 종양 체적이 100-200㎣ 정도로 된 시점에서, 각 군의 종양 체적의 평균이 균일해지도록 무작위 층별화에 의해 1군 5-6마리를 할당하고, 화합물 A, 아파티닙 및 오시머티닙을 14일간, 하루 1회 연일 경구 투여하였다.

투여 용량은, 아파티닙에서는 본 시험의 투여 기간인 14일간에서의 최대 내약 용량(투여 기간 중의 체중 감소가 20％ 미만이 되는 최대 투여 용량)의 20mg/kg/day, 오시머티닙에서는, 임상 약효 상당 용량의 25mg/kg/day, 화합물 A에서는, 최대 내약 용량인 200mg/kg/day로부터 3dose 설정하고, 200, 100, 50mg/kg/day를 사용하였다. 또한, 최대 내약 용량은, 미국 국립 암 연구소(NCI)에 의한 「Guidelines Involving Experimental Neoplasia Proposals in Mice and Rats」에 따라서 인도적 관점에서 설정하였다.

각 피검 화합물 투여에 있어서의 종양의 경시적 증식 추이를 비교하기 위해서, 종양의 체적(tumor volume, 이하, 「TV」라고도 칭한다)을 지표로 하였다. 독성의 지표로서 경시적으로 체중을 측정하여 군 분류일에 대한 평균 체중 변화율(Body weight change, 이하, 「BWC(％)」라고도 칭한다)을 이하의 식에 따라서 산출하였다.

BWC(％)=(체중 측정일의 체중)/(군 분류 시의 체중).

최종 평가일의 control군과 약제 투여군의 평균 TV의 차가 통계학적으로 유의(Dunnett 검정, P<0.05)이며, 또한 하기 식을 사용하여 산출되는 treatment/control(T/C)값이 100 미만인 경우에 효과 있음으로 판정하고, 도면 중에 * 표시로 나타냈다.

T/C(％)=(약제 투여군의 평균 TV)/(Control군의 평균 TV)×100.

도 1에 도시하는 결과로 명백해진 바와 같이, 본 발명 화합물 A는 누드마우스의 피하에 이식한 G719A 변이형 EGFR 발현 세포주에 대하여 종양 퇴치 또는 축소를 수반하는 현저한 항종양 효과를 나타냈다. 또한 그 효과는 아파티닙이나 오시머티닙에 비하여 높았다. 도 2에 도시한 바와 같이, 마우스에서의 위독한 체중 감소, 편 이상, 피부 이상의 증상은 보이지 않았다.

시험예 4 In vitro 약효 시험

T790M 변이형 EGFR 발현 세포주에 대한 세포 증식 억제 효과의 평가(in vitro)

화합물의 T790M 변이형 EGFR에 대한 저해 활성은, 인간 EGFR 유전자를 도입한 마우스 B 림프구 전구 세포주인 Ba/F3 세포를 사용하여 행하였다. Ba/F3 세포는 10％ 소태아혈청(FBS), 100U/mL 페니실린/100μg/mL 스트렙토마이신(Thermo Fisher Scientific Inc.) 및 1ng/mL 마우스 인터류킨-3(mIL-3)(CST)을 포함하는 RPMI-1640 배지(Thermo Fisher Scientific Inc.)에서 유지하고, 인간 EGFR 유전자(야생형(WT), G719A+T790M, L861Q+T790M)를 코드한 PB-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro 벡터 혹은 PB-CMV-MCS-EF1-RFP+Puro 벡터를 Super PiggyBacTransposase 발현 벡터와 함께 Amaxa(상표) Cell Line Nucleofector(상표) Kit V에 의한 전기·구멍법에 의해 도입한 후 퓨로마이신(SIGMA)으로 선택하였다. G719A+T790M 및 L861Q+T790M 변이형 EGFR을 발현한 Ba/F3 세포(이하, 「Ba/F3-EGFR G719A+T790M」, 「Ba/F3-EGFR L861Q+T790M」)는 EGF 비존재 하에서 mIL-3 비의존적인 증식을 나타냈다.

