KR20180117558A - 세포 생존율 판정 장치 및 세포 생존율 판정 방법 - Google Patents

세포 생존율 판정 장치 및 세포 생존율 판정 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은, 염색 시약을 이용하지 않고, 또한, 세포의 자가 형광에 의존하지 않고 세포의 생존율을 판정 가능한 세포 생존율 판정 장치를 제공하는 것을 과제로 한다.
배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액에서의 입자 크기의 분포를 얻는 분포 취득부(301)와, 분포에 있어서, 미리 정해진 임계치를 이용하여 입자를 소입자군과 대입자군으로 분류하는 분류부(302)와, 소입자군에 속하는 입자의 수와 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 산출하는 비산출부(303)와, 미리 취득한 비와 세포의 생존율의 관계를 이용하여, 비의 값으로부터 배양 세포의 생존율을 판정하는 생존율 판정부(304)를 구비하는 세포 생존율 판정 장치가 제공된다.

Description

세포 생존율 판정 장치 및 세포 생존율 판정 방법{APPARATUS AND METHOD FOR DETERMINING SURVIVAL RATE OF CELLS}
본 발명은 세포 배양 기술에 관한 것으로, 세포 생존율 판정 장치 및 세포 생존율 판정 방법에 관한 것이다.
바이오 프로세스나 세포 배양의 분야에 있어서, 세포 배양의 조건을 제어하기 위해, 및 세포 배양의 정지 시기를 판단하기 위해 등, 배양 세포의 생사를 판정하여 생존율이 측정된다. 세포의 생사를 판정하는 방법으로는, 세포 내의 핵산에 형광 색소를 결합시켜, 여기된 형광의 강도에 의해 세포의 생사를 판정하는 방법(예컨대 특허문헌 1 참조)이 제안되어 있다. 또한, 사세포의 세포막을 투과하여 사세포의 세포질을 푸르게 염색하는 트리판 블루 염색에 의해, 세포의 생사를 판정하는 방법도 알려져 있다.
그러나, 염색 시약은 고가이고, 또한, 세포를 염색하는 공정은 번잡하다. 또한, 염색 시약은 인체에 유해한 경우가 많다. 그 때문에, 염색 시약은, 관리되어 보관될 필요가 있다. 또한, 염색 시약으로 염색된 세포를 계속해서 배양하는 것은 어려우며, 폐액의 처리에도 주의할 필요가 있다. 이것에 대하여, 염색 시약을 이용하지 않고, 세포가 발하는 자가 형광에 기초하여 세포의 생사를 판정하는 방법이 제안되어 있다(예컨대 특허문헌 2 참조).
일본 특허 제2592114호 공보 일본 특허 제4868879호 공보
세포가 발하는 자가 형광은 미약하므로, 긴 노광 시간이 필요로 되거나, 고감도의 형광 검출 장치가 필요로 되거나 하는 경우가 있다. 따라서, 본 발명은, 염색 시약을 이용하지 않고, 또한, 세포의 자가 형광에 의존하지 않고 세포의 생존율을 판정 가능한 세포 생존율 판정 장치 및 세포 생존율 판정 방법을 제공하는 것을 목적의 하나로 한다.
본 발명의 양태에 의하면, 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액에서의 입자 크기의 분포를 얻는 분포 취득부와, 분포에 있어서, 미리 정해진 임계치를 이용하여 입자를 소입자군과 대입자군으로 분류하는 분류부와, 소입자군에 속하는 입자의 수와, 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 산출하는 비산출부와, 미리 취득한 비와 세포의 생존율의 관계를 이용하여, 비의 값으로부터 배양 세포의 생존율을 판정하는 생존율 판정부를 구비하는 세포 생존율 판정 장치가 제공된다.
상기 세포 생존율 판정 장치에 있어서, 분포 취득부가, 용액의 화상에 기초하여 입자 크기의 분포를 얻어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 장치에 있어서, 분포 취득부가, 입자의 각각에서 생긴 산란광의 강도에 기초하여 입자 크기의 분포를 얻어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 장치가, 용액이 흐르는 제거 가능한 유로와, 유로에 접속된 제거 가능한 측정 셀과, 측정 셀 내에 측정광을 조사하는 조사기와, 측정광이 조사된 측정 셀 내에서 생긴 산란광의 강도를 측정하는 산란광 측정기를 더 구비하고 있어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 장치에 있어서, 배양 세포가 부유 배양되어 있어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 장치에 있어서, 배양 세포가 차이니즈 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary; CHO) 세포이어도 좋다.
