KR20180130080A - 자초 추출물을 포함하는 항염용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

자초 추출물을 포함하는 항염용 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 자초 추출물, 더욱 바람직하게는 자초의 용매 조추출물 또는 이의 용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 자초 추출물은 다양한 염증의 완화, 억제 및 치료에 유용한 약학적 조성물, 염증 개선용 화장품 조성물 또는 기능성 식품 조성물로 이용될 수 있다.

Description

자초 추출물을 포함하는 항염용 조성물 및 이의 제조방법{Anti-inflammatory composition comprising extracts of grasses and preparing method thereof}
본 발명은 자초 추출물, 더욱 바람직하게는 자초의 용매 조추출물 또는 이의 용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 자초 추출물은 다양한 염증의 완화, 억제 및 치료에 유용한 약학적 조성물, 화장품 조성물 또는 기능성 식품 조성물로 이용될 수 있다.
염증반응은 우리 몸에서의 항상성 유지를 위한 자극에 대한 생체 방어반응으로 지질 다당류(lipopolysaccaride; 이하, LPS)와 같은 외부 자극원과 아라키돈산(arachidonic acid)과 같은 내부 자극원들을 매개로 한다(Han SM, Lee KG, Yeo JH, Kweon HY. Anti-inflammatory effect of the venom from asian honey bees (Apis cerana L.) on inducible nitric oxide synthase and tumor necrosis factor-a in Raw 264.7 cell line. Korean J apicuture. 2004.16:89)).
Raw 264.7 세포에 LPS를 처리하게 되면 대식세포의 활성화가 이뤄지고 염증반응을 매개하는 일산화질소(nitric oxide, NO), 프로스타글란딘 E2 (protstaglandin E2; PGE2)를 방출하게 되며, 과량의 NO, PGE2 등의 염증인자는 유도형 NO 생성효소(NO synthase; iNOS) 및 시클로옥시게나아제-2(cyclooxygenase-2; COX-2)에 의해 형성된다.
우리의 피부는 여러 가지 유해물질들에 의하여 자극을 받게 된다. 장기간 태양 광선에 노출되면 피부에 홍반이 생기게 되고 이는 자외선에 의하여 피부자극이 나타났음을 의미한다. 자외선뿐만 아니라 화장품 기능성 원료인 레티놀, 락드산에 의해서도 자극을 받게 된다 (Park KS, Kim HJ, Kim EJ, Nam KT, Oh JH, Song CW, Jung HK, kim DJ, Yun YW, Kim HS, Chung SY, Cho DH, Kim BY and Hong JT. Effect of glycolic acid on UVB-induced skin damage and inflammation in guinea pigs, Skin pharmacol appl. skin physiol. 2002. 15. 236; Kang S. Duel EA, Fisher GJ, Datta SC, Wang ZQ, Reddy AP, Tavakkol A, Yi JY, Griffiths CE, and Elder JT. Application of retinol to human skin in vivo induced epidermal hyperplasia and cellular retinoid binding proteins characteristic of retinoic acid but without measuralbe retinoic acid levels or inrritation. J invest dermatol. 1995. 105: 549).
개인관리제품을 사용하는 사람 중 10% 이상이 피부자극에 대한 부작용을 호소하고 있으며, 미국의 연구결과에 따르면 소비자들의 50% 이상이 자신을 민감성 피부라고 생각하는 것으로 나타났다. 항염 효능은 피부 진정과 여드름, 아토피에 관련하여 많이 사용되는 효능으로 피부 자극완화를 목적으로 하는 화장품 류에 많이 사용되고 있다 (Czamecha OM, Bator WM, Silny W. Atopy patch test reaction to ariborne allegens in the diagnosis of atopi dermatitis. Acta Dermatovenerol Croat 2005. 13:3).