세포 증식 억제 효과의 평가 시에, Ba/F3-EGFR G719A+T790M 세포 및 Ba/F3-EGFR L861Q+T790M 세포는 10％ FBS, 100U/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신을 포함하는 RPMI-1640 배지에서 현탁하고, 세포 현탁액을 96웰 평평한 밑바닥 마이크로플레이트의 각 웰에 1웰당의 세포수가 15,000개로 되도록 파종하였다. 다음으로 화합물 A, 게페티닙, 에를로티닙, 아파티닙 및 오시머티닙(이하, 「비교 화합물」이라고도 칭한다)을 DMSO에 용해하고, DMSO 혹은 각 세포의 현탁에 사용한 배지를 사용하여 희석하고, 이것을 세포의 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 5％ 탄산 가스 함유의 배양기 중 37℃에서 3일 배양하였다. 배양 후의 세포수의 계측은 Cell Titer-Glo(상표) Luminescent Cell Viability Assay(프로메가)를 사용하여, 메이커가 권장하는 프로토콜에 기초하여 행하였다. 이하의 식으로부터 증식율을 산출하고, 50％ 저해하는 피검 화합물의 농도(IC₅₀(μM))를 구하였다.

증식율(％)=T/C×100

T: 피검 화합물을 첨가한 웰의 발광 강도

C: 피검 화합물을 첨가하지 않은 웰의 발광 강도

또한, 이하의 식으로부터 야생형 EGFR와 G719A+T790M 변이형 EGFR 또는 L861Q+T790M 변이형 EGFR의 IC₅₀값의 비를 산출하였다. 결과를 표 3에 나타내었다.

IC₅₀ 비=IC₅₀(WT)/IC₅₀(G719A+T790M 또는 L861Q+T790M).

표 3으로부터 명백해진 바와 같이, 화합물 A는, G719A+T790M 또는 L861Q+T790M 변이에 대한 선택적 저해 활성을 나타냈다.

시험예 5 In vivo 약효 시험

G719A+T790M 변이형 EGFR 발현 세포주 마우스 피하 이식 모델을 사용한 항종양 효과의 평가

G719A+T790M 변이형 EGFR 발현 세포주의 마우스 피하 이식 모델을 사용한 평가에서는, 인간 EGFR 유전자를 도입한 마우스 섬유아세포주인 NIH-3T3 세포를 사용하여 행하였다. NIH-3T3 세포는 10％ 소신생아혈청(NBCS), 1,500mg/L 탄산수소나트륨, 100U/mL 페니실린/100μg/mL 스트렙토마이신(Thermo Fisher Scientific Inc.)을 포함하는 D-MEM(고 글루코오스) 배지(와코준야쿠)에서 유지하고, 인간 EGFR 유전자(G719A+T790M)를 코드한 PB-CMV-MCS-EF1-RFP+Puro 벡터를 Super PiggyBacTransposase 발현 벡터와 함께 Amaxa(상표) Cell Line Nucleofector(상표) Kit R에 의한 전기·구멍법에 의해 도입한 후 퓨로마이신(SIGMA)으로 선택하였다. 엑손18 변이형 EGFR을 발현한 NIH-3T3 세포(이하, 「NIH3T3-EGFR G719A+T790M」이라고도 칭한다)는 1％ NBCS 조건 하 또한 EGF 비존재 하에서 증식을 나타냈다.

G719A+T790M 변이형 EGFR 발현 세포주의 마우스 피하 이식 모델을 사용한 평가 시에, 인간 변이형 EGFR을 도입한 NIH3T3-EGFR G719A+T790M 세포를 누드마우스의 피하에 이식하고, 종양이 생착된 누드마우스의 종양 체적이 100-300㎣ 정도로 된 시점에서, 각 군의 종양 체적의 평균이 균일해지도록 무작위 층별화에 의해 1군 5마리를 할당하고, 본 발명 화합물 A,아파티닙을 1일간, 하루 1회 연일 경구 투여하였다.

