KR20190039672A - Ｂｔｋ 억제제로서의 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체 및 그것의 제조 방법 및 제약학적 조성물 - Google Patents

Ｂｔｋ 억제제로서의 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체 및 그것의 제조 방법 및 제약학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20190039672A
KR20190039672A KR1020187036605A KR20187036605A KR20190039672A KR 20190039672 A KR20190039672 A KR 20190039672A KR 1020187036605 A KR1020187036605 A KR 1020187036605A KR 20187036605 A KR20187036605 A KR 20187036605A KR 20190039672 A KR20190039672 A KR 20190039672A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
substituted
formula
compound
unsubstituted
ring
Prior art date
Application number
KR1020187036605A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102404759B1 (ko
Inventor
유추안 우
Original Assignee
쑤저우 시노벤트 파마슈티칼즈 씨오., 엘티디.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 쑤저우 시노벤트 파마슈티칼즈 씨오., 엘티디. filed Critical 쑤저우 시노벤트 파마슈티칼즈 씨오., 엘티디.
Publication of KR20190039672A publication Critical patent/KR20190039672A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102404759B1 publication Critical patent/KR102404759B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/444—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring heteroatom, e.g. amrinone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

본 출원은 식 (I)에 나타낸 것과 같은 신규한 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물, 및 그것의 입체이성질체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물을 개시한다. 이에 더불어, 본 출원은 추가로 화합물의 제조 방법, 발명의 화합물을 포함하는 제약학적 조성물 및 그 화합물의 용도를 개시한다.
Figure pct00084