항염제로 사용되고 있는 물질로 비스테로이드 계통의 벤지다민, 인도메타신, 이부프로펜 등이 있으며, 스테로이드 계통의 덱사메타손, 하이드로코티존이 있다 (Leung YF, Tam PO, Lee WS, Lam DS, Yam HF, Fan BJ, Tham CC, Cua JK, Pang CP. The dual role of dexamethasone on anti-inflmmation and outflow resistance demonstrated in cultured human trabecular meshwork cells. Mol Vis Sep 2003.59:425 ; Rocksen D, Lilliehook B, Larsson R, Johansson T, Bucht A. Differential anti-inflammatory and anti-oxidative effects of dexamethasone and N-acetyl-cysteine in endotoxin-induced lung inflammation. Clin exp immunol. 2000. 122:249 ; Endo Y, Tsuriya S, Fujihira E. Hepatic drug metabolizing enzyme activities and anti-inflammatory potency of hydrocortisone in rats with granulomatous inflammation. Res Commun Chem pathol pharmacol. 1981. 33: 195 ; Favour CB. Local anti-inflammatory effect of hydrocortisone. Stanford med bull. 1958. 6: 15 ; Sato S, Maehara K. Anti-inflammatory and analgesic effects of benzydamine on thermal inflammation. J osaka den univ. 1967. 1: 37)).
그러나 이러한 물질은 화장품 원료로 사용할 수 없거나 사용량이 제한되어 있는 경우가 대부분이며, 특히 스테로이드 계통의 경우 피부위축, 불면, 불안 등의 부작용을 동반하고 있다. 따라서 최근에는 피부에 안전성이 우수한 천연 식물에서의 항염 효능을 갖는 물질 연구가 필요 시 되고 있다.
최근 세계적으로 현대병으로 알려진 아토피성 피부염과 피부질환 및 알레르기 질환의 유병률이 증가하고 있는 추세이며, 이는 환경오염 및 음식에 의해 더욱더 증가하고 있는 추세이다. 이를 치료하기 위해서 스테로이드제 및 항히스타민제, 면역억제제외에는 대안이 없으며 장기간 사용 시 여러 부작용 사례도 나타난다 (Yoo, 2010).
피부질환의 치료방법으로 최근 부작용이 없고 면역증강, 항암, 항산화 등 생리활성이 다양한 물질을 찾고자 연구자들은 노력하고 있다. (Yoo JH. 2010. The effect of complex mushroom extracts on the improvement in skin conditions with atopic dermatitis and acne symptoms. Chosun University)
이에 본 발명자들은 염증의 완화, 억제 또는 치료제를 개발하기 위해, 염증에 효력을 보일 가능성이 있는 50종 이상의 생약 및 민간약들을 대상으로 스크리닝하였으며, 이중 자초(Lithospermum erythrorhizon S. et Z.)의 유의성 있는 항염 활성을 발견하여 현재 사용되는 항염제보다 활성이 월등히 우수한 것을 확인하였다.
이에, 본 발명의 목적은 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 완화, 억제 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 완화, 개선 또는 억제용 화장품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 완화 또는 억제용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 자초의 추출물의 염증의 완화, 억제 또는 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에 투여하여 염증 완화, 억제 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 염증의 완화, 억제 또는 치료 용도에 사용하는 자초 추출물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 자초의 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 완화, 억제 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 자초 추출물은 자초의 용매 조추출물 및 이의 용매 분획물을 포함하며, 자초 추출물은 염증의 완화, 억제 및 치료 활성을 나타낸다.
이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다
자초는 한자어로는 지초(芝草), 자초(紫草), 자근(紫根)이라고 한다. 학명은 Lithospermum erythrorhizon S. et Z.이다. 크기는 50 내지 100㎝이며 전체에 강모(剛毛)가 밀포되어 있다. 줄기는 곧게 섰으며 상부 가지가 2 내지 3개로 갈라져 있다. 백색 5판의 꽃은 5개의 비늘 조각이 화후(花喉)에 있다. 꽃의 크기는 5 내지 8㎜이다. 잎은 어긋나며 후질(厚質)이고 양끝이 뾰족하고 거치(鋸齒：톱니)가 없다. 뿌리는 인삼 모양으로 갈라져 있다. 비후(肥厚)하며 자색 색소가 외피 주위에 형성되어 자색이 강하다. 따라서, 지치가 자라는 주위의 흙색도 자색이다.