투여 용량은, 아파티닙에서는 본 시험의 투여 기간인 14일간에서의 최대 내약 용량(투여 기간 중의 체중 감소가 20％ 미만이 되는 최대 투여 용량)의 20mg/kg/day, 본 발명 화합물 A에서는, 최대 내약 용량인 200mg/kg/day로부터 3dose 설정하고, 200, 100, 50mg/kg/day를 사용하였다. 또한, 최대 내약 용량은, 미국 국립 암 연구소(NCI)에 의한 「Guidelines Involving Experimental Neoplasia Proposals in Mice and Rats」에 따라서 인도적 관점에서 설정하였다.

각 피검 화합물 투여에 있어서의 종양의 경시적 증식 추이를 비교하기 위해서, 종양의 체적(tumor volume, 이하, 「TV」라고도 칭한다)을 지표로 하였다. TV의 경시적 추이를 도 3에 도시하였다. 또한 독성의 지표로서 경시적으로 체중을 측정하여 군 분류일에 대한 평균 체중 변화율(Body weight change, 이하, 「BWC(％)」라고도 칭한다)을 이하의 식에 따라서 산출하고, 경시적 추이를 도 4에 도시하였다.

BWC(％)=(체중 측정일의 체중)/(군 분류 시의 체중).

최종 평가일의 평균 TV를 지표로서 던네트 검정을 행하고, control군과 약제 투여군의 평균 TV의 차가 통계학적으로 유의(P<0.05)이며, 또한 하기 식을 사용하여 산출되는 treatment/control(T/C)값이 100 미만인 경우에 효과 있음으로 판정하고, 도 3 및 표 4에 * 표시로 나타냈다(*: P<0.05, **: P<0.01, ***: P<0.001). 또한 발명 화합물 A 투여군과 아파티닙 투여군의 평균 TV의 차가 통계학적으로 유의(P<0.05)이며, 또한 발명 화합물 A 투여군의 T/C값이 아파티닙 투여군의 T/C값보다 낮은 경우에 아파티닙보다도 높은 항종양 효과가 있다고 판정하고, 도 3 및 표 4에 #으로 나타냈다(#: P<0.05, ##: P<0.01, ###: P<0.001).

T/C(％)=(약제 투여군의 평균 TV)/(Control군의 평균 TV)×100

도 3에 도시하는 결과로 명백해진 바와 같이, 본 발명 화합물 A는 누드마우스의 피하에 이식한 G719A+T790M 변이형 EGFR 발현 세포주에 대하여 유의한 항종양 효과를 나타냈다. 또한, 표 4에 나타낸 바와 같이, 그 효과는 아파티닙에 비하여 높고, 그 때에 도 4에 도시한 바와 같이 마우스에서의 위독한 체중 감소, 편 이상, 피부 이상의 증상은 보이지 않았다.

SEQUENCE LISTING <110> TAIHO PHARMACEUTICAL CO., LTD. <120> Exon 18 and/or 21 EGFR Mutant-selective Inhibitor <130> P18-145WO <150> JP 2017-168606 <151> 2017-09-01 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1210 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala 1 5 10 15 Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln 20 25 30 Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe 35 40 45 Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn 50 55 60 Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys 65 70 75 80 Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val 85 90 95 Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr 100 105 110 Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn 115 120 125 Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu 130 135 140 His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu 145 150 155 160 Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met 165 170 175 Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro 180 185 190 Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln 195 200 205 Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg 210 215 220 Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys 225 230 235 240 Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp 245 250 255 Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro 260 265 270 Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly 275 280 285 Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His 290 295 300 Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu 305 310 315 320 Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val 325 330 335 Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn 340 345 350 Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp 355 360 365 Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr 370 375 380 Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu 385 390 395 400 Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp 405 410 415 Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln 420 425 430 His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu 435 440 445 Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser 450 455 460 Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu 465 470 475 480 Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu 485 490 495 Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro 500 505 510 Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn 515 520 525 Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly 530 535 540 Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro 545 550 555 560 Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro 565 570 575 Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val 580 585 590 Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp 595 600 605 Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys 610 615 620 Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly 625 630 635 640 Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu 645 650 655 Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His 660 665 670 Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu 675 680 685 Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu 690 695 700 Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser 705 710 715 720 Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu 725 730 735 Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser 740 745 750 Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser 755 760 765 Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser 770 775 780 Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp 785 790 795 800 Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn 805 810 815 Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg 820 825 830 Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro 835 840 845 Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala 850 855 860 Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp 865 870 875 880 Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp 885 890 895 Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser 900 905 910 Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu 915 920 925 Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr 930 935 940 Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys 945 950 955 960 Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln 965 970 975 Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro 980 985 990 Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp 995 1000 1005 Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe 1010 1015 1020 Phe Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu 1025 1030 1035 Ser Ala Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn 1040 1045 1050 Gly Leu Gln Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg 1055 1060 1065 Tyr Ser Ser Asp Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp 1070 1075 1080 Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro 1085 1090 1095 Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln 1100 1105 1110 Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro 1115 1120 1125 His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln 1130 1135 1140 Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala 1145 1150 1155 Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln 1160 1165 1170 Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys 1175 1180 1185 Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln 1190 1195 1200 Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala 1205 1210