또한, 본 발명의 양태에 의하면, 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액에서의 입자 크기의 분포를 얻는 것과, 분포에 있어서, 미리 정해진 임계치를 이용하여 입자를 소입자군과 대입자군으로 분류하는 것과, 소입자군에 속하는 입자의 수와, 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 산출하는 것과, 미리 취득한 비와 세포의 생존율의 관계를 이용하여, 비의 값으로부터 배양 세포의 생존율을 판정하는 것을 포함하는 세포 생존율 판정 방법이 제공된다.
상기 세포 생존율 판정 방법에 있어서, 용액의 화상에 기초하여 입자 크기의 분포를 얻어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 방법에 있어서, 입자의 각각에서 생긴 산란광의 강도에 기초하여 입자 크기의 분포를 얻어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 방법이, 제거 가능한 유로, 및 유로에 접속된 제거 가능한 측정 셀에 용액을 흘리는 것과, 측정 셀 내에 측정광을 조사하는 것과, 측정광이 조사된 측정 셀 내에서 생긴 산란광의 강도를 측정하는 것을 더 포함하고 있어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 방법에 있어서, 배양 세포가 부유 배양되어 있어도 좋다.
상기 세포 생존율 판정 방법에 있어서, 배양 세포가 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포이어도 좋다.
본 발명에 의하면, 염색 시약을 이용하지 않고, 또한, 세포의 자가 형광에 의존하지 않고 세포의 생존율을 판정 가능한 세포 생존율 판정 장치 및 세포 생존율 판정 방법을 제공할 수 있다.
도 1은 제1 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치의 모식도이다.
도 2는 제1 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치의 모식도이다.
도 3은 제1 실시형태에 관한 입자의 도수 분포를 나타내는 모식적인 그래프이다.
도 4는 제1 실시형태에 관한 세포의 배양 시간과, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비의 관계를 나타내는 모식적인 그래프이다.
도 5는 제1 실시형태에 관한 사세포의 비율과, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비의 관계를 나타내는 모식적인 그래프이다.
도 6은 제2 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치의 모식도이다.
도 7은 제2 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치의 모식도이다.
도 8은 배양 개시후 0일째부터 3일째에 있어서의 실시예에 관한 입자의 도수 분포를 나타내는 그래프이다.
도 9는 배양 개시후 4일째부터 7일째에 있어서의 실시예에 관한 입자의 도수 분포를 나타내는 그래프이다.
도 10은 배양 개시후 8일째부터 11일째에 있어서의 실시예에 관한 입자의 도수 분포를 나타내는 그래프이다.
도 11은 배양 개시후 12일째 및 13일째에 있어서의 실시예에 관한 입자의 도수 분포를 나타내는 그래프이다.
도 12는 실시예에 관한 부유 배양된 세포를 포함하는 배지의 사진이다.
도 13은 실시예에 관한 세포의 배양 시간과, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비의 관계를 나타내는 그래프이다.
도 14는 실시예에 관한 세포의 생존율과, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비의 관계를 나타내는 그래프이다.
이하에 본 발명의 실시형태를 설명한다. 이하의 도면의 기재에 있어서, 동일 또는 유사한 부분에는 동일 또는 유사한 부호로 나타내고 있다. 단, 도면은 모식적인 것이다. 따라서, 구체적인 치수 등은 이하의 설명에 비추어 판단해야 하는 것이다. 또한, 도면 상호간에 있어서도 서로의 치수의 관계나 비율이 상이한 부분이 포함되어 있는 것은 물론이다.
또, 이 개시의 일부를 이루는 기재 및 도면은 본 발명을 한정하는 것이라고 이해해서는 안된다. 이 개시로부터 당업자에게는 여러가지 대체 실시형태, 실시예 및 운용 기술이 밝혀지는 것이다. 따라서, 본 발명은 여기서는 기재하지 않은 여러가지 실시형태 등도 포함한다는 것을 이해해야 한다.