생육조건은 산지(山地) 초원의 잡초 속에서 줄기만 햇볕을 받고 뿌리에 직사광선이 없는 조건이 적당하다. 우리나라에서는 함경북도와 경상남도, 제주도를 제외한 전국에 야생한다. 일본에서는 북위 33° 내지 43°, 동경 131° 내지 143°에 분포하고, 중국은 선양에서부터 하북 안후이성에 이르는 지역에서 생산된다. 꽃은 6월에 피기 시작하고 열매는 8, 9월에 맺는다.
재배는 습하지 않고 지대가 높은 밭의 희고 부드러운 흙이나 청색 사지에 3월 중에 파종한다. 1년에 꽃도 피고 종자도 맺으므로 일년초로 재배하기는 쉬우나 다년초로 만들기 위한 재배는 힘들다.
본 발명은 자초의 추출물을 함유하는 염증 억제 활성을 갖는 조성물에 관한 것으로서, 상기 '추출물'은 용매 조추출물, 특정 용매 가용 추출물 (용매 분획물), 및 용매 조추출물의 용매 분획물을 포함하며, 상기 자초 추출물은 용액, 농축물 또는 분말 상태일 수 있다.
본 발명에 따른 자초 추출물은 자초의 뿌리, 줄기 및 잎으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 사용하여 제조한 추출물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 자초 추출물은 자초를 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물일 수 있다.
자초의 조추출물 제조에 사용되는 한 용매에 물과 알코올의 혼합물을 사용하는 경우에는 10% 이상 내지 100%(v/v) 미만, 20% 이상 내지 100%(v/v) 미만, 30% 이상 내지 100%(v/v) 미만, 40% 이상 내지 100%(v/v) 미만, 50% 이상 내지 100%(v/v) 미만, 60% 이상 내지 100%(v/v) 미만, 또는 70% 이상 내지 100%(v/v) 미만의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있다.
또한, 상기 알코올 수용액은 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 프로판올 수용액 및 부탄올 수용액으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 자초 추출물은 용매 조추출물을 추가의 용매로 분획한 용매 분획물일 수 있으며, 예를 들면 상기 용매 조추출물에 에틸에테르, 아세트산에틸, 및 부탄올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물일 수 있다.
예를 들면, 상기 자초를 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 용매 조추출물을 에틸에테르, 아세트산에틸 및 부탄올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물일 수 있다.
바람직하게는 본 발명에 따른 자초의 용매 분획물은 상기 용매 조추출물, 바람직하게는 하기 용매 분획물을 포함할 수 있다.
1) 자초의 용매 조추출물에 에틸에테르를 첨가하여 얻은 에틸에테르 분획물,
2) 자초의 용매 조추출물에 아세트산에틸을 첨가하여 얻은 아세트산에틸 분획물,
3) 자초의 용매 조추출물에 부탄올을 첨가하여 얻은 부탄올 분획물.
본 발명의 다른 일 양태는 염증 억제 활성을 갖는 자초 추출물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 자초 추출물은 자초의 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을, 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물일 수 있다.
본 발명에 따른 자초 추출물의 제조 과정을 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다:
자초를 절단하고 물로 세척하여 협착물을 제거하고 건조시킨 후, 상기 자초의 중량에 대하여 약 5 내지 20 부피배, 바람직하게는 7 내지 15 부피배의 추출용매로 환류 추출한다. 추출 후 여과하여 여과액을 모은다. 추출 온도는 특별한 제한은 없지만 40 내지 110, 바람직하게는 55 내지 90인 것이 좋다.