Description

ＢＴＫ 억제제로서의 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체 및 그것의 제조 방법 및 제약학적 조성물
본 발명은 의료 화학의 기술분야에 속한 것이고, 특히 높은 선택성 및 양호한 약물동역학적 특성을 나타내는, BTK 억제제로서의 신규하고 강력한 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체, 뿐만 아니라 그것의 제조 방법 및 그것을 포함하는 제약학적 조성물을 포함한다.
단백질 키나아제는 500개가 넘는 단백질을 포함하여, 인간의 생물학적 효소들의 가장 큰 패밀리를 나타낸다. 특히, 티로신 키나아제의 경우, 티로신 잔기 상의 페놀성 작용기는 중요한 생체신호전달 효과를 발휘하기 위하여 인산화될 수 있다. 티로신 키나아제 패밀리의 구성원들은 세포 성장, 이동, 및 분화를 제어한다. 비정상적인 키나아제 활성은 암, 자가면역 질환, 및 염증성 질환을 포함하여 많은 인간 질환과 밀접하게 관련되는 것으로 설명되었다.
브루톤 티로신 키나아제(Bruton's tyrosine kinase)(BTK)는 세포질의 비-수용체 티로신 키나아제이고, TEC 키나아제 패밀리의 한 구성원이다(BTK, TEC, ITK, TXK, 및 BMX의 총 5개의 구성원을 포함함). BTK 유전자는 X-염색체 상에 Xq21.33-Xq22에서 위치하며 게놈 DNA의 37.5 kb에 걸쳐 총 19개의 엑손을 가진다.
BTK는 거의 모든 조혈 세포(T 세포 및 혈장 세포를 제외함)에서 발현되며, 특히 B 림프구의 발달, 분화, 신호전달 및 생존에 필수적인 역할을 한다. B 세포는 B 세포 수용체(BCR)를 통해 활성화되며, BTK는 BCR 신호전달 경로에서 중요한 역할을 한다. B 세포에서 BCR의 활성화는 BTK의 활성화를 유발하며, 그것은 계속해서 하류 포스포리파아제 C(PLC) 농도의 증가로 이어지고 IP3 및 DAG 신호전달 경로를 활성화한다. 이런 신호전달 경로는 세포 증식, 부착 및 생존을 촉진할 수 있다. BTK 유전자의 돌연변이는 X-연관 무감마글로불린혈증(XLA)으로서 알려져 있는, 희귀한 유전적 B 세포-특이적 면역결핍 질환을 초래할 것이다. 이 질환에서, BTK의 기능은 억제되어, B 세포의 생성 또는 성숙의 지연을 초래한다. XLA 질환에 걸린 남성들은 그들의 신체에 B 세포를 거의 갖지 않으며, 소수의 순환 항체를 가지고, 심각한 또는 심지어 치명적인 감염에 걸리기 쉽다. 이것은 BTK가 B 세포의 성장 및 분화에 매우 중요한 역할을 하는 것을 강하게 증명한다.
소분자 BTK 억제제는 BTK에 결합할 수 있고, BTK의 자가인산화(autophosphorylation)를 억제할 수 있으며, BTK의 활성화를 방지할 수 있다. 이것은 BCR 경로를 통한 신호 변환을 차단할 수 있고, B 림프종 세포의 증식을 억제할 수 있으며, 종양 세포의 부착을 파괴할 수 있고, 종양 세포의 세포자멸을 촉진하여 세포자멸을 유도할 수 있다. 이것은 B 세포-관련 암, 특히 B-세포 림프종 및 백혈병, 예컨대 비-호지킨 림프종(NHL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 및 재발성 또는 난치성 외투 세포(mantle cell) 림프종(MCL), 등에서 BTK가 매력적인 약물 표적이 되도록 한다.
B-세포 림프종 및 백혈병을 억제하는 것에 더불어, BTK 억제제는 또한 B 세포의 자가항체들 및 사이토킨들의 생성을 억제할 수 있다. 자가면역 질환에서, B 세포는 자가항원을 제공하고, T 세포의 전염증성 인자들의 활성화 및 선택을 촉진하며, 그것은 대다수의 항체을 생성하도록 B 세포를 활성화할뿐 아니라 조직 손상을 유발하고, 그로써 자가면역 반응을 촉발시킨다. T 세포와 B 세포의 상호작용은 피드백 조절 사슬을 구성하여, 제어되지 않은 자가면역 반응 및 악화된 조직병리학적 손상을 유발한다. 그러므로, BTK는 류머티스성 관절염, 전신 홍반성 루푸스(SLE), 및 알레르기성 질환(예컨대 식도염, 등과 같은 질환)과 같은 자가면역 질환의 치료를 위한 약물 표적으로서 작용할 수 있다.
이에 더불어, BTK 억제제는 화학요법제 또는 면역학적 관문(immunological checkpoint) 억제제와 조합되어 사용될 수 있어서, 임상 실험에서 다중 고형 종양에 더 나은 치료 효과를 나타낸다.
현재 시판되는 약물들 중에서, 이브루티닙(Ibrutinib)은 Pharmacyclics와 Johnson & Johnson에 의해 공동 개발된 비가역적인 BTK 억제제로, 외투 세포 림프종(MCL) 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)의 치료에 대해 각각 2013년 11월 및 2014년 2월에 FDA에 의해 승인받았다. 이브루티닙은 BTK의 시스테인상의 티올기와 반응하고 공유 결합을 형성함으로써 BTK 효소를 비활성화하고, 그로써 치료 효과를 달성하는 "돌파구"성 새로운 약물로서 FDA에 의해 지정되었다. 그러나, 이브루티닙은 투여 중에 쉽게 대사작용함(대사 효소들에 의해 다이하이드록시화 생성물로 산화성 대사작용하거나 또는 다른 티올-함유 효소들, 시스테인, 글루타티온, 등의 공격에 의해 비활성화됨)으로써, 치료 효과에 영향을 미친다. 임상에서 투여된 용량은 1일당 560 mg에 도달해야 했고, 그것은 환자에 대한 부담을 증가켰다. 이에 더불어, 이브루티닙은 또한 BTK 이외의 일부 키나아제들에 약간의 억제성 효과를 나타내고, 특히 EGFR의 억제는 발진, 설사 및 기타와 같은 보다 심각한 부작용을 유발할 수 있다.
본 발명은 관련된 질환의 치료를 위한 보다 효율적이고, 선택적이며, 양호한 약물동역학적 특성을 가지는 새로운 부류의 BTK 억제제로서 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체를 제공한다.
다음은 본 출원에서 상세하게 설명될 주제의 요약이다. 그러나, 그것이 청구범위의 범주를 제한하려고 의도되지 않는다.
본 발명자들은 단백질 키나아제 BTK의 효과적이고, 안전하며 고도로 선택적인 억제제인 신규한 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체의 부류를 개발하였다.
본 발명의 구체예는 신규한 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체를 제공한다. 시스테인과의 반응성을 변경시킴으로써 효능, 선택성 및 안전성을 개선하는, 표적과의 친화도를 개선하는 것은 바로 신규한 공유 억제제이다.
본 발명의 구체예는 또한 상기 유도체의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 구체예는 또한 상기 유도체를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 구체예는 또한 상기 유도체의 용도를 제공한다.
구체적으로, 본 발명의 구체예에서, 본 발명은 다음 식 (I)로 표시되는 신규한 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물을 제공한다:
Figure pct00001
상기 식 (I)에서,
n 및 m은 독립적으로 0, 1 또는 2로부터 선택되며;
L은 O, -C(O)NH-, -CH2-, S, S(O), NH 또는 S(O)2이고;
A는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되며, 그것의 부모 핵(parent nucleus) 및 L에 대한 부착 부위는 임의로 선택될 수 있고;
B는 독립적으로 치환된 또는 치환되지 않은 지방족 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되며, 그것의 L에 대한 부착 부위는 임의로 선택될 수 있고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 할로겐, 및 시아노로부터 선택되거나, 또는 R1 및 R2는 그것들이 부착되는 탄소 원자와 함께 3- 또는 4-원 탄소 고리를 형성하거나, 또는 R1 및 R2는 결합되어 옥소 기를 형성하며;
Y는 시아노, 식
Figure pct00002
또는
Figure pct00003
으로부터 선택되고;
R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 치환되지 않은 C1-C4 알킬, 하이드록시 치환된 C1-C4 알킬, C1-C4 알콕시 C1-4 알킬, 할로겐, 시아노, 또는 -(CH2)qN(RaRb)로부터 선택되며, 여기서 q는 1, 2, 3, 또는 4이고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, 및 치환되지 않은 C1-C4 알킬로부터 선택되며;
단, R1 및 R2 중 하나는 수소이고 다른 하나는 메틸일 때, Y는 시아노이고, A는 벤젠 고리이며, L은 O이고, m은 1이며 n은 2이고, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니며; R1 및 R2가 둘 다 수소일 때, A는 벤젠 고리이고, m은 1이며 n은 2이고, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 피리딘 고리가 아니며; R1 및 R2가 둘 다 수소일 때, A는 피리딘 고리이고, m은 1이며 n은 2이고, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니며; R1 및 R2가 둘 다 수소일 때, A는 벤젠 고리이고, L은 O이며, m은 1이고 n은 1이며, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명은 n과 m은 독립적으로 0, 1, 또는 2로부터 선택되고; L은 O, -C(O)NH-, -CH2-, NH 또는 S, 보다 바람직하게는 O, -C(O)NH-, 또는 NH인, 식 (I)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물을 제공한다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명은 식 (I)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물을 제공하는데, 이때 A는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되며, 그것의 부모 핵 및 L에 대한 부착 부위는 선택적으로 선택될 수 있고; B는 독립적으로 치환된 또는 치환되지 않은 지방족 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되며, 그것의 L에 대한 부착 부위는 선택적으로 선택될 수 있다.
치환된 벤젠 고리는 페닐 기상의 임의의 위치가 수소, 메틸, 메톡시, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡실 및 시아노 기로 구성되는 군으로부터 선택된 치환기로 선택적으로 치환되는 것을 의미하고; 바람직하게는 치환된 벤젠 고리는 플루오로 치환된 페닐 기, 또는 클로로 치환된 페닐 기, 보다 바람직하게는 2,4-다이플루오로페닐 기, 또는 4-클로로페닐 기이다.
치환되지 않은 헤테로아릴 고리는 푸란, 피롤, 티오펜, 옥사졸, 아이소옥사졸, 피라졸, 이미다졸, 티아졸, 아이소티아졸, 옥사다이아졸, 트라이아졸, 티아다이아졸, 테트라졸리움, 피리딘, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 또는 트라이아진을 의미하고; 치환된 헤테로아릴 고리는 임의의 위치(들)에서 수소, 메틸, 메톡실, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡실 및 시아노로 구성되는 군으로부터 선택된 임의의 치환기를 가지는 상기 기들을 의미하며; 보다 바람직하게, 치환된 피리딘은 클로로피리딘이고, 특히 바람직하게는 4-클로로-피리딘-2-일이다.
치환되지 않은 지방족 고리는 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로헵탄, 또는 사이클로옥탄을 의미하고; 치환된 지방족 고리는 임의의 위치(들)에서 수소, 메틸, 메톡실, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡시 및 시아노로 구성되는 군으로부터 선택된 임의의 치환기를 가지는 상기 기들을 의미한다.
치환되지 않은 헤테로고리형 고리는 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로피란, 테트라하이드로피롤, 피페리딘,
Figure pct00004
Figure pct00005
을 의미하고, 여기서 w는 0, 1 또는 2로부터 선택되며; 치환된 헤테로고리형 고리는 임의의 위치(들)에서 수소, 메틸, 메톡시, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡시 및 시아노로 구성되는 군으로부터 선택된 임의의 치환기를 가지는 상기 기들을 의미한다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명은 식 (I)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물을 제공하고, 식에서 바람직하게는, R1 및 R2는 둘 다 수소이거나 그것들 중 하나는 수소이고 다른 하나는 C1-C4 알킬 기(메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, 또는 t-부틸)이거나, 또는 R1 및 R2 는 그것들이 부착되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 기를 형성하고; 보다 바람직하게는, R1 및 R2는 둘 다 수소이거나, 또는 그것들 중 하나는 수소이고 다른 하나는 메틸이거나, 또는 R1 및 R2 는 그것들이 부착되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필 기를 형성하다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 본 발명은 다음 식 (II)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물을 제공한다:
Figure pct00006
상기 식 (II)에서,
L, A, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되고;
단, A가 벤젠 고리일 때, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 피리딘 고리가 아니며; A가 피리딘 고리일 때, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니다.
본 발명의 보다 바람직한 구체예에서, 본 발명에 의해 제공된 식 (II)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물은 다음 화합물들 중 하나이다:
Figure pct00007
또는
Figure pct00008
상기 식 (II-1) 또는 (II-2)에서 L, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되며;
단, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 피리딘 고리가 아니다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 본 발명은 식 (III)으로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물을 제공한다:
Figure pct00009
상기 식 (III)에서, L, A, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되고;
단, Y가 시아노 기일 때, A는 벤젠 고리이며, L은 O이고, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니다.
본 발명의 보다 바람직한 구체예에서, 본 발명에 의해 제공된 식 (III)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물은 다음 화합물들 중 하나이다:
상기 식 (III-1), (III-2), (III-3) 및 (III-4)에서, L, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되고;
단, Y가 시아노 기이고 L이 O일 때, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, 본 발명은 식 (IV)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물을 제공한다:
Figure pct00011
상기 식 (IV)에서, L, A, B, 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의된다.
본 발명의 보다 바람직한 구체예에서, 본 발명에 의해 제공된 식 (IV)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물은 다음 화합물들 중 하나이다:
Figure pct00012
상기 식 (IV-1) 또는 (IV-2)에서, L, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의된다.
본 발명의 보다 바람직한 구체예에서, 본 발명은 식 (I), (II), (II-1), (II-2), (III), (III-1), (III-2), (III-3), (III-4), (IV), (IV-1), 또는 (IV-2)의 화합물을 제공하며, 식에서 L은 O이고;
B는
Figure pct00013
이며,
Y는 -CN,
Figure pct00014
또는
Figure pct00015
이고; 식에서 R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로수소, 치환되지 않은 C1-C4 알킬, 하이드록시-치환된 C1-C4 알킬, C1-C4 알콕시 C1-C4 알킬, 할로겐, 시아노 또는 -(CH2)qN(RaRb)로부터 선택되며, 이때 q는 1, 2, 3, 또는 4이고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, 또는 치환되지 않은 C1-C4 알킬로부터 선택된다.
본 발명의 특히 바람직한 구체예에서, 본 발명에 의해 제공된 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물은 다음 화합물로부터 선택된 화합물이다:
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
본 발명의 구체예에서, 용어 "제약학적으로 허용되는 염"은 제약학적으로 허용되는 산 부가 염 또는 제약학적으로 허용되는 염기 부가 염을 나타낸다.
용어 "제약학적으로 허용되는 산 부가 염"은 다른 부작용 없이 유리 염기의 생물학적 효능을 보유할 수 있는 무기 산 또는 유기 산으로 형성된 염을 나타낸다. 무기 산 염으로는, 한정하는 것은 아니지만, 염산염, 하이드로브로마이드, 설페이트, 포스페이트, 등을 들 수 있고; 및 유기 산 염으로는, 한정하는 것은 아니지만, 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 글리콜레이트, 글루코네이트, 락테이트, 옥살레이트, 말레에이트, 석시네이트, 푸마레이트, 타르트레이트, 시트레이트, 글루타메이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 메탄설포네이트, p-톨루엔설포네이트 및 살리실레이트, 등을 들 수 있다. 이 염들은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.
용어 "제약학적으로 허용되는 염기 부가 염"은 다른 부작용 없이 유리 산의 생물학적 효능을 유지할 수 있는 염을 나타낸다. 이 염들은 유리 산에 무기 염기 또는 유기 염기를 첨가함으로써 제조된다. 무기 염기로부터 유래된 염들로는, 한정하는 것은 아니지만, 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘 염 등을 들 수 있다. 유기 염기로부터 유래되는 염으로는, 한정하는 것은 아니지만, 암모늄 염, 트라이에틸아민 염, 리신 염, 아르기닌 염, 등을 들 수 있다. 이 염들은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다.
발명의 구체예에서, 용어 "용매화물"은 용매와 본 발명의 화합물에 의해 형성된 착체를 나타낸다. 그것들은 용매에서 반응시키거나 용매로부터 침전시키거나 결정화함으로써 얻어진다. 예를 들어, 물로 형성된 착체는 "수화물"로서 언급된다.
본 발명의 구체예에서, 발명의 화합물은 하나 이상의 키랄 중심을 포함할 수 있고 상이한 광학 활성 형태로 있을 수 있다. 한 개의 키랄 중심을 포함할 때, 화합물은 그것의 거울상 이성질체를 포함한다. 본 발명은 이 두 개의 이성질체 및 그것들의 혼합물, 예컨대 라세미 혼합물을 다 포함한다. 거울상 이성질체는 당업계에 공지된 방법, 예컨대 결정화 및 키랄 크로마토그래피 등에 의해 분해될 수 있다. 식 (I)의 화합물이 하나 이상의 키랄 중심을 포함할 때, 부분입체 이성질체가 있을 수 있다. 본 발명의 구체예들은 부분입체 이성질체의 혼합물 뿐만 아니라 임의의 특이적 분해된 광학적으로 순수한 이성질체를 포함한다. 부분입체 이성질체는 결정화 및 제조용 크로마토그래피와 같이, 당업계에 공지된 방법에 의해 분해될 수 있다.
본 발명의 구체예에서, 전구약물은 부모 화합물이 공지의 아미노 보호기 또는 카르복시 보호기가 생리 조건 하에서 가수분해됨으로써 또는 효소 반응을 통해 방출됨으로써 얻어질 수 있는 것을 의미한다. 구체적인 전구약물 제조 방법은 Saulnier, MG; Frennesson, DB; Deshpande, MS; Hansel, S. B and Vysa, DM Bioorg. Med. Chem Lett. 1994, 4, 1985-1990. Greenwald, RB; Choe , YH; Conover, CD; Shum, K.; Wu, D.; Royzen, MJ Med. Chem. 2000, 43, 475를 참고할 수 있다.
제 2 측면으로, 본 발명은 상기 식 (I)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물의 제조 방법을 제공하며, 방법은
(1) 식 (V)의 화합물을 식 (VI)의 화합물과 반응시켜서 식 (VII)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00021
;
(2) 식 (VII)의 화합물을 가수분해시켜서 식 (VIII)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00022
;
(3) 식 (VIII)의 화합물로부터 보호기 PG를 제거하여 식 (IX)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00023
;
(4) 식 (IX)의 화합물을 식 (X)의 화합물과 반응시켜서 식 (I)의 화합물을 얻는 단계:
Figure pct00024
.
상기 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)에서 치환기 R1, R2, L, A, B, Y, 및 n 및 m은 식 (I)에 대해서와 같이 정의되고, PG는 아미노 보호기(적합한 아미노 보호기는 아실(예컨대 아세틸)을 포함함), 카바메이트(예컨대 2',2',2'-트라이클로로에톡시카르보닐, Cbz(벤질옥시카르보닐) 또는 BOC(삼차-부톡시카르보닐)) 및 아릴알킬(예컨대, Bn(벤질))이고, 이것은 가수분해에 의해(예를 들어, 다이옥산 중의 염화수소 용액 또는 다이클로로메탄 중의 트라이플루오로아세트산 용액과 같은 산을 사용하여) 또는 환원(예를 들어, 벤질 또는 벤질옥시카르보닐의 수소화분해 또는 아세트산에서 아연 환원성을 사용하여 2',2',2'-트라이클로로에톡시카르보닐의 환원성 제거)에 의해 제거될 수 있다. 다른 적합한 아미노 보호기는 트라이플루오로아세틸(-COCF3)(알칼리 촉매된 가수분해에 의해 제거될 수 있음), 벤질옥시카르보닐 또는 삼차-부톡시카르보닐 기를 포함하며, (T. W. Greene 'Protective Groups in Organic Synthesis' (4th edition, J. Wiley and Sons, 2006)을 언급할 수 있음), R3은 C1-C4 알킬 기(바람직하게는 에틸)이고, X는 클로로, 브로모 또는 하이드록실이다.
본 발명의 구체예에서, 본 발명은 상기 식 (I)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물의 제조 방법을 제공하며, 이때 식 (VI)의 화합물이 하기와 같이 얻어질 수 있다:
Figure pct00025
여기서, 상기 화합물에서 치환기 R4는 C1-C4 알킬(바람직하게는 메틸)이고; X는 클로로 또는 브로모, 바람직하게는 클로로이며; R3은 C1-C4 알킬(바람직하게는 에틸)이고; L, A 및 B는 식 (I)의 화합물에 대한 것과 같이 정의된다.
보다 구체적으로, 다음의 합성 경로가 이어질 수 있다:
Figure pct00026
본 발명의 구체예에서, 본 발명은 상기 식 (I)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물의 제조 방법을 제공하며, 이때 식 (V)의 화합물이 다음 방법을 참조함으로써 제조될 수 있다:
Figure pct00027
또는
Figure pct00028
본 발명의 구체예에서, 본 발명은 또한, 한정하는 것은 아니지만 다음과 같은, 상기 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물의 합성을 위한 중간체 화합물을 제공하며:
Figure pct00029
;
여기서, Boc는 삼차-부톡시카르보닐 기이고, Cbz는 벤질옥시카르보닐 기이다.
제 3 측면으로, 본 발명은 본 발명의 상기 구체예들에 따라 상기 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물들의 하나 이상, 또는 그것들의 입체이성질체, 호변체, 용매화물 또는 제약학적으로 허용되는 염의 유효량을 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 제약학적 조성물은 추가로 제약학적으로 허용되는 보조 물질을 포함한다.
본 발명의 제약학적 조성물은 고체, 반고체, 액체 또는 기체성 제형, 예컨대 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌제, 주사제, 흡입제, 겔, 미소구체 및 에어로졸로 제형될 수 있다.
본 발명의 제약학적 조성물은 제약 분야에 잘 알려져 있는 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition (Philadelphia College of Pharmacy and Science, 2000) 참조.
본 발명의 제약학적 조성물의 투여 경로는, 한정하는 것은 아니지만, 경구, 국소, 경피, 근육내, 정맥내, 흡입, 비경구, 혀밑, 직장, 질, 및 비강내 투여를 포함한다. 예를 들어, 경구 투여에 적합한 투여 형태는 캡슐, 정제, 과립, 및 시럽, 등을 포함한다. 이들 제제에 함유된 본 발명의 식 (I)의 화합물은 고형 분말 또는 과립; 수성 또는 비-수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 유-중-수 에멀션 (water in oil emulsion) 또는 수-중-유 에멀션 (oil in water emulsion) 등일 수 있다. 상기 투여 형태는 활성 화합물 및 하나 이상의 담체 또는 부형제로부터 종래의 제약 방법을 통해 제조될 수 있다. 담체는 활성 화합물 또는 다른 보조 물질과 부합될 필요가 있다. 고형 제형의 경우, 통상적인 비-독성 담체는, 한정하는 것은 아니지만, 만니톨, 락토오스, 전분, 스테아르산 마그네슘, 셀룰로오스, 글루코오스, 수크로오스, 등을 들 수 있다. 액체 제제용 담체로는, 한정하는 것은 아니지만, 물, 생리 식염수, 수성 덱스트로오스, 에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 등을 들 수 있다. 활성 화합물은 상기 담체와 용액 또는 현탁액을 형성할 수 있다. 투여의 구체적인 방식 및 투여 형태는 화합물 자체의 물리화학적 특성, 뿐만 아니라 치료되는 질환의 중증도, 등에 따라 좌우된다. 당업자들은 그들 자신의 지식과 조합하여 상기 인자들을 기반으로 구체적인 투여 경로를 측정할 수 있다. 예를 들어, Li Jun, "Clinical Pharmacology", People's Health Publishing House, 2008.06; Ding Yufeng, Disscussion on clinical dosage form factors and drug rational use in hospital, Herald of Medicine, 26 (5), 2007; Howard C. Ansel, Loyd V. Allen, Jr., Nicholas G. Popovich (Eds.), Jiang Zhiqiang (Trans.), "Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems", China Medical Science Press, 2003.05 참조.
본 발명의 구체예들에서 제약학적 조성물은 단위 투여량당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 제공될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은 활성 성분의 일일 투여량 또는 하위 용량, 또는 그것의 적절한 분획을 함유하는 것들이다. 그러므로, 그러한 단위 용량은 하루에 1회 이상으로 투여될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은, 상기 본원에서 기술된 것과 같이, 일일 용량 또는 하위 용량(하루에 1회 이상의 투여), 또는 그것의 적절한 분획을 함유하는 것들이다.
본 발명의 구체예들에 따른 제약학적 조성물은 의학적 실시 가이드라인에 따르는 방식으로 제형화되고, 정량되며, 투여된다. 본 발명의 구체예들에 따르는 화합물의 "치료적 유효량"은 치료되는 특정 조건, 치료되는 개체, 질병의 원인, 약물의 표적, 및 투여 방식 등에 의해 결정된다. 일반적으로, 비경구 투여를 위한 용량은 1 내지 200 mg/kg일 수 있고, 경구 투여를 위한 용량은 1 내지 1000 mg/kg일 수 있다.
본원에 제공된 유효 투여량의 범위는 본 발명의 범주를 제한하려는 의도는 아니며, 오히려 바람직한 투여 범위를 나타낸다. 그러나, 가장 바람직한 투여량은, 당업자들에 의해 인지되고 측정되는 것과 같이, 개별적인 대상체에 대해 조정될 수 있다(예컨대 Berkow, et al., The Merck Manuals, 16th ed., Merck, Rahway, NJ, 1992 참조).
제 4 측면으로, 본 발명은 BTK 매개된 질환을 예방 또는 치료하기 위한 약물의 제조에서의 상기 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 용매화물 또는 제약학적으로 허용되는 염의 사용을 제공한다.
본 발명은 BTK 활성의 억제 방법을 제공하며, 방법은 본 발명의 상기 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 용매화물 또는 제약학적으로 허용되는 염, 또는 본 발명의 상기 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 용매화물 또는 제약학적으로 허용되는 염을 포함하는 제약학적 조성물을 생물학적 시스템에 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, 생물학적 시스템은 효소, 세포, 또는 포유류이다.
본 발명은 또한 BTK에 의해 매개된 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공하며, 방법은 본 발명의 상기 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물들의 하나 이상 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 용매화물 또는 제약학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량 및 면역조절제, 면역학적 관문 억제제, 글루코코르티코이드, 비-스테로이드성 항-염증 약물, Cox-2 특이적 억제제, TNF-α 결합 단백질, 인터페론, 인터류킨 및 화학요법 약물로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 약물을 그것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 구체예에서, BTK 매개된 질환은 자가면역 질환, 염증성 질환, 이종발생성 면역 질병 또는 질환, 혈전 색전성 질환, 및 암을 포함한다. 일부 특정 구체예에서, 암은 B-세포 만성 림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 다발성 골수종, 외투 세포 림프종, 소형 림프구성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 또는 고형 종양을 포함한다. 일부 특정 구체예에서, 자가면역 질환 및 염증성 질환은 류머티스성 관절염, 골관절염, 소아기 관절염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발성 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 건선, 건선성 관절염, 크론병, 궤양성 대장염, 및 과민성 대장 증후군으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 특정 구체예에서, 이종발생성 면역 질병 또는 질환은 이식편대숙주 질환, 이식, 수혈, 알레르기성 반응, 알레르기, 제 1형 과민증, 알레르기성 결막염, 알레르기성 비염 또는 아토피 피부염을 포함한다.
본원에서 실험 데이터는 본 발명에 의해 제공된 상기 5-아미노피라졸릴 카르복사미드 화합물이 단백질 키나아제 BTK의 효과적이고 안전한 억제제임을 증명한다.
첨부되는 도면은 발명의 실례를 추가로 예시하기 위해 제공되고 명세서의 일부를 구성한다. 도면 및 발명의 상세한 설명을 참조로 발명의 구체예들의 다음의 명세는 발명의 구체예들을 제한하지 않는다.
도 1은 본 발명의 화합물이 생체내에서 미만성 거대 B-세포 림프종 세포주 TMD-8의 성장을 효과적으로 억제하고 대조군 화합물 이브루티닙과 동일한 항종양 효과를 나타내는 것을 보여준다.
본 발명의 구체예들이 아래에 상세하게 기술된다. 아래에 기술된 것과 같이 본원에 포함된 실험, 합성 방법, 및 중간체들의 특정 실례들은 본 출원을 예시하는 것이고 출원의 범주를 제한하려고 의도되지 않는 것이 인지되어야 한다. 충돌이 없는 경우에, 본 출원의 실시예 및 그 안의 특징들은 서로 임의로 조합될 수 있다는 것이 주지되어야 한다.
본 발명의 실험에 사용된 출발 물질은 시약 공급업체로부터 구매하거나 공지된 원료로부터 당업계에 잘 알려져 있는 방법에 의해 제조된다. 다르게 표시되지 않는 한, 다음의 조건들이 본원의 실시예들에 적용된다.
온도 단위는 섭씨(℃)이고; 실온은 18 내지 25℃로 정의된다;
유기 용매는 무수 황산 마그네슘 또는 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고; 감압 및 증가된 온도 하에 회전 증발기를 사용하여 회전 건조시킨다(예를 들어 15 mmHg, 30℃);
200 내지 300 메시 실리카겔이 플래시 칼럼 크로마토그래피에 대한 담체로서 사용되고 TLC는 박층 크로마토그래피를 나타낸다;
보통, 반응의 진행은 TLC 또는 LC-MS에 의해 모니터링된다;
최종 생성물의 확인은 핵 자기 공명(Bruker AVANCE 300, 300 MHz) 및 LC-MS(Bruker esquine 6000, Agilent 1200 시리즈)에 의해 수행된다.
실시예 1
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-400)의 제조
Figure pct00030
단계 1. 6-메틸피페리딘-3-올의 제조
5-하이드록시-2-메틸피리딘(1 g, 9 mmol)을 아세트산(20 mL)에 용해시킨 후 이산화 백금(0.25 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 수소 분위기에서 50 psi의 압력 하에 밤새도록 흔들어주었다. 용액을 여과하고 회전 건조시켜서 미정제 생성물인 6-메틸피페리딘-3-올을 얻었다.
단계 2. 벤질 5-하이드록시-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트의 제조
6-메틸피페리딘-3-올을 다이클로로메탄(100 mL)에 용해시킨 후 트라이에틸아민(7.5 당량)을 적하방식으로 첨가함 다음 벤질옥시카르보닐 클로라이드(2 g, 11.2 mmol)를 첨가하였다. 반응은 16시간 동안 교반된 후에 완료되었다. 반응 용액을 회전 건조시킨 후, 잔류물을 실리카 칼럼을 사용하여 정제하여 원하는 생성물인 벤질 5-하이드록실-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트(무색 오일, 60%)를 얻었다.
단계 3. 벤질 2-메틸-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트의 제조
벤질 5-하이드록시-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트(1 g, 3.96 mmol)를 다이클로로메탄(10 mL)에 용해시키고 0℃로 냉각하고, Dess-Martin 시약(1 당량)을 첨가하였다. 반응을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응을 포화 티오설페이트 수용액으로 조심스럽게 퀀칭한 후 물과 다이클로로메탄으로 희석하였다. 유기층을 보유하고, 포화 염수로 세척하고 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 유기층을 농축한 후, 그 결과 생성된 미정제 생성물인 벤질 2-메틸-5-옥소피피리딘-1-카르복실레이트를 추가의 정제 없이 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 4. 벤질(5E) -5-[(삼차-부톡시카르보닐)하이드라조노]-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트의 제조
벤질 2-메틸-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트(2.00 g, 8.09 mmol)를 테트라하이드로푸란(10 mL)에 용해시킨 후, t-부톡시카르보닐 하이드라진(1.2 당량)을 실온에서 첨가하였다. 반응을 2.5시간 동안 환류시켰다. 그런 후 용매를 증발시켜서 미정제 생성물인 벤질(5E)-5-[(삼차-부톡시카르보닐)하이드라조노]-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트를 백색 고체로서 얻었다.
단계 5. 벤질 5-[2-(삼차-부톡시카르보닐)하이드라지노]-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트의 제조
벤질(5E)-5-[(삼차-부톡시카르보닐)하이드라조노]-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트(1.2 g, 4 mmol)를 테트라하이드로푸란(10 mL)에 용해시킨 후, 나트륨 시아노보로하이드라이드(1 당량)을 실온에서 첨가한 후 테트라하이드로푸란(2 mL) 중의 p-톨루엔설폰산 일수화물(1 당량) 용액을 적하방식으로 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하에 농축한 후, 에틸 아세테이트(100 mL)를 첨가하고, 그것을 포화 중탄산 나트륨 수용액, 1N 수산화 나트륨 수용액, 물 및 포화 염수로 순서대로 세척하였고, 그런 후 무수 황산 나트륨 상에서 건조시켰다. 용액의 농축 후에, 미정제 생성물인 벤질 5-[2-(삼차-부틸옥시카르보닐)하이드라지노]-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트를 백색 고체로서 얻었다.
단계 6. 벤질 5-하이드라지노-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트의 제조
벤질 5-[2-(삼차-부틸옥시카르보닐)하이드라지노]-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트(1.78 g, 4.9 mmol)를 다이클로로메탄(10 mL)에 용해시킨 후, 트라이플루오로아세트산(5 mL)을 실온에서 적하방식으로 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하여 담황색의 미정제 생성물인 벤질 5-하이드라지노-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트를 얻었다.
단계 7. 메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트의 제조
메틸 4-하이드록시벤조에이트(6.5 g, 49 mmol), 5-클로로-2-플루오로피리딘(5.0 g, 33 mmol) 및 탄산 세슘(20 g, 65 mmol)을 N,N-다이메틸 포름아미드(50 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 110℃에서 12시간 동안 환류시키고, 반응의 완료를 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1)에 의해 모니터링하고, 용매를 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 에틸 아세테이트(250 mL)와 물(250 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 증발시켰다. 미정제 화합물을 정제하고 칼럼 크로마토그래피에 의해 분리하여 생성물인 메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트(9.0 g, 93%)를 얻었다.
MS: m/z 264.2 [M+1]
단계 8. 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산의 제조
메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트(6.5 g, 49 mmol)를 메탄올(100 mL) 및 물(5 mL)에 용해시켰다. 반응 시스템에 수산화 리튬(2.3 g)을 첨가하였다. 반응 용액을 45℃에서 12시간 동안 반응시키고, 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)를 사용하여 반응의 완료를 모니터링하고, 용매를 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 희석된 염산(100 mL, 1 M)에 첨가하여 pH를 7로 조정하였다. 이때 실질적인 양의 고체가 생성되었고, 그 고체를 여과하고 오븐 건조시켜서 생성물인 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산(6.5 g, 백색 고체, 84%)을 얻었다.
MS: m/z 250.1 [M+1]
단계 9. 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드의 제조
4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산(6.5 g, 23 mmol)을 티오닐 클로라이드(20 mL)에 첨가하였다. 반응 용액을 80℃에서 3시간 동안 반응시키고, 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)를 사용하여 반응의 완료를 모니터링하고, 용매를 회전 건조시켰다. 미정제 생성물인 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드(7 g, 황색 고체)를 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 10. 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(하이드록시)메틸렌)말로노니트릴의 제조
0℃의 조건에서, 말로노니트릴(3.72 g, 56.4 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(50 mL)에 용해시킨 후, 수소화 나트륨(3.6 g, 90 mmol, 60%)을 서서히 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응을 실온으로 가온시키는 한편 1시간 동안 교반한 후 0℃로 냉각시켰다. 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드(6 g, 22.2 mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(50 mL)에 용해시키고, 상기 반응 용액을 적하방식으로 서서히 첨가하였다. 적하 과정이 완료된 후, 반응 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)를 사용하여 반응의 완료를 모니터링하였고, 새로운 반점이 생성되었다. 반응 용액을 포화 염화 암모늄(100 mL)으로 퀀칭하고 EtOAc로 3회 추출하였다(100 mLx3). 유기 상을 포화 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 50:1과 섞어서(mash) 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(하이드록시)메틸렌)말로노니트릴(8.0 g, 담황색 고체, 82%)을 얻었다.
MS: m/z 298 [M+1]
단계 11. 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(에톡시)메틸렌)말로노니트릴의 제조
2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(하이드록시)메틸렌)말로노니트릴(5.0 g, 16.8 mmol)를 트라이에틸 오르토포르메이트(50 mL)에 첨가하고, 그 반응을 80℃로 가온시키면서 12시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)로 생성물의 생성을 표시하였다. 반응 용액을 여과하고, 여과물을 회전 건조시켜서 고체를 얻었고, 그것을 메탄올과 섞어서 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(에톡시)메틸렌)말로노니트릴(1.5 g, 백색 생성물, 27.7%)을 얻었다.
MS: m/z 326.0 [M+1]
단계 12. 벤질 5-(5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-4-시아노-1H-피라졸-1-일)-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트의 제조
2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(에톡시)메틸렌)말로노니트릴(1.0 g, 3.09 mmol), 벤질 5-하이드라지노-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트(1.28 g, 3.71 mmol) 및 트라이에틸아민(1.56 g, 15.5 mmol)을 에탄올(20 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 25℃에서 12시간 동안 반응시키고, 반응의 완료를 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)에 의해 모니터링하고, 반응을 물로 퀀칭하고 에틸 아세테이트(25 mL*3)로 추출하였다. 유기 상을 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 50:1로 2회 섞어서 생성물인 벤질 5-(5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-4-시아노-1H-피라졸-1-일)-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트(1.5 g, 88%)를 얻었다.
MS: m/z 555.2 [M+1]
단계 13. 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드의 제조
벤질 5-(5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-4-시아노-1H-피라졸-1-일)-2-메틸피페리딘-1-카르복실레이트(750 mg, 1.35 mmol)을 90% 농축된 황산에(10분에 걸쳐) 실온에서 첨가하고, 15분 동안 교반한 후, 반응을 30℃로 24시간 동안 가온하였다. 반응이 완료된 것을 감지하기 위하여 박층 크로마토그래피(다이클로로메탄:메탄올 = 10:1)를 사용하였고, 반응 용액을 서서히 수성 암모니아(50 ml)에 붓고, pH=7로 조정하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다 (30 mL*3). 유기 상을 조합하여 포화 식염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 칼럼 상에서 정제하여 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(480 mg, 78%, 담황색 고체)를 얻었다.