(제1 실시형태)
제1 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치는, 도 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액에서의 입자 크기의 분포를 얻는 분포 취득부(301)와, 분포에 있어서, 미리 정해진 임계치를 이용하여 입자를 소입자군과 대입자군으로 분류하는 분류부(302)와, 소입자군에 속하는 입자의 수와, 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 산출하는 비산출부(303)와, 미리 취득한 비와 세포의 생존율의 관계를 이용하여, 비의 값으로부터 배양 세포의 생존율을 판정하는 생존율 판정부(304)를 구비한다. 분포 취득부(301), 분류부(302), 비산출부(303) 및 생존율 판정부(304)는, 예컨대 연산 처리 장치(300)에 포함된다.
배양 세포는, 예컨대 부유 배양되어 있는 세포이다. 부유 배양에 있어서는, 세포를 배양기의 바닥면에 접착시키지 않고, 구형의 세포를 배양액 중에 부유시킨 상태로 증식시킨다. 배양 세포는 접착 배양된 세포이어도 좋다. 배양 세포는, 모든 종류의 세포를 포함한다. 배양 세포의 일례로는, 항체 생성 세포를 들 수 있다. 항체 생성 세포의 예로는, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포를 들 수 있다. CHO 세포는, 주화(株化)한 CHO 세포를 포함한다. 또한, CHO 세포는, CHO-K1 세포나, 디히드로 엽산 환원 효소(DHFR) 결손 CHO-DG44 세포 등의 아종을 포함한다.
분포 취득부(301)는, 예컨대 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액의 화상에 기초하여 단위체적당 입자 크기의 도수 분포를 얻는다. 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액의 화상에 찍혀 있는 개개의 입자 크기를 계측함으로써, 입자 크기의 도수 분포를 얻을 수 있다. 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액의 화상은, 부유 배양되어 있는 세포를 포함하는 용액의 화상이다. 혹은, 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액의 화상은, 접착 배양되어 있던 세포이며, 배양기로부터 박리되어 용액 중에 현탁된 세포를 포함하는 용액의 화상이다. 입자 크기의 도수 분포는, 예컨대 히스토그램으로 표시된다. 단, 입자 크기의 도수 분포는, 반드시 시각적으로 표현될 필요는 없다.
배양 세포를 포함하는 입자의 크기란, 입자의 직경이어도 좋고 입자의 반경이어도 좋다. 또한, 입자의 크기를 반영하는 수치를, 입자의 크기를 나타내는 지표로서 이용해도 좋다. 예컨대, 입자에 광을 조사하면, 입자에 있어서 미산란광이 생긴다. 미산란광의 강도는 입자의 크기를 반영하고 있다. 따라서, 미산란광의 강도를, 입자의 크기를 나타내는 지표로서 이용해도 좋다. 이 경우, 분포 취득부(301)는, 입자의 각각에서 생긴 산란광의 강도에 기초하여 입자 크기의 분포를 얻는다.
본 발명자가 발견한 지견에 의하면, 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액에 있어서 입자의 크기를 측정하면, 도 3의 (a)에 나타낸 바와 같이, 크기가 미리 정해진 임계치보다 큰 대입자군과, 크기가 미리 정해진 임계치보다 작은 소입자군이 관찰된다. 세포의 배양일수가 경과하여 배양액 중의 사세포가 증가하면, 도 3의 (b)에 나타낸 바와 같이, 배양 초기와 비교하여, 대입자군에 속하는 입자의 수가 감소하고, 소입자군에 속하는 입자의 수가 증가하는 경향이 있다. 세포의 배양일수가 더욱 경과하여 배양액 중의 사세포가 더욱 증가하면, 도 3의 (c)에 나타낸 바와 같이, 대입자군에 속하는 입자의 수가 더욱 감소하고, 소입자군에 속하는 입자의 수가 더욱 증가하는 경향이 있다.
따라서, 예컨대 도 4에 나타낸 바와 같이, 배양 시간이 경과함에 따라서, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비가 증가하는 경향이 있다. 또한, 도 5에 나타낸 바와 같이, 용액에서의 사세포의 비율이 증가함에 따라서, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비가 증가하는 경향이 있다.