추출공정은 1회 또는 수회 반복할 수 있으며, 본 발명의 한 바람직한 예에서는 1차 추출 후 다시 재추출하는 방법을 채택할 수 있는데, 이는 생약추출물을 대량 생산하는 경우 효과적으로 여과를 한다 하더라도 생약 자체의 수분 함량이 높기 때문에 손실이 발생하게 되어 1차 추출만으로는 추출효율이 떨어지므로 이를 방지하기 위함이다. 또한, 각 단계별 추출효율을 검증한 결과 2차 추출에 의해 전체 추출량의 80 내지 90% 정도가 추출되는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 일 예에서, 추출공정을 2회 반복하는 경우, 상기 얻어진 잔사에 다시 추출용매, 약 5 내지 15 부피배, 바람직하게는 8 내지 12 부피배로 환류 추출한다. 추출 후 여과하고 이전에 얻어진 여과액과 합쳐서 감압농축을 하여 자초 추출물을 제조할 수 있다.
이와 같이 2차에 걸친 추출 및 각각의 추출 후 얻어진 여과액을 혼합함으로써 추출 효율을 높일 수 있으나, 본 발명의 추출물이 추출 횟수에 한정되는 것은 아니다.
상기 자초 추출물 제조 시에 사용되는 용매의 양이 너무 적으면 교반이 어렵게 되고 추출물의 용해도가 낮아져 추출효율이 떨어지게 되고, 지나치게 많은 경우는 다음의 정제단계에서 사용되는 용매의 사용량이 많아져 경제적이지 못하여 취급상 문제가 발생할 수 있으므로, 용매의 사용량은 상기 범위로 하는 것이 좋다.
이와 같이 얻어진 여과된 추출물은 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 저급 알코올의 함량을 조절하기 위하여 농축물 총량의 약 10 내지 30배, 바람직하게는 15 내지 25배, 보다 바람직하게는 약 20 중량배의 물로 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 3회 공비 농축하고 재차 동량의 물을 가하여 균질하게 현탁시킨 후 동결건조하여 분말상태의 자초 추출물로서 제조될 수 있다.
본 발명에 사용된 추출 방법은 통상적으로 사용되는 모든 방법일 수 있으며, 예컨대, 냉침, 열수추출, 초음파 추출 또는 환류 냉각 추출법일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은 상기와 같은 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증 완화, 억제 또는 치료용 조성물을 제공한다.
상기 자초 추출물은 자초의 용매 조추출물, 용매 분획물을 포함하며 상술한 바와 같다.
상기 염증은 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염 또는 건성 피부염 등 일 수 있으며, 예를 들어, 건성 피부염인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물 내의 유효성분으로서의 추출물의 함량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절할 수 있으며, 고형분 중량 기준으로 0.001 내지 99.9 중량%, 또는 0.1 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 50 중량%, 또는 0.1 내지 40 중량%일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예를 들어, 경구, 피부, 정맥, 근육, 피하 등의 경로로 투여될 수 있으며, 바람직하게는 경구로 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연고제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 또는 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 혼합 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제 등의 보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.
경구를 위한 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 연고제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 경피제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
좌제의 제제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물을 인간에게 적용하는 구체예에 있어서, 본 발명의 자초 추출물 조성물은 단독으로 투여될 수 있으나, 일반적으로 투여방식과 표준 약제학적 관행(standard phamaceutical practice)을 고려하여 선택된 약제학적 담체와 혼합되어 투여될 수 있다.
예를 들면, 본 발명의 자초 추출물 함유 조성물은 전분 또는 락토오즈를 함유하는 정제 형태로, 또는 단독 또는 부형제를 함유하는 캡슐 형태로, 또는 맛을 내거나 색을 띄게 하는 화학 약품을 함유하는 엘릭시르 또는 현탁제 형태로 경구, 구강 내 또는 혀 밑 투여될 수 있다. 이러한 액체 제제는 현탁제(예를 들면, 메틸셀룰로오즈, 위텝솔(witepsol)과 같은 반합성 글리세라이드 또는 행인유(apricot kernel oil)와 PEG-6 에스테르의 혼합물 또는 PEG-8과 카프릴릭/카프릭 글리세라이드의 혼합물과 같은 글리세라이드 혼합물)와 같은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 제형화 될 수 있다.