MS: m/z 439.2 [M+1]
단계 14. 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-((3R,6S)-1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드의 제조
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(50 mg, 0.113 mmol)를 N,N-다이메틸포름아미드(5 mL)에 용해시킨 후, 탄산 세슘(110 mg, 0.342 mmol) 및 시아노겐 브로마이드(12.5 mg, 0.113 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피를 수행하여 반응의 완료를 감지하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)에 붓고, 물로 세척하고(20 mL*3), 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 건조한 상태로 증발시켰다. 미정제 생성물을 제조용 플레이트(다이클로로메탄 : 메탄올 = 50:1)에 의해 정제하여 생성물인 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(15 mg, 15%)를 얻었다.
MS: m/z 452.2 [M+1]
실시예 2
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-((3R,6S)-1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-401)의 제조
Figure pct00031
실시예 2의 화합물을 실시예 1의 단계 14로부터의 생성물의 키랄 분해로부터 얻을 수 있다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% metanol, 70 mL/분). MS: m/z 452.2 [M+1]
실시예 3
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-((3S,6R)-1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-402)의 제조
Figure pct00032
실시예 3의 화합물을 실시예 1의 단계 14로부터의 생성물의 키랄 분해로부터 얻을 수 있다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분). MS: m/z 452.2 [M+1]
실시예 4
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-((3R,6R)-1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-403)의 제조
Figure pct00033
실시예 4의 화합물을 실시예 1의 단계 14로부터의 생성물의 키랄 분해로부터 얻을 수 있다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분). MS: m/z 452.2 [M+1]
실시예 5
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-((3S,6S)-1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-404)의 제조
Figure pct00034
실시예 5의 화합물을 실시예 1의 단계 14로부터의 생성물의 키랄 분해로부터 얻을 수 있다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분). MS: m/z 452.2 [M+1]
실시예 6
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-405)의 제조
Figure pct00035
단계 1. 메틸 4-하이드록시부티레이트의 제조
다이하이드로푸란-2(3H)-온(100 g, 1.163 mol) 및 트라이에틸아민(460 g, 4.65 mol)을 메탄올 용액(1 L)에 첨가하고, 반응을 60℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)를 사용하여 반응의 완료를 감지하였고, 반응 용액을 회전 건조시켜서 메틸 4-하이드록시부티레이트(120 g, 87.6%, 황색 액체)을 얻었고, 그것을 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 2. 메틸 4-옥소부티레이트의 제조
메틸 4-하이드록시부티레이트(120 g, 1.02 mol)를 다이클로로메탄 용액(1.2 L)에 첨가한 후 피리디늄 클로로크로메이트(330 g, 1.53 mol)를 상기 반응 용액에 첨가하고, 반응을 실온에서 12시간 동안 수행하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)를 사용하여 반응이 완료된 것을 감지하였다. 반응 용액을 셀라이트를 통해 여과하고 회전 건조시켜서 메틸 4-옥소부티레이트(60 g, 50%, 황색 액체)를 얻었고, 그것을 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 3. 메틸 4-하이드록시-5-니트로발레레이트의 제조
얼음 수조에서, 메틸 4-옥소부티레이트(60 g, 0.46 mol), 니트로메탄(42 g, 0.69 mol), 테트라하이드로푸란(300 mL), 및 삼차-부탄올(300 mL)을 반응 플라스크에 첨가하였다. 그런 후 칼륨 삼차-부톡사이드(5 g)를 상기 반응 시스템에 서서히 첨가하고, 온도를 실온으로 올리고, 반응을 2시간 동안 수행하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)를 사용하여 반응이 완료된 것을 감지하고, 물(30 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하였다. 용매를 회전 건조시켰다. 물(300 mL) 및 에틸 아세테이트(300 mL)를 액체 분리를 위해 첨가하였다. 유기 상을 포화 염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 회전 건조시켜서 미정제 메틸 4-하이드록시-5-니트로발레레이트(45 g, 담황색 유성 액체)를 얻었고, 그것을 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 4. 5-하이드록시피페리딘-2-온의 제조
메틸 4-하이드록시-5-니트로펜타노에이트(45 g, 0.23 mol) 및 탄소 상의 팔라듐(2.1 g)을 메탄올 용액(500 mL)에 첨가하고, 반응 용액을 60℃에서 H2 하에서 24시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)를 사용하여 반응의 완료를 감지하였다. 반응 용액을 셀라이트를 통하여 여과하고, 여과물을 회전 건조시켜서 5-하이드록시피페리딘-2-온(10 g, 황색 고체, 38 %)을 얻었고, 그것을 직접 다음 반응에 사용하였다.
단계 5. 1-벤질-5-(벤질옥시)피페리딘-2-온의 제조
5-하이드록시피페리딘-2-온(10 g, 0.1 mol)을 다이메틸 설폭사이드(100 mL)에 실온에서 첨가한 후, 수소화 나트륨(10 g, 0.25 mol)을 상기 반응 시스템에 서서히 첨가하였다. 반응이 완료된 후, 벤질 브로마이드(43.5 g, 0.25 mol)를 반응 용액에 첨가하고, 밤새도록 교반하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)를 사용하여 반응이 완료된 것을 감지하였다. 반응 시스템에 포화 수성 염화 암모늄(100 mL)을 첨가하여 반응을 퀀칭하였다. 반응을 EtOAc로 3회 추출하고(100 mL*3), 포화 염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 회전 건조시키고, 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 1-벤질-5-(벤질옥시)피페리딘-2-온(16 g, 황색 고체, 54%)을 얻었다.
단계 6. 4-벤질-6-(벤질옥시)-4-아자스피로[2.5]옥탄의 제조
1-벤질-5-(벤질옥시)피페리딘-2-온(15 g, 50 mmol)을 질소 분위기의 보호 하에 -78℃에서 무수 테트라하이드로푸란(150 mL)에 용해시킨 후, 에틸 마그네슘 브로마이드(150 mL)를 반응 플라스크에 서서히 적하방식으로 첨가하였다. 적하 과정이 완료된 후에, 테트라프로필 티타네이트(45 g, 150 mmol)를 상기 반응 시스템에 첨가하였다. 첨가가 완료된 후에, 반응을 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응을 포화 수성 염화 암모늄(100 ml)을 반응 시스템에 첨가함으로써 퀀칭하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고(100 mL*3), 포화 염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 회전 건조시키고, 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 4-벤질-6-(벤질옥시)-4-아자스피로[2.5]옥탄(5.1 g, 황색 고체, 31%)을 얻었다.
단계 7. 4-아자스피로[2.5]옥트-6-올의 제조
4-벤질-6-(벤질옥시)-4-아자스피로[2.5]옥탄(5.5 g, 18 mmol) 및 탄소 상의 팔라듐(2 g, 1.8 mmol)을 염화 수소(2 mL) 중의 메탄올(200 mL) 용액에 첨가하였다. 반응 용액을 H2 하에서 60℃에서 48시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응 용액을 셀라이트를 통하여 여과하고, 여과물을 회전 건조시켜서 4-아자스피로[2.5]옥트-6-올(2.5 g, 황색 고체)을 얻었고, 그것을 직접 다음 단계에 사용하였다.
단계 8. 벤질 6-하이드록시-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트의 제조
4-아자스피로[2.5]옥트-6-올(2.5 g, 21 mmol) 및 중탄산 나트륨(3.8 g, 45 mmol)을 테트라하이드로푸란(100 mL) 용액에 첨가한 후, 벤질옥시카르보닐 클로라이드(4.25 g, 25 mmol)를 상기 반응 시스템에 적하 방식으로 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 48시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응 용액을 추출하고, 여과물을 회전 건조시키고 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 벤질 6-하이드록시-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(4.2 g)를 얻었다.
단계 9. 벤질 6-옥소-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트의 제조
벤질 6-하이드록시-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(4.2 g, 16 mmol) 및 2-요오독시벤조산(6.7 g, 24 mmol)을 아세톤(10 mL) 용액에 첨가하였다. 그런 후 반응 용액을 60℃로 가온하고 12시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하고, 반응 용액을 추출하고, 여과물을 회전 건조시키고 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 벤질 6-옥소-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(3.6 g, 85%)를 얻었다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.34-7.35(m, 5H), 5.15(s, 2H), 4.07(s, 2H), 2.55-2.58(m, 2H), 1.95-1.98(m, 2H), 1.09-1.11(m, 2H), 0.85-0.86(m, 2H).
단계 10. 벤질(E)-6-(2-(삼차-부톡시카르보닐)하이드라조노)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트의 제조
벤질 6-옥소-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(3.6 g, 13.9 mmol) 및 삼차-부톡시카르보닐 하이드라진(1.98 g, 15 mmol)을 테트라하이드로푸란(50 mL) 용액에 첨가하였다. 반응 용액을 70℃로 가온시키고 2시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응 용액을 추출하고, 여과물을 회전 건조시키고 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 벤질(E) -6-(2-(삼차-부톡시카르보닐)하이드라조노)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(5.0 g, 90%)를 얻었다.
단계 11. 벤질 6-(2-(삼차-부톡시카르보닐)하이드라지노)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트의 제조
벤질(E)-6-(2-(삼차-부톡시카르보닐)하이드라조노)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(5.0 g, 13.4 mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.4 g, 20 mmol)를 테트라하이드로푸란(100 mL) 용액에 첨가한 후, p-톨루엔설폰산(3.8 g, 20 mmol)을 적하방식으로 상기 반응 시스템에 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 36시간 동안 반응되도록 놓아두었다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응 용액을 추출하고, 여과물을 회전 건조시키고 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 벤질 6-(2-(삼차-부톡시카르보닐)하이드라지노)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(4.2 g, 80.4%)를 얻었다.
단계 12. 벤질 6-하이드라지노-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트의 제조
벤질 6-(2-(삼차-부톡시카르보닐)하이드라지노)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(4.2 g, 11 mmol)를 염화수소/에틸 아세테이트(50 mL)의 용액에 첨가하였다. 반응을 실온에서 12시간 동안 수행하고, 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응 용액을 추출하고, 여과물을 회전 건조시키고 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 벤질 6-하이드라지노-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(3.5 g)를 얻었다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.21-7.35(m, 10H), 4.46-4.54(m, 2H), 3.89-3.93(m, 1H), 3.78-3.81(m, 1H), 3.68-3.73(m, 1H), 2.86-2.90(m, 1H), 2.63-2.68(m, 1H), 2.08-2.12(m, 1H), 1.57-1.85(m, 2H), 1.24-1.29(m, 1H), 0.65(s, 2H).0.41-0.44(m, 2H)
단계 13. 메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트의 제조
메틸 4-하이드록시벤조에이트(6.5 g, 49 mmol), 5-클로로-2-플루오로피리딘(5.0 g, 33 mmol) 및 탄산 세슘(20 g, 65 mmol)을 N,N-다이메틸 포름아미드(50 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 110℃에서 12시간 동안 환류시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하고, 용매를 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 에틸 아세테이트(250 mL)와 물(250 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 건조상태로 증발시켰다. 미정제 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 생성물인 메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트(9.0 g, 93%)를 얻었다.
MS: m/z 264.2 [M+1]
단계 14. 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산의 제조
메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트(6.5 g, 49 mmol)를 메탄올(100 mL) 및 물(5 mL)에 용해시켰다. 그런 후 수산화 리튬(2.3 g)을 반응 시스템에 첨가하였다. 반응 용액을 45℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 용매를 회전 건조시켰다. 미정제 화합물에 희석된 수성 염산(100 mL, 1 M)을 첨가하여 pH = 7로 하였다. 이때 실질적인 양의 고체가 생성되었고, 고체를 여과하고 오븐 건조시켜서 생성물 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산(6.5 g, 백색 고체, 84%)을 얻었다.
MS: m/z 250.1 [M+1]
단계 15. 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드의 제조
4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산(6.5 g, 23 mmol)을 다이클로로설폭사이드(20 mL)에 첨가하고, 반응 용액을 80℃에서 3시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 용매를 회전 건조시키고 미정제 생성물인 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드(7 g, 황색 고체)를 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 16. 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(하이드록시)메틸렌)말로노니트릴의 제조
말로노니트릴(3.72 g, 56.4 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(50 mL)에 0℃에서 용해시킨 후, 수소화 나트륨(3.6 g, 90 mmol, 60%)을 서서히 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응을 실온으로 가온시키고 1시간 동안 교반한 후, 0℃로 냉각하였다. 무수 테트라하이드로푸란(50 mL)에 용해시킨 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드(6 g, 22.2 mmol)를 상기 반응 용액에 적하방식으로 서서히 첨가하였다. 적하 과정이 완료된 후, 반응 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였고, 새로운 반점이 생성되었다. 반응 용액을 포화 수성 염화암모늄(100 mL)으로 퀀칭하고, EtOAc로 3회 추출하였다(100 mL*3). 유기 상을 포화 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 50:1과 섞어서 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(하이드록시)메틸렌)말로노니트릴(8.0 g, 담황색 고체, 82%)을 얻었다.
MS: m/z 298 [M+1]
단계 17. 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(에톡시)메틸렌)말로노니트릴의 제조
2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(하이드록시)메틸렌)말로노니트릴(5.0 g, 16.8 mmol)을 트라이에틸 오르토포르메이트(50 mL)에 첨가하였다. 반응을 80℃로 가온시키고 12시간 동안 교반하였다. 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)는 생성물이 생성되었는지를 나타냈다. 반응 용액을 여과하고, 여과물을 회전 건조시켰다. 그 결과 생성된 고체를 메탄올과 섞어서 2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(에톡시)메틸렌)말로노니트릴(1.5 g, 백색 생성물, 27.7%)을 얻었다.
MS: m/z 326.0 [M+1]
단계 18. 벤질 6-(5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-4-시아노-1H-피라졸-1-일)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트의 제조
2-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)(에톡시)메틸렌)말로노니트릴(1.0 g, 3.09 mmol), 벤질 6-하이드라지노-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(1.28 g, 3.71 mmol) 및 트라이에틸아민(1.56 g, 15.5 mmol)을 에탄올(20 mL)에 용해시켰다. 반응 용액을 25℃에서 12시간 동안 반응시켰고, 박층 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 2:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였고 반응을 물을 첨가하여 퀀칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다(25 mL*3). 유기 상을 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 50:1과 2회 섞어서 생성물인 벤질 6-(5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-4-시아노-1H-피라졸-1-일)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(1.5 g, 88%)를 얻었다.
MS: m/z 555.2 [M+1]
단계 19. 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드의 제조
벤질 6-(5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-4-시아노-1H-피라졸-1-일)-4-아자스피로[2.5]옥탄-4-카르복실레이트(750 mg, 1.35 mmol)를 90% 농축된 황산에 실온에서 첨가하고(10분에 걸쳐), 15분 동안 교반한 후, 반응 시스템을 30℃로 가온시키고 24시간 동안 반응시켰다. 박층 크로마토그래피(다이클로로메탄:메탄올 = 10:1)를 사용하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응 용액을 수성 암모니아(50 ml)에 서서히 붓고 pH = 7로 조정하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다 (30 mL*3). 유기 상을 조합하여 포화 염수(30 mL)로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 회전 건조시켰다. 미정제 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(480 mg, 78%, 담황색 고체)를 얻었다.
MS: m/z 439.2 [M+1]
단계 20. 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-H-피라졸-4-카르복사미드의 제조