대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비와, 용액에서의 사세포 또는 생세포의 비율의 관계는, 미리 취득하는 것이 가능하다. 예컨대, 세포의 배양을 시작하고 나서, 매일, 세포를 포함하는 용액에서의 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비를 측정하고, 또한, 세포를 포함하는 용액에서의 사세포 또는 생세포의 비율을, 트리판 블루 염색 등의 기지의 방법으로 측정한다. 이에 따라, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비와, 용액에서의 사세포 또는 생세포의 비율의 관계가 취득된다. 상기 관계의 취득시에는, 최소 제곱법 등의 근사법을 적절하게 채용해도 좋다. 예컨대, 상기 관계는, 비를 독립 변수로 하고, 비율을 종속 변수로 하는 일차 함수로 표시되어도 좋다.
도 1에 나타내는 연산 처리 장치(300)에는, 예컨대 데이터 기억 장치(401)가 접속되어 있다. 데이터 기억 장치(401)는, 상기와 같이 미리 취득된 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비와, 용액에서의 사세포 또는 생세포의 비율의 관계를 보존한다.
분류부(302)는, 분포 취득부(301)가 취득한 입자 크기의 도수 분포에 있어서, 도 3에 나타낸 바와 같이, 미리 정해진 임계치를 이용하여 입자를 소입자군과 대입자군으로 분류한다. 미리 정해진 임계치에는, 예컨대 도수의 극소치를 부여하는 입자의 크기가 설정된다. 미리 정해진 임계치보다 크기가 작은 입자가 소입자군으로 분류되고, 미리 정해진 임계치보다 크기가 큰 입자가 대입자군으로 분류된다.
도 1에 나타내는 비산출부(303)는, 소입자군에 속하는 입자의 수와, 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 산출한다. 비의 값은, 소입자군에 속하는 입자의 수에 대한 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값이어도 좋고, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값이어도 좋다. 이하에 있어서는, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비를 이용하는 예를 설명한다.
생존율 판정부(304)는, 데이터 기억 장치(401)로부터, 미리 취득된 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비와, 용액에서의 사세포 또는 생세포의 비율의 관계를 판독한다. 생존율 판정부(304)는, 판독한 관계와 비산출부(303)가 산출한 비의 값에 기초하여, 용액에서의 사세포 또는 생세포의 비율을 산출하고, 배양 세포의 생존율을 판정한다. 여기서, 배양 세포의 생존율이란, 예컨대 사세포와 생세포의 합계에 대한 생세포의 비율이다. 단, 사세포의 비율로부터 배양 세포의 생존율을 판정해도 좋다.
연산 처리 장치(300)에는, 예컨대 일시 기억 장치(402), 신호 출력 장치(403), 신호 입력 장치(404), 신호 송수신 장치(405) 및 표시 장치(406) 등이 접속되어 있어도 좋다. 일시 기억 장치(402)는, 연산 처리 장치(300)의 연산 과정에서의 정보를 일시적으로 기억한다. 신호 출력 장치(403)는, 연산 처리 장치(300)가 연산한 신호를 출력한다. 신호 입력 장치(404)는, 연산 처리 장치가 연산하는 신호를 입력한다. 신호 송수신 장치(405)는, 외부의 장치와 신호의 송수신을 한다. 표시 장치(406)는, 연산 처리 장치(300)의 처리 과정에서의 정보 및 처리 결과의 정보를 표시한다.
이상 설명한 제1 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치에 의하면, 염색 시약을 이용하지 않고, 또한, 세포의 자가 형광에 의존하지 않고 세포의 생존율을 판정 가능하다.
(제2 실시형태)
제2 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치는, 도 6 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 광학식 입자 검출 장치(500)를 더 구비한다. 광학식 입자 검출 장치(500)는, 예컨대, 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액이 흐르는 제거 가능한 유로(501)와, 유로(501)에 접속된 제거 가능한 측정 셀(502)과, 측정 셀(502) 내에 측정광을 조사하는 조사기(503)와, 측정광이 조사된 측정 셀(502) 내에서 생긴 산란광의 강도를 측정하는 산란광 측정기(504)를 구비한다.