본 발명의 생약 추출물 함유 조성물의 투여 용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
예를 들어, 유효성분 함량을 기준으로 1일 투여량이 0.1 내지 500㎎/kg, 바람직하게는 0.5 내지 300㎎/kg일 수 있다. 상기한 투여량은 평균적인 경우를 예시한 것으로서 개인적인 차이에 따라 그 투여량이 높거나 낮을 수 있다.
본 발명의 자초 추출물 함유 조성물의 1일 투여량이 상기 투여 용량 미만이면 유의성 있는 효과를 얻을 수 없으며, 그 이상을 초과하는 경우 비경제적일 뿐만 아니라 상용량의 범위를 벗어나므로 바람직하지 않은 부작용이 나타날 우려가 발생할 수 있으므로, 상기 범위로 하는 것이 좋다.
본 발명의 또 다른 일 양태는 상기와 같은 자초 추출물을 함유하는 염증 완화, 억제 또는 개선용 건강 기능성 식품에 관한 것이다.
상기 자초 추출물은 기 설명한 것과 동일하다.
상기 건강 기능성 식품은 각종 식품, 음료, 식품 첨가제 등일 수 있다.
상기 건강 기능성 식품에 함유된 유효성분으로서의 생약 추출물의 함량은 식품의 형태, 소망하는 용도 등에 따라 적절하게 특별한 제한이 없으며, 예를 들어, 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등, 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다.
상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
특히, 본 발명의 자초 추출물을 인체에 투여하는 경우 천연추출물의 일반적 특성에 비추어 볼 때 다른 합성 의약품에 비해 부작용의 염려가 없을 것으로 사료되며, 실제로 규격화된 생약 조성물에 대한 독성 시험 결과 생체에 아무런 영향이 없는 것으로 판명되었다.
본 발명의 또 다른 양태는 자초 추출물을 포함하는 염증의 완화, 억제 또는 개선용 화장품 조성물에 관한 것이다.
상기 자초 추출물은 기 설명한 것과 동일하다.
상기 화장품 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 자초 추출물의 화장품학적 유효량(cosmetically effective amount); 및/또는 (b) 화장품학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 용어 "화장품학적 유효량"은 상술한 본 발명의 조성물의 피부상태 개선 효능을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
상기 화장품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장품의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장품의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장품의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장품의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장품의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 자초 추출물과 담체 성분 이외에, 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예를 들어, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.
본 발명은 자초 추출물, 더욱 바람직하게는 자초의 용매 조추출물 또는 이의 용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항염용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 자초 추출물은 다양한 염증의 완화, 억제 및 치료에 유용한 약학적 조성물, 염증 개선용 화장품 조성물 또는 기능성 식품 조성물로 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 시코닌(shikonin) 표준품의 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography; HPLC)의 크로마토그램을 보여주는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 자초 추출물의 고성능 액체 크로마토그래피의 크로마토그램을 보여주는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 자초 추출물의 세포독성실험 결과를 보여주는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실시예에 따른 자초 추출물의 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2; PGE2) 생성억제효과를 보여주는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 실시예에 따른 자초 추출물의 COX-2 단백질 발현억제효과 결과를 보여주는 그래프이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 자초 추출물 제조 및 지표분석
1-1. 자초 추출물 제조
자초 건물 100g에 메탄올을 10배(g/v) 첨가하고, 실온에서 3일 동안 정치한 후, 여과지로 여과 후 건조하였다. 자초 추출물을 13.25g 수득하였으며, 수율은 13.25%였다.
1-2. 지표분석
자초 추출물 137.0mg을 10ml 부피플라스크에 넣고 메탄올(HPLC용)로 5ml을 넣어 용해시키고 10ml로 채운 후 0.45 um 맴브레인필터로 여과하였다.