Claims

(S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 함유하는, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 항종양제.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제1항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인 항종양제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인 항종양제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 항종양제.
엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자에게 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 투여하는 공정을 포함하는 악성 종양 환자의 치료 방법.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제5항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인 치료 방법.
제5항 또는 제6항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인 치료 방법.
제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 치료 방법.
엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제9항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.
제9항 또는 제10항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염.
(S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염의, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 사용.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제13항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인 사용.
제13항 또는 제14항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인 사용.
제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 사용.
(S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염의, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 의약을 제조하기 위한 사용.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제17항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인 사용.
제17항 또는 제18항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인 사용.
제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 사용.
(S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염 및 약학적으로 허용할 수 있는 담체를 포함하는, 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖는 EGFR을 발현하고 있는 악성 종양 환자를 치료하기 위한 의약 조성물.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제21항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인 의약 조성물.
제21항 또는 제22항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인 의약 조성물.
제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 의약 조성물.
하기 공정 (1) 내지 (2)를 포함하는, 악성 종양 환자에 있어서의 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법의 치료 효과를 예측하는 방법:
(1) 당해 환자로부터 채취된 생체 시료에 포함되는 EGFR 유전자의 변이 유무를 검출하는 공정, 및
(2) 상기 공정 (1)에 있어서의 검출의 결과, EGFR 유전자가 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖고 있는 경우, 당해 환자에 대한 당해 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측하는 공정.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제25항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인 방법.
제25항 또는 제26항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인 방법.
제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 방법.
하기 공정 (1) 내지 (3)을 포함하는, 악성 종양 환자의 치료 방법:
(1) 당해 환자로부터 채취된 생체 시료에 포함되는 EGFR 유전자의 변이의 유무를 검출하는 공정, 및
(2) 상기 공정 (1)에 있어서의 검출의 결과, EGFR 유전자가 엑손18의 G719X 변이, 엑손18의 E709X 변이 및 엑손21의 L861X 변이로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이를 갖고 있는 경우, 당해 환자에 대한 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측하는 공정, 및
(3) 상기 공정 (2)에 있어서 (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 유효 성분으로 하는 항종양제를 사용한 화학 요법이 충분한 치료 효과를 나타낼 가능성이 높다고 예측된 악성 종양 환자에게, (S)-N-(4-아미노-6-메틸-5-(퀴놀린-3-일)-8,9-디히드로피리미도[5,4-b]인돌리진-8-일)아크릴아미드 또는 그의 염을 투여하는 공정.
[X는 임의의 아미노산 잔기를 나타낸다.]
제29항에 있어서, 엑손18 변이가, G719A, G719S, G719C, E709K 및 E709A로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 변이인 방법.
제29항 또는 제30항에 있어서, 엑손21 변이가 L861Q인 방법.
제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, EGFR이 추가로 T790M 변이를 갖는 방법.