송액 장치(505)에 의해, 유로(501)에 배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액이 흐른다. 송액 장치(505)는, 송액 제어부(506)에 의해 제어되고, 용액의 유량 등을 설정한다. 유로(501)는, 광학식 입자 검출 장치(500)로부터 제거 가능하다. 제거된 유로(501)는, 세정되어도 좋고, 새로운 청정한 유로(501)와 교환되어도 좋다. 측정 셀(502)은, 측정광 및 산란광이 투과 가능한 투명 부재로 이루어진다. 측정 셀(502)의 재료로는, 석영 유리를 들 수 있지만, 이것에 한정되지 않는다. 측정 셀(502)은, 광학식 입자 검출 장치(500)로부터 제거 가능하다. 제거된 측정 셀(502)은, 세정되어도 좋고, 새로운 청정한 측정 셀(502)과 교환되어도 좋다.
유로(501) 및 측정 셀(502)이 청정하지 않은 경우, 전회 측정한 입자가 유로(501) 및 측정 셀(502)에 잔존하여, 그 후의 측정에 영향을 미칠 가능성이 있다. 이것에 대하여, 제2 실시형태에 관한 유로(501) 및 측정 셀(502)은, 광학식 입자 검출 장치(500)로부터 제거 가능하므로, 유로(501) 및 측정 셀(502)을 청정하게 하는 것이 용이하다.
조사기(503)는, 예컨대 레이저 광원과, 레이저 광원의 제어 장치를 구비한다. 조사기(503)는, 측정 셀(502) 내에, 예컨대 레이저광인 측정광을 조사한다. 측정 셀(502) 내에 촛점을 맺도록 렌즈를 배치해도 좋다. 측정 셀(502) 내의 입자에 측정광이 조사되면, 입자에 있어서 미산란광이 생긴다. 산란광 측정기(504)는, 입자에서 생긴 산란광의 강도를 측정한다.
산란광 측정기(504)에서 측정된 산란광의 강도는, 신호 송수신 장치(405) 등을 통해 분포 취득부(301)에 보내진다. 전술한 바와 같이, 미산란광의 강도는 입자의 크기를 반영하고 있기 때문에, 분포 취득부(301)는, 입자의 각각에서 생긴 산란광의 강도에 기초하여 입자 크기의 분포를 얻는다.
제2 실시형태에 관한 세포 생존율 판정 장치의 다른 구성 요소는, 제1 실시형태와 동일하기 때문에 설명은 생략한다.
[실시예]
L-글루타민(종농도 6 mmol/L), 항응집제(Anti-Clumping Agent)(종농도 1%)를 첨가한 배지(CD OptiCHO, 등록상표, 단백질 불함유, 동물 유래 성분 불함유, 인비트로젠 제조)를 준비했다. 상기 배지에서, 트라스투주맙을 생성하는 CHO-K1 세포를 37℃, 5% CO2로 부유 배양했다. 부유 배양 개시후, 정기적으로 세포를 포함하는 배지를 샘플링했다.
샘플링한 배지를 미리 정해진 배율로 희석하고, 입자 검출 장치(IMD-W, 아즈빌 제조)를 이용하여, 배지에 포함되는 입자 각각에 레이저광을 조사하고 입자의 각각에서 생기는 미산란광의 강도를 측정했다. 입자에서 생기는 미산란광의 강도는, 입자의 입경을 나타내고 있다. 또한, 샘플링하여 희석한 배지에 포함되는 세포를 트리판 블루로 염색하고, 셀 카운터를 이용하여 총세포수와 염색 세포수를 계수했다. 염색된 세포는 사세포로 판정했다. 판정 결과로부터 세포의 생존율을 산출했다. 또한, 샘플링하여 희석한 배지의 사진을 촬영하여 배지 중의 입자를 관찰했다.
배양 개시후 1일마다 측정한 입자의 입경의 도수 분포를 나타내는 히스토그램을 도 8 내지 도 11에 나타낸다. 히스토그램에 있어서, 도수의 극소치를 부여하는 입경을 경계로, 소입자군의 분포와 대입자군의 분포가 나타났다. 도 12에 나타내는 샘플링된 세포를 포함하는 배지의 화상으로부터, 대입자군으로 분류된 입자는 생세포를 포함하는 것으로 생각되었다.