용매로 아세토나이트릴(Acetonitrile, B&J)을 이용하고, Reagent로 인산(대정화금)을 사용하였으며, 표준품으로 시코닌(shikonin)을 사용하였다. 구체적으로, 동일시마즈(DAD, 216nm)의 크로마토그래피를 사용하여 수행하였으며, 컬럼은 RSTECH , Hector C18, 5um, 4.6*250mm을 사용하였다. 일루션으로는 1% 인산 수용액(A로 표시) 및 아세토나이트릴(Acetonitrile, B로 표시)을 사용하여, 하기 표 0과 같이 실온에서 수행하였으며, 표준품인 시코닌에 대한 결과를 도 1에 나타내었으며, 자초 추출물에 대한 결과를 도 2에 나타내었다.
시간
(분)		 용매 구성
(부피 %)		 유속
(ml/분)
0 50% B 1.0
13 100% B 1.0
18 100% B 1.0
23 50% B 1.0
25 50% B 1.0
도 1 및 2에서 확인할 수 있듯이, 상기 자초 추출물의 지표물질인 시코닌은 15.6ug/g임을 확인하였다.
실시예 2. 세포독성실험
2-1. 세포배양
RAW 264.7 세포 1ml을 50ml 튜브에 옮기고 PBS 9ml을 넣어 세포를 부유시킨 뒤, 1,200 rpm에서 5분간 원심 분리하여 상층액을 제거하였다. 그 다음, 세포가 있는 튜브에 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum; 이하, FBS)와 1% 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)으로 조성된 둘베코수정이글배지(Dulbecco’s modified Eagle’s medium; 이하, DMEM) 배지 1.0 ml을 넣어 부유시켰다. 그 다음, 100㎜ 디쉬(dish)에 9.0 ml의 DMEM 배지를 넣고, 세포를 부유시켜 세포배양기(37℃, 5% CO2)에서 70 내지 80%가 찰 때까지 배양하였다. 계대배양 횟수는 5회 이상으로 하였으며 시료들을 처리하기 전에 24시간 적응시켰다.
그 다음, 세포를 24-웰 플레이트에 웰당 5 X 104개로 분주한 후 37℃에서 24시간 배양하였다. 그 다음, 배지를 버리고 PBS로 세척한 후, 10% FBS를 포함하지 않는 새로운 배지로 갈아주고 일정농도의 자초 추출물을 처리하여 세포를 24시간 배양하였다.
그 다음, MTT용액(0.53-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide)을 각 웰에 100ul 씩 넣고 37℃에서 4시간 배양하였다. 배양액을 제거하고 DMSO 용액 1000ul씩을 넣고 10분간 흔들어 준 다음 ELISA reader로 540㎚에서 흡광도를 측정하여, 그 결과를 도 3 및 표 2에 나타내었다. 양성대조군으로는 덱사메타손(Dexamethasone) 50ng/ml를 사용하였다.
MTT NT L. erythrorhizon(ug/ml)
50 100 200 300 400 500 750 1000
Mean 100 99.594* 99.431 99.309 98.700 98.903 97.359 96.546 95.937
SD 0.402 0.057 0.057 0.345 0.057 0.345 0.115 0.115 0.632
*NT를 100으로 했을 때의 상대비교 값
도 3 및 표 2에서 확인할 수 있듯이, 1000ug/ml까지 세포 독성이 없으며, 400ug/ml까지 세포 수 감소가 전혀 없음을 확인하였다.
실시예 3. 세포효능실험
3-1. 프로스타글란딘 E2(prostaglandin E2; PGE2) 생성억제효과
RAW 264.7 세포를 50ml 튜브에 옮기고 PBS 9ml을 넣어 세포를 부유시킨 뒤, 1,200rpm에서 5분간 원심 분리하여 상층액을 제거하였다. 세포가 있는 튜브에 10% Fetal Bovine Serum (FBS)와 1% penicillin/streptomycin으로 조성된 DMEM 배지 1ml을 넣어 부유시켰다. 100㎜ dish에 9ml의 배지를 넣고, 세포를 부유시켜 세포배양기(37℃, 5% CO2)에서 배양하였다. 계대배양 횟수는 5회 이상으로 하였으며 시료들을 처리하기 전에 24시간 적응 시켰다.