5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(50 mg, 0.113 mmol)를 N,N-다이메틸포름아미드(5 mL)에 용해시킨 후, 탄산 세슘(110 mg, 0.342 mmol) 및 시아노겐 브로마이드(12.5 mg, 0.113 mmol)를 첨가하였다. 반응 용액을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 박층 크로마토그래피를 수행하여 반응이 완료되었는지를 감지하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(50 mL)에 붓고 물(20 mL*3)로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 건조상태로 증발시켰다. 미정제 생성물을 제조용 플레이트(다이클로로메탄:메탄올 = 50:1)에 의해 정제하여 생성물인 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(15 mg, 15%)를 얻었다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.12(s, 1H), 7.66-7.69(dd, J1=2.4 Hz, J2=8.4 Hz 2H), 7.56-7.58(d, J=8Hz, 2H), 7.21-7.23(d, J=8Hz, 2H), 6.92-6.94(d, J=8Hz, 1H), 5.61(s, 1H), 5.19-5.30(m, 2H), 4.19-4.25(m, 1H), 3.52-3.66(m, 2H), 2.34-2.45(m, 2H), 2.19(s, 1H), 1.25-1.30(m, 1H), 1.15-1.20(m, 1H), 0.78-0.89(m, 2H), 0.66-0.71(m, 1H).
MS: m/z 446.2 [M+1]
실시예 7
(E)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-(4-하이드록시부트-2-에노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-406)의 제조
Figure pct00036
실시예 6의 단계 19로부터의 생성물을 다음 단계에 의해 실시예 7의 화합물을 제조하기 위한 출발 물질로서 사용하였다:
단계 1. (E)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-(4-하이드록시부트-2-에노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드의 제조
4-하이드록시-2-부테노산(100 mg, 0.94 mmol), 1-하이드록시벤조트라이아졸(280 mg, 0.72 mmol), 1-에틸-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 염산염(260 mg, 0.72 mmol) 및 트라이에틸아민(160 mg, 1.44 mmol)을 다이클로로메탄(2 mL)에 용해시키고 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그런 후 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(100 mg, 0.226 mmol)를 상기 반응 용액에 첨가하고, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. TLC를 사용하여 반응의 완료를 감지하였다. 반응을 감압 하에 건조 상태로 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL*3)에 용해시키고, 물(30 mL*3)로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 건조 상태로 증발시켰다. 미정제 생성물을 제조용 플레이트(다이클로로메탄:메탄올 = 10:1) 상에서 정제하여 생성물인 (E)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-(4-하이드록시부트-2-에노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(17 mg, 15%)를 얻었다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.17(s, 1H), 7.68-7.69(d, J=4 Hz, 1H), 7.36-7.57(m, 2H), 7.24(brs., 2H), 6.87-6.94(m, 2H), 6.37-6.43(m, 1H), 5.75-5.79(m, 1H), 4.66-4.70(m, 1H), 3.73-4.06(m, 2H), 3.28-3.32(m, 1H), 2.55-2.58(m, 1H), 2.11-2.21(m, 2H), 1.18-1.35(m, 2H), 1.15-1.16(brs, 1H), 0.72-0.79(m, 2H).
MS: m/z 523.2 [M+1]
실시예 8
1-(4-아크릴로일-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-407)의 제조
Figure pct00037
실시예 6의 단계 19로부터의 반응 생성물을 다음 단계에 의하여 실시예 8의 화합물을 제조하기 위한 출발 물질로서 사용하였다:
단계 1. 1-(4-아크릴로일-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드의 제조
아크릴산(8 mg, 0.113 mmol)을 다이클로로메탄(2 mL)에 용해된 2-(7-아조벤조트라이아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(65 mg, 0.171 mmol) 및 트라이에틸아민(35 mg, 0.342 mmol)에 첨가하고, 15분 동안 교반하였다. 그런 후, 5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(50 mg, 0.113 mmol)를 상기 반응 용액에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. TLC를 사용하여 반응의 완료를 감지하였다. 반응을 감압 하에 건조 상태로 증발시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트(20 mL*3)에 용해시키고, 물(30 mL*3)로 세척하고, 무수 황산 나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 건조 상태로 증발시켰다. 미정제 생성물을 제조용 HPLC에 의해 정제하여 생성물인 1-(4-아크릴로일-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(8 mg, 적색 고체)를 얻었다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 8.17(s, 1H), 7.68-7.69(d, J=4 Hz, 1H), 7.36-7.57(m, 2H), 7.24(brs., 2H), 6.87-6.94(m, 2H), 6.37-6.43(m, 1H), 5.75-5.79(m, 1H), 4.66-4.70(m, 1H), 3.73-4.06(m, 2H), 3.28-3.32(m, 1H), 2.55-2.58(m, 1H), 2.11-2.21(m, 2H), 1.18-1.35(m, 2H), 1.15-1.16(brs, 1H), 0.72-0.79(m, 2H).
MS: m/z 493.2 [M+1]
실시예 9
5-아미노-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-408)의 제조
Figure pct00038
실시예 9의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.47-7.49(dd, J1=8 Hz, J2=8.4 Hz 2H), 7.08-7.14(m, 1H), 6.87-7.02(m, 4H), 5.56(s, 1H), 5.13-5.16(s, 2H), 4.17-4.22(m, 1H), 3.60-3.66(m, 1H), 3.48-3.51(m, 1H), 2.34-2.41(m, 2H), 2.15-2.17(s, 1H), 1.26-1.30(m, 1H), 1.14-1.19(m, 1H), 0.78-0.88(m, 2H), 0.66-0.70(m, 1H).
MS: m/z 465.2 [M+1]
실시예 10
(E)-5-아미노-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1-(4-(4-하이드록시부트-2-에노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-409)의 제조.
Figure pct00039
실시예 10의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 7과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.49-7.51(d, J=8 Hz, 2H), 7.07-7.18(m, 1H), 7.69-7.01(m, 3H), 6.87-6.94(m, 2H), 5.74(s, 2H), 5.16(s, 1H), 4.62(brs., 1H), 4.40(s, 2H), 3.93(s, 1H), 3.22(m, 1H), 2.14-2.17(d, J=12 Hz, 2H), 1.99-2.00(m, 1H), 1.36-1.42(m, 2H), 1.16-1.21(m, 1H), 0.69-0.73(m, 2H).
MS: m/z 524.4 [M+1]
실시예 11
1-(4-아크릴로일-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-5-아미노-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-410)의 제조
Figure pct00040
실시예 11의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 8과 유사한 방법에 의해 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 7.46-7.49(d, J=12Hz, 2H), 7.08-7.18(m, 1H), 6.99-7.01(m, 2H), 6.42-6.43(d, J=4 Hz, 1H), 5.63-5.77(brs., 1H), 5.62(s, 2H), 5.09(brs., 2H), 4.64(m, 1H), 3.91(m, 1H), 3.24(m, 1H), 2.57(m, 1H), 2.01-2.18(m, 2H), 1.31-1.40(m, 1H), 1.22-1.24(m, 1H), 1.12-1.18(m, 1H), 0.68-0.77(m, 2H).
MS: m/z 494.3 [M+1]
실시예 12
(R)-5-아미노-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-411) 및 (S)-5-아미노-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-412)의 제조
Figure pct00041
실시예 12의 화합물들을 실시예 9의 생성물의 키랄 분해로부터 얻었다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분).
WS-411 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.48(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.15-7.09(m, 1H), 7.02-6.95(m, 3H), 6.92-6.88(m, 1H), 5.75(s, 2H), 5.29(s, 2H), 4.32-4.26(m, 1H), 3.65-3.52(m, 2H), 2.42-2.30(m, 2H), 2.18-2.15(m, 1H), 1.19-1.14(m, 1H), 0.87-0.67(m, 4H).
MS: m/z 465.4 [M+H]
WS-412 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.48(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.15-7.09(m, 1H), 7.02-6.95(m, 3H), 6.92-6.88(m, 1H), 5.75(s, 2H), 5.29(s, 2H), 4.32-4.26(m, 1H), 3.65-3.52(m, 2H), 2.42-2.30(m, 2H), 2.18-2.15(m, 1H), 1.19-1.14(m, 1H), 0.87-0.67(m, 4H).
MS: m/z 465.4 [M+H]
실시예 13
(R)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-413) 및 (S)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1-(4-시아노-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-414)의 제조
Figure pct00042
실시예 13의 화합물들을 실시예 6의 생성물의 키랄 분해로부터 얻었다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분).
WS-413 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.12(s, 1H), 7.69-7.67(m, 1H), 7.57(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.22(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.93(d, J=8.8 Hz, 1H), 5.60(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.25-4.20(m, 1H), 3.67-3.48(m, 2H), 2.42-2.35(m, 2H), 2.19-2.16(m, 1H), 1.30-1.26(m, 1H), 1.21-1.16(m, 1H), 0.90-0.79(m, 2H), 0.71-0.67(m, 1H).
MS: m/z 464.4 [M+H]
WS-414 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.12(s, 1H), 7.69-7.67(m, 1H), 7.57(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.22(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.93(d, J=8.8 Hz, 1H), 5.60(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.25-4.20(m, 1H), 3.67-3.48(m, 2H), 2.42-2.35(m, 2H), 2.19-2.16(m, 1H), 1.30-1.26(m, 1H), 1.21-1.16(m, 1H), 0.90-0.79(m, 2H), 0.71-0.67(m, 1H).
MS: m/z 464.4 [M+H]
실시예 14
5-아미노-1-(4-(2-부티노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-415)의 제조
Figure pct00043
실시예 14의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 8과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, MeOD): δ ppm 8.08(s, 1H), 7.85(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.61-7.57(m, 2H), 7.23-7.20(m, 2H), 7.05(d, J=8.8 Hz, 1H), 4.40-4.37(m, 1H), 4.22-3.90(m, 2H), 3.60-3.31(m, 1H), 2.34-2.31(m, 1H), 2.16-2.09(m, 2H), 2.06(s, 3H), 1.14-0.75(m, 4H).
MS: m/z 505.1 [M+H]
실시예 15
(R)-5-아미노-1-(4-(2-부티노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-416) 및 (S)-5-아미노-1-(4-(2-부티노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-417)의 제조
Figure pct00044
실시예 15의 화합물들을 실시예 14의 생성물의 키랄 분해로부터 얻었다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분).
WS-416 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, MeOD): δ ppm 8.08(s, 1H), 7.85(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.61-7.57(m, 2H), 7.23-7.20(m, 2H), 7.05(d, J=8.8 Hz, 1H), 4.40-4.37(m, 1H), 4.22-3.90(m, 2H), 3.60-3.31(m, 1H), 2.34-2.31(m, 1H), 2.16-2.09(m, 2H), 2.06(s, 3H), 1.14-0.75(m, 4H).
MS: m/z 505.1 [M+H]
WS-417 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, MeOD): δ ppm 8.08(s, 1H), 7.85(d, J=8.8 Hz, 1H), 7.61-7.57(m, 2H), 7.23-7.20(m, 2H), 7.05(d, J=8.8 Hz, 1H), 4.40-4.37(m, 1H), 4.22-3.90(m, 2H), 3.60-3.31(m, 1H), 2.34-2.31(m, 1H), 2.16-2.09(m, 2H), 2.06(s, 3H), 1.14-0.75(m, 4H).
MS: m/z 505.1 [M+H]
실시예 16
(R)-1-(4-아크릴로일-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-418) 및 (S)-1-(4-아크릴로일-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-5-아미노-3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-419)의 제조
Figure pct00045
실시예 16의 화합물들을 실시예 8의 생성물의 키랄 분해로부터 얻었다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분).
WS-418 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.12(s, 1H), 7.69-7.66(m, 1H), 7.59(d, J=8.4Hz, 2H), 7.21(d, J=8.4Hz, 2H), 6.94-6.88(m, 3H), 6.41-6.37(m, 1H), 5.75(s, 2H), 5.43(s, 2H), 4.68-4.66(m, 1H), 4.01-3.95(m, 1H), 3.31-3.19(m, 2H), 2.63-2.56(m, 1H), 2.19-2.12(m, 2H), 1.40-1.37(m, 2H), 1.25-1.10(m, 2H).
MS: m/z 493.1[M+H]
WS-419 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.12(s, 1H), 7.69-7.66(m, 1H), 7.59(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.21(d, J=8.4 Hz, 2H), 6.94-6.88(m, 3H), 6.41-6.37(m, 1H), 5.75(s, 2H), 5.43(s, 2H), 4.68-4.66(m, 1H), 4.01-3.95(m, 1H), 3.31-3.19(m, 2H), 2.63-2.56(m, 1H), 2.19-2.12(m, 2H), 1.40-1.37(m, 2H),1.25-1.10(m, 2H).
MS: m/z 493.1[M+H]
실시예 17
5-아미노-1-(4-(2-부티노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-420)의 제조
Figure pct00046
실시예 17의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 8과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.52(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.13-7.10(m, 1H), 7.03-6.95(m, 3H), 6.91-6.88(m, 1H), 5.65(s, 2H), 5.18(s, 2H), 4.56-3.92(m, 3H), 3.25-3.20(m, 1H), 2.52-2.51(m, 1H), 2.21-2.14(m, 2H), 2.09(s, 3H), 1.08-0.88(m, 2H), 0.72-0.65(m, 2H).
MS: m/z 506.4 [M+H]
실시예 18
(R)-5-아미노-1-(4-(2-부티노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-421) 및 (R)-5-아미노-1-(4-(2-부티노일)-4-아자스피로[2.5]옥트-6-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-422)의 제조
Figure pct00047
실시예 18의 화합물들을 실시예 17의 생성물의 키랄 분해로부터 얻었다. 분해 조건은 다음과 같았다: 초임계 유체 크로마토그래피(ChiralPak AD 5 μ, 21 x 250 mm col, 27% 메탄올, 70 mL/분).
WS-421 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.52(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.13-7.10(m, 1H), 7.03-6.95(m, 3H), 6.91-6.88(m, 1H), 5.65(s, 2H), 5.18(s, 2H), 4.56-3.92(m, 3H), 3.25-3.20(m, 1H), 2.52-2.51(m, 1H), 2.21-2.14(m, 2H), 2.09(s, 3H), 1.08-0.88(m, 2H), 0.72-0.65(m, 2H).
MS: m/z 506.4 [M+H]
WS-422 스펙트럼 데이터:
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.52(d, J=8.0 Hz, 1H), 7.13-7.10(m, 1H), 7.03-6.95(m, 3H), 6.91-6.88(m, 1H), 5.65(s, 2H), 5.18(s, 2H), 4.56-3.92(m, 3H), 3.25-3.20(m, 1H), 2.52-2.51(m, 1H), 2.21-2.14(m, 2H), 2.09(s, 3H), 1.08-0.88(m, 2H), 0.72-0.65(m, 2H).
MS: m/z 506.4 [M+H]
실시예 19
5-아미노-1-(1-시아노-피롤리딘-3-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-423)의 제조
Figure pct00048
실시예 19의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.50(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.16-7.10(m, 1H), 7.02-6.95(m, 3H), 6.92-6.88(m, 1H), 5.52(s, 2H), 5.34(s, 2H), 4.69-4.66(m, 1H), 3.87-3.76(m, 3H), 3.60-3.54(m, 1H), 2.56-2.51(m, 1H), 2.35-2.30(m, 1H).
MS: m/z 425.3 [M+H]
실시예 20
5-아미노-1-(1-시아노피페리딘-4-일)-3-(4-(2,4-다이플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-424)의 제조
Figure pct00049
실시예 20의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.49(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.15-7.09(m, 1H), 7.02-6.92(m, 3H), 6.92-6.88(m, 1H), 5.43(s, 2H), 5.21(s, 2H), 3.99-3.93(m, 1H), 3.66-3.62(m, 2H), 3.23-3.17(m, 2H), 2.41-2.32(m, 1H), 2.03-2.01(m, 1H).
MS: m/z 439.2 [M+H]
실시예 21
1-(1-아크릴로일-6-메틸피페리딘-3-일)-5-아미노-3-(4-(2-클로로-4-플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-425)의 제조
Figure pct00050