배양 시간에 대하여, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 플롯한 그래프를 도 13에 나타낸다. 도 13에 나타낸 바와 같이, 비의 값은, 배양일수가 진행됨에 따라서 커지는 경향이 있었다. 또, 배양 초기에 약간 비의 값이 큰 것은, 입자 검출 장치에, 이전에 측정한 소입자가 잔존한 것이 고려된다. 또한, 그 후, 비의 값이 일단 작아진 것은, 생세포가 증식하고, 대입자군으로 분류된 입자가 증가했기 때문이라고 생각된다.
또한, 세포의 생존율에 대하여, 대입자군에 속하는 입자의 수에 대한 소입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 플롯한 그래프를 도 14에 나타낸다. 비와 세포의 생존율 사이에는 상관관계가 보였다. 따라서, 세포를 배양하면, 배양일수가 진행됨에 따라서, 배지 중에 소입자군으로 분류되는 입자가 증가하는 것, 소입자군에 속하는 입자의 수와, 대입자군에 속하는 입자의 수의 비로부터 세포의 생존율을 추측할 수 있는 것이 나타났다.
300 : 연산 처리 장치, 301 : 분포 취득부, 302 : 분류부, 303 : 비산출부, 304 : 생존율 판정부, 401 : 데이터 기억 장치, 402 : 일시 기억 장치, 403 : 신호 출력 장치, 404 : 신호 입력 장치, 405 : 신호 송수신 장치, 406 : 표시 장치, 500 : 광학식 입자 검출 장치, 501 : 유로, 502 : 측정 셀, 503 : 조사기, 504 : 산란광 측정기, 505 : 송액 장치, 506 : 송액 제어부

Claims (10)

  1. 세포 생존율 판정 장치에 있어서,
    배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액에서의 상기 입자의 크기의 분포를 얻는 분포 취득부와,
    상기 분포에 있어서, 미리 정해진 임계치를 이용하여, 상기 입자를 소입자군과 대입자군으로 분류하는 분류부와,
    상기 소입자군에 속하는 입자의 수와, 상기 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 산출하는 비산출부와,
    미리 취득한 상기 비와 세포의 생존율의 관계를 이용하여, 상기 비의 값으로부터 상기 배양 세포의 생존율을 판정하는 생존율 판정부
    를 포함하는 세포 생존율 판정 장치.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 분포 취득부는, 상기 용액의 화상에 기초하여 상기 입자의 크기의 분포를 얻는 것인 세포 생존율 판정 장치.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 분포 취득부는, 상기 입자의 각각에서 생긴 산란광의 강도에 기초하여 상기 입자의 크기의 분포를 얻는 것인 세포 생존율 판정 장치.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 용액이 흐르는 제거 가능한 유로와,
    상기 유로에 접속된 제거 가능한 측정 셀과,
    상기 측정 셀 내에 측정광을 조사하는 조사기와,
    상기 측정광이 조사된 상기 측정 셀 내에서 생긴 산란광의 강도를 측정하는 산란광 측정기
    를 더 포함하는 세포 생존율 판정 장치.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 배양 세포가 부유 배양되어 있는 것인 세포 생존율 판정 장치.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 배양 세포는 차이니즈 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary; CHO) 세포인 것인 세포 생존율 판정 장치.
  7. 세포 생존율 판정 방법에 있어서,
    배양 세포를 포함하는 입자를 포함하는 용액에서의 상기 입자의 크기의 분포를 얻는 단계와,
    상기 분포에 있어서, 미리 정해진 임계치를 이용하여 상기 입자를 소입자군과 대입자군으로 분류하는 단계와,
    상기 소입자군에 속하는 입자의 수와, 상기 대입자군에 속하는 입자의 수의 비의 값을 산출하는 단계와,
    미리 취득한 상기 비와 세포의 생존율의 관계를 이용하여, 상기 비의 값으로부터 상기 배양 세포의 생존율을 판정하는 단계
    를 포함하는 세포 생존율 판정 방법.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 용액의 화상에 기초하여, 상기 입자의 크기의 분포를 얻는 세포 생존율 판정 방법.
  9. 제7항에 있어서,
    상기 입자의 각각에서 생긴 산란광의 강도에 기초하여, 상기 입자의 크기의 분포를 얻는 세포 생존율 판정 방법.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 배양 세포는 부유 배양되어 있는 것인 세포 생존율 판정 방법.
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