그 다음, 자초 추출물 분말을 DMSO 녹여 400, 200, 100 및 50 ug/ml의 농도로 시료를 제조하고, 각각의 시료를 각각의 웰에 5.0 ul씩 담았다. 각 웰에 검출 시약 A(Detection Reagent A working solution)를 50ul 첨가하여 뚜껑을 덮은 후 37℃에서 1시간 놓아둔 후, 각 웰을 세척 버퍼 350 ul씩 첨가하여 3번 세척하였다. 그 다음, 각 웰에 검출 시약 B(Detection Reagent B working solution) 100 ul를 첨가하고 37℃에서 45분간 반응시키고, 세척 버퍼로 웰을 5회 세척하였다. 그 다음, 각 웰에 TMB Substrate solution 90 ul를 첨가하여 37℃에서 15 내지 30분간 반응시킨 후, 각 웰에 정지액 50 ul를 첨가하였다. 파장 450㎚에서 흡광도를 측정하여, 하기 계산식으로 계산한 결과를 도 4 및 표 3에 나타내었다. (NT: non-treated control, LPS: lipopolysaccharide, DEXA: dexamethason, L. eryhtrorhizon: Lithospermum erythrorhizon)
[계산식]
PGE2 Concentration (pg/ml) = (측정 흡광도 / a)^(1 / b) * 희석 배수
PGE2 NT LPC DEXA L. erythrorhizon(ug/ml)
50 100 200 400
Mean 47.14 1430.02 169.49 1286.53 1120.60 883.08 872.64
SD 2.50 84.85 6.94 40.20 60.24 41.71 36.34
% vs LPC -10.03 -21.64 -38.25 -38.98
도 4 및 표 3에서 확인할 수 있듯이, 자초 추출물이 LPS 유발된 염증에서 용량의존적으로 PGE2발현을 억제함을 확인하였으며, 자초 추출물이 PGE2 발현에 영향을 주는 것을 확인하였다. 또한, LPS로 유발된 염증에서 자초 추출물에 의하여 용량의존적으로 PGE2의 발현이 억제됨을 확인하였다.
3-1. COX-2 단백질 발현억제효과
RAW 264.7 세포를 50ml 튜브에 옮기고 PBS 9.0 ml을 넣어 세포를 부유시킨 뒤, 1,200 rpm에서 5분간 원심 분리하여 상층액을 제거하였다. 그 다음, 세포가 있는 튜브에 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신으로 조성된 DMEM 배지 1.0 ml을 넣어 부유시켰다. 그 다음, 100㎜ 디쉬에 9.0 ml의 DMEM 배지를 넣고, 세포를 부유시켜 세포배양기(37℃, 5% CO2)에서 70 내지 80% 정도 찰 때까지 배양하였다. 계대배양 횟수는 5회 이상으로 하였으며 시료들을 처리하기 전에 24시간 적응시켰다. 시료는 자초 추출물 분말을 DMSO 녹여 400, 200, 100 및 50ug/ml의 농도로 제조하였다.
세포가 어느 정도 자란 후(confluence 80 내지 90%), 배지를 비우고 1X PBS로 1번 세척하였다. 그 다음, 지름 10cm인 배양 접시 기준으로, 1X 세포 용해 버퍼 및 1 mM PMSF 0.5 ml을 넣고 5분간 놓아둔 후, 세포를 긁어내어 알맞은 튜브에 넣었다. 그 다음, 얼음에서 긁어낸 세포들을 4℃에서 5초간 작동(on) 후 5초간 정지(off)하는 방식으로 총 15분간 소니캐이션(sonication) 시켰다. 그 다음, 14000rpm, 10분간 원심분리를 한 후 상층액만을 새로운 튜브에 수득하였다.