실시예 21의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.52-7.49(m, 2H), 7.25-7.25(m, 1H), 7.09-6.97(m, 4H), 6.59-6.57(m, 1H), 6.32-6.12(m, 1H), 5.87-5.85(m, 2H), 5.68-5.60(m, 2H), 4.70-4.25(m, 1H), 3.88-3.85(m, 1H), 3.48-3.46(m, 1H), 2.72-2.61(m, 1H), 2.04-1.97(m, 2H), 1.82-1.77(m, 2H), 1.41-1.35(m, 3H).
MS: m/z 498.2 [M+H]
실시예 22
5-아미노-3-(4-(2-클로로-4-플루오로페녹시)페닐)-1-(1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-426)의 제조
Figure pct00051
실시예 22의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.49(d, J=8.4 Hz, 2H), 7.23-7.24(m, 1H), 7.07-7.11(m, 1H), 6.97-7.04(m, 3H), 6.55(s, 1H), 5.55(s, 1H), 5.21(s, 1H), 4.03-4.09(m, 1H), 3.60-3.71(m, 2H), 3.34-3.40(m, 1H), 2.29-2.35(m, 1H), 1.93-2.04(m, 2H),1.82-1.86(m, 1H), 1.38(d, J=6.8 Hz, 2H).
MS: m/z 469.3 [M+H]
실시예 23
5-아미노-1-(1-(2-부티노일)-6-메틸피페리딘-3-일)-3-(4-(2-클로로-4-플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-427)의 제조
Figure pct00052
실시예 23의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.52-7.49(m, 2H), 7.29-7.23(m, 1H), 7.06-6.97(m, 4H), 5.63-5.61(m, 2H), 5.35-5.23(m, 2H), 4.91-4.72(m, 1H), 3.91-3.81(m, 1H), 3.26-3.17(m, 1H), 2.51-2.42(m, 2H), 2.06(d, J=16.8 Hz, 2H), 1.81-1.76(m, 2H), 1.41-1.34(m, 3H).
MS: m/z 510.2 [M+H]
실시예 24
5-아미노-3-(4-(4-클로로-2-플루오로페녹시)페닐)-1-(1-시아노-6-메틸피페리딘-3-일)-1H-피라졸-4- 카르복사미드(WS-428)의 제조
Figure pct00053
실시예 24의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CD3OD): δ ppm 7.49(d, J=8.8 Hz, 2H), 7.40-7.36(m, 1H), 7.25-7.16(m, 2H), 7.07(d, J=8.8 Hz, 2H), 4.33(s, 2H), 3.70-3.63(m, 1H), 3.60-3.57(m, 1H), 3.42-3.38(m, 1H), 2.28-2.25(m, 1H), 2.19-2.19(m, 3H), 1.37(d, J=6.8 Hz, 3H).
MS: m/z 469.1 [M+H]
실시예 25
1-(1-아크릴로일-6-메틸피페리딘-3-일)-5-아미노-3-(4-(4-클로로-2-플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-429)의 제조
Figure pct00054
실시예 25의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDOD3): δ ppm 7.55-7.53(m, 2H), 7.40-7.38(m, 1H), 7.25-7.16(m, 2H), 7.09(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.85-6.73(m, 1H), 6.24-6.15(m, 1H), 5.78-5.72(m, 1H), 4.70-4.40(m, 2H), 4.23-4.01(m, 1H), 2.38-2.32(m, 1H), 2.04-2.02(m, 1H), 1.91-1.77(m, 2H), 1.37(d, J=6.8, 3H).
MS: m/z 498.1 [M+H]
실시예 26
5-아미노-1-(1-(2-부티노일)-6-메틸피페리딘-3-일)-3-(4-(4-클로로-2-플루오로페녹시)페닐)-1H-피라졸-4-카르복사미드(WS-430)의 제조
Figure pct00055
실시예 26의 화합물을 상응하는 출발 물질로부터 시작하여 실시예 6과 유사한 방법에 의하여 제조하였다.
1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ ppm 7.54-7.50(m, 2H), 7.25-7.22(m, 1H), 7.20-7.02(m, 4H), 5.37(s, 2H), 5.92-5.91(m, 1H), 4.61-4.59(m, 1H), 4.68-4.41(m, 1H), 3.94-3.83(m, 1H), 3.69-3.63(m, 1H), 2.52-2.43(m, 1H), 2.03(d, J=16.8 Hz, 3H), 2.011-1.76(m, 3H), 1.41-1.34(m, 3H).
MS: m/z 510.1 [M+H]
실시예 27 내지 40
실시예 27 내지 40에 나타낸 구조를 가지는 화합물들은 본 발명의 실시예 1 내지 26과 유사한 방법들에 의하여 제조할 수 있다.
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
실시예 41
키나아제 활성(BTK) 억제 검정
본원에 개시된 화합물들의 BTK 키나아제 활성에 대한 억제 효과를 시간 분해 형광 공명 에너지 전달(TR-FRET) 방법을 기반으로 한 검정으로 테스트하였다. 재조합 Btk를 본원에 개시된 화합물들과 함께 50 mM Tris pH 7.4, 10 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 20 nM SEB, 0.1% BSA, 0.005% 트윈-20을 함유한 검정 완충액에서 실온에서 1시간 동안 사전인큐베이션하였다. 반응은 ATP(ATP Km 농도에서) 및 펩타이드 기질(Biotin-AVLESEEELYSSARQ-NH2)의 첨가에 의해 시작하였다. 1시간 동안 실온에서 인큐베이션한 후, 50 mM HEPES pH 7.0, 800 mM KF, 20 mM EDTA, 0.1% BSA, Eu 크립테이트와 결합된 p-Tyr66 항체 및 스트렙트아비딘-표지된 XL665를 함유하는, 동일한 부피의 중단 용액을 첨가하여 반응을 중단시켰다. 플레이트를 추가의 시간 동안 실온에서 인큐베이션한 후, TR-FRET 신호를 BMG PHERAstar FS 기기(ex337 nm, em 620 nm / 665 nm) 상에서 판독하였다. 665 nm 대비 615 nm에서의 형광 신호의 비율을 기반으로, 효소 활성을 화합물 농도의 증가에 따라 계산하였다. 각 화합물의 IC50을 데이터를 Graphpad Prism 소프트웨어의 4-매개변수 방정식에 맞춤으로써 얻었다.
상기 실험 방법에 따라, 본 발명의 화합물들은 BTK 키나아제의 억제 효과를 나타내고(IC50 < 1000 nM), 일부 바람직한 화합물은 매우 강력한 활성을 갖는다(IC50 < 100 nM). 특정 결과를 아래의 표에 나타낸다.
화합물 번호 BTK 키나아제 억제 활성 등급(A/B/C) 화합물 번호 BTK 키나아제 억제 활성 등급(A/B/C)
WS-401 A WS-410 A
WS-402 B WS-411 A
WS-403 B WS-412 C
WS-404 B WS-413 A
WS-405 A WS-414 B
WS-406 A WS-416 A
WS-407 A WS-417 B
WS-408 A WS-421 A
WS-409 A WS-422 A
키나아제 억제 활성 등급은 A, B 및 C로, 구체적으로 A(IC50 < 100 nM)，B(100 nM < IC50 < 1000 nM)，C(IC50 > 1000 nM)로 배정한다.
실시예 42
시험관내 키나아제 선택성 검정
EGFR 및 ITK 키나아제 활성에 미치는 검정 플랫폼을 시간-분해 형광 공명 에너지 전달-기반 방법을 사용하여 수립하였고; LCK, SRC 및 LYN 키나아제 활성에 대한 검정 플랫폼을 Z'-Lyte 방법을 사용하여 수립하였으며; TEC 및 JAK3 키나아제 활성에 대한 검정 플랫폼을 Lance Ultra 방법을 사용하여 수립하였다. 본원에 개시된 화합물들의 상이한 키나아제 활성에 미치는 억제 효과를 11개의 농도에서 각 화합물에 대해 별도로 테스트하였다. 각 화합물의 IC50 값을 Graphpad Prism 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.
상기 실험 방법에 따라, 본 발명의 일부 화합물은 매우 높은 키나아제 선택성 프로파일을 나타냈고, 그것은 대조군 화합물 이브루티닙의 그것보다 유의미하게 양호하였다. 결과에 대해서는 아래의 표를 참조한다.
화합물 번호 LCK SRC LYN EGFR ITK TEC
WS-411 B C B C C A
WS-413 C C C B C A
WS-416 C C C C C A
이브루티닙 A A A A A A
키나아제 억제 활성 등급을 A, B, 및 C로, 구체적으로, A(IC50 < 100 nM)，B(100 nM < IC50 < 1000 nM)，C(IC50 > 1000 nM)로 배정한다.
실시예 43
B 세포 억제 검정
시험관내에서 BTK 억제제에 대한 일시적인 노출은 정상인 B 세포에서 B 세포 활성화를 억제하기에 충분하다. 이 프로토콜은 생체내에서 억제제에 대한 세포의 예측된 노출을 모방하며, 억제제가 세척되어 제거되었을 때에도 B 세포의 억제가 유지되는 것을 보여준다.
B 세포를 RosetteSep 인간 B 세포 풍부화 혼합물을 사용하여 네거티브 선택을 통해 건강한 공여자의 혈액으로부터 정제에 의해 얻었다. 세포들을 성장 배지(10% RPMI + 10% 소 태아 혈청)에 플레이팅하고 억제제를 명시된 농도에서 첨가하였다. 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 세포를 3회 세척하고, 각각의 세척물을 성장 배지에서 8-배 희석을 위해 사용하였다. 그런 후 세포를 10 μg/mL IgM F(ab')2로 37℃에서 18시간 동안 자극하였다. 세포를 계속해서 항-CD69-PE 항체로 염색하고 표준 조건을 사용하여 유동 세포분석에 의해 분석하였다.
상기 방법에 따라 본 발명의 바람직한 화합물들은 10 nM 미만의 IC50으로 B 세포에 대한 강한 억제 활성을 가지는 것이 측정된다.
실시예 44
T 세포 억제 검정
T 세포를 RosetteSep 인간 T 세포 풍부화 혼합물을 사용하여 네거티브 선택을 통해 건강한 공여자의 혈액의 정제에 의해 얻었다. 세포들을 성장 배지(10% RPMI + 10% 소 태아 혈청)에 플레이팅하고 억제제를 명시된 농도에서 첨가하였다. 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 세포를 3회 세척하고, 각각의 세척물을 성장 배지에서 10-배 희석을 위해 사용하였다. 그런 후 세포를 항-CD3/CD28 코팅 비즈(비드/세포 비율 1:1)로 37℃에서 18시간 동안 자극하였다. 세포를 계속해서 항-CD69-PE 항체로 염색하고 표준 조건을 사용하여 유동 세포분석에 의해 분석하였다. 상기 방법에 따라 본 발명의 바람직한 화합물들은 4000 nM보다 높은 IC50 값으로, T 세포에 대해 매우 낮은 억제 활성을 가지거나 억제 활성을 갖지 않는 것이 측정된다.
실시예 45
인간 전혈 B 세포에 대한 억제 검정
인간 전혈(hWB)을 건강한 지원자로부터 얻었고, 혈액을 정맥천자에 의해 헤파린 나트륨-항응고제 Vacutainer 튜브에 수집하였다. 테스트 화합물을 PBS로 필요한 초기 약물 농도로 10배로 희석하고, 이어서 PBS 중의 10% DMSO로 3-배 연속 희석하여 9-점 용량 반응 곡선을 얻었다. 5.5 μL의 각각의 희석된 화합물을 aiil 96-웰 V-자형 바닥 플레이트에 2개 한 벌로 첨가하였다; PBS 중의 10% DMSO 5.5 μL를 대조군 및 비-자극 웰에 첨가하였다. 인간 전혈(100 μL)을 각 웰에 첨가하고, 혼합한 후, 플레이트를 30분 동안 37℃에서 및 5% CO2, 100% 습도에서 인큐베이션하였다. 항-인간 IgM F(ab')2(Southern Biotech)(10 μL의 500 μg/mL 용액, 50 μg/mL의 최종 농도)를 소용돌이를 일으키면서 각 웰에 첨가하고(비-자극 웰은 제외함), 플레이트를 추가로 다시 20시간 동안 인큐베이션하였다. 20-시간 인큐베이션 후에, 샘플들을 20 μL의 형광 프로브-표지된 APC 마우스 항-인간 CD69(BD Pharmingen)와 함께 30분 동안 37℃, 5% CO2, 100% 습도에서 인큐베이션하였다. 유도된 대조군, 염색되지 않은 샘플, 및 단일-염색된 샘플들을 보상 및 초기 전압 세팅에 포함시켰다. 그런 후 샘플들을 1 ml의 IX Pharmingen 용해 완충액(BD Pharmingen)으로 용해시키고 플레이트를 1500 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 상층액을 흡인 제거하고, 남아있는 펠릿을 추가의 1 ml의 IX Pharmingen 용해 완충액으로 용해시키고, 플레이티를 상기와 같이 원심분리하였다. 상층액을 흡인 제거하고 남아 있는 펠릿을 FAC 완충액(PBS + 1% FBQ)으로 세척하였다. 원심분리 및 상층액의 제거 후에, 펠릿을 150 μL의 FACS 완충액에 재현탁하엿다. 샘플을 BD LSR II 유동 세포분석기의 HTS 96-웰 시스템 상에서의 작동에 적합한 96-웰 플레이트에 옮겼다. 데이터를 사용된 발색단에 적합한 여기 및 방출 파장을 사용하여 획득하였고, 퍼센트 포지티브 세포 값을 Cell Quest 소프트웨어를 사용하여 얻었다. 결과를 초기에 FACS 분석 소프트웨어(Flow Jo)를 사용하여 분석하였다. 그런 후 IC50 값을 XLfit v3, 방정식 201을 사용하여 계산하였다.
상기 방법에 따라, 본 발명의 선택된 화합물들이 인간 전혈에서, 200 nM 미만의 IC50 값을 가지며, B 세포에 대해 강력한 억제 활성을 가지는 것이 증명된다.
실시예 46
인간 마이크로솜에서 화합물의 안정성 연구
1. 테스트 화합물들을 아세토니트릴에 용해시켜서 0.5 mM의 농도를 가지는 스톡 용액을 제조하였다.
2. 2 μL의 스톡 용액을 1.5 ml 원심분리 튜브에 넣은 후, 148 μL의 포스페이트 완충액(100 mM, pH 7.4) 및 10 μL의 간 마이크로솜 현탁액(단백질 농도는 20 mg/ml임) [BD Gentest]을 첨가하였다. 간 마이크로솜을 인간, 개, 래트, 및 마우스로부터 얻었다; 158 μL의 포스페이트 완충액(100 mM, pH 7.4)을 가지는 대조군 그룹을 첨가하였다.
3. 단계 2에서 얻어진 혼합물을 3분 동안 37℃ 수조에서 사전 인큐베이션한 후; 40 μL의 NADPH 생성 시스템(NADP+를 함유함: 6.5 mM, 글루코오스 6-포스페이트: 16.5 mM, MgCl2: 16.5 mM, 글루코오스 6-포스페이트 탈수소효소: 2 U/ml)을 첨가하여 반응을 시작하였다. 반응 시스템을 1시간 동안 37℃ 수조에서 인큐베이션하였다.
4. 반응을 1시간 동안 수행한 후에, 원심분리 튜브를 수조로부터 제거하고, 반응을 400 μL의 아세토니트릴을 첨가함으로써 종결시킨 후 3분 동안 소용돌이를 일으켰다. 마지막으로, 튜브를 5분 동안 원심분리하고(13,000 rpm, 4℃) 상층액을 HPLC에 의해 남아 있는 약물 농도, Cr의 검출을 위해 택하였다.
5. 0-분 반응 샘플과 동시 제조 과정: 단계 2에서 제조된 혼합물을 37℃ 수조에서 3분 동안 사전 인큐베이션하였다. 수조로부터 제거한 후에, 400 μL의 아세토니트릴을 첨가하고, 이어서 40 μL의 NADPH 생성 시스템을 첨가하였다. 3분 동안 소용돌이를 일으킨 후, 원심분리(13,000 rpm, 4℃)를 5분 동안 수행하였다. 상층액을 HPLC에 의한 약물 농도 CO의 검출을 위해 택하였다.
6. 인큐베이션 60분 후, 인큐베이션 시스템에 남아 있는 약물의 백분율을 다음과 같이 계산하였다:
남아 있는 약물(%) = Cr/CO x 100%
상기 실험 방법에 따라, 본 발명의 선택된 화합물의 일부는 다양한 종의 간 마이크로솜에서 30%를 초과하는 잔류 백분율로 개선된 마이크로솜 안정성을 나타낸다.
실시예 47
CYP 효소의 억제를 위한 화합물들의 평가
CYP 효소 대사는 약물 생체변형에 대한 주요 경로이고, CYP 효소의 양 및 활성은 생체내에서 약물의 활성화 및 대사에 직접적으로 영향을 미친다. 외인성 화합물들의 주요 대사 효소로소, 사이토크롬 CYP는 다양한 외인성 화합물들의 산화성 및 환원성 대사를 촉매할 수 있는 중요한 I단계 약물 대사 효소이다. CYP 효소는 약물 제거에서 매우 중요한 역할을 하고, 또한 조합 약물 치료 중에 약물 상호작용을 유발하는 주요 인자이다.
방법: 이 실험은 칵테일 프로브 기질 접근법을 사용하여 인간 간 마이크로솜의 5가지 CYP450 효소들에 미치는 화합물의 억제 효과를 동시에 측정하였다. 인간 마이크로솜은 BD Gentest로부터 유래하였다.
실험 단계들은 다음과 같다:
반응을 총 부피 200 μL로 하여, 100 mM의 포스페이트 완충액에서 수행하였다. 반응 시스템에서 마이크로솜의 농도는 0.25 mg/mL이었고, 테스트 화합물의 농도는 20 μM, 6.67 μM, 2.22 μM, 0.74 μM, 및 0.25 μM이었다. 특이적 프로브 기질 및 농도는 각각 페나세틴(phenacetin)(CYP1A2) 40 μM, 덱스트로메토르판(dextromethorphan)(CYP2D6) 5 μM, 다이클로페낙(diclofenac)(CYP2C9) 10 μM, S-메페니토인(S-mephenytoin)(CYP2C19) 40 μM, 테스토스테론(CYP3A4) 80 μM이었다. 혼합물을 37℃ 항온 진동기에서 5분 동안 사전 인큐베이션하고, NADPH-생성 시스템(1.3 mM NADP+, 3.3 mM 글루코오스 6-포스페이트, 0.4 U/L 글루코오스 6-포스페이트 탈수소효소, 3.3 mM MgCl2를 함유함)을 첨가하여 반응을 시작하였다. 45분 동안 인큐베이션한 후, 반응을 동일 부피의 아세토니트릴을 첨가함으로써 중단시켰다. 튜브를 소용돌이를 일으키고 13,000 rpm에서 원심분리하였다. 그 결과의 상층액에 LC-MS-MS를 수행하여 생성된 대사물의 양을 측정하였다. 특정 대사물은 각각 아세트아미노펜(CYP1A2), 덱스트로판(CYP2D6), 4-하이드록시 다이클로페낙(CYP2C9), 4-하이드록시메펜토인(CYP2C19), 및 6β-하이드록시테스토스테론(CYP3A4)이었다. 참조로서 사용된 특정 억제제는 각각 푸라필린(furaphylline)(CYP1A2), 퀴니딘(quinidine)(CYP2D6), 설파페나졸(sulfaphenazole)(CYP2C9), 트라닐시프로민(tranylcypromine)(CYP2C19), 및 케토코나졸(ketoconazole)(CYP3A4)이었다. 이 실험의 최종 결과는 계산된 반 억제 농도, 또는 IC50 값이다. IC50 = ((50% - 최저 억제 백분율%) / (최고 억제 백분율% - 최저 억제 백분율%)) x (최고 농도 - 최저 농도) + 최저 농도.
상기 실험 방법에 따라, 본 발명의 일부 선택된 화합물은 다양한 CYP 효소에 대해 매우 낮은 억제 효과를 가지거나 억제 효과는 갖지 않으며, 다른 약물의 대사에 거의 영향을 미치지 않는 것으로 나타난다.
실시예 48
래트에서 화합물들의 약물동역학에 대한 연구 방법
1. 수컷 SD 래트(HFK)들을 실험실에 도착 후 7일 동안 적응시켰다.
2. 9마리의 SD 래트를 무작위로 3개 그룹으로 나누고, 각 그룹에 3마리씩을 두었다. 한 그룹에 경구 섭식(p.o.)에 의해 투약하였고, 다른 그룹은 꼬리 정맥 주사(i.v.)에 의해 투약하였다. p.o. 그룹의 래트를 약물 투여전에 밤새 금식시켰다.
3. 약물 투여 후에, 혈액 샘플을 래트로부터 후 안와 정맥총(posterior orbital venous plexus) 접근법을 통해 다음 시점에 수집하였다: I.V.: (약물 투여 전), 0.08시간, 0.25시간, 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 24시간; P.O.: 0.08시간, 0.25시간, 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 24시간. 약 300 μl의 혈액을 각 시점에 수집하였다.
4. 수집한 혈액 샘플을 12000 rpm에서 5분 동안 4℃에서 원심분리한 후, 상부 혈장 샘플을 수집하고 -20℃의 냉동고에 보관하였다.
5. 실험 작동을 아래 표에 요약하였다:
래트에서 화합물들의 생체내 약물동역학 테스트의 설계
투여 경로 i.v. 투여 p.o. 투여
투여량 2 mg/kg 10 mg/kg
투여된 제형의 농도 1.5 mg/ml 0.75 mg/ml
투약 부피 2 ml/kg 4 ml/kg
투약 비히클 DMSO/트윈 20/탈이온수(1/0.5/28.5)
테스트 동물 그룹당 3마리의 SD 래트
혈액-수집 시점 0.08, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 24시간
6. LC-MS/MS(UPLC-MS/MS: 액체 크로마토그래피 Waters Acquity UPLC(USA) 및질량 분광분석 5500 Q Trap(Applied Biosystem/MDS SCIEX) 또는 HPLC-MS\MS(액체 크로마토그래피 Agilent 1200 시리즈(USA) 및 질량 분광분석 API 4000(Applied Biosystem/MDS SCIEX))을 사용하여 혈장 내 화합물의 농도를 측정하였다. 전형적인 검출 조건은 다음과 같다:
HPLC Agilent 1200 시리즈
이동상 A) 아세토니트릴(0.1% FA); B) 물(0.1% FA)
구배 0-2.5분, A:B 22:75-95:5
2.5-5.0분, A:B 95:5
5.0-8분, A:B 22:75
칼럼 XSELECT C18(2.1*50mm, 3.5um)
칼럼 온도 45℃
유량 0.6 ml/분
주사 용량 5 ul
UPLC WatersTM Acquity UPLC
이동상 A) 메탄올(0.1% FA); B) 물(0.1% FA)
구배 0-1.5분, A:B 10:90-95:5
1.5-3.0분, A:B 95:5
3.0-4.5분, A:B 10:90
칼럼 Acquity C18(2.1*50mm, 2.5um)
칼럼 온도 45oC
유량 0.6 ml/분
주사 용량 1 ul
약물동역학적 매개변수들을 약물동역학 소프트웨어 WinNonlin [모델명: PhoenixTM WinNonlin® 6.1; 제조사: Pharsight Corporation] [Phoenix 1.1 User's Guide: p251-p300]을 사용하여 계산하였다. 상기 실험 방법에 따라, 본 발명에서 측정된 화합물들은 양호한 생체내 이용률 (>40%)을 나타낸다.
실시예 49
hERG 결합 검정(도페틸라이드(Dofetillide) 방법)
hERG 억제에 대한 화합물들의 IC50 값을 특허 출원 US20050214870 A1에서 기술된 방법에 따라 측정할 수 있다. 본 발명의 선택된 화합물들은 hERG에 대해 매우 낮은 억제 효과를 가지거나 억제 효과를 갖지 않으며, 이때 IC50 값은 1000 nM보다 크다.
실시예 50
약물역학적 검정
심각한 면역결핍성 NOD.SCID 마우스들을 Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.로부터 구입하여, SPF 등급 동물실에 하우징하였다. TMD-8 세포를 충분한 양으로 배양한 후, 세포들을 원심분리에 의해 수집하고 PBS로 2회 세척하였다. 마지막으로, 세포를 혈청-유리 RPMI 1640 배지 플러스 마트리겔(1:1 v/v)에 재현탁하였다. 0.2 ml의 세포 현탁액을 각 마우스의 우측 옆구리에 1 ml 주사기 및 25G 주사 바늘을 사용하여 피하 주사하였다. 종양 크기를 주사 후 1주일 후에 캘리퍼로 측정하였다. 종양 부피를 다음 식에 따라 계산하였다: 종양 부피 = (길이 x 폭2)/2. 종양 부피가 약 100 내지 200 mm3에 도달했을 때, 마우스들을 그룹화하고 21일 동안 매일 p.o. 투여하였다.
화합물 WS411, WS413, WS416, 및 WS422는 미만성 거대 B-세포 림프종 세포주 TMD-8의 성장을 생체내에서 유의미하게 억제하였고 대조군 화합물 이브루티닙과 동일한 항-종양 효과를 나타냈다(실험 결과에 대해서는 도 1 참조).
본 발명에 의해 제공된 신규한 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체는 단백질 키나아제 BTK의 효과적이고, 안전하며 고도로 선택적인 억제제이고, BTK 매개된 질환을 치료하기 위한 약물로서 사용될 수 있다.

Claims (11)

  1. 식 (I)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물:
    Figure pct00060

    상기 식에서,
    n 및 m은 독립적으로 0, 1 또는 2로부터 선택되며;
    L은 O, -C(O)NH-, -CH2-, S, S(O), NH 또는 S(O)2이고;
    A는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되며, 그것의 부모 핵 및 L에 대한 부착 부위는 임의로 선택될 수 있고;
    B는 독립적으로 치환된 또는 치환되지 않은 지방족 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되며, 그것의 L에 대한 부착 부위는 임의로 선택될 수 있고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-C4 알킬, 할로겐, 및 시아노로부터 선택되거나, 또는 R1 및 R2는 그것들이 부착되는 탄소 원자와 함께 3- 또는 4-원 탄소 고리를 형성하거나, 또는 R1 및 R2는 결합되어 옥소 기를 형성하며;
    Y는 시아노, 식
    Figure pct00061
    또는
    Figure pct00062
    으로부터 선택되고;
    R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 치환되지 않은 C1-C4 알킬, 하이드록시 치환된 C1-C4 알킬, C1-C4 알콕시 C1-4 알킬, 할로겐, 시아노, 또는 -(CH2)qN(RaRb)로부터 선택되며, 여기서 q는 1, 2, 3, 또는 4이고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, 및 치환되지 않은 C1-C4 알킬로부터 선택되며;
    단, R1 및 R2 중 하나는 수소이고 다른 하나는 메틸일 때, Y는 시아노이고, A는 벤젠 고리이며, L은 O이고, m은 1이며 n은 2이고, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니며; R1 및 R2가 둘 다 수소일 때, A는 벤젠 고리이고, m은 1이며 n은 2이고, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 피리딘 고리가 아니며; R1 및 R2가 둘 다 수소일 때, A는 피리딘 고리이고, m은 1이며 n은 2이고, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니며; R1 및 R2가 둘 다 수소일 때, A는 벤젠 고리이고, L은 O이며, m은 1이고 n은 1이며, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아님.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 n 및 m은 독립적으로 0, 1, 및 2로부터 선택되고; 상기 L은 O, -C(O)NH-, -CH2-, NH 또는 S, 보다 바람직하게는 O, -C(O)NH-, 또는 NH인 것인 화합물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 A는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되고, 부모 핵 및 L에 대한 그것의 부착 부위는 선택적으로 선택되며; 상기 B는 독립적으로 치환된 또는 치환되지 않은 지방족 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로고리형 고리, 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 및 치환된 또는 치환되지 않은 헤테로아릴 고리로부터 선택되고, L에 대한 그것의 부착 부위는 선택적으로 선택되며; 여기서
    상기 치환된 벤젠 고리는 페닐 기상의 임의의 위치(들)에서 수소, 메틸, 메톡시, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡실 및 시아노 기로 구성되는 군으로부터 선택된 임의의 치환기로 치환되는 것을 의미하고; 바람직하게는 치환된 벤젠 고리는 플루오로 치환된 페닐 기, 또는 클로로 치환된 페닐 기, 보다 바람직하게는 2,4-다이플루오로페닐 기, 또는 4-클로로페닐 기이며;
    상기 치환되지 않은 헤테로아릴 고리는 푸란, 피롤, 티오펜, 옥사졸, 아이소옥사졸, 피라졸, 이미다졸, 티아졸, 아이소티아졸, 옥사다이아졸, 트라이아졸, 티아다이아졸, 테트라졸리움, 피리딘, 피리미딘, 피라진, 피리다진, 또는 트라이아진을 의미하고; 상기 치환된 헤테로아릴 고리는 임의의 위치(들)에서 수소, 메틸, 메톡실, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡실 및 시아노로 구성되는 군으로부터 선택된 임의의 치환기를 가지는 상기 기들을 의미하며; 보다 바람직하게, 치환된 피리딘은 클로로피리딘이고, 특히 바람직하게는 4-클로로-피리딘-2-일이고;
    상기 치환되지 않은 지방족 고리는 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로헵탄, 또는 사이클로옥탄을 의미하며; 상기 치환된 지방족 고리는 임의의 위치(들)에서 수소, 메틸, 메톡실, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡시 및 시아노로 구성되는 군으로부터 선택된 임의의 치환기를 가지는 상기 기들을 의미하고;
    상기 치환되지 않은 헤테로고리형 고리는 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로피란, 테트라하이드로피롤, 피페리딘,
    Figure pct00063
    Figure pct00064
    을 의미하고, 여기서 w는 0, 1 또는 2로부터 선택되며; 상기 치환된 헤테로고리형 고리는 임의의 위치(들)에서 수소, 메틸, 메톡시, 플루오로, 클로로, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡시 및 시아노로 구성되는 군으로부터 선택된 임의의 치환기를 가지는 상기 기들을 의미하는 것인, 화합물.
  4. 제 1 항에 있어서, 바람직하게는 R1 및 R2가 둘 다 수소이거나, 그것들 중 하나는 수소이고 다른 하나는 C1-C4 알킬 기이거나, 또는 R1 및 R2는 그것들이 부착되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하며; 보다 바람직하게는, R1 및 R2가 둘 다 수소이거나, 그것들 중 하나는 수소이고 다른 하나는 메틸이거나, 또는 R1 및 R2는 그것들이 부착되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필을 형성하는 것인, 화합물.
  5. 제 1 항에 있어서, 바람직하게는 식 (II)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물이며:
    Figure pct00065