각 웰에 희석한 시료 또는 희석하지 않은 분석 시료(자초 추출물 농도 50, 100, 200, 400 ug/ml을 만들어 농도를 반으로 희석시켜서 50 ug/ml로 만듦)를 각각 100ul를 넣고 뚜껑을 닫은 채, 37℃에 2시간 동안 방치하였다. 그 다음, 뚜껑을 조심스럽게 제거한 후, 각 웰에 1X 세척 버퍼 200 ul로 세척을 4회 반복하였다. 각 웰에 준비한 검출 항체 100 ul를 첨가하고, 뚜껑을 닫은 채 37℃에서 1시간 놓아둔 후, 각 웰을 1X 세척 버퍼 200 ul로 세척을 4회 반복하여 세척하였다.
그 다음, 각 웰에 준비한 HRP-연결 2차 항체 100 ul를 첨가하고 뚜껑을 닫은 채, 37℃에서 30분간 놓아둔 후, 1X 세척 버퍼 200 ul로 세척을 4회 반복하여 세척하였다. 각 웰에 TMB substrate 100 ul 첨가하고 25℃에서 30분간 반응시켰다. 그 다음, 각 웰에 정지액(Stop Solution) 100 ul를 첨가한 후 30분 이내에 파장 450㎚에서 흡광도 값을 확인하고, 하기의 계산식에 넣어 값을 계산한 뒤, 그 결과를 도 5 및 표 4에 나타내었다. (NT: non-treated control, LPS: lipopolysaccharide, DEXA: dexamethason, L. eryhtrorhizon: Lithospermum erythrorhizon)
[계산식]
COX2 Conc. (ng/ml) = (측정 흡광도 - 절편) / 기울기
COX2 NT LPC DEXA L. erythrorhizon(ug/ml)
50 100 200 400
Mean 0.03 6.86 0.31 5.72 5.01 4.04 3.98
SD 0.03 1.17 0.02 0.10 0.03 0.06 0.04
% vs LPC -16.58 -26.98 -41.08 -42.00
도 5 및 표 4에서 확인할 수 있듯이, 자초 추출물이 LPS 유발된 염증에서 용량의존적으로 COX2 발현을 억제하는 것을 확인하여, 자초 추출물이 COX2 발현에 영향을 주는 것을 확인하였다. 또한, LPS로 유발된 염증에서 자초 추출물에 의하여 용량의존적으로 COX2의 발현이 억제됨을 확인하였다.

Claims (10)

  1. 자초(Lithospermum erythrorhizon S. et Z.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증의 완화, 억제 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 자초 추출물은 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물인 것인, 염증의 완화, 억제 또는 치료용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 염증은 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염 또는 건성 피부염인 것인, 염증의 완화, 억제 또는 치료용 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 조성물의 1일 투여량은 유효성분 함량 기준으로 0.1 내지 500mg/kg인 것인, 염증의 완화, 억제 또는 치료용 약학적 조성물.
  5. 자초(Lithospermum erythrorhizon S. et Z.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증의 완화, 억제 또는 개선용 식품 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 자초 추출물은 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물인 것인, 염증의 완화, 억제 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 제5항에 있어서, 상기 염증은 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염 또는 건성 피부염인 것인, 염증의 완화, 억제 또는 치료용 약학적 조성물.
  8. 자초(Lithospermum erythrorhizon S. et Z.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증의 완화, 억제 또는 개선용 화장품 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 자초 추출물은 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물인 것인, 염증의 완화, 억제 또는 개선용 화장품 조성물.
  10. 제8항에 있어서, 상기 염증은 접촉성 피부염, 알레르기성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염 또는 건성 피부염인 것인, 염증의 완화, 억제 또는 개선용 화장품 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200136207A (ko) * 2019-05-27 2020-12-07 한국과학기술연구원 지치 추출물을 포함하는 항알러지용 조성물
KR20210073265A (ko) * 2019-12-10 2021-06-18 이진선 상온 유화 공정을 이용한 아토피 개선 로션
WO2021235921A1 (ko) * 2020-05-22 2021-11-25 한국과학기술연구원 스페르미딘 유도체 화합물, 이의 용도 및 이의 제조방법
KR20230010391A (ko) * 2021-07-12 2023-01-19 주식회사 홀리스틱바이오 자초의 초고압 추출물을 포함하는 아토피 피부염 치료용 조성물

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