    상기 식에서, L, A, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되고;
    단, A가 벤젠 고리일 때, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 피리딘 고리가 아니며; A가 피리딘 고리일 때, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니고;
    보다 바람직하게는, 식 (II)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물은 다음 화합물들 중 하나, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물이며:
    Figure pct00066
    및
    Figure pct00067

    상기 식에서, 식 (II-1) 또는 (II-2)의 L, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되고;
    단, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리, 또는 치환된 또는 치환되지 않은 피리딘 고리가 아니며; 또는
    바람직하게는 식 (III)으로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물이고:
    Figure pct00068

    상기 식에서 L, A, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되며;
    단, Y가 시아노 기일 때, A는 벤젠 고리이고, L은 O이며, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니고;
    보다 바람직하게는, 식 (III)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물은 다음 화합물들 중 하나, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물이며:
    Figure pct00069

    상기 식에서, 식 (III-1), (III-2), (III-3) 및 (III-4)의 L, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되고;
    단, Y가 시아노 기이고 L이 O일 때, B는 치환된 또는 치환되지 않은 벤젠 고리가 아니며; 또는
    바람직하게는 식 (IV)로 표시되는 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물이고:
    Figure pct00070

    상기 식에서 L, A, B, 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의되며;
    보다 바람직하게는, 식 (IV)의 5-아미노피라졸 카르복사미드 화합물은 다음 화합물들 중 하나, 또는 그것의 입체이성질체, 호변체, 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물인 화합물:
    Figure pct00071

    상기 식에서, 식 (IV-1) 또는 (IV-2)의 L, B 및 Y는 상기 식 (I)에서와 같이 정의됨.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 L은 O이고;
    B는
    Figure pct00072
    이며;
    Y는 -CN,
    Figure pct00073
    또는
    Figure pct00074
    이고; 여기서 R3, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 치환되지 않은 C1-C4 알킬, 하이드록시-치환된 C1-C4 알킬, C1-C4 알콕시 C1-C4 알킬, 할로겐, 시아노 또는 -(CH2)qN(RaRb)로부터 선택되며, 이때 q는 1, 2, 3, 또는 4이고, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 수소, 또는 치환되지 않은 C1-C4 알킬로부터 선택되는 것인 화합물.
  7. 다음으로부터 선택된 화합물, 또는 그것의 제약학적으로 허용되는 염, 용매화물, 또는 전구약물:
    Figure pct00075

    Figure pct00076

    Figure pct00077

    Figure pct00078

    Figure pct00079
    .
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 제조 방법으로서,
    (1) 식 (V)의 화합물을 식 (VI)의 화합물과 반응시켜서 식 (VII)의 화합물을 얻는 단계:
    Figure pct00080
    ;
    (2) 식 (VII)의 화합물을 가수분해시켜서 식 (VIII)의 화합물을 얻는 단계:
    Figure pct00081
    ;
    (3) 식 (VIII)의 화합물로부터 보호기 PG를 제거하여 식 (IX)의 화합물을 얻는 단계:
    Figure pct00082
    ; 및
    (4) 식 (IX)의 화합물을 식 (X)의 화합물과 반응시켜서 식 (I)의 화합물을 얻는 단계:
    Figure pct00083

    를 포함하며,
    상기 식 (V), 식 (VI), 식 (VII), 식 (VIII), 식 (IX) 및 식 (X)의 치환기 R1, R2, L, A, B, Y, 및 m 및 n은 식 (I)에 대해서와 같이 정의되고, PG는 아미노 보호기이고, R3은 C1-C4 알킬 기, 바람직하게는 에틸이며, X는 클로로, 브로모 또는 하이드록실인 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그것의 제약학적으로 허용되는 염을 포함하는 제약학적 조성물.
  10. BTK 억제제의 약물의 제조에서의 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제 9 항의 제약학적 조성물의 용도.
  11. 제 10 항에 있어서, BTK 억제제는 BTK에 의해 매개된 질환을 예방 또는 치료하고, 상기 질환은 자가면역 질환, 염증성 질환, 이종발생성 면역 질병 또는 질환, 혈전색전성 질환, 및 암으로부터 선택되는 것인 용도.
KR1020187036605A 2016-05-16 2017-04-25 Ｂｔｋ 억제제로서의 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체 및 그것의 제조 방법 및 제약학적 조성물 KR102404759B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610323755 2016-05-16
CN201610323755.4 2016-05-16
PCT/CN2017/081906 WO2017198050A1 (zh) 2016-05-16 2017-04-25 作为btk抑制剂的5-氨基吡唑甲酰胺衍生物及其制备方法和药物组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190039672A true KR20190039672A (ko) 2019-04-15
KR102404759B1 KR102404759B1 (ko) 2022-05-31

Family

ID=60324854

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187036605A KR102404759B1 (ko) 2016-05-16 2017-04-25 Ｂｔｋ 억제제로서의 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체 및 그것의 제조 방법 및 제약학적 조성물

Country Status (7)

Country Link
US (1) US10882843B2 (ko)
EP (1) EP3459940B8 (ko)
JP (1) JP6953445B2 (ko)
KR (1) KR102404759B1 (ko)
CN (1) CN107382973B (ko)
AU (1) AU2017265219B2 (ko)
WO (1) WO2017198050A1 (ko)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MA43753A (fr) 2016-03-24 2018-11-28 Mission Therapeutics Ltd Dérivés 1-cyano-pyrrolidine comme inhibiteurs de dbu
GB201616511D0 (en) 2016-09-29 2016-11-16 Mission Therapeutics Limited Novel compounds
WO2019091440A1 (zh) * 2017-11-10 2019-05-16 苏州信诺维医药科技有限公司 作为btk抑制剂的5-氨基吡唑甲酰胺化合物的晶型i
WO2019091438A1 (zh) * 2017-11-10 2019-05-16 苏州信诺维医药科技有限公司 作为btk抑制剂的5-氨基吡唑甲酰胺化合物的无定型固体分散体
CN111225912B (zh) * 2017-11-10 2020-11-10 苏州信诺维医药科技有限公司 作为btk抑制剂的5-氨基吡唑甲酰胺化合物及其制备方法
CN108530436B (zh) * 2018-05-17 2020-12-29 黄传满 一种吡唑类化合物及其制备方法和应用
CN111718332B (zh) * 2019-03-19 2021-08-17 北京赛特明强医药科技有限公司 2-取代吡唑氨基-4-取代氨基-5-嘧啶甲酰胺类化合物、组合物及其应用
TW202317099A (zh) * 2020-09-10 2023-05-01 美商絡速藥業公司 用於製備(s)-5-胺基-3-(4-((5-氟-2-甲氧基苯甲醯胺基)甲基)苯基)-1-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)-1h-吡唑-4-甲醯胺之方法及中間體
WO2022140246A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 Hangzhou Jijing Pharmaceutical Technology Limited Methods and compounds for targeted autophagy
CN113200987A (zh) * 2021-04-29 2021-08-03 湖南华腾制药有限公司 一种伊布替尼的制备方法
WO2023150663A1 (en) * 2022-02-04 2023-08-10 Retune Pharma Inc. Certain chemical entities, compositions, and methods

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014068527A1 (en) * 2012-11-02 2014-05-08 Pfizer Inc. Bruton's tyrosine kinase inhibitors
WO2014082598A1 (en) * 2012-11-30 2014-06-05 Centaurus Biopharma Co., Ltd. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
US20150005277A1 (en) * 2013-06-28 2015-01-01 Beigene, Ltd. Protein Kinase Inhibitors and Uses Thereof
CN104341388A (zh) * 2013-10-16 2015-02-11 上海润诺生物科技有限公司 芳香族酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2015169233A1 (zh) * 2014-05-07 2015-11-12 北京赛林泰医药技术有限公司 布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ598985A (en) * 2009-09-04 2013-07-26 Biogen Idec Inc Bruton's tyrosine kinase inhibitors
CN104854233B (zh) * 2012-08-07 2018-11-27 3M创新有限公司 制备团聚的微生物培养基及其组合物的方法

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014068527A1 (en) * 2012-11-02 2014-05-08 Pfizer Inc. Bruton's tyrosine kinase inhibitors
CN105008344A (zh) * 2012-11-02 2015-10-28 辉瑞公司 布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂
JP2015535277A (ja) * 2012-11-02 2015-12-10 ファイザー・インク ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤
WO2014082598A1 (en) * 2012-11-30 2014-06-05 Centaurus Biopharma Co., Ltd. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
CN103848810A (zh) * 2012-11-30 2014-06-11 北京赛林泰医药技术有限公司 鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
JP2016500119A (ja) * 2012-11-30 2016-01-07 センタウルス・バイオファーマ・カンパニー・リミテッドＣｅｎｔａｕｒｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． ブルトン型チロシンキナーゼ阻害剤
US20150005277A1 (en) * 2013-06-28 2015-01-01 Beigene, Ltd. Protein Kinase Inhibitors and Uses Thereof
CN104341388A (zh) * 2013-10-16 2015-02-11 上海润诺生物科技有限公司 芳香族酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2015169233A1 (zh) * 2014-05-07 2015-11-12 北京赛林泰医药技术有限公司 布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
CN105085474A (zh) * 2014-05-07 2015-11-25 北京赛林泰医药技术有限公司 鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
EP3141546A1 (en) * 2014-05-07 2017-03-15 Centaurus Biopharma Co., Ltd. Inhibitor of bruton's tyrosine kinase

Also Published As

Publication number Publication date
EP3459940B8 (en) 2022-08-24
EP3459940A4 (en) 2020-01-08
AU2017265219B2 (en) 2021-02-04
CN107382973A (zh) 2017-11-24
CN107382973B (zh) 2020-08-07
JP6953445B2 (ja) 2021-10-27
AU2017265219A1 (en) 2018-12-06
EP3459940B1 (en) 2022-07-20
US10882843B2 (en) 2021-01-05
US20190152952A1 (en) 2019-05-23
JP2019519521A (ja) 2019-07-11
EP3459940A1 (en) 2019-03-27
KR102404759B1 (ko) 2022-05-31
WO2017198050A1 (zh) 2017-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102404759B1 (ko) Ｂｔｋ 억제제로서의 5-아미노피라졸 카르복사미드 유도체 및 그것의 제조 방법 및 제약학적 조성물
KR101779272B1 (ko) 키나제 억제제로서의 신규 벤즈이미다졸 유도체
US8933109B2 (en) Furo[3, 2-B] pyrrol-3-ones as cathespin S inhibitors
KR100869616B1 (ko) 프롤린 유도체 및 그의 다이펩티딜 펩티다제－ｉｖ저해제로서의 용도
CN107383013B (zh) 作为btk抑制剂的吡唑并嘧啶衍生物及其制备方法和药物组合物
EP2297162B1 (en) Compounds
CA2757654C (en) Sulfonic amide and sulfoximine-substituted diaryl-dihydropyrimidinones and usage thereof
US20100075965A1 (en) Pi3 kinase inhibitors and methods of their use
BRPI0614621A2 (pt) inibidores macrocìclicos de vìrus da hepatite c
JP2016513656A (ja) がんの処置のための、がん幹細胞経路キナーゼの阻害剤としての３−（アリールまたはヘテロアリール）メチレンインドリン−２−オン誘導体
US20090247523A1 (en) Carboxamide 4-[(4-pyridyl)amino]pyrimidines useful as hcv inhibitors
CN114258391A (zh) 吡咯化合物
CN111225912B (zh) 作为btk抑制剂的5-氨基吡唑甲酰胺化合物及其制备方法
AU2018364183B2 (en) Crystal form I of a 5-aminopyrazole carboxamide compound as BTK inhibitor
CN111212644A (zh) 作为btk抑制剂的5-氨基吡唑甲酰胺化合物的无定型固体分散体
CA3215920A1 (en) Pyridine derivatives with n-linked cyclic substituents as cgas inhibitors
JP2024511012A (ja) キナーゼ関連疾患の処置のための小分子
TW202014191A (zh) 具有選擇性ｂａｃｅ１抑制活性的四氫哌喃并衍生物